CN114397443A

CN114397443A - 免疫磁珠的保存液以及免疫磁珠试剂

Info

Publication number: CN114397443A
Application number: CN202111499935.5A
Authority: CN
Inventors: 黄佳俊; 王菊芳; 杜婧; 郑永耀; 杨正伟
Original assignee: Shenzhen Junhe Biotechnology Co ltd; South China University of Technology SCUT
Current assignee: Shenzhen Junhe Biotechnology Co ltd; South China University of Technology SCUT
Priority date: 2021-12-09
Filing date: 2021-12-09
Publication date: 2022-04-26

Abstract

本发明公开了一种免疫磁珠的保存液，包括稳定剂、增稠剂、防腐剂以及作为溶剂的缓冲液，保存液的pH为6.5～8.5。增稠剂为蛋白胨，蛋白胨的浓度不低于0.2g/mL。现有技术中，蛋白胨虽然也用于免疫磁珠的保存液，但是通常是作为稳定剂存在，且现有技术中保存液内的蛋白胨浓度一般不超过15g/L。本申请中创造性的采用蛋白胨作为增稠剂，利用蛋白胨在2℃～6℃的低温环境凝固的特点，将蛋白胨的浓度设置成不低于0.2g/mL，使得免疫磁珠的保存液可以在2℃～6℃的低温环境下呈半固体状态，从而既可以避免由于干燥导致免疫磁珠的聚集以及免疫配基的失活，又可以使得免疫磁珠充分分散并且不会发生聚集，从而避免出现免疫磁珠结块的现象，可以用于免疫磁珠的较长期保存。

Description

免疫磁珠的保存液以及免疫磁珠试剂

技术领域

本发明涉及化学发光检测技术领域，尤其是涉及一种免疫磁珠的保存液以及包括该免疫磁珠的保存液的免疫磁珠试剂。

背景技术

免疫磁珠(Impeti Cbead IMB)也称免疫磁性微球，是一种均匀、具有超顺磁性及保护性壳的球形小粒子，基本上由载体微球和免疫配基结合而成。其核心为顺磁性粒子，核心外层包裹一层高分子料，最外层是免疫配基。免疫配基通过生物高分子的功能基团结合到磁性载体微球上形成免疫磁珠。由于载体微球制备材料和方法不同，其表现出的物理性质也不同，从而可结合不同的免疫配基，如抗原、抗体、凝集素、DNA和RNA等。

一般来说，免疫磁珠需要保存在保存体系中，以避免干燥导致免疫磁珠的聚集以及免疫配基的失活，并且由于免疫磁珠密度远大于水，在保存体系中往往易出现结块等现象。而上述现象的出现，容易导致免疫磁珠在保存体系中分散不均，从而可能会导致对后续的检测结果的准确性造成影响。

发明内容

基于此，有必要提供一种可以解决上述问题的免疫磁珠的保存液。

此外，还有必要提供一种包括上述免疫磁珠的保存液的免疫磁珠试剂。

一种免疫磁珠的保存液，包括稳定剂、增稠剂、防腐剂以及作为溶剂的缓冲液，所述保存液的pH为6.5～8.5；

所述增稠剂为蛋白胨，所述蛋白胨的浓度不低于0.2g/mL。

在一个实施例中，所述蛋白胨的浓度为0.2g/mL～0.6g/mL。

在一个实施例中，所述蛋白胨的浓度为0.25g/mL～0.45g/mL。

在一个实施例中，所述蛋白胨为动物蛋白胨。

在一个实施例中，所述蛋白胨为血液蛋白胨、骨蛋白胨或皮蛋白胨。

在一个实施例中，所述缓冲液为浓度为10mmol/L～200mmol/L的Tris-HCl缓冲液或浓度为10mmol/L～100mmol/L的PBS缓冲液。

在一个实施例中，所述稳定剂包括可溶性蛋白、糖和多元醇；

所述免疫磁珠的保存液中，所述可溶性蛋白的质量浓度为0.5％～3％，所述糖的质量浓度为0.2％～3％，所述多元醇的质量浓度为0.2％～3％。

在一个实施例中，所述可溶性蛋白选自BSA和明胶中的至少一种，所述糖选自蔗糖和海藻糖中的至少一种，所述多元醇选自甘油和甘露醇中的至少一种。

在一个实施例中，所述防腐剂选自Proclin200、Proclin 300、Proclin 950和叠氮钠中的至少一种；

所述免疫磁珠的保存液中，所述防腐剂的质量浓度为0.1％～0.15％。

一种免疫磁珠试剂，包括免疫磁珠以及上述的免疫磁珠的保存液。

现有技术中，蛋白胨虽然也用于免疫磁珠的保存液，但是通常是作为稳定剂存在，且现有技术中保存液内的蛋白胨浓度一般不超过15g/L。

本申请中创造性的采用蛋白胨作为增稠剂，利用蛋白胨在2℃～6℃的低温环境凝固的特点，将蛋白胨的浓度设置成不低于0.2g/mL，使得免疫磁珠的保存液可以在2℃～6℃的低温环境下呈半固体状态，从而既可以避免由于干燥导致免疫磁珠的聚集以及免疫配基的失活，又可以使得免疫磁珠充分分散并且不会发生聚集，从而避免出现免疫磁珠结块的现象，可以用于免疫磁珠的较长期保存。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

一种免疫磁珠的保存液，包括稳定剂、增稠剂、防腐剂以及作为溶剂的缓冲液，保存液的pH为6.5～8.5。

增稠剂为蛋白胨，蛋白胨的浓度不低于0.2g/mL。

结合实施例部分的数据，这种免疫磁珠的保存液在较长时间保存免疫磁珠后，免疫磁珠上的免疫配基依然具有足够的活性。

需要指出的是，这种免疫磁珠的保存液在较长时间保存免疫磁珠后，需要对免疫磁珠经过简单分离(可以在添加水或缓冲液稀释后加热至38℃～42℃并搅拌，接着采用磁铁吸附免疫磁珠)，再重新用上述的保存液混合后，才可以使用。

蛋白胨的浓度不低于0.2g/mL，但可以保证免疫磁珠的保存液可以在2℃～6℃的低温环境下呈半固体状态，蛋白胨的浓度也不宜过高，一方面是浓度过高容易导致免疫磁珠分散不均匀，另一方面也会使得免疫磁珠的保存液可以在2℃～6℃的低温环境下呈固体状态，从而给后续的分离带来困难。

优选的，蛋白胨的浓度为0.2g/mL～0.6g/mL。

更优选的，蛋白胨的浓度为0.25g/mL～0.45g/mL。

本实施方式中，蛋白胨优选为动物蛋白胨。动物蛋白胨的增稠能力更强，在低温下形成半固体状态的性质也更好。

更优选的，本实施方式中，蛋白胨为血液蛋白胨、骨蛋白胨或皮蛋白胨。

血液蛋白胨中不含有核酸，可以当免疫磁珠用于检测核酸时，可以避免误反应。

骨蛋白胨和皮蛋白胨中含有大量胶原蛋白的水解产物，增稠能力更好。

优选的，缓冲液为浓度为10mmol/L～200mmol/L的Tris-HCl缓冲液或浓度为10mmol/L～100mmol/L的PBS缓冲液。

本实施方式中，优选采用PBS缓冲液。

本申请中的免疫磁珠的保存液一般用于免疫磁珠的较长期保存，一般只需要加热至38℃～42℃后加水或缓冲液搅拌稀释即可溶解。

需要指出的是，本申请中所指出的较长期保存指保存时间超过6个月。

优选的，稳定剂包括可溶性蛋白、糖和多元醇，可溶性蛋白选自BSA和明胶中的至少一种，糖选自蔗糖和海藻糖中的至少一种，多元醇选自甘油和甘露醇中的至少一种。

优选的，凝胶体系中，可溶性蛋白的质量浓度为0.5％～3％，糖的质量浓度为0.2％～3％，多元醇的质量浓度为0.2％～3％。

优选的，防腐剂选自Proclin200、Proclin 300、Proclin 950和叠氮钠中的至少一种。

优选的，凝胶体系中，防腐剂的质量浓度为0.1％～0.15％。

本发明还公开了一种免疫磁珠试剂，包括免疫磁珠以及上述的免疫磁珠的保存液。

以下为具体实施例。

实施例1

配制保存液，保存液包括1wt％的BSA、0.4g/mL的血液蛋白胨(血粉蛋白胨，购自SIGMA公司)、1wt％的海藻糖、1wt％的甘油、0.1wt％的Proclin200以及50mmol/L的PBS缓冲液，保存液的pH调节至7.5。

将免疫磁珠(超顺磁珠标记的血栓调节蛋白抗体，君和公司自产，货号为A20029)分散到保存液中，得到分散有免疫磁珠的保存液。

实施例2

配制保存液，保存液包括1wt％的BSA、0.25g/mL的皮蛋白胨(购自梁山生物制品有限公司)、1wt％的海藻糖、1wt％的甘油、0.1wt％的Proclin200以及50mmol/L的PBS缓冲液，保存液的pH调节至7.5。

实施例3

配制保存液，保存液包括1wt％的BSA、0.3g/mL的骨蛋白胨(购自梁山生物制品有限公司)、1wt％的海藻糖、1wt％的甘油、0.1wt％的Proclin200以及50mmol/L的PBS缓冲液，保存液的pH调节至7.5。

对比例1

配制保存液，保存液包括1wt％的BSA、1wt％的海藻糖、1wt％的甘油、0.1wt％的Proclin200以及50mmol/L的PBS缓冲液，保存液的pH调节至7.5。

实施例4

免疫磁珠体系的保存和分离。

实施例1～3以及对比例1制得的分散有免疫磁珠的保存液，各自分成四份，分别存储到4℃冰箱中，分别在1个月、3个月、6个月和12个月取出一份。

实施例1～3制得的免疫磁珠的保存液在取出后，需要对免疫磁珠进行分离和再保存。

免疫磁珠进行分离和再保存的操作大致如下：搅拌状态下，按照体积比为1：1，向免疫磁珠的保存液中加入50mmol/L的PBS缓冲液，混合物加热至42℃并充分搅拌至混合物转变成混合液体后，用磁铁吸附容器侧壁后将容器内的混合液体吸出，再加入对比例1中的保存液。其中，磁铁吸附到再加入保存液的操作重复三次，从而得到再保存后的免疫磁珠试剂。

同样对对比例1制得的分散有免疫磁珠的保存液进行磁铁吸附到再加入保存液的操作的操作，并且重复三次，得到再保存后的免疫磁珠试剂。

对实施例1～3和对比例1对应的再保存后的免疫磁珠试剂进行观察，结果如下。

表1：实施例1～3和对比例1对应的再保存后的免疫磁珠试剂的观察结果

由表1可以看出，实施例1～3对应的免疫磁珠的保存液均可以在1个月、3个月和6个月后依然保证没有结块出现，实施例2对应的免疫磁珠的保存液在12个月后依然保证没有沉淀出现，实施例1和3对应的免疫磁珠的保存液在12个月后出现少量。

而对比例1对应的免疫磁珠的保存液在3个月的保存后就出现了少量。

由此可以看出，实施例1～3的保存液，可以在较长时间内保证免疫磁珠不出现免疫磁珠结块现象。

实施例5

再保存后的免疫磁珠的发光测试。

在保存12个月时对实施例1～3和对比例1对应的再保存后的免疫磁珠试剂进行发光测试，具体测试流程如下。

发光测试流程：依照血栓调节蛋白项目的试剂反应参数，设定化学发光仪参数，并装载上述配制好的吖啶试剂和试剂盒其他组分，上机测试。

第一步，将样本、生物标记物试剂和免疫磁珠试剂(超顺磁珠标记的血栓调节蛋白抗体，君和公司自产，货号为A20029)混合孵育：样本中的血栓调节蛋白和顺磁性微粒上包被的血栓调节蛋白抗体(君和公司自产，货号为A20029)及生物标记物试剂中的生物标记物(吖啶酯标记的血栓调节蛋白抗体，君和公司自产，货号为A20030)反应，形成夹心(抗体-抗原-抗体)复合物。

第二步，清洗：在磁场作用下，磁微粒吸附到反应管壁，未结合的物质被清洗液洗去。

第三步，激发和读数：在反应复合物中加入预激发液和激发液，通过相对发光强度测定化学发光反应。

样本中的血栓调节蛋白的量和测定仪光学系统测定到的相对发光强度(RLU)呈正相关。

上述测试结果如下表所示，测试结果与实施例1比较。

表1：实施例1～3和对比例1对应的免疫磁珠试剂的发光测试结果

	测试值1	测试值2	均值	偏差
					实施例1	23652	23453	23552.5	/
实施例2	22875	23564	23219.5	-1.41％
					实施例3	25011	24872	24941.5	5.90％
对比例1	12665	12021	12343	-47.60％

由表1可以看出，储存12个月后，实施例1、2和3对应的免疫磁珠试剂均可以保证发光值偏差在10％以内，而对比例1对应的免疫磁珠试剂的发光值出现较大幅度的下降，这与对比例1对应的免疫磁珠试剂在12个月的保存后出现了少量结块有着明显的关系。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对申请专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims

1.一种免疫磁珠的保存液，其特征在于，包括稳定剂、增稠剂、防腐剂以及作为溶剂的缓冲液，所述保存液的pH为6.5～8.5；

所述增稠剂为蛋白胨，所述蛋白胨的浓度不低于0.2g/mL。

2.根据权利要求1所述的免疫磁珠的保存液，其特征在于，所述蛋白胨的浓度为0.2g/mL～0.6g/mL。

3.根据权利要求2所述的免疫磁珠的保存液，其特征在于，所述蛋白胨的浓度为0.25g/mL～0.45g/mL。

4.根据权利要求3所述的免疫磁珠的保存液，其特征在于，所述蛋白胨为动物蛋白胨。

5.根据权利要求4所述的免疫磁珠的保存液，其特征在于，所述蛋白胨为血液蛋白胨、骨蛋白胨或皮蛋白胨。

6.根据权利要求1～5中任意一项所述的免疫磁珠的保存液，其特征在于，所述缓冲液为浓度为10mmol/L～200mmol/L的Tris-HCl缓冲液或浓度为10mmol/L～100mmol/L的PBS缓冲液。

7.根据权利要求6所述的免疫磁珠的保存液，其特征在于，所述稳定剂包括可溶性蛋白、糖和多元醇；

8.根据权利要求7所述的免疫磁珠的保存液，其特征在于，所述可溶性蛋白选自BSA和明胶中的至少一种，所述糖选自蔗糖和海藻糖中的至少一种，所述多元醇选自甘油和甘露醇中的至少一种。

9.根据权利要求8所述的免疫磁珠的保存液，其特征在于，所述防腐剂选自Proclin200、Proclin 300、Proclin 950和叠氮钠中的至少一种；

10.一种免疫磁珠试剂，其特征在于，包括免疫磁珠以及如权利要求1～9中任意一项所述的免疫磁珠的保存液。