CN111700998A

CN111700998A - 复方中成药在治疗新型冠状病毒感染的肺炎covid-19中的应用

Info

Publication number: CN111700998A
Application number: CN202010668208.6A
Authority: CN
Inventors: 薛永新
Original assignee: SICHUAN ENWEI PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: SICHUAN ENWEI PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2020-07-13
Filing date: 2020-07-13
Publication date: 2020-09-25

Abstract

本发明公开了一种复方中成药在治疗新型冠状病毒感染的肺炎COVID‑19中的应用，其中，所述复方中成药由玄参、栀子、黄连、连翘、茵陈、茯苓、黄芪、黄精、莪术、三棱、延胡索、蛇床子、制天南星、五倍子制成，具有清热解毒、化湿祛痰、扶正祛邪、调和五脏功效，可用于新冠肺炎发病初期、临床治疗期、疾病恢复期的治疗，以及新冠肺炎的预防。根据细胞水平的筛选结果计算获知，该复方中成药的CC₅₀为177.83μg/mL，EC₅₀为89.13μg/mL，选择指数SI为1.995，表明其对新型冠状病毒SARS‑CoV‑2具有抑制效果；根据急性和长期给药毒理学试验结果提示该复方中成药在临床推荐剂量下是安全的。因此，该复方中成药应用于新型冠状病毒感染的肺炎COVID‑19的治疗和预防，具有较好的治疗效果，无毒副作用。

Description

复方中成药在治疗新型冠状病毒感染的肺炎COVID-19中的应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，特别涉及一种复方中成药在治疗新型冠状病毒感染的肺炎COVID-19中的应用。

背景技术

新型冠状病毒感染的肺炎(COVID-19)是指由新型冠状病毒(SARS-CoV-2) 感染引起的肺炎。新型冠状病毒(SARS-CoV-2)属于β属的冠状病毒，有包膜，颗粒呈圆形或椭圆形，常为多形性，直径60～140nm。采用化药进行抗病毒治疗时，产生的毒副作用较大。由于新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染引发的新冠肺炎在中医学上属于瘟疫湿热疫毒蕴于气分肺部，湿热毒邪并重之证，因此可从中医角度对其进行治疗。

乾坤宁片是四川恩威制药有限公司研制开发的纯中药复方制剂，研究开发始于1988年，最初是作为抗乙型肝炎药物进行研究的，在研究工作中发现其有明显的抗病毒作用，故先后用于艾滋病、病毒性感冒的治疗。经多年的临床前研究，药效学试验，表明其能明显抑制HBV、HIV等病毒的复制，不仅具有广谱抗病毒作用，同时能够提高人体免疫功能，提高体内CD₄、CD₈水平；观察结果还表明，服用乾坤宁片未发现有明显不良反应。乾坤宁片治疗病毒感染性疾病临床疗效确切，在病毒性肝炎、艾滋病、非典型肺炎、病毒性流感和甲型H1N1 流感的临床治疗均有疗效。

(1)乾坤宁片治疗病毒性肝炎的临床研究

1993年经四川省卫生厅批准，乾坤宁片开始用于慢性乙型肝炎和肝癌的临床观察治疗，乾坤宁片具有降低转氨酶、改善肝功能、降低血中病毒载量的功能；肝癌病人服用后具有缩小瘤体、延长生存期、提高生存质量的作用。

2002年以上海中医药大学附属曙光医院为负责医院，中国人民解放军第302 医院、湖北中医学院附属医院、湖南中医学院第一附属医院、云南中医学院附属医院参加的乙肝长乐片(乾坤宁片)治疗慢性乙型肝炎(肝脾湿热证)随机、双盲双模拟、复方益肝丸平行对照、多中心的Ⅱ期临床试验结果表明，乾坤宁片治疗肝脾湿热型慢性乙型肝炎疗效与对照药复方益肝丸相同，未发现相关不良反应。提示乾坤宁片治疗肝脾湿热慢性乙型肝炎安全、有效。具体结果如下： ①降酶疗效：治疗组的总有效率略高于对照组，但两组降酶率和有效率的比较差别无统计学意义。乾坤宁片组和复方益肝丸组的降酶疗效有效率在ITT人群分别为83.48％和77.16％，在PP人群分别为87.62％和83.84％；②中医证候疗效：治疗组的中医证候疗效和有效率略高于对照组，但两组差别比较无统计学意义。乾坤宁组和复方益肝丸组的中医证候疗效有效率在ITT人群分别为 87.83％和81.58％，在PP人群分别为93.14％和90.43％；③血清胆红素疗效：两组血清胆红素疗效和有效率的比较差别无统计学意义，乾坤宁片组和复方益肝丸组的血清胆红素疗效有效率在ITT人群分别为82.81％和73.02％，在PP人群分别为81.97％和73.68％；④血浆蛋白疗效：治疗组改善蛋白代谢的有效率略优于对照组，但比较差别无统计学意义，乾坤宁片组和复方益肝丸组的血浆蛋白疗效有效率在ITT人群分别为83.78％和77.27％，在PP人群分别为83.10％和75.81％。

(2)乾坤宁片治疗HIV/AIDS的临床研究

从1994年开始先后与云南省中医中药研究所、四川省卫生防疫站、美国芝加哥大学、华西医科大学等研究单位合作，分别进行了乾坤宁片对无症状的艾滋病感染者与艾滋病患者的疗效观察，具体结果显示：①服用乾坤宁片三个月对HIV/AIDS患者具有一定提高机体免疫、改善临床症状、减轻体征、增加体重的作用；②参照美国新药研制法规制定的临床研究方案，结合我国HIV/AIDS 临床试验研究的具体情况，进行的完全随机双盲安慰剂对照临床研究，显示乾坤宁片和安慰剂之间比较血浆HIV-1RNA具有显著差异，说明乾坤宁片具有显著降低病毒载量的作用；③开放治疗3个月后的研究显示，乾坤宁片具有显著降低HIV/AIDS患者血浆HIV-1RNA、升高CD4的作用；服药期间患者临床症状得到改善，生存质量提高；④对服用鸡尾酒疗法停药后反弹的10例患者采用乾坤宁片治疗6个月后，病毒从50万以上降至500—10000，免疫细胞上升50—80 个。

2006年由北京佑安医院为负责单位，北京地坛医院、四川大学华西医院为参加单位的乾坤宁双盲安慰剂对照的临床研究，完成了全部180例病例的纳入及24周治疗观察。临床研究表明，乾坤宁片能够提高HIV/AIDS患者的生存质量，具有改善临床症状、控制机会性感染，显著降低血液中病毒载量，增强机体免疫力，延长生存期的作用，显示较好的临床治疗效果，临床使用剂量下长期服用安全。

(3)乾坤宁片防治非典型肺炎的临床研究

2003年4-6月由北京朝阳医院、广州市第八人民医院、河北省胸科医院、北京煤炭总医院、山西省太原市结核病医院、武警总医院参加的乾坤宁片防治 “非典型肺炎”临床研究总结报告显示：①乾坤宁片对治疗非典型肺炎，有迅速退烧、改善全身中毒症状和呼吸道症状、加快肺部炎症吸收、阻止病情进一步加重的显著作用；②乾坤宁片对非典型肺炎患者有增强机体免疫功能，抑制和清除病毒作用；③乾坤宁片具有预防非典型肺炎病毒感染的特殊功效；④乾坤宁片临床应用无明显毒副作用。

(4)乾坤宁片治疗病毒性感冒的临床研究

2005-2008年，以成都中医药大学附属医院为负责单位，四川大学华西医院、北京朝阳医院、江西中医药大学附属医院、湖南中医药大学附属医院等5家单位参加的乾坤宁片治疗感冒(风热证)Ⅱ期、Ⅲ期临床试验结果表明，乾坤宁片治疗感冒针对中医辨证为风热证者，临床症状见有：发热、恶寒轻或微恶风、汗出、咽喉疼痛、鼻塞、流涕、头痛、咳嗽、咯痰、口渴、舌边尖红、舌苔薄黄、脉浮数等，疗效确切，安全可靠，具体结果如下：Ⅱ期临床试验：对感冒的疗效：PP分析结果表明，试验组101例，痊愈率为34.65％，显效率54.46％，愈显率为89.11％，总有效率为98.02％；对照组112例，痊愈率为29.46％，显效率52.68％，愈显率为82.14％，总有效率为95.54％。对中医证候(风热证) 的疗效：试验组101例，痊愈率为42.57％，显效率37.62％，愈显率为80.20％，总有效率为97.03％；对照组112例，痊愈率为34.82％，显效率36.61％，愈显率为71.43％，总有效率为94.64％。Ⅲ期临床试验：对感冒的疗效：试验组346 例，痊愈率为38.73％，显效率为40.17％，总有效率为95.09％；对照组117例，痊愈率为29.91％，显效率为40.17％，总有效率为93.16％。对中医证候的疗效：试验组346例，痊愈率为39.60％，显效率为30.06％，总有效率为94.51％；对照组117例，痊愈率为30.77％，显效率为34.19％，总有效率为92.31％。两组疗效比较，差异无统计学意义。

(5)乾坤宁片治疗甲型H1N1流感的临床研究

2009年度乾坤宁片治疗组、乾坤宁片合用达菲治疗组、单纯对症治疗组治疗108例甲型H1N1流感病例临床观察疗效分析表明：①乾坤宁片组和达菲合用乾坤宁片组治疗后8个主要症状持续时间之和的中位天数显著短于对症治疗组。②甲型H1N1流感病毒核酸转阴情况：乾坤宁片+达菲组治疗后流感病毒核酸转阴最快，其次为乾坤宁片组，但组间差异无统计学意义；两组均显著快于对症治疗组。

发明内容

本发明的目的在于提供一种复方中成药在治疗新型冠状病毒感染的肺炎 COVID-19中的应用。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

复方中成药在治疗新型冠状病毒感染的肺炎COVID-19中的应用，其中，所述复方中成药为由玄参、栀子、黄连、连翘、茵陈、茯苓、黄芪、黄精、莪术、三棱、延胡索、蛇床子、制天南星、五倍子制成的具有清热解毒、化湿祛痰、扶正祛邪、调和五脏功效的药物。

作为优选，所述复方中成药由以下重量份的原料制成：玄参10-30份、栀子 10-30份、黄连10-30份、连翘10-30份、茵陈10-30份、茯苓10-30份、黄芪 20-60份、黄精10-30份、莪术10-30份、三棱10-30份、延胡索10-30份、蛇床子20-60份、制天南星10-30份、五倍子10-30份。

作为优选，所述复方中成药由以下重量份的原料制成：玄参16-22份、栀子 12-18份、黄连12-18份、连翘12-18份、茵陈12-18份、茯苓18-24份、黄芪24-36份、黄精12-18份、莪术12-18份、三棱12-18份、延胡索12-18份、蛇床子20-28份、制天南星10-15份、五倍子12-18份。

本发明中，所述复方中成药加入药学上可接受的辅料制备为片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊剂或口服液。

新型冠状病毒感染的肺炎COVID-19，简称新冠肺炎，从中医理论上看是瘟疫湿热疫毒蕴于气分肺部，湿热毒邪并重之证。疫毒邪气熏蒸肺部则发热、口渴；肺失宣发肃降则咳嗽；疫毒热邪煎熬津液则痰黏或黄痰；壮热食气，同时湿为阴邪损伤肺脾阳气则胸闷倦怠、头身困重；后天脾气受损则脾胃运化无权而见口淡无味、不欲饮食；湿性粘腻湿热并重则痰黏不易咯出、大便不爽或秘结；舌质红、苔黄白或黄腻、脉濡数皆是湿热疫毒蕴肺伤及后天，五脏失衡见症。

方中玄参苦寒，清热凉血，滋阴降火，解毒散结，用于肺热咳嗽、痰黄黏稠、口干舌燥，玄参重在清热养阴解毒，新冠肺炎传变迅猛，由卫分入里，化热化燥，耗损肺阴金气，玄参清肺热而又能滋阴凉血、降火解毒，顾护肺中阴液，黄连清热燥湿、泻火解毒；栀子泻火除烦、清热利尿、凉血解毒，叁药合用，直清肺脏湿热郁邪而生正气，使湿热得清，恢复肺脏宣肃功能；玄参、黄连皆有清热解毒功能，同时栀子之利尿功能，有利于导湿邪从小便而出，叁药是为君药，并具有杀灭病毒作用。

连翘清热解毒、消肿散结，苦寒清热辅助君药清热解毒之功；茵陈清热利湿；茯苓渗湿利水，健脾和胃，宁心安神，茵陈、茯苓利湿清热，茯苓更能兼顾脾虚而渗湿；黄芪甘温，益气补肺脾；新冠肺炎发展过程中，出现乏力、头身困重等肺脾气虚症状，黄芪、茯苓补益肺脾力专效宏，金气和后天脾土得补益，帮助君药清热祛湿，正气健旺方能祛邪杀毒，肆药辅助君药清热解毒，益气化湿之功，合用共为臣药。

湿热疫邪最易伤阴耗气，热邪伤津，气血瘀滞，湿邪困阻，气机不利，气为血帅，气滞则血瘀，莪术、三棱、延胡索三药具有活血化瘀散结之功效，针对新冠肺炎胸闷气短病机施药，瘀血得去，血行则气行，气行则湿气得化；制天南星辛苦微温，燥湿化痰用于黄痰咳嗽；五倍子敛肺降火止咳；佐蛇床子温肾壮阳、燥湿，肾为命门是一身阳气先天之根本，湿邪最易伤阳，用蛇床子温肾壮阳，填补命门真气，先天肾阳得补则脾肺健旺，阳气生化有源；制天南星、五倍子、蛇床子三药合用，温阳燥湿化痰、敛肺止咳；黄精补气养阴、健脾、润肺、益肾，佐助玄参滋阴清热，亦协同蛇床子共同补肾填精，增强机体免疫力；七药共同佐助君药、臣药功能，使脾肺健而乏力、胸闷倦怠、头身困重、口淡无味、不欲饮食等阳气不足、湿邪困阻症状得以消除；七味共用佐使君臣。

综合全方以清热解毒、化湿祛毒、扶正祛邪、调和五脏为主，抑制瘟疫病毒生长；辅以扶正补虚、活血化瘀、止咳化痰之药，祛邪兼扶正，清利行滞而不伤耗阳气，寒凉清泻而不冰伏邪气，共成邪去正安之功。对新冠肺炎湿热蕴肺、阴虚火旺、五脏失衡患者，发挥天然中药复方的治疗优势。

具体地，所述复方中成药应用于新型冠状病毒感染的肺炎COVID-19发病初期治疗：

所述复方中成药可针对新冠肺炎初期的基本病机进行治疗，不仅能充分缓解发热、乏力、咳嗽等临床症状和体征，而且标本兼顾，内寓“治未病”功效，可严防病机传变，截断病毒感染途径，阻断疾病向重症发展。

具体地，所述复方中成药应用于新型冠状病毒感染的肺炎COVID-19临床治疗期治疗：

新冠肺炎中期，新型冠状病毒SARS-CoV-2耗伤真阴真阳，造成精液枯竭，真气失散，脏腑亏损，病毒乘虚而入，正所谓“邪之所凑，其气必虚”。新冠肺炎重症期，呈现弥散性血管内凝血，患者出现以肺栓塞为主的气滞血瘀证临床表现。

所述复方中成药具有抑杀新型冠状病毒SARS-CoV-2，标本兼治，提高自身免疫力，抵御并治疗病毒伤害的功效。以玄参、黄连、栀子清肺脏湿热郁邪、杀灭病毒而生正气；以黄芪、黄精等药益气养阴，使脾肾共得调补；以莪术、三棱、延胡索活血化瘀散结之功，针对胸闷气短病机施药，共凑重建人体免疫系统、增强人体免疫功能的效果，同时能有力地对抗新型冠状病毒SARS-CoV-2 破坏人体免疫系统的过程，对机体的免疫功能起到双向调节作用，既对正常的免疫机能具有促进作用，又对异常的变态反应有抑制作用，最终保持和恢复自身调节的稳定状态，达到“阴平阳秘，精神乃治”的目的，进而获得改善新冠肺炎患者全身症状，恢复正常状态的理想效果。

具体地，所述复方中成药应用于新型冠状病毒感染的肺炎COVID-19疾病恢复期治疗：

所述复方中成药组方寒温并用，邪正兼顾，寒者意在清解瘟疫毒邪，温者意在益气养阴，扶正固本，寒凉与温热共伍，以使寒凉而不冰伏恋邪，活血行气与扶正固本之味相配，破滞不致失度伤正，通过调动机体自我康复机制，达到扶正驱邪，益气养阴，固本归元，治愈疾病、恢复健康的目的。

具体地，所述复方中成药应用于抑制使用西药治疗新型冠状病毒感染的肺炎COVID-19引起的毒副反应，或/和增强使用西药治疗新型冠状病毒感染的肺炎COVID-19的治疗效果：

所述复方中成药可以有效抑制和治疗因大量服用西药治疗而引起的毒副反应，与西药合用可扬长避短，更大程度上发挥好中、西药物的治疗效果，避免患者因使用西药导致的二次伤害；同时针对西药副反应出现的临床症状予以纠正，起到缓解和治愈临床不良反应的作用。

具体地，所述复方中成药应用于对新型冠状病毒感染的肺炎COVID-19的预防：

所述复方中成药可用于整体调理人体阴阳平衡，使得“正气存内，邪不可干”，对患有基础疾病、亚健康人群起到抵御病毒侵袭的防护作用。

具体地，所述复方中成药应用于新型冠状病毒感染的肺炎COVID-19并发症治疗：

流行病学调查显示，新冠肺炎患者多伴有特定指向的基础疾病，占比较为突出的有心脑血管系统疾病、病毒性肝炎、肾炎、肿瘤、肥胖等，属于易感人群或重症发病率较高人群，重症患者后期可见因免疫系统衰竭引起的全身性脏器衰竭。所述复方中成药获得的国家新药临床研究项目中，包括有效治疗乙型肝炎、冠心病、高脂血症、上呼吸道感染(风热感冒等)、获得性免疫缺陷综合征(艾滋病)等。因此，乾坤宁片在治疗新冠肺炎的同时，对于患有上述基础疾病的患者可以多靶点治疗，起到事半功倍的治疗效果。

用药方法

使用上述复方中成药的片剂用药剂型(0.55g/片)，或等效量其他用药剂型：

1)确诊患者

(1)发热患者：每次服用上述复方中成药片剂8片，用不低于150毫升水送服(服用时尽量多喝水)，4小时服用一次。退烧后减至每次6片，每日3次。

(2)无发热患者：每次服用上述复方中成药片剂6片，每日4次(早、中、晚餐前各服一次，晚上睡觉前服一次)，服用时尽量多喝水。症状缓解后减至每次6片，每日3次。

(3)无症状带病毒者：每次餐前服用上述复方中成药片剂6片，每日3次。

(4)重症患者：鼻饲给药(用量相当于上述复方中成药片剂每次10片，4 小时一次)，每次液体总量为10毫升，每日不低于6次，或每次间隔一小时少量多次。症状缓解后逐渐减量，直至可以自主服药后减至每次6片，每日3次。

2)防护及调理：每次餐前服用上述复方中成药片剂4片，一日3次。

3)疗程：7天；根据病情增加使用疗程。

并且，所述复方中成药的药理毒理实验表明，有抑制病毒作用，无毒副反应。

1)药效学研究表明：

(1)体外抗新型冠状病毒(SARS-CoV-2试验)

中国医学科学院实验动物研究所对所述复方中成药(乾坤宁片)体外抑制 SARS-CoV-2进行了研究，结果表明，乾坤宁片的CC₅₀(对细胞半数毒性浓度) 为177.83μg/mL，EC₅₀(抑制病毒半数有效浓度)为89.13μg/mL，选择指数 SI为1.995。

(2)抗病毒作用：乾坤宁片体外抗病毒药效学试验显示：对流感病毒甲1 型(A1/雅防8-10株)、甲3型(A3/京防92-93株)、腺病毒(ADV)3、7、11 型、呼吸道合胞病毒(RSV)、单纯疱疹病毒(HSV2)、柯萨奇B组病毒(COXB) 混合株均有不同程度的抗病毒作用，最小有效浓度均为62.5-275mg/ml，治疗指数为1-4，体外对SARS-CoV BJ 01株没有抗病毒活性。

(3)抗菌作用：乾坤宁片对常见呼吸道致病菌的体外抗菌试验显示，乾坤宁片体外对所试革兰氏阳性球菌中的金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌及其他葡萄球菌、肺炎链球菌均有较强的抗菌活性；对所试革兰氏阴性杆菌中的铜绿假单胞菌、流感嗜血杆菌、鲍曼不动杆菌、大肠埃希菌及克雷伯氏杆菌的抗菌活性强；对所试临床分离致病菌的体外抗菌活性均明显强于中药对照药复方穿心莲；对氨苄西林和罗红霉素耐药菌株仍有抗菌活性。

乾坤宁对小鼠腹腔感染金黄色葡萄球菌的体内保护试验结果显示，口服灌胃乾坤宁10.8g生药、21.6g生药能减少金黄色葡萄球菌感染造成的动物死亡，经统计学比较，与感染对照组有显著性差异(P＜0.05)。

(4)解热作用：乾坤宁片对2，4-二硝基苯酚所致大鼠发热试验显示，乾坤宁片能有效抑制2，4二硝基苯酚所致的大鼠体温升高，并具一定量效关系；对大肠杆菌内毒素所致家兔发热试验显示，乾坤宁片能有效抑制大肠杆菌内毒素所致家兔的体温升高，并具有量效关系。

(5)抗炎作用：乾坤宁片对二甲苯引起小鼠耳廓肿胀试验显示，乾坤宁片各剂量组对二甲苯引起小鼠耳廓肿胀均有抑制作用；乾坤宁片对大鼠棉球肉芽肿试验显示，乾坤宁片具有明显抑制大鼠棉球肉芽肿形成的作用，有一定剂量效应关系。

(6)镇痛作用：镇痛试验(热板法)显示，乾坤宁片三个剂量组表现出明显提高了小鼠痛阈值的作用，显示乾坤宁片有明显镇痛作用；镇痛试验(扭体法)显示，乾坤宁片高、中、低剂量组均能有效的抑制醋酸对小鼠腹腔的致痛作用。

(7)对免疫功能作用：乾坤宁片对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能影响试验显示，乾坤宁片能明显提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能，与正常对照组比较有显著性差异(P＜0.01)；乾坤宁片对ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化率的影响试验显示，乾坤宁片有促进ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化和提高脾脏指数的作用。

(8)乾坤宁体外杀灭禽流感病毒试验：不同浓度的乾坤宁药液分别与禽流感病毒(DV-1)作用不同时间(10min、30min、60min)，作用后接种10日龄 SPF鸡胚后，观察5天鸡胚存活情况。对照药为达菲。试验结果表明乾坤宁体外杀灭禽流感病毒效果较好。将乾坤宁以不同剂量给4-6周龄鸡预防用药，用不同量的禽流感病毒进行攻击。试验表明，乾坤宁高、中剂量给鸡预防用药，对 25LD50禽流感病毒攻击具有明显保护作用。乾坤宁高、低剂量给鸡预防用药，对2.5LD50禽流感病毒攻击具有明显保护作用。乾坤宁高、中、低剂量给鸡预防用药，对250LD50禽流感病毒攻击无任何效果。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明通过老药新用的方式，将具有多年临床应用的复方中成药(乾坤宁) 用于新型冠状病毒感染的肺炎COVID-19的治疗和预防，疗效确切，无毒副作用，临床使用安全有效。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明，本发明的实施方式包括但不限于下列实施例。

实施例

复方中成药在治疗新型冠状病毒感染的肺炎COVID-19中的应用，其中，所述复方中成药采用如下重量份的组方药材经制备得所需用药剂型：玄参10-30 份、栀子10-30份、黄连10-30份、连翘10-30份、茵陈10-30份、茯苓10-30 份、黄芪20-60份、黄精10-30份、莪术10-30份、三棱10-30份、延胡索10-30 份、蛇床子20-60份、制天南星10-30份、五倍子10-30份。该复方中成药的产品名可为乾坤宁。

作为优选，所述复方中成药采用如下重量份的组方药材制备：玄参16-22 份、栀子12-18份、黄连12-18份、连翘12-18份、茵陈12-18份、茯苓18-24 份、黄芪24-36份、黄精12-18份、莪术12-18份、三棱12-18份、延胡索12-18 份、蛇床子20-28份、制天南星10-15份、五倍子12-18份。

具体地，在一种制备方式中，采用玄参19.4份、栀子16.0份、黄连16.0份、连翘16.0份、茵陈16.9份、茯苓23.7份、黄芪31.3份、黄精16.0份、莪术16.0 份、三棱16.0份、延胡索16.0份、蛇床子23.7份、制天南星10.1份、五倍子 16.0份的处方比例药材，经提取浓缩和喷雾干燥制粒，加入辅料适量混匀，压片，包薄膜衣，制成乾坤宁片剂1000片(0.55g/片)，即得。

又如，在另一种制备方式中，采用玄参18份、栀子15份、黄连15份、连翘15份、茵陈18份、茯苓24份、黄芪33份、黄精15份、莪术15份、三棱15份、延胡索15份、蛇床子21份、制天南星12份、五倍子15份的处方比例药材，经提取浓缩和喷雾干燥制粒，加入辅料适量混匀，压片，包薄膜衣，制成乾坤宁片剂1000片(0.55g/片)，即得。

又如，在另一种制备方式中，采用玄参22份、栀子18份、黄连18份、连翘18份、茵陈18份、茯苓18份、黄芪28份、黄精18份、莪术18份、三棱18份、延胡索18份、蛇床子25份、制天南星15份、五倍子18份的处方比例药材，经提取(同时收集挥发油)浓缩和喷雾干燥制粒，20目筛整粒，喷雾加入挥发油，混匀，闷润制成乾坤宁颗粒剂1000g，分装(每袋重3g)，即得。

又如，在另一种制备方式中，采用玄参15份、栀子10份、黄连10份、连翘10份、茵陈12份、茯苓20份、黄芪30份、黄精10份、莪术10份、三棱10份、延胡索10份、蛇床子30份、制天南星10份、五倍子10份的处方比例药材，经提取(同时收集挥发油)浓缩和喷雾干燥制粒，20目筛整粒，喷雾加入挥发油，混匀，闷润制成乾坤宁颗粒剂1000g，分装(每袋重3g)，即得。

又如，在另一种制备方式中，采用玄参25份、栀子22份、黄连22份、连翘22份、茵陈25份、茯苓22份、黄芪40份、黄精22份、莪术22份、三棱22份、延胡索22份、蛇床子35份、制天南星12份、五倍子22份的处方比例药材，经提取(同时收集挥发油)浓缩和喷雾干燥成浸膏粉，挥发油用辅料 (β-环糊精)包裹后混入浸膏粉，装入胶囊制成乾坤宁胶囊剂1000粒(0.33g/ 粒)，即得。

又如，在另一种制备方式中，采用玄参16份、栀子12份、黄连12份、连翘12份、茵陈12份、茯苓18份、黄芪24份、黄精12份、莪术12份、三棱12份、延胡索12份、蛇床子20份、制天南星10份、五倍子12份的处方比例药材，经提取(同时收集挥发油)浓缩和喷雾干燥成浸膏粉，挥发油用辅料 (β-环糊精)包裹后混入浸膏粉，装入胶囊制成乾坤宁胶囊剂1000粒(0.33g/ 粒)，即得。

具体地，乾坤宁片应用于新型冠状病毒感染的肺炎COVID-19发病初期治疗：①对于无症状带病毒者：每次餐前服用乾坤宁片6片(0.55g/片)，每日3次； ②对于无发热患者：每次服用乾坤宁片6片(0.55g/片)，每日4次(早、中、晚餐前各服一次，晚上睡觉前服一次)，服用时尽量多喝水，症状缓解后减至每次 6片，每日3次；③对于发热患者：每次服用乾坤宁片8片(0.55g/片)，用不低于150毫升水送服(服用时尽量多喝水)，4小时服用一次，退烧后减至每次6 片，每日3次；7日为一疗程，根据病情增加使用疗程。

具体地，乾坤宁片应用于新型冠状病毒感染的肺炎COVID-19临床治疗期治疗：①对于发热患者：每次服用乾坤宁片8片(0.55g/片)，用不低于150毫升水送服(服用时尽量多喝水)，4小时服用一次，退烧后减至每次6片，每日3 次；②对于重症患者：鼻饲给药(用量相当于乾坤宁片剂每次10片(0.55g/片)， 4小时一次)，每次液体总量为10毫升，每日不低于6次，或每次间隔一小时少量多次，症状缓解后逐渐减量，直至可以自主服药后减至每次6片，每日3次； 7日为一疗程，根据病情增加使用疗程。

具体地，乾坤宁片应用于新型冠状病毒感染的肺炎COVID-19疾病恢复期治疗：每次餐前服用乾坤宁片4片(0.55g/片)，一日3次；7日为一疗程，根据病情增加使用疗程。

具体地，乾坤宁片应用于抑制使用西药治疗新型冠状病毒感染的肺炎 COVID-19引起的毒副反应，或/和增强使用西药治疗新型冠状病毒感染的肺炎 COVID-19的治疗效果：每次餐前服用乾坤宁片4片(0.55g/片)，一日3次；7日为一疗程，根据病情增加使用疗程。

具体地，乾坤宁片应用于对新型冠状病毒感染的肺炎COVID-19的预防：每次餐前服用乾坤宁片4片(0.55g/片)，一日3次；7日为一疗程。

一、新型冠状病毒SARS-CoV-2体外筛选试验

委托中国医学科学院实验动物研究所对乾坤宁片体外抑制新型冠状病毒 SARS-CoV-2进行研究，用于在细胞水平评价乾坤宁片(0.55g/片)抗SARS-CoV-2 效果。

1、实验材料

受试药品：乾坤宁片(0.55g/片)，生产企业为四川恩威制药有限公司，药物批号为200202，药物生产日期为2020.02.26。

细胞：VeroE6细胞，由中国医学科学院医学实验动物研究所病原中心保存。

病毒：新型冠状病毒SARS-CoV-2，滴度为10⁵TCID₅₀/ml，由中国医学科学院医学实验动物研究所病原中心-80℃保存。使用病毒滴度为100TCID₅₀。

2、实验方法

(1)受试药物细胞毒性实验

①无菌96孔培养板，每孔加入100μl浓度为4×10⁵cell/ml Vero E6细胞，37℃5％CO₂培养24小时；

②药物用DMEM培养基(含2％双抗和16μg/ml胰蛋白酶)溶解，配制成 4mg/mL的溶液，然后倍比系列稀释，原倍，1:2，1:4……1:128共8个稀释度；

③弃去96孔培养板中细胞培养液，分别加入稀释好的药物，每孔100μl，每浓度4个复孔，每孔再加入100μl DMEM培养基(含2％双抗和16μg/ml胰蛋白酶)；

④同时设立细胞对照：每孔200μlDMEM培养基(含2％双抗和16μg/ml胰蛋白酶)加入至长成单层的Vero E6细胞96孔培养板中，共4个复孔。

⑤37℃5％CO₂孵箱孵育3天；

⑥光学显微镜下观察细胞病变(CPE)，细胞有CPE变化记为“+”，细胞无 CPE变化或正常细胞形态记为“-”。

(2)受试药物抗病毒实验

②受试药物稀释成5个浓度，每个浓度4个复孔，每孔100μl，然后每孔再加入等体积100TCID₅₀病毒，37℃，5％CO₂孵箱作用1h；

③1h后，弃去96孔培养板中细胞培养液，加入上述混合液；

④同时设立细胞对照、病毒对照；

细胞对照：每孔200μlDMEM培养基(含2％双抗和16μg/ml胰蛋白酶)加入至长成单层的Vero E6细胞96孔培养板中，共4个复孔。

病毒对照：每孔100μl DMEM培养基(含2％双抗和16μg/ml胰蛋白酶)，再加入等体积100TCID₅₀病毒，共4个复孔，37℃作用1h，1h后弃去96孔培养板中细胞培养液，加入上述病毒液。

⑤细胞37℃，5％CO₂孵箱孵育4-5天；

(3)实验条件：以上实验操作均在BSL-3实验室内完成。

(4)药物效果计算：

①药物对细胞半数毒性浓度(CC₅₀)的计算：

A:大于50％细胞病变率的百分数，B:小于50％细胞病变率的百分数，C: log(稀释倍数)，D:log(小于50％细胞病变率所对应的药物浓度)

②药物抑制病毒百分率：

③药物抑制病毒半数有效浓度(EC₅₀)

A:大于50％抑制率的百分数，B:小于50％抑制率的百分数，C:log(稀释倍数)，D:log(小于50％抑制率所对应的药物浓度)

如药物无抑制病毒作用将无法测得EC₅₀。

④选择指数(SI)

(5)药效评价指标：

选择指数(Selection Index，SI)：指药物对细胞50％毒性浓度与对病毒50％抑制浓度的比值(CC₅₀/EC₅₀)，或者表示药物对细胞最大无毒浓度与对病毒最小有效浓度的比值(CC₀/EC₀)。选择指数越大安全性越高。

3、实验结果

(1)受试药物细胞毒性实验

药物分别设置8个浓度，细胞毒性测定结果显示乾坤宁片(0.55g/片)在 250μg/mL及以上浓度对细胞有毒性，结果见表1，根据药物毒性CC₅₀计算公式，得出CC₅₀＝177.83μg/mL。

表1.药物毒性结果

“+”为细胞有CPE变化，“-”为细胞无CPE变化或正常细胞形态。

(2)受试药物抗病毒实验

药物分别设置5个浓度，受试药物乾坤宁片(0.55g/片)在62.5μg/mL及以下浓度对新型冠状病毒SARS-CoV-2没有抗病毒作用，结果见表2，根据药物抑制病毒半数有效浓度EC₅₀计算公式，得出EC₅₀＝89.13μg/mL。

表2.药物抗新型冠状病毒SARS-CoV-2效果

“+”为细胞有CPE变化，“-”为细胞无CPE变化或正常细胞形态，“/”

为细胞细胞毒性

(3)选择指数(SI)

受试药物乾坤宁片(0.55g/片)

选择指数(SI)是判断药物安全性的指标，指数越大安全范围越大，大于 1.00以上有开发价值。乾坤宁片SI为1.995，意味着有进一步研究价值。

4、结论

根据细胞水平的筛选结果，计算乾坤宁片(0.55g/片)的CC₅₀为177.83μg/mL， EC₅₀为89.13μg/mL，选择指数SI为1.995。

EC₅₀为89.13μg/mL，意味着乾坤宁片在浓度为89.13μg/mL时，即可对50％的新型冠状病毒SARS-CoV-2产生抑制效果。

二、急性毒理学试验

1)试验材料

受试药品：乾坤宁片。

动物：昆明种小鼠，雌雄各半。

2)试验过程

(1)口服给药

分为6个剂量组，每组10只，剂量分别为：148.00g/kg、126.00g/kg、107.00g/kg、91.04g/kg、77.38g/kg、65.77g/kg，一次性灌胃后，观察一周内动物的反应并记录死亡情况。

(2)腹腔注射

分为6个剂量组，每组10只，剂量分别为3.00g/kg、2.40g/kg、1.92g/kg、 1.54g/kg、1.23g/kg、0.98g/kg，一次腹腔注射后，观察一周内动物的反应并记录死亡情况。

3)试验结果

乾坤宁经口服给药途径小鼠急性毒性试验测定，LD₅₀为99.50g原生药/kg， 95％可信区间为92.30～106.70g/kg。

乾坤宁经腹腔注射给药途径小鼠急性毒性试验测定，LD₅₀为2.05g原生药 /kg，95％可信区间为1.79～2.31g/kg。

三、长期给药毒理学试验

1、大鼠长期毒性试验

(1)试验材料

受试药品：乾坤宁片。

动物：Wistar大鼠。

(2)试验过程

按6、12、36g原生药/kg/d(相当于临床日用量10、20、60倍)，对大鼠连续灌胃3个月。

(3)试验结果

肝肾功能、心电图未见明显影响，除肾脏外各器官组织形态学未见明显特异性损害。

高剂量组表现的毒性反应为食欲降低、体重增加缓慢，甚至下降；部分脏器如肝、脾、肾、睾丸有所增大；组织形态学观察到8/18(两只动物死亡)大鼠肾小管上皮细胞胞浆嗜伊红、灶性肾小管上皮细胞轻度浊肿。

中剂量组毒性反应较轻，表现为雌性动物脾、肾指数增大，8/20只大鼠肾脏发生与大剂量组相同的病理学改变。

低剂量组未见任何毒性反应。

2、犬长期毒性试验

(1)试验材料

受试药品：乾坤宁片。

动物：试验用杂种犬。

(2)试验过程

按2.4、6.6、10.8g原生药/kg/d(相当于临床日用量4、11、18倍)，让受试犬连续6个月口服乾坤宁。

(3)试验结果

除高剂量组有轻微的短期便稀溏、厌食、体重增长缓慢，未见其他明显毒副作用；停药观察一个月，亦无延迟毒性反应。提示最小毒性剂量大于10.8g原生药/kg/d op×6月，为临床剂量18倍。

乾坤宁片治疗新冠肺炎案例

1、患者资料

李某，男，51岁，于某日出现体温异常、干咳、肌肉酸痛症状，经体温检测38.5度，去医院就诊，胸部CT示双肺散在小片状阴影，确诊为新冠肺炎 COVID-19。

2、治疗方案

居家隔离治疗。

第一阶段：口服抗病毒药物和莲花清瘟中药一周。效果不明显，仍有间断发热，体温在37.8～38度之间波动，出现轻度呼吸困难，胸部CT示双肺阴影增多加重，阴影中央出现感染坏死病灶。

第二阶段：口服乾坤宁片剂(0.55g/片)8片/次，一天3次。3天后体温正常并保持在37度以下，肌肉酸痛明显减轻，一周后呼吸困难明显好转，淋巴细胞回升，肺部CT示双肺片状阴影消退，仅有肺纹理增粗。再一周后复查核酸转阴，三天后二次复查核酸仍为阴性。后逐渐康复且抗体检测阳性。

上述实施例仅为本发明的优选实施方式，不应当用于限制本发明的保护范围，凡在本发明的主体设计思想和精神上作出的毫无实质意义的改动或润色，其所解决的技术问题仍然与本发明一致的，均应当包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.复方中成药在治疗新型冠状病毒感染的肺炎COVID-19中的应用，其中，所述复方中成药为由玄参、栀子、黄连、连翘、茵陈、茯苓、黄芪、黄精、莪术、三棱、延胡索、蛇床子、制天南星、五倍子制成的具有清热解毒、化湿祛痰、扶正祛邪、调和五脏功效的药物。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述复方中成药由以下重量份的原料制成：玄参10-30份、栀子10-30份、黄连10-30份、连翘10-30份、茵陈10-30份、茯苓10-30份、黄芪20-60份、黄精10-30份、莪术10-30份、三棱10-30份、延胡索10-30份、蛇床子20-60份、制天南星10-30份、五倍子10-30份。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述复方中成药由以下重量份的原料制成：玄参16-22份、栀子12-18份、黄连12-18份、连翘12-18份、茵陈12-18份、茯苓18-24份、黄芪24-36份、黄精12-18份、莪术12-18份、三棱12-18份、延胡索12-18份、蛇床子20-28份、制天南星10-15份、五倍子12-18份。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述复方中成药加入药学上可接受的辅料制备为片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊剂或口服液。

5.根据权利要求1～4任一项所述的应用，其特征在于，所述复方中成药应用于新型冠状病毒感染的肺炎COVID-19发病初期治疗。

6.根据权利要求1～4任一项所述的应用，其特征在于，所述复方中成药应用于新型冠状病毒感染的肺炎COVID-19临床治疗期治疗。

7.根据权利要求1～4任一项所述的应用，其特征在于，所述复方中成药应用于新型冠状病毒感染的肺炎COVID-19疾病恢复期治疗。

8.根据权利要求1～4任一项所述的应用，其特征在于，所述复方中成药应用于抑制使用西药治疗新型冠状病毒感染的肺炎COVID-19引起的毒副反应，或/和增强使用西药治疗新型冠状病毒感染的肺炎COVID-19的治疗效果。

9.根据权利要求1～4任一项所述的应用，其特征在于，所述复方中成药应用于对新型冠状病毒感染的肺炎COVID-19的预防。