CN114280188B - 中空纤维液相微萃取养殖水中氟苯尼考含量的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种中空纤维液相微萃取养殖水中氟苯尼考含量的检测方法，涉及氟苯尼考检测技术领域。包括以下步骤：(1)制备氟苯尼考和氟苯尼考胺标准曲线；(2)前处理：将中空纤维膜浸没在醇中，使膜壁上的微孔充满正辛醇。用水冲洗，将醇移除，将移除后的中空纤维膜完全浸没在待测养殖水样中，将醇注入到中空纤维膜中，进行萃取；(3)萃取完成后，从中空纤维膜中抽取正辛醇，用高效液相色谱质谱仪检测。该方法绿色高效，操作简单，填补养殖水中氟苯尼考含量的检测方法的空白，并提供一定的技术支撑。

Description

中空纤维液相微萃取养殖水中氟苯尼考含量的检测方法

技术领域

本发明涉及氟苯尼考检测技术领域，具体涉及一种中空纤维液相微萃取养殖水中氟苯尼考含量的检测方法。

背景技术

氟苯尼考，又名氟甲砜霉素，是甲砜霉素的单氟衍生物。化学名称：D(+)-苏-1-对甲砜基苯基-2-二氯乙酞胺基-3-氟丙醇，分子式C₁₂H₁₄C_l2FNO₄S，相对分子量为358.2，是一种广谱抗生素，属于酰胺醇类抗生素，与它同类的抗生素包括氯霉素、甲砜霉素等。由于其抗菌谱广、吸收良好、体内分布广泛，无潜在的致再生障碍性贫血作用，无致畸、致癌和致突变等三致作用，氟苯尼考用于代替氯霉素的酰胺醇类广谱抗生素，主要用于治疗牛、猪、禽以及鱼类的细菌性呼吸系统感染和肠道感染疾病。氟苯尼考的消除半衰期长，如果临床用药不科学，很容易产生药物残留问题。与早期的酰胺醇类药物相比，氟苯尼考虽不会引起再生障碍性贫血，但却能够可逆性地抑制红细胞生成，且具有胚胎毒性，用药后动物还会出现厌食、腹泻等不良反应。

氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺等从养殖场到土壤和水环境的途径主要包括直接排放和间接扩散两种方式。一部分是通过养殖废水直接排放进入到水体环境中，另一部分是通过动物粪便发酵成肥料进入到土壤环境中。一旦氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺被排放到环境中，药物中的活性成分就会渗滤到地下水体中，或者迁移到地表水体中，或者被土壤吸附，从而改变陆生动植物和水生生物的生长环境而影响生长，其残留物最终可以通过生物食物链的放大作用而传递到人的身体中，必将对人体和生态环境产生毒害作用。虽然与早期的酰胺醇类药物相比，氟苯尼考不会引起再生障碍性贫血，但却能够可逆性地抑制红细胞生成，且具有胚胎毒性，其造成的危害不容忽视。

对于水产品养殖而言，养殖水中的氟苯尼考残留会影响水质和周围环境，影响人体健康。但是对于养殖水中氟苯尼考的残留量测定方法，目前缺乏检测标准和相关研究，亟需相关检测技术的支持。叶赛等人用液相色谱-串联质谱测定养殖海水中氟苯尼考残留，前处理过程包括制样、提取、净化、衍生，操作复杂，需要较多的溶剂和设备，条件要求较高。

有鉴于此，本申请针对现有技术存在的问题，开发了一种检测养殖水中氟苯尼考含量的方法。该方法绿色高效，操作简单，填补养殖水中氟苯尼考含量的检测方法的空白，并提供一定的技术支撑。

发明内容

本发明的目的是提供一种绿色、高效的中空纤维液相微萃取养殖水中氟苯尼考含量的检测方法，利用中空纤维液相微萃取工艺，联合高效液相色谱-质谱法实现，中空纤维液相微萃取方法用于富集和分离，高效液相色谱-质谱联用仪检测养殖水中氟苯尼考含量。

为实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：

一种中空纤维液相微萃取养殖水中氟苯尼考含量的检测方法，包括以下步骤：

(1)制备氟苯尼考和氟苯尼考胺标准曲线；

(2)前处理：将中空纤维膜浸没在醇中，使膜壁上的微孔充满正辛醇。然后用水冲洗，将醇移除，将移除后的中空纤维膜完全浸没在待测养殖水样中，将醇注入到中空纤维膜中，进行萃取；

(3)萃取完成后，从中空纤维膜中抽取正辛醇，用高效液相色谱质谱仪检测。

优选地，步骤(1)中，所述氟苯尼考标准曲线浓度为5μg/L-100μg/L，氟苯尼考胺标准曲线浓度为10μg/L～200μg/L，内标浓度均为20μg/L。

优选地，所述中空纤维膜在使用前，先用丙酮清洗，具体步骤为：将中空纤维膜在丙酮中超声清洗1-5min，晾干。

优选地，步骤(2)中，所述中空纤维膜选自聚丙烯中空纤维膜、聚偏氟乙烯中空纤维膜、聚四氟乙烯中空纤维膜、聚氯乙烯中空纤维膜，进一步优选为聚丙烯中空纤维。

优选地，步骤(2)中，所述醇选自正辛醇、正己烷、异辛烷、正辛烷、乙酸异戊酯中的至少一种，进一步优选为正辛醇。

优选地，步骤(2)中，所述中空纤维膜在醇中的浸没时间为10-30s，进一步优选为20s。

优选地，步骤(2)中，所述萃取的条件为：萃取温度为20-40℃，进一步优选为30℃；萃取时的搅拌转速为300-800r/min，进一步优选为500r/min；萃取时间为15-40min，进一步优选为25min。

优选地，步骤(3)中，所述检测的液相条件为：

色谱柱：C18色谱柱

流速：0.2-0.4mL/min

柱温：30-40℃

流动相：流动相A为0.05-0.5％甲酸水，流动相B为乙腈

洗脱方式：梯度洗脱

进一步优选地，步骤(3)中，所述检测的液相条件为：

色谱柱：C18色谱柱

流速：0.3mL/min

柱温：40℃

流动相：流动相A为0.1％甲酸水，流动相B为乙腈

洗脱方式：梯度洗脱，洗脱条件如下：

其中，术语“0.1％甲酸水”是指甲酸在水中的体积浓度为0.1％。

优选地，步骤(3)中，所述检测的质谱条件为：

离子源：电喷雾源ESI；正/负离子切换扫描；扫描方式：多反应监测(MRM)；喷雾电压：2000-4000V；鞘气流量：8-12L/min；干燥气温度：200-400℃；雾化器压力：30-50psi。

进一步优选的，步骤(3)中，所述检测的质谱条件为：

离子源：电喷雾源ESI；

喷雾电压：3000V；

鞘气流量：10L/min；

干燥气温度：300℃；

雾化器压力：40psi。

正/负离子切换扫描；

扫描方式：多反应监测(MRM)；

其中，*代表定量离子。

本发明的有益效果为：

本发明适用于养殖水中氟苯尼考的残留量检测，操作过程快速简便，检测精度高，能够很好地为养殖水中氟苯尼考的残留量检测提供检测技术支撑。

具体实施方式

为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐明本发明，但下述实施例仅为本发明的优选实施例，并非全部。基于实施方式中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得其它实施例，都属于本发明的保护范围。下述实施例中，若无特殊说明，所用的操作方法均为常规操作方法，所用设备均为常规设备，各个实施例所用设备材料均相同。

本发明中所有公开的“范围”以下限和上限的形式表述，可以分别为一个或多个下限，和一个或多个上限。给定范围是通过选定一个下限和一个上限进行限定的。选定的下限和上限限定了特别范围的边界。所有可以这种方式进行限定的范围是包含和可组合的，即任何下限可以与任何上限组合形成一个范围。例如，针对特定参数列出了60-120和80-110的范围，理解为60-110和80-120的范围也是预料到的。此外，如果列出的最小范围值1和2，和如果列出了最大范围3，4和5，则下面的范围可全部预料到：1-2、1-4、1-5、2-3、2-4和2-5。

本发明中，除非有其他说明，数值范围“a-b”表示a到b之间的任意实数组合的缩略表示，其中a和b都是实数。例如数值范围“0-5”表示本文中已经全部列出了“0-5”之间的全部实数，“0-5”只是这些数值组合的缩略表示。例如，当提及“柱温：30-50℃”，则包括但不限于柱温为30℃、31℃、31.5℃、35℃、40℃、45℃、50℃等温度。

实施例1养殖水中氟苯尼考含量的检测

试剂：乙腈(色谱纯)；甲醇(色谱纯)；超纯水(一级水质)；甲酸(99％)；正辛醇(色谱纯)

设备与耗材：高效液相色谱质谱仪(TripleQuad4500)；涡旋振荡器；电子天平(0.0001g)；聚丙烯中空纤维膜；温控磁力搅拌器；进样针；0.22μm的有机滤膜。

(1)标准溶液配制：标准储备液：氟苯尼考标准溶液(100mg/L，甲醇溶剂)，氟苯尼考－D3标准溶液(100mg/L，甲醇溶剂)，氟苯尼考胺标准溶液(100mg/L，甲醇溶剂)，氟苯尼考胺－D3标准溶液(100mg/L，甲醇溶剂)。氟苯尼考标准曲线浓度为5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L、80μg/L、100μg/L，氟苯尼考胺标准曲线浓度为10μg/L、20μg/L、40μg/L、100μg/L、160μg/L、200μg/L，内标浓度均为20μg/L。

(2)前处理过程将聚丙烯中空纤维，在丙酮中超声清洗2min，晾干。将中空纤维膜的在正辛醇中浸没约20s，使膜壁上的微孔充满正辛醇。然后用水冲洗，将其中的正辛醇移除。向放有搅拌子的样品瓶中加入待测养殖水样，将中空纤维膜完全浸没在水样中，慢慢地将正辛醇注入到中空纤维膜中，在30℃下，以500r/min速进行萃取。

(3)萃取25min后，从中空纤维膜中抽取正辛醇，待仪器检测。

液相条件：

色谱柱：C18(2.6μm,21mm*100mm)

流速：0.3mL/min

进样体积：2uL

柱温：40℃

流动相：A：0.1％甲酸水；B：乙腈

洗脱方式：梯度洗脱，洗脱条件如下：

质谱条件：

离子源：电喷雾源ESI；

喷雾电压：3000V；

鞘气流量：10L/min；

干燥气温度：300℃；

雾化器压力：40psi。

正/负离子切换扫描；

扫描方式：多反应监测(MRM)；

*定量离子

检测结果

1、含量检测

分别采集5份养殖水样品，按照实施例1前处理过程和仪器条件进行测定，检测数据如下：

样品	检测结果(μg/L)
		养殖水1	ND
养殖水2	ND
		养殖水3	ND
养殖水4	ND
		养殖水5	ND

5份养殖水中均未检出氟苯尼考。

2、精密度和回收率实验

为了验证该方法的精密度和准确性，在空白样品中添加高、中、低3个浓度的标准溶液，每个加标样品连续进行测定6次，结果如下：

结果表明，本方法的精密度和回收率高，满足要求。

3、线性范围、检出限、定量限

本发明采用中空纤维液相微萃取的对养殖水进行富集，该方法具有操作简单，耗时短，对氟苯尼考相关系数为0.9997，线性相关性好，检出限0.1μg/L，定量限0.3μg/L，灵敏度高，精密度和准确度高，很好的满足养殖水中氟苯尼考的测定要求。

对比例1

与实施例1不同的是，采用以下步骤进行前处理：水样经0.45μm玻璃纤维滤膜过滤后，调节pH，通过HLB固相萃取小柱净化。其余皆与实施例1相同。

分别称取6份养殖水样品，添加浓度氟苯尼考浓度为1.0μg/L，氟苯尼考胺浓度为2.0μg/L，分别按照上述实施例1和对比例1的前处理过程和仪器条件进行测定，检测数据如下：

对比例1和实施例1的精密度和回收率结果如下：

结果表明，实施例1的样品富集方法操作步骤比对比例1操作步骤简单，耗时短，且使用实施例1方法检测的精密度和回收率均高于对比例1的检测结果。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种中空纤维液相微萃取养殖水中氟苯尼考含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）制备氟苯尼考和氟苯尼考胺标准曲线；

（2）前处理：将中空纤维膜浸没在醇中，使膜壁上的微孔充满正辛醇，然后用水冲洗，将醇移除，将移除后的中空纤维膜完全浸没在待测养殖水样中，将醇注入到中空纤维膜中，在30℃下，以500r/min速进行萃取；

（3）萃取25min后，从中空纤维膜中抽取正辛醇，用高效液相色谱质谱仪检测；

液相条件：

色谱柱：C18(2.6μm,21mm*100mm)

流速：0.3mL/min

进样体积：2μL

柱温：40℃

流动相：A：0.1%甲酸水；B：乙腈

洗脱方式：梯度洗脱，洗脱条件如下：

质谱条件：

离子源：电喷雾源ESI；

喷雾电压：3000 V；

鞘气流量：10 L/min；

干燥气温度：300℃；

雾化器压力：40 psi；

正/负离子切换扫描；

扫描方式：多反应监测(MRM)；

。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述中空纤维膜在使用前，先用丙酮清洗，具体步骤为：将中空纤维膜在丙酮中超声清洗1-5min，晾干。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（2）中，所述中空纤维膜选自聚丙烯中空纤维膜、聚偏氟乙烯中空纤维膜、聚四氟乙烯中空纤维膜、聚氯乙烯中空纤维膜。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，步骤（2）中，所述中空纤维膜为聚丙烯中空纤维膜。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（2）中，所述中空纤维膜在醇中的浸没时间为10-30s。