CN114829565A - 包含具有α淀粉酶活性的多肽的清洁组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了包含α‑淀粉酶的变体的清洁组合物、制备此类清洁组合物的方法以及用包含此类组合物的水性液体处理诸如织物的表面的方法。
Description
参考序列表
本申请包含计算机可读形式的序列表。所述计算机可读形式以引用方式并入本文。
技术领域
本发明涉及包含淀粉酶的清洁组合物、其制备方法和其使用方法。本发明的组合物和方法适合用于家庭清洁组合物或处理组合物,具体地为衣物洗涤组合物和盘碟洗涤组合物,包括手洗和/或自动衣物洗涤组合物以及/或者手洗和/或自动盘碟洗涤组合物。本发明尤其可用于清洁衣物。
背景技术
α-淀粉酶(α-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶,E.C.3.2.1.1)构成催化淀粉及其他直链和支链1,4-葡糖苷低聚糖和多糖的水解的一组酶。众所周知,它们已在家庭清洁组合物中使用多年,包括首次取用自地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)的细菌α-淀粉酶,也称为Termamyl。碱性淀粉酶例如来自AA560(WO2000/060060)和来自SP707的那些(由Tsukamoto等人,1988,Biochem.Biophys.Res.Comm.151:25-31所述)可用于洗涤剂中并且已知修饰这些和其他淀粉酶可以改善它们在洗涤剂中的稳定性。例如,WO 96/23873公开了删除SP707(WO 96/23873的SEQ ID NO:7)的第181+182位氨基酸或第183+184位氨基酸以改善该淀粉酶的稳定性。WO 96/23873进一步公开了通过将M202替换为例如亮氨酸来修饰SP707淀粉酶以使该分子对氧化稳定。
洗涤剂配制人员面临着尤其是以对环境有利的方式改善清洁组合物的功效的不断挑战。由于环境原因,提供有效的(优选地还在通常使用更少体积的水和/或更低的温度的快速洗涤循环中)洗涤剂组合物也变得日益重要。因此,期望拥有在与亲本多肽相比时表现出改善的特性(诸如比活性)的淀粉分解酶。本发明提供了包含变体多肽的组合物,所述变体多肽具有α-淀粉酶活性以及与其杂交体和/或亲本多肽相比改善的特性或酶洗净力有益效果(诸如去除含淀粉的污渍或比活性)。特别优选的淀粉分解酶可在低温下和/或更短洗涤循环中发挥作用,与此同时保留或增强其他期望的特性,诸如比活性(淀粉分解活性)、稳定性和/或洗涤性能,以实现良好清洁。
因此,本发明的一个目标是提供包含α-淀粉酶变体的清洁组合物,所述α-淀粉酶变体在与亲本多肽相比时表现出改善的特性(诸如去除含淀粉的污渍或比活性)并且可用于洗涤、盘碟洗涤和/或清洁过程。本发明的另外一个目标是提供包含α-淀粉酶变体的清洁组合物,该α-淀粉酶变体在低温下例如在5℃至低于40℃或至低于30℃或至低于28℃或至低于25℃的洗涤温度下具有与亲本α-淀粉酶相比或与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14中任一者的α-淀粉酶相比改善的洗涤性能。
发明内容
本发明涉及一种清洁组合物,该清洁组合物包含:
(a)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处包含修饰的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体与亲本多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性;以及
清洁助剂。
本发明还提供了包含亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体的清洁组合物,该α-淀粉酶变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体与亲本多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有与所述亲本多肽的洗涤性能相比改善的洗涤性能;以及清洁助剂。亲本多肽优选地为SEQ IDNO:1或SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3。本发明还提供了一种制备清洁组合物的方法,该方法包括获得如上所述的α淀粉酶变体,以及将α淀粉酶变体与清洁助剂混合以制备清洁组合物。
本发明还提供了一种制备清洁组合物的方法,该方法包括获得亲本α-淀粉酶的变体,其包括如下步骤:在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处引入改变:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,从而提供α-淀粉酶变体,其中所述变体与亲本多肽具有至少60%,诸如至少65%,诸如至少70%,诸如至少75%,诸如至少80%,诸如至少85%,诸如至少90%,诸如至少95%,诸如至少97%,诸如至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有改善的洗涤性能;以及将α-淀粉酶变体与清洁助剂混合以制备清洁组合物。
本发明还提供了一种处理表面(优选地,纺织物)的方法,该方法包括:
(i)形成水性洗涤液体,该水性洗涤液体包含水、如本文所述的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体、以及清洁助剂,
(ii)优选地在5℃至60℃,优选地10℃至等于或小于40℃,或优选地至多35℃的温度下,更优选地在30℃或小于30℃的温度下,或者在20℃或小于20℃的温度下用该水性洗涤液体处理该表面;以及
(iii)冲洗该表面。
优选地,变体淀粉酶具有α-淀粉酶活性,其中该变体具有相对于亲本α-淀粉酶改善的洗涤性能。
本文的组合物和方法尤其可用于处理包含棉和/或合成纤维(诸如聚酯、尼龙等)的表面,该表面可为纤维或织物的形式,例如单一织物或混合织物,诸如涤棉布。本发明还涉及如上所述的组合物或方法用于以下方面的用途:清洁或去除污渍,尤其是含淀粉或其他碳水化合物的污渍,去除恶臭或增加织物白度。
具体实施方式
定义
根据该详细描述,以下定义适用。需注意,单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数指代物,除非上下文另外明确地指明。
本文对“约”值或参数的提及包括涉及该值或参数本身的方面。例如,提及“约X”的描述包括方面“X”。
除非另有定义或上下文清楚指明,否则本文所使用的所有技术和科学术语均具有与本发明所属领域的普通技术人员所通常理解的含义相同的含义。
A结构域、B结构域和C结构域:α-淀粉酶的结构包括三种不同结构域A、B和C,参见例如Machius等人,1995,J.Mol.Biol.246:545-559。术语“结构域”意指形成整个分子的不同且独立的子结构的多肽区域。α-淀粉酶由以下部分组成:带有活性位点的β/α-8桶,其被表示为A结构域;β-折叠3与α-螺旋3之间的相当长的环,其被表示为B结构域;和C结构域;以及在一些情况下还有碳水化合物结合结构域(例如,WO2005/001064;Machius等人,见上)。
可通过结构分析(诸如通过使用结晶学技术)来确定α-淀粉酶的结构域。用于确定α-淀粉酶的结构域的替代方法是通过将α-淀粉酶的氨基酸序列与另一种已确定结构域的α-淀粉酶进行序列比对。与例如已确定B结构域的α-淀粉酶中的B结构域序列比对的序列可被视为给定α-淀粉酶的B结构域。
等位变体:术语“等位变体”指占据相同染色体座位的基因的两个或更多个替代形式中的任何一个。等位变体天然来源于突变,并且可导致种群内的多态性。基因突变可为沉默突变(不改变编码的多肽)或者可编码具有改变的氨基酸序列的多肽。多肽的等位变体是由基因的等位变体编码的多肽。
α-淀粉酶:术语“α-淀粉酶”与术语“具有α-淀粉酶活性的多肽”同义。“α-淀粉酶活性”意指α-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶,E.C.3.2.1.1的活性,其构成催化淀粉及其他直链和支链1,4-葡糖苷低聚糖和多糖的水解的一组酶。因此,如本文所用,术语“α-淀粉酶”是指具有α-淀粉酶活性的酶(酶类:EC 3.2.1.1),其水解α-连接的较大多糖(诸如淀粉和糖原)的α键,从而产生葡萄糖和麦芽糖。术语“α-淀粉酶”和“淀粉酶”在本文中可互换使用并且构成相同的含义和目的。就本发明的目的而言,根据在以下子标题“方法”下描述的程序确定α-淀粉酶活性。在一个方面,本发明的α-淀粉酶与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14的多肽的氨基酸序列具有至少20%,例如至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或至少100%的序列同一性。
氨基酸:如本文所用,术语“氨基酸”包括标准二十种基因编码氨基酸及其‘d’形式的对应立体异构体(与天然‘l’形式相比)、ω-氨基酸、其他天然存在的氨基酸、非常规氨基酸(例如,α,α-二取代氨基酸、N-烷基氨基酸等)和化学衍生的氨基酸。可通过与官能侧基反应来获得一种或多种氨基酸的化学衍生物。此类衍生的分子包括例如游离氨基经衍生而形成胺盐酸盐、对甲苯磺酰基、羧基苄氧基、叔丁氧基羰基、氯乙酰基或甲酰基的那些分子。游离羧基可经衍生而形成盐、甲酯和乙酯或其他类型的酯和酰肼。游离羟基可经衍生而形成O-酰基或O-烷基衍生物。作为化学衍生物,还包括那些包含二十种标准氨基酸的天然存在的氨基酸衍生物的肽。例如:4-羟脯氨酸可替换脯氨酸;5-羟赖氨酸可替换赖氨酸;3-甲基组氨酸可替换组氨酸;高丝氨酸可替换丝氨酸,并且鸟氨酸可替换赖氨酸。衍生物还包括包含一个或多个添加或缺失的肽,只要保持必要的活性即可。其他包括的修饰是酰胺化、氨基末端酰化(例如,乙酰化或巯基乙酸酰胺化)、末端羧基酰胺化(例如,用氨或甲胺)和类似末端修饰。
当具体列举氨基酸诸如‘丙氨酸’或‘Ala’或‘A’时,除非另外明确说明,否则该术语是指l-丙氨酸和d-丙氨酸两者。其他非常规氨基酸也可以是本发明的多肽的合适组分,只要该多肽保留所需的功能特性即可。对于所示的肽而言,每个编码的氨基酸残基在适当时由与常规氨基酸的俗名相对应的单字母名称表示。在一个实施方案中,本发明的多肽包含l-氨基酸或由其组成。
催化结构域:术语“催化结构域”意指包含酶的催化机制的酶的区域。
cDNA:术语“cDNA”意指可通过从获自真核细胞的经剪接的成熟mRNA分子的逆转录来制备的DNA分子。cDNA缺少可能存在于对应基因组DNA中的内含子序列。最初的初始RNA转录物是mRNA的前体,其在作为成熟的经拼接的mRNA出现之前,通过一系列步骤,包括拼接,被加工。
编码序列:术语“编码序列”指多核苷酸,其直接规定了变体的氨基酸序列。编码序列的边界一般由开放阅读框确定,它通常起始于起始密码子如ATG、GTG或TTG并终止于终止密码子如TAA、TAG或TGA。编码序列可为DNA、cDNA、合成的、或重组的多核苷酸。
控制序列:术语“控制序列”是指编码本发明的变体的多核苷酸的表达所需的核酸序列。每个控制序列可以是对编码该变体的多核苷酸而言天然的(即,来自相同基因)或外源的(即,来自不同基因),或对彼此而言天然的或外源的。此类调控序列包括但不限于前导序列、聚腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列、和转录终止子。调控序列至少包括启动子以及转录和翻译终止信号。可以为控制序列设置接头用于引入特异性限制性位点,以便于将该控制序列与编码变体的多核苷酸的编码区连接起来。
对应于:如本文所用,术语“对应于”是指确定序列的特定氨基酸的方式,其中参考特定氨基酸序列。例如,就本发明的目的而言,当参考特定氨基酸位置时,技术人员将能够使另一个氨基酸序列与已参考的所述氨基酸序列比对,以便确定哪个特定氨基酸可能在所述另一个氨基酸序列中是感兴趣的。本文其他地方已描述了另一个氨基酸序列与例如如SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14中所阐述的序列或本文所列的任何其他序列的比对。可使用替代比对方法并且这些方法是技术人员所熟知的。
盘碟洗涤组合物:如本文所用,术语“盘碟洗涤组合物”是指用于清洁盘碟的所有形式的组合物。盘碟洗涤组合物是液体盘碟洗涤组合物、粉末盘碟洗涤组合物,任选地其中该组合物呈单位剂量的形式。单位剂量盘碟洗涤组合物可包括多于一个隔室,该多个隔室包含粉末、液体或它们的组合。在一个优选的实施方案中,至少一个隔室包含液体并且至少一个隔室包含粉末。
酶洗净力有益效果:本文使用的术语“酶洗净力有益效果”是指与没有酶的相同洗涤剂相比酶可向洗涤剂增添的有利效果。可由酶提供的重要洗净力有益效果是在洗涤和/或清洁之后没有或只有很少可见污渍的去污;防止或减少洗涤过程中释放的污渍的再沉积(也称为抗再沉积的效应);完全或部分恢复最初为白色但在反复使用和洗涤之后获得了淡灰色或淡黄色外观的纺织物的白度(也称为增白的效应)。不与催化去污或防止污渍再沉积直接相关的纺织物护理有益效果对于酶洗净力有益效果也可能很重要。此类纺织物护理有益效果的示例是防止或减少从一种织物到另一种织物或相同织物的另一部分的染料转移(也称为染料转移抑制或抗返染的效应);从织物表面去除突出或断裂的纤维以减少起球倾向或去除已经存在的球粒或绒毛(也称为抗起球的效应);改善织物柔软性;织物的颜色澄清;以及去除截留在织物或衣服的纤维中的颗粒污渍。酶漂白是另外一种酶洗净力有益效果,其中催化活性通常用于催化漂白组分(诸如过氧化氢或其他过氧化物)的形成。
表达:术语“表达”包括涉及制备变体的任何步骤,包括但不限于转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰和分泌。
表达载体:术语“表达载体”是指线性或环状的DNA分子,其包含编码变体的多核苷酸,并且可操作地连接至提供其表达的附加核苷酸。
片段:如本文所用,术语“片段”是指从亲本α-淀粉酶的成熟多肽(例如本文所公开的亲本序列中的任何一个亲本序列,诸如SEQ ID NO:1-14中的任何一者)的氨基和/或羧基末端缺少一个或多个(例如,若干个)氨基酸的多肽;其中该片段具有α-淀粉酶活性。在一个方面,片段包含SEQ ID NO:1-14中的任何一者的至少200个连续氨基酸残基,例如SEQ IDNO:1-14中的任何一者的至少300个连续氨基酸残基、或至少350个连续氨基酸残基、或至少400个连续氨基酸残基、或至少450个连续氨基酸残基。
融合多肽:如本文所用,术语“融合多肽”是指包含来源于多于一种(诸如两种、三种或四种)物种的氨基酸序列的多肽。可能已通过技术人员熟知的分子技术生成这种融合多肽。本发明的融合多肽具有α-淀粉酶活性。具体地,本发明的融合多肽包含例如一种α-淀粉酶的A和C结构域以及来自另一种α-淀粉酶的B结构域。杂交体多肽(或“杂交体”)和融合多肽可互换使用并且构成相同的含义和目的。
硬质表面清洁:如本文所用,术语“硬质表面清洁”是指包括地板、屋顶、汽车、厨房或浴室表面在内的任何硬质表面的清洁以及盘碟清洁(盘碟洗涤)。
异源多核苷酸:术语“异源多核苷酸”在本文中被定义为对宿主细胞不是天然的多核苷酸;已对编码区进行结构修饰的天然多核苷酸;因重组DNA技术对DNA操纵(例如,不同(外来)启动子)而使其表达在数量上改变的天然多核苷酸;或在宿主细胞中具有该多核苷酸的一个或多个额外拷贝而在数量上改变表达的天然多核苷酸。“异源基因”是包含异源多核苷酸的基因。
异源:术语“异源”意指对于宿主细胞而言,多肽或核酸不天然存在于宿主细胞中。术语“异源”意指对于多肽或核酸而言,多肽或核酸的控制序列(例如,启动子)或结构域不与多肽或核酸天然相关,即,控制序列来自编码这些变体的基因之外的基因。
高严格性条件:术语“高严格性条件”是指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言,遵循标准Southern印迹规程,在42℃下在5X SSPE、0.3%SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精DNA和50%甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。最终使用2X SSC、0.2%SDS在65℃下洗涤载体材料三次,每次15分钟。
宿主细胞:术语“宿主细胞”是指对用包含本文所述多核苷酸的核酸构建体或表达载体进行的转化、转染、转导等敏感的任何细胞类型。术语“宿主细胞”包括了由于在复制过程中发生的突变而与亲本细胞不相同的亲本细胞的任何子代。
杂交:术语“杂交”是指使用标准Southern印迹规程使核酸的基本上互补的链配对。可在中等、中高、高或极高严格性条件下执行杂交。中等严格性条件是指在42℃下在5XSSPE、0.3%SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精DNA和35%甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时,然后在55℃下使用0.2X SSC、0.2%SDS洗涤三次,每次15分钟。中高严格性条件是指在42℃下在5X SSPE、0.3%SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精DNA和35%甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时,然后在60℃下使用0.2X SSC、0.2%SDS洗涤三次,每次15分钟。高严格性条件是指在42℃下在5X SSPE、0.3%SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精DNA和50%甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时,然后在65℃下使用0.2X SSC、0.2%SDS洗涤三次,每次15分钟。极高严格性条件是指在42℃下在5X SSPE、0.3%SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精DNA和50%甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时,然后在70℃下使用0.2X SSC、0.2%SDS洗涤三次,每次15分钟。改善的特性:术语“改善的特性”在本文中被定义为与亲本α-淀粉酶相比改善的变体相关特征。此类改善的特性包括但不限于增加的淀粉分解活性、增加的催化效率、增加的催化速率、增加的化学稳定性、增加的氧化稳定性、增加的pH活性、增加的pH稳定性、增加的比活性、增强的底物结合、增强的底物裂解、增加的底物特异性、增加的底物稳定性、增加的表面特性、增加的热活性、增加的热稳定性、增加的洗涤性能(诸如去污性能,例如对含淀粉的污渍、去污、抗变灰的性能)、稳定性(例如热稳定性、pH稳定性或在存在助洗剂(包括螯合剂)的情况下的稳定性、在粉末、液体或凝胶洗涤剂制剂或盘碟洗涤组合物中的稳定性)、改变的温度相关性能和活性谱、pH活性、底物特异性、产物特异性及化学稳定性。
改善的洗涤性能:术语“改善的洗涤性能”在本文中被定义为相对于亲本淀粉酶的洗涤性能或相对于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3中任何一者的淀粉酶表现出淀粉酶的洗涤性能的改善(例如通过增强的去污性)。可通过比较所谓的强度值来测量改善的洗涤性能。优选地,根据实施例确定改善的洗涤性能。如果在实施例中所列的条件中的一个或多个条件下改善因数(IF)高于1.0、优选地高于1.05,则洗涤性能改善。实施例部分中描述了洗涤条件。术语“洗涤性能”包括一般的清洁例如如盘碟洗涤中的硬质表面清洁,但也包括对纺织物诸如衣物的洗涤性能,并且也包括工业和机构清洁。可通过比较如本文定义中所述的Δ强度来测量改善的洗涤性能。
分离的:术语“分离的”是指自然界中不存在的形式或环境中的物质。分离的物质的非限制性示例包括(1)任何非天然存在的物质;(2)至少部分地从一种或多种或全部天然存在的成分移出的任何物质(在自然界中与这些成分相关联),包括但不限于任何酶、变体、核酸、蛋白质、肽或辅因子;(3)相对于自然界中发现的那种物质,经人工修饰的任何物质;或(4)通过相对于与其天然相关的其他组分,增加物质的量而修饰的任何物质(例如编码该物质的基因的多个拷贝;使用比与编码该物质的基因天然相关的启动子更强的启动子)。分离的物质可存在于发酵液样品中。在一个方面,本发明涉及一种分离的α-淀粉酶变体。
强度值:洗涤性能按亮度测量,该亮度被表示为在用白光照明时从样品反射的光的强度。当样品沾上污渍时,反射光的强度低于干净样品。因此,反射光的强度可用于测量洗涤性能,其中更高的强度值与更高的洗涤性能相关。使用用于捕获所洗涤的纺织物的图像的专业平板扫描仪(Kodak iQsmart,柯达公司(Kodak))进行颜色测量。为了从所扫描的图像提取光强度的值,将来自该图像的24位像素值转换成红绿蓝(RGB)的值。通过将RGB值一起相加为矢量、然后测定所得矢量的长度来计算强度值(Int):
低温:“低温”优选地为5至40℃、或5至35℃、或5至30℃、或甚至5至25℃、或5至20℃、或5至15℃、或5至10℃的温度。优选的“低温”可为10至35℃,优选地10至30℃、或10至25℃、或10至20℃、或10至15℃的温度。
成熟多肽:术语“成熟多肽”是指在翻译和任何翻译后修饰(诸如N末端加工、C末端截短、糖基化、磷酸化等)之后呈其最终形式的多肽。本领域已知,宿主细胞可产生由相同多核苷酸表达的两种或更多种不同成熟多肽的混合物(即,具有不同的C末端和/或N末端氨基酸)。
成熟多肽编码序列:术语“成熟多肽编码序列”是指编码具有α-淀粉酶活性的成熟多肽的多核苷酸。
中等严格性条件:术语“中等严格性条件”是指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言,遵循标准Southern印迹规程,在42℃下在5XSSPE、0.3%SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精DNA和35%甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。最终使用2X SSC、0.2%SDS在55℃下洗涤载体材料三次,每次15分钟。
中高严格性条件:术语“中高严格性条件”是指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言,遵循标准Southern印迹规程,在42℃下在5XSSPE、0.3%SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精DNA和35%甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。最终使用2X SSC、0.2%SDS在60℃下洗涤载体材料三次,每次15分钟。
修饰:在本发明多肽的上下文中,术语“修饰”是指通过用不同氨基酸替换、通过氨基酸插入或通过缺失(优选地通过至少一个缺失)来改变参考氨基酸序列(例如,SEQ IDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14)内的一个或多个氨基酸。术语“修饰”、“改变”和“突变”可互换使用并且构成相同的含义和目的。
突变体:术语“突变体”是指编码变体的多核苷酸。
天然:术语“天然”是指核酸或多肽天然存在于宿主细胞中。
核酸构建体:术语“核酸构建体”是指包含一个或多个控制序列的单链或双链的核酸分子,它是从天然存在的基因分离的,或者以原本在自然界中不存在的方式进行修饰而包含核酸的片段,或者它是合成的。当所述核酸构建体包含本发明的编码序列的表达所需的控制序列时,术语核酸构建体与术语“表达盒”是同义的。
可操作地连接:术语“可操作地连接”是指一种构型,控制序列在其中被置于相对于多核苷酸的编码序列的适当位点上,使得控制序列指导编码序列的表达。
亲本或亲本α-淀粉酶:如本文所用,术语“亲本”α-淀粉酶是指对其进行修饰而产生本发明的变体α-淀粉酶的α-淀粉酶。该术语还指本发明的变体与之比较的多肽。亲本优选地是通过任何合适的方式制备的天然存在的(野生型)多肽或其杂交体多肽。亲本甚至可以是通过任何合适的方式制备的野生型多肽或杂交体多肽的变体。例如,亲本蛋白质可以是已在氨基酸序列中加以修饰或改变的天然存在的多肽的变体。因此,亲本α-淀粉酶可具有一个或多个(或一个或若干个)氨基酸替换、缺失和/或插入。因此,亲本α-淀粉酶可以是天然存在的多肽α-淀粉酶的变体。亲本还可以是等位变体,即由占据相同染色体座位的基因的两个或更多个替代形式中的任何一个替代形式编码的多肽。如本文所用,优选的“亲本”或“亲本α-淀粉酶”选自SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13和14的α-淀粉酶。合适的亲本可以是与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13和14的多肽中的任何多肽具有至少60%序列同一性的任何α-淀粉酶。亲本α-淀粉酶还可以是包含SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14中的任何一者的片段的多肽。亲本可以是细菌或真菌α-淀粉酶,优选地细菌α-淀粉酶。具有SEQ ID NO:1、2或3的淀粉酶可以例如是对于本发明至关重要的亲本或杂交体多肽。
纯化的:术语“纯化的”是指如通过本领域熟知的分析技术所确定,基本上不含其他组分的核酸或多肽(例如,纯化的多肽或核酸可形成电泳凝胶中的离散泳带、色谱洗脱液和/或经受密度梯度离心的培养基)。纯化的核酸或多肽为至少约50%纯,通常至少约60%、约65%、约70%、约75%、约80%、约85%、约90%、约91%、约92%、约93%、约94%、约95%、约96%、约97%、约98%、约99%、约99.5%、约99.6%、约99.7%、约99.8%纯或更大的纯度(例如,按摩尔计的重量百分比)。在相关意义上,当在应用纯化或富集技术之后分子的浓度存在实质增加时,组合物富含该分子。术语“富含”是指化合物、多肽、细胞、核酸、氨基酸或其他指定材料或组分以高于起始组合物的相对或绝对浓度存在于组合物中。
重组:术语“重组”在参考细胞、核酸、蛋白质或载体使用时是指其已从其天然状态进行了修饰。因此,例如,重组细胞表达不存在于细胞的天然(非重组)形式内的基因,或以与自然界中存在的水平不同的水平或在与自然界中存在的条件不同的条件下表达天然基因。重组核酸有一个或多个核苷酸不同于天然序列和/或可操作地连接至异源序列,例如表达载体中的异源启动子。重组蛋白质可有一个或多个氨基酸不同于天然序列和/或与异源序列融合。包含编码多肽的核酸的载体是重组载体。术语“重组的”与“经基因修饰的”和“转基因的”同义。
序列同一性:两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的相关性由参数“序列同一性”描述。
就本发明的目的而言,两个氨基酸序列之间的序列同一性使用Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.48:443-453)确定,如在EMBOSS程序包的Needle程序中实现(EMBOSS:The European Molecular Biology Open Software Suite,Rice等人,2000,Trends Genet.16:276-277),优选5.0.0版或更新版。所用的参数可以是,为10的空位开放罚分,为0.5的空位延伸罚分,和EBLOSUM62(EMBOSS版的BLOSUM62)替换矩阵。使用标记为“最长同一性”的Needle输出(使用-nobrief选项获得)作为百分比同一性,并且如下计算:
(相同残基×100)/(序列长度-序列中的总空位数)
就本发明的目的而言,两个脱氧核糖核苷酸序列之间的序列同一性使用Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch,1970,见上)确定,如在EMBOSS程序包的Needle程序中实现(EMBOSS:The European Molecular Biology Open Software Suite,Rice等人,2000,见上),优选5.0.0版或更新版。所用的参数是,为10的空位罚分,为0.5的空位延伸罚分,和EDNAFULL(EMBOSS版的NCBI NUC4.4)替换矩阵。使用标记为“最长同一性”的Needle输出(使用-nobrief选项获得)作为百分比同一性,并且如下计算:
(相同脱氧核糖核苷酸×100)/(序列长度-序列中的总空位数)
信号肽:术语“信号肽”在本文中被定义为框内连接(融合)到具有生物活性的多肽的氨基末端的肽并且指导该多肽进入细胞的分泌途径。可使用本领域已知的技术确定信号序列(参见例如Zhang和Henzel,2004,Protein Science 13:2819-2824)。
淀粉结合结构域:术语“淀粉结合结构域(SBD)或碳水化合物结合模块(CBM)”在本文中可互换使用。SBD可被分成九个CBM家族。作为能量来源,淀粉被大量不同淀粉分解酶降解。然而,其中只有约10%能够结合并降解生淀粉。这些酶通常具有称为淀粉结合结构域的不同序列结构模块,该淀粉结合结构域介导对淀粉颗粒的附着。SBD是指优先结合淀粉(多糖)底物或麦芽糖、α-、β和γ-环糊精等的氨基酸序列。它们通常是存在于约10%微生物淀粉分解酶中的大约100个氨基酸残基的基序。
子序列:术语“子序列”是指具有从成熟多肽编码序列的5’和/或3’端缺失的一个或多个(例如,若干个)核苷酸的多核苷酸;其中子序列编码具有α-淀粉酶活性的片段。
纺织物护理有益效果:如本文所用,术语“纺织物护理有益效果”被定义为不与催化去污或防止污渍再沉积直接相关,对于酶洗净力有益效果也很重要。此类纺织物护理有益效果的示例是防止或减少从一种纺织物到另一种纺织物或相同纺织物的另一部分的染料转移(染料转移抑制);从纺织物表面去除突出或断裂的纤维以减少起球倾向或去除已经存在的球粒或绒毛(抗起球);改善纺织物柔软性;纺织物的颜色澄清;以及去除截留在纺织物的纤维中的颗粒污渍。酶漂白是另外一种酶洗净力有益效果,其中催化活性一般用于催化漂白组分诸如过氧化氢或其他过氧化物或其他漂白物质的形成。
变体:如本文所用,术语“变体”是指在一个或多个(例如,若干个)位置处包含修饰(即,替换、插入和/或缺失)的具有α-淀粉酶活性的多肽。替换是指占据某一位置的氨基酸被不同的氨基酸替代;缺失是指占据某一位置的氨基酸的移除;并且插入是指邻近占据某一位置的氨基酸并紧接在该氨基酸之后添加氨基酸。该变体具有SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14的多肽中的一种或多种多肽的α-淀粉酶活性的至少20%,例如至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或至少100%。
极高严格性条件:术语“极高严格性条件”是指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言,遵循标准Southern印迹规程,在42℃下在5XSSPE、0.3%SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精DNA和50%甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。最终使用2X SSC、0.2%SDS在70℃下洗涤载体材料三次,每次15分钟。
极低严格性条件:术语“极低严格性条件”是指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言,遵循标准Southern印迹规程,在42℃下在5XSSPE、0.3%SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精DNA和25%甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。最终使用2X SSC、0.2%SDS在45℃下洗涤载体材料三次,每次15分钟。
洗涤性能:在本发明上下文中,术语“洗涤性能”用作在例如衣物或硬质表面清洁(诸如盘碟洗涤)期间酶去除存在于待清洁的物体上的淀粉或含淀粉的污渍的能力。术语“洗涤性能”包括一般的清洁例如如盘碟洗涤中的硬质表面清洁,但也包括对纺织物诸如衣物的洗涤性能,并且也包括工业和机构清洁。可通过计算所谓的强度值来定量洗涤性能。
野生型酶:术语“野生型”α-淀粉酶是指由天然存在的微生物(诸如存在于自然界中的细菌、酵母或丝状真菌)表达的α-淀粉酶。当亲本酶不是变体酶时,术语“野生型酶”和“亲本酶”可互换使用。
命名
就本发明的目的而言,命名[Y/F]是指该位置处的氨基酸可以是酪氨酸(Try,Y)或苯丙氨酸(Phe,F)。同样,命名[V/G/A/I]是指该位置处的氨基酸可以是缬氨酸(Val,V)、甘氨酸(Gly,G)、丙氨酸(Ala,A)或异亮氨酸(Ile,I)以及如本文所述的其他组合等。除非另有说明,否则氨基酸X被定义为使得其可为20种天然氨基酸的任一种。
变体设计的规则
就本发明的目的而言,除非另有说明,否则SEQ ID NO:1中公开的多肽用于确定另一种α-淀粉酶中对应的氨基酸残基。另选地,SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3中公开的多肽可用于确定另一种α-淀粉酶中对应的氨基酸残基。将另一种α-淀粉酶的氨基酸序列与SEQ IDNO:1中公开的多肽进行比对,并且基于该比对,确定与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3中公开的多肽中的任何氨基酸残基相对应的氨基酸位置编号,其使用了Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.48:443-453)确定,如在EMBOSS程序包的Needle程序中实现(EMBOSS:The European Molecular Biology Open Software Suite,Rice等人,2000,Trends Genet.16:276-277),优选3.0.0版或更新版。
另一种α-淀粉酶中对应的氨基酸残基的鉴定可通过将多个多肽序列用若干个计算机程序进行比对来确定,程序包括但不限于MUSCLE(基于对数期望的多重序列比较(multiple sequence comparison by log-expectation);版本3.5或更新版;Edgar,2004,Nucleic Acids Research 32:1792-1797),MAFFT(版本6.857或更新版;Katoh和Kuma,2002,Nucleic Acids Research 30:3059-3066;Katoh等人,2005,Nucleic AcidsResearch 33:511-518;Katoh和Toh,2007,Bioinformatics 23:372-374;Katoh等人,2009,Methods in Molecular Biology 537:39-64;Katoh和Toh,2010,Bioinformatics 26: 1899-1900),和采用ClustalW的EMBOSS EMMA(1.83或更新版;Thompson等人,1994,NucleicAcids Research 22:4673-4680),使用它们各自的默认参数。
当另一酶与SEQ ID NO:1的多肽存在分化由此使得传统的基于序列的比较未检测出它们的关系(Lindahl和Elofsson,2000,J.Mol.Biol.295:613-615),可使用其他成对序列比较算法。使用利用了多肽家族的概率表现(谱)来检索数据库的检索程序能够获得基于序列的检索中的更高灵敏度。例如,PSI-BLAST程序通过迭代的数据库搜索过程来生成谱,并且能够检测远缘同系物(Atschul等人,1997,Nucleic Acids Res.25:3389-3402)来实现。
如果多肽的家族或超家族在蛋白质结构数据库中具有一个或多个代表,则能够实现甚至更高的敏感性。诸如GenTHREADER(Jones,1999,J.Mol.Biol.287:797-815;McGuffin和Jones,2003,Bioinformatics 19:874-881)的程序利用多种来源的信息(PSI-BLAST、二级结构预测、结构比对谱和溶解能)作为预测查询序列的结构性折叠的神经网络的输入。类似地,Gough等人,2000,J.Mol.Biol.313:903-919的方法能够被用于将未知结构的序列与SCOP数据库中存在的超家族模型比对。这些比对可以继而用于生成多肽的同源性模型,且可以使用多种为此目的开发的工具来评估这类模型的精确性。
对于已知结构的蛋白质,已经有数种用于检索和生成其结构性比对的工具和资源。例如,蛋白质的SCOP超家族已经过了结构性比对,并且可以获取和下载那些比对结果。可使用多种算法诸如距离比对矩阵(Holm和Sander,1998,Proteins 33:88-96)或组合延伸(Shindyalov和Bourne,1998,Protein Engineering 11:739-747)来比对两个或多个蛋白结构,这些算法的实现可以另外用于使用感兴趣的结构来检索结构数据库以发现可能的结构同系物(例如,Holm和Park,2000,Bioinformatics 16:566-567)。
在对这些变体的描述中,使用下述命名法以便于参考。采用了公认的IUPAC单字母或三字母氨基酸缩写。
替换:对于氨基酸替换,使用下列命名法:初始氨基酸、位点、替换后的氨基酸。因此,在位置226处用丙氨酸替换苏氨酸被命名为“Thr226Ala”或“T226A”。在给定位置处的氨基酸可被替换为任何其他氨基酸的情况下,其被命名为T226ACDEFGHIKLMNPQRSWVY。因此,这意指可用选自A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、W、V或Y的一种氨基酸替换位置226处的苏氨酸。同样,在给定位置处的氨基酸可被替换为选自特定组氨基酸的一种氨基酸(例如可用酪氨酸、苯丙氨酸或组氨酸中的任一种替换位置226处的苏氨酸)的情况下,其被命名为T226YFH。给定位置处的不同改变还可以由逗号分隔,例如“Arg170Tyr,Glu”或“R170Y,E”代表在位置170处用酪氨酸或谷氨酸替换精氨酸。因此,“Tyr167Gly,Ala+Arg170Gly,Ala”指定以下变体:“Tyr167Gly+Arg170Gly”、“Tyr167Gly+Arg170Ala”、“Tyr167Ala+Arg170Gly”和“Tyr167Ala+Arg170Ala”。
多个突变由加号(“+”)分隔,例如“Gly205Arg+Ser411Phe”或“G205R+S411F”代表分别在位置205和411处用精氨酸(R)替换甘氨酸(G)以及用苯丙氨酸(F)替换丝氨酸(S)。
缺失。对于氨基酸缺失,使用以下命名法:原始氨基酸,位置,*。因此,位置195处的甘氨酸的缺失被命名为“Gly195*”或“G195*”。多个缺失由加号(“+”)分隔,例如“Gly195*+Ser411*”或“G195*+S411*”。
插入。对于氨基酸插入,使用以下命名法:原始氨基酸,位置,原始氨基酸,插入的氨基酸。因此,在位置195处的甘氨酸之后插入赖氨酸被命名为“Gly195GlyLys”或“G195GK”。多个氨基酸的插入被命名为[初始氨基酸,位置,初始氨基酸,插入的氨基酸#1,插入的氨基酸#2等]。例如,在位置195上的甘氨酸之后插入赖氨酸和丙氨酸被表示为“Gly195GlyLysAla”或“G195GKA”。
在这类情况下,通过在插入氨基酸残基之前的氨基酸残基位置号上添加小写字母,来对插入氨基酸残基编号。如此,在上述示例中,序列将是:
亲本: | 变体: |
195 | 195 195a 195b |
G | G-K-A |
多个改变。包含多个改变的变体由加号(“+”)分隔,例如“Arg170Tyr+Gly195Glu”或“R170Y+G195E”代表分别在位置170和195处用酪氨酸替换精氨酸以及用谷氨酸替换甘氨酸
具体实施方式
本发明提供了一种清洁组合物或方法,该清洁组合物包含:
(a)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处包含修饰的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体与亲本多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性;以及
清洁助剂。
亲本α-淀粉酶
具有淀粉酶活性的多肽可以是融合(杂交体)多肽。
具有α-淀粉酶活性的多肽可包含与SEQ ID NO:1、2、3、4或5中的任何一者的A结构域具有至少60%序列同一性的A结构域、与SEQ ID NO:1、2、10、11或12中的任何一者的B结构域具有至少60%序列同一性的B结构域以及与SEQ ID NO:1、2、3、4或5中的任何一者的C结构域具有至少60%序列同一性的C结构域。
具有α-淀粉酶活性的多肽可包含具有α-淀粉酶活性的亲本多肽的杂交体α-淀粉酶,该杂交体α-淀粉酶包含A结构域、B结构域和C结构域,其中所述杂交体是融合多肽。
合适的A结构域与SEQ ID NO:1的A结构域具有至少60%的序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性。
合适的A结构域与SEQ ID NO:2的A结构域具有至少60%的序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性。
合适的A结构域与SEQ ID NO:3的A结构域具有至少60%的序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性。
合适的A结构域与SEQ ID NO:4的A结构域具有至少60%的序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性。
合适的A结构域与SEQ ID NO:5的A结构域具有至少60%的序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性。
合适的B结构域与SEQ ID NO:1的B结构域具有至少60%的序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性。
合适的B结构域与SEQ ID NO:2的B结构域具有至少60%的序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性。
合适的B结构域与SEQ ID NO:10的B结构域具有至少60%的序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性。
合适的B结构域与SEQ ID NO:11的B结构域具有至少60%的序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性。
合适的B结构域与SEQ ID NO:12的B结构域具有至少60%的序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性。
合适的C结构域与SEQ ID NO:1的C结构域具有至少60%的序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性。
合适的C结构域与SEQ ID NO:2的C结构域具有至少60%的序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性。
合适的C结构域与SEQ ID NO:3的C结构域具有至少60%的序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性。
合适的C结构域与SEQ ID NO:4的C结构域具有至少60%的序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性。
合适的C结构域与SEQ ID NO:5的C结构域具有至少60%的序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性。
可通过将一种α-淀粉酶的B结构域或其一部分替换为另一种α-淀粉酶的B结构域或其一部分来产生本文中可用的α-淀粉酶。还可通过将一种α-淀粉酶的A结构域和C结构域或其一部分替换为另一种α-淀粉酶的A结构域和C结构域或其一部分来产生α-淀粉酶。
对于B结构域已被确定为氨基酸残基109-206的芽孢杆菌属(Bacillus)α-淀粉酶(SEQ ID NO:4),待由另一种α-淀粉酶的对应序列替代的序列从位置93-113的范围内的一个位置开始并在位置195-215的范围内的一个位置结束,例如从位置97-109的范围内的一个位置开始并在位置199-215的范围内的一个位置结束,或从位置100-106的范围内的一个位置开始并在位置202-208的范围内的一个位置结束,特别是SEQ ID NO:12的位置109-206。芽孢杆菌属α-淀粉酶的A和C结构域分别被确定为氨基酸残基1-108(A1)+207-396(A2)和397-485。本发明的α-淀粉酶可包含A1结构域,该A1结构域从位置1-5的范围内的一个位置开始并在位置94-114的范围内的一个位置结束,例如从位置1-3的范围内的一个位置开始并在位置99-110的范围内的一个位置结束,或从位置1-3的范围内的一个位置开始并在位置104-109的范围内的一个位置结束,特别是SEQ ID NO:4的位置1-108。本发明的α-淀粉酶可包含A2和C结构域,该A2和C结构域从位置201-221的范围内的一个位置开始并在位置478-514的范围内的一个位置结束,例如从位置203-211的范围内的一个位置开始并在位置480-510的范围内的一个位置结束,或从位置205-216的范围内的一个位置开始并在位置482-484的范围内的一个位置结束,特别是SEQ ID NO:4的位置207-485。
杂交体多肽可包含SEQ ID NO:1或2或SEQ ID NO:3中所阐述的氨基酸序列或由其组成。在另一个实施方案中,杂交体多肽是SEQ ID NO:1、2或3、或者1或2的多肽的等位变体。
在一个优选的实施方案中,亲本多肽可包含SEQ ID NO:1中所阐述的氨基酸序列或由其组成。如本文其他地方所述,亲本多肽可以是具有α-淀粉酶活性并且与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14中的任何一者中所阐述的氨基酸序列中的任何一个氨基酸序列具有至少60%序列同一性的任何多肽。
在一个优选的实施方案中,亲本多肽与SEQ ID NO:2中所阐述的氨基酸序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性,并且该亲本多肽具有α-淀粉酶活性。在一个实施方案中,亲本多肽的氨基酸序列有多达10个氨基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)不同于SEQ ID NO:1-14中所阐述的氨基酸序列。
根据本发明,1.0的值对应于针对亲本多肽观察到的性能。高于1.0的值指示与亲本多肽相比所测试的杂交体的性能改善。因此,>1.0的任何值指示与亲本多肽相比杂交体多肽的特性改善,诸如增加的比活性。
在一个方面,杂交体多肽是亲本多肽。
亲本α-淀粉酶可以是与SEQ ID No:1-14的多肽中的任何一种多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性的多肽。
在一个方面,亲本与SEQ ID NO:1的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%或100%的序列同一性,该亲本具有α-淀粉酶活性。在一个实施方案中,亲本的氨基酸序列有不超过十个氨基酸,例如五个氨基酸、四个氨基酸、三个氨基酸、两个氨基酸和一个氨基酸不同于SEQ ID NO:1的多肽。
亲本优选地包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或由其组成。在一个实施方案中,亲本包含SEQ ID NO:1的多肽或由其组成。在另一个实施方案中,亲本是SEQ ID NO:1的多肽的等位变体。
在一个方面,亲本与SEQ ID NO:2的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%或100%的序列同一性,该亲本具有α-淀粉酶活性。在一个实施方案中,亲本的氨基酸序列有不超过十个氨基酸,例如五个氨基酸、四个氨基酸、三个氨基酸、两个氨基酸和一个氨基酸不同于SEQ ID NO:2的多肽。
亲本优选地包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或由其组成。在一个实施方案中,亲本包含SEQ ID NO:2的多肽或由其组成。在另一个实施方案中,亲本是SEQ ID NO:2的多肽的等位变体。
在一个方面,亲本与SEQ ID NO:3的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%或100%的序列同一性,该亲本具有α-淀粉酶活性。在一个实施方案中,亲本的氨基酸序列有不超过十个氨基酸,例如五个氨基酸、四个氨基酸、三个氨基酸、两个氨基酸和一个氨基酸不同于SEQ ID NO:3的多肽。
亲本优选地包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列或由其组成。在一个实施方案中,亲本包含SEQ ID NO:3的多肽或由其组成。在另一个实施方案中,亲本是SEQ ID NO:3的多肽的等位变体。
在一个方面,亲本与SEQ ID NO:4的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%或100%的序列同一性,该亲本具有α-淀粉酶活性。在一个实施方案中,亲本的氨基酸序列有不超过十个氨基酸,例如五个氨基酸、四个氨基酸、三个氨基酸、两个氨基酸和一个氨基酸不同于SEQ ID NO:4的多肽。
亲本优选地包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列或由其组成。在一个实施方案中,亲本包含SEQ ID NO:4的多肽或由其组成。在另一个实施方案中,亲本是SEQ ID NO:4的多肽的等位变体。
在一个方面,亲本与SEQ ID NO:5的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%或100%的序列同一性,该亲本具有α-淀粉酶活性。在一个实施方案中,亲本的氨基酸序列有不超过十个氨基酸,例如五个氨基酸、四个氨基酸、三个氨基酸、两个氨基酸和一个氨基酸不同于SEQ ID NO:5的多肽。
亲本优选地包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列或由其组成。在一个实施方案中,亲本包含SEQ ID NO:5的多肽或由其组成。在另一个实施方案中,亲本是SEQ ID NO:5的多肽的等位变体。
在一个方面,亲本与SEQ ID NO:6的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%或100%的序列同一性,该亲本具有α-淀粉酶活性。在一个实施方案中,亲本的氨基酸序列有不超过十个氨基酸,例如五个氨基酸、四个氨基酸、三个氨基酸、两个氨基酸和一个氨基酸不同于SEQ ID NO:6的多肽。
亲本优选地包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列或由其组成。在一个实施方案中,亲本包含SEQ ID NO:6的多肽或由其组成。在另一个实施方案中,亲本是SEQ ID NO:6的多肽的等位变体。
在一个方面,亲本与SEQ ID NO:7的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%或100%的序列同一性,该亲本具有α-淀粉酶活性。在一个实施方案中,亲本的氨基酸序列有不超过十个氨基酸,例如五个氨基酸、四个氨基酸、三个氨基酸、两个氨基酸和一个氨基酸不同于SEQ ID NO:7的多肽。
亲本优选地包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列或由其组成。在一个实施方案中,亲本包含SEQ ID NO:7的多肽或由其组成。在另一个实施方案中,亲本是SEQ ID NO:7的多肽的等位变体。
在一个方面,亲本与SEQ ID NO:8的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%或100%的序列同一性,该亲本具有α-淀粉酶活性。在一个实施方案中,亲本的氨基酸序列有不超过十个氨基酸,例如五个氨基酸、四个氨基酸、三个氨基酸、两个氨基酸和一个氨基酸不同于SEQ ID NO:8的多肽。
亲本优选地包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列或由其组成。在一个实施方案中,亲本包含SEQ ID NO:8的多肽或由其组成。在另一个实施方案中,亲本是SEQ ID NO:8的多肽的等位变体。
在一个方面,亲本与SEQ ID NO:9的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%或100%的序列同一性,该亲本具有α-淀粉酶活性。在一个实施方案中,亲本的氨基酸序列有不超过十个氨基酸,例如五个氨基酸、四个氨基酸、三个氨基酸、两个氨基酸和一个氨基酸不同于SEQ ID NO:9的多肽。
亲本优选地包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列或由其组成。在一个实施方案中,亲本包含SEQ ID NO:9的多肽或由其组成。在另一个实施方案中,亲本是SEQ ID NO:9的多肽的等位变体。
在一个方面,亲本与SEQ ID NO:10的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%或100%的序列同一性,该亲本具有α-淀粉酶活性。在一个实施方案中,亲本的氨基酸序列有不超过十个氨基酸,例如五个氨基酸、四个氨基酸、三个氨基酸、两个氨基酸和一个氨基酸不同于SEQ ID NO:10的多肽。
亲本优选地包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列或由其组成。在一个实施方案中,亲本包含SEQ ID NO:10的多肽或由其组成。在另一个实施方案中,亲本是SEQ ID NO:10的多肽的等位变体。
在一个方面,亲本与SEQ ID NO:11的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%或100%的序列同一性,该亲本具有α-淀粉酶活性。在一个实施方案中,亲本的氨基酸序列有不超过十个氨基酸,例如五个氨基酸、四个氨基酸、三个氨基酸、两个氨基酸和一个氨基酸不同于SEQ ID NO:11的多肽。
亲本优选地包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列或由其组成。在一个实施方案中,亲本包含SEQ ID NO:11的多肽或由其组成。在另一个实施方案中,亲本是SEQ ID NO:11的多肽的等位变体。
在一个方面,亲本与SEQ ID NO:12的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%或100%的序列同一性,该亲本具有α-淀粉酶活性。在一个实施方案中,亲本的氨基酸序列有不超过十个氨基酸,例如五个氨基酸、四个氨基酸、三个氨基酸、两个氨基酸和一个氨基酸不同于SEQ ID NO:12的多肽。
亲本优选地包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列或由其组成。在一个实施方案中,亲本包含SEQ ID NO:12的多肽或由其组成。在另一个实施方案中,亲本是SEQ ID NO:12的多肽的等位变体。
在一个方面,亲本与SEQ ID NO:13的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%或100%的序列同一性,该亲本具有α-淀粉酶活性。在一个实施方案中,亲本的氨基酸序列有不超过十个氨基酸,例如五个氨基酸、四个氨基酸、三个氨基酸、两个氨基酸和一个氨基酸不同于SEQ ID NO:13的多肽。
亲本优选地包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列或由其组成。在一个实施方案中,亲本包含SEQ ID NO:13的多肽或由其组成。在另一个实施方案中,亲本是SEQ ID NO:13的多肽的等位变体。
在一个方面,亲本与SEQ ID NO:14的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%或100%的序列同一性,该亲本具有α-淀粉酶活性。在一个实施方案中,亲本的氨基酸序列有不超过十个氨基酸,例如五个氨基酸、四个氨基酸、三个氨基酸、两个氨基酸和一个氨基酸不同于SEQ ID NO:14的多肽。
亲本优选地包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列或由其组成。在一个实施方案中,亲本包含SEQ ID NO:14的多肽或由其组成。在另一个实施方案中,亲本是SEQ ID NO:14的多肽的等位变体。
SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ IDNO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14的氨基酸序列或其片段可用于设计核酸探针以根据本领域熟知的方法来鉴定和克隆编码来自不同属或种的菌株的亲本的DNA。具体地,此类探针可用于遵循标准Southern印迹规程与感兴趣的属或种的基因组或cDNA进行杂交,以便鉴定和分离其中的对应基因。此类探针可比整个序列短得多,但长度应为至少14个,例如至少25个、至少35个或至少70个核苷酸。优选地,核酸探针的长度为至少100个核苷酸,例如长度为至少200个核苷酸、至少300个核苷酸、至少400个核苷酸、至少500个核苷酸、至少600个核苷酸、至少700个核苷酸、至少800个核苷酸或至少900个核苷酸。可使用DNA和RNA探针两者。探针通常被标记以便检测对应基因(例如,标记了32P、3H、35S、生物素或亲和素)。本发明涵盖此类探针。
可在从此类其他菌株制备的基因组DNA或cDNA文库中筛选与上述探针杂交并且编码亲本的DNA。可通过琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳或其他分离技术来分离来自此类其他菌株的基因组或其他DNA。可将来自文库的DNA或分离的DNA转移并固定到硝酸纤维素或其他合适的载体材料上。为了鉴定与亲本或其子序列杂交的克隆或DNA,将该载体材料用于Southern印迹。
就本发明的目的而言,杂交指示该多核苷酸在低至极高严格性条件下杂交到与编码SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQID NO:7、SEQ ID NO:8的多核苷酸或其子序列相对应的标记的核苷酸探针。可使用例如X射线胶片或本领域已知的任何其他检测手段来检测探针与之杂交的分子。
在一个方面,核酸探针是编码SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8的多肽或其片段的多核苷酸。
对于长度为至少100个核苷酸的长探针而言,极低至极高严格性条件被定义为遵循标准Southern印迹规程,在42℃下在5X SSPE、0.3%SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精DNA和对于极低严格性和低严格性而言25%甲酰胺或对于中等严格性和中高严格性而言35%甲酰胺或对于高严格性和极高严格性而言50%甲酰胺中预杂交和杂交,最好进行12至24小时。最终使用2X SSC、0.2%SDS在45℃(极低严格性)、50℃(低严格性)、55℃(中等严格性)、60℃(中高严格性)、65℃(高严格性)或70℃(极高严格性)下洗涤载体材料三次,每次15分钟。
对于长度为约15个核苷酸至约70个核苷酸的短探针而言,严格性条件被定义为遵循标准Southern印迹规程,在比使用根据Bolton和McCarthy(1962,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 48:1390)的计算法计算的Tm低约5℃至约10℃下在0.9M NaCl、0.09M Tris-HCl pH 7.6、6mM EDTA、0.5%NP-40、1X邓哈特溶液、1mM焦磷酸钠、1mM磷酸二氢钠、0.1mM ATP和0.2mg/ml酵母RNA中预杂交和杂交,最好进行12至24小时。最终在比所计算的Tm低5℃至10℃下在6X SCC加0.1%SDS中洗涤载体材料一次,持续15分钟,并且使用6XSSC洗涤两次,每次15分钟。
亲本可得自任何属的微生物。就本发明的目的而言,如本文所用,与给定来源相关的术语“得自”将指由多核苷酸编码的亲本由该来源或者由来自该来源的多核苷酸已被插入至其中的菌株产生。在一个方面,亲本被分泌到细胞外。
亲本可以是细菌的α-淀粉酶。例如,亲本可以是革兰氏阳性细菌多肽诸如芽孢杆菌属、梭菌属(Clostridium)、肠球菌属(Enterococcus)、地芽孢杆菌属(Geobacillus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、乳球菌属(Lactococcus)、海洋芽孢杆菌属(Oceanobacillus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、链球菌属(Streptococcus)、或链霉菌属(Streptomyces)α-淀粉酶;或革兰氏阴性细菌多肽诸如弯曲杆菌属(Campylobacter)、大肠杆菌(E.coli)、黄杆菌属(Flavobacterium)、梭杆菌属(Fusobacterium)、螺杆菌属(Helicobacter)、泥杆菌属(Ilyobacter)、奈瑟氏菌属(Neisseria)、假单胞菌属(Pseudomonas)、沙门氏菌属(Salmonella)或脲原体属(Ureaplasma)α-淀粉酶。
在一个方面,亲本是嗜碱芽孢杆菌(Bacillus alkalophilus)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、短芽孢杆菌(Bacillus brevis)、环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)、克劳氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)、凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)、坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)、灿烂芽孢杆菌(Bacillus lautus)、迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、或苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)α-淀粉酶。
在另一方面,亲本是似马链球菌(Streptococcus equisimilis)、酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)、乳房链球菌(Streptococcus uberis)、或马链球菌兽痕亚种(Streptococcus equi subsp.Zooepidemicus)α-淀粉酶。
在另一方面,亲本是不产色链霉菌(Streptomyces achromogenes)、除虫链霉菌(Streptomyces avermitilis)、天蓝链霉菌(Streptomyces coelicolor)、灰色链霉菌(Streptomyces griseus)、或变铅青链霉菌(Streptomyces lividans)α-淀粉酶。
在另一个方面,亲本是芽孢杆菌属(Bacillus sp.)α-淀粉酶,例如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13或SEQID NO:14的α-淀粉酶。
应当理解的是,对于前述菌种,本发明涵盖了完全和不完全阶段,和其它分类学的等同物,例如无性型,而无论它们已知的种名如何。本领域的技术人员会容易地识别适合的等同物的身份。
公众能够从许多培养物保藏机构容易地取得这些种的菌株,所述保藏机构如美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)(ATCC)、德意志微生物和细胞培养物保藏中心(Deutsche Sammlung vonMikroorganismen und Zellkulturen GmbH)(DSM)、真菌菌种保藏中心(Centraalbureau Voor Schimmelcultures)(CBS)、和农业研究机构专利培养物保藏中心北区研究中心(Agricultural Research Service PatentCulture Collection,Northern Regional Research Center)(NRRL)。
也可以使用上述的探针从其他来源,包括从自然界(例如,土壤、堆肥、水等)分离的微生物或直接从自然物质(例如,土壤、堆肥、水等)中获得的DNA样品鉴定和获得亲本。用于从天然生境分离微生物和直接分离DNA的技术为本领域内的人们所熟知。随后可通过相似地筛选另外的微生物或混合的DNA样品的基因组或cDNA文库来得到编码亲本的多核苷酸。一旦用探针检测到编码亲本的多核苷酸,就能够使用本领域普通技术人员已知的技术分离或克隆该多核苷酸(参见,例如,Sambrook等人,1989,见上)。
亲本可以是杂交体多肽,一种多肽的部分在其中被融合到另一种多肽的部分的N末端或C末端。
亲本还可以是融合多肽或可裂解的融合多肽,一种多肽在其中被融合到另一种多肽的N末端或C末端。通过使编码一种多肽的多核苷酸与编码另外的多肽的多核苷酸融合,产生融合的多肽。用于制备融合多肽的技术是本领域已知的,并且包括连接编码多肽的编码序列以使它们在阅读框中,和使所述融合多肽的表达在相同启动子和终止子的控制下。融合蛋白也可以使用内含肽技术构建,该技术中融合是翻译后创建的(Cooper等人,1993,EMBO J.12:2575-2583;Dawson等人,1994,Science 266:776-779)。
融合多肽还可包含两种多肽之间的裂解位点。融合多肽被分泌时,该位点被裂解,从而释放两种多肽。裂解位点的示例包括但不限于公布于以下中的位点:Martin等人,2003,J.Ind.Microbiol.Biotechnol.3:568-576;Svetina等人,2000,J.Biotechnol.76:245-251;Rasmussen-Wilson等人,1997,Appl.Environ.Microbiol.63:3488-3493;Ward等人,1995,Biotechnology 13:498-503;以及Contreras等人,1991,Biotechnology 9:378-381;Eaton等人,1986,Biochemistry 25:505-512;Collins-Racie等人,1995,Biotechnology 13:982-987;Carter等人,1989,Proteins:Structure,Function,andGenetics 6:240-248;以及Stevens,2003,Drug Discovery World 4:35-48。
变体的制备
本发明涉及用于获得清洁组合物的方法,所述方法包括获得具有α-淀粉酶活性的变体,其包括(a)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处向亲本α-淀粉酶中引入修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,其中每种修饰独立地为替换或缺失,并且所述变体具有α-淀粉酶活性;以及(b)回收所述变体,并且将所述变体与清洁助剂混合。
用于获得具有α-淀粉酶活性的变体的方法可包括(a)在与以下如SEQ ID NO:1中所阐述的氨基酸序列的位置相对应的一个或多个位置处向亲本α-淀粉酶中引入修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,其中每种修饰独立地为替换或缺失,并且所述变体具有α-淀粉酶活性;以及(b)回收所述变体。
在一个方面,用于获得具有α-淀粉酶活性的变体的方法包括(a)在与以下使用SEQID NO:1进行编号的如SEQ ID NO:2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14中的任何一者中所阐述的氨基酸序列的位置相对应的一个或多个位置处向亲本α-淀粉酶中引入修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中每种修饰独立地为替换或缺失,并且所述变体具有α-淀粉酶活性;以及(b)回收所述变体。
在一个实施方案中,该修饰为替换。在一个实施方案中,该修饰为缺失。
在另一个实施方案中,用于获得具有α-淀粉酶活性的变体的方法包括(a)在一个或多个位置处向亲本α-淀粉酶中引入修饰,其中该修饰选自如SEQ ID NO:1中所阐述的氨基酸序列的H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,以及(b)回收该变体。
在另一个实施方案中,用于获得具有α-淀粉酶活性的变体的方法包括(a)在一个或多个位置处向亲本α-淀粉酶中引入替换,其中该替换选自使用SEQ ID NO:1进行编号的如SEQ ID NO:2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14中所阐述的氨基酸序列的N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180Q、R180S、S181L、S181T、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,以及(b)回收该变体。
在一个实施方案中,该方法还包括在一个或多个位置中向亲本α-淀粉酶引入缺失,其中该缺失选自:使用SEQ ID NO:1进行编号的SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14的多肽的H1*、H2*、R180*、S181*、T182*和G183*,以及回收该变体。
变体可以使用本领域中已知的任何诱变方法来制备,例如定点诱变、合成基因构建、半合成基因构建、随机诱变、改组等等。
定点诱变是其中在编码亲本的多核苷酸中的一个或多个限定位点制造一个或多个(若干个)突变的技术。
定点诱变能在体外通过PCR完成,所述PCR涉及包含期望突变的寡核苷酸引物的使用。定点诱变也能在体外通过盒诱变进行,所述盒诱变涉及限制性酶在包含编码亲本的多核苷酸的质粒中的一个位点上裂解以及随后将包含突变的寡核苷酸连入多核苷酸中。通常消化质粒和寡核苷酸的限制性酶是相同的,使得质粒的粘性末端和插入序列彼此连接。参见,例如,Scherer和Davis,1979,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 76:4949-4955;和Barton等人,1990,Nucleic Acids Res.18:7349-4966。
定点诱变也可通过本领域已知的方法在体内完成。参见,例如,美国专利申请公布No.2004/0171154;Storici等人,2001,Nature Biotechnol.19:773-776;Kren等人,1998,Nat.Med.4:285-290;以及Calissano和Macino,1996,Fungal Genet.Newslett.43:15-16。
本发明能够使用任何定点诱变程序。有许多可利用的商品化试剂盒能够用于制备变体。
合成基因构建需要体外合成设计的多核苷酸分子以编码受关注的多肽。基因合成能够利用多个技术进行,诸如Tian等人(2004,Nature 432:1050-1054)描述的基于多元微芯片的技术,以及其中在可光编程的微流体芯片上合成和装配寡核苷酸的类似技术。
能使用已知的诱变、重组、和/或重排方法生成并测试单个或多个氨基酸替换、缺失、和/或插入,随后进行有关的筛选程序,诸如那些由以下文献公开的程序:Reidhaar-Olson和Sauer,1988,Science 241:53-57;Bowie和Sauer,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:2152-2156;WO 95/17413;或WO 95/22625。能够使用的其它方法包括易错PCR、噬菌体展示(例如,Lowman等人,1991,Biochemistry 30:10832-10837美国专利5,223,409;WO 92/06204)和区域定点诱变(Derbyshire等人,1986,Gene 46:145;Ner等人,1988,DNA 7:127)。
诱变/重排方法可以和高通量的、自动的筛选方法相结合,以检测宿主细胞表达的克隆的、诱变处理的多肽的活性(Ness等人,1999,Nature Biotechnology 17:893-896)。编码活性多肽的诱变DNA分子可从宿主细胞中回收并使用本领域的标准方法快速测序。这些方法允许多肽中单个氨基酸残基重要性的快速确定。
半合成基因构建通过组合使用合成基因构建、和/或定点诱变、和/或随机诱变、和/或改组来完成。半合成构建的典型是通过利用合成的多核苷酸片段与PCR技术相结合的方法。因此可从头合成限定的基因区域,而其它区域可使用位点特异性诱变引物进行扩增,而其它区域可经过易错PCR或非易错PCR进行扩增。然后多核苷酸亚序列可以被重排。
α-淀粉酶变体
用于本文中的亲本α-淀粉酶的合适α-淀粉酶变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
α-淀粉酶变体可在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
α-淀粉酶变体可在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14中的任何一者具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
合适的α-淀粉酶变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14中的任何一者具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中α-淀粉酶变体具有相对于所述亲本多肽改善的特性。
合适的α-淀粉酶变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且该变体具有α-淀粉酶活性并且其中α-淀粉酶变体具有相对于所述亲本多肽改善的特性。
在一个方面,在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处包含修饰的α-淀粉酶变体:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且该变体具有α-淀粉酶活性并且其中α-淀粉酶变体具有相对于所述亲本多肽改善的特性并且其中所述亲本多肽是SEQ ID NO:1、2或3。
优选的变体与亲本多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。在另一个实施方案中,该变体与具有α-淀粉酶活性的亲本多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
优选的变体与杂交体多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
优选的变体与具有α-淀粉酶活性的杂交体多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
优选的变体与SEQ ID NO:1的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
优选的变体与SEQ ID NO:2的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
优选的变体与SEQ ID NO:3的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
优选的变体与SEQ ID NO:4的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
优选的变体与SEQ ID NO:5的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
优选的变体与SEQ ID NO:6的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
优选的变体与SEQ ID NO:7的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
优选的变体与SEQ ID NO:8的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
优选的变体与SEQ ID NO:9的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
优选的变体与SEQ ID NO:10的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个实施方案中,该变体与SEQ ID NO:11的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个实施方案中,该变体与SEQ ID NO:12的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
优选的变体与SEQ ID NO:13的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
优选的变体与SEQ ID NO:14的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个方面,替换的氨基酸残基不同于该位置中的天然存在的氨基酸残基。在一个实施方案中,该替换选自A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W和Y,前提条件是替换的氨基酸残基不同于该位置中的天然存在的氨基酸残基。
在一个方面,修饰数量为1-50,例如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5,诸如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个修饰。
在一个方面,替换数量为1-50,例如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5,诸如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个替换。
在一个方面,缺失数量为1-50,例如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5,诸如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个缺失。
上述具有替换的变体应被理解为涵盖指定位置处的一个或多个替换的所有可能组合。
在一个方面,α-淀粉酶变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个方面,α-淀粉酶变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个(例如,若干个)位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、475和47694、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的两个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的三个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的四个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的五个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的六个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的七个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的八个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的九个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的十个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的十一个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的十二个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的十三个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的十四个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的十五个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的十六个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、9894、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的十七个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的十八个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的十九个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476475和476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的二十个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的二十一个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的二十二个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的二十三个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的二十四个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的二十五个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的二十六个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的二十七个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的每个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,该变体包含与位置1相对应的位置处的缺失或由其组成。在另一个方面,与位置1相对应的位置处的氨基酸从SEQ ID NO:1的多肽缺失。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的缺失H1*或由其组成
在另一个方面,该变体包含与位置2相对应的位置处的缺失或由其组成。在另一个方面,与位置2相对应的位置处的氨基酸从SEQ ID NO:1的多肽缺失。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的缺失H2*或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置3相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置3相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换N3S或N3D或N3G或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置7相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置7相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换G7A或G7H或G7S或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置26相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置26相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换R26Y或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置31相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置31相对应的位置处的氨基酸被替换为Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换A31S或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置37相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置37相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换R37A或R37N或R37V或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置40相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置40相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换T40N或T40G或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置41相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置41相对应的位置处的氨基酸被替换为Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Thr、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换A41D或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置54相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置54相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换N54S或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置56相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置56相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp或Tyr。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换V56T或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置60相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置60相对应的位置处的氨基酸被替换为Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换A60P或A60V或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置63相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置63相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换L63F或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置72相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置72相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换K72R或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置73相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置73相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换G73L或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置93相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置93相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换K93D或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置94相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置94相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换N94D或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置98相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置98相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换Q98L或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置103相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置103相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp或Tyr。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换V103或V103I或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置104相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置104相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp或Tyr。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换V104M或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置105相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置105相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换M105I或M105L或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置106相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置106相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换N106D或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置109相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置109相对应的位置处的氨基酸被替换为Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换A109G或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置110相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置110相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换G110K或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置111相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置111相对应的位置处的氨基酸被替换为Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换A111G或A111L或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置113相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置113相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换G113A或G113Q或G113S或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置114相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置114相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换T114K或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置116相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置116相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换F116L或F116N或F116Q或F116W或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置117相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置117相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp或Tyr。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换V117G或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置118相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置118相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换D118T或D118Q或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置123相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置123相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换D123N或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置126相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置126相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换N126D或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置128相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置128相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换N128Y或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置131相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置131相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换T131I或T131V或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置132相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置132相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换S132D或S132L或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置134相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置134相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换T134D或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置135相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置135相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换Y135E或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置136相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置136相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换Q136T或Q136K或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置137相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置137相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换I137F或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置138相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置138相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换Q138V或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置140相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置140相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换W140S或W140Y或W140M或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置142相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置142相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换K142E或K142G或K142P或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置144相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置144相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换D144N或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置146相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置146相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换P146H或P146S或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置151相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置151相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换T151A或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置152相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置152相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换Y152L或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置155相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置155相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换F155W或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置159相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置159相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换W159H或W159L或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置160相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置160相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换Y160P或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置165相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置165相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换T165V或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置167相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置167相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换W167A或W167D或W167E或W167F或W167P或W167S或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置169相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置169相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换E169V或E169I或E169Q或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置172相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置172相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换K172G或K172Q或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置173相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置173相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换L173F或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置174相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置174相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换N174K或N174S或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置176相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置176相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换I176V或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置177相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置177相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换Y177D或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置178相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置178相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换K178A或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置180相对应的位置处的缺失或替换或由其组成。在另一个方面,与位置180相对应的位置处的氨基酸从SEQ ID NO:1的多肽缺失。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的缺失R180*或由其组成。在另一个方面,与位置180相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换R180Q或R180S或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置181相对应的位置处的缺失或替换或由其组成。在另一个方面,与位置181相对应的位置处的氨基酸从SEQ ID NO:1的多肽缺失。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的缺失S181*或由其组成。在另一个方面,与位置181相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换S181L或S181T或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置182相对应的位置处的缺失或替换或由其组成。在另一个方面,与位置182相对应的位置处的氨基酸从SEQ ID NO:1的多肽缺失。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的缺失T182*或由其组成。在另一个方面,与位置182相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ IDNO:1的多肽的替换T182D或T182E或T182G或T182I或T182L或T182M或T182S或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置183相对应的位置处的缺失或替换或由其组成。在另一个方面,与位置183相对应的位置处的氨基酸从SEQ ID NO:1的多肽缺失。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的缺失G183*或由其组成。在另一个方面,与位置183相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ IDNO:1的多肽的替换G183P或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置185相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置185相对应的位置处的氨基酸被替换为Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换A186D或A186E或A186K或A186N或A186Q或A186R或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置188相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置188相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换W188C或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置189相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置189相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换E189P或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置193相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置193相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换E193I或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置194相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置194相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换N194F或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置196相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置196相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换N196F或N196I或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置202相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置202相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换F202Y或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置203相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置203相对应的位置处的氨基酸被替换为Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换A203F或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置205相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置205相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换L205F或L205N或L205Q或L205R或L205V或L205Y或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置224相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置224相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换T224F或T244Y或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置225相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置225相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换N225S或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置242相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置242相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换Y242F或Y242L或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置243相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置243相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换S243Q或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置244相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置244相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Ser、Pro、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换F244I或F244L或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置252相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置252相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp或Tyr。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换V252I或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与SEQ ID NO:1的位置256相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置256相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换T256A或T256D或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置258相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置258相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换K258V或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置259相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置259相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换E259G或E259V或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置260相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置260相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换M260D或M260W或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置261相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置261相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换F261K或F261P或F261S或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置266相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置266相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换F266Y或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置276相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置276相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换N276F或N276W或N276Y或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置279相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置279相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换N279S或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置280相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置280相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换K280F或K280W或K280Y或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置283相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置283相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换W283N或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置286相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置286相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换S286K或S286L或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置302相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置302相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换S302T或S302Y或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置303相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置303相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换G303R或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置315相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置315相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换T315A或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置320相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置320相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换H320T或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置321相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置321相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换P321H或P321Y或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置322相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置322相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换M322G或M322Y或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置323相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置323相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换H323A或H323N或H323W或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置346相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置346相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换W346N或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置354相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置354相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换L354V或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置359相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置359相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换E359W或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置361相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置361相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp或Tyr。在另一个方面,该变体包含SEQ IDNO:1的多肽的替换G361M或由其组成。在另一个方面,该变体包含与位置362相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置362相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp或Val。在另一个方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的替换Y362V或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置365相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置365相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Tyr或Trp。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换V365I或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置371相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置371相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换Y371S或Y371N或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置383相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置383相对应的位置处的氨基酸被替换为Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换A383D或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置390相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置390相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换E390A或E390D或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置394相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置394相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换N394W或N394D或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置395相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置395相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换F395Y或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置405相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置405相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换D405G或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置409相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置409相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换I409L或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置414相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置414相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换R414M或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置420相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置420相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换H420A或H420P或H420Q或H420Y或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置422相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置422相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp或Tyr。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换N422V或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置427相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置427相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换T427L或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置455相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置455相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换G455R或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置457相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置457相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换K457N或K457R或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置458相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置458相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换P458S或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置470相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置470相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换N470A或N470M或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置472相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置472相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换S472R或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置473相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置473相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp或Tyr。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换V473C或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置474相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置474相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换N474F或N474L或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置475相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置475相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换G475E或G475K或由其组成。
在另一个方面,该变体包含与位置476相对应的位置处的替换或由其组成。在另一个方面,与位置476相对应的位置处的氨基酸被替换为Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val。在另一个方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的替换G476A或G476E或G476H或由其组成。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处包含修饰:H1、H2、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、R180、S181、T182、G183、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475和G476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:2具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:3具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:4具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:5具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:6具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:7具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:8具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:9具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:10具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:11具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:12具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:13具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个方面,变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
如本文所用,术语“成对缺失”是指两个位置中的氨基酸的缺失。所述两个位置可彼此相邻但也可相隔一个、两个、三个、四个或五个氨基酸。
在一个方面,变体包含亲本多肽的B结构域内的成对缺失。
在一个方面,变体包含具有α-淀粉酶活性的亲本多肽的B结构域内的成对缺失。
如本文所用,术语“成对缺失”是指两个位置中的氨基酸的缺失。所述两个位置可彼此相邻但也可相隔一个、两个、三个、四个或五个氨基酸。
在一个方面,本发明的α-淀粉酶变体在一个或多个位置处包含缺失,该一个或多个位置选自使用SEQ ID NO:1进行编号的R180*+S181*、R180*+T182*、R180*+G183*、S181*+T182*、S181*+G183*和T182*+G183*,优选地R180*+S181*。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:1的变体,该变体在与使用SEQ ID NO:1进行编号的R180*+S181*相对应的位置中包含缺失,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
因此,在一个实施方案中,所述变体包含
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置180、181、182和183相对应的两个或更多个位置处的缺失和/或替换,以及
b)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476相对应的一个或多个位置处的修饰,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个实施方案中,所述变体包含
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180、S181、T182和G183相对应的两个或更多个位置处的缺失和/或替换,以及
b)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置H1、H2*、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475和G476相对应的一个或多个位置处的修饰,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个实施方案中,所述变体包含
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180、S181、T182和G183相对应的两个或更多个位置处的缺失和/或替换,以及
b)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A相对应的一个或多个位置处的修饰,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:1的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:1的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S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NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:1的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:1的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:1的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:1的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:1的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:1的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:1的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
使用SEQ ID NO:1进行编号的H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:2的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:2的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S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ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:2的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:2的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:2的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:2的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:2的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:2的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:2的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
使用SEQ ID NO:1进行编号的H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:3的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:3的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S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ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:3的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:3的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:3的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:3的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:3的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:3的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:3的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
使用SEQ ID NO:1进行编号的H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:4的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:4的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S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NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:4的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:4的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:4的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:4的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:4的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:4的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:4的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
使用SEQ ID NO:1进行编号的H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:5的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:5的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S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NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:5的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:5的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:5的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:5的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:5的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:5的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:5的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
使用SEQ ID NO:1进行编号的H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:6的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:6的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S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ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:6的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:6的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:6的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:6的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:6的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:6的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:6的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
使用SEQ ID NO:1进行编号的H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:7的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:7的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S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NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:7的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:7的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:7的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:7的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:7的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:7的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:7的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
使用SEQ ID NO:1进行编号的H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:8的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:8的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S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NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:8的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:8的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:8的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:8的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:8的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:8的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:8的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
使用SEQ ID NO:1进行编号的H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:9的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:9的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S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NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:9的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:9的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:9的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:9的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:9的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:9的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:9的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
使用SEQ ID NO:1进行编号的H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:10的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:10的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S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NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:10的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:10的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:10的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:10的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:10的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:10的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:10的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
使用SEQ ID NO:1进行编号的H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:11的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:11的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S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ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:11的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:11的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:11的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:11的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:11的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:11的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:11的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
使用SEQ ID NO:1进行编号的H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:12的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:12的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S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ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:12的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:12的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:12的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:12的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:12的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:12的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:12的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
使用SEQ ID NO:1进行编号的H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:13的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:13的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S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ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:13的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:13的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:13的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:13的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:13的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:13的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:13的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
使用SEQ ID NO:1进行编号的H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:14的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:14的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S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NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:14的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:14的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:14的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:14的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:14的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:14的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:14的变体,所述变体包含:
a)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置R180*和S181*相对应的位置处的缺失,以及
使用SEQ ID NO:1进行编号的H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:1的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:H1*+G7A+R180*+S181*、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+N279S、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+G303R+E390A+G476A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:1的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:E169I+R180*+S181*、T114K+R180*+S181*、W167A+R180*+S181*、E169V+R180*+S181*、R180*+S181*+W188C、W167D+R180*+S181*、Y177D+R180*+S181*、W167S+R180*+S181*、W167E+R180*+S181*、W167P+R180*+S181*、R180*+S181*+L205R、R180*+S181*+A203F、W159L+R180*+S181*、Y160P+R180*+S181*、W159H+R180*+S181*、K178A+R180*+S181*、R180*+S181*+G183P、Q136T+R180*+S181*、K142P+R180*+S181*、K142E+R180*+S181*、Y152L+R180*+S181*、A111L+R180*+S181*、G110K+R180*+S181*、A111G+R180*+S181*和V117G+R180*+S181*,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:1的变体,该变体在与使用SEQ ID NO:1进行编号的R180*+S181*+E193I+H323N相对应的位置中包含修饰,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:1的变体,所述变体在与使用SEQ ID NO:1进行编号的G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*、G7H+W167P+R180*+S181*+G455R和Q98L+V103A+G110K+R180*+S181*相对应的位置中包含修饰,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:1的变体,该变体在与使用SEQID NO:1进行编号的A60V+Q98L+G110K+R180*+S181*+A383D相对应的位置中包含修饰,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:1的变体,所述变体在与使用SEQ ID NO:1进行编号的F116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y和Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+T315A相对应的位置中包含修饰,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:1的变体,所述变体在与使用SEQ ID NO:1进行编号的H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K和H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K相对应的位置中包含修饰,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:1的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:H1*+G7A+R180*+S181*+T182S+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+T182L+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+S181L+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180S+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A60P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105I+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182G+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182M+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185K+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185N+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185R+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244L+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W167P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7H+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E390A+G475K和L63F+W140Y+L173F+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+H323W,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:1的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E359W+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+I176V+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M322Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322Y+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+S286K+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+H320T+E390A+G475K、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E359W+E390A+G475K和W140Y+L173F+R180*+S181*+N194F+L205Y+N225S+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323A,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:1的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280F+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280F+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E359W+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M322Y+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+I137F+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7H+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+D405G+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+T256A+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474L、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475E、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474F、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+R414M+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323W+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321Y+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360M+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K和
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:1的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+S286K+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+P146S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302T+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474F+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N422V+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N470A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242L+E259G+N279S+G303R+W346N+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+H420P+G475K、
H1*+G7A+R26Y+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y371S+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A41D+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K和
H1*+G7A+T40G+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:1的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+S181*+T182*+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+T134D+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A和H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:1的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
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H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470A+G475K、
H1*+G7A+S132L+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K和T40N+F116L+D123N+N126D+N128Y+T131I+F155W+R180*+S181*+T182D+E189P+F202Y+K457N+P458S+G475K+G476E,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:1的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:
H1*+G7A+G113A+F116W+D123N+T131V+Q136K+E169Q+K172Q+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+N94D+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+I409L+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474F、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394D+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180Q+S181*+T182*+A185Q+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A和
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:1的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476A、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420P+N474L、
H1*+G7A+G73L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G475K、
N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+V103I+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+P146H+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+R414M+G475K、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180Q+S181*+T182*+A185Q+E189P+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A和
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:1的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+V365I+E390A+N474L、
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H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+N474F、
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H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+Q360Y+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205N+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180Q+S181*+T182*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+Y371N+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+N474L、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G476A、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+Y371N+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+R414M+G476H、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
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H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+H420A+G475K、
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H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K、
N3G+G7A+R37V+D118T+W140M+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+N394D+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K和
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:1的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:
H1*+G7A+N106D+A109G+F116W+D123N+N126D+T131I+T165V+N174S+R180*+S181*+T182I+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+H420A+N474L、
H1*+N3D+G7A+K93R+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+W346N+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476A、
H1*+G7A+R37N+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
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H1*+N3G+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+G361M+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+N174K+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321Y+L354V+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+Q360M+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K和
H1*+G7A+A31S+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:1的变体,所述变体在与使用SEQ ID NO:1进行编号的H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K相对应的位置中包含修饰,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:1的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:
H1*+N54S+V56T+K72R+G113Q+F116Q+D118Q+D123N+N126D+T131I+K142G+D144N+W167F+K172G+N174S+S181T+T182*+G183*+F202Y+E390A+F395Y+K457R+S472R+V473C+G475K,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:1的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:
H1*+N54S+V56T+K72R+N106D+A109G+G113Q+F116Q+D118Q+D123N+N126D+T131I+K142G+D144N+W167F+K172G+N174S+S181T+T182*+G183*+F202Y+E390A+F395Y+K457R+S472R+V473C+G475K,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:2的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:E169I+R180*+S181*、T114K+R180*+S181*、W167A+R180*+S181*、E169V+R180*+S181*、R180*+S181*+W188C、W167D+R180*+S181*、Y177D+R180*+S181*、W167S+R180*+S181*、W167E+R180*+S181*、W167P+R180*+S181*、R180*+S181*+L205R、R180*+S181*+A203F、W159L+R180*+S181*、Y160P+R180*+S181*、W159H+R180*+S181*、K178A+R180*+S181*、R180*+S181*+G183P、Q136T+R180*+S181*、K142P+R180*+S181*、K142E+R180*+S181*、Y152L+R180*+S181*、A111L+R180*+S181*、G110K+R180*+S181*、A111G+R180*+S181*和V117G+R180*+S181*,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:2的变体,该变体在与使用SEQ ID NO:1进行编号的R180*+S181*+E193I+H323N相对应的位置中包含修饰,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:2的变体,所述变体在与使用SEQ ID NO:1进行编号的G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*、G7H+W167P+R180*+S181*+G455R和Q98L+V103A+G110K+R180*+S181*相对应的位置中包含修饰,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:2的变体,该变体在与使用SEQ ID NO:1进行编号的A60V+Q98L+G110K+R180*+S181*+A383D相对应的位置中包含修饰,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:2的变体,所述变体在与使用SEQ ID NO:1进行编号的F116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y和Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+T315A相对应的位置中包含修饰,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:2的变体,所述变体在与使用SEQ ID NO:1进行编号的H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K和H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K相对应的位置中包含修饰,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:2的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:H1*+G7A+R180*+S181*+T182S+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+T182L+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+S181L+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180S+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A60P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105I+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182G+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182M+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185K+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185N+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185R+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W167P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323A+E390A+G475K、
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H1*+G7H+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E390A+G475K和L63F+W140Y+L173F+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+H323W,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:2的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E359W+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+I176V+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M322Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322Y+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+S286K+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+H320T+E390A+G475K、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E359W+E390A+G475K和W140Y+L173F+R180*+S181*+N194F+L205Y+N225S+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323A,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:2的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280F+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280F+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E359W+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M322Y+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+I137F+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7H+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+D405G+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+T256A+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474L、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475E、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474F、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+R414M+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323W+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321Y+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360M+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K和
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:2的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+S286K+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+P146S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302T+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474F+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N422V+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N470A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242L+E259G+N279S+G303R+W346N+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+H420P+G475K、
H1*+G7A+R26Y+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y371S+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A41D+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K和
H1*+G7A+T40G+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:2的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+S181*+T182*+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+T134D+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D123N+W140Y+I176V+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+T315A+E390A+G475K、
H1*+A60V+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:2的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+S132L+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K和T40N+F116L+D123N+N126D+N128Y+T131I+F155W+R180*+S181*+T182D+E189P+F202Y+K457N+P458S+G475K+G476E,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:2的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:
H1*+G7A+G113A+F116W+D123N+T131V+Q136K+E169Q+K172Q+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+N94D+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+I409L+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474F、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394D+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180Q+S181*+T182*+A185Q+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A和
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:2的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476A、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420P+N474L、
H1*+G7A+G73L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G475K、
N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+V103I+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+P146H+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+R414M+G475K、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
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在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:2的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:
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H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+Q360Y+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205N+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180Q+S181*+T182*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+Y371N+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321Y+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420Q+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G476H、
H1*+G7A+R37A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Q+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3G+G7A+V104M+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
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H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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N3G+G7A+R37V+D118T+W140M+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
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H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K和
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:2的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:
H1*+G7A+N106D+A109G+F116W+D123N+N126D+T131I+T165V+N174S+R180*+S181*+T182I+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+H420A+N474L、
H1*+N3D+G7A+K93R+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+W346N+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+G475K、
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H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321Y+L354V+N394D+G475K、
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H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K和
H1*+G7A+A31S+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:2的变体,所述变体在与使用SEQ ID NO:1进行编号的H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K相对应的位置中包含修饰,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:2的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:
H1*+N54S+V56T+K72R+G113Q+F116Q+D118Q+D123N+N126D+T131I+K142G+D144N+W167F+K172G+N174S+S181T+T182*+G183*+F202Y+E390A+F395Y+K457R+S472R+V473C+G475K,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:2的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:
H1*+N54S+V56T+K72R+N106D+A109G+G113Q+F116Q+D118Q+D123N+N126D+T131I+K142G+D144N+W167F+K172G+N174S+S181T+T182*+G183*+F202Y+E390A+F395Y+K457R+S472R+V473C+G475K,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:3的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:E169I+R180*+S181*、T114K+R180*+S181*、W167A+R180*+S181*、E169V+R180*+S181*、R180*+S181*+W188C、W167D+R180*+S181*、Y177D+R180*+S181*、W167S+R180*+S181*、W167E+R180*+S181*、W167P+R180*+S181*、R180*+S181*+L205R、R180*+S181*+A203F、W159L+R180*+S181*、Y160P+R180*+S181*、W159H+R180*+S181*、K178A+R180*+S181*、R180*+S181*+G183P、Q136T+R180*+S181*、K142P+R180*+S181*、K142E+R180*+S181*、Y152L+R180*+S181*、A111L+R180*+S181*、G110K+R180*+S181*、A111G+R180*+S181*和V117G+R180*+S181*,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:3的变体,该变体在与使用SEQ ID NO:1进行编号的R180*+S181*+E193I+H323N相对应的位置中包含修饰,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:3的变体,所述变体在与使用SEQ ID NO:1进行编号的G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*、G7H+W167P+R180*+S181*+G455R和Q98L+V103A+G110K+R180*+S181*相对应的位置中包含修饰,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:3的变体,该变体在与使用SEQ ID NO:1进行编号的A60V+Q98L+G110K+R180*+S181*+A383D相对应的位置中包含修饰,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:3的变体,所述变体在与使用SEQ ID NO:1进行编号的F116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y和Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+T315A相对应的位置中包含修饰,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:3的变体,所述变体在与使用SEQ ID NO:1进行编号的H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K和H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K相对应的位置中包含修饰,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:3的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:H1*+G7A+R180*+S181*+T182S+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+T182L+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+S181L+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180S+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A60P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105I+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182G+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182M+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185K+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185N+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+T40N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W167P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7H+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E390A+G475K和L63F+W140Y+L173F+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+H323W,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:3的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q360W+E390A+G475K、
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H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+I176V+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M322Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+Q360Y+E390A+G475K、
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H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+S286K+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+H320T+E390A+G475K、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E359W+E390A+G475K和W140Y+L173F+R180*+S181*+N194F+L205Y+N225S+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323A,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:3的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280F+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280F+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E359W+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M322Y+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+I137F+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7H+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+D405G+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+T256A+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474L、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475E、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474F、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+R414M+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323W+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321Y+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360M+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K和
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:3的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+S286K+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+P146S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302T+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474F+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N422V+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N470A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242L+E259G+N279S+G303R+W346N+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+H420P+G475K、
H1*+G7A+R26Y+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y371S+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A41D+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K和
H1*+G7A+T40G+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:3的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+S181*+T182*+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+T134D+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+I176V+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+I176V+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+T315A+E390A+G475K、
H1*+A60V+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+T151A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+K258V+E259V+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+N94D+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+T151A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+K258V+E259V+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+T427L+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A和H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:3的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:3的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:
H1*+G7A+G113A+F116W+D123N+T131V+Q136K+E169Q+K172Q+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1*+N3S+G7A+N94D+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+I409L+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205N+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180Q+S181*+T182*+A185Q+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A和
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:3的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476A、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420P+N474L、
H1*+G7A+G73L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G475K、
N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+V103I+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+P146H+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N196I+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420Y+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A和
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:3的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+V365I+E390A+N474L、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+N474F、
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H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390D+H420P+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+Q360Y+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K和
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:3的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:
H1*+G7A+N106D+A109G+F116W+D123N+N126D+T131I+T165V+N174S+R180*+S181*+T182I+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+H420A+N474L、
H1*+N3D+G7A+K93R+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+W346N+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476A、
H1*+G7A+R37N+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3G+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+G361M+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+N174K+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321Y+L354V+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+Q360M+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K和
H1*+G7A+A31S+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:3的变体,所述变体在与使用SEQ ID NO:1进行编号的H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K相对应的位置中包含修饰,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:3的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:
H1*+N54S+V56T+K72R+G113Q+F116Q+D118Q+D123N+N126D+T131I+K142G+D144N+W167F+K172G+N174S+S181T+T182*+G183*+F202Y+E390A+F395Y+K457R+S472R+V473C+G475K,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性
在一个方面,本发明涉及SEQ ID NO:3的变体,所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置中包含修饰:
H1*+N54S+V56T+K72R+N106D+A109G+G113Q+F116Q+D118Q+D123N+N126D+T131I+K142G+D144N+W167F+K172G+N174S+S181T+T182*+G183*+F202Y+E390A+F395Y+K457R+S472R+V473C+G475K,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性
所述变体还可包含一个或多个(例如,若干个)其他位置处的一个或多个附加替换和/或缺失。
氨基酸变化可能是轻微性质的,即不会显著影响蛋白质的折叠和/或活性的保守氨基酸替换或插入;通常1至30个氨基酸的小缺失;小氨基末端或羧基末端延伸,诸如氨基末端甲硫氨酸残基;至多20至25个残基的小接头肽;或通过改变净电荷或另一种功能来促进纯化的小延伸,诸如多组氨酸序列(poly-histidine tract)、抗原表位或结合结构域。
因此即使可用于本发明的α-淀粉酶变体仅可包含提供根据本发明的改善的特性的一个特定替换,其仍可具有得到α-淀粉酶变体的附加修饰,该α-淀粉酶变体与SEQ IDNo:1、2、7或8的氨基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。这些附加修饰应优选地不显著改变α-淀粉酶变体的改善的特性。
保守替换的例子在碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸和组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺),疏水氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸)、芳族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸),和小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、苏氨酸、丝氨酸和甲硫氨酸)的组内。通常不改变比活性的氨基酸替换是本领域已知的,并且由例如H.Neurath和R.L.Hill,1979,In,The Proteins,Academic Press,New York进行了描述。常见的替换有Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu、和Asp/Gly。
多肽中的必需氨基酸可根据本领域已知的方法进行鉴定,例如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(Cunningham和Wells,1989,Science 244:1081-1085)。在后一种技术中,在分子中的每个残基处导入单个丙氨酸突变,并且针对蛋白酶活性测试所得的突变型分子,以鉴定对该分子的活性至关重要的氨基酸残基。还可参见,Hilton等人,1996,J.Biol.Chem.271:4699-4708。所述酶的活性位点或其它生物学相互作用还可通过结构的物理分析进行测定,如通过诸如核磁共振、晶体学、电子衍射或光亲和标记,与推定接触位点氨基酸突变的技术一起所测定的。参见,例如,de Vos等人,1992,Science 255:306-312;Smith等人,1992,J.Mol.Biol.224:899-904;Wlodaver等人,(1992)FEBS Lett.309:59-64。
在一个方面,可用于本发明的α-淀粉酶变体具有相对于亲本多肽改善的特性,其中改善的特性选自增加的催化效率、增加的催化速率、增加的化学稳定性、增加的氧化稳定性、增加的pH活性、增加的pH稳定性、增加的比活性、储存条件下增加的稳定性、增强的底物结合、增强的底物裂解、增加的底物特异性、增加的底物稳定性、增加的表面特性、增加的热活性和增加的热稳定性。
在一个实施方案中,α-淀粉酶变体与亲本多肽相比具有改善的(增加的)比活性。
在一个实施方案中,α-淀粉酶变体与亲本多肽相比具有改善的(增加的)洗涤性能。
在一个实施方案中,α-淀粉酶变体与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3相比具有改善的(增加的)洗涤性能。
在一个方面,α-淀粉酶变体具有相对于所述亲本多肽改善的(增加的)特性,其中所述改善的特性是按增加的比活性来度量的改善的洗涤性能并且其中所述增加的比活性是在模型A洗涤剂组合物中测得的。
在一个方面,α-淀粉酶变体具有相对于所述亲本多肽改善的(增加的)特性,其中所述改善的特性是按增加的比活性来度量的改善的洗涤性能并且其中所述增加的比活性是采用如实施例中所述的微样本测定法和/或AMSA测定法在模型A洗涤剂组合物中测得的。
在一个方面,α-淀粉酶变体具有按模型A洗涤剂组合物中增加的比活性来度量的改善的洗涤性能,该增加的比活性被测量为相对于所述亲本多肽而言>1.0、至少1.1、至少1.2、至少1.3、至少1.4、至少1.5、至少1.6、至少1.7、至少1.8、至少1.9、至少2.0、至少2.5、至少3.0、至少3.5、至少4.0、至少4.5、至少5.0、至少5.5、至少6.0、至少6.5、至少7.0、至少7.5、至少8.0、至少8.5、至少9.0、至少9.5、至少10.0的改善因数(IF)。
在一个方面,α-淀粉酶变体具有按模型A洗涤剂组合物中增加的比活性来度量的改善的洗涤性能,该增加的比活性被测量为相对于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ IDNO:3而言>1.0、至少1.1、至少1.2、至少1.3、至少1.4、至少1.5、至少1.6、至少1.7、至少1.8、至少1.9、至少2.0、至少2.5、至少3.0、至少3.5、至少4.0、至少4.5、至少5.0、至少5.5、至少6.0、至少6.5、至少7.0、至少7.5、至少8.0、至少8.5、至少9.0、至少9.5、至少10.0的改善因数(IF)。
在一个方面,α-淀粉酶变体具有按模型A洗涤剂组合物中增加的比活性来度量的改善的洗涤性能,该增加的比活性被测量为相对于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ IDNO:3而言>1.0、至少1.1、至少1.2、至少1.3、至少1.4、至少1.5、至少1.6、至少1.7、至少1.8、至少1.9、至少2.0、至少2.5、至少3.0、至少3.5、至少4.0、至少4.5、至少5.0、至少5.5、至少6.0、至少6.5、至少7.0、至少7.5、至少8.0、至少8.5、至少9.0、至少9.5、至少10.0的改善因数(IF)。
在一个方面,α-淀粉酶变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、476,并且其中所述α-淀粉酶变体具有按增加的比活性来度量的改善的洗涤性能,该增加的比活性被测量为>1.1的改善因数(IF),并且其中所述变体与SEQID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,α-淀粉酶变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处包含修饰:H1、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、R180、S181、T182、G183、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475、G476,并且其中所述α-淀粉酶变体具有按增加的比活性来度量的改善的洗涤性能,该增加的比活性被测量为>1.1的改善因数(IF),并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,α-淀粉酶变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、Y242F、Y242Y、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,并且其中所述α-淀粉酶变体具有按增加的比活性来度量的改善的洗涤性能,该增加的比活性被测量为>1.1的改善因数(IF),并且其中所述变体与SEQID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,α-淀粉酶变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、476,并且其中所述α-淀粉酶变体具有按增加的比活性来度量的改善的洗涤性能,该增加的比活性在模型A洗涤剂组合物中被测量为>1.1的改善因数(IF),并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,α-淀粉酶变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处包含修饰:H1、H2、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、R180、S181、T182、G183、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475、G476,并且其中所述α-淀粉酶变体具有按增加的比活性来度量的改善的洗涤性能,该增加的比活性在模型A洗涤剂组合物中被测量为>1.1的改善因数(IF),并且其中所述变体与SEQID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,α-淀粉酶变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、Y242F、Y242Y、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,并且其中所述α-淀粉酶变体具有按增加的比活性来度量的改善的洗涤性能,该增加的比活性在模型A洗涤剂组合物中被测量为>1.1的改善因数(IF),并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,α-淀粉酶变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、476,并且其中所述α-淀粉酶变体具有按增加的比活性来度量的改善的洗涤性能,该增加的比活性在模型A洗涤剂组合物中被测量为>1.1的改善因数(IF),并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,α-淀粉酶变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处包含修饰:H1、H2、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、R180、S181、T182、G183、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475、G476,并且其中所述α-淀粉酶变体具有按增加的比活性来度量的改善的洗涤性能,该增加的比活性在模型A洗涤剂组合物中被测量为>1.1的改善因数(IF),并且其中所述变体与SEQID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,α-淀粉酶变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、Y242F、Y242Y、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,并且其中所述α-淀粉酶变体具有按增加的比活性来度量的改善的洗涤性能,该增加的比活性在模型A洗涤剂组合物中被测量为>1.1的改善因数(IF),并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一个方面,α-淀粉酶变体具有按增加的比活性来度量的改善的洗涤性能,该增加的比活性在模型A洗涤剂组合物中被测量为与亲本多肽相比>1.1的改善因数(IF),并且其中所述变体选自以下使用SEQ ID NO:1进行编号的变体:
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+T182S+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+T182L+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+S181L+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180S+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+A60P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+M105L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+M105I+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+T182D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+T182E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+T182G+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+T182M+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+A185K+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+A185D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+A185N+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+A185R+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+A185E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244L+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280F+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280F+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+S181*+T182*+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E359W+Q360W+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q360W+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E359W+Q360W+E390A+G475K
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K
H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+S286K+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M322Y+Q360Y+E390A+G475K
H1*+G7A+D123N+I176V+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+G113A+F116W+D123N+T131V+Q136K+E169Q+K172Q+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+N106D+A109G+F116W+D123N+N126D+T131I+T165V+N174S+R180*+S181*+T182I+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+E390A+G475K
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q360W+E390A+G475K
H1*+G7A+T40N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7S+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K
H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+E390A+G475K
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A
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H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470A+G475K
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H1*+G7A+A31S+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K
R180*+S181*
T40N+F116L+D123N+N126D+N128Y+T131I+F155W+R180*+S181*+T182D+E189P+F202Y+K457N+P458S+G475K+G476E
A60V+Q98L+G110K+R180*+S181*+A383D
Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+T315A
G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*
G7H+W167P+R180*+S181*+G455R
Q98L+V103A+G110K+R180*+S181*
T114K+R180*+S181*
E169V+R180*+S181*
R180*+S181*+W188C
W167D+R180*+S181*
W167S+R180*+S181*
W167E+R180*+S181*
W167P+R180*+S181*
R180*+S181*+E193I+H323N
R180*+S181*+A203F
W159L+R180*+S181*
W159H+R180*+S181*
K178A+R180*+S181*
A111L+R180*+S181*
G110K+R180*+S181*
A111G+R180*+S181*,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
多核苷酸
本发明还涉及编码本发明的α-淀粉酶变体的多核苷酸。
在一个方面,编码α-淀粉酶变体的多核苷酸在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、476,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
用于分离或克隆多核苷酸的技术是本领域已知的并且包括从基因组DNA或cDNA分离或它们的组合。从基因组DNA克隆这些多核苷酸可例如通过以下方式实现:使用聚合酶链反应(PCR)或表达文库的抗体筛选以检测具有共享结构特征的克隆DNA片段。参见例如Innis等人,1990,PCR:A Guide to Methods and Application,Academic Press,NewYork。可使用其他核酸扩增规程,诸如连接酶链反应(LCR)、连接激活转录(LAT)和基于多核苷酸的扩增(NASBA)。这些多核苷酸可克隆自木霉(Trichoderma)、蜡蚧菌(Lecanicillium)、单梗霉属(Simplicillium)、曲霉属(Aspergillus)、棒囊壳属(Cornyascus)、端梗孢属(Acrophialophora)、喙枝孢属(Rhinocladiella)、炭层菌属(Nemania)、篮状菌属(Talaromyces)、暗领毛壳属(Collariella)、硬孔菌属(Rigidoporou)和/或长毛球壳属(Loramyces)的菌株或相关生物体,因此例如可以是多核苷酸的多肽编码区的种间变体。
对编码本发明的α-淀粉酶变体的多核苷酸的修饰可能是合成与该多肽基本上类似的多肽所必需的。术语与该多肽“基本上类似”是指该多肽的非天然存在的形式。这些多肽可因采用了某种工程化方式而不同于从其天然来源分离的多肽,例如在比活性、热稳定性、最适pH等方面不同的变体。这些变体可根据呈现为成熟多肽编码序列(例如其子序列)的多核苷酸来构建,和/或通过引入不导致该多肽的氨基酸序列变化但对应于预期用于产生该酶的宿主生物体的密码子使用的核苷酸替换来构建;或通过引入可产生不同氨基酸序列的核苷酸替换。关于核苷酸替换的一般描述,参见例如Ford等人,1991,ProteinExpression and Purification 2:95-107。
核酸构建体
本发明还涉及核酸构建体,所述核酸构建体包含编码本发明的α-淀粉酶变体的多核苷酸。
在一个方面,所述核酸构建体包含编码α-淀粉酶变体的多核苷酸,所述α-淀粉酶变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、476,其中该多核苷酸可操作地连接至一个或多个控制序列,所述控制序列指导编码序列在合适的宿主细胞中、在与控制序列相容的条件下表达。
本发明还涉及核酸构建体,所述核酸构建体包含编码本发明的α-淀粉酶变体的多核苷酸,该多核苷酸可操作地连接至一个或多个控制序列,该一个或多个控制序列指导该编码序列在合适的宿主细胞中、在与控制序列相容的条件下表达。
可以多种方式操纵该多核苷酸以提供变体的表达。根据表达载体在其插入载体之前对所述多核苷酸的操作可为可取的和必需的。利用重组DNA方法修饰多核苷酸的技术为本领域所熟知。
控制序列可以是启动子序列,即被宿主细胞识别而表达该多核苷酸的多核苷酸。启动子包含转录控制序列,其介导该变体的表达。所述启动子可为在宿主细胞中显示转录活性的任何多核苷酸,其包括突变型、截短的和杂交体启动子,可得自对宿主细胞同源的或异源的、编码细胞外或细胞内多肽的基因。
用于在细菌宿主细胞中指导本发明的核酸构建体的转录的合适启动子的示例为得自下列的启动子:解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)α-淀粉酶基因(amyQ)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)α-淀粉酶基因(amyL)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)青霉素酶基因(penP)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillusstearothermophilus)麦芽糖淀粉酶基因(amyM)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)果聚糖蔗糖酶基因(sacB)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)xylA和xylB基因、苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)cryIIIA基因(Agaisse和Lereclus,1994,MolecularMicrobiology 13:97-107)、大肠杆菌(E.coli)乳糖操纵子、大肠杆菌(E.coli)trc启动子(Egon等人,1988,Gene 69:301-315)、天蓝色链霉菌(Streptomyces coelicolor)琼脂糖酶基因(dagA)以及原核β-内酰胺酶基因(Villa-Kamaroff等人,1978,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 75:3727-3731),以及tac启动子(DeBoer等人,1983,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 80:21-25)。另外的启动子在Gilbert等人,1980,ScientificAmerican 242:74-94的“来自重组细菌的有用的蛋白质(Useful proteins fromrecombinant bacteria)”和Sambrook等人,1989,同上中有所描述。WO 99/43835中公开了串联启动子的例子。
用于在丝状真菌宿主细胞中指导本发明的多核苷酸的转录的合适启动子的示例为得自下列的基因的启动子:构巢曲霉(Aspergillus nidulans)乙酰胺酶、黑曲霉(Aspergillus niger)中性α-淀粉酶、黑曲霉(Aspergillus niger)酸稳定性α-淀粉酶、黑曲霉(Aspergillus niger)或泡盛曲霉(Aspergillus awamori)葡糖淀粉酶(glaA)、米曲霉(Aspergillus oryzae)TAKA淀粉酶、米曲霉(Aspergillus oryzae)碱性蛋白酶、米曲霉(Aspergillus oryzae)磷酸丙糖异构酶、尖孢镰孢(Fusarium oxysporum)胰蛋白酶样蛋白酶(WO 96/00787)、镰孢霉(Fusarium venenatum)淀粉葡萄糖苷酶(WO 00/56900)、镰孢霉(Fusarium venenatum)Daria(WO 00/56900)、镰孢霉(Fusarium venenatum)Quinn(WO 00/56900)、米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)脂肪酶、米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)天冬氨酸蛋白酶、里氏木霉(Trichoderma reesei)β-葡糖苷酶、里氏木霉(Trichodermareesei)纤维二糖水解酶I、里氏木霉(Trichoderma reesei)纤维二糖水解酶II、里氏木霉(Trichoderma reesei)内切葡聚糖酶I、里氏木霉(Trichoderma reesei)内切葡聚糖酶II、里氏木霉(Trichodermareesei)内切葡聚糖酶III、里氏木霉(Trichoderma reesei)内切葡聚糖酶V、里氏木霉(Trichoderma reesei)木聚糖酶I、里氏木霉(Trichoderma reesei)木聚糖酶II、里氏木霉(Trichoderma reesei)木聚糖酶III、里氏木霉(Trichoderma reesei)β-木糖苷酶和里氏木霉(Trichoderma reesei)翻译延伸因子,以及NA2-tpi启动子(包含来自曲霉属(Aspergillus)中性α-淀粉酶基因的经修饰的启动子,其中非翻译前导序列已被替换为来自曲霉属(Aspergillus)磷酸丙糖异构酶基因的非翻译前导序列;非限制性示例包括来自黑曲霉(Aspergillus niger)中性α-淀粉酶基因的经修饰的启动子,其中非翻译前导序列已被替换为来自构巢曲霉(Aspergillus nidulans)或米曲霉(Aspergillusoryzae)磷酸丙糖异构酶基因的非翻译前导序列);以及它们的突变的、截短的和杂交体启动子。其它启动子在美国专利6,011,147中有所描述。
在酵母宿主中,可用的启动子得自以下的基因:酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)烯醇酶(ENO-1)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)半乳糖激酶(GAL1)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(ADH1、ADH2/GAP)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)磷酸丙糖异构酶(TPI)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)金属硫蛋白(CUP1)和酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)3-磷酸甘油酸激酶。其它对于酵母宿主细胞有用的启动子在Romanos等人,1992,Yeast 8:423-488中有所描述。
该控制序列还可为转录终止子,其被宿主细胞识别以终止转录。该终止子可操作地连接至编码该多肽的多核苷酸的3’-末端。本发明中可使用在宿主细胞中有功能的任何终止子。
对于细菌宿主细胞优选的终止子是得自克劳氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)碱性蛋白酶(aprH)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)α-淀粉酶(amyL)和大肠杆菌(Escherichia coli)核糖体RNA(rrnB)的基因。
对于丝状真菌宿主细胞优选的终止子得自以下的基因:构巢曲霉(Aspergillusnidulans)乙酰胺酶、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)邻氨基苯甲酸合成酶、黑曲霉(Aspergillus niger)葡糖淀粉酶、黑曲霉(Aspergillus niger)α-葡萄糖苷酶、米曲霉(Aspergillus oryzae)TAKA淀粉酶、尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)胰蛋白酶样蛋白酶、里氏木霉(Trichoderma reesei)β-葡糖苷酶、里氏木霉(Trichoderma reesei)纤维二糖水解酶I、里氏木霉(Trichoderma reesei)纤维二糖水解酶II、里氏木霉(Trichodermareesei)内切葡聚糖酶I、里氏木霉(Trichoderma reesei)内切葡聚糖酶II、里氏木霉(Trichoderma reesei)内切葡聚糖酶III、里氏木霉(Trichoderma reesei)内切葡聚糖酶V、里氏木霉(Trichoderma reesei)木聚糖酶I、里氏木霉(Trichoderma reesei)木聚糖酶II、里氏木霉(Trichoderma reesei)木聚糖酶III、里氏木霉(Trichoderma reesei)β-木糖苷酶和里氏木霉(Trichoderma reesei)翻译延伸因子。
对于酵母宿主细胞优选的终止子得自以下的基因:酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)烯醇酶、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)细胞色素C(CYC1)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)甘油醛-3-磷酸脱氢酶。Romanos等人,1992,同上描述了对于酵母宿主细胞有用的其它终止子。
该控制序列还可为位于启动子的下游和基因编码序列的上游的mRNA稳定子区,其增加该基因的表达。
合适的mRNA稳定子区的示例得自苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)cryIIIA基因(WO 94/25612)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)SP82基因(Hue等人,1995,J.Bacteriol.177:3465-3471)。
该控制序列还可为前导序列,即对通过宿主细胞翻译重要的mRNA的非翻译区。前导序列可操作地连接至编码该多肽的多核苷酸的5’-末端。可使用在宿主细胞中有功能性的任何前导序列。
对于丝状真菌宿主细胞优选的前导序列得自米曲霉(Aspergillus oryzae)TAKA淀粉酶和构巢曲霉(Aspergillus nidulans)磷酸丙糖异构酶的基因。
适用于酵母宿主细胞的前导序列得自以下的基因:酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)烯醇酶(ENO-1)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)3-磷酸甘油酸激酶、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)α-因子和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(ADH2/GAP)。
控制序列还可为聚腺苷酸化序列,该序列可操作地连接至多核苷酸的3’-末端,并且当被转录时被宿主细胞识别为将聚腺苷酸残基添加至被转录的mRNA的信号。可使用在宿主细胞中有功能性的任何聚腺苷酸化序列。
对于丝状真菌宿主细胞优选的聚腺苷酸化序列得自以下的基因:构巢曲霉(Aspergillus nidulans)邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉(Aspergillus niger)葡糖淀粉酶、黑曲霉(Aspergillus niger)α-葡糖苷酶、米曲霉(Aspergillus oryzae)TAKA淀粉酶和尖孢镰孢(Fusarium oxysporum)胰蛋白酶样蛋白酶。
对于酵母宿主细胞有用的聚腺苷酸化序列由Guo和Sherman,1995,Mol.CellularBiol.15:5983-5990描述。
控制序列还可为信号肽编码区,其编码连接至多肽的N-末端的信号肽并指导该多肽进入细胞的分泌途径。多核苷酸的编码序列的5’-末端可固有地包含信号肽编码序列,其与编码多肽的编码序列的片段天然地连接在翻译阅读框中。另选地,编码序列的5’-末端可包含信号肽编码序列,其对该编码序列是异源的。在该编码序列天然不包含信号肽编码序列的情况下,可能需要异源信号肽编码序列。另选地,异源信号肽编码序列可简单地替换天然信号肽编码序列以增强多肽的分泌。然而,可使用指导被表达的多肽进入宿主细胞的分泌途径的任何信号肽编码序列。
对于细菌宿主细胞有效的信号肽编码序列是得自以下的基因的信号肽编码序列:芽孢杆菌属(Bacillus)NCIB 11837麦芽糖淀粉酶、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)枯草杆菌蛋白酶、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)β-内酰胺酶、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)α-淀粉酶、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)中性蛋白酶(nprT、nprS、nprM)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)prsA。另外的信号肽由Simonen和Palva,1993,Microbiol.Rev.57:109-137描述。
对于丝状真菌宿主细胞有效的信号肽编码序列是得自以下的基因的信号肽编码序列:黑曲霉(Aspergillus niger)中性淀粉酶、黑曲霉(Aspergillus niger)葡糖淀粉酶、米曲霉(Aspergillus oryzae)TAKA淀粉酶、特异腐质霉(Humicola insolens)纤维素酶、特异腐质霉(Humicola insolens)内切葡聚糖酶V、柔毛腐质霉(Humicola lanuginosa)脂肪酶和米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)天冬氨酸蛋白酶。
对于酵母宿主细胞有用的信号肽是得自酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)α-因子和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)反转酶的基因。Romanos等人,1992,同上描述了其它有用的信号肽编码序列。
控制序列还可为前肽编码序列,其编码定位在多肽的N-末端的前肽。所得的多肽被称为酶原或多肽原(或有时候为酶原)。多肽原是大体失活的,并且能够通过来自多肽原的多肽的催化或自催化裂解转变为活性多肽。前肽编码序列可得自以下的基因:枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)碱性蛋白酶(aprE)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)中性蛋白酶(nprT)、嗜热毁丝霉(Myceliophthora thermophila)漆酶(WO 95/33836)、米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)天冬氨酸蛋白酶和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)α-因子。
在信号肽和前肽序列均存在的情况下,前肽序列被定位在该多肽的N-末端旁边并且信号肽序列被定位在前肽序列的N-末端旁边。
添加调控序列也是可取的,其调控与宿主细胞的生长相关的多肽的表达。调控序列的示例是导致基因响应于化学或物理刺激(包括调控化合物的存在)而开启或关闭表达的那些(序列)。原核系统中的调控序列包括lac、tac和trp操纵子系统。在酵母中,也可使用ADH2系统或GAL1系统。在丝状真菌中,可使用黑曲霉(Aspergillus niger)葡糖淀粉酶启动子、米曲霉(Aspergillus oryzae)TAKAα-淀粉酶启动子和米曲霉(Aspergillus oryzae)葡糖淀粉酶启动子、里氏木霉(Trichoderma reesei)纤维二糖水解酶I启动子和里氏木霉(Trichoderma reesei)纤维二糖水解酶II启动子。调控序列的其它例子是允许基因扩增的那些。在真核系统中,这些调控序列包括在甲氨蝶呤的存在下扩增的二氢叶酸还原酶基因,以及与重金属扩增的金属硫蛋白基因。在这些情况下,编码多肽的多核苷酸将可操作地连接至调控序列。
表达载体
本发明还涉及重组表达载体,其包含编码本发明的α-淀粉酶变体的多核苷酸、启动子以及转录和翻译终止信号。可将各种核苷酸和控制序列连接在一起以制备重组表达载体,其可包括一个或多个方便的限制性位点以允许在此类位点插入或替换编码该变体的多核苷酸。作为另外一种选择,可通过将所述多核苷酸或包含所述多核苷酸的核酸构建体插入合适的用于表达的载体来表达所述多核苷酸。在创建表达载体中,该编码序列位于载体中使得该编码序列与合适的用于表达的控制序列可操作地连接。
在一个方面,重组载体包含编码α-淀粉酶变体的多核苷酸、启动子以及转录和翻译终止信号,该α-淀粉酶变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、476。可将各种核苷酸和控制序列结合在一起以制备重组表达载体,其可包括一个或多个(若干个)方便的限制性位点以允许在此类位点插入或替换编码该变体的多核苷酸。作为另外一种选择,可通过将所述多核苷酸或包含所述多核苷酸的核酸构建体插入合适的用于表达的载体来表达所述多核苷酸。在创建表达载体中,该编码序列位于载体中使得该编码序列与合适的用于表达的控制序列可操作地连接。
重组表达载体可为任何载体(例如,质粒或病毒),其可方便地进行重组DNA规程并可引起该多核苷酸的表达。载体的选择通常取决于载体与被导入所述载体的宿主细胞的相容性。载体可为线性或封闭的环形质粒。
载体可为自主复制载体,即,作为染色体外实体存在的载体,其复制独立于染色体复制,例如,质粒、染色体外元件、微型染色体或人工染色体。所述载体可包含任何形式以确保自我复制。作为另外一种选择,所述载体可为一种载体,当其被导入宿主细胞时被整合进基因组并连同被整合进的染色体一起复制。此外,可使用单个载体或质粒、或同时包含被导入宿主细胞的基因组的总DNA的两个或更多个载体或质粒、或转座子。
所述载体优选地包含一个或多个选择性标记,其允许简单选择转化的,转染的,转导等的细胞。选择性标记是一个基因,其产物提供了生物灭杀剂或病毒抗性、重金属抗性、原养型到营养缺陷型等等。
细菌选择性标记的示例是地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)或枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)dal基因,或赋予抗生素抗性(诸如氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、新霉素、奇放线菌素或四环素抗性)的标记。对于酵母宿主细胞合适的标记包括但不限于ADE2、HIS3、LEU2、LYS2、MET3、TRP1和URA3。用于丝状真菌宿主细胞的选择性标记包括但不限于adeA(磷酸核糖酰氨咪唑琥珀酸甲酰胺合酶)、adeB(磷酸核糖酰氨基咪唑合酶)、amdS(乙酰胺酶)、argB(鸟氨酸氨甲酰转移酶)、bar(草胺膦乙酰转移酶)、hph(潮霉素磷酸转移酶)、niaD(硝酸还原酶)、pyrG(乳清酸核苷-5’磷酸脱羧酶)、sC(硫酸腺苷酰基转移酶)和trpC(邻氨基苯甲酸合酶),以及其等同物。优选用于曲霉属(Aspergillus)细胞中的是构巢曲霉(Aspergillus nidulans)或米曲霉(Aspergillus oryzae)amdS和pyrG基因以及吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus bar)bar基因。优选用于木霉属(Trichoderma)细胞的是adeA、adeB、amdS、hph和pyrG基因。
选择性标记可以是双选择性标记系统,如在WO 2010/039889中所述的。在一个方面,双选择性标记是hph-tk双选择性标记系统。
所述载体优选地包含元件,其允许载体整合至宿主细胞基因组或在细胞中独立于基因组自主复制载体。
对于整合进入宿主细胞基因组,所述载体可依赖于编码所述多肽的多核苷酸的序列或载体的任何其他元件,通过同源或非同源重组整合进基因组。作为另外一种选择,所述载体可包含另外的多核苷酸,用于指导通过同源重组在染色体的精确位置整合进入宿主细胞的基因组。为了增加在精确位置整合的可能性,整合元件应包含足够数量的核酸,诸如100至10,000个碱基对、400至10,000个碱基对、以及800至10,000个碱基对,其与对应的靶序列具有高度的序列同一性以提高同源重组的概率。所述整合元件可为与宿主细胞基因组中靶序列同源的任何序列。此外,所述整合元件可为非编码或可编码多核苷酸。另一方面,所述载体可通过非同源重组整合进宿主细胞的基因组。
对于自主复制,所述载体还包含复制起点,使得所述载体在所考虑的宿主细胞中自主复制。所述复制起点可为在细胞中起作用的介导自主复制的任何质粒复制因子。术语“复制起点”或“质粒复制因子”是指使得质粒或载体在体内复制的多核苷酸。
细菌复制起点的示例是质粒pBR322、pUC19、pACYC177和pACYC184的复制起点,其允许在大肠杆菌(E.coli)中复制,以及pUB110、pE194、pTA1060、和pAMβ1的复制起点,其允许在芽孢杆菌属(Bacillus)中复制。
可用于酵母宿主细胞的复制起点的例子是2微米复制起点、ARS1、ARS4、ARS1和CEN3的组合、以及ARS4和CEN6的组合。
可用于丝状真菌细胞的复制起点的示例是AMA1和ANS1(Gems等人,1991,Gene 98:61-67;Cullen等人,1987,Nucleic Acids Res.15:9163-9175;WO 00/24883)。可按照在WO00/24883中公开的方法完成AMA1基因的分离和包含所述基因的质粒或载体的构建。
可将多于一个拷贝的本发明的多核苷酸插入宿主细胞以增加多肽的制备。可通过将至少一个附加的拷贝的所述序列整合进宿主细胞基因组、或在细胞包含扩增拷贝的选择性标记基因的情况下通过包含所述多核苷酸的可扩增的选择性标记来获得所述多核苷酸拷贝数的增加,从而能通过在合适的选择性试剂的存在下培养所述细胞而选择所述多核苷酸的附加的拷贝。
用于连接上述元件以构建本发明的重组表达载体的规程是本领域技术人员所熟知的(参见,例如,Sambrook等人,1989,同上)。
宿主细胞
本发明还涉及重组宿主细胞,所述重组宿主细胞包含编码本发明的α-淀粉酶变体的多核苷酸,该多核苷酸可操作地连接至一个或多个控制序列,该一个或多个控制序列指导本发明的变体的产生。如前面所述,将包含多核苷酸的构建体或载体导入宿主细胞使得构建体或载体保持为染色体整合体或作为自主复制的染色体外载体。术语“宿主细胞”涵盖了由于在复制过程中发生的突变而与亲本细胞不相同的亲本细胞的任何子代。宿主细胞的选择将在很大程度上取决于编码该变体的基因和它的来源。
宿主细胞可为在α-淀粉酶变体的重组制备中有用的任何细胞,例如,原核细胞或真核细胞。
在一些实施方案中,该多肽对重组宿主细胞是异源的。
在一些实施方案中,该一个或多个控制序列中的至少一个控制序列对编码α-淀粉酶变体的多核苷酸是异源的。
在一些实施方案中,重组宿主细胞包含本发明的多核苷酸的至少两个拷贝,例如三个、四个或五个拷贝。
宿主细胞可为在本发明的多肽的重组制备中有用的任何微生物或植物细胞,例如,原核细胞或真菌细胞。
所述原核宿主细胞可为任何革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌。革兰氏阳性细菌包括但不限于芽孢杆菌属Bacillus、梭菌属(Clostridium)、肠球菌属(Enterococcus)、地芽孢杆菌属(Geobacillus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、乳球菌属(Lactococcus)、海洋芽孢杆菌属(Oceanobacillus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、链球菌属(Streptococcus)和链霉菌属(Streptomyces)。革兰氏阴性细菌包括但不限于弯曲杆菌(Campylobacter)、大肠杆菌(E.coli)、黄杆菌属(Flavobacterium)、梭杆菌属(Fusobacterium)、螺杆菌属(Helicobacter)、泥杆菌属(Ilyobacter)、奈瑟氏球菌属(Neisseria)、假单胞菌属(Pseudomonas)、沙门氏菌属(Salmonella)和脲原体属(Ureaplasma)。
细菌宿主细胞可为任何芽孢杆菌属(Bacillus)细胞,包括但不限于嗜碱芽孢杆菌(Bacillus alkalophilus)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、短芽孢杆菌(Bacillus brevis)、环状芽胞杆菌(Bacillus circulans)、克劳氏芽孢杆菌(Bacillusclausii)、凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)、灿烂芽孢杆菌(Bacillus lautus)、迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)和苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)细胞。
细菌宿主细胞还可为任何链球菌属(Streptococcus)细胞,包括但不限于似马链球菌(Streptococcus equisimilis)、酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)、乳房链球菌(Streptococcus uberis)和马链球菌兽瘟亚种(Streptococcus equisubsp.Zooepidemicus)细胞。
细菌宿主细胞还可为任何链霉菌属(Streptomyces)细胞,包括但不限于不产色链霉菌(Streptomyces achromogenes)、除虫链霉菌(Streptomyces avermitilis)、天蓝色链霉菌(Streptomyces coelicolor)、灰色链霉菌(Streptomyces griseus)和浅青紫链霉菌(Streptomyces lividans)细胞。
将DNA导入芽孢杆菌属(Bacillus)细胞可通过原生质体转化(参见,例如,Chang和Cohen,1979,Mol.Gen.Genet.168:111-115)、感受态细胞转化(参见,例如Young和Spizizen,1961,J.Bacteriol.81:823-829,或Dubnau和Davidoff-Abelson,1971,J.Mol.Biol.56:209-221)、电穿孔(参见,例如Shigekawa和Dower,1988,Biotechniques 6:742--751)或结合(参见,例如Koehler和Thorne,1987,J.Bacteriol.169:5271-5278)来实现。将DNA导入大肠杆菌(E.coli)细胞可通过原生质体转化(参见,例如Hanahan,1983,J.Mol.Biol.166:557-580)或电穿孔(参见,例如Dower等人,1988,Nucleic Acids Res.16:6127-6145)来实现。将DNA导入链霉菌属(Streptomyces)细胞可通过原生质体转化、电穿孔(参见,例如Gong等人,2004,Folia Microbiol.(Praha)49:399-405)、结合(参见,例如Mazodier等人,1989,J.Bacteriol.171:3583-3585)或转导(参见,例如Burke等人,2001,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 98:6289-6294)来实现。将DNA导入假单胞菌属(Pseudomonas)细胞可通过电穿孔(参见,例如Choi等人,2006,J.Microbiol.Methods 64:391-397)或结合(参见,例如Pinedo和Smets,2005,Appl.Environ.Microbiol.71:51-57)来实现。将DNA导入链球菌属(Streptococcus)细胞可通过自然感受态(参见,例如Perry和Kuramitsu,1981,Infect.Immun.32:1295-1297)、原生质体转化(参见,例如Catt和Jollick,1991,Microbios68:189-207)、电穿孔(参见,例如Buckley等人,1999,Appl.Environ.Microbiol.65:3800-3804)或结合(参见,例如Clewell,1981,Microbiol.Rev.45:409-436)来实现。然而,可使用本领域已知的将DNA导入宿主细胞的任何方法。
所述宿主细胞还可为真菌细胞。如本文所用,“真菌”包括子囊菌门(Ascomycota)、担子菌门(Basidiomycota)、壶菌门(Chytridiomycota)和接合菌门(Zygomycota)以及卵菌门(Oomycota)和所有分生孢子真菌(如Hawksworth等人,在Ainsworth and Bisby’sDictionary of The Fungi,第8版,1995,CAB International,University Press,Cambridge,UK中定义的)。
所述真菌宿主细胞可为酵母细胞。如本文所用,“酵母”包括产子囊孢子酵母(ascosporogenous yeast)(内孢霉目(Endomycetales))、产担子酵母(basidiosporogenous yeast)和属于不完全菌纲(Fungi Imperfecti)(芽生菌目(Blastomycetes))的酵母。由于未来酵母的分类可发生变化,就本发明的目的而言,应如Biology and Activities of Yeast(Skinner、Passmore和Davenport编辑,Soc.App.Bacteriol.Symposium Series No.9,1980)中所述定义酵母。
酵母宿主细胞可为假丝酵母属(Candida)、汉逊酵母属(Hansenula)、克鲁维酵母属(Kluyveromyces)、毕赤酵母属(Pichia)、酵母属(Saccharomyces)、裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)或耶氏酵母属(Yarrowia)细胞,诸如乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)、卡尔斯伯酵母(Saccharomyces carlsbergensis)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、糖化酵母(Saccharomyces diastaticus)、道格拉氏酵母(Saccharomyces douglasii)、克鲁费酵母(Saccharomyces kluyveri)、诺地酵母(Saccharomyces norbensis)、卵形酵母(Saccharomyces oviformis)或解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)细胞。
所述真菌宿主细胞可为丝状真菌细胞。“丝状真菌”包括所有丝状形式的真菌门和卵菌门亚门(如Hawksworth等人,1995,同上所定义的)。所述丝状真菌是特征大致在于由甲壳质、纤维素、葡聚糖、脱乙酰壳多糖、甘露聚糖和其它复合多糖构成的菌丝壁。营养生长是通过菌丝延长,并且碳分解代谢是专性需氧的。相比之下,酵母诸如酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的营养生长是通过单细胞菌体的出芽,并且碳分解代谢可为发酵的。
丝状真菌宿主细胞可以是枝顶孢霉属(Acremonium)、曲霉属(Aspergillus)、出芽短梗霉(Aureobasidium)、烟管霉属(Bjerkandera)、拟蜡孔菌属(Ceriporiopsis)、金孢子菌属(Chrysosporium)、鬼伞属(Coprinus)、革盖菌属(Coriolus)、隐球菌属(Cryptococcus)、线黑粉菌属(Filibasidium)、镰孢菌属(Fusarium)、腐质霉属(Humicola)、巨座壳属(Magnaporthe、毛霉菌属(Mucor、毁丝霉属(Myceliophthora)、新美鞭菌属(Neocallimastix)、脉孢菌属(Neurospora)、拟青霉属(Paecilomyces)、青霉属(Penicillium)、原毛平革菌属(Phanerochaete)、射脉菌属(Phlebia)、瘤胃壶菌属(Piromyces)、侧耳属(Pleurotus)、裂褶菌属(Schizophyllum)、篮状菌属(Talaromyces)、嗜热子囊菌属(Thermoascus)、梭孢壳属(Thielavia)、弯颈霉属(Tolypocladium)、栓菌属(Trametes)或木霉属(Trichoderma)细胞。
例如,丝状真菌宿主细胞可以是泡盛曲霉(Aspergillus awamori)、臭曲霉(Aspergillus foetidus)、烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、日本曲霉(Aspergillusjaponicus)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)、黑曲霉(Aspergillus niger)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、烟管菌(Bjerkandera adusta)、干拟蜡菌(Ceriporiopsisaneirina)、卡内基拟蜡菌(Ceriporiopsis caregiea)、浅黄拟蜡孔菌(Ceriporiopsisgilvescens)、潘诺希塔拟蜡菌(Ceriporiopsis pannocinta)、环带拟蜡菌(Ceriporiopsisrivulosa)、微红拟蜡菌(Ceriporiopsis subrufa)、虫拟蜡菌(Ceriporiopsissubvermispora)、狭边金孢子菌(Chrysosporium inops)、嗜角质金孢子菌(Chrysosporiumkeratinophilum)、勒克瑙金孢子菌(Chrysosporium lucknowense)、粪状金孢子菌(Chrysosporium merdarium)、毡状金孢子菌(Chrysosporium pannicola)、昆士兰金孢子菌(Chrysosporium queenslandicum)、热带金孢子菌(Chrysosporium tropicum)、具环带金孢子菌(Chrysosporium zonatum)、灰盖鬼伞(Coprinus cinereus)、毛革盖菌(Coriolushirsutus)、杆孢状镰孢菌(Fusarium bactridioides)、禾谷镰孢菌(Fusarium cerealis)、克鲁克维尔镰孢菌(Fusariumcrookwellense)、大刀镰孢菌(Fusarium culmorum)、禾本科镰孢菌(Fusarium graminearum)、禾赤镰孢菌(Fusarium graminum)、异孢镰孢菌(Fusarium heterosporum)、合欢木镰孢菌(Fusarium negundi)、尖孢镰孢菌(Fusariumoxysporum)、多枝镰孢菌(Fusarium reticulatum)、粉红镰孢菌(Fusarium roseum)、接骨木镰孢菌(Fusarium sambucinum)、肤色镰孢菌(Fusarium sarcochroum)、拟分枝孢镰孢菌(Fusarium sporotrichioides)、硫色镰孢菌(Fusarium sulphureum)、簇囊镰孢菌(Fusarium torulosum)、拟丝孢镰孢菌(Fusarium trichothecioides)、枯萎镰孢菌(Fusarium venenatum)、特异腐质霉(Humicola insolens)、柔毛腐质霉(Humicolalanuginosa)、米黑毛霉(Mucor miehei)、嗜热毁丝霉(Myceliophthora thermophila)、粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)、产紫青霉菌(Penicillium purpurogenum)、黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)、射脉侧菌(Phlebia radiata)、杏鲍菇(Pleurotuseryngii)、埃默森篮状菌(Talaromyces emersonii)、太瑞斯梭孢壳霉(Thielaviaterrestris)、长绒毛栓菌(Trametes villosa)、变色栓菌(Trametes versicolor)、哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、康宁木霉(Trichoderma koningii)、长梗木霉(Trichodermalongibrachiatum)、里氏木霉(Trichoderma reesei)或绿色木霉(Trichoderma viride)细胞。
可以通过涉及原生质体形成、原生质体转化和细胞壁再生的方法,以本身已知的方式转化真菌细胞。用于转化曲霉属(Aspergillus)和木霉属(Trichoderma)宿主细胞的合适的规程在EP 238023;Yelton等人,1984,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81:1470-1474以及Christensen等人,1988,Bio/Technology 6:1419-1422中有所描述。用于转化镰孢属(Fusarium)菌种的合适的方法在Malardier等人,1989,Gene 78:147-156和WO 96/00787中有所描述。可使用Becker和Guarente,载于Abelson,J.N.和Simon,M.I.编辑,Guide toYeast Genetics and Molecular Biology,Methods in Enzymology,第194卷,第182-187页,Academic Press,Inc.,New York;Ito等人,1983,J.Bacteriol.153:163;和Hinnen等人,1978,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 75:1920所述的规程转化酵母。
α-淀粉酶的制备方法
可通过包括以下步骤的方法制备该变体:(a)在适合该变体表达的条件下培养本发明的宿主细胞;和(b)回收该变体。
在一个方面,获得α-淀粉酶变体的方法包括在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处向亲本α-淀粉酶中引入修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、476,并且其中该变体具有α-淀粉酶活性;和任选地回收该变体。
使用本领域已知的方法在适于制备该杂交体或变体的营养培养基中培养宿主细胞。例如,该细胞可以在实验室或工业发酵罐中,在合适的培养基中和在允许该多肽被表达和/或分离的条件下,通过摇瓶培养、或小规模或大规模发酵(包括连续、分批、补料分批或固态发酵)来培养。在包含碳源和氮源和无机盐的合适的营养培养基中,使用本领域已知的步骤进行培养。合适的培养基可购自商业供应商或可根据公布的组合物(例如,在美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)的目录中)制备。如果该杂交体或变体被分泌在营养培养基中,可直接从培养基中回收该杂交体或变体。如果该杂交体或变体不是分泌的,可从细胞裂解液中回收它。
可使用本领域已知的对该杂交体或变体为特异性的方法来检测该杂交体或变体。这些检测方法可包括使用特异性抗体、形成酶产物或酶底物的消失。例如,可使用酶反应分析法以测定该杂交体或变体的活性。
在一个另选的方面,不回收该杂交体或变体,而是使用如本文所述表达杂交体或变体的宿主细胞作为杂交体或变体源。
在一个方面,一种改善具有α-淀粉酶的多肽的变体的洗涤性能的方法,所述变体具有SEQ ID NO:1或与之具有至少60%序列同一性的氨基酸序列,所述方法包括以下步骤:(a)具有α-淀粉酶活性的多肽中的两个、三个或四个位置的替换和/或缺失,所述位置对应于使用SEQ ID NO:1进行编号的位置180、181、182和183;以及(b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处的修饰:H1、H2、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、R180、S181、T182、G183、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475和G476,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性以及与所述多肽相比改善的(增加的)洗涤性能。
α-淀粉酶变体颗粒
本发明还涉及包含本文所述α-淀粉酶变体的酶颗粒/微粒。在一个实施方案中,该颗粒包括芯和任选地围绕该芯的一个或多个涂层(外层)。芯可具有按等效球径(基于体积的平均粒度)测量的20μm至2000μm、特别是50μm至1500μm、100μm至1500μm或250μm至1200μm的直径。
在一个实施方案中,芯包含本发明的一种或多种α-淀粉酶变体。在一个实施方案中,芯包含具有本发明的α-淀粉酶变体的一种或多种多肽。在一个实施方案中,芯包含具有α-淀粉酶变体的一种或多种多肽和/或具有本发明的α-淀粉酶变体的一种或多种多肽。
芯可包含附加材料,诸如粘结剂、填料、纤维材料(纤维素或合成纤维)、稳定剂、增溶剂、悬浮剂、粘度调节剂、增塑剂、盐、润滑剂、染料、颜料、还原剂、抗氧化剂、过氧化物分解催化剂(例如,过氧化氢酶)、酸性缓冲组分和芳香剂。
芯可由至少一个涂层围绕,例如以改善储存稳定性,在处理期间减少粉尘形成,或用于对该颗粒进行着色。任选的涂层可包括盐涂层或其他合适的涂层材料,诸如聚乙二醇(PEG)、甲基羟丙基纤维素(MHPC)和聚乙烯醇(PVA)。
涂层优选地为至少0.1μm厚,特别是至少0.5μm、至少1μm或至少5μm。在一些实施方案中,涂层的厚度低于100μm,诸如低于60μm或低于40μm。
涂层应通过形成基本上连续的层来包封芯单元。基本上连续的层应被理解为只有很少或没有孔的涂层,使得其包封/封闭的芯单元只有很少或没有未涂覆的区域。具体地,该层或涂层应是厚度上均匀的。
涂层还可包含如本领域已知的其他材料,例如填料、抗粘剂、颜料、染料、增塑剂和/或粘结剂,诸如二氧化钛、高岭土、碳酸钙或滑石。
盐涂层可包含至少60重量%的盐,例如至少65重量%、至少70重量%、至少75重量%、至少80重量%、至少85重量%、至少90重量%、至少95重量%或至少99重量%。
为了提供可接受的保护,盐涂层优选地为至少0.1μm厚,例如至少0.5μm、至少1μm、至少2μm、至少4μm、至少5μm或至少8μm。在一个特定实施方案中,盐涂层的厚度低于100μm,诸如低于60μm或低于40μm。
盐可以是无机盐,例如硫酸、亚硫酸、磷酸、膦酸、硝酸、氯化物或碳酸的盐,或者简单有机酸的盐(小于10个碳原子,例如6个或更少碳原子)诸如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。这些盐中的阳离子的示例是碱金属或碱土金属离子、铵离子或第一过渡系的金属离子,诸如钠、钾、镁、钙、锌或铝。阴离子的示例包括氯离子、溴离子、碘离子、硫酸根、亚硫酸根、亚硫酸氢根、硫代硫酸根、磷酸根、磷酸二氢根、磷酸一氢根、次磷酸根、焦磷酸二氢根、四硼酸根、硼酸根、碳酸根、碳酸氢根、偏硅酸根、柠檬酸根、苹果酸根、马来酸根、丙二酸根、琥珀酸根、乳酸根、甲酸根、乙酸根、丁酸根、丙酸根、苯甲酸根、酒石酸根、抗坏血酸根或葡萄糖酸根。具体地,可使用硫酸、亚硫酸、磷酸、膦酸、硝酸、氯化物或碳酸的碱金属盐或碱土金属盐,或简单有机酸的盐诸如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。在一个实施方案中,盐是硫酸钠。
颗粒可任选地具有一个或多个附加涂层。合适涂层材料的示例是聚乙二醇(PEG)、甲基羟丙基纤维素(MHPC)和聚乙烯醇(PVA)。具有多个涂层的酶颗粒的示例在WO 93/07263和WO 97/23606中有所描述。
颗粒还可包含一种或多种附加酶。于是每种酶将存在于更多颗粒中,从而确保酶的更均匀分布,并且由于粒度不同,还减少了不同酶的物理分离。用于制备多酶复合颗粒的方法在ip.com公开IPCOM000200739D中公开。
在一个实施方案中,颗粒还包含一种或多种附加酶,例如水解酶、异构酶、连接酶、裂解酶、氧化还原酶和转移酶。该一种或多种附加酶优选地选自乙酰木聚糖酯酶、酰基甘油脂肪酶、淀粉酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、阿魏酸酯酶、半乳聚糖酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶、β-葡糖苷酶、溶血磷脂酶、溶菌酶、α-甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶(甘露聚糖酶)、植酸酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶D、蛋白酶、普鲁兰酶、果胶酯酶、三酰基甘油脂肪酶、木聚糖酶、β-木糖苷酶或它们的任何组合。
颗粒可经由多种充分描述的加工技术来制备,包括喷雾干燥、经由流化床过程的分层和混合器制粒产品(其中将含酶液体添加到常规制粒组分的干粉组合物中)。由酶、填料和粘结剂等组成的颗粒与纤维素纤维混合以加强颗粒,从而产生所谓的T颗粒。加强的颗粒是更加坚固,并且释放更少酶粉尘)。
发酵液制剂或细胞组合物
本发明还涉及包含本发明的α-淀粉酶变体的发酵液制剂或细胞组合物。发酵液制剂或细胞组合物还包含发酵过程中使用的附加成分,诸如例如细胞(包括:包含编码本发明的多肽的基因的宿主细胞,这些宿主细胞用于产生感兴趣的多肽)、细胞碎片、生物质、发酵培养基和/或发酵产物。在一些实施方案中,该组合物是杀死细胞的全发酵液,其包含有机酸、杀死的细胞和/或细胞碎片以及培养基。
如本文所用,术语“发酵液”是指通过细胞发酵产生并且不经历或经历最少回收和/或纯化的制备物。例如,当微生物培养物生长到饱和,在限碳条件下温育以允许蛋白质合成(例如,由宿主细胞表达酶)和分泌到细胞培养基中时,产生发酵液。发酵液可包含在发酵结束时得到的发酵材料的未分级或分级成分。通常,发酵液是未分级的并且包含在例如通过离心去除微生物细胞(例如,丝状真菌细胞)之后存在的消耗培养基和细胞碎片。在一些实施方案中,发酵液包含消耗细胞培养基、胞外酶以及活的和/或非活的微生物细胞。
在一些实施方案中,发酵液制剂或细胞组合物包含第一有机酸组分和第二有机酸组分,该第一有机酸组分包含至少一种1-5碳有机酸和/或其盐,并且该第二有机酸组分包含至少一种6碳或更多碳有机酸和/或其盐。在一些实施方案中,第一有机酸组分是乙酸、甲酸、丙酸或其盐或前述物质中的两者或更多者的混合物,并且第二有机酸组分是苯甲酸、环己甲酸、4-甲基戊酸、苯乙酸、其盐或前述物质中的两者或更多者的混合物。
在一个方面,该组合物包含有机酸,并且任选地还包含杀死的细胞和/或细胞碎片。在一些实施方案中,从杀死细胞的全发酵液中去除杀死的细胞和/或细胞碎片以提供不含这些组分的组合物。
发酵液制剂或细胞组合物还可包含防腐剂和/或抗微生物(例如,抑菌)剂,包括但不限于山梨糖醇、氯化钠、山梨酸钾和本领域已知的其他组分。
杀死细胞的全发酵液或组合物可包含在发酵结束时得到的发酵材料的未分级成分。通常,杀死细胞的全发酵液或组合物包含在微生物细胞(例如,丝状真菌细胞)生长到饱和,在限碳条件下温育以允许蛋白质合成之后存在的消耗培养基和细胞碎片。在一些实施方案中,杀死细胞的全发酵液或组合物包含消耗细胞培养基、胞外酶和杀死的丝状真菌细胞。在一些实施方案中,可使用本领域已知的方法透化和/或裂解杀死细胞的全发酵液或组合物中存在的微生物细胞。
如本文所述的全发酵液或细胞组合物通常为液体,但可包含不溶性组分,诸如杀死的细胞、细胞碎片、培养基组分和/或不溶性酶。在一些实施方案中,可去除不溶性组分以提供澄清的液体组合物。
可通过WO 90/15861或WO 2010/096673中所述的方法来产生本发明的全发酵液制剂和细胞组合物。可制备α-淀粉酶以便以预混物的形式掺入清洁组合物中,该预混物可包含α-淀粉酶作为主要酶组分,例如单组分预混物。另选地,预混物可具有多种酶活性,诸如氨基肽酶、附加淀粉酶、糖酶、羧肽酶、过氧化氢酶、纤维素酶、壳多糖酶、角质酶、环糊精糖基转移酶、脱氧核糖核酸酶、酯酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、α-葡糖苷酶、β-葡糖苷酶、卤素过氧化物酶、氨基己糖苷酶、转化酶、漆酶、脂肪酶、甘露糖苷酶、氧化酶、果胶分解酶、肽谷氨酰胺酶、过氧化物酶、植酸酶、多酚氧化酶、蛋白水解酶、核糖核酸酶、转谷氨酰胺酶或木聚糖酶。存在于预混物中的附加酶可例如由属于芽孢杆菌属(Bacillus)的微生物产生,例如地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)和枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis),或由属于曲霉属(Aspergillus)的微生物产生,例如棘孢曲霉(Aspergillusaculeatus)、泡盛曲霉(Aspergillus awamori)、臭曲霉(Aspergillus foetidus)、烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、日本曲霉(Aspergillus japonicus)、构巢曲霉(Aspergillusnidulans)、黑曲霉(Aspergillus niger)或米曲霉(Aspergillus oryzae);由属于镰刀霉属(Fusarium)的微生物产生,例如杆孢状镰孢(Fusarium bactridioides)、禾谷镰孢(Fusarium cerealis)、Fusarium crookwellense、大刀镰孢(Fusarium culmorum)、禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、禾赤镰孢(Fusarium graminum)、Fusarium heterosporum、Fusarium negundi、尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)、多枝镰孢(Fusariumreticulatum)、粉红镰孢(Fusarium roseum)、接骨木镰孢(Fusarium sambucinum)、肤色镰孢(Fusarium sarcochroum)、硫色镰刀菌(Fusarium sulphureum)、Fusarium toruloseum、丝孢镰刀菌(Fusarium trichothecioides)、或镰孢霉(Fusarium venenatum);由属于腐质霉属(Humicola)的微生物产生,例如特异腐质霉(Humicola insolens)或Humicolalanuginosa;或由属于木霉属(Trichoderma)的微生物产生,例如哈茨木霉(Trichodermaharzianum)、康宁木霉(Trichoderma koningii)、长梗木霉(Trichodermalongibrachiatum)、里氏木霉(Trichoderma reesei)或绿色木霉(Trichoderma viride),或由本文所述的任何其他宿主细胞产生。
预混物可根据本领域已知的方法来制备并且可呈液体或干燥组合物的形式。例如,预混物可呈颗粒或微粒的形式。淀粉酶变体可根据本领域已知的方法进行稳定。用于掺入预混物中的优选附加组分可选自:酶稳定剂、可逆蛋白酶抑制剂、表面活性剂、附加酶以及它们的混合物,所有这些组分均如本文所述。
清洁组合物
本发明的清洁组合物优选地涉及用于以下的产品和/或涉及以下的方法和/或用于以下的受权利要求保护的组合物的用途:空气护理、汽车护理、盘碟洗涤、衣物清洁、护理、(调理和/或软化)、衣物洗涤和漂洗添加剂、硬质表面清洁和/或处理、以及用于消费者或机构用途的其他清洁。优选地,该组合物包含衣物洗涤剂或硬质表面清洁组合物,诸如盘碟洗涤组合物,优选地衣物洗涤剂。本发明的组合物可为固体(例如,条、片剂、粉末、颗粒)、液体、凝胶和/或糊剂,或可呈片材的形式,优选地为液体。优选的形式是单位剂量形式,其可为片剂、片材或优选地小袋,优选地包含液体和/或固体组合物的水溶性小袋。优选的是多隔室小袋。尤其优选的是单位剂量形式,其包含以小袋的形式、任选地以多组分小袋的形式包封在水溶性材料中的液体洗涤剂。优选的单位剂量包含液体衣物洗涤剂/护理组合物。
液体洗涤剂可为水性的,通常包含至多70%的水和0%至30%的有机溶剂,或为非水的或包含大于0.5g/L洗涤剂组合物的溶液。
本发明的组合物可例如被配制成手洗或机洗衣物洗涤剂组合物,该组合物包括适于预处理带污渍的织物的衣物洗涤添加剂组合物和漂洗加入的织物软化剂组合物,或被配制成用于一般的家居硬质表面清洁操作的洗涤剂组合物,或被配制成用于手洗或机洗盘碟洗涤操作。
本发明的清洁组合物可呈皂条的形式,优选地为洗衣皂条,并且可用于手洗衣物、织物和/或纺织物。术语洗衣皂条包括洗衣条、皂条、组合条、合成洗涤剂条和洗涤剂条。
除了杂交体多肽或淀粉酶变体酶之外,清洁组合物还包含清洁/洗涤剂助剂。表述清洁助剂在本文中通常包括多于一种清洁助剂的组合。通常,清洁助剂将以从0.0001重量%至99.9999重量%、优选地从10重量%至99.999重量%、优选地至少30重量%或40重量%或50重量%的清洁助剂的量存在于组合物中。合适的清洁助剂包括:表面活性剂、助洗剂、漂白剂、漂白催化剂、着色剂、漂白增强剂、螯合剂、染料转移剂、沉积助剂、分散剂、附加酶、酶稳定剂、催化材料、漂白活化剂、过氧化氢、过氧化氢源、荧光增白剂、光活化剂、荧光剂、织物调色剂、织物调理剂、预成形过酸、聚合物分散剂、粘土污垢去除/抗再沉积剂、填料盐、水溶助长剂、增白剂、抑泡剂、结构增弹剂、织物软化剂、可水解表面活性剂、防腐剂、抗氧化剂、抗收缩剂、杀菌剂、杀真菌剂、抗变色剂、抗腐蚀剂、碱度来源、增溶剂、载体、加工助剂、颜料、染料、香料和pH控制剂、包封物、聚合物以及它们的混合物。例如,这些清洁助剂可包含:漂白成分,诸如亚胺漂白增强剂;过氧化氢源,诸如过碳酸盐和/或过硼酸盐,特别是涂覆有诸如碳酸盐和/或硫酸盐、硅酸盐、硼硅酸盐、以及它们的任何混合物的材料的过碳酸盐;预成形过酸,包括胶囊包封形式的预成形过酸;过渡金属催化剂;抑泡剂或抑泡体系,诸如基于有机硅的抑泡剂和/或基于脂肪酸的抑泡剂;织物软化剂,诸如粘土、硅氧烷和/或季铵化合物;絮凝剂,诸如聚环氧乙烷;染料转移抑制剂,诸如聚乙烯吡咯烷酮、聚4-乙烯基吡啶N-氧化物和/或乙烯基吡咯烷酮和乙烯基咪唑的共聚物;织物完整组分,例如通过咪唑和表氯醇缩合生成的低聚物;污垢分散剂和污垢抗再沉积助剂例如烷氧基化的聚胺和乙氧基化的乙烯亚胺聚合物;抗再沉积组分,诸如聚酯;羧酸盐聚合物,诸如马来酸聚合物或马来酸和丙烯酸的共聚物;香料,诸如香料微胶囊、淀粉包封调和物、香料喷雾;皂环;美观颗粒;染料;填料,诸如硫酸钠和/或柑橘纤维,但是该组合物可优选地基本上不含填料;硅酸盐,诸如硅酸钠(包括1.6R和2.0R硅酸钠)或偏硅酸钠;二羧酸和二醇的共聚酯;纤维素聚合物,例如甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟基乙氧基纤维素、或其他烷基或烷基烷氧基纤维素;溶剂,诸如1,2-丙二醇、单乙醇胺;二甘醇、乙醇、以及它们的任何混合物;水溶助长剂,诸如异丙基苯磺酸钠、二甲苯磺酸钠、甲苯磺酸钠、以及任何混合物;有机酸,诸如柠檬酸;以及它们的任何组合。优选地,该组合物包含清洁助剂,该清洁助剂包含表面活性剂和附加酶。优选地,该组合物包含选自以下的一种或多种助剂:(i)香料微胶囊;(ii)织物调色剂;(iii)蛋白酶;(iv)两亲性清洁聚合物;(v)脂肪酶;(vi)脱氧核糖核酸酶和/或核糖核酸酶;(vii)甘露聚糖酶;(viii)黄原胶裂解酶;(ix)氨基己糖苷酶;或(viii)它们的混合物。
优选地,该组合物包含表面活性剂,该表面活性剂优选地占该组合物的0.1重量%至60重量%、或0.5重量%至50重量%、或1重量%至40重量%。表面活性剂优选地包括表面活性剂体系,该表面活性剂体系包含多于一种表面活性剂的混合物,该混合物可包含例如阴离子、非离子(包括半极性)、阳离子、两性离子和/或两性表面活性剂以及它们的混合物。
优选地,该组合物包含阴离子表面活性剂。优选的阴离子表面活性剂为磺酸盐和硫酸盐表面活性剂,优选地为烷基苯磺酸盐和/或(任选地烷氧基化的)烷基硫酸盐。特别优选的阴离子表面活性剂包括直链烷基苯磺酸盐(LAS)。优选的烷基硫酸盐包括烷基醚硫酸盐,特别是C-9-15醇醚硫酸盐(特别是具有0.5至7、优选地1至5的平均乙氧基化度的那些)、C8-C16酯硫酸盐和C10-C14酯硫酸盐(如单十二烷基酯硫酸盐)。在根据本发明的优选的组合物中,表面活性剂包括阴离子表面活性剂,优选地包括烷基苯磺酸盐和/或任选地乙氧基化烷基硫酸盐,优选地具有0至7、更优选地0.5至3的乙氧基化度。LAS的异构体、支链烷基苯磺酸盐(BABS)、苯基链烷磺酸盐、α-烯烃磺酸盐(AOS)、聚烯烃磺酸盐、单烯烃磺酸盐、链烷-2,3-二基双(硫酸盐)、羟烷基磺酸盐和二磺酸盐,烷基硫酸盐(AS),诸如十二烷基硫酸钠(SDS)、脂肪醇硫酸盐(FAS)、伯醇硫酸盐(PAS)、醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES,也称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐),仲烷基磺酸盐(SAS)、石蜡磺酸盐(PS)、酯磺酸盐、磺化脂肪酸甘油酯、α-磺基脂肪酸甲酯(α-SFMe或SES)(包括甲酯磺酸盐(MES))、烷基琥珀酸或烯基琥珀酸、十二烷基/十四烷基琥珀酸(DTSA)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺基琥珀酸的二酯和单酯或脂肪酸的盐(皂)、以及它们的组合也是合适的阴离子表面活性剂。在一个优选的实施方案中,表面活性剂包括阴离子表面活性剂,优选地包括烷基苯磺酸盐和/或任选地乙氧基化烷基硫酸盐,优选地具有0至7、更优选地0.5至3的乙氧基化度。
优选地将阴离子表面活性剂以盐的形式添加到清洁组合物。优选的阳离子为碱金属离子,诸如钠和钾。然而,阴离子表面活性剂的盐形式可通过使用碱(诸如氢氧化钠或胺如单乙醇胺、二乙醇胺或三乙醇胺)中和表面活性剂的酸形式而原位形成。优选地,表面活性剂包括非离子表面活性剂。优选地,该表面活性剂包括阴离子表面活性剂和非离子表面活性剂,该阴离子表面活性剂与该非离子表面活性剂的重量比优选地为30:1至1:2、优选地20:1至2:3或至1:1。
非离子表面活性剂的非限制性示例包括醇乙氧基化物(AE或AEO)、醇丙氧基化物、丙氧基化脂肪醇(PFA)、烷氧基化脂肪酸烷基酯,诸如乙氧基化和/或丙氧基化脂肪酸烷基酯、烷基酚乙氧基化物(APE)、壬基酚乙氧基化物(NPE)、烷基多苷(APG)、烷氧基化胺、脂肪酸单乙醇酰胺(FAM)、脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)、乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)、丙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM)、多羟基烷基脂肪酸酰胺、或葡糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(葡糖酰胺,GA或脂肪酸葡糖酰胺,FAGA)、以及可以商品名SPAN和TWEEN购得的产品、以及它们的组合。尤其优选的是醇乙氧基化物,其优选地具有C9-18烷基链、优选地C12-15烷基链,并且优选地具有3至9、更优选地3至7的平均乙氧基化度。可商购获得的非离子表面活性剂包括得自BASF的PlurafacTM、lutensolTM和pluronicTM,得自Cognis的DehyponTM系列,和得自Clariant的Cognis和genapolTM系列。
清洁组合物优选地包含约1%至约40%的阴离子表面活性剂。清洁组合物优选地包含0.2%至约40%的非离子表面活性剂。
清洁组合物优选地包含一种或多种附加酶。因此,优选的组合物包含:(a)如本文所定义的淀粉酶,和(b)一种或多种附加酶,该一种或多种附加酶优选地选自氨基肽酶、附加淀粉酶、糖酶、羧肽酶、过氧化氢酶、纤维素酶、壳多糖酶、角质酶、环糊精糖基转移酶、脱氧核糖核酸酶、内切葡聚糖酶、酯酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、α-葡糖苷酶、β-葡糖苷酶、卤素过氧化物酶、卤代过氧合酶、氨基己糖苷酶、转化酶、漆酶、地衣多糖酶(licheninase)、脂肪酶、甘露聚糖酶、甘露糖苷酶、氧化酶、果胶酶、果胶裂解酶、果胶分解酶、肽谷氨酰胺酶、过氧化物酶、植酸酶、多酚氧化酶、蛋白水解酶(蛋白酶)、过氧化物酶、核糖核酸酶、转谷氨酰胺酶、木聚糖酶、黄原胶裂解酶、黄原胶酶以及它们的混合物。优选地,组合物包含附加酶,该附加酶选自黄原胶裂解酶、黄原胶酶、甘露聚糖酶、以及它们的混合物。尤其优选的是甘露聚糖酶。还尤其优选的是黄原胶裂解酶和黄原胶酶以及它们的混合物。蛋白酶、脂肪酶和/或纤维素酶是优选的,特别是蛋白酶。附加酶可例如由属于曲霉属(Aspergillus)的微生物产生,例如棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus)、泡盛曲霉(Aspergillus awamori)、臭曲霉(Aspergillus foetidus)、烟曲霉(Aspergillusfumigatus)、日本曲霉(Aspergillus japonicus)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)、黑曲霉(Aspergillus niger)或米曲霉(Aspergillus oryzae);由属于镰刀霉属(Fusarium)的微生物产生,例如杆孢状镰孢(Fusarium bactridioides)、禾谷镰孢(Fusariumcerealis)、Fusariumcrookwellense、大刀镰孢(Fusarium culmorum)、禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、禾赤镰孢(Fusarium graminum)、Fusarium heterosporum、Fusarium negundi、尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)、多枝镰孢(Fusariumreticulatum)、粉红镰孢(Fusarium roseum)、接骨木镰孢(Fusarium sambucinum)、肤色镰孢(Fusarium sarcochroum)、硫色镰刀菌(Fusarium sulphureum)、Fusarium toruloseum、丝孢镰刀菌(Fusarium trichothecioides)、或镰孢霉(Fusarium venenatum);由属于腐质霉属(Humicola)的微生物产生,例如特异腐质霉(Humicola insolens)或Humicolalanuginosa;或由属于木霉属(Trichoderma)的微生物产生,例如哈茨木霉(Trichodermaharzianum)、康宁木霉(Trichoderma koningii)、长梗木霉(Trichodermalongibrachiatum)、里氏木霉(Trichoderma reesei)或绿色木霉(Trichoderma viride)。
优选地,该组合物包含以下组分中的一种或多种:蛋白酶、脂肪酶、过氧化物酶、附加淀粉分解酶(例如附加α-淀粉酶、葡糖淀粉酶、异淀粉酶、麦芽糖淀粉酶,优选地附加α-淀粉酶)、环糊精葡萄糖基转移酶、纤维素酶、甘露聚糖酶(诸如得自Novozymes,Denmark的MANNAWAYTM)、果胶酶、果胶裂解酶、角质酶和/或漆酶或这些组分中的多于一种组分的混合物。
一般来讲,所选择酶的特性通常将与所选择的洗涤剂相容(即最适pH、与其他酶或非酶成分相容等),并且该酶应当以有效量存在。优选地,本发明的组合物包含至少0.01mg、优选地约0.05mg至约10mg、更优选地约0.1mg至约6mg、特别是约0.2mg至约5mg另外的活性酶/g组合物。
蛋白酶:本发明的组合物可包含一种或多种蛋白酶。两种或更多种蛋白酶的混合物可有助于在较宽的温度、循环持续时间和/或底物范围内增强清洁(并且提供硬质表面上优异的光泽有益效果,尤其是当与抗再沉积剂和/或磺化聚合物结合使用时)。合适的蛋白酶包括金属蛋白酶和丝氨酸蛋白酶,丝氨酸蛋白酶包括中性或碱性微生物丝氨酸蛋白酶,诸如枯草杆菌蛋白酶(EC 3.4.21.62)。合适的蛋白酶包括动物源、植物源或微生物源的那些。在一个方面,此类合适的蛋白酶可为微生物源。合适的蛋白酶包括前述合适蛋白酶的经化学修饰或基因修饰的突变体。在一个方面,合适的蛋白酶可为丝氨酸蛋白酶,诸如碱性微生物蛋白酶或/和胰蛋白酶型蛋白酶。合适的中性或碱性蛋白酶的示例包括:
枯草杆菌蛋白酶(EC 3.4.21.62),特别是WO2004067737、WO2015091989、WO2015091990、WO2015024739、WO2015143360、US 6,312,936B1、US 5,679,630、US 4,760,025、DE102006022216A1、WO2015089447、WO2015089441、WO2016066756、WO2016066757、WO2016069557、WO2016069563、WO2016069569、WO2016174234、WO2017/089093、WO2020/156419中所述的来源于芽孢杆菌(Bacillus)(诸如芽孢杆菌属、迟缓芽孢杆菌(B.lentus)、嗜碱芽孢杆菌(B.alkalophilus)、枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)、吉氏芽孢杆菌(B.gibsonii)、秋叶氏芽孢杆菌(B.akibaii)、克劳氏芽孢杆菌(Bacillus Clausii)和克氏芽孢杆菌(B.clarkii))的那些。具体地,突变S9R、A15T、V66A、A188P、V199I、N212D、Q239R、N255D、X9E、X200L、X256E、X9R、X19L、X60D(Savinase编号系统);
来自短小芽孢杆菌(B.pumilus)的枯草杆菌蛋白酶诸如DE102006022224A1、WO2020/221578、WO2020/221579、WO2020/221580中所述的枯草杆菌蛋白酶,包括包含选自9、130、133、144、252、271(BPN’编号系统)的位置中的至少一个或多个位置中的氨基酸替换的变体;
胰蛋白酶型或胰凝乳蛋白酶型蛋白酶,诸如胰蛋白酶(例如源自猪或牛的胰蛋白酶),包括WO 89/06270中所述的镰孢菌蛋白酶和WO 05/052161和WO 05/052146中所述的来源于纤维单胞菌属(Cellumonas)的胰凝乳蛋白酶;
金属蛋白酶,特别是WO 07/044993A2中所述的来源于解淀粉芽孢杆菌的那些;WO2014194032、WO2014194054和WO2014194117中所述的来源于芽孢杆菌属、短芽胞杆菌属(Brevibacillus)、热放线菌属(Thermoactinomyces)、杆菌属(Geobacillus)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、赖氨酸芽胞杆菌属(Lysinibacillus)或链霉菌属菌种的那些;WO2015193488中所述的来源于Kribella alluminosa的那些;以及WO2016075078中所述的来源于链霉菌属和溶杆菌属(Lysobacter)的那些;
与在WO92/17577(Novozymes A/S)中所述的来自芽孢杆菌属TY145,NCIMB 40339的枯草杆菌酶具有至少90%同一性的蛋白酶,包括WO2015024739和WO2016066757中所述的该芽孢杆菌属TY145枯草杆菌酶的变体。
用于本发明的洗涤剂的特别优选的附加蛋白酶是与来自迟缓芽孢杆菌的野生型酶具有至少90%、优选至少95%、更优选至少98%、甚至更优选至少99%、特别是100%的同一性的多肽,使用如WO00/37627(其以引用方式并入本文)中所示的BPN'编号系统和氨基酸缩写,所述多肽在下列一个或多个、优选两个或更多个、更优选三个或更多个位置包含突变:S9R、A15T、V68A、N76D、N87S、S99D、S99SD、S99A、S101G、S101M、S103A、V104N/I、G118V、G118R、S128L、P129Q、S130A、Y167A、R170S、A194P、V205I、Q206L/D/E、Y209W、M222S、Q245R和/或M222S。
最优选地,蛋白酶选自相对于PB92野生型(WO 08/010925中的SEQ ID NO:2)或枯草杆菌蛋白酶309野生型(按照PB92主链的序列,不同的是包含自然变异N87S)包含下列突变(BPN'编号系统)的组。
(i)G118V+S128L+P129Q+S130A
(ii)S101M+G118V+S128L+P129Q+S130A
(iii)N76D+N87R+G118R+S128L+P129Q+S130A+S188D+N248R
(iv)N76D+N87R+G118R+S128L+P129Q+S130A+S188D+V244R
(v)N76D+N87R+G118R+S128L+P129Q+S130A
(vi)V68A+N87S+S101G+V104N
(vii)S99AD
(viii)S9R+A15T+V68A+N218D+Q245R
合适的可商购获得的附加蛋白酶包括以如下商品名由Novozymes A/S(Denmark)出售的那些:、、、、、、、Liquanase 、Savinase 、 、 、、、、、、Blaze 、 、 Exceed、 Pro、、Uno、Excel、 Key、、和Het;以商品名、、、、、Purafect 、Purafect、、、、和Purafect 由Dupont出售的那些;以商品名和由Solvay Enzymes出售的那些;可从Henkel/Kemira获得的那些,即BLAP(序列示于US 5,352,604的图29中,具有下列突变S99D+S101R+S103A+V104I+G159S,下文称为BLAP)、BLAP R(具有S3T+V4I+V199M+V205I+L217D的BLAP)、BLAP X(具有S3T+V4I+V205I的BLAP)和BLAP F49(具有S3T+V4I+A194P+V199M+V205I+L217D的BLAP);并且可任选地包含另外的突变101E或101D;KAP(具有突变A230V+S256G+S259N的嗜碱芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶)(Kao);以及得自BASF的、 Pro、CBright。
本发明产品中蛋白酶的优选含量包括约0.05mg至约10mg、更优选地约0.5mg至约7mg并且特别是约1mg至约6mg活性蛋白酶/g组合物。
脂肪酶:合适的脂肪酶包括源自细菌或真菌的那些。包括经化学修饰或蛋白质工程化的突变体。可用脂肪酶的示例包括来自腐质霉属(同义词嗜热真菌属(Thermomyces))的脂肪酶,例如来自柔毛腐质霉(疏绵状嗜热丝孢菌(T.lanuginosus))或来自特异腐质霉的脂肪酶,假单胞菌属脂肪酶(Pseudomonas lipase),例如来自产碱假单胞菌(P.alcaligenes)或类产碱假单胞菌(P.pseudoalcaligenes)、洋葱假单胞菌(P.cepacia)、施氏假单孢菌(P.stutzeri)、荧光假单胞菌(P.fluorescens)、假单胞菌属(Pseudomonassp.)菌株SD 705,威斯康星假单胞菌(P.wisconsinensis)的脂肪酶,芽孢杆菌属脂肪酶,例如来自枯草芽孢杆菌的脂肪酶(Dartois等人(1993年)Biochemica et Biophysica Acta(《生物化学与生物物理学报》),第1131卷,第253-360页),嗜热脂肪芽孢杆菌(B.stearothermophilus)或短小芽孢杆菌。
脂肪酶可为“第一循环脂肪酶”,诸如美国专利6,939,702 B1和美国专利2009/0217464中所述的那些。在一个方面,脂肪酶为第一洗涤脂肪酶,优选地为来自包含T231R和N233R突变的疏绵状嗜热丝孢菌的野生型脂肪酶的变体。野生型序列是Swissprot登录号为Swiss-Prot O59952(来源于疏绵状嗜热丝孢菌(棉毛状腐质霉(Humicola lanuginosa)))的269个氨基酸(氨基酸23-291)。优选的脂肪酶将包括以商品名、和出售的那些。
纤维素酶:合适的纤维素酶包括源自细菌或真菌的那些。包括经化学修饰或蛋白质工程化的突变体。合适的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属(Bacillus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、腐质霉属(Humicola)、镰孢属(Fusarium)、梭孢壳属(Thielavia)、枝顶孢霉属(Acremonium)的纤维素酶,例如由特异腐质霉(Humicola insolens)、嗜热毁丝菌(Myceliophthora thermophila)和尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)产生的真菌纤维素酶。
在一个方面,优选的酶包括源自微生物的内切葡聚糖酶,其表现出内切-β-1,4-葡聚糖酶活性(E.C.3.2.1.4),优选地选自以下物质:
(a)芽孢杆菌属成员内源性的细菌多肽,其具有与US 7,141,403B2中氨基酸序列SEQ ID No:2至少90%、94%、97%和甚至99%的同一性的序列;
(b)糖基水解酶,其具有对木葡聚糖和非晶形纤维素底物的酶活性,其中该糖基水解酶选自GH第5、12、44或74家族;
(c)糖基水解酶,其具有与WO09/148983中的氨基酸序列SEQ ID NO:3有至少90%、94%、97%和甚至99%的同一性的序列;
(d)以及它们的混合物。
附加淀粉酶:优选地,该组合物包含附加(另外的)淀粉酶。合适的另外淀粉酶包括α-淀粉酶,包括源自细菌或真菌的那些。包括经化学修饰或基因修饰的突变体(变体)。优选的碱性α-淀粉酶来源于芽孢杆菌(Bacillus)的菌株,诸如地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、或其它芽孢杆菌属(Bacillus sp.),诸如芽孢杆菌属NCBI 12289、NCBI 12512、NCBI 12513、DSM 9375(USP7,153,818)、DSM 12368、DSMZ no.12649、KSM AP1378(WO 97/00324)、KSM K36或KSM K38(EP 1,022,334)。优选的另外淀粉酶可选自:(a)WO 94/02597、WO 94/18314、WO96/23874和WO 97/43424中所述的变体,尤其是相对于如WO 96/23874中SEQ ID NO:2所列的酶在一个或多个以下位置具有替换的变体:15、23、105、106、124、128、133、154、156、181、188、190、197、202、208、209、243、264、304、305、391、408和444;(b)WO 96/23873、WO00/60060、WO06/002643和WO2017/192657中所述的变体,尤其是相对于如WO 06/002643中SEQ ID No.12所列的AA560酶在以下位置具有一个或多个替换的变体:26、30、33、82、37、106、118、128、133、149、150、160、178、182、186、193、203、214、231、246、256、257、258、269、270、272、283、295、296、298、299、303、304、305、311、314、315、318、319、339、345、361、378、383、419、421、437、441、444、445、446、447、450、461、471、482、484,其优选地还包含D183*和G184*缺失;(c)表现出与WO06/002643中的SEQ ID No.4(来自芽孢杆菌属SP722的野生型酶)的至少90%的同一性的变体,尤其是在183和184位具有缺失的变体,以及WO 00/60060中描述的变体,将所述文献以引用方式并入本文;(d)变体表现出与来自芽孢杆菌属707(Bacillus sp.707)的野生型酶(US 6,093,562中的SEQ ID NO:7),尤其是包含下列突变中的一个或多个:M202、M208、S255、R172和/或M261的那些,至少95%的同一性。优选地,所述淀粉酶包含M202L、M202V、M202S、M202T、M202I、M202Q、M202W、S255N和/或R172Q中的一个或多个。尤其优选的是包含M202L或M202T突变的那些;(e)描述于WO 09/149130中的变体,优选地表现出与WO09/149130中的SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2(来自嗜热脂肪芽孢杆菌的野生型酶或其截短形式)的至少90%的同一性的那些。(f)表现出与WO2016091688中的SEQ ID NO:1的至少89%的同一性的变体,特别是在位置H183+G184处包含缺失并且还在位置405、位置421、位置422和/或位置428处包含一个或多个突变的那些;(g)表现出与来自解凝乳类芽孢杆菌YK9(Paenibacillus curdlanolyticus YK9)的“PcuAmylα-淀粉酶”(WO2014099523中的SEQID NO:3)的至少60%氨基酸序列同一性的变体;(h)表现出与来自噬细胞菌属(Cytophagasp.)的“CspAmy2淀粉酶”(WO2014164777中的SEQ ID NO:1)的至少60%氨基酸序列同一性的变体;(i)表现出与来自枯草芽孢杆菌的AmyE(WO2009149271中的SEQ ID NO:1)的至少85%的同一性的变体;(j)表现出与来自芽孢杆菌属KSM-K38的野生型淀粉酶(登录号AB051102)的至少90%的同一性的变体;(k)表现出与来自芽孢杆菌属的AAI10的成熟氨基酸序列(WO2016180748中的SEQ ID NO:7)的至少80%的同一性的变体;(l)表现出与脂环酸芽孢杆菌属(Alicyclobacillus sp.)淀粉酶的成熟氨基酸序列(WO2016180748中的SEQ IDNO:8)的至少80%的同一性的变体;或它们的混合物。在存在的情况下,本发明的组合物优选地包含从至少0.01mg、优选地从约0.05mg至约10mg、更优选地从约0.1mg至约6mg、特别是从约0.2mg至约5mg另外的活性淀粉酶/g组合物。
合适的可商购获得的α-淀粉酶包括、、、TERMAMYL、、、、STAINZYME、、、和(Novozymes A/S,Bagsvaerd,Denmark)、AT 9000Biozym BiotechTrading GmbH Wehlistrasse 27b A-1200Wien Austria、、、、OPTISIZE HT、、PREFERENZ系列(包括PREFERENZ和PREFERENZ)、PURASTAR(DuPont.,Palo Alto,California)和(Kao,14-10Nihonbashi Kayabacho,1-chome,Chuo-ku Tokyo 103-8210,Japan)。在一个方面,合适的淀粉酶包括、、、和STAINZYME以及它们的混合物。
过氧化物酶/氧化酶:合适的过氧化物酶/氧化酶包括源自植物、细菌或真菌的那些。包括经化学修饰或蛋白质工程化的突变体。可用的过氧化物酶的示例包括来自鬼伞属(Coprinus)(例如来自灰盖鬼伞(C.cinereus))的过氧化物酶及它们的变体,如WO 93/24618、WO 95/10602和WO 98/15257中所述的那些。
其他酶:其他优选的附加酶包括以商品名、出售的果胶酸裂解酶以及以商品名(均来自Novozymes A/S,Bagsvaerd,Denmark)和(Genencor International Inc.,Palo Alto,California)出售的甘露聚糖酶。
果胶酸裂解酶:合适的果胶酸裂解酶包括以商品名、、(均得自Novozymes A/S,Bagsvaerd,Denmark)、F1000(DuPontIndustrial Biosciences)出售的那些。
甘露聚糖酶。该组合物优选地包含一种或多种甘露聚糖酶。如本文所用,术语“甘露聚糖酶”或“半乳甘露聚糖酶”表示以下甘露聚糖酶:其根据本领域已知定义为甘露聚糖内切-1,4-β-甘露糖苷酶,并且具有别名β-甘露聚糖酶和内切-1,4-甘露聚糖酶并催化甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡甘露聚糖和半乳葡甘露聚糖中的1,4-β-D-甘露糖苷键的水解。甘露聚糖酶根据酶命名法分类为EC 3.2.1.78并且属于糖基水解酶家族5、26和113。许多合适的甘露聚糖酶属于糖基水解酶家族5。可商购获得的甘露聚糖酶包括所有以商品名(Novozymes A/S)诸如200L和Mannaway Evity 4.0T出售的那些。其他可商购获得的甘露聚糖酶包括M1000、375、PreferenzM100和(均得自DuPont Industrial Biosciences)及Biotouch M7(ABEnzymes)。其他合适的甘露聚糖酶属于糖基水解酶家族26,包括WO2018191135、WO2015040159、WO2017021515、WO2017021516、WO2017021517和WO2019081515中描述的那些。甘露聚糖酶的合适混合物包括WO2019081515中描述的糖基水解酶家族5和糖基水解酶家族26甘露聚糖酶的组合。
黄原胶降解酶:该组合物可包含一种或多种黄原胶降解酶。用于降解基于黄原胶的污渍的合适酶包括黄原胶内切葡聚糖酶,任选地与黄原胶裂解酶结合。如本文所用,术语“黄原胶内切葡聚糖酶”表示表现出内切-β-1,4-葡聚糖酶活性的酶,该酶能够任选地与合适的黄原胶裂解酶结合催化黄原胶的1,4-连接的β-D-葡萄糖聚合物主链的水解。合适的黄原胶内切葡聚糖酶在WO2013167581、WO2015181299、WO2015181292、WO2017046232、WO2017046260、WO201837062、WO201837065、WO2019038059和WO2019162000中有所描述。如本文所用,术语“黄原胶裂解酶”表示裂解黄原胶的β-D-甘露糖基-β-D-1,4-葡糖醛酸键的酶。此类酶属于E.C.4.2.2.12。合适的黄原胶裂解酶在WO2015001017、WO2018037061、WO201837064、WO2019038060、WO2019162000和WO2019038057中有所描述。
核酸酶:优选地,该组合物包含核酸酶,诸如RNA酶或DNA酶或它们的混合物。核酸酶是能够裂解核酸的核苷酸亚单位之间的磷酸二酯键的酶。本文的核酸酶优选地为脱氧核糖核酸酶或核糖核酸酶或它们的功能性片段。所谓的功能性片段或部分是指核酸酶的催化DNA主链中磷酸二酯键的裂解的部分,并且因此是保留催化活性的所述核酸酶蛋白的区域。因此,它包括酶和/或变体和/或衍生物和/或同源物的功能得以维持的截短但功能性形式。
优选地,核酸酶是脱氧核糖核酸酶,优选地选自以下类中的任一种:E.C.3.1.21.x,其中x=1、2、3、4、5、6、7、8或9,E.C.3.1.22.y,其中y=1、2、4或5,E.C.3.1.30.z,其中z=1或2,E.C.3.1.31.1以及它们的混合物。
DNA酶:合适的DNA酶包括由WO2017162836(Novozymes)中的SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8和9定义的DNA酶的野生型和变体,和包括WO2018011277(Novozymes)中所述的那些在内的食物芽孢杆菌(Bacillus cibi)DNA酶的变体,上述文献以引用方式并入本文。优选的DNA酶如共同未决的欧洲专利申请EP18202967中所述。
RNA酶:合适的RNA酶包括由WO2018178061(Novozymes)中的SEQ ID NO:3、6、9、12、15、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、72和73定义的DNA酶的野生型和变体,上述文献以引用方式并入本文。
氨基己糖苷酶:该组合物可包含一种或多种氨基己糖苷酶。术语氨基己糖苷酶包括“分散蛋白”和缩写"Dsp",其是指具有氨基己糖苷酶活性的多肽,EC 3.2.1.-该酶催化存在于微生物源污渍中的N-乙酰基-葡糖胺聚合物的β-1,6-糖苷键的水解。术语氨基己糖苷酶包括具有N-乙酰葡糖胺糖苷酶活性和β-Ν-乙酰葡糖胺糖苷酶活性的多肽。可根据WO2018184873中所述的测定法II来确定氨基己糖苷酶活性。合适的氨基己糖苷酶包括WO2017186936、WO2017186937、WO2017186943、WO2017207770、WO2018184873、WO2019086520、WO2019086528、WO2019086530、WO2019086532、WO2019086521、WO2019086526、WO2020002604、WO2020002608、WO2020007863、WO2020007875、WO2020008024、WO2020070063、WO2020070249、WO2020088957、WO2020088958和WO2020207944中公开的那些。由WO2020207944的SEQ ID NO:1定义的嗜糖土地芽孢杆菌氨基己糖苷酶的变体可为优选的,特别是该公布中公开的具有改善的热稳定性的变体。
半乳聚糖酶:优选地,组合物包含半乳聚糖酶,即包含内切-β-1,6-半乳聚糖酶的细胞外聚合物降解酶。术语“内切-β-1,6-半乳聚糖酶”或“具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽”是指催化聚合度(DP)高于3的1,6-3-D-低聚半乳糖水解裂解的来自糖苷水解酶家族30的内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性(EC 3.2.1.164),以及它们在非还原末端具有4-O-甲基葡糖醛酸或葡糖醛酸酯基团的酸性衍生物。出于本公开的目的,内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性根据WO 2015185689中的测定法I中所述的过程测定。来自EC 3.2.1.164的合适的示例描述于WO 2015185689中,诸如成熟多肽SEQ ID NO:2。
可通过添加包含附加酶的单独酶添加剂或者包含这些附加酶中的两种或若干种或所有附加酶的组合酶添加剂来将附加酶包括在洗涤剂组合物中。这种酶添加剂可呈颗粒、液体或浆液的形式,优选地另外包含酶稳定剂。
优选地,基于该组合物的重量计,该附加酶或每种附加酶将以至少0.0001重量%至约0.1重量%的纯活性酶蛋白诸如约0.0001%至约0.01%、约0.001%至约0.01%或约0.001%至约0.01%的量存在于该组合物中。
可通过添加包含一种或多种酶的单独添加剂(预混物)或通过添加包含所有这些酶的组合添加剂(预混物)来将酶包括在清洁组合物中。本发明的洗涤剂添加剂(即,单个添加剂或混合添加剂)可被配制成例如颗粒、液体、浆液等。优选的洗涤剂添加剂制剂是颗粒,具体地为无粉尘颗粒、液体,具体地为稳定液体、或混悬液。
可生产无粉尘颗粒,并且可任选地通过本领域已知的方法进行涂覆。蜡质涂层材料的示例为聚(环氧乙烷)产品(聚乙二醇,PEG),其具有1000至20000平均摩尔量;具有16至50个亚乙基氧单元的乙氧基化对壬基苯酚;乙氧基化脂肪醇,其中该醇包含12至20个碳原子,并且其中存在15至80个亚乙基氧单元;脂肪醇、脂肪酸;和脂肪酸甘油一酯和甘油二酯和甘油三酯。成膜涂层材料可例如通过流化床技术来施加。例如液体酶制备可根据已建立的方法,通过加入多元醇如丙二醇、糖或糖醇、乳酸或硼酸来稳定。
清洁组合物可包含织物调色剂(有时被称为遮光剂、上蓝剂或美白剂)。调色剂通常向织物提供蓝色或紫色色调。调色剂能够单独使用或组合使用,以产生特定的调色色调和/或对不同的织物类型调色。这可例如通过将红色和蓝绿色染料混合以产生蓝色或紫色色调来提供。调色剂可选自任何已知化学类别的染料,包括但不限于吖啶、蒽醌(包括多环醌类)、吖嗪、偶氮(例如,单偶氮、双偶氮、三偶氮、四偶氮、多偶氮)、包括预金属化偶氮、苯并二呋喃和苯并二呋喃酮、类胡萝卜素、香豆素、花菁、二氮杂半花菁、二苯甲烷、甲臜、半花菁、靛蓝类、甲烷、萘酰亚胺、萘醌、硝基和亚硝基、噁嗪、酞菁、吡唑类、二苯乙烯、苯乙烯基、三芳基甲烷、三苯甲烷、氧杂蒽以及它们的混合物,优选的染料是偶氮(特别是双偶氮)、蒽醌、吖嗪和三芳基甲烷染料。偶氮染料是特别优选的。
合适的织物调色剂包括染料、染料-粘土缀合物、以及有机颜料和无机颜料。合适的染料包括小分子染料和聚合物染料;聚合物染料是优选的。合适的小分子染料包括选自属于染料索引(C.I.)分类的直接、碱性、活性、或水解的活性、溶剂或分散染料(例如被分类为蓝、紫、红、绿或黑的)并且单独地或组合地提供所期望的色调的小分子染料。在另一个方面,合适的小分子染料包括选自以下颜色索引(Society of Dyers and Colourists,Bradford,UK)编号的小分子染料:直接紫染料诸如9、35、48、51、66和99,直接蓝染料诸如1、71、80和279,酸性红染料诸如17、73、52、88和150,酸性紫染料诸如15、17、24、43、49和50,酸性蓝染料诸如15、17、25、29、40、45、75、80、83、90和113,酸性黑染料诸如1,碱性紫染料诸如1、3、4、10和35,碱性蓝染料诸如3、16、22、47、66、75和159,诸如EP1794275或EP1794276中所述的分散染料或溶剂染料、或如US 7,208,459 B2中所公开的染料、以及它们的混合物。在另一方面,合适的小分子染料包括选自以下颜色索引编号的小分子染料:酸性紫17、直接蓝71、直接紫51、直接蓝1、酸性红88、酸性红150、酸性蓝29、酸性蓝113、或它们的混合物。
合适的聚合物染料包括选自以下的聚合物染料:含有共价结合(有时被称为缀合)的色原体的聚合物(染料-聚合物缀合物)(例如具有共聚至该聚合物主链中的色原体的聚合物)以及它们的混合物。聚合物染料包括WO2011/98355、WO2011/47987、US2012/090102、WO2010/145887、WO2006/055787和WO2010/142503中所述的那些。
在另一方面,合适的聚合物染料包括选自以下的聚合物染料:以商品名(Milliken,Spartanburg,South Carolina,USA)销售的织物-实体着色剂、由至少一种活性染料和聚合物形成的染料-聚合物缀合物,该聚合物选自包含以下部分的聚合物,该部分选自羟基部分、伯胺部分、仲胺部分、硫醇部分以及它们的混合物。优选的聚合物染料的示例包括选自以下的聚合物染料:紫CT,与活性蓝、活性紫或活性红染料共价结合的羧甲基纤维素(CMC),诸如与C.I.活性蓝19缀合的CMC,由Megazyme,Wicklow,Ireland以产品名AZO-CM-CELLULOSE,产品代码S-ACMC销售、烷氧基化的三苯基-甲烷聚合着色剂、烷氧基化的噻吩聚合着色剂、以及它们的混合物。
优选的调色染料包括例如如US2008/0177090中所述的烷氧基化噻吩偶氮增白剂,其可任选地为阴离子的,诸如选自WO2011/011799的表5中的实施例1至42的那些。其他优选的染料公开于US 8138222中。与其他化学品一样,调色染料可包含由其合成工艺得到的化合物与杂质的混合物,所述杂质诸如为来自其有机合成的残余量的反应物和/或生产和/或储存时染料的低水平氧化或水解反应产物。
合适的颜料包括选自以下的颜料:黄烷士酮、蓝蒽酮、包含1至4个氯原子的氯化蓝蒽酮、皮蒽酮、二氯皮蒽酮、单溴二氯皮蒽酮、二溴二氯皮蒽酮、四溴皮蒽酮、二萘嵌苯-3,4,9,10-四羧酸二酰亚胺,其中所述酰亚胺基团可为未取代的或者被C1至C3的烷基或苯基或杂环基取代,并且其中苯基和杂环基可另外带有不提供水中溶解度的取代基、蒽嘧啶羧酸酰胺、蒽酮紫、异蒽酮紫、二噁嗪颜料、每个分子可包含至多2个氯原子的铜酞菁、多氯铜酞菁或每个分子包含至多14个溴原子的多溴氯铜酞菁、群青蓝(C.I.颜料蓝29)、群青紫(C.I.颜料紫15)以及它们的混合物。
助洗剂:清洁组合物还可包含助洗剂,诸如基于碳酸盐、碳酸氢盐或硅酸盐的助洗剂,硅酸盐的助洗剂可为沸石,如沸石A、沸石MAP(高铝类型P)。可用于衣物洗涤的沸石优选地具有式Na12(AlO2)12(SiO2)12·27H2O并且沸石A的粒度通常在1μm至10μm之间,沸石MAP的粒度通常在0.7μm至2μm之间。其他助洗剂为偏硅酸钠(Na2SiO3·nH2O或Na2Si2O5·n H2O)强碱,并且优选地用于盘碟洗涤。在优选的实施方案中,洗涤剂助洗剂的量可高于5%、高于10%、高于20%、高于30%、高于40%或高于50%,并且可低于80%、65%。在盘碟洗涤剂中,助洗剂的含量通常为40%至65%,尤其是50%至65%或甚至75%至90%。
包封物:该组合物可包含包封物。例如,包含芯、具有内表面和外表面的壳的包封物,所述壳包封所述芯。合适包封物的芯可包含选自以下的材料:香料;增白剂;染料;驱虫剂;硅氧烷;蜡;风味剂;维生素;织物软化剂;皮肤护理剂,在一个方面,石蜡;酶;抗菌剂;漂白剂;感觉剂;以及它们的混合物;并且所述外壳可包含选自下列的材料:聚乙烯;聚酰胺;聚苯乙烯;聚异戊二烯;聚碳酸酯;聚酯;聚丙烯酸酯;氨基塑料,在一个方面所述氨基塑料可包含聚脲、聚氨酯、和/或聚脲氨酯,在一个方面所述聚脲可包括聚甲醛脲和/或三聚氰胺甲醛树脂;聚烯烃;多糖,在一个方面所述多糖可包括藻酸盐和/或脱乙酰壳多糖;明胶;紫胶;环氧树脂;乙烯基聚合物;水不溶性无机物;硅氧烷;以及它们的混合物,优选的被包封的材料是香料或酶,特别是香料。合适的包封物壳可包含三聚氰胺甲醛和/或交联三聚氰胺甲醛和/或聚丙烯酸酯。
优选地,至少75%、85%或甚至90%的所述包封物可具有约1微米至约80微米、约5微米至60微米、约10微米至约50微米、或甚至约15微米至约40微米的粒度。优选地,至少75%、85%或甚至90%的所述包封物可具有约30nm至约250nm、约80nm至约180nm、或甚至约100nm至约160nm的颗粒壁厚。
优选的包封物芯材料可包含选自以下的材料:香料原料和/或任选地选自以下的材料:植物油(包括纯植物油和/或共混植物油),包括蓖麻油、椰子油、棉籽油、葡萄油、菜籽油、大豆油、玉米油、棕榈油、亚麻籽油、红花油、橄榄油、花生油、椰子油、棕榈仁油、蓖麻油、柠檬油、以及它们的混合物;植物油的酯、酯,包括己二酸二丁酯、邻苯二甲酸二丁酯、己二酸苄基丁酯、已二酸辛基苄酯、磷酸三甲苯酯、磷酸三辛酯、以及它们的混合物;直链或支链烃,包括具有大于约80℃的沸点的那些直链或支链烃;部分氢化的三联苯、邻苯二甲酸酯、烷基联苯(包括单异丙基联苯)、烷基化萘(包括二丙基萘)、石油溶剂油(包括煤油)、矿物油、以及它们的混合物;芳族溶剂,包括苯、甲苯、以及它们的混合物;硅油;以及它们的混合物。优选地,包封物壁材料可包含合适的树脂,该树脂包含醛和胺的反应产物,合适的醛包括甲醛。合适的胺包括三聚氰胺、脲、苯胍胺、甘脲、以及它们的混合物。合适的三聚氰胺包括羟甲基三聚氰胺、甲基化羟甲基三聚氰胺、亚氨基三聚氰胺以及它们的混合物。合适的脲包括二羟甲基脲、甲基化二羟甲基脲、脲-间苯二酚、以及它们的混合物。
在一个方面,合适的甲醛清除剂可与包封物一起用于例如胶囊浆液中,和/或在包封物添加到消费产品中之前、期间或之后添加到此类消费产品中。
合适的胶囊可购自Appleton Papers Inc.(Appleton,Wisconsin USA)。
结构剂:该组合物可包含选自以下的结构剂:甘油二酯和甘油三酯、乙二醇二硬脂酸酯、微晶纤维素、基于纤维素的材料、微纤维纤维素、生物聚合物、黄原胶、结冷胶、以及它们的混合物。
聚合物:清洁组合物可包含一种或多种聚合物。示例为羧甲基纤维素、聚(乙烯基吡咯烷酮)、聚(乙二醇)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯基吡啶-N-氧化物)、聚(乙烯基咪唑)、聚羧酸酯如聚丙烯酸酯、马来酸/丙烯酸共聚物和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物和两亲性聚合物。
两亲性清洁聚合物:优选地,两亲性清洁聚合物是具有以下通式结构的化合物:双((C2H5O)(C2H4O)n)(CH3)-N+-CxH2x-N+-(CH3)-双((C2H5O)(C2H4O)n),其中n=20至30,并且x=3至8,或它们的硫酸化或磺酸化变体。
本发明的两亲性烷氧基化油脂清洁聚合物是指具有平衡的亲水特性和疏水特性的任何烷氧基化聚合物,使得它们能够从织物和表面去除油脂颗粒。本发明的两亲性烷氧基化油脂清洁聚合物的具体的实施方案包含芯结构和连接到该芯结构的多个烷氧基化物基团。这些可包括烷氧基化的聚烯亚胺,优选地具有内部聚环氧乙烷嵌段和外部聚环氧丙烷嵌段。
芯结构可包含聚亚烷基亚胺结构,该聚亚烷基亚胺结构以缩合形式包含式(I)、(II)、(III)和(IV)的重复单元:
其中在每种情况下,#表示两个相邻的式(I)、(II)、(III)或(IV)的重复单元的氮原子和基团A1的自由结合位置之间的键的二分之一;在每种情况下,*表示与烷氧基化物基团中的一个基团连接的键的二分之一;并且A1独立地选自直链或支链C2-C6-亚烷基;其中聚亚烷基亚胺结构由1个式(I)的重复单元、x个式(II)的重复单元、y个式(III)的重复单元和y+1个式(IV)的重复单元组成,其中在每种情况下,x和y具有0至约150范围内的值;其中聚亚烷基亚胺芯结构的平均重均分子量Mw为约60g/mol至约10,000g/mol范围内的值。
芯结构可另选地包含至少一种选自式(I.a)和/或(I.b)的N-(羟烷基)胺的化合物的缩合产物的聚链烷醇胺结构,
其中A独立地选自C1-C6-亚烷基;R1、R1*、R2、R2*、R3、R3*、R4、R4*、R5和R5*独立地选自氢、烷基、环烷基或芳基,其中最后三个提及的基团可任选地被置换;并且R6选自氢、烷基、环烷基或芳基,其中最后三个提及的基团可任选地被置换。
连接到芯结构的所述多个亚烷氧基基团独立地选自式(V)的亚烷氧基单元
其中在每种情况下,*表示与式(I)、(II)或(IV)的重复单元的氮原子连接的键的二分之一;在每种情况下,A2独立地选自1,2-亚丙基、1,2-亚丁基和1,2-亚异丁基;A3为1,2-亚丙基;在每种情况下,R独立地选自氢和C1-C4-烷基;m具有0至约2范围内的均值;n具有约20至约50范围内的均值;n具有约10至约50范围内的均值。
两亲性烷氧基化油脂清洁聚合物的具体的实施方案可选自具有内部聚环氧乙烷嵌段和外部聚环氧丙烷嵌段的烷氧基化聚亚烷基亚胺,其具有不高于或低于特定限制值的乙氧基化度和丙氧基化度。烷氧基化聚亚烷基亚胺具有聚乙烯嵌段与聚丙烯嵌段(n/p)的约0.6的最小比和约1.5(x+2y+1)1/2的最大比。已发现n/p比为约0.8至约1.2(x+2y+1)1/2的烷氧基化聚亚烷基亚胺具有特别有利的特性。烷氧基化聚亚烷基亚胺可具有由伯胺、仲胺和叔胺氮原子组成的主链,这些氮原子通过亚烷基A彼此连接并且是随机排列的。起始或终止聚亚烷基亚胺主链的主链和侧链并且其随后被亚烷氧基单元取代的剩余氢原子的伯氨基部分分别称为式(I)或(IV)的重复单元。随后被亚烷氧基单元取代的剩余氢原子的仲氨基部分称为式(II)的重复单元。使主链和侧链支化的叔氨基部分称为式(III)的重复单元。
由氮原子和A基团组成的聚亚烷基亚胺主链具有约60g/mol至约10,000g/mol,优选地约100g/mol至约8,000g/mol,并且更优选地约500g/mol至约6,000g/mol的平均分子量Mw。
(x+2y+1)之和对应于存在于一个单独的聚亚烷基亚胺主链中的亚烷基亚胺单元总数,并且从而与聚亚烷基亚胺主链的分子量直接相关。然而,说明书中给出的值涉及存在于混合物中的所有聚亚烷基亚胺的数量均值。(x+2y+2)之和对应于存在于一个单独的聚亚烷基亚胺主链中的氨基总数。
连接氨基氮原子的基团A可为相同的或不同的、直链或支链的C2-C6-亚烷基,诸如1,2-亚乙基、1,2-亚丙基、1,2-亚丁基、1,2-亚异丁基、1,2-戊二基、1,2-己二基或六亚甲基。优选的支链亚烷基为1,2-亚丙基。优选的直链亚烷基为亚乙基和六亚甲基。更优选的亚烷基为1,2-亚乙基。
聚亚烷基亚胺主链中伯氨基和仲氨基的氢原子被式(V)的亚烷氧基单元取代。
在该式中,变量优选地具有以下给出的含义中的一个含义:
在每种情况下,A2选自1,2-亚丙基、1,2-亚丁基和1,2-亚异丁基;优选地,A2为1,2-亚丙基。A3为1,2-亚丙基;在每种情况下,R选自氢和C1-C4-烷基,诸如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基和叔丁基;优选地,R为氢。在每种情况下,指数m具有0至约2的值;优选地,m为0或大约为1;更优选地,m为0。指数n具有在约20至约50范围内、优选地在约22至约40范围内、并且更优选地在约24至约30范围内的均值。指数p具有在约10至约50范围内、优选地在约11至约40范围内、并且更优选地在约12至约30范围内的均值。优选地,式(V)的亚烷氧基单元为烷氧基化物嵌段的非随机序列。非随机序列是指首先加入[-A2-O-]m(即最接近式(I)、(II)或(III)的重复单元的氮原子的键),其次加入[-CH2-CH2-O-]n,并且第三次加入[-A3-O-]p。该取向提供了烷氧基化聚亚烷基亚胺,其具有内部聚环氧乙烷嵌段和外部聚环氧丙烷嵌段。这些式(V)的亚烷氧基单元的主要部分由氧乙烯单元-[CH2-CH2-O)]n-和氧丙烯单元-[CH2-CH2(CH3)-O]p-形成。亚烷氧基单元还可另外具有小比例的氧丙烯或氧丁烯单元-[A2-O]m-,即,氢原子饱和的聚亚烷基亚胺主链最初可与每摩尔所含NH-部分为至多约2mol、尤其是约0.5mol至约1.5mol,具体地为约0.8mol至约1.2mol的环氧丙烷或环氧丁烷反应(即初期的烷氧基化)。
两亲性烷氧基化油脂清洁聚合物优选地以按织物和家庭护理产品的重量计约0.05%至10%范围内的水平存在于本发明的清洁组合物中。织物和家庭护理产品的实施方案可包含约0.1重量%至约5重量%的油脂清洁聚合物。更具体地讲,这些实施方案可包含约0.25%至约2.5%的油脂清洁聚合物。
羧酸酯聚合物:本发明的清洁组合物还可包含一种或多种羧酸酯聚合物,诸如马来酸酯/丙烯酸酯无规共聚物或聚丙烯酸酯均聚物。在一个方面,羧酸酯聚合物为聚丙烯酸酯均聚物,其具有4,000Da至9,000Da,或6,000Da至9,000Da的分子量。
去垢性聚合物:本发明的清洁组合物还可包含一种或多种去垢性聚合物,该去垢性聚合物具有由以下结构(I)、(II)或(III)中的一个结构定义的结构:
(I)-[(OCHR1-CHR2)a-O-OC-Ar-CO-]d
(II)-[(OCHR3-CHR4)b-O-OC-sAr-CO-]e
(III)-[(OCHR5-CHR6)c-OR7]f
其中:
a、b和c为1至200;
d、e和f为1至50;
Ar为1,4-取代的亚苯基;
sAr为在位置5被SO3Me取代的1,3-取代的亚苯基;
Me为Li、K、Mg/2、Ca/2、Al/3、铵、单烷基铵、二烷基铵、三烷基铵或四烷基铵,其中烷基为C1-C18烷基或C2-C10羟烷基或它们的混合物;
R1、R2、R3、R4、R5和R6独立地选自H或C1-C18正烷基或C1-C18异烷基;以及
R7为直链或支链的C1-C18烷基,或直链或支链的C2-C30烯基,或具有5个至9个碳原子的环烷基,或C8-C30芳基,或C6-C30芳基烷基。
合适的去垢性聚合物为聚酯去垢性聚合物,诸如Repel-o-tex聚合物,包括由Rhodia供应的Repel-o-tex SF、SF-2和SRP6。其他合适的去垢性聚合物包括Texcare聚合物,包括由科莱恩公司(Clariant)供应的Texcare SRA100、SRA300、SRN100、SRN170、SRN240、SRN300和SRN325。其它合适的去垢性聚合物为Marloquest聚合物,诸如由Sasol提供的Marloquest SL。
纤维素聚合物:本发明的清洁组合物还可包含一种或多种纤维素聚合物,包括选自以下的那些:烷基纤维素、烷基烷氧基烷基纤维素、羧烷基纤维素、烷基羧烷基纤维素。在一个方面,纤维素聚合物选自羧甲基纤维素、甲基纤维素、甲基羟乙基纤维素、甲基羧甲基纤维素、以及它们的混合物。在一个方面,羧甲基纤维素具有0.5至0.9的羧甲基取代度和100,000Da至300,000Da的分子量。
漂白剂:洗涤剂可包含漂白体系,该漂白体系可包含H2O2源(诸如过硼酸盐或过碳酸盐),其可与形成过酸的漂白活化剂诸如四乙酰乙二胺或壬酰氧基苯磺酸盐混合。另选地,漂白体系可包含过氧酸(例如酰胺、酰亚胺、或砜类过氧酸)。一般来讲,当使用漂白剂时,本发明的组合物可包含按主题清洁组合物的重量计约0.1%至约50%或甚至约0.1%至约25%的漂白剂。
螯合剂:本文的清洁组合物可包含螯合剂。合适的螯合剂包括铜、铁和/或锰螯合剂、以及它们的混合物。当使用螯合剂时,主题清洁组合物可包含按该主题清洁组合物的重量计约0.005%至约15%、或甚至约3.0%至约10%的螯合剂。合适的螯合剂包括DTPA(二亚乙基三胺五醋酸)、HEDP(羟乙烷二膦酸酯)、DTPMP(环丁烷三胺五(亚甲基膦酸))、1,2-二羟基苯-3,5-二磺酸二钠盐水合物、乙二胺、环丁烷三胺、乙二胺二琥珀酸(EDDS)、N-羟乙基乙二胺三乙酸(HEDTA)、三亚乙基四胺六乙酸(TTHA)、N-羟乙基亚氨基二乙酸(HEIDA)、二羟乙基甘氨酸(DHEG)、乙二胺四丙酸(EDTP)以及它们的衍生物。
稳定剂:可使用以下的常规稳定剂和/或蛋白酶抑制剂来稳定本发明的组合物中的酶变体和/或附加酶:例如多元醇(诸如丙二醇或甘油、糖或糖醇)、盐(诸如氯化钠和氯化钾)、乳酸、甲酸、硼酸或硼酸衍生物(例如芳族硼酸酯,或苯基硼酸衍生物诸如4-甲酰基苯基硼酸)、或肽醛(诸如二肽醛、三肽醛或四肽醛或醛类似物)(B1-B0-R形式中的任一种,其中R为H、CH3、CX3、CHX2或CH2X(X=卤素),B0为单个氨基酸残基(优选地具有任选取代的脂族或芳族侧链);并且B1由一个或多个氨基酸残基(优选地一个、两个或三个氨基酸残基)组成,任选地包含N末端保护基团,或如WO09118375、WO98/13459中所述的)、或蛋白质类型的蛋白酶抑制剂诸如RASI、BASI、WASI(稻、大麦和小麦的双官能α-淀粉酶/枯草杆菌蛋白酶抑制剂)或CI2或SSI。在一些实施方案中,本文所用的酶由成品组合物中存在的可向酶提供的水溶性锌(II)、钙(II)和/或镁(II)离子以及其他金属离子(例如钡(II)、钪(II)、铁(II)、锰(II)、铝(III)、锡(II)、钴(II)、铜(II)、镍(II)和氧钒(IV))源来稳定。
该组合物可包含选自以下的酶稳定剂:(a)无机盐,该无机盐选自钙盐、镁盐以及它们的混合物;(b)碳水化合物,该碳水化合物选自低聚糖、多糖以及它们的混合物;(c)高效可逆蛋白酶抑制剂,高效可逆蛋白酶抑制剂选自苯基硼酸以及它们的衍生物;以及(d)它们的混合物。
该组合物可包含:(1)可逆蛋白酶抑制剂,诸如含硼化合物;(2)1-2丙二醇;(3)甲酸钙和/或甲酸钠;以及(4)它们的任意组合。
清洁组合物还可包含(作为清洁助剂)其他常规洗涤剂成分(诸如织物调理剂),包括粘土、泡沫促进剂、抑泡剂、防蚀剂、污垢悬浮剂、抗污垢再沉积剂、染料、杀菌剂、荧光增白剂、水溶助长剂、变色抑制剂、有机溶剂(诸如乙醇)、或香料。另外,洗涤剂可包含预点滴剂或增效剂,其被添加到洗涤中以增强一般清洁程度,这些添加剂中的一些添加剂也可用作在洗涤步骤之前施加到纺织物的预处理剂。
目前考虑的是,在清洁组合物中,任何酶(具体地为本发明必需的酶)可以对应于每升洗涤液体0.001mg至100mg酶蛋白的量、优选地每升洗涤液体0.005mg至5mg酶蛋白的量、更优选地每升洗涤液体0.01mg至1mg酶蛋白的量、并且具体地以每升洗涤液体0.1mg至1mg酶蛋白的量来添加。然而,本发明的组合物包含至少0.0001重量%至约0.1重量%的纯酶蛋白,例如约0.0001%至约0.01%、约0.001%至约0.01%或约0.001%至约0.01%。然而,当使用配制的酶时,洗涤剂组合物包含约0.02重量%至约20重量%的配制的酶,例如或约0.05重量%至约15重量%、或约0.05重量%至约20重量%、或约0.05重量%至约5重量%、或约0.05重量%至约3重量%。
使用方法
本发明包括用于清洁和/或处理表面(优选地织物)的方法。在一个方面,这种方法包括以下步骤:任选地洗涤和/或漂洗所述表面,使所述表面与包含本文所述清洁组合物的水性洗涤液体接触,然后任选地洗涤和/或漂洗所述表面。
水性洗涤液体优选具有从约4或从约7或8至约12,优选地至约10.5的pH。所述组合物优选以溶液中约500ppm至约15,000ppm的浓度使用。水与织物的比率通常为约1:1至约30:1。
本发明还提供了本发明的清洁组合物用于提供在低温下(例如在从5℃或从10℃至低于40℃或低于35℃或低于30℃或低于25℃的温度下)改善的洗涤性能的用途。
在另外一个方面,本发明涉及一种用于从表面去除污渍的方法,该方法包括使该表面与如本文所述的杂交体多肽或淀粉酶变体和清洁助剂接触,其中清洁助剂包含表面活性剂和任选地如上所述的一种或多种附加清洁助剂。另外一个方面是一种用于从表面去除污渍的方法,该方法包括使该表面与如本文所述的清洁组合物接触。
下列段落进一步定义了上述本发明。
段落1.(a)一种包含亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体和清洁助剂的组合物,该α-淀粉酶变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476。
段落2.根据段落1所述的组合物,其中所述变体在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体与SEQ IDNo:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
段落3.根据前述段落中任一段落所述的组合物,其中所述变体在与以下使用SEQID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有改善的性能,其中按比活性来度量的该改善的性能被测量为与SEQ ID NO:2或3的所述亲本多肽相比>1.0的改善因数(IF)。
段落4.根据前述段落中任一段落所述的组合物,其中所述修饰位于与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置中:H1、H2、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475、G476。
段落5.根据前述段落中任一段落所述的组合物,其中所述修饰位于与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置中:H1*、H2、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A。
段落6.根据前述段落中任一段落所述的组合物,其中该变体包含与使用SEQ IDNO:1进行编号的位置R180、S181、T182和G183相对应的两个或更多个位置处的缺失。
段落7.根据段落6所述的组合物,其中该缺失选自使用SEQ ID NO:1进行编号的R180*+S181*、R180*+T182*、R180*+G183*、S181*+T182*、S181*+G183*或T182*+G183*。
段落8.根据前述段落中任一段落所述的组合物,其中该变体包含选自以下的使用SEQ ID NO:1进行编号的一种或多种修饰:
H1*+G7A+R180*+S181*、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+N279S、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+N279S+G303R、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+G303R+E390A+G476A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
段落9.根据前述段落中任一段落所述的组合物,其中该变体包含选自以下的使用SEQ ID NO:1进行编号的一种或多种修饰或由其组成:
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182S+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+T182L+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+S181L+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180S+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A60P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105I+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182G+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182M+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185K+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185N+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185R+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244L+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280F+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280F+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+S181*+T182*+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E359W+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E359W+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+S286K+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
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H1*+G7A+Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+T315A+E390A+G475K、
H1*+G7H+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+A60V+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+T151A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+K258V+E259V+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+N94D+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1*+N3S+G7A+N94D+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
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G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*、
G7H+W167P+R180*+S181*+G455R、
Q98L+V103A+G110K+R180*+S181*、
T114K+R180*+S181*、
E169V+R180*+S181*、
R180*+S181*+W188C、
W167D+R180*+S181*、
W167S+R180*+S181*、
W167E+R180*+S181*、
W167P+R180*+S181*、
R180*+S181*+E193I+H323N、
R180*+S181*+A203F、
W159L+R180*+S181*、
W159H+R180*+S181*、
K178A+R180*+S181*、
A111L+R180*+S181*、
G110K+R180*+S181*和
A111G+R180*+S181*,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
段落10.根据前述段落中任一段落所述的组合物,其中所述变体具有改善的特性,其中所述改善的特性是按增加的比活性来度量的改善的洗涤性能,该增加的比活性被测量为>1.0的改善因数(IF)。
段落11.根据任一前述段落所述的组合物,其中所述变体具有改善的特性,其中所述改善的特性是按增加的比活性来度量的改善的洗涤性能,该增加的比活性被测量为与所述亲本多肽相比>1.0的改善因数(IF)。
段落12.根据任一前述段落所述的组合物,其中所述变体具有改善的特性,其中所述改善的特性是按增加的比活性来度量的改善的洗涤性能,该增加的比活性被测量为与SEQ ID NO:2和/或SEQ ID NO:3的所述亲本多肽相比>1.0的改善因数(IF)。
段落13.根据任一前述段落所述的组合物,其中修饰数量为1至20种,例如1至10种和1至5种,诸如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20种修饰。
段落14.根据任一前述段落所述的组合物,其中所述α-淀粉酶来源于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)、芽孢杆菌属(Bacillus sp.)KSM-K38、迟缓芽孢杆菌(B.lentos)、短芽孢杆菌(B.brevis)、嗜热脂肪芽孢杆菌(B.Stearothermophilus)、嗜碱芽孢杆菌(B.alkalophilus)、解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)、凝结芽孢杆菌(B.coagulans)、环状芽孢杆菌(B.circulans)、灿烂芽孢杆菌(B.lautus)、苏云金芽孢杆菌(B.thuringiensis)、浅青紫链霉菌(Streptomyces lividans)、盐敏芽孢杆菌(Bacillus halmapalus)或鼠灰链霉菌(S.murinus)。
段落15.根据任一前述段落所述的组合物,其中所述亲本α-淀粉酶选自SEQ IDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13和14中所阐述的氨基酸序列,或与SEQ ID NO:1、2或3中所阐述的氨基酸序列中的任何氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性的任何α-淀粉酶。
段落16.根据任一前述段落所述的组合物,其中亲本α-淀粉酶包含SEQ ID NO:1、2和/或3中所阐述的氨基酸序列或由其组成。
段落17.一种多核苷酸,该多核苷酸编码根据段落1至16所述的α-淀粉酶变体。
段落18.一种核酸构建体,该核酸构建体包含根据段落17所述的多核苷酸。
段落19.一种表达载体,该表达载体包含根据段落17所述的多核苷酸。
段落20.一种宿主细胞,该宿主细胞包含根据段落17所述的多核苷酸、根据段落18所述的核酸构建体或根据段落19所述的表达载体。
段落21.一种制备清洁组合物的方法,该方法包括获得α-淀粉酶变体,其包括:a.在适于表达所述变体的条件下培养段落20的宿主细胞;和b.任选地回收所述变体;以及c)将所述α-淀粉酶变体与清洁助剂混合。
段落22.一种制备清洁组合物的方法,该方法包括通过在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处引入修饰来获得亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性;以及将所述α-淀粉酶变体与清洁助剂混合。
段落23.一种改善包含亲本α-淀粉酶和清洁助剂的水性洗涤液体的洗涤性能的方法,该方法包括以下步骤:获得具有SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的氨基酸序列或与之具有至少60%序列同一性的亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体,所述方法通过修饰该亲本进行,包括:
a)杂交体α-淀粉酶中的两个、三个或四个位置的替换和/或缺失,所述位置对应于使用SEQ ID NO:1进行编号的位置180、181、182和183;以及
b)在与以下使用SEQ ID NO:1进行编号的位置相对应的一个或多个位置处的修饰:H1、H2、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475、G476,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
段落24.根据段落1至16中任一段落所述的组合物,其中清洁助剂包含选自以下的一种或多种组分:表面活性剂、助洗剂、絮凝助剂、螯合剂、染料转移抑制剂、酶稳定剂、酶抑制剂、催化材料、漂白活化剂、过氧化氢、过氧化氢源、预成形过酸、聚合物分散剂、粘土污垢去除/抗再沉积剂、增白剂、抑泡剂、染料、香料、结构增弹剂、织物软化剂、载体、水溶助长剂、助洗剂和共助洗剂、织物调色剂、消泡剂、分散剂、加工助剂和/或颜料。
段落25.根据段落1至16或24中任一段落所述的组合物,其中所述清洁助剂包含附加酶。
段落26.根据段落1至16、24或25中任一段落所述的组合物,其中附加酶选自蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原酸酶、过氧化物酶、卤代过氧化物酶、过氧化氢酶和甘露聚糖酶,或它们的任何混合物。
段落27.根据段落1至16或24至26中任一段落所述的组合物,该组合物是液体洗涤剂、固体洗涤剂、凝胶洗涤剂、粉末洗涤剂,优选地呈单位剂量形式。
段落28.根据段落1至16或24至27中任一段落所述的组合物,该组合物是液体或粉末衣物洗涤组合物或者液体或粉末盘碟洗涤组合物,任选地呈小袋、优选地水溶性小袋的形式。
段落29.如任一前述段落中所述的α-淀粉酶变体在清洁过程中的用途,所述清洁过程诸如衣物洗涤或包括盘碟洗涤和工业清洁在内的硬质表面清洁。
段落30.一种清洁组合物,该清洁组合物包含具有α-淀粉酶活性的杂交体多肽和清洁助剂,该杂交体多肽包含与SEQ ID NO:1、2、3、4或5中的任何一者的A结构域具有至少60%序列同一性的A结构域、与SEQ ID NO:1、2、10、11或12中的任何一者的B结构域具有至少60%序列同一性的B结构域以及与SEQ ID NO:1、2、3、4或5中的任何一者的C结构域具有至少60%序列同一性的C结构域。
段落31.根据段落30所述的清洁组合物,其中A结构域与SEQ ID NO:4的A结构域具有至少60%的序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性。
段落32.根据段落30至31中任一段落所述的清洁组合物,其中A1结构域与从位置1至5的范围内的一个位置开始并在位置94至114的范围内的一个位置结束,例如从位置1至3的范围内的一个位置开始并在位置99至110的范围内的一个位置结束或从位置1至3的范围内的一个位置开始并在位置104至109的范围内的一个位置结束,特别是SEQ ID NO:4的位置1至108的序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性。
段落33.根据段落30至32中任一段落所述的清洁组合物,其中B结构域与从位置93至113的范围内的一个位置开始并在位置195至215的范围内的一个位置结束,例如从位置97至109的范围内的一个位置开始并在位置199至211的范围内的一个位置结束或从位置100至106的范围内的一个位置开始并在位置202至208的范围内的一个位置结束,特别是SEQ ID NO:12的位置109至205的序列具有至少60%的序列同一性、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性。
段落34.根据段落30至33中任一段落所述的清洁组合物,其中C结构域与SEQ IDNO:4的C结构域具有至少60%的序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性。
段落35.根据段落30至34中任一段落所述的清洁组合物,其中A2和C结构域与从位置201至221的范围内的一个位置开始并在位置478至514的范围内的一个位置结束,例如从位置203至211的范围内的一个位置开始并在位置480至510的范围内的一个位置结束或从位置205至216的范围内的一个位置开始并在位置480至500的范围内的一个位置结束,特别是SEQ ID NO:4的位置206至485的序列具有至少60%的序列同一性、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性。
段落36.根据段落30至35中任一项所述的清洁组合物,其中所述杂交体多肽具有相对于SEQ ID NO:3的所述亲本多肽改善的特性。
段落37.根据段落30至36中任一段落所述的清洁组合物,其中改善的特性是增加的比活性的形式的增加的洗涤性能,特别是模型A洗涤剂组合物中增加的比活性。
段落38.根据段落30至37中任一段落所述的清洁组合物,其中改善的特性是增加的比活性,该增加的比活性被测量为在与SEQ ID NO:3的所述亲本多肽相比时>1.0的改善因数(IF)。
段落39.根据段落30至38中任一段落所述的清洁组合物,其中所述亲本多肽与SEQID NO:1-14中的任何一者具有至少60%,诸如65%,诸如至少70%,诸如至少75%,诸如至少80%,诸如至少85%,诸如至少90%,诸如至少95%,诸如至少97%,诸如至少99%,但小于100%的序列同一性。
段落40.根据段落30至39中任一段落所述的清洁组合物,其中所述杂交体多肽与SEQ ID NO:1-14中的任何一者具有至少60%,诸如65%,诸如至少70%,诸如至少75%,诸如至少80%,诸如至少85%,诸如至少90%,诸如至少95%,诸如至少97%,诸如至少99%,但小于100%的序列同一性。
段落41.根据段落30至40中任一段落所述的清洁组合物,其中杂交体多肽还包含与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置180、181、182和183相对应的一个或多个氨基酸的缺失。
段落42.根据段落41所述的清洁组合物,其中杂交体多肽包含与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置180、181、182和183相对应的两个或更多个氨基酸的缺失。
段落43.根据段落42所述的清洁组合物,其中杂交体多肽包含与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置180和181相对应的氨基酸的缺失。
段落44.根据段落42所述的清洁组合物,其中杂交体多肽包含与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置180和182相对应的氨基酸的缺失。
段落45.根据段落42所述的清洁组合物,其中杂交体多肽包含与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置180和183相对应的氨基酸的缺失。
段落46.根据段落42所述的清洁组合物,其中杂交体多肽包含与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置181和182相对应的氨基酸的缺失。
段落47.根据段落42所述的清洁组合物,其中杂交体多肽包含与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置181和183相对应的氨基酸的缺失。
段落48.根据段落42所述的清洁组合物,其中杂交体多肽包含与使用SEQ ID NO:1进行编号的位置182和183相对应的氨基酸的缺失。
段落49.根据段落41至42中任一段落所述的清洁组合物,其中杂交体多肽包含SEQID NO:1或2或由其组成。
段落50.根据段落30至49中任一段落所述的清洁组合物,其中杂交体多肽具有相对于SEQ ID NO:3的亲本多肽的至少一种改善的特性,其中改善的特性选自洗涤剂稳定性、增加的比活性、底物特异性、热稳定性、pH依赖性活性、pH依赖性稳定性、氧化稳定性、Ca2+依赖性和洗涤性能。
段落51.根据段落30-50中任一段落所述的清洁组合物,其中杂交体多肽α-淀粉酶来源于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)、芽孢杆菌属(Bacillus sp.)KSM-K38、迟缓芽孢杆菌(B.lentos)、短芽孢杆菌(B.brevis)、嗜热脂肪芽孢杆菌(B.Stearothermophilus)、嗜碱芽孢杆菌(B.alkalophilus)、解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)、凝结芽孢杆菌(B.coagulans)、环状芽孢杆菌(B.circulans)、灿烂芽孢杆菌(B.lautus)、苏云金芽孢杆菌(B.thuringiensis)、浅青紫链霉菌(Streptomyces lividans)、盐敏芽孢杆菌(Bacillus halmapalus)或鼠灰链霉菌(S.murinus)。
段落52.一种多核苷酸,该多核苷酸编码根据前述段落30至51中任一段落所述的杂交体多肽。
段落53.一种核酸构建体,该核酸构建体包含根据段落52所述的多核苷酸。
段落54.一种表达载体,该表达载体包含根据段落52所述的多核苷酸。
段落55.一种宿主细胞,该宿主细胞包含根据段落52所述的多核苷酸、根据段落53所述的核酸构建体或根据段落54所述的表达载体。
段落56.一种改善与SEQ ID NO:4或5的α淀粉酶具有至少60%同一性的α淀粉酶的洗涤性能的方法,所述方法包括将所述α淀粉酶的B结构域替换为具有SEQ ID NO:12的氨基酸109至206或与之有至少60%同一性的序列的B结构域。
段落57.一种制备杂交体多肽的方法,该方法包括:a.在适于表达所述杂交体的条件下培养段落55的宿主细胞;和b.任选地回收所述杂交体。
段落58.根据段落30至51中任一段落所述的清洁组合物,其中清洁助剂包含选自以下的活性组分:表面活性剂、助洗剂、絮凝助剂、螯合剂、染料转移抑制剂、酶稳定剂、酶抑制剂、催化材料、漂白活化剂、过氧化氢、过氧化氢源、预成形过酸、聚合物分散剂、粘土污垢去除/抗再沉积剂、增白剂、抑泡剂、染料、香料、结构增弹剂、织物软化剂、载体、水溶助长剂、助洗剂和共助洗剂、织物调色剂、消泡剂、分散剂、加工助剂和/或颜料以及它们的混合物。
段落59.根据段落58所述的清洁组合物,其中所述清洁助剂包含附加酶,其中该酶选自蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤代过氧化物酶、过氧化氢酶和甘露聚糖酶以及它们的混合物。
段落60.根据段落58或59所述的组合物,其中所述组合物是液体洗涤剂或固体洗涤剂诸如粉末。
段落61.根据段落58至60中任一段落所述的组合物,该组合物是衣物洗涤组合物或盘碟洗涤组合物,任选地呈单位剂量形式。
段落67.根据段落58至61中任一段落所述的清洁组合物在清洁过程中的用途,所述清洁过程诸如衣物洗涤或包括盘碟洗涤和工业清洁在内的硬质表面清洁。
以下实施例进一步描述了本发明,这些实施例不应被理解为限制本发明的范围。
材料和方法
α-淀粉酶活性的测定法
pNP-G7测定法
可通过采用G7-pNP底物的方法来确定α-淀粉酶活性。G7-pNP是4,6-亚乙基(G7)-
对-硝基苯(G1)-α,D-麦芽七糖苷的缩写,它是可由内淀粉酶诸如α-淀粉酶裂解的封闭的低
聚糖。裂解后,该试剂盒中包括的α-葡糖苷酶进一步消化水解的底物以释放游离PNP分子,
该游离PNP分子具有黄色,因此可通过λ=405nm(400至420nm)处的可见分光光度法来测量。
包含G7-pNP底物和α-葡糖苷酶的试剂盒由Roche/Hitachi制造(目录号11876473)。
试剂:
来自该试剂盒的G7-pNP底物包含22mM 4,6-亚乙基-G7-pNP和52.4mM HEPES(2-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]-乙磺酸),pH 7.0)。
α-葡糖苷酶试剂包含52.4mM HEPES、87mM NaCl、12.6mM MgCl2、0.075mM CaCl2、>4kU/Lα-葡糖苷酶。
通过将1mL的α-葡糖苷酶试剂与0.2mL的G7-pNP底物混合来制备底物工作溶液。在临使用之前制备该底物工作溶液。
稀释缓冲液:50mM MOPS、0.05%(重量/体积)Triton X100(聚乙二醇对-(1,1,3,3-四甲基丁基)-苯基醚(C14H22O(C2H4O)n(n=9至10)))、1mM CaCl2,pH8.0。
程序:
将待分析的淀粉酶样品稀释于稀释缓冲液中以确保稀释样品中的pH为7。通过以下方式执行该测定法:将20μl稀释酶样品转移到96孔微量滴定板并且添加80μl底物工作溶液。混合该溶液并在室温下预温育1分钟,并且在5分钟内每20秒在OD 405nm处测量吸收率。
时间相关吸收曲线的斜率(每分钟的吸光度)与所考虑的α-淀粉酶在给定组条件下的比活性(每mg酶的活性)成正比。应将淀粉酶样品稀释到斜率低于0.4吸光度单位/分钟的水平。
Phadebas活性测定法:
还可通过使用Phadebas底物(得自例如Magle Life Sciences,Lund,Sweden)的方法来确定α-淀粉酶活性。Phadebas片剂包含互连的淀粉聚合物,这些互连的淀粉聚合物呈不溶于水的球状微球的形式。蓝色染料共价结合至这些微球。微球中的互连的淀粉聚合物以与α-淀粉酶活性成比例的速度降解。当α-淀粉酶降解淀粉聚合物时,释放的蓝色染料是水溶性的并且可通过在620nm处测量吸光度来确定染料浓度。蓝色浓度与样品中的α-淀粉酶活性成比例。
将待分析的淀粉酶样品稀释于具有期望pH的活性缓冲液中。将一个底物片剂悬浮于5mL活性缓冲液中并且在磁力搅拌器上混合。在底物混合期间,将150μl转移到微量滴定板(MTP)或PCR-MTP。将30μl稀释淀粉酶样品添加到150μl底物并且混合。在37℃下温育15分钟。通过添加30μl1M NaOH并且混合来终止该反应。将MTP在4000xg下离心5分钟。将100μl转移到新MTP并且在620nm处测量吸光度。
应稀释淀粉酶样品,使得620nm处的吸光度介于0和2.2之间,并且在活性测定法的线性范围内。
还原糖活性测定法:
还可通过使用例如玉米淀粉底物的还原糖测定法来确定α-淀粉酶活性。通过与对羟基苯甲酸肼(PHBAH)反应来确定由α-淀粉酶水解淀粉中的α-1,4-糖苷键而形成的还原端的数量。在与PHBAH反应之后,可通过在405nm处测量吸光度来测量还原端的数量并且还原端的浓度与样品中的α-淀粉酶活性成比例。
通过在milliQ水中煮5分钟来溶解玉米淀粉底物(3mg/ml)并且在测定法之前冷却该玉米淀粉底物。为终止溶液制备酒石酸钾钠/NaOH溶液(酒石酸钾钠(Merck 8087)50g/l,NaOH 20g/l)并且通过将对羟基苯甲酸肼(PHBAH,Sigma H9882)添加到酒石酸钾钠/NaOH溶液达到15mg/ml来新鲜制备终止溶液。
在PCR-MTP中,将50μl活性缓冲液与50μl底物混合。添加50μl稀释的酶并且混合。在PCR机中在期望的温度下温育5分钟。通过添加75μl终止溶液(酒石酸钾钠/NaOH/PHBAH)来终止反应。在PCR机中在95℃下温育10分钟。将150μl转移到新MTP并且在405nm处测量吸光度。
应稀释淀粉酶样品,使得405nm处的吸光度介于0和2.2之间,并且在活性测定法的线性范围内。
底物是玉米淀粉衍生物DQTM淀粉,其是用FL染料标记达到淬灭荧光的程度的玉米淀粉。将包含大约1mg冻干底物的一个小瓶溶解于100微升的50mM乙酸钠(pH4.0)中。将该小瓶涡旋20秒并且置于室温、暗处,不时混合直到溶解。然后添加900微升的100mM乙酸盐、0.01%(重量/体积)X100、0.125mM CaCl2,pH 5.5,充分涡旋并且储存在室温、暗处直到准备使用。通过在残余活性缓冲液(100mM乙酸盐、0.01%(重量/体积)X100、0.125mM CaCl2,pH 5.5)中稀释10倍来制备储备底物工作溶液。温育后立即将酶在100mM乙酸盐、0.01%(重量/体积)X100、0.125mM CaCl2,pH 5.5中稀释到10至20ng酶蛋白/ml的浓度。
对于该测定法而言,将25微升的底物工作溶液与25微升的稀释的酶在黑色384孔微量滴定板中混合10秒。在25℃下在15分钟内每分钟测量每孔中的荧光强度(激发:485nm,发射:555nm),并且按荧光强度对时间的曲线图的斜率来计算Vmax。该曲线图应为线性的,并且已调节残余活性测定法,使得稀释的参考酶溶液在活性测定法的线性范围内。
实施例
实施例1:如SEQ ID NO:1中所阐述的杂交体多肽的构建
A和C结构域与B结构域之间的杂交体的构建,该A和C结构域来自具有如SEQ IDNO:3中所阐述的氨基酸序列(第一亲本多肽)的氨基酸编号1至氨基酸编号108和氨基酸编号207至氨基酸编号485的多肽,并且该B结构域来自具有SEQ ID NO:11中所阐述的氨基酸序列(第二亲本多肽)的氨基酸编号109至氨基酸编号206的多肽。
基于这两种淀粉酶的3D结构比对,将第一亲本多肽的氨基酸编号1至氨基酸编号108和氨基酸编号207至氨基酸编号485定义为结构域A和C并且将第二亲本多肽的氨基酸109至氨基酸编号206定义为B结构域。设计了编码来自第一亲本多肽的A-C结构域和来自第二亲本多肽的B结构域的一部分的合成DNA片段并且从外部供应商购得这些合成DNA片段。
由来自第一亲本多肽的A和C结构域及来自第二亲本多肽的B结构域组成的所得淀粉酶是如SEQ ID NO:1中所阐述的多肽。此外,具有R180*+S181*缺失的所得淀粉酶是如SEQID NO:2中所阐述的多肽。
实施例2:杂交体多肽的比活性
为了确定如实施例1中所述的那样生成的杂交体多肽是否具有保持的或甚至改善的活性,通过微样本测定法来评估该杂交体多肽。制备以下洗涤剂组合物:
表1:模型洗涤剂A(按重量/重量给出的百分比)
模型A洗涤剂(0.33%)的制备:具有6000dH(水硬度)的4:1摩尔比CaCl2和MgCl2储备溶液。称取125.8g的CaCl2.2H2O到1升瓶中并且向其中添加500ml的I级水并充分搅拌。向其中称取并添加43.8g的MgCl2.6H2O并使之充分溶解,并且用I级水将最终体积定容至1000ml。
0.535M的NaHCO3溶液:将44.9g的碳酸氢钠溶解于100ml的I级水中。
水硬度为15(15°dH)的模型A洗涤剂:称取3.335g的模型A洗涤剂并将其转移到1升瓶中并且向其中添加865ml的I级水并充分混合。向其中添加7.5ml的0.535M NaHCO3,充分混合,并且用1级水定容至1升。为了将水硬度调节至15°dH,添加2.5ml具有6000°dH的4:1摩尔比CaCl2.2H2O与MgCl2.6H2O储备溶液并且将混合物搅拌15分钟。
实验程序
母板的制备:
通过菌落挑选器(KBiosystems)从转化的板上挑取菌落并且将菌落接种于包含TBGly培养基的96孔培养板中以让其生长。让培养物在37℃下生长3天,并且通过离心来从板回收上清液。
底物板的制备:
从Center for Test materials(CFT,The Netherlands)购得5米样本CS-27并且使用样本打孔机将其切成6mm微样本。在96孔Nunc板的每个孔中放入一个或两个样本,向每个孔中添加180μl的模型A洗涤剂(0.33%)。使用含0.1mM CaCl2、0.01%Triton-X的100mMMOPS(pH 7)将培养上清液或纯化的蛋白质稀释到0.1ppm或0.4ppm。向包含样本和模型A洗涤剂的板中添加20μl的稀释酶样品以达到0.01或0.04ppm的最终浓度并在25℃、800RPM下温育10分钟。将40μl的反应混合物转移到另一个96孔板,并且为了将所有释放的低聚糖消化成葡萄糖,添加10μl的0.1mg/ml淀粉葡萄糖苷酶(AMG)并在室温下温育5分钟。AMG纯化自商业产品AMG 300L(Novozymes)。通过对羟基苯甲酸酰肼(PAHBAH)方法来检测还原端(Lever M Anal Biochem.81:21-7)。为了制备1.5%PAHBAH试剂,将1.5g的对羟基苯甲酸酰肼(PAHBAH)溶解于包含1.0M Na2CO3、0.17M酒石酸钾钠和5mM Bi(NO3)3.5H2O的缓冲液中。向50μl AMG消化物中添加50μl的1.5%PAHBAH试剂并且在95℃下加热10分钟。在405nm下测量所得混合物的吸光度,该吸光度与酶活性成比例。就培养上清液而言,通过ELISA使用特异性抗体来确定表达的酶的浓度。通过取活性与蛋白质浓度之比来计算比活性,并且命中被鉴定为比亲本多肽(α-淀粉酶)的比活性更高的任何值。
改善因数(IF)计算如下:
改善因数(IF)=[杂交体多肽的比活性]/[亲本多肽(α-淀粉酶)的比活性]
杂交体多肽的比活性=15.70
亲本多肽的比活性=11.41
改善因数(IF)=15.70/11.41=1.4。
因此,SEQ ID NO:2(杂交体多肽)的IF为1.4并且SEQ ID NO:3(亲本多肽)的IF为1.0。
实施例3:根据本发明的变体的生成
按标准规程制备SEQ ID NO:1的淀粉酶变体,简言之:向该基因中引入随机突变和/或定点突变,用这些突变的基因转化枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)宿主细胞,使转化的宿主细胞发酵(例如,如
WO 2004/111220的实施例1中所述)。以类似方式在枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)中重组地产生α-淀粉酶变体。生成变体文库,在该文库中作出位置中的改变的不同组合。下列实施例中列出了所生成的变体。
实施例4:变体的比活性
为了确定如实施例3中所述的那样生成的变体是否具有保持的或甚至改善的活性,通过如实施例2中所述的微样本测定法来评估这些变体。通过取活性与蛋白质浓度之比来计算比活性,并且变体被鉴定为比SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:2的α-淀粉酶的比活性更高的任何值。
表2:通过上述方法获得的根据本发明的变体的比活性如下(氨基酸替换涉及SEQ
ID NO:1)
实施例5:使用自动机械应力测定法测定α-淀粉酶的洗涤性能
为了评估洗涤剂基础组合物中的α-淀粉酶的洗涤性能,可使用自动机械应力测定法(AMSA)执行洗涤实验。利用AMSA测试,可检查大量小体积酶洗涤剂溶液的洗涤性能。AMSA板具有用于测试溶液的多个槽以及盖,该盖紧紧地挤压纺织物样本,使之抵靠所有槽开口进行洗涤。在洗涤时间期间,剧烈摇动板、测试溶液、纺织物和盖以使测试溶液接触到纺织物并且以规则的周期性振荡方式施加机械应力。关于进一步的描述,参见WO 02/42740,特别是第23至24页的段落“特殊方法实施方案(Special method embodiments)”。
一般洗涤性能描述
制备包含水和如下所述模型洗涤剂A以及浓度为0或0.09ppm的本发明的酶的测试溶液。添加沾染了淀粉(CS-28,得自Center For Test materials BV,P.O.Box 120,3133KT,Vlaardingen,The Netherlands)的织物并且在20℃下洗涤10分钟。在流动自来水下彻底漂洗并在暗处干燥之后,随后测量带污渍的织物的光强度值作为洗涤性能的度量。具有0mg酶蛋白/L的测试用作空白对照并且对应于来自洗涤剂的贡献。优选地,在洗涤步骤期间施加机械动作,该机械动作例如呈摇动、旋转或搅拌洗涤溶液与织物的形式。可在下面指定的实验条件下进行AMSA洗涤性能实验:
表A:实验条件
洗涤剂 | 液体模型洗涤剂A(参见表B) |
洗涤剂剂量 | 3.33g/L |
测试溶液体积 | 160微升 |
pH | 按原样 |
洗涤时间 | 10分钟 |
温度 | 20℃ |
水硬度 | 15°dH |
测试的酶浓度 | 0.09pmm |
测试材料 | CS-28(大米淀粉棉) |
表B:模型洗涤剂A
化合物 | 化合物的含量(%重量/重量) | 活性组分%(%重量/重量) |
LAS | 12.00 | 11.60 |
AEOS、SLES | 17.63 | 4.90 |
大豆脂肪酸 | 2.75 | 2.48 |
椰油脂肪酸 | 2.75 | 2.80 |
AEO | 11.00 | 11.00 |
氢氧化钠 | 1.75 | 1.80 |
乙醇/丙-2-醇 | 3.00 | 2.70/0.30 |
MPG | 6.00 | 6.00 |
甘油 | 1.71 | 1.70 |
TEA | 3.33 | 3.30 |
甲酸钠 | 1.00 | 1.00 |
柠檬酸钠 | 2.00 | 2.00 |
DTMPA | 0.48 | 0.20 |
PCA | 0.46 | 0.18 |
苯氧基乙醇 | 0.50 | 0.50 |
离子交换的H<sub>2</sub>O | 33.64 | 33.64 |
通过将CaCl2、MgCl2和NaHCO3
(Ca2+:Mg2+:HCO3-=4:1:7.5)添加到测试体系中,将水硬度调节至15°dH。洗涤后,将纺织物在自来水中冲洗并干燥。
洗涤性能按亮度测量,该亮度被表示为在用白光照明时从样品反射的光的强度。当样品沾上污渍时,反射光的强度低于干净样品。因此,反射光的强度可用于测量洗涤性能。
使用用于捕获所洗涤的纺织物的图像的专业平板扫描仪(EPSON Expression10000XL,EPSON)进行颜色测量。
为了从所扫描的图像提取光强度的值,将来自该图像的48→24位颜色像素值转换成红绿蓝(RGB)的值。通过将RGB值一起相加为矢量、然后测定所得矢量的长度来计算强度值(Int):
表3:根据本发明的变体的洗涤性能示于下表中。
清洁组合物实施例
实施例1至6
设计用于手洗或顶部加载式洗衣机的颗粒状衣物洗涤剂组合物。
*本发明的淀粉酶以每100g洗涤剂的活性酶的毫克数表示。
实施例7至12
设计用于前加载式自动洗衣机的颗粒状衣物洗涤剂组合物。
*本发明的淀粉酶以每100g洗涤剂的活性酶的毫克数表示。
实施例13至18重垢型液体衣物洗涤剂组合物
1无规接枝共聚物为聚乙酸乙烯酯接枝的聚环氧乙烷共聚物,其具有聚环氧乙烷主链和多个聚乙酸乙烯酯侧链。聚环氧乙烷主链的分子量为约6000,并且聚环氧乙烷与聚乙酸乙烯酯的重量比为约40至60,并且每50个环氧乙烷单元具有不超过1个接枝点。
2聚乙烯亚胺(MW=600),每个-NH具有20个乙氧基化基团。
3两亲烷氧基化油脂清洁聚合物为聚乙烯亚胺(MW=600),其中每个-NH具有24个乙氧基化基团,并且每个-NH具有16个丙氧基化基团
*本发明的淀粉酶以每100g洗涤剂的活性酶的毫克数表示。
实施例19至21重垢型液体衣物洗涤剂组合物
*本发明的淀粉酶以每100g洗涤剂的活性酶的毫克数表示。
**基于总清洁和/或处理组合物重量计,共计不超过7%的水。
针对清洁组合物实施例1至21的原材料和说明
具有C11-C18平均脂族碳链长度的直链烷基苯磺酸盐
C12-18二甲基羟乙基氯化铵
AE3S为C12-15烷基乙氧基(3)硫酸盐
AE7为C12-15醇乙氧基化物,平均乙氧基化度为7
AE9为C12-16醇乙氧基化物,平均乙氧基化度为9
HSAS是如US 6,020,303和US 6,060,443所公开的具有约16-17的碳链长度的中间支化伯烷基硫酸盐
膦酸盐螯合剂是,例如,二亚乙基四胺五乙酸(DTPA)羟乙烷二磷酸盐(HEDP)
TAED是四乙酰基乙二胺
S-ACMC为与C.I.活性蓝19产品名AZO-CM-CELLULOSE缀合的羧甲基纤维素
丙烯酸/马来酸共聚物的分子量为70,000,丙烯酸根与马来酸根的比率为70:30
EDDS是乙二胺-N,N'-二琥珀酸的钠盐,(S,S)异构体抑泡剂附聚物是由DowCorning,Midland,Michigan,USA提供的
HSAS是中间支化的烷基硫酸盐
1无规接枝共聚物为聚乙酸乙烯酯接枝的聚环氧乙烷共聚物,其具有聚环氧乙烷主链和多个聚乙酸乙烯酯侧链。聚环氧乙烷主链的分子量为约6000,并且聚环氧乙烷与聚乙酸乙烯酯的重量比为约40至60,并且每50个环氧乙烷单元具有不超过1个接枝点。
2聚乙烯亚胺(MW=600),每个-NH具有20个乙氧基化基团。
3两亲性烷氧基化聚合物是聚乙烯亚胺(分子量=600),制备自被衍生为每个-NH包含24个乙氧基化物基团且每个–NH包含16个丙氧基化物基团的聚合物。
淀粉酶4是本文a)至k)中的任何一种(mg活性蛋白)。
实施例22至26单位剂量衣物洗涤剂组合物。此类单位剂量制剂可包括一个或多个隔室。
*本发明的淀粉酶以每100g洗涤剂的活性酶的毫克数表示。
1聚乙烯亚胺(MW=600),每个-NH具有20个乙氧基化基团。
实施例27多隔室单位剂量组合物
下文中提供了本发明的多隔室的单位剂量衣物洗涤剂配方。在这些实施例中,单位剂量具有三个隔室,但类似的组合物能够以两个、四个或五个隔室被制得。用于包封所述隔室的膜是聚乙烯醇。
多隔室配方
*本发明的淀粉酶以每100g洗涤剂的活性酶的毫克数表示。
本文所公开的量纲和值不应理解为严格限于所引用的精确数值。相反,除非另外指明,否则每个此类量纲旨在表示所述值以及围绕该值功能上等同的范围。例如,公开为“40mm”的量纲旨在表示“约40mm”。
Claims (15)
1.一种清洁组合物,所述清洁组合物包含:(i)亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体,其中所述变体在与使用SEQ ID NO:1进行编号的以下位置相对应的一个或多个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和47694、98475和476,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中当与所述亲本多肽、优选地SEQ ID NO:2或3相比时,所述变体具有改善的性能,诸如按改善因数(IF)>1.0的比活性来度量的改善的洗涤性能;以及(ii)清洁助剂。
2.根据权利要求1所述的清洁组合物,其中所述修饰位于与使用SEQ ID NO:1进行编号的以下位置相对应的至少一个位置中:H1、H2、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475和G476,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14中的任何一者具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的清洁组合物,其中所述修饰位于与使用SEQ IDNO:1进行编号的以下位置相对应的至少一个位置中:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
4.根据前述权利要求中任一项所述的清洁组合物,其中所述变体在选自以下的使用SEQ ID NO:1进行编号的两个或更多个位置处包含缺失:R180*+S181*;R180*+T182*;R180*+G183*;S181*+T182*;S181*+G183*;和T182*+G183*。
5.根据前述权利要求中任一项所述的清洁组合物,其中所述变体包含以下或由以下组成:(a)所述亲本α-淀粉酶中的两个、三个或四个位置的替换和/或缺失,所述位置对应于使用SEQ ID NO:1进行编号的位置180、181、182和183;以及(b)与使用SEQ ID NO:1进行编号的以下位置相对应的一个或多个位置处的修饰:H1*、H2、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
6.根据前述权利要求中任一项所述的清洁组合物,其中所述变体包含选自以下的使用SEQ ID NO:1进行编号的一种或多种修饰:
H1*+G7A+R180*+S181*、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+N279S、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+N279S+G303R、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+G303R+E390A+G476A,
并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
7.根据前述权利要求中任一项所述的清洁组合物,其中所述变体包含选自以下的使用SEQ ID NO:1进行编号的一种或多种修饰或由其组成:
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182S+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+T182L+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+S181L+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180S+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A60P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105I+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182G+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182M+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185K+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185N+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185R+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244L+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280F+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+T315A+E390A+G475K、
H1*+G7H+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+A60V+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+T151A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+K258V+E259V+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+N94D+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+T256A+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+N94D+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
R180*+S181*、
T40N+F116L+D123N+N126D+N128Y+T131I+F155W+R180*+S181*+T182D+E189P+F202Y+K457N+P458S+G475K+G476E、
A60V+Q98L+G110K+R180*+S181*+A383D、
Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+T315A、
G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*、
G7H+W167P+R180*+S181*+G455R、
Q98L+V103A+G110K+R180*+S181*、
T114K+R180*+S181*、
E169V+R180*+S181*、
R180*+S181*+W188C、
W167D+R180*+S181*、
W167S+R180*+S181*、
W167E+R180*+S181*、
W167P+R180*+S181*、
R180*+S181*+E193I+H323N、
R180*+S181*+A203F、
W159L+R180*+S181*、
W159H+R180*+S181*、
K178A+R180*+S181*、
A111L+R180*+S181*、
G110K+R180*+S181*和
A111G+R180*+S181*,
并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
8.根据前述权利要求中任一项所述的清洁组合物,其中所述亲本α-淀粉酶选自SEQ IDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13和14中所阐述的氨基酸序列,或与SEQ ID NO:1、2或3中所阐述的氨基酸序列中的任何氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性的任何α-淀粉酶。
9.根据前述权利要求中任一项所述的清洁组合物,其中所述亲本α-淀粉酶包含SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3中所阐述的氨基酸序列或由其组成。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的清洁组合物,其中所述清洁助剂包含附加酶,所述附加酶优选地选自蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、核酸酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、黄原胶裂解酶、过氧化物酶、卤代过氧化物酶、氨基己糖苷酶、过氧化氢酶和甘露聚糖酶或它们的任何混合物。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的清洁组合物,所述清洁组合物是液体或固体洗涤剂组合物,优选地衣物洗涤或盘碟洗涤组合物,优选地液体衣物洗涤组合物。
12.一种制备清洁组合物的方法,所述方法包括以下步骤:(i)通过在与使用SEQ IDNO:1进行编号的以下位置相对应的一个或多个位置处引入修饰来获得亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和47694、98475和476,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性;以及(ii)将所述α-淀粉酶变体与清洁助剂混合。
13.一种改善清洁组合物的洗涤性能的方法,所述方法包括向所述清洁组合物中掺入亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体,所述变体具有SEQ IDNO:1的氨基酸序列或与之具有至少60%的序列同一性,所述方法包括以下步骤:(a)在所述亲本α-淀粉酶的两个、三个或四个位置中引入替换和/或缺失,所述位置对应于使用SEQ ID NO:1进行编号的位置180、181、182和183;以及(b)在与使用SEQ ID NO:1进行编号的以下位置相对应的一个或多个位置处引入修饰:H1*、H2、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14中的任何一者具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性和与所述亲本多肽相比改善的洗涤性能。
14.根据权利要求1至10中任一项所述的清洁组合物在清洁过程中的用途,所述用途优选地为衣物洗涤或包括盘碟洗涤和工业清洁在内的硬质表面清洁,最优选地用于清洁衣物。
15.一种处理表面、优选地织物的方法,所述方法包括:
(i)形成水性洗涤液体,所述水性洗涤液体包含水、如任何前述权利要求中所述的具有淀粉酶活性的所述α-淀粉酶变体、以及清洁助剂,
(ii)优选地在5℃至35℃的温度下,优选地在30℃或小于30℃的温度下,或在28℃或更低或者20℃或更低的温度下,用所述水性洗涤液体处理所述表面;以及
(iii)冲洗所述表面。
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