BR122023026759A2 - Variantes de alfa-amilase progenitora, método para obter uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase progenitora, uso de uma variante de alfa-amilase e composição - Google Patents
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Abstract
VARIANTES DE ALFA-AMILASE PROGENITORA, MÉTODO PARA OBTER UMA VARIANTE DE ALFA-AMILASE DE UMA ALFA-AMILASE PROGENITORA, USO DE UMA VARIANTE DE ALFA-AMILASE E COMPOSIÇÃO. A presente invenção se relaciona com variantes de alfa-amilase de uma alfa-amilase progenitora que têm um desempenho de lavagem melhorado em comparação com a alfa-amilase progenitora. A presente invenção também se relaciona com polinucleotídeos que codificam as variantes, construtos de ácidos nucleicos, vetores e células hospedeiras compreendendo os polinucleotídeos, e um método de produção das variantes da presente invenção.
Description
[0001] Dividido do BR 112022011955-0, depositado em 18/12/2020.
[0002] Este pedido contém uma Listagem de Sequências em forma legível por computador. A forma legível por computador é incorporada aqui por referência.
[0003] A presente invenção se relaciona com variantes de alfa-amilase tendo atividade de alfa-amilase. A presente invenção se relaciona adicionalmente com polinucleotídeos codificando tais variantes, vetores e células hospedeiras compreendendo genes codificando tais variantes, que também podem permitir a produção de tais variantes. A presente invenção se relaciona adicionalmente com o uso em limpeza ou tratamento doméstico, em particular lavagem de roupa e louça, incluindo lavagem de roupa manual e/ou automática e/ou lavagem de louça manual e/ou automática. A presente invenção é particularmente útil para limpeza de roupa.
[0004] As alfa-amilases (alfa-1,4-glucan-4- glucano-hidrolases, E.C. 3.2.1.1) constituem um grupo de enzimas que catalisam a hidrólise de amido e outros oligo- e polissacarídeos 1,4-glucosídicos lineares e ramificados. São conhecidas para uso no ambiente doméstico desde há muitos anos, incluindo as primeiras alfa-amilases bacterianas a serem usadas de B.licheniformis, também conhecidas como Termamyl. Amilases alcalinas, por exemplo, as de AA560 (WO2000/060060) e de SP707 (descritas por Tsukamoto et al., 1988, Biochem. Biophys. Res. Comm. 151: 25-31) são úteis em detergentes e é conhecido como modificar estas e outras amilases para melhorar a sua estabilidade em detergentes. Por exemplo, WO 96/23873 divulga a deleção dos aminoácidos 181+182 ou dos aminoácidos 183+184 de SP707 (SEQ ID NO: 7 de WO 96/23873) para melhorar a estabilidade desta amilase. WO 96/23873 revela adicionalmente a modificação da amilase SP707 pela substituição de M202 com, por exemplo, uma leucina para estabilizar a molécula em relação a oxidação.
[0005] É um desafio constante melhorar o desempenho de enzimas amilolíticas, especialmente de um modo ambientalmente favorável. Por motivos ambientais também é cada vez mais importante proporcionar enzimas amilolíticas que sejam eficazes, preferencialmente também em ciclos de lavagem rápida muitas vezes usando volumes menores de água e/ou temperaturas mais baixas. Assim, é desejável dispor de enzimas amilolíticas que exibam uma propriedade melhorada, como atividade específica, quando comparadas com o polipeptídeo progenitor. A presente invenção proporciona polipeptídeos variantes tendo atividade de alfa-amilase e uma propriedade melhorada ou benefício de detergência enzimática, como remoção de manchas contendo amido, ou atividade específica, em comparação com o seu híbrido e/ou um polipeptídeo progenitor. Enzimas amilolíticas particularmente preferenciais podem funcionar a baixa temperatura e/ou em ciclos de lavagem mais curtos e ao mesmo tempo preservar ou aumentar outras propriedades desejáveis tais como atividade específica (atividade amilolítica), estabilidade e/ou desempenho de lavagem.
[0006] Portanto, é um objetivo da presente invenção proporcionar variantes de alfa-amilase exibindo uma propriedade melhorada, como a remoção de manchas contendo amido ou atividade específica, quando comparadas com o polipeptídeo progenitor e que possam ser usadas em processos de lavagem, lavagem de louça e/ou limpeza a baixa temperatura, tal como temperaturas de 5-40 °C. É um objetivo adicional da presente invenção proporcionar variantes de alfa-amilase que tenham um desempenho de lavagem melhorado em comparação à alfa-amilase genitora ou em comparação à alfa-amilase de qualquer uma das SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14. SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[0007] A presente invenção se relaciona com uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase progenitora compreendendo uma modificação em uma ou mais posições correspondendo à posição: 1, 2 , 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94 , 98 , 103 , 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO. 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100 % de identidade de sequência com o polipeptídeo progenitor.
[0008] A presente invenção se relaciona com uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase progenitora compreendendo uma modificação em uma ou mais posições correspondendo à posição: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94, 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474 475 e 476, usando a SEQ ID NO. 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com o polipeptídeo progenitor e em que a referida variante tem um desempenho de lavagem melhorado, em que o desempenho de lavagem é melhorado comparado com o do polipeptídeo progenitor, em que o polipeptídeo progenitor é preferencialmente a SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2 ou SEQ ID NO: 3.
[0009] A presente invenção também se refere a um polinucleotídeo que codifica uma variante de alfa amilase de acordo com a invenção, um construto de ácido nucleico compreendendo o polinucleotídeo que codifica a variante de acordo com a invenção, um vetor de expressão compreendendo o polinucleotídeo que codifica a variante de acordo com a invenção ou uma célula hospedeira compreendendo o polinucleotídeo que codifica a variante de acordo com a invenção.
[0010] A presente invenção também se refere a um método de produção de uma variante de alfa-amilase, compreendendo (a) cultivar a célula hospedeira da invenção sob condições adequadas para a expressão da variante, e (b) recuperar a variante.
[0011] A presente invenção se relaciona adicionalmente com um método para obter uma variante de alfa- amilase, compreendendo introduzir em uma alfa-amilase progenitora uma modificação em uma ou mais posições correspondentes à posição 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63 , 72, 73, 93, 94 , 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO. 1 para a numeração, em que cada modificação é independentemente uma substituição ou deleção, e a variante tem atividade de alfa-amilase; e recuperar a variante.
[0012] De acordo com esta descrição detalhada, as seguintes definições se aplicam. Se note que as formas singulares “um”, “uma” e “o/a” incluem referências plurais a não ser que o contexto indique claramente de outro modo.
[0013] A referência a “cerca de” um valor ou parâmetro aqui inclui aspectos que estão dirigidos a esse valor ou parâmetro per se. Por exemplo, a descrição se referindo a “cerca de X” inclui o aspecto “X”.
[0014] Ao longo deste documento, valores expressos em um formato de intervalo devem ser interpretados de um modo flexível para incluir não só os valores numéricos explicitamente apresentados como os limites do intervalo, mas também para incluir todos os valores numéricos individuais ou subintervalos abrangidos dentro desse intervalo tal como se cada valor numérico e subintervalo fosse explicitamente apresentado. Por exemplo, um intervalo de "cerca de 0,1 por cento até cerca de 5 por cento" ou "cerca de 0,1 por cento até 5 por cento" deve ser interpretado como incluindo não só cerca de 0,1 por cento até cerca de 5 por cento, mas também os valores individuais (por exemplo, 1 por cento, 2 por cento, 3 por cento, e 4 por cento) e os subintervalos (por exemplo, 0,1 por cento até 0,5 por cento, 1,1 por cento até 2,2 por cento, 3,3 por cento até 4,4 por cento) dentro do intervalo indicado. A afirmação "cerca de X até Y" tem o mesmo significado de "cerca de X até cerca de Y", a menos que indicado de outro modo. De igual modo, a afirmação "cerca de X, Y, ou cerca de Z" tem o mesmo significado de "cerca de X, cerca de Y, ou cerca de Z," a menos que indicado de outro modo.
[0015] A não ser que definidos de outro modo ou claramente indicado pelo contexto, todos os termos técnicos e científicos usados aqui têm o mesmo significado como comumente entendido por um habitualmente versado na técnica à qual esta invenção pertence.
[0016] Domínios A, B e C: A estrutura de alfa- amilases compreende três domínios distintos A, B e C, ver, por exemplo, Machius et al., 1995, J. Mol. Biol. 246: 545-559. O termo “domínio” significa uma região de um polipeptídeo que forma uma subestrutura distinta e independente da molécula inteira. As alfa-amilases consistem em um barril beta/alfa-8 alojando o local ativo, que é denotado como o domínio A, um laço algo longo entre a folha-beta 3 e hélice-alfa 3, que é denotado o domínio B, e um domínio C e em alguns casos também um domínio de ligação a carboidratos (p.ex., WO 2005/001064; Machius et al., supra).
[0017] Os domínios de uma alfa-amilase podem ser determinados por análise da estrutura tal como usando técnicas cristalográficas. Um método alternativo para determinação dos domínios de uma alfa-amilase é por alinhamento de sequências da sequência de aminoácidos da alfa-amilase com outra alfa- amilase para a qual os domínios foram determinados. A sequência que se alinha com, p.ex., a sequência do domínio B na alfa- amilase para a qual o domínio B foi determinado pode ser considerada o domínio B para a dada alfa-amilase.
[0018] Variante alélica: O termo “variante alélica” significa qualquer uma de duas ou mais formas alternativas de um gene ocupando o mesmo lócus cromossômico. A variação alélica surge naturalmente através da mutação e pode resultar em polimorfismo dentro das populações. As mutações genéticas podem ser silenciosas (sem mudança no polipeptídeo codificado) ou podem codificar polipeptídeos tendo sequências de aminoácidos alteradas. Uma variante alélica de um polipeptídeo é um polipeptídeo codificado por uma variante alélica de um gene.
[0019] Alfa-amilases: O termo “alfa-amilase” é sinônimo do termo “polipeptídeos tendo atividade de alfa- amilase”. “Atividade de alfa-amilase” significa a atividade de alfa-1,4-glucan-4-glucanoidrolases, E.C. 3.2.1.1, que constituem um grupo de enzimas, catalisando a hidrólise de amido e outros oligo- e polissacarídeos 1,4-glucosídicos lineares e ramificados. Assim, o termo “alfa-amilase”, como usado aqui, se refere a uma enzima que tem atividade de alfa- amilase (Classe de Enzimas; EC 3.2.1.1) que hidrolisa ligações alfa de grandes polissacarídeos, ligados em alfa, tais como amido e glicogênio, originando glucose e maltose. Os termos “alfa-amilase” e “amilase” podem ser usados indistintamente e constituem o mesmo significado e propósito aqui. Para propósitos da presente invenção, a atividade de alfa-amilase é determinada de acordo com o procedimento descrito sob o subcabeçalho Métodos, em baixo. Em um aspecto, as alfa-amilases da presente invenção têm pelo menos 20%, por exemplo, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, como pelo menos 65%, como pelo menos 70%, como pelo menos 75%, como pelo menos 80%,como cerca de 85%, cerca de 90%, cerca de 91%, cerca de 92%, cerca de 93%, cerca de 94%, cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98%, cerca de 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos do polipeptídeo da SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0020] Aminoácido: O termo “aminoácido”, como usado aqui, se refere aos vinte aminoácidos geneticamente codificados padrão e seus estereoisômeros correspondentes na forma “d” (em comparação com a forma natural “l”), ômega- aminoácidos diferentes dos aminoácidos ocorrendo naturalmente, aminoácidos não convencionais (p.ex., aminoácidos α,α- dissubstituídos, N-alquilaminoácidos, etc.) e aminoácidos quimicamente derivatizados. Os derivados químicos de um ou mais aminoácidos podem ser alcançados por reação com um grupo lateral funcional. Tais moléculas derivatizadas incluem, por exemplo, aquelas moléculas nas quais os grupos amino livres foram derivatizados para formar hidrocloretos de amina, grupos p-toluenossulfonila, grupos carboxibenzóxi, grupos t- butiloxicarbonila, grupos cloroacetila ou grupos formila. Os grupos carboxila livres podem ser derivatizados para formar sais, ésteres de metila e etila ou outros tipos de ésteres e hidrazidas. Os grupos hidroxila livres podem ser derivatizados para formar derivados de O-acila ou O-alquila. São também incluídos como derivados químicos aqueles peptídeos que contêm derivados de aminoácidos ocorrendo naturalmente dos vinte aminoácidos padrão. Por exemplo: a 4-hidroxiprolina pode substituir prolina; a 5-hidroxilisina pode substituir lisina; a 3-metil-histidina pode substituir histidina; a homosserina pode substituir serina e a ornitina pode substituir lisina. Os derivados incluem também peptídeos contendo uma ou mais adições ou deleções desde que a atividade obrigatória seja mantida. Outras modificações incluídas são amidação, acilação aminoterminal (p.ex., acetilação ou amidação de ácido tioglicólico), carboxilamidação terminal (p.ex., com amônia ou metilamina) e as modificações de terminais similares.
[0021] Quando um aminoácido está sendo especificamente indicado, tal como “alanina” ou “Ala” ou “A”, o termo se refere tanto a l-alanina como a d-alanina a não ser que explicitamente mencionado de outro modo. Outros aminoácidos não convencionais podem ser também componentes apropriados para polipeptídeos da presente invenção, desde que a propriedade funcional desejada seja retida pelo polipeptídeo. Para os peptídeos mostrados, cada resíduo de aminoácido codificado, onde apropriado, é representado por uma designação de letra única, correspondendo ao nome trivial do aminoácido convencional. Em uma modalidade, os polipeptídeos da invenção compreendem ou consistem em l-aminoácidos.
[0022] Domínio catalítico: O termo “domínio catalítico” significa a região de uma enzima contendo a maquinaria catalítica da enzima.
[0023] cDNA: O termo "cDNA" significa uma molécula de DNA que pode ser preparada por transcrição reversa de uma molécula mRNA, encadeada, madura obtida de uma célula eucariótica. O cDNA não tem sequências íntron que podem estar presentes no correspondente DNA genômico. O transcrito de RNA primário, inicial é um precursor de mRNA que é processado através de uma série de passos, incluindo encadeamento, antes de aparecer como mRNA encadeado maduro.
[0024] Sequência codificante: O termo “sequência codificante” significa um polinucleotídeo que especifica diretamente a sequência de aminoácidos de uma variante. As fronteiras da sequência codificante são geralmente determinadas por uma grelha de leitura aberta, que habitualmente começa com um códon de iniciação tal como ATG, GTG, ou TTG e termina com um códon de terminação tal como TAA, TAG, ou TGA. A sequência codificante pode ser um DNA, cDNA, polinucleotídeo sintético ou recombinante.
[0025] Sequências de controle: O termo “sequências de controle” significa sequências de ácido nucleico necessárias para expressão de um polinucleotídeo codificando uma variante da presente invenção. Cada sequência de controle pode ser nativa (isto é, do mesmo gene) ou estranha (isto é, de um gene diferente) para o polinucleotídeo que codifica a variante ou nativa ou estranha entre si. Tais sequências de controle incluem, mas não estão limitadas a, uma líder, sequência de poliadenilação, sequência de pró-peptídeo, promotor, sequência de peptídeo-sinal e terminador da transcrição. No mínimo, as sequências de controle incluem um promotor e sinais de terminação da transcrição e tradução. As sequências de controle podem ser proporcionadas com ligantes para o propósito de introdução de sítios de restrição específicos facilitando a ligação das sequências de controle à região codificante do polinucleotídeo que codifica uma variante.
[0026] Correspondente a: O termo “correspondendo a”, como usado aqui, se refere a um modo de determinar o aminoácido específico de uma sequência em que é feita referência a uma sequência de aminoácidos específica. Por exemplo, para os propósitos da presente invenção, quando as referências são feitas a posições de aminoácidos específicas, a pessoa versada pode alinhar outra sequência de aminoácidos à dita sequência de aminoácidos à qual foi feita referência, de modo a determinar qual aminoácido específico pode ser de interesse na dita outra sequência de aminoácidos. O alinhamento de uma outra sequência de aminoácidos com, p.ex., a sequência apresentada na SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14, ou qualquer outra sequência listada aqui, foi descrito em outro lugar aqui. Métodos de alinhamento alternativos podem ser usados e são bem conhecidos do perito.
[0027] Composição de lavagem de louça: O termo “composição de lavagem de louça”, como usado aqui, se refere a todas as formas de composições para limpeza de louça. A composição de lavagem de louça é uma composição líquida de lavagem de louça, uma composição em pó de lavagem de louça, opcionalmente em que a composição está na forma de uma dose unitária. Uma composição de lavagem de louça em dose unitária pode compreender mais do que um compartimento, em que os múltiplos compartimentos compreendem pó, líquido ou uma sua combinação.
[0028] Benefício de Detergência Enzimática: O termo “benefício de detergência enzimática”, usado aqui, se refere ao efeito vantajoso que uma enzima pode adicionar a um detergente em comparação com o mesmo detergente sem a enzima. Benefícios de detergência importantes que podem ser proporcionados por enzimas são remoção de manchas com nenhumas ou muitos poucas sujidades visíveis após lavagem e/ou limpeza, prevenção ou redução da redeposição de sujidades liberadas no processo de lavagem (um efeito que é também denominado antirredeposição), restabelecimento total ou parcial da brancura de têxteis que originalmente eram brancos mas, após uso e lavagem repetidos, adquiriram uma aparência acinzentada ou amarelada (um efeito que é também denominado branqueamento). Benefícios de cuidado de têxteis, que não estão diretamente relacionados com a remoção catalítica de manchas ou prevenção da redeposição de sujidades, também podem ser importantes para os benefícios de detergência enzimática. Exemplos de tais benefícios de cuidado de têxteis são prevenção ou redução da transferência de corantes de um tecido para um outro tecido ou uma outra parte do mesmo tecido (um efeito que é também denominado inibição da transferência de corantes ou antirretrocoloração), remoção de fibras salientes ou quebradas da superfície de um tecido para diminuir as tendências de formação de borbotos ou remover os borbotos ou felpo já existentes (um efeito que é também denominado antiformação de borbotos), melhoria da suavidade do tecido, clarificação da cor do tecido e remoção de sujidades particuladas que estão presas nas fibras do tecido ou peça de vestuário. O branqueamento enzimático é um benefício de detergência de enzima adicional onde a atividade catalítica é geralmente usada para catalisar a formação de componente de branqueamento tal como peróxido de hidrogênio ou outros peróxidos.
[0029] Expressão: O termo “expressão” inclui qualquer passo envolvido na produção da variante incluindo, mas não se limitando a, transcrição, modificação pós- transcrição, tradução, modificação pós-tradução e secreção.
[0030] Vetor de expressão: O termo “vetor de expressão” significa uma molécula de DNA linear ou circular que compreende um polinucleotídeo codificando uma variante e está operacionalmente ligado a nucleotídeos adicionais que proporcionam sua expressão.
[0031] Fragmento: O termo "fragmento", como usado aqui, se relaciona com um polipeptídeo tendo um ou mais (por exemplo, vários) aminoácidos ausentes do terminal amino e/ou carboxila do polipeptídeo maduro de qualquer uma das sequências progenitoras aqui divulgadas, como as SEQ ID NOs: 1-14; em que o fragmento tem atividade de alfa-amilase. Em um aspecto, um fragmento contém pelo menos 200 resíduos de aminoácidos contíguos de SEQ ID NOs: 1-14, por exemplo, pelo menos 300 resíduos de aminoácidos contíguos, ou pelo menos 350 resíduos de aminoácidos contíguos, ou pelo menos 400 resíduos de aminoácidos contíguos, ou pelo menos 450 resíduos de aminoácidos contíguos das SEQ ID Nos: 1-14.
[0032] Polipeptídeo de Fusão: O termo “polipeptídeo de fusão”, como usado aqui, se refere a um polipeptídeo que compreende sequências de aminoácidos tendo origem em mais do que uma, tal como duas, três ou quatro espécies. Um tal polipeptídeo de fusão pode ter sido gerado por técnicas moleculares bem conhecidas da pessoa perita. Um polipeptídeo de fusão da presente invenção tem atividade de alfa-amilase. Em particular, um polipeptídeo de fusão da presente invenção compreende, p.ex., um domínio A e C de uma alfa-amilase e um domínio B de outra alfa-amilase. Polipeptídeo híbrido (ou "híbrido") e polipeptídeo de fusão podem ser usados indistintamente e constituem o mesmo significado e propósito.
[0033] Limpeza de superfícies duras: O termo "limpeza de superfícies duras", como usado aqui, se relaciona com limpeza de quaisquer superfícies duras incluindo superfícies de soalhos, telhados, carros, cozinha ou banheiro, bem como limpeza de louça (lavagem de louça).
[0034] Polinucleotídeo heterólogo: O termo “polinucleotídeo heterólogo” é definido aqui como um polinucleotídeo que não é nativo da célula hospedeira; um polinucleotídeo nativo no qual modificações estruturais foram feitas na região codificante; um polinucleotídeo nativo cuja expressão está quantitativamente alterada como resultado de uma manipulação do DNA por técnicas de DNA recombinantes, p.ex. um promotor diferente (estranho); ou um polinucleotídeo nativo em uma célula hospedeira tendo uma ou mais cópias extra do polinucleotídeo para alterar quantitativamente a expressão. Um “gene heterólogo” é um gene compreendendo um polinucleotídeo heterólogo.
[0035] Heterólogo: O termo “heterólogo” significa, em relação a uma célula hospedeira, que um polipeptídeo ou ácido nucleico não ocorre naturalmente na célula hospedeira. O termo “heterólogo” significa, em relação a um polipeptídeo ou ácido nucleico, que uma sequência de controle, por exemplo, promotor, ou domínio de um polipeptídeo ou ácido nucleico não está naturalmente associado ao polipeptídeo ou ácido nucleico, isto é, a sequência de controle provém de um gene diferente do gene que codifica as variantes.
[0036] Condições de elevada estringência: O termo “condições de elevada estringência” significa, para sondas com pelo menos 100 nucleotídeos de comprimento, pré-hibridação e hibridação a 42 °C em 5X SSPE, SDS a 0,3%, DNA de esperma de salmão cisalhado e desnaturado a 200 microgramas/mL e formamida a 50%, seguindo procedimentos de transferência de Southern padrão durante 12 a 24 horas. O material transportador é finalmente lavado três vezes cada uma durante 15 minutos usando 2X SSC, SDS a 0,2% a 65 °C.
[0037] Célula hospedeira: O termo “célula hospedeira” significa qualquer célula microbiana ou vegetal na qual um construto de ácido nucleico ou vetor de expressão que compreende um polinucleotídeo da presente invenção foi introduzido. Os métodos para introdução incluem, mas não se limitam a, fusão de protoplastos, transfecção, transformação, eletroporação, conjugação e transdução. Em algumas modalidades, a célula hospedeira é uma célula hospedeira recombinante isolada que é parcial ou completamente separada de pelo menos um outro componente com, incluindo, mas não se limitando a proteínas, ácidos nucleicos, células, etc.
[0038] Hibridação: O termo “hibridação” significa o emparelhamento de fitas substancialmente complementares de ácidos nucleicos, usando procedimentos padrão de transferência Southern. A hibridação pode ser realizada em condições de estringência média, média-elevada, elevada ou muito elevada. Condições de estringência média significam pré-hibridação e hibridação a 42 °C em 5X SSPE, SDS a 0,3%, DNA de esperma de salmão cisalhado e desnaturado a 200 microgramas/mL e formamida a 35% durante 12 a 24 horas, seguidas por lavagem três vezes cada uma durante 15 minutos usando 0,2X SSC, SDS a 0,2% a 55 °C. Condições de estringência média-elevada significam pré- hibridação e hibridação a 42 °C em 5X SSPE, SDS a 0,3%, DNA de esperma de salmão cisalhado e desnaturado a 200 microgramas/mL e formamida a 35% durante 12 a 24 horas, seguidas por lavagem três vezes cada uma durante 15 minutos usando 0,2X SSC, SDS a 0,2% a 60 °C. Condições de estringência elevada significam pré-hibridação e hibridação a 42 °C em 5X SSPE, SDS a 0,3%, DNA de esperma de salmão cisalhado e desnaturado a 200 microgramas/mL e formamida a 50% durante 12 a 24 horas, seguidas por lavagem três vezes cada uma durante 15 minutos usando 0,2X SSC, SDS a 0,2% a 65 °C. Condições de estringência muito elevada significam pré-hibridação e hibridação a 42 °C em 5X SSPE, SDS a 0,3%, DNA de esperma de salmão cisalhado e desnaturado a 200 microgramas/mL e formamida a 50% durante 12 a 24 horas, seguidas por lavagem três vezes cada uma durante 15 minutos usando 0,2X SSC, SDS a 0,2% a 70 °C.
[0039] Propriedade melhorada: O termo “propriedade melhorada” é definido aqui como uma característica associada a uma variante que é melhorada em comparação com a alfa-amilase progenitora. Tais propriedades melhoradas incluem, mas não estão limitadas a, atividade amilolítica aumentada, eficiência catalítica aumentada, velocidade catalítica aumentada, estabilidade química aumentada, estabilidade à oxidação aumentada, atividade de pH aumentada, estabilidade ao pH aumentada, atividade específica aumentada, ligação ao substrato aumentada, clivagem do substrato aumentada, especificidade para o substrato aumentada, estabilidade do substrato aumentada, propriedades de superfície aumentadas, atividade térmica aumentada, termoestabilidade aumentada, desempenho de lavagem aumentado tal como desempenho de remoção de sujidades, p.ex., desempenho para sujidades contendo amido, remoção de manchas, antiacinzentamento, estabilidade, p.ex., termoestabilidade, estabilidade ao pH ou estabilidade na presença de antirredepositantes, incluindo quelante, estabilidade em formulação detergente ou composição de lavagem de louça em pó, líquido ou gel, desempenho dependente da temperatura e perfil de atividade, atividade de pH, especificidade para o substrato, especificidade do produto e estabilidade química alterados.
[0040] Desempenho de lavagem melhorado: O termo "desempenho de lavagem melhorado"é definido aqui como exibindo uma melhoria do desempenho de lavagem de uma amilase relativamente ao desempenho de lavagem da amilase progenitora ou relativamente à alfa-amilase de qualquer uma das SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 ou SEQ ID NO: 3, por exemplo, por remoção acrescida de manchas. O desempenho de lavagem melhorado pode ser medido por comparação do assim chamado Valor de intensidade. Preferencialmente, o desempenho de lavagem melhorado é determinado de acordo com os Exemplos. O desempenho de lavagem é melhorado se o Fator de Melhoramento (IF) for superior a 1,0, preferencialmente superior a 1,05 em uma ou mais das condições listadas nos exemplos. As condições de lavagem são descritas na seção de Exemplos. O termo “desempenho de lavagem” inclui limpeza em geral, por exemplo, limpeza de superfícies duras como na lavagem de louça, mas também o desempenho de lavagem de tecidos como na lavagem de roupa e também limpeza industrial e institucional. O desempenho de lavagem melhorado pode ser medido por comparação das intensidades de delta como descrito na definição aqui.
[0041] Isolado: O termo “isolado” significa uma substância em uma forma ou ambiente que não ocorre na natureza. Exemplos não limitantes de substâncias isoladas incluem (1) qualquer substância não ocorrendo naturalmente, (2) qualquer substância incluindo, mas não se limitando a, qualquer enzima, variante, ácido nucleico, proteína, peptídeo ou cofator, que é pelo menos parcialmente removida de um ou mais ou todos os constituintes ocorrendo naturalmente aos quais está associada na natureza; (3) qualquer substância modificada pelo homem em relação a essa substância encontrada na natureza; ou (4) qualquer substância modificada por aumento da quantidade da substância em relação a outros componentes aos quais está naturalmente associada (p.ex., múltiplas cópias de um gene codificando a substância; uso de um promotor mais forte do que o promotor naturalmente associado ao gene codificando a substância). Uma substância isolada pode estar presente em uma amostra de caldo de fermentação. Em um aspecto, a presente invenção se refere a uma variante de alfa-amilase isolada.
[0042] Valor de intensidade: O desempenho de lavagem é medido como o brilho expresso como a intensidade da luz refletida da amostra quando iluminada com luz branca. Quando a amostra está manchada, a intensidade da luz refletida é mais baixa do que aquela de uma amostra limpa. Portanto, a intensidade da luz refletida pode ser usada para medir o desempenho de lavagem, onde um valor de intensidade mais alto se correlaciona com maior desempenho de lavagem. As medições de cor são feitas com um digitalizador de mesa profissional (Kodak iQsmart, Kodak) usado para capturar uma imagem do têxtil lavado. Para extrair um valor para a intensidade da luz a partir das imagens digitalizadas, os valores de pixel de 24 bits da imagem são convertidos em valores para vermelho, verde e azul (RGB). O valor de intensidade (Int) é calculado adicionando os valores RGB como vetores e depois tomando o comprimento do vetor resultante:
[0043] Condições de baixa estringência: O termo "condições de baixa estringência"significa, para sondas com pelo menos 100 nucleotídeos de comprimento, pré-hibridação e hibridação a 42 °C em 5X SSPE, SDS a 0,3%, 200 microgramas/mL de DNA de esperma de salmão cisalhado e desnaturado, e formamida a 25%, seguindo procedimentos de transferência Southern padrão durante 12 a 24 horas. O material transportador é finalmente lavado três vezes, cada uma durante 15 minutos usando SSC 0,2X, SDS a 0,2% a 50 °C.
[0044] Baixa temperatura: "Baixa temperatura" é uma temperatura de 5-40 °C, ou 5-35 °C, ou 5-30 °C, ou mesmo 525 °C, ou 5-20 °C, ou 5-15 °C, ou 5-10 °C. Preferencialmente, "baixa temperatura" é uma temperatura de 10-35 °C, preferencialmente 10-30 °C, ou 10-25 °C, ou 10-20 °C.
[0045] Sequência codificante de polipeptídeo maduro: O termo “sequência codificante do polipeptídeo maduro” significa um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo maduro tendo atividade de alfa-amilase.
[0046] Polipeptídeo maduro: O termo “polipeptídeo maduro” significa um polipeptídeo em sua forma final após tradução e quaisquer modificações pós-tradução, tais como processamento N-terminal, truncamento C-terminal, glicosilação, fosforilação, etc. É conhecido na técnica que uma célula hospedeira pode produzir uma mistura de dois ou mais polipeptídeos maduros diferentes (isto é, com um aminoácido C- terminal e/ou N-terminal diferente) expressos pelo mesmo polinucleotídeo.
[0047] Condições de média estringência: O termo "condições de média estringência"significa, para sondas com pelo menos 100 nucleotídeos de comprimento, pré-hibridação e hibridação a 42 °C em 5X SSPE, SDS a 0,3%, 200 microgramas/mL de DNA de esperma de salmão cisalhado e desnaturado, e formamida a 35%, seguindo procedimentos padrão de transferência Southern durante 12 a 24 horas. O material transportador é finalmente lavado três vezes, cada uma por 15 minutos com o uso de 2X SSC, 0,2% de SDS a 55 °C.
[0048] Condições de média-elevada estringência: O termo “condições de média-elevada estringência” significa, para sondas com pelo menos 100 nucleotídeos de comprimento, pré-hibridação e hibridação a 42 °C em 5X SSPE, SDS a 0,3%, DNA de esperma de salmão cisalhado e desnaturado a 200 microgramas/mL e formamida a 35%, seguindo procedimentos de transferência Southern padrão durante 12 a 24 horas. O material transportador é finalmente lavado três vezes, cada uma por 15 minutos com o uso de 2X SSC, 0,2% de SDS a 60 °C.
[0049] Modificação: O termo “modificação”, no contexto dos polipeptídeos da invenção, significa que um ou mais aminoácidos dentro da sequência de aminoácidos de referência (p.ex., SEQ ID NOs: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14) são alterados por substituição por um aminoácido diferente, por inserção de um aminoácido ou por deleção, preferencialmente por pelo menos uma deleção. Os termos “modificação”, “alteração” e “mutação” podem ser usados indistintamente e constituem o mesmo significado e propósito.
[0050] Mutante: O termo “mutante” significa um polinucleotídeo codificando uma variante.
[0051] Nativo: O termo “nativo” significa um ácido nucleico ou polipeptídeo de ocorrência natural em uma célula hospedeira.
[0052] Construto de ácido nucleico: O termo “construto de ácido nucleico” significa uma molécula de ácido nucleico, de fita simples ou dupla, que é isolada de um gene de ocorrência natural ou é modificada para conter segmentos de ácidos nucleicos de uma maneira que, caso contrário, não existiria na natureza, ou que é sintética, que compreende uma ou mais sequências de controle. O termo construto de ácido nucleico é sinônimo do termo “cassete de expressão” quando o construto de ácido nucleico contém as sequências de controle requeridas para expressão de uma sequência codificante da presente invenção.
[0053] Operacionalmente ligado: O termo “operacionalmente ligado” significa uma configuração na qual uma sequência de controle está colocada em uma posição apropriada em relação à sequência codificante de um polinucleotídeo tal que a sequência de controle dirige a expressão da sequência codificante.
[0054] Progenitor ou alfa-amilase progenitora: O termo alfa-amilase “progenitora”, como usado aqui, significa uma alfa-amilase na qual são feitas modificações para produzir a alfa-amilase variante da presente invenção. Este termo também se relaciona com o polipeptídeo com o qual uma variante da invenção é comparada. O progenitor pode ser um polipeptídeo ocorrendo naturalmente (de tipo selvagem) ou pode mesmo ser uma sua variante, preparado por qualquer meio adequado. Por exemplo, a proteína progenitora pode ser uma variante de um polipeptídeo de ocorrência natural que foi modificado ou alterado na sequência de aminoácidos. Assim, a alfa-amilase progenitora pode ter uma ou mais (ou uma ou várias) substituições, deleções e/ou inserções de aminoácidos. Assim, a alfa-amilase progenitora pode ser uma variante de uma alfa- amilase progenitora. Um progenitor também pode ser uma variante alélica que é um polipeptídeo codificado por quaisquer duas ou mais formas alternativas de um gene ocupando o mesmo lócus cromossômico. O termo "progenitora" ou "alfa-amilase progenitora", como usado aqui, se relaciona com a alfa-amilase das SEQ ID NOs: SEQ ID NOs: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14, ou qualquer alfa-amilase tendo pelo menos 60% de identidade de sequência com qualquer um dos polipeptídeos das SEQ ID NOs: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14. A alfa-amilase progenitora também pode ser um polipeptídeo compreendendo um fragmento das SEQ ID NOs: 1-14. A progenitora pode ser uma alfa-amilase bacteriana ou fúngica, preferencialmente uma alfa-amilase bacteriana. A amilase tendo a SEQ ID NO: 1, 2 ou 3 pode ser, por exemplo, um polipeptídeo progenitor ou híbrido essencial para a presente invenção.
[0055] Purificado: O termo “purificado” significa um ácido nucleico ou polipeptídeo que está substancialmente livre de outros componentes, conforme determinado por técnicas analíticas bem conhecidas na técnica (por exemplo, um polipeptídeo ou ácido nucleico purificado pode formar uma banda discreta em um gel eletroforético, eluato cromatográfico e/ou um meio sujeito a centrifugação com gradiente de densidade). Um ácido nucleico ou polipeptídeo purificado é pelos menos cerca de 50% puro, normalmente, pelo menos cerca de 60%, cerca de 65%, cerca de 70%, cerca de 75%, cerca de 80%, cerca de 85%, cerca de 90%, cerca de 91%, cerca de 92%, cerca de 93%, cerca de 94%, cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98%, cerca de 99%, cerca de 99,5%, cerca de 99,6%, cerca de 99,7%, cerca de 99,8% ou mais puro (por exemplo, percentagem por peso em uma base molar). Em um sentido relacionado, uma composição é enriquecida em uma molécula quando há um aumento substancial na concentração da molécula após a aplicação de uma técnica de purificação ou enriquecimento. O termo “enriquecido” refere- se a um composto, polipeptídeo, célula, ácido nucleico, aminoácido ou outro material ou componente específico que está presente em uma composição em uma concentração relativa ou absoluta que é maior que uma composição inicial.
[0056] Recombinante: O termo “recombinante”, quando usado em referência a uma célula, ácido nucleico, proteína ou vetor, significa que foi modificado relativamente ao seu estado nativo. Assim, por exemplo, as células recombinantes expressam genes que não são encontrados na forma nativa (não recombinante) da célula ou expressam genes nativos em diferentes níveis ou sob diferentes condições em relação aos encontrados na natureza. Os ácidos nucleicos recombinantes diferem de uma sequência nativa em um ou mais nucleotídeos e/ou são operacionalmente ligados a sequências heterólogas, por exemplo, um promotor heterólogo em um vetor de expressão. As proteínas recombinantes podem diferir de uma sequência nativa em um ou mais aminoácidos e/ou são fundidas a sequências heterólogas. Um vetor que compreende um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo é um vetor recombinante. O termo “recombinante” é sinônimo de “geneticamente modificado” e “transgênico”.
[0057] Identidade de Sequência: A relação entre duas sequências de aminoácidos ou entre duas sequências de nucleotídeos é descrita pelo parâmetro "identidade de sequência".
[0058] Para os fins da presente invenção, a identidade de sequência entre duas sequências de aminoácidos é determinada usando o algoritmo de Needleman-Wunsch (Needleman e Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48: 443 a 453) como implementado no programa Needle do pacote EMBOSS (EMBOSS: The European Molecular Biology Open Software Suite, Rice et al., 2000, Trends Genet. 16: 276-277), preferencialmente versão 5.0.0 ou posterior. Os parâmetros usados podem ser penalidade de abertura de lacunas de 10, penalidade de extensão de lacunas de 0,5 e a matriz de substituição EBLOSUM62 (versão EMBOSS de BLOSUM62). O resultado de Needle identificado “identidade mais longa” (obtido usando a opção -nobrief) é usado como a percentagem de identidade e é calculado como se segue: (Resíduos Idênticos x 100)/(Comprimento do Alinhamento - Número Total de Lacunas no Alinhamento)
[0059] Para propósitos da presente invenção, a identidade de sequência entre duas sequências de desoxirribonucleotídeos é determinada usando o algoritmo de Needleman-Wunsch (Needleman e Wunsch, 1970, supra) como implementado no programa Needle do pacote EMBOSS (EMBOSS: The European Molecular Biology Open Software Suite, Rice et al., 2000, supra), de preferência a versão 5.0.0 ou posterior. Os parâmetros usados são penalidade de abertura de lacunas de 10, penalidade de extensão de lacunas de 0,5 e a matriz de substituição EDNAFULL (versão EMBOSS de NCBI NUC4.4). O resultado de Needle marcado “identidade mais longa” (obtido usando a opção -nobrief) é usado como a percentagem de identidade e é calculado como se segue: (Desoxirribonucleotídeos Idênticos x 100)/(Comprimento do Alinhamento - Número Total de Lacunas no Alinhamento)
[0060] Peptídeo sinal: O termo “peptídeo sinal” é definido aqui como um peptídeo ligado (fundido) em grelha ao terminal amino de um polipeptídeo tendo atividade biológica e dirige o polipeptídeo para a via secretora da célula. As sequências de sinal podem ser determinadas usando técnicas conhecidas na técnica (Ver, por exempo, Zhang e Henzel, 2004, Protein Science 13: 2819-2824).
[0061] Domínio de ligação de amido: Os termos "domínio de ligação de amido (SBD) ou módulo de ligação de carboidratos (CBM)"são usados indistintamente aqui. SBDs podem ser divididos em nove famílias CBM. Como fonte de energia, o amido é degradado por um grande número de enzimas amilolíticas variadas. No entanto, somente cerca de 10 por cento delas são capazes de se ligar e degradar amido bruto. Estas enzimas possuem habitualmente um módulo estrutural de sequência distinto denominado domínio de ligação de amido que medeia a anexação a grânulos de amido. SBD se relaciona com uma sequência de aminoácidos que se liga preferencialmente a um substrato de amido (polissacarídeo) ou um maltossacarídeo, alfa-, beta e gama-ciclodextrina e similares. Habitualmente são motivos com aproximadamente 100 resíduos de aminoácidos presentes em cerca de 10 por cento das enzimas amilolíticas microbianas.
[0062] Subsequência: O termo "subsequência"significa um polinucleotídeo com um ou mais (vários) nucleotídeos eliminados da extremidade 5' e/ou 3' de uma sequência de codificação de polipeptídeo maduro; em que a subsequência codifica um fragmento com atividade alfa-amilase.
[0063] Benefícios de Cuidado de Têxteis: O termo “benefícios de cuidado de têxteis”, como usado aqui, é definido como não estando diretamente relacionado com a remoção catalítica de manchas ou prevenção da redeposição de sujidades, são também importantes para benefícios de detergência de enzima. Exemplos de tais benefícios de cuidados de têxteis são prevenção ou redução da transferência de corante de um têxtil para outro têxtil ou outra parte do mesmo têxtil (inibição de transferência de corante), remoção de fibras salientes ou quebradas da superfície de um têxtil para diminuir a tendência de formação de borbotos ou remover os borbotos ou felpo já existentes (antiformação de borbotos) melhoria da suavidade do têxtil, clarificação da cor do têxtil e remoção de sujidades particuladas que estão presas nas fibras do têxtil. O branqueamento enzimático é um benefício de detergência de enzimas adicional onde a atividade catalítica é geralmente usada para catalisar a formação de componente de branqueamento tal como peróxido de hidrogênio ou outros peróxidos ou outras espécies de branqueamento.
[0064] Variante: O termo "variante", como usado aqui, significa um polipeptídeo tendo atividade de alfa- amilase compreendendo uma modificação, i.e. uma substituição, inserção, e/ou deleção, em uma ou mais (p.ex., várias) posições. Uma substituição significa a substituição de um aminoácido que ocupa uma posição por um aminoácido diferente; uma deleção significa a remoção de um aminoácido que ocupa uma posição; e uma inserção significa a adição de um aminoácido adjacente a e imediatamente após um aminoácido que ocupa uma posição. A variante tem pelo menos 20%, por exemplo, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, cerca de 85%, cerca de 90%, cerca de 91%, cerca de 92%, cerca de 93%, cerca de 94%, cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98%, cerca de 99%, mas menos do que 100% da atividade de alfa-amilase de um ou mais dos polipeptídeos das SEQ ID NOs: 1-14.
[0065] Condições de muito elevada estringência: O termo “condições de muito elevada estringência” significa, para sondas com pelo menos 100 nucleotídeos de comprimento, pré-hibridação e hibridação a 42 °C em 5X SSPE, SDS a 0,3%, DNA de esperma de salmão cisalhado e desnaturado a 200 microgramas/mL e formamida a 50%, seguindo procedimentos de transferência Southern padrão durante 12 a 24 horas. O material transportador é finalmente lavado três vezes cada uma durante 15 minutos usando 2X SSC, SDS a 0,2% a 70 °C.
[0066] Condições de muito baixa estringência: O termo "condições de muito baixa estringência" significa, para sondas com pelo menos 100 nucleotídeos de comprimento, pré- hibridação e hibridação a 42 °C em 5X SSPE, SDS a 0,3%, 200 microgramas/mL de DNA de esperma de salmão cisalhado e desnaturado, e formamida a 25%, seguindo procedimentos padrão de transferência Southern durante 12 a 24 horas. O material transportador é finalmente lavado três vezes cada uma durante 15 minutos usando 2X SSC, SDS a 0,2% a 45 °C.
[0067] Desempenho de lavagem: No presente contexto, o termo "desempenho de lavagem" é usado como a capacidade de uma enzima de remover amido ou manchas contendo amido presentes no objeto a ser limpo durante, por exemplo, lavagem de roupa ou limpeza de superfícies duras, como lavagem de louça. O termo “desempenho de lavagem” inclui limpeza em geral, por exemplo, limpeza de superfícies duras como na lavagem de louça, mas também o desempenho de lavagem de têxteis como na lavagem de roupa e também limpeza industrial e institucional. O desempenho de lavagem pode ser quantificado calculando o assim chamado Valor de intensidade.
[0068] Enzima do Tipo Selvagem: O termo alfa- amilase de “tipo selvagem” significa uma alfa-amilase expressa por um microrganismo ocorrendo naturalmente, tal como uma bactéria, levedura ou fungo filamentoso encontrado na natureza Os termos "enzima de tipo selvagem" e "enzima progenitora" podem ser usados indistintamente quando a enzima progenitora não é uma enzima variante.
[0069] Para propósitos da presente invenção, a nomenclatura [Y/F] significa que o aminoácido em esta posição pode ser uma tirosina (Try, Y) ou uma fenilalanina (Phe, F). Do mesmo modo, a nomenclatura [V/G/A/I] significa que o aminoácido em esta posição pode ser uma valina (Val, V), glicina (Gly, G), alanina (Ala, A) ou isoleucina (Ile, I) e assim por diante para outras combinações como descrito aqui. O aminoácido X é definido tal que pode ser qualquer um dos 20 aminoácidos naturais, a não ser que de outro modo afirmado.
[0070] Para propósitos da presente invenção, o polipeptídeo divulgado na SEQ ID NO: 1 é usado para determinar o resíduo de aminoácido correspondente em uma outra alfa- amilase. Alternativamente, o polipeptídeo divulgado na SEQ ID NO: 2 ou SEQ ID NO: 3 pode ser usado para determinar o resíduo de aminoácido correspondente em outra alfa-amilase. A sequência de aminoácidos de uma outra alfa-amilase é alinhada com o polipeptídeo divulgado na SEQ ID NO: 1 e, com base no alinhamento, o número de posições de aminoácidos correspondendo a qualquer resíduo de aminoácido no polipeptídeo divulgado na SEQ ID NO: 2 ou SEQ ID NO: 3 é determinado usando o algoritmo de Needleman-Wunsch (Needleman e Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48: 443 a 453) como implementado no programa Needle do pacote EMBOSS (EMBOSS: The European Molecular Biology Open Software Suite, Rice et al., 2000, Trends Genet. 16: 276-277), preferencialmente versão 3.0.0 ou posterior.
[0071] A identificação do resíduo de aminoácido correspondente em outra alfa-amilase pode ser determinada por um alinhamento de múltiplas sequências polipeptídicas usando vários programas de computador incluindo, mas não se limitando a, MUSCLE (comparação de múltiplas sequências por expectativa log; versão 3.5 ou posterior; Edgar, 2004, Nucleic Acids Research 32: 1792-1797), MAFFT (versão 6.857 ou posterior; Katoh e Kuma, 2002, Nucleic Acids Research 30: 3059-3066; Katoh et al., 2005, Nucleic Acids Research 33: 511-518; Katoh e Toh, 2007, Bioinformatics 23: 372-374; Katoh et al., 2009, Methods in Molecular Biology 537: 39-64; Katoh e Toh, 2010, Bioinformatics 26: 1899-1900) e EMBOSS EMMA empregando ClustalW (1.83 ou posterior; Thompson et al., 1994, Nucleic Acids Research 22: 4673-4680), usando seus respectivos parâmetros predeterminados.
[0072] Quando a outra enzima divergiu do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1 tal que a comparação tradicional baseada em sequências não consiga detectar a sua relação (Lindahl e Elofsson, 2000, J. Mol. Biol. 295: 613-615), outros algoritmos de comparação de sequências pareadas podem ser usados. Pode ser alcançada maior sensibilidade na pesquisa com base em sequências usando programas de pesquisa que utilizam representações probabilísticas de famílias (perfis) de polipeptídeos para pesquisar bases de dados. Por exemplo, o programa PSI-BLAST gera perfis através de um processo iterativo de pesquisa de bases de dados e é capaz de detectar homólogos remotos (Atschul et al., 1997, Nucleic Acids Res. 25: 33893402).
[0073] Pode ser alcançada ainda maior sensibilidade se a família ou superfamília para o polipeptídeo tiver um ou mais representantes nas bases de dados de estruturas de proteínas. Programas tais como GenTHREADER (Jones, 1999, J. Mol. Biol. 287: 797-815; McGuffin e Jones, 2003, Bioinformatics 19: 874 a 881) utilizam informação de uma variedade de fontes (PSI-BLAST, previsão de estrutura secundária, perfis de alinhamentos estruturais, e potenciais de solvatação) como entrada para uma rede neural que prevê a dobragem estrutural para uma sequência de consulta. Similarmente, o método de Gough et al., 2000, J. Mol. Biol. 313: 903-919, pode ser usado para alinhar uma sequência de estrutura desconhecida com os modelos de superfamília presentes na base de dados SCOP. Estes alinhamentos podem, por sua vez, ser usados para gerar modelos de homologia para o polipeptídeo, e tais modelos podem ser avaliados quanto à precisão usando uma variedade de ferramentas desenvolvidas para esse propósito.
[0074] Para proteínas de estrutura conhecida estão disponíveis várias ferramentas e recursos para recuperar e gerar alinhamentos estruturais. Por exemplo, as superfamílias de proteínas SCOP foram estruturalmente alinhadas, e esses alinhamentos estão acessíveis e podem ser baixados. Duas ou mais estruturas proteicas podem ser alinhadas usando uma variedade de algoritmos, como a matriz de alinhamento de distância (Holm e Sander, 1998, proteínas33: 88-96) ou extensão combinatorial (Shindyalov e Bourne, 1998, Protein Engineering 11: 739 a 747), e pode ser adicionalmente utilizada implementação destes algoritmos para consultar bases de dados de estruturas com uma estrutura de interesse de modo a descobrir possíveis homólogos estruturais (por exemplo, Holm e Park, 2000, Bioinformatics 16: 566-567).
[0075] Na descrição das variantes, a nomenclatura descrita a seguir é adaptada para facilidade de referência. É usada a abreviatura de aminoácidos de letra única ou três letras aceite pela IUPAC.
[0076] Substituições: Para uma substituição de aminoácidos é usada a seguinte nomenclatura: Aminoácido original, posição, aminoácido substituído. Conformemente, a substituição de treonina na posição 226 por alanina é designada como “Thr226Ala” ou “T226A”. Em situações em que o aminoácido em uma dada posição pode ser substituído por qualquer outro aminoácido, é designado T226ACDEFGHIKLMNPQRSWVY. Em conformidade, tal significa que treonina na posição 226 pode ser substituída por um aminoácido selecionado do grupo de A, C,D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, W, V ou Y. De igual modo, em situações em que o aminoácido em uma dada posição pode ser substituído por um aminoácido selecionado de um grupo específico de aminoácidos, por exemplo, quando a treonina na posição 226 pode ser substituída por qualquer um de tirosina, fenilalanina ou histidina, é designado T226YFH. As diferentes alterações em uma dada posição também podem ser separadas por uma vírgula, por exemplo, "Arg170Tyr,Glu" ou "R170Y,E" representa uma substituição de arginina na posição 170 por tirosina ou ácido glutâmico. Assim, "Tyr167Gly,Ala + Arg170Gly,Ala" designa as seguintes variantes: “Tyr167Gly+Arg170Gly”, “Tyr167Gly+Arg170Ala", “Tyr167Ala+Arg170Gly” e “Tyr167Ala+Arg170Ala”.
[0077] Mutações múltiplas são separadas por sinais de adição ("+"), por exemplo, "Gly205Arg + Ser411Phe" ou "G205R + S411F", representando substituições nas posições 205 e 411 da glicina (G) por arginina (R) e serina (S) por fenilalanina (F), respectivamente.
[0078] Deleções. Para uma deleção de aminoácidos, é usada a seguinte nomenclatura: Aminoácido original, posição, *. Conformemente, a deleção de glicina na posição 195 é designada como “Gly195*” ou “G195*”. Deleções múltiplas são separadas por sinais de adição ("+"), por exemplo, "Gly195* + Ser411*" ou "G195* + S411*".
[0079] Inserções. Para uma inserção de aminoácidos, é usada a seguinte nomenclatura: Aminoácido original, posição, aminoácido original, aminoácido inserido. Conformemente, a inserção de lisina após glicina na posição 195 é designada “Gly195GlyLys” ou “G195GK”. Uma inserção de múltiplos aminoácidos é designada [Aminoácido original, posição, aminoácido original, aminoácido inserido #1, aminoácido inserido #2; etc.]. Por exemplo, a inserção de lisina e alanina após glicina na posição 195 é indicada como "Gly195GlyLysAla" ou "G195GKA".
[0080] Em tais casos, o(s) resíduo(s) de aminoácido(s) inserido(s) é(são) numerado(s) pela adição de letras minúsculas ao número de posição do resíduo de aminoácido precedendo o(s) resíduo(s) de aminoácido(s) inserido(s). No exemplo acima, a sequência seria assim:
[0081] Múltiplasalterações . Variantes compreendendo múltiplas alterações são separadas por sinais de adição ("+"), por exemplo, "Arg170Tyr+Gly195Glu" ou "R170Y+G195E" representando uma substituição de arginina e glicina nas posições 170 e 195 por tirosina e ácido glutâmico, respectivamente.
[0082] A presente invenção se relaciona com um polipeptídeo tendo atividade de amilase, em que o polipeptídeo é um polipeptídeo de fusão (híbrido).
[0083] A presente invenção proporciona um polipeptídeo tendo atividade de alfa-amilase compreendendo um domínio A com pelo menos 60% de identidade de sequência com o domínio A de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1, 2, 3, 4 ou 5, um domínio B com pelo menos 60% de identidade de sequência com o domínio B de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1, 2, 10, 11 ou 12, e um domínio C com pelo menos 60% de identidade de sequência com o domínio C de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1, 2, 3, 4 ou 5.
[0084] A presente invenção compreende uma alfa- amilase híbrida de um polipeptídeo progenitor tendo atividade de alfa-amilase compreendendo um domínio A, um domínio B e um domínio C, em que o referido híbrido é um polipeptídeo de fusão.
[0085] Em uma modalidade, o domínio A tem pelo menos 60% de identidade de sequência, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% de identidade de sequência com o domínio A da SEQ ID NO: 1.
[0086] Em uma modalidade, o domínio A tem pelo menos 60% de identidade de sequência, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% de identidade de sequência com o domínio A da SEQ ID NO: 2.
[0087] Em uma modalidade, o domínio A tem pelo menos 60% de identidade de sequência, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% de identidade de sequência com o domínio A da SEQ ID NO: 3.
[0088] Em uma modalidade, o domínio A tem pelo menos 60% de identidade de sequência, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% de identidade de sequência com o domínio A da SEQ ID NO: 4.
[0089] Em uma modalidade, o domínio A tem pelo menos 60% de identidade de sequência, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% de identidade de sequência com o domínio A da SEQ ID NO: 5.
[0090] Em uma modalidade, o domínio B tem pelo menos 60% de identidade de sequência, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% de identidade de sequência com o domínio B da SEQ ID NO: 1.
[0091] Em uma modalidade, o domínio B tem pelo menos 60% de identidade de sequência, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% de identidade de sequência com o domínio B da SEQ ID NO: 2.
[0092] Em uma modalidade, o domínio B tem pelo menos 60% de identidade de sequência, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% de identidade de sequência com o domínio B da SEQ ID NO: 10.
[0093] Em uma modalidade, o domínio B tem pelo menos 60% de identidade de sequência, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% de identidade de sequência com o domínio B da SEQ ID NO: 11.
[0094] Em uma modalidade, o domínio B tem pelo menos 60% de identidade de sequência, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% de identidade de sequência com o domínio B da SEQ ID NO: 12.
[0095] Em uma modalidade, o domínio C tem pelo menos 60% de identidade de sequência, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% de identidade de sequência com o domínio C da SEQ ID NO: 1.
[0096] Em uma modalidade, o domínio C tem pelo menos 60% de identidade de sequência, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% de identidade de sequência com o domínio C da SEQ ID NO: 2.
[0097] Em uma modalidade, o domínio C tem pelo menos 60% de identidade de sequência, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% de identidade de sequência com o domínio C da SEQ ID NO: 3.
[0098] Em uma modalidade, o domínio C tem pelo menos 60% de identidade de sequência, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% de identidade de sequência com o domínio C da SEQ ID NO: 4.
[0099] Em uma modalidade, o domínio C tem pelo menos 60% de identidade de sequência, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% de identidade de sequência com o domínio C da SEQ ID NO: 5.
[0100] As alfa-amilases podem ser produzidas substituindo o domínio B ou uma sua porção de uma alfa-amilase pelo domínio B ou uma sua porção de outra alfa-amilase. As alfa-amilases também podem ser produzidas substituindo os domínios A e C ou uma sua porção de uma alfa-amilase pelos domínios A e C ou uma sua porção de outra alfa-amilase.
[0101] Para a alfa-amilase de Bacillus (SEQ ID NO: 4) em que foi determinado o domínio B como sendo os resíduos de aminoácidos 109-206, a sequência a ser substituída pela sequência correspondente de outra alfa-amilase começa em uma posição no intervalo de posições 93-113 e termina em uma posição no intervalo de posições 195-215, por exemplo, começa em uma posição no intervalo de posições 97-109 e termina em uma posição no intervalo de posições 199-215 ou começa em uma posição no intervalo de posições 100-106 e termina em uma posição no intervalo de posições 202-208, em particular posições 109-206 da SEQ ID NO: 12. Os domínios A e C da alfa- amilase de Bacillus foram determinados como sendo os resíduos de aminoácidos 1-108 (A1) + 207-396 (A2) e 397-485, respectivamente. As alfa-amilases da presente invenção podem compreender um domínio A1 começando em uma posição no intervalo de posições 1-5 e terminando em uma posição no intervalo de posições 94-114, por exemplo, começando em uma posição no intervalo de posições 1-3 e terminando em uma posição no intervalo de posições 99-110 ou começando em uma posição no intervalo de posições 1-3 e terminando em uma posição no intervalo de posições 104-109, em particular posições 1-108 da SEQ ID NO: 4. As alfa-amilases da presente invenção podem compreender domínios A2 e C começando em uma posição no intervalo de posições 201-221 e terminando em uma posição no intervalo de posições 478-514, por exemplo, começando em uma posição no intervalo de posições 203-211 e terminando em uma posição no intervalo de posições 480-510 ou começando em uma posição no intervalo de posições 205-216 e terminando em uma posição no intervalo de posições 482-484, em particular posições 207-485 da SEQ ID NO: 4.
[0102] Em uma modalidade, o polipeptídeo híbrido compreende ou consiste na sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 1 ou 2. Em outra modalidade, o polipeptídeo híbrido é uma variante alélica do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1 ou 2.
[0103] Em outra modalidade, o polipeptídeo progenitor pode compreender ou consistir na sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 1. Como afirmado em outro lugar aqui, o polipeptídeo progenitor pode ser qualquer polipeptídeo tendo atividade de alfa-amilase e tendo pelo menos 60% de identidade de sequência com qualquer uma das sequências de aminoácidos como apresentado nas SEQ ID NOs: 1-14.
[0104] Em uma modalidade, o polipeptídeo progenitor tem uma identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 2 de pelo menos 60%, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% e cujo polipeptídeo progenitor tem atividade de alfa-amilase. Em uma modalidade, a sequência de aminoácidos do polipeptídeo progenitor difere em até 10 aminoácidos, por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10, das sequências de aminoácidos apresentadas nas SEQ ID NOs: 1-14.
[0105] De acordo com a presente invenção, um valor 1,0 corresponde ao desempenho observado para o polipeptídeo progenitor. Um valor acima de 1,0 indica uma melhoria de desempenho do híbrido testado em comparação com o polipeptídeo progenitor. Em conformidade, qualquer valor > 1,0 é indicativo de melhoria de propriedade, como atividade específica aumentada, do polipeptídeo híbrido em comparação com o polipeptídeo progenitor.
[0106] Em um aspecto, o polipeptídeo híbrido é um polipeptídeo progenitor.
[0107] A alfa-amilase progenitora pode ser um polipeptídeo com pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com qualquer um dos polipeptídeos das SEQ ID Nos: 114.
[0108] Em um aspecto, o progenitor tem uma identidade de sequência com o polipeptídeo da SEQ ID NO: 1 de pelo menos 60%, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, ou 100% que tem atividade de alfa-amilase. Em uma modalidade, a sequência de aminoácidos do progenitor difere em não mais do que dez aminoácidos, p.ex., em cinco aminoácidos, em quatro aminoácidos, em três aminoácidos, em dois aminoácidos e em um aminoácido do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0109] O progenitor compreende ou consiste preferencialmente na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 1. Em uma modalidade, o progenitor compreende ou consiste no polipeptídeo da SEQ ID NO: 1. Em outra modalidade, o progenitor é uma variante alélica do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0110] Em um aspecto, o progenitor tem uma identidade de sequência com o polipeptídeo da SEQ ID NO: 2 de pelo menos 60%, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, ou 100% que tem atividade de alfa-amilase. Em uma modalidade, a sequência de aminoácidos do progenitor difere em não mais do que dez aminoácidos, p.ex., em cinco aminoácidos, em quatro aminoácidos, em três aminoácidos, em dois aminoácidos e em um aminoácido do polipeptídeo da SEQ ID NO: 2.
[0111] O progenitor compreende ou consiste preferencialmente na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 2. Em uma modalidade, o progenitor compreende ou consiste no polipeptídeo da SEQ ID NO: 2. Em outra modalidade, o progenitor é uma variante alélica do polipeptídeo da SEQ ID NO: 2.
[0112] Em um aspecto, o progenitor tem uma identidade de sequência com o polipeptídeo da SEQ ID NO: 3 de pelo menos 60%, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, ou 100% que tem atividade de alfa-amilase. Em uma modalidade, a sequência de aminoácidos do progenitor difere em não mais do que dez aminoácidos, p.ex., em cinco aminoácidos, em quatro aminoácidos, em três aminoácidos, em dois aminoácidos e em um aminoácido do polipeptídeo da SEQ ID NO: 3.
[0113] O progenitor compreende ou consiste preferencialmente na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 3. Em uma modalidade, o progenitor compreende ou consiste no polipeptídeo da SEQ ID NO: 3. Em outra modalidade, o progenitor é uma variante alélica do polipeptídeo da SEQ ID NO: 3.
[0114] Em um aspecto, o progenitor tem uma identidade de sequência com o polipeptídeo da SEQ ID NO: 4 de pelo menos 60%, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, ou 100% que tem atividade de alfa-amilase. Em uma modalidade, a sequência de aminoácidos do progenitor difere em não mais do que dez aminoácidos, p.ex., em cinco aminoácidos, em quatro aminoácidos, em três aminoácidos, em dois aminoácidos e em um aminoácido do polipeptídeo da SEQ ID NO: 4.
[0115] O progenitor compreende ou consiste preferencialmente na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4. Em uma modalidade, o progenitor compreende ou consiste no polipeptídeo da SEQ ID NO: 4. Em outra modalidade, o progenitor é uma variante alélica do polipeptídeo da SEQ ID NO: 4.
[0116] Em um aspecto, o progenitor tem uma identidade de sequência com o polipeptídeo da SEQ ID NO: 5 de pelo menos 60%, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, ou 100% que tem atividade de alfa-amilase. Em uma modalidade, a sequência de aminoácidos do progenitor difere em não mais do que dez aminoácidos, p.ex., em cinco aminoácidos, em quatro aminoácidos, em três aminoácidos, em dois aminoácidos e em um aminoácido do polipeptídeo da SEQ ID NO: 5.
[0117] O progenitor compreende ou consiste preferencialmente na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5. Em uma modalidade, o progenitor compreende ou consiste no polipeptídeo da SEQ ID NO: 5. Em outra modalidade, o progenitor é uma variante alélica do polipeptídeo da SEQ ID NO: 5.
[0118] Em um aspecto, o progenitor tem uma identidade de sequência com o polipeptídeo da SEQ ID NO: 6 de pelo menos 60%, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, ou 100% que tem atividade de alfa-amilase. Em uma modalidade, a sequência de aminoácidos do progenitor difere em não mais do que dez aminoácidos, p.ex., em cinco aminoácidos, em quatro aminoácidos, em três aminoácidos, em dois aminoácidos e em um aminoácido do polipeptídeo da SEQ ID NO: 6.
[0119] O progenitor compreende ou consiste preferencialmente na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6. Em uma modalidade, o progenitor compreende ou consiste no polipeptídeo da SEQ ID NO: 6. Em outra modalidade, o progenitor é uma variante alélica do polipeptídeo da SEQ ID NO: 6.
[0120] Em um aspecto, o progenitor tem uma identidade de sequência com o polipeptídeo da SEQ ID NO: 7 de pelo menos 60%, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, ou 100% que tem atividade de alfa-amilase. Em uma modalidade, a sequência de aminoácidos do progenitor difere em não mais do que dez aminoácidos, p.ex., em cinco aminoácidos, em quatro aminoácidos, em três aminoácidos, em dois aminoácidos e em um aminoácido do polipeptídeo da SEQ ID NO: 7.
[0121] O progenitor compreende ou consiste preferencialmente na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7. Em uma modalidade, o progenitor compreende ou consiste no polipeptídeo da SEQ ID NO: 7. Em outra modalidade, o progenitor é uma variante alélica do polipeptídeo da SEQ ID NO: 7.
[0122] Em um aspecto, o progenitor tem uma identidade de sequência com o polipeptídeo da SEQ ID NO: 8 de pelo menos 60%, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, ou 100% que tem atividade de alfa-amilase. Em uma modalidade, a sequência de aminoácidos do progenitor difere em não mais do que dez aminoácidos, p.ex., em cinco aminoácidos, em quatro aminoácidos, em três aminoácidos, em dois aminoácidos e em um aminoácido do polipeptídeo da SEQ ID NO: 8.
[0123] O progenitor compreende ou consiste preferencialmente na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 8. Em uma modalidade, o progenitor compreende ou consiste no polipeptídeo da SEQ ID NO: 8. Em outra modalidade, o progenitor é uma variante alélica do polipeptídeo da SEQ ID NO: 8.
[0124] Em um aspecto, o progenitor tem uma identidade de sequência com o polipeptídeo da SEQ ID NO: 9 de pelo menos 60%, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, ou 100% que tem atividade de alfa-amilase. Em uma modalidade, a sequência de aminoácidos do progenitor difere em não mais do que dez aminoácidos, p.ex., em cinco aminoácidos, em quatro aminoácidos, em três aminoácidos, em dois aminoácidos e em um aminoácido do polipeptídeo da SEQ ID NO: 9.
[0125] O progenitor compreende ou consiste preferencialmente na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 9. Em uma modalidade, o progenitor compreende ou consiste no polipeptídeo da SEQ ID NO: 9. Em outra modalidade, o progenitor é uma variante alélica do polipeptídeo da SEQ ID NO: 9.
[0126] Em um aspecto, o progenitor tem uma identidade de sequência com o polipeptídeo da SEQ ID NO: 10 de pelo menos 60%, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, ou 100% que tem atividade de alfa-amilase. Em uma modalidade, a sequência de aminoácidos do progenitor difere em não mais do que dez aminoácidos, p.ex., em cinco aminoácidos, em quatro aminoácidos, em três aminoácidos, em dois aminoácidos e em um aminoácido do polipeptídeo da SEQ ID NO: 10.
[0127] O progenitor compreende ou consiste preferencialmente na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 10. Em uma modalidade, o progenitor compreende ou consiste no polipeptídeo da SEQ ID NO: 10. Em outra modalidade, o progenitor é uma variante alélica do polipeptídeo da SEQ ID NO: 10.
[0128] Em um aspecto, o progenitor tem uma identidade de sequência com o polipeptídeo da SEQ ID NO: 11 de pelo menos 60%, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, ou 100% que tem atividade de alfa-amilase. Em uma modalidade, a sequência de aminoácidos do progenitor difere em não mais do que dez aminoácidos, p.ex., em cinco aminoácidos, em quatro aminoácidos, em três aminoácidos, em dois aminoácidos e em um aminoácido do polipeptídeo da SEQ ID NO: 11.
[0129] O progenitor compreende ou consiste preferencialmente na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11. Em uma modalidade, o progenitor compreende ou consiste no polipeptídeo da SEQ ID NO: 11. Em outra modalidade, o progenitor é uma variante alélica do polipeptídeo da SEQ ID NO: 11.
[0130] Em um aspecto, o progenitor tem uma identidade de sequência com o polipeptídeo da SEQ ID NO: 12 de pelo menos 60%, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, ou 100% que tem atividade de alfa-amilase. Em uma modalidade, a sequência de aminoácidos do progenitor difere em não mais do que dez aminoácidos, p.ex., em cinco aminoácidos, em quatro aminoácidos, em três aminoácidos, em dois aminoácidos e em um aminoácido do polipeptídeo da SEQ ID NO: 12.
[0131] O progenitor compreende ou consiste preferencialmente na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 12. Em uma modalidade, o progenitor compreende ou consiste no polipeptídeo da SEQ ID NO: 12. Em outra modalidade, o progenitor é uma variante alélica do polipeptídeo da SEQ ID NO: 12.
[0132] Em um aspecto, o progenitor tem uma identidade de sequência com o polipeptídeo da SEQ ID NO: 13 de pelo menos 60%, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, ou 100% que tem atividade de alfa-amilase. Em uma modalidade, a sequência de aminoácidos do progenitor difere em não mais do que dez aminoácidos, p.ex., em cinco aminoácidos, em quatro aminoácidos, em três aminoácidos, em dois aminoácidos e em um aminoácido do polipeptídeo da SEQ ID NO: 13.
[0133] O progenitor compreende ou consiste preferencialmente na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13. Em uma modalidade, o progenitor compreende ou consiste no polipeptídeo da SEQ ID NO: 13. Em outra modalidade, o progenitor é uma variante alélica do polipeptídeo da SEQ ID NO: 13.
[0134] Em um aspecto, o progenitor tem uma identidade de sequência com o polipeptídeo da SEQ ID NO: 14 de pelo menos 60%, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, ou 100% que tem atividade de alfa-amilase. Em uma modalidade, a sequência de aminoácidos do progenitor difere em não mais do que dez aminoácidos, p.ex., em cinco aminoácidos, em quatro aminoácidos, em três aminoácidos, em dois aminoácidos e em um aminoácido do polipeptídeo da SEQ ID NO: 14.
[0135] O progenitor compreende ou consiste preferencialmente na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 14. Em uma modalidade, o progenitor compreende ou consiste no polipeptídeo da SEQ ID NO: 14. Em outra modalidade, o progenitor é uma variante alélica do polipeptídeo da SEQ ID NO: 14.
[0136] A sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14 ou um seu fragmento, pode ser usada para desenhar sondas de ácido nucleico para identificar e clonar DNA codificando um genitor de estirpes de diferentes gêneros ou espécies de acordo com métodos bem conhecidos na técnica. Em particular, tais sondas podem ser usadas para hibridação com o DNA genômico ou cDNA do gênero ou espécie de interesse, seguindo procedimentos padrão de transferência Southern, de modo a identificar e isolar aí o gene correspondente. Tais sondas podem ser consideravelmente mais curtas do que a sequência inteira, mas devem ter pelo menos 14, p.ex., pelo menos 25, pelo menos 35 ou pelo menos 70 nucleotídeos de comprimento. De preferência, a sonda de ácido nucleico tem pelo menos 100 nucleotídeos de comprimento, por exemplo, pelo menos 200 nucleotídeos, pelo menos 300 nucleotídeos, pelo menos 400 nucleotídeos, pelo menos 500 nucleotídeos, pelo menos 600 nucleotídeos, pelo menos 700 nucleotídeos, pelo menos 800 nucleotídeos, ou pelo menos 900 nucleotídeos de comprimento. Podem ser usadas sondas tanto de DNA como de RNA. As sondas são tipicamente marcadas para detectar o gene correspondente (por exemplo, com 32P, 3H, 35S, biotina, ou avidina). Tais sondas são englobadas pela presente invenção.
[0137] Uma biblioteca de DNA genômico ou cDNA preparada a partir de tais outras estirpes pode ser rastreada quanto a DNA que hibrida com as sondas descritas acima e codifica um genitor. O DNA genômico ou outro de tais outras cepas pode ser separado por eletroforese em gel de agarose ou de poliacrilamida ou outras técnicas de separação. O DNA das bibliotecas ou o DNA separado pode ser transferido para e imobilizado em nitrocelulose ou outro material transportador adequado. De modo a identificar um clone ou DNA que hibride com um progenitor ou uma subsequência do mesmo, o material transportador é usado em uma transferência Southern.
[0138] Para propósitos da presente invenção, a hibridação indica que o polinucleotídeo hibrida com uma sonda de nucleotídeos marcada correspondendo a um polinucleotídeo codificando a SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, ou uma sua subsequência, sob condições de estringência baixa a muito elevada. As moléculas com as quais a sonda hibrida podem ser detectadas usando, por exemplo, filme de raios X ou qualquer outro meio de detecção conhecido na técnica.
[0139] Em um aspecto, a sonda de ácido nucleico é um polinucleotídeo que codifica o polipeptídeo da SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8 ou um fragmento das mesmas.
[0140] Para sondas longas de pelo menos 100 nucleotídeos de comprimento, são definidas condições de muito baixa a muito elevada estringência como pré-hibridação e hibridação a 42 °C em 5X SSPE, SDS a 0,3%, 200 microgramas/mL de DNA de esperma de salmão cisalhado e desnaturado, e formamida a 25% para estringências muito baixas e baixas, formamida a 35% para estringências médias e média-elevadas, ou formamida a 50% para estringências elevadas e muito elevadas, seguindo procedimentos de transferência Southern padrão durante 12 a 24 horas otimamente. O material transportador é finalmente lavado três vezes cada uma durante 15 minutos usando 2X SSC, SDS a 0,2% a 45 °C (estringência muito baixa), 50 °C (estringência baixa), 55 °C (estringência média), 60 °C (estringência média-elevada), 65 °C (estringência elevada) ou 70 °C (estringência muito elevada).
[0141] Para sondas curtas que têm cerca de 15 nucleotídeos a cerca de 70 nucleotídeos de comprimento, as condições de estringência são definidas como pré-hibridização e hibridização a cerca de 5 °C até 10 °C abaixo da Tf calculada usando o cálculo de acordo com Bolton e McCarthy (1962, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 48: 1390) em NaCl a 0,9 M, Tris-HCl a 0,09 M pH 7,6, EDTA a 6 mM, NP-40 a 0,5%, 1X solução de Denhardt, pirofosfato de sódio a 1 mM, fosfato de sódio monobásico a 1 mM, ATP a 0,1 mM e 0,2 mg de RNA de levedura por mL seguindo procedimentos padrão de transferência Southern durante 12 a 24 horas otimamente. O material transportador é finalmente lavado uma vez em 6X SCC mais SDS a 0,1% durante 15 minutos e duas vezes cada uma durante 15 minutos usando 6X SSC a 5 °C até 10 °C abaixo da Tf calculada.
[0142] O progenitor pode ser obtido de microrganismos de qualquer gênero. Para propósitos da presente invenção, o termo "obtido de", para uso aqui em conexão com uma determinada fonte, deve significar que o genitor codificado por um polinucleotídeo é produzido pela fonte ou por uma estirpe na qual o polinucleotídeo da fonte foi inserido. Em um aspecto, o progenitor é secretado extracelularmente.
[0143] O progenitor pode ser uma alfa-amilase bacteriana. Por exemplo, o genitor pode ser um polipeptídeo bacteriano gram-positivo como uma alfa-amilase de Bacillus, Clostridium, Enterococcus, Geobacillus, Lactobacillus, Lactococcus, Oceanobacillus, Staphylococcus, Streptococcus, ou Streptomyces, ou um polipeptídeo bacteriano gram-negativo como uma alfa-amilase de Campylobacter, E. coli, Flavobacterium, Fusobacterium, Helicobacter, Ilyobacter, Neisseria, Pseudomonas, Salmonella, ou Ureaplasma.
[0144] Em um aspecto, o genitor é uma alfa-amilase de Bacillus alkalophilus, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus brevis, Bacillus circulans, Bacillus clausii, Bacillus coagulans, Bacillus firmus, Bacillus lautus, Bacillus lentus, Bacillus licheniformis, Bacillus megaterium, Bacillus pumilus, Bacillus stearothermophilus, Bacillus subtilis ou Bacillus thuringiensis.
[0145] Em outro aspeto, o genitor é uma alfa-amilase de Streptococcus equisimilis, Streptococcus pyogenes, Streptococcus uberis, ou Streptococcus equi subsp. Zooepidemicus.
[0146] Em outro aspeto, o genitor é uma alfa-amilase de Streptomyces achromogenes, Streptomyces avermitilis, Streptomyces coelicolor, Streptomyces griseus, ou Streptomyces lividans.
[0147] Em outro aspecto, o genitor é uma alfa- amilase de Bacillus sp., por exemplo a alfa-amilase da SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13 ou SEQ ID NO: 14.
[0148] Será entendido que, para as espécies acima mencionadas, a invenção abrange os estados perfeito e imperfeito, e outros equivalentes taxonômicos, por exemplo, anamorfos, independentemente do nome da espécie pelo qual são conhecidos. Os versados na técnica reconhecerão prontamente a identidade de equivalentes apropriados.
[0149] As estirpes destas espécies estão prontamente acessíveis ao público em algumas coleções de culturas, como a American Type Culture Collection (ATCC), Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (DSM), Centraalbureau Voor Schimmelcultures (CBS) e Agricultural Research Service Patent Culture Collection, Northern Regional Research Center (NRRL).
[0150] O progenitor pode ser identificado e obtido de outras fontes incluindo microrganismos isolados da natureza (p.ex., solo, adubos, água, etc.) ou amostras de DNA obtidas diretamente de materiais naturais (p.ex., solo, adubos, água, etc.) usando as sondas mencionadas acima. Técnicas para isolamento de microrganismos e DNA diretamente de habitats naturais são bem conhecidas na técnica. O polinucleotídeo codificado um progenitor pode ser depois derivado por rastreamento similar de uma biblioteca genômica ou de cDNA de um outro microrganismo ou amostra de DNA misto. Logo que um polinucleotídeo codificando um progenitor tenha sido detectado com uma sonda(s), o polinucleotídeo pode ser isolado ou clonado por utilização de técnicas que são conhecidas pelos habitualmente peritos na técnica (ver, p.ex., Sambrook et al., 1989, supra).
[0151] O progenitor pode ser um polipeptídeo híbrido no qual uma porção de um polipeptídeo é fundida no terminal N ou terminal C de uma porção de um outro polipeptídeo.
[0152] O progenitor pode ser também um polipeptídeo fundido ou polipeptídeo de fusão clivável no qual um polipeptídeo é fundido no terminal N ou terminal C de um outro polipeptídeo. Um polipeptídeo fundido é produzido por fusão de um polinucleotídeo codificando um polipeptídeo com um polinucleotídeo codificando um outro polipeptídeo. Técnicas para produção de polipeptídeos de fusão são conhecidas na técnica e incluem ligação das sequências codificantes codificando os polipeptídeos tal que fiquem em grelha e que a expressão do polipeptídeo fundido esteja sob controle do(s) mesmo(s) promotor(es) e terminador. As proteínas de fusão podem ser também construídas usando tecnologia de inteína na qual são criadas fusões pós-tradução (Cooper et al., 1993, EMBO J. 12: 2575-2583; Dawson et al., 1994, Science 266: 776-779).
[0153] Um polipeptídeo de fusão pode compreender ainda um sítio de clivagem entre os dois polipeptídeos. Após a secreção da proteína de fusão, o sítio é clivado liberando os dois polipeptídeos. Os exemplos de sítios de clivagem incluem, sem limitação, os sítios revelados em Martin et al., 2003, J. Ind. Microbiol. Biotechnol. 3: 568-576; Svetina et al., 2000, J. Biotechnol. 76: 245-251; Rasmussen-Wilson et al., 1997, Appl. Environ. Microbiol. 63: 3488-3493; Ward et al., 1995, Biotechnology 13: 498-503; e Contreras et al., 1991, Biotechnology 9: 378-381; Eaton et al., 1986, Biochemistry 25: 505-512; Collins-Racie et al., 1995, Biotechnology 13: 982987; Carter et al., 1989, Proteins: Structure, Function, and Genetics 6: 240-248; e Stevens, 2003, Drug Discovery World 4: 35-48.
[0154] A presente invenção se relaciona com um método para obter uma variante tendo atividade de alfa-amilase, compreendendo (a) introduzir em uma alfa-amilase progenitora uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94 , 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, em que cada modificação é independentemente uma substituição ou deleção, e a referida variante tem atividade de alfa-amilase; e (b) recuperar a referida variante.
[0155] O método para obter uma variante tendo atividade de alfa-amilase, compreendendo (a) introduzir em uma alfa-amilase progenitora uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94, 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472 473, 474, 475 e 476 da sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 1, em que cada modificação é independentemente uma substituição ou deleção, e a referida variante tem atividade de alfa-amilase; e (b) recuperar a referida variante.
[0156] Em um aspecto, o método para obter uma variante tendo atividade de alfa-amilase, compreendendo (a) introduzir em uma alfa-amilase progenitora uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições 1, 2, 3, 7, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476 da sequência de aminoácidos 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94, 98, 103, apresentada nas SEQ ID NOs: 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e em que cada modificação é independentemente uma substituição ou deleção, e a referida variante tem atividade de alfa-amilase; e (b) recuperar a referida variante.
[0157] Em uma modalidade, a modificação é uma substituição. Em uma modalidade, a modificação é uma deleção.
[0158] Em outra modalidade, o método para obter uma variante tendo atividade de alfa-amilase, compreendendo (a) introduzir em uma alfa-amilase progenitora uma modificação em uma ou mais posições, em que a modificação é selecionada de H1*, H2*, N3D, N3G, N3S, G7A, G7H, G7S, R26Y, A31S, R37A, R37N, R37V, T40G, T40N, A41D, N54S, V56T, A60V, A60P, L63F, K72R, G73L, K93R, N94D, Q98L, V103A, V103I, V103L, V104M, M105I, M105L, N106D, A109G, G110K, A111G, A111L, G113Q, G113S, G113A, T114K, F116L, F116N, F116Q, F116W, V117G, D118Q, D118T, D123N, N126D, N128Y, T131I, T131V, S132D, S132L, T134D, Y135E, Q136T, Q136K, I137F, Q138V, W140S, W140M, W140Y, K142E, K142G, K142P, D144N, P146S, P146H, T151A, Y152L, F155W, W159H, W159L, Y160P, T165V, W167A, W167D, W167E, W167F, W167P, W167S, E169I, E169Q, E169V, K172G, K172Q, L173F, N174K, N174S, I176V, Y177D, K178A, R180*, R180Q, R180S, S181*, S181L, S181T, T182*, T182D, T182E, T182G, T182I, T182L, T182M, T182S, G183*, G183P, A185D, A185E, A185K, A185N, A185Q, A185R, W188C, E189P, E193I, N194F, F202Y, F202Y, A203F, L205F, L205N, L205Q, L205R, L205V, L205Y, T224F, T224Y, N225S, Y242F, Y242L, S243Q, F244I, F244L, V252I, T256A, T256D, K258V, E259G, E259V, M260D, M260W, F261K, F261P, F261S, F266Y, N276F, N276W, N276Y, N279S, N280F, N280W, N280Y, W283N, S286K, S286L, S302T, S302Y, G303R, T315A, H320T, P321H, P321Y, M322G, M322Y, H323A, H323N, H323W, W346N, L354V, E359W, Q360M, Q360W, Q360Y, G361M, Y362V, V365I, Y371S, Y371N, A383D, E390A, E390D, N394W, N394D, F395Y, D405G, I409L, R414M, H420P, H420A, H420Q, H420Y, N422V, T427L, G455R, K457N, K457R, R458S, N470A, N470M, S472R, V473C, N474F, N474L, G475E, G475K, G476H, G476E e G476A da sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 1, e (b) recuperar a variante.
[0159] Em outra modalidade, o método para obter uma variante tendo atividade de alfa-amilase, compreendendo (a) introduzir em uma alfa-amilase progenitora uma substituição em uma ou mais posições, em que a substituição é selecionada de N3D, N3G, N3S, G7A, G7H, G7S, R26Y, A31S, R37A, R37N, R37V, T40G, T40N, A41D, N54S, V56T, A60V, A60P, L63F, K72R, G73L, K93R, N94D, Q98L, V103A, V103I, V103L, V104M, M105I, M105L, N106D, A109G, G110K, A111G, A111L, G113Q, G113S, G113A, T114K, F116L, F116N, F116Q, F116W, V117G, D118Q, D118T, D123N, N126D, N128Y, T131I, T131V, S132D, S132L, T134D, Y135E, Q136T, Q136K, I137F, Q138V, W140S, W140M, W140Y, K142E, K142G, K142P, D144N, P146S, P146H, T151A, Y152L, F155W, W159H, W159L, Y160P, T165V, W167A, W167D, W167E, W167F, W167P, W167S, E169I, E169Q, E169V, K172G, K172Q, L173F, N174K, N174S, I176V, Y177D, K178A, R180Q, R180S, S181L, S181T, T182D, T182E, T182G, T182I, T182L, T182M, T182S, G183P, A185D, A185E, A185K, A185N, A185Q, A185R, W188C, E189P, E193I, N194F, F202Y, F202Y, A203F, L205F, L205N, L205Q, L205R, L205V, L205Y, T224F, T224Y, N225S, Y242F, Y242L, S243Q, F244I, F244L, V252I, T256A, T256D, K258V, E259G, E259V, M260D, M260W, F261K, F261P, F261S, F266Y, N276F, N276W, N276Y, N279S, N280F, N280W, N280Y, W283N, S286K, S286L, S302T, S302Y, G303R, T315A, H320T, P321H, P321Y, M322G, M322Y, H323A, H323N, H323W, W346N, L354V, E359W, Q360M, Q360W, Q360Y, G361M, Y362V, V365I, Y371S, Y371N, A383D, E390A, E390D, N394W, N394D, F395Y, D405G, I409L, R414M, H420P, H420A, H420Q, H420Y, N422V, T427L, G455R, K457N, K457R, R458S, N470A, N470M, S472R, V473C, N474F, N474L, G475E, G475K, G476H, G476E e G476A da sequência de aminoácidos apresentada nas SEQ ID NOs: 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e (b) recuperar a variante.
[0160] Em uma modalidade, o método compreende adicionalmente introduzir na alfa-amilase genitora uma deleção em uma ou mais posições, em que a deleção é selecionada de: H1*, H2*, R180*, S181*, T182* e G183* do polipeptídeo das SEQ ID Nos: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e recuperar a variante.
[0161] As variantes podem ser preparadas usando qualquer procedimento de mutagênese conhecido na técnica, tal como mutagênese sítio-dirigida, construção gênica sintética, construção gênica semissintética, mutagênese aleatória, embaralhamento, etc.
[0162] A mutagênese sítio-dirigida é uma técnica na qual uma ou mais (várias) mutações são criadas em um ou mais locais definidos em um polinucleotídeo codificando o genitor.
[0163] A mutagênese sítio-dirigida pode ser alcançada in vitro por PCR envolvendo o uso de iniciadores de oligonucleotídeos contendo a mutação desejada. A mutagênese sítio-dirigida pode ser também realizada in vitro por mutagênese de cassete envolvendo a clivagem por uma enzima de restrição em um sítio no plasmídeo compreendendo um polinucleotídeo que codifica a progenitora e subsequente ligação de um oligonucleotídeo contendo a mutação no polinucleotídeo. Usualmente, a enzima de restrição que digere o plasmídeo e o oligonucleotídeo é a mesma, permitindo que as extremidades coesivas do plasmídeo e inserção se liguem entre si. Ver, p.ex., Scherer e Davis, 1979, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 76: 4949 a 4955; e Barton et al., 1990, Nucleic Acids Res. 18: 7349-4966.
[0164] A mutagênese sítio-dirigida pode ser também alcançada in vivo por métodos conhecidos na técnica. Consultar, por exemplo, Publicação do Pedido de Patente No U.S. 2004/0171154; Storici et al., 2001, Nature Biotechnol. 19: 773-776; Kren et al., 1998, Nat. Med. 4: 285-290; e Calissano e Macino, 1996, Fungal Genet. Newslett. 43: 15-16.
[0165] Pode ser usado qualquer procedimento de mutagênese sítio-dirigida na presente invenção. Existem muitos kits comerciais disponíveis que podem ser usados para preparar variantes.
[0166] A construção gênica sintética implica a síntese in vitro de uma molécula de polinucleotídeo designada para codificar um polipeptídeo de interesse. A síntese gênica pode ser realizada utilizando algumas técnicas, tal como a tecnologia à base de microchip em multiplex descrita por Tian et al. (2004, Nature 432: 1050-1054) e tecnologias similares em que oligonucleotídeos são sintetizados e montados em chips microfluídicos fotoprogramáveis.
[0167] Substituições, eliminações, e/ou inserções simples ou múltiplas de aminoácidos podem ser feitas e testadas usando métodos conhecidos de mutagênese, recombinação e/ou embaralhamento, seguido de um procedimento de rastreio relevante, como os revelados por Reidhaar-Olson e Sauer, 1988, Science 241: 53-57; Bowie e Sauer, 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 2152-2156; WO 95/17413; ou WO 95/22625. Outros métodos que podem ser usados incluem PCR propenso a erros, exibição em fagos (por exemplo, Lowman et al., 1991, Biochemistry 30: 10832-10837; Patente U.S. No. 5,223,409; WO 92/06204) e mutagênese dirigida a regiões (Derbyshire et al., 1986, Gene 46: 145; Ner et al., 1988, DNA 7: 127).
[0168] Os métodos de mutagênese/embaralhamento podem ser combinados com métodos de rastreio automatizados, de elevado rendimento, para detectar a atividade de polipeptídeos clonados, mutagenizados, expressos por células hospedeiras (Ness et al., 1999, Nature Biotechnology 17: 893-896). Moléculas de DNA mutagenizadas que codificam polipeptídeos ativos podem ser recuperadas das células hospedeiras e rapidamente sequenciadas usando métodos comuns na técnica. Estes métodos permitem a determinação rápida da importância de resíduos de aminoácidos individuais em um polipeptídeo.
[0169] A construção gênica semissintética é alcançada por combinação de aspectos da construção gênica sintética e/ou mutagênese sítio-dirigida e/ou mutagênese aleatória e/ou embaralhamento. A construção semissintética é tipificada por um processo que usa fragmentos de polinucleotídeos que são sintetizados, em combinação com as técnicas de PCR. As regiões definidas dos genes podem ser, assim, sintetizadas de novo, enquanto outras regiões podem ser amplificadas usando iniciadores mutagênicos sítio-específicos, enquanto outras regiões ainda podem ser sujeitas à amplificação por PCR propensa a erros ou PCR não propensa a erros. As subsequências de polinucleotídeos podem ser depois embaralhadas.
[0170] A presente invenção se relaciona com variantes de alfa-amilase de uma alfa-amilase progenitora compreendendo uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94, 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase.
[0171] Em um aspecto, as variantes de alfa-amilase compreendem uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94 , 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase.
[0172] Em um aspecto, as variantes de alfa-amilase compreendem uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94 , 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0173] Em um aspecto, as variantes de alfa-amilase compreendem uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94, 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante de alfa-amilase tem uma propriedade melhorada relativamente ao referido polipeptídeo progenitor.
[0174] Em um aspecto, variantes de alfa-amilase compreendendo uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60 , 63, 72, 73, 93, 94 , 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e a variante tem atividade de alfa-amilase e em que a variante de alfa-amilase tem uma propriedade melhorada relativamente ao referido polipeptídeo progenitor.
[0175] Em um aspecto, variantes de alfa-amilase compreendendo uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94, 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e variante tem atividade de alfa-amilase e em que a variante de alfa-amilase tem uma propriedade melhorada relativamente ao referido polipeptídeo progenitor e em que o referido polipeptídeo progenitor tem a SEQ ID NO: 1, 2 ou 3.
[0176] Em outra modalidade, a variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com o polipeptídeo progenitor.
[0177] Em outra modalidade, a variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com o polipeptídeo progenitor tendo atividade de alfa-amilase.
[0178] Em uma modalidade, a variante tem identidade de sequência de pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% com o polipeptídeo híbrido.
[0179] Em uma modalidade, a variante tem identidade de sequência de pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% com o polipeptídeo híbrido tendo atividade de alfa-amilase.
[0180] Em outra modalidade, a variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com o polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0181] Em outra modalidade, a variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com o polipeptídeo da SEQ ID NO: 2.
[0182] Em outra modalidade, a variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com o polipeptídeo da SEQ ID NO: 3.
[0183] Em outra modalidade, a variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com o polipeptídeo da SEQ ID NO: 4.
[0184] Em outra modalidade, a variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com o polipeptídeo da SEQ ID NO: 5.
[0185] Em outra modalidade, a variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com o polipeptídeo da SEQ ID NO: 6.
[0186] Em outra modalidade, a variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87% pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91% pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95% pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com o polipeptídeo da SEQ ID NO: 7.
[0187] Em outra modalidade, a variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com o polipeptídeo da SEQ ID NO: 8.
[0188] Em outra modalidade, a variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com o polipeptídeo da SEQ ID NO: 9.
[0189] Em outra modalidade, a variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com o polipeptídeo da SEQ ID NO: 10.
[0190] Em outra modalidade, a variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com o polipeptídeo da SEQ ID NO: 11.
[0191] Em outra modalidade, a variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com o polipeptídeo da SEQ ID NO: 12.
[0192] Em outra modalidade, a variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com o polipeptídeo da SEQ ID NO: 13.
[0193] Em outra modalidade, a variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com o polipeptídeo da SEQ ID NO: 14.
[0194] Em um aspecto, o resíduo de aminoácido substituído é diferente do resíduo de aminoácido ocorrendo naturalmente em essa posição. Em uma modalidade, a substituição é selecionada do grupo consistindo em A, C, D, E, F, G, H, I, K, L, M, N, P, Q, R, S, T, V, W e Y, com a condição de que o resíduo de aminoácido substituído seja diferente do resíduo de aminoácido ocorrendo naturalmente em essa posição.
[0195] Em um aspecto, o número de modificações é 1-50, por exemplo, 1-45, 1-40, 1-35, 1-30, 1-25, 1-20, 1-15, 1-10 ou 1-5, como 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 ou 50 modificações.
[0196] Em um aspecto, o número de substituições é 1-50, por exemplo, 1-45, 1-40, 1-35, 1-30, 1-25, 1-20, 1-15, 1-10 ou 1-5, como 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 ou 50 substituições.
[0197] Em um aspecto, o número de deleções é 1-50, por exemplo, 1-45, 1-40, 1-35, 1-30, 1-25, 1-20, 1-15, 1-10 ou 1-5, como 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 ou 50 deleções.
[0198] Deve ser entendido que as variantes acima mencionadas tendo substituições abrangem todas as possíveis combinações de uma ou mais substituições nas posições especificadas.
[0199] Em um aspecto, as variantes de alfa-amilase compreendem uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94 , 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0200] Em um aspecto, as variantes de alfa-amilase compreendendo uma modificação em uma ou mais que a referida variante tem atividade de alfa- amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0201] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em duas posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94 , 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%,mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0202] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em três posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94, 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0203] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em quatro posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94, 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0204] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em cinco posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94, 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%,mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0205] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em seis posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94, 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0206] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em sete posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94, 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0207] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em oito posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94, 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0208] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em nove posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94, 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0209] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em dez posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94, 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0210] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em onze posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94 , 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0211] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em doze posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94, 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0212] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em treze posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94, 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0213] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em quatorze posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94 , 98, 103, 104, 105, 106, 109 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0214] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em quinze posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94, 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0215] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em dezesseis posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60 , 63, 72, 73, 93, 94 , 98, 103, 104, 105, 106, 109 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0216] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em dezessete posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60 , 63, 72, 73, 93, 94 , 98, 103, 104, 105, 106, 109 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0217] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em dezoito posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94, 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476 usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0218] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em dezenove posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60 , 63, 72, 73, 93, 94 , 98, 103, 104, 105, 106, 109 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0219] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em vinte posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94, 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0220] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em vinte e uma posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94, 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0221] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em vinte e duas posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60 , 63, 72, 73, 93, 94 , 98, 103, 104, 105, 106, 109 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0222] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em vinte e três posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60 , 63, 72, 73, 93, 94 , 98, 103, 104, 105, 106, 109 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0223] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em vinte e quatro posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94, 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0224] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em vinte e cinco posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94 , 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0225] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em vinte e seis posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60 , 63, 72, 73, 93, 94 , 98, 103, 104, 105, 106, 109 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0226] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em vinte e sete posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94 , 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0227] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em cada posição correspondente às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94, 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0228] Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma deleção em uma posição correspondendo à posição 1. Em um outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 1 está deletado do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na deleção H1* do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1
[0229] Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma deleção em uma posição correspondendo à posição 2. Em um outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 2 está deletado do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na deleção H2* do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0230] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 3 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 3 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição N3S ou N3D ou N3G do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0231] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 7 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 7 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição G7A ou G7H ou G7S do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0232] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 26 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 26 está substituído por Ala, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição R26Y do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0233] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 31 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 31 está substituído por Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição A31S do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0234] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 37 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 37 está substituído por Ala, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição R37A ou R37N ou R37V do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0235] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 40 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 40 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição T40N ou T40G do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0236] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 41 da SEQ ID NO: 1. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 41 é substituído por Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Trp, Thr, Tyr, ou Val. Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição A41D do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0237] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 54 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 54 está substituído por Ala, Arg, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição N54S do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0238] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 56 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 56 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp ou Tyr. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição V56T do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0239] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 60 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 60 está substituído por Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição A60P ou A60V do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0240] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 63 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 63 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição L63F do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0241] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 72 da SEQ ID NO: 1. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 72 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição K72R do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0242] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 73 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 73 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição G73L do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0243] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 93 da SEQ ID NO: 1. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 93 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição K93D do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0244] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 94 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 94 está substituído por Ala, Arg, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição N94D do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0245] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 98 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 98 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição Q98L do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0246] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 103 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 103 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp ou Tyr. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição V103 ou VA103I do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0247] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 104 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 104 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp ou Tyr. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição V104M do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0248] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 105 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 105 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição M105I ou M105L do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0249] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 106 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 106 está substituído por Ala, Arg, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição N106D do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0250] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 109 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 109 está substituído por Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição A109G do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0251] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 110 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 110 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição G110K do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0252] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 111 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 111 está substituído por Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição A111G ou A111L do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0253] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 113 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 113 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição G113A ou G113Q ou G113S do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0254] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 114 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 114 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição T114K do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0255] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 116 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 116 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição F116L ou F116N ou F116Q ou F116W do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0256] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 117 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 117 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp ou Tyr. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição V117G do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0257] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 118 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 118 está substituído por Ala, Arg, Asn, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição D118T ou D118Q do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0258] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 123 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 123 está substituído por Ala, Arg, Asn, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição D123N do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0259] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 126 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 126 está substituído por Ala, Arg, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição N126D do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0260] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 128 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 128 está substituído por Ala, Arg, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição N128Y do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0261] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 131 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 131 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição T131I ou T131V do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0262] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 132 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 132 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição S132D ou S132L do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0263] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 134 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 134 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição T134D do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0264] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 135 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 135 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição Y135E do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0265] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 136 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 136 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição Q136T ou Q136K do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0266] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 137 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 137 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição I137F do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0267] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 138 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 138 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição Q138V do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0268] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 140 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 140 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição W140S ou W140Y ou W140M do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0269] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 142 da SEQ ID NO: 1. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 142 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição K142E ou K142G ou K142P do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0270] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 144 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 144 está substituído por Ala, Arg, Asn, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição D144N do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0271] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 146 da SEQ ID NO: 1. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 146 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição P146H ou P146S do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0272] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 151 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 151 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição T151A do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0273] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 152 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 152 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição Y152L do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0274] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 155 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 155 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição F155W do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0275] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 159 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 159 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição W159H ou W159L do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0276] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 160 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 160 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição Y160P do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0277] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 165 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 165 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição T165V do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0278] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 167 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 167 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição W167A ou W167D ou W167E ou W167F ou W167P ou W167S do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0279] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 169 da SEQ ID NO: 1. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 169 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Gly, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição E169V ou E169I ou E169Q do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0280] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 172 da SEQ ID NO: 1. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 172 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição K172G ou K172Q do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0281] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 173 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 173 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição L173F do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0282] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 174 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 174 está substituído por Ala, Arg, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição N174K ou N174S do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0283] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 176 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 176 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição I176V do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0284] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 177 da SEQ ID NO: 1. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 177 é substituído por Ala, Arg, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, ou Val. Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição Y177D do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0285] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 178 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 178 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição K178A do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0286] Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma deleção ou substituição em uma posição correspondendo à posição 180. Em um outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 180 está deletado do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na deleção R180* do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 180 está substituído por Ala, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição R180Q ou R180S do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0287] Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma deleção ou substituição em uma posição correspondendo à posição 181. Em um outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 181 está deletado do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na deleção S181* do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 181 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição S181L ou S181T do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0288] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em deleção ou substituição em uma posição correspondente à posição 182 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 182 está deletado do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na deleção T182* do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 182 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Trp, Tyr, ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição T182D ou T182E ou T182G ou T182I ou T182L ou T182M ou T182S do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0289] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em deleção ou substituição em uma posição correspondente à posição 183 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 183 está deletado do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na deleção G183* do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 183 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição G183P do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0290] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 185 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 185 está substituído por Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição A186D ou A186E ou A186K ou A186N ou A186Q ou A186R do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0291] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 188 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 188 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição W188C do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0292] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 189 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 189 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição E189P do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0293] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 193 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 193 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição E193I do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0294] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 194 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 194 está substituído por Ala, Arg, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição N194F do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0295] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 196 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 196 está substituído por Ala, Arg, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição N196F ou N196I do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0296] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 202 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 202 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição F202Y do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0297] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 203 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 203 está substituído por Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição A203F do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0298] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 205 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 205 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição L205F ou L205N ou L205Q ou L205R ou L205V ou L205Y do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0299] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 224 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 224 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição T224F ou T244Y do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0300] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 225 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 225 está substituído por Ala, Arg, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição N225S do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0301] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 242 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 242 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição Y242F ou Y242L do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0302] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 243 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 243 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição S243Q do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0303] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 244 da SEQ ID NO: 1. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 244 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Ser, Pro, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição F244I ou F244L do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0304] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 252 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 252 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp ou Tyr. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição V252I do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0305] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 256 da SEQ ID NO: 1. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 256 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição T256A ou T256D do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0306] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 258. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 258 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição K258V do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0307] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 259. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 259 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição E259G ou E259V do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0308] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 260. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 260 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Glu, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição M260D ou M260W do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0309] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 261. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 261 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição F261K ou F261P ou F261S do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0310] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 266. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 266 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição F266Y do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0311] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 276. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 276 é substituído por Ala, Arg, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição N276F ou N276W ou N276Y do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0312] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 279. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 279 é substituído por Ala, Arg, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição N279S do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0313] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 280. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 280 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Met, Pro, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição K280F ou K280W ou K280Y do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0314] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 283. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 283 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Phe, Ser, Thr, Tyr, ou Val. Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição W283N do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0315] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 286. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 286 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Phe, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição S286K ou S286L do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0316] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 302. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 302 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Phe, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição S302T ou S302Y do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0317] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 303. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 303 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, His, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição G303R do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0318] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 315. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 315 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Phe, Ser, Trp, Tyr, ou Val. Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição T315A do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0319] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 320. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 320 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição H320T do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0320] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 321. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 321 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição P321H ou P321Y do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0321] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 322. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 322 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Pro, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição M322G ou M322Y do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0322] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 323. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 323 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição H323A ou H323N ou H323W do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0323] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 346. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 346 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Phe, Ser, Thr, Tyr, ou Val. Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição W346N do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0324] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 354. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 354 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Met, Pro, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição L354V do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0325] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 359. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 359 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição E359W do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0326] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 360. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 360 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição Q360M ou Q360W ou Q360Y do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0327] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 361. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 361 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, ou Tyr. Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição G361M do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0328] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 362. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 362 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Phe, Ser, Thr, Trp, ou Val. Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição Y362V do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0329] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 365. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 365 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Phe, Ser, Thr, Tyr, ou Trp. Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição V365I do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0330] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 371. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 371 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Phe, Ser, Thr, Trp, ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição Y371S ou Y371N do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0331] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 383. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 383 é substituído por Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição A383D do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0332] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 390. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 390 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição E390A ou E390D do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0333] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 394. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 394 é substituído por Ala, Arg, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição N394W ou N394D do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0334] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 395. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 395 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição F395Y do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0335] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 405. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 405 é substituído por Ala, Arg, Asn, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição D405G do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0336] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 409. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 409 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Pro, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição I409L do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0337] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 414. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 414 está substituído por Ala, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição R414M do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0338] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 420. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 420 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição H420A ou H420P ou H420Q ou H420Y do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0339] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 422. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 422 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp ou Tyr. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição N422V do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0340] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 427. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 427 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Phe, Ser, Trp, Tyr, ou Val. Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição T427L do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0341] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 455. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 455 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, His, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição G455R do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0342] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 457. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 457 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Met, Pro, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição K457N ou K457R do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0343] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 458. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 458 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição P458S do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0344] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 470. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 470 é substituído por Ala, Arg, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição N470A ou N470M do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0345] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 472. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 472 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Phe, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição S472R do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0346] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 473. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 473 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Phe, Ser, Thr, Trp, ou Tyr. Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição V473C do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0347] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 474. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 474 é substituído por Ala, Arg, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição N474F ou N474L do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0348] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 475. Em outro aspecto, o aminoácido em uma posição correspondente à posição 475 é substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, His, Ile, Leu, Lys, Met, Pro, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição G475E ou G475K do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0349] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondente à posição 476. Em um outro aspeto, o aminoácido em uma posição correspondendo à posição 476 está substituído por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr ou Val. Em um outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição G476A ou G476E ou G476H do polipeptídeo da SEQ ID NO: 1.
[0350] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: H1, H2, N3, G7, R26, A31, R37, T40, A41, N5 4, V56 , A60, L63, K72, G73, K93, N94 , Q98, V103, V104, M105, N106, A109, G110, A111, G113, T114, F116, V117, D118, D123, N126, N128, T131, S132, T134, Y135, Q136, I137, Q138, W140, K142, D144, P146, T151, Y152, F155, W159, Y160, T165, W167, E169, K172, L173, N174, I176, Y177, K178, R180, S181, T182, G183, A185, W188, E189, E193, N194, N196, F202, A203, L205, T224, N225, Y242, S243, F244, V252, T256, K258, E259, M260, F261, F266, N276, N279, K280, W283, S286, S302, G303, T315, H320, P321, M322, H323, W346, L354, E359, Q360, G361, Y362, V365, Y371, A383, E390, N394, F395, D405, I409, R414, H420, N422, T427, G455, K457, P458, N470, S472, V473, N474, G475 e G476, usando a SEQ ID NO : 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0351] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: H1*, H2*, N3D, N3G, N3S, G7A, G7H, G7S, R26Y, A31S, R37A, R37N, R37V, T40G, T40N, A41D, N54S, V56T, A60V, A60P, L63F, K72R, G73L, K93R, N94D, Q98L, V103A, V103I, V103L, V104M, M105I, M105L, N106D, A109G, G110K, A111G, A111L, G113Q, G113S, G113A, T114K, F116L, F116N, F116Q, F116W, V117G, D118Q, D118T, D123N, N126D, N128Y, T131I, T131V, S132D, S132L, T134D, Y135E, Q136T, Q136K, I137F, Q138V, W140S, W140M, W140Y, K142E, K142G, K142P, D144N, P146S, P146H, T151A, Y152L, F155W, W159H, W159L, Y160P, T165V, W167A, W167D, W167E, W167F, W167P, W167S, E169I, E169Q, E169V, K172G, K172Q, L173F, N174K, N174S, I176V, Y177D, K178A, R180*, R180Q, R180S, S181*, S181L, S181T, T182*, T182D, T182E, T182G, T182I, T182L, T182M, T182S, G183*, G183P, A185D, A185E, A185K, A185N, A185Q, A185R, W188C, E189P, E193I, N194F, F202Y, F202Y, A203F, L205F, L205N, L205Q, L205R, L205V, L205Y, T224F, T224Y, N225S, Y242F, Y242L, S243Q, F244I, F244L, V252I, T256A, T256D, K258V, E259G, E259V, M260D, M260W, F261K, F261P, F261S, F266Y, N276F, N276W, N276Y, N279S, N280F, N280W, N280Y, W283N, S286K, S286L, S302T, S302Y, G303R, T315A, H320T, P321H, P321Y, M322G, M322Y, H323A, H323N, H323W, W346N, L354V, E359W, Q360M, Q360W, Q360Y, G361M, Y362V, V365I, Y371S, Y371N, A383D, E390A, E390D, N394W, N394D, F395Y, D405G, I409L, R414M, H420P, H420A, H420Q, H420Y, N422V, T427L, G455R, K457N, K457R, R458S, N470A, N470M, S472R, V473C, N474F, N474L, G475E, G475K, G476H, G476E e G476A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa- amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0352] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: H1*, H2*, N3D, N3G, N3S, G7A, G7H, G7S, R26Y, A31S, R37A, R37N, R37V, T40G, T40N, A41D, N54S, V56T, A60V, A60P, L63F, K72R, G73L, K93R, N94D, Q98L, V103A, V103I, V103L, V104M, M105I, M105L, N106D, A109G, G110K, A111G, A111L, G113Q, G113S, G113A, T114K, F116L, F116N, F116Q, F116W, V117G, D118Q, D118T, D123N, N126D, N128Y, T131I, T131V, S132D, S132L, T134D, Y135E, Q136T, Q136K, I137F, Q138V, W140S, W140M, W140Y, K142E, K142G, K142P, D144N, P146S, P146H, T151A, Y152L, F155W, W159H, W159L, Y160P, T165V, W167A, W167D, W167E, W167F, W167P, W167S, E169I, E169Q, E169V, K172G, K172Q, L173F, N174K, N174S, I176V, Y177D, K178A, R180*, R180Q, R180S, S181*, S181L, S181T, T182*, T182D, T182E, T182G, T182I, T182L, T182M, T182S, G183*, G183P, A185D, A185E, A185K, A185N, A185Q, A185R, W188C, E189P, E193I, N194F, F202Y, F202Y, A203F, L205F, L205N, L205Q, L205R, L205V, L205Y, T224F, T224Y, N225S, Y242F, Y242L, S243Q, F244I, F244L, V252I, T256A, T256D, K258V, E259G, E259V, M260D, M260W, F261K, F261P, F261S, F266Y, N276F, N276W, N276Y, N279S, N280F, N280W, N280Y, W283N, S286K, S286L, S302T, S302Y, G303R, T315A, H320T, P321H, P321Y, M322G, M322Y, H323A, H323N, H323W, W346N, L354V, E359W, Q360M, Q360W, Q360Y, G361M, Y362V, V365I, Y371S, Y371N, A383D, E390A, E390D, N394W, N394D, F395Y, D405G, I409L, R414M, H420P, H420A, H420Q, H420Y, N422V, T427L, G455R, K457N, K457R, R458S, N470A, N470M, S472R, V473C, N474F, N474L, G475E, G475K, G476H, G476E e G476A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa- amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1.
[0353] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: H1*, H2*, N3D, N3G, N3S, G7A, G7H, G7S, R26Y, A31S, R37A, R37N, R37V, T40G, T40N, A41D, N54S, V56T, A60V, A60P, L63F, K72R, G73L, K93R, N94D, Q98L, V103A, V103I, V103L, V104M, M105I, M105L, N106D, A109G, G110K, A111G, A111L, G113Q, G113S, G113A, T114K, F116L, F116N, F116Q, F116W, V117G, D118Q, D118T, D123N, N126D, N128Y, T131I, T131V, S132D, S132L, T134D, Y135E, Q136T, Q136K, I137F, Q138V, W140S, W140M, W140Y, K142E, K142G, K142P, D144N, P146S, P146H, T151A, Y152L, F155W, W159H, W159L, Y160P, T165V, W167A, W167D, W167E, W167F, W167P, W167S, E169I, E169Q, E169V, K172G, K172Q, L173F, N174K, N174S, I176V, Y177D, K178A, R180*, R180Q, R180S, S181*, S181L, S181T, T182*, T182D, T182E, T182G, T182I, T182L, T182M, T182S, G183*, G183P, A185D, A185E, A185K, A185N, A185Q, A185R, W188C, E189P, E193I, N194F, F202Y, F202Y, A203F, L205F, L205N, L205Q, L205R, L205V, L205Y, T224F, T224Y, N225S, Y242F, Y242L, S243Q, F244I, F244L, V252I, T256A, T256D, K258V, E259G, E259V, M260D, M260W, F261K, F261P, F261S, F266Y, N276F, N276W, N276Y, N279S, N280F, N280W, N280Y, W283N, S286K, S286L, S302T, S302Y, G303R, T315A, H320T, P321H, P321Y, M322G, M322Y, H323A, H323N, H323W, W346N, L354V, E359W, Q360M, Q360W, Q360Y, G361M, Y362V, V365I, Y371S, Y371N, A383D, E390A, E390D, N394W, N394D, F395Y, D405G, I409L, R414M, H420P, H420A, H420Q, H420Y, N422V, T427L, G455R, K457N, K457R, R458S, N470A, N470M, S472R, V473C, N474F, N474L, G475E, G475K, G476H, G476E e G476A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa- amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 2.
[0354] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: H1*, H2*, N3D, N3G, N3S, G7A, G7H, G7S, R26Y, A31S, R37A, R37N, R37V, T40G, T40N, A41D, N54S, V56T, A60V, A60P, L63F, K72R, G73L, K93R, N94D, Q98L, V103A, V103I, V103L, V104M, M105I, M105L, N106D, A109G, G110K, A111G, A111L, G113Q, G113S, G113A, T114K, F116L, F116N, F116Q, F116W, V117G, D118Q, D118T, D123N, N126D, N128Y, T131I, T131V, S132D, S132L, T134D, Y135E, Q136T, Q136K, I137F, Q138V, W140S, W140M, W140Y, K142E, K142G, K142P, D144N, P146S, P146H, T151A, Y152L, F155W, W159H, W159L, Y160P, T165V, W167A, W167D, W167E, W167F, W167P, W167S, E169I, E169Q, E169V, K172G, K172Q, L173F, N174K, N174S, I176V, Y177D, K178A, R180*, R180Q, R180S, S181*, S181L, S181T, T182*, T182D, T182E, T182G, T182I, T182L, T182M, T182S, G183*, G183P, A185D, A185E, A185K, A185N, A185Q, A185R, W188C, E189P, E193I, N194F, F202Y, F202Y, A203F, L205F, L205N, L205Q, L205R, L205V, L205Y, T224F, T224Y, N225S, Y242F, Y242L, S243Q, F244I, F244L, V252I, T256A, T256D, K258V, E259G, E259V, M260D, M260W, F261K, F261P, F261S, F266Y, N276F, N276W, N276Y, N279S, N280F, N280W, N280Y, W283N, S286K, S286L, S302T, S302Y, G303R, T315A, H320T, P321H, P321Y, M322G, M322Y, H323A, H323N, H323W, W346N, L354V, E359W, Q360M, Q360W, Q360Y, G361M, Y362V, V365I, Y371S, Y371N, A383D, E390A, E390D, N394W, N394D, F395Y, D405G, I409L, R414M, H420P, H420A, H420Q, H420Y, N422V, T427L, G455R, K457N, K457R, R458S, N470A, N470M, S472R, V473C, N474F, N474L, G475E, G475K, G476H, G476E e G476A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa- amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 3.
[0355] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: H1*, H2*, N3D, N3G, N3S, G7A, G7H, G7S, R26Y, A31S, R37A, R37N, R37V, T40G, T40N, A41D, N54S, V56T, A60V, A60P, L63F, K72R, G73L, K93R, N94D, Q98L, V103A, V103I, V103L, V104M, M105I, M105L, N106D, A109G, G110K, A111G, A111L, G113Q, G113S, G113A, T114K, F116L, F116N, F116Q, F116W, V117G, D118Q, D118T, D123N, N126D, N128Y, T131I, T131V, S132D, S132L, T134D, Y135E, Q136T, Q136K, I137F, Q138V, W140S, W140M, W140Y, K142E, K142G, K142P, D144N, P146S, P146H, T151A, Y152L, F155W, W159H, W159L, Y160P, T165V, W167A, W167D, W167E, W167F, W167P, W167S, E169I, E169Q, E169V, K172G, K172Q, L173F, N174K, N174S, I176V, Y177D, K178A, R180*, R180Q, R180S, S181*, S181L, S181T, T182*, T182D, T182E, T182G, T182I, T182L, T182M, T182S, G183*, G183P, A185D, A185E, A185K, A185N, A185Q, A185R, W188C, E189P, E193I, N194F, F202Y, F202Y, A203F, L205F, L205N, L205Q, L205R, L205V, L205Y, T224F, T224Y, N225S, Y242F, Y242L, S243Q, F244I, F244L, V252I, T256A, T256D, K258V, E259G, E259V, M260D, M260W, F261K, F261P, F261S, F266Y, N276F, N276W, N276Y, N279S, N280F, N280W, N280Y, W283N, S286K, S286L, S302T, S302Y, G303R, T315A, H320T, P321H, P321Y, M322G, M322Y, H323A, H323N, H323W, W346N, L354V, E359W, Q360M, Q360W, Q360Y, G361M, Y362V, V365I, Y371S, Y371N, A383D, E390A, E390D, N394W, N394D, F395Y, D405G, I409L, R414M, H420P, H420A, H420Q, H420Y, N422V, T427L, G455R, K457N, K457R, R458S, N470A, N470M, S472R, V473C, N474F, N474L, G475E, G475K, G476H, G476E e G476A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa- amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 4.
[0356] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: H1*, H2*, N3D, N3G, N3S, G7A, G7H, G7S, R26Y, A31S, R37A, R37N, R37V, T40G, T40N, A41D, N54S, V56T, A60V, A60P, L63F, K72R, G73L, K93R, N94D, Q98L, V103A, V103I, V103L, V104M, M105I, M105L, N106D, A109G, G110K, A111G, A111L, G113Q, G113S, G113A, T114K, F116L, F116N, F116Q, F116W, V117G, D118Q, D118T, D123N, N126D, N128Y, T131I, T131V, S132D, S132L, T134D, Y135E, Q136T, Q136K, I137F, Q138V, W140S, W140M, W140Y, K142E, K142G, K142P, D144N, P146S, P146H, T151A, Y152L, F155W, W159H, W159L, Y160P, T165V, W167A, W167D, W167E, W167F, W167P, W167S, E169I, E169Q, E169V, K172G, K172Q, L173F, N174K, N174S, I176V, Y177D, K178A, R180*, R180Q, R180S, S181*, S181L, S181T, T182*, T182D, T182E, T182G, T182I, T182L, T182M, T182S, G183*, G183P, A185D, A185E, A185K, A185N, A185Q, A185R, W188C, E189P, E193I, N194F, F202Y, F202Y, A203F, L205F, L205N, L205Q, L205R, L205V, L205Y, T224F, T224Y, N225S, Y242F, Y242L, S243Q, F244I, F244L, V252I, T256A, T256D, K258V, E259G, E259V, M260D, M260W, F261K, F261P, F261S, F266Y, N276F, N276W, N276Y, N279S, N280F, N280W, N280Y, W283N, S286K, S286L, S302T, S302Y, G303R, T315A, H320T, P321H, P321Y, M322G, M322Y, H323A, H323N, H323W, W346N, L354V, E359W, Q360M, Q360W, Q360Y, G361M, Y362V, V365I, Y371S, Y371N, A383D, E390A, E390D, N394W, N394D, F395Y, D405G, I409L, R414M, H420P, H420A, H420Q, H420Y, N422V, T427L, G455R, K457N, K457R, R458S, N470A, N470M, S472R, V473C, N474F, N474L, G475E, G475K, G476H, G476E e G476A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa- amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 5.
[0357] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: H1*, H2*, N3D, N3G, N3S, G7A, G7H, G7S, R26Y, A31S, R37A, R37N, R37V, T40G, T40N, A41D, N54S, V56T, A60V, A60P, L63F, K72R, G73L, K93R, N94D, Q98L, V103A, V103I, V103L, V104M, M105I, M105L, N106D, A109G, G110K, A111G, A111L, G113Q, G113S, G113A, T114K, F116L, F116N, F116Q, F116W, V117G, D118Q, D118T, D123N, N126D, N128Y, T131I, T131V, S132D, S132L, T134D, Y135E, Q136T, Q136K, I137F, Q138V, W140S, W140M, W140Y, K142E, K142G, K142P, D144N, P146S, P146H, T151A, Y152L, F155W, W159H, W159L, Y160P, T165V, W167A, W167D, W167E, W167F, W167P, W167S, E169I, E169Q, E169V, K172G, K172Q, L173F, N174K, N174S, I176V, Y177D, K178A, R180*, R180Q, R180S, S181*, S181L, S181T, T182*, T182D, T182E, T182G, T182I, T182L, T182M, T182S, G183*, G183P, A185D, A185E, A185K, A185N, A185Q, A185R, W188C, E189P, E193I, N194F, F202Y, F202Y, A203F, L205F, L205N, L205Q, L205R, L205V, L205Y, T224F, T224Y, N225S, Y242F, Y242L, S243Q, F244I, F244L, V252I, T256A, T256D, K258V, E259G, E259V, M260D, M260W, F261K, F261P, F261S, F266Y, N276F, N276W, N276Y, N279S, N280F, N280W, N280Y, W283N, S286K, S286L, S302T, S302Y, G303R, T315A, H320T, P321H, P321Y, M322G, M322Y, H323A, H323N, H323W, W346N, L354V, E359W, Q360M, Q360W, Q360Y, G361M, Y362V, V365I, Y371S, Y371N, A383D, E390A, E390D, N394W, N394D, F395Y, D405G, I409L, R414M, H420P, H420A, H420Q, H420Y, N422V, T427L, G455R, K457N, K457R, R458S, N470A, N470M, S472R, V473C, N474F, N474L, G475E, G475K, G476H, G476E e G476A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa- amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 6.
[0358] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: H1*, H2*, N3D, N3G, N3S, G7A, G7H, G7S, R26Y, A31S, R37A, R37N, R37V, T40G, T40N, A41D, N54S, V56T, A60V, A60P, L63F, K72R, G73L, K93R, N94D, Q98L, V103A, V103I, V103L, V104M, M105I, M105L, N106D, A109G, G110K, A111G, A111L, G113Q, G113S, G113A, T114K, F116L, F116N, F116Q, F116W, V117G, D118Q, D118T, D123N, N126D, N128Y, T131I, T131V, S132D, S132L, T134D, Y135E, Q136T, Q136K, I137F, Q138V, W140S, W140M, W140Y, K142E, K142G, K142P, D144N, P146S, P146H, T151A, Y152L, F155W, W159H, W159L, Y160P, T165V, W167A, W167D, W167E, W167F, W167P, W167S, E169I, E169Q, E169V, K172G, K172Q, L173F, N174K, N174S, I176V, Y177D, K178A, R180*, R180Q, R180S, S181*, S181L, S181T, T182*, T182D, T182E, T182G, T182I, T182L, T182M, T182S, G183*, G183P, A185D, A185E, A185K, A185N, A185Q, A185R, W188C, E189P, E193I, N194F, F202Y, F202Y, A203F, L205F, L205N, L205Q, L205R, L205V, L205Y, T224F, T224Y, N225S, Y242F, Y242L, S243Q, F244I, F244L, V252I, T256A, T256D, K258V, E259G, E259V, M260D, M260W, F261K, F261P, F261S, F266Y, N276F, N276W, N276Y, N279S, N280F, N280W, N280Y, W283N, S286K, S286L, S302T, S302Y, G303R, T315A, H320T, P321H, P321Y, M322G, M322Y, H323A, H323N, H323W, W346N, L354V, E359W, Q360M, Q360W, Q360Y, G361M, Y362V, V365I, Y371S, Y371N, A383D, E390A, E390D, N394W, N394D, F395Y, D405G, I409L, R414M, H420P, H420A, H420Q, H420Y, N422V, T427L, G455R, K457N, K457R, R458S, N470A, N470M, S472R, V473C, N474F, N474L, G475E, G475K, G476H, G476E e G476A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa- amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 7.
[0359] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: H1*, H2*, N3D, N3G, N3S, G7A, G7H, G7S, R26Y, A31S, R37A, R37N, R37V, T40G, T40N, A41D, N54S, V56T, A60V, A60P, L63F, K72R, G73L, K93R, N94D, Q98L, V103A, V103I, V103L, V104M, M105I, M105L, N106D, A109G, G110K, A111G, A111L, G113Q, G113S, G113A, T114K, F116L, F116N, F116Q, F116W, V117G, D118Q, D118T, D123N, N126D, N128Y, T131I, T131V, S132D, S132L, T134D, Y135E, Q136T, Q136K, I137F, Q138V, W140S, W140M, W140Y, K142E, K142G, K142P, D144N, P146S, P146H, T151A, Y152L, F155W, W159H, W159L, Y160P, T165V, W167A, W167D, W167E, W167F, W167P, W167S, E169I, E169Q, E169V, K172G, K172Q, L173F, N174K, N174S, I176V, Y177D, K178A, R180*, R180Q, R180S, S181*, S181L, S181T, T182*, T182D, T182E, T182G, T182I, T182L, T182M, T182S, G183*, G183P, A185D, A185E, A185K, A185N, A185Q, A185R, W188C, E189P, E193I, N194F, F202Y, F202Y, A203F, L205F, L205N, L205Q, L205R, L205V, L205Y, T224F, T224Y, N225S, Y242F, Y242L, S243Q, F244I, F244L, V252I, T256A, T256D, K258V, E259G, E259V, M260D, M260W, F261K, F261P, F261S, F266Y, N276F, N276W, N276Y, N279S, N280F, N280W, N280Y, W283N, S286K, S286L, S302T, S302Y, G303R, T315A, H320T, P321H, P321Y, M322G, M322Y, H323A, H323N, H323W, W346N, L354V, E359W, Q360M, Q360W, Q360Y, G361M, Y362V, V365I, Y371S, Y371N, A383D, E390A, E390D, N394W, N394D, F395Y, D405G, I409L, R414M, H420P, H420A, H420Q, H420Y, N422V, T427L, G455R, K457N, K457R, R458S, N470A, N470M, S472R, V473C, N474F, N474L, G475E, G475K, G476H, G476E e G476A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa- amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 8.
[0360] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: H1*, H2*, N3D, N3G, N3S, G7A, G7H, G7S, R26Y, A31S, R37A, R37N, R37V, T40G, T40N, A41D, N54S, V56T, A60V, A60P, L63F, K72R, G73L, K93R, N94D, Q98L, V103A, V103I, V103L, V104M, M105I, M105L, N106D, A109G, G110K, A111G, A111L, G113Q, G113S, G113A, T114K, F116L, F116N, F116Q, F116W, V117G, D118Q, D118T, D123N, N126D, N128Y, T131I, T131V, S132D, S132L, T134D, Y135E, Q136T, Q136K, I137F, Q138V, W140S, W140M, W140Y, K142E, K142G, K142P, D144N, P146S, P146H, T151A, Y152L, F155W, W159H, W159L, Y160P, T165V, W167A, W167D, W167E, W167F, W167P, W167S, E169I, E169Q, E169V, K172G, K172Q, L173F, N174K, N174S, I176V, Y177D, K178A, R180*, R180Q, R180S, S181*, S181L, S181T, T182*, T182D, T182E, T182G, T182I, T182L, T182M, T182S, G183*, G183P, A185D, A185E, A185K, A185N, A185Q, A185R, W188C, E189P, E193I, N194F, F202Y, F202Y, A203F, L205F, L205N, L205Q, L205R, L205V, L205Y, T224F, T224Y, N225S, Y242F, Y242L, S243Q, F244I, F244L, V252I, T256A, T256D, K258V, E259G, E259V, M260D, M260W, F261K, F261P, F261S, F266Y, N276F, N276W, N276Y, N279S, N280F, N280W, N280Y, W283N, S286K, S286L, S302T, S302Y, G303R, T315A, H320T, P321H, P321Y, M322G, M322Y, H323A, H323N, H323W, W346N, L354V, E359W, Q360M, Q360W, Q360Y, G361M, Y362V, V365I, Y371S, Y371N, A383D, E390A, E390D, N394W, N394D, F395Y, D405G, I409L, R414M, H420P, H420A, H420Q, H420Y, N422V, T427L, G455R, K457N, K457R, R458S, N470A, N470M, S472R, V473C, N474F, N474L, G475E, G475K, G476H, G476E e G476A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa- amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 9.
[0361] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: H1*, H2*, N3D, N3G, N3S, G7A, G7H, G7S, R26Y, A31S, R37A, R37N, R37V, T40G, T40N, A41D, N54S, V56T, A60V, A60P, L63F, K72R, G73L, K93R, N94D, Q98L, V103A, V103I, V103L, V104M, M105I, M105L, N106D, A109G, G110K, A111G, A111L, G113Q, G113S, G113A, T114K, F116L, F116N, F116Q, F116W, V117G, D118Q, D118T, D123N, N126D, N128Y, T131I, T131V, S132D, S132L, T134D, Y135E, Q136T, Q136K, I137F, Q138V, W140S, W140M, W140Y, K142E, K142G, K142P, D144N, P146S, P146H, T151A, Y152L, F155W, W159H, W159L, Y160P, T165V, W167A, W167D, W167E, W167F, W167P, W167S, E169I, E169Q, E169V, K172G, K172Q, L173F, N174K, N174S, I176V, Y177D, K178A, R180*, R180Q, R180S, S181*, S181L, S181T, T182*, T182D, T182E, T182G, T182I, T182L, T182M, T182S, G183*, G183P, A185D, A185E, A185K, A185N, A185Q, A185R, W188C, E189P, E193I, N194F, F202Y, F202Y, A203F, L205F, L205N, L205Q, L205R, L205V, L205Y, T224F, T224Y, N225S, Y242F, Y242L, S243Q, F244I, F244L, V252I, T256A, T256D, K258V, E259G, E259V, M260D, M260W, F261K, F261P, F261S, F266Y, N276F, N276W, N276Y, N279S, N280F, N280W, N280Y, W283N, S286K, S286L, S302T, S302Y, G303R, T315A, H320T, P321H, P321Y, M322G, M322Y, H323A, H323N, H323W, W346N, L354V, E359W, Q360M, Q360W, Q360Y, G361M, Y362V, V365I, Y371S, Y371N, A383D, E390A, E390D, N394W, N394D, F395Y, D405G, I409L, R414M, H420P, H420A, H420Q, H420Y, N422V, T427L, G455R, K457N, K457R, R458S, N470A, N470M, S472R, V473C, N474F, N474L, G475E, G475K, G476H, G476E e G476A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa- amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 10.
[0362] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: H1*, H2*, N3D, N3G, N3S, G7A, G7H, G7S, R26Y, A31S, R37A, R37N, R37V, T40G, T40N, A41D, N54S, V56T, A60V, A60P, L63F, K72R, G73L, K93R, N94D, Q98L, V103A, V103I, V103L, V104M, M105I, M105L, N106D, A109G, G110K, A111G, A111L, G113Q, G113S, G113A, T114K, F116L, F116N, F116Q, F116W, V117G, D118Q, D118T, D123N, N126D, N128Y, T131I, T131V, S132D, S132L, T134D, Y135E, Q136T, Q136K, I137F, Q138V, W140S, W140M, W140Y, K142E, K142G, K142P, D144N, P146S, P146H, T151A, Y152L, F155W, W159H, W159L, Y160P, T165V, W167A, W167D, W167E, W167F, W167P, W167S, E169I, E169Q, E169V, K172G, K172Q, L173F, N174K, N174S, I176V, Y177D, K178A, R180*, R180Q, R180S, S181*, S181L, S181T, T182*, T182D, T182E, T182G, T182I, T182L, T182M, T182S, G183*, G183P, A185D, A185E, A185K, A185N, A185Q, A185R, W188C, E189P, E193I, N194F, F202Y, F202Y, A203F, L205F, L205N, L205Q, L205R, L205V, L205Y, T224F, T224Y, N225S, Y242F, Y242L, S243Q, F244I, F244L, V252I, T256A, T256D, K258V, E259G, E259V, M260D, M260W, F261K, F261P, F261S, F266Y, N276F, N276W, N276Y, N279S, N280F, N280W, N280Y, W283N, S286K, S286L, S302T, S302Y, G303R, T315A, H320T, P321H, P321Y, M322G, M322Y, H323A, H323N, H323W, W346N, L354V, E359W, Q360M, Q360W, Q360Y, G361M, Y362V, V365I, Y371S, Y371N, A383D, E390A, E390D, N394W, N394D, F395Y, D405G, I409L, R414M, H420P, H420A, H420Q, H420Y, N422V, T427L, G455R, K457N, K457R, R458S, N470A, N470M, S472R, V473C, N474F, N474L, G475E, G475K, G476H, G476E e G476A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa- amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 11.
[0363] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: H1*, H2*, N3D, N3G, N3S, G7A, G7H, G7S, R26Y, A31S, R37A, R37N, R37V, T40G, T40N, A41D, N54S, V56T, A60V, A60P, L63F, K72R, G73L, K93R, N94D, Q98L, V103A, V103I, V103L, V104M, M105I, M105L, N106D, A109G, G110K, A111G, A111L, G113Q, G113S, G113A, T114K, F116L, F116N, F116Q, F116W, V117G, D118Q, D118T, D123N, N126D, N128Y, T131I, T131V, S132D, S132L, T134D, Y135E, Q136T, Q136K, I137F, Q138V, W140S, W140M, W140Y, K142E, K142G, K142P, D144N, P146S, P146H, T151A, Y152L, F155W, W159H, W159L, Y160P, T165V, W167A, W167D, W167E, W167F, W167P, W167S, E169I, E169Q, E169V, K172G, K172Q, L173F, N174K, N174S, I176V, Y177D, K178A, R180*, R180Q, R180S, S181*, S181L, S181T, T182*, T182D, T182E, T182G, T182I, T182L, T182M, T182S, G183*, G183P, A185D, A185E, A185K, A185N, A185Q, A185R, W188C, E189P, E193I, N194F, F202Y, F202Y, A203F, L205F, L205N, L205Q, L205R, L205V, L205Y, T224F, T224Y, N225S, Y242F, Y242L, S243Q, F244I, F244L, V252I, T256A, T256D, K258V, E259G, E259V, M260D, M260W, F261K, F261P, F261S, F266Y, N276F, N276W, N276Y, N279S, N280F, N280W, N280Y, W283N, S286K, S286L, S302T, S302Y, G303R, T315A, H320T, P321H, P321Y, M322G, M322Y, H323A, H323N, H323W, W346N, L354V, E359W, Q360M, Q360W, Q360Y, G361M, Y362V, V365I, Y371S, Y371N, A383D, E390A, E390D, N394W, N394D, F395Y, D405G, I409L, R414M, H420P, H420A, H420Q, H420Y, N422V, T427L, G455R, K457N, K457R, R458S, N470A, N470M, S472R, V473C, N474F, N474L, G475E, G475K, G476H, G476E e G476A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa- amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 12.
[0364] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: H1*, H2*, N3D, N3G, N3S, G7A, G7H, G7S, R26Y, A31S, R37A, R37N, R37V, T40G, T40N, A41D, N54S, V56T, A60V, A60P, L63F, K72R, G73L, K93R, N94D, Q98L, V103A, V103I, V103L, V104M, M105I, M105L, N106D, A109G, G110K, A111G, A111L, G113Q, G113S, G113A, T114K, F116L, F116N, F116Q, F116W, V117G, D118Q, D118T, D123N, N126D, N128Y, T131I, T131V, S132D, S132L, T134D, Y135E, Q136T, Q136K, I137F, Q138V, W140S, W140M, W140Y, K142E, K142G, K142P, D144N, P146S, P146H, T151A, Y152L, F155W, W159H, W159L, Y160P, T165V, W167A, W167D, W167E, W167F, W167P, W167S, E169I, E169Q, E169V, K172G, K172Q, L173F, N174K, N174S, I176V, Y177D, K178A, R180*, R180Q, R180S, S181*, S181L, S181T, T182*, T182D, T182E, T182G, T182I, T182L, T182M, T182S, G183*, G183P, A185D, A185E, A185K, A185N, A185Q, A185R, W188C, E189P, E193I, N194F, F202Y, F202Y, A203F, L205F, L205N, L205Q, L205R, L205V, L205Y, T224F, T224Y, N225S, Y242F, Y242L, S243Q, F244I, F244L, V252I, T256A, T256D, K258V, E259G, E259V, M260D, M260W, F261K, F261P, F261S, F266Y, N276F, N276W, N276Y, N279S, N280F, N280W, N280Y, W283N, S286K, S286L, S302T, S302Y, G303R, T315A, H320T, P321H, P321Y, M322G, M322Y, H323A, H323N, H323W, W346N, L354V, E359W, Q360M, Q360W, Q360Y, G361M, Y362V, V365I, Y371S, Y371N, A383D, E390A, E390D, N394W, N394D, F395Y, D405G, I409L, R414M, H420P, H420A, H420Q, H420Y, N422V, T427L, G455R, K457N, K457R, R458S, N470A, N470M, S472R, V473C, N474F, N474L, G475E, G475K, G476H, G476E e G476A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa- amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 13.
[0365] Em outro aspecto, variante de alfa-amilase compreende uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: H1*, H2*, N3D, N3G, N3S, G7A, G7H, G7S, R26Y, A31S, R37A, R37N, R37V, T40G, T40N, A41D, N54S, V56T, A60V, A60P, L63F, K72R, G73L, K93R, N94D, Q98L, V103A, V103I, V103L, V104M, M105I, M105L, N106D, A109G, G110K, A111G, A111L, G113Q, G113S, G113A, T114K, F116L, F116N, F116Q, F116W, V117G, D118Q, D118T, D123N, N126D, N128Y, T131I, T131V, S132D, S132L, T134D, Y135E, Q136T, Q136K, I137F, Q138V, W140S, W140M, W140Y, K142E, K142G, K142P, D144N, P146S, P146H, T151A, Y152L, F155W, W159H, W159L, Y160P, T165V, W167A, W167D, W167E, W167F, W167P, W167S, E169I, E169Q, E169V, K172G, K172Q, L173F, N174K, N174S, I176V, Y177D, K178A, R180*, R180Q, R180S, S181*, S181L, S181T, T182*, T182D, T182E, T182G, T182I, T182L, T182M, T182S, G183*, G183P, A185D, A185E, A185K, A185N, A185Q, A185R, W188C, E189P, E193I, N194F, F202Y, F202Y, A203F, L205F, L205N, L205Q, L205R, L205V, L205Y, T224F, T224Y, N225S, Y242F, Y242L, S243Q, F244I, F244L, V252I, T256A, T256D, K258V, E259G, E259V, M260D, M260W, F261K, F261P, F261S, F266Y, N276F, N276W, N276Y, N279S, N280F, N280W, N280Y, W283N, S286K, S286L, S302T, S302Y, G303R, T315A, H320T, P321H, P321Y, M322G, M322Y, H323A, H323N, H323W, W346N, L354V, E359W, Q360M, Q360W, Q360Y, G361M, Y362V, V365I, Y371S, Y371N, A383D, E390A, E390D, N394W, N394D, F395Y, D405G, I409L, R414M, H420P, H420A, H420Q, H420Y, N422V, T427L, G455R, K457N, K457R, R458S, N470A, N470M, S472R, V473C, N474F, N474L, G475E, G475K, G476H, G476E e G476A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa- amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 14.
[0366] O termo “deleção par a par”, como usado aqui, se refere a uma deleção de um aminoácido em duas posições. As referidas duas posições podem ser adjacentes uma à outra mas também podem estar separadas por um, dois, três, quatro, ou cinco aminoácidos.
[0367] Em um aspecto, uma variante compreende uma deleção em pares dentro do domínio B do polipeptídeo progenitor.
[0368] Em um aspecto, uma variante compreende uma deleção em pares dentro do domínio B do polipeptídeo progenitor tendo atividade de alfa-amilase.
[0369] O termo “deleção par a par”, como usado aqui, se refere a uma deleção de um aminoácido em duas posições. As referidas duas posições podem ser adjacentes uma à outra mas também podem estar separadas por um, dois, três, quatro, ou cinco aminoácidos.
[0370] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da presente invenção compreende deleção em uma ou mais posições selecionadas do grupo consistindo em R180*+S181*, R180*+T182*, R180*+G183*, S181*+T182*, S181*+ G183* e T182*+G183*, preferencialmente R180*+S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para numeração.
[0371] Em um aspecto, a invenção se relaciona com variante da SEQ ID NO: 1 compreendendo deleção nas posições correspondentes a R180*+S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa- amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0372] Assim, em uma modalidade, a referida variante de alfa-amilase compreende a) uma deleção e/ou uma substituição em duas ou mais posições correspondentes às posições 180, 181, 182 e 183, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94, 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0373] Em uma modalidade, a referida variante de alfa-amilase compreende a) uma deleção e/ou uma substituição em duas ou mais posições correspondentes às posições R180, S181, T182 e G183, numeração, e em uma ou mais posições H2*, N3, G7, R26, A31, R37, a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante
[0374] Em uma modalidade, a referida variante de alfa-amilase compreende a) uma deleção e/ou uma substituição em duas ou mais posições correspondentes às posições R180, S181, T182 e G183, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições H1*, H2*, N3D, N3G, N3S, G7A, G7H, G7S, R26Y, A31S, R37A, R37N, R37V, T40G, T40N, A41D, N54S, V56T, A60V, A60P, L63F, K72R, G73L, K93R, N94D, Q98L, V103A, V103I, V103L, V104M, M105I, M105L, N106D, A109G, G110K, A111G, A111L, G113Q, G113S, G113A, T114K, F116L, F116N, F116Q, F116W, V117G, D118Q, D118T, D123N, N126D, N128Y, T131I, T131V, S132D, S132L, T134D, Y135E, Q136T, Q136K, I137F, Q138V, W140S, W140M, W140Y, K142E, K142G, K142P, D144N, P146S, P146H, T151A, Y152L, F155W, W159H, W159L, Y160P, T165V, W167A, W167D, W167E, W167F, W167P, W167S, E169I, E169Q, E169V, K172G, K172Q, L173F, N174K, N174S, I176V, Y177D, K178A, A185D, A185E, A185K, A185N, A185Q, A185R, W188C, E189P, E193I, N194F, F202Y, F202Y, A203F, L205F, L205N, L205Q, L205R, L205V, L205Y, T224F, T224Y, N225S, Y242F, Y242L, S243Q, F244I, F244L, V252I, T256A, T256D, K258V, E259G, E259V, M260D, M260W, F261K, F261P, F261S, F266Y, N276F, N276W, N276Y, N279S, N280F, N280W, N280Y, W283N, S286K, S286L, S302T, S302Y, G303R, T315A, H320T, P321H, P321Y, M322G, M322Y, H323A, H323N, H323W, W346N, L354V, E359W, Q360M, Q360W, Q360Y, G361M, Y362V, V365I, Y371S, Y371N, A383D, E390A, E390D, N394W, N394D, F395Y, D405G, I409L, R414M, H420P, H420A, H420Q, H420Y, N422V, T427L, G455R, K457N, K457R, R458S, N470A, N470M, S472R, V473C, N474F, N474L, G475E, G475K, G476H, G476E e G476A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0375] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 1, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+D118T, H1*+W140Y, H1*+T182S, H1*+A185D, H1*+E189P, H1*+Y242F, H1*+E259G, H1*+F266Y, H1*+N279S, H1*+K280Y, H1*+G303R, H1*+E390A, H1*+G475K, H1*+A185Q, H1*+N194F, D118T+W140Y, D118T+T182S, D118T+A185D, D118T+E189P, D118T+Y242F, D118T+E259G, D118T+F266Y, D118T+N279S,D118T+K280Y,D118T+G303R,D118T+E390A,D118T+G475K,D 118T+A185Q,D118T+N194F,W140Y+T182S,W140Y+A185D,W140Y+E189P,W1 40Y+Y242F,W140Y+E259G,W140Y+F266Y,W140Y+N279S,W140Y+K280Y,W14 0Y+G303R,W140Y+E390A,W140Y+G475K,W140Y+A185Q,W140Y+N194F,T182 S+A185D,T182S+E189P,T182S+Y242F,T182S+E259G,T182S+F266Y,T182S +N279S,T182S+K280Y,T182S+G303R,T182S+E390A,T182S+G475K,T182S+ A185Q,T182S+N194F,A185D+E189P,A185D+Y242F,A185D+E259G,A185D+F 266Y,A185D+N279S,A185D+K280Y,A185D+G303R,A185D+E390A,A185D+G4 75K,A185D,+A185Q,A185D,+N194F,E189P+Y242F,E189P+E259G,E189P+F 266Y,E189P+N279S,E189P+K280Y,E189P+G303R,E189P+E390A,E189P+G4 Petição 870230111758, de 18/12/2023, pág. 145/914 133/845 75K,E189P+A185Q,E189P+N194F,Y242F+E259G,Y242F+F266Y,Y242F+N27 9S,Y242F+K280Y,Y242F+G303R,Y242F+E390A,Y242F+G475K,Y242F+A185 Q,Y242F+N194F,E259G+F266Y,E259G+N279S,E259G+K280Y,E259G+G303R ,E259G+E390A,E259G+G475K,E259G+A185Q,E259G+N194F,F266Y+N279S, F266Y+K280Y,F266Y+G303R,F266Y+E390A,F266Y+G475K,F266Y+A185Q,F 266Y+N194F,N279+K280Y,N279S+G303R,N279S+E390A,N279S+G475K,N27 9S+A185Q,N279S+N194F,K280Y+G303R,K280Y+E390A,K280Y+G475K,K280 Y+A185Q,K280Y+N194F,G303R+E390A,G303R+G475K,G303R+A185Q,G303R +N194F,E390A+G475K,E390A+A185Q,E390A+N194F,G475K+A185Q,G475K+ N194F, A185Q+N194F, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0376] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 1, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+D118T+W140Y, H1*+D118T+T182S, H1*+D118T+A185D, H1*+D118T+E189P, H1*+D118T+Y242F, H1*+D118T+E259G, H1*+D118T+F266Y, H1*+D118T+N279S, H1*+D118T+K280Y, H1*+D118T+G303R, H1*+D118T+E390A, H1*+D118T+G475K, H1*+D118T+A185Q, H1*+D118T+N194F, H1*+W140Y+T182S, H1*+W140Y+A185D, H1*+W140Y+E189P, H1*+W140Y+Y242F, H1*+W140Y+E259G, H1*+W140Y+F266Y,H1*+W140Y+N279S,H1*+W140Y+K280Y,H1*+W140Y+G30 3R,H1*+W140Y+E390A,H1*+W140Y+G475K,H1*+W140Y+A185Q,H1*+W140Y+ N194F,H1*+T182S+A185D,H1*+T182S+E189P,H1*+T182S+Y242F,H1*+T18 2S+E259G,H1*+T182S+F266Y,H1*+T182S+N279S,H1*+T182S+K280Y,H1*+ T182S+G303R,H1*+T182S+E390A,H1*+T182S+G475K,H1*+T182S+A185Q,H 1*+T182S+N194F,H1*+A185D+E189P,H1*+A185D+Y242F,H1*+A185D+E259 G,H1*+A185D+F266Y,H1*+A185D+N279S,H1*+A185D+K280Y,H1*+A185D+G 303R,H1*+A185D+E390A,H1*+A185D+G475K,H1*+A185D+A185Q,H1*+A185 D+N194F,H1*+E189P+Y242F,H1*+E189P+E259G,H1*+E189P+F266Y,H1*+E 189P+N279S,H1*+E189P+K280Y,H1*+E189P+G303R,H1*+E189P+E390A,H1 *+E189P+G475K,H1*+E189P+A185Q,H1*+E189P+N194F,H1*+Y242F+E259G ,H1*+Y242F+F266Y,H1*+Y242F+N279S,H1*+Y242F+K280Y,H1*+Y242F+G3 03R,H1*+Y242F+E390A,H1*+Y242F+G475K,H1*+Y242F+A185Q,H1*+Y242F +N194F,H1*+E259G+F266Y,H1*+E259G+N279S,H1*+E259G+K280Y,H1*+E2 59G+G303R,H1*+E259G+E390A,H1*+E259G+G475K,H1*+E259G+A185Q,H1* +E259G+N194F,H1*+F266Y+N279S,H1*+F266Y+K280Y,H1*+F266Y+G303R, H1*+F266Y+E390A,H1*+F266Y+G475K,H1*+F266Y+A185Q,H1*+F266Y+N19 4F,H1*+N279S+K280Y,H1*+N279S+G303R,H1*+N279S+E390A,H1*+N279S+ G475K,H1*+N279S+A185Q,H1*+N279S+N194F,H1*+K280Y+G303R,H1*+K28 0Y+E390A,H1*+K280Y+G475K,H1*+K280Y+A185Q,H1*+K280Y+N194F,H1*+ G303R+E390A,H1*+G303R+G475K,H1*+G303R+A185Q,H1*+G303R+N194F,H 1*+E390A+G475K,H1*+E390A+A185Q,H1*+E390A+N194F,H1*+G475K+A185 Q,H1*+G475K+N194F,H1*+A185Q+N194F,D118T+W140Y+T182S,D118T+W14 0Y+A185D,D118T+W140Y+E189P,D118T+W140Y+Y242F,D118T+W140Y+E259 G,D118T+W140Y+F266Y,D118T+W140Y+N279S,D118T+W140Y+K280Y,D118T +W140Y+G303R,D118T+W140Y+E390A,D118T+W140Y+G475K,D118T+W140Y+ A185Q,D118T+W140Y+N194F,D118T+T182S+A185D,D118T+T182S+E189P,D 118T+T182S+Y242F,D118T+T182S+E259G,D118T+T182S+F266Y,D118T+T1 82S+N279S,D118T+T182S+K280Y,D118T+T182S+G303R,D118T+T182S+E39 0A,D118T+T182S+G475K,D118T+T182S+A185Q,D118T+T182S+N194F,D118 T+A185D+E189P,D118T+A185D+Y242F,D118T+A185D+E259G,D118T+A185D +F266Y,D118T+A185D+N279S,D118T+A185D+K280Y,D118T+A185D+G303R, D118T+A185D+E390A,D118T+A185D+G475K,D118T+A185D+A185Q,D118T+A 185D+N194F,D118T+E189P+Y242F,D118T+E189P+E259G,D118T+E189P+F2 66Y,D118T+E189P+N279S,D118T+E189P+K280Y,D118T+E189P+G303R,D11 8T+E189P+E390A,D118T+E189P+G475K,D118T+E189P+A185Q,D118T+E189 P+N194F,D118T+Y242F+E259G,D118T+Y242F+F266Y,D118T+Y242F+N279S ,D118T+Y242F+K280Y,D118T+Y242F+G303R,D118T+Y242F+E390A,D118T+ Y242F+G475K,D118T+Y242F+A185Q,D118T+Y242F+N194F,D118T+E259G+F 266Y,D118T+E259G+N279S,D118T+E259G+K280Y,D118T+E259G+G303R,D1 18T+E259G+E390A,D118T+E259G+G475K,D118T+E259G+A185Q,D118T+E25 9G+N194F,D118T+F266Y+N279S,D118T+F266Y+K280Y,D118T+F266Y+G303 R,D118T+F266Y+E390A,D118T+F266Y+G475K,D118T+F266Y+A185Q,D118T +F266Y+N194F,D118T+N279S+K280Y,D118T+N279S+G303R,D118T+N279S+ E390A,D118T+N279S+G475K,D118T+N279S+A185Q,D118T+N279S+N194F,D 118T+K280Y+G303R,D118T+K280Y+E390A,D118T+K280Y+G475K,D118T+K2 80Y+A185Q,D118T+K280Y+N194F,D118T+G303R+E390A,D118T+G303R+G47 5K,D118T+G303R+A185Q,D118T+G303R+N194F,D118T+E390A+G475K,D118 T+E390A+A185Q,D118T+E390A+N194F,D118T+G475K+A185Q,D118T+G475K +N194F,D118T+A185Q+N194F,W140Y+T182S+A185D,W140Y+T182S+E189P, W140Y+T182S+Y242F,W140Y+T182S+E259G,W140Y+T182S+F266Y,W140Y+T 182S+N279S,W140Y+T182S+K280Y,W140Y+T182S+G303R,W140Y+T182S+E3 90A,W140Y+T182S+G475K,W140Y+T182S+A185Q,W140Y+T182S+N194F,W14 0Y+A185D+E189P,W140Y+A185D+Y242F,W140Y+A185D+E259G,W140Y+A185 D+F266Y,W140Y+A185D+N279S,W140Y+A185D+K280Y,W140Y+A185D+G303R ,W140Y+A185D+E390A,W140Y+A185D+G475K,W140Y+A185D+A185Q,W140Y+ A185D+N194F,W140Y+E189P+Y242F,W140Y+E189P+E259G,W140Y+E189P+F 266Y,W140Y+E189P+N279S,W140Y+E189P+K280Y,W140Y+E189P+G303R,W1 40Y+E189P+E390A,W140Y+E189P+G475K,W140Y+E189P+A185Q,W140Y+E18 9P+N194F,W140Y+Y242F+E259G,W140Y+Y242F+F266Y,W140Y+Y242F+N279 S,W140Y+Y242F+K280Y,W140Y+Y242F+G303R,W140Y+Y242F+E390A,W140Y +Y242F+G475K,W140Y+Y242F+A185Q,W140Y+Y242F+N194F,W140Y+E259G+ F266Y,W140Y+E259G+N279S,W140Y+E259G+K280Y,W140Y+E259G+G303R,W 140Y+E259G+E390A,W140Y+E259G+G475K,W140Y+E259G+A185Q,W140Y+E2 59G+N194F,W140Y+F266Y+N279S,W140Y+F266Y+K280Y,W140Y+F266Y+G30 3R,W140Y+F266Y+E390A,W140Y+F266Y+G475K,W140Y+F266Y+A185Q,W140 Y+F266Y+N194F,W140Y+N279S+K280Y,W140Y+N279S+G303R,W140Y+N279S +E390A,W140Y+N279S+G475K,W140Y+N279S+A185Q,W140Y+N279S+N194F, W140Y+K280Y+G303R,W140Y+K280Y+E390A,W140Y+K280Y+G475K,W140Y+K 280Y+A185Q,W140Y+K280Y+N194F,W140Y+G303R+E390A,W140Y+G303R+G4 75K,W140Y+G303R+A185Q,W140Y+G303R+N194F,W140Y+E390A+G475K,W14 0Y+E390A+A185Q,W140Y+E390A+N194F,W140Y+G475K+A185Q,W140Y+G475 K+N194F,W140Y+A185Q+N194F,T182S+A185D+E189P,T182S+A185D+Y242F ,T182S+A185D+E259G,T182S+A185D+F266Y,T182S+A185D+N279S,T182S+ A185D+K280Y,T182S+A185D+G303R,T182S+A185D+E390A,T182S+A185D+G 45K,T182S+A185D+A185Q,T182S+A185D+N194F,T182S+E189P+Y242F,T18 2S+E189P+E259G,T182S+E189P+F266Y,T182S+E189P+N279S,T182S+E189 P+K280Y,T182S+E189P+G303R,T182S+E189P+E390A,T182S+E189P+G475K ,T182S+E189P+A185Q,T182S+E189P+N194F,T182S+Y242F+E259G,T182S+ Y242F+F266Y,T182S+Y242F+N279S,T182S+Y242F+K280Y,T182S+Y242F+G 303R,T182S+Y242F+E390A,T182S+Y242F+G475K,T182S+Y242F+A185Q,T1 82S+Y242F+N194F,T182S+E259G+F266Y,T182S+E259G+N279S,T182S+E25 9G+K280Y,T182S+E259G+G303R,T182S+E259G+E390A,T182S+E259G+G475 K,T182S+E259G+A185Q,T182S+E259G+N194F,T182S+F266Y+N279S,T182S +F266Y+K280Y,T182S+F266Y+G303R,T182S+F266Y+E390A,T182S+F266Y+ G475K,T182S+F266Y+A185Q,T182S+F266Y+N194F,T182S+N279S+K280Y,T 182S+N279S+G303R,T182S+N279S+E390A,T182S+N279S+G475K,T182S+N2 79S+A185Q,T182S+N279S+N194F,T182S+K280Y+G303R,T182S+K280Y+E39 0A,T182S+K280Y+G475K,T182S+K280Y+A185Q,T182S+K280Y+N194F,T182 S+G303R+E390A,T182S+G303R+G475K,T182S+G303R+A185Q,T182S+G303R +N194F,T182S+E390A+G475K,T182S+E390A+A185Q,T182S+E390A+N194F, T182S+G475K+A185Q,T182S+G475K+N194F,T182S+A185Q+N194F,A185D+E 189P+Y242F,A185D+E189P+E259G,A185D+E189P+F266Y,A185D+E189P+N2 79S,A185D+E189P+K280Y,A185D+E189P+G303R,A185D+E189P+E390A,A18 5D+E189P+G475K,A185D+E189P+A185Q,A185D+E189P+N194F,A185D+Y242 F+E259G,A185D+Y242F+F266Y,A185D+Y242F+N279S,A185D+Y242F+K280Y ,A185D+Y242F+G303R,A185D+Y242F+E390A,A185D+Y242F+G475K,A185D+ Y242F+A185Q,A185D+Y242F+N194F,A185D+E259G+F266Y,A185D+E259G+N 279S,A185D+E259G+K280Y,A185D+E259G+G303R,A185D+E259G+E390A,A1 85D+E259G+G475K,A185D+E259G+A185Q,A185D+E259G+N194F,A185D+F26 6Y+N279S,A185D+F266Y+K280Y,A185D+F266Y+G303R,A185D+F266Y+E390 A,A185D+F266Y+G475K,A185D+F266Y+A185Q,A185D+F266Y+N194F,A185D +N279S+K280Y,A185D+N279S+G303R,A185D+N279S+E390A,A185D+N279S+ G475K,A185D+N279S+A185Q,A185D+N279S+N194F,A185D+K280Y+G303R,A 185D+K280Y+E390A,A185D+K280Y+G475K,A185D+K280Y+A185Q,A185D+K2 80Y+N194F,A185D+G303R+E390A,A185D+G303R+G475K,A185D+G303R+A18 5Q,A185D+G303R+N194F,A185D+E390A+G475K,A185D+E390A+A185Q,A185 D+E390A+N194F,A185D+G475K+A185Q,A185D+G475K+N194F,A185D+A185Q +N194F,E189P+Y242F+E259G,E189P+Y242F+F266Y,E189P+Y242F+N279S, E189P+Y242F+K280Y,E189P+Y242F+G303R,E189P+Y242F+E390A,E189P+Y 242F+G475K,E189P+Y242F+A185Q,E189P+Y242F+N194F,E189P+E259G+F2 66Y,E189P+E259G+N279S,E189P+E259G+K280Y,E189P+E259G+G303R,E18 9P+E259G+E390A,E189P+E259G+G475K,E189P+E259G+A185Q,E189P+E259 G+N194F,E189P+F266Y+N279S,E189P+F266Y+K280Y,E189P+F266Y+G303R ,E189P+F266Y+E390A,E189P+F266Y+G475K,E189P+F266Y+A185Q,E189P+ F266Y+N194F,E189P+N279S+K280Y,E189P+N279S+G303R,E189P+N279S+E 390A,E189P+N279S+G475K,E189P+N279S+A185Q,E189P+N279S+N194F,E1 89P+K280Y+G303R,E189P+K280Y+E390A,E189P+K280Y+G475K,E189P+K28 0Y+A185Q,E189P+K280Y+N194F,E189P+G303R+E390A,E189P+G303R+G475 K,E189P+G303R+A185Q,E189P+G303R+N194F,E189P+E390A+G475K,E189P +E390A+A185Q,E189P+E390A+N194F,E189P+G475K+A185Q,E189P+G475K+ N194F,E189P+A185Q+N194F,Y242F+E259G+F266Y,Y242F+E259G+N279S,Y 242F+E259G+K280Y,Y242F+E259G+G303R,Y242F+E259G+E390A,Y242F+E2 59G+G475K,Y242F+E259G+A185Q,Y242F+E259G+N194F,Y242F+F266Y+N27 9S,Y242F+F266Y+K280Y,Y242F+F266Y+G303R,Y242F+F266Y+E390A,Y242 F+F266Y+G475K,Y242F+F266Y+A185Q,Y242F+F266Y+N194F,Y242F+N279S +K280Y,Y242F+N279S+G303R,Y242F+N279S+E390A,Y242F+N279S+G475K, Y242F+N279S+A185Q,Y242F+N279S+N194F,Y242F+K280Y+G303R,Y242F+K 280Y+E390A,Y242F+K280Y+G475K,Y242F+K280Y+A185Q,Y242F+K280Y+N1 94F,Y242F+G303R+E390A,Y242F+G303R+G475K,Y242F+G303R+A185Q,Y24 2F+G303R+N194F,Y242F+E390A+G475K,Y242F+E390A+A185Q,Y242F+E390 A+N194F,Y242F+G475K+A185Q,Y242F+G475K+N194F,Y242F+A185Q+N194F ,E259G+F266Y+N279S,E259G+F266Y+K280Y,E259G+F266Y+G303R,E259G+ F266Y+E390A,E259G+F266Y+G475K,E259G+F266Y+A185Q,E259G+F266Y+N 194F,E259G+N279S+K280Y,E259G+N279S+G303R,E259G+N279S+E390A,E2 59G+N279S+G475K,E259G+N279S+A185Q,E259G+N279S+N194F,E259G+K28 0Y+G303R,E259G+K280Y+E390A,E259G+K280Y+G475K,E259G+K280Y+A185 Q,E259G+K280Y+N194F,E259G+G303R+E390A,E259G+G303R+G475K,E259G +G303R+A185Q,E259G+G303R+N194F,E259G+E390A+G475K,E259G+E390A+ A185Q,E259G+E390A+N194F,E259G+G475K+A185Q,E259G+G475K+N194F,E 259G+A185Q+N194F,F266Y+N279S+K280Y,F266Y+N279S+G303R,F266Y+N2 79S+E390A,F266Y+N279S+G475K,F266Y+N279S+A185Q,F266Y+N279S+N19 4F,F266Y+K280Y+G303R,F266Y+K280Y+E390A,F266Y+K280Y+G475K,F266 Y+K280Y+A185Q,F266Y+K280Y+N194F,F266Y+G303R+E390A,F266Y+G303R +G475K,F266Y+G303R+A185Q,F266Y+G303R+N194F,F266Y+E390A+G475K, F266Y+E390A+A185Q,F266Y+E390A+N194F,F266Y+G475K+A185Q,F266Y+G 475K+N194F,F266Y+A185Q+N194F,N279S+K280Y+G303R,N279S+K280Y+E3 90A,N279S+K280Y+G475K,N279S+K280Y+A185Q,N279S+K280Y+N194F,N27 9S+G303R+E390A,N279S+G303R+G475K,N279S+G303R+A185Q,N279S+G303 R+N194F,N279S+E390A+G475K,N279S+E390A+A185Q,N279S+E390A+N194F ,N279S+G475K+A185Q, N279S+G475K+N194F,N279S+A185Q+N194F,K280Y+G303R+E39 0A,K280Y+G303R+G475K,K280Y+G303R+A185Q,K280Y+G303R+N194F,K280 Y+E390A+G475K,K280Y+E390A+A185Q,K280Y+E390A+N194F,K280Y+G475K +A185Q,K280Y+G475K+N194F,K280Y+A185Q+N194F,G303R+E390A+G475K, G303R+E390A+A185Q,G303R+E390A+N194F,G303R+G475K+A185Q,G303R+G 475K+N194F,G303R+A185Q+N194F,E390A+G475K+A185Q,E390A+G475K+N1 94F,E390A+A185Q+N194F,G475K+A185Q+N194F, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0377] Em um aspecto, a invenção se relaciona com variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 1, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P, H1*+G7A+W140Y+Y242F, H1*+G7A+W140Y+E259G, H1*+G7A+W140Y+N279S, H1*+G7A+W140Y+K280Y, H1*+G7A+W140Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F,H1*+G7A+E189P+E259G,H1*+G7A+E189P+N279S,H 1*+G7A+E189P+K280Y,H1*+G7A+E189P+G303R,H1*+G7A+E189P+E390A,H1 *+G7A+Y242F+E259G,H1*+G7A+Y242F+N279S,H1*+G7A+Y242F+K280Y,H1* +G7A+Y242F+G303R,H1*+G7A+Y242F+E390A,H1*+G7A+E259G+N279S,H1*+ G7A+E259G+K280Y,H1*+G7A+E259G+G303R,H1*+G7A+E259G+E390A,H1*+G 7A+N279S+K280Y,H1*+G7A+N279S+G303R,H1*+G7A+N279S+E390A,H1*+G7 A+K280Y+G303R,H1*+G7A+K280Y+E390A,H1*+G7A+G303R+E390A,H1*+W14 0Y+E189P+Y242F,H1*+W140Y+E189P+E259G,H1*+W140Y+E189P+N279S,H1 *+W140Y+E189P+K280Y,H1*+W140Y+E189P+G303R,H1*+W140Y+E189P+E39 0A,H1*+W140Y+Y242F+E259G,H1*+W140Y+Y242F+N279S,H1*+W140Y+Y242 F+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+G303R,H1*+W140Y+Y242F+E390A,H1*+W140Y +E259G+N279S,H1*+W140Y+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E259G+G303R,H1*+ W140Y+E259G+E390A,H1*+W140Y+N279S+K280Y,H1*+W140Y+N279S+G303R ,H1*+W140Y+N279S+E390A,H1*+W140Y+K280Y+G303R,H1*+W140Y+K280Y+ E390A,H1*+W140Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G,H1*+E189P+Y 242F+N279S,H1*+E189P+Y242F+K280Y,H1*+E189P+Y242F+G303R,H1*+E1 89P+Y242F+E390A,H1*+E189P+E259G+N279S,H1*+E189P+E259G+K280Y,H 1*+E189P+E259G+G303R,H1*+E189P+E259G+E390A,H1*+E189P+N279S+K2 80Y,H1*+E189P+N279S+G303R,H1*+E189P+N279S+E390A,H1*+E189P+K28 0Y+G303R,H1*+E189P+K280Y+E390A,H1*+E189P+G303R+E390A,H1*+Y242 F+E259G+N279S,H1*+Y242F+E259G+K280Y,H1*+Y242F+E259G+G303R,H1* +Y242F+E259G+E390A,H1*+Y242F+N279S+K280Y,H1*+Y242F+N279S+G303 R,H1*+Y242F+N279S+E390A,H1*+Y242F+K280Y+G303R,H1*+Y242F+K280Y +E390A,H1*+Y242F+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y,H1*+E259G+ N279S+G303R,H1*+E259G+N279S+E390A,H1*+E259G+K280Y+G303R,H1*+E 259G+K280Y+E390A,H1*+E259G+G303R+E390A,H1*+N279S+K280Y+G303R, H1*+N279S+K280Y+E390A,H1*+N279S+G303R+E390A,H1*+K280Y+G303R+E 390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F,G7A+W140Y+E189P+E259G,G7A+W140Y+E1 89P+N279S,G7A+W140Y+E189P+K280Y,G7A+W140Y+E189P+G303R,G7A+W14 0Y+E189P+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E259G,G7A+W140Y+Y242F+N279S,G7 A+W140Y+Y242F+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E39 0A,G7A+W140Y+E259G+N279S,G7A+W140Y+E259G+K280Y,G7A+W140Y+E259 G+G303R,G7A+W140Y+E259G+E390A,G7A+W140Y+N279S+K280Y,G7A+W140Y +N279S+G303R,G7A+W140Y+N279S+E390A,G7A+W140Y+K280Y+G303R,G7A+ W140Y+K280Y+E390A,G7A+W140Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G ,G7A+E189P+Y242F+N279S,G7A+E189P+Y242F+K280Y,G7A+E189P+Y242F+ G303R,G7A+E189P+Y242F+E390A,G7A+E189P+E259G+N279S,G7A+E189P+E 259G+K280Y,G7A+E189P+E259G+G303R,G7A+E189P+E259G+E390A,G7A+E1 89P+N279S+K280Y,G7A+E189P+N279S+G303R,G7A+E189P+N279S+E390A,G 7A+E189P+K280Y+G303R,G7A+E189P+K280Y+E390A,G7A+E189P+G303R+E3 90A,G7A+Y242F+E259G+N279S,G7A+Y242F+E259G+K280Y,G7A+Y242F+E25 9G+G303R,G7A+Y242F+E259G+E390A,G7A+Y242F+N279S+K280Y,G7A+Y242 F+N279S+G303R,G7A+Y242F+N279S+E390A,G7A+Y242F+K280Y+G303R,G7A +Y242F+K280Y+E390A,G7A+Y242F+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280 Y,G7A+E259G+N279S+G303R,G7A+E259G+N279S+E390A,G7A+E259G+K280Y +G303R,G7A+E259G+K280Y+E390A,G7A+E259G+G303R+E390A,G7A+N279S+ K280Y+G303R,G7A+N279S+K280Y+E390A,G7A+N279S+G303R+E390A,G7A+K 280Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G,W140Y+E189P+Y242F+N2 79S,W140Y+E189P+Y242F+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+G303R,W140Y+E18 9P+Y242F+E390A,W140Y+E189P+E259G+N279S,W140Y+E189P+E259G+K280 Y,W140Y+E189P+E259G+G303R,W140Y+E189P+E259G+E390A,W140Y+E189P +N279S+K280Y,W140Y+E189P+N279S+G303R,W140Y+E189P+N279S+E390A, W140Y+E189P+K280Y+G303R,W140Y+E189P+K280Y+E390A,W140Y+E189P+G 303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N279S,W140Y+Y242F+E259G+K280Y,W1 40Y+Y242F+E259G+G303R,W140Y+Y242F+E259G+E390A,W140Y+Y242F+N27 9S+K280Y,W140Y+Y242F+N279S+G303R,W140Y+Y242F+N279S+E390A,W140 Y+Y242F+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+K280Y+E390A,W140Y+Y242F+G303R +E390A,W140Y+E259G+N279S+K280Y,W140Y+E259G+N279S+G303R,W140Y+ E259G+N279S+E390A,W140Y+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E259G+K280Y+E 390A,W140Y+E259G+G303R+E390A,W140Y+N279S+K280Y+G303R,W140Y+N2 79S+K280Y+E390A,W140Y+N279S+G303R+E390A,W140Y+K280Y+G303R+E39 0A,E189P+Y242F+E259G+N279S,E189P+Y242F+E259G+K280Y,E189P+Y242 F+E259G+G303R,E189P+Y242F+E259G+E390A,E189P+Y242F+N279S+K280Y ,E189P+Y242F+N279S+G303R,E189P+Y242F+N279S+E390A,E189P+Y242F+ K280Y+G303R,E189P+Y242F+K280Y+E390A,E189P+Y242F+G303R+E390A,E 189P+E259G+N279S+K280Y,E189P+E259G+N279S+G303R,E189P+E259G+N2 79S+E390A,E189P+E259G+K280Y+G303R,E189P+E259G+K280Y+E390A,E18 9P+E259G+G303R+E390A,E189P+N279S+K280Y+G303R,E189P+N279S+K280 Y+E390A,E189P+N279S+G303R+E390A,E189P+K280Y+G303R+E390A,Y242F +E259G+N279S+K280Y,Y242F+E259G+N279S+G303R,Y242F+E259G+N279S+ E390A,Y242F+E259G+K280Y+G303R,Y242F+E259G+K280Y+E390A,Y242F+E 259G+G303R+E390A,Y242F+N279S+K280Y+G303R,Y242F+N279S+K280Y+E3 90A,Y242F+N279S+G303R+E390A,Y242F+K280Y+G303R+E390A,E259G+N27 9S+K280Y+G303R,E259G+N279S+K280Y+E390A,E259G+N279S+G303R+E390 A,E259G+K280Y+G303R+E390A,N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0378] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 1, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S, H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y, H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S,H1*+G7A+W 140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G +E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R,H1 *+G7A+W140Y+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R,H1*+G7A+W14 0Y+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+ E259G,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S,H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y,H1* +G7A+E189P+Y242F+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A,H1*+G7A+E189 P+E259G+N279S,H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y,H1*+G7A+E189P+E259G+G 303R,H1*+G7A+E189P+E259G+E390A,H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y,H1*+ G7A+E189P+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+N279S+E390A,H1*+G7A+E189P +K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+G303R+E3 90A,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G 7A+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A,H1*+G7A+Y242F+ N279S+K280Y,H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R,H1*+G7A+Y242F+N279S+E39 0A,H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R,H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A,H1*+G7 A+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+E259G+N 279S+G303R,H1*+G7A+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+E259G+K280Y+G303 R,H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A +N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+N279S+G3 03R+E390A,H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E25 9G,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y,H1 *+W140Y+E189P+Y242F+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A,H1*+W14 0Y+E189P+E259G+N279S,H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E1 89P+E259G+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A,H1*+W140Y+E189P+N 279S+K280Y,H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R,H1*+W140Y+E189P+N279S+ E390A,H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A ,H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S,H1*+ W140Y+Y242F+E259G+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R,H1*+W140Y +Y242F+E259G+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,H1*+W140Y+Y242 F+N279S+G303R,H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A,H1*+W140Y+Y242F+K28 0Y+G303R,H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+G303R+E3 90A,H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R,H 1*+W140Y+E259G+N279S+E390A,H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R,H1*+W1 40Y+E259G+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A,H1*+W140Y+N 279S+K280Y+G303R,H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+N279S+ G303R+E390A,H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G +N279S,H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+E189P+Y242F+E259G+G303 R,H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1* +E189P+Y242F+N279S+G303R,H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A,H1*+E189 P+Y242F+K280Y+G303R,H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A,H1*+E189P+Y24 2F+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y,H1*+E189P+E259G+N2 79S+G303R,H1*+E189P+E259G+N279S+E390A,H1*+E189P+E259G+K280Y+G 303R,H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A,H1*+E189P+E259G+G303R+E390A, H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R,H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+E 189P+N279S+G303R+E390A,H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+ E259G+N279S+K280Y,H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+Y242F+E259G +N279S+E390A,H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+Y242F+E259G+K280 Y+E390A,H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1*+Y242F+N279S+K280Y+G30 3R,H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1 *+Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+E25 9G+N279S+K280Y+E390A,H1*+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+E259G+K2 80Y+G303R+E390A,H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y 242F+E259G,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S,G7A+W140Y+E189P+Y242F+ K280Y,G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A ,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S,G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y,G7A+ W140Y+E189P+E259G+G303R,G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A,G7A+W140Y +E189P+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189 P+N279S+E390A,G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+K28 0Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N2 79S,G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R,G 7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,G7A+W1 40Y+Y242F+N279S+G303R,G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A,G7A+W140Y+Y 242F+K280Y+G303R,G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y242F+ G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E259G+N279S +G303R,G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A,G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303 R,G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A,G7A +W140Y+N279S+K280Y+G303R,G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140 Y+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y24 2F+E259G+N279S,G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y,G7A+E189P+Y242F+E2 59G+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A,G7A+E189P+Y242F+N279S+K 280Y,G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R,G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A, G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A,G7A+E 189P+Y242F+G303R+E390A,G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y,G7A+E189P+ E259G+N279S+G303R,G7A+E189P+E259G+N279S+E390A,G7A+E189P+E259G +K280Y+G303R,G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A,G7A+E189P+E259G+G303 R+E390A,G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+N279S+K280Y+E39 0A,G7A+E189P+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A,G7 A+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R,G7A+Y24 2F+E259G+N279S+E390A,G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R,G7A+Y242F+E2 59G+K280Y+E390A,G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A,G7A+Y242F+N279S+K 280Y+G303R,G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+Y242F+N279S+G303R+ E390A,G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R ,G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+ E259G+K280Y+G303R+E390A,G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+N279S,W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,W140Y+E189 P+Y242F+E259G+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A,W140Y+E189P +Y242F+N279S+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R,W140Y+E189P+ Y242F+N279S+E390A,W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y 242F+K280Y+E390A,W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,W140Y+E189P+E2 59G+N279S+K280Y,W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,W140Y+E189P+E25 9G+N279S+E390A,W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E189P+E259 G+K280Y+E390A,W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,W140Y+E189P+N279S +K280Y+G303R,W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E189P+N279S+ G303R+E390A,W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N 279S+K280Y,W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R,W140Y+Y242F+E259G+N2 79S+E390A,W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+E259G+K28 0Y+E390A,W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A,W140Y+Y242F+N279S+K280 Y+G303R,W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A,W140Y+Y242F+N279S+G303R +E390A,W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E259G+N279S+K280Y+ G303R,W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E259G+N279S+G303R+E 390A,W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,W140Y+N279S+K280Y+G303R+E3 90A,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,E189P+Y242F+E259G+N279S+G30 3R,E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303 R,E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A ,E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R,E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A,E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,E 189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,E1 89P+E259G+N279S+G303R+E390A,E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A,E18 9P+N279S+K280Y+G303R+E390A,Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,Y242 F+E259G+N279S+K280Y+E390A,Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,Y242F +E259G+K280Y+G303R+E390A,Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,E259G+ N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0379] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 1, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G30 3R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+ N279S,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+E25 9G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+ N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E18 9P+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+ E189P+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A,H1*+G7A+W14 0Y+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+ W140Y+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A,H1*+G 7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R,H1 *+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R ,H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E3 90A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S +G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+K2 80Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G +G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+N2 79S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y +K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+E1 89P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A +E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1*+ G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A,H 1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390 A,H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K 280Y,H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+E259G+N279 S+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+E259G+K 280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+N279 S+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+N 279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242 F+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+Y 242F+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7 A+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1* +G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E39 0A,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+ E390A,H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E259G+K280Y+G30 3R+E390A,H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242 F+E259G+N279S,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+W1 40Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R ,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280 Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y24 2F+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E1 89P+E259G+N279S+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A,H1*+W 140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390 A,H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+N279S+K28 0Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+N2 79S+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+ W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G30 3R,H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+G3 03R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R,H1*+W140Y+Y242F+N 279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+W140Y+ Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1* +W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E3 90A,H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+N279S+K280Y+G 303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+E189P+Y242F+ E259G+N279S+G303R,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,H1*+E189P +Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1 *+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G 303R,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+ G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G +N279S+K280Y+G303R,H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+E189 P+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A,H 1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+ G303R,H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+Y242F+E259G+N279S +G303R+E390A,H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+N279 S+K280Y+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W14 0Y+E189P+Y242F+E259G+N279S,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G +E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E189P+Y242 F+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A,G7A+W140Y+E18 9P+Y242F+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A,G7A+W1 40Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y ,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279 S+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+E25 9G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,G7A+W140Y+E1 89P+N279S+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,G7A+W 140Y+E189P+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390 A,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N27 9S+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E2 59G+K280Y+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y 242F+E259G+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R,G7A+ W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E39 0A,G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+N279S+K2 80Y+G303R,G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E259G+N 279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+ N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A +E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E3 90A,G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+K 280Y+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+ N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+E189P +Y242F+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7 A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E 390A,G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+E259G+K280Y+ G303R+E390A,G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R,G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+Y242 F+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,G 7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+ E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+E 259G+N279S+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,W140Y+E1 89P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E39 0A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+N279 S+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E189P +Y242F+N279S+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,W140Y+E189P+E259G+N279S+K 280Y+E390A,W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A,W140Y+E189P+E2 59G+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,W14 0Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280 Y+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G +K280Y+G303R+E390A,W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,W140Y+ E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G 303R,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,E189P+Y242F+E259G+N2 79S+G303R+E390A,E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,E189P+Y24 2F+N279S+K280Y+G303R+E390A,E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390 A,Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0380] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 1, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0381] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 1, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N2 79S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A +W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242 F+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G30 3R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+ E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y +G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+ G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E 259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+ E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W14 0Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N2 79S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,H 1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242 F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G30 3R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+ E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G +N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390 A,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+ G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1* +W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y +G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1 *+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280 Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,G 7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+ Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K28 0Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F +E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K2 80Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E39 0A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0382] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 1, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W14 0Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K 280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+ E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G 7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K2 80Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0383] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 1, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E 390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0384] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 2, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+D118T, H1*+W140Y, H1*+T182S, H1*+A185D, H1*+E189P, H1*+Y242F, H1*+E259G, H1*+F266Y, H1*+N279S, H1*+K280Y, H1*+G303R, H1*+E390A, H1*+G475K, H1*+A185Q, H1*+N194F, D118T+W140Y, D118T+T182S, D118T+A185D, D118T+E189P, D118T+Y242F, D118T+E259G, D118T+F266Y, D118T+N279S,D118T+K280Y,D118T+G303R,D118T+E390A,D118T+G475K,D 118T+A185Q,D118T+N194F,W140Y+T182S,W140Y+A185D,W140Y+E189P,W1 40Y+Y242F,W140Y+E259G,W140Y+F266Y,W140Y+N279S,W140Y+K280Y,W14 0Y+G303R,W140Y+E390A,W140Y+G475K,W140Y+A185Q,W140Y+N194F,T182 S+A185D,T182S+E189P,T182S+Y242F,T182S+E259G,T182S+F266Y,T182S +N279S,T182S+K280Y,T182S+G303R,T182S+E390A,T182S+G475K,T182S+ A185Q,T182S+N194F,A185D+E189P,A185D+Y242F,A185D+E259G,A185D+F 266Y,A185D+N279S,A185D+K280Y,A185D+G303R,A185D+E390A,A185D+G4 75K,A185D+A185Q,A185D+N194F,E189P+Y242F,E189P+E259G,E189P+F26 6Y,E189P+N279S,E189P+K280Y,E189P+G303R,E189P+E390A,E189P+G475 K,E189P+A185Q,E189P+N194F,Y242F+E259G,Y242F+F266Y,Y242F+N279S ,Y242F+K280Y,Y242F+G303R,Y242F+E390A,Y242F+G475K,Y242F+A185Q, Y242F+N194F,E259G+F266Y,E259G+N279S,E259G+K280Y,E259G+G303R,E 259G+E390A,E259G+G475K,E259G+A185Q,E259G+N194F,F266Y+N279S,F2 66Y+K280Y,F266Y+G303R,F266Y+E390A,F266Y+G475K,F266Y+A185Q,F26 6Y+N194F,N279+K280Y,N279S+G303R,N279S+E390A,N279S+G475K,N279S +A185Q,N279S+N194F,K280Y+G303R,K280Y+E390A,K280Y+G475K,K280Y+ A185Q,K280Y+N194F,G303R+E390A,G303R+G475K,G303R+A185Q,G303R+N 194F,E390A+G475K,E390A+A185Q,E390A+N194F,G475K+A185Q,G475K+N1 94F, A185Q+N194F, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0385] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 2, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+D118T+W140Y, H1*+D118T+T182S, H1*+D118T+A185D, H1*+D118T+E189P, H1*+D118T+Y242F, H1*+D118T+E259G, H1*+D118T+F266Y, H1*+D118T+N279S, H1*+D118T+K280Y, H1*+D118T+G303R, H1*+D118T+E390A, H1*+D118T+G475K, H1*+D118T+A185Q, H1*+D118T+N194F, H1*+W140Y+T182S, H1*+W140Y+A185D, H1*+W140Y+E189P, H1*+W140Y+Y242F, H1*+W140Y+E259G, H1*+W140Y+F266Y,H1*+W140Y+N279S,H1*+W140Y+K280Y,H1*+W140Y+G30 3R,H1*+W140Y+E390A,H1*+W140Y+G475K,H1*+W140Y+A185Q,H1*+W140Y+ N194F,H1*+T182S+A185D,H1*+T182S+E189P,H1*+T182S+Y242F,H1*+T18 2S+E259G,H1*+T182S+F266Y,H1*+T182S+N279S,H1*+T182S+K280Y,H1*+ T182S+G303R,H1*+T182S+E390A,H1*+T182S+G475K,H1*+T182S+A185Q,H 1*+T182S+N194F,H1*+A185D+E189P,H1*+A185D+Y242F,H1*+A185D+E259 G,H1*+A185D+F266Y,H1*+A185D+N279S,H1*+A185D+K280Y,H1*+A185D+G 303R,H1*+A185D+E390A,H1*+A185D+G475K,H1*+A185D+A185Q,H1*+A185 D+N194F,H1*+E189P+Y242F,H1*+E189P+E259G,H1*+E189P+F266Y,H1*+E 189P+N279S,H1*+E189P+K280Y,H1*+E189P+G303R,H1*+E189P+E390A,H1 *+E189P+G475K,H1*+E189P+A185Q,H1*+E189P+N194F,H1*+Y242F+E259G ,H1*+Y242F+F266Y,H1*+Y242F+N279S,H1*+Y242F+K280Y,H1*+Y242F+G3 03R,H1*+Y242F+E390A,H1*+Y242F+G475K,H1*+Y242F+A185Q,H1*+Y242F +N194F,H1*+E259G+F266Y,H1*+E259G+N279S,H1*+E259G+K280Y,H1*+E2 5 9G+G3 0 3R, H1*+E2 5 9G+E3 90A,H1*+E2 5 9G+G4 7 5K,H1*+E2 5 9G+A18 5Q,H1* +E259G+N194F,H1*+F266Y+N279S,H1*+F266Y+K280Y,H1*+F266Y+G303R, H1*+F266Y+E390A,H1*+F266Y+G475K,H1*+F266Y+A185Q,H1*+F266Y+N19 4F,H1*+N279S+K280Y,H1*+N279S+G303R,H1*+N279S+E390A,H1*+N279S+ G475K,H1*+N279S+A185Q,H1*+N279S+N194F,H1*+K280Y+G303R,H1*+K28 0Y+E390A,H1*+K280Y+G475K,H1*+K280Y+A185Q,H1*+K280Y+N194F,H1*+ G3 03R+E3 90A,H1*+G3 03R+G4 7 5K,H1* + G3 03R+A18 5Q,H1*+G3 03R+N19 4F, H 1*+E390A+G475K,H1*+E390A+A185Q,H1*+E390A+N194F,H1*+G475K+A185 Q,H1*+G475K+N194F,H1*+A185Q+N194F,D118T+W140Y+T182S,D118T+W14 0Y+A185D,D118T+W140Y+E189P,D118T+W140Y+Y242F,D118T+W140Y+E259 G,D118T+W140Y+F266Y,D118T+W140Y+N279S,D118T+W140Y+K280Y,D118T +W140Y+G303R,D118T+W140Y+E390A,D118T+W140Y+G475K,D118T+W140Y+ A185Q,D118T+W140Y+N194F,D118T+T182S+A185D,D118T+T182S+E189P,D 118T+T182S+Y242F,D118T+T182S+E259G,D118T+T182S+F266Y,D118T+T1 82S+N279S,D118T+T182S+K280Y,D118T+T182S+G303R,D118T+T182S+E39 0A,D118T+T182S+G475K,D118T+T182S+A185Q,D118T+T182S+N194F,D118 T+A185D+E189P,D118T+A185D+Y242F,D118T+A185D+E259G,D118T+A185D +F266Y,D118T+A185D+N279S,D118T+A185D+K280Y,D118T+A185D+G303R, D118T+A185D+E390A,D118T+A185D+G475K,D118T+A185D+A185Q,D118T+A 185D+N194F,D118T+E189P+Y242F,D118T+E189P+E259G,D118T+E189P+F2 66Y,D118T+E189P+N279S,D118T+E189P+K280Y,D118T+E189P+G303R,D11 8T+E189P+E390A,D118T+E189P+G475K,D118T+E189P+A185Q,D118T+E189 P+N194F,D118T+Y242F+E259G,D118T+Y242F+F266Y,D118T+Y242F+N279S ,D118T+Y242F+K280Y,D118T+Y242F+G303R,D118T+Y242F+E390A,D118T+ Y242F+G475K,D118T+Y242F+A185Q,D118T+Y242F+N194F,D118T+E259G+F 266Y,D118T+E259G+N279S,D118T+E259G+K280Y,D118T+E259G+G303R,D1 18T+E259G+E390A,D118T+E259G+G475K,D118T+E259G+A185Q,D118T+E25 9G+N194F,D118T+F266Y+N279S,D118T+F266Y+K280Y,D118T+F266Y+G303 R,D118T+F266Y+E390A,D118T+F266Y+G475K,D118T+F266Y+A185Q,D118T +F266Y+N194F,D118T+N279S+K280Y,D118T+N279S+G303R,D118T+N279S+ E3 90A,D118T+N2 7 9S+G4 7 5K,D118T+N2 7 9S+A18 5Q,D118T+N2 7 9S+N19 4F, D 118T+K280Y+G303R,D118T+K280Y+E390A,D118T+K280Y+G475K,D118T+K2 80Y+A185Q,D118T+K280Y+N194F,D118T+G303R+E390A,D118T+G303R+G47 5K,D118T+G303R+A185Q,D118T+G303R+N194F,D118T+E390A+G475K,D118 T+E390A+A185Q,D118T+E390A+N194F,D118T+G475K+A185Q,D118T+G475K +N194F,D118T+A185Q+N194F,W140Y+T182S+A185D,W140Y+T182S+E189P, W140Y+T182S+Y242F,W140Y+T182S+E259G,W140Y+T182S+F266Y,W140Y+T 182S+N279S,W140Y+T182S+K280Y,W140Y+T182S+G303R,W140Y+T182S+E3 90A,W140Y+T182S+G475K,W140Y+T182S+A185Q,W140Y+T182S+N194F,W14 0Y+A185D+E189P,W140Y+A185D+Y242F,W140Y+A185D+E259G,W140Y+A185 D+F266Y,W140Y+A185D+N279S,W140Y+A185D+K280Y,W140Y+A185D+G303R ,W140Y+A185D+E390A,W140Y+A185D+G475K,W140Y+A185D+A185Q,W140Y+ A185D+N194F,W140Y+E189P+Y242F,W140Y+E189P+E259G,W140Y+E189P+F 266Y,W140Y+E189P+N279S,W140Y+E189P+K280Y,W140Y+E189P+G303R,W1 40Y+E189P+E390A,W140Y+E189P+G475K,W140Y+E189P+A185Q,W140Y+E18 9P+N194F,W140Y+Y242F+E259G,W140Y+Y242F+F266Y,W140Y+Y242F+N279 S,W140Y+Y242F+K280Y,W140Y+Y242F+G303R,W140Y+Y242F+E390A,W140Y +Y242F+G475K,W140Y+Y242F+A185Q,W140Y+Y242F+N194F,W140Y+E259G+ F266Y,W140Y+E259G+N279S,W140Y+E259G+K280Y,W140Y+E259G+G303R,W 140Y+E259G+E390A,W140Y+E259G+G475K,W140Y+E259G+A185Q,W140Y+E2 59G+N194F,W140Y+F266Y+N279S,W140Y+F266Y+K280Y,W140Y+F266Y+G30 3R,W140Y+F266Y+E390A,W140Y+F266Y+G475K,W140Y+F266Y+A185Q,W140 Y+F266Y+N194F,W140Y+N279S+K280Y,W140Y+N279S+G303R,W140Y+N279S +E390A,W140Y+N279S+G475K,W140Y+N279S+A185Q,W140Y+N279S+N194F, W140Y+K280Y+G303R,W140Y+K280Y+E390A,W140Y+K280Y+G475K,W140Y+K 280Y+A185Q,W140Y+K280Y+N194F,W140Y+G303R+E390A,W140Y+G303R+G4 75K,W140Y+G303R+A185Q,W140Y+G303R+N194F,W140Y+E390A+G475K,W14 0Y+E390A+A185Q,W140Y+E390A+N194F,W140Y+G475K+A185Q,W140Y+G475 K+N194F,W140Y+A185Q+N194F,T182S+A185D+E189P,T182S+A185D+Y242F ,T182S+A185D+E259G,T182S+A185D+F266Y,T182S+A185D+N279S,T182S+ A185D+K280Y,T182S+A185D+G303R,T182S+A185D+E390A,T182S+A185D+G 45K,T182S+A185D+A185Q,T182S+A185D+N194F,T182S+E189P+Y242F,T18 2S+E189P+E259G,T182S+E189P+F266Y,T182S+E189P+N279S,T182S+E189 P+K280Y,T182S+E189P+G303R,T182S+E189P+E390A,T182S+E189P+G475K ,T182S+E189P+A185Q,T182S+E189P+N194F,T182S+Y242F+E259G,T182S+ Y242F+F266Y,T182S+Y242F+N279S,T182S+Y242F+K280Y,T182S+Y242F+G 303R,T182S+Y242F+E390A,T182S+Y242F+G475K,T182S+Y242F+A185Q,T1 82S+Y242F+N194F,T182S+E259G+F266Y,T182S+E259G+N279S,T182S+E25 9G+K280Y,T182S+E259G+G303R,T182S+E259G+E390A,T182S+E259G+G475 K,T182S+E259G+A185Q,T182S+E259G+N194F,T182S+F266Y+N279S,T182S +F266Y+K280Y,T182S+F266Y+G303R,T182S+F266Y+E390A,T182S+F266Y+ G475K,T182S+F266Y+A185Q,T182S+F266Y+N194F,T182S+N279S+K280Y,T 182S+N279S+G303R,T182S+N279S+E390A,T182S+N279S+G475K,T182S+N2 79S+A185Q,T182S+N279S+N194F,T182S+K280Y+G303R,T182S+K280Y+E39 0A,T182S+K280Y+G475K,T182S+K280Y+A185Q,T182S+K280Y+N194F,T182 S+G303R+E390A,T182S+G303R+G475K,T182S+G303R+A185Q,T182S+G303R +N194F,T182S+E390A+G475K,T182S+E390A+A185Q,T182S+E390A+N194F, T182S+G475K+A185Q,T182S+G475K+N194F,T182S+A185Q+N194F,A185D+E 189P+Y242F,A185D+E189P+E259G,A185D+E189P+F266Y,A185D+E189P+N2 79S,A185D+E189P+K280Y,A185D+E189P+G303R,A185D+E189P+E390A,A18 5D+E189P+G475K,A185D+E189P+A185Q,A185D+E189P+N194F,A185D+Y242 F+E259G,A185D+Y242F+F266Y,A185D+Y242F+N279S,A185D+Y242F+K280Y ,A185D+Y242F+G303R,A185D+Y242F+E390A,A185D+Y242F+G475K,A185D+ Y242F+A185Q,A185D+Y242F+N194F,A185D+E259G+F266Y,A185D+E259G+N 279S,A185D+E259G+K280Y,A185D+E259G+G303R,A185D+E259G+E390A,A1 85D+E259G+G475K,A185D+E259G+A185Q,A185D+E259G+N194F,A185D+F26 6Y+N279S,A185D+F266Y+K280Y,A185D+F266Y+G303R,A185D+F266Y+E390 A,A185D+F266Y+G475K,A185D+F266Y+A185Q,A185D+F266Y+N194F,A185D +N279S+K280Y,A185D+N279S+G303R,A185D+N279S+E390A,A185D+N279S+ G475K,A185D+N279S+A185Q,A185D+N279S+N194F,A185D+K280Y+G303R,A 185D+K280Y+E390A,A185D+K280Y+G475K,A185D+K280Y+A185Q,A185D+K2 80Y+N194F,A185D+G303R+E390A,A185D+G303R+G475K,A185D+G303R+A18 5Q,A185D+G303R+N194F,A185D+E390A+G475K,A185D+E390A+A185Q,A185 D+E390A+N194F,A185D+G475K+A185Q,A185D+G475K+N194F,A185D+A185Q +N194F,E189P+Y242F+E259G,E189P+Y242F+F266Y,E189P+Y242F+N279S, E189P+Y242F+K280Y,E189P+Y242F+G303R,E189P+Y242F+E390A,E189P+Y 242F+G475K,E189P+Y242F+A185Q,E189P+Y242F+N194F,E189P+E259G+F2 66Y,E189P+E259G+N279S,E189P+E259G+K280Y,E189P+E259G+G303R,E18 9P+E259G+E390A,E189P+E259G+G475K,E189P+E259G+A185Q,E189P+E259 G+N194F,E189P+F266Y+N279S,E189P+F266Y+K280Y,E189P+F266Y+G303R ,E189P+F266Y+E390A,E189P+F266Y+G475K,E189P+F266Y+A185Q,E189P+ F266Y+N194F,E189P+N279S+K280Y,E189P+N279S+G303R,E189P+N279S+E 390A,E189P+N279S+G475K,E189P+N279S+A185Q,E189P+N279S+N194F,E1 89P+K280Y+G303R,E189P+K280Y+E390A,E189P+K280Y+G475K,E189P+K28 0Y+A185Q,E189P+K280Y+N194F,E189P+G303R+E390A,E189P+G303R+G475 K,E189P+G303R+A185Q,E189P+G303R+N194F,E189P+E390A+G475K,E189P +E390A+A185Q,E189P+E390A+N194F,E189P+G475K+A185Q,E189P+G475K+ N194F,E189P+A185Q+N194F,Y242F+E259G+F266Y,Y242F+E259G+N279S,Y 242F+E259G+K280Y,Y242F+E259G+G303R,Y242F+E259G+E390A,Y242F+E2 59G+G475K,Y242F+E259G+A185Q,Y242F+E259G+N194F,Y242F+F266Y+N27 9S,Y242F+F266Y+K280Y,Y242F+F266Y+G303R,Y242F+F266Y+E390A,Y242 F+F266Y+G475K,Y242F+F266Y+A185Q,Y242F+F266Y+N194F, Y242F+N279S +K280Y,Y242F+N279S+G303R,Y242F+N279S+E390A,Y242F+N279S+G475K, Y242F+N279S+A185Q,Y242F+N279S+N194F,Y242F+K280Y+G303R,Y242F+K 280Y+E390A,Y242F+K280Y+G475K,Y242F+K280Y+A185Q,Y242F+K280Y+N1 94F,Y242F+G303R+E390A,Y242F+G303R+G475K,Y242F+G303R+A185Q,Y24 2F+G303R+N194F,Y242F+E390A+G475K,Y242F+E390A+A185Q,Y242F+E390 A+N194F,Y242F+G475K+A185Q,Y242F+G475K+N194F,Y242F+A185Q+N194F ,E2 5 9G+F2 6 6Y+N2 7 9S,E2 5 9G+F2 6 6Y+K2 8 0Y,E2 5 9G+F2 6 6Y+G3 0 3R, E2 5 9G+ F266Y+E390A,E259G+F266Y+G475K,E259G+F266Y+A185Q,E259G+F266Y+N 194F,E259G+N279S+K280Y,E259G+N279S+G303R,E259G+N279S+E390A,E2 59G+N279S+G475K,E259G+N279S+A185Q,E259G+N279S+N194F,E259G+K28 0Y+G303R,E259G+K280Y+E390A,E259G+K280Y+G475K,E259G+K280Y+A185 Q,E259G+K280Y+N194F,E259G+G303R+E390A,E259G+G303R+G475K,E259G +G303R+A185Q,E259G+G303R+N194F,E259G+E390A+G475K,E259G+E390A+ A185Q,E259G+E390A+N194F,E259G+G475K+A185Q,E259G+G475K+N194F,E 259G+A185Q+N194F,F266Y+N279S+K280Y,F266Y+N279S+G303R,F266Y+N2 79S+E390A,F266Y+N279S+G475K,F266Y+N279S+A185Q,F266Y+N279S+N19 4F,F266Y+K280Y+G303R,F266Y+K280Y+E390A,F266Y+K280Y+G475K,F266 Y+K280Y+A185Q,F266Y+K280Y+N194F,F266Y+G303R+E390A,F266Y+G303R +G475K,F266Y+G303R+A185Q,F266Y+G303R+N194F,F266Y+E390A+G475K, F266Y+E390A+A185Q,F266Y+E390A+N194F,F266Y+G475K+A185Q,F266Y+G 475K+N194F,F266Y+A185Q+N194F,N279S+K280Y+G303R,N279S+K280Y+E3 90A,N279S+K280Y+G475K,N279S+K280Y+A185Q,N279S+K280Y+N194F,N27 9S+G303R+E390A,N279S+G303R+G475K,N279S+G303R+A185Q,N279S+G303 R+N194F,N279S+E390A+G475K,N279S+E390A+A185Q,N279S+E390A+N194F ,N279S+G475K+A185Q, N279S+G475K+N194F,N279S+A185Q+N194F,K280Y+G303R+E39 0A,K280Y+G303R+G475K,K280Y+G303R+A185Q,K280Y+G303R+N194F,K280 Y+E390A+G475K,K280Y+E390A+A185Q,K280Y+E390A+N194F,K280Y+G475K +A185Q,K280Y+G475K+N194F,K280Y+A185Q+N194F,G303R+E390A+G475K, G303R+E390A+A185Q,G303R+E390A+N194F,G303R+G475K+A185Q,G303R+G 475K+N194F,G303R+A185Q+N194F,E390A+G475K+A185Q,E390A+G475K+N1 94F,E390A+A185Q+N194F,G475K+A185Q+N194F, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0386] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 2, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P, H1*+G7A+W140Y+Y242F, H1*+G7A+W140Y+E259G, H1*+G7A+W140Y+N279S, H1*+G7A+W140Y+K280Y, H1*+G7A+W140Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F,H1*+G7A+E189P+E259G,H1*+G7A+E189P+N279S,H 1*+G7A+E189P+K280Y,H1*+G7A+E189P+G303R,H1*+G7A+E189P+E390A,H1 *+G7A+Y242F+E259G,H1*+G7A+Y242F+N279S,H1*+G7A+Y242F+K280Y,H1* +G7A+Y242F+G303R,H1*+G7A+Y242F+E390A,H1*+G7A+E259G+N279S,H1*+ G7A+E259G+K280Y,H1*+G7A+E259G+G303R,H1*+G7A+E259G+E390A,H1*+G 7A+N279S+K280Y,H1*+G7A+N279S+G303R,H1*+G7A+N279S+E390A,H1*+G7 A+K280Y+G303R,H1*+G7A+K280Y+E390A,H1*+G7A+G303R+E390A,H1*+W14 0Y+E189P+Y242F,H1*+W140Y+E189P+E259G,H1*+W140Y+E189P+N279S,H1 *+W140Y+E189P+K280Y,H1*+W140Y+E189P+G303R,H1*+W140Y+E189P+E39 0A,H1*+W140Y+Y242F+E259G,H1*+W140Y+Y242F+N279S,H1*+W140Y+Y242 F+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+G303R,H1*+W140Y+Y242F+E390A,H1*+W140Y +E259G+N279S,H1*+W140Y+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E259G+G303R,H1*+ W140Y+E259G+E390A,H1*+W140Y+N279S+K280Y,H1*+W140Y+N279S+G303R ,H1*+W140Y+N279S+E390A,H1*+W140Y+K280Y+G303R,H1*+W140Y+K280Y+ E390A,H1*+W140Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G,H1*+E189P+Y 242F+N279S,H1*+E189P+Y242F+K280Y,H1*+E189P+Y242F+G303R, H1*+E1 89P+Y242F+E390A,H1*+E189P+E259G+N279S,H1*+E189P+E259G+K280Y,H 1*+E189P+E259G+G303R,H1*+E189P+E259G+E390A,H1*+E189P+N279S+K2 80Y,H1*+E189P+N279S+G303R,H1*+E189P+N279S+E390A,H1*+E189P+K28 0Y+G303R,H1*+E189P+K280Y+E390A,H1*+E189P+G303R+E390A,H1*+Y242 F+E259G+N279S,H1*+Y242F+E259G+K280Y,H1*+Y242F+E259G+G303R,H1* +Y242F+E259G+E390A,H1*+Y242F+N279S+K280Y,H1*+Y242F+N279S+G303 R,H1*+Y242F+N279S+E390A,H1*+Y242F+K280Y+G303R,H1*+Y242F+K280Y +E390A,H1*+Y242F+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y,H1*+E259G+ N279S+G303R,H1*+E259G+N279S+E390A,H1*+E259G+K280Y+G303R,H1*+E 259G+K280Y+E390A,H1*+E259G+G303R+E390A,H1*+N279S+K280Y+G303R, H1*+N279S+K280Y+E390A,H1*+N279S+G303R+E390A,H1*+K280Y+G303R+E 390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F,G7A+W140Y+E189P+E259G,G7A+W140Y+E1 89P+N279S,G7A+W140Y+E189P+K280Y,G7A+W140Y+E189P+G303R,G7A+W14 0Y+E189P+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E259G,G7A+W140Y+Y242F+N279S,G7 A+W140Y+Y242F+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E39 0A,G7A+W140Y+E259G+N279S,G7A+W140Y+E259G+K280Y,G7A+W140Y+E259 G+G303R,G7A+W140Y+E259G+E390A,G7A+W140Y+N279S+K280Y,G7A+W140Y +N279S+G303R,G7A+W140Y+N279S+E390A,G7A+W140Y+K280Y+G303R,G7A+ W140Y+K280Y+E390A,G7A+W140Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G ,G7A+E189P+Y242F+N279S,G7A+E189P+Y242F+K280Y,G7A+E189P+Y242F+ G303R,G7A+E189P+Y242F+E390A,G7A+E189P+E259G+N279S,G7A+E189P+E 259G+K280Y,G7A+E189P+E259G+G303R,G7A+E189P+E259G+E390A,G7A+E1 89P+N279S+K280Y,G7A+E189P+N279S+G303R,G7A+E189P+N279S+E390A,G 7A+E189P+K280Y+G303R,G7A+E189P+K280Y+E390A,G7A+E189P+G303R+E3 90A,G7A+Y242F+E259G+N279S,G7A+Y242F+E259G+K280Y,G7A+Y242F+E25 9G+G303R,G7A+Y242F+E259G+E390A,G7A+Y242F+N279S+K280Y,G7A+Y242 F+N279S+G303R,G7A+Y242F+N279S+E390A,G7A+Y242F+K280Y+G303R,G7A +Y242F+K280Y+E390A,G7A+Y242F+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280 Y,G7A+E259G+N279S+G303R,G7A+E259G+N279S+E390A,G7A+E259G+K280Y +G303R,G7A+E259G+K280Y+E390A,G7A+E259G+G303R+E390A,G7A+N279S+ K280Y+G303R,G7A+N279S+K280Y+E390A,G7A+N279S+G303R+E390A,G7A+K 280Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G,W140Y+E189P+Y242F+N2 79S,W140Y+E189P+Y242F+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+G303R,W140Y+E18 9P+Y242F+E390A,W140Y+E189P+E259G+N279S,W140Y+E189P+E259G+K280 Y,W140Y+E189P+E259G+G303R,W140Y+E189P+E259G+E390A,W140Y+E189P +N279S+K280Y,W140Y+E189P+N279S+G303R,W140Y+E189P+N279S+E390A, W140Y+E189P+K280Y+G303R,W140Y+E189P+K280Y+E390A,W140Y+E189P+G 303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N279S,W140Y+Y242F+E259G+K280Y,W1 40Y+Y242F+E259G+G303R,W140Y+Y242F+E259G+E390A,W140Y+Y242F+N27 9S+K280Y,W140Y+Y242F+N279S+G303R,W140Y+Y242F+N279S+E390A,W140 Y+Y242F+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+K280Y+E390A,W140Y+Y242F+G303R +E390A,W140Y+E259G+N279S+K280Y,W140Y+E259G+N279S+G303R,W140Y+ E259G+N279S+E390A,W140Y+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E259G+K280Y+E 390A,W140Y+E259G+G303R+E390A,W140Y+N279S+K280Y+G303R,W140Y+N2 79S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A,W140Y+K280Y+G303R+E390 A,E189P+Y242F+E259G+N279S,E189P+Y242F+E259G+K280Y,E189P+Y242F +E259G+G303R,E189P+Y242F+E259G+E390A,E189P+Y242F+N279S+K280Y, E189P+Y242F+N279S+G303R,E189P+Y242F+N279S+E390A,E189P+Y242F+K 280Y+G303R,E189P+Y242F+K280Y+E390A,E189P+Y242F+G303R+E390A,E1 89P+E259G+N279S+K280Y,E189P+E259G+N279S+G303R,E189P+E259G+N27 9S+E390A,E189P+E259G+K280Y+G303R,E189P+E259G+K280Y+E390A,E189 P+E259G+G303R+E390A,E189P+N279S+K280Y+G303R,E189P+N279S+K280Y +E390A,E189P+N279S+G303R+E390A,E189P+K280Y+G303R+E390A,Y242F+ E259G+N279S+K280Y,Y242F+E259G+N279S+G303R,Y242F+E259G+N279S+E 390A,Y242F+E259G+K280Y+G303R,Y242F+E259G+K280Y+E390A,Y242F+E2 59G+G303R+E390A,Y242F+N279S+K280Y+G303R,Y242F+N279S+K280Y+E39 0A,Y242F+N279S+G303R+E390A,Y242F+K280Y+G303R+E390A,E259G+N279 S+K280Y+G303R,E259G+N279S+K280Y+E390A,E259G+N279S+G303R+E390A ,E259G+K280Y+G303R+E390A,N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0387] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 2, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S, H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y, H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S,H1*+G7A+W 140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G +E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R,H1 *+G7A+W140Y+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R,H1*+G7A+W14 0Y+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+ E259G,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S,H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y,H1* +G7A+E189P+Y242F+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A,H1*+G7A+E189 P+E259G+N279S,H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y,H1*+G7A+E189P+E259G+G 303R,H1*+G7A+E189P+E259G+E390A,H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y,H1*+ G7A+E189P+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+N279S+E390A,H1*+G7A+E189P +K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+G303R+E3 90A,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G 7A+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A,H1*+G7A+Y242F+ N279S+K280Y,H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R,H1*+G7A+Y242F+N279S+E39 0A,H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R,H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A,H1*+G7 A+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+E259G+N 279S+G303R,H1*+G7A+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+E259G+K280Y+G303 R,H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A +N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+N279S+G3 03R+E390A,H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E25 9G,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y,H1 *+W140Y+E189P+Y242F+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A,H1*+W14 0Y+E189P+E259G+N279S,H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E1 89P+E259G+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A,H1*+W140Y+E189P+N 279S+K280Y,H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R,H1*+W140Y+E189P+N279S+ E390A,H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A ,H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S,H1*+ W140Y+Y242F+E259G+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R,H1*+W140Y +Y242F+E259G+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,H1*+W140Y+Y242 F+N279S+G303R,H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A,H1*+W140Y+Y242F+K28 0Y+G303R,H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+G303R+E3 90A,H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R,H 1*+W140Y+E259G+N279S+E390A,H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R,H1*+W1 40Y+E259G+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A,H1*+W140Y+N 279S+K280Y+G303R,H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+N279S+ G303R+E390A,H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G +N279S,H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+E189P+Y242F+E259G+G303 R,H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1* +E189P+Y242F+N279S+G303R,H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A,H1*+E189 P+Y242F+K280Y+G303R,H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A,H1*+E189P+Y24 2F+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y,H1*+E189P+E259G+N2 79S+G303R,H1*+E189P+E259G+N279S+E390A,H1*+E189P+E259G+K280Y+G 303R,H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A,H1*+E189P+E259G+G303R+E390A, H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R,H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+E 189P+N279S+G303R+E390A,H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+ E259G+N279S+K280Y,H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+Y242F+E259G +N279S+E390A,H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+Y242F+E259G+K280 Y+E390A,H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1*+Y242F+N279S+K280Y+G30 3R,H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1 *+Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+E25 9G+N279S+K280Y+E390A,H1*+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+E259G+K2 80Y+G303R+E390A,H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y 242F+E259G,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S,G7A+W140Y+E189P+Y242F+ K280Y,G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A ,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S,G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y,G7A+ W140Y+E189P+E259G+G303R,G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A,G7A+W140Y +E189P+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189 P+N279S+E390A,G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+K28 0Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N2 79S,G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R,G 7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,G7A+W1 40Y+Y242F+N279S+G303R,G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A,G7A+W140Y+Y 242F+K280Y+G303R,G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y242F+ G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E259G+N279S +G303R,G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A,G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303 R,G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A,G7A +W140Y+N279S+K280Y+G303R,G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140 Y+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y24 2F+E259G+N279S,G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y,G7A+E189P+Y242F+E2 59G+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A,G7A+E189P+Y242F+N279S+K 280Y,G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R,G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A, G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A,G7A+E 189P+Y242F+G303R+E390A,G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y,G7A+E189P+ E259G+N279S+G303R,G7A+E189P+E259G+N279S+E390A,G7A+E189P+E259G +K280Y+G303R,G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A,G7A+E189P+E259G+G303 R+E390A,G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+N279S+K280Y+E39 0A,G7A+E189P+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A,G7 A+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R,G7A+Y24 2F+E259G+N279S+E390A,G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R,G7A+Y242F+E2 59G+K280Y+E390A,G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A,G7A+Y242F+N279S+K 280Y+G303R,G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+Y242F+N279S+G303R+ E390A,G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R ,G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+ E259G+K280Y+G303R+E390A,G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+N279S,W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,W140Y+E189 P+Y242F+E259G+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A,W140Y+E189P +Y242F+N279S+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R,W140Y+E189P+ Y242F+N279S+E390A,W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y 242F+K280Y+E390A,W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,W140Y+E189P+E2 59G+N279S+K280Y,W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,W140Y+E189P+E25 9G+N279S+E390A,W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E189P+E259 G+K280Y+E390A,W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,W140Y+E189P+N279S +K280Y+G303R,W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E189P+N279S+ G303R+E390A,W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N 279S+K280Y,W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R,W140Y+Y242F+E259G+N2 79S+E390A,W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+E259G+K28 0Y+E390A,W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A,W140Y+Y242F+N279S+K280 Y+G303R,W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A,W140Y+Y242F+N279S+G303R +E390A,W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E259G+N279S+K280Y+ G303R,W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E259G+N279S+G303R+E 390A,W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,W140Y+N279S+K280Y+G303R+E3 90A,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,E189P+Y242F+E259G+N279S+G30 3R,E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303 R,E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A ,E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R,E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A,E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,E 189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,E1 89P+E259G+N279S+G303R+E390A,E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A,E18 9P+N279S+K280Y+G303R+E390A,Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,Y242 F+E259G+N279S+K280Y+E390A,Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,Y242F +E259G+K280Y+G303R+E390A,Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,E259G+ N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0388] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 2, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G30 3R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+ N279S,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+E25 9G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+ N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E18 9P+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+ E189P+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A,H1*+G7A+W14 0Y+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+ W140Y+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A,H1*+G 7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R,H1 *+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R ,H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E3 90A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S +G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+K2 80Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G +G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+N2 79S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y +K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+E1 89P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A +E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1*+ G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A,H 1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390 A,H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K 280Y,H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+E259G+N279 S+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+E259G+K 280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+N279 S+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+N 279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242 F+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+Y 242F+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7 A+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1* +G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E39 0A,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+ E390A,H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E259G+K280Y+G30 3R+E390A,H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242 F+E259G+N279S,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+W1 40Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R ,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280 Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y24 2F+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E1 89P+E259G+N279S+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A,H1*+W 140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390 A,H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+N279S+K28 0Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+N2 79S+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+ W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G30 3R,H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+G3 03R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R,H1*+W140Y+Y242F+N 279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+W140Y+ Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1* +W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E3 90A,H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+N279S+K280Y+G 303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+E189P+Y242F+ E259G+N279S+G303R,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,H1*+E189P +Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1 *+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G 303R,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+ G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G +N279S+K280Y+G303R,H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+E189 P+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A,H 1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+ G303R,H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+Y242F+E259G+N279S +G303R+E390A,H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+N279 S+K280Y+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W14 0Y+E189P+Y242F+E259G+N279S,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G +E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E189P+Y242 F+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A,G7A+W140Y+E18 9P+Y242F+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A,G7A+W1 40Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y ,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279 S+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+E25 9G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,G7A+W140Y+E1 89P+N279S+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,G7A+W 140Y+E189P+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390 A,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N27 9S+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E2 59G+K280Y+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y 242F+E259G+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R,G7A+ W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E39 0A,G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+N279S+K2 80Y+G303R,G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E259G+N 279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+ N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A +E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E3 90A,G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+K 280Y+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+ N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+E189P +Y242F+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7 A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E 390A,G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+E259G+K280Y+ G303R+E390A,G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R,G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+Y242 F+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,G 7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+ E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+E 259G+N279S+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,W140Y+E1 89P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E39 0A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+N279 S+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E189P +Y242F+N279S+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,W140Y+E189P+E259G+N279S+K 280Y+E390A,W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A,W140Y+E189P+E2 59G+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,W14 0Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280 Y+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G +K280Y+G303R+E390A,W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,W140Y+ E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G 303R,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,E189P+Y242F+E259G+N2 79S+G303R+E390A,E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,E189P+Y24 2F+N279S+K280Y+G303R+E390A,E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390 A,Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0389] Em um aspecto, a variante da SEQ ID NO: 2, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0390] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 2, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N2 79S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A +W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242 F+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G30 3R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+ E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y +G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+ G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E 259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+ E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W14 0Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N2 79S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,H 1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242 F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G30 3R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+ E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G +N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390 A,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+ G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1* +W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y +G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1 *+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280 Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,G 7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+ Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K28 0Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F +E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K2 80Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E39 0A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0391] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 2, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W14 0Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K 280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+ E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G 7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K2 80Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0392] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 2, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E 390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0393] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 3, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+D118T, H1*+W140Y, H1*+T182S, H1*+A185D, H1*+E189P, H1*+Y242F, H1*+E259G, H1*+F266Y, H1*+N279S, H1*+K280Y, H1*+G303R, H1*+E390A, H1*+G475K, H1*+A185Q, H1*+N194F, D118T+W140Y, D118T+T182S, D118T+A185D, D118T+E189P, D118T+Y242F, D118T+E259G, D118T+F266Y, D118T+N279S,D118T+K280Y,D118T+G303R,D118T+E390A,D118T+G475K,D 118T+A185Q,D118T+N194F,W140Y+T182S,W140Y+A185D,W140Y+E189P,W1 40Y+Y242F,W140Y+E259G,W140Y+F266Y,W140Y+N279S,W140Y+K280Y,W14 0Y+G303R,W140Y+E390A,W140Y+G475K,W140Y+A185Q,W140Y+N194F,T182 S+A185D,T182S+E189P,T182S+Y242F,T182S+E259G,T182S+F266Y,T182S +N279S,T182S+K280Y,T182S+G303R,T182S+E390A,T182S+G475K,T182S+ A185Q,T182S+N194F,A185D+E189P,A185D+Y242F,A185D+E259G,A185D+F 266Y,A185D+N279S,A185D+K280Y,A185D+G303R,A185D+E390A,A185D+G4 75K,A185D,+A185Q,A185D,+N194F,E189P+Y242F,E189P+E259G,E189P+F 266Y,E189P+N279S,E189P+K280Y,E189P+G303R,E189P+E390A,E189P+G4 75K,E189P+A185Q,E189P+N194F,Y242F+E259G,Y242F+F266Y,Y242F+N27 9S,Y242F+K280Y,Y242F+G303R,Y242F+E390A,Y242F+G475K,Y242F+A185 Q,Y242F+N194F,E259G+F266Y,E259G+N279S,E259G+K280Y,E259G+G303R ,E259G+E390A,E259G+G475K,E259G+A185Q,E259G+N194F,F266Y+N279S, F266Y+K280Y,F266Y+G303R,F266Y+E390A,F266Y+G475K,F266Y+A185Q,F 266Y+N194F,N279+K280Y,N279S+G303R,N279S+E390A,N279S+G475K,N27 9S+A185Q,N279S+N194F,K280Y+G303R,K280Y+E390A,K280Y+G475K,K280 Y+A185Q,K280Y+N194F,G303R+E390A,G303R+G475K,G303R+A185Q,G303R +N194F,E390A+G475K,E390A+A185Q,E390A+N194F,G475K+A185Q,G475K+ N194F, A185Q+N194F, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0394] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 3, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+D118T+W140Y, H1*+D118T+T182S, H1*+D118T+A185D, H1*+D118T+E189P, H1*+D118T+Y242F, H1*+D118T+E259G, H1*+D118T+F266Y, H1*+D118T+N279S, H1*+D118T+K280Y, H1*+D118T+G303R, H1*+D118T+E390A, H1*+D118T+G475K, H1*+D118T+A185Q, H1*+D118T+N194F, H1*+W140Y+T182S, H1*+W140Y+A185D, H1*+W140Y+E189P, H1*+W140Y+Y242F, H1*+W140Y+E259G, H1*+W140Y+F266Y,H1*+W140Y+N279S,H1*+W140Y+K280Y,H1*+W140Y+G30 3R,H1*+W140Y+E390A,H1*+W140Y+G475K,H1*+W140Y+A185Q,H1*+W140Y+ N194F,H1*+T182S+A185D,H1*+T182S+E189P,H1*+T182S+Y242F,H1*+T18 2S+E259G,H1*+T182S+F266Y,H1*+T182S+N279S,H1*+T182S+K280Y,H1*+ T182S+G303R,H1*+T182S+E390A,H1*+T182S+G475K,H1*+T182S+A185Q,H 1*+T182S+N194F,H1*+A185D+E189P,H1*+A185D+Y242F,H1*+A185D+E259 G,H1*+A185D+F266Y,H1*+A185D+N279S,H1*+A185D+K280Y,H1*+A185D+G 303R,H1*+A185D+E390A,H1*+A185D+G475K,H1*+A185D+A185Q,H1*+A185 D+N194F,H1*+E189P+Y242F,H1*+E189P+E259G,H1*+E189P+F266Y,H1*+E 189P+N279S,H1*+E189P+K280Y,H1*+E189P+G303R,H1*+E189P+E390A,H1 *+E189P+G475K,H1*+E189P+A185Q,H1*+E189P+N194F,H1*+Y242F+E259G ,H1*+Y242F+F266Y,H1*+Y242F+N279S,H1*+Y242F+K280Y,H1*+Y242F+G3 03R,H1*+Y242F+E390A,H1*+Y242F+G475K,H1*+Y242F+A185Q,H1*+Y242F +N194F,H1*+E259G+F266Y,H1*+E259G+N279S,H1*+E259G+K280Y,H1*+E2 59G+G303R,H1*+E259G+E390A,H1*+E259G+G475K,H1*+E259G+A185Q,H1* +E259G+N194F,H1*+F266Y+N279S,H1*+F266Y+K280Y,H1*+F266Y+G303R, H1*+F266Y+E390A,H1*+F266Y+G475K,H1*+F266Y+A185Q,H1*+F266Y+N19 4F,H1*+N279S+K280Y,H1*+N279S+G303R,H1*+N279S+E390A,H1*+N279S+ G475K,H1*+N279S+A185Q,H1*+N279S+N194F,H1*+K280Y+G303R,H1*+K28 0Y+E390A,H1*+K280Y+G475K,H1*+K280Y+A185Q,H1*+K280Y+N194F,H1*+ G303R+E390A,H1*+G303R+G475K,H1*+G303R+A185Q,H1*+G303R+N194F,H 1*+E390A+G475K,H1*+E390A+A185Q,H1*+E390A+N194F,H1*+G475K+A185 Q,H1*+G475K+N194F,H1*+A185Q+N194F,D118T+W140Y+T182S,D118T+W14 0Y+A185D,D118T+W140Y+E189P,D118T+W140Y+Y242F,D118T+W140Y+E259 G,D118T+W140Y+F266Y,D118T+W140Y+N279S,D118T+W140Y+K280Y,D118T +W140Y+G303R,D118T+W140Y+E390A,D118T+W140Y+G475K,D118T+W140Y+ A185Q,D118T+W140Y+N194F,D118T+T182S+A185D,D118T+T182S+E189P,D 118T+T182S+Y242F,D118T+T182S+E259G,D118T+T182S+F266Y,D118T+T1 82S+N279S,D118T+T182S+K280Y,D118T+T182S+G303R,D118T+T182S+E39 0A,D118T+T182S+G475K,D118T+T182S+A185Q,D118T+T182S+N194F,D118 T+A185D+E189P,D118T+A185D+Y242F,D118T+A185D+E259G,D118T+A185D +F266Y,D118T+A185D+N279S,D118T+A185D+K280Y,D118T+A185D+G303R, D118T+A185D+E390A,D118T+A185D+G475K,D118T+A185D+A185Q,D118T+A 185D+N194F,D118T+E189P+Y242F,D118T+E189P+E259G,D118T+E189P+F2 66Y,D118T+E189P+N279S,D118T+E189P+K280Y,D118T+E189P+G303R,D11 8T+E189P+E390A,D118T+E189P+G475K,D118T+E189P+A185Q,D118T+E189 P+N194F,D118T+Y242F+E259G,D118T+Y242F+F266Y,D118T+Y242F+N279S ,D118T + Y2 4 2F+K2 8 0Y,D118T+Y2 4 2F+G3 03R,D118T+Y2 4 2F+E3 9 0A, D118T + Y242F+G475K,D118T+Y242F+A185Q,D118T+Y242F+N194F,D118T+E259G+F 266Y,D118T+E259G+N279S,D118T+E259G+K280Y,D118T+E259G+G303R,D1 18T+E259G+E390A,D118T+E259G+G475K,D118T+E259G+A185Q,D118T+E25 9G+N194F,D118T+F266Y+N279S,D118T+F266Y+K280Y,D118T+F266Y+G303 R,D118T+F266Y+E390A,D118T+F266Y+G475K,D118T+F266Y+A185Q,D118T +F266Y+N194F,D118T+N279S+K280Y,D118T+N279S+G303R,D118T+N279S+ E390A,D118T+N279S+G475K,D118T+N279S+A185Q,D118T+N279S+N194F,D 118T+K280Y+G303R,D118T+K280Y+E390A,D118T+K280Y+G475K,D118T+K2 80Y+A185Q,D118T+K280Y+N194F,D118T+G303R+E390A,D118T+G303R+G47 5K,D118T+G303R+A185Q,D118T+G303R+N194F,D118T+E390A+G475K,D118 T+E390A+A185Q,D118T+E390A+N194F,D118T+G475K+A185Q,D118T+G475K +N194F,D118T+A185Q+N194F,W140Y+T182S+A185D,W140Y+T182S+E189P, W140Y+T182S+Y242F,W140Y+T182S+E259G,W140Y+T182S+F266Y,W140Y+T 182S+N279S,W140Y+T182S+K280Y,W140Y+T182S+G303R,W140Y+T182S+E3 90A,W140Y+T182S+G475K,W140Y+T182S+A185Q,W140Y+T182S+N194F,W14 0Y+A185D+E189P,W140Y+A185D+Y242F,W140Y+A185D+E259G,W140Y+A185 D+F266Y,W140Y+A185D+N279S,W140Y+A185D+K280Y,W140Y+A185D+G303R ,W140Y+A185D+E390A,W140Y+A185D+G475K,W140Y+A185D+A185Q,W140Y+ A185D+N194F,W140Y+E189P+Y242F,W140Y+E189P+E259G,W140Y+E189P+F 266Y,W140Y+E189P+N279S,W140Y+E189P+K280Y,W140Y+E189P+G303R,W1 40Y+E189P+E390A,W140Y+E189P+G475K,W140Y+E189P+A185Q,W140Y+E18 9P+N194F,W140Y+Y242F+E259G,W140Y+Y242F+F266Y,W140Y+Y242F+N279 S,W140Y+Y242F+K280Y,W140Y+Y242F+G303R,W140Y+Y242F+E390A,W140Y +Y242F+G475K,W140Y+Y242F+A185Q,W140Y+Y242F+N194F,W140Y+E259G+ F266Y,W140Y+E259G+N279S,W140Y+E259G+K280Y,W140Y+E259G+G303R,W 140Y+E259G+E390A,W140Y+E259G+G475K,W140Y+E259G+A185Q,W140Y+E2 59G+N194F,W140Y+F266Y+N279S,W140Y+F266Y+K280Y,W140Y+F266Y+G30 3R,W140Y+F266Y+E390A,W140Y+F266Y+G475K,W140Y+F266Y+A185Q,W140 Y+F266Y+N194F,W140Y+N279S+K280Y,W140Y+N279S+G303R,W140Y+N279S +E390A,W140Y+N279S+G475K,W140Y+N279S+A185Q,W140Y+N279S+N194F, W140Y+K280Y+G303R,W140Y+K280Y+E390A,W140Y+K280Y+G475K,W140Y+K 280Y+A185Q,W140Y+K280Y+N194F,W140Y+G303R+E390A,W140Y+G303R+G4 75K,W140Y+G303R+A185Q,W140Y+G303R+N194F,W140Y+E390A+G475K,W14 0Y+E390A+A185Q,W140Y+E390A+N194F,W140Y+G475K+A185Q,W140Y+G475 K+N194F,W140Y+A185Q+N194F,T182S+A185D+E189P,T182S+A185D+Y242F ,T182S+A185D+E259G,T182S+A185D+F266Y,T182S+A185D+N279S,T182S+ A185D+K280Y,T182S+A185D+G303R,T182S+A185D+E390A,T182S+A185D+G 45K,T182S+A185D+A185Q,T182S+A185D+N194F,T182S+E189P+Y242F,T18 2S+E189P+E259G,T182S+E189P+F266Y,T182S+E189P+N279S,T182S+E189 P+K280Y,T182S+E189P+G303R,T182S+E189P+E390A,T182S+E189P+G475K ,T182S + E18 9P+A185Q,T18 2S+E18 9P+N194F,T182S+Y2 42F+E25 9G, T18 2S + Y242F+F266Y,T182S+Y242F+N279S,T182S+Y242F+K280Y,T182S+Y242F+G 303R,T182S+Y242F+E390A,T182S+Y242F+G475K,T182S+Y242F+A185Q,T1 82S+Y242F+N194F,T182S+E259G+F266Y,T182S+E259G+N279S,T182S+E25 9G+K280Y,T182S+E259G+G303R,T182S+E259G+E390A,T182S+E259G+G475 K,T182S+E259G+A185Q,T182S+E259G+N194F,T182S+F266Y+N279S,T182S +F266Y+K280Y,T182S+F266Y+G303R,T182S+F266Y+E390A,T182S+F266Y+ G475K,T182S+F266Y+A185Q,T182S+F266Y+N194F,T182S+N279S+K280Y,T 182S+N279S+G303R,T182S+N279S+E390A,T182S+N279S+G475K,T182S+N2 79S+A185Q,T182S+N279S+N194F,T182S+K280Y+G303R,T182S+K280Y+E39 0A,T182S+K280Y+G475K,T182S+K280Y+A185Q,T182S+K280Y+N194F,T182 S+G303R+E390A,T182S+G303R+G475K,T182S+G303R+A185Q,T182S+G303R +N194F,T182S+E390A+G475K,T182S+E390A+A185Q,T182S+E390A+N194F, T182S+G475K+A185Q,T182S+G475K+N194F,T182S+A185Q+N194F,A185D+E 189P+Y242F,A185D+E189P+E259G,A185D+E189P+F266Y,A185D+E189P+N2 79S,A185D+E189P+K280Y,A185D+E189P+G303R,A185D+E189P+E390A,A18 5D+E189P+G475K,A185D+E189P+A185Q,A185D+E189P+N194F,A185D+Y242 F+E259G,A185D+Y242F+F266Y,A185D+Y242F+N279S,A185D+Y242F+K280Y ,A185D+Y242F+G303R,A185D+Y242F+E390A,A185D+Y242F+G475K,A185D+ Y242F+A185Q,A185D+Y242F+N194F,A185D+E259G+F266Y,A185D+E259G+N 279S,A185D+E259G+K280Y,A185D+E259G+G303R,A185D+E259G+E390A,A1 85D+E259G+G475K,A185D+E259G+A185Q,A185D+E259G+N194F,A185D+F26 6Y+N279S,A185D+F266Y+K280Y,A185D+F266Y+G303R,A185D+F266Y+E390 A,A185D+F266Y+G475K,A185D+F266Y+A185Q,A185D+F266Y+N194F,A185D +N279S+K280Y,A185D+N279S+G303R,A185D+N279S+E390A,A185D+N279S+ G475K,A185D+N279S+A185Q,A185D+N279S+N194F,A185D+K280Y+G303R,A 185D+K280Y+E390A,A185D+K280Y+G475K,A185D+K280Y+A185Q,A185D+K2 80Y+N194F,A185D+G303R+E390A,A185D+G303R+G475K,A185D+G303R+A18 5Q,A185D+G303R+N194F,A185D+E390A+G475K,A185D+E390A+A185Q,A185 D+E390A+N194F,A185D+G475K+A185Q,A185D+G475K+N194F,A185D+A185Q +N194F,E189P+Y242F+E259G,E189P+Y242F+F266Y,E189P+Y242F+N279S, E189P+Y242F+K280Y,E189P+Y242F+G303R,E189P+Y242F+E390A,E189P+Y 242F+G475K,E189P+Y242F+A185Q,E189P+Y242F+N194F,E189P+E259G+F2 66Y,E189P+E259G+N279S,E189P+E259G+K280Y,E189P+E259G+G303R,E18 9P+E259G+E390A,E189P+E259G+G475K,E189P+E259G+A185Q,E189P+E259 G+N194F,E189P+F266Y+N279S,E189P+F266Y+K280Y,E189P+F266Y+G303R ,E189P+F266Y+E390A,E189P+F266Y+G475K,E189P+F266Y+A185Q,E189P+ F266Y+N194F,E189P+N279S+K280Y,E189P+N279S+G303R,E189P+N279S+E 390A,E189P+N279S+G475K,E189P+N279S+A185Q,E189P+N279S+N194F,E1 89P+K280Y+G303R,E189P+K280Y+E390A,E189P+K280Y+G475K,E189P+K28 0Y+A185Q,E189P+K280Y+N194F,E189P+G303R+E390A,E189P+G303R+G475 K,E189P+G303R+A185Q,E189P+G303R+N194F,E189P+E390A+G475K,E189P +E390A+A185Q,E189P+E390A+N194F,E189P+G475K+A185Q,E189P+G475K+ N194F,E189P+A185Q+N194F,Y242F+E259G+F266Y,Y242F+E259G+N279S,Y 242F+E259G+K280Y,Y242F+E259G+G303R,Y242F+E259G+E390A,Y242F+E2 59G+G475K,Y242F+E259G+A185Q,Y242F+E259G+N194F,Y242F+F266Y+N27 9S,Y242F+F266Y+K280Y,Y242F+F266Y+G303R,Y242F+F266Y+E390A,Y242 F+F266Y+G475K,Y242F+F266Y+A185Q,Y242F+F266Y+N194F,Y242F+N279S +K280Y,Y242F+N279S+G303R,Y242F+N279S+E390A,Y242F+N279S+G475K, Y242F+N279S+A185Q,Y242F+N279S+N194F,Y242F+K280Y+G303R,Y242F+K 280Y+E390A,Y242F+K280Y+G475K,Y242F+K280Y+A185Q,Y242F+K280Y+N1 94F,Y242F+G303R+E390A,Y242F+G303R+G475K,Y242F+G303R+A185Q,Y24 2F+G303R+N194F,Y242F+E390A+G475K,Y242F+E390A+A185Q,Y242F+E390 A+N194F,Y242F+G475K+A185Q,Y242F+G475K+N194F,Y242F+A185Q+N194F ,E259G+F266Y+N279S,E259G+F266Y+K280Y,E259G+F266Y+G303R,E259G+ F266Y+E390A,E259G+F266Y+G475K,E259G+F266Y+A185Q,E259G+F266Y+N 194F,E259G+N279S+K280Y,E259G+N279S+G303R,E259G+N279S+E390A,E2 59G+N279S+G475K,E259G+N279S+A185Q,E259G+N279S+N194F,E259G+K28 0Y+G303R,E259G+K280Y+E390A,E259G+K280Y+G475K,E259G+K280Y+A185 Q,E259G+K280Y+N194F,E259G+G303R+E390A,E259G+G303R+G475K,E259G +G303R+A185Q,E259G+G303R+N194F,E259G+E390A+G475K,E259G+E390A+ A185Q,E259G+E390A+N194F,E259G+G475K+A185Q,E259G+G475K+N194F,E 259G+A185Q+N194F,F266Y+N279S+K280Y,F266Y+N279S+G303R,F266Y+N2 79S+E390A,F266Y+N279S+G475K,F266Y+N279S+A185Q,F266Y+N279S+N19 4F,F266Y+K280Y+G303R,F266Y+K280Y+E390A,F266Y+K280Y+G475K,F266 Y+K280Y+A185Q,F266Y+K280Y+N194F,F266Y+G303R+E390A,F266Y+G303R +G475K,F266Y+G303R+A185Q,F266Y+G303R+N194F,F266Y+E390A+G475K, F266Y+E390A+A185Q,F266Y+E390A+N194F,F266Y+G475K+A185Q,F266Y+G 475K+N194F,F266Y+A185Q+N194F,N279S+K280Y+G303R,N279S+K280Y+E3 90A,N279S+K280Y+G475K,N279S+K280Y+A185Q,N279S+K280Y+N194F,N27 9S+G303R+E390A,N279S+G303R+G475K,N279S+G303R+A185Q,N279S+G303 R+N194F,N279S+E390A+G475K,N279S+E390A+A185Q,N279S+E390A+N194F ,N279S+G475K+A185Q, N279S+G475K+N194F,N279S+A185Q+N194F,K280Y+G303R+E39 0A,K280Y+G303R+G475K,K280Y+G303R+A185Q,K280Y+G303R+N194F,K280 Y+E390A+G475K,K280Y+E390A+A185Q,K280Y+E390A+N194F,K280Y+G475K +A185Q,K280Y+G475K+N194F,K280Y+A185Q+N194F,G303R+E390A+G475K, G303R+E390A+A185Q,G303R+E390A+N194F,G303R+G475K+A185Q,G303R+G 475K+N194F,G303R+A185Q+N194F,E390A+G475K+A185Q,E390A+G475K+N1 94F,E390A+A185Q+N194F,G475K+A185Q+N194F, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0395] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 3, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P, H1*+G7A+W140Y+Y242F, H1*+G7A+W140Y+E259G, H1*+G7A+W140Y+N279S, H1*+G7A+W140Y+K280Y, H1*+G7A+W140Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F,H1*+G7A+E189P+E259G,H1*+G7A+E189P+N279S,H 1*+G7A+E189P+K280Y,H1*+G7A+E189P+G303R,H1*+G7A+E189P+E390A,H1 *+G7A+Y242F+E259G,H1*+G7A+Y242F+N279S,H1*+G7A+Y242F+K280Y,H1* +G7A+Y242F+G303R,H1*+G7A+Y242F+E390A,H1*+G7A+E259G+N279S,H1*+ G7A+E259G+K280Y,H1*+G7A+E259G+G303R,H1*+G7A+E259G+E390A,H1*+G 7A+N279S+K280Y,H1*+G7A+N279S+G303R,H1*+G7A+N279S+E390A,H1*+G7 A+K280Y+G303R,H1*+G7A+K280Y+E390A,H1*+G7A+G303R+E390A,H1*+W14 0Y+E189P+Y242F,H1*+W140Y+E189P+E259G,H1*+W140Y+E189P+N279S,H1 *+W140Y+E189P+K280Y,H1*+W140Y+E189P+G303R,H1*+W140Y+E189P+E39 0A,H1*+W140Y+Y242F+E259G,H1*+W140Y+Y242F+N279S,H1*+W140Y+Y242 F+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+G303R,H1*+W140Y+Y242F+E390A,H1*+W140Y +E259G+N279S,H1*+W140Y+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E259G+G303R,H1*+ W140Y+E259G+E390A,H1*+W140Y+N279S+K280Y,H1*+W140Y+N279S+G303R ,H1*+W140Y+N279S+E390A,H1*+W140Y+K280Y+G303R,H1*+W140Y+K280Y+ E390A,H1*+W140Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G,H1*+E189P+Y 242F+N279S,H1*+E189P+Y242F+K280Y,H1*+E189P+Y242F+G303R,H1*+E1 89P+Y242F+E390A,H1*+E189P+E259G+N279S,H1*+E189P+E259G+K280Y,H 1*+E189P+E259G+G303R,H1*+E189P+E259G+E390A,H1*+E189P+N279S+K2 80Y,H1*+E189P+N279S+G303R,H1*+E189P+N279S+E390A,H1*+E189P+K28 0Y+G303R,H1*+E189P+K280Y+E390A,H1*+E189P+G303R+E390A,H1*+Y242 F+E259G+N279S,H1*+Y242F+E259G+K280Y,H1*+Y242F+E259G+G303R,H1* +Y242F+E259G+E390A,H1*+Y242F+N279S+K280Y,H1*+Y242F+N279S+G303 R,H1*+Y242F+N279S+E390A,H1*+Y242F+K280Y+G303R,H1*+Y242F+K280Y +E390A,H1*+Y242F+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y,H1*+E259G+ N279S+G303R,H1*+E259G+N279S+E390A,H1*+E259G+K280Y+G303R,H1*+E 259G+K280Y+E390A,H1*+E259G+G303R+E390A,H1*+N279S+K280Y+G303R, H1*+N279S+K280Y+E390A,H1*+N279S+G303R+E390A,H1*+K280Y+G303R+E 390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F,G7A+W140Y+E189P+E259G,G7A+W140Y+E1 89P+N279S,G7A+W140Y+E189P+K280Y,G7A+W140Y+E189P+G303R,G7A+W14 0Y+E189P+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E259G,G7A+W140Y+Y242F+N279S,G7 A+W140Y+Y242F+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E39 0A,G7A+W140Y+E259G+N279S,G7A+W140Y+E259G+K280Y,G7A+W140Y+E259 G+G303R,G7A+W140Y+E259G+E390A,G7A+W140Y+N279S+K280Y,G7A+W140Y +N279S+G303R,G7A+W140Y+N279S+E390A,G7A+W140Y+K280Y+G303R,G7A+ W140Y+K280Y+E390A,G7A+W140Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G ,G7A+E189P+Y242F+N279S,G7A+E189P+Y242F+K280Y,G7A+E189P+Y242F+ G303R,G7A+E189P+Y242F+E390A,G7A+E189P+E259G+N279S,G7A+E189P+E 259G+K280Y,G7A+E189P+E259G+G303R,G7A+E189P+E259G+E390A,G7A+E1 89P+N279S+K280Y,G7A+E189P+N279S+G303R,G7A+E189P+N279S+E390A,G 7A+E189P+K280Y+G303R,G7A+E189P+K280Y+E390A,G7A+E189P+G303R+E3 90A,G7A+Y242F+E259G+N279S,G7A+Y242F+E259G+K280Y,G7A+Y242F+E25 9G+G303R,G7A+Y242F+E259G+E390A,G7A+Y242F+N279S+K280Y,G7A+Y242 F+N279S+G303R,G7A+Y242F+N279S+E390A,G7A+Y242F+K280Y+G303R,G7A +Y242F+K280Y+E390A,G7A+Y242F+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280 Y,G7A+E259G+N279S+G303R,G7A+E259G+N279S+E390A,G7A+E259G+K280Y +G303R,G7A+E259G+K280Y+E390A,G7A+E259G+G303R+E390A,G7A+N279S+ K280Y+G303R,G7A+N279S+K280Y+E390A,G7A+N279S+G303R+E390A,G7A+K 280Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G,W140Y+E189P+Y242F+N2 79S,W140Y+E189P+Y242F+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+G303R,W140Y+E18 9P+Y242F+E390A,W140Y+E189P+E259G+N279S,W140Y+E189P+E259G+K280 Y,W140Y+E189P+E259G+G303R,W140Y+E189P+E259G+E390A,W140Y+E189P +N279S+K280Y,W140Y+E189P+N279S+G303R,W140Y+E189P+N279S+E390A, W140Y+E189P+K280Y+G303R,W140Y+E189P+K280Y+E390A,W140Y+E189P+G 303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N279S,W140Y+Y242F+E259G+K280Y,W1 40Y+Y242F+E259G+G303R,W140Y+Y242F+E259G+E390A,W140Y+Y242F+N27 9S+K280Y,W140Y+Y242F+N279S+G303R,W140Y+Y242F+N279S+E390A,W140 Y+Y242F+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+K280Y+E390A,W140Y+Y242F+G303R +E390A,W140Y+E259G+N279S+K280Y,W140Y+E259G+N279S+G303R,W140Y+ E259G+N279S+E390A,W140Y+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E259G+K280Y+E 390A,W140Y+E259G+G303R+E390A,W140Y+N279S+K280Y+G303R,W140Y+N2 79S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A,W140Y+K280Y+G303R+E390 A,E189P+Y242F+E259G+N279S,E189P+Y242F+E259G+K280Y,E189P+Y242F +E259G+G303R,E189P+Y242F+E259G+E390A,E189P+Y242F+N279S+K280Y, E189P+Y242F+N279S+G303R,E189P+Y242F+N279S+E390A,E189P+Y242F+K 280Y+G303R,E189P+Y242F+K280Y+E390A,E189P+Y242F+G303R+E390A,E1 89P+E259G+N279S+K280Y,E189P+E259G+N279S+G303R,E189P+E259G+N27 9S+E390A,E189P+E259G+K280Y+G303R,E189P+E259G+K280Y+E390A,E189 P+E259G+G303R+E390A,E189P+N279S+K280Y+G303R,E189P+N279S+K280Y +E390A,E189P+N279S+G303R+E390A,E189P+K280Y+G303R+E390A,Y242F+ E259G+N279S+K280Y,Y242F+E259G+N279S+G303R,Y242F+E259G+N279S+E 390A,Y242F+E259G+K280Y+G303R,Y242F+E259G+K280Y+E390A,Y242F+E2 59G+G303R+E390A,Y242F+N279S+K280Y+G303R,Y242F+N279S+K280Y+E39 0A,Y242F+N279S+G303R+E390A,Y242F+K280Y+G303R+E390A,E259G+N279 S+K280Y+G303R,E259G+N279S+K280Y+E390A,E259G+N279S+G303R+E390A ,E259G+K280Y+G303R+E390A,N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0396] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 3, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S, H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y, H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S,H1*+G7A+W 140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G +E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R,H1 *+G7A+W140Y+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R,H1*+G7A+W14 0Y+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+ E259G,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S,H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y,H1* +G7A+E189P+Y242F+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A,H1*+G7A+E189 P+E259G+N279S,H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y,H1*+G7A+E189P+E259G+G 303R,H1*+G7A+E189P+E259G+E390A,H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y,H1*+ G7A+E189P+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+N279S+E390A,H1*+G7A+E189P +K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+G303R+E3 90A,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G 7A+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A,H1*+G7A+Y242F+ N279S+K280Y,H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R,H1*+G7A+Y242F+N279S+E39 0A,H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R,H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A,H1*+G7 A+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+E259G+N 279S+G303R,H1*+G7A+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+E259G+K280Y+G303 R,H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A +N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+N279S+G3 03R+E390A,H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E25 9G,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y,H1 *+W140Y+E189P+Y242F+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A,H1*+W14 0Y+E189P+E259G+N279S,H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E1 89P+E259G+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A,H1*+W140Y+E189P+N 279S+K280Y,H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R,H1*+W140Y+E189P+N279S+ E390A,H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A ,H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S,H1*+ W140Y+Y242F+E259G+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R,H1*+W140Y +Y242F+E259G+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,H1*+W140Y+Y242 F+N279S+G303R,H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A,H1*+W140Y+Y242F+K28 0Y+G303R,H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+G303R+E3 90A,H1*+W14 0Y+E2 5 9G+N2 7 9S+K2 8 0Y,H1*+W14 0Y+E2 5 9G+N2 7 9S+G3 0 3R, H 1*+W140Y+E259G+N279S+E390A,H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R,H1*+W1 40Y+E259G+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A,H1*+W140Y+N 279S+K280Y+G303R,H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+N279S+ G303R+E390A,H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G +N279S,H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+E189P+Y242F+E259G+G303 R,H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1* +E189P+Y242F+N279S+G303R,H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A,H1*+E189 P+Y242F+K280Y+G303R,H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A,H1*+E189P+Y24 2F+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y,H1*+E189P+E259G+N2 79S+G303R,H1*+E189P+E259G+N279S+E390A,H1*+E189P+E259G+K280Y+G 3 0 3R, H1*+E18 9P+E2 5 9G+K2 8 0Y+E3 90A,H1* + E18 9P+E2 5 9G+G3 0 3R+E3 90A, H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R,H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+E 189P+N279S+G303R+E390A,H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+ E259G+N279S+K280Y,H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+Y242F+E259G +N279S+E390A,H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+Y242F+E259G+K280 Y+E390A,H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1*+Y242F+N279S+K280Y+G30 3R,H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1 *+Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+E25 9G+N279S+K280Y+E390A,H1*+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+E259G+K2 80Y+G303R+E390A,H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y 242F+E259G,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S,G7A+W140Y+E189P+Y242F+ K280Y,G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A ,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S,G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y,G7A+ W140Y+E189P+E259G+G303R,G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A,G7A+W140Y +E189P+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189 P+N279S+E390A,G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+K28 0Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N2 79S,G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R,G 7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,G7A+W1 40Y+Y242F+N279S+G303R,G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A,G7A+W140Y+Y 242F+K280Y+G303R,G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y242F+ G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E259G+N279S +G303R,G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A,G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303 R,G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A,G7A +W140Y+N279S+K280Y+G303R,G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140 Y+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y24 2F+E259G+N279S,G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y,G7A+E189P+Y242F+E2 59G+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A,G7A+E189P+Y242F+N279S+K 280Y,G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R,G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A, G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A,G7A+E 189P+Y242F+G303R+E390A,G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y,G7A+E189P+ E259G+N279S+G303R,G7A+E189P+E259G+N279S+E390A,G7A+E189P+E259G +K280Y+G303R,G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A,G7A+E189P+E259G+G303 R+E390A,G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+N279S+K280Y+E39 0A,G7A+E189P+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A,G7 A+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R,G7A+Y24 2F+E259G+N279S+E390A,G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R,G7A+Y242F+E2 59G+K280Y+E390A,G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A,G7A+Y242F+N279S+K 280Y+G303R,G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+Y242F+N279S+G303R+ E390A,G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R ,G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+ E259G+K280Y+G303R+E390A,G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+N279S,W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,W140Y+E189 P+Y242F+E259G+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A,W140Y+E189P +Y242F+N279S+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R,W140Y+E189P+ Y242F+N279S+E390A,W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y 242F+K280Y+E390A,W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,W140Y+E189P+E2 59G+N279S+K280Y,W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,W140Y+E189P+E25 9G+N279S+E390A,W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E189P+E259 G+K280Y+E390A,W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,W140Y+E189P+N279S +K280Y+G303R,W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E189P+N279S+ G303R+E390A,W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N 279S+K280Y,W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R,W140Y+Y242F+E259G+N2 79S+E390A,W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+E259G+K28 0Y+E390A,W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A,W140Y+Y242F+N279S+K280 Y+G303R,W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A,W140Y+Y242F+N279S+G303R +E390A,W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E259G+N279S+K280Y+ G303R,W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E259G+N279S+G303R+E 390A,W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,W140Y+N279S+K280Y+G303R+E3 90A,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,E189P+Y242F+E259G+N279S+G30 3R,E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303 R,E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A ,E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R,E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A,E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,E 189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,E1 89P+E259G+N279S+G303R+E390A,E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A,E18 9P+N279S+K280Y+G303R+E390A,Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,Y242 F+E259G+N279S+K280Y+E390A,Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,Y242F +E259G+K280Y+G303R+E390A,Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,E259G+ N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0397] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 3, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G30 3R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+ N279S,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+E25 9G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+ N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E18 9P+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+ E189P+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A,H1*+G7A+W14 0Y+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+ W140Y+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A,H1*+G 7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R,H1 *+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R ,H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E3 90A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S +G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+K2 80Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G +G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+N2 79S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y +K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+E1 89P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A +E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1*+ G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A,H 1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390 A,H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K 280Y,H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+E259G+N279 S+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+E259G+K 280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+N279 S+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+N 279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242 F+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+Y 242F+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7 A+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1* +G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E39 0A,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+ E390A,H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E259G+K280Y+G30 3R+E390A,H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242 F+E259G+N279S,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+W1 40Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R ,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280 Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y24 2F+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E1 89P+E259G+N279S+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A,H1*+W 140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390 A,H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+N279S+K28 0Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+N2 79S+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+ W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G30 3R,H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+G3 03R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R,H1*+W140Y+Y242F+N 279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+W140Y+ Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1* +W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E3 90A,H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+N279S+K280Y+G 303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+E189P+Y242F+ E259G+N279S+G303R,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,H1*+E189P +Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1 *+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G 303R,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+ G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G +N279S+K280Y+G303R,H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+E189 P+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A,H 1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+ G303R,H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+Y242F+E259G+N279S +G303R+E390A,H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+N279 S+K280Y+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W14 0Y+E189P+Y242F+E259G+N279S,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G +E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E189P+Y242 F+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A,G7A+W140Y+E18 9P+Y242F+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A,G7A+W1 40Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y ,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279 S+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+E25 9G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,G7A+W140Y+E1 89P+N279S+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,G7A+W 140Y+E189P+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390 A,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N27 9S+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E2 59G+K280Y+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y 242F+E259G+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R,G7A+ W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E39 0A,G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+N279S+K2 80Y+G303R,G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E259G+N 279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+ N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A +E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E3 90A,G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+K 280Y+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+ N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+E189P +Y242F+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7 A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E 390A,G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+E259G+K280Y+ G303R+E390A,G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R,G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+Y242 F+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,G 7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+ E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+E 259G+N279S+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,W140Y+E1 89P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E39 0A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+N279 S+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E189P +Y242F+N279S+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,W140Y+E189P+E259G+N279S+K 280Y+E390A,W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A,W140Y+E189P+E2 59G+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,W14 0Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280 Y+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G +K280Y+G303R+E390A,W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,W140Y+ E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G 303R,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,E189P+Y242F+E259G+N2 79S+G303R+E390A,E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,E189P+Y24 2F+N279S+K280Y+G303R+E390A,E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390 A,Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0398] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 3, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y24 2F+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0399] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 3, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N2 79S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A +W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242 F+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G30 3R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+ E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y +G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+ G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E 259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+ E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W14 0Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N2 79S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,H 1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242 F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G30 3R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+ E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G +N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390 A,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+ G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1* +W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y +G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1 *+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280 Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,G 7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+ Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K28 0Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F +E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K2 80Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E39 0A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0400] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 3, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W14 0Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K 280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+ E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G 7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K2 80Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0401] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 3, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E 390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0402] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 4, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+D118T, H1*+W140Y, H1*+T182S, H1*+A185D, H1*+E189P, H1*+Y242F, H1*+E259G, H1*+F266Y, H1*+N279S, H1*+K280Y, H1*+G303R, H1*+E390A, H1*+G475K, H1*+A185Q, H1*+N194F, D118T+W140Y, D118T+T182S, D118T+A185D, D118T+E189P, D118T+Y242F, D118T+E259G, D118T+F266Y, D118T+N279S,D118T+K280Y,D118T+G303R,D118T+E390A,D118T+G475K,D 118T+A185Q,D118T+N194F,W140Y+T182S,W140Y+A185D,W140Y+E189P,W1 40Y+Y242F,W140Y+E259G,W140Y+F266Y,W140Y+N279S,W140Y+K280Y,W14 0Y+G303R,W140Y+E390A,W140Y+G475K,W140Y+A185Q,W140Y+N194F,T182 S+A185D,T182S+E189P,T182S+Y242F,T182S+E259G,T182S+F266Y,T182S +N279S,T182S+K280Y,T182S+G303R,T182S+E390A,T182S+G475K,T182S+ A185Q,T182S+N194F,A185D+E189P,A185D+Y242F,A185D+E259G,A185D+F 266Y,A185D+N279S,A185D+K280Y,A185D+G303R,A185D+E390A,A185D+G4 75K,A185D,+A185Q,A185D,+N194F,E189P+Y242F,E189P+E259G,E189P+F 266Y,E189P+N279S,E189P+K280Y,E189P+G303R,E189P+E390A,E189P+G4 75K,E189P+A185Q,E189P+N194F,Y242F+E259G,Y242F+F266Y,Y242F+N27 9S,Y242F+K280Y,Y242F+G303R,Y242F+E390A,Y242F+G475K,Y242F+A185 Q,Y242F+N194F,E259G+F266Y,E259G+N279S,E259G+K280Y,E259G+G303R ,E259G+E390A,E259G+G475K,E259G+A185Q,E259G+N194F,F266Y+N279S, F266Y+K280Y,F266Y+G303R,F266Y+E390A,F266Y+G475K,F266Y+A185Q,F 266Y+N194F,N279+K280Y,N279S+G303R,N279S+E390A,N279S+G475K,N27 9S+A185Q,N279S+N194F,K280Y+G303R,K280Y+E390A,K280Y+G475K,K280 Y+A185Q,K280Y+N194F,G303R+E390A,G303R+G475K,G303R+A185Q,G303R +N194F,E390A+G475K,E390A+A185Q,E390A+N194F,G475K+A185Q,G475K+ N194F, A185Q+N194F, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0403] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 4, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+D118T+W140Y, H1*+D118T+T182S, H1*+D118T+A185D, H1*+W140Y+E259G, H1*+W140Y+F266Y,H1*+W140Y+N279S,H1*+W140Y+K280Y,H1*+W140Y+G30 3R,H1*+W140Y+E390A,H1*+W140Y+G475K,H1*+W140Y+A185Q,H1*+W140Y+ N194F,H1*+T182S+A185D,H1*+T182S+E189P,H1*+T182S+Y242F,H1*+T18 2S+E259G,H1*+T182S+F266Y,H1*+T182S+N279S,H1*+T182S+K280Y,H1*+ T182S+G303R,H1*+T182S+E390A,H1*+T182S+G475K,H1*+T182S+A185Q,H 1*+T182S+N194F,H1*+A185D+E189P,H1*+A185D+Y242F,H1*+A185D+E259 G,H1*+A185D+F266Y,H1*+A185D+N279S,H1*+A185D+K280Y,H1*+A185D+G 303R,H1*+A185D+E390A,H1*+A185D+G475K,H1*+A185D+A185Q,H1*+A185 D+N194F,H1*+E189P+Y242F,H1*+E189P+E259G,H1*+E189P+F266Y,H1*+E 189P+N279S,H1*+E189P+K280Y,H1*+E189P+G303R,H1*+E189P+E390A,H1 *+E189P+G475K,H1*+E189P+A185Q,H1*+E189P+N194F,H1*+Y242F+E259G ,H1*+Y242F+F266Y,H1*+Y242F+N279S,H1*+Y242F+K280Y,H1*+Y242F+G3 03R,H1*+Y242F+E390A,H1*+Y242F+G475K,H1*+Y242F+A185Q,H1*+Y242F +N194F,H1*+E259G+F266Y,H1*+E259G+N279S,H1*+E259G+K280Y,H1*+E2 59G+G303R,H1*+E259G+E390A,H1*+E259G+G475K,H1*+E259G+A185Q,H1* +E259G+N194F,H1*+F266Y+N279S,H1*+F266Y+K280Y,H1*+F266Y+G303R, H1*+F266Y+E390A,H1*+F266Y+G475K,H1*+F266Y+A185Q,H1*+F266Y+N19 4F,H1*+N279S+K280Y,H1*+N279S+G303R,H1*+N279S+E390A,H1*+N279S+ G475K,H1*+N279S+A185Q,H1*+N279S+N194F,H1*+K280Y+G303R,H1*+K28 0Y+E390A,H1*+K280Y+G475K,H1*+K280Y+A185Q,H1*+K280Y+N194F,H1*+ G303R+E390A,H1*+G303R+G475K,H1*+G303R+A185Q,H1*+G303R+N194F,H 1*+E390A+G475K,H1*+E390A+A185Q,H1*+E390A+N194F,H1*+G475K+A185 Q,H1*+G475K+N194F,H1*+A185Q+N194F,D118T+W140Y+T182S,D118T+W14 0Y+A185D,D118T+W140Y+E189P,D118T+W140Y+Y242F,D118T+W140Y+E259 G,D118T+W140Y+F266Y,D118T+W140Y+N279S,D118T+W140Y+K280Y,D118T +W140Y+G303R,D118T+W140Y+E390A,D118T+W140Y+G475K,D118T+W140Y+ A18 5Q,D118T+W14 0Y+N194F,D118T+T18 2S+A18 5D,D118T+T18 2S+E18 9P, D 118T+T182S+Y242F,D118T+T182S+E259G,D118T+T182S+F266Y,D118T+T1 82S+N279S,D118T+T182S+K280Y,D118T+T182S+G303R,D118T+T182S+E39 0A,D118T+T182S+G475K,D118T+T182S+A185Q,D118T+T182S+N194F,D118 T+A185D+E189P,D118T+A185D+Y242F,D118T+A185D+E259G,D118T+A185D +F266Y,D118T+A185D+N279S,D118T+A185D+K280Y,D118T+A185D+G303R, D118T+A185D+E390A,D118T+A185D+G475K,D118T+A185D+A185Q,D118T+A 185D+N194F,D118T+E189P+Y242F,D118T+E189P+E259G,D118T+E189P+F2 66Y,D118T+E189P+N279S,D118T+E189P+K280Y,D118T+E189P+G303R,D11 8T+E189P+E390A,D118T+E189P+G475K,D118T+E189P+A185Q,D118T+E189 P+N194F,D118T+Y242F+E259G,D118T+Y242F+F266Y,D118T+Y242F+N279S ,D118T+Y242F+K280Y,D118T+Y242F+G303R,D118T+Y242F+E390A,D118T+ Y242F+G475K,D118T+Y242F+A185Q,D118T+Y242F+N194F,D118T+E259G+F 2 6 6Y,D118T+E259G+N279S,D118T+E259G+K280Y,D118T+E259G+G303R,D1 18T+E259G+E390A,D118T+E259G+G475K,D118T+E259G+A185Q,D118T+E25 9G+N194F,D118T+F266Y+N279S,D118T+F266Y+K280Y,D118T+F266Y+G303 R,D118T+F266Y+E390A,D118T+F266Y+G475K,D118T+F266Y+A185Q,D118T +F266Y+N194F,D118T+N279S+K280Y,D118T+N279S+G303R,D118T+N279S+ E390A,D118T+N279S+G475K,D118T+N279S+A185Q,D118T+N279S+N194F,D 118T+K280Y+G303R,D118T+K280Y+E390A,D118T+K280Y+G475K,D118T+K2 80Y+A185Q,D118T+K280Y+N194F,D118T+G303R+E390A,D118T+G303R+G47 5K,D118T+G303R+A185Q,D118T+G303R+N194F,D118T+E390A+G475K,D118 T+E390A+A185Q,D118T+E390A+N194F,D118T+G475K+A185Q,D118T+G475K +N194F,D118T+A185Q+N194F,W140Y+T182S+A185D,W140Y+T182S+E189P, W140Y+T182S+Y242F,W140Y+T182S+E259G,W140Y+T182S+F266Y,W140Y+T 182S+N279S,W140Y+T182S+K280Y,W140Y+T182S+G303R,W140Y+T182S+E3 90A,W140Y+T182S+G475K,W140Y+T182S+A185Q,W140Y+T182S+N194F,W14 0Y+A185D+E189P,W140Y+A185D+Y242F,W140Y+A185D+E259G,W140Y+A185 D+F266Y,W140Y+A185D+N279S,W140Y+A185D+K280Y,W140Y+A185D+G303R ,W140Y+A185D+E390A,W140Y+A185D+G475K,W140Y+A185D+A185Q,W140Y+ A185D+N194F,W140Y+E189P+Y242F,W140Y+E189P+E259G,W140Y+E189P+F 266Y,W140Y+E189P+N279S,W140Y+E189P+K280Y,W140Y+E189P+G303R,W1 40Y+E189P+E390A,W140Y+E189P+G475K,W140Y+E189P+A185Q,W140Y+E18 9P+N194F,W140Y+Y242F+E259G,W140Y+Y242F+F266Y,W140Y+Y242F+N279 S,W140Y+Y242F+K280Y,W140Y+Y242F+G303R,W140Y+Y242F+E390A,W140Y +Y242F+G475K,W140Y+Y242F+A185Q,W140Y+Y242F+N194F,W140Y+E259G+ F266Y,W140Y+E259G+N279S,W140Y+E259G+K280Y,W140Y+E259G+G303R,W 140Y+E259G+E390A,W140Y+E259G+G475K,W140Y+E259G+A185Q,W140Y+E2 59G+N194F,W140Y+F266Y+N279S,W140Y+F266Y+K280Y,W140Y+F266Y+G30 3R,W140Y+F266Y+E390A,W140Y+F266Y+G475K,W140Y+F266Y+A185Q,W140 Y+F266Y+N194F,W140Y+N279S+K280Y,W140Y+N279S+G303R,W140Y+N279S +E390A,W140Y+N279S+G475K,W140Y+N279S+A185Q,W140Y+N279S+N194F, W140Y+K280Y+G303R,W140Y+K280Y+E390A,W140Y+K280Y+G475K,W140Y+K 280Y+A185Q,W140Y+K280Y+N194F,W140Y+G303R+E390A,W140Y+G303R+G4 75K,W140Y+G303R+A185Q,W140Y+G303R+N194F,W140Y+E390A+G475K,W14 0Y+E390A+A185Q,W140Y+E390A+N194F,W140Y+G475K+A185Q,W140Y+G475 K+N194F,W140Y+A185Q+N194F,T182S+A185D+E189P,T182S+A185D+Y242F ,T182S+A185D+E259G,T182S+A185D+F266Y,T182S+A185D+N279S,T182S+ A185D+K280Y,T182S+A185D+G303R,T182S+A185D+E390A,T182S+A185D+G 45K,T182S+A185D+A185Q,T182S+A185D+N194F,T182S+E189P+Y242F,T18 2S+E189P+E259G,T182S+E189P+F266Y,T182S+E189P+N279S,T182S+E189 P+K280Y,T182S+E189P+G303R,T182S+E189P+E390A,T182S+E189P+G475K ,T182S + E18 9P+A185Q,T18 2S+E18 9P+N194F,T182S+Y2 42F+E25 9G, T18 2S + Y242F+F266Y,T182S+Y242F+N279S,T182S+Y242F+K280Y,T182S+Y242F+G 303R,T182S+Y242F+E390A,T182S+Y242F+G475K,T182S+Y242F+A185Q,T1 82S+Y242F+N194F,T182S+E259G+F266Y,T182S+E259G+N279S,T182S+E25 9G+K280Y,T182S+E259G+G303R,T182S+E259G+E390A,T182S+E259G+G475 K,T182S+E259G+A185Q,T182S+E259G+N194F,T182S+F266Y+N279S,T182S +F266Y+K280Y,T182S+F266Y+G303R,T182S+F266Y+E390A,T182S+F266Y+ G475K,T182S+F266Y+A185Q,T182S+F266Y+N194F,T182S+N279S+K280Y,T 182S+N279S+G303R,T182S+N279S+E390A,T182S+N279S+G475K,T182S+N2 79S+A185Q,T182S+N279S+N194F,T182S+K280Y+G303R,T182S+K280Y+E39 0A,T182S+K280Y+G475K,T182S+K280Y+A185Q,T182S+K280Y+N194F,T182 S+G303R+E390A,T182S+G303R+G475K,T182S+G303R+A185Q,T182S+G303R +N194F,T182S+E390A+G475K,T182S+E390A+A185Q,T182S+E390A+N194F, T182S+G475K+A185Q,T182S+G475K+N194F,T182S+A185Q+N194F,A185D+E 189P+Y242F,A185D+E189P+E259G,A185D+E189P+F266Y,A185D+E189P+N2 79S,A185D+E189P+K280Y,A185D+E189P+G303R,A185D+E189P+E390A,A18 5D+E189P+G475K,A185D+E189P+A185Q,A185D+E189P+N194F,A185D+Y242 F+E259G,A185D+Y242F+F266Y,A185D+Y242F+N279S,A185D+Y242F+K280Y ,A185D+Y242F+G303R,A185D+Y242F+E390A,A185D+Y242F+G475K,A185D+ Y242F+A185Q,A185D+Y242F+N194F,A185D+E259G+F266Y,A185D+E259G+N 279S,A185D+E259G+K280Y,A185D+E259G+G303R,A185D+E259G+E390A,A1 85D+E259G+G475K,A185D+E259G+A185Q,A185D+E259G+N194F,A185D+F26 6Y+N279S,A185D+F266Y+K280Y,A185D+F266Y+G303R,A185D+F266Y+E390 A,A185D+F266Y+G475K,A185D+F266Y+A185Q,A185D+F266Y+N194F,A185D +N279S+K280Y,A185D+N279S+G303R,A185D+N279S+E390A,A185D+N279S+ G475K,A185D+N279S+A185Q,A185D+N279S+N194F,A185D+K280Y+G303R,A 185D+K280Y+E390A,A185D+K280Y+G475K,A185D+K280Y+A185Q,A185D+K2 80Y+N194F,A185D+G303R+E390A,A185D+G303R+G475K,A185D+G303R+A18 5Q,A185D+G303R+N194F,A185D+E390A+G475K,A185D+E390A+A185Q,A185 D+E390A+N194F,A185D+G475K+A185Q,A185D+G475K+N194F,A185D+A185Q +N194F,E189P+Y242F+E259G,E189P+Y242F+F266Y,E189P+Y242F+N279S, E189P+Y242F+K280Y,E189P+Y242F+G303R,E189P+Y242F+E390A,E189P+Y 242F+G475K,E189P+Y242F+A185Q,E189P+Y242F+N194F,E189P+E259G+F2 66Y,E189P+E259G+N279S,E189P+E259G+K280Y,E189P+E259G+G303R,E18 9P+E259G+E390A,E189P+E259G+G475K,E189P+E259G+A185Q,E189P+E259 G+N194F,E189P+F266Y+N279S,E189P+F266Y+K280Y,E189P+F266Y+G303R ,E189P+F266Y+E390A,E189P+F266Y+G475K,E189P+F266Y+A185Q,E189P+ F266Y+N194F,E189P+N279S+K280Y,E189P+N279S+G303R,E189P+N279S+E 390A,E189P+N279S+G475K,E189P+N279S+A185Q,E189P+N279S+N194F,E1 89P+K280Y+G303R,E189P+K280Y+E390A,E189P+K280Y+G475K,E189P+K28 0Y+A185Q,E189P+K280Y+N194F,E189P+G303R+E390A,E189P+G303R+G475 K,E189P+G303R+A185Q,E189P+G303R+N194F,E189P+E390A+G475K,E189P +E390A+A185Q,E189P+E390A+N194F,E189P+G475K+A185Q,E189P+G475K+ N194F,E189P+A185Q+N194F,Y242F+E259G+F266Y,Y242F+E259G+N279S,Y 242F+E259G+K280Y,Y242F+E259G+G303R,Y242F+E259G+E390A,Y242F+E2 59G+G475K,Y242F+E259G+A185Q,Y242F+E259G+N194F,Y242F+F266Y+N27 9S,Y242F+F266Y+K280Y,Y242F+F266Y+G303R,Y242F+F266Y+E390A,Y242 F+F266Y+G475K,Y242F+F266Y+A185Q,Y242F+F266Y+N194F,Y242F+N279S +K280Y,Y242F+N279S+G303R,Y242F+N279S+E390A,Y242F+N279S+G475K, Y242F+N279S+A185Q,Y242F+N279S+N194F,Y242F+K280Y+G303R,Y242F+K 280Y+E390A,Y242F+K280Y+G475K,Y242F+K280Y+A185Q,Y242F+K280Y+N1 94F,Y242F+G303R+E390A,Y242F+G303R+G475K,Y242F+G303R+A185Q,Y24 2F+G303R+N194F,Y242F+E390A+G475K,Y242F+E390A+A185Q,Y242F+E390 A+N194F,Y242F+G475K+A185Q,Y242F+G475K+N194F,Y242F+A185Q+N194F ,E259G+F266Y+N279S,E259G+F266Y+K280Y,E259G+F266Y+G303R,E259G+ F266Y+E390A,E259G+F266Y+G475K,E259G+F266Y+A185Q,E259G+F266Y+N 194F,E259G+N279S+K280Y,E259G+N279S+G303R,E259G+N279S+E390A,E2 59G+N279S+G475K,E259G+N279S+A185Q,E259G+N279S+N194F,E259G+K28 0Y+G303R,E259G+K280Y+E390A,E259G+K280Y+G475K,E259G+K280Y+A185 Q,E259G+K280Y+N194F,E259G+G303R+E390A,E259G+G303R+G475K,E259G +G303R+A185Q,E259G+G303R+N194F,E259G+E390A+G475K,E259G+E390A+ A185Q,E259G+E390A+N194F,E259G+G475K+A185Q,E259G+G475K+N194F,E 259G+A185Q+N194F,F266Y+N279S+K280Y,F266Y+N279S+G303R,F266Y+N2 79S+E390A,F266Y+N279S+G475K,F266Y+N279S+A185Q,F266Y+N279S+N19 4F,F266Y+K280Y+G303R,F266Y+K280Y+E390A,F266Y+K280Y+G475K,F266 Y+K280Y+A185Q,F266Y+K280Y+N194F,F266Y+G303R+E390A,F266Y+G303R +G475K,F266Y+G303R+A185Q,F266Y+G303R+N194F,F266Y+E390A+G475K, F266Y+E390A+A185Q,F266Y+E390A+N194F,F266Y+G475K+A185Q,F266Y+G 475K+N194F,F266Y+A185Q+N194F,N279S+K280Y+G303R,N279S+K280Y+E3 90A,N279S+K280Y+G475K,N279S+K280Y+A185Q,N279S+K280Y+N194F,N27 9S+G303R+E390A,N279S+G303R+G475K,N279S+G303R+A185Q,N279S+G303 R+N194F,N279S+E390A+G475K,N279S+E390A+A185Q,N279S+E390A+N194F ,N279S+G475K+A185Q, N279S+G475K+N194F,N279S+A185Q+N194F,K280Y+G303R+E39 0A,K280Y+G303R+G475K,K280Y+G303R+A185Q,K280Y+G303R+N194F,K280 Y+E390A+G475K,K280Y+E390A+A185Q,K280Y+E390A+N194F,K280Y+G475K +A185Q,K280Y+G475K+N194F,K280Y+A185Q+N194F,G303R+E390A+G475K, G303R+E390A+A185Q,G303R+E390A+N194F,G303R+G475K+A185Q,G303R+G 475K+N194F,G303R+A185Q+N194F,E390A+G475K+A185Q,E390A+G475K+N1 94F,E390A+A185Q+N194F,G475K+A185Q+N194F, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0404] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 4, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P, H1*+G7A+W140Y+Y242F, H1*+G7A+W140Y+E259G, H1*+G7A+W140Y+N279S, H1*+G7A+W140Y+K280Y, H1*+G7A+W140Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F,H1*+G7A+E189P+E259G,H1*+G7A+E189P+N279S,H 1*+G7A+E189P+K280Y,H1*+G7A+E189P+G303R,H1*+G7A+E189P+E390A,H1 *+G7A+Y242F+E259G,H1*+G7A+Y242F+N279S,H1*+G7A+Y242F+K280Y,H1* +G7A+Y242F+G303R,H1*+G7A+Y242F+E390A,H1*+G7A+E259G+N279S,H1*+ G7A+E259G+K280Y,H1*+G7A+E259G+G303R,H1*+G7A+E259G+E390A,H1*+G 7A+N279S+K280Y,H1*+G7A+N279S+G303R,H1*+G7A+N279S+E390A,H1*+G7 A+K280Y+G303R,H1*+G7A+K280Y+E390A,H1*+G7A+G303R+E390A,H1*+W14 0Y+E189P+Y242F,H1*+W140Y+E189P+E259G,H1*+W140Y+E189P+N279S,H1 *+W14 0Y+E18 9P+K2 8 0Y,H1*+W14 0Y+E18 9P+G3 03R, H1*+W14 0Y+E18 9P+E3 9 0A,H1*+W140Y+Y242F+E259G,H1*+W140Y+Y242F+N279S,H1*+W140Y+Y242 F+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+G303R,H1*+W140Y+Y242F+E390A,H1*+W140Y +E259G+N279S,H1*+W140Y+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E259G+G303R,H1*+ W140Y+E259G+E390A,H1*+W140Y+N279S+K280Y,H1*+W140Y+N279S+G303R ,H1*+W140Y+N279S+E390A,H1*+W140Y+K280Y+G303R,H1*+W140Y+K280Y+ E3 90A,H1*+W14 0Y+G3 03R+E3 90A,H1* + E18 9P+Y2 4 2F+E2 5 9G, H1*+E18 9P+Y 242F+N27 9S,H1*+E18 9P+Y24 2F+K280Y,H1* + E18 9P+Y24 2F+G3 0 3R, H1*+E1 89P+Y242F+E390A,H1*+E189P+E259G+N279S,H1*+E189P+E259G+K280Y,H 1*+E189P+E259G+G303R,H1*+E189P+E259G+E390A,H1*+E189P+N279S+K2 80Y,H1*+E189P+N279S+G303R,H1*+E189P+N279S+E390A,H1*+E189P+K28 0Y+G303R,H1*+E189P+K280Y+E390A,H1*+E189P+G303R+E390A,H1*+Y242 F+E259G+N279S,H1*+Y242F+E259G+K280Y,H1*+Y242F+E259G+G303R,H1* +Y242F+E259G+E390A,H1*+Y242F+N279S+K280Y,H1*+Y242F+N279S+G303 R,H1*+Y242F+N279S+E390A,H1*+Y242F+K280Y+G303R,H1*+Y242F+K280Y +E390A,H1*+Y242F+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y,H1*+E259G+ N279S+G303R,H1*+E259G+N279S+E390A,H1*+E259G+K280Y+G303R,H1*+E 259G+K280Y+E390A,H1*+E259G+G303R+E390A,H1*+N279S+K280Y+G303R, H1*+N279S+K280Y+E390A,H1*+N279S+G303R+E390A,H1*+K280Y+G303R+E 390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F,G7A+W140Y+E189P+E259G,G7A+W140Y+E1 89P+N279S,G7A+W140Y+E189P+K280Y,G7A+W140Y+E189P+G303R,G7A+W14 0Y+E189P+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E259G,G7A+W140Y+Y242F+N279S,G7 A+W140Y+Y242F+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E39 0A,G7A+W140Y+E259G+N279S,G7A+W140Y+E259G+K280Y,G7A+W140Y+E259 G+G303R,G7A+W140Y+E259G+E390A,G7A+W140Y+N279S+K280Y,G7A+W140Y +N279S+G303R,G7A+W140Y+N279S+E390A,G7A+W140Y+K280Y+G303R,G7A+ W140Y+K280Y+E390A,G7A+W140Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G ,G7A+E189P+Y242F+N279S,G7A+E189P+Y242F+K280Y,G7A+E189P+Y242F+ G303R,G7A+E189P+Y242F+E390A,G7A+E189P+E259G+N279S,G7A+E189P+E 2 5 9G+K2 8 0Y,G7A+E18 9P+E2 5 9G+G3 03R,G7A+E18 9P+E2 5 9G+E3 9 0A, G7A+E1 89P+N279S+K280Y,G7A+E189P+N279S+G303R,G7A+E189P+N279S+E390A,G 7A+E189P+K280Y+G303R,G7A+E189P+K280Y+E390A,G7A+E189P+G303R+E3 90A,G7A+Y242F+E259G+N279S,G7A+Y242F+E259G+K280Y,G7A+Y242F+E25 9G+G303R,G7A+Y242F+E259G+E390A,G7A+Y242F+N279S+K280Y,G7A+Y242 F+N279S+G303R,G7A+Y242F+N279S+E390A,G7A+Y242F+K280Y+G303R,G7A +Y242F+K280Y+E390A,G7A+Y242F+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280 Y,G7A+E259G+N279S+G303R,G7A+E259G+N279S+E390A,G7A+E259G+K280Y +G303R,G7A+E259G+K280Y+E390A,G7A+E259G+G303R+E390A,G7A+N279S+ K280Y+G303R,G7A+N279S+K280Y+E390A,G7A+N279S+G303R+E390A,G7A+K 280Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G,W140Y+E189P+Y242F+N2 79S,W140Y+E189P+Y242F+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+G303R,W140Y+E18 9P+Y242F+E390A,W140Y+E189P+E259G+N279S,W140Y+E189P+E259G+K280 Y,W140Y+E189P+E259G+G303R,W140Y+E189P+E259G+E390A,W140Y+E189P +N279S+K280Y,W140Y+E189P+N279S+G303R,W140Y+E189P+N279S+E390A, W140Y+E189P+K280Y+G303R,W140Y+E189P+K280Y+E390A,W140Y+E189P+G 303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N279S,W140Y+Y242F+E259G+K280Y,W1 40Y+Y242F+E259G+G303R,W140Y+Y242F+E259G+E390A,W140Y+Y242F+N27 9S+K280Y,W140Y+Y242F+N279S+G303R,W140Y+Y242F+N279S+E390A,W140 Y+Y242F+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+K280Y+E390A,W140Y+Y242F+G303R +E390A,W140Y+E259G+N279S+K280Y,W140Y+E259G+N279S+G303R,W140Y+ E259G+N279S+E390A,W140Y+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E259G+K280Y+E 390A,W140Y+E259G+G303R+E390A,W140Y+N279S+K280Y+G303R,W140Y+N2 79S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A,W140Y+K280Y+G303R+E390 A,E189P+Y242F+E259G+N279S,E189P+Y242F+E259G+K280Y,E189P+Y242F +E259G+G303R,E189P+Y242F+E259G+E390A,E189P+Y242F+N279S+K280Y, E189P+Y242F+N279S+G303R,E189P+Y242F+N279S+E390A,E189P+Y242F+K 280Y+G303R,E189P+Y242F+K280Y+E390A,E189P+Y242F+G303R+E390A,E1 89P+E259G+N279S+K280Y,E189P+E259G+N279S+G303R,E189P+E259G+N27 9S+E390A,E189P+E259G+K280Y+G303R,E189P+E259G+K280Y+E390A,E189 P+E259G+G303R+E390A,E189P+N279S+K280Y+G303R,E189P+N279S+K280Y +E390A,E189P+N279S+G303R+E390A,E189P+K280Y+G303R+E390A,Y242F+ E259G+N279S+K280Y,Y242F+E259G+N279S+G303R,Y242F+E259G+N279S+E 390A,Y242F+E259G+K280Y+G303R,Y242F+E259G+K280Y+E390A,Y242F+E2 59G+G303R+E390A,Y242F+N279S+K280Y+G303R,Y242F+N279S+K280Y+E39 0A,Y242F+N279S+G303R+E390A,Y242F+K280Y+G303R+E390A,E259G+N279 S+K280Y+G303R,E259G+N279S+K280Y+E390A,E259G+N279S+G303R+E390A ,E259G+K280Y+G303R+E390A,N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0405] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 4, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S,H1*+G7A+W 140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G +E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R,H1 *+G7A+W140Y+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R,H1*+G7A+W14 0Y+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+ E259G,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S,H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y,H1* +G7A+E189P+Y242F+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A,H1*+G7A+E189 P+E259G+N279S,H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y,H1*+G7A+E189P+E259G+G 303R,H1*+G7A+E189P+E259G+E390A,H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y,H1*+ G7A+E189P+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+N279S+E390A,H1*+G7A+E189P +K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+G303R+E3 90A,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G 7A+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A,H1*+G7A+Y242F+ N279S+K280Y,H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R,H1*+G7A+Y242F+N279S+E39 0A,H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R,H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A,H1*+G7 A+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+E259G+N 279S+G303R,H1*+G7A+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+E259G+K280Y+G303 R,H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A +N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+N279S+G3 03R+E390A,H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E25 9G,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y,H1 *+W140Y+E189P+Y242F+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A,H1*+W14 0Y+E189P+E259G+N279S,H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E1 89P+E259G+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A,H1*+W140Y+E189P+N 279S+K280Y,H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R,H1*+W140Y+E189P+N279S+ E390A,H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A ,H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S,H1*+ W140Y+Y242F+E259G+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R,H1*+W140Y +Y242F+E259G+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,H1*+W140Y+Y242 F+N279S+G303R,H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A,H1*+W140Y+Y242F+K28 0Y+G303R,H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+G303R+E3 90A,H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R,H 1*+W140Y+E259G+N279S+E390A,H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R,H1*+W1 40Y+E259G+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A,H1*+W140Y+N 2 7 9S+K2 8 0Y+G3 03R,H1*+W14 0Y+N2 7 9S+K2 8 0Y+E3 9 0A, H1*+W14 0Y+N2 7 9S + G303R+E390A,H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G +N279S,H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+E189P+Y242F+E259G+G303 R,H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1* +E189P+Y242F+N279S+G303R,H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A,H1*+E189 P+Y242F+K280Y+G303R,H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A,H1*+E189P+Y24 2F+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y,H1*+E189P+E259G+N2 79S+G303R,H1*+E189P+E259G+N279S+E390A,H1*+E189P+E259G+K280Y+G 3 0 3R, H1*+E18 9P+E2 5 9G+K2 8 0Y+E3 90A,H1* + E18 9P+E2 5 9G+G3 0 3R+E3 90A, H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R,H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+E 189P+N279S+G303R+E390A,H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+ E259G+N279S+K280Y,H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+Y242F+E259G +N279S+E390A,H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+Y242F+E259G+K280 Y+E390A,H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1*+Y242F+N279S+K280Y+G30 3R,H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1 *+Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+E25 9G+N279S+K280Y+E390A,H1*+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+E259G+K2 80Y+G303R+E390A,H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y 242F+E259G,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S,G7A+W140Y+E189P+Y242F+ K280Y,G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A ,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S,G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y,G7A+ W140Y+E189P+E259G+G303R,G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A,G7A+W140Y +E189P+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189 P+N279S+E390A,G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+K28 0Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N2 79S,G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R,G 7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,G7A+W1 40Y+Y242F+N279S+G303R,G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A,G7A+W140Y+Y 242F+K280Y+G303R,G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y242F+ G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E259G+N279S +G303R,G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A,G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303 R,G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A,G7A +W140Y+N279S+K280Y+G303R,G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140 Y+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y24 2F+E259G+N279S,G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y,G7A+E189P+Y242F+E2 59G+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A,G7A+E189P+Y242F+N279S+K 280Y,G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R,G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A, G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A,G7A+E 189P+Y242F+G303R+E390A,G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y,G7A+E189P+ E259G+N279S+G303R,G7A+E189P+E259G+N279S+E390A,G7A+E189P+E259G +K280Y+G303R,G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A,G7A+E189P+E259G+G303 R+E390A,G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+N279S+K280Y+E39 0A,G7A+E189P+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A,G7 A+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R,G7A+Y24 2F+E259G+N279S+E390A,G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R,G7A+Y242F+E2 59G+K280Y+E390A,G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A,G7A+Y242F+N279S+K 280Y+G303R,G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+Y242F+N279S+G303R+ E390A,G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R ,G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+ E259G+K280Y+G303R+E390A,G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+N279S,W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,W140Y+E189 P+Y242F+E259G+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A,W140Y+E189P +Y242F+N279S+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R,W140Y+E189P+ Y242F+N279S+E390A,W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y 242F+K280Y+E390A,W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,W140Y+E189P+E2 59G+N279S+K280Y,W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,W140Y+E189P+E25 9G+N279S+E390A,W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E189P+E259 G+K280Y+E390A,W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,W140Y+E189P+N279S +K280Y+G303R,W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E189P+N279S+ G303R+E390A,W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N 279S+K280Y,W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R,W140Y+Y242F+E259G+N2 79S+E390A,W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+E259G+K28 0Y+E390A,W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A,W140Y+Y242F+N279S+K280 Y+G303R,W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A,W140Y+Y242F+N279S+G303R +E390A,W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E259G+N279S+K280Y+ G303R,W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E259G+N279S+G303R+E 390A,W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,W140Y+N279S+K280Y+G303R+E3 90A,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,E189P+Y242F+E259G+N279S+G30 3R,E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303 R,E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A ,E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R,E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A,E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,E 189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,E1 89P+E259G+N279S+G303R+E390A,E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A,E18 9P+N279S+K280Y+G303R+E390A,Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,Y242 F+E259G+N279S+K280Y+E390A,Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,Y242F +E259G+K280Y+G303R+E390A,Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,E259G+ N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0406] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 4, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G30 3R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+ N279S,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+E25 9G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+ N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E18 9P+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+ E189P+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A,H1*+G7A+W14 0Y+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+ W140Y+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A,H1*+G 7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R,H1 *+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R ,H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E3 90A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S +G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+K2 80Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G +G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+N2 79S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y +K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+E1 89P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A +E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1*+ G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A,H 1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390 A,H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K 280Y,H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+E259G+N279 S+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+E259G+K 280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+N279 S+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+N 279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242 F+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+Y 242F+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7 A+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1* +G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E39 0A,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+ E390A,H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E259G+K280Y+G30 3R+E390A,H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242 F+E259G+N279S,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+W1 40Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R ,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280 Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y24 2F+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E1 89P+E259G+N279S+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A,H1*+W 140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390 A,H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+N279S+K28 0Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+N2 79S+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+ W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G30 3R,H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+G3 03R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R,H1*+W140Y+Y242F+N 279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+W140Y+ Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1* +W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E3 90A,H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+N279S+K280Y+G 303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+E189P+Y242F+ E259G+N279S+G303R,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,H1*+E189P +Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1 *+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G 303R,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+ G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G +N279S+K280Y+G303R,H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+E189 P+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A,H 1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+ G303R,H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+Y242F+E259G+N279S +G303R+E390A,H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+N279 S+K280Y+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W14 0Y+E189P+Y242F+E259G+N279S,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G +E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E189P+Y242 F+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A,G7A+W140Y+E18 9P+Y242F+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A,G7A+W1 40Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y ,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279 S+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+E25 9G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,G7A+W140Y+E1 89P+N279S+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,G7A+W 140Y+E189P+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390 A,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N27 9S+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E2 59G+K280Y+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y 242F+E259G+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R,G7A+ W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E39 0A,G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+N279S+K2 80Y+G303R,G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E259G+N 279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+ N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A +E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E3 90A,G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+K 280Y+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+ N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+E189P +Y242F+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7 A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E 390A,G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+E259G+K280Y+ G303R+E390A,G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R,G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+Y242 F+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,G 7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+ E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+E 259G+N279S+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,W140Y+E1 89P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E39 0A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+N279 S+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E189P +Y242F+N279S+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,W140Y+E189P+E259G+N279S+K 280Y+E390A,W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A,W140Y+E189P+E2 59G+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,W14 0Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280 Y+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G +K280Y+G303R+E390A,W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,W140Y+ E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G 303R,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,E189P+Y242F+E259G+N2 79S+G303R+E390A,E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,E189P+Y24 2F+N279S+K280Y+G303R+E390A,E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390 A,Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0407] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 4, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0408] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 4, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N2 79S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A +W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242 F+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G30 3R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+ E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y +G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+ G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E 259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+ E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W14 0Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N2 79S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,H 1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242 F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G30 3R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+ E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G +N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390 A,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+ G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1* +W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y +G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1 *+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280 Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,G 7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+ Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K28 0Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F +E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K2 80Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E39 0A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0409] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 4, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W14 0Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K 280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+ E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G 7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K2 80Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0410] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 4, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E 390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0411] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 5, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+D118T, H1*+W140Y, H1*+T182S, H1*+A185D, H1*+E189P, H1*+Y242F, H1*+E259G, H1*+F266Y, H1*+N279S, H1*+K280Y, H1*+G303R, H1*+E390A, H1*+G475K, H1*+A185Q, H1*+N194F, D118T+W140Y, D118T+T182S, D118T+A185D, D118T+E189P, D118T+Y242F, D118T+E259G, D118T+F266Y, D118T+N279S,D118T+K280Y,D118T+G303R,D118T+E390A,D118T+G475K,D 118T+A185Q,D118T+N194F,W140Y+T182S,W140Y+A185D,W140Y+E189P,W1 40Y+Y242F,W140Y+E259G,W140Y+F266Y,W140Y+N279S,W140Y+K280Y,W14 0Y+G303R,W140Y+E390A,W140Y+G475K,W140Y+A185Q,W140Y+N194F,T182 S+A185D,T182S+E189P,T182S+Y242F,T182S+E259G,T182S+F266Y,T182S +N279S,T182S+K280Y,T182S+G303R,T182S+E390A,T182S+G475K,T182S+ A185Q,T182S+N194F,A185D+E189P,A185D+Y242F,A185D+E259G,A185D+F 266Y,A185D+N279S,A185D+K280Y,A185D+G303R,A185D+E390A,A185D+G4 75K,A185D,+A185Q,A185D,+N194F,E189P+Y242F,E189P+E259G,E189P+F 266Y,E189P+N279S,E189P+K280Y,E189P+G303R,E189P+E390A,E189P+G4 75K,E189P+A185Q,E189P+N194F,Y242F+E259G,Y242F+F266Y,Y242F+N27 9S,Y242F+K280Y,Y242F+G303R,Y242F+E390A,Y242F+G475K,Y242F+A185 Q,Y242F+N194F,E259G+F266Y,E259G+N279S,E259G+K280Y,E259G+G303R ,E259G+E390A,E259G+G475K,E259G+A185Q,E259G+N194F,F266Y+N279S, F266Y+K280Y,F266Y+G303R,F266Y+E390A,F266Y+G475K,F266Y+A185Q,F 266Y+N194F,N279+K280Y,N279S+G303R,N279S+E390A,N279S+G475K,N27 9S+A185Q,N279S+N194F,K280Y+G303R,K280Y+E390A,K280Y+G475K,K280 Y+A185Q,K280Y+N194F,G303R+E390A,G303R+G475K,G303R+A185Q,G303R +N194F,E390A+G475K,E390A+A185Q,E390A+N194F,G475K+A185Q,G475K+ N194F, A185Q+N194F, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0412] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 5, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+D118T+W140Y, H1*+D118T+T182S, H1*+D118T+A185D, H1*+D118T+E189P, H1*+D118T+Y242F, H1*+D118T+E259G, H1*+D118T+F266Y, H1*+D118T+N279S, H1*+D118T+K280Y, H1*+D118T+G303R, H1*+D118T+E390A, H1*+D118T+G475K, H1*+D118T+A185Q, H1*+D118T+N194F, H1*+W140Y+T182S, H1*+W140Y+A185D, H1*+W140Y+E189P, H1*+W140Y+Y242F, H1*+W140Y+E259G, H1*+W140Y+F266Y,H1*+W140Y+N279S,H1*+W140Y+K280Y,H1*+W140Y+G30 3R,H1*+W140Y+E390A,H1*+W140Y+G475K,H1*+W140Y+A185Q,H1*+W140Y+ N194F,H1*+T182S+A185D,H1*+T182S+E189P,H1*+T182S+Y242F,H1*+T18 2S+E259G,H1*+T182S+F266Y,H1*+T182S+N279S,H1*+T182S+K280Y,H1*+ T182S+G303R,H1*+T182S+E390A,H1*+T182S+G475K,H1*+T182S+A185Q,H 1*+T182S+N194F,H1*+A185D+E189P,H1*+A185D+Y242F,H1*+A185D+E259 G,H1*+A185D+F266Y,H1*+A185D+N279S,H1*+A185D+K280Y,H1*+A185D+G 303R,H1*+A185D+E390A,H1*+A185D+G475K,H1*+A185D+A185Q,H1*+A185 D+N194F,H1*+E189P+Y242F,H1*+E189P+E259G,H1*+E189P+F266Y,H1*+E 189P+N279S,H1*+E189P+K280Y,H1*+E189P+G303R,H1*+E189P+E390A,H1 *+E189P+G475K,H1*+E189P+A185Q,H1*+E189P+N194F,H1*+Y242F+E259G ,H1*+Y242F+F266Y,H1*+Y242F+N279S,H1*+Y242F+K280Y,H1*+Y242F+G3 03R,H1*+Y242F+E390A,H1*+Y242F+G475K,H1*+Y242F+A185Q,H1*+Y242F +N194F,H1*+E259G+F266Y,H1*+E259G+N279S,H1*+E259G+K280Y,H1*+E2 59G+G303R,H1*+E259G+E390A,H1*+E259G+G475K,H1*+E259G+A185Q,H1* +E259G+N194F,H1*+F266Y+N279S,H1*+F266Y+K280Y,H1*+F266Y+G303R, H1*+F266Y+E390A,H1*+F266Y+G475K,H1*+F266Y+A185Q,H1*+F266Y+N19 4F,H1*+N279S+K280Y,H1*+N279S+G303R,H1*+N279S+E390A,H1*+N279S+ G475K,H1*+N279S+A185Q,H1*+N279S+N194F,H1*+K280Y+G303R,H1*+K28 0Y+E390A,H1*+K280Y+G475K,H1*+K280Y+A185Q,H1*+K280Y+N194F,H1*+ G303R+E390A,H1*+G303R+G475K,H1*+G303R+A185Q,H1*+G303R+N194F,H 1*+E390A+G475K,H1*+E390A+A185Q,H1*+E390A+N194F,H1*+G475K+A185 Q,H1*+G475K+N194F,H1*+A185Q+N194F,D118T+W140Y+T182S,D118T+W14 0Y+A185D,D118T+W140Y+E189P,D118T+W140Y+Y242F,D118T+W140Y+E259 G,D118T+W140Y+F266Y,D118T+W140Y+N279S,D118T+W140Y+K280Y,D118T +W140Y+G303R,D118T+W140Y+E390A,D118T+W140Y+G475K,D118T+W140Y+ A18 5Q,D118T+W14 0Y+N194F,D118T+T18 2S+A18 5D,D118T+T18 2S+E18 9P, D 118T+T182S+Y242F,D118T+T182S+E259G,D118T+T182S+F266Y,D118T+T1 82S+N279S,D118T+T182S+K280Y,D118T+T182S+G303R,D118T+T182S+E39 0A,D118T+T182S+G475K,D118T+T182S+A185Q,D118T+T182S+N194F,D118 T+A185D+E189P,D118T+A185D+Y242F,D118T+A185D+E259G,D118T+A185D +F266Y,D118T+A185D+N279S,D118T+A185D+K280Y,D118T+A185D+G303R, D118T+A185D+E390A,D118T+A185D+G475K,D118T+A185D+A185Q,D118T+A 185D+N194F,D118T+E189P+Y242F,D118T+E189P+E259G,D118T+E189P+F2 66Y,D118T+E189P+N279S,D118T+E189P+K280Y,D118T+E189P+G303R,D11 8T+E189P+E390A,D118T+E189P+G475K,D118T+E189P+A185Q,D118T+E189 P+N194F,D118T+Y242F+E259G,D118T+Y242F+F266Y,D118T+Y242F+N279S ,D118T+Y242F+K280Y,D118T+Y242F+G303R,D118T+Y242F+E390A,D118T+ Y242F+G475K,D118T+Y242F+A185Q,D118T+Y242F+N194F,D118T+E259G+F 266Y,D118T+E259G+N279S,D118T+E259G+K280Y,D118T+E259G+G303R,D1 18T+E259G+E390A,D118T+E259G+G475K,D118T+E259G+A185Q,D118T+E25 9G+N194F,D118T+F266Y+N279S,D118T+F266Y+K280Y,D118T+F266Y+G303 R,D118T+F266Y+E390A,D118T+F266Y+G475K,D118T+F266Y+A185Q,D118T +F266Y+N194F,D118T+N279S+K280Y,D118T+N279S+G303R,D118T+N279S+ E390A,D118T+N279S+G475K,D118T+N279S+A185Q,D118T+N279S+N194F,D 118T+K280Y+G303R,D118T+K280Y+E390A,D118T+K280Y+G475K,D118T+K2 80Y+A185Q,D118T+K280Y+N194F,D118T+G303R+E390A,D118T+G303R+G47 5K,D118T+G303R+A185Q,D118T+G303R+N194F,D118T+E390A+G475K,D118 T+E390A+A185Q,D118T+E390A+N194F,D118T+G475K+A185Q,D118T+G475K +N194F,D118T+A185Q+N194F,W140Y+T182S+A185D,W140Y+T182S+E189P, W140Y+T182S+Y242F,W140Y+T182S+E259G,W140Y+T182S+F266Y,W140Y+T 182S+N279S,W140Y+T182S+K280Y,W140Y+T182S+G303R,W140Y+T182S+E3 90A,W140Y+T182S+G475K,W140Y+T182S+A185Q,W140Y+T182S+N194F,W14 0Y+A185D+E189P,W140Y+A185D+Y242F,W140Y+A185D+E259G,W140Y+A185 D+F266Y,W140Y+A185D+N279S,W140Y+A185D+K280Y,W140Y+A185D+G303R ,W140Y+A185D+E390A,W140Y+A185D+G475K,W140Y+A185D+A185Q,W140Y+ A185D+N194F,W140Y+E189P+Y242F,W140Y+E189P+E259G,W140Y+E189P+F 266Y,W140Y+E189P+N279S,W140Y+E189P+K280Y,W140Y+E189P+G303R,W1 40Y+E189P+E390A,W140Y+E189P+G475K,W140Y+E189P+A185Q,W140Y+E18 9P+N194F,W140Y+Y242F+E259G,W140Y+Y242F+F266Y,W140Y+Y242F+N279 S,W140Y+Y242F+K280Y,W140Y+Y242F+G303R,W140Y+Y242F+E390A,W140Y +Y242F+G475K,W140Y+Y242F+A185Q,W140Y+Y242F+N194F,W140Y+E259G+ F266Y,W140Y+E259G+N279S,W140Y+E259G+K280Y,W140Y+E259G+G303R,W 140Y+E259G+E390A,W140Y+E259G+G475K,W140Y+E259G+A185Q,W140Y+E2 59G+N194F,W140Y+F266Y+N279S,W140Y+F266Y+K280Y,W140Y+F266Y+G30 3R,W140Y+F266Y+E390A,W140Y+F266Y+G475K,W140Y+F266Y+A185Q,W140 Y+F266Y+N194F,W140Y+N279S+K280Y,W140Y+N279S+G303R,W140Y+N279S +E390A,W140Y+N279S+G475K,W140Y+N279S+A185Q,W140Y+N279S+N194F, W140Y+K280Y+G303R,W140Y+K280Y+E390A,W140Y+K280Y+G475K,W140Y+K 280Y+A185Q,W140Y+K280Y+N194F,W140Y+G303R+E390A,W140Y+G303R+G4 75K,W140Y+G303R+A185Q,W140Y+G303R+N194F,W140Y+E390A+G475K,W14 0Y+E390A+A185Q,W140Y+E390A+N194F,W140Y+G475K+A185Q,W140Y+G475 K+N194F,W140Y+A185Q+N194F,T182S+A185D+E189P,T182S+A185D+Y242F ,T182S+A185D+E259G,T182S+A185D+F266Y,T182S+A185D+N279S,T182S+ A185D+K280Y,T182S+A185D+G303R,T182S+A185D+E390A,T182S+A185D+G 45K,T182S+A185D+A185Q,T182S+A185D+N194F,T182S+E189P+Y242F,T18 2S+E189P+E259G,T182S+E189P+F266Y,T182S+E189P+N279S,T182S+E189 P+K280Y,T182S+E189P+G303R,T182S+E189P+E390A,T182S+E189P+G475K ,T182S+E189P+A185Q,T182S+E189P+N194F,T182S+Y242F+E259G,T182S+ Y242F+F266Y,T182S+Y242F+N279S,T182S+Y242F+K280Y,T182S+Y242F+G 303R,T182S+Y242F+E390A,T182S+Y242F+G475K,T182S+Y242F+A185Q,T1 82S+Y242F+N194F,T182S+E259G+F266Y,T182S+E259G+N279S,T182S+E25 9G+K280Y,T182S+E259G+G303R,T182S+E259G+E390A,T182S+E259G+G475 K,T182S+E259G+A185Q,T182S+E259G+N194F,T182S+F266Y+N279S,T182S +F266Y+K280Y,T182S+F266Y+G303R,T182S+F266Y+E390A,T182S+F266Y+ G475K,T182S+F266Y+A185Q,T182S+F266Y+N194F,T182S+N279S+K280Y,T 182S+N279S+G303R,T182S+N279S+E390A,T182S+N279S+G475K,T182S+N2 79S+A185Q,T182S+N279S+N194F,T182S+K280Y+G303R,T182S+K280Y+E39 0A,T182S+K280Y+G475K,T182S+K280Y+A185Q,T182S+K280Y+N194F,T182 S+G303R+E390A,T182S+G303R+G475K,T182S+G303R+A185Q,T182S+G303R +N194F,T182S+E390A+G475K,T182S+E390A+A185Q,T182S+E390A+N194F, T182S+G475K+A185Q,T182S+G475K+N194F,T182S+A185Q+N194F,A185D+E 189P+Y242F,A185D+E189P+E259G,A185D+E189P+F266Y,A185D+E189P+N2 79S,A185D+E189P+K280Y,A185D+E189P+G303R,A185D+E189P+E390A,A18 5D+E189P+G475K,A185D+E189P+A185Q,A185D+E189P+N194F,A185D+Y242 F+E259G,A185D+Y242F+F266Y,A185D+Y242F+N279S,A185D+Y242F+K280Y ,A185D+Y242F+G303R,A185D+Y242F+E390A,A185D+Y242F+G475K,A185D+ Y242F+A185Q,A185D+Y242F+N194F,A185D+E259G+F266Y,A185D+E259G+N 279S,A185D+E259G+K280Y,A185D+E259G+G303R,A185D+E259G+E390A,A1 85D+E259G+G475K,A185D+E259G+A185Q,A185D+E259G+N194F,A185D+F26 6Y+N279S,A185D+F266Y+K280Y,A185D+F266Y+G303R,A185D+F266Y+E390 A,A185D+F266Y+G475K,A185D+F266Y+A185Q,A185D+F266Y+N194F,A185D +N279S+K280Y,A185D+N279S+G303R,A185D+N279S+E390A,A185D+N279S+ G475K,A185D+N279S+A185Q,A185D+N279S+N194F,A185D+K280Y+G303R,A 185D+K280Y+E390A,A185D+K280Y+G475K,A185D+K280Y+A185Q,A185D+K2 80Y+N194F,A185D+G303R+E390A,A185D+G303R+G475K,A185D+G303R+A18 5Q,A185D+G303R+N194F,A185D+E390A+G475K,A185D+E390A+A185Q,A185 D+E390A+N194F,A185D+G475K+A185Q,A185D+G475K+N194F,A185D+A185Q +N194F,E189P+Y242F+E259G,E189P+Y242F+F266Y,E189P+Y242F+N279S, E189P+Y242F+K280Y,E189P+Y242F+G303R,E189P+Y242F+E390A,E189P+Y 242F+G475K,E189P+Y242F+A185Q,E189P+Y242F+N194F,E189P+E259G+F2 66Y,E189P+E259G+N279S,E189P+E259G+K280Y,E189P+E259G+G303R,E18 9P+E259G+E390A,E189P+E259G+G475K,E189P+E259G+A185Q,E189P+E259 G+N194F,E189P+F266Y+N279S,E189P+F266Y+K280Y,E189P+F266Y+G303R ,E189P+F266Y+E390A,E189P+F266Y+G475K,E189P+F266Y+A185Q,E189P+ F266Y+N194F,E189P+N279S+K280Y,E189P+N279S+G303R,E189P+N279S+E 390A,E189P+N279S+G475K,E189P+N279S+A185Q,E189P+N279S+N194F,E1 89P+K280Y+G303R,E189P+K280Y+E390A,E189P+K280Y+G475K,E189P+K28 0Y+A185Q,E189P+K280Y+N194F,E189P+G303R+E390A,E189P+G303R+G475 K,E189P+G303R+A185Q,E189P+G303R+N194F,E189P+E390A+G475K,E189P +E390A+A185Q,E189P+E390A+N194F,E189P+G475K+A185Q,E189P+G475K+ N194F,E189P+A185Q+N194F,Y242F+E259G+F266Y,Y242F+E259G+N279S,Y 242F+E259G+K280Y,Y242F+E259G+G303R,Y242F+E259G+E390A,Y242F+E2 59G+G475K,Y242F+E259G+A185Q,Y242F+E259G+N194F,Y242F+F266Y+N27 9S,Y242F+F266Y+K280Y,Y242F+F266Y+G303R,Y242F+F266Y+E390A,Y242 F+F266Y+G475K,Y242F+F266Y+A185Q,Y242F+F266Y+N194F,Y242F+N279S +K280Y,Y242F+N279S+G303R,Y242F+N279S+E390A,Y242F+N279S+G475K, Y242F+N279S+A185Q,Y242F+N279S+N194F,Y242F+K280Y+G303R,Y242F+K 280Y+E390A,Y242F+K280Y+G475K,Y242F+K280Y+A185Q,Y242F+K280Y+N1 94F,Y242F+G303R+E390A,Y242F+G303R+G475K,Y242F+G303R+A185Q,Y24 2F+G303R+N194F,Y242F+E390A+G475K,Y242F+E390A+A185Q,Y242F+E390 A+N194F,Y242F+G475K+A185Q,Y242F+G475K+N194F,Y242F+A185Q+N194F ,E259G+F266Y+N279S,E259G+F266Y+K280Y,E259G+F266Y+G303R,E259G+ F266Y+E390A,E259G+F266Y+G475K,E259G+F266Y+A185Q,E259G+F266Y+N 194F,E259G+N279S+K280Y,E259G+N279S+G303R,E259G+N279S+E390A,E2 59G+N279S+G475K,E259G+N279S+A185Q,E259G+N279S+N194F,E259G+K28 0Y+G303R,E259G+K280Y+E390A,E259G+K280Y+G475K,E259G+K280Y+A185 Q,E259G+K280Y+N194F,E259G+G303R+E390A,E259G+G303R+G475K,E259G +G303R+A185Q,E259G+G303R+N194F,E259G+E390A+G475K,E259G+E390A+ A185Q,E259G+E390A+N194F,E259G+G475K+A185Q,E259G+G475K+N194F,E 259G+A185Q+N194F,F266Y+N279S+K280Y,F266Y+N279S+G303R,F266Y+N2 79S+E390A,F266Y+N279S+G475K,F266Y+N279S+A185Q,F266Y+N279S+N19 4F,F266Y+K280Y+G303R,F266Y+K280Y+E390A,F266Y+K280Y+G475K,F266 Y+K280Y+A185Q,F266Y+K280Y+N194F,F266Y+G303R+E390A,F266Y+G303R +G475K,F266Y+G303R+A185Q,F266Y+G303R+N194F,F266Y+E390A+G475K, F266Y+E390A+A185Q,F266Y+E390A+N194F,F266Y+G475K+A185Q,F266Y+G 475K+N194F,F266Y+A185Q+N194F,N279S+K280Y+G303R,N279S+K280Y+E3 90A,N279S+K280Y+G475K,N279S+K280Y+A185Q,N279S+K280Y+N194F,N27 9S+G303R+E390A,N279S+G303R+G475K,N279S+G303R+A185Q,N279S+G303 R+N194F,N279S+E390A+G475K,N279S+E390A+A185Q,N279S+E390A+N194F ,N279S+G475K+A185Q, N279S+G475K+N194F,N279S+A185Q+N194F,K280Y+G303R+E39 0A,K280Y+G303R+G475K,K280Y+G303R+A185Q,K280Y+G303R+N194F,K280 Y+E390A+G475K,K280Y+E390A+A185Q,K280Y+E390A+N194F,K280Y+G475K +A185Q,K280Y+G475K+N194F,K280Y+A185Q+N194F,G303R+E390A+G475K, G303R+E390A+A185Q,G303R+E390A+N194F,G303R+G475K+A185Q,G303R+G 475K+N194F,G303R+A185Q+N194F,E390A+G475K+A185Q,E390A+G475K+N1 94F,E390A+A185Q+N194F,G475K+A185Q+N194F, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0413] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 5, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P, H1*+G7A+W140Y+Y242F, H1*+G7A+W140Y+E259G, H1*+G7A+W140Y+N279S, H1*+G7A+W140Y+K280Y, H1*+G7A+W140Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F,H1*+G7A+E189P+E259G,H1*+G7A+E189P+N279S,H 1*+G7A+E189P+K280Y,H1*+G7A+E189P+G303R,H1*+G7A+E189P+E390A,H1 *+G7A+Y242F+E259G,H1*+G7A+Y242F+N279S,H1*+G7A+Y242F+K280Y,H1* +G7A+Y242F+G303R,H1*+G7A+Y242F+E390A,H1*+G7A+E259G+N279S,H1*+ G7A+E259G+K280Y,H1*+G7A+E259G+G303R,H1*+G7A+E259G+E390A,H1*+G 7A+N279S+K280Y,H1*+G7A+N279S+G303R,H1*+G7A+N279S+E390A,H1*+G7 A+K280Y+G303R,H1*+G7A+K280Y+E390A,H1*+G7A+G303R+E390A,H1*+W14 0Y+E189P+Y242F,H1*+W140Y+E189P+E259G,H1*+W140Y+E189P+N279S,H1 *+W140Y+E189P+K280Y,H1*+W140Y+E189P+G303R,H1*+W140Y+E189P+E39 0A,H1*+W140Y+Y242F+E259G,H1*+W140Y+Y242F+N279S,H1*+W140Y+Y242 F+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+G303R,H1*+W140Y+Y242F+E390A,H1*+W140Y +E259G+N279S,H1*+W140Y+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E259G+G303R,H1*+ W140Y+E259G+E390A,H1*+W140Y+N279S+K280Y,H1*+W140Y+N279S+G303R ,H1*+W140Y+N279S+E390A,H1*+W140Y+K280Y+G303R,H1*+W140Y+K280Y+ E390A,H1*+W140Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G, H1*+E189P+Y 242F+N279S,H1*+E189P+Y242F+K280Y,H1*+E189P+Y242F+G303R,H1*+E1 89P+Y242F+E390A,H1*+E189P+E259G+N279S,H1*+E189P+E259G+K280Y,H 1*+E189P+E259G+G303R,H1*+E189P+E259G+E390A,H1*+E189P+N279S+K2 80Y,H1*+E189P+N279S+G303R,H1*+E189P+N279S+E390A,H1*+E189P+K28 0Y+G303R,H1*+E189P+K280Y+E390A,H1*+E189P+G303R+E390A,H1*+Y242 F+E259G+N279S,H1*+Y242F+E259G+K280Y,H1*+Y242F+E259G+G303R,H1* +Y242F+E259G+E390A,H1*+Y242F+N279S+K280Y,H1*+Y242F+N279S+G303 R,H1*+Y242F+N279S+E390A,H1*+Y242F+K280Y+G303R,H1*+Y242F+K280Y +E390A,H1*+Y242F+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y,H1*+E259G+ N279S+G303R,H1*+E259G+N279S+E390A,H1*+E259G+K280Y+G303R,H1*+E 259G+K280Y+E390A,H1*+E259G+G303R+E390A,H1*+N279S+K280Y+G303R, H1*+N279S+K280Y+E390A,H1*+N279S+G303R+E390A,H1*+K280Y+G303R+E 390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F,G7A+W140Y+E189P+E259G,G7A+W140Y+E1 89P+N279S,G7A+W140Y+E189P+K280Y,G7A+W140Y+E189P+G303R,G7A+W14 0Y+E189P+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E259G,G7A+W140Y+Y242F+N279S,G7 A+W140Y+Y242F+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E39 0A,G7A+W140Y+E259G+N279S,G7A+W140Y+E259G+K280Y,G7A+W140Y+E259 G+G303R,G7A+W140Y+E259G+E390A,G7A+W140Y+N279S+K280Y,G7A+W140Y +N279S+G303R,G7A+W140Y+N279S+E390A,G7A+W140Y+K280Y+G303R,G7A+ W140Y+K280Y+E390A,G7A+W140Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G ,G7A+E189P+Y242F+N279S,G7A+E189P+Y242F+K280Y,G7A+E189P+Y242F+ G303R,G7A+E189P+Y242F+E390A,G7A+E189P+E259G+N279S,G7A+E189P+E 259G+K280Y,G7A+E189P+E259G+G303R,G7A+E189P+E259G+E390A,G7A+E1 89P+N279S+K280Y,G7A+E189P+N279S+G303R,G7A+E189P+N279S+E390A,G 7A+E189P+K280Y+G303R,G7A+E189P+K280Y+E390A,G7A+E189P+G303R+E3 90A,G7A+Y242F+E259G+N279S,G7A+Y242F+E259G+K280Y,G7A+Y242F+E25 9G+G303R,G7A+Y242F+E259G+E390A,G7A+Y242F+N279S+K280Y,G7A+Y242 F+N279S+G303R,G7A+Y242F+N279S+E390A,G7A+Y242F+K280Y+G303R,G7A +Y242F+K280Y+E390A,G7A+Y242F+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280 Y,G7A+E259G+N279S+G303R,G7A+E259G+N279S+E390A,G7A+E259G+K280Y +G303R,G7A+E259G+K280Y+E390A,G7A+E259G+G303R+E390A,G7A+N279S+ K280Y+G303R,G7A+N279S+K280Y+E390A,G7A+N279S+G303R+E390A,G7A+K 280Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G,W140Y+E189P+Y242F+N2 79S,W140Y+E189P+Y242F+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+G303R,W140Y+E18 9P+Y242F+E390A,W140Y+E189P+E259G+N279S,W140Y+E189P+E259G+K280 Y,W140Y+E189P+E259G+G303R,W140Y+E189P+E259G+E390A,W140Y+E189P +N279S+K280Y,W140Y+E189P+N279S+G303R,W140Y+E189P+N279S+E390A, W140Y+E189P+K280Y+G303R,W140Y+E189P+K280Y+E390A,W140Y+E189P+G 303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N279S,W140Y+Y242F+E259G+K280Y,W1 40Y+Y242F+E259G+G303R,W140Y+Y242F+E259G+E390A,W140Y+Y242F+N27 9S+K280Y,W140Y+Y242F+N279S+G303R,W140Y+Y242F+N279S+E390A,W140 Y+Y242F+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+K280Y+E390A,W140Y+Y242F+G303R +E390A,W140Y+E259G+N279S+K280Y,W140Y+E259G+N279S+G303R,W140Y+ E259G+N279S+E390A,W140Y+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E259G+K280Y+E 390A,W140Y+E259G+G303R+E390A,W140Y+N279S+K280Y+G303R,W140Y+N2 79S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A,W140Y+K280Y+G303R+E390 A,E189P+Y242F+E259G+N279S,E189P+Y242F+E259G+K280Y,E189P+Y242F +E259G+G303R,E189P+Y242F+E259G+E390A,E189P+Y242F+N279S+K280Y, E189P+Y242F+N279S+G303R,E189P+Y242F+N279S+E390A,E189P+Y242F+K 280Y+G303R,E189P+Y242F+K280Y+E390A,E189P+Y242F+G303R+E390A,E1 89P+E259G+N279S+K280Y,E189P+E259G+N279S+G303R,E189P+E259G+N27 9S+E390A,E189P+E259G+K280Y+G303R,E189P+E259G+K280Y+E390A,E189 P+E259G+G303R+E390A,E189P+N279S+K280Y+G303R,E189P+N279S+K280Y +E390A,E189P+N279S+G303R+E390A,E189P+K280Y+G303R+E390A,Y242F+ E259G+N279S+K280Y,Y242F+E259G+N279S+G303R,Y242F+E259G+N279S+E 390A,Y242F+E259G+K280Y+G303R,Y242F+E259G+K280Y+E390A,Y242F+E2 59G+G303R+E390A,Y242F+N279S+K280Y+G303R,Y242F+N279S+K280Y+E39 0A,Y242F+N279S+G303R+E390A,Y242F+K280Y+G303R+E390A,E259G+N279 S+K280Y+G303R,E259G+N279S+K280Y+E390A,E259G+N279S+G303R+E390A ,E259G+K280Y+G303R+E390A,N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0414] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 5, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S, H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y, H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S,H1*+G7A+W 140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G +E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R,H1 *+G7A+W140Y+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R,H1*+G7A+W14 0Y+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+ E259G,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S,H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y,H1* +G7A+E189P+Y242F+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A,H1*+G7A+E189 P+E259G+N279S,H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y,H1*+G7A+E189P+E259G+G 303R,H1*+G7A+E189P+E259G+E390A,H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y,H1*+ G7A+E189P+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+N279S+E390A,H1*+G7A+E189P +K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+G303R+E3 90A,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G 7A+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A,H1*+G7A+Y242F+ N279S+K280Y,H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R,H1*+G7A+Y242F+N279S+E39 0A,H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R,H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A,H1*+G7 A+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+E259G+N 279S+G303R,H1*+G7A+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+E259G+K280Y+G303 R,H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A +N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+N279S+G3 03R+E390A,H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E25 9G,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y,H1 *+W140Y+E189P+Y242F+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A,H1*+W14 0Y+E189P+E259G+N279S,H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E1 89P+E259G+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A,H1*+W140Y+E189P+N 279S+K280Y,H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R,H1*+W140Y+E189P+N279S+ E390A,H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A ,H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S,H1*+ W140Y+Y242F+E259G+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R,H1*+W140Y +Y242F+E259G+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,H1*+W140Y+Y242 F+N279S+G303R,H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A,H1*+W140Y+Y242F+K28 0Y+G303R,H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+G303R+E3 90A,H1*+W14 0Y+E2 5 9G+N2 7 9S+K2 8 0Y,H1*+W14 0Y+E2 5 9G+N2 7 9S+G3 0 3R, H 1*+W140Y+E259G+N279S+E390A,H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R,H1*+W1 40Y+E259G+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A,H1*+W140Y+N 279S+K280Y+G303R,H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+N279S+ G303R+E390A,H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G +N279S,H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+E189P+Y242F+E259G+G303 R,H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1* +E189P+Y242F+N279S+G303R,H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A,H1*+E189 P+Y242F+K280Y+G303R,H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A,H1*+E189P+Y24 2F+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y,H1*+E189P+E259G+N2 79S+G303R,H1*+E189P+E259G+N279S+E390A,H1*+E189P+E259G+K280Y+G 3 0 3R, H1*+E18 9P+E2 5 9G+K2 8 0Y+E3 90A,H1* + E18 9P+E2 5 9G+G3 0 3R+E3 90A, H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R,H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+E 189P+N279S+G303R+E390A,H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+ E259G+N279S+K280Y,H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+Y242F+E259G +N279S+E390A,H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+Y242F+E259G+K280 Y+E390A,H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1*+Y242F+N279S+K280Y+G30 3R,H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1 *+Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+E25 9G+N279S+K280Y+E390A,H1*+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+E259G+K2 80Y+G303R+E390A,H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y 242F+E259G,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S,G7A+W140Y+E189P+Y242F+ K280Y,G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A ,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S,G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y,G7A+ W140Y+E189P+E259G+G303R,G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A,G7A+W140Y +E189P+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189 P+N279S+E390A,G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+K28 0Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N2 7 9S,G7A+W14 0Y+Y2 4 2F+E2 5 9G+K2 8 0Y,G7A+W14 0Y+Y2 4 2F+E2 5 9G+G3 0 3R, G 7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,G7A+W1 40Y+Y242F+N279S+G303R,G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A,G7A+W140Y+Y 242F+K280Y+G303R,G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y242F+ G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E259G+N279S +G303R,G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A,G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303 R,G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A,G7A +W140Y+N279S+K280Y+G303R,G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140 Y+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y24 2F+E259G+N279S,G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y,G7A+E189P+Y242F+E2 59G+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A,G7A+E189P+Y242F+N279S+K 280Y,G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R,G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A, G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A,G7A+E 189P+Y242F+G303R+E390A,G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y,G7A+E189P+ E259G+N279S+G303R,G7A+E189P+E259G+N279S+E390A,G7A+E189P+E259G +K280Y+G303R,G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A,G7A+E189P+E259G+G303 R+E390A,G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+N279S+K280Y+E39 0A,G7A+E189P+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A,G7 A+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R,G7A+Y24 2F+E259G+N279S+E390A,G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R,G7A+Y242F+E2 59G+K280Y+E390A,G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A,G7A+Y242F+N279S+K 280Y+G303R,G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+Y242F+N279S+G303R+ E390A,G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R ,G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+ E259G+K280Y+G303R+E390A,G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+N279S,W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,W140Y+E189 P+Y242F+E259G+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A,W140Y+E189P +Y242F+N279S+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R,W140Y+E189P+ Y242F+N279S+E390A,W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y 242F+K280Y+E390A,W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,W140Y+E189P+E2 59G+N279S+K280Y,W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,W140Y+E189P+E25 9G+N279S+E390A,W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E189P+E259 G+K280Y+E390A,W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,W140Y+E189P+N279S +K280Y+G303R,W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E189P+N279S+ G303R+E390A,W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N 279S+K280Y,W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R,W140Y+Y242F+E259G+N2 79S+E390A,W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+E259G+K28 0Y+E390A,W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A,W140Y+Y242F+N279S+K280 Y+G303R,W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A,W140Y+Y242F+N279S+G303R +E390A,W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E259G+N279S+K280Y+ G303R,W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E259G+N279S+G303R+E 390A,W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,W140Y+N279S+K280Y+G303R+E3 90A,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,E189P+Y242F+E259G+N279S+G30 3R,E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303 R,E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A ,E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R,E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A,E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,E 189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,E1 89P+E259G+N279S+G303R+E390A,E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A,E18 9P+N279S+K280Y+G303R+E390A,Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,Y242 F+E259G+N279S+K280Y+E390A,Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,Y242F +E259G+K280Y+G303R+E390A,Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,E259G+ N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0415] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 5, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G30 3R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+ N279S,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+E25 9G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+ N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E18 9P+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+ E189P+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A,H1*+G7A+W14 0Y+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+ W140Y+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A,H1*+G 7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R,H1 *+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R ,H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E3 90A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S +G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+K2 80Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G +G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+N2 79S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y +K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+E1 89P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A +E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1*+ G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A,H 1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390 A,H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K 280Y,H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+E259G+N279 S+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+E259G+K 280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+N279 S+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+N 279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242 F+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+Y 242F+E259G+N2 7 9S + E390A,H1* + G7A+Y24 2F+E2 59G+K280Y+G3 0 3R, H1*+G7 A+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1* +G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E39 0A,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+ E390A,H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E259G+K280Y+G30 3R+E390A,H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242 F+E259G+N279S,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+W1 40Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R ,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280 Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y24 2F+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E1 89P+E259G+N279S+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A,H1*+W 140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390 A,H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+N279S+K28 0Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+N2 79S+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+ W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G30 3R,H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+G3 03R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R,H1*+W140Y+Y242F+N 279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+W140Y+ Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1* +W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E3 90A,H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+N279S+K280Y+G 303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+E189P+Y242F+ E259G+N279S+G303R,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,H1*+E189P +Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1 *+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G 303R,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+ G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G +N279S+K280Y+G303R,H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+E189 P+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A,H 1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+ G303R,H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+Y2 4 2F+E2 5 9G+N2 7 9S +G303R+E390A,H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+N279 S+K280Y+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W14 0Y+E189P+Y242F+E259G+N279S,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G +E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E189P+Y242 F+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A,G7A+W140Y+E18 9P+Y242F+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A,G7A+W1 40Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y ,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279 S+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+E25 9G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,G7A+W140Y+E1 89P+N279S+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,G7A+W 140Y+E189P+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390 A,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N27 9S+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E2 59G+K280Y+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y 242F+E259G+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R,G7A+ W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E39 0A,G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+N279S+K2 80Y+G303R,G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E259G+N 279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+ N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A +E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E3 90A,G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+K 280Y+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+ N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+E189P +Y242F+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7 A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E 390A,G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+E259G+K280Y+ G303R+E390A,G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R,G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+Y242 F+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,G 7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+ E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+E 259G+N279S+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,W140Y+E1 89P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E39 0A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+N279 S+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E189P +Y242F+N279S+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,W140Y+E189P+E259G+N279S+K 280Y+E390A,W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A,W140Y+E189P+E2 59G+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,W14 0Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280 Y+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G +K280Y+G303R+E390A,W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,W140Y+ E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G 303R,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,E189P+Y242F+E259G+N2 79S+G303R+E390A,E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,E189P+Y24 2F+N279S+K280Y+G303R+E390A,E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390 A,Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0416] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 5, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y24 2F+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E25 9G+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E25 9G+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E25 9G+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0417] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 5, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N2 79S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A +W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242 F+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G30 3R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+ E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y +G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+ G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E 259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+ E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W14 0Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N2 79S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,H 1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242 F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G30 3R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+ E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G +N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390 A,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+ G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1* +W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y +G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1 *+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280 Y+G3 03R+E3 90A,G7A+W14 0Y+E18 9P+Y2 4 2F+E2 5 9G+N2 7 9S+K2 8 0Y+G3 0 3R, G 7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+ Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K28 0Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F +E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K2 80Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E39 0A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0418] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 5, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W14 0Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K 280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+ E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G 7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K2 80Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0419] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 5, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E 390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0420] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 6, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+D118T, H1*+W140Y, H1*+T182S, H1*+A185D, H1*+E189P, H1*+Y242F, H1*+E259G, H1*+F266Y, H1*+N279S, H1*+K280Y, H1*+G303R, H1*+E390A, H1*+G475K, H1*+A185Q, H1*+N194F, D118T+W140Y, D118T+T182S, D118T+A185D, D118T+E189P, D118T+Y242F, D118T+E259G, D118T+F266Y, D118T+N279S,D118T+K280Y,D118T+G303R,D118T+E390A,D118T+G475K,D 118T+A185Q,D118T+N194F,W140Y+T182S,W140Y+A185D,W140Y+E189P,W1 40Y+Y242F,W140Y+E259G,W140Y+F266Y,W140Y+N279S,W140Y+K280Y,W14 0Y+G303R,W140Y+E390A,W140Y+G475K,W140Y+A185Q,W140Y+N194F,T182 S+A185D,T182S+E189P,T182S+Y242F,T182S+E259G,T182S+F266Y,T182S +N279S,T182S+K280Y,T182S+G303R,T182S+E390A,T182S+G475K,T182S+ A185Q,T182S+N194F,A185D+E189P,A185D+Y242F,A185D+E259G,A185D+F 266Y,A185D+N279S,A185D+K280Y,A185D+G303R,A185D+E390A,A185D+G4 75K,A185D+A185Q,A185D+N194F,E189P+Y242F,E189P+E259G,E189P+F26 6Y,E189P+N279S,E189P+K280Y,E189P+G303R,E189P+E390A,E189P+G475 K,E189P+A185Q,E189P+N194F,Y242F+E259G,Y242F+F266Y,Y242F+N279S ,Y242F+K280Y,Y242F+G303R,Y242F+E390A,Y242F+G475K,Y242F+A185Q, Y242F+N194F,E259G+F266Y,E259G+N279S,E259G+K280Y,E259G+G303R,E 259G+E390A,E259G+G475K,E259G+A185Q,E259G+N194F,F266Y+N279S,F2 66Y+K280Y,F266Y+G303R,F266Y+E390A,F266Y+G475K,F266Y+A185Q,F26 6Y+N194F,N279+K280Y,N279S+G303R,N279S+E390A,N279S+G475K,N279S +A185Q,N279S+N194F,K280Y+G303R,K280Y+E390A,K280Y+G475K,K280Y+ A185Q,K280Y+N194F,G303R+E390A,G303R+G475K,G303R+A185Q,G303R+N 194F,E390A+G475K,E390A+A185Q,E390A+N194F,G475K+A185Q,G475K+N1 94F, A185Q+N194F, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0421] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 6, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+D118T+W140Y, H1*+D118T+T182S, H1*+D118T+A185D, H1*+W140Y+E259G, H1*+W140Y+F266Y,H1*+W140Y+N279S,H1*+W140Y+K280Y,H1*+W140Y+G30 3R,H1*+W140Y+E390A,H1*+W140Y+G475K,H1*+W140Y+A185Q,H1*+W140Y+ N194F,H1*+T182S+A185D,H1*+T182S+E189P,H1*+T182S+Y242F,H1*+T18 2S+E259G,H1*+T182S+F266Y,H1*+T182S+N279S,H1*+T182S+K280Y,H1*+ T182S+G303R,H1*+T182S+E390A,H1*+T182S+G475K,H1*+T182S+A185Q,H 1*+T182S+N194F,H1*+A185D+E189P,H1*+A185D+Y242F,H1*+A185D+E259 G,H1*+A185D+F266Y,H1*+A185D+N279S,H1*+A185D+K280Y,H1*+A185D+G 303R,H1*+A185D+E390A,H1*+A185D+G475K,H1*+A185D+A185Q,H1*+A185 D+N194F,H1*+E189P+Y242F,H1*+E189P+E259G,H1*+E189P+F266Y,H1*+E 189P+N279S,H1*+E189P+K280Y,H1*+E189P+G303R,H1*+E189P+E390A,H1 *+E189P+G475K,H1*+E189P+A185Q,H1*+E189P+N194F,H1*+Y242F+E259G ,H1*+Y242F+F266Y,H1*+Y242F+N279S,H1*+Y242F+K280Y,H1*+Y242F+G3 03R,H1*+Y242F+E390A,H1*+Y242F+G475K,H1*+Y242F+A185Q,H1*+Y242F +N194F,H1*+E259G+F266Y,H1*+E259G+N279S,H1*+E259G+K280Y,H1*+E2 59G+G303R,H1*+E259G+E390A,H1*+E259G+G475K,H1*+E259G+A185Q,H1* +E259G+N194F,H1*+F266Y+N279S,H1*+F266Y+K280Y,H1*+F266Y+G303R, H1*+F266Y+E390A,H1*+F266Y+G475K,H1*+F266Y+A185Q,H1*+F266Y+N19 4F,H1*+N279S+K280Y,H1*+N279S+G303R,H1*+N279S+E390A,H1*+N279S+ G475K,H1*+N279S+A185Q,H1*+N279S+N194F,H1*+K280Y+G303R,H1*+K28 0Y+E390A,H1*+K280Y+G475K,H1*+K280Y+A185Q,H1*+K280Y+N194F,H1*+ G303R+E390A,H1*+G303R+G475K,H1*+G303R+A185Q,H1*+G303R+N194F,H 1*+E390A+G475K,H1*+E390A+A185Q,H1*+E390A+N194F,H1*+G475K+A185 Q,H1*+G475K+N194F,H1*+A185Q+N194F,D118T+W140Y+T182S,D118T+W14 0Y+A185D,D118T+W140Y+E189P,D118T+W140Y+Y242F,D118T+W140Y+E259 G,D118T+W140Y+F266Y,D118T+W140Y+N279S,D118T+W140Y+K280Y,D118T +W140Y+G303R,D118T+W140Y+E390A,D118T+W140Y+G475K,D118T+W140Y+ A185Q,D118T+W140Y+N194F,D118T+T182S+A185D,D118T+T182S+E189P,D 118T+T182S+Y242F,D118T+T182S+E259G,D118T+T182S+F266Y,D118T+T1 82S+N279S,D118T+T182S+K280Y,D118T+T182S+G303R,D118T+T182S+E39 0A,D118T+T182S+G475K,D118T+T182S+A185Q,D118T+T182S+N194F,D118 T+A185D+E189P,D118T+A185D+Y242F,D118T+A185D+E259G,D118T+A185D +F266Y,D118T+A185D+N279S,D118T+A185D+K280Y,D118T+A185D+G303R, D118T+A185D+E390A,D118T+A185D+G475K,D118T+A185D+A185Q,D118T+A 185D+N194F,D118T+E189P+Y242F,D118T+E189P+E259G,D118T+E189P+F2 66Y,D118T+E189P+N279S,D118T+E189P+K280Y,D118T+E189P+G303R,D11 8T+E189P+E390A,D118T+E189P+G475K,D118T+E189P+A185Q,D118T+E189 P+N194F,D118T+Y242F+E259G,D118T+Y242F+F266Y,D118T+Y242F+N279S ,D118T+Y242F+K280Y,D118T+Y242F+G303R,D118T+Y242F+E390A,D118T+ Y242F+G475K,D118T+Y242F+A185Q,D118T+Y242F+N194F,D118T+E259G+F 266Y,D118T+E259G+N279S,D118T+E259G+K280Y,D118T+E259G+G303R,D1 18T+E259G+E390A,D118T+E259G+G475K,D118T+E259G+A185Q,D118T+E25 9G+N194F,D118T+F266Y+N279S,D118T+F266Y+K280Y,D118T+F266Y+G303 R,D118T+F266Y+E390A,D118T+F266Y+G475K,D118T+F266Y+A185Q,D118T +F266Y+N194F,D118T+N279S+K280Y,D118T+N279S+G303R,D118T+N279S+ E390A,D118T+N279S+G475K,D118T+N279S+A185Q,D118T+N279S+N194F,D 118T+K280Y+G303R,D118T+K280Y+E390A,D118T+K280Y+G475K,D118T+K2 80Y+A185Q,D118T+K280Y+N194F,D118T+G303R+E390A,D118T+G303R+G47 5K,D118T+G303R+A185Q,D118T+G303R+N194F,D118T+E390A+G475K,D118 T+E390A+A185Q,D118T+E390A+N194F,D118T+G475K+A185Q,D118T+G475K +N194F,D118T+A185Q+N194F,W140Y+T182S+A185D,W140Y+T182S+E189P, W140Y+T182S+Y242F,W140Y+T182S+E259G,W140Y+T182S+F266Y,W140Y+T 182S+N279S,W140Y+T182S+K280Y,W140Y+T182S+G303R,W140Y+T182S+E3 90A,W140Y+T182S+G475K,W140Y+T182S+A185Q,W140Y+T182S+N194F,W14 0Y+A185D+E189P,W140Y+A185D+Y242F,W140Y+A185D+E259G,W140Y+A185 D+F266Y,W140Y+A185D+N279S,W140Y+A185D+K280Y,W140Y+A185D+G303R ,W140Y+A185D+E390A,W140Y+A185D+G475K,W140Y+A185D+A185Q,W140Y+ A185D+N194F,W140Y+E189P+Y242F,W140Y+E189P+E259G,W140Y+E189P+F 266Y,W140Y+E189P+N279S,W140Y+E189P+K280Y,W140Y+E189P+G303R,W1 40Y+E189P+E390A,W140Y+E189P+G475K,W140Y+E189P+A185Q,W140Y+E18 9P+N194F,W140Y+Y242F+E259G,W140Y+Y242F+F266Y,W140Y+Y242F+N279 S,W140Y+Y242F+K280Y,W140Y+Y242F+G303R,W140Y+Y242F+E390A,W140Y +Y242F+G475K,W140Y+Y242F+A185Q,W140Y+Y242F+N194F,W140Y+E259G+ F266Y,W140Y+E259G+N279S,W140Y+E259G+K280Y,W140Y+E259G+G303R,W 140Y+E259G+E390A,W140Y+E259G+G475K,W140Y+E259G+A185Q,W140Y+E2 59G+N194F,W140Y+F266Y+N279S,W140Y+F266Y+K280Y,W140Y+F266Y+G30 3R,W140Y+F266Y+E390A,W140Y+F266Y+G475K,W140Y+F266Y+A185Q,W140 Y+F266Y+N194F,W140Y+N279S+K280Y,W140Y+N279S+G303R,W140Y+N279S +E390A,W140Y+N279S+G475K,W140Y+N279S+A185Q,W140Y+N279S+N194F, W140Y+K280Y+G303R,W140Y+K280Y+E390A,W140Y+K280Y+G475K,W140Y+K 280Y+A185Q,W140Y+K280Y+N194F,W140Y+G303R+E390A,W140Y+G303R+G4 75K,W140Y+G303R+A185Q,W140Y+G303R+N194F,W140Y+E390A+G475K,W14 0Y+E390A+A185Q,W140Y+E390A+N194F,W140Y+G475K+A185Q,W140Y+G475 K+N194F,W140Y+A185Q+N194F,T182S+A185D+E189P,T182S+A185D+Y242F ,T182S+A185D+E259G,T182S+A185D+F266Y,T182S+A185D+N279S,T182S+ A185D+K280Y,T182S+A185D+G303R,T182S+A185D+E390A,T182S+A185D+G 45K,T182S+A185D+A185Q,T182S+A185D+N194F,T182S+E189P+Y242F,T18 2S+E189P+E259G,T182S+E189P+F266Y,T182S+E189P+N279S,T182S+E189 P+K280Y,T182S+E189P+G303R,T182S+E189P+E390A,T182S+E189P+G475K ,T182S+E189P+A185Q,T182S+E189P+N194F,T182S+Y242F+E259G,T182S+ Y242F+F266Y,T182S+Y242F+N279S,T182S+Y242F+K280Y,T182S+Y242F+G 303R,T182S+Y242F+E390A,T182S+Y242F+G475K,T182S+Y242F+A185Q,T1 82S+Y242F+N194F,T182S+E259G+F266Y,T182S+E259G+N279S,T182S+E25 9G+K280Y,T182S+E259G+G303R,T182S+E259G+E390A,T182S+E259G+G475 K,T182S+E259G+A185Q,T182S+E259G+N194F,T182S+F266Y+N279S,T182S +F266Y+K280Y,T182S+F266Y+G303R,T182S+F266Y+E390A,T182S+F266Y+ G475K,T182S+F266Y+A185Q,T182S+F266Y+N194F,T182S+N279S+K280Y,T 182S+N279S+G303R,T182S+N279S+E390A,T182S+N279S+G475K,T182S+N2 79S+A185Q,T182S+N279S+N194F,T182S+K280Y+G303R,T182S+K280Y+E39 0A,T182S+K280Y+G475K,T182S+K280Y+A185Q,T182S+K280Y+N194F,T182 S+G303R+E390A,T182S+G303R+G475K,T182S+G303R+A185Q,T182S+G303R +N194F,T182S+E390A+G475K,T182S+E390A+A185Q,T182S+E390A+N194F, T182S+G475K+A185Q,T182S+G475K+N194F,T182S+A185Q+N194F,A185D+E 189P+Y242F,A185D+E189P+E259G,A185D+E189P+F266Y,A185D+E189P+N2 79S,A185D+E189P+K280Y,A185D+E189P+G303R,A185D+E189P+E390A,A18 5D+E189P+G475K,A185D+E189P+A185Q,A185D+E189P+N194F,A185D+Y242 F+E259G,A185D+Y242F+F266Y,A185D+Y242F+N279S,A185D+Y242F+K280Y ,A185D+Y242F+G303R,A185D+Y242F+E390A,A185D+Y242F+G475K,A185D+ Y242F+A185Q,A185D+Y242F+N194F,A185D+E259G+F266Y,A185D+E259G+N 279S,A185D+E259G+K280Y,A185D+E259G+G303R,A185D+E259G+E390A,A1 85D+E259G+G475K,A185D+E259G+A185Q,A185D+E259G+N194F,A185D+F26 6Y+N279S,A185D+F266Y+K280Y,A185D+F266Y+G303R,A185D+F266Y+E390 A,A185D+F266Y+G475K,A185D+F266Y+A185Q,A185D+F266Y+N194F,A185D +N279S+K280Y,A185D+N279S+G303R,A185D+N279S+E390A,A185D+N279S+ G475K,A185D+N279S+A185Q,A185D+N279S+N194F,A185D+K280Y+G303R,A 185D+K280Y+E390A,A185D+K280Y+G475K,A185D+K280Y+A185Q,A185D+K2 80Y+N194F,A185D+G303R+E390A,A185D+G303R+G475K,A185D+G303R+A18 5Q,A185D+G303R+N194F,A185D+E390A+G475K,A185D+E390A+A185Q,A185 D+E390A+N194F,A185D+G475K+A185Q,A185D+G475K+N194F,A185D+A185Q +N194F,E189P+Y242F+E259G,E189P+Y242F+F266Y,E189P+Y242F+N279S, E189P+Y242F+K280Y,E189P+Y242F+G303R,E189P+Y242F+E390A,E189P+Y 242F+G475K,E189P+Y242F+A185Q,E189P+Y242F+N194F,E189P+E259G+F2 66Y,E189P+E259G+N279S,E189P+E259G+K280Y,E189P+E259G+G303R,E18 9P+E259G+E390A,E189P+E259G+G475K,E189P+E259G+A185Q,E189P+E259 G+N194F,E189P+F266Y+N279S,E189P+F266Y+K280Y,E189P+F266Y+G303R ,E189P+F266Y+E390A,E189P+F266Y+G475K,E189P+F266Y+A185Q,E189P+ F266Y+N194F,E189P+N279S+K280Y,E189P+N279S+G303R,E189P+N279S+E 390A,E189P+N279S+G475K,E189P+N279S+A185Q,E189P+N279S+N194F,E1 89P+K280Y+G303R,E189P+K280Y+E390A,E189P+K280Y+G475K,E189P+K28 0Y+A185Q,E189P+K280Y+N194F,E189P+G303R+E390A,E189P+G303R+G475 K,E189P+G303R+A185Q,E189P+G303R+N194F,E189P+E390A+G475K,E189P +E390A+A185Q,E189P+E390A+N194F,E189P+G475K+A185Q,E189P+G475K+ N194F,E189P+A185Q+N194F,Y242F+E259G+F266Y,Y242F+E259G+N279S,Y 242F+E259G+K280Y,Y242F+E259G+G303R,Y242F+E259G+E390A,Y242F+E2 59G+G475K,Y242F+E259G+A185Q,Y242F+E259G+N194F,Y242F+F266Y+N27 9S,Y242F+F266Y+K280Y,Y242F+F266Y+G303R,Y242F+F266Y+E390A,Y242 F+F266Y+G475K,Y242F+F266Y+A185Q,Y242F+F266Y+N194F,Y242F+N279S +K280Y,Y242F+N279S+G303R,Y242F+N279S+E390A,Y242F+N279S+G475K, Y242F+N279S+A185Q,Y242F+N279S+N194F,Y242F+K280Y+G303R,Y242F+K 280Y+E390A,Y242F+K280Y+G475K,Y242F+K280Y+A185Q,Y242F+K280Y+N1 94F,Y242F+G303R+E390A,Y242F+G303R+G475K,Y242F+G303R+A185Q,Y24 2F+G303R+N194F,Y242F+E390A+G475K,Y242F+E390A+A185Q,Y242F+E390 A+N194F,Y242F+G475K+A185Q,Y242F+G475K+N194F,Y242F+A185Q+N194F ,E2 5 9G+F2 6 6Y+N2 7 9S,E2 5 9G+F2 6 6Y+K2 8 0Y,E2 5 9G+F2 6 6Y+G3 0 3R, E2 5 9G+ F266Y+E390A,E259G+F266Y+G475K,E259G+F266Y+A185Q,E259G+F266Y+N 194F,E259G+N279S+K280Y,E259G+N279S+G303R,E259G+N279S+E390A,E2 59G+N279S+G475K,E259G+N279S+A185Q,E259G+N279S+N194F,E259G+K28 0Y+G303R,E259G+K280Y+E390A,E259G+K280Y+G475K,E259G+K280Y+A185 Q,E259G+K280Y+N194F,E259G+G303R+E390A,E259G+G303R+G475K,E259G +G303R+A185Q,E259G+G303R+N194F,E259G+E390A+G475K,E259G+E390A+ A185Q,E259G+E390A+N194F,E259G+G475K+A185Q,E259G+G475K+N194F,E 259G+A185Q+N194F,F266Y+N279S+K280Y,F266Y+N279S+G303R,F266Y+N2 79S+E390A,F266Y+N279S+G475K,F266Y+N279S+A185Q,F266Y+N279S+N19 4F,F266Y+K280Y+G303R,F266Y+K280Y+E390A,F266Y+K280Y+G475K,F266 Y+K280Y+A185Q,F266Y+K280Y+N194F,F266Y+G303R+E390A,F266Y+G303R +G475K,F266Y+G303R+A185Q,F266Y+G303R+N194F,F266Y+E390A+G475K, F266Y+E390A+A185Q,F266Y+E390A+N194F,F266Y+G475K+A185Q,F266Y+G 475K+N194F,F266Y+A185Q+N194F,N279S+K280Y+G303R,N279S+K280Y+E3 90A,N279S+K280Y+G475K,N279S+K280Y+A185Q,N279S+K280Y+N194F,N27 9S+G303R+E390A,N279S+G303R+G475K,N279S+G303R+A185Q,N279S+G303 R+N194F,N279S+E390A+G475K,N279S+E390A+A185Q,N279S+E390A+N194F ,N279S+G475K+A185Q, N279S+G475K+N194F,N279S+A185Q+N194F,K280Y+G303R+E39 0A,K280Y+G303R+G475K,K280Y+G303R+A185Q,K280Y+G303R+N194F,K280 Y+E390A+G475K,K280Y+E390A+A185Q,K280Y+E390A+N194F,K280Y+G475K +A185Q,K280Y+G475K+N194F,K280Y+A185Q+N194F,G303R+E390A+G475K, G303R+E390A+A185Q,G303R+E390A+N194F,G303R+G475K+A185Q,G303R+G 475K+N194F,G303R+A185Q+N194F,E390A+G475K+A185Q,E390A+G475K+N1 94F,E390A+A185Q+N194F,G475K+A185Q+N194F, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0422] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 6, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P, H1*+G7A+W140Y+Y242F, H1*+G7A+W140Y+E259G, H1*+G7A+W140Y+N279S, H1*+G7A+W140Y+K280Y, H1*+G7A+W140Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F,H1*+G7A+E189P+E259G,H1*+G7A+E189P+N279S,H 1*+G7A+E189P+K280Y,H1*+G7A+E189P+G303R,H1*+G7A+E189P+E390A,H1 *+G7A+Y242F+E259G,H1*+G7A+Y242F+N279S,H1*+G7A+Y242F+K280Y,H1* +G7A+Y242F+G303R,H1*+G7A+Y242F+E390A,H1*+G7A+E259G+N279S,H1*+ G7A+E259G+K280Y,H1*+G7A+E259G+G303R,H1*+G7A+E259G+E390A,H1*+G 7A+N279S+K280Y,H1*+G7A+N279S+G303R,H1*+G7A+N279S+E390A,H1*+G7 A+K280Y+G303R,H1*+G7A+K280Y+E390A,H1*+G7A+G303R+E390A,H1*+W14 0Y+E189P+Y242F,H1*+W140Y+E189P+E259G,H1*+W140Y+E189P+N279S,H1 *+W140Y+E189P+K280Y,H1*+W140Y+E189P+G303R,H1*+W140Y+E189P+E39 0A,H1*+W140Y+Y242F+E259G,H1*+W140Y+Y242F+N279S,H1*+W140Y+Y242 F+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+G303R,H1*+W140Y+Y242F+E390A,H1*+W140Y +E259G+N279S,H1*+W140Y+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E259G+G303R,H1*+ W140Y+E259G+E390A,H1*+W140Y+N279S+K280Y,H1*+W140Y+N279S+G303R ,H1*+W140Y+N279S+E390A,H1*+W140Y+K280Y+G303R,H1*+W140Y+K280Y+ E390A,H1*+W140Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G,H1*+E189P+Y 242F+N279S,H1*+E189P+Y242F+K280Y,H1*+E189P+Y242F+G303R,H1*+E1 89P+Y242F+E390A,H1*+E189P+E259G+N279S,H1*+E189P+E259G+K280Y,H 1*+E189P+E259G+G303R,H1*+E189P+E259G+E390A,H1*+E189P+N279S+K2 80Y,H1*+E189P+N279S+G303R,H1*+E189P+N279S+E390A,H1*+E189P+K28 0Y+G303R,H1*+E189P+K280Y+E390A,H1*+E189P+G303R+E390A,H1*+Y242 F+E259G+N279S,H1*+Y242F+E259G+K280Y,H1*+Y242F+E259G+G303R,H1* +Y242F+E259G+E390A,H1*+Y242F+N279S+K280Y,H1*+Y242F+N279S+G303 R,H1*+Y242F+N279S+E390A,H1*+Y242F+K280Y+G303R,H1*+Y242F+K280Y +E390A,H1*+Y242F+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y,H1*+E259G+ N279S+G303R,H1*+E259G+N279S+E390A,H1*+E259G+K280Y+G303R,H1*+E 259G+K280Y+E390A,H1*+E259G+G303R+E390A,H1*+N279S+K280Y+G303R, H1*+N279S+K280Y+E390A,H1*+N279S+G303R+E390A,H1*+K280Y+G303R+E 390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F,G7A+W140Y+E189P+E259G,G7A+W140Y+E1 89P+N279S,G7A+W140Y+E189P+K280Y,G7A+W140Y+E189P+G303R,G7A+W14 0Y+E189P+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E259G,G7A+W140Y+Y242F+N279S,G7 A+W140Y+Y242F+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E39 0A,G7A+W140Y+E259G+N279S,G7A+W140Y+E259G+K280Y,G7A+W140Y+E259 G+G303R,G7A+W140Y+E259G+E390A,G7A+W140Y+N279S+K280Y,G7A+W140Y +N279S+G303R,G7A+W140Y+N279S+E390A,G7A+W140Y+K280Y+G303R,G7A+ W140Y+K280Y+E390A,G7A+W140Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G ,G7A+E189P+Y242F+N279S,G7A+E189P+Y242F+K280Y,G7A+E189P+Y242F+ G303R,G7A+E189P+Y242F+E390A,G7A+E189P+E259G+N279S,G7A+E189P+E 259G+K280Y,G7A+E189P+E259G+G303R,G7A+E189P+E259G+E390A,G7A+E1 89P+N279S+K280Y,G7A+E189P+N279S+G303R,G7A+E189P+N279S+E390A,G 7A+E189P+K280Y+G303R,G7A+E189P+K280Y+E390A,G7A+E189P+G303R+E3 90A,G7A+Y242F+E259G+N279S,G7A+Y242F+E259G+K280Y,G7A+Y242F+E25 9G+G303R,G7A+Y242F+E259G+E390A,G7A+Y242F+N279S+K280Y,G7A+Y242 F+N279S+G303R,G7A+Y242F+N279S+E390A,G7A+Y242F+K280Y+G303R,G7A +Y242F+K280Y+E390A,G7A+Y242F+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280 Y,G7A+E259G+N279S+G303R,G7A+E259G+N279S+E390A,G7A+E259G+K280Y +G303R,G7A+E259G+K280Y+E390A,G7A+E259G+G303R+E390A,G7A+N279S+ K280Y+G303R,G7A+N279S+K280Y+E390A,G7A+N279S+G303R+E390A,G7A+K 280Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G,W140Y+E189P+Y242F+N2 79S,W140Y+E189P+Y242F+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+G303R,W140Y+E18 9P+Y242F+E390A,W140Y+E189P+E259G+N279S,W140Y+E189P+E259G+K280 Y,W140Y+E189P+E259G+G303R,W140Y+E189P+E259G+E390A,W140Y+E189P +N279S+K280Y,W140Y+E189P+N279S+G303R,W140Y+E189P+N279S+E390A, W140Y+E189P+K280Y+G303R,W140Y+E189P+K280Y+E390A,W140Y+E189P+G 303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N279S,W140Y+Y242F+E259G+K280Y,W1 40Y+Y242F+E259G+G303R,W140Y+Y242F+E259G+E390A,W140Y+Y242F+N27 9S+K280Y,W140Y+Y242F+N279S+G303R,W140Y+Y242F+N279S+E390A,W140 Y+Y242F+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+K280Y+E390A,W140Y+Y242F+G303R +E390A,W140Y+E259G+N279S+K280Y,W140Y+E259G+N279S+G303R,W140Y+ E259G+N279S+E390A,W140Y+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E259G+K280Y+E 390A,W140Y+E259G+G303R+E390A,W140Y+N279S+K280Y+G303R,W140Y+N2 79S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A,W140Y+K280Y+G303R+E390 A,E189P+Y242F+E259G+N279S,E189P+Y242F+E259G+K280Y,E189P+Y242F +E259G+G303R,E189P+Y242F+E259G+E390A,E189P+Y242F+N279S+K280Y, E189P+Y242F+N279S+G303R,E189P+Y242F+N279S+E390A,E189P+Y242F+K 280Y+G303R,E189P+Y242F+K280Y+E390A,E189P+Y242F+G303R+E390A,E1 89P+E259G+N279S+K280Y,E189P+E259G+N279S+G303R,E189P+E259G+N27 9S+E390A,E189P+E259G+K280Y+G303R,E189P+E259G+K280Y+E390A,E189 P+E259G+G303R+E390A,E189P+N279S+K280Y+G303R,E189P+N279S+K280Y +E390A,E189P+N279S+G303R+E390A,E189P+K280Y+G303R+E390A,Y242F+ E259G+N279S+K280Y,Y242F+E259G+N279S+G303R,Y242F+E259G+N279S+E 390A,Y242F+E259G+K280Y+G303R,Y242F+E259G+K280Y+E390A,Y242F+E2 59G+G303R+E390A,Y242F+N279S+K280Y+G303R,Y242F+N279S+K280Y+E39 0A,Y242F+N279S+G303R+E390A,Y242F+K280Y+G303R+E390A,E259G+N279 S+K280Y+G303R,E259G+N279S+K280Y+E390A,E259G+N279S+G303R+E390A ,E259G+K280Y+G303R+E390A,N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0423] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 6, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S, H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y, H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S,H1*+G7A+W 140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G +E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R,H1 *+G7A+W140Y+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R,H1*+G7A+W14 0Y+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+ E259G,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S,H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y,H1* +G7A+E189P+Y242F+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A,H1*+G7A+E189 P+E259G+N279S,H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y,H1*+G7A+E189P+E259G+G 303R,H1*+G7A+E189P+E259G+E390A,H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y,H1*+ G7A+E189P+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+N279S+E390A,H1*+G7A+E189P +K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+G303R+E3 90A,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G 7A+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A,H1*+G7A+Y242F+ N279S+K280Y,H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R,H1*+G7A+Y242F+N279S+E39 0A,H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R,H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A,H1*+G7 A+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+E259G+N 279S+G303R,H1*+G7A+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+E259G+K280Y+G303 R,H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A +N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+N279S+G3 03R+E390A,H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E25 9G,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y,H1 *+W140Y+E189P+Y242F+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A,H1*+W14 0Y+E189P+E259G+N279S,H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E1 89P+E259G+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A,H1*+W140Y+E189P+N 279S+K280Y,H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R,H1*+W140Y+E189P+N279S+ E390A,H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A ,H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S,H1*+ W140Y+Y242F+E259G+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R,H1*+W140Y +Y242F+E259G+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,H1*+W140Y+Y242 F+N279S+G303R,H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A,H1*+W140Y+Y242F+K28 0Y+G303R,H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+G303R+E3 90A,H1*+W14 0Y+E2 5 9G+N2 7 9S+K2 8 0Y,H1*+W14 0Y+E2 5 9G+N2 7 9S+G3 0 3R, H 1*+W140Y+E259G+N279S+E390A,H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R,H1*+W1 40Y+E259G+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A,H1*+W140Y+N 279S+K280Y+G303R,H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+N279S+ G303R+E390A,H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G +N279S,H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+E189P+Y242F+E259G+G303 R,H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1* +E189P+Y242F+N279S+G303R,H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A,H1*+E189 P+Y242F+K280Y+G303R,H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A,H1*+E189P+Y24 2F+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y,H1*+E189P+E259G+N2 79S+G303R,H1*+E189P+E259G+N279S+E390A,H1*+E189P+E259G+K280Y+G 303R,H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A,H1*+E189P+E259G+G303R+E390A, H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R,H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+E 189P+N279S+G303R+E390A,H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+ E259G+N279S+K280Y,H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+Y242F+E259G +N279S+E390A,H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+Y242F+E259G+K280 Y+E390A,H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1*+Y242F+N279S+K280Y+G30 3R,H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1 *+Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+E25 9G+N279S+K280Y+E390A,H1*+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+E259G+K2 80Y+G303R+E390A,H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y 242F+E259G,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S,G7A+W140Y+E189P+Y242F+ K280Y,G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A ,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S,G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y,G7A+ W140Y+E189P+E259G+G303R,G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A,G7A+W140Y +E189P+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189 P+N279S+E390A,G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+K28 0Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N2 79S,G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R,G 7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,G7A+W1 40Y+Y242F+N279S+G303R,G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A,G7A+W140Y+Y 242F+K280Y+G303R,G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y242F+ G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E259G+N279S +G303R,G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A,G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303 R,G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A,G7A +W140Y+N279S+K280Y+G303R,G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140 Y+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y24 2F+E259G+N279S,G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y,G7A+E189P+Y242F+E2 59G+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A,G7A+E189P+Y242F+N279S+K 280Y,G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R,G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A, G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A,G7A+E 189P+Y242F+G303R+E390A,G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y,G7A+E189P+ E259G+N279S+G303R,G7A+E189P+E259G+N279S+E390A,G7A+E189P+E259G +K280Y+G303R,G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A,G7A+E189P+E259G+G303 R+E390A,G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+N279S+K280Y+E39 0A,G7A+E189P+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A,G7 A+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R,G7A+Y24 2F+E259G+N279S+E390A,G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R,G7A+Y242F+E2 59G+K280Y+E390A,G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A,G7A+Y242F+N279S+K 280Y+G303R,G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+Y242F+N279S+G303R+ E390A,G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R ,G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+ E259G+K280Y+G303R+E390A,G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+N279S,W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,W140Y+E189 P+Y242F+E259G+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A,W140Y+E189P +Y242F+N279S+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R,W140Y+E189P+ Y242F+N279S+E390A,W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y 242F+K280Y+E390A,W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,W140Y+E189P+E2 59G+N279S+K280Y,W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,W140Y+E189P+E25 9G+N279S+E390A,W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E189P+E259 G+K280Y+E390A,W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,W140Y+E189P+N279S +K280Y+G303R,W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E189P+N279S+ G303R+E390A,W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N 279S+K280Y,W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R,W140Y+Y242F+E259G+N2 79S+E390A,W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+E259G+K28 0Y+E390A,W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A,W140Y+Y242F+N279S+K280 Y+G303R,W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A,W140Y+Y242F+N279S+G303R +E390A,W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E259G+N279S+K280Y+ G303R,W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E259G+N279S+G303R+E 390A,W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,W140Y+N279S+K280Y+G303R+E3 90A,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,E189P+Y242F+E259G+N279S+G30 3R,E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303 R,E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A ,E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R,E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A,E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,E 189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,E1 89P+E259G+N279S+G303R+E390A,E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A,E18 9P+N279S+K280Y+G303R+E390A,Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,Y242 F+E259G+N279S+K280Y+E390A,Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,Y242F +E259G+K280Y+G303R+E390A,Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,E259G+ N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0424] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 6, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G30 3R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+ N279S,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+E25 9G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+ N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E18 9P+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+ E189P+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A,H1*+G7A+W14 0Y+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+ W140Y+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A,H1*+G 7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R,H1 *+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R ,H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E3 90A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S +G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+K2 80Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G +G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+N2 79S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y +K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+E1 89P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A +E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1*+ G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A,H 1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390 A,H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K 280Y,H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+E259G+N279 S+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+E259G+K 280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+N279 S+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+N 279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242 F+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+Y 242F+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7 A+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1* +G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E39 0A,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+ E390A,H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E259G+K280Y+G30 3R+E390A,H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242 F+E259G+N279S,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+W1 40Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R ,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280 Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y24 2F+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E1 89P+E259G+N279S+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A,H1*+W 140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390 A,H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+N279S+K28 0Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+N2 79S+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+ W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G30 3R,H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+G3 03R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R,H1*+W140Y+Y242F+N 279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+W140Y+ Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1* +W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E3 90A,H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+N279S+K280Y+G 303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+E189P+Y242F+ E259G+N279S+G303R,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,H1*+E189P +Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1 *+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G 303R,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+ G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G +N279S+K280Y+G303R,H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+E189 P+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A,H 1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+ G303R,H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+Y242F+E259G+N279S +G303R+E390A,H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+N279 S+K280Y+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W14 0Y+E189P+Y242F+E259G+N279S,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G +E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E189P+Y242 F+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A,G7A+W140Y+E18 9P+Y242F+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A,G7A+W1 40Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y ,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279 S+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+E25 9G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,G7A+W140Y+E1 89P+N279S+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,G7A+W 140Y+E189P+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390 A,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N27 9S+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E2 59G+K280Y+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y 242F+E259G+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R,G7A+ W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E39 0A,G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+N279S+K2 80Y+G303R,G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E259G+N 279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+ N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A +E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E3 90A,G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+K 280Y+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+ N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+E189P +Y242F+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7 A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E 390A,G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+E259G+K280Y+ G303R+E390A,G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R,G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+Y242 F+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,G 7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+ E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+E 259G+N279S+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,W140Y+E1 89P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E39 0A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+N279 S+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E189P +Y242F+N279S+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,W140Y+E189P+E259G+N279S+K 280Y+E390A,W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A,W140Y+E189P+E2 59G+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,W14 0Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280 Y+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G +K280Y+G303R+E390A,W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,W140Y+ E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G 303R,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,E189P+Y242F+E259G+N2 79S+G303R+E390A,E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,E189P+Y24 2F+N279S+K280Y+G303R+E390A,E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390 A,Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0425] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 6, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y24 2F+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0426] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 6, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N2 79S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A +W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242 F+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G30 3R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+ E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y +G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+ G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E 259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+ E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W14 0Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N2 79S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,H 1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242 F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G30 3R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+ E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G +N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390 A,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+ G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1* +W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y +G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1 *+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280 Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,G 7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+ Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K28 0Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F +E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K2 80Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E39 0A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0427] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 6, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W14 0Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K 280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+ E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G 7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K2 80Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0428] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 6, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E 390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0429] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 7, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+D118T, H1*+W140Y, H1*+T182S, H1*+A185D, H1*+E189P, H1*+Y242F, H1*+E259G, H1*+F266Y, H1*+N279S, H1*+K280Y, H1*+G303R, H1*+E390A, H1*+G475K, H1*+A185Q, H1*+N194F, D118T+W140Y, D118T+T182S, D118T+A185D, D118T+E189P, D118T+Y242F, D118T+E259G, D118T+F266Y, D118T+N279S,D118T+K280Y,D118T+G303R,D118T+E390A,D118T+G475K,D 118T+A185Q,D118T+N194F,W140Y+T182S,W140Y+A185D,W140Y+E189P,W1 40Y+Y242F,W140Y+E259G,W140Y+F266Y,W140Y+N279S,W140Y+K280Y,W14 0Y+G303R,W140Y+E390A,W140Y+G475K,W140Y+A185Q,W140Y+N194F,T182 S+A185D,T182S+E189P,T182S+Y242F,T182S+E259G,T182S+F266Y,T182S +N279S,T182S+K280Y,T182S+G303R,T182S+E390A,T182S+G475K,T182S+ A185Q,T182S+N194F,A185D+E189P,A185D+Y242F,A185D+E259G,A185D+F 266Y,A185D+N279S,A185D+K280Y,A185D+G303R,A185D+E390A,A185D+G4 75K,A185D+A185Q,A185D+N194F,E189P+Y242F,E189P+E259G,E189P+F26 6Y,E189P+N279S,E189P+K280Y,E189P+G303R,E189P+E390A,E189P+G475 K,E189P+A185Q,E189P+N194F,Y242F+E259G,Y242F+F266Y,Y242F+N279S ,Y242F+K280Y,Y242F+G303R,Y242F+E390A,Y242F+G475K,Y242F+A185Q, Y242F+N194F,E259G+F266Y,E259G+N279S,E259G+K280Y,E259G+G303R,E 259G+E390A,E259G+G475K,E259G+A185Q,E259G+N194F,F266Y+N279S,F2 66Y+K280Y,F266Y+G303R,F266Y+E390A,F266Y+G475K,F266Y+A185Q,F26 6Y+N194F,N279+K280Y,N279S+G303R,N279S+E390A,N279S+G475K,N279S +A185Q,N279S+N194F,K280Y+G303R,K280Y+E390A,K280Y+G475K,K280Y+ A185Q,K280Y+N194F,G303R+E390A,G303R+G475K,G303R+A185Q,G303R+N 194F,E390A+G475K,E390A+A185Q,E390A+N194F,G475K+A185Q,G475K+N1 94F, A185Q+N194F, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0430] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 7, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+D118T+W140Y, H1*+D118T+T182S, H1*+D118T+A185D H1*+W140Y+E259G, H1*+W140Y+F266Y,H1*+W140Y+N279S,H1*+W140Y+K280Y,H1*+W140Y+G30 3R,H1*+W140Y+E390A,H1*+W140Y+G475K,H1*+W140Y+A185Q,H1*+W140Y+ N194F,H1*+T182S+A185D,H1*+T182S+E189P,H1*+T182S+Y242F,H1*+T18 2S+E259G,H1*+T182S+F266Y,H1*+T182S+N279S,H1*+T182S+K280Y,H1*+ T182S+G303R,H1*+T182S+E390A,H1*+T182S+G475K,H1*+T182S+A185Q,H 1*+T182S+N194F,H1*+A185D+E189P,H1*+A185D+Y242F,H1*+A185D+E259 G,H1*+A185D+F266Y,H1*+A185D+N279S,H1*+A185D+K280Y,H1*+A185D+G 303R,H1*+A185D+E390A,H1*+A185D+G475K,H1*+A185D+A185Q,H1*+A185 D+N194F,H1*+E189P+Y242F,H1*+E189P+E259G,H1*+E189P+F266Y,H1*+E 189P+N279S,H1*+E189P+K280Y,H1*+E189P+G303R,H1*+E189P+E390A,H1 *+E189P+G475K,H1*+E189P+A185Q,H1*+E189P+N194F,H1*+Y242F+E259G ,H1*+Y242F+F266Y,H1*+Y242F+N279S,H1*+Y242F+K280Y,H1*+Y242F+G3 03R,H1*+Y242F+E390A,H1*+Y242F+G475K,H1*+Y242F+A185Q,H1*+Y242F +N194F,H1*+E259G+F266Y,H1*+E259G+N279S,H1*+E259G+K280Y,H1*+E2 59G+G303R,H1*+E259G+E390A,H1*+E259G+G475K,H1*+E259G+A185Q,H1* +E259G+N194F,H1*+F266Y+N279S,H1*+F266Y+K280Y,H1*+F266Y+G303R, H1*+F266Y+E390A,H1*+F266Y+G475K,H1*+F266Y+A185Q,H1*+F266Y+N19 4F,H1*+N279S+K280Y,H1*+N279S+G303R,H1*+N279S+E390A,H1*+N279S+ G475K,H1*+N279S+A185Q,H1*+N279S+N194F,H1*+K280Y+G303R,H1*+K28 0Y+E390A,H1*+K280Y+G475K,H1*+K280Y+A185Q,H1*+K280Y+N194F,H1*+ G303R+E390A,H1*+G303R+G475K,H1*+G303R+A185Q,H1*+G303R+N194F,H 1*+E390A+G475K,H1*+E390A+A185Q,H1*+E390A+N194F,H1*+G475K+A185 Q,H1*+G475K+N194F,H1*+A185Q+N194F,D118T+W140Y+T182S,D118T+W14 0Y+A185D,D118T+W140Y+E189P,D118T+W140Y+Y242F,D118T+W140Y+E259 G,D118T+W140Y+F266Y,D118T+W140Y+N279S,D118T+W140Y+K280Y,D118T +W140Y+G303R,D118T+W140Y+E390A,D118T+W140Y+G475K,D118T+W140Y+ A18 5Q,D118T+W14 0Y+N194F,D118T+T18 2S+A18 5D,D118T+T18 2S+E18 9P, D 118T+T182S+Y242F,D118T+T182S+E259G,D118T+T182S+F266Y,D118T+T1 82S+N279S,D118T+T182S+K280Y,D118T+T182S+G303R,D118T+T182S+E39 0A,D118T+T182S+G475K,D118T+T182S+A185Q,D118T+T182S+N194F,D118 T+A185D+E189P,D118T+A185D+Y242F,D118T+A185D+E259G,D118T+A185D +F266Y,D118T+A185D+N279S,D118T+A185D+K280Y,D118T+A185D+G303R, D118T+A185D+E390A,D118T+A185D+G475K,D118T+A185D+A185Q,D118T+A 185D+N194F,D118T+E189P+Y242F,D118T+E189P+E259G,D118T+E189P+F2 66Y,D118T+E189P+N279S,D118T+E189P+K280Y,D118T+E189P+G303R,D11 8T+E189P+E390A,D118T+E189P+G475K,D118T+E189P+A185Q,D118T+E189 P+N194F,D118T+Y242F+E259G,D118T+Y242F+F266Y,D118T+Y242F+N279S ,D118T+Y242F+K280Y,D118T+Y242F+G303R,D118T+Y242F+E390A,D118T+ Y242F+G475K,D118T+Y242F+A185Q,D118T+Y242F+N194F,D118T+E259G+F 266Y,D118T+E259G+N279S,D118T+E259G+K280Y,D118T+E259G+G303R,D1 18T+E259G+E390A,D118T+E259G+G475K,D118T+E259G+A185Q,D118T+E25 9G+N194F,D118T + F2 66Y+N27 9S,D118T + F2 66Y+K2 8 0Y, D118T + F2 6 6Y+G3 03 R,D118T+F266Y+E390A,D118T+F266Y+G475K,D118T+F266Y+A185Q,D118T +F266Y+N194F,D118T+N279S+K280Y,D118T+N279S+G303R,D118T+N279S+ E390A,D118T+N279S+G475K,D118T+N279S+A185Q,D118T+N279S+N194F,D 118T+K280Y+G303R,D118T+K280Y+E390A,D118T+K280Y+G475K,D118T+K2 80Y+A185Q,D118T+K280Y+N194F,D118T+G303R+E390A,D118T+G303R+G47 5K,D118T+G303R+A185Q,D118T+G303R+N194F,D118T+E390A+G475K,D118 T+E390A+A185Q,D118T+E390A+N194F,D118T+G475K+A185Q,D118T+G475K +N194F,D118T+A185Q+N194F,W140Y+T182S+A185D,W140Y+T182S+E189P, W140Y+T182S+Y242F,W140Y+T182S+E259G,W140Y+T182S+F266Y,W140Y+T 182S+N279S,W140Y+T182S+K280Y,W140Y+T182S+G303R,W140Y+T182S+E3 90A,W140Y+T182S+G475K,W140Y+T182S+A185Q,W140Y+T182S+N194F,W14 0Y+A185D+E189P,W140Y+A185D+Y242F,W140Y+A185D+E259G,W140Y+A185 D+F266Y,W140Y+A185D+N279S,W140Y+A185D+K280Y,W140Y+A185D+G303R ,W140Y+A185D+E390A,W140Y+A185D+G475K,W140Y+A185D+A185Q,W140Y+ A185D+N194F,W140Y+E189P+Y242F,W140Y+E189P+E259G,W140Y+E189P+F 266Y,W140Y+E189P+N279S,W140Y+E189P+K280Y,W140Y+E189P+G303R,W1 40Y+E189P+E390A,W140Y+E189P+G475K,W140Y+E189P+A185Q,W140Y+E18 9P+N194F,W140Y+Y242F+E259G,W140Y+Y242F+F266Y,W140Y+Y242F+N279 S,W140Y+Y242F+K280Y,W140Y+Y242F+G303R,W140Y+Y242F+E390A,W140Y +Y242F+G475K,W140Y+Y242F+A185Q,W140Y+Y242F+N194F,W140Y+E259G+ F266Y,W140Y+E259G+N279S,W140Y+E259G+K280Y,W140Y+E259G+G303R,W 140Y+E259G+E390A,W140Y+E259G+G475K,W140Y+E259G+A185Q,W140Y+E2 59G+N194F,W140Y+F266Y+N279S,W140Y+F266Y+K280Y,W140Y+F266Y+G30 3R,W140Y+F266Y+E390A,W140Y+F266Y+G475K,W140Y+F266Y+A185Q,W140 Y+F266Y+N194F,W140Y+N279S+K280Y,W140Y+N279S+G303R,W140Y+N279S +E390A,W140Y+N279S+G475K,W140Y+N279S+A185Q,W140Y+N279S+N194F, W140Y+K280Y+G303R,W140Y+K280Y+E390A,W140Y+K280Y+G475K,W140Y+K 280Y+A185Q,W140Y+K280Y+N194F,W140Y+G303R+E390A,W140Y+G303R+G4 75K,W140Y+G303R+A185Q,W140Y+G303R+N194F,W140Y+E390A+G475K,W14 0Y+E390A+A185Q,W140Y+E390A+N194F,W140Y+G475K+A185Q,W140Y+G475 K+N194F,W140Y+A185Q+N194F,T182S+A185D+E189P,T182S+A185D+Y242F ,T182S+A185D+E259G,T182S+A185D+F266Y,T182S+A185D+N279S,T182S+ A185D+K280Y,T182S+A185D+G303R,T182S+A185D+E390A,T182S+A185D+G 45K,T182S+A185D+A185Q,T182S+A185D+N194F,T182S+E189P+Y242F,T18 2S+E189P+E259G,T182S+E189P+F266Y,T182S+E189P+N279S,T182S+E189 P+K280Y,T182S+E189P+G303R,T182S+E189P+E390A,T182S+E189P+G475K ,T182S+E189P+A185Q,T182S+E189P+N194F,T182S+Y242F+E259G,T182S+ Y242F+F266Y,T182S+Y242F+N279S,T182S+Y242F+K280Y,T182S+Y242F+G 303R,T182S+Y242F+E390A,T182S+Y242F+G475K,T182S+Y242F+A185Q,T1 82S+Y242F+N194F,T182S+E259G+F266Y,T182S+E259G+N279S,T182S+E25 9G+K280Y,T182S+E259G+G303R,T182S+E259G+E390A,T182S+E259G+G475 K,T182S+E259G+A185Q,T182S+E259G+N194F,T182S+F266Y+N279S,T182S +F266Y+K280Y,T182S+F266Y+G303R,T182S+F266Y+E390A,T182S+F266Y+ G475K,T182S+F266Y+A185Q,T182S+F266Y+N194F,T182S+N279S+K280Y,T 182S+N279S+G303R,T182S+N279S+E390A,T182S+N279S+G475K,T182S+N2 79S+A185Q,T182S+N279S+N194F,T182S+K280Y+G303R,T182S+K280Y+E39 0A,T182S+K280Y+G475K,T182S+K280Y+A185Q,T182S+K280Y+N194F,T182 S+G303R+E390A,T182S+G303R+G475K,T182S+G303R+A185Q,T182S+G303R +N194F,T182S+E390A+G475K,T182S+E390A+A185Q,T182S+E390A+N194F, T182S+G475K+A185Q,T182S+G475K+N194F,T182S+A185Q+N194F,A185D+E 189P+Y242F,A185D+E189P+E259G,A185D+E189P+F266Y,A185D+E189P+N2 79S,A185D+E189P+K280Y,A185D+E189P+G303R,A185D+E189P+E390A,A18 5D+E189P+G475K,A185D+E189P+A185Q,A185D+E189P+N194F,A185D+Y242 F+E259G,A185D+Y242F+F266Y,A185D+Y242F+N279S,A185D+Y242F+K280Y ,A185D+Y242F+G303R,A185D+Y242F+E390A,A185D+Y242F+G475K,A185D+ Y242F+A185Q,A185D+Y242F+N194F,A185D+E259G+F266Y,A185D+E259G+N 279S,A185D+E259G+K280Y,A185D+E259G+G303R,A185D+E259G+E390A,A1 85D+E259G+G475K,A185D+E259G+A185Q,A185D+E259G+N194F,A185D+F26 6Y+N279S,A185D+F266Y+K280Y,A185D+F266Y+G303R,A185D+F266Y+E390 A,A185D+F266Y+G475K,A185D+F266Y+A185Q,A185D+F266Y+N194F,A185D +N279S+K280Y,A185D+N279S+G303R,A185D+N279S+E390A,A185D+N279S+ G475K,A185D+N279S+A185Q,A185D+N279S+N194F,A185D+K280Y+G303R,A 185D+K280Y+E390A,A185D+K280Y+G475K,A185D+K280Y+A185Q,A185D+K2 80Y+N194F,A185D+G303R+E390A,A185D+G303R+G475K,A185D+G303R+A18 5Q,A185D+G303R+N194F,A185D+E390A+G475K,A185D+E390A+A185Q,A185 D+E390A+N194F,A185D+G475K+A185Q,A185D+G475K+N194F,A185D+A185Q +N194F,E189P+Y242F+E259G,E189P+Y242F+F266Y,E189P+Y242F+N279S, E189P+Y242F+K280Y,E189P+Y242F+G303R,E189P+Y242F+E390A,E189P+Y 242F+G475K,E189P+Y242F+A185Q,E189P+Y242F+N194F,E189P+E259G+F2 66Y,E189P+E259G+N279S,E189P+E259G+K280Y,E189P+E259G+G303R,E18 9P+E259G+E390A,E189P+E259G+G475K,E189P+E259G+A185Q,E189P+E259 G+N194F,E189P+F266Y+N279S,E189P+F266Y+K280Y,E189P+F266Y+G303R ,E189P+F266Y+E390A,E189P+F266Y+G475K,E189P+F266Y+A185Q,E189P+ F266Y+N194F,E189P+N279S+K280Y,E189P+N279S+G303R,E189P+N279S+E 390A,E189P+N279S+G475K,E189P+N279S+A185Q,E189P+N279S+N194F,E1 89P+K280Y+G303R,E189P+K280Y+E390A,E189P+K280Y+G475K,E189P+K28 0Y+A185Q,E189P+K280Y+N194F,E189P+G303R+E390A,E189P+G303R+G475 K,E189P+G303R+A185Q,E189P+G303R+N194F,E189P+E390A+G475K,E189P +E390A+A185Q,E189P+E390A+N194F,E189P+G475K+A185Q,E189P+G475K+ N194F,E189P+A185Q+N194F,Y242F+E259G+F266Y,Y242F+E259G+N279S,Y 242F+E259G+K280Y,Y242F+E259G+G303R,Y242F+E259G+E390A,Y242F+E2 59G+G475K,Y242F+E259G+A185Q,Y242F+E259G+N194F,Y242F+F266Y+N27 9S,Y242F+F266Y+K280Y,Y242F+F266Y+G303R,Y242F+F266Y+E390A,Y242 F+F266Y+G475K,Y242F+F266Y+A185Q,Y242F+F266Y+N194F,Y242F+N279S +K280Y,Y242F+N279S+G303R,Y242F+N279S+E390A,Y242F+N279S+G475K, Y242F+N279S+A185Q,Y242F+N279S+N194F,Y242F+K280Y+G303R,Y242F+K 280Y+E390A,Y242F+K280Y+G475K,Y242F+K280Y+A185Q,Y242F+K280Y+N1 94F,Y242F+G303R+E390A,Y242F+G303R+G475K,Y242F+G303R+A185Q,Y24 2F+G303R+N194F,Y242F+E390A+G475K,Y242F+E390A+A185Q,Y242F+E390 A+N194F,Y242F+G475K+A185Q,Y242F+G475K+N194F,Y242F+A185Q+N194F ,E259G+F266Y+N279S,E259G+F266Y+K280Y,E259G+F266Y+G303R,E259G+ F266Y+E390A,E259G+F266Y+G475K,E259G+F266Y+A185Q,E259G+F266Y+N 194F,E259G+N279S+K280Y,E259G+N279S+G303R,E259G+N279S+E390A,E2 59G+N279S+G475K,E259G+N279S+A185Q,E259G+N279S+N194F,E259G+K28 0Y+G303R,E259G+K280Y+E390A,E259G+K280Y+G475K,E259G+K280Y+A185 Q,E259G+K280Y+N194F,E259G+G303R+E390A,E259G+G303R+G475K,E259G +G303R+A185Q,E259G+G303R+N194F,E259G+E390A+G475K,E259G+E390A+ A185Q,E259G+E390A+N194F,E259G+G475K+A185Q,E259G+G475K+N194F,E 259G+A185Q+N194F,F266Y+N279S+K280Y,F266Y+N279S+G303R,F266Y+N2 79S+E390A,F266Y+N279S+G475K,F266Y+N279S+A185Q,F266Y+N279S+N19 4F,F266Y+K280Y+G303R,F266Y+K280Y+E390A,F266Y+K280Y+G475K,F266 Y+K280Y+A185Q,F266Y+K280Y+N194F,F266Y+G303R+E390A,F266Y+G303R +G475K,F266Y+G303R+A185Q,F266Y+G303R+N194F,F266Y+E390A+G475K, F266Y+E390A+A185Q,F266Y+E390A+N194F,F266Y+G475K+A185Q,F266Y+G 475K+N194F,F266Y+A185Q+N194F,N279S+K280Y+G303R,N279S+K280Y+E3 90A,N279S+K280Y+G475K,N279S+K280Y+A185Q,N279S+K280Y+N194F,N27 9S+G303R+E390A,N279S+G303R+G475K,N279S+G303R+A185Q,N279S+G303 R+N194F,N279S+E390A+G475K,N279S+E390A+A185Q,N279S+E390A+N194F ,N279S+G475K+A185Q, N279S+G475K+N194F,N279S+A185Q+N194F,K280Y+G303R+E39 0A,K280Y+G303R+G475K,K280Y+G303R+A185Q,K280Y+G303R+N194F,K280 Y+E390A+G475K,K280Y+E390A+A185Q,K280Y+E390A+N194F,K280Y+G475K +A185Q,K280Y+G475K+N194F,K280Y+A185Q+N194F,G303R+E390A+G475K, G303R+E390A+A185Q,G303R+E390A+N194F,G303R+G475K+A185Q,G303R+G 475K+N194F,G303R+A185Q+N194F,E390A+G475K+A185Q,E390A+G475K+N1 94F,E390A+A185Q+N194F,G475K+A185Q+N194F, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0431] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 7, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P, H1*+G7A+W140Y+Y242F, H1*+G7A+W140Y+E259G, H1*+G7A+W140Y+N279S, H1*+G7A+W140Y+K280Y, H1*+G7A+W140Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F,H1*+G7A+E189P+E259G,H1*+G7A+E189P+N279S,H 1*+G7A+E189P+K280Y,H1*+G7A+E189P+G303R,H1*+G7A+E189P+E390A,H1 *+G7A+Y242F+E259G,H1*+G7A+Y242F+N279S,H1*+G7A+Y242F+K280Y,H1* +G7A+Y242F+G303R,H1*+G7A+Y242F+E390A,H1*+G7A+E259G+N279S,H1*+ G7A+E259G+K280Y,H1*+G7A+E259G+G303R,H1*+G7A+E259G+E390A,H1*+G 7A+N279S+K280Y,H1*+G7A+N279S+G303R,H1*+G7A+N279S+E390A,H1*+G7 A+K280Y+G303R,H1*+G7A+K280Y+E390A,H1*+G7A+G303R+E390A,H1*+W14 0Y+E189P+Y242F,H1*+W140Y+E189P+E259G,H1*+W140Y+E189P+N279S,H1 *+W140Y+E189P+K280Y,H1*+W140Y+E189P+G303R,H1*+W140Y+E189P+E39 0A,H1*+W140Y+Y242F+E259G,H1*+W140Y+Y242F+N279S,H1*+W140Y+Y242 F+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+G303R,H1*+W140Y+Y242F+E390A,H1*+W140Y +E2 5 9G+N2 7 9S,H1*+W14 0Y+E2 5 9G+K2 8 0Y,H1*+W14 0Y+E25 9G+G3 03R, H1* + W140Y+E259G+E390A,H1*+W140Y+N279S+K280Y,H1*+W140Y+N279S+G303R ,H1*+W140Y+N279S+E390A,H1*+W140Y+K280Y+G303R,H1*+W140Y+K280Y+ E390A,H1*+W140Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G,H1*+E189P+Y 242F+N279S,H1*+E189P+Y242F+K280Y,H1*+E189P+Y242F+G303R,H1*+E1 89P+Y242F+E390A,H1*+E189P+E259G+N279S,H1*+E189P+E259G+K280Y,H 1*+E189P+E259G+G303R,H1*+E189P+E259G+E390A,H1*+E189P+N279S+K2 80Y,H1*+E189P+N279S+G303R,H1*+E189P+N279S+E390A,H1*+E189P+K28 0Y+G303R,H1*+E189P+K280Y+E390A,H1*+E189P+G303R+E390A,H1*+Y242 F+E259G+N279S,H1*+Y242F+E259G+K280Y,H1*+Y242F+E259G+G303R,H1* +Y242F+E259G+E390A,H1*+Y242F+N279S+K280Y,H1*+Y242F+N279S+G303 R,H1*+Y242F+N279S+E390A,H1*+Y242F+K280Y+G303R,H1*+Y242F+K280Y +E390A,H1*+Y242F+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y,H1*+E259G+ N279S+G303R,H1*+E259G+N279S+E390A,H1*+E259G+K280Y+G303R,H1*+E 259G+K280Y+E390A,H1*+E259G+G303R+E390A,H1*+N279S+K280Y+G303R, H1*+N279S+K280Y+E390A,H1*+N279S+G303R+E390A,H1*+K280Y+G303R+E 390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F,G7A+W140Y+E189P+E259G,G7A+W140Y+E1 89P+N279S,G7A+W140Y+E189P+K280Y,G7A+W140Y+E189P+G303R,G7A+W14 0Y+E189P+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E259G,G7A+W140Y+Y242F+N279S,G7 A+W140Y+Y242F+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E39 0A,G7A+W140Y+E259G+N279S,G7A+W140Y+E259G+K280Y,G7A+W140Y+E259 G+G303R,G7A+W140Y+E259G+E390A,G7A+W140Y+N279S+K280Y,G7A+W140Y +N279S+G303R,G7A+W140Y+N279S+E390A,G7A+W140Y+K280Y+G303R,G7A+ W140Y+K280Y+E390A,G7A+W140Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G ,G7A+E189P+Y242F+N279S,G7A+E189P+Y242F+K280Y,G7A+E189P+Y242F+ G303R,G7A+E189P+Y242F+E390A,G7A+E189P+E259G+N279S,G7A+E189P+E 2 5 9G+K2 8 0Y,G7A+E18 9P+E2 5 9G+G3 03R,G7A+E18 9P+E2 5 9G+E3 9 0A, G7A+E1 89P+N279S+K280Y,G7A+E189P+N279S+G303R,G7A+E189P+N279S+E390A,G 7A+E189P+K280Y+G303R,G7A+E189P+K280Y+E390A,G7A+E189P+G303R+E3 90A,G7A+Y242F+E259G+N279S,G7A+Y242F+E259G+K280Y,G7A+Y242F+E25 9G+G303R,G7A+Y242F+E259G+E390A,G7A+Y242F+N279S+K280Y,G7A+Y242 F+N279S+G303R,G7A+Y242F+N279S+E390A,G7A+Y242F+K280Y+G303R,G7A +Y242F+K280Y+E390A,G7A+Y242F+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280 Y,G7A+E259G+N279S+G303R,G7A+E259G+N279S+E390A,G7A+E259G+K280Y +G303R,G7A+E259G+K280Y+E390A,G7A+E259G+G303R+E390A,G7A+N279S+ K280Y+G303R,G7A+N279S+K280Y+E390A,G7A+N279S+G303R+E390A,G7A+K 280Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G,W140Y+E189P+Y242F+N2 79S,W140Y+E189P+Y242F+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+G303R,W140Y+E18 9P+Y242F+E390A,W140Y+E189P+E259G+N279S,W140Y+E189P+E259G+K280 Y,W140Y+E189P+E259G+G303R,W140Y+E189P+E259G+E390A,W140Y+E189P +N279S+K280Y,W140Y+E189P+N279S+G303R,W140Y+E189P+N279S+E390A, W140Y+E189P+K280Y+G303R,W140Y+E189P+K280Y+E390A,W140Y+E189P+G 303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N279S,W140Y+Y242F+E259G+K280Y,W1 40Y+Y242F+E259G+G303R,W140Y+Y242F+E259G+E390A,W140Y+Y242F+N27 9S+K280Y,W140Y+Y242F+N279S+G303R,W140Y+Y242F+N279S+E390A,W140 Y+Y242F+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+K280Y+E390A,W140Y+Y242F+G303R +E390A,W140Y+E259G+N279S+K280Y,W140Y+E259G+N279S+G303R,W140Y+ E259G+N279S+E390A,W140Y+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E259G+K280Y+E 390A,W140Y+E259G+G303R+E390A,W140Y+N279S+K280Y+G303R,W140Y+N2 79S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A,W140Y+K280Y+G303R+E390 A,E189P+Y242F+E259G+N279S,E189P+Y242F+E259G+K280Y,E189P+Y242F +E259G+G303R,E189P+Y242F+E259G+E390A,E189P+Y242F+N279S+K280Y, E189P+Y242F+N279S+G303R,E189P+Y242F+N279S+E390A,E189P+Y242F+K 280Y+G303R,E189P+Y242F+K280Y+E390A,E189P+Y242F+G303R+E390A,E1 89P+E259G+N279S+K280Y,E189P+E259G+N279S+G303R,E189P+E259G+N27 9S+E390A,E189P+E259G+K280Y+G303R,E189P+E259G+K280Y+E390A,E189 P+E259G+G303R+E390A,E189P+N279S+K280Y+G303R,E189P+N279S+K280Y +E390A,E189P+N279S+G303R+E390A,E189P+K280Y+G303R+E390A,Y242F+ E259G+N279S+K280Y,Y242F+E259G+N279S+G303R,Y242F+E259G+N279S+E 390A,Y242F+E259G+K280Y+G303R,Y242F+E259G+K280Y+E390A,Y242F+E2 59G+G303R+E390A,Y242F+N279S+K280Y+G303R,Y242F+N279S+K280Y+E39 0A,Y242F+N279S+G303R+E390A,Y242F+K280Y+G303R+E390A,E259G+N279 S+K280Y+G303R,E259G+N279S+K280Y+E390A,E259G+N279S+G303R+E390A ,E259G+K280Y+G303R+E390A,N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0432] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 7, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S, H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y, H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S,H1*+G7A+W 140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G +E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R,H1 *+G7A+W140Y+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R,H1*+G7A+W14 0Y+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+ E259G,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S,H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y,H1* +G7A+E189P+Y242F+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A,H1*+G7A+E189 P+E259G+N279S,H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y,H1*+G7A+E189P+E259G+G 303R,H1*+G7A+E189P+E259G+E390A,H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y,H1*+ G7A+E189P+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+N279S+E390A,H1*+G7A+E189P +K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+G303R+E3 90A,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G 7A+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A,H1*+G7A+Y242F+ N279S+K280Y,H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R,H1*+G7A+Y242F+N279S+E39 0A,H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R,H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A,H1*+G7 A+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+E259G+N 279S+G303R,H1*+G7A+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+E259G+K280Y+G303 R,H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A +N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+N279S+G3 03R+E390A,H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E25 9G,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y,H1 *+W140Y+E189P+Y242F+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A,H1*+W14 0Y+E189P+E259G+N279S,H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E1 89P+E259G+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A,H1*+W140Y+E189P+N 279S+K280Y,H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R,H1*+W140Y+E189P+N279S+ E390A,H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A ,H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S,H1*+ W140Y+Y242F+E259G+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R,H1*+W140Y +Y242F+E259G+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,H1*+W140Y+Y242 F+N279S+G303R,H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A,H1*+W140Y+Y242F+K28 0Y+G303R,H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+G303R+E3 90A,H1*+W14 0Y+E2 5 9G+N2 7 9S+K2 8 0Y,H1*+W14 0Y+E2 5 9G+N2 7 9S+G3 0 3R, H 1*+W14 0Y+E2 5 9G+N2 7 9S+E3 90A,H1*+W14 0Y+E2 5 9G+K2 8 0Y+G3 0 3R, H1*+W1 40Y+E259G+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A,H1*+W140Y+N 279S+K280Y+G303R,H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+N279S+ G303R+E390A,H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G +N279S,H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+E189P+Y242F+E259G+G303 R,H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1* +E189P+Y242F+N279S+G303R,H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A,H1*+E189 P+Y242F+K280Y+G303R,H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A,H1*+E189P+Y24 2F+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y,H1*+E189P+E259G+N2 79S+G303R,H1*+E189P+E259G+N279S+E390A,H1*+E189P+E259G+K280Y+G 303R,H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A,H1*+E189P+E259G+G303R+E390A, H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R,H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+E 189P+N279S+G303R+E390A,H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+ E259G+N279S+K280Y,H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+Y242F+E259G +N279S+E390A,H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+Y242F+E259G+K280 Y+E390A,H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1*+Y242F+N279S+K280Y+G30 3R,H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1 *+Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+E25 9G+N279S+K280Y+E390A,H1*+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+E259G+K2 80Y+G303R+E390A,H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y 242F+E259G,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S,G7A+W140Y+E189P+Y242F+ K280Y,G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A ,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S,G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y,G7A+ W140Y+E189P+E259G+G303R,G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A,G7A+W140Y +E189P+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189 P+N279S+E390A,G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+K28 0Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N2 7 9S,G7A+W14 0Y+Y2 4 2F+E2 5 9G+K2 8 0Y,G7A+W14 0Y+Y2 4 2F+E2 5 9G+G3 0 3R, G 7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,G7A+W1 40Y+Y242F+N279S+G303R,G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A,G7A+W140Y+Y 242F+K280Y+G303R,G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y242F+ G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E259G+N279S +G303R,G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A,G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303 R,G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A,G7A +W140Y+N279S+K280Y+G303R,G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140 Y+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y24 2F+E259G+N279S,G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y,G7A+E189P+Y242F+E2 59G+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A,G7A+E189P+Y242F+N279S+K 280Y,G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R,G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A, G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A,G7A+E 189P+Y242F+G303R+E390A,G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y,G7A+E189P+ E259G+N279S+G303R,G7A+E189P+E259G+N279S+E390A,G7A+E189P+E259G +K280Y+G303R,G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A,G7A+E189P+E259G+G303 R+E390A,G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+N279S+K280Y+E39 0A,G7A+E189P+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A,G7 A+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R,G7A+Y24 2F+E259G+N279S+E390A,G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R,G7A+Y242F+E2 59G+K280Y+E390A,G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A,G7A+Y242F+N279S+K 280Y+G303R,G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+Y242F+N279S+G303R+ E390A,G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R ,G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+ E259G+K280Y+G303R+E390A,G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+N279S,W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,W140Y+E189 P+Y242F+E259G+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A,W140Y+E189P +Y242F+N279S+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R,W140Y+E189P+ Y242F+N279S+E390A,W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y 242F+K280Y+E390A,W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,W140Y+E189P+E2 59G+N279S+K280Y,W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,W140Y+E189P+E25 9G+N279S+E390A,W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E189P+E259 G+K280Y+E390A,W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,W140Y+E189P+N279S +K280Y+G303R,W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E189P+N279S+ G303R+E390A,W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N 279S+K280Y,W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R,W140Y+Y242F+E259G+N2 79S+E390A,W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+E259G+K28 0Y+E390A,W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A,W140Y+Y242F+N279S+K280 Y+G303R,W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A,W140Y+Y242F+N279S+G303R +E390A,W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E259G+N279S+K280Y+ G303R,W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E259G+N279S+G303R+E 390A,W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,W140Y+N279S+K280Y+G303R+E3 90A,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,E189P+Y242F+E259G+N279S+G30 3R,E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303 R,E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A ,E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R,E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A,E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,E 189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,E1 89P+E259G+N279S+G303R+E390A,E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A,E18 9P+N279S+K280Y+G303R+E390A,Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,Y242 F+E259G+N279S+K280Y+E390A,Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,Y242F +E259G+K280Y+G303R+E390A,Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,E259G+ N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0433] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 7, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G30 3R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+ N279S,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+E25 9G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+ N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E18 9P+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+ E189P+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A,H1*+G7A+W14 0Y+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+ W140Y+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A,H1*+G 7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R,H1 *+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R ,H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E3 90A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S +G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+K2 80Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G +G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+N2 79S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y +K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+E1 89P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A +E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1*+ G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A,H 1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390 A,H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K 280Y,H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+E259G+N279 S+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+E259G+K 280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+N279 S+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+N 279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242 F+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+Y 242F+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7 A+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1* +G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E39 0A,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+ E390A,H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E259G+K280Y+G30 3R+E390A,H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242 F+E259G+N279S,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+W1 40Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R ,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280 Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y24 2F+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E1 89P+E259G+N279S+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A,H1*+W 140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390 A,H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+N279S+K28 0Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+N2 79S+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+ W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G30 3R,H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+G3 03R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R,H1*+W140Y+Y242F+N 279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+W140Y+ Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1* +W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E3 90A,H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+N279S+K280Y+G 303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+E189P+Y242F+ E259G+N279S+G303R,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,H1*+E189P +Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1 *+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G 303R,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+ G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G +N279S+K280Y+G303R,H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+E189 P+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A,H 1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+ G303R,H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+Y242F+E259G+N279S +G303R+E390A,H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+N279 S+K280Y+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W14 0Y+E189P+Y242F+E259G+N279S,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G +E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E189P+Y242 F+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A,G7A+W140Y+E18 9P+Y242F+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A,G7A+W1 40Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y ,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279 S+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+E25 9G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,G7A+W140Y+E1 89P+N279S+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,G7A+W 140Y+E189P+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390 A,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N27 9S+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E2 59G+K280Y+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y 242F+E259G+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R,G7A+ W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E39 0A,G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+N279S+K2 80Y+G303R,G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E259G+N 279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+ N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A +E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E3 90A,G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+K 280Y+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+ N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+E189P +Y242F+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7 A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E 390A,G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+E259G+K280Y+ G303R+E390A,G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R,G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+Y242 F+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,G 7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+ E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+E 259G+N279S+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,W140Y+E1 89P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E39 0A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+N279 S+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E189P +Y242F+N279S+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,W140Y+E189P+E259G+N279S+K 280Y+E390A,W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A,W140Y+E189P+E2 59G+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,W14 0Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280 Y+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G +K280Y+G303R+E390A,W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,W140Y+ E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G 303R,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,E189P+Y242F+E259G+N2 79S+G303R+E390A,E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,E189P+Y24 2F+N279S+K280Y+G303R+E390A,E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390 A,Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0434] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 7, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y24 2F+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, usando SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0435] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 7, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N2 79S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A +W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242 F+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G30 3R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+ E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y +G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+ G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E 259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+ E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W14 0Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N2 79S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,H 1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242 F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G30 3R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+ E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G +N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390 A,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+ G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1* +W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y +G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1 *+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280 Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,G 7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+ Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K28 0Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F +E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K2 80Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E39 0A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0436] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 7, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W14 0Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K 280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+ E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G 7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K2 80Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0437] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 7, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E 390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0438] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 8, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+D118T, H1*+W140Y, H1*+T182S, H1*+A185D, H1*+E189P, H1*+Y242F, H1*+E259G, H1*+F266Y, H1*+N279S, H1*+K280Y, H1*+G303R, H1*+E390A, H1*+G475K, H1*+A185Q, H1*+N194F, D118T+W140Y, D118T+T182S, D118T+A185D, D118T+E189P, D118T+Y242F, D118T+E259G, D118T+F266Y, D118T+N279S,D118T+K280Y,D118T+G303R,D118T+E390A,D118T+G475K,D 118T+A185Q,D118T+N194F,W140Y+T182S,W140Y+A185D,W140Y+E189P,W1 40Y+Y242F,W140Y+E259G,W140Y+F266Y,W140Y+N279S,W140Y+K280Y,W14 0Y+G303R,W140Y+E390A,W140Y+G475K,W140Y+A185Q,W140Y+N194F,T182 S+A185D,T182S+E189P,T182S+Y242F,T182S+E259G,T182S+F266Y,T182S +N279S,T182S+K280Y,T182S+G303R,T182S+E390A,T182S+G475K,T182S+ A185Q,T182S+N194F,A185D+E189P,A185D+Y242F,A185D+E259G,A185D+F 266Y,A185D+N279S,A185D+K280Y,A185D+G303R,A185D+E390A,A185D+G4 75K,A185D+A185Q,A185D+N194F,E189P+Y242F,E189P+E259G,E189P+F26 6Y,E189P+N279S,E189P+K280Y,E189P+G303R,E189P+E390A,E189P+G475 K,E189P+A185Q,E189P+N194F,Y242F+E259G,Y242F+F266Y,Y242F+N279S ,Y242F+K280Y,Y242F+G303R,Y242F+E390A,Y242F+G475K,Y242F+A185Q, Y242F+N194F,E259G+F266Y,E259G+N279S,E259G+K280Y,E259G+G303R,E 259G+E390A,E259G+G475K,E259G+A185Q,E259G+N194F,F266Y+N279S,F2 66Y+K280Y,F266Y+G303R,F266Y+E390A,F266Y+G475K,F266Y+A185Q,F26 6Y+N194F,N279+K280Y,N279S+G303R,N279S+E390A,N279S+G475K,N279S +A185Q,N279S+N194F,K280Y+G303R,K280Y+E390A,K280Y+G475K,K280Y+ A185Q,K280Y+N194F,G303R+E390A,G303R+G475K,G303R+A185Q,G303R+N 194F,E390A+G475K,E390A+A185Q,E390A+N194F,G475K+A185Q,G475K+N1 94F, A185Q+N194F, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0439] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 8, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+D118T+W140Y, H1*+D118T+T182S, H1*+D118T+A185D, H1*+D118T+E189P, H1*+D118T+Y242F, H1*+D118T+E259G, H1* + D118T + F266Y, H1* + D118T+N2 7 9S, H1* + D118T+K2 8 0Y, H1*+D118T+G303R, H1*+D118T+E390A, H1*+D118T+G475K, H1* + D118T+A185Q, H1* + D118T+N194F, H1*+W14 0Y+T18 2S, H1*+W140Y+A185D, H1*+W140Y+E189P, H1*+W140Y+Y242F, H1*+W140Y+E259G, H1*+W140Y+F266Y,H1*+W140Y+N279S,H1*+W140Y+K280Y,H1*+W140Y+G30 3R,H1*+W140Y+E390A,H1*+W140Y+G475K,H1*+W140Y+A185Q,H1*+W140Y+ N194F,H1*+T182S+A185D,H1*+T182S+E189P,H1*+T182S+Y242F,H1*+T18 2S+E259G,H1*+T182S+F266Y,H1*+T182S+N279S,H1*+T182S+K280Y,H1*+ T182S+G303R,H1*+T182S+E390A,H1*+T182S+G475K,H1*+T182S+A185Q,H 1*+T182S+N194F,H1*+A185D+E189P,H1*+A185D+Y242F,H1*+A185D+E259 G,H1*+A185D+F266Y,H1*+A185D+N279S,H1*+A185D+K280Y,H1*+A185D+G 303R,H1*+A185D+E390A,H1*+A185D+G475K,H1*+A185D+A185Q,H1*+A185 D+N194F,H1*+E189P+Y242F,H1*+E189P+E259G,H1*+E189P+F266Y,H1*+E 189P+N279S,H1*+E189P+K280Y,H1*+E189P+G303R,H1*+E189P+E390A,H1 *+E189P+G475K,H1*+E189P+A185Q,H1*+E189P+N194F,H1*+Y242F+E259G ,H1*+Y242F+F266Y,H1*+Y242F+N279S,H1*+Y242F+K280Y,H1*+Y242F+G3 03R,H1*+Y242F+E390A,H1*+Y242F+G475K,H1*+Y242F+A185Q,H1*+Y242F +N194F,H1*+E259G+F266Y,H1*+E259G+N279S,H1*+E259G+K280Y,H1*+E2 59G+G303R,H1*+E259G+E390A,H1*+E259G+G475K,H1*+E259G+A185Q,H1* +E259G+N194F,H1*+F266Y+N279S,H1*+F266Y+K280Y,H1*+F266Y+G303R, H1*+F266Y+E390A,H1*+F266Y+G475K,H1*+F266Y+A185Q,H1*+F266Y+N19 4F,H1*+N279S+K280Y,H1*+N279S+G303R,H1*+N279S+E390A,H1*+N279S+ G475K,H1*+N279S+A185Q,H1*+N279S+N194F,H1*+K280Y+G303R,H1*+K28 0Y+E390A,H1*+K280Y+G475K,H1*+K280Y+A185Q,H1*+K280Y+N194F,H1*+ G303R+E390A,H1*+G303R+G475K,H1*+G303R+A185Q,H1*+G303R+N194F,H 1*+E390A+G475K,H1*+E390A+A185Q,H1*+E390A+N194F,H1*+G475K+A185 Q,H1*+G475K+N194F,H1*+A185Q+N194F,D118T+W140Y+T182S,D118T+W14 0Y+A185D,D118T+W140Y+E189P,D118T+W140Y+Y242F,D118T+W140Y+E259 G,D118T+W140Y+F266Y,D118T+W140Y+N279S,D118T+W140Y+K280Y,D118T +W140Y+G303R,D118T+W140Y+E390A,D118T+W140Y+G475K,D118T+W140Y+ A185Q,D118T+W140Y+N194F,D118T+T182S+A185D,D118T+T182S+E189P,D 118T+T182S+Y242F,D118T+T182S+E259G,D118T+T182S+F266Y,D118T+T1 82S+N279S,D118T+T182S+K280Y,D118T+T182S+G303R,D118T+T182S+E39 0A,D118T+T182S+G475K,D118T+T182S+A185Q,D118T+T182S+N194F,D118 T+A185D+E189P,D118T+A185D+Y242F,D118T+A185D+E259G,D118T+A185D +F266Y,D118T+A185D+N279S,D118T+A185D+K280Y,D118T+A185D+G303R, D118T+A185D+E390A,D118T+A185D+G475K,D118T+A185D+A185Q,D118T+A 185D+N194F,D118T+E189P+Y242F,D118T+E189P+E259G,D118T+E189P+F2 66Y,D118T+E18 9P+N27 9S,D118T+E18 9P+K2 8 0Y, D118T+E18 9P+G3 03R,D11 8T+E189P+E390A,D118T+E189P+G475K,D118T+E189P+A185Q,D118T+E189 P+N194F,D118T+Y242F+E259G,D118T+Y242F+F266Y,D118T+Y242F+N279S ,D118T+Y242F+K280Y,D118T+Y242F+G303R,D118T+Y242F+E390A,D118T+ Y242F+G475K,D118T+Y242F+A185Q,D118T+Y242F+N194F,D118T+E259G+F 266Y,D118T+E259G+N279S,D118T+E259G+K280Y,D118T+E259G+G303R,D1 18T+E259G+E390A,D118T+E259G+G475K,D118T+E259G+A185Q,D118T+E25 9G+N194F,D118T+F266Y+N279S,D118T+F266Y+K280Y,D118T+F266Y+G303 R,D118T+F266Y+E390A,D118T+F266Y+G475K,D118T+F266Y+A185Q,D118T +F266Y+N194F,D118T+N279S+K280Y,D118T+N279S+G303R,D118T+N279S+ E390A,D118T+N279S+G475K,D118T+N279S+A185Q,D118T+N279S+N194F,D 118T+K280Y+G303R,D118T+K280Y+E390A,D118T+K280Y+G475K,D118T+K2 80Y+A185Q,D118T+K280Y+N194F,D118T+G303R+E390A,D118T+G303R+G47 5K,D118T+G303R+A185Q,D118T+G303R+N194F,D118T+E390A+G475K,D118 T+E390A+A185Q,D118T+E390A+N194F,D118T+G475K+A185Q,D118T+G475K +N194F,D118T+A185Q+N194F,W140Y+T182S+A185D,W140Y+T182S+E189P, W140Y+T182S+Y242F,W140Y+T182S+E259G,W140Y+T182S+F266Y,W140Y+T 182S+N279S,W140Y+T182S+K280Y,W140Y+T182S+G303R,W140Y+T182S+E3 90A,W140Y+T182S+G475K,W140Y+T182S+A185Q,W140Y+T182S+N194F,W14 0Y+A185D+E189P,W140Y+A185D+Y242F,W140Y+A185D+E259G,W140Y+A185 D+F266Y,W140Y+A185D+N279S,W140Y+A185D+K280Y,W140Y+A185D+G303R ,W140Y+A185D+E390A,W140Y+A185D+G475K,W140Y+A185D+A185Q,W140Y+ A185D+N194F,W140Y+E189P+Y242F,W140Y+E189P+E259G,W140Y+E189P+F 266Y,W140Y+E189P+N279S,W140Y+E189P+K280Y,W140Y+E189P+G303R,W1 40Y+E189P+E390A,W140Y+E189P+G475K,W140Y+E189P+A185Q,W140Y+E18 9P+N194F,W140Y+Y242F+E259G,W140Y+Y242F+F266Y,W140Y+Y242F+N279 S,W140Y+Y242F+K280Y,W140Y+Y242F+G303R,W140Y+Y242F+E390A,W140Y +Y242F+G475K,W140Y+Y242F+A185Q,W140Y+Y242F+N194F,W140Y+E259G+ F266Y,W140Y+E259G+N279S,W140Y+E259G+K280Y,W140Y+E259G+G303R,W 140Y+E259G+E390A,W140Y+E259G+G475K,W140Y+E259G+A185Q,W140Y+E2 59G+N194F,W140Y+F266Y+N279S,W140Y+F266Y+K280Y,W140Y+F266Y+G30 3R,W140Y+F266Y+E390A,W140Y+F266Y+G475K,W140Y+F266Y+A185Q,W140 Y+F266Y+N194F,W140Y+N279S+K280Y,W140Y+N279S+G303R,W140Y+N279S +E390A,W140Y+N279S+G475K,W140Y+N279S+A185Q,W140Y+N279S+N194F, W140Y+K280Y+G303R,W140Y+K280Y+E390A,W140Y+K280Y+G475K,W140Y+K 280Y+A185Q,W140Y+K280Y+N194F,W140Y+G303R+E390A,W140Y+G303R+G4 75K,W140Y+G303R+A185Q,W140Y+G303R+N194F,W140Y+E390A+G475K,W14 0Y+E390A+A185Q,W140Y+E390A+N194F,W140Y+G475K+A185Q,W140Y+G475 K+N194F,W140Y+A185Q+N194F,T182S+A185D+E189P,T182S+A185D+Y242F ,T182S+A185D+E259G,T182S+A185D+F266Y,T182S+A185D+N279S,T182S+ A185D+K280Y,T182S+A185D+G303R,T182S+A185D+E390A,T182S+A185D+G 45K,T182S+A185D+A185Q,T182S+A185D+N194F,T182S+E189P+Y242F,T18 2S+E189P+E259G,T182S+E189P+F266Y,T182S+E189P+N279S,T182S+E189 P+K280Y,T182S+E189P+G303R,T182S+E189P+E390A,T182S+E189P+G475K ,T182S+E189P+A185Q,T182S+E189P+N194F,T182S+Y242F+E259G,T182S+ Y242F+F266Y,T182S+Y242F+N279S,T182S+Y242F+K280Y,T182S+Y242F+G 303R,T182S+Y242F+E390A,T182S+Y242F+G475K,T182S+Y242F+A185Q,T1 82S+Y242F+N194F,T182S+E259G+F266Y,T182S+E259G+N279S,T182S+E25 9G+K280Y,T182S+E259G+G303R,T182S+E259G+E390A,T182S+E259G+G475 K,T182S+E259G+A185Q,T182S+E259G+N194F,T182S+F266Y+N279S,T182S +F266Y+K280Y,T182S+F266Y+G303R,T182S+F266Y+E390A,T182S+F266Y+ G475K,T182S+F266Y+A185Q,T182S+F266Y+N194F,T182S+N279S+K280Y,T 182S+N279S+G303R,T182S+N279S+E390A,T182S+N279S+G475K,T182S+N2 79S+A185Q,T182S+N279S+N194F,T182S+K280Y+G303R,T182S+K280Y+E39 0A,T182S+K280Y+G475K,T182S+K280Y+A185Q,T182S+K280Y+N194F,T182 S+G303R+E390A,T182S+G303R+G475K,T182S+G303R+A185Q,T182S+G303R +N194F,T182S+E390A+G475K,T182S+E390A+A185Q,T182S+E390A+N194F, T182S+G475K+A185Q,T182S+G475K+N194F,T182S+A185Q+N194F,A185D+E 189P+Y242F,A185D+E189P+E259G,A185D+E189P+F266Y,A185D+E189P+N2 79S,A185D+E189P+K280Y,A185D+E189P+G303R,A185D+E189P+E390A,A18 5D+E189P+G475K,A185D+E189P+A185Q,A185D+E189P+N194F,A185D+Y242 F+E259G,A185D+Y242F+F266Y,A185D+Y242F+N279S,A185D+Y242F+K280Y ,A185D+Y242F+G303R,A185D+Y242F+E390A,A185D+Y242F+G475K,A185D+ Y242F+A185Q,A185D+Y242F+N194F,A185D+E259G+F266Y,A185D+E259G+N 279S,A185D+E259G+K280Y,A185D+E259G+G303R,A185D+E259G+E390A,A1 85D+E259G+G475K,A185D+E259G+A185Q,A185D+E259G+N194F,A185D+F26 6Y+N279S,A185D+F266Y+K280Y,A185D+F266Y+G303R,A185D+F266Y+E390 A,A185D+F266Y+G475K,A185D+F266Y+A185Q,A185D+F266Y+N194F,A185D +N279S+K280Y,A185D+N279S+G303R,A185D+N279S+E390A,A185D+N279S+ G475K,A185D+N279S+A185Q,A185D+N279S+N194F,A185D+K280Y+G303R,A 185D+K280Y+E390A,A185D+K280Y+G475K,A185D+K280Y+A185Q,A185D+K2 80Y+N194F,A185D+G303R+E390A,A185D+G303R+G475K,A185D+G303R+A18 5Q,A185D+G303R+N194F,A185D+E390A+G475K,A185D+E390A+A185Q,A185 D+E390A+N194F,A185D+G475K+A185Q,A185D+G475K+N194F,A185D+A185Q +N194F,E189P+Y242F+E259G,E189P+Y242F+F266Y,E189P+Y242F+N279S, E189P+Y242F+K280Y,E189P+Y242F+G303R,E189P+Y242F+E390A,E189P+Y 242F+G475K,E189P+Y242F+A185Q,E189P+Y242F+N194F,E189P+E259G+F2 66Y,E189P+E259G+N279S,E189P+E259G+K280Y,E189P+E259G+G303R,E18 9P+E259G+E390A,E189P+E259G+G475K,E189P+E259G+A185Q,E189P+E259 G+N194F,E189P+F266Y+N279S,E189P+F266Y+K280Y,E189P+F266Y+G303R ,E189P+F266Y+E390A,E189P+F266Y+G475K,E189P+F266Y+A185Q,E189P+ F266Y+N194F,E189P+N279S+K280Y,E189P+N279S+G303R,E189P+N279S+E 390A,E189P+N279S+G475K,E189P+N279S+A185Q,E189P+N279S+N194F,E1 89P+K280Y+G303R,E189P+K280Y+E390A,E189P+K280Y+G475K,E189P+K28 0Y+A185Q,E189P+K280Y+N194F,E189P+G303R+E390A,E189P+G303R+G475 K,E189P+G303R+A185Q,E189P+G303R+N194F,E189P+E390A+G475K,E189P +E390A+A185Q,E189P+E390A+N194F,E189P+G475K+A185Q,E189P+G475K+ N194F,E189P+A185Q+N194F,Y242F+E259G+F266Y,Y242F+E259G+N279S,Y 242F+E259G+K280Y,Y242F+E259G+G303R,Y242F+E259G+E390A,Y242F+E2 59G+G475K,Y242F+E259G+A185Q,Y242F+E259G+N194F,Y242F+F266Y+N27 9S,Y242F+F266Y+K280Y,Y242F+F266Y+G303R,Y242F+F266Y+E390A,Y242 F+F266Y+G475K,Y242F+F266Y+A185Q,Y242F+F266Y+N194F,Y242F+N279S +K280Y,Y242F+N279S+G303R,Y242F+N279S+E390A,Y242F+N279S+G475K, Y242F+N279S+A185Q,Y242F+N279S+N194F,Y242F+K280Y+G303R,Y242F+K 280Y+E390A,Y242F+K280Y+G475K,Y242F+K280Y+A185Q,Y242F+K280Y+N1 94F,Y242F+G303R+E390A,Y242F+G303R+G475K,Y242F+G303R+A185Q,Y24 2F+G303R+N194F,Y242F+E390A+G475K,Y242F+E390A+A185Q,Y242F+E390 A+N194F,Y242F+G475K+A185Q,Y242F+G475K+N194F,Y242F+A185Q+N194F ,E259G+F266Y+N279S,E259G+F266Y+K280Y,E259G+F266Y+G303R,E259G+ F266Y+E390A,E259G+F266Y+G475K,E259G+F266Y+A185Q,E259G+F266Y+N 194F,E259G+N279S+K280Y,E259G+N279S+G303R,E259G+N279S+E390A,E2 59G+N279S+G475K,E259G+N279S+A185Q,E259G+N279S+N194F,E259G+K28 0Y+G303R,E259G+K280Y+E390A,E259G+K280Y+G475K,E259G+K280Y+A185 Q,E259G+K280Y+N194F,E259G+G303R+E390A,E259G+G303R+G475K,E259G +G303R+A185Q,E259G+G303R+N194F,E259G+E390A+G475K,E259G+E390A+ A185Q,E259G+E390A+N194F,E259G+G475K+A185Q,E259G+G475K+N194F,E 259G+A185Q+N194F,F266Y+N279S+K280Y,F266Y+N279S+G303R,F266Y+N2 79S+E390A,F266Y+N279S+G475K,F266Y+N279S+A185Q,F266Y+N279S+N19 4F,F266Y+K280Y+G303R,F266Y+K280Y+E390A,F266Y+K280Y+G475K,F266 Y+K280Y+A185Q,F266Y+K280Y+N194F,F266Y+G303R+E390A,F266Y+G303R +G475K,F266Y+G303R+A185Q,F266Y+G303R+N194F,F266Y+E390A+G475K, F266Y+E390A+A185Q,F266Y+E390A+N194F,F266Y+G475K+A185Q,F266Y+G 475K+N194F,F266Y+A185Q+N194F,N279S+K280Y+G303R,N279S+K280Y+E3 90A,N279S+K280Y+G475K,N279S+K280Y+A185Q,N279S+K280Y+N194F,N27 9S+G303R+E390A,N279S+G303R+G475K,N279S+G303R+A185Q,N279S+G303 R+N194F,N279S+E390A+G475K,N279S+E390A+A185Q,N279S+E390A+N194F ,N279S+G475K+A185Q, N279S+G475K+N194F,N279S+A185Q+N194F,K280Y+G303R+E39 0A,K280Y+G303R+G475K,K280Y+G303R+A185Q,K280Y+G303R+N194F,K280 Y+E390A+G475K,K280Y+E390A+A185Q,K280Y+E390A+N194F,K280Y+G475K +A185Q,K280Y+G475K+N194F,K280Y+A185Q+N194F,G303R+E390A+G475K, G303R+E390A+A185Q,G303R+E390A+N194F,G303R+G475K+A185Q,G303R+G 475K+N194F,G303R+A185Q+N194F,E390A+G475K+A185Q,E390A+G475K+N1 94F,E390A+A185Q+N194F,G475K+A185Q+N194F, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0440] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 8, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P, H1*+G7A+W140Y+Y242F, H1*+G7A+W140Y+E259G, H1*+G7A+W140Y+N279S, H1*+G7A+W140Y+K280Y, H1*+G7A+W140Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F,H1*+G7A+E189P+E259G,H1*+G7A+E189P+N279S,H 1*+G7A+E189P+K280Y,H1*+G7A+E189P+G303R,H1*+G7A+E189P+E390A,H1 *+G7A+Y242F+E259G,H1*+G7A+Y242F+N279S,H1*+G7A+Y242F+K280Y,H1* +G7A+Y242F+G303R,H1*+G7A+Y242F+E390A,H1*+G7A+E259G+N279S,H1*+ G7A+E259G+K280Y,H1*+G7A+E259G+G303R,H1*+G7A+E259G+E390A,H1*+G 7A+N279S+K280Y,H1*+G7A+N279S+G303R,H1*+G7A+N279S+E390A,H1*+G7 A+K280Y+G303R,H1*+G7A+K280Y+E390A,H1*+G7A+G303R+E390A,H1*+W14 0Y+E189P+Y242F,H1*+W140Y+E189P+E259G,H1*+W140Y+E189P+N279S,H1 *+W140Y+E189P+K280Y,H1*+W140Y+E189P+G303R,H1*+W140Y+E189P+E39 0A,H1*+W140Y+Y242F+E259G,H1*+W140Y+Y242F+N279S,H1*+W140Y+Y242 F+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+G303R,H1*+W140Y+Y242F+E390A,H1*+W140Y +E259G+N279S,H1*+W140Y+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E259G+G303R,H1*+ W140Y+E259G+E390A,H1*+W140Y+N279S+K280Y,H1*+W140Y+N279S+G303R ,H1*+W140Y+N279S+E390A,H1*+W140Y+K280Y+G303R,H1*+W140Y+K280Y+ E390A,H1*+W140Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G,H1*+E189P+Y 242F+N279S,H1*+E189P+Y242F+K280Y,H1*+E189P+Y242F+G303R,H1*+E1 89P+Y242F+E390A,H1*+E189P+E259G+N279S,H1*+E189P+E259G+K280Y,H 1*+E189P+E259G+G303R,H1*+E189P+E259G+E390A,H1*+E189P+N279S+K2 80Y,H1*+E189P+N279S+G303R,H1*+E189P+N279S+E390A,H1*+E189P+K28 0Y+G303R,H1*+E189P+K280Y+E390A,H1*+E189P+G303R+E390A,H1*+Y242 F+E259G+N279S,H1*+Y242F+E259G+K280Y,H1*+Y242F+E259G+G303R,H1* +Y242F+E259G+E390A,H1*+Y242F+N279S+K280Y,H1*+Y242F+N279S+G303 R,H1*+Y242F+N279S+E390A,H1*+Y242F+K280Y+G303R,H1*+Y242F+K280Y +E390A,H1*+Y242F+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y,H1*+E259G+ N279S+G303R,H1*+E259G+N279S+E390A,H1*+E259G+K280Y+G303R,H1*+E 259G+K280Y+E390A,H1*+E259G+G303R+E390A,H1*+N279S+K280Y+G303R, H1*+N279S+K280Y+E390A,H1*+N279S+G303R+E390A,H1*+K280Y+G303R+E 390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F,G7A+W140Y+E189P+E259G,G7A+W140Y+E1 89P+N279S,G7A+W140Y+E189P+K280Y,G7A+W140Y+E189P+G303R,G7A+W14 0Y+E189P+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E259G,G7A+W140Y+Y242F+N279S,G7 A+W140Y+Y242F+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E39 0A,G7A+W140Y+E259G+N279S,G7A+W140Y+E259G+K280Y,G7A+W140Y+E259 G+G303R,G7A+W140Y+E259G+E390A,G7A+W140Y+N279S+K280Y,G7A+W140Y +N279S+G303R,G7A+W140Y+N279S+E390A,G7A+W140Y+K280Y+G303R,G7A+ W140Y+K280Y+E390A,G7A+W140Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G ,G7A+E189P+Y242F+N279S,G7A+E189P+Y242F+K280Y,G7A+E189P+Y242F+ G303R,G7A+E189P+Y242F+E390A,G7A+E189P+E259G+N279S,G7A+E189P+E 259G+K280Y,G7A+E189P+E259G+G303R,G7A+E189P+E259G+E390A,G7A+E1 89P+N279S+K280Y,G7A+E189P+N279S+G303R,G7A+E189P+N279S+E390A,G 7A+E189P+K280Y+G303R,G7A+E189P+K280Y+E390A,G7A+E189P+G303R+E3 90A,G7A+Y242F+E259G+N279S,G7A+Y242F+E259G+K280Y,G7A+Y242F+E25 9G+G303R,G7A+Y242F+E259G+E390A,G7A+Y242F+N279S+K280Y,G7A+Y242 F+N279S+G303R,G7A+Y242F+N279S+E390A,G7A+Y242F+K280Y+G303R,G7A +Y242F+K280Y+E390A,G7A+Y242F+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280 Y,G7A+E259G+N279S+G303R,G7A+E259G+N279S+E390A,G7A+E259G+K280Y +G303R,G7A+E259G+K280Y+E390A,G7A+E259G+G303R+E390A,G7A+N279S+ K280Y+G303R,G7A+N279S+K280Y+E390A,G7A+N279S+G303R+E390A,G7A+K 280Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G,W140Y+E189P+Y242F+N2 79S,W140Y+E189P+Y242F+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+G303R,W140Y+E18 9P+Y242F+E390A,W140Y+E189P+E259G+N279S,W140Y+E189P+E259G+K280 Y,W140Y+E189P+E259G+G303R,W140Y+E189P+E259G+E390A,W140Y+E189P +N279S+K280Y,W140Y+E189P+N279S+G303R,W140Y+E189P+N279S+E390A, W140Y+E189P+K280Y+G303R,W140Y+E189P+K280Y+E390A,W140Y+E189P+G 303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N279S,W140Y+Y242F+E259G+K280Y,W1 40Y+Y242F+E259G+G303R,W140Y+Y242F+E259G+E390A,W140Y+Y242F+N27 9S+K280Y,W140Y+Y242F+N279S+G303R,W140Y+Y242F+N279S+E390A,W140 Y+Y242F+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+K280Y+E390A,W140Y+Y242F+G303R +E390A,W140Y+E259G+N279S+K280Y,W140Y+E259G+N279S+G303R,W140Y+ E259G+N279S+E390A,W140Y+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E259G+K280Y+E 390A,W140Y+E259G+G303R+E390A,W140Y+N279S+K280Y+G303R,W140Y+N2 79S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A,W140Y+K280Y+G303R+E390 A,E189P+Y242F+E259G+N279S,E189P+Y242F+E259G+K280Y,E189P+Y242F +E259G+G303R,E189P+Y242F+E259G+E390A,E189P+Y242F+N279S+K280Y, E189P+Y242F+N279S+G303R,E189P+Y242F+N279S+E390A,E189P+Y242F+K 280Y+G303R,E189P+Y242F+K280Y+E390A,E189P+Y242F+G303R+E390A,E1 89P+E259G+N279S+K280Y,E189P+E259G+N279S+G303R,E189P+E259G+N27 9S+E390A,E189P+E259G+K280Y+G303R,E189P+E259G+K280Y+E390A,E189 P+E259G+G303R+E390A,E189P+N279S+K280Y+G303R,E189P+N279S+K280Y +E390A,E189P+N279S+G303R+E390A,E189P+K280Y+G303R+E390A,Y242F+ E259G+N279S+K280Y,Y242F+E259G+N279S+G303R,Y242F+E259G+N279S+E 390A,Y242F+E259G+K280Y+G303R,Y242F+E259G+K280Y+E390A,Y242F+E2 59G+G303R+E390A,Y242F+N279S+K280Y+G303R,Y242F+N279S+K280Y+E39 0A,Y242F+N279S+G303R+E390A,Y242F+K280Y+G303R+E390A,E259G+N279 S+K280Y+G303R,E259G+N279S+K280Y+E390A,E259G+N279S+G303R+E390A ,E259G+K280Y+G303R+E390A,N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0441] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 8, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S, H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y, H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S,H1*+G7A+W 140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G +E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R,H1 *+G7A+W140Y+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R,H1*+G7A+W14 0Y+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+ E259G,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S,H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y,H1* +G7A+E189P+Y242F+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A,H1*+G7A+E189 P+E259G+N279S,H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y,H1*+G7A+E189P+E259G+G 303R,H1*+G7A+E189P+E259G+E390A,H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y,H1*+ G7A+E189P+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+N279S+E390A,H1*+G7A+E189P +K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+G303R+E3 90A,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G 7A+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A,H1*+G7A+Y242F+ N279S+K280Y,H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R,H1*+G7A+Y242F+N279S+E39 0A,H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R,H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A,H1*+G7 A+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+E259G+N 279S+G303R,H1*+G7A+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+E259G+K280Y+G303 R,H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A +N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+N279S+G3 03R+E390A,H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E25 9G,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y,H1 *+W140Y+E189P+Y242F+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A,H1*+W14 0Y+E189P+E259G+N279S,H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E1 89P+E259G+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A,H1*+W140Y+E189P+N 279S+K280Y,H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R,H1*+W140Y+E189P+N279S+ E390A,H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A ,H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S,H1*+ W140Y+Y242F+E259G+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R,H1*+W140Y +Y242F+E259G+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,H1*+W140Y+Y242 F+N279S+G303R,H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A,H1*+W140Y+Y242F+K28 0Y+G303R,H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+G303R+E3 90A,H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R,H 1*+W140Y+E259G+N279S+E390A,H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R,H1*+W1 40Y+E259G+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A,H1*+W140Y+N 279S+K280Y+G303R,H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+N279S+ G303R+E390A,H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G +N279S,H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+E189P+Y242F+E259G+G303 R,H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1* +E189P+Y242F+N279S+G303R,H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A,H1*+E189 P+Y242F+K280Y+G303R,H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A,H1*+E189P+Y24 2F+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y,H1*+E189P+E259G+N2 79S+G303R,H1*+E189P+E259G+N279S+E390A,H1*+E189P+E259G+K280Y+G 303R,H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A,H1*+E189P+E259G+G303R+E390A, H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R,H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+E 189P+N279S+G303R+E390A,H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+ E259G+N279S+K280Y,H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+Y242F+E259G +N279S+E390A,H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+Y242F+E259G+K280 Y+E390A,H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1*+Y242F+N279S+K280Y+G30 3R,H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1 *+Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+E25 9G+N279S+K280Y+E390A,H1*+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+E259G+K2 80Y+G303R+E390A,H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y 242F+E259G,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S,G7A+W140Y+E189P+Y242F+ K280Y,G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A ,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S,G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y,G7A+ W140Y+E189P+E259G+G303R,G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A,G7A+W140Y +E189P+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189 P+N279S+E390A,G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+K28 0Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N2 79S,G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R,G 7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,G7A+W1 40Y+Y242F+N279S+G303R,G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A,G7A+W140Y+Y 242F+K280Y+G303R,G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y242F+ G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E259G+N279S +G303R,G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A,G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303 R,G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A,G7A +W140Y+N279S+K280Y+G303R,G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140 Y+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y24 2F+E259G+N279S,G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y,G7A+E189P+Y242F+E2 59G+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A,G7A+E189P+Y242F+N279S+K 280Y,G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R,G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A, G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A,G7A+E 189P+Y242F+G303R+E390A,G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y,G7A+E189P+ E259G+N279S+G303R,G7A+E189P+E259G+N279S+E390A,G7A+E189P+E259G +K280Y+G303R,G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A,G7A+E189P+E259G+G303 R+E390A,G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+N279S+K280Y+E39 0A,G7A+E189P+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A,G7 A+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R,G7A+Y24 2F+E259G+N279S+E390A,G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R,G7A+Y242F+E2 59G+K280Y+E390A,G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A,G7A+Y242F+N279S+K 280Y+G303R,G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+Y242F+N279S+G303R+ E390A,G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R ,G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+ E259G+K280Y+G303R+E390A,G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+N279S,W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,W140Y+E189 P+Y242F+E259G+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A,W140Y+E189P +Y242F+N279S+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R,W140Y+E189P+ Y242F+N279S+E390A,W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y 242F+K280Y+E390A,W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,W140Y+E189P+E2 59G+N279S+K280Y,W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,W140Y+E189P+E25 9G+N279S+E390A,W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E189P+E259 G+K280Y+E390A,W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,W140Y+E189P+N279S +K280Y+G303R,W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E189P+N279S+ G303R+E390A,W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N 279S+K280Y,W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R,W140Y+Y242F+E259G+N2 79S+E390A,W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+E259G+K28 0Y+E390A,W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A,W140Y+Y242F+N279S+K280 Y+G303R,W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A,W140Y+Y242F+N279S+G303R +E390A,W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E259G+N279S+K280Y+ G303R,W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E259G+N279S+G303R+E 390A,W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,W140Y+N279S+K280Y+G303R+E3 90A,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,E189P+Y242F+E259G+N279S+G30 3R,E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303 R,E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A ,E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R,E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A,E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,E 189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,E1 89P+E259G+N279S+G303R+E390A,E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A,E18 9P+N279S+K280Y+G303R+E390A,Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,Y242 F+E259G+N279S+K280Y+E390A,Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,Y242F +E259G+K280Y+G303R+E390A,Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,E259G+ N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0442] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 8, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G30 3R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+ N279S,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+E25 9G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+ N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E18 9P+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+ E189P+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A,H1*+G7A+W14 0Y+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+ W140Y+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A,H1*+G 7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R,H1 *+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R ,H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E3 90A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S +G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+K2 80Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G +G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+N2 79S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y +K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+E1 89P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A +E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1*+ G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A,H 1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390 A,H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K 280Y,H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+E259G+N279 S+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+E259G+K 280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+N279 S+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+N 279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242 F+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+Y 242F+E259G+N2 7 9S + E390A,H1* + G7A+Y24 2F+E2 59G+K280Y+G3 0 3R, H1*+G7 A+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1* +G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E39 0A,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+ E390A,H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E259G+K280Y+G30 3R+E390A,H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242 F+E259G+N279S,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+W1 40Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R ,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280 Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y24 2F+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E1 89P+E259G+N279S+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A,H1*+W 140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390 A,H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+N279S+K28 0Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+N2 79S+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+ W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G30 3R,H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+G3 03R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R,H1*+W140Y+Y242F+N 279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+W140Y+ Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1* +W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E3 90A,H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+N279S+K280Y+G 303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+E189P+Y242F+ E259G+N279S+G303R,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,H1*+E189P +Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1 *+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G 303R,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+ G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G +N279S+K280Y+G303R,H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+E189 P+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A,H 1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+ G303R,H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+Y242F+E259G+N279S +G303R+E390A,H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+N279 S+K280Y+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W14 0Y+E189P+Y242F+E259G+N279S,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G +E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E189P+Y242 F+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A,G7A+W140Y+E18 9P+Y242F+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A,G7A+W1 40Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y ,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279 S+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+E25 9G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,G7A+W140Y+E1 89P+N279S+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,G7A+W 140Y+E189P+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390 A,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N27 9S+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E2 59G+K280Y+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y 242F+E259G+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R,G7A+ W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E39 0A,G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+N279S+K2 80Y+G303R,G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E259G+N 279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+ N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A +E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E3 90A,G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+K 280Y+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+ N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+E189P +Y242F+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7 A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E 390A,G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+E259G+K280Y+ G303R+E390A,G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R,G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+Y242 F+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,G 7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+ E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+E 259G+N279S+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,W140Y+E1 89P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E39 0A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+N279 S+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E189P +Y242F+N279S+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,W140Y+E189P+E259G+N279S+K 280Y+E390A,W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A,W140Y+E189P+E2 59G+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,W14 0Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280 Y+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G +K280Y+G303R+E390A,W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,W140Y+ E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G 303R,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,E189P+Y242F+E259G+N2 79S+G303R+E390A,E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,E189P+Y24 2F+N279S+K280Y+G303R+E390A,E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390 A,Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0443] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 8, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y24 2F+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0444] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 8, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N2 79S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A +W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242 F+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G30 3R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+ E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y +G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+ G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E 259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+ E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W14 0Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N2 79S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,H 1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242 F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G30 3R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+ E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G +N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390 A,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+ G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1* +W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y +G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1 *+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280 Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, G 7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+ Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K28 0Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F +E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K2 80Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E39 0A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0445] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 8, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W14 0Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K 280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+ E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G 7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K2 80Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0446] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 8, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E 390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0447] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 9, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+D118T, H1*+W140Y, H1*+T182S, H1*+A185D, H1*+E189P, H1*+Y242F, H1*+E259G, H1*+F266Y, H1*+N279S, H1*+K280Y, H1*+G303R, H1*+E390A, H1*+G475K, H1*+A185Q, H1*+N194F, D118T+W140Y, D118T+T182S, D118T+A185D, D118T+E189P, D118T+Y242F, D118T+E259G, D118T+F266Y, D118T+N279S,D118T+K280Y,D118T+G303R,D118T+E390A,D118T+G475K,D 118T+A185Q,D118T+N194F,W140Y+T182S,W140Y+A185D,W140Y+E189P,W1 40Y+Y242F,W140Y+E259G,W140Y+F266Y,W140Y+N279S,W140Y+K280Y,W14 0Y+G303R,W140Y+E390A,W140Y+G475K,W140Y+A185Q,W140Y+N194F,T182 S+A185D,T182S+E189P,T182S+Y242F,T182S+E259G,T182S+F266Y,T182S +N279S,T182S+K280Y,T182S+G303R,T182S+E390A,T182S+G475K,T182S+ A185Q,T182S+N194F,A185D+E189P,A185D+Y242F,A185D+E259G,A185D+F 266Y,A185D+N279S,A185D+K280Y,A185D+G303R,A185D+E390A,A185D+G4 75K,A185D+A185Q,A185D+N194F,E189P+Y242F,E189P+E259G,E189P+F26 6Y,E189P+N279S,E189P+K280Y,E189P+G303R,E189P+E390A,E189P+G475 K,E189P+A185Q,E189P+N194F,Y242F+E259G,Y242F+F266Y,Y242F+N279S ,Y242F+K280Y,Y242F+G303R,Y242F+E390A,Y242F+G475K,Y242F+A185Q, Y242F+N194F,E259G+F266Y,E259G+N279S,E259G+K280Y,E259G+G303R,E 259G+E390A,E259G+G475K,E259G+A185Q,E259G+N194F,F266Y+N279S,F2 66Y+K280Y,F266Y+G303R,F266Y+E390A,F266Y+G475K,F266Y+A185Q,F26 6Y+N194F,N279+K280Y,N279S+G303R,N279S+E390A,N279S+G475K,N279S +A185Q,N279S+N194F,K280Y+G303R,K280Y+E390A,K280Y+G475K,K280Y+ A185Q,K280Y+N194F,G303R+E390A,G303R+G475K,G303R+A185Q,G303R+N 194F,E390A+G475K,E390A+A185Q,E390A+N194F,G475K+A185Q,G475K+N1 94F, A185Q+N194F, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0448] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 9, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+D118T+W140Y, H1*+D118T+T182S, H1*+D118T+A185D, H1*+W140Y+E259G, H1*+W140Y+F266Y,H1*+W140Y+N279S,H1*+W140Y+K280Y,H1*+W140Y+G30 3R,H1*+W140Y+E390A,H1*+W140Y+G475K,H1*+W140Y+A185Q,H1*+W140Y+ N194F,H1*+T182S+A185D,H1*+T182S+E189P,H1*+T182S+Y242F,H1*+T18 2S+E259G,H1*+T182S+F266Y,H1*+T182S+N279S,H1*+T182S+K280Y,H1*+ T182S+G303R,H1*+T182S+E390A,H1*+T182S+G475K,H1*+T182S+A185Q,H 1*+T182S+N194F,H1*+A185D+E189P,H1*+A185D+Y242F,H1*+A185D+E259 G,H1*+A185D+F266Y,H1*+A185D+N279S,H1*+A185D+K280Y,H1*+A185D+G 303R,H1*+A185D+E390A,H1*+A185D+G475K,H1*+A185D+A185Q,H1*+A185 D+N194F,H1*+E189P+Y242F,H1*+E189P+E259G,H1*+E189P+F266Y,H1*+E 189P+N279S,H1*+E189P+K280Y,H1*+E189P+G303R,H1*+E189P+E390A,H1 *+E189P+G475K,H1*+E189P+A185Q,H1*+E189P+N194F,H1*+Y242F+E259G ,H1*+Y242F+F266Y,H1*+Y242F+N279S,H1*+Y242F+K280Y,H1*+Y242F+G3 03R,H1*+Y242F+E390A,H1*+Y242F+G475K,H1*+Y242F+A185Q,H1*+Y242F +N194F,H1*+E259G+F266Y,H1*+E259G+N279S,H1*+E259G+K280Y,H1*+E2 59G+G303R,H1*+E259G+E390A,H1*+E259G+G475K,H1*+E259G+A185Q,H1* +E259G+N194F,H1*+F266Y+N279S,H1*+F266Y+K280Y,H1*+F266Y+G303R, H1*+F266Y+E390A,H1*+F266Y+G475K,H1*+F266Y+A185Q,H1*+F266Y+N19 4F,H1*+N279S+K280Y,H1*+N279S+G303R,H1*+N279S+E390A,H1*+N279S+ G475K,H1*+N279S+A185Q,H1*+N279S+N194F,H1*+K280Y+G303R,H1*+K28 0Y+E390A,H1*+K280Y+G475K,H1*+K280Y+A185Q,H1*+K280Y+N194F,H1*+ G303R+E390A,H1*+G303R+G475K,H1*+G303R+A185Q,H1*+G303R+N194F,H 1*+E390A+G475K,H1*+E390A+A185Q,H1*+E390A+N194F,H1*+G475K+A185 Q,H1*+G475K+N194F,H1*+A185Q+N194F,D118T+W140Y+T182S,D118T+W14 0Y+A185D,D118T+W140Y+E189P,D118T+W140Y+Y242F,D118T+W140Y+E259 G,D118T+W140Y+F266Y,D118T+W140Y+N279S,D118T+W140Y+K280Y,D118T +W140Y+G303R,D118T+W140Y+E390A,D118T+W140Y+G475K,D118T+W140Y+ A185Q,D118T+W140Y+N194F,D118T+T182S+A185D,D118T+T182S+E189P,D 118T+T182S+Y242F,D118T+T182S+E259G,D118T+T182S+F266Y,D118T+T1 82S+N279S,D118T+T182S+K280Y,D118T+T182S+G303R,D118T+T182S+E39 0A,D118T+T182S+G475K,D118T+T182S+A185Q,D118T+T182S+N194F,D118 T+A185D+E189P,D118T+A185D+Y242F,D118T+A185D+E259G,D118T+A185D +F266Y,D118T+A185D+N279S,D118T+A185D+K280Y,D118T+A185D+G303R, D118T+A185D+E390A,D118T+A185D+G475K,D118T+A185D+A185Q,D118T+A 185D+N194F,D118T+E189P+Y242F,D118T+E189P+E259G,D118T+E189P+F2 66Y,D118T+E189P+N279S,D118T+E189P+K280Y,D118T+E189P+G303R,D11 8T+E189P+E390A,D118T+E189P+G475K,D118T+E189P+A185Q,D118T+E189 P+N194F,D118T+Y242F+E259G,D118T+Y242F+F266Y,D118T+Y242F+N279S ,D118T+Y242F+K280Y,D118T+Y242F+G303R,D118T+Y242F+E390A,D118T+ Y242F+G475K,D118T+Y242F+A185Q,D118T+Y242F+N194F,D118T+E259G+F 2 6 6Y, D118T+E259G+N279S,D118T+E259G+K280Y,D118T+E259G+G303R,D1 18T+E259G+E390A,D118T+E259G+G475K,D118T+E259G+A185Q,D118T+E25 9G+N194F,D118T+F266Y+N279S,D118T+F266Y+K280Y, D118T + F2 6 6Y+G3 03 R,D118T+F266Y+E390A,D118T+F266Y+G475K,D118T+F266Y+A185Q,D118T +F266Y+N194F,D118T+N279S+K280Y,D118T+N279S+G303R,D118T+N279S+ E3 90A,D118T+N2 7 9S+G4 7 5K,D118T+N2 7 9S+A18 5Q,D118T+N2 7 9S+N19 4F, D 118T+K280Y+G303R,D118T+K280Y+E390A,D118T+K280Y+G475K,D118T+K2 80Y+A185Q,D118T+K280Y+N194F,D118T+G303R+E390A,D118T+G303R+G47 5K,D118T+G303R+A185Q,D118T+G303R+N194F,D118T+E390A+G475K,D118 T+E390A+A185Q,D118T+E390A+N194F,D118T+G475K+A185Q,D118T+G475K +N194F,D118T+A185Q+N194F,W140Y+T182S+A185D,W140Y+T182S+E189P, W140Y+T182S+Y242F,W140Y+T182S+E259G,W140Y+T182S+F266Y,W140Y+T 182S+N279S,W140Y+T182S+K280Y,W140Y+T182S+G303R,W140Y+T182S+E3 90A,W140Y+T182S+G475K,W140Y+T182S+A185Q,W140Y+T182S+N194F,W14 0Y+A185D+E189P,W140Y+A185D+Y242F,W140Y+A185D+E259G,W140Y+A185 D+F266Y,W140Y+A185D+N279S,W140Y+A185D+K280Y,W140Y+A185D+G303R ,W140Y+A185D+E390A,W140Y+A185D+G475K,W140Y+A185D+A185Q,W140Y+ A185D+N194F,W140Y+E189P+Y242F,W140Y+E189P+E259G,W140Y+E189P+F 266Y,W140Y+E189P+N279S,W140Y+E189P+K280Y,W140Y+E189P+G303R,W1 40Y+E189P+E390A,W140Y+E189P+G475K,W140Y+E189P+A185Q,W140Y+E18 9P+N194F,W140Y+Y242F+E259G,W140Y+Y242F+F266Y,W140Y+Y242F+N279 S,W140Y+Y242F+K280Y,W140Y+Y242F+G303R,W140Y+Y242F+E390A,W140Y +Y242F+G475K,W140Y+Y242F+A185Q,W140Y+Y242F+N194F,W140Y+E259G+ F266Y,W140Y+E259G+N279S,W140Y+E259G+K280Y,W140Y+E259G+G303R,W 140Y+E259G+E390A,W140Y+E259G+G475K,W140Y+E259G+A185Q,W140Y+E2 59G+N194F,W140Y+F266Y+N279S,W140Y+F266Y+K280Y,W140Y+F266Y+G30 3R,W140Y+F266Y+E390A,W140Y+F266Y+G475K,W140Y+F266Y+A185Q,W140 Y+F266Y+N194F,W140Y+N279S+K280Y,W140Y+N279S+G303R,W140Y+N279S +E390A,W140Y+N279S+G475K,W140Y+N279S+A185Q,W140Y+N279S+N194F, W140Y+K280Y+G303R,W140Y+K280Y+E390A,W140Y+K280Y+G475K,W140Y+K 280Y+A185Q,W140Y+K280Y+N194F,W140Y+G303R+E390A,W140Y+G303R+G4 75K,W140Y+G303R+A185Q,W140Y+G303R+N194F,W140Y+E390A+G475K,W14 0Y+E390A+A185Q,W140Y+E390A+N194F,W140Y+G475K+A185Q,W140Y+G475 K+N194F,W140Y+A185Q+N194F,T182S+A185D+E189P,T182S+A185D+Y242F ,T182S+A185D+E259G,T182S+A185D+F266Y,T182S+A185D+N279S,T182S+ A185D+K280Y,T182S+A185D+G303R,T182S+A185D+E390A,T182S+A185D+G 45K,T182S+A185D+A185Q,T182S+A185D+N194F,T182S+E189P+Y242F,T18 2S+E189P+E259G,T182S+E189P+F266Y,T182S+E189P+N279S,T182S+E189 P+K280Y,T182S+E189P+G303R,T182S+E189P+E390A,T182S+E189P+G475K ,T182S+E189P+A185Q,T182S+E189P+N194F,T182S+Y242F+E259G,T182S+ Y242F+F266Y,T182S+Y242F+N279S,T182S+Y242F+K280Y,T182S+Y242F+G 303R,T182S+Y242F+E390A,T182S+Y242F+G475K,T182S+Y242F+A185Q,T1 82S+Y242F+N194F,T182S+E259G+F266Y,T182S+E259G+N279S,T182S+E25 9G+K280Y,T182S+E259G+G303R,T182S+E259G+E390A,T182S+E259G+G475 K,T182S+E259G+A185Q,T182S+E259G+N194F,T182S+F266Y+N279S,T182S +F266Y+K280Y,T182S+F266Y+G303R,T182S+F266Y+E390A,T182S+F266Y+ G475K,T182S+F266Y+A185Q,T182S+F266Y+N194F,T182S+N279S+K280Y,T 182S+N279S+G303R,T182S+N279S+E390A,T182S+N279S+G475K,T182S+N2 79S+A185Q,T182S+N279S+N194F,T182S+K280Y+G303R,T182S+K280Y+E39 0A,T182S+K280Y+G475K,T182S+K280Y+A185Q,T182S+K280Y+N194F,T182 S+G303R+E390A,T182S+G303R+G475K,T182S+G303R+A185Q,T182S+G303R +N194F,T182S+E390A+G475K,T182S+E390A+A185Q,T182S+E390A+N194F, T182S+G475K+A185Q,T182S+G475K+N194F,T182S+A185Q+N194F,A185D+E 189P+Y242F,A185D+E189P+E259G,A185D+E189P+F266Y,A185D+E189P+N2 79S,A185D+E189P+K280Y,A185D+E189P+G303R,A185D+E189P+E390A,A18 5D+E189P+G475K,A185D+E189P+A185Q,A185D+E189P+N194F,A185D+Y242 F+E259G,A185D+Y242F+F266Y,A185D+Y242F+N279S,A185D+Y242F+K280Y ,A185D+Y242F+G303R,A185D+Y242F+E390A,A185D+Y242F+G475K,A185D+ Y242F+A185Q,A185D+Y242F+N194F,A185D+E259G+F266Y,A185D+E259G+N 279S,A185D+E259G+K280Y,A185D+E259G+G303R,A185D+E259G+E390A,A1 85D+E259G+G475K,A185D+E259G+A185Q,A185D+E259G+N194F,A185D+F26 6Y+N279S,A185D+F266Y+K280Y,A185D+F266Y+G303R,A185D+F266Y+E390 A,A185D+F266Y+G475K,A185D+F266Y+A185Q,A185D+F266Y+N194F,A185D +N279S+K280Y,A185D+N279S+G303R,A185D+N279S+E390A,A185D+N279S+ G475K,A185D+N279S+A185Q,A185D+N279S+N194F,A185D+K280Y+G303R,A 185D+K280Y+E390A,A185D+K280Y+G475K,A185D+K280Y+A185Q,A185D+K2 80Y+N194F,A185D+G303R+E390A,A185D+G303R+G475K,A185D+G303R+A18 5Q,A185D+G303R+N194F,A185D+E390A+G475K,A185D+E390A+A185Q,A185 D+E390A+N194F,A185D+G475K+A185Q,A185D+G475K+N194F,A185D+A185Q +N194F,E189P+Y242F+E259G,E189P+Y242F+F266Y,E189P+Y242F+N279S, E189P+Y242F+K280Y,E189P+Y242F+G303R,E189P+Y242F+E390A,E189P+Y 242F+G475K,E189P+Y242F+A185Q,E189P+Y242F+N194F,E189P+E259G+F2 66Y,E189P+E259G+N279S,E189P+E259G+K280Y,E189P+E259G+G303R,E18 9P+E259G+E390A,E189P+E259G+G475K,E189P+E259G+A185Q,E189P+E259 G+N194F,E189P+F266Y+N279S,E189P+F266Y+K280Y,E189P+F266Y+G303R ,E189P+F266Y+E390A,E189P+F266Y+G475K,E189P+F266Y+A185Q,E189P+ F266Y+N194F,E189P+N279S+K280Y,E189P+N279S+G303R,E189P+N279S+E 390A,E189P+N279S+G475K,E189P+N279S+A185Q,E189P+N279S+N194F,E1 89P+K280Y+G303R,E189P+K280Y+E390A,E189P+K280Y+G475K,E189P+K28 0Y+A185Q,E189P+K280Y+N194F,E189P+G303R+E390A,E189P+G303R+G475 K,E189P+G303R+A185Q,E189P+G303R+N194F,E189P+E390A+G475K,E189P +E390A+A185Q,E189P+E390A+N194F,E189P+G475K+A185Q,E189P+G475K+ N194F,E189P+A185Q+N194F,Y242F+E259G+F266Y,Y242F+E259G+N279S,Y 242F+E259G+K280Y,Y242F+E259G+G303R,Y242F+E259G+E390A,Y242F+E2 59G+G475K,Y242F+E259G+A185Q,Y242F+E259G+N194F,Y242F+F266Y+N27 9S,Y242F+F266Y+K280Y,Y242F+F266Y+G303R,Y242F+F266Y+E390A,Y242 F+F266Y+G475K,Y242F+F266Y+A185Q,Y242F+F266Y+N194F,Y242F+N279S +K280Y,Y242F+N279S+G303R,Y242F+N279S+E390A,Y242F+N279S+G475K, Y242F+N279S+A185Q,Y242F+N279S+N194F,Y242F+K280Y+G303R,Y242F+K 280Y+E390A,Y242F+K280Y+G475K,Y242F+K280Y+A185Q,Y242F+K280Y+N1 94F,Y242F+G303R+E390A,Y242F+G303R+G475K,Y242F+G303R+A185Q,Y24 2F+G303R+N194F,Y242F+E390A+G475K,Y242F+E390A+A185Q,Y242F+E390 A+N194F,Y242F+G475K+A185Q,Y242F+G475K+N194F,Y242F+A185Q+N194F ,E259G+F266Y+N279S,E259G+F266Y+K280Y,E259G+F266Y+G303R,E259G+ F266Y+E390A,E259G+F266Y+G475K,E259G+F266Y+A185Q,E259G+F266Y+N 194F,E259G+N279S+K280Y,E259G+N279S+G303R,E259G+N279S+E390A,E2 59G+N279S+G475K,E259G+N279S+A185Q,E259G+N279S+N194F,E259G+K28 0Y+G303R,E259G+K280Y+E390A,E259G+K280Y+G475K,E259G+K280Y+A185 Q,E259G+K280Y+N194F,E259G+G303R+E390A,E259G+G303R+G475K,E259G +G303R+A185Q,E259G+G303R+N194F,E259G+E390A+G475K,E259G+E390A+ A185Q,E259G+E390A+N194F,E259G+G475K+A185Q,E259G+G475K+N194F,E 259G+A185Q+N194F,F266Y+N279S+K280Y,F266Y+N279S+G303R,F266Y+N2 79S+E390A,F266Y+N279S+G475K,F266Y+N279S+A185Q,F266Y+N279S+N19 4F,F266Y+K280Y+G303R,F266Y+K280Y+E390A,F266Y+K280Y+G475K,F266 Y+K280Y+A185Q,F266Y+K280Y+N194F,F266Y+G303R+E390A,F266Y+G303R +G475K,F266Y+G303R+A185Q,F266Y+G303R+N194F,F266Y+E390A+G475K, F266Y+E390A+A185Q,F266Y+E390A+N194F,F266Y+G475K+A185Q,F266Y+G 475K+N194F,F266Y+A185Q+N194F,N279S+K280Y+G303R,N279S+K280Y+E3 90A,N279S+K280Y+G475K,N279S+K280Y+A185Q,N279S+K280Y+N194F,N27 9S+G303R+E390A,N279S+G303R+G475K,N279S+G303R+A185Q,N279S+G303 R+N194F,N279S+E390A+G475K,N279S+E390A+A185Q,N279S+E390A+N194F ,N279S+G475K+A185Q, N279S+G475K+N194F,N279S+A185Q+N194F,K280Y+G303R+E39 0A,K280Y+G303R+G475K,K280Y+G303R+A185Q,K280Y+G303R+N194F,K280 Y+E390A+G475K,K280Y+E390A+A185Q,K280Y+E390A+N194F,K280Y+G475K +A185Q,K280Y+G475K+N194F,K280Y+A185Q+N194F,G303R+E390A+G475K, G303R+E390A+A185Q,G303R+E390A+N194F,G303R+G475K+A185Q,G303R+G 475K+N194F,G303R+A185Q+N194F,E390A+G475K+A185Q,E390A+G475K+N1 94F,E390A+A185Q+N194F,G475K+A185Q+N194F, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0449] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 9, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P, H1*+G7A+W140Y+Y242F, H1*+G7A+W140Y+E259G, H1*+G7A+W140Y+N279S, H1*+G7A+W140Y+K280Y, H1*+G7A+W140Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F,H1*+G7A+E189P+E259G,H1*+G7A+E189P+N279S,H 1*+G7A+E189P+K280Y,H1*+G7A+E189P+G303R,H1*+G7A+E189P+E390A,H1 *+G7A+Y242F+E259G,H1*+G7A+Y242F+N279S,H1*+G7A+Y242F+K280Y,H1* +G7A+Y242F+G303R,H1*+G7A+Y242F+E390A,H1*+G7A+E259G+N279S,H1*+ G7A+E259G+K280Y,H1*+G7A+E259G+G303R,H1*+G7A+E259G+E390A,H1*+G 7A+N279S+K280Y,H1*+G7A+N279S+G303R,H1*+G7A+N279S+E390A,H1*+G7 A+K280Y+G303R,H1*+G7A+K280Y+E390A,H1*+G7A+G303R+E390A,H1*+W14 0Y+E189P+Y242F,H1*+W140Y+E189P+E259G,H1*+W140Y+E189P+N279S,H1 *+W140Y+E189P+K280Y,H1*+W140Y+E189P+G303R,H1*+W140Y+E189P+E39 0A,H1*+W140Y+Y242F+E259G,H1*+W140Y+Y242F+N279S,H1*+W140Y+Y242 F+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+G303R,H1*+W140Y+Y242F+E390A,H1*+W140Y +E259G+N279S,H1*+W140Y+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E259G+G303R,H1*+ W140Y+E259G+E390A,H1*+W140Y+N279S+K280Y,H1*+W140Y+N279S+G303R ,H1*+W140Y+N279S+E390A,H1*+W140Y+K280Y+G303R,H1*+W140Y+K280Y+ E390A,H1*+W140Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G,H1*+E189P+Y 242F+N279S,H1*+E189P+Y242F+K280Y,H1*+E189P+Y242F+G303R,H1*+E1 89P+Y242F+E390A,H1*+E189P+E259G+N279S,H1*+E189P+E259G+K280Y,H 1*+E189P+E259G+G303R,H1*+E189P+E259G+E390A,H1*+E189P+N279S+K2 80Y,H1*+E189P+N279S+G303R,H1*+E189P+N279S+E390A,H1*+E189P+K28 0Y+G303R,H1*+E189P+K280Y+E390A,H1*+E189P+G303R+E390A,H1*+Y242 F+E259G+N279S,H1*+Y242F+E259G+K280Y,H1*+Y242F+E259G+G303R,H1* +Y242F+E259G+E390A,H1*+Y242F+N279S+K280Y,H1*+Y242F+N279S+G303 R,H1*+Y242F+N279S+E390A,H1*+Y242F+K280Y+G303R,H1*+Y242F+K280Y +E390A,H1*+Y242F+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y,H1*+E259G+ N279S+G303R,H1*+E259G+N279S+E390A,H1*+E259G+K280Y+G303R,H1*+E 259G+K280Y+E390A,H1*+E259G+G303R+E390A,H1*+N279S+K280Y+G303R, H1*+N279S+K280Y+E390A,H1*+N279S+G303R+E390A,H1*+K280Y+G303R+E 390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F,G7A+W140Y+E189P+E259G,G7A+W140Y+E1 89P+N279S,G7A+W140Y+E189P+K280Y,G7A+W140Y+E189P+G303R,G7A+W14 0Y+E189P+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E259G,G7A+W140Y+Y242F+N279S,G7 A+W140Y+Y242F+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E39 0A,G7A+W140Y+E259G+N279S,G7A+W140Y+E259G+K280Y,G7A+W140Y+E259 G+G303R,G7A+W140Y+E259G+E390A,G7A+W140Y+N279S+K280Y,G7A+W140Y +N279S+G303R,G7A+W140Y+N279S+E390A,G7A+W140Y+K280Y+G303R,G7A+ W140Y+K280Y+E390A,G7A+W140Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G ,G7A+E189P+Y242F+N279S,G7A+E189P+Y242F+K280Y,G7A+E189P+Y242F+ G303R,G7A+E189P+Y242F+E390A,G7A+E189P+E259G+N279S,G7A+E189P+E 259G+K280Y,G7A+E189P+E259G+G303R,G7A+E189P+E259G+E390A,G7A+E1 89P+N279S+K280Y,G7A+E189P+N279S+G303R,G7A+E189P+N279S+E390A,G 7A+E189P+K280Y+G303R,G7A+E189P+K280Y+E390A,G7A+E189P+G303R+E3 90A,G7A+Y242F+E259G+N279S,G7A+Y242F+E259G+K280Y,G7A+Y242F+E25 9G+G303R,G7A+Y242F+E259G+E390A,G7A+Y242F+N279S+K280Y,G7A+Y242 F+N279S+G303R,G7A+Y242F+N279S+E390A,G7A+Y242F+K280Y+G303R,G7A +Y242F+K280Y+E390A,G7A+Y242F+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280 Y,G7A+E259G+N279S+G303R,G7A+E259G+N279S+E390A,G7A+E259G+K280Y +G303R,G7A+E259G+K280Y+E390A,G7A+E259G+G303R+E390A,G7A+N279S+ K280Y+G303R,G7A+N279S+K280Y+E390A,G7A+N279S+G303R+E390A,G7A+K 280Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G,W140Y+E189P+Y242F+N2 79S,W140Y+E189P+Y242F+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+G303R,W140Y+E18 9P+Y242F+E390A,W140Y+E189P+E259G+N279S,W140Y+E189P+E259G+K280 Y,W140Y+E189P+E259G+G303R,W140Y+E189P+E259G+E390A,W140Y+E189P +N279S+K280Y,W140Y+E189P+N279S+G303R,W140Y+E189P+N279S+E390A, W140Y+E189P+K280Y+G303R,W140Y+E189P+K280Y+E390A,W140Y+E189P+G 303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N279S,W140Y+Y242F+E259G+K280Y,W1 40Y+Y242F+E259G+G303R,W140Y+Y242F+E259G+E390A,W140Y+Y242F+N27 9S+K280Y,W140Y+Y242F+N279S+G303R,W140Y+Y242F+N279S+E390A,W140 Y+Y242F+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+K280Y+E390A,W140Y+Y242F+G303R +E390A,W140Y+E259G+N279S+K280Y,W140Y+E259G+N279S+G303R,W140Y+ E259G+N279S+E390A,W140Y+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E259G+K280Y+E 390A,W140Y+E259G+G303R+E390A,W140Y+N279S+K280Y+G303R,W140Y+N2 79S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A,W140Y+K280Y+G303R+E390 A,E189P+Y242F+E259G+N279S,E189P+Y242F+E259G+K280Y,E189P+Y242F +E259G+G303R,E189P+Y242F+E259G+E390A,E189P+Y242F+N279S+K280Y, E189P+Y242F+N279S+G303R,E189P+Y242F+N279S+E390A,E189P+Y242F+K 280Y+G303R,E189P+Y242F+K280Y+E390A,E189P+Y242F+G303R+E390A,E1 89P+E259G+N279S+K280Y,E189P+E259G+N279S+G303R,E189P+E259G+N27 9S+E390A,E189P+E259G+K280Y+G303R,E189P+E259G+K280Y+E390A,E189 P+E259G+G303R+E390A,E189P+N279S+K280Y+G303R,E189P+N279S+K280Y +E390A,E189P+N279S+G303R+E390A,E189P+K280Y+G303R+E390A,Y242F+ E259G+N279S+K280Y,Y242F+E259G+N279S+G303R,Y242F+E259G+N279S+E 390A,Y242F+E259G+K280Y+G303R,Y242F+E259G+K280Y+E390A,Y242F+E2 59G+G303R+E390A,Y242F+N279S+K280Y+G303R,Y242F+N279S+K280Y+E39 0A,Y242F+N279S+G303R+E390A,Y242F+K280Y+G303R+E390A,E259G+N279 S+K280Y+G303R,E259G+N279S+K280Y+E390A,E259G+N279S+G303R+E390A ,E259G+K280Y+G303R+E390A,N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0450] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 9, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S,H1*+G7A+W 140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G +E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R,H1 *+G7A+W140Y+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R,H1*+G7A+W14 0Y+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+ E259G,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S,H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y,H1* +G7A+E189P+Y242F+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A,H1*+G7A+E189 P+E259G+N279S,H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y,H1*+G7A+E189P+E259G+G 303R,H1*+G7A+E189P+E259G+E390A,H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y,H1*+ G7A+E189P+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+N279S+E390A,H1*+G7A+E189P +K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+G303R+E3 90A,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G 7A+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A,H1*+G7A+Y242F+ N279S+K280Y,H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R,H1*+G7A+Y242F+N279S+E39 0A,H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R,H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A,H1*+G7 A+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+E259G+N 279S+G303R,H1*+G7A+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+E259G+K280Y+G303 R,H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A +N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+N279S+G3 03R+E390A,H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E25 9G,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y,H1 *+W140Y+E189P+Y242F+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A,H1*+W14 0Y+E189P+E259G+N279S,H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E1 89P+E259G+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A,H1*+W140Y+E189P+N 279S+K280Y,H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R,H1*+W140Y+E189P+N279S+ E390A,H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A ,H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S,H1*+ W140Y+Y242F+E259G+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R,H1*+W140Y +Y242F+E259G+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,H1*+W140Y+Y242 F+N279S+G303R,H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A,H1*+W140Y+Y242F+K28 0Y+G303R,H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+G303R+E3 90A,H1*+W14 0Y+E2 5 9G+N2 7 9S+K2 8 0Y,H1*+W14 0Y+E2 5 9G+N2 7 9S+G3 0 3R, H 1*+W140Y+E259G+N279S+E390A,H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R,H1*+W1 40Y+E259G+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A,H1*+W140Y+N 279S+K280Y+G303R,H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+N279S+ G303R+E390A,H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G +N279S,H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+E189P+Y242F+E259G+G303 R,H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1* +E189P+Y242F+N279S+G303R,H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A,H1*+E189 P+Y242F+K280Y+G303R,H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A,H1*+E189P+Y24 2F+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y,H1*+E189P+E259G+N2 79S+G303R,H1*+E189P+E259G+N279S+E390A,H1*+E189P+E259G+K280Y+G 3 0 3R, H1*+E18 9P+E2 5 9G+K2 8 0Y+E3 90A,H1* + E18 9P+E2 5 9G+G3 0 3R+E3 90A, H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R,H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+E 189P+N279S+G303R+E390A,H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+ E259G+N279S+K280Y,H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+Y242F+E259G +N279S+E390A,H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+Y242F+E259G+K280 Y+E390A,H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1*+Y242F+N279S+K280Y+G30 3R,H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1 *+Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+E25 9G+N279S+K280Y+E390A,H1*+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+E259G+K2 80Y+G303R+E390A,H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y 242F+E259G,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S,G7A+W140Y+E189P+Y242F+ K280Y,G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A ,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S,G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y,G7A+ W140Y+E189P+E259G+G303R,G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A,G7A+W140Y +E189P+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189 P+N279S+E390A,G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+K28 0Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N2 79S,G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R,G 7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,G7A+W1 40Y+Y242F+N279S+G303R,G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A,G7A+W140Y+Y 242F+K280Y+G303R,G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y242F+ G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E259G+N279S +G303R,G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A,G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303 R,G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A,G7A +W140Y+N279S+K280Y+G303R,G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140 Y+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y24 2F+E259G+N279S,G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y,G7A+E189P+Y242F+E2 59G+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A,G7A+E189P+Y242F+N279S+K 280Y,G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R,G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A, G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A,G7A+E 189P+Y242F+G303R+E390A,G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y,G7A+E189P+ E259G+N279S+G303R,G7A+E189P+E259G+N279S+E390A,G7A+E189P+E259G +K280Y+G303R,G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A,G7A+E189P+E259G+G303 R+E390A,G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+N279S+K280Y+E39 0A,G7A+E189P+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A,G7 A+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R,G7A+Y24 2F+E259G+N279S+E390A,G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R,G7A+Y242F+E2 59G+K280Y+E390A,G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A,G7A+Y242F+N279S+K 280Y+G303R,G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+Y242F+N279S+G303R+ E390A,G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R ,G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+ E259G+K280Y+G303R+E390A,G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+N279S,W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,W140Y+E189 P+Y242F+E259G+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A,W140Y+E189P +Y242F+N279S+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R,W140Y+E189P+ Y242F+N279S+E390A,W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y 242F+K280Y+E390A,W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,W140Y+E189P+E2 59G+N279S+K280Y,W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,W140Y+E189P+E25 9G+N279S+E390A,W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E189P+E259 G+K280Y+E390A,W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,W140Y+E189P+N279S +K280Y+G303R,W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E189P+N279S+ G303R+E390A,W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N 279S+K280Y,W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R,W140Y+Y242F+E259G+N2 79S+E390A,W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+E259G+K28 0Y+E390A,W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A,W140Y+Y242F+N279S+K280 Y+G303R,W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A,W140Y+Y242F+N279S+G303R +E390A,W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E259G+N279S+K280Y+ G303R,W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E259G+N279S+G303R+E 390A,W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,W140Y+N279S+K280Y+G303R+E3 90A,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,E189P+Y242F+E259G+N279S+G30 3R,E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303 R,E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A ,E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R,E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A,E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,E 189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,E1 89P+E259G+N279S+G303R+E390A,E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A,E18 9P+N279S+K280Y+G303R+E390A,Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,Y242 F+E259G+N279S+K280Y+E390A,Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,Y242F +E259G+K280Y+G303R+E390A,Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,E259G+ N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0451] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 9, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G30 3R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+ N279S,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+E25 9G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+ N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E18 9P+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+ E189P+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A,H1*+G7A+W14 0Y+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+ W140Y+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A,H1*+G 7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R,H1 *+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R ,H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E3 90A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S +G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+K2 80Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G +G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+N2 79S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y +K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+E1 89P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A +E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1*+ G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A,H 1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390 A,H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K 280Y,H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+E259G+N279 S+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+E259G+K 280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+N279 S+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+N 279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242 F+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+Y 242F+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7 A+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1* +G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E39 0A,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+ E390A,H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E259G+K280Y+G30 3R+E390A,H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242 F+E259G+N279S,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+W1 40Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R ,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280 Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y24 2F+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E1 89P+E259G+N279S+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A,H1*+W 140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390 A,H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+N279S+K28 0Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+N2 79S+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+ W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G30 3R,H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+G3 03R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R,H1*+W140Y+Y242F+N 279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+W140Y+ Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1* +W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E3 90A,H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+N279S+K280Y+G 303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+E189P+Y242F+ E259G+N279S+G303R,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,H1*+E189P +Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1 *+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G 303R,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+ G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G +N279S+K280Y+G303R,H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+E189 P+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A,H 1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+ G303R,H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+Y242F+E259G+N279S +G303R+E390A,H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+N279 S+K280Y+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W14 0Y+E189P+Y242F+E259G+N279S,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G +E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E189P+Y242 F+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A,G7A+W140Y+E18 9P+Y242F+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A,G7A+W1 40Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y ,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279 S+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+E25 9G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,G7A+W140Y+E1 89P+N279S+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,G7A+W 140Y+E189P+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390 A,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N27 9S+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E2 59G+K280Y+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y 242F+E259G+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R,G7A+ W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E39 0A,G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+N279S+K2 80Y+G303R,G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E259G+N 279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+ N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A +E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E3 90A,G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+K 280Y+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+ N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+E189P +Y242F+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7 A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E 390A,G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+E259G+K280Y+ G303R+E390A,G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R,G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+Y242 F+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,G 7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+ E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+E 259G+N279S+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,W140Y+E1 89P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E39 0A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+N279 S+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E189P +Y242F+N279S+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,W140Y+E189P+E259G+N279S+K 280Y+E390A,W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A,W140Y+E189P+E2 59G+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,W14 0Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280 Y+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G +K280Y+G303R+E390A,W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,W140Y+ E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G 303R,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,E189P+Y242F+E259G+N2 79S+G303R+E390A,E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,E189P+Y24 2F+N279S+K280Y+G303R+E390A,E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390 A,Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0452] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 9, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y24 2F+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0453] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 9, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N2 79S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A +W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242 F+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G30 3R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+ E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y +G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+ G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E 259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+ E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W14 0Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N2 79S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,H 1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242 F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G30 3R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+ E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G +N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390 A,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+ G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1* +W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y +G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1 *+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280 Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,G 7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+ Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K28 0Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F +E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K2 80Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E39 0A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0454] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 9, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W14 0Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K 280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+ E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G 7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K2 80Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0455] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 9, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E 390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0456] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 10, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+D118T, H1*+W140Y, H1*+T182S, H1*+A185D, H1*+E189P, H1*+Y242F, H1*+E259G, H1*+F266Y, H1*+N279S, H1*+K280Y, H1*+G303R, H1*+E390A, H1*+G475K, H1*+A185Q, H1*+N194F, D118T+W140Y, D118T+T182S, D118T+A185D, D118T+E189P, D118T+Y242F, D118T+E259G, D118T+F266Y, D118T+N279S,D118T+K280Y,D118T+G303R,D118T+E390A,D118T+G475K,D 118T+A185Q,D118T+N194F,W140Y+T182S,W140Y+A185D,W140Y+E189P,W1 40Y+Y242F,W140Y+E259G,W140Y+F266Y,W140Y+N279S,W140Y+K280Y,W14 0Y+G303R,W140Y+E390A,W140Y+G475K,W140Y+A185Q,W140Y+N194F,T182 S+A185D,T182S+E189P,T182S+Y242F,T182S+E259G,T182S+F266Y,T182S +N279S,T182S+K280Y,T182S+G303R,T182S+E390A,T182S+G475K,T182S+ A185Q,T182S+N194F,A185D+E189P,A185D+Y242F,A185D+E259G,A185D+F 266Y,A185D+N279S,A185D+K280Y,A185D+G303R,A185D+E390A,A185D+G4 75K,A185D,+A185Q,A185D,+N194F,E189P+Y242F,E189P+E259G,E189P+F 266Y,E189P+N279S,E189P+K280Y,E189P+G303R,E189P+E390A,E189P+G4 75K,E189P+A185Q,E189P+N194F,Y242F+E259G,Y242F+F266Y,Y242F+N27 9S,Y242F+K280Y,Y242F+G303R,Y242F+E390A,Y242F+G475K,Y242F+A185 Q,Y242F+N194F,E259G+F266Y,E259G+N279S,E259G+K280Y,E259G+G303R ,E259G+E390A,E259G+G475K,E259G+A185Q,E259G+N194F,F266Y+N279S, F266Y+K280Y,F266Y+G303R,F266Y+E390A,F266Y+G475K,F266Y+A185Q,F 266Y+N194F,N279+K280Y,N279S+G303R,N279S+E390A,N279S+G475K,N27 9S+A185Q,N279S+N194F,K280Y+G303R,K280Y+E390A,K280Y+G475K,K280 Y+A185Q,K280Y+N194F,G303R+E390A,G303R+G475K,G303R+A185Q,G303R +N194F,E390A+G475K,E390A+A185Q,E390A+N194F,G475K+A185Q,G475K+ N194F, A185Q+N194F, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65 pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0457] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 10, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+D118T+W140Y, H1*+D118T+T182S, H1*+D118T+A185D, H1*+D118T+E189P, H1*+D118T+Y242F, H1*+D118T+E259G, H1*+D118T+F266Y, H1*+D118T+N279S, H1*+D118T+K280Y, H1*+D118T+G303R, H1*+D118T+E390A, H1*+D118T+G475K, H1*+D118T+A185Q, H1*+D118T+N194F, H1*+W140Y+T182S, H1*+W140Y+A185D, H1*+W140Y+E189P, H1*+W140Y+Y242F, H1*+W140Y+E259G, H1*+W140Y+F266Y,H1*+W140Y+N279S,H1*+W140Y+K280Y,H1*+W140Y+G30 3R,H1*+W140Y+E390A,H1*+W140Y+G475K,H1*+W140Y+A185Q,H1*+W140Y+ N194F,H1*+T182S+A185D,H1*+T182S+E189P,H1*+T182S+Y242F,H1*+T18 2S+E259G,H1*+T182S+F266Y,H1*+T182S+N279S,H1*+T182S+K280Y,H1*+ T182S+G303R,H1*+T182S+E390A,H1*+T182S+G475K,H1*+T182S+A185Q,H 1*+T182S+N194F,H1*+A185D+E189P,H1*+A185D+Y242F,H1*+A185D+E259 G,H1*+A185D+F266Y,H1*+A185D+N279S,H1*+A185D+K280Y,H1*+A185D+G 303R,H1*+A185D+E390A,H1*+A185D+G475K,H1*+A185D+A185Q,H1*+A185 D+N194F,H1*+E189P+Y242F,H1*+E189P+E259G,H1*+E189P+F266Y,H1*+E 189P+N279S,H1*+E189P+K280Y,H1*+E189P+G303R,H1*+E189P+E390A,H1 *+E189P+G475K,H1*+E189P+A185Q,H1*+E189P+N194F,H1*+Y242F+E259G ,H1*+Y242F+F266Y,H1*+Y242F+N279S,H1*+Y242F+K280Y,H1*+Y242F+G3 03R,H1*+Y242F+E390A,H1*+Y242F+G475K,H1*+Y242F+A185Q,H1*+Y242F +N194F,H1*+E259G+F266Y,H1*+E259G+N279S,H1*+E259G+K280Y,H1*+E2 59G+G303R,H1*+E259G+E390A,H1*+E259G+G475K,H1*+E259G+A185Q,H1* +E259G+N194F,H1*+F266Y+N279S,H1*+F266Y+K280Y,H1*+F266Y+G303R, H1*+F266Y+E390A,H1*+F266Y+G475K,H1*+F266Y+A185Q,H1*+F266Y+N19 4F,H1*+N279S+K280Y,H1*+N279S+G303R,H1*+N279S+E390A,H1*+N279S+ G475K,H1*+N279S+A185Q,H1*+N279S+N194F,H1*+K280Y+G303R,H1*+K28 0Y+E390A,H1*+K280Y+G475K,H1*+K280Y+A185Q,H1*+K280Y+N194F,H1*+ G303R+E390A,H1*+G303R+G475K,H1*+G303R+A185Q,H1*+G303R+N194F,H 1*+E390A+G475K,H1*+E390A+A185Q,H1*+E390A+N194F,H1*+G475K+A185 Q,H1*+G475K+N194F,H1*+A185Q+N194F,D118T+W140Y+T182S,D118T+W14 0Y+A185D,D118T+W140Y+E189P,D118T+W140Y+Y242F,D118T+W140Y+E259 G,D118T+W140Y+F266Y,D118T+W140Y+N279S,D118T+W140Y+K280Y,D118T +W140Y+G303R,D118T+W140Y+E390A,D118T+W140Y+G475K,D118T+W140Y+ A18 5Q,D118T+W14 0Y+N194F,D118T+T18 2S+A18 5D,D118T+T18 2S+E18 9P, D 118T+T182S+Y242F,D118T+T182S+E259G,D118T+T182S+F266Y,D118T+T1 82S+N279S,D118T+T182S+K280Y,D118T+T182S+G303R,D118T+T182S+E39 0A,D118T+T182S+G475K,D118T+T182S+A185Q,D118T+T182S+N194F,D118 T+A185D+E189P,D118T+A185D+Y242F,D118T+A185D+E259G,D118T+A185D +F266Y,D118T+A185D+N279S,D118T+A185D+K280Y,D118T+A185D+G303R, D118T+A185D+E390A,D118T+A185D+G475K,D118T+A185D+A185Q,D118T+A 185D+N194F,D118T+E189P+Y242F,D118T+E189P+E259G,D118T+E189P+F2 66Y,D118T+E189P+N279S,D118T+E189P+K280Y,D118T+E189P+G303R,D11 8T+E189P+E390A,D118T+E189P+G475K,D118T+E189P+A185Q,D118T+E189 P+N194F,D118T+Y242F+E259G,D118T+Y242F+F266Y,D118T+Y242F+N279S ,D118T+Y242F+K280Y,D118T+Y242F+G303R,D118T+Y242F+E390A,D118T+ Y242F+G475K,D118T+Y242F+A185Q,D118T+Y242F+N194F,D118T+E259G+F 266Y,D118T+E259G+N279S,D118T+E259G+K280Y,D118T+E259G+G303R,D1 18T+E259G+E390A,D118T+E259G+G475K,D118T+E259G+A185Q,D118T+E25 9G+N194F,D118T+F266Y+N279S,D118T+F266Y+K280Y,D118T+F266Y+G303 R,D118T+F266Y+E390A,D118T+F266Y+G475K,D118T+F266Y+A185Q,D118T +F266Y+N194F,D118T+N279S+K280Y,D118T+N279S+G303R,D118T+N279S+ E390A,D118T+N279S+G475K,D118T+N279S+A185Q,D118T+N279S+N194F,D 118T+K280Y+G303R,D118T+K280Y+E390A,D118T+K280Y+G475K,D118T+K2 80Y+A185Q,D118T+K280Y+N194F,D118T+G303R+E390A,D118T+G303R+G47 5K,D118T+G303R+A185Q,D118T+G303R+N194F,D118T+E390A+G475K,D118 T+E390A+A185Q,D118T+E390A+N194F,D118T+G475K+A185Q,D118T+G475K +N194F,D118T+A185Q+N194F,W140Y+T182S+A185D,W140Y+T182S+E189P, W140Y+T182S+Y242F,W140Y+T182S+E259G,W140Y+T182S+F266Y,W140Y+T 182S+N279S,W140Y+T182S+K280Y,W140Y+T182S+G303R,W140Y+T182S+E3 90A,W140Y+T182S+G475K,W140Y+T182S+A185Q,W140Y+T182S+N194F,W14 0Y+A185D+E189P,W140Y+A185D+Y242F,W140Y+A185D+E259G,W140Y+A185 D+F266Y,W140Y+A185D+N279S,W140Y+A185D+K280Y,W140Y+A185D+G303R ,W140Y+A185D+E390A,W140Y+A185D+G475K,W140Y+A185D+A185Q,W140Y+ A185D+N194F,W140Y+E189P+Y242F,W140Y+E189P+E259G,W140Y+E189P+F 266Y,W140Y+E189P+N279S,W140Y+E189P+K280Y,W140Y+E189P+G303R,W1 40Y+E189P+E390A,W140Y+E189P+G475K,W140Y+E189P+A185Q,W140Y+E18 9P+N194F,W140Y+Y242F+E259G,W140Y+Y242F+F266Y,W140Y+Y242F+N279 S,W140Y+Y242F+K280Y,W140Y+Y242F+G303R,W140Y+Y242F+E390A,W140Y +Y242F+G475K,W140Y+Y242F+A185Q,W140Y+Y242F+N194F,W140Y+E259G+ F266Y,W140Y+E259G+N279S,W140Y+E259G+K280Y,W140Y+E259G+G303R,W 140Y+E259G+E390A,W140Y+E259G+G475K,W140Y+E259G+A185Q,W140Y+E2 59G+N194F,W140Y+F266Y+N279S,W140Y+F266Y+K280Y,W140Y+F266Y+G30 3R,W140Y+F266Y+E390A,W140Y+F266Y+G475K,W140Y+F266Y+A185Q,W140 Y+F266Y+N194F,W140Y+N279S+K280Y,W140Y+N279S+G303R,W140Y+N279S +E390A,W140Y+N279S+G475K,W140Y+N279S+A185Q,W140Y+N279S+N194F, W140Y+K280Y+G303R,W140Y+K280Y+E390A,W140Y+K280Y+G475K,W140Y+K 280Y+A185Q,W140Y+K280Y+N194F,W140Y+G303R+E390A,W140Y+G303R+G4 75K,W140Y+G303R+A185Q,W140Y+G303R+N194F,W140Y+E390A+G475K,W14 0Y+E390A+A185Q,W140Y+E390A+N194F,W140Y+G475K+A185Q,W140Y+G475 K+N194F,W140Y+A185Q+N194F,T182S+A185D+E189P,T182S+A185D+Y242F ,T182S+A185D+E259G,T182S+A185D+F266Y,T182S+A185D+N279S,T182S+ A185D+K280Y,T182S+A185D+G303R,T182S+A185D+E390A,T182S+A185D+G 45K,T182S+A185D+A185Q,T182S+A185D+N194F,T182S+E189P+Y242F,T18 2S+E189P+E259G,T182S+E189P+F266Y,T182S+E189P+N279S,T182S+E189 P+K280Y,T182S+E189P+G303R,T182S+E189P+E390A,T182S+E189P+G475K ,T182S+E189P+A185Q,T182S+E189P+N194F,T182S+Y242F+E259G,T182S+ Y242F+F266Y,T182S+Y242F+N279S,T182S+Y242F+K280Y,T182S+Y242F+G 303R,T182S+Y242F+E390A,T182S+Y242F+G475K,T182S+Y242F+A185Q,T1 82S+Y242F+N194F,T182S+E259G+F266Y,T182S+E259G+N279S,T182S+E25 9G+K280Y,T182S+E259G+G303R,T182S+E259G+E390A,T182S+E259G+G475 K,T182S+E259G+A185Q,T182S+E259G+N194F,T182S+F266Y+N279S,T182S +F266Y+K280Y,T182S+F266Y+G303R,T182S+F266Y+E390A,T182S+F266Y+ G475K,T182S+F266Y+A185Q,T182S+F266Y+N194F,T182S+N279S+K280Y,T 182S+N279S+G303R,T182S+N279S+E390A,T182S+N279S+G475K,T182S+N2 79S+A185Q,T182S+N279S+N194F,T182S+K280Y+G303R,T182S+K280Y+E39 0A,T182S+K280Y+G475K,T182S+K280Y+A185Q,T182S+K280Y+N194F,T182 S+G303R+E390A,T182S+G303R+G475K,T182S+G303R+A185Q,T182S+G303R +N194F,T182S+E390A+G475K,T182S+E390A+A185Q,T182S+E390A+N194F, T182S+G475K+A185Q,T182S+G475K+N194F,T182S+A185Q+N194F,A185D+E 189P+Y242F,A185D+E189P+E259G,A185D+E189P+F266Y,A185D+E189P+N2 79S,A185D+E189P+K280Y,A185D+E189P+G303R,A185D+E189P+E390A,A18 5D+E189P+G475K,A185D+E189P+A185Q,A185D+E189P+N194F,A185D+Y242 F+E259G,A185D+Y242F+F266Y,A185D+Y242F+N279S,A185D+Y242F+K280Y ,A185D+Y242F+G303R,A185D+Y242F+E390A,A185D+Y242F+G475K,A185D+ Y242F+A185Q,A185D+Y242F+N194F,A185D+E259G+F266Y,A185D+E259G+N 279S,A185D+E259G+K280Y,A185D+E259G+G303R,A185D+E259G+E390A,A1 85D+E259G+G475K,A185D+E259G+A185Q,A185D+E259G+N194F,A185D+F26 6Y+N279S,A185D+F266Y+K280Y,A185D+F266Y+G303R,A185D+F266Y+E390 A,A185D+F266Y+G475K,A185D+F266Y+A185Q,A185D+F266Y+N194F,A185D +N279S+K280Y,A185D+N279S+G303R,A185D+N279S+E390A,A185D+N279S+ G475K,A185D+N279S+A185Q,A185D+N279S+N194F,A185D+K280Y+G303R,A 185D+K280Y+E390A,A185D+K280Y+G475K,A185D+K280Y+A185Q,A185D+K2 80Y+N194F,A185D+G303R+E390A,A185D+G303R+G475K,A185D+G303R+A18 5Q,A185D+G303R+N194F,A185D+E390A+G475K,A185D+E390A+A185Q,A185 D+E390A+N194F,A185D+G475K+A185Q,A185D+G475K+N194F,A185D+A185Q +N194F,E189P+Y242F+E259G,E189P+Y242F+F266Y,E189P+Y242F+N279S, E189P+Y242F+K280Y,E189P+Y242F+G303R,E189P+Y242F+E390A,E189P+Y 242F+G475K,E189P+Y242F+A185Q,E189P+Y242F+N194F,E189P+E259G+F2 66Y,E189P+E259G+N279S,E189P+E259G+K280Y,E189P+E259G+G303R,E18 9P+E259G+E390A,E189P+E259G+G475K,E189P+E259G+A185Q,E189P+E259 G+N194F,E189P+F266Y+N279S,E189P+F266Y+K280Y,E189P+F266Y+G303R ,E189P+F266Y+E390A,E189P+F266Y+G475K,E189P+F266Y+A185Q,E189P+ F266Y+N194F,E189P+N279S+K280Y,E189P+N279S+G303R,E189P+N279S+E 390A,E189P+N279S+G475K,E189P+N279S+A185Q,E189P+N279S+N194F,E1 89P+K280Y+G303R,E189P+K280Y+E390A,E189P+K280Y+G475K,E189P+K28 0Y+A185Q,E189P+K280Y+N194F,E189P+G303R+E390A,E189P+G303R+G475 K,E189P+G303R+A185Q,E189P+G303R+N194F,E189P+E390A+G475K,E189P +E390A+A185Q,E189P+E390A+N194F,E189P+G475K+A185Q,E189P+G475K+ N194F,E189P+A185Q+N194F,Y242F+E259G+F266Y,Y242F+E259G+N279S,Y 242F+E259G+K280Y,Y242F+E259G+G303R,Y242F+E259G+E390A,Y242F+E2 59G+G475K,Y242F+E259G+A185Q,Y242F+E259G+N194F,Y242F+F266Y+N27 9S,Y242F+F266Y+K280Y,Y242F+F266Y+G303R,Y242F+F266Y+E390A,Y242 F+F266Y+G475K,Y242F+F266Y+A185Q,Y242F+F266Y+N194F,Y242F+N279S +K280Y,Y242F+N279S+G303R,Y242F+N279S+E390A,Y242F+N279S+G475K, Y242F+N279S+A185Q,Y242F+N279S+N194F,Y242F+K280Y+G303R,Y242F+K 280Y+E390A,Y242F+K280Y+G475K,Y242F+K280Y+A185Q,Y242F+K280Y+N1 94F,Y242F+G303R+E390A,Y242F+G303R+G475K,Y242F+G303R+A185Q,Y24 2F+G303R+N194F,Y242F+E390A+G475K,Y242F+E390A+A185Q,Y242F+E390 A+N194F,Y242F+G475K+A185Q,Y242F+G475K+N194F,Y242F+A185Q+N194F ,E259G+F266Y+N279S,E259G+F266Y+K280Y,E259G+F266Y+G303R,E259G+ F266Y+E390A,E259G+F266Y+G475K,E259G+F266Y+A185Q,E259G+F266Y+N 194F,E259G+N279S+K280Y,E259G+N279S+G303R,E259G+N279S+E390A,E2 59G+N279S+G475K,E259G+N279S+A185Q,E259G+N279S+N194F,E259G+K28 0Y+G303R,E259G+K280Y+E390A,E259G+K280Y+G475K,E259G+K280Y+A185 Q,E259G+K280Y+N194F,E259G+G303R+E390A,E259G+G303R+G475K,E259G +G303R+A185Q,E259G+G303R+N194F,E259G+E390A+G475K,E259G+E390A+ A185Q,E259G+E390A+N194F,E259G+G475K+A185Q,E259G+G475K+N194F,E 259G+A185Q+N194F,F266Y+N279S+K280Y,F266Y+N279S+G303R,F266Y+N2 79S+E390A,F266Y+N279S+G475K,F266Y+N279S+A185Q,F266Y+N279S+N19 4F,F266Y+K280Y+G303R,F266Y+K280Y+E390A,F266Y+K280Y+G475K,F266 Y+K280Y+A185Q,F266Y+K280Y+N194F,F266Y+G303R+E390A,F266Y+G303R +G475K,F266Y+G303R+A185Q,F266Y+G303R+N194F,F266Y+E390A+G475K, F266Y+E390A+A185Q,F266Y+E390A+N194F,F266Y+G475K+A185Q,F266Y+G 475K+N194F,F266Y+A185Q+N194F,N279S+K280Y+G303R,N279S+K280Y+E3 90A,N279S+K280Y+G475K,N279S+K280Y+A185Q,N279S+K280Y+N194F,N27 9S+G303R+E390A,N279S+G303R+G475K,N279S+G303R+A185Q,N279S+G303 R+N194F,N279S+E390A+G475K,N279S+E390A+A185Q,N279S+E390A+N194F ,N279S+G475K+A185Q, N279S+G475K+N194F,N279S+A185Q+N194F,K280Y+G303R+E39 0A,K280Y+G303R+G475K,K280Y+G303R+A185Q,K280Y+G303R+N194F,K280 Y+E390A+G475K,K280Y+E390A+A185Q,K280Y+E390A+N194F,K280Y+G475K +A185Q,K280Y+G475K+N194F,K280Y+A185Q+N194F,G303R+E390A+G475K, G303R+E390A+A185Q,G303R+E390A+N194F,G303R+G475K+A185Q,G303R+G 475K+N194F,G303R+A185Q+N194F,E390A+G475K+A185Q,E390A+G475K+N1 94F,E390A+A185Q+N194F,G475K+A185Q+N194F, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0458] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 10, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P, H1*+G7A+W140Y+Y242F, H1*+G7A+W140Y+E259G, H1*+G7A+W140Y+N279S, H1*+G7A+W140Y+K280Y, H1*+G7A+W140Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F,H1*+G7A+E189P+E259G,H1*+G7A+E189P+N279S,H 1*+G7A+E189P+K280Y,H1*+G7A+E189P+G303R,H1*+G7A+E189P+E390A,H1 *+G7A+Y242F+E259G,H1*+G7A+Y242F+N279S,H1*+G7A+Y242F+K280Y,H1* +G7A+Y242F+G303R,H1*+G7A+Y242F+E390A,H1*+G7A+E259G+N279S,H1*+ G7A+E259G+K280Y,H1*+G7A+E259G+G303R,H1*+G7A+E259G+E390A,H1*+G 7A+N279S+K280Y,H1*+G7A+N279S+G303R,H1*+G7A+N279S+E390A,H1*+G7 A+K280Y+G303R,H1*+G7A+K280Y+E390A,H1*+G7A+G303R+E390A,H1*+W14 0Y+E189P+Y242F,H1*+W140Y+E189P+E259G,H1*+W140Y+E189P+N279S,H1 *+W140Y+E189P+K280Y,H1*+W140Y+E189P+G303R,H1*+W140Y+E189P+E39 0A,H1*+W140Y+Y242F+E259G,H1*+W140Y+Y242F+N279S,H1*+W140Y+Y242 F+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+G303R,H1*+W140Y+Y242F+E390A,H1*+W140Y +E259G+N279S,H1*+W140Y+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E259G+G303R,H1*+ W140Y+E259G+E390A,H1*+W140Y+N279S+K280Y,H1*+W140Y+N279S+G303R ,H1*+W140Y+N279S+E390A,H1*+W140Y+K280Y+G303R,H1*+W140Y+K280Y+ E390A,H1*+W140Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G, H1*+E189P+Y 242F+N279S,H1*+E189P+Y242F+K280Y,H1*+E189P+Y242F+G303R, H1*+E1 89P+Y242F+E390A,H1*+E189P+E259G+N279S,H1*+E189P+E259G+K280Y,H 1*+E189P+E259G+G303R,H1*+E189P+E259G+E390A,H1*+E189P+N279S+K2 80Y,H1*+E189P+N279S+G303R,H1*+E189P+N279S+E390A,H1*+E189P+K28 0Y+G303R,H1*+E189P+K280Y+E390A,H1*+E189P+G303R+E390A,H1*+Y242 F+E259G+N279S,H1*+Y242F+E259G+K280Y,H1*+Y242F+E259G+G303R,H1* +Y242F+E259G+E390A,H1*+Y242F+N279S+K280Y,H1*+Y242F+N279S+G303 R,H1*+Y242F+N279S+E390A,H1*+Y242F+K280Y+G303R,H1*+Y242F+K280Y +E390A,H1*+Y242F+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y,H1*+E259G+ N279S+G303R,H1*+E259G+N279S+E390A,H1*+E259G+K280Y+G303R,H1*+E 259G+K280Y+E390A,H1*+E259G+G303R+E390A,H1*+N279S+K280Y+G303R, H1*+N279S+K280Y+E390A,H1*+N279S+G303R+E390A,H1*+K280Y+G303R+E 390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F,G7A+W140Y+E189P+E259G,G7A+W140Y+E1 89P+N279S,G7A+W140Y+E189P+K280Y,G7A+W140Y+E189P+G303R,G7A+W14 0Y+E189P+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E259G,G7A+W140Y+Y242F+N279S,G7 A+W140Y+Y242F+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E39 0A,G7A+W140Y+E259G+N279S,G7A+W140Y+E259G+K280Y,G7A+W140Y+E259 G+G303R,G7A+W140Y+E259G+E390A,G7A+W140Y+N279S+K280Y,G7A+W140Y +N279S+G303R,G7A+W140Y+N279S+E390A,G7A+W140Y+K280Y+G303R,G7A+ W140Y+K280Y+E390A,G7A+W140Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G ,G7A+E189P+Y242F+N279S,G7A+E189P+Y242F+K280Y,G7A+E189P+Y242F+ G303R,G7A+E189P+Y242F+E390A,G7A+E189P+E259G+N279S,G7A+E189P+E 259G+K280Y,G7A+E189P+E259G+G303R,G7A+E189P+E259G+E390A,G7A+E1 89P+N279S+K280Y,G7A+E189P+N279S+G303R,G7A+E189P+N279S+E390A,G 7A+E189P+K280Y+G303R,G7A+E189P+K280Y+E390A,G7A+E189P+G303R+E3 90A,G7A+Y242F+E259G+N279S,G7A+Y242F+E259G+K280Y,G7A+Y242F+E25 9G+G303R,G7A+Y242F+E259G+E390A,G7A+Y242F+N279S+K280Y,G7A+Y242 F+N279S+G303R,G7A+Y242F+N279S+E390A,G7A+Y242F+K280Y+G303R,G7A +Y242F+K280Y+E390A,G7A+Y242F+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280 Y,G7A+E259G+N279S+G303R,G7A+E259G+N279S+E390A,G7A+E259G+K280Y +G303R,G7A+E259G+K280Y+E390A,G7A+E259G+G303R+E390A,G7A+N279S+ K280Y+G303R,G7A+N279S+K280Y+E390A,G7A+N279S+G303R+E390A,G7A+K 280Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G,W140Y+E189P+Y242F+N2 79S,W140Y+E189P+Y242F+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+G303R,W140Y+E18 9P+Y242F+E390A,W140Y+E189P+E259G+N279S,W140Y+E189P+E259G+K280 Y,W140Y+E189P+E259G+G303R,W140Y+E189P+E259G+E390A,W140Y+E189P +N279S+K280Y,W140Y+E189P+N279S+G303R,W140Y+E189P+N279S+E390A, W140Y+E189P+K280Y+G303R,W140Y+E189P+K280Y+E390A,W140Y+E189P+G 303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N279S,W140Y+Y242F+E259G+K280Y,W1 40Y+Y242F+E259G+G303R,W140Y+Y242F+E259G+E390A,W140Y+Y242F+N27 9S+K280Y,W140Y+Y242F+N279S+G303R,W140Y+Y242F+N279S+E390A,W140 Y+Y242F+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+K280Y+E390A,W140Y+Y242F+G303R +E390A,W140Y+E259G+N279S+K280Y,W140Y+E259G+N279S+G303R,W140Y+ E259G+N279S+E390A,W140Y+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E259G+K280Y+E 390A,W140Y+E259G+G303R+E390A,W140Y+N279S+K280Y+G303R,W140Y+N2 79S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A,W140Y+K280Y+G303R+E390 A,E189P+Y242F+E259G+N279S,E189P+Y242F+E259G+K280Y,E189P+Y242F +E259G+G303R,E189P+Y242F+E259G+E390A,E189P+Y242F+N279S+K280Y, E189P+Y242F+N279S+G303R,E189P+Y242F+N279S+E390A,E189P+Y242F+K 280Y+G303R,E189P+Y242F+K280Y+E390A,E189P+Y242F+G303R+E390A,E1 89P+E259G+N279S+K280Y,E189P+E259G+N279S+G303R,E189P+E259G+N27 9S+E390A,E189P+E259G+K280Y+G303R,E189P+E259G+K280Y+E390A,E189 P+E259G+G303R+E390A,E189P+N279S+K280Y+G303R,E189P+N279S+K280Y +E390A,E189P+N279S+G303R+E390A,E189P+K280Y+G303R+E390A,Y242F+ E259G+N279S+K280Y,Y242F+E259G+N279S+G303R,Y242F+E259G+N279S+E 390A,Y242F+E259G+K280Y+G303R,Y242F+E259G+K280Y+E390A,Y242F+E2 59G+G303R+E390A,Y242F+N279S+K280Y+G303R,Y242F+N279S+K280Y+E39 0A,Y242F+N279S+G303R+E390A,Y242F+K280Y+G303R+E390A,E259G+N279 S+K280Y+G303R,E259G+N279S+K280Y+E390A,E259G+N279S+G303R+E390A ,E259G+K280Y+G303R+E390A,N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0459] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 10, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S, H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y, H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S,H1*+G7A+W 140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G +E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R,H1 *+G7A+W140Y+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R,H1*+G7A+W14 0Y+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+ E259G,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S,H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y,H1* +G7A+E189P+Y242F+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A,H1*+G7A+E189 P+E259G+N279S,H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y,H1*+G7A+E189P+E259G+G 303R,H1*+G7A+E189P+E259G+E390A,H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y,H1*+ G7A+E189P+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+N279S+E390A,H1*+G7A+E189P +K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+G303R+E3 90A,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G 7A+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A,H1*+G7A+Y242F+ N279S+K280Y,H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R,H1*+G7A+Y242F+N279S+E39 0A,H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R,H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A,H1*+G7 A+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+E259G+N 279S+G303R,H1*+G7A+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+E259G+K280Y+G303 R,H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A +N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+N279S+G3 03R+E390A,H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E25 9G,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y,H1 *+W140Y+E189P+Y242F+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A,H1*+W14 0Y+E189P+E259G+N279S,H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E1 89P+E259G+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A,H1*+W140Y+E189P+N 279S+K280Y,H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R,H1*+W140Y+E189P+N279S+ E390A,H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A ,H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S,H1*+ W140Y+Y242F+E259G+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R,H1*+W140Y +Y242F+E259G+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,H1*+W140Y+Y242 F+N279S+G303R,H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A,H1*+W140Y+Y242F+K28 0Y+G303R,H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+G303R+E3 90A,H1*+W14 0Y+E2 5 9G+N2 7 9S+K2 8 0Y,H1*+W14 0Y+E2 5 9G+N2 7 9S+G3 0 3R, H 1*+W140Y+E259G+N279S+E390A,H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R,H1*+W1 40Y+E259G+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A,H1*+W140Y+N 279S+K280Y+G303R,H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+N279S+ G303R+E390A,H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G +N279S,H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+E189P+Y242F+E259G+G303 R,H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1* +E189P+Y242F+N279S+G303R,H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A,H1*+E189 P+Y242F+K280Y+G303R,H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A,H1*+E189P+Y24 2F+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y,H1*+E189P+E259G+N2 79S+G303R,H1*+E189P+E259G+N279S+E390A,H1*+E189P+E259G+K280Y+G 3 0 3R, H1*+E18 9P+E2 5 9G+K2 8 0Y+E3 90A,H1* + E18 9P+E2 5 9G+G3 0 3R+E3 90A, H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R,H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+E 189P+N279S+G303R+E390A,H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+ E259G+N279S+K280Y,H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+Y242F+E259G +N279S+E390A,H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+Y242F+E259G+K280 Y+E390A,H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1*+Y242F+N279S+K280Y+G30 3R,H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1 *+Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+E25 9G+N279S+K280Y+E390A,H1*+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+E259G+K2 80Y+G303R+E390A,H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y 242F+E259G,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S,G7A+W140Y+E189P+Y242F+ K280Y,G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A ,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S,G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y,G7A+ W140Y+E189P+E259G+G303R,G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A,G7A+W140Y +E189P+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189 P+N279S+E390A,G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+K28 0Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N2 79S,G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R,G 7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,G7A+W1 40Y+Y242F+N279S+G303R,G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A,G7A+W140Y+Y 242F+K280Y+G303R,G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y242F+ G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E259G+N279S +G303R,G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A,G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303 R,G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A,G7A +W140Y+N279S+K280Y+G303R,G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140 Y+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y24 2F+E259G+N279S,G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y,G7A+E189P+Y242F+E2 59G+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A,G7A+E189P+Y242F+N279S+K 280Y,G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R,G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A, G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A,G7A+E 189P+Y242F+G303R+E390A,G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y,G7A+E189P+ E259G+N279S+G303R,G7A+E189P+E259G+N279S+E390A,G7A+E189P+E259G +K280Y+G303R,G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A,G7A+E189P+E259G+G303 R+E390A,G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+N279S+K280Y+E39 0A,G7A+E189P+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A,G7 A+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R,G7A+Y24 2F+E259G+N279S+E390A,G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R,G7A+Y242F+E2 59G+K280Y+E390A,G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A,G7A+Y242F+N279S+K 280Y+G303R,G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+Y242F+N279S+G303R+ E390A,G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R ,G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+ E259G+K280Y+G303R+E390A,G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+N279S,W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,W140Y+E189 P+Y242F+E259G+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A,W140Y+E189P +Y242F+N279S+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R,W140Y+E189P+ Y242F+N279S+E390A,W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y 242F+K280Y+E390A,W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,W140Y+E189P+E2 59G+N279S+K280Y,W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,W140Y+E189P+E25 9G+N279S+E390A,W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E189P+E259 G+K280Y+E390A,W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,W140Y+E189P+N279S +K280Y+G303R,W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E189P+N279S+ G303R+E390A,W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N 279S+K280Y,W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R,W140Y+Y242F+E259G+N2 79S+E390A,W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+E259G+K28 0Y+E390A,W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A,W140Y+Y242F+N279S+K280 Y+G303R,W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A,W140Y+Y242F+N279S+G303R +E390A,W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E259G+N279S+K280Y+ G303R,W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E259G+N279S+G303R+E 390A,W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,W140Y+N279S+K280Y+G303R+E3 90A,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,E189P+Y242F+E259G+N279S+G30 3R,E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303 R,E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A ,E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R,E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A,E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,E 189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,E1 89P+E259G+N279S+G303R+E390A,E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A,E18 9P+N279S+K280Y+G303R+E390A,Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,Y242 F+E259G+N279S+K280Y+E390A,Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,Y242F +E259G+K280Y+G303R+E390A,Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,E259G+ N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0460] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 10, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G30 3R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+ N279S,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+E25 9G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+ N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E18 9P+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+ E189P+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A,H1*+G7A+W14 0Y+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+ W140Y+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A,H1*+G 7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R,H1 *+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R ,H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E3 90A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S +G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+K2 80Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G +G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+N2 79S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y +K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+E1 89P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A +E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1*+ G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A,H 1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390 A,H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K 280Y,H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+E259G+N279 S+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+E259G+K 280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+N279 S+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+N 279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242 F+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+Y 242F+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7 A+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1* +G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E39 0A,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+ E390A,H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E259G+K280Y+G30 3R+E390A,H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242 F+E259G+N279S,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+W1 40Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R ,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280 Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y24 2F+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E1 89P+E259G+N279S+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A,H1*+W 140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390 A,H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+N279S+K28 0Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+N2 79S+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+ W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G30 3R,H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+G3 03R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R,H1*+W140Y+Y242F+N 279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+W140Y+ Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1* +W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E3 90A,H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+N279S+K280Y+G 303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+E189P+Y242F+ E259G+N279S+G303R,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,H1*+E189P +Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1 *+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G 303R,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+ G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G +N279S+K280Y+G303R,H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+E189 P+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A,H 1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+ G3 03R,H1*+Y2 4 2F+E2 5 9G+N2 7 9S+K2 8 0Y+E3 9 0A, H1*+Y2 4 2F+E2 5 9G+N2 7 9S +G303R+E390A,H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+N279 S+K280Y+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W14 0Y+E189P+Y242F+E259G+N279S,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G +E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E189P+Y242 F+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A,G7A+W140Y+E18 9P+Y242F+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A,G7A+W1 40Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y ,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279 S+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+E25 9G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,G7A+W140Y+E1 89P+N279S+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,G7A+W 140Y+E189P+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390 A,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N27 9S+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E2 59G+K280Y+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y 242F+E259G+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R,G7A+ W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E39 0A,G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+N279S+K2 80Y+G303R,G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E259G+N 279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+ N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A +E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E3 90A,G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+K 280Y+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+ N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+E189P +Y242F+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7 A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E 390A,G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+E259G+K280Y+ G303R+E390A,G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R,G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+Y242 F+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,G 7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+ E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+E 259G+N279S+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,W140Y+E1 89P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E39 0A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+N279 S+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E189P +Y242F+N279S+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,W140Y+E189P+E259G+N279S+K 280Y+E390A,W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A,W140Y+E189P+E2 59G+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,W14 0Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280 Y+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G +K280Y+G303R+E390A,W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,W140Y+ E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G 303R,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,E189P+Y242F+E259G+N2 79S+G303R+E390A,E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,E189P+Y24 2F+N279S+K280Y+G303R+E390A,E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390 A,Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, usando SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0461] Em um aspecto, variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 10, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y24 2F+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0462] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 10, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N2 79S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A +W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242 F+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G30 3R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+ E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y +G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+ G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E 259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+ E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W14 0Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N2 79S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,H 1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242 F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G30 3R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+ E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G +N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390 A,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+ G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1* +W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y +G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1 *+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280 Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,G 7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+ Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K28 0Y+G3 03R+E3 9 0A, G7A+W14 0Y+E18 9P+Y2 4 2F+N2 7 9S+K2 8 0Y+G3 0 3R+E3 90A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F +E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K2 80Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E39 0A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0463] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 10, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W14 0Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K 280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+ E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G 7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K2 80Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0464] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 10, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E 390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0465] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 11, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+D118T, H1*+W140Y, H1*+T182S, H1*+A185D, H1*+E189P, H1*+Y242F, H1*+E259G, H1*+F266Y, H1*+N279S, H1*+K280Y, H1*+G303R, H1*+E390A, H1*+G475K, H1*+A185Q, H1*+N194F, D118T+W140Y, D118T+T182S, D118T+A185D, D118T+E189P, D118T+Y242F, D118T+E259G, D118T+F266Y, D118T+N279S,D118T+K280Y,D118T+G303R,D118T+E390A,D118T+G475K,D 118T+A185Q,D118T+N194F,W140Y+T182S,W140Y+A185D,W140Y+E189P,W1 40Y+Y242F,W140Y+E259G,W140Y+F266Y,W140Y+N279S,W140Y+K280Y,W14 0Y+G303R,W140Y+E390A,W140Y+G475K,W140Y+A185Q,W140Y+N194F,T182 S+A185D,T182S+E189P,T182S+Y242F,T182S+E259G,T182S+F266Y,T182S +N279S,T182S+K280Y,T182S+G303R,T182S+E390A,T182S+G475K,T182S+ A185Q,T182S+N194F,A185D+E189P,A185D+Y242F,A185D+E259G,A185D+F 266Y,A185D+N279S,A185D+K280Y,A185D+G303R,A185D+E390A,A185D+G4 75K,A185D+A185Q,A185D+N194F,E189P+Y242F,E189P+E259G,E189P+F26 6Y,E189P+N279S,E189P+K280Y,E189P+G303R,E189P+E390A,E189P+G475 K,E189P+A185Q,E189P+N194F,Y242F+E259G,Y242F+F266Y,Y242F+N279S ,Y242F+K280Y,Y242F+G303R,Y242F+E390A,Y242F+G475K,Y242F+A185Q, Y242F+N194F,E259G+F266Y,E259G+N279S,E259G+K280Y,E259G+G303R,E 259G+E390A,E259G+G475K,E259G+A185Q,E259G+N194F,F266Y+N279S,F2 66Y+K280Y,F266Y+G303R,F266Y+E390A,F266Y+G475K,F266Y+A185Q,F26 6Y+N194F,N279+K280Y,N279S+G303R,N279S+E390A,N279S+G475K,N279S +A185Q,N279S+N194F,K280Y+G303R,K280Y+E390A,K280Y+G475K,K280Y+ A185Q,K280Y+N194F,G303R+E390A,G303R+G475K,G303R+A185Q,G303R+N 194F,E390A+G475K,E390A+A185Q,E390A+N194F,G475K+A185Q,G475K+N1 94F, A185Q+N194F, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0466] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 11, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+D118T+W140Y, H1*+D118T+T182S, H1*+D118T+A185D, H1*+W140Y+E259G, H1*+W140Y+F266Y,H1*+W140Y+N279S,H1*+W140Y+K280Y,H1*+W140Y+G30 3R,H1*+W140Y+E390A,H1*+W140Y+G475K,H1*+W140Y+A185Q,H1*+W140Y+ N194F,H1*+T182S+A185D,H1*+T182S+E189P,H1*+T182S+Y242F,H1*+T18 2S+E259G,H1*+T182S+F266Y,H1*+T182S+N279S,H1*+T182S+K280Y,H1*+ T182S+G303R,H1*+T182S+E390A,H1*+T182S+G475K,H1*+T182S+A185Q,H 1*+T182S+N194F,H1*+A185D+E189P,H1*+A185D+Y242F,H1*+A185D+E259 G,H1*+A185D+F266Y,H1*+A185D+N279S,H1*+A185D+K280Y,H1*+A185D+G 303R,H1*+A185D+E390A,H1*+A185D+G475K,H1*+A185D+A185Q,H1*+A185 D+N194F,H1*+E189P+Y242F,H1*+E189P+E259G,H1*+E189P+F266Y,H1*+E 189P+N279S,H1*+E189P+K280Y,H1*+E189P+G303R,H1*+E189P+E390A,H1 *+E189P+G475K,H1*+E189P+A185Q,H1*+E189P+N194F,H1*+Y242F+E259G ,H1*+Y242F+F266Y,H1*+Y242F+N279S,H1*+Y242F+K280Y,H1*+Y242F+G3 03R,H1*+Y242F+E390A,H1*+Y242F+G475K,H1*+Y242F+A185Q,H1*+Y242F +N194F,H1*+E259G+F266Y,H1*+E259G+N279S,H1*+E259G+K280Y,H1*+E2 59G+G303R,H1*+E259G+E390A,H1*+E259G+G475K,H1*+E259G+A185Q,H1* +E259G+N194F,H1*+F266Y+N279S,H1*+F266Y+K280Y,H1*+F266Y+G303R, H1*+F266Y+E390A,H1*+F266Y+G475K,H1*+F266Y+A185Q,H1*+F266Y+N19 4F,H1*+N279S+K280Y,H1*+N279S+G303R,H1*+N279S+E390A,H1*+N279S+ G475K,H1*+N279S+A185Q,H1*+N279S+N194F,H1*+K280Y+G303R,H1*+K28 0Y+E3 90A,H1*+K2 8 0Y+G4 7 5K,H1*+K2 8 0Y+A18 5Q,H1*+K2 8 0Y+N194F, H1* + G3 03R+E3 90A,H1*+G3 03R+G4 7 5K,H1* + G3 03R+A18 5Q,H1*+G3 03R+N19 4F, H 1*+E390A+G475K,H1*+E390A+A185Q,H1*+E390A+N194F,H1*+G475K+A185 Q,H1*+G475K+N194F,H1*+A185Q+N194F,D118T+W140Y+T182S,D118T+W14 0Y+A185D,D118T+W140Y+E189P,D118T+W140Y+Y242F,D118T+W140Y+E259 G,D118T+W140Y+F266Y,D118T+W140Y+N279S,D118T+W140Y+K280Y,D118T +W140Y+G303R,D118T+W140Y+E390A,D118T+W140Y+G475K,D118T+W140Y+ A185Q,D118T+W140Y+N194F,D118T+T182S+A185D,D118T+T182S+E189P,D 118T+T182S+Y242F,D118T+T182S+E259G,D118T+T182S+F266Y,D118T+T1 82S+N279S,D118T+T182S+K280Y,D118T+T182S+G303R,D118T+T182S+E39 0A,D118T+T182S+G475K,D118T+T182S+A185Q,D118T+T182S+N194F,D118 T+A185D+E189P,D118T+A185D+Y242F,D118T+A185D+E259G,D118T+A185D +F266Y,D118T+A185D+N279S,D118T+A185D+K280Y,D118T+A185D+G303R, D118T+A185D+E390A,D118T+A185D+G475K,D118T+A185D+A185Q,D118T+A 185D+N194F,D118T+E189P+Y242F,D118T+E189P+E259G,D118T+E189P+F2 66Y,D118T+E189P+N279S,D118T+E189P+K280Y,D118T+E189P+G303R,D11 8T+E189P+E390A,D118T+E189P+G475K,D118T+E189P+A185Q,D118T+E189 P+N194F,D118T+Y242F+E259G,D118T+Y242F+F266Y,D118T+Y242F+N279S ,D118T+Y242F+K280Y,D118T+Y242F+G303R,D118T+Y242F+E390A, D118T + Y242F+G475K,D118T+Y242F+A185Q,D118T+Y242F+N194F,D118T+E259G+F 266Y,D118T+E259G+N279S,D118T+E259G+K280Y,D118T+E259G+G303R,D1 18T+E259G+E390A,D118T+E259G+G475K,D118T+E259G+A185Q,D118T+E25 9G+N194F,D118T+F266Y+N279S,D118T+F266Y+K280Y,D118T+F266Y+G303 R,D118T+F266Y+E390A,D118T+F266Y+G475K,D118T+F266Y+A185Q,D118T +F266Y+N194F,D118T+N279S+K280Y,D118T+N279S+G303R,D118T+N279S+ E390A,D118T+N279S+G475K,D118T+N279S+A185Q,D118T+N279S+N194F,D 118T+K280Y+G303R,D118T+K280Y+E390A,D118T+K280Y+G475K,D118T+K2 80Y+A185Q,D118T+K280Y+N194F,D118T+G303R+E390A,D118T+G303R+G47 5K,D118T+G303R+A185Q,D118T+G303R+N194F,D118T+E390A+G475K,D118 T+E390A+A185Q,D118T+E390A+N194F,D118T+G475K+A185Q,D118T+G475K +N194F,D118T+A185Q+N194F,W140Y+T182S+A185D,W140Y+T182S+E189P, W140Y+T182S+Y242F,W140Y+T182S+E259G,W140Y+T182S+F266Y,W140Y+T 182S+N279S,W140Y+T182S+K280Y,W140Y+T182S+G303R,W140Y+T182S+E3 90A,W140Y+T182S+G475K,W140Y+T182S+A185Q,W140Y+T182S+N194F,W14 0Y+A185D+E189P,W140Y+A185D+Y242F,W140Y+A185D+E259G,W140Y+A185 D+F266Y,W140Y+A185D+N279S,W140Y+A185D+K280Y,W140Y+A185D+G303R ,W140Y+A185D+E390A,W140Y+A185D+G475K,W140Y+A185D+A185Q,W140Y+ A185D+N194F,W140Y+E189P+Y242F,W140Y+E189P+E259G,W140Y+E189P+F 266Y,W140Y+E189P+N279S,W140Y+E189P+K280Y,W140Y+E189P+G303R,W1 40Y+E189P+E390A,W140Y+E189P+G475K,W140Y+E189P+A185Q,W140Y+E18 9P+N194F,W140Y+Y242F+E259G,W140Y+Y242F+F266Y,W140Y+Y242F+N279 S,W140Y+Y242F+K280Y,W140Y+Y242F+G303R,W140Y+Y242F+E390A,W140Y +Y242F+G475K,W140Y+Y242F+A185Q,W140Y+Y242F+N194F,W140Y+E259G+ F266Y,W140Y+E259G+N279S,W140Y+E259G+K280Y,W140Y+E259G+G303R,W 140Y+E259G+E390A,W140Y+E259G+G475K,W140Y+E259G+A185Q,W140Y+E2 59G+N194F,W140Y+F266Y+N279S,W140Y+F266Y+K280Y,W140Y+F266Y+G30 3R,W140Y+F266Y+E390A,W140Y+F266Y+G475K,W140Y+F266Y+A185Q,W140 Y+F266Y+N194F,W140Y+N279S+K280Y,W140Y+N279S+G303R,W140Y+N279S +E390A,W140Y+N279S+G475K,W140Y+N279S+A185Q,W140Y+N279S+N194F, W140Y+K280Y+G303R,W140Y+K280Y+E390A,W140Y+K280Y+G475K,W140Y+K 280Y+A185Q,W140Y+K280Y+N194F,W140Y+G303R+E390A,W140Y+G303R+G4 75K,W140Y+G303R+A185Q,W140Y+G303R+N194F,W140Y+E390A+G475K,W14 0Y+E390A+A185Q,W140Y+E390A+N194F,W140Y+G475K+A185Q,W140Y+G475 K+N194F,W140Y+A185Q+N194F,T182S+A185D+E189P,T182S+A185D+Y242F ,T182S+A185D+E259G,T182S+A185D+F266Y,T182S+A185D+N279S,T182S+ A185D+K280Y,T182S+A185D+G303R,T182S+A185D+E390A,T182S+A185D+G 45K,T182S+A185D+A185Q,T182S+A185D+N194F,T182S+E189P+Y242F,T18 2S+E189P+E259G,T182S+E189P+F266Y,T182S+E189P+N279S,T182S+E189 P+K280Y,T182S+E189P+G303R,T182S+E189P+E390A,T182S+E189P+G475K ,T182S+E189P+A185Q,T182S+E189P+N194F,T182S+Y242F+E259G,T182S+ Y242F+F266Y,T182S+Y242F+N279S,T182S+Y242F+K280Y,T182S+Y242F+G 303R,T182S+Y242F+E390A,T182S+Y242F+G475K,T182S+Y242F+A185Q,T1 82S+Y242F+N194F,T182S+E259G+F266Y,T182S+E259G+N279S,T182S+E25 9G+K280Y,T182S+E259G+G303R,T182S+E259G+E390A,T182S+E259G+G475 K,T182S+E259G+A185Q,T182S+E259G+N194F,T182S+F266Y+N279S,T182S +F266Y+K280Y,T182S+F266Y+G303R,T182S+F266Y+E390A,T182S+F266Y+ G475K,T182S+F266Y+A185Q,T182S+F266Y+N194F,T182S+N279S+K280Y,T 182S+N279S+G303R,T182S+N279S+E390A,T182S+N279S+G475K,T182S+N2 79S+A185Q,T182S+N279S+N194F,T182S+K280Y+G303R,T182S+K280Y+E39 0A,T182S+K280Y+G475K,T182S+K280Y+A185Q,T182S+K280Y+N194F,T182 S+G303R+E390A,T182S+G303R+G475K,T182S+G303R+A185Q,T182S+G303R +N194F,T182S+E390A+G475K,T182S+E390A+A185Q,T182S+E390A+N194F, T182S+G475K+A185Q,T182S+G475K+N194F,T182S+A185Q+N194F,A185D+E 189P+Y242F,A185D+E189P+E259G,A185D+E189P+F266Y,A185D+E189P+N2 79S,A185D+E189P+K280Y,A185D+E189P+G303R,A185D+E189P+E390A,A18 5D+E189P+G475K,A185D+E189P+A185Q,A185D+E189P+N194F,A185D+Y242 F+E259G,A185D+Y242F+F266Y,A185D+Y242F+N279S,A185D+Y242F+K280Y ,A185D+Y242F+G303R,A185D+Y242F+E390A,A185D+Y242F+G475K,A185D+ Y242F+A185Q,A185D+Y242F+N194F,A185D+E259G+F266Y,A185D+E259G+N 279S,A185D+E259G+K280Y,A185D+E259G+G303R,A185D+E259G+E390A,A1 85D+E259G+G475K,A185D+E259G+A185Q,A185D+E259G+N194F,A185D+F26 6Y+N279S,A185D+F266Y+K280Y,A185D+F266Y+G303R,A185D+F266Y+E390 A,A185D+F266Y+G475K,A185D+F266Y+A185Q,A185D+F266Y+N194F,A185D +N279S+K280Y,A185D+N279S+G303R,A185D+N279S+E390A,A185D+N279S+ G475K,A185D+N279S+A185Q,A185D+N279S+N194F,A185D+K280Y+G303R,A 185D+K280Y+E390A,A185D+K280Y+G475K,A185D+K280Y+A185Q,A185D+K2 80Y+N194F,A185D+G303R+E390A,A185D+G303R+G475K,A185D+G303R+A18 5Q,A185D+G303R+N194F,A185D+E390A+G475K,A185D+E390A+A185Q,A185 D+E390A+N194F,A185D+G475K+A185Q,A185D+G475K+N194F,A185D+A185Q +N194F,E189P+Y242F+E259G,E189P+Y242F+F266Y,E189P+Y242F+N279S, E189P+Y242F+K280Y,E189P+Y242F+G303R,E189P+Y242F+E390A,E189P+Y 242F+G475K,E189P+Y242F+A185Q,E189P+Y242F+N194F,E189P+E259G+F2 66Y,E189P+E259G+N279S,E189P+E259G+K280Y,E189P+E259G+G303R,E18 9P+E259G+E390A,E189P+E259G+G475K,E189P+E259G+A185Q,E189P+E259 G+N194F,E189P+F266Y+N279S,E189P+F266Y+K280Y,E189P+F266Y+G303R ,E189P+F266Y+E390A,E189P+F266Y+G475K,E189P+F266Y+A185Q,E189P+ F266Y+N194F,E189P+N279S+K280Y,E189P+N279S+G303R,E189P+N279S+E 390A,E189P+N279S+G475K,E189P+N279S+A185Q,E189P+N279S+N194F,E1 89P+K280Y+G303R,E189P+K280Y+E390A,E189P+K280Y+G475K,E189P+K28 0Y+A185Q,E189P+K280Y+N194F,E189P+G303R+E390A,E189P+G303R+G475 K,E189P+G303R+A185Q,E189P+G303R+N194F,E189P+E390A+G475K,E189P +E390A+A185Q,E189P+E390A+N194F,E189P+G475K+A185Q,E189P+G475K+ N194F,E189P+A185Q+N194F,Y242F+E259G+F266Y,Y242F+E259G+N279S,Y 242F+E259G+K280Y,Y242F+E259G+G303R,Y242F+E259G+E390A,Y242F+E2 59G+G475K,Y242F+E259G+A185Q,Y242F+E259G+N194F,Y242F+F266Y+N27 9S,Y242F+F266Y+K280Y,Y242F+F266Y+G303R,Y242F+F266Y+E390A,Y242 F+F266Y+G475K,Y242F+F266Y+A185Q,Y242F+F266Y+N194F,Y242F+N279S +K280Y,Y242F+N279S+G303R,Y242F+N279S+E390A,Y242F+N279S+G475K, Y242F+N279S+A185Q,Y242F+N279S+N194F,Y242F+K280Y+G303R,Y242F+K 280Y+E390A,Y242F+K280Y+G475K,Y242F+K280Y+A185Q,Y242F+K280Y+N1 94F,Y242F+G303R+E390A,Y242F+G303R+G475K,Y242F+G303R+A185Q,Y24 2F+G303R+N194F,Y242F+E390A+G475K,Y242F+E390A+A185Q,Y242F+E390 A+N194F,Y242F+G475K+A185Q,Y242F+G475K+N194F,Y242F+A185Q+N194F ,E259G+F266Y+N279S,E259G+F266Y+K280Y,E259G+F266Y+G303R,E259G+ F266Y+E390A,E259G+F266Y+G475K,E259G+F266Y+A185Q,E259G+F266Y+N 194F,E259G+N279S+K280Y,E259G+N279S+G303R,E259G+N279S+E390A,E2 59G+N279S+G475K,E259G+N279S+A185Q,E259G+N279S+N194F,E259G+K28 0Y+G303R,E259G+K280Y+E390A,E259G+K280Y+G475K,E259G+K280Y+A185 Q,E259G+K280Y+N194F,E259G+G303R+E390A,E259G+G303R+G475K,E259G +G303R+A185Q,E259G+G303R+N194F,E259G+E390A+G475K,E259G+E390A+ A185Q,E259G+E390A+N194F,E259G+G475K+A185Q,E259G+G475K+N194F,E 259G+A185Q+N194F,F266Y+N279S+K280Y,F266Y+N279S+G303R,F266Y+N2 79S+E390A,F266Y+N279S+G475K,F266Y+N279S+A185Q,F266Y+N279S+N19 4F,F266Y+K280Y+G303R,F266Y+K280Y+E390A,F266Y+K280Y+G475K,F266 Y+K280Y+A185Q,F266Y+K280Y+N194F,F266Y+G303R+E390A,F266Y+G303R +G475K,F266Y+G303R+A185Q,F266Y+G303R+N194F,F266Y+E390A+G475K, F266Y+E390A+A185Q,F266Y+E390A+N194F,F266Y+G475K+A185Q,F266Y+G 475K+N194F,F266Y+A185Q+N194F,N279S+K280Y+G303R,N279S+K280Y+E3 90A,N279S+K280Y+G475K,N279S+K280Y+A185Q,N279S+K280Y+N194F,N27 9S+G303R+E390A,N279S+G303R+G475K,N279S+G303R+A185Q,N279S+G303 R+N194F,N279S+E390A+G475K,N279S+E390A+A185Q,N279S+E390A+N194F ,N279S+G475K+A185Q, N279S+G475K+N194F,N279S+A185Q+N194F,K280Y+G303R+E39 0A,K280Y+G303R+G475K,K280Y+G303R+A185Q,K280Y+G303R+N194F,K280 Y+E390A+G475K,K280Y+E390A+A185Q,K280Y+E390A+N194F,K280Y+G475K +A185Q,K280Y+G475K+N194F,K280Y+A185Q+N194F,G303R+E390A+G475K, G303R+E390A+A185Q,G303R+E390A+N194F,G303R+G475K+A185Q,G303R+G 475K+N194F,G303R+A185Q+N194F,E390A+G475K+A185Q,E390A+G475K+N1 94F,E390A+A185Q+N194F,G475K+A185Q+N194F, usando a SEQ ID NO: menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0467] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 11, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P, H1*+G7A+W140Y+Y242F, H1*+G7A+W140Y+E259G, H1*+G7A+W140Y+N279S, H1*+G7A+W140Y+K280Y, H1*+G7A+W140Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F,H1*+G7A+E189P+E259G,H1*+G7A+E189P+N279S,H 1*+G7A+E189P+K280Y,H1*+G7A+E189P+G303R,H1*+G7A+E189P+E390A,H1 *+G7A+Y242F+E259G,H1*+G7A+Y242F+N279S,H1*+G7A+Y242F+K280Y,H1* +G7A+Y242F+G303R,H1*+G7A+Y242F+E390A,H1*+G7A+E259G+N279S,H1*+ G7A+E259G+K280Y,H1*+G7A+E259G+G303R,H1*+G7A+E259G+E390A,H1*+G 7A+N279S+K280Y,H1*+G7A+N279S+G303R,H1*+G7A+N279S+E390A,H1*+G7 A+K280Y+G303R,H1*+G7A+K280Y+E390A,H1*+G7A+G303R+E390A,H1*+W14 0Y+E189P+Y242F,H1*+W140Y+E189P+E259G,H1*+W140Y+E189P+N279S,H1 *+W140Y+E189P+K280Y,H1*+W140Y+E189P+G303R,H1*+W140Y+E189P+E39 0A,H1*+W140Y+Y242F+E259G,H1*+W140Y+Y242F+N279S,H1*+W140Y+Y242 F+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+G303R,H1*+W140Y+Y242F+E390A,H1*+W140Y +E259G+N279S,H1*+W140Y+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E259G+G303R,H1*+ W140Y+E259G+E390A,H1*+W140Y+N279S+K280Y,H1*+W140Y+N279S+G303R ,H1*+W140Y+N279S+E390A,H1*+W140Y+K280Y+G303R,H1*+W140Y+K280Y+ E390A,H1*+W140Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G,H1*+E189P+Y 242F+N279S,H1*+E189P+Y242F+K280Y,H1*+E189P+Y242F+G303R,H1*+E1 89P+Y242F+E390A,H1*+E189P+E259G+N279S,H1*+E189P+E259G+K280Y,H 1*+E189P+E259G+G303R,H1*+E189P+E259G+E390A,H1*+E189P+N279S+K2 80Y,H1*+E189P+N279S+G303R,H1*+E189P+N279S+E390A,H1*+E189P+K28 0Y+G303R,H1*+E189P+K280Y+E390A,H1*+E189P+G303R+E390A,H1*+Y242 F+E259G+N279S,H1*+Y242F+E259G+K280Y,H1*+Y242F+E259G+G303R,H1* +Y242F+E259G+E390A,H1*+Y242F+N279S+K280Y,H1*+Y242F+N279S+G303 R,H1*+Y242F+N279S+E390A,H1*+Y242F+K280Y+G303R,H1*+Y242F+K280Y +E390A,H1*+Y242F+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y,H1*+E259G+ N279S+G303R,H1*+E259G+N279S+E390A,H1*+E259G+K280Y+G303R,H1*+E 259G+K280Y+E390A,H1*+E259G+G303R+E390A,H1*+N279S+K280Y+G303R, H1*+N279S+K280Y+E390A,H1*+N279S+G303R+E390A,H1*+K280Y+G303R+E 390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F,G7A+W140Y+E189P+E259G,G7A+W140Y+E1 89P+N279S,G7A+W140Y+E189P+K280Y,G7A+W140Y+E189P+G303R,G7A+W14 0Y+E189P+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E259G,G7A+W140Y+Y242F+N279S,G7 A+W140Y+Y242F+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E39 0A,G7A+W140Y+E259G+N279S,G7A+W140Y+E259G+K280Y,G7A+W140Y+E259 G+G303R,G7A+W140Y+E259G+E390A,G7A+W140Y+N279S+K280Y,G7A+W140Y +N279S+G303R,G7A+W140Y+N279S+E390A,G7A+W140Y+K280Y+G303R,G7A+ W140Y+K280Y+E390A,G7A+W140Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G ,G7A+E189P+Y242F+N279S,G7A+E189P+Y242F+K280Y,G7A+E189P+Y242F+ G303R,G7A+E189P+Y242F+E390A,G7A+E189P+E259G+N279S,G7A+E189P+E 259G+K280Y,G7A+E189P+E259G+G303R,G7A+E189P+E259G+E390A,G7A+E1 89P+N279S+K280Y,G7A+E189P+N279S+G303R,G7A+E189P+N279S+E390A,G 7A+E189P+K280Y+G303R,G7A+E189P+K280Y+E390A,G7A+E189P+G303R+E3 90A,G7A+Y242F+E259G+N279S,G7A+Y242F+E259G+K280Y,G7A+Y242F+E25 9G+G303R,G7A+Y242F+E259G+E390A,G7A+Y242F+N279S+K280Y,G7A+Y242 F+N279S+G303R,G7A+Y242F+N279S+E390A,G7A+Y242F+K280Y+G303R,G7A +Y242F+K280Y+E390A,G7A+Y242F+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280 Y,G7A+E259G+N279S+G303R,G7A+E259G+N279S+E390A,G7A+E259G+K280Y +G303R,G7A+E259G+K280Y+E390A,G7A+E259G+G303R+E390A,G7A+N279S+ K280Y+G303R,G7A+N279S+K280Y+E390A,G7A+N279S+G303R+E390A,G7A+K 280Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G,W140Y+E189P+Y242F+N2 79S,W140Y+E189P+Y242F+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+G303R,W140Y+E18 9P+Y242F+E390A,W140Y+E189P+E259G+N279S,W140Y+E189P+E259G+K280 Y,W140Y+E189P+E259G+G303R,W140Y+E189P+E259G+E390A,W140Y+E189P +N279S+K280Y,W140Y+E189P+N279S+G303R,W140Y+E189P+N279S+E390A, W140Y+E189P+K280Y+G303R,W140Y+E189P+K280Y+E390A,W140Y+E189P+G 303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N279S,W140Y+Y242F+E259G+K280Y,W1 40Y+Y242F+E259G+G303R,W140Y+Y242F+E259G+E390A,W140Y+Y242F+N27 9S+K280Y,W140Y+Y242F+N279S+G303R,W140Y+Y242F+N279S+E390A,W140 Y+Y242F+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+K280Y+E390A,W140Y+Y242F+G303R +E390A,W140Y+E259G+N279S+K280Y,W140Y+E259G+N279S+G303R,W140Y+ E259G+N279S+E390A,W140Y+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E259G+K280Y+E 390A,W140Y+E259G+G303R+E390A,W140Y+N279S+K280Y+G303R,W140Y+N2 79S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A,W140Y+K280Y+G303R+E390 A,E189P+Y242F+E259G+N279S,E189P+Y242F+E259G+K280Y,E189P+Y242F +E259G+G303R,E189P+Y242F+E259G+E390A,E189P+Y242F+N279S+K280Y, E189P+Y242F+N279S+G303R,E189P+Y242F+N279S+E390A,E189P+Y242F+K 280Y+G303R,E189P+Y242F+K280Y+E390A,E189P+Y242F+G303R+E390A,E1 89P+E259G+N279S+K280Y,E189P+E259G+N279S+G303R,E189P+E259G+N27 9S+E390A,E189P+E259G+K280Y+G303R,E189P+E259G+K280Y+E390A,E189 P+E259G+G303R+E390A,E189P+N279S+K280Y+G303R,E189P+N279S+K280Y +E390A,E189P+N279S+G303R+E390A,E189P+K280Y+G303R+E390A,Y242F+ E259G+N279S+K280Y,Y242F+E259G+N279S+G303R,Y242F+E259G+N279S+E 390A,Y242F+E259G+K280Y+G303R,Y242F+E259G+K280Y+E390A,Y242F+E2 59G+G303R+E390A,Y242F+N279S+K280Y+G303R,Y242F+N279S+K280Y+E39 0A,Y242F+N279S+G303R+E390A,Y242F+K280Y+G303R+E390A,E259G+N279 S+K280Y+G303R,E259G+N279S+K280Y+E390A,E259G+N279S+G303R+E390A ,E259G+K280Y+G303R+E390A,N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0468] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 11, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G, Petição 870230111758, de 18/12/2023, pág. 390/914 378/845 H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S, H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y, H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S,H1*+G7A+W 140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G +E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R,H1 *+G7A+W140Y+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R,H1*+G7A+W14 0Y+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+ E259G,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S,H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y,H1* +G7A+E189P+Y242F+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A,H1*+G7A+E189 P+E259G+N279S,H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y,H1*+G7A+E189P+E259G+G 303R,H1*+G7A+E189P+E259G+E390A,H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y,H1*+ G7A+E189P+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+N279S+E390A,H1*+G7A+E189P +K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+G303R+E3 90A,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G 7A+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A,H1*+G7A+Y242F+ N279S+K280Y,H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R,H1*+G7A+Y242F+N279S+E39 0A,H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R,H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A,H1*+G7 A+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+E259G+N 279S+G303R,H1*+G7A+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+E259G+K280Y+G303 R,H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A +N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+N279S+G3 03R+E390A,H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E25 9G,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y,H1 *+W140Y+E189P+Y242F+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A,H1*+W14 0Y+E189P+E259G+N279S,H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E1 89P+E259G+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A,H1*+W140Y+E189P+N 279S+K280Y,H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R,H1*+W140Y+E189P+N279S+ E390A,H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A ,H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S,H1*+ W140Y+Y242F+E259G+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R,H1*+W140Y +Y242F+E259G+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,H1*+W140Y+Y242 F+N279S+G303R,H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A,H1*+W140Y+Y242F+K28 0Y+G303R,H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+G303R+E3 90A,H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R,H 1*+W140Y+E259G+N279S+E390A,H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R,H1*+W1 40Y+E259G+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A,H1*+W140Y+N 279S+K280Y+G303R,H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+N279S+ G303R+E390A,H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G +N279S,H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+E189P+Y242F+E259G+G303 R,H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1* +E189P+Y242F+N279S+G303R,H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A,H1*+E189 P+Y242F+K280Y+G303R,H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A,H1*+E189P+Y24 2F+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y,H1*+E189P+E259G+N2 79S+G303R,H1*+E189P+E259G+N279S+E390A,H1*+E189P+E259G+K280Y+G 303R,H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A,H1*+E189P+E259G+G303R+E390A, H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R,H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+E 189P+N279S+G303R+E390A,H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+ E259G+N279S+K280Y,H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+Y242F+E259G +N279S+E390A,H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+Y242F+E259G+K280 Y+E390A,H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1*+Y242F+N279S+K280Y+G30 3R,H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1 *+Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+E25 9G+N279S+K280Y+E390A,H1*+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+E259G+K2 80Y+G303R+E390A,H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y 242F+E259G,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S,G7A+W140Y+E189P+Y242F+ K280Y,G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A ,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S,G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y,G7A+ W140Y+E189P+E259G+G303R,G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A,G7A+W140Y +E189P+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189 P+N279S+E390A,G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+K28 0Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N2 79S,G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R,G 7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,G7A+W1 40Y+Y242F+N279S+G303R,G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A,G7A+W140Y+Y 242F+K280Y+G303R,G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y242F+ G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E259G+N279S +G303R,G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A,G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303 R,G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A,G7A +W140Y+N279S+K280Y+G303R,G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140 Y+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y24 2F+E259G+N279S,G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y,G7A+E189P+Y242F+E2 59G+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A,G7A+E189P+Y242F+N279S+K 280Y,G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R,G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A, G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A,G7A+E 189P+Y242F+G303R+E390A,G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y,G7A+E189P+ E259G+N279S+G303R,G7A+E189P+E259G+N279S+E390A,G7A+E189P+E259G +K280Y+G303R,G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A,G7A+E189P+E259G+G303 R+E390A,G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+N279S+K280Y+E39 0A,G7A+E189P+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A,G7 A+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R,G7A+Y24 2F+E259G+N279S+E390A,G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R,G7A+Y242F+E2 59G+K280Y+E390A,G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A,G7A+Y242F+N279S+K 280Y+G303R,G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+Y242F+N279S+G303R+ E390A,G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R ,G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+ E259G+K280Y+G303R+E390A,G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+N279S,W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,W140Y+E189 P+Y242F+E259G+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A,W140Y+E189P +Y242F+N279S+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R,W140Y+E189P+ Y242F+N279S+E390A,W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y 242F+K280Y+E390A,W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,W140Y+E189P+E2 59G+N279S+K280Y,W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,W140Y+E189P+E25 9G+N279S+E390A,W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E189P+E259 G+K280Y+E390A,W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,W140Y+E189P+N279S +K280Y+G303R,W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E189P+N279S+ G303R+E390A,W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N 279S+K280Y,W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R,W140Y+Y242F+E259G+N2 79S+E390A,W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+E259G+K28 0Y+E390A,W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A,W140Y+Y242F+N279S+K280 Y+G303R,W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A,W140Y+Y242F+N279S+G303R +E390A,W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E259G+N279S+K280Y+ G303R,W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E259G+N279S+G303R+E 390A,W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,W140Y+N279S+K280Y+G303R+E3 90A,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,E189P+Y242F+E259G+N279S+G30 3R,E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303 R,E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A ,E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R,E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A,E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,E 189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,E1 89P+E259G+N279S+G303R+E390A,E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A,E18 9P+N279S+K280Y+G303R+E390A,Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,Y242 F+E259G+N279S+K280Y+E390A,Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,Y242F +E259G+K280Y+G303R+E390A,Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,E259G+ N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0469] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 11, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G30 3R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+ N279S,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+E25 9G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+ N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E18 9P+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+ E189P+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A,H1*+G7A+W14 0Y+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+ W140Y+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A,H1*+G 7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R,H1 *+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R ,H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E3 90A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S +G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+K2 80Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G +G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+N2 79S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y +K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+E1 89P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A +E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1*+ G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A,H 1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390 A,H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K 280Y,H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+E259G+N279 S+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+E259G+K 280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+N279 S+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+N 279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242 F+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+Y 242F+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7 A+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1* +G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E39 0A,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+ E390A,H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E259G+K280Y+G30 3R+E390A,H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242 F+E259G+N279S,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+W1 40Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R ,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280 Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y24 2F+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E1 89P+E259G+N279S+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A,H1*+W 140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390 A,H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+N279S+K28 0Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+N2 7 9S+G3 0 3R+E3 90A,H1*+W14 0Y+E18 9P+K2 8 0Y+G3 03R+E3 9 0A, H1*+W14 0Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+ W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G30 3R,H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+G3 03R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R,H1*+W140Y+Y242F+N 279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+W140Y+ Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1* +W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E3 90A,H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+N279S+K280Y+G 303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+E189P+Y242F+ E259G+N279S+G303R,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,H1*+E189P +Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1 *+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G 303R,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+ G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G +N279S+K280Y+G303R,H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+E189 P+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A,H 1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+ G303R,H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+Y242F+E259G+N279S +G303R+E390A,H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+N279 S+K280Y+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W14 0Y+E189P+Y242F+E259G+N279S,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G +E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E189P+Y242 F+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A,G7A+W140Y+E18 9P+Y242F+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A,G7A+W1 40Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y ,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279 S+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+E25 9G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,G7A+W140Y+E1 89P+N279S+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,G7A+W 140Y+E189P+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390 A,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N27 9S+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E2 59G+K280Y+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A, G7A+W14 0Y+Y 242F+E259G+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R,G7A+ W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E39 0A,G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+N279S+K2 80Y+G303R,G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E259G+N 279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+ N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A +E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E3 90A,G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+K 280Y+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+ N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+E189P +Y2 4 2F+N2 7 9S+G3 03R+E3 9 0A,G7A+E18 9P+Y2 4 2F+K2 8 0Y+G3 03R+E3 90A, G7 A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E 390A,G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+E259G+K280Y+ G303R+E390A,G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R,G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+Y242 F+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,G 7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+ E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+E 259G+N279S+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,W140Y+E1 89P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E39 0A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+N279 S+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E189P +Y242F+N279S+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,W140Y+E189P+E259G+N279S+K 280Y+E390A,W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A,W140Y+E189P+E2 59G+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,W14 0Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280 Y+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G +K280Y+G303R+E390A,W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,W140Y+ E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G 303R,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,E189P+Y242F+E259G+N2 79S+G303R+E390A,E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,E189P+Y24 2F+N279S+K280Y+G303R+E390A,E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390 A,Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0470] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 11, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y24 2F+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0471] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 11, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N2 79S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A +W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242 F+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G30 3R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+ E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y +G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+ G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E 259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+ E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W14 0Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N2 79S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,H 1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242 F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G30 3R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+ E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G +N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390 A,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+ G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1* +W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y +G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1 *+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280 Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,G 7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+ Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K28 0Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F +E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K2 80Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E39 0A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0472] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 11, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W14 0Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K 280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+ E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G 7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K2 80Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0473] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 11, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E 390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0474] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 12, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+D118T, H1*+W140Y, H1*+T182S, H1*+A185D, H1*+E189P, H1*+Y242F, H1*+E259G, H1*+F266Y, H1*+N279S, H1*+K280Y, H1*+G303R, H1*+E390A, H1*+G475K, H1*+A185Q, H1*+N194F, D118T+W140Y, D118T+T182S, D118T+A185D, D118T+E189P, D118T+Y242F, D118T+E259G, D118T+F266Y, D118T+N279S,D118T+K280Y,D118T+G303R,D118T+E390A,D118T+G475K,D 118T+A185Q,D118T+N194F,W140Y+T182S,W140Y+A185D,W140Y+E189P,W1 40Y+Y242F,W140Y+E259G,W140Y+F266Y,W140Y+N279S,W140Y+K280Y,W14 0Y+G303R,W140Y+E390A,W140Y+G475K,W140Y+A185Q,W140Y+N194F,T182 S+A185D,T182S+E189P,T182S+Y242F,T182S+E259G,T182S+F266Y,T182S +N279S,T182S+K280Y,T182S+G303R,T182S+E390A,T182S+G475K,T182S+ A185Q,T182S+N194F,A185D+E189P,A185D+Y242F,A185D+E259G,A185D+F 266Y,A185D+N279S,A185D+K280Y,A185D+G303R,A185D+E390A,A185D+G4 75K,A185D+A185Q,A185D+N194F,E189P+Y242F,E189P+E259G,E189P+F26 6Y,E189P+N279S,E189P+K280Y,E189P+G303R,E189P+E390A,E189P+G475 K,E189P+A185Q,E189P+N194F,Y242F+E259G,Y242F+F266Y,Y242F+N279S ,Y242F+K280Y,Y242F+G303R,Y242F+E390A,Y242F+G475K,Y242F+A185Q, Y242F+N194F,E259G+F266Y,E259G+N279S,E259G+K280Y,E259G+G303R,E 259G+E390A,E259G+G475K,E259G+A185Q,E259G+N194F,F266Y+N279S,F2 66Y+K280Y,F266Y+G303R,F266Y+E390A,F266Y+G475K,F266Y+A185Q,F26 6Y+N194F,N279+K280Y,N279S+G303R,N279S+E390A,N279S+G475K,N279S +A185Q,N279S+N194F,K280Y+G303R,K280Y+E390A,K280Y+G475K,K280Y+ A185Q,K280Y+N194F,G303R+E390A,G303R+G475K,G303R+A185Q,G303R+N 194F,E390A+G475K,E390A+A185Q,E390A+N194F,G475K+A185Q,G475K+N1 94F, A185Q+N194F, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0475] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 12, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+D118T+W140Y, H1*+D118T+T182S, H1*+D118T+A185D H1*+W140Y+E259G, H1*+W140Y+F266Y,H1*+W140Y+N279S,H1*+W140Y+K280Y,H1*+W140Y+G30 3R,H1*+W140Y+E390A,H1*+W140Y+G475K,H1*+W140Y+A185Q,H1*+W140Y+ N194F,H1*+T182S+A185D,H1*+T182S+E189P,H1*+T182S+Y242F,H1*+T18 2S+E259G,H1*+T182S+F266Y,H1*+T182S+N279S,H1*+T182S+K280Y,H1*+ T182S+G303R,H1*+T182S+E390A,H1*+T182S+G475K,H1*+T182S+A185Q,H 1*+T182S+N194F,H1*+A185D+E189P,H1*+A185D+Y242F,H1*+A185D+E259 G,H1*+A185D+F266Y,H1*+A185D+N279S,H1*+A185D+K280Y,H1*+A185D+G 303R,H1*+A185D+E390A,H1*+A185D+G475K,H1*+A185D+A185Q,H1*+A185 D+N194F,H1*+E189P+Y242F,H1*+E189P+E259G,H1*+E189P+F266Y,H1*+E 189P+N279S,H1*+E189P+K280Y,H1*+E189P+G303R,H1*+E189P+E390A,H1 *+E189P+G475K,H1*+E189P+A185Q,H1*+E189P+N194F,H1*+Y242F+E259G ,H1*+Y242F+F266Y,H1*+Y242F+N279S,H1*+Y242F+K280Y,H1*+Y242F+G3 03R,H1*+Y242F+E390A,H1*+Y242F+G475K,H1*+Y242F+A185Q,H1*+Y242F +N194F,H1*+E259G+F266Y,H1*+E259G+N279S,H1*+E259G+K280Y,H1*+E2 59G+G303R,H1*+E259G+E390A,H1*+E259G+G475K,H1*+E259G+A185Q,H1* +E259G+N194F,H1*+F266Y+N279S,H1*+F266Y+K280Y,H1*+F266Y+G303R, H1*+F266Y+E390A,H1*+F266Y+G475K,H1*+F266Y+A185Q,H1*+F266Y+N19 4F,H1*+N279S+K280Y,H1*+N279S+G303R,H1*+N279S+E390A,H1*+N279S+ G475K,H1*+N279S+A185Q,H1*+N279S+N194F,H1*+K280Y+G303R,H1*+K28 0Y+E390A,H1*+K280Y+G475K,H1*+K280Y+A185Q,H1*+K280Y+N194F,H1*+ G303R+E390A,H1*+G303R+G475K,H1*+G303R+A185Q,H1*+G303R+N194F,H 1*+E390A+G475K,H1*+E390A+A185Q,H1*+E390A+N194F,H1*+G475K+A185 Q,H1*+G475K+N194F,H1*+A185Q+N194F,D118T+W140Y+T182S,D118T+W14 0Y+A185D,D118T+W140Y+E189P,D118T+W140Y+Y242F,D118T+W140Y+E259 G,D118T+W140Y+F266Y,D118T+W140Y+N279S,D118T+W140Y+K280Y,D118T +W140Y+G303R,D118T+W140Y+E390A,D118T+W140Y+G475K,D118T+W140Y+ A185Q,D118T+W140Y+N194F,D118T+T182S+A185D,D118T+T182S+E189P,D 118T+T182S+Y242F,D118T+T182S+E259G,D118T+T182S+F266Y,D118T+T1 82S+N279S,D118T+T182S+K280Y,D118T+T182S+G303R,D118T+T182S+E39 0A,D118T+T182S+G475K,D118T+T182S+A185Q,D118T+T182S+N194F,D118 T+A185D+E189P,D118T+A185D+Y242F,D118T+A185D+E259G,D118T+A185D +F266Y,D118T+A185D+N279S,D118T+A185D+K280Y,D118T+A185D+G303R, D118T+A185D+E390A,D118T+A185D+G475K,D118T+A185D+A185Q,D118T+A 185D+N194F,D118T+E189P+Y242F,D118T+E189P+E259G,D118T+E189P+F2 66Y,D118T+E189P+N279S,D118T+E189P+K280Y,D118T+E189P+G303R,D11 8T+E189P+E390A,D118T+E189P+G475K,D118T+E189P+A185Q,D118T+E189 P+N194F,D118T+Y242F+E259G,D118T+Y242F+F266Y,D118T+Y242F+N279S ,D118T+Y242F+K280Y,D118T+Y242F+G303R,D118T+Y242F+E390A,D118T+ Y242F+G475K,D118T+Y242F+A185Q,D118T+Y242F+N194F,D118T+E259G+F 266Y,D118T+E259G+N279S,D118T+E259G+K280Y,D118T+E259G+G303R,D1 18T+E259G+E390A,D118T+E259G+G475K,D118T+E259G+A185Q,D118T+E25 9G+N194F,D118T + F2 66Y+N27 9S,D118T + F2 66Y+K2 8 0Y, D118T + F2 6 6Y+G3 03 R,D118T+F266Y+E390A,D118T+F266Y+G475K,D118T+F266Y+A185Q,D118T +F266Y+N194F,D118T+N279S+K280Y,D118T+N279S+G303R,D118T+N279S+ E390A,D118T+N279S+G475K,D118T+N279S+A185Q,D118T+N279S+N194F,D 118T+K280Y+G303R,D118T+K280Y+E390A,D118T+K280Y+G475K,D118T+K2 80Y+A185Q,D118T+K280Y+N194F,D118T+G303R+E390A,D118T+G303R+G47 5K,D118T+G303R+A185Q,D118T+G303R+N194F,D118T+E390A+G475K,D118 T+E390A+A185Q,D118T+E390A+N194F,D118T+G475K+A185Q,D118T+G475K +N194F,D118T+A185Q+N194F,W140Y+T182S+A185D,W140Y+T182S+E189P, W140Y+T182S+Y242F,W140Y+T182S+E259G,W140Y+T182S+F266Y,W140Y+T 182S+N279S,W140Y+T182S+K280Y,W140Y+T182S+G303R,W140Y+T182S+E3 90A,W140Y+T182S+G475K,W140Y+T182S+A185Q,W140Y+T182S+N194F,W14 0Y+A185D+E189P,W140Y+A185D+Y242F,W140Y+A185D+E259G,W140Y+A185 D+F266Y,W140Y+A185D+N279S,W140Y+A185D+K280Y,W140Y+A185D+G303R ,W140Y+A185D+E390A,W140Y+A185D+G475K,W140Y+A185D+A185Q,W140Y+ A185D+N194F,W140Y+E189P+Y242F,W140Y+E189P+E259G,W140Y+E189P+F 266Y,W140Y+E189P+N279S,W140Y+E189P+K280Y,W140Y+E189P+G303R,W1 40Y+E189P+E390A,W140Y+E189P+G475K,W140Y+E189P+A185Q,W140Y+E18 9P+N194F,W140Y+Y242F+E259G,W140Y+Y242F+F266Y,W140Y+Y242F+N279 S,W140Y+Y242F+K280Y,W140Y+Y242F+G303R,W140Y+Y242F+E390A,W140Y +Y242F+G475K,W140Y+Y242F+A185Q,W140Y+Y242F+N194F,W140Y+E259G+ F266Y,W140Y+E259G+N279S,W140Y+E259G+K280Y,W140Y+E259G+G303R,W 140Y+E259G+E390A,W140Y+E259G+G475K,W140Y+E259G+A185Q,W140Y+E2 59G+N194F,W140Y+F266Y+N279S,W140Y+F266Y+K280Y,W140Y+F266Y+G30 3R,W140Y+F266Y+E390A,W140Y+F266Y+G475K,W140Y+F266Y+A185Q,W140 Y+F266Y+N194F,W140Y+N279S+K280Y,W140Y+N279S+G303R,W140Y+N279S +E390A,W140Y+N279S+G475K,W140Y+N279S+A185Q,W140Y+N279S+N194F, W140Y+K280Y+G303R,W140Y+K280Y+E390A,W140Y+K280Y+G475K,W140Y+K 280Y+A185Q,W140Y+K280Y+N194F,W140Y+G303R+E390A,W140Y+G303R+G4 75K,W140Y+G303R+A185Q,W140Y+G303R+N194F,W140Y+E390A+G475K,W14 0Y+E390A+A185Q,W140Y+E390A+N194F,W140Y+G475K+A185Q,W140Y+G475 K+N194F,W140Y+A185Q+N194F,T182S+A185D+E189P,T182S+A185D+Y242F ,T182S+A185D+E259G,T182S+A185D+F266Y,T182S+A185D+N279S,T182S+ A185D+K280Y,T182S+A185D+G303R,T182S+A185D+E390A,T182S+A185D+G 45K,T182S+A185D+A185Q,T182S+A185D+N194F,T182S+E189P+Y242F,T18 2S+E189P+E259G,T182S+E189P+F266Y,T182S+E189P+N279S,T182S+E189 P+K280Y,T182S+E189P+G303R,T182S+E189P+E390A,T182S+E189P+G475K ,T182S+E189P+A185Q,T182S+E189P+N194F,T182S+Y242F+E259G,T182S+ Y242F+F266Y,T182S+Y242F+N279S,T182S+Y242F+K280Y,T182S+Y242F+G 303R,T182S+Y242F+E390A,T182S+Y242F+G475K,T182S+Y242F+A185Q,T1 82S+Y242F+N194F,T182S+E259G+F266Y,T182S+E259G+N279S,T182S+E25 9G+K280Y,T182S+E259G+G303R,T182S+E259G+E390A,T182S+E259G+G475 K,T182S+E259G+A185Q,T182S+E259G+N194F,T182S+F266Y+N279S,T182S +F266Y+K280Y,T182S+F266Y+G303R,T182S+F266Y+E390A,T182S+F266Y+ G475K,T182S+F266Y+A185Q,T182S+F266Y+N194F,T182S+N279S+K280Y,T 182S+N279S+G303R,T182S+N279S+E390A,T182S+N279S+G475K,T182S+N2 79S+A185Q,T182S+N279S+N194F,T182S+K280Y+G303R,T182S+K280Y+E39 0A,T182S+K280Y+G475K,T182S+K280Y+A185Q,T182S+K280Y+N194F,T182 S+G303R+E390A,T182S+G303R+G475K,T182S+G303R+A185Q,T182S+G303R +N194F,T182S+E390A+G475K,T182S+E390A+A185Q,T182S+E390A+N194F, T182S+G475K+A185Q,T182S+G475K+N194F,T182S+A185Q+N194F,A185D+E 189P+Y242F,A185D+E189P+E259G,A185D+E189P+F266Y,A185D+E189P+N2 79S,A185D+E189P+K280Y,A185D+E189P+G303R,A185D+E189P+E390A,A18 5D+E189P+G475K,A185D+E189P+A185Q,A185D+E189P+N194F,A185D+Y242 F+E259G,A185D+Y242F+F266Y,A185D+Y242F+N279S,A185D+Y242F+K280Y ,A185D+Y242F+G303R,A185D+Y242F+E390A,A185D+Y242F+G475K,A185D+ Y242F+A185Q,A185D+Y242F+N194F,A185D+E259G+F266Y,A185D+E259G+N 279S,A185D+E259G+K280Y,A185D+E259G+G303R,A185D+E259G+E390A,A1 85D+E259G+G475K,A185D+E259G+A185Q,A185D+E259G+N194F,A185D+F26 6Y+N279S,A185D+F266Y+K280Y,A185D+F266Y+G303R,A185D+F266Y+E390 A,A185D+F266Y+G475K,A185D+F266Y+A185Q,A185D+F266Y+N194F,A185D +N279S+K280Y,A185D+N279S+G303R,A185D+N279S+E390A,A185D+N279S+ G475K,A185D+N279S+A185Q,A185D+N279S+N194F,A185D+K280Y+G303R,A 185D+K280Y+E390A,A185D+K280Y+G475K,A185D+K280Y+A185Q,A185D+K2 80Y+N194F,A185D+G303R+E390A,A185D+G303R+G475K,A185D+G303R+A18 5Q,A185D+G303R+N194F,A185D+E390A+G475K,A185D+E390A+A185Q,A185 D+E390A+N194F,A185D+G475K+A185Q,A185D+G475K+N194F,A185D+A185Q +N194F,E189P+Y242F+E259G,E189P+Y242F+F266Y,E189P+Y242F+N279S, E189P+Y242F+K280Y,E189P+Y242F+G303R,E189P+Y242F+E390A,E189P+Y 242F+G475K,E189P+Y242F+A185Q,E189P+Y242F+N194F,E189P+E259G+F2 66Y,E189P+E259G+N279S,E189P+E259G+K280Y,E189P+E259G+G303R,E18 9P+E259G+E390A,E189P+E259G+G475K,E189P+E259G+A185Q,E189P+E259 G+N194F,E189P+F266Y+N279S,E189P+F266Y+K280Y,E189P+F266Y+G303R ,E189P+F266Y+E390A,E189P+F266Y+G475K,E189P+F266Y+A185Q,E189P+ F266Y+N194F,E189P+N279S+K280Y,E189P+N279S+G303R,E189P+N279S+E 390A,E189P+N279S+G475K,E189P+N279S+A185Q,E189P+N279S+N194F,E1 89P+K280Y+G303R,E189P+K280Y+E390A,E189P+K280Y+G475K,E189P+K28 0Y+A185Q,E189P+K280Y+N194F,E189P+G303R+E390A,E189P+G303R+G475 K,E189P+G303R+A185Q,E189P+G303R+N194F,E189P+E390A+G475K,E189P +E390A+A185Q,E189P+E390A+N194F,E189P+G475K+A185Q,E189P+G475K+ N194F,E189P+A185Q+N194F,Y242F+E259G+F266Y,Y242F+E259G+N279S,Y 242F+E259G+K280Y,Y242F+E259G+G303R,Y242F+E259G+E390A,Y242F+E2 59G+G475K,Y242F+E259G+A185Q,Y242F+E259G+N194F,Y242F+F266Y+N27 9S,Y242F+F266Y+K280Y,Y242F+F266Y+G303R,Y242F+F266Y+E390A,Y242 F+F266Y+G475K,Y242F+F266Y+A185Q,Y242F+F266Y+N194F,Y242F+N279S +K280Y,Y242F+N279S+G303R,Y242F+N279S+E390A,Y242F+N279S+G475K, Y242F+N279S+A185Q,Y242F+N279S+N194F,Y242F+K280Y+G303R,Y242F+K 280Y+E390A,Y242F+K280Y+G475K,Y242F+K280Y+A185Q,Y242F+K280Y+N1 94F,Y242F+G303R+E390A,Y242F+G303R+G475K,Y242F+G303R+A185Q,Y24 2F+G303R+N194F,Y242F+E390A+G475K,Y242F+E390A+A185Q,Y242F+E390 A+N194F,Y242F+G475K+A185Q,Y242F+G475K+N194F,Y242F+A185Q+N194F ,E259G+F266Y+N279S,E259G+F266Y+K280Y,E259G+F266Y+G303R,E259G+ F266Y+E390A,E259G+F266Y+G475K,E259G+F266Y+A185Q,E259G+F266Y+N 194F,E259G+N279S+K280Y,E259G+N279S+G303R,E259G+N279S+E390A,E2 59G+N279S+G475K,E259G+N279S+A185Q,E259G+N279S+N194F,E259G+K28 0Y+G303R,E259G+K280Y+E390A,E259G+K280Y+G475K,E259G+K280Y+A185 Q,E259G+K280Y+N194F,E259G+G303R+E390A,E259G+G303R+G475K,E259G +G303R+A185Q,E259G+G303R+N194F,E259G+E390A+G475K,E259G+E390A+ A185Q,E259G+E390A+N194F,E259G+G475K+A185Q,E259G+G475K+N194F,E 259G+A185Q+N194F,F266Y+N279S+K280Y,F266Y+N279S+G303R,F266Y+N2 79S+E390A,F266Y+N279S+G475K,F266Y+N279S+A185Q,F266Y+N279S+N19 4F,F266Y+K280Y+G303R,F266Y+K280Y+E390A,F266Y+K280Y+G475K,F266 Y+K280Y+A185Q,F266Y+K280Y+N194F,F266Y+G303R+E390A,F266Y+G303R +G475K,F266Y+G303R+A185Q,F266Y+G303R+N194F,F266Y+E390A+G475K, F266Y+E390A+A185Q,F266Y+E390A+N194F,F266Y+G475K+A185Q,F266Y+G 475K+N194F,F266Y+A185Q+N194F,N279S+K280Y+G303R,N279S+K280Y+E3 90A,N279S+K280Y+G475K,N279S+K280Y+A185Q,N279S+K280Y+N194F,N27 9S+G303R+E390A,N279S+G303R+G475K,N279S+G303R+A185Q,N279S+G303 R+N194F,N279S+E390A+G475K,N279S+E390A+A185Q,N279S+E390A+N194F ,N279S+G475K+A185Q, N279S+G475K+N194F,N279S+A185Q+N194F,K280Y+G303R+E39 0A,K280Y+G303R+G475K,K280Y+G303R+A185Q,K280Y+G303R+N194F,K280 Y+E390A+G475K,K280Y+E390A+A185Q,K280Y+E390A+N194F,K280Y+G475K +A185Q,K280Y+G475K+N194F,K280Y+A185Q+N194F,G303R+E390A+G475K, G303R+E390A+A185Q,G303R+E390A+N194F,G303R+G475K+A185Q,G303R+G 475K+N194F,G303R+A185Q+N194F,E390A+G475K+A185Q,E390A+G475K+N1 94F,E390A+A185Q+N194F,G475K+A185Q+N194F, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0476] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 12, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P, H1*+G7A+W140Y+Y242F, H1*+G7A+W140Y+E259G, H1*+G7A+W140Y+N279S, H1*+G7A+W140Y+K280Y, H1*+G7A+W140Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F,H1*+G7A+E189P+E259G,H1*+G7A+E189P+N279S,H 1*+G7A+E189P+K280Y,H1*+G7A+E189P+G303R,H1*+G7A+E189P+E390A,H1 *+G7A+Y242F+E259G,H1*+G7A+Y242F+N279S,H1*+G7A+Y242F+K280Y,H1* +G7A+Y242F+G303R,H1*+G7A+Y242F+E390A,H1*+G7A+E259G+N279S,H1*+ G7A+E259G+K280Y,H1*+G7A+E259G+G303R,H1*+G7A+E259G+E390A,H1*+G 7A+N279S+K280Y,H1*+G7A+N279S+G303R,H1*+G7A+N279S+E390A,H1*+G7 A+K280Y+G303R,H1*+G7A+K280Y+E390A,H1*+G7A+G303R+E390A,H1*+W14 0Y+E189P+Y242F,H1*+W140Y+E189P+E259G,H1*+W140Y+E189P+N279S,H1 *+W140Y+E189P+K280Y,H1*+W140Y+E189P+G303R,H1*+W140Y+E189P+E39 0A,H1*+W140Y+Y242F+E259G,H1*+W140Y+Y242F+N279S,H1*+W140Y+Y242 F+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+G303R,H1*+W140Y+Y242F+E390A,H1*+W140Y +E259G+N279S,H1*+W140Y+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E259G+G303R,H1*+ W140Y+E259G+E390A,H1*+W140Y+N279S+K280Y,H1*+W140Y+N279S+G303R ,H1*+W140Y+N279S+E390A,H1*+W140Y+K280Y+G303R,H1*+W140Y+K280Y+ E390A,H1*+W140Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G, H1*+E18 9P+Y 242F+N279S,H1*+E189P+Y242F+K280Y,H1*+E189P+Y242F+G303R, H1*+E1 89P+Y242F+E390A,H1*+E189P+E259G+N279S,H1*+E189P+E259G+K280Y,H 1*+E189P+E259G+G303R,H1*+E189P+E259G+E390A,H1*+E189P+N279S+K2 80Y,H1*+E189P+N279S+G303R,H1*+E189P+N279S+E390A,H1*+E189P+K28 0Y+G303R,H1*+E189P+K280Y+E390A,H1*+E189P+G303R+E390A,H1*+Y242 F+E259G+N279S,H1*+Y242F+E259G+K280Y,H1*+Y242F+E259G+G303R,H1* +Y242F+E259G+E390A,H1*+Y242F+N279S+K280Y,H1*+Y242F+N279S+G303 R,H1*+Y242F+N279S+E390A,H1*+Y242F+K280Y+G303R,H1*+Y242F+K280Y +E390A,H1*+Y242F+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y,H1*+E259G+ N279S+G303R,H1*+E259G+N279S+E390A,H1*+E259G+K280Y+G303R,H1*+E 259G+K280Y+E390A,H1*+E259G+G303R+E390A,H1*+N279S+K280Y+G303R, H1*+N279S+K280Y+E390A,H1*+N279S+G303R+E390A,H1*+K280Y+G303R+E 390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F,G7A+W140Y+E189P+E259G,G7A+W140Y+E1 89P+N279S,G7A+W140Y+E189P+K280Y,G7A+W140Y+E189P+G303R,G7A+W14 0Y+E189P+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E259G,G7A+W140Y+Y242F+N279S,G7 A+W140Y+Y242F+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E39 0A,G7A+W140Y+E259G+N279S,G7A+W140Y+E259G+K280Y,G7A+W140Y+E259 G+G303R,G7A+W140Y+E259G+E390A,G7A+W140Y+N279S+K280Y,G7A+W140Y +N279S+G303R,G7A+W140Y+N279S+E390A,G7A+W140Y+K280Y+G303R,G7A+ W140Y+K280Y+E390A,G7A+W140Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G ,G7A+E189P+Y242F+N279S,G7A+E189P+Y242F+K280Y,G7A+E189P+Y242F+ G303R,G7A+E189P+Y242F+E390A,G7A+E189P+E259G+N279S,G7A+E189P+E 259G+K280Y,G7A+E189P+E259G+G303R,G7A+E189P+E259G+E390A,G7A+E1 89P+N279S+K280Y,G7A+E189P+N279S+G303R,G7A+E189P+N279S+E390A,G 7A+E189P+K280Y+G303R,G7A+E189P+K280Y+E390A,G7A+E189P+G303R+E3 90A,G7A+Y242F+E259G+N279S,G7A+Y242F+E259G+K280Y,G7A+Y242F+E25 9G+G303R,G7A+Y242F+E259G+E390A,G7A+Y242F+N279S+K280Y,G7A+Y242 F+N279S+G303R,G7A+Y242F+N279S+E390A,G7A+Y242F+K280Y+G303R,G7A +Y242F+K280Y+E390A,G7A+Y242F+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280 Y,G7A+E259G+N279S+G303R,G7A+E259G+N279S+E390A,G7A+E259G+K280Y +G303R,G7A+E259G+K280Y+E390A,G7A+E259G+G303R+E390A,G7A+N279S+ K280Y+G303R,G7A+N279S+K280Y+E390A,G7A+N279S+G303R+E390A,G7A+K 280Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G,W140Y+E189P+Y242F+N2 79S,W140Y+E189P+Y242F+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+G303R,W140Y+E18 9P+Y242F+E390A,W140Y+E189P+E259G+N279S,W140Y+E189P+E259G+K280 Y,W140Y+E189P+E259G+G303R,W140Y+E189P+E259G+E390A,W140Y+E189P +N279S+K280Y,W140Y+E189P+N279S+G303R,W140Y+E189P+N279S+E390A, W140Y+E189P+K280Y+G303R,W140Y+E189P+K280Y+E390A,W140Y+E189P+G 303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N279S,W140Y+Y242F+E259G+K280Y,W1 40Y+Y242F+E259G+G303R,W140Y+Y242F+E259G+E390A,W140Y+Y242F+N27 9S+K280Y,W140Y+Y242F+N279S+G303R,W140Y+Y242F+N279S+E390A,W140 Y+Y242F+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+K280Y+E390A,W140Y+Y242F+G303R +E390A,W140Y+E259G+N279S+K280Y,W140Y+E259G+N279S+G303R,W140Y+ E259G+N279S+E390A,W140Y+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E259G+K280Y+E 390A,W140Y+E259G+G303R+E390A,W140Y+N279S+K280Y+G303R,W140Y+N2 79S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A,W140Y+K280Y+G303R+E390 A,E189P+Y242F+E259G+N279S,E189P+Y242F+E259G+K280Y,E189P+Y242F +E259G+G303R,E189P+Y242F+E259G+E390A,E189P+Y242F+N279S+K280Y, E189P+Y242F+N279S+G303R,E189P+Y242F+N279S+E390A,E189P+Y242F+K 280Y+G303R,E189P+Y242F+K280Y+E390A,E189P+Y242F+G303R+E390A,E1 89P+E259G+N279S+K280Y,E189P+E259G+N279S+G303R,E189P+E259G+N27 9S+E390A,E189P+E259G+K280Y+G303R,E189P+E259G+K280Y+E390A,E189 P+E259G+G303R+E390A,E189P+N279S+K280Y+G303R,E189P+N279S+K280Y +E390A,E189P+N279S+G303R+E390A,E189P+K280Y+G303R+E390A,Y242F+ E259G+N279S+K280Y,Y242F+E259G+N279S+G303R,Y242F+E259G+N279S+E 390A,Y242F+E259G+K280Y+G303R,Y242F+E259G+K280Y+E390A,Y242F+E2 59G+G303R+E390A,Y242F+N279S+K280Y+G303R,Y242F+N279S+K280Y+E39 0A,Y242F+N279S+G303R+E390A,Y242F+K280Y+G303R+E390A,E259G+N279 S+K280Y+G303R,E259G+N279S+K280Y+E390A,E259G+N279S+G303R+E390A ,E259G+K280Y+G303R+E390A,N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0477] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 12, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S, H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y, H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S,H1*+G7A+W 140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G +E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R,H1 *+G7A+W140Y+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R,H1*+G7A+W14 0Y+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+ E259G,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S,H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y,H1* +G7A+E189P+Y242F+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A,H1*+G7A+E189 P+E259G+N279S,H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y,H1*+G7A+E189P+E259G+G 303R,H1*+G7A+E189P+E259G+E390A,H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y,H1*+ G7A+E189P+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+N279S+E390A,H1*+G7A+E189P +K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+G303R+E3 90A,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G 7A+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A,H1*+G7A+Y242F+ N279S+K280Y,H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R,H1*+G7A+Y242F+N279S+E39 0A,H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R,H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A,H1*+G7 A+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+E259G+N 279S+G303R,H1*+G7A+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+E259G+K280Y+G303 R,H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A +N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+N279S+G3 03R+E390A,H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E25 9G,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y,H1 *+W140Y+E189P+Y242F+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A,H1*+W14 0Y+E189P+E259G+N279S,H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E1 89P+E259G+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A,H1*+W140Y+E189P+N 279S+K280Y,H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R,H1*+W140Y+E189P+N279S+ E390A,H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A ,H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S,H1*+ W140Y+Y242F+E259G+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R,H1*+W140Y +Y242F+E259G+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,H1*+W140Y+Y242 F+N279S+G303R,H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A,H1*+W140Y+Y242F+K28 0Y+G303R,H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+G303R+E3 90A,H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R,H 1*+W140Y+E259G+N279S+E390A,H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R,H1*+W1 40Y+E259G+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A,H1*+W140Y+N 279S+K280Y+G303R,H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+N279S+ G303R+E390A,H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G +N279S,H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+E189P+Y242F+E259G+G303 R,H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1* +E189P+Y242F+N279S+G303R,H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A,H1*+E189 P+Y242F+K280Y+G303R,H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A,H1*+E189P+Y24 2F+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y,H1*+E189P+E259G+N2 79S+G303R,H1*+E189P+E259G+N279S+E390A,H1*+E189P+E259G+K280Y+G 303R,H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A,H1*+E189P+E259G+G303R+E390A, H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R,H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+E 189P+N279S+G303R+E390A,H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+ E259G+N279S+K280Y,H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+Y242F+E259G +N279S+E390A,H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+Y242F+E259G+K280 Y+E390A,H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1*+Y242F+N279S+K280Y+G30 3R,H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1 *+Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+E25 9G+N279S+K280Y+E390A,H1*+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+E259G+K2 80Y+G303R+E390A,H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y 242F+E259G,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S,G7A+W140Y+E189P+Y242F+ K280Y,G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A ,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S,G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y,G7A+ W140Y+E189P+E259G+G303R,G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A,G7A+W140Y +E189P+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189 P+N279S+E390A,G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+K28 0Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N2 79S,G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R,G 7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,G7A+W1 40Y+Y242F+N279S+G303R,G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A,G7A+W140Y+Y 242F+K280Y+G303R,G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y242F+ G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E259G+N279S +G3 03R,G7A+W14 0Y+E2 5 9G+N2 7 9S+E3 9 0A, G7A+W14 0Y+E2 5 9G+K2 8 0Y+G3 03 R,G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A,G7A +W140Y+N279S+K280Y+G303R,G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140 Y+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y24 2F+E259G+N279S,G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y,G7A+E189P+Y242F+E2 59G+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A,G7A+E189P+Y242F+N279S+K 280Y,G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R,G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A, G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A,G7A+E 189P+Y242F+G303R+E390A,G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y,G7A+E189P+ E259G+N279S+G303R,G7A+E189P+E259G+N279S+E390A,G7A+E189P+E259G +K280Y+G303R,G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A,G7A+E189P+E259G+G303 R+E390A,G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+N279S+K280Y+E39 0A,G7A+E189P+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A,G7 A+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R,G7A+Y24 2F+E259G+N279S+E390A,G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R,G7A+Y242F+E2 59G+K280Y+E390A,G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A,G7A+Y242F+N279S+K 280Y+G303R,G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+Y242F+N279S+G303R+ E390A,G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R ,G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+ E259G+K280Y+G303R+E390A,G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+N279S,W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,W140Y+E189 P+Y242F+E259G+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A,W140Y+E189P +Y242F+N279S+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R,W140Y+E189P+ Y242F+N279S+E390A,W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y 242F+K280Y+E390A,W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,W140Y+E189P+E2 59G+N279S+K280Y,W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,W140Y+E189P+E25 9G+N279S+E390A,W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E189P+E259 G+K280Y+E390A,W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,W140Y+E189P+N279S +K280Y+G303R,W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E189P+N279S+ G303R+E390A,W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N 279S+K280Y,W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R,W140Y+Y242F+E259G+N2 79S+E390A,W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+E259G+K28 0Y+E390A,W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A,W140Y+Y242F+N279S+K280 Y+G303R,W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A,W140Y+Y242F+N279S+G303R +E390A,W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E259G+N279S+K280Y+ G303R,W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E259G+N279S+G303R+E 390A,W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,W140Y+N279S+K280Y+G303R+E3 90A,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,E189P+Y242F+E259G+N279S+G30 3R,E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303 R,E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A ,E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R,E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A,E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,E 189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,E1 89P+E259G+N279S+G303R+E390A,E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A,E18 9P+N279S+K280Y+G303R+E390A,Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,Y242 F+E259G+N279S+K280Y+E390A,Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,Y242F +E259G+K280Y+G303R+E390A,Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,E259G+ N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0478] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 12, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G30 3R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+ N279S,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+E25 9G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+ N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E18 9P+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+ E189P+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A,H1*+G7A+W14 0Y+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+ W140Y+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A,H1*+G 7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R,H1 *+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R ,H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E3 90A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S +G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+K2 80Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G +G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+N2 79S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y +K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+E1 89P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A +E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1*+ G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A,H 1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390 A,H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K 280Y,H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+E259G+N279 S+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+E259G+K 280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+N279 S+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+N 279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242 F+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+Y 242F+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7 A+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1* +G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E39 0A,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+ E390A,H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E259G+K280Y+G30 3R+E390A,H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242 F+E259G+N279S,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E18 9P+Y2 4 2F+E2 5 9G+G3 03R,H1*+W14 0Y+E18 9P+Y2 4 2F+E2 5 9G+E3 9 0A, H1*+W1 40Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R ,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280 Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y24 2F+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E1 89P+E259G+N279S+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A,H1*+W 140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390 A,H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+N279S+K28 0Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+N2 79S+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+ W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G30 3R,H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+G3 03R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R,H1*+W140Y+Y242F+N 279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+W140Y+ Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1* +W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E3 90A,H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+N279S+K280Y+G 303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+E189P+Y242F+ E259G+N279S+G303R,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,H1*+E189P +Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1 *+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G 303R,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+ G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G +N279S+K280Y+G303R,H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+E189 P+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A,H 1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+ G303R,H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+Y242F+E259G+N279S +G303R+E390A,H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+N279 S+K280Y+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W14 0Y+E189P+Y242F+E259G+N279S,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G +E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E189P+Y242 F+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A,G7A+W140Y+E18 9P+Y242F+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A,G7A+W1 40Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y ,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279 S+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+E25 9G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,G7A+W140Y+E1 89P+N279S+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,G7A+W 140Y+E189P+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390 A,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N27 9S+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E2 59G+K280Y+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y 242F+E259G+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R,G7A+ W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E39 0A,G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+N279S+K2 80Y+G303R,G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E259G+N 279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+ N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A +E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E3 90A,G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+K 280Y+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+ N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+E189P +Y242F+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7 A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E 390A,G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+E259G+K280Y+ G303R+E390A,G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R,G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+Y242 F+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,G 7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+ E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+E 259G+N279S+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,W140Y+E1 89P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E39 0A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+N279 S+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E189P +Y242F+N279S+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,W140Y+E189P+E259G+N279S+K 280Y+E390A,W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A,W140Y+E189P+E2 59G+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,W14 0Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280 Y+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G +K280Y+G303R+E390A,W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,W140Y+ E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G 303R,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,E189P+Y242F+E259G+N2 79S+G303R+E390A,E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,E189P+Y24 2F+N279S+K280Y+G303R+E390A,E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390 A,Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0479] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 12, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y24 2F+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0480] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 12, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N2 79S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A +W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242 F+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G30 3R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+ E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y +G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+ G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E 259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+ E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W14 0Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N2 79S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,H 1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242 F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G30 3R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+ E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G +N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390 A,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+ G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1* +W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y +G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1 *+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280 Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,G 7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+ Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K28 0Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F +E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K2 80Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E39 0A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0481] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 12, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W14 0Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K 280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+ E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G 7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K2 80Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0482] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 12, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E 390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0483] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 13, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+D118T, H1*+W140Y, H1*+T182S, H1*+A185D, H1*+E189P, H1*+Y242F, H1*+E259G, H1*+F266Y, H1*+N279S, H1*+K280Y, H1*+G303R, H1*+E390A, H1*+G475K, H1*+A185Q, H1*+N194F, D118T+W140Y, D118T+T182S, D118T+A185D, D118T+E189P, D118T+Y242F, D118T+E259G, D118T+F266Y, D118T+N279S,D118T+K280Y,D118T+G303R,D118T+E390A,D118T+G475K,D 118T+A185Q,D118T+N194F,W140Y+T182S,W140Y+A185D,W140Y+E189P,W1 40Y+Y242F,W140Y+E259G,W140Y+F266Y,W140Y+N279S,W140Y+K280Y,W14 0Y+G303R,W140Y+E390A,W140Y+G475K,W140Y+A185Q,W140Y+N194F,T182 S+A185D,T182S+E189P,T182S+Y242F,T182S+E259G,T182S+F266Y,T182S +N279S,T182S+K280Y,T182S+G303R,T182S+E390A,T182S+G475K,T182S+ A185Q,T182S+N194F,A185D+E189P,A185D+Y242F,A185D+E259G,A185D+F 266Y,A185D+N279S,A185D+K280Y,A185D+G303R,A185D+E390A,A185D+G4 75K,A185D+A185Q,A185D+N194F,E189P+Y242F,E189P+E259G,E189P+F26 6Y,E189P+N279S,E189P+K280Y,E189P+G303R,E189P+E390A,E189P+G475 K,E189P+A185Q,E189P+N194F,Y242F+E259G,Y242F+F266Y,Y242F+N279S ,Y242F+K280Y,Y242F+G303R,Y242F+E390A,Y242F+G475K,Y242F+A185Q, Y242F+N194F,E259G+F266Y,E259G+N279S,E259G+K280Y,E259G+G303R,E 259G+E390A,E259G+G475K,E259G+A185Q,E259G+N194F,F266Y+N279S,F2 66Y+K280Y,F266Y+G303R,F266Y+E390A,F266Y+G475K,F266Y+A185Q,F26 6Y+N194F,N279+K280Y,N279S+G303R,N279S+E390A,N279S+G475K,N279S +A185Q,N279S+N194F,K280Y+G303R,K280Y+E390A,K280Y+G475K,K280Y+ A185Q,K280Y+N194F,G303R+E390A,G303R+G475K,G303R+A185Q,G303R+N 194F,E390A+G475K,E390A+A185Q,E390A+N194F,G475K+A185Q,G475K+N1 94F, A185Q+N194F, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0484] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 13, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+D118T+W140Y, H1*+D118T+T182S, H1*+D118T+A185D, H1*+D118T+E189P, H1*+D118T+Y242F, H1*+D118T+E259G, H1* + D118T + F266Y, H1* + D118T+N2 7 9S, H1* + D118T+K2 8 0Y, H1*+D118T+G303R, H1*+D118T+E390A, H1*+D118T+G475K, H1* + D118T+A185Q, H1* + D118T+N194F, H1*+W14 0Y+T18 2S, H1*+W140Y+A185D, H1*+W140Y+E189P, H1*+W140Y+Y242F, H1*+W140Y+E259G, H1*+W140Y+F266Y,H1*+W140Y+N279S,H1*+W140Y+K280Y,H1*+W140Y+G30 3R,H1*+W140Y+E390A,H1*+W140Y+G475K,H1*+W140Y+A185Q,H1*+W140Y+ N194F,H1*+T182S+A185D,H1*+T182S+E189P,H1*+T182S+Y242F,H1*+T18 2S+E259G,H1*+T182S+F266Y,H1*+T182S+N279S,H1*+T182S+K280Y,H1*+ T182S+G303R,H1*+T182S+E390A,H1*+T182S+G475K,H1*+T182S+A185Q,H 1*+T182S+N194F,H1*+A185D+E189P,H1*+A185D+Y242F,H1*+A185D+E259 G,H1*+A185D+F266Y,H1*+A185D+N279S,H1*+A185D+K280Y,H1*+A185D+G 303R,H1*+A185D+E390A,H1*+A185D+G475K,H1*+A185D+A185Q,H1*+A185 D+N194F,H1*+E189P+Y242F,H1*+E189P+E259G,H1*+E189P+F266Y,H1*+E 189P+N279S,H1*+E189P+K280Y,H1*+E189P+G303R,H1*+E189P+E390A,H1 *+E189P+G475K,H1*+E189P+A185Q,H1*+E189P+N194F,H1*+Y242F+E259G ,H1*+Y242F+F266Y,H1*+Y242F+N279S,H1*+Y242F+K280Y,H1*+Y242F+G3 03R,H1*+Y242F+E390A,H1*+Y242F+G475K,H1*+Y242F+A185Q,H1*+Y242F +N194F,H1*+E259G+F266Y,H1*+E259G+N279S,H1*+E259G+K280Y,H1*+E2 59G+G303R,H1*+E259G+E390A,H1*+E259G+G475K,H1*+E259G+A185Q,H1* +E259G+N194F,H1*+F266Y+N279S,H1*+F266Y+K280Y,H1*+F266Y+G303R, H1*+F266Y+E390A,H1*+F266Y+G475K,H1*+F266Y+A185Q,H1*+F266Y+N19 4F,H1*+N279S+K280Y,H1*+N279S+G303R,H1*+N279S+E390A,H1*+N279S+ G475K,H1*+N279S+A185Q,H1*+N279S+N194F,H1*+K280Y+G303R,H1*+K28 0Y+E390A,H1*+K280Y+G475K,H1*+K280Y+A185Q,H1*+K280Y+N194F,H1*+ G303R+E390A,H1*+G303R+G475K,H1*+G303R+A185Q,H1*+G303R+N194F,H 1*+E390A+G475K,H1*+E390A+A185Q,H1*+E390A+N194F,H1*+G475K+A185 Q,H1*+G475K+N194F,H1*+A185Q+N194F,D118T+W140Y+T182S,D118T+W14 0Y+A185D,D118T+W140Y+E189P,D118T+W140Y+Y242F,D118T+W140Y+E259 G,D118T+W140Y+F266Y,D118T+W140Y+N279S,D118T+W140Y+K280Y,D118T +W140Y+G303R,D118T+W140Y+E390A,D118T+W140Y+G475K,D118T+W140Y+ A185Q,D118T+W140Y+N194F,D118T+T182S+A185D,D118T+T182S+E189P,D 118T+T182S+Y242F,D118T+T182S+E259G,D118T+T182S+F266Y,D118T+T1 82S+N279S,D118T+T182S+K280Y,D118T+T182S+G303R,D118T+T182S+E39 0A,D118T+T182S+G475K,D118T+T182S+A185Q,D118T+T182S+N194F,D118 T+A185D+E189P,D118T+A185D+Y242F,D118T+A185D+E259G,D118T+A185D +F266Y,D118T+A185D+N279S,D118T+A185D+K280Y,D118T+A185D+G303R, D118T+A185D+E390A,D118T+A185D+G475K,D118T+A185D+A185Q,D118T+A 185D+N194F,D118T+E189P+Y242F,D118T+E189P+E259G,D118T+E189P+F2 66Y,D118T+E189P+N279S,D118T+E189P+K280Y,D118T+E189P+G303R,D11 8T+E189P+E390A,D118T+E189P+G475K,D118T+E189P+A185Q,D118T+E189 P+N194F,D118T+Y242F+E259G,D118T+Y242F+F266Y,D118T+Y242F+N279S ,D118T+Y242F+K280Y,D118T+Y242F+G303R,D118T+Y242F+E390A,D118T+ Y242F+G475K,D118T+Y242F+A185Q,D118T+Y242F+N194F,D118T+E259G+F 266Y,D118T+E259G+N279S,D118T+E259G+K280Y,D118T+E259G+G303R,D1 18T+E259G+E390A,D118T+E259G+G475K,D118T+E259G+A185Q,D118T+E25 9G+N194F,D118T+F266Y+N279S,D118T+F266Y+K280Y,D118T+F266Y+G303 R,D118T+F266Y+E390A,D118T+F266Y+G475K,D118T+F266Y+A185Q,D118T +F266Y+N194F,D118T+N279S+K280Y,D118T+N279S+G303R,D118T+N279S+ E390A,D118T+N279S+G475K,D118T+N279S+A185Q,D118T+N279S+N194F,D 118T+K280Y+G303R,D118T+K280Y+E390A,D118T+K280Y+G475K,D118T+K2 80Y+A185Q,D118T+K280Y+N194F,D118T+G303R+E390A,D118T+G303R+G47 5K,D118T+G303R+A185Q,D118T+G303R+N194F,D118T+E390A+G475K,D118 T+E390A+A185Q,D118T+E390A+N194F,D118T+G475K+A185Q,D118T+G475K +N194F,D118T+A185Q+N194F,W140Y+T182S+A185D,W140Y+T182S+E189P, W140Y+T182S+Y242F,W140Y+T182S+E259G,W140Y+T182S+F266Y,W140Y+T 182S+N279S,W140Y+T182S+K280Y,W140Y+T182S+G303R,W140Y+T182S+E3 90A,W140Y+T182S+G475K,W140Y+T182S+A185Q,W140Y+T182S+N194F,W14 0Y+A185D+E189P,W140Y+A185D+Y242F,W140Y+A185D+E259G,W140Y+A185 D+F266Y,W140Y+A185D+N279S,W140Y+A185D+K280Y,W140Y+A185D+G303R ,W140Y+A185D+E390A,W140Y+A185D+G475K,W140Y+A185D+A185Q,W140Y+ A185D+N194F,W140Y+E189P+Y242F,W140Y+E189P+E259G,W140Y+E189P+F 266Y,W140Y+E189P+N279S,W140Y+E189P+K280Y,W140Y+E189P+G303R,W1 40Y+E189P+E390A,W140Y+E189P+G475K,W140Y+E189P+A185Q,W140Y+E18 9P+N194F,W140Y+Y242F+E259G,W140Y+Y242F+F266Y,W140Y+Y242F+N279 S,W140Y+Y242F+K280Y,W140Y+Y242F+G303R,W140Y+Y242F+E390A,W140Y +Y242F+G475K,W140Y+Y242F+A185Q,W140Y+Y242F+N194F,W140Y+E259G+ F266Y,W140Y+E259G+N279S,W140Y+E259G+K280Y,W140Y+E259G+G303R,W 140Y+E259G+E390A,W140Y+E259G+G475K,W140Y+E259G+A185Q,W140Y+E2 59G+N194F,W140Y+F266Y+N279S,W140Y+F266Y+K280Y,W140Y+F266Y+G30 3R,W140Y+F266Y+E390A,W140Y+F266Y+G475K,W140Y+F266Y+A185Q,W140 Y+F266Y+N194F,W140Y+N279S+K280Y,W140Y+N279S+G303R,W140Y+N279S +E390A,W140Y+N279S+G475K,W140Y+N279S+A185Q,W140Y+N279S+N194F, W140Y+K280Y+G303R,W140Y+K280Y+E390A,W140Y+K280Y+G475K,W140Y+K 280Y+A185Q,W140Y+K280Y+N194F,W140Y+G303R+E390A,W140Y+G303R+G4 75K,W140Y+G303R+A185Q,W140Y+G303R+N194F,W140Y+E390A+G475K,W14 0Y+E390A+A185Q,W140Y+E390A+N194F,W140Y+G475K+A185Q,W140Y+G475 K+N194F,W140Y+A185Q+N194F,T182S+A185D+E189P,T182S+A185D+Y242F ,T182S+A185D+E259G,T182S+A185D+F266Y,T182S+A185D+N279S,T182S+ A185D+K280Y,T182S+A185D+G303R,T182S+A185D+E390A,T182S+A185D+G 45K,T182S+A185D+A185Q,T182S+A185D+N194F,T182S+E189P+Y242F,T18 2S+E189P+E259G,T182S+E189P+F266Y,T182S+E189P+N279S,T182S+E189 P+K280Y,T182S+E189P+G303R,T182S+E189P+E390A,T182S+E189P+G475K ,T182S+E189P+A185Q,T182S+E189P+N194F,T182S+Y242F+E259G,T182S+ Y242F+F266Y,T182S+Y242F+N279S,T182S+Y242F+K280Y,T182S+Y242F+G 303R,T182S+Y242F+E390A,T182S+Y242F+G475K,T182S+Y242F+A185Q,T1 82S+Y242F+N194F,T182S+E259G+F266Y,T182S+E259G+N279S,T182S+E25 9G+K280Y,T182S+E259G+G303R,T182S+E259G+E390A,T182S+E259G+G475 K,T182S+E259G+A185Q,T182S+E259G+N194F,T182S+F266Y+N279S,T182S +F266Y+K280Y,T182S+F266Y+G303R,T182S+F266Y+E390A,T182S+F266Y+ G475K,T182S+F266Y+A185Q,T182S+F266Y+N194F,T182S+N279S+K280Y,T 182S+N279S+G303R,T182S+N279S+E390A,T182S+N279S+G475K,T182S+N2 79S+A185Q,T182S+N279S+N194F,T182S+K280Y+G303R,T182S+K280Y+E39 0A,T182S+K280Y+G475K,T182S+K280Y+A185Q,T182S+K280Y+N194F,T182 S+G303R+E390A,T182S+G303R+G475K,T182S+G303R+A185Q,T182S+G303R +N194F,T182S+E390A+G475K,T182S+E390A+A185Q,T182S+E390A+N194F, T182S+G475K+A185Q,T182S+G475K+N194F,T182S+A185Q+N194F,A185D+E 189P+Y242F,A185D+E189P+E259G,A185D+E189P+F266Y,A185D+E189P+N2 79S,A185D+E189P+K280Y,A185D+E189P+G303R,A185D+E189P+E390A,A18 5D+E189P+G475K,A185D+E189P+A185Q,A185D+E189P+N194F,A185D+Y242 F+E259G,A185D+Y242F+F266Y,A185D+Y242F+N279S,A185D+Y242F+K280Y ,A185D+Y242F+G303R,A185D+Y242F+E390A,A185D+Y242F+G475K,A185D+ Y242F+A185Q,A185D+Y242F+N194F,A185D+E259G+F266Y,A185D+E259G+N 279S,A185D+E259G+K280Y,A185D+E259G+G303R,A185D+E259G+E390A,A1 85D+E259G+G475K,A185D+E259G+A185Q,A185D+E259G+N194F,A185D+F26 6Y+N279S,A185D+F266Y+K280Y,A185D+F266Y+G303R,A185D+F266Y+E390 A,A185D+F266Y+G475K,A185D+F266Y+A185Q,A185D+F266Y+N194F,A185D +N279S+K280Y,A185D+N279S+G303R,A185D+N279S+E390A,A185D+N279S+ G475K,A185D+N279S+A185Q,A185D+N279S+N194F,A185D+K280Y+G303R,A 185D+K280Y+E390A,A185D+K280Y+G475K,A185D+K280Y+A185Q,A185D+K2 80Y+N194F,A185D+G303R+E390A,A185D+G303R+G475K,A185D+G303R+A18 5Q,A185D+G303R+N194F,A185D+E390A+G475K,A185D+E390A+A185Q,A185 D+E390A+N194F,A185D+G475K+A185Q,A185D+G475K+N194F,A185D+A185Q +N194F,E189P+Y242F+E259G,E189P+Y242F+F266Y,E189P+Y242F+N279S, E189P+Y242F+K280Y,E189P+Y242F+G303R,E189P+Y242F+E390A,E189P+Y 242F+G475K,E189P+Y242F+A185Q,E189P+Y242F+N194F,E189P+E259G+F2 66Y,E189P+E259G+N279S,E189P+E259G+K280Y,E189P+E259G+G303R,E18 9P+E259G+E390A,E189P+E259G+G475K,E189P+E259G+A185Q,E189P+E259 G+N194F,E189P+F266Y+N279S,E189P+F266Y+K280Y,E189P+F266Y+G303R ,E189P+F266Y+E390A,E189P+F266Y+G475K,E189P+F266Y+A185Q,E189P+ F266Y+N194F,E189P+N279S+K280Y,E189P+N279S+G303R,E189P+N279S+E 390A,E189P+N279S+G475K,E189P+N279S+A185Q,E189P+N279S+N194F,E1 89P+K280Y+G303R,E189P+K280Y+E390A,E189P+K280Y+G475K,E189P+K28 0Y+A185Q,E189P+K280Y+N194F,E189P+G303R+E390A,E189P+G303R+G475 K,E189P+G303R+A185Q,E189P+G303R+N194F,E189P+E390A+G475K,E189P +E390A+A185Q,E189P+E390A+N194F,E189P+G475K+A185Q,E189P+G475K+ N194F,E189P+A185Q+N194F,Y242F+E259G+F266Y,Y242F+E259G+N279S,Y 242F+E259G+K280Y,Y242F+E259G+G303R,Y242F+E259G+E390A,Y242F+E2 59G+G475K,Y242F+E259G+A185Q,Y242F+E259G+N194F,Y242F+F266Y+N27 9S,Y242F+F266Y+K280Y,Y242F+F266Y+G303R,Y242F+F266Y+E390A,Y242 F+F266Y+G475K,Y242F+F266Y+A185Q,Y242F+F266Y+N194F,Y242F+N279S +K280Y,Y242F+N279S+G303R,Y242F+N279S+E390A,Y242F+N279S+G475K, Y242F+N279S+A185Q,Y242F+N279S+N194F,Y242F+K280Y+G303R,Y242F+K 280Y+E390A,Y242F+K280Y+G475K,Y242F+K280Y+A185Q,Y242F+K280Y+N1 94F,Y242F+G303R+E390A,Y242F+G303R+G475K,Y242F+G303R+A185Q,Y24 2F+G303R+N194F,Y242F+E390A+G475K,Y242F+E390A+A185Q,Y242F+E390 A+N194F,Y242F+G475K+A185Q,Y242F+G475K+N194F,Y242F+A185Q+N194F ,E259G+F266Y+N279S,E259G+F266Y+K280Y,E259G+F266Y+G303R,E259G+ F266Y+E390A,E259G+F266Y+G475K,E259G+F266Y+A185Q,E259G+F266Y+N 194F,E259G+N279S+K280Y,E259G+N279S+G303R,E259G+N279S+E390A,E2 59G+N279S+G475K,E259G+N279S+A185Q,E259G+N279S+N194F,E259G+K28 0Y+G303R,E259G+K280Y+E390A,E259G+K280Y+G475K,E259G+K280Y+A185 Q,E259G+K280Y+N194F,E259G+G303R+E390A,E259G+G303R+G475K,E259G +G303R+A185Q,E259G+G303R+N194F,E259G+E390A+G475K,E259G+E390A+ A185Q,E259G+E390A+N194F,E259G+G475K+A185Q,E259G+G475K+N194F,E 259G+A185Q+N194F,F266Y+N279S+K280Y,F266Y+N279S+G303R,F266Y+N2 79S+E390A,F266Y+N279S+G475K,F266Y+N279S+A185Q,F266Y+N279S+N19 4F,F266Y+K280Y+G303R,F266Y+K280Y+E390A,F266Y+K280Y+G475K,F266 Y+K280Y+A185Q,F266Y+K280Y+N194F,F266Y+G303R+E390A,F266Y+G303R +G475K,F266Y+G303R+A185Q,F266Y+G303R+N194F,F266Y+E390A+G475K, F266Y+E390A+A185Q,F266Y+E390A+N194F,F266Y+G475K+A185Q,F266Y+G 475K+N194F,F266Y+A185Q+N194F,N279S+K280Y+G303R,N279S+K280Y+E3 90A,N279S+K280Y+G475K,N279S+K280Y+A185Q,N279S+K280Y+N194F,N27 9S+G303R+E390A,N279S+G303R+G475K,N279S+G303R+A185Q,N279S+G303 R+N194F,N279S+E390A+G475K,N279S+E390A+A185Q,N279S+E390A+N194F ,N279S+G475K+A185Q, N279S+G475K+N194F,N279S+A185Q+N194F,K280Y+G303R+E39 0A,K280Y+G303R+G475K,K280Y+G303R+A185Q,K280Y+G303R+N194F,K280 Y+E390A+G475K,K280Y+E390A+A185Q,K280Y+E390A+N194F,K280Y+G475K +A185Q,K280Y+G475K+N194F,K280Y+A185Q+N194F,G303R+E390A+G475K, G303R+E390A+A185Q,G303R+E390A+N194F,G303R+G475K+A185Q,G303R+G 475K+N194F,G303R+A185Q+N194F,E390A+G475K+A185Q,E390A+G475K+N1 94F,E390A+A185Q+N194F,G475K+A185Q+N194F, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0485] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 13, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P, H1*+G7A+W140Y+Y242F, H1*+G7A+W140Y+E259G, H1*+G7A+W140Y+N279S, H1*+G7A+W140Y+K280Y, H1*+G7A+W140Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F,H1*+G7A+E189P+E259G,H1*+G7A+E189P+N279S,H 1*+G7A+E189P+K280Y,H1*+G7A+E189P+G303R,H1*+G7A+E189P+E390A,H1 *+G7A+Y242F+E259G,H1*+G7A+Y242F+N279S,H1*+G7A+Y242F+K280Y,H1* +G7A+Y242F+G303R,H1*+G7A+Y242F+E390A,H1*+G7A+E259G+N279S,H1*+ G7A+E259G+K280Y,H1*+G7A+E259G+G303R,H1*+G7A+E259G+E390A,H1*+G 7A+N279S+K280Y,H1*+G7A+N279S+G303R,H1*+G7A+N279S+E390A,H1*+G7 A+K280Y+G303R,H1*+G7A+K280Y+E390A,H1*+G7A+G303R+E390A,H1*+W14 0Y+E189P+Y242F,H1*+W140Y+E189P+E259G,H1*+W140Y+E189P+N279S,H1 *+W140Y+E189P+K280Y,H1*+W140Y+E189P+G303R,H1*+W140Y+E189P+E39 0A,H1*+W140Y+Y242F+E259G,H1*+W140Y+Y242F+N279S,H1*+W140Y+Y242 F+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+G303R,H1*+W140Y+Y242F+E390A,H1*+W140Y +E259G+N279S,H1*+W140Y+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E259G+G303R,H1*+ W140Y+E259G+E390A,H1*+W140Y+N279S+K280Y,H1*+W140Y+N279S+G303R ,H1*+W140Y+N279S+E390A,H1*+W140Y+K280Y+G303R,H1*+W140Y+K280Y+ E390A,H1*+W140Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G,H1*+E189P+Y 242F+N279S,H1*+E189P+Y242F+K280Y,H1*+E189P+Y242F+G303R,H1*+E1 89P+Y242F+E390A,H1*+E189P+E259G+N279S,H1*+E189P+E259G+K280Y,H 1*+E189P+E259G+G303R,H1*+E189P+E259G+E390A,H1*+E189P+N279S+K2 80Y,H1*+E189P+N279S+G303R,H1*+E189P+N279S+E390A,H1*+E189P+K28 0Y+G303R,H1*+E189P+K280Y+E390A,H1*+E189P+G303R+E390A,H1*+Y242 F+E259G+N279S,H1*+Y242F+E259G+K280Y,H1*+Y242F+E259G+G303R,H1* +Y242F+E259G+E390A,H1*+Y242F+N279S+K280Y,H1*+Y242F+N279S+G303 R,H1*+Y242F+N279S+E390A,H1*+Y242F+K280Y+G303R,H1*+Y242F+K280Y +E390A,H1*+Y242F+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y,H1*+E259G+ N279S+G303R,H1*+E259G+N279S+E390A,H1*+E259G+K280Y+G303R,H1*+E 259G+K280Y+E390A,H1*+E259G+G303R+E390A,H1*+N279S+K280Y+G303R, H1*+N279S+K280Y+E390A,H1*+N279S+G303R+E390A,H1*+K280Y+G303R+E 390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F,G7A+W140Y+E189P+E259G,G7A+W140Y+E1 89P+N279S,G7A+W140Y+E189P+K280Y,G7A+W140Y+E189P+G303R,G7A+W14 0Y+E189P+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E259G,G7A+W140Y+Y242F+N279S,G7 A+W140Y+Y242F+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E39 0A,G7A+W140Y+E259G+N279S,G7A+W140Y+E259G+K280Y,G7A+W140Y+E259 G+G303R,G7A+W140Y+E259G+E390A,G7A+W140Y+N279S+K280Y,G7A+W140Y +N279S+G303R,G7A+W140Y+N279S+E390A,G7A+W140Y+K280Y+G303R,G7A+ W140Y+K280Y+E390A,G7A+W140Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G ,G7A+E189P+Y242F+N279S,G7A+E189P+Y242F+K280Y,G7A+E189P+Y242F+ G303R,G7A+E189P+Y242F+E390A,G7A+E189P+E259G+N279S,G7A+E189P+E 259G+K280Y,G7A+E189P+E259G+G303R,G7A+E189P+E259G+E390A,G7A+E1 89P+N279S+K280Y,G7A+E189P+N279S+G303R,G7A+E189P+N279S+E390A,G 7A+E189P+K280Y+G303R,G7A+E189P+K280Y+E390A,G7A+E189P+G303R+E3 90A,G7A+Y242F+E259G+N279S,G7A+Y242F+E259G+K280Y,G7A+Y242F+E25 9G+G303R,G7A+Y242F+E259G+E390A,G7A+Y242F+N279S+K280Y,G7A+Y242 F+N279S+G303R,G7A+Y242F+N279S+E390A,G7A+Y242F+K280Y+G303R,G7A +Y242F+K280Y+E390A,G7A+Y242F+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280 Y,G7A+E259G+N279S+G303R,G7A+E259G+N279S+E390A,G7A+E259G+K280Y +G303R,G7A+E259G+K280Y+E390A,G7A+E259G+G303R+E390A,G7A+N279S+ K280Y+G303R,G7A+N279S+K280Y+E390A,G7A+N279S+G303R+E390A,G7A+K 280Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G,W140Y+E189P+Y242F+N2 79S,W140Y+E189P+Y242F+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+G303R,W140Y+E18 9P+Y242F+E390A,W140Y+E189P+E259G+N279S,W140Y+E189P+E259G+K280 Y,W140Y+E189P+E259G+G303R,W140Y+E189P+E259G+E390A,W140Y+E189P +N279S+K280Y,W140Y+E189P+N279S+G303R,W140Y+E189P+N279S+E390A, W140Y+E189P+K280Y+G303R,W140Y+E189P+K280Y+E390A,W140Y+E189P+G 303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N279S,W140Y+Y242F+E259G+K280Y,W1 40Y+Y242F+E259G+G303R,W140Y+Y242F+E259G+E390A,W140Y+Y242F+N27 9S+K280Y,W140Y+Y242F+N279S+G303R,W140Y+Y242F+N279S+E390A,W140 Y+Y242F+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+K280Y+E390A,W140Y+Y242F+G303R +E390A,W140Y+E259G+N279S+K280Y,W140Y+E259G+N279S+G303R,W140Y+ E259G+N279S+E390A,W140Y+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E259G+K280Y+E 390A,W140Y+E259G+G303R+E390A,W140Y+N279S+K280Y+G303R,W140Y+N2 79S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A,W140Y+K280Y+G303R+E390 A,E189P+Y242F+E259G+N279S,E189P+Y242F+E259G+K280Y,E189P+Y242F +E259G+G303R,E189P+Y242F+E259G+E390A,E189P+Y242F+N279S+K280Y, E189P+Y242F+N279S+G303R,E189P+Y242F+N279S+E390A,E189P+Y242F+K 280Y+G303R,E189P+Y242F+K280Y+E390A,E189P+Y242F+G303R+E390A,E1 89P+E259G+N279S+K280Y,E189P+E259G+N279S+G303R,E189P+E259G+N27 9S+E390A,E189P+E259G+K280Y+G303R,E189P+E259G+K280Y+E390A,E189 P+E259G+G303R+E390A,E189P+N279S+K280Y+G303R,E189P+N279S+K280Y +E390A,E189P+N279S+G303R+E390A,E189P+K280Y+G303R+E390A,Y242F+ E259G+N279S+K280Y,Y242F+E259G+N279S+G303R,Y242F+E259G+N279S+E 390A,Y242F+E259G+K280Y+G303R,Y242F+E259G+K280Y+E390A,Y242F+E2 59G+G303R+E390A,Y242F+N279S+K280Y+G303R,Y242F+N279S+K280Y+E39 0A,Y242F+N279S+G303R+E390A,Y242F+K280Y+G303R+E390A,E259G+N279 S+K280Y+G303R,E259G+N279S+K280Y+E390A,E259G+N279S+G303R+E390A ,E259G+K280Y+G303R+E390A,N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0486] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 13, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S, H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y, H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S,H1*+G7A+W 140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G +E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R,H1 *+G7A+W140Y+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R,H1*+G7A+W14 0Y+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+ E259G,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S,H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y,H1* +G7A+E189P+Y242F+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A,H1*+G7A+E189 P+E259G+N279S,H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y,H1*+G7A+E189P+E259G+G 303R,H1*+G7A+E189P+E259G+E390A,H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y,H1*+ G7A+E189P+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+N279S+E390A,H1*+G7A+E189P +K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+G303R+E3 90A,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G 7A+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A,H1*+G7A+Y242F+ N279S+K280Y,H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R,H1*+G7A+Y242F+N279S+E39 0A,H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R,H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A,H1*+G7 A+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+E259G+N 279S+G303R,H1*+G7A+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+E259G+K280Y+G303 R,H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A +N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+N279S+G3 03R+E390A,H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E25 9G,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y,H1 *+W140Y+E189P+Y242F+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A,H1*+W14 0Y+E189P+E259G+N279S,H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E1 89P+E259G+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A,H1*+W140Y+E189P+N 279S+K280Y,H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R,H1*+W140Y+E189P+N279S+ E390A,H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A ,H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S,H1*+ W140Y+Y242F+E259G+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R,H1*+W140Y +Y242F+E259G+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,H1*+W140Y+Y242 F+N279S+G303R,H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A,H1*+W140Y+Y242F+K28 0Y+G303R,H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+G303R+E3 90A,H1*+W14 0Y+E2 5 9G+N2 7 9S+K2 8 0Y,H1*+W14 0Y+E2 5 9G+N2 7 9S+G3 0 3R, H 1*+W140Y+E259G+N279S+E390A,H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R,H1*+W1 40Y+E259G+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A,H1*+W140Y+N 279S+K280Y+G303R,H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+N279S+ G303R+E390A,H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G +N279S,H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+E189P+Y242F+E259G+G303 R,H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1* +E189P+Y242F+N279S+G303R,H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A,H1*+E189 P+Y242F+K280Y+G303R,H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A,H1*+E189P+Y24 2F+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y,H1*+E189P+E259G+N2 79S+G303R,H1*+E189P+E259G+N279S+E390A,H1*+E189P+E259G+K280Y+G 3 0 3R, H1*+E18 9P+E2 5 9G+K2 8 0Y+E3 90A,H1* + E18 9P+E2 5 9G+G3 0 3R+E3 90A, H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R,H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+E 189P+N279S+G303R+E390A,H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+ E259G+N279S+K280Y,H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+Y242F+E259G +N279S+E390A,H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+Y242F+E259G+K280 Y+E390A,H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1*+Y242F+N279S+K280Y+G30 3R,H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1 *+Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+E25 9G+N279S+K280Y+E390A,H1*+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+E259G+K2 80Y+G303R+E390A,H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y 242F+E259G,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S,G7A+W140Y+E189P+Y242F+ K280Y,G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A ,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S,G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y,G7A+ W140Y+E189P+E259G+G303R,G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A,G7A+W140Y +E189P+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189 P+N279S+E390A,G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+K28 0Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N2 79S,G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R,G 7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,G7A+W1 40Y+Y242F+N279S+G303R,G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A,G7A+W140Y+Y 242F+K280Y+G303R,G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y242F+ G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E259G+N279S +G303R,G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A,G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303 R,G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A,G7A +W140Y+N279S+K280Y+G303R,G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140 Y+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y24 2F+E259G+N279S,G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y,G7A+E189P+Y242F+E2 59G+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A,G7A+E189P+Y242F+N279S+K 280Y,G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R,G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A, G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A,G7A+E 189P+Y242F+G303R+E390A,G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y,G7A+E189P+ E259G+N279S+G303R,G7A+E189P+E259G+N279S+E390A,G7A+E189P+E259G +K280Y+G303R,G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A,G7A+E189P+E259G+G303 R+E390A,G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+N279S+K280Y+E39 0A,G7A+E189P+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A,G7 A+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R,G7A+Y24 2F+E259G+N279S+E390A,G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R,G7A+Y242F+E2 59G+K280Y+E390A,G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A,G7A+Y242F+N279S+K 280Y+G303R,G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+Y242F+N279S+G303R+ E390A,G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R ,G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+ E259G+K280Y+G303R+E390A,G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+N279S,W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,W140Y+E189 P+Y242F+E259G+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A,W140Y+E189P +Y242F+N279S+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R,W140Y+E189P+ Y242F+N279S+E390A,W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y 242F+K280Y+E390A,W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,W140Y+E189P+E2 59G+N279S+K280Y,W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,W140Y+E189P+E25 9G+N279S+E390A,W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E189P+E259 G+K280Y+E390A,W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,W140Y+E189P+N279S +K280Y+G303R,W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E189P+N279S+ G303R+E390A,W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N 279S+K280Y,W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R,W140Y+Y242F+E259G+N2 79S+E390A,W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+E259G+K28 0Y+E390A,W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A,W140Y+Y242F+N279S+K280 Y+G303R,W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A,W140Y+Y242F+N279S+G303R +E390A,W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E259G+N279S+K280Y+ G303R,W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E259G+N279S+G303R+E 390A,W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,W140Y+N279S+K280Y+G303R+E3 90A,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,E189P+Y242F+E259G+N279S+G30 3R,E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303 R,E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A ,E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R,E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A,E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,E 189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,E1 89P+E259G+N279S+G303R+E390A,E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A,E18 9P+N279S+K280Y+G303R+E390A,Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,Y242 F+E259G+N279S+K280Y+E390A,Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,Y242F +E259G+K280Y+G303R+E390A,Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,E259G+ N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0487] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 13, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G30 3R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+ N279S,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+E25 9G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+ N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E18 9P+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+ E189P+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A,H1*+G7A+W14 0Y+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+ W140Y+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A,H1*+G 7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R,H1 *+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R ,H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E3 90A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S +G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+K2 80Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G +G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+N2 79S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y +K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+E1 89P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A +E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1*+ G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A,H 1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390 A,H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K 280Y,H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+E259G+N279 S+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+E259G+K 280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+N279 S+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+N 279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242 F+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+Y 242F+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7 A+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1* +G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E39 0A,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+ E390A,H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E259G+K280Y+G30 3R+E390A,H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242 F+E259G+N279S,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+W1 40Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R ,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280 Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y24 2F+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E1 89P+E259G+N279S+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A,H1*+W 140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390 A,H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+N279S+K28 0Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+N2 79S+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+ W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G30 3R,H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+G3 03R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R,H1*+W140Y+Y242F+N 279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+W140Y+ Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1* +W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E3 90A,H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+N279S+K280Y+G 303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+E189P+Y242F+ E259G+N279S+G303R,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,H1*+E189P +Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1 *+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G 303R,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+ G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G +N279S+K280Y+G303R,H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+E189 P+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A,H 1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+ G303R,H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+Y242F+E259G+N279S +G303R+E390A,H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+N279 S+K280Y+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W14 0Y+E189P+Y242F+E259G+N279S,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G +E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E189P+Y242 F+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A,G7A+W140Y+E18 9P+Y242F+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A,G7A+W1 40Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y ,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279 S+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+E25 9G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,G7A+W140Y+E1 89P+N279S+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,G7A+W 140Y+E189P+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390 A,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N27 9S+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E2 59G+K280Y+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y 242F+E259G+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R,G7A+ W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E39 0A,G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+N279S+K2 80Y+G303R,G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E259G+N 279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+ N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A +E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E3 90A,G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+K 280Y+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+ N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+E189P +Y242F+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7 A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E 390A,G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+E259G+K280Y+ G303R+E390A,G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R,G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+Y242 F+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,G 7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+ E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+E 259G+N279S+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,W140Y+E1 89P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E39 0A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+N279 S+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E189P +Y242F+N279S+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,W140Y+E189P+E259G+N279S+K 280Y+E390A,W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A,W140Y+E189P+E2 59G+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,W14 0Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280 Y+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G +K280Y+G303R+E390A,W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,W140Y+ E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G 303R,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,E189P+Y242F+E259G+N2 79S+G303R+E390A,E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,E189P+Y24 2F+N279S+K280Y+G303R+E390A,E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390 A,Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0488] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 13, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y24 2F+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0489] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 13, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N2 79S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A +W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242 F+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G30 3R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+ E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y +G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+ G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E 259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+ E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W14 0Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N2 79S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,H 1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242 F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G30 3R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+ E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G +N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390 A,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+ G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1* +W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y +G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1 *+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280 Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, G 7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+ Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K28 0Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F +E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K2 80Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E39 0A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0490] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 13, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W14 0Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K 280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+ E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G 7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K2 80Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0491] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 13, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E 390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0492] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 14, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+D118T, H1*+W140Y, H1*+T182S, H1*+A185D, H1*+E189P, H1*+Y242F, H1*+E259G, H1*+F266Y, H1*+N279S, H1*+K280Y, H1*+G303R, H1*+E390A, H1*+G475K, H1*+A185Q, H1*+N194F, D118T+W140Y, D118T+T182S, D118T+A185D, D118T+E189P, D118T+Y242F, D118T+E259G, D118T+F266Y, D118T+N279S,D118T+K280Y,D118T+G303R,D118T+E390A,D118T+G475K,D 118T+A185Q,D118T+N194F,W140Y+T182S,W140Y+A185D,W140Y+E189P,W1 40Y+Y242F,W140Y+E259G,W140Y+F266Y,W140Y+N279S,W140Y+K280Y,W14 0Y+G303R,W140Y+E390A,W140Y+G475K,W140Y+A185Q,W140Y+N194F,T182 S+A185D,T182S+E189P,T182S+Y242F,T182S+E259G,T182S+F266Y,T182S +N279S,T182S+K280Y,T182S+G303R,T182S+E390A,T182S+G475K,T182S+ A185Q,T182S+N194F,A185D+E189P,A185D+Y242F,A185D+E259G,A185D+F 266Y,A185D+N279S,A185D+K280Y,A185D+G303R,A185D+E390A,A185D+G4 75K,A185D+A185Q,A185D+N194F,E189P+Y242F,E189P+E259G,E189P+F26 6Y,E189P+N279S,E189P+K280Y,E189P+G303R,E189P+E390A,E189P+G475 K,E189P+A185Q,E189P+N194F,Y242F+E259G,Y242F+F266Y,Y242F+N279S ,Y242F+K280Y,Y242F+G303R,Y242F+E390A,Y242F+G475K,Y242F+A185Q, Y242F+N194F,E259G+F266Y,E259G+N279S,E259G+K280Y,E259G+G303R,E 259G+E390A,E259G+G475K,E259G+A185Q,E259G+N194F,F266Y+N279S,F2 66Y+K280Y,F266Y+G303R,F266Y+E390A,F266Y+G475K,F266Y+A185Q,F26 6Y+N194F,N279+K280Y,N279S+G303R,N279S+E390A,N279S+G475K,N279S +A185Q,N279S+N194F,K280Y+G303R,K280Y+E390A,K280Y+G475K,K280Y+ A185Q,K280Y+N194F,G303R+E390A,G303R+G475K,G303R+A185Q,G303R+N 194F,E390A+G475K,E390A+A185Q,E390A+N194F,G475K+A185Q,G475K+N1 94F, A185Q+N194F, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0493] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 14, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+D118T+W140Y, H1*+D118T+T182S, H1*+D118T+A185D, H1*+W140Y+E259G, H1*+W140Y+F266Y,H1*+W140Y+N279S,H1*+W140Y+K280Y,H1*+W140Y+G30 3R,H1*+W140Y+E390A,H1*+W140Y+G475K,H1*+W140Y+A185Q,H1*+W140Y+ N194F,H1*+T182S+A185D,H1*+T182S+E189P,H1*+T182S+Y242F,H1*+T18 2S+E259G,H1*+T182S+F266Y,H1*+T182S+N279S,H1*+T182S+K280Y,H1*+ T182S+G303R,H1*+T182S+E390A,H1*+T182S+G475K,H1*+T182S+A185Q,H 1*+T182S+N194F,H1*+A185D+E189P,H1*+A185D+Y242F,H1*+A185D+E259 G,H1*+A185D+F266Y,H1*+A185D+N279S,H1*+A185D+K280Y,H1*+A185D+G 303R,H1*+A185D+E390A,H1*+A185D+G475K,H1*+A185D+A185Q,H1*+A185 D+N194F,H1*+E189P+Y242F,H1*+E189P+E259G,H1*+E189P+F266Y,H1*+E 189P+N279S,H1*+E189P+K280Y,H1*+E189P+G303R,H1*+E189P+E390A,H1 *+E189P+G475K,H1*+E189P+A185Q,H1*+E189P+N194F,H1*+Y242F+E259G ,H1*+Y242F+F266Y,H1*+Y242F+N279S,H1*+Y242F+K280Y,H1*+Y242F+G3 03R,H1*+Y242F+E390A,H1*+Y242F+G475K,H1*+Y242F+A185Q,H1*+Y242F +N194F,H1*+E259G+F266Y,H1*+E259G+N279S,H1*+E259G+K280Y,H1*+E2 59G+G303R,H1*+E259G+E390A,H1*+E259G+G475K,H1*+E259G+A185Q,H1* +E259G+N194F,H1*+F266Y+N279S,H1*+F266Y+K280Y,H1*+F266Y+G303R, H1*+F266Y+E390A,H1*+F266Y+G475K,H1*+F266Y+A185Q,H1*+F266Y+N19 4F,H1*+N279S+K280Y,H1*+N279S+G303R,H1*+N279S+E390A,H1*+N279S+ G475K,H1*+N279S+A185Q,H1*+N279S+N194F,H1*+K280Y+G303R,H1*+K28 0Y+E390A,H1*+K280Y+G475K,H1*+K280Y+A185Q,H1*+K280Y+N194F,H1*+ G3 03R+E3 90A,H1*+G3 03R+G4 7 5K,H1* + G3 03R+A18 5Q,H1*+G3 03R+N19 4F, H 1*+E390A+G475K,H1*+E390A+A185Q,H1*+E390A+N194F,H1*+G475K+A185 Q,H1*+G475K+N194F,H1*+A185Q+N194F,D118T+W140Y+T182S,D118T+W14 0Y+A185D,D118T+W140Y+E189P,D118T+W140Y+Y242F,D118T+W140Y+E259 G,D118T+W140Y+F266Y,D118T+W140Y+N279S,D118T+W140Y+K280Y,D118T +W140Y+G303R,D118T+W140Y+E390A,D118T+W140Y+G475K,D118T+W140Y+ A185Q,D118T+W140Y+N194F,D118T+T182S+A185D,D118T+T182S+E189P,D 118T+T182S+Y242F,D118T+T182S+E259G,D118T+T182S+F266Y,D118T+T1 82S+N279S,D118T+T182S+K280Y,D118T+T182S+G303R,D118T+T182S+E39 0A,D118T+T182S+G475K,D118T+T182S+A185Q,D118T+T182S+N194F,D118 T+A185D+E189P,D118T+A185D+Y242F,D118T+A185D+E259G,D118T+A185D +F266Y,D118T+A185D+N279S,D118T+A185D+K280Y,D118T+A185D+G303R, D118T+A185D+E390A,D118T+A185D+G475K,D118T+A185D+A185Q,D118T+A 185D+N194F,D118T+E189P+Y242F,D118T+E189P+E259G,D118T+E189P+F2 66Y,D118T+E189P+N279S,D118T+E189P+K280Y,D118T+E189P+G303R,D11 8T+E189P+E390A,D118T+E189P+G475K,D118T+E189P+A185Q,D118T+E189 P+N194F,D118T+Y242F+E259G,D118T+Y242F+F266Y,D118T+Y242F+N279S ,D118T + Y2 4 2F+K2 8 0Y,D118T+Y2 4 2F+G3 03R,D118T+Y2 4 2F+E3 9 0A, D118T + Y242F+G475K,D118T+Y242F+A185Q,D118T+Y242F+N194F,D118T+E259G+F 2 6 6Y,D118T+E259G+N279S,D118T+E259G+K280Y,D118T+E259G+G303R,D1 18T+E259G+E390A,D118T+E259G+G475K,D118T+E259G+A185Q,D118T+E25 9G+N194F,D118T+F266Y+N279S,D118T+F266Y+K280Y,D118T+F266Y+G303 R,D118T+F266Y+E390A,D118T+F266Y+G475K,D118T+F266Y+A185Q,D118T +F266Y+N194F,D118T+N279S+K280Y,D118T+N279S+G303R,D118T+N279S+ E390A,D118T+N279S+G475K,D118T+N279S+A185Q,D118T+N279S+N194F,D 118T+K280Y+G303R,D118T+K280Y+E390A,D118T+K280Y+G475K,D118T+K2 80Y+A185Q,D118T+K280Y+N194F,D118T+G303R+E390A,D118T+G303R+G47 5K,D118T+G303R+A185Q,D118T+G303R+N194F,D118T+E390A+G475K,D118 T+E390A+A185Q,D118T+E390A+N194F,D118T+G475K+A185Q,D118T+G475K +N194F,D118T+A185Q+N194F,W140Y+T182S+A185D,W140Y+T182S+E189P, W140Y+T182S+Y242F,W140Y+T182S+E259G,W140Y+T182S+F266Y,W140Y+T 182S+N279S,W140Y+T182S+K280Y,W140Y+T182S+G303R,W140Y+T182S+E3 90A,W140Y+T182S+G475K,W140Y+T182S+A185Q,W140Y+T182S+N194F,W14 0Y+A185D+E189P,W140Y+A185D+Y242F,W140Y+A185D+E259G,W140Y+A185 D+F266Y,W140Y+A185D+N279S,W140Y+A185D+K280Y,W140Y+A185D+G303R ,W140Y+A185D+E390A,W140Y+A185D+G475K,W140Y+A185D+A185Q,W140Y+ A185D+N194F,W140Y+E189P+Y242F,W140Y+E189P+E259G,W140Y+E189P+F 266Y,W140Y+E189P+N279S,W140Y+E189P+K280Y,W140Y+E189P+G303R,W1 40Y+E189P+E390A,W140Y+E189P+G475K,W140Y+E189P+A185Q,W140Y+E18 9P+N194F,W140Y+Y242F+E259G,W140Y+Y242F+F266Y,W140Y+Y242F+N279 S,W140Y+Y242F+K280Y,W140Y+Y242F+G303R,W140Y+Y242F+E390A,W140Y +Y242F+G475K,W140Y+Y242F+A185Q,W140Y+Y242F+N194F,W140Y+E259G+ F266Y,W140Y+E259G+N279S,W140Y+E259G+K280Y,W140Y+E259G+G303R,W 140Y+E259G+E390A,W140Y+E259G+G475K,W140Y+E259G+A185Q,W140Y+E2 59G+N194F,W140Y+F266Y+N279S,W140Y+F266Y+K280Y,W140Y+F266Y+G30 3R,W140Y+F266Y+E390A,W140Y+F266Y+G475K,W140Y+F266Y+A185Q,W140 Y+F266Y+N194F,W140Y+N279S+K280Y,W140Y+N279S+G303R,W140Y+N279S +E390A,W140Y+N279S+G475K,W140Y+N279S+A185Q,W140Y+N279S+N194F, W140Y+K280Y+G303R,W140Y+K280Y+E390A,W140Y+K280Y+G475K,W140Y+K 280Y+A185Q,W140Y+K280Y+N194F,W140Y+G303R+E390A,W140Y+G303R+G4 75K,W140Y+G303R+A185Q,W140Y+G303R+N194F,W140Y+E390A+G475K,W14 0Y+E390A+A185Q,W140Y+E390A+N194F,W140Y+G475K+A185Q,W140Y+G475 K+N194F,W140Y+A185Q+N194F,T182S+A185D+E189P,T182S+A185D+Y242F ,T182S+A185D+E259G,T182S+A185D+F266Y,T182S+A185D+N279S,T182S+ A185D+K280Y,T182S+A185D+G303R,T182S+A185D+E390A,T182S+A185D+G 4 5K,T18 2S+A18 5D+A18 5Q,T18 2S+A18 5D+N19 4F, T182S+E189P+Y242F, T18 2S+E189P+E259G,T182S+E189P+F266Y,T182S+E189P+N279S,T182S+E189 P+K280Y,T182S+E189P+G303R,T182S+E189P+E390A,T182S+E189P+G475K ,T182S+E189P+A185Q,T182S+E189P+N194F,T182S+Y242F+E259G,T182S+ Y242F+F266Y,T182S+Y242F+N279S,T182S+Y242F+K280Y,T182S+Y242F+G 303R,T182S+Y242F+E390A,T182S+Y242F+G475K,T182S+Y242F+A185Q,T1 82S+Y242F+N194F,T182S+E259G+F266Y,T182S+E259G+N279S,T182S+E25 9G+K280Y,T182S+E259G+G303R,T182S+E259G+E390A,T182S+E259G+G475 K,T182S+E259G+A185Q,T182S+E259G+N194F,T182S+F266Y+N279S,T182S +F266Y+K280Y,T182S+F266Y+G303R,T182S+F266Y+E390A,T182S+F266Y+ G475K,T182S+F266Y+A185Q,T182S+F266Y+N194F,T182S+N279S+K280Y,T 182S+N279S+G303R,T182S+N279S+E390A,T182S+N279S+G475K,T182S+N2 79S+A185Q,T182S+N279S+N194F,T182S+K280Y+G303R,T182S+K280Y+E39 0A,T182S+K280Y+G475K,T182S+K280Y+A185Q,T182S+K280Y+N194F,T182 S+G303R+E390A,T182S+G303R+G475K,T182S+G303R+A185Q,T182S+G303R +N194F,T182S+E390A+G475K,T182S+E390A+A185Q,T182S+E390A+N194F, T182S+G475K+A185Q,T182S+G475K+N194F,T182S+A185Q+N194F,A185D+E 189P+Y242F,A185D+E189P+E259G,A185D+E189P+F266Y,A185D+E189P+N2 79S,A185D+E189P+K280Y,A185D+E189P+G303R,A185D+E189P+E390A,A18 5D+E189P+G475K,A185D+E189P+A185Q,A185D+E189P+N194F,A185D+Y242 F+E259G,A185D+Y242F+F266Y,A185D+Y242F+N279S,A185D+Y242F+K280Y ,A185D+Y242F+G303R,A185D+Y242F+E390A,A185D+Y242F+G475K,A185D+ Y242F+A185Q,A185D+Y242F+N194F,A185D+E259G+F266Y,A185D+E259G+N 279S,A185D+E259G+K280Y,A185D+E259G+G303R,A185D+E259G+E390A,A1 85D+E259G+G475K,A185D+E259G+A185Q,A185D+E259G+N194F,A185D+F26 6Y+N279S,A185D+F266Y+K280Y,A185D+F266Y+G303R,A185D+F266Y+E390 A,A185D+F266Y+G475K,A185D+F266Y+A185Q,A185D+F266Y+N194F,A185D +N279S+K280Y,A185D+N279S+G303R,A185D+N279S+E390A,A185D+N279S+ G475K,A185D+N279S+A185Q,A185D+N279S+N194F,A185D+K280Y+G303R,A 185D+K280Y+E390A,A185D+K280Y+G475K,A185D+K280Y+A185Q,A185D+K2 80Y+N194F,A185D+G303R+E390A,A185D+G303R+G475K,A185D+G303R+A18 5Q,A185D+G303R+N194F,A185D+E390A+G475K,A185D+E390A+A185Q,A185 D+E390A+N194F,A185D+G475K+A185Q,A185D+G475K+N194F,A185D+A185Q +N194F,E189P+Y242F+E259G,E189P+Y242F+F266Y,E189P+Y242F+N279S, E189P+Y242F+K280Y,E189P+Y242F+G303R,E189P+Y242F+E390A,E189P+Y 242F+G475K,E189P+Y242F+A185Q,E189P+Y242F+N194F,E189P+E259G+F2 66Y,E189P+E259G+N279S,E189P+E259G+K280Y,E189P+E259G+G303R,E18 9P+E259G+E390A,E189P+E259G+G475K,E189P+E259G+A185Q,E189P+E259 G+N194F,E189P+F266Y+N279S,E189P+F266Y+K280Y,E189P+F266Y+G303R ,E18 9P+F2 6 6Y+E3 90A,E18 9P+F2 6 6Y+G4 7 5K,E18 9P + F2 6 6Y+A18 5Q, E18 9P+ F266Y+N194F,E189P+N279S+K280Y,E189P+N279S+G303R,E189P+N279S+E 390A,E189P+N279S+G475K,E189P+N279S+A185Q,E189P+N279S+N194F,E1 89P+K280Y+G303R,E189P+K280Y+E390A,E189P+K280Y+G475K,E189P+K28 0Y+A185Q,E189P+K280Y+N194F,E189P+G303R+E390A,E189P+G303R+G475 K,E189P+G303R+A185Q,E189P+G303R+N194F,E189P+E390A+G475K,E189P +E390A+A185Q,E189P+E390A+N194F,E189P+G475K+A185Q,E189P+G475K+ N194F,E189P+A185Q+N194F,Y242F+E259G+F266Y,Y242F+E259G+N279S,Y 242F+E259G+K280Y,Y242F+E259G+G303R,Y242F+E259G+E390A,Y242F+E2 59G+G475K,Y242F+E259G+A185Q,Y242F+E259G+N194F,Y242F+F266Y+N27 9S,Y242F+F266Y+K280Y,Y242F+F266Y+G303R,Y242F+F266Y+E390A,Y242 F+F266Y+G475K,Y242F+F266Y+A185Q,Y242F+F266Y+N194F,Y242F+N279S +K280Y,Y242F+N279S+G303R,Y242F+N279S+E390A,Y242F+N279S+G475K, Y242F+N279S+A185Q,Y242F+N279S+N194F,Y242F+K280Y+G303R,Y242F+K 280Y+E390A,Y242F+K280Y+G475K,Y242F+K280Y+A185Q,Y242F+K280Y+N1 94F,Y242F+G303R+E390A,Y242F+G303R+G475K,Y242F+G303R+A185Q,Y24 2F+G303R+N194F,Y242F+E390A+G475K,Y242F+E390A+A185Q,Y242F+E390 A+N194F,Y242F+G475K+A185Q,Y242F+G475K+N194F,Y242F+A185Q+N194F ,E2 5 9G+F2 6 6Y+N2 7 9S,E2 5 9G+F2 6 6Y+K2 8 0Y,E2 5 9G+F2 6 6Y+G3 0 3R, E2 5 9G+ F266Y+E390A,E259G+F266Y+G475K,E259G+F266Y+A185Q,E259G+F266Y+N 194F,E259G+N279S+K280Y,E259G+N279S+G303R,E259G+N279S+E390A,E2 59G+N279S+G475K,E259G+N279S+A185Q,E259G+N279S+N194F,E259G+K28 0Y+G303R,E259G+K280Y+E390A,E259G+K280Y+G475K,E259G+K280Y+A185 Q,E259G+K280Y+N194F,E259G+G303R+E390A,E259G+G303R+G475K,E259G +G303R+A185Q,E259G+G303R+N194F,E259G+E390A+G475K,E259G+E390A+ A185Q,E259G+E390A+N194F,E259G+G475K+A185Q,E259G+G475K+N194F,E 259G+A185Q+N194F,F266Y+N279S+K280Y,F266Y+N279S+G303R,F266Y+N2 79S+E390A,F266Y+N279S+G475K,F266Y+N279S+A185Q,F266Y+N279S+N19 4F,F266Y+K280Y+G303R,F266Y+K280Y+E390A,F266Y+K280Y+G475K,F266 Y+K280Y+A185Q,F266Y+K280Y+N194F,F266Y+G303R+E390A,F266Y+G303R +G475K,F266Y+G303R+A185Q,F266Y+G303R+N194F,F266Y+E390A+G475K, F266Y+E390A+A185Q,F266Y+E390A+N194F,F266Y+G475K+A185Q,F266Y+G 475K+N194F,F266Y+A185Q+N194F,N279S+K280Y+G303R,N279S+K280Y+E3 90A,N279S+K280Y+G475K,N279S+K280Y+A185Q,N279S+K280Y+N194F,N27 9S+G303R+E390A,N279S+G303R+G475K,N279S+G303R+A185Q,N279S+G303 R+N194F,N279S+E390A+G475K,N279S+E390A+A185Q,N279S+E390A+N194F ,N279S+G475K+A185Q, N279S+G475K+N194F,N279S+A185Q+N194F,K280Y+G303R+E39 0A,K280Y+G303R+G475K,K280Y+G303R+A185Q,K280Y+G303R+N194F,K280 Y+E390A+G475K,K280Y+E390A+A185Q,K280Y+E390A+N194F,K280Y+G475K +A185Q,K280Y+G475K+N194F,K280Y+A185Q+N194F,G303R+E390A+G475K, G303R+E390A+A185Q,G303R+E390A+N194F,G303R+G475K+A185Q,G303R+G 475K+N194F,G303R+A185Q+N194F,E390A+G475K+A185Q,E390A+G475K+N1 94F,E390A+A185Q+N194F,G475K+A185Q+N194F, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0494] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 14, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P, H1*+G7A+W140Y+Y242F, H1*+G7A+W140Y+E259G, H1*+G7A+W140Y+N279S, H1*+G7A+W140Y+K280Y, H1*+G7A+W140Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F,H1*+G7A+E189P+E259G,H1*+G7A+E189P+N279S,H 1*+G7A+E189P+K280Y,H1*+G7A+E189P+G303R,H1*+G7A+E189P+E390A,H1 *+G7A+Y242F+E259G,H1*+G7A+Y242F+N279S,H1*+G7A+Y242F+K280Y,H1* +G7A+Y242F+G303R,H1*+G7A+Y242F+E390A,H1*+G7A+E259G+N279S,H1*+ G7A+E259G+K280Y,H1*+G7A+E259G+G303R,H1*+G7A+E259G+E390A,H1*+G 7A+N279S+K280Y,H1*+G7A+N279S+G303R,H1*+G7A+N279S+E390A,H1*+G7 A+K280Y+G303R,H1*+G7A+K280Y+E390A,H1*+G7A+G303R+E390A,H1*+W14 0Y+E189P+Y242F,H1*+W140Y+E189P+E259G,H1*+W140Y+E189P+N279S,H1 *+W140Y+E189P+K280Y,H1*+W140Y+E189P+G303R,H1*+W140Y+E189P+E39 0A,H1*+W140Y+Y242F+E259G,H1*+W140Y+Y242F+N279S,H1*+W140Y+Y242 F+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+G303R,H1*+W140Y+Y242F+E390A,H1*+W140Y +E259G+N279S,H1*+W140Y+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E259G+G303R,H1*+ W140Y+E259G+E390A,H1*+W140Y+N279S+K280Y,H1*+W140Y+N279S+G303R ,H1*+W140Y+N279S+E390A,H1*+W140Y+K280Y+G303R,H1*+W140Y+K280Y+ E390A,H1*+W140Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G,H1*+E189P+Y 242F+N279S,H1*+E189P+Y242F+K280Y,H1*+E189P+Y242F+G303R,H1*+E1 89P+Y242F+E390A,H1*+E189P+E259G+N279S,H1*+E189P+E259G+K280Y,H 1*+E189P+E259G+G303R,H1*+E189P+E259G+E390A,H1*+E189P+N279S+K2 80Y,H1*+E189P+N279S+G303R,H1*+E189P+N279S+E390A,H1*+E189P+K28 0Y+G303R,H1*+E189P+K280Y+E390A,H1*+E189P+G303R+E390A,H1*+Y242 F+E259G+N279S,H1*+Y242F+E259G+K280Y,H1*+Y242F+E259G+G303R,H1* +Y242F+E259G+E390A,H1*+Y242F+N279S+K280Y,H1*+Y242F+N279S+G303 R,H1*+Y242F+N279S+E390A,H1*+Y242F+K280Y+G303R,H1*+Y242F+K280Y +E390A,H1*+Y242F+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y,H1*+E259G+ N279S+G303R,H1*+E259G+N279S+E390A,H1*+E259G+K280Y+G303R,H1*+E 259G+K280Y+E390A,H1*+E259G+G303R+E390A,H1*+N279S+K280Y+G303R, H1*+N279S+K280Y+E390A,H1*+N279S+G303R+E390A,H1*+K280Y+G303R+E 390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F,G7A+W140Y+E189P+E259G,G7A+W140Y+E1 89P+N279S,G7A+W140Y+E189P+K280Y,G7A+W140Y+E189P+G303R,G7A+W14 0Y+E189P+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E259G,G7A+W140Y+Y242F+N279S,G7 A+W140Y+Y242F+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E39 0A,G7A+W140Y+E259G+N279S,G7A+W140Y+E259G+K280Y,G7A+W140Y+E259 G+G303R,G7A+W140Y+E259G+E390A,G7A+W140Y+N279S+K280Y,G7A+W140Y +N279S+G303R,G7A+W140Y+N279S+E390A,G7A+W140Y+K280Y+G303R,G7A+ W140Y+K280Y+E390A,G7A+W140Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G ,G7A+E189P+Y242F+N279S,G7A+E189P+Y242F+K280Y,G7A+E189P+Y242F+ G303R,G7A+E189P+Y242F+E390A,G7A+E189P+E259G+N279S,G7A+E189P+E 259G+K280Y,G7A+E189P+E259G+G303R,G7A+E189P+E259G+E390A,G7A+E1 89P+N279S+K280Y,G7A+E189P+N279S+G303R,G7A+E189P+N279S+E390A,G 7A+E189P+K280Y+G303R,G7A+E189P+K280Y+E390A,G7A+E189P+G303R+E3 90A,G7A+Y242F+E259G+N279S,G7A+Y242F+E259G+K280Y,G7A+Y242F+E25 9G+G303R,G7A+Y242F+E259G+E390A,G7A+Y242F+N279S+K280Y,G7A+Y242 F+N279S+G303R,G7A+Y242F+N279S+E390A,G7A+Y242F+K280Y+G303R,G7A +Y242F+K280Y+E390A,G7A+Y242F+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280 Y,G7A+E259G+N279S+G303R,G7A+E259G+N279S+E390A,G7A+E259G+K280Y +G303R,G7A+E259G+K280Y+E390A,G7A+E259G+G303R+E390A,G7A+N279S+ K280Y+G303R,G7A+N279S+K280Y+E390A,G7A+N279S+G303R+E390A,G7A+K 280Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G,W140Y+E189P+Y242F+N2 79S,W140Y+E189P+Y242F+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+G303R,W140Y+E18 9P+Y242F+E390A,W140Y+E189P+E259G+N279S,W140Y+E189P+E259G+K280 Y,W140Y+E189P+E259G+G303R,W140Y+E189P+E259G+E390A,W140Y+E189P +N279S+K280Y,W140Y+E189P+N279S+G303R,W140Y+E189P+N279S+E390A, W140Y+E189P+K280Y+G303R,W140Y+E189P+K280Y+E390A,W140Y+E189P+G 303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N279S,W140Y+Y242F+E259G+K280Y,W1 40Y+Y242F+E259G+G303R,W140Y+Y242F+E259G+E390A,W140Y+Y242F+N27 9S+K280Y,W140Y+Y242F+N279S+G303R,W140Y+Y242F+N279S+E390A,W140 Y+Y242F+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+K280Y+E390A,W140Y+Y242F+G303R +E390A,W140Y+E259G+N279S+K280Y,W140Y+E259G+N279S+G303R,W140Y+ E259G+N279S+E390A,W140Y+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E259G+K280Y+E 390A,W140Y+E259G+G303R+E390A,W140Y+N279S+K280Y+G303R,W140Y+N2 79S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A,W140Y+K280Y+G303R+E390 A,E189P+Y242F+E259G+N279S,E189P+Y242F+E259G+K280Y,E189P+Y242F +E259G+G303R,E189P+Y242F+E259G+E390A,E189P+Y242F+N279S+K280Y, E189P+Y242F+N279S+G303R,E189P+Y242F+N279S+E390A,E189P+Y242F+K 280Y+G303R,E189P+Y242F+K280Y+E390A,E189P+Y242F+G303R+E390A,E1 89P+E259G+N279S+K280Y,E189P+E259G+N279S+G303R,E189P+E259G+N27 9S+E390A,E189P+E259G+K280Y+G303R,E189P+E259G+K280Y+E390A,E189 P+E259G+G303R+E390A,E189P+N279S+K280Y+G303R,E189P+N279S+K280Y +E390A,E189P+N279S+G303R+E390A,E189P+K280Y+G303R+E390A,Y242F+ E259G+N279S+K280Y,Y242F+E259G+N279S+G303R,Y242F+E259G+N279S+E 390A,Y242F+E259G+K280Y+G303R,Y242F+E259G+K280Y+E390A,Y242F+E2 59G+G303R+E390A,Y242F+N279S+K280Y+G303R,Y242F+N279S+K280Y+E39 0A,Y242F+N279S+G303R+E390A,Y242F+K280Y+G303R+E390A,E259G+N279 S+K280Y+G303R,E259G+N279S+K280Y+E390A,E259G+N279S+G303R+E390A ,E259G+K280Y+G303R+E390A,N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0495] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 14, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S,H1*+G7A+W 140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G +E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R,H1 *+G7A+W140Y+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R,H1*+G7A+W14 0Y+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+ E259G,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S,H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y,H1* +G7A+E189P+Y242F+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A,H1*+G7A+E189 P+E259G+N279S,H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y,H1*+G7A+E189P+E259G+G 303R,H1*+G7A+E189P+E259G+E390A,H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y,H1*+ G7A+E189P+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+N279S+E390A,H1*+G7A+E189P +K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+G303R+E3 90A,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G 7A+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A,H1*+G7A+Y242F+ N279S+K280Y,H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R,H1*+G7A+Y242F+N279S+E39 0A,H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R,H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A,H1*+G7 A+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+E259G+N 279S+G303R,H1*+G7A+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+E259G+K280Y+G303 R,H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A +N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+N279S+G3 03R+E390A,H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E25 9G,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y,H1 *+W140Y+E189P+Y242F+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A,H1*+W14 0Y+E189P+E259G+N279S,H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E1 89P+E259G+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A,H1*+W140Y+E189P+N 279S+K280Y,H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R,H1*+W140Y+E189P+N279S+ E390A,H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A ,H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S,H1*+ W140Y+Y242F+E259G+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R,H1*+W140Y +Y242F+E259G+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,H1*+W140Y+Y242 F+N279S+G303R,H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A,H1*+W140Y+Y242F+K28 0Y+G303R,H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+G303R+E3 90A,H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R,H 1*+W140Y+E259G+N279S+E390A,H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R,H1*+W1 40Y+E259G+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A,H1*+W140Y+N 2 7 9S+K2 8 0Y+G3 03R,H1*+W14 0Y+N2 7 9S+K2 8 0Y+E3 9 0A, H1*+W14 0Y+N2 7 9S + G303R+E390A,H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G +N279S,H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+E189P+Y242F+E259G+G303 R,H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1* +E189P+Y242F+N279S+G303R,H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A,H1*+E189 P+Y242F+K280Y+G303R,H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A,H1*+E189P+Y24 2F+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y,H1*+E189P+E259G+N2 79S+G303R,H1*+E189P+E259G+N279S+E390A,H1*+E189P+E259G+K280Y+G 303R,H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A,H1*+E189P+E259G+G303R+E390A, H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R,H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+E 189P+N279S+G303R+E390A,H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+ E259G+N279S+K280Y,H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+Y242F+E259G +N279S+E390A,H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+Y242F+E259G+K280 Y+E390A,H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1*+Y242F+N279S+K280Y+G30 3R,H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1 *+Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+E25 9G+N279S+K280Y+E390A,H1*+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+E259G+K2 80Y+G303R+E390A,H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y 242F+E259G,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S,G7A+W140Y+E189P+Y242F+ K280Y,G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A ,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S,G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y,G7A+ W140Y+E189P+E259G+G303R,G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A,G7A+W140Y +E189P+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189 P+N279S+E390A,G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+K28 0Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N2 79S,G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R,G 7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,G7A+W1 40Y+Y242F+N279S+G303R,G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A,G7A+W140Y+Y 242F+K280Y+G303R,G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y242F+ G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E259G+N279S +G303R,G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A,G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303 R,G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A,G7A +W140Y+N279S+K280Y+G303R,G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140 Y+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y24 2F+E259G+N279S,G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y,G7A+E189P+Y242F+E2 59G+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A,G7A+E189P+Y242F+N279S+K 280Y,G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R,G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A, G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A,G7A+E 189P+Y242F+G303R+E390A,G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y,G7A+E189P+ E259G+N279S+G303R,G7A+E189P+E259G+N279S+E390A,G7A+E189P+E259G +K280Y+G303R,G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A,G7A+E189P+E259G+G303 R+E390A,G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+N279S+K280Y+E39 0A,G7A+E189P+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A,G7 A+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R,G7A+Y24 2F+E259G+N279S+E390A,G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R,G7A+Y242F+E2 59G+K280Y+E390A,G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A,G7A+Y242F+N279S+K 280Y+G303R,G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+Y242F+N279S+G303R+ E390A,G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R ,G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+ E259G+K280Y+G303R+E390A,G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+N279S,W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,W140Y+E189 P+Y242F+E259G+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A,W140Y+E189P +Y242F+N279S+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R,W140Y+E189P+ Y242F+N279S+E390A,W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y 242F+K280Y+E390A,W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,W140Y+E189P+E2 59G+N279S+K280Y,W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,W140Y+E189P+E25 9G+N279S+E390A,W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E189P+E259 G+K280Y+E390A,W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,W140Y+E189P+N279S +K280Y+G303R,W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E189P+N279S+ G303R+E390A,W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N 279S+K280Y,W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R,W140Y+Y242F+E259G+N2 79S+E390A,W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+E259G+K28 0Y+E390A,W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A,W140Y+Y242F+N279S+K280 Y+G303R,W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A,W140Y+Y242F+N279S+G303R +E390A,W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E259G+N279S+K280Y+ G303R,W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E259G+N279S+G303R+E 390A,W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,W140Y+N279S+K280Y+G303R+E3 90A,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,E189P+Y242F+E259G+N279S+G30 3R,E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303 R,E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A ,E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R,E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A,E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,E 189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,E1 89P+E259G+N279S+G303R+E390A,E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A,E18 9P+N279S+K280Y+G303R+E390A,Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,Y242 F+E259G+N279S+K280Y+E390A,Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,Y242F +E259G+K280Y+G303R+E390A,Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,E259G+ N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0496] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 14, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G30 3R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+ N279S,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+E25 9G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+ N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E18 9P+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+ E189P+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A,H1*+G7A+W14 0Y+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+ W140Y+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A,H1*+G 7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R,H1 *+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R ,H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E3 90A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S +G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+K2 80Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G +G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+N2 79S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y +K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S,H1*+G7A+E1 89P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A +E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1*+ G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A,H 1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390 A,H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K 280Y,H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+E189P+E259G+N279 S+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+E259G+K 280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+N279 S+K280Y+G303R,H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+N 279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242 F+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+Y 242F+E259G+N279S+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7 A+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1* +G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E39 0A,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+ E390A,H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E259G+K280Y+G30 3R+E390A,H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242 F+E259G+N279S,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A,H1*+W1 40Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R ,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280 Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y24 2F+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+E1 89P+E259G+N279S+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A,H1*+W 140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390 A,H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+N279S+K28 0Y+G303R,H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+N2 79S+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+ W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G30 3R,H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E259G+G3 03R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R,H1*+W140Y+Y242F+N 279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+W140Y+ Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1* +W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E3 90A,H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+N279S+K280Y+G 303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+E189P+Y242F+ E259G+N279S+G303R,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,H1*+E189P +Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1 *+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G 303R,H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+E189P+Y242F+N279S+ G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G +N279S+K280Y+G303R,H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+E189 P+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A,H 1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+ G303R,H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+Y242F+E259G+N279S +G303R+E390A,H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+Y242F+N279 S+K280Y+G303R+E390A,H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W14 0Y+E189P+Y242F+E259G+N279S,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G +E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y,G7A+W140Y+E189P+Y242 F+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A,G7A+W140Y+E18 9P+Y242F+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A,G7A+W1 40Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y ,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,G7A+W140Y+E189P+E259G+N279 S+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+E25 9G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A,G7A+W140Y+E1 89P+N279S+K280Y+G303R,G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A,G7A+W 140Y+E189P+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390 A,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N27 9S+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A,G7A+W140Y+Y242F+E2 59G+K280Y+G303R,G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y 242F+E259G+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R,G7A+ W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E39 0A,G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+N279S+K2 80Y+G303R,G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E259G+N 279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+ N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,G7A +E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E3 90A,G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+E259G+K 280Y+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+ N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,G7A+E189P +Y242F+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A,G7 A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E 390A,G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+E189P+E259G+K280Y+ G303R+E390A,G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R,G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+Y242 F+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,G 7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+ E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,W140Y+E189P+Y242F+E 259G+N279S+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A,W140Y+E1 89P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E39 0A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+N279 S+K280Y+G303R,W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,W140Y+E189P +Y242F+N279S+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,W140Y+E189P+E259G+N279S+K 280Y+E390A,W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A,W140Y+E189P+E2 59G+K280Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,W14 0Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280 Y+E390A,W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,W140Y+Y242F+E259G +K280Y+G303R+E390A,W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,W140Y+ E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G 303R,E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,E189P+Y242F+E259G+N2 79S+G303R+E390A,E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,E189P+Y24 2F+N279S+K280Y+G303R+E390A,E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390 A,Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0497] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 14, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0498] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 14, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E18 9P+Y242F+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N2 79S+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A +W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242 F+E259G+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G30 3R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+ E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y +G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+ G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E 259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+ E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W14 0Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N2 79S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,H 1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+Y242 F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G30 3R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+ E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G +N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390 A,H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+ G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1* +W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y +G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1 *+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280 Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,G 7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,G7A+W140Y+E189P+ Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K28 0Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A, G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+Y242F +E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K2 80Y+G303R+E390A,W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E39 0A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0499] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 14, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e b) modificação em posições correspondentes às posições: H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R,H1*+G7A+W14 0Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K 280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+ E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G 7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+G7A+E189P+Y2 42F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R+E390A,G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K2 80Y+G303R+E390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0500] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 14, que compreende: a) deleção em posições correspondentes às posições R180* e S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E 390A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0501] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 1 compreendendo modificações nas posições correspondentes a: H1*+G7A+ R180*+S181*, H1*+G7A+ R180*+S181*+Y242F, H1*+G7A+ R180*+S181*+Y242F+N279S, H1*+G7A+ R180*+S181*+Y242F+N279S+G303R, H1*+G7A+ R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+ G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+ G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A +G475K, H1*+ G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+E390A +G476A, H1*+ G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A +G476A, H1*+ G7A+R180*+S181*+ D118T+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A +G475K, H1*+ G7A+R180*+S181*+ D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A +G476A, H1*+ G7A+R180*+S181*+ D118T+ W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A +G476A, H1*+ G7A+R180*+S181*+ D118T+ W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A +G475K, H1*+ G7A+R180*+S181*+ D118T+ W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A +G476A, H1*+ G7A+R180*+S181*+ D118T+ W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A +G476A, H1*+ G7A+R180*+S181*+ D118T+ W140Y+N194F+ Y242F+ E259G+ N279S+ G303R+ E390A + G475K, H1*+ G7A+R180*+S181*+ D118T+ W140Y+ N194F+ Y242F+E259G+N279S+E390A +G476A, H1*+ G7A+R180*+S181*+ D118T+ W140Y+ N194F+ Y242F+ E259G+ N279S+ G303R+ E390A + G476A, H1*+ G7A+R180*+S181*+ D118T+ W140Y+N194F+ Y242F+ E259G+ K280Y+ N279S+ G303R+ E390A + G475K, H1*+ G7A+R180*+S181*+ D118T+ W140Y+ N194F+ Y242F+E259G+ K280Y+ N279S+E390A +G476A, H1*+ G7A+R180*+S181*+ D118T+ W140Y+ N194F+ Y242F+ E259G+ K280Y+ N279S+ G303R+ E390A + G476A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0502] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 1 compreendendo modificações nas posições correspondentes a E169I+R180*+S181*, T114K+R180*+S181*, W167A+R180*+S181*, E169V+R180*+S181*, R180*+S181*+W188C, W167D+R180*+S181*, Y177D+R180*+S181*, W167S+R180*+S181*, W167E+R180*+S181*, W167P+R180*+S181*, R180*+S181*+L205R, R180*+S181*+A203F, W159L+R180*+S181*, Y160P+R180*+S181*, W159H+R180*+S181*, K178A+R180*+S181*, R180*+S181*+G183P, Q136T+R180*+S181*, K142P+R180*+S181*, K142E+R180*+S181*, Y152L+R180*+S181*, A111L+R180*+S181*, G110K+R180*+S181*, A111G+R180*+S181* e V117G+R180*+S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0503] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 1 compreendendo modificações nas posições correspondentes a R180*+S181*+E193I+H323N, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0504] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 1 compreendendo modificações nas posições correspondentes a G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*, G7H+W167P+R180*+S181*+G455R e Q98L+V103A+G110K+R180*+S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0505] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 1 compreendendo modificações nas posições correspondentes a A60V+Q98L+G110K+R180*+S181*+A383D, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0506] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 1 compreendendo modificações nas posições correspondentes a F116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y e Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+T315A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0507] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 1 compreendendo modificações nas posições correspondentes a H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K e H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0508] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 1 compreendendo modificações nas posições correspondentes a H1*+G7A+R180*+S181*+T182S+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+T182L+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+S181L+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180S+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+A60P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E3 90A+G475K, H1*+G7A+M105L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+M105I+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+T182D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+T182E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+T182G+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+T182M+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+A185K+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+A185D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+A185N+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+A185R+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+A185E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244L+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244I+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E 390A+G475K, H1*+G7A+T40N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E3 90A+G475K, H1*+G7S+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E3 90A+G475K, H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E 390A+G475K, H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+W140S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+W167P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323A+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322Y+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360Y+E 390A+G475K, H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E3 90A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7H+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E3 90A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E 390A+G475K e L63F+W140Y+L173F+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+H3 23W, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0509] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 1 compreendendo modificações nas posições correspondentes a H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205F+Y242F+E259G+N279S+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276F+N279S+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276W+N279S+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280W+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q 360W+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E359W+Q 360W+E390A+G475K, H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y 362V+E390A+G475K, H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G30 3R+E390A+G475K, H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G30 3R+E390A+G475K, H1*+G7A+D123N+I176V+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q 360W+E390A+G475K, H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G30 3R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+H 323A+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+H 323A+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M 322Y+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+Q 360Y+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322Y+Q 360Y+E390A+G475K, H1*+G7S+T40N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y3 62V+E390A+G475K, H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y 362V+E390A+G475K, H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G30 3R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y 362V+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+H 320T+E390A+G475K, H1*+G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G3 03R+E390A+G475K, H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G3 03R+E390A+G475K, H1*+G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G3 03R+E390A+G475K, H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G3 03R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+Y 362V+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+S286K+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H 320T+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H 323A+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+H 320T+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A +G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E359W+E390A +G475K e W140Y+L173F+R180*+S181*+N194F+L205Y+N225S+Y242F+E259G+N279S+G 303R+H323A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0510] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 1 compreendendo modificações nas posições correspondentes a H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R +E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276Y+N 279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276W+N 279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K 280F+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K 280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K 280W+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276F+N 279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276Y+N 279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276W+N 279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K 280F+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K 280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K 280W+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+S181*+T182*+Y242F+E259G+N 279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G30 3R+Y362V+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E 359W+Q360W+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G 303R+Y362V+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M 322Y+Q360Y+E390A+G475K, H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N 279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G30 3R+H320T+E390A+G475K, H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G30 3R+Y362V+E390A+G475K, H1*+G7A+I137F+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G 303R+Y362V+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G 303R+Y362V+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H 320T+H323A+E390A+G475K, H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G3 03R+Y362V+E390A+G475K, H1*+G7H+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A3 83D+E390A+D405G+G475K, H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+T256A+E259G+N2 79S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G3 03R+A383D+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N 279S+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N 279S+G303R+N394W+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N 279S+G303R+E390A+N474L, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N 279S+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N 279S+G303R+E390A+G475E, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N 279S+G303R+E390A+N474F, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N 279S+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N 279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R37A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E2 59G+N279S+G303R+G475K, H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S +G303R+Q360Y+E390A+G475K, H1*+G7A+R37N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E2 59G+N279S+G303R+G475K, H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S +G303R+E390A+R414M+G475K, H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P +N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S +G303R+H323W+E390A+G475K, H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S +G303R+P321Y+E390A+G475K, H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S +G303R+Q360M+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K 280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K 280Y+G303R+E390A+G475K e H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+E259G+N 279S+G303R+E390A+G475K, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0511] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 1 compreendendo modificações nas posições correspondentes: H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+S286K+G 303R+H320T+H323A+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E 259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205V+Y242F+E 259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E 259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205V+Y242F+E 259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E 259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E 259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+Q98L+G110K+P146S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N2 79S+G303R+A383D+E390A+G475K, H1*+N3S+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+V252I+E259 G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+F 266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E 259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E 259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N 279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N 279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F 266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N 279S+S302T+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N 279S+G303R+E390A+N474F+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N 279S+G303R+E390A+N422V+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F 261P+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N 279S+G303R+E390A+N470A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242L+E259G+N 279S+G303R+W346N+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N 279S+G303R+E390A+H420P+G475K, H1*+G7A+R26Y+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E2 59G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N 279S+G303R+Y371S+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+E259G+N 279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+Y242F+E259G+N 279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+Y242F+S243Q+E259G+N 279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+Y242F+S243Q+E259G+N 279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N 279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+A41D+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E2 59G+N279S+G303R+E390A+G475K e H1*+G7A+T40G+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E2 59G+N279S+G303R+E390A+G475K, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa- amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0512] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 1 compreendendo modificações nas posições correspondentes: H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+S181*+T182*+F202Y+Y242F+E259G +N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+T134D+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205V+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205V+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D123N+W140Y+I176V+R180*+S181*+N194F+L205V+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D123N+W140Y+I176V+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+Y242F+E2 59G+N279S+G303R+T315A+E390A+G475K, H1*+A60V+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E 259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+T151A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+K 258V+E259V+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+N3S+G7A+N94D+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+V252I +E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+T151A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+K 258V+E259V+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E 259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E 259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205V+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205V+Y242F+E 259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E 259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205V+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E 259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E 259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+Y242F+S243Q+E259G+F 266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+Y242F+S243Q+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+F266Y+N 279S+K280Y+G303R+E390A+T427L+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+Y242F+S243Q+E259G+F 266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+S243Q+E 259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+S243Q+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+S 243Q+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E 259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F 266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+E 259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+Y242F+E259G+F 266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+L205Y+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F 266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M 260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F 266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A e H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S +K280Y+G303R+E390A+G476A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa- amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0513] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 1 compreendendo modificações nas posições correspondentes: H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L 205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+N106D+A109G+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205V+Y242F +E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F +E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205V+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205V+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+S 243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E 259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+L205Y+Y242F+E 259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E 259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+S 243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y +Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+R37N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E2 59G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T 224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T 224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+S 243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S 243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T 224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T 224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M 260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470A+G475K, H1*+G7A+S132L+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E 259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, e T40N+F116L+D123N+N126D+N128Y+T131I+F155W+R180*+S181*+T182D+E1 89P+F202Y+K457N+P458S+G475K+G476E, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa- amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0514] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 1 compreendendo modificações nas posições correspondentes a H1*+G7A+G113A+F116W+D123N+T131V+Q136K+E169Q+K172Q+R 180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+N3S+G7A+N94D+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y +Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y 242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+S 243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y 242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+L205Y+Y242F+S 243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+I409L+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394W+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474F, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205V+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205N+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Q+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474F, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394W+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394D+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180Q+S181*+T182*+A185Q+E189P+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N1 94F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T 224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+N3D+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E25 9G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N 194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A e H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0515] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 1 compreendendo modificações nas posições correspondentes a H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+W140Y+R180*+S181*+N 194F+F202Y+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+W140Y+R180*+S181*+N 194F+F202Y+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y 242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476A, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420P+N474L, H1*+G7A+G73L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G476H, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G475K, N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L, H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K, H1*+G7A+V103I+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+P146H+R180*+S181*+T182S+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+R414M+G475K, H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+P146H+R180*+S181*+T182S+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+N 194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y 242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180Q+S181*+T182*+A185Q+E189P+Y 242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+L 205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+L 205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 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H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476H, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K, H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N19 4F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+L205Y+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E1 89P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260W+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N1 94F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 196I+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420Y+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A e H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L 205Y+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0516] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 1 compreendendo modificações nas posições correspondentes a H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+V365I+E390A+N474L, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K, H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189 P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+N474F, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390D+H420P+G475K, H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 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94F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+N3G+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189 P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K, H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N 194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N 194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+T256D+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K, N3G+G7A+R37V+D118T+W140M+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+N394D+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E18 9P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K, H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N 194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N19 4F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+M260W+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E1 89P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K e H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0517] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 1 compreendendo modificações nas posições correspondentes a H1*+G7A+N106D+A109G+F116W+D123N+N126D+T131I+T165V+N 174S+R180*+S181*+T182I+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G4 75K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+H420A+N474 L, H1*+N3D+G7A+K93R+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189 P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L, H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+W346N+E390A+G4 75K, H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+G4 75K, H1*+N3G+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E18 9P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476 A, H1*+G7A+R37N+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E1 89P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G47 5K, H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189 P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189 P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189 P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K, H1*+N3G+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189 P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189 P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189 P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+G361M+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189 P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E18 9P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475 K, H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G47 5K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G47 5K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G47 5K, H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G47 5K, H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G47 5K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+N174K+R180*+S181*+T182S+E1 89P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+G47 5K, H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321Y+L354V+N394D+G47 5K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+Q360M+E390A+G47 5K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E18 9P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475 K e H1*+G7A+A31S+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A18 5Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475 K, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0518] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 1 compreendendo modificações nas posições correspondentes a H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F +L205Y+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0519] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 1 compreendendo modificações nas posições correspondentes a H1*+N54S+V56T+K72R+G113Q+F116Q+D118Q+D123N+N126D+T1 31I+K142G+D144N+W167F+K172G+N174S+S181T+T182*+G183*+F202Y+E39 0A+F395Y+K457R+S472R+V473C+G475K, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa- amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0520] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 1 compreendendo modificações nas posições correspondentes a H1*+N54S+V56T+K72R+N106D+A109G+G113Q+F116Q+D118Q+D1 23N+N126D+T131I+K142G+D144N+W167F+K172G+N174S+S181T+T182*+G18 3*+F202Y+E390A+F395Y+K457R+S472R+V473C+G475K, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0521] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 2 compreendendo modificações nas posições Y152L+R180*+S181*, A111L+R180*+S181*, G110K+R180*+S181*, A111G+R180*+S181* e V117G+R180*+S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0522] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 2 compreendendo modificações nas posições correspondentes a R180*+S181*+E193I+H323N, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0523] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 2 compreendendo modificações nas posições correspondentes a G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*, G7H+W167P+R180*+S181*+G455R e Q98L+V103A+G110K+R180*+S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90% pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94% pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0524] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 2 compreendendo modificações nas posições correspondentes a A60V+Q98L+G110K+R180*+S181*+A383D, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0525] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 2 compreendendo modificações nas posições correspondentes a F116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y e Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+T315A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0526] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 2 compreendendo modificações nas posições correspondentes a H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K e H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0527] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 2 compreendendo modificações nas posições correspondentes a H1*+G7A+R180*+S181*+T182S+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+T182L+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+S181L+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180S+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+A60P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E3 90A+G475K, H1*+G7A+M105L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+M105I+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+T182D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+T182E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+T182G+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+T182M+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+A185K+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+A185D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+A185N+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+A185R+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+A185E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244L+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244I+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E 390A+G475K, H1*+G7A+T40N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E3 90A+G475K, H1*+G7S+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E3 90A+G475K, H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E 390A+G475K, H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+W140S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+W167P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323A+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322Y+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360Y+E 390A+G475K, H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E3 90A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7H+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E3 90A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E 390A+G475K e L63F+W140Y+L173F+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+H3 23W, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0528] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 2 compreendendo modificações nas posições correspondentes a H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205F+Y242F+E259G+N279S+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276F+N279S+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276W+N279S+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280W+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q 360W+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E359W+Q 360W+E390A+G475K, H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y 362V+E390A+G475K, H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G30 3R+E390A+G475K, H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G30 3R+E390A+G475K, H1*+G7A+D123N+I176V+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q 360W+E390A+G475K, H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G30 3R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+H 323A+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+H 323A+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M 322Y+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+Q 360Y+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322Y+Q 360Y+E390A+G475K, H1*+G7S+T40N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y3 62V+E390A+G475K, H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y 362V+E390A+G475K, H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G30 3R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y 362V+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+H 320T+E390A+G475K, H1*+G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G3 03R+E390A+G475K, H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G3 03R+E390A+G475K, H1*+G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G3 03R+E390A+G475K, H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G3 03R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+Y 362V+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+S286K+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H 320T+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H 323A+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+H 320T+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A +G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E359W+E390A +G475K e W140Y+L173F+R180*+S181*+N194F+L205Y+N225S+Y242F+E259G+N279S+G 303R+H323A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0529] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 2 compreendendo modificações nas posições correspondentes a H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R +E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276Y+N 279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276W+N 279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K 280F+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K 280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K 280W+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276F+N 279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276Y+N 279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276W+N 279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K 280F+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K 280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K 280W+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+S181*+T182*+Y242F+E259G+N 279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G30 3R+Y362V+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E 359W+Q360W+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G 303R+Y362V+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M 322Y+Q360Y+E390A+G475K, H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N 279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G30 3R+H320T+E390A+G475K, H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G30 3R+Y362V+E390A+G475K, H1*+G7A+I137F+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G 303R+Y362V+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G 303R+Y362V+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H 320T+H323A+E390A+G475K, H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G3 03R+Y362V+E390A+G475K, H1*+G7H+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A3 83D+E390A+D405G+G475K, H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+T256A+E259G+N2 79S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+Q98L+G110K+R1 03R+A383D+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S 279S+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+W140Y+R180*+S 279S+G303R+N394W+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S 279S+G303R+E390A+N474L, H1*+G7A+W140Y+R180*+S 279S+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S 279S+G303R+E390A+G475E, H1*+G7A+W140Y+R180*+S 279S+G303R+E390A+N474F, H1*+G7A+W140Y+R180*+S 279S+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S 279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R37A+W140Y+R1 59G+N279S+G303R+G475K, H1*+W140Y+R180*+S181* +G303R+Q360Y+E390A+G475K, H1*+G7A+R37N+W140Y+R1 59G+N279S+G303R+G475K, H1*+W140Y+R180*+S181* +G303R+E390A+R414M+G475K, H1*+W140Y+R180*+S181* +N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+W140Y+R180*+S181* +G303R+H323W+E390A+G475K, H1*+W140Y+R180*+S181* +G303R+P321Y+E390A+G475K, H1*+W140Y+R180*+S181* +G303R+Q360M+E390A+G475K, +S181*+Y242F+E259G+N279S+G3 *+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N *+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N *+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N *+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N *+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N *+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N *+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N *+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N +S181*+N194F+L205Y+Y242F+E2 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S +S181*+N194F+L205Y+Y242F+E2 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S 94F+L205Y+Y242F+E259G+F261P 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K 280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K 280Y+G303R+E390A+G475K e H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+E259G+N 279S+G303R+E390A+G475K, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0530] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 2 compreendendo modificações nas posições correspondentes: H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+S286K+G 303R+H320T+H323A+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E 259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205V+Y242F+E 259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E 259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205V+Y242F+E 259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E 259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E 259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+Q98L+G110K+P146S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N2 79S+G303R+A383D+E390A+G475K, H1*+N3S+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+V252I+E259 G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+F 266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E 259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E 259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N 279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N 279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F 266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N 279S+S302T+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N 279S+G303R+E390A+N474F+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N 279S+G303R+E390A+N422V+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F 261P+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N 279S+G303R+E390A+N470A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242L+E259G+N 279S+G303R+W346N+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N 279S+G303R+E390A+H420P+G475K, H1*+G7A+R26Y+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E2 59G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N 279S+G303R+Y371S+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+E259G+N 279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+Y242F+E259G+N 279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+Y242F+S243Q+E259G+N 279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+Y242F+S243Q+E259G+N 279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N 279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+A41D+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E2 59G+N279S+G303R+E390A+G475K e H1*+G7A+T40G+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E2 59G+N279S+G303R+E390A+G475K, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa- amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0531] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 2 compreendendo modificações nas posições correspondentes: H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+S181*+T182*+F202Y+Y242F+E259G +N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+T134D+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205V+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205V+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D123N+W140Y+I176V+R180*+S181*+N194F+L205V+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D123N+W140Y+I176V+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+Y242F+E2 59G+N279S+G303R+T315A+E390A+G475K, H1*+A60V+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E 259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+T151A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+K 258V+E259V+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+N3S+G7A+N94D+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+V252I +E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+T151A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+K 258V+E259V+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E 259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E 259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205V+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205V+Y242F+E 259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E 259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205V+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E 259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E 259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+Y242F+S243Q+E259G+F 266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+Y242F+S243Q+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S 279S+K280Y+G303R+E390A+T427L+G4 H1*+G7A+W140Y+R180*+S 266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G4 H1*+G7A+W140Y+R180*+S 259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G4 H1*+G7A+W140Y+R180*+S 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G4 H1*+G7A+W140Y+R180*+S 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G4 H1*+G7A+W140Y+R180*+S 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G4 H1*+G7A+W140Y+R180*+S 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G4 H1*+G7A+W140Y+R180*+S 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G4 H1*+G7A+W140Y+R180*+S 243Q+E259G+N279S+G303R+E390A+G4 H1*+G7A+W140Y+R180*+S 259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G4 H1*+G7A+W140Y+R180*+S 266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G4 H1*+G7A+W140Y+R180*+S 259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G4 H1*+G7A+W140Y+R180*+S 266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G4 H1*+G7A+W140Y+R180*+S 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G4 H1*+G7A+W140Y+R180*+S 266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G4 H1*+G7A+W140Y+R180*+S 260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G4 H1*+G7A+W140Y+R180*+S 266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G4 H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S +K280Y+G303R+E390A+G476A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa- amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0532] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 2 compreendendo modificações nas posições correspondentes: H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L 205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+N106D+A109G+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205V+Y242F +E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F +E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205V+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205V+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+S 243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E 259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+L205Y+Y242F+E 259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E 259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+S 243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y +Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+R37N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E2 59G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T 224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T 224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+S 243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S 243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T 224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T 224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M 260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470A+G475K, H1*+G7A+S132L+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E 259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, e T40N+F116L+D123N+N126D+N128Y+T131I+F155W+R180*+S181*+T182D+E1 89P+F202Y+K457N+P458S+G475K+G476E, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa- amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0533] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 2 compreendendo modificações nas posições correspondentes a H1*+G7A+G113A+F116W+D123N+T131V+Q136K+E169Q+K172Q+R 180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+N3S+G7A+N94D+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y +Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y 242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+S 243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y 242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+L205Y+Y242F+S 243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+I409L+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394W+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474F, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205V+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205N+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Q+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474F, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394W+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394D+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180Q+S181*+T182*+A185Q+E189P+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N1 94F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T 224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+N3D+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E25 9G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N 194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A e H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0534] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 2 compreendendo modificações nas posições correspondentes a H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+W140Y+R180*+S181*+N 194F+F202Y+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+W140Y+R180*+S181*+N 194F+F202Y+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y 242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K, 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H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N19 4F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+L205Y+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E1 89P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260W+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N1 94F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 196I+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420Y+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A e H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L 205Y+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0535] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 2 compreendendo modificações nas posições correspondentes a H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+V365I+E390A+N474L, Petição 870230111758, de 18/12/2023, pág. 559/914 547/845 H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K, H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189 P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+N474F, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390D+H420P+G475K, H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G475K, H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K, 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H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+T256D+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K, N3G+G7A+R37V+D118T+W140M+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+N394D+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E18 9P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K, H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N 194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N19 4F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+M260W+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E1 89P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K e H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0536] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 2 compreendendo modificações nas posições correspondentes a H1*+G7A+N106D+A109G+F116W+D123N+N126D+T131I+T165V+N 174S+R180*+S181*+T182I+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G4 75K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+H420A+N474 L, H1*+N3D+G7A+K93R+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189 P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L, H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+W346N+E390A+G4 75K, H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+G4 75K, H1*+N3G+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E18 9P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476 A, H1*+G7A+R37N+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E1 89P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G47 5K, H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189 P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189 P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189 P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K, H1*+N3G+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189 P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189 P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189 P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+G361M+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189 P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E18 9P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475 K, H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G47 5K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G47 5K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G47 5K, H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G47 5K, H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G47 5K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+N174K+R180*+S181*+T182S+E1 89P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+G47 5K, H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321Y+L354V+N394D+G47 5K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+Q360M+E390A+G47 5K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E18 9P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475 K e H1*+G7A+A31S+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A18 5Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475 K, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0537] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 2 compreendendo modificações nas posições correspondentes a H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F +L205Y+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0538] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 2 compreendendo modificações nas posições correspondentes a H1*+N54S+V56T+K72R+G113Q+F116Q+D118Q+D123N+N126D+T1 31I+K142G+D144N+W167F+K172G+N174S+S181T+T182*+G183*+F202Y+E39 0A+F395Y+K457R+S472R+V473C+G475K, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa- amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0539] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 2 compreendendo modificações nas posições correspondentes a H1*+N54S+V56T+K72R+N106D+A109G+G113Q+F116Q+D118Q+D1 23N+N126D+T131I+K142G+D144N+W167F+K172G+N174S+S181T+T182*+G18 3*+F202Y+E390A+F395Y+K457R+S472R+V473C+G475K, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0540] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 3 compreendendo modificações nas posições A111G+R180*+S181* e V117G+R180*+S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0541] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 3 compreendendo modificações nas posições correspondentes a R180*+S181*+E193I+H323N, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0542] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 3 compreendendo modificações nas posições correspondentes a G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*, G7H+W167P+R180*+S181*+G455R e Q98L+V103A+G110K+R180*+S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0543] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 3 compreendendo modificações nas posições correspondentes a A60V+Q98L+G110K+R180*+S181*+A383D, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0544] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 3 compreendendo modificações nas posições correspondentes a F116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y e Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+T315A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0545] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 3 compreendendo modificações nas posições correspondentes a H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K e H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0546] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 3 compreendendo modificações nas posições correspondentes a H1*+G7A+R180*+S181*+T182S+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+T182L+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+S181L+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180S+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+A60P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E3 90A+G475K, H1*+G7A+M105L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+M105I+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+T182D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+T182E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+T182G+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+T182M+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+A185K+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+A185D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+A185N+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+A185R+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+A185E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244L+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244I+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E 390A+G475K, H1*+G7A+T40N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E3 90A+G475K, H1*+G7S+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E3 90A+G475K, H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E 390A+G475K, H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+W140S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+W167P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323A+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322Y+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360Y+E 390A+G475K, H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E3 90A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7H+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E3 90A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E 390A+G475K e L63F+W140Y+L173F+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+H3 23W, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0547] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 3 compreendendo modificações nas posições correspondentes a H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205F+Y242F+E259G+N279S+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276F+N279S+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276W+N279S+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280W+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q 360W+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E359W+Q 360W+E390A+G475K, H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y 362V+E390A+G475K, H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G30 3R+E390A+G475K, H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G30 3R+E390A+G475K, H1*+G7A+D123N+I176V+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q 360W+E390A+G475K, H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G30 3R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+H 323A+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+H 323A+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M 322Y+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+Q 360Y+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322Y+Q 360Y+E390A+G475K, H1*+G7S+T40N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y3 62V+E390A+G475K, H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y 362V+E390A+G475K, H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G30 3R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y 362V+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+H 320T+E390A+G475K, H1*+G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G3 03R+E390A+G475K, H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G3 03R+E390A+G475K, H1*+G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G3 03R+E390A+G475K, H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G3 03R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+Y 362V+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+S286K+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H 320T+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H 323A+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+H 320T+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A +G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E359W+E390A +G475K e W140Y+L173F+R180*+S181*+N194F+L205Y+N225S+Y242F+E259G+N279S+G 303R+H323A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0548] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 3 compreendendo modificações nas posições correspondentes a H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R +E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276Y+N 279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276W+N 279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K 280F+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K 280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K 280W+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276F+N 279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276Y+N 279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276W+N 279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K 280F+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K 280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K 280W+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+S181*+T182*+Y242F+E259G+N 279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G30 3R+Y362V+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E 359W+Q360W+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G 303R+Y362V+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M 322Y+Q360Y+E390A+G475K, H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N 279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G30 3R+H320T+E390A+G475K, H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G30 3R+Y362V+E390A+G475K, H1*+G7A+I137F+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G 303R+Y362V+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G 303R+Y362V+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H 320T+H323A+E390A+G475K, H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G3 03R+Y362V+E390A+G475K, H1*+G7H+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A3 83D+E390A+D405G+G475K, H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+T256A+E259G+N2 79S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G3 03R+A383D+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N 279S+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N 279S+G303R+N394W+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N 279S+G303R+E390A+N474L, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N 279S+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N 279S+G303R+E390A+G475E, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N 279S+G303R+E390A+N474F, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N 279S+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N 279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R37A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E2 59G+N279S+G303R+G475K, H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S +G303R+Q360Y+E390A+G475K, H1*+G7A+R37N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E2 59G+N279S+G303R+G475K, H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S +G303R+E390A+R414M+G475K, H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P +N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S +G303R+H323W+E390A+G475K, H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S +G303R+P321Y+E390A+G475K, H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S +G303R+Q360M+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K 280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K 280Y+G303R+E390A+G475K e H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+E259G+N 279S+G303R+E390A+G475K, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0549] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 3 compreendendo modificações nas posições correspondentes: H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+S286K+G 303R+H320T+H323A+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E 259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205V+Y242F+E 259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E 259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205V+Y242F+E 259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E 259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E 259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+Q98L+G110K+P146S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N2 79S+G303R+A383D+E390A+G475K, H1*+N3S+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+V252I+E259 G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+F 266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E 259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E 259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N 279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N 279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F 266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N 279S+S302T+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N 279S+G303R+E390A+N474F+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N 279S+G303R+E390A+N422V+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F 261P+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N 279S+G303R+E390A+N470A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242L+E259G+N 279S+G303R+W346N+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N 279S+G303R+E390A+H420P+G475K, H1*+G7A+R26Y+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E2 59G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N 279S+G303R+Y371S+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+E259G+N 279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+Y242F+E259G+N 279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+Y242F+S243Q+E259G+N 279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+Y242F+S243Q+E259G+N 279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N 279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+A41D+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E2 59G+N279S+G303R+E390A+G475K e H1*+G7A+T40G+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E2 59G+N279S+G303R+E390A+G475K, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa- amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0550] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 3 compreendendo modificações nas posições correspondentes: H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+S181*+T182*+F202Y+Y242F+E259G +N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+T134D+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205V+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205V+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D123N+W140Y+I176V+R180*+S181*+N194F+L205V+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D123N+W140Y+I176V+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+Y242F+E2 59G+N279S+G303R+T315A+E390A+G475K, H1*+A60V+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E 259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+T151A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+K 258V+E259V+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+N3S+G7A+N94D+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+V252I +E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+T151A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+K 258V+E259V+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E 259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E 259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205V+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205V+Y242F+E 259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E 259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205V+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E 259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E 259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+Y242F+S243Q+E259G+F 266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+Y242F+S243Q+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+F266Y+N 279S+K280Y+G303R+E390A+T427L+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+Y242F+S243Q+E259G+F 266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+S243Q+E 259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+S243Q+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+S 243Q+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E 259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F 266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+E 259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+Y242F+E259G+F 266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+L205Y+Y242F+E 259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F 266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M 260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F 266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A e H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S +K280Y+G303R+E390A+G476A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa- amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0551] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 3 compreendendo modificações nas posições correspondentes: H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L 205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+N106D+A109G+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205V+Y242F +E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F +E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G +N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205V+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205V+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+S 243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E 259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+L205Y+Y242F+E 259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E 259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+S 243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y +Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+L205Y+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+R37N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E2 59G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T 224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T 224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+S 243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S 243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T 224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T 224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M 260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470A+G475K, H1*+G7A+S132L+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E 259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, e T40N+F116L+D123N+N126D+N128Y+T131I+F155W+R180*+S181*+T182D+E1 89P+F202Y+K457N+P458S+G475K+G476E, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa- amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0552] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 3 compreendendo modificações nas posições correspondentes a H1*+G7A+G113A+F116W+D123N+T131V+Q136K+E169Q+K172Q+R 180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+N3S+G7A+N94D+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y +Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y 242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+S 243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y 242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+L205Y+Y242F+S 243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+I409L+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394W+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474F, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 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205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394W+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394D+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180Q+S181*+T182*+A185Q+E189P+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N1 94F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T 224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+N3D+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E25 9G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N 194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A e H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0553] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 3 compreendendo modificações nas posições correspondentes a H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+W140Y+R180*+S181*+N 194F+F202Y+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+W140Y+R180*+S181*+N 194F+F202Y+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y 242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476A, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420P+N474L, H1*+G7A+G73L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G476H, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G475K, N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L, H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K, H1*+G7A+V103I+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+P146H+R180*+S181*+T182S+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+R414M+G475K, H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N474L, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+P146H+R180*+S181*+T182S+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+N 194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y 242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180Q+S181*+T182*+A185Q+E189P+Y 242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+L 205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+L 205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 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H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476H, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K, H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N19 4F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+L205Y+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E1 89P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260W+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N1 94F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 196I+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420Y+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A e H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L 205Y+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0554] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 3 compreendendo modificações nas posições correspondentes a H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+V365I+E390A+N474L, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K, H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189 P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+N474F, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390D+H420P+G475K, H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 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94F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+N3G+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189 P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L 205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K, H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N 194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N 194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+T256D+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K, N3G+G7A+R37V+D118T+W140M+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+N394D+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E18 9P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K, H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N 194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N19 4F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+M260W+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E1 89P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K e H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0555] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 3 compreendendo modificações nas posições correspondentes a H1*+G7A+N106D+A109G+F116W+D123N+N126D+T131I+T165V+N 174S+R180*+S181*+T182I+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G4 75K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+H420A+N474 L, H1*+N3D+G7A+K93R+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189 P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L, H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+W346N+E390A+G4 75K, H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+G4 75K, H1*+N3G+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E18 9P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476 A, H1*+G7A+R37N+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E1 89P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G47 5K, H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189 P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189 P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189 P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K, H1*+N3G+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189 P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189 P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189 P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+G361M+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189 P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E18 9P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475 K, H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G47 5K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G47 5K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G47 5K, H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G47 5K, H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G47 5K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+N174K+R180*+S181*+T182S+E1 89P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+G47 5K, H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321Y+L354V+N394D+G47 5K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N1 94F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+Q360M+E390A+G47 5K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E18 9P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475 K e H1*+G7A+A31S+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A18 5Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475 K, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0556] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 3 compreendendo modificações nas posições correspondentes a H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F +L205Y+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0557] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 3 compreendendo modificações nas posições correspondentes a H1*+N54S+V56T+K72R+G113Q+F116Q+D118Q+D123N+N126D+T1 31I+K142G+D144N+W167F+K172G+N174S+S181T+T182*+G183*+F202Y+E39 0A+F395Y+K457R+S472R+V473C+G475K, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa- amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0558] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase da SEQ ID NO: 3 compreendendo modificações nas posições correspondentes a H1*+N54S+V56T+K72R+N106D+A109G+G113Q+F116Q+D118Q+D1 23N+N126D+T131I+K142G+D144N+W167F+K172G+N174S+S181T+T182*+G18 3*+F202Y+E390A+F395Y+K457R+S472R+V473C+G475K, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
[0559] As variantes podem adicionalmente compreender uma ou mais substituições e/ou deleções adicionais em uma ou mais (por ex., várias) outras posições.
[0560] As alterações de aminoácidos podem ser de natureza secundária, isto é, substituições conservativas ou inserções de aminoácidos que não afetam significativamente o dobramento e/ou atividade da proteína; pequenas deleções, tipicamente de 1-30 aminoácidos; pequenas extensões do terminal amino ou carboxila, tal como um resíduo metionina amino-terminal; um pequeno peptídeo ligador possuindo até 2025 resíduos; ou uma pequena extensão que facilita a purificação por meio de alteração da carga total ou outra função, tal como um trato de poli-histidina, um epítopo antigênico ou um domínio de ligação.
[0561] Em consequência, mesmo apesar de as variantes de alfa-amilase úteis na invenção poderem compreender somente uma substituição específica proporcionando a propriedade melhorada de acordo com a invenção, ainda podem ter modificações adicionais conducentes a uma variante de alfa- amilase tendo pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência, com a sequência de aminoácidos da SEQ ID No: 1, 2, ou 3. Preferencialmente, estas modificações adicionais não devem mudar significativamente as propriedades melhoradas da variante de alfa-amilase.
[0562] Exemplos de substituições conservativas estão dentro dos grupos de aminoácidos básicos (arginina, lisina e histidina), aminoácidos acídicos (ácido glutâmico e ácido aspártico), aminoácidos polares (glutamina e asparagina), aminoácidos hidrofóbicos (leucina, isoleucina e valina), aminoácidos aromáticos (fenilalanina, triptofano e tirosina), e pequenos aminoácidos (glicina, alanina, serina, treonina e metionina). As substituições de aminoácidos que não alteram geralmente a atividade específica são conhecidas na técnica e são descritas, por exemplo, por H. Neurath e R.L. Hill, 1979, Em, The Proteins, Academic Press, Nova Iorque. Substituições comuns são Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Tyr/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu e Asp/Gly.
[0563] Os aminoácidos essenciais em um polipeptídeo podem ser identificados de acordo com procedimentos conhecidos na técnica, tais como mutagênese sítio-dirigida ou mutagênese de varredura por alanina (Cunningham e Wells, 1989, Science 244: 1081-1085). Na última técnica, mutações de alanina únicas são introduzidas em todos os resíduos da molécula, e as moléculas mutantes resultantes são testadas quanto à atividade de protease para identificar resíduos de aminoácidos que são críticos para a atividade da molécula. Ver também, Hilton et al., 1996, J. Biol. Chem. 271: 4699-4708. O sítio ativo da enzima ou outra interação biológica também pode ser determinado pela análise física da estrutura, conforme determinado por técnicas como ressonância magnética nuclear, cristalografia, difração de elétrons ou rotulagem por fotoafinidade, em conjunto com a mutação dos aminoácidos do sítio de contato putativo. Ver, por exemplo, de Vos et al., 1992, Science 255: 306-312; Smith et al., 1992, J. Mol. Biol. 224: 899-904; Wlodaver et al., 1992, FEBS Lett. 309: 59-64.
[0564] Em um aspecto, as variantes de alfa-amilase úteis na presente invenção têm uma propriedade melhorada relativamente ao polipeptídeo progenitor, em que a propriedade melhorada é selecionada do grupo consistindo em eficiência catalítica aumentada, velocidade catalítica aumentada, estabilidade química aumentada, estabilidade à oxidação aumentada, atividade de pH aumentada, estabilidade ao pH aumentada, atividade específica aumentada, estabilidade sob condições de armazenamento aumentada, ligação ao substrato aumentada, clivagem de substrato aumentada, especificidade para o substrato aumentada, estabilidade do substrato aumentada, propriedades de superfície aumentadas, atividade térmica aumentada, e termoestabilidade aumentada.
[0565] Em uma modalidade, a(s) variante(s) de alfa- amilase têm atividade específica melhorada (aumentada) em comparação com o polipeptídeo progenitor.
[0566] Em uma modalidade, a(s) variante(s) de alfa- amilase têm desempenho de lavagem melhorado (aumentado) em comparação com o polipeptídeo progenitor.
[0567] Em uma modalidade, a(s) variante(s) de alfa- amilase têm desempenho de lavagem melhorado (aumentado) em comparação com a SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 ou SEQ ID NO: 3.
[0568] Em um aspecto, a(s) variante(s) de alfa- amilase têm propriedade melhorada (aumentada) relativamente ao referido polipeptídeo progenitor, em que a referida propriedade melhorada é desempenho de lavagem melhorado para uma medida como atividade específica aumentada e em que a referida atividade específica aumentada em composição detergente Modelo A.
[0569] Em um aspecto, a(s) variante(s) de alfa- amilase têm propriedade melhorada (aumentada) relativamente ao referido polipeptídeo progenitor, em que a referida propriedade melhorada é desempenho de lavagem melhorado para uma medida da atividade específica aumentada e em que a referida atividade específica aumentada em composição detergente Modelo A no ensaio de microamostras e/ou ensaio AMSA como descrito nos exemplos.
[0570] Em um aspecto, a(s) variante(s) de alfa- amilase têm desempenho de lavagem melhorado para uma medida de atividade específica aumentada em composição detergente Modelo A medida como Fator de Melhoramento (IF) é >1,0, pelo menos 1,1, pelo menos 1,2, pelo menos 1,3, pelo menos 1,4, pelo menos 1,5, pelo menos 1,6, pelo menos 1,7, pelo menos 1,8, pelo menos 1,9, pelo menos 2,0, pelo menos 2,5, pelo menos 3,0, pelo menos 3,5, pelo menos 4,0, pelo menos 4,5, pelo menos 5,0, pelo menos 5,5, pelo menos 6,0, pelo menos 6,5, pelo menos 7,0, pelo menos 7,5, pelo menos 8,0, pelo menos 8,5, pelo menos 9,0, pelo menos 9,5, pelo menos 10,0 relativamente ao referido polipeptídeo progenitor.
[0571] Em um aspecto, a(s) variante(s) de alfa- amilase têm desempenho de lavagem melhorado para uma medida de atividade específica aumentada em composição detergente Modelo A medida como Fator de Melhoramento (IF) é >1,0, pelo menos 1,1, pelo menos 1,2, pelo menos 1,3, pelo menos 1,4, pelo menos 1,5, pelo menos 1,6, pelo menos 1,7, pelo menos 1,8, pelo menos 1,9, pelo menos 2,0, pelo menos 2,5, pelo menos 3,0, pelo menos 3,5, pelo menos 4,0, pelo menos 4,5, pelo menos 5,0, pelo menos 5,5, pelo menos 6,0, pelo menos 6,5, pelo menos 7,0, pelo menos 7,5, pelo menos 8,0, pelo menos 8,5, pelo menos 9,0, pelo menos 9,5, pelo menos 10,0 relativamente à SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 ou SEQ ID NO: 3.
[0572] Em um aspecto, a(s) variante(s) de alfa- amilase têm desempenho de lavagem melhorado para uma medida de atividade específica aumentada em composição detergente Modelo A medida como Fator de Melhoramento (IF) é >1,0, pelo menos 1,1, pelo menos 1,2, pelo menos 1,3, pelo menos 1,4, pelo menos 1,5, pelo menos 1,6, pelo menos 1,7, pelo menos 1,8, pelo menos 1,9, pelo menos 2,0, pelo menos 2,5, pelo menos 3,0, pelo menos 3,5, pelo menos 4,0, pelo menos 4,5, pelo menos 5,0, pelo menos 5,5, pelo menos 6,0, pelo menos 6,5, pelo menos 7,0, pelo menos 7,5, pelo menos 8,0, pelo menos 8,5, pelo menos 9,0, pelo menos 9,5, pelo menos 10,0 relativamente à SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 ou SEQ ID NO: 3.
[0573] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase compreendendo uma modificação em uma posição correspondente às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94 , 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475, 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e em que a referida variante de alfa-amilase tem desempenho de lavagem melhorado para uma medida como atividade específica aumentada de Fator de Melhoramento (IF) >1,1 e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0574] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase compreendendo uma modificação em uma posição correspondente às posições: H1 , N3, G7, R26, A31 , R37, T40, A41, N54, V56 , A60, L63, K72, G73, K93, N94 , Q98, V103, V104, M105, N106, A109, G110, A111, G113, T114, F116, V117, D118, D123, N126, N128, T131, S132, T134, Y135, Q136, I137, Q138, W140, K142, D144, P146, T151, Y152, F155, W159, Y160, T165, W167, E169, K172, L173, N174, I176, Y177, K178, R180, S181, T182, G183, A185, W188, E189, E193, N194, N196, F202, A203, L205, T224, N225, Y242, S243, F244, V252, T256, K258, E259, M260, F261, F266, N276, N279, K280, W283, S286, S302, G303, T315, H320, P321, M322, H323, W346, L354, E359, Q360, G361, Y362, V365, Y371, A383, E390, N394, F395, D405, I409, R414, H420, N422, T427, G455, K457, P458, N470, S472, V473, N474, G475, G476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e em que a referida variante de alfa-amilase tem desempenho de lavagem melhorado para uma medida como atividade específica aumentada medida como Fator de Melhoramento (IF) >1,1 e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0575] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase compreendendo uma modificação em uma posição correspondente às posições: H1*, H2*, N3D, N3G, N3S, G7A, G7H, G7S, R26Y, A31S, R37A, R37N, R37V, T40G, T40N, A41D, N54S, V56T, A60V, A60P, L63F, K72R, G73L, K93R, N94D, Q98L, V103A, V103L, V104M, M105I, M105L, N106D, A109G, G110K, A111G, A111L, G113Q, G113S, G113A, T114K, F116L, F116N, F116Q, F116W, V117G, D118Q, D118T, D123N, N126D, N128Y, T131I, T131V, S132D, S132L, T134D, Y135E, Q136T, Q136K, I137F, W140S, W140M, W140Y, K142E, K142G, K142P, D144N, P146S, T151A, Y152L, F155W, W159H, W159L, Y160P, W167A, W167D, W167E, W167F, W167P, W167S, E169I, E169Q, E169V, K172G, K172Q, L173F, N174K, N174S, I176V, Y177D, K178A, R180*, R180Q, R180S, S181*, S181L, S181T, T182*, T182D, T182E, T182G, T182I, T182L, T182M, T182S, G183*, G183P, A185D, A185E, A185K, A185N, A185Q, A185R, W188C, E189P, E193I, N194F, F202Y, F202Y, A203F, L205F, L205N, L205Q, L205R, L205V, L205Y, Y242F, Y242Y, S243Q, F244I, F244L, V252I, T256A, T256D, K258V, E259G, E259V, M260D, M260W, F261K, F261P, F261S, N279S, N280F, N280W, N280Y, W283N, S286K, S286L, S302T, S302Y, G303R, T315A, H320T, P321H, P321Y, M322G, M322Y, H323A, H323N, H323W, W346N, E359W, Q360M, Q360W, Q360Y, G361M, Y362V, V365I, Y371S, Y371N, A383D, E390A, E390D, N394W, N394D, F395Y, D405G, I409L, R414M, H420P, H420A, H420Q, H420Y, N422V, T427L, G455R, K457N, K457R, R458S, N470A, N470M, S472R, V473C, N474F, N474L, G475E, G475K, G476H, G476E e G476A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e em que a referida variante de alfa-amilase tem desempenho de lavagem melhorado para uma medida como atividade específica aumentada de Fator de Melhoramento (IF) >1,1 e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0576] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase compreendendo uma modificação em uma posição correspondente às Melhoramento (IF) >1,1 em composição detergente Modelo A identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0577] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase compreendendo uma modificação em uma posição correspondente às posições: H1, H2, N3, G7, R26, A31, R37, T40, A41, N54, V56, identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0578] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase compreendendo uma modificação em uma posição correspondente às posições: H1*, H2*, N3D, N3G, N3S, G7A, G7H, G7S, R26Y, A31S, R37A, R37N, R37V, T40G, T40N, A41D, N54S, V56T, A60V, A60P, L63F, K72R, G73L, K93R, N94D, Q98L, V103A, V103L, V104M, M105I, M105L, N106D, A109G, G110K, A111G, A111L, G113Q, G113S, G113A, T114K, F116L, F116N, F116Q, F116W, V117G, D118Q, D118T, D123N, N126D, N128Y, T131I, T131V, S132D, S132L, T134D, Y135E, Q136T, Q136K, I137F, W140S, W140M, W140Y, K142E, K142G, K142P, D144N, P146S, T151A, Y152L, F155W, W159H, W159L, Y160P, W167A, W167D, W167E, W167F, W167P, W167S, E169I, E169Q, E169V, K172G, K172Q, L173F, N174K, N174S, I176V, Y177D, K178A, R180*, R180Q, R180S, S181*, S181L, S181T, T182*, T182D, T182E, T182G, T182I, T182L, T182M, T182S, G183*, G183P, A185D, A185E, A185K, A185N, A185Q, A185R, W188C, E189P, E193I, N194F, F202Y, F202Y, A203F, L205F, L205N, L205Q, L205R, L205V, L205Y, Y242F, Y242Y, S243Q, F244I, F244L, V252I, T256A, T256D, K258V, E259G, E259V, M260D, M260W, F261K, F261P, F261S, N279S, N280F, N280W, N280Y, W283N, S286K, S286L, S302T, S302Y, G303R, T315A, H320T, P321H, P321Y, M322G, M322Y, H323A, H323N, H323W, W346N, E359W, Q360M, Q360W, Q360Y, G361M, Y362V, V365I, Y371S, Y371N, A383D, E390A, E390D, N394W, N394D, F395Y, D405G, I409L, R414M, H420P, H420A, H420Q, H420Y, N422V, T427L, G455R, K457N, K457R, R458S, N470A, N470M, S472R, V473C, N474F, N474L, G475E, G475K, G476H, G476E e G476A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e em que a referida variante de alfa-amilase tem desempenho de lavagem melhorado para uma medida como atividade específica aumentada de Fator de Melhoramento (IF) >1,1 em composição detergente Modelo A e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0579] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase compreendendo uma modificação em uma posição correspondente às 73, 93, 94 , 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 72 422 427 455 457 458 470 472 473 3, 7, 26 56, 60, 63 474, 475, 476, usando posições: 1, 2 31, 37, 40, 41, 54 medida como atividade específica aumentada de Fator de Melhoramento (IF) >1,1 em composição detergente Modelo A e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0580] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase compreendendo uma modificação em uma posição correspondente às posições: H1, H2, N3, G7, R26, A31, R37, T40, A41, N54, V56, A60, L63, K72, G73, K93, N94, Q98, V103, V104, M105, N106, A109, G110, A111, G113, T114, F116, V117, D118, D123, N126, N128, T131, S132, T134, Y135, Q136, I137, Q138, W140, K142, D144, P146, T151, Y152, F155, W159, Y160, T165, W167, E169, K172, L173, N174, I176, Y177, K178, R180, S181, T182, G183, A185, W188, E189, E193, N194, N196, F202, A203, L205, T224, N225, Y242, S243, F244, V252, T256, K258, E259, M260, F261, F266, N276, N279, K280, W283, S286, S302, G303, T315, H320, P321, M322, H323, W346, L354, E359, Q360, G361, Y362, V365, Y371, A383, E390, N394, F395, D405, I409, R414, H420, N422, T427, G455, K457, P458, N470, S472, V473, N474, G475, G476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e em que a referida variante de alfa-amilase tem desempenho de lavagem melhorado para uma medida como atividade específica aumentada de Fator de Melhoramento (IF) >1,1 em composição detergente Modelo A e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0581] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase compreendendo uma modificação em uma posição correspondente às posições: H1*, H2*, N3D, N3G, N3S, G7A, G7H, G7S, R26Y, A31S, R37A, R37N, R37V, T40G, T40N, A41D, N54S, V56T, A60V, A60P, L63F, K72R, G73L, K93R, N94D, Q98L, V103A, V103L, V104M, M105I, M105L, N106D, A109G, G110K, A111G, A111L, G113Q, G113S, G113A, T114K, F116L, F116N, F116Q, F116W, V117G, D118Q, D118T, D123N, N126D, N128Y, T131I, T131V, S132D, S132L, T134D, Y135E, Q136T, Q136K, I137F, W140S, W140M, W140Y, K142E, K142G, K142P, D144N, P146S, T151A, Y152L, F155W, W159H, W159L, Y160P, W167A, W167D, W167E, W167F, W167P, W167S, E169I, E169Q, E169V, K172G, K172Q, L173F, N174K, N174S, I176V, Y177D, K178A, R180*, R180Q, R180S, S181*, S181L, S181T, T182*, T182D, T182E, T182G, T182I, T182L, T182M, T182S, G183*, G183P, A185D, A185E, A185K, A185N, A185Q, A185R, W188C, E189P, E193I, N194F, F202Y, F202Y, A203F, L205F, L205N, L205Q, L205R, L205V, L205Y, Y242F, Y242Y, S243Q, F244I, F244L, V252I, T256A, T256D, K258V, E259G, E259V, M260D, M260W, F261K, F261P, F261S, N279S, N280F, N280W, N280Y, W283N, S286K, S286L, S302T, S302Y, G303R, T315A, H320T, P321H, P321Y, M322G, M322Y, H323A, H323N, H323W, W346N, E359W, Q360M, Q360W, Q360Y, G361M, Y362V, V365I, Y371S, Y371N, A383D, E390A, E390D, N394W, N394D, F395Y, D405G, I409L, R414M, H420P, H420A, H420Q, H420Y, N422V, T427L, G455R, K457N, K457R, R458S, N470A, N470M, S472R, V473C, N474F, N474L, G475E, G475K, G476H, G476E e G476A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e em que a referida variante de alfa-amilase tem desempenho de lavagem melhorado para uma medida como atividade específica aumentada de Fator de Melhoramento (IF) >1,1 em composição detergente Modelo A e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0582] Em um aspecto, a variante de alfa-amilase tem desempenho de lavagem melhorado para uma medida como atividade específica aumentada de Fator de Melhoramento (IF) >1,1 em composição detergente Modelo A em comparação com polipeptídeo progenitor, e em que a referida variante é selecionada do grupo consistindo em: H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G 475K H1*+G7A+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G 475K H1*+G7A+R180*+S181*+T182S+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K H1*+G7A+R180*+T182L+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K H1*+G7A+S181L+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K H1*+G7A+R180S+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K H1*+G7A+A60P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E3 90A+G475K H1*+G7A+M105L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K H1*+G7A+M105I+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K H1*+G7A+R180*+S181*+T182D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K H1*+G7A+R180*+S181*+T182E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K H1*+G7A+R180*+S181*+T182G+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K H1*+G7A+R180*+S181*+T182M+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K H1*+G7A+R180*+S181*+A185K+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K H1*+G7A+R180*+S181*+A185D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K H1*+G7A+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K H1*+G7A+R180*+S181*+A185N+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K H1*+G7A+R180*+S181*+A185R+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K H1*+G7A+R180*+S181*+A185E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K H1*+G7A+R180*+S181*+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K H1*+G7A+R180*+S181*+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244L+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244I+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E 390A+G475K H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G 303R+E390A+G475K H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205F+Y242F+E259G+N279S+G 303R+E390A+G475K H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G 303R+E390A+G475K H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276F+N279S+G 303R+E390A+G475K H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G 303R+E390A+G475K H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276W+N279S+G 303R+E390A+G475K H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G 303R+E390A+G475K H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280W+G 303R+E390A+G475K H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276F+N 279S+G303R+E390A+G475K H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276Y+N 279S+G303R+E390A+G475K H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276W+N 279S+G303R+E390A+G475K H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K 280F+G303R+E390A+G475K H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K 280Y+G303R+E390A+G475K 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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T 224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T 224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+S 243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S 243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 196I+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420Y+G475K H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M 260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T 224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T 224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N 194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E1 89P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M 260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470A+G475K H1*+G7A+S132L+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E 259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K H1*+G7A+A31S+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A18 5Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475 K H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L 205Y+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K R180*+S181* T40N+F116L+D123N+N126D+N128Y+T131I+F155W+R180*+S181 *+T182D+E189P+F202Y+K457N+P458S+G475K+G476E A60V+Q98L+G110K+R180*+S181*+A383D Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+T315A G7H+Q98L+G110K+R180*+S181* G7H+W167P+R180*+S181*+G455R Q98L+V103A+G110K+R180*+S181* T114K+R180*+S181* E169V+R180*+S181* R180*+S181*+W188C W167D+R180*+S181* W167S+R180*+S181* W167E+R180*+S181* W167P+R180*+S181* R180*+S181*+E193I+H323N R180*+S181*+A203F W159L+R180*+S181* W159H+R180*+S181* K178A+R180*+S181* A111L+R180*+S181* G110K+R180*+S181* A111G+R180*+S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase. Polinucleotídeos
[0583] A presente invenção também se relaciona com polinucleotídeos codificando variante(s) de alfa-amilase da presente invenção.
[0584] Em um aspecto, o polinucleotídeo codificando variantes de alfa-amilase compreendendo uma modificação em uma 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 31 54 72 73 103 104 37, 40, 41 56, 60, 63 93, 94, 98 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475, 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase.
[0585] As técnicas usadas para isolar ou clonar um polinucleotídeo são conhecidas na técnica e incluem isolamento a partir de DNA genômico ou cDNA, ou uma sua combinação. A clonagem dos polinucleotídeos a partir de DNA genômico pode ser efetuada, por exemplo, por uso da reação em cadeia da polimerase (PCR) ou rastreamento com anticorpos de bibliotecas de expressão para a detecção de fragmentos de DNA clonados com características estruturais partilhadas. Ver, por exemplo, Innis et al., 1990, PCR: A Guide to Methods and Application, Academic Press, Nova Iorque. Podem ser usados outros procedimentos de amplificação de ácidos nucleicos, como reação em cadeia de ligase (LCR), transcrição ativada por ligação (LAT) e amplificação baseada em polinucleotídeos (NASBA). Os polinucleotídeos podem ser clonados de uma estirpe de Trichoderma, Lecanicillium, Simplicillium, Aspergillus, Cornyascus, Acrophialophora, Rhinocladiella, Nemania, Talaromyces, Collariella, Rigidoporous, e/ou Loramyces, ou um organismo relacionado e assim, por exemplo, pode ser uma variante de espécie do polipeptídeo codificando região do polinucleotídeo.
[0586] A modificação de um polinucleotídeo codificando variante(s) de alfa-amilase da presente invenção pode ser necessária para síntese de polipeptídeos substancialmente similares ao polipeptídeo. O termo “substancialmente similar” ao polipeptídeo se refere a formas do polipeptídeo não ocorrendo naturalmente. Estes polipeptídeos podem diferir de algum modo manipulado do polipeptídeo isolado de sua fonte nativa, por exemplo, variantes que diferem na atividade específica, termoestabilidade, pH ótimo ou similares. As variantes podem ser construídas com base no polinucleotídeo apresentado como a sequência codificante do polipeptídeo maduro, por exemplo, uma sua subsequência, e/ou por introdução de substituições de nucleotídeos que não resultam em uma mudança na sequência de aminoácidos do polipeptídeo, mas que correspondem ao uso de códons do organismo hospedeiro pretendido para produção da enzima, ou por introdução de substituições de nucleotídeos que podem dar origem a uma sequência de aminoácidos diferente. Quanto a uma descrição geral de substituições de nucleotídeos ver, por exemplo, Ford et al., 1991, Protein Expression and Purification 2: 95-107.
[0587] A presente invenção também se relaciona com construtos de ácidos nucleicos compreendendo um polinucleotídeo codificando variante(s) de alfa-amilase da presente invenção.
[0588] Em um aspecto, os construtos de ácidos nucleicos compreendendo um polinucleotídeo codificando variantes de alfa-amilase compreendendo uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94, 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475, 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, em que o polinucleotídeo está operacionalmente ligado a uma ou mais sequências de controle que direcionam a expressão da sequência codificante em uma célula hospedeira adequada sob condições compatíveis com as sequências de controle.
[0589] A presente invenção também se relaciona com construtos de ácidos nucleicos compreendendo um polinucleotídeo codificando variante(s) de alfa-amilase da presente invenção operacionalmente ligado a uma ou mais sequências de controle que dirigem a expressão da sequência codificante em uma célula hospedeira adequada sob condições compatíveis com as sequências de controle.
[0590] O polinucleotídeo pode ser manipulado em uma variedade de modos para proporcionar expressão de uma variante. A manipulação do polinucleotídeo antes de sua inserção em um vetor pode ser desejável ou necessária, dependendo do vetor de expressão. As técnicas para modificar polinucleotídeos utilizando métodos de DNA recombinante são bem conhecidas na técnica.
[0591] A sequência de controle pode ser um promotor, um polinucleotídeo que é reconhecido por uma célula hospedeira para expressão do polinucleotídeo. O promotor contém sequências de controle de transcrição que mediam a expressão da variante. O promotor pode ser qualquer polinucleotídeo que mostre atividade de transcrição na célula hospedeira, incluindo promotores mutantes, truncados e híbridos, e pode ser obtido de genes que codificam polipeptídeos extracelulares ou intracelulares homólogos ou heterólogos à célula hospedeira.
[0592] Exemplos de promotores adequados para direcionamento da transcrição dos construtos de ácido nucleico da presente invenção em uma célula hospedeira bacteriana são os promotores obtidos do gene da alfa-amilase (amyQ) de Bacillus amyloliquefaciens, gene da alfa-amilase (amyL) de Bacillus licheniformis, gene da penicilinase (penP) de Bacillus licheniformis, gene da amilase maltogênica (amyM) de Bacillus stearothermophilus, gene da levansacarase (sacB) de Bacillus subtilis, genes xylA e xylB de Bacillus subtilis, gene cryIIIA de Bacillus thuringiensis (Agaisse e Lereclus, 1994, Molecular Microbiology 13: 97-107), operon lac de E. coli, promotor trc de E. coli (Egon et al., 1988, Gene 69: 301-315), gene da agarase (dagA) de Streptomyces coelicolor, e gene da beta-lactamase procariótica (Villa-Kamaroff et al., 1978, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 75: 3727-3731), bem como o promotor tac (DeBoer et al., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80: 21-25). Promotores adicionais são descritos em "Useful proteins from recombinant bacteria" em Gilbert et al., 1980, Scientific American 242: 74-94; e em Sambrook et al., 1989, supra. Exemplos de promotores em tandem são divulgados no documento WO 99/43835.
[0593] Exemplos de promotores adequados para direcionamento da transcrição do polinucleotídeo da presente invenção em uma célula hospedeira fúngica filamentosa são os promotores obtidos dos genes da acetamidase de Aspergillus nidulans, alfa-amilase neutra de Aspergillus niger, alfa- amilase estável em ácidos de Aspergillus niger, glucoamilase (glaA) de Aspergillus niger ou Aspergillus awamori, amilase TAKA de Aspergillus oryzae, protease alcalina de Aspergillus oryzae, triose fosfato isomerase de Aspergillus oryzae, protease do tipo tripsina de Fusarium oxysporum (WO 96/00787), amiloglucosidase de Fusarium venenatum (WO 00/56900), Daria de Fusarium venenatum (WO 00/56900), Quinn de Fusarium venenatum (WO 00/56900), lipase de Rhizomucor miehei, proteinase aspártica de Rhizomucor miehei, beta-glucosidase de Trichoderma reesei, celobio-hidrolase I de Trichoderma reesei, celobio-hidrolase II de Trichoderma reesei, endoglucanase I de Trichoderma reesei, endoglucanase II de Trichoderma reesei, endoglucanase III de Trichoderma reesei, endoglucanase V de Trichoderma reesei, xilanase I de Trichoderma reesei, xilanase II de Trichoderma reesei, xilanase III de Trichoderma reesei, beta-xilosidase de Trichoderma reesei, e fator de alongamento da tradução de Trichoderma reesei, bem como o promotor NA2-tpi (um promotor modificado de um gene da alfa-amilase neutra de Aspergillus no qual o líder não traduzido foi substituído por um líder não traduzido de um gene da triose fosfato isomerase de Aspergillus; exemplos não limitantes incluem promotores modificados de um gene da alfa-amilase neutra de Aspergillus niger nos quais o líder não traduzido foi substituído por um líder não traduzido de um gene da triose fosfato isomerase de Aspergillus nidulans ou Aspergillus oryzae); e seus promotores mutantes, truncados, e híbridos. Outros promotores são descritos na Patente U.S. No. 6,011,147.
[0594] Em um hospedeiro de levedura, promotores úteis são obtidos dos genes de enolase (ENO-1) de Saccharomyces cerevisiae, galactocinase (GAL1) de Saccharomyces cerevisiae, álcool desidrogenase/gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (ADH1, ADH2/GAP) de Saccharomyces cerevisiae, triose fosfato isomerase (TPI) de Saccharomyces cerevisiae, metalotioneína (CUP1) de Saccharomyces cerevisiae, e 3-fosfoglicerato cinase de Saccharomyces cerevisiae. Outros promotores úteis para células hospedeiras de levedura são descritos por Romanos et al., 1992, Yeast 8: 423-488.
[0595] A sequência de controle pode ser também um terminador da transcrição, que é reconhecido por uma célula hospedeira para terminar a transcrição. O terminador está operacionalmente ligado ao terminal 3' do polinucleotídeo codificando o polipeptídeo. Pode ser usado na presente invenção qualquer terminador que seja funcional na célula hospedeira.
[0596] Terminadores preferenciais para células hospedeiras bacterianas são obtidos dos genes de protease alcalina (aprH) de Bacillus clausii, alfa-amilase (amyL) de Bacillus licheniformis, e RNA ribossômico (rrnB) de Escherichia coli.
[0597] Terminadores preferenciais para células hospedeiras de fungos filamentosos são obtidos dos genes da acetamidase de Aspergillus nidulans, antranilato sintase de Aspergillus nidulans, glucoamilase de Aspergillus niger, alfa- glucosidase de Aspergillus niger, amilase TAKA de Aspergillus oryzae, protease do tipo tripsina de Fusarium oxysporum, beta-glucosidase de Trichoderma reesei, celobio-hidrolase I de Trichoderma reesei, celobio-hidrolase II de Trichoderma reesei, endoglucanase I de Trichoderma reesei, endoglucanase II de Trichoderma reesei, endoglucanase III de Trichoderma reesei, endoglucanase V de Trichoderma reesei, xilanase I de Trichoderma reesei, xilanase II de Trichoderma reesei, xilanase III de Trichoderma reesei, beta-xilosidase de Trichoderma reesei, e fator de alongamento da tradução de Trichoderma reesei.
[0598] Terminadores preferenciais para células hospedeiras de levedura são obtidos dos genes da enolase de Saccharomyces cerevisiae, citocromo C (CYC1) de Saccharomyces cerevisiae e gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase de Saccharomyces cerevisiae. Outros terminadores úteis para células hospedeiras de levedura são descritos por Romanos et al., 1992, supra.
[0599] A sequência de controle pode ser também uma região estabilizadora de mRNA a jusante de um promotor e a montante da sequência codificante de um gene que aumenta a expressão do gene.
[0600] Exemplos de regiões estabilizadoras de mRNA adequadas são obtidos de um gene cryIIIA de Bacillus thuringiensis (WO 94/25612) e um gene SP82 de Bacillus subtilis (Hue et al., 1995, J. Bacteriol. 177: 3465-3471).
[0601] A sequência de controle pode ser também um líder, uma região não traduzida de um mRNA que é importante para tradução pela célula hospedeira. O líder está operacionalmente ligado ao terminal 5' do polinucleotídeo codificando o polipeptídeo. Pode ser usado qualquer líder que seja funcional na célula hospedeira.
[0602] Líderes preferenciais para células hospedeiras fúngicas filamentosas são obtidos dos genes da amilase TAKA de Aspergillus oryzae e triose fosfato isomerase de Aspergillus nidulans.
[0603] Líderes adequados para células hospedeiras de levedura são obtidos dos genes da enolase (ENO-1) de Saccharomyces cerevisiae, 3-fosfoglicerato cinase de Saccharomyces cerevisiae, fator alfa de Saccharomyces cerevisiae e álcool desidrogenase/gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (ADH2/GAP) de Saccharomyces cerevisiae.
[0604] A sequência de controle pode ser também uma sequência de poliadenilação, uma sequência operacionalmente ligada ao terminal 3' do polinucleotídeo e, quando transcrita, é reconhecida pela célula hospedeira como um sinal para adicionar resíduos de poliadenosina ao mRNA transcrito. Pode ser usada qualquer sequência de poliadenilação que seja funcional na célula hospedeira.
[0605] Sequências de poliadenilação preferenciais para células hospedeiras de fungos filamentosos são obtidas dos genes da antranilato sintase de Aspergillus nidulans, glucoamilase de Aspergillus niger, alfa-glucosidase de Aspergillus niger, amilase TAKA de Aspergillus oryzae e protease tipo tripsina de Fusarium oxysporum.
[0606] Sequências de poliadenilação úteis para células hospedeiras de levedura são descritas por Guo e Sherman, 1995, Mol. Cellular Biol. 15: 5983-5990.
[0607] A sequência de controle pode ser também uma região codificante do peptídeo de sinal que codifica um peptídeo de sinal ligado ao terminal N de um polipeptídeo e dirige o polipeptídeo para a via secretora da célula. A extremidade 5’ da sequência codificante do polinucleotídeo pode conter inerentemente uma sequência codificante do peptídeo de sinal naturalmente ligada em grelha de leitura de tradução com o segmento da sequência codificante que codifica o polipeptídeo. Alternativamente, a extremidade 5' da sequência codificante pode conter uma sequência codificante do peptídeo de sinal que é heteróloga à sequência codificante. Uma sequência codificante do peptídeo de sinal heteróloga pode ser necessária quando a sequência codificante não contém naturalmente uma sequência codificante do peptídeo de sinal. Alternativamente, uma sequência codificante do peptídeo de sinal heteróloga pode simplesmente substituir a sequência codificante do peptídeo de sinal natural para intensificar a secreção do polipeptídeo. No entanto, pode ser usada qualquer sequência codificante de peptídeo de sinal que direcione o polipeptídeo expresso para a via de secreção de uma célula hospedeira.
[0608] Sequências codificantes de peptídeo sinal eficazes para células hospedeiras bacterianas são as sequências codificantes de peptídeo sinal obtidas dos genes da amilase maltogênica de Bacillus NCIB 11837, subtilisina de Bacillus licheniformis, beta-lactamase de Bacillus licheniformis, alfa-amilase de Bacillus stearothermophilus, proteases neutras (nprT, nprS, nprM) de Bacillus stearothermophilus e prsA de Bacillus subtilis. Outros peptídeos sinal são descritos por Simonen e Palva, 1993, Microbiol. Rev. 57: 109-137.
[0609] Sequências codificantes de peptídeo sinal eficazes para células hospedeiras fúngicas filamentosas são as sequências codificantes de peptídeo sinal obtidas dos genes da amilase neutra de Aspergillus niger, glucoamilase de Aspergillus niger, amilase TAKA de Aspergillus oryzae, celulase de Humicola insolens, endoglucanase V de Humicola insolens, lipase de Humicola lanuginosa, e proteinase aspártica de Rhizomucor miehei.
[0610] Peptídeos sinal úteis para células hospedeiras de levedura são obtidos dos genes do fator alfa de Saccharomyces cerevisiae e invertase de Saccharomyces cerevisiae. Outras sequências codificantes de peptídeo sinal úteis são descritas por Romanos et al., 1992, supra.
[0611] A sequência de controle pode ser também uma sequência codificante de pró-peptídeo que codifica um pró- peptídeo posicionado no terminal N de um polipeptídeo. O polipeptídeo resultante é conhecido como uma pró-enzima ou pró-polipeptídeo (ou um zimogênio em alguns casos). Um pró- polipeptídeo é geralmente inativo e pode ser convertido em um polipeptídeo ativo por clivagem catalítica ou autocatalítica do pró-peptídeo do pró-polipeptídeo. A sequência codificante do pró-peptídeo pode ser obtida dos genes de protease alcalina (aprE) de Bacillus subtilis, protease neutra (nprT) de Bacillus subtilis, lacase de Myceliophthora thermophila (WO 95/33836), proteinase aspártica de Rhizomucor miehei e fator alfa de Saccharomyces cerevisiae.
[0612] Quando estiverem presentes ambas as sequências de peptídeo sinal e pró-peptídeo, a sequência de pró-peptídeo é posicionada próxima ao terminal N de um polipeptídeo e a sequência de peptídeo sinal é posicionada próxima ao terminal N da sequência de pró-peptídeo.
[0613] Pode ser também desejável adicionar sequências reguladoras que regulem a expressão do polipeptídeo em relação ao crescimento da célula hospedeira. Exemplos de sequências reguladoras são aquelas que fazem com que a expressão do gene seja ligada ou desligada em resposta a um estímulo químico ou físico, incluindo a presença de um composto regulador. As sequências reguladoras em sistemas procarióticos incluem os sistemas de operadores lac, tac e trp. Em levedura pode ser usado o sistema ADH2 ou o sistema GAL1. Em fungos filamentosos podem ser usados o promotor de glucoamilase de Aspergillus niger, promotor de alfa-amilase TAKA de Aspergillus oryzae e promotor de glucoamilase de Aspergillus oryzae, promotor de celobioidrolase I de Trichoderma reesei e promotor de celobioidrolase II de Trichoderma reesei. Outros exemplos de sequências reguladoras são aqueles que permitem a amplificação gênica. Em sistemas eucarióticos, estas sequências reguladoras incluem o gene da di-idrofolato redutase que é amplificado na presença de metotrexato e os genes da metalotioneína que são amplificados com metais pesados. Em estes casos, o polinucleotídeo codificando o polipeptídeo estará operacionalmente ligado à sequência reguladora. Vetores de Expressão
[0614] A presente invenção se refere também a vetores de expressão recombinantes compreendendo um polinucleotídeo que codifica variante(s) de alfa-amilase da presente invenção, um promotor e sinais de terminação da transcrição e tradução. As várias sequências de nucleotídeos e de controle podem ser unidas para produzir um vetor de expressão recombinante que pode incluir um ou mais sítios de restrição convenientes para permitir a inserção ou a substituição do polinucleotídeo que codifica a variante nesses sítios. Alternativamente, o polinucleotídeo pode ser expresso por inserção do polinucleotídeo ou um construto de ácido nucleico compreendendo o polinucleotídeo em um vetor apropriado para expressão. Na criação do vetor de expressão, a sequência codificante está localizada no vetor, de modo que a sequência codificante esteja operacionalmente ligada com as sequências de controle apropriadas para expressão.
[0615] Em um aspecto, os vetores recombinantes compreendendo um polinucleotídeo codificando variante de alfa- amilase compreendendo uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60 , 63, 72, 73, 93, 94 , 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475, 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, um promotor e sinais de terminação da transcrição e tradução. As várias sequências de nucleotídeos e de controle podem ser ligadas para produzir um vetor de expressão recombinante que possa incluir um ou mais (vários) sítios de restrição convenientes para permitir a inserção ou substituição do polinucleotídeo que codifica a variante em tais sítios. Alternativamente, o polinucleotídeo pode ser expresso por inserção do polinucleotídeo ou um construto de ácido nucleico compreendendo o polinucleotídeo em um vetor adequado para expressão. Na criação do vetor de expressão, a sequência codificante está localizada no vetor tal que a sequência codificante esteja operacionalmente ligada às sequências de controle apropriadas para expressão.
[0616] O vetor de expressão recombinante pode ser qualquer vetor (por exemplo, um plasmídeo ou vírus) que possa ser convenientemente submetido a procedimentos de DNA recombinante e possa suscitar a expressão do polinucleotídeo. A escolha do vetor dependerá tipicamente da compatibilidade do vetor com a célula hospedeira na qual o vetor deve ser introduzido. O vetor pode ser um plasmídeo linear ou circular fechado.
[0617] O vetor pode ser um vetor autonomamente replicante, ou seja, um vetor que existe como uma entidade extracromossômica, cuja replicação é independente da replicação cromossômica, por exemplo, um plasmídeo, um elemento extracromossômico, um minicromossomo ou um cromossomo artificial. O vetor pode conter quaisquer meios para assegurar a autorreplicação. Alternativamente, o vetor pode ser aquele que, quando introduzido na célula hospedeira, é integrado no genoma e replicado em conjunto com o(s) cromossomo(s) no(s) qual(ais) foi integrado. Além do mais, pode ser usado um único vetor ou plasmídeo ou dois ou mais vetores ou plasmídeos que contenham em conjunto o DNA total a ser introduzido no genoma da célula hospedeira ou um transposon.
[0618] O vetor contém preferencialmente um ou mais marcadores selecionáveis que permitem a fácil seleção de células transformadas, transfectadas, transduzidas ou similares. Um marcador selecionável é um gene cujo produto proporciona resistência biocida ou viral, resistência a metais pesados, prototrofia a auxótrofos e similares.
[0619] Exemplos de marcadores selecionáveis bacterianos são genes dal de Bacillus licheniformis ou Bacillus subtilis, ou marcadores que conferem resistência a antibióticos tal como resistência a ampicilina, cloranfenicol, canamicina, neomicina, espectinomicina, ou tetraciclina. Marcadores adequados para células hospedeiras levedura incluem, porém sem limitação, ADE2, HIS3, LEU2, LYS2, MET3, TRP1 e URA3. Marcadores selecionáveis para uso em uma célula hospedeira fúngica filamentosa incluem, porém sem limitação, adeA (fosforribosilaminoimidazol-succinocarboxamida sintase), adeB (fosforribosil-aminoimidazol sintase), amdS (acetamidase), argB (ornitina carbamoiltransferase), bar (fosfinotricina acetiltransferase), hph (higromicina fosfotransferase), niaD (nitrato redutase), pyrG (orotidina-5'-fosfato descarboxilase), sC (sulfato adeniltransferase), e trpC (antranilato sintase), bem como seus equivalentes. São preferenciais para uso em uma célula de Aspergillus os genes amdS e pyrG de Aspergillus nidulans ou Aspergillus oryzae e um gene bar de Streptomyces hygroscopicus. São preferenciais para uso em uma célula de Trichoderma os genes adeA, adeB, amdS, hph e pyrG.
[0620] O marcador selecionável pode ser um sistema de marcador selecionável dual como descrito em WO 2010/039889. Em um aspecto, o marcador selecionável dual é um sistema de marcador selecionável dual hph-tk.
[0621] O vetor contém preferencialmente um elemento(s) que permite(m) a integração do vetor no genoma da célula hospedeira ou replicação autônoma do vetor na célula independentemente do genoma.
[0622] Para integração no genoma da célula hospedeira, o vetor pode se basear na sequência do polinucleotídeo codificando o polipeptídeo ou qualquer outro elemento do vetor para integração no genoma por recombinação homóloga ou não homóloga. Alternativamente, o vetor pode conter polinucleotídeos adicionais para dirigir a integração por recombinação homóloga no genoma da célula hospedeira em uma localização(ões) precisa(s) no(s) cromossomo(s). Para aumentar a probabilidade de integração em uma localização precisa, os elementos de integração devem conter um número suficiente de ácidos nucleicos, tal como 100 a 10.000 pares de bases, 400 a 10.000 pares de bases e 800 a 10.000 pares de bases, que têm um elevado grau de identidade de sequência com a sequência- alvo correspondente para intensificar a probabilidade de recombinação homóloga. Os elementos de integração podem ser qualquer sequência que seja homóloga à sequência-alvo no genoma da célula hospedeira. Além do mais, os elementos de integração podem ser polinucleotídeos não codificantes ou codificantes. Por outro lado, o vetor pode ser integrado no genoma da célula hospedeira por recombinação não homóloga.
[0623] Para replicação autônoma, o vetor pode compreender adicionalmente uma origem de replicação que permita ao vetor se replicar autonomamente na célula hospedeira em questão. A origem de replicação pode ser qualquer replicador de plasmídeo que medeie a replicação autônoma que funciona em uma célula. O termo “origem da replicação” ou “replicador de plasmídeo” significa um polinucleotídeo que permite que um plasmídeo ou vetor se replique in vivo.
[0624] Exemplos de origens de replicação bacterianas são as origens de replicação de plasmídeos pBR322, pUC19, pACYC177 e pACYC184, que permitem replicação em E. coli, e pUBllO, pE194, pTA1060 e pAMβl, que permitem a replicação em Bacillus.
[0625] Exemplos de origens de replicação para uso em uma célula hospedeira de levedura são a origem de replicação de 2 mícrones, ARS1, ARS4, a combinação de ARS1 e CEN3 e a combinação de ARS4 e CEN6.
[0626] Exemplos de origens de replicação úteis em uma célula de fungo filamentoso são AMA1 e ANS1 (Gems et al., 1991, Gene 98: 61-67; Cullen et al., 1987, Nucleic Acids Res. 15: 9163-9175; WO 00/24883). O isolamento do gene AMA1 e construção de plasmídeos ou vetores compreendendo o gene podem ser efetuados de acordo com os métodos divulgados em WO 00/24883.
[0627] Pode ser inserida mais do que uma cópia de um polinucleotídeo da presente invenção em uma célula hospedeira para aumentar a produção de um polipeptídeo. Um aumento no número de cópias do polinucleotídeo pode ser obtido pela integração de pelo menos uma cópia adicional da sequência no genoma da célula hospedeira, ou pela inclusão de um gene marcador selecionável amplificável com o polinucleotídeo, em que as células que contêm cópias amplificadas do gene marcador selecionável, e assim cópias adicionais do polinucleotídeo, podem ser selecionadas por cultivo das células na presença do agente selecionável apropriado.
[0628] Os procedimentos utilizados para ligar os elementos descritos acima para construir os vetores de expressão recombinantes da presente invenção são bem conhecidos pelo especialista na técnica (ver, por exemplo, Sambrook et al., 1989, supra).
[0629] A presente invenção também se refere a células hospedeiras recombinantes compreendendo um polinucleotídeo que codifica variante(s) de alfa-amilase da presente invenção operacionalmente ligado a uma ou mais sequências de controle que direcionam a produção de uma variante da presente invenção. Um construto ou vetor compreendendo um polinucleotídeo é introduzido em uma célula hospedeira de modo que o construto ou vetor seja mantido como um integrante cromossômico ou como um vetor extracromossômico autorreplicante conforme anteriormente descrito. O termo “célula hospedeira” abrange qualquer descendência de uma célula progenitora que não é idêntica à célula progenitora devido a mutações que ocorrem durante a replicação. A escolha de uma célula hospedeira dependerá em grande medida do gene que codifica a variante e sua fonte.
[0630] A célula hospedeira pode ser qualquer célula útil na produção recombinante de variante(s) de alfa-amilase, por exemplo, um procariota ou um eucariota.
[0631] Em algumas modalidades, o polipeptídeo é heterólogo à célula hospedeira recombinante.
[0632] Em algumas modalidades, pelo menos uma da uma ou mais sequências de controle é heteróloga ao polinucleotídeo codificando a(s) variante(s) de alfa-amilase.
[0633] Em algumas modalidades, a célula hospedeira recombinante compreende pelo menos duas cópias, por exemplo, três, quatro ou cinco, do polinucleotídeo da presente invenção.
[0634] A célula hospedeira pode ser qualquer célula microbiana ou vegetal útil na produção recombinante de um polipeptídeo da presente invenção, por exemplo, uma célula procariótica ou uma célula fúngica.
[0635] A célula hospedeira procariótica pode ser qualquer bactéria Gram-positiva ou Gram-negativa. As bactérias Gram-positivas incluem, mas não estão limitadas a, Bacillus, Clostridium, Enterococcus, Geobacillus, Lactobacillus, Lactococcus, Oceanobacillus, Staphylococcus, Streptococcus e Streptomyces. As bactérias Gram-negativas incluem, mas não estão limitadas a, Campylobacter, E. coli, Flavobacterium, Fusobacterium, Helicobacter, Ilyobacter, Neisseria, Pseudomonas, Salmonella e Ureaplasma.
[0636] A célula hospedeira bacteriana pode ser qualquer célula de Bacillus incluindo, mas não se limitando a, células de Bacillus alkalophilus, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus brevis, Bacillus circulans, Bacillus clausii, Bacillus coagulans, Bacillus firmus, Bacillus lautus, Bacillus lentus, Bacillus licheniformis, Bacillus megaterium, Bacillus pumilus, Bacillus stearothermophilus, Bacillus subtilis e Bacillus thuringiensis.
[0637] A célula hospedeira bacteriana pode ser também qualquer célula de Streptococcus incluindo, mas não se limitando a, células de Streptococcus equisimilis, Streptococcus pyogenes, Streptococcus uberis e Streptococcus equi subsp. Zooepidemicus.
[0638] A célula hospedeira bacteriana pode ser também qualquer célula de Streptomyces incluindo, mas não se limitando a, células de Streptomyces achromogenes, Streptomyces avermitilis, Streptomyces coelicolor, Streptomyces griseus e Streptomyces lividans.
[0639] A introdução de DNA em uma célula de Bacillus pode ser feita por transformação com protoplastos (ver, por exemplo, Chang e Cohen, 1979, Mol. Gen. Genet. 168: 111 a 115), transformação de células competentes (consultar, por exemplo, Young e Spizizen, 1961, J. Bacteriol. 81: 823-829, ou Dubnau e Davidoff-Abelson, 1971, J. Mol. Biol. 56: 209-221), eletroporação (ver, por exemplo, Shigekawa e Dower, 1988, Biotechniques 6: 742-751), ou conjugação (consultar, por exemplo, Koehler e Thorne, 1987, J. Bacteriol. 169: 5271-5278). A introdução de DNA em uma célula de E. coli pode ser feita por transformação com protoplastos (ver, por exemplo, Hanahan, 1983, J. Mol. Biol. 166: 557 a 580) ou eletroporação (ver, por exemplo, Dower et al., 1988, Nucleic Acids Res. 16: 6127-6145). A introdução de DNA em uma célula de Streptomyces pode ser efetuada por transformação com protoplastos, eletroporação (ver, por exemplo, Gong et al., 2004, Folia Microbiol. (Praga) 49: 399 a 405), conjugação (consultar, por exemplo, Mazodier et al., 1989, J. Bacteriol. 171: 3583-3585), ou transdução (ver, por exemplo, Burke et al., 2001, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98: 6289-6294). A introdução de DNA em uma célula de Pseudomonas pode ser efetuada por eletroporação (ver, por exemplo, Choi et al., 2006, J. Microbiol. Methods 64: 391-397) ou conjugação (ver, por exemplo, Pinedo e Smets, 2005, Appl. Environ. Microbiol. 71: 51-57). A introdução de DNA em uma célula de Streptococcus pode ser efetuada por competência natural (ver, por exemplo, Perry e Kuramitsu, 1981, Infect. Immun. 32: 1295-1297), transformação com protoplastos (ver, por exemplo, Catt e Jollick, 1991, Microbios 68: 189 a 207), eletroporação (consultar, por exemplo, Buckley et al., 1999, Appl. Environ. Microbiol. 65: 3800-3804) ou conjugação (ver, por exemplo, Clewell, 1981, Microbiol. Rev. 45: 409-436). No entanto, pode ser usado qualquer método conhecido na técnica para introdução de DNA em uma célula hospedeira.
[0640] A célula hospedeira pode ser uma célula fúngica. "Fungos" como usado aqui inclui os filos Ascomycota, Basidiomycota, Chytridiomycota e Zygomycota, bem como os Oomycota e todos os fungos mitospóricos (como definidos por Hawksworth et al., Em, Ainsworth and Bisby’s Dictionary of The Fungi, 8a edição, 1995, CAB International, University Press, Cambridge, RU).
[0641] A célula hospedeira fúngica pode ser uma célula de levedura. “Levedura”, como usado AQUI, inclui levedura ascosporógena (Endomycetales), levedura basidiosporógena e levedura pertencendo aos fungos imperfeitos (Blastomycetes). Uma vez que a classificação de leveduras pode mudar no futuro, para os propósitos desta invenção, a levedura deve ser definida como descrito em Biology and Activities of Yeast (Skinner, Passmore, e Davenport, editores, Soc. App. Bacteriol. Symposium Series No. 9, 1980).
[0642] A célula hospedeira de levedura pode ser uma célula de Candida, Hansenula, Kluyveromyces, Pichia, Saccharomyces, Schizosaccharomyces ou Yarrowia, tal como uma célula de Kluyveromyces lactis, Saccharomyces carlsbergensis, Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces diastaticus, Saccharomyces douglasii, Saccharomyces kluyveri, Saccharomyces norbensis, Saccharomyces oviformis ou Yarrowia lipolytica.
[0643] A célula hospedeira de fungo pode ser uma célula de fungo filamentoso. "Fungos filamentosos" incluem todas as formas filamentosas da subdivisão Eumycota e Oomycota (como definidos por Hawksworth et al., 1995, supra). Os fungos filamentosos são geralmente caracterizados por uma parede micelial composta por quitina, celulose, glucana, quitosana, manana e outros polissacarídeos complexos. O crescimento vegetativo é por alongamento de hifas e o catabolismo de carbono é obrigatoriamente aeróbico. Em contraste, o crescimento vegetativo por leveduras, tais como Saccharomyces cerevisiaeé por brotamento de um talo unicelular e o catabolismo de carbono pode ser fermentativo.
[0644] A célula hospedeira de fungo filamentoso pode ser uma célula de Acremonium, Aspergillus, Aureobasidium, Bjerkandera, Ceriporiopsis, Chrysosporium, Coprinus, Coriolus, Cryptococcus, Filibasidium, Fusarium, Humicola, Magnaporthe, Mucor, Myceliophthora, Neocallimastix, Neurospora, Paecilomyces, Penicillium, Phanerochaete, Phlebia, Piromyces, Pleurotus, Schizophyllum, Talaromyces, Thermoascus, Thielavia, Tolypocladium, Trametes ou Trichoderma.
[0645] Por exemplo, a célula hospedeira fúngica filamentosa pode ser uma célula de Aspergillus awamori, Aspergillus foetidus, Aspergillus fumigatus, Aspergillus japonicus, Aspergillus nidulans, Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, Bjerkandera adusta, Ceriporiopsis aneirina, Ceriporiopsis caregiea, Ceriporiopsis gilvescens, Ceriporiopsis pannocinta, Ceriporiopsis rivulosa, Ceriporiopsis subrufa, Ceriporiopsis subvermispora, Chrysosporium inops, Chrysosporium keratinophilum, Chrysosporium lucknowense, Chrysosporium merdarium, Chrysosporium pannicola, Chrysosporium queenslandicum, Chrysosporium tropicum, Chrysosporium zonatum, Coprinus cinereus, Coriolus hirsutus, Fusarium bactridioides, Fusarium cerealis, Fusarium crookwellense, Fusarium culmorum, Fusarium graminearum, Fusarium graminum, Fusarium heterosporum, Fusarium negundi, Fusarium oxysporum, Fusarium reticulatum, Fusarium roseum, Fusarium sambucinum, Fusarium sarcochroum, Fusarium sporotrichioides, Fusarium sulphureum, Fusarium torulosum, Fusarium trichothecioides, Fusarium venenatum, Humicola insolens, Humicola lanuginosa, Mucor miehei, Myceliophthora thermophila, Neurospora crassa, Penicillium purpurogenum, Phanerochaete chrysosporium, Phlebia radiata, Pleurotus eryngii, Talaromyces emersonii, Thielavia terrestris, Trametes villosa, Trametes versicolor, Trichoderma harzianum, Trichoderma koningii, Trichoderma longibrachiatum, Trichoderma reesei, ou Trichoderma viride.
[0646] As células fúngicas podem ser transformadas por um processo envolvendo a formação de protoplastos, a transformação dos protoplastos e a regeneração da parede celular de uma maneira conhecida per se. Procedimentos adequados para a transformação de células hospedeiras de Aspergillus e Trichodermasão descritos em EP 238023, Yelton et al., 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 1470-1474, e Christensen et al., 1988, Bio/Technology 6: 1419-1422. Métodos adequados para a transformação de espécies Fusariumsão descritos por Malardier et al., 1989, Gene 78: 147-156 e WO 96/00787. A levedura pode ser transformada usando os procedimentos descritos por Becker e Guarente, Em Abelson, J.N. e Simon, M.I., editores, Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology, Methods in Enzymology, Volume 194, páginas 182-187, Academic Press, Inc., Nova Iorque; Ito et al., 1983, J. Bacteriol. 153: 163; e Hinnen et al., 1978, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 75: 1920. Métodos de Produção da Alfa-Amilase
[0647] A variante pode ser produzida por um método compreendendo: (a) cultivar uma célula hospedeira da presente invenção sob condições adequadas para a expressão da variante; e (b) recuperar a variante.
[0648] Em um aspecto, o método para obter uma variante de alfa-amilase compreende: introduzir em uma alfa- amilase progenitora uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94, 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475, 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e a variante tem atividade de alfa-amilase; e opcionalmente recuperar a variante.
[0649] As células hospedeiras são cultivadas em um meio nutriente adequado para produção do híbrido ou variante usando métodos conhecidos na técnica. Por exemplo, a célula pode ser cultivada por cultivo em balão agitado ou fermentação em pequena escala ou grande escala (incluindo as fermentações contínua, descontínua, descontínua alimentada ou em estado sólido) em fermentadores laboratoriais ou industriais realizado em um meio adequado e sob condições que permitem que o polipeptídeo seja expresso e/ou isolado. O cultivo ocorre em um meio nutritivo adequado compreendendo fontes de carbono e nitrogênio e sais inorgânicos, usando procedimentos conhecidos na técnica. Meios adequados estão disponíveis de fornecedores comerciais ou podem ser preparados de acordo com composições publicadas (p.ex., em catálogos da American Type Culture Collection). Se o híbrido ou variante for secretado no meio nutriente, o híbrido ou variante pode ser recuperado diretamente do meio. Se o híbrido ou variante não for secretado, pode ser recuperado de lisados de células.
[0650] O híbrido ou variante pode ser detectado usando métodos conhecidos na técnica que são específicos para o híbrido ou variante. Estes métodos de detecção podem incluir uso de anticorpos específicos, formação de um produto de enzima ou desaparecimento de um substrato de enzima. Por exemplo, pode ser usado um ensaio enzimático para determinar a atividade do híbrido ou variante.
[0651] Em um aspecto alternativo, o híbrido ou variante não é recuperado, mas ao invés uma célula hospedeira como descrito aqui expressando um híbrido ou variante é usada como fonte do híbrido ou variante.
[0652] Em um aspecto, um método para melhorar o desempenho de lavagem de uma variante de um polipeptídeo tendo alfa-amilase, a referida variante tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 1, ou tendo pelo menos 60% de identidade de sequência com aquela, o referido método compreendendo os passos de: (a) uma substituição e/ou deleção de duas, três ou quatro posições no polipeptídeo tendo atividade de alfa-amilase, as referidas posições correspondentes à posição 180, 181, 182, e 183 usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração; e (b) uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições H1, H2, N3, G7, R26, A31, R37, T40, A41, N54, V56 , A60, L63, K72, G73, K93, N94, Q98, V103, V104, M105, N106, A109, G110, A111, G113, T114, F116, V117, D118, D123, N126, N128, T131, S132, T134, Y135, Q136, I137, Q138, W140, K142, D144, P146, T151, Y152, F155, W159, Y160, T165, W167, E169, K172, L173, N174, I176, Y177, K178, R180, S181, T182, G183, A185, W188, E189, E193, N194, N196, F202, A203, L205, T224, N225, Y242, S243, F244, V252, T256, K258, E259, M260, F261, F266, N276, N279, K280, W283, S286, S302, G303, T315, H320, P321, M322, H323, W346, L354, E359, Q360, G361, Y362, V365, Y371, A383, E390, N394, F395, D405, I409, R414, H420, N422, T427, G455, K457, P458, N470, S472, V473, N474, G475 e G476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e desempenho de lavagem melhorado (aumentado) em comparação com o referido polipeptídeo. Grânulos de Variantes de Alfa-Amilase
[0653] A presente invenção também se relaciona com grânulos/partículas de enzima compreendendo a(s) variante(s) de alfa-amilase da invenção. Em uma modalidade, o grânulo compreende um núcleo e, opcionalmente, um ou mais revestimentos (camadas externas) rodeando o núcleo.
[0654] O núcleo pode ter um diâmetro, medido como diâmetro esférico equivalente (tamanho médio de partículas com base no volume) de 20-2000 μm, particularmente 50-1500 μm, 100-1500 μm ou 250-1200 μm.
[0655] Em uma modalidade, o núcleo compreende uma ou mais variantes de alfa-amilase da presente invenção. Em uma modalidade, o núcleo compreende um ou mais polipeptídeos tendo variante de alfa-amilase da presente invenção. Em uma modalidade, o núcleo compreende um ou mais polipeptídeos tendo variante de alfa-amilase e/ou um ou mais polipeptídeos tendo variante de alfa-amilase da presente invenção.
[0656] O núcleo pode incluir materiais adicionais tais como enchimentos, materiais de fibra (celulose ou fibras sintéticas), agentes estabilizantes, agentes solubilizantes, agentes de suspensão, agentes reguladores da viscosidade, esferas leves, plastificantes, sais, lubrificantes e fragrâncias.
[0657] O núcleo pode incluir um aglutinante, tal como polímero sintético, cera, gordura ou carboidrato.
[0658] O núcleo pode incluir um sal de um cátion multivalente, um agente redutor, um antioxidante, um catalisador para decomposição de peróxido e/ou um componente de tampão ácido, tipicamente como uma combinação homogênea.
[0659] O núcleo pode incluir uma partícula inerte com a enzima absorvida na mesma ou aplicada na superfície, p.ex., por revestimento em leito fluidizado.
[0660] O núcleo pode ter um diâmetro de 20-2000 μm, particularmente 50-1500 μm, 100-1500 μm ou 250-1200 μm.
[0661] O núcleo pode ser rodeado por pelo menos um revestimento, p.ex., para melhorar a estabilidade no armazenamento, para reduzir formação de poeiras durante o manuseamento ou para colorir o grânulo. O(s) revestimento(s) opcional(ais) pode(m) incluir um revestimento de sal ou outros materiais de revestimento adequados, tais como polietilenoglicol (PEG), de metil-hidroxipropilcelulose (MHPC) e álcool polivinílico (PVA).
[0662] O revestimento pode ser aplicado em uma quantidade de pelo menos 0,1% em peso do núcleo, p.ex., pelo menos 0,5%, pelo menos 1%, pelo menos 5%, pelo menos 10% ou pelo menos 15%. A quantidade pode ser no máximo 100%, 70%, 50%, 40% ou 30%.
[0663] O revestimento tem preferencialmente pelo menos 0,1 μm de espessura, particularmente pelo menos 0,5 μm, pelo menos 1 μm ou pelo menos 5 μm. Em algumas modalidades, a espessura do revestimento é inferior a 100 μm, tal como inferior a 60 μm ou inferior a 40 μm.
[0664] O revestimento deve encapsular a unidade nuclear por formação de uma camada substancialmente contínua. Uma camada substancialmente contínua é para ser entendida como um revestimento tendo poucos ou nenhuns orifícios, tal que a unidade nuclear que está encapsulando/encerrando tenha poucas ou nenhumas áreas não revestidas. A camada ou revestimento deve ter, em particular, espessura homogênea.
[0665] O revestimento pode conter adicionalmente outros materiais como conhecidos na técnica, p.ex., enchimentos, agentes antiaderentes, pigmentos, corantes, plastificantes e/ou aglutinantes, tais como dióxido de titânio, caulim, carbonato de cálcio ou talco.
[0666] Um revestimento de sal pode compreender pelo menos 60% em peso de um sal, p.ex., pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95% ou pelo menos 99% em peso.
[0667] Para proporcionar proteção aceitável, o revestimento de sal tem preferencialmente pelo menos 0,1 μm de espessura, p.ex., pelo menos 0,5 μm, pelo menos 1 μm, pelo menos 2 μm, pelo menos 4 μm, pelo menos 5 μm ou pelo menos 8 μm. Em uma modalidade particular, a espessura do revestimento de sal é abaixo de 100 μm, tal como abaixo de 60 μm ou abaixo de 40 μm.
[0668] O sal pode ser adicionado a partir de uma solução de sal onde o sal é completamente dissolvido ou a partir de uma suspensão de sal em que as partículas finas são menores do que 50 μm, tal como menores do que 10 μm ou menores do que 5 μm.
[0669] O revestimento de sal pode compreender um único sal ou uma mistura de dois ou mais sais. O sal pode ser solúvel em água, em particular, tendo uma solubilidade de pelo menos 0,1 g em 100 g de água a 20 °C, preferencialmente pelo menos 0,5 g por 100 g de água, p.ex., pelo menos 1 g por 100 g de água, p.ex., pelo menos 5 g por 100 g de água.
[0670] O sal pode ser um sal inorgânico, p.ex., sais de sulfato, sulfito, fosfato, fosfonato, nitrato, cloreto ou carbonato ou sais de ácidos orgânicos simples (menos do que 10 átomos de carbono, p.ex., 6 ou menos átomos de carbono) tais como citrato, malonato ou acetato. Exemplos de cátions nestes sais são íons de metais alcalinos ou alcalinoterrosos, o íon de amônio ou íons de metais da primeira série de transição, tais como sódio, potássio, magnésio, cálcio, zinco ou alumínio. Exemplos de ânions incluem cloreto, brometo, iodeto, sulfato, sulfito, bissulfito, tiossulfato, fosfato, fosfato monobásico, fosfato dibásico, hipofosfito, di-hidrogenopirofosfato, tetraborato, borato, carbonato, bicarbonato, metassilicato, citrato, malato, maleato, malonato, succinato, lactato, formato, acetato, butirato, propionato, benzoato, tartarato, ascorbato ou gluconato. Em particular podem ser usados sais de metais alcalinos ou alcalinoterrosos de sulfato, sulfito, fosfato, fosfonato, nitrato, cloreto ou carbonato ou sais de ácidos orgânicos simples tais como citrato, malonato ou acetato.
[0671] O sal presente no revestimento pode ter uma umidade constante a 20 °C acima de 60%, particularmente acima de 70%, acima de 80% ou acima de 85%, ou pode ser uma outra forma hidratada de um tal sal (p.ex., anidrato). O revestimento de sal pode ser como descrito em WO 00/01793 ou WO 2006/034710.
[0672] Exemplos específicos de sais adequados são NaCl (CH20 °C=76%), Na2CO3 (CH20 °C=92%), NaNO3 (CH20 °C=73%), Na2HPO4 (CH20 °C=95%), Na3PO4 (CH25 °C=92%), NH4Cl (CH20 °C = 79,5%), (NH4)2HPO4 (CH20 °C = 93,0%), NH4H2PO4 (CH20 °C = 93,1%), (NH4)2SO4 (CH20 °C=81,1%), KCl (CH20 °C=85%), K2HPO4 (CH20 °C=92%), KH2PO4 (CH20 °C=96,5%), KNO3 (CH20 °C=93,5%), Na2SO4 (CH20 °C=93%), K2SO4 (CH20 °C=98%), KHSO4 (CH20 °C=86%), MgSO4 (CH20 °C=90%), ZnSO4 (CH20 °C=90%) e citrato de sódio (CH25 °C=86%). Outros exemplos incluem NaH2PO4, (NH4)H2PO4, CuSO4, Mg(NO3)2 e acetato de magnésio.
[0673] O sal pode estar em forma anidra ou pode ser um sal hidratado, i.e., um sal cristalino hidratado com água(s) de cristalização ligada(s), tal como descrito em WO 99/32595. Exemplos específicos incluem sulfato de sódio anidro (Na2SO4), sulfato de magnésio anidro (MgSO4), sulfato de magnésio hepta- hidratado (MgSO4.7H2O), sulfato de zinco hepta-hidratado (ZnSO4.7H2O), fosfato de sódio dibásico hepta-hidratado (Na2HPO4.7H2O), nitrato de magnésio hexa-hidratado (Mg(NO3)2(6H2O)), citrato de sódio di-hidratado e acetato de magnésio tetra-hidratado.
[0674] De preferência, o sal é aplicado como uma solução do sal, por exemplo, usando um leito fluidizado.
[0675] Os materiais de revestimento podem ser materiais de revestimento cerosos e materiais de revestimento de formação de filme. Exemplos de materiais de revestimento cerosos são produtos de poli(óxido de etileno) (polietilenoglicol, PEG) com pesos molares médios de 1000 a 20000; nonilfenóis etoxilados tendo de 16 a 50 unidades de óxido de etileno; álcoois graxos etoxilados, nos quais o álcool contém de 12 a 20 átomos de carbono e nos quais existem de 15 a 80 unidades de óxido de etileno; álcoois graxos; ácidos graxos; e mono- e di- e triglicerídeos de ácidos graxos. Exemplos de materiais de revestimento formadores de película adequados para aplicação por técnicas de leito fluidizado são dados no documento GB 1483591.
[0676] O grânulo pode opcionalmente ter um ou mais revestimentos adicionais. Exemplos de materiais de revestimento adequados são polietilenoglicol (PEG), metil- hidroxipropilcelulose (MHPC) e álcool polivinílico (PVA). Exemplos de grânulos de enzimas com múltiplos revestimentos são descritos em WO 93/07263 e WO 97/23606.
[0677] O núcleo pode ser preparado por granulação de uma combinação dos ingredientes, por exemplo, por um método compreendendo técnicas de granulação, tais como cristalização, precipitação, revestimento em agitador de alta velocidade, revestimento em leito fluidizado, aglomeração em leito fluidizado, atomização rotativa, extrusão, pelotização (prilling), esferonização, métodos de redução do tamanho, granulação em tambor e/ou granulação de alto cisalhamento.
[0678] Métodos para a preparação do núcleo podem ser encontrados no Handbook of Powder Technology; Particle size enlargement de C. E. Capes; Volume 1; 1980; Elsevier. Métodos de preparação incluem tecnologias conhecidas de formulação de rações e grânulos, por exemplo: (a) Produtos secos por pulverização, em que uma solução contendo enzima líquida é atomizada em uma torre de secagem por pulverização para formar gotículas pequenas que, durante seu trajeto para baixo na torre de secagem, secam para formar um material particulado contendo enzima. Partículas muito pequenas podem ser produzidas deste modo (Michael S. Showell (editor); Powdered detergents; Surfactant Science Series; 1998; vol. 71; páginas 140-142; Marcel Dekker). (b) Produtos em camadas, em que a enzima é revestida como uma camada em torno de uma partícula nuclear inerte pré- formada, em que uma solução contendo enzima é atomizada, tipicamente em um dispositivo de leito fluidizado em que as partículas nucleares pré-formadas são fluidizadas, e a solução contendo enzima adere às partículas nucleares e seca para deixar uma camada de enzima seca na superfície da partícula nuclear. Partículas de um tamanho desejado podem ser obtidas deste modo se uma partícula nuclear útil do tamanho desejado puder ser encontrada. Este tipo de produto é descrito em, p.ex., WO 97/23606. (c) Partículas nucleares absorvidas, em que, em vez do revestimento da enzima como uma camada em torno do núcleo, a enzima é absorvida sobre a e/ou na superfície do núcleo. Um tal processo é descrito em WO 97/39116. (d) Produtos de extrusão ou peletizados, em que uma pasta contendo enzima é prensada em péletes ou, sob pressão, é extrudada através de uma pequena abertura e cortada em partículas que são subsequentemente secas. Tais partículas têm usualmente um tamanho considerável porque o material no qual a abertura de extrusão é feita (usualmente uma placa com orifícios perfurados) define um limite na queda de pressão permissível através da abertura de extrusão. Igualmente, pressões de extrusão muito elevadas quando se usa uma pequena abertura aumentam a geração de calor na pasta de enzima, que é prejudicial à enzima (Michael S. Showell (editor); Powdered detergents; Surfactant Science Series; 1998; vol. 71; páginas 140-142; Marcel Dekker). (e) Produtos pelotizados, em que um pó contendo enzima é suspenso em cera fundida e a suspensão é pulverizada, p.ex., através de um atomizador de disco rotativo, em uma câmara de resfriamento onde as gotículas solidificam rapidamente (Michael S. Showell (editor); Powdered detergents; Surfactant Science Series; 1998; volume 71; páginas 140-142; Marcel Dekker). O produto obtido é aquele em que a enzima está uniformemente distribuída ao longo de um material inerte em vez de estar concentrada em sua superfície. As Patentes U.S. Nos. 4,016,040 e 4,713,245 descrevem esta técnica. (f) Produtos de granulação em misturador, em que um líquido contendo enzima é adicionado a uma composição em pó seca de componentes de granulação convencionais. O líquido e o pó em uma proporção adequada são misturados e, à medida que a umidade do líquido é absorvida no pó seco, os componentes do pó seco começarão a aderir e aglomerar e partículas se acumularão, formando granulados compreendendo a enzima. Um tal processo é descrito na Patente U.S. No. 4,106,991 e documentos relacionados EP 170360, EP 304332, EP 304331, WO 90/09440 e WO 90/09428. Em um produto específico deste processo, vários misturadores de elevado cisalhamento podem ser usados como granuladores. Os granulados consistindo em enzima, enchimentos e aglutinantes, etc. são misturados com fibras de celulose para reforçar as partículas para produzir o assim chamado granulado T. As partículas reforçadas são mais robustas e liberam menos poeira enzimática. (g) Redução do tamanho, em que os núcleos são produzidos por moagem ou esmagamento de partículas maiores, péletes, comprimidos, briquetes, etc. contendo a enzima. A fração de partículas nucleares desejada é obtida por peneiração do produto moído ou esmagado. As partículas sobre- e subdimensionadas podem ser recicladas. A redução de tamanho é descrita em Martin Rhodes (editor); Principles of Powder Technology; 1990; Capítulo 10; John Wiley & Sons. (h) Granulação em leito fluidizado. A granulação em leito fluidizado envolve a suspensão de particulados em uma corrente de ar e pulverização de um líquido nas partículas fluidizadas através de bocais. As partículas atingidas por gotículas de pulverização ficam úmidas e se tornam pegajosas. As partículas pegajosas colidem com outras partículas e aderem às mesmas para formar um grânulo. (i) Os núcleos podem ser sujeitos a secagem, tal como em um secador de leito fluidizado. Outros métodos conhecidos para a secagem de grânulos na indústria de rações ou enzimas podem ser usados pelo perito. A secagem tem lugar preferencialmente a uma temperatura do produto de 25 a 90 °C. Para algumas enzimas é importante que os núcleos compreendendo a enzima contenham uma baixa quantidade de água antes de serem revestidos com o sal. Se as enzimas sensíveis à água forem revestidas com um sal antes da água excessiva ser removida, ela será aprisionada no núcleo e pode afetar a atividade da enzima negativamente. Após secagem, os núcleos contêm preferencialmente 0,1-10% p/p de água.
[0679] Os granulados sem formação de poeiras podem ser produzidos, p.ex., como divulgado nas Patentes U.S. Nos. 4,106,991 e 4,661,452 e podem ser opcionalmente revestidos por métodos conhecidos na técnica.
[0680] O granulado pode conter adicionalmente uma ou mais enzimas adicionais. Cada enzima estará então presente em mais grânulos assegurando uma distribuição mais uniforme das enzimas e também reduz a segregação física de diferentes enzimas devido a diferentes tamanhos de partículas. Métodos para produção de cogranulados de múltiplas enzimas são divulgados na divulgação de ip.com IPCOM000200739D.
[0681] Um outro exemplo da formulação de enzimas pelo uso de cogranulados é divulgado em WO 2013/188331.
[0682] A presente invenção também se refere a enzimas protegidas preparadas de acordo com o método divulgado em EP 238,216.
[0683] Em uma modalidade, o grânulo compreende também uma ou mais enzimas adicionais, p.ex., hidrolase, isomerase, ligase, liase, oxidorredutase e transferase. A uma ou mais enzimas adicionais são preferencialmente selecionadas do grupo consistindo em acetilxilana esterase, acilglicerol lipase, amilase, alfa-amilase, beta-amilase, arabinofuranosidase, celobioidrolases, celulase, feruloil esterase, galactanase, alfa-galactosidase, beta-galactosidase, beta-glucanase, beta-glucosidase, lisofosfolipase, lisozima, alfa-manosidase, beta-manosidase (mananase), fitase, fosfolipase A1, fosfolipase A2, fosfolipase D, protease, pululanase, pectina esterase, triacilglicerol lipase, xilanase, beta-xilosidase ou qualquer sua combinação. Formulações de Caldo de Fermentação ou Composições de Células
[0684] A presente invenção se relaciona também com uma formulação de caldo de fermentação ou uma composição de células compreendendo variante(s) de alfa-amilase da presente invenção. A formulação do caldo de fermentação ou a composição de células compreende adicionalmente ingredientes adicionais usados no processo de fermentação, tais como, por exemplo, células (incluindo as células hospedeiras contendo o gene que codifica o polipeptídeo da presente invenção, que são usadas para produzir o polipeptídeo de interesse), detritos celulares, biomassa, meios de fermentação e/ou produtos de fermentação. Em algumas modalidades, a composição é um caldo integral de células mortas contendo ácido(s) orgânico(s), células mortas e/ou detritos celulares e meio de cultura.
[0685] O termo “caldo de fermentação” como usado aqui se refere a uma preparação produzida por fermentação celular que sofre recuperação e/ou purificação nulas ou mínimas. Por exemplo, caldos de fermentação são produzidos quando as culturas microbianas são cultivadas até a saturação, incubadas sob condições com limite de carbono para permitir a síntese de proteínas (por exemplo, a expressão de enzimas por células hospedeiras) e a secreção no meio de cultura de células. O caldo de fermentação pode conter conteúdos não fracionados ou fracionados dos materiais de fermentação derivados no final da fermentação. Tipicamente, o caldo de fermentação não é fracionado e compreende o meio de cultura gasto e os detritos celulares presentes depois que as células microbianas (por exemplo, células fúngicas filamentosas) são removidas, por exemplo, por centrifugação. Em algumas modalidades, o caldo de fermentação contém meio de cultura de células gasto, enzimas extracelulares e células microbianas viáveis e/ou não viáveis.
[0686] Em algumas modalidades, a formulação de caldo de fermentação ou a composição celular compreende um primeiro componente de ácido orgânico que compreende pelo menos um ácido orgânico de 1 a 5 carbonos e/ou um sal do mesmo e um segundo componente de ácido orgânico que compreende pelo menos um ácido orgânico de 6 ou mais carbonos e/ou um sal do mesmo. Em algumas modalidades, o primeiro componente de ácido orgânico é ácido acético, ácido fórmico, ácido propiônico, um seu sal, ou uma mistura de dois ou mais dos anteriores e o segundo componente de ácido orgânico é ácido benzoico, ácido ciclo- hexanocarboxílico, ácido 4-metilvalérico, ácido fenilacético, um seu sal, ou uma mistura de dois ou mais dos anteriores.
[0687] Em um aspecto, a composição contém ácido(s) orgânico(s) e, opcionalmente, contém ainda células mortas e/ou detritos celulares. Em algumas modalidades, as células mortas e/ou detritos celulares são removidos de um caldo integral de células mortas para fornecer uma composição que esteja isenta destes componentes.
[0688] A formulação de caldo de fermentação ou composição celular pode compreender ainda um conservante e/ou agente antimicrobiano (por exemplo, bacteriostático), incluindo, mas não se limitando a, sorbitol, cloreto de sódio, sorbato de potássio e outros conhecidos na técnica.
[0689] O caldo integral de células mortas ou composição pode conter os conteúdos não fracionados dos materiais de fermentação derivados no final da fermentação. Tipicamente, o caldo integral de células mortas ou composição contém o meio de cultura gasto e resíduos de células presentes depois que as células microbianas (por exemplo, células fúngicas filamentosas) são cultivadas até a saturação, incubadas sob condições com limite de carbono para permitir a síntese proteica. Em algumas modalidades, o caldo integral de células mortas ou composição contém o meio de cultura de células gasto, enzimas extracelulares e células fúngicas filamentosas mortas. Em algumas modalidades, as células microbianas presentes no caldo integral de células mortas ou composição podem ser permeabilizadas e/ou lisadas usando métodos conhecidos na técnica.
[0690] Um caldo integral ou composição de células como descrito aqui é tipicamente um líquido, mas pode conter componentes insolúveis, como células mortas, resíduos de células, componentes de meios de cultura e/ou enzima(s) insolúvel(eis). Em algumas modalidades, os componentes insolúveis podem ser removidos para fornecer uma composição líquida clarificada.
[0691] As formulações de caldo inteiro e composição de células da presente invenção podem ser produzidas por um método descrito em WO 90/15861 ou WO 2010/096673.
[0692] A composição de limpeza da presente invenção preferencialmente se relaciona com produtos para e/ou métodos relacionados com e/ou uso das composições reivindicadas que são destinadas a cuidado do ar, cuidado do carro, lavagem de louça, limpeza de roupa, cuidado (condicionamento e/ou amaciamento), aditivos para lavagem de roupa e enxaguamento, limpeza e/ou tratamento de superfícies duras, e outras limpezas para uso do consumidor ou institucional. Preferencialmente, a composição compreende um detergente para lavagem de roupa ou composição de limpeza de superfícies duras, como uma composição de lavagem de louça. A composição da invenção pode ser um sólido (por exemplo, uma barra, pastilha, pó, grânulos), líquido, gel e/ou pasta ou pode estar na forma de uma folha. Uma forma preferencial é uma forma de dose unitária que pode ser uma pastilha, folha, ou preferencialmente uma bolsa compreendendo composições líquidas e/ou sólidas. São preferenciais bolsas de múltiplos compartimentos. A composição pode ser um agente de lavagem "de serviço pesado" para todos os fins em forma de pó, uma forma de pasta para todos os fins, um líquido do tipo serviço pesado, um agente líquido para tecidos delicados, um agente de lavagem manual de louça, um agente de lavagem de louça para serviço ligeiro, um tipo formador de muita espuma, um agente de lavagem de louça à máquina. A composição de lavagem de louça pode estar na forma de um líquido, gel ou pó e pode estar na forma de uma dose unitária, como uma pastilha ou bolsa, e é preferencialmente uma composição de lavagem principal ou um auxiliar de tipo enxaguamento. A composição pode estar também em pacotes de dose única, incluindo aqueles conhecidos na técnica e aqueles que são solúveis em água, insolúveis em água e/ou permeáveis à água. Um detergente líquido pode ser aquoso, tipicamente contendo até 70% de água e 0-30% de solvente orgânico, ou não aquoso ou uma solução contendo mais do que 0,5 g/L da composição detergente.
[0693] A composição da invenção pode, por exemplo, ser formulada como uma composição detergente para lavagem de roupa manual ou à máquina, incluindo uma composição de aditivo de lavagem de roupa adequada para pré-tratamento de tecidos manchados e uma composição de amaciador de tecidos adicionada ao enxaguamento, ou ser formulada como uma composição detergente para uso em operações domésticas gerais de limpeza de superfícies duras, ou ser formulada para operações de lavagem de louça manual ou à máquina.
[0694] Composições em dose unitária preferenciais compreendem sólido (preferencialmente na forma de um pó), ou líquido ou uma sua combinação, preferencialmente em uma dose unitária de múltiplos compartimentos. Especialmente preferencial é uma forma de dose unitária compreendendo detergente líquido encapsulado em material solúvel em água na forma de uma bolsa, opcionalmente na forma de uma bolsa de múltiplos componentes. Uma dose unitária preferencial compreende composição líquida detergente/de cuidado para lavagem de roupa, opcionalmente em uma forma de dose unitária.
[0695] A composição de limpeza da invenção pode estar na forma de uma barra de sabão, preferencialmente uma barra de sabão para lavagem de roupa e pode ser usada para lavagem manual de roupa, tecidos e/ou têxteis. O termo barra de sabão para lavagem de roupa inclui barras para lavagem de roupa, barras de sabão, barras combinadas, barras syndet e barras de detergente.
[0696] As composições de limpeza, para além do polipeptídeo híbrido ou variante de enzima amilase, compreendem um adjunto de limpeza/detergente. A expressão adjunto de limpeza aqui compreende tipicamente uma combinação de mais do que um adjunto de limpeza. Tipicamente, o adjunto de limpeza estará presente na composição em uma quantidade desde 0,0001 até 99,9999% p, preferencialmente desde 10 até 99,999% p, preferencialmente pelo menos 30 ou 40 ou 50% p de adjunto de limpeza. Adjuntos de limpeza adequados compreendem: tensoativos, antirredepositantes, branqueadores, catalisadores de branqueamento, agentes de coloração, agentes de reforço de branqueamento, agentes quelantes, agentes de transferência de corantes, auxiliares da deposição, dispersantes, enzimas adicionais, e estabilizadores de enzimas, materiais catalíticos, ativadores de branqueamento, peróxido de hidrogênio, fontes de peróxido de hidrogênio, abrilhantadores ópticos, fotoativadores, agentes fluorescentes, agentes de matização de tecidos, condicionadores de tecidos, perácidos pré-formados, agentes dispersantes poliméricos, agentes de remoção/antirredeposição de sujidade de argila, sais de enchimento, hidrótropos, abrilhantadores, supressores de espuma de sabão, agentes elastificantes da estrutura, amaciadores para tecidos, tensoativos hidrolisáveis, conservantes, antioxidantes, agentes antiencolhimento, germicidas, fungicidas, agentes antiembaciamento, agentes anticorrosão, fontes de alcalinidade, agentes solubilizadores, transportadores, auxiliares de processamento, pigmentos, corantes, perfumes e agentes de controle do pH, encapsulados, polímeros e suas misturas. Por exemplo, estes podem incluir: ingredientes de branqueamento como agentes de reforço de branqueadores imina; fontes de peróxido de hidrogênio como percarbonato e/ou perborato, especialmente percarbonato revestido com material como sal carbonato e/ou sulfato, sal silicato, borossilicato, e qualquer mistura destes; perácido pré-formado, incluindo perácido pré-formado em forma encapsulada; catalisadores de metais de transição; supressores ou sistemas supressores de espuma de sabão como supressores de espuma de sabão à base de silicone e/ou supressores de espuma de sabão à base de ácidos graxos; amaciadores de tecidos como argila, silicone e/ou compostos de amônio quaternário; floculantes como óxido de polietileno; inibidores da transferência de corantes como polivinilpirrolidona, N-óxido de poli-4-vinilpiridina e/ou copolímero de vinilpirrolidona e vinilimidazol; componentes para integridade de tecidos como oligômeros produzidos pela condensação de imidazol e epicloridrina; dispersantes de sujidade e auxiliares antirredeposição de sujidade como poliaminas alcoxiladas e polímeros de etilenimina etoxilados; componentes antirredeposição como poliésteres; polímeros de carboxilato como polímeros de ácido maleico ou copolímeros de ácido maleico e acrílico; perfumes como microcápsulas de perfume, acordes encapsulados em amido, pulverização de perfume; anéis de sabão; partículas estéticas; corantes; agentes de enchimento como sulfato de sódio e/ou fibras cítricas, apesar de poder ser preferencial que a composição esteja substancialmente desprovida de agentes de enchimento; sal silicato como silicato de sódio, incluindo silicato de sódio 1,6R e 2,0R, ou metassilicato de sódio; copoliésteres de ácido dicarboxílicos e dióis; polímeros celulósicos como metilcelulose, carboximetilcelulose, hidroxietoxicelulose, ou outra alquilou alquilalcoxicelulose; solventes como 1,2-propanodiol, monoetanolamina; dietilenoglicol, etanol, e qualquer mistura destes; hidrótropos como sulfonato de cumeno sódico, sulfonato de xileno sódico, sulfonato de tolueno sódico, e quaisquer misturas; ácido orgânicos como ácido cítrico; e qualquer combinação destes. Preferencialmente, a composição compreende um adjunto de limpeza compreendendo tensoativo e enzima adicional. Preferencialmente, a composição compreende um ou mais adjuntos selecionados do grupo consistindo em (i) microcápsula de perfume; (ii) agente de matização de tecidos; (iii) protease; (iv) polímero anfifílico de limpeza; (v) lipase, (vi) DNase e/ou RNase, (vii) mananase, (viii) xantana liase; (ix) hexosaminidase; ou (viii) suas misturas.
[0697] Preferencialmente, a composição compreende um tensoativo, preferencialmente desde 0,1 até 60% em peso ou desde 0,5 até 50% p ou 1 até 40% p da composição, de tensoativo. O tensoativo compreende preferencialmente um sistema tensoativo compreendendo uma mistura de mais do que um tensoativo, que podem compreender, por exemplo, tensoativos aniônicos, não iônicos incluindo semipolares, catiônicos, zwiteriônicos e/ou anfotéricos e suas misturas.
[0698] Preferencialmente, a composição compreende um tensoativo aniônico. Tensoativos aniônicos preferenciais são tensoativos sulfonato e sulfato, preferencialmente alquilbenzenossulfonatos e/ou alquilsulfatos (opcionalmente alcoxilados). Um tensoativo aniônico particularmente preferencial compreende alquilbenzenossulfonatos lineares (LAS). Alquilsulfatos preferenciais compreendem alquilétersulfatos, especialmente C-9-15 álcoolétersulfatos, especialmente os tendo um grau médio de etoxilação desde 0,5 até 7, preferencialmente desde 1 até 5, C8-C16 éstersulfatos e C10-C14 éstersulfatos, como monododeciléstersulfatos. Em uma composição preferencial de acordo com a invenção, o tensoativo compreende tensoativo aniônico, preferencialmente compreendendo alquilbenzenossulfonato e/ou alquilsulfato opcionalmente etoxilado, preferencialmente tendo um grau de etoxilação desde 0 até 7, mais preferencialmente desde 0,5 até 3. Isômeros de LAS, alquilbenzenossulfonatos ramificados (BABS), fenilalcanossulfonatos, alfa-olefinossulfonatos (AOS), olefinossulfonatos, alcenossulfonatos, alcano-2,3-di- ilbis(sulfatos), hidroxialcanossulfonatos e dissulfonatos, alquilsulfatos (AS) tais como dodecilsulfato de sódio (SDS), sulfatos de álcool graxo (FAS), sulfatos de álcool primário (PAS), éter sulfatos de álcool (AES ou AEOS ou FES, também conhecidos como etoxissulfatos de álcool ou étersulfatos de álcool graxo), alcanossulfonatos secundários (SAS), parafinassulfonatos (PS), éstersulfonatos, ésteres de glicerol de ácidos graxos sulfonados, ésteres de metila de ácidos alfa- sulfograxos (alfa-SFMe ou SES) incluindo éstersulfonato de metila (MES), ácido alquil- ou alcenilsuccínico, ácido dodecenil/tetradecenilsuccínico (DTSA), derivados de ácidos graxos de aminoácidos, diésteres e monoésteres de ácido sulfossuccínico ou sal de ácidos graxos (sabão) e combinações dos mesmos também são tensoativos aniônicos adequados. Em uma modalidade preferencial, o tensoativo compreende tensoativo aniônico, preferencialmente compreendendo alquilbenzenossulfonato e/ou alquilsulfato opcionalmente etoxilado, preferencialmente tendo um grau de etoxilação desde 0 até 7, mais preferencialmente desde 0,5 até 3.
[0699] Os tensoativos aniônicos são preferencialmente adicionados à composição de limpeza na forma de sais. Cátions preferenciais são íons de metais alcalinos, como sódio e potássio. No entanto, a forma de sal do tensoativo aniônico pode ser formada in situ por neutralização da forma de ácido do tensoativo com alcali, como hidróxido de sódio ou uma amina, como mono-, di-, ou trietanolamina. Preferencialmente, o tensoativo compreende tensoativo não iônico. Preferencialmente, o tensoativo compreende um tensoativo aniônico e um não iônico, preferencialmente em uma razão em peso de aniônico para não iônico desde 30:1 até 1:2, preferencialmente desde 20:1 até 2:3 ou 1:1.
[0700] Exemplos não limitantes de tensoativos não iônicos incluem etoxilatos de álcool (AE ou AEO), propoxilatos de álcool, álcoois graxos propoxilados (PFA), ésteres de alquila de ácidos graxos alcoxilados, tais como ésteres de alquila de ácidos graxos etoxilados e/ou propoxilados, etoxilatos de alquilfenol (APE), etoxilatos de nonilfenol (NPE), alquilpoliglicosídeos (APG), aminas alcoxiladas, monoetanolamidas de ácidos graxos (FAM), dietanolamidas de ácidos graxos (FADA), monoetanolamidas de ácidos graxos etoxiladas (EFAM), monoetanolamidas de ácidos graxos propoxiladas (PFAM), amidas de poli-hidroxialquila de ácidos graxos, ou derivados N-acila N-alquila de glucosamina (glucamidas, GA, ou glucamidas de ácidos graxos, FAGA), bem como produtos disponíveis sob os nomes registrados SPAN e TWEEN, e suas combinações. Etoxilados de álcool são particularmente preferenciais, preferencialmente tendo uma cadeia C9-18 alquila, preferencialmente entre C12-15 e preferencialmente tendo um grau médio de etoxilação 3 até 9, mais preferencialmente desde 3 até 7. Tensoativos não iônicos comercialmente disponíveis incluem Plurafac, Lutensol™ e Pluronic™ da BASF, série Dehypon™ da Cognis e série Genapol™ da Clariant.
[0701] A composição de limpeza compreende preferencialmente desde cerca de 1% até cerca de 40% de um tensoativo aniônico. A composição de limpeza compreende preferencialmente desde 0,2% até cerca de 40% de um tensoativo não iônico como etoxilado de álcool, etoxilado de nonilfenol, alquilpoliglicosídeo, óxido de alquildimetilamina, monoetanol- amida de ácido graxo etoxilado, monoetanolamida de ácido graxo, amida de poli-hidroxialquila de ácido graxo, ou derivados N- acila N-alquila de glucosamina ("glucamidas").
[0702] A composição de limpeza compreende preferencialmente uma ou mais enzimas adicionais. Em consequência, uma composição preferencial compreende (a) amilase como definido aqui, e (b) uma ou mais enzimas adicionais preferencialmente selecionadas do grupo consistindo em aminopeptidase, amilase, carboidrase, carboxipeptidase, catalase, celulase, quitinase, cutinase, ciclodextrina glicosiltransferase, desoxirribonuclease, endoglucanase, esterase, alfa-galactosidase, beta-galactosidase, glucoamilase, alfa-glucosidase, beta-glucosidase, haloperoxidase, haloperoxigenase, hexosaminidase, invertase, lacase, liqueninase, lipase, mananase, manosidase, oxidase, pectinases, pectina liases, enzima pectinolítica, peptidoglutaminase, peroxidase, fitase, polifenoloxidase, enzima proteolítica (protease), peroxidase, ribonuclease, transglutaminase, xilanase, xantana liase, xantanase, xiloglucanase e suas misturas. Preferencialmente, a composição compreende enzimas adicionais selecionadas de xantana liase, xantanase, mananase e suas misturas. Mananase é particularmente preferencial. Xantana liase e xantanase e suas misturas também são particularmente preferenciais. Proteases, lipases e/ou celulases são preferenciais, particularmente proteases. A(s) enzima(s) adicional(ais) pode(m) ser produzida(s), por exemplo, por um microrganismo pertencente ao gênero Aspergillus, por exemplo, Aspergillus aculeatus, Aspergillus awamori, Aspergillus foetidus, Aspergillus fumigatus, Aspergillus japonicus, Aspergillus nidulans, Aspergillus niger, ou Aspergillus oryzae; Fusarium, por exemplo, Fusarium bactridioides, Fusarium cerealis, Fusarium crookwellense, Fusarium culmorum, Fusarium graminearum, Fusarium graminum, Fusarium heterosporum, Fusarium negundi, Fusarium oxysporum, Fusarium reticulatum, Fusarium roseum, Fusarium sambucinum, Fusarium sarcochroum, Fusarium sulphureum, Fusarium toruloseum, Fusarium trichothecioides, ou Fusarium venenatum; Humicola, por exemplo, Humicola insolens ou Humicola lanuginosa; ou Trichoderma, por exemplo, Trichoderma harzianum, Trichoderma koningii, Trichoderma longibrachiatum, Trichoderma reesei, ou Trichoderma viride.
[0703] Preferencialmente, a composição compreende uma ou mais, de uma ou mais de: uma protease, uma lipase, uma peroxidase, enzima amilolítica adicional, por exemplo, uma alfa-amilase, glucoamilase, isoamilase, amilase maltogênica adicional, preferencialmente uma alfa-amilase adicional, CGTase, celulase, mananase (como MANNAWAY™ da Novozymes, Dinamarca), pectinase, pectato liase, cutinase, e/ou lacase ou misturas de mais do que uma destas.
[0704] Em geral, as propriedades da enzima(s) escolhida(s) devem ser compatíveis com o detergente selecionado (isto é, pH ótimo, compatibilidade com outros ingredientes enzimáticos e não enzimáticos, etc.), e a(s) enzima(s) deve(m) estar presente(s) em quantidades eficazes. Preferencialmente, a composição da invenção compreende pelo menos 0,01 mg, preferencialmente desde cerca de 0,05 até cerca de 10, mais preferencialmente desde cerca de 0,1 até cerca de 6, especialmente desde cerca de 0,2 até cerca de 5 mg de enzima ativa adicional/ g de composição.
[0705] Proteases: Proteases adequadas incluem metaloproteases e/ou serina proteases, incluindo serina proteases microbianas neutras ou alcalinas, como subtilisinas (EC 3.4.21.62). Proteases adequadas incluem aquelas de origem animal, vegetal ou microbiana. Em um aspecto, tal protease adequada pode ter origem microbiana. As proteases adequadas incluem mutantes química ou geneticamente modificados das proteases adequadas acima mencionadas. Em um aspecto, a protease adequada pode ser uma serina protease, como uma protease alcalina microbiana ou/e uma protease do tipo tripsina. Exemplos de proteases neutras ou alcalinas adequadas incluem: (a) subtilisinas (EC 3.4.21.62), incluindo as derivadas de Bacillus, como Bacillus lentus, B. alkalophilus, B. subtilis, B. amyloliquefaciens, Bacillus pumilus e Bacillus gibsonii descritas em US 6,312,936 B1, US 5,679,630, US 4,760,025, US 7,262,042 e WO09/021867. (b) proteases do tipo tripsina ou tipo quimotripsina, como tripsina (por exemplo, de origem porcina ou bovina), incluindo a protease de Fusarium descrita em WO 89/06270, e as proteases quimotripsina derivadas de Cellumonas descritas em WO 05/052161 e WO 05/052146. (c) metaloproteases, incluindo as derivadas de Bacillus amyloliquefaciens descritas em WO 07/044993A2.
[0706] Proteases preferenciais incluem as derivadas de Bacillus gibsonii ou Bacillus Lentus.
[0707] Enzimas protease adequadas comercialmente disponíveis incluem as vendidas com as marcas registradas Alcalase®, Savinase®, Primase®, Durazym®, Polarzyme®, Kannase®, Liquanase®, Liquanase Ultra®, Savinase Ultra®, Ovozyme®, Neutrase®, Everlase® e Esperase® pela Novozymes A/S (Dinamarca), as vendidas com a marca registrada Maxatase®, Maxacal®, Maxapem®, Properase®, Purafect®, Purafect Prime®, Purafect Ox®, FN3®, FN4®, Excellase® e Purafect OXP® pela Genencor International, as vendidas com a marca registrada Opticlean® e Optimase® pela Solvay Enzymes, as disponibilizadas pela Henkel/ Kemira, nomeadamente BLAP (sequência mostrada na Figura 29 de US 5,352,604 com as seguintes mutações S99D + S101 R + S103A + V104I + G159S, daqui em diante referida como BLAP), BLAP R (BLAP com S3T + V4I + V199M + V205I + L217D), BLAP X (BLAP com S3T + V4I + V205I) e BLAP F49 (BLAP com S3T + V4I + A194P + V199M + V205I + L217D) - todas da Henkel/Kemira; e KAP (subtilisina de Bacillus alkalophilus com mutações A230V + S256G + S259N) da Kao. Proteases adequadas adicionais são descritas em WO2011/03623, WO2011/140316, WO2011/140364 e WO2012/05778.
[0708] Lipases: Lipases adequadas incluem aquelas de origem bacteriana ou fúngica. São incluídos mutantes quimicamente modificados ou manipulados em proteína. Exemplos de lipases úteis incluem lipases de Humicola (sinônimoThermomyces), por exemplo, de H. lanuginosa (T. lanuginosus) ou de H. insolens, uma lipase de Pseudomonas, por exemplo, de P. alcaligenes ou P. pseudoalcaligenes, P. cepacia, P. stutzeri, P. fluorescens, Pseudomonas sp. estirpe SD 705, P. wisconsinensis, uma lipase de Bacillus, por exemplo, de B. subtilis (Dartois et al. (1993), Biochemica et Biophysica Acta, 1131, 253-360), B. stearothermophilus ou B. pumilus.
[0709] A lipase pode ser uma "lipase de primeiro ciclo" como as descritas na Patente U.S. 6,939,702 B1 e US PA 2009/0217464. Em um aspecto, a lipase é uma lipase de primeira lavagem, preferencialmente uma variante da lipase de tipo selvagem deThermomyces lanuginosus compreendendo mutações T231R e N233R. A sequência de tipo selvagem consiste nos 269 aminoácidos (aminoácidos 23 - 291) do número de acesso da Swissprot Swiss-Prot O59952 (derivada de Thermomyces lanuginosus (Humicola lanuginosa)). Lipases preferenciais incluem as vendidas com as marcas registradas Lipex®, Lipolex® e Lipoclean®.
[0710] Celulases: Celulases adequadas incluem as de origem bacteriana ou fúngica. São incluídos mutantes quimicamente modificados ou com manipulação de proteínas. Celulases adequadas incluem celulases dos gêneros Bacillus, Pseudomonas, Humicola, Fusarium, Thielavia, Acremonium, p.ex., as celulases fúngicas produzidas a partir de Humicola insolens, Myceliophthora thermophila e Fusarium oxysporum.
[0711] Em um aspecto, enzimas preferenciais incluem endoglucanases derivadas de micróbios exibindo atividade de endo-beta-1,4-glucanase (E.C. 3.2.1.4), preferencialmente selecionadas do grupo compreendendo: (a) um polipeptídeo bacteriano endógeno a um membro do gênero Bacillus que tem uma sequência de pelo menos 90%, 94%, 97% e mesmo 99% de identidade com a sequência de aminoácidos SEQ ID NO:2 de US 7,141,403B2; (b) uma glicosil-hidrolase tendo atividade enzimática em substratos de xiloglucano e celulose amorfa, em que a glicosil-hidrolase é selecionada das famílias GH 5, 12, 44 ou 74; (c) uma glicosil-hidrolase tendo uma sequência de pelo menos 90%, 94%, 97% e mesmo 99% de identidade com a sequência de aminoácidos SEQ ID NO:3 de WO09/148983; (d) e suas misturas.
[0712] Endoglucanases adequadas são vendidas sob os nomes registrados Celluclean® e Whitezyme® (Novozymes A/S, Bagsvaerd, Dinamarca).
[0713] Outras celulases comercialmente disponíveis incluem CELLUZYME®, e CAREZYME® (Novozymes A/S), CLAZINASE®, e PURADAX HA® (Genencor International Inc.), e KAC-500(B)® (Kao Corporation).
[0714] Amilases adicionais: Preferencialmente, a composição compreende uma amilase adicional (suplementar). Amilases suplementares adequadas incluem alfa-amilases incluindo as de origem bacteriana ou fúngica. São incluídos mutantes (variantes) química ou geneticamente modificados. Uma alfa-amilase alcalina preferencial é derivada de uma estirpe de Bacillus, como Bacillus licheniformis, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus stearothermophilus, Bacillus subtilis, ou outros Bacillus sp., como Bacillus sp. NCBI 12289, NCBI 12512, NCBI 12513, DSM 9375 (USP 7,153,818) DSM 12368, DSMZ no. 12649, KSM AP1378 (WO 97/00324), KSM K36 ou KSM K38 (EP 1,022,334). Amilases suplementares preferenciais podem ser selecionadas de: (a) variantes descritas em WO 94/02597, WO 94/18314, WO96/23874 e WO 97/43424, especialmente as variantes com substituições em uma ou mais das seguintes posições versus a enzima listada como SEQ ID No. 2 em WO 96/23874: 15, 23, 105, 106, 124, 128, 133, 154, 156, 181, 188, 190, 197, 202, 208, 209, 243, 264, 304, 305, 391, 408, e 444; (b) variantes descritas em WO 96/23873, WO00/60060, WO06/002643 e WO2017/192657, especialmente as variantes com um ou mais substituições nas seguintes posições versus a enzima AA560 listada como SEQ ID No. 12 em WO 06/002643: 26, 30, 33, 82, 37, 106, 118, 128, 133, 149, 150, 160, 178, 182, 186, 193, 203, 214, 231, 246, 256, 257, 258, 269, 270, 272, 283, 295, 296, 298, 299, 303, 304, 305, 311, 314, 315, 318, 319, 339, 345, 361, 378, 383, 419, 421, 437, 441, 444, 445, 446, 447, 450, 461, 471, 482, 484, que preferencialmente também contêm as deleções de D183* e G184*; (c) variantes exibindo pelo menos 90% de identidade com a SEQ ID No. 4 de WO06/002643, a enzima de tipo selvagem de Bacillus SP722, especialmente variantes com deleções nas posições 183 e 184 e variantes descritas em WO 00/60060, que é incorporado aqui a título de referência; (d) variantes exibindo pelo menos 95% de identidade com a enzima de tipo selvagem de Bacillus sp.707 (SEQ ID NO:7 de US 6,093, 562), especialmente as compreendendo uma ou mais das seguintes mutações M202, M208, S255, R172, e/ou M261. Preferencialmente, a referida amilase compreende uma ou mais de M202L, M202V, M202S, M202T, M202I, M202Q, M202W, S255N e/ou R172Q. Particularmente preferenciais são as compreendendo as mutações M202L ou M202T; (e) variantes descritas em WO 09/149130, preferencialmente as exibindo pelo menos 90% de identidade com a SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO:2 de WO 09/149130, a enzima de tipo selvagem de Geobacillus stearophermophilus ou uma sua versão truncada; (f) variantes exibindo pelo menos 89% de identidade com a SEQ ID NO:1 de WO2016091688, especialmente as compreendendo deleções nas posições H183+G184 e adicionalmente uma ou mais mutações nas posições 405, 421, 422 e/ou 428; (g) variantes exibindo pelo menos 60% de identidade de sequência de aminoácidos com a "PcuAmyl α-amilase" de Paenibacillus curdlanolyticus YK9 (SEQ ID NO:3 de WO2014099523); (h) variantes exibindo pelo menos 60% de identidade de sequência de aminoácidos com a "CspAmy2 amilase" de Cytophaga sp. (SEQ ID NO:1 de WO2014164777); (i) variantes exibindo pelo menos 85% de identidade com AmyE de Bacillus subtilis (SEQ ID NO:1 de WO2009149271); (j) variantes exibindo pelo menos 90% de identidade com a amilase de tipo selvagem de Bacillus sp. KSM-K38 com número de acesso AB051102; (k) variantes exibindo pelo menos 80% de identidade com a sequência de aminoácidos madura de AAI10 de Bacillus sp (SEQ ID NO:7 de WO2016180748); (l) variantes exibindo pelo menos 80% de identidade com a sequência de aminoácidos madura de amilase de Alicyclobacillus sp. (SEQ ID NO:8 de WO2016180748); ou suas misturas. Quando presente, a composição da invenção compreende preferencialmente desde pelo menos 0,01 mg, preferencialmente desde cerca de 0,05 até cerca de 10, mais preferencialmente desde cerca de 0,1 até cerca de 6, especialmente desde cerca de 0,2 até cerca de 5 mg de amilase ativa suplementar/ g de composição.
[0715] Alfa-amilases adequadas comercialmente disponíveis incluem DURAMYL®, LIQUEZYME®, TERMAMYL®, TERMAMYL ULTRA®, NATALASE®, SUPRAMYL®, STAINZYME®, STAINZYME PLUS®, FUNGAMYL®, ATLANTIC®, INTENSA® e BAN® (Novozymes A/S, Bagsvaerd, Dinamarca), KEMZYM® AT 9000 Biozym Biotech Trading GmbH Wehlistrasse 27b A-1200 Viena Áustria, RAPIDASE®, PURASTAR®, ENZYSIZE®, OPTISIZE HT PLUS®, POWERASE®, série PREFERENZ S® (incluindo PREFERENZ S1000® e PREFERENZ S2000® e PURASTAR OXAM® (DuPont., Palo Alto, Califórnia) e KAM® (Kao, 14-10 Nihonbashi Kayabacho, 1-chome, Chuo-ku Tóquio 103-8210, Japão). Em um aspecto, amilases adequadas incluem ATLANTIC®, STAINZYME®, POWERASE®, INTENSA® e STAINZYME PLUS® e suas misturas.
[0716] Peroxidases/Oxidases: As peroxidases/oxidases adequadas incluem aquelas de origem vegetal, bacteriana ou fúngica. São incluídos mutantes quimicamente modificados ou manipulados com proteínas. Os exemplos de peroxidases úteis incluem peroxidases de Coprinus, por exemplo, de C. cinereus e suas variantes como aquelas descritas nos documentos n° WO 93/24618, WO 95/10602 e WO 98/15257.
[0717] Peroxidases comercialmente disponíveis incluem GUARDZYME® (Novozymes A/S).
[0718] Outras enzimas: Outras enzimas preferenciais incluem pectato liases vendidas com as marcas registradas Pectawash®, Pectaway® e mananases vendidas com as marcas registradas Mannaway® (todas da Novozymes A/S, Bagsvaerd, Dinamarca), e Purabrite® (Genencor International Inc., Palo Alto, Califórnia).
[0719] A(s) enzima(s) pode(m) ser incluída(s) na composição de limpeza adicionando aditivos separados (pré- misturas) contendo uma ou mais enzimas, ou adicionando um aditivo combinado (pré-mistura) compreendendo todas estas enzimas. Um aditivo de detergente da invenção, i.e., um aditivo separado ou um aditivo combinado, pode ser formulado, por exemplo, granulado, um líquido, uma pasta, etc. Formulações de aditivo de detergente preferenciais são granulados, em particular granulados sem formação de poeiras, líquidos, em particular líquidos estabilizados, ou pastas.
[0720] Podem ser produzidos granulados sem formação de poeiras e podem ser opcionalmente revestidos por métodos conhecidos na técnica. Exemplos de materiais de revestimento cerosos são produtos de poli(óxido de etileno) (polietilenoglicol, PEG) com pesos molares médios de 1000 a 20000; nonilfenóis etoxilados tendo de 16 a 50 unidades de óxido de etileno; álcoois graxos etoxilados, nos quais o álcool contém de 12 a 20 átomos de carbono e nos quais existem 15 a 80 unidades de óxido de etileno; álcoois graxos; ácidos graxos; e mono- e di- e triglicerídeos de ácidos graxos. Materiais de revestimento formadores de filme podem ser aplicados, por exemplo, por técnicas de leito fluidizado. Preparações de enzimas líquidas podem, por exemplo, ser estabilizadas adicionando um poliol, tal como propilenoglicol, um açúcar ou álcool de açúcar, ácido láctico ou ácido bórico de acordo com métodos estabelecidos.
[0721] A composição de limpeza pode compreender um agente de matização de tecidos (por vezes referido como agentes que conferem tonalidade, aniladores ou branqueadores). Tipicamente, o agente de matização proporciona ao tecido uma tonalidade azul ou violeta. Agentes de matização podem ser usados isoladamente ou em combinação para criar uma tonalidade específica de matização e/ou para conferir tonalidade a diferentes tipos de tecidos. Tal pode ser proporcionado, por exemplo, misturando um corante vermelho e verde-azul para originar uma tonalidade azul ou violeta. Agentes de matização podem ser selecionados de qualquer classe química conhecida de corante, incluindo, mas sem limitação, acridina, antraquinona (incluindo quinonas policíclicas), azina, azo (por exemplo, monoazo, disazo, trisazo, tetraquisazo, poliazo), incluindo azo pré-metalizado, benzodifurano e benzodifuranona, carotenoide, cumarina, cianina, diaza-hemicianina, difenilmetano, formazano, hemicianina, indigoides, metano, naftalimidas, naftoquinona, nitro e nitroso, oxazina, ftalocianina, pirazóis, estilbeno, estirila, triarilmetano, trifenilmetano, xantenos e suas misturas, corantes preferenciais são corantes azo, especialmente bisazo, antraquinona, azina e triarilmetano. Corantes azo são especialmente preferenciais.
[0722] Agentes de matização de tecidos adequados incluem corantes, conjugados corante-argila, e pigmentos orgânicos e inorgânicos. Corantes adequados incluem corantes de molécula pequena e corantes poliméricos; corantes poliméricos são preferenciais. Corantes de molécula pequena adequados incluem corantes de molécula pequena selecionados do grupo consistindo em corantes que caiem dentro das classificações do Índice de Cor (C.I.) de corantes Diretos, Básicos, Reativos ou Reativos hidrolisados, de Solvente ou Dispersos, por exemplo, que são classificados como Azul, Violeta, Vermelho, Verde ou Negro, e proporcionam a tonalidade desejada isoladamente ou em combinação. Em outro aspecto, corantes de molécula pequena adequados incluem corantes de molécula pequena selecionados do grupo consistindo nos números do Índice de Cor (Society of Dyers and Colourists, Bradford, RU) corantes Violeta Direto como 9, 35, 48, 51, 66, e 99, corantes Azul Direto como 1, 71, 80 e 279, corantes Vermelho Ácido como 17, 73, 52, 88 e 150, corantes Violeta Ácido como 15, 17, 24, 43, 49 e 50, corantes Azul Ácido como 15, 17, 25, 29, 40, 45, 75, 80, 83, 90 e 113, corantes Negro Ácido como 1, corantes Violeta Básico como 1, 3, 4, 10 e 35, corantes Azul Básico como 3, 16, 22, 47, 66, 75 e 159, corantes Dispersos ou de Solvente como os descritos em EP1794275 ou EP1794276, ou corantes como divulgado em US 7,208,459 B2, e suas misturas. Em outro aspecto, corantes de molécula pequena adequados incluem corantes de molécula pequena selecionados do grupo consistindo nos números do Índice de Cor Violeta Ácido 17, Azul Direto 71, Violeta Direto 51, Azul Direto 1, Vermelho Ácido 88, Vermelho Ácido 150, Azul Ácido 29, Azul Ácido 113 ou suas misturas.
[0723] Corantes poliméricos adequados incluem os corantes poliméricos selecionados do grupo consistindo em polímeros contendo cromogênios covalentemente ligados (por vezes referidos como conjugados), (conjugados corante- polímero), por exemplo, polímeros com cromogênios copolimerizados no esqueleto do polímero e suas misturas. Corantes poliméricos incluem os descritos em WO2011/98355, WO2011/47987, US2012/090102, WO2010/145887, WO2006/055787 e WO2010/142503.
[0724] Em outro aspecto, corantes poliméricos adequados incluem corantes poliméricos selecionados do grupo consistindo em corantes substantivos de tecido vendidos sob o nome de Liquitint® (Milliken, Spartanburg, Carolina do Sul, EUA), conjugados corante-polímero formados a partir de pelo menos um corante reativo e um polímero selecionado do grupo consistindo em polímeros compreendendo uma fração selecionada do grupo consistindo em uma fração hidroxila, uma fração amina primária, uma fração amina secundária, uma fração tiol e suas misturas. Ainda em outro aspecto, corantes poliméricos adequados incluem corantes poliméricos selecionados do grupo consistindo em Liquitint® Violeta CT, carboximetilcelulose (CMC) covalentemente ligada a um corante azul reativo, violeta reativo ou vermelho reativo tal como CMC conjugado com C.I. Azul Reativo 19, vendido pela Megazyme, Wicklow, Irlanda sob o nome de produto AZO-CM-CELLULOSE, o código do produto S-ACMC, corantes poliméricos de trifenil-metano alcoxilado, corantes poliméricos de tiofeno alcoxilado, e suas misturas.
[0725] Corantes de matização preferenciais incluem os agentes branqueadores azo tiofeno alcoxilado, por exemplo, como descrito em US2008/0177090 que podem ser opcionalmente aniônicos, como os selecionados dos Exemplos 1-42 na Tabela 5 de WO2011/011799. Outros corantes preferenciais são divulgados em US 8138222.
[0726] pausaPigmentos adequados incluem pigmentos selecionados do grupo consistindo em flavantrona, indantrona, indantrona clorada contendo de 1 a 4 átomos de cloro, pirantrona, dicloropirantrona, monobromodicloropirantrona, dibromodicloropirantrona, tetrabromopirantrona, di-imida de ácido perileno-3,4,9,10-tetracarboxílico, em que os grupos imida podem não estar substituídos ou estar substituídos com C1-C3 alquila ou um radical fenila ou heterocíclico, e em que os radicais fenila e heterocíclico podem adicionalmente transportar substituintes que não conferem solubilidade em água, amidas de ácido antrapirimidinocarboxílico, violantrona, isoviolantrona, pigmentos de dioxazina, ftalocianina de cobre que pode conter até 2 átomos de cloro por molécula, ftalocianina de policloro-cobre ou ftalocianina de polibromocloro-cobre contendo até 14 átomos de bromo por molécula, Azul Ultramarino (C.I. Pigmento Azul 29), Violeta Ultramarino (C.I. Pigmento Violeta 15) e suas misturas.
[0727] Antirredepositantes (“Builders”) - A composição de limpeza pode conter adicionalmente antirredepositantes, como antirredepositantes baseados em carbonato, bicarbonato ou silicatos que podem ser Zeólitas, como Zeólita A, Zeólita MAP (Máximo de Alumínio tipo P). Zeólitas usáveis na lavagem de roupa têm preferencialmente a fórmula Nai2(Alθ2)i2(Siθ2)i2-27H2θ e o tamanho das partículas situa-se habitualmente entre 1-10 μm para zeólita A e 0,7-2 um para zeólita MAP. Outros antirredepositantes são Metassilicato de sódio (Na2SiO3 • nH2O ou Na2Si2O5 • n H2O) fortemente alcalino e preferencialmente usado em lavagem de louça. Em modalidades preferenciais, a quantidade de um antirredepositante de detergente pode ser maior do que 5%, maior do que 10%, maior do que 20%, maior do que 30%, maior do que 40% ou maior do que 50%, e pode ser menor do que 80%, 65%. Em um detergente de lavagem de louça, o nível de antirredepositante é tipicamente 40-65%, particularmente 50-65% ou mesmo 75-90%.
[0728] Encapsulados - A composição pode compreender um encapsulado. Em um aspecto, um encapsulado compreendendo um núcleo, um invólucro tendo uma superfície interna e externa, o referido invólucro encapsulando o referido núcleo.
[0729] Em um aspecto do referido encapsulado, o referido núcleo pode compreender um material selecionado do grupo consistindo em perfumes; abrilhantadores; corantes; repelentes de insetos; silicones; ceras; aromas; vitaminas; agentes amaciadores de tecidos; agentes de cuidados da pele, em um aspecto parafinas; enzimas; agentes antibacterianos; branqueadores; agentes que provocam sensações (“sensates”); e suas misturas; e o referido invólucro pode compreender um material selecionado do grupo consistindo em polietilenos; poliamidas; poliestirenos; poli-isoprenos; policarbonatos; poliésteres; poliacrilatos; aminoplastos, em um aspecto o referido aminoplasto pode compreender uma poliureia, poliuretano e/ou poliureiauretano, em um aspecto a referida poliureia pode compreender polioximetilenoureia e/ou melamina- formaldeído; poliolefinas; polissacarídeos, em um aspecto o referido polissacarídeo pode compreender alginato e/ou quitosana; gelatina; goma-laca; resinas de epóxi; polímeros de vinila; inorgânicos insolúveis em água; silicone; e suas misturas.
[0730] Em um aspecto do referido encapsulado, o referido núcleo pode compreender perfume. Tais encapsulados são microcápsulas de perfume. Um invólucro de encapsulado adequado pode compreender melamina-formaldeído e/ou melamina- formaldeído reticulado, e/ou poliacrilato.
[0731] Em um aspecto, pelo menos 75%, 85% ou mesmo 90% dos referidos encapsulados podem ter um tamanho de partículas desde cerca de 1 mícron até cerca de 80 mícrones, cerca de 5 mícrones até 60 mícrones, desde cerca de 10 mícrones até cerca de 50 mícrones, ou mesmo desde cerca de 15 mícrones até cerca de 40 mícrones.
[0732] Em um aspecto, pelo menos 75%, 85% ou mesmo 90% dos referidos encapsulados podem ter uma espessura de parede de partículas desde cerca de 30 nm até cerca de 250 nm, desde cerca de 80 nm até cerca de 180 nm, ou mesmo desde cerca de 100 nm até cerca de 160 nm.
[0733] Em um aspecto, o material de núcleo dos referidos encapsulados pode compreender um material selecionado do grupo consistindo em uma matéria-prima de perfume e/ou opcionalmente um material selecionado do grupo consistindo em óleo vegetal, incluindo óleos vegetais puros e/ou combinados incluindo óleo de rícino, óleo de coco, óleo de semente de algodão, óleo de uva, óleo de colza, óleo de soja, óleo de milho, óleo de palma, óleo de linhaça, óleo de cártamo, azeite, óleo de amendoim, óleo de coco, óleo de semente de palma, óleo de rícino, óleo de limão e suas misturas; ésteres de óleos vegetais, ésteres, incluindo adipato de dibutila, ftalato de dibutila, adipato de butilbenzila, adipato de benziloctila, fosfato de tricresila, fosfato de trioctila e suas misturas; hidrocarbonetos de cadeia linear ou ramificada, incluindo aqueles hidrocarbonetos de cadeia linear ou ramificada tendo um ponto de ebulição maior do que cerca de 80 °C; terfenilas parcialmente hidrogenadas, ftalatos de dialquila, alquilbifenilas, incluindo monoisopropilbifenila, naftaleno alquilado, incluindo dipropilnaftaleno, álcoois de petróleo, incluindo querosene, óleo mineral e suas misturas; solventes aromáticos, incluindo benzeno, tolueno e suas misturas; óleos de silicone; e suas misturas.
[0734] Em um aspeto, o referido material de parede dos encapsulados pode compreender uma resina adequada incluindo o produto de reação de um aldeído e uma amina, aldeídos adequados incluem formaldeído. Aminas adequadas incluem melamina, ureia, benzoguanamina, glicoluril e suas misturas. Melaminas adequadas incluem metilolmelamina, metilolmelamina metilada, iminomelamina e suas misturas. Ureias adequadas incluem dimetilolureia, dimetilolureia metilada, ureia-resorcinol e suas misturas.
[0735] Em um aspecto, removedores de formaldeído adequados podem ser empregues com os encapsulados, p.ex., em uma pasta para cápsulas e/ou adicionados a um produto para o consumidor antes, durante ou após os encapsulados serem adicionados a tal produto para o consumidor.
[0736] Cápsulas adequadas podem ser adquiridas à Appleton Papers Inc. de Appleton, Wisconsin EUA.
[0737] Adicionalmente, os materiais para fabricar os encapsulados acima mencionados podem ser obtidos da Solutia Inc. (St Louis, Missouri E.U.A.), Cytec Industries (West Paterson, New Jersey E.U.A.), Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri E.U.A.), CP Kelco Corp. de San Diego, Califórnia, EUA; BASF AG de Ludwigshafen, Alemanha; Rhodia Corp. de Cranbury, New Jersey, EUA; Hercules Corp. de Wilmington, Delaware, EUA; Agrium Inc. de Calgary, Alberta, Canadá, ISP de New Jersey E.U.A., Akzo Nobel de Chicago, IL, EUA; Stroever Shellac Bremen de Bremen, Alemanha; Dow Chemical Company de Midland, MI, EUA; Bayer AG de Leverkusen, Alemanha; Sigma-Aldrich Corp., St. Louis, Missouri, EUA.
[0738] A composição pode compreender um estruturante selecionado do grupo consistindo em diglicerídeos e triglicerídeos, diestearato de etilenoglicol, celulose microcristalina, materiais à base de celulose, microfibra de celulose, biopolímeros, goma xantana, goma gelana, e suas misturas. Polímeros
[0739] A composição de limpeza pode compreender um ou mais polímeros. Exemplos são carboximetilcelulose, poli(vinil-pirrolidona), poli(etilenoglicol), poli(álcool vinílico), poli(vinilpiridina-N-óxido), poli(vinilimidazol), policarboxilatos como poliacrilatos, copolímeros ácido maleico/acrílico e copolímeros metacrilato de laurila/ácido acrílico e polímeros anfifílicos.
[0740] O detergente pode conter um sistema de branqueamento que pode compreender uma fonte de H2O2 tal como perborato ou percarbonato que pode ser combinada com um ativador de branqueamento formador de perácido tal como tetracetiletilenodiamina ou nonanoiloxibenzenossulfonato. Alternativamente, o sistema de branqueamento pode compreender peroxiácidos, por exemplo, do tipo amida, imida ou sulfona. Em geral, quando é usado um agente de branqueamento, as composições da presente invenção podem compreender de cerca de 0,1% a cerca de 50% ou mesmo de cerca de 0,1% a cerca de 25% de agente de branqueamento em peso da composição de limpeza em questão.
[0741] Agentes Quelantes - As composições de limpeza aqui podem conter um agente quelante. Agentes quelantes adequados incluem agentes quelantes de cobre, ferro e/ou manganês e suas misturas. Quando é usado um agente quelante, a composição de limpeza em questão pode compreender desde cerca de 0,005% até cerca de 15% ou mesmo desde cerca de 3,0% até cerca de 10% de agente quelante por peso da composição de limpeza em questão. Quelantes adequados incluem DTPA (Ácido Dietilenotriaminopentacético), HEDP (Ácido hidroxietanodifosfônico), DTPMP (Dietilenotriaminopenta(ácido metilenofosfônico)), Sal dissódico de ácido 1,2-di- hidroxibenzeno-3,5-dissulfônico hidratado, etilenodiamina, dietilenotriamina, dietilenotriamina, ácido etilenodiaminodissuccínico (EDDS), ácido N- hidroxietiletilidenodiaminotriacético (HEDTA), ácido trietilenotetramino-hexacético (TTHA), ácido N- hidroxietiliminodiacético (HEIDA), di-hidroxietilglicina (DHEG), ácido etilenodiaminotetrapropiônico (EDTP) e seus derivados.
[0742] As variantes de enzima da invenção podem ser estabilizadas usando agentes estabilizadores convencionais, e/ou inibidores de proteases, por exemplo, um poliol, como propilenoglicol ou glicerol, um açúcar ou álcool de açúcar, sais como cloreto de sódio e cloreto de potássio; ácido láctico, ácido fórmico, ácido bórico, ou um derivado de ácido bórico, por exemplo, um éster borato aromático, ou um derivado de ácido fenilborônico, como ácido 4-formilfenilborônico, ou um aldeído peptídico, como aldeídos ou análogos de aldeídos di-, tri- ou tetrapeptídicos (da forma B1-B0-R em que R é H, CH3, CX3, CHX2, ou CH2X (X=halogênio), B0 é um resíduo de aminoácido simples (preferencialmente com uma cadeia lateral alifática ou aromática opcionalmente substituída); e B1 consiste em um ou mais resíduos de aminoácidos (preferencialmente um, dois ou três), opcionalmente compreendendo um grupo de proteção N- terminal, ou como descrito em WO09118375, WO98/13459) ou um inibidor de proteases do tipo proteico, como RASI, BASI, WASI (inibidores bifuncionais de alfa-amilase/subtilisina de arroz, cevada e trigo) ou CI2 ou SSI. Em algumas modalidades, as enzimas empregues aqui são estabilizadas pela presença de fontes solúveis em água de íons de zinco (II), cálcio (II) e/ou magnésio (II) nas composições acabadas que fornecem tais íons às enzimas, bem como outros íons de metal (por exemplo, bário (II), escândio (II), ferro (II), manganês (II), alumínio (III), Estanho (II), cobalto (II), cobre (II), Níquel (II) e oxovanádio (IV)).
[0743] A composição pode compreender um estabilizador de enzima selecionado do grupo consistindo em (a) sais inorgânicos selecionados do grupo consistindo em sais de cálcio, sais de magnésio e suas misturas; (b) carboidratos selecionados do grupo consistindo em oligossacarídeos, polissacarídeos e suas misturas; (c) inibidores de proteases reversíveis eficientes em massa selecionados do grupo consistindo em ácido fenilborônico e seus derivados; e (d) suas misturas.
[0744] A composição pode compreender: (1) inibidores de proteases reversíveis como um composto contendo boro; (2) 1-2-propanodiol; (3) formato de cálcio e/ou formato de sódio; e (4) qualquer combinação destes.
[0745] A composição de limpeza também pode conter (como adjunto de limpeza) outros ingredientes de detergentes convencionais como, por exemplo, condicionadores de tecidos incluindo argilas, reforçadores de espuma, supressores de espuma de sabão, agentes anticorrosão, agentes de suspensão de sujidade, antirredeposição de sujidade, corantes, bactericidas, abrilhantadores ópticos, hidrótropos, inibidores de manchas, solventes orgânicos como etanol ou perfumes. Adicionalmente, o detergente pode conter um pré-removedor de manchas ou um agente de reforço, que é adicionado à lavagem para aumentar o nível geral de limpeza, alguns destes aditivos também podem ser usados como agente pré-tratamento aplicado no têxtil antes do passo de lavagem.
[0746] É presentemente contemplado que, nas composições de limpeza, qualquer enzima, em particular a enzima essencial para a presente invenção, pode ser adicionada em uma quantidade correspondente a 0,001-100 mg de proteína enzimática por litro de licor de lavagem, preferencialmente 0,005-5 mg de proteína enzimática por litro de licor de lavagem, mais preferencialmente 0,01-1 mg de proteína enzimática por litro de licor de lavagem e em particular 0,1-1 mg de proteína enzimática por litro de licor de lavagem. No entanto, as composições da presente invenção compreendem pelo menos 0,0001 até cerca de 0,1% em peso de proteína enzimática pura, como desde cerca de 0,0001% até cerca de 0,01%, desde cerca de 0,001% até cerca de 0,01% ou desde cerca de 0,001% até cerca de 0,01%. No entanto, ao usar uma enzima formulada, a composição detergente compreende desde cerca de 0,02% até cerca de 20% em peso, como ou desde cerca de 0,05% até cerca de 15% em peso, ou desde cerca de 0,05 até cerca de 20%, ou desde cerca de 0,05% até cerca de 5%, ou desde cerca de 0,05% até cerca de 3%. As variantes de alfa-amilase úteis na presente invenção podem ser adicionalmente incorporadas nas formulações de detergente divulgadas em WO 97/07202, que é deste modo incorporado a título de referência.
[0747] A presente invenção inclui um método para limpar e/ou tratar uma superfície, preferencialmente um tecido. Em um aspecto, tal método compreende os passos de opcionalmente lavar e/ou enxaguar a referida superfície, contatar a referida superfície com um licor de lavagem aquoso compreendendo a composição de limpeza descrita aqui, então opcionalmente lavar e/ou enxaguar a referida superfície.
[0748] O licor de lavagem aquoso tem preferencialmente um pH desde cerca de 4 ou desde cerca de 7 ou 8 até cerca de 12, preferencialmente até cerca de 10,5. As composições são preferencialmente empregues a concentrações desde cerca de 500 ppm até cerca de 15 000 ppm em solução. As temperaturas da água variam tipicamente de cerca de 5 °C a cerca de 90 °C. A razão entre água e tecido é tipicamente desde cerca de 1:1 até cerca de 30:1.
[0749] A presente invenção também proporciona o uso de uma composição de limpeza da invenção para proporcionar um desempenho de lavagem melhorado em composições detergentes e em aplicações detergentes, como lavagem de louça ou lavagem de roupa a baixas temperaturas.
[0750] Em um aspecto adicional, a invenção se relaciona com um método para remover uma mancha de uma superfície, compreendendo contatar a superfície com um polipeptídeo híbrido ou variante de amilases como descrito aqui, e um adjunto de limpeza, em que o adjunto de limpeza compreende tensoativo e opcionalmente um ou mais adjuntos de limpeza selecionados da lista compreendendo hidrótropos, antirredepositantes e co-antirredepositantes, sistemas de branqueamento, polímeros, agentes de matização de tecidos e materiais adjuntos, ou qualquer mistura destes em composições detergentes e em aplicações detergentes. Um aspecto adicional é um método para remover uma mancha de uma superfície, compreendendo contatar a superfície com uma composição de limpeza como descrito aqui. Usos
[0751] A presente invenção é dirigida a métodos para usar os polipeptídeos tendo atividade de alfa-amilase, ou suas composições, em um processo de limpeza como lavagem de roupa ou processos de limpeza de superfícies duras incluindo lavagem automática de louça.
[0752] As sujidades e manchas que são importantes para limpeza são compostas por muitas substâncias diferentes, e uma gama de diferentes enzimas, todas com diferentes especificidades para substratos, foi desenvolvida para uso em detergentes em relação tanto à lavagem de roupa como à limpeza de superfície duras, tal como lavagem de louça. Estas enzimas são consideradas como proporcionando um benefício de detergência de enzimas, uma vez que melhoram especificamente a remoção de manchas no processo de limpeza em que são usadas, em comparação com o mesmo processo sem enzimas. Enzimas de remoção de manchas que são conhecidas na técnica incluem enzimas tais como proteases, amilases, lipases, cutinases, celulases, endoglucanases, xiloglucanases, pectinases, pectina liases, xantanases, peroxidases, liquenases, haloperoxigenases, catalases e mananases.
[0753] Em um aspecto, a invenção diz respeito ao uso de alfa-amilases da presente invenção em composições detergentes, para uso na limpeza de superfícies duras, tais como lavagem de louça, ou na lavagem de roupa ou para remoção de manchas. Em um aspecto adicional, a presente invenção demonstra que o uso das alfa-amilases da invenção exibe um desempenho de lavagem melhorado em composições detergentes e em aplicações detergentes, como lavagem de louça ou lavagem de roupa a baixas temperaturas.
[0754] Outro aspecto da invenção é o uso da composição detergente compreendendo uma alfa-amilase da presente invenção em conjunto com um ou mais tensoativos e opcionalmente um ou mais componentes detergentes, selecionados da lista compreendendo hidrótropos, antirredepositantes e co- antirredepositantes, sistemas de branqueamento, polímeros, agentes de matização de tecidos e materiais adjuntos, ou qualquer mistura destes em composições detergentes e em aplicações detergentes.
[0755] Um aspecto adicional é o uso da composição detergente compreendendo uma alfa-amilase da presente invenção em conjunto com um ou mais tensoativos, e uma ou mais enzimas adicionais selecionadas do grupo compreendendo proteases, lipases, cutinases, celulases, endoglucanases, xiloglucanases, pectinases, pectina liases, xantanases, peroxidases, liquenases, haloperoxigenases, catalases e mananases, ou qualquer mistura destas em composições detergentes e em aplicações detergentes.
[0756] Em outro aspecto, a invenção se relaciona com um processo de lavagem de louça que pode ser para lavagem de louça doméstica bem como lavagem de louça industrial. O termo “lavagem de louça”, como usado aqui, se refere tanto a lavagem de louça manual como a lavagem de louça automatizada. Além disso, a invenção se relaciona com um processo para a lavagem de superfícies duras (p.ex., talheres tais como facas, garfos, colheres; faianças tais como pratos, copos, tigelas; e panelas) onde o processo compreende tratamento da superfície dura com uma solução de lavagem contendo uma composição detergente e uma variante alfa-amilase da presente invenção. A lavagem de superfícies duras pode por exemplo ser levada cabo usando uma máquina de lavar louça doméstica ou industrial ou ser levada a cabo manualmente usando uma composição detergente contendo uma alfa-amilase da invenção, opcionalmente em conjunto com uma ou mais enzimas adicionais selecionadas do grupo compreendendo proteases, amilases, lipases, cutinases, celulases, endoglucanases, xiloglucanases, pectinases, pectina liases, xantanases, peroxidases, haloperoxigenases, catalases, mananases, ou qualquer sua mistura.
[0757] Em um aspecto adicional, a invenção se relaciona com um método para remoção de uma mancha de uma superfície, compreendendo contatar a superfície com uma composição compreendendo uma alfa-amilase da presente invenção em conjunto com um ou mais tensoativos e opcionalmente um ou mais componentes detergentes selecionados da lista compreendendo hidrótopos, antirredepositantes e coantirredepositantes, sistemas de branqueamento, polímeros, agentes de matização de tecidos e materiais adjuntos, ou qualquer sua mistura em composições detergentes e em aplicações detergentes. Um aspecto adicional é um método para remover uma mancha de uma superfície, compreendendo contatar a superfície com a composição compreendendo uma variante de alfa-amilase da presente invenção em conjunto com um ou mais tensoativos, uma ou mais enzimas adicionais selecionadas do grupo compreendendo proteases, lipases, cutinases, celulases, endoglucanases, xiloglucanases, pectinases, pectina liases, xantanases, peroxidases, liquenases, haloperoxigenases, catalases e mananases, ou qualquer mistura destas em composições detergentes e em aplicações detergentes.
[0758] A presente invenção também se relaciona com um método para limpar e/ou tratar no local, inter alia, uma superfície ou tecido. Em um aspecto, tal método que é divulgado compreende as etapas de opcionalmente lavar e/ou enxaguar a referida superfície ou tecido, contatar a referida superfície ou tecido com qualquer produto de consumidor divulgado neste relatório descritivo, então opcionalmente lavar e/ou enxaguar a referida superfície ou tecido.
[0759] Como usado aqui, lavar inclui, mas sem limitação, esfregar e agitar mecanicamente. A secagem de tais superfícies ou tecidos pode ser realizada por qualquer um dos meios comuns empregues, quer em ambientes domésticos ou industriais. Tais meios incluem, mas não estão limitados a, secagem com ar forçado ou ar parado à temperatura ambiente ou temperaturas elevadas a pressões entre 5 e 0,01 atmosferas na presença ou ausência de radiação eletromagnética, incluindo irradiação com luz solar, infra-vermelho, ultra-violeta e micro-ondas. Em um aspecto, a referida secagem pode ser efetuada a temperaturas acima da temperatura ambiente por utilização de um ferro de passar, em que, por exemplo, o referido tecido pode estar em contato direto com o referido ferro de passar durante períodos de tempo relativamente curtos ou até mesmo prolongados e em que pode ser exercida pressão superior àquela normalmente presente devido a força gravitacional. Em outro aspecto, a referida secagem pode ser efetuada a temperaturas acima da temperatura ambiente por uso de um secador. Um aparelho para a secagem de tecido é bem conhecido e é frequentemente chamado de uma secadora de roupa. Além de roupa, tais aparelhos são usados para secar vários outros itens incluindo toalhas, lençóis, fronhas, fraldas e assim por diante, e tal equipamento foi aceite como um utensílio padrão em várias nações do mundo, substancialmente substituindo o uso de varais para a secagem de tecido. A maioria das secadoras em uso hoje em dia usam ar aquecido que é passado por cima e através do tecido enquanto é movimentado na secadora. O ar pode ser aquecido, por exemplo, de forma eletrônica, através de chama de gás, ou até mesmo com radiação de micro-ondas. Tal ar pode ser aquecido de cerca de 15 °C a cerca de 400 °C, de cerca de 25°C a cerca de 200 °C, de cerca de 35 °C a cerca de 100 °C, ou até mesmo de cerca de 40 °C a cerca de 85 °C e usado na secadora para secar uma superfície e/ou tecido. Como será constatado por um especialista na técnica, as composições de limpeza da presente invenção são idealmente apropriadas para uso em aplicações de lavagem de roupa. Assim, a presente invenção inclui um método para lavagem de um tecido. O método compreende as etapas de colocar um tecido a ser lavado em contato com a referida solução de limpeza de roupa compreendendo pelo menos uma modalidade da composição de limpeza, aditivo de limpeza ou mistura dos mesmos dos Requerentes. O tecido pode compreender praticamente qualquer tecido que possa ser lavado sob condições normais de uso do consumidor ou institucional. A solução tem preferencialmente um pH de cerca de 4,0 a cerca de 12,0. As composições podem ser empregues a concentrações de cerca de 500 ppm a cerca de 15.000 ppm em solução. As temperaturas da água variam tipicamente de cerca de 5 °C a cerca de 90 °C. A razão entre água e tecido é tipicamente desde cerca de 1:1 até cerca de 30:1.
[0760] A invenção descrita acima é adicionalmente definida nos parágrafos seguintes: Parágrafo 1. Uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase progenitora compreendendo uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94, 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476 , usando a SEQ ID NO: 1 para numeração. Parágrafo 2. A variante de alfa-amilase de acordo com o parágrafo 1, em que a referida variante compreende uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94, 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14. Parágrafo 3. A variante de alfa-amilase de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes, em que a referida variante compreende uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60 , 63, 72, 73, 93, 94 , 98, 103, 104, 105, 106, 109 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a referida variante tem um desempenho melhorado, como um desempenho de lavagem melhorado para uma medida de atividade específica de Fator de Melhoramento (IF) >1,0, em comparação com o referido polipeptídeo progenitor, preferencialmente a SEQ ID NO: 2 ou 3. Parágrafo 4. A variante de alfa-amilase de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes, em que a referida modificação em uma ou mais posições corresponde à posição: H1, H2, N3, G7, R26, A31, R37, T40, A41, N54, V56, A60, L63, K72, G73, K93, N94, Q98 , V103, V104, M105, N106, A109, G110, A111, G113, T114, F116, V117, D118, D123, N126, N128, T131, S132, T134, Y135, Q136, I137, Q138, W140, K142, D144, P146, T151, Y152, F155, W159, Y160, T165, W167, E169, K172, L173, N174, I176, Y177, K178, A185, W188, E189, E193, N194, N196, F202, A203, L205, T224, N225, Y242, S243, F244, V252, T256, K258, E259, M260, F261, F266, N276, N279, K280, W283, S286, S302, G303, T315, H320, P321, M322, H323, W346, L354, E359, Q360, G361, Y362, V365, Y371, A383, E390, N394, F395, D405, I409, R414, H420, N422, T427, G455, K457, P458, N470, S472, V473, N474, G475, G476, usando a SEQ ID NO: 1 para numeração. Parágrafo 5. A varia nte de alfa- amilase de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes, em que a referida modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: H1*, H2, N3D, N3G, N3S, G7A, G7H, G7S, R26Y, A31S, R37A, R37N, R37V, T40G, T40N, A41D, N54S, V56T, A60V, A60P, L63F, K72R, G73L, K93R, N94D, Q98L, V103A, V103I, V103L, V104M, M105I, M105L, N106D, A109G, G110K, A111G, A111L, G113Q, G113S, G113A, T114K, F116L, F116N, F116Q, F116W, V117G, D118Q, D118T, D123N, N126D, N128Y, T131I, T131V, S132D, S132L, T134D, Y135E, Q136T, Q136K, I137F, Q138V, W140S, W140M, W140Y, K142E, K142G, K142P, D144N, P146S, P146H, T151A, Y152L, F155W, W159H, W159L, Y160P, T165V, W167A, W167D, W167E, W167F, W167P, W167S, E169I, E169Q, E169V, K172G, K172Q, L173F, N174K, N174S, I176V, Y177D, K178A, R180*, R180Q, R180S, S181*, S181L, S181T, T182*, T182D, T182E, T182G, T182I, T182L, T182M, T182S, G183*, G183P, A185D, A185E, A185K, A185N, A185Q, A185R, W188C, E189P, E193I, N194F, F202Y, F202Y, A203F, L205F, L205N, L205Q, L205R, L205V, L205Y, T224F, T224Y, N225S, Y242F, Y242L, S243Q, F244I, F244L, V252I, T256A, T256D, K258V, E259G, E259V, M260D, M260W, F261K, F261P, F261S, F266Y, N276F, N276W, N276Y, N279S, N280F, N280W, N280Y, W283N, S286K, S286L, S302T, S302Y, G303R, T315A, H320T, P321H, P321Y, M322G, M322Y, H323A, H323N, H323W, W346N, L354V, E359W, Q360M, Q360W, Q360Y, G361M, Y362V, V365I, Y371S, Y371N, A383D, E390A, E390D, N394W, N394D, F395Y, D405G, I409L, R414M, H420P, H420A, H420Q, H420Y, N422V, T427L, G455R, K457N, K457R, R458S, N470A, N470M, S472R, V473C, N474F, N474L, G475E, G475K, G476H, G476E e G476A, usando a SEQ ID NO: 1 para numeração. Parágrafo 6. A variante de alfa-amilase de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes, em que a variante compreende deleção em duas ou mais posições correspondentes às posições R180, S181, T182, e G183, usando a SEQ ID NO: 1 para numeração. Parágrafo 7. A variante de alfa-amilase de acordo com o parágrafo 6, em que a deleção é selecionada do grupo consistindo em R180*+S181*, R180*+ T182*, R180*+ G183*, S181*+ T182*, S181*+ G183*, ou T182*+ G183*, usando a SEQ ID NO: 1 para numeração. Parágrafo 8. A variante de alfa-amilase de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes, em que a variante compreende uma ou mais de uma modificação selecionadas do grupo consistindo em: H1*+G7A+ R180*+S181*, H1*+G7A+ R180*+S181*+Y242F, H1*+G7A+ R180*+S181*+Y242F+N279S, H1*+G7A+ R180*+S181*+Y242F+N279S+G303R, H1*+G7A+ R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+ G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A, H1*+ G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A +G475K, H1*+ G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+E390A +G476A, H1*+ G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A +G476A, H1*+ G7A+R180*+S181*+ D118T+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A G7A+R180*+S181*+ D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A +G476A W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A +G475K W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A +G476A W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A +G476A H1*+ G7A+R180*+S181*+ D118T+ W140Y+N194F+ E259G+ N279S+ G303R+ E390A + G475K, H1*+ G7A+R180*+S181*+ D118T+ W140Y+ N194F+ Y242F+E259G+N279S+E390A +G476A, H1*+ G7A+R180*+S181*+ D118T+ W140Y+ N194F+ Y242F+ E259G+ N279S+ G303R+ E390A + G476A, H1*+ G7A+R180*+S181*+ D118T+ W140Y+N194F+ Y242F+ E259G+ K280Y+ N279S+ G303R+ E390A + G475K, H1*+ G7A+R180*+S181*+ D118T+ W140Y+ N194F+ Y242F+E259G+ K280Y+ N279S+E390A +G476A, H1*+ G7A+R180*+S181*+ D118T+ W140Y+ N194F+ Y242F+ E259G+ K280Y+ N279S+ G303R+ E390A + G476A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase. Parágrafo 9. A variante de alfa-amilase de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes, em que a variante compreende ou consiste em uma ou mais de uma modificação selecionadas do grupo consistindo em: H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G 475K, H1*+G7A+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G 475K, H1*+G7A+R180*+S181*+T182S+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+T182L+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+S181L+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180S+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+A60P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E3 90A+G475K, H1*+G7A+M105L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+M105I+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+T182D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+T182E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+T182G+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+T182M+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+A185K+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+A185D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+A185N+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+A185R+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+A185E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244L+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244I+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205F+Y242F+E259G+N279S+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276F+N279S+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276W+N279S+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280W+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276F+N 279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276Y+N 279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276W+N 279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K 280F+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K 280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K 280W+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276F+N 279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276Y+N 279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276W+N 279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K 280F+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K 280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K 280W+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+S181*+T182*+Y242F+E259G+N 279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+S181*+T182*+F202Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G30 3R+Y362V+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E 359W+Q360W+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q 360W+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E359W+Q 360W+E390A+G475K, H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y 362V+E390A+G475K, H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G30 3R+E390A+G475K, H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G30 3R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G 303R+Y362V+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+S286K+G 303R+H320T+H323A+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M 322Y+Q360Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D123N+I176V+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G 303R+E390A+G475K, H1*+G7A+G113A+F116W+D123N+T131V+Q136K+E169Q+K172Q+R 180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N 279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y+Y 242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+N106D+A109G+F116W+D123N+N126D+T131I+T165V+N 174S+R180*+S181*+T182I+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G4 75K, H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G30 3R+H320T+E390A+G475K, H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G30 3R+Y362V+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E 390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q 360W+E390A+G475K, H1*+G7A+T40N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E3 90A+G475K, H1*+G7S+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E3 90A+G475K, H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E 390A+G475K, H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G30 3R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E 390A+G475K, H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+E 390A+G475K, H1*+G7A+I137F+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G 303R+Y362V+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+H 323A+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+H 323A+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M 322Y+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+Q 360Y+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322Y+Q 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194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T 224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T 224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+S 243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S 243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 196I+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y 242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420Y+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L 205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M 260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y 242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T 224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T 224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N 194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y 242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E1 89P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N19 4F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M 260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470A+G475K, H1*+G7A+S132L+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E 259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+A31S+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A18 5Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475 K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L 205Y+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N 194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, R180*+S181*, T40N+F116L+D123N+N126D+N128Y+T131I+F155W+R180*+S181 *+T182D+E189P+F202Y+K457N+P458S+G475K+G476E, A60V+Q98L+G110K+R180*+S181*+A383D, Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+T315A, G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*, G7H+W167P+R180*+S181*+G455R, Q98L+V103A+G110K+R180*+S181*, T114K+R180*+S181*, E169V+R180*+S181*, R180*+S181*+W188C, W167D+R180*+S181*, W167S+R180*+S181*, W167E+R180*+S181*, W167P+R180*+S181*, R180*+S181*+E193I+H323N, R180*+S181*+A203F, W159L+R180*+S181*, W159H+R180*+S181*, K178A+R180*+S181*, A111L+R180*+S181*, G110K+R180*+S181*, e A111G+R180*+S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO:1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa-amilase. Parágrafo 10. A variante de alfa-amilase de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes, em que a referida variante tem propriedade melhorada, em que a referida propriedade melhorada é desempenho de lavagem melhorado para uma medida de atividade específica aumentada de Fator de Melhoramento (IF) >1,0. Parágrafo 11. A variante de alfa-amilase de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes, em que a referida variante tem propriedade melhorada, em que a referida propriedade melhorada é desempenho de lavagem melhorado para uma medida de atividade específica aumentada de Fator de Melhoramento (IF) >1,0 em comparação com o referido polipeptídeo progenitor. Parágrafo 12. A variante de alfa-amilase de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes, em que a referida variante tem propriedade melhorada, em que a referida propriedade melhorada é desempenho de lavagem melhorado para uma medida de atividade específica aumentada de Fator de Melhoramento (IF) >1,0 em comparação com o referido polipeptídeo progenitor da SEQ ID NO: 2 e/ou SEQ ID NO: 3. Parágrafo 13. A variante de alfa-amilase de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes, em que o número de modificações é 1 até 20, por exemplo, 1 até 10 e 1 até 5, como 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, ou 20 modificações. Parágrafo 14. A variante de alfa-amilase de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes, em que a referida alfa-amilase é derivada de Bacillus subtilis, B. licheniformis, Bacillus sp. KSM-K38, B. lentos, B. brevis, B. Stearothermophilus, B. alkalophilus, B. amyloliquefaciens, B. coagulans, B. circulans, B. lautus, B. thuringiensis, Streptomyces lividans, Bacillus halmapalus ou S. murinus. Parágrafo 15. A variante de alfa-amilase de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes, em que a referida alfa-amilase progenitora é selecionada das sequências de aminoácidos apresentadas nas SEQ ID NOs: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 e 14, ou qualquer alfa-amilase tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com quaisquer das sequências de aminoácidos apresentadas nas SEQ ID NOs: 1, 2 ou 3. Parágrafo 16. A variante de alfa-amilase de acordo com parágrafos, em que a referida alfa-amilase progenitora compreende ou consiste na sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 1, 2 e 3. Parágrafo 17. Um polinucleotídeo codificando a variante de alfa-amilase de acordo com os parágrafos 1-16. Parágrafo 18. Um construto de ácido nucleico compreendendo o polinucleotídeo de acordo com o parágrafo 17. Parágrafo 19. Um vetor de expressão compreendendo o polinucleotídeo de acordo com o parágrafo 17. Parágrafo 20. Uma célula hospedeira compreendendo o polinucleotídeo de acordo com o parágrafo 17, o construto de ácido nucleico de acordo com o parágrafo 18 ou o vetor de expressão de acordo com o parágrafo 19. Parágrafo 21. Um método para produzir uma variante de alfa-amilase, compreendendo a. cultivar a célula hospedeira do parágrafo 20 sob condições adequadas para expressão da referida variante; e b. opcionalmente recuperar a referida variante. Parágrafo 22. Um método para obter uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase progenitora, introduzindo uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94, 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e em que a referida variante tem 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo meno s 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14. Parágrafo 23. Um método para melhorar o desempenho de lavagem de variante de alfa-amilase de alfa-amilase progenitora tendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 1, ou tendo pelo menos 60% de identidade de sequência com aquela, o referido método compreendendo os passos de: a) uma substituição e/ou deleção de duas, três ou quatro posições na alfa-amilase híbrida, as referidas posições correspondentes à posição 180, 181, 182, e 183 usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração; e b) uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: H1 , H2, N3, G7 , R26, A31, R37, T40, A4 1, N54 , V56, A60, L63, K72, G73 , K93, N94, Q98, V103, V1 04, M105, N106, A109 , G110 , A111, G113, T114, F116, V117, D118, D123, N126, N128, T131, S132, T134, Y135, Q136, I137, Q138, W140, K142, D144, P146, T151, Y152, F155, W159, Y160, T165, W167, E169, K172, L173, N174, I176, Y177, K178, A185, W188, E189, E193, N194, N196, F202, A203, L205, T224, N225, Y242, S243, F244, V252, T256, K258, E259, M260, F261, F266, N276, N279, K280, W283, S286, S302, G303, T315, H320, P321, M322, H323, W346, L354, E359, Q360, G361, Y362, V365, Y371, A383, E390, N394, F395, D405, I409, R414, H420, N422, T427, G455, K457, P458, N470, S472, V473, N474, G475, G476, usando a SEQ ID NO 1 para a numeração e em que a referida variante tem 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e desempenho de lavagem melhorado em comparação com o referido polipeptídeo progenitor. Parágrafo 24. Uma composição compreendendo a variante de acordo com qualquer um dos parágrafos 1-16. Parágrafo 25. A composição de acordo com o parágrafo 24, compreendendo adicionalmente pelo menos um componente ativo adicional. Parágrafo 26. A composição de acordo com o parágrafo 25, em que o componente ativo é selecionado do grupo consistindo em tensoativos, antirredepositantes, auxiliar de floculação, agentes quelantes, inibidores da transferência de corantes, estabilizantes de enzimas, inibidores de enzimas, materiais catalíticos, ativadores de branqueamento, peróxido de hidrogênio, fontes de peróxido de hidrogênio, perácidos pré-formados, agentes dispersantes poliméricos, agentes de remoção/antirredeposição de sujidades de argila, branqueadores, supressores de solução saponífera, corantes, perfumes, agentes elastificantes da estrutura, amaciadores de tecidos, carreadores, hidrótopos, antirredepositantes e coantirredepositanteses, agentes de matização de tecidos, agentes antiespumantes, dispersantes, auxiliares do processamento, e/ou pigmentos. Parágrafo 27. A composição de acordo com o parágrafo 26, em que o referido componente ativo é uma enzima. Parágrafo 28. A composição de acordo com qualquer um dos parágrafos 24-27, em que a enzima é selecionada do grupo compreendendo proteases, amilases, lipases, cutinases, celulases, endoglucanases, xiloglucanases, pectinases, pectina liases, xantanases, peroxidases, haloperoxigenases, catalases e mananases, ou qualquer mistura destas. Parágrafo 29. A composição de acordo com qualquer um dos parágrafos 24-28, que é uma composição detergente, como um detergente líquido, detergente sólido, detergente em gel, detergente em pó, detergente em pastilhas, bolsas solúveis em água (“pods”), bolsas e detergente em grânulos. Parágrafo 30. A composição de acordo com qualquer um dos parágrafos 24-29, que é uma composição de lavagem de roupa líquida ou lavagem de louça líquida, tal como uma composição detergente líquida de Lavagem de Louça Automática (ADW), ou uma composição de lavagem de roupa em pó, tal como uma barra de sabão, ou composição de lavagem de louça em pó, tal como uma composição detergente de dose unitária de ADW. Parágrafo 31. Uso de uma variante de alfa-amilase de acordo com qualquer um dos parágrafos 1-16 em um processo de limpeza como lavagem de roupa ou limpeza de superfícies duras, incluindo lavagem de louça e limpeza industrial. Parágrafo 32. Um polipeptídeo híbrido tendo atividade de alfa-amilase compreendendo um domínio A com pelo menos 60% de identidade de sequência com o domínio A de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1, 2, 3, 4 ou 5, um domínio B com pelo menos 60% de identidade de sequência com o domínio B de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1, 2, 10, 11 ou 12, e um domínio C com pelo menos 60% de identidade de sequência com o domínio C de qualquer uma das SEQ ID NOs: 1, 2, 3, 4 ou 5. Parágrafo 33. O híbrido de acordo com o parágrafo 32, em que o domínio A tem pelo menos 60% de identidade de sequência, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% de identidade de sequência com o domínio A da SEQ ID NO: 4. Parágrafo 34. O híbrido de acordo com os parágrafos 32-33, em que o domínio A1 tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência que começa em uma posição no intervalo de posições 1-5 e termina em uma posição no intervalo de posições 94-114, por exemplo, começa em uma posição no intervalo de posições 1-3 e termina em uma posição no intervalo de posições 99-110 ou começa em uma posição no intervalo de posições 1-3 e termina em uma posição no intervalo de posições 104-109, em particular posições 1-108 da SEQ ID NO: 4. Parágrafo 35. O híbrido de acordo com os parágrafos 32-34, em que o domínio B tem pelo menos 60% de identidade de sequência, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência que começa em uma posição no intervalo de posições 93-113 e termina em uma posição no intervalo de posições 195-215, por exemplo, começa em uma posição no intervalo de posições 97-109 e termina em uma posição no intervalo de posições 199-211 ou começa em uma posição no intervalo de posições 100-106 e termina em uma posição no intervalo de posições 202-208, em particular posições 109-205 da SEQ ID NO: 12. Parágrafo 36. O híbrido de acordo com os parágrafos 32-35, em que o domínio C tem pelo menos 60% de identidade de sequência, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% de identidade de sequência com o domínio C da SEQ ID NO: 4. Parágrafo 37. O híbrido de acordo com os parágrafos 32-36, em que os domínios A2 e C têm pelo menos 60% de identidade de sequência, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência que começa em uma posição no intervalo de posições 201-221 e termina em uma posição no intervalo de posições 478514, por exemplo, começa em uma posição no intervalo de posições 203-211 e termina em uma posição no intervalo de posições 480-510 ou começa em uma posição no intervalo de posições 205-216 e termina em uma posição no intervalo de posições 480-500, em particular posições 206-485 da SEQ ID NO: 4. Parágrafo 38. O polipeptídeo híbrido de acordo com qualquer um dos parágrafos 32-37, em que o referido polipeptídeo híbrido tem propriedade melhorada relativamente ao referido polipeptídeo progenitor da SEQ ID NO: 3. Parágrafo 39. O polipeptídeo híbrido de acordo com qualquer um dos parágrafos 32-38, em que a propriedade melhorada é desempenho de lavagem aumentado como atividade específica aumentada, particularmente atividade específica aumentada na composição detergente Modelo A. Parágrafo 40. O polipeptídeo híbrido de acordo com qualquer um dos parágrafos 32-39, em que propriedade melhorada é atividade específica aumentada medida como Fator de Melhoramento (IF) >1,0 em comparação com o referido polipeptídeo progenitor da SEQ ID NO: 3. Parágrafo 41. O polipeptídeo híbrido de acordo com qualquer um dos parágrafos 32-40, em que o referido polipeptídeo progenitor tem pelo menos 60%, como 65%, como pelo menos 70%, como pelo menos 75%, como pelo menos 80%, como pelo menos 85%, como pelo menos 90%, como pelo menos 95%, como pelo menos 97%, como pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com qualquer uma das SEQ ID NOs:1-14. Parágrafo 42. O polipeptídeo híbrido de acordo com qualquer um dos parágrafos 32-41, em que o referido polipeptídeo híbrido tem pelo menos 60%, como 65%, como pelo menos 70%, como pelo menos 75%, como pelo menos 80%, como pelo menos 85%, como pelo menos 90%, como pelo menos 95%, como pelo menos 97%, como pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com qualquer uma das SEQ ID NOs:1-14. Parágrafo 43. O polipeptídeo híbrido de acordo com qualquer um dos parágrafos 32-42 compreende adicionalmente uma deleção de um ou mais aminoácidos correspondentes às posições 180, 181, 182 e 183 usando a SEQ ID NO: 1 para numeração. Parágrafo 44. O polipeptídeo híbrido de acordo com o parágrafo 43 compreende uma deleção de dois ou mais aminoácidos correspondentes às posições 180, 181, 182 e 183 usando a SEQ ID NO: 1 para numeração. Parágrafo 45. O polipeptídeo híbrido de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes 43-44 compreende uma deleção dos aminoácidos correspondentes às posições 180 e 181 usando a SEQ ID NO: 1 para numeração. Parágrafo 46. O polipeptídeo híbrido de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes 43-44 compreende uma deleção dos aminoácidos correspondentes às posições 180 e 182 usando a SEQ ID NO: 1 para numeração. Parágrafo 47. O polipeptídeo híbrido de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes 43-44 compreende uma deleção dos aminoácidos correspondentes às posições 180 e 183 usando a SEQ ID NO: 1 para numeração. Parágrafo 48. O polipeptídeo híbrido de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes 43-44 compreende uma deleção dos aminoácidos correspondentes às posições 181 e 182 usando a SEQ ID NO: 1 para numeração. Parágrafo 49. O polipeptídeo híbrido de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes 43-44 compreende uma deleção dos aminoácidos correspondentes às posições 181 e 183 usando a SEQ ID NO: 1 para numeração. Parágrafo 50. O polipeptídeo híbrido de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes 43-44 compreende uma deleção dos aminoácidos correspondentes às posições 182 e 183 usando a SEQ ID NO: 1 para numeração. Parágrafo 51. O polipeptídeo híbrido de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes 43-44 compreendendo ou consistindo na SEQ ID NO: 1 ou 2. Parágrafo 52. O polipeptídeo híbrido de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes 32-51 que tem pelo menos uma propriedade melhorada relativamente ao polipeptídeo progenitor da SEQ ID NO: 3 em que a propriedade melhorada é selecionada do grupo compreendendo estabilidade em detergente, atividade específica aumentada, especificidade para o substrato, estabilidade térmica, atividade dependente do pH, estabilidade dependente do pH, estabilidade oxidativa, dependência de Ca2+ e desempenho de lavagem. Parágrafo 53. O polipeptídeo híbrido de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes 32-52, em que a referida alfa-amilase é derivada de Bacillus subtilis, B. licheniformis, Bacillus sp. KSM-K38, B. lentos, B. brevis, B. Stearothermophilus, B. alkalophilus, B. amyloliquefaciens, B. coagulans, B. circulans, B. lautus, B. thuringiensis, Streptomyces lividans, Bacillus halmapalus ou S. murinus. Parágrafo 54. Um polinucleotídeo codificando o polipeptídeo híbrido de acordo com qualquer um dos parágrafos precedentes 32-53. Parágrafo 55. Um construto de ácido nucleico compreendendo o polinucleotídeo de acordo com o parágrafo 54. Parágrafo 56. Um vetor de expressão compreendendo o polinucleotídeo de acordo com o parágrafo 54. Parágrafo 57. Uma célula hospedeira compreendendo o polinucleotídeo de acordo com o parágrafo 54, o construto de ácido nucleico de acordo com o parágrafo 55 ou o vetor de expressão de acordo com o parágrafo 56. Parágrafo 58. Um método para melhorar o desempenho de lavagem de uma alfa amilase tendo pelo menos 60% de identidade com a alfa amilase da SEQ ID NO: 4 ou 5, o referido método compreendendo substituir o domínio B da referida alfa amilase por um domínio B tendo os aminoácidos 109-206 da SEQ ID NO: 12 ou uma sequência que tem pelo menos 60% de identidade com aquela. Parágrafo 59. Um método para produzir um polipeptídeo híbrido, compreendendo: a. cultivar a célula hospedeira do parágrafo 57 sob condições adequadas para expressão do referido híbrido; e b. opcionalmente recuperar o referido híbrido. Parágrafo 60. Uma composição de limpeza compreendendo o híbrido de acordo com qualquer um dos parágrafos 32-53. Parágrafo 61. A composição de acordo com o parágrafo 60, compreendendo adicionalmente pelo menos um componente ativo adicional. Parágrafo 62. A composição de acordo com o parágrafo 61, em que o componente ativo é selecionado do grupo consistindo em tensoativos, antirredepositantes, auxiliar de floculação, agentes quelantes, inibidores da transferência de corantes, estabilizantes de enzimas, inibidores de enzimas, materiais catalíticos, ativadores de branqueamento, peróxido de hidrogênio, fontes de peróxido de hidrogênio, perácidos pré-formados, agentes dispersantes poliméricos, agentes de remoção/antirredeposição de sujidades de argila, branqueadores, supressores de solução saponífera, corantes, perfumes, agentes elastificantes da estrutura, amaciadores de tecidos, carreadores, hidrótopos, antirredepositantes e coantirredepositantes, agentes de matização de tecidos, agentes antiespumantes, dispersantes, auxiliares do processamento, e/ou pigmentos. Parágrafo 63. A composição de acordo com o parágrafo 62, em que o referido componente ativo é uma enzima. Parágrafo 64. A composição de acordo com qualquer um dos parágrafos 60-63, em que a enzima é selecionada do grupo compreendendo proteases, amilases, lipases, cutinases, celulases, endoglucanases, xiloglucanases, pectinases, pectina liases, xantanases, peroxidases, haloperoxigenases, catalases e mananases, ou qualquer mistura destas. Parágrafo 65. A composição de acordo com qualquer um dos parágrafos 60-64, em que a composição é selecionada de um grupo compreendendo: detergente líquido, detergente sólido, detergente em gel, detergente em pó, detergente em pastilhas, bolsas solúveis em água, bolsas e grânulos. Parágrafo 66. A composição de acordo com qualquer um dos parágrafos 60-65, que é uma composição de lavagem de roupa líquida ou lavagem de louça líquida, tal como uma composição detergente líquida de Lavagem de Louça Automática (ADW), ou uma composição de lavagem de roupa em pó, tal como uma barra de sabão, ou composição de lavagem de louça em pó, tal como uma composição detergente de dose unitária de ADW. Parágrafo 67. Uso de um polipeptídeo híbrido de acordo com qualquer um dos parágrafos 60-66 em um processo de limpeza, como lavagem de roupa ou limpeza de superfícies duras, incluindo lavagem de louça e limpeza industrial.
[0761] A atividade de alfa-amilase pode ser determinada por um método empregando o substrato G7-pNP. G7- pNP que é uma abreviatura de 4,6-etilideno(G7)-p- nitrofenil(Gi)-a,D-malto—heptaosídeo, um oligossacarídeo bloqueado que pode ser clivado por uma endo-amilase, tal como uma alfa-amilase. Após a clivagem, a alfa-Glucosidase incluída no kit digere o substrato hidrolisado adicionalmente para liberar uma molécula de PNP livre que tem uma cor amarela e assim pode ser medida por espectrofotometria visível a À = 405 nm (400-420 nm). Kits contendo o substrato G7-pNP e alfa- Glucosidase são fabricados pela Roche/Hitachi (cat. 11876473).
[0762] O substrato G7-pNP deste kit contém 22 mM de 4,6-etilideno-G7-pNP e 52,4 mM de HEPES (ácido 2-[4-(2- hidroxietil)-1-piperazinil]-etanossulfônico), pH 7,0).
[0763] O reagente de alfa-Glucosidase contém 52,4 mM de HEPES, 87 mM de NaCl, 12,6 mM de MgCl2, 0,075 mM de CaCl2, > 4 kU/L de alfa-glucosidase.
[0764] A solução de trabalho do substrato é preparada por mistura de 1 mL do reagente alfa-Glucosidase com 0,2 mL do substrato G7-pNP. Esta solução de trabalho do substrato é feita imediatamente antes do uso.
[0765] Tampão de diluição: MOPS a 50 mM, 0,05% (p/v) de Triton X100 (p-(1,1,3,3-tetrametilbutil)-feniléter de polietilenoglicol (C14H22O(C2H4O)n (n = 9-10))), CaCl2 a 1 mM, pH 8,0.
[0766] A amostra de amilase a ser analisada é diluída em um tampão de diluição para assegurar que o pH na amostra diluída seja 7. O ensaio é realizado por transferência de 20 μL de amostras de enzima diluídas para placa de microtitulação de 96 poços e adição de 80 μL de solução de trabalho de substrato. A solução é misturada e pré-incubada durante 1 minuto à temperatura ambiente, e a absorção é medida a cada 20 segundos durante 5 minutos à OD 405 nm.
[0767] A inclinação (absorvância por minuto) da curva de absorção dependente do tempo é diretamente proporcional à atividade específica (atividade por mg de enzima) da alfa-amilase em questão sob o dado conjunto de condições. A amostra de amilase deve ser diluída até um nível onde a inclinação esteja abaixo de 0,4 unidades de absorvância por minuto.
[0768] A atividade de alfa-amilase também pode ser determinada por um método usando o substrato Phadebas (por exemplo, da Magle Life Sciences, Lund, Suécia). Um comprimido Phadebas inclui polímeros de amido interligados que estão na forma de microesferas globulares que são insolúveis em água. Um corante azul está covalentemente ligado a estas microesferas. Os polímeros de amido interligados na microesfera são degradados a uma velocidade que é proporcional à atividade de alfa-amilase. Quando a alfa-amilase degrada os polímeros de amido, o corante azul liberado é solúvel em água, e a concentração de corante pode ser determinada por medição da absorbância a 620 nm. A concentração de azul é proporcional à atividade de alfa-amilase na amostra.
[0769] A amostra de amilase a ser analisada é diluída no tampão de atividade com o pH desejado. Um comprimido de substrato é suspenso em 5 mL de tampão de atividade e misturado em agitador magnético. Durante a mistura do substrato transferir 150 μL para placa de microtitulação (MTP) ou PCR- MTP. Adicionar 30 μL de amostra de amilase diluída a 150 μL de substrato e misturar. Incubar durante 15 minutos a 37 °C. A reação é parada por adição de 30 μL de NaOH a 1 M e misturar. Centrifugar MTP durante 5 minutos a 4.000 xg. Transferir 100 μL para nova MTP e medir a absorbância a 620 nm.
[0770] A amostra de amilase deve ser diluída tal que a absorbância a 620 nm esteja entre 0 e 2,2 e esteja dentro da gama linear do ensaio de atividade. Ensaio de atividade de açúcares redutores:
[0771] A atividade de alfa-amilase pode ser também determinada por ensaio de açúcares redutores com por exemplo substrato de amido de milho. O número de extremidades redutoras formadas pela alfa-amilase hidrolisando as ligações alfa-1,4- glicosídicas em amido é determinado por reação com Hidrazida de ácido p-hidroxibenzoico (PHBAH). Após reação com PHBAH, o número de extremidades redutoras pode ser medido por absorbância a 405 nm e a concentração de extremidades redutoras é proporcional à atividade de alfa-amilase na amostra.
[0772] O substrato de amido de milho (3 mg/mL) é solubilizado por cozimento durante 5 minutos em água milliQ e resfriado antes do ensaio. Para a solução de paragem preparar uma solução de tartarato de Ka-Na/NaOH (tartarato de K-Na (Merck 8087) a 50 g/L, NaOH a 20 g/L) epreparar de fresco a solução de paragem por adição de Hidrazida de ácido p- hidroxibenzoico (PHBAH, Sigma H9882) à solução de tartarato de Ka-Na/NaOH até 15 mg/mL.
[0773] Em PCR-MTP, 50 μL de tampão de atividade são misturados com 50 μL de substrato. Adicionar 50 μL de enzima diluída e misturar. Incubar à temperatura desejada em máquina de PCR durante 5 minutos. A reação é parada por adição de 75 μL de solução de paragem (tartarato de Ka-Na/NaOH/PHBAH). Incubar em máquina de PCR durante 10 minutos a 95 °C. Transferir 150 μL para nova MTP e medir a absorvância a 405 nm.
[0774] A amostra de amilase deve ser diluída tal que a absorbância a 405 nm esteja entre 0 e 2,2 e esteja dentro da gama linear do ensaio de atividade. Ensaio EnzChek®:
[0775] Para a determinação da atividade de amilase residual, pode ser usado um Kit EnzChek® Ultra Amylase Assay (E33651, Invitrogen, La Jolla, CA, EUA).
[0776] O substrato é um derivado de amido de milho, amido DQTM, que é amido de milho marcado com corante BODIPY® FL em um grau tal que a fluorescência é extinta. Um frasco contendo aprox. 1 mg de substrato liofilizado é dissolvido em 100 microlitros de acetato de sódio a 50 mM (pH 4,0). O frasco é vortexado durante 20 segundos e deixado à temperatura ambiente, no escuro, com mistura ocasional até a dissolução. Em seguida, 900 microlitros de acetato a 100 mM, 0,01% (p/v) de TRITON® X100, CaCl2 a 0,125 mM, pH 5,5 são adicionados, submetidos a vórtice extenso e armazenados à temperatura ambiente, no escuro, até que estejam prontos para uso. A solução de trabalho de substrato de estoque é preparada diluindo 10 vezes em tampão de atividade residual (acetato a 100 mM, 0,01% (p/v) de TRITON® X100, CaCl2 a 0,125 mM, pH 5,5). Imediatamente após a incubação, a enzima é diluída para uma concentração de 10 a 20 ng de proteína enzimática/mL em acetato a 100 mM, 0,01% (p/v) de TRITON® X100, CaCl2 a 0,125 mM, pH 5,5.
[0777] Para o ensaio, 25 microlitros da solução de trabalho de substrato são misturados por 10 segundos com 25 microlitros da enzima diluída em uma placa de microtitulação de 384 poços negra. A intensidade de fluorescência é medida (excitação: 485 nm, emissão: 555 nm) uma vez por minuto durante 15 minutos em cada poço a 25 °C e o Vmax é calculado como a inclinação do gráfico da intensidade da fluorescência em função do tempo. A representação gráfica deve ser linear e o ensaio de atividade residual foi ajustado de modo que a solução enzimática de referência diluída esteja dentro da faixa linear do ensaio de atividade.
[0778] Construção de um híbrido entre o domínio A e C de um polipeptídeo tendo o aminoácido n° 1 até ao aminoácido n° 108 e aminoácido n° 207 até ao aminoácido n° 485 da sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 3 (o primeiro polipeptídeo progenitor) e o domínio B de um polipeptídeo tendo o aminoácido n° 109 até ao aminoácido n° 206 da sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 11 (o segundo polipeptídeo progenitor).
[0779] Com base no alinhamento estrutural 3D das duas amilases, o aminoácido n° 1 até ao aminoácido n° 108 e o aminoácido n° 207 até ao aminoácido n° 485 do primeiro polipeptídeo progenitor são definidos como domínio A e C, e o aminoácido 109 até ao aminoácido n° 206 do segundo polipeptídeo progenitor são definidos como o domínio B. Fragmentos de DNA sintético codificando parte do domínio A-C do primeiro polipeptídeo progenitor e o domínio B do segundo polipeptídeo progenitor foram concebidos e adquiridos a um vendedor externo.
[0780] A amilase resultante consistindo no domínio A e C do primeiro polipeptídeo progenitor e o domínio B do segundo polipeptídeo progenitor é o polipeptídeo apresentado na SEQ ID NO: 1. Além disso, a amilase resultante tendo as deleções de R180*+S181* é o polipeptídeo apresentado na SEQ ID NO: 2.
[0781] Para determinar se o polipeptídeo híbrido gerado como descrito no Exemplo 1 tem uma atividade mantida ou mesmo melhorada, o polipeptídeo híbrido foi avaliado pelo ensaio de microamostras. A seguinte composição detergente foi preparada:
Tabela 1: Detergente modelo A (percentagens apresentadas em p/p)
[0782] Preparação de Detergente Modelo A (0,33%): Razão Molar 4:1 de Solução de Estoque de CaCl2 e MgCl2 com 6000 dH (Dureza da Água). 125,8 g de CaCl2.2H2O foram pesados em garrafa de 1 litro e a esta 500 mL de água tipo I foram adicionados e bem agitados. A este 43,8 g de MgCl2.6H2O foram pesados e adicionados e bem dissolvidos e o volume final foi constituído até 1000 mL com água tipo I.
[0783] Solução 0,535 M de NaHCO3: 44,9 g de Hidrogenocarbonato de Sódio foram dissolvidos em 100 mL de água tipo I.
[0784] Detergente Modelo A com uma Dureza da Água de 15 (15° dH): 3,335 g de detergente Modelo A foram pesados e transferidos para uma garrafa de 1 litro e a esta 865 mL de água tipo I foram adicionados e bem misturados. A este sistema 7,5 mL de NaHCO3 a 0,535 M foram adicionados, bem misturados e o volume foi constituído até 1 litro com água tipo 1. Para ajustar a dureza da água para 15° dH, 2,5 mL de razão molar 4:1 de solução de estoque de CaCl2.2H2O e MgCl2.6H2O com 6000° dH foram adicionados e a mistura foi agitada durante 15 min.
[0785] Colônias foram recolhidas da placa transformada com o recolhedor de colônias (KBiosystems) e inoculadas em uma placa de cultura de 96 poços compreendendo meio TBGly para o crescimento. As culturas foram cultivadas durante 3 dias a 37 °C e o sobrenadante foi recuperado das placas por centrifugação.
[0786] CS-27, amostras de 5 metros foram obtidas do Center for Test materials (CFT, Países Baixos) e foram cortadas em microamostras de 6 mm usando uma punção de amostras. Uma ou duas amostras foram colocadas em cada poço de placas Nunc de 96 poços aos quais foram adicionados 180 μL de detergente Modelo A (0,33%). Os sobrenadantes da cultura ou proteína purificada foram diluídos para 0,1 ppm ou 0,4 ppm com MOPS 100 mM, pH 7 com CaCl2 0,1 mM, Triton-X 0,01%. Às placas contendo as amostras e detergente Modelo A foram adicionados 20 uL de amostras de enzima diluídas para obter uma concentração final de 0,01 ou 0,04 ppm e o sistema foi incubado a 25 °C, 800 RPM durante 10 min. 40 uL da mistura reacional foram transferidos para outra placa de 96 poços e, para digerir todos os oligossacarídeos liberados em glucose, 10 uL de Amiloglucosidase (AMG) 0,1 mg/mL foram adicionados e o sistema foi incubado durante 5 min à temperatura ambiente. AMG foi purificada do produto comercial AMG 300L (Novozymes). As extremidades redutoras foram detectadas pelo método de hidrazida do ácido p-hidroxibenzoico (PAHBAH) (Lever M Anal Biochem. 81:21-7). Para preparar reagente PAHBAH 1,5%, 1,5 g de hidrazida do ácido p-hidroxibenzoico (PAHBAH) foram dissolvidos no tampão contendo Na2CO3 1,0 M, tartarato de sódio e potássio 0,17 M e Bi(NO3)3.5H2O 5 mM. A 50 uL do digesto de AMG foram adicionados 50 uL de reagente PAHBAH 1,5% e o sistema foi aquecido a 95 °C durante 10 mins. A absorvância da mistura resultante foi medida a 405 nm, que é proporcional à atividade enzimática. No caso de sobrenadantes de cultura, a concentração de enzima expressa foi determinada por ELISA usando anticorpos específicos. A atividade específica foi calculada tomando a razão da atividade por concentração de proteína e o acerto foi identificado como algo maior do que a atividade específica do polipeptídeo progenitor (alfa-amilase).
[0787] O Fator de Melhoramento (IF) foi calculado do modo seguinte: Fator de Melhoramento (IF) = [Atividade Específica do polipeptídeo Híbrido]/[Atividade Específica do polipeptídeo progenitor (alfa-amilase)] Atividade específica do Polipeptídeo Híbrido=15,70 Atividade específica do Polipeptídeo Progenitor=11,41 Fator de Melhoramento (IF) = 15,70/11,41= 1,4.
[0788] Em consequência, o IF da SEQ ID NO: 2 (polipeptídeo híbrido) é 1,4 e o IF da SEQ ID NO: 3 (polipeptídeo progenitor) é 1,0.
[0789] A variantes de amilase da SEQ ID NO: 1 foram preparadas por procedimentos comuns, em resumo: Introduzir mutações aleatórias e/ou sítio-dirigidas no gene, transformar células hospedeiras de Bacillus subtilis com os genes mutados, fermentar as células hospedeiras transformadas (por exemplo, como descrito no Exemplo 1 de WO 2004/111220). As variantes de alfa-amilase foram produzidas recombinantemente em Bacillus subtilis de um modo similar. Foi gerada uma biblioteca de variantes onde foram efetuadas diferentes combinações de alterações em posições. As variantes geradas são listadas nos seguintes exemplos.
[0790] Para determinar se as variantes geradas como descrito no Exemplo 3 têm uma atividade mantida ou mesmo melhorada, as variantes foram avaliadas pelo ensaio de microamostras como descrito no Exemplo 2. A atividade específica foi calculada tomando a razão da atividade por concentração de proteína e as variantes foram identificadas como algo maior do que a atividade específica da alfa-amilase da SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID NO: 2. Tabela 2: A atividade específica das variantes de acordo com a invenção obtida pelo método descrito acima é a seguinte (substituições de aminoácidos se referem à SEQ ID NO: 1)
[0791] De forma a avaliar o desempenho de lavagem das alfa-amilases em uma composição de base de detergente, podem ser realizados experimentos de lavagem usando o Ensaio de Tensão Mecânica Automática (AMSA). Com o teste AMSA, o desempenho de lavagem de uma grande quantidade de soluções detergentes de enzima de volume pequeno pode ser examinado. A placa de AMSA tem alguns compartimentos para soluções de teste e uma tampa que aperta firmemente a amostra têxtil a ser lavada contra todas as aberturas dos compartimentos. Durante o tempo de lavagem, a placa, soluções de teste, têxtil e tampa são vigorosamente agitados para colocar a solução de teste em contato com o têxtil e aplicar tensão mecânica de um modo regular, periodicamente oscilante. Para descrição adicional ver WO 02/42740, especialmente o parágrafo “Special method embodiments” nas páginas 23 a 24.
[0792] É preparada uma solução de teste compreendendo água e detergente modelo A como descrito abaixo, e a enzima da invenção à concentração de 0 ou 0,09 ppm. Tecidos manchados com amido (CS-28 do Center For Test materials BV, P.O. Box 120, 3133 KT, Vlaardingen, Países Baixos) são adicionados e lavados durante 10 minutos a 20 °C. Após enxágue abundante com água da torneira corrente e secagem na escuridão, os valores da intensidade da luz dos tecidos manchados são subsequentemente medidos como uma medida de desempenho de lavagem. O teste com 0 mg de proteína enzimática/L é usado como branco e corresponde à contribuição do detergente. De preferência, ação mecânica é aplicada durante a etapa de lavagem, por exemplo, sob a forma de sacudidela, rotação ou agitação da solução de lavagem com os tecidos. Os experimentos de desempenho de lavagem de AMSA podem ser conduzidos sob as condições experimentais especificadas abaixo: Tabela A: Condição experimental
Tabela B: Detergente modelo A A dureza da água foi ajustada para 15 °dH por adição de CaCl2, MgCl2 e NaHCO3 (Ca2+:Mg2+:HCO3- = 4:1:7,5) ao sistema de teste. Após lavagem, os têxteis foram enxaguados em água de torneira e secos.
[0793] O desempenho de lavagem é medido como o brilho expresso como a intensidade da luz refletida da amostra quando iluminada com luz branca. Quando a amostra está manchada, a intensidade da luz refletida é mais baixa do que aquela de uma amostra limpa. Portanto, a intensidade da luz refletida pode ser usada para medir o desempenho de lavagem.
[0794] As medições de cor são feitas com um digitalizador de mesa profissional (EPSON Expression 10000XL, EPSON) usado para capturar uma imagem do têxtil lavado.
[0795] Para extrair um valor para a intensidade da luz a partir das imagens digitalizadas, os valores de pixel de Cor com 48^24 Bits da imagem são convertidos em valores para vermelho, verde e azul (RGB). O valor de intensidade (Int) é calculado por adição dos valores RGB como vetores e depois consideração do comprimento do vetor resultante: Tabela 3: O desempenho de lavagem das variantes de acordo com a invenção é mostrado na tabela abaixo.
[0796] As dimensões e valores revelados aqui não devem ser entendidos como estando estritamente limitados aos valores numéricos exatos mencionados. Em vez disso, salvo especificado de outro modo, cada uma de tais dimensões pretende significar tanto o valor mencionado como uma faixa funcionalmente equivalente em torno deste valor.
[0797] A invenção descrita e reivindicada aqui não deve estar limitada no escopo pelos aspectos específicos revelados aqui, uma vez que estes aspectos são pretendidos como ilustrações de vários aspectos da invenção. É pretendido que quaisquer aspectos equivalentes estejam dentro do escopo desta invenção. De fato, várias modificações da invenção adicionalmente àquelas mostradas e descritas aqui se tornarão claras àqueles versados na técnica a partir da descrição anterior. Tais modificações se destinam também a se enquadrarem dentro do escopo das reivindicações anexas. Em caso de conflito, a presente divulgação incluindo as definições prevalecerá.
Claims (16)
1. Variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase progenitora caracterizada pelo fato de que a referida variante compreende uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: 303, 1, 2 , 3, 7, 2 6, 31, 37, 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94 , 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 1a23, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138 , 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169 , 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188 , 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244 , 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286 , 302, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362 , 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427 , 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e em que a referida variante tem 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
2. Variante, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a referida modificação em pelo menos uma posição corresponde às posições: G303, H1, H2, N3, G7, R26, A31, R37, T40, A41, N54, V56, A60, L63, K72, G73, K93, N94, Q98, V103, V104, M105, N106, A109, G110, A111, G113, T114, F116, V117, D118, D123, N126, N128, T131, S132, T134, Y135, Q136, I137, Q138, W140, K142, D144, P146, T151, Y152, F155, W159, Y160, T165, W167, E169, K172, L173, N174, I176, Y177, K178, A185, W188, E189, E193, N194, N196, F202, A203, L205, T224, N225, Y242, S243, F244, V252, T256, K258, E259, M260, F261, F266, N276, N279, K280, W283, S286, S302, T315, H320, P321, M322, H323, W346, L354, E359, Q360, G361, Y362, V365, Y371, A383, E390, N394, F395, D405, I409, R414, H420, N422, T427, G455, K457, P458, N470, S472, V473, N474, G475 e G476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
3. Variante, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, pelo menos uma posição corresponde às posições: G303R, H1*, H2*, N3D, N3G, N3S, G7A, G7H, G7S, R2 6Y, A31 S, R37A, R37N, R37V, T40G, T40N, A41D N54S, V56T, A60V, A60 P, L63F, K72R, G73L, K93R, N9 4D, Q98L , V103A , V103I, V103L, V104M, M105I, M105L, N106D, A109G, G110K, A111G, A111L, G113Q, G113S, G113A, T114K, F116L, F116N, F116Q, F116W, V117G, D118Q, D118T, D123N, N126D, N128Y, T131I, T131V, S132D, S132L, T134D, Y135E, Q136T, Q136K, I137F, Q138V, W140S, W140M, W140Y, K142E, K142G, K142P, D144N, P146S, P146H, T151A, Y152L, F155W, W159H, W159L, Y160P, T165V, W167A, W167D, W167E, W167F, W167P, W167S, E169I, E169Q, E169V, K172G, K172Q, L173F, N174K, N174S, I176V, Y177D, K178A, R180*, R180Q, R180S, S181*, S181L, S181T, T182*, T182D, T182E, T182G, T182I, T182L, T182M, T182S, G183*, G183P, A185D, A185E, A185K, A185N, A185Q, A185R, W188C, E189P, E193I, N194F, F202Y, F202Y, A203F, L205F, L205N, L205Q, L205R, referida modificação caracterizada pelo fato de que a L205V, L205Y, T224F, T224Y, N225S, Y242F, Y242L, S243Q, F244I, F244L, V252I, T256A, T256D, K258V, E259G, E259V, M260D, M260W, F261K, F261P, F261S, F266Y, N276F, N276W, N276Y, N279S, N280F, N280W, N280Y, W283N, S286K, S286L, S302T, S302Y, T315A, H320T, P321H, P321Y, M322G, M322Y, H323A, H323N, H323W, W346N, L354V, E359W, Q360M, Q360W, Q360Y, G361M, Y362V, V365I, Y371S, Y371N, A383D, E390A, E390D, N394W, N394D, F395Y, D405G, I409L, R414M, H420P, H420A, H420Q, H420Y, N422V, T427L, G455R, K457N, K457R, R458S, N470A, N470M, S472R, V473C, N474F, N474L, G475E, G475K, G476H, G476E e G476A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variant e tem 60%, pelo menos 65%, pelo meno s 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80% , pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo meno s 84%, pelo menos 85% , pelo menos 86 %, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo meno s 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91% , pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo meno s 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo me nos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
4. Variante, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada pelo fato de que a referida variante compreende uma deleção em duas ou mais posições selecionadas do grupo consistindo em: R180*+S181*; R180*+T182*; R180*+G183*; S181*+T182*; S181*+G183*; e T182*+G183*; e T182*+G183*; usando a SEQ ID NO: 1 para numeração.
5. Variante, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada pelo fato de que a variante compreende ou consiste em: (a) uma substituição e/ou deleção de duas, três ou quatro posições na alfa-amilase progenitora, as referidas posições correspondendo à posição 180, 181, 182 e 183 usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração; e (b) uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: G303R, H1*, H2, N3D, N3G , N3S, G7A, G7H, G7S, R26Y, A31S, R37A, R37N, R37V, T40G, T40N, A41D, N54S, V56T, A60V, A60P, L63F, K72R, G73L, K93R, N94D, Q98L, V103A, V103I, V1 03L, V104M, M105I , M105L, N106D, A109G, G110K, A111G, A111L, G113Q, G113S, G113A, T114K, F116L, F116N, F116Q, F116W, V117G, D118Q, D118T, D123N, N126D, N128Y, T131I, T131V, S132D, S132L, T134D, Y135E, Q136T, Q136K, I137F, Q138V, W140S, W140M, W140Y, K142E, K142G, K142P, D144N, P146S, P146H, T151A, Y152L, F155W, W159H, W159L, Y160P, T165V, W167A, W167D, W167E, W167F, W167P, W167S, E169I, E169Q, E169V, K172G, K172Q, L173F, N174K, N174S, I176V, Y177D, K178A, A185D, A185E, A185K, A185N, A185Q, A185R, W188C, E189P, E193I, N194F, F202Y, F202Y, A203F, L205F, L205N, L205Q, L205R, L205V, L205Y, T224F, T224Y, N225S, Y242F, Y242L, S243Q, F244I, F244L, V252I, T256A, T256D, K258V, E259G, E259V, M260D, M260W, F261K, F261P, F261S, F266Y, N276F, N276W, N276Y, N279S, N280F, N280W, N280Y, W283N, S286K, S286L, S302T, S302Y, T315A, H320T, P321H, P321Y, M322G, M322Y, H323A, H323N, H323W, W346N, L354V, E359W, Q360M, Q360W, Q360Y, G361M, Y362V, V365I, Y371S, Y371N, A383D, E390A, E390D, N394W, N394D, F395Y, D405G, I409L, R414M, H420P, H420A, H420Q, H420Y, N422V, T427L, G455R, K457N, K457R, R458S, N470A, N470M, S472R, V473C, N474F, N474L, G475E, G475K, G476H, G476E e G476A,, usando a SEQ ID NO: 1 para a numera ção, e em que a referida variante tem 60%, pelo menos 65%, pelo meno s 70%, pelo menos 75% , pelo menos 80 %, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo meno s 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85% , pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo meno s 89%, pelo menos 90% , pelo menos 91 %, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
6. Variante, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada pelo fato de que a variante compreende de uma ou mais modificações selecionadas do grupo consistindo em: H1*+G7A+R180*+S181*, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+N279S, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+N279S+G303R, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A , H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A +G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A , H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A +G476A, H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+Y242F+E259G+N279S+G303R +E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S +E390A+G476A, H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+ W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+ W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+ W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A, H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+ W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G +N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G +N279S+E390A+G476A, H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G +N279S+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G +K280Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G +K280Y+N279S+E390A +G476A, H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G +K280Y+N279S+G303R+ E390A+G476A, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa- amilase.
7. Variante, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada pelo fato de que a variante compreende ou consiste em uma ou mais modificações selecionadas do grupo consistindo em: H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A +G475K, H1*+G7A+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A +G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+T182S+Y242F+E259G+N279S+G303R +E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+T182L+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R +E390A+G475K, H1*+G7A+S181L+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R +E390A+G475K, H1*+G7A+R180S+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R +E390A+G475K, H1*+G7A+A60P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+ E390A+G475K, H1*+G7A+M105L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R +E390A+G475K, H1*+G7A+M105I+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R +E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+T182D+Y242F+E259G+N279S+G303R +E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+T182E+Y242F+E259G+N279S+G303R +E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+T182G+Y242F+E259G+N279S+G303R +E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+T182M+Y242F+E259G+N279S+G303R +E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+A185K+Y242F+E259G+N279S+G303R +E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+A185D+Y242F+E259G+N279S+G303R +E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R +E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+A185N+Y242F+E259G+N279S+G303R +E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+A185R+Y242F+E259G+N279S+G303R +E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+A185E+Y242F+E259G+N279S+G303R +E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R +E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R +E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R +E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R +E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244L+E259G+N279S+G303R +E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244I+E259G+N279S+G303R +E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R +E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R +E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+Y242F+E259G+N279S+G303R +E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S +G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205F+Y242F+E259G+N279S +G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+L205Y+Y242F+E259G+N279S +G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276F+N279S +G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276Y+N279S +G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276W+N279S +G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y +G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280W +G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276F +N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276Y +N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276W +N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S +K280F+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S +K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S +K280W+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276F +N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276Y +N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276W +N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S +K280F+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S +K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S +K280W+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+S181*+T182*+Y242F+E259G +N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+S181*+T182*+F202Y +Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G 303R+Y362V+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G +E359W+Q360W+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G +Q360W+E390A+G475K, H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E359W 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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F +Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P +N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F +T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F +T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P +N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P +N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F +Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F +Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P +N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F +S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F +S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P +N196I+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P +Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420Y+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F +L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G +M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F +Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F +T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F +T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P +N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F +Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+ E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K , H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P +N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475 K, H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N 194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K, H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G +M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470A+G475K, H1*+G7A+S132L+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F +E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K, H1*+G7A+A31S+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A 185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+ G475K, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P +N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F +L205Y+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A, H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P +N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K, R180*+S181*, T40N+F116L+D123N+N126D+N128Y+T131I+F155W+R180*+S1 81*+T182D+E189P+F202Y+K457N+P458S+G475K+G476E, A60V+Q98L+G110K+R180*+S181*+A383D, Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+T315A, G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*, G7H+W167P+R180*+S181*+G455R, Q98L+V103A+G110K+R180*+S181*, T114K+R180*+S181*, E169V+R180*+S181*, R180*+S181*+W188C, W167D+R180*+S181*, W167S+R180*+S181*, W167E+R180*+S181*, W167P+R180*+S181*, R180*+S181*+E193I+H323N, R180*+S181*+A203F, W159L+R180*+S181*, W159H+R180*+S181*, K178A+R180*+S181*, A111L+R180*+S181*, G110K+R180*+S181*, e A111G+R180*+S181*, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração e em que a referida variante tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a variante tem atividade de alfa- amilase.
8. Variante, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada pelo fato de que a referida alfa-amilase progenitora é selecionada das sequências de aminoácidos apresentadas na SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, ou qualquer alfa- amilase tem pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com qualquer uma das sequências de aminoácidos apresentadas nas SEQ ID NOs: 1, 2 ou 3.
9. Variante, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada pelo fato de que a referida alfa-amilase progenitora compreende ou consiste na sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 e SEQ ID NO: 3.
10. Variante, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada pelo fato de que a referida variante tem um desempenho melhorado, tal como um desempenho de lavagem melhorado para uma medida de atividade específica do Fator de Melhoramento (IF) >1,0, quando comparado ao referido polipeptídeo progenitor, preferencialmente SEQ ID Nos: 1, 2 ou 3.
11. Método para obter uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase progenitora caracterizado pelo fato de que se introduz uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições: 1, 2, 3, 7, 26, 31, 37 , 40, 41, 54, 56, 60, 63, 72, 73, 93, 94, 98, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 111, 113, 114, 116, 117, 118, 123, 126, 128, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 140, 142, 144, 146, 151, 152, 155, 159, 160, 165, 167, 169, 172, 173, 174, 176, 177, 178, 180, 181, 182, 183, 185, 188, 189, 193, 194, 196, 202, 203, 205, 224, 225, 242, 243, 244, 252, 256, 258, 259, 260, 261, 266, 276, 279, 280, 283, 286, 302, 303, 315, 320, 321, 322, 323, 346, 354, 359, 360, 361, 362, 365, 371, 383, 390, 394, 395, 405, 409, 414, 420, 422, 427, 455, 457, 458, 470, 472, 473, 474, 475 e 476, usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração, e em que a referida variante tem 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14.
12. Método para melhorar o desempenho de lavagem de uma variante de alfa-amilase de uma alfa-amilase progenitora, em que a referida variante tem a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 1, ou tem pelo menos 60% de identidade de sequência com aquela, caracterizado pelo fato de que o referido método compreende os passos de: (a) introduzir uma substituição e/ou deleção de duas, três ou quatro posições na alfa-amilase progenitora, em que as referidas posições correspondem à posição 180, 181, 182 e 183 usando a SEQ ID NO: 1 para a numeração; e (b) introduzir uma modificação em uma ou mais posições correspondentes às posições H1*, H2, N3D, N3G, N3S, G7A, G7H, G7S, R26Y, A31S, R37A, R37N, R37V, T40G , T40N, A41D, N54S, V56T, A60V, A60P, L63F, K72R, G73L, K93R, N94D , Q98L, V103A, V103I, V103L, V104M, M105I, M105L, N106D, A109G, G110K, A111G, A111L, G113Q, G113S, G113A, T114K, F116L, F116N, F116Q, F116W, V117G, D118Q, D118T, D123N, N126D, N128Y, T131I, T131V, S132D, S132L, T134D, Y135E, Q136T, Q136K, I137F, Q138V, W140S, W140M, W140Y, K142E, K142G, K142P, D144N, P146S, P146H, T151A, Y152L, F155W, W159H, W159L, Y160P, T165V, W167A, W167D, W167E, W167F, W167P, W167S, E169I, E169Q, E169V, K172G, K172Q, L173F, N174K, N174S, I176V, Y177D, K178A, A185D, A185E, A185K, A185N, A185Q, A185R, W188C, SEQ ID NO: 1 para a numeração, e em que a referida variante tem 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos do que 100% de identidade de sequência com a SEQ ID No: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ou 14 e em que a referida variante tem atividade de alfa-amilase e desempenho de lavagem melhorado relativamente ao referido polipeptídeo progenitor.
13. Uso de uma variante de alfa-amilase, conforme definida em qualquer uma das reivindicações anteriores 1 a 10, caracterizado pelo fato de que é em um processo de limpeza, como lavagem de roupa ou limpeza de superfícies duras, incluindo lavagem de louça e limpeza industrial.
14. Composição caracterizada pelo fato de que compreende a variante, conforme definida em qualquer uma das reivindicações anteriores 1 a 10.
15. Composição, de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pelo fato de que a composição é selecionada a partir de um grupo compreendendo: detergentes líquidos, detergentes sólidos, detergentes em gel, detergentes em pó, detergentes em pastilhas, bolsas solúveis em água, bolsas e grânulos.
16. Composição, de acordo com a reivindicação 14 ou 15, caracterizada pelo fato de que é uma composição de lavagem de roupa líquida ou lavagem de louça líquida, tal como uma composição detergente líquida de Lavagem de Louça Automática (ADW), ou uma composição de lavagem de roupa sólida, tal como uma barra de sabão, ou composição de lavagem de louça em pó, tal como uma composição detergente de dose unitária de ADW.
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