CN114558128B - 裸花紫珠作为鱼类疫苗佐剂及其应用 - Google Patents
裸花紫珠作为鱼类疫苗佐剂及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114558128B CN114558128B CN202210261605.0A CN202210261605A CN114558128B CN 114558128 B CN114558128 B CN 114558128B CN 202210261605 A CN202210261605 A CN 202210261605A CN 114558128 B CN114558128 B CN 114558128B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- vaccine
- fish
- adjuvant
- beautyberry
- inactivated
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 title claims abstract description 40
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 title abstract description 8
- 229940124931 vaccine adjuvant Drugs 0.000 title abstract description 8
- 241000404844 Callicarpa nudiflora Species 0.000 title description 13
- 240000003690 Callicarpa japonica Species 0.000 claims abstract description 41
- 235000017595 Callicarpa japonica Nutrition 0.000 claims abstract description 41
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 41
- 241000607471 Edwardsiella tarda Species 0.000 claims abstract description 34
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 33
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 18
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 18
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims description 2
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 abstract description 30
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 abstract description 4
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 abstract description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 abstract 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 35
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 description 33
- 241000252212 Danio rerio Species 0.000 description 29
- 241001275898 Mylopharyngodon piceus Species 0.000 description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 description 16
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 15
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 14
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 11
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 11
- 241000607473 Edwardsiella <enterobacteria> Species 0.000 description 10
- 239000000463 material Substances 0.000 description 10
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000009360 aquaculture Methods 0.000 description 7
- 244000144974 aquaculture Species 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 5
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 5
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 4
- 238000013461 design Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 3
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 241000252233 Cyprinus carpio Species 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 241000411851 herbal medicine Species 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- -1 stilbene polysaccharide Chemical class 0.000 description 2
- FYGDTMLNYKFZSV-URKRLVJHSA-N (2s,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,4r,5r,6s)-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-[(2r,4r,5r,6s)-4,5,6-trihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxan-3-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1[C@@H](CO)O[C@@H](OC2[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-URKRLVJHSA-N 0.000 description 1
- WRMNZCZEMHIOCP-UHFFFAOYSA-N 2-Phenylethanol Natural products OCCC1=CC=CC=C1 WRMNZCZEMHIOCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000607516 Aeromonas caviae Species 0.000 description 1
- 241000607525 Aeromonas salmonicida Species 0.000 description 1
- 201000001178 Bacterial Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 229920002498 Beta-glucan Polymers 0.000 description 1
- 229910001369 Brass Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001247197 Cephalocarida Species 0.000 description 1
- 241000252203 Clupea harengus Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 241000252230 Ctenopharyngodon idella Species 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 description 1
- 241000270322 Lepidosauria Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000269979 Paralichthys olivaceus Species 0.000 description 1
- 206010034133 Pathogen resistance Diseases 0.000 description 1
- 208000029082 Pelvic Inflammatory Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000277331 Salmonidae Species 0.000 description 1
- PJANXHGTPQOBST-VAWYXSNFSA-N Stilbene Natural products C=1C=CC=CC=1/C=C/C1=CC=CC=C1 PJANXHGTPQOBST-VAWYXSNFSA-N 0.000 description 1
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 240000001949 Taraxacum officinale Species 0.000 description 1
- 235000005187 Taraxacum officinale ssp. officinale Nutrition 0.000 description 1
- 241001073567 Verbenaceae Species 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 241000607618 Vibrio harveyi Species 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 210000005006 adaptive immune system Anatomy 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 229960001212 bacterial vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000003287 bathing Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 239000010951 brass Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 235000019514 herring Nutrition 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940023041 peptide vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 235000015170 shellfish Nutrition 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 235000021286 stilbenes Nutrition 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/0208—Specific bacteria not otherwise provided for
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
- A61K2039/521—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55588—Adjuvants of undefined constitution
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
- Y02A40/80—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in fisheries management
- Y02A40/81—Aquaculture, e.g. of fish
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Farming Of Fish And Shellfish (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
本发明是将裸花紫珠作为鱼类疫苗的佐剂，其有效成分为裸花紫珠，该佐剂的应用可以提高疫苗接种后的特异性保护率，该佐剂使用方式是与迟缓型爱德华氏菌灭活疫苗混合后注射使用。将裸花紫珠作为一种鱼类疫苗佐剂，其优点在于价格低廉、残留低，不会使鱼获得耐药性、抗药性等。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别涉及裸花紫珠作为鱼类疫苗佐剂及其应用。
背景技术
近年来，随着我国水产养殖业规模化和集约化程度的提升，病害已成为制约水产养殖业持续健康发展的重要因素。其中，迟缓型爱德华氏菌所引起的细菌性疾病对青鱼、草鱼等鲤科鱼类的健康养殖造成了巨大威胁。迟缓型爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)属于肠杆菌科爱德华菌属，属革兰氏阴性菌，已被中国农业农村部列为三类动物疫病，其易感动物包括鱼类、贝类、哺乳类、爬行类等。鱼类主要通过摄食带有迟缓爱德华氏菌的饵料，或接触带有迟缓爱德华氏菌的鱼类而受到感染。Edwardsiella tarda通过鱼类的消化道、鳃或者受伤表皮侵入鱼体，给我国水产养殖业造成了巨大的经济损失。
鱼类虽然是最低等的脊椎动物，但它同时拥有先天免疫系统和适应性免疫系统。早在1938年，Snieszko等就发表了使用点状气单胞菌免疫鲤鱼后可获得免疫保护力的相关文献；1939年及1942年，Duff的研究发现通过注射和口服免疫，鳟鱼可获得杀鲑气单胞菌的免疫保护；在随后的“二战”时期，由于抗菌药物的广泛使用，使得水产养殖业进入了“药物时代”。但随着病原抗药性、耐药性等问题的出现，不仅导致水产养殖业巨大的经济损失，而且影响水产品质量并造成生态环境污染，这让人们重燃起对鱼类疫苗的兴趣。至20世纪70年代，鱼类疫苗在商业化的水产养殖业中开始得到应用。
鱼类疫苗根据其能否复制，可分为非复制型及复制型疫苗。其中非复制型疫苗包含灭活疫苗、亚单位疫苗、合成肽疫苗及颗粒疫苗，这些疫苗可通过紫外线、高温及声波等物理方法灭活，也可通过使用化学试剂如甲醛或通过低PH、溶剂、洗涤剂等化学方法灭活。复制型疫苗主要包括减毒活疫苗，它可通过实验室传代、环境菌替代、物理或化学诱变、基因工程技术及活菌表达抗原等方式达到减毒的效果。
鱼类疫苗主要通过三种方式进行接种：腹腔或肌肉注射、浸泡(浸浴或喷洒)及饲喂含疫苗饲料的经口免疫。这三种接种方式有各自的优缺点：(1)注射免疫能引起最佳的免疫保护，但对接种设备要求高、不适合鱼苗或小鱼种、耗费劳动力；(2)浸浴操作方便，不需要将鱼从养殖池转运出来，不会对鱼造成损伤，但其缺点是只适合鱼苗或幼鱼，成鱼或数量巨大的鱼如果用浸浴免疫会导致成本过高；(3)口服免疫适用于数量巨大、不易处理或易应激的鱼类，其缺点是保护效果差、疫苗消耗过大。
迄今为止，疫苗接种是预防水产养殖业传染性疾病最有效的方法。然而仅使用疫苗并不能起到很好的免疫保护效果，因此，通常会加入佐剂来提高疫苗的免疫效力。传统佐剂(如矿物油)被广泛应用于鱼类细菌疫苗，但这类佐剂不易注射，会引起较强的组织炎性反应，产生明显的副作用，且对细胞内病原疫苗作用不明显。随着鱼类免疫学的深入研究，纳米粒子、β-葡聚糖、细胞因子及中草药成分也作为佐剂应用于鱼类疫苗。如将黄茋多糖和蒲公英多糖作为哈维氏弧菌灭活疫苗的佐剂，可以明显提高该疫苗对牙鲆的免疫保护率。
裸花紫珠是一种分布于中国海南、广东、广西的中草药，属马鞭草科的灌木或小乔木。其叶有止血止痛、散瘀消肿之药用，亦可用于血热毒盛所导致的呼吸道、消化道出血及细菌感染性炎症，裸花紫珠还具有治疗肝硬化消化道出血、慢性盆腔炎、细菌性肺炎等临床药效。研究人员通过色谱法分离纯化，发现裸花紫珠化学成分主要包括6个黄铜和3个苯乙醇苷。目前，未有将裸花紫珠作为鱼类疫苗佐剂的相关报道。
发明内容
为了解决现有技术中上述问题，本发明提供了裸花紫珠作为鱼类疫苗佐剂及其应用。
为了达到上述目的，本发明的实施例提供了裸花紫珠在制备增强鱼类疫苗免疫接种效果的佐剂中的应用。
进一步的，所述鱼类疫苗的抗原为细菌。
更进一步的，所述细菌为迟缓型爱德华氏菌。
更进一步的，所述鱼类疫苗选自迟缓型爱德华氏菌灭活疫苗。
进一步的，所述佐剂的使用方法为与灭活疫苗混合后注射使用。
本发明是将裸花紫珠作为鱼类疫苗的佐剂，裸花紫珠是其有效成分，该佐剂的应用可以提高疫苗接种后的特异性保护率，该佐剂使用方式是与迟缓型爱德华氏菌灭活疫苗混合后注射使用。
本发明的上述方案有如下的有益效果：
本发明的上述方案将裸花紫珠作为一种鱼类疫苗佐剂能明显提高迟缓型爱德华氏菌灭活疫苗的免疫保护率，且其优点在于价格低廉、残留低，不会使鱼获得耐药性、抗药性等。
具体实施方式
为使本发明要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结合具体实施例进行详细描述。
除非另有定义，本发明中所使用的专业术语与本领域技术人员通常理解含义相同。本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。
本发明针对现有的问题，提供了裸花紫珠作为鱼类疫苗佐剂及其应用。
本发明佐剂使用方法如下：
(1)裸花紫珠注射斑马鱼/青鱼安全剂量的确定：将裸花紫珠浸膏称重，取1g溶于50mL灭菌PBS溶液中配制原液，即原液浓度为20mg/mL。将原液与PBS按比例配制为不同浓度的佐剂溶液：0.1mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、5mg/mL、10mg/mL，将上述不同浓度的裸花紫珠溶液经腹腔注射30尾斑马鱼/青鱼，观察21天，根据免疫鱼的成活情况，由此确定裸花紫珠作为佐剂的安全剂量范围。
(2)迟缓型爱德华氏菌致死浓度的确定：第一天将-80℃冰箱保种的迟缓型爱德华氏菌划线到带有Col抗性的TSA平板上；第二天挑取3个爱德华氏菌单克隆摇菌，在5mL TSB培养基中加入5μL Col，接种后拍打管壁，于28℃培养箱中静置过夜培养；第三天按1：20比例转菌，即250μL菌液加入4750μLTSB中，转接后置于培养箱中培养2-3小时，期间测OD540，当OD540为0.5时收菌，此时细菌浓度为2.5×108个/mL，4000g离心5分钟收集1mL菌种，PBS洗3次，再加入250μL PBS吹散混匀(标记为细菌原液；cfu：1×109)。将细菌原液与PBS按比例配制不同浓度的菌液(PBS组、104倍稀释液、103倍稀释液、102倍稀释液、10倍稀释液)，每组30条斑马鱼，每条斑马鱼注射10μL菌液，各组斑马鱼注射爱德华氏菌数分别为：0、103、104、105、106、107。
(3)灭活疫苗的制备及使用：将迟缓型爱德华氏菌置于1％浓度福尔马林中，4℃冰箱中静置过夜。第二天用PBS清洗3遍后离心，加入PBS制备为不同浓度的灭活疫苗。将不同浓度裸花紫珠佐剂与灭活疫苗按比例混合后，对斑马鱼进行腹腔注射接种，再按前述方法喂养及观察斑马鱼。
(4)裸花紫珠作为佐剂用于斑马鱼/青鱼的最佳浓度确定：将不同浓度裸花紫珠佐剂(0mg/mL、0.1mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、2.5mg/mL、5mg/mL)与疫苗(104/105cfu)按比例混合后免疫接种斑马鱼/青鱼，30天后进行活的迟缓型爱德华氏菌攻毒试验，攻毒浓度为104/105cfu，攻毒后28天统计斑马鱼/青鱼死亡率。
以下通过实施例对本发明进一步说明。
实施例1：裸花紫珠对斑马鱼安全注射剂量试验
1.材料与方法
(1)试验材料及养殖条件：选取五月龄健康TU品系斑马鱼，体重约为0.32g，试验期间各组置于分隔的水槽中，每日喂斑马鱼两次丰年虫，水温控制在21℃-25℃之间，每日14小时光照及10小时黑暗；
(2)裸花紫珠对斑马鱼注射安全剂量的确定：分别使用前述浓度的裸花紫珠腹腔注射斑马鱼，每组注射30尾，每尾注射10μL，观察21天。
2.试验结果
对照组及试验组斑马鱼在21天中的死亡情况见表1，由此可知，裸花紫珠对斑马鱼的最大安全注射剂量为50μg/尾，即156.25μg/g(裸花紫珠/鱼体重)。
表1裸花紫珠对斑马鱼注射安全剂量试验
实施例2：迟缓型爱德华氏菌对斑马鱼致死浓度试验
1.材料与方法
(1)试验材料及养殖条件：同实施例1；
(2)迟缓型爱德华氏菌对斑马鱼致死浓度的测定：分别使用0、103、104、105、106、107数量的迟缓型爱德华氏菌经腹腔注射斑马鱼，每组注射30尾，每尾注射10μL，观察21天。
2.试验结果
对照组及试验组斑马鱼在21天中的死亡情况见表2，由此可知，迟缓型爱德华氏菌对斑马鱼的注射完全致死浓度为104/尾。
表2迟缓型爱德华氏菌对斑马鱼注射致死浓度试验
实施例3：裸花紫珠添加于迟缓型爱德华氏菌灭活疫苗中，注射免疫接种斑马鱼。
1.材料与方法：
(1)试验材料及养殖条件：同实施例1。
(2)疫苗制备：第一天将-80℃冰箱保种的迟缓型爱德华氏菌在TSA培养基板(Col+)子上划板，活化细菌；第二天挑取TSA板子上的3个克隆接种至TSB培养基(Col+)中，于28℃培养箱中静置过夜；第三天再以1：20的比例转菌，即250μL细菌接种于4750μL TSB(Col+)中，继续培养约3小时，检测OD540值并确定其浓度。4000g离心5分钟收集菌种，PBS洗3次，再用PBS悬浮菌种，将其制成2.5×108cfu/mL浓度的菌悬液，置于浓度为1％福尔马林中，4℃冰箱中放置过夜，次日用PBS清洗菌体3次，再用PBS悬浮，制成迟缓型爱德华氏菌灭活疫苗，置于4℃保存。取出100μL灭活疫苗涂布于TSA培养基上划板，过夜培养，第二日确定无菌种生长，即可确定灭活疫苗制备成功。此试验中，注射裸花紫珠与灭活疫苗的总量为20μL/尾。
2.试验设计
(1)试验分组：将试验设计分为7组，分别为对照组(仅注射PBS)、裸花紫珠组、迟缓型爱德华氏菌灭活疫苗组、不同剂量裸花紫珠与迟缓型爱德华氏菌灭活疫苗配对组。具体分组情况见表3。
表3斑马鱼免疫试验分组
(2)免疫方法：腹腔注射，注射剂量为20μL/尾。
(3)免疫后攻毒：免疫28天后，斑马鱼经腹腔注射新鲜E.tarda菌液(1×104cfu/尾)，进行人工感染试验。
3.试验结果
攻毒后14天统计各试验组的死亡率，并根据公式相对保护率＝[1-(免疫组死亡率/对照组死亡率)]×100％，计算相对保护率。具体结果见表4。
表4裸花紫珠为迟缓爱德华氏菌灭活疫苗免疫佐剂对斑马鱼的免疫相对保护率
试验结果表明，仅注射裸花紫珠或仅注射迟缓型爱德华氏菌灭活疫苗，对斑马鱼的免疫保护效果太差，其平均相对保护率分别为7.8％及17.8％。在灭活疫苗中添加不同剂量的裸花紫珠，均可提高灭活疫苗的相对保护率。其中，当灭活疫苗中添加31.25μg/g(裸花紫珠/体重)裸花紫珠时，效果最为明显，其平均相对保护率可提高至58.9％。上述结果证明了裸花紫珠作为迟缓型爱德华氏菌灭活疫苗的佐剂，可提高该疫苗的相对保护率。
实施例4：裸花紫珠对青鱼安全注射剂量试验
1.材料与方法
(1)试验材料及养殖条件：选取10-12cm、体重约为18g的同批次健康青鱼，试验期间各组置于分隔的水桶中，每日投喂青鱼两次赤虫，水温控制在21℃-25℃之间，24小时连续充气；
(2)裸花紫珠对青鱼注射安全剂量的确定：分别使用前述浓度的裸花紫珠腹腔注射青鱼，每组注射30尾，每尾注射10μL，观察21天。
2.试验结果
裸花紫珠注射组，各组在21天时死亡青鱼数汇总见表5，通过结果可知，裸花紫珠对青鱼的注射安全剂量范围为50μg/尾，即2.78μg/g(裸花紫珠/鱼体重)。
表5裸花紫珠对青鱼注射安全剂量试验
实施例5：裸花紫珠添加于迟缓型爱德华氏菌灭活疫苗中，注射免疫接种青鱼。
1.材料与方法：
(1)试验材料及养殖条件：同实施例4。
(2)疫苗制备：同实施例3。
2.试验设计
(1)试验分组：将试验设计分为7组，分别为对照组(仅注射PBS)、裸花紫珠组、迟缓型爱德华氏菌灭活疫苗组、不同剂量裸花紫珠与迟缓型爱德华氏菌灭活疫苗配对组。具体分组情况见表6。
表6青鱼免疫试验分组
(2)免疫方法：腹腔注射，注射剂量为20μL/尾。
(3)免疫后攻毒：免疫28天后，青鱼经腹腔注射新鲜E.tarda菌液(1×105cfu/尾)，进行人工感染试验。
3.试验结果
攻毒后14天统计各试验组的死亡率，并根据公式前述公式计算相对保护率。结果见表7。
表7裸花紫珠为迟缓爱德华氏菌灭活疫苗免疫佐剂对青鱼的免疫相对保护率
试验结果表明，仅注射裸花紫珠或迟缓型爱德华氏菌灭活疫苗，对青鱼的免疫保护效果较差，其平均相对保护率分别为8.9％及17.8％。在灭活疫苗中添加不同量的裸花紫珠，均可提高灭活疫苗的相对保护率。其中，当灭活疫苗中添加0.278μg/g(裸花紫珠/体重)裸花紫珠时，其保护效果最为明显，其平均相对保护率可提高至48.9％。上述结果证明了裸花紫珠作为迟缓型爱德华氏菌灭活疫苗的佐剂，可提高疫苗的相对保护率。
以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (4)
1.裸花紫珠在制备增强鱼类疫苗免疫接种效果的佐剂中的应用；其特征在于，所述鱼类疫苗选自迟缓型爱德华氏菌灭活疫苗。
2.根据权利要求1所述的佐剂在制备鱼类疫苗中的应用，所述鱼类疫苗选自迟缓型爱德华氏菌灭活疫苗，其特征在于，所述迟缓型爱德华氏菌灭活疫苗的抗原为细菌。
3.根据权利要求2所述的佐剂在制备鱼类疫苗中的应用，其特征在于，所述细菌为迟缓型爱德华氏菌。
4.根据权利要求1所述的佐剂在制备鱼类疫苗中的应用，其特征在于，所述佐剂的使用方法为与迟缓型爱德华氏菌灭活疫苗混合后注射使用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210261605.0A CN114558128B (zh) | 2022-03-17 | 2022-03-17 | 裸花紫珠作为鱼类疫苗佐剂及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210261605.0A CN114558128B (zh) | 2022-03-17 | 2022-03-17 | 裸花紫珠作为鱼类疫苗佐剂及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114558128A CN114558128A (zh) | 2022-05-31 |
| CN114558128B true CN114558128B (zh) | 2024-01-30 |
Family
ID=81720654
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210261605.0A Active CN114558128B (zh) | 2022-03-17 | 2022-03-17 | 裸花紫珠作为鱼类疫苗佐剂及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114558128B (zh) |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102430120A (zh) * | 2011-12-01 | 2012-05-02 | 中国水产科学研究院黄海水产研究所 | 增强鱼类疫苗免疫接种效果的佐剂及其应用 |
| CN102988981A (zh) * | 2012-12-13 | 2013-03-27 | 中国水产科学研究院黄海水产研究所 | 一种增强爱德华氏菌疫苗免疫接种效果的佐剂及使用方法 |
| WO2014075570A1 (zh) * | 2012-11-19 | 2014-05-22 | 苏州润新生物科技有限公司 | 紫珠总苷提取物及其制备方法和用途 |
| CN107183407A (zh) * | 2017-05-26 | 2017-09-22 | 中山火炬职业技术学院 | 一种淡水鱼防病害中草药饲料配方及其生产工艺 |
| CN109007439A (zh) * | 2018-07-25 | 2018-12-18 | 广州格雷特生物科技有限公司 | 含裸花紫珠的对虾饲料添加剂及其制备方法和应用 |
| CN111671827A (zh) * | 2020-06-11 | 2020-09-18 | 江西普正制药股份有限公司 | 一种裸花紫珠提取物在制备溃疡性结肠炎药物中的应用 |
| CN113057988A (zh) * | 2021-04-08 | 2021-07-02 | 河北科技师范学院 | 一种防治半滑舌鳎细菌性疾病的复方中草药及其制备方法 |
-
2022
- 2022-03-17 CN CN202210261605.0A patent/CN114558128B/zh active Active
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102430120A (zh) * | 2011-12-01 | 2012-05-02 | 中国水产科学研究院黄海水产研究所 | 增强鱼类疫苗免疫接种效果的佐剂及其应用 |
| WO2014075570A1 (zh) * | 2012-11-19 | 2014-05-22 | 苏州润新生物科技有限公司 | 紫珠总苷提取物及其制备方法和用途 |
| CN102988981A (zh) * | 2012-12-13 | 2013-03-27 | 中国水产科学研究院黄海水产研究所 | 一种增强爱德华氏菌疫苗免疫接种效果的佐剂及使用方法 |
| CN107183407A (zh) * | 2017-05-26 | 2017-09-22 | 中山火炬职业技术学院 | 一种淡水鱼防病害中草药饲料配方及其生产工艺 |
| CN109007439A (zh) * | 2018-07-25 | 2018-12-18 | 广州格雷特生物科技有限公司 | 含裸花紫珠的对虾饲料添加剂及其制备方法和应用 |
| CN111671827A (zh) * | 2020-06-11 | 2020-09-18 | 江西普正制药股份有限公司 | 一种裸花紫珠提取物在制备溃疡性结肠炎药物中的应用 |
| CN113057988A (zh) * | 2021-04-08 | 2021-07-02 | 河北科技师范学院 | 一种防治半滑舌鳎细菌性疾病的复方中草药及其制备方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Callicarpa nudiflora Hook. & Arn.: A comprehensive review of its phytochemistry and pharmacology;Yang等;《Journal of Ethnopharmacol》;第264卷;文章号113123 * |
| 中草药在鱼病防治中的应用;杨娟;《甘肃畜牧兽医》;第48卷(第08期);第72-75页 * |
| 裸花紫珠化学成分研究;林朝展 等;《广州中医药大学学报》;第30卷(第2期);第228-232页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114558128A (zh) | 2022-05-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102430120B (zh) | 增强鱼类疫苗免疫接种效果的佐剂及其应用 | |
| CN101144062B (zh) | 一种干酪乳杆菌菌株及其制品在禽类免疫中的应用 | |
| CN102154176B (zh) | 一种大菱鲆致病菌株及腹水病灭活疫苗 | |
| US11786566B2 (en) | Bifidobacterium animalis and application of compound bacterium preparation prepared from Bifidobacterium animalis in preparing medicine for treating or preventing avian influenza virus infection | |
| CN113583972A (zh) | 一株可降低抗生素耐药性的大肠杆菌噬菌体及其应用 | |
| CN108939062A (zh) | 一种杀鲑气单胞菌疫苗及其应用 | |
| DK181323B1 (en) | Method and composition comprising probiotic bacteria for increasing weight of fish and isolated strains of psychrobacter and pseudomonas | |
| Lee et al. | Immunostimulatory effects of Sarcodia suiae water extracts on Nile tilapia Oreochromis niloticus and its resistance against Streptococcus agalactiae | |
| CN113201505B (zh) | 一株具备跨种裂解能力的溶藻弧菌噬菌体、其噬菌体组合物及其应用 | |
| CN114558128B (zh) | 裸花紫珠作为鱼类疫苗佐剂及其应用 | |
| CN116286671A (zh) | 一株沙门氏菌噬菌体sp8、噬菌体组合物及其应用 | |
| CN100443502C (zh) | 一种防治对虾病毒病的卵黄免疫球蛋白及其制备方法和应用 | |
| CN115624578A (zh) | 一种抑制嗜水气单胞菌的中药组合物及其应用 | |
| CN109010816A (zh) | 一种杀鲑异弧菌疫苗及其应用 | |
| CN111494363B (zh) | 木犀草素在抗水产养殖动物嗜水气单胞菌感染中的应用 | |
| CN103667145A (zh) | 迟缓爱德华氏菌基因工程弱毒株及其应用 | |
| CN109675024B (zh) | 一种草鱼细菌性败血症及赤皮病联合疫苗及其制备方法 | |
| CN103272240B (zh) | 一种鸡肾型传染性支气管炎特异性转移因子复合热保护剂及其应用 | |
| CN112876546A (zh) | 一种防止水产养殖动物致病的免疫因子的制备方法及使用方法 | |
| CN101705198B (zh) | 迟缓爱德华菌弱毒菌株及应用 | |
| CN105886429A (zh) | 一种无抗生素标记的嗜水气单胞菌减毒菌及应用 | |
| CN110840841B (zh) | 一种大菱鲆油乳化疫苗及其应用 | |
| CN101411873B (zh) | 养殖鲆鱼腹水病二联灭活菌苗及制备方法 | |
| CN109385406A (zh) | 一株副溶血弧菌噬菌体及其在增强水产动物免疫力方面的应用 | |
| CN114533799B (zh) | 裸花紫珠在淡水鱼类抗病毒方面的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |