CN114539289B - 头孢吡肟精氨酸聚合物及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明属于药物化学领域，涉及头孢吡肟精氨酸聚合物及其制备方法和用途。所述头孢吡肟精氨酸聚合物结构式如下，以头孢吡肟精氨酸聚合物为标准品，用HPLC法测定注射用盐酸头孢吡肟中头孢吡肟精氨酸聚合物的含量，以鉴别注射用盐酸头孢吡肟是否引起溶血，从而确保注射用盐酸头孢吡肟临床用药的安全性。

Description

头孢吡肟精氨酸聚合物及其制备方法和用途
技术领域
本发明属于药物化学领域，更具体而言，涉及一种新化合物头孢吡肟精氨酸聚合物及其制备方法和用途。
背景技术
头孢吡肟属于第四代头孢菌素，对多种革兰阳性和阴性菌，包括肠杆菌属、绿脓杆菌和其它非发酵性杆菌、嗜血杆菌属、葡萄球菌等均有较强的抗菌活性，因其抗菌谱广、抗菌活性强、临床疗效确切、耐受性好，临床用于治疗上述敏感细菌引起的中重度感染，包括下呼吸道感染(肺炎和支气管炎)，单纯性下尿路感染和复杂性尿路感染(包括肾盂肾炎)等，为人类治疗细菌性感染起到重要作用。
目前临床使用的是注射用盐酸头孢吡肟，其为盐酸头孢吡肟和L-精氨酸的无菌混合物，其中L-精氨酸的浓度约为725mg/g。
临床试验过程中，发现注射用盐酸头孢吡肟也会发生一些副作用。根据文献《头孢吡肟的不良反应及合理应用》(海峡药学，2011年第23卷第1期)，注射用盐酸头孢吡肟的国内报告的不良反应发生率为2％-6％，如过敏反应、局部刺激、二重感染，药热、药疹、头晕、头痛、恶心、呕吐、腹泻、便秘、腹部不适等，还会偶发血液系统不良反应，如耿文锦等报道1例6岁男孩因支气管肺炎使用注射用盐酸头孢吡肟滴注治疗，诱发急性免疫性溶血性贫血；吕敬龙等《头孢吡肟致凝血功能异常1例并文献复习》(检验医学与临床，2016年6月第13卷第13期)报道，某28岁女患者因胆囊炎输注注射用盐酸头孢吡肟，出现瘀斑、瘀点及凝血功能异常，结论为注射用盐酸头孢吡肟致凝血功能异常。
血液系统不良反应是注射用盐酸头孢吡肟不良反应中最严重副反应，但目前注射用盐酸头孢吡肟血液系统不良反应的现状、特点、控制方法均无系统性阐述。临床目前无法提前预知使用注射用盐酸头孢吡肟是否会发生血液系统不良反应；如果发生了血液系统不良反应后，需要经过较长时间、多因素排查后，才可能找到发生血液系统不良反应是否与使用的注射用盐酸头孢吡肟有关的依据。因此目前既无法提前预知正在使用的这一支的注射用盐酸头孢吡肟是否会发生血液系统不良反应，也无法快速分析和排查导致血液性副反应的原因，导致注射用盐酸头孢吡肟在临床使用过程中，产生血液系统的严重副反应，危险患者的生命健康。
药品的体外溶血实验，是检查药品是否存在引起体内血液系统不良反应的一种方法，一般来说，药品不产生体外溶血现象的样品比产生体外溶血现象的样品，产生血液系统不良反应的几率低，用药更安全。由于药品的体外溶血实验耗时长、成本高，目前中国药典中，不仅是注射用盐酸头孢吡肟这个产品没有将样品体外溶血实验纳入产品的药品标准，其他药品也未将体外溶血实验纳入药品标准，因此目前除了采用体外溶血实验，尚无其他低成本、快速甄别注射用盐酸头孢吡肟是否会产生体外溶血现象，因而药品潜在的发生血液系统不良反应的威胁处于不可预知的状态。
为解决上述问题，本发明人进行了深入的研究分析，通过分析检测不同厂家、不同批次的注射用盐酸头孢吡肟的样品，发现了某些注射用盐酸头孢吡肟中存在着一种头孢吡肟精氨酸聚合物，并成功分离出该化合物，鉴别了其结构，并发现其会引起溶血，从而建立了注射用盐酸头孢吡肟特征聚合物头孢吡肟精氨酸聚合物含量水平与样品产生体外溶血现象的关联关系，进而建立了一种新的低成本、高效快捷的高效液相方法用于注射用盐酸头孢吡肟检验，从而将容易产生体外溶血现象的注射用盐酸头孢吡肟与不产生体外溶血现象的注射用盐酸头孢吡肟区别开来，这样有利于控制易产生体外溶血现象的样品不流入市场，提升注射用盐酸头孢吡肟用药安全性。
发明内容
因此，本发明的目的在于提供一种新化合物，即头孢吡肟精氨酸聚合物；
本发明的另一目的在于提供上述头孢吡肟精氨酸聚合物的制备方法；
本发明的还一目的在于提供头孢吡肟精氨酸聚合物在鉴别头孢吡肟注射制剂是否引起溶血中的应用，从而确保注射用盐酸头孢吡肟临床用药的安全性。
根据本发明的一个方面，本发明提供的头孢吡肟精氨酸聚合物，其结构式如下：
Figure BDA0003305068860000031
所述头孢吡肟精氨酸聚合物化学式：C39H51N15O12S4
头孢吡肟精氨酸聚合物分子量：1050.17554
头孢吡肟精氨酸聚合物化学名(英文)：
(6R,7R)-7-((Z)-2-(2-(((2-(((Z)-2-(2-((R)-2-amino-5-guanidinopentanamido)thiazol-4-yl)-2-(methoxyimino)acetamido)(carboxy)methyl)-4-carboxy-3,6-dihydro-2H-1,3-thiazin-5-yl)methyl)amino)thiazol-4-yl)-2-(methoxyimino)acetamido)-3-((1-methylpyrrolidin-1-ium-1-yl)methyl)-8-oxo-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylate
头孢吡肟精氨酸聚合物化学名(中文)：
(6R,7R)-7-((Z)-2-(2-(((2-(((Z)-2-(2-((R)-2-氨基-5-胍基戊酰氨基)噻唑-4-基)-2-(甲氧基亚氨基)乙酰氨基)(羧基)甲基)-4-羧基-3,6-二氢-2H-1,3-噻嗪-5-基)甲基)氨基)噻唑-4-基)-2-(甲氧基亚氨基)乙酰氨基)-3-((1-甲基吡咯烷-1-鎓-1-基)甲基)-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]辛-2-烯-2-羧酸盐)
根据本发明的另一方面，本发明的头孢吡肟精氨酸聚合物的制备方法包括：
将注射用盐酸头孢吡肟用水溶解，得到水溶液，对该水溶液进行色谱柱层析分离以制备头孢吡肟精氨酸聚合物，其中，色谱柱为HJ-大曹亲水反相C18色谱柱，洗脱液为乙腈与水的混合液，收集保留时间为18.2±0.5min洗脱馏分，对该馏分洗脱液减压浓缩，冷冻干燥，得到头孢吡肟精氨酸聚合物。
下面更具体地说明本发明的头孢吡肟精氨酸聚合物的制备方法。
在所述头孢吡肟精氨酸聚合物的制备方法中，所述注射用盐酸头孢吡肟，其为盐酸头孢吡肟和L-精氨酸的无菌混合物，例如，其中L-精氨酸的浓度约为725mg/g。注射用盐酸头孢吡肟用水溶解，所加入的注射用盐酸头孢吡肟与加入的水的重量比为1:1～1.5。
在所述头孢吡肟精氨酸聚合物的制备方法中，用于柱层析色谱分离的色谱柱为HJ-大曹亲水反相C18色谱柱，所述HJ-大曹亲水反相C18色谱柱由ODS反相C18填料填充而成，具体地，例如可以如下制备：称取330g ODS反相C18填料(型号：SP-120-50-ODS-RPS，厂家：日本OSAKA SODA Co.LTD.)，加入300ml甲醇，搅拌均匀无气泡后，倒入330g规格的空塑料柱中，压实填料。
在所述头孢吡肟精氨酸聚合物的制备方法中，洗脱液为乙腈和水的混合液，例如乙腈和水的体积比例为10:0.8～1.5的混合液。
在所述头孢吡肟精氨酸聚合物的制备方法中，收集保留时间为18.2±0.5min洗脱馏分，且合并纯度大于70％的该馏分的洗脱液，这样得到的洗脱液而后减压浓缩，得到浓缩液。根据需要，对该浓缩液，以相同的柱层析条件，重复一次或多次柱层析，直至收集得到纯度为90％以上、95％以上或98％以上的该馏分的洗脱液，经减压浓缩、冷冻干燥，得到本发明的头孢吡肟精氨酸聚合物。
在所述头孢吡肟精氨酸聚合物的制备方法中，进行减压浓缩的温度为20℃～40℃，且减压浓缩后溶液体积为未减压浓缩溶液体积的10％～20％。
在所述头孢吡肟精氨酸聚合物的制备方法中，冷冻干燥条件为在-30℃～-80℃，或者-60℃～-80℃下进行真空干燥。
根据本发明的又一方面，所述头孢吡肟精氨酸聚合物在体外溶血实验中存在溶血现象。
根据本发明的还一方面，本发明提供头孢吡肟精氨酸聚合物在鉴别注射用盐酸头孢吡肟是否引起溶血中的应用，从而确保注射用盐酸头孢吡肟临床用药的安全性，其中，以头孢吡肟精氨酸聚合物为标准品，用HPLC法测定注射用盐酸头孢吡肟中头孢吡肟精氨酸聚合物的含量，当注射用盐酸头孢吡肟中头孢吡肟精氨酸聚合物的含量为0.080wt％以下时，该注射用盐酸头孢吡肟不会引起溶血，所述HPLC法如下：
1.色谱条件
色谱柱：Itertsil ODS-3,4.6mm×250mm，5μm或等效的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；
缓冲液：0.68g/L磷酸二氢钾溶液(用2％氢氧化钾溶液或2％磷酸溶液调pH＝5.0)
流动相A：缓冲液/乙腈(体积比90：10)
流动相B：流动相A/乙腈(体积比50：50)
检测波长：254nm；
流速：1.0ml/min；
进样器温度：5℃；
柱温：30℃；
进样量：10μl。
梯度洗脱程序：
Figure BDA0003305068860000051
2.供试品、对照品制备
2.1注射用盐酸头孢吡肟供试品溶液的制备
精密称取注射用盐酸头孢吡肟适量，加流动相A溶解并稀释制成每lml中含头孢吡肟1.4mg的溶液，再从中精密量取1ml，置100ml量瓶中，用流动相A稀释至刻度，摇匀，作为供试品。
2.2头孢吡肟精氨酸聚合物对照溶液的制备：
取头孢吡肟精氨酸聚合物2.0mg，用流动相A稀释至100ml，作为定位对照溶液。
3.测定和计算
取注射用盐酸头孢吡肟供试品溶液、头孢吡肟精氨酸聚合物对照溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。如供试品溶液出现头孢吡肟精氨酸聚合物峰，按自身对照法，计算头孢吡肟精氨酸聚合物含量。
计算
按照以下公式计算
Figure BDA0003305068860000061
AT：供试品色谱图中特征头孢吡肟精氨酸聚合物的峰面积；
AS：头孢吡肟自身对照色谱图峰面积。
有益效果
本发明优点在于：
(1)本发明分离并得到了杂质化合物头孢吡肟精氨酸聚合物，其可以作为注射用盐酸头孢吡肟检验的标准对照品，检测注射用盐酸头孢吡肟中头孢吡肟精氨酸聚合物杂质的含量；同时，本发明发现所述头孢吡肟精氨酸聚合物在体外溶血实验中存在溶血现象。
(2)本发明建立低成本、高效快捷的注射用盐酸头孢吡肟中头孢吡肟精氨酸聚合物杂质的检测方法，替代高成本、耗时长的体外溶血实验，方便快速的甄别出会发生体外溶血的注射用盐酸头孢吡肟，有利于提高注射用盐酸头孢吡肟的用药安全性。
附图说明
图1为制备实施例1制备的头孢吡肟精氨酸聚合物的高效液相色谱图；
图2为制备实施例1制备的头孢吡肟精氨酸聚合物的核磁共振碳谱图；
图3为制备实施例1制备的头孢吡肟精氨酸聚合物的核磁共振氢谱图；
图4为制备实施例1制备的头孢吡肟精氨酸聚合物的质谱图。
具体实施方式
下面通过实施例更具体地说明本发明，但本发明的保护范围不局限于如下实施例中。
一、头孢吡肟精氨酸聚合物的制备
制备实施例1
将注射用盐酸头孢吡肟(盐酸头孢吡肟和L-精氨酸的无菌混合物，其中L-精氨酸的浓度约为725mg/g)100g，用100g的水溶解，待溶清后，得到水溶液；将该水溶液加至制备色谱柱上，进行柱层析分离以制备头孢吡肟精氨酸聚合物，其中，色谱柱为HJ-大曹亲水反相C18色谱柱，乙腈/水(体积比90：10)混合液为洗脱液洗脱，通过调节色谱柱出水阀门，控制洗脱液流速为5-6ml/分钟，用玻璃瓶收集洗脱液，每瓶收集洗脱液20ml左右后，换新的玻璃瓶收集，收集保留时间为18.2±0.5min洗脱馏分，合并纯度大于70％的该馏分的洗脱液，这样得到的洗脱液而后减压浓缩，浓缩温度控制在20-40度之间，将洗脱液浓缩至原液10-15％左右体积，停止浓缩。
对上述得到的浓缩液，以相同的色谱柱层析条件和工艺，重复柱层析，收集合并纯度为90％以上的该馏分的洗脱液，在20℃～40℃下减压浓缩，将洗脱液浓缩至原液15-20％左右体积，而后在-30℃～-80℃下冷冻干燥72-80小时，得到淡黄色头孢吡肟精氨酸聚合物固体36mg，纯度88.1％。
图1为本制备实施例制备的头孢吡肟精氨酸聚合物的高效液相色谱图，可以看到纯度为88.1％；图2为其核磁共振碳谱图；图3为其核磁共振氢谱图；
图4为其质谱图，其中质谱图解析如下：
Figure BDA0003305068860000081
制备实施例2
将注射用盐酸头孢吡肟(盐酸头孢吡肟和L-精氨酸的无菌混合物，其中L-精氨酸的浓度约为725mg/g)100g，用120g的水溶解，待溶清后，得到水溶液；将该水溶液加至制备色谱柱上，进行柱层析分离以制备头孢吡肟精氨酸聚合物，其中，色谱柱为HJ-大曹亲水反相C18色谱柱，乙腈/水(体积比100：15)混合液为洗脱液洗脱，通过调节色谱柱出水阀门，控制洗脱液流速为5-6ml/分钟，用玻璃瓶收集洗脱液，每瓶收集洗脱液20ml左右后，换新的玻璃瓶收集，收集保留时间为18.2±0.5min洗脱馏分，合并纯度大于70％的该馏分的洗脱液，这样得到的洗脱液而后减压浓缩，浓缩温度控制在30℃～40℃之间，将洗脱液浓缩至原液10-15％左右体积，停止浓缩。
对上述得到的浓缩液，以相同的色谱柱层析条件和工艺，重复柱层析，收集合并纯度为90％以上的该馏分的洗脱液，在30℃～40℃下减压浓缩，将洗脱液浓缩至原液15-20％左右体积，而后在-30℃～-80℃下冷冻干燥72-80小时，得到淡黄色头孢吡肟精氨酸聚合物固体33mg，纯度89.2％。
制备实施例3
将注射用盐酸头孢吡肟(盐酸头孢吡肟和L-精氨酸的无菌混合物，其中L-精氨酸的浓度约为725mg/g)100g，用150g的水溶解，待溶清后，得到水溶液；将该水溶液加至制备色谱柱上，进行柱层析分离以制备头孢吡肟精氨酸聚合物，其中，色谱柱为HJ-大曹亲水反相C18色谱柱，乙腈/水(体积比100：8)混合液为洗脱液洗脱，通过调节色谱柱出水阀门，控制洗脱液流速为5-6ml/分钟，用玻璃瓶收集洗脱液，每瓶收集洗脱液20ml左右后，换新的玻璃瓶收集，收集保留时间为18.2±0.5min洗脱馏分，合并纯度大于70％的该馏分的洗脱液，这样得到的洗脱液而后减压浓缩，浓缩温度控制在25℃～35℃之间，将洗脱液浓缩至原液10-15％左右体积，停止浓缩。
对上述得到的浓缩液，以相同的色谱柱层析条件和工艺，重复柱层析，收集合并纯度为90％以上的该馏分的洗脱液，在25℃～35℃下减压浓缩，将洗脱液浓缩至原液15-20％左右体积，而后在-30℃～-80℃下冷冻干燥72-80小时，得到淡黄色头孢吡肟精氨酸聚合物固体35mg，纯度88.6％。
二、注射用盐酸头孢吡肟中头孢吡肟精氨酸聚合物含量的测定
以上述制备实施例1制备的头孢吡肟精氨酸聚合物为标准品，用HPLC法测定注射用盐酸头孢吡肟中头孢吡肟精氨酸聚合物的含量。
2.1测试样品制备：
分别用市购注射用盐酸头孢吡肟原料粉末样品(批号：20201001、20201002、20201003、20201004、20201005)和参比样品(Bristol-Myers Squibb S.t.l,(批号：8K05681)按以下方法进行测试样品制备。
供试品的制备：
精密称取注射用盐酸头孢吡肟适量，加流动相A溶解并稀释制成每lml中含头孢吡肟1.4mg的溶液，再从中精密量取1ml，置100ml量瓶中，用流动相A稀释至刻度，摇匀，作为供试品。
定位特征头孢吡肟精氨酸聚合物对照溶液的制备：
取头孢吡肟精氨酸聚合物2.0mg,用流动相A稀释至100ml，作为定位对照溶液。
测定法：取定位特征头孢吡肟精氨酸聚合物对照溶液、上述制备的供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪(DIONEX Ultimate 3000)，色谱条件如上所述，进行色谱，记录色谱图。如供试品溶液出现特征头孢吡肟精氨酸聚合物峰，按自身对照法，计算头孢吡肟精氨酸聚合物含量。
计算：
按照以下公式计算
Figure BDA0003305068860000101
AT：供试品色谱图中特征头孢吡肟精氨酸聚合物的峰面积；
AS：头孢吡肟自身对照色谱图峰面积。
2.2结果：头孢吡肟精氨酸聚合物(保留时间18.2±0.5min)，结果如下：
供试品样品 头孢吡肟精氨酸聚合物含量％
样品1(批号20201001) 0.928
样品2(批号20201002) 0.785
样品3(批号(20201003) 0.530
样品4(批号20201004) 0.200
样品5(批号20201005) 0.080
参比样品(批号8K05681) 0.053
三、体外溶血实验
对上述制备实施例制备的头孢吡肟精氨酸聚合物、样品1-5、参比样品进行体外溶血实验。
加药浓度设计
注射用盐酸头孢吡肟临床静脉注射给药浓度分别为20-40mg/mL，肌肉注
射给药浓度为250mg/mL。2017年《中国药典分析检测技术指南》第八章生物检查法第十二节溶血与凝聚检查法，体外溶血与凝聚检查所规定采用的供试品浓度一般不低于临床使用浓度，血管内给药通常为临床使用浓度，非血管内给药通常为临床使用浓度的1/3。由于本品临床使用注射用水配制高浓度药液，或采用0.9％氯化钠注射液配制低浓度药液，故本试验加药浓度采用临床肌肉注射给药浓度的1/3，即83.3mg/mL(采用注射用水配制)。
3.1实验方法
3.1.1红细胞悬液的配制
新西兰兔采用耳中动脉采集血液8～12mL，放入含玻璃珠的三角烧瓶中同一方向匀速摇约10min，除去纤维蛋白原，使成脱纤血液。取脱纤血液加10倍量的等渗溶液(0.9％氯化钠注射液)、混匀，1500r/min离心10min，除去上清液，沉淀的红细胞再每管加约10倍量的0.9％氯化钠注射液摇匀，按上述方法洗涤2～4次，至上清液不显红色为止。取所得红细胞用0.9％氯化钠注射液配成2％的混悬液。
3.1.2加药方法
取洁净试管9支，进行编号，1-5号管为样品1-5的注射用盐酸头孢吡肟受试物(加药浓度为83.3mg/mL)液体管，6号管为头孢吡肟精氨酸聚合物(加药浓度为0.08mg/mL)液体管，7号管为参比样品的注射用盐酸头孢吡肟(加药浓度为83.3mg/mL)液体管，8号管为阴性对照管，9号管为阳性对照管。使用移液器按下表所示依次加入2％红细胞悬液、0.9％氯化钠注射液或灭菌注射用水和供试品溶液，混匀。
溶血试验加样表
Figure BDA0003305068860000121
3.1.3结果观察
给药后将试管置于37℃±0.5℃的恒温培养箱中，于15min、30min、45min、1h、2h、3h观察溶血情况，若试管中的溶液呈澄明红色，管底无细胞残留或有少量红细胞残留，表明有溶血发生；如红细胞全部下沉，上清液体无色澄明，表明无溶血发生。若溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀，振摇后不分散，表明有红细胞凝聚发生。
如有红细胞凝聚的现象，按下法进一步判定真凝聚还是假凝聚。若凝聚物在试管振荡后又能均匀分散；或将聚集物放在载波片上，在盖玻片边缘滴加2滴0.9％氯化钠注射液，或将试管中液体摇匀后，用移液器取20μL液体涂抹于载玻片上，置显微镜下观察。如凝聚红细胞分散为假凝聚，如凝聚物不被摇散或在玻片上多个红细胞连在一起不分散，则表明为真凝聚。
3.1.4结果判断：
当阴性对照管无溶血和凝聚发生，阳性对照管有溶血发生时，若受试物管中的溶液在3h内不发生溶血和凝聚，则说明受试物无溶血现象；若受试物管中的溶液在3h内发生溶血和(或)凝聚，则说明受试物有溶血现象。
3.2实验结果：
样品批号 溶血结果
样品1(批号20201001) 有溶血现象
样品2(批号20201002) 有溶血现象
样品3(批号20201003) 有溶血现象
样品4(批号20201004) 有溶血现象
样品5(批号20201005) 未见溶血现象，不引起红细胞凝聚
头孢批肟精氨酸聚合物 有溶血现象
参比样品(批号8K05681) 未见溶血现象，不引起红细胞凝聚
3.3结论：
体外溶血试验表明，注射用盐酸头孢吡肟中含有头孢吡肟精氨酸聚合物含量0.200％以上，出现溶血反应。如果头孢吡肟精氨酸聚合物含量不大于0.080％的样品，没有溶血反应。6号管表明药液中头孢吡肟精氨酸聚合物浓度为0.08mg/mL，出现溶血反应，即注射用盐酸头孢吡肟中含有头孢吡肟精氨酸聚合物0.096wt％。因此，在产品质量标准中，建议注射用盐酸头孢吡肟中头孢吡肟精氨酸聚合物含量限度不要超过0.080wt％。

Claims (10)

1.头孢吡肟精氨酸聚合物，其结构式如下：
Figure FDA0004103336220000011
2.一种权利要求1所述的头孢吡肟精氨酸聚合物的制备方法，该制备方法包括：将注射用盐酸头孢吡肟用水溶解，得到水溶液，对该水溶液进行色谱柱层析分离以制备头孢吡肟精氨酸聚合物，其中，色谱柱为HJ-大曹亲水反相C18色谱柱，洗脱液为乙腈与水的混合液，收集保留时间为18.2±0.5min洗脱馏分，对该馏分洗脱液减压浓缩，冷冻干燥，得到头孢吡肟精氨酸聚合物。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征是，所述注射用盐酸头孢吡肟为盐酸头孢吡肟和L-精氨酸的无菌混合物。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征是，所述HJ-大曹亲水反相C18色谱柱由ODS反相C18填料填充而成。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征是，所述HJ-大曹亲水反相C18色谱柱按如下制备：取ODS反相C18填料加入甲醇，搅拌均匀无气泡后，倒入所需规格的空塑料柱中，压实填料。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征是，所述洗脱液为乙腈和水的体积比例为10:0.8～1.5的混合液。
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征是，所述制备方法包括：收集保留时间为18.2±0.5min洗脱馏分，且合并纯度大于70％的该馏分的洗脱液，这样得到的洗脱液而后减压浓缩，得到浓缩液；根据需要，对该浓缩液，以相同的柱层析条件，重复一次或多次柱层析，直至收集得到纯度为90％以上的该馏分的洗脱液，经减压浓缩、冷冻干燥，得到头孢吡肟精氨酸聚合物。
8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征是，所述头孢吡肟精氨酸聚合物采用HPLC法检测，色谱条件如下：
色谱柱：Itertsil ODS-3,4.6mm×250mm，5μm或等效的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；
缓冲液：0.68g/L磷酸二氢钾溶液，用2％氢氧化钾溶液或2％磷酸溶液调pH＝5.0
流动相A：缓冲液/乙腈，体积比90：10
流动相B：流动相A/乙腈，体积比50：50
检测波长：254nm；
流速：1.0ml/min；
进样器温度：5℃；
柱温：30℃；
进样量：10μl。
9.权利要求1所述的头孢吡肟精氨酸聚合物在鉴别注射用盐酸头孢吡肟是否引起溶血中的应用，其中，以头孢吡肟精氨酸聚合物为标准品，用HPLC法测定注射用盐酸头孢吡肟中头孢吡肟精氨酸聚合物的含量，当注射用盐酸头孢吡肟中头孢吡肟精氨酸聚合物的含量为0.080wt％以下时，该注射用盐酸头孢吡肟不会引起溶血。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征是，
所述HPLC法如下：
(1)色谱条件
色谱柱：Itertsil ODS-3,4.6mm×250mm，5μm或等效的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；
缓冲液：0.68g/L磷酸二氢钾溶液，用2％氢氧化钾溶液或2％磷酸溶液调pH＝5.0
流动相A：缓冲液/乙腈，体积比90：10
流动相B：流动相A/乙腈，体积比50：50
检测波长：254nm；
流速：1.0ml/min；
进样器温度：5℃；
柱温：30℃；
进样量：10μl；
梯度洗脱程序：
Figure FDA0004103336220000031
(2)供试品、对照品制备
注射用盐酸头孢吡肟供试品溶液的制备：
精密称取注射用盐酸头孢吡肟适量，加流动相A溶解并稀释制成每lml中含头孢吡肟1.4mg的溶液，再从中精密量取1ml，置100ml量瓶中，用流动相A稀释至刻度，摇匀，作为供试品；
头孢吡肟精氨酸聚合物对照溶液的制备：
取头孢吡肟精氨酸聚合物2.0mg，用流动相A稀释至100ml，作为定位对照溶液；
(3)测定和计算
取注射用盐酸头孢吡肟供试品溶液、头孢吡肟精氨酸聚合物对照溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；如供试品溶液出现头孢吡肟精氨酸聚合物峰，按自身对照法，计算头孢吡肟精氨酸聚合物含量：
计算
按照以下公式计算
Figure FDA0004103336220000041
AT：供试品色谱图中特征头孢吡肟精氨酸聚合物的峰面积；
AS：头孢吡肟自身对照色谱图峰面积。
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