CN114891097B - 一株羊驼源纳米抗体及其应用 - Google Patents
一株羊驼源纳米抗体及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114891097B CN114891097B CN202210757615.3A CN202210757615A CN114891097B CN 114891097 B CN114891097 B CN 114891097B CN 202210757615 A CN202210757615 A CN 202210757615A CN 114891097 B CN114891097 B CN 114891097B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cov
- sars
- pharmaceutical composition
- polynucleotide
- 2rbd
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241001416177 Vicugna pacos Species 0.000 title claims abstract description 31
- 108091005634 SARS-CoV-2 receptor-binding domains Proteins 0.000 claims abstract description 33
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims abstract description 30
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 14
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 8
- 241001678559 COVID-19 virus Species 0.000 claims abstract 5
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 26
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 26
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 26
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 claims description 22
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 22
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 22
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 22
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 20
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 17
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 17
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 17
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 17
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 14
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 14
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 12
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 11
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 5
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 4
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 claims description 4
- 229940097496 nasal spray Drugs 0.000 claims description 4
- 239000002674 ointment Substances 0.000 claims description 4
- 239000006187 pill Substances 0.000 claims description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 3
- 239000003826 tablet Substances 0.000 claims description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 3
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 239000007888 film coating Substances 0.000 claims description 2
- 238000009501 film coating Methods 0.000 claims description 2
- 239000007902 hard capsule Substances 0.000 claims description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 claims description 2
- 239000011505 plaster Substances 0.000 claims description 2
- 229940098458 powder spray Drugs 0.000 claims description 2
- 239000007901 soft capsule Substances 0.000 claims description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 2
- 239000006190 sub-lingual tablet Substances 0.000 claims description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 claims description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 claims 2
- 239000004503 fine granule Substances 0.000 claims 1
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 claims 1
- 229940023488 pill Drugs 0.000 claims 1
- 229940098466 sublingual tablet Drugs 0.000 claims 1
- 241001112090 Pseudovirus Species 0.000 abstract description 22
- 208000025721 COVID-19 Diseases 0.000 abstract description 3
- 208000037847 SARS-CoV-2-infection Diseases 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 29
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 22
- 201000003176 Severe Acute Respiratory Syndrome Diseases 0.000 description 20
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 19
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 18
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 14
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 description 11
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 11
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 10
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 208000001528 Coronaviridae Infections Diseases 0.000 description 7
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 7
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 7
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 7
- 101000629318 Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 Spike glycoprotein Proteins 0.000 description 6
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 6
- 102100031673 Corneodesmosin Human genes 0.000 description 5
- 101710139375 Corneodesmosin Proteins 0.000 description 5
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 5
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 3
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000000889 atomisation Methods 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 3
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 3
- 108010037850 glycylvaline Proteins 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 3
- 229910001453 nickel ion Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 3
- 238000004091 panning Methods 0.000 description 3
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 3
- XWFWAXPOLRTDFZ-FXQIFTODSA-N Ala-Pro-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XWFWAXPOLRTDFZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- 102000053723 Angiotensin-converting enzyme 2 Human genes 0.000 description 2
- 108090000975 Angiotensin-converting enzyme 2 Proteins 0.000 description 2
- 235000002198 Annona diversifolia Nutrition 0.000 description 2
- PBSOQGZLPFVXPU-YUMQZZPRSA-N Arg-Glu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O PBSOQGZLPFVXPU-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 2
- 101100282617 Bovine herpesvirus 1.1 (strain Cooper) gC gene Proteins 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- OYTPNWYZORARHL-XHNCKOQMSA-N Gln-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N OYTPNWYZORARHL-XHNCKOQMSA-N 0.000 description 2
- FQCILXROGNOZON-YUMQZZPRSA-N Gln-Pro-Gly Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O FQCILXROGNOZON-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- ZFBBMCKQSNJZSN-AUTRQRHGSA-N Gln-Val-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O ZFBBMCKQSNJZSN-AUTRQRHGSA-N 0.000 description 2
- MIIVFRCYJABHTQ-ONGXEEELSA-N Gly-Leu-Val Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O MIIVFRCYJABHTQ-ONGXEEELSA-N 0.000 description 2
- GMTXWRIDLGTVFC-IUCAKERBSA-N Gly-Lys-Glu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O GMTXWRIDLGTVFC-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- WNZOCXUOGVYYBJ-CDMKHQONSA-N Gly-Phe-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)NC(=O)CN)O WNZOCXUOGVYYBJ-CDMKHQONSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PMGDADKJMCOXHX-UHFFFAOYSA-N L-Arginyl-L-glutamin-acetat Natural products NC(=N)NCCCC(N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(O)=O PMGDADKJMCOXHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282842 Lama glama Species 0.000 description 2
- QLQHWWCSCLZUMA-KKUMJFAQSA-N Leu-Asp-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 QLQHWWCSCLZUMA-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- ZTLGVASZOIKNIX-DCAQKATOSA-N Leu-Gln-Glu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N ZTLGVASZOIKNIX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- LINKCQUOMUDLKN-KATARQTJSA-N Leu-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N)O LINKCQUOMUDLKN-KATARQTJSA-N 0.000 description 2
- YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N Ser-Gly-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- QYSFWUIXDFJUDW-DCAQKATOSA-N Ser-Leu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O QYSFWUIXDFJUDW-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 2
- SLOYNOMYOAOUCX-BVSLBCMMSA-N Trp-Phe-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O SLOYNOMYOAOUCX-BVSLBCMMSA-N 0.000 description 2
- 101100208365 Trypanosoma brucei brucei KRET2 gene Proteins 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 108010069020 alanyl-prolyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 108010008355 arginyl-glutamine Proteins 0.000 description 2
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000012930 cell culture fluid Substances 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 108010067216 glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Natural products NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 108010090333 leucyl-lysyl-proline Proteins 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- -1 media Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 2
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 108010020755 prolyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 2
- 108010003137 tyrosyltyrosine Proteins 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- VBRDBGCROKWTPV-XHNCKOQMSA-N Ala-Glu-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N VBRDBGCROKWTPV-XHNCKOQMSA-N 0.000 description 1
- DVJSJDDYCYSMFR-ZKWXMUAHSA-N Ala-Ile-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(O)=O DVJSJDDYCYSMFR-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- AJBVYEYZVYPFCF-CIUDSAMLSA-N Ala-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O AJBVYEYZVYPFCF-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- ZDILXFDENZVOTL-BPNCWPANSA-N Ala-Val-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ZDILXFDENZVOTL-BPNCWPANSA-N 0.000 description 1
- PQWTZSNVWSOFFK-FXQIFTODSA-N Arg-Asp-Asn Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N)CN=C(N)N PQWTZSNVWSOFFK-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- PRLPSDIHSRITSF-UNQGMJICSA-N Arg-Phe-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O PRLPSDIHSRITSF-UNQGMJICSA-N 0.000 description 1
- HNXWVVHIGTZTBO-LKXGYXEUSA-N Asn-Ser-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O HNXWVVHIGTZTBO-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- YNQIDCRRTWGHJD-ZLUOBGJFSA-N Asp-Asn-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O YNQIDCRRTWGHJD-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- QJHOOKBAHRJPPX-QWRGUYRKSA-N Asp-Phe-Gly Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CC1=CC=CC=C1 QJHOOKBAHRJPPX-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- JSHWXQIZOCVWIA-ZKWXMUAHSA-N Asp-Ser-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O JSHWXQIZOCVWIA-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- CZIVKMOEXPILDK-SRVKXCTJSA-N Asp-Tyr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O CZIVKMOEXPILDK-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- JDHMXPSXWMPYQZ-AAEUAGOBSA-N Cys-Gly-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CS)N JDHMXPSXWMPYQZ-AAEUAGOBSA-N 0.000 description 1
- VFGADOJXRLWTBU-JBDRJPRFSA-N Cys-Ile-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N VFGADOJXRLWTBU-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 1
- 108010090461 DFG peptide Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- JXFLPKSDLDEOQK-JHEQGTHGSA-N Gln-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O JXFLPKSDLDEOQK-JHEQGTHGSA-N 0.000 description 1
- MSHXWFKYXJTLEZ-CIUDSAMLSA-N Gln-Met-Asn Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N MSHXWFKYXJTLEZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- HNAUFGBKJLTWQE-IFFSRLJSSA-N Gln-Val-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)O HNAUFGBKJLTWQE-IFFSRLJSSA-N 0.000 description 1
- SBCYJMOOHUDWDA-NUMRIWBASA-N Glu-Asp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SBCYJMOOHUDWDA-NUMRIWBASA-N 0.000 description 1
- UDEPRBFQTWGLCW-CIUDSAMLSA-N Glu-Pro-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O UDEPRBFQTWGLCW-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- KRRMJKMGWWXWDW-STQMWFEESA-N Gly-Arg-Phe Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 KRRMJKMGWWXWDW-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- CQMFNTVQVLQRLT-JHEQGTHGSA-N Gly-Thr-Gln Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O CQMFNTVQVLQRLT-JHEQGTHGSA-N 0.000 description 1
- UMBDRSMLCUYIRI-DVJZZOLTSA-N Gly-Trp-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)NC(=O)CN)O UMBDRSMLCUYIRI-DVJZZOLTSA-N 0.000 description 1
- IZVICCORZOSGPT-JSGCOSHPSA-N Gly-Val-Tyr Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O IZVICCORZOSGPT-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- JHNJNTMTZHEDLJ-NAKRPEOUSA-N Ile-Ser-Arg Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O JHNJNTMTZHEDLJ-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- RTIRBWJPYJYTLO-MELADBBJSA-N Leu-Lys-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N RTIRBWJPYJYTLO-MELADBBJSA-N 0.000 description 1
- QUCDKEKDPYISNX-HJGDQZAQSA-N Lys-Asn-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QUCDKEKDPYISNX-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- CAODKDAPYGUMLK-FXQIFTODSA-N Met-Asn-Ser Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O CAODKDAPYGUMLK-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)CN)C(O)=O)=CNC2=C1 AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 239000008118 PEG 6000 Substances 0.000 description 1
- BIYWZVCPZIFGPY-QWRGUYRKSA-N Phe-Gly-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BIYWZVCPZIFGPY-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- 229920002584 Polyethylene Glycol 6000 Polymers 0.000 description 1
- MGDFPGCFVJFITQ-CIUDSAMLSA-N Pro-Glu-Asp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O MGDFPGCFVJFITQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 229940096437 Protein S Drugs 0.000 description 1
- 241000315672 SARS coronavirus Species 0.000 description 1
- OOKCGAYXSNJBGQ-ZLUOBGJFSA-N Ser-Asn-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O OOKCGAYXSNJBGQ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- INCNPLPRPOYTJI-JBDRJPRFSA-N Ser-Cys-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CO)N INCNPLPRPOYTJI-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 1
- UBRMZSHOOIVJPW-SRVKXCTJSA-N Ser-Leu-Lys Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O UBRMZSHOOIVJPW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- WLJPJRGQRNCIQS-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O WLJPJRGQRNCIQS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- ZKOKTQPHFMRSJP-YJRXYDGGSA-N Ser-Thr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ZKOKTQPHFMRSJP-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 1
- BCAVNDNYOGTQMQ-AAEUAGOBSA-N Ser-Trp-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)NCC(O)=O BCAVNDNYOGTQMQ-AAEUAGOBSA-N 0.000 description 1
- LGIMRDKGABDMBN-DCAQKATOSA-N Ser-Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N LGIMRDKGABDMBN-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 101710198474 Spike protein Proteins 0.000 description 1
- XSLXHSYIVPGEER-KZVJFYERSA-N Thr-Ala-Val Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O XSLXHSYIVPGEER-KZVJFYERSA-N 0.000 description 1
- FQPDRTDDEZXCEC-SVSWQMSJSA-N Thr-Ile-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FQPDRTDDEZXCEC-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 1
- BPGDJSUFQKWUBK-KJEVXHAQSA-N Thr-Val-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 BPGDJSUFQKWUBK-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 1
- SVGAWGVHFIYAEE-JSGCOSHPSA-N Trp-Gly-Gln Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 SVGAWGVHFIYAEE-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 1
- BURPTJBFWIOHEY-UWJYBYFXSA-N Tyr-Ala-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 BURPTJBFWIOHEY-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- NSOMQRHZMJMZIE-GVARAGBVSA-N Tyr-Ala-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 NSOMQRHZMJMZIE-GVARAGBVSA-N 0.000 description 1
- SMLCYZYQFRTLCO-UWJYBYFXSA-N Tyr-Cys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O SMLCYZYQFRTLCO-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- ZPFLBLFITJCBTP-QWRGUYRKSA-N Tyr-Ser-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O ZPFLBLFITJCBTP-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- QFHRUCJIRVILCK-YJRXYDGGSA-N Tyr-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N)O QFHRUCJIRVILCK-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 1
- MWUYSCVVPVITMW-IGNZVWTISA-N Tyr-Tyr-Ala Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 MWUYSCVVPVITMW-IGNZVWTISA-N 0.000 description 1
- ANHVRCNNGJMJNG-BZSNNMDCSA-N Tyr-Tyr-Cys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O ANHVRCNNGJMJNG-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- KSGKJSFPWSMJHK-JNPHEJMOSA-N Tyr-Tyr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KSGKJSFPWSMJHK-JNPHEJMOSA-N 0.000 description 1
- PZTZYZUTCPZWJH-FXQIFTODSA-N Val-Ser-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N PZTZYZUTCPZWJH-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- HTONZBWRYUKUKC-RCWTZXSCSA-N Val-Thr-Val Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O HTONZBWRYUKUKC-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- JXWGBRRVTRAZQA-ULQDDVLXSA-N Val-Tyr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N JXWGBRRVTRAZQA-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- OWFGFHQMSBTKLX-UFYCRDLUSA-N Val-Tyr-Tyr Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)O)N OWFGFHQMSBTKLX-UFYCRDLUSA-N 0.000 description 1
- 230000010530 Virus Neutralization Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 108010068265 aspartyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 108010016616 cysteinylglycine Proteins 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical compound OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 230000017188 evasion or tolerance of host immune response Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 108010078144 glutaminyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010084389 glycyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000011866 long-term treatment Methods 0.000 description 1
- 230000034217 membrane fusion Effects 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 238000002663 nebulization Methods 0.000 description 1
- 238000007857 nested PCR Methods 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 1
- 108010009962 valyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/22—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from camelids, e.g. camel, llama or dromedary
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/567—Framework region [FR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/569—Single domain, e.g. dAb, sdAb, VHH, VNAR or nanobody®
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明涉及一株羊驼源纳米抗体及其应用，具体涉及一种与SARS‑CoV‑2RBD结合的羊驼源纳米抗体及其应用，包含重链可变区，所述重链可变区包含以下的CDR：氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的CDR1，氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的CDR2，以及氨基酸序列如SEQID NO:3所示的CDR3。本发明的S43纳米抗体与SARS‑CoV‑2的结合常数为1.2E‑10±1.4E‑11M，能有效抑制SARS‑CoV‑2假病毒感染。本发明的S43纳米抗体有着预防、治疗和/或检测SARS‑CoV‑2感染的临床应用价值。
Description
交叉引用
本申请要求于2021年9月16日提交的、申请号为202111087998.X、发明名称为“一株羊驼源纳米抗体及其应用”的发明专利申请的优先权益，其全部内容通过引用并入本文。
技术领域
本发明涉及生物医药领域，具体涉及一株羊驼源纳米抗体及其应用，更具体地，涉及一种与SARS-CoV-2RBD结合的羊驼源纳米抗体或其抗原结合片段、编码其的多核苷酸、包含该多核苷酸的核酸构建体、包含该核酸构建体的表达载体、其制备方法、转化的细胞以及包含上述的药物组合物，以及它们在制备预防、治疗和/或检测新冠病毒感染的药物中的应用。
背景技术
中和抗体，该药物主要是通过与病原微生物表面的抗原结合，阻止病原微生物表达的特定分子与细胞表面受体结合，达到“中和”的效果。SARS-CoV和SARS-CoV-2 病毒表面都具有糖基化的刺突蛋白(spike protein,S)，该S蛋白能与宿主细胞受体蛋白 ACE2相互作用并触发膜融合，因此阻断S蛋白与ACE2的结合是治疗新冠病毒感染的有效途径。
然而旨在阻断病毒与宿主细胞受体的抗体策略，仍需要进一步优化和升级。一方面，新冠病毒这样的RNA病毒具有易突变、易发生免疫逃逸等特点，单一特异性抗体很难满足长久的治疗需求。另外，常规的单克隆抗体因其分子量过大，在实际应用中也存在一定的缺陷。
发明内容
发明目的
本发明的目的在于提供一种与SARS-CoV-2RBD结合的羊驼源纳米抗体或其抗原结合片段、编码其的多核苷酸、包含该多核苷酸的核酸构建体、包含该核酸构建体的表达载体、其制备方法、转化的细胞以及包含上述的药物组合物，以及它们在制备预防或新冠病毒的药物中的应用。本发明的羊驼源纳米抗体或其抗原结合片段为高中和活性的纳米抗体，与SARS-CoV-2RBD蛋白的结合能力强，能有效抑制SARS-CoV-2感染，该纳米抗体具有分子量小(～15kDa)、免疫原性小、更好的溶解度和稳定性、较长的CDR3区的优点，可以雾化给药，能直达肺部，起效更快，为新冠或其他冠状病毒感染提供了潜在的治疗策略。
解决方案
为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
第一方面，本发明提供了一种与SARS-CoV-2RBD结合的羊驼源纳米抗体或其抗原结合片段，包含重链可变区，所述重链可变区包含以下的CDR：
氨基酸序列如SEQ ID NO:1(即，GFTLDYYAIG)所示的CDR1，
氨基酸序列如SEQ ID NO:2(即，CISSNNSTYYADSVKG)所示的CDR2，
以及氨基酸序列如SEQ ID NO:3(即，EPDYSGVYYYTCGWTDFGS)所示的CDR3。
进一步地，所述重链可变区还包括4个框架区FR1-4，所述FR1-4与所述CDR1、CDR2和CDR3按顺序交错排列。
在一个优选的实施方案中，所述FR1-4的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4(即，QVQLQESGGGLVQPGGSLRLTCAPS)、SEQ ID NO:5(即，WFRQAPGKEREGVS)、 SEQ ID NO:6(即，RFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAA)和SEQ ID NO:7 (即，WGQGTQVTVSS)所示。
进一步地，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示：
第二方面，本发明提供一种多核苷酸，其编码所述的羊驼源纳米抗体或其抗原结合片段。
进一步地，所述多核苷酸为DNA或mRNA。
进一步地，所述多核苷酸具有如SEQ ID NO:9所示的核苷酸序列：
CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCTGGAGGAGGCTTGGTGCAGCCTGGGGGGTCT CTGAGACTCACCTGTGCACCCTCTGGATTCACTTTGGATTATTATGCCATAGGCTGG TTCCGCCAGGCCCCAGGGAAGGAGCGTGAGGGGGTCTCATGTATTAGTAGTAATAA TAGCACATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACG CCAAGAACACGGTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACAGCCGT TTATTACTGTGCAGCAGAACCAGACTATAGCGGTGTTTACTACTACACCTGCGGATG GACTGACTTTGGTTCCTGGGGCCAGGGGACGCAGGTGACCGTGAGCTCT。
第三方面，本发明提供一种核酸构建体，其包含所述的多核苷酸。
进一步优选地，所述多核苷酸还包含与所述多核苷酸可操作地连接的至少一个表达调控元件。例如组氨酸标签、终止密码子等。
第四方面，本发明提供一种表达载体，其包含所述的核酸构建体。
第五方面，本发明提供了一种转化的细胞，其包括如上述第二方面所述的多核苷酸、如上述第三方面所述的核酸构建体或如上述第四方面所述的表达载体。
第六方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含如上述第一方面所述的与SARS-CoV-2RBD结合的羊驼源纳米抗体或其抗原结合片段、如上述第二方面所述的多核苷酸、如上述第三方面所述的核酸构建体、如上述第四方面所述的表达载体或如上述第五方面所述的转化的细胞，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。
进一步优选地，所述药物组合物为鼻喷剂、口服制剂、栓剂或胃肠外制剂的形式。
进一步优选地，所述鼻喷剂选自气雾剂、喷雾剂和粉雾剂。
进一步优选地，所述口服制剂选自片剂、粉末剂、丸剂、散剂、颗粒剂、细粒剂、软/硬胶囊剂、薄膜包衣剂、小丸剂、舌下片和膏剂。
进一步优选地，所述胃肠外制剂为经皮剂、软膏剂、硬膏剂、外用液剂、可注射或可推注制剂。
第七方面，本发明提供了一种如上述第一方面所述的与SARS-CoV-2RBD结合的羊驼源纳米抗体或其抗原结合片段、如上述第二方面所述的多核苷酸、如上述第三方面所述的核酸构建体、如上述第四方面所述的表达载体或如上述第五方面所述的转化的细胞或如上述第六方面所述的药物组合物在制备预防、治疗和/或检测新冠病毒感染的药物中的应用。
优选地，所述新冠病毒为SARS-CoV-2原始毒株和/或SARS-CoV-2变异毒株。
进一步优选地，所述SARS-CoV-2变异毒株为Alpha(B.1.1.7)、Beta(B.1.351)、Gamma (P.1)、Kappa(B.1.617.1)和/或Delta(B.1.617.2)毒株。
第八方面，本发明提供了一种预防或治疗新冠病毒感染的方法，其包括：向有需要的受试者施用预防或治疗有效量的如上述第一方面所述的与SARS-CoV-2RBD结合的羊驼源纳米抗体或其抗原结合片段、如上述第二方面所述的多核苷酸、如上述第三方面所述的核酸构建体、如上述第四方面所述的表达载体或如上述第五方面所述的转化的细胞或如上述第六方面所述的药物组合物。
优选地，所述新冠病毒为SARS-CoV-2原始毒株和/或SARS-CoV-2变异毒株。
进一步优选地，所述SARS-CoV-2变异毒株为Alpha(B.1.1.7)、Beta(B.1.351)、Gamma (P.1)、Kappa(B.1.617.1)和/或Delta(B.1.617.2)毒株。
本发明的药物组合物的有效成分的给药量，根据给药对象、对象脏器、症状、给药方法等不同而存在差异，可以考虑剂型的种类、给药方法、患者的年龄和体重、患者的症状等，根据医生的判断来确定。
第九方面，本发明提供了一种检测新冠病毒的方法，其包括使用如上述第一方面所述的与SARS-CoV-2RBD结合的羊驼源纳米抗体或其抗原结合片段。
优选地，所述新冠病毒为SARS-CoV-2原始毒株和/或SARS-CoV-2变异毒株。进一步优选地，所述SARS-CoV-2变异毒株为Alpha(B.1.1.7)、Beta (B.1.351)、Gamma(P.1)、Kappa(B.1.617.1)和/或Delta(B.1.617.2)毒株。
有益效果
本发明针对新冠病毒进行纳米抗体药物开发，通过用SARS-CoV-2S蛋白免疫羊驼、构建抗体文库、利用噬菌体展示技术筛选特异性纳米抗体等，筛选到以高亲和力特异性结合SARS-CoV-2RBD的纳米抗体，本文命名为S43纳米抗体。本发明的S43纳米抗体能以高亲和力与SARS-CoV-2RBD结合，其结合常数为1.2E-10±1.4E-11M，并且在假病毒中和实验中，能以高中和活性中和SARS-CoV-2假病毒，这些均表明：S43纳米抗体是能够以高亲和力与SARS-CoV-2RBD结合的、并具有高中和活性的新型冠状病毒 (SARS-CoV-2)羊驼源纳米抗体。
本发明为新型冠状病毒(包括原始毒株以及一系列变异毒株)的临床预防、治疗和检测提供了潜在的纳米抗体新药。
附图说明
一个或多个实施例通过与之对应的附图中的图片进行示例性说明，这些示例性说明并不构成对实施例的限定。在这里专用的词“示例性”意为“用作例子、实施例或说明性”。这里作为“示例性”所说明的任何实施例不必解释为优于或好于其它实施例。
图1是本发明实施例1的SARS-CoV-2S蛋白分子筛层析和SDS-PAGE鉴定结果示意图；
图2是本发明实施例1的SARS-CoV-2RBD蛋白分子筛层析和SDS-PAGE鉴定结果示意图；
图3是本发明实施例4的S43纳米抗体的分子筛层析和SDS-PAGE鉴定结果示意图；
图4是本发明实施例5测定的S43纳米抗体结合SARS-CoV-2RBD的动力学曲线示意图；其中，虚线是指原始数据，实线是指拟合后的动力学曲线；
图5是本发明实施例6测定的S43纳米抗体中和VSV-SARS-CoV-2假病毒感染的效果示意图，其中，其中，A为S43纳米抗体中和原始毒株SARS-CoV-2WT的假病毒感染的效果图；B为S43纳米抗体中和SARS-CoV-2变异毒株Alpha(B.1.1.7)的假病毒感染的效果图；C为S43纳米抗体中和SARS-CoV-2变异毒株Beta(B.1.351)的假病毒感染的效果图；D为S43纳米抗体中和SARS-CoV-2变异毒株Gamma(P.1)的假病毒感染的效果图；E 为S43纳米抗体中和SARS-CoV-2变异毒株Kappa(B.1.617.1)的假病毒感染的效果图；F 为S43纳米抗体中和SARS-CoV-2变异毒株Delta(B.1.617.2)的假病毒感染的效果图。
图6显示了本发明实施例9中所检测的S43纳米抗体在雾化前、后对新冠病毒原始毒株假病毒的中和活性。
图7显示了本发明实施例10中所检测的S43纳米抗体在小鼠体内预防新冠病毒感染的功效。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。除非另有其它明确表示，否则在整个说明书和权利要求书中，术语“包括”或其变换如“包含”或“包括有”等等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分，而并未排除其它元件或其它组成部分。
另外，为了更好的说明本发明，在下文的具体实施方式中给出了众多的具体细节。本领域技术人员应当理解，没有某些具体细节，本发明同样可以实施。在一些实施例中，对于本领域技术人员熟知的原料、元件、方法、手段等未作详细描述，以便于凸显本发明的主旨。
以下，对本发明进行详述。
定义
“纳米抗体”，即“重链单域抗体”，该类抗体只包含一个重链可变区(VHH，variable domain of heavy chain of heavy-chain antibody)，相比于其他抗体，轻链天然缺失。
由于纳米抗体自身的生物物理优势，可以很容易地对其进行雾化并通过吸入器直接递送到肺部，从而治疗呼吸系统病毒引起的感染，被认为是非常有潜力的抗体类药物。
当提及配体/受体、抗体/抗原或其它结合对时，“特异性”结合是指在蛋白和/或其它生物试剂的异质群体中确定是否存在所述蛋白例如本发明的纳米抗体与SARS-CoV-2RBD蛋白的结合反应。因此，在所指定的条件下，特定的配体/抗原与特定的受体/抗体结合，并且并不以显著量与样品中存在的其它蛋白结合。
本发明以下实施例中所使用的试剂、酶、培养基、抗生素和牛奶等化学材料均为市售产品，例如，TRIzol购自Invitrogen，Superscript II First-Strand Synthesis Systemfor RT-PCR试剂盒购自Invitrogen。
一些常用的生物材料，如感受态细胞、载体、辅助噬菌体、待转化的细胞等也为市售产品，例如，pCAGGS载体购自MiaoLingPlasmid，293F细胞、HEK293T细胞等购自 ATCC；电感受态E.coli TG1细胞购自Lucigen，VCSM13辅助噬菌体购自StrataGene、质粒pMES4购自Addgene；protein A芯片购自GE Healthcare；Vero细胞购自ATCC CCL81。
一些合成类生物材料，例如引物、序列等需要人工合成的材料，均委托合成公司完成，例如，本发明中的引物(SED ID NO:14～19)由北京擎科生物科技有限公司合成。
本发明的SARS-CoV-2S蛋白、SARS-CoV-2RBD蛋白为发明者实验室获得(参见实施例1)。
实施例1：SARS-CoV-2S和SARS-CoV-2RBD的表达与纯化
在SARS-CoV-2S蛋白编码序列(如SEQ ID NO:10所示)的3’端连上三聚体标签(如SEQ ID NO:11所示)和8个组氨酸标签(hexa-His-tag)的编码序列及翻译终止密码子(TGA)，通过限制性内切酶位点EcoRI和XhoI，将其构建入pCAGGS载体中，转染至293F 细胞中，进行SARS-CoV-2S-his蛋白的表达。含有目的蛋白的细胞培养液经镍离子亲和层析(HisTrapTM excel(GE))和凝胶过滤层析(SuperoseTM 6Increase 10/300GL(GE))纯化后，可以获得较纯的目的蛋白SARS-CoV-2S-his。SARS-CoV-2S-his蛋白的SDS-PAGE鉴定大小约为200KD，结果如图1。
同样地，在SARS-CoV-2RBD蛋白编码序列(如SEQ ID NO:12所示)的3’端连上6 个组氨酸标签(hexa-His-tag)的编码序列及翻译终止密码子(TGA)，通过限制性内切酶位点EcoRI和XhoI，将其构建入pCAGGS载体中，转染至293F细胞中，进行SARS-CoV-2 RBD-his蛋白的表达。含有目的蛋白的细胞培养液经镍离子亲和层析(HisTrapTM excel((GEHealthcare))和凝胶过滤层析(SuperdexTM 200Increase 10/300GL column(GEHealthcare))纯化后，可以获得较纯的目的蛋白SARS-CoV-2RBD-his。SARS-CoV-2 RBD-his蛋白的SDS-PAGE鉴定大小为30KD左右，结果如图2。
在SARS-CoV-2RBD蛋白编码序列(如SEQ ID NO:12所示)的3’端连上人源Fc标签(hFc)的编码序列(如SEQ ID NO:13所示)及翻译终止密码子，通过连接EcoRI和XhoI 构建入pCAGGS载体中，转染至293F细胞中，进行SARS-CoV-2RBD-hFc蛋白的表达。
实施例2：羊驼免疫和抗体文库构建
实施例1中制备的带有6个组氨酸标签的SARS-CoV-2S蛋白200μg，用PBS稀释至终体积1mL，加1ml完全弗氏佐剂乳化5min，皮下多点注射进行免疫。之后每两周进行一次免疫，并改用MF59水溶性佐剂乳化S蛋白，第五次免疫后的第12天，采集 50-60mL的血液，分离PBMCs(外周血单个核细胞)。将分离的PBMCs加入1mL TRIzol (购自Invitrogen)，按照说明书的步骤提取总RNA。以提取的总RNA为模板，使用 Superscript II First-StrandSynthesis System for RT-PCR试剂盒(购自Invitrogen)，用随机引物oligo-dT12-18引物合成cDNA。以cDNA为模板，使用特异性引物CALL001和CALL002 (引物如表1)进行PCR试验，对700bp大小的条带进行切胶并回收。纯化后的DNA作为模板，使用巢式引物VHH-BACK和PMCF进行巢式PCR，来扩增纳米抗体(VHHs)序列，回收纯化大小在400bp左右VHHs序列。
使用双酶切法，通过限制性酶切位点PstⅠ和BstEⅡ，将VHHs片段连接入质粒pMES4。将纯化的克隆载体和电感受态E.coli TG1细胞混合，使用电转仪(BIO-RAD电转化仪MicroPulser)将克隆载体转化入电感受态E.coli TG1细胞，全部涂布在含有氨苄青霉素的选择性培养基上，37℃过夜培养后，收集所有的菌落于LB培养基中，离心并弃上清，用 LB重悬细胞，此为抗体文库。
表1、反应引物
实施例3：噬菌体展示技术筛选特异性的纳米抗体
取实施例2已转染重组质粒的E.coli TG1，以感染复数(multiplicity ofinfection,MOI) 约为20的比例，加入VCSM13辅助噬菌体，过夜培养后，4000rpm离心，取上清，0.22 μm的膜过滤后，按体积比1:4加入PEG6000/NaCl，混合后，4℃下放置至少1小时，8000×g 离心30min，弃上清，沉淀用PBS重悬，即为收集的噬菌体颗粒，测定噬菌体效价。
将2×1011个上述收集的噬菌体与等体积的5％(w/v)脱脂牛奶混合，加到包被有SARS-CoV-2S-his抗原的96孔板中，室温孵育1h后，用0.2M甘氨酸洗脱特异性的噬菌体，并用Tris-HCl(pH 9.1)中和洗脱的噬菌体。然后用该噬菌体感染E.coli TG1细胞，并对噬菌体进行扩增。再次准备包被有SARS-CoV-2S-his抗原的96孔板，进行第2轮淘选，来富集表达有特异性纳米抗体的噬菌体，共进行3轮淘选。每轮淘选后，从长有菌落的琼脂平板上随机挑选不同单一菌落，在37℃摇床中培养，随后加入VCSM13辅助噬菌体过夜扩培，第二天离心培养液，取噬菌体上清进行ELISA实验(采用SARS-CoV-2 RBD-his蛋白作为包被抗原)，当OD450nM>0.2时，判定为阳性反应，取对应的克隆，使用特异性引物MP57和GⅢ对质粒进行测序(引物如表2)，获得其质粒中编码VHHs的序列。通过序列测定，获得S43的核心编码序列。
表2、反应引物
实施例4：S43纳米抗体的表达
为了使S43的重链可变区更加完整，在实施例3获得的S43的核心编码序列的5’端连上QVQLQ的编码序列(CAGGTGCAGCTGCAG)，3’端连上QVTVSS的编码序列(CAGGTGACCGTGAGCTCT)，得到如SEQ ID NO:9的核苷酸序列，即本申请的S43纳米抗体的编码序列，然后在其后连上6个组氨酸标签(hexa-His-tag)的编码序列及翻译终止密码子TGA，通过限制性酶切位点EcoRI和XhoI，将其构建入pCAGGS载体中，转染293F细胞，培养5天后，收集上清，经过5000rpm离心30min后，经过0.22μm滤膜过滤后，经镍离子亲和层析(HisTrap TM excel((GE Healthcare))和凝胶过滤层析 (SuperdexTM 75Increase 10/300GL column(GE Healthcare))纯化后，获得较纯的目的蛋白。目的峰通过SDS-PAGE确定，结果如图3，得到纯化的S43纳米抗体。
实施例5：表面等离子共振技术检测抗体与SARS-CoV-2RBD的结合能力
表面等离子共振分析利用Biacore 8K(Biacore Inc.)进行。具体步骤如下：
选用protein A芯片(购自GE Healthcare)，通过protein A芯片与hFc的亲和力将实施例 1得到的SARS-CoV-2RBD-hFc蛋白固定在芯片上，固定量约为100RU，用PBST缓冲液(2.7mM KCl，137mM NaCl，4.3mM Na2HPO4，1.4mM KH2PO4，0.05％吐温)倍比稀释S43蛋白，从低浓度到高浓度逐一上样。抗体结合SARS-CoV-2RBD蛋白的动力学曲线如图4所示。S43纳米抗体结合SARS-CoV-2RBD的动力学常数如表3所示。结合动力学常数的计算是利用BIAevaluation software 8K(Biacore，Inc.)软件进行。说明S43纳米抗体能够和SARS-CoV-2RBD以较高的亲和力结合。
表3、抗体与SARS-CoV-2RBD蛋白结合的动力学常数
实施例6：SARS-CoV-2原始毒株及变异毒株假病毒的包装
1)分别将编码SARS-CoV-2原始毒株(WT)及变异毒株(Alpha(B.1.1.7)、Beta(B.1.351)、Gamma(P.1)、Kappa(B.1.617.1)和Delta(B.1.617.2))的S蛋白后18位氨基酸的基因去掉，S蛋白其余序列进行合成(由苏州金唯智提供合成服务)，得到 SARS-CoV-2-WT-S-del18、B.1.1.7-S-del18、B.1.351-S-del18、P.1-S-del18、B.1.617.1-S-del18、B.1.617.2-S-del18基因的核苷酸序列，序列分别如SEQ ID NO:20～25所示。
2)分别将1)中获得的该蛋白基因克隆到pCAGGS载体上，得到表达质粒 pCAGGS-SARS-CoV-2-WT-S-del18、pCAGGS-B.1.1.7-S-del18、pCAGGS-B.1.351-S-del18、 pCAGGS-P.1-S-del18、pCAGGS-B.1.617.1-S-del18、pCAGGS-B.1.617.2-S-del18。
SARS-CoV-2原始毒株及变异毒株假病毒的包装步骤如下：
a.细胞准备：在10cm细胞培养皿中铺HEK293T细胞，使第二天细胞汇合密度至80％左右。培养液为含10％FBS的DMEM培养基。
b.转染：取上述步骤2)中的各S蛋白的表达质粒，用PEI转染30μg质粒/10cm细胞培养皿，目的质粒与PEI按1:3比例混匀后转染，4-6h换培养液(含10％FBS的DMEM 培养基)，37℃培养24h。
c.加毒：将假病毒包装骨架病毒G*VSV-delG(购自武汉枢密脑科学技术有限公司)加入上述转染后的HEK293T细胞，37℃孵育2h，换培养液(含10％FBS的DMEM培养基)，并加入VSV-G抗体(表达该抗体的杂交瘤细胞购自ATCC细胞库)，在培养箱中继续培养30h。
d.收毒：收上清3000rpm离心10min,在超净工作台中经0.45μm无菌滤器过滤，去除细胞碎片，分装，-80℃冰箱冻存。
分别得到SARS-CoV-2原始毒株(SARS-CoV-2WT)及变异毒株(Alpha(B.1.1.7)、Beta(B.1.351)、Gamma(P.1)、Kappa(B.1.617.1)及Delta(B.1.617.2))的假病毒。
实施例7：S43纳米抗体中和SARS-CoV-2假病毒感染的检测
将实施例4得到的纯化的S43纳米抗体从5μg/mL开始5倍倍比稀释至第9个梯度(2.56pg/mL)与1.6x104 TCID50实施例6获得的一系列SARS-CoV-2原始毒株及变异毒株的假病毒分别混合，在37℃混合孵育1h，然后加入到预先接种Vero细胞(购自ATCC CCL81)的96孔板中。孵育18～20小时后，通过CQ1 Confocal Quantitative Image Cytometer(Yokogawa)检测。根据带GFP荧光的细胞数，计算抗体对上述一系列SARS-CoV-2原始毒株及变异毒株的假病毒的中和能力，其结果分别如图5A～5F所示，结果统计如表4。
表4、S43纳米抗体对新冠病毒的假病毒中和效果
*其中，IC50(μg/mL)a为S43纳米抗体的半抑制浓度。
由表4可知，S43纳米抗体能以高中和活性中和上述一系列SARS-CoV-2原始毒株及变异毒株的假病毒。
综上，S43纳米抗体能够作为高中和活性的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)羊驼源纳米抗体。
实施例8：S43纳米抗体中和SARS-CoV-2活病毒感染的检测
本实施例中，通过基于细胞病变效应(CPE)的活病毒中和试验，测定纳米抗体S43对新冠病毒活病毒的中和效果；具体程序如下：
将纳米抗体S43以2倍倍比稀释至第11个梯度，每个梯度4个重复孔，每孔50μL，将各稀释液与等体积的100TCID50的SARS-CoV-2原始毒株或其变异毒株Alpha、Beta 和Delta于37℃孵育；1小时后，将混合物加入到悬浮的Vero细胞中，并在37℃下继续孵育3天；观察和记录细胞病变情况；使用GraphPad Prism 7.0计算该纳米抗体抑制新冠病毒活病毒感染的IC50。
上述实验重复了两次，均在中国疾病预防控制中心的生物安全三级实验室(BSL3)中进行。
纳米抗体S43对新冠病毒原始毒株及其变异毒株的活病毒的中和效果见以下表5。
表5、S43纳米抗体对新冠病毒活病毒的中和效果
表5结果显示：本发明纳米抗体S43对新冠病毒原始毒株及其变异毒株的活病毒均具有良好的抑制效果。
实施例9：S43纳米抗体雾化前后稳定性的检测
使用Aerogen Solo(Aerogen Inc.,Chicago,USA)雾化器，将纳米抗体S43进行雾化，然后使用含有20mL PBS的全玻璃SKC(Eighty Four,PA,USA)收集雾化后的抗体，并按实施例7所述进行假病毒中和试验。
结果如图6所示，图6结果表明：本发明的纳米抗体S43在雾化前、后对新冠病毒原始毒株的假病毒的中和活性保持稳定，提示该纳米抗体适于通过雾化途径给药。
实施例10：S43纳米抗体在体内预防新冠病毒感染的效果检测
本实施例中，在7-8周的雌性BALB/c小鼠(购自北京维通利华实验动物技术有限公司)中，检测本发明纳米抗体S43预防新冠病毒感染的功效；具体程序如下：
1)对7-8周的雌性BALB/c小鼠进行麻醉，滴鼻感染重组腺病毒Ad5-hACE2(按照Jing Sun et al.,“Generation of a Broadly Useful Model for COVID-19Pathogenesis, Vaccination,and Treatment”Cell.2020Aug 6；182(3):734-743中描述的方法制得)；
2)第5天，对小鼠进行给药和攻毒；
具体地，纳米抗体S43通过滴鼻方式进行给药：将5只小鼠麻醉后，用移液枪往小鼠鼻孔滴注50μL 2mg/ml的纳米抗体S43，给药剂量为5mg/kg；此外，对另外5只小鼠通过滴鼻的方式给予200μL的PBS，作为对照组；
给药后6小时，再次将小鼠麻醉，滴鼻感染新冠病毒原始毒株的活病毒(5×105TCID50)；
3)第10天，解剖小鼠，取肺组织，提RNA，测病毒载量。
上述实验在中国疾病预防控制中心的生物安全三级实验室(BSL3)中进行。
结果如图7所示，图7结果显示，本发明的纳米抗体S43能有效降低肺部病毒载量，有效预防小鼠感染新冠病毒。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 中国科学院微生物研究所
<120> 一株羊驼源纳米抗体及其应用
<130> 1087-210169F-1
<160> 25
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 骆驼源纳米抗体S43的重链互补区的CDR1氨基酸序列
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(10)
<400> 1
Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr Ala Ile Gly
1 5 10
<210> 2
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 骆驼源纳米抗体S43的重链互补区的CDR2氨基酸序列
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(16)
<400> 2
Cys Ile Ser Ser Asn Asn Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
<210> 3
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 骆驼源纳米抗体S43的重链互补区的CDR3氨基酸序列
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(19)
<400> 3
Glu Pro Asp Tyr Ser Gly Val Tyr Tyr Tyr Thr Cys Gly Trp Thr Asp
1 5 10 15
Phe Gly Ser
<210> 4
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 骆驼源纳米抗体S43的FR1框架区
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(25)
<400> 4
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ala Pro Ser
20 25
<210> 5
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 骆驼源纳米抗体S43的FR2框架区
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(14)
<400> 5
Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val Ser
1 5 10
<210> 6
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 骆驼源纳米抗体S43的FR3框架区
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(32)
<400> 6
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala
20 25 30
<210> 7
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 骆驼源纳米抗体S43的FR4框架区
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(11)
<400> 7
Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 8
<211> 127
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 骆驼源纳米抗体S43的重链互补区的氨基酸序列
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(127)
<400> 8
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ala Pro Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr
20 25 30
Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ser Cys Ile Ser Ser Asn Asn Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Ala Glu Pro Asp Tyr Ser Gly Val Tyr Tyr Tyr Thr Cys Gly Trp Thr
100 105 110
Asp Phe Gly Ser Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 9
<211> 381
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 骆驼源纳米抗体S43的核苷酸序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(381)
<400> 9
caggtgcagc tgcaggagtc tggaggaggc ttggtgcagc ctggggggtc tctgagactc 60
acctgtgcac cctctggatt cactttggat tattatgcca taggctggtt ccgccaggcc 120
ccagggaagg agcgtgaggg ggtctcatgt attagtagta ataatagcac atactatgca 180
gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaacg ccaagaacac ggtgtatctg 240
caaatgaaca gcctgaaacc tgaggacaca gccgtttatt actgtgcagc agaaccagac 300
tatagcggtg tttactacta cacctgcgga tggactgact ttggttcctg gggccagggg 360
acgcaggtga ccgtgagctc t 381
<210> 10
<211> 3657
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SARS-CoV-2 S蛋白的核苷酸序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(3657)
<400> 10
atgcacagct cagcactgct ctgttgcctg gtcctcctga ctggggtgag ggccagccag 60
tgcgtgaacc tgaccacacg gacccagctc cctcccgcct acacaaactc tttcacccgg 120
ggcgtgtact accccgacaa ggtgttccgg tctagcgtgc tccactctac acaggacctg 180
ttcctccctt tcttcagcaa cgtgacatgg ttccacgcca tccacgtgtc tggcacaaac 240
ggcacaaagc ggttcgacaa ccccgtgctc cctttcaacg acggcgtgta cttcgccagc 300
accgagaagt ctaacattat ccggggctgg attttcggca ccacactcga ctctaagaca 360
cagtccctcc tgattgtgaa caacgccaca aacgtggtga ttaaggtgtg cgagttccag 420
ttctgcaacg accctttcct gggcgtgtac taccacaaga acaacaagtc ttggatggag 480
tctgagttca gagtgtactc tagcgccaac aactgcacct tcgagtacgt gtcccagcct 540
ttcctcatgg acctggaggg caagcagggc aacttcaaga acctgagaga gttcgtgttc 600
aagaacattg acggctactt caagatttac tctaagcaca ccccaattaa cctcgtgagg 660
gacctccctc agggcttctc cgccttagaa ccactggtgg acctccctat tggcattaac 720
atcacacgct tccagacact gctcgccctc caccggtctt acctgacccc aggcgactct 780
agctctggct ggacagccgg cgccgccgcc tactacgtgg gctacctgca gcctaggacc 840
ttcctcctga agtacaacga gaacggcaca attaccgacg ccgtggactg cgccctggac 900
ccactgtccg agacaaagtg cacactgaag tccttcacag tggagaaggg catttaccag 960
acatctaact tccgggtgca gcctacagag tctattgtgc ggttcccaaa catcacaaac 1020
ctgtgccctt tcggcgaggt gttcaacgcc acccggttcg cctctgtgta cgcctggaac 1080
cggaagcgga tctctaactg cgtggccgac tactccgtgc tgtacaactc cgcctctttc 1140
tctacattca agtgctacgg cgtgtcccct acaaagctga acgacctgtg cttcaccaac 1200
gtgtacgccg actctttcgt gattagaggc gacgaggtga ggcagattgc ccccggccag 1260
acaggcaaga tcgccgacta caactacaag ctgcccgacg acttcacagg ctgcgtgatc 1320
gcctggaact ctaacaacct ggactctaag gtgggcggca actacaacta cctgtacaga 1380
ctgttccgga agtctaacct gaagccattc gagagggaca ttagcaccga gatttaccag 1440
gccggctcta ccccatgcaa cggcgtggag ggcttcaact gctacttccc actgcagtcc 1500
tacggcttcc agcctacaaa cggcgtgggc taccagcctt accgggtggt ggtgctgtct 1560
ttcgagctgc tccacgcccc cgccacagtg tgcggcccaa agaagagcac aaacctcgtg 1620
aagaacaagt gcgtgaactt caacttcaac ggcctcacag gcacaggcgt gctcaccgag 1680
tctaacaaga agttcctccc tttccagcag ttcggccgcg acattgccga caccaccgac 1740
gccgtgcggg accctcagac actggaaatt ctcgacatca ccccttgcag cttcggcggc 1800
gtgtccgtga tcaccccagg cacaaacaca tctaaccagg tggccgtgct gtaccaggac 1860
gtgaactgca ccgaggtgcc agtggccatc cacgccgacc agctcacccc aacatggagg 1920
gtgtacagca caggctctaa cgtgttccag acccgggccg gctgcctcat tggcgccgag 1980
cacgtgaaca actcttacga gtgcgacatc cctattggcg ccggcatttg cgcctcttac 2040
cagacccaga caaactctcc atctagcgcc tcctctgtgg cctctcagag cattattgcc 2100
tacaccatgt ctctgggcgc cgagaactct gtggcctact ctaacaactc tattgccatc 2160
cctacaaact tcacaatttc tgtgaccacc gagattctcc cagtgtctat gaccaagaca 2220
tctgtggact gcaccatgta catttgcggc gactccaccg agtgctctaa cctcctgctc 2280
cagtacggct ctttctgcac ccagctcaac cgcgccctga caggcatcgc cgtggagcag 2340
gacaagaaca cccaggaggt gttcgcccag gtgaagcaga tttacaagac ccccccaatt 2400
aaggacttcg gcggcttcaa cttctctcag attctccccg acccatccaa gcctagcaag 2460
cggtccttca ttgaggacct cctgttcaac aaggtgacac tggccgacgc cggcttcatt 2520
aagcagtacg gcgactgcct gggcgacatt gccgcccggg acctgatttg cgcccagaag 2580
ttcaacggcc tcacagtgct ccccccactg ctcaccgacg agatgattgc ccagtacaca 2640
tctgccctcc tggccggcac aattacatct ggctggacct tcggcgccgg cgccgccctg 2700
cagatccctt tcgccatgca gatggcctac cgcttcaacg gcatcggcgt gacacagaac 2760
gtgctgtacg agaaccagaa gctgatcgcc aaccagttca acagcgccat tggcaagatt 2820
caggactctc tgagcagcac agccagcgcc ctgggcaagc tgcaggacgt ggtgaaccag 2880
aacgcccagg ccctgaacac actggtgaag cagctgtctt ctaacttcgg cgccatttct 2940
agcgtgctga acgacattct gtcgcggctg gaccctccag aggccgaggt gcagattgac 3000
aggctcatca caggcagact gcagtctctg cagacatacg tgacccagca gctgattaga 3060
gccgccgaga ttagagcctc cgccaacctg gccgccacca agatgagcga gtgcgtgctc 3120
ggccagtcta agcgggtgga cttctgcggc aagggctacc acctcatgtc tttccctcag 3180
tccgcccctc acggcgtggt gttcctccac gtgacatacg tgcccgccca ggagaagaac 3240
ttcaccacag cccccgccat ttgccacgac ggcaaggccc acttccctag ggagggcgtg 3300
ttcgtgtcta acggcaccca ctggttcgtg acccagcgga acttctacga gcctcagatt 3360
attaccacag acaacacatt cgtgagcggc aactgcgacg tggtgattgg cattgtgaac 3420
aacacagtgt acgacccact gcagcctgag ttggactctt tcaaggagga actcgacaag 3480
tacttcaaga accacacatc tcctgacgtg gacctgggcg acattagcgg cattaacgcc 3540
tctgtggtga acattcagaa ggagattgac agactgaacg aggtggccaa gaacctgaac 3600
gagtctctca ttgacctgca ggagctgggc aagtacgagc agtacattaa gtggcct 3657
<210> 11
<211> 114
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 三聚体标签的核苷酸序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(114)
<400> 11
cgactggtac cacgaggtag tccaggatca ggttatattc ctgaagctcc aagagatggg 60
caagcttacg ttcgtaaaga tggcgaatgg gtattacttt ctaccttttt agga 114
<210> 12
<211> 669
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SARS-CoV-2 RBD蛋白的核苷酸序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(669)
<400> 12
agagtgcaac ctacagaatc aatcgtgaga tttcctaaca tcacaaacct ttgccctttc 60
ggcgaggtgt ttaacgcaac aagatttgca tcagtgtacg catggaacag aaagcgtata 120
tcaaactgcg tggcagatta ctcagtgctt tacaactcag catcattcag tacgtttaaa 180
tgctacggag tgtcacctac aaagctaaat gatctttgct ttacaaacgt gtacgcagat 240
tcatttgtga tcagaggaga tgaagtgaga caaatcgcac ctggacaaac aggaaagatt 300
gccgattaca actacaaact tcctgatgat ttcaccggct gcgtgatcgc atggaactca 360
aacaaccttg attcaaaggt aggtggtaat tataattatt tgtataggct ctttcgtaag 420
agcaacttaa agccatttga gcgagatatc tcaacagaaa tctaccaagc aggatcaaca 480
ccttgcaacg gagtggaagg atttaactgc tactttcctc ttcaatcata cggatttcaa 540
cctacaaacg gagtgggata ccaaccttac agagtggtgg tgctttcatt tgaacttctt 600
cacgcacctg caacagtgtg cggacctaag aagagcacga accttgtgaa gaataagtgc 660
gtgaacttt 669
<210> 13
<211> 681
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人源Fc标签的编码核苷酸序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(681)
<400> 13
gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc 60
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 120
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 180
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 240
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 300
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaactatctc caaagccaaa 360
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggatga gctgaccaag 420
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 480
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 540
gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 600
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 660
ctctccctgt ctccgggtaa a 681
<210> 14
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CALL001引物序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(23)
<400> 14
gtcctggctg ctcttctaca agg 23
<210> 15
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CALL002引物序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(23)
<400> 15
ggtacgtgct gttgaactgt tcc 23
<210> 16
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VHH-BA引物序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(29)
<400> 16
gatgtgcagc tgcaggagtc tggrggagg 29
<210> 17
<211> 34
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> PMCF引物序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(34)
<400> 17
ctagtgcggc cgctgaggag acggtgacct gggt 34
<210> 18
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MP57引物序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(20)
<400> 18
ttatgcttcc ggctcgtatg 20
<210> 19
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GⅢ引物序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(19)
<400> 19
ccacagacag ccctcatag 19
<210> 20
<211> 3786
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 新冠病毒SARS-CoV-2-WT-S-del18的编码核苷酸序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(3786)
<400> 20
atgttcgtgt tcctggtgct gctgcccctg gtgagcagcc aatgcgtgaa cctgaccaca 60
agaacacagc tgccccccgc ctacaccaac agcttcacaa gaggcgtgta ctaccccgac 120
aaggtgttca gaagcagcgt cctccacagc acccaagacc tgttcctgcc cttcttcagc 180
aacgtgacct ggttccacgc catcagcggc accaacggca ccaagagatt cgacaacccc 240
gtgctgccct tcaacgacgg cgtgtacttc gctagcaccg agaagagcaa catcatcaga 300
ggctggatct tcggcaccac cctggacagc aaaacacaga gcctgctgat cgtgaacaac 360
gccacaaacg tggtgatcaa ggtgtgcgag tttcagttct gcaacgaccc cttcctgggc 420
gtgtaccaca agaacaacaa gagctggatg gagagcgagt tccgggtgta cagcagcgcc 480
aacaactgca ccttcgagta cgtgagccaa cccttcctga tggacctgga gggcaagcaa 540
ggcaatttta agaacctgag agagttcgtg ttcaagaaca tcgacggcta cttcaagatc 600
tacagcaagc acacccccat caacctggtg agagacctgc cccaaggctt cagcgccctg 660
gagcccctgg tggacctgcc catcggcatc aacatcacaa gatttcagac cctgctggcc 720
ctgcacagaa gctatctgac ccccggcgac agcagcagcg gctggaccgc cggcgccgcc 780
gcttactacg tgggctacct gcagcctaga accttcctgc tgaagtacaa cgagaacggc 840
acaatcaccg acgccgtcga ctgcgccctg gaccccctga gcgagaccaa gtgcaccctg 900
aagagcttca ccgtggagaa gggcatctat cagacaagca acttcagagt gcagcccacc 960
gagagcatcg tgagattccc caacatcacc aacctgtgcc ccttcggcga ggtgttcaac 1020
gccacaagat tcgctagcgt gtacgcctgg aacagaaaga gaatcagcaa ctgcgtggcc 1080
gactacagcg tgctgtacaa cagcgctagc ttcagcacct tcaagtgcta cggcgtcagc 1140
cccaccaagc tgaacgacct gtgcttcacc aacgtgtacg ccgacagctt cgtgatcaga 1200
ggcgacgagg tgagacagat cgcccccggg cagaccggca agatcgccga ctacaactac 1260
aagctgcccg acgacttcac cggctgcgtg atcgcctgga acagcaacaa cctggactcc 1320
aaggtgggcg gcaactacaa ctacctgtac agactgttca gaaagagcaa cctgaagccc 1380
ttcgagagag acatcagcac cgagatctac caagccggca gcaccccctg caacggcgtg 1440
gagggcttca actgctactt ccccctgcag agctacggct ttcagcccac ctacggcgtg 1500
ggctatcagc cctacagagt ggtcgtgctg agcttcgagc tgctgcacgc ccccgccacc 1560
gtgtgcggcc ccaagaagag caccaacctg gtgaagaaca agtgcgtgaa cttcaacttc 1620
aacggcctca ccgggaccgg cgtgctgacc gagagcaaca agaagttcct gcctttccaa 1680
cagttcggca gagacatcga cgacaccacc gacgccgtca gagaccctca gaccctggag 1740
atcctggaca tcacaccctg cagcttcggc ggcgtgagcg tgatcacccc cggcaccaac 1800
acaagcaacc aagtggccgt gctgtaccaa ggcgtgaact gcaccgaggt gcccgtggcc 1860
atccacgccg atcagctgac ccccacctgg agagtgtaca gcaccggcag caacgtgttt 1920
cagacaagag ccggctgcct gatcggcgcc gagcacgtga acaacagcta cgagtgcgac 1980
atccccatcg gcgccggcat ctgcgctagc tatcagacac agaccaacag ccacagaaga 2040
gctagaagcg tggctagcca aagcatcatc gcctacacca tgagcctggg cgccgagaac 2100
agcgtggcct acagcaacaa cagcatcgcc atccccacca acttcaccat cagcgtgacc 2160
accgaaatcc tgcctgtgag catgaccaag acaagcgtgg actgcaccat gtacatctgc 2220
ggcgacagca ccgagtgcag caacctgctc ctgcagtacg gcagcttctg cattcagctg 2280
aacagagccc tgaccggcat cgccgtggag caagacaaga acacccaaga ggtgttcgcc 2340
caagtgaagc agatctacaa gacccccccc atcaaggact tcggcggctt caacttcagc 2400
caaatcctgc ctgaccctag caagcctagc aagagaagct tcatcgagga cctgctgttc 2460
aacaaggtga ccctggccga cgccggcttc atcaagcagt acggcgactg cctgggcgac 2520
atcgccgcta gagacctgat ctgcgctcag aagttcaacg gcctgaccgt gctgcccccc 2580
ctgctgaccg acgagatgat cgctcagtac acaagcgccc tgctcgctgg caccatcaca 2640
agcgggtgga ccttcggcgc cggggccgcc ctgcagatcc ccttcgccat gcagatggcc 2700
tacagattca acggcatcgg cgtgacacag aacgtgctgt acgagaatca gaagctgatc 2760
gccaatcagt tcaacagcgc catcggcaag atccaagaca gcctgagcag caccgctagc 2820
gccctgggca agctgcaaga cgtggtgaat cagaacgccc aagccctgaa caccctggtg 2880
aagcagctga gcagcaactt cggcgccatc agcagcgtgc tgaacgacat cctggctaga 2940
ctggacaagg tggaggccga ggtgcagatc gatagactga tcaccggcag actgcagagc 3000
ctgcagacct acgtgacaca gcagctgatc agagccgccg agatcagagc tagcgccaac 3060
ctggccgcca ccaagatgag cgagtgcgtg ctggggcaga gcaagagagt ggacttctgc 3120
ggcaagggct accacctgat gagcttccct cagagcgccc cccacggcgt ggtgttcctg 3180
cacgtgacct acgtgcccgc ccaagagaag aacttcacca ccgcccccgc catctgccac 3240
gacggcaagg cccacttccc tagagagggc gtgttcgtga gcaacggcac ccactggttc 3300
gtgacacaga gaaacttcta cgagcctcag atcatcacca cccacaacac cttcgtgagc 3360
ggcaactgcg acgtggtgat cggcatcgtg aacaacaccg tgtacgaccc tctgcagccc 3420
gagctggaca gcttcaagga ggagctggac aagtacttca agaaccacac aagccccgac 3480
gtggacctgg gcgacatcag cgggatcaac gctagcgtgg tgaacattca gaaggaaatc 3540
gacagactga atgaggtggc caagaacctg aacgagagcc tgatcgacct gcaagagctg 3600
ggcaagtacg agcagtacat caagtggccc tggtacatct ggctgggctt catcgccggc 3660
ctgatcgcca tcgtgatggt gaccatcatg ctgtgctgca tgacaagctg ctgctcctgt 3720
ctgaaggggt gctgcagctg cggcagctgc tgcaaggact acaaggacga tgacgacaag 3780
ggcccc 3786
<210> 21
<211> 3786
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 新冠病毒SARS-CoV-2-B.1.1.7-S-del18的编码核苷酸序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(3786)
<400> 21
atgttcgtgt tcctggtgct gctgcccctg gtgagcagcc aatgcgtgaa cctgaccaca 60
agaacacagc tgccccccgc ctacaccaac agcttcacaa gaggcgtgta ctaccccgac 120
aaggtgttca gaagcagcgt cctccacagc acccaagacc tgttcctgcc cttcttcagc 180
aacgtgacct ggttccacgc catcagcggc accaacggca ccaagagatt cgacaacccc 240
gtgctgccct tcaacgacgg cgtgtacttc gctagcaccg agaagagcaa catcatcaga 300
ggctggatct tcggcaccac cctggacagc aaaacacaga gcctgctgat cgtgaacaac 360
gccacaaacg tggtgatcaa ggtgtgcgag tttcagttct gcaacgaccc cttcctgggc 420
gtgtaccaca agaacaacaa gagctggatg gagagcgagt tccgggtgta cagcagcgcc 480
aacaactgca ccttcgagta cgtgagccaa cccttcctga tggacctgga gggcaagcaa 540
ggcaatttta agaacctgag agagttcgtg ttcaagaaca tcgacggcta cttcaagatc 600
tacagcaagc acacccccat caacctggtg agagacctgc cccaaggctt cagcgccctg 660
gagcccctgg tggacctgcc catcggcatc aacatcacaa gatttcagac cctgctggcc 720
ctgcacagaa gctatctgac ccccggcgac agcagcagcg gctggaccgc cggcgccgcc 780
gcttactacg tgggctacct gcagcctaga accttcctgc tgaagtacaa cgagaacggc 840
acaatcaccg acgccgtcga ctgcgccctg gaccccctga gcgagaccaa gtgcaccctg 900
aagagcttca ccgtggagaa gggcatctat cagacaagca acttcagagt gcagcccacc 960
gagagcatcg tgagattccc caacatcacc aacctgtgcc ccttcggcga ggtgttcaac 1020
gccacaagat tcgctagcgt gtacgcctgg aacagaaaga gaatcagcaa ctgcgtggcc 1080
gactacagcg tgctgtacaa cagcgctagc ttcagcacct tcaagtgcta cggcgtcagc 1140
cccaccaagc tgaacgacct gtgcttcacc aacgtgtacg ccgacagctt cgtgatcaga 1200
ggcgacgagg tgagacagat cgcccccggg cagaccggca agatcgccga ctacaactac 1260
aagctgcccg acgacttcac cggctgcgtg atcgcctgga acagcaacaa cctggactcc 1320
aaggtgggcg gcaactacaa ctacctgtac agactgttca gaaagagcaa cctgaagccc 1380
ttcgagagag acatcagcac cgagatctac caagccggca gcaccccctg caacggcgtg 1440
gagggcttca actgctactt ccccctgcag agctacggct ttcagcccac ctacggcgtg 1500
ggctatcagc cctacagagt ggtcgtgctg agcttcgagc tgctgcacgc ccccgccacc 1560
gtgtgcggcc ccaagaagag caccaacctg gtgaagaaca agtgcgtgaa cttcaacttc 1620
aacggcctca ccgggaccgg cgtgctgacc gagagcaaca agaagttcct gcctttccaa 1680
cagttcggca gagacatcga cgacaccacc gacgccgtca gagaccctca gaccctggag 1740
atcctggaca tcacaccctg cagcttcggc ggcgtgagcg tgatcacccc cggcaccaac 1800
acaagcaacc aagtggccgt gctgtaccaa ggcgtgaact gcaccgaggt gcccgtggcc 1860
atccacgccg atcagctgac ccccacctgg agagtgtaca gcaccggcag caacgtgttt 1920
cagacaagag ccggctgcct gatcggcgcc gagcacgtga acaacagcta cgagtgcgac 1980
atccccatcg gcgccggcat ctgcgctagc tatcagacac agaccaacag ccacagaaga 2040
gctagaagcg tggctagcca aagcatcatc gcctacacca tgagcctggg cgccgagaac 2100
agcgtggcct acagcaacaa cagcatcgcc atccccacca acttcaccat cagcgtgacc 2160
accgaaatcc tgcctgtgag catgaccaag acaagcgtgg actgcaccat gtacatctgc 2220
ggcgacagca ccgagtgcag caacctgctc ctgcagtacg gcagcttctg cattcagctg 2280
aacagagccc tgaccggcat cgccgtggag caagacaaga acacccaaga ggtgttcgcc 2340
caagtgaagc agatctacaa gacccccccc atcaaggact tcggcggctt caacttcagc 2400
caaatcctgc ctgaccctag caagcctagc aagagaagct tcatcgagga cctgctgttc 2460
aacaaggtga ccctggccga cgccggcttc atcaagcagt acggcgactg cctgggcgac 2520
atcgccgcta gagacctgat ctgcgctcag aagttcaacg gcctgaccgt gctgcccccc 2580
ctgctgaccg acgagatgat cgctcagtac acaagcgccc tgctcgctgg caccatcaca 2640
agcgggtgga ccttcggcgc cggggccgcc ctgcagatcc ccttcgccat gcagatggcc 2700
tacagattca acggcatcgg cgtgacacag aacgtgctgt acgagaatca gaagctgatc 2760
gccaatcagt tcaacagcgc catcggcaag atccaagaca gcctgagcag caccgctagc 2820
gccctgggca agctgcaaga cgtggtgaat cagaacgccc aagccctgaa caccctggtg 2880
aagcagctga gcagcaactt cggcgccatc agcagcgtgc tgaacgacat cctggctaga 2940
ctggacaagg tggaggccga ggtgcagatc gatagactga tcaccggcag actgcagagc 3000
ctgcagacct acgtgacaca gcagctgatc agagccgccg agatcagagc tagcgccaac 3060
ctggccgcca ccaagatgag cgagtgcgtg ctggggcaga gcaagagagt ggacttctgc 3120
ggcaagggct accacctgat gagcttccct cagagcgccc cccacggcgt ggtgttcctg 3180
cacgtgacct acgtgcccgc ccaagagaag aacttcacca ccgcccccgc catctgccac 3240
gacggcaagg cccacttccc tagagagggc gtgttcgtga gcaacggcac ccactggttc 3300
gtgacacaga gaaacttcta cgagcctcag atcatcacca cccacaacac cttcgtgagc 3360
ggcaactgcg acgtggtgat cggcatcgtg aacaacaccg tgtacgaccc tctgcagccc 3420
gagctggaca gcttcaagga ggagctggac aagtacttca agaaccacac aagccccgac 3480
gtggacctgg gcgacatcag cgggatcaac gctagcgtgg tgaacattca gaaggaaatc 3540
gacagactga atgaggtggc caagaacctg aacgagagcc tgatcgacct gcaagagctg 3600
ggcaagtacg agcagtacat caagtggccc tggtacatct ggctgggctt catcgccggc 3660
ctgatcgcca tcgtgatggt gaccatcatg ctgtgctgca tgacaagctg ctgctcctgt 3720
ctgaaggggt gctgcagctg cggcagctgc tgcaaggact acaaggacga tgacgacaag 3780
ggcccc 3786
<210> 22
<211> 3786
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 新冠病毒SARS-CoV-2-B.1.351-S-del18的编码核苷酸序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(3786)
<400> 22
atgttcgtgt tcctggtgct gctgcccctg gtgagcagcc aatgcgtgaa cttcaccaca 60
cggacccagc tccctcccgc ctacacaaac tctttcaccc ggggcgtgta ctaccccgac 120
aaggtgttcc ggtctagcgt gctccactct acacaggacc tgttcctccc tttcttcagc 180
aacgtgacat ggttccacgc catccacgtg tctggcacaa acggcacaaa gcggttcgcc 240
aaccccgtgc tccctttcaa cgacggcgtg tacttcgcca gcaccgagaa gtctaacatt 300
atccggggct ggattttcgg caccacactc gactctaaga cacagtccct cctgattgtg 360
aacaacgcca caaacgtggt gattaaggtg tgcgagttcc agttctgcaa cgaccctttc 420
ctgggcgtgt actaccacaa gaacaacaag tcttggatgg agtctgagtt cagagtgtac 480
tctagcgcca acaactgcac cttcgagtac gtgtcccagc ctttcctcat ggacctggag 540
ggcaagcagg gcaacttcaa gaacctgaga gagttcgtgt tcaagaacat tgacggctac 600
ttcaagattt actctaagca caccccaatt aacctcgtga ggggcctccc tcagggcttc 660
tccgccttag aaccactggt ggacctccct attggcatta acatcacacg cttccagaca 720
ctgcacatct cttacctgac cccaggcgac tctagctctg gctggacagc cggcgccgcc 780
gcctactacg tgggctacct gcagcctagg accttcctcc tgaagtacaa cgagaacggc 840
acaattaccg acgccgtgga ctgcgccctg gacccactgt ccgagacaaa gtgcacactg 900
aagtccttca cagtggagaa gggcatttac cagacatcta acttccgggt gcagcctaca 960
gagtctattg tgcggttccc aaacatcaca aacctgtgcc ctttcggcga ggtgttcaac 1020
gccacccggt tcgcctctgt gtacgcctgg aaccggaagc ggatctctaa ctgcgtggcc 1080
gactactccg tgctgtacaa ctccgcctct ttctctacat tcaagtgcta cggcgtgtcc 1140
cctacaaagc tgaacgacct gtgcttcacc aacgtgtacg ccgactcttt cgtgattaga 1200
ggcgacgagg tgaggcagat tgcccccggc cagacaggca acatcgccga ctacaactac 1260
aagctgcccg acgacttcac aggctgcgtg atcgcctgga actctaacaa cctggactct 1320
aaggtgggcg gcaactacaa ctacctgtac agactgttcc ggaagtctaa cctgaagcca 1380
ttcgagaggg acattagcac cgagatttac caggccggct ctaccccatg caacggcgtg 1440
aagggcttca actgctactt cccactgcag tcctacggct tccagcctac atacggcgtg 1500
ggctaccagc cttaccgggt ggtggtgctg tctttcgagc tgctccacgc ccccgccaca 1560
gtgtgcggcc caaagaagag cacaaacctc gtgaagaaca agtgcgtgaa cttcaacttc 1620
aacggcctca caggcacagg cgtgctcacc gagtctaaca agaagttcct ccctttccag 1680
cagttcggcc gcgacattgc cgacaccacc gacgccgtgc gggaccctca gacactggaa 1740
attctcgaca tcaccccttg cagcttcggc ggcgtgtccg tgatcacccc aggcacaaac 1800
acatctaacc aggtggccgt gctgtaccag ggcgtgaact gcaccgaggt gccagtggcc 1860
atccacgccg accagctcac cccaacatgg agggtgtaca gcacaggctc taacgtgttc 1920
cagacccggg ccggctgcct cattggcgcc gagcacgtga acaactctta cgagtgcgac 1980
atccctattg gcgccggcat ttgcgcctct taccagaccc agacaaactc tccacggaga 2040
gcccggtctg tggcctctca gagcattatt gcctacacca tgtctctggg cgtggagaac 2100
tctgtggcct actctaacaa ctctattgcc atccctacaa acttcacaat ttctgtgacc 2160
accgagattc tcccagtgtc tatgaccaag acatctgtgg actgcaccat gtacatttgc 2220
ggcgactcca ccgagtgctc taacctcctg ctccagtacg gctctttctg cacccagctc 2280
aaccgcgccc tgacaggcat cgccgtggag caggacaaga acacccagga ggtgttcgcc 2340
caggtgaagc agatttacaa gaccccccca attaaggact tcggcggctt caacttctct 2400
cagattctcc ccgacccatc caagcctagc aagcggtcct tcattgagga cctcctgttc 2460
aacaaggtga cactggccga cgccggcttc attaagcagt acggcgactg cctgggcgac 2520
attgccgccc gggacctgat ttgcgcccag aagttcaacg gcctcacagt gctcccccca 2580
ctgctcaccg acgagatgat tgcccagtac acatctgccc tcctggccgg cacaattaca 2640
tctggctgga ccttcggcgc cggcgccgcc ctgcagatcc ctttcgccat gcagatggcc 2700
taccgcttca acggcatcgg cgtgacacag aacgtgctgt acgagaacca gaagctgatc 2760
gccaaccagt tcaacagcgc cattggcaag attcaggact ctctgagcag cacagccagc 2820
gccctgggca agctgcagga cgtggtgaac cagaacgccc aggccctgaa cacactggtg 2880
aagcagctgt cttctaactt cggcgccatt tctagcgtgc tgaacgacat tctgtcgcgg 2940
ctggacaagg tggaggccga ggtgcagatt gacaggctca tcacaggcag actgcagtct 3000
ctgcagacat acgtgaccca gcagctgatt agagccgccg agattagagc ctccgccaac 3060
ctggccgcca ccaagatgag cgagtgcgtg ctcggccagt ctaagcgggt ggacttctgc 3120
ggcaagggct accacctcat gtctttccct cagtccgccc ctcacggcgt ggtgttcctc 3180
cacgtgacat acgtgcccgc ccaggagaag aacttcacca cagcccccgc catttgccac 3240
gacggcaagg cccacttccc tagggagggc gtgttcgtgt ctaacggcac ccactggttc 3300
gtgacccagc ggaacttcta cgagcctcag attattacca cagacaacac attcgtgagc 3360
ggcaactgcg acgtggtgat tggcattgtg aacaacacag tgtacgaccc actgcagcct 3420
gagttggact ctttcaagga ggaactcgac aagtacttca agaaccacac atctcctgac 3480
gtggacctgg gcgacattag cggcattaac gcctctgtgg tgaacattca gaaggagatt 3540
gacagactga acgaggtggc caagaacctg aacgagtctc tcattgacct gcaggagctg 3600
ggcaagtacg agcagtacat taagtggcct tggtacattt ggctgggctt cattgccggc 3660
ctgatcgcca ttgtgatggt gaccatcatg ctgtgctgca tgacatcttg ctgcagctgc 3720
ctgaagggct gctgctcttg cggctcttgc tgcaaggact acaaggacga cgatgacaag 3780
ggacct 3786
<210> 23
<211> 3765
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 新冠病毒SARS-CoV-2-P.1-S-del18的编码核苷酸序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(3765)
<400> 23
atgttcgtgt tcctggtgct gctgcccctg gtgagcagcc aatgcgtgaa cctgacaaac 60
agaactcaat taccctctgc atacactaat tctttcacac gtggtgttta ttaccctgac 120
aaagttttca gatcctcagt tttacattca actcaggact tgttcttacc tttcttttcc 180
aatgttactt ggttccatgc tatacatgtc tctgggacca atggtactaa gaggtttgat 240
aaccctgtcc taccatttaa tgatggtgtt tattttgctt ccactgagaa gtctaacata 300
ataagaggct ggatttttgg tactacttta gattcgaaga cccagtccct acttattgtt 360
aataacgcta ctaatgttgt tattaaagtc tgtgaatttc aattttgtaa ttatccattt 420
ttgggtgttt attaccacaa aaacaacaaa agttggatgg aaagtgagtt cagagtttat 480
tctagtgcga ataattgcac ttttgaatat gtctctcagc cttttcttat ggaccttgaa 540
ggaaaacagg gtaatttcaa aaatcttagt gaatttgtgt ttaagaatat tgatggttat 600
tttaaaatat attctaagca cacgcctatt aatttagtgc gtgatctccc tcagggtttt 660
tcggctttag aaccattggt agatttgcca ataggtatta acatcactag gtttcaaact 720
ttacttgctt tacatagaag ttatttgact cctggtgatt cttcttcagg ttggacagct 780
ggtgctgcag cttattatgt gggttatctt caacctagga cttttctatt aaaatataat 840
gaaaatggaa ccattacaga tgctgtagac tgtgcacttg accctctctc agaaacaaag 900
tgtacgttga aatccttcac tgtagaaaaa ggaatctatc aaacttctaa ctttagagtc 960
caaccaacag aatctattgt tagatttcct aatattacaa acttgtgccc ttttggtgaa 1020
gtttttaacg ccaccagatt tgcatctgtt tatgcttgga acaggaagag aatcagcaac 1080
tgtgttgctg attattctgt cctatataat tccgcatcat tttccacttt taagtgttat 1140
ggagtgtctc ctactaaatt aaatgatctc tgctttacta atgtctatgc agattcattt 1200
gtaattagag gtgatgaagt cagacaaatc gctccagggc aaactggaac gattgctgat 1260
tataattata aattaccaga tgattttaca ggctgcgtta tagcttggaa ttctaacaat 1320
cttgattcta aggttggtgg taattataat tacctgtata gattgtttag gaagtctaat 1380
ctcaaacctt ttgagagaga tatttcaact gaaatctatc aggccggtag cacaccttgt 1440
aatggtgtta aaggttttaa ttgttacttt cctttacaat catatggttt ccaacccact 1500
tatggtgttg gttaccaacc atacagagta gtagtacttt cttttgaact tctacatgca 1560
ccagcaactg tttgtggacc taaaaagtct actaatttgg ttaaaaacaa atgtgtcaat 1620
ttcaacttca atggtttaac aggcacaggt gttcttactg agtctaacaa aaagtttctg 1680
cctttccaac aatttggcag agacattgct gacactactg atgctgtccg tgatccacag 1740
acacttgaga ttcttgacat tacaccatgt tcttttggtg gtgtcagtgt tataacacca 1800
ggaacaaata cttctaacca ggttgctgtt ctttatcagg gtgttaactg cacagaagtc 1860
cctgttgcta ttcatgcaga tcaacttact cctacttggc gtgtttattc tacaggttct 1920
aatgtttttc aaacacgtgc aggctgttta ataggggctg aatatgtcaa caactcatat 1980
gagtgtgaca tacccattgg tgcaggtata tgcgctagtt atcagactca gactaattct 2040
cctcggcggg cacgtagtgt agctagtcaa tccatcattg cctacactat gtcacttggt 2100
gcagaaaatt cagttgctta ctctaataac tctattgcca tacccacaaa ttttactatt 2160
agtgttacca cagaaattct accagtgtct atgaccaaga catcagtaga ttgtacaatg 2220
tacatttgtg gtgattcaac tgaatgcagc aatcttttgt tgcaatatgg cagtttttgt 2280
acacaattaa accgtgcttt aactggaata gctgttgaac aagacaaaaa cacccaagaa 2340
gtttttgcac aagtcaaaca aatttacaaa acaccaccaa ttaaagattt tggtggtttt 2400
aatttttcac aaatattacc agatccatca aaaccaagca agaggtcatt tattgaagat 2460
ctacttttca acaaagtgac acttgcagat gctggcttca tcaaacaata tggtgattgc 2520
cttggtgata ttgctgctag agacctcatt tgtgcacaaa agtttaacgg ccttactgtt 2580
ttgccacctt tgctcacaga tgaaatgatt gctcaataca cttctgcact gttagcgggt 2640
acaatcactt ctggttggac ctttggtgca ggtgctgcat tacaaatacc atttgctatg 2700
caaatggctt ataggtttaa tggtattgga gttacacaga atgttctcta tgagaaccaa 2760
aaattgattg ccaaccaatt taatagtgct attggcaaaa ttcaagactc actttcttcc 2820
acagcaagtg cacttggaaa acttcaagat gtggtcaacc aaaatgcaca agctttaaac 2880
acgcttgtta aacaacttag ctccaatttt ggtgcaattt caagtgtttt aaatgatatc 2940
ctttcacgtc ttgacaaagt tgaggctgaa gtgcaaattg ataggttgat cacaggcaga 3000
cttcaaagtt tgcagacata tgtgactcaa caattaatta gagctgcaga aatcagagct 3060
tctgctaatc ttgctgctat taaaatgtca gagtgtgtac ttggacaatc aaaaagagtt 3120
gatttttgtg gaaagggcta tcatcttatg tccttccctc agtcagcacc tcatggtgta 3180
gtcttcttgc atgtgactta tgtccctgca caagaaaaga acttcacaac tgctcctgcc 3240
atttgtcatg atggaaaagc acactttcct cgtgaaggtg tctttgtttc aaatggcaca 3300
cactggtttg taacacaaag gaatttttat gaaccacaaa tcattactac agacaacaca 3360
tttgtgtctg gtaactgtga tgttgtaata ggaattgtca acaacacagt ttatgatcct 3420
ttgcaacctg aattagactc attcaaggag gagttagata aatattttaa gaatcataca 3480
tcaccagatg ttgatttagg tgacatctct ggcattaatg cttcatttgt aaacattcaa 3540
aaagaaattg accgcctcaa tgaggttgcc aagaatttaa atgaatctct catcgatctc 3600
caagaacttg gaaagtatga gcagtatata aaatggccat ggtacatttg gctaggtttt 3660
atagctggct tgattgccat agtaatggtg acaattatgc tttgctgtat gaccagttgc 3720
tgtagttgtc tcaagggctg ttgttcttgt ggatcctgct gcaaa 3765
<210> 24
<211> 3795
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 新冠病毒SARS-CoV-2-B.1.617.1-S-del18的编码核苷酸序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(3795)
<400> 24
atgttcgtgt tcctggtgct gctgcccctg gtgagcagcc aatgcgtgaa cctgaccaca 60
agaacacagc tgccccccgc ctacaccaac agcttcacaa gaggcgtgta ctaccccgac 120
aaggtgttca gaagcagcgt gctgcactcc acccaagacc tgttcctgcc cttcttcagc 180
aacgtgacct ggttccacgc catccacgtg agcggcacca acggcaccaa gagattcgac 240
aaccccgtgc tgcccttcaa cgacggcgtg tacttcgcta gcaccgagaa gagcaacatc 300
atcagaggct ggatcttcgg caccaccctc gatagcaaga cacagagcct gctgatcgtg 360
aataatgcta ccaacgtggt gatcaaggtg tgcgagtttc agttctgcaa cgaccccttc 420
ctggacgtgt actaccacaa gaacaacaag agctggatga agagcgagtt cagagtgtac 480
agcagcgcta acaactgcac cttcgagtac gtgagccaac ccttcctgat ggacctggag 540
ggcaagcaag gcaacttcaa gaacctgaga gagttcgtgt tcaagaacat cgacggctac 600
ttcaagatct acagcaagca cacccccatc aacctggtga gagacctgcc ccaaggcttc 660
agcgccctgg agcccctggt ggacctgccc atcggcatca acatcacaag atttcagacc 720
ctgctggccc tgcacagatc ctacctcacc cccggcgata gcagcagcgg gtggacagcc 780
ggcgctgccg cctactacgt gggctacctg cagcctagaa ccttcctgct gaagtacaac 840
gagaacggca ccattaccga cgctgtggac tgtgccctgg accccctgag cgagaccaag 900
tgcaccctga agagcttcac cgtggagaag ggcatctatc agacaagcaa cttcagagtg 960
cagcccaccg agagcatcgt gagattcccc aacatcacca acctgtgccc cttcggcgag 1020
gtgttcaacg ccacaagatt cgctagcgtg tacgcctgga atagaaagag aatcagcaac 1080
tgcgtggccg actacagcgt gctgtacaac agcgctagct tcagcacctt caaatgctat 1140
ggcgtgagcc ccaccaagct gaacgacctg tgcttcacca acgtgtacgc cgacagcttc 1200
gtgatcagag gcgacgaggt gagacagatc gcccccgggc agaccggcaa gatcgccgat 1260
tacaactaca aactgcccga cgacttcacc ggctgcgtga tcgcctggaa cagcaacaac 1320
ctggacagca aggtcggcgg caactacaac tacagataca gactgttcag aaagagcaac 1380
ctgaagccct tcgagagaga catcagcacc gagatctacc aagccggcag caccccctgc 1440
aacggcgtgc aaggcttcaa ctgctacttc cccctgcaga gctacggctt tcagcccacc 1500
aacggcgtgg gctatcagcc ctacagagtg gtcgtgctga gcttcgagct gctgcacgct 1560
cccgccaccg tctgcggccc caagaagtcc accaacctcg tgaagaacaa gtgcgtgaac 1620
ttcaacttta acggcctgac cgggaccggc gtgctgaccg agagcaacaa gaagtttctg 1680
cccttccaac agttcggcag agacatcgcc gacaccaccg acgccgtgag agaccctcag 1740
accctggaga tcctggacat caccccttgt agcttcggcg gcgtgagcgt gatcaccccc 1800
ggcaccaaca caagcaacca agtggccgtg ctgtaccaag gcgtgaactg caccgaggtg 1860
cccgtggcca tccacgccga tcagctgacc cccacctgga gagtctacag caccggcagc 1920
aacgtgtttc agacaagagc cggctgcctg atcggcgccg agcacgtgaa caacagctac 1980
gagtgcgaca tccccatcgg cgccggcatc tgcgctagct atcagacaca gaccaacagc 2040
agacggagag ctagaagcgt ggctagccaa agcatcatcg cctacaccat gagcctgggc 2100
gccgagaaca gcgtggccta cagcaacaac agcatcgcca tccccaccaa cttcaccatc 2160
agcgtgacca ccgagatcct gcccgtcagc atgaccaaga caagcgtgga ctgcaccatg 2220
tacatctgcg gcgacagcac cgagtgcagc aacctgctcc tgcagtacgg cagcttctgc 2280
acacagctga acagagccct gaccggcatc gccgtggagc aagacaagaa cacccaagag 2340
gtgttcgccc aagtgaagca gatctacaag acccccccca tcaaggactt cggcggcttc 2400
aacttcagcc aaatcctccc cgatcctagc aagcctagca agagaagctt catcgaggac 2460
ctgctgttca acaaggtgac cctggccgac gccggcttca tcaagcagta cggcgactgc 2520
ctgggcgaca tcgccgctag agacctgatc tgcgctcaga agtttaacgg cctgaccgtg 2580
ctcccccccc tgctgaccga cgagatgatc gctcagtaca caagcgccct gctggccggc 2640
accatcacaa gcggctggac atttggcgcc ggcgccgctc tgcagatccc cttcgccatg 2700
cagatggcct acagattcaa cggcatcggc gtgacacaga acgtgctgta cgagaatcag 2760
aagctgatcg ccaatcagtt caacagcgcc atcggcaaga tccaagacag cctgagcagc 2820
accgctagcg ccctgggcaa gctgcaagac gtggtgaatc agaacgccca agccctgaac 2880
accctggtga agcagctgag cagcaacttc ggcgccatca gcagcgtgct gaacgatatc 2940
ctgagcagac tggacaaggt ggaggccgag gtgcagatcg atagactgat taccggcaga 3000
ctgcagagcc tgcagaccta cgtgacacag cagctgatca gagccgccga gatcagagct 3060
agcgccaacc tggccgccac caagatgagc gagtgcgtgc tggggcagag caagagagtg 3120
gacttctgcg gcaagggcta ccacctgatg agcttccctc agagcgcccc ccacggcgtg 3180
gtgttcctgc acgtgaccta cgtgcccgcc cacgaaaaga acttcacaac cgcccctgcc 3240
atctgccacg acggcaaggc ccacttccct agagagggcg tgttcgtgag caacggcacc 3300
gactggttcg tgacacagag aaacttctac gagcctcaga tcatcaccac cgacaacacc 3360
ttcgtgagcg gcaactgcga cgtggtgatc ggcatcgtga acaacaccgt gtacgaccct 3420
ctgcagcccg agctggacag cttcaaggag gagctggaca agtacttcaa gaatcacaca 3480
agccccgacg tggacctggg ggacatcagc ggcatcaacg ctagcgtggt gaacattcag 3540
aaggagatcg acagactgaa cgaagtggcc aagaacctga acgagagcct gatcgacctg 3600
caagagctgg gcaagtacga gcagtacatc aagtggccct ggtacatctg gctgggcttc 3660
atcgccggcc tgatcgccat cgtgatggtg accatcatgc tgtgctgcat gacaagctgc 3720
tgcagctgcc tgaagggctg ctgctcctgc ggcagctgct gcaaggacta caaggacgat 3780
gacgacaagg gcccc 3795
<210> 25
<211> 3789
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 新冠病毒SARS-CoV-2-b.1.617.2-S-del18的编码核苷酸序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(3789)
<400> 25
atgttcgtgt tcctcgtgct cctgcctctg gtgtctagcc agtgcgtgaa cctgagaaca 60
cggacccagc tccctcccgc ctacacaaac tctttcaccc ggggcgtgta ctaccccgac 120
aaggtgttcc ggtctagcgt gctccactct acacaggacc tgttcctccc tttcttcagc 180
aacgtgacat ggttccacgc catccacgtg tctggcacaa acggcacaaa gcggttcgac 240
aaccccgtgc tccctttcaa cgacggcgtg tacttcgcca gcaccgagaa gtctaacatt 300
atccggggct ggattttcgg caccacactc gactctaaga cacagtccct cctgattgtg 360
aacaacgcca caaacgtggt gattaaggtg tgcgagttcc agttctgcaa cgaccctttc 420
ctggacgtgt actaccacaa gaacaacaag tcttggatgg agtctggcgt gtactctagc 480
gccaacaact gcaccttcga gtacgtgtcc cagcctttcc tcatggacct ggagggcaag 540
cagggcaact tcaagaacct gagagagttc gtgttcaaga acattgacgg ctacttcaag 600
atttactcta agcacacccc aattaacctc gtgagggacc tccctcaggg cttctccgtg 660
ttagaaccac tggtggacct ccctattggc attaacatca cacgcttcca gacactgctc 720
gccctccacc ggtcttacct gaccccaggc gactctagct ctggctggac agccggcgcc 780
gccgcctact acgtgggcta cctgcagcct aggaccttcc tcctgaagta caacgagaac 840
ggcacaatta ccgacgccgt ggactgcgcc ctggacccac tgtccgagac aaagtgcaca 900
ctgaagtcct tcacagtgga gaagggcatt taccagacat ctaacttccg ggtgcagcct 960
acagagtcta ttgtgcggtt cccaaacatc acaaacctgt gccctttcgg cgaggtgttc 1020
aacgccaccc ggttcgcctc tgtgtacgcc tggaaccgga agcggatctc taactgcgtg 1080
gccgactact ccgtgctgta caactccgcc tctttctcta cattcaagtg ctacggcgtg 1140
tcccctacaa agctgaacga cctgtgcttc accaacgtgt acgccgactc tttcgtgatt 1200
agaggcgacg aggtgaggca gattgccccc ggccagacag gcaagatcgc cgactacaac 1260
tacaagctgc ccgacgactt cacaggctgc gtgatcgcct ggaactctaa caacctggac 1320
tctaaggtgg gcggcaacta caactacaga tacagactgt tccggaagtc taacctgaag 1380
ccattcgaga gggacattag caccgagatt taccaggccg gctctaagcc atgcaacggc 1440
gtggagggct tcaactgcta cttcccactg cagtcctacg gcttccagcc tacaaacggc 1500
gtgggctacc agccttaccg ggtggtggtg ctgtctttcg agctgctcca cgcccccgcc 1560
acagtgtgcg gcccaaagaa gagcacaaac ctcgtgaaga acaagtgcgt gaacttcaac 1620
ttcaacggcc tcacaggcac aggcgtgctc accgagtcta acaagaagtt cctccctttc 1680
cagcagttcg gccgcgacat tgccgacacc accgacgccg tgcgggaccc tcagacactg 1740
gaaattctcg acatcacccc ttgcagcttc ggcggcgtgt ccgtgatcac cccaggcaca 1800
aacacatcta accaggtggc cgtgctgtac cagggcgtga actgcaccga ggtgccagtg 1860
gccatccacg ccgaccagct caccccaaca tggagggtgt acagcacagg ctctaacgtg 1920
ttccagaccc gggccggctg cctcattggc gccgagcacg tgaacaactc ttacgagtgc 1980
gacatcccta ttggcgccgg catttgcgcc tcttaccaga cccagacaaa ctctagacgg 2040
agagcccggt ctgtggcctc tcagagcatt attgcctaca ccatgtctct gggcgccgag 2100
aactctgtgg cctactctaa caactctatt gccatcccta caaacttcac aatttctgtg 2160
accaccgaga ttctcccagt gtctatgacc aagacatctg tggactgcac catgtacatt 2220
tgcggcgact ccaccgagtg ctctaacctc ctgctccagt acggctcttt ctgcacccag 2280
ctcaaccgcg ccctgacagg catcgccgtg gagcaggaca agaacaccca ggaggtgttc 2340
gcccaggtga agcagattta caagaccccc ccaattaagg acttcggcgg cttcaacttc 2400
tctcagattc tccccgaccc atccaagcct agcaagcggt ccttcattga ggacctcctg 2460
ttcaacaagg tgacactggc cgacgccggc ttcattaagc agtacggcga ctgcctgggc 2520
gacattgccg cccgggacct gatttgcgcc cagaagttca acggcctcac agtgctcccc 2580
ccactgctca ccgacgagat gattgcccag tacacatctg ccctcctggc cggcacaatt 2640
acatctggct ggaccttcgg cgccggcgcc gccctgcaga tccctttcgc catgcagatg 2700
gcctaccgct tcaacggcat cggcgtgaca cagaacgtgc tgtacgagaa ccagaagctg 2760
atcgccaacc agttcaacag cgccattggc aagattcagg actctctgag cagcacagcc 2820
agcgccctgg gcaagctgca gaacgtggtg aaccagaacg cccaggccct gaacacactg 2880
gtgaagcagc tgtcttctaa cttcggcgcc atttctagcg tgctgaacga cattctgtcg 2940
cggctggaca aggtggaggc cgaggtgcag attgacaggc tcatcacagg cagactgcag 3000
tctctgcaga catacgtgac ccagcagctg attagagccg ccgagattag agcctccgcc 3060
aacctggccg ccaccaagat gagcgagtgc gtgctcggcc agtctaagcg ggtggacttc 3120
tgcggcaagg gctaccacct catgtctttc cctcagtccg cccctcacgg cgtggtgttc 3180
ctccacgtga catacgtgcc cgcccaggag aagaacttca ccacagcccc cgccatttgc 3240
cacgacggca aggcccactt ccctagggag ggcgtgttcg tgtctaacgg cacccactgg 3300
ttcgtgaccc agcggaactt ctacgagcct cagattatta ccacagacaa cacattcgtg 3360
agcggcaact gcgacgtggt gattggcatt gtgaacaaca cagtgtacga cccactgcag 3420
cctgagttgg actctttcaa ggaggaactc gacaagtact tcaagaacca cacatctcct 3480
gacgtggacc tgggcgacat tagcggcatt aacgcctctg tggtgaacat tcagaaggag 3540
attgacagac tgaacgaggt ggccaagaac ctgaacgagt ctctcattga cctgcaggag 3600
ctgggcaagt acgagcagta cattaagtgg ccttggtaca tttggctggg cttcattgcc 3660
ggcctgatcg ccattgtgat ggtgaccatc atgctgtgct gcatgacatc ttgctgcagc 3720
tgcctgaagg gctgctgctc ttgcggctct tgctgcaagg actacaagga cgacgatgac 3780
aagggacct 3789
Claims (24)
1.一种与SARS-CoV-2RBD结合的羊驼源纳米抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区，
所述重链可变区包含以下的CDR：氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的CDR1，氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的CDR2，以及氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示的CDR3。
2.根据权利要求1所述的与SARS-CoV-2RBD结合的羊驼源纳米抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述重链可变区还包括4个框架区FR1-4，所述FR1-4与所述CDR1、CDR2和CDR3按顺序交错排列。
3.根据权利要求2所述的与SARS-CoV-2RBD结合的羊驼源纳米抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述FR1-4的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4、5、6、7所示。
4.根据权利要求1所述的与SARS-CoV-2RBD结合的羊驼源纳米抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。
5.一种多核苷酸，其特征在于，其编码权利要求1至4任一所述的与SARS-CoV-2RBD结合的羊驼源纳米抗体或其抗原结合片段。
6.根据权利要求5所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸为DNA或mRNA。
7.根据权利要求5所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸具有如SEQ ID NO:9所示的核苷酸序列。
8.一种核酸构建体，其包含权利要求5-7任一项所述的多核苷酸。
9.根据权利要求8所述的核酸构建体，其特征在于，还包含与所述多核苷酸可操作地连接的至少一个表达调控元件。
10.一种表达载体，其包含权利要求8或9所述的核酸构建体。
11.一种转化的细胞，其包括权利要求5-7任一项所述的多核苷酸、权利要求8或9所述的核酸构建体或权利要求10所述的表达载体。
12.一种药物组合物，其包含权利要求1至4任一项所述的与SARS-CoV-2RBD结合的羊驼源纳米抗体或其抗原结合片段、权利要求5-7任一项所述的多核苷酸、权利要求8或9所述的核酸构建体、权利要求10所述的表达载体或权利要求11所述的转化的细胞，以及药学上可接受的载体。
13.根据权利要求12所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为鼻喷剂、口服制剂、栓剂或胃肠外制剂的形式。
14.根据权利要求13所述的药物组合物，其特征在于，所述鼻喷剂选自气雾剂、喷雾剂和粉雾剂。
15.根据权利要求13所述的药物组合物，其特征在于，所述口服制剂选自片剂、粉末剂、丸剂、颗粒剂、软/硬胶囊剂、薄膜包衣剂和膏剂。
16.根据权利要求15所述的药物组合物，其特征在于，所述片剂为舌下片。
17.根据权利要求15所述的药物组合物，其特征在于，所述颗粒剂为细粒剂。
18.根据权利要求15所述的药物组合物，其特征在于，所述粉末剂为散剂。
19.根据权利要求15所述的药物组合物，其特征在于，所述丸剂为小丸剂。
20.根据权利要求13所述的药物组合物，其特征在于，所述胃肠外制剂为经皮剂、软膏剂、硬膏剂、外用液剂或可注射制剂。
21.根据权利要求20所述的药物组合物，其特征在于，所述可注射制剂为可推注制剂。
22.一种权利要求1至4任一项所述的与SARS-CoV-2RBD结合的羊驼源纳米抗体或其抗原结合片段、权利要求5-7任一项所述的多核苷酸、权利要求8或9所述的核酸构建体、权利要求10所述的表达载体、权利要求11所述的转化的细胞或权利要求12-21任一项所述的药物组合物在制备预防、治疗和/或检测新冠病毒感染的药物中的应用。
23.根据权利要求22所述的应用，其特征在于，所述新冠病毒为SARS-CoV-2原始毒株和/或SARS-CoV-2变异毒株。
24.根据权利要求23所述的应用，其特征在于，所述SARS-CoV-2变异毒株为Alpha(B.1.1.7)、Beta(B.1.351)、Gamma(P.1)、Kappa(B.1.617.1)和/或Delta(B.1.617.2)毒株。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111087998X | 2021-09-16 | ||
| CN202111087998 | 2021-09-16 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114891097A CN114891097A (zh) | 2022-08-12 |
| CN114891097B true CN114891097B (zh) | 2023-01-24 |
Family
ID=82730172
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210757615.3A Active CN114891097B (zh) | 2021-09-16 | 2022-06-30 | 一株羊驼源纳米抗体及其应用 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114891097B (zh) |
| WO (1) | WO2023040834A1 (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114891097B (zh) * | 2021-09-16 | 2023-01-24 | 中国科学院微生物研究所 | 一株羊驼源纳米抗体及其应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB202020502D0 (en) * | 2020-12-23 | 2021-02-03 | Vib Vzw | Antibody composistion for treatment of corona virus infection |
| CN112724248A (zh) * | 2021-01-28 | 2021-04-30 | 南京拓峰生物科技有限公司 | 可结合SARS-CoV-2的纳米抗体及其应用 |
| WO2021156490A2 (en) * | 2020-02-06 | 2021-08-12 | Vib Vzw | Corona virus binders |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111825762A (zh) * | 2020-06-17 | 2020-10-27 | 武汉华美生物工程有限公司 | 抗sars-cov-2病毒s蛋白rbd结构域的纳米抗体及其用途 |
| CN112010967B (zh) * | 2020-09-07 | 2021-03-23 | 康维众和(中山)生物药业有限公司 | 新型冠状病毒SARS-Cov-2中和毒性的纳米抗体及其制备方法与应用 |
| CN112062839A (zh) * | 2020-09-22 | 2020-12-11 | 石河子大学 | 一种基于新型冠状病毒s蛋白s1亚基的纳米抗体及其应用 |
| CN112094342B (zh) * | 2020-09-25 | 2022-05-13 | 中国科学技术大学 | 与SARS-CoV-2 RBD结合的羊驼源纳米抗体 |
| CN114891097B (zh) * | 2021-09-16 | 2023-01-24 | 中国科学院微生物研究所 | 一株羊驼源纳米抗体及其应用 |
-
2022
- 2022-06-30 CN CN202210757615.3A patent/CN114891097B/zh active Active
- 2022-09-13 WO PCT/CN2022/118493 patent/WO2023040834A1/zh unknown
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2021156490A2 (en) * | 2020-02-06 | 2021-08-12 | Vib Vzw | Corona virus binders |
| GB202020502D0 (en) * | 2020-12-23 | 2021-02-03 | Vib Vzw | Antibody composistion for treatment of corona virus infection |
| CN112724248A (zh) * | 2021-01-28 | 2021-04-30 | 南京拓峰生物科技有限公司 | 可结合SARS-CoV-2的纳米抗体及其应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| SARS-CoV-2和新型冠状病毒肺炎:发病机制与药物开发研究进展;吴雅玲等;《福建师范大学学报(自然科学版)》;20200911(第05期);全文 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2023040834A1 (zh) | 2023-03-23 |
| CN114891097A (zh) | 2022-08-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111793129B (zh) | 一种特异性结合冠状病毒的抗体或其抗原结合片段 | |
| CN114933651B (zh) | 一株羊驼源纳米抗体及其应用 | |
| CN106928371B (zh) | 具有补体调节活性的重组补体因子h-免疫球蛋白融合蛋白及其制备方法与应用 | |
| CN110621697B (zh) | 拮抗性cd40单克隆抗体及其用途 | |
| KR20070085439A (ko) | 인플루엔자 м2 단백질에 대한 인간 모노클로날 항체 및그의 제조 및 사용 방법 | |
| CN111808187B (zh) | 针对呼吸道合胞病毒的蛋白结合分子 | |
| CN114805560B (zh) | 纳米抗体r14的构建体及其应用 | |
| CN114397453B (zh) | 新型冠状病毒突变株的检测试剂盒及其应用 | |
| KR101593271B1 (ko) | 파골세포분화를 억제할 수 있는 항체 | |
| CN114891097B (zh) | 一株羊驼源纳米抗体及其应用 | |
| CN114395035B (zh) | 基于人源抗体的新型冠状病毒分型检测试剂盒及其应用 | |
| CN116813758A (zh) | 纳米抗体s43的构建体及其应用 | |
| CN113004415B (zh) | 靶向her2和4-1bb的双特异性抗体及其应用 | |
| CN114591988B (zh) | 一种激活肿瘤免疫的基因修饰干细胞制备方法 | |
| CN112778417B (zh) | 一种分离的结合抗原bcma的蛋白及其用途 | |
| CN115400207A (zh) | Ace2改造蛋白及其应用 | |
| CN109666073B (zh) | 一种抗人dll4和抗人vegf双特异性抗体及其制备与应用 | |
| CN115232207B (zh) | 抗体-溶菌素（SM-ScFv-Fc-Ly）在治疗变形链球菌感染中的应用 | |
| KR101596364B1 (ko) | 면역원성 복합 단백질을 생산하는 형질전환 식물체의 제조방법 및 이로부터 수득된 면역원성 복합 단백질 | |
| CN117510621A (zh) | 靶向新冠病毒ntd的广谱性纳米抗体n103和n235、其构建体及其应用 | |
| CN115925911A (zh) | 一株羊驼源纳米抗体r67及其应用 | |
| CN115947836A (zh) | 一株羊驼源纳米抗体s102及其应用 | |
| CN116710120A (zh) | 重组ace2-fc融合分子及其制备和使用方法 | |
| CN115724962A (zh) | 一株羊驼源纳米抗体r218及其应用 | |
| CN113897346A (zh) | 能够提高与SARS-CoV-2 S蛋白亲和力的ACE2突变组合及应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |