CN114042007A - 一种l-肉碱基蓝铜肽离子液体及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种L‑肉碱基蓝铜肽离子液体及其制备方法和应用，所述L‑肉碱基蓝铜肽离子液体包括L‑肉碱酒石酸离子液体以及包裹其中的蓝铜肽。本发明所涉及的L‑肉碱基蓝铜肽离子液体选择特定的L‑肉碱酒石酸离子液体为载体，将稳定性和透皮吸收性较差的蓝铜肽包裹其中，既能保证蓝铜肽原有的功效发挥，又能提高其皮肤渗透性和稳定性，大大提高了蓝铜肽的生物利用率。而且，L‑肉碱酒石酸离子液体载体中的酒石酸分子与蓝铜肽在抗氧化、减少皱纹和紧致皮肤、刺激胶原蛋白和弹性蛋白产生等功效方面具有显著的协同增效作用。

Description

一种L-肉碱基蓝铜肽离子液体及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于化妆品技术领域，涉及一种L-肉碱基蓝铜肽离子液体及其制备方法和应用，尤其涉及一种L-肉碱基蓝铜肽离子液体及其制备方法和在制备化妆品中的应用。

背景技术

蓝铜肽中文别名为三胜肽；甘氨酰-L-组氨酰-赖氨酰GHK-Cu(glycy1-histidy1-lysine)，是一种天然存在于人血浆中的小型铜结合肽。它可以通过化学方法合成，也可以通过蛋白质的酶解产生。这种小分子的蛋白质具有极佳的安全性。大量研究表明，蓝铜肽具有改善皮肤老化状况的卓越功效，这使得蓝铜肽在抗衰老和保护皮肤的护肤品中不可或缺。此外，它还被证实可以极大地改善皮肤多种不良的问题，例如促进皮肤伤口的愈合、恢复受损成纤维细胞的功能、减少瘢痕、减少皱纹和紧致皮肤、减少色素沉着以及刺激胶原蛋白、弹性蛋白和糖胺聚糖的合成等，因此被广泛地应用于化妆品中。

CN113616542A公开了一种蓝铜肽修护面膜及制备方法，所述蓝铜肽修护面膜中的精华液包括保湿剂、增稠剂、促渗透剂、皮肤调理剂和水；按质量分数计，所述增稠剂包括0.1-0.5％的水解小核菌胶和0.10-0.30％的透明质酸钠，所述促渗透剂包括0.5-3％的甘油葡糖苷、0.02-0.20％的聚谷氨酸钠和0.001-0.05％的聚季铵盐-51中的一种或多种，所述皮肤调理剂包括0.1-0.5％的蓝铜肽。

CN109512691A公开了一种蓝铜肽冻干粉制剂及其制备方法，包括由蓝铜肽冻干粉和蓝铜肽溶酶液构成的溶液剂，其中，蓝铜肽冻干粉由下述质量配比的组份制作而成：三肽-1铜、甘露糖醇、透明质酸钠、寡肽-1；水；蓝铜肽冻干粉溶酶由下述质量配比的组份制作而成：甘油、1,3-丁二醇小核菌(SCLEROTIUM ROLFSSII)胶、五肽-1、PGA-WS聚谷氨酸、透明质酸钠、GC-04萃取物、香精、胎盘蛋白、水。

虽然蓝铜肽的功效众多且出众，但是由于其亲水性很差，很难被皮肤直接吸收，且而添加在化妆品中也很容易受到温度、pH及其他因素的影响而变性失活，以至于难以发挥其特有的功效。因此，开发一种既能保证蓝铜肽功效发挥，又能提高其皮肤渗透性和稳定性的策略是非常有意义的。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种L-肉碱基蓝铜肽离子液体及其制备方法和应用，尤其提供一种L-肉碱基蓝铜肽离子液体及其制备方法和在制备化妆品中的应用。该L-肉碱基蓝铜肽离子液体克服了蓝铜肽皮肤吸收性差、稳定性差、生物利用率低的弊端，具有更好的溶解度和更高的透皮吸收效率，且在较宽的温度范围内性质稳定，大大提高了蓝铜肽在实际应用中的生物利用率。

为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种L-肉碱基蓝铜肽离子液体，所述L-肉碱基蓝铜肽离子液体包括L-肉碱酒石酸离子液体以及包裹其中的蓝铜肽。

本发明所涉及的L-肉碱基蓝铜肽离子液体选择特定的L-肉碱酒石酸离子液体为载体，将稳定性和透皮吸收性较差的蓝铜肽包裹其中，既能保证蓝铜肽原有的功效发挥，又能提高其皮肤渗透性和稳定性，大大提高了蓝铜肽的生物利用率。而且，L-肉碱酒石酸离子液体载体中的酒石酸分子与蓝铜肽在抗氧化、减少皱纹和紧致皮肤、刺激胶原蛋白和弹性蛋白合成等功效方面具有显著的协同增效作用。

本发明所涉及的L-肉碱酒石酸离子的结构式为

优选地，所述L-肉碱酒石酸离子液体与蓝铜肽的质量比为(10-100):1，例如10:1、20:1、30:1、40:1、50:1、60:1、70:1、80:1、90:1、100:1等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

所述L-肉碱酒石酸离子液体与蓝铜肽在满足上述特定的质量比关系下，具有更优异的技术效果，若蓝铜肽的相对量过多则多余的蓝铜肽不能很好的被包裹进离子液体中，若蓝铜肽的相对量过少则不能最大限度的发挥其生物学作用。

第二方面，本发明提供一种如第一方面所述的L-肉碱基蓝铜肽离子液体的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：将蓝铜肽与L-肉碱酒石酸离子液体在惰性气体保护中进行混合，使蓝铜肽被包裹于L-肉碱酒石酸离子液体中，得到所述L-肉碱基蓝铜肽离子液体。

本发明所涉及的L-肉碱基蓝铜肽离子液体的制备方法简单易行、便于操作、无需任何有机溶剂，天然无污染。

优选地，所述惰性气体包括氦气或氮气，以防止产生副产物。

优选地，所述混合在搅拌的条件下进行，所述混合的时间为1-10h，例如1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、10h等，温度为20-60℃，例如20℃、25℃、30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、60℃等，上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

优选地，所述混合后还进行透析和/或浓缩干燥。

优选地，所述浓缩干燥是指浓缩干燥至反应液体积的1/8-1/3，例如1/8、1/7、1/6、1/5、1/4、1/3等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

优选地，所述透析的时间为1-5h，例如1h、2h、3h、4h、5h等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

本发明所涉及的L-肉碱基蓝铜肽离子液体按照上述制备条件进行制备时，得到的产物在稳定性、透皮吸收性、生物利用度方面的技术效果更好。

优选地，所述L-肉碱酒石酸离子液体的制备方法包括如下步骤：

将L-肉碱与酒石酸在惰性气体保护中混合，进行离子化改性反应，得到所述L-肉碱酒石酸离子液体。

本发明以L-肉碱和酒石酸分别作为反应的阳离子前驱体和阴离子前驱体，并结合离子化改性反应技术合成L-肉碱酒石酸离子液体，在离子化改性反应结束后只需要适度的进行干燥且无需分离纯化，为制备液态的L-肉碱基蓝铜肽离子液体提供一个前体条件。

优选地，所述L-肉碱与酒石酸的摩尔比为1:(1-8)，例如1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。进一步优选1:(1-4)。

所述L-肉碱与酒石酸的摩尔比在满足1:(1-8)的比例关系时，该离子液体会具有较好的稳定性；若酒石酸的添加量进一步减少或进一步增加则会导致离子液体性质不稳定。

优选地，所述惰性气体包括氦气或氮气，以防止产生副产物。

优选地，所述离子化改性反应在20-90℃(例如20℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃等)下进行4-24h(4h、6h、8h、10h、12h、14h、18h、20h、22h、24h等)，上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

优选地，所述离子化改性反应在搅拌的条件下进行。

优选地，所述反应结束后还进行透析和/或浓缩干燥。

优选地，所述浓缩干燥是指浓缩干燥至反应液体积的1/8-1/3，例如1/8、1/7、1/6、1/5、1/4、1/3等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

优选地，所述透析的时间为1-5h，例如1h、2h、3h、4h、5h等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

第三方面，本发明还提供一种如第一方面所述的L-肉碱基蓝铜肽离子液体在制备化妆品中的应用。

由于蓝铜肽被证实可以极大地改善皮肤多种不良的问题，例如促进皮肤伤口的愈合、恢复受损成纤维细胞的功能、减少瘢痕、减少皱纹和紧致皮肤、减少色素沉着以及刺激胶原蛋白、弹性蛋白和糖胺聚糖的合成等，因此被广泛地应用于化妆品中。本发明所涉及的L-肉碱基蓝铜肽离子液体应用于化妆品中可以克服蓝铜肽皮肤吸收性差、稳定性差、生物利用率低的弊端，具有更好的溶解度和更高的透皮吸收效率，且在较宽的温度范围内性质稳定，大大提高了蓝铜肽在化妆品中的生物利用率。

相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

本发明所涉及的L-肉碱基蓝铜肽离子液体选择特定的L-肉碱酒石酸离子液体为载体，将稳定性和透皮吸收性较差的蓝铜肽包裹其中，既能保证蓝铜肽原有的功效发挥，又能提高其皮肤渗透性和稳定性，大大提高了蓝铜肽的生物利用率。而且，L-肉碱酒石酸离子液体载体中的酒石酸分子与蓝铜肽在抗氧化、减少皱纹和紧致皮肤、刺激胶原蛋白和弹性蛋白合成等功效方面具有显著的协同增效作用。

附图说明

图1是实施例1中制得的L-肉碱酒石酸离子液体的核磁共振氢谱图；

图2是实施例1中制得的L-肉碱酒石酸离子液体的核磁共振碳谱图；

图3是测试例3中各组产品的抗DPPH自由基效果统计结果图；

图4是测试例4中各组产品的总抗氧化效果统计结果图。

具体实施方式

下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。

下述实施例和对比例所涉及的部分原料来源如下：

蓝铜肽购自于艾克比生物公司，型号为05807；

L-肉碱购自于Sigma-Aldrich，型号为C0158；

酒石酸购自于Sigma-Aldrich，型号为T400；

谷氨酸购自于Sigma-Aldrich，型号为49449；

其他原料均通过普通的市售途径购买获得。

实施例1

本实施例提供一种L-肉碱基蓝铜肽离子液体，其制备方法如下：

在氮气氛围下，将0.01mol L-肉碱加入反应器中，然后将0.01mol酒石酸逐滴加入有L-肉碱的反应器中搅拌使其混合均匀，加热至50℃，离子化改性反应16h；反应完毕后，在旋蒸仪中浓缩溶液至反应液的1/5，经透析后即可得到纯净的L-肉碱酒石酸离子液体。其核磁共振氢谱图、核磁共振碳谱图分别如图1、图2所示。

在氮气氛围下，将0.01mg蓝铜肽缓慢加入所述L-肉碱酒石酸离子液体中，在磁力搅拌下在25℃下搅拌2.5h，透析1h、干燥2.5h，即可得到L-肉碱基蓝铜肽离子液体。

实施例2

本实施例提供一种L-肉碱基蓝铜肽离子液体，其制备方法如下：

在氮气氛围下，将0.01mol L-肉碱加入反应器中，然后将0.02mol酒石酸逐滴加入有L-肉碱的反应器中搅拌使其混合均匀，加热至20℃，离子化改性反应4h；反应完毕后，在旋蒸仪中浓缩溶液至反应液的1/8，经透析后即可得到纯净的L-肉碱酒石酸离子液体。

在氮气氛围下，将0.01mg蓝铜肽缓慢加入所述L-肉碱酒石酸离子液体中，在磁力搅拌下在25℃下搅拌1.0h，透析1h、干燥3.5h，即可得到L-肉碱基蓝铜肽离子液体。

实施例3

本实施例提供一种L-肉碱基蓝铜肽离子液体，其制备方法如下：

在氮气氛围下，将0.01mol L-肉碱加入反应器中，然后将0.04mol酒石酸逐滴加入有L-肉碱的反应器中搅拌使其混合均匀，加热至80℃，离子化改性反应24h；反应完毕后，在旋蒸仪中浓缩溶液至反应液的1/3，经透析后即可得到纯净的L-肉碱酒石酸离子液体。

在氮气氛围下，将0.01mg蓝铜肽缓慢加入所述L-肉碱酒石酸离子液体中，在磁力搅拌下在25℃下搅拌4.5h，透析1h、干燥4.5h，即可得到L-肉碱基蓝铜肽离子液体。

实施例4

本实施例提供一种L-肉碱基蓝铜肽离子液体，其制备方法如下：

在氮气氛围下，将0.01mol L-肉碱加入反应器中，然后将0.06mol酒石酸逐滴加入有L-肉碱的反应器中搅拌使其混合均匀，加热至40℃，离子化改性反应12h；反应完毕后，在旋蒸仪中浓缩溶液至反应液的1/6，经透析后即可得到纯净的L-肉碱酒石酸离子液体。

在氮气氛围下，将0.01mg蓝铜肽缓慢加入所述L-肉碱酒石酸离子液体中，在磁力搅拌下在25℃下搅拌2.0h，透析1h、干燥2.0h，即可得到L-肉碱基蓝铜肽离子液体。

实施例5

本实施例提供一种L-肉碱基蓝铜肽离子液体，其制备方法如下：

在氮气氛围下，将0.01mol L-肉碱加入反应器中，然后将0.08mol酒石酸逐滴加入有L-肉碱的反应器中搅拌使其混合均匀，加热至60℃，离子化改性反应20h；反应完毕后，在旋蒸仪中浓缩溶液至反应液的1/3，经透析后即可得到纯净的L-肉碱酒石酸离子液体。

在氮气氛围下，将0.01mg蓝铜肽缓慢加入所述L-肉碱酒石酸离子液体中，在磁力搅拌下在25℃下搅拌4.5h，透析1h、干燥4.5h，即可得到L-肉碱基蓝铜肽离子液体。

实施例6

本实施例提供一种L-肉碱基蓝铜肽离子液体，其制备方法与实施例1的区别仅在于使用L-肉碱谷氨酸离子液体作为蓝铜肽的载体材料，具体如下：

在氮气氛围下，将0.01mol L-肉碱加入反应器中，然后将0.01mol谷氨酸逐滴加入有L-肉碱的反应器中搅拌使其混合均匀，加热至50℃，离子化改性反应16h；反应完毕后，在旋蒸仪中浓缩溶液至反应液的1/5，经透析后即可得到纯净的L-肉碱谷氨酸离子液体。

在氮气氛围下，将0.01mg蓝铜肽缓慢加入所述L-肉碱谷氨酸离子液体中，在磁力搅拌下在25℃下搅拌2.5h，透析1h、干燥2.5h，即可得到L-肉碱基蓝铜肽离子液体。

对比例1

本对比例提供单纯的L-肉碱酒石酸离子液体，制备方法如下：

在氮气氛围下，将0.01mol L-肉碱加入反应器中，然后将0.01mol酒石酸逐滴加入有L-肉碱的反应器中搅拌使其混合均匀，加热至50℃，离子化改性反应16h；反应完毕后，在旋蒸仪中浓缩溶液至反应液的1/5，经透析后即可得到纯净的L-肉碱酒石酸离子液体。

对比例2

本对比例提供单纯的蓝铜肽。

测试例1

安全性测试：

探究实施例1-6和对比例2制得的L-肉碱基蓝铜肽离子液体对NHF成纤维细胞的存活率的影响，具体方法如下：

利用碧云天生物公司的CCK-8试剂盒检测L-肉碱基蓝铜肽离子液体对NHF成纤维细胞的毒性。

结果如表1所示：

表1

组别	细胞存活率(％)
		实施例1	98.5±1.3
实施例2	99.4±1.1
		实施例3	97.4±1.0
实施例4	98.8±1.8
		实施例5	96.3±2.3
实施例6	93.5±2.1
		对比例2	95.5±1.3

由表1数据可知：与以L-肉碱谷氨酸离子液体作为载体材料的产品或单纯的蓝铜肽相比，本发明所涉及的L-肉碱蓝铜肽离子液体具有很好的生物安全性，温和无刺激。

测试例2

透皮吸收性测试：

对实施例1-6和对比例2制得的样品进行透皮吸收性测试，具体方法为：以乳猪皮肤为模型，通过Franz扩散池，在36℃条件下，以100r/min进行体外皮肤渗透实验，检测蓝铜肽在各时间点时的累积透皮量(μg/cm²)，以此评价L-肉碱基蓝铜肽离子液体的皮肤渗透性能。

结果如表2所示：

表2

由表2数据可知：与以L-肉碱谷氨酸离子液体作为载体材料的产品或单纯的蓝铜肽相比，本发明所涉及的L-肉碱蓝铜肽离子液体具有更好的透皮吸收性。

测试例3

抗氧化性测试1：

对实施例1-6和对比例1-2制得的样品进行抗氧化性测试，具体方法为：利用碧云天生物公司的DPPH试剂盒，对各组产品的抗氧化能力进行检测。以VC作为阳性对照组，检测浓度范围为0-8μg·mL^-1时的DPPH自由基清除率，统计结果如图3所示。

由图3结果可知：与以L-肉碱谷氨酸离子液体作为载体材料的产品或单纯的蓝铜肽或单纯的载体材料相比，本发明所涉及的L-肉碱蓝铜肽离子液体具有更好的抗DPPH自由基效果，说明酒石酸与蓝铜肽在抗氧化性上具有显著的协同增效作用。

测试例4

抗氧化性测试2：

对实施例1-6和对比例1-2制得的样品进行抗氧化性测试，具体方法为：

利用碧云天生物公司的总抗氧化能力检测试剂盒(ABTS快速法)，对各组产品的总抗氧化能力进行检测。以VC作为阳性对照组，检测浓度范围为0-8μg·mL^-1时的总抗氧化能力，统计结果如图4所示。

由图4结果可知：与以L-肉碱谷氨酸离子液体作为载体材料的产品或单纯的蓝铜肽或单纯的载体材料相比，本发明所涉及的L-肉碱蓝铜肽离子液体具有更好的总抗氧化效果，说明酒石酸与蓝铜肽在抗氧化性上具有显著的协同增效作用。

申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的一种L-肉碱基蓝铜肽离子液体及其制备方法和应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。

另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

Claims (10)

1.一种L-肉碱基蓝铜肽离子液体，其特征在于，所述L-肉碱基蓝铜肽离子液体包括L-肉碱酒石酸离子液体以及包裹其中的蓝铜肽。

2.如权利要求1所述的L-肉碱基蓝铜肽离子液体，其特征在于，所述L-肉碱酒石酸离子液体与蓝铜肽的质量比为(10-100):1。

3.如权利要求1或2所述的L-肉碱基蓝铜肽离子液体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：将蓝铜肽与L-肉碱酒石酸离子液体在惰性气体保护中进行混合，使蓝铜肽被包裹于L-肉碱酒石酸离子液体中，得到所述L-肉碱基蓝铜肽离子液体。

4.如权利要求3所述的L-肉碱基蓝铜肽离子液体的制备方法，其特征在于，所述惰性气体包括氦气或氮气；

优选地，所述混合在搅拌的条件下进行，所述混合的时间为1-10h，温度为20-60℃。

5.如权利要求3或4所述的L-肉碱基蓝铜肽离子液体的制备方法，其特征在于，所述混合后还进行透析和/或浓缩干燥；

优选地，所述浓缩干燥是指浓缩干燥至反应液体积的1/8-1/3；

优选地，所述透析的时间为1-5h。

6.如权利要求3-5中任一项所述的L-肉碱基蓝铜肽离子液体的制备方法，其特征在于，所述L-肉碱酒石酸离子液体的制备方法包括如下步骤：

将L-肉碱与酒石酸在惰性气体保护中混合，进行离子化改性反应，得到所述L-肉碱酒石酸离子液体。

7.如权利要求6所述的L-肉碱基蓝铜肽离子液体的制备方法，其特征在于，所述L-肉碱与酒石酸的摩尔比为1:(1-8)，优选1:(1-4)。

8.如权利要求6或7所述的L-肉碱基蓝铜肽离子液体的制备方法，其特征在于，所述惰性气体包括氦气或氮气；

优选地，所述离子化改性反应在20-90℃下进行4-24h；

优选地，所述离子化改性反应在搅拌的条件下进行。

9.如权利要求6-8中任一项所述的L-肉碱基蓝铜肽离子液体的制备方法，其特征在于，所述反应结束后还进行透析和/或浓缩干燥；

优选地，所述浓缩干燥是指浓缩干燥至反应液体积的1/8-1/3；

优选地，所述透析的时间为1-5h。

10.如权利要求1或2所述的L-肉碱基蓝铜肽离子液体在制备化妆品中的应用。

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