CN115569085A

CN115569085A - 一种超分子蓝铜肽溶液及其制备方法、应用

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Publication number: CN115569085A
Application number: CN202211183241.5A
Authority: CN
Inventors: 张嘉恒; 王振元; 张荻茏; 潘智昊; 周丽; 韩知璇; 阮博
Original assignee: Guangzhou Entropy Technology Co ltd
Current assignee: Guangzhou Entropy Technology Co ltd
Priority date: 2022-09-27
Filing date: 2022-09-27
Publication date: 2023-01-06

Abstract

本发明公开了一种超分子蓝铜肽溶液及其制备方法、应用，制备方法包括步骤：提供蓝铜肽、赖氨酸苹果酸离子液体以及纯水；将所述蓝铜肽加入到所述纯水中并混合处理，得到蓝铜肽悬浊液；将所述赖氨酸苹果酸离子液体加入所述蓝铜肽悬浊液中，并进行微射流处理，得到超分子蓝铜肽溶液。赖氨酸苹果酸离子液体具有油水双亲性质，与蓝铜肽悬浊液形成超分子蓝铜肽溶液，赖氨酸苹果酸离子液体与蓝铜肽形成稳定的超分子结构，避免搭配时造成蓝铜肽失效变色，提高了蓝铜肽的配伍性能。

Description

一种超分子蓝铜肽溶液及其制备方法、应用

技术领域

本发明涉及化妆品技术领域，尤其涉及的是一种超分子蓝铜肽溶液及其制备方法、应用。

背景技术

伴随着护肤需求的细分，市场调查发现，生活作息紊乱容易导致肌肤问题频出。蓝铜肽具有分子量极小、易吸收、无刺激、无负担、高活性、高疗效等优点。蓝铜肽中文别名为三胜肽(甘氨酰-L-组氨酰-赖氨酸)，英文名称(glycy1-histidy1-lysine)，铜离子Cu²⁺并不是铜金属的黄色，而是在水溶液中呈现蓝色，所以GHK-Cu又称为蓝铜肽。铜以胺基酸复合物(胜肽peptide)为载体，胜肽通过有效络合、转运铜元素而发挥相应的作用，铜与胜肽二者相辅相成使蓝铜肽具有多重生物学效能：(1)修复：能够增加血管生长和抗氧化能力，并刺激葡萄糖聚胺(GAGs)产生，帮助皮肤恢复自我修补。(2)抗炎：GHK-Cu对炎症反应有抑制作用，可减少促炎细胞因子包括TNF-α、TGF-β、IL-6等。有效减轻炎症，减少激素引起的红肿、瘙痒、刺痛等问题依赖，并再生皮肤。(3)抗皱：有效阻止乙酰胆碱物质的神经传导，从而放松肌肉，改善动态性皱纹。

但现实使用时，蓝铜肽不仅原料价格昂贵，还存在易失活、难配伍、生物利用度低的问题，例如不能和酸性物质(果酸、A酸、高浓度水溶性左旋VC、水杨酸等)一起使用；不能和过酸或者过碱性的成品搭配，过低或过高的pH均可导致GHK-Cu的分解失效变色，失去作用。因此，现有技术的蓝铜肽存在难配伍的问题。

因此，现有技术还有待于改进和发展。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于，针对现有技术的上述缺陷，提供一种超分子蓝铜肽溶液及其制备方法、应用，旨在解决现有技术中蓝铜肽难配伍的问题。

本发明解决技术问题所采用的技术方案如下：

一种超分子蓝铜肽溶液的制备方法，其中，包括步骤：

提供蓝铜肽、赖氨酸苹果酸离子液体以及纯水；

将所述蓝铜肽加入到所述纯水中并混合处理，得到蓝铜肽悬浊液；

将所述赖氨酸苹果酸离子液体加入所述蓝铜肽悬浊液中，并进行微射流处理，得到超分子蓝铜肽溶液。

所述的超分子蓝铜肽溶液的制备方法，其中，所述超分子蓝铜肽溶液包括：赖氨酸-苹果酸-蓝铜肽三元超分子结构，具体为：

所述的超分子蓝铜肽溶液的制备方法，其中，所述纯水采用超纯水；所述超分子蓝铜肽溶液还包括：水；其中，所述超分子蓝铜肽溶液中水的质量分数为25wt％～94wt％，所述超分子蓝铜肽溶液中蓝铜肽的质量分数为5wt％～20wt％。

所述的超分子蓝铜肽溶液的制备方法，其中，所述赖氨酸苹果酸离子液体中，赖氨酸和苹果酸的摩尔比为1:4～4:1。

所述的超分子蓝铜肽溶液的制备方法，其中，所述赖氨酸苹果酸离子液体中，赖氨酸和苹果酸的摩尔比为1:1。

所述的超分子蓝铜肽溶液的制备方法，其中，所述微射流处理的工作压力为400-500bar，工作温度为25℃-35℃；

所述混合处理采用均质时间为20-40min，均质压力为100-200bar，均质温度为25℃-40℃的均质处理后，在50-100rm转速下保持搅拌状态。

所述的超分子蓝铜肽溶液的制备方法，其中，所述赖氨酸苹果酸离子液体采用如下步骤得到：

将赖氨酸和苹果酸加入微波搅拌机，微波功率为300～600W，搅拌1～4h，得到预混物；

将所述预混物放入超声反应器，加热到40～70℃，反应时间为12～24小时；

将反应液过滤，得到赖氨酸苹果酸离子液体；

或者，所述赖氨酸苹果酸离子液体采用如下步骤得到：

将赖氨酸盐和苹果酸盐分别溶于溶剂，得到赖氨酸盐溶液和苹果酸盐溶液；

将所述赖氨酸盐溶液和所述苹果酸盐溶液放入反应器中，加热到40～70℃，搅拌反应12～24小时；

收集反应液，过滤去除固体，在75～100℃下真空处理除去溶剂，得到赖氨酸果酸离子液体。

所述的超分子蓝铜肽溶液的制备方法，其中，所述溶剂包括：乙醇、甲醇中的至少一种。

一种超分子蓝铜肽溶液，其中，采用如上述任一项所述制备方法的步骤得到。

一种超分子蓝铜肽溶液在制备化妆品中的应用，其中，所述超分子蓝铜肽溶液采用如上述任一项所述制备方法的步骤得到。

有益效果：赖氨酸苹果酸离子液体具有油水双亲性质，与蓝铜肽悬浊液形成超分子蓝铜肽溶液，赖氨酸苹果酸离子液体与蓝铜肽形成稳定的超分子结构，避免搭配时造成蓝铜肽失效变色，提高了蓝铜肽的配伍性能。

附图说明

图1是本发明实施例1的赖氨酸苹果酸离子液体核磁共振氢谱图；

图2-1是赖氨酸单体的红外分析图谱；

图2-2是苹果酸单体的红外分析图谱；

图2-3是本发明实施例1的赖氨酸苹果酸离子液体的红外分析图谱；

图3是本发明实施例1的赖氨酸苹果酸离子液体的热重分析图谱；

图4是本发明实施例1的赖氨酸苹果酸离子液体的差示热分析图谱；

图5是本发明实施例5超分子蓝铜肽溶液去除水分后的二维核磁NOESY谱图；

图6是本发明实施例5超分子蓝铜肽溶液(右)与蓝铜肽溶液(左)的溶解度提升测试图；

图7是本发明实施例5超分子蓝铜肽溶液的稳定性提升测试图；

图8是本发明实施例5超分子蓝铜肽溶液与对比例1的蓝铜肽溶液的配伍性提升测试图；

图9是本发明实施例5超分子蓝铜肽溶液与对比例1的蓝铜肽溶液的经皮渗透测试图；

图10是本发明实施例5超分子蓝铜肽溶液的修护能力测试图；

图11是本发明实施例5超分子蓝铜肽溶液的抗氧化能力测试图；

图12是本发明实施例5超分子蓝铜肽溶液的抗皱能力测试图。

图13是本发明超分子蓝铜肽溶液的制备方法的流程图。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚、明确，以下参照附图并举实施例对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

请同时参阅图1-图13，本发明提供了一种超分子蓝铜肽溶液的制备方法的一些实施例。

如图13所示，本发明的超分子蓝铜肽溶液的制备方法，包括以下步骤：

步骤S100、提供蓝铜肽、赖氨酸苹果酸离子液体以及纯水。

具体地，蓝铜肽可以采用粉末状蓝铜肽。赖氨酸苹果酸离子液体是指由赖氨酸和苹果酸形成的离子液体，离子液体是指在室温或接近室温下呈现液态的、完全由阴阳离子所组成的盐。纯水采用高纯水或超纯水，高纯水是指水的温度为25℃时，电导率小于0.1us/cm，pH值为6.8-7.0及去除其他杂质和细菌的水；超纯水是指水的温度为25℃时，电阻率达到18MΩ*cm及去除其他杂质和细菌的水。

蓝铜肽的结构式如下：

赖氨酸的结构式如下：

苹果酸的结构式如下：

赖氨酸苹果酸离子液体中存在如下物质的至少一种：

步骤S200、将所述蓝铜肽加入到所述纯水中并混合处理，得到蓝铜肽悬浊液。

具体地，将蓝铜肽加入道纯水中，得到蓝铜肽悬浊液。需要说明的是，由于蓝铜肽的水溶解性较低(约为5％，30℃)，本申请中需要确保最终得到的超分子蓝铜肽溶液中蓝铜肽的含量较高，因此，加入的蓝铜肽的量较多，纯水的量较少，则形成蓝铜肽悬浊液。通过混合处理，可以得到均一的蓝铜肽悬浊液。

步骤S300、将所述赖氨酸苹果酸离子液体加入所述蓝铜肽悬浊液中，并进行微射流处理，得到超分子蓝铜肽溶液。

具体地，将赖氨酸苹果酸离子液体加入到蓝铜肽悬浊液中，并经过微射流处理，得到超分子蓝铜肽溶液。超分子通常是指由两种或两种以上分子依靠分子间相互作用结合在一起，组成复杂的、有组织的聚集体，并保持一定的完整性使其具有明确的微观结构和宏观特性。本申请原料中有赖氨酸、苹果酸以及蓝铜肽三者之间存在电子与质子的转移，并形成氢键等分子件弱相互作用力，从而形成赖氨酸-苹果酸-蓝铜肽三元超分子结构，具体为：

所述超分子蓝铜肽溶液还包括：水；超分子蓝铜肽溶液中的赖氨酸-苹果酸-蓝铜肽三元超分子结构分散在水中，形成多个单元的超分子蓝铜肽溶液中的赖氨酸-苹果酸-蓝铜肽三元超分子结构。每个单元的赖氨酸-苹果酸-蓝铜肽三元超分子结构中，可以有若干个赖氨酸分子、若干个苹果酸分子以及若干个蓝铜肽分子，赖氨酸、苹果酸、蓝铜肽的摩尔比根据原料的比例变化，可以是1:1:1，也可以是2:1:1等其它比例，当然不同单元的赖氨酸-苹果酸-蓝铜肽三元超分子结构中，赖氨酸、苹果酸、蓝铜肽也可能并不是固定比例。每个单元的赖氨酸-苹果酸-蓝铜肽三元超分子结构中各赖氨酸、苹果酸、蓝铜肽相互靠拢并形成氢键连接。

所述超分子蓝铜肽溶液中水的质量分数为25wt％～94wt％，所述超分子蓝铜肽溶液中蓝铜肽的质量分数为5wt％～20wt％。超分子蓝铜肽溶液中的水作为助剂，水的含量可以根据需要配置，蓝铜肽的含量也可以根据需要配置。

离子液体本身所具有的许多传统溶剂所无法比拟的优点，对许多无机盐和有机物有良好的溶解性与递送能力。赖氨酸可以作为保湿成分和营养物质滋润皮肤，使皮肤水润的同时加速其他物质的吸收，苹果酸具有良好的渗透性，并且能够对角质层进行剥落，促进皮肤更新。赖氨酸苹果酸离子液体具有油水双亲性质，与蓝铜肽形成三元超分子后有助于帮助蓝铜胜肽高效穿过细胞间脂质，进入深层肌肤。

赖氨酸为碱性氨基酸，具有两个氨基和一个羧基，苹果酸为羟基丁二酸，具有两个羧基与一个羟基，羧基上的氢可以与赖氨酸之间形成氢的转移，使两种分子之间形成非共价键的弱相互作用力，这种弱相互作用力使产品的理化性质发生改变，熔产物点为-30～-20℃，在室温下为液态。

超分子蓝铜肽溶液中的超分子蓝铜肽主要成分为赖氨酸-苹果酸-蓝铜肽三元超分子结构。三肽-1的氨基酸序列为甘氨酸-组氨酸-赖氨酸，蓝铜肽是三肽-1螯合铜之后形成的结构，分子中具有两个肽键，一个羧基，一个氨基，这些基团与赖氨酸苹果酸的电子云发生重叠，并存在电子与质子的转移，形成了氢键等分子间弱相互作用力，从而形成了赖氨酸-苹果酸-蓝铜肽三元超分子结构。

赖氨酸苹果酸离子液体与蓝铜肽形成超分子后，且自身水溶性很好，该超分子结构能够充分保护蓝铜肽的生物活性，超分子蓝铜肽溶液经高温(45℃)、低温(5℃)、高低温循环和光照条件下放置数月后，物料的各种理化性质、蓝铜肽含量、产品外观均保持稳定，和传统蓝铜肽水溶液相比，在成分保鲜上体现出明显优势。

所述赖氨酸苹果酸离子液体中，赖氨酸和苹果酸的摩尔比为1:4～4:1。赖氨酸和苹果酸的摩尔比为1:4～4:1时，形成较均匀的赖氨酸苹果酸离子液体。优选地，所述赖氨酸苹果酸离子液体中，赖氨酸和苹果酸的摩尔比为1:1。赖氨酸和苹果酸的摩尔比为1:1时，产率较高，粘度更小，有利于在化妆品上的应用。

所述混合处理采用均质时间为20-40min，均质压力为100-200bar，均质温度为25℃-40℃的均质处理后，在50-100rm转速下保持搅拌状态。将蓝铜肽粉末预先在纯水中混合均匀有利于蓝铜肽分散，使蓝铜肽与纯水均匀接触，通过均质的方式，有利于蓝铜肽均匀的溶解分散在水中，后续在50-100rm转速下保持搅拌状态可使蓝铜肽悬浊液与离子液体更均匀接触。

所述微射流处理的工作压力为400-500bar，工作温度为25℃-35℃。加入离子液体的蓝铜肽悬浊液通过高压下微射流处理，接触更充分，当离子液体与蓝铜肽接触时，离子液体能够与蓝铜肽结合，形成赖氨酸-苹果酸-蓝铜肽三元超分子结构，从而完全溶解在水中。

本发明所提供的超分子蓝铜肽溶液，从锁鲜、渗透、增溶上围绕蓝铜胜肽进行技术和配方创新，最终确保了蓝铜肽的活性以及渗透效果。

所述赖氨酸苹果酸离子液体采用如下步骤得到：

步骤A100、将赖氨酸和苹果酸加入微波搅拌机，微波功率为300～600W，搅拌1～4h，得到预混物。

步骤A200、将所述预混物放入超声反应器，加热到40～70℃，反应时间为12～24小时。

步骤A300、将反应液过滤，得到赖氨酸苹果酸离子液体。

具体地，可以采用赖氨酸和苹果酸作为原料，制备赖氨酸苹果酸离子液体，先将赖氨酸和苹果酸混合得到预混物，然后将预混物放入超声反应器中，反应得到反应液，并过滤得到赖氨酸苹果酸离子液体。

所述赖氨酸苹果酸离子液体采用如下步骤得到：

步骤B100、将赖氨酸盐和苹果酸盐分别溶于溶剂，得到赖氨酸盐溶液和苹果酸盐溶液。

步骤B200、将所述赖氨酸盐溶液和所述苹果酸盐溶液放入反应器中，加热到40～70℃，搅拌反应12～24小时。

步骤B300、收集反应液，过滤去除固体，在75～100℃下真空处理除去溶剂，得到赖氨酸果酸离子液体。

所述溶剂包括：乙醇、甲醇中的至少一种。

具体地，可以采用赖氨酸盐和苹果酸盐作为原料，制备赖氨酸苹果酸离子液体，先将赖氨酸盐和苹果酸盐分别溶于溶剂，以得到赖氨酸盐溶液和苹果酸盐溶液，然后将赖氨酸盐溶液和苹果酸盐溶液放入反应器，加热反应得到反应液，并过滤，且去除溶剂，得到赖氨酸果酸离子液体。

实施例1

A1将摩尔比为1:1的赖氨酸和苹果酸加入微波搅拌机，微波功率为500W，搅拌2h，得到预混物；

A2将预混物放入超声反应器，加热到60℃，反应18小时；

A3过滤，得到的液体即为赖氨酸苹果酸离子液体，称量得到的离子液体质量，与投料质量计算，产率为97％。

实施例2

与实施例1相比，区别在于，赖氨酸和苹果酸的摩尔比为4:1。称量得到的离子液体质量，与投料质量计算，产率为91％。

实施例3

与实施例1相比，区别在于，赖氨酸和苹果酸的摩尔比为1:4。称量得到的离子液体质量，与投料质量计算，产率为87％。

对比例1

与实施例1相比，区别在于，赖氨酸和苹果酸的摩尔比为5:1。步骤A2超声反应后，得到的产品仍有很多固体粉末，部分形成粘稠的液态物质，无法过滤。

对比例2

与实施例1相比，区别在于，赖氨酸和苹果酸的摩尔比为1:5。步骤A2超声反应后，得到的产品仍有很多固体粉末，部分形成粘稠的液态物质，无法过滤。

实施例4

B1将摩尔比为1:1的赖氨酸盐酸盐和苹果酸钠分别溶于水和无水乙醇，得到赖氨酸盐酸盐水溶液和苹果酸钠乙醇溶液；

B2将赖氨酸盐酸盐水溶液和苹果酸钠乙醇溶液放入反应器中，回流反应24小时；

B3收集反应液，过滤去除固体，在80℃下真空干燥48小时除去溶剂，得到赖氨酸苹果酸离子液体。

实施例5

S1将蓝铜肽粉末在30℃的适宜温度下加入到适量超纯水中，均质混合，时间为30min，均质压力为150bar，均质温度为30℃，均质后在80rm转速下保持搅拌状态，得到均一的蓝铜肽悬浊液；

S2将实施例1中赖氨酸苹果酸离子液体缓慢加入到蓝铜肽悬浊液中，通过微射流处理，工作温度为30℃，工作压力为450bar，时间为60min，得到终物料，即超分子蓝铜肽溶液，其中蓝铜肽的质量分数为15wt％。

对比例3

将蓝铜肽粉末在30℃的适宜温度下加入到超纯水中，搅拌均匀，其中蓝铜肽的质量分数为5wt％。由于蓝铜肽溶解性限制，无法做到与实施例3中相同含量。

测试例1

核磁共振氢谱测试

核磁共振氢谱(1HNMR)：氢原子具有磁性，如电磁波照射氢原子核，它能通过共振吸收电磁波能量，发生跃迁。用核磁共振仪可以记录到有关信号，处在不同环境中的氢原子因产生共振时吸收电磁波的频率不同，在图谱上出现的位置也不同，各种氢原子的这种差异被称为化学位移。利用化学位移，峰面积和积分值以及耦合常数等信息，进而推测其在碳骨架上的位置。在核磁共振氢谱图中，特征峰的数目反映了有机分子中氢原子化学环境的种类；不同特征峰的强度比(及特征峰的高度比)反映了不同化学环境氢原子的数目比。

对实施例1中的赖氨酸苹果酸离子液体进行测试，结果如图1所示。

化学位移δ4.29-4.27、2.69-2.66及2.56-2.52ppm处出现的峰是苹果酸的特征峰；化学位移δ3.65-3.63、2.91-2.88、1.78-1.73、1.61-1.56及1.40-1.28ppm处出现的峰是赖氨酸的特征峰；由赖氨酸苹果酸离子液体的核磁谱图可以看出，赖氨酸和苹果酸的摩尔比是1:1，且除了溶剂峰和水峰外，没有其他杂质峰。

测试例2

红外光谱测试

红外光谱可以研究分子的结构和化学键，如力常数的测定和分子对称性等，利用红外光谱方法可测定分子的键长和键角，并由此推测分子的立体构型。根据所得的力常数可推知化学键的强弱，由简正频率计算热力学函数等。

实施例1得到的赖氨酸苹果酸离子液体的红外光谱结果显示(见图2-1、图2-2、图2-3)：从赖氨酸单体、苹果酸单体以及赖氨酸苹果酸离子液体的红外分析谱图可以看出，赖氨酸苹果酸离子液体在波数2250～3500cm^-1的位置出现的宽峰，明显区别于赖氨酸单体和苹果酸单体，进一步佐证了赖氨酸和苹果酸之间存在弱相互作用力，形成了离子液体。

测试例3

热重分析测试

样品重量变化所引起的天平位移量转化成电磁量，这个微小的电量经过放大器放大后，送入记录仪记录；而电量的大小正比于样品的重量变化量。当被测物质在加热过程中有升华、汽化、分解出气体或失去结晶水时，被测的物质质量就会发生变化。这时热重曲线就不是直线而是有所下降。通过分析热重曲线，就可以知道被测物质在多少度时产生变化，并且根据失重量，可以计算失去了多少物质(如CuSO₄·5H₂O中的结晶水)。热重分析在实际的材料分析中常与其他分析方法联用，进行综合热分析，全面准确分析材料。

本发明实施例1所得赖氨酸苹果酸离子液体的热重分析图谱结果显示(见图3)：赖氨酸的分解温度是224.5℃；苹果酸的分解温度是225-235℃(MSDS提供)；而赖氨酸苹果酸离子液体的初始分解温度则是在130℃左右，均低于两单体，佐证了赖氨酸和苹果酸之间存在弱相互作用力，形成了离子液体。

测试例4

差示扫描量热测试

差示扫描量热(DSC)：将有物相变化的样品和在所测定温度范围内不发生相变且没有任何热效应产生的参比物，在相同的条件下进行等温加热或冷却，当样品发生相变时，在样品和参比物之间就产生一个温度差。放置于它们下面的一组差示热电偶即产生温差电势U△T，经差热放大器放大后送入功率补偿放大器，功率补偿放大器自动调节补偿加热丝的电流，使样品和参比物之间温差趋于零，两者温度始终维持相同。此补偿热量即为样品的热效应，以电功率形式显示于记录仪上。

本发明实施例1所得赖氨酸苹果酸离子液体的差示热分析结果显示(见图4)：赖氨酸苹果酸离子液体的玻璃态温度在-30～-20℃，明显低于赖氨酸单体(熔点：215℃)及苹果酸单体(熔点：131-133℃)，进一步佐证了赖氨酸和苹果酸之间存在弱相互作用力，形成了离子液体。

测试例5

对实施例5得到的超分子蓝铜肽溶液在30℃下真空干燥72小时，再于室温条件下通过隔膜泵抽真空72小时，祛除其中的水分。将得到的产物进行二维核磁测试，结果如图5所示。可以清晰地看到赖氨酸、苹果酸与蓝铜肽之间有明显的星形面存在，产生了明显的NOE效应。在核磁共振中，两个(组)不同类型的质子若空间距离较接近，照射其中一个(组)质子会使另一个(组)质子的信号强度增强，这种现象称为核Overhauser效应，简称NOE效应。赖氨酸、苹果酸与蓝铜肽之间星形面即为信号强度增强形成的信号，即证明了三者之间有氢键存在，形成了三元超分子结构。

测试例6

蓝铜肽溶解度测试

依据【国家标准GBT 21845-2008化学品水溶解度试验】，配制15wt％蓝铜肽水溶液与实施例5中得到的15wt％蓝铜肽质量分数的超分子蓝铜肽溶液进行对比，如图6，左为蓝铜肽水溶液，右为超分子蓝铜肽溶液。结果显示：15wt％蓝铜肽水溶液为不均一的蓝铜肽浊液，实施例5中产品为均一透亮的蓝色液体，证明在相同蓝铜肽的质量分数下，超分子蓝铜肽溶液的水溶性明显高于蓝铜肽粉末单体。

测试例7

蓝铜肽稳定性测试

依据标准【ISO TR 18811-2018化妆品稳定性试验指南】，对实施例5中得到的超分子蓝铜肽溶液进行长时间稳定性测试，如图7和表1所示：超分子蓝铜肽溶液经高温(45℃)、低温(5℃)、高低温循环和光照条件下放置3个月后，物料的各种理化性质、蓝铜肽含量、产品外观均保持稳定无变化，和传统蓝铜肽水溶液相比，在成分稳定性上体现出明显优势。

表1超分子蓝铜肽溶液的长时间稳定性测试结果表

测试例8

蓝铜肽配伍性测试

对实施例5中得到的超分子蓝铜肽溶液和对比例1中得到的蓝铜肽水溶液进行配伍性测试。加入质量分数为2wt％的柠檬酸粉末，搅拌均匀，观察状态，图8可以看出蓝铜肽水溶液出现了明显的颜色变化，说明蓝铜肽GHK-Cu分解失效变色，失去作用。本申请中超分子蓝铜肽溶液无明显变化，表明蓝铜肽GHK-Cu未分解，更稳定，配伍性能更佳。

测试例9

经皮渗透测试

依据国标【GBT 27818-2011化学品皮肤吸收体外试验方法标准】，对蓝铜肽进行经皮渗透测试，实验设置实验组为实施例5中得到的超分子蓝铜肽溶液稀释至蓝铜肽的质量分数为1wt％，设置对照组为对比例1中得到的蓝铜肽水溶液稀释至蓝铜肽的质量分数为1wt％，结果如图9所示：在皮肤孵育24h后，超分子蓝铜肽溶液的透皮效果显著优于蓝铜肽水溶液(见图9)。

测试例10

超分子蓝铜肽溶液的修护能力测试

用人角质形成细胞增殖方法，以细胞相对活力作为评价指标，对超分子蓝铜肽溶液进行修护能力测试，设置BC组为空白组，PC组为阳性对照组，SH为实验组，即实施例5中样品稀释至蓝铜肽质量分数为0.3wt％。如图10所示，与BC组相比，PC组的细胞增殖率显著上升，说明本次测试阳性对照有效。与BC组相比，样品SH给药24h、48h、72h后对角质形成细胞均表现出显著细胞活力增长趋势，细胞增殖率显著上升，增殖率分别为19.04％、28.45％、15.61％。证明超分子蓝铜肽溶液对细胞存在修护能力。

测试例11

超分子蓝铜肽溶液的抗氧化能力测试

根据人成纤维细胞活性氧ROS测定方法对超分子蓝铜肽溶液进行抗氧化能力测试，设置BC组为空白组，NC组为阴性对照，PC组(维生素E，VE)为阳性对照组，SH为实验组，即实施例5中样品稀释至蓝铜肽质量分数为0.3wt％。如图11所示，与BC组相比，NC组的ROS含量显著上升，说明本次测试刺激条件有效。与NC组相比，样品SH的ROS含量显著下降，抑制率为20.84％。证明超分子蓝铜肽溶液具有抗氧化能力。

测试例12

超分子蓝铜肽溶液的抗皱能力测试

依据标准【T/S HRH031-2020化妆品紧致抗皱功效测试-体外成纤维细胞I型胶原蛋白含量测定】对超分子蓝铜肽溶液进行紧致抗皱测试，设置BC组为空白组，NC组为阴性对照，PC组(转化生长因子β1，transforming growth factor-β1，TGF-β1)为阳性对照组，SH为实验组，即实施例5中样品稀释至蓝铜肽质量分数为0.3wt％。如图12所示：与BC组相比，NC组的Collagen I含量显著下降，说明本次测试刺激条件有效。与NC组相比，PC(TGF-β1)组的Collagen I含量显著上升，说明本次测试阳性对照有效。与NC组相比，样品SH的Collagen I含量显著上升，提升率为246.55％。证明超分子蓝铜肽溶液具有很好的抗皱能力。

测试例13

超分子蓝铜肽溶液的安全性测试

依据【化妆品安全技术规范(2015版)】检测实施例5得到的超分子蓝铜肽溶液对人体皮肤潜在的不良反应，结果显示：人体皮肤封闭型斑贴试验结果显示，31人中0例出现皮肤不良反应，证明超分子蓝铜肽溶液安全性良好(见表2、表3)。

表2皮肤封闭型斑贴试验皮肤反应分级标准表

表3化妆品人体皮肤斑贴试验结果汇总表

基于上述任意一实施例所述的超分子蓝铜肽溶液的制备方法，本发明还提供了一种超分子蓝铜肽溶液的较佳实施例：

本发明实施例的一种超分子蓝铜肽溶液，采用如上述任意一实施例所述的超分子蓝铜肽溶液的制备方法的步骤得到。

基于上述任意一实施例所述的超分子蓝铜肽溶液的制备方法，本发明还提供了一种超分子蓝铜肽溶液在制备化妆品中的应用的较佳实施例：

本发明实施例的一种超分子蓝铜肽溶液在制备化妆品中的应用，所述超分子蓝铜肽溶液采用如上述任意一实施例所述的超分子蓝铜肽溶液的制备方法的步骤得到。

应当理解的是，本发明的应用不限于上述的举例，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

Claims

1.一种超分子蓝铜肽溶液的制备方法，其特征在于，包括步骤：

提供蓝铜肽、赖氨酸苹果酸离子液体以及纯水；

2.根据权利要求1所述的超分子蓝铜肽溶液的制备方法，其特征在于，所述超分子蓝铜肽溶液包括：赖氨酸-苹果酸-蓝铜肽三元超分子结构，具体为：

3.根据权利要求2所述的超分子蓝铜肽溶液的制备方法，其特征在于，所述纯水采用超纯水；所述超分子蓝铜肽溶液还包括：水；其中，所述超分子蓝铜肽溶液中水的质量分数为25wt％～94wt％，所述超分子蓝铜肽溶液中蓝铜肽的质量分数为5wt％～20wt％。

4.根据权利要求1所述的超分子蓝铜肽溶液的制备方法，其特征在于，所述赖氨酸苹果酸离子液体中，赖氨酸和苹果酸的摩尔比为1:4～4:1。

5.根据权利要求4所述的超分子蓝铜肽溶液的制备方法，其特征在于，所述赖氨酸苹果酸离子液体中，赖氨酸和苹果酸的摩尔比为1:1。

6.根据权利要求1所述的超分子蓝铜肽溶液的制备方法，其特征在于，所述微射流处理的工作压力为400-500bar，工作温度为25℃-35℃；

7.根据权利要求1所述的超分子蓝铜肽溶液的制备方法，其特征在于，所述赖氨酸苹果酸离子液体采用如下步骤得到：

将反应液过滤，得到赖氨酸苹果酸离子液体；

或者，所述赖氨酸苹果酸离子液体采用如下步骤得到：

8.根据权利要求7所述的超分子蓝铜肽溶液的制备方法，其特征在于，所述溶剂包括：乙醇、甲醇中的至少一种。

9.一种超分子蓝铜肽溶液，其特征在于，采用如权利要求1至8中任一项所述制备方法的步骤得到。

10.一种超分子蓝铜肽溶液在制备化妆品中的应用，其特征在于，所述超分子蓝铜肽溶液采用如权利要求1至8中任一项所述制备方法的步骤得到。