CN114573456B - 一种贝壳杉烷型二萜化合物及其制备方法和应用 - Google Patents
一种贝壳杉烷型二萜化合物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114573456B CN114573456B CN202210235520.5A CN202210235520A CN114573456B CN 114573456 B CN114573456 B CN 114573456B CN 202210235520 A CN202210235520 A CN 202210235520A CN 114573456 B CN114573456 B CN 114573456B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ethyl acetate
- excisanin
- methanol
- ratio
- preparation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 42
- IVZWRQBQDVHDNG-UHFFFAOYSA-N (-)-Kauran; alpha-Dihydrokauren Natural products C1CC2C3(C)CCCC(C)(C)C3CCC22CC(C)C1C2 IVZWRQBQDVHDNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 39
- 229930001567 kaurane Natural products 0.000 title claims abstract description 39
- -1 Kaurane diterpenoid compound Chemical class 0.000 title claims abstract description 31
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 38
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 26
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 17
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 144
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 81
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 80
- SOISFJAFHWJMRU-AWQMTSQZSA-N chembl472435 Chemical compound C1C[C@H]([C@H]2O)C(=C)C(=O)[C@@]32[C@H](O)C[C@@H]2[C@](COC(=O)C)(C)CC[C@H](O)[C@@]2(C)[C@@H]31 SOISFJAFHWJMRU-AWQMTSQZSA-N 0.000 claims description 41
- SOISFJAFHWJMRU-UHFFFAOYSA-N excisanin D Natural products C1CC(C2O)C(=C)C(=O)C32C(O)CC2C(COC(=O)C)(C)CCC(O)C2(C)C31 SOISFJAFHWJMRU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 41
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 39
- 239000002024 ethyl acetate extract Substances 0.000 claims description 35
- NQABJFRJEKCYEC-UHFFFAOYSA-N excisanin K Natural products C1CC(C2O)C(=C)C(=O)C32C(O)CC2C(C)(CO)CCC(O)C2(C)C31 NQABJFRJEKCYEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 35
- IOLAXGYDTVZNNV-UGKKBRBKSA-N excisanin k Chemical compound C1C[C@H]([C@H]2O)C(=C)C(=O)[C@@]32CC[C@@H]2[C@@](C)(CO)CC[C@H](O)[C@@]2(C)[C@@H]31 IOLAXGYDTVZNNV-UGKKBRBKSA-N 0.000 claims description 35
- 239000000469 ethanolic extract Substances 0.000 claims description 29
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 claims description 28
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 27
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- SRCZQMGIVIYBBJ-UHFFFAOYSA-N ethoxyethane;ethyl acetate Chemical compound CCOCC.CCOC(C)=O SRCZQMGIVIYBBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 239000013078 crystal Substances 0.000 claims description 20
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 20
- 241001183967 Isodon Species 0.000 claims description 19
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 19
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000012043 crude product Substances 0.000 claims description 16
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 16
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 16
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 16
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 14
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 9
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 8
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 8
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims description 8
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 claims description 8
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 7
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 claims description 7
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 claims description 7
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 claims description 7
- WBKFWQBXFREOFH-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;ethyl acetate Chemical compound ClCCl.CCOC(C)=O WBKFWQBXFREOFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 7
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 7
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 7
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 claims description 7
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 7
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 claims description 7
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 7
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 claims description 7
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 5
- 241001365031 Isodon japonicus Species 0.000 claims description 4
- 238000007605 air drying Methods 0.000 claims description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 4
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 3
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 3
- 239000006187 pill Substances 0.000 claims description 3
- LGZKGOGODCLQHG-CYBMUJFWSA-N 5-[(2r)-2-hydroxy-2-(3,4,5-trimethoxyphenyl)ethyl]-2-methoxyphenol Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC=C1C[C@@H](O)C1=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C1 LGZKGOGODCLQHG-CYBMUJFWSA-N 0.000 claims 2
- LGZKGOGODCLQHG-UHFFFAOYSA-N combretastatin Natural products C1=C(O)C(OC)=CC=C1CC(O)C1=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C1 LGZKGOGODCLQHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims 2
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 claims 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 19
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 11
- 239000000284 extract Substances 0.000 abstract description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 241001646826 Isodon rubescens Species 0.000 abstract description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 abstract description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 abstract description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 3
- 150000002611 lead compounds Chemical class 0.000 abstract description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 25
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 13
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 10
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 6
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 150000004141 diterpene derivatives Chemical class 0.000 description 6
- 238000002451 electron ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 6
- IVZWRQBQDVHDNG-KUIXFMFUSA-N ent-kaurane Chemical compound C([C@@]1(C)[C@@H]2CC3)CCC(C)(C)[C@H]1CC[C@]21C[C@H](C)[C@H]3C1 IVZWRQBQDVHDNG-KUIXFMFUSA-N 0.000 description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 4
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 4
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 4
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 150000004545 kaurane derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 230000004565 tumor cell growth Effects 0.000 description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 230000005918 in vitro anti-tumor Effects 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 2
- 238000005084 2D-nuclear magnetic resonance Methods 0.000 description 1
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000205571 Caulophyllum Species 0.000 description 1
- 206010051625 Conjunctival hyperaemia Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 229930182717 Excisanin Natural products 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000554432 Isodon amethystoides Species 0.000 description 1
- 206010068319 Oropharyngeal pain Diseases 0.000 description 1
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 1
- 201000007100 Pharyngitis Diseases 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000009982 effect on human Effects 0.000 description 1
- NAXAHKFDLHFVHY-YNDYFHGHSA-N excisanin c Chemical compound C1C[C@H]([C@H]2O)C(=C)C(=O)[C@@]32[C@H](O)C[C@@H]2[C@@](C)(CO)CCC[C@@]2(C)[C@@H]31 NAXAHKFDLHFVHY-YNDYFHGHSA-N 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000009422 growth inhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229940030980 inova Drugs 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
- C07C69/02—Esters of acyclic saturated monocarboxylic acids having the carboxyl group bound to an acyclic carbon atom or to hydrogen
- C07C69/12—Acetic acid esters
- C07C69/21—Acetic acid esters of hydroxy compounds with more than three hydroxy groups
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C49/00—Ketones; Ketenes; Dimeric ketenes; Ketonic chelates
- C07C49/587—Unsaturated compounds containing a keto groups being part of a ring
- C07C49/703—Unsaturated compounds containing a keto groups being part of a ring containing hydroxy groups
- C07C49/743—Unsaturated compounds containing a keto groups being part of a ring containing hydroxy groups having unsaturation outside the rings, e.g. humulones, lupulones
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C2603/00—Systems containing at least three condensed rings
- C07C2603/56—Ring systems containing bridged rings
- C07C2603/86—Ring systems containing bridged rings containing four rings
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
本发明对贵州民间药草宽叶香茶菜化学成分及其制备方法和应用进行研究,发明团队通过活性筛选发现具有开发价值的先导化合物,目前从宽叶香茶菜中分离提取得到贝壳杉烷型二萜化合物Excisanin D、Excisanin K,并通过实验证明此化合物具有明显的抑制肿瘤细胞活性,可以在制备治疗癌症或肿瘤药物方面应用。
Description
技术领域
本发明涉及药学领域,具体涉及一种贝壳杉烷型二萜化合物及其制备方法和应用,尤其涉及从宽叶香茶菜中分离得到的贝壳杉烷型二萜化合物Excisanin D、ExcisaninK及其制备方法和应用。
背景技术
宽叶香茶菜Isodon latifolius(C.Y.Wu&H.W.Li)H.Hara系唇形科香茶菜属多年生草本,仡佬族药名为蒙秋咯。该植物仅仅分布于海拔1450-2000米的四川东部、贵州北部地区草丛等阴湿处。宽叶香茶菜作为贵州省道真县区域仡佬族特有的民间药用经验方,当地仡佬族民间医生用于治疗头痛目赤、风热表证、咽喉肿痛等症,疗效确切,使用广泛。[中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志[M].第66卷.科学出版社,2004:540.]。
由于现有文献中未见宽叶香茶菜化学成分贝壳杉烷型二萜化合物Exci sanin D、Excisanin K及其制备方法的报道,也未见该化合物在制备治疗癌症或肿瘤药物方面应用的研究报道,因此为对贵州民间药草宽叶香茶菜化学成分及其制备方法和应用进行研究,本发明团队通过活性筛选发现具有开发价值的先导化合物,目前从宽叶香茶菜中分离提取得到贝壳杉烷型二萜化合物Excisanin D、Excisanin K,并通过实验证明此化合物具有明显的抑制肿瘤细胞活性,可以在制备治疗癌症或肿瘤药物方面应用。
发明内容
本发明的目的是提供一种从宽叶香茶菜中分离得到的贝壳杉烷型二萜化合物Excisanin D、Excisanin K。
本发明的另一目的是提供一种从宽叶香茶菜中得到贝壳杉烷型二萜化合物Excisanin D、Excisanin K的制备方法。
本发明的另一目的是贝壳杉烷型二萜化合物Excisanin D、Excisanin K在制备治疗癌症或肿瘤药物制剂方面的应用。
本发明所述的贝壳杉烷型二萜化合物是从宽叶香茶菜中分离得到的贝壳杉烷型二萜化合物Excisanin D、Excisanin K。
本发明所述的贝壳杉烷型二萜化合物Excisanin D,分子式为:C22H32O6,EI-MS m/z:392[M]+,白色片状晶体;溶于甲醇,微溶于二氯甲烷,难溶于石油醚、乙酸乙酯;TCL检测,10%H2SO4-EtOH溶液显色呈橙黄色,10%H3[P(Mo3O10)]4-EtOH溶液显色呈现深蓝色,化学结构式如下:
1H-NMR(600MHz,CDCl3)、13C-NMR(150MHz,CDCl3)数据如下:
Data were recorded in CDCl3 on a AVANCE NEO-600MHz spectrometer.
18位为羟基取代的贝壳杉烷型二萜化合物Excisanin K,白色片状晶体;溶于甲醇,微溶于二氯甲烷,难溶于石油醚、乙酸乙酯;TCL检测,10%H2SO4-EtOH溶液显色呈现棕黄色,10%H3[P(Mo3O10)]4-EtOH溶液显色呈深蓝色。EI-MS m/z:373[M+Na]+,化合物分子式为:C20H30O5,结构式:
1H-NMR(600MHz,CD3OD)、13C-NMR(150MHz,CD3OD)数据如下:
Data were recorded in CD3OD on a AVANCE NEO-600MHz spectrometer.
本发明所述贝壳杉烷型二萜化合物Excisanin D和Excisanin K的制备方法如下:
1)65%~95%乙醇加热回流提取:宽叶香茶菜叶经自然风干后粉碎,取粉碎的宽叶香茶菜叶6~7Kg,加料液比为1:10~1:30mL·g-1的65%~95%乙醇在温度为75~85℃条件下加热回流提取2~4次,每次2~4小时,得稀乙醇提取液;
2)浓缩稀乙醇提取液:将稀乙醇提取液减压浓缩得乙醇浸膏,在减压浓缩过程中回收乙醇;
3)把乙醇浸膏溶于蒸馏水中呈混悬液,再用1~3倍量乙酸乙酯萃取2~5次,得稀乙酸乙酯萃取液;
4)浓缩稀乙酸乙酯萃取液:将乙酸乙酯萃取液减压浓缩得乙酸乙酯浸膏,在减压浓缩过程中回收乙酸乙酯;
5)柱层析分离:将乙酸乙酯浸膏与硅胶拌样,转入层析柱,硅胶粒度200~300目,用比例为V/V 10/0、9/1、4/1、7/3、6/4、0/10的石油醚-乙酸乙酯洗脱液洗脱,得到A、B、C、D、E、F、G七个部分;E部分用适量甲醇溶解,用1:1.5倍聚酰胺拌样,用MCI进行脱色处理,用50%、60%、70%、80%、90%、100%甲醇-水混合溶剂系统洗脱,通过HPLC检测合并,合并极性相似流分,最终按照极性由大到小分为E-1、E-2、E-3、E-4四个部分;E-1部分用比例为10:1、5:1、2:1、1:1的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂系统及甲醇进行洗脱,通过薄层层析法检测,合并相似流分,最终分为E-1-1、E-1-2、E-1-3三部分,其中E-1-1部分借助硅胶柱层析,以比例为20:1、10:1、5:1、2:1、1:1、1:2的二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶剂系统及甲醇进行洗脱,再经比例为1:1石油醚-乙酸乙酯系统反复分离纯化,得到白色针晶化合物Excisanin D;Excisanin D粗品用比例为90/10的甲醇/水常温条件下静置挥发,70~75小时得本发明的晶体Excisanin D;
E-1-3部分用比例为3:1二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶剂系统及甲醇反复进行等度洗脱,最后得到白色针状晶体化合物Excisanin K;Excisanin K粗品用比例为85/15的甲醇/水常温条件下静置挥发,92~98小时得本发明的Excisanin K。
优选后的所述贝壳杉烷型二萜化合物Excisanin D和Excisanin K的制备方法如下:
1)95%乙醇加热回流提取:宽叶香茶菜叶经自然风干后粉碎,取粉碎的宽叶香茶菜叶6.5Kg,加料液比为1:20mL·g-1的95%乙醇在温度为85℃条件下加热回流提取2次,每次2小时,得稀乙醇提取液;
2)浓缩稀乙醇提取液:将稀乙醇提取液减压浓缩得乙醇浸膏1100g,在减压浓缩过程中回收乙醇;
3)萃取:把乙醇浸膏溶于蒸馏水中,再用2倍量乙酸乙酯萃取3~4次,得稀乙酸乙酯萃取液;
4)浓缩稀乙酸乙酯萃取液:将乙酸乙酯萃取液减压浓缩得乙酸乙酯浸膏(53g),在减压浓缩过程中回收乙酸乙酯;
5)柱层析分离:将乙酸乙酯浸膏与硅胶拌样,转入层析柱,硅胶粒度200~300目,用比例为V/V 10/0、9/1、4/1、7/3、6/4、0/10的石油醚-乙酸乙酯洗脱液洗脱,得到A、B、C、D、E、F、G七个部分;E部分用适量甲醇溶解,用1:1.5倍聚酰胺拌样,用MCI进行脱色处理,用50%、60%、70%、80%、90%、100%甲醇-水混合溶剂系统洗脱,通过HPLC检测合并,合并极性相似流分,最终按照极性由大到小分为E-1、E-2、E-3、E-4四个部分;E-1部分用比例为10:1、5:1、2:1、1:1的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂系统及甲醇进行洗脱,通过薄层层析法检测,合并相似流分,最终分为E-1-1、E-1-2、E-1-3三部分,其中E-1-1部分借助硅胶柱层析,以比例为20:1、10:1、5:1、2:1、1:1、1:2的二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶剂系统及甲醇进行洗脱,再经比例为1:1石油醚-乙酸乙酯系统反复分离纯化,得到白色针晶化合物Excisanin D(34.5mg);Excisanin D粗品用比例为90/10的甲醇/水常温条件下静置挥发,72小时得本发明的晶体Excisanin D;
E-1-3部分用比例为3:1二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶剂系统及甲醇反复进行等度洗脱,最后得到白色针状晶体化合物Excisanin K(9.6mg);Excisanin K粗品用比例为85/15的甲醇/水常温条件下静置挥发,96小时得本发明的Excisanin K。
本发明所述贝壳杉烷型二萜化合物Excisanin D、Excisanin K在制备治疗癌症或肿瘤药物方面的应用。
本发明所述贝壳杉烷型二萜化合物Excisanin D、Excisanin K在制备治疗癌症或肿瘤药物制剂方面的应用。
本发明所述制剂为加入药学上可接受的辅料按常规工艺制成药学上可接受的制剂。
本发明所述药学上可接受的制剂为固体制剂或液体制剂。
本发明所述固体制剂为颗粒剂、丸剂、胶囊剂、片剂、散剂、冻干粉针剂。
本发明所述液体制剂为口服液、注射制剂。
本发明所述的辅料没有限定,药学上接受即可。
有益效果:
现有技术的问题:现有文献中未见宽叶香茶菜化学成分贝壳杉烷型二萜化合物Excisanin D、Excisanin K及其制备方法的报道,也未见该化合物在制备治疗癌症或肿瘤药物方面应用的研究报道。
本发明的有益效果:本发明对贵州民间药草宽叶香茶菜化学成分及其制备方法和应用进行研究,发明团队通过活性筛选发现具有开发价值的先导化合物,目前从宽叶香茶菜中分离提取得到贝壳杉烷型二萜化合物Excisanin D、Excisanin K,并通过体外抗肿瘤活性测试Excisanin D、Excisanin K化合物具有明显的抑制肿瘤细胞活性,可以在制备治疗癌症或肿瘤药物方面应用,尤其是在制备治疗人结肠癌细胞HCT-116、人乳腺癌细胞231、肝癌细胞HepG2药物或制剂方面的应用。
附图说明
图1 Excisanin D的1H-NMR谱。
图2 Excisanin D的13C-NMR谱。
图3 Excisanin K的1H-NMR谱。
图4 Excisanin K的13C-NMR谱。
具体实施方式
下面通过具体实施例,对本发明的技术方案作进一步地具体说明。
实施例1
贝壳杉烷型二萜化合物Excisanin D:
分子式为:C22H32O6,EI-MS m/z:392[M]+,白色片状晶体;溶于甲醇,微溶于二氯甲烷,难溶于石油醚、乙酸乙酯;TCL检测,10%H2SO4-EtOH溶液显色呈橙黄色,10%H3[P(Mo3O10)]4-EtOH溶液显色呈现深蓝色,化学结构式如下:
1H-NMR(600MHz,CDCl3)、13C-NMR(150MHz,CDCl3)数据如下:
Data were recorded in CDCl3 on a AVANCE NEO-600MHz spectrometer.
18位为羟基取代的贝壳杉烷型二萜化合物Excisanin K:
白色片状晶体;溶于甲醇,微溶于二氯甲烷,难溶于石油醚、乙酸乙酯;TCL检测,10%H2SO4-EtOH溶液显色呈现棕黄色,10%H3[P(Mo3O10)]4-EtOH溶液显色呈深蓝色。EI-MSm/z:373[M+Na]+,化合物分子式为:C20H30O5,结构式:
1H-NMR(600MHz,CD3OD)、13C-NMR(150MHz,CD3OD)数据如下:
Data were recorded in CD3OD on a AVANCE NEO-600MHz spectrometer.
实施例2
贝壳杉烷型二萜化合物Excisanin D和Excisanin K的制备方法如下:
1)95%乙醇加热回流提取:宽叶香茶菜叶经自然风干后粉碎,取粉碎的宽叶香茶菜叶6.5Kg,加料液比为1:20mL·g-1的95%乙醇在温度为85℃条件下加热回流提取2次,每次2小时,得稀乙醇提取液;
2)浓缩稀乙醇提取液:将稀乙醇提取液减压浓缩得乙醇浸膏1100g,在减压浓缩过程中回收乙醇;
3)萃取:把乙醇浸膏溶于蒸馏水中,再用2倍量乙酸乙酯萃取3~4次,得稀乙酸乙酯萃取液;
4)浓缩稀乙酸乙酯萃取液:将乙酸乙酯萃取液减压浓缩得乙酸乙酯浸膏(53g),在减压浓缩过程中回收乙酸乙酯;
5)柱层析分离:将乙酸乙酯浸膏与硅胶拌样,转入层析柱,硅胶粒度200~300目,用比例为V/V 10/0、9/1、4/1、7/3、6/4、0/10的石油醚-乙酸乙酯洗脱液洗脱,得到A、B、C、D、E、F、G七个部分;E部分用适量甲醇溶解,用1:1.5倍聚酰胺拌样,用MCI进行脱色处理,用50%、60%、70%、80%、90%、100%甲醇-水混合溶剂系统洗脱,通过HPLC检测合并,合并极性相似流分,最终按照极性由大到小分为E-1、E-2、E-3、E-4四个部分;E-1部分用比例为10:1、5:1、2:1、1:1的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂系统及甲醇进行洗脱,通过薄层层析法检测,合并相似流分,最终分为E-1-1、E-1-2、E-1-3三部分,其中E-1-1部分借助硅胶柱层析,以比例为20:1、10:1、5:1、2:1、1:1、1:2的二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶剂系统及甲醇进行洗脱,再经比例为1:1石油醚-乙酸乙酯系统反复分离纯化,得到白色针晶化合物Excisanin D(34.5mg);Excisanin D粗品用比例为90/10的甲醇/水常温条件下静置缓慢挥发,72小时得本发明的晶体Excisanin D;
E-1-3部分用比例为3:1二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶剂系统及甲醇反复进行等度洗脱,最后得到白色针状晶体化合物Excisanin K(9.6mg);Excisanin K粗品用比例为85/15的甲醇/水常温条件下静置缓慢挥发,96小时得本发明的Excisanin K。
应用:在制备治疗癌症或肿瘤药物方面的应用,尤其是在制备治疗人结肠癌细胞HCT-116、人乳腺癌细胞231、肝癌细胞HepG2药物或制剂方面的应用。
实施例3:
贝壳杉烷型二萜化合物Excisanin D和Excisanin K的制备方法如下:
1)65%乙醇加热回流提取:宽叶香茶菜叶经自然风干后粉碎,取粉碎的宽叶香茶菜叶6Kg,加料液比为1:10mL·g-1的65%乙醇在温度为75℃条件下加热回流提取2次,每次4小时,得稀乙醇提取液;
2)浓缩稀乙醇提取液:将稀乙醇提取液减压浓缩得乙醇浸膏,在减压浓缩过程中回收乙醇;
3)萃取:把乙醇浸膏溶于蒸馏水中,再用3倍量乙酸乙酯萃取2次,得稀乙酸乙酯萃取液;
4)浓缩稀乙酸乙酯萃取液:将乙酸乙酯萃取液减压浓缩得乙酸乙酯浸膏,在减压浓缩过程中回收乙酸乙酯;
5)柱层析分离:将乙酸乙酯浸膏与硅胶拌样,转入层析柱,硅胶粒度200~300目,用比例为V/V 10/0、9/1、4/1、7/3、6/4、0/10的石油醚-乙酸乙酯洗脱液洗脱,得到A、B、C、D、E、F、G七个部分;E部分用适量甲醇溶解,用1:1.5倍聚酰胺拌样,用MCI进行脱色处理,用50%、60%、70%、80%、90%、100%甲醇-水混合溶剂系统洗脱,通过HPLC检测合并,合并极性相似流分,最终按照极性由大到小分为E-1、E-2、E-3、E-4四个部分;E-1部分用比例为10:1、5:1、2:1、1:1的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂系统及甲醇进行洗脱,通过薄层层析法检测,合并相似流分,最终分为E-1-1、E-1-2、E-1-3三部分,其中E-1-1部分借助硅胶柱层析,以比例为20:1、10:1、5:1、2:1、1:1、1:2的二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶剂系统及甲醇进行洗脱,再经比例为1:1石油醚-乙酸乙酯系统反复分离纯化,得到白色针晶化合物Excisanin D;Excisanin D粗品用比例为90/10的甲醇/水常温条件下静置缓慢挥发,70~75小时得本发明的晶体Excisanin D;
E-1-3部分用比例为3:1二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶剂系统及甲醇反复进行等度洗脱,最后得到白色针状晶体化合物Excisanin K;Excisanin K粗品用比例为85/15的甲醇/水常温条件下静置缓慢挥发,92小时得本发明的Excisanin K。
应用:在制备治疗癌症或肿瘤药物方面的应用,尤其是在制备治疗人结肠癌细胞HCT-116、人乳腺癌细胞231、肝癌细胞HepG2药物或制剂方面的应用。
实施例4:
贝壳杉烷型二萜化合物Excisanin D和Excisanin K的制备方法如下:
1)95%乙醇加热回流提取:宽叶香茶菜叶经自然风干后粉碎,取粉碎的宽叶香茶菜叶7Kg,加料液比为1:30mL·g-1的95%乙醇在温度为85℃条件下加热回流提取4次,每次2小时,得稀乙醇提取液;
2)浓缩稀乙醇提取液:将稀乙醇提取液减压浓缩得乙醇浸膏,在减压浓缩过程中回收乙醇;
3)萃取:把乙醇浸膏溶于蒸馏水中,再用1倍量乙酸乙酯萃取5次,得稀乙酸乙酯萃取液;
4)浓缩稀乙酸乙酯萃取液:将乙酸乙酯萃取液减压浓缩得乙酸乙酯浸膏,在减压浓缩过程中回收乙酸乙酯;
5)柱层析分离:将乙酸乙酯浸膏与硅胶拌样,转入层析柱,硅胶粒度200~300目,用比例为V/V 10/0、9/1、4/1、7/3、6/4、0/10的石油醚-乙酸乙酯洗脱液洗脱,得到A、B、C、D、E、F、G七个部分;E部分用适量甲醇溶解,用1:1.5倍聚酰胺拌样,用MCI进行脱色处理,用50%、60%、70%、80%、90%、100%甲醇-水混合溶剂系统洗脱,通过HPLC检测合并,合并极性相似流分,最终按照极性由大到小分为E-1、E-2、E-3、E-4四个部分;E-1部分用比例为10:1、5:1、2:1、1:1的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂系统及甲醇进行洗脱,通过薄层层析法检测,合并相似流分,最终分为E-1-1、E-1-2、E-1-3三部分,其中E-1-1部分借助硅胶柱层析,以比例为20:1、10:1、5:1、2:1、1:1、1:2的二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶剂系统及甲醇进行洗脱,再经比例为1:1石油醚-乙酸乙酯系统反复分离纯化,得到白色针晶化合物Excisanin D;Excisanin D粗品用比例为90/10的甲醇/水常温条件下缓慢静置挥发,70~75小时得本发明的晶体Excisanin D;
E-1-3部分用比例为3:1二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶剂系统及甲醇反复进行等度洗脱,最后得到白色针状晶体化合物Excisanin K;Excisanin K粗品用比例为85/15的甲醇/水常温条件下静置缓慢挥发,98小时得本发明的Excisanin K。
应用:在制备治疗癌症或肿瘤药物方面的应用,尤其是在制备治疗人结肠癌细胞HCT-116、人乳腺癌细胞231、肝癌细胞HepG2药物或制剂方面的应用。
实施例5:
取化合物Excisanin D、Excisanin K任意一种作为原料药,加入15倍量的药用淀粉混合均匀,制粒,得颗粒剂。
实施例6:
取化合物Excisanin D、Excisanin K任意一种作为原料药,加入13倍量的药用淀粉混合均匀,装入胶囊,得胶囊剂。
实施例7:
取化合物Excisanin D、Excisanin K任意一种作为原料药,加入16倍量的药用淀粉混合均匀,干燥,制成丸剂。
实施例8:
取化合物Excisanin D、Excisanin K任意一种作为原料药,加入14倍量的药用淀粉混合均匀,压片,得片剂。
实施例9:
取化合物Excisanin D、Excisanin K任意一种作为原料药,加入20倍量注射用水,搅拌,过滤,灭菌,得注射剂。
实施例10:
取化合物Excisanin D、Excisanin K任意一种作为原料药,加入18倍量的纯净水,混合均匀,过滤,灭菌,得口服液。
实施例11:
取化合物Excisanin D、Excisanin K任意一种作为原料药,加入8倍量的注射用水,搅拌,过滤,冻干,得冻干粉剂。
为了进一步验证本发明的可行性及有效性,发明人进行了以下实验:
一、提取工艺的考察
发明人进行了响应面优化试验,在单因素试验的基础上,按照Box-Behnken设计原理工艺优化选取提取温度(A)、乙醇浓度(B)、提取时间(C)、料液比(D)4个因素作为自变量,以Excisanin D粗品得率为响应值,依据试验因素和水平设计进行响应面试验设计,优化二萜化合物富集段的提取工艺。-1、0、1水平:A分别为65、75和85℃;B分别为65%、80%和95%;C分别为2、3和4小时;D分别为1:10、1:20和1:30mL·g-1。
/>
结论:通过提取工艺优化,确定了该化合物的最优提取工艺,即药材粉碎后用95%乙醇/水溶剂进行加热回流提取,温度为85℃,提取2小时,料液比为1:20,在该条件下Excisanin D粗品得率最高。
二.化合物表征及体外抗肿瘤活性测试
(一)仪器与试剂:
旋光Rudolph-型旋光仪(美国鲁道夫公司)测定;核磁共振氢谱1HNMR,核磁共振碳谱13CNMR和2D NMR由INOVA 400MHZ超导核磁共振波谱仪(美国瓦里安公司)测定(四甲基硅醚TMS为内标);电喷雾质谱ESIMS由5973MSD质谱仪(安捷伦公司)测定;紫外光谱UV由HP8453紫外可见分光光度计(惠普公司)测定;红外光谱IR由VECTOR22型傅立叶变换红外光谱仪(德国BRUKER仪器公司,KBr压片)测定;熔点由XT-4双目显微熔点测定仪(北京泰克仪器有限公司)测定;柱层析硅胶(200-300目)及薄层层析硅胶均为青岛海洋化工产;其它试剂均为分析纯。
(二)实验方法
本发明实验药材于2017年10月采自贵州省道真苗族仡佬族自治县,由贵州中医药大学孙庆文教授鉴定为宽叶香茶菜Isodon latifolius(C.Y.Wu&H.W.Li)H.Hara,植物标本存放在贵州中医药大学苗医药重点实验室(标本凭证:GY20171001)。
1.贝壳杉烷型二萜化合物Excisanin D和Excisanin K的制备方法:
1)95%乙醇加热回流提取:宽叶香茶菜叶经自然风干后粉碎,取粉碎的宽叶香茶菜叶6.5Kg,加料液比为1:20mL·g-1的95%乙醇在温度为85℃条件下加热回流提取2次,每次2小时,得稀乙醇提取液;
2)浓缩稀乙醇提取液:将稀乙醇提取液减压浓缩得乙醇浸膏1100g,在减压浓缩过程中回收乙醇;
3)萃取:把乙醇浸膏溶于蒸馏水中,再用2~3倍量乙酸乙酯萃取3~4次,得稀乙酸乙酯萃取液;
4)浓缩稀乙酸乙酯萃取液:将乙酸乙酯萃取液减压浓缩得乙酸乙酯浸膏(53g),在减压浓缩过程中回收乙酸乙酯;
5)柱层析分离:将乙酸乙酯浸膏与硅胶拌样,转入层析柱,硅胶粒度200~300目,用比例为V/V 10/0、9/1、4/1、7/3、6/4、0/10的石油醚-乙酸乙酯洗脱液洗脱,得到A、B、C、D、E、F、G七个部分;E部分用适量甲醇溶解,用1:1.5倍聚酰胺拌样,用MCI进行脱色处理,用50%、60%、70%、80%、90%、100%甲醇-水混合溶剂系统洗脱,通过HPLC检测合并,合并极性相似流分,最终按照极性由大到小分为E-1、E-2、E-3、E-4四个部分;E-1部分用比例为10:1、5:1、2:1、1:1的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂系统及甲醇进行洗脱,通过薄层层析法检测,合并相似流分,最终分为E-1-1、E-1-2、E-1-3三部分,其中E-1-1部分借助硅胶柱层析,以比例为20:1、10:1、5:1、2:1、1:1、1:2的二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶剂系统及甲醇进行洗脱,再经比例为1:1石油醚-乙酸乙酯系统反复分离纯化,得到白色针晶化合物Excisanin D(34.5mg);Excisanin D粗品用比例为90/10的甲醇/水常温条件下静置挥发,72小时得本发明的晶体Excisanin D;
E-1-3部分用比例为3:1二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶剂系统及甲醇反复进行等度洗脱,最后得到白色针状晶体化合物Excisanin K(9.6mg);Exc isanin K粗品用比例为85/15的甲醇/水常温条件下静置挥发,96小时得本发明的Excisanin K。
2.化合物表征
贝壳杉烷型二萜化合物Excisanin D:
分子式为:C22H32O6,EI-MS m/z:392[M]+,白色片状晶体;溶于甲醇,微溶于二氯甲烷,难溶于石油醚、乙酸乙酯;TCL检测,10%H2SO4-EtOH溶液显色呈橙黄色,10%H3[P(Mo3O10)]4-EtOH溶液显色呈现深蓝色,化学结构式如下:
1H-NMR(600MHz,CDCl3)、13C-NMR(150MHz,CDCl3)数据如下:
Data were recorded in CDCl3 on a AVANCE NEO-600MHz spectrometer.
18位为羟基取代的贝壳杉烷型二萜化合物Excisanin K:
白色片状晶体;溶于甲醇,微溶于二氯甲烷,难溶于石油醚、乙酸乙酯;TCL检测,10%H2SO4-EtOH溶液显色呈现棕黄色,10%H3[P(Mo3O10)]4-EtOH溶液显色呈深蓝色。EI-MSm/z:373[M+Na]+,化合物分子式为:C20H30O5,结构式:
1H-NMR(600MHz,CDCl3)、13C-NMR(150MHz,CDCl3)数据如下:
Data were recorded in CD3OD on a AVANCE NEO-600MHz spectrometer.
3.体外抗肿瘤活性测试
将HCT-116、MDA-MB-231和HepG2细胞在含有10%灭活的胎牛血清和10mL/L青霉素-链霉素的DMEM完全培养基上,于37℃、100%湿度、5%CO2的培养基中孵育培养。选用对数生长期的肿瘤细胞,用适量的0.25%的胰酶消化3-5分钟,使贴附的肿瘤细胞脱落,1000转,5分钟离心后用含10%胎牛血清的培养液悬浮,吹打成单个细胞悬液。细胞计数板计数,一般活细胞应在95%以上。用含10%胎牛血清的培养液调整细胞浓度为50000个/mL,96孔板每孔加入细胞悬液100μl,接种后,37℃、5%CO2培养箱培养24h。取96孔板设计为正常对照组、加药组,设6个给药剂量组,用新的培养基稀释药物到相应的终浓度。吸掉孔内原有培养基,每孔加入200μl相应药液,正常对照孔和空白孔加入培养液,每组设定4个平行孔。37℃、5%CO2培养箱培养48h。48h后,弃掉上清,每孔加入5mg/ml MTT溶液20μl,继续培养4h,小心吸取孔内上清液并遗弃,每孔加入150μl DMSO,微型振荡器上震荡约10分钟,使甲瓒溶解完全。用酶标仪在570nm波长测定每孔的OD值,以双蒸水孔凋零。按以下计算药物的肿瘤细胞生长抑制率:肿瘤细胞生长抑制率(%)=(正常对照组平均OD值-加药组平均OD值)/正常对照组平均OD值*100%。结果见表1:
表1肿瘤细胞生长抑制率
总结:Excisanin D对人结肠癌细胞HCT-116、人乳腺癌细胞231、肝癌细胞HepG2均有抑制生长作用,Excisanin K对人结肠癌细胞HCT-116具有细胞毒活性。Excisanin D显示出对人结肠癌细胞HCT-116、人乳腺癌细胞231、肝癌细胞HepG2有较强的抑制生长作用,因此Excisanin D与Excisanin K可用作制备治疗肿瘤的候选药物。
虽然,上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验,对本发明作了详尽的描述,但在本发明基础上,可以对之作出一些修改或改进,这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此,在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进,均属于本发明要求保护的范围。
Claims (6)
1.一种贝壳杉烷型二萜化合物的制备方法,其特征在于,所述化合物是从宽叶香茶菜中分离得到的贝壳杉烷型二萜化合物Excisanin D、Excisanin K;
贝壳杉烷型二萜化合物Excisanin D、Excisanin K化合物结构式为:
贝壳杉烷型二萜化合物Excisanin D和Excisanin K的制备方法如下:
1)95%乙醇加热回流提取:宽叶香茶菜叶经自然风干后粉碎,取粉碎的宽叶香茶菜叶6.5Kg,加料液比为1:20mL·g-1的95%乙醇在温度为85℃条件下加热回流提取2次,每次2小时,得稀乙醇提取液;
2)浓缩稀乙醇提取液:将稀乙醇提取液减压浓缩得乙醇浸膏,在减压浓缩过程中回收乙醇;
3)萃取:把乙醇浸膏溶于蒸馏水中,再用2倍量乙酸乙酯萃取3~4次,得稀乙酸乙酯萃取液;
4)浓缩稀乙酸乙酯萃取液:将乙酸乙酯萃取液减压浓缩得乙酸乙酯浸膏,在减压浓缩过程中回收乙酸乙酯;
5)柱层析分离:将乙酸乙酯浸膏与硅胶拌样,转入层析柱,硅胶粒度200~300目,用比例为V/V 10/0、9/1、4/1、7/3、6/4、0/10的石油醚-乙酸乙酯洗脱液洗脱,得到A、B、C、D、E、F、G七个部分;E部分用适量甲醇溶解,用1:1.5倍聚酰胺拌样,用MCI进行脱色处理,用50%、60%、70%、80%、90%、100%甲醇-水混合溶剂系统洗脱,通过HPLC检测合并,合并极性相似流分,最终按照极性由大到小分为E-1、E-2、E-3、E-4四个部分;E-1部分用比例为10:1、5:1、2:1、1:1的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂系统及甲醇进行洗脱,通过薄层层析法检测,合并相似流分,最终分为E-1-1、E-1-2、E-1-3三部分,其中E-1-1部分借助硅胶柱层析,以比例为20:1、10:1、5:1、2:1、1:1、1:2的二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶剂系统及甲醇进行洗脱,再经比例为1:1石油醚-乙酸乙酯系统反复分离纯化,得到白色针晶化合物Excisanin D;Excisanin D粗品用比例为90/10的甲醇/水常温条件下静置挥发,72小时得本发明的晶体Excisanin D;
E-1-3部分用比例为3:1二氯甲烷-乙酸乙酯混合溶剂系统及甲醇反复进行等度洗脱,最后得到白色针状晶体化合物Excisanin K;Excisanin K粗品用比例为85/15的甲醇/水常温条件下静置挥发,96小时得本发明的Excisanin K。
2.根据权利要求1所述的制备方法制出的贝壳杉烷型二萜化合物Excisanin D、Excisanin K在制备治疗人结肠癌细胞HCT-116、人乳腺癌细胞231、肝癌细胞HepG2药物或制剂方面的应用。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述制剂为加入药学上可接受的辅料按常规工艺制成药学上可接受的制剂。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述药学上可接受的制剂为固体制剂或液体制剂。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述固体制剂为颗粒剂、丸剂、胶囊剂、片剂、散剂、冻干粉针剂。
6.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述液体制剂为口服液、注射制剂。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210235520.5A CN114573456B (zh) | 2022-03-11 | 2022-03-11 | 一种贝壳杉烷型二萜化合物及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210235520.5A CN114573456B (zh) | 2022-03-11 | 2022-03-11 | 一种贝壳杉烷型二萜化合物及其制备方法和应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN114573456A CN114573456A (zh) | 2022-06-03 |
CN114573456B true CN114573456B (zh) | 2023-12-01 |
Family
ID=81775878
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202210235520.5A Active CN114573456B (zh) | 2022-03-11 | 2022-03-11 | 一种贝壳杉烷型二萜化合物及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN114573456B (zh) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115282135B (zh) * | 2022-07-26 | 2023-07-21 | 扬州大学 | 对映-贝壳杉烷型二萜化合物dka在制备抗肿瘤转移药物或抑制剂中的应用 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1566061A (zh) * | 2003-06-30 | 2005-01-19 | 桂明玉 | 一种新的天然药物有效部位-尾叶香茶菜总二萜 |
-
2022
- 2022-03-11 CN CN202210235520.5A patent/CN114573456B/zh active Active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1566061A (zh) * | 2003-06-30 | 2005-01-19 | 桂明玉 | 一种新的天然药物有效部位-尾叶香茶菜总二萜 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
布依药野苏麻的二萜类化学成分研究;李继新等;《中国药房》;第31卷(第20期);第2459页2.1部分,第2461页图1 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN114573456A (zh) | 2022-06-03 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN110511255B (zh) | 一种新的环烯醚萜苷化合物及其制备方法和用途 | |
CN115160337B (zh) | 1α-烷基瑞香烷型二萜类化合物及其制备方法和应用 | |
CN114573456B (zh) | 一种贝壳杉烷型二萜化合物及其制备方法和应用 | |
Wang et al. | Elution‐extrusion counter‐current chromatography separation of two new benzyl ester glucosides and three other high‐polarity compounds from the tubers of pleione bulbocodioides | |
CN116925054B (zh) | 紫丁香中的一种木脂素化合物及其制备方法与应用 | |
CN111548327B (zh) | 降碳贝壳杉烷型二萜及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的用途 | |
CN110028535B (zh) | 连钱草中的二萜苷类化合物及其提取分离方法 | |
CN109206429B (zh) | 一种异喹啉类生物碱化合物及其制备方法和用途 | |
CN113620912B (zh) | 一种呋喃酮化合物及其制备方法与应用 | |
CN111606801B (zh) | 一种裂环半日花烷型二萜类化合物及其分离方法和应用 | |
CN112194645B (zh) | 一种新化合物及其在抑制黑色素瘤方面的用途 | |
CN109734696B (zh) | 一种新的二环氧木脂素化合物及其制备方法 | |
CN102146114B (zh) | 一种丹参酮ⅱa的制备方法 | |
CN111410645B (zh) | 一种木脂素类化合物及其制备与应用 | |
CN110078783A (zh) | 木通皂苷h及其制备方法 | |
CN109879926A (zh) | 连钱草中的三萜苷类化合物及其提取分离方法 | |
CN104861010A (zh) | 一种新的劳丹烷型二萜苷化合物及其制备方法和用途 | |
CN113354609B (zh) | 一种异戊烯基取代香豆素类化合物及其制备方法和应用 | |
CN118373836A (zh) | 一种从小黄皮中提取的新化合物、提取方法及应用 | |
CN116354824B (zh) | 松香烷型二萜类化合物及其制备方法、药物组合物和应用 | |
CN113980085B (zh) | 一种多氧孕甾烷类化合物亚乎奴甾g的制备方法及其应用 | |
CN111187327B (zh) | 一种从小驳骨中提取三萜类化合物驳骨萜a的方法及其应用 | |
CN113402488B (zh) | 一种刺齿凤尾蕨中的化合物及其提取分离纯化方法和应用 | |
CN108440458B (zh) | 一种四氢呋喃衍生物类化合物及其制备方法和应用 | |
CN118359670A (zh) | 一种多羽凤尾蕨中的新化合物及提取分离纯化方法和应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |