JP2023507365A - α-アミラーゼ活性を有するポリペプチドを含む洗浄組成物 - Google Patents

α-アミラーゼ活性を有するポリペプチドを含む洗浄組成物 Download PDF

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Abstract

α-アミラーゼの変異体を含む洗浄組成物、そのような洗浄組成物を作製する方法、及びそのような組成物を含む水性液で布地など表面を処理する方法。

Description

(配列リストの参照)
本明細書は、コンピュータ可読形態での配列表を含む。このコンピュータ可読形態は、参照により本明細書に組み込まれる。
(発明の分野)
本発明は、アミラーゼ酵素を含む洗浄組成物、それらを製造する方法、及びそれらを使用する方法に関する。本発明の組成物及び方法は、家庭用洗浄組成物又は処理組成物、特に、手洗い及び/若しくは自動の洗濯組成物並びに/又は手洗い及び/若しくは自動の食器洗浄組成物など洗濯組成物並びに食器洗浄組成物において使用するのに好適である。本発明は、洗濯物の洗浄に特に有用である。
α-アミラーゼ(α-1,4-グルカン-4-グルカノヒドロラーゼ、E.C.3.2.1.1)は、デンプン並びに他の直鎖状及び分岐状1,4-グルコシドオリゴ糖及び多糖類の加水分解を触媒する酵素の一群を構成する。これらは、Termamylとしても既知のB.リケニフォルミス由来の、最初に使用された細菌α-アミラーゼなど、長年にわたって家庭用洗浄組成物に使用されていることが既知である。例えば、AA560(国際公開第2000/060060号)及びSP707(Tsukamoto et al.,1988,Biochem.Biophys.Res.Comm.151:25-31に記載)由来のものは洗剤で有用であり、これら及び他のアミラーゼを修飾して、洗剤中の安定性を改善することが既知である。例えば、国際公開第96/23873号は、このアミラーゼの安定性を改善するために、SP707(国際公開第96/23873号の配列番号7)のアミノ酸181+182又はアミノ酸183+184を欠失させることを開示している。国際公開第96/23873号は、M202を例えばロイシンに置換することによってSP707アミラーゼを修飾して、分子を酸化に対して安定化させることを更に開示している。
洗剤配合者にとっては、洗浄組成物の有効性を、特に環境に優しい方法で改善することが常に課題となっている。環境上の理由から、好ましくはしばしばより少量の水及び/又はより低い温度を使用する急速洗浄サイクルにおいても有効であるような洗剤組成物を提供することもまた、ますます重要になっている。したがって、親ポリペプチドと比較した場合に、比活性などの改善された特性を呈するデンプン分解酵素を有することが望ましい。本発明は変異体ポリペプチドを含む組成物を提供し、当h該変異体ポリペプチドは、α-アミラーゼ活性と、そのハイブリッド及び/又は親ポリペプチドと比較して改善された、デンプン含有汚れの除去又は比活性など特性又は酵素洗剤効果と、を有する。特に、好ましいデンプン分解酵素は、低温下及び/又はより短い洗浄サイクルで機能することができ、同時に、良好な洗浄を可能にするための比活性(デンプン分解活性)、安定性、及び/又は洗浄性能など他の望ましい特性を保持又は増加させることができる。
国際公開第2000/060060号 国際公開第96/23873号
したがって、本発明の目的は、親ポリペプチドと比較したときに、デンプン含有汚れの除去又は比活性など改善された特性を呈するα-アミラーゼ変異体を含む洗浄組成物を提供することであり、これは、洗浄(washing)、食器洗浄及び/又は洗浄(cleaning)方法において使用することができる。本発明の更なる目的は、親α-アミラーゼと比較して、又は配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14のいずれかのα-アミラーゼと比較して低温で、例えば5℃~40℃未満、又は30℃未満、又は28℃未満、又は25℃未満の洗浄温度で、改善された洗浄性能を有するα-アミラーゼ変異体を含む、洗浄組成物を提供することである。
本発明は、
(a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する1つ以上の位置において修飾を含む、親α-アミラーゼのα-アミラーゼ変異体であって、当該変異体は、親ポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する、α-アミラーゼ変異体と、
洗浄補助剤と、を含む洗浄組成物に関する。
本発明はまた、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する1つ以上の位置において修飾を含む、親α-アミラーゼのα-アミラーゼ変異体であって、当該変異体は、親ポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体は、当該親ポリペプチドの洗浄性能と比較して改善された洗浄性能を有する、αアミラーゼ変異体と、洗浄補助剤と、を含む洗浄組成物を提供する。親ポリペプチドは、好ましくは配列番号1、又は配列番号2、又は配列番号3である。本発明はまた、上記のようなαアミラーゼ変異体を得ることと、αアミラーゼ変異体を洗浄補助剤と混合して洗浄組成物を作製することと、を含む、洗浄組成物を作製する方法を提供する。
本発明はまた、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する1つ以上の位置において改変を導入し、それによってα-アミラーゼ変異体を提供する工程であって、当該変異体は、親ポリペプチドに対して、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%など、少なくとも70%など、少なくとも75%など、少なくとも80%など、少なくとも85%など、少なくとも90%など、少なくとも95%など、少なくとも97%など、又は少なくとも99%などであるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体は改善された洗浄性能を有する、工程を含む、親α-アミラーゼの変異体を得ることと、α-アミラーゼ変異体を洗浄補助剤と混合して、洗浄組成物を作製することと、を含む、洗浄組成物を作製する方法を提供する。
本発明はまた、表面、好ましくは織物を処理する方法を提供し、この方法は、
(i)水と、本明細書に記載の親α-アミラーゼのα-アミラーゼ変異体と、洗浄補助剤と、を含む、水性洗浄液を形成することと、
(ii)表面を、水性洗浄液を用いて、好ましくは5℃~60℃、好ましくは10~40℃以下、又は好ましくは最大35℃の温度で、より好ましくは30℃以下の温度で、又は20℃以下の温度で処理することと、
(iii)表面をすすぐことと、を含む。
好ましくは、変異体アミラーゼはα-アミラーゼ活性を有し、変異体は、親α-アミラーゼと比較して改善された洗浄性能を有する。
本明細書における組成物及び方法は、繊維又は布地、例えば単独又は混紡(例えばポリコットン)の形態であり得る、綿及び/又は合成繊維(例えばポリエステル、ナイロンなど)を含む表面を処理するのに特に有用である。本発明はまた、汚れ(特にデンプン又は他の炭水化物含有の汚れ)を洗浄する若しくは除去する、悪臭を除去する、又は布地の白色度を増加させるための上記の組成物の使用又は方法に関する。
定義
この詳細な説明においては、以下の定義が適用される。単数形「a」、「an」、及び「the」は、文脈で明示されない限り、複数形の対象物を含むことに留意されたい。
本明細書における「約」の値又はパラメータへの言及は、その値又はパラメータ自体を対象とする態様を含む。例えば、「約X」に言及する記述は、態様「X」を含む。
特に定義されない、又は文脈で明示されない限り、本明細書で使用されている全ての技術的用語及び科学的用語は、本発明が属する分野の当業者に共通に理解されるものと同じ意味を有している。
Aドメイン、Bドメイン、及びCドメイン:α-アミラーゼの構造は、3つの別個のドメインA、B、及びCを含む。例えば、Machius et al.,1995,J.Mol.Biol.246:545-559を参照されたい。用語「ドメイン」は、全分子の別個の独立した部分構造を形成する、ポリペプチドの領域を意味する。α-アミラーゼは、Aドメインで示される、活性部位を有するβ/α-8バレル、Bドメインで示される、βシート3とα-ヘリックス3との間のやや長いループ、及びC-ドメイン、場合によっては、炭水化物結合ドメインからなる(例えば、上記の国際公開第2005/001064号、Machius et al.)。
α-アミラーゼのドメインは、結晶学的技術を使用することによるなど、構造分析によって決定され得る。α-アミラーゼのドメインを決定するための代替方法は、ドメインが決定済みの別のαアミラーゼとのαアミラーゼのアミノ酸配列の配列アラインメントによるものである。例えば、Bドメインが決定済みであるα-アミラーゼ中のBドメイン配列とアラインメントする配列は、所与のα-アミラーゼのBドメインと見なされ得る。
対立遺伝子変異体:用語「対立遺伝子変異体」は、同じ染色体座を占める遺伝子の2つ以上の代替形態のうちのいずれかを意味する。対立遺伝子変異は、変異によって自然発生し、個体群内の多形性をもたらし得る。遺伝子の変異はサイレント(コード化されたポリペプチドが変化しない)であり得、改変されたアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードしてもよい。ポリペプチドの対立遺伝子変異体は、遺伝子の対立遺伝子変異体によってコード化されたポリペプチドである。
α-アミラーゼ:用語「α-アミラーゼ」は、用語「α-アミラーゼ活性を有するポリペプチド」と同義である。「α-アミラーゼ活性」は、デンプン並びに他の直鎖状及び分岐状1,4-グルコシドオリゴ糖及び多糖類の加水分解を触媒する酵素の一群を構成するα-1,4-グルカン-4-グルカノヒドロラーゼ(E.C.3.2.1.1)の活性を意味する。したがって、本明細書で使用される場合、用語「α-アミラーゼ」は、デンプン及びグリコーゲンなど大きなα結合多糖類のα結合を加水分解して、グルコース及びマルトースをもたらす、α-アミラーゼ活性(酵素クラス、EC3.2.1.1)を有する酵素を指す。用語「α-アミラーゼ」及び「アミラーゼ」は、本明細書において互換的に使用され、同じ意味及び目的を構成し得る。本発明の目的では、α-アミラーゼ活性は、下記の小見出し「方法」に記載の手順に従って決定される。一態様では、本発明のα-アミラーゼは、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14のポリペプチドのアミノ酸配列に対して、少なくとも20%、例えば、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも95%、又は少なくとも100%の配列同一性を有する。
アミノ酸:本明細書で使用される用語「アミノ酸」は、標準的な20個の遺伝的にコードされたアミノ酸、及び「d」形態の(天然の「l」形態と比較した場合)それらの対応する立体異性体、オメガアミノ酸、他の天然に生じるアミノ酸、非従来型アミノ酸(例えば、α,α-二置換アミノ酸、N-アルキルアミノ酸など)、及び化学的に誘導体化されたアミノ酸を含む。1つ以上のアミノ酸の化学誘導体は、官能性側基との反応によって獲得され得る。このような誘導体化された分子としては、例えば、遊離アミノ基が誘導体化されて、アミン塩酸塩、p-トルエンスルホニル基、カルボキシベンゾキシ基、t-ブチルオキシカルボニル基、クロロアセチル基、又はホルミル基を形成する分子が挙げられる。遊離カルボキシル基は、塩、メチル及びエチルエステル、又は他の種類のエステル及びヒドラジドを形成するために誘導体化されてもよい。遊離ヒドロキシル基は、O-アシル又はO-アルキル誘導体を形成するために誘導体化されてもよい。また、化学誘導体としては、20個の標準アミノ酸の天然に生じるアミノ酸誘導体を含有するペプチドも含まれる。例えば、4-ヒドロキシプロリンが、プロリンの代わりに使用されてもよく、5-ヒドロキシリジンが、リジンの代わりに使用されてもよく、3-メチルヒスチジンが、ヒスチジンの代わりに使用されてもよく、ホモセリンが、セリンの代わりに使用されてもよく、オルニチンが、リジンの代わりに使用されてもよい。誘導体はまた、必要な活性が維持される限り、1つ以上の付加又は欠失を含有するペプチドも含む。他の含まれる修飾は、アミド化、アミノ末端アシル化(例えば、アセチル化又はチオグリコール酸アミド化)、末端カルボキシルアミド化(例えば、アンモニア又はメチルアミンによる)などの末端修飾である。
「アラニン」又は「Ala」又は「A」などのようにアミノ酸が具体的に列挙されている場合、他のものが明示されていない限り、その用語は、l-アラニン及びd-アラニンの両方を指す。他の非従来型アミノ酸はまた、所望の機能特性がポリペプチドによって保持される限り、本発明のポリペプチドに好適な構成成分であってもよい。示されるペプチドについて、各コードされたアミノ酸残基は、適切な場合、従来のアミノ酸の慣用名に対応する単一の文字表記によって表される。一実施形態では、本発明のポリペプチドは、l-アミノ酸を含むか、又はそれからなる。
触媒ドメイン:用語「触媒ドメイン」は、酵素の触媒機構を含有する酵素の領域を意味する。
cDNA:用語「cDNA」は、真核細胞から得られる成熟したスプライシングされたmRNA分子からの逆転写によって調製できるDNA分子を意味する。cDNAは、対応するゲノムDNA中に存在し得るイントロン配列を欠く。初期の一次RNA転写物は、スプライシングされた成熟mRNAとして現れる前に、スプライシングを含む一連のプロセシングをとおして加工されるmRNAの前駆体である。
コード配列:用語「コード配列」は、ポリヌクレオチドであって、その変異体のアミノ酸配列を直接特定するポリヌクレオチドを意味する。コード配列の境界は、一般にオープンリーディングフレームで決定され、通常、ATG、GTG、及びTTGなどの開始コドンで開始し、TAA、TAG、及びTGAなどの終止コドンで終了する。コード配列は、DNA、cDNA、合成、又は組換えポリヌクレオチドであり得る。
制御配列:用語「制御配列」は、本発明の変異体をコードしているポリヌクレオチドの発現に必要な核酸配列を意味する。各制御配列は、変異体をコードしているポリヌクレオチドに対してネイティブ(すなわち、同じ遺伝子に由来する)であっても外来(すなわち、異なる遺伝子に由来する)であってもよく、又は互いに対してネイティブであっても外来であってもよい。このような制御配列としては、リーダー、ポリアデニル化配列、プロペプチド配列、プロモータ、シグナルペプチド配列、及び転写ターミネータが挙げられるが、これらに限定されない。制御配列は、最低限、プロモータと、転写及び翻訳終止シグナルとを含む。制御配列は、制御配列と変異体をコードしているポリヌクレオチドのコード領域とのライゲーションを促進する特異的制限酵素部位を導入する目的のためのリンカーを備えていてもよい。
対応する:本明細書で使用される用語「対応する」は、配列の特定のアミノ酸を決定する方法を指し、特定のアミノ酸配列に対する参照がなされる。例えば、本発明の目的のために、特定のアミノ酸の位置への参照がなされるとき、当業者は、別のアミノ酸配列を、参照がなされた当該アミノ酸配列にアラインメントすることができ、これにより、どの特定のアミノ酸が当該別のアミノ酸配列において関心対象であり得るかを決定することができるであろう。別のアミノ酸配列の、例えば、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に記載される配列との、又は本明細書に列挙される任意の他の配列とのアラインメントは、本明細書の他の箇所に記載されている。代替的なアラインメント方法が使用され得、当業者には周知である。
食器洗浄組成物:本明細書で使用される用語「食器洗浄組成物」は、食器を洗浄するための組成物の全ての形態を指す。食器洗浄組成物は、液体食器洗浄組成物、粉末食器洗浄組成物であり、任意選択的に、組成物は単位用量の形態である。単位用量食器洗浄組成物は、複数の区画を含み得、複数の区画は、粉末、液体、又はそれらの組み合わせを含む。好ましい実施形態では、少なくとも1つの区画は液体を含み、少なくとも1つの区画は粉末を含む。
酵素洗剤効果:本明細書で使用される用語「酵素洗剤効果」は、酵素を含まない同じ洗剤と比較して、酵素が洗剤に追加し得る有利な効果を指す。酵素によって提供され得る重要な洗剤効果は、洗濯及び/又は洗浄後に可視的な汚れを全く又はほとんど伴わない染み除去、洗濯プロセス中に放出される汚れの再付着の予防又は低減(再付着防止とも呼ばれる効果)、元々白色であったが、繰り返し使用及び洗浄した結果、灰色又は黄味がかった外観を得た織物の白色度を完全に又は部分的に回復させること(ホワイトニングとも呼ばれる効果)である。汚れの再付着の触媒的染み除去又は防止に直接関係しない織物ケア効果も、酵素洗剤効果にとって重要であり得る。このような織物ケア効果の例としては、1つの布地から別の布地への、又は同じ布地の別の部分への移染の防止又は低減(移染防止又は裏汚れ防止とも呼ばれる効果)、ピリング傾向を減少させるか、又は既に存在する毛玉若しくは毛羽立ちを除去するための布地表面からの突出繊維又は破断繊維の除去(抗ピリングとも呼ばれる効果)、布地の柔軟性の改善、布地の色の澄明化、及び布地又は衣類の繊維に捕捉された粒子状汚れの除去、が挙げられる。酵素漂白は、更なる酵素洗剤効果であり、この触媒活性は、過酸化水素又は他の過酸化物などの漂白成分の形成を触媒するために一般的に使用される。
発現:用語「発現」は、転写、転写後修飾、翻訳、翻訳後修飾、及び分泌が挙げられるがこれらに限定されない、変異体の産生に含まれる任意の工程を含む。
発現ベクター:用語「発現ベクター」は、変異体をコードしているポリヌクレオチドを含む直鎖状又は環状のDNA分子を意味し、それを発現させる追加のヌクレオチドに操作可能に連結している。
フラグメント:本明細書で使用される用語「フラグメント」は、親α-アミラーゼの成熟ポリペプチドのアミノ末端及び/又はカルボキシル末端に存在しない1つ以上の(例えば、いくつかの)アミノ酸、例えば、配列番号1~14のいずれかなど本明細書に開示される親配列のうちのいずれか1つを有するポリペプチドを意味する。ここで、フラグメントは、α-アミラーゼ活性を有する。一態様では、フラグメントは、配列番号1~14のいずれかの少なくとも200個の連続するアミノ酸残基、例えば、配列番号1~14のうちのいずれかの少なくとも300個の連続するアミノ酸残基、又は少なくとも350個の連続するアミノ酸残基、又は少なくとも400個の連続するアミノ酸残基、又は少なくとも450個の連続するアミノ酸残基を含有する。
融合ポリペプチド:本明細書で使用される用語「融合ポリペプチド」は、2つ、3つ、又は4つの種など、2つ以上の種に由来するアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。そのような融合ポリペプチドは、当業者に周知の分子技術によって生成され得る。本発明の融合ポリペプチドは、α-アミラーゼ活性を有する。特に、本発明の融合ポリペプチドは、例えば、あるα-アミラーゼのAドメイン及びCドメインと、別のα-アミラーゼ由来のBドメインと、を含む。ハイブリッドポリペプチド(又は「ハイブリッド」)、及び融合ポリペプチドは、互換的に使用され得、同じ意味及び目的を構成する。
硬質表面洗浄:本明細書で使用される用語「硬質表面洗浄」は、床、屋根、車、台所、又は浴室の表面の洗浄、並びに食器洗浄(dish cleaning)(食器洗浄(dish-washing))など任意の硬質表面の洗浄を指す。
異種ポリヌクレオチド:用語「異種ポリヌクレオチド」は、本明細書において宿主細胞に対してネイティブではないポリヌクレオチド、コード領域に対して構造修飾がなされた天然ポリヌクレオチド、組換えDNA法、例えば、異なる(外来)プロモータによるDNAの操作の結果として、発現が定量的に変化する天然ポリヌクレオチド、又は発現を定量的に変化させるために、ポリヌクレオチドの1つ以上の余剰コピーを有する宿主細胞中の天然ポリヌクレオチドとして定義される。「異種遺伝子」は、異種ポリヌクレオチドを含む遺伝子である。
異種:用語「異種」は、宿主細胞に関して、ポリペプチド又は核酸が宿主細胞に天然に存在しないことを意味する。用語「異種」は、ポリペプチド又は核酸に関して、制御配列を意味する。例えば、ポリペプチド又は核酸のプロモータ又はドメインは、ポリペプチド又は核酸には天然に関連付けられない。すなわち、制御配列は、変異体をコードする遺伝子以外の遺伝子に由来する。
高いストリンジェンシー条件:用語「高いストリンジェンシー条件」は、長さが少なくとも100ヌクレオチドのプローブに関して、標準的なサザンブロッティング手順に従って12~24時間、5X SSPE、0.3%SDS、200マイクログラム/mLの剪断及び変性されたサケ精子DNA、並びに50%ホルムアミドにおける42℃でのプレハイブリダイゼーション及びハイブリダイゼーションを意味する。最後に、2×SSC、65℃の0.2% SDSを使用して、担体材料をそれぞれ15分間3回洗浄する。
宿主細胞:用語「宿主細胞」とは、本明細書に記載のポリヌクレオチドを含む核酸コンストラクト又は発現ベクターを用いて、形質転換、トランスフェクション、形質導入などをしやすい任意の細胞型を意味する。用語「宿主細胞」は、複製中に生じた変異に起因する、親細胞とは同一ではない親細胞の任意の後代を包含する。
ハイブリダイゼーション:用語「ハイブリダイゼーション」は、標準的なサザンブロッティング手順を使用して、核酸の実質的に相補的な鎖の対合を意味する。ハイブリダイゼーションは、中程度、中高度、高い、又は非常に高いストリンジェンシー条件下で行われ得る。中程度のストリンジェンシー条件は、5X SSPE、0.3%SDS、200マイクログラム/mLの剪断及び変性されたサケ精子DNA、並びに35%ホルムアミドにおける42℃での12~24時間のプレハイブリダイゼーション及びハイブリダイゼーション、続いて、55℃の0.2×SSC、0.2%SDSを使用してそれぞれ15分間、3回洗浄することを意味する。中高度のストリンジェンシー条件は、5X SSPE、0.3%SDS、200マイクログラム/mLの剪断及び変性されたサケ精子DNA、並びに35%ホルムアミドにおける42℃での12~24時間のプレハイブリダイゼーション及びハイブリダイゼーション、続いて、60℃で0.2×SSC、0.2%SDSを使用してそれぞれ15分間、3回洗浄することを意味する。高いストリンジェンシー条件は、5X SSPE、0.3%SDS、200マイクログラム/mLの剪断及び変性されたサケ精子DNA、並びに50%ホルムアミドにおける42℃での12~24時間のプレハイブリダイゼーション及びハイブリダイゼーション、続いて、65℃の0.2×SSC、0.2%SDSを使用してそれぞれ15分間、3回洗浄することを意味する。非常に高いストリンジェンシー条件は、5X SSPE、0.3%SDS、200マイクログラム/mLの剪断及び変性されたサケ精子DNA、並びに50%ホルムアミドにおける42℃での12~24時間のプレハイブリダイゼーション及びハイブリダイゼーション、続いて、70℃の0.2×SSC、0.2%SDSを使用してそれぞれ15分間、3回洗浄することを意味する。改善された特性:本明細書における用語「改善された特性」は、親α-アミラーゼと比較して改善された変異体に関連する特徴として定義される。そのような改善された特性としては、限定されるものではないが、デンプン分解活性の増加、触媒効率の向上、触媒速度の向上、化学安定性の増大、酸化安定性の増大、pH活性の増加、pH安定性の増大、比活性の増加、基質結合の増加、基質の切断の増加、基質特異性の増加、基質安定性の増加、表面特性の向上、熱活性の増加、熱安定性の向上、汚れ除去性能など洗浄性能の向上が挙げられ、例えば、デンプン含有汚れに対する性能、染み除去、灰色化防止、安定性(例えば熱安定性、pH安定性、又はビルダー(キレート剤を含む)の存在下での安定性、粉末、液体、若しくはゲル状洗剤配合物若しくは食器洗浄組成物中での安定性)、改変された温度依存性性能及び活性プロファイル、pH活性、基質特異性、製品特異性、及び化学的安定性である。
改善された洗浄性能:用語「改善された洗浄性能」は、本明細書において、例えば、染み除去の増大による、親アミラーゼの洗浄性能に対する、又は配列番号1、配列番号2、若しくは配列番号3のいずれかのアミラーゼに対する、アミラーゼの洗浄性能の改善を示すものとして定義される。改善された洗浄性能は、いわゆる強度値を比較することによって測定され得る。好ましくは、改善された洗浄性能は、実施例に従って決定される。実施例に列挙される1つ以上の条件において、改善係数(IF)が1.0を超える、好ましくは1.05を超える場合、洗浄性能は改善される。洗浄条件は、実施例セクションに記載される。用語「洗浄性能」は、一般的に、例えば、食器洗浄時の硬質表面洗浄の洗浄を含むが、洗濯などの織物上での洗浄性能、並びに工業的及び業務的洗浄も含む。改善された洗浄性能は、本明細書の定義に記載のデルタ強度を比較することによって測定することができる。
単離された:用語「単離された」は、自然に発生しない形態又は環境中の物質を意味する。単離された物質の非限定的な例としては、(1)天然に発生しない任意の物質、(2)天然に関連付けられる自然発生の構成成分の1つ以上若しくは全てから少なくとも部分的に除去された、任意の酵素、変異体、核酸、タンパク質、ペプチド、若しくは補因子を含むが、これらに限定されない任意の物質、(3)天然に見出される物質に対して、人為的に修飾された任意の物質、又は(4)天然に関連付けられる他の成分に対して、物質の量を増加させることによって(例えば、物質をコードする遺伝子の複数のコピー;物質をコードしている遺伝子に天然に関連付けられるプロモータよりも強力なプロモータの使用)修飾された任意の物質、を含む。単離された物質は、発酵ブロス試料中に存在してもよい。一態様では、本発明は、単離されたα-アミラーゼ変異体に関する。
強度値:洗浄性能は、白色光で照射されるときに、試料から反射される光の強度として表される輝度として測定される。試料が染色されると、反射光の強度は、きれいな試料の反射光の強度よりも低い。したがって、反射光の強度を使用して洗浄性能を測定することができ、より高い強度値は、より高い洗浄性能と相関する。洗浄した織物の画像を捕捉するために使用する、専門のフラットベッドスキャナー(Kodak iQsmart,Kodak)を用いて色測定を行う。スキャンした画像から光強度の値を抽出するために、画像からの24ビットピクセル値を、レッド、グリーン及びブルー(RGB)の値に変換する。RGB値を1次元配列として合計し、その後、結果として生じる1次元配列の長さを算出して、強度値(Int)を計算する:
Figure 2023507365000001
低温:「低温」は、好ましくは、5~40℃、若しくは5~35℃、若しくは5~30℃、又は更には5~25℃、若しくは5~20℃、若しくは5~15℃、若しくは5~10℃の温度である。好ましい「低温」は、10~35℃、好ましくは10~30℃、又は10~25℃、又は10~20℃、又は10~15℃の温度であり得る。
成熟ポリペプチド:用語「成熟ポリペプチド」は、翻訳後、及び任意の翻訳後修飾後、例えば、N末端プロセシング、C末端切断、グリコシル化、リン酸化後の最終形態のポリペプチドを意味する。当該技術分野において、宿主細胞は、同じポリヌクレオチドによって発現される2つ以上の異なる成熟ポリペプチド(すなわち、異なるC末端及び/又はN末端アミノ酸を伴う)の混合物を生成し得ることが、当該技術分野において既知である。
成熟ポリペプチドコード配列:用語「成熟ポリペプチドコード配列」は、αーアミラーゼ活性を有する成熟ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドを意味する。
中程度のストリンジェンシー条件:用語「中程度のストリンジェンシー条件」は、長さが少なくとも100ヌクレオチドのプローブに関して、標準的なサザンブロッティング手順に従って12~24時間、5X SSPE、0.3%SDS、200マイクログラム/mlの剪断及び変性されたサケ精子DNA、並びに35%ホルムアミドにおける42℃でのプレハイブリダイゼーション及びハイブリダイゼーションを意味する。最後に、2× SSC、55℃の0.2% SDSを使用して、担体材料をそれぞれ15分間3回洗浄する。
中高度のストリンジェンシー条件:用語「中高度のストリンジェンシー条件」は、長さが少なくとも100ヌクレオチドのプローブに関して、標準的なサザンブロッティング手順に従って12~24時間、5X SSPE、0.3%SDS、200マイクログラム/mlの剪断及び変性されたサケ精子DNA、並びに35%ホルムアミドにおける42℃でのプレハイブリダイゼーション及びハイブリダイゼーションを意味する。最後に、2×SSC、60℃の0.2% SDSを使用して、担体材料をそれぞれ15分間3回洗浄する。
修飾:本発明のポリペプチドの文脈において、用語「修飾」は、参照アミノ酸配列(例えば、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14)内の1つ以上のアミノ酸が、別のアミノ酸での置換によって、アミノ酸の挿入によって、又は欠失によって、好ましくは少なくとも1つの欠失によって、改変されることを意味する。用語「修飾」、「改変」、及び「変異」は、互換的に使用され、同じ意味及び目的を構成し得る。
突然変異体:用語「突然変異体」は、変異体をコードするポリヌクレオチドを意味する。
ナイーブ:用語「ナイーブ」は、宿主細胞中に天然に存在する核酸又はポリペプチドを意味する。
核酸コンストラクト:用語「核酸コンストラクト」は、天然に存在する遺伝子から単離されたか若しくは修飾しなければ自然界には存在しない様式で核酸のセグメントを含有するように修飾された、又は合成である、1つ以上の制御配列を含有する、一本鎖又は二本鎖のいずれかである核酸分子を意味する。核酸コンストラクトという用語は、核酸コンストラクトが本発明のコード配列の発現に必要な制御配列を含有する場合、用語「表現カセット」と同義である。
操作可能に連結される:用語「操作可能に連結される」は、制御配列がコード配列の発現を指示するように、ポリヌクレオチドのコード配列に対して適切な位置に制御配列が配置される構成を意味する。
親又は親α-アミラーゼ:本明細書で使用される用語「親」又は「親α-アミラーゼ」は、本発明の変異体α-アミラーゼを産生するために修飾がなされるα-アミラーゼを意味する。この用語はまた、本発明の変異体が比較されるポリペプチドを指す。親は、好ましくは天然に存在する(野生型)ポリペプチド、又は任意の好適な手段によって調製された、そのハイブリッドポリペプチドである。親は、更には、野生型ポリペプチドの変異体、又は任意の好適な手段によって調製されたハイブリッドポリペプチドの変異体であり得る。例えば、親タンパク質は、アミノ酸配列において修飾又は改変された自然発生ポリペプチドの変異体であってもよい。したがって、この親α-アミラーゼは、1つ以上の(又は1つ若しくは複数の)アミノ酸置換、欠失及び/又は挿入を有し得る。したがって、この親α-アミラーゼは、天然に存在する親α-アミラーゼの変異体であり得る。親はまた、同じ染色体遺伝子座を占める遺伝子の2つ以上の代替形態のいずれかによりコードされるポリペプチドである対立遺伝子変異体であってもよい。本明細書で使用される好ましい「親」又は「親α-アミラーゼ」は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、及び14のα-アミラーゼから選択される。好適な親は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、及び14のポリペプチドのいずれかに対して少なくとも60%の配列同一性を有する、任意のα-アミラーゼであり得る。親α-アミラーゼはまた、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13又は14のいずれかのフラグメントを含むポリペプチドであり得る。親は、細菌又は真菌α-アミラーゼ、好ましくは細菌α-アミラーゼであり得る。配列番号1、2、又は3を有するアミラーゼは、例えば、本発明に必須の親又はハイブリッドポリペプチドであり得る。
精製された:用語「精製された」は、当技術分野で周知の分析技術によって測定される他の成分を実質的に含まない核酸又はポリペプチドを意味する(例えば、精製されたポリペプチド又は核酸は、電気泳動ゲル、クロマトグラフィー溶出液、及び/又は密度勾配遠心分離に供される媒体に個別のバンドを形成し得る)。精製された核酸又はポリペプチドは、純度が少なくとも約50%、通常は少なくとも約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%、約99.5%、約99.6%、約99.7%、約99.8%以上である(例えば、モルベースの重量パーセント)。関連する意味では、精製又は濃縮技術の適用後に分子の濃度が著しく増加する場合、組成物は分子に対して濃縮される。用語「濃縮された」は、出発組成物よりも高い相対濃度又は絶対濃度で組成物中に存在する化合物、ポリペプチド、細胞、核酸、アミノ酸、又は他の特定の物質若しくは成分を指す。
組換え:細胞、核酸、タンパク質、又はベクターに関して使用される場合、用語「組換え」は、その天然の状態から修飾されていることを意味する。したがって、例えば、組換え細胞は、ネイティブ(非組換え)形態の細胞内に見られない遺伝子を発現するか、又は天然に見られるのとは異なるレベルで、又は異なる条件下でネイティブ遺伝子を発現する。組換え核酸は、1つ以上のヌクレオチドによってネイティブ配列とは異なり、及び/又は異種配列に、例えば、発現ベクター中の異種プロモータに操作可能に連結されている。組換えタンパク質は、1つ以上のアミノ酸によって天然配列とは異なり得、及び/又は異種配列と融合し得る。ポリペプチドをコードする核酸を含むベクターは、組換えベクターである。用語「組換え」は、「遺伝的に修飾された」及び「遺伝子組換え」と同義である。
配列同一性:2つのアミノ酸配列間、又は2つのヌクレオチド配列間の関連性は、パラメータ「配列同一性」によって表される。
本発明の目的では、2つのアミノ酸配列間の配列同一性は、EMBOSSパッケージ(EMBOSS:The European Molecular Biology Open Software Suite,Rice et al.,2000,Trends Genet.16:276-277)のNeedleプログラムにおいて実施されるようなNeedleman-Wunschアルゴリズム(Needleman and Wunsch,1970,J.Mol.Biol.48:443-453)、好ましくはバージョン5.0.0以降を用いて求められる。用いられるパラメータは、ギャップ開始ペナルティが10、ギャップ伸長ペナルティが0.5、及びEBLOSUM62(BLOSUM62のEMBOSSバージョン)置換マトリックスであり得る。「最長同一性(longest identity)」と表示されたNeedleの出力(-nobriefオプションを用いて得られる)を同一率として用い、これは以下のように計算される。
(同一残基×100)/(アラインメントの長さ-アラインメント中のギャップの総数)
本発明の目的では、2つのデオキシリボヌクレオチド配列間の配列同一性は、EMBOSSパッケージ(EMBOSS:The European Molecular Biology Open Software Suite,Riceら、2000、上記参照)のNeedleプログラムにおいて実施されるようなNeedleman-Wunschアルゴリズ(Needleman and Wunsch,1970、上記参照)、好ましくはバージョン5.0.0又はそれ以降を用いて決定される。用いられるパラメータは、ギャップ開始ペナルティが10、ギャップ伸長ペナルティが0.5、及びEDNAFULL(EMBOSSバージョンNCBI NUC4.4)置換マトリックスである。「最長同一性(longest identity)」と表示されたNeedleの出力(-nobriefオプションを用いて得られる)を同一率として用い、これは以下のように計算される。
(同一 デオキシリボヌクレオチド×100)/(アラインメントの長さ-アラインメント中のギャップの総数)
シグナルペプチド:用語「シグナルペプチド」は、本明細書において、生物学的活性を有するポリペプチドのアミノ末端にフレーム単位で連結(融合)され、ポリペプチドを細胞の分泌経路に向かわせるペプチドとして定義される。シグナル配列は、当該技術分野で既知の技術を使用して決定され得る(例えば、Zhang and Henzel,2004,Protein Science 13:2819-2824を参照)。
デンプン結合ドメイン:用語「デンプン結合ドメイン(starch binding domain、SBD)又は炭水化物結合モジュール(carbohydrate binding module、CBM)」は、本明細書において互換的に使用される。SBDは、9つのCBMファミリーに分割され得る。エネルギー源として、デンプンは多数の様々なデンプン分解酵素によって分解される。しかしながら、それらの約10パーセントのみが、生デンプンの結合及び分解を行うことができる。これらの酵素は通常、デンプン顆粒への付着を媒介するデンプン結合ドメインと呼ばれる別個の配列構造モジュールを有する。SBDは、デンプン(多糖類)基質又はマルトサッカリド、α-シクロデキストリン、β-シクロデキストリン、及びγ-シクロデキストリンなどに優先的に結合するアミノ酸配列を指す。これらは通常、約10パーセントの微生物デンプン分解酵素に見られる約100個のアミノ酸残基のモチーフである。
サブシークエンス:用語「サブシークエンス」は、成熟ポリペプチドコード配列の5’-及び/又は3’-末端から欠失した1つ以上の(例えば、数個の)ヌクレオチドを有するポリヌクレオチドを意味し、ここで、サブシークエンスは、α-アミラーゼ活性を有するフラグメントをコードする。
織物ケア効果:本明細書で使用される用語「織物ケア効果」は、触媒的染み除去又は汚れの再付着の防止に直接関係しないものとして定義され、酵素洗剤効果にとっても重要である。このような織物ケア効果の例としては、ある織物から別の織物への、又は同じ織物の別の部分への移染の防止又は低減(移染防止)、ピリング傾向を減少させるか、又は既に存在する毛玉若しくは毛羽立ちを除去するための織物表面からの突出繊維又は破断繊維の除去(抗ピリング)、織物の柔軟性の改善、織物の色の澄明化、及び織物の繊維に捕捉された粒子状汚れの除去である。酵素漂白は、更なる酵素洗剤効果であり、この触媒活性は、過酸化水素又は他の過酸化物又は他の漂白物質などの漂白成分の形成を触媒するために一般的に使用される。
変異体:本明細書で使用される用語「変異体」は、1つ以上の(例えば、いくつかの)位置において修飾、すなわち、置換、挿入、及び/又は欠失を含む、α-アミラーゼ活性を有するポリペプチドを意味する。置換は、ある位置を占有するアミノ酸を異なるアミノ酸で置き換えることを意味し、欠失は、ある位置を占有するアミノ酸の除去を意味し、挿入は、ある位置を占有するアミノ酸に隣接させ、その直後にアミノ酸を付加することを意味する。変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14のポリペプチドの1つ以上のα-アミラーゼ活性の少なくとも20%、例えば、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも95%、又は少なくとも100%を有する。
非常に高いストリンジェンシー条件:用語「非常に高いストリンジェンシー条件」は、長さが少なくとも100ヌクレオチドのプローブに関して、標準的なサザンブロッティング手順に従って12~24時間、5X SSPE、0.3%SDS、200マイクログラム/mLの剪断及び変性されたサケ精子DNA、並びに50%ホルムアミドにおける42℃でのプレハイブリダイゼーション及びハイブリダイゼーションを意味する。最後に、2×SSC、70℃の0.2% SDSを使用して、担体材料をそれぞれ15分間3回洗浄する。
非常に低いストリンジェンシー条件:用語「非常に低いストリンジェンシー条件」は、長さが少なくとも100ヌクレオチドのプローブに関して、標準的なサザンブロッティング手順に従って12~24時間、5X SSPE、0.3%SDS、200マイクログラム/mlの剪断及び変性されたサケ精子DNA、並びに25%ホルムアミドにおける42℃でのプレハイブリダイゼーション及びハイブリダイゼーションを意味する。最後に、2×SSC、45℃の0.2% SDSを使用して、担体材料をそれぞれ15分間3回洗浄する。
洗浄性能:本文脈では、用語「洗浄性能」は、例えば、洗濯又は食器洗浄など硬質表面の洗浄中に洗浄される、対象物上に存在するデンプン又はデンプン含有の汚れを除去する酵素の能力として使用される。用語「洗浄性能」は、一般的に、例えば、食器洗浄時の硬質表面洗浄の洗浄を含むが、洗濯などの織物上での洗浄性能、並びに工業的及び業務的洗浄も含む。洗浄性能は、いわゆる強度値を計算することによって定量化され得る。
野生型酵素:「野生型」α-アミラーゼという用語は、自然界に見られる細菌、酵母菌又は糸状菌などの自然発生微生物によって発現されるα-アミラーゼを意味する。用語「野生型酵素」及び「親酵素」は、親酵素が変異体酵素ではない場合、互換的に使用され得る。
命名法
本発明の目的上、命名法[Y/F]は、この位置におけるアミノ酸がチロシン(Try、Y)又はフェニルアラニン(Phe、F)であり得ることを意味する。同様に、命名法[V/G/A/I]は、この位置におけるアミノ酸がバリン(Val、V)、グリシン(Gly、G)、アラニン(Ala、A)、又はイソロイシン(Ile、I)であり得ることを意味し、本明細書に記載の他の組み合わせについても同様である。アミノ酸Xは、特に明示されない限り、20種の天然アミノ酸のいずれかであり得ると定義される。
変異体指定の取り決め
本発明の目的では、配列番号1に開示されるポリペプチドは、特に明示されない限り、別のα-アミラーゼ中の対応するアミノ酸残基を決定するのに使用される。あるいは、配列番号2又は配列番号3に開示されるポリペプチドが、別のα-アミラーゼ中の対応するアミノ酸残基を決定するのに使用される。別のα-アミラーゼのアミノ酸配列を配列番号1に開示されているポリペプチドとアラインメントし、そのアラインメントに基づいて、配列番号2又は配列番号3に開示されているポリペプチド中の任意のアミノ酸残基に対応するアミノ酸位置番号を、EMBOSSパッケージ(EMBOSS:The European Molecular Biology Open Software Suite,Rice et al.,2000,Trends Genet.16:276-277)の好ましくはバージョン3.0.0以上のNeedleプログラムにおいて実施される、Needleman-Wunschアルゴリズム(Needleman and Wunsch,1970,J.Mol.Biol.48:443-453)を使用して決定する。
別のα-アミラーゼにおける対応するアミノ酸残基の同定は、限定するものではないが、MUSCLE(log予測による多重配列比較;バージョン3.5以上;Edgar,2004,Nucleic Acids Research 32:1792-1797)、MAFFT(バージョン6.857以上;Katoh and Kuma,2002,Nucleic Acids Research 30:3059-3066、Katoh et al.,2005,Nucleic Acids Research 33:511-518、Katoh and Toh,2007,Bioinformatics 23:372-374、Katoh et al.,2009,Methods in Molecular Biology 537:39-64;Katoh and Toh,2010,Bioinformatics 26:1899-1900)、及びEMBOSS EMMA employing ClustalW(1.83以上;Thompson et al.,1994,Nucleic Acids Research 22:4673-4680)を使用するEMBOSS EMMA、を含むいくつかのコンピュータプログラムを使用して、複数のポリペプチド配列をアラインメントすることにより、決定することができる。
他の酵素が配列番号1のポリペプチドから分岐しており、その結果、従来の配列に基づく比較がこれらの関係を検出できないとき(Lindahl and Elofsson,2000,J.Mol.Biol.295:613-615)、他のペアワイズ配列比較アルゴリズムを使用してもよい。データベースを検索するためにポリペプチドファミリーの確率的表現(プロファイル)を利用するサーチプログラムを使用して、配列に基づく検索においてより大きな感度を得ることができる。例えば、PSI-BLASTプログラムは、反復データベース検索プロセスをとおしてプロファイルを作成し、遠縁ホモログを検出することができる(Atschul et al.,1997,Nucleic Acids Res.25:3389-3402を参照)によって行うことができる。
ポリペプチドのファミリー又はスーパーファミリーが、タンパク質構造データベースにおいて1つ以上の表現を有する場合、更に大きな感度を得ることができる。GenTHREADER(Jones,1999,J.Mol.Biol.287:797-815; McGuffin and Jones,2003,Bioinformatics 19:874-881)などのプログラムは、クエリー配列の構造的折り畳みを予測するニューラルネットワークへのインプットとして、様々な情報源(PSI-BLAST、二次構造予測、構造的アラインメントプロファイル、及び溶媒和物電位)からの情報を利用する。同様に、Gough et al.,2000,J.Mol.Biol.313:903-919の方法を使用して、未知の構造の配列を、SCOPデータベース中に存在するスーパーファミリーのモデルとアラインメントすることができる。次に、これらアラインメントを、ポリペプチドのホモロジーモデルを作成するために使用することができ、その目的のために開発された様々なツールを使用して、このようなモデルを精度について評価することができる。
既知の構造のタンパク質については、構造的アラインメントを検索し、作成するために、いくつかのツール及び情報源を利用可能である。例えば、タンパク質のSCOPスーパーファミリーは、構造的にアラインメントされており、これらのアラインメントは、アクセス可能であり、ダウンロード可能である。ディスタンスアラインメントマトリックス(Holm and Sander,1998,Proteins 33:88-96)又はコンビナトリアルエクステンション(Shindyalov and Bourne,1998,Protein Engineering 11:739-747)などの様々なアルゴリズムを使用して2つ以上のタンパク質構造体をアラインメントすることができ、これらアルゴリズムの実行は、更に、可能性のある構造的ホモログを見つけるために、対象構造について構造データベースにクエリーを行うために利用することができる(例えば、Holm and Park,2000,Bioinformatics 16:566-567)。
変異体の記載においては、参照し易くするために下記命名法を適応する。一般に認められているIUPACの1文字又は3文字アミノ酸略記を用いる。
置換:アミノ酸置換については、以下の命名法:オリジナルのアミノ酸、位置、置換されたアミノ酸を使用する。したがって、位置226におけるスレオニンのアラニンでの置換は、「Thr226Ala」又は「T226A」と表される。所与の位置のアミノ酸が任意の他のアミノ酸に置換され得る状況では、T226ACDEFGHIKLMNPQRSWVYと表記される。したがって、これは、位置226のスレオニンが、A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、W、V、又はYの群から選択される1つのアミノ酸で置換され得ることを意味する。同様に、所与の位置のアミノ酸が特定の群のアミノ酸から選択される1つのアミノ酸で置換され得る、例えば、位置226のスレオニンが、チロシン、フェニルアラニン、又はヒスチジンのいずれかで置換され得る状況では、T226YFHと表記される。所与の位置における異なる改変は、コンマにより区切られ得、例えば、「Arg170Tyr,Glu」又は「R170Y,E」は、位置170におけるアルギニンのチロシン又はグルタミン酸での置換を表す。したがって、「Tyr167Gly,Ala+Arg170Gly,Ala」は、変異体「Tyr167Gly+Arg170Gly」、「Tyr167Gly+Arg170Ala」、「Tyr167Ala+Arg170Gly」、及び「Tyr167Ala+Arg170Ala」を表す。
複数の突然変異は、マーク(「+」)を付加することによって区切られ、例えば、「Gly205Arg+Ser411Phe」若しくは「G205R+S411F」は、位置205及び411において、それぞれ、グリシン(G)をアルギン(R)で、及びセリン(S)をフェニルアラニン(F)で置換することを表す。
欠失。アミノ酸欠失に関しては、次の命名法、すなわち、元のアミノ酸、位置、アルタリスク(*)が使用される。したがって、位置195におけるグリシンの欠失は、「Gly195*」又は「G195*」と表記される。複数の欠失は、加法記号(「+」)によって区切られ、例えば、「Gly195*+Ser411*」又は「G195*+S411*」である。
挿入。アミノ酸挿入に関しては、次の命名法、すなわち、元のアミノ酸、位置、元のアミノ酸、挿入されたアミノ酸、が使用される。したがって、位置195のグリシンの後のリジンの挿入は、「Gly195GlyLys」又は「G195GK」と表記される。複数のアミノ酸の挿入は、[元のアミノ酸、位置、元のアミノ酸、挿入されたアミノ酸#1、挿入されたアミノ酸#2;など]と表される。例えば、位置195におけるグリシンの後のリジン及びアラニンの挿入は、「Gly195GlyLysAla」又は「G195GKA」と表される。
このような場合、挿入されるアミノ酸残基は、挿入されるアミノ酸残基に先行するアミノ酸残基の位置番号に小文字を付加することによって付番される。上記の例では、配列は、次のようになり得る。
Figure 2023507365000002
複数の改変。複数の改変を含む変異体は、加法記号(「+」)を付加することにより区切られ、例えば、「Arg170Tyr+Gly195Glu」又は「R170Y+G195E」は、それぞれ、位置170及び195におけるアルギニン及びグリシンのチロシン及びグルタミン酸での置換を表す。
発明の詳細な説明
本発明は、
(a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する1つ以上の位置において修飾を含む、親α-アミラーゼのα-アミラーゼ変異体であって、当該変異体は、親ポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する、α-アミラーゼ変異体と、
洗浄補助剤と、を含む洗浄組成物又は方法を含む。
親α-アミラーゼ
アミラーゼ活性を有するポリペプチドは、融合(ハイブリッド)ポリペプチドであり得る。
α-アミラーゼ活性を有するポリペプチドは、配列番号1、2、3、4、又は5のいずれかのAドメインと少なくとも60%の配列同一性を有するAドメインと、配列番号1、2、10、11、又は12のいずれかのBドメインと少なくとも60%の配列同一性を有するBドメインと、配列番号1、2、3、4、又は5のいずれかのCドメインと少なくとも60%の配列同一性を有するCドメインと、を含み得る。
α-アミラーゼ活性を有するポリペプチドは、Aドメイン、Bドメイン、及びCドメインを含むα-アミラーゼ活性を有する親ポリペプチドのハイブリッドα-アミラーゼを含み得、当該ハイブリッドは、融合ポリペプチドである。
好適なAドメインは、配列番号1のAドメインと少なくとも60%の配列同一性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する。
好適なAドメインは、配列番号2のAドメインと少なくとも60%の配列同一性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する。
好適なAドメインは、配列番号3のAドメインと少なくとも60%の配列同一性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する。
好適なAドメインは、配列番号4のAドメインと少なくとも60%の配列同一性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する。
好適なAドメインは、配列番号5のAドメインと少なくとも60%の配列同一性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する。
好適なBドメインは、配列番号1のBドメインと少なくとも60%の配列同一性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する。
好適なBドメインは、配列番号2のBドメインと少なくとも60%の配列同一性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する。
好適なBドメインは、配列番号10のBドメインと少なくとも60%の配列同一性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する。
好適なBドメインは、配列番号11のBドメインと少なくとも60%の配列同一性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する。
好適なBドメインは、配列番号12のBドメインと少なくとも60%の配列同一性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する。
好適なCドメインは、配列番号1のCドメインと少なくとも60%の配列同一性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する。
好適なCドメインは、配列番号2のCドメインと少なくとも60%の配列同一性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する。
好適なCドメインは、配列番号3のCドメインと少なくとも60%の配列同一性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する。
好適なCドメインは、配列番号4のCドメインと少なくとも60%の配列同一性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する。
好適なCドメインは、配列番号5のCドメインと少なくとも60%の配列同一性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する。
本明細書で有用なα-アミラーゼは、あるα-アミラーゼのBドメイン又はその一部を、別のα-アミラーゼのBドメイン又はその一部で置換することによって産生され得る。α-アミラーゼはまた、あるα-アミラーゼのAドメイン及びCドメイン又はそれらの一部を、別のα-アミラーゼのAドメイン及びCドメイン又はそれらの一部で置換することによって産生され得る。
Bドメインがアミノ酸残基109~206として決定されている、バチルスα-アミラーゼ(配列番号4)の場合、別のα-アミラーゼの対応する配列によって置換される配列は、位置93~113の範囲内の位置において開始し、位置195~215の範囲内の位置において終了する。例えば、位置97~109の範囲の位置において開始し、位置199~215の範囲の位置において終了するか、又は、位置100~106の範囲の位置において開始し、位置202~208の範囲の位置、特に配列番号12の位置109~206において終了する。バチルスα-アミラーゼのAドメイン及びCドメインは、アミノ酸残基1~108(A1)+207~396(A2)及び397~485であるとそれぞれ決定された。本発明のα-アミラーゼは、位置1~5の範囲の位置において開始し、位置94~114の範囲の位置において終了する、例えば、位置1~3の範囲の位置において開始し、位置99~110の範囲の位置において終了するか、又は位置1~3の範囲の位置において開始し、位置104~109、特に配列番号4の位置1~108の範囲の位置において終了するA1ドメインを含み得る。本発明のα-アミラーゼは、位置201~221の範囲の位置において開始し、位置478~514の範囲の位置において終了する、例えば、位置203~211の範囲の位置において開始し、位置480~510の範囲の位置において終了するか、又は位置205~216の範囲の位置において開始し、位置482~484、特に配列番号4の位置207~485の範囲の位置において終了するA2ドメイン及びCドメインを含み得る。
ハイブリッドポリペプチドは、配列番号1若しくは2、又は配列番号3に記載のアミノ酸配列を含み得るか、又はそれからなり得る。別の一実施形態では、ハイブリッドポリペプチドは、配列番号1、2、若しくは3、又は配列番号1若しくは2のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
好ましい実施形態では、親ポリペプチドは、配列番号1に記載のアミノ酸配列を含み得るか、又はそれからなり得る。本明細書の他の箇所で述べられるように、親ポリペプチドは、α-アミラーゼ活性を有し、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14のいずれかに記載のアミノ酸配列のいずれか1つに対して少なくとも60%の配列同一性を有する任意のポリペプチドであり得る。
好ましい実施形態では、親ポリペプチドは、配列番号2に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有し、その親ポリペプチドは、α-アミラーゼ活性を有する。一実施形態では、親ポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号1~14に記載のアミノ酸配列とは最大10個のアミノ酸、例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10個のアミノ酸が異なる。
本発明によると、1.0の値は、親ポリペプチドについて観察された性能に対応する。1.0を超える値は、親ポリペプチドと比較して、試験されたハイブリッドの性能が改善していることを示す。したがって、>1.0の値は、親ポリペプチドと比較して、ハイブリッドポリペプチドの特性の改善、例えば比活性の増加を示す。
一態様では、ハイブリッドポリペプチドは親ポリペプチドである。
親α-アミラーゼは、配列番号1~14のポリペプチドのいずれか1つと少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有するポリペプチドであり得る。
一態様では、親は、配列番号1のポリペプチドに対して、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有し、α-アミラーゼ活性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号1のポリペプチドと10個以下のアミノ酸、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸、及び1個のアミノ酸が異なる。
親は好ましくは、配列番号1のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。一実施形態では、親は、配列番号1のポリペプチドを含むか、又はそれからなる。別の実施形態では、親は、配列番号1のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
一態様では、親は、配列番号2のポリペプチドに対して、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有し、α-アミラーゼ活性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号2のポリペプチドと10個以下のアミノ酸、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸、及び1個のアミノ酸が異なる。
親は好ましくは、配列番号2のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。一実施形態では、親は、配列番号2のポリペプチドを含むか、又はそれからなる。別の実施形態では、親は、配列番号2のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
一態様では、親は、配列番号3のポリペプチドに対して、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有し、α-アミラーゼ活性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号3のポリペプチドと10個以下のアミノ酸、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸、及び1個のアミノ酸が異なる。
親は好ましくは、配列番号3のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。一実施形態では、親は、配列番号3のポリペプチドを含むか、又はそれからなる。別の実施形態では、親は、配列番号3のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
一態様では、親は、配列番号4のポリペプチドに対して、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有し、α-アミラーゼ活性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号4のポリペプチドと10個以下のアミノ酸、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸、及び1個のアミノ酸が異なる。
親は好ましくは、配列番号4のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。一実施形態では、親は、配列番号4のポリペプチドを含むか、又はそれからなる。別の実施形態では、親は、配列番号4のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
一態様では、親は、配列番号5のポリペプチドに対して、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有し、α-アミラーゼ活性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号5のポリペプチドと10個以下のアミノ酸、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸、及び1個のアミノ酸が異なる。
親は好ましくは、配列番号5のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。一実施形態では、親は、配列番号5のポリペプチドを含むか、又はそれからなる。別の実施形態では、親は、配列番号5のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
一態様では、親は、配列番号6のポリペプチドに対して、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有し、α-アミラーゼ活性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号6のポリペプチドと10個以下のアミノ酸、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸、及び1個のアミノ酸が異なる。
親は好ましくは、配列番号6のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。一実施形態では、親は、配列番号6のポリペプチドを含むか、又はそれからなる。別の実施形態では、親は、配列番号6のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
一態様では、親は、配列番号7のポリペプチドに対して、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有し、α-アミラーゼ活性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号7のポリペプチドと10個以下のアミノ酸、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸、及び1個のアミノ酸が異なる。
親は好ましくは、配列番号7のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。一実施形態では、親は、配列番号7のポリペプチドを含むか、又はそれからなる。別の実施形態では、親は、配列番号7のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
一態様では、親は、配列番号8のポリペプチドに対して、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有し、α-アミラーゼ活性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号8のポリペプチドと10個以下のアミノ酸、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸、及び1個のアミノ酸が異なる。
親は好ましくは、配列番号8のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。一実施形態では、親は、配列番号8のポリペプチドを含むか、又はそれからなる。別の実施形態では、親は、配列番号8のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
一態様では、親は、配列番号9のポリペプチドに対して、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有し、α-アミラーゼ活性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号9のポリペプチドと10個以下のアミノ酸、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸、及び1個のアミノ酸が異なる。
親は好ましくは、配列番号9のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。一実施形態では、親は、配列番号9のポリペプチドを含むか、又はそれからなる。別の実施形態では、親は、配列番号9のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
一態様では、親は、配列番号10のポリペプチドに対して、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有し、α-アミラーゼ活性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号10のポリペプチドと10個以下のアミノ酸、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸、及び1個のアミノ酸が異なる。
親は好ましくは、配列番号10のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。一実施形態では、親は、配列番号10のポリペプチドを含むか、又はそれからなる。別の実施形態では、親は、配列番号10のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
一態様では、親は、配列番号11のポリペプチドに対して、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有し、α-アミラーゼ活性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号11のポリペプチドと10個以下のアミノ酸、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸、及び1個のアミノ酸が異なる。
親は好ましくは、配列番号11のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。一実施形態では、親は、配列番号11のポリペプチドを含むか、又はそれからなる。別の実施形態では、親は、配列番号11のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
一態様では、親は、配列番号12のポリペプチドに対して、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有し、α-アミラーゼ活性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号12のポリペプチドと10個以下のアミノ酸、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸、及び1個のアミノ酸が異なる。
親は好ましくは、配列番号12のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。一実施形態では、親は、配列番号12のポリペプチドを含むか、又はそれからなる。別の実施形態では、親は、配列番号12のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
一態様では、親は、配列番号13のポリペプチドに対して、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有し、α-アミラーゼ活性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号13のポリペプチドと10個以下のアミノ酸、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸、及び1個のアミノ酸が異なる。
親は好ましくは、配列番号13のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。一実施形態では、親は、配列番号13のポリペプチドを含むか、又はそれからなる。別の実施形態では、親は、配列番号13のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
一態様では、親は、配列番号14のポリペプチドに対して、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有し、α-アミラーゼ活性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号14のポリペプチドと10個以下のアミノ酸、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸、及び1個のアミノ酸が異なる。
親は好ましくは、配列番号14のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。一実施形態では、親は、配列番号14のポリペプチドを含むか、又はそれからなる。別の実施形態では、親は、配列番号14のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
当該技術分野において周知の方法に従って、異なる属又は種の株に由来する親をコードするDNAを同定及びクローニングするために、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14のアミノ酸配列、又はそのフラグメントを、核酸プローブの設計に使用することが可能である。特に、かかるプローブは、所望の属又は種のゲノム又はcDNAをハイブリダイズするために使用可能であり、その中の対応する遺伝子を同定及び単離するために、続いて通常のサザンブロッティング手順が行われる。このようなプローブは全配列より大幅に短くてよいが、長さが少なくとも14、例えば、少なくとも25、少なくとも35、又は少なくとも70ヌクレオチドでなければならない。好ましくは、核酸プローブは、長さが少なくとも100ヌクレオチド、例えば、少なくとも200ヌクレオチド、少なくとも300ヌクレオチド、少なくとも400ヌクレオチド、少なくとも500ヌクレオチド、少なくとも600ヌクレオチド、少なくとも700ヌクレオチド、少なくとも800ヌクレオチド、又は少なくとも900ヌクレオチド長である。DNAとRNAとの両方を使用することができる。プローブは、対応する遺伝子(例えば、32P、3H、35S、ビオチン、又はアビジンを有する)を検出するために、通常標識化される。かかるプローブは本発明に包含される。
このような他の株から調製されるゲノムDNA又はcDNAライブラリは、上述のプローブとハイブリダイズし、親をコードするDNAについてスクリーニングされ得る。このような他の株からのゲノム又は他のDNAは、アガロース若しくはポリアクリルアミド電気泳動、又は他の分離技術によって分離され得る。ライブラリからのDNA又は分離されたDNAは、ニトロセルロース又はその他の好適な担体物質上に移動及び不動化されてもよい。親又はそのサブシークエンスとハイブリダイズするクローン又はDNAを同定するために、サザンブロット法において担体物質を使用する。
本発明の目的では、ハイブリダイゼーションは、ポリヌクレオチドが、低い~非常に高いストリンジェンシー条件下で、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8をコードするポリヌクレオチド、又はそのサブシーケンスに対応する、標識化されたヌクレオチドプローブにハイブリダイズすることを示す。プローブがハイブリダイズする分子は、例えば、X線フィルム又は当該技術分野において既知であるその他の検出手段を用いて検出され得る。
一態様では、核酸プローブは、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであるか、又はそれらのフラグメントである。
長さが少なくとも100ヌクレオチドの長いプローブでは、ストリンジェンシーが非常に低い条件から非常に高い条件は、5X SSPE、0.3%SDS、200マイクログラム/mLの断片化変性サケ精子DNA、及びストリンジェンシーが非常に低い場合及び低い場合には25%のホルムアミド、ストリンジェンシーが中程度である場合及び中の上である場合には35%のホルムアミド、ストリンジェンシーが高い場合及び非常に高い場合には50%のホルムアミドのいずれか中、42℃でプレハイブリダイゼーション及びハイブリダイゼーションを行った後に、標準的なサザンブロッティング手順を12~24時間、最適に行うものとして定義する。最後に、2×SSC、0.2%のSDSを用いて、45℃(非常に低いストリンジェンシー)、50℃(低いストリンジェンシー)、55℃(中程度のストリンジェンシー)、60℃(中の上のストリンジェンシー)、65℃(高いストリンジェンシー)、又は70℃(非常に高いストリンジェンシー)で、担体物質を、15分間それぞれ3回洗浄する。
約15個のヌクレオチド~約70個のヌクレオチドの長さである短いプローブについて、ストリンジェンシー条件は、最適には12~24時間の標準的なサザンブロッティング手順の後、0.9MのNaCl、0.09MのTris-HCl pH7.6、6mMのEDTA、0.5%のNP-40、1Xデンハルト溶液、1mMのピロリン酸ナトリウム、1mMの一塩基リン酸ナトリウム、0.1mMのATP、及び1mlあたり0.2mgの酵母RNA中、Bolton and McCarthy(1962,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 48:1390)に従う計算を用いて算出されるTmよりも低い約5℃~約10℃でのプレハイブリダイゼーション及びハイブリダイゼーションとして定義される。最後に、担体物質を6XSCC及び0.1%のSDS中で15分間一度洗い、計算されたTmよりも低い約5℃~約10℃の温度で6X SSCを用いてそれぞれ15分間、2回洗う。
親は、あらゆる属の微生物から得ることができる。本発明の目的では、用語「から得られる」は、所与の源に関連して本明細書で使用するとき、ポリヌクレオチドによってコードされる親が、源によって、又は源からのポリヌクレオチドが挿入された株によって産生されることを意味するものとする。一態様において、親は細胞外に分泌される。
親は、細菌α-アミラーゼであってもよい。例えば、親は、グラム陽性細菌ポリペプチド、例えば、バチルス(Bacillus)、クロストリジウム(Clostridium)、エンテロコッカス(Enterococcus)、ゲオバチルス(Geobacillus)、ラクトバチルス(Lactobacillus)、ラクトコッカス(Lactococcus)、オセカンバチルス(Oceanobacillus)、スタフィロコッカス(Staphylococcus)、ストレプトコッカス(Streptococcus)、若しくはストレプトマイセス(Streptomyces)のα-アミラーゼであるか、又はグラム陰性細菌ポリペプチド、例えば、カンピロバクター(Campylobacter)、大腸菌(E.coli)、フラボバクテリウム(Flavobacterium)、フソバクテリウム(Fusobacterium)、ヘリコバクター(Helicobacter)、イリオバクター(Ilyobacter)、ネセシリア(Neissera)、シュードモナス(Pseudomonas)、サルモネラ(Salmonella)、若しくはウレアプラズマ(Ureaplasma)のα-アミラーゼであり得る。
一態様では、親は、バチルス・アルカロフィルス(Bacillus alkalophilus)、バチルス・アミロリケファシエンス(Bacillus amyloliquefaciens)、バチルス・ブレビス(Bacillus brevis)、バチルス・シルクランス(Bacillus circulans)、バチルス・クラウシイ(Bacillus clausii)、バチルス・コアグランス(Bacillus coagulans)、バチルス・フィルムス(Bacillus firmus)、バチルス・ラウタス(Bacillus lautus)、バチルス・レンタス(Bacillus lentus)、バチルス・リケニフォルミス、バチルス・メガテリウム(Bacillus megaterium)、バチルス・プミルス(Bacillus pumilus)、バチルス・ステアロサーモフィルス(Bacillus stearothermophilus)、バチルス・サブチリス(Bacillus subtilis)、又はバチルス・チューリンゲンシス(Bacillus thuringiensis)のα-アミラーゼである。
別の態様では、親は、ストレプトコッカス・エクイシミリス(Streptococcus equisimilis)、ストレプトコッカス・ピオゲネス(Streptococcus pyogenes)、ストレプトコッカス・ウベリス(Streptococcus uberis)、又はストレプトコッカス・イクイ(Streptococcus equi)亜種ズーエピデミカス(Zooepidemicus)のα-アミラーゼである。
別の態様では、親は、ストレプトマイセス・アクロモゲネス(Streptomyces achromogenes)、ストレプトマイセス・アベルミチリス(Streptomyces avermitilis)、ストレプトマイセス・コエリコラ(Streptomyces coelicolor)、ストレプトマイセス・グリセウス(Streptomyces griseus)、又はストレプトマイセス・リビダンス(Streptomyces lividans)のα-アミラーゼである。
別の態様では、親は、バチルス種α-アミラーゼ、例えば、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号11、配列番号12、配列番号13、又は配列番号14のα-アミラーゼである。
前述の種については、本発明は、それらについて知られている種名に関わらず、完全及び不完全な状態、並びに他の分類学上の等価物、例えばアナモルフ、を包含することが理解されるであろう。当業者は、適切な等価物の同一性を容易に認識するであろう。
これらの種の株は、American Type Culture Collection(ATCC)、Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH(DSM)、Centraalbureau Voor Schimmelcultures(CBS)、及びAgricultural Research Service Service、Culture Collection、Northern Regional Research Center(NRRL)などの多数の培養コレクションにおいて、公衆に容易に利用可能とされている。
親は、天然物(例えば、土壌、堆肥、水など)から単離された微生物、又は前述のプローブを使用して天然物質(例えば、土壌、堆肥、水など)から直接得られたDNA試料を含む他の供給源から同定及び取得され得る。天然生息物から直接微生物及びDNAを単離するための技術は、当該技術分野において周知である。次いで、親をコードするポリヌクレオチドは、別の微生物のゲノム若しくはcDNAライブラリ、又は混合DNA試料を同様にスクリーニングすることによって、得ることができる。親をコードするポリヌクレオチドがプローブで検出されると、ポリヌクレオチドは、当業者に既知の技術を利用することによって単離されるか、又はクローニングされ得る(例えば、上記Sambrook et al.,1989を参照されたい)。
親は、1つのポリペプチドの一部が別のポリペプチドの一部のN末端又はC末端で融合されるハイブリッドポリペプチドであってもよい。
親はまた、1つのポリペプチドが別のポリペプチドのN末端又はC末端で融合される融合ポリペプチド又は切断可能な融合ポリペプチドであってもよい。融合ポリペプチドは、1つのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを、別のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに融合させることによって産生される。融合ポリペプチドを産生するための技術は、当該技術分野において既知であり、それらがフレーム内にあるようにポリペプチドをコードするコード配列をライゲーションすることを含み、融合されたポリペプチドの発現は、同じプロモータ及びターミネータの制御下にある。融合タンパク質はまた、翻訳後に融合が生成されるインテイン技術を使用して構築されてもよい(Cooper et al.,1993,EMBO J.12:2575-2583、Dawson et al.,1994,Science 266:776-779)。
融合ポリペプチドは、2つのポリペプチド間に切断部位を更に含むことができる。融合タンパク質の分泌の際、部位は切断され、2つのポリペプチドを放出する。切断部位の例としては、Martin et al.,2003,J.Ind.Microbiol.Biotechnol.3:568-576、Svetina et al.,2000,J.Biotechnol.76:245-251、Rasmussen-Wilson et al.,1997,Appl.Environ.Microbiol.63:3488-3493、Ward et al.,1995,Biotechnology 13:498-503及びContreras et al.,1991,Biotechnology 9:378-381、Eaton et al.,1986,Biochemistry 25:505-512、Collins-Racie et al.,1995,Biotechnology 13:982-987、Carter et al.,1989,Proteins:Structure,Function,and Genetics 6:240-248及びStevens,2003,Drug Discovery World 4:35-48において開示されている部位が挙げられるが、これらに限定されない。
変異体の調製
本発明は、洗浄組成物を得るための方法に関し、この方法は、α-アミラーゼ活性を有する変異体を取得することであって、(a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する1つ以上の位置において修飾を親α-アミラーゼに導入することであって、各修飾は独立して置換又は欠失であり、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する、ことと、(b)当該変異体を回収することと、を含む、ことと、当該変異体を洗浄補助剤と混合することと、を含む。
α-アミラーゼ活性を有する変異体を取得するための方法は、(a)配列番号1に記載のアミノ酸配列の位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する1つ以上の位置において修飾を親α-アミラーゼに導入することであって、各修飾は、独立して置換又は欠失であり、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する、ことと、(b)当該変異体を回収することと、を含み得る。
一態様では、α-アミラーゼ活性を有する変異体を得るための方法は、(a)番号付けのために配列番号1を使用して、配列番号2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14のいずれかに記載のアミノ酸配列の位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する1つ以上の位置において修飾を親α-アミラーゼに導入することであって、各修飾は、独立して置換又は欠失であり、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する、ことと、(b)当該変異体を回収することと、を含む。
一実施形態では、修飾は置換である。一実施形態では、修飾は欠失である。
別の実施形態では、α-アミラーゼ活性を有する変異体を得るための方法は、(a)1つ以上の位置において修飾を親α-アミラーゼに導入することであって、修飾は、配列番号1に記載のアミノ酸配列のH1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E、及びG476Aから選択される、ことと、(b)変異体を回収することと、を含む。
別の実施形態では、α-アミラーゼ活性を有する変異体を得るための方法は、(a)1つ以上の位置において置換を親α-アミラーゼに導入することであって、置換は、番号付けのために配列番号1を使用して、配列番号2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に記載のアミノ酸配列のN3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180Q、R180S、S181L、S181T、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E、及びG476Aから選択される、ことと、(b)変異体を回収することと、を含む。
一実施形態では、方法は、1つ以上の位置において欠失を親α-アミラーゼに導入することであって、欠失は、番号付けのために配列番号1を使用して、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14のポリペプチドのH1*、H2*、R180*、S181*、T182*、及びG183*から選択される、ことと、変異体を回収することと、を更に含む。
変異体は、部位特異的な突然変異誘発、合成遺伝子構築、半合成遺伝子構築、ランダム変異導入法、シャッフルなどなどの、当該技術分野において既知である任意の突然変異誘発手段を用いて調製することができる。
部位特異的変異誘発は、親をコードしているポリヌクレオチドにおける1つ以上の規定の部位に1つ以上(数個)の変異を作成する技術である。
部位特異的変異誘発は、所望の変異を含むオリゴヌクレオチドプライマーの使用を伴うPCRによって、インビトロで行うことができる。また、部位特異的変異誘発は、親をコードしているポリヌクレオチドを含むプラスミド中のある部位を制限酵素によって切断し、続いて、ポリヌクレオチド中の変異を含有するオリゴヌクレオチドをライゲーションすることを含むカセット式変異誘発によって、インビトロで行うこともできる。通常、このプラスミド及びオリゴヌクレオチドで消化する制限酵素は同じであり、プラスミドの付着末端及び互いをライゲートするためのインサートを可能にする。例えば、Scherer and Davis,1979,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 76:4949-4955及びBarton et al.,1990,Nucleic Acids Res.18:7349-4966を参照されたい。
また、部位特異的変異誘発は、当該技術分野において既知の方法によってインビボで行うこともできる。例えば、米国特許出願公開第2004/0171154号、Storici et al.,2001,Nature Biotechnol.19:773-776、Kren et al.,1998,Nat.Med.4:285-290及びCalissano and Macino,1996,Fungal Genet.Newslett.43:15-16を参照されたい。
本発明では、任意の部位特異的な変異誘発手順を用いることができる。変異体を調製するために使用することができる多くの市販のキットが入手可能である。
合成遺伝子の構築は、対象ポリペプチドをコードするように設計されたポリヌクレオチド分子のインビトロ合成を必要とする。遺伝子合成は、オリゴヌクレオチドを合成し、フォトプログラム可能なマイクロ流体チップ上でアセンブルする、Tianら(2004,Nature 432:1050-1054)によって記載されているマルチプレックスマイクロチップベースの技術及び類似の技術などの多くの技術を利用して実施することができる。
単一又は複数のアミノ酸の置換、欠失、及び/又は挿入は、既知の変異誘発、組換え、及び/又はシャッフリングの方法、続いて、Reidhaar-Olson and Sauer,1988,Science241:53-57、Bowie and Sauer,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86:2152-2156、国際公開第95/17413号、又は国際公開第95/22625号によって開示されているものなどの関連するスクリーニング手順を用いて実施及び試験され得る。使用することができる他の方法としては、エラープローンPCR、ファージディスプレイ(例えば、Lowman et al.,1991,Biochemistry 30:10832-10837、米国特許第5,223,409号、国際公開第92/06204号)、及び領域指向突然変異誘発(Derbyshire et al.,1986,Gene 46:145;Ner et al.,1988,DNA 7:127)が挙げられる。
変異誘発/シャッフリング方法は、宿主細胞によって発現されるクローニングされた変異ポリペプチドの活性を検出するためにハイスループット自動スクリーニング法と組み合わせてもよい(Ness et al.,1999,Nature Biotechnology 17:893-896)。活性ポリペプチドをコードしている変異DNA分子を宿主細胞から回収し、当該技術分野において標準的な方法を用いて迅速にシークエンスすることができる。これら方法により、ポリペプチドにおける個々のアミノ酸残基の重要性を迅速に決定することができる。
半合成遺伝子構築は、合成遺伝子構築、並びに/又は部位特異的な変異誘発、及び/若しくはランダムな変異誘発、並びに/又はシャッフリングの側面を組み合わせることによって達成される。半合成構築は、PCR技術と組み合わされた、合成されるポリヌクレオチドのフラグメントを利用するプロセスに代表される。このように、遺伝子の規定の領域をデノボ合成することができるが、他の領域は、部位特異的変異誘発プライマーを用いて増幅してもよく、また、更に他の領域は、エラープローンPCR又は非エラープローンPCR増幅に供してもよい。次いで、ポリヌクレオチドのサブシークエンスをシャッフリングしてもよい。
α-アミラーゼ変異体
本明細書で用いるのに好適な親α-アミラーゼのα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する1つ以上の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する1つ以上の位置において修飾を含み得、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する1つ以上の位置において修飾を含み得、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14のいずれかに対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
好適なα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する1つ以上の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14のいずれかに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、α-アミラーゼ変異体は、当該親ペプチドと比較して改善された特性を有する。
好適なα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する1つ以上の位置において修飾を含み、変異体はα-アミラーゼ活性を有し、α-アミラーゼ変異体は、当該親ペプチドと比較して改善された特性を有する。
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する1つ以上の位置において修飾を含み、変異体はα-アミラーゼ活性を有し、α-アミラーゼ変異体は、当該親ペプチドと比較して改善された特性を有し、当該親ペプチドは、配列番号1、2、又は3である。
好ましい変異体は、親ポリペプチドに対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を含む。別の実施形態では、変異体は、α-アミラーゼ活性を有する親ポリペプチドに対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
好ましい変異体は、ハイブリッドポリペプチドに対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
好ましい変異体は、α-アミラーゼ活性を有するハイブリッドポリペプチドに対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
好ましい変異体は、配列番号1のポリペプチドに対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
好ましい変異体は、配列番号2のポリペプチドに対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
好ましい変異体は、配列番号3のポリペプチドに対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
好ましい変異体は、配列番号4のポリペプチドに対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
好ましい変異体は、配列番号5のポリペプチドに対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
好ましい変異体は、配列番号6のポリペプチドに対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
好ましい変異体は、配列番号7のポリペプチドに対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
好ましい変異体は、配列番号8のポリペプチドに対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
好ましい変異体は、配列番号9のポリペプチドに対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
好ましい変異体は、配列番号10のポリペプチドに対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の実施形態では、変異体は、配列番号11のポリペプチドに対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の実施形態では、変異体は、配列番号12のポリペプチドに対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
好ましい変異体は、配列番号13のポリペプチドに対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
好ましい変異体は、配列番号14のポリペプチドに対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、置換アミノ酸残基は、当該位置の天然に存在するアミノ酸残基とは異なる。一実施形態では、置換は、A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W、及びYからなる群から選択され、ただし、置換アミノ酸残基は、当該位置の天然に存在するアミノ酸残基とは異なることを条件とする。
一態様では、修飾の数は、1~50、例えば、1~45、1~40、1~35、1~30、1~25、1~20、1~15、1~10、又は1~5であり、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、又は50個の修飾である。
一態様では、置換の数は、1~50、例えば、1~45、1~40、1~35、1~30、1~25、1~20、1~15、1~10、又は1~5であり、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、又は50個の置換である。
一態様では、欠失の数は、1~50、例えば、1~45、1~40、1~35、1~30、1~25、1~20、1~15、1~10、又は1~5であり、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、又は50個の欠失である。
置換を有する上述の変異体は、指定位置において1つ以上の置換の全ての可能な組み合わせを包含するものとして理解されるべきである。
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する1つ以上の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、475及び47694、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する1つ以上の(例えば、いくつかの)位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する2つの位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する3つの位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する4つの位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する5つの位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する6つの位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する7つの位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する8つの位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する9つの位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する10の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する11の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する12の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する13の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する14の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する15の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、9894、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する16の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する17の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する18の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476475及び476に対応する19の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する20の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する21の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する22の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する23の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する24の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する25の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する26の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する27の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する各位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の一態様では、変異体は、位置1に対応する位置において欠失を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置1に対応する位置のアミノ酸は、配列番号1のポリペプチドを欠失する。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの欠失H1*を含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置2に対応する位置において欠失を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置2に対応する位置のアミノ酸は、配列番号1のポリペプチドを欠失する。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの欠失H2*を含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置3に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置3に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換N3S又はN3D又はN3Gを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置7に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置7に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換G7A又はG7H又はG7Sを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置26に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置26に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換R26Yを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置31に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置31に対応する位置のアミノ酸は、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換A31Sを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置37に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置37に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換R37A又はR37N又はR37Vを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置40に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置40に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換T40N又はT40Gを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置41に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置41に対応する位置のアミノ酸は、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Thr、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換A41Dを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置54に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置54に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換N54Sを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置56に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置56に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はTyrで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換V56Tを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置60に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置60に対応する位置のアミノ酸は、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換A60P又はA60Vを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置63に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置63に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換L63Fを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置72に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置72に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換K72Rを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置73に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置73に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換G73Lを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置93に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置93に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換K93Dを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置94に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置94に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換N94Dを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置98に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置98に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換Q98Lを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置103に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置103に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はTyrで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換V103又はV103Iを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置104に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置104に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はTyrで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換V104Mを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置105に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置105に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換M105I又はM105Lを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置106に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置106に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換N106Dを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置109に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置109に対応する位置のアミノ酸は、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換A109Gを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置110に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置110に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換G110Kを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置111に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置111に対応する位置のアミノ酸は、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換A111G又はA111Lを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置113に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置113に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換G113A又はG113Q又はG113Sを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置114に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置114に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換T114Kを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置116に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置116に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換F116L又はF116N又はF116Q又はF116Wを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置117に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置117に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はTyrで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換V117Gを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置118に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置118に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換D118T又はD118Qを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置123に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置123に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換D123Nを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置126に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置126に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換N126Dを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置128に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置128に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換N128Yを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置131に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置131に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換T131I又はT131Vを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置132に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置132に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換S132D又はS132Lを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置134に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置134に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換T134Dを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置135に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置135に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換Y135Eを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置136に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置136に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換Q136T又はQ136Kを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置137に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置137に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換I137Fを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置138に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置138に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換Q138Vを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置140に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置140に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換W140S又はW140Y又はW140Mを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置142に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置142に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換K142E又はK142G又はK142Pを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置144に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置144に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換D144Nを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置146に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置146に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換P146H又はP146Sを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置151に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置151に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換T151Aを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置152に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置152に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換Y152Lを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置155に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置155に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換F155Wを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置159に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置159に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換W159H又はW159Lを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置160に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置160に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換Y160Pを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置165に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置165に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換T165Vを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置167に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置167に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換W167A又はW167D又はW167E又はW167F又はW167P又はW167Sを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置169に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置169に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換E169V又はE169I又はE169Qを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置172に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置172に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換K172G又はK172Qを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置173に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置173に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換L173Fを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置174に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置174に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換N174K又はN174Sを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置176に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置176に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換I176Vを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置177に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置177に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換Y177Dを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置178に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置178に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換K178Aを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置180に対応する位置に欠失又は置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置180に対応する位置のアミノ酸は、配列番号1のポリペプチドを欠失する。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの欠失R180*を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置180に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換R180Q又はR180Sを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置181に対応する位置に欠失又は置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置181に対応する位置のアミノ酸は、配列番号1のポリペプチドを欠失する。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの欠失S181*を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置181に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換S181L又はS181Tを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置182に対応する位置において欠失又は置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置182に対応する位置のアミノ酸は、配列番号1のポリペプチドを欠失する。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの欠失T182*を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置182に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換T182D又はT182E又はT182G又はT182I又はT182L又はT182M又はT182Sを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置183に対応する位置において欠失又は置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置183に対応する位置のアミノ酸は、配列番号1のポリペプチドを欠失する。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの欠失G183*を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置183に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換G183Pを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置185に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置185に対応する位置のアミノ酸は、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換A186D又はA186E又はA186K又はA186N又はA186Q又はA186Rを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置188に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置188に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換W188Cを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置189に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置189に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換E189Pを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置193に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置193に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換E193Iを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置194に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置194に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換N194Fを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置196に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置196に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換N196F又はN196Iを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置202に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置202に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換F202Yを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置203に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置203に対応する位置のアミノ酸は、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換A203Fを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置205に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置205に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換L205F又はL205N又はL205Q又はL205R又はL205V又はL205Yを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置224に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置224に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換T224F又はT244Yを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置225に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置225に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換N225Sを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置242に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置242に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換Y242F又はY242Lを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置243に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置243に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換S243Qを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置244に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置244に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Ser、Pro、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換F244I又はF244Lを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置252に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置252に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はTyrで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換V252Iを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、配列番号1の位置256に対応する位置において置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置256に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換T256A又はT256Dを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置258に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置258に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換K258Vを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置259に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置259に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換E259G又はE259Vを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置260に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置260に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換M260D又はM260Wを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置261に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置261に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換F261K又はF261P又はF261Sを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置266に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置266に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換F266Yを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置276に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置276に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換N276F又はN276W又はN276Yを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置279に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置279に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換N279Sを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置280に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置280に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換K280F又はK280W又はK280Yを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置283に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置283に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換W283Nを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置286に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置286に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換S286K又はS286Lを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置302に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置302に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換S302T又はS302Yを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置303に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置303に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換G303Rを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置315に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置315に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換T315Aを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置320に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置320に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換H320Tを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置321に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置321に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換P321H又はP321Yを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置322に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置322に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換M322G又はM322Yを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置323に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置323に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換H323A又はH323N又はH323Wを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置346に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置346に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換W346Nを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置354に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置354に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換L354Vを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置359に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置359に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換E359Wを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置361に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置361に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はTyrで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換G361Mを含むか、又はそれからなる。別の一態様では、変異体は、位置362に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置362に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換Y362Vを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置365に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置365に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Tyr、又はTrpで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換V365Iを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置371に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置371に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Tyr、又はTrpで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換Y371S又はY371Nを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置383に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置383に対応する位置のアミノ酸は、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換A383Dを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置390に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置390に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換E390A又はE390Dを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置394に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置394に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換N394W又はN394Dを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置395に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置395に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換F395Yを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置405に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置405に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換D405Gを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置409に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置409に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換I409Lを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置414に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置414に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換R414Mを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置420に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置420に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換H420A又はH420P又はH420Q又はH420Yを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置422に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置422に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はTyrで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換N422Vを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置427に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置427に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換T427Lを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置455に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置455に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換G455Rを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置457に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置457に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換K457N又はK457Rを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置458に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置458に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換P458Sを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置470に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置470に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換N470A又はN470Mを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置472に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置472に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換S472Rを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置473に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置473に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Tyr、又はTyrで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換V473Cを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置474に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置474に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換N474F又はN474Lを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置475に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置475に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換G475E又はG475Kを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、位置476に対応する位置に置換を含むか、又はそれからなる。別の一態様では、位置476に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の一態様では、変異体は、配列番号1のポリペプチドの置換G476A又はG476E又はG476Hを含むか、又はそれからなる。
別の一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1、H2、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、R180、S181、T182、G183、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475、及びG476に対応する1つ以上の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E、及びG476Aに対応する1つ以上の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E、及びG476Aに対応する1つ以上の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E、及びG476Aに対応する1つ以上の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号2に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E、及びG476Aに対応する1つ以上の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号3に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E、及びG476Aに対応する1つ以上の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号4に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E、及びG476Aに対応する1つ以上の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号5に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E、及びG476Aに対応する1つ以上の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号6に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E、及びG476Aに対応する1つ以上の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号7に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E、及びG476Aに対応する1つ以上の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号8に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E、及びG476Aに対応する1つ以上の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号9に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E、及びG476Aに対応する1つ以上の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号10に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E、及びG476Aに対応する1つ以上の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号11に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E、及びG476Aに対応する1つ以上の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号12に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E、及びG476Aに対応する1つ以上の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号13に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
別の一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E、及びG476Aに対応する1つ以上の位置において修飾を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
本明細書で使用される用語「ペアワイズ欠失」は、2つの位置でのアミノ酸の欠失を指す。当該2つの位置は、互いに隣接し得るが、1つ、2つ、3つ、4つ、又は5つのアミノ酸によって分離されることもあり得る。
一態様では、変異体は、親ポリペプチドのBドメイン内にペアワイズ欠失を含む。
一態様では、変異体は、α-アミラーゼ活性を有する親ポリペプチドのBドメイン内にペアワイズ欠失を含む。
本明細書で使用される用語「ペアワイズ欠失」は、2つの位置におけるアミノ酸の欠失を指す。当該2つの位置は、互いに隣接し得るが、1つ、2つ、3つ、4つ、又は5つのアミノ酸によって分離されることもあり得る。
一態様では、本発明のα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、R180*+S181*、R180*+T182*、R180*+G183*、S181*+T182*、S181*+G183*、及びT182*+G183*からなる群から選択される1つ以上の位置、好ましくはR180*S181*において欠失を含む。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、R180*+S181*に対応する位置に欠失を含む、配列番号1の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
したがって、一実施形態では、当該変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置180、181、182、及び183に対応する2つ以上の位置における欠失及び/又は置換と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する1つ以上の位置における修飾と、を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一実施形態では、当該変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180、S181、T182、及びG183に対応する2つ以上の位置における欠失及び/又は置換と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1、H2*、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475、及びG476に対応する1つ以上の位置における修飾と、を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一実施形態では、当該変異体は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180、S181、T182、及びG183に対応する2つ以上の位置における欠失及び/又は置換と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E、及びG476Aに対応する1つ以上の位置における修飾と、を含み、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194Fに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号1の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182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F、T182S+Y242F+E259G、T182S+Y242F+F266Y、T182S+Y242F+N279S、T182S+Y242F+K280Y、T182S+Y242F+G303R、T182S+Y242F+E390A、T182S+Y242F+G475K、T182S+Y242F+A185Q、T182S+Y242F+N194F、T182S+E259G+F266Y、T182S+E259G+N279S、T182S+E259G+K280Y、T182S+E259G+G303R、T182S+E259G+E390A、T182S+E259G+G475K、T182S+E259G+A185Q、T182S+E259G+N194F、T182S+F266Y+N279S、T182S+F266Y+K280Y、T182S+F266Y+G303R、T182S+F266Y+E390A、T182S+F266Y+G475K、T182S+F266Y+A185Q、T182S+F266Y+N194F、T182S+N279S+K280Y、T182S+N279S+G303R、T182S+N279S+E390A、T182S+N279S+G475K、T182S+N279S+A185Q、T182S+N279S+N194F、T182S+K280Y+G303R、T182S+K280Y+E390A、T182S+K280Y+G475K、T182S+K280Y+A185Q、T182S+K280Y+N194F、T182S+G303R+E390A、T182S+G303R+G475K、T182S+G303R+A185Q、T182S+G303R+N194F、T182S+E390A+G475K、T182S+E390A+A185Q、T182S+E390A+N194F、T182S+G475K+A185Q、T182S+G475K+N194F、T182S+A185Q+N194F、A185D+E189P+Y242F、A185D+E189P+E259G、A185D+E189P+F266Y、A185D+E189P+N279S、A185D+E189P+K280Y、A185D+E189P+G303R、A185D+E189P+E390A、A185D+E189P+G475K、A185D+E189P+A185Q、A185D+E189P+N194F、A185D+Y242F+E259G、A185D+Y242F+F266Y、A185D+Y242F+N279S、A185D+Y242F+K280Y、A185D+Y242F+G303R、A185D+Y242F+E390A、A185D+Y242F+G475K、A185D+Y242F+A185Q、A185D+Y242F+N194F、A185D+E259G+F266Y、A185D+E259G+N279S、A185D+E259G+K280Y、A185D+E259G+G303R、A185D+E259G+E390A、A185D+E259G+G475K、A185D+E259G+A185Q、A185D+E259G+N194F、A185D+F266Y+N279S、A185D+F266Y+K280Y、A185D+F266Y+G303R、A185D+F266Y+E390A、A185D+F266Y+G475K、A185D+F266Y+A185Q、A185D+F266Y+N194F、A185D+N279S+K280Y、A185D+N279S+G303R、A185D+N279S+E390A、A185D+N279S+G475K、A185D+N279S+A185Q、A185D+N279S+N194F、A185D+K280Y+G303R、A185D+K280Y+E390A、A185D+K280Y+G475K、A185D+K280Y+A185Q、A185D+K280Y+N194F、A185D+G303R+E390A、A185D+G303R+G475K、A185D+G303R+A185Q、A185D+G303R+N194F、A185D+E390A+G475K、A185D+E390A+A185Q、A185D+E390A+N194F、A185D+G475K+A185Q、A185D+G475K+N194F、A185D+A185Q+N194F、E189P+Y242F+E259G、E189P+Y242F+F266Y、E189P+Y242F+N279S、E189P+Y242F+K280Y、E189P+Y242F+G303R、E189P+Y242F+E390A、E189P+Y242F+G475K、E189P+Y242F+A185Q、E189P+Y242F+N194F、E189P+E259G+F266Y、E189P+E259G+N279S、E189P+E259G+K280Y、E189P+E259G+G303R、E189P+E259G+E390A、E189P+E259G+G475K、E189P+E259G+A185Q、E189P+E259G+N194F、E189P+F266Y+N279S、E189P+F266Y+K280Y、E189P+F266Y+G303R、E189P+F266Y+E390A、E189P+F266Y+G475K、E189P+F266Y+A185Q、E189P+F266Y+N194F、E189P+N279S+K280Y、E189P+N279S+G303R、E189P+N279S+E390A、E189P+N279S+G475K、E189P+N279S+A185Q、E189P+N279S+N194F、E189P+K280Y+G303R、E189P+K280Y+E390A、E189P+K280Y+G475K、E189P+K280Y+A185Q、E189P+K280Y+N194F、E189P+G303R+E390A、E189P+G303R+G475K、E189P+G303R+A185Q、E189P+G303R+N194F、E189P+E390A+G475K、E189P+E390A+A185Q、E189P+E390A+N194F、E189P+G475K+A185Q、E189P+G475K+N194F、E189P+A185Q+N194F、Y242F+E259G+F266Y、Y242F+E259G+N279S、Y242F+E259G+K280Y、Y242F+E259G+G303R、Y242F+E259G+E390A、Y242F+E259G+G475K、Y242F+E259G+A185Q、Y242F+E259G+N194F、Y242F+F266Y+N279S、Y242F+F266Y+K280Y、Y242F+F266Y+G303R、Y242F+F266Y+E390A、Y242F+F266Y+G475K、Y242F+F266Y+A185Q、Y242F+F266Y+N194F、Y242F+N279S+K280Y、Y242F+N279S+G303R、Y242F+N279S+E390A、Y242F+N279S+G475K、Y242F+N279S+A185Q、Y242F+N279S+N194F、Y242F+K280Y+G303R、Y242F+K280Y+E390A、Y242F+K280Y+G475K、Y242F+K280Y+A185Q、Y242F+K280Y+N194F、Y242F+G303R+E390A、Y242F+G303R+G475K、Y242F+G303R+A185Q、Y242F+G303R+N194F、Y242F+E390A+G475K、Y242F+E390A+A185Q、Y242F+E390A+N194F、Y242F+G475K+A185Q、Y242F+G475K+N194F、Y242F+A185Q+N194F、E259G+F266Y+N279S、E259G+F266Y+K280Y、E259G+F266Y+G303R、E259G+F266Y+E390A、E259G+F266Y+G475K、E259G+F266Y+A185Q、E259G+F266Y+N194F、E259G+N279S+K280Y、E259G+N279S+G303R、E259G+N279S+E390A、E259G+N279S+G475K、E259G+N279S+A185Q、E259G+N279S+N194F、E259G+K280Y+G303R、E259G+K280Y+E390A、E259G+K280Y+G475K、E259G+K280Y+A185Q、E259G+K280Y+N194F、E259G+G303R+E390A、E259G+G303R+G475K、E259G+G303R+A185Q、E259G+G303R+N194F、E259G+E390A+G475K、E259G+E390A+A185Q、E259G+E390A+N194F、E259G+G475K+A185Q、E259G+G475K+N194F、E259G+A185Q+N194F、F266Y+N279S+K280Y、F266Y+N279S+G303R、F266Y+N279S+E390A、F266Y+N279S+G475K、F266Y+N279S+A185Q、F266Y+N279S+N194F、F266Y+K280Y+G303R、F266Y+K280Y+E390A、F266Y+K280Y+G475K、F266Y+K280Y+A185Q、F266Y+K280Y+N194F、F266Y+G303R+E390A、F266Y+G303R+G475K、F266Y+G303R+A185Q、F266Y+G303R+N194F、F266Y+E390A+G475K、F266Y+E390A+A185Q、F266Y+E390A+N194F、F266Y+G475K+A185Q、F266Y+G475K+N194F、F266Y+A185Q+N194F、N279S+K280Y+G303R、N279S+K280Y+E390A、N279S+K280Y+G475K、N279S+K280Y+A185Q、N279S+K280Y+N194F、N279S+G303R+E390A、N279S+G303R+G475K、N279S+G303R+A185Q、N279S+G303R+N194F、N279S+E390A+G475K、N279S+E390A+A185Q、N279S+E390A+N194F、N279S+G475K+A185Q、
N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194Fに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号1の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号1の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7
A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号1の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G
7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号1の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号1の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号1の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号1の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
番号付けのために配列番号1を使用して、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aと、を含む、配列番号1の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194Fに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号2の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182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F、T182S+Y242F+E259G、T182S+Y242F+F266Y、T182S+Y242F+N279S、T182S+Y242F+K280Y、T182S+Y242F+G303R、T182S+Y242F+E390A、T182S+Y242F+G475K、T182S+Y242F+A185Q、T182S+Y242F+N194F、T182S+E259G+F266Y、T182S+E259G+N279S、T182S+E259G+K280Y、T182S+E259G+G303R、T182S+E259G+E390A、T182S+E259G+G475K、T182S+E259G+A185Q、T182S+E259G+N194F、T182S+F266Y+N279S、T182S+F266Y+K280Y、T182S+F266Y+G303R、T182S+F266Y+E390A、T182S+F266Y+G475K、T182S+F266Y+A185Q、T182S+F266Y+N194F、T182S+N279S+K280Y、T182S+N279S+G303R、T182S+N279S+E390A、T182S+N279S+G475K、T182S+N279S+A185Q、T182S+N279S+N194F、T182S+K280Y+G303R、T182S+K280Y+E390A、T182S+K280Y+G475K、T182S+K280Y+A185Q、T182S+K280Y+N194F、T182S+G303R+E390A、T182S+G303R+G475K、T182S+G303R+A185Q、T182S+G303R+N194F、T182S+E390A+G475K、T182S+E390A+A185Q、T182S+E390A+N194F、T182S+G475K+A185Q、T182S+G475K+N194F、T182S+A185Q+N194F、A185D+E189P+Y242F、A185D+E189P+E259G、A185D+E189P+F266Y、A185D+E189P+N279S、A185D+E189P+K280Y、A185D+E189P+G303R、A185D+E189P+E390A、A185D+E189P+G475K、A185D+E189P+A185Q、A185D+E189P+N194F、A185D+Y242F+E259G、A185D+Y242F+F266Y、A185D+Y242F+N279S、A185D+Y242F+K280Y、A185D+Y242F+G303R、A185D+Y242F+E390A、A185D+Y242F+G475K、A185D+Y242F+A185Q、A185D+Y242F+N194F、A185D+E259G+F266Y、A185D+E259G+N279S、A185D+E259G+K280Y、A185D+E259G+G303R、A185D+E259G+E390A、A185D+E259G+G475K、A185D+E259G+A185Q、A185D+E259G+N194F、A185D+F266Y+N279S、A185D+F266Y+K280Y、A185D+F266Y+G303R、A185D+F266Y+E390A、A185D+F266Y+G475K、A185D+F266Y+A185Q、A185D+F266Y+N194F、A185D+N279S+K280Y、A185D+N279S+G303R、A185D+N279S+E390A、A185D+N279S+G475K、A185D+N279S+A185Q、A185D+N279S+N194F、A185D+K280Y+G303R、A185D+K280Y+E390A、A185D+K280Y+G475K、A185D+K280Y+A185Q、A185D+K280Y+N194F、A185D+G303R+E390A、A185D+G303R+G475K、A185D+G303R+A185Q、A185D+G303R+N194F、A185D+E390A+G475K、A185D+E390A+A185Q、A185D+E390A+N194F、A185D+G475K+A185Q、A185D+G475K+N194F、A185D+A185Q+N194F、E189P+Y242F+E259G、E189P+Y242F+F266Y、E189P+Y242F+N279S、E189P+Y242F+K280Y、E189P+Y242F+G303R、E189P+Y242F+E390A、E189P+Y242F+G475K、E189P+Y242F+A185Q、E189P+Y242F+N194F、E189P+E259G+F266Y、E189P+E259G+N279S、E189P+E259G+K280Y、E189P+E259G+G303R、E189P+E259G+E390A、E189P+E259G+G475K、E189P+E259G+A185Q、E189P+E259G+N194F、E189P+F266Y+N279S、E189P+F266Y+K280Y、E189P+F266Y+G303R、E189P+F266Y+E390A、E189P+F266Y+G475K、E189P+F266Y+A185Q、E189P+F266Y+N194F、E189P+N279S+K280Y、E189P+N279S+G303R、E189P+N279S+E390A、E189P+N279S+G475K、E189P+N279S+A185Q、E189P+N279S+N194F、E189P+K280Y+G303R、E189P+K280Y+E390A、E189P+K280Y+G475K、E189P+K280Y+A185Q、E189P+K280Y+N194F、E189P+G303R+E390A、E189P+G303R+G475K、E189P+G303R+A185Q、E189P+G303R+N194F、E189P+E390A+G475K、E189P+E390A+A185Q、E189P+E390A+N194F、E189P+G475K+A185Q、E189P+G475K+N194F、E189P+A185Q+N194F、Y242F+E259G+F266Y、Y242F+E259G+N279S、Y242F+E259G+K280Y、Y242F+E259G+G303R、Y242F+E259G+E390A、Y242F+E259G+G475K、Y242F+E259G+A185Q、Y242F+E259G+N194F、Y242F+F266Y+N279S、Y242F+F266Y+K280Y、Y242F+F266Y+G303R、Y242F+F266Y+E390A、Y242F+F266Y+G475K、Y242F+F266Y+A185Q、Y242F+F266Y+N194F、Y242F+N279S+K280Y、Y242F+N279S+G303R、Y242F+N279S+E390A、Y242F+N279S+G475K、Y242F+N279S+A185Q、Y242F+N279S+N194F、Y242F+K280Y+G303R、Y242F+K280Y+E390A、Y242F+K280Y+G475K、Y242F+K280Y+A185Q、Y242F+K280Y+N194F、Y242F+G303R+E390A、Y242F+G303R+G475K、Y242F+G303R+A185Q、Y242F+G303R+N194F、Y242F+E390A+G475K、Y242F+E390A+A185Q、Y242F+E390A+N194F、Y242F+G475K+A185Q、Y242F+G475K+N194F、Y242F+A185Q+N194F、E259G+F266Y+N279S、E259G+F266Y+K280Y、E259G+F266Y+G303R、E259G+F266Y+E390A、E259G+F266Y+G475K、E259G+F266Y+A185Q、E259G+F266Y+N194F、E259G+N279S+K280Y、E259G+N279S+G303R、E259G+N279S+E390A、E259G+N279S+G475K、E259G+N279S+A185Q、E259G+N279S+N194F、E259G+K280Y+G303R、E259G+K280Y+E390A、E259G+K280Y+G475K、E259G+K280Y+A185Q、E259G+K280Y+N194F、E259G+G303R+E390A、E259G+G303R+G475K、E259G+G303R+A185Q、E259G+G303R+N194F、E259G+E390A+G475K、E259G+E390A+A185Q、E259G+E390A+N194F、E259G+G475K+A185Q、E259G+G475K+N194F、E259G+A185Q+N194F、F266Y+N279S+K280Y、F266Y+N279S+G303R、F266Y+N279S+E390A、F266Y+N279S+G475K、F266Y+N279S+A185Q、F266Y+N279S+N194F、F266Y+K280Y+G303R、F266Y+K280Y+E390A、F266Y+K280Y+G475K、F266Y+K280Y+A185Q、F266Y+K280Y+N194F、F266Y+G303R+E390A、F266Y+G303R+G475K、F266Y+G303R+A185Q、F266Y+G303R+N194F、F266Y+E390A+G475K、F266Y+E390A+A185Q、F266Y+E390A+N194F、F266Y+G475K+A185Q、F266Y+G475K+N194F、F266Y+A185Q+N194F、N279S+K280Y+G303R、N279S+K280Y+E390A、N279S+K280Y+G475K、N279S+K280Y+A185Q、N279S+K280Y+N194F、N279S+G303R+E390A、N279S+G303R+G475K、N279S+G303R+A185Q、N279S+G303R+N194F、N279S+E390A+G475K、N279S+E390A+A185Q、N279S+E390A+N194F、N279S+G475K+A185Q、
N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194Fに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号2の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号2の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7
A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号2の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G
7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号2の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号2の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号2の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号2の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
番号付けのために配列番号1を使用して、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aと、を含む、配列番号2の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194Fに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号3の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182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F、T182S+Y242F+E259G、T182S+Y242F+F266Y、T182S+Y242F+N279S、T182S+Y242F+K280Y、T182S+Y242F+G303R、T182S+Y242F+E390A、T182S+Y242F+G475K、T182S+Y242F+A185Q、T182S+Y242F+N194F、T182S+E259G+F266Y、T182S+E259G+N279S、T182S+E259G+K280Y、T182S+E259G+G303R、T182S+E259G+E390A、T182S+E259G+G475K、T182S+E259G+A185Q、T182S+E259G+N194F、T182S+F266Y+N279S、T182S+F266Y+K280Y、T182S+F266Y+G303R、T182S+F266Y+E390A、T182S+F266Y+G475K、T182S+F266Y+A185Q、T182S+F266Y+N194F、T182S+N279S+K280Y、T182S+N279S+G303R、T182S+N279S+E390A、T182S+N279S+G475K、T182S+N279S+A185Q、T182S+N279S+N194F、T182S+K280Y+G303R、T182S+K280Y+E390A、T182S+K280Y+G475K、T182S+K280Y+A185Q、T182S+K280Y+N194F、T182S+G303R+E390A、T182S+G303R+G475K、T182S+G303R+A185Q、T182S+G303R+N194F、T182S+E390A+G475K、T182S+E390A+A185Q、T182S+E390A+N194F、T182S+G475K+A185Q、T182S+G475K+N194F、T182S+A185Q+N194F、A185D+E189P+Y242F、A185D+E189P+E259G、A185D+E189P+F266Y、A185D+E189P+N279S、A185D+E189P+K280Y、A185D+E189P+G303R、A185D+E189P+E390A、A185D+E189P+G475K、A185D+E189P+A185Q、A185D+E189P+N194F、A185D+Y242F+E259G、A185D+Y242F+F266Y、A185D+Y242F+N279S、A185D+Y242F+K280Y、A185D+Y242F+G303R、A185D+Y242F+E390A、A185D+Y242F+G475K、A185D+Y242F+A185Q、A185D+Y242F+N194F、A185D+E259G+F266Y、A185D+E259G+N279S、A185D+E259G+K280Y、A185D+E259G+G303R、A185D+E259G+E390A、A185D+E259G+G475K、A185D+E259G+A185Q、A185D+E259G+N194F、A185D+F266Y+N279S、A185D+F266Y+K280Y、A185D+F266Y+G303R、A185D+F266Y+E390A、A185D+F266Y+G475K、A185D+F266Y+A185Q、A185D+F266Y+N194F、A185D+N279S+K280Y、A185D+N279S+G303R、A185D+N279S+E390A、A185D+N279S+G475K、A185D+N279S+A185Q、A185D+N279S+N194F、A185D+K280Y+G303R、A185D+K280Y+E390A、A185D+K280Y+G475K、A185D+K280Y+A185Q、A185D+K280Y+N194F、A185D+G303R+E390A、A185D+G303R+G475K、A185D+G303R+A185Q、A185D+G303R+N194F、A185D+E390A+G475K、A185D+E390A+A185Q、A185D+E390A+N194F、A185D+G475K+A185Q、A185D+G475K+N194F、A185D+A185Q+N194F、E189P+Y242F+E259G、E189P+Y242F+F266Y、E189P+Y242F+N279S、E189P+Y242F+K280Y、E189P+Y242F+G303R、E189P+Y242F+E390A、E189P+Y242F+G475K、E189P+Y242F+A185Q、E189P+Y242F+N194F、E189P+E259G+F266Y、E189P+E259G+N279S、E189P+E259G+K280Y、E189P+E259G+G303R、E189P+E259G+E390A、E189P+E259G+G475K、E189P+E259G+A185Q、E189P+E259G+N194F、E189P+F266Y+N279S、E189P+F266Y+K280Y、E189P+F266Y+G303R、E189P+F266Y+E390A、E189P+F266Y+G475K、E189P+F266Y+A185Q、E189P+F266Y+N194F、E189P+N279S+K280Y、E189P+N279S+G303R、E189P+N279S+E390A、E189P+N279S+G475K、E189P+N279S+A185Q、E189P+N279S+N194F、E189P+K280Y+G303R、E189P+K280Y+E390A、E189P+K280Y+G475K、E189P+K280Y+A185Q、E189P+K280Y+N194F、E189P+G303R+E390A、E189P+G303R+G475K、E189P+G303R+A185Q、E189P+G303R+N194F、E189P+E390A+G475K、E189P+E390A+A185Q、E189P+E390A+N194F、E189P+G475K+A185Q、E189P+G475K+N194F、E189P+A185Q+N194F、Y242F+E259G+F266Y、Y242F+E259G+N279S、Y242F+E259G+K280Y、Y242F+E259G+G303R、Y242F+E259G+E390A、Y242F+E259G+G475K、Y242F+E259G+A185Q、Y242F+E259G+N194F、Y242F+F266Y+N279S、Y242F+F266Y+K280Y、Y242F+F266Y+G303R、Y242F+F266Y+E390A、Y242F+F266Y+G475K、Y242F+F266Y+A185Q、Y242F+F266Y+N194F、Y242F+N279S+K280Y、Y242F+N279S+G303R、Y242F+N279S+E390A、Y242F+N279S+G475K、Y242F+N279S+A185Q、Y242F+N279S+N194F、Y242F+K280Y+G303R、Y242F+K280Y+E390A、Y242F+K280Y+G475K、Y242F+K280Y+A185Q、Y242F+K280Y+N194F、Y242F+G303R+E390A、Y242F+G303R+G475K、Y242F+G303R+A185Q、Y242F+G303R+N194F、Y242F+E390A+G475K、Y242F+E390A+A185Q、Y242F+E390A+N194F、Y242F+G475K+A185Q、Y242F+G475K+N194F、Y242F+A185Q+N194F、E259G+F266Y+N279S、E259G+F266Y+K280Y、E259G+F266Y+G303R、E259G+F266Y+E390A、E259G+F266Y+G475K、E259G+F266Y+A185Q、E259G+F266Y+N194F、E259G+N279S+K280Y、E259G+N279S+G303R、E259G+N279S+E390A、E259G+N279S+G475K、E259G+N279S+A185Q、E259G+N279S+N194F、E259G+K280Y+G303R、E259G+K280Y+E390A、E259G+K280Y+G475K、E259G+K280Y+A185Q、E259G+K280Y+N194F、E259G+G303R+E390A、E259G+G303R+G475K、E259G+G303R+A185Q、E259G+G303R+N194F、E259G+E390A+G475K、E259G+E390A+A185Q、E259G+E390A+N194F、E259G+G475K+A185Q、E259G+G475K+N194F、E259G+A185Q+N194F、F266Y+N279S+K280Y、F266Y+N279S+G303R、F266Y+N279S+E390A、F266Y+N279S+G475K、F266Y+N279S+A185Q、F266Y+N279S+N194F、F266Y+K280Y+G303R、F266Y+K280Y+E390A、F266Y+K280Y+G475K、F266Y+K280Y+A185Q、F266Y+K280Y+N194F、F266Y+G303R+E390A、F266Y+G303R+G475K、F266Y+G303R+A185Q、F266Y+G303R+N194F、F266Y+E390A+G475K、F266Y+E390A+A185Q、F266Y+E390A+N194F、F266Y+G475K+A185Q、F266Y+G475K+N194F、F266Y+A185Q+N194F、N279S+K280Y+G303R、N279S+K280Y+E390A、N279S+K280Y+G475K、N279S+K280Y+A185Q、N279S+K280Y+N194F、N279S+G303R+E390A、N279S+G303R+G475K、N279S+G303R+A185Q、N279S+G303R+N194F、N279S+E390A+G475K、N279S+E390A+A185Q、N279S+E390A+N194F、N279S+G475K+A185Q、
N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194Fに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号3の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号3の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7
A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号3の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G
7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号3の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号3の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号3の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号3の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
番号付けのために配列番号1を使用して、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aと、を含む、配列番号3の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194Fに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号4の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182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F、T182S+Y242F+E259G、T182S+Y242F+F266Y、T182S+Y242F+N279S、T182S+Y242F+K280Y、T182S+Y242F+G303R、T182S+Y242F+E390A、T182S+Y242F+G475K、T182S+Y242F+A185Q、T182S+Y242F+N194F、T182S+E259G+F266Y、T182S+E259G+N279S、T182S+E259G+K280Y、T182S+E259G+G303R、T182S+E259G+E390A、T182S+E259G+G475K、T182S+E259G+A185Q、T182S+E259G+N194F、T182S+F266Y+N279S、T182S+F266Y+K280Y、T182S+F266Y+G303R、T182S+F266Y+E390A、T182S+F266Y+G475K、T182S+F266Y+A185Q、T182S+F266Y+N194F、T182S+N279S+K280Y、T182S+N279S+G303R、T182S+N279S+E390A、T182S+N279S+G475K、T182S+N279S+A185Q、T182S+N279S+N194F、T182S+K280Y+G303R、T182S+K280Y+E390A、T182S+K280Y+G475K、T182S+K280Y+A185Q、T182S+K280Y+N194F、T182S+G303R+E390A、T182S+G303R+G475K、T182S+G303R+A185Q、T182S+G303R+N194F、T182S+E390A+G475K、T182S+E390A+A185Q、T182S+E390A+N194F、T182S+G475K+A185Q、T182S+G475K+N194F、T182S+A185Q+N194F、A185D+E189P+Y242F、A185D+E189P+E259G、A185D+E189P+F266Y、A185D+E189P+N279S、A185D+E189P+K280Y、A185D+E189P+G303R、A185D+E189P+E390A、A185D+E189P+G475K、A185D+E189P+A185Q、A185D+E189P+N194F、A185D+Y242F+E259G、A185D+Y242F+F266Y、A185D+Y242F+N279S、A185D+Y242F+K280Y、A185D+Y242F+G303R、A185D+Y242F+E390A、A185D+Y242F+G475K、A185D+Y242F+A185Q、A185D+Y242F+N194F、A185D+E259G+F266Y、A185D+E259G+N279S、A185D+E259G+K280Y、A185D+E259G+G303R、A185D+E259G+E390A、A185D+E259G+G475K、A185D+E259G+A185Q、A185D+E259G+N194F、A185D+F266Y+N279S、A185D+F266Y+K280Y、A185D+F266Y+G303R、A185D+F266Y+E390A、A185D+F266Y+G475K、A185D+F266Y+A185Q、A185D+F266Y+N194F、A185D+N279S+K280Y、A185D+N279S+G303R、A185D+N279S+E390A、A185D+N279S+G475K、A185D+N279S+A185Q、A185D+N279S+N194F、A185D+K280Y+G303R、A185D+K280Y+E390A、A185D+K280Y+G475K、A185D+K280Y+A185Q、A185D+K280Y+N194F、A185D+G303R+E390A、A185D+G303R+G475K、A185D+G303R+A185Q、A185D+G303R+N194F、A185D+E390A+G475K、A185D+E390A+A185Q、A185D+E390A+N194F、A185D+G475K+A185Q、A185D+G475K+N194F、A185D+A185Q+N194F、E189P+Y242F+E259G、E189P+Y242F+F266Y、E189P+Y242F+N279S、E189P+Y242F+K280Y、E189P+Y242F+G303R、E189P+Y242F+E390A、E189P+Y242F+G475K、E189P+Y242F+A185Q、E189P+Y242F+N194F、E189P+E259G+F266Y、E189P+E259G+N279S、E189P+E259G+K280Y、E189P+E259G+G303R、E189P+E259G+E390A、E189P+E259G+G475K、E189P+E259G+A185Q、E189P+E259G+N194F、E189P+F266Y+N279S、E189P+F266Y+K280Y、E189P+F266Y+G303R、E189P+F266Y+E390A、E189P+F266Y+G475K、E189P+F266Y+A185Q、E189P+F266Y+N194F、E189P+N279S+K280Y、E189P+N279S+G303R、E189P+N279S+E390A、E189P+N279S+G475K、E189P+N279S+A185Q、E189P+N279S+N194F、E189P+K280Y+G303R、E189P+K280Y+E390A、E189P+K280Y+G475K、E189P+K280Y+A185Q、E189P+K280Y+N194F、E189P+G303R+E390A、E189P+G303R+G475K、E189P+G303R+A185Q、E189P+G303R+N194F、E189P+E390A+G475K、E189P+E390A+A185Q、E189P+E390A+N194F、E189P+G475K+A185Q、E189P+G475K+N194F、E189P+A185Q+N194F、Y242F+E259G+F266Y、Y242F+E259G+N279S、Y242F+E259G+K280Y、Y242F+E259G+G303R、Y242F+E259G+E390A、Y242F+E259G+G475K、Y242F+E259G+A185Q、Y242F+E259G+N194F、Y242F+F266Y+N279S、Y242F+F266Y+K280Y、Y242F+F266Y+G303R、Y242F+F266Y+E390A、Y242F+F266Y+G475K、Y242F+F266Y+A185Q、Y242F+F266Y+N194F、Y242F+N279S+K280Y、Y242F+N279S+G303R、Y242F+N279S+E390A、Y242F+N279S+G475K、Y242F+N279S+A185Q、Y242F+N279S+N194F、Y242F+K280Y+G303R、Y242F+K280Y+E390A、Y242F+K280Y+G475K、Y242F+K280Y+A185Q、Y242F+K280Y+N194F、Y242F+G303R+E390A、Y242F+G303R+G475K、Y242F+G303R+A185Q、Y242F+G303R+N194F、Y242F+E390A+G475K、Y242F+E390A+A185Q、Y242F+E390A+N194F、Y242F+G475K+A185Q、Y242F+G475K+N194F、Y242F+A185Q+N194F、E259G+F266Y+N279S、E259G+F266Y+K280Y、E259G+F266Y+G303R、E259G+F266Y+E390A、E259G+F266Y+G475K、E259G+F266Y+A185Q、E259G+F266Y+N194F、E259G+N279S+K280Y、E259G+N279S+G303R、E259G+N279S+E390A、E259G+N279S+G475K、E259G+N279S+A185Q、E259G+N279S+N194F、E259G+K280Y+G303R、E259G+K280Y+E390A、E259G+K280Y+G475K、E259G+K280Y+A185Q、E259G+K280Y+N194F、E259G+G303R+E390A、E259G+G303R+G475K、E259G+G303R+A185Q、E259G+G303R+N194F、E259G+E390A+G475K、E259G+E390A+A185Q、E259G+E390A+N194F、E259G+G475K+A185Q、E259G+G475K+N194F、E259G+A185Q+N194F、F266Y+N279S+K280Y、F266Y+N279S+G303R、F266Y+N279S+E390A、F266Y+N279S+G475K、F266Y+N279S+A185Q、F266Y+N279S+N194F、F266Y+K280Y+G303R、F266Y+K280Y+E390A、F266Y+K280Y+G475K、F266Y+K280Y+A185Q、F266Y+K280Y+N194F、F266Y+G303R+E390A、F266Y+G303R+G475K、F266Y+G303R+A185Q、F266Y+G303R+N194F、F266Y+E390A+G475K、F266Y+E390A+A185Q、F266Y+E390A+N194F、F266Y+G475K+A185Q、F266Y+G475K+N194F、F266Y+A185Q+N194F、N279S+K280Y+G303R、N279S+K280Y+E390A、N279S+K280Y+G475K、N279S+K280Y+A185Q、N279S+K280Y+N194F、N279S+G303R+E390A、N279S+G303R+G475K、N279S+G303R+A185Q、N279S+G303R+N194F、N279S+E390A+G475K、N279S+E390A+A185Q、N279S+E390A+N194F、N279S+G475K+A185Q、
N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194Fに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号4の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号4の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279SH1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A
+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号4の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G
7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号4の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号4の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号4の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号4の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
番号付けのために配列番号1を使用して、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aと、を含む、配列番号4の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194Fに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号5の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182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F、T182S+Y242F+E259G、T182S+Y242F+F266Y、T182S+Y242F+N279S、T182S+Y242F+K280Y、T182S+Y242F+G303R、T182S+Y242F+E390A、T182S+Y242F+G475K、T182S+Y242F+A185Q、T182S+Y242F+N194F、T182S+E259G+F266Y、T182S+E259G+N279S、T182S+E259G+K280Y、T182S+E259G+G303R、T182S+E259G+E390A、T182S+E259G+G475K、T182S+E259G+A185Q、T182S+E259G+N194F、T182S+F266Y+N279S、T182S+F266Y+K280Y、T182S+F266Y+G303R、T182S+F266Y+E390A、T182S+F266Y+G475K、T182S+F266Y+A185Q、T182S+F266Y+N194F、T182S+N279S+K280Y、T182S+N279S+G303R、T182S+N279S+E390A、T182S+N279S+G475K、T182S+N279S+A185Q、T182S+N279S+N194F、T182S+K280Y+G303R、T182S+K280Y+E390A、T182S+K280Y+G475K、T182S+K280Y+A185Q、T182S+K280Y+N194F、T182S+G303R+E390A、T182S+G303R+G475K、T182S+G303R+A185Q、T182S+G303R+N194F、T182S+E390A+G475K、T182S+E390A+A185Q、T182S+E390A+N194F、T182S+G475K+A185Q、T182S+G475K+N194F、T182S+A185Q+N194F、A185D+E189P+Y242F、A185D+E189P+E259G、A185D+E189P+F266Y、A185D+E189P+N279S、A185D+E189P+K280Y、A185D+E189P+G303R、A185D+E189P+E390A、A185D+E189P+G475K、A185D+E189P+A185Q、A185D+E189P+N194F、A185D+Y242F+E259G、A185D+Y242F+F266Y、A185D+Y242F+N279S、A185D+Y242F+K280Y、A185D+Y242F+G303R、A185D+Y242F+E390A、A185D+Y242F+G475K、A185D+Y242F+A185Q、A185D+Y242F+N194F、A185D+E259G+F266Y、A185D+E259G+N279S、A185D+E259G+K280Y、A185D+E259G+G303R、A185D+E259G+E390A、A185D+E259G+G475K、A185D+E259G+A185Q、A185D+E259G+N194F、A185D+F266Y+N279S、A185D+F266Y+K280Y、A185D+F266Y+G303R、A185D+F266Y+E390A、A185D+F266Y+G475K、A185D+F266Y+A185Q、A185D+F266Y+N194F、A185D+N279S+K280Y、A185D+N279S+G303R、A185D+N279S+E390A、A185D+N279S+G475K、A185D+N279S+A185Q、A185D+N279S+N194F、A185D+K280Y+G303R、A185D+K280Y+E390A、A185D+K280Y+G475K、A185D+K280Y+A185Q、A185D+K280Y+N194F、A185D+G303R+E390A、A185D+G303R+G475K、A185D+G303R+A185Q、A185D+G303R+N194F、A185D+E390A+G475K、A185D+E390A+A185Q、A185D+E390A+N194F、A185D+G475K+A185Q、A185D+G475K+N194F、A185D+A185Q+N194F、E189P+Y242F+E259G、E189P+Y242F+F266Y、E189P+Y242F+N279S、E189P+Y242F+K280Y、E189P+Y242F+G303R、E189P+Y242F+E390A、E189P+Y242F+G475K、E189P+Y242F+A185Q、E189P+Y242F+N194F、E189P+E259G+F266Y、E189P+E259G+N279S、E189P+E259G+K280Y、E189P+E259G+G303R、E189P+E259G+E390A、E189P+E259G+G475K、E189P+E259G+A185Q、E189P+E259G+N194F、E189P+F266Y+N279S、E189P+F266Y+K280Y、E189P+F266Y+G303R、E189P+F266Y+E390A、E189P+F266Y+G475K、E189P+F266Y+A185Q、E189P+F266Y+N194F、E189P+N279S+K280Y、E189P+N279S+G303R、E189P+N279S+E390A、E189P+N279S+G475K、E189P+N279S+A185Q、E189P+N279S+N194F、E189P+K280Y+G303R、E189P+K280Y+E390A、E189P+K280Y+G475K、E189P+K280Y+A185Q、E189P+K280Y+N194F、E189P+G303R+E390A、E189P+G303R+G475K、E189P+G303R+A185Q、E189P+G303R+N194F、E189P+E390A+G475K、E189P+E390A+A185Q、E189P+E390A+N194F、E189P+G475K+A185Q、E189P+G475K+N194F、E189P+A185Q+N194F、Y242F+E259G+F266Y、Y242F+E259G+N279S、Y242F+E259G+K280Y、Y242F+E259G+G303R、Y242F+E259G+E390A、Y242F+E259G+G475K、Y242F+E259G+A185Q、Y242F+E259G+N194F、Y242F+F266Y+N279S、Y242F+F266Y+K280Y、Y242F+F266Y+G303R、Y242F+F266Y+E390A、Y242F+F266Y+G475K、Y242F+F266Y+A185Q、Y242F+F266Y+N194F、Y242F+N279S+K280Y、Y242F+N279S+G303R、Y242F+N279S+E390A、Y242F+N279S+G475K、Y242F+N279S+A185Q、Y242F+N279S+N194F、Y242F+K280Y+G303R、Y242F+K280Y+E390A、Y242F+K280Y+G475K、Y242F+K280Y+A185Q、Y242F+K280Y+N194F、Y242F+G303R+E390A、Y242F+G303R+G475K、Y242F+G303R+A185Q、Y242F+G303R+N194F、Y242F+E390A+G475K、Y242F+E390A+A185Q、Y242F+E390A+N194F、Y242F+G475K+A185Q、Y242F+G475K+N194F、Y242F+A185Q+N194F、E259G+F266Y+N279S、E259G+F266Y+K280Y、E259G+F266Y+G303R、E259G+F266Y+E390A、E259G+F266Y+G475K、E259G+F266Y+A185Q、E259G+F266Y+N194F、E259G+N279S+K280Y、E259G+N279S+G303R、E259G+N279S+E390A、E259G+N279S+G475K、E259G+N279S+A185Q、E259G+N279S+N194F、E259G+K280Y+G303R、E259G+K280Y+E390A、E259G+K280Y+G475K、E259G+K280Y+A185Q、E259G+K280Y+N194F、E259G+G303R+E390A、E259G+G303R+G475K、E259G+G303R+A185Q、E259G+G303R+N194F、E259G+E390A+G475K、E259G+E390A+A185Q、E259G+E390A+N194F、E259G+G475K+A185Q、E259G+G475K+N194F、E259G+A185Q+N194F、F266Y+N279S+K280Y、F266Y+N279S+G303R、F266Y+N279S+E390A、F266Y+N279S+G475K、F266Y+N279S+A185Q、F266Y+N279S+N194F、F266Y+K280Y+G303R、F266Y+K280Y+E390A、F266Y+K280Y+G475K、F266Y+K280Y+A185Q、F266Y+K280Y+N194F、F266Y+G303R+E390A、F266Y+G303R+G475K、F266Y+G303R+A185Q、F266Y+G303R+N194F、F266Y+E390A+G475K、F266Y+E390A+A185Q、F266Y+E390A+N194F、F266Y+G475K+A185Q、F266Y+G475K+N194F、F266Y+A185Q+N194F、N279S+K280Y+G303R、N279S+K280Y+E390A、N279S+K280Y+G475K、N279S+K280Y+A185Q、N279S+K280Y+N194F、N279S+G303R+E390A、N279S+G303R+G475K、N279S+G303R+A185Q、N279S+G303R+N194F、N279S+E390A+G475K、N279S+E390A+A185Q、N279S+E390A+N194F、N279S+G475K+A185Q、
N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194Fに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号5の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号5の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7
A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号5の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G
7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号5の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号5の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号5の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号5の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
番号付けのために配列番号1を使用して、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aと、を含む、配列番号5の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194Fに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号6の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182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F、T182S+Y242F+E259G、T182S+Y242F+F266Y、T182S+Y242F+N279S、T182S+Y242F+K280Y、T182S+Y242F+G303R、T182S+Y242F+E390A、T182S+Y242F+G475K、T182S+Y242F+A185Q、T182S+Y242F+N194F、T182S+E259G+F266Y、T182S+E259G+N279S、T182S+E259G+K280Y、T182S+E259G+G303R、T182S+E259G+E390A、T182S+E259G+G475K、T182S+E259G+A185Q、T182S+E259G+N194F、T182S+F266Y+N279S、T182S+F266Y+K280Y、T182S+F266Y+G303R、T182S+F266Y+E390A、T182S+F266Y+G475K、T182S+F266Y+A185Q、T182S+F266Y+N194F、T182S+N279S+K280Y、T182S+N279S+G303R、T182S+N279S+E390A、T182S+N279S+G475K、T182S+N279S+A185Q、T182S+N279S+N194F、T182S+K280Y+G303R、T182S+K280Y+E390A、T182S+K280Y+G475K、T182S+K280Y+A185Q、T182S+K280Y+N194F、T182S+G303R+E390A、T182S+G303R+G475K、T182S+G303R+A185Q、T182S+G303R+N194F、T182S+E390A+G475K、T182S+E390A+A185Q、T182S+E390A+N194F、T182S+G475K+A185Q、T182S+G475K+N194F、T182S+A185Q+N194F、A185D+E189P+Y242F、A185D+E189P+E259G、A185D+E189P+F266Y、A185D+E189P+N279S、A185D+E189P+K280Y、A185D+E189P+G303R、A185D+E189P+E390A、A185D+E189P+G475K、A185D+E189P+A185Q、A185D+E189P+N194F、A185D+Y242F+E259G、A185D+Y242F+F266Y、A185D+Y242F+N279S、A185D+Y242F+K280Y、A185D+Y242F+G303R、A185D+Y242F+E390A、A185D+Y242F+G475K、A185D+Y242F+A185Q、A185D+Y242F+N194F、A185D+E259G+F266Y、A185D+E259G+N279S、A185D+E259G+K280Y、A185D+E259G+G303R、A185D+E259G+E390A、A185D+E259G+G475K、A185D+E259G+A185Q、A185D+E259G+N194F、A185D+F266Y+N279S、A185D+F266Y+K280Y、A185D+F266Y+G303R、A185D+F266Y+E390A、A185D+F266Y+G475K、A185D+F266Y+A185Q、A185D+F266Y+N194F、A185D+N279S+K280Y、A185D+N279S+G303R、A185D+N279S+E390A、A185D+N279S+G475K、A185D+N279S+A185Q、A185D+N279S+N194F、A185D+K280Y+G303R、A185D+K280Y+E390A、A185D+K280Y+G475K、A185D+K280Y+A185Q、A185D+K280Y+N194F、A185D+G303R+E390A、A185D+G303R+G475K、A185D+G303R+A185Q、A185D+G303R+N194F、A185D+E390A+G475K、A185D+E390A+A185Q、A185D+E390A+N194F、A185D+G475K+A185Q、A185D+G475K+N194F、A185D+A185Q+N194F、E189P+Y242F+E259G、E189P+Y242F+F266Y、E189P+Y242F+N279S、E189P+Y242F+K280Y、E189P+Y242F+G303R、E189P+Y242F+E390A、E189P+Y242F+G475K、E189P+Y242F+A185Q、E189P+Y242F+N194F、E189P+E259G+F266Y、E189P+E259G+N279S、E189P+E259G+K280Y、E189P+E259G+G303R、E189P+E259G+E390A、E189P+E259G+G475K、E189P+E259G+A185Q、E189P+E259G+N194F、E189P+F266Y+N279S、E189P+F266Y+K280Y、E189P+F266Y+G303R、E189P+F266Y+E390A、E189P+F266Y+G475K、E189P+F266Y+A185Q、E189P+F266Y+N194F、E189P+N279S+K280Y、E189P+N279S+G303R、E189P+N279S+E390A、E189P+N279S+G475K、E189P+N279S+A185Q、E189P+N279S+N194F、E189P+K280Y+G303R、E189P+K280Y+E390A、E189P+K280Y+G475K、E189P+K280Y+A185Q、E189P+K280Y+N194F、E189P+G303R+E390A、E189P+G303R+G475K、E189P+G303R+A185Q、E189P+G303R+N194F、E189P+E390A+G475K、E189P+E390A+A185Q、E189P+E390A+N194F、E189P+G475K+A185Q、E189P+G475K+N194F、E189P+A185Q+N194F、Y242F+E259G+F266Y、Y242F+E259G+N279S、Y242F+E259G+K280Y、Y242F+E259G+G303R、Y242F+E259G+E390A、Y242F+E259G+G475K、Y242F+E259G+A185Q、Y242F+E259G+N194F、Y242F+F266Y+N279S、Y242F+F266Y+K280Y、Y242F+F266Y+G303R、Y242F+F266Y+E390A、Y242F+F266Y+G475K、Y242F+F266Y+A185Q、Y242F+F266Y+N194F、Y242F+N279S+K280Y、Y242F+N279S+G303R、Y242F+N279S+E390A、Y242F+N279S+G475K、Y242F+N279S+A185Q、Y242F+N279S+N194F、Y242F+K280Y+G303R、Y242F+K280Y+E390A、Y242F+K280Y+G475K、Y242F+K280Y+A185Q、Y242F+K280Y+N194F、Y242F+G303R+E390A、Y242F+G303R+G475K、Y242F+G303R+A185Q、Y242F+G303R+N194F、Y242F+E390A+G475K、Y242F+E390A+A185Q、Y242F+E390A+N194F、Y242F+G475K+A185Q、Y242F+G475K+N194F、Y242F+A185Q+N194F、E259G+F266Y+N279S、E259G+F266Y+K280Y、E259G+F266Y+G303R、E259G+F266Y+E390A、E259G+F266Y+G475K、E259G+F266Y+A185Q、E259G+F266Y+N194F、E259G+N279S+K280Y、E259G+N279S+G303R、E259G+N279S+E390A、E259G+N279S+G475K、E259G+N279S+A185Q、E259G+N279S+N194F、E259G+K280Y+G303R、E259G+K280Y+E390A、E259G+K280Y+G475K、E259G+K280Y+A185Q、E259G+K280Y+N194F、E259G+G303R+E390A、E259G+G303R+G475K、E259G+G303R+A185Q、E259G+G303R+N194F、E259G+E390A+G475K、E259G+E390A+A185Q、E259G+E390A+N194F、E259G+G475K+A185Q、E259G+G475K+N194F、E259G+A185Q+N194F、F266Y+N279S+K280Y、F266Y+N279S+G303R、F266Y+N279S+E390A、F266Y+N279S+G475K、F266Y+N279S+A185Q、F266Y+N279S+N194F、F266Y+K280Y+G303R、F266Y+K280Y+E390A、F266Y+K280Y+G475K、F266Y+K280Y+A185Q、F266Y+K280Y+N194F、F266Y+G303R+E390A、F266Y+G303R+G475K、F266Y+G303R+A185Q、F266Y+G303R+N194F、F266Y+E390A+G475K、F266Y+E390A+A185Q、F266Y+E390A+N194F、F266Y+G475K+A185Q、F266Y+G475K+N194F、F266Y+A185Q+N194F、N279S+K280Y+G303R、N279S+K280Y+E390A、N279S+K280Y+G475K、N279S+K280Y+A185Q、N279S+K280Y+N194F、N279S+G303R+E390A、N279S+G303R+G475K、N279S+G303R+A185Q、N279S+G303R+N194F、N279S+E390A+G475K、N279S+E390A+A185Q、N279S+E390A+N194F、N279S+G475K+A185Q、
N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194Fに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号6の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号6の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7
A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号6の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G
7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号6の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号6の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号6の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号6の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
番号付けのために配列番号1を使用して、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aと、を含む、配列番号6の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194Fに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号7の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182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F、T182S+Y242F+E259G、T182S+Y242F+F266Y、T182S+Y242F+N279S、T182S+Y242F+K280Y、T182S+Y242F+G303R、T182S+Y242F+E390A、T182S+Y242F+G475K、T182S+Y242F+A185Q、T182S+Y242F+N194F、T182S+E259G+F266Y、T182S+E259G+N279S、T182S+E259G+K280Y、T182S+E259G+G303R、T182S+E259G+E390A、T182S+E259G+G475K、T182S+E259G+A185Q、T182S+E259G+N194F、T182S+F266Y+N279S、T182S+F266Y+K280Y、T182S+F266Y+G303R、T182S+F266Y+E390A、T182S+F266Y+G475K、T182S+F266Y+A185Q、T182S+F266Y+N194F、T182S+N279S+K280Y、T182S+N279S+G303R、T182S+N279S+E390A、T182S+N279S+G475K、T182S+N279S+A185Q、T182S+N279S+N194F、T182S+K280Y+G303R、T182S+K280Y+E390A、T182S+K280Y+G475K、T182S+K280Y+A185Q、T182S+K280Y+N194F、T182S+G303R+E390A、T182S+G303R+G475K、T182S+G303R+A185Q、T182S+G303R+N194F、T182S+E390A+G475K、T182S+E390A+A185Q、T182S+E390A+N194F、T182S+G475K+A185Q、T182S+G475K+N194F、T182S+A185Q+N194F、A185D+E189P+Y242F、A185D+E189P+E259G、A185D+E189P+F266Y、A185D+E189P+N279S、A185D+E189P+K280Y、A185D+E189P+G303R、A185D+E189P+E390A、A185D+E189P+G475K、A185D+E189P+A185Q、A185D+E189P+N194F、A185D+Y242F+E259G、A185D+Y242F+F266Y、A185D+Y242F+N279S、A185D+Y242F+K280Y、A185D+Y242F+G303R、A185D+Y242F+E390A、A185D+Y242F+G475K、A185D+Y242F+A185Q、A185D+Y242F+N194F、A185D+E259G+F266Y、A185D+E259G+N279S、A185D+E259G+K280Y、A185D+E259G+G303R、A185D+E259G+E390A、A185D+E259G+G475K、A185D+E259G+A185Q、A185D+E259G+N194F、A185D+F266Y+N279S、A185D+F266Y+K280Y、A185D+F266Y+G303R、A185D+F266Y+E390A、A185D+F266Y+G475K、A185D+F266Y+A185Q、A185D+F266Y+N194F、A185D+N279S+K280Y、A185D+N279S+G303R、A185D+N279S+E390A、A185D+N279S+G475K、A185D+N279S+A185Q、A185D+N279S+N194F、A185D+K280Y+G303R、A185D+K280Y+E390A、A185D+K280Y+G475K、A185D+K280Y+A185Q、A185D+K280Y+N194F、A185D+G303R+E390A、A185D+G303R+G475K、A185D+G303R+A185Q、A185D+G303R+N194F、A185D+E390A+G475K、A185D+E390A+A185Q、A185D+E390A+N194F、A185D+G475K+A185Q、A185D+G475K+N194F、A185D+A185Q+N194F、E189P+Y242F+E259G、E189P+Y242F+F266Y、E189P+Y242F+N279S、E189P+Y242F+K280Y、E189P+Y242F+G303R、E189P+Y242F+E390A、E189P+Y242F+G475K、E189P+Y242F+A185Q、E189P+Y242F+N194F、E189P+E259G+F266Y、E189P+E259G+N279S、E189P+E259G+K280Y、E189P+E259G+G303R、E189P+E259G+E390A、E189P+E259G+G475K、E189P+E259G+A185Q、E189P+E259G+N194F、E189P+F266Y+N279S、E189P+F266Y+K280Y、E189P+F266Y+G303R、E189P+F266Y+E390A、E189P+F266Y+G475K、E189P+F266Y+A185Q、E189P+F266Y+N194F、E189P+N279S+K280Y、E189P+N279S+G303R、E189P+N279S+E390A、E189P+N279S+G475K、E189P+N279S+A185Q、E189P+N279S+N194F、E189P+K280Y+G303R、E189P+K280Y+E390A、E189P+K280Y+G475K、E189P+K280Y+A185Q、E189P+K280Y+N194F、E189P+G303R+E390A、E189P+G303R+G475K、E189P+G303R+A185Q、E189P+G303R+N194F、E189P+E390A+G475K、E189P+E390A+A185Q、E189P+E390A+N194F、E189P+G475K+A185Q、E189P+G475K+N194F、E189P+A185Q+N194F、Y242F+E259G+F266Y、Y242F+E259G+N279S、Y242F+E259G+K280Y、Y242F+E259G+G303R、Y242F+E259G+E390A、Y242F+E259G+G475K、Y242F+E259G+A185Q、Y242F+E259G+N194F、Y242F+F266Y+N279S、Y242F+F266Y+K280Y、Y242F+F266Y+G303R、Y242F+F266Y+E390A、Y242F+F266Y+G475K、Y242F+F266Y+A185Q、Y242F+F266Y+N194F、Y242F+N279S+K280Y、Y242F+N279S+G303R、Y242F+N279S+E390A、Y242F+N279S+G475K、Y242F+N279S+A185Q、Y242F+N279S+N194F、Y242F+K280Y+G303R、Y242F+K280Y+E390A、Y242F+K280Y+G475K、Y242F+K280Y+A185Q、Y242F+K280Y+N194F、Y242F+G303R+E390A、Y242F+G303R+G475K、Y242F+G303R+A185Q、Y242F+G303R+N194F、Y242F+E390A+G475K、Y242F+E390A+A185Q、Y242F+E390A+N194F、Y242F+G475K+A185Q、Y242F+G475K+N194F、Y242F+A185Q+N194F、E259G+F266Y+N279S、E259G+F266Y+K280Y、E259G+F266Y+G303R、E259G+F266Y+E390A、E259G+F266Y+G475K、E259G+F266Y+A185Q、E259G+F266Y+N194F、E259G+N279S+K280Y、E259G+N279S+G303R、E259G+N279S+E390A、E259G+N279S+G475K、E259G+N279S+A185Q、E259G+N279S+N194F、E259G+K280Y+G303R、E259G+K280Y+E390A、E259G+K280Y+G475K、E259G+K280Y+A185Q、E259G+K280Y+N194F、E259G+G303R+E390A、E259G+G303R+G475K、E259G+G303R+A185Q、E259G+G303R+N194F、E259G+E390A+G475K、E259G+E390A+A185Q、E259G+E390A+N194F、E259G+G475K+A185Q、E259G+G475K+N194F、E259G+A185Q+N194F、F266Y+N279S+K280Y、F266Y+N279S+G303R、F266Y+N279S+E390A、F266Y+N279S+G475K、F266Y+N279S+A185Q、F266Y+N279S+N194F、F266Y+K280Y+G303R、F266Y+K280Y+E390A、F266Y+K280Y+G475K、F266Y+K280Y+A185Q、F266Y+K280Y+N194F、F266Y+G303R+E390A、F266Y+G303R+G475K、F266Y+G303R+A185Q、F266Y+G303R+N194F、F266Y+E390A+G475K、F266Y+E390A+A185Q、F266Y+E390A+N194F、F266Y+G475K+A185Q、F266Y+G475K+N194F、F266Y+A185Q+N194F、N279S+K280Y+G303R、N279S+K280Y+E390A、N279S+K280Y+G475K、N279S+K280Y+A185Q、N279S+K280Y+N194F、N279S+G303R+E390A、N279S+G303R+G475K、N279S+G303R+A185Q、N279S+G303R+N194F、N279S+E390A+G475K、N279S+E390A+A185Q、N279S+E390A+N194F、N279S+G475K+A185Q、
N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194Fに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号7の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号7の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7
A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号7の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G
7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号7の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号7の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号7の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号7の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
番号付けのために配列番号1を使用して、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aと、を含む、配列番号7の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194Fに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号8の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182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F、T182S+Y242F+E259G、T182S+Y242F+F266Y、T182S+Y242F+N279S、T182S+Y242F+K280Y、T182S+Y242F+G303R、T182S+Y242F+E390A、T182S+Y242F+G475K、T182S+Y242F+A185Q、T182S+Y242F+N194F、T182S+E259G+F266Y、T182S+E259G+N279S、T182S+E259G+K280Y、T182S+E259G+G303R、T182S+E259G+E390A、T182S+E259G+G475K、T182S+E259G+A185Q、T182S+E259G+N194F、T182S+F266Y+N279S、T182S+F266Y+K280Y、T182S+F266Y+G303R、T182S+F266Y+E390A、T182S+F266Y+G475K、T182S+F266Y+A185Q、T182S+F266Y+N194F、T182S+N279S+K280Y、T182S+N279S+G303R、T182S+N279S+E390A、T182S+N279S+G475K、T182S+N279S+A185Q、T182S+N279S+N194F、T182S+K280Y+G303R、T182S+K280Y+E390A、T182S+K280Y+G475K、T182S+K280Y+A185Q、T182S+K280Y+N194F、T182S+G303R+E390A、T182S+G303R+G475K、T182S+G303R+A185Q、T182S+G303R+N194F、T182S+E390A+G475K、T182S+E390A+A185Q、T182S+E390A+N194F、T182S+G475K+A185Q、T182S+G475K+N194F、T182S+A185Q+N194F、A185D+E189P+Y242F、A185D+E189P+E259G、A185D+E189P+F266Y、A185D+E189P+N279S、A185D+E189P+K280Y、A185D+E189P+G303R、A185D+E189P+E390A、A185D+E189P+G475K、A185D+E189P+A185Q、A185D+E189P+N194F、A185D+Y242F+E259G、A185D+Y242F+F266Y、A185D+Y242F+N279S、A185D+Y242F+K280Y、A185D+Y242F+G303R、A185D+Y242F+E390A、A185D+Y242F+G475K、A185D+Y242F+A185Q、A185D+Y242F+N194F、A185D+E259G+F266Y、A185D+E259G+N279S、A185D+E259G+K280Y、A185D+E259G+G303R、A185D+E259G+E390A、A185D+E259G+G475K、A185D+E259G+A185Q、A185D+E259G+N194F、A185D+F266Y+N279S、A185D+F266Y+K280Y、A185D+F266Y+G303R、A185D+F266Y+E390A、A185D+F266Y+G475K、A185D+F266Y+A185Q、A185D+F266Y+N194F、A185D+N279S+K280Y、A185D+N279S+G303R、A185D+N279S+E390A、A185D+N279S+G475K、A185D+N279S+A185Q、A185D+N279S+N194F、A185D+K280Y+G303R、A185D+K280Y+E390A、A185D+K280Y+G475K、A185D+K280Y+A185Q、A185D+K280Y+N194F、A185D+G303R+E390A、A185D+G303R+G475K、A185D+G303R+A185Q、A185D+G303R+N194F、A185D+E390A+G475K、A185D+E390A+A185Q、A185D+E390A+N194F、A185D+G475K+A185Q、A185D+G475K+N194F、A185D+A185Q+N194F、E189P+Y242F+E259G、E189P+Y242F+F266Y、E189P+Y242F+N279S、E189P+Y242F+K280Y、E189P+Y242F+G303R、E189P+Y242F+E390A、E189P+Y242F+G475K、E189P+Y242F+A185Q、E189P+Y242F+N194F、E189P+E259G+F266Y、E189P+E259G+N279S、E189P+E259G+K280Y、E189P+E259G+G303R、E189P+E259G+E390A、E189P+E259G+G475K、E189P+E259G+A185Q、E189P+E259G+N194F、E189P+F266Y+N279S、E189P+F266Y+K280Y、E189P+F266Y+G303R、E189P+F266Y+E390A、E189P+F266Y+G475K、E189P+F266Y+A185Q、E189P+F266Y+N194F、E189P+N279S+K280Y、E189P+N279S+G303R、E189P+N279S+E390A、E189P+N279S+G475K、E189P+N279S+A185Q、E189P+N279S+N194F、E189P+K280Y+G303R、E189P+K280Y+E390A、E189P+K280Y+G475K、E189P+K280Y+A185Q、E189P+K280Y+N194F、E189P+G303R+E390A、E189P+G303R+G475K、E189P+G303R+A185Q、E189P+G303R+N194F、E189P+E390A+G475K、E189P+E390A+A185Q、E189P+E390A+N194F、E189P+G475K+A185Q、E189P+G475K+N194F、E189P+A185Q+N194F、Y242F+E259G+F266Y、Y242F+E259G+N279S、Y242F+E259G+K280Y、Y242F+E259G+G303R、Y242F+E259G+E390A、Y242F+E259G+G475K、Y242F+E259G+A185Q、Y242F+E259G+N194F、Y242F+F266Y+N279S、Y242F+F266Y+K280Y、Y242F+F266Y+G303R、Y242F+F266Y+E390A、Y242F+F266Y+G475K、Y242F+F266Y+A185Q、Y242F+F266Y+N194F、Y242F+N279S+K280Y、Y242F+N279S+G303R、Y242F+N279S+E390A、Y242F+N279S+G475K、Y242F+N279S+A185Q、Y242F+N279S+N194F、Y242F+K280Y+G303R、Y242F+K280Y+E390A、Y242F+K280Y+G475K、Y242F+K280Y+A185Q、Y242F+K280Y+N194F、Y242F+G303R+E390A、Y242F+G303R+G475K、Y242F+G303R+A185Q、Y242F+G303R+N194F、Y242F+E390A+G475K、Y242F+E390A+A185Q、Y242F+E390A+N194F、Y242F+G475K+A185Q、Y242F+G475K+N194F、Y242F+A185Q+N194F、E259G+F266Y+N279S、E259G+F266Y+K280Y、E259G+F266Y+G303R、E259G+F266Y+E390A、E259G+F266Y+G475K、E259G+F266Y+A185Q、E259G+F266Y+N194F、E259G+N279S+K280Y、E259G+N279S+G303R、E259G+N279S+E390A、E259G+N279S+G475K、E259G+N279S+A185Q、E259G+N279S+N194F、E259G+K280Y+G303R、E259G+K280Y+E390A、E259G+K280Y+G475K、E259G+K280Y+A185Q、E259G+K280Y+N194F、E259G+G303R+E390A、E259G+G303R+G475K、E259G+G303R+A185Q、E259G+G303R+N194F、E259G+E390A+G475K、E259G+E390A+A185Q、E259G+E390A+N194F、E259G+G475K+A185Q、E259G+G475K+N194F、E259G+A185Q+N194F、F266Y+N279S+K280Y、F266Y+N279S+G303R、F266Y+N279S+E390A、F266Y+N279S+G475K、F266Y+N279S+A185Q、F266Y+N279S+N194F、F266Y+K280Y+G303R、F266Y+K280Y+E390A、F266Y+K280Y+G475K、F266Y+K280Y+A185Q、F266Y+K280Y+N194F、F266Y+G303R+E390A、F266Y+G303R+G475K、F266Y+G303R+A185Q、F266Y+G303R+N194F、F266Y+E390A+G475K、F266Y+E390A+A185Q、F266Y+E390A+N194F、F266Y+G475K+A185Q、F266Y+G475K+N194F、F266Y+A185Q+N194F、N279S+K280Y+G303R、N279S+K280Y+E390A、N279S+K280Y+G475K、N279S+K280Y+A185Q、N279S+K280Y+N194F、N279S+G303R+E390A、N279S+G303R+G475K、N279S+G303R+A185Q、N279S+G303R+N194F、N279S+E390A+G475K、N279S+E390A+A185Q、N279S+E390A+N194F、N279S+G475K+A185Q、
N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194Fに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号8の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号8の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7
A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号8の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G
7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号8の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号8の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号8の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号8の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
番号付けのために配列番号1を使用して、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aと、を含む、配列番号8の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194Fに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号9の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182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F、T182S+Y242F+E259G、T182S+Y242F+F266Y、T182S+Y242F+N279S、T182S+Y242F+K280Y、T182S+Y242F+G303R、T182S+Y242F+E390A、T182S+Y242F+G475K、T182S+Y242F+A185Q、T182S+Y242F+N194F、T182S+E259G+F266Y、T182S+E259G+N279S、T182S+E259G+K280Y、T182S+E259G+G303R、T182S+E259G+E390A、T182S+E259G+G475K、T182S+E259G+A185Q、T182S+E259G+N194F、T182S+F266Y+N279S、T182S+F266Y+K280Y、T182S+F266Y+G303R、T182S+F266Y+E390A、T182S+F266Y+G475K、T182S+F266Y+A185Q、T182S+F266Y+N194F、T182S+N279S+K280Y、T182S+N279S+G303R、T182S+N279S+E390A、T182S+N279S+G475K、T182S+N279S+A185Q、T182S+N279S+N194F、T182S+K280Y+G303R、T182S+K280Y+E390A、T182S+K280Y+G475K、T182S+K280Y+A185Q、T182S+K280Y+N194F、T182S+G303R+E390A、T182S+G303R+G475K、T182S+G303R+A185Q、T182S+G303R+N194F、T182S+E390A+G475K、T182S+E390A+A185Q、T182S+E390A+N194F、T182S+G475K+A185Q、T182S+G475K+N194F、T182S+A185Q+N194F、A185D+E189P+Y242F、A185D+E189P+E259G、A185D+E189P+F266Y、A185D+E189P+N279S、A185D+E189P+K280Y、A185D+E189P+G303R、A185D+E189P+E390A、A185D+E189P+G475K、A185D+E189P+A185Q、A185D+E189P+N194F、A185D+Y242F+E259G、A185D+Y242F+F266Y、A185D+Y242F+N279S、A185D+Y242F+K280Y、A185D+Y242F+G303R、A185D+Y242F+E390A、A185D+Y242F+G475K、A185D+Y242F+A185Q、A185D+Y242F+N194F、A185D+E259G+F266Y、A185D+E259G+N279S、A185D+E259G+K280Y、A185D+E259G+G303R、A185D+E259G+E390A、A185D+E259G+G475K、A185D+E259G+A185Q、A185D+E259G+N194F、A185D+F266Y+N279S、A185D+F266Y+K280Y、A185D+F266Y+G303R、A185D+F266Y+E390A、A185D+F266Y+G475K、A185D+F266Y+A185Q、A185D+F266Y+N194F、A185D+N279S+K280Y、A185D+N279S+G303R、A185D+N279S+E390A、A185D+N279S+G475K、A185D+N279S+A185Q、A185D+N279S+N194F、A185D+K280Y+G303R、A185D+K280Y+E390A、A185D+K280Y+G475K、A185D+K280Y+A185Q、A185D+K280Y+N194F、A185D+G303R+E390A、A185D+G303R+G475K、A185D+G303R+A185Q、A185D+G303R+N194F、A185D+E390A+G475K、A185D+E390A+A185Q、A185D+E390A+N194F、A185D+G475K+A185Q、A185D+G475K+N194F、A185D+A185Q+N194F、E189P+Y242F+E259G、E189P+Y242F+F266Y、E189P+Y242F+N279S、E189P+Y242F+K280Y、E189P+Y242F+G303R、E189P+Y242F+E390A、E189P+Y242F+G475K、E189P+Y242F+A185Q、E189P+Y242F+N194F、E189P+E259G+F266Y、E189P+E259G+N279S、E189P+E259G+K280Y、E189P+E259G+G303R、E189P+E259G+E390A、E189P+E259G+G475K、E189P+E259G+A185Q、E189P+E259G+N194F、E189P+F266Y+N279S、E189P+F266Y+K280Y、E189P+F266Y+G303R、E189P+F266Y+E390A、E189P+F266Y+G475K、E189P+F266Y+A185Q、E189P+F266Y+N194F、E189P+N279S+K280Y、E189P+N279S+G303R、E189P+N279S+E390A、E189P+N279S+G475K、E189P+N279S+A185Q、E189P+N279S+N194F、E189P+K280Y+G303R、E189P+K280Y+E390A、E189P+K280Y+G475K、E189P+K280Y+A185Q、E189P+K280Y+N194F、E189P+G303R+E390A、E189P+G303R+G475K、E189P+G303R+A185Q、E189P+G303R+N194F、E189P+E390A+G475K、E189P+E390A+A185Q、E189P+E390A+N194F、E189P+G475K+A185Q、E189P+G475K+N194F、E189P+A185Q+N194F、Y242F+E259G+F266Y、Y242F+E259G+N279S、Y242F+E259G+K280Y、Y242F+E259G+G303R、Y242F+E259G+E390A、Y242F+E259G+G475K、Y242F+E259G+A185Q、Y242F+E259G+N194F、Y242F+F266Y+N279S、Y242F+F266Y+K280Y、Y242F+F266Y+G303R、Y242F+F266Y+E390A、Y242F+F266Y+G475K、Y242F+F266Y+A185Q、Y242F+F266Y+N194F、Y242F+N279S+K280Y、Y242F+N279S+G303R、Y242F+N279S+E390A、Y242F+N279S+G475K、Y242F+N279S+A185Q、Y242F+N279S+N194F、Y242F+K280Y+G303R、Y242F+K280Y+E390A、Y242F+K280Y+G475K、Y242F+K280Y+A185Q、Y242F+K280Y+N194F、Y242F+G303R+E390A、Y242F+G303R+G475K、Y242F+G303R+A185Q、Y242F+G303R+N194F、Y242F+E390A+G475K、Y242F+E390A+A185Q、Y242F+E390A+N194F、Y242F+G475K+A185Q、Y242F+G475K+N194F、Y242F+A185Q+N194F、E259G+F266Y+N279S、E259G+F266Y+K280Y、E259G+F266Y+G303R、E259G+F266Y+E390A、E259G+F266Y+G475K、E259G+F266Y+A185Q、E259G+F266Y+N194F、E259G+N279S+K280Y、E259G+N279S+G303R、E259G+N279S+E390A、E259G+N279S+G475K、E259G+N279S+A185Q、E259G+N279S+N194F、E259G+K280Y+G303R、E259G+K280Y+E390A、E259G+K280Y+G475K、E259G+K280Y+A185Q、E259G+K280Y+N194F、E259G+G303R+E390A、E259G+G303R+G475K、E259G+G303R+A185Q、E259G+G303R+N194F、E259G+E390A+G475K、E259G+E390A+A185Q、E259G+E390A+N194F、E259G+G475K+A185Q、E259G+G475K+N194F、E259G+A185Q+N194F、F266Y+N279S+K280Y、F266Y+N279S+G303R、F266Y+N279S+E390A、F266Y+N279S+G475K、F266Y+N279S+A185Q、F266Y+N279S+N194F、F266Y+K280Y+G303R、F266Y+K280Y+E390A、F266Y+K280Y+G475K、F266Y+K280Y+A185Q、F266Y+K280Y+N194F、F266Y+G303R+E390A、F266Y+G303R+G475K、F266Y+G303R+A185Q、F266Y+G303R+N194F、F266Y+E390A+G475K、F266Y+E390A+A185Q、F266Y+E390A+N194F、F266Y+G475K+A185Q、F266Y+G475K+N194F、F266Y+A185Q+N194F、N279S+K280Y+G303R、N279S+K280Y+E390A、N279S+K280Y+G475K、N279S+K280Y+A185Q、N279S+K280Y+N194F、N279S+G303R+E390A、N279S+G303R+G475K、N279S+G303R+A185Q、N279S+G303R+N194F、N279S+E390A+G475K、N279S+E390A+A185Q、N279S+E390A+N194F、N279S+G475K+A185Q、
N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194Fに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号9の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号9の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7
A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号9の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G
7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号9の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R,H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号9の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号9の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号9の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
番号付けのために配列番号1を使用して、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aと、を含む、配列番号9の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194Fに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号10の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182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F、T182S+Y242F+E259G、T182S+Y242F+F266Y、T182S+Y242F+N279S、T182S+Y242F+K280Y、T182S+Y242F+G303R、T182S+Y242F+E390A、T182S+Y242F+G475K、T182S+Y242F+A185Q、T182S+Y242F+N194F、T182S+E259G+F266Y、T182S+E259G+N279S、T182S+E259G+K280Y、T182S+E259G+G303R、T182S+E259G+E390A、T182S+E259G+G475K、T182S+E259G+A185Q、T182S+E259G+N194F、T182S+F266Y+N279S、T182S+F266Y+K280Y、T182S+F266Y+G303R、T182S+F266Y+E390A、T182S+F266Y+G475K、T182S+F266Y+A185Q、T182S+F266Y+N194F、T182S+N279S+K280Y、T182S+N279S+G303R、T182S+N279S+E390A、T182S+N279S+G475K、T182S+N279S+A185Q、T182S+N279S+N194F、T182S+K280Y+G303R、T182S+K280Y+E390A、T182S+K280Y+G475K、T182S+K280Y+A185Q、T182S+K280Y+N194F、T182S+G303R+E390A、T182S+G303R+G475K、T182S+G303R+A185Q、T182S+G303R+N194F、T182S+E390A+G475K、T182S+E390A+A185Q、T182S+E390A+N194F、T182S+G475K+A185Q、T182S+G475K+N194F、T182S+A185Q+N194F、A185D+E189P+Y242F、A185D+E189P+E259G、A185D+E189P+F266Y、A185D+E189P+N279S、A185D+E189P+K280Y、A185D+E189P+G303R、A185D+E189P+E390A、A185D+E189P+G475K、A185D+E189P+A185Q、A185D+E189P+N194F、A185D+Y242F+E259G、A185D+Y242F+F266Y、A185D+Y242F+N279S、A185D+Y242F+K280Y、A185D+Y242F+G303R、A185D+Y242F+E390A、A185D+Y242F+G475K、A185D+Y242F+A185Q、A185D+Y242F+N194F、A185D+E259G+F266Y、A185D+E259G+N279S、A185D+E259G+K280Y、A185D+E259G+G303R、A185D+E259G+E390A、A185D+E259G+G475K、A185D+E259G+A185Q、A185D+E259G+N194F、A185D+F266Y+N279S、A185D+F266Y+K280Y、A185D+F266Y+G303R、A185D+F266Y+E390A、A185D+F266Y+G475K、A185D+F266Y+A185Q、A185D+F266Y+N194F、A185D+N279S+K280Y、A185D+N279S+G303R、A185D+N279S+E390A、A185D+N279S+G475K、A185D+N279S+A185Q、A185D+N279S+N194F、A185D+K280Y+G303R、A185D+K280Y+E390A、A185D+K280Y+G475K、A185D+K280Y+A185Q、A185D+K280Y+N194F、A185D+G303R+E390A、A185D+G303R+G475K、A185D+G303R+A185Q、A185D+G303R+N194F、A185D+E390A+G475K、A185D+E390A+A185Q、A185D+E390A+N194F、A185D+G475K+A185Q、A185D+G475K+N194F、A185D+A185Q+N194F、E189P+Y242F+E259G、E189P+Y242F+F266Y、E189P+Y242F+N279S、E189P+Y242F+K280Y、E189P+Y242F+G303R、E189P+Y242F+E390A、E189P+Y242F+G475K、E189P+Y242F+A185Q、E189P+Y242F+N194F、E189P+E259G+F266Y、E189P+E259G+N279S、E189P+E259G+K280Y、E189P+E259G+G303R、E189P+E259G+E390A、E189P+E259G+G475K、E189P+E259G+A185Q、E189P+E259G+N194F、E189P+F266Y+N279S、E189P+F266Y+K280Y、E189P+F266Y+G303R、E189P+F266Y+E390A、E189P+F266Y+G475K、E189P+F266Y+A185Q、E189P+F266Y+N194F、E189P+N279S+K280Y、E189P+N279S+G303R、E189P+N279S+E390A、E189P+N279S+G475K、E189P+N279S+A185Q、E189P+N279S+N194F、E189P+K280Y+G303R、E189P+K280Y+E390A、E189P+K280Y+G475K、E189P+K280Y+A185Q、E189P+K280Y+N194F、E189P+G303R+E390A、E189P+G303R+G475K、E189P+G303R+A185Q、E189P+G303R+N194F、E189P+E390A+G475K、E189P+E390A+A185Q、E189P+E390A+N194F、E189P+G475K+A185Q、E189P+G475K+N194F、E189P+A185Q+N194F、Y242F+E259G+F266Y、Y242F+E259G+N279S、Y242F+E259G+K280Y、Y242F+E259G+G303R、Y242F+E259G+E390A、Y242F+E259G+G475K、Y242F+E259G+A185Q、Y242F+E259G+N194F、Y242F+F266Y+N279S、Y242F+F266Y+K280Y、Y242F+F266Y+G303R、Y242F+F266Y+E390A、Y242F+F266Y+G475K、Y242F+F266Y+A185Q、Y242F+F266Y+N194F、Y242F+N279S+K280Y、Y242F+N279S+G303R、Y242F+N279S+E390A、Y242F+N279S+G475K、Y242F+N279S+A185Q、Y242F+N279S+N194F、Y242F+K280Y+G303R、Y242F+K280Y+E390A、Y242F+K280Y+G475K、Y242F+K280Y+A185Q、Y242F+K280Y+N194F、Y242F+G303R+E390A、Y242F+G303R+G475K、Y242F+G303R+A185Q、Y242F+G303R+N194F、Y242F+E390A+G475K、Y242F+E390A+A185Q、Y242F+E390A+N194F、Y242F+G475K+A185Q、Y242F+G475K+N194F、Y242F+A185Q+N194F、E259G+F266Y+N279S、E259G+F266Y+K280Y、E259G+F266Y+G303R、E259G+F266Y+E390A、E259G+F266Y+G475K、E259G+F266Y+A185Q、E259G+F266Y+N194F、E259G+N279S+K280Y、E259G+N279S+G303R、E259G+N279S+E390A、E259G+N279S+G475K、E259G+N279S+A185Q、E259G+N279S+N194F、E259G+K280Y+G303R、E259G+K280Y+E390A、E259G+K280Y+G475K、E259G+K280Y+A185Q、E259G+K280Y+N194F、E259G+G303R+E390A、E259G+G303R+G475K、E259G+G303R+A185Q、E259G+G303R+N194F、E259G+E390A+G475K、E259G+E390A+A185Q、E259G+E390A+N194F、E259G+G475K+A185Q、E259G+G475K+N194F、E259G+A185Q+N194F、F266Y+N279S+K280Y、F266Y+N279S+G303R、F266Y+N279S+E390A、F266Y+N279S+G475K、F266Y+N279S+A185Q、F266Y+N279S+N194F、F266Y+K280Y+G303R、F266Y+K280Y+E390A、F266Y+K280Y+G475K、F266Y+K280Y+A185Q、F266Y+K280Y+N194F、F266Y+G303R+E390A、F266Y+G303R+G475K、F266Y+G303R+A185Q、F266Y+G303R+N194F、F266Y+E390A+G475K、F266Y+E390A+A185Q、F266Y+E390A+N194F、F266Y+G475K+A185Q、F266Y+G475K+N194F、F266Y+A185Q+N194F、N279S+K280Y+G303R、N279S+K280Y+E390A、N279S+K280Y+G475K、N279S+K280Y+A185Q、N279S+K280Y+N194F、N279S+G303R+E390A、N279S+G303R+G475K、N279S+G303R+A185Q、N279S+G303R+N194F、N279S+E390A+G475K、N279S+E390A+A185Q、N279S+E390A+N194F、N279S+G475K+A185Q、
N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194Fに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号10の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号10の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7
A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号10の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G
7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号10の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号10の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号10の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号10の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
番号付けのために配列番号1を使用して、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aと、を含む、配列番号10の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194Fに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号11の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182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F、T182S+Y242F+E259G、T182S+Y242F+F266Y、T182S+Y242F+N279S、T182S+Y242F+K280Y、T182S+Y242F+G303R、T182S+Y242F+E390A、T182S+Y242F+G475K、T182S+Y242F+A185Q、T182S+Y242F+N194F、T182S+E259G+F266Y、T182S+E259G+N279S、T182S+E259G+K280Y、T182S+E259G+G303R、T182S+E259G+E390A、T182S+E259G+G475K、T182S+E259G+A185Q、T182S+E259G+N194F、T182S+F266Y+N279S、T182S+F266Y+K280Y、T182S+F266Y+G303R、T182S+F266Y+E390A、T182S+F266Y+G475K、T182S+F266Y+A185Q、T182S+F266Y+N194F、T182S+N279S+K280Y、T182S+N279S+G303R、T182S+N279S+E390A、T182S+N279S+G475K、T182S+N279S+A185Q、T182S+N279S+N194F、T182S+K280Y+G303R、T182S+K280Y+E390A、T182S+K280Y+G475K、T182S+K280Y+A185Q、T182S+K280Y+N194F、T182S+G303R+E390A、T182S+G303R+G475K、T182S+G303R+A185Q、T182S+G303R+N194F、T182S+E390A+G475K、T182S+E390A+A185Q、T182S+E390A+N194F、T182S+G475K+A185Q、T182S+G475K+N194F、T182S+A185Q+N194F、A185D+E189P+Y242F、A185D+E189P+E259G、A185D+E189P+F266Y、A185D+E189P+N279S、A185D+E189P+K280Y、A185D+E189P+G303R、A185D+E189P+E390A、A185D+E189P+G475K、A185D+E189P+A185Q、A185D+E189P+N194F、A185D+Y242F+E259G、A185D+Y242F+F266Y、A185D+Y242F+N279S、A185D+Y242F+K280Y、A185D+Y242F+G303R、A185D+Y242F+E390A、A185D+Y242F+G475K、A185D+Y242F+A185Q、A185D+Y242F+N194F、A185D+E259G+F266Y、A185D+E259G+N279S、A185D+E259G+K280Y、A185D+E259G+G303R、A185D+E259G+E390A、A185D+E259G+G475K、A185D+E259G+A185Q、A185D+E259G+N194F、A185D+F266Y+N279S、A185D+F266Y+K280Y、A185D+F266Y+G303R、A185D+F266Y+E390A、A185D+F266Y+G475K、A185D+F266Y+A185Q、A185D+F266Y+N194F、A185D+N279S+K280Y、A185D+N279S+G303R、A185D+N279S+E390A、A185D+N279S+G475K、A185D+N279S+A185Q、A185D+N279S+N194F、A185D+K280Y+G303R、A185D+K280Y+E390A、A185D+K280Y+G475K、A185D+K280Y+A185Q、A185D+K280Y+N194F、A185D+G303R+E390A、A185D+G303R+G475K、A185D+G303R+A185Q、A185D+G303R+N194F、A185D+E390A+G475K、A185D+E390A+A185Q、A185D+E390A+N194F、A185D+G475K+A185Q、A185D+G475K+N194F、A185D+A185Q+N194F、E189P+Y242F+E259G、E189P+Y242F+F266Y、E189P+Y242F+N279S、E189P+Y242F+K280Y、E189P+Y242F+G303R、E189P+Y242F+E390A、E189P+Y242F+G475K、E189P+Y242F+A185Q、E189P+Y242F+N194F、E189P+E259G+F266Y、E189P+E259G+N279S、E189P+E259G+K280Y、E189P+E259G+G303R、E189P+E259G+E390A、E189P+E259G+G475K、E189P+E259G+A185Q、E189P+E259G+N194F、E189P+F266Y+N279S、E189P+F266Y+K280Y、E189P+F266Y+G303R、E189P+F266Y+E390A、E189P+F266Y+G475K、E189P+F266Y+A185Q、E189P+F266Y+N194F、E189P+N279S+K280Y、E189P+N279S+G303R、E189P+N279S+E390A、E189P+N279S+G475K、E189P+N279S+A185Q、E189P+N279S+N194F、E189P+K280Y+G303R、E189P+K280Y+E390A、E189P+K280Y+G475K、E189P+K280Y+A185Q、E189P+K280Y+N194F、E189P+G303R+E390A、E189P+G303R+G475K、E189P+G303R+A185Q、E189P+G303R+N194F、E189P+E390A+G475K、E189P+E390A+A185Q、E189P+E390A+N194F、E189P+G475K+A185Q、E189P+G475K+N194F、E189P+A185Q+N194F、Y242F+E259G+F266Y、Y242F+E259G+N279S、Y242F+E259G+K280Y、Y242F+E259G+G303R、Y242F+E259G+E390A、Y242F+E259G+G475K、Y242F+E259G+A185Q、Y242F+E259G+N194F、Y242F+F266Y+N279S、Y242F+F266Y+K280Y、Y242F+F266Y+G303R、Y242F+F266Y+E390A、Y242F+F266Y+G475K、Y242F+F266Y+A185Q、Y242F+F266Y+N194F、Y242F+N279S+K280Y、Y242F+N279S+G303R、Y242F+N279S+E390A、Y242F+N279S+G475K、Y242F+N279S+A185Q、Y242F+N279S+N194F、Y242F+K280Y+G303R、Y242F+K280Y+E390A、Y242F+K280Y+G475K、Y242F+K280Y+A185Q、Y242F+K280Y+N194F、Y242F+G303R+E390A、Y242F+G303R+G475K、Y242F+G303R+A185Q、Y242F+G303R+N194F、Y242F+E390A+G475K、Y242F+E390A+A185Q、Y242F+E390A+N194F、Y242F+G475K+A185Q、Y242F+G475K+N194F、Y242F+A185Q+N194F、E259G+F266Y+N279S、E259G+F266Y+K280Y、E259G+F266Y+G303R、E259G+F266Y+E390A、E259G+F266Y+G475K、E259G+F266Y+A185Q、E259G+F266Y+N194F、E259G+N279S+K280Y、E259G+N279S+G303R、E259G+N279S+E390A、E259G+N279S+G475K、E259G+N279S+A185Q、E259G+N279S+N194F、E259G+K280Y+G303R、E259G+K280Y+E390A、E259G+K280Y+G475K、E259G+K280Y+A185Q、E259G+K280Y+N194F、E259G+G303R+E390A、E259G+G303R+G475K、E259G+G303R+A185Q、E259G+G303R+N194F、E259G+E390A+G475K、E259G+E390A+A185Q、E259G+E390A+N194F、E259G+G475K+A185Q、E259G+G475K+N194F、E259G+A185Q+N194F、F266Y+N279S+K280Y、F266Y+N279S+G303R、F266Y+N279S+E390A、F266Y+N279S+G475K、F266Y+N279S+A185Q、F266Y+N279S+N194F、F266Y+K280Y+G303R、F266Y+K280Y+E390A、F266Y+K280Y+G475K、F266Y+K280Y+A185Q、F266Y+K280Y+N194F、F266Y+G303R+E390A、F266Y+G303R+G475K、F266Y+G303R+A185Q、F266Y+G303R+N194F、F266Y+E390A+G475K、F266Y+E390A+A185Q、F266Y+E390A+N194F、F266Y+G475K+A185Q、F266Y+G475K+N194F、F266Y+A185Q+N194F、N279S+K280Y+G303R、N279S+K280Y+E390A、N279S+K280Y+G475K、N279S+K280Y+A185Q、N279S+K280Y+N194F、N279S+G303R+E390A、N279S+G303R+G475K、N279S+G303R+A185Q、N279S+G303R+N194F、N279S+E390A+G475K、N279S+E390A+A185Q、N279S+E390A+N194F、N279S+G475K+A185Q、
N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194Fに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号11の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号11の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7
A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号11の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G
7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号11の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号11の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号11の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号11の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
番号付けのために配列番号1を使用して、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aと、を含む、配列番号11の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194Fに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号12の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182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F、T182S+Y242F+E259G、T182S+Y242F+F266Y、T182S+Y242F+N279S、T182S+Y242F+K280Y、T182S+Y242F+G303R、T182S+Y242F+E390A、T182S+Y242F+G475K、T182S+Y242F+A185Q、T182S+Y242F+N194F、T182S+E259G+F266Y、T182S+E259G+N279S、T182S+E259G+K280Y、T182S+E259G+G303R、T182S+E259G+E390A、T182S+E259G+G475K、T182S+E259G+A185Q、T182S+E259G+N194F、T182S+F266Y+N279S、T182S+F266Y+K280Y、T182S+F266Y+G303R、T182S+F266Y+E390A、T182S+F266Y+G475K、T182S+F266Y+A185Q、T182S+F266Y+N194F、T182S+N279S+K280Y、T182S+N279S+G303R、T182S+N279S+E390A、T182S+N279S+G475K、T182S+N279S+A185Q、T182S+N279S+N194F、T182S+K280Y+G303R、T182S+K280Y+E390A、T182S+K280Y+G475K、T182S+K280Y+A185Q、T182S+K280Y+N194F、T182S+G303R+E390A、T182S+G303R+G475K、T182S+G303R+A185Q、T182S+G303R+N194F、T182S+E390A+G475K、T182S+E390A+A185Q、T182S+E390A+N194F、T182S+G475K+A185Q、T182S+G475K+N194F、T182S+A185Q+N194F、A185D+E189P+Y242F、A185D+E189P+E259G、A185D+E189P+F266Y、A185D+E189P+N279S、A185D+E189P+K280Y、A185D+E189P+G303R、A185D+E189P+E390A、A185D+E189P+G475K、A185D+E189P+A185Q、A185D+E189P+N194F、A185D+Y242F+E259G、A185D+Y242F+F266Y、A185D+Y242F+N279S、A185D+Y242F+K280Y、A185D+Y242F+G303R、A185D+Y242F+E390A、A185D+Y242F+G475K、A185D+Y242F+A185Q、A185D+Y242F+N194F、A185D+E259G+F266Y、A185D+E259G+N279S、A185D+E259G+K280Y、A185D+E259G+G303R、A185D+E259G+E390A、A185D+E259G+G475K、A185D+E259G+A185Q、A185D+E259G+N194F、A185D+F266Y+N279S、A185D+F266Y+K280Y、A185D+F266Y+G303R、A185D+F266Y+E390A、A185D+F266Y+G475K、A185D+F266Y+A185Q、A185D+F266Y+N194F、A185D+N279S+K280Y、A185D+N279S+G303R、A185D+N279S+E390A、A185D+N279S+G475K、A185D+N279S+A185Q、A185D+N279S+N194F、A185D+K280Y+G303R、A185D+K280Y+E390A、A185D+K280Y+G475K、A185D+K280Y+A185Q、A185D+K280Y+N194F、A185D+G303R+E390A、A185D+G303R+G475K、A185D+G303R+A185Q、A185D+G303R+N194F、A185D+E390A+G475K、A185D+E390A+A185Q、A185D+E390A+N194F、A185D+G475K+A185Q、A185D+G475K+N194F、A185D+A185Q+N194F、E189P+Y242F+E259G、E189P+Y242F+F266Y、E189P+Y242F+N279S、E189P+Y242F+K280Y、E189P+Y242F+G303R、E189P+Y242F+E390A、E189P+Y242F+G475K、E189P+Y242F+A185Q、E189P+Y242F+N194F、E189P+E259G+F266Y、E189P+E259G+N279S、E189P+E259G+K280Y、E189P+E259G+G303R、E189P+E259G+E390A、E189P+E259G+G475K、E189P+E259G+A185Q、E189P+E259G+N194F、E189P+F266Y+N279S、E189P+F266Y+K280Y、E189P+F266Y+G303R、E189P+F266Y+E390A、E189P+F266Y+G475K、E189P+F266Y+A185Q、E189P+F266Y+N194F、E189P+N279S+K280Y、E189P+N279S+G303R、E189P+N279S+E390A、E189P+N279S+G475K、E189P+N279S+A185Q、E189P+N279S+N194F、E189P+K280Y+G303R、E189P+K280Y+E390A、E189P+K280Y+G475K、E189P+K280Y+A185Q、E189P+K280Y+N194F、E189P+G303R+E390A、E189P+G303R+G475K、E189P+G303R+A185Q、E189P+G303R+N194F、E189P+E390A+G475K、E189P+E390A+A185Q、E189P+E390A+N194F、E189P+G475K+A185Q、E189P+G475K+N194F、E189P+A185Q+N194F、Y242F+E259G+F266Y、Y242F+E259G+N279S、Y242F+E259G+K280Y、Y242F+E259G+G303R、Y242F+E259G+E390A、Y242F+E259G+G475K、Y242F+E259G+A185Q、Y242F+E259G+N194F、Y242F+F266Y+N279S、Y242F+F266Y+K280Y、Y242F+F266Y+G303R、Y242F+F266Y+E390A、Y242F+F266Y+G475K、Y242F+F266Y+A185Q、Y242F+F266Y+N194F、Y242F+N279S+K280Y、Y242F+N279S+G303R、Y242F+N279S+E390A、Y242F+N279S+G475K、Y242F+N279S+A185Q、Y242F+N279S+N194F、Y242F+K280Y+G303R、Y242F+K280Y+E390A、Y242F+K280Y+G475K、Y242F+K280Y+A185Q、Y242F+K280Y+N194F、Y242F+G303R+E390A、Y242F+G303R+G475K、Y242F+G303R+A185Q、Y242F+G303R+N194F、Y242F+E390A+G475K、Y242F+E390A+A185Q、Y242F+E390A+N194F、Y242F+G475K+A185Q、Y242F+G475K+N194F、Y242F+A185Q+N194F、E259G+F266Y+N279S、E259G+F266Y+K280Y、E259G+F266Y+G303R、E259G+F266Y+E390A、E259G+F266Y+G475K、E259G+F266Y+A185Q、E259G+F266Y+N194F、E259G+N279S+K280Y、E259G+N279S+G303R、E259G+N279S+E390A、E259G+N279S+G475K、E259G+N279S+A185Q、E259G+N279S+N194F、E259G+K280Y+G303R、E259G+K280Y+E390A、E259G+K280Y+G475K、E259G+K280Y+A185Q、E259G+K280Y+N194F、E259G+G303R+E390A、E259G+G303R+G475K、E259G+G303R+A185Q、E259G+G303R+N194F、E259G+E390A+G475K、E259G+E390A+A185Q、E259G+E390A+N194F、E259G+G475K+A185Q、E259G+G475K+N194F、E259G+A185Q+N194F、F266Y+N279S+K280Y、F266Y+N279S+G303R、F266Y+N279S+E390A、F266Y+N279S+G475K、F266Y+N279S+A185Q、F266Y+N279S+N194F、F266Y+K280Y+G303R、F266Y+K280Y+E390A、F266Y+K280Y+G475K、F266Y+K280Y+A185Q、F266Y+K280Y+N194F、F266Y+G303R+E390A、F266Y+G303R+G475K、F266Y+G303R+A185Q、F266Y+G303R+N194F、F266Y+E390A+G475K、F266Y+E390A+A185Q、F266Y+E390A+N194F、F266Y+G475K+A185Q、F266Y+G475K+N194F、F266Y+A185Q+N194F、N279S+K280Y+G303R、N279S+K280Y+E390A、N279S+K280Y+G475K、N279S+K280Y+A185Q、N279S+K280Y+N194F、N279S+G303R+E390A、N279S+G303R+G475K、N279S+G303R+A185Q、N279S+G303R+N194F、N279S+E390A+G475K、N279S+E390A+A185Q、N279S+E390A+N194F、N279S+G475K+A185Q、
N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194Fに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号12の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号12の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7
A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号12の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G
7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号12の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号12の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号12の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号12の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
番号付けのために配列番号1を使用して、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aと、を含む、配列番号12の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194Fに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号13の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182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F、T182S+Y242F+E259G、T182S+Y242F+F266Y、T182S+Y242F+N279S、T182S+Y242F+K280Y、T182S+Y242F+G303R、T182S+Y242F+E390A、T182S+Y242F+G475K、T182S+Y242F+A185Q、T182S+Y242F+N194F、T182S+E259G+F266Y、T182S+E259G+N279S、T182S+E259G+K280Y、T182S+E259G+G303R、T182S+E259G+E390A、T182S+E259G+G475K、T182S+E259G+A185Q、T182S+E259G+N194F、T182S+F266Y+N279S、T182S+F266Y+K280Y、T182S+F266Y+G303R、T182S+F266Y+E390A、T182S+F266Y+G475K、T182S+F266Y+A185Q、T182S+F266Y+N194F、T182S+N279S+K280Y、T182S+N279S+G303R、T182S+N279S+E390A、T182S+N279S+G475K、T182S+N279S+A185Q、T182S+N279S+N194F、T182S+K280Y+G303R、T182S+K280Y+E390A、T182S+K280Y+G475K、T182S+K280Y+A185Q、T182S+K280Y+N194F、T182S+G303R+E390A、T182S+G303R+G475K、T182S+G303R+A185Q、T182S+G303R+N194F、T182S+E390A+G475K、T182S+E390A+A185Q、T182S+E390A+N194F、T182S+G475K+A185Q、T182S+G475K+N194F、T182S+A185Q+N194F、A185D+E189P+Y242F、A185D+E189P+E259G、A185D+E189P+F266Y、A185D+E189P+N279S、A185D+E189P+K280Y、A185D+E189P+G303R、A185D+E189P+E390A、A185D+E189P+G475K、A185D+E189P+A185Q、A185D+E189P+N194F、A185D+Y242F+E259G、A185D+Y242F+F266Y、A185D+Y242F+N279S、A185D+Y242F+K280Y、A185D+Y242F+G303R、A185D+Y242F+E390A、A185D+Y242F+G475K、A185D+Y242F+A185Q、A185D+Y242F+N194F、A185D+E259G+F266Y、A185D+E259G+N279S、A185D+E259G+K280Y、A185D+E259G+G303R、A185D+E259G+E390A、A185D+E259G+G475K、A185D+E259G+A185Q、A185D+E259G+N194F、A185D+F266Y+N279S、A185D+F266Y+K280Y、A185D+F266Y+G303R、A185D+F266Y+E390A、A185D+F266Y+G475K、A185D+F266Y+A185Q、A185D+F266Y+N194F、A185D+N279S+K280Y、A185D+N279S+G303R、A185D+N279S+E390A、A185D+N279S+G475K、A185D+N279S+A185Q、A185D+N279S+N194F、A185D+K280Y+G303R、A185D+K280Y+E390A、A185D+K280Y+G475K、A185D+K280Y+A185Q、A185D+K280Y+N194F、A185D+G303R+E390A、A185D+G303R+G475K、A185D+G303R+A185Q、A185D+G303R+N194F、A185D+E390A+G475K、A185D+E390A+A185Q、A185D+E390A+N194F、A185D+G475K+A185Q、A185D+G475K+N194F、A185D+A185Q+N194F、E189P+Y242F+E259G、E189P+Y242F+F266Y、E189P+Y242F+N279S、E189P+Y242F+K280Y、E189P+Y242F+G303R、E189P+Y242F+E390A、E189P+Y242F+G475K、E189P+Y242F+A185Q、E189P+Y242F+N194F、E189P+E259G+F266Y、E189P+E259G+N279S、E189P+E259G+K280Y、E189P+E259G+G303R、E189P+E259G+E390A、E189P+E259G+G475K、E189P+E259G+A185Q、E189P+E259G+N194F、E189P+F266Y+N279S、E189P+F266Y+K280Y、E189P+F266Y+G303R、E189P+F266Y+E390A、E189P+F266Y+G475K、E189P+F266Y+A185Q、E189P+F266Y+N194F、E189P+N279S+K280Y、E189P+N279S+G303R、E189P+N279S+E390A、E189P+N279S+G475K、E189P+N279S+A185Q、E189P+N279S+N194F、E189P+K280Y+G303R、E189P+K280Y+E390A、E189P+K280Y+G475K、E189P+K280Y+A185Q、E189P+K280Y+N194F、E189P+G303R+E390A、E189P+G303R+G475K、E189P+G303R+A185Q、E189P+G303R+N194F、E189P+E390A+G475K、E189P+E390A+A185Q、E189P+E390A+N194F、E189P+G475K+A185Q、E189P+G475K+N194F、E189P+A185Q+N194F、Y242F+E259G+F266Y、Y242F+E259G+N279S、Y242F+E259G+K280Y、Y242F+E259G+G303R、Y242F+E259G+E390A、Y242F+E259G+G475K、Y242F+E259G+A185Q、Y242F+E259G+N194F、Y242F+F266Y+N279S、Y242F+F266Y+K280Y、Y242F+F266Y+G303R、Y242F+F266Y+E390A、Y242F+F266Y+G475K、Y242F+F266Y+A185Q、Y242F+F266Y+N194F、Y242F+N279S+K280Y、Y242F+N279S+G303R、Y242F+N279S+E390A、Y242F+N279S+G475K、Y242F+N279S+A185Q、Y242F+N279S+N194F、Y242F+K280Y+G303R、Y242F+K280Y+E390A、Y242F+K280Y+G475K、Y242F+K280Y+A185Q、Y242F+K280Y+N194F、Y242F+G303R+E390A、Y242F+G303R+G475K、Y242F+G303R+A185Q、Y242F+G303R+N194F、Y242F+E390A+G475K、Y242F+E390A+A185Q、Y242F+E390A+N194F、Y242F+G475K+A185Q、Y242F+G475K+N194F、Y242F+A185Q+N194F、E259G+F266Y+N279S、E259G+F266Y+K280Y、E259G+F266Y+G303R、E259G+F266Y+E390A、E259G+F266Y+G475K、E259G+F266Y+A185Q、E259G+F266Y+N194F、E259G+N279S+K280Y、E259G+N279S+G303R、E259G+N279S+E390A、E259G+N279S+G475K、E259G+N279S+A185Q、E259G+N279S+N194F、E259G+K280Y+G303R、E259G+K280Y+E390A、E259G+K280Y+G475K、E259G+K280Y+A185Q、E259G+K280Y+N194F、E259G+G303R+E390A、E259G+G303R+G475K、E259G+G303R+A185Q、E259G+G303R+N194F、E259G+E390A+G475K、E259G+E390A+A185Q、E259G+E390A+N194F、E259G+G475K+A185Q、E259G+G475K+N194F、E259G+A185Q+N194F、F266Y+N279S+K280Y、F266Y+N279S+G303R、F266Y+N279S+E390A、F266Y+N279S+G475K、F266Y+N279S+A185Q、F266Y+N279S+N194F、F266Y+K280Y+G303R、F266Y+K280Y+E390A、F266Y+K280Y+G475K、F266Y+K280Y+A185Q、F266Y+K280Y+N194F、F266Y+G303R+E390A、F266Y+G303R+G475K、F266Y+G303R+A185Q、F266Y+G303R+N194F、F266Y+E390A+G475K、F266Y+E390A+A185Q、F266Y+E390A+N194F、F266Y+G475K+A185Q、F266Y+G475K+N194F、F266Y+A185Q+N194F、N279S+K280Y+G303R、N279S+K280Y+E390A、N279S+K280Y+G475K、N279S+K280Y+A185Q、N279S+K280Y+N194F、N279S+G303R+E390A、N279S+G303R+G475K、N279S+G303R+A185Q、N279S+G303R+N194F、N279S+E390A+G475K、N279S+E390A+A185Q、N279S+E390A+N194F、N279S+G475K+A185Q、
N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194Fに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号13の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号13の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7
A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号13の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G
7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号13の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号13の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号13の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号13の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
番号付けのために配列番号1を使用して、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aと、を含む、配列番号13の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D、+A185Q、A185D、+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194Fに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号14の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182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F、T182S+Y242F+E259G、T182S+Y242F+F266Y、T182S+Y242F+N279S、T182S+Y242F+K280Y、T182S+Y242F+G303R、T182S+Y242F+E390A、T182S+Y242F+G475K、T182S+Y242F+A185Q、T182S+Y242F+N194F、T182S+E259G+F266Y、T182S+E259G+N279S、T182S+E259G+K280Y、T182S+E259G+G303R、T182S+E259G+E390A、T182S+E259G+G475K、T182S+E259G+A185Q、T182S+E259G+N194F、T182S+F266Y+N279S、T182S+F266Y+K280Y、T182S+F266Y+G303R、T182S+F266Y+E390A、T182S+F266Y+G475K、T182S+F266Y+A185Q、T182S+F266Y+N194F、T182S+N279S+K280Y、T182S+N279S+G303R、T182S+N279S+E390A、T182S+N279S+G475K、T182S+N279S+A185Q、T182S+N279S+N194F、T182S+K280Y+G303R、T182S+K280Y+E390A、T182S+K280Y+G475K、T182S+K280Y+A185Q、T182S+K280Y+N194F、T182S+G303R+E390A、T182S+G303R+G475K、T182S+G303R+A185Q、T182S+G303R+N194F、T182S+E390A+G475K、T182S+E390A+A185Q、T182S+E390A+N194F、T182S+G475K+A185Q、T182S+G475K+N194F、T182S+A185Q+N194F、A185D+E189P+Y242F、A185D+E189P+E259G、A185D+E189P+F266Y、A185D+E189P+N279S、A185D+E189P+K280Y、A185D+E189P+G303R、A185D+E189P+E390A、A185D+E189P+G475K、A185D+E189P+A185Q、A185D+E189P+N194F、A185D+Y242F+E259G、A185D+Y242F+F266Y、A185D+Y242F+N279S、A185D+Y242F+K280Y、A185D+Y242F+G303R、A185D+Y242F+E390A、A185D+Y242F+G475K、A185D+Y242F+A185Q、A185D+Y242F+N194F、A185D+E259G+F266Y、A185D+E259G+N279S、A185D+E259G+K280Y、A185D+E259G+G303R、A185D+E259G+E390A、A185D+E259G+G475K、A185D+E259G+A185Q、A185D+E259G+N194F、A185D+F266Y+N279S、A185D+F266Y+K280Y、A185D+F266Y+G303R、A185D+F266Y+E390A、A185D+F266Y+G475K、A185D+F266Y+A185Q、A185D+F266Y+N194F、A185D+N279S+K280Y、A185D+N279S+G303R、A185D+N279S+E390A、A185D+N279S+G475K、A185D+N279S+A185Q、A185D+N279S+N194F、A185D+K280Y+G303R、A185D+K280Y+E390A、A185D+K280Y+G475K、A185D+K280Y+A185Q、A185D+K280Y+N194F、A185D+G303R+E390A、A185D+G303R+G475K、A185D+G303R+A185Q、A185D+G303R+N194F、A185D+E390A+G475K、A185D+E390A+A185Q、A185D+E390A+N194F、A185D+G475K+A185Q、A185D+G475K+N194F、A185D+A185Q+N194F、E189P+Y242F+E259G、E189P+Y242F+F266Y、E189P+Y242F+N279S、E189P+Y242F+K280Y、E189P+Y242F+G303R、E189P+Y242F+E390A、E189P+Y242F+G475K、E189P+Y242F+A185Q、E189P+Y242F+N194F、E189P+E259G+F266Y、E189P+E259G+N279S、E189P+E259G+K280Y、E189P+E259G+G303R、E189P+E259G+E390A、E189P+E259G+G475K、E189P+E259G+A185Q、E189P+E259G+N194F、E189P+F266Y+N279S、E189P+F266Y+K280Y、E189P+F266Y+G303R、E189P+F266Y+E390A、E189P+F266Y+G475K、E189P+F266Y+A185Q、E189P+F266Y+N194F、E189P+N279S+K280Y、E189P+N279S+G303R、E189P+N279S+E390A、E189P+N279S+G475K、E189P+N279S+A185Q、E189P+N279S+N194F、E189P+K280Y+G303R、E189P+K280Y+E390A、E189P+K280Y+G475K、E189P+K280Y+A185Q、E189P+K280Y+N194F、E189P+G303R+E390A、E189P+G303R+G475K、E189P+G303R+A185Q、E189P+G303R+N194F、E189P+E390A+G475K、E189P+E390A+A185Q、E189P+E390A+N194F、E189P+G475K+A185Q、E189P+G475K+N194F、E189P+A185Q+N194F、Y242F+E259G+F266Y、Y242F+E259G+N279S、Y242F+E259G+K280Y、Y242F+E259G+G303R、Y242F+E259G+E390A、Y242F+E259G+G475K、Y242F+E259G+A185Q、Y242F+E259G+N194F、Y242F+F266Y+N279S、Y242F+F266Y+K280Y、Y242F+F266Y+G303R、Y242F+F266Y+E390A、Y242F+F266Y+G475K、Y242F+F266Y+A185Q、Y242F+F266Y+N194F、Y242F+N279S+K280Y、Y242F+N279S+G303R、Y242F+N279S+E390A、Y242F+N279S+G475K、Y242F+N279S+A185Q、Y242F+N279S+N194F、Y242F+K280Y+G303R、Y242F+K280Y+E390A、Y242F+K280Y+G475K、Y242F+K280Y+A185Q、Y242F+K280Y+N194F、Y242F+G303R+E390A、Y242F+G303R+G475K、Y242F+G303R+A185Q、Y242F+G303R+N194F、Y242F+E390A+G475K、Y242F+E390A+A185Q、Y242F+E390A+N194F、Y242F+G475K+A185Q、Y242F+G475K+N194F、Y242F+A185Q+N194F、E259G+F266Y+N279S、E259G+F266Y+K280Y、E259G+F266Y+G303R、E259G+F266Y+E390A、E259G+F266Y+G475K、E259G+F266Y+A185Q、E259G+F266Y+N194F、E259G+N279S+K280Y、E259G+N279S+G303R、E259G+N279S+E390A、E259G+N279S+G475K、E259G+N279S+A185Q、E259G+N279S+N194F、E259G+K280Y+G303R、E259G+K280Y+E390A、E259G+K280Y+G475K、E259G+K280Y+A185Q、E259G+K280Y+N194F、E259G+G303R+E390A、E259G+G303R+G475K、E259G+G303R+A185Q、E259G+G303R+N194F、E259G+E390A+G475K、E259G+E390A+A185Q、E259G+E390A+N194F、E259G+G475K+A185Q、E259G+G475K+N194F、E259G+A185Q+N194F、F266Y+N279S+K280Y、F266Y+N279S+G303R、F266Y+N279S+E390A、F266Y+N279S+G475K、F266Y+N279S+A185Q、F266Y+N279S+N194F、F266Y+K280Y+G303R、F266Y+K280Y+E390A、F266Y+K280Y+G475K、F266Y+K280Y+A185Q、F266Y+K280Y+N194F、F266Y+G303R+E390A、F266Y+G303R+G475K、F266Y+G303R+A185Q、F266Y+G303R+N194F、F266Y+E390A+G475K、F266Y+E390A+A185Q、F266Y+E390A+N194F、F266Y+G475K+A185Q、F266Y+G475K+N194F、F266Y+A185Q+N194F、N279S+K280Y+G303R、N279S+K280Y+E390A、N279S+K280Y+G475K、N279S+K280Y+A185Q、N279S+K280Y+N194F、N279S+G303R+E390A、N279S+G303R+G475K、N279S+G303R+A185Q、N279S+G303R+N194F、N279S+E390A+G475K、N279S+E390A+A185Q、N279S+E390A+N194F、N279S+G475K+A185Q、
N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194Fに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号14の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号14の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280YH1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7
A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号14の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G
7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号14の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、
G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、
G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、
G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む、配列番号14の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号14の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aに対応する位置における修飾と、を含む配列番号14の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、
a)番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180*及びS181*に対応する位置における欠失と、
番号付けのために配列番号1を使用して、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390Aと、を含む、配列番号14の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、H1*+G7A+R180*+S181*、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+N279S、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+G303R+E390A+G476Aに対応する位置に修飾を含む、配列番号1の変異体に関し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、E169I+R180*+S181*、T114K+R180*+S181*、W167A+R180*+S181*、E169V+R180*+S181*、R180*+S181*+W188C、W167D+R180*+S181*、Y177D+R180*+S181*、W167S+R180*+S181*、W167E+R180*+S181*、W167P+R180*+S181*、R180*+S181*+L205R、R180*+S181*+A203F、W159L+R180*+S181*、Y160P+R180*+S181*、W159H+R180*+S181*、K178A+R180*+S181*、R180*+S181*+G183P、Q136T+R180*+S181*、K142P+R180*+S181*、K142E+R180*+S181*、Y152L+R180*+S181*、A111L+R180*+S181*、G110K+R180*+S181*、A111G+R180*+S181* and V117G+R180*+S181*に対応する位置に修飾を含む配列番号1の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、R180*+S181*+E193I+H323Nに対応する位置に修飾を含む配列番号1の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*、G7H+W167P+R180*+S181*+G455R、及びQ98L+V103A+G110K+R180*+S181*に対応する位置に修飾を含む配列番号1の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、A60V+Q98L+G110K+R180*+S181*+A383Dに対応する位置に修飾を含む、配列番号1の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、F116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y及びQ98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+T315Aに対応する位置に修飾を含む配列番号1の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、及びH1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475Kに対応する位置に修飾を含む配列番号1の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、H1*+G7A+R180*+S181*+T182S+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+T182L+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+S181L+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180S+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A60P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105I+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182G+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182M+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185K+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185N+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185R+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244L+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W167P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7H+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E390A+G475K、及びL63F+W140Y+L173F+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+H323Wに対応する位置に修飾を含む配列番号1の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E359W+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+I176V+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M322Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322Y+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+S286K+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+H320T+E390A+G475K、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E359W+E390A+G475K、及びW140Y+L173F+R180*+S181*+N194F+L205Y+N225S+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323Aに対応する位置に修飾を含む配列番号1の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280F+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280F+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E359W+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M322Y+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+I137F+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7H+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+D405G+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+T256A+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474L、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475E、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474F、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+R414M+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323W+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321Y+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360M+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、及び
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475Kに対応する位置に修飾を含む配列番号1の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+S286K+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+P146S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302T+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474F+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N422V+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N470A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242L+E259G+N279S+G303R+W346N+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+H420P+G475K、
H1*+G7A+R26Y+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y371S+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A41D+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、及び
H1*+G7A+T40G+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475Kに対応する位置に修飾を含む配列番号1の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+S181*+T182*+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+T134D+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+I176V+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+I176V+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+T315A+E390A+G475K、
H1*+A60V+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+T151A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+K258V+E259V+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+N94D+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+T151A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+K258V+E259V+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+T427L+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、及びH1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476Aに対応する位置に修飾を含む配列番号1の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98f%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+N106D+A109G+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R37N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470A+G475K、
H1*+G7A+S132L+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、及びT40N+F116L+D123N+N126D+N128Y+T131I+F155W+R180*+S181*+T182D+E189P+F202Y+K457N+P458S+G475K+G476Eに対応する位置に修飾を含む配列番号1の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、
H1*+G7A+G113A+F116W+D123N+T131V+Q136K+E169Q+K172Q+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+N94D+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+I409L+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474F、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205N+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Q+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474F、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394D+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180Q+S181*+T182*+A185Q+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、及び
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475Kに対応する位置に修飾を含む配列番号1の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476A、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420P+N474L、
H1*+G7A+G73L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G475K、
N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+V103I+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+P146H+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+R414M+G475K、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+P146H+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180Q+S181*+T182*+A185Q+E189P+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N196I+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420Y+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、及び
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476Aに対応する位置に修飾を含む配列番号1の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+V365I+E390A+N474L、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+N474F、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390D+H420P+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+Q360Y+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205N+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180Q+S181*+T182*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+Y371N+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420Q+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G476H、
H1*+G7A+R37A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G476A、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+Y371N+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+R414M+G476H、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G476A、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G476H、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G476H、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394D+H420A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Q+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3G+G7A+V104M+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3G+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K、
N3G+G7A+R37V+D118T+W140M+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+N394D+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、及び
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475Kに対応する位置に修飾を含む配列番号1の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、
H1*+G7A+N106D+A109G+F116W+D123N+N126D+T131I+T165V+N174S+R180*+S181*+T182I+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+H420A+N474L、
H1*+N3D+G7A+K93R+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+W346N+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476A、
H1*+G7A+R37N+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3G+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+G361M+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+N174K+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321Y+L354V+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+Q360M+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、及び
H1*+G7A+A31S+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475Kに対応する位置に修飾を含む配列番号1の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475Kに対応する位置に修飾を含む配列番号1の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、
H1*+N54S+V56T+K72R+G113Q+F116Q+D118Q+D123N+N126D+T131I+K142G+D144N+W167F+K172G+N174S+S181T+T182*+G183*+F202Y+E390A+F395Y+K457R+S472R+V473C+G475Kに対応する位置に修飾を含む配列番号1の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、
H1*+N54S+V56T+K72R+N106D+A109G+G113Q+F116Q+D118Q+D123N+N126D+T131I+K142G+D144N+W167F+K172G+N174S+S181T+T182*+G183*+F202Y+E390A+F395Y+K457R+S472R+V473C+G475Kに対応する位置に修飾を含む配列番号1の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、E169I+R180*+S181*、T114K+R180*+S181*、W167A+R180*+S181*、E169V+R180*+S181*、R180*+S181*+W188C、W167D+R180*+S181*、Y177D+R180*+S181*、W167S+R180*+S181*、W167E+R180*+S181*、W167P+R180*+S181*、R180*+S181*+L205R、R180*+S181*+A203F、W159L+R180*+S181*、Y160P+R180*+S181*、W159H+R180*+S181*、K178A+R180*+S181*、R180*+S181*+G183P、Q136T+R180*+S181*、K142P+R180*+S181*、K142E+R180*+S181*、Y152L+R180*+S181*、A111L+R180*+S181*、G110K+R180*+S181*、A111G+R180*+S181*、及びV117G+R180*+S181*に対応する位置に修飾を含む配列番号2の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、R180*+S181*+E193I+H323Nに対応する位置に修飾を含む配列番号2の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*、G7H+W167P+R180*+S181*+G455R、及びQ98L+V103A+G110K+R180*+S181*に対応する位置に修飾を含む配列番号2の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、A60V+Q98L+G110K+R180*+S181*+A383Dに対応する位置に修飾を含む配列番号2の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、F116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y及びQ98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+T315Aに対応する位置に修飾を含む配列番号2の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、及びH1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475Kに対応する位置に修飾を含む配列番号2の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、H1*+G7A+R180*+S181*+T182S+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+T182L+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+S181L+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180S+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A60P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105I+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182G+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182M+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185K+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185N+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185R+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244L+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W167P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7H+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E390A+G475K and L63F+W140Y+L173F+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+H323Wに対応する位置に修飾を含む配列番号2の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E359W+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+I176V+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M322Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322Y+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+S286K+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+H320T+E390A+G475K、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E359W+E390A+G475K、W140Y+L173F+R180*+S181*+N194F+L205Y+N225S+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323Aに対応する位置に修飾を含む配列番号2の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280F+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280F+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E359W+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M322Y+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+I137F+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7H+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+D405G+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+T256A+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474L、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475E、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474F、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+R414M+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323W+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321Y+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360M+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、及び
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475Kに対応する位置に修飾を含む配列番号2の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+S286K+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+P146S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302T+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474F+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N422V+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N470A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242L+E259G+N279S+G303R+W346N+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+H420P+G475K、
H1*+G7A+R26Y+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y371S+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A41D+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、及び
H1*+G7A+T40G+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475Kに対応する位置に修飾を含む配列番号2の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+S181*+T182*+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+T134D+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+I176V+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+I176V+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+T315A+E390A+G475K、
H1*+A60V+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+T151A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+K258V+E259V+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+N94D+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+T151A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+K258V+E259V+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+T427L+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、及びH1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476Aに対応する位置に修飾を含む配列番号2の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+N106D+A109G+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R37N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470A+G475K、
H1*+G7A+S132L+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、及びT40N+F116L+D123N+N126D+N128Y+T131I+F155W+R180*+S181*+T182D+E189P+F202Y+K457N+P458S+G475K+G476Eに対応する位置に修飾を含む配列番号2の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、
H1*+G7A+G113A+F116W+D123N+T131V+Q136K+E169Q+K172Q+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+N94D+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+I409L+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474F、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205N+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Q+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474F、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394D+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180Q+S181*+T182*+A185Q+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、及び
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475Kに対応する位置に修飾を含む配列番号2の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476A、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420P+N474L、
H1*+G7A+G73L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G475K、
N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+V103I+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+P146H+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+R414M+G475K、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+P146H+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N196I+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420Y+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、及び
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476Aに対応する位置に修飾を含む配列番号2の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+V365I+E390A+N474L、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+N474F、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390D+H420P+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+Q360Y+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205N+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180Q+S181*+T182*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+Y371N+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420Q+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G476H、
H1*+G7A+R37A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G476A、
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H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+Y371N+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+R414M+G476H、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G476A、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G476H、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G476H、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394D+H420A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Q+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3G+G7A+V104M+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3G+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K、
N3G+G7A+R37V+D118T+W140M+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+N394D+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、及び
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475Kに対応する位置に修飾を含む配列番号2の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、
H1*+G7A+N106D+A109G+F116W+D123N+N126D+T131I+T165V+N174S+R180*+S181*+T182I+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+H420A+N474L、
H1*+N3D+G7A+K93R+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+W346N+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476A、
H1*+G7A+R37N+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3G+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+G361M+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+N174K+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321Y+L354V+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+Q360M+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、及び
H1*+G7A+A31S+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475Kに対応する位置に修飾を含む配列番号2の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475Kに対応する位置に修飾を含む配列番号2の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、
H1*+N54S+V56T+K72R+G113Q+F116Q+D118Q+D123N+N126D+T131I+K142G+D144N+W167F+K172G+N174S+S181T+T182*+G183*+F202Y+E390A+F395Y+K457R+S472R+V473C+G475Kに対応する位置に修飾を含む配列番号2の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、
H1*+N54S+V56T+K72R+N106D+A109G+G113Q+F116Q+D118Q+D123N+N126D+T131I+K142G+D144N+W167F+K172G+N174S+S181T+T182*+G183*+F202Y+E390A+F395Y+K457R+S472R+V473C+G475Kに対応する位置に修飾を含む配列番号2の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、E169I+R180*+S181*、T114K+R180*+S181*、W167A+R180*+S181*、E169V+R180*+S181*、R180*+S181*+W188C、W167D+R180*+S181*、Y177D+R180*+S181*、W167S+R180*+S181*、W167E+R180*+S181*、W167P+R180*+S181*、R180*+S181*+L205R、R180*+S181*+A203F、W159L+R180*+S181*、Y160P+R180*+S181*、W159H+R180*+S181*、K178A+R180*+S181*、R180*+S181*+G183P、Q136T+R180*+S181*、K142P+R180*+S181*、K142E+R180*+S181*、Y152L+R180*+S181*、A111L+R180*+S181*、G110K+R180*+S181*、A111G+R180*+S181*、及びV117G+R180*+S181*に対応する位置に修飾を含む配列番号3の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、R180*+S181*+E193I+H323Nに対応する位置に修飾を含む配列番号3の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*、G7H+W167P+R180*+S181*+G455R、及びQ98L+V103A+G110K+R180*+S181*に対応する位置に修飾を含む配列番号3の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、A60V+Q98L+G110K+R180*+S181*+A383Dに対応する位置に修飾を含む、配列番号3の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、F116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y及びQ98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+T315Aに対応する位置に修飾を含む配列番号3の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、及びH1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475Kに対応する位置に修飾を含む配列番号3の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号3を使用して、H1*+G7A+R180*+S181*+T182S+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+T182L+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+S181L+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180S+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A60P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105I+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182G+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182M+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185K+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185N+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185R+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244L+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W167P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7H+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E390A+G475K and L63F+W140Y+L173F+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+H323Wに対応する位置に修飾を含む配列番号3の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号3を使用して、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E359W+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+I176V+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M322Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322Y+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+S286K+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+H320T+E390A+G475K、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E359W+E390A+G475K、W140Y+L173F+R180*+S181*+N194F+L205Y+N225S+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323Aに対応する位置に修飾を含む配列番号3の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280F+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280F+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E359W+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M322Y+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+I137F+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7H+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+D405G+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+T256A+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474L、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475E、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474F、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+R414M+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323W+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321Y+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360M+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、及び
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475Kに対応する位置に修飾を含む配列番号3の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+S286K+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+P146S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302T+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474F+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N422V+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N470A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242L+E259G+N279S+G303R+W346N+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+H420P+G475K、
H1*+G7A+R26Y+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y371S+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A41D+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、及び
H1*+G7A+T40G+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475Kに対応する位置に修飾を含む配列番号3の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+S181*+T182*+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+T134D+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+I176V+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+I176V+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+T315A+E390A+G475K、
H1*+A60V+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+T151A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+K258V+E259V+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+N94D+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+T151A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+K258V+E259V+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+T427L+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、及びH1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476Aに対応する位置に修飾を含む配列番号3の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+N106D+A109G+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R37N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470A+G475K、
H1*+G7A+S132L+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、及びT40N+F116L+D123N+N126D+N128Y+T131I+F155W+R180*+S181*+T182D+E189P+F202Y+K457N+P458S+G475K+G476Eに対応する位置に修飾を含む配列番号3の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、
H1*+G7A+G113A+F116W+D123N+T131V+Q136K+E169Q+K172Q+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+N94D+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+I409L+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474F、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205N+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Q+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474F、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394D+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180Q+S181*+T182*+A185Q+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、及び
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475Kに対応する位置に修飾を含む配列番号3の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476A、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420P+N474L、
H1*+G7A+G73L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G475K、
N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+V103I+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+P146H+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N196I+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420Y+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、及び
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476Aに対応する位置に修飾を含む配列番号3の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+V365I+E390A+N474L、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+N474F、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390D+H420P+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+Q360Y+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205N+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、及び
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475Kに対応する位置に修飾を含む配列番号3の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、
H1*+G7A+N106D+A109G+F116W+D123N+N126D+T131I+T165V+N174S+R180*+S181*+T182I+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+H420A+N474L、
H1*+N3D+G7A+K93R+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+W346N+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476A、
H1*+G7A+R37N+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3G+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+G361M+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+N174K+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321Y+L354V+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+Q360M+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、及び
H1*+G7A+A31S+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475Kに対応する位置に修飾を含む配列番号3の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475Kに対応する位置に修飾を含む配列番号3の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、
H1*+N54S+V56T+K72R+G113Q+F116Q+D118Q+D123N+N126D+T131I+K142G+D144N+W167F+K172G+N174S+S181T+T182*+G183*+F202Y+E390A+F395Y+K457R+S472R+V473C+G475Kに対応する位置に修飾を含む配列番号3の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を使用して、
H1*+N54S+V56T+K72R+N106D+A109G+G113Q+F116Q+D118Q+D123N+N126D+T131I+K142G+D144N+W167F+K172G+N174S+S181T+T182*+G183*+F202Y+E390A+F395Y+K457R+S472R+V473C+G475Kに対応する位置に修飾を含む配列番号3の変異体に関し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
この変異体は、1つ以上の(例えばいくつかの)他の位置に、1つ以上の追加の置換及び/又は欠失を更に含み得る。
アミノ酸の変化は、軽度のもの、すなわち、タンパク質の折り畳み及び/若しくは活性に著しく影響を及ぼさない保存的なアミノ酸置換又は挿入、小さい欠失、典型的には、1~30個のアミノ酸の欠失、アミノ末端メチオニン残基などの小さいアミノ末端又はカルボキシ末端の伸長、最大20~25残基の小さいリンカーペプチド、又は、ポリ-ヒスチジントラクト、抗原エピトープ、若しくは結合ドメインなどの、正味電荷若しくは別の機能を変化させることによって精製を容易にする小さな伸長であり得る。
したがって、本発明において有用なα-アミラーゼ変異体は、本発明による改善された特性を提供する1つの特定の置換のみを含み得るが、これは依然として、配列番号1、2、7、又は8のアミノ酸配列に対して、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性をもたらす追加の修飾を有し得る。これらの追加の修飾は、好ましくは、α-アミラーゼ変異体の改善された特性を著しくは変化させない。
保存的置換の例は、塩基性アミノ酸(アルギニン、リジン及びヒスチジン)、酸性アミノ酸(グルタミン酸及びアスパラギン酸)、極性アミノ酸(グルタミン及びアスパラギン)、疎水性アミノ酸(ロイシン、イソロイシン及びバリン)、芳香族アミノ酸(フェニルアラニン、トリプトファン及びチロシン)、及び低分子アミノ酸(グリシン、アラニン、セリン、スレオニン及びメチオニン)の群内のものである。一般的に比活性を変化させないアミノ酸の置換は、当該技術分野において既知であり、例えば、H.Neurath and R.L.Hill,1979,The Proteins,Academic Press,New Yorkに記載されている。一般的な置換は、Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu、及びAsp/Glyである。
ポリペプチド中の必須アミノ酸は、部位特異的変異誘発又はアラニン-スキャニング変異誘発(Cunningham and Wells,1989,Science 244:1081-1085)等の当該技術分野において既知の手順によって同定され得る。後者の技術では、分子中の全ての残基に単一アラニン変異を導入し、得られた変異体分子をプロテアーゼ活性について試験して、当該分子の活性に重要なアミノ酸残基を同定する。Hilton et al.,1996,J.Biol.Chem.271:4699-4708を参照されたい。また、酵素又は他の生物学的相互作用の活性部位は、推定接触部位のアミノ酸の変異と併せて、核磁気共鳴、結晶学、電子線回折、又は光親和性標識等の技術によって決定されるように、構造の物理分析によっても決定することができる。例えば、de Vos et al.,1992,Science 255:306-312;Smith et al.,1992,J.Mol.Biol.224:899-904、Wlodaver et al.,1992,FEBS Lett.309:59-64を参照されたい。
一態様では、本発明において有用なα-アミラーゼ変異体は、親ポリペプチドに対して改善された特性を有し、この改善された特性は、触媒効率の向上、触媒速度の向上、化学的安定性の増大、酸化安定性の増大、pH活性の増加、pH安定性の増大、比活性の増加、保存条件下での安定性の増加、基質結合の増加、基質の切断の増加、基質特異性の増加、基質安定性の増加、表面特性の向上、熱活性の向上、及び熱安定性の向上からなる群から選択される。
一実施形態では、このα-アミラーゼ変異体は、親ポリペプチドと比較して改善された(増大した)比活性を有する。
一実施形態では、このα-アミラーゼ変異体は、親ポリペプチドと比較して改善された(増加した)洗浄性能を有する。
一実施形態では、このα-アミラーゼ変異体は、配列番号1、配列番号2、又は配列番号3と比較して、改善された(増加した)洗浄性能を有する。
一態様では、このα-アミラーゼ変異体は、当該親ポリペプチドと比較して改善された(増大した)特性を有し、当該改善された特性は、増加した比活性としての測定値に対する改善された洗浄性能であり、モデルA洗剤組成物における増加した比活性である。
一態様では、このα-アミラーゼ変異体は、当該親ポリペプチドと比較して改善された(増大した)特性を有し、当該改善された特性は、増加した比活性の測定値に対する改善された洗浄性能であり、マイクロスワッチアッセイ及び/又は実施例に記載のAMSAアッセイ中のモデルA洗剤組成物における増加した比活性である。
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、改善因子(IF)が>1.0、少なくとも1.1、少なくとも1.2、少なくとも1.3、少なくとも1.4、少なくとも1.5、少なくとも1.6、少なくとも1.7、少なくとも1.8、少なくとも1.9、少なくとも2.0、少なくとも2.5、少なくとも3.0、少なくとも3.5、少なくとも4.0、少なくとも4.5、少なくとも5.0、少なくとも5.5、少なくとも6.0、少なくとも6.5、少なくとも7.0、少なくとも7.5、少なくとも8.0、少なくとも8.5、少なくとも9.0、少なくとも9.5、少なくとも10.0であるとして測定される、モデルA洗剤組成物における増加した比活性の測定値に対する改善された洗浄性能を有する。
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、改善因子(IF)が、配列番号1、配列番号2、又は配列番号3に対して>1.0、少なくとも1.1、少なくとも1.2、少なくとも1.3、少なくとも1.4、少なくとも1.5、少なくとも1.6、少なくとも1.7、少なくとも1.8、少なくとも1.9、少なくとも2.0、少なくとも2.5、少なくとも3.0、少なくとも3.5、少なくとも4.0、少なくとも4.5、少なくとも5.0、少なくとも5.5、少なくとも6.0、少なくとも6.5、少なくとも7.0、少なくとも7.5、少なくとも8.0、少なくとも8.5、少なくとも9.0、少なくとも9.5、少なくとも10.0であるとして測定される、モデルA洗剤組成物における増加した比活性の測定値に対する改善された洗浄性能を有する。
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、改善因子(IF)が、配列番号1、配列番号2、又は配列番号3に対して>1.0、少なくとも1.1、少なくとも1.2、少なくとも1.3、少なくとも1.4、少なくとも1.5、少なくとも1.6、少なくとも1.7、少なくとも1.8、少なくとも1.9、少なくとも2.0、少なくとも2.5、少なくとも3.0、少なくとも3.5、少なくとも4.0、少なくとも4.5、少なくとも5.0、少なくとも5.5、少なくとも6.0、少なくとも6.5、少なくとも7.0、少なくとも7.5、少なくとも8.0、少なくとも8.5、少なくとも9.0、少なくとも9.5、少なくとも10.0であるとして測定される、モデルA洗剤組成物における増加した比活性の測定値に対する改善された洗浄性能を有する。
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する位置において修飾を含み、当該α-アミラーゼ変異体は、>1.1の改善因子(IF)として測定される、増加した比活性としての測定値に対して改善された洗浄性能を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、R180、S181、T182、G183、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475、G476に対応する位置において修飾を含み、当該α-アミラーゼ変異体は、>1.1の改善因子(IF)として測定される、増加した比活性としての測定値に対して改善された洗浄性能を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、Y242F、Y242Y、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E、及びG476Aに対応する位置において修飾を含み、当該α-アミラーゼ変異体は、>1.1の改善因子(IF)として測定される、増加した比活性としての測定値に対して改善された洗浄性能を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する位置において修飾を含み、当該α-アミラーゼ変異体は、モデルA洗剤組成物において>1.1の改善因子(IF)として測定される、増加した比活性としての測定値に対して改善された洗浄性能を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1、H1、H2、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、R180、S181、T182、G183、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475、G476に対応する位置において修飾を含み、当該α-アミラーゼ変異体は、モデルA洗剤組成物において>1.1の改善因子(IF)として測定される、増加した比活性としての測定値に対して改善された洗浄性能を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、Y242F、Y242Y、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E、及びG476Aに対応する位置において修飾を含み、当該α-アミラーゼ変異体は、モデルA洗剤組成物において>1.1の改善因子(IF)として測定される、増加した比活性としての測定値に対して改善された洗浄性能を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する位置において修飾を含み、当該α-アミラーゼ変異体は、モデルA洗剤組成物において>1.1の改善因子(IF)として測定される、増加した比活性としての測定値に対して改善された洗浄性能を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1、H1、H2、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、R180、S181、T182、G183、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475、G476に対応する位置において修飾を含み、当該α-アミラーゼ変異体は、モデルA洗剤組成物において>1.1の改善因子(IF)として測定される、増加した比活性としての測定値に対して改善された洗浄性能を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、Y242F、Y242Y、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E、及びG476Aに対応する位置において修飾を含み、当該α-アミラーゼ変異体は、モデルA洗剤組成物において>1.1の改善因子(IF)として測定される、増加した比活性としての測定値に対して改善された洗浄性能を有し、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、α-アミラーゼ変異体は、親ポリペプチドと比較して、モデルA洗剤組成物において>1.1の改善因子(IF)として測定された、増加した比活性としての測定値に対する改善された洗浄性能を有し、当該変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182S+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+T182L+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+S181L+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180S+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A60P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105I+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182G+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182M+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185K+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185N+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185R+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244L+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280F+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280F+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+S181*+T182*+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E359W+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E359W+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+S286K+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M322Y+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+I176V+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113A+F116W+D123N+T131V+Q136K+E169Q+K172Q+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+N106D+A109G+F116W+D123N+N126D+T131I+T165V+N174S+R180*+S181*+T182I+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
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L63F+W140Y+L173F+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+H323W
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H1*+G7A+D118T+W140Y+P146H+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Q+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180Q+S181*+T182*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3G+G7A+V104M+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N196I+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420Y+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
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H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470A+G475K、
H1*+G7A+S132L+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A31S+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
R180*+S181*、
T40N+F116L+D123N+N126D+N128Y+T131I+F155W+R180*+S181*+T182D+E189P+F202Y+K457N+P458S+G475K+G476E、
A60V+Q98L+G110K+R180*+S181*+A383D、
Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+T315A、
G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*、
G7H+W167P+R180*+S181*+G455R、
Q98L+V103A+G110K+R180*+S181*、
T114K+R180*+S181*、
E169V+R180*+S181*、
R180*+S181*+W188C、
W167D+R180*+S181*、
W167S+R180*+S181*、
W167E+R180*+S181*、
W167P+R180*+S181*、
R180*+S181*+E193I+H323N、
R180*+S181*+A203F、
W159L+R180*+S181*、
W159H+R180*+S181*、
K178A+R180*+S181*、
A111L+R180*+S181*、
G110K+R180*+S181*、
A111G+R180*+S181*からなる群から選択され、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
ポリヌクレオチド
本発明はまた、本発明のα-アミラーゼ変異体をコードするポリヌクレオチドに関する。
一態様では、α-アミラーゼ変異体をコードするポリヌクレオチドは、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、476に対応する1つ以上の位置において修飾を含み、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、変異体はα-アミラーゼ活性を有する。
ポリヌクレオチドの単離又はクローニングに使用される技術は、当該技術分野で既知であり、ゲノムDNA若しくはcDNAからの単離、又はそれらの組み合わせが挙げられる。ゲノムDNAからのポリヌクレオチドのクローニングは、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応(polymerase chain reaction、PCR)又は発現ライブラリーの抗体スクリーニングを使用して、共通の構造的特徴を有する、クローニングされたDNAフラグメントを検出することによって行うことができる。例えば、Innis et al.,1990,PCR:A Guide to Methods and Application,Academic Press,New Yorkを参照されたい。リガーゼ連鎖反応(ligase chain reaction、LCR)、ライゲーション活性化転写(ligation activated transcription、LAT)、及びポリヌクレオチドベースの増幅(polynucleotide-based amplification、NASBA)など他の核酸増幅手段を使用することができる。ポリヌクレオチドは、トリコデマ(Trichoderma)、レカニシリウム(Lecanicillium)、シンプリシルリウム(Simplicillium)、アスペルギルス(Aspergillus)、コーニーアスカス(Cornyascus)、アクロフィアロホーラ(Acrophialophora)、リノクラジエア(Rhinocladiella)、ネマニア(Nemania)、タラロマイセス(Talaromyces)、コラリエラ(Collariella)、リジド ポルス(Rigidoporous)、及び/若しくはロラミセス(Loramyces)の菌種、又は関連生物からクローニングされ得、したがって、例えば、ポリヌクレオチドの領域をコードするポリペプチドの変種であり得る。
本発明のα-アミラーゼ変異体をコードするポリヌクレオチドの修飾は、ポリペプチドと実質的に同様のポリペプチドを合成するために必要であり得る。ポリペプチドに対する、用語「実質的に同様」は、ポリペプチドの天然に存在しない形態を指す。これらのポリペプチドは、いくつか遺伝子操作された方法でその天然起源から単離されたポリペプチドとは異なり得、例えば、比活性、熱安定性、pH最適条件などが異なる変異体である。変異体は、成熟ポリペプチドコード配列、例えば、それらのサブシーケンスとして提示されるポリヌクレオチドに基づいて、及び/又はポリペプチドのアミノ酸配列にポリペプチドのアミノ酸配列に変化をもたらさないが、酵素の産生を意図した宿主生物のコドン使用に対応するヌクレオチド置換の導入によって、若しくは異なるアミノ酸配列を生じさせ得るヌクレオチド置換の導入によって構築され得る。ヌクレオチド置換の一般的な説明については、例えば、Ford et al.,1991,Protein Expression and Purification 2:95-107を参照されたい。
核酸コンストラクト
本発明はまた、本発明のα-アミラーゼ変異体をコードするポリヌクレオチドを含む核酸コンストラクトに関する。
一態様では、核酸コンストラクトは、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、476に対応する1つ以上の位置において修飾を含むα-アミラーゼ変異体をコードするポリヌクレオチドを含み、ポリヌクレオチドは、制御配列に適合する条件下で、好適な宿主細胞においてコード配列の発現を誘導する1つ以上の制御配列に操作可能に連結されている。
本発明はまた、制御配列に適合する条件下で、好適な宿主細胞においてコード配列の発現を誘導する1つ以上の制御配列に操作可能に連結された、本発明のα-アミラーゼ変異体をコードするポリヌクレオチドを含む核酸コンストラクトに関する。
ポリヌクレオチドは、変異体の発現を提供するために様々な方法で操作され得る。ベクターに挿入する前にポリヌクレオチドを操作することが、発現ベクターによっては望ましい又は必要な場合がある。組換えDNA法を利用してポリヌクレオチドを改変するための技術は、当該技術分野において周知である。
制御配列は、ポリヌクレオチドの発現のために宿主細胞によって認識されるプロモータ、ポリヌクレオチドであってよい。プロモータは、変異体の発現を媒介する転写制御配列を含む。プロモータは、突然変異型、切断型、及びハイブリッド型のプロモータを含む、宿主細胞において転写活性を示す任意のポリヌクレオチドであってよく、宿主細胞に相同又は非相同な細胞外又は細胞内ポリペプチドをコードしている遺伝子から得ることができる。
細菌宿主細胞における本発明の核酸コンストラクトの転写を誘導するための好適なプロモータの例は、バチルス・アミロリケファシエンスアルファ-アミラーゼ遺伝子(amyQ)、バチルス・リケニフォルミスアルファ-アミラーゼ遺伝子(amyL)、バチルス・リケニフォルミスペニシリナーゼ遺伝子(penP)、バチルス・ステアロサーモフィルスマルトース生成アミラーゼ遺伝子(amyM)、バチルス・サブチリスレバンスクラーゼ遺伝子(sacB)、バチルス・サブチリスxylA及びxylB遺伝子、バチルス・チューリンゲンシスcryIIIA遺伝子(Agaisse and Lereclus,1994,Molecular Microbiology 13:97-107)、大腸菌lacオペロン、大腸菌trcプロモータ(Egon et al.,1988,Gene 69:301-315)、ストレプトマイセス・コエリコラアガラーゼ遺伝子(dagA)、及び原核ベータ-ラクタマーゼ遺伝子(Villa-Kamaroff et al.,1978,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 75:3727-3731)から得られるプロモータ、並びにtacプロモータ(DeBoer et al.,1983,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 80:21-25を参照)によって行うことができる。更なるプロモータは、Gilbert et al.,1980,Scientific American 242:74-94における「Useful proteins from recombinant bacteria」及び上記のSambrook et al.,1989に記載されている。タンデムプロモータの例は、国際公開第99/43835号に開示されている。
糸状菌宿主細胞における本発明のポリヌクレオチドの転写を誘導するための好適なプロモータの例は、アスペルギルス・ニデュランスアセトアミダーゼ、アスペルギルス・ニガー中性アルファ-アミラーゼ、アスペルギルス・ニガー酸安定性アルファ-アミラーゼ、アスペルギルス・ニガー又はアスペルギルス・アワモリグルコアミラーゼ(glaA)、アスペルギルス・オリザエTAKAアミラーゼ、アスペルギルス・オリザエアルカリプロテアーゼ、アスペルギルス・オリザエトリソースリン酸イソメラーゼ、フザリウム・オキシスポルムトリプシン様プロテアーゼ(国際公開第96/00787号)、フザリウム・ベネナツムアミログルコシダーゼ(国際公開第00/56900号)、フザリウム・ベネナツムDaria(国際公開第00/56900号)、フザリウム・ベネナツムQuinn(国際公開第00/56900号)、リゾムコール・ミエヘイリパーゼ、リゾムコール・ミエヘイアスパラギン酸プロテイナーゼ、トリコデルマ・レーシβグルコシダーゼ、トリコデルマ・レーシセロビオヒドロラーゼI、トリコデルマ・レーシセロビオヒドロラーゼII、トリコデルマ・レーシエンドグルカナーゼI、トリコデルマ・レーシエンドグルカナーゼII、トリコデルマ・レーシエンドグルカナーゼIII、トリコデルマ・レーシエンドグルカナーゼV、トリコデルマ・レーシキシラナーゼI、トリコデルマ・レーシキシラナーゼII、トリコデルマ・レーシβ-キシロシダーゼから得られるプロモータ、及びトリコデルマ・レーシ翻訳延長因子、並びにNA2-tpiプロモータ(非翻訳リーダーがアスペルギルス・トリオースリン酸イソメラーゼ遺伝子由来の非翻訳リーダーで置換されているアスペルギルス中性アルファ-アミラーゼ遺伝子由来の修飾プロモータ;非限定的な例としては、非翻訳リーダーがアスペルギルス・ニデュランス又はアスペルギルス・オリザエトリソースリン酸イソメラーゼ遺伝子由来の非翻訳リーダーで置換されているアスペルギルス・ニガー中性アルファ-アミラーゼ遺伝子由来の修飾プロモータが挙げられる)、並びにそれらの変異体、切断型、及びハイブリッド型プロモータである。他のプロモータは、米国特許第6,011,147号に記載されている。
酵母宿主では、有用なプロモータは、サッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)エノラーゼ(ENO-1)、サッカロマイセス・セレビシエガラクトキナーゼ(GAL1)、サッカロマイセス・セレビシエアルコールデヒドロゲナーゼ/グリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼ(ADH1、ADH2/GAP)、サッカロマイセス・セレビシエトリオースリン酸イソメラーゼ(TPI)、サッカロマイセス・セレビシエメタロチオネイン(CUP1)、及びサッカロマイセス・セレビシエ3-ホスホグリセリン酸キナーゼの遺伝子から得られる。酵母宿主細胞のための他の有用なプロモータは、Romanos et al.,1992,Yeast 8:423-488によって記載されている。
また、制御配列は、転写を終結するために宿主細胞によって認識される転写ターミネータであってもよい。ターミネータは、ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドの3’末端に操作可能に連結される。宿主細胞において機能する任意のターミネータを本発明において使用してよい。
細菌宿主細胞に好ましいターミネータは、バチルス・クラウシイアルカリプロテアーゼ(aprH)、バチルス・リケニフォルミスアルファ-アミラーゼ(amyL)、及び大腸菌リボソームRNA(rrnB)の遺伝子から得られる。
糸状菌宿主細胞に好ましいターミネータは、アスペルギルス・ニデュランスアセトアミダーゼ、アスペルギルス・ニデュランスアントラニル酸合成酵素、アスペルギルス・ニガーグルコアミラーゼ、アスペルギルス・ニガーα-グルコシダーゼ、アスペルギルス・オリザエTAKAアミラーゼ、フサリウム・オキシスポラムトリプシン様プロテアーゼ、トリコデルマ・リーゼイβ-グルコシダーゼ、トリコデルマ・リーゼイセロビオヒドロラーゼI、トリコデルマ・リーゼイセロビオヒドロラーゼII、トリコデルマ・リーゼイエンドグルカナーゼI、トリコデルマ・リーゼイエンドグルカナーゼII、トリコデルマ・リーゼイエンドグルカナーゼIII、トリコデルマ・リーゼイエンドグルカナーゼV、トリコデルマ・リーゼイキシラナーゼI、トリコデルマ・リーゼイキシラナーゼII、トリコデルマ・リーゼイキシラナーゼIII、トリコデルマ・リーゼイβ-キシロシダーゼ、及びトリコデルマ・リーゼイ翻訳延長因子の遺伝子から得られる。
酵母宿主細胞に好ましいターミネータは、サッカロマイセス・セレビシエエノラーゼ、サッカロマイセス・セレビシエシトクロムC(CYC1)、及びサッカロマイセス・セレビシエグリセルアルデヒド3-リン酸デヒドロゲナーゼの遺伝子から得られる。酵母宿主細胞のための他の有用なターミネータは、上記のRomanos et al.,1992によって記載されている。
また、制御配列は、遺伝子の発現を増加させる遺伝子のプロモータの下流かつコード配列の上流のmRNA安定化領域であってもよい。
好適なmRNA安定化領域の例は、バチルス・チューリンゲンシスcryIIIA遺伝子(国際公開第94/25612号)及びバチルス・サブチリスSP82遺伝子(Hue et al.,1995,J.Bacteriol.177:3465-3471)から得られる。
また、制御配列は、宿主細胞による翻訳にとって重要なmRNAの非翻訳領域である、リーダーであってもよい。リーダーは、ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドの5’末端に操作可能に連結される。宿主細胞において機能する任意のリーダーを使用してよい。
糸状菌宿主細胞に好ましいリーダーは、アスペルギルス・オリザエTAKAアミラーゼ及びアスペルギルス・ニデュランストリオースリン酸イソメラーゼの遺伝子から得られる。
酵母宿主細胞に好適なリーダーは、サッカロマイセス・セレビシエエノラーゼ(ENO-1)、サッカロマイセス・セレビシエ3-ホスホグリセリン酸キナーゼ、サッカロマイセス・セレビシエアルファ-因子、及びサッカロマイセス・セレビシエアルコールデヒドロゲナーゼ/グリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼ(ADH2/GAP)の遺伝子から得られる。
また、制御配列は、ポリヌクレオチドの3’末端に操作可能に連結しており、転写されるとき、転写されたmRNAにポリアデノシン残基を付加するためのシグナルとして宿主細胞によって認識される配列である、ポリアデニル化配列であり得る。宿主細胞において機能する任意のポリアデニル化配列を使用してよい。
糸状菌宿主細胞に好ましいポリアデニル化配列は、アスペルギルス・ニデュランスアントラニル酸合成酵素、アスペルギルス・ニガーグルコアミラーゼ、アスペルギルス・ニガーアルファ-グルコシダーゼ、アスペルギルス・オリザエTAKAアミラーゼ、及びフザリウム・オキシスポラムトリプシン様プロテアーゼの遺伝子から得られる。
酵母宿主細胞のために有用なポリアデニル化配列は、Guo and Sherman,1995,Mol.Cellular Biol.15:5983-5990によって記載されている。
また、制御配列は、ポリペプチドのN末端に連結されたシグナルペプチドをコードしており、ポリペプチドを細胞の分泌経路に誘導する、シグナルペプチドコード領域であり得る。ポリヌクレオチドのコード配列の5’末端は、ポリヌクレオチドをコードしているコード配列のセグメントと翻訳リーディングフレームで天然に連結されているシグナルペプチドコード配列を固有に含有し得る。あるいは、コード配列の5’末端は、コード配列に対して異種であるシグナルペプチドコード配列を含有し得る。異種シグナルペプチドコード配列は、そのコード配列がシグナルペプチドコード配列を天然には含有していない場合、必要になることがある。あるいは、ポリペプチドの分泌を強化するために、異種シグナルペプチドコード配列を単に外来シグナルペプチドコード配列に置き換えてもよい。しかし、発現されたポリペプチドを宿主細胞の分泌経路に誘導する任意のシグナルペプチドコード配列を使用してもよい。
細菌宿主細胞に有効なシグナルペプチドコード配列は、バチルスNCIB 11837マルトース生成アミラーゼ、バチルス・リケニフォルミスサブチリシン、バチルス・リケニフォルミスベータ-ラクタマーゼ、バチルス・ステアロサーモフィルスアルファ-アミラーゼ、バチルス・ステアロサーモフィルス中性プロテアーゼ(nprT、nprS、nprM)、及びバチルス・サブチリスprsAの遺伝子から得られるシグナルペプチドコード配列である。更なるシグナルペプチドは、Simonen and Palva,1993,Microbiol.Rev.57:109-137によって記載されている。
糸状菌宿主細胞に有効なシグナルペプチドコード配列は、アスペルギルス・ニガー中性アミラーゼ、アスペルギルス・ニガーグルコアミラーゼ、アスペルギルス・オリザエTAKAアミラーゼ、フミコーラ・インソレンスセルラーゼ、フミコーラ・インソレンスエンドグルカナーゼV、フミコーラ・ラヌギノサリパーゼ、及びリゾムコール・ミエヘイアスパラギン酸プロテイナーゼの遺伝子から得られるシグナルペプチドコード配列である。
酵母宿主細胞のための有用なシグナルペプチドは、サッカロマイセス・セレビシエアルファ-因子及びサッカロマイセス・セレビシエインベルターゼの遺伝子から得られる。他の有用なシグナルペプチドコード配列は、Romanos et al.,1992,上記によって記載されている。
また、制御配列は、ポリペプチドのN末端に位置するプロペプチドをコードしているプロペプチドコード配列であり得る。得られるポリペプチドは、プロ酵素又はプロポリペプチド(又は場合によっては酵素原)として知られている。ポリペプチドは、一般的には不活性であり、プロポリペプチドからのプロペプチドの触媒的又は自己触媒的開裂によって活性ポリペプチドに変換され得る。プロペプチドコード配列は、バチルス・サブチリスアルカリプロテアーゼ(aprE)、バチルス・サブチリス中性プロテアーゼ(nprT)、ミセリオフィソーラ・サーモフィララッカーゼ(国際公開第95/33836号)、リゾムコール・ミエヘイアスパラギン酸プロテイナーゼ、及びサッカロマイセス・セレビシエα因子の遺伝子から得ることができる。
シグナルペプチド及びプロペプチド配列の両方が存在する場合、プロペプチド配列はポリペプチドのN末端に隣接して位置し、シグナルペプチド配列はプロペプチド配列のN末端に隣接して位置する。
また、宿主細胞の増殖に対してポリペプチドの発現を調節する調節配列を付加することが望ましい場合もある。調節配列の例は、調節化合物の存在を含む化学的又は物理的刺激に応答して遺伝子の発現をオン又はオフにするものである。原核細胞系における調節配列としては、lac、tac、及びtrpオペレータ系が挙げられる。酵母では、ADH2システム又はGAL1システムを使用してもよい。糸状菌では、アスペルギルス・ニガーグルコアミラーゼプロモータ、アスペルギルス・オリザエTAKAα-アミラーゼプロモータ、及びアスペルギルス・オリザエグルコアミラーゼプロモータ、トリコデルマ・リーゼイセロビオヒドロラーゼIプロモータ、及びトリコデルマ・リーゼイセロビオヒドロラーゼIIプロモータを使用してよい。調節配列の他の例は、遺伝子増幅を可能にするものである。真核細胞系では、これら調節配列としては、メトトレキサートの存在下で増幅するジヒドロ葉酸還元酵素遺伝子及び重金属で増幅するメタロチオネイン遺伝子が挙げられる。これらの場合、ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドは、調節配列に操作可能に連結される。
発現ベクター
本発明はまた、本発明のα-アミラーゼ変異体をコードしているポリヌクレオチドを含む組換え発現ベクター、プロモータ、並びに転写及び翻訳終止シグナルにも関する。様々なヌクレオチド及び制御配列は、1つ以上の便利な制限部位において変異体をコードしているポリヌクレオチドを挿入又は置換するのを可能にするために、このような部位を含み得る組換え発現ベクターを産生するために一緒に接合させてもよい。代替的に、ポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチド又はポリヌクレオチドを含む核酸コンストラクトを、発現に適したベクターに挿入することによって発現させることもできる。発現ベクターの作成において、コード配列は、コード配列が発現に適した制御配列と操作可能に連結されるように、ベクター内に位置する。
一態様では、組換えベクターは、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、476に対応する1つ以上の位置において修飾を含むα-アミラーゼ変異体をコードしているポリヌクレオチド、プロモータ、並びに転写及び翻訳終止シグナルを含む。様々なヌクレオチド及び制御配列は、1つ以上(数個)の便利な制限酵素部位において変異体をコードしているポリヌクレオチドを挿入又は置換するのを可能にするために、このような部位を含み得る組換え発現ベクターを生成するために互いに接合させてもよい。代替的に、ポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチド又はポリヌクレオチドを含む核酸コンストラクトを、発現に適したベクターに挿入することによって発現させることもできる。発現ベクターの作成において、コード配列は、コード配列が発現に適した制御配列と操作可能に連結されるように、ベクター内に位置する。
組換え発現ベクターは、便利に組換えDNA手順に供することができ、ポリヌクレオチドを発現させることができる任意のベクター(例えば、プラスミド又はウイルス)であってよい。ベクターの選択は、典型的には、ベクターと、ベクターが導入される宿主細胞との適合性に依存する。ベクターは、直鎖又は閉環状プラスミドであってよい。
ベクターは、自律的に複製するベクター、すなわち、その複製が染色体複製とは無関係な染色体外実体として存在するベクター、例えば、プラスミド、染色体外因子、ミニ染色体、又は人工染色体であってもよい。ベクターは、自己複製を保証するための任意の手段を含んでいてよい。あるいは、ベクターは、宿主細胞に導入されるときに、ゲノムに組み込まれ、それが組み込まれた染色体とともに複製されるベクターであってもよい。更に、宿主細胞のゲノムに導入される全DNA又はトランスポゾンを一緒に含有する、単一のベクター若しくはプラスミド、又は2つ以上のベクター若しくはプラスミドを使用してもよい。
ベクターは、好ましくは、形質転換、トランスフェクト、形質導入などに供された細胞を容易に選択することを可能にする1つ以上の選択可能マーカーを含有する。選択可能マーカーは、その生成物が殺生物剤又はウイルス耐性、重金属耐性、栄養要求体に対する原栄養性などを備える遺伝子である。
細菌の選択可能マーカーの例は、バチルス・リケニフォルミス若しくはバチルス・サブチリスのdal遺伝子、又はアンピシリン、クロラムフェニコール、カナマイシン、ネオマイシン、スペクチノマイシン、若しくはテトラサイクリン耐性などの抗生物質耐性を付与するマーカーである。酵母宿主細胞に好適なマーカーとしては、ADE2、HIS3、LEU2、LYS2、MET3、TRP1、及びURA3が挙げられるが、これらに限定されない。糸状菌宿主細胞において使用するための選択可能マーカーとしては、adeA(ホスホリボシルアミノイミダゾール-スクシノカルボキサミド合成酵素)、adeB(ホスホリボシル-アミノイミダゾール合成酵素)、amdS(アセトアミダーゼ)、argB(オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼ)、bar(ホスフィノロトリシンアセチルトランスフェラーゼ)、hph(ハイグロマイシンホスホトランスフェラーゼ)、niaD(硝酸還元酵素)、pyrG(オロチジン-5’リン酸デカルボキシラーゼ)、sC(硫酸アデニルトランスフェラーゼ)、及びtrpC(アントラニル酸合成酵素)、並びにこれらの等価物が挙げられるが、これらに限定されない。アスペルギルスの細胞において使用するのに好ましいのは、アスペルギルス・ニデュランス又はアスペルギルス・オリザエのamdS及びpyrG遺伝子、並びにストレプトマイセス・ハイグロスコピカスのbar遺伝子である。トリコデルマ属の細胞において使用するのに好ましいのは、adeA、adeB、amdS、hph、及びpyrG遺伝子である。
選択可能マーカーは、国際公開第2010/039889号に記載されているような二重選択可能マーカ系であってもよい。一態様では、二重選択可能マーカーは、hph-tk二重選択可能マーカー系である。
ベクターは、好ましくは、宿主細胞のゲノムにベクターを組み込むか、又はゲノムに依存せずに細胞内でベクターが自律複製することを可能にするエレメントを含有する。
宿主細胞のゲノムへの組み込みについては、ベクターは、ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドの配列、又は相同若しくは非相同組換えによってゲノムに組み込むためのベクターの任意の他のエレメントに依存し得る。代替的に、ベクターは、染色体中の正確な位置における宿主細胞のゲノムへの相同組換えによる組み込みを誘導するための追加のポリヌクレオチドを含有していてもよい。正確な位置における組み込みの可能性を高めるために、組み込みエレメントは、相同組換えの可能性を高めるために、対応する標的配列に対して高い配列同一度を有する、100~10,000塩基対、400~10,000塩基対、及び800~10,000塩基対等の十分な数の核酸を含有しなければならない。組み込みエレメントは、宿主細胞のゲノム中の標的配列と相同な任意の配列であってもよい。更に、組み込みエレメントは、非コード又はコードポリヌクレオチドであってもよい。他方、ベクターは、非相同的組換えにより宿主細胞のゲノムに組み込まれてもよい。
自律複製については、ベクターは、ベクターを対象宿主細胞中で自律的に複製することができる複製起点を更に含み得る。複製起点は、細胞内で機能する自律複製を媒介する任意のプラスミドレプリケータであり得る。用語「複製起点」又は「プラスミドレプリケータ」は、プラスミド又はベクターをインビボで複製させることができるポリヌクレオチドを意味する。
細菌の複製起点の例は、大腸菌における複製を可能にするpBR322、pUC19、pACYC177、及びpACYC184、並びにバチルスにおける複製を可能にするpUB110、pE194、pTA1060、及びpAMβ1のプラスミドの複製起点である。
酵母宿主細胞で使用するための複製起点の例は、2ミクロン複製起点、ARS1、ARS4、ARS1とCEN3との組み合わせ、及びARS4とCEN6との組み合わせである。
糸状菌細胞において有用な複製起点の例は、AMA1及びANS1である(Gems et al.,1991,Gene 98:61-67;Cullen et al.,1987,Nucleic Acids Res.15:9163-9175、国際公開第00/24883号)。AMA1遺伝子の単離及び当該遺伝子を含むプラスミド又はベクターの構築は、国際公開第00/24883号に開示されている方法に従って実施され得る。
本発明のポリヌクレオチドの1つ超のコピーを宿主細胞に挿入して、ポリペプチドの生成を増加させることもできる。ポリヌクレオチドのコピー数の増加は、配列の少なくとも1つの追加コピーを宿主細胞のゲノムに組み込むことによって、又は選択可能なマーカー遺伝子の増幅されたコピー、したがってポリヌクレオチドの追加のコピーを含む細胞が、適切な選択可能な薬剤の存在下で細胞を培養することによって選択され得る、ポリヌクレオチドとともに増幅可能かつ選択可能なマーカー遺伝子を含めることによって、得ることができる。
本発明の組換え発現ベクターを構築するために上述のエレメントをライゲーションするために使用される手順は、当業者に周知である(例えば、Sambrook et al.,1989、上記を参照されたい)。
宿主細胞
本発明はまた、本発明の変異体の産生を誘導する1つ以上の制御配列に操作可能に連結された本発明のα-アミラーゼ変異体をコードするポリヌクレオチドを含む、組換え宿主細胞に関する。ポリヌクレオチドを含むコンストラクト又はベクターは、当該コンストラクト又はベクターが上記のように染色体組み込み体として又は自己複製染色体外ベクターとして維持されるように、宿主細胞に導入される。用語「宿主細胞」は、複製中に生じた変異に起因する、親細胞と同一ではない親細胞の任意の後代を包含する。宿主細胞の選択は、変異体をコードしている遺伝子及びその起源に大きく依存する。
宿主細胞は、α-アミラーゼ変異体の組換え産生において有用な任意の細胞、例えば原核生物又は真核生物であり得る。
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、組換え宿主細胞に対して異種である。
いくつかの実施形態では、1つ以上の制御配列のうちの少なくとも1つは、α-アミラーゼ変異体をコードするポリヌクレオチドにとって異種である。
いくつかの実施形態では、組換え宿主細胞は、本発明のポリヌクレオチドの少なくとも2つ、例えば、3つ、4つ、又は5つのコピーを含む。
宿主細胞は、本発明のポリペプチドの組換え産生において有用な任意の微生物細胞又は植物細胞、例えば原核細胞又は真菌細胞であり得る。
原核宿主細胞は、任意のグラム陽性又はグラム陰性細菌であってよい。グラム陽性細菌としては、バチルス属、クロストリジウム属、エンテロコッカス属、ゲオバチルス属、ラクトバチルス属、ラクトコッカス属、オセアノバチルス属、スタフィロコッカス属、ストレプトコッカス属、及びストレプトマイセス属が挙げられるが、これらに限定されない。グラム陰性細菌としては、カンピロバクター属、大腸菌、フラボバクテリウム属、フソバクテリウム属、ヘリコバクター属、イリオバクター属、ナイセリア属、シュードモナス属、サルモネラ属、及びウレアプラズマ属が挙げられるが、これらに限定されない。
細菌宿主細胞は、バチルス・アルカロフィルス、バチルス・アミロリケファシエンス、バチルス・ブレビス、バチルス・シルクランス、バチルス・クラウシイ、バチルス・コアグランス、バチルス・フィルムス、バチルス・ラウタス、バチルス・レンタス、バチルス・リケニフォルミス、バチルス・メガテリウム、バチルス・プミルス、バチルス・ステアロサーモフィルス、バチルス・サブチリス、及びバチルス・チューリンゲンシスの細胞が挙げられるがこれらに限定されない、任意のバチルス属の細胞であってもよい。
また、細菌宿主細胞は、ストレプトコッカス・エクイシミリス(Streptococcus equisimilis)、ストレプトコッカス・ピオゲネス、ストレプトコッカス・ウベリス、及びストレプトコッカス・イクイ亜種ズーエピデミカスの細胞が挙げられるがこれらに限定されない、任意のストレプトコッカス属の細胞であり得る。
また、細菌宿主細胞は、ストレプトマイセス・アクロモゲネス(Streptomyces achromogenes)、ストレプトマイセス・アベルミチリス(Streptomyces avermitilis)、ストレプトマイセス・コエリコラ(Streptomyces coelicolor)、ストレプトマイセス・グリセウス(Streptomyces griseus)、及びストレプトマイセス・リビダンス(Streptomyces lividans)の細胞が挙げられるがこれらに限定されない、任意のストレプトマイセス属の細胞であり得る。
バチルス属の細胞へのDNAの導入は、プロトプラスト形質転換(例えば、Chang and Cohen,1979,Mol.Gen.Genet.168:111-115を参照)、コンピテントセル形質転換(例えば、Young and Spizizen,1961,J.Bacteriol.81:823-829、若しくはDubnau and Davidoff-Abelson,1971,J.Mol.Biol.56:209-221を参照)、エレクトロポレーション(例えば、Shigekawa and Dower,1988,Biotechniques 6:742-751を参照)、又はコンジュゲーション(例えば、Koehler and Thorne,1987,J.Bacteriol.169:5271-5278を参照)によって行うことができる。大腸菌細胞へのDNAの導入は、プロトプラスト形質転換(例えば、Hanahan,1983,J.Mol.Biol.166:557-580を参照)又はエレクトロポレーション(例えば、Dower et al.,1988,Nucleic Acids Res.16:6127-6145を参照)によって行うことができる。ストレプトマイセス属の細胞へのDNAの導入は、プロトプラスト形質転換、エレクトロポレーション(例えば、Gong et al.,2004,Folia Microbiol.(Praha)49:399-405を参照)、コンジュゲーション(例えば、Mazodier et al.,1989,J.Bacteriol.171:3583-3585)、又は形質導入(例えば、Burke et al.,2001,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 98:6289-6294を参照)によって行うことができる。シュードモナス属の細胞へのDNAの導入は、エレクトロポレーション(例えば、Choi et al.,2006,J.Microbiol.Methods 64:391-397を参照)、又はコンジュゲーション(例えば、Pinedo and Smets,2005,Appl.Environ.Microbiol.71:51-57を参照)によって行うことができる。ストレプトコッカス属の細胞へのDNAの導入は、天然コンピテント(例えば、Perry and Kuramitsu,1981,Infect.Immun.32:1295-1297を参照)、プロトプラスト形質転換(例えば、Catt and Jollick,1991,Microbios 68:189-207を参照)、エレクトロポーテ-ション(例えば、Buckley et al.,1999,Appl.Environ.Microbiol.65:3800-3804を参照)、又はコンジュゲーション(例えば、Clewell,1981,Microbiol.Rev.45:409-436を参照)によって行うことができる。しかし、宿主細胞にDNAを導入するための当該技術分野において既知の任意の方法を使用することができる。
宿主細胞は、真菌細胞であってもよい。「真菌」とは、本明細書で使用するとき、子嚢菌類、担子菌類、ツボカビ類、及び接合菌類、並びに卵菌類及び全ての栄養胞子形成菌(Hawksworth et al.,Ainsworth and Bisby’s Dictionary of The Fungi,8th edition,1995,CAB International,University Press,Cambridge,UKによって定義)を含む。
真菌宿主細胞は、酵母細胞であってもよい。「酵母」は、本明細書で使用するとき、子嚢胞子形成酵母(エンドミセス目)、担子胞子形成酵母、及び不完全菌類(分芽菌)に属する酵母を含む。酵母の分類は将来的に変化する可能性があるので、本発明の目的では、酵母は、Biology and Activities of Yeast(Skinner,Passmore,and Davenport,editors,Soc.App.Bacteriol.Symposium Series No.9,1980)に記載のとおり定義されるものとする。
酵母宿主細胞は、カンジダ属、ハンゼヌラ属、クリベロマイセス属、ピキア属、サッカロマイセス属、シゾサッカロマイセス属、又はヤロウイア属の細胞、例えば、クリベロマイセス・ラクチス(Kluyveromyces lactis)、サッカロマイセス・カルルスベルゲンシス、サッカロマイセス・セレビシエ、サッカロマイセス・ジディアスタティカス、サッカロマイセス・ドゥグラシィ、サッカロマイセス・クルイベリ、サッカロマイセス・ノルベンシス、サッカロマイセス・オビホルミス、又はヤロウイア・リポリチカ(Yarrowia lipolytica)の細胞であり得る。
真菌宿主細胞は、糸状菌細胞であってもよい。「糸状菌」は、(Hawksworth et al.,1995,上記、によって定義される)真菌類及び卵菌類の亜門の全ての糸状体を含む。糸状菌は、一般的には、キチン、セルロース、グルカン、キトサン、マンナン、及び他の複合多糖類で構成される菌糸体壁を特徴とする。栄養生長は、菌糸の伸長によるものであり、炭素異化は、偏性好気性である。対照的に、サッカロマイセス・セレビシエなどの酵母による栄養生長は、単細胞の葉状体の出芽によるものであり、炭素異化は発酵性であり得る。
糸状菌宿主細胞は、アクレモニウム、アスペルギルス、アウレオバシディウム、ビヤー力ンデラ、セリポリオプシス、クリソスポリウム、コプリヌス、コリオルス、クリプトコッカス、フィリバシディウム、フザリウム、フミコーラ、マグナポルテ、ムコール、ミセリオフィソーラ、ネオカリマスティクス、ニューロスポラ、ペシロマイセス、ペニシリウム、ファネロカエテ、フレビア、ピロマイセス、プレウロツス、シゾフィリウム、タラロマイセス、サーモアスカス、チェラビア、トリポクラジウム、トラメテス、又はトリコデルマの細胞であってもよい。
例えば、糸状菌宿主細胞は、アスペルギルス・アワモリ、アスペルギルス・フォエティダス、アスペルギルス・フミガーツス、アスペルギルス・ジャポニクス、アスペルギルス・ニデュランス、アスペルギルス・ニガー、アスペルギルス・オリザエ、ヤケイロタケ(Bjerkandera adusta)、セリポリオプシス・アネイリナ(Ceriporiopsis aneirina)、セリポリオプシス・カレギエア(Ceriporiopsis caregiea)、セリポリオプシス・ギルベスセンス(Ceriporiopsis gilvescens)、セリポリオプシス・パンノシンタ(Ceriporiopsis pannocinta)、セリポリオプシス・リブロサ(Ceriporiopsis rivulosa)、セリポリオプシス・スブルファ(Ceriporiopsis subrufa)、セリポリオプシス・スブベルミスポラ(Ceriporiopsis subvermispora)、クリソスポリウム・イノプス、クリソスポリウム・ケラチノフィルム、クリソスポリウム・ラックノウェンセ、クリソスポリウム・メルダリウム、クリソスポリウム・パンニコラ、クリソスポリウム・クイーンスランジクム、クリソスポリウム・トロピクム、クリソスポリウム・ゾナツム、コプリヌス・シネレウス、コリオルス・ヒルスツス、フザリウム・バクテリジオイデス、フザリウム・セレアリス、フザリウム・クロークウェレンス、フザリウム・クルモルム、フザリウム・グラミネアルム、フザリウム・グラミヌム、フザリウム・ヘテロスポルム、フザリウム・ネグンディ、フザリウム・オキシスポルム、フザリウム・レチクランツム、フザリウム・ロゼウム、フザリウム・サムブシヌム、フザリウム・サルコクロウム、フザリウムス・ポロトリキオイデス、フザリウム・スルフレウム、フザリウム・トルロスム、フザリウム・トリコテシオイデス、フザリウム・ベネナツム、フミコーラ・インソレンス、フミコーラ・ラヌギノサ、ムコール・ミエヘイ、ミセリオフィソーラ・テルモフィラ、ニューロスポラ・クラッサ、ペニシリウム・プルプロゲヌム、ファネロケーテ・クリソスポリウム、フレビア・ラジアタ(Phlebia radiata)、プレウロツス・エリンギイ(Pleurotus eryngii)、タラロミセス・エメルソニイ(Talaromyces emersonii)、チエラビア・テレストリス、トラメテス・ビローサ(Trametes villosa)、トラメテス・ベルシコロル(Trametes versicolor)、トリコデルマ・ハルジアナム、トリコデルマ・コニンギイ、トリコデルマ・ロンギブラキアタム、トリコデルマ・レーシ、又はトリコデルマ・ビリデの細胞であり得る。
真菌細胞は、それ自体既知のプロセスにおいて、プロトプラスト形成、プロトプラストの形質転換、及び細胞壁の再生を伴うプロセスによって形質転換され得る。アスペルギルス及びトリコデルマ宿主細胞の形質転換のための好適な手順は、欧州特許第238023号、Yelton et al.,1984,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81:1470-1474、及びChristensen et al.,1988,Bio/Technology 6:1419-1422に記載されている。フザリウム種を形質転換するのに好適な方法は、Malardier et al.,1989,Gene 78:147-156及び国際公開第96/00787号に記載されている。酵母は、Becker and Guarente,In Abelson,J.N.and Simon,M.I.,editors,Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology,Methods in Enzymology,Volume 194,pp 182-187,Academic Press,Inc.,New York;Ito et al.,1983,J.Bacteriol.153:163及びHinnen et al.,1978,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 75:1920によって記載されている手順を使用して形質転換され得る。
α-アミラーゼの産生方法
変異体は、(a)本発明の宿主細胞を、変異体の発現に好適な条件下で培養することと、(b)変異体を回収することと、を含む方法によって産生され得る。
一態様では、α-アミラーゼ活性を有する変異体を得る方法は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、476に対応する1つ以上の位置において修飾を親α-アミラーゼに導入することであって、変異体はα-アミラーゼ活性を有することと、任意選択的に変異体を回収することと、を含む。
宿主細胞は、当該技術分野において既知の方法を使用してハイブリッド又は変異体の産生に好適な栄養培地中で培養される。例えば、細胞は、実験室又は産業用発酵槽において、好適な培地中、ポリペプチドの発現及び/又は単離を可能にする条件下で実施される、振盪フラスコ培養又は小規模若しくは大規模発酵(連続、バッチ、流加、又は固形発酵を含む)によって培養され得る。培養は、当該技術分野において既知の手順を使用して、炭素及び窒素源並びに無機塩類を含む好適な栄養培地中で行われる。好適な培地は、商業供給者から入手可能であるか、又は(例えば、American Type Culture Collectionのカタログに)公開されている組成に従って調製され得る。ハイブリッド又は変異体が栄養培地に分泌された場合、ハイブリッド又は変異体を培地から直接回収することができる。ハイブリッド又は変異体が分泌されない場合、細胞溶解物から回収することができる。
ハイブリッド又は変異体は、ハイブリッド又は変異体に特異的な当該技術分野において既知の方法を用いて検出され得る。これら検出方法としては、特異的抗体の使用、酵素生成物の形成、又は酵素基質の消失を挙げることができる。例えば、酵素アッセイを用いてハイブリッド又は変異体の活性を決定することができる。
別の一態様では、ハイブリッド又は変異体を回収せずに、ハイブリッド又は変異体を発現する、本明細書に記載の宿主細胞をハイブリッド源又は変異体源として使用する。
一態様では、α-アミラーゼを有するポリペプチドの変異体の洗浄性能を改善する方法であって、当該変異体は、配列番号1のアミノ酸配列を有するか、又は配列番号1のアミノ酸配列に対して少なくとも60%の配列同一性を有し、当該方法は、(a)α-アミラーゼ活性を有するポリペプチド中の2つ、3つ、又は4つの位置の置換及び/又は欠失の工程であって、当該位置は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置180、181、182、及び183対応する、工程と、(b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1、H2、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、R180、S181、T182、G183、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475及びG476に対応する1つ以上における修飾の工程と、を含み、当該変異体は、α-アミラーゼ活性と、当該ポリペプチドと比較して改善された(増加した)洗浄性能を有する。
α-アミラーゼ変異体の顆粒
本発明はまた、本明細書に記載のα-アミラーゼ変異体を含む酵素顆粒/粒子に関する。一実施形態では、顆粒は、コアと、任意選択にコアを囲む1つ以上のコーティング(外層)と、を含む。コアは、球相当径(体積ベースの平均粒径)として測定される、20~2000μm、特に50~1500μm、100~1500μm、又は250~1200μmの直径を有し得る。
一実施形態では、コアは、本発明の1つ以上のα-アミラーゼ変異体を含む。一実施形態では、コアは、本発明のα-アミラーゼ変異体を有する、1つ以上のポリペプチドを含む。一実施形態では、コアは、α-アミラーゼ変異体を有する、1つ以上のポリペプチド、及び/又は本発明のα-アミラーゼ変異体を有する、1つ以上のポリペプチドを含む。
コアは、結合剤、充填剤、繊維材料(セルロース若しくは合成繊維)、安定化剤、可溶化剤、懸濁剤、粘度調整剤、可塑剤、塩、潤滑剤、染料、顔料、還元剤、酸化防止剤、過酸化物分解触媒(例えば、カタラーゼ)、酸性緩衝成分、及び芳香剤など追加材料を含み得る。
コアは、例えば、保管安定性を改善するか、取り扱い中の粉塵形成を低減するか、又は顆粒を着色するために、少なくとも1つのコーティングによって囲まれ得る。任意のコーティングは、塩コーティング、又はポリエチレングリコール(PEG)、メチルヒドロキシプロピルセルロース(MHPC)及びポリビニルアルコール(PVA)など他の適切なコーティング材料を含み得る。
コーティングは、好ましくは少なくとも0.1μmの厚さ、特に少なくとも0.5μm、少なくとも1μm、又は少なくとも5μmである。いくつかの実施形態では、コーティングの厚さは、60μm未満、又は40μm未満など、100μm未満である。
コーティングは、実質的に連続的な層を形成することによってコアユニットをカプセル化するべきである。実質的に連続的な層は、カプセル化/封入するコアユニットが、コーティングされていない領域をほとんど有さない、又は全く有さないように、穴をほとんど有さない、又は全く有さないコーティングとして理解されるべきである。層又はコーティングは、特に、厚さが均質であるべきである。
コーティングは、当技術分野で既知の他の材料、例えば、充填剤、粘着防止剤、顔料、染料、可塑剤、及び/又は二酸化チタン、カオリン、炭酸カルシウム、若しくはタルクなど結合剤を更に含み得る。
塩コーティングは、少なくとも60重量%、例えば、少なくとも65重量%、少なくとも70重量%、少なくとも75重量%、少なくとも80重量%、少なくとも85重量%、少なくとも90重量%、少なくとも95重量%、又は少なくとも99重量%の塩を含み得る。
許容範囲の保護を提供するために、塩コーティングは、好ましくは、少なくとも0.1μmの厚さ、例えば、少なくとも0.5μm、少なくとも1μm、少なくとも2μm、少なくとも4μm、少なくとも5μm、又は少なくとも8μmである。特定の実施形態では、塩コーティングの厚さは、60μm未満、又は40μm未満など100μm未満である。
塩は、無機塩、例えば、硫酸塩、亜硫酸塩、リン酸塩、ホスホン酸塩、硝酸塩、塩化物若しくは炭酸塩、又はクエン酸塩、マロン酸エステル塩、若しくは酢酸塩など単純な有機酸の塩(10個より少ない炭素原子、例えば、6個以下の炭素原子)であり得る。これらの塩中のカチオンの例は、アルカリ又はアルカリ土類金属イオン、第1遷移系列のアンモニウムイオン又は金属イオン、例えばナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、亜鉛、又はアルミニウムである。アニオンの例としては、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硫酸塩、亜硫酸塩、二硫酸塩、チオ硫酸塩、リン酸塩、一塩基性リン酸塩、二塩基性リン酸塩、次亜リン酸塩、二水素ピロリン酸塩、四ホウ酸塩、ホウ酸塩、炭酸塩、重炭酸塩、メタケイ酸塩、クエン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸エステル塩、マロン酸エステル塩、コハク酸塩、乳酸塩、ギ酸塩、酢酸塩、酪酸塩、プロピオン酸塩、安息香酸塩、酒石酸塩、アスコルビン酸塩、又はグルコン酸塩が挙げられる。特に、硫酸塩、亜硫酸塩、ホスホン酸塩、硝酸塩、硝酸塩、塩化物、又は炭酸塩のアルカリ金属塩又はアルカリ土類金属塩、又はクエン酸塩、マロン酸エステル塩、若しくは酢酸塩など単純な有機酸の塩を使用することができる。一実施形態では、塩は硫酸ナトリウムである。
顆粒は、任意選択的に、1つ以上の追加コーティングを有し得る。好適なコーティング材料の例は、ポリエチレングリコール(PEG)、メチルヒドロキシ-プロピルセルロース(MHPC)、及びポリビニルアルコール(PVA)である。複数のコーティングを施した酵素顆粒の例は、国際公開第93/07263号及び同第97/23606号に記載されている。
顆粒は、1つ以上の追加酵素を含み得る。各酵素はより多くの顆粒に存在して、酵素のより均一な分布を確保し、また、異なる粒径による異なる酵素の物理的分離を低減する。多酵素共顆粒を産生する方法は、IP.comの情報開示IPCOM000200739Dに開示されている。
一実施形態では、顆粒は、1つ以上の追加酵素、例えば、ヒドロラーゼ、イソメラーゼ、リガーゼ、リアーゼ、酸化還元酵素、及びトランスフェラーゼを更に含む。1つ以上の追加酵素は、好ましくは、アセチルキシランエステラーゼ、アシルグリセロールリパーゼ、アミラーゼ、α-アミラーゼ、β-アミラーゼ、アラビノフラノシダーゼ、セロバイオヒドロラーゼ、セルラーゼ、フェルロイルエステラーゼ、ガラクタナーゼ、α-ガラクトシダーゼ、β-ガラクトシダーゼ、β-グルカナーゼ、β-グルコシダーゼ、リゾホスホリパーゼ、リゾチーム、α-マンノシダーゼ、β-マンノシダーゼ(マンナーゼ)、フィターゼ、ホスホリパーゼA1、ホスホリパーゼA2、ホスホリパーゼD、プロテアーゼ、プルラナーゼ、ペクチンエステラーゼ、トリアシルグリセロールリパーゼ、キシラナーゼ、β-キシロシダーゼ、又はそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
顆粒は、噴霧乾燥、流動床プロセスによる層化、及びミキサー造粒生成物(酵素含有液体が従来の造粒成分の乾燥粉末組成物に添加される)など様々なよく説明されているプロセス技術によって作製することができる。酵素、充填剤、及び結合剤などからなる顆粒をセルロース繊維と混合して粒子を強化して、いわゆるT顆粒を産生する。強化粒子は、より堅牢であり、より少量の酵素ダストを放出する)。
発酵ブロス配合物又は細胞組成物
本発明はまた、本発明のα-アミラーゼ変異体を含む、発酵ブロス配合物又は細胞組成物に関する。発酵ブロス配合物又は細胞組成物は、例えば、細胞(対象のポリペプチドを産生するために使用される、本発明のポリペプチドをコードする遺伝子を含む宿主細胞など)、細胞破片、バイオマス、発酵培地、及び/又は発酵生成物など発酵プロセスで使用される追加成分を更に含む。いくつかの実施形態では、組成物は、有機酸、死滅細胞及び/又は細胞破片、並びに培地を含有する、細胞死滅全ブロスである。
本明細書で使用される用語「発酵ブロス」は、回収及び/又は精製を一切受けないか、又は最小限に受ける細胞発酵によって生成される調製物を指す。例えば、発酵ブロスは、微生物培養物を飽和まで増殖させ、タンパク質合成(例えば、宿主細胞による酵素の発現)及び細胞培地への分泌を可能にする炭素制限条件下でインキュベートする際に生成される。発酵ブロスは、発酵の終わりに生成された発酵材料の未分画成分又は分画成分を含有し得る。典型的には、発酵ブロスは未分画であり、典型的に、発酵ブロスは、未分画であり、微生物細胞(例えば、糸状菌細胞)を、例えば遠心分離により除去した後に存在する使用済み培地および細胞破片を含む。いくつかの実施形態において、発酵ブロスは、使用済み細胞培養培地、細胞外酵素、並びに生育可能及び/又は生育不能な微生物細胞を含む。
いくつかの実施形態では、発酵ブロス配合物又は細胞組成物は、少なくとも1つの1~5炭素有機酸及び/又はその塩を含む第1の有機酸成分と、少なくとも1つの6以上の炭素有機酸及び/又はその塩を含む第2の有機酸成分とを含む。いくつかの実施形態では、第1の有機酸成分は、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、それらの塩、又は前述の2つ以上の混合物であり、第2の有機酸成分は、安息香酸、シクロヘキサンカルボン酸、4-メチル吉草酸、フェニル酢酸、それらの塩、又は前述の2つ以上の混合物である。
一態様では、組成物は、有機酸を含有し、任意選択的に死滅細胞及び/又は細胞破片を更に含有する。いくつかの実施形態では、細胞死滅全ブロスから死滅細胞及び/又は細胞破片を除去して、これらの成分を含まない組成物を提供する。
発酵ブロス配合物又は細胞組成物は、防腐剤及び/又は抗菌剤(例えば、静菌性)、例えば、限定するものではないが、ソルビトール、塩化ナトリウム、ソルビン酸カリウム、及び当該技術分野で既知の他のものを更に含み得る。
細胞死滅全ブロス又は組成物は、発酵の終わりに生成された発酵材料の未分画成分を含有し得る。典型的には、細胞死滅全ブロス又は組成物は、微生物細胞(例えば、糸状菌細胞)を飽和まで増殖させ、タンパク質合成を可能にする炭素制限条件下でインキュベートした後に存在する使用済み培地および細胞破片を含有する。いくつかの実施形態では、細胞死滅全ブロス又は組成物は、使用済み細胞培地、細胞外酵素、及び死滅糸状菌細胞を含有する。いくつかの実施形態では、細胞死滅全ブロス又は組成物中に存在する微生物細胞は、当該技術分野で既知の方法を使用して透過性にされ得る、及び/又は溶解され得る。
本明細書に記載の全ブロス又は細胞組成物は、典型的には液体であるが、死滅細胞、細胞破片、培地成分、及び/又は不溶性酵素など不溶性成分を含有し得る。いくつかの実施形態では、不溶性成分を除去して、精製液体組成物を提供し得る。
本発明の全ブロス配合物及び細胞組成物は、国際公開第90/15861号又は同第2010/096673号に記載の方法によって産生され得る。α-アミラーゼは、主要酵素成分としてα-アミラーゼを含み得るプレミックス、例えば、単成分プレミックス中の洗浄組成物に組み込むために調製され得る。あるいは、プレミックスは、アミノペプチダーゼ、追加のアミラーゼ、カルボヒドラーゼ、カルボキシペプチダーゼ、カタラーゼ、セルラーゼ、キチナーゼ、クチナーゼ、シクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼ、デオキシリボヌクレアーゼ、エステラーゼ、α-ガラクトシダーゼ、β-ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、α-グルコシダーゼ、β-グルコシダーゼ、ハロペルオキシダーゼ、ヘキソサミニダーゼ、インベルターゼ、ラッカーゼ、リパーゼ、マンノシダーゼ、オキシダーゼ、ペクチン分解酵素、ペプチドグルタミナーゼ、ペルオキシダーゼ、フィターゼ、ポリフェノールオキシダーゼ、タンパク質分解酵素、リボヌクレアーゼ、トランスグルタミナーゼ、又はキシラナーゼなど複数の酵素活性を含み得る。プレミックス中に存在する追加の酵素は、例えば、バチルス属、例えば、バチルス・リケニフォルミス及びバチルス・サブチリス、又はアスペルギルス属、例えば、アスペルギルス・アクレタス、アスペルギルス・アワモリ、アスペルギルス・フォエティダス、アスペルギルス・フミガーツフ、アスペルギルス・ジャパニクス,アスペルギルス・ニダルス、アスペルギルス・ニガー、又はアスペルギルス・オリザエ; フザリウム(Fusarium)、例えば、フザリウム・バクトリジオイデス、フザリウム・セレアリス、フザリウム・クロークウェレンス、フザリウム・クルモラム、フザリウム・グラミネアルム、フザリウム・グラミナム、フザリウム・ヘテロスポラム、フザリウム・ネグンジ、フザリウム・オキシスポラム、フザリウム・レチクラタム、フザリウム・ロセウム、フザリウム・サムブシナム、フザリウム・サルコクロウム、フザリウム・スルフレウム、フザリウム・トルロサム、フザリウム・トリコテシオイデス、若しくはフザリウム・ベンニタム;フミコーラ(Humicola)、例えば、フミコーラ・インソレンス、若しくはフミコーラ・ラヌギノサ;又はトリコデルマ(Trichoderma)、例えば、トリコデルマ・ハルジアナム、トリコデルマ・コニンギイ、トリコデルマ・ロンギブラキアタム、トリコデルマ・レーシ、若しくはトリコデルマ・ビリデに属する微生物、又は本明細書に記載の他の宿主細胞によって産生され得る。
プレミックスは、当該技術分野において既知の方法に従って調製され得、液体又は乾燥組成物の形状であり得る。例えば、プレミックスは粒子又は微粒子の形態であり得る。アミラーゼ変異体は、当該技術分野において既知の方法に従って安定化することができる。プレミックスに組み込むための好ましい追加成分は、酵素安定剤、可逆的プロテアーゼ阻害剤、界面活性剤、追加の酵素、及びそれらの混合物から選択され得、これらは全て本明細書に記載されるとおりである。
洗浄組成物
本発明の洗浄組成物は、好ましくは、エアケア、カーケア、食器洗浄、洗濯洗浄、ケア、(コンディショニング及び/又は柔軟化)、洗濯及びすすぎ添加剤、硬質表面洗浄及び/又は処理、並びに消費者用又は業務用の他の洗浄のための特許請求される組成物の製品、当該組成物に関する方法、及び/又は当該組成物の使用に関する。好ましくは、組成物は、食器洗浄組成物、好ましくは洗濯洗剤など洗濯洗剤又は硬質表面洗浄組成物を含む。本発明の組成物は、固体(例えば、バー、錠剤、粉末、顆粒)、液体、ゲル、及び/又はペーストであり得るか、又はシート、好ましくは液体の形態であり得る。好ましい形態は、錠剤、シート、又は好ましくはパウチ、好ましくは液体及び/又は固体組成物を含む水溶性パウチであり得る単位用量形態である。多区画パウチが好ましい。特に好ましいのは、パウチの形態、任意選択的に多区画パウチの形態の、水溶性材料に封入された液体洗濯洗剤を含む単位用量形態である。好ましい単位用量は、液体洗濯洗剤/ケア組成物を含む。
液体洗剤は、典型的には、最大70%の水及び0~30%の有機溶媒を含有する水性の液体洗剤であるか、非水性であるか、あるいは0.5g/Lを超える洗剤組成物を含有する溶液であり得る。
本発明の組成物は、例えば、染みのついた布地の前処理に好適な洗濯添加組成物及びすすぎ添加布地柔軟剤組成物を含む手洗い用又は機械用洗濯洗剤組成物として製剤化され得るか、全般的な家庭の硬表面洗浄作業で用いる洗剤組成物として製剤化され得るか、あるいは手洗い用又は機械用食器洗浄作業のために製剤化され得る。
本発明の洗浄組成物は、固形石鹸、好ましくは固形洗濯石鹸の形態であり得、洗濯物、布地及び/又は織物を手洗いするために使用され得る。用語「固形洗濯石鹸」は、固形洗濯石鹸、固形石鹸、コンボ固形石鹸、固形合成洗剤、及び固形洗剤を含む。
洗浄組成物は、ハイブリッドポリペプチド又はアミラーゼ変異体酵素に加えて、洗浄/洗剤補助剤を含む。本明細書の表現「洗浄補助剤」は、典型的には、2つ以上の洗浄補助剤の組み合わせを含む。典型的には、洗浄補助剤は、0.0001~99.9999重量%、好ましくは10~99.999重量%、好ましくは少なくとも30又は40又は50重量%の洗浄補助剤の量で組成物中に存在する。好適な洗浄補助剤は、界面活性剤、ビルダー、漂白剤、漂白触媒、着色剤、漂白促進剤、キレート剤、転染剤、付着助剤、分散剤、追加の酵素、酵素安定剤、触媒物質、漂白活性剤、過酸化水素、過酸化水素源、蛍光増白剤、光活性剤、蛍光剤、布地色相剤、布地コンディショニナー、予形成過酸、ポリマー分散剤、泥汚れ除去剤/再付着防止剤、フィラー塩、ヒドロトロープ、増白剤、抑泡剤、構造伸縮剤、布地柔軟剤、加水分解性界面活性剤、防腐剤、酸化防止剤、収縮防止剤、殺菌剤、防カビ剤、変色防止剤、防食剤、アルカリ度源、可溶化剤、担体、加工助剤、顔料、染料、香料、及びpH調整剤、カプセル化剤、ポリマー、及びこれらの混合物を含む。例えば、これらは、イミン漂白促進剤などの漂白成分、過酸化水素源、例えば、過炭酸塩及び/又は過ホウ酸塩、特に、炭酸塩及び/又は硫酸塩、ケイ酸塩、ホウケイ酸塩、及びこれらの任意の混合物などの材料でコーティングされた過炭酸塩、カプセル化形態の予め形成された過酸を含む、予め形成された過酸、遷移金属触媒、抑泡剤又は抑泡剤系、例えば、シリコーン系抑泡剤及び/若しくは脂肪酸系抑泡剤、粘土、シリコーン、及び/又は四級アンモニウム化合物などの布地柔軟剤、ポリエチレンオキシドなどの凝集剤、ポリビニルピロリドン、ポリ4-ビニルピリジンN-オキシド、及び/又はビニルピロリドンとビニルイミダゾールとのコポリマーなどの移染阻害剤、イミダゾールとエピクロロヒドリンとの縮合によって産生されるオリゴマーなどの布地一体性成分、アルコキシル化ポリアミン及びエトキシル化エチレンイミンポリマーなどの汚れ分散剤及び汚れ再付着防止助剤、ポリエステルなどの再付着防止成分、カルボキシレートポリマー、例えば、マレイン酸ポリマー、又はマレイン酸とアクリル酸とのコポリマー、香料、例えば、香料マイクロカプセル、デンプン封入アコード、香料噴霧剤、石鹸リング、美容粒子、染料、硫酸ナトリウム及び/又は柑橘類繊維などのフィラー(ただし、組成物はフィラーを実質的に含まないことが好ましい場合がある)、1.6R及び2.0Rケイ酸ナトリウムを含むケイ酸ナトリウム、又はメタケイ酸ナトリウムなどのケイ酸塩、ジカルボン酸とジオールとのコポリエステル、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエトキシセルロース、又は他のアルキル若しくはアルキルアルコキシセルロースなどのセルロース性ポリマー、1,2プロパンジオール、モノエタノールアミンなどの溶媒、ジエチレングリコール、エタノール、及びこれらの任意の混合物、ヒドロトロープ、例えば、クメンスルホン酸ナトリウム、キシレンスルホン酸ナトリウム、トルエンスルホン酸ナトリウム、及び任意の混合物、クエン酸などの有機酸、並びにこれらの任意の組み合わせを含み得る。好ましくは、組成物は、界面活性剤及び追加の酵素を含む洗浄補助剤を含む。好ましくは、組成物は、(i)香料マイクロカプセル、(ii)布地色相剤、(iii)プロテアーゼ、(iv)両親媒性のクリーニング用ポリマー、(v)リパーゼ、(vi)DNase及び/若しくはRNase、(vii)マンナナーゼ、(viii)キサンタンリアーゼ;(ix)ヘキソサミニダーゼ;又は(d)これらの混合物からなる群から選択される1つ以上の補助剤を含む。
好ましくは、組成物は、組成物の重量に対して好ましくは0.1~60重量%、又は0.5~50重量%、又は1~40重量%の界面活性剤を含む。界面活性剤は、好ましくは、2つ以上の界面活性剤の混合物を含む界面活性剤系を含み、これは、例えば、アニオン性、半極性など非イオン性、カチオン性、双性イオン性及び/又は両性界面活性剤、並びにそれらの混合物を含み得る。
好ましくは、組成物は、アニオン性界面活性剤を含む。好ましいアニオン性界面活性剤は、スルホネート及びサルフェート界面活性剤、好ましくはアルキルベンゼンスルホネート及び/又は(任意にアルコキシル化された)アルキルサルフェートである。特に好ましいアニオン性界面活性剤は、直鎖アルキルベンゼンスルホネート(LAS)を含む。好ましいアルキルサルフェートは、アルキルエーテルサルフェート、特にC-9~15アルコールエーテルサルフェート、特に0.5~7、好ましくは1~5の平均エトキシル化度を有するもの、C8~C16エステルサルフェート、及びモノドデシルエステルサルフェートなどのC10~C14エステルサルフェートを含む。本発明による好ましい組成物では、界面活性剤は、アニオン性界面活性剤を含み、好ましくはアルキルベンゼンスルホネート及び/又は任意にエトキシル化アルキルサルフェートを含み、好ましくは0~7、より好ましくは0.5~3のエトキシル化度を有する。LASの異性体、分岐アルキルベンゼンスルホネート(BABS)、フェニルアルカンスルホネート、アルファ-オレフィンスルホネート(AOS)、オレフィンスルホネート、アルケンスルホネート、アルカン-2,3-ジイルビス(サルフェート)、ヒドロキシアルカンスルホネート及びジスルホネート、アルキルサルフェート(AS)、例えば、ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)、脂肪族アルコールサルフェート(FAS)、一級アルコールサルフェート(PAS)、アルコールエーテルサルフェート(AES又はAEOS又はFES、アルコールエトキシサルフェート又は脂肪族アルコールエーテルサルフェートとしても知られている)、二級アルカンスルホネート(SAS)、パラフィンスルホネート(PS)、エステルスルホネート、スルホン化脂肪酸グリセロールエステル、アルファ-スルホ脂肪酸メチルエステル(アルファ-SFMe又はSES)(メチルエステルスルホネート(MES)を含む)、アルキル-又はアルケニルコハク酸、ドデセニル/テトラデセニルコハク酸(DTSA)、アミノ酸の脂肪酸誘導体、スルホコハク酸のジエステル及びモノエステル、又は脂肪酸の塩(石鹸)、並びにこれらの組み合わせも好適なアニオン性界面活性剤である。好ましい実施形態では、界面活性剤は、好ましくはアルキルベンゼンスルホネート及び/又は任意にエトキシル化アルキルサルフェートを含み、好ましくは0~7、より好ましくは0.5~3のエトキシル化度を有するアニオン性界面活性剤を含む。
アニオン性界面活性剤は、好ましくは、塩の形態で洗浄組成物に添加される。好ましいカチオンは、ナトリウム及びカリウムなどのアルカリ金属イオンである。しかしながら、界面活性剤の酸形態を水酸化ナトリウムなどのアルカリ、又はモノ-、ジ-、若しくはトリエタノールアミンなどのアミンで中和することによって、アニオン性界面活性剤の塩形態がin situで形成されてもよい。好ましくは、界面活性剤は、非イオン性界面活性剤を含む。好ましくは、界面活性剤はアニオン性及び非イオン性界面活性剤を含み、好ましくはアニオン性対非イオン性の重量比が30:1~1:2、好ましくは20:1~2:3又は1:1である。
非イオン性界面活性剤の非限定的な例としては、アルコールエトキシレート(AE又はAEO)、アルコールプロポキシレート、プロポキシル化脂肪族アルコール(PFA)、アルコキシル化脂肪酸アルキルエステル、例えばエトキシル化及び/又はプロポキシル化脂肪酸アルキルエステル、アルキルフェノールエトキシレート(APE)、ノニルフェノールエトキシレート(NPE)、アルキルポリグリコシド(APG)、アルコキシル化アミン、脂肪酸モノエタノールアミド(FAM)、脂肪酸ジエタノールアミド(FADA)、エトキシル化脂肪酸モノエタノールアミド(EFAM)、プロポキシル化脂肪酸モノエタノールアミド(PFAM)、ポリヒドロキシアルキル脂肪酸アミド、又はグルコサミンのN-アシルN-アルキル誘導体(グルカミド、GA、又は脂肪酸グルカミド、FAGA)、並びに商標名SPAN及びTWEEN(登録商標)として入手可能な製品、並びにこれらの組み合わせが挙げられる。好ましくはC9~18、好ましくはC12~15アルキル鎖を有し、好ましくは3~9、より好ましくは3~7の平均エトキシル化度を有するアルコールエトキシレートが特に好ましい。市販されている非イオン性界面活性剤としては、BASF製のPlurafac(商標)、Lutensol(商標)、及びPluronic(商標)、Cognis製のDehypon(商標)シリーズ、並びにClariant製のGenapol(商標)シリーズが挙げられる。
洗浄組成物は、好ましくは約1%~約40%のアニオン性界面活性剤を含む。洗浄組成物は、好ましくは約0.2%~約40%の非イオン性界面活性剤を含む。
洗浄組成物は、好ましくは、1つ以上の追加の酵素を含む。したがって、好ましい組成物は、(a)本明細書に定義されるアミラーゼと、(b)好ましくはアミノペプチダーゼ、追加のアミラーゼ、カルボヒドラーゼ、カルボキシペプチダーゼ、カタラーゼ、セルラーゼ、キチナーゼ、クチナーゼ、シクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼ、デオキシリボヌクレアーゼ、エンドグルカナーゼ、エステラーゼ、α-ガラクトシダーゼ、β-ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、α-グルコシダーゼ、β-グルコシダーゼ、ハロペルオキシダーゼ、ハロペルオキシゲナーゼ、ヘキソサミニダーゼ、インベルターゼ、ラッカーゼ、リケニナーゼ、リパーゼ、マンナナーゼ、マンノシダーゼ、オキシダーゼ、ペクチナーゼ、ペクチンリアーゼ、ペクチン分解酵素、ペプチドグルタミナーゼ、ペルオキシダーゼ、フィターゼ、ポリフェノールオキシダーゼ、タンパク質分解酵素(プロテアーゼ)、ペルオキシダーゼ、リボヌクレアーゼ、トランスグルタミナーゼ、キシラナーゼ、キサンタンリアーゼ、キサンタナーゼ、キシログルカナーゼ、及びこれらの混合物からなる群から選択される1つ以上の追加の酵素と、を含む。好ましくは、組成物は、キサンタンリアーゼ、キサンタナーゼ、マンナナーゼ、及びこれらの混合物から選択される追加の酵素を含む。マンナナーゼが特に好ましい。キサンタンリアーゼ及びキサンタナーゼ並びにこれらの混合物も特に好ましい。プロテアーゼ、リパーゼ、及び/又はセルラーゼが好ましく、特にプロテアーゼである。追加の酵素は、例えば、アスペルギルス属、例えば、アスペルギルス・アクレタス、アスペルギルス・アワモリ、アスペルギルス・フォエティダス、アスペルギルス-フミガーツフ、アスペルギルス・ジャポニクス、アスペルギルス・ニデュランス、アスペルギルス・ニガー、若しくはアスペルギルス・オリザエ;フザリウム(Fusarium)、例えば、フザリウム・バクトリジオイデス、フザリウム・セレアリス、フザリウム・クロークウェレンス、フザリウム・クルモラム、フザリウム・グラミネアルム、フザリウム・グラミナム、フザリウム・ヘテロスポラム、フザリウム・ネグンジ、フザリウム・オキシスポラム、フザリウム・レチクラタム、フザリウム・ロセウム、フザリウム・サムブシナム、フザリウム・サルコクロウム、フザリウム・スルフレウム、フザリウム・トルロサム、フザリウム・トリコテシオイデス、若しくはフザリウム・ベンニタム;フミコーラ(Humicola)、例えば、フミコーラ・インソレンス、若しくはフミコーラ・ラヌギノサ;又はトリコデルマ(Trichoderma)、例えば、トリコデルマ・ハルジアナム、トリコデルマ・コニンギイ、トリコデルマ・ロンギブラキアタム、トリコデルマ・レーシ、若しくはトリコデルマ・ビリデ、に属する微生物によって産生されてもよい。
好ましくは、組成物は、プロテアーゼ、リパーゼ、ペルオキシダーゼ、追加のデンプン分解酵素、例えば、追加のα-アミラーゼ、グルコアミラーゼ、イソアミラーゼ、マルトジェニックアミラーゼ、好ましくは追加のα-アミラーゼ、CGTase、セルラーゼ、マンナナーゼ(Novozymes(Denmark)からのMANNAWAY(商標)など)、ペクチナーゼ、ペクチン酸リアーゼ、クチナーゼ、及び/若しくはラッカーゼ、又はこれらのうちの1つ以上の混合物のうちの1つ以上のうちの1つ以上を含む。
概して、選択された酵素の性質は、選択された洗剤と適合すべきであり(すなわち、pH最適条件、他の酵素及び非酵素成分との適合性など)、酵素は、有効量で存在すべきである。好ましくは、本発明の組成物は、組成物1グラム当たり、少なくとも0.01mg、好ましくは約0.05~約10、より好ましくは約0.1~約6、とりわけ約0.2~約5mgの更なる活性酵素を含む。
プロテアーゼ:本発明の組成物は、1つ以上のプロテアーゼを含み得る。2つ以上のプロテアーゼの混合物は、より広い温度、サイクル持続時間及び/又は基質範囲にわたって洗浄の増強に貢献することができる(また、特に再付着防止剤及び/又はスルホン化ポリマーとともに使用されるとき、硬質表面に優れた光沢効果を提供することができる)。好適なプロテアーゼとしては、メタロプロテアーゼ及びセリンプロテアーゼが挙げられ、例えば、サブチリシン(EC 3.4.21.62)などの中性又はアルカリ性微生物セリンプロテアーゼを含む。好適なプロテアーゼとしては、動物、植物又は微生物起源のものが挙げられる。一態様では、このような好適なプロテアーゼは、微生物起源のものであってもよい。好適なプロテアーゼとしては、前述の好適なプロテアーゼの化学的又は遺伝的に修飾された変異体が挙げられる。一態様では、好適なプロテアーゼは、アルカリ性微生物プロテアーゼ又は/及びトリプシン型プロテアーゼなどのセリンプロテアーゼであってよい。好適な中性又はアルカリ性プロテアーゼの例としては、以下が挙げられる。
サブチリシン(EC 3.4.21.62)、特に国際公開第2004067737号、同第2015091989号、同第2015091990号、同第2015024739号、同第2015143360号、米国特許第6,312,936(B1)号、同第5,679,630号、同第4,760,025号、独国特許公開第102006022216(A1)号、国際公開第2015089447号、同第2015089441号、同第2016066756号、同第2016066757号、同第2016069557号、同第2016069563号、同第2016069569号、同第2016174234号、同第2017/089093号、同第2020/156419号に記載されている、バチルス属(Bacillus)の種、B.レンタス(B.lentus)、B.アルカロフィラス(B.alkalophilus)、B.サブチリス(B.subtilis)、B.アミロリケファシエンス(B.amyloliquefaciens)、ギブソニイ(B.gibsonii)、B.アキバイ(B.akibaii)、バチルス・クラウシイ(Bacillus Clausii)、及びB.クラーキ(B.clarkii)などのバチルス属由来のもの。具体的には、変異S9R、A15T、V66A、A188P、V199I、N212D、Q239R、N255D、X9E、X200L、X256E、X9R、X19L、X60D(サビナーゼ付番システム);
独国特許公開第102006022224(A1)号、国際公開第2020/221578号、同第2020/221579号、同第2020/221580号に記載されているものなどB.プミルス(B.pumilus)に由来するサブチリシン、例えば、9、130、133、144、252、271から選択される位置のうちの少なくとも1つ以上にアミノ酸置換を含む変異体(BPN’番号付けシステム);
国際公開第89/06270号に記載されているフサリウム属プロテアーゼ、並びに同第05/052161号及び同第05/052146号に記載されているセルロモナス属に由来するキモトリプシンプロテアーゼなどトリプシン(例えば、ブタ又はウシ起源)などのトリプシン型又はキモトリプシン型プロテアーゼ;
メタロプロテアーゼ、特に国際公開第07/044993(A2)号に記載されているバチルス・アミロリケファシエンス由来のもの;国際公開第2014194032号、同第2014194054号及び同第2014194117号に記載されているバチルス、ブレビバチルス、サーモアクチノミセス、ゲオバチルス、パエニバチルス、リシニバチルス又はストレプトミセス種由来のもの、国際公開第2015193488号に記載されているクリベラ・アルミノサ由来のもの;並びに国際公開第2016075078号に記載されているストレプトミセス及びリソバクター由来のもの;
国際公開第92/17577号(Novozymes A/S)に記載されているバチルス種TY145、NCIMB 40339由来のサブチラーゼに対して少なくとも90%の同一性を有するプロテアーゼ、例えば、国際公開第2015024739号及び同第2016066757号に記載されてい、このバチルス種TY145サブチラーゼの変異体など。
本発明の洗剤に特に好ましい追加のプロテアーゼは、バシラス・レンタス(Bacillus lentus)由来の野生型酵素と少なくとも90%、好ましくは少なくとも95%、より好ましくは少なくとも98%、更により好ましくは少なくとも99%、とりわけ100%同一性を示し、以下の位置:S9R、A15T、V68A、N76D、N87S、S99D、S99SD、S99A、S101G、S101M、S103A、V104N/I、G118V、G118R、S128L、P129Q、S130A、Y167A、R170S、A194P、V205I、Q206L/D/E、Y209W、M222S、Q245R、及び/又はM222S(参照により本明細書に組み込まれる国際公開第00/37627号に例示されるBPN’付番システム及びアミノ酸略語を使用する)のうちの1つ以上、好ましくは2つ以上、より好ましくは3つ以上に突然変異を含む、ポリペプチドである。
最も好ましくは、追加のプロテアーゼは、PB92野生型(国際公開第08/010925号の配列番号2)又はサブチリシン309野生型(N87Sの自然変異を含む以外はPB92主鎖による配列)のいずれかに対して以下の変異(BPN付番システム)を含むプロテアーゼの群から選択される。
(i)G118V+S128L+P129Q+S130A
(ii)S101M+G118V+S128L+P129Q+S130A
(iii)N76D+N87R+G118R+S128L+P129Q+S130A+S188D+N248R
(iv)N76D+N87R+G118R+S128L+P129Q+S130A+S188D+V244R
(v)N76D+N87R+G118R+S128L+P129Q+S130A
(vi)V68A+N87S+S101G+V104N
(vii)S99AD
(viii)S9R+A15T+V68A+N218D+Q245R
好適な市販の追加のプロテアーゼ酵素には、Alcalase(登録商標)、Savinase(登録商標)、Primase(登録商標)、Durazym(登録商標)、Polarzyme(登録商標)、Kannase(登録商標)、Liquanase(登録商標)、Liquanase Ultra(登録商標)、Savinase Ultra(登録商標)、Liquanase(登録商標)Evity(登録商標)、Savinase(登録商標)Evity(登録商標)、Ovozyme(登録商標)、Neutrase(登録商標)、Everlase(登録商標)、Coronase(登録商標)、Blaze(登録商標)、Blaze Ultra(登録商標)、Blaze(登録商標)Evity(登録商標)、Blaze(登録商標)Exceed,Blaze(登録商標)Pro、Esperase(登録商標)、Progress(登録商標)Uno、Progress(登録商標)Excel、Progress(登録商標)Key、Ronozyme(登録商標)、Vinzon(登録商標)、及びHet Ultra(登録商標)の商品名でNovozymes A/S(Denmark)により販売されているもの;商品名Maxatase(登録商標)、Maxacal(登録商標)、Maxapem(登録商標)、Properase(登録商標)、Purafect(登録商標)、Purafect Prime(登録商標)、Purafect Ox(登録商標)、FN3(登録商標)、FN4(登録商標)、Excellase(登録商標)、Ultimase(登録商標)及びPurafect OXP(登録商標)としてDupontによって販売されているもの;Opticlean(登録商標)及びOptimase(登録商標)の商品名でSolvay Enzymesにより販売されているもの;Henkel/Kemiraから入手可能なもの、すなわち、BLAP(配列は米国特許第5,352,604号の図29に示され、S99D+S101R+S103A+V104I+G159Sの突然変異を有する、本明細書において以降BLAPと称する)、BLAP R(S3T+V4I+V199M+V205I+L217Dを有するBLAP)、BLAP X(S3T+V4I+V205Iを有するBLAP)及びBLAP F49(S3T+V4I+A194P+V199M+V205I+L217Dを有するBLAP);任意選択的に、更なる突然変異101E又は101Dを含み得;KAP(突然変異A230V+S256G+S259Nを有するバチルス・アルカロフィラス(Bacillus alkalophilus)のサブチリシン)(Kao);並びにBASFからのLavergy(登録商標)、Lavergy(登録商標)Pro、Lavergy(登録商標)C Brightが挙げられる。
Properase(登録商標)、Blaze(登録商標)、Ultimase(登録商標)、Everlase(登録商標)、Savinase(登録商標)、Excellase(登録商標)、Blaze Ultra(登録商標)、BLAP及びBLAP変異体からなる群から選択される市販のプロテアーゼは、本明細書に用いるのに特に好ましい。
本発明の製品中のプロテアーゼの好ましい濃度としては、組成物1g当たり約0.05~約10mg、より好ましくは約0.5~約7mg、特に約1~約6mgの活性プロテアーゼが挙げられる。
リパーゼ:適切なリパーゼとしては、細菌由来又は真菌由来のものが挙げられる。化学修飾された又はタンパク質が遺伝子操作を受けた変異体が含まれる。有用なリパーゼの例としては、例えば、H.ラヌギノサ(H.lanuginosa)(T.ラヌギノサス)(T.lanuginosus))又はH.インソレンス(H.insolens)などのフミコーラ属(別名サーモマイセス属(Thermomyces))由来のリパーゼ;例えば、P.アルカリゲネス(P.alcaligenes)又はP.シュードアルカリゲネス(P.pseudoalcaligenes)、P.セパシア(P.cepacia)、P.スタットゼリ(P.stutzeri)、P.フルオレセンス(P.fluorescens)、シュードモナスSD705株、P.ウィスコシネンシス(P.wisconsinensis)などのシュードモナス属のリパーゼ;例えば、B.サブチリス(Dartois et al.(1993),Biochemica et Biophysica Acta,1131,253-360)、B.ステアロサーモフィルス、又はB.プミルスなどのバチルス属のリパーゼが挙げられる。
リパーゼは、米国特許第6,939,702(B1)号、及び米国特許出願第2009/0217464号に記載されているような「第1サイクルのリパーゼ」であってもよい。一態様では、リパーゼは、第1の洗浄用リパーゼであり、好ましくは、T231R及びN233R変異を含む、サーモマイセス・ラヌギノサス(Thermomyces lanuginosus)由来の野生型リパーゼの変異体である。野生型配列は、Swissprotのアクセッション番号Swiss-Prot O59952(サーモマイセス・ラヌギノサス(フミコーラ・ラヌギノサ)由来の269個のアミノ酸(アミノ酸23~291)である。好ましいリパーゼは、Lipex(登録商標)、Lipolex(登録商標)、及びLipoclean(登録商標)の商品名で販売されているリパーゼを含み得る。
セルラーゼ:好適なセルラーゼとしては、細菌由来又は真菌由来のセルラーゼが挙げられる。化学修飾された又はタンパク質が遺伝子操作を受けた変異体が含まれる。好適なセルラーゼとしては、バチルス(Bacillus)属、シュードモナス(Pseudomonas)属、フミコーラ(Humicola)属、フザリウム(Fusarium)属、チエラビア(Thielavia)属、アクレモニウム(Acremonium)属由来のセルラーゼ、例えば、フミコーラ・インソレンス(Humicola insolens)、ミセリオフィソーラ・サーモフィラ、及びフザリウム・オキシスポラムから産生される、真菌セルラーゼが挙げられる。
一態様では、好ましい酵素としては、エンド-ベータ-1,4-グルカナーゼ活性(E.C.3.2.1.4)を呈する微生物由来のエンドグルカナーゼが挙げられ、好ましくは、以下を含む群から選択される:
(a)米国特許第7,141,403(B2)号におけるアミノ酸配列の配列番号2に対して少なくとも90%、94%、97%、更には99%同一な配列を有するバシルス属のメンバーに対して内因性である細菌性ポリペプチド;
(b)キシログルカンと非晶質セルロース基質の両方に対して酵素活性を有するグリコシル加水分解酵素であって、GHファミリー5、12、44又は74の中から選択される、グリコシル加水分解酵素;
(c)国際公開第09/148983号の配列番号3のアミノ酸配列に対して少なくとも90%、94%、97%、及び更には99%同一性の配列を有するグリコシルヒドロラーゼ;
(d)及びこれらの混合物。
好適なエンドグルカナーゼは、商品名Celluclean(登録商標)及びWhitezyme(登録商標)(Novozymes A/S(Bagsvaerd,Denmark)として販売されている。
他の市販のセルラーゼとしては、CELLUZYME(登録商標)及びCAREZYME(登録商標)(Novozymes A/S)、CLAZINASE(登録商標)及びPURADAX HA(登録商標)(Genencor International Inc.)、並びにKAC-500(B)(登録商標)(Kao Corporation)が挙げられる。
追加のアミラーゼ:好ましくは、組成物は追加の(更なる)アミラーゼを含む。好適な更なるアミラーゼは、細菌又は真菌由来のものを含む、α-アミラーゼを含む。化学的又は遺伝的に修飾された突然変異体(変異体)が含まれる。好ましいアルカリ性α-アミラーゼは、バチルスの菌種に由来するもの、例えば、バチルス・リケニフォルミス()、バチルス・アミロリケファシエンス()、バチルス・ステアロサーモフィルス、バチルス・サブチリス、又は他のバチルス属(Bacillus sp.)、例えばバチルス属のNCBI 12289、NCBI 12512、NCBI 12513、DSM 9375(米国特許第7,153,818号)DSM 12368、DSMZ12649、KSM AP1378(国際公開第97/00324号)、KSM K36、又はKSM K38(欧州特許第1,022,334号)である。好ましい更なるアミラーゼは、以下から選択され得る:(a)国際公開第94/02597号、同第94/18314号、同第96/23874号及び同第97/43424号に記載されている変異体、特に国際公開第96/23874号に配列番号2として列挙されている酵素に対して、以下の位置:15、23、105、106、124、128、133、154、156、181、188、190、197、202、208、209、243、264、304、305、391、408及び444のうちの1つ以上が置換されている変異体;(b)国際公開第96/23873号、同第00/60060号、同第06/002643号、及び同第2017/192657号に記載の変異体、特に、国際公開第06/002643号において配列番号12として記載のAA560酵素に対して、以下の位置:26、30、33、82、37、106、118、128、133、149、150、160、178、182、186、193、203、214、231、246、256、257、258、269、270、272、283、295、296、298、299、303、304、305、311、314、315、318、319、339、345、361、378、383、419、421、437、441、444、445、446、447、450、461、471、482、484において1つ以上の置換を有する変異体、好ましくは、D183及びG184の欠損を含有する変異体;(c)国際公開第06/002643号における配列番号4、バチルス属SP722由来の野生型酵素と少なくとも90%の同一性を示す変異体、特に183及び184位に欠失を有する変異体、並びに参照によって本明細書に組み込まれる国際公開第00/60060号に記載されている変異体;(d)バチルス属707の野生型酵素(米国特許第6,093,562号の配列番号7)と少なくとも95%の同一性を示す変異体、特に、以下の変異M202、M208、S255、R172、及び/又はM261のうちの1つ以上を含むもの。好ましくは、当該アミラーゼは、M202L、M202V、M202S、M202T、M202I、M202Q、M202W、S255N及び/又はR172Qのうちの1つ以上を含む。特に好ましいのは、M202L又はM202T変異を含むものである;(e)国際公開第09/149130号に記載されている変異体、好ましくは国際公開第09/149130号において配列番号1又は配列番号2と少なくとも90%の同一性を示すもの、ゲオバチルス・ステアロフェルモフィルス(Geobacillus Stearophermophilus)に由来する野生型酵素又はその切断バージョン;(f)国際公開第2016/091688号の配列番号1と少なくとも89%の同一性を示す変異体、特にH183+G184位での欠失及び405、421、422、及び/又は428位に1つ以上の変異を含む変異体;(g)パエニバチルス・カードラノリティカス(Paenibacillus curdlanolyticus)YK9 由来の「PcuAmyl α-アミラーゼ」(国際公開第2014/099523号の配列番号3)と少なくとも60%のアミノ酸配列同一性を示す変異体;(h)サイトファーガ属(Cytophaga sp.)由来の「CspAmy2アミラーゼ」(国際公開第2014/164777号の配列番号1)と少なくとも60%のアミノ酸配列同一性を示す変異体;(i)バチルス・サブチリス由来のAmyE(国際公開第2009/149271号の配列番号1)と少なくとも85%のアミノ酸配列同一性を示す変異体;(j)受託番号AB051102によるバチルス属KSM-K38由来の野生型アミラーゼと少なくとも90%の同一性を示す変異体;(k)バチルス属由来のAAI10の成熟アミノ酸配列(国際公開第2016/180748号の配列番号7)と少なくとも80%の同一性を示す変異体;(l)アリシクロバチルス属アミラーゼ(国際公開第2016/180748号の配列番号8)の成熟アミノ酸配列と少なくとも80%の同一性を示す変異体;又はこれらの混合物であり得る。存在する場合、本発明の組成物は、好ましくは、組成物1グラム当たり、少なくとも0.01mg、好ましくは約0.05~約10、より好ましくは約0.1~約6、とりわけ約0.2~約5mgの更なる活性アミラーゼを含む。
好適な市販のα-アミラーゼとしては、DURAMYL(登録商標)、LIQUEZYME(登録商標)、TERMAMYL(登録商標)、TERMAMYL ULTRA(登録商標)、NATALASE(登録商標)、SUPRAMYL(登録商標)、STAINZYME(登録商標)、STAINZYME PLUS(登録商標)、FUNGAMYL(登録商標)、ATLANTIC(登録商標)、INTENSA(登録商標)及びBAN(登録商標)(Novozymes A/S(Bagsvaerd,Denmark))、KEMZYM(登録商標)AT 9000(Biozym Biotech Trading GmbH Wehlistrasse 27b A-1200 Wien Austria)、RAPIDASE(登録商標)、PURASTAR(登録商標)、ENZYSIZE(登録商標)、OPTISIZE HT PLUS(登録商標)、POWERASE(登録商標)、PREFERENZ S(登録商標)シリーズ(PREFERENZ S1000(登録商標)及びPREFERENZ S2000(登録商標)を含む)並びにPURASTAR OXAM(登録商標)(DuPont.,Palo Alto,California)並びにKAM(登録商標)(Kao,14-10 Nihonbashi Kayabacho,1-chome,Chuo-ku Tokyo 103-8210,Japan)が挙げられる。一態様では、好適なアミラーゼとしては、ATLANTIC(登録商標)、STAINZYME(登録商標)、POWERASE(登録商標)、INTENSA(登録商標)及びSTAINZYME PLUS(登録商標)並びにこれらの混合物が挙げられる。
ペルオキシダーゼ/オキシダーゼ:好適なペルオキシダーゼ/オキシダーゼとしては、植物、細菌、又は真菌起源のものが挙げられる。化学修飾された又はタンパク質が遺伝子操作を受けた変異体が含まれる。有用なペルオキシダーゼの例としては、コプリナス(Coprinus)属のペルオキシダーゼ、例えば、国際公開第93/24618号、同第95/10602号、及び同第98/15257号に記載のようなC.サイネレウス(C.cinereus)及びその変異体のペルオキシダーゼが挙げられる。
市販のペルオキシダーゼとしては、GUARDZYME(登録商標)(Novozymes A/S)が挙げられる。
他の酵素;他の好ましい、追加の酵素としては、Pectawash(登録商標)、Pectaway(登録商標)の商標名で販売されているペクチン酸リアーゼ、及び商標名、Mannaway(登録商標)(以上全てNovozymes A/S、Bagsvaerd、Denmark)、及びPurabrite(登録商標)(Genencor International Inc.、Palo Alto,California)の商品名で販売されているマンナナーゼが挙げられる。
ペクチン酸リアーゼ:好適なペクチン酸リアーゼとしては、Pectawash(登録商標)、Pectaway(登録商標)、X-Pect(登録商標)、(全てNovozymes A/S(Bagsvaerd,Denmark))Preferenz(登録商標)F1000(DuPont Industrial Biosciences)の商品名で販売されているものが挙げられる。
マンナナーゼ。組成物は、好ましくは、1つ以上の追加のマンナナーゼ酵素を含む。本明細書で使用するとき、「マンナナーゼ」又は「ガラクトマンナナーゼ」という用語は、マンナンエンド-1,4-ベータ-マンノシダーゼとして当該技術分野において既知のものに従って定義され、別名ベータ-マンナナーゼ及びエンド-1,4-マンナナーゼを有し、マンナン、ガラクトマンナン、グルコマンナン、及びガラクトグルコマンナンにおける1,4-ベータ-D-マンノシド連結の加水分解を触媒するマンナナーゼ酵素を意味する。マンナナーゼは、酵素命名法に従ってEC3.2.1.78として分類され、グリコシルヒドロラーゼファミリー5、26、及び113に属する。多くの好適なマンナナーゼは、グリコシルヒドロラーゼファミリー5に属する。市販のマンナナーゼとしては、Mannaway(登録商標)200L及びMannawayEvity4.0Tなど商品名Mannaway(登録商標)(NovozymesA/S)で販売されている全てのものが挙げられる。他の市販のマンナナーゼとしては、Effectene(登録商標)M1000、Mannastar(登録商標)375、Prefienz M100、及びPurabrite(登録商標)(全てDuPontIndustrialBiosciences)及びBiotouch M7(AB酵素)が挙げられる。他の好適なマンナナーゼは、国際公開第2018/191135号、同第2015040159号、同第2017/021515号、同第2017/021516、同第2017/021517号、及び同第2019/081515号に記載されているものなどグリコシルヒドロラーゼファミリー26に属する。マンナーゼの好適な混合物としては、国際公開第2019/081515号に記載されているグリコシルヒドロラーゼファミリー5マンナーゼ及びグリコシルヒドロラーゼファミリー26マンナーゼの組み合わせが挙げられる。
キサンタンガム分解酵素:組成物は、1つ以上のキサンタンガム分解酵素を含み得る。キサンタンガム系汚れの分解に好適な酵素としては、キサンタンエンドグルカナーゼが挙げられ、任意選択的にキサンタンリアーゼと組み合わされる。本明細書で使用するとき、用語「キサンタンエンドグルカナーゼ」は、好適なキサンタンリアーゼ酵素と共に、キサンタンガムの1,4-連結型β-D-グルコースポリマー骨格の加水分解を触媒することができるエンド-β-1,4-グルカナーゼ活性を示す酵素を意味する。好適なキサンタンエンドグルカナーゼは、国際公開第2013/167581号、同第2015/181299号、同第2015/181292号、同第2017/046232号、同第2017/046260号、同第2018/37062号、同第2018/37065号、同第2019/038059号、及び同第2019/162000号に記載されている。本明細書で使用するとき、用語「キサンタンリアーゼ」は、キサンタンガムのβ-D-マンノシル-β-D-1,4-グルクロノシル結合を切断する酵素を意味する。そのような酵素は、E.C.4.2.2.12に属する。好適なキサンタンリーゼは、国際公開第2015/001017号、同第2018/037061号、同第2018/37064号、同第2019/038060号、同第2019/162000号、及び同第2019/038057に記載されている。
ヌクレアーゼ:好ましくは、組成物は、RNase若しくはDNaseなどのヌクレアーゼ、又はこれらの混合物を含む。ヌクレアーゼ酵素は、核酸のヌクレオチドサブユニット間のホスホジエステル結合を切断することができる酵素である。本明細書におけるヌクレアーゼ酵素は、好ましくは、デオキシリボヌクレアーゼ若しくはリボヌクレアーゼ酵素又はこれらの機能的断片である。機能的断片又は部分とは、DNA骨格におけるホスホジエステル結合の切断を触媒するヌクレアーゼ酵素の部分を意味し、したがって、触媒活性を保持する当該ヌクレアーゼタンパク質の領域である。したがって、それは、その機能が維持されている酵素及び/又は変異体及び/又は誘導体及び/又はホモログの、切頭されているが、機能的なバージョンを含む。
好ましくは、ヌクレアーゼ酵素は、好ましくは、以下の分類のいずれかから選択されるデオキシリボヌクレアーゼである:E.C.3.1.21.x(式中、x=1、2、3、4、5、6、7、8又は9である)、E.C.3.1.22.y(式中、y=1、2、4又は5である)、E.C.3.1.30.z(式中、z=1又は2である)、E.C.3.1.31.1、及びこれらの混合物。
DNase:好適なDNaseとしては、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第2017162836号(Novozymes)における配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、及び9によって定義されるDNaseの野生型及び変異体、並びに国際公開第2018011277号(Novozymes)に記載されているものを含むバチルス・シビ(Bacillus cibi)DNaseの変異体が挙げられる。好ましいDNaseは、同時係属中の欧州特許出願第18202967号に請求されているとおりである。
RNase:好適なRNaseとしては、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第2018178061号(Novozymes)における配列番号3、6、9、12、15、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、72、及び73により定義されるDNaseの野生型及び変異体が挙げられる。
ヘキソサミニダーゼ:組成物は1つ以上のヘキソサミニダーゼを含み得る。用語「ヘキソサミニダーゼ」は、「分散剤」及び略語「Dsp」を含み、つまり、微生物起源の汚れに見られるN-アセチル-グルコサミンポリマーのβ-1,6-グリコシド結合の加水分解を触媒するヘキソサミニダーゼ活性を有するポリペプチド(EC3.2.1)を意味する。用語「ヘキソサミニダーゼ」は、N-アセチルグルコサミニダーゼ活性及びβ-N-アセチルグルコサミダーゼ活性を有するポリペプチドを含む。ヘキソサミニダーゼ活性は、国際公開第2018/184873号に記載のアッセイIIに従って判定され得る。好適なヘキソサミニダーゼとしては、国際公開第2017186936号、同第2017186937号、同第2017186943号、同第2017207770号、同第2018184873号、同第2019086520号、同第2019086528号、同第2019086530号、同第2019086532号、同第2019086521号、同第2019086526号、同第2020002604号、同第2020002608号、同第2020007863号、同第2020007875号、同第2020008024号、同第2020070063号、同第2020070249号、同第2020088957号、同第2020088958号、及び同第2020207944に開示されているものが挙げられる。国際公開第2020207944号の配列番号1によって定義されるテリバシラス・サッカロフィルスヘキソサミニダーゼの変異体、特に、当該公開に開示されている、改善された熱安定性を有する変異体が好ましい場合がある。
ガラクタナーゼ:好ましくは、組成物は、ガラクタナーゼ、すなわち、エンド-ベータ-1,6-ガラクタナーゼ酵素を含む細胞外ポリマー分解酵素を含む。用語「エンド-ベータ-1,6-ガラクタナーゼ」又は「エンド-ベータ-1,6-ガラクタナーゼ活性を有するポリペプチド」は、3よりも高い重合度(DP)を有する1,6-3-D-ガラクトオリゴ糖、及び4-O-メチルグルコシルウロネート又はグルコシルウロネート基を非還元末端に有するその酸性誘導体の加水分解性切断を触媒するグリコシドヒドロラーゼファミリー30由来のエンド-ベータ-1,6-ガラクタナーゼ活性(EC3.2.1.164)を意味する。本開示の目的のために、エンド-ベータ-1,6-ガラクタナーゼ活性は、アッセイIにおいて、国際公開第2015185689号に記載の手順に従って求められる。分類EC3.2.1.164由来の好適な例は、国際公開第2015185689号に記載されており、例えば、成熟ポリペプチド配列番号2である。
追加の酵素は、追加の酵素を含有する別個の酵素添加剤、又は追加の酵素のうちの2つ若しくはいくつか若しくは全てを含む、混合酵素添加剤を添加することによって、洗剤組成物に包含され得る。そのような酵素添加剤は、顆粒、液体、又はスラリーの形態であり得、好ましくは追加的に酵素安定剤を更に含む。
好ましくは、追加の酵素又は各追加の酵素は、組成物の重量に基づいて、約0.0001重量%~約0.01重量%、約0.001重量%~約0.01重量%、又は約0.001重量%~約0.01重量%など少なくとも0.0001重量%~約0.1重量%の量の純粋活性酵素タンパク質で存在する。
酵素は、1種以上の酵素を含有する別個の添加物(プレミックス)を添加することによって、又はこれらの酵素の全てを含む混合添加物(プレミックス)を添加することによって、洗剤組成物に包含され得る。本発明の洗剤添加物、すなわち、別個の添加物又は混合添加物は、例えば、粒状、液体、スラリーなどに製剤化することができる。好ましい洗剤添加物製剤は、粒状、特に非ダスティング粒状、液体、特に安定化された液体、又はスラリーである。
非ダスティング粒状物が産生されてもよく、任意に当該技術分野において既知の方法でコーティングされてもよい。ワックス状コーティング材料の例は、平均モル重量が1000~20000であるポリ(エチレンオキシド)生成物(ポリエチレングリコール、PEG);16~50個のエチレンオキシド単位を有するエトキシル化ノニルフェノール;アルコールが12~20個の炭素原子を含有し、かつ15~80個のエチレンオキシド単位が存在するエトキシル化脂肪族アルコール;脂肪族アルコール;脂肪酸;並びに脂肪酸のモノ-及びジ-及びトリグリセリドである。フィルム形成コーティング材料は、例えば、流動床技術に適用されてもよい。液体酵素調製品は、例えば、確立されている方法に従ってプロピレングリコールなどのポリオール、糖又は糖アルコール、乳酸又はホウ酸を添加することによって安定化させてもよい。
洗浄組成物は、布地色相剤(色合い剤、青味剤、又は白化剤と称される場合もある)を含み得る。典型的には、色調剤は、布地に青又は紫の色合いをもたらす。色相剤は、単独又は組み合わせのいずれかで使用され、特定の色相の色合いを作り出し、かつ/又は異なる種類の布地に色合いを付けることができる。これは、例えば赤と緑-青の染料とを混合して青又は紫の色合いを生じさせることによりもたらされ得る。色相剤は、アクリジン、アントラキノン(多環式キノンを含む)、アジン、前金属化した(premetallized)アゾを含むアゾ(例えば、モノアゾ、ジアゾ、トリスアゾ、テトラキスアゾ、ポリアゾ)、ベンゾジフラン及びベンゾジフラノン、カロテノイド、クマリン、シアニン、ジアザヘミシアニン、ジフェニルメタン、ホルマザン、ヘミシアニン、インジゴイド、メタン、ナフタルイミド、ナフトキノン、ニトロ及びニトロソ、オキサジン、フタロシアニン、ピラゾール、スチルベン、スチリル、トリアリールメタン、トリフェニルメタン、キサンテン、並びにこれらの混合物を含むが、これらに限定されない任意の既知の染料の化学分類から選択され得、好ましい染料は、アゾ、特に、ビスアゾ、アントラキノン、アジン、及びトリアリールメタン染料である。アゾ染料が特に好ましい。
好適な布地色相剤としては、染料、染料-粘土共役体、並びに有機及び無機顔料が挙げられる。好適な染料としては、低分子染料及びポリマー染料が挙げられ,ポリマー染料が好ましい。好適な小分子染料としては、例えば、青色、紫色、赤色、緑色、又は黒色に分類され、単独で又は組み合わせのいずれかで所望の色合いをもたらす、直接染料、塩基性染料、反応染料若しくは加水分解した反応性染料、溶媒染料、又は分散染料のカラーインデックス(C.I.)分類に分類される染料からなる群から選択される小分子染料が挙げられる。別の態様では、好適な小分子染料としては、カラーインデックス(染色業者及びカラーリスト協会(Society of Dyers and Colourists,Bradford,UK))番号が、ダイレクトバイオレット染料9、35、48、51、66、及び99など、ダイレクトブルー染料1、71、80、及び279など、アシッドレッド染料17、73、52、88、及び150など、アシッドバイオレット染料15、17、24、43、49、及び50など、アシッドブルー染料15、17、25、29、40、45、75、80、83、90、及び113など、アシッドブラック染料1など、ベーシックバイオレット染料1、3、4、10、及び35など、ベーシックブルー染料3、16、22、47、66、75、及び159など、欧州特許第1794275号又は同第1794276号に記載されるものなどの分散又は溶剤染料、あるいは米国特許第7,208,459(B2)号に開示されている染料、並びにこれらの混合物からなる群から選択される小分子染料が挙げられる。別の一態様では、適切な小分子染料としては、色指数番号が、アシッドバイオレット17、ダイレクトブルー71、ダイレクトバイオレット51、ダイレクトブルー1、アシッドレッド88、アシッドレッド150、アシッドブルー29、アシッドブルー113又はこれらの混合物からなる群から選択される小分子染料が挙げられる。
好適なポリマー染料としては、共有結合している(結合していると称されることもある)色原体(染料-ポリマー結合体)を含有するポリマー、例えば、ポリマーの主鎖に共重合した色原体を有するポリマー及びこれらの混合物からなる群から選択されるポリマー染料が挙げられる。ポリマー染料としては、国際公開第2011/98355号、同第2011/47987号、米国特許出願公開第2012/090102号、国際公開第2010/145887号、同第2006/055787号、及び同第2010/142503号に記載されているものが挙げられる。
別の一態様では、好適なポリマー染料としては、Liquitint(登録商標)(Milliken,Spartanburg,South Carolina,USA)の名称で販売されている布地直接着色剤、少なくとも1つの反応染料と、ヒドロキシル部分、第一級アミン部分、第二級アミン部分、チオール部分、及びこれらの混合物からなる群から選択される部分を含むポリマーからなる群から選択されるポリマーと、から形成される染料-ポリマー共役体からなる群から選択されるポリマー染料が挙げられる。好ましいポリマー染料の例としては、Liquitint(登録商標)バイオレットCT、Megazyme(Wicklow,Ireland)によって商品名AZO-CM-CELLULOSE、商品コードS-ACMCとして販売されているC.I.リアクティブブルー19と共役されているCMCなどのリアクティブブルー、リアクティブバイオレット、又はリアクティブレッドの染料に共有結合しているカルボキシメチルセルロース(CMC)、アルコキシル化トリフェニル-メタンポリマー着色剤、アルコキシル化チオフェンポリマー着色剤、及びこれらの混合物からなる群から選択されるポリマー染料が挙げられる。
好ましい色相染料としては、例えば、米国特許出願公開第2008/0177090号に記載のアルコキシル化チオフェンアゾ増白剤が挙げられ、場合により、国際公開第2011/011799号の表5中の実施例1~42から選択されるものなどのように、アニオン性であり得る。他の好ましい染料は、米国特許第8138222号に開示されている。他の化学物質と同様に色相染料は、それらの合成プロセス及び不純物の結果として、それらの有機合成からの反応物の残量、並びに/又は製造及び/若しくは保管に対する染料の低レベルの酸化若しくは加水分解反応生成物など、化合物の混合物を含み得る。
好適な顔料としては、フラバントロン、インダントロン、1~4個の塩素原子を含有する塩素化インダントロン、ピラントロン、ジクロロピラントロン、モノブロモジクロロピラントロン、ジブロモジクロロピラントロン、テトラブロモピラントロン、ペリレン-3,4,9,10-テトラカルボン酸ジイミド(イミド基は、非置換であっても、C1~C3-アルキル若しくはフェニル若しくは複素環式ラジカルによって置換されていてもよく、これらのフェニル及び複素環式ラジカルは、水溶性を付与しない置換基を更に有してもよい)、アントラピリミジンカルボン酸アミド、ビオラントロン、イソビオラントロン、ジオキサジン顔料、1分子当たり最大2個の塩素原子を含有し得る銅フタロシアニン、1分子当たり最大14個の臭素原子を含有するポリクロロ-銅フタロシアニン又はポリブロモクロロ-銅フタロシアニン、Ultramarine Blue(C.I.Pigment Blue 29)、Ultramarine Violet(C.I.Pigment Violet 15)、並びにこれらの混合物からなる群から選択される顔料が挙げられる。
ビルダー:洗浄組成物は、ゼオライトA、ゼオライトMAP(Maximum Aluminium type P)などゼオライトであり得る、炭酸塩、重炭酸塩、又はケイ酸塩に基づくビルダーなどのビルダーを更に含有し得る。洗濯に使用可能なゼオライトは、好ましくは、式Na12(AlO12(SiO12・27HOを有し、粒径は、通常、ゼオライトAにおいて1~10μm、及びゼオライトMAPにおいて0.7~2umである。他のビルダーは、強アルカリ性のメタケイ酸ナトリウム(NaSiO・nHO又はNaSi・nHO)であり、好ましくは食器洗浄に使用される。好ましい実施形態では、洗剤ビルダーの量は、5%超、10%超、20%超、30%超、40%超、又は50%超であってもよく、また80%未満、65%未満であってもよい。食器洗浄洗剤において、ビルダーの濃度は、典型的には、40~65%、特に50~65%、又は更には75~90%である。
カプセル化剤:組成物はカプセル化剤を含み得る。例えば、カプセル化剤は、コアと、内面及び外面を有するシェルと、を含み、当該シェルは、当該コアをカプセル化する。好適なカプセル化剤のコアは、以下からなる群から選択される材料を含み得る:香料;増白剤;染料、防虫剤;シリコーン;ワックス;着香剤;ビタミン;布地柔軟化剤;スキンケア剤、一態様では、パラフィン;酵素;抗菌剤;漂白剤;感覚剤;及びこれらの混合物からなる群から選択される材料を含んでもよく、当該シェルは、ポリエチレン;ポリアミド、ポリスチレン;ポリイソプレン;ポリカーボネート;ポリエステル;ポリアクリレート;アミノプラスト(一態様では、当該アミノプラストは、ポリ尿素、ポリウレタン、及び/又はポリ尿素ウレタンを含んでもよく、一態様では、当該ポリ尿素は、ポリオキシメチレン尿素及び/又はメラミンホルムアルデヒドを含んでもよい);ポリオレフィン;多糖類、(一態様では、当該多糖類は、アルギン酸塩及び/又はキトサンを含んでもよい);ゼラチン、シェラック;エポキシ樹脂;ビニルポリマー;水不溶性無機材料;シリコーン;及びそれらの混合物。好ましいカプセル化材料は、香料又は酵素、特に香料である。好適なカプセル化剤シェルは、メラミンホルムアルデヒド、及び/又は架橋メラミンホルムアルデヒド、及び/又はポリアクリレートを含み得る。
好ましくは、当該カプセル化剤の少なくとも75%、85%、又は更には90%は、約1マイクロメートル~約80マイクロメートル、約5マイクロメートル~60マイクロメートル、約10マイクロメートル~約50マイクロメートル、又は更には約15マイクロメートル~約40マイクロメートルの粒径を有し得る。好ましくは、当該カプセル化剤の少なくとも75%、85%、又は更には90%は、約30nm~約250nm、約80nm~約180nm、又は更には約100nm~約160nmの粒子壁厚を有し得る。
好ましいカプセル化剤のコア材料は、香料原材料からなる群から選択される材料、及び/又は場合により、以下からなる群から選択される材料を含み得る:ヒマシ油、ココナッツ油、綿実油、菜種油、大豆油、トウモロコシ油、ヤシ油、亜麻仁油、ベニバナ油、オリーブ油、ピーナッツ油、ココナッツ油、パーム核油、ヒマシ油、レモン油及びこれらの混合物を含むストレート及び/又はブレンド植物油を含む植物油;植物油のエステル(エステルは、アジピン酸ジブチル、フタル酸ジブチル、アジピン酸ブチルベンジル、アジピン酸ベンジルオクチル、リン酸トリクレジル、リン酸トリオクチル、及びこれらの混合物を含む);約80℃を超える沸点を有する直鎖又は分岐鎖炭化水素を含む、直鎖又は分岐鎖炭化水素;部分的に水素化したテルフェニル、フタル酸ジアルキル、モノイソプロピルビフェニルを含むアルキルジフェニル、ジプロピルナフタレンを含むアルキル化ナフタレン、灯油、鉱油、及びこれらの混合物を含むペトロリウムスピリット;ベンゼン、トルエン、及びこれらの混合物を含む芳香族溶剤;シリコーンオイル;並びにこれらの混合物。好ましくは、このカプセル化剤の壁材料は、アルデヒドとアミンの反応生成物などの適切な樹脂を含み得、好適なアルデヒドとしてはホルムアルデヒドが挙げられる。好適なアミンとしては、メラミン、尿素、ベンゾグアナミン、グリコールウリル、及びこれらの混合物が挙げられる。好適なメラミンとしては、メチロールメラミン、メチル化メチロールメラミン、イミノメラミン、及びこれらの混合物が挙げられる。好適な尿素としては、ジメチロール尿素、メチル化ジメチロール尿素、尿素-レゾルシノール、及びこれらの混合物が挙げられる。
一態様では、好適なホルムアルデヒドスカベンジャは、カプセル化剤とともに、例えばカプセルスラリー中で用いても、かつ/又は、カプセル化剤を消費者製品に加える前に、加えるときに、加えた後に、このような消費者製品に加えられてもよい。
好適なカプセルは、Appleton Papers Inc.(Appleton,Wisconsin USA)から購入することができる。
構造化剤:組成物は、ジグリセリド及びトリグリセリド、エチレングリコールジステアレート、微結晶セルロース、セルロースベースの材料、マイクロファイバーセルロース、バイオポリマー、キサンタンガム、ジェランガム、並びにこれらの混合物からなる群から選択される構造化剤を含み得る。
ポリマー:洗浄組成物は1つ以上のポリマーを含み得る。実施例には、カルボキシメチルセルロース、ポリ(ビニル-ピロリドン)、ポリ(エチレングリコール)、ポリ(ビニルアルコール)、ポリ(ビニルピリジン-N-オキシド)、ポリ(ビニルイミダゾール)、ポリアクリル酸塩などのポリカルボン酸塩、マレイン酸/アクリル酸コポリマー、及びメタクリル酸ラウリル/アクリル酸コポリマー、並びに両親媒性のポリマーがある。
両親媒性洗浄ポリマー:好ましくは、両親媒性洗浄ポリマーは、次の一般構造式:ビス((CO)(CO)n)(CH)-N-C2x-N-(CH)-ビス((CO)(CO)n)(式中、n=20~30であり、xは、3~8である)を有する化合物であるか、又はその硫酸化若しくはスルホン化変異体である。
本発明の両親媒性アルコキシル化グリースクリーニングポリマーは、布地及び表面からグリース粒子を除去するように、親水性と疎水性との特性が釣り合っている任意のアルコキシル化ポリマーを示す。本発明の両親媒性アルコキシル化グリースクリーニングポリマーの具体的な実施形態は、コア構造及びそのコア構造に結合した複数のアルコキシレート基を含む。これらは、好ましくは内側ポリエチレンオキシドブロック及び外側ポリプロピレンオキシドブロックを有するアルコキシル化ポリアルキレンイミンを含んでいてもよい。
コア構造は、縮合形態で式(I)、(II)、(III)、及び(IV)の繰り返し単位を含むポリアルキレンイミン構造を含んでもよい。
Figure 2023507365000003
(式中、#は、各場合において、窒素原子と、式(I)、(II)、(III)又は(IV)の2つの隣接する繰り返し単位の基Aの遊離結合部位との間の結合の半分を示し、は、各場合において、アルコキシレート基の1つとの結合の半分を示し;Aは独立して直鎖又は分岐鎖C~C-アルキレンから選択され;ポリアルキレンイミン構造は、式(I)の1の繰り返し単位、式(II)のxの繰り返し単位、式(III)のyの繰り返し単位及び式(IV)のy+1の繰り返し単位からなり、x及びyは、各場合において、0~約150の範囲の値を有し、ポリアルキレンイミンコア構造の平均重量平均分子量Mwは、約60~約10,000g/モルの範囲の値である)。
代替的に、コア構造は、式(I.a)及び/又は(I.b)のN-(ヒドロキシアルキル)アミンから選択される少なくとも1つの化合物の縮合生成物のポリアルカノールアミン構造
Figure 2023507365000004
を含む(式中Aは、C~C-アルキレンから独立して選択され、R、R1*、R、R2*、R、R3*、R、R4*、R及びR5*は、水素、アルキル、シクロアルキル、又はアリールから独立して選択され、上記ラジカルのアルキル、シクロアルキル、又はアリールは、任意に置換されてもよく、Rは、水素、アルキル、シクロアルキル、又はアリールから選択され、上記ラジカルのアルキル、シクロアルキル、又はアリールは、任意に置換されてもよい)。
コア構造に結合した複数のアルキレンオキシ基は、式(V)のアルキレンオキシ単位
Figure 2023507365000005
から独立して選択される(式中は、各場合において、式(I)、(II)、又は(IV)の繰り返し単位の窒素原子に対する結合の半分を示し、Aは、いずれの場合も、独立して、1,2-プロピレン、1,2-ブチレン及び1,2-イソブチレンから選択され、Aは、1,2-プロピレンであり、Rは、いずれも場合も、独立して、水素及びC~C-アルキルから選択され、mは、0~約2の範囲の平均値を有し、nは、約20~約50の範囲の平均値を有し、pは、約10~約50の範囲の平均値を有する)。
両親媒性アルコキシル化グリースクリーニングポリマーの特定の実施形態は、内側ポリエチレンオキシドブロックと外側ポリプロピレンオキシドブロックとを有するアルコキシル化ポリアルキレンイミンから選択されてもよく、エトキシル化度及びプロポキシル化度は特定の制限値を上回りも下回りもしない。アルコキシル化ポリアルキレンイミンは、好ましくはポリエチレンブロックの、ポリプロピレンブロックに対する比率(n/p)の最小値が約0.6であり、最大値が約1.5(x+2y+1)1/2である。約0.8~約1.2(x+2y+1)1/2のn/p比率を有するアルコキシル化ポリアルキレンイミンは、特に有益な特性を有することが判明している。アルコキシル化ポリアルキレンイミンは、第一級、第二級、及び第三級アミン窒素原子からなる主鎖を有し得、これらの窒素原子は、アルキレンラジカルAにより互いに結合し、ランダムに配列される。ポリアルキレンイミン主鎖の主鎖及び側鎖を開始又は終端し、その残りの水素原子が引き続いてアルキレンオキシ単位により置換される、第一級アミノ部分は、それぞれ式(I)又は(IV)の繰り返し単位と称される。残りの水素原子が引き続いてアルキレンオキシ単位により置換される第二級アミノ部分は、式(II)の繰り返し単位と称される。主鎖及び側鎖に分岐する第三級アミノ部分は、式(III)の繰り返し単位と称される。
窒素原子及びA基からなるポリアルキレンイミン主鎖は、好ましくは約60~約10,000g/モル、好ましくは、約100~約8,000g/モル、より好ましくは、約500~約6,000g/モルの平均分子量Mwを有する。
和(x+2y+1)は、1つの個々のポリアルキレンイミン主鎖内に存在するアルキレンイミン単位の総数に相当し、それゆえにポリアルキレンイミン主鎖の分子量に直接関わる。しかしながら、本明細書で与えられた値は、混合物中に存在する全てのポリアルキレンイミンの数平均に関わる。和(x+2y+2)は、1つの個々のポリアルキレンイミン主鎖内に存在するアミノ基の総数に相当する。
アミノ窒素原子に接続するラジカルAは、1,2-エチレン、1,2-プロピレン、1,2-ブチレン、1,2-イソブチレン、1,2-ペンタンジイル、1,2-ヘキサンジイル又はヘキサメチレンなどの、同一又は異なる、直鎖又は分岐鎖C~C-アルキレンラジカルであり得る。好ましい分岐状アルキレンは、1,2-プロピレンである。好ましい直鎖アルキレンは、エチレン及びヘキサメチレンである。より好ましいアルキレンは、1,2-エチレンである。
ポリアルキレンイミン主鎖の第一級及び第二級アミノ基の水素原子は、式(V)のアルキレンオキシ単位により置換される。
Figure 2023507365000006
この式では、可変因子は、好ましくは、以下に与えられる意味のうちの1つを有する。
は、各場合において、1,2-プロピレン、1,2-ブチレン及び1,2-イソブチレンから選択され、好ましくは、Aは、1,2-プロピレンであり、Aは、1,2-プロピレンであり、Rは、各場合において、水素及びC~Cアルキル(メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル及びtert-ブチルなど)から選択され、好ましくは、Rは、水素である。添え字mは、各場合において、0~約2の値を有し、好ましくは、mは、0又はおよそ1であり、より好ましくは、mは、0である。添え字nは、約20~約50の範囲、好ましくは、約22~約40の範囲、より好ましくは、約24~約30の範囲の平均値を有する。添え字pは、約10~約50の範囲、好ましくは、約11~約40の範囲、より好ましくは、約12~約30の範囲の平均値を有する。好ましくは、式(V)のアルキレンオキシ単位は、アルコキシレートブロックの非ランダム配列である。非ランダム配列により、[-A-O-]が1番目に付加され(すなわち、式(I)、(II)又は(III)の繰り返し単位の窒素原子に対する結合に最も近接している)、[-CH-CH-O-]が2番目に付加され、[-A-O-]が3番目に付加されることが意味される。この配向は、内側ポリエチレンオキシドブロックと外側ポリプロピレンオキシドブロックとを有するアルコキシル化ポリアルキレンイミンを提供する。式(V)のこれらのアルキレンオキシ単位のかなりの部分は、エチレンオキシ単位-[CH-CH-O)]-及びプロピレンオキシ単位-[CH-CH(CH)-O]-により形成される。アルキレンオキシ単位はまた追加的に、小さな比率のプロピレンオキシ又はブチレンオキシ単位-[A-O]-を有してもよく、すなわち、水素原子で飽和したポリアルキレンイミン主鎖は、存在するNH-部分1モル当たりで最大約2モル、特に約0.5~約1.5モル、特に約0.8~約1.2モルの、少量のプロピレンオキシド又はブチレンオキシドと最初に反応させてもよい、すなわち、初期にアルコキシル化させてもよい。
両親媒性のアルコキシル化グリース洗浄ポリマーは、本発明の洗浄組成物中に、布地ケア製品及びホームケア製品の約0.05重量%~10重量%の範囲の濃度で存在する。布地ケア製品及びホームケア製品の実施形態は、約0.1%~約5重量%を含んでもよい。より具体的には、本実施形態は、約0.25~約2.5%のグリースクリーニングポリマーを含んでもよい。
カルボキシレートポリマー:本発明の洗浄組成物はまた、マレエート/アクリレートランダムコポリマー又はポリアクリレートホモポリマーなどの1つ以上のカルボキシレートポリマーを含み得る。一態様では、カルボキシレートポリマーは、4,000Da~9,000Da又は6,000Da~9,000Daの分子量を有するポリアクリレートホモポリマーである。
汚れ放出ポリマー:本発明の洗浄組成物はまた、以下の構造(I)、(II)又は(III)の1つにより定義される構造を有する1種以上の汚れ放出ポリマーを含み得る。
(I) -[(OCHR-CHR-O-OC-Ar-CO-]
(II) -[(OCHR-CHR-O-OC-sAr-CO-]
(III) -[(OCHR-CHR-OR
(式中、
a、b及びcは、1~200であり、
d、e及びfは、1~50であり、
Arは、1,4-置換フェニレンであり、
sArは、5位がSOMeで置換されている1,3-置換フェニレンであり、
Meは、Li、K、Mg/2、Ca/2、Al/3、アンモニウム、モノ-、ジ-、トリ-、若しくはテトラ-アルキルアンモニウム(アルキル基は、C~C18アルキル又はC~C10ヒドロキシアルキルである)、又はこれらの混合物であり、
、R、R、R、R、及びRは、独立して、H又はC~C18n-若しくはイソ-アルキルから選択され、
は、直鎖状若しくは分岐鎖状C~C18アルキル、又は直鎖状若しくは分岐鎖状C~C30アルケニル、又は5~9個の炭素原子を有するシクロアルキル基、又はC~C30アリール基、又はC~C30アリールアルキル基である。
好適な汚れ遊離ポリマーは、Rhodiaによって供給されているRepel-o-tex SF、SF-2及びSRP6を含むRepel-o-texポリマーなどのポリエステル汚れ放出ポリマーである。他の好適な汚れ放出ポリマーとしては、Clariantによって供給されているTexcare SRA100、SRA300、SRN100、SRN170、SRN240、SRN300及びSRN325を含むTexcareポリマーが挙げられる。他の好適な汚れ放出ポリマーは、Marloquestポリマー(例えば、Sasolにより供給されているMarloquest SLなど)である。
セルロース系ポリマー:本発明の洗浄組成物はまた、アルキルセルロース、アルキルアルコキシアルキルセルロース、カルボキシアルキルセルロース、アルキルカルボキシアルキルセルロースから選択されるものを含む、1つ以上のセルロース系ポリマーを含み得る。一態様では、セルロース系ポリマーは、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、メチルヒドロキシエチルセルロース、メチルカルボキシメチルセルロース、及びこれらの混合物を含む群から選択される。一態様では、カルボキシメチルセルロースは、0.5~0.9のカルボキシメチル置換度及び100,000Da~300,000Daの分子量を有する。
漂白系:洗剤は、テトラアセチルエチレンジアミン又はノナノイルオキシベンゼンスルホネートなどの過酸形成漂白活性化剤と合わせることができる過ホウ酸塩又は過炭酸塩などのH源を含み得る、漂白系を含有し得る。あるいは、漂白系は、例えば、アミド、イミド、又はスルホン型のペルオキシ酸を含んでもよい。一般的に、漂白剤が使用される場合、本発明の組成物は、標記洗浄組成物の約0.1重量%~約50重量%、又は更に約0.1重量%~約25重量%の漂白剤を含んでもよい。
キレート剤:本明細書に記載の洗浄組成物は、キレート剤を含有し得る。好適なキレート剤としては、銅、鉄、及び/又はマンガンキレート剤、並びにこれらの混合物が挙げられる。キレート剤を使用する場合、対象洗浄組成物は、対象洗浄組成物の約0.005重量%~約15重量%、又は更には約3.0重量%~約10重量%のキレート剤を含み得る。適切なキレート剤としては、DTPA(ジエチレントリアミン五酢酸)、HEDP(ヒドロキシエタンジホスホン酸)、DTPMP(ジエチレントリアミンペンタ(メチレンホスホン酸))、1,2-ジヒドロキシベンゼン-3,5-ジスルホン酸二ナトリウム塩水和物、エチレンジアミン、ジエチレントリアミン、エチレンジアミン二コハク酸(EDDS)、N-ヒドロキシエチルエチレンジアミン三酢酸(HEDTA)、トリエチレンテトラアミン六酢酸(TTHA)、N-ヒドロキシエチルイミノ二酢酸(HEIDA)、ジヒドロキシエチルグリシン(DHEG)、エチレンジアミンテトラプロピオン酸(EDTP)、及びこれらの誘導体が挙げられる。
安定化剤:本発明の組成物中の酵素変異体、及び/若しくは追加の酵素は、従来の安定化剤、並びに/又はプロテアーゼ阻害剤、例えば、プロピレングリコール若しくはグリセロールなどのポリオール、糖類若しくは糖アルコール、塩化ナトリウム及び塩化カリウムなどの塩、乳酸、ギ酸、ホウ酸、又はホウ酸誘導体、例えば、芳香族ホウ酸エステル、又は4-ホルミルフェニルボロン酸などのフェニルボロン酸誘導体、又はジ-、トリ-、若しくはテトラペプチドアルデヒド又はアルデヒド類似体などのペプチドアルデヒドを用いて安定化され得、これらのいずれかはB1-B0-Rを形成し、式中、Rは、H、CH3、CX3、CHX2、若しくはCH2Xであり(X=ハロゲン)、B0は、単一アミノ酸残基であり(好ましくは、任意で置換された脂肪族側鎖又は芳香族側鎖を有する)、かつB1は、任意でN末端保護基を含むか、あるいは国際公開第09/118375号、同第98/13459号)に記載の1つ以上のアミノ酸残基(好ましくは1つ、2つ又は3つ)、あるいはRASI、BASI、WASI(稲、大麦及び小麦の二官能性α-アミラーゼ/サブチリシン阻害剤)、又はCI2若しくはSSIなどのタンパク質型のプロテアーゼ阻害剤からなる。いくつかの実施形態では、本明細書において採用される酵素は、以下のようなイオンを酵素に提供する最終組成物中で、亜鉛(II)、カルシウム(II)及び/又はマグネシウム(II)イオンの水溶性供給源、並びに他の金属イオン(例えば、バリウム(II)、スカンジウム(II)、鉄(II)、マンガン(II)、アルミニウム(III)、スズ(II)、コバルト(II)、銅(II)、ニッケル(II)、及びオキソバナジウム(IV))の存在によって安定化される。
組成物は、以下からなる群から選択される酵素安定化剤を含み得る:(a)カルシウム塩、マグネシウム塩、及びこれらの混合物からなる群から選択される無機塩;(b)オリゴ糖、多糖類、及びこれらの混合物からなる群から選択される炭水化物;(c)フェニルボロン酸及びそれらの誘導体からなる群から選択される質量有効可逆性プロテアーゼ阻害剤;並びに(d)これらの混合物。
組成物は、(1)ホウ素含有化合物などの可逆的プロテアーゼ阻害剤、(2)1-2プロパンジオール、(3)ギ酸カルシウム及び/又はギ酸ナトリウム、並びに(4)それらの任意の組み合わせを含み得る。
洗浄組成物は、例えば、粘土を含む布地調整剤、起泡力増進剤、石鹸泡抑制剤、防食剤、土壌沈殿防止剤、土壌再堆積防止剤、染料、殺菌剤、蛍光増白剤、ヒドロトロープ、曇り防止剤、エタノールなどの有機溶媒、又は香料などの他の従来の洗剤成分も(洗浄補助剤として)含有し得る。更に、洗剤は、全般的なクリーニングレベルを増加させるために洗濯物に付加される事前染み抜き又は増進剤を含有し得、これらの添加物のうちのいずれかは、洗浄工程前に織物に適用される前処理剤としても使用され得る。
洗浄組成物では、任意の酵素、具体的には、本発明に必須の酵素は、洗浄液1リットル当たり0.001~100mgの酵素タンパク質、好ましくは洗浄液1リットル当たり0.005~5mgの酵素タンパク質、より好ましくは洗浄液1リットル当たり0.01~1mgの酵素タンパク質、具体的には、洗浄液1リットル当たり0.1~1mgの酵素タンパク質に相当する量で添加され得ることが、現在企図されている。しかしながら、本発明の組成物は、少なくとも0.0001~約0.1重量%、例えば、約0.0001重量%~約0.01重量%、約0.001重量%~約0.01重量%、又は約0.001重量%~約0.01重量%の純酵素タンパク質を含む。しかしながら、製剤化された酵素を用いるとき、洗剤組成物は、約0.02%~約20重量%、又は例えば、約0.05重量%~約15重量%、又は約0.05重量%~約20重量%、又は約0.05重量%~約5重量%、又は約0.05重量%~約3重量%を含む。
使用方法
本発明は、表面、好ましくは布地を洗浄及び/又は処理するための方法を含む。一態様では、かかる方法は、任意選択的に当該表面を洗浄する及び/又はすすぐ工程と、当該表面を本明細書に記載の洗浄組成物を含む水性洗浄液と接触させる工程と、次いで、任意選択的に当該表面を洗浄する及び/又はすすぐ工程と、を含む。
水性洗浄液は、好ましくは、約4から、又は約7若しくは約8から約12まで、好ましくは約10.5までのpHを有する。組成物は、好ましくは、溶液中約500ppm~約15,000ppmの濃度で用いられる。水と布地との比は、典型的には、約1:1~約30:1である。
本発明はまた、低温で、例えば、5℃又は10℃~40℃未満又は35℃未満又は30℃未満又は25℃未満の温度で改善された洗浄性能を提供するための、本発明の洗浄組成物の使用を提供する。
更なる態様では、本発明は、本明細書に記載のハイブリッドポリペプチド又はアミラーゼ変異体及び洗浄補助剤と表面を接触させることを含む、表面から汚れを除去するための方法に関し、洗浄補助剤は、界面活性剤と、任意選択的に上記の1つ以上の追加の洗浄補助剤と、を含む。更なる態様は、本明細書に記載の洗浄組成物と表面を接触させることを含む、表面から汚れを除去するための方法である。
本発明は、以下の段落で更に定義される。
段落1.番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する1つ以上の位置において修飾を含む、親α-アミラーゼのαアミラーゼ変異体と、洗浄補助剤と、を含む、組成物。
段落2.当該変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する1つ以上の位置において修飾を含み、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する、段落1に記載の組成物。
段落3.当該変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する1つ以上の位置において修飾を含み、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体は改善された性能を有し、改善された洗浄性能は、配列番号2又は3の親ペプチドと比較して、>1.0の改善係数(IF)として測定される、比活性の測定値に対する、段落1又は2のいずれか1つに記載の洗浄組成物。
段落4.当該修飾は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1、H2、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475、G476に対応する1つ以上の位置にある、段落1~3のいずれか1つに記載の洗浄組成物。
段落5.当該修飾は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1、H2、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180、R180Q、R180S、S181、S181L、S181T、T182、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E、及びG476Aに対応する、1つ以上の位置にある、段落1~4のいずれか1つに記載の洗浄組成物。
段落6.変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置R180、S181、T182、及びG183に対応する2つ以上の位置において欠失を含む、段落1~5のいずれか1つに記載の組成物。
段落7.欠失は、番号付けのために配列番号1を使用して、R180+S181、R180+T182、R180+G183、S181+T182、S181+G183、又はT182+G183からなる群から選択される、段落6に記載の組成物。
段落8.変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、
H1+G7A+R180+S181
H1+G7A+R180+S181+Y242F、
H1+G7A+R180+S181+Y242F+N279S、
H1+G7A+R180+S181+Y242F+N279S+G303R、
H1+G7A+R180+S181+Y242F+E259G+N279S+G303R、
H1+G7A+R180+S181+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1+G7A+R180+S181+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1+G7A+R180+S181+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1+G7A+R180+S181+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1+G7A+R180+S181+D118T+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1+G7A+R180+S181+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1+G7A+R180+S181+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1+G7A+R180+S181+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1+G7A+R180+S181+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1+G7A+R180+S181+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1+G7A+R180+S181+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1+G7A+R180+S181+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1+G7A+R180+S181+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1+G7A+R180+S181+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1+G7A+R180+S181+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+E390A+G476A、
H1+G7A+R180+S181+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+G303R+E390A+G476Aからなる群から選択される1つ以上の修飾を含み、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する、段落1~7のいずれか1つに記載の組成物。
段落9.変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、
H1+G7A+R180+S181+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1+G7A+S181+T182+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1+G7A+R180+S181+T182S+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1+G7A+R180+T182L+G183+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1+G7A+S181L+T182+G183+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1+G7A+R180S+T182+G183+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1+G7A+A60P+R180+S181+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1+G7A+M105L+R180+S181+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1+G7A+M105I+R180+S181+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1+G7A+R180+S181+T182D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1+G7A+R180+S181+T182E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1+G7A+R180+S181+T182G+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1+G7A+R180+S181+T182M+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1+G7A+R180+S181+A185K+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1+G7A+W140Y+R180+S181+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1+G7A+W140Y+R180+S181+T182D+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1+G7A+A41D+W140Y+R180+S181+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1+G7A+T40G+W140Y+R180+S181+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
L63F+W140Y+L173F+R180+S181+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+H323W
W140Y+L173F+R180+S181+N194F+L205Y+N225S+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323A、
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H1+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180+S181+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G475K、
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H1+G7A+D118T+W140Y+R180+S181+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1+G7A+D118T+W140Y+R180+S181+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1+G7A+D118T+W140Y+R180+S181+T182D+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1+G7A+D118T+W140Y+R180+S181+T182S+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1+G7A+D118T+W140Y+R180+S181+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1+G7A+D118T+W140Y+R180+S181+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1+G7A+D118T+W140Y+R180+S181+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1+G7A+D118T+W140Y+R180+S181+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1+G7A+D118T+W140Y+R180+S181+T182D+A185Q+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1+G7A+D118T+W140Y+R180+S181+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1+G7A+D118T+W140Y+R180+S181+T182S+A185Q+E189P+N196I+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1+G7A+D118T+W140Y+R180+S181+T182S+A185D+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420Y+G475K、
H1+G7A+D118T+W140Y+R180+S181+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1+G7A+W140Y+R180+S181+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1+G7A+D118T+W140Y+R180+S181+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1+G7A+D118T+W140Y+R180+S181+T182D+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1+G7A+D118T+W140Y+R180+S181+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1+G7A+D118T+W140Y+R180+S181+T182D+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1+G7A+D118T+W140Y+R180+S181+T182D+A185Q+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180+S181+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1+G7A+D118T+W140Y+R180+S181+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180+S181+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1+G7A+W140Y+R180+S181+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470A+G475K、
H1+G7A+S132L+W140Y+R180+S181+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1+G7A+A31S+R37N+D118T+W140Y+R180+S181+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1+G7A+D118T+W140Y+R180+S181+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1+G7A+D118T+W140Y+R180+S181+T182D+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1+G7A+D118T+W140Y+R180+S181+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
R180+S181
T40N+F116L+D123N+N126D+N128Y+T131I+F155W+R180+S181+T182D+E189P+F202Y+K457N+P458S+G475K+G476E、
A60V+Q98L+G110K+R180+S181+A383D、
Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180+S181+T315A、
G7H+Q98L+G110K+R180+S181
G7H+W167P+R180+S181+G455R、
Q98L+V103A+G110K+R180+S181
T114K+R180+S181
E169V+R180+S181
R180+S181+W188C、
W167D+R180+S181
W167S+R180+S181
W167E+R180+S181
W167P+R180+S181
R180+S181+E193I+H323N、
R180+S181+A203F、
W159L+R180+S181
W159H+R180+S181
K178A+R180+S181
A111L+R180+S181
G110K+R180+S181、及び
A111G+R180+S181からなる群から選択される1つ以上の修飾を含むか、又はそれからなり、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、当該変異体はα-アミラーゼ活性を有する、段落1~8のいずれか1つに記載の組成物。
段落10.当該変異体は改善された特性を有し、当該改善された特性は、>1.0の改善因子(IF)として測定される、増加した比活性の測定値に対して改善された洗浄性能である、段落1~9のいずれか1つに記載の組成物。
段落11.当該変異体は改善された特性を有し、当該改善された特性は、当該親ポリペプチドと比較して、>1.0の改善因子(IF)として測定される、増加した比活性の測定値に対して改善された洗浄性能である、段落1~10のいずれかに記載の組成物。
段落12.当該変異体は改善された特性を有し、当該改善された特性は、配列番号2及び/又は配列番号3の当該親ポリペプチドと比較して、>1.0の改善因子(IF)として測定される、増加した比活性の測定値に対して改善された洗浄性能である、段落1~11のいずれか1つに記載の組成物。
段落13.修飾数は1~20、例えば、1~10、及び1~5、例えば1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、又は20の修飾である、段落1~12のいずれかに記載の組成物。
段落14.当該α-アミラーゼは、バチルス・サブチリス、B.リケニフォルミス、バチルス属KSM-K38、B.レンタス、B.ブレビス、B.ステアロサーモフィルス、B.アルカロフィルス、B.アミロリケファシエンス、B.コアグランス、B.シルクランス、B.ラウタス、B.チューリンゲンシス、ストレプトマイセス・リビダンス、バチルス・ハルマパルス、又はS.ムリナスに由来する、段落1~13のいずれかに記載の組成物。
段落15.当該親α-アミラーゼは、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、及び14に記載のアミノ酸配列から選択されるか、又は任意のα-アミラーゼは、配列番号1、2、若しくは3に記載のアミノ酸配列のいずれかに対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する、段落1~14のいずれかに記載の組成物。
段落16.親α-アミラーゼは、配列番号1、配列番号2、及び/又は配列番号3に記載のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、段落1~15のいずれかに記載の組成物。
段落17.段落1~16に記載のα-アミラーゼ変異体をコードするポリヌクレオチド。
段落18.段落17に記載のポリヌクレオチドを含む、核酸コンストラクト。
段落19.段落17に記載のポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
段落20.段落17に記載のポリヌクレオチド、段落18に記載の核酸コンストラクト、又は段落19に記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。
段落21.αアミラーゼを得ることを含む、洗浄組成物の産生方法であって、a.当該変異体の発現に好適な条件下で段落20の宿主細胞を培養することと、b.任意選択的に、当該変異体を回収することと、c)当該α-アミラーゼ変異体を洗浄補助剤と混合することと、を含む、方法。
段落22.洗浄組成物の産生方法であって、当該方法は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び476に対応する1つ以上の位置において修飾を導入することによって親α-アミラーゼのα-アミラーゼ変異体を得ることであって、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する、ことと、当該αアミラーゼ変異体を洗浄補助剤と混合することと、を含む、方法。
段落23.親α-アミラーゼと、洗浄補助剤と、を含む水性洗浄液の洗浄性能を改善する方法であって、当該方法は、配列番号1、配列番号2、若しくは配列番号3のアミノ酸配列を有するか、又はそれらの配列に対して少なくとも60%の配列同一性を有する親α-アミラーゼのα-アミラーゼ変異体を得る工程を含み、親を修飾することによる当該方法は、
a)ハイブリッドα-アミラーゼ中の2つ、3つ、又は4つの位置の置換及び/又は欠失であって、当該位置は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置180、181、182、及び183に対応する、置換及び/又は欠失と、
b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1、H2、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475、G476に対応する1つ以上の位置における修飾であって、当該変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する、修飾と、を含む、方法。
段落24.洗浄補助剤は、界面活性剤、ビルダー、凝集助剤、キレート剤、移染阻害剤、酵素安定剤、酵素阻害剤、触媒材料、漂白活性化剤、過酸化水素、過酸化水素源、予形成した過酸、高分子分散剤、粘土汚れ除去/再付着防止剤、増白剤、発泡抑制剤、染料、香料、構造弾性化剤、布地柔軟剤、担体、ヒドロトロープ、ビルダー及びコビルダー、布地色相剤、消泡剤、分散剤、加工助剤、及び/又は顔料からなる群から選択される1つ以上の成分を含む、段落1~16のいずれかに記載の組成物。
段落25.当該洗浄補助剤は追加の酵素を含む、段落16又は24のいずれかに記載の組成物。
段落26.追加の酵素は、プロテアーゼ、アミラーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、セルラーゼ、エンドグルカナーゼ、キシログルカナーゼ、ペクチナーゼ、ペクチンリアーゼ、キサンタナーゼ、ペルオキシダーゼ、ハロペルオキシダーゼ、カタラーゼ、及びマンナナーゼ、又はこれらの任意の混合物を含む群から選択される、段落1~16、24、又は25のいずれかに記載の組成物。
段落27.液体洗剤、固体洗剤、ゲル洗剤、粉末洗剤、好ましくは単位用量形態である、段落1~16、又は24~26のいずれかに記載の組成物。
段落28.液体若しくは粉末洗濯組成物、又は液体若しくは粉末食器洗浄組成物、任意選択的にパウチの形態、好ましくは水溶性パウチの形態である、段落1~16又は24~27のいずれかに記載の組成物。
段落29.洗濯、又は食器洗浄及び工業洗浄を含む硬質表面洗浄など洗浄方法における、段落1~28のいずれかに記載のα-アミラーゼ変異体の使用。
段落30.配列番号1、2、3、4、又は5のいずれかのAドメインと少なくとも60%の配列同一性を有するAドメイン、配列番号1、2、10、11、又は12のいずれかのBドメインと少なくとも60%の配列同一性を有するBドメイン、及び配列番号1、2、3、4、又は5のいずれかのCドメインと少なくとも60%の配列同一性を有するCドメインを含む、α-アミラーゼ活性を有するハイブリッドポリペプチドと、洗浄補助剤と、を含む、洗浄組成物。
段落31.Aドメインは、配列番号4のAドメインと少なくとも60%の配列同一性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する、段落30に記載の洗浄組成物。
段落32.A1ドメインは、位置1~5の範囲の位置において開始し、位置94~114の範囲の位置において終了する、例えば、位置1~3の範囲の位置において開始し、位置99~110の範囲の位置において終了する、又は位置1~3の範囲の位置において開始し、位置104~109、特に配列番号4の位置1~108の範囲の位置において終了する配列と、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する、段落30~31のいずれかに記載の洗浄組成物。
段落33.Bドメインは、位置93~113の範囲の位置において開始し、位置195~215の範囲の位置において終了する、例えば、位置97~109の範囲の位置において開始し、位置199~211の範囲の位置において終了する、又は位置100~106の範囲の位置において開始し、位置202~208、特に配列番号12の位置109~205の範囲の位置において終了する配列と、少なくとも60%の配列同一性、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する、段落30~32のいずれかに記載の洗浄組成物。
段落34.Cドメインは、配列番号4のCドメインと少なくとも60%の配列同一性、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する、段落30~33のいずれかに記載の洗浄組成物。
段落35.A2ドメイン及びCドメインは、位置201~221の範囲の位置において開始し、位置478~514の範囲の位置において終了する、例えば、位置203~211の範囲の位置において開始し、位置480~510の範囲の位置において終了する、又は位置205~216の範囲の位置において開始し、位置480~500、特に配列番号4の位置206~485の範囲の位置において終了する配列と、少なくとも60%の配列同一性、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する、段落30~34のいずれかに記載の洗浄組成物。
段落36.当該ハイブリッドポリペプチドは、配列番号3の当該親ポリペプチドに対して改善された特性を有する、段落30~35のいずれかに記載の洗浄組成物。
段落37.改善された特性は、増加した比活性であり、特にモデルA洗剤組成物において増加した比活性としての増加した洗浄性能である、段落30~36のいずれかに記載の洗浄組成物。
段落38.改善された特性は、配列番号3の当該親ポリペプチドと比較したときに、>1.0の改善係数(IF)として測定される、増加した比活性である、段落30~37のいずれかに記載の洗浄組成物。
段落39.当該親ポリペプチドは、配列番号1~14のいずれか1つに対して、少なくとも60%、例えば65%、例えば、少なくとも70%、例えば少なくとも75%、例えば少なくとも80%、例えば少なくとも85%、例えば少なくとも90%、例えば少なくとも95%、例えば少なくとも97%、例えば、少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する、段落30~38のいずれかに記載の洗浄組成物。
段落40.当該ハイブリッドポリペプチドは、配列番号1~14のいずれか1つに対して、少なくとも60%、例えば、65%、例えば少なくとも70%、例えば少なくとも75%、例えば少なくとも80%、例えば少なくとも85%、例えば少なくとも90%、例えば少なくとも95%、例えば少なくとも97%、例えば、少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する、段落30~39のいずれかに記載の洗浄組成物。
段落41.ハイブリッドポリペプチドは、番号付けのために配列番号1を使用して、位置180、181、182、及び183に対応する1つ以上のアミノ酸の欠失を更に含む、段落30~40のいずれかに記載の洗浄組成物。
段落42.ハイブリッドポリペプチドは、番号付けのために配列番号1を使用して、位置180、181、182、及び183に対応する2つ以上のアミノ酸の欠失を含む、段落41に記載の洗浄組成物。
段落43.ハイブリッドポリペプチドは、番号付けのために配列番号1を使用して、位置180及び181に対応するアミノ酸の欠失を含む、段落42に記載の洗浄組成物。
段落44.ハイブリッドポリペプチドは、番号付けのために配列番号1を使用して、位置180及び182に対応するアミノ酸の欠失を含む、段落42に記載の洗浄組成物。
段落45.ハイブリッドポリペプチドは、番号付けのために配列番号1を使用して、位置180及び183に対応するアミノ酸の欠失を含む、段落42に記載の洗浄組成物。
段落46.ハイブリッドポリペプチドは、番号付けのために配列番号1を使用して、位置181及び182に対応するアミノ酸の欠失を含む、段落42に記載の洗浄組成物。
段落47.ハイブリッドポリペプチドは、番号付けのために配列番号1を使用して、位置181及び183に対応するアミノ酸の欠失を含む、段落42に記載の洗浄組成物。
段落48.ハイブリッドポリペプチドは、番号付けのために配列番号1を使用して、位置182及び183に対応するアミノ酸の欠失を含む、段落42に記載の洗浄組成物。
段落49.ハイブリッドポリペプチドは、配列番号1又は2を含むか、又はそれからなる、段落41~42のいずれかに記載の洗浄組成物。
段落50.ハイブリッドポリペプチドは、配列番号3の親ポリペプチドに対して、少なくとも1つの改善された特性を有し、改善された特性は、洗剤安定性、増加した比活性、基質特異性、熱安定性、pH依存性活性、pH依存性安定性、酸化安定性、Ca2+依存性、及び洗浄性能を含む群から選択される、段落30~49のいずれかに記載の洗浄組成物。
段落51.ハイブリッドポリペプチドα-アミラーゼは、バチルス・サブチリス、B.リケニフォルミス、バチルス属KSM-K38、B.レンタス、B.ブレビス、B.ステアロサーモフィルス、B.アルカロフィルス、B.アミロリケファシエンス、B.コアグランス、B.シルクランス、B.ラウタス、B.チューリンゲンシス、ストレプトマイセス・リビダンス、バチルス・ハルマパルス、又はS.ムリナスに由来する、段落30~50のいずれかに記載の洗浄組成物。
段落52.段落30~51のいずれか1つに記載のハイブリッドポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
段落53.段落52に記載のポリヌクレオチドを含む、核酸コンストラクト。
段落54.段落52に記載のポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
段落55.段落52に記載のポリヌクレオチド、段落53に記載の核酸コンストラクト、又は段落54に記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。
段落56.配列番号4又は5のα-アミラーゼに対して少なくとも60%の配列同一性を有するα-アミラーゼの洗浄性能を改善する方法であって、当該方法は、当該α-アミラーゼのBドメインを、配列番号12のアミノ酸109~206又は配列番号12に対して少なくとも60%の同一性を有する配列で置換することを含む、方法。
段落57.ハイブリッドポリペプチドを産生する方法であって、a.段落55に記載の宿主細胞を、当該ハイブリッドの発現に好適な条件下で培養することと、b.任意選択的に当該ハイブリッドを回収することと、を含む、方法。
段落58.洗浄補助剤は、界面活性剤、ビルダー、凝集助剤、キレート剤、移染阻害剤、酵素安定剤、酵素阻害剤、触媒材料、漂白活性化剤、過酸化水素、過酸化水素源、予形成した過酸、高分子分散剤、粘土汚れ除去/再付着防止剤、増白剤、発泡抑制剤、染料、香料、構造弾性化剤、布地柔軟剤、担体、ヒドロトロープ、ビルダー及びコビルダー、布地色相剤、消泡剤、分散剤、加工助剤、及び/又は顔料、並びにこれらの混合物からなる群から選択される活性成分を含む、請求項30~51のいずれかに記載の洗浄組成物。
段落59.当該洗浄補助剤は追加の酵素を含み、酵素は、プロテアーゼ、アミラーゼ、リパーゼ、カチナーゼ、セルラーゼ、エンドグルカナーゼ、キシログルカナーゼ、ペクチナーゼ、ペクチンリアーゼ、キサンタナーゼ、ペルオキシダーゼ、ハロペルオキシゲナーゼ、カタラーゼ、及びマンナーゼ、並びにこれらの混合物からなる群から選択される、段落58に記載の洗浄組成物。
段落60.組成物は、液体洗剤又は粉末など固体洗剤である、段落58又は59に記載の組成物。
段落61.洗濯組成物又は食器洗浄組成物、任意選択的に単位用量の形態である、段落58~60のいずれかに記載の組成物。
段落67.洗濯、又は食器洗浄及び工業洗浄など硬質表面洗浄など洗浄方法における、段落58~61のいずれかに記載の組成物の使用。
本発明は更に以下の例によって説明されるが、これは本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
材料及び方法
α-アミラーゼ活性のアッセイ
pNP-G7アッセイ
α-アミラーゼ活性を、G7-pNP基質を採用する方法によって決定することができる。G7-pNPは、4,6-エチリデン(G)-p-ニトロフェニル(G)-α、D-マルトヘプタオシドの省略形であり、α-アミラーゼなどのエンドアミラーゼで切断することができるブロックオリゴ糖である。切断後、キット中に含まれるα-グルコシダーゼは、加水分解基質を更に消化して、黄色を有する遊離PNP分子を自由にし、ひいては、λ=405nm(400~420nm)で、可視分光測光で測定することができる。G7-pNP基質及びα-グルコシダーゼを含有するキットは、Roche/Hitachi(カタログ番号11876473)によって製造される。
試薬:
このキットのG7-pNP基質は、22mMの4,6-エチリデン-G7-pNP及び52.4mMのHEPES(2-[4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジニル]-エタンスルホン酸)(pH7.0)を含有する。
α-グルコシダーゼ試薬は、52.4mMのHEPES、87mMのNaCl、12.6mMのMgCl、0.075mMのCaCl、>4kU/Lのα-グルコシダーゼ)を含有する。
1mLのα-グルコシダーゼ試薬を0.2mLのG7-pNP基質と混合して、基質作用液を作製する。この基質作用液を、使用直前に作製する。
希釈緩衝液:50mMのMOP、0.05%(w/v)のTriton X100(ポリエチレングリコールp-(1,1,3,3-テトラメチルブチル)-フェニルエーテル(C1422O(CO)(n=9-10)))、1mMのCaCl2、pH8.0。
手順:
希釈した試料中のpHが7であることを確実にするために、分析されるアミラーゼ試料を希釈緩衝液で希釈する。20μLの希釈酵素試料を96ウェルマイクロタイタープレートに移し、80μLの基質作用溶液を添加することによって、アッセイを実施する。溶液を混合し、室温で1分間事前インキュベートし、吸収を20秒毎に5分間、OD405nmで測定する。
時間依存吸収曲線の勾配(1分間当たりの吸収度)は、所与の一連の条件下での問題のα-アミラーゼの比活性(1mg酵素当たりの活性)に直接比例する。アミラーゼ試料を、勾配が1分間当たり0.4吸収度単位未満のレベルに希釈すべきである。
Phadebas活性アッセイ:
α-アミラーゼ活性は、Phadebas基質(例えば、Magle Life Sciences(Lund,Sweden)から)を使用する方法によっても決定することができる。Phadebas錠剤は、水に不溶性である球状ミクロスフェアの形態である連結デンプンポリマーを含む。青色染料は、これらのミクロスフェアに共有結合(covantly bound)する。ミクロスフェア中の連結デンプンポリマーは、α-アミラーゼ活性に比例する速度で分解される。α-アミルがデンプンポリマーを分解すると、放出される青色染料は水溶性であり、染料の濃度は620nmで吸光度を測定することによって決定することができる。青色の濃度は、試料中のα-アミラーゼ活性に比例する。
分析されるアミラーゼ試料を、所望のpHを有する活性緩衝液で希釈する。1つの基質錠剤を5mLの活性緩衝液中に懸濁し、磁気撹拌機で混合する。基質の混合中に、150μLをマイクロタイタープレート(MTP)又はPCR-MTPに移す。30μLの希釈アミラーゼ試料を150μLの基質に添加し、混合する。37℃で15分間インキュベートする。30μLの1M NaOHを添加し、混合することによって、反応を停止させる。MTPを4000xgで5分間遠心分離する。100μLを新しいMTPに移し、620nmで吸光度を測定する。
アミラーゼ試料は、620nmでの吸光度が0~2.2であり、活性アッセイの線形範囲内にあるように希釈されるべきである。
糖活性アッセイの還元:
α-アミラーゼ活性はまた、例えばトウモロコシデンプン基質を用いて糖アッセイを還元することによって決定され得る。デンプン中のα-1,4-グリコシド結合を加水分解するα-アミラーゼによって形成される還元末端の数は、p-ヒドロキシ安息香酸ヒドラジド(Phbah)との反応によって決定される。Phbahとの反応後、還元末端の数を405nmでの吸光度によって測定することができ、還元末端の濃度は、試料中のα-アミラーゼ活性に比例する。
トウモロコシデンプン基質(3mg/mL)は、ミリQ水中で5分間調理することによって可溶化され、アッセイ前に冷却される。停止液の場合、Ka-Na-酒石酸塩/NaOH溶液(K-Na-酒石酸塩(Merck8087))50g/L、NaOH 20g/L)を調製し、p-ヒドロキシ安息香酸ヒドラジド(PHBAH、Sigma H9882)をKa-Na-酒石酸塩/NaOH溶液に、15mg/mLまで添加することにより、新たに停止液を調製する。
PCR-MTPの場合、50μLの活性緩衝液を、50μLの基質と混合する。50μLの希釈酵素を添加し、混合する。PCR機器において、所望の温度で5分間インキュベートする。75μLの停止液(Ka-Na-酒石酸塩/NaOH/PHBAH)を添加することによって、反応を停止する。PCR機器において、95℃で10分間インキュベートする。150μLを新しいMTPに移し、405nmで吸光度を測定する。
アミラーゼ試料は、405nmでの吸光度が0~2.2であり、活性アッセイの線形範囲内にあるように希釈されるべきである。
EnzChek(登録商標)アッセイ:
残存アミラーゼ活性の決定のために、EnzChek(登録商標)Ultra Amylase Assay Kit(E33651、Invitrogen,La Jolla,CA,USA)を使用することができる。
基質は、トウモロコシデンプン誘導体のDQ(商標)デンプンであり、蛍光がクエンチされる程度までBODIPY(登録商標)FL染料で標識されるトウモロコシデンプンである。約1mgの凍結乾燥基質を含有する1つのバイアルを、100マイクロリットルの50mM酢酸ナトリウム(pH4.0)に溶解する。バイアルを20秒間ボルテックスし、室温で暗所に残し、溶解するまで時折混合する。次いで、900マイクロリットルの100mM酢酸塩、0.01%(w/v)のTRITON(登録商標)X100、0.125mMのCaCl(pH5.5)を添加し、完全にボルテックスし、使用する準備が整うまで室温で暗所に保管する。ストック基質作業溶液は、残存活性緩衝液(100mMの酢酸塩、0.01%(w/v)のTRITON(登録商標)X100、0.125mMのCaCl、pH5.5))中で10倍に希釈することによって調製される。インキュベーションの直後に、酵素を、100mMの酢酸塩中10~20ngの酵素タンパク質/mLの濃度、0.01%(W/v)のTRITON(登録商標)X100、0.125mMのCaCl(pH5.5)に希釈する。
アッセイのために、25マイクロリットルの基質作業溶液を、黒色の384ウェルマイクロタイタープレート内の25マイクロリットルの希釈酵素と10秒間混合する。25℃で各ウェル内で15分間にわたって毎分に1回、蛍光強度を測定し(励起:485nm、放出:555nm)、時間に対する蛍光強度のプロットの勾配として、Vmaxを計算する。プロットは線形であるべきであり、残存活性アッセイは、希釈された基準酵素溶液が活性アッセイの線形範囲内にあるように調整されている。
実施例1:配列番号1に記載のハイブリッドポリペプチドの構築
配列番号3(第1の親ポリペプチド)に記載のアミノ酸配列のアミノ酸番号1~アミノ酸番号108及びアミノ酸番号207~アミノ酸番号485のアミノ酸を有するポリペプチドからのAドメイン及びCドメインと、配列番号11(第2の親ポリペプチド)に記載のアミノ酸配列のアミノ酸番号109~アミノ酸番号206を有するポリペプチドからのBドメインとの間でのハイブリッドの構築。
2つのアミラーゼの3D構造的アラインメントに基づいて、第1の親ポリペプチドのアミノ酸番号1~アミノ酸番号108及びアミノ酸番号207~アミノ酸番号485はドメインA及びドメインCとして定義され、第2の親ポリペプチドのアミノ酸番号109~アミノ酸番号206は、Bドメインとして定義される。第1の親ポリペプチドからのA-Cドメインの一部及び第2の親ポリペプチドからのBドメインをコードする合成DNAフラグメントを設計し、外部ベンダーから購入した。
第1の親ポリペプチドからのAドメイン及びCドメイン、並びに第2の親ポリペプチドからのBドメインからなる、得られたアミラーゼは、配列番号1に記載のポリペプチドである。更に、R180+S181の欠失を有する、得られたアミラーゼは、配列番号2記載のポリペプチドである。
実施例2:ハイブリッドポリペプチドの比活性
実施例1に記載のように生成したハイブリッドポリペプチドが、維持された活性、又は更には改善された活性を有するかどうかを判定するために、ハイブリッドポリペプチドをマイクロスワッチアッセイによって評価した。次の洗剤組成物を調製した。
Figure 2023507365000007
モデルA洗剤(0.33%)の調製:4:1のCaCl2及びMgCl2ストック溶液(6000dH(水硬度))のモル比。125.8gのCaCl2.2H2Oを1リットルの瓶に秤量し、これにタイプIの水500mLを添加し、十分に撹拌した。これに、43.8gのMgCl2.6H2Oを秤量して添加し、十分に溶解し、タイプIの水で最終体積を1000mLとした。
0.535MのNaHCO3溶液:44.9gの水酸化ナトリウムを、100mLのタイプIの水に溶解した。
水硬度15(15dH)のモデルA洗剤:3.335gのモデルA洗剤を秤量し、1リットル瓶に移し、これに865mLのタイプIの水を添加し、十分に混合した。これに0.535MのNaHCO3を7.5mL加え、十分に混合し、タイプ1の水で体積を1リットルとした。水硬度を15°dHに調整するために、モル比4:1、6000°dHのCaCl2.2H2O及びMgCl2.6H2O原液2.5mLを加え、混合物を15分間撹拌した。
実験手順
マザープレートの調製:
コロニーピッカー(KBiosystems)により形質転換したプレートからコロニーを採取し、TBGly培地を含む96ウェル培養プレートに接種し、増殖させた。培養物を37℃で3日間増殖させ、遠心分離によって上清をプレートから回収した。
基質プレートの調製:
CS-27(5メートルのスワッチ)をCenter for Testmaterials(CFT、オランダ)から入手し、スワッチパンチを使用して6mmのマイクロスワッチに切断した。1つ又は2つのスワッチを96ウェルNuncプレートの各ウェルに入れ、180μLのモデルA洗剤(0.33%)を添加した。培養上清又は精製タンパク質を、0.1mMのCaCl2、0.01%のTriton-Xを含む100mMのMOPS(pH7)で0.1ppm又は0.4ppmに希釈した。スワッチ及びモデルA洗剤を含有するプレートに、20uLの希釈酵素試料を添加して、最終濃度0.01又は0.04ppmを得、25℃で10分間、800RPMでインキュベートした。40uLの反応混合物を別の96ウェルプレートに移し、放出されたオリゴ糖をグルコースに消化するために、0.1mg/mLのアミログルコシダーゼ(AMG)10uLを添加し、室温で5分間インキュベートした。AMGは、市販製品AMG 300L(Novozymes)から精製した。還元末端は、p-ヒドロキシ安息香酸ヒドラジド(PAHBAH)法(Lever M Anal Biochem.81:21-7)により検出された。1.5% PAHBAH試薬を調製するために、1.5gのp-ヒドロキシ安息香酸ヒドラジド(PAHBAH)を、1.0M Na2CO3、0.17M酒石酸カリウムナトリウム、及び5mM Bi(NO3)3.5H2Oを含有する緩衝液に溶解した。50ulのAMG消化物に、50ulの1.5% PAHBAH試薬を添加し、95℃で10分間加熱した。得られた混合物の吸光度を405nmで測定した(これは酵素活性に比例する)。培養上清の場合、発現酵素の濃度は、特定の抗体を使用してELISAにより測定した。比活性は、比活性のタンパク質比を計算し、親ポリペプチド(α-アミラーゼ)の比活性よりも高いものを成功として識別した。
改善係数(IF)は、以下のように計算した:
改善係数(IF)=[ハイブリッドポリペプチドの比活性]/[親ポリペプチド(α-アミラーゼ)の比活性]
ハイブリッドポリペプチドの比活性=15.70
親ポリペプチドの比活性=11.41
改善因子(IF)=15.70/11.41=1.4。
したがって、配列番号の2(ハイブリッドポリペプチド)のIFは1.4であり、配列番号3(親ポリペプチド)のIFは1.0である。
実施例3:本発明による変異体の生成
配列番号1のアミラーゼ変異体は、標準的な手順、つまり、ランダム及び/又は部位特異的変異を遺伝子に導入し、変異した遺伝子でバチルス・サブチリス宿主細胞を形質転換し、形質転換された宿主細胞を発酵させることにより調製した(例えば、国際公開第2004/111220号の実施例1に記述されているとおり)。
α-アミラーゼ変異体は、同様の方法でバチルス・サブチリスにおいて組換えにより生成した。複数の位置で様々な組み合わせの改変を行った、変異体のライブラリを生成した。生成した変異体を以下の実施例に列挙する。
実施例4:変異体の比活性
実施例3に記載のように生成した変異体が、維持された活性、又は更には改善された活性を有するかどうかを判定するために、実施例2に記載のマイクロスワッチアッセイによって変異体を評価した。比活性は、比活性のタンパク質比を計算し、配列番号3又は配列番号2のα-アミラーゼの比活性よりも高いものを変異体として識別した。
表2:上記の方法によって得た、本発明による変異体の比活性(アミノ酸置換は配列番号1を参照):
Figure 2023507365000008
Figure 2023507365000009
Figure 2023507365000010
Figure 2023507365000011
Figure 2023507365000012
Figure 2023507365000013
Figure 2023507365000014
Figure 2023507365000015
Figure 2023507365000016
Figure 2023507365000017
Figure 2023507365000018
Figure 2023507365000019
Figure 2023507365000020
Figure 2023507365000021
Figure 2023507365000022
Figure 2023507365000023
Figure 2023507365000024
Figure 2023507365000025
Figure 2023507365000026
Figure 2023507365000027
Figure 2023507365000028
Figure 2023507365000029
Figure 2023507365000030
Figure 2023507365000031
Figure 2023507365000032
Figure 2023507365000033
Figure 2023507365000034
Figure 2023507365000035
実施例5:自動機械的応力アッセイを使用したα-アミラーゼの洗浄性能
洗剤ベース組成物中のα-アミラーゼの洗浄性能を評価するために、自動機械的応力アッセイ(AMSA)を使用して洗浄実験を実施することができる。AMSA試験で、大量の少量酵素-洗剤溶液の洗浄性能を試験することが可能である。AMSAプレートは、試験溶液のための多くのスロット及び洗浄される織物の見本をスロットの全開口部にしっかりと締め付けるリッドを有している。洗浄期間中、プレート、試験溶液、織物及びリッドを、試験溶液を織物と接触させ、規則的及び周期的な振動様式で機械的ストレスを印加するために、精力的に振盪する。更なる説明に関して、国際公開第02/42740号、特に23~24ページの段落「Special method embodiments」を参照されたい。
一般的な洗浄性能の記述:
水、以下に説明するモデル洗剤A、及び0若しくは0.09ppmの濃度の本発明の酵素を含む試験溶液を調製する。デンプン(Center For Testmaterials BV,P.O.Box 120,3133 KT,Vlaardingen,The NetherlandsのCS-28)で染みを付けた布地を加え、20℃で10分間洗浄する。水道水を流して完全にすすぎ、暗所で乾燥させた後、続いて、染色した布地の光強度の値を、洗浄性能の尺度として測定する。1Lあたり0mgの酵素タンパク質を伴う試験物をブランクとして使用し、洗剤からの貢献度に相関させる。好ましくは、機械的な動きを、例えば、布地を有する洗浄液の振盪、回転又は撹拌の形態で、洗浄工程中に適用する。AMSA洗浄性能実験を、以下に指定される実験条件下で実行することができる。
Figure 2023507365000036
Figure 2023507365000037
CaCl2、MgCl2及びNAHCO3(Ca2+:Mg2+:HCO3-=4:1:7.5)を試験系に加えることにより、水硬度を15°dHに調整した。洗浄後、織物を水道水で洗い流し、乾燥させた。
洗浄性能は、白色光で照射される場合に、試料から反射される光の強度として表される輝度として測定される。試料が染色されると、反射光の強度は、きれいな試料の反射光の強度よりも低い。したがって、反射光の強度を、洗浄性能を測定するために使用することができる。
洗浄した織物の画像を捕捉するために使用する、専門のフラットベッドスキャナー(EPSON Expression 10000XL,EPSON)を用いて色測定を行う。
スキャンした画像から光強度の値を抽出するために、画像からの48→24ビットカラーピクセル値を、RGB値としても既知である、レッド、グリーン及びブルーの値に変換する。RGB値を1次元配列として合計し、その後、結果として生じる1次元配列の長さを算出して、強度値(Int)を計算する:
Figure 2023507365000038
Figure 2023507365000039
Figure 2023507365000040
Figure 2023507365000041
Figure 2023507365000042
洗浄組成物例
実施例1~6
手洗い用又はトップローディング式洗濯機用に設計されている顆粒状洗濯洗剤組成物。
Figure 2023507365000043
*本発明のアミラーゼは、洗剤100g当たりの活性酵素のmgとして示される。
実施例7~12
フロントローディング式自動洗濯機用に設計されている顆粒状洗濯洗剤組成物。
Figure 2023507365000044
*本発明のアミラーゼは、洗剤100g当たりの活性酵素のmgとして示される。
実施例13~18:強力液体洗濯洗剤組成物
Figure 2023507365000045
1ランダムグラフトコポリマーは、ポリエチレンオキシド主鎖と複数のポリ酢酸ビニル側鎖とを有する、ポリ酢酸ビニルグラフト化ポリエチレンオキシドコポリマーである。ポリエチレンオキシド骨格鎖の分子量は、約6000であり、ポリエチレンオキシドのポリ酢酸ビニルに対する重量比は、約40~60であり、50のエチレンオキシド単位当たり1個以下のグラフト点である。
2-NH1個当たり20個のエトキシレート基を有するポリエチレンイミン(MW=600)。
3両親媒性アルコキシル化グリース洗浄ポリマーは、1つの-NHにつき24個のエトキシレート基と、1つの-NHにつき16個のプロポキシレート基とを有するポリエチレンイミン(MW=600)である。
*本発明のアミラーゼは、洗剤100g当たりの活性酵素のmgとして示される。
実施例19~21:強力液体洗濯洗剤組成物
Figure 2023507365000046
*本発明のアミラーゼは、洗剤100g当たりの活性酵素のmgとして示される。
**総洗浄及び/又は処理組成物重量に基づいて、水は合計7%以下である。
実施例1~21の洗浄組成物の原材料及び注記
C11~C18の平均脂肪族炭素鎖長を有する直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、
C12~18ジメチルヒドロキシエチルアンモニウムクロリド
AE3Sは、C12~15アルキルエトキシ(3)サルフェートである
AE7は、平均エトキシル化度が7のC12~15アルコールエトキシレートである。
AE9は、平均エトキシル化度が9のC12~16アルコールエトキシレートである。
HSASは、米国特許第6,020,303号及び同第6,060,443号に開示されているとおり、約16~17の炭素鎖長を有する中鎖分岐状一級アルキルサルフェートである。
ポリアクリレートMW4500は、BASFによって供給されている。
カルボキシメチルセルロースは、CP Kelco(Arnhem,Netherlands)により供給されているFinnfix(登録商標)Vである。
CHECは、カチオン変性ヒドロキシエチルセルロースポリマーである。
ホスホネートキレート剤は、例えば、ジエチレンテトラアミン五酢酸(DTPA)ヒドロキシエタンジホスホネート(HEDP)である。
Savinase(登録商標)、Natalase(登録商標)、Stainzyme(登録商標)、Lipex(登録商標)、Celluclean(商標)、Mannaway(登録商標)、及びWhitezyme(登録商標)はいずれも、Novozymes(Bagsvaerd,Denmark)の製品である。
Purafect(登録商標)、Purafect Prime(登録商標)は、Genencor International(Palo Alto,California,USA)の製品である。
蛍光増白剤1は、Tinopal(登録商標)AMSであり、蛍光増白剤2は、Tinopal(登録商標)CBS-Xであり、ダイレクトバイオレット9は、Pergasol(登録商標)Violet BN-Zであり、NOBSは、ノナノイルオキシベンゼンスルホン酸ナトリウムである。
TAEDはテトラアセチルエチレンジアミンである。
S-ACMCは、C.I.Reactive Blue 19と共役しているカルボキシメチルセルロース、商品名AZO-CM-CELLULOSEである。
汚れ放出剤は、Repel-o-tex(登録商標)PFである。
アクリル酸/マレイン酸コポリマーは、分子量70,000であり、アクリレート:マレエート比は、70:30であり、
EDDSは、エチレンジアミン-N,N’-二コハク酸、(S,S)異性体のナトリウム塩であり、泡抑制剤凝集体は、Dow Corning(Midland,Michigan,USA)によって供給されている。
HSASは、中鎖分岐状アルキルサルフェートである。
リキティント(Liquitint)(登録商標)バイオレットCTは、Milliken(Spartanburg,South Carolina,USA)から供給される。
1ランダムグラフトコポリマーは、ポリエチレンオキシド主鎖と複数のポリ酢酸ビニル側鎖とを有する、ポリ酢酸ビニルグラフト化ポリエチレンオキシドコポリマーである。ポリエチレンオキシド骨格鎖の分子量は、約6000であり、ポリエチレンオキシドのポリ酢酸ビニルに対する重量比は、約40~60であり、50のエチレンオキシド単位当たり1個以下のグラフト点である。
2-NH1個当たり20個のエトキシレート基を有するポリエチレンイミン(MW=600)。
3両親媒性アルコキシル化ポリマーは、-NH1個当たり24個のエトキシレート基及び-NH1個当たり16個のプロポキシレート基を含有するように誘導体化されたポリマーから調製されるポリエチレンイミン(MW600)である。
アミラーゼ4は、本明細書のa)~k)のいずれか(mg活性タンパク質)である。
実施例22~26 単位分量洗濯洗剤組成物。このような単位用量の製剤は、1つ又は複数の区画を含んでもよい。
Figure 2023507365000047
*本発明のアミラーゼは、洗剤100g当たりの活性酵素のmgとして示される。
1-NH1個当たり20個のエトキシレート基を有するポリエチレンイミン(MW=600)。
実施例27 多区画型単位分量組成物
本発明の多区画単位用量洗濯洗剤製剤を以下に提供する。これらの実施例では、単位用量は3つの区画を有するが、同様の組成物を2、4、又は5つの区画で作製することもできる。区画を封入するために使用されるフィルムは、ポリビニルアルコールである。
Figure 2023507365000048
*本発明のアミラーゼは、洗剤100g当たりの活性酵素のmgとして示される。
本明細書に開示される寸法及び値は、列挙された正確な数値に厳密に限定されるものとして理解されるべきではない。その代わりに、特に指示がない限り、そのような寸法は各々、列挙された値とその値を囲む機能的に同等な範囲との両方を意味することが意図される。例えば、「40mm」として開示される寸法は、「約40mm」を意味することが意図される。

Claims (15)

  1. 洗浄組成物であって、(i)親α-アミラーゼのα-アミラーゼ変異体であって、前記変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、及び47694、98475、及び476に対応する1つ以上の位置において修飾を含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、前記変異体は、前記親ポリペプチド、好ましくは、配列番号2又は3と比較したときに、改善係数(IF)>1.0の比活性の測定値に対する改善された洗浄性能など、改善された性能を有する、親α-アミラーゼのα-アミラーゼ変異体と、(ii)洗浄補助剤と、を含む、洗浄組成物。
  2. 前記修飾は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1、H2、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475、及びG476に対応する少なくとも1つの位置にあり、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14のいずれかに対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する、請求項1に記載の洗浄組成物。
  3. 前記修飾は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E、及びG476Aに対応する、少なくとも1つの位置にあり、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する、請求項1又は請求項2に記載の洗浄組成物。
  4. 前記変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、R180*+S181*、R180*+T182*、R180*+G183*、S181*+T182*、S181*+G183*、及びT182*+G183*からなる群から選択される2つ以上の位置において欠失を含む、請求項1~3のいずれか一項に記載の洗浄組成物。
  5. 前記変異体は、(a)前記親α-アミラーゼ中の2つ、3つ、又は4つの位置の置換及び/又は欠失であって、前記位置は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置180、181、182、及び183に対応する、置換及び/又は欠失と、(b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*、H2、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E、及びG476Aに対応する1つ以上の位置における修飾と、を含むか、又はそれからなり、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する、請求項1~4のいずれか一項に記載の洗浄組成物。
  6. 前記変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、
    H1*+G7A+R180*+S181*、
    H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F、
    H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+N279S、
    H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+N279S+G303R、
    H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R、
    H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
    H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
    H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
    H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
    H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
    H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
    H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
    H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
    H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
    H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
    H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
    H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
    H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
    H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
    H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+E390A+G476A、
    H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+G303R+E390A+G476Aからなる群から選択される1つ以上の修飾を含み、
    前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有する、請求項1~5のいずれか一項に記載の洗浄組成物。
  7. 前記変異体は、番号付けのために配列番号1を使用して、
    H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
    H1*+G7A+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
    H1*+G7A+R180*+S181*+T182S+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
    H1*+G7A+R180*+T182L+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
    H1*+G7A+S181L+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
    H1*+G7A+R180S+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
    H1*+G7A+A60P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
    H1*+G7A+M105L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
    H1*+G7A+M105I+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
    H1*+G7A+R180*+S181*+T182D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
    H1*+G7A+R180*+S181*+T182E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
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    H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
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    H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
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    H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
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    H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
    H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N196I+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
    H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420Y+G475K、
    H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
    H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
    H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
    H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
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    H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
    H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
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    H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
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    H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470A+G475K、
    H1*+G7A+S132L+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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    H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
    H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
    R180*+S181*、
    T40N+F116L+D123N+N126D+N128Y+T131I+F155W+R180*+S181*+T182D+E189P+F202Y+K457N+P458S+G475K+G476E、
    A60V+Q98L+G110K+R180*+S181*+A383D、
    Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+T315A、
    G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*、
    G7H+W167P+R180*+S181*+G455R、
    Q98L+V103A+G110K+R180*+S181*、
    T114K+R180*+S181*、
    E169V+R180*+S181*、
    R180*+S181*+W188C、
    W167D+R180*+S181*、
    W167S+R180*+S181*、
    W167E+R180*+S181*、
    W167P+R180*+S181*、
    R180*+S181*+E193I+H323N、
    R180*+S181*+A203F、
    W159L+R180*+S181*、
    W159H+R180*+S181*、
    K178A+R180*+S181*、
    A111L+R180*+S181*、
    G110K+R180*+S181*、及び
    A111G+R180*+S181*からなる群から選択される1つ以上の修飾を含むか、又はそれからなり、
    前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有する、請求項1~6のいずれか一項に記載の洗浄組成物。
  8. 前記親α-アミラーゼは、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、及び14に記載のアミノ酸配列から選択されるか、又は配列番号1、2、若しくは3に記載のアミノ酸配列のいずれかに対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する任意のα-アミラーゼである、請求項1~7のいずれか一項に記載の洗浄組成物。
  9. 前記親α-アミラーゼは、配列番号1、配列番号2、又は配列番号3に記載のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、請求項1~8のいずれか一項に記載の洗浄組成物。
  10. 前記洗浄補助剤は、好ましくはプロテアーゼ、アミラーゼ、リパーゼ、カチナーゼ、セルラーゼ、ヌクレアーゼ、エンドグルカナーゼ、キシログルカナーゼ、ペクチナーゼ、ペクチンリアーゼ、キサンタナーゼ、キサンタンリアーゼ、ペルオキシダーゼ、ハロペルオキシゲナーゼ、ヘキソサミニダーゼ、カタラーゼ、及びマンナーゼ、又はそれらの任意の混合物からなる群から選択される、追加の酵素を含む、請求項1~9のいずれか一項に記載の洗浄組成物。
  11. 液体又は固体洗剤組成物、好ましくは洗濯組成物又は食器洗浄組成物、好ましくは液体洗濯組成物である、請求項1~10のいずれか一項に記載の洗浄組成物。
  12. 洗浄組成物を作製する方法であって、(i)番号付けのために配列番号1を使用して、位置1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475及び47694、98475及び476に対応する1つ以上の位置において修飾を導入することによって親α-アミラーゼのα-アミラーゼ変異体を得る工程であって、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14に対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有する、工程と、(ii)前記αアミラーゼ変異体を洗浄補助剤と混合する工程と、を含む、方法。
  13. 洗浄組成物の洗浄性能を改善する方法であって、前記洗浄組成物に親α-アミラーゼのα-アミラーゼ変異体を組み込むことであって、前記変異体は、配列番号1のアミノ酸配列を有するか、又は配列番号1のアミノ酸配列に対して少なくとも60%の配列同一性を有する、ことを含み、前記方法は、(a)前記親α-アミラーゼ中の2つ、3つ、又は4つの位置の置換及び/又は欠失を導入する工程であって、前記位置は、番号付けのために配列番号1を使用して、位置180、181、182、及び183に対応する、工程と、(b)番号付けのために配列番号1を使用して、位置H1*、H2、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E、及びG476Aに対応する1つ以上の位置において修飾を導入する工程と、を含み、前記変異体は、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、又は14のいずれかに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも81%、少なくとも82%、少なくとも83%、少なくとも84%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%であるが、100%未満の配列同一性を有し、前記変異体は、α-アミラーゼ活性と、前記親ペプチドと比較して改善した洗浄性能と、を有する、方法。
  14. 洗浄方法、好ましくは、洗濯、又は食器洗浄及び工業洗浄など硬質表面洗浄における、最も好ましくは洗濯物の洗浄のための、請求項1~10のいずれか一項に記載の組成物の使用。
  15. 表面、好ましくは布地を処理する方法であって、
    (i)水と、請求項1~14のいずれか一項に記載の、アミラーゼ活性を有する前記α-アミラーゼ変異体と、洗浄補助剤と、を含む水性洗浄液を形成することと、
    (ii)前記表面を、前記水性洗浄液を用いて、好ましくは5℃~35℃の温度で、又は好ましくは30℃以下の温度で、又は28℃以下、若しくは20℃以下の温度で処理することと、
    (iii)前記表面をすすぐことと、を含む、方法。
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