CN114264744A - 一种基于茴香醛特征标志物鉴别枇杷蜂蜜的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及蜂蜜检测领域，具体涉及一种基于茴香醛特征标志物鉴别枇杷蜂蜜的方法，分析对比不同地区的枇杷蜂蜜，确定枇杷蜂蜜的特征标志物为茴香醛；将样品蜜种进行前处理后，采用液相色谱‑串联质谱法进行分析，检测样品蜜种是否含有枇杷蜂蜜的特征标志物，从而鉴别样品蜜种是否为枇杷蜂蜜。与现有技术相比，本发明提供的一种基于茴香醛特征标志物鉴别枇杷蜂蜜的方法，以茴香醛作为枇杷蜂蜜中的特征标志物，对于准确鉴别枇杷蜂蜜具有重要意义，操作简单，灵敏度高，准确度高，具有很大的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及蜂蜜检测领域，具体涉及一种基于茴香醛特征标志物鉴别枇杷蜂蜜的方法。
背景技术
蜂蜜是指蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露,与自身分泌物混合后,经充分酿造而成的天然甜味物质。糖类约占蜂蜜质量的60％～80％,其中葡萄糖和果糖含量较高(占总糖量的85％～95％),蔗糖含量不超过5％。水分为蜂蜜的第二大组分,纯蜂蜜的含水量为14％～25％,主要受蜂蜜的采收季节以及气候环境等因素的影响。水分含量越低,蜂蜜的成熟度相对越高,品质也越好。酚类化合物(如脱落酸、丁香酸、异阿魏酸、苯甲酸等)约占总量的5％左右。由于酚类物质的存在,蜂蜜具有抗菌、消炎、抗过敏、抗血栓形成等广泛的生物学活性。蛋白质主要来源于蜜蜂自身分泌物或蜜源植物,含量约为0.1％～0.5％,地理位置、蜜源植物对蜂蜜中蛋白质的含量及种类有显著影响。蜂蜜中还含有少量维生素类、生物活性酶、氨基酸和矿物质元素以及花粉粒等。这些营养成分赋予了蜂蜜多种活性功效。由于蜜源植物种类、蜜源产地以及蜂种的不同，导致不同种类蜂蜜中营养成分和含量存在差异，其特征成分也成为鉴别蜂蜜种类的关键指标。
枇杷蜂蜜是蜜蜂采集开花的枇杷花蜜，经蜜蜂酿造而成。枇杷蜂蜜：呈浅琥珀色，性凉，入口时有一股杏仁的味道，温度低于13～14度时易出现细腻的白色结晶。研究表明，枇杷蜜具有镇静止咳、安眠及治疗支气管炎、气管炎等有辅助作用，为上等蜂蜜，稀有蜜种，营养丰富，清肺解毒，养身补气，枇杷蜜具有枇杷主治“肺热喘咳、胃热呕吐、烦热口渴”的药效，有清肺、泄热、化痰、止咳平喘等保健功效。堪称蜜中佳品，主要产地为南方各省，如福建、浙江等省份，属稀有蜜种。
目前，尚未见采用茴香醛作为特征标志物来鉴别枇杷蜂蜜的方法。
发明内容
为解决背景技术中提到的问题，本发明的目的在于提供一种操作简单，灵敏度高，准确度高的基于茴香醛特征标志物鉴别枇杷蜂蜜的方法，可以满足作为鉴别枇杷蜂蜜的判别依据的要求。
一种基于茴香醛特征标志物鉴别枇杷蜂蜜的方法，关键在于：根据待测蜂蜜中是否含有茴香醛来鉴别枇杷蜂蜜。
优选的，包括以下步骤：
S1.特征标志物的确定：分析对比不同地区枇杷蜂蜜，确定枇杷蜂蜜的特征标志物为茴香醛；
S2.样品前处理：将样品蜜种与水混合后，离心分离，取液相转移至HLB柱，用淋洗液淋洗，收集淋洗液，充分涡匀后过滤；
S3.上机分析：将滤液采用液相色谱-串联质谱法进行分析，检测是否含有枇杷蜂蜜的特征标志物；
S4.根据样品蜜种中是否含有茴香醛，用于鉴别样品蜜种是否为枇杷蜂蜜。
优选的，S1具体为：采用液相色谱-串联质谱全扫描分析不同品种蜂蜜，将枇杷蜂蜜中特征标志物的碎片离子信息及NIST谱库检索到的结构与茴香醛标准物质进行比对，确定该特征标志物为茴香醛。
优选的，S2具体为：将质量比为1：(2-4)的样品蜜种与水充分涡匀，在5000-10000r/min下，离心10-30min，取液相转移至HLB固相萃取柱上净化，用甲醇淋洗，收集淋洗液，充分涡匀后，用孔径为0.1-0.5μm滤膜过滤。
优选的，S3的色谱条件为色谱条件为：
色谱柱：Seva C18，100*4.6，2.6μm
流动相：A：0.1％甲酸甲醇B：0.1％甲酸水
流速：0.7mL/min
柱温：30℃
进样量：25μL。
优选的，S3的质谱条件为：
离子源：可加热的电喷雾离子源(HESI-II)
喷雾电压：3.0kv
毛细管温度：280℃
加热温度：350℃
鞘气(N2)流速：50psi
辅助气(N2)流速：8psi
吹扫气(N2)流速：3psi。
有益效果：与现有技术相比，本发明提供的一种基于茴香醛特征标志物鉴别枇杷蜂蜜的方法，以茴香醛作为枇杷蜂蜜中的特征标志物，对于准确鉴别枇杷蜂蜜具有重要意义，操作简单，灵敏度高，准确度高，具有很大的应用前景。
附图说明
图1为各品种蜂蜜的选择离子(m/z 137)色谱图；
图2为各地区枇杷蜜的选择离子(m/z 137)色谱图；
图3为枇杷蜜特征离子的二级离子质谱图；
图4为NIST谱库检索到的结构及离子碎片；
图5为茴香醛标准品与枇杷蜂蜜样品的选择离子色谱图。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行具体描述，在此指出以下实施例只用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域的技术熟练人员可以根据上述发明内容对本发明做出一些非本质的改进和调整。除特殊说明外，本发明所述份数均为重量份，所述百分比均为质量百分比，所述浓度为质量百分比浓度。
实施例1
特征标志物的确定：采用液相色谱-串联质谱全扫描分析不同地区(苏州、安徽、福建、广东、四川、浙江)的枇杷蜜，将枇杷蜂蜜中特征标志物的碎片离子信息及NIST谱库检索到的结构与茴香醛标准物质进行比对，确定该特征标志物为茴香醛(图2)，图2中从上至下为苏州19，苏州20，安徽、福建、广东、四川、浙江，福建莆田，茴香醛标志物离子相关信息如下表所示：
实施例2
准确称取待测样品蜂蜜20.0g于50mL离心管中，加入40.0mL水溶液提取，充分涡匀，在5000r/min下离心10min；取15mL甲醇平衡HLB固相萃取柱，加入15mL水溶液活化萃取柱，将上述离心后的蜂蜜样品液转移至HLB固相萃取柱上，自然流干，加入15mL水洗固相萃取柱，最后用2mL甲醇淋洗，收集淋洗液，充分涡匀后，用孔径为0.1μm滤膜过滤，上机采用液相色谱-串联质谱法进行分析，色谱条件为：色谱柱：Seva C18，100*4.6，2.6μm；流动相：A：0.1％甲酸甲醇B：0.1％甲酸水；流速：0.7mL/min；柱温：30℃；进样量：25μL；质谱条件为：离子源：可加热的电喷雾离子源(HESI-II)；喷雾电压：3.0kv毛细管温度：280℃；加热温度：350℃；鞘气(N2)流速：50psi；辅助气(N2)流速：8psi；吹扫气(N2)流速：3psi。
实施例3
准确称取待测样品蜂蜜12.5g于50mL离心管中，加入50.0mL水溶液提取，充分涡匀，在10000r/min下离心30min；取15mL甲醇平衡HLB固相萃取柱，加入15mL水溶液活化萃取柱，将上述离心后的蜂蜜样品液转移至HLB固相萃取柱上，自然流干，加入15mL水洗固相萃取柱，最后用2mL甲醇淋洗，收集淋洗液，充分涡匀后，用孔径为0.5μm滤膜过滤，上机采用液相色谱-串联质谱法进行分析，色谱条件为：色谱柱：Seva C18，100*4.6，2.6μm；流动相：A：0.1％甲酸甲醇B：0.1％甲酸水；流速：0.7mL/min；柱温：30℃；进样量：25μL；质谱条件为：离子源：可加热的电喷雾离子源(HESI-II)；喷雾电压：3.0kv毛细管温度：280℃；加热温度：350℃；鞘气(N2)流速：50psi；辅助气(N2)流速：8psi；吹扫气(N2)流速：3psi。
实施例4
准确称取待测样品蜂蜜20g于50mL离心管中，加入50.0mL水溶液提取，充分涡匀，在8000r/min下离心15min；取15mL甲醇平衡HLB固相萃取柱，加入15mL水溶液活化萃取柱，将上述离心后的蜂蜜样品液转移至HLB固相萃取柱上，自然流干，加入15mL水洗固相萃取柱，最后用2mL甲醇淋洗，收集淋洗液，充分涡匀后，用孔径为0.22μm滤膜过滤，上机采用液相色谱-串联质谱法进行分析，色谱条件为：色谱柱：Seva C18，100*4.6，2.6μm；流动相：A：0.1％甲酸甲醇B：0.1％甲酸水；流速：0.7mL/min；柱温：30℃；进样量：25μL；质谱条件为：离子源：可加热的电喷雾离子源(HESI-II)；喷雾电压：3.0kv毛细管温度：280℃；加热温度：350℃；鞘气(N2)流速：50psi；辅助气(N2)流速：8psi；吹扫气(N2)流速：3psi。
各待测样品蜂蜜(枇杷蜜、椴树蜜、枸杞蜜、油菜蜜、洋槐蜜、花椒蜜、枣花蜜、荆条蜜)采用实施例4的方法测得色谱图如图1所示；图1中从上至下为枇杷蜜、椴树蜜、枸杞蜜、油菜蜜、洋槐蜜、花椒蜜、枣花蜜、荆条蜜，通过对比，可以看到在椴树、枸杞、油菜、洋槐、花椒、枣花、荆条蜂蜜中均未发现茴香醛物质，表明可以以茴香醛为特征标志物来鉴别枇杷蜂蜜。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (8)
1.一种基于茴香醛特征标志物鉴别枇杷蜂蜜的方法，其特征在于：根据待测蜂蜜中是否含有茴香醛来鉴别枇杷蜂蜜。
2.根据权利要求1所述的一种基于茴香醛特征标志物鉴别枇杷蜂蜜的方法，其特征在于：分析对比不同地区的枇杷蜂蜜，确定枇杷蜂蜜的特征标志物为茴香醛；将样品蜜种进行前处理后，采用液相色谱-串联质谱法进行分析，检测样品蜜种是否含有枇杷蜂蜜的特征标志物来鉴别样品蜜种是否为枇杷蜂蜜，从而评价枇杷蜂蜜的纯度及品质。
3.根据权利要求2所述的一种基于茴香醛特征标志物鉴别枇杷蜂蜜的方法，其特征在于：通过茴香醛标志物检测，来鉴别枇杷蜂蜜是否掺假，可用于蜂蜜掺假鉴定。
4.根据权利要求2所述的一种基于茴香醛特征标志物鉴别枇杷蜂蜜的方法，其特征在于枇杷蜂蜜的特征标志物的确定过程具体为：采用液相色谱-串联质谱全扫描分析不同品种蜂蜜，将枇杷蜂蜜中特征标志物的碎片离子信息及NIST谱库检索到的结构与茴香醛标准物质进行比对，确定该特征标志物为茴香醛。
5.根据权利要求2所述的一种基于茴香醛特征标志物鉴别枇杷蜂蜜的方法，其特征在于所述样品蜜种前处理过程为：将样品蜜种与水混合后，离心分离，取液相转移至HLB柱，用淋洗液淋洗，收集淋洗液，充分涡匀后过滤。
6.根据权利要求4所述的一种基于茴香醛特征标志物鉴别枇杷蜂蜜的方法，其特征在于前处理过程具体为：将质量比为1：(2-4)的样品蜜种与水充分涡匀，在5000-10000r/min下，离心10-30min，取液相转移至HLB固相萃取柱上净化，用甲醇淋洗，收集淋洗液，充分涡匀后，用孔径为0.1-0.5μm滤膜过滤。
7.根据权利要求2所述的一种基于茴香醛特征标志物鉴别枇杷蜂蜜的方法，其特征在于液相色谱-串联质谱法的色谱条件为：
色谱柱：Seva C18，100*4.6，2.6μm
流动相：A：0.1％甲酸甲醇B：0.1％甲酸水
流速：0.7mL/min
柱温：30℃
进样量：25μL。
8.根据权利要求1所述的一种基于茴香醛特征标志物鉴别枇杷蜂蜜的方法，其特征在于液相色谱-串联质谱法的质谱条件为：
离子源：可加热的电喷雾离子源HESI-II
喷雾电压：3.0kv
毛细管温度：280℃
加热温度：350℃
鞘气N2流速：50psi
辅助气N2流速：8psi
吹扫气N2流速：3psi。
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