CN114397453A - 新型冠状病毒突变株的检测试剂盒及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种新型冠状病毒突变株的检测试剂盒及其应用。利用获得的新型冠状病毒IMCAS‑123和IMCAS‑364抗体开展配对检测，针对病毒表面抗原进行高灵敏、抗突变、具备高传播性Omicron突变株或强致病力Delta突变株的快速检测。本发明首次利用IMCAS‑123和IMCAS‑364抗体对RBD蛋白表位不具有竞争性进行Omicron或Delta变异株的产品开发，具有灵敏度高、特异性好，检测快速的优点。

Description

新型冠状病毒突变株的检测试剂盒及其应用
技术领域
本申请属于生物医药技术领域，具体涉及一种检测新型冠状病毒的试剂盒及其应用。
背景技术
新冠病毒进入人群传播后产生的多种突变让全球建立起来的疫苗免疫防线岌岌可危，自Omicron出现后变异株很可能具有感染小鼠等啮齿类动物的能力形成跨种传播成为学界关注的焦点，我们必须在Omicron致病力降低的表象中，警惕由于非人宿主免疫压力带来的新型突变，导致产生对人类既能免疫逃逸又致病力加强的大流行毒株。面对未来新冠突变压力，广谱治疗手段与抗突变的检测手段亟待同时开展。
抗体研发在应对新冠暴发后治疗与预防手段的紧急研发中起到了开路先锋作用，据统计目前已有4213个抗体序列被发表公开，然而在一片繁荣景象的背后，值得注意的是2988个抗体利用了康复病人外周血细胞测序产出的抗体，仅有几个被证明是新冠突变株具有广谱结合效果，Omicron暴发后，全部8个上市抗体仅存S309尚可以继续抵御，通过全世界多位学者根据抗体结合位置、结合特性、抗突变能力进行的归类中我们不难发现，S309所对应的潜在保守靶位至今鲜有抗体报道。这是由于广谱抗体的特性决定的，逻辑上讲广谱抗体的产生，需要有两个必要条件，即“保守位点的存在”与“抗体的有效调动”，从进化选择来说保守表位只有被病毒巧妙的隐藏不引起宿主针对性的免疫反应才有利于病毒长期的存在。针对保守位点免疫原性低的特点，科学家进一步通过不同抗原的免疫聚焦、续贯免疫的策略提升“抗体的有效调动”继而获得广谱抗体，例如S309抗体是从一位感染10年的SARS康复患者中体外利用SARS2靶蛋白获得的，但是这类志愿者不但存在极少，而且在Sarbecoviruses (SARS-CoV1, SARS-CoV2)层面实现广谱一定对SARS-CoV2新生突变产生的有效抵御尚缺相关性定论。更棘手的是，SARS2暴发事件不长，对于同一人先后感染不同受关注变体VOC（Variant of Concern）病毒株的机率与交替免疫不同VOC疫苗的可能性极小，这驱使我们必须另辟蹊径挖掘这种弱免疫原性的广谱抗体。
体外操作的抗体展示库技术的独特优势可在应对新冠突变株广谱抗体的难题上发挥重要作用，本质上来说，展示库是基于体外从抗原与抗体的结合的单一角度抽象体内发生的复杂免疫反应，展示库技术与单细胞分选技术相比可以在体外快速实现不同抗原的交替差减筛选实现广谱抗体富集，其次抗体展示库技术可以实现不同人中VH/VL的全新组合从数量级水平提升了新抗体可获得性。
目前，市场上针对新型冠状病毒变异株分型的产品主要为分子诊断产品，对奥密克戎（Omicron）突变株检测的方法主要有《CN 113943838 A 2019基于多重荧光定量ARMS-PCR技术的新冠病毒奥密克戎突变序列检测技术及其应用》和《CN 113981152 A检测SARS-CoV-2变异株的组合物、试剂盒、方法及其用途》，仅针对Omicron。免疫学方法尚无用于新冠变异株分型的产品。
因此，亟需解决：1.快速检测Delta这类致病力强或Omicron这类传播力高的突变株，2.对新发突变具备有效包容性，需要多个广谱抗体组合实现，3.对不同抗原灵敏度与特异性，可拓展到非呼吸道以外如快递表面、冷藏食品等多种适应场景。
发明内容
本发明利用全新抗体增扩引物构建康复病人抗体噬菌体展示库和完备的多种突变抗原表达形式，通过体外独特设计的筛选策略，获得多株结合在RBD不同表位对VOC实现广谱中和的全人源抗体。对其中IMCAS-123、IMCAS-364针对病毒表面抗原进行高灵敏、抗突变、具备高致病Delta突变株或高传播Omicron突变株的快速检测。本发明首次基于免疫层析平台进行免疫学进行Omicron突变株和Delta突变株检测的产品开发，具有灵敏度高、特异性好，检测快速的优点。
具体的，本申请提供了一种检测新型冠状病毒的抗体，其为：
IMCAS-123：HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:25所示，HCDR2的氨基酸序列如SEQID NO: 26所示， HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:27所示；所述LCDR1的氨基酸序列如SEQID NO:29所示，LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO: 30所示，且LCDR3的氨基酸序列如SEQ IDNO: 31所示；或者，
IMCAS-364：所述HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO: 7所示，核苷酸序列如SEQ IDNO:8所示，所述HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO: 9所示，核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示，所述HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO: 11所示，核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示；所述LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO: 16所示，核苷酸序列如SEQ ID NO:17所示，所述LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO: 18所示，核苷酸序列如SEQ ID NO:19所示，所述LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO: 20所示，核苷酸序列如SEQ ID NO:21所示。
优选的，IMCAS-123：重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：28所示，且轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：32所示；或者，
IMCAS-364：重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：13所示，且轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：22 所示。
所述的抗体或其抗原结合片段，其为全长抗体、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、双特异性抗体、多特异性抗体、重链抗体、单域抗体的形式。
所述的抗体或其抗原结合片段，特异性结合新型冠状病毒抗原S-RBD蛋白，所述S-RBD选自SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列，相应的核苷酸序列选自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5。
优选的，检测Delta突变株或Omicron突变株。
本发明还提供了一种新型冠状病毒检测试剂盒，包括上述抗体或抗原结合片段、核酸；进一步的，还包括裂解液和采样拭子。所述裂解液为含有0.05%-2% NaCl、20mM-200mMTris缓冲液、0.05%-2%的Triton X-100或Tween20的缓冲液。
所述试剂盒优选为免疫层析试剂盒，还可为化学发光试剂盒、酶联免疫试剂盒等。
其中，所述免疫层析试剂盒包括检测卡，检测卡包括：底板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；所述的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸依次互相交错搭接后粘贴在所述的底板上；结合垫上喷涂有IMCAS-364抗体标记的示踪标志物划线位置从吸水纸往加样孔方向依次为：C线、T线，其中C线固定鼠抗人IgG抗体，T线固定的抗体为IMCAS-123。优选的，底板为PVC板；优选的，示踪标志物可以为纳米颗粒，如胶体金、乳胶微球、或荧光微球。
进一步的，IMCAS-123抗体的浓度为0.5-2mg/mL，优选的，为1-1.5mg/mL ；IMCAS-364的浓度为2μg-10μg /mL，优选的，为4-6μg /mL。
进一步的，免疫层析试剂盒的具体制备方法如下：(1)结合垫浸泡在10mM Tris缓冲液(pH8.0)中，缓冲液含1％BSA、0.9％NaCl、0.5％Triton X-100，室温浸泡1h，60℃烘干1小时，将浓度2μg-10μg /mL 的IMCA-S364抗体标记的示踪标志物均匀喷在结合垫上，置于干燥箱中，优选的，干燥箱为鼓风干燥箱，37℃烘干过夜；(2)T线划线液配制：用划膜缓冲液将IMCAS-123抗体稀释至0.5-2mg/mL，所述划膜缓冲液为0.01mol/L PBS溶液，pH7.0～7.4；（3）C线划线液配制：用划膜缓冲液将鼠抗人IgG稀释至1.5～2.0mg/mL，所述划膜缓冲液为0.01mol/L PBS溶液，pH7.0～7.4；(4)采用划膜仪，将C线抗体、T线抗体分别包被在固定于底板上的硝酸纤维素膜上，划液量：1μL/cm；划膜速度：50mm/s；(5)将划好的硝酸纤维素膜置于35-45℃环境烘干2-12h；(6)组装、成品。
所述免疫层析试剂盒还包括外壳，切割的试纸条组装在由塑料制成的上壳和塑料制成的下壳扣合而成的塑料外壳中，塑料上壳上设置有加样孔和观察窗，加样孔对应于样品垫，观察窗对应于检测线T线和质控线C线。在此需要说明的是，上述塑料材质的壳体只是示例性公开的一个实施例，不局限于塑料材质。
本发明的抗体组合还可以用于本领域已知的各种试剂盒中，用于新型冠状病毒Delta突变株或Omicron突变株的检测。
本发明适用的样本包括人上呼吸道样本如鼻浅、鼻咽、口咽、唾液，及人非呼吸道样本，如快递表面、冷藏食品表面等。
与现有技术相比，本申请具有如下有益效果：
本发明提供的抗体、试剂盒可以快速检测Delta这类致病力强或Omicron这类传播力高的突变株。
检测范围可拓展到非呼吸道以外如快递表面、冷藏食品等多种适应场景。
本发明为首次利用IMCAS-364抗体 、IMCAS-123抗体进行Omicron突变株或Delta突变株的产品开发，具有灵敏度高、特异性好，检测快速的优点。
附图说明
图1为本申请具体实施例示例性公开的免疫层析试剂盒的检测卡结构示意图；
图2A-图2C为实施例2提供的免疫层析试剂盒对新型冠状病毒不同抗原分型检测灵敏度评估，其中，2A为对应表1中的WT-RBD的试剂盒，2B为对应表1中Delta-RBD的试剂盒，2C为对应表1中Omicron-RBD的试剂盒；
图3A-图3C为以市售抗体制备出免疫层析试剂盒对新型冠状病毒不同抗原分型检测灵敏度评估，其中，3A为对应表2中的WT-RBD的试剂盒，3B为对应表2中Delta-RBD的试剂盒，3C中为对应表2中Omicron-RBD的试剂盒。
具体实施方式
实施例1：抗体制备
一、康复病人外周血淋巴细胞RNA提取与人源单链抗体噬菌体展示文库的建立
在12名感染新型冠状病毒且痊愈出院的人员知情同意下，各采集3-10mL 的血液，分离PBMCs，转入1.5mlEP管中。加入700mltrizol并放置5分钟，在上述EP管中，加入0.14ml氯仿，盖上EP管盖子，剧烈震荡15秒，室温静置3分钟，12000g（4℃）离心15分钟。取上层水相置于新EP管中，加入 0.5ml异丙醇，在室温下静置10分钟，12000g（4℃）离心10分钟。弃上清，加入1ml 75% 乙醇进行洗涤，涡旋混合，7500g（4℃）离心5分钟，弃上清。让沉淀的RNA在室温在自然干燥。用Rnase-free water 溶解RNA沉淀。
通过HiScript-TS 5'/3' RACE Kit (Vazyme) 逆转录试剂盒，按说明书分别增扩VH、VL的DNA模板后，用2 × Taq Master Mix酶 (Vazyme)进行PCR，扩增抗体可变区序列，反应条件如下：95℃，2min；95℃，15s，58℃，15s，72℃，30s，35个循环，72℃，7min。1.2％的琼脂糖凝胶电泳，分离PCR产物，将400-500bp的条带切胶回收。等摩尔比将12个人VH混合一起，同法混合VL片段后，将混合后VH与VL进行等摩尔比混合后用PCR搭桥引物连接抗体基因的重链轻链可变区，使用2 × Taq Master Mix酶 (Vazyme)进行PCR，反应条件如下：95℃，2min；95℃，15s，67℃，15s，72℃，30s，30个循环，72℃，7min增扩出完整的单链抗体scfv(VH-VL)，1.2％的琼脂糖凝胶电泳，分离PCR产物，将750-800bp的条带切胶回收。将Overlapping后的产物与sfiI酶切后的pcomb3xss (addgene)质粒按照3：1的比例连接形成Phagemid，连接产物转化Top10感受态细胞，涂氨苄抗性平板（1：1000），37℃过夜培养后，将所有菌落收集大提质粒，得到5-10mg质粒文库。将20ug质粒使用电转仪(biorad)转化入TG1感受态细胞，1mlSOC37度1小时慢摇后，加入5ml氨苄抗性培养基，40分钟后加入5E7个辅助噬菌体，1小时后，转入125ml锥形瓶，加入氨苄西林和卡那霉素双抗LB，25ml，30度过夜，可增扩得到5E12pfu/ml 的噬菌体文库。
二、关键抗原制备
合成野生型新型冠状病毒刺突蛋白受体结合域段（RBD）蛋白（氨基酸序列如SEQID NO：1所示、核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示）、Beta型新型冠状病毒刺突蛋白受体结合域段（RBD）蛋白（氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示、核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示）。通过EcoRI与XhoI两个酶切位点构建到pCAGGS质粒载体上。其中蛋白编码区5‘端前置信号肽核苷酸序列ATGTTTGTGTTTCTTGTGCTTCTTCCTCTTGTGTCATCACAATGC，同时蛋白编码区的3’端连上6个组氨酸标签(hexa-His-tag)的编码序列及翻译终止密码子。用含10%FBS的DMEM培养293T细胞。用质粒转染293T。转染4-6小时后给细胞换液成无血清的DMEM继续培养3天，收集上清，并补加DMEM，再培养4天，收集上清。收集的上清经过5000rpm离心30min后，与含有20mM磷酸钠(pH 8.0)的缓冲液等体积混合，经过0.22 μm滤膜过滤后，与His-trapExcel预装柱结合（5mL，GE Healthcare）。以10mM咪唑洗脱结合的蛋白。收集此蛋白浓缩后进行分子筛层析。目的峰通过SDS-PAGE确定，结果说明目标蛋白得到正常表达。
三、人源单链抗体噬菌体展示文库筛选
取纯化的野生型新型冠状病毒RBD蛋白，用PBS（Ph7.4）溶液按5ng/ul，每孔100ul包被96孔板，置于4℃冰箱中过夜包被。过夜包被后，弃去各孔内的包被液用0.05%的PBST溶液洗去未吸附的抗原，每孔加入65ul浓度为0.5%的BSA封闭半小时，随后加入40ul 10%吐温-20室 温下静置半小时30min后，弃去封闭液，0.05%的PBST洗板3次。取100ul纯化后的噬菌体溶入900ul 溶解buffer(0.5%的BSA0.05%的PBST)中混匀，用排枪向每孔中加入100ul，室温下孵育2h。弃去Elisa板中的噬菌体溶液，用0.05%的PBST洗板10次。用排枪向每孔内加入100ul洗脱液（pH=2.2,0.1M HCL），400rpm摇20min。将每10个孔内的洗脱液混合在一起，得到1000ul噬菌体。每管噬菌体加入200ul 终止液(1M Tris和0.5% BSA 1:1混合)，收集在2ml离心管内。取1管XLI-Blue感受态细胞（约100ul）接入5ml液体LB培养基中，摇至OD600介于0.6至0.8时停止。向5ml菌液中加入600ul噬菌体，转移至50ml无菌离心管中，37℃下220rpm摇菌半小时。向50ml管中加入1/1000的比例氨苄西林37℃下220rpm接菌，摇至OD值0.8左右。按1：1000的比例加入辅助噬菌体M13KO7（9×1012pfu/ml），37℃下220rpm摇菌半小时。随后转入到含有30ml 2YT培养基的锥形瓶，1：1000加入氨苄西林和卡那霉素。37℃下220rpm摇菌4小时，向锥形瓶中1:1000加入IPTG 30℃下过夜培养后的5E12pfu噬菌体筛选文库。重复上述步骤三次后，将野生型新型冠状病毒RBD蛋白变化为突变新型冠状病毒beta-RBD蛋白开展第四轮筛选。将第四轮洗脱的噬菌体，20ul接入摇至OD600介于0.6至0.8时的XLI-Blue感染20分钟后，涂布LB平板，37度过夜静置后，挑选384个单克隆进行菌落PCR，使用2 × Taq Master Mix酶 (Vazyme)进行PCR，反应条件如下：95℃，2min；95℃，15s，67℃，15s，72℃，30s，30个循环，72℃，7min增扩。1.2％的琼脂糖凝胶电泳，分离PCR产物，将850-1000bp的阳性条带切胶回收。
四、候选抗体 SS320原核细胞小规模表达与鉴定
测序并进行序列比对，将所ScFv序列重复数大于2的噬菌体质粒，利用电转技术转化进入SS320细胞，加入无抗培养基在37℃摇菌1h，涂1‰氨苄抗性平板，挑单克隆菌落到100ul含有氨苄的培养基中，37℃培养箱中过夜培养。次日，接入到1.5ml的含有1‰氨苄和20ml 1M Mgcl2的SB培养基中,继续在400 rpm/min的37℃培养箱中培养8h后1：1000加入1M的IPTG 37℃过夜诱导。次日，将诱导完成的菌液收集，6500rpm，4℃，离心30min，收集上清后用0.22μm滤膜进行推滤。上清加入包被有野生型和Beta突变型、Omicron新型冠状病毒RBD蛋白（氨基酸序列如SEQIDNO：5所示、核苷酸序列如SEQIDNO：6所示）的96孔板中进行ELISA实验，每孔按顺序加入100ul试表达溶液，每个样品加3个孔，室温下静置1h。100ul0.1%PBST溶液洗脱洗3次。按照1：2500的比例在0.1%的PBST中稀释一抗（兔抗HA），注意避光保存。用排枪向每孔中加入100ul一抗稀释液，室温下孵育1h。100ul 0.1%PBST溶液洗脱洗3次。二抗为羊抗兔IgG-HRP，孵育1h，100ul 0.1%PBST溶液洗脱洗3次。向每孔中加入50ul显色液TMB，37℃反应10-20min至显色适当时，立即加入50ul 2M浓HCl终止显色反应。
确认最优广谱结合能力的scfv为IMCAS-123，其scFv氨基酸序列如SEQ ID NO：37所示、核苷酸序列如SEQ ID NO：36所示。
IMCAS-364 scFv氨基酸序列如SEQ ID NO：39所示、核苷酸序列如SEQ ID NO：40所示。
五、抗体IgG全抗构建、表达和纯化
为了获得人源抗体进行后续评价，我们设计了全抗IgG1构建。策略如下：
重链H：CMV promoter-EcoRI-信号肽(SP)-重链可变区(VH)-重链恒定区(CH)-Xhol；
轻链κ：CMV promoter-EcoRI-信号肽(SP)-轻链可变区(VK)-轻链恒定区(CLκ)-Xhol；
分别将轻重链可变区序列与相应的含由重链CH和轻链CLκ的恒定区的表达载体pCAGGS，通过同源重组连接，克隆至表达载体pCAGGS中，得到含有特定抗体轻、重链编码基因的重组质粒；其中，使用酶切位点ScaI和KpnI将轻重链可变区连入含有恒定区的载体中。
用IMCAS-123/或IMCAS-364的轻、重链编码基因的质粒按照重链：轻链1：1.5比例共转染密度3*10^6 293F细胞。用150mM NaCl稀释质粒1ml细胞加1ug质粒，用150mM NaCl稀释1mg/ml PEI 1ml 细胞加3ul，静置5min；上述二者混匀后静置20min，逐滴加入293F细胞。转染24h后按照1ml加0.035ml补料液，随后每48h加一次补料液。
转染5d后收上清，6500rpm离心30min去除细胞沉淀，与含有20mM磷酸钠(pH 7.4)等体积混合，经过0.22 um滤膜过滤后，与protein A预装柱结合（5mL, GE Healthcare）。以10mM甘氨酸(pH 3.0)洗脱结合的蛋白。收集此蛋白浓缩后进行分子筛层析。目的峰通过SDS-PAGE确定。
获得抗体序列如下：
（1）IMCAS-123抗体，重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：28所示，轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：32所示；
抗体IgG的重链包括SEQ ID NO：33所示的氨基酸序列，核苷酸序列如SEQ ID NO：34，轻链包括SEQ ID NO：35所示的氨基酸序列，核苷酸序列如SEQ ID NO：38。
（2）IMCAS-364抗体，重链可变区氨基酸序列如SEQIDNO：13所示；轻链可变区氨基酸序列如SEQIDNO：22所示；
抗体IgG的重链包括SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列，核苷酸序列如SEQ ID NO：15所示；轻链包括SEQ ID NO：23所示的氨基酸序列，核苷酸序列如SEQ ID NO：24所示。
实施例2：用于新型冠状病毒检测的免疫层析试剂盒
1）试剂盒制备：
采用得到的新型冠状病毒人源抗体制备新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒如图1所示，所述试剂盒包括检测卡、裂解液、采样拭子；
裂解液为含有0.05%-2% NaCl、20mM-200mM Tris缓冲液、0.05%-2%的Triton X-100或Tween20的缓冲液。通过摸索、反复试验，获得曲拉通X-100和Tween20的上述配制浓度，使得病毒较好释放。
检测卡包括PVC底板5、样品垫4、结合垫3、硝酸纤维素膜2和吸水纸1，所述的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸依次互相交错搭接后粘贴在所述的PVC底板上，形成试纸板、切割；互相交错搭接的尺寸为2mm，PVC底板5的尺寸为80-300mm，切割尺寸为3-4mm宽，加干燥剂于常温下在铝箔袋中密封保存，得到所述的检测卡；其中，样品垫4，尺寸为20*300mm；吸水纸1，尺寸为28*300mm；结合垫3为玻璃纤维材质，喷涂抗体标记的胶体金，胶体金上标记有IMCAS-364抗体。
结合垫处理液：10mM Tris(PH7.5-8.5)，含1-2%BSA,0.9%NaCl,0.1-0.5% TritonX-100。
划线稀释液：10mM-50mM PH7.0-7.4 PB。
胶体金保存液为：0.05-5％BSA、1-30％蔗糖、1-30%海藻糖、0.05%-0.2％Tween-20的pH8.0-8.5的20mM-50mM Tris-HCl缓冲液。
所述的检试剂盒还包括外壳，切割的检测卡组装在由塑料制成的上壳和塑料制成的下壳扣合而成的塑料外壳中，塑料上壳上设置有加样孔和观察窗，加样孔对应于样品垫5，观察窗对应于检测线T线和质控线C线。
试剂盒的具体制备方法如下：(1)结合垫浸泡在10mM Tris缓冲液(pH8.0)中，缓冲液含1％BSA、0.9％NaCl、0.5％Triton X-100，室温浸泡1h，60℃烘干1小时，将浓度2μg-10μg /mL 的IMCAS-364抗体标记的示踪标志物均匀喷在结合垫上，置于干燥箱中，优选的，干燥箱为鼓风干燥箱，37℃烘干过夜；(2)T线划线液配制：用划膜缓冲液将IMCAS-123抗体稀释至0.5-2mg/mL，所述划膜缓冲液为0.01mol/L PBS溶液，pH7.0～7.4； (3)C线划线液配制：用划膜缓冲液将鼠抗人IgG稀释至1.5～2.0mg/mL，所述划膜缓冲液为0.01mol/L PBS溶液，pH7.0～7.4；(4)采用划膜仪，将C线抗体、T线抗体分别包被在固定于底板上的硝酸纤维素膜上，划液量：1μL/cm；划膜速度：50mm/s；(5)将划好的硝酸纤维素膜置于35-45℃环境烘干2-12h；(6)组装、成品。
将检测卡、裂解液、采样拭子和说明书装盒即为新型冠状病毒检测的免疫层析试剂盒成品。
2）试剂盒检测效果实验：分别用裂解液梯度稀释WT-RBD(野生型)、delta-RBD、Omicron-RBD，使用实施例1）获得的试剂盒对新型冠状病毒不同抗原分型进行检测，对灵敏度进行评估，对照组选取市售的两株抗新型冠状病毒RBD的鼠抗制备成的试剂盒进行检测。其中，实验组抗体浓度分别：IMCAS-123为1mg/mL，IMCAS-364为5μg/mL；对照组抗体浓度：T线抗体为1mg/mL，金标抗体2为5μg/mL。结果如表1、表2、图2A-图2C所示，其中，图2A对应表1中的WT-RBD的试剂盒，图2B对应表1中Delta-RBD的试剂盒，图2C对应表1中Omicron-RBD的试剂盒。结果表明，IMCAS-123对野生型RBD检测灵敏度达到0.002ug/ml、对delta型RBD的检测灵敏度达到0.008ug/ml，对Omicron型RBD的检测灵敏度达到0.016ug/ml。所述试剂盒能够检测出是否携带新型冠状病毒，并且能够对delta突变株或Omicron突变株进行检测，检测灵敏度很高。
对照组中，如表2、图3A-图3C所示，其中，图3A对应表2中的WT-RBD的试剂盒，图3B对应表2中Delta-RBD的试剂盒，图3C中为对应表2中Omicron-RBD的试剂盒。结果表明，对照组T检测Delta-RBD的最低检测限为0.031ug/mL,检测野生型-RBD的最低检测限为0.031ug/mL,检测Omicron-RBD的最低检测限为0.061ug/mL。因此，该采用市售抗体制备的试剂盒对Omicron突变株和Delta突变株检测灵敏度较差。
表1.本发明试剂盒检测结果
Figure 696713DEST_PATH_IMAGE001
表2. 对照组：市售的两株鼠抗新型冠状病毒抗体
Figure 676170DEST_PATH_IMAGE002
3）不同浓度抗体对新型冠状病毒检测效果的影响实验：分别用裂解液梯度稀释WT-RBD、delta-RBD、Omicron-RBD，采用实施例1）中的方法获取不同的试剂盒对新型冠状病毒不同抗原分型进行检测，检测结果如表3-表5所示。其中，表3所用抗体浓度分别：IMCAS-123为0.5mg/mL，IMCAS-364为2μg/mL；表4所用抗体浓度分别：IMCAS-123为1mg/mL，IMCAS-364为5μg/mL；表5所用抗体浓度分别：IMCAS-123为2mg/mL，IMCAS-364为10μg/mL。
表3不同浓度抗体对新型冠状病毒检测效果的影响（浓度一）
Figure 518224DEST_PATH_IMAGE003
从表3中可以看出：T线对野生型RBD的最低检测限为0.008ug/mL、对Delta型RBD的最低检测限为0.008ug/mL、对Omicron型RBD的最低检测限为0.125ug/mL。因此，对野生型RBD和Delta型RBD，T线均呈现强的检测结果，故该抗体浓度，试纸盒可用于检测Omicron突变株和Delta突变株，但对于Omicron型RBD的检测灵敏度较低。
表4不同浓度抗体对新型冠状病毒检测效果的影响（浓度二）
Figure 710171DEST_PATH_IMAGE001
从表4中可以看出：T线对野生型RBD的最低检测限为0.002ug/mL、对Delta型RBD的最低检测限为0.008ug/mL、对Omicron型RBD的最低检测限为0.016ug/mL。因此，该抗体浓度，试纸盒可用于检测Omicron突变株和Delta突变株，但对于Omicron型RBD的检测灵敏度较低。
表5不同浓度抗体对新型冠状病毒检测效果的影响（浓度三）
Figure 353904DEST_PATH_IMAGE004
从表5中可以看出：T线对野生型RBD的最低检测限为0.004ug/mL、对Delta型RBD的最低检测限为0.004ug/mL、对Omicron型RBD的最低检测限为0.063ng/mL。因此，该浓度抗体，试纸盒可用于快速检测Omicron突变株和Delta突变株。
综上所述，从不同抗体浓度组合情况可以看出，在一定范围内随着抗体浓度增加，试纸盒灵敏度增加，继续增加将影响试纸盒的灵敏度。
实施例3：不同形式试剂盒对不同样本的检测实验
1）使用实施例2中获得的试剂盒用于对不同样本源新型冠状病毒进行检测，结果如表6；
2）化学发光试剂盒：包括中性亲和素或链霉亲和素偶联磁微球、生物素化的IMCAS-364抗体、吖啶酯标记的IMCAS-123抗体，校准品、样本稀释液和化学发光底物，其中IMCAS-364抗体的浓度为0.5-3μg/mL，IMCAS-123抗体的使用量为1-10μg/mL；采用常规方法制备出化学发光试剂盒，并将该试剂盒用于对不同样本源新型冠状病毒分型进行检测，结果如表6；
3）酶联免疫试剂盒：包括酶标板、IMCAS-364抗体、鼠抗人-HRP、显色液、终止液、稀释液、洗涤液、标准品；酶标板包被IMCAS-123抗体，IMCAS-123抗体的浓度为1μg/ml-5μg/mL；采用常规方法制备出酶联免疫试剂盒，并该试剂盒用于对不同样本源新型冠状病毒分型进行检测，结果如表6。
表6对不同样本源检测结果统计
Figure 238684DEST_PATH_IMAGE005
表1-表6中符合所代表含义如下：
“+++”及“++++”： 强阳（T线颜色很深）；
“++”： 中阳（T线颜色深）；
“+”： 阳性（T线颜色较深，且明显可见）；
“+-”： 弱阳（T线颜色淡，但清晰可见）；
“+--”： 临界阳性（T线颜色很淡，需要仔细观察可见）；
“-”： 阴性（T线不可见）。
以上已以较佳实施例公布了本发明，然其并非用以限制本发明，凡采取等同替换或等效变换的方案所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围内。
序列表
<110> 江苏美克医学技术有限公司 中国科学院微生物研究所
<120> 新型冠状病毒突变株的检测试剂盒及其应用
<141> 2022-02-23
<160> 40
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 732
<212> DNA/RNA
<213> WT-RBD
<400> 1
atgtttgtgt ttcttgtgct tcttcctctt gtgtcatcac aatgcagagt gcaacctaca 60
gaatcaatcg tgagatttcc taacatcaca aacctttgcc ctttcggcga ggtgtttaac 120
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gattactcag tgctttacaa ctcagcatca ttcagtacgt ttaaatgcta cggagtgtca 240
cctacaaagc taaatgatct ttgctttaca aacgtgtacg cagattcatt tgtgatcaga 300
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gtgtgcggac ctaagaagag cacgaacctt gtgaagaata agtgcgtgaa ctttcaccac 720
caccaccacc ac 732
<210> 2
<211> 244
<212> PRT
<213> WT-RBD
<400> 2
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Arg
1 5 10 15
Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu
20 25 30
Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr
35 40 45
Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val
50 55 60
Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser
65 70 75 80
Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser
85 90 95
Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr
100 105 110
Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly
115 120 125
Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly
130 135 140
Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro
145 150 155 160
Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro
165 170 175
Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr
180 185 190
Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val
195 200 205
Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro
210 215 220
Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe His His
225 230 235 240
His His His His
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<211> 732
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Cys Asn Gly Val Lys Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr
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Gly Phe Gln Pro Thr Tyr Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val
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Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro
210 215 220
Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe His His
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Ser Phe Arg Pro Thr Asn Gly Val Gly His Gln Pro Tyr Arg Val Val
195 200 205
Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro
210 215 220
Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe His His
225 230 235 240
His His His His
<210> 7
<211> 8
<212> PRT
<213> IMCAS-364
<400> 7
Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr Gly
1 5
<210> 8
<211> 24
<212> DNA/RNA
<213> IMCAS-364
<400> 8
ggattcacct tcagtagata tggc 24
<210> 9
<211> 8
<212> PRT
<213> IMCAS-364
<400> 9
Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys
1 5
<210> 10
<211> 24
<212> DNA/RNA
<213> IMCAS-364
<400> 10
atttggtatg atggaagtaa taaa 24
<210> 11
<211> 19
<212> PRT
<213> IMCAS-364
<400> 11
Ala Lys Gln Glu Gly Thr Tyr Cys Ser Gly Gly Ser Cys Tyr Ser Gly
1 5 10 15
Leu Asp Tyr
<210> 12
<211> 57
<212> DNA/RNA
<213> IMCAS-364
<400> 12
gcgaaacagg aggggacata ttgtagtggt ggtagctgct acagtggcct tgactac 57
<210> 13
<211> 128
<212> PRT
<213> IMCAS-364
<400> 13
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gln Glu Gly Thr Tyr Cys Ser Gly Gly Ser Cys Tyr Ser Gly
100 105 110
Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
<210> 14
<211> 477
<212> PRT
<213> IMCAS-364
<400> 14
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Val
20 25 30
Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe
35 40 45
Thr Phe Ser Arg Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
50 55 60
Gly Leu Glu Trp Val Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr
65 70 75 80
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser
85 90 95
Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Asp Asp Thr
100 105 110
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Gln Glu Gly Thr Tyr Cys Ser Gly Gly
115 120 125
Ser Cys Tyr Ser Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
130 135 140
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
145 150 155 160
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
165 170 175
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
180 185 190
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
195 200 205
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
210 215 220
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
225 230 235 240
Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
245 250 255
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
260 265 270
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Gly His Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
275 280 285
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
290 295 300
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
305 310 315 320
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
325 330 335
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
340 345 350
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
355 360 365
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
370 375 380
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
385 390 395 400
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
405 410 415
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
420 425 430
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
435 440 445
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
450 455 460
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470 475
<210> 15
<211> 1431
<212> DNA/RNA
<213> IMCAS-364
<400> 15
atggagacgg atacgctgct cctgtgggtt ttgctgctct gggttccagg ttccactggt 60
gaccaggtgc agctgcagga gtctggggga ggcgtggtcc agcctgggag gtccctgaga 120
ctctcctgtg cagcgtctgg attcaccttc agtagatatg gcatgcactg ggtccgccag 180
gctccaggca aggggctgga gtgggtggca gttatttggt atgatggaag taataaatac 240
tatgcagact ccgtgaaggg ccgattcacc atctccagag acaattccaa gaacacgttg 300
tatctgcaaa tgaacagcct gagagccgac gacacggctg tgtattactg tgcgaaacag 360
gaggggacat attgtagtgg tggtagctgc tacagtggcc ttgactactg gggccaggga 420
accctggtca ccgtctcctc agccagcacc aaaggcccga gcgtgtttcc gctggcgccg 480
agcagcaaaa gcaccagcgg cggcaccgcg gcgctgggct gcctggtgaa agattatttt 540
ccggaaccgg tgaccgtgag ctggaacagc ggcgcgctga ccagcggcgt gcataccttt 600
ccggcggtgc tgcagagcag cggcctgtat agcctgagca gcgtggtgac cgtgccgagc 660
agcagcctgg gcacccagac ctatatttgc aacgtgaacc ataaaccgag caacaccaaa 720
gtggataaac gcgtggagcc caaatcttgt gacaaaactc acacatgccc accgtgccca 780
gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc ttcctcttcc ccccaaaacc caaaggacac 840
ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac 900
cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag 960
ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac 1020
caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc 1080
cccatcgaga aaactatctc caaagccaaa gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc 1140
ctgcccccat cccgggatga gctgaccaag aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa 1200
ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac 1260
tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc 1320
accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag 1380
gctctgcaca accactacac gcagaagagc ctctccctgt ctccgggtaa a 1431
<210> 16
<211> 6
<212> PRT
<213> IMCAS-364
<400> 16
Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
1 5
<210> 17
<211> 18
<212> DNA/RNA
<213> IMCAS-364
<400> 17
cagagcatta gcagctat 18
<210> 18
<211> 3
<212> PRT
<213> IMCAS-364
<400> 18
Ala Ala Ser
1
<210> 19
<211> 9
<212> DNA/RNA
<213> IMCAS-364
<400> 19
gctgcatcc 9
<210> 20
<211> 9
<212> PRT
<213> IMCAS-364
<400> 20
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu Thr
1 5
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<211> 27
<212> DNA/RNA
<213> IMCAS-364
<400> 21
caacagagtt acagtacacc gctcact 27
<210> 22
<211> 108
<212> PRT
<213> IMCAS-364
<400> 22
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Gly
100 105
<210> 23
<211> 236
<212> PRT
<213> IMCAS-364
<400> 23
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
20 25 30
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln
35 40 45
Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
50 55 60
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro
65 70 75 80
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
85 90 95
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser
100 105 110
Tyr Ser Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Ile Lys Val Asp Ile Lys
115 120 125
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
130 135 140
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
145 150 155 160
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
165 170 175
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
180 185 190
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
195 200 205
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
210 215 220
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Ser
225 230 235
<210> 24
<211> 708
<212> DNA/RNA
<213> IMCAS-364
<400> 24
atggagacgg atacgctgct cctgtgggtt ttgctgctct gggttccagg ttccactggt 60
gacgacatcc agatgaccca gtctccatcc tccctgtctg catctgtagg agacagagtc 120
accatcactt gccgggcaag tcagagcatt agcagctatt taaattggta tcagcagaaa 180
ccagggaaag cccctaagct cctgatctat gctgcatcca gtttgcaaag tggggtccca 240
tcaaggttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagtctgcaa 300
cctgaagatt ttgcaactta ctactgtcaa cagagttaca gtacaccgct cactttcggc 360
ggagggatca aagtggatat caaacgaact gtggctgcac caagcgtgtt tatcttccct 420
cccagcgacg agcagctgaa gagcggcacc gccagcgtgg tctgtctcct gaacaacttc 480
tatcccaggg aggccaaggt ccagtggaaa gtggacaacg ccctgcaaag cggcaatagc 540
caggagtccg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcctgtc cagcaccctg 600
accctcagca aggccgacta cgagaagcac aaggtgtacg cttgcgaggt gacccatcag 660
ggcctgtcca gccccgtgac caagtccttc aacaggggcg aatgcagc 708
<210> 25
<211> 8
<212> PRT
<213> IMCAS-123
<400> 25
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
<210> 26
<211> 8
<212> PRT
<213> IMCAS-123
<400> 26
Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 27
<211> 17
<212> PRT
<213> IMCAS-123
<400> 27
Ala Lys Asp His Leu Ile Thr Met Val Gln Pro Glu Tyr Phe His His
1 5 10 15
Trp
<210> 28
<211> 125
<212> PRT
<213> IMCAS-123
<400> 28
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp His Leu Ile Thr Met Val Gln Pro Glu Tyr Phe His His
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
<210> 29
<211> 6
<212> PRT
<213> IMCAS-123
<400> 29
Gln Gly Ile Ser Arg Trp
1 5
<210> 30
<211> 3
<212> PRT
<213> IMCAS-123
<400> 30
Ala Ala Gly
1
<210> 31
<211> 7
<212> PRT
<213> IMCAS-123
<400> 31
Cys Gln Gln Ala Asp Ser Phe
1 5
<210> 32
<211> 108
<212> PRT
<213> IMCAS-123
<400> 32
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Ser Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Arg Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Gly Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asp Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Gly
100 105
<210> 33
<211> 474
<212> PRT
<213> IMCAS-123
<400> 33
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
20 25 30
Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe
35 40 45
Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
50 55 60
Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser
85 90 95
Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
100 105 110
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Asp His Leu Ile Thr Met Val Gln Pro
115 120 125
Glu Tyr Phe His His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
130 135 140
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
145 150 155 160
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
165 170 175
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
180 185 190
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
195 200 205
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
210 215 220
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
225 230 235 240
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
245 250 255
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
260 265 270
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
275 280 285
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
290 295 300
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
305 310 315 320
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
325 330 335
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
340 345 350
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
355 360 365
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
370 375 380
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
385 390 395 400
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
405 410 415
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
420 425 430
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
435 440 445
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
450 455 460
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470
<210> 34
<211> 1422
<212> DNA/RNA
<213> IMCAS-123
<400> 34
atggagacgg atacgctgct cctgtgggtt ttgctgctct gggttccagg ttccactggt 60
gaccaggtgc agctggtgga gtctggggga ggcttggtac agcctggagg gtccctgaga 120
ctctcctgtg cagcctctgg attcaccttt agcagctatg ccatgagctg ggtccgccag 180
gctccaggga aggggctgga gtgggtctca gctattagtg gtagtggtgg tagcacatac 240
tacgcagact ccgtgaaggg ccggttcacc atctccagag acaattccaa gaacacgctg 300
tatctgcaaa tgaacagcct gagagccgag gacacggccg tatattactg tgcgaaagat 360
caccttatta ctatggttca gcctgaatac ttccaccact ggggccaggg caccctggtc 420
accgtctcct cagccagcac caaaggcccg agcgtgtttc cgctggcgcc gagcagcaaa 480
agcaccagcg gcggcaccgc ggcgctgggc tgcctggtga aagattattt tccggaaccg 540
gtgaccgtga gctggaacag cggcgcgctg accagcggcg tgcatacctt tccggcggtg 600
ctgcagagca gcggcctgta tagcctgagc agcgtggtga ccgtgccgag cagcagcctg 660
ggcacccaga cctatatttg caacgtgaac cataaaccga gcaacaccaa agtggataaa 720
cgcgtggagc ccaaatcttg tgacaaaact cacacatgcc caccgtgccc agcacctgaa 780
ctcctggggg gaccgtcagt cttcctcttc cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc 840
tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc 900
aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag 960
gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg 1020
ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag 1080
aaaactatct ccaaagccaa agggcagccc cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca 1140
tcccgggatg agctgaccaa gaaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat 1200
cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc 1260
acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct caccgtggac 1320
aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac 1380
aaccactaca cgcagaagag cctctccctg tctccgggta aa 1422
<210> 35
<211> 236
<212> PRT
<213> IMCAS-123
<400> 35
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val
20 25 30
Ser Ala Ser Val Gly Asp Ser Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln
35 40 45
Gly Ile Ser Arg Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala
50 55 60
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Gly Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro
65 70 75 80
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
85 90 95
Ser Asp Leu Gln Ala Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala
100 105 110
Asp Ser Phe Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
115 120 125
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
130 135 140
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
145 150 155 160
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
165 170 175
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
180 185 190
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
195 200 205
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
210 215 220
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Ser
225 230 235
<210> 36
<211> 810
<212> DNA/RNA
<213> IMCAS-123 SCFV
<400> 36
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtcggaga cagcgtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca gggaattagc agatggttag cctggtatca gcagagacca 120
gggaaagccc ctaaactcct gatctatgct gcaggcaatt tggaaactgg ggtcccatcc 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcga cctgcaggct 240
gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctgacagtt tcccgctcac tttcggcgga 300
gggaccaaag tggatatcaa aggtggttcc tctagatctt cccaggtgca gctggtggag 360
tctgggggag gcttggtaca gcctggaggg tccctgagac tctcctgtgc agcctctgga 420
ttcaccttta gcagctatgc catgagctgg gtccgccagg ctccagggaa ggggctggag 480
tgggtctcag ctattagtgg tagtggtggt agcacatact acgcagactc cgtgaagggc 540
cggttcacca tctccagaga caattccaag aacacgctgt atctgcaaat gaacagcctg 600
agagccgagg acacggccgt atattactgt gcgaaagatc accttattac tatggttcag 660
cctgaatact tccaccactg gggccagggc accctggtca ccgtctcctc agcctccacc 720
aagggcccat ccgtcactag tggccaggcc ggccagcacc atcaccatca ccatggcgca 780
tacccgtacg acgttccgga ctacgcttct 810
<210> 37
<211> 270
<212> PRT
<213> IMCAS-123 SCFV
<400> 37
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Ser Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Arg Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Gly Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asp Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Gly Gly Ser Ser Arg
100 105 110
Ser Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro
115 120 125
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
130 135 140
Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
145 150 155 160
Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp
165 170 175
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
180 185 190
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
195 200 205
Tyr Cys Ala Lys Asp His Leu Ile Thr Met Val Gln Pro Glu Tyr Phe
210 215 220
His His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
225 230 235 240
Lys Gly Pro Ser Val Thr Ser Gly Gln Ala Gly Gln His His His His
245 250 255
His His Gly Ala Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala Ser
260 265 270
<210> 38
<211> 708
<212> DNA/RNA
<213> IMCAS-123
<400> 38
atggagacgg atacgctgct cctgtgggtt ttgctgctct gggttccagg ttccactggt 60
gacgacatcc agatgaccca gtctccatct tccgtgtctg catctgtcgg agacagcgtc 120
accatcactt gtcgggcgag tcagggaatt agcagatggt tagcctggta tcagcagaga 180
ccagggaaag cccctaaact cctgatctat gctgcaggca atttggaaac tggggtccca 240
tccaggttca gcggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cgacctgcag 300
gctgaagatt ttgcaactta ctattgtcaa caggctgaca gtttcccgct cactttcggc 360
ggagggacca aagtggatat caaacgaact gtggctgcac caagcgtgtt tatcttccct 420
cccagcgacg agcagctgaa gagcggcacc gccagcgtgg tctgtctcct gaacaacttc 480
tatcccaggg aggccaaggt ccagtggaaa gtggacaacg ccctgcaaag cggcaatagc 540
caggagtccg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcctgtc cagcaccctg 600
accctcagca aggccgacta cgagaagcac aaggtgtacg cttgcgaggt gacccatcag 660
ggcctgtcca gccccgtgac caagtccttc aacaggggcg aatgcagc 708
<210> 39
<211> 273
<212> PRT
<213> IMCAS-364 SCFV
<400> 39
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Gly Gly Ser Ser Arg
100 105 110
Ser Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro
115 120 125
Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
130 135 140
Arg Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
145 150 155 160
Trp Val Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp
165 170 175
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
180 185 190
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr
195 200 205
Tyr Cys Ala Lys Gln Glu Gly Thr Tyr Cys Ser Gly Gly Ser Cys Tyr
210 215 220
Ser Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
225 230 235 240
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Thr Ser Gly Gln Ala Gly Gln His
245 250 255
His His His His His Gly Ala Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala
260 265 270
Ser
<210> 40
<211> 819
<212> DNA/RNA
<213> IMCAS-364 SCFV
<400> 40
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta caccgctcac tttcggcgga 300
gggaccaaag tggatatcaa aggtggttcc tctagatctt cccaggtgca gctgcaggag 360
tctgggggag gcgtggtcca gcctgggagg tccctgagac tctcctgtgc agcgtctgga 420
ttcaccttca gtagatatgg catgcactgg gtccgccagg ctccaggcaa ggggctggag 480
tgggtggcag ttatttggta tgatggaagt aataaatact atgcagactc cgtgaagggc 540
cgattcacca tctccagaga caattccaag aacacgttgt atctgcaaat gaacagcctg 600
agagccgacg acacggctgt gtattactgt gcgaaacagg aggggacata ttgtagtggt 660
ggtagctgct acagtggcct tgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 720
gcctccacca agggcccatc cgtcactagt ggccaggccg gccagcacca tcaccatcac 780
catggcgcat acccgtacga cgttccggac tacgcttct 819

Claims (18)

1.一种检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括
IMCAS-364抗体和IMCAS-123抗体，所述抗体包括重链可变区和轻链可变区：所述重链可变区包括HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述的轻链可变区包含LCDR1、LCDR2和LCDR3；
其中，IMCAS-123抗体的HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:25所示，HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO: 26所示，HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:27所示；LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:29所示，LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO: 30所示，且LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO: 31所示；
IMCAS-364抗体的HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO: 7所示，HCDR2的氨基酸序列如SEQID NO: 9所示，HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO: 11所示； LCDR1的氨基酸序列如SEQ IDNO: 16所示，LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO: 15所示，LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示。
2.如权利要求1所述的检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，
所述IMCAS-123抗体重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：28所示，且轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：32所示；
IMCAS-364抗体重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：13所示，且轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：22所示。
3.如权利要求1所述的检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：裂解液和采样拭子。
4.如权利要求3所述的检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，所述裂解液为含有0.05%-2% NaCl、20mM-200mM Tris缓冲液、0.05%-2%的Triton X-100或Tween20的缓冲液。
5.如权利要求1-4任一项所述的检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒为免疫层析试剂盒、酶联免疫试剂盒或化学发光试剂盒。
6.如权利要求5所述的检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，所述免疫层析试剂盒包括检测卡，检测卡包括：底板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；底板为PVC板；所述的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸依次互相交错搭接后粘贴在所述的底板上；结合垫上喷涂有IMCAS-364抗体标记的示踪标志物，示踪标志物为包括胶体金、乳胶微球、荧光微球在内的纳米颗粒，划线位置从吸水纸往加样孔方向依次为：C线、T线，其中C线固定鼠抗人IgG抗体，T线固定的抗体为IMCAS-123。
7.如权利要求6所述的检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括外壳，检测卡组装在上壳和下壳扣合而成的外壳中，上壳上设置有加样孔和观察窗，加样孔对应于样品垫，观察窗对应于T线和C线。
8.如权利要求6-7任一项所述的检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，IMCAS-123抗体的浓度为0.5-2mg/mL；IMCAS-364的浓度为2μg-10μg /mL。
9.如权利要求6-7任一项所述检测新型冠状病毒的试剂盒的制备方法，其特征在于，(1)结合垫浸泡在10mM Tris缓冲液(pH8.0)中，缓冲液含1％BSA、0.9％NaCl、0.5％TritonX-100，室温浸泡1h，60℃烘干1小时，将浓度2μg-10μg /mL 的IMCAS-364抗体标记的示踪标志物均匀喷在结合垫上，置于干燥箱中，37℃烘干过夜；(2)T线划线液配制：用划膜缓冲液将IMCAS-123抗体稀释至0.5-2mg/mL，所述划膜缓冲液为0.01mol/L PBS溶液，pH7.0～7.4；（3）C线划线液配制：用划膜缓冲液将鼠抗人IgG稀释至1.5～2.0mg/mL，所述划膜缓冲液为0.01mol/L PBS溶液，pH7.0～7.4；(4)采用划膜仪，将C线抗体、T线抗体分别包被在固定于底板上的硝酸纤维素膜上，划液量：1μL/cm；划膜速度：50mm/s；(5)将划好的硝酸纤维素膜置于35-45℃环境烘干2-12h；(6)组装、成品。
10.权利要求9所述的检测新型冠状病毒的试剂盒的制备方法，其特征在于，IMCAS-123抗体的浓度为1-1.5mg/mL ；IMCAS-364的浓度为4-6μg /mL。
11.如权利要求5所述的检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，所述化学发光试剂盒包括中性亲和素或链霉亲和素偶联磁微球、生物素化抗体、吖啶酯标记的抗体、校准品、化学发光底物。
12.如权利要求11所述的检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，生物素化抗体含有IMCAS-364；吖啶酯标记的抗体为IMCAS-123抗体；校准品为Delta、Omicron的RBD标准品。
13.如权利要求5所述的检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，所述酶联免疫试剂盒包括IMCAS-123抗体包被的酶标板、IMCAS-364抗体、鼠抗人-HRP、显色液、终止液、稀释液、洗涤液、标准品。
14.一种利用权利要求1-4任一项所述的试剂盒进行新型冠状病毒抗原检测的非疾病诊断的检测方法。
15.权利要求1-4任一项所述的试剂盒在制备检测新型冠状病毒的产品中的应用。
16.权利要求14所述的非疾病诊断的检测方法，其特征在于，检测样本为离体的上呼吸道样本或非呼吸道样本。
17.权利要求14所述的非疾病诊断的检测方法，其特征在于，所述上呼吸道样本为鼻浅、鼻咽、口咽、唾液，所述非呼吸道样本为快递表面或冷藏食品表面。
18.权利要求14所述的非疾病诊断的检测方法，其特征在于，其特征在于，所述新型冠状病毒包括新型冠状病毒Delta突变株或Omicron突变株。
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