CN114015559A - 一种高效率的缬氨酸半连续发酵方法及其成套装置 - Google Patents

一种高效率的缬氨酸半连续发酵方法及其成套装置 Download PDF

Info

Publication number
CN114015559A
CN114015559A CN202111048395.9A CN202111048395A CN114015559A CN 114015559 A CN114015559 A CN 114015559A CN 202111048395 A CN202111048395 A CN 202111048395A CN 114015559 A CN114015559 A CN 114015559A
Authority
CN
China
Prior art keywords
fermentation
tank
unit
pipe
liquid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202111048395.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN114015559B (zh
Inventor
韩成秀
常柯欣
李妍茜
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Bayannur Huaheng Biotechnology Co ltd
Hefei Huaheng Biological Engineering Co ltd
Qinhuangdao Huaheng Bioengineering Co ltd
Anhui Huaheng Biotechnology Co Ltd
Original Assignee
Bayannur Huaheng Biotechnology Co ltd
Hefei Huaheng Biological Engineering Co ltd
Qinhuangdao Huaheng Bioengineering Co ltd
Anhui Huaheng Biotechnology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bayannur Huaheng Biotechnology Co ltd, Hefei Huaheng Biological Engineering Co ltd, Qinhuangdao Huaheng Bioengineering Co ltd, Anhui Huaheng Biotechnology Co Ltd filed Critical Bayannur Huaheng Biotechnology Co ltd
Priority to CN202111048395.9A priority Critical patent/CN114015559B/zh
Publication of CN114015559A publication Critical patent/CN114015559A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114015559B publication Critical patent/CN114015559B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/22—Transparent or translucent parts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M27/00—Means for mixing, agitating or circulating fluids in the vessel
    • C12M27/02—Stirrer or mobile mixing elements
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M29/00—Means for introduction, extraction or recirculation of materials, e.g. pumps
    • C12M29/04—Filters; Permeable or porous membranes or plates, e.g. dialysis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M29/00—Means for introduction, extraction or recirculation of materials, e.g. pumps
    • C12M29/06—Nozzles; Sprayers; Spargers; Diffusers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M29/00—Means for introduction, extraction or recirculation of materials, e.g. pumps
    • C12M29/14—Pressurized fluid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M37/00—Means for sterilizing, maintaining sterile conditions or avoiding chemical or biological contamination
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
    • C12M41/12—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of temperature
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
    • C12M41/26—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of pH
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
    • C12M41/40—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of pressure
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
    • C12M41/44—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of volume or liquid level
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M47/00—Means for after-treatment of the produced biomass or of the fermentation or metabolic products, e.g. storage of biomass
    • C12M47/10—Separation or concentration of fermentation products
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M47/00—Means for after-treatment of the produced biomass or of the fermentation or metabolic products, e.g. storage of biomass
    • C12M47/14—Drying
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/08—Lysine; Diaminopimelic acid; Threonine; Valine
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
    • Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
    • Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Thermal Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Clinical Laboratory Science (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及一种缬氨酸半连续的发酵方法及成套设备，包括如下步骤：步骤一：将缬氨酸发酵种子液，加入到装有第一发酵培养基的发酵罐中，在密闭环境、25‑35℃、50‑200r/min条件下，厌氧发酵得到发酵液；步骤二：当发酵液中有晶体析出时，按0.04‑0.1L/min流量向发酵液中通入无菌空气，使得晶体逐渐浮于发酵液上层；步骤三：当检测到发酵液中残糖量小于10g/L时，停止通入无菌空气，将发酵液上方含晶体的发酵液排出发酵罐，再流加与排出的发酵液同等体积的第二发酵培养基，继续发酵，重复步骤二和步骤三，如此反复150‑200批次后停止；步骤四：排出的含晶体的发酵液经灭菌、分离、水洗后、干燥后，得到缬氨酸晶体。本发明能够实现缬氨酸的半连续发酵，提高发酵效率，缩短发酵周期及提高了发酵罐的利用率。

Description

一种高效率的缬氨酸半连续发酵方法及其成套装置
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种高效率的缬氨酸半连续发酵方法及其成套装置。
背景技术
缬氨酸为机体必需氨基酸和营养物质，被广泛应用于食品、医药、化妆品、饲料等领域，并用作食品添加剂、饲料添加剂、营养增补剂、风味剂、化妆品添加剂、药物(如抗生素、除草剂等)的制备前体等，市场前景十分广阔。
缬氨酸发酵法主要采用分批发酵法，微生物经过一级扩增培养、二级扩增培养后，葡萄糖在培养基中发酵转化为缬氨酸。当发酵液中生成的缬氨酸浓度达到饱和状态或过饱和状态时即停止发酵，如有晶体析出，该批次发酵液需要将晶体分离或者加水溶解后，才能进行分离操作，并且分离出的发酵液可能存在葡萄糖残留量高，发酵效率低，资源利用率低、发酵液粘稠且富含营养，进而增加发酵母液的后处理难度和生产成本；二是分批发酵需要不断重复微生物的一级扩增培养、二级扩增培养，且每批发酵液均需经除菌、脱色、浓缩、结晶、分离等处理，并需清洗和杀菌每批发酵设备，由此导致发酵设备和菌液的利用率低，发酵周期长，发酵操作复杂且生产效率低。为此，需要研究开发高效率的缬氨酸发酵设备和发酵方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种高效率的缬氨酸半连续发酵罐，包括进气管、进料管、出料管、搅拌装置、驱动装置、观察窗，所述进料管设置在发酵罐的顶部，进料管在发酵罐中的管体长度为发酵罐长度的1/6-1/4，所述出料管设置在发酵罐顶部，出料管在发酵罐中的管体长度为发酵罐长度的1/6-1/5，所述驱动装置设置在发酵罐的顶部并连接搅拌装置，所述搅拌装置从发酵罐顶部延伸至发酵罐底部，搅拌装置上设置有多组搅拌桨；所述进气管的末端设置有出气孔，出气孔设置在搅拌装置的正下方。
本发明优选的技术方案，所述进气管连接外部的无菌气体过滤器，所述无菌气体过滤器连接空气压缩机。
本发明优选的技术方案，所述进气管为多孔橡胶、陶瓷或膜构成的曝气管。
本发明优选的技术方案，所述发酵罐由具有耐压性、抗热性和防污性质的材料制成。
本发明优选的技术方案，所述发酵罐还可以进一步设置有刮除装置、温度控制装置、水位控制装置、pH控制装置、压力调节装置。
本发明的另一目的在于提供包含所述发酵罐的半连续发酵生产缬氨酸的成套设备，包括发酵罐、进气单元、第一进料单元、第二进料单元、灭菌罐、分离单元、水洗单元和干燥单元。所述发酵罐为上文所述的缬氨酸半连续发酵罐。
本发明优选的技术方案，所述进气单元包括空气压缩机和无菌气体过滤器，所述空气压缩机通过无菌气体过滤器与进气管相连。
本发明优选的技术方案，所述第一进料单元包括第一发酵培养基储罐和第一蠕动泵，通过第一蠕动泵与进料管相连。
本发明优选的技术方案，所述第二进料单元包括第二发酵培养基储罐和第二蠕动泵，通过第二蠕动泵与进料管相连。
本发明优选的技术方案，所述分离单元为板框压滤机或离心机。
本发明优选的技术方案，所述水洗单元为装有能够清洁分离膜的液体的储罐，所述液体为水、盐酸、氢氧化钠的水溶液及其混合物。
本发明优选的技术方案，所述干燥单元为烘箱或流化床。
本发明优选的技术方案，所述发酵罐的进气管、出料管分别通向进气单元、灭菌罐，所述发酵罐的进料管连通第一进料单元和第二进料单元，分离单元的入口和出口分别与灭菌罐的出口、水洗单元的入口相连，水洗单元的出口通过管路和干燥单元相连。
本发明优选的技术方案，进气管与无菌气体过滤器相连的管路上设有截止阀。
本发明优选的技术方案，进料管与第一进料单元、第二进料单元相连的管路上均设有截止阀。
本发明优选的技术方案，所述分离单元为离心分离装置，或者分离膜组件，分离膜优选为具有0.001um或更大但小于10um的平均孔径的孔的多孔膜。
本发明优选的技术方案，所述水洗单元为装有能够清洁分离膜的液体的储罐，所述液体为水、盐酸、氢氧化钠的水溶液及其混合物。
本发明的目的在于提供一种缬氨酸半连续的发酵方法，包括如下步骤：
步骤一：将缬氨酸发酵种子液，按1-5％的接种量加入到装有第一发酵培养基的发酵罐中，在密闭环境、25-40℃、50-200r/min条件下，厌氧发酵得到发酵液；
步骤二：当发酵液中有晶体析出时，按0.02-0.1L/min流量向发酵液中通入无菌空气，使得晶体逐渐浮于发酵液上层；
步骤三：当检测到发酵液中残糖量小于10g/L时，停止通入无菌空气，将发酵液上方含晶体的发酵液排出发酵罐，再加入占原始发酵液体积1/12-1/8的第二发酵培养基，继续发酵，重复步骤二和步骤三，如此反复10-250批次后停止；
步骤四：排出的含晶体的发酵液经灭菌、分离、水洗后、干燥后，得到缬氨酸晶体。
本发明优选的技术方案，所述发酵方法，包括如下步骤：
步骤一：向发酵罐中投入占发酵罐体积4/5的第一发酵培养基，将缬氨酸发酵种子液按1-5％的接种量接种到第一发酵培养基中，开启搅拌装置，在密闭环境、25-35℃、50-200r/min条件下，厌氧发酵得到发酵液；
步骤二：当从观察窗中观察到发酵液中有晶体析出时，打开进气管，按0.02-0.1L/min流量通入无菌空气，使得晶体逐渐浮于发酵液液面上层；
步骤三：当检测到发酵液中残糖量小于10g/L时，出料管管口浸没在含晶体的发酵液液面下，此时关闭进气管，打开出料管，发酵液上方含晶体的发酵液在发酵罐内外压力差的作用下，通过出料管排出发酵罐，进入灭菌罐；等发酵罐中的发酵液液位下降到出料管口下方时，关闭出料管，打开进料管，泵入占原始发酵液体积1/12-1/8的第二发酵培养基，流加完成后关闭进料管，开启搅拌装置，在密闭环境、25-40℃、50-200r/min条件下，厌氧发酵得到发酵液，重复步骤二和步骤三，如此反复150-200批次后停止；
步骤四：对进入到灭菌罐的含晶体的发酵液灭菌，再送入分离单元进行过滤，滤渣送入水洗单元进行水洗后，再送入干燥单元烘干，得到缬氨酸晶体。
本发明优选的技术方案，步骤一中，所述发酵培养温度为30-35℃。
本发明优选的技术方案，所述第一发酵培养基组成为：磷酸氢二铵1-20g/L，磷酸二氢钾1-20g/L，硫酸铵1-5g/L，七水硫酸镁0.2-2g/L，七水硫酸亚铁0.01-0.05g/L，生物素1-500μg/L，维生素B1 1-500μg/L，葡萄糖160-200g/L。
本发明优选的技术方案，所述第一发酵培养基的制备方法为：除葡萄糖外的其余组分和葡萄糖分开灭菌后混合，再调节pH值为6.5-7.8。
本发明优选的技术方案，所述发酵种子液OD值为1-8，优选OD值为3-5。
本发明优选的技术方案，所述发酵种子液的获得方法为：
(1)将微生物菌株按接种量为1-5％接种到LB培养基中，将其培养体系置于180-220r/min、35-37℃、pH 6-7条件下，培养至OD值1-8，得到一级种子液；
(2)将一级种子液按照1-5％接种量转接至合成培养基中，将其置于180-220r/min、35-37℃、pH 6-7条件下，培养至OD值1-8，得到发酵种子液。
本发明优选的方案，所述LB培养基组成为：8-10g/L蛋白胨，5-10g/L酵母粉和8-10g/L氯化钠。
本发明优选的方案，所述合成培养基组成为：甘油8-10g/L，磷酸二氢钾18-21g/L，硫酸铵5-7g/L，硫酸镁1-2g/L，酵母粉1.0-1.2g/L，维生素B1为0.002-0.004g/L，灭菌前用pH调节剂调pH7.3-7.5。
本发明优选的技术方案，所述微生物菌株选自Sval031菌株、Sval049菌株、Sval065菌株中的任一种。
本发明优选的技术方案，所述Sval031菌株(保藏编号：CGMCC No.19456)于2020年3月6日提交保藏，分类命名：大肠埃希氏菌(Escherichia coli)，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
本发明优选的技术方案，所述Sval049菌株(保藏编号：CGMCC No.19457)于2020年3月6日提交保藏，分类命名：大肠埃希氏菌(Escherichia coli)，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
本发明优选的技术方案，所述Sval065菌株(保藏编号：CGMCC No.19458)于2020年3月6日提交保藏，分类命名：大肠埃希氏菌(Escherichia coli)，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
本发明优选的技术方案，步骤二中，通入空气量为0.03-0.08L/min，优选为0.04-0.06L/min。
本发明优选的技术方案，步骤三中，当检测到发酵液中残糖含量小于8g/L时打开进气管，优选为小于5.0g/L时打开进气管。
本发明优选的技术方案，步骤三中，所述第二发酵培养基的加入量为原始发酵液体积的1/10。
本发明优选的技术方案，重复步骤二和步骤三的次数为10-200次，优选为50-150次。
本发明优选的技术方案，所述第二发酵培养基的组成为：磷酸氢二铵1-20g/L，磷酸二氢钾1-20g/L，硫酸铵1-5g/L，七水硫酸镁0.2-2g/L，七水硫酸亚铁0.01-0.05g/L，生物素1-500μg/L，维生素B1 1-500μg/L，葡萄糖200-350g/L。
本发明优选的技术方案，所述第二发酵培养基的制备方法为：除葡萄糖外的其余组分和葡萄糖分开灭菌后混合，再用氨水或4％氢氧化钠溶液调节pH值为6.5-7.8。
本发明优选的技术方案，所述第二发酵培养基的补加方式为一次投料或流加，优选为流加。
本发明优选的技术方案，所述缬氨酸晶体纯度不低于98％。
本发明优选的技术方案，所述缬氨酸晶体可用于制备饲料添加剂、饲料、营养增补剂、氨基酸制剂、医药原料、医药中间体、药品。
除非另有说明，本发明涉及液体与液体之间的百分比时，所述的百分比为体积/体积百分比；本发明涉及液体与固体之间的百分比时，所述百分比为体积/重量百分比；本发明涉及固体与液体之间的百分比时，所述百分比为重量/体积百分比；其余为重量/重量百分比。
与现有技术相比，本发明具有下述有益效果：
1.本发明能够实现缬氨酸的半连续发酵，有利于产物提取和积累，提高了发酵罐的利用率，保持了高浓度发酵底物，提高了发酵效率，缩短发酵周期，且保持了微生物活性进一步提高发酵效率，极大程度的节约时间成本，进而大幅节约生产成本。
2.本发明提供的半连续发酵成套装置，节约了微生物的一级、二级扩培和设备消杀清洗过程，大大提高设备利用率，且极大程度缩短整体工艺周期；同时避免分批发酵结束后，所有发酵液需经除菌脱色蒸发结晶等多道工序，产品提取手段简洁，仅水洗即可，工艺简便；产品质量好，极大程度的降低了生产成本，适宜工业化生产。
附图说明
图1本发明发酵罐的结构示意图；
图2本发明生产系统的结构示意图；
其中图中包括发酵罐(10)、进气管(11)、进料管(12)、出料管(13)、搅拌装置(14)、驱动装置(15)、观察窗(16)、搅拌桨(17)、进气孔(111)、进气单元(20)、第一进料单元(30)、灭菌罐(40)、分离单元(50)、水洗单元(60)、干燥单元(70)、空气压缩机(21)、无菌气体过滤器(22)、第一发酵培养基储罐(31)、第一蠕动泵(32)、第二进料单元(80)、第二发酵培养基储罐(81)、第二蠕动泵(82)。
具体实施方式
通过以下实施例和实验例进一步详细说明本发明。这些实施例和实验例仅用于说明性目的，而并非用于限制本发明的范围。
实施例中的菌种为中国专利申请(CN202010401422.5、CN202010466347.0、CN202010460035.9)中的菌种Sval065菌株(保藏编号为CGMCC NO.19458)、Sval031菌株(保藏编号：CGMCC No.19456)、Sval049菌株(保藏编号：CGMCC No.19457)。
LB培养基组成为：10g/L蛋白胨，5g/L酵母粉和10g/L氯化钠。
合成培养基组成为：甘油8-10g/L，磷酸二氢钾18-21g/L，硫酸铵5-7g/L，硫酸镁1-2g/L，酵母粉1.0-1.2g/L，维生素B1为0.002-0.004g/L，灭菌前用氨水调pH7.3-7.5。
第一发酵培养基的组成为：磷酸氢二铵3g/L，磷酸二氢钾5g/L，硫酸铵2g/L，七水硫酸镁1g/L，七水硫酸亚铁0.02g/L，生物素100μg/L，维生素B1 200μg/L，葡萄糖180g/L。发酵培养基的制备方法为：除葡萄糖外的其余组分与葡萄糖分开灭菌后混合，再用氨水调节pH值为6.5～7.8。
第二发酵培养基的组成为：磷酸氢二铵3g/L，磷酸二氢钾5g/L，硫酸铵2g/L，七水硫酸镁1g/L，七水硫酸亚铁0.02g/L，生物素100μg/L，维生素B1 200μg/L，葡萄糖300g/L。新鲜培养基的制备方法为：除葡萄糖外的其余组分与葡萄糖分开灭菌后混合，再用氨水调节pH值为6.5～7.8。
实施例1中发酵种子液的培养方法：
将缬氨酸生产菌(保藏编号：CGMCC No.19457)按照接种量为1-5％接种到LB培养基中，将其培养体系置于180-220r/min、35-37℃、pH 6-7条件下，培养至OD值3-4，得到一级种子液；将一级种子液按照1-5％接种量转接至合成培养基中，将其置于180-220r/min、35-37℃、pH 6-7条件下，培养至OD值3-4，得到发酵种子液，用于实施例1。
实施例2中发酵种子液的培养方法：
将缬氨酸生产菌(保藏编号：CGMCC No.19456)按照接种量为1-5％接种到LB培养基中，将其培养体系置于180-220r/min、35-37℃、pH 6-7条件下，培养至OD值3-4，得到一级种子液；将一级种子液按照1-5％接种量转接至合成培养基中，将其置于180-220r/min、35-37℃、pH 6-7条件下，培养至OD值3-4，得到发酵种子液，用于实施例2。
缬氨酸半连续发酵罐
参阅附图1，一种缬氨酸的半连续发酵罐10，包括进气管(11)、进料管(12)、出料管(13)、搅拌装置(14)、驱动装置(15)、观察窗(16)，所述进料管(12)设置在发酵罐(10)的顶部，进料管(12)在发酵罐(10)中的管体长度为发酵罐长度的1/6，所述出料管(13)设置在发酵罐(10)顶部，出料管(13)在发酵罐(10)中的管体长度为发酵罐长度的1/5，所述驱动装置(15)设置在发酵罐(10)的顶部并连接搅拌装置(14)，所述搅拌装置(14)从发酵罐(10)顶部延伸至发酵罐底部，搅拌装置(14)上设置有多组搅拌桨(17)；所述进气管(11)的末端设置有进气孔(111)，进气孔(111)设置在搅拌装置(14)的正下方。
所述进气管为多孔橡胶、陶瓷或膜构成的曝气管。所述发酵罐由具有耐压性、抗热性和防污性质的材料制成。所述出料管孔径尺寸为足够大到不引起出料晶浆的堵塞。所述发酵罐进一步设置有刮除装置、温度控制装置、水位控制装置、pH控制装置、压力调节装置。
缬氨酸半连续发酵成套装置
参阅附图2，一种缬氨酸的半连续生产成套设备，包括发酵罐10、进气单元20、进料单元30、灭菌罐40、分离单元50、水洗单元60和干燥单元70。所述发酵罐10为上文所述的缬氨酸半连续发酵罐。所述进气单元20包括空气压缩机21和无菌气体过滤器22，所述空气压缩机21通过无菌气体过滤器22与进气管11相连。所述第一进料单元30包括第一发酵培养基储罐31和第一蠕动泵32，通过第一蠕动泵32与进料管12相连。所述第二进料单元80包括第二发酵培养基储罐81和第二蠕动泵82，通过第一蠕动泵82与进料管12相连。所述分离单元50为板框压滤机或离心机。所述水洗单元60为装有能够清洁分离膜的液体的储罐，所述液体为水、盐酸、氢氧化钠的水溶液及其混合物。所述干燥单元70为烘箱或流化床。所述发酵罐10的进气管11、出料管13分别通向进气单元20、灭菌罐40，所述发酵罐10的进料管12连通第一进料单元30和第二进料单元80，分离单元50的入口和出口分别与灭菌罐40的出口、水洗单元60的入口相连，水洗单元60的出口通过管路和干燥单元70相连。进气管11与无菌气体过滤器22相连的管路上设有截止阀，进料管12与第一进料单元(30)、第二进料单元(80)相连的管路上均设有截止阀。
实施例1中试发酵生产
本发明的缬氨酸半连续发酵方法为：
步骤一：通过进料管(12)向5L发酵罐(10)接入4L第一发酵培养基，再按照3％接种量向第一发酵培养基中加入发酵种子液；
步骤二：在密闭环境和30℃、200r/min条件下厌氧发酵60小时，从观察窗(16)中观测到有晶体析出，打开进气管，按0.04L/min流量通入无菌空气，使得晶体逐渐浮于液面上层。每1h检测发酵液中残留葡萄糖含量。
步骤三：当发酵71h，检测到发酵液中残糖量为3.3g/L，出料管(13)管口浸没在含晶体的发酵液液面下，此时关闭进气管(11)，打开出料管(13)，发酵罐上层含晶体的发酵液在发酵罐内外压力差的作用下，通过出料管(13)排出发酵罐(10)，进入灭菌罐(40)。待发酵罐(10)中的发酵液液面低于出料管的管口时，关闭出料管，打开进料管(12)，流加泵入第二发酵培养基400mL，流加完成后关闭进料管(12)，在密闭环境和30℃、200r/min条件下厌氧发酵，重复步骤二和步骤三，如此反复150批次后停止。
步骤四：对进入到灭菌罐(40)的含缬氨酸晶体的发酵液，在80℃下灭菌20min，再送入分离单元(50)进行过滤，滤渣送入水洗单元(60)进行水洗后，再送入干燥单元(70)在60℃下烘干，得到缬氨酸产品796g。整个发酵时长为1560h。经检测，产品纯度为98.3％，外观呈类黄色，满足饲料级缬氨酸要求。
实施例2工业化发酵生产
本发明的缬氨酸半连续发酵方法为：
步骤一：通过进料管(12)向500L发酵罐(10)中通入400L第一发酵培养基，再按照3％接种量向第一发酵培养基中接入发酵种子液；
步骤二：打开搅拌装置，在密闭环境和35℃、80r/min条件下厌氧发酵60小时，从观察窗(16)处观察到有晶体析出，打开进气管，按4L/min流量通入无菌空气，使得晶体逐渐浮于液面上层。每1h检测发酵液中残留葡萄糖含量。
步骤三：当发酵65h，检测到发酵液中残糖量为3.2g/L，出料管(13)管口浸没在含晶体的发酵液液面下，此时关闭进气管(11)，打开出料管(13)，发酵罐上层含晶体的发酵液在发酵罐内外压力差的作用下，通过出料管(13)排出发酵罐(10)，进入灭菌罐(40)。等发酵罐(10)中的发酵液液面低于出料管管口时，关闭出料管，打开进料管(12)，流加泵入第二发酵培养基40L，流加完成后关闭进料管(12)，打开搅拌装置，在密闭环境和35℃、80r/min条件下厌氧发酵，重复步骤二和步骤三，如此反复150批次后停止。
步骤四：对进入到灭菌罐(40)的含缬氨酸晶体的发酵液，在80℃下灭菌20min，再送入分离单元(50)进行过滤，滤渣送入水洗单元(60)进行水洗后，再送入干燥单元(70)在60℃下烘干，得到缬氨酸产品800公斤。整个发酵时长为1580h。经检测，产品纯度为98.1％，外观呈类黄色，满足饲料级缬氨酸要求。
以上对本发明具体实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明权利要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种高效率的缬氨酸半连续发酵罐(10)，其特征在于，包括进气管(11)、进料管(12)、出料管(13)、搅拌装置(14)、驱动装置(15)、观察窗(16)，所述进料管(12)设置在发酵罐(10)的顶部，进料管(12)在发酵罐(10)中的管体长度为发酵罐长度的1/6-1/4，所述出料管(13)设置在发酵罐(10)顶部，出料管(13)在发酵罐(10)中的管体长度为发酵罐长度的1/6-1/5，所述驱动装置(15)设置在发酵罐(10)的顶部并连接搅拌装置(14)，所述搅拌装置(14)从发酵罐(10)顶部延伸至发酵罐底部，搅拌装置(14)上设置有多组搅拌桨(17)；所述进气管(11)的末端设置有出气孔(111)，出气孔(111)设置在搅拌装置(14)的正下方。
2.一种半连续发酵生产缬氨酸的成套设备，其特征在于，包括如权利要求1所述的发酵罐(10)、进气单元(20)、第一进料单元(30)、第二进料单元(80)、灭菌罐(40)、分离单元(50)、水洗单元(60)、干燥单元(70)，所述发酵罐的进气管(11)与进气单元(20)相连、进料管(12)与第一进料单元(30)、第二进料单元(80)相连、出料管(13)与灭菌罐(40)相连，灭菌罐(40)的出口与分离单元(50)的入口相连，分离单元(50)的出口与水洗单元(60)的入口相连、水洗单元(60)的出口与干燥单元(70)相连。
3.如权利要求2所述的成套设备，其特征在于，所述第一进料单元(30)包括与进料管(12)相连的第一发酵培养基储罐(31)，进料管(12)的管路上设有第一蠕动泵(32)；所述第二进料单元(80)包括与进料管(12)相连的第二发酵培养基储罐(81)，进料管(12)的管路上设有第二蠕动泵(82)。
4.如权利要求2-3任一项所述的成套设备，其特征在于，所述发酵罐(10)的进气管(11)、出料管(13)分别通向进气单元(20)、灭菌罐(40)，所述发酵罐(10)的进料管(12)连接第一进料单元(30)和第二进料单元(80)，分离单元(50)的入口和出口分别与灭菌罐(40)的出口、水洗单元(60)的入口相连，水洗单元(60)的出口通过管路和干燥单元(70)相连。
5.一种缬氨酸半连续的发酵方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一：将缬氨酸发酵种子液，按1-5％的接种量加入到装有第一发酵培养基的发酵罐中，在密闭环境、25-35℃、50-200r/min条件下，厌氧发酵得到发酵液；
步骤二：当发酵液中有晶体析出时，按0.04-0.1L/min流量向发酵液中通入无菌空气，使得晶体逐渐浮于发酵液上层；
步骤三：当检测到发酵液中残糖量小于10g/L时，停止通入无菌空气，将发酵液上方含晶体的发酵液排出发酵罐，再流加与排出的发酵液同等体积的第二发酵培养基，继续发酵，重复步骤二和步骤三，如此反复150-200批次后停止；
步骤四：排出的含晶体的发酵液经灭菌、分离、水洗后、干燥后，得到缬氨酸晶体。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤一中：向发酵罐(10)中投入占发酵罐体积4/5的第一发酵培养基，再将缬氨酸发酵种子液按1-5％的接种量接种到第一发酵培养基中，开启搅拌装置(14)，在密闭环境、25-40℃、50-200r/min条件下，厌氧发酵得到发酵液。
7.如权利要求5-6任一项所述的方法，其特征在于，步骤二：当从观察窗(16)中观察到发酵液中有晶体析出时，打开进气管(11)，按0.02-0.1L/min流量通入无菌空气，使得晶体逐渐浮于发酵液液面上层。
8.如权利要求5-7任一项所述的方法，其特征在于，步骤三：当检测到发酵液中残糖量小于10g/L时，出料管(13)的管口浸没在韩晶体的发酵液液面下方，此时关闭进气管(11)，打开出料管(13)，含晶体的发酵液在发酵罐内外压力差的作用下，通过出料管(13)排出发酵罐(10)，进入灭菌罐(40)；待发酵罐(10)中的发酵液液位下降到出料管口下方时，打开进料管(12)，泵入占原发酵液体积1/12-1/8的第二发酵培养基后，关闭进料管(12)，重复步骤二和步骤三，如此反复150-200批次后停止。
9.如权利要求5-8任一项所述的方法，其特征在于，步骤四：对进入到灭菌罐(40)的含晶体的发酵液灭菌，再送入分离单元(50)进行过滤，滤渣送入水洗单元(60)进行水洗后，再送入干燥单元(70)烘干，得到缬氨酸晶体。
10.如权利要求5-9任一项所述的方法，其特征在于，所述缬氨酸晶体可用于制备饲料添加剂、饲料、营养增补剂、氨基酸制剂、医药原料、医药中间体、药品。
CN202111048395.9A 2021-09-08 2021-09-08 一种高效率的缬氨酸半连续发酵方法及其成套装置 Active CN114015559B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111048395.9A CN114015559B (zh) 2021-09-08 2021-09-08 一种高效率的缬氨酸半连续发酵方法及其成套装置

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111048395.9A CN114015559B (zh) 2021-09-08 2021-09-08 一种高效率的缬氨酸半连续发酵方法及其成套装置

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114015559A true CN114015559A (zh) 2022-02-08
CN114015559B CN114015559B (zh) 2023-06-23

Family

ID=80054235

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111048395.9A Active CN114015559B (zh) 2021-09-08 2021-09-08 一种高效率的缬氨酸半连续发酵方法及其成套装置

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114015559B (zh)

Citations (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0139592A2 (fr) * 1983-10-27 1985-05-02 Les Produits Organiques Du Santerre Orsan Procédé et installation de production d'amino-acides par fermentation
US5188948A (en) * 1987-04-16 1993-02-23 Ajinomoto Co., Inc. Process for producing L-valine by fermentation
EP1964923A1 (en) * 2007-02-27 2008-09-03 Alain André Guy Vertès Multiplex fermentation process
CN101659949A (zh) * 2009-09-23 2010-03-03 安徽丰原发酵技术工程研究有限公司 一种液体纤维素酶的制备方法
WO2013024947A1 (en) * 2011-08-16 2013-02-21 Cj Cheiljedang Corporation Microorganism having enhanced l-valine productivity and method for producing l-valine using the same
CN103865792A (zh) * 2014-03-28 2014-06-18 济南大学 一种循环式微生物发酵反应与料液分离一体化设备
CN105018538A (zh) * 2015-07-07 2015-11-04 北京化工大学 一种基于结晶法发酵分离耦合生产乳酸镁的方法
CN107164420A (zh) * 2017-07-07 2017-09-15 精晶药业股份有限公司 一种l‑丙氨酸半连续发酵的方法
CN109486894A (zh) * 2019-01-11 2019-03-19 内蒙古拜克生物有限公司 一种l-缬氨酸的生产方法
CN110643547A (zh) * 2019-11-07 2020-01-03 巴彦淖尔华恒生物科技有限公司 一种产l-缬氨酸的黄色短杆菌及利用该菌生产l-缬氨酸的方法
CN110892928A (zh) * 2019-11-11 2020-03-20 浙江茗皇天然食品开发股份有限公司 半连续红茶菌发酵液制备方法及装置
CN111500510A (zh) * 2020-06-29 2020-08-07 乐康珍泰（天津）生物技术有限公司 一种提高缬氨酸生产效率的恒容发酵工艺
CN111621530A (zh) * 2020-07-02 2020-09-04 宝鸡阜丰生物科技有限公司 一种半连续发酵生产谷氨酸的方法及系统
CN112522121A (zh) * 2020-12-23 2021-03-19 苏州聚维元创生物科技有限公司 一种克鲁维酵母及其在生产木糖醇中的应用
CN212982940U (zh) * 2020-06-11 2021-04-16 江苏澳创生物科技有限公司 一种色氨酸发酵生产装置
CN113025670A (zh) * 2020-12-25 2021-06-25 安徽华恒生物科技股份有限公司 一种高效的缬氨酸制备方法
CN217324059U (zh) * 2021-09-08 2022-08-30 安徽华恒生物科技股份有限公司 一种高效率的缬氨酸半连续发酵罐及成套装置
CN115181764A (zh) * 2022-08-11 2022-10-14 通辽梅花生物科技有限公司 一种制备l-苏氨酸的半连续发酵方法及其糖蜜营养液

Patent Citations (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0139592A2 (fr) * 1983-10-27 1985-05-02 Les Produits Organiques Du Santerre Orsan Procédé et installation de production d'amino-acides par fermentation
US5188948A (en) * 1987-04-16 1993-02-23 Ajinomoto Co., Inc. Process for producing L-valine by fermentation
EP1964923A1 (en) * 2007-02-27 2008-09-03 Alain André Guy Vertès Multiplex fermentation process
CN101659949A (zh) * 2009-09-23 2010-03-03 安徽丰原发酵技术工程研究有限公司 一种液体纤维素酶的制备方法
WO2013024947A1 (en) * 2011-08-16 2013-02-21 Cj Cheiljedang Corporation Microorganism having enhanced l-valine productivity and method for producing l-valine using the same
CN103865792A (zh) * 2014-03-28 2014-06-18 济南大学 一种循环式微生物发酵反应与料液分离一体化设备
CN105018538A (zh) * 2015-07-07 2015-11-04 北京化工大学 一种基于结晶法发酵分离耦合生产乳酸镁的方法
CN107164420A (zh) * 2017-07-07 2017-09-15 精晶药业股份有限公司 一种l‑丙氨酸半连续发酵的方法
CN109486894A (zh) * 2019-01-11 2019-03-19 内蒙古拜克生物有限公司 一种l-缬氨酸的生产方法
CN110643547A (zh) * 2019-11-07 2020-01-03 巴彦淖尔华恒生物科技有限公司 一种产l-缬氨酸的黄色短杆菌及利用该菌生产l-缬氨酸的方法
CN110892928A (zh) * 2019-11-11 2020-03-20 浙江茗皇天然食品开发股份有限公司 半连续红茶菌发酵液制备方法及装置
CN212982940U (zh) * 2020-06-11 2021-04-16 江苏澳创生物科技有限公司 一种色氨酸发酵生产装置
CN111500510A (zh) * 2020-06-29 2020-08-07 乐康珍泰（天津）生物技术有限公司 一种提高缬氨酸生产效率的恒容发酵工艺
CN111621530A (zh) * 2020-07-02 2020-09-04 宝鸡阜丰生物科技有限公司 一种半连续发酵生产谷氨酸的方法及系统
CN112522121A (zh) * 2020-12-23 2021-03-19 苏州聚维元创生物科技有限公司 一种克鲁维酵母及其在生产木糖醇中的应用
CN113025670A (zh) * 2020-12-25 2021-06-25 安徽华恒生物科技股份有限公司 一种高效的缬氨酸制备方法
CN217324059U (zh) * 2021-09-08 2022-08-30 安徽华恒生物科技股份有限公司 一种高效率的缬氨酸半连续发酵罐及成套装置
CN115181764A (zh) * 2022-08-11 2022-10-14 通辽梅花生物科技有限公司 一种制备l-苏氨酸的半连续发酵方法及其糖蜜营养液

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
潘毅等: "L-缬氨酸生产工艺研究进展", 广东化工, vol. 40, no. 3, pages 79 - 80 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN114015559B (zh) 2023-06-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102296102B (zh) 微生物法生产葡萄糖酸盐的控制方法
CN111733101B (zh) 一种聚唾液酸发酵培养基及大肠杆菌发酵生产聚唾液酸的方法
CN106434401B (zh) 一种富含麦角甾醇的酵母菌株及麦角酵母粉的制备方法
CN106635934B (zh) 一种嗜热型乳酸杆菌及人工添加该嗜热型乳酸杆菌的玉米浸泡方法
CN115141757A (zh) 一株出芽短梗霉菌株及其发酵法生产普鲁兰多糖的方法
CN103060411B (zh) 一种甲醇蛋白肽的生产方法
CN103695315B (zh) 一种用微生物发酵生产甲壳低聚糖的方法
CN101195801A (zh) 灵芝多糖制备设备和制备工艺
CN110904163A (zh) 一种提高玉米浆乳酸含量的方法
CN111394280A (zh) 一种适合地衣芽孢杆菌生长的培养基及其应用
CN104212851B (zh) 一种多级连续发酵生产l-苯丙氨酸的方法
CN112852680A (zh) 一种高芽孢数凝结芽孢杆菌的液体发酵方法
CN114015559B (zh) 一种高效率的缬氨酸半连续发酵方法及其成套装置
CN102127515A (zh) 一株高产l-脯氨酸短波单胞杆菌(jnpp-1)的筛选及应用
CN101153294A (zh) 琥珀酸的固定化细胞单罐高强度连续发酵工艺
CN217324059U (zh) 一种高效率的缬氨酸半连续发酵罐及成套装置
CN106854670B (zh) 一种发酵法生产替考拉宁并调控其组分含量的方法
CN108048512B (zh) 制备纽莫康定b0的发酵方法
FI85501C (fi) Foerfarande foer framstaellning av polyoler genom pao industriell skala baserad fermentation av socker.
CN102492614A (zh) 一种用于固液分相微生物发酵方法
CN108060192B (zh) 用于提高麦白霉素发酵水平的发酵培养基及补料方法
CN102041279B (zh) 生物膜-电渗析耦合连续生产l-乳酸工艺
CN112592941A (zh) 一种降低l-组氨酸发酵液粘度的方法
CN112725200A (zh) 一株库德里阿兹威毕赤酵母菌及其在发酵白酒糟中的应用
CN111808895A (zh) 一种利用甘薯制备味精的发酵方法及装置

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant