CN112194645B - 一种新化合物及其在抑制黑色素瘤方面的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种新化合物及其制备方法和抗黑色素瘤方面的用途，所述化合物结构式为
Figure DDA0002693375370000011
，所述化合物可降低黑色素瘤A 375细胞的存活率，可用于抗黑色素瘤药物的开发。

Description

一种新化合物及其在抑制黑色素瘤方面的用途
技术领域
本发明属于药物技术领域，具体涉及一种新化合物及其制备方法和抑制黑色素瘤的用途。
背景技术
黑色素瘤，通常是指恶性黑色素瘤，由黑色素细胞恶变而来的一种高度恶性的肿瘤，恶性黑色素瘤的发病率及致死率在近数十年来逐渐增高。全球平均每年新发16万例，死亡48000例。黑色素瘤的恶性程度较高，多发生转移，预后较差。早期诊断与及时合理治疗极其重要，及早局部手术切除是争取治愈的最佳方法，化疗仅适合晚期患者，免疫疗法仍处在试验阶段，疗效不确定，总体来说，预后较差。
姜科植物温郁金Curcuma wenyujin Y.H.Chen et C.Ling的根茎即为中药材莪术的一种，习称“温莪术”。具有行气破血，消积止痛之功效。常用于血气心痛，饮食积滞，脘腹胀痛，血滞经闭，痛经，癓瘕痞块，跌打损伤。在抗肿瘤治疗中应用广泛，其所含姜黄素、莪术醇等化合物均有抗肿瘤作用。从莪术中分离得到抗肿瘤活性化合物，寻找高效低毒的抗肿瘤活性物质是新药研发的一个重要方向。
发明内容
本发明的目的是提供一种新化合物，可降低黑色素瘤A 375的细胞存活率，本发明还提供其制备方法，对莪术根茎进行系统分离，得到本发明所述化合物。
本发明所述的新化合物，其化学结构如下：
Figure GDA0002809532330000011
本发明所述的新化合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)取莪术根茎，加入提取溶剂回流提取，提取液浓缩后得到粗提物浸膏；
(2)粗提物浸膏分散于水中，用乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯萃取液，浓缩后得到乙酸乙酯萃取浸膏；
(3)取乙酸乙酯萃取浸膏，用硅胶柱进行分离，先用体积比为三氯甲烷-甲醇(50:1)洗脱10个柱体积，弃去洗脱液，再用体积比为三氯甲烷-甲醇(20:1)洗脱10个柱体积，弃去洗脱液，继用体积比为三氯甲烷-甲醇(10:1)洗脱10个柱体积，收集洗脱液，浓缩成浸膏；
(4)将步骤(3)所得浸膏继续经制备型高效液相色谱进行进一步分离，其中高效液相色谱条件为：C18色谱柱，检测波长为250nm，流动相为80％甲醇进行洗脱，收集第三个色谱峰洗脱液，回收洗脱液，即获得目标化合物。
本发明所述的新化合物的应用，用于制备抗黑色素瘤的药物。
一、本发明中所述的化合物的结构确证
白色无定形粉末，溶于甲醇。高分辨质谱得到m/z381.1913[M+H]+(计算值381.1913)及m/z403.1733[M+Na]+(计算值403.1733)的分子离子峰，再结合1H NMR谱图和13C NMR谱图数据推测化合物的分子式为C20H28O7。在1H NMR谱图中，δH 6.97(d,2H,J＝8.4Hz,H-2’,6’)、6.66(d,2H,J＝8.4Hz,H-3’,5’)提示结构中含有对位取代苯结构。δH6.84(dd,1H,J＝15.3,4.3Hz,H-3)、6.02(d,1H,J＝15.6Hz,H-2)提示结构中含有反式双键。13CNMR共给出了20个碳信号，其中δC130.4(C-2’,6’)δC 116.1(C-3’,5’)为重叠碳信号，结合HSQC、HMBC谱，对相关碳氢信号进行了归属，见表1，确定本发明所述的新化合物的化学结构为：
Figure GDA0002809532330000021
表1 1H(600MHz)and 13C(150MHz)NMR Spectroscopic Data in CD3OD(δin ppm,Jin Hz).
Figure GDA0002809532330000031
二、降低黑色素瘤A 375细胞存活率
1.材料与试剂
3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)分析纯，购自Sigma公司；
DMEM购自美国Hyclone公司；
胎牛血清购自美国Hyclone公司；
青霉素和链霉素均购于美国Hyclone公司；
人黑色素瘤A375细胞购自美国ATCC公司。
2.仪器与设备
梅特勒MS205DU型分析天平；VERSAmax酶标仪。
3.细胞培养
A 375复苏后培养在含10％胎牛血清，100U/mL青霉素和50U/mL链霉素的DMEM完全培养基中。细胞置于培养箱中培养(37℃，5％CO2)，根据细胞的生长状态传代，取对数生长期细胞用于以下实验。
4.MTT测定细胞存活率
将A375细胞接种于96孔培养板，每孔1×104个细胞，150μL/孔，置于培养箱中(37℃，5％CO2)培养24h后，加入不同浓度的本发明所述新化合物(以10％DMSO配制，浓度分别为20μM、10μM、5μM、2.5μM、1.25μM、0.625μM)，加入药物体积为50μL/孔，培养24h。对照组加相同体积的溶剂，空白组加相同体积的培养液。然后，往培养板中加入MTT溶液(用PBS将MTT配成5mg/mL溶液，注意避光)20μL/孔，37℃孵育4h后弃上清液，加入DMSO 200μL/孔，振荡10min，紫色结晶物充分溶解后，在570nm处用酶标仪测定各孔吸光度值。计算细胞存活率，同时计算半数抑制浓度(IC50)。
存活细胞率％＝(OD实验-OD空白)/(OD对照-OD空白)×100％
由实验结果可知，随着新化合物浓度的增加，黑色素瘤细胞A375的存活率呈下降趋势，呈现浓度依赖性，其存活率见图1。通过IC50计算器得出其IC50＝2.99μmol/L。因此，本发明所述化合物具有较强的抗黑色素瘤作用，可用于抗黑色素瘤药物的开发。
附图说明
图1为本发明所述新化合物对黑色素瘤A375细胞存活率的影响
图2为本发明所述新化合物的核磁共振1H-NMR谱
图3为本发明所述新化合物的核磁共振13C-NMR谱
图4为本发明所述新化合物的核磁共振HMBC谱
图5为本发明所述新化合物的核磁共振HSQC谱
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但其并不限制本发明的实施。
实施例1
(1)取莪术根茎10kg，加入50L 60％乙醇回流提取3小时，提取液浓缩后得到粗提物浸膏；
(2)将粗提物浸膏分散于10L水中，用等体积的乙酸乙酯萃取3遍，收集乙酸乙酯萃取液，浓缩后得到乙酸乙酯萃取浸膏；
(3)取乙酸乙酯萃取浸膏，用硅胶柱进行分离(浸膏:硅胶＝1:20(重量比)，直径:柱高＝1:5)，先用三氯甲烷-甲醇(50:1)洗脱10个柱体积，弃去洗脱液，再用体积比为三氯甲烷-甲醇(20:1)洗脱10个柱体积，弃去洗脱液，继用体积比为三氯甲烷-甲醇(10:1)洗脱10个柱体积，收集洗脱液，浓缩成浸膏；
(4)将步骤(3)所得浸膏继续经制备型高效液相色谱进行进一步分离，其中高效液相色谱条件为：C18色谱柱，检测波长为250nm，流动相为80％甲醇进行洗脱，收集第三个色谱峰洗脱液，回收洗脱液，即获得目标化合物。

Claims (2)

1.一种新化合物，其特征在于，其化学结构如下：
Figure DEST_PATH_IMAGE001
。
2.一种权利要求1所述的新化合物的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
（1）取莪术根茎，加入提取溶剂回流提取，提取液浓缩后得到粗提物浸膏；
（2）粗提物浸膏分散于水中，用乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯萃取液，浓缩后得到乙酸乙酯萃取浸膏；
（3）取乙酸乙酯萃取浸膏，用硅胶柱进行分离，先用体积比为50:1的三氯甲烷-甲醇洗脱10个柱体积，弃去洗脱液，再用体积比为20:1的三氯甲烷-甲醇洗脱10个柱体积，弃去洗脱液，继用体积比为10:1的三氯甲烷-甲醇洗脱10个柱体积，收集洗脱液，浓缩成浸膏；
（4）将步骤（3）所得浸膏继续经制备型高效液相色谱进行进一步分离，其中高效液相色谱条件为：C18色谱柱，检测波长为250nm，流动相为80%甲醇进行洗脱，收集第三个色谱峰洗脱液，回收洗脱液，即获得目标化合物。
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