CN114945664A - α-淀粉酶变体 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及亲本α‑淀粉酶的α‑淀粉酶变体,当与亲本α‑淀粉酶相比时,该亲本α‑淀粉酶的α‑淀粉酶变体具有改善的洗涤性能。本发明还涉及编码这些变体的多核苷酸,包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞,以及产生本发明的变体的方法。

Description

α-淀粉酶变体
序列表的引用
本申请含有计算机可读形式的序列表。该计算机可读形式通过引用并入本文。
技术领域
本发明涉及具有α-淀粉酶活性的α-淀粉酶变体。本发明进一步涉及编码此类变体的多核苷酸,和包含编码此类变体的基因的载体和宿主细胞,其中这些载体和宿主细胞也能够产生此类变体。本发明进一步涉及在家庭清洁或处理,特别是衣物洗涤和餐具洗涤,包括手洗和/或自动衣物洗涤和/或手洗和/或自动餐具洗涤中的用途。本发明特别适用于清洁衣物。
背景技术
α-淀粉酶(α-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶,E.C.3.2.1.1)构成催化淀粉以及其他直链和支链1,4-糖苷寡糖和多糖的水解的一组酶。多年来,它们用于在家庭中使用已为人所共知,包括来自地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)的首先被使用的细菌α-淀粉酶,也称为Termamyl。碱性淀粉酶,例如来自AA560(WO 2000/060060)和来自SP707(Tsukamoto等人,1988,Biochem.Biophys.Res.Comm.[生物化学和生物物理研究通讯]151:25-31所述)的那些可用于洗涤剂中,并且已知修饰这些和其他淀粉酶以改善它们在洗涤剂中的稳定性。例如,WO 96/23873披露了缺失SP707(WO 96/23873的SEQ ID NO:7)的氨基酸181+182或氨基酸183+184以改善此淀粉酶的稳定性。WO 96/23873进一步披露了通过用例如亮氨酸取代M202来修饰SP707淀粉酶以使该分子对氧化保持稳定。
改善淀粉分解酶的性能,尤其是以环境上有利的方式是持续的挑战。出于环境原因,提供有效的淀粉分解酶也日益重要,优选也在通常使用较小体积的水和/或较低温度的快速洗涤循环中。因此,期望具有与亲本多肽相比时表现出改善的特性(例如比活性)的淀粉分解酶。本发明提供了变体多肽,这些变体多肽与其杂合体和/或亲本多肽相比,具有α-淀粉酶活性和改善的特性或酶洗涤益处,例如去除含淀粉的污渍、或比活性。特别优选的淀粉分解酶可以在低温下和/或在较短的洗涤循环中起作用并且同时保留或增加其他所期望的特性如比活性(淀粉分解活性)、稳定性和/或洗涤性能。
因此,本发明的一个目的是提供α-淀粉酶变体,其与亲本多肽相比时表现出改善的特性,例如去除含淀粉的污渍或比活性,并且其可以在低温(如5℃-40℃的温度)下用于洗涤、餐具洗涤和/或清洁过程中。本发明的另一个目的是提供α-淀粉酶变体,其与亲本α-淀粉酶相比或与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14中任一个的α-淀粉酶相比具有改善的洗涤性能。
发明内容
本发明涉及亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体,该变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO.1进行编号,并且其中所述变体与亲本多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
本发明涉及亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体,该变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO.1进行编号,并且其中所述变体与亲本多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有改善的洗涤性能,其中与亲本多肽相比改善的洗涤性能,其中所述亲本多肽优选为SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3。
本发明还涉及编码根据本发明的α淀粉酶变体的多核苷酸、包含编码根据本发明的变体的多核苷酸的核酸构建体、包含编码根据本发明的变体的多核苷酸的表达载体、或包含编码根据本发明的变体的多核苷酸的宿主细胞。
本发明还涉及产生α-淀粉酶变体的方法,该方法包括:(a)在适合于该变体表达的条件下培养本发明的宿主细胞;和(b)回收该变体。
本发明进一步涉及一种获得α-淀粉酶变体的方法,该方法包括在对应于以下位置的一个或多个位置处向亲本α-淀粉酶中引入修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO.1进行编号,其中每个修饰独立地是取代或缺失,并且该变体具有α-淀粉酶活性;以及回收该变体。
定义
根据此详细描述,以下定义适用。注意,单数形式“一种/个(a/an)”以及“该/这些(the)”包括复数个指示物,除非上下文中另外明确指明。
本文提及“约”值或参数包括针对该值或参数本身的方面。例如,提及“约X”的描述包括方面“X”。
在整个本文件中,以范围形式表达的值应以灵活的方式解释为不仅包括明确列举为范围界限的数值,而且还包括涵盖在该范围内的所有单独数值或子范围,如同明确列举每个数值和子范围。例如,“约0.1%至约5%”或“约0.1%至5%”的范围应解释为不仅包括约0.1%至约5%,而且还包括在所示范围内的单独值(例如1%、2%、3%和4%)和子范围(例如0.1%至0.5%、1.1%至2.2%、3.3%至4.4%)。除非另有说明,否则陈述“约X至Y”具有与“约X至约Y”相同的含义。同样,陈述“约X、Y或约Z”具有与“约X、约Y或约Z”相同的含义,除非另有说明。
除非另外定义或由上下文明确指示,否则本文所用的全部技术与科学术语具有如本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
A、B和C结构域:α-淀粉酶的结构包含三个不同结构域A、B和C,参见例如Machius等人,1995,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]246:545-559。术语“结构域”意指形成整个分子的不同且独立的子结构的多肽区域。α-淀粉酶由携带活性位点的β/α-8桶状结构(其表示为A结构域)、β-折叠3和α-螺旋3之间相当长的环状结构(其表示为B结构域)和C结构域,并且在某些情况下还由碳水化合物结合结构域组成(例如,WO 2005/001064;Machius等人,同上)。
α-淀粉酶的结构域可以通过结构分析来确定,例如通过使用晶体学技术。用于确定α-淀粉酶的结构域的可替代方法是通过该α-淀粉酶与另一个已经确定结构域的α-淀粉酶的氨基酸序列的序列比对。与例如已经确定了B结构域的α-淀粉酶中的B结构域序列比对的序列可以视为给定α-淀粉酶的B结构域。
等位基因变体:术语“等位基因变体”意指占据同一染色体基因座的基因的两种或更多种替代形式中的任一种。等位基因变异通过突变而自然产生,并且可以导致群体内部的多态性。基因突变可以是沉默的(所编码的多肽无变化)或可以编码具有改变的氨基酸序列的多肽。多肽的等位基因变体是由基因的等位基因变体编码的多肽。
α-淀粉酶:术语“α-淀粉酶”与术语“具有α-淀粉酶活性的多肽”是同义的。“α-淀粉酶活性”是指α-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶(E.C.3.2.1.1)的活性,其构成催化淀粉以及其他直链和支链1,4-糖苷寡糖和多糖的水解的一组酶。因此,如本文使用的术语“α-淀粉酶”是指具有α-淀粉酶活性的酶(酶类:EC 3.2.1.1),其水解大的、经α键连接的多糖(如淀粉和糖原)的α键,产生葡萄糖和麦芽糖。术语“α-淀粉酶”和“淀粉酶”可以可互换地使用并且构成本文相同的含义和目的。出于本发明的目的,根据下文小标题方法中所述的程序测定α-淀粉酶活性。在一方面,本发明的α-淀粉酶与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14的多肽的氨基酸序列具有至少20%、例如至少40%、至少50%、至少60%、例如至少65%、例如至少70%、例如至少75%、例如至少80%、例如约85%、约90%、约91%、约92%、约93%、约94%、约95%、约96%、约97%、约98%、约99%,但小于100%的序列同一性。
氨基酸:如本文使用的术语“氨基酸”是指标准二十种遗传编码的氨基酸及其相应的处于“d”型(与天然“l”型进行对比)的立体异构体、ω-氨基酸、其他天然存在的氨基酸、非常规氨基酸(例如α,α-双取代的氨基酸、N-烷基氨基酸等)和化学衍生化的氨基酸。可以通过与功能性侧基团反应来实现一个或多个氨基酸的化学衍生物。此类衍生的分子包括例如,其中游离氨基基团已被衍生化以形成胺盐酸盐、对甲苯磺酰基基团、羧基苯氧基基团、叔丁氧基羰基基团、氯乙酰基基团或甲酰基基团的那些分子。游离羧基基团可被衍生化以形成盐、甲酯和乙酯或其他类型的酯和酰肼。游离羟基基团可被衍生化以形成O-酰基或O-烷基衍生物。作为化学衍生物还包括那些含有二十种标准氨基酸的天然存在的氨基酸衍生物的肽。例如:4-羟脯氨酸可以取代脯氨酸;5-羟赖氨酸可以取代赖氨酸;3-甲基组氨酸可以取代组氨酸;高丝氨酸可以取代丝氨酸并且鸟氨酸取代赖氨酸。只要维持必要的活性,衍生物也包括含有一个或多个添加或缺失的肽。其他包括的修饰是酰胺化、氨基末端酰化(例如乙酰化或巯基乙酸酰胺化)、末端羧基酰胺化(例如用氨或甲胺)、和类似的末端修饰。
当明确列举氨基酸,如“丙氨酸”或“Ala”或“A”时,除非另有明确说明,否则该术语是指l-丙氨酸和d-丙氨酸两者。其他非常规氨基酸也可以是本发明多肽的适合组分,只要所需功能特性由多肽保留即可。对于所示的肽,适当时,每个编码的氨基酸残基由单字母代号表示,对应于常规氨基酸的普通名称。在一个实施例中,本发明的多肽包含l-氨基酸或由其组成。
催化结构域:术语“催化结构域”意指含有酶的催化机构的该酶的区域。
cDNA:术语“cDNA”意指可以通过从成熟的剪接的mRNA分子逆转录制备的DNA分子,该mRNA分子是从真核细胞中获得。cDNA缺少可存在于相应基因组DNA中的内含子序列。初始的初级RNA转录物是mRNA的前体,其要通过一系列的步骤(包括剪接)进行加工,然后呈现为成熟的剪接的mRNA。
编码序列:术语“编码序列”意指多核苷酸,该多核苷酸直接规定了变体的氨基酸序列。编码序列的边界通常由开放阅读框确定,该开放阅读框通常以起始密码子(如ATG、GTG或TTG)开始并且以终止密码子(如TAA、TAG或TGA)结束。编码序列可以是DNA、cDNA、合成、或重组的多核苷酸。
控制序列:术语“控制序列”意指对于表达编码本发明的变体的多核苷酸所必需的核酸序列。每个控制序列对于编码该变体的多核苷酸来说可以是天然的(即,来自相同基因)或外源的(即,来自不同基因),或相对于彼此是天然的或外源的。此类控制序列包括但不限于前导序列、多腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列、以及转录终止子。最少,控制序列包括启动子、以及转录和翻译终止信号。出于引入促进控制序列与编码变体的多核苷酸的编码区域连接的特异性限制位点的目的,控制序列可以提供有接头。
对应于:如本文使用的,术语“对应于”是指确定序列中的特定氨基酸(其中参考了具体氨基酸序列)的方式。例如出于本发明的目的,当参考特定氨基酸位置时,技术人员会能够将另一氨基酸序列与所述已经被参考的氨基酸序列进行比对,从而确定哪一个特定氨基酸可能在所述另一氨基酸序列中是感兴趣的。已经在本文其他地方描述了另一氨基酸序列与例如SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14中所示的序列或本文列出的任何其他序列的比对。可使用可替代的比对方法,并且这些方法为本领域技术人员所熟知。
餐具洗涤组合物:如本文使用的术语“餐具洗涤组合物”是指用于清洁餐具的所有形式的组合物。餐具洗涤组合物是液体餐具洗涤组合物、粉末状餐具洗涤组合物,任选地其中组合物呈单位剂量的形式。单位剂量餐具洗涤组合物可包含多于一个隔室,多个隔室包含粉末、液体或其组合。
酶洗涤益处:本文使用的术语“酶洗涤益处”是指可将一种酶添加至洗涤剂中与不具有该酶的同一洗涤剂相比的有利作用。可能由酶提供的重要洗涤益处是污渍去除伴随在洗涤和/或清洁之后无可见污垢或几乎无可见污垢、预防或减少在洗涤过程中释放的污垢再沉积(一种又称作抗再沉积的作用)、完全或部分地恢复纺织品的白度(一种又称作增白的作用),其中这些纺织品最初是白色的,但是在反复使用和洗涤后获得淡灰或淡黄色外观。不直接与污垢的催化污渍去除或其再沉积的预防相关的纺织品护理益处对于酶洗涤益处而言也可能是重要的。此类纺织品护理益处的实例是防止或减少染料从一织物转移至另一织物或同一织物的另一部分(也被称作染料转移抑制或抗返染的效果),从织物表面去除突出或断裂的纤维以减少起球倾向或去除已经存在的球或绒毛(也被称作抗起球的效果),改善织物柔软性,使织物的颜色澄清以及去除陷在织物或服装的纤维中的微粒状污垢。酶法漂白是一种另外的酶洗涤益处,其中通常将催化活性用于催化漂白组分(如过氧化氢或其他过氧化物)的形成。
表达:术语“表达”包括涉及产生变体的任何步骤,包括但不限于:转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰、以及分泌。
表达载体:术语“表达载体”意指包含编码变体的多核苷酸并可操作地连接至提供其表达的另外的核苷酸的线性或环形DNA分子。
片段:如本文使用的术语“片段”是指在本文披露的任何一个亲本序列(如SEQ IDNO:1-14)的成熟多肽的氨基和/或羧基末端缺少一个或多个(例如几个)氨基酸的多肽;其中该片段具有α-淀粉酶活性。在一方面,片段含有SEQ ID NO:1-14的至少200个连续的氨基酸残基,例如SEQ ID NO:1-14的至少300个连续的氨基酸残基、或至少350个连续的氨基酸残基、或至少400个连续的氨基酸残基、或至少450个连续的氨基酸残基。
融合多肽:如本文使用的术语“融合多肽”是指包含源自超过一种(例如两种、三种或四种)物种的氨基酸序列的多肽。这样的融合多肽可通过本领域技术人员所熟知的分子技术产生。本发明的融合多肽具有α-淀粉酶活性。特别地,本发明的融合多肽包含例如一种α-淀粉酶的A和C结构域,以及来自另一种α-淀粉酶的B结构域。杂合多肽(或“杂合体”)和融合多肽可以互换使用并且构成相同的含义和目的。
硬表面清洁:如本文使用的,术语“硬表面清洁”是指清洁任何硬表面,包括地板、屋顶、汽车、厨房或浴室表面,以及餐具清洁(餐具洗涤)。
异源多核苷酸:术语“异源多核苷酸”在本文定义为对宿主细胞不是天然的多核苷酸;天然多核苷酸,其中对编码区已进行了结构修饰;天然多核苷酸,其表达由于通过重组DNA技术(例如不同的(外源)启动子)操纵DNA而被定量改变;或宿主细胞中的一种天然多核苷酸,该宿主细胞具有该多核苷酸的一个或多个额外拷贝以定量改变表达。“异源基因”是包含异源多核苷酸的基因。
异源:对于宿主细胞,术语“异源的”意指多肽或核酸不是天然存在于宿主细胞中。对于多肽或核酸,术语“异源”意指控制序列(例如多肽或核酸的启动子或结构域)不与该多肽或核酸天然地相关联,即,控制序列是来自编码变体的基因以外的基因。
高严格条件:术语“高严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言,遵循标准DNA印迹程序,在42℃,于5X SSPE、0.3%SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子DNA和50%甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。最后在65℃使用2X SSC、0.2%SDS将运载体材料洗涤三次,每次15分钟。
宿主细胞:术语“宿主细胞”意指其中引入了包含本发明多核苷酸的核酸构建体或表达载体的任何微生物或植物细胞。引入方法包括但不限于原生质体融合、转染、转化、电穿孔、接合和转导。在一些实施例中,宿主细胞是分离的重组宿主细胞,其与至少一种其他组分(包括但不限于蛋白质、核酸、细胞等)部分或完全分离。
杂交:术语“杂交”意指使用标准DNA印迹程序将核酸的基本上互补的链配对。杂交可以在中、中-高、高或非常高严格条件下进行。中严格条件意指在42℃,于5X SSPE、0.3%SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子DNA和35%甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时,随后在55℃使用0.2X SSC、0.2%SDS洗涤三次,每次15分钟。中-高严格条件意指在42℃,于5XSSPE、0.3%SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子DNA和35%甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时,随后在60℃使用0.2X SSC、0.2%SDS洗涤三次,每次15分钟。高严格条件意指在42℃,于5X SSPE、0.3%SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子DNA和50%甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时,随后在65℃使用0.2X SSC、0.2%SDS洗涤三次,每次15分钟。非常高严格条件意指在42℃,于5X SSPE、0.3%SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子DNA和50%甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时,随后在70℃使用0.2X SSC、0.2%SDS洗涤三次,每次15分钟。
改善的特性:术语“改善的特性”在本文中定义为与相对于亲本α-淀粉酶有所改善的变体相关的特征。这种改善的特性包括但不限于增加的淀粉分解活性、增加的催化效率、增加的催化速率、增加的化学稳定性、增加的氧化稳定性、增加的pH活性、增加的pH稳定性、增加的比活性、增加的底物结合、增加的底物切割、增加的底物特异性、增加的底物稳定性、增加的表面特性、增加的热活性、增加的热稳定性、增加的洗涤性能(如去污性能,例如对含淀粉的污垢的性能)、污渍去除、抗灰化、稳定性(例如热稳定性、pH稳定性或在包括螯合剂在内的助洗剂存在下的稳定性、在粉末、液体或凝胶洗涤剂配制品或餐具洗涤组合物中的稳定性)、改变的温度依赖性性能以及活性曲线、pH活性、底物特异性、产物特异性和化学稳定性。
改善的洗涤性能:术语“改善的洗涤性能”在本文中定义为相对于亲本淀粉酶或相对于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3中任一个的α-淀粉酶的洗涤性能,例如通过增加的污渍去除显示出淀粉酶洗涤性能的改善。改善的洗涤性能可以通过比较所谓的强度值来测量。优选地根据实例确定改善的洗涤性能。如果在实例中列出的一种或多种条件下改善因子(IF)高于1.0,优选地高于1.05,则洗涤性能得到了改善。实例部分中描述了这些洗涤条件。术语“洗涤性能”包括通常清洁例如硬表面清洁,如在餐具洗涤中,但还包括在纺织品如衣物上的洗涤性能,并且还包括工业清洁和机构清洁。可以通过比较如在本文的定义中描述的δ强度来测量改善的洗涤性能。
分离的:术语“分离的”意指处于自然界中不存在的形式或环境中的物质。分离的物质的非限制性实例包括(1)任何非天然存在的物质,(2)包括但不限于任何酶、变体、核酸、蛋白质、肽或辅因子的任何物质,该物质至少部分地从与其性质相关的一种或多种或所有天然存在的成分中去除;(3)相对于自然界中发现的物质通过人工修饰的任何物质;或(4)通过增加该物质相对于与其本质相关的其他组分的量而修饰的任何物质(例如,编码该物质的基因的多拷贝;比与编码该物质的基因天然相关联的启动子更强的启动子的使用)。分离的物质可以存在于发酵液样品中。在一方面,本发明涉及分离的α-淀粉酶变体。
强度值:洗涤性能被测量为亮度,表达为当用白光照亮时从样品反射的光的强度。当样品带有污渍时,反射光的强度低于干净样品的反射光的强度。因此,反射光的强度可以用于测量洗涤性能,其中更高的强度值与更高的洗涤性能相关。用专业平板扫描仪(KodakiQsmart,柯达(Kodak))进行颜色测量,该扫描仪用于捕获所洗涤纺织品的图像。为了从扫描的图像中提取光强度的值,将来自图像的24-位像素值转化为红色、绿色以及蓝色(RGB)的值。通过将RGB值作为向量进行加和并且然后取所得向量的长度来计算强度值(Int):
Figure BDA0003686175180000101
低严格条件:术语“低严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言,遵循标准DNA印迹程序,在42℃,于5X SSPE、0.3%SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子DNA和25%甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。运载体材料最终使用0.2X SSC、0.2%SDS,在50℃下洗涤三次,每次15分钟。
低温:“低温”是5℃-40℃、或5℃-35℃、或5℃-30℃、或甚至5℃-25℃、或5℃-20℃、或5℃-15℃、或5℃-10℃的温度。优选地,“低温”是10℃-35℃、优选10℃-30℃、或10℃-25℃、或10℃-20℃的温度。
成熟多肽编码序列:术语“成熟多肽编码序列”意指编码具有α-淀粉酶活性的成熟多肽的多核苷酸。
成熟多肽:术语“成熟多肽”意指在翻译和任何翻译后修饰(如N末端加工、C末端截短、糖基化、磷酸化等)之后处于其最终形式的多肽。本领域已知宿主细胞可以产生由相同多核苷酸表达的两种或更多种不同成熟多肽(即,具有不同C末端和/或N末端氨基酸)的混合物。
中严格条件:术语“中严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言,遵循标准DNA印迹程序,在42℃,于5X SSPE、0.3%SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子DNA和35%甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。最后在55℃使用2X SSC、0.2%SDS将运载体材料洗涤三次,每次15分钟。
中-高严格条件:术语“中-高严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言,遵循标准DNA印迹程序,在42℃,于5X SSPE、0.3%SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子DNA和35%甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。最后在60℃使用2X SSC、0.2%SDS将运载体材料洗涤三次,每次15分钟。
修饰:在本发明的多肽的上下文中,术语“修饰”意指通过用不同的氨基酸取代、通过插入氨基酸、或通过缺失(优选地通过至少一个缺失)而改变在参考氨基酸序列(例如SEQID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14)内的一个或多个氨基酸。术语“修饰”、“改变”和“突变”可以互换地使用并且构成相同的含义和目的。
突变体:术语“突变体”意指编码变体的多核苷酸。
天然的:术语“天然的”意指天然存在于宿主细胞中的核酸或多肽。
核酸构建体:术语“核酸构建体”意指单链或双链的核酸分子,该核酸分子是从天然存在的基因中分离的,或以原本不存在于自然界中的方式被修饰成含有核酸的区段,或者是合成的,该核酸分子包含一个或多个控制序列。当核酸构建体含有表达本发明编码序列所需要的控制序列时,术语核酸构建体与术语“表达盒”是同义的。
可操作地连接:术语“可操作地连接”意指一种构型,在该构型中控制序列相对于多核苷酸的编码序列放置在适当位置处,这样使得控制序列指导编码序列的表达。
亲本或亲本α-淀粉酶:如本文使用的术语“亲本”α-淀粉酶意指进行修饰以产生本发明的变体α-淀粉酶的α-淀粉酶。该术语还指本发明的变体与之进行比较的多肽。亲本可以是天然存在(野生型)多肽,或者它可以甚至是通过任何适合的手段制备的其变体。例如,亲本蛋白质可以是在氨基酸序列方面已经进行过修饰或改变的天然存在多肽的变体。因此,亲本α-淀粉酶可具有一个或多个(或一个或几个)氨基酸取代、缺失和/或插入。因此,亲本α-淀粉酶可为亲本α-淀粉酶的变体。亲本也可以是等位基因变体,其是由占据相同染色体基因座的基因的两种或更多种可替代形式中的任一种编码的多肽。如本文使用的术语“亲本”或“亲本α-淀粉酶”是指SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14的α-淀粉酶,或与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14的任一多肽具有至少60%序列同一性的任何α-淀粉酶。亲本α-淀粉酶也可以是包含SEQ ID NO:1-14的片段的多肽。亲本可以是细菌或真菌α-淀粉酶,优选细菌α-淀粉酶。具有SEQ ID NO:1、2或3的淀粉酶可以例如是本发明必需的亲本或杂合多肽。
纯化的:术语“纯化的”意指基本上不含其他组分的核酸或多肽,如通过本领域熟知的分析技术(例如,在电泳凝胶、色谱洗脱液和/或经过密度梯度离心的培养基中,纯化的多肽或核酸可形成离散的条带)所确定。纯化的核酸或多肽是至少约50%纯的,通常是至少约60%、约65%、约70%、约75%、约80%、约85%、约90%、约91%、约92%、约93%、约94%、约95%、约96%、约97%、约98%、约99%、约99.5%、约99.6%、约99.7%、约99.8%或更加纯的(例如,以摩尔计的重量百分比)。在相关意义上,当在应用纯化或富集技术之后存在分子的浓度的大幅度增加时,组合物富集了分子。术语“富集”是指化合物、多肽、细胞、核酸、氨基酸或其他指定材料或组分以高于起始组合物的相对或绝对浓度存在于组合物中。
重组:当用于提及细胞、核酸、蛋白质或载体时,术语“重组”意指已经从其天然状态经修饰。因此,例如,重组细胞表达在天然(非重组)形式的细胞内未发现的基因,或与在自然界中发现的相比,以不同水平表达或在不同条件下表达天然基因。重组核酸与天然序列的差异在于一个或多个核苷酸和/或与异源序列(例如,表达载体中的异源启动子)可操作地连接。重组蛋白与天然序列的差异可以在于一个或多个氨基酸和/或与异源序列融合。包含编码多肽的核酸的载体是重组载体。术语“重组”与“遗传修饰的”和“转基因的”同义。
序列同一性:两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的关联度通过参数“序列同一性”来描述。
出于本发明的目的,使用如在EMBOSS软件包(EMBOSS:欧洲分子生物学开放软件套件(The European Molecular Biology Open Software Suite),Rice等人,2000,TrendsGenet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选5.0.0版本或更新版本)的尼德尔程序中所实施的尼德曼-翁施算法(Needleman-Wunsch algorithm)(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列同一性。使用的参数可以是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5、以及EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)取代矩阵。将标记为“最长同一性”的尼德尔的输出(使用非简化选项获得)用作同一性百分比并且计算如下:
(相同的残基x100)/(比对长度-比对中的空位总数)
出于本发明的目的,使用如在EMBOSS软件包(EMBOSS:欧洲分子生物学开放软件套件,Rice等人,2000,同上)(优选5.0.0版本或更新版本)的尼德尔程序所实施的尼德曼-翁施算法(Needleman和Wunsch,1970,同上)来确定两个脱氧核苷酸序列之间的序列同一性。所使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5、和EDNAFULL(NCBI NUC4.4的EMBOSS版)取代矩阵。将标记为“最长同一性”的尼德尔的输出(使用非简化选项获得)用作同一性百分比并且计算如下:
(相同的脱氧核糖核苷酸x100)/(比对长度-比对中的空位总数)
信号肽:术语“信号肽”在本文中定义为以符合阅读框的方式连接(融合)至具有生物活性的多肽的氨基末端且指导该多肽进入细胞的分泌途径的肽。信号序列可以使用本领域已知的技术来测定(参见,例如,Zhang和Henzel,2004,Protein Science[蛋白质科学]13:2819-2824)。
淀粉结合结构域:术语“淀粉结合结构域(SBD)或碳水化合物结合模块(CBM)”在本文中可互换使用。SBD可分为九个CBM家族。作为能源来源,淀粉被大量各种淀粉分解酶降解。然而,这些淀粉分解酶中只有约10%能够结合和降解生淀粉。这些酶通常具有称为淀粉结合结构域的独特序列结构模块,该淀粉结合结构域介导与淀粉颗粒的附接。SBD是指优先与淀粉(多糖)底物或麦芽糖、α-环糊精、β-环糊精和γ-环糊精等结合的氨基酸序列。它们通常是在约10%的微生物淀粉分解酶中发现的约100个氨基酸残基的基序。
子序列:术语“子序列”意指从成熟多肽编码序列的5'和/或3'端缺失一个或多个(例如几个)核苷酸的多核苷酸;其中该子序列编码具有α-淀粉酶活性的片段。
纺织品护理益处:被定义为不直接与污垢的催化污渍去除或其再沉积的预防相关的、如本文使用的术语“纺织品护理益处”对于酶洗涤益处而言也是重要的。此类纺织品护理益处的实例是预防或减少染料从一个纺织品转移至另一个纺织品或同一纺织品的另一个部分(染料转移抑制),从纺织品表面去除突出或断裂的纤维以减少起球倾向或去除已经存在的绒球或绒毛(抗起球),改善纺织品柔软性,使纺织品的颜色澄清以及去除陷在纺织品的纤维中的微粒状污垢。酶漂白是一种另外的酶洗涤益处,其中通常将催化活性用于催化漂白组分(例如过氧化氢或其他过氧化物或其他漂白种类)的形成。
变体:如本文使用的术语“变体”意指,具有α-淀粉酶活性的、在一个或多个(例如几个)位置包含修饰(即取代、插入和/或缺失)的多肽。取代意指将占据一个位置的氨基酸用不同的氨基酸替代;缺失意指去除占据某一位置的氨基酸;并且插入意指邻近占据位置的氨基酸并紧跟它添加一个氨基酸。变体具有SEQ ID NO:1-14的一种或多种多肽的α-淀粉酶活性的至少20%,例如至少40%、至少50%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、约85%、约90%、约91%、约92%、约93%、约94%、约95%、约96%、约97%、约98%、约99%,但小于100%。
非常高严格条件:术语“非常高严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言,遵循标准DNA印迹程序,在42℃,于5X SSPE、0.3%SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子DNA和50%甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。最后在70℃使用2X SSC、0.2%SDS将运载体材料洗涤三次,每次15分钟。
非常低严格条件:术语“非常低严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言,遵循标准DNA印迹程序,在42℃,于5X SSPE、0.3%SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子DNA和25%甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。最后在45℃使用2X SSC、0.2%SDS将运载体材料洗涤三次,每次15分钟。
洗涤性能:在本发明背景下,使用术语“洗涤性能”作为酶在例如衣物或硬表面清洁如餐具洗涤期间去除存在于待清洁的物体上的淀粉或含淀粉污渍的能力。术语“洗涤性能”包括通常清洁例如硬表面清洁,如在餐具洗涤中,但还包括在纺织品如衣物上的洗涤性能,并且还包括工业清洁和机构清洁。该洗涤性能可以通过计算所谓的强度值来量化。
野生型酶:术语“野生型”α-淀粉酶意指由天然存在的微生物(例如自然界中发现的细菌、酵母或丝状真菌)表达的α-淀粉酶。当亲本酶不是变体酶时,术语“野生型酶”和“亲本酶”可互换地使用。
命名法
出于本发明的目的,命名[Y/F]意指在此位置的氨基酸可以是酪氨酸(Try,Y)或苯丙氨酸(Phe,F)。同样,命名法[V/G/A/I]意指在此位置的氨基酸可以是缬氨酸(Val,V)、甘氨酸(Gly,G)、丙氨酸(Ala,A)或异亮氨酸(Ile,I),对于如本文所述的其他组合,依次类推。除非另外指出,否则氨基酸X被这样定义,使得它可以是20种天然氨基酸中的任一种。
变体命名惯例
出于本发明的目的,使用在SEQ ID NO:1中披露的多肽来确定另一种α-淀粉酶中的相应氨基酸残基。可替代地,可使用在SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3中披露的多肽来确定另一种α-淀粉酶中的相应氨基酸残基。将另一种α-淀粉酶的氨基酸序列与SEQ ID NO:1中披露的多肽进行比对,并且基于该比对,使用如在EMBOSS软件包(EMBOSS:欧洲分子生物学开放软件套件,Rice等人,2000,Trends Genet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选3.0.0版本或更新版本)的尼德尔程序中所实施的尼德曼-翁施算法(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453)来确定对应于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3中披露的多肽中的任何氨基酸残基的氨基酸位置编号。
可以通过使用几个计算机程序,使用其相应默认参数比对多个多肽序列来确定在另一种α-淀粉酶中的对应氨基酸残基的鉴定,这些计算机程序包括但不限于MUSCLE(通过对数预期的多序列比较;版本3.5或更新版本;Edgar,2004,Nucleic Acids Research[核酸研究]32:1792-1797),MAFFT(版本6.857或更新版本;Katoh和Kuma,2002,Nucleic AcidsResearch[核酸研究]30:3059-3066;Katoh等人,2005,Nucleic Acids Research[核酸研究]33:511-518;Katoh和Toh,2007,Bioinformatics[生物信息学]23:372-374;Katoh等人,2009,Methods in Molecular Biology[分子生物学方法]537:39-64;Katoh和Toh,2010,Bioinformatics[生物信息学]26:1899-1900)以及采用ClustalW的EMBOSS EMMA(1.83或更新版本;Thompson等人,1994,Nucleic Acids Research[核酸研究]22:4673-4680)。
当其他酶与SEQ ID NO:1的多肽相背离这样使得传统的基于序列的比较方法不能检测其关系时(Lindahl和Elofsson,2000,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]295:613-615),可使用其他成对序列比较算法。在基于序列的搜索中较高的敏感度可使用搜索程序来获得,这些搜索程序利用多肽家族的概率表现(谱)来搜索数据库。例如,PSI-BLAST程序通过迭代数据库搜索过程来产生多个谱,并且能够检测远距离同源物(Atschul等人,1997,Nucleic Acids Res.[核酸研究]25:3389-3402)。
如果多肽的家族或超家族具有在蛋白结构数据库中的一个或多个代表,可以实现甚至更高的敏感度。程序例如GenTHREADER(Jones,1999,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]287:797-815;McGuffin和Jones,2003,Bioinformatics[生物信息学]19:874-881)利用来自多种来源(PSI-BLAST、二级结构预测、结构比对谱、以及溶剂化势)的信息作为预测查询序列的结构折叠的神经网络的输入。类似地,Gough等人,2000,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]313:903-919的方法可用于将未知结构的序列与存在于SCOP数据库中的超家族模型进行比对。这些比对进而可以用于产生多肽的同源性模型,并且使用出于该目的而开发的多种工具可以评估此类模型的准确度。
对于已知结构的蛋白质,几种工具和资源可用于检索并产生结构比对。例如,蛋白质的SCOP超家族已经在结构上进行比对,并且那些比对是可访问且可下载的。可以使用多种算法如距离比对矩阵(Holm和Sander,1998,Proteins[蛋白质]33:88-96)或组合延伸(Shindyalov和Bourne,1998,Protein Engineering[蛋白质工程]11:739-747)比对两种或更多种蛋白质结构,并且这些算法的实施可以另外用于查询具有目的结构的结构数据库,以便发现可能的结构同源物(例如,Holm和Park,2000,Bioinformatics[生物信息学]16:566-567)。
在描述变体中,以下所述的命名法适于方便参考。采用了已接受的IUPAC单字母或三字母的氨基酸缩写。
取代:对于氨基酸取代,使用以下命名法:原始氨基酸、位置、取代的氨基酸。相应地,将在位置226处的苏氨酸被丙氨酸取代表示为“Thr226Ala”或“T226A”。在给定位置处的氨基酸可以用任何其他氨基酸取代的情况下,将其表示为T226ACDEFGHIKLMNPQRSWVY。因此,这意指位置226处的苏氨酸可以被选自A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、W、V或Y的组的一个氨基酸取代。同样地,在给定位置处的氨基酸可以被选自特定的氨基酸组的一个氨基酸取代的情况下,例如位置226处的苏氨酸可以被酪氨酸、苯丙氨酸或组氨酸中的任一个取代的情况下,将其表示为T226YFH。给定位置处的不同改变还可以由一个逗号分开,例如“Arg170Tyr,Glu”或“R170Y,E”代表位置170处的精氨酸被酪氨酸或谷氨酸取代。因此,“Tyr167Gly,Ala+Arg170Gly,Ala”表示以下变体:“Tyr167Gly+Arg170Gly”、“Tyr167Gly+Arg170Ala”、“Tyr167Ala+Arg170Gly”、和“Tyr167Ala+Arg170Ala”。
多个突变通过加号(“+”)分开,例如“Gly205Arg+Ser411Phe”或“G205R+S411F”代表在位置205和位置411处的甘氨酸(G)和丝氨酸(S)分别被精氨酸(R)和苯丙氨酸(F)取代。
缺失.对于氨基酸缺失,使用以下命名法:原始氨基酸、位置、*。相应地,将在位置195处的甘氨酸的缺失表示为“Gly195*”或“G195*”。多个缺失由加号(“+”)分隔,例如,“Gly195*+Ser411*”或“G195*+S411*”。
插入.对于氨基酸插入,使用以下命名法:原始氨基酸、位置、原始氨基酸、插入的氨基酸。因此,将在位置195处的甘氨酸之后插入赖氨酸表示为“Gly195GlyLys”或“G195GK”。多个氨基酸的插入被表示为[原始氨基酸、位置、原始氨基酸、插入的氨基酸#1、插入的氨基酸#2;等]。例如,将在位置195处的甘氨酸之后插入赖氨酸和丙氨酸表示为“Gly195GlyLysAla”或“G195GKA”。
在此类情况下,通过将小写字母添加至在所插入的一个或多个氨基酸残基之前的氨基酸残基的位置编号而对所插入的一个或多个氨基酸残基进行编号。在以上实例中,该序列因此会是:
亲本: 变体:
195 195 195a 195b
G G-K-A
多个改变.包含多个改变的变体由加号(“+”)分开,例如“Arg170Tyr+Gly195Glu”或者“R170Y+G195E”代表在位置170和位置195处的精氨酸和甘氨酸分别被酪氨酸和谷氨酸取代。
具体实施方式
亲本α-淀粉酶
本发明涉及具有淀粉酶活性的多肽,其中所述多肽是融合(杂合)多肽。
本发明提供了具有α-淀粉酶活性的多肽,该多肽包含与SEQ ID NO:1、2、3、4或5中任一个的A结构域具有至少60%序列同一性的A结构域,与SEQ ID NO:1、2、10、11或12中任一个的B结构域具有至少60%序列同一性的B结构域,和与SEQ ID NO:1、2、3、4或5中任一个的C结构域具有至少60%序列同一性的C结构域。
本发明包含具有α-淀粉酶活性的亲本多肽的杂合α-淀粉酶,该杂合α-淀粉酶包含A结构域、B结构域和C结构域,其中所述杂合体是融合多肽。
在实施例中,A结构域与SEQ ID NO:1的A结构域具有至少60%序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
在实施例中,A结构域与SEQ ID NO:2的A结构域具有至少60%序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
在实施例中,A结构域与SEQ ID NO:3的A结构域具有至少60%序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
在实施例中,A结构域与SEQ ID NO:4的A结构域具有至少60%序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
在实施例中,A结构域与SEQ ID NO:5的A结构域具有至少60%序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
在实施例中,B结构域与SEQ ID NO:1的B结构域具有至少60%序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
在实施例中,B结构域与SEQ ID NO:2的B结构域具有至少60%序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
在实施例中,B结构域与SEQ ID NO:10的B结构域具有至少60%序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
在实施例中,B结构域与SEQ ID NO:11的B结构域具有至少60%序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
在实施例中,B结构域与SEQ ID NO:12的B结构域具有至少60%序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
在实施例中,C结构域与SEQ ID NO:1的C结构域具有至少60%序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
在实施例中,C结构域与SEQ ID NO:2的C结构域具有至少60%序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
在实施例中,C结构域与SEQ ID NO:3的C结构域具有至少60%序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
在实施例中,C结构域与SEQ ID NO:4的C结构域具有至少60%序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
在实施例中,C结构域与SEQ ID NO:5的C结构域具有至少60%序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
α-淀粉酶可以通过用另一种α-淀粉酶的B结构域或其部分取代一种α-淀粉酶的B结构域或其部分来产生。α-淀粉酶也可以通过用另一种α-淀粉酶的A和C结构域或其部分取代一种α-淀粉酶的A和C结构域或其部分来产生。
对于其中B结构域已经被确定为氨基酸残基109-206的芽孢杆菌属α-淀粉酶(SEQID NO:4),要被另一种α-淀粉酶的相应序列替代的序列起始于SEQ ID NO:12的位置93-113范围中的位置处并终止于位置195-215范围中的位置处,例如,起始于位置97-109范围中的位置处并终止于位置199-215范围中的位置处,或起始于位置100-106范围中的位置处并终止于位置202-208,特别是位置109-206范围中的位置处。确定芽孢杆菌属α-淀粉酶的A和C结构域分别为氨基酸残基1-108(A1)+207-396(A2)和397-485。本发明的α-淀粉酶可以包含A1结构域,其起始于SEQ ID NO:4的位置1-5范围中的位置处并终止于位置94-114范围中的位置,例如起始于位置1-3范围中的位置处并终止于位置99-110范围中的位置处,或起始于位置1-3中范围内的位置处并终止于位置104-109,特别是位置1-108范围中的位置处。本发明的α-淀粉酶可以包含A2结构域和C结构域,其起始于SEQ ID NO:4的位置201-221范围中的位置处并终止于位置478-514范围中的位置处,例如起始于位置203-211范围中的位置处并终止于位置480-510范围中的位置处,或起始于位置205-216范围内的位置处并终止于位置482-484,特别是位置207-485范围中的位置处。
在一个实施例中,杂合多肽包含SEQ ID NO:1或2中所示的氨基酸序列或由其组成。在另一个实施例中,杂合多肽是SEQ ID NO:1或2的多肽的等位基因变体。
在另一个实施例中,亲本多肽可以包含SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列或由其组成。如本文其他地方所述,亲本多肽可以是具有α-淀粉酶活性并且与SEQ ID NO:1-14中所示的任一个氨基酸序列具有至少60%序列同一性的任何多肽。
在一个实施例中,亲本多肽与SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性,并且该亲本多肽具有α-淀粉酶活性。在一个实施例中,亲本多肽的氨基酸序列与SEQ IDNO:1-14中所示的氨基酸序列相差多达10个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)氨基酸。
根据本发明,1.0的值对应于亲本多肽所观察到的性能。值大于1.0表明与亲本多肽相比,测试的杂合体的性能得到改善。因此,任何>1.0的值指示与亲本多肽相比杂合多肽的特性得到改善,例如比活性增加。
在一方面,杂合多肽是亲本多肽。
亲本α-淀粉酶可以是与SEQ ID No:1-14的任一种多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%但小于100%序列同一性的多肽。
在一方面,亲本与SEQ ID NO:1的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%、或100%序列同一性,该多肽具有α-淀粉酶活性。在一个实施例中,亲本的氨基酸序列与SEQ ID NO:1的多肽相差不超过十个氨基酸,例如相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸以及相差一个氨基酸。
亲本优选地包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列,或由其组成。在一个实施例中,亲本包含SEQ ID NO:1的多肽,或由其组成。在另一个实施例中,亲本是SEQ ID NO:1的多肽的等位基因变体。
在一方面,亲本与SEQ ID NO:2的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%、或100%序列同一性,该多肽具有α-淀粉酶活性。在一个实施例中,亲本的氨基酸序列与SEQ ID NO:2的多肽相差不超过十个氨基酸,例如相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸以及相差一个氨基酸。
亲本优选地包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列,或由其组成。在一个实施例中,亲本包含SEQ ID NO:2的多肽,或由其组成。在另一个实施例中,亲本是SEQ ID NO:2的多肽的等位基因变体。
在一方面,亲本与SEQ ID NO:3的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%、或100%序列同一性,该多肽具有α-淀粉酶活性。在一个实施例中,亲本的氨基酸序列与SEQ ID NO:3的多肽相差不超过十个氨基酸,例如相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸以及相差一个氨基酸。
亲本优选地包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列,或由其组成。在一个实施例中,亲本包含SEQ ID NO:3的多肽,或由其组成。在另一个实施例中,亲本是SEQ ID NO:3的多肽的等位基因变体。
在一方面,亲本与SEQ ID NO:4的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%、或100%序列同一性,该多肽具有α-淀粉酶活性。在一个实施例中,亲本的氨基酸序列与SEQ ID NO:4的多肽相差不超过十个氨基酸,例如相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸以及相差一个氨基酸。
亲本优选地包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列,或由其组成。在一个实施例中,亲本包含SEQ ID NO:4的多肽,或由其组成。在另一个实施例中,亲本是SEQ ID NO:4的多肽的等位基因变体。
在一方面,亲本与SEQ ID NO:5的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%、或100%序列同一性,该多肽具有α-淀粉酶活性。在一个实施例中,亲本的氨基酸序列与SEQ ID NO:5的多肽相差不超过十个氨基酸,例如相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸以及相差一个氨基酸。
亲本优选地包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列,或由其组成。在一个实施例中,亲本包含SEQ ID NO:5的多肽,或由其组成。在另一个实施例中,亲本是SEQ ID NO:5的多肽的等位基因变体。
在一方面,亲本与SEQ ID NO:6的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%、或100%序列同一性,该多肽具有α-淀粉酶活性。在一个实施例中,亲本的氨基酸序列与SEQ ID NO:6的多肽相差不超过十个氨基酸,例如相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸以及相差一个氨基酸。
亲本优选地包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列,或由其组成。在一个实施例中,亲本包含SEQ ID NO:6的多肽,或由其组成。在另一个实施例中,亲本是SEQ ID NO:6的多肽的等位基因变体。
在一方面,亲本与SEQ ID NO:7的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%、或100%序列同一性,该多肽具有α-淀粉酶活性。在一个实施例中,亲本的氨基酸序列与SEQ ID NO:7的多肽相差不超过十个氨基酸,例如相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸以及相差一个氨基酸。
亲本优选地包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列,或由其组成。在一个实施例中,亲本包含SEQ ID NO:7的多肽,或由其组成。在另一个实施例中,亲本是SEQ ID NO:7的多肽的等位基因变体。
在一方面,亲本与SEQ ID NO:8的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%、或100%序列同一性,该多肽具有α-淀粉酶活性。在一个实施例中,亲本的氨基酸序列与SEQ ID NO:8的多肽相差不超过十个氨基酸,例如相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸以及相差一个氨基酸。
亲本优选地包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列,或由其组成。在一个实施例中,亲本包含SEQ ID NO:8的多肽,或由其组成。在另一个实施例中,亲本是SEQ ID NO:8的多肽的等位基因变体。
在一方面,亲本与SEQ ID NO:9的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%、或100%序列同一性,该多肽具有α-淀粉酶活性。在一个实施例中,亲本的氨基酸序列与SEQ ID NO:9的多肽相差不超过十个氨基酸,例如相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸以及相差一个氨基酸。
亲本优选地包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列,或由其组成。在一个实施例中,亲本包含SEQ ID NO:9的多肽,或由其组成。在另一个实施例中,亲本是SEQ ID NO:9的多肽的等位基因变体。
在一方面,亲本与SEQ ID NO:10的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%、或100%序列同一性,该多肽具有α-淀粉酶活性。在一个实施例中,亲本的氨基酸序列与SEQ ID NO:10的多肽相差不超过十个氨基酸,例如相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸以及相差一个氨基酸。
亲本优选地包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列,或由其组成。在一个实施例中,亲本包含SEQ ID NO:10的多肽,或由其组成。在另一个实施例中,亲本是SEQ ID NO:10的多肽的等位基因变体。
在一方面,亲本与SEQ ID NO:11的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%、或100%序列同一性,该多肽具有α-淀粉酶活性。在一个实施例中,亲本的氨基酸序列与SEQ ID NO:11的多肽相差不超过十个氨基酸,例如相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸以及相差一个氨基酸。
亲本优选地包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列,或由其组成。在一个实施例中,亲本包含SEQ ID NO:11的多肽,或由其组成。在另一个实施例中,亲本是SEQ ID NO:11的多肽的等位基因变体。
在一方面,亲本与SEQ ID NO:12的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%、或100%序列同一性,该多肽具有α-淀粉酶活性。在一个实施例中,亲本的氨基酸序列与SEQ ID NO:12的多肽相差不超过十个氨基酸,例如相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸以及相差一个氨基酸。
亲本优选地包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列,或由其组成。在一个实施例中,亲本包含SEQ ID NO:12的多肽,或由其组成。在另一个实施例中,亲本是SEQ ID NO:12的多肽的等位基因变体。
在一方面,亲本与SEQ ID NO:13的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%、或100%序列同一性,该多肽具有α-淀粉酶活性。在一个实施例中,亲本的氨基酸序列与SEQ ID NO:13的多肽相差不超过十个氨基酸,例如相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸以及相差一个氨基酸。
亲本优选地包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列,或由其组成。在一个实施例中,亲本包含SEQ ID NO:13的多肽,或由其组成。在另一个实施例中,亲本是SEQ ID NO:13的多肽的等位基因变体。
在一方面,亲本与SEQ ID NO:14的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%、或100%序列同一性,该多肽具有α-淀粉酶活性。在一个实施例中,亲本的氨基酸序列与SEQ ID NO:14的多肽相差不超过十个氨基酸,例如相差五个氨基酸、相差四个氨基酸、相差三个氨基酸、相差两个氨基酸以及相差一个氨基酸。
亲本优选地包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列,或由其组成。在一个实施例中,亲本包含SEQ ID NO:14的多肽,或由其组成。在另一个实施例中,亲本是SEQ ID NO:14的多肽的等位基因变体。
SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ IDNO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14的氨基酸序列或其片段可被用于设计核酸探针,以根据本领域熟知的方法从不同属或物种的菌株鉴定并克隆编码亲本的DNA。特别地,遵循标准的DNA印迹程序,可将此类探针用于与目的属或物种的基因组或cDNA杂交,以鉴定和分离其中相应的基因。此类探针可明显短于完整序列,但是长度应为至少14个,例如至少25个、至少35个或至少70个核苷酸。优选地,该核酸探针的长度为至少100个核苷酸,例如长度为至少200个核苷酸、至少300个核苷酸、至少400个核苷酸、至少500个核苷酸、至少600个核苷酸、至少700个核苷酸、至少800个核苷酸、或至少900个核苷酸。DNA和RNA探针两者都可使用。典型地将探针进行标记(例如,用32P、3H、35S、生物素、或抗生物素蛋白),用于检测相应基因。此类探针涵盖于本发明中。
可以针对与上文所述的探针杂交并编码亲本的DNA来筛选由此类其他菌株制备的基因组DNA或cDNA文库。来自此类其他菌株的基因组DNA或其他DNA可通过琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳或其他分离技术来分离。可将来自文库的DNA或分离的DNA转移到并固定在硝化纤维素或其他适合的运载体材料上。为了鉴定与亲本或其子序列杂交的克隆或DNA,在DNA印迹中使用运载体材料。
出于本发明的目的,杂交指示多核苷酸在低至非常高严格条件下,与被标记的核苷酸探针杂交,该核苷酸探针对应于编码SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8或其子序列的多核苷酸。可以使用例如X-射线片或本领域已知的任何其他检测手段来检测该探针所杂交的分子。
在一方面,该核酸探针是编码SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8的多肽或其片段的多核苷酸。
对于长度为至少100个核苷酸的长探针而言,非常低至非常高严格条件定义为最佳地遵循标准DNA印迹程序,在42℃在5X SSPE、0.3%SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑精DNA中,以及对于非常低和低严格度在25%甲酰胺中,对于中和中-高严格度在35%甲酰胺中,或对于高和非常高严格度在50%甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。将运载体材料最终使用2X SSC、0.2%SDS在45℃(非常低严格度)、50℃(低严格度)、55℃(中严格度)、60℃(中-高严格度)、65℃(高严格度)、或70℃(非常高严格度)洗涤三次,每次持续15分钟。
对于长度为约15个核苷酸至约70个核苷酸的短探针而言,严格条件定义为最佳地遵循标准DNA印迹程序,在比使用根据Bolton和McCarthy(1962,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]48:1390)的计算所算出的Tm低约5℃至约10℃,在每ml 0.9M NaCl、0.09M Tris-HCl(pH 7.6)、6mM EDTA、0.5%NP-40、1X登哈特氏溶液(Denhardt’ssolution)、1mM焦磷酸钠、1mM磷酸二氢钠、0.1mM ATP、以及0.2mg的酵母RNA中预杂交和杂交12至24小时。将运载体材料最终在比所计算的Tm低5℃至10℃,在6X SCC加0.1%SDS中洗涤一次(持续15分钟)并且使用6X SSC洗涤两次(每次15分钟)。
亲本可以从任何属的微生物中获得。出于本发明的目的,如本文中与给出的来源结合使用,术语“从……获得”应当意指由多核苷酸编码的亲本是由该来源或由其中已经插入来自该来源的多核苷酸的菌株产生的。在一方面,亲本是胞外分泌的。
亲本可以是细菌α-淀粉酶。例如,亲本可以是革兰氏阳性细菌多肽,如芽孢杆菌属、梭菌属(Clostridium)、肠球菌属(Enterococcus)、土芽孢杆菌属(Geobacillus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、乳球菌属(Lactococcus)、大洋芽孢杆菌属(Oceanobacillus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、链球菌属(Streptococcus)、或链霉菌属(Streptomyces)α-淀粉酶,或者革兰氏阴性细菌多肽,如弯曲杆菌属(Campylobacter)、大肠杆菌(E.coli)、黄杆菌属(Flavobacterium)、梭杆菌属(Fusobacterium)、螺杆菌属(Helicobacter)、泥杆菌属(Ilyobacter)、奈瑟氏菌属(Neisseria)、假单胞菌属(Pseudomonas)、沙门氏菌属(Salmonella)、或脲原体属(Ureaplasma)α-淀粉酶。
在一方面,亲本是嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、坚强芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、或苏云金芽孢杆菌α-淀粉酶。
在另一方面,亲本是似马链球菌(Streptococcus equisimilis)、酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)、乳房链球菌(Streptococcus uberis)、或马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi subsp.Zooepidemicus)α-淀粉酶。
在另一方面,亲本是不产色链霉菌(Streptomyces achromogenes)、除虫链霉菌(Streptomyces avermitilis)、天蓝链霉菌(Streptomyces coelicolor)、灰色链霉菌(Streptomyces griseus)、或浅青紫链霉菌(Streptomyces lividans)α-淀粉酶。
在另一方面,亲本是芽孢杆菌属物种α-淀粉酶,例如,SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:14的α-淀粉酶。
应理解的是,对于前述物种,本发明涵盖完全和不完全阶段(perfect andimperfect states),和其他分类学等同物,例如无性型,而与它们已知的物种名无关。本领域的技术人员会容易地识别适当等同物的身份。
这些物种的菌株可以容易地在许多培养物保藏中心为公众所获得,这些培养物保藏中心如美国典型培养物保藏中心(ATCC)、德国微生物和细胞培养物保藏中心(DeutscheSammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH,DSM)、荷兰菌种保藏中心(Centraalbureau Voor Schimmelcultures,CBS)以及美国农业研究服务专利培养物保藏中心北方地区研究中心(NRRL)。
可以使用上述探针,从其他来源包括从自然界(例如,土壤、堆肥、水等)分离的微生物鉴定并获得该亲本或从天然材料(例如,土壤、堆肥、水等)直接获得DNA样品。用于从天然生境中直接分离微生物和DNA的技术是本领域熟知的。随后可以通过类似地筛选另一种微生物的基因组或cDNA文库或混合DNA样品而得到编码亲本的多核苷酸。一旦已经用一种或多种探针检测到编码亲本的多核苷酸,则可通过利用对本领域的普通技术人员来说已知的技术来分离或克隆该多核苷酸(参见例如,Sambrook等人,1989,同上)。
亲本可以是杂合多肽,其中一个多肽的一部分融合在另一个多肽的一部分的N末端或C末端处。
亲本还可为一种融合多肽或可切割的融合多肽,其中一个多肽融合在另一个多肽的N末端或C末端处。通过将编码一个多肽的多核苷酸融合至编码另一个多肽的多核苷酸而产生融合多肽。用于产生融合多肽的技术是本领域已知的,并包括连接编码多肽的编码序列,使得它们在阅读框中,并且使该融合多肽的表达在相同的一个或多个启动子和终止子的控制下。还可使用内含肽技术构建融合多肽,其中在翻译后产生融合物(Cooper等人,1993,EMBO J.[欧洲分子生物学学会杂志]12:2575-2583;Dawson等人,1994,Science[科学]266:776-779)。
融合多肽可进一步包含两个多肽之间的切割位点。在融合蛋白分泌之时,位点被切割,从而释放出这两种多肽。切割位点的实例包括但不限于在以下文献中披露的位点:Martin等人,2003,J.Ind.Microbiol.Biotechnol.[工业微生物生物技术杂志]3:568-576;Svetina等人,2000,J.Biotechnol.[生物技术杂志]76:245-251;Rasmussen-Wilson等人,1997,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]63:3488-3493;Ward等人,1995,Biotechnology[生物技术]13:498-503;和Contreras等人,1991,Biotechnology[生物技术]9:378-381;Eaton等人,1986,Biochemistry[生物化学]25:505-512;Collins-Racie等人,1995,Biotechnology[生物技术]13:982-987;Carter等人,1989,Proteins:Structure,Function,and Genetics[蛋白质:结构、功能以及遗传学]6:240-248;以及Stevens,2003,Drug Discovery World[药物发现世界]4:35-48。
变体的制备
本发明涉及一种用于获得具有α-淀粉酶活性的变体的方法,该方法包括(a)在对应于以下位置的一个或多个位置处向亲本α-淀粉酶引入修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ IDNO:1进行编号,其中每个修饰独立地是取代或缺失,并且所述变体具有α-淀粉酶活性;以及(b)回收所述变体。
用于获得具有α-淀粉酶活性的变体的方法,该方法包括(a)在对应于SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的以下位置的一个或多个位置处向亲本α-淀粉酶引入修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,其中每个修饰独立地是取代或缺失,并且所述变体具有α-淀粉酶活性;以及(b)回收所述变体。
在一方面,用于获得具有α-淀粉酶活性的变体的方法,该方法包括(a)在对应于SEQ ID NO:2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14所示的氨基酸序列的以下位置的一个或多个位置处向亲本α-淀粉酶引入修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中每个修饰独立地是取代或缺失,并且所述变体具有α-淀粉酶活性;以及(b)回收所述变体。
在一个实施例中,修饰是取代。在一个实施例中,修饰是缺失。
在另一个实施例中,用于获得具有α-淀粉酶活性的变体的方法,该方法包括(a)在一个或多个位置处向亲本α-淀粉酶引入修饰,其中该修饰选自SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,以及(b)回收该变体。
在另一个实施例中,用于获得具有α-淀粉酶活性的变体的方法,该方法包括(a)在一个或多个位置处向亲本α-淀粉酶引入取代,其中该取代选自SEQ ID NO:2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14所示的氨基酸序列的N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180Q、R180S、S181L、S181T、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及(b)回收该变体。
在一个实施例中,该方法进一步包括在一个或多个位置中向亲本α-淀粉酶引入缺失,其中该缺失选自:SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14的多肽的H1*、H2*、R180*、S181*、T182*和G183*,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及回收该变体。
可以使用本领域已知的任何诱变程序来制备这些变体,如定点诱变、合成基因构建、半合成基因构建、随机诱变、改组等。
定点诱变是在编码该亲本的多核苷酸中在一个或多个限定位点处创建一个或多个(几个)突变的技术。
通过涉及使用含有所希望的突变的寡核苷酸引物的PCR可以体外实现定点诱变。也可以通过盒式诱变进行体外定点诱变,该盒式诱变涉及由限制酶在包含编码亲本的多核苷酸的质粒中的位点处切割并且随后将含有突变的寡核苷酸连接在多核苷酸中。通常,消化质粒和寡核苷酸的限制性酶是相同的,允许质粒和插入物的粘性末端彼此连接。参见例如,Scherer和Davis,1979,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]76:4949-4955;和Barton等人,1990,Nucleic Acids Res.[核酸研究]18:7349-4966。
还可以通过本领域中已知的方法在体内实现定点诱变。参见例如,美国专利申请公布号2004/0171154;Storici等人,2001,Nature Biotechnol.[自然生物技术]19:773-776;Kren等人,1998,Nat.Med.[自然医学]4:285-290;以及Calissano和Macino,1996,Fungal Genet.Newslett.[真菌遗传学时事通讯]43:15-16。
可以在本发明中使用任何定点诱变程序。存在可用于制备变体的许多可商购的试剂盒。
合成基因构建需要设计的多核苷酸分子的体外合成以编码目的多肽。基因合成可以利用多种技术来进行,如由Tian等人(2004,Nature[自然]432:1050-1054)所述的基于多路微芯片的技术、以及其中在光可编程的微流芯片上合成并组装寡核苷酸的类似技术。
使用已知的诱变、重组和/或改组方法,随后进行相关的筛选程序可以做出单或多氨基酸取代、缺失和/或插入并对其进行测试,该相关的筛选程序例如由Reidhaar-Olson和Sauer,1988,Science[科学]241:53-57;Bowie和Sauer,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]86:2152-2156;WO95/17413;或WO 95/22625披露的那些。其他可以使用的方法包括易错PCR、噬菌体展示(例如Lowman等人,1991,Biochemistry[生物化学]30:10832-10837;美国专利号5,223,409;WO 92/06204)以及区域定向诱变(Derbyshire等人,1986,Gene[基因]46:145;Ner等人,1988,DNA 7:127)。
诱变/改组方法可以与高通量、自动化的筛选方法组合以检测由宿主细胞表达的克隆的、诱变的多肽的活性(Ness等人,1999,Nature Biotechnology[自然生物技术]17:893-896)。可从宿主细胞回收编码活性多肽的诱变的DNA分子,并使用本领域的标准方法快速测序。这些方法允许快速确定多肽中各个氨基酸残基的重要性。
通过组合合成基因构建、和/或定点诱变、和/或随机诱变、和/或改组的多方面来实现半合成基因构建。半合成构建典型地是利用合成的多核苷酸片段的过程结合PCR技术。因此,基因的限定区域可以从头合成,而其他区域可以使用位点特异性诱变引物来扩增,而还有其他区域可以进行易错PCR或非易错PCR扩增。然后可以对多核苷酸子序列进行改组。
α-淀粉酶变体
本发明涉及亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体,这些变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中该α-淀粉酶变体相对于所述亲本多肽具有改善的特性。
在一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中该α-淀粉酶变体相对于所述亲本多肽具有改善的特性。
在一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且该变体具有α-淀粉酶活性,并且其中该α-淀粉酶变体相对于所述亲本多肽具有改善的特性,并且其中所述亲本多肽具有SEQ ID NO:1、2或3。
在另一个实施例中,变体与亲本多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个实施例中,变体与具有α-淀粉酶活性的亲本多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在实施例中,变体与杂合多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在实施例中,变体与具有α-淀粉酶活性的杂合多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个实施例中,变体与SEQ ID NO:1的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个实施例中,变体与SEQ ID NO:2的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个实施例中,变体与SEQ ID NO:3的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个实施例中,变体与SEQ ID NO:4的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个实施例中,变体与SEQ ID NO:5的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个实施例中,变体与SEQ ID NO:6的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个实施例中,变体与SEQ ID NO:7的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个实施例中,变体与SEQ ID NO:8的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个实施例中,变体与SEQ ID NO:9的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个实施例中,变体与SEQ ID NO:10的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个实施例中,变体与SEQ ID NO:11的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个实施例中,变体与SEQ ID NO:12的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个实施例中,变体与SEQ ID NO:13的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一个实施例中,变体与SEQ ID NO:14的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,取代的氨基酸残基与该位置处天然存在的氨基酸残基不同。在一个实施例中,取代选自下组,该组由以下组成:A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W和Y,条件是该取代的氨基酸残基与该位置处天然存在的氨基酸残基不同。
在一方面,修饰的数目是1-50,例如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个,如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个修饰。
在一方面,取代的数目是1-50,例如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个,如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个取代。
在一方面,缺失的数目是1-50,例如1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10或1-5个,如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个缺失。
上面提及的具有取代的变体应该被理解为涵盖在指定的位置的一个或多个取代的所有可能的组合。
在一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的一个或多个(例如几个)位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的两个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的三个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的四个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的五个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的六个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的七个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的八个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的九个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的十个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的十一个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的十二个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的十三个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的十四个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的十五个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的十六个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的十七个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的十八个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的十九个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的二十个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的二十一个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的二十二个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的二十三个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的二十四个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的二十五个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的二十六个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的二十七个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的每个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,该变体在对应于位置1的位置处包含缺失,或由其组成。在另一方面,SEQ ID NO:1的多肽中对应于位置1的位置处的氨基酸缺失。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的缺失H1*,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置2的位置处包含缺失,或由其组成。在另一方面,SEQ ID NO:1的多肽中对应于位置2的位置处的氨基酸缺失。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的缺失H2*,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置3的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置3的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代N3S或N3D或N3G,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置7的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置7的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代G7A或G7H或G7S或者由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置26的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置26的位置处的氨基酸被Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代R26Y,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置31的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置31的位置处的氨基酸被Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代A31S,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置37的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置37的位置处的氨基酸被Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代R37A或R37N或R37V,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置40的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置40的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代T40N或T40G,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置41的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置41的位置处的氨基酸被Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Thr、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代A41D,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置54的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置54的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代N54S,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置56的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置56的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp或Tyr取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代V56T,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置60的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置60的位置处的氨基酸被Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代A60P或A60V,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置63的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置63的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,所述变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代L63F,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置72的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置72的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代K72R,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置73的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置73的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代G73L,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置93的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置93的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代K93D,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置94的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置94的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代N94D,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置98的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置98的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代Q98L,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置103的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置103的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp或Tyr取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代V103或VA103I,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置104的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置104的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp或Tyr取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代V104M,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置105的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置105的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代M105I或M105L,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置106的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置106的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代N106D,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置109的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置109的位置处的氨基酸被Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代A109G,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置110的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置110的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代G110K,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置111的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置111的位置处的氨基酸被Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代A111G或A111L,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置113的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置113的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代G113A或G113Q或G113S,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置114的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置114的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代T114K,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置116的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置116的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代F116L或F116N或F116Q或F116W,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置117的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置117的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp或Tyr取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代V117G,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置118的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置118的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代D118T或D118Q,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置123的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置123的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代D123N,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置126的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置126的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代N126D,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置128的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置128的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代N128Y,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置131的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置131的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代T131I或T131V,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置132的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置132的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代S132D或S132L,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置134的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置134的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代T134D,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置135的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置135的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代Y135E,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置136的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置136的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代Q136T或Q136K,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置137的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置137的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代I137F,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置138的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置138的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代Q138V,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置140的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置140的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代W140S或W140Y或W140M,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置142的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置142的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代K142E或K142G或K142P,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置144的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置144的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代D144N,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置146的位置处包含取代或由其组成。在另一个方面,对应于位置146的一个位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代P146H或P146S,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置151的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置151的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代T151A,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置152的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置152的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代Y152L,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置155的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置155的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代F155W,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置159的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置159的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代W159H或W159L,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置160的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置160的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代Y160P,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置165的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置165的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代T165V,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置167的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置167的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代W167A或W167D或W167E或W167F或W167P或W167S,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置169的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置169的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代E169V或E169I或E169Q,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置172的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置172的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代K172G或K172Q,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置173的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置173的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代L173F,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置174的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置174的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代N174K或N174S,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置176的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置176的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代I176V,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置177的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置177的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ IDNO:1的多肽的取代Y177D,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置178的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置178的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代K178A,或由其组成。
在另一方面,该变体包含在对应于位置180的位置处的缺失或取代,或由其组成。在另一方面,SEQ ID NO:1的多肽中对应于位置180的位置处的氨基酸缺失。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的缺失R180*,或由其组成。在另一方面,在对应于位置180的位置处的氨基酸被Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代R180Q或R180S,或由其组成。
在另一方面,该变体包含在对应于位置181的位置处的缺失或取代,或由其组成。在另一方面,对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置181的位置处的氨基酸缺失。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的缺失S181*,或由其组成。在另一方面,在对应于位置181的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代S181L或S181T,或由其组成。
在另一方面,该变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置182的位置处的缺失或取代或由其组成。在另一方面,对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置182的位置处的氨基酸缺失。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的缺失T182*,或由其组成。在另一个方面,对应于位置182的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代T182D或T182E或T182G或T182I或T182L或T182M或T182S,或由其组成。
在另一方面,该变体包含在对应于SEQ ID NO:1的位置183的位置处的缺失或取代或由其组成。在另一方面,对应于SEQ ID NO:1的多肽的位置183的位置处的氨基酸缺失。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的缺失G183*,或由其组成。在另一方面,在对应于位置183的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代G183P,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置185的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置185的位置处的氨基酸被Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,所述变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代A186D或A186E或A186K或A186N或A186Q或A186R,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置188的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置188的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代W188C,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置189的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置189的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代E189P,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置193的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置193的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代E193I,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置194的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置194的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代N194F,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置196的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置196的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代N196F或N196I,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置202的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置202的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代F202Y,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置203的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置203的位置处的氨基酸被Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代A203F,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置205的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置205的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代L205F或L205N或L205Q或L205R或L205V或L205Y,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置224的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置224的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代T224F或T244Y,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置225的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置225的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代N225S,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置242的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置242的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代Y242F或Y242L,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置243的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置243的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代S243Q,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置244的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置244的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Ser、Pro、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代F244I或F244L,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置252的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置252的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp或Tyr取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代V252I,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于SEQ ID NO:1的位置256的位置处包含取代或由其组成。在另一方面,在对应于位置256的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQID NO:1的多肽的取代T256A或T256D,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置258的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置258的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代K258V,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置259的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置259的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代E259G或E259V,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置260的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置260的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代M260D或M260W,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置261的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置261的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代F261K或F261P或F261S,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置266的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置266的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代F266Y,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置276的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置276的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代N276F或N276W或N276Y,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置279的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置279的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代N279S,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置280的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置280的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代K280F或K280W或K280Y,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置283的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置283的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代W283N,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置286的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置286的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代S286K或S286L,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置302的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置302的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代S302T或S302Y,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置303的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置303的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代G303R,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置315的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置315的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代T315A,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置320的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置320的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代H320T,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置321的位置处包含取代,或由其组成。在另一个方面,在对应于位置321的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代P321H或P321Y,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置322的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置322的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代M322G或M322Y,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置323的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置323的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代H323A或H323N或H323W,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置346的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置346的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代W346N,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置354的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置354的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代L354V,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置359的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置359的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代E359W,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置360的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置360的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代Q360M或Q360W或Q360Y,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置361的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置361的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp或Tyr取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代G361M,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置362的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置362的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代Y362V,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置365的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置365的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Tyr或Trp取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代V365I,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置371的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置371的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代Y371S或Y371N,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置383的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置383的位置处的氨基酸被Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代A383D,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置390的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置390的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代E390A或E390D,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置394的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置394的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代N394W或N394D,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置395的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置395的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代F395Y,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置405的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置405的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代D405G,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置409的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置409的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代I409L,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置414的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置414的位置处的氨基酸被Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代R414M,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置420的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置420的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的取代H420A或H420P或H420Q或H420Y,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置422的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置422的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp或Tyr取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代N422V,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置427的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置427的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代T427L,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置455的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置455的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代G455R,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置457的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置457的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代K457N或K457R,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置458的位置处包含取代,或由其组成。在另一个方面,在对应于位置458的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代P458S,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置470的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置470的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代N470A或N470M,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置472的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置472的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代S472R,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置473的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置473的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp或Tyr取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代V473C,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置474的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置474的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代N474F或N474L,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置475的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置475的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代G475E或G475K,或由其组成。
在另一方面,该变体在对应于位置476的位置处包含取代,或由其组成。在另一方面,在对应于位置476的位置处的氨基酸被Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr或Val取代。在另一方面,该变体包含SEQ ID NO:1的多肽的取代G476A或G476E或G476H,或由其组成。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含修饰:H1、H2、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、R180、S181、T182、G183、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475和G476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:2具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:3具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:4具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:5具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:6具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:7具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:8具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:9具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:10具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:11具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:12具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:13具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在另一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
如本文使用的术语“成对缺失”是指两个位置上的氨基酸的缺失。所述的两个位置可以彼此相邻,但还可以被一个、两个、三个、四个、或五个氨基酸所分开。
在一方面,变体在亲本多肽的B结构域内包含成对缺失。
在一方面,变体在具有α-淀粉酶活性的亲本多肽的B结构域内包含成对缺失。
如本文使用的术语“成对缺失”是指两个位置上的氨基酸的缺失。所述的两个位置可以彼此相邻,但还可以被一个、两个、三个、四个、或五个氨基酸所分开。
在一方面,本发明的α-淀粉酶变体在选自由R180*+S181*、R180*+T182*、R180*+G183*、S181*+T182*、S181*+G183*和T182*+G183*组成的组,优选R180*+S181*的一个或多个位置处包含缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号。
在一方面,本发明涉及SEQ ID NO:1的变体,其在对应于R180*+S181*的位置处包含缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
因此,在一个实施例中,所述α-淀粉酶变体包含
a)在对应于位置180、181、182和183的两个或更多个位置处的缺失和/或取代,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的一个或多个位置处的修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个实施例中,所述α-淀粉酶变体包含
a)在对应于位置R180、S181、T182和G183的两个或更多个位置处的缺失和/或取代,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的一个或多个位置处的修饰:H1、H2*、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475和G476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一个实施例中,所述α-淀粉酶变体包含
a)在对应于位置R180、S181、T182和G183的两个或更多个位置处的缺失和/或取代,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的一个或多个位置处的修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:1的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D+A185Q、A185D+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:1的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S+E18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在一方面,本发明涉及SEQ ID NO:1的α-淀粉酶变体,该α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:1的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:1的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:1的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:1的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ IDNO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:1的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:1的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ IDNO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:2的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D+A185Q、A185D+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:2的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S+E18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N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194F,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:2的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、
W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:2的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:2的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:2的变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:2的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ IDNO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:2的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:2的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ IDNO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:3的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D+A185Q、A185D+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:3的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S+E18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N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194F,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:3的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:3的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:3的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:3的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:3的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ IDNO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:3的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:3的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ IDNO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:4的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D+A185Q、A185D+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:4的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S+E18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N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194F,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:4的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:4的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:4的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:4的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:4的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ IDNO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:4的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:4的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ IDNO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:5的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D+A185Q、A185D+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:5的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S+E18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N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194F,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:5的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:5的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:5的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:5的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:5的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ IDNO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:5的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:5的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ IDNO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:6的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D+A185Q、A185D+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:6的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S+E18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ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:6的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:6的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:6的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:6的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:6的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ IDNO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:6的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:6的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ IDNO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:7的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D+A185Q、A185D+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:7的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S+E18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N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194F,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:7的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:7的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:7的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:7的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:7的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ IDNO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:7的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:7的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ IDNO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:8的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D+A185Q、A185D+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:8的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S+E18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N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194F,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:8的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:8的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:8的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:8的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:8的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ IDNO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:8的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:8的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ IDNO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:9的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D+A185Q、A185D+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:9的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S+E18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N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194F,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:9的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:9的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:9的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:9的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:9的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ IDNO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:9的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:9的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ IDNO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:10的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D+A185Q、A185D+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:10的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S+E18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N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194F,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:10的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:10的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:10的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:10的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:10的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ IDNO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:10的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:10的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ IDNO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:11的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D+A185Q、A185D+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:11的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S+E18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N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194F,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:11的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:11的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:11的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:11的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:11的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ IDNO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:11的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:11的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ IDNO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:12的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D+A185Q、A185D+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:12的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S+E18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N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194F,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:12的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:12的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:12的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:12的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:12的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ IDNO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:12的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:12的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ IDNO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:13的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D+A185Q、A185D+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:13的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S+E18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N279S+G475K+N194F、N279S+A185Q+N194F、K280Y+G303R+E390A、K280Y+G303R+G475K、K280Y+G303R+A185Q、K280Y+G303R+N194F、K280Y+E390A+G475K、K280Y+E390A+A185Q、K280Y+E390A+N194F、K280Y+G475K+A185Q、K280Y+G475K+N194F、K280Y+A185Q+N194F、G303R+E390A+G475K、G303R+E390A+A185Q、G303R+E390A+N194F、G303R+G475K+A185Q、G303R+G475K+N194F、G303R+A185Q+N194F、E390A+G475K+A185Q、E390A+G475K+N194F、E390A+A185Q+N194F、G475K+A185Q+N194F,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:13的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:13的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:13的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:13的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:13的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ IDNO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:13的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:13的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ IDNO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:14的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+D118T、H1*+W140Y、H1*+T182S、H1*+A185D、H1*+E189P、H1*+Y242F、H1*+E259G、H1*+F266Y、H1*+N279S、H1*+K280Y、H1*+G303R、H1*+E390A、H1*+G475K、H1*+A185Q、H1*+N194F、D118T+W140Y、D118T+T182S、D118T+A185D、D118T+E189P、D118T+Y242F、D118T+E259G、D118T+F266Y、D118T+N279S、D118T+K280Y、D118T+G303R、D118T+E390A、D118T+G475K、D118T+A185Q、D118T+N194F、W140Y+T182S、W140Y+A185D、W140Y+E189P、W140Y+Y242F、W140Y+E259G、W140Y+F266Y、W140Y+N279S、W140Y+K280Y、W140Y+G303R、W140Y+E390A、W140Y+G475K、W140Y+A185Q、W140Y+N194F、T182S+A185D、T182S+E189P、T182S+Y242F、T182S+E259G、T182S+F266Y、T182S+N279S、T182S+K280Y、T182S+G303R、T182S+E390A、T182S+G475K、T182S+A185Q、T182S+N194F、A185D+E189P、A185D+Y242F、A185D+E259G、A185D+F266Y、A185D+N279S、A185D+K280Y、A185D+G303R、A185D+E390A、A185D+G475K、A185D+A185Q、A185D+N194F、E189P+Y242F、E189P+E259G、E189P+F266Y、E189P+N279S、E189P+K280Y、E189P+G303R、E189P+E390A、E189P+G475K、E189P+A185Q、E189P+N194F、Y242F+E259G、Y242F+F266Y、Y242F+N279S、Y242F+K280Y、Y242F+G303R、Y242F+E390A、Y242F+G475K、Y242F+A185Q、Y242F+N194F、E259G+F266Y、E259G+N279S、E259G+K280Y、E259G+G303R、E259G+E390A、E259G+G475K、E259G+A185Q、E259G+N194F、F266Y+N279S、F266Y+K280Y、F266Y+G303R、F266Y+E390A、F266Y+G475K、F266Y+A185Q、F266Y+N194F、N279+K280Y、N279S+G303R、N279S+E390A、N279S+G475K、N279S+A185Q、N279S+N194F、K280Y+G303R、K280Y+E390A、K280Y+G475K、K280Y+A185Q、K280Y+N194F、G303R+E390A、G303R+G475K、G303R+A185Q、G303R+N194F、E390A+G475K、E390A+A185Q、E390A+N194F、G475K+A185Q、G475K+N194F、A185Q+N194F,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:14的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+D118T+W140Y、H1*+D118T+T182S、H1*+D118T+A185D、H1*+D118T+E189P、H1*+D118T+Y242F、H1*+D118T+E259G、H1*+D118T+F266Y、H1*+D118T+N279S、H1*+D118T+K280Y、H1*+D118T+G303R、H1*+D118T+E390A、H1*+D118T+G475K、H1*+D118T+A185Q、H1*+D118T+N194F、H1*+W140Y+T182S、H1*+W140Y+A185D、H1*+W140Y+E189P、H1*+W140Y+Y242F、H1*+W140Y+E259G、H1*+W140Y+F266Y、H1*+W140Y+N279S、H1*+W140Y+K280Y、H1*+W140Y+G303R、H1*+W140Y+E390A、H1*+W140Y+G475K、H1*+W140Y+A185Q、H1*+W140Y+N194F、H1*+T182S+A185D、H1*+T182S+E189P、H1*+T182S+Y242F、H1*+T182S+E259G、H1*+T182S+F266Y、H1*+T182S+N279S、H1*+T182S+K280Y、H1*+T182S+G303R、H1*+T182S+E390A、H1*+T182S+G475K、H1*+T182S+A185Q、H1*+T182S+N194F、H1*+A185D+E189P、H1*+A185D+Y242F、H1*+A185D+E259G、H1*+A185D+F266Y、H1*+A185D+N279S、H1*+A185D+K280Y、H1*+A185D+G303R、H1*+A185D+E390A、H1*+A185D+G475K、H1*+A185D+A185Q、H1*+A185D+N194F、H1*+E189P+Y242F、H1*+E189P+E259G、H1*+E189P+F266Y、H1*+E189P+N279S、H1*+E189P+K280Y、H1*+E189P+G303R、H1*+E189P+E390A、H1*+E189P+G475K、H1*+E189P+A185Q、H1*+E189P+N194F、H1*+Y242F+E259G、H1*+Y242F+F266Y、H1*+Y242F+N279S、H1*+Y242F+K280Y、H1*+Y242F+G303R、H1*+Y242F+E390A、H1*+Y242F+G475K、H1*+Y242F+A185Q、H1*+Y242F+N194F、H1*+E259G+F266Y、H1*+E259G+N279S、H1*+E259G+K280Y、H1*+E259G+G303R、H1*+E259G+E390A、H1*+E259G+G475K、H1*+E259G+A185Q、H1*+E259G+N194F、H1*+F266Y+N279S、H1*+F266Y+K280Y、H1*+F266Y+G303R、H1*+F266Y+E390A、H1*+F266Y+G475K、H1*+F266Y+A185Q、H1*+F266Y+N194F、H1*+N279S+K280Y、H1*+N279S+G303R、H1*+N279S+E390A、H1*+N279S+G475K、H1*+N279S+A185Q、H1*+N279S+N194F、H1*+K280Y+G303R、H1*+K280Y+E390A、H1*+K280Y+G475K、H1*+K280Y+A185Q、H1*+K280Y+N194F、H1*+G303R+E390A、H1*+G303R+G475K、H1*+G303R+A185Q、H1*+G303R+N194F、H1*+E390A+G475K、H1*+E390A+A185Q、H1*+E390A+N194F、H1*+G475K+A185Q、H1*+G475K+N194F、H1*+A185Q+N194F、D118T+W140Y+T182S、D118T+W140Y+A185D、D118T+W140Y+E189P、D118T+W140Y+Y242F、D118T+W140Y+E259G、D118T+W140Y+F266Y、D118T+W140Y+N279S、D118T+W140Y+K280Y、D118T+W140Y+G303R、D118T+W140Y+E390A、D118T+W140Y+G475K、D118T+W140Y+A185Q、D118T+W140Y+N194F、D118T+T182S+A185D、D118T+T182S+E189P、D118T+T182S+Y242F、D118T+T182S+E259G、D118T+T182S+F266Y、D118T+T182S+N279S、D118T+T182S+K280Y、D118T+T182S+G303R、D118T+T182S+E390A、D118T+T182S+G475K、D118T+T182S+A185Q、D118T+T182S+N194F、D118T+A185D+E189P、D118T+A185D+Y242F、D118T+A185D+E259G、D118T+A185D+F266Y、D118T+A185D+N279S、D118T+A185D+K280Y、D118T+A185D+G303R、D118T+A185D+E390A、D118T+A185D+G475K、D118T+A185D+A185Q、D118T+A185D+N194F、D118T+E189P+Y242F、D118T+E189P+E259G、D118T+E189P+F266Y、D118T+E189P+N279S、D118T+E189P+K280Y、D118T+E189P+G303R、D118T+E189P+E390A、D118T+E189P+G475K、D118T+E189P+A185Q、D118T+E189P+N194F、D118T+Y242F+E259G、D118T+Y242F+F266Y、D118T+Y242F+N279S、D118T+Y242F+K280Y、D118T+Y242F+G303R、D118T+Y242F+E390A、D118T+Y242F+G475K、D118T+Y242F+A185Q、D118T+Y242F+N194F、D118T+E259G+F266Y、D118T+E259G+N279S、D118T+E259G+K280Y、D118T+E259G+G303R、D118T+E259G+E390A、D118T+E259G+G475K、D118T+E259G+A185Q、D118T+E259G+N194F、D118T+F266Y+N279S、D118T+F266Y+K280Y、D118T+F266Y+G303R、D118T+F266Y+E390A、D118T+F266Y+G475K、D118T+F266Y+A185Q、D118T+F266Y+N194F、D118T+N279S+K280Y、D118T+N279S+G303R、D118T+N279S+E390A、D118T+N279S+G475K、D118T+N279S+A185Q、D118T+N279S+N194F、D118T+K280Y+G303R、D118T+K280Y+E390A、D118T+K280Y+G475K、D118T+K280Y+A185Q、D118T+K280Y+N194F、D118T+G303R+E390A、D118T+G303R+G475K、D118T+G303R+A185Q、D118T+G303R+N194F、D118T+E390A+G475K、D118T+E390A+A185Q、D118T+E390A+N194F、D118T+G475K+A185Q、D118T+G475K+N194F、D118T+A185Q+N194F、W140Y+T182S+A185D、W140Y+T182S+E189P、W140Y+T182S+Y242F、W140Y+T182S+E259G、W140Y+T182S+F266Y、W140Y+T182S+N279S、W140Y+T182S+K280Y、W140Y+T182S+G303R、W140Y+T182S+E390A、W140Y+T182S+G475K、W140Y+T182S+A185Q、W140Y+T182S+N194F、W140Y+A185D+E189P、W140Y+A185D+Y242F、W140Y+A185D+E259G、W140Y+A185D+F266Y、W140Y+A185D+N279S、W140Y+A185D+K280Y、W140Y+A185D+G303R、W140Y+A185D+E390A、W140Y+A185D+G475K、W140Y+A185D+A185Q、W140Y+A185D+N194F、W140Y+E189P+Y242F、W140Y+E189P+E259G、W140Y+E189P+F266Y、W140Y+E189P+N279S、W140Y+E189P+K280Y、W140Y+E189P+G303R、W140Y+E189P+E390A、W140Y+E189P+G475K、W140Y+E189P+A185Q、W140Y+E189P+N194F、W140Y+Y242F+E259G、W140Y+Y242F+F266Y、W140Y+Y242F+N279S、W140Y+Y242F+K280Y、W140Y+Y242F+G303R、W140Y+Y242F+E390A、W140Y+Y242F+G475K、W140Y+Y242F+A185Q、W140Y+Y242F+N194F、W140Y+E259G+F266Y、W140Y+E259G+N279S、W140Y+E259G+K280Y、W140Y+E259G+G303R、W140Y+E259G+E390A、W140Y+E259G+G475K、W140Y+E259G+A185Q、W140Y+E259G+N194F、W140Y+F266Y+N279S、W140Y+F266Y+K280Y、W140Y+F266Y+G303R、W140Y+F266Y+E390A、W140Y+F266Y+G475K、W140Y+F266Y+A185Q、W140Y+F266Y+N194F、W140Y+N279S+K280Y、W140Y+N279S+G303R、W140Y+N279S+E390A、W140Y+N279S+G475K、W140Y+N279S+A185Q、W140Y+N279S+N194F、W140Y+K280Y+G303R、W140Y+K280Y+E390A、W140Y+K280Y+G475K、W140Y+K280Y+A185Q、W140Y+K280Y+N194F、W140Y+G303R+E390A、W140Y+G303R+G475K、W140Y+G303R+A185Q、W140Y+G303R+N194F、W140Y+E390A+G475K、W140Y+E390A+A185Q、W140Y+E390A+N194F、W140Y+G475K+A185Q、W140Y+G475K+N194F、W140Y+A185Q+N194F、T182S+A185D+E189P、T182S+A185D+Y242F、T182S+A185D+E259G、T182S+A185D+F266Y、T182S+A185D+N279S、T182S+A185D+K280Y、T182S+A185D+G303R、T182S+A185D+E390A、T182S+A185D+G45K、T182S+A185D+A185Q、T182S+A185D+N194F、T182S+E189P+Y242F、T182S+E189P+E259G、T182S+E189P+F266Y、T182S+E18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ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:14的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:H1*+G7A+W140Y+E189P、H1*+G7A+W140Y+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E259G、H1*+G7A+W140Y+N279S、H1*+G7A+W140Y+K280Y、H1*+G7A+W140Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F、H1*+G7A+E189P+E259G、H1*+G7A+E189P+N279S、H1*+G7A+E189P+K280Y、H1*+G7A+E189P+G303R、H1*+G7A+E189P+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G、H1*+G7A+Y242F+N279S、H1*+G7A+Y242F+K280Y、H1*+G7A+Y242F+G303R、H1*+G7A+Y242F+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S、H1*+G7A+E259G+K280Y、H1*+G7A+E259G+G303R、H1*+G7A+E259G+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y、H1*+G7A+N279S+G303R、H1*+G7A+N279S+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R、H1*+G7A+K280Y+E390A、H1*+G7A+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F、H1*+W140Y+E189P+E259G、H1*+W140Y+E189P+N279S、H1*+W140Y+E189P+K280Y、H1*+W140Y+E189P+G303R、H1*+W140Y+E189P+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G、H1*+W140Y+Y242F+N279S、H1*+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S、H1*+W140Y+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E259G+G303R、H1*+W140Y+E259G+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y、H1*+W140Y+N279S+G303R、H1*+W140Y+N279S+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R、H1*+W140Y+K280Y+E390A、H1*+W140Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G、H1*+E189P+Y242F+N279S、H1*+E189P+Y242F+K280Y、H1*+E189P+Y242F+G303R、H1*+E189P+Y242F+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S、H1*+E189P+E259G+K280Y、H1*+E189P+E259G+G303R、H1*+E189P+E259G+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y、H1*+E189P+N279S+G303R、H1*+E189P+N279S+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R、H1*+E189P+K280Y+E390A、H1*+E189P+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S、H1*+Y242F+E259G+K280Y、H1*+Y242F+E259G+G303R、H1*+Y242F+E259G+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y、H1*+Y242F+N279S+G303R、H1*+Y242F+N279S+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R、H1*+Y242F+K280Y+E390A、H1*+Y242F+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y、H1*+E259G+N279S+G303R、H1*+E259G+N279S+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R、H1*+E259G+K280Y+E390A、H1*+E259G+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R、H1*+N279S+K280Y+E390A、H1*+N279S+G303R+E390A、H1*+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F、G7A+W140Y+E189P+E259G、G7A+W140Y+E189P+N279S、G7A+W140Y+E189P+K280Y、G7A+W140Y+E189P+G303R、G7A+W140Y+E189P+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G、G7A+W140Y+Y242F+N279S、G7A+W140Y+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S、G7A+W140Y+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E259G+G303R、G7A+W140Y+E259G+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y、G7A+W140Y+N279S+G303R、G7A+W140Y+N279S+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R、G7A+W140Y+K280Y+E390A、G7A+W140Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G、G7A+E189P+Y242F+N279S、G7A+E189P+Y242F+K280Y、G7A+E189P+Y242F+G303R、G7A+E189P+Y242F+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S、G7A+E189P+E259G+K280Y、G7A+E189P+E259G+G303R、G7A+E189P+E259G+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y、G7A+E189P+N279S+G303R、G7A+E189P+N279S+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R、G7A+E189P+K280Y+E390A、G7A+E189P+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S、G7A+Y242F+E259G+K280Y、G7A+Y242F+E259G+G303R、G7A+Y242F+E259G+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y、G7A+Y242F+N279S+G303R、G7A+Y242F+N279S+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R、G7A+Y242F+K280Y+E390A、G7A+Y242F+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y、G7A+E259G+N279S+G303R、G7A+E259G+N279S+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R、G7A+E259G+K280Y+E390A、G7A+E259G+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R、G7A+N279S+K280Y+E390A、G7A+N279S+G303R+E390A、G7A+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G、W140Y+E189P+Y242F+N279S、W140Y+E189P+Y242F+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S、W140Y+E189P+E259G+K280Y、W140Y+E189P+E259G+G303R、W140Y+E189P+E259G+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y、W140Y+E189P+N279S+G303R、W140Y+E189P+N279S+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R、W140Y+E189P+K280Y+E390A、W140Y+E189P+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S、W140Y+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+G303R、W140Y+Y242F+E259G+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+N279S+G303R、W140Y+Y242F+N279S+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E259G+N279S+G303R、W140Y+E259G+N279S+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E259G+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R、W140Y+N279S+K280Y+E390AW140Y+N279S+G303R+E390A、W140Y+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S、E189P+Y242F+E259G+K280Y、E189P+Y242F+E259G+G303R、E189P+Y242F+E259G+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y、E189P+Y242F+N279S+G303R、E189P+Y242F+N279S+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R、E189P+Y242F+K280Y+E390A、E189P+Y242F+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y、E189P+E259G+N279S+G303R、E189P+E259G+N279S+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R、E189P+E259G+K280Y+E390A、E189P+E259G+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R、E189P+N279S+K280Y+E390A、E189P+N279S+G303R+E390A、E189P+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y、Y242F+E259G+N279S+G303R、Y242F+E259G+N279S+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R、Y242F+E259G+K280Y+E390A、Y242F+E259G+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R、Y242F+N279S+K280Y+E390A、Y242F+N279S+G303R+E390A、Y242F+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R、E259G+N279S+K280Y+E390A、E259G+N279S+G303R+E390A、E259G+K280Y+G303R+E390A、N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:14的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:14的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:14的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:14的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ IDNO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:14的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
b)在对应于以下位置的位置处的修饰:
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+E189P+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+W140Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+G7A+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、H1*+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:14的α-淀粉酶变体包含:
a)在对应于位置R180*和S181*的位置处的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号,以及
H1*+G7A+W140Y+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A,使用SEQ IDNO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:1的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:H1*+G7A+R180*+S181*、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+N279S、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+N279S+G303R、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+G303R+E390A+G476A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,SEQ ID NO:1的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:E169I+R180*+S181*、T114K+R180*+S181*、W167A+R180*+S181*、E169V+R180*+S181*、R180*+S181*+W188C、W167D+R180*+S181*、Y177D+R180*+S181*、W167S+R180*+S181*、W167E+R180*+S181*、W167P+R180*+S181*、R180*+S181*+L205R、R180*+S181*+A203F、W159L+R180*+S181*、Y160P+R180*+S181*、W159H+R180*+S181*、K178A+R180*+S181*、R180*+S181*+G183P、Q136T+R180*+S181*、K142P+R180*+S181*、K142E+R180*+S181*、Y152L+R180*+S181*、A111L+R180*+S181*、G110K+R180*+S181*、A111G+R180*+S181*和V117G+R180*+S181*,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:1的α-淀粉酶变体在对应于R180*+S181*+E193I+H323N的位置处包含修饰,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:1的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*、G7H+W167P+R180*+S181*+G455R和Q98L+V103A+G110K+R180*+S181*,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:1的α-淀粉酶变体在对应于A60V+Q98L+G110K+R180*+S181*+A383D的位置处包含修饰,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:1的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:F116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y和Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+T315A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:1的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K和H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:1的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+G7A+R180*+S181*+T182S+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+T182L+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+S181L+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180S+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A60P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105I+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182G+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182M+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185K+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185N+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185R+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244L+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W167P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7H+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E390A+G475K和L63F+W140Y+L173F+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+H323W,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:1的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E359W+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+I176V+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M322Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322Y+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+H320T+E390A+G475K、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E359W+E390A+G475K和W140Y+L173F+R180*+S181*+N194F+L205Y+N225S+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:1的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280F+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E359W+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M322Y+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+I137F+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7H+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+D405G+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+T256A+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474L、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475E、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474F、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+R414M+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323W+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321Y+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360M+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K和
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:1的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+S286K+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+P146S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302T+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474F+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N422V+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N470A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242L+E259G+N279S+G303R+W346N+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+H420P+G475K、
H1*+G7A+R26Y+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y371S+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A41D+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K和
H1*+G7A+T40G+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:1的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+S181*+T182*+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+T134D+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+I176V+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+I176V+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+T315A+E390A+G475K、
H1*+A60V+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+T151A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+K258V+E259V+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+N94D+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+T151A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+K258V+E259V+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+T427L+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A和H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:1的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+N106D+A109G+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R37N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470A+G475K、
H1*+G7A+S132L+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K和T40N+F116L+D123N+N126D+N128Y+T131I+F155W+R180*+S181*+T182D+E189P+F202Y+K457N+P458S+G475K+G476E,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:1的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+G7A+G113A+F116W+D123N+T131V+Q136K+E169Q+K172Q+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+N94D+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+I409L+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474F、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205N+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Q+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474F、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394D+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180Q+S181*+T182*+A185Q+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A和
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:1的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476A、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420P+N474L、
H1*+G7A+G73L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G475K、
N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+V103I+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+P146H+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+R414M+G475K、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+P146H+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180Q+S181*+T182*+A185Q+E189P+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+N422V+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
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H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N196I+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420Y+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A和
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:1的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+V365I+E390A+N474L、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+N474F、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390D+H420P+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+Q360Y+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205N+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180Q+S181*+T182*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+Y371N+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420Q+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G476H、
H1*+G7A+R37A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G476A、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+Y371N+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+R414M+G476H、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G476A、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G476H、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G476H、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394D+H420A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Q+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3G+G7A+V104M+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3G+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K、
N3G+G7A+R37V+D118T+W140M+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+N394D+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K和
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:1的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+G7A+N106D+A109G+F116W+D123N+N126D+T131I+T165V+N174S+R180*+S181*+T182I+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+H420A+N474L、
H1*+N3D+G7A+K93R+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+W346N+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476A、
H1*+G7A+R37N+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3G+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+G361M+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+N174K+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321Y+L354V+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+Q360M+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K和
H1*+G7A+A31S+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:1的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:1的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+N54S+V56T+K72R+G113Q+F116Q+D118Q+D123N+N126D+T131I+K142G+D144N+W167F+K172G+N174S+S181T+T182*+G183*+F202Y+E390A+F395Y+K457R+S472R+V473C+G475K,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:1的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+N54S+V56T+K72R+N106D+A109G+G113Q+F116Q+D118Q+D123N+N126D+T131I+K142G+D144N+W167F+K172G+N174S+S181T+T182*+G183*+F202Y+E390A+F395Y+K457R+S472R+V473C+G475K,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:2的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:E169I+R180*+S181*、T114K+R180*+S181*、W167A+R180*+S181*、E169V+R180*+S181*、R180*+S181*+W188C、W167D+R180*+S181*、Y177D+R180*+S181*、W167S+R180*+S181*、W167E+R180*+S181*、W167P+R180*+S181*、R180*+S181*+L205R、R180*+S181*+A203F、W159L+R180*+S181*、Y160P+R180*+S181*、W159H+R180*+S181*、K178A+R180*+S181*、R180*+S181*+G183P、Q136T+R180*+S181*、K142P+R180*+S181*、K142E+R180*+S181*、Y152L+R180*+S181*、A111L+R180*+S181*、G110K+R180*+S181*、A111G+R180*+S181*和V117G+R180*+S181*,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:2的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:R180*+S181*+E193I+H323N,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:2的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*、G7H+W167P+R180*+S181*+G455R和Q98L+V103A+G110K+R180*+S181*,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:2的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:A60V+Q98L+G110K+R180*+S181*+A383D,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:2的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:F116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y和Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+T315A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:2的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K和H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:2的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+G7A+R180*+S181*+T182S+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+T182L+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+S181L+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180S+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A60P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105I+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182G+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182M+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185K+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185N+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185R+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244L+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W167P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7H+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E390A+G475K和L63F+W140Y+L173F+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+H323W,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:2的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
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在一方面,SEQ ID NO:2的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
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H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+I137F+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7H+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+D405G+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+T256A+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474L、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475E、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474F、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+R414M+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323W+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321Y+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360M+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K和
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:2的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+S286K+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+P146S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302T+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474F+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N422V+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N470A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242L+E259G+N279S+G303R+W346N+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+H420P+G475K、
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H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y371S+E390A+G475K、
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H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A41D+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K和
H1*+G7A+T40G+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:2的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
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H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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在一方面,SEQ ID NO:2的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R37N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470A+G475K、
H1*+G7A+S132L+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K和T40N+F116L+D123N+N126D+N128Y+T131I+F155W+R180*+S181*+T182D+E189P+F202Y+K457N+P458S+G475K+G476E,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:2的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+G7A+G113A+F116W+D123N+T131V+Q136K+E169Q+K172Q+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+N94D+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+I409L+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474F、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205N+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394D+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180Q+S181*+T182*+A185Q+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A和
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:2的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476A、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420P+N474L、
H1*+G7A+G73L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G475K、
N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+V103I+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+P146H+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+R414M+G475K、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+P146H+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+G475K
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N196I+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420Y+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A和
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:2的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+V365I+E390A+N474L、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+N474F、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390D+H420P+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+Q360Y+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205N+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180Q+S181*+T182*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+Y371N+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420Q+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G476H、
H1*+G7A+R37A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G476A、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+Y371N+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+R414M+G476H、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G476A、
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H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Q+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3G+G7A+V104M+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3G+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+G475K、
N3G+G7A+R37V+D118T+W140M+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+N394D+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K和
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:2的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+G7A+N106D+A109G+F116W+D123N+N126D+T131I+T165V+N174S+R180*+S181*+T182I+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+H420A+N474L、
H1*+N3D+G7A+K93R+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+W346N+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476A、
H1*+G7A+R37N+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3G+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
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H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+N174K+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321Y+L354V+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+Q360M+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K和
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在一方面,SEQ ID NO:2的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:2的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+N54S+V56T+K72R+G113Q+F116Q+D118Q+D123N+N126D+T131I+K142G+D144N+W167F+K172G+N174S+S181T+T182*+G183*+F202Y+E390A+F395Y+K457R+S472R+V473C+G475K,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:2的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+N54S+V56T+K72R+N106D+A109G+G113Q+F116Q+D118Q+D123N+N126D+T131I+K142G+D144N+W167F+K172G+N174S+S181T+T182*+G183*+F202Y+E390A+F395Y+K457R+S472R+V473C+G475K,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:3的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:E169I+R180*+S181*、T114K+R180*+S181*、W167A+R180*+S181*、E169V+R180*+S181*、R180*+S181*+W188C、W167D+R180*+S181*、Y177D+R180*+S181*、W167S+R180*+S181*、W167E+R180*+S181*、W167P+R180*+S181*、R180*+S181*+L205R、R180*+S181*+A203F、W159L+R180*+S181*、Y160P+R180*+S181*、W159H+R180*+S181*、K178A+R180*+S181*、R180*+S181*+G183P、Q136T+R180*+S181*、K142P+R180*+S181*、K142E+R180*+S181*、Y152L+R180*+S181*、A111L+R180*+S181*、G110K+R180*+S181*、A111G+R180*+S181*和V117G+R180*+S181*,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:3的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:R180*+S181*+E193I+H323N,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:3的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*、G7H+W167P+R180*+S181*+G455R和Q98L+V103A+G110K+R180*+S181*,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:3的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:A60V+Q98L+G110K+R180*+S181*+A383D,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:3的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:F116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y和Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+T315A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:3的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、H1*+G7A+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K和H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:3的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+G7A+R180*+S181*+T182S+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+T182L+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+S181L+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180S+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A60P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105I+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182G+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182M+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185K+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185N+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185R+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244L+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
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H1*+G7A+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7H+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E390A+G475K和L63F+W140Y+L173F+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+H323W,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:3的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+S286L+G303R+Y362V+E390A+G475K、
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H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H323A+E390A+G475K、
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H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E359W+E390A+G475K和W140Y+L173F+R180*+S181*+N194F+L205Y+N225S+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ IDNo:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:3的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280F+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E359W+Q360W+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M322Y+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+E390A+G475K、
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+I137F+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7H+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+D405G+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+T256A+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474L、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475E、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474F、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+R414M+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+H323W+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321Y+E390A+G475K、
H1*+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Q360M+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K和
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:3的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+S286K+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+P146S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+S302T+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N474F+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N422V+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+N470A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242L+E259G+N279S+G303R+W346N+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+H420P+G475K、
H1*+G7A+R26Y+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y371S+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A41D+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K和
H1*+G7A+T40G+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:3的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+S181*+T182*+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+T134D+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+I176V+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D123N+W140Y+I176V+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+T315A+E390A+G475K、
H1*+A60V+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+T151A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+K258V+E259V+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+N94D+Q98L+G110K+R180*+S181*+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+T151A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+K258V+E259V+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+T427L+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A和H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:3的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+N106D+A109G+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205V+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R37N+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470A+G475K、
H1*+G7A+S132L+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K和T40N+F116L+D123N+N126D+N128Y+T131I+F155W+R180*+S181*+T182D+E189P+F202Y+K457N+P458S+G475K+G476E,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:3的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+G7A+G113A+F116W+D123N+T131V+Q136K+E169Q+K172Q+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+N94D+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116N+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+I409L+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474F、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205V+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205N+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Q+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+T256D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474F、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394W+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+N394D+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180Q+S181*+T182*+A185Q+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A和
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:3的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205V+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+W140Y+R180*+S181*+N194F+F202Y+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+S243Q+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476A、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420P+N474L、
H1*+G7A+G73L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G476H、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G475K、
N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+V103I+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+P146H+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+R414M+G475K、
H1*+G7A+T40G+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+G475K
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
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H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394W+G475K、
H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N196I+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185D+E189P+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420Y+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A和
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:3的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+V365I+E390A+N474L、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+N474F、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390D+H420P+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420P+G475K、
H1*+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+E390A+N474L、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321H+Q360Y+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205N+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180Q+S181*+T182*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+Q98L+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+T224F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+Y371N+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321Y+E390A+G475K、
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H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K和
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:3的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+G7A+N106D+A109G+F116W+D123N+N126D+T131I+T165V+N174S+R180*+S181*+T182I+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+H420A+N474L、
H1*+N3D+G7A+K93R+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+N474L、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+W346N+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+Y135E+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F261P+N279S+K280Y+G303R+Y362V+E390A+G475K、
H1*+N3G+G7A+D118T+Q138V+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G476A、
H1*+G7A+R37N+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+N394D+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3G+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+G361M+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+S132D+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394D+H420A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+N174K+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+N394W+G475K、
H1*+G7A+R37A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+P321Y+L354V+N394D+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+H323W+Q360M+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K和
H1*+G7A+A31S+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:3的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+G7A+D118T+S132L+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:3的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+N54S+V56T+K72R+G113Q+F116Q+D118Q+D123N+N126D+T131I+K142G+D144N+W167F+K172G+N174S+S181T+T182*+G183*+F202Y+E390A+F395Y+K457R+S472R+V473C+G475K,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
在一方面,SEQ ID NO:3的α-淀粉酶变体在对应于以下的位置处包含修饰:
H1*+N54S+V56T+K72R+N106D+A109G+G113Q+F116Q+D118Q+D123N+N126D+T131I+K142G+D144N+W167F+K172G+N174S+S181T+T182*+G183*+F202Y+E390A+F395Y+K457R+S472R+V473C+G475K,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
这些变体可以进一步在一个或多个(例如几个)其他位置处包含一个或多个另外的取代和/或缺失。
氨基酸改变可以具有微小性质,即,不会显著地影响蛋白质的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入;典型地1至30个氨基酸的小缺失;小的氨基末端或羧基末端延伸,如氨基末端的甲硫氨酸残基;多达20-25个残基的小接头肽;或小的延伸,其通过改变净电荷或另一功能(如聚组氨酸段、抗原表位或结合结构域)来促进纯化。
因此,尽管用于本发明的α-淀粉酶变体可以仅包含一种特定的取代(该取代提供根据本发明的改善的特性),但是它可能仍然具有另外的修饰,这些修饰导致α-淀粉酶变体与SEQ ID No:1、2或3的氨基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%但小于100%的序列同一性。这些另外的修饰应优选不显著改变α-淀粉酶变体的改善的特性。
保守取代的实例是在下组之内:碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸及组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸及缬氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸及酪氨酸)及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸及甲硫氨酸)。一般不会改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的并且例如由H.Neurath和R.L.Hill,1979,于The Proteins[蛋白质],Academic Press[学术出版社],纽约中描述。常见取代为Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu和Asp/Gly。
可以根据本领域中已知的程序,如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(Cunningham和Wells,1989,Science[科学]244:1081-1085)来鉴定多肽中的必需氨基酸。在后一项技术中,在该分子中的每个残基处引入单个丙氨酸突变,并且对所得突变体分子的蛋白酶活性进行测试以鉴定对于该分子的活性至关重要的氨基酸残基。还参见,Hilton等人,1996,J.Biol.Chem.[生物化学杂志]271:4699-4708。酶或其他生物学相互作用的活性位点还可通过对结构的物理分析来确定,如由下述技术确定:核磁共振、晶体学(crystallography)、电子衍射、或光亲和标记,连同对推定的接触位点氨基酸进行突变。参见例如,de Vos等人,1992,Science[科学]255:306-312;Smith等人,1992,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]224:899-904;Wlodaver等人,1992,FEBS Lett.[欧洲生化学会联合会快报]309:59-64。
在一方面,用于本发明的α-淀粉酶变体相对于亲本多肽具有改善的特性,其中该改善的特性选自由以下组成的组:增加的催化效率、增加的催化速率、增加的化学稳定性、增加的氧化稳定性、增加的pH活性、增加的pH稳定性、增加的比活性、存储条件下增加的稳定性、增加的底物结合、增加的底物切割、增加的底物特异性、增加的底物稳定性、增加的表面特性、增加的热活性和增加的热稳定性。
在实施例中,与亲本多肽相比,一种或多种α-淀粉酶变体具有改善的(增加的)比活性。
在实施例中,与亲本多肽相比,一种或多种α-淀粉酶变体具有改善的(增加的)洗涤性能。
在实施例中,与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3相比,一种或多种α-淀粉酶变体具有改善的(增加的)洗涤性能。
在一方面,一种或多种α-淀粉酶变体相对于所述亲本多肽具有改善的(增加的)特性,其中所述改善的特性是测量为增加的比活性的改善的洗涤性能,并且其中所述增加的比活性是在模式A洗涤剂(Model Adetergent)组合物中。
在一方面,一种或多种α-淀粉酶变体相对于所述亲本多肽具有改善的(增加的)特性,其中所述改善的特性是测量为增加的比活性的改善的洗涤性能,并且其中所述增加的比活性是在如实例中所述的微样片测定和/或AMSA测定中在模式A洗涤剂组合物中。
在一方面,一种或多种α-淀粉酶变体相对于所述亲本多肽具有测量为增加的比活性的改善的洗涤性能,该增加的比活性在模式A洗涤剂组合物中测量为如下的改善因子(IF):>1.0、至少1.1、至少1.2、至少1.3、至少1.4、至少1.5、至少1.6、至少1.7、至少1.8、至少1.9、至少2.0、至少2.5、至少3.0、至少3.5、至少4.0、至少4.5、至少5.0、至少5.5、至少6.0、至少6.5、至少7.0、至少7.5、至少8.0、至少8.5、至少9.0、至少9.5、至少10.0。
在一方面,一种或多种α-淀粉酶变体相对于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ IDNO:3具有测量为增加的比活性的改善的洗涤性能,该增加的比活性在模式A洗涤剂组合物中测量为如下改善因子(IF):>1.0、至少1.1、至少1.2、至少1.3、至少1.4、至少1.5、至少1.6、至少1.7、至少1.8、至少1.9、至少2.0、至少2.5、至少3.0、至少3.5、至少4.0、至少4.5、至少5.0、至少5.5、至少6.0、至少6.5、至少7.0、至少7.5、至少8.0、至少8.5、至少9.0、至少9.5、至少10.0。
在一方面,一种或多种α-淀粉酶变体相对于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ IDNO:3具有测量为增加的比活性的改善的洗涤性能,该增加的比活性在模式A洗涤剂组合物中测量为如下改善因子(IF):>1.0、至少1.1、至少1.2、至少1.3、至少1.4、至少1.5、至少1.6、至少1.7、至少1.8、至少1.9、至少2.0、至少2.5、至少3.0、至少3.5、至少4.0、至少4.5、至少5.0、至少5.5、至少6.0、至少6.5、至少7.0、至少7.5、至少8.0、至少8.5、至少9.0、至少9.5、至少10.0。
在一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、476,使用SEQ ID NO.1进行编号,并且其中所述α-淀粉酶变体具有测量为改善因子(IF)>1.1的增加的比活性的改善的洗涤性能,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的位置处包含修饰:H1、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、R180、S181、T182、G183、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475、G476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述α-淀粉酶变体具有测量为增加的比活性的改善的洗涤性能,该增加的比活性测量为改善因子(IF)>1.1,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、Y242F、Y242Y、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,使用SEQ IDNO:1进行编号,并且其中所述α-淀粉酶变体具有测量为改善因子(IF)>1.1的增加的比活性的改善的洗涤性能,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述α-淀粉酶变体在模式A洗涤剂组合物中具有测量为改善因子(IF)>1.1的增加的比活性的改善的洗涤性能,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的位置处包含修饰:H1、H2、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、R180、S181、T182、G183、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475、G476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述α-淀粉酶变体在模式A洗涤剂组合物中具有测量为改善因子(IF)>1.1的增加的比活性的改善的洗涤性能,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、Y242F、Y242Y、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,使用SEQ IDNO:1进行编号,并且其中所述α-淀粉酶变体在模式A洗涤剂组合物中具有测量为改善因子(IF)>1.1的增加的比活性的改善的洗涤性能,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述α-淀粉酶变体在模式A洗涤剂组合物中具有测量为改善因子(IF)>1.1的增加的比活性的改善的洗涤性能,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的位置处包含修饰:H1、H2、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、R180、S181、T182、G183、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475、G476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述α-淀粉酶变体在模式A洗涤剂组合物中具有测量为改善因子(IF)>1.1的增加的比活性的改善的洗涤性能,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,α-淀粉酶变体在对应于以下位置的位置处包含修饰:H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、Y242F、Y242Y、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,使用SEQ IDNO:1进行编号,并且其中所述α-淀粉酶变体在模式A洗涤剂组合物中具有测量为改善因子(IF)>1.1的增加的比活性的改善的洗涤性能,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
在一方面,与亲本多肽相比,α-淀粉酶变体在模式A洗涤剂组合物中具有测量为改善因子(IF)>1.1的增加的比活性的改善的洗涤性能,并且其中所述变体选自由以下组成的组:
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+T182S+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+T182L+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+S181L+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180S+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+A60P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+M105L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+M105I+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+T182D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+T182E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+T182G+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+T182M+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+A185K+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+A185D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+A185N+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+A185R+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+A185E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244L+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280F+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280F+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+S181*+T182*+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E359W+Q360W+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q360W+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E359W+Q360W+E390A+G475K
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K
H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+S286K+G303R+Y362V+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+W283N+S286K+G303R+H320T+H323A+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+P321H+M322Y+Q360Y+E390A+G475K
H1*+G7A+D123N+I176V+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+G113A+F116W+D123N+T131V+Q136K+E169Q+K172Q+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+G113S+F116W+D123N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+F116L+D123N+N126D+T131I+R180*+S181*+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+N106D+A109G+F116W+D123N+N126D+T131I+T165V+N174S+R180*+S181*+T182I+F202Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+H320T+E390A+G475K
H1*+G7S+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+M322G+Q360W+E390A+G475K
H1*+G7A+T40N+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7S+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261K+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K
H1*+G7A+T40N+Q98L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K
H1*+G7S+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+E390A+G475K
H1*+G7A+I137F+R180*+S181*+Y242F+E259G+F261S+N279S+G303R+Y362V+E390A+G475K
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K
R180*+S181*
T40N+F116L+D123N+N126D+N128Y+T131I+F155W+R180*+S181*+T182D+E189P+F202Y+K457N+P458S+G475K+G476E
A60V+Q98L+G110K+R180*+S181*+A383D
Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+T315A
G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*
G7H+W167P+R180*+S181*+G455R
Q98L+V103A+G110K+R180*+S181*
T114K+R180*+S181*
E169V+R180*+S181*
R180*+S181*+W188C
W167D+R180*+S181*
W167S+R180*+S181*
W167E+R180*+S181*
W167P+R180*+S181*
R180*+S181*+E193I+H323N
R180*+S181*+A203F
W159L+R180*+S181*
W159H+R180*+S181*
K178A+R180*+S181*
A111L+R180*+S181*
G110K+R180*+S181*
A111G+R180*+S181*,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ IDNo:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
多核苷酸
本发明还涉及编码本发明的一种或多种α-淀粉酶变体的多核苷酸。
在一方面,编码α-淀粉酶变体的多核苷酸在对应于以下位置的一个或多个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、476,使用SEQ ID NO.1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
用于分离或克隆多核苷酸的技术是本领域已知的且包括从基因组DNA或cDNA或其组合进行分离。来自基因组DNA的多核苷酸的克隆可以例如通过使用聚合酶链式反应(PCR)或用以对具有共有的结构特征的克隆的DNA片段进行检测的表达库抗体筛选来实现。参见例如,Innis等人,1990,PCR:A Guide to Methods and Application[PCR:方法和应用指南],Academic Press[学术出版社],纽约。可以使用其他核酸扩增程序如连接酶链式反应(LCR)、连接激活的转录(LAT)和基于多核苷酸的扩增(NASBA)。多核苷酸可从木霉属、蜡蚧菌属、拟青霉属、曲霉属、棒囊菌属、端梗孢属、枝霉属、碳垫菌属、篮状菌属、Collariella、硬孔菌属和/或Loramyces的菌株或相关生物体中克隆,因此,例如,可以是多核苷酸的多肽编码区的种类变体。
编码本发明的一种或多种α-淀粉酶变体的多核苷酸的修饰对于合成基本上类似于该多肽的多肽可以是必需的。术语“基本上类似”于该多肽是指多肽的非天然存在的形式。这些多肽可以因某种工程化方式而与从其天然来源分离的多肽不同,例如在比活性、热稳定性、最适pH等方面不同的变体。可以如下构建变体:基于作为成熟多肽编码序列(例如,其子序列)所提出的多核苷酸,和/或通过引入核苷酸取代,这些核苷酸取代不导致多肽的氨基酸序列变化,但是对应于旨在用于产生酶的宿主生物的密码子使用,或通过引入可以产生不同氨基酸序列的核苷酸取代。对于核苷酸取代的一般描述,参见例如Ford等人,1991,Protein Expression and Purification[蛋白质表达与纯化]2:95-107。
核酸构建体
本发明还涉及核酸构建体,这些核酸构建体包含编码本发明的一种或多种α-淀粉酶变体的多核苷酸。
在一方面,核酸构建体包含编码α-淀粉酶变体的多核苷酸,这些α-淀粉酶变体在对应于如下位置的一个或多个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、476,使用SEQ ID NO:1进行编号,其中在与控制序列相容的条件下,该多核苷酸可操作地连接至一个或多个控制序列,该一个或多个控制序列指导该编码序列在适合的宿主细胞中的表达。
本发明还涉及包含编码本发明的一种或多种α-淀粉酶变体的、可操作地连接至一个或多个控制序列上的多核苷酸的核酸构建体,该一个或多个控制序列在与控制序列相容的条件下指导编码序列在适合的宿主细胞中表达。
可以按多种方式来操纵多核苷酸以提供变体的表达。取决于表达载体,在多核苷酸插入载体之前对其进行操作可以是理想的或必需的。用于利用重组DNA方法修饰多核苷酸的技术是本领域熟知的。
控制序列可以是启动子,即由宿主细胞识别用于表达该多核苷酸的多核苷酸。启动子含有介导变体的表达的转录控制序列。启动子可以是在宿主细胞中显示转录活性的任何多核苷酸,包括突变型、截短型和杂合型启动子,并且可以获得自编码与宿主细胞同源或异源的细胞外或细胞内多肽的基因。
用于在细菌宿主细胞中指导本发明核酸构建体的转录的适合启动子的实例是从以下基因中获得的启动子:解淀粉芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyQ)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyL)、地衣芽孢杆菌青霉素酶基因(penP)、嗜热脂肪芽孢杆菌产麦芽糖淀粉酶基因(amyM)、枯草芽孢杆菌果聚糖蔗糖酶基因(sacB)、枯草芽孢杆菌xylA和xylB基因、苏云金芽孢杆菌cryIIIA基因(Agaisse和Lereclus,1994,Molecular Microbiology[分子微生物学]13:97-107)、大肠杆菌lac操纵子、大肠杆菌trc启动子(Egon等人,1988,Gene[基因]69:301-315)、天蓝链霉菌琼脂水解酶基因(dagA)和原核β-内酰胺酶基因(Villa-Kamaroff等人,1978,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]75:3727-3731)以及tac启动子(DeBoer等人,1983,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]80:21-25)。其他启动子描述于Gilbert等人,1980,Scientific American[科学美国人]242:74-94的“Usefulproteins from recombinant bacteria[来自重组细菌的有用蛋白质]”;和Sambrook等人,1989,同上。串联启动子的实例披露于WO 99/43835中。
用于在丝状真菌宿主细胞中指导本发明多核苷酸的转录的适合的启动子的实例是从以下基因中获得的启动子:构巢曲霉(Aspergillus nidulans)乙酰胺酶、黑曲霉(Aspergillus niger)中性α-淀粉酶、黑曲霉酸稳定性α-淀粉酶、黑曲霉或泡盛曲霉(Aspergillus awamori)葡糖淀粉酶(glaA)、米曲霉(Aspergillus oryzae)TAKA淀粉酶、米曲霉碱性蛋白酶、米曲霉丙糖磷酸异构酶、尖孢镰孢(Fusarium oxysporum)胰蛋白酶样蛋白酶(WO 96/00787)、镶片镰孢(Fusarium venenatum)淀粉葡糖苷酶(WO 00/56900)、镶片镰孢Daria(WO 00/56900)、镶片镰孢Quinn(WO 00/56900)、米黑根毛霉(Rhizomucormiehei)脂肪酶、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶、里氏木霉(Trichoderma reesei)β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉木聚糖酶I、里氏木霉木聚糖酶II、里氏木霉木聚糖酶III、里氏木霉β-木糖苷酶以及里氏木霉翻译延伸因子,连同NA2-tpi启动子(来自曲霉属中性α-淀粉酶基因的经修饰的启动子,其中已经用来自曲霉属丙糖磷酸异构酶基因的未翻译的前导序列替代未翻译的前导序列;非限制性实例包括来自黑曲霉中性α-淀粉酶基因的经修饰的启动子,其中已经用来自构巢曲霉或米曲霉丙糖磷酸异构酶基因的未翻译的前导序列替代未翻译的前导序列);及其突变型、截短型及杂合型启动子。其他启动子在美国专利号6,011,147中描述。
在酵母宿主中,有用的启动子从以下的基因中获得:酿酒酵母烯醇酶(ENO-1)、酿酒酵母半乳糖激酶(GAL1)、酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(ADH1、ADH2/GAP)、酿酒酵母磷酸丙糖异构酶(TPI)、酿酒酵母金属硫蛋白(CUP1)、以及酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶。酵母宿主细胞的其他有用的启动子由Romanos等人,1992,Yeast[酵母]8:423-488描述。
控制序列也可为由宿主细胞识别以终止转录的转录终止子。终止子可操作地连接至编码多肽的多核苷酸的3'末端。在宿主细胞中有功能的任何终止子可用于本发明中。
细菌宿主细胞的优选终止子从以下的基因获得:克劳氏芽孢杆菌碱性蛋白酶(aprH)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶(amyL)、和大肠杆菌核糖体RNA(rrnB)。
用于丝状真菌宿主细胞的优选终止子从以下的基因获得:构巢曲霉乙酰胺酶、构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶、尖孢镰孢胰蛋白酶样蛋白酶、里氏木霉β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉木聚糖酶I、里氏木霉木聚糖酶II、里氏木霉木聚糖酶III、里氏木霉β-木糖苷酶以及里氏木霉翻译延伸因子。
酵母宿主细胞的优选终止子从以下的基因中获得:酿酒酵母烯醇酶、酿酒酵母细胞色素C(CYC1)以及酿酒酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶。酵母宿主细胞的其他有用的终止子由Romanos等人(1992,同上)描述。
控制序列还可以是启动子下游和基因的编码序列上游的mRNA稳定子区域,其增加该基因的表达。
适合的mRNA稳定子区域的实例是从以下获得的:苏云金芽孢杆菌cryIIIA基因(WO94/25612)和枯草芽孢杆菌SP82基因(Hue等人,1995,J.Bacteriol.[细菌学杂志]177:3465-3471)。
控制序列也可以是前导序列,即对宿主细胞翻译很重要的mRNA的非翻译区域。前导序列可操作地连接至编码多肽的多核苷酸的5'末端。可以使用在宿主细胞中有功能的任何前导序列。
用于丝状真菌宿主细胞的优选前导序列从米曲霉TAKA淀粉酶和构巢曲霉丙糖磷酸异构酶的基因获得。
酵母宿主细胞的适合的前导序列从以下的基因中获得:酿酒酵母烯醇酶(ENO-1)、酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶、酿酒酵母α-因子和酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(ADH2/GAP)。
控制序列还可以是多腺苷酸化序列,一种可操作地连接至该多核苷酸的3’末端并且当转录时由宿主细胞识别为将多腺苷酸残基添加至所转录的mRNA的信号的序列。可以使用在宿主细胞中有功能的任何多腺苷酸化序列。
丝状真菌宿主细胞的优选多腺苷酸化序列从以下的基因获得:构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶、以及尖孢镰孢胰蛋白酶样蛋白酶。
酵母宿主细胞的有用的多腺苷酸化序列由Guo和Sherman,1995,Mol.CellularBiol.[分子细胞生物学]15:5983-5990描述。
控制序列还可以是编码与多肽的N-末端连接的信号肽并指导多肽进入细胞的分泌途径的信号肽编码区。多核苷酸的编码序列的5’端本身可以含有在翻译阅读框中天然与编码多肽的编码序列区段相连接的信号肽编码序列。可替代地,编码序列的5’端可以含有对于该编码序列是异源的信号肽编码序列。在编码序列天然地不含有信号肽编码序列的情况下,可能需要异源信号肽编码序列。可替代地,异源信号肽编码序列可以单纯地替代天然信号肽编码序列以便增强多肽的分泌。然而,可以使用指导已表达多肽进入宿主细胞的分泌途径的任何信号肽编码序列。
用于细菌宿主细胞的有效信号肽编码序列是从芽孢杆菌NCIB 11837产麦芽糖淀粉酶、地衣芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶、地衣芽孢杆菌β-内酰胺酶、嗜热脂肪芽孢杆菌α-淀粉酶、嗜热脂肪芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT、nprS、nprM)、和枯草芽孢杆菌prsA的基因获得的信号肽编码序列。另外的信号肽由Simonen和Palva,1993,Microbiol.Rev.[微生物评论]57:109-137描述。
用于丝状真菌宿主细胞的有效的信号肽编码序列是从以下酶的基因获得的信号肽编码序列:黑曲霉中性淀粉酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、米曲霉TAKA淀粉酶、特异腐质霉纤维素酶、特异腐质霉内切葡聚糖酶V、疏棉状腐质霉脂肪酶和米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶。
对于酵母宿主细胞而言可用的信号肽从酿酒酵母α-因子和酿酒酵母转化酶的基因中获得。其他的有用的信号肽编码序列由Romanos等人(1992,同上)描述。
控制序列还可以是编码位于多肽的N-末端的前肽的前肽编码序列。所得的多肽被称为前体酶(proenzyme)或多肽原(或在一些情况下被称为酶原(zymogen))。多肽原通常是无活性的并且可通过催化切割或自身催化切割来自多肽原的前肽而转化为活性多肽。前肽编码序列可以从以下的基因获得:枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶(aprE)、枯草芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT)、嗜热毁丝霉漆酶(WO 95/33836)、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶和酿酒酵母α-因子。
在信号肽序列和前肽序列二者都存在的情况下,该前肽序列位于紧邻多肽的N-末端且该信号肽序列位于紧邻前肽序列的N-末端。
还可希望的是添加调节序列,这些调节序列调节宿主细胞生长相关的多肽的表达。调节序列的实例是引起基因表达以响应于化学或物理刺激(包括调节化合物的存在)而开启或关闭的那些。原核系统中的调节序列包括lac、tac、和trp操纵子系统。在酵母中,可以使用ADH2系统或GAL1系统。在丝状真菌中,可以使用黑曲霉葡糖淀粉酶启动子、米曲霉TAKAα-淀粉酶启动子和米曲霉葡糖淀粉酶启动子、里氏木霉纤维二糖水解酶I启动子以及里氏木霉纤维二糖水解酶II启动子。调节序列的其他实例是允许基因扩增的那些序列。在真核系统中,这些调节序列包括在甲氨蝶呤存在下扩增的二氢叶酸还原酶基因以及用重金属扩增的金属硫蛋白基因。在这些情况中,编码多肽的多核苷酸会与调节序列可操作地连接。
表达载体
本发明还涉及包含编码本发明的一种或多种α-淀粉酶变体的多核苷酸、启动子、以及转录和翻译终止信号的重组表达载体。各种核苷酸和控制序列可以连接在一起以产生重组表达载体,该重组表达载体可以包括一个或多个合宜的限制位点以允许在此类位点处插入或取代编码变体的多核苷酸。可替代地,可以通过将多核苷酸或包含该多核苷酸的核酸构建体插入用于表达的适当载体中而表达该多核苷酸。在产生表达载体时,编码序列位于载体中,使得编码序列与用于表达的适当控制序列可操作地连接。
在一方面,重组载体包含编码α-淀粉酶变体的多核苷酸、启动子、以及转录和翻译终止信号,该α-淀粉酶变体在对应于如下位置的一个或多个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、476,使用SEQ ID NO:1进行编号。各种核苷酸和控制序列可以连接在一起以产生重组表达载体,该重组表达载体可以包括一个或多个(几个)合宜的限制性位点以允许在这样的位点插入或取代编码变体的多核苷酸。可替代地,可以通过将多核苷酸或包含该多核苷酸的核酸构建体插入用于表达的适当载体中而表达该多核苷酸。在产生表达载体时,编码序列位于载体中,使得编码序列与用于表达的适当控制序列可操作地连接。
重组表达载体可以是可以方便地经受重组DNA程序并且可以引起多核苷酸表达的任何载体(例如,质粒或病毒)。载体的选择将典型地取决于载体与待引入载体的宿主细胞的相容性。载体可以是直链或闭合环状质粒。
载体可以是自主复制载体,即作为染色体外实体存在的载体,其复制独立于染色体复制,例如质粒、染色体外元件、微染色体或人工染色体。载体可以含有用于确保自我复制的任何手段。可替代地,载体可以是这样的载体,当它引入宿主细胞中时整合入基因组中并与其中已整合了它的一个或多个染色体一起复制。此外,可以使用单独的载体或质粒或两个或更多个载体或质粒,其共同含有待引入宿主细胞基因组的总DNA,或可以使用转座子。
载体优选地含有允许方便地选择转化细胞、转染细胞、转导细胞等细胞的一个或多个选择性标记。选择性标记是一种基因,其产物提供了杀生物剂抗性或病毒抗性、对重金属抗性、对营养缺陷型的原养型等。
细菌选择性标记的实例是地衣芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌dal基因、或赋予抗生素抗性(如氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、新霉素、大观霉素、或四环素抗性)的标记。酵母宿主细胞的适合的标记包括但不限于:ADE2、HIS3、LEU2、LYS2、MET3、TRP1和URA3。用于在丝状真菌宿主细胞中使用的选择性标记包括但不限于adeA(磷酸核糖酰氨基咪唑-琥珀羧胺合酶)、adeB(磷酸核糖酰-氨基咪唑合酶)、amdS(乙酰胺酶)、argB(鸟氨酸氨甲酰基转移酶)、bar(草丁膦乙酰转移酶)、hph(潮霉素磷酸转移酶)、niaD(硝酸还原酶)、pyrG(乳清酸核苷-5'-磷酸脱羧酶)、sC(硫酸腺苷基转移酶)以及trpC(邻氨基苯甲酸合酶)连同其等同物。优选的用于曲霉属细胞中的是构巢曲霉或米曲霉amdS和pyrG基因以及吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)bar基因。优选的用于木霉属细胞的是adeA、adeB、amdS、hph以及pyrG基因。
选择性标记可以是如WO 2010/039889中所述的双选择性标记系统。在一方面,双选择性标记是hph-tk双选择性标记系统。
载体优选地含有允许载体整合到宿主细胞的基因组中或载体在细胞中独立于基因组自主复制的一个或多个元件。
对于整合到宿主细胞基因组中,载体可以依靠编码该多肽的多核苷酸序列或用于通过同源或非同源重组整合到该基因组中的载体的任何其他元件。可替代地,载体可以含有用于指导通过同源重组而整合入宿主细胞基因组中的一个或多个染色体中的一个或多个精确位置处的另外的多核苷酸。为了增加在精确位置处整合的可能性,整合元件应当含有足够数目的核酸,例如100至10,000个碱基对、400至10,000个碱基对和800至10,000个碱基对,这些核酸与相应的靶序列具有高度序列同一性以增强同源重组的概率。整合元件可以是与宿主细胞基因组内的靶序列同源的任何序列。此外,整合元件可以是非编码或编码的多核苷酸。另一方面,载体可以通过非同源重组整合入宿主细胞的基因组中。
为了自主复制,载体可以进一步包含复制起点,该复制起点使得载体在讨论中的宿主细胞中自主复制成为可能。复制起点可以是在细胞中发挥作用的介导自主复制的任何质粒复制子。术语“复制起点”或“质粒复制子”意指使质粒或载体能够在体内复制的多核苷酸。
细菌复制起点的实例是允许在大肠杆菌中复制的质粒pBR322、pUC19、pACYC177、和pACYC184的复制起点,以及允许在芽孢杆菌属中复制的质粒pUB110、pE194、pTA1060、和pAMβ1的复制起点。
用于酵母宿主细胞中的复制起点的实例是2微米复制起点、ARS1、ARS4、ARS1与CEN3的组合、及ARS4与CEN6的组合。
在丝状真菌细胞中有用的复制起点的实例是AMA1和ANS1(Gems等人,1991,Gene[基因]98:61-67;Cullen等人,1987,Nucleic Acids Res.[核酸研究]15:9163-9175;WO00/24883)。可根据WO 00/24883中披露的方法完成AMA1基因的分离和包含该基因的质粒或载体的构建。
可将本发明多核苷酸的多于一个拷贝插入宿主细胞以提高多肽的产生。通过将序列的至少一个另外的拷贝整合到宿主细胞基因组中或者通过包括与该多核苷酸一起的可扩增的选择性标记基因可以获得多核苷酸的提高的拷贝数目,其中通过在适当的选择性试剂的存在下培养细胞可以选择含有选择性标记基因的经扩增的拷贝以及由此该多核苷酸的另外的拷贝的细胞。
用于连接以上所述的元件以构建本发明的重组表达载体的程序是本领域的普通技术人员熟知的(参见例如,Sambrook等人,1989,同上)。
宿主细胞
本发明还涉及重组宿主细胞,这些重组宿主细胞包含编码本发明的一种或多种α-淀粉酶变体的、可操作地连接至一个或多个控制序列的多核苷酸,该一个或多个控制序列指导本发明的变体的产生。将包含多核苷酸的构建体或载体引入宿主细胞中,这样使得该构建体或载体作为染色体整合体或作为自主复制的染色体外载体维持,如较早前所述。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间出现的突变而与亲本细胞不相同的任何亲本细胞子代。宿主细胞的选择在很大程度上将取决于编码变体的基因及其来源。
宿主细胞可以是在一种或多种α-淀粉酶变体的重组生产中有用的任何细胞,例如原核细胞或真核细胞。
在一些实施例中,多肽与重组宿主细胞是异源的。
在一些实施例中,一个或多个控制序列中的至少一个与编码一种或多种α-淀粉酶变体的多核苷酸是异源的。
在一些实施例中,重组宿主细胞包含本发明的多核苷酸的至少两个拷贝,例如三个、四个或五个。
宿主细胞可以是可用于重组产生本发明的多肽的任何微生物或植物细胞,例如原核细胞或真菌细胞。
原核宿主细胞可以是任何革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌。革兰氏阳性细菌包括但不限于:芽孢杆菌属、梭菌属、肠球菌属、土芽孢杆菌属、乳杆菌属、乳球菌属、大洋芽孢杆菌属、葡萄球菌属、链球菌属以及链霉菌属。革兰氏阴性细菌包括但不限于:弯曲杆菌属、大肠杆菌、黄杆菌属、梭杆菌属、螺杆菌属、泥杆菌属、奈瑟氏菌属、假单胞菌属、沙门氏菌属、以及脲原体属。
细菌宿主细胞可以是任何芽孢杆菌属细胞,包括但不限于嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、坚强芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌以及苏云金芽孢杆菌细胞。
细菌宿主细胞还可以是任何链球菌属细胞,包括但不限于似马链球菌、酿脓链球菌、乳房链球菌和马链球菌兽疫亚种细胞。
细菌宿主细胞还可以是任何链霉菌属细胞,包括但不限于:不产色链霉菌、除虫链霉菌、天蓝链霉菌、灰色链霉菌、以及浅青紫链霉菌细胞。
将DNA引入芽孢杆菌属细胞中可以通过以下方式来实现:原生质体转化(参见例如,Chang和Cohen,1979,Mol.Gen.Genet.[分子与普通遗传学]168:111-115)、感受态细胞转化(参见例如,Young和Spizizen,1961,J.Bacteriol.[细菌学杂志]81:823-829;或Dubnau和Davidoff-Abelson,1971,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]56:209-221)、电穿孔(参见例如,Shigekawa和Dower,1988,Biotechniques[生物技术]6:742-751)、或接合(参见例如,Koehler和Thorne,1987,J.Bacteriol.[细菌学杂志]169:5271-5278)。将DNA引入大肠杆菌细胞中可以通过以下方式来实现:原生质体转化(参见例如,Hanahan,1983,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]166:557-580)或电穿孔(参见例如,Dower等人,1988,Nucleic Acids Res.[核酸研究]16:6127-6145)。将DNA引入链霉菌属细胞中可以通过以下方式来实现:原生质体转化、电穿孔(参见例如,Gong等人,2004,Folia Microbiol.(Praha)[叶线形微生物学(布拉格)]49:399-405)、接合(参见例如,Mazodier等人,1989,J.Bacteriol.[细菌学杂志]171:3583-3585)、或转导(参见例如,Burke等人,2001,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]98:6289-6294)。将DNA引入假单胞菌属细胞中可以通过以下方式来实现:电穿孔(参见例如,Choi等人,2006,J.Microbiol.Methods[微生物学方法杂志]64:391-397)或接合(参见例如,Pinedo和Smets,2005,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]71:51-57)。将DNA引入链球菌属细胞中可以通过以下方式来实现:天然感受态(natural competence)(参见例如,Perry和Kuramitsu,1981,Infect.Immun.[感染与免疫]32:1295-1297)、原生质体转化(参见例如,Catt和Jollick,1991,Microbios[微生物学]68:189-207)、电穿孔(参见例如,Buckley等人,1999,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]65:3800-3804)、或接合(参见例如,Clewell,1981,Microbiol.Rev.[微生物学评论]45:409-436)。然而,可以使用本领域已知的将DNA引入宿主细胞中的任何方法。
宿主细胞可以是真菌细胞。如本文所用的“真菌”包括子囊菌门(Ascomycota)、担子菌门(Basidiomycota)、壶菌门(Chytridiomycota)和接合菌门(Zygomycota)以及卵菌门(Oomycota)和所有有丝分裂孢子真菌(如由Hawksworth等人在以下文献中所定义:Ainsworth and Bisby’s Dictionary of The Fungi[安斯沃思和拜斯比真菌字典],第8版,1995,CAB International[国际应用生物科学中心],University Press[大学出版社],Cambridge,UK[英国剑桥])。
真菌宿主细胞可以为酵母细胞。如本文使用的“酵母”包括产子囊酵母(ascosporogenous yeast)(内孢霉目(Endomycetales))、产担子酵母(basidiosporogenous yeast)和属于半知菌类(Fungi Imperfecti)(芽孢纲(Blastomycetes))的酵母。由于酵母的分类可在将来变化,出于本发明的目的,酵母应当如Biology and Activities of Yeast[酵母的生物学与活性](Skinner,Passmore和Davenport编辑,Soc.App.Bacteriol.Symposium Series No.9[应用细菌学学会专题论文集系列9],1980)中所描述的那样定义。
酵母宿主细胞可以是假丝酵母属(Candida)、汉逊酵母属(Hansenula)、克鲁维酵母属(Kluyveromyces)、毕赤酵母属(Pichia)、酵母属(Saccharomyces)、裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)或耶氏酵母属(Yarrowia)细胞,如乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)、卡尔酵母(Saccharomyces carlsbergensis)、酿酒酵母、糖化酵母(Saccharomyces diastaticus)、道格拉氏酵母(Saccharomyces douglasii)、克鲁弗酵母(Saccharomyces kluyveri)、诺地酵母(Saccharomyces norbensis)、卵形酵母(Saccharomyces oviformis)或解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)细胞。
真菌宿主细胞可为丝状真菌细胞。“丝状真菌”包括真菌门(Eumycota)和卵菌门(Oomycota)的亚门的所有丝状形式(如由Hawksworth等人,1995(同上)所定义的)。丝状真菌通常的特征在于由甲壳素、纤维素、葡聚糖、壳聚糖、甘露聚糖和其他复杂多糖构成的菌丝体壁。营养生长是通过菌丝延伸来进行的,而碳分解代谢是专性需氧的。相反,酵母(如酿酒酵母)的营养生长是通过单细胞菌体的出芽(budding)来进行的,而碳分解代谢可以是发酵性的。
丝状真菌宿主细胞可以是枝顶孢属(Acremonium)、曲霉属、短梗霉属(Aureobasidium)、烟管霉属(Bjerkandera)、拟腊菌属(Ceriporiopsis)、金孢子菌属(Chrysosporium)、鬼伞属(Coprinus)、革盖菌属(Coriolus)、隐球菌属(Cryptococcus)、线黑粉菌科(Filibasidium)、镰孢属(Fusarium)、腐质霉属(Humicola)、梨孢菌属(Magnaporthe)、毛霉属(Mucor)、毁丝霉属(Myceliophthora)、新美鞭菌属(Neocallimastix)、脉胞菌属(Neurospora)、拟青霉属(Paecilomyces)、青霉属(Penicillium)、平革菌属(Phanerochaete)、射脉菌属(Phlebia)、瘤胃壶菌属(Piromyces)、侧耳属(Pleurotus)、裂褶菌属(Schizophyllum)、篮状菌属、嗜热子囊菌属(Thermoascus)、梭孢壳属(Thielavia)、弯颈霉属(Tolypocladium)、栓菌属(Trametes)、或木霉属细胞。
例如,丝状真菌宿主细胞可以是泡盛曲霉、臭曲霉、烟曲霉、日本曲霉、构巢曲霉、黑曲霉、米曲霉、黑刺烟管霉(Bjerkandera adusta)、干拟蜡菌(Ceriporiopsisaneirina)、卡内基拟蜡菌(Ceriporiopsis caregiea)、浅黄拟蜡菌(Ceriporiopsisgilvescens)、潘诺希塔拟蜡菌(Ceriporiopsis pannocinta)、环带拟蜡菌(Ceriporiopsisrivulosa)、微红拟蜡菌(Ceriporiopsis subrufa)、虫拟蜡菌(Ceriporiopsissubvermispora)、狭边金孢子菌(Chrysosporium inops)、嗜角质金孢子菌(Chrysosporiumkeratinophilum)、卢克诺文思金孢子菌(Chrysosporium lucknowense)、粪状金孢子菌(Chrysosporium merdarium)、租金孢子菌(Chrysosporium pannicola)、女王杜香金孢子菌(Chrysosporium queenslandicum)、热带金孢子菌(Chrysosporium tropicum)、褐薄金孢子菌(Chrysosporium zonatum)、灰盖鬼伞(Coprinus cinereus)、毛革盖菌(Coriolushirsutus)、杆孢状镰孢、谷类镰孢、库威镰孢、大刀镰孢、禾谷镰孢、禾赤镰孢、异孢镰孢、合欢木镰孢、尖孢镰孢、多枝镰孢、粉红镰孢、接骨木镰孢、肤色镰孢、拟分枝孢镰孢、硫色镰孢、圆镰孢、拟丝孢镰孢、镶片镰孢、特异腐质霉、疏棉状腐质霉、米黑根毛霉、嗜热毁丝霉、粗糙脉胞菌、产紫青霉、黄孢平革菌(Phanerochaete chrysosporium)、射脉菌(Phlebiaradiata)、刺芹侧耳(Pleurotus eryngii)、埃默森篮状菌、土生梭孢霉、长域毛栓菌(Trametes villosa)、变色栓菌(Trametes versicolor)、哈茨木霉、康宁木霉、长枝木霉、里氏木霉或绿色木霉细胞。
可以将真菌细胞通过涉及原生质体形成、原生质体转化、以及细胞壁再生的方法以本身已知的方式转化。用于转化曲霉属和木霉属宿主细胞的适合程序描述于以下文献中:EP 238023,Yelton等人,1984,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]81:1470-1474以及Christensen等人,1988,Bio/Technology[生物/技术]6:1419-1422。用于转化镰孢属物种的适合方法由Malardier等人,1989,Gene[基因]78:147-156和WO 96/00787描述。可以使用由以下文献描述的程序转化酵母:Becker和Guarente,在Abelson,J.N.和Simon,M.I.编辑,Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology[酵母遗传学与分子生物学指南],Methods in Enzymology[酶学方法],第194卷,第182-187页,AcademicPress,Inc.[学术出版社有限公司],纽约);Ito等人,1983,J.Bacteriol.[细菌学杂志]153:163;以及Hinnen等人,1978,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]75:1920。
α-淀粉酶的产生方法
变体可以通过包括以下的方法产生:(a)在适合该变体的表达的条件下培养本发明的宿主细胞;以及(b)回收该变体。
在一方面,获得α-淀粉酶变体的方法包括:向亲本α-淀粉酶中在对应于以下位置的一个或多个位置处引入修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475、476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且该变体具有α-淀粉酶活性;以及任选地回收该变体。
使用本领域已知的方法在适合于产生杂合体或变体的营养培养基中培养宿主细胞。例如,可以通过摇瓶培养,或者在一种适合的培养基中并在允许该多肽表达和/或分离的条件下在实验室或工业发酵罐中进行小规模或大规模发酵(包括连续发酵、分批发酵、分批给料发酵或固态发酵)来培养该细胞。使用本领域中已知的程序,培养发生在包含碳和氮来源及无机盐的适合的营养培养基中。适合的培养基可从商业供应商获得或可以根据公开的组成(例如,在美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)的目录中)制备。如果杂合体或变体被分泌到营养培养基中,则杂合体或变体可以直接从培养基回收。如果杂合体或变体没有分泌,则它可以从细胞裂解液中回收。
可以使用本领域已知的对杂合体或变体特异的多种方法来检测该杂合体或多肽。这些检测方法可包括特异性抗体的使用、酶产物的形成或酶底物的消失。例如,可以使用酶测定来确定杂合体或变体的活性。
在可替代的方面,不回收杂合体或变体,而是将表达杂合体或变体的本文所述的宿主细胞用作杂合体或变体的来源。
在一方面,一种改善具有α-淀粉酶的多肽的变体的洗涤性能的方法,所述变体具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列,或与其具有至少60%的序列同一性,所述方法包括以下步骤:(a)在具有α-淀粉酶活性的多肽中两个、三个或四个位置的取代和/或缺失,所述位置对应于位置180、181、182和183,使用SEQ ID NO:1进行编号;和(b)在对应于以下位置的一个或多个位置处的修饰:H1、H2、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、R180、S181、T182、G183、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475和G476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性和与所述多肽相比改善的(增加的)洗涤性能。
α-淀粉酶变体颗粒
本发明还涉及包含本发明的一种或多种α-淀粉酶变体的酶颗粒/粒子。在实施例中,颗粒包含核心以及任选地包围该核心的一种或多种包衣(外层)。
核心的直径(测量为当量球径(基于体积的平均粒度))是20-2000μm,特别是50-1500μm、100-1500μm或250-1200μm。
在实施例中,核心包含一种或多种本发明的α-淀粉酶变体。在实施例中,核心包含一种或多种具有本发明的α-淀粉酶变体的多肽。在实施例中,核心包含一种或多种具有α-淀粉酶变体的多肽和/或一种或多种具有本发明的α-淀粉酶变体的多肽。
核心可以包括另外的材料如填料、纤维材料(纤维素或合成纤维)、稳定剂、增溶剂、悬浮剂、粘度调节剂、轻球体、增塑剂、盐、润滑剂和芳香剂。
核心可以包括黏合剂,例如合成聚合物、蜡、脂肪或碳水化合物。
核心典型地作为均匀的共混物可以包括多价阳离子的盐、还原剂、抗氧化剂、过氧化物分解催化剂和/或酸性缓冲液组分。
核心可以包括惰性粒子,其中酶被吸附到该惰性粒子之内,或者被施加(例如通过流化床包衣)到该惰性粒子的表面上。
核心的直径可以是20-2000μm,特别地50-1500μm、100-1500μm或250-1200μm。
核心可以被至少一种包衣包围,例如以改善储存稳定性、以减少在处理过程中的粉尘形成或用于着色该颗粒。一个或多个任选的包衣可以包括盐包衣、或其他适合的包衣材料,如聚乙二醇(PEG)、甲基羟基-丙基纤维素(MHPC)以及聚乙烯醇(PVA)。
可以将包衣按核心的重量计以至少0.1%(例如,至少0.5%、至少1%、至少5%、至少10%或至少15%)的量施加。该量至多可以是100%、70%、50%、40%或30%。
包衣优选地是至少0.1μm厚,特别是至少0.5μm、至少1μm或至少5μm厚。在一些实施例中,包衣的厚度低于100μm,例如低于60μm或低于40μm。
包衣应当通过形成基本上连续的层来密封该核心单元。基本上连续的层应当理解为具有极少或没有孔洞的包衣,使得密封/封闭的核心单元具有极少或没有未包衣的区域。层或包衣特别应在厚度上是均匀的。
包衣可以进一步含有其他本领域已知的材料,例如填料、防粘剂、颜料、染料、增塑剂和/或黏合剂,例如二氧化钛、高岭土、碳酸钙或滑石。
盐包衣可以包含按重量计至少60%的盐,例如按重量计至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%。
为了提供可接受的保护,盐包衣优选地是至少0.1μm厚,例如至少0.5μm、至少1μm、至少2μm、至少4μm、至少5μm或至少8μm。在特定的实施例中,盐包衣的厚度低于100μm,例如低于60μm或低于40μm。
盐可以从盐溶液(其中该盐是完全溶解的)中添加,或者从盐悬浮液(其中这些细粒子是少于50μm,例如少于10μm或少于5μm)中添加。
盐包衣可以包含单一盐或者两种或更多种盐的混合物。盐可以是水溶性的,特别地具有在20℃在100g水中至少0.1g的溶解度,优选地至少0.5g/100g水,例如至少1g/100g水、例如至少5g/100g水。
盐可以是无机盐,例如硫酸盐、亚硫酸盐、磷酸盐、膦酸盐、硝酸盐、氯盐或碳酸盐或者简单有机酸(少于10个碳原子,例如6个或更少的碳原子)的盐例如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。在这些盐中的阳离子的实例是碱或碱土金属离子、铵离子或第一过渡系的金属离子,例如钠、钾、镁、钙、锌或铝。阴离子的实例包括氯、溴、碘、硫酸根、亚硫酸根、亚硫酸氢根、硫代硫酸根、磷酸根、磷酸二氢根、二碱式磷酸根、次磷酸根、焦磷酸二氢根、四硼酸根、硼酸根、碳酸根、碳酸氢根、硅酸根、柠檬酸根、苹果酸根、马来酸根、丙二酸根、琥珀酸根、乳酸根、甲酸根、乙酸根、丁酸根、丙酸根、苯甲酸根、酒石酸根、抗坏血酸根或葡萄糖酸根。特别地,可以使用硫酸根、亚硫酸根、磷酸根、膦酸根、硝酸根、氯或碳酸根的碱或碱土金属盐或者简单有机酸的盐如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。
在包衣中的盐可以在20℃下具有超过60%的恒定湿度,特别地超过70%、超过80%或超过85%,或者它可以是此盐的另一种水合物形式(例如,无水物)。盐包衣可以如在WO 00/01793或WO 2006/034710中所描述。
适合的盐的具体实例是NaCl(CH20℃=76%)、Na2CO3(CH20℃=92%)、NaNO3(CH20℃=73%)、Na2HPO4(CH20℃=95%)、Na3PO4(CH25℃=92%)、NH4Cl(CH20℃=79.5%)、(NH4)2HPO4(CH20℃=93,0%)、NH4H2PO4(CH20℃=93.1%)、(NH4)2SO4(CH20℃=81.1%)、KCl(CH20℃=85%)、K2HPO4(CH20℃=92%)、KH2PO4(CH20℃=96.5%)、KNO3(CH20℃=93.5%)、Na2SO4(CH20℃=93%)、K2SO4(CH20℃=98%)、KHSO4(CH20℃=86%)、MgSO4(CH20℃=90%)、ZnSO4(CH20℃=90%)以及柠檬酸钠(CH25℃=86%)。其他实例包括NaH2PO4、(NH4)H2PO4、CuSO4、Mg(NO3)2以及乙酸镁。
盐可以处于无水形式,或者它可以是水合盐,即具有结晶化的一个或多个结合水的结晶盐水合物,例如描述于WO 99/32595中。具体实例包括无水硫酸钠(Na2SO4)、无水硫酸镁(MgSO4)、七水硫酸镁(MgSO4·7H2O)、七水硫酸锌(ZnSO4·7H2O)、七水磷酸氢二钠(Na2HPO4·7H2O)、六水硝酸镁(Mg(NO3)2(6H2O))、二水柠檬酸钠以及四水乙酸镁。
优选地,作为盐溶液使用该盐,例如使用流化床。
包衣材料可以是蜡状包衣材料和成膜包衣材料。蜡状包衣材料的实例是平均分子量为1000至20000的聚(环氧乙烷)产品(聚乙二醇,PEG);具有16至50个环氧乙烷单元的乙氧基化壬基酚;乙氧基化脂肪醇,其中该醇含有12至20个碳原子,并且其中存在15至80个环氧乙烷单元;脂肪醇;脂肪酸;以及脂肪酸的甘油单酯、和甘油二酯、和甘油三酯。适合用于通过流化床技术应用的成膜包衣材料的实例在GB 1483591中给出。
颗粒可以任选地具有一种或多种另外的包衣。适合的包衣材料的实例是聚乙二醇(PEG)、甲基羟基-丙基纤维素(MHPC)以及聚乙烯醇(PVA)。具有多种包衣的酶颗粒的实例描述于WO 93/07263和WO 97/23606中。
核心可以通过粒化成分的共混物来制备,例如通过包括造粒技术的方法,如结晶、沉淀、锅包衣(pan-coating)、流化床包衣、流化床凝集、旋转雾化、挤压、颗粒化(prilling)、滚圆(spheronization)、粒度减小法、转鼓造粒(drum granulation)和/或高剪切造粒。
用于制备核心的方法可见于Handbook of Powder Technology[粉末技术手册];C.E.Capes的Particle size enlargement[粒度增大];第1卷;1980;Elsevier[爱思唯尔]中。制备方法包括已知的饲料和颗粒配制技术,例如:
(a)喷雾干燥产品,其中在喷雾干燥塔中雾化液体含酶溶液以形成小液滴,在它们在沿干燥塔下降的过程中干燥形成含酶的微粒状材料。非常小的粒子可以通过这种方式产生(Michael S.Showell(编辑);Powdered detergents[粉状洗涤剂];Surfactant ScienceSeries[表面活性剂科学系列];1998;第71卷;第140-142页;Marcel Dekker[马塞尔德克尔公司])。
(b)层状产品,其中酶在预形成的惰性核心粒子周围包衣成层,其中含酶溶液典型地在流化床装置中被雾化,在该流化床装置中预形成的核心粒子被流体化并且含酶溶液附着到核心粒子上并干燥,直到使得干的酶层留在核心粒子的表面上。如果可以发现具有期望尺寸的有用核心粒子,则通过这种方式能够获得具有期望尺寸的粒子。这种类型的产品描述于,例如,WO 97/23606中。
(c)吸收的核心粒子,其中不是将该酶在核心周围包衣成层,而是在核心的表面上和/或表面中吸收该酶。这样的方法描述于WO 97/39116中。
(d)挤出或丸粒化的产品,其中将含酶糊剂压成丸粒或在压力下通过小的开口挤出并切割为粒子,随后干燥这些丸粒。此类粒子通常具有相当大的尺寸,因为开有挤出开口的材料(通常是具有钻孔的平板)限制了通过挤出开口可允许的压力降。此外,当使用小开口时,非常高的挤出压力增加了酶糊剂中的热发生,这对酶是有害的(Michael S.Showell(编辑);Powdered detergents[粉状洗涤剂];Surfactant Science Series[表面活性剂科学系列];1998;第71卷;第140-142页;马塞尔·德克尔公司)。
(e)颗粒化的产品,其中含酶粉末悬浮于熔化的蜡中并且例如通过转盘喷雾器将悬浮液喷洒到冷却室中,在此液滴快速地固化(Michael S.Showell(编辑);Powdereddetergents[粉状洗涤剂];Surfactant Science Series[表面活性剂科学系列];1998;第71卷;第140-142页;马塞尔·德克尔公司)。所获得产物是酶均匀分布遍及整个惰性材料而不是集中在其表面上的产物。美国专利号4,016,040和4,713,245描述了这项技术。
(f)混合器造粒产品,其中将含酶液体添加至常用造粒组分的干燥粉末组合物中。将液体和粉末以适合的比例混合,并且因为液体的水分为干燥粉末所吸收,干燥粉末的组分开始附着并凝集,并且粒子将累积,形成包含酶的颗粒。这样的方法描述于美国专利号4,106,991和相关文献EP 170360、EP 304332、EP 304331、WO 90/09440和WO 90/09428中。在此方法的特定产品中,各种高剪切混合器可以用作造粒机。将由酶、填料和黏合剂等组成的颗粒与纤维素纤维混合以强化粒子,而得到所谓的T-颗粒(T-granulate)。经强化的粒子更加坚固,并释放更少的酶粉尘。
(g)粒度减小,其中通过碾磨或压碎含酶的较大的粒子、丸粒、平片体、坯块(briquette)等产生核心。通过将碾磨或压碎的产物过筛获得所需要的核心粒子级分。可以回收尺寸过大和尺寸过小的粒子。粒度减小在Martin Rhodes(编辑);Principles ofPowder Technology[粉末技术原理];1990;第10章;John Wiley&Sons[约翰威利父子公司]中描述。
(h)流化床造粒。流化床造粒涉及将微粒悬浮于空气流中并经喷嘴喷射液体到流态化粒子上。被喷洒的液滴击中的粒子湿润并发粘。发粘的粒子与其他粒子碰撞并附着到其上以形成颗粒。
(i)这些核心可经受干燥,例如在流化床干燥器中。本领域技术人员可以使用在饲料或酶工业中用于干燥颗粒的其他已知的方法。干燥优选地在从25℃至90℃的产物温度下进行。对于一些酶来说,重要的是包含酶的核心在用盐包衣之前含有少量的水。如果在过量水去除之前水敏性酶被盐包衣,则水分会截留在核心中并可能消极地影响酶的活性。干燥之后,这些核心优选地含有0.1-10%w/w的水。
可以产生无粉尘颗粒,例如如美国专利号4,106,991和4,661,452中所披露,并且这些颗粒可以任选地通过本领域已知的方法来包衣。
颗粒可以进一步一种或多种另外的酶。然后,每种酶将存在于更多颗粒中,确保酶的更均匀分布,并且还由于不同的粒度而减少不同酶的物理分离。用于产生多酶共颗粒的方法披露于ip.com公开内容IPCOM000200739D中。
通过使用共颗粒配制酶的另一个实例披露于WO 2013/188331中。
本发明还涉及根据EP 238,216中披露的方法制备的受保护的酶。
在实施例中,颗粒进一步包含一种或多种另外的酶,例如,水解酶、异构酶、连接酶、裂解酶、氧化还原酶和转移酶。该一种或多种另外的酶优选地选自下组,该组由以下组成:乙酰木聚糖酯酶、酰基甘油脂肪酶、淀粉酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、阿魏酸酯酶、半乳聚糖酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶、β-葡糖苷酶、溶血磷脂酶、溶菌酶、α-甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶(甘露聚糖酶)、植酸酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶D、蛋白酶、支链淀粉酶、果胶酯酶、三酰基甘油脂肪酶、木聚糖酶、β-木糖苷酶或其任何组合。
发酵液配制品或细胞组合物
本发明还涉及包含本发明的一种或多种α-淀粉酶变体的发酵液配制品或细胞组合物。发酵液配制品或细胞组合物进一步包含在发酵过程中使用的另外的成分,例如像细胞(包括含有编码本发明多肽的基因的宿主细胞,这些宿主细胞用于产生目的多肽)、细胞碎片、生物质、发酵培养基和/或发酵产物。在一些实施例中,组合物是含有一种或多种有机酸、杀灭的细胞和/或细胞碎片以及培养基的细胞杀灭的全培养液。
如本文使用的术语“发酵液”是指由细胞发酵产生的、不经历或经历最少的回收和/或纯化的制剂。例如,当微生物培养物在允许蛋白质合成(例如,由宿主细胞表达酶)并且将蛋白质分泌到细胞培养基中的碳限制条件下孵育生长到饱和时,产生发酵液。发酵液可以含有在发酵结束时得到的发酵材料的未分级的或分级的内容物。典型地,发酵液是未分级的并且包含用过的培养基以及例如通过离心去除微生物细胞(例如,丝状真菌细胞)之后存在的细胞碎片。在一些实施例中,发酵液含有用过的细胞培养基、胞外酶以及有活力的和/或无活力的微生物细胞。
在一些实施例中,发酵液配制品或细胞组合物包含第一有机酸组分(包含至少一种1-5个碳的有机酸和/或其盐)和第二有机酸组分(包含至少一种6个或更多个碳的有机酸和/或其盐)。在一些实施例中,第一有机酸组分是乙酸、甲酸、丙酸、其盐或前述两种或更多种的混合物;并且第二有机酸组分是苯甲酸、环己烷羧酸、4-甲基戊酸、苯乙酸、其盐或前述两种或更多种的混合物。
在一方面,组合物含有一种或多种有机酸,并且任选地进一步含有杀灭的细胞和/或细胞碎片。在一些实施例中,从细胞杀灭的全培养液中去除这些杀灭的细胞和/或细胞碎片,以提供不含这些组分的组合物。
发酵液配制品或细胞组合物可以进一步包含防腐剂和/或抗微生物(例如,抑菌)剂,包括但不限于山梨醇、氯化钠、山梨酸钾、以及本领域已知的其他试剂。
细胞杀灭的全培养液或组合物可以含有在发酵结束时得到的发酵材料的未分级的内容物。典型地,细胞杀灭的全培养液或组合物含有用过的培养基以及在微生物细胞(例如,丝状真菌细胞)生长至饱和、在碳限制条件下孵育以允许蛋白质合成之后存在的细胞碎片。在一些实施例中,细胞杀灭的全培养液或组合物含有用过的细胞培养基、胞外酶和杀灭的丝状真菌细胞。在一些实施例中,可以使用本领域已知的方法来使细胞杀灭的全培养液或组合物中存在的微生物细胞透性化和/或裂解。
如本文所述的全培养液或细胞组合物典型地是液体,但是可以含有不溶性组分,例如杀灭的细胞、细胞碎片、培养基组分和/或一种或多种不溶性酶。在一些实施例中,可以去除不溶性组分以提供澄清的液体组合物。
本发明的全培养液配制品和细胞组合物可以通过WO 90/15861或WO 2010/096673中所述的方法来产生。
清洁组合物
本发明的清洁组合物优选地涉及用于所要求保护的组合物的产品和/或涉及所要求保护的组合物的方法和/或所要求保护的组合物的用途,所要求保护的组合物用于空气护理、汽车护理、餐具洗涤、衣物洗涤、护理(调理和/或软化)、衣物添加剂和漂洗添加剂、硬表面清洁和/或处理、以及供消费者或机构使用的其他清洁。优选地,组合物包含衣物洗涤剂或硬表面清洁组合物,例如餐具洗涤组合物。本发明的组合物可以是固体(例如条、片剂、粉末、颗粒)、液体、凝胶和/或糊剂或可以是片的形式。优选的形式是单位剂量形式,其可以是片剂、片、或优选地包含液体和/或固体组合物的小袋。优选的是多隔室小袋。组合物可以是粉末形式的通用“重垢型”洗涤剂、糊剂形式的通用洗涤剂、重垢型液体型洗涤剂、液体细薄织物洗涤剂、手洗餐具洗涤剂、轻垢型餐具洗涤剂、高泡型洗涤剂、机洗餐具洗涤剂。餐具洗涤组合物可以是液体、凝胶或粉末的形式,并且其可以是单位剂量的形式,例如片剂或小袋,并且优选为主洗涤组合物或漂洗助剂类型。组合物还可以处于单位剂量包装中,包括本领域已知的那些以及水可溶、水不可溶和/或水可渗透的那些。液体洗涤剂可以是水性的,典型地含有至多70%的水和0-30%的有机溶剂,或可以是非水性的或含有大于0.5g/L洗涤剂组合物的溶液。
例如,可以将本发明的组合物配制成手洗或机洗衣物洗涤剂组合物,包括适于预处理带有污渍的织物的衣物洗涤添加剂组合物和漂洗中添加的织物软化剂组合物,或配制成用于在一般性的家居硬表面的清洁操作中使用的洗涤剂组合物,或配制成在手洗或机洗餐具洗涤操作中使用的洗涤剂组合物。
优选的单位剂量组合物包含固体(优选粉末形式)或液体或其组合,优选以多隔室单位剂量。尤其优选的是包含液体洗涤剂的单位剂量形式,该液体洗涤剂以小袋形式,任选地多隔室小袋形式封装在水溶性材料。优选的单位剂量包含液体衣物洗涤剂/护理组合物,任选地以单位剂量形式。
本发明的清洁组合物可以呈以下形式:皂条,优选地洗衣皂条,并且可以用于手动洗涤衣物、织物和/或纺织品。术语洗衣皂条包括洗衣条、皂条、组合条(combo bar)、合成洗涤剂条、以及洗涤剂条。
除了杂合多肽或淀粉酶变体酶之外,清洁组合物还包含清洁/洗涤剂助剂。本文中清洁助剂的表述典型地包含多于一种清洁助剂的组合。典型地,清洁助剂将以0.0001至99.9999重量%,优选地10至99.999重量%,优选地至少30或40或50重量%清洁助剂的量存在于组合物中。合适的清洁助剂包含:表面活性剂、助洗剂、漂白剂、漂白催化剂、着色剂、漂白增效剂、螯合剂、染料转移剂、沉积助剂、分散剂、另外的酶和酶稳定剂、催化材料、漂白活化剂、过氧化氢、过氧化氢源、光学增亮剂、光活化剂、荧光剂、织物调色剂、织物调理剂、预形成的过酸、聚合物分散剂、粘土去污剂/抗再沉积剂、填料盐、助水溶剂、增亮剂、抑泡剂、结构增弹剂、织物软化剂、可水解的表面活性剂、防腐剂、抗氧化剂、抗收缩剂、杀菌剂、杀真菌剂、抗晦暗剂、抗腐蚀剂、碱性来源、增溶剂、载剂、加工助剂、颜料、染料、香料和pH控制剂、胶囊化物、聚合物及其混合物。例如,这些可以包括:漂白成分,例如亚胺漂白增效剂;过氧化氢源,如过碳酸盐和/或过硼酸盐,特别是涂覆有材料如碳酸盐和/或硫酸盐、硅酸盐、硼硅酸盐及其任何混合物的过碳酸盐;预形成的过酸,包括呈包封形式的预形成的过酸;过渡金属催化剂;抑泡剂或抑泡剂体系,例如基于硅酮的抑泡剂和/或基于脂肪酸的抑泡剂;;织物软化剂,例如粘土、硅酮和/或季铵化合物;絮凝剂,例如聚环氧乙烷;染料转移抑制剂,例如聚乙烯吡咯烷酮、聚4-乙烯基吡啶N-氧化物和/或乙烯基吡咯烷酮和乙烯基咪唑的共聚物;织物完整性组分,例如通过咪唑和表氯醇缩合产生的低聚物;土壤分散剂和土壤抗再沉积助剂,例如烷氧基化多胺和乙氧基化乙烯亚胺聚合物;抗再沉积组分,例如聚酯;羧酸酯聚合物,例如马来酸聚合物或马来酸和丙烯酸的共聚物;香料如香料微胶囊、淀粉包封的协调剂、香料喷雾;肥皂环;美学粒子;染料;填料,例如硫酸钠和/或柑橘纤维,尽管组合物可以优选基本上不含填料;硅酸盐如硅酸钠,包括1.6R和2.0R硅酸钠、或偏硅酸钠;二羧酸和二醇的共聚酯;纤维素聚合物,例如甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟基乙氧基纤维素或其他烷基或烷基烷氧基纤维素;溶剂,例如1,2丙二醇、单乙醇胺;二甘醇、乙醇及其任何混合物;助水溶剂,例如异丙苯磺酸钠、二甲苯磺酸钠、甲苯磺酸钠和任何混合物;有机酸,例如柠檬酸;及其任何组合。优选地,组合物包含清洁助剂,该清洁助剂包含表面活性剂和另外的酶。优选地,组合物包含一种或多种选自由以下组成的组的助剂:(i)香料微胶囊;(ii)织物调色剂;(iii)蛋白酶;(iv)两亲清洁聚合物;(v)脂肪酶,(vi)DNA酶和/或RNA酶,(vii)甘露聚糖酶,(viii)黄原胶裂解酶;(ix)己糖胺酶;或(viii)其混合物。
优选地,组合物包含表面活性剂,优选地为组合物的0.1至60重量%或0.5至50重量%或1至40重量%的表面活性剂。表面活性剂优选地包含含有多于一种表面活性剂的混合物的表面活性剂体系,该表面活性剂可包含例如阴离子、非离子(包括半极性)、阳离子、兼性离子和/或两性表面活性剂及其混合物。
优选地,组合物包含阴离子表面活性剂。优选的阴离子表面活性剂是磺酸盐和硫酸盐表面活性剂,优选地烷基苯磺酸盐和/或(任选地烷氧基化的)烷基硫酸盐。特别优选的阴离子表面活性剂包含直链烷基苯磺酸盐(LAS)。优选的烷基硫酸盐包含烷基醚硫酸盐,特别是C9-15醇醚硫酸盐,特别是平均乙氧基化度为0.5-7,优选1-5的那些、C8-C16酯硫酸盐和C10-C14酯硫酸盐,例如单十二烷基酯硫酸盐。在根据本发明的优选组合物中,表面活性剂包含阴离子表面活性剂,优选包含烷基苯磺酸盐和/或任选乙氧基化的烷基硫酸盐,优选具有0-7,更优选0.5-3的乙氧基化度。LAS的异构体、支链烷基苯磺酸盐(BABS)、苯基链烷磺酸盐、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烯烃磺酸盐、链烯烃磺酸盐、链烷-2,3-二基双(硫酸盐)、羟基链烷磺酸盐以及二磺酸盐、烷基硫酸盐(AS)(如十二烷基硫酸钠(SDS))、脂肪醇硫酸盐(FAS)、伯醇硫酸盐(PAS)、醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES,也被称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)、仲链烷磺酸盐(SAS)、石蜡磺酸盐(PS)、酯磺酸盐、磺化的脂肪酸甘油酯、α-磺基脂肪酸甲酯(α-SFMe或SES)(包括甲酯磺酸盐(MES))、烷基琥珀酸或烯基琥珀酸、十二烯基/十四烯基琥珀酸(DTSA)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺基琥珀酸的二酯和单酯或脂肪酸盐(皂)、及其组合也是合适的阴离子表面活性剂。在一个优选的实施例中,表面活性剂包含阴离子表面活性剂,优选包含烷基苯磺酸盐和/或任选乙氧基化的烷基硫酸盐,优选具有0-7,更优选0.5-3的乙氧基化度。
阴离子表面活性剂优选以盐的形式添加至洗清洁组合物中。优选的阳离子是碱金属离子,例如钠和钾。然而,盐形式的阴离子表面活性剂可通过用碱如氢氧化钠或胺如单、二或三乙醇胺中和酸形式的表面活性剂而原位形成。优选地,表面活性剂包含非离子表面活性剂。优选地,表面活性剂包含阴离子和非离子表面活性剂,优选阴离子与非离子的重量比为30:1至1:2,优选20:1至2:3或1:1。
非离子表面活性剂的非限制性实例包括醇乙氧基化物(AE或AEO)、醇丙氧基化物、丙氧基化的脂肪醇(PFA)、烷氧基化的脂肪酸烷基酯(如乙氧基化的和/或丙氧基化的脂肪酸烷基酯)、烷基酚乙氧基化物(APE)、壬基酚乙氧基化物(NPE)、烷基多糖苷(APG)、烷氧基化胺、脂肪酸单乙醇酰胺(FAM)、脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)、乙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)、丙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM)、多羟基烷基脂肪酸酰胺、或葡萄糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(葡糖酰胺(GA)、或脂肪酸葡糖酰胺(FAGA))、以及以SPAN和TWEEN商品名可获得的产品、及其组合。醇乙氧基化物是特别优选的,优选具有C9-18烷基链,优选C12-15,并且优选具有3-9,更优选3-7的平均乙氧基化度。可商购的非离子型表面活性剂包括来自BASF公司的PlurafacTM、LutensolTM和PluronicTM,来自科宁公司(Cognis)的DehyponTM系列和来自科莱恩特公司(Clariant)的GenapolTM系列。
清洁组合物优选包含约1%至约40%的阴离子表面活性剂。清洁组合物优选地包含0.2%到约40%的非离子表面活性剂,例如醇乙氧基化物、壬基酚乙氧基化物、烷基多糖苷、烷基二甲基胺氧化物、乙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺、脂肪酸单乙醇酰胺、多羟基烷基脂肪酰胺、或葡糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(“葡糖酰胺”)。
清洁组合物优选包含一种或多种另外的酶。因此,优选的组合物包含(a)如本文所定义的淀粉酶,和(b)一种或多种另外的酶,优选选自由以下组成的组:氨肽酶、淀粉酶、糖酶、羧肽酶、过氧化氢酶、纤维素酶、几丁质酶、角质酶、环糊精糖基转移酶、脱氧核糖核酸酶、内切葡聚糖酶、酯酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、α-葡糖苷酶、β-葡糖苷酶、卤代过氧化物酶、卤代过氧合酶、己糖胺酶、转化酶、漆酶、地衣多糖酶、脂肪酶、甘露聚糖酶、甘露糖苷酶、氧化酶、果胶酶、果胶裂解酶、果胶分解酶、肽谷氨酰胺酶、过氧化物酶、植酸酶、多酚氧化酶、蛋白水解酶(蛋白酶)、过氧化物酶、核糖核酸酶、转谷氨酰胺酶、木聚糖酶、黄原胶裂解酶、黄原胶酶、木葡聚糖酶及其混合物。优选地,组合物包含选自黄原胶裂解酶、黄原胶酶、甘露聚糖酶及其混合物的另外的酶。甘露聚糖酶是特别优选的。黄原胶裂解酶和黄原胶酶及其混合物也是特别优选的。蛋白酶、脂肪酶和/或纤维素酶是优选的,特别是蛋白酶。一种或多种另外的酶可以通过例如属于以下属或种的微生物产生:曲霉属,例如棘孢曲霉、泡盛曲霉、臭曲霉、烟曲霉、日本曲霉、构巢曲霉、黑曲霉或米曲霉;镰孢属,例如杆孢状镰孢、谷类镰孢、库威镰孢、大刀镰孢、禾本科镰孢、禾赤镰孢、异孢镰孢、合欢木镰孢、尖孢镰孢、多枝镰孢、粉红镰孢、接骨木镰孢、肤色镰孢、硫色镰孢、圆镰孢、拟丝孢镰孢或镶片镰孢;腐质霉属,例如特异腐质霉或疏棉状腐质霉;或木霉属,例如哈茨木霉、康宁木霉、长枝木霉、里氏木霉或绿色木霉。
优选地,组合物包含以下中的一种或多种:蛋白酶、脂肪酶、过氧化物酶、另外的淀粉分解酶,例如另外的α-淀粉酶、葡糖淀粉酶、异淀粉酶、麦芽糖淀粉酶,优选另外的α-淀粉酶、CGT酶、纤维素酶、甘露聚糖酶(例如来自丹麦诺维信公司的MANNAWAYTM)、果胶酶、果胶裂解酶、角质酶和/或漆酶或这些酶中多于一种的混合物。
一般来说,一种或多种选定酶的特性应与选择的洗涤剂相容,(即,pH最适,与其它酶和非酶成份等相容),且该一种或多种酶应当以有效量存在。优选地,本发明的组合物包含至少0.01mg,优选约0.05至约10mg,更优选约0.1至约6mg,特别是约0.2至约5mg活性的另外的酶/g组合物。
蛋白酶:适合的蛋白酶包括金属蛋白酶和/或丝氨酸蛋白酶,包括中性的或碱性的微生物丝氨酸蛋白酶,例如枯草杆菌蛋白酶(EC 3.4.21.62)。适合的蛋白酶包括动物、植物或微生物来源的那些。在一方面,这种适合的蛋白酶可以是微生物来源的。适合的蛋白酶包括前述适合的蛋白酶的化学或遗传修饰的突变体。在一方面,适合的蛋白酶可以是一种丝氨酸蛋白酶,例如碱性微生物蛋白酶或/和胰蛋白酶类蛋白酶。适合的中性或碱性蛋白酶的实例包括:
(a)枯草杆菌蛋白酶(EC 3.4.21.62),包括衍生自芽孢杆菌属的那些,例如迟缓芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短小芽孢杆菌以及吉氏芽孢杆菌,描述于US 6,312,936 B1、US 5,679,630、US 4,760,025、US 7,262,042和WO 09/021867中。
(b)胰蛋白酶类或胰凝乳蛋白酶类蛋白酶,例如胰蛋白酶(例如猪或牛来源的),包括镰孢属蛋白酶(描述于WO 89/06270中),以及衍生自纤维单胞菌属(Cellumonas)的胰凝乳蛋白酶(描述于WO 05/052161和WO 05/052146中)。
(c)金属蛋白酶,包括衍生自解淀粉芽孢杆菌的那些,描述于WO 07/044993A2中。
优选的蛋白酶包括衍生自吉氏芽孢杆菌或迟缓芽孢杆菌的那些。
适合的可商购的蛋白酶包括诺维信公司(Novozymes A/S)(丹麦)的在以下商标名下出售的那些:
Figure BDA0003686175180007481
Figure BDA0003686175180007482
Liquanase
Figure BDA0003686175180007483
Savinase
Figure BDA0003686175180007484
Figure BDA0003686175180007491
Figure BDA0003686175180007492
在杰能科国际公司(GenencorInternational)的在以下商标名下出售的那些:
Figure BDA0003686175180007493
Figure BDA0003686175180007494
Purafect
Figure BDA0003686175180007495
Purafect
Figure BDA0003686175180007496
Figure BDA0003686175180007497
和Purafect
Figure BDA0003686175180007498
在苏威酶公司(Solvay Enzymes)的在以下商标名下出售的那些:
Figure BDA0003686175180007499
Figure BDA00036861751800074910
获得自汉高公司(Henkel)/凯米拉公司(Kemira)的那些,名为BLAP(序列显示于US 5,352,604的图29中,具有以下突变S99D+S101R+S103A+V104I+G159S,在下文中称为BLAP)、BLAP R(BLAP,具有S3T+V4I+V199M+V205I+L217D)、BLAP X(BLAP,具有S3T+V4I+V205I)以及BLAP F49(BLAP具有S3T+V4I+A194P+V199M+V205I+L217D)-所有的均来自汉高/凯米拉;以及来自花王公司(Kao)的KAP(嗜碱芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶,具有突变A230V+S256G+S259N)。另外的合适的蛋白酶描述于WO 2011/03623、WO 2011/140316、WO 2011/140364和WO 2012/05778中。
脂肪酶:适合的脂肪酶包括细菌或真菌来源的那些脂肪酶。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。有用的脂肪酶的实例包括来自腐质霉属(与嗜热霉属同义),例如来自疏棉状腐质霉(细毛嗜热霉)或来自特异腐质霉的脂肪酶;假单胞菌属脂肪酶,例如来自产碱假单胞菌或类产碱假单胞菌、洋葱假单胞菌、施氏假单胞菌、萤光假单胞菌、假单胞菌属物种菌株SD 705、威斯康星假单胞菌;芽孢杆菌属脂肪酶,例如来自枯草芽孢杆菌(Dartois等人,(1993),Biochemica et Biophysica Acta[生物化学与生物物理学报],1131,253-360),嗜热脂肪芽孢杆菌或短小芽孢杆菌。
脂肪酶可以是“第一循环脂肪酶”,如在美国专利6,939,702B1和US PA2009/0217464中描述的那些。在一方面,脂肪酶是首次洗涤脂肪酶,优选来自疏绵状嗜热丝孢菌的野生型脂肪酶的变体,其包含T231R和N233R突变。野生型序列是Swissprot登录号Swiss-Prot O59952的269个氨基酸(氨基酸23-291)(衍生自疏绵状嗜热丝孢菌(疏棉状腐质霉))。优选的脂肪酶包括以商品名
Figure BDA00036861751800074911
Figure BDA00036861751800074912
出售的那些。
纤维素酶:适合的纤维素酶包括细菌来源或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。合适的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、假单胞菌属、腐质霉属(Humicola)、镰孢属(Fusarium)、梭孢壳属(Thielavia)、枝顶孢属的纤维素酶,例如由特异腐质霉(Humicola insolens)、嗜热毁丝霉(Myceliophthora thermophila)和尖孢镰孢(Fusarium oxysporum)产生的真菌纤维素酶。
在一方面,优选的酶包括展现出内切-β-1,4-葡聚糖酶活性的微生物来源的内切葡聚糖酶(E.C.3.2.1.4),优选地选自包含以下的组:
(a)对于芽孢杆菌属成员而言内源的细菌多肽,其具有与US7,141,403B2中的氨基酸序列SEQ ID NO:2具有至少90%、94%、97%和甚至99%同一性的序列;
(b)对木葡聚糖和无定形纤维素底物具有酶活性的糖基水解酶,其中该糖基水解酶选自GH家族5、12、44或74;
(c)糖基水解酶,其具有与WO 09/148983中的氨基酸序列SEQ ID NO:3具有至少90%、94%、97%和甚至99%同一性的序列;
(d)及其混合物。
适合的内切葡聚糖酶以商品名
Figure BDA0003686175180007501
Figure BDA0003686175180007502
(诺维信公司,巴格斯瓦德(Bagsvaerd),丹麦)出售。
其他可商购的纤维素酶包括
Figure BDA0003686175180007503
Figure BDA0003686175180007504
(诺维信公司)、
Figure BDA0003686175180007505
Figure BDA0003686175180007506
(杰能科国际公司(Genencor InternationalInc.))和
Figure BDA0003686175180007507
(花王株式会社(Kao Corporation))。
另外的淀粉酶:优选地,组合物包含另外的淀粉酶。合适的另外的淀粉酶包括α-淀粉酶,包括细菌或真菌来源的那些。化学或遗传修饰的突变体(变体)被包括在内。优选的碱性α-淀粉酶衍生自芽孢杆菌属的菌株,例如地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌或者其他的芽孢杆菌属物种,如芽孢杆菌属物种NCBI 12289,NCBI12512,NCBI 12513,DSM 9375(USP 7,153,818),DSM 12368,DSMZ号12649,KSM AP1378(WO97/00324)、KSM K36或KSM K38(EP 1,022,334)。优选的另外的淀粉酶可以选自:(a)WO 94/02597、WO 94/18314、WO96/23874和WO 97/43424中描述的变体,尤其是相对于WO 96/23874中如SEQ ID No.2所列的酶,在一个或多个以下位置处具有取代的变体:15、23、105、106、124、128、133、154、156、181、188、190、197、202、208、209、243、264、304、305、391、408、和444;(b)描述于WO 96/23873、WO00/60060、WO06/002643和WO2017/192657中的变体,尤其是相对于WO 06/002643中如SEQ ID No.12所列的AA560酶,在以下位置处具有一个或多个取代的变体:26、30、33、82、37、106、118、128、133、149、150、160、178、182、186、193、203、214、231、246、256、257、258、269、270、272、283、295、296、298、299、303、304、305、311、314、315、318、319、339、345、361、378、383、419、421、437、441、444、445、446、447、450、461、471、482、484,优选还含有D183*和G184*的缺失;(c)展现出与WO06/002643中的SEQ ID No.4(来自芽孢杆菌属SP722的野生型酶)具有至少90%同一性的变体,尤其是在183和184位具有缺失的变体以及描述于WO 00/60060中的变体,将其通过引用并入本文;(d)展现出与来自芽孢杆菌属物种707的野生型酶(US 6,093,562中的SEQ ID NO:7)具有至少95%同一性的变体,尤其是包含以下突变中的一个或多个的那些:M202、M208、S255、R172、和/或M261。优选地所述淀粉酶包含M202L、M202V、M202S、M202T、M202I、M202Q、M202W、S255N和/或R172Q中的一个或多个。特别优选的是包含突变M202L或M202T的那些;(e)描述于WO 09/149130中的变体,优选展现出与WO 09/149130中的SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2(来自嗜热脂肪土芽孢杆菌的野生型酶或其截短形式)具有至少90%同一性的那些;(f)展现出与WO 2016091688中的SEQID NO:1具有至少89%同一性的变体,尤其是在位置H183+G184处包含缺失并且在位置405、421、422和/或428处另外包含一个或多个突变的那些;(g)展现出与来自解凝乳类芽孢杆菌YK9的“PcuAmylα-淀粉酶”(WO 2014099523中的SEQ ID NO:3)具有至少60%氨基酸序列同一性的变体;(h)展现出与来自噬细胞菌属物种的“CspAmy2淀粉酶”(WO 2014164777中的SEQ ID NO:1)具有至少60%氨基酸序列同一性的变体;(i)展现出与来自枯草芽孢杆菌的AmyE(WO 2009149271中的SEQ ID NO:1)具有至少85%同一性的变体;(j)展现出与来自登录号为AB051102的芽孢杆菌属物种KSM-K38的野生型淀粉酶具有至少90%同一性的变体;(k)展现出与来自芽孢杆菌属物种的AAI10的成熟氨基酸序列(WO 2016180748中的SEQ IDNO:7)具有至少80%同一性的变体;(l)展现出与脂环酸芽孢杆菌属物种淀粉酶的成熟氨基酸序列(WO 2016180748中的SEQ ID NO:8)具有至少80%同一性的变体;或其混合物。当存在时,本发明的组合物优选包含至少0.01mg,优选约0.05至约10,更优选约0.1至约6,特别是约0.2至约5mg活性的另外的淀粉酶/g组合物。
适合的可商购的α-淀粉酶包括
Figure BDA0003686175180007511
Figure BDA0003686175180007521
TERMAMYL
Figure BDA0003686175180007522
Figure BDA0003686175180007523
STAINZYME
Figure BDA0003686175180007524
Figure BDA0003686175180007525
Figure BDA0003686175180007526
(诺维信公司,巴格斯瓦德,丹麦)、
Figure BDA0003686175180007527
AT 9000百因美生物技术贸易有限公司(Biozym Biotech Trading GmbH)威利斯塔斯(Wehlistrasse)27b A-1200奥地利维也纳(Wien Austria)、
Figure BDA0003686175180007528
Figure BDA0003686175180007529
OPTISIZE HT
Figure BDA00036861751800075210
PREFERENZ
Figure BDA00036861751800075211
系列(包括PREFERENZ
Figure BDA00036861751800075212
和PREFERENZ
Figure BDA00036861751800075213
以及PURASTAR
Figure BDA00036861751800075214
(杜邦,帕洛阿尔托(Palo Alto),加利福尼亚州),以及
Figure BDA00036861751800075215
(花王公司(Kao),14-10桥茅场町(Nihonbashi Kayabacho),1-丁目,东京中央区103-8210,日本)。在一方面,适合的淀粉酶包括
Figure BDA00036861751800075216
和STAINZYME
Figure BDA00036861751800075217
及其混合物。
过氧化物酶/氧化酶:适合的过氧化物酶/氧化酶包括植物、细菌、或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自鬼伞属,例如来自灰盖鬼伞(C.cinereus)的过氧化物酶,及其变体,如在WO 93/24618、WO95/10602、以及WO 98/15257中描述的那些。
可商购的过氧化物酶包括
Figure BDA00036861751800075218
(诺维信公司)。
其他酶:其他优选的酶包括在商标名
Figure BDA00036861751800075219
下出售的果胶裂解酶,以及在商标名
Figure BDA00036861751800075220
下出售的甘露聚糖酶(所有的均来自诺维信公司,巴格斯瓦德,丹麦),以及
Figure BDA00036861751800075221
(杰能科国际公司,帕洛阿尔托,加利福尼亚州)。
该一种或多种酶可以通过添加含有一种或多种酶的独立添加剂(预混合物),或通过添加包含所有这些酶的组合添加剂(预混合物)而被包括于清洁组合物中。本发明的洗涤剂添加剂,即单独的或组合的添加剂,可以配制成例如颗粒、液体、浆液等。优选的洗涤剂添加剂配制品是颗粒,特别是无粉尘颗粒;液体,特别是稳定化液体;或浆液。
无尘颗粒可以产生并且可以任选地通过本领域已知的方法进行包衣。蜡状包衣材料的实例是平均分子量为1000至20000的聚(环氧乙烷)产品(聚乙二醇,PEG);具有从16个到50个环氧乙烷单位的乙氧基化壬基酚;乙氧基化脂肪醇,其中该醇含有12至20个碳原子,并且其中存在15至80个环氧乙烷单元;脂肪醇;脂肪酸;以及脂肪酸的甘油单酯、和甘油二酯、和甘油三酯。成膜包衣材料可以例如通过流化床技术施加。液体酶制剂可以例如通过根据已确立的方法添加多元醇(如丙二醇)、糖或糖醇、乳酸或硼酸而稳定化。
清洁组合物可包含织物调色剂(有时称为遮光剂、上蓝剂或增白剂)。典型地,调色剂为织物提供蓝色或紫色色调。调色剂可单独使用或组合使用以产生特定调色色调和/或对不同的织物类型进行调色。这可以例如通过混合一种红色和绿色-蓝色染料以产生一种蓝色或紫色调色来提供。调色剂可以选自任何已知化学类别的染料,包括但不限于吖啶、蒽醌(包括多环醌)、吖嗪、偶氮(例如单偶氮、双偶氮、三偶氮、四偶氮、多偶氮),包括金属络合偶氮、苯并二呋喃和苯并二呋喃酮、类胡萝卜素、香豆素、花菁、二氮杂半花菁、二苯基甲烷、甲瓒、半花菁、靛类、甲烷、萘酰亚胺、萘醌、硝基和亚硝基、噁嗪、酞菁、吡唑、芪、苯乙烯基、三芳基甲烷、三苯甲烷、呫吨及其混合物,优选的染料是偶氮,尤其是双偶氮、蒽醌、吖嗪和三芳基甲烷染料。偶氮染料是特别优选的。
适合的织物调色剂包括染料、染料-粘土共轭物、以及有机和无机颜料。适合的染料包括小分子染料和聚合物染料;聚合物染料是优选的。适合的小分子染料包括选自下组的小分子染料,该组由落入比色指数(Colour Index,C.I.)分类的以下染料组成:直接染料、碱性染料、反应性染料或水解反应性染料、溶剂染料或分散染料,例如分类为蓝色、紫色、红色、绿色或黑色,并且单独或组合提供期望的色调。在另一方面,适合的小分子染料包括选自由以下组成的组的小分子染料:比色指数(染工和着色师学会,布拉德福德,英国)编号直接紫染料如9、35、48、51、66和99,直接蓝染料如1、71、80和279,酸性红染料如17、73、52、88和150,酸性紫染料如15、17、24、43、49和50,酸性蓝染料如15、17、25、29、40、45、75、80、83、90和113,酸性黑染料如1,碱性紫染料如1、3、4、10和35,碱性蓝染料如3、16、22、47、66、75和159,分散或溶剂染料如EP1794275或EP1794276中所述的那些,或如US 7,208,459B2中披露的染料,及其混合物。在另一方面,适合的小分子染料包括选自下组的小分子染料,该组由以下各项组成:比色指数编号酸性紫17、直接蓝71、直接紫51、直接蓝1、酸性红88、酸性红150、酸性蓝29、酸性蓝113或其混合物。
适合的聚合物染料包括选自由以下组成的组的聚合物染料:含有共价结合的(有时称为缀合的)色原体的聚合物(染料-聚合物缀合物),例如色原体共聚到聚合物主链中的聚合物,及其混合物。聚合物染料包括WO 2011/98355、WO 2011/47987、US 2012/090102、WO2010/145887、WO 2006/055787和WO 2010/142503中所述的那些。
在另一方面,适合的聚合物染料包括选自由以下组成的组的聚合物染料:在
Figure BDA0003686175180007541
(美利肯(Milliken),斯帕坦堡,南卡罗来纳州,美国)名称之下出售的织物实质性着色剂,从至少一种反应性染料和选自由以下组成的组的聚合物形成的染料-聚合物缀合物:包含选自由羟基部分、一级胺部分、二级胺部分、硫醇部分及其混合物组成的组的部分的聚合物。在又另一方面,适合的聚合物染料包括选自由以下组成的组的聚合物染料:
Figure BDA0003686175180007542
紫色CT、与活性蓝、活性紫或活性红染料共价结合的羧甲基纤维素(CMC),例如与C.I.活性蓝19缀合的CMC,由Megazyme,威克洛,爱尔兰以产品名AZO-CM-CELLULOSE,产品代码S-ACMC出售、烷氧基化三苯基甲烷聚合物着色剂、烷氧基化噻吩聚合物着色剂、及其混合物。
优选的调色染料包括烷氧基化噻吩偶氮增白剂,例如US 2008/0177090中所述,其可以是任选阴离子的,例如选自WO 2011/011799的表5中的实例1-42的那些。其他优选的染料披露在US 8138222中。
适合的颜料包括选自由以下组成的组的颜料:黄士酮、阴丹酮、含有从1至4个氯原子的含氯阴丹酮、皮蒽酮、二氯皮蒽酮、单溴二氯皮蒽酮、二溴二氯皮蒽酮、四溴皮蒽酮、二萘嵌苯-3,4,9,10-四羧酸二酰亚胺(其中这些酰亚胺基团可以是未取代的或被C1-C3-烷基或苯基或杂环基团取代的,并且其中该苯基和杂环基团可以另外地带有不赋予在水中的溶解度的取代基)、蒽素嘧啶羧酸酰胺、蒽酮紫、异蒽酮紫、二噁嗪颜料、每个分子可以含有高达2个氯原子的酞菁铜、多氯-酞菁铜或每个分子含有高达14个溴原子的多溴氯-酞菁铜、群青蓝(C.I.颜料蓝29)、群青紫(C.I.颜料紫15)以及其混合物。
助洗剂-清洁组合物可以进一步含有助洗剂,例如基于碳酸盐、碳酸氢盐或硅酸盐的助洗剂,其可以是沸石,例如沸石A、沸石MAP(最大铝类型P)。可用于衣物洗涤的沸石优选具有式Na12(AlO2)12(SiO2)12·27H2O,并且对于沸石A,粒度通常为1-10μm,并且对于沸石MAP,粒度通常为0.7-2μm。其他助洗剂是偏硅酸钠(Na2SiO3·nH2O或Na2Si2O5·n H2O)强碱,优选用于餐具洗涤。在优选的实施例中,洗涤剂助洗剂的量可以高于5%、高于10%、高于20%、高于30%、高于40%或高于50%,并且可以低于80%、65%。在餐具洗涤洗涤剂中,助洗剂的水平典型地为40%-65%,特别是50%-65%或甚至75%-90%。
胶囊化物-该组合物可以包含一种胶囊化物。在一方面,胶囊化物包含核心、具有内表面和外表面的包壳,所述包壳包封所述核心。
在所述胶囊化物的一方面,所述核心可以包含选自由以下组成的组的材料:香料增亮剂;染料;驱虫剂;硅酮;蜡;调味剂;维生素;织物柔软剂;护肤剂;在一方面,石蜡;酶;抗细菌剂;漂白剂;感受剂(sensate);及其混合物;并且所述包壳可以包含选自由以下组成的组的材料:聚乙烯;聚酰胺;聚苯乙烯;聚异戊二烯;聚碳酸酯;聚酯;聚丙烯酸酯;氨基塑料,在一方面,所述氨基塑料可以包含聚脲、聚氨酯和/或聚脲聚氨酯,在一方面,所述聚脲可以包含聚氧基亚甲基脲和/或三聚氰胺甲醛;聚烯烃;多糖,在一方面,所述多糖可以包含藻朊酸盐和/或壳聚糖;明胶;虫胶;环氧树脂;乙烯基聚合物水不溶性无机物;硅酮;及其混合物。
在所述胶囊化物的一方面,所述核心可以包含香料。此类胶囊化物为香料微胶囊。适合的胶囊化物外壳可包含三聚氰胺甲醛和/或交联三聚氰胺甲醛、和/或聚丙烯酸酯。
在一方面,所述胶囊化物的至少75%、85%或甚至90%可以具有从约1微米至约80微米、约5微米至60微米、从约10微米至约50微米、或甚至从约15微米至约40微米的粒度。
在一方面,所述胶囊化物的至少75%、85%或甚至90%可以具有从约30nm至约250nm、从约80nm至约180nm、或甚至从约100nm至约160nm的粒子壁厚。
在一方面,所述胶囊化物的核心材料可以包含选自由香料原材料组成的组的材料,和/或任选地选自由以下组成的组的材料:植物油,包括纯净植物油和/或共混植物油,包括蓖麻油(caster oil)、椰子油、棉籽油、葡萄籽油、油菜籽、大豆油、玉米油、棕榈油、亚麻籽油、红花油、橄榄油、花生油、椰子油、棕榈仁油、蓖麻子油(castor oil)、柠檬油及其混合物;植物油的酯,酯,包括己二酸二丁酯、酞酸二丁酯、己二酸丁基苄酯、己二酸辛基苄酯、磷酸三甲苯酯、磷酸三辛酯及其混合物;直链或支链烃,包括具有高于约80℃的沸点的那些直链或支链烃;部分氢化的三联苯、二烷基邻苯二甲酸酯、烷基联苯(包括单异丙基联苯)、烷基化的萘(包括二丙基萘)、石油精(包括煤油)、矿物油及其混合物;芳香族溶剂,包括苯、甲苯及其混合物;硅酮油;及其混合物。
在一方面,所述胶囊化物的壁材料可以包含适合的树脂,该树脂包括醛和胺的反应产物,适合的醛包括甲醛。适合的胺包括三聚氰胺、脲、苯并胍胺、甘脲及其混合物。适合的三聚氰胺包括羟甲基三聚氰胺、甲基化的羟甲基三聚氰胺、亚氨基三聚氰胺及其混合物。适合的脲包括二羟甲基脲、甲基化的二羟甲基脲、脲-间苯二酚及其混合物。
在一方面,在将胶囊化物添加至消费品之前、期间或之后,适合的甲醛清除剂可以与例如处于胶囊浆料中的胶囊化物一起使用和/或添加至这样的消费品中。
适合的胶囊可以购买自美国威斯康星州阿普尔顿(Appleton)的阿普尔顿帕佩尔斯公司(Appleton Papers Inc.)。
此外,用于制备上述胶囊化物的材料可获自首诺公司(Solutia Inc.)(美国密苏里州圣路易斯)、氰特工业公司(Cytec Industries)(美国新泽西州西帕特森)、西格玛奥德里奇公司(sigma-Aldrich)(美国密苏里州圣路易斯)、美国加利福尼亚州圣迭戈的斯比凯可公司(CP Kelco Corp.);德国路德维希港的巴斯夫公司(BASF AG);美国新泽西州克兰伯里的罗地亚公司(Rhodia Corp.);美国特拉华州威尔明顿的大力神公司(HerculesCorp.);加拿大阿尔伯塔省卡尔加里的加阳公司(Agrium Inc.)、美国新泽西州的ISP、美国伊利诺伊州芝加哥的阿克苏诺贝尔公司(Akzo Nobel);德国不来梅的Stroever ShellacBremen公司;美国密歇根州米德兰的陶氏化学公司(Dow Chemical Company);德国勒沃库森的拜耳公司(Bayer AG);美国密苏里州圣路易斯的西格玛奥德里奇公司。
组合物可包含选自由以下组成的组的结构化剂:甘油二酯和甘油三酯、硬脂酸乙二醇双酯、微晶纤维素、基于纤维素的材料、微纤维纤维素、生物聚合物、黄原胶、吉兰糖胶及其混合物。
聚合物
清洁组合物可以包含一种或多种聚合物。实例为羧甲基纤维素、聚(乙烯基-吡咯烷酮)、聚(乙二醇)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯基吡啶-N-氧化物)、聚(乙烯基咪唑)、聚羧酸酯(例如聚丙烯酸酯)、马来酸/丙烯酸共聚物、以及甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物和两亲聚合物。
洗涤剂可以含有漂白体系,该体系可以包含H2O2来源例如过硼酸或过碳酸,其可以与形成过酸的漂白活化剂(例如四乙酰基乙二胺或壬酰基氧基苯磺酸盐)组合。可替代地,漂白体系可以包含过酸,例如酰胺、亚胺或砜类型的过酸。通常,当使用一种漂白剂时,本发明的组合物可以包含按主题清洁组合物的重量计从约0.1%至约50%或甚至从约0.1%至约25%的漂白剂。
螯合剂-本文的清洁组合物可含有螯合剂。适合的螯合剂包括铜、离子和/或锰螯合试剂及其混合物。当使用螯合剂时,主题清洁组合物可以包含按主题清洁组合物的重量计从约0.005%至约15%或甚至从约3.0%至约10%的螯合剂。适合的螯合剂包括DTPA(二亚乙基三胺五乙酸)、HEDP(羟基乙烷二膦酸)、DTPMP(二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸))、1,2-二羟基苯-3,5-二磺酸二钠盐水合物、乙二胺、二亚乙基三胺、乙二胺二琥珀酸(EDDS)、N-羟基乙基乙二胺三乙酸(HEDTA)、三亚乙基四胺六乙酸(TTHA)、N-羟基乙基亚氨基二乙酸(HEIDA)、二羟基乙基甘氨酸(DHEG)、亚乙基二胺四丙酸(EDTP)、及其衍生物。
本发明的酶变体可以使用常规稳定剂和/或蛋白酶抑制剂来稳定,例如多元醇如丙二醇或甘油、糖或糖醇、盐如氯化钠和氯化钾、乳酸、甲酸、硼酸、或者硼酸衍生物(例如芳香族硼酸酯)、或者苯基硼酸衍生物(例如4-甲酰基苯基硼酸)、或者肽醛(例如二肽醛、三肽醛或四肽醛或醛类似物)(或者具有形式B1-B0-R,其中R是H、CH3、CX3、CHX2、或CH2X(X=卤素),B0是单个氨基酸残基(优选地具有任选地经取代的脂肪族或芳香族侧链);并且B1由一个或多个氨基酸残基(优选一个、两个或三个)组成,任选地包含N-末端保护基团,或者如在WO 09118375、WO 98/13459中描述的)或者蛋白质类型的蛋白酶抑制剂,例如RASI、BASI、WASI(水稻、大麦和小麦的双功能α-淀粉酶/枯草杆菌蛋白酶抑制剂)或CI2或SSI。在一些实施例中,本文所使用的这些酶由存在于为这些酶提供此类离子的成品组合物中的锌(II)、钙(II)和/或镁(II)离子的水溶性来源,连同其他金属离子(例如,钡(II)、钪(II)、铁(II)、锰(II)、铝(III)、锡(II)、钴(II)、铜(II)、镍(II)以及氧钒(IV))稳定化。
组合物可包含选自由以下组成的组的酶稳定剂:(a)选自由钙盐、镁盐及其混合物组成的组的无机盐;(b)选自由寡糖、多糖及其混合物组成的组的碳水化合物;(c)选自由苯基硼酸及其衍生物组成的组的大量有效的可逆蛋白酶抑制剂;以及(d)其混合物。
组合物可包含:(1)可逆蛋白酶抑制剂,例如含硼化合物;(2)1-2丙二醇;(3)甲酸钙和/或甲酸钠;以及(4)其任何组合。
清洁组合物还可以含有(作为清洁助剂)其他的常规洗涤剂成分,像例如织物调理剂,这些织物调理剂包括粘土、泡沫促进剂、抑泡剂、抗腐蚀剂、污垢悬浮剂、抗污物再沉淀剂、染料、杀菌剂、光学增亮剂、助水溶剂、晦暗抑制剂、有机溶剂如乙醇或香料。此外,洗涤剂可含有预去污剂或增强剂,将其添加到洗涤中以提高总体清洁水平,这些添加剂中的一些也可用作在洗涤步骤之前施加到纺织品上的预处理剂。
目前考虑了向清洁组合物中以相当于每升洗涤液0.001-100mg的酶蛋白、优选每升洗涤液0.005-5mg的酶蛋白、更优选每升洗涤液0.01-1mg的酶蛋白并且特别是每升洗涤液0.1-1mg的酶蛋白的量添加任何酶,特别是本发明必需的酶。然而,本发明的组合物包含至少0.0001至约0.1%重量百分比的纯酶蛋白,如约0.0001%至约0.01%、约0.001%至约0.01%或约0.001%至约0.01%。然而,当使用配制的酶时,洗涤剂组合物包含约0.02%至约20%重量百分比,例如或约0.05%至约15%重量、或约0.05至约20%、或约0.05%至约5%、或约0.05%至约3%。可用于本发明的α-淀粉酶变体可另外掺入WO 97/07202中披露的洗涤剂配制品中,其通过引用特此并入。
使用方法
本发明包括用于清洁和/或处理表面,优选织物的方法。在一方面,此类方法包括以下步骤:任选地洗涤和/或漂洗所述表面,使所述表面与包含本文所述的清洁组合物的水性洗涤液接触,然后任选地洗涤和/或漂洗所述表面。
水性洗涤液优选具有约4或约7或8至约12,优选至约10.5的pH。优选在溶液中以从约500ppm至约15,000ppm的浓度使用组合物。水温范围典型地是从约5℃至约90℃。水与织物比率典型地是约1:1至约30:1。
本发明还提供了本发明的清洁组合物在洗涤剂组合物中和在洗涤剂应用如低温餐具洗涤或衣物洗涤中提供改善的洗涤性能的用途。
在另外的方面,本发明涉及用于从表面去除污渍的方法,该方法包括使该表面与如本文所述的杂合多肽或淀粉酶变体和清洁助剂接触,其中该清洁助剂在洗涤剂组合物和洗涤剂应用中包含表面活性剂和任选地一种或多种选自以下列表的清洁助剂,该列表包含助水溶剂、助洗剂和共助洗剂、漂白体系、聚合物、织物调色剂和辅料或其任何混合物。另外的方面是用于从表面去除污渍的方法,该方法包括使该表面与本文所述的清洁组合物接触。
用途
本发明针对用于使用具有α-淀粉酶活性的多肽或其组合物在清洁过程例如包括自动化餐具洗涤的衣物洗涤或硬表面清洁过程中的方法。
对于清洁而言重要的污垢和污渍由许多不同物质构成,并且已经开发具有不同底物特异性的一系列不同的酶以用于在涉及衣物洗涤和硬表面清洁(如餐具洗涤)两者的洗涤剂中使用。这些酶被认为提供酶洗涤益处,因为与不具有酶的同一过程相比,它们在其应用的清洁过程中特异性地改进污渍去除。本领域已知的污渍去除酶包括以下酶,如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、地衣聚糖酶、卤代过氧合酶、过氧化氢酶以及甘露聚糖酶。
在一方面,本发明涉及本发明的α-淀粉酶在洗涤剂组合物中用于在清洁硬表面(例如餐具洗涤),或在衣物洗涤中使用或用于去污的用途。在一个另外的方面中,本发明证明了在洗涤剂组合物中和在洗涤剂应用如餐具洗涤或衣物洗涤中在低温下使用本发明的α淀粉酶具有改善的洗涤性能。
本发明的另一个方面是在洗涤剂组合物中和在洗涤剂应用中使用包含本发明的α-淀粉酶连同一种或多种表面活性剂以及任选地一种或多种选自以下列表的洗涤剂组分的洗涤剂组合物,该列表包含助水溶剂、助洗剂和共助洗剂、漂白体系、聚合物、织物调色剂和辅料或其任何混合物。
另外的方面是在洗涤剂组合物和在洗涤剂应用中使用包含本发明的α-淀粉酶连同一种或多种表面活性剂以及一种或多种选自下组的另外的酶的洗涤剂组合物,该组包含蛋白酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、地衣聚糖酶、卤代过氧酶、过氧化氢酶以及甘露聚糖酶或其任何混合物。
在另一方面,本发明涉及餐具洗涤方法,该方法可用于家用餐具洗涤以及工业餐具洗涤。如本文使用的术语“餐具洗涤”是指手动餐具洗涤和自动化餐具洗涤两者。此外,本发明涉及一种用于洗涤硬表面(例如餐具,例如刀、叉、匙;陶器,例如盘、玻璃杯、碗;以及平底锅)的方法,其中该方法包括用含有洗涤剂组合物和本发明的α-淀粉酶变体的洗涤溶液处理硬表面。可以例如使用家用或工业洗碗机洗涤硬表面或使用洗涤剂组合物手动地洗涤硬表面,该洗涤剂组合物含有本发明的α-淀粉酶、任选地连同一种或多种选自下组的另外的酶,该组包含:蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤代过氧酶、过氧化氢酶、甘露聚糖酶、或其任何混合物。
在另外的方面,本发明涉及用于从表面去除污渍的方法,该方法包括使该表面与在洗涤剂组合物中和在洗涤剂应用中的包含本发明的α-淀粉酶连同一种或多种表面活性剂以及任选地一种或多种选自以下列表的洗涤剂组分的组合物接触,该列表包含助水溶剂、助洗剂和共助洗剂、漂白体系、聚合物、织物调色剂和辅料或其任何混合物。另外的方面是用于从表面去除污渍的方法,该方法包括使该表面与在洗涤剂组合物中和在洗涤剂应用中的包含本发明的α-淀粉酶变体连同一种或多种表面活性剂、一种或多种选自下组的另外的酶的组合物接触,该组包含蛋白酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、地衣聚糖酶、卤代过氧酶、过氧化氢酶以及甘露聚糖酶或其任何混合物。
使用方法
本发明还涉及用于清洁和/或处理部位(尤其是表面)或织物的方法。在一方面,披露了这样一种方法,该方法包括任选地洗涤和/或冲洗所述表面或织物,使所述表面或织物与本说明书中披露的任何消费品接触,然后任选地洗涤和/或冲洗所述表面或织物的步骤。
如本文使用的,洗涤包括但不限于擦洗和机械搅拌。对此类表面或织物进行干燥可以通过在家庭或工业环境中采用的通用手段中的任一种来完成。在存在或不存在电磁辐射(包括日光、红外线、紫外线和微波照射)的情况下,此类手段包括但不限于在环境温度或升高的温度下在5与0.01大气压之间的压力下的鼓风干燥或静止空气干燥。在一方面,所述干燥可通过采用熨斗在高于环境的温度完成,其中,例如,所述织物可与所述熨斗直接接触相对短的或甚至延长的时间段,并且其中可施加超过由于重力另外通常存在的压力。在另一方面,所述干燥可以通过采用干燥器在高于环境的温度完成。用于干燥织物的设备是已知的,并且通常被称为干衣机。除了衣物之外,此类家用电器还用于干燥许多其他物品,这些物品包括毛巾、床单、枕套、尿布等,并且此类设备已经在世界上许多国家中被接受为标准便利,基本上取代了用于织物干燥的晾衣绳的使用。今天使用的大多数干燥器使用加热的空气,随着织物在干燥器内翻滚,加热的空气经过和/或穿过织物。例如,空气可通过电子方式、经由气体火焰、或甚至用微波照射加热。这样的空气可以从约15℃加热到约400℃、从约25℃加热到约200℃、从约35℃加热到约100℃、或甚至从约40℃加热到约85℃,并用于干燥器中以干燥表面和/或织物。如本领域技术人员会理解的,本发明的清洁组合物理想地适用于衣物洗涤应用。因此,本发明包括用于洗涤织物的方法。该方法包括使待洗涤的织物与所述清洁衣物洗涤溶液接触,该清洁衣物洗涤溶液包含申请人的清洁组合物、清洁添加剂或其混合物的至少一种实施例。织物可以包含能够在常规消费者或公共机构使用条件下被洗涤的大多数任何织物。溶液优选具有约4.0至约12.0的pH。可以在溶液中以从约500ppm至约15,000ppm的浓度使用组合物。水温范围典型地是从约5℃至约90℃。水与织物比率典型地是约1:1至约30:1。
在以下段落中进一步定义上述本发明:
段落1.一种亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体,其在对应于以下位置的一个或多个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO.1进行编号。
段落2.根据段落1所述的α-淀粉酶变体,其中所述变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
段落3.根据前述段落中任一项所述的α-淀粉酶变体,其中所述变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有改善的性能,例如当与所述亲本多肽,优选SEQ ID NO:2或3相比时,测量为改善因子(IF)>1.0的比活性的改善的洗涤性能。
段落4.根据前述段落中任一项所述的α-淀粉酶变体,其中所述修饰在对应于以下位置的一个或多个位置处:H1、H2、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475、G476,使用SEQ IDNO:1进行编号。
段落5.根据前述段落中任一项所述的α-淀粉酶变体,其中所述修饰在对应于以下位置的一个或多个位置处:H1*、H2、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,使用SEQ ID NO:1进行编号。
段落6.根据前述段落中任一项所述的α-淀粉酶变体,其中该变体在对应于位置R180、S181、T182以及G183的两个或更多个位置处包含缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号。
段落7.根据段落6所述的α-淀粉酶变体,其中该缺失选自由以下组成的组:R180*+S181*、R180*+T182*、R180*+G183*、S181*+T182*、S181*+G183*、或T182*+G183*,使用SEQID NO:1进行编号。
段落8.根据前述段落中任一项所述的α-淀粉酶变体,其中该变体包含选自由以下组成的组的一个或多个修饰:
H1*+G7A+R180*+S181*、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+N279S、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+N279S+G303R、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+G303R+E390A+G476A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
段落9.根据前述段落中任一项所述的α-淀粉酶变体,其中该变体包含选自由以下组成的组的一个或多个修饰或由其组成:
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182S+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+T182L+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+S181L+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180S+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A60P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105I+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182G+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182M+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185K+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185N+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185R+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244L+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280W+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280F+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+L205F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+T315A+E390A+G475K、
H1*+G7H+G110K+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+A60V+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+A383D+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+T151A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+K258V+E259V+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+N3S+G7A+N94D+Q98L+W140Y+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+V252I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+G7A+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
H1*+N3D+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+H420A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470A+G475K、
H1*+G7A+S132L+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A31S+R37N+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+S302Y+E390A+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+L205Y+T224Y+Y242F+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
R180*+S181*、
T40N+F116L+D123N+N126D+N128Y+T131I+F155W+R180*+S181*+T182D+E189P+F202Y+K457N+P458S+G475K+G476E、
A60V+Q98L+G110K+R180*+S181*+A383D、
Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+T315A、
G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*、
G7H+W167P+R180*+S181*+G455R、
Q98L+V103A+G110K+R180*+S181*、
T114K+R180*+S181*、
E169V+R180*+S181*、
R180*+S181*+W188C、
W167D+R180*+S181*、
W167S+R180*+S181*、
W167E+R180*+S181*、
W167P+R180*+S181*、
R180*+S181*+E193I+H323N、
R180*+S181*+A203F、
W159L+R180*+S181*、
W159H+R180*+S181*、
K178A+R180*+S181*、
A111L+R180*+S181*、
G110K+R180*+S181*、和
A111G+R180*+S181*,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ IDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中该变体具有α-淀粉酶活性。
段落10.根据前述段落中任一项所述的α-淀粉酶变体,其中所述变体具有改善的特性,其中所述改善的特性是测量为改善因子(IF)>1.0的增加的比活性的改善的洗涤性能。
段落11.根据前述段落中任一项所述的α-淀粉酶变体,其中所述变体具有改善的特性,其中所述改善的特性是与所述亲本多肽相比,测量为改善因子(IF)>1.0的增加的比活性的改善的洗涤性能。
段落12.根据前述段落中任一项所述的α-淀粉酶变体,其中所述变体具有改善的特性,其中所述改善的特性是与所述SEQ ID NO:2和/或SEQ ID NO:3的亲本多肽相比测量为改善因子(IF)>1.0的增加的比活性的改善的洗涤性能。
段落13.根据前述段落中任一项所述的α-淀粉酶变体,其中修饰的数目为1至20,例如1至10和1至5,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个修饰。
段落14.根据前述段落中任一项所述的α-淀粉酶变体,其中所述α-淀粉酶变体衍生自枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、芽孢杆菌属物种KSM-K38、迟缓芽孢杆菌、短芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、浅青紫链霉菌、盐敏芽孢杆菌或鼠灰链霉菌。
段落15.根据前述段落中任一项所述的α-淀粉酶变体,其中所述亲本α-淀粉酶选自SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13和14中所示的氨基酸序列,或任何α-淀粉酶与SEQ ID NO:1、2或3中所示的任一氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
段落16.根据段落所述的α-淀粉酶变体,其中所述亲本α-淀粉酶包含SEQ ID NO:1、2和3中所示的氨基酸序列或由其组成。
段落17.一种多核苷酸,其编码根据段落1-16所述的α-淀粉酶变体。
段落18.一种核酸构建体,其包含根据段落17所述的多核苷酸。
段落19.一种表达载体,其包含根据段落17所述的多核苷酸。
段落20.一种宿主细胞,其包含根据段落17所述的多核苷酸、根据段落18所述的核酸构建体、或根据段落19所述的表达载体。
段落21.一种产生α-淀粉酶变体的方法,该方法包括a.在适合于所述变体表达的条件下培养根据段落20所述的宿主细胞;以及b.任选地回收所述变体。
段落22.一种获得亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体的方法,该方法通过在对应于以下位置的一个或多个位置处引入修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
段落23.一种改善亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体的洗涤性能的方法,该变体具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列或与其具有至少60%的序列同一性,所述方法包括以下步骤:
a)在该杂合α-淀粉酶中的两个、三个或四个位置的取代和/或缺失,所述位置对应于位置180、181、182和183,使用SEQ ID NO:1进行编号;以及
b)在对应于以下位置的一个或多个位置处的修饰:H1、H2、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、G303、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475、G476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性以及与所述亲本多肽相比改善的洗涤性能。
段落24.一种组合物,其包含根据段落1-16中任一项所述的变体。
段落25.根据段落24所述的组合物,其进一步包含至少一种另外的活性组分。
段落26.根据段落25所述的组合物,其中活性组分选自由以下组成的组:表面活性剂、助洗剂、絮凝助剂、螯合剂、染料转移抑制剂、酶稳定剂、酶抑制剂、催化材料、漂白活化剂、过氧化氢、过氧化氢源、预形成的过酸、聚合物分散剂、粘土去污剂/抗再沉积剂、增亮剂、抑泡剂、染料、香料、结构增弹剂、织物软化剂、载剂、助水溶剂、助洗剂和共助洗剂、织物调色剂、防沫剂、分散剂、加工助剂、和/或颜料。
段落27.根据段落26所述的组合物,其中所述活性组分是酶。
段落28.根据段落24-27中任一项所述的组合物,其中该酶选自包含以下的组:蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤代过氧合酶、过氧化氢酶以及甘露聚糖酶,或其任何混合物。
段落29.根据段落24-28中任一项所述的组合物,其为洗涤剂组合物,例如液体洗涤剂、固体洗涤剂、凝胶洗涤剂、粉末洗涤剂、片剂、荚、小袋和颗粒洗涤剂。
段落30.根据段落24-29中任一项所述的组合物,该组合物是液体衣物洗涤或液体餐具洗涤组合物,例如自动餐具洗涤(ADW)液体洗涤剂组合物,或粉末状衣物洗涤,例如皂条,或粉末状餐具洗涤组合物,例如ADW单位剂量洗涤剂组合物。
段落31.根据段落1-16中任一项所述的α-淀粉酶变体在清洁过程如衣物洗涤或包括餐具洗涤和工业清洁的硬表面清洁中的用途。
段落32.一种具有α-淀粉酶活性的杂合多肽,该多肽包含与SEQ ID NO:1、2、3、4或5中任一个的A结构域具有至少60%序列同一性的A结构域,与SEQ ID NO:1、2、10、11或12中任一个的B结构域具有至少60%序列同一性的B结构域,和与SEQ ID NO:1、2、3、4或5中任一个的C结构域具有至少60%序列同一性的C结构域。
段落33.根据段落32所述的杂合体,其中该A结构域与SEQ ID NO:4的A结构域具有至少60%序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
段落34.根据段落32-33所述的杂合体,其中该A1结构域与起始于SEQ ID NO:4的位置1-5范围中的位置处并终止于位置94-114范围中的位置处,例如,起始于位置1-3范围中的位置处并终止于位置99-110范围中的位置处或起始于位置1-3范围中的位置处并终止于位置104-109,特别是位置1-108范围中的位置处的序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性。
段落35.根据段落32-34所述的杂合体,其中该B结构域与起始于SEQ ID NO:12的位置93-113范围中的位置处并终止于位置195-215范围中的位置处,例如,起始于位置97-109范围中的位置处并终止于位置199-211范围中的位置处或起始于位置100-106范围中的位置处并终止于位置202-208,特别是位置109-205范围中的位置处的序列具有至少60%序列同一性、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
段落36.根据段落32-35所述的杂合体,其中该C结构域与SEQ ID NO:4的C结构域具有至少60%序列同一性,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
段落37.根据段落32-36所述的杂合体,其中该A2和C结构域与起始于SEQ ID NO:4的位置201-221范围中的位置处并终止于位置478-514范围中的位置处,例如,起始于位置203-211范围中的位置处并终止于位置480-510范围中的位置处或起始于位置205-216范围中的位置处并终止于位置480-500,特别是位置206-485范围中的位置处的序列具有至少60%序列同一性、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
段落38.根据段落32-37中任一项所述的杂合多肽,其中所述杂合多肽相对于SEQID NO:3的所述亲本多肽具有改善的特性。
段落39.根据段落32-38中任一项所述的杂合多肽,其中该改善的特性是作为增加的比活性的增加的洗涤性能,特别是在模式A洗涤剂组合物中增加的比活性。
段落40.根据段落32-39中任一项所述的杂合多肽,其中当与SEQ ID NO:3的所述亲本多肽相比时,改善的特性是测量为改善因子(IF)>1.0的增加的比活性。
段落41.根据段落32-40中任一项所述的杂多肽,其中所述亲本多肽与SEQ ID NO:1-14中的任一个具有至少60%、例如65%、例如至少70%、例如至少75%、例如至少80%、例如至少85%、例如至少90%、例如至少95%、例如至少97%、例如至少99%、但小于100%的序列同一性。
段落42.根据段落32-41中任一项所述的杂多肽,其中所述杂合多肽与SEQ ID NO:1-14中的任一个具有至少60%、例如65%、例如至少70%、例如至少75%、例如至少80%、例如至少85%、例如至少90%、例如至少95%、例如至少97%、例如至少99%、但小于100%的序列同一性。
段落43.根据段落32-42中任一项所述的杂合多肽,其进一步包含对应于位置180、181、182和183的一个或多个氨基酸的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号。
段落44.根据段落43所述的杂合多肽,其包含对应于位置180、181、182和183的两个或更多个氨基酸的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号。
段落45.根据前述段落43-44中任一项所述的杂合多肽,其包含对应于位置180和181的氨基酸的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号。
段落46.根据前述段落43-44中任一项所述的杂合多肽,其包含对应于位置180和182的氨基酸的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号。
段落47.根据前述段落43-44中任一项所述的杂合多肽,其包含对应于位置180和183的氨基酸的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号。
段落48.根据前述段落43-44中任一项所述的杂合多肽,其包含对应于位置181和182的氨基酸的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号。
段落49.根据前述段落43-44中任一项所述的杂合多肽,其包含对应于位置181和183的氨基酸的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号。
段落50.根据前述段落43-44中任一项所述的杂合多肽,其包含对应于位置182和183的氨基酸的缺失,使用SEQ ID NO:1进行编号。
段落51.根据前述段落43-44中任一项所述的杂合多肽,其包含SEQ ID NO:1或2或由其组成。
段落52.根据前述段落32-51中任一项所述的杂合多肽,其相对于SEQ ID NO:3的亲本多肽具有至少一种改善的特性,其中该改善的特性选自下组,该组包含洗涤剂稳定性、增加的比活性、底物特异性、热稳定性、PH依赖性活性、pH依赖性稳定性、氧化稳定性、Ca2+依赖性以及洗涤性能。
段落53.根据前述段落32-52中任一项所述的杂合多肽,其中所述α-淀粉酶变体衍生自枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、芽孢杆菌属物种KSM-K38、迟缓芽孢杆菌、短芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、浅青紫链霉菌、盐敏芽孢杆菌或鼠灰链霉菌。
段落54.一种多核苷酸,其编码根据前述段落32-53中任一项所述的杂合多肽。
段落55.一种核酸构建体,其包含根据段落54所述的多核苷酸。
段落56.一种表达载体,其包含根据段落54所述的多核苷酸。
段落57.一种宿主细胞,其包含根据段落54所述的多核苷酸、根据段落55所述的核酸构建体、或根据段落56所述的表达载体。
段落58.一种改善与SEQ ID NO:4或5的α淀粉酶具有至少60%同一性的α淀粉酶的洗涤性能的方法,所述方法包括用具有SEQ ID NO:12的氨基酸109-206的B结构域或与其具有至少60%同一性的序列替代所述α淀粉酶的B结构域。
段落59.一种产生杂合多肽的方法,该方法包括:a.在适合表达所述杂合体的条件下培养根据段落57所述的宿主细胞;以及b.任选地回收所述杂合体。
段落60.一种清洁组合物,其包含根据段落32-53中任一项所述的杂合体。
段落61.根据段落60所述的组合物,其进一步包含至少一种另外的活性组分。
段落62.根据段落61所述的组合物,其中活性组分选自由以下组成的组:表面活性剂、助洗剂、絮凝助剂、螯合剂、染料转移抑制剂、酶稳定剂、酶抑制剂、催化材料、漂白活化剂、过氧化氢、过氧化氢源、预形成的过酸、聚合物分散剂、粘土去污剂/抗再沉积剂、增亮剂、抑泡剂、染料、香料、结构增弹剂、织物软化剂、载剂、助水溶剂、助洗剂和共助洗剂、织物调色剂、防沫剂、分散剂、加工助剂、和/或颜料。
段落63.根据段落62所述的组合物,其中所述活性组分是酶。
段落64.根据段落60-63中任一项所述的组合物,其中该酶选自包含以下的组:蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤代过氧合酶、过氧化氢酶以及甘露聚糖酶,或其任何混合物。
段落65.根据段落60-64中任一项所述的组合物,其中该组合物选自包含以下的组:液体洗涤剂、固体洗涤剂、凝胶洗涤剂、粉末洗涤剂、片剂、荚、小袋和颗粒洗涤剂。
段落66.根据段落60-65中任一项所述的组合物,该组合物是液体衣物洗涤或液体餐具洗涤组合物,例如自动餐具洗涤(ADW)液体洗涤剂组合物,或粉末状衣物洗涤,例如皂条,或粉末状餐具洗涤组合物,例如ADW单位剂量洗涤剂组合物。
段落67.根据段落60-66中任一项所述的杂合多肽在清洁过程如衣物洗涤或包括餐具洗涤和工业清洁的硬表面清洁中的用途。
材料与方法
α-淀粉酶活性的测定
pNP-G7测定法
可以通过使用G7-pNP底物的方法确定α-淀粉酶活性。为4,6-亚乙基(G7)-对硝基苯基(G1)-α,D-麦芽庚糖苷的缩写的G7-pNP是一种可以由内切淀粉酶例如α-淀粉酶切割的嵌段寡糖。切割之后,试剂盒中所包括的α-葡糖苷酶进一步消化水解底物以释放游离PNP分子,该分子具有黄颜色并且因而可通过可见分光光度法在λ=405nm(400-420nm)处测量。含有G7-pNP底物和α-葡糖苷酶的试剂盒由罗氏公司/日立公司(Roche/Hitachi)制造(目录号11876473)。
试剂:
来自这个试剂盒的G7-pNP底物含有22mM 4,6-亚乙基-G7-pNP和52.4mM HEPES(2-[4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪基]-乙磺酸),pH 7.0。
α-葡糖苷酶试剂含有52.4mM HEPES、87mM NaCl、12.6mM MgCl2、0.075mM CaCl2、≥4kU/L的α-葡糖苷酶。
通过将1mLα-葡糖苷酶试剂与0.2mL G7-pNP底物混合,制成底物工作溶液。此底物工作溶液在使用之前立即制成。
稀释缓冲液:50mM MOPS,0.05%(w/v)Triton X100(聚乙二醇对-(1,1,3,3-四甲基丁基)-苯基醚(C14H22O(C2H4O)n(n=9-10))),1mM CaCl2,pH 8.0。
程序:
将待分析的淀粉酶样品稀释于稀释缓冲液中以确保稀释样品中的pH是7。通过将20μl稀释的酶样品转移至96孔微量滴定板中并添加80μl底物工作溶液来进行测定。将溶液混合并在室温预孵育1分钟并且在OD 405nm经5分钟每20秒测量吸收。
在给定的一组条件下,时间依赖性吸收曲线的斜率(每分钟的吸光度)与所讨论的α-淀粉酶的比活性(活性/mg酶)成正比。淀粉酶样品应稀释至其中斜率为0.4吸光度单位/分钟以下的水平。
Phadebas活性测定:
α-淀粉酶活性还可通过使用Phadebas底物(例如来自麦戈尔生命科学(MagleLife Sciences),隆德(Lund),瑞典(Sweden))的方法来确定。Phadebas片剂包括互联淀粉聚合物,这些聚合物呈不溶于水的球状微球形式。将一种蓝色染料共价结合至这些微球。微球中的互联淀粉聚合物以与α-淀粉酶活性成比例的速度降解。当α-淀粉酶降解了淀粉聚合物时,释放的蓝色染料是可溶于水的并且染料浓度可通过在620nm下测量吸光度来确定。蓝色的浓度与样品中的α-淀粉酶活性成比例。
将待分析的淀粉酶样品稀释于具有所希望pH的活性缓冲液中。将一个底物片剂悬浮于5mL活性缓冲液中并在磁力搅拌器上混合。在混合底物期间,将150μl转移至微量滴定板(MTP)或PCR-MTP。将30μl稀释的淀粉酶样品添加至150μl底物并混合。在37℃孵育15分钟。通过添加30μl 1M NaOH并且混合来停止反应。在4000xg离心MTP 5分钟。将100μl转移至新的MTP并且测量620nm处的吸光度。
淀粉酶样品应稀释成使得620nm处的吸光度在0与2.2之间,并且在活性测定的线性范围内。
还原糖活性测定:
α-淀粉酶活性还可通过使用例如玉米淀粉底物的还原糖测定来确定。通过与对-羟基苯甲酸酰肼(PHBAH)反应来确定用α-淀粉酶水解淀粉中的α-1,4-糖苷键所形成的多个还原端。在与PHBAH反应之后,可以通过在405nm处的吸光度来测量还原端的数目并且还原端的浓度与样品中的α-淀粉酶活性成比例。
通过在milliQ水中蒸煮5分钟来溶解玉米淀粉底物(3mg/ml)并且在测定之前冷却。关于终止液,制备Ka-Na-酒石酸盐/NaOH溶液(K-Na-酒石酸盐(默克(Merck)8087)50g/l,NaOH 20g/l)并且通过将对-羟基苯甲酸酰肼(PHBAH,西格玛(Sigma)H9882)添加至Ka-Na-酒石酸盐/NaOH溶液至15mg/ml来新鲜制备终止液。
在PCR-MTP中,将50μl活性缓冲液与50μl底物混合。添加50μl稀释的酶并混合。在PCR仪中在所希望的温度下孵育5分钟。通过添加75μl终止液(Ka-Na-酒石酸盐/NaOH/PHBAH)来停止反应。在PCR仪中在95℃下孵育10分钟。将150μl转移至新MTP中并测量405nm处的吸光度。
淀粉酶样品应稀释成使得405nm处的吸光度在0与2.2之间,并且在活性测定的线性范围内。
Figure BDA0003686175180008181
测定法:
为了确定残余淀粉酶活性,可以使用
Figure BDA0003686175180008182
Ultr淀粉酶测定试剂盒(E33651,英杰公司(Invitrogen),拉霍亚(La Jolla),加利福尼亚州,美国)。
底物是玉米淀粉衍生物DQTM淀粉,它是用
Figure BDA0003686175180008183
FL染料标记以使得荧光被淬灭的玉米淀粉。将含有大约1mg冻干底物的一个小瓶溶解于100微升的50mM乙酸钠(pH 4.0)中。将小瓶涡旋20秒并且在室温下在黑暗中放置,并偶尔混合直到溶解为止。然后添加900微升的100mM乙酸盐、0.01%(w/v)
Figure BDA0003686175180008184
X100、0.125mM CaCl2,pH 5.5,充分涡旋并在室温下在黑暗中储存直到准备使用为止。通过以10倍稀释于残余活性缓冲液(100mM乙酸盐、0.01%(w/v)
Figure BDA0003686175180008185
X100、0.125mM CaCl2,pH 5.5)中来制备储备底物工作溶液。孵育之后立即将酶在100mM乙酸盐、0.01%(W/v)
Figure BDA0003686175180008186
X100、0.125mM CaCl2,pH 5.5中稀释至10-20ng酶蛋白/ml的浓度。
为了测定,在黑色384孔微量滴定板中,将25微升的底物工作溶液与25微升稀释的酶混合10秒。在每个孔中在25℃下于15分钟内每分钟测量一次荧光强度(激发:485nm,发射:555nm)并计算荧光强度相对于时间的曲线的斜率作为Vmax。曲线应是线性的,并且调节了残余活性测定使得稀释的参考酶溶液在活性测定的线性范围内。
实例
实例1:SEQ ID NO:1中所示的杂合多肽的构建
构建来自具有如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的氨基酸编号1至氨基酸编号108和氨基酸编号207至氨基酸编号485的多肽(第一亲本多肽)的A和C结构域与来自具有SEQ IDNO:11所示氨基酸序列的氨基酸编号109至氨基酸编号206的多肽(第二亲本多肽)的B结构域之间的杂合体。
基于这两个淀粉酶的3D结构比对,将第一亲本多肽的氨基酸编号1至氨基酸编号108和氨基酸编号207至氨基酸编号485定义为结构域A和C,并且将第二亲本多肽的氨基酸109至氨基酸编号206定义为B结构域。对合成DNA片段进行设计(其编码来自第一亲本多肽的部分A-C结构域和来自第二亲本多肽的B结构域),并且这些合成DNA片段购买自外部供应商。
所得淀粉酶是如SEQ ID NO:1所示的多肽,该淀粉酶由来自第一亲本多肽的A和C结构域以及来自第二亲本多肽的B结构域组成。此外,具有R180*+S181*缺失的所得淀粉酶是SEQ ID NO:2中所示的多肽。
实例2:杂合多肽的比活性
为了确定如在实例1中描述产生的杂合多肽是否具有维持或甚至改善的活性,通过微样片测定法来评估该杂合多肽。制备以下洗涤剂组合物
Figure BDA0003686175180008191
Figure BDA0003686175180008201
表1:标准洗涤剂A(以w/w给出百分比)
制备模式A洗涤剂(0.33%):4:1摩尔比的CaCl2和MgCl2储备溶液,具有6000dH(水硬度)。称取125.8g的CaCl2.2H2O至1升瓶中,并向其中添加500ml I型水并充分搅拌。向其中称取并添加43.8g的MgCl2.6H2O,并充分溶解,并且最终体积用I型水补至1000ml。
0.535M NaHCO3的溶液:将44.9g的碳酸氢钠溶解在100ml的I型水中。
模式A洗涤剂,水硬度为15(15°dH):称取3.335g的模式A洗涤剂并转移到1升瓶中,并向其中添加865ml的I型水并充分混合。向其中添加7.5ml的0.535M NaHCO3,充分混合,并且体积用1型水补至1升。为了将水硬度调节至15°dH,添加2.5ml的4:1摩尔比的CaCl2.2H2O和MgCl2.6H2O储备溶液(6000°dH),并将混合物搅拌15min。
实验程序
制备母板:
通过菌落挑取器(K生物系统公司(KBiosystems))从转化的板中挑取菌落并接种在包含TBGly培养基的96孔培养板中生长。使培养物在37℃下生长3天,并通过离心从板中回收上清液。
制备底物板:
从测试材料中心(Center for Testmaterials)(CFT,荷兰)获得CS-27,5米样片并使用样片打孔器将其切割为6mm微样片。将一个或两个样片置于96孔Nunc板的每个孔中,向其中添加180μl模式A洗涤剂(0.33%)。将培养上清液或纯化蛋白质用100mM MOPS(pH 7)、0.1mM CaCl2、0.01%Triton-X稀释至0.1ppm或0.4ppm。向含有样片和模式A洗涤剂的板中添加20ul稀释的酶样品以获得0.01或0.04ppm的最终浓度,并在25℃,800RPM下孵育10分钟。将40ul反应混合物转移至另一个96孔板,为了将所有释放的寡糖消化为葡萄糖,添加10ul 0.1mg/ml淀粉葡糖苷酶(AMG)并在室温下孵育5min。从商业产品AMG 300L(诺维信公司(Novozymes))中纯化出AMG。通过对羟基苯甲酸酰肼(PAHBAH)法(Lever M AnalBiochem.[分析生物化学]81:21-7)检测还原末端。为制备1.5%PAHBAH试剂,将1.5g对羟基苯甲酸酰肼(PAHBAH)溶解于含有1.0M Na2CO3、0.17M酒石酸钠钾和5mM Bi(NO3)3.5H2O的缓冲液中。向50ul AMG消化物添加50ul 1.5%PAHBAH试剂并在95℃下加热10min。在405nm下测量所得混合物的吸光度,其与酶活性成比例。在培养上清液的情况下,使用特异性抗体通过ELISA测定表达酶的浓度。通过取按蛋白质浓度计的活性的比率来计算比活性,并且将命中鉴定为高于亲本多肽(α-淀粉酶)的比活性的一切。
改善因子(IF)计算如下:
改善因子(IF)=[杂合多肽的比活性]/[亲本多肽(α-淀粉酶)的比活性]
杂合多肽的比活性=15.70
亲本多肽的比活性=11.41
改善因子(IF)=15.70/11.41=1.4。
因此,SEQ ID NO:2(杂合多肽)的IF是1.4,SEQ ID NO:3(亲本多肽)的IF是1.0。
实例3:根据本发明的变体的产生
通过标准程序制备SEQ ID NO:1的淀粉酶变体,简言之:将随机和/或定点突变引入基因中,用突变基因转化枯草芽孢杆菌宿主细胞,发酵经转化的宿主细胞(例如,如描述于WO 2004/111220的实例1中)。以类似方式在枯草芽孢杆菌中重组产生α-淀粉酶变体。产生变体文库,其中进行位置处改变的不同组合。产生的变体列于以下实例中。
实例4:变体的比活性
为了确定如在实例3中描述产生的变体是否具有维持或甚至改善的活性,通过如在实例2中所述的微样片测定法来评估这些变体。通过取按蛋白质浓度计的活性的比率来计算比活性,并且将变体鉴定为高于SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:2的α-淀粉酶的比活性的一切。
表2:通过上述方法获得的根据本发明的变体的比活性如下(氨基酸取代是指SEQID NO:1)。
Figure BDA0003686175180008221
Figure BDA0003686175180008231
Figure BDA0003686175180008241
Figure BDA0003686175180008251
Figure BDA0003686175180008261
Figure BDA0003686175180008271
Figure BDA0003686175180008281
Figure BDA0003686175180008291
Figure BDA0003686175180008301
Figure BDA0003686175180008311
Figure BDA0003686175180008321
Figure BDA0003686175180008331
Figure BDA0003686175180008341
Figure BDA0003686175180008351
Figure BDA0003686175180008361
Figure BDA0003686175180008371
Figure BDA0003686175180008381
Figure BDA0003686175180008391
Figure BDA0003686175180008401
Figure BDA0003686175180008411
Figure BDA0003686175180008421
Figure BDA0003686175180008431
Figure BDA0003686175180008441
Figure BDA0003686175180008451
Figure BDA0003686175180008461
Figure BDA0003686175180008471
Figure BDA0003686175180008481
Figure BDA0003686175180008491
Figure BDA0003686175180008501
Figure BDA0003686175180008511
Figure BDA0003686175180008521
Figure BDA0003686175180008531
Figure BDA0003686175180008541
Figure BDA0003686175180008551
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Figure BDA0003686175180008581
Figure BDA0003686175180008591
Figure BDA0003686175180008601
Figure BDA0003686175180008611
Figure BDA0003686175180008621
Figure BDA0003686175180008631
Figure BDA0003686175180008641
Figure BDA0003686175180008651
Figure BDA0003686175180008661
Figure BDA0003686175180008671
Figure BDA0003686175180008681
Figure BDA0003686175180008691
Figure BDA0003686175180008701
Figure BDA0003686175180008711
Figure BDA0003686175180008721
Figure BDA0003686175180008731
Figure BDA0003686175180008741
Figure BDA0003686175180008751
Figure BDA0003686175180008761
Figure BDA0003686175180008771
Figure BDA0003686175180008781
Figure BDA0003686175180008791
实例5:使用自动机械应力测定的α-淀粉酶的洗涤性能
为了评定α-淀粉酶在洗涤剂基础组合物中的洗涤性能,可以使用自动机械应力测定(AMSA)进行洗涤实验。使用AMSA测试,可以检查大量小体积酶洗涤剂溶液的洗涤性能。AMSA板具有许多用于测试溶液的缝和盖子,盖子将待洗涤的纺织品样片对所有缝开口强力挤压。在洗涤时间期间,板、测试溶液、纺织品和盖子剧烈摇动以使测试溶液与纺织品接触并以规则的、周期性摆动方式施加机械应力。关于进一步描述,参见WO 02/42740,尤其是第23-24页的“具体方法实施例”段落。
洗涤性能总体描述
制备测试溶液,该测试溶液包含水和如下文描述的模式洗涤剂A和浓度为0或0.09ppm的本发明的酶。添加用淀粉污染的织物(来自测试材料中心BV(邮政信箱120,3133KT,弗拉尔丁恩,荷兰)CS-28)并在20℃下洗涤10分钟。在流动自来水下彻底漂洗并且在黑暗中干燥之后,随后测量带有污渍的织物的光强度值作为对洗涤性能的测量。具有0mg酶蛋白/L的测试用作空白并且对应于来自洗涤剂的贡献。优选地,在洗涤步骤期间施加机械作用,例如以将洗涤溶液与织物一起振摇、转动或搅拌的形式施加。AMSA洗涤性能实验可以在以下详细说明的实验条件下实施:
表A:实验条件
洗涤剂 液体模式洗涤剂A(参见表B)
洗涤剂剂量 3.33g/L
测试溶液体积 160μL
pH 按原样
洗涤时间 10分钟
温度 20℃
水硬度 15°dH
测试中的酶浓度 0.09pmm
测试材料 CS-28(大米淀粉棉花)
表B:模式洗涤剂A
Figure BDA0003686175180008801
Figure BDA0003686175180008811
通过将CaCl2、MgCl2、和NaHCO3
(Ca2+:Mg2+:HCO3-=4:1:7.5)添加至测试系统中来将水硬度调节至15°dH。在洗涤之后,将纺织品在自来
水中沖洗并干燥。
洗涤性能被测量为亮度,表达为当用白光照亮时从样品反射的光的强度。当样品带有污渍时,反射光的强度低于干净样品的反射光的强度。因此,反射光的强度可以用来衡量洗涤性能。
使用专业平板扫描仪(EPSON Expression 10000XL,EPSON)进行颜色测量,该扫描仪用于捕获所洗涤纺织品的图像。
为了从扫描图像中提取光强度的值,将来自图像的48→24位彩色像素值转化为红色、绿色和蓝色(RGB)的值。通过将RGB值作为向量进行加和并且然后取所得向量的长度来计算强度值(Int):
Figure BDA0003686175180008812
表3:根据本发明的变体的洗涤性能在下表中显示。
Figure BDA0003686175180008821
Figure BDA0003686175180008831
Figure BDA0003686175180008841
Figure BDA0003686175180008851
Figure BDA0003686175180008861
Figure BDA0003686175180008871
Figure BDA0003686175180008881
Figure BDA0003686175180008891
本文披露的尺寸和值不应理解为严格限于所记载的精确数值。相反,除非另有说明,否则每个这样的尺寸旨在意指所记载的值和围绕该值的功能等同的范围两者。
本文描述和要求保护的本发明不限于本文披露的特定方面的范围,因为这些方面旨在作为本发明几个方面的说明。任何等同方面旨在处于本发明的范围之内。实际上,除了本文所示和描述的那些之外,本发明的各种修改因前述说明而对本领域的技术人员变得清楚。此类修改也旨在落入所附权利要求的范围内。在冲突的情况下,以包括定义的本披露为准。
序列表
<110> 诺维信公司(Novozymes A/S)
<120> α-淀粉酶变体
<130> 15076-WO-PCT
<160> 14
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 484
<212> PRT
<213> 人工
<400> 1
His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp His
1 5 10 15
Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Asp Asp Ala Ser
20 25 30
Asn Leu Arg Asn Arg Gly Ile Thr Ala Ile Trp Ile Pro Pro Ala Trp
35 40 45
Lys Gly Thr Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr
50 55 60
Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly
65 70 75 80
Thr Arg Ser Gln Leu Glu Ser Ala Ile His Ala Leu Lys Asn Asn Gly
85 90 95
Val Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Ala Gly Ala Asp
100 105 110
Gly Thr Glu Phe Val Asp Ala Val Glu Val Asp Pro Ser Asn Arg Asn
115 120 125
Gln Glu Thr Ser Gly Thr Tyr Gln Ile Gln Ala Trp Thr Lys Phe Asp
130 135 140
Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr Tyr Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr
145 150 155 160
His Phe Asp Gly Thr Asp Trp Asp Glu Ser Arg Lys Leu Asn Arg Ile
165 170 175
Tyr Lys Phe Arg Ser Thr Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp Thr
180 185 190
Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Phe Ala Asp Leu Asp Met Asp
195 200 205
His Pro Glu Val Val Asn Glu Leu Arg Arg Trp Gly Glu Trp Tyr Thr
210 215 220
Asn Thr Leu Asn Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His Ile
225 230 235 240
Lys Tyr Ser Phe Thr Arg Asp Trp Leu Thr His Val Arg Asn Ala Thr
245 250 255
Gly Lys Glu Met Phe Ala Val Ala Glu Phe Trp Lys Asn Asp Leu Gly
260 265 270
Ala Leu Glu Asn Tyr Leu Asn Lys Thr Asn Trp Asn His Ser Val Phe
275 280 285
Asp Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Asn Ala Ser Asn Ser Gly Gly
290 295 300
Asn Tyr Asp Met Ala Lys Leu Leu Asn Gly Thr Val Val Gln Lys His
305 310 315 320
Pro Met His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro Gly
325 330 335
Glu Ser Leu Glu Ser Phe Val Gln Glu Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr
340 345 350
Ala Leu Ile Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr Gly
355 360 365
Asp Tyr Tyr Gly Ile Pro Thr His Ser Val Pro Ala Met Lys Ala Lys
370 375 380
Ile Asp Pro Ile Leu Glu Ala Arg Gln Asn Phe Ala Tyr Gly Thr Gln
385 390 395 400
His Asp Tyr Phe Asp His His Asn Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu Gly
405 410 415
Asn Thr Thr His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp Gly
420 425 430
Pro Gly Gly Glu Lys Trp Met Tyr Val Gly Gln Asn Lys Ala Gly Gln
435 440 445
Val Trp His Asp Ile Thr Gly Asn Lys Pro Gly Thr Val Thr Ile Asn
450 455 460
Ala Asp Gly Trp Ala Asn Phe Ser Val Asn Gly Gly Ser Val Ser Ile
465 470 475 480
Trp Val Lys Arg
<210> 2
<211> 482
<212> PRT
<213> 人工
<400> 2
His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp His
1 5 10 15
Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Asp Asp Ala Ser
20 25 30
Asn Leu Arg Asn Arg Gly Ile Thr Ala Ile Trp Ile Pro Pro Ala Trp
35 40 45
Lys Gly Thr Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr
50 55 60
Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly
65 70 75 80
Thr Arg Ser Gln Leu Glu Ser Ala Ile His Ala Leu Lys Asn Asn Gly
85 90 95
Val Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Ala Gly Ala Asp
100 105 110
Gly Thr Glu Phe Val Asp Ala Val Glu Val Asp Pro Ser Asn Arg Asn
115 120 125
Gln Glu Thr Ser Gly Thr Tyr Gln Ile Gln Ala Trp Thr Lys Phe Asp
130 135 140
Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr Tyr Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr
145 150 155 160
His Phe Asp Gly Thr Asp Trp Asp Glu Ser Arg Lys Leu Asn Arg Ile
165 170 175
Tyr Lys Phe Thr Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp Thr Glu Asn
180 185 190
Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Phe Ala Asp Leu Asp Met Asp His Pro
195 200 205
Glu Val Val Asn Glu Leu Arg Arg Trp Gly Glu Trp Tyr Thr Asn Thr
210 215 220
Leu Asn Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His Ile Lys Tyr
225 230 235 240
Ser Phe Thr Arg Asp Trp Leu Thr His Val Arg Asn Ala Thr Gly Lys
245 250 255
Glu Met Phe Ala Val Ala Glu Phe Trp Lys Asn Asp Leu Gly Ala Leu
260 265 270
Glu Asn Tyr Leu Asn Lys Thr Asn Trp Asn His Ser Val Phe Asp Val
275 280 285
Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Asn Ala Ser Asn Ser Gly Gly Asn Tyr
290 295 300
Asp Met Ala Lys Leu Leu Asn Gly Thr Val Val Gln Lys His Pro Met
305 310 315 320
His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro Gly Glu Ser
325 330 335
Leu Glu Ser Phe Val Gln Glu Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala Leu
340 345 350
Ile Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr Gly Asp Tyr
355 360 365
Tyr Gly Ile Pro Thr His Ser Val Pro Ala Met Lys Ala Lys Ile Asp
370 375 380
Pro Ile Leu Glu Ala Arg Gln Asn Phe Ala Tyr Gly Thr Gln His Asp
385 390 395 400
Tyr Phe Asp His His Asn Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu Gly Asn Thr
405 410 415
Thr His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp Gly Pro Gly
420 425 430
Gly Glu Lys Trp Met Tyr Val Gly Gln Asn Lys Ala Gly Gln Val Trp
435 440 445
His Asp Ile Thr Gly Asn Lys Pro Gly Thr Val Thr Ile Asn Ala Asp
450 455 460
Gly Trp Ala Asn Phe Ser Val Asn Gly Gly Ser Val Ser Ile Trp Val
465 470 475 480
Lys Arg
<210> 3
<211> 483
<212> PRT
<213> 芽孢杆菌属(Bacillus)
<400> 3
His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp His
1 5 10 15
Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Asp Asp Ala Ser
20 25 30
Asn Leu Arg Asn Arg Gly Ile Thr Ala Ile Trp Ile Pro Pro Ala Trp
35 40 45
Lys Gly Thr Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr
50 55 60
Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly
65 70 75 80
Thr Arg Ser Gln Leu Glu Ser Ala Ile His Ala Leu Lys Asn Asn Gly
85 90 95
Val Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp
100 105 110
Ala Thr Glu Asn Val Leu Ala Val Glu Val Asn Pro Asn Asn Arg Asn
115 120 125
Gln Glu Ile Ser Gly Asp Tyr Thr Ile Glu Ala Trp Thr Lys Phe Asp
130 135 140
Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr Tyr Ser Asp Phe Lys Trp Arg Trp Tyr
145 150 155 160
His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Gln Ser Arg Gln Phe Gln Asn Arg
165 170 175
Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp Ser Glu
180 185 190
Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Val Asp Met Asp His
195 200 205
Pro Glu Val Val Asn Glu Leu Arg Arg Trp Gly Glu Trp Tyr Thr Asn
210 215 220
Thr Leu Asn Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His Ile Lys
225 230 235 240
Tyr Ser Phe Thr Arg Asp Trp Leu Thr His Val Arg Asn Ala Thr Gly
245 250 255
Lys Glu Met Phe Ala Val Ala Glu Phe Trp Lys Asn Asp Leu Gly Ala
260 265 270
Leu Glu Asn Tyr Leu Asn Lys Thr Asn Trp Asn His Ser Val Phe Asp
275 280 285
Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Asn Ala Ser Asn Ser Gly Gly Asn
290 295 300
Tyr Asp Met Ala Lys Leu Leu Asn Gly Thr Val Val Gln Lys His Pro
305 310 315 320
Met His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro Gly Glu
325 330 335
Ser Leu Glu Ser Phe Val Gln Glu Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala
340 345 350
Leu Ile Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr Gly Asp
355 360 365
Tyr Tyr Gly Ile Pro Thr His Ser Val Pro Ala Met Lys Ala Lys Ile
370 375 380
Asp Pro Ile Leu Glu Ala Arg Gln Asn Phe Ala Tyr Gly Thr Gln His
385 390 395 400
Asp Tyr Phe Asp His His Asn Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu Gly Asn
405 410 415
Thr Thr His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp Gly Pro
420 425 430
Gly Gly Glu Lys Trp Met Tyr Val Gly Gln Asp Lys Ala Gly Gln Val
435 440 445
Trp His Asp Ile Thr Gly Asn Lys Pro Gly Thr Val Thr Ile Asn Ala
450 455 460
Asp Gly Trp Ala Asn Phe Ser Val Asn Gly Gly Ser Val Ser Ile Trp
465 470 475 480
Val Lys Arg
<210> 4
<211> 485
<212> PRT
<213> 芽孢杆菌属(Bacillus)
<400> 4
His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp His
1 5 10 15
Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Asp Asp Ala Ser
20 25 30
Asn Leu Arg Asn Arg Gly Ile Thr Ala Ile Trp Ile Pro Pro Ala Trp
35 40 45
Lys Gly Thr Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr
50 55 60
Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly
65 70 75 80
Thr Arg Ser Gln Leu Glu Ser Ala Ile His Ala Leu Lys Asn Asn Gly
85 90 95
Val Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp
100 105 110
Ala Thr Glu Asn Val Leu Ala Val Glu Val Asn Pro Asn Asn Arg Asn
115 120 125
Gln Glu Ile Ser Gly Asp Tyr Thr Ile Glu Ala Trp Thr Lys Phe Asp
130 135 140
Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr Tyr Ser Asp Phe Lys Trp Arg Trp Tyr
145 150 155 160
His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Gln Ser Arg Gln Phe Gln Asn Arg
165 170 175
Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Asp Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp
180 185 190
Ser Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Val Asp Met
195 200 205
Asp His Pro Glu Val Val Asn Glu Leu Arg Arg Trp Gly Glu Trp Tyr
210 215 220
Thr Asn Thr Leu Asn Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His
225 230 235 240
Ile Lys Tyr Ser Phe Thr Arg Asp Trp Leu Thr His Val Arg Asn Ala
245 250 255
Thr Gly Lys Glu Met Phe Ala Val Ala Glu Phe Trp Lys Asn Asp Leu
260 265 270
Gly Ala Leu Glu Asn Tyr Leu Asn Lys Thr Asn Trp Asn His Ser Val
275 280 285
Phe Asp Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Asn Ala Ser Asn Ser Gly
290 295 300
Gly Asn Tyr Asp Met Ala Lys Leu Leu Asn Gly Thr Val Val Gln Lys
305 310 315 320
His Pro Met His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro
325 330 335
Gly Glu Ser Leu Glu Ser Phe Val Gln Glu Trp Phe Lys Pro Leu Ala
340 345 350
Tyr Ala Leu Ile Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr
355 360 365
Gly Asp Tyr Tyr Gly Ile Pro Thr His Ser Val Pro Ala Met Lys Ala
370 375 380
Lys Ile Asp Pro Ile Leu Glu Ala Arg Gln Asn Phe Ala Tyr Gly Thr
385 390 395 400
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420 425 430
Gly Pro Gly Gly Glu Lys Trp Met Tyr Val Gly Gln Asp Lys Ala Gly
435 440 445
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450 455 460
Asn Ala Asp Gly Trp Ala Asn Phe Ser Val Asn Gly Gly Ser Val Ser
465 470 475 480
Ile Trp Val Lys Arg
485
<210> 5
<211> 514
<212> PRT
<213> 芽孢杆菌属(Bacillus)
<400> 5
Met Lys Gln Gln Lys Arg Leu Tyr Ala Arg Leu Leu Thr Leu Leu Phe
1 5 10 15
Ala Leu Ile Phe Leu Leu Pro His Ser Ala Ala Ala Ala His His Asn
20 25 30
Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp His Leu Pro Asn
35 40 45
Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Asp Asp Ala Ser Asn Leu Arg
50 55 60
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65 70 75 80
Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr Asp Leu Gly
85 90 95
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100 105 110
Gln Leu Glu Ser Ala Ile His Ala Leu Lys Asn Asn Gly Val Gln Val
115 120 125
Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp Ala Thr Glu
130 135 140
Asn Val Leu Ala Val Glu Val Asn Pro Asn Asn Arg Asn Gln Glu Ile
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165 170 175
Arg Gly Asn Thr Tyr Ser Asp Phe Lys Trp Arg Trp Tyr His Phe Asp
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Gly Val Asp Trp Asp Gln Ser Arg Gln Phe Gln Asn Arg Ile Tyr Lys
195 200 205
Phe Arg Gly Asp Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp Ser Glu Asn
210 215 220
Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Val Asp Met Asp His Pro
225 230 235 240
Glu Val Val Asn Glu Leu Arg Arg Trp Gly Glu Trp Tyr Thr Asn Thr
245 250 255
Leu Asn Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His Ile Lys Tyr
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275 280 285
Glu Met Phe Ala Val Ala Glu Phe Trp Lys Asn Asp Leu Gly Ala Leu
290 295 300
Glu Asn Tyr Leu Asn Lys Thr Asn Trp Asn His Ser Val Phe Asp Val
305 310 315 320
Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Asn Ala Ser Asn Ser Gly Gly Asn Tyr
325 330 335
Asp Met Ala Lys Leu Leu Asn Gly Thr Val Val Gln Lys His Pro Met
340 345 350
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370 375 380
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405 410 415
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Gly Trp Ala Asn Phe Ser Val Asn Gly Gly Ser Val Ser Ile Trp Val
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Lys Arg
<210> 6
<211> 485
<212> PRT
<213> 芽孢杆菌属(Bacillus)
<400> 6
His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr
1 5 10 15
Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Ser Asp Ala Ser
20 25 30
Asn Leu Lys Asp Lys Gly Ile Ser Ala Val Trp Ile Pro Pro Ala Trp
35 40 45
Lys Gly Ala Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr
50 55 60
Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Ile Arg Thr Lys Tyr Gly
65 70 75 80
Thr Arg Asn Gln Leu Gln Ala Ala Val Asn Ala Leu Lys Ser Asn Gly
85 90 95
Ile Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp
100 105 110
Ala Thr Glu Met Val Arg Ala Val Glu Val Asn Pro Asn Asn Arg Asn
115 120 125
Gln Glu Val Ser Gly Glu Tyr Thr Ile Glu Ala Trp Thr Lys Phe Asp
130 135 140
Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr His Ser Asn Phe Lys Trp Arg Trp Tyr
145 150 155 160
His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Gln Ser Arg Lys Leu Asn Asn Arg
165 170 175
Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Asp Gly Lys Gly Trp Asp Trp Glu Val Asp
180 185 190
Thr Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Ile Asp Met
195 200 205
Asp His Pro Glu Val Val Asn Glu Leu Arg Asn Trp Gly Val Trp Tyr
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Thr Asn Thr Leu Gly Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His
225 230 235 240
Ile Lys Tyr Ser Phe Thr Arg Asp Trp Ile Asn His Val Arg Ser Ala
245 250 255
Thr Gly Lys Asn Met Phe Ala Val Ala Glu Phe Trp Lys Asn Asp Leu
260 265 270
Gly Ala Ile Glu Asn Tyr Leu Asn Lys Thr Asn Trp Asn His Ser Val
275 280 285
Phe Asp Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Asn Ala Ser Lys Ser Gly
290 295 300
Gly Asn Tyr Asp Met Arg Gln Ile Phe Asn Gly Thr Val Val Gln Arg
305 310 315 320
His Pro Met His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro
325 330 335
Glu Glu Ala Leu Glu Ser Phe Val Glu Glu Trp Phe Lys Pro Leu Ala
340 345 350
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355 360 365
Gly Asp Tyr Tyr Gly Ile Pro Thr His Gly Val Pro Ala Met Lys Ser
370 375 380
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385 390 395 400
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405 410 415
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420 425 430
Gly Ala Gly Gly Asn Lys Trp Met Phe Val Gly Arg Asn Lys Ala Gly
435 440 445
Gln Val Trp Thr Asp Ile Thr Gly Asn Arg Ala Gly Thr Val Thr Ile
450 455 460
Asn Ala Asp Gly Trp Gly Asn Phe Ser Val Asn Gly Gly Ser Val Ser
465 470 475 480
Ile Trp Val Asn Lys
485
<210> 7
<211> 485
<212> PRT
<213> 芽孢杆菌属物种(Bacillus sp)
<400> 7
His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr
1 5 10 15
Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Asn Ser Asp Ala Ser
20 25 30
Asn Leu Lys Ser Lys Gly Ile Thr Ala Val Trp Ile Pro Pro Ala Trp
35 40 45
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50 55 60
Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly
65 70 75 80
Thr Arg Ser Gln Leu Gln Ala Ala Val Thr Ser Leu Lys Asn Asn Gly
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100 105 110
Ala Thr Glu Met Val Arg Ala Val Glu Val Asn Pro Asn Asn Arg Asn
115 120 125
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130 135 140
Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr His Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr
145 150 155 160
His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Gln Ser Arg Arg Leu Asn Asn Arg
165 170 175
Ile Tyr Lys Phe Arg Gly His Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp
180 185 190
Thr Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Ile Asp Met
195 200 205
Asp His Pro Glu Val Val Asn Glu Leu Arg Asn Trp Gly Val Trp Tyr
210 215 220
Thr Asn Thr Leu Gly Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His
225 230 235 240
Ile Lys Tyr Ser Phe Thr Arg Asp Trp Ile Asn His Val Arg Ser Ala
245 250 255
Thr Gly Lys Asn Met Phe Ala Val Ala Glu Phe Trp Lys Asn Asp Leu
260 265 270
Gly Ala Ile Glu Asn Tyr Leu Gln Lys Thr Asn Trp Asn His Ser Val
275 280 285
Phe Asp Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Asn Ala Ser Lys Ser Gly
290 295 300
Gly Asn Tyr Asp Met Arg Asn Ile Phe Asn Gly Thr Val Val Gln Arg
305 310 315 320
His Pro Ser His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro
325 330 335
Glu Glu Ala Leu Glu Ser Phe Val Glu Glu Trp Phe Lys Pro Leu Ala
340 345 350
Tyr Ala Leu Thr Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr
355 360 365
Gly Asp Tyr Tyr Gly Ile Pro Thr His Gly Val Pro Ala Met Arg Ser
370 375 380
Lys Ile Asp Pro Ile Leu Glu Ala Arg Gln Lys Tyr Ala Tyr Gly Lys
385 390 395 400
Gln Asn Asp Tyr Leu Asp His His Asn Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu
405 410 415
Gly Asn Thr Ala His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp
420 425 430
Gly Ala Gly Gly Ser Lys Trp Met Phe Val Gly Arg Asn Lys Ala Gly
435 440 445
Gln Val Trp Ser Asp Ile Thr Gly Asn Arg Thr Gly Thr Val Thr Ile
450 455 460
Asn Ala Asp Gly Trp Gly Asn Phe Ser Val Asn Gly Gly Ser Val Ser
465 470 475 480
Ile Trp Val Asn Lys
485
<210> 8
<211> 485
<212> PRT
<213> 芽孢杆菌属物种(Bacillus sp.)
<400> 8
His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr
1 5 10 15
Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Ser Asp Ala Ser
20 25 30
Asn Leu Lys Asp Lys Gly Ile Thr Ala Val Trp Ile Pro Pro Ala Trp
35 40 45
Lys Gly Ala Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr
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115 120 125
Gln Glu Val Ser Gly Asp Tyr Thr Ile Glu Ala Trp Thr Lys Phe Asp
130 135 140
Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr His Ser Asn Phe Lys Trp Arg Trp Tyr
145 150 155 160
His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Gln Ser Arg Gln Leu Gln Asn Arg
165 170 175
Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Asp Gly Lys Gly Trp Asp Trp Glu Val Asp
180 185 190
Thr Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Ile Asp Met
195 200 205
Asp His Pro Glu Val Val Asn Glu Leu Arg Asn Trp Gly Val Trp Tyr
210 215 220
Thr Asn Thr Leu Gly Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His
225 230 235 240
Ile Lys Tyr Ser Phe Thr Arg Asp Trp Leu Thr His Val Arg Asn Thr
245 250 255
Thr Gly Lys Asn Met Phe Ala Val Ala Glu Phe Trp Lys Asn Asp Ile
260 265 270
Gly Ala Ile Glu Asn Tyr Leu Ser Lys Thr Asn Trp Asn His Ser Val
275 280 285
Phe Asp Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Asn Ala Ser Arg Ser Gly
290 295 300
Gly Asn Tyr Asp Met Arg Gln Ile Phe Asn Gly Thr Val Val Gln Arg
305 310 315 320
His Pro Thr His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro
325 330 335
Glu Glu Ala Leu Glu Ser Phe Val Glu Glu Trp Phe Lys Pro Leu Ala
340 345 350
Cys Ala Leu Thr Leu Thr Arg Asp Gln Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr
355 360 365
Gly Asp Tyr Tyr Gly Ile Pro Thr His Gly Val Pro Ala Met Lys Ser
370 375 380
Lys Ile Asp Pro Ile Leu Glu Ala Arg Gln Lys Tyr Ala Tyr Gly Lys
385 390 395 400
Gln Asn Asp Tyr Leu Asp His His Asn Met Ile Gly Trp Thr Arg Glu
405 410 415
Gly Asn Thr Ala His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp
420 425 430
Gly Pro Gly Gly Asn Lys Trp Met Tyr Val Gly Arg Asn Lys Ala Gly
435 440 445
Gln Val Trp Arg Asp Ile Thr Gly Asn Arg Ser Gly Thr Val Thr Ile
450 455 460
Asn Ala Asp Gly Trp Gly Asn Phe Ser Val Asn Gly Gly Ser Val Ser
465 470 475 480
Ile Trp Val Asn Asn
485
<210> 9
<211> 483
<212> PRT
<213> 地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)
<400> 9
Ala Asn Leu Asn Gly Thr Leu Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr Met Pro
1 5 10 15
Asn Asp Gly Gln His Trp Arg Arg Leu Gln Asn Asp Ser Ala Tyr Leu
20 25 30
Ala Glu His Gly Ile Thr Ala Val Trp Ile Pro Pro Ala Tyr Lys Gly
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Gly Glu Phe His Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly Thr Lys
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Gly Glu Leu Gln Ser Ala Ile Lys Ser Leu His Ser Arg Asp Ile Asn
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Val Tyr Gly Asp Val Val Ile Asn His Lys Gly Gly Ala Asp Ala Thr
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Ile Ser Gly Glu His Leu Ile Lys Ala Trp Thr His Phe His Phe Pro
130 135 140
Gly Arg Gly Ser Thr Tyr Ser Asp Phe Lys Trp His Trp Tyr His Phe
145 150 155 160
Asp Gly Thr Asp Trp Asp Glu Ser Arg Lys Leu Asn Arg Ile Tyr Lys
165 170 175
Phe Gln Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Ser Asn Glu Asn Gly Asn
180 185 190
Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Ile Asp Tyr Asp His Pro Asp Val
195 200 205
Ala Ala Glu Ile Lys Arg Trp Gly Thr Trp Tyr Ala Asn Glu Leu Gln
210 215 220
Leu Asp Gly Phe Arg Leu Asp Ala Val Lys His Ile Lys Phe Ser Phe
225 230 235 240
Leu Arg Asp Trp Val Asn His Val Arg Glu Lys Thr Gly Lys Glu Met
245 250 255
Phe Thr Val Ala Glu Tyr Trp Gln Asn Asp Leu Gly Ala Leu Glu Asn
260 265 270
Tyr Leu Asn Lys Thr Asn Phe Asn His Ser Val Phe Asp Val Pro Leu
275 280 285
His Tyr Gln Phe His Ala Ala Ser Thr Gln Gly Gly Gly Tyr Asp Met
290 295 300
Arg Lys Leu Leu Asn Gly Thr Val Val Ser Lys His Pro Leu Lys Ser
305 310 315 320
Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Thr Gln Pro Gly Gln Ser Leu Glu
325 330 335
Ser Thr Val Gln Thr Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala Phe Ile Leu
340 345 350
Thr Arg Glu Ser Gly Tyr Pro Gln Val Phe Tyr Gly Asp Met Tyr Gly
355 360 365
Thr Lys Gly Asp Ser Gln Arg Glu Ile Pro Ala Leu Lys His Lys Ile
370 375 380
Glu Pro Ile Leu Lys Ala Arg Lys Gln Tyr Ala Tyr Gly Ala Gln His
385 390 395 400
Asp Tyr Phe Asp His His Asp Ile Val Gly Trp Thr Arg Glu Gly Asp
405 410 415
Ser Ser Val Ala Asn Ser Gly Leu Ala Ala Leu Ile Thr Asp Gly Pro
420 425 430
Gly Gly Ala Lys Arg Met Tyr Val Gly Arg Gln Asn Ala Gly Glu Thr
435 440 445
Trp His Asp Ile Thr Gly Asn Arg Ser Glu Pro Val Val Ile Asn Ser
450 455 460
Glu Gly Trp Gly Glu Phe His Val Asn Gly Gly Ser Val Ser Ile Tyr
465 470 475 480
Val Gln Arg
<210> 10
<211> 613
<212> PRT
<213> 芽孢杆菌属(Bacillus)
<400> 10
Met Lys Gln Gln Lys Arg Leu Tyr Ala Arg Leu Leu Thr Leu Leu Phe
1 5 10 15
Ala Leu Ile Phe Leu Leu Pro His Ser Ala Ala Ala Ala Ala Asn Thr
20 25 30
Ala Pro Ile Asn Glu Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Asp Leu Pro
35 40 45
Asn Asp Gly Thr Leu Trp Thr Lys Val Lys Asn Glu Ala Ala Asn Leu
50 55 60
Ser Ser Leu Gly Ile Thr Ala Leu Trp Leu Pro Pro Ala Tyr Lys Gly
65 70 75 80
Thr Ser Gln Ser Asp Val Gly Tyr Gly Val Tyr Asp Leu Tyr Asp Leu
85 90 95
Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Ile Arg Thr Lys Tyr Gly Thr Lys
100 105 110
Thr Gln Tyr Ile Gln Ala Ile Gln Ala Ala Lys Ala Ala Gly Met Gln
115 120 125
Val Tyr Ala Asp Val Val Phe Asn His Lys Ala Gly Ala Asp Gly Thr
130 135 140
Glu Phe Val Asp Ala Val Glu Val Asp Pro Ser Asn Arg Asn Gln Glu
145 150 155 160
Thr Ser Gly Thr Tyr Gln Ile Gln Ala Trp Thr Lys Phe Asp Phe Pro
165 170 175
Gly Arg Gly Asn Thr Tyr Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr His Phe
180 185 190
Asp Gly Thr Asp Trp Asp Glu Ser Arg Lys Leu Asn Arg Ile Tyr Lys
195 200 205
Phe Arg Ser Thr Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp Thr Glu Asn
210 215 220
Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Phe Ala Asp Leu Asp Met Asp His Pro
225 230 235 240
Glu Val Val Thr Glu Leu Lys Asn Trp Gly Thr Trp Tyr Val Asn Thr
245 250 255
Thr Asn Ile Asp Gly Phe Arg Leu Asp Ala Val Lys His Ile Lys Tyr
260 265 270
Ser Phe Phe Pro Asp Trp Leu Thr Tyr Val Arg Asn Gln Thr Gly Lys
275 280 285
Asn Leu Phe Ala Val Gly Glu Phe Trp Ser Tyr Asp Val Asn Lys Leu
290 295 300
His Asn Tyr Ile Thr Lys Thr Asn Gly Ser Met Ser Leu Phe Asp Ala
305 310 315 320
Pro Leu His Asn Asn Phe Tyr Thr Ala Ser Lys Ser Ser Gly Tyr Phe
325 330 335
Asp Met Arg Tyr Leu Leu Asn Asn Thr Leu Met Lys Asp Gln Pro Ser
340 345 350
Leu Ala Val Thr Leu Val Asp Asn His Asp Thr Gln Pro Gly Gln Ser
355 360 365
Leu Gln Ser Trp Val Glu Pro Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala Phe
370 375 380
Ile Leu Thr Arg Gln Glu Gly Tyr Pro Cys Val Phe Tyr Gly Asp Tyr
385 390 395 400
Tyr Gly Ile Pro Lys Tyr Asn Ile Pro Gly Leu Lys Ser Lys Ile Asp
405 410 415
Pro Leu Leu Ile Ala Arg Arg Asp Tyr Ala Tyr Gly Thr Gln Arg Asp
420 425 430
Tyr Ile Asp His Gln Asp Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu Gly Ile Asp
435 440 445
Thr Lys Pro Asn Ser Gly Leu Ala Ala Leu Ile Thr Asp Gly Pro Gly
450 455 460
Gly Ser Lys Trp Met Tyr Val Gly Lys Lys His Ala Gly Lys Val Phe
465 470 475 480
Tyr Asp Leu Thr Gly Asn Arg Ser Asp Thr Val Thr Ile Asn Ala Asp
485 490 495
Gly Trp Gly Glu Phe Lys Val Asn Gly Gly Ser Val Ser Ile Trp Val
500 505 510
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515 520 525
Ser Gly Gln Asn Val Tyr Val Val Ala Asn Ile Pro Glu Leu Gly Asn
530 535 540
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545 550 555 560
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565 570 575
Phe Ile Lys Lys Asp Gln Ala Gly Asn Val Ile Trp Glu Ser Thr Ser
580 585 590
Asn Arg Thr Tyr Thr Val Pro Phe Ser Ser Thr Gly Ser Tyr Thr Ala
595 600 605
Ser Trp Asn Val Pro
610
<210> 11
<211> 582
<212> PRT
<213> 芽孢杆菌属(Bacillus)
<400> 11
Asn Thr Ala Pro Ile Asn Glu Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Asp
1 5 10 15
Leu Pro Asn Asp Gly Thr Leu Trp Thr Lys Val Lys Asn Glu Ala Ala
20 25 30
Asn Leu Ser Ser Leu Gly Ile Thr Ala Leu Trp Leu Pro Pro Ala Tyr
35 40 45
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50 55 60
Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Ile Arg Thr Lys Tyr Gly
65 70 75 80
Thr Lys Thr Gln Tyr Ile Gln Ala Ile Gln Ala Ala Lys Ala Ala Gly
85 90 95
Met Gln Val Tyr Ala Asp Val Val Phe Asn His Lys Ala Gly Ala Asp
100 105 110
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115 120 125
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145 150 155 160
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165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
Asn Thr Thr Asn Ile Asp Gly Phe Arg Leu Asp Ala Val Lys His Ile
225 230 235 240
Lys Tyr Ser Phe Phe Pro Asp Trp Leu Thr Tyr Val Arg Asn Gln Thr
245 250 255
Gly Lys Asn Leu Phe Ala Val Gly Glu Phe Trp Ser Tyr Asp Val Asn
260 265 270
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275 280 285
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290 295 300
Phe Asp Met Arg Tyr Leu Leu Asn Asn Thr Leu Met Lys Asp Gln Pro
305 310 315 320
Ser Leu Ala Val Thr Leu Val Asp Asn His Asp Thr Gln Pro Gly Gln
325 330 335
Ser Leu Gln Ser Trp Val Glu Pro Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala
340 345 350
Phe Ile Leu Thr Arg Gln Glu Gly Tyr Pro Cys Val Phe Tyr Gly Asp
355 360 365
Tyr Tyr Gly Ile Pro Lys Tyr Asn Ile Pro Gly Leu Lys Ser Lys Ile
370 375 380
Asp Pro Leu Leu Ile Ala Arg Arg Asp Tyr Ala Tyr Gly Thr Gln Arg
385 390 395 400
Asp Tyr Ile Asp His Gln Asp Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu Gly Ile
405 410 415
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420 425 430
Gly Gly Ser Lys Trp Met Tyr Val Gly Lys Lys His Ala Gly Lys Val
435 440 445
Phe Tyr Asp Leu Thr Gly Asn Arg Ser Asp Thr Val Thr Ile Asn Ala
450 455 460
Asp Gly Trp Gly Glu Phe Lys Val Asn Gly Gly Ser Val Ser Ile Trp
465 470 475 480
Val Ala Lys Thr Ser Asn Val Thr Phe Thr Val Asn Asn Ala Thr Thr
485 490 495
Thr Ser Gly Gln Asn Val Tyr Val Val Ala Asn Ile Pro Glu Leu Gly
500 505 510
Asn Trp Asn Thr Ala Asn Ala Ile Lys Met Asn Pro Ser Ser Tyr Pro
515 520 525
Thr Trp Lys Ala Thr Ile Ala Leu Pro Gln Gly Lys Ala Ile Glu Phe
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Lys Phe Ile Lys Lys Asp Gln Ala Gly Asn Val Ile Trp Glu Ser Thr
545 550 555 560
Ser Asn Arg Thr Tyr Thr Val Pro Phe Ser Ser Thr Gly Ser Tyr Thr
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Ala Ser Trp Asn Val Pro
580
<210> 12
<211> 484
<212> PRT
<213> 芽孢杆菌属(Bacillus)
<400> 12
Asn Thr Ala Pro Ile Asn Glu Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Asp
1 5 10 15
Leu Pro Asn Asp Gly Thr Leu Trp Thr Lys Val Lys Asn Glu Ala Ala
20 25 30
Asn Leu Ser Ser Leu Gly Ile Thr Ala Leu Trp Leu Pro Pro Ala Tyr
35 40 45
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65 70 75 80
Thr Lys Thr Gln Tyr Ile Gln Ala Ile Gln Ala Ala Lys Ala Ala Gly
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180 185 190
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245 250 255
Gly Lys Asn Leu Phe Ala Val Gly Glu Phe Trp Ser Tyr Asp Val Asn
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290 295 300
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305 310 315 320
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325 330 335
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340 345 350
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Ile Asp Pro Leu Leu Ile Ala Arg Arg Asp Tyr Ala Tyr Gly Thr Gln
385 390 395 400
Arg Asp Tyr Ile Asp His Gln Asp Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu Gly
405 410 415
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420 425 430
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435 440 445
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Trp Val Ala Lys
<210> 13
<211> 483
<212> PRT
<213> 盐敏芽孢杆菌(Bacillus halmapalus)
<400> 13
His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp His
1 5 10 15
Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Asp Asp Ala Ser
20 25 30
Asn Leu Arg Asn Arg Gly Ile Thr Ala Ile Trp Ile Pro Pro Ala Trp
35 40 45
Lys Gly Thr Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr
50 55 60
Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly
65 70 75 80
Thr Arg Ser Gln Leu Glu Ser Ala Ile His Ala Leu Lys Asn Asn Gly
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Ala Thr Glu Asn Val Leu Ala Val Glu Val Asn Pro Asn Asn Arg Asn
115 120 125
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130 135 140
Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr Tyr Ser Asp Phe Lys Trp Arg Trp Tyr
145 150 155 160
His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Gln Ser Arg Gln Phe Gln Asn Arg
165 170 175
Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp Ser Glu
180 185 190
Phe Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Tyr Asp Met Asp His
195 200 205
Pro Glu Val Val Asn Glu Leu Arg Arg Trp Gly Glu Trp Tyr Thr Asn
210 215 220
Thr Leu Asn Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His Ile Lys
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Phe Ser Phe Thr Arg Asp Trp Leu Thr His Val Arg Asn Ala Thr Gly
245 250 255
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260 265 270
Leu Glu Asn Tyr Leu Asn Lys Thr Asn Trp Asn His Ser Val Phe Asp
275 280 285
Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Asn Ala Ser Asn Ser Arg Gly Asn
290 295 300
Tyr Asp Met Ala Lys Leu Leu Asn Gly Thr Val Val Gln Lys His Pro
305 310 315 320
Met His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro Gly Glu
325 330 335
Ser Leu Glu Ser Phe Val Gln Glu Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala
340 345 350
Leu Ile Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr Gly Asp
355 360 365
Tyr Tyr Gly Ile Pro Thr His Ser Val Pro Ala Met Lys Ala Lys Ile
370 375 380
Asp Pro Ile Leu Glu Ala Arg Gln Asn Phe Ala Tyr Gly Thr Gln His
385 390 395 400
Asp Tyr Phe Asp His His Asn Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu Gly Asn
405 410 415
Thr Thr His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp Gly Pro
420 425 430
Gly Gly Glu Lys Trp Met Tyr Val Gly Gln Asn Lys Ala Gly Gln Val
435 440 445
Trp His Asp Ile Thr Gly Asn Lys Pro Gly Thr Val Thr Ile Asn Ala
450 455 460
Asp Gly Trp Ala Asn Phe Ser Val Asn Lys Gly Ser Val Ser Ile Trp
465 470 475 480
Val Lys Arg
<210> 14
<211> 482
<212> PRT
<213> 盐敏芽孢杆菌(Bacillus halmapalus)
<400> 14
His Asn Gly Thr Asn Ala Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp His Leu
1 5 10 15
Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Asp Asp Ala Ser Asn
20 25 30
Leu Arg Asn Arg Gly Ile Thr Ala Ile Trp Ile Pro Pro Ala Trp Lys
35 40 45
Gly Thr Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr Asp
50 55 60
Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly Thr
65 70 75 80
Arg Ser Gln Leu Glu Ser Ala Ile His Ala Leu Lys Asn Asn Gly Val
85 90 95
Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Ala Gly Ala Asp Ala
100 105 110
Thr Glu Asn Val Leu Ala Val Glu Val Asn Pro Asn Asn Arg Asn Gln
115 120 125
Glu Ile Ser Gly Asp Tyr Thr Ile Glu Ala Tyr Thr Lys Phe Asp Phe
130 135 140
Pro Gly Arg Gly Asn Thr Tyr Ser Asp Phe Lys Trp Arg Trp Tyr His
145 150 155 160
Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Gln Ser Arg Gln Phe Gln Asn Arg Ile
165 170 175
Tyr Lys Phe Arg Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp Ser Glu Phe
180 185 190
Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Tyr Asp Met Asp His Pro
195 200 205
Glu Val Val Asn Glu Leu Arg Arg Trp Gly Glu Trp Tyr Thr Asn Thr
210 215 220
Leu Asn Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His Ile Lys Phe
225 230 235 240
Ser Phe Thr Arg Asp Trp Leu Thr His Val Arg Asn Ala Thr Gly Lys
245 250 255
Gly Met Phe Ala Val Ala Glu Phe Trp Lys Asn Asp Leu Gly Ala Leu
260 265 270
Glu Asn Tyr Leu Ser Lys Thr Asn Trp Asn His Ser Val Phe Asp Val
275 280 285
Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Asn Ala Ser Asn Ser Arg Gly Asn Tyr
290 295 300
Asp Met Ala Lys Leu Leu Asn Gly Thr Val Val Gln Lys His Pro Met
305 310 315 320
His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro Gly Glu Ser
325 330 335
Leu Glu Ser Phe Val Gln Glu Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala Leu
340 345 350
Ile Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr Gly Asp Tyr
355 360 365
Tyr Gly Ile Pro Thr His Ser Val Pro Ala Met Lys Ala Lys Ile Asp
370 375 380
Pro Ile Leu Ala Ala Arg Gln Asn Phe Ala Tyr Gly Thr Gln His Asp
385 390 395 400
Tyr Phe Asp His His Asn Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu Gly Asn Thr
405 410 415
Thr His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp Gly Pro Gly
420 425 430
Gly Glu Lys Trp Met Tyr Val Gly Gln Asn Lys Ala Gly Gln Val Trp
435 440 445
His Asp Ile Thr Gly Asn Lys Pro Gly Thr Val Thr Ile Asn Ala Asp
450 455 460
Gly Trp Ala Asn Phe Ser Val Asn Lys Gly Ser Val Ser Ile Trp Val
465 470 475 480
Lys Arg

Claims (15)

1.一种亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体,其中所述变体在对应于以下位置的一个或多个位置处包含修饰:303、1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中在与所述亲本多肽,优选SEQ ID NO:2或3相比时,所述变体具有改善的性能,例如测量为改善因子(IF)>1.0的比活性的改善的洗涤性能。
2.根据权利要求1所述的变体,其中所述修饰在对应于以下位置的至少一个位置处:G303、H1、H2、N3、G7、R26、A31、R37、T40、A41、N54、V56、A60、L63、K72、G73、K93、N94、Q98、V103、V104、M105、N106、A109、G110、A111、G113、T114、F116、V117、D118、D123、N126、N128、T131、S132、T134、Y135、Q136、I137、Q138、W140、K142、D144、P146、T151、Y152、F155、W159、Y160、T165、W167、E169、K172、L173、N174、I176、Y177、K178、A185、W188、E189、E193、N194、N196、F202、A203、L205、T224、N225、Y242、S243、F244、V252、T256、K258、E259、M260、F261、F266、N276、N279、K280、W283、S286、S302、T315、H320、P321、M322、H323、W346、L354、E359、Q360、G361、Y362、V365、Y371、A383、E390、N394、F395、D405、I409、R414、H420、N422、T427、G455、K457、P458、N470、S472、V473、N474、G475和G476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
3.根据权利要求1或2所述的变体,其中所述修饰在对应于以下位置的至少一个位置处:G303R、H1*、H2*、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、R180*、R180Q、R180S、S181*、S181L、S181T、T182*、T182D、T182E、T182G、T182I、T182L、T182M、T182S、G183*、G183P、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
4.根据前述权利要求中任一项所述的变体,其中所述变体在选自由以下组成的组的两个或更多个位置处包含缺失:R180*+S181*;R180*+T182*;R180*+G183*;S181*+T182*;S181*+G183*;和T182*+G183*;使用SEQ ID NO:1进行编号。
5.根据前述权利要求中任一项所述的变体,其中该变体包含以下或由其组成:
(a)在该亲本α-淀粉酶中的两个、三个或四个位置的取代和/或缺失,所述位置对应于位置180、181、182和183,使用SEQ ID NO:1进行编号;以及
(b)在对应于以下位置的两个或更多个位置处的修饰:G303R、H1*、H2、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
6.根据前述权利要求中任一项所述的变体,其中该变体包含选自由以下组成的组的一个或多个修饰:
H1*+G7A+R180*+S181*、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+N279S、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+N279S+G303R、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+E390A +G476A、
H1*+G7A+R180*+S181*+D118T+W140Y+N194F+Y242F+E259G+K280Y+N279S+G303R+E390A+G476A,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
7.根据前述权利要求中任一项所述的变体,其中该变体包含选自由以下组成的组的一个或多个修饰或由其组成:
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+S181*+T182*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182S+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+T182L+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+S181L+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180S+T182*+G183*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+A60P+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105L+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+M105I+R180*+S181*+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182G+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+T182M+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185K+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185D+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185Q+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185N+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185R+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+A185E+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+S243Q+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244L+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+F244I+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+Y242F+E259G+F266Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N194F+L205F+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+N196F+L205Y+Y242F+E259G+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276F+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276Y+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N276W+N279S+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+R180*+S181*+E189P+Y242F+E259G+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+A185Q+E189P+N194F+L205Y+Y242F+E259G+F266Y+N279S+K280Y+G303R+E390A+G475K、
H1*+G7A+W140Y+R180*+S181*+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260W+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+Y242F+E259G+M260D+N279S+K280Y+S302Y+E390A+N470M+G475K、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+E189P+N194F+T224Y+Y242F+N279S+K280Y+G303R+E390A+G476A、
H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182D+A185Q+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
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H1*+G7A+D118T+W140Y+R180*+S181*+T182S+A185Q+E189P+N194F+Y242F+E259G+N279S+K280Y+S302T+E390A+G475K、
R180*+S181*、
T40N+F116L+D123N+N126D+N128Y+T131I+F155W+R180*+S181*+T182D+E189P+F202Y+K457N+P458S+G475K+G476E、
A60V+Q98L+G110K+R180*+S181*+A383D、
Q98L+G110K+S132D+Y135E+R180*+S181*+T315A、
G7H+Q98L+G110K+R180*+S181*、
G7H+W167P+R180*+S181*+G455R、
Q98L+V103A+G110K+R180*+S181*、
T114K+R180*+S181*、
E169V+R180*+S181*、
R180*+S181*+W188C、
W167D+R180*+S181*、
W167S+R180*+S181*、
W167E+R180*+S181*、
W167P+R180*+S181*、
R180*+S181*+E193I+H323N、
R180*+S181*+A203F、
W159L+R180*+S181*、
W159H+R180*+S181*、
K178A+R180*+S181*、
A111L+R180*+S181*、
G110K+R180*+S181*、和
A111G+R180*+S181*,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性。
8.根据前述权利要求中任一项所述的变体,其中所述亲本α-淀粉酶选自SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14中所示的氨基酸序列,或任何α-淀粉酶与SEQ ID NO:1、2或3中所示的任一氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%,但小于100%的序列同一性。
9.根据前述权利要求中任一项所述的变体,其中所述亲本α-淀粉酶包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列或由其组成。
10.一种获得亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体的方法,该方法通过在对应于以下位置的一个或多个位置处引入修饰:1、2、3、7、26、31、37、40、41、54、56、60、63、72、73、93、94、98、103、104、105、106、109、110、111、113、114、116、117、118、123、126、128、131、132、134、135、136、137、138、140、142、144、146、151、152、155、159、160、165、167、169、172、173、174、176、177、178、180、181、182、183、185、188、189、193、194、196、202、203、205、224、225、242、243、244、252、256、258、259、260、261、266、276、279、280、283、286、302、303、315、320、321、322、323、346、354、359、360、361、362、365、371、383、390、394、395、405、409、414、420、422、427、455、457、458、470、472、473、474、475和476,使用SEQ ID NO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性。
11.一种改善亲本α-淀粉酶的α-淀粉酶变体的洗涤性能的方法,所述变体具有SEQ IDNO:1的氨基酸序列或与其具有至少60%的序列同一性,所述方法包括以下步骤:(a)在该亲本α-淀粉酶中的两个、三个或四个位置引入取代和/或缺失,所述位置对应于位置180、181、182和183,使用SEQ ID NO:1进行编号;以及(b)在对应于以下位置的一个或多个位置处引入修饰:H1*、H2、N3D、N3G、N3S、G7A、G7H、G7S、R26Y、A31S、R37A、R37N、R37V、T40G、T40N、A41D、N54S、V56T、A60V、A60P、L63F、K72R、G73L、K93R、N94D、Q98L、V103A、V103I、V103L、V104M、M105I、M105L、N106D、A109G、G110K、A111G、A111L、G113Q、G113S、G113A、T114K、F116L、F116N、F116Q、F116W、V117G、D118Q、D118T、D123N、N126D、N128Y、T131I、T131V、S132D、S132L、T134D、Y135E、Q136T、Q136K、I137F、Q138V、W140S、W140M、W140Y、K142E、K142G、K142P、D144N、P146S、P146H、T151A、Y152L、F155W、W159H、W159L、Y160P、T165V、W167A、W167D、W167E、W167F、W167P、W167S、E169I、E169Q、E169V、K172G、K172Q、L173F、N174K、N174S、I176V、Y177D、K178A、A185D、A185E、A185K、A185N、A185Q、A185R、W188C、E189P、E193I、N194F、F202Y、F202Y、A203F、L205F、L205N、L205Q、L205R、L205V、L205Y、T224F、T224Y、N225S、Y242F、Y242L、S243Q、F244I、F244L、V252I、T256A、T256D、K258V、E259G、E259V、M260D、M260W、F261K、F261P、F261S、F266Y、N276F、N276W、N276Y、N279S、N280F、N280W、N280Y、W283N、S286K、S286L、S302T、S302Y、G303R、T315A、H320T、P321H、P321Y、M322G、M322Y、H323A、H323N、H323W、W346N、L354V、E359W、Q360M、Q360W、Q360Y、G361M、Y362V、V365I、Y371S、Y371N、A383D、E390A、E390D、N394W、N394D、F395Y、D405G、I409L、R414M、H420P、H420A、H420Q、H420Y、N422V、T427L、G455R、K457N、K457R、R458S、N470A、N470M、S472R、V473C、N474F、N474L、G475E、G475K、G476H、G476E和G476A,使用SEQ IDNO:1进行编号,并且其中所述变体与SEQ ID No:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14具有60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%,但小于100%的序列同一性,并且其中所述变体具有α-淀粉酶活性以及相对于所述亲本多肽改善的洗涤性能。
12.根据权利要求1-9中任一项所述的α-淀粉酶变体在清洁过程如衣物洗涤或包括餐具洗涤和工业清洁的硬表面清洁中的用途。
13.一种组合物,其包含根据权利要求1-9中任一项所述的变体。
14.根据权利要求13所述的组合物,其中该组合物选自包含以下的组:液体洗涤剂、固体洗涤剂、凝胶洗涤剂、粉末洗涤剂、片剂、荚、小袋和颗粒洗涤剂。
15.根据权利要求13-14中任一项所述的组合物,该组合物是液体衣物洗涤或液体餐具洗涤组合物,例如自动餐具洗涤(ADW)液体洗涤剂组合物,或固体衣物洗涤,例如皂条,或粉末状餐具洗涤组合物,例如ADW单位剂量洗涤剂组合物。
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