CN114099610B - 一种中药组合物在制备防治鼻病毒性疾病药物和/或非治疗用试剂中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及中药技术领域，具体公开了一种中药组合物在制备防治鼻病毒性疾病药物和/或非治疗用试剂中的应用，所述中药组合物的制备原料包括以下组分：葶苈子、蜜麻黄、苦杏仁、浙贝母、枇杷叶、大青叶、石菖蒲、穿山龙、一枝蒿、银杏叶、五味子、枳实、生石膏、甘草。该中药组合物对被鼻病毒感染的细胞表现出良好的病变保护效应，具有良好的预防/治疗鼻病毒感染的应用前景。

Description

一种中药组合物在制备防治鼻病毒性疾病药物和/或非治疗 用试剂中的应用
技术领域
本发明属于中药技术领域，具体涉及一种中药组合物在制备防治鼻病毒性疾病药物和/或非治疗用试剂中的应用。
背景技术
鼻病毒(Rhinovirus，RhV)是引起人类病毒性呼吸道感染最主要的病毒性病原体之一，上呼吸道感染30％～50％由人鼻病毒引起。它不仅能引起普通感冒以及婴儿病毒性毛细支气管炎等呼吸系统感染疾病，目前大量证据还表明它与哮喘的恶化、慢性阻塞性肺病的急性加重等有关，近年来逐步成为病毒学研究的热点之一。
鼻病毒为小RNA病毒，目前发现至少有100多种亚型，疫苗的研制难度较大。除此之外，现有的抗RhV感染药物均为对症治疗，例如干扰素、衣壳蛋白成分、受体阻滞剂等，但是上述药物副反应较多。而中药讲究整体辩证施治，副作用更小，安全性更高，但是，目前尚缺乏安全有效的、能够预防和治疗RhV感染的中药治疗剂。
已有研究显示，银黄清肺胶囊具有体外抗呼吸道合胞病毒、流感病毒作用，并对幼龄大鼠流感病毒肺炎具有较好的保护作用。与抗呼吸道合胞病毒、流感病毒不同的是，鼻病毒具有独特的病原学特征，主要体现在以下方面：(1)类型：流感病毒为单股负链RNA病毒，呼吸道合胞病毒为非节段性、单股负链RNA病毒，鼻病毒为单股正链RNA病毒；(2)亚型：甲型流感病毒有18种HA亚型(H1-H18)和11种NA亚型(N1-N11)，呼吸道合胞病毒有14种RSV-A基因型和25种RSV-B基因型，鼻病毒有超过100种的HRV血清型，在抗原位点上具有高水平的序列变异性；(3)感染疾病：流感病毒感染引起的疾病以甲型流感与乙型流感为主；呼吸道合胞病毒感染引起的疾病包括下呼吸道感染，还可向肺外组织血源性地扩散，如具有免疫特性的骨髓基质细胞中；鼻病毒感染导致的疾病包括上呼吸道感染、哮喘急性发作等。
发明内容
本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种中药组合物在制备防治鼻病毒性疾病药物和/或非治疗用试剂中的应用。
本发明的第一方面，提供一种中药组合物在制备防治鼻病毒性疾病药物中的应用，所述中药组合物的制备原料包括以下组分：葶苈子、蜜麻黄、苦杏仁、浙贝母、枇杷叶、大青叶、石菖蒲、穿山龙、一枝蒿、银杏叶、五味子、枳实、生石膏、甘草。
本发明的银黄清肺胶囊为由蜜麻黄、葶苈子、浙贝母、苦杏仁、一枝蒿等药味采用现代工艺制成的中药新药，能清肺化痰、止咳平喘，用于慢性支气管炎急性发作之痰热壅肺证。本品首选葶苈子、蜜麻黄为君药，以葶苈子之寒性以祛肺热，下气行水以驱痰涎，泻肺平喘以治其主症；蜜麻黄功善发汗利水，宣肺平喘。两药合用，一宣一降，共同针对痰、咳、喘的主症而通达肺经，以行宣肺降气、止咳平喘之效。苦杏仁性专降泄，兼能润肠通便；浙贝母、枇杷叶清肺化痰散结、降气止咳；银杏叶化痰平喘，兼能解除痰热壅肺造成的瘀滞状态，又能收敛肺气，佐制麻黄，防其发散太过耗伤肺气，四药共为臣药。石菖蒲、穿山龙、一枝蒿、大青叶、五味子、枳实、生石膏共为佐药。石菖蒲功善开窍豁痰、理气活血、散风祛湿，穿山龙活血、祛痰、利水。一枝蒿、大青叶清肺经浊热热毒，并改善痰热造成的瘀滞状态。用五味子配蜜麻黄，一宣一敛，宣中有敛，散中有收，使宣降有序，本源兼顾。借枳实、生石膏之力，加强君臣药消痰除满、清热泻火之功。方中用甘草调和诸药而为使药。诸药配合，清肺化痰，止咳平喘，使肺热清，痰浊祛，咳喘平，诸证向愈。
在本发明的一些实施方式中，所述中药组合物的制备原料包括以下质量份的组分：葶苈子55-65份、蜜麻黄35-40份、苦杏仁40-50份、浙贝母40-50份、枇杷叶40-50份、大青叶27-32份、石菖蒲40-50份、穿山龙40-50份、一枝蒿27-32份、银杏叶40-50份、五味子12-18份、枳实12-18份、生石膏55-65份、甘草12-18份。
在本发明的一些优选的实施方式中，所述中药组合物的制备原料包括以下质量份的组分：葶苈子60份、蜜麻黄37.5份、苦杏仁45份、浙贝母45份、枇杷叶45份、大青叶30份、石菖蒲45份、穿山龙45份、一枝蒿30份、银杏叶45份、五味子15份、枳实15份、生石膏60份、甘草15份。
在本发明的一些实施方式中，所述鼻病毒为鼻病毒14型。
在本发明的一些实施方式中，所述鼻病毒性疾病为鼻病毒感染导致的上呼吸道感染、哮喘急性发作、嗜酸性气道炎症、小儿囊性纤维化。
在本发明的一些实施方式中，所述防治鼻病毒性疾病药物为能够抑制鼻病毒感染的细胞病变的药物。
在本发明的一些实施方式中，所述防治鼻病毒性疾病药物包括药学上可接受的载体或辅料。
本发明的第二方面，提供一种中药组合物在制备非治疗用试剂中的应用，所述中药组合物的制备原料包括以下组分：葶苈子、蜜麻黄、苦杏仁、浙贝母、枇杷叶、大青叶、石菖蒲、穿山龙、一枝蒿、银杏叶、五味子、枳实、生石膏、甘草。
在本发明的一些实施方式中，所述中药组合物的制备原料包括以下质量份的组分：葶苈子55-65份、蜜麻黄35-40份、苦杏仁40-50份、浙贝母40-50份、枇杷叶40-50份、大青叶27-32份、石菖蒲40-50份、穿山龙40-50份、一枝蒿27-32份、银杏叶40-50份、五味子12-18份、枳实12-18份、生石膏55-65份、甘草12-18份。
在本发明的一些优选的实施方式中，所述中药组合物的制备原料包括以下质量份的组分：葶苈子60份、蜜麻黄37.5份、苦杏仁45份、浙贝母45份、枇杷叶45份、大青叶30份、石菖蒲45份、穿山龙45份、一枝蒿30份、银杏叶45份、五味子15份、枳实15份、生石膏60份、甘草15份。
在本发明的一些实施方式中，所述试剂为能够增强被鼻病毒感染的细胞的活力或者存活率的试剂。
在本发明的一些实施方式中，所述鼻病毒为鼻病毒14型。
在本发明的一些实施方式中，所述细胞为人胚肺二倍体(HEL)细胞。
在本发明的一些实施方式中，所述增强被鼻病毒感染的细胞的活力或者存活率是通过抑制鼻病毒感染细胞的细胞病变效应(cytopathic effect，CPE)实现的。
本发明的有益效果为：
本发明的中药组合物在体外能够降低鼻病毒感染细胞的CPE水平，对鼻病毒感染细胞表现出良好的病变保护效应，能够增强被鼻病毒感染的细胞的活力或者存活率，具有良好的预防/治疗鼻病毒感染的应用前景。
本申请中术语：
“药学上可接受的”的成分是适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)的物质。
具体的，“药学上可接受的载体或辅料”指用于治疗剂给药的载体或辅料。它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。合适的载体是本领域技术人员所熟知的。在组合物中药学上可接受的载体可含有液体，如水、盐水、甘油和乙醇。另外，这些载体中还可能存在辅助性的物质，包括但不限于：甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素C、EDTA二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β-环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁。但对于本领域技术人员而言，还知晓可用于本发明的药用载体或辅料不仅限于上述类型。
附图说明
下面结合附图和实施例对本发明作进一步的说明，其中：
图1为本发明的中药组合物(银黄清肺胶囊)在HEL细胞上对鼻病毒14型的抑制作用，图C1、C2分别为银黄清肺胶囊2.5mg/ml、1.25mg/ml；C3为利巴韦林2.0mg/ml。
图2为本发明的中药组合物(银黄清肺胶囊)在HEL细胞上对鼻病毒14型的治疗作用，图B1、B2分别为银黄清肺胶囊2.5mg/ml、1.25mg/ml；B3为利巴韦林2.0mg/ml。
具体实施方式
以下将结合实施例对本发明的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。
实施例
实施例1样品前处理
精密称取银黄清肺胶囊1.0262g，用三蒸水充分浸泡溶胀后置于60℃水浴2小时后离心，取上清液后隔水蒸腾浓缩至母液浓度为500mg/ml。母液以间歇灭菌法除菌(80℃水浴30分钟，连续3日)，离心分装冻于-20℃备用。
阳性药物利巴韦林：精密称取利巴韦林粉末0.0524g，用5.2ml的无菌培养基DMEM充分溶解后，经0.22μm微孔滤膜过滤除菌分装冻于-20℃备用，母液浓度为10mg/ml。
实施例2银黄清肺胶囊对鼻病毒14型的体外抑制作用
常规消化HEL细胞，用完全培养基调整接种密度至5.0×105个/ml，以0.1ml/孔接种于96孔一次性培养板上，37℃、5％CO2培养至紧密单层后备用。选取浓度10mg/ml、5.0mg/ml、2.5mg/ml和1.25mg/ml作为银黄清肺胶囊的实验浓度。先将稀释好的药物接种于96孔细胞板上，每个样品浓度接种4个细胞复孔，加样后直接接种100TCID50病毒悬液100μl于35℃、5％CO2条件下继续培养4天。同时设置阳性药物利巴韦林对照、病毒对照和正常细胞对照，实验结束后以CPE法评价受试样品对病毒的抑制作用，结果见图1。
结果表明：由图1中可以得出，1.25mg/ml的银黄清肺胶囊导致HEL细胞的CPE水平下降，而2.5mg/ml的银黄清肺胶囊与2.0mg/ml的利巴韦林的抑制效果相当，几乎完全抑制HEL细胞出现CPE。
实施例3银黄清肺胶囊对鼻病毒14型的体外治疗作用
常规消化HEL细胞，用完全培养基调整接种密度至5.0×105个/ml，以0.1ml/孔接种于96孔一次性培养板上，37℃、5％CO2培养至紧密单层后备用。先将100TCID50的病毒悬液攻击HEL细胞，病毒攻击2小时后分别加入受试浓度为40mg/ml、20mg/ml、10mg/ml、5.0mg/ml、2.5mg/ml和1.25mg/ml的银黄清肺胶囊培养基。每个样品浓度接种4个细胞复孔，于33-35℃、5％CO2条件下继续培养4天。同时设置阳性药物利巴韦林对照、病毒对照和正常细胞对照，实验结束后以CPE法评价受试样品对病毒的抑制作用，结果见图2。
结果表明：由图2中可以得出，1.25mg/ml的银黄清肺胶囊导致HEL细胞的CPE水平下降，而2.5mg/ml的银黄清肺胶囊与2.0mg/ml的利巴韦林的治疗效果相当，几乎完全抑制HEL细胞出现CPE。
采用SPSS 19.0统计软件分析数据，计量资料以
Figure BDA0003425758320000061
表示，多组间比较，当资料满足正态分布且组间方差齐时，应用单因素方差分析；如不满足上述条件则采用非参数检验(秩和检验)，检验水准为α＝0.05。
表1为不同实验浓度的银黄清肺胶囊和对照药利巴韦林对鼻病毒14型的抑制及治疗作用对比。
表1
Figure BDA0003425758320000062
Figure BDA0003425758320000071
注：“Θ”表示样品对细胞具有毒性作用，造成细胞破碎、固缩等；“-”无毒、无病变；细胞病变程度“-”<10％，“+”25％，“++”50％，“+++”75％，“++++”>90％。
由表中的数据可以看出，银黄清肺胶囊对鼻病毒的抑制作用为，当剂量为5.0mg/ml和2.5mg/ml时均能完全抑制病毒的复制。银黄清肺胶囊对鼻病毒的治疗作用为，当剂量为2.5mg/ml时，能抑制90％的HEL细胞出现CPE，当剂量为1.25mg/ml时能抑制60％-70％的HEL细胞出现CPE。
上面结合附图对本发明实施例作了详细说明，但是本发明不限于上述实施例，在所属技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。此外，在不冲突的情况下，本发明的实施例及实施例中的特征可以相互组合。

Claims (3)

1.一种中药组合物在制备防治鼻病毒性疾病药物中的应用，其特征在于，所述中药组合物的制备原料由以下质量份的组分组成：葶苈子55-65份、蜜麻黄35-40份、苦杏仁40-50份、浙贝母40-50份、枇杷叶40-50份、大青叶27-32份、石菖蒲40-50份、穿山龙40-50份、一枝蒿27-32份、银杏叶40-50份、五味子12-18份、枳实12-18份、生石膏55-65份、甘草12-18份；
所述鼻病毒为鼻病毒14型。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述防治鼻病毒性疾病药物为能够抑制鼻病毒感染的细胞病变的药物。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的应用，其特征在于，所述防治鼻病毒性疾病药物包括药学上可接受的载体或辅料。
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