CN114184715B

CN114184715B - Uplc-ms/ms法同时测定食品接触用油墨中20种光引发剂的迁移量的方法

Info

Publication number: CN114184715B
Application number: CN202111045337.0A
Authority: CN
Inventors: 钟怀宁; 潘静静; 黎梓城; 姚皓程; 李丹; 董犇; 陈�胜; 陈燕芬; 曾莹; 郑建国
Original assignee: Guangzhou Customs Technology Center
Current assignee: Guangzhou Customs Technology Center
Priority date: 2021-09-07
Filing date: 2021-09-07
Publication date: 2023-02-03
Anticipated expiration: 2041-09-07
Also published as: CN114184715A

Abstract

本发明公开了一种UPLC‑MS/MS法同时测定食品接触用油墨中20种光引发剂的迁移量的方法。该方法，包括以下步骤：(1)制备标准工作溶液和待测样品溶液，所述的待测样品溶液由待测样品与食品模拟物通过迁移实验获得，所述的食品模拟物选自体积分数为4％的乙酸、体积分数为10％的乙醇、体积分数为95％的乙醇、异辛烷和橄榄油中的一种以上；(2)分别吸取待测样品溶液和标准溶液采用超液相色谱－串联质谱法进行定性和定量分析。本发明建立的方法应用前景良好，有利于为生产企业或检测机构提供辅助作用，以避免安全事故的发生。

Description

UPLC-MS/MS法同时测定食品接触用油墨中20种光引发剂的迁移量的方法

技术领域：

本发明涉及油墨的理化检验技术领域，具体涉及一种UPLC-MS/MS法同时测定食品接触用油墨中20种光引发剂的迁移量的方法。

背景技术：

光引发剂是印刷紫外固化油墨配方不可替代的成分，它的混合物被广泛应用于光聚物中。因为光固化技术以其固化速度快、节省能源、环保和生产效率高等优点得到快速发展，因此紫外光油墨逐步取代传统的苯溶性油墨而被广泛用于食品包装印刷。然而，在印刷过程中光引发剂并不总是完全被利用或除去，应用于包装材料外表面的低相对分子质量的光引发剂迁移到食物中去的事件仍然存在。光引发剂具有一定的毒性，不仅对皮肤有一定的刺激作用和接触毒性，而且还有生殖毒性、遗传毒性和致癌作用。有研究表明，小分子的光引发剂既容易挥发又容易迁移，半挥发性的光引发剂可通过蒸汽间接污染食品，低相对分子质量的光引发剂通过迁移直接污染食品，这不仅会给被包装食品带来难闻的气味，而且迁移的物质会对人体健康造成潜在的危害。2009年，欧洲欧盟食品链与动物健康常设委员会规定食品包装印刷油墨中二苯甲酮和4-甲基二苯甲酮的迁移量不得超过0.6mg/kg，而在我国国标GB 9685-2016《食品接触材料及制品用添加剂使用标准》中规定油墨中二苯甲酮的特定迁移量限量为0.6mg/kg。

食品接触材料或食品中光引发剂的残留量的测定方法主要有液相色谱-串联质谱法、气相色谱－质谱法、凝胶色谱法。虽然这些方法可以筛查并定量分析印刷UV油墨中的光引发剂，但在实际印刷UV油墨的工艺中，常常需要多种光引发剂配合使用，而目前的方法多为单一或者少量目标物的检测，无法实现对多成分的光引发剂的检测，不利于大量的实际样品检测。因此需要一种快速、简单、高通量的分析方法去鉴定和定量分析涵盖市面上尽可能多的光引发剂的迁移量，以监测可能存在的风险，保证相关食品接触材料的安全卫生要求。

发明内容：

本发明的目的是提供一种UPLC-MS/MS法同时测定食品接触用油墨中20种光引发剂的迁移量的方法，对食品接触用材料中的20种光引发剂进行研究，建立高通量快速筛查和定性定量检测技术，实现食品接触用油墨中光引发剂的快速、有效识别和准确检测。

本发明是通过以下技术方案予以实现的：

一种UPLC-MS/MS法同时测定食品接触用油墨中20种光引发剂的迁移量的方法，所述的20种光引发剂选自1-(联苯基-4-基)-2-甲基-2-吗啉基丙烷-1-酮、2,4-二乙基硫杂蒽-9-酮、2-苯甲酰基苯甲酸甲酯、2-苄基-2-二甲基氨基-4'-吗啉基苯丁酮、2-甲基二苯甲酮、2-氯-4-苯基二苯甲酮、4,4'-双(二乙基氨基)二苯甲酮、4-二甲氨基苯甲酸乙酯、4-甲基二苯甲酮、胺增感剂A198、二苯甲酮、光引发剂1001M、光引发剂150、光引发剂160、光引发剂184、光引发剂379、光引发剂907、光引发剂EHA、光引发剂ITX和光引发剂TPO中的一种以上，所述的光引发剂结构式如图1所示；

该方法包括以下步骤：

(1)制备标准工作溶液和待测样品溶液，所述的待测样品溶液由待测样品与食品模拟物通过迁移实验获得，所述的食品模拟物选自体积分数为4％的乙酸、体积分数为10％的乙醇、体积分数为95％的乙醇、异辛烷和橄榄油中的一种以上；

(2)分别吸取待测样品溶液和标准溶液采用超液相色谱－串联质谱法进行定性和定量分析。

优选地，待测样品溶液的制备具体包括以下步骤：按照GB 5009.156-2016进行迁移实验；对于乙酸及乙醇类模拟物：取1mL溶液，过0.22μm滤膜，待测；对于异辛烷模拟物，移取2mL溶液至试管中，将溶液于40℃条件下氮吹至近干，加2mL甲醇定容，过0.22μm滤膜，待测；对于橄榄油模拟物，取橄榄油模拟物2g至试管中，加入3mL正己烷和2mL 80％甲醇-水溶液，涡旋混匀3min，待静置分层后，取下层清液，过0.22μm滤膜，待测。

优选地，标准工作溶液的制备包括以下步骤：

对于乙酸及乙醇类模拟物，20种光引发剂标准品用甲醇配制成质量浓度为1000mg/L的单标储备溶液，再用甲醇稀释成质量浓度为10mg/L的上述20种光引发剂混合标准中间溶液，准确吸取20种光引发剂标准中间溶液0mL、0.02mL、0.05mL、0.1mL、0.2mL、0.5mL于10mL容量瓶中，用体积分数4％的乙酸定容，得到20种光引发剂浓度分别为0mg/L、0.02mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、0.2mg/L、0.5mg/L的标准工作溶液；采用同样方式，分别用体积分数为10％的乙醇、体积分数为95％的乙醇食品模拟物配制同样浓度系列的20种光引发剂标准工作溶液，取1mL标准工作溶液，过0.22μm滤膜，待测；

对于异辛烷食品模拟物，分别准确吸取20种光引发剂标准中间溶液0mL、0.02mL、0.05mL、0.1mL、0.2mL、0.5mL于10mL容量瓶中，用异辛烷定容，得到20种光引发剂浓度分别为0mg/L、0.02mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、0.2mg/L、0.5mg/L的标准工作溶液，移取2mL异辛烷溶液至试管中，将溶液于40℃条件下氮吹至近干，加2mL甲醇定容，过0.22μm滤膜，待测；

对于橄榄油食品模拟物，分别准确吸取20种光引发剂标准中间溶液0mL、0.02mL、0.05mL、0.1mL、0.2mL、0.5mL于10mL容量瓶中，用橄榄油定容，得到20种光引发剂浓度分别为0mg/L、0.02mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、0.2mg/L、0.5mg/L的标准工作溶液，取橄榄油模拟物2g至试管中，加入3mL正己烷和2mL 80％甲醇-水溶液，涡旋混匀3min，待静置分层后，取下层清液，过0.22μm滤膜，待测。

优选地，所述的超液相色谱－串联质谱法中的色谱条件为：色谱柱：Eclipse PlusC18 RRHD，50mm×3.0mm×1.8μm；流动相A：0.1％甲酸，B：甲醇；洗脱梯度：0～1min，90％A；4min，60％A；10～13.5min，5％A；13.6～15％，90％A；流速0.4mL/min；进样体积：10μL；柱温：40℃；所述的超液相色谱－串联质谱法中的质谱条件为：ESI正离子模式；雾化气：45psi；喷雾电压：500V；毛细管电压：4000V；气流速度：7L/min；气流温度：300℃；鞘气N₂流速：11L/min；鞘气N₂温度：380℃。

以光引发剂的准分子离子峰的精确质量数为定性离子和定量离子，以标准工作溶液的浓度X为横坐标，定性定量离子的峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行单离子外标法定量，用样品溶液中出现的色谱峰保留时间和定性离子的精确质量数进行定性。

20种光引发剂的质谱参数如下表1所示：

表1

*为定量离子

本发明的有益效果如下：本发明提出的方法对20种光引发剂的色谱分离效果良好，各物质在0.02～0.5mg/L浓度范围内线性关系良好，最低检出限为0.01mg/kg。加标回收率为87.1％～103.8％，相对标准偏差为2.1％～8.6％，在10款样品中共检出4类光引发剂。本方法简单、灵敏、准确，适用于食品接触材料用油墨20种光引发剂迁移量的检测。

附图说明：

图1是20种光引发剂的化学结构式；

图2是实施例2中20种光引发剂总离子流色谱图，图中序号与表1排序对应；

图3是实施例3中不同的提取时间对20种光引发剂测定结果的影响，图中序号与表1排序对应；

图4是实施例3中实际样品不同的提取溶剂对光引发剂测定结果的影响；

图5是实施例3中实际样品不同的提取时间对光引发剂测定结果的影响；

图6是实施例6中阳性样品检出光引发剂150和1-(联苯基-4-基)-2-甲基-2-吗啉基丙烷-1-酮的色谱图。

具体实施方式：

以下是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

仪器与试剂如下：

Agilent 1290-6495液相色谱-三重四级杆质谱仪(美国安捷伦公司)；EclipsePlus C₁₈ RRHD液相色谱柱(50mm×3.0mm×1.8μm，美国安捷伦公司)；涡旋振荡仪(德国海道夫公司)；Milli Q Q-POD纯水机(德国默克公司)。

20种光引发剂标准品(详见表1)，购自CNW公司。

甲酸、甲醇、乙醇、乙腈、异辛烷、正己烷为HPLC级，购自Fisher公司；乙酸为分析纯，购自广州化学试剂厂；橄榄油为分析纯，购自默克林公司。

检测样品来自市面采购的复合膜、纸以及涂层。

一种UPLC-MS/MS法同时测定食品接触用油墨中20种光引发剂的迁移量的方法，按照GB 31604.1-2015选用体积分数4％乙酸、体积分数10％乙醇、体积分数95％乙醇、异辛烷和橄榄油作为食品模拟物，该方法包括以下步骤：

(1)标准工作溶液的制备：

(2)待测样品溶液的制备：

按照GB 5009.156-2016进行迁移实验；对于乙酸及乙醇类模拟物：取1mL溶液，过0.22μm滤膜，待测；对于异辛烷模拟物，移取2mL溶液至试管中，将溶液于40℃条件下氮吹至近干，加2mL甲醇定容，过0.22μm滤膜，待测；对于橄榄油模拟物，取橄榄油模拟物2g至试管中，加入3mL正己烷和2mL 80％甲醇-水溶液，涡旋混匀3min，待静置分层后，取下层清液，过0.22μm滤膜，待测。平行制样2份。

(3)分别吸取待测样品溶液和标准工作溶液进行测试，色谱条件为：色谱柱：Eclipse Plus C18 RRHD，50mm×3.0mm×1.8μm；流动相A：0.1％甲酸，B：甲醇；洗脱梯度：0～1min，90％A；4min，60％A；10～13.5min，5％A；13.6～15％，90％A；流速0.4mL/min；进样体积：10μL；柱温：40℃；质谱条件为：ESI正离子模式；雾化气：45psi；喷雾电压：500V；毛细管电压：4000V；气流速度：7L/min；气流温度：300℃；鞘气(N₂)流速：11L/min；鞘气(N₂)温度：380℃。

实施例1：流动相的选择

基于光引发剂易溶于甲醇和乙腈，因此选择了反相色谱常用的甲醇-水体系和乙腈-水体系进行考察。鉴于甲酸有利于物质更好的形成[M+H]⁺的分子离子峰，因此考察对比0.1％甲酸-甲醇和0.1％甲酸-乙腈体系作为流动相的情况，结果显示甲醇体系的峰型更优，因此选择了0.1％甲酸-甲醇体系作为流动相。

实施例2：质谱条件的选择

考察到本方法测定的光引发剂都属于酮类，而酮类在ESI源下容易形成[M+H]⁺的分子离子峰。在电喷雾离子源正离子模式下进行全扫描，可获得理想的分子离子峰[M+H]⁺。以分子离子峰为母离子，调节适当的碎裂电压，选择响应值高、干扰小的两个碎片作为定性离子和定量离子，同时分别优化各离子对的碰撞能量，得到的优化后的质谱条件如图2所示。

实施例3：油基食品模拟物提取的选择

1、提取溶剂的考察：结合各物质结构，分别选取了甲醇、80％甲醇-水溶液、乙腈进行提取。结果表明，甲醇与80％甲醇-水溶液的提取效果相当，乙腈次之，但80％甲醇-水溶液的提取效果较于甲醇来说，80％甲醇-水乳化效果不明显，更便于操作，因此选择了80％甲醇-水溶液作为提取溶剂。

2、提取时间的考察：选定提取溶剂后，考察了提取时间(5min、10min、15min、20min)对20种光引发剂提取量的影响。结果如图3所示。

由图3可以得出，在10min以后，提取量达到稳定，随着时间增加，提取量增加趋势变化不大，甚至出现下降的情况，因此选择10min作为最佳的提取时间。

3、实际样品的测试

选取了一个含光引发剂ITX的样品对上述提取溶剂和提取时间进行验证，在样品经过橄榄油，100℃，2h的浸泡后，分别按照上述的方法进行提取。提取结果如图4和图5所示，在提取时间为10min时，80％甲醇-水溶液作为提取溶剂的效果最佳，在提取溶剂为80％甲醇-水溶液时，提取时间为10min的效果最佳。

实施例4：线性范围、检出限和定量限

检出限与定量限的确定，选取未检出光引发剂的空白试样进行全模拟液迁移试验，取所得浸泡液进行不同浓度(低于限量)的加标，计算目标峰的S/N值。依据信噪比S/N≥3初步确定检出限，然后再采用空白基质加标的方式进行实际验证，确定检出限；依信噪比S/N≥10初步确定定量限，然后再采用空白基质加标的方式进行实际验证，确定定量限。按仪器工作条件对食品模拟物中20种光引发剂的混合标准工作曲线进行测定，根据3倍信噪比计算方法的检出限，10倍信噪比计算方法的定量限。得到检出限均为0.01mg/kg，定量限均为0.02mg/kg。

将20种光引发剂系列标准工作溶液，按已优化的仪器条件进行分析，每个浓度进行两次进样，取其平均值进行计算。以峰面积对20种光引发剂浓度绘制标准工作曲线Y＝aX+b，其中Y为20种光引发剂的峰面积，X为20种光引发剂的溶液浓度，单位为mg/L或mg/kg。在本方法所确定的实验条件下，对光引发剂标准溶液在0.02～0.5mg/L浓度范围内测定，其浓度与响应值有良好的线性关系，相关系数r分别为0.995。从表中可以看出，各化合物的线性范围广。20种光引发剂在不同食品模拟物中的线性回归方程和相关系数如表2～6所示。

表2 4％乙酸中线性范围、线性回归方程、相关系数、检出限和定量限

表3 10％乙醇中线性范围、线性回归方程、相关系数、检出限和定量限

表4 95％乙醇中线性范围、线性回归方程、相关系数、检出限和定量限

表5异辛烷中线性范围、线性回归方程、相关系数、检出限和定量限

表6橄榄油中线性范围、线性回归方程、相关系数、检出限和定量限

食品模拟物为4％乙酸、10％乙醇、95％乙醇、异辛烷和橄榄油时的线性范围0.02～0.5mg/L，相关系数均大于0.995，表明了本方法在线性范围内线性良好。

实施例5：回收率与精密度

按试验方法对4％乙酸、10％乙醇、95％乙醇、异辛烷和橄榄油(空白食品模拟物)进行加标回收试验，加标量依次为0.02mg/L、0.1mg/L、0.5mg/L，平行测定6次，计算回收率和重复6次的相对标准偏差，结果见表7(表7中各序号代表的化合物与表1排序对应)。加标回收率为87.1～103.8％，精密度为2.1～8.6％，体现了本方法的精密度高，回收率良好。

表7各食品模拟物的加标回收率和精密度结果

实施例6：实际样品分析

依据上述方法对5款复合膜、3款纸制品以及2款涂层共10款不同样品进行分析。样品分别在4％(体积分数)乙酸、10％(体积分数)乙醇、95％(体积分数)乙醇、异辛烷和橄榄油5种食品模拟物中进行20种光引发剂的迁移试验后上机测试。

结果如下：其中有3个样品检出光引发剂ITX，浓度在0.05～0.68mg/kg之间；1个样品中同时检出光引发剂150和1-(联苯基-4-基)-2-甲基-2-吗啉基丙烷-1-酮(如图6所示)，检出值分别为4mg/kg和18mg/kg；2个样品中检出光引发剂369，检出值分别为0.054mg/kg和0.18mg/kg。以上结果表明本方法可用于实际样品的测定。

Claims

1.一种UPLC-MS/MS法同时测定食品接触用油墨中20种光引发剂的迁移量的方法，其特征在于，所述的20种光引发剂选自1-(联苯基-4-基)-2-甲基-2-吗啉基丙烷-1-酮、2,4-二乙基硫杂蒽-9-酮、2-苯甲酰基苯甲酸甲酯、2-苄基-2-二甲基氨基-4'-吗啉基苯丁酮、2-甲基二苯甲酮、2-氯-4-苯基二苯甲酮、4,4'-双(二乙基氨基)二苯甲酮、4-二甲氨基苯甲酸乙酯、4-甲基二苯甲酮、胺增感剂A198、二苯甲酮、光引发剂1001M、光引发剂150、光引发剂160、光引发剂184、光引发剂379、光引发剂907、光引发剂EHA、光引发剂ITX和光引发剂TPO，该方法包括以下步骤：

（1）制备标准工作溶液和待测样品溶液，所述的待测样品溶液由待测样品与食品模拟物通过迁移实验获得，所述的食品模拟物选自体积分数为4%的乙酸、体积分数为10%的乙醇、体积分数为95%的乙醇、异辛烷和橄榄油中的一种以上；

（2）分别吸取待测样品溶液和标准溶液采用超高效液相色谱－串联质谱法进行定性和定量分析；待测样品溶液的制备具体包括以下步骤：按照 GB 5009.156-2016 进行迁移实验；对于乙酸及乙醇类模拟物：取1 mL溶液，过0.22 μm滤膜，待测；对于异辛烷模拟物，移取2 mL溶液至试管中，将溶液于40℃条件下氮吹至近干，加2 mL甲醇定容，过0.22 μm滤膜，待测；对于橄榄油模拟物，取橄榄油模拟物2 g至试管中，加入3 mL正己烷和2 mL 80%甲醇-水溶液，涡旋混匀3 min，待静置分层后，取下层清液，过0.22 μm滤膜，待测；所述的超高效液相色谱－串联质谱法中的色谱条件为：色谱柱：Eclipse Plus C18 RRHD，50 mm×3.0 mm×1.8 μm；流动相A：0.1%甲酸，B：甲醇；洗脱梯度：0~1 min，90%A；4 min，60%A；10~13.5 min，5%A；13.6~15 min，90%A；流速0.4 mL/min；进样体积：10 μL；柱温：40℃；所述的超高效液相色谱－串联质谱法中的质谱条件为：ESI正离子模式；雾化气：45 psi；喷雾电压：500 V；毛细管电压：4000 V；气流速度：7 L/min；气流温度：300℃；鞘气N₂流速：11 L/min；鞘气N₂温度：380℃。

2.根据权利要求1所述的UPLC-MS/MS法同时测定食品接触用油墨中20种光引发剂的迁移量的方法，其特征在于，标准工作溶液的制备包括以下步骤：

对于乙酸及乙醇类模拟物，20种光引发剂标准品用甲醇配制成质量浓度为 1000 mg/L的单标储备溶液，再用甲醇稀释成质量浓度为 10 mg/L 的上述20种光引发剂混合标准中间溶液，准确吸取 20种光引发剂标准中间溶液 0 mL、0.02 mL、0.05 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL 于 10 mL 容量瓶中，用体积分数4%的乙酸定容，得到 20种光引发剂浓度分别为 0mg/L、0.02 mg/L、0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.5 mg/L 的标准工作溶液；采用同样方式，分别用体积分数为10%的乙醇、体积分数为95%的乙醇食品模拟物配制同样浓度系列的20种光引发剂标准工作溶液，取 1 mL标准工作溶液，过 0.22 μm 滤膜，待测；

对于异辛烷食品模拟物，分别准确吸取20种光引发剂标准中间溶液0 mL、0.02 mL、0.05 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL 于 10 mL 容量瓶中，用异辛烷定容，得到20种光引发剂浓度分别为0 mg/L、0.02 mg/L、0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.5 mg/L的标准工作溶液，移取2 mL异辛烷溶液至试管中，将溶液于40℃条件下氮吹至近干，加2 mL甲醇定容，过0.22 μm滤膜，待测；

对于橄榄油食品模拟物，分别准确吸取20种光引发剂标准中间溶液0 mL、0.02 mL、0.05 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL 于 10 mL 容量瓶中，用橄榄油定容，得到20种光引发剂浓度分别为0 mg/L、0.02 mg/L、0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.5 mg/L的标准工作溶液，取橄榄油模拟物2 g至试管中，加入3 mL正己烷和2 mL 80%甲醇-水溶液，涡旋混匀3min，待静置分层后，取下层清液，过0.22 μm滤膜，待测。