CN114487205A - 一种宁夏枸杞的指纹图谱的构建方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种宁夏枸杞的指纹图谱的构建方法,涉及分析检测技术领域。具体包括供试品溶液、对照品溶液的制备,采用HPLC法进行分析测定,完成指纹图谱的构建。本发明的测定方法简单,具有精密度、稳定性和重复性高的特点,经测定,绿原酸、咖啡酸、4‑香豆酸、东莨菪内酯、阿魏酸、芦丁、山奈酚‑3‑O‑芸香糖苷和水仙苷可以作为宁夏枸杞指纹图谱的共有特征峰进行鉴别研究。
Description
技术领域
本发明涉及分析检测技术领域,特别是涉及一种宁夏枸杞的指纹图谱的构建方法。
背景技术
茄科枸杞属植物分布广泛,具有丰富的营养价值和药用开发价值。在众多的枸杞属植物中,基源为宁夏枸杞(Lycium barbarum)的栽培和应用最广,在亚洲有着悠久的药用历史,是一种药食两用植物,并作为功能性食品在全球范围内使用。近年来,以宁夏枸杞为原料的功能性产品在世界范围内越来越流行,被制成果干、果茶、酒、果汁和饮料等产品进行生产和销售。
宁夏枸杞含有多糖、酚类、类胡萝卜素、生物碱、维生素、氨基酸、脂肪酸等成分,具有免疫调节、抗衰老、促进成骨细胞增殖、放射保护、改善肝脑损伤和运动活动受损、神经保护、防治前列腺增生、延迟视网膜病变、抗氧化和酶抑制、抗炎、抗糖尿病、抗癌、抗高血压和心脏保护等作用。枸杞多糖是宁夏枸杞的主要生物活性成分,也是目前研究最为充分的成分,随着对宁夏枸杞研究的深入,非多糖类成分及其生物活性受到了更多的关注。宁夏枸杞非多糖类成分的生物活性包括抗氧化、抗细菌和真菌、抗糖尿病以及抗炎等,提供一种指纹图谱构建方法以实现对宁夏枸杞非多糖类成分,尤其是酚类成分的高效测定显得十分必要。
发明内容
本发明的目的是提供一种宁夏枸杞的指纹图谱的构建方法,以解决上述现有技术存在的问题,实现对宁夏枸杞酚类成分的测定,使测定具有较高的精密度、稳定性和重复性。
为实现上述目的,本发明提供了如下方案:
本发明提供一种宁夏枸杞的指纹图谱的构建方法,包括以下步骤:
供试品溶液的制备:将宁夏枸杞制备成供试品溶液;
对照品溶液的制备:取绿原酸、咖啡酸、4-香豆酸、东莨菪内酯、阿魏酸、芦丁、山奈酚-3-O-芸香糖苷和水仙苷作为对照品,分别制备成对照品溶液;
指纹图谱的构建:采用HPLC法进行分析测定,得到所述宁夏枸杞的指纹图谱。
进一步地,HPLC法分析测定所用色谱柱为Shim-pack GIST AQ-C18(250×4.6mm,5μm)。
进一步地,HPLC法进行分析测定时,流动相:甲醇(A),0.5%甲酸水溶液(B);梯度洗脱;流速:1.0mL/min;进样体积:20μL;柱温:35℃;检测波长:360nm。
进一步地,所述梯度洗脱程序如下:
进一步地,制备所述供试品溶液所用的溶剂为甲醇水溶液。
进一步地,制备所述对照品溶液所用的溶剂为甲醇。
本发明公开了以下技术效果:
本发明的测定方法简单,具有精密度、稳定性和重复性高的特点,经测定,绿原酸、咖啡酸、4-香豆酸、东莨菪内酯、阿魏酸、芦丁、山奈酚-3-O-芸香糖苷和水仙苷,共8个成分可以作为宁夏枸杞指纹图谱的共有特征峰进行鉴别研究。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例1的混标对照品图谱;
图2为本发明实施例1宁夏枸杞果实酚类成分对照指纹图谱;
图3为本发明实施例1中15批宁夏枸杞果实酚类成分指纹图谱。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式,该详细说明不应认为是对本发明的限制,而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式,并非用于限制本发明。另外,对于本发明中的数值范围,应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明,否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料,但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入,用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时,以本说明书的内容为准。
在不背离本发明的范围或精神的情况下,可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化,这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。
关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等,均为开放性的用语,即意指包含但不限于。
实施例1
1.仪器与试药
高效液相色谱仪:岛津LC-20AT(SIL-20A,SPD-M20A,CTO-20A);色谱柱:Shim-packGIST AQ-C18色谱柱(4.6×250mm,5μm);分析电子天平:上海良平仪器仪表有限公司,FA1004;超声波清洗器:上海科导超声仪器有限公司,SK7210HP;
乙腈、甲醇均为Fisher公司色谱纯试剂;甲酸(批号:F8124-0500,ROE SCIENTIFICINC)为色谱纯;水为娃哈哈纯净水;甲醇(批号:C12133641,MACKLIN)为分析纯;
绿原酸(纯度:96.1%,批号:110753-202018,中国食品药品检定研究院)、咖啡酸(纯度:99.7%,批号:110885-201703,中国食品药品检定研究院)、4-香豆酸(纯度:99.7%,批号:112037-202102,中国食品药品检定研究院)、东莨菪内酯(纯度:99.7%,批号:110768-202105,中国食品药品检定研究院)、阿魏酸(纯度:99.4%,批号:110773-201915,中国食品药品检定研究院)、芦丁(纯度:92.2%,批号:100080-202012,中国食品药品检定研究院)、山奈酚-3-O-芸香糖苷(纯度:94.0%,批号:112007-202103,中国食品药品检定研究院)和水仙苷(纯度:98.0%,批号:wkq21020307,深圳博泰尔生物技术有限公司);
宁夏枸杞15批(产地分别为:青海5批、甘肃5批、宁夏5批)。
2.指纹图谱的构建
(1)色谱条件
色谱柱:Shim-pack GIST AQ-C18(250×4.6mm,5μm);
流动相:甲醇(A),0.5%甲酸水溶液(B);梯度洗脱;流速:1.0mL/min;进样体积:20μL;柱温:35℃;检测波长:360nm。
梯度洗脱程序见表1。
表1
(2)对照品溶液的制备
分别取绿原酸、咖啡酸、4-香豆酸、东莨菪内酯、阿魏酸、芦丁、山奈酚-3-O-芸香糖苷和水仙苷对照品适量,精密称定,加甲醇配制成浓度为499μg/mL、518μg/mL、603μg/mL、542μg/mL、508μg/mL、538μg/mL、486μg/mL、473μg/mL的对照品溶液。
(3)供试品溶液的制备
取枸杞子粗粉1.5g,精密称定,精密加入80%甲醇水溶液10mL,称定重量,超声(53KHz,350W)处理30min,放至室温,再称定重量,用80%甲醇水溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,取滤液,0.22μm微孔滤膜滤过,即得。
(4)方法学考察
a.精密度
取宁夏枸杞供试品溶液适量,连续进样6次。计算得到绿原酸、咖啡酸、4-香豆酸、东莨菪内酯、阿魏酸、芦丁、山奈酚-3-O-芸香糖苷和水仙苷峰面积RSD值分别为0.28、0.15、2.38、0.86、1.95、0.07、0.71、1.28,表明仪器精密度良好。
b.稳定性
取宁夏枸杞供试品溶液,分别在0、2、4、6、8、10、12、24h进样。计算得到绿原酸、咖啡酸、4-香豆酸、东莨菪内酯、阿魏酸、芦丁、山奈酚-3-O-芸香糖苷和水仙苷峰面积RSD值分别为0.70、0.22、2.28、0.86、2.48、0.49、0.84、1.29,表明供试品溶液在24h内具有良好的稳定性。
c.重复性
精密称取同一批宁夏枸杞供试品粉末6份,制备供试品溶液,进样。计算得到绿原酸、咖啡酸、4-香豆酸、东莨菪内酯、阿魏酸、芦丁、山奈酚-3-O-芸香糖苷和水仙苷峰面积RSD值分别为0.95、1.80、1.10、2.10、2.96、1.13、2.81、2.14,表明该方法具有良好的重复性。
(5)样品测定
分别取宁夏枸杞样品,分别按照供试品溶液项下的方法制备,按照样品测定方法测定,记录色谱图,采用相似度软件计算相似度,结果见表2。
表2 15批宁夏枸杞果实酚类成分指纹图谱相似度计算结果
测定结果显示,15批宁夏枸杞果实酚类成分指纹图谱相似度均大于0.95。
其中,混标对照品图谱见图1;宁夏枸杞果实酚类成分对照指纹图谱见图2;15批宁夏枸杞果实酚类成分指纹图谱见图3(S1-S15:样品,S16:对照指纹图谱)。
图1-3谱图中:1.绿原酸,2.咖啡酸,3.4-香豆酸,4.东莨菪内酯,5.阿魏酸,6.芦丁,7.山奈酚-3-O-芸香糖苷,8.水仙苷。
经15批样品测定,绿原酸、咖啡酸、4-香豆酸、东莨菪内酯、阿魏酸、芦丁、山奈酚-3-O-芸香糖苷和水仙苷,共8个成分可以作为宁夏枸杞指纹图谱的共有特征峰进行鉴别研究。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述,并非对本发明的范围进行限定,在不脱离本发明设计精神的前提下,本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进,均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
Claims (6)
1.一种宁夏枸杞的指纹图谱的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:
供试品溶液的制备:将宁夏枸杞制备成供试品溶液;
对照品溶液的制备:取绿原酸、咖啡酸、4-香豆酸、东莨菪内酯、阿魏酸、芦丁、山奈酚-3-O-芸香糖苷和水仙苷作为对照品,分别制备成对照品溶液;
指纹图谱的构建:采用HPLC法进行分析测定,得到所述宁夏枸杞的指纹图谱。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,HPLC法分析测定所用色谱柱为Shim-packGIST AQ-C18,250×4.6mm,5μm。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,HPLC法进行分析测定时的色谱条件为:流动相为甲醇-0.5%甲酸水溶液;梯度洗脱;流速为1.0mL/min;进样体积为20μL;柱温为35℃;检测波长为360nm。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,制备所述供试品溶液所用的溶剂为甲醇水溶液。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,制备所述对照品溶液所用的溶剂为甲醇。
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