CN107727867A - 一种补体c3检测试剂盒的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种补体C3检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：(1)按试剂R1的组分含量，配制成R1缓冲液；将聚乙二醇8000、EDTA‑Na、叠氮钠溶于R1缓冲液，再用1mol/L盐酸或氢氧化钠调pH至8.5，得试剂R1；(2)按试剂R2的组分含量，配制R2缓冲液；将BSA、EDTA‑Na、Tween‑20、络蛋白、蔗糖、NaCl、叠氮钠溶于R2缓冲液，得R2分散液；制备聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体；用R2分散液溶解聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体，再用1mol/L盐酸或氢氧化钠调pH至7.4，得试剂R2。本发明优点为：制备得到的试剂盒具有较高的灵敏度和稳定性，且操作简单、快速。

Description

一种补体C3检测试剂盒的制备方法
技术领域
本发明涉及医学检验技术领域，尤其涉及一种补体C3检测试剂盒的制备方法。
背景技术
补体C3是由α和β两条肽链通过二硫键连结组成，为β1球蛋白，分子量180kD，含糖量约占2.2％，是血清中含量最多的补体成分，约占总补体含量的1/3以上。在补体系统激活过程中，无论是经典途径还是旁路途径，均需C3活化后才能推进后续补体成分(C5-C9)的连锁反应。因此，它在两条激活途径中起关键作用。补体C3主要在肝实质细胞被合成分泌，少量由巨噬细胞和单核细胞合成。生理情况下，体液中或组织炎症部位存在的蛋白水解酶，可缓慢裂解C3，持续产生少量的C3b和C3转化酶(C3bB)，一般可被I因子、H因子迅速灭活，故并不激活补体系统，一旦C3被激活物质激活，C3b又可在B因子、D因子作用下合成新的C3bBb并进一步使C3激活，裂解、释放许多生物学活性片段，其结果可表现为增强机体的防御能力，亦可出现引起疾病的免疫病理作用。
C3的增多与减少基本与总补体活性相似，但更为敏感。补体C3在机体组织损伤和急性炎症时，常增高或为正常，如菌血症、肺炎、扁桃腺炎、结核、伤寒、麻疹、流脑等；肿瘤患者，尤以肝癌，血清C3含量升高更为显著，但胰腺癌晚期与隐性淋巴细胞白血病则呈降低趋势。补体动态变化在临床上越来越受到重视。抗原-抗体复合物引起的胃炎病人血清总补体和C3均明显下降。大多数全身性红斑狼疮患者血清补体的降低和病情恶化有关。活动性全身性红斑狼疮患者血清中C1、C4、C2和C3降低，病情缓解时血清补体水平恢复正常。传染病及组织损伤和急性炎症时，C2、C3、C4均增加，总补体活性正常或升高，但晚期则降低。肿瘤患者补体量升高，特别是肝癌，C3升高最为明显，具有诊断意义。胰腺癌晚期与隐性淋巴细胞白血病患者C3降低。肝脏疾病患者C3多为降低，肾移植病人C3的水平不稳定，C3在排异反应开始时升高，然后下降到正常以下。
目前，检测血清补体C3的含量方法主要是普通的免疫比浊法，对补体C3含量检测的试剂盒也多是基于此方法设计。免疫比浊法是抗原抗体结合动态测定方法，其基本原理是：当抗原与抗体在一定稀释系统中反应且比例合适时，形成的可溶性免疫复合物在稀释系统中的促聚剂的作用下，自液相析出，形成微粒，使反应液出现浊度；当抗体浓度固定时，形成的免疫复合物的量随着检样中抗原量的增加而增加，反应液的浊度也随之增加；通过测定反应液的浊度与一系列标准品对照，即可计算出检样中抗原的含量。然而，该方法却也存在一些弊端：灵敏度低、线性范围窄，重复性差且不稳定。
乳胶颗粒增强比浊法(PETIA)是近年来出现的一种较稳定、准确的体液蛋白均相免疫比浊法。PETIA法大体分为两种：一种是散射比浊法；一种是透射比浊法；这两种方法的基本原理相似，都是以高分子胶乳微球为载体的表面交联相应抗体，当交联有抗体的微球与抗原结合后，短时间内可迅速聚集，改变反应液的散光性能或透光性能，且反应液散光性能或透光性能的改变与被测抗原的浓度相关，在一定范围内可以反映被测抗原的量。
PETIA法采用的乳胶颗粒多为惰性微球、羧基微球及氨基微球；微球表面的羧基或氨基与抗体的氨基端共价结合，形成的桥联化学臂降低了位阻效应，不仅提高了抗体的结合率，且为抗体提供合适的三维空间立体结构，有效地保护抗体与抗原结合的活性区域；微球粒子直径一般在20nm-4um，提高了检测灵敏度。微球的推出可在一定程度上解决了临床检测的线性范围窄、干扰因素多、实验稳定性差等问题。
因此，目前急需一种基于乳胶颗粒增强比浊法的补体C3检测试剂盒的制备方法。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种检测速度快、灵敏度高、线性范围宽、重复性好且稳定的补体C3检测试剂盒的制备方法。
本发明是通过以下技术方案实现的：一种补体C3检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
(1)按照下列组分含量配制试剂R1：
试剂R1：
其溶剂为纯化水；
①按照上述试剂R1的组分含量，将Tris溶于纯化水中，搅拌均匀，待充分溶解，配制成R1缓冲液；
②按照上述试剂R1的组分含量，将聚乙二醇8000、EDTA-Na、叠氮钠溶于R1缓冲液中，搅拌均匀，再用1mol/L盐酸或氢氧化钠调pH至8.5，即制得试剂R1；
(2)按照下列组分含量配制试剂R2：
试剂R2：
其溶剂为纯化水；
①按照上述试剂R2的组分含量，将Tris溶于纯化水中，搅拌均匀，待充分溶解，配制成R2缓冲液；
②按照上述试剂R2的组分含量，将BSA、EDTA-Na、Tween-20、络蛋白、蔗糖、NaCl、叠氮钠溶于R2缓冲液中，搅拌均匀，得R2分散液；
③制备聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体：
a.将聚苯乙烯乳胶用PB缓冲液稀释到浓度为1％-5％，每毫升体积溶液中加入EDAC 1.6mg，室温反应2h，10000-20000rpm转速下离心30-40min，去上清，将沉淀悬浮于MES缓冲液中，超声分散；
b.再于10000-20000rpm转速下离心30-40min，弃上清，将沉淀悬浮于PB缓冲液中，使其中的聚苯乙烯乳胶颗粒最终浓度为3.0％，超声分散；接着，边搅拌边加入等体积的含抗人C3抗体的PB稀释液，混合搅拌，室温反应2h，其中的胶乳颗粒最终浓度为1.5％；
c.10000-20000rpm转速下离心30-40min，弃上清，沉淀悬浮PB缓冲液中，超声分散，加入BSA，4℃封闭过夜，离心去上清后，得最终所需的聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体；
④用R2分散液来溶解得到的聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体，使其中的胶乳颗粒终浓度为0.1-2.0％，超声分散，再用1mol/L盐酸或氢氧化钠调pH至7.4，最终制得试剂R2。
作为本发明的优选方式之一，所述制备聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体的步骤a中，采用的聚苯乙烯乳胶微粒原料为粒径为100-200nm的聚苯乙烯乳胶微粒。
作为本发明的优选方式之一，所述制备聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体的步骤a中，采用的PB缓冲液为0.1-0.15mol/L的PB缓冲液，采用的MES缓冲液为0.05-0.1mmol/L的MES缓冲液。
作为本发明的优选方式之一，所述制备聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体的步骤b中，采用的PB缓冲液为0.1-0.15mol/L的PB缓冲液，采用的PB稀释液为0.02-0.05mol/L的PB缓冲液。
作为本发明的优选方式之一，所述制备聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体的步骤b中，抗人C3抗体与聚苯乙烯乳胶微粒包被的质量比为(1-3)：10。
作为本发明的优选方式之一，所述制备聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体的步骤c中，采用的PB缓冲液为0.02-0.05mol/L的PB缓冲液。
作为本发明的优选方式之一，所述制备聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体的步骤c中，采用的BSA为0.5％-1％BSA。
本发明相比现有技术的优点在于：
(1)本发明制备的试剂盒操作简单、快速，从检测到出结果只需10分钟；
(2)乳胶增强免疫比浊法定量测定补体C3具有很好的放大作用，测定溶液浊度增加的程度与标本中的补体C3含量呈正相关，大大提高了试剂检测的灵敏度，试剂盒线性范围宽，重复性好；本发明制备的试剂盒经实验验证，灵敏度达到3.0mg/dl，最高浓度达到1000.0mg/dl时仍未见HOOK效应，批内重复性≤2.3％，批间重复性≤6.7％；
(3)本发明制备的试剂盒在2-8℃可稳定保存24个月，37℃加速试验7天，结果显示降解率为6.3％；
(4)本发明制备的试剂盒可应用于全自动生化分析仪上，适合全自动测试，可大规模的开展和推广。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1
本实施例的一种补体C3检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
(1)按照下列组分含量配制试剂R1：
试剂R1：
其溶剂为纯化水；
①按照上述试剂R1的组分含量，将Tris溶于纯化水中，搅拌均匀，待充分溶解，配制成R1缓冲液；
②按照上述试剂R1的组分含量，将聚乙二醇8000、EDTA-Na、叠氮钠溶于R1缓冲液中，搅拌均匀，再用1mol/L盐酸或氢氧化钠调pH至8.5，即制得试剂R1；
(2)按照下列组分含量配制试剂R2：
其溶剂为纯化水；
①按照上述试剂R2的组分含量，将Tris溶于纯化水中，搅拌均匀，待充分溶解，配制成R2缓冲液；
②按照上述试剂R2的组分含量，将BSA、EDTA-Na、Tween-20、络蛋白、蔗糖、NaCl、叠氮钠溶于R2缓冲液中，搅拌均匀，得R2分散液；
③制备聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体：
a.将粒径为100nm的聚苯乙烯乳胶用0.1mol/L的PB缓冲液稀释到浓度为1％，每毫升体积溶液中加入EDAC 1.6mg，室温反应2h，10000rpm转速下离心30min，去上清，将沉淀悬浮于0.05mmol/L的MES缓冲液中，超声分散；
b.再于10000rpm转速下离心30min，弃上清，将沉淀悬浮于0.1mol/L的PB缓冲液中，使其中的聚苯乙烯乳胶颗粒最终浓度为3.0％，超声分散；接着，边搅拌边加入等体积的含抗人C3抗体的0.02mol/L PB稀释液，混合搅拌，室温反应2h，其中的胶乳颗粒最终浓度为1.5％；其中，抗人C3抗体与聚苯乙烯乳胶微粒包被的质量比为1：10；
c.10000-20000rpm转速下离心30min，弃上清，沉淀悬浮于0.02mol/L的PB缓冲液中，超声分散，加入0.5％BSA，4℃封闭过夜，离心去上清后，得最终所需的聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体；
④用R2分散液来溶解得到的聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体，使其中的胶乳颗粒终浓度为0.1％，超声分散，再用1mol/L盐酸或氢氧化钠调pH至7.4，最终制得试剂R2。
实施例2
本实施例的一种补体C3检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
(1)按照下列组分含量配制试剂R1：
试剂R1：
其溶剂为纯化水；
①按照上述试剂R1的组分含量，将Tris溶于纯化水中，搅拌均匀，待充分溶解，配制成R1缓冲液；
②按照上述试剂R1的组分含量，将聚乙二醇8000、EDTA-Na、叠氮钠溶于R1缓冲液中，搅拌均匀，再用1mol/L盐酸或氢氧化钠调pH至8.5，即制得试剂R1；
(2)按照下列组分含量配制试剂R2：
试剂R2：
其溶剂为纯化水；
①按照上述试剂R2的组分含量，将Tris溶于纯化水中，搅拌均匀，待充分溶解，配制成R2缓冲液；
②按照上述试剂R2的组分含量，将BSA、EDTA-Na、Tween-20、络蛋白、蔗糖、NaCl、叠氮钠溶于R2缓冲液中，搅拌均匀，得R2分散液；
③制备聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体：
a.将粒径为200nm的聚苯乙烯乳胶用0.15mol/L的PB缓冲液稀释到浓度为5％，每毫升体积溶液中加入EDAC 1.6mg，室温反应2h，20000rpm转速下离心40min，去上清，将沉淀悬浮于0.1mmol/L的MES缓冲液中，超声分散；
b.再于20000rpm转速下离心40min，弃上清，将沉淀悬浮于0.15mol/L的PB缓冲液中，使其中的聚苯乙烯乳胶颗粒最终浓度为3.0％，超声分散；接着，边搅拌边加入等体积的含抗人C3抗体的0.05mol/L PB稀释液，混合搅拌，室温反应2h，其中的胶乳颗粒最终浓度为1.5％；其中，抗人C3抗体与聚苯乙烯乳胶微粒包被的质量比为3：10；
c.20000rpm转速下离心40min，弃上清，沉淀悬浮于0.05mol/L的PB缓冲液中，超声分散，加入1％BSA，4℃封闭过夜，离心去上清后，得最终所需的聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体；
④用R2分散液来溶解得到的聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体，使其中的胶乳颗粒终浓度为2.0％，超声分散，再用1mol/L盐酸或氢氧化钠调pH至7.4，最终制得试剂R2。
实施例3
本实施例的一种补体C3检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
(1)按照下列组分含量配制试剂R1：
试剂R1：
其溶剂为纯化水；
①按照上述试剂R1的组分含量，将Tris溶于纯化水中，搅拌均匀，待充分溶解，配制成R1缓冲液；
②按照上述试剂R1的组分含量，将聚乙二醇8000、EDTA-Na、叠氮钠溶于R1缓冲液中，搅拌均匀，再用1mol/L盐酸或氢氧化钠调pH至8.5，即制得试剂R1；
(2)按照下列组分含量配制试剂R2：
试剂R2：
其溶剂为纯化水；
①按照上述试剂R2的组分含量，将Tris溶于纯化水中，搅拌均匀，待充分溶解，配制成R2缓冲液；
②按照上述试剂R2的组分含量，将BSA、EDTA-Na、Tween-20、络蛋白、蔗糖、NaCl、叠氮钠溶于R2缓冲液中，搅拌均匀，得R2分散液；
③制备聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体：
a.将粒径为150nm的聚苯乙烯乳胶用0.13mol/L的PB缓冲液稀释到浓度为3％，每毫升体积溶液中加入EDAC 1.6mg，室温反应2h，15000rpm转速下离心35min，去上清，将沉淀悬浮于0.08mmol/L的MES缓冲液中，超声分散；
b.再于15000rpm转速下离心35min，弃上清，将沉淀悬浮于0.13mol/L的PB缓冲液中，使其中的聚苯乙烯乳胶颗粒最终浓度为3.0％，超声分散；接着，边搅拌边加入等体积的含抗人C3抗体的0.03mol/L PB稀释液，混合搅拌，室温反应2h，其中的胶乳颗粒最终浓度为1.5％；其中，抗人C3抗体与聚苯乙烯乳胶微粒包被的质量比为2：10；
c.15000rpm转速下离心35min，弃上清，沉淀悬浮于0.04mol/L的PB缓冲液中，超声分散，加入0.8％BSA，4℃封闭过夜，离心去上清后，得最终所需的聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体；
④用R2分散液来溶解得到的聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体，使其中的胶乳颗粒终浓度为1％，超声分散，再用1mol/L盐酸或氢氧化钠调pH至7.4，最终制得试剂R2。
实施例4
本实施例的采用上述实施例方法制备得到的补体C3检测试剂盒的使用方法，包括如下步骤：
(1)将10uL待测样品与150uL试剂R1混合，37℃孵育5min；
(2)与50uL试剂R2混合，37℃反应5min；
(3)用全自动生化分析仪在600nm波长处测定反应后的吸光度A；
(4)根据读取的吸光度A计算出样本中的补体C3的浓度。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种补体C3检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)按照下列组分含量配制试剂R1：
试剂R1：
其溶剂为纯化水；
①按照上述试剂R1的组分含量，将Tris溶于纯化水中，搅拌均匀，待充分溶解，配制成R1缓冲液；
②按照上述试剂R1的组分含量，将聚乙二醇8000、EDTA-Na、叠氮钠溶于R1缓冲液中，搅拌均匀，再用1mol/L盐酸或氢氧化钠调pH至8.5，即制得试剂R1；
(2)按照下列组分含量配制试剂R2：
试剂R2：
其溶剂为纯化水；
①按照上述试剂R2的组分含量，将Tris溶于纯化水中，搅拌均匀，待充分溶解，配制成R2缓冲液；
②按照上述试剂R2的组分含量，将BSA、EDTA-Na、Tween-20、络蛋白、蔗糖、NaCl、叠氮钠溶于R2缓冲液中，搅拌均匀，得R2分散液；
③制备聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体：
a.将聚苯乙烯乳胶用PB缓冲液稀释到浓度为1％-5％，每毫升体积溶液中加入EDAC1.6mg，室温反应2h，10000-20000rpm转速下离心30-40min，去上清，将沉淀悬浮于MES缓冲液中，超声分散；
b.再于10000-20000rpm转速下离心30-40min，弃上清，将沉淀悬浮于PB缓冲液中，使其中的聚苯乙烯乳胶颗粒最终浓度为3.0％，超声分散；接着，边搅拌边加入等体积的含抗人C3抗体的PB稀释液，混合搅拌，室温反应2h，其中的胶乳颗粒最终浓度为1.5％；
c.10000-20000rpm转速下离心30-40min，弃上清，沉淀悬浮PB缓冲液中，超声分散，加入BSA，4℃封闭过夜，离心去上清后，得最终所需的聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体；
④用R2分散液来溶解得到的聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体，使其中的胶乳颗粒终浓度为0.1-2.0％，超声分散，再用1mol/L盐酸或氢氧化钠调pH至7.4，最终制得试剂R2。
2.根据权利要求1所述的补体C3检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述制备聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体的步骤a中，采用的聚苯乙烯乳胶微粒原料为粒径为100-200nm的聚苯乙烯乳胶微粒。
3.根据权利要求1所述的补体C3检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述制备聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体的步骤a中，采用的PB缓冲液为0.1-0.15mol/L的PB缓冲液，采用的MES缓冲液为0.05-0.1mmol/L的MES缓冲液。
4.根据权利要求1所述的补体C3检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述制备聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体的步骤b中，采用的PB缓冲液为0.1-0.15mol/L的PB缓冲液，采用的PB稀释液为0.02-0.05mol/L的PB缓冲液。
5.根据权利要求1所述的补体C3检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述制备聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体的步骤b中，抗人C3抗体与聚苯乙烯乳胶微粒包被的质量比为(1-3)：10。
6.根据权利要求1所述的补体C3检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述制备聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体的步骤c中，采用的PB缓冲液为0.02-0.05mol/L的PB缓冲液。
7.根据权利要求1所述的补体C3检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述制备聚苯乙烯乳胶微粒包被的抗人C3抗体的步骤c中，采用的BSA为0.5％-1％BSA。
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CN111693709A (zh) * 2019-03-12 2020-09-22 程明 一种补体C1q测定试剂盒及其测定方法
CN114047338A (zh) * 2021-11-10 2022-02-15 上海捷门生物技术有限公司 一种尿液转铁蛋白检测试剂盒及其检测方法

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111693709A (zh) * 2019-03-12 2020-09-22 程明 一种补体C1q测定试剂盒及其测定方法
CN114047338A (zh) * 2021-11-10 2022-02-15 上海捷门生物技术有限公司 一种尿液转铁蛋白检测试剂盒及其检测方法
CN114047338B (zh) * 2021-11-10 2024-03-12 上海捷门生物技术有限公司 一种尿液转铁蛋白检测试剂盒及其检测方法

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