CN113891704A

CN113891704A - 半胱天冬酶抑制剂前药注射用组合物

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Publication number: CN113891704A
Application number: CN202080039861.4A
Authority: CN
Inventors: 金成垣; 金福泰; 崔世铉; 白宰旭
Original assignee: LG Chem Ltd
Current assignee: LG Chem Ltd
Priority date: 2019-05-31
Filing date: 2020-05-29
Publication date: 2022-01-04
Also published as: KR102366215B1; EP3970699A4; JP2022534428A; KR20200138065A; US20220226306A1; EP3970699A1; JP7362184B2; WO2020242235A1

Abstract

本发明涉及一种半胱天冬酶抑制剂前药注射用药物组合物，并且更具体地说，涉及一种注射用药物组合物，所述组合物包含作为活性成分的半胱天冬酶抑制剂前药或其药学上可接受的盐或异构体，以及生物相容性聚合物。

Description

半胱天冬酶抑制剂前药注射用组合物

技术领域

本发明涉及一种用于注射半胱天冬酶抑制剂前药的药物组合物。更具体地说，本发明涉及一种注射用药物组合物，所述注射用药物组合物包含作为活性成分的半胱天冬酶抑制剂前药或其药学上可接受的盐或异构体以及生物相容性聚合物。

背景技术

半胱天冬酶是一种酶并且是以α2β2四聚体形式存在的半胱氨酸蛋白酶。半胱天冬酶抑制剂干扰这些半胱天冬酶的活性，从而调控由半胱天冬酶作用引起的炎症或细胞凋亡。通过施用这些化合物可以消除或减轻症状的疾病包括骨关节炎、类风湿性关节炎、退行性关节炎、破坏性骨病、由肝炎病毒引起的肝病、急性肝炎、肝硬化、由肝炎病毒引起的脑损伤、人暴发性肝衰竭、败血症、器官移植排斥、缺血性心脏病、痴呆、中风、由AIDS引起的脑损伤、糖尿病、胃溃疡等。

在被称为半胱天冬酶抑制剂的具有各种结构的化合物中，异

唑啉衍生物作为韩国专利申请第10-2004-0066726号、第10-2006-0013107号和第10-2008-0025123号提交。此外，国际公开第WO 2007/015931号(申请人：Vertex Pharmaceuticals Incorporated,USA)中公开了基于异

唑啉衍生物的半胱天冬酶抑制剂的前药。

同时，下式2的尼氟卡生(nivocasan)((R)-N-((2S,3S)-2-(氟甲基)-2-羟基-5-氧代四氢呋喃-3-基]-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)-4,5-二氢异

唑-5-甲酰胺)作为有效的半胱天冬酶抑制剂而受到关注。

[式2]

然而，当将尼氟卡生制备为持续释放制剂中的聚合物微球制剂时，根据其物理化学性质，在制备过程期间损失大量药物，导致低包封效率，并且对于体外药物释放期也存在限制。

发明内容

技术问题

因此，本发明的技术问题是提供一种注射用组合物，当制备半胱天冬酶抑制剂的持续释放制剂时，所述注射用组合物中包封效率大大提高并且药物的释放期大大增加。

技术解决方案

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种注射用药物组合物，其含有作为活性成分的下式1的化合物或其药学上可接受的盐或异构体；以及生物相容性聚合物：

[式1]

其中

R₁表示烷基、环烷基、芳基或-C(O)R₂；

R₂表示烷基、环烷基、芳基、芳基烷基或包括一个或多个选自N、O和S的杂原子的杂芳基；并且

所述烷基、环烷基、芳基烷基和杂芳基任选被取代，并且取代基可以是选自烷基、环烷基、羟基、卤基、卤代烷基、酰基、氨基、烷氧基、烷氧羰基、羧基、羧基氨基、氰基、硝基、硫醇、芳氧基、磺氧基和胍基中的一种或多种。

在本发明中，式1化合物可以形成药学上可接受的盐。药学上可接受的盐可包括由以下酸形成的酸加成盐：无机酸，如盐酸、硫酸、硝酸、磷酸、氢溴酸和氢碘酸；有机酸，如酒石酸、甲酸、柠檬酸、乙酸、三氯乙酸、三氟乙酸、葡萄糖酸、苯甲酸、乳酸、富马酸、马来酸和水杨酸；或磺酸，如甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸和对甲苯磺酸，这些酸形成包括药学上可接受的阴离子的无毒的酸加成盐。此外，药学上可接受的羧酸盐包括与碱金属或碱土金属如锂、钠、钾、钙和镁形成的盐；与氨基酸如赖氨酸、精氨酸和胍形成的盐；有机盐，如二环己胺、N-甲基-D-葡糖胺、三(羟甲基)甲胺、二乙醇胺、胆碱和三乙胺。根据本发明的式1化合物可以通过常规方法转化为其盐。

同时，由于根据本发明的式1化合物可以具有不对称碳中心和不对称轴或平面，因此它们可以作为E-或Z-异构体、R-或S-异构体、外消旋混合物或非对映异构体混合物和每个非对映异构体存在，所有这些均在本发明的范围内。

在本文中，除非另有说明，否则术语“式1化合物”用于表示所有式1化合物，包括其药学上可接受的盐和异构体。

在本文中，定义取代基的以下概念用于定义式1化合物。

术语“卤素”或“卤基”是指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘(I)。

术语“烷基”是指直链或支链烃，可以包括单键、双键或三键，并且优选为C₁-C₁₀烷基。烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、癸基、十二烷基、十五烷基、十八烷基、乙炔、乙烯基、三氟甲基等。

术语“环烷基”是指部分或完全饱和的单环或稠环烃，并且优选为C₃-C₁₀环烷基。环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基等。

除非另有定义，否则术语“烷氧基”是指具有1至10个碳原子的烷氧基。

术语“芳基”是指芳族烃，优选C₅-C₁₂芳基，并且更优选C₆-C₁₀芳基。芳基的实例包括但不限于苯基、萘基等。

术语“杂芳基”是指形成单环或稠环(其可以与苯并或C₃-C₈环烷基稠合)并且包括一个或多个选自N、O和S的杂原子作为环成员的3元至12元、更优选5元至10元芳族烃。杂芳基的实例包括但不限于吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、

二唑基、异

二唑基、四唑基、三唑基、吲哚基、吲唑基、异

唑基、

唑基、噻唑基、异噻唑基、呋喃基、苯并呋喃基、咪唑基、噻吩基、苯并噻唑、苯并咪唑、喹啉基、吲哚啉基、1,2,3,4-四氢异喹啉基、3,4-二氢异喹啉基、噻唑并吡啶基、2,3-二氢苯并呋喃、2,3-二氢噻吩、2,3-二氢吲哚、苯并[1,3]二

英、色满、硫色满、1,2,3,4-四氢喹啉、4H-苯并[1,3]二

英、2,3-二氢苯并[1,4]-二

英、6,7-二氢-5H-环戊[d]嘧啶等。

芳基-烷基、烷基-芳基和杂芳基-烷基是指由上述芳基和烷基、或杂芳基和烷基的组合形成的基团。实例包括但不限于苄基、噻吩甲基、嘧啶甲基等。

根据本发明的一个实施方式，在式1中R₁表示C₁-C₈烷基或-C(O)R₂；并且R₂表示C₁-C₂₀烷基、C₆-C₁₀芳基或C₆-C₁₀芳基-C₁-C₇烷基。

根据本发明的另一个实施方式，在式1中R₁表示C₁-C₅烷基或-C(O)R₂；R₂表示C₁-C₁₅烷基、C₆-C₁₀芳基或C₆-C₁₀芳基-C₁-C₅烷基；并且取代基为烷基或卤代烷基。

根据本发明的代表性式1化合物包括但不限于以下化合物：

乙酸(2S,3S)-2-(氟甲基)-3-((R)-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)-4,5-二氢异

唑-5-甲酰胺基)-5-氧代四氢呋喃-2-基酯；

丙酸(2S,3S)-2-(氟甲基)-3-((R)-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)-4,5-二氢异

唑-5-甲酰胺基)-5-氧代四氢呋喃-2-基酯；

异丁酸(2R,3S)-2-(氟甲基)-3-((R)-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)-4,5-二氢异

唑-5-甲酰胺基)-5-氧代四氢呋喃-2-基酯；

新戊酸(2R,3S)-2-(氟甲基)-3-((R)-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)-4,5-二氢异

唑-5-甲酰胺基)-5-氧代四氢呋喃-2-基酯；

3-甲基丁酸(2S,3S)-2-(氟甲基)-3-((R)-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)-4,5-二氢异

唑-5-甲酰胺基)-5-氧代四氢呋喃-2-基酯；

3,3-二甲基丁酸(2S,3S)-2-(氟甲基)-3-((R)-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)-4,5-二氢异

唑-5-甲酰胺基)-5-氧代四氢呋喃-2-基酯；

棕榈酸(2S,3S)-2-(氟甲基)-3-((R)-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)-4,5-二氢异

唑-5-甲酰胺基)-5-氧代四氢呋喃-2-基酯；

苯甲酸(2S,3S)-2-(氟甲基)-3-((R)-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)-4,5-二氢异

唑-5-甲酰胺基)-5-氧代四氢呋喃-2-基酯；

4-(三氟甲基)苯甲酸(2S,3S)-2-(氟甲基)-3-((R)-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)-4,5-二氢异

唑-5-甲酰胺基)-5-氧代四氢呋喃-2-基酯；

2-苯基乙酸(2S,3S)-2-(氟甲基)-3-((R)-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)-4,5-二氢异

唑-5-甲酰胺基)-5-氧代四氢呋喃-2-基酯；

(5R)-N-((3S)-2-乙氧基-2-(氟甲基)-5-氧代四氢呋喃-3-基)-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)-4,5-二氢异

唑-5-甲酰胺；和

(5R)-N-((3S)-2-(氟甲基)-2-甲氧基-5-氧代四氢呋喃-3-基)-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)-4,5-二氢异

唑-5-甲酰胺。

除非另有说明，否则本文中使用的术语和缩写保留其原始含义。

在本发明的一个实施方式中，生物相容性聚合物可以是选自聚丙交酯(PLA)、聚乙交酯(PGA)、聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)、聚己内酯、聚原酸酯和聚磷嗪中的一种或多种，但不限于此。

在本发明的一个实施方式中，生物相容性聚合物是聚(丙交酯-共-乙交酯)。聚(丙交酯-共-乙交酯)可以在催化剂存在下通过开环聚合由丙交酯和乙交酯聚合。

在本发明的一个实施方式中，聚(丙交酯-共-乙交酯)的丙交酯与乙交酯的摩尔比优选为90:10至10:90，更优选为90:10至40:60，并且更优选为85:15至50:50。

聚(丙交酯-共-乙交酯)——即由乳酸和乙醇酸(乳酸和乙醇酸为体内物质)聚合而获得的聚合物——具有生物相容性和生物降解性，因此其通过药物的控释被广泛应用于医疗和制药领域。聚(丙交酯-共-乙交酯)中乙交酯的比率越高，亲水性越大，从而在体内分解速度更快，因为水分吸收好，并且水解加速。反之，随着丙交酯的比率增加，疏水性增加并且水分吸收不好，从而使抗水解性增加并且在体内的分解速率延迟。此外，聚(丙交酯-共-乙交酯)的平均分子量越大，聚合物的链长越长并且分解时间越长。此外，聚(丙交酯-共-乙交酯)的分解速率可能受端基类型、分子结构、结晶度等影响。在本发明的一个实施方式中，注射用药物组合物还可包含溶剂。溶剂的实例包括但不限于水、盐水或磷酸盐缓冲盐水。

如果需要，本发明的可注射药物组合物还可包含其他成分，例如分散剂、润湿剂或悬浮剂。

可以通过根据本发明的注射用药物组合物预防或治疗的示例性疾病包括但不限于选自细胞凋亡相关疾病、炎性疾病、骨关节炎、类风湿性关节炎、退行性关节炎和破坏性骨病的那些疾病。

在本发明的一个实施方式中，根据本发明的注射用药物组合物可用于骨关节炎的预防、治疗或镇痛。

有利效果

在本发明中，通过提供一种使用式1化合物(其为半胱天冬酶抑制剂的前药)的注射用药物组合物，可以大大提高制备聚合物微球时的包封效率，并且药物的释放期可以显著增加。

附图说明

图1是实施例1、4和5中制备的微球的扫描电子显微镜(SEM)照片。

图2是比较例中制备的微球的扫描电子显微镜(SEM)照片。

图3是示出实验例2中的体外溶出试验结果的图。

具体实施方式

在下文中，将通过制备例和实施例更详细地描述本发明。然而，这些实施例仅是说明性的，并且本发明的范围不限于此。

制备例1：乙酸(2S,3S)-2-(氟甲基)-3-((R)-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)-4,5-二氢异

唑-5-甲酰胺基)-5-氧代四氢呋喃-2-基酯

将尼氟卡生((R)-N-((2S,3S)-2-(氟甲基)-2-羟基-5-氧代四氢呋喃-3-基]-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)-4,5-二氢异

唑-5-甲酰胺；5.0g,12.0mmol)溶解在二氯甲烷(50mL)中，然后向其中加入乙酰氯(0.94mL,13.2mmol,1.1当量)、三乙胺(2.52mL,18.0mmol,1.5当量)和4-二甲氨基吡啶(0.15g,1.2mmol,0.1当量)，同时保持温度为5℃或更低。将反应混合物在25℃下搅拌约2小时，并且通过加入10％碳酸氢钠水溶液(25mL)终止反应。加入水(25mL)并搅拌后，分离有机层并减压蒸馏。将所得混合物在乙酸乙酯和己烷的1:5混合物(EtOAc:己烷＝1:5)中重结晶，获得3.0g(产率：54％)的标题化合物。

¹H NMR(400 MHz,CDCl₃)δ9.12(d,1H),8.55(d,1H),7.87(d,1H),7.74-7.69(m,3H),7.08(d,1H),5.22(m,1H),4.69(d,2H),4.03(d,1H),3.83(d,1H),2.97(m,2H),2.38(m,1H),2.18(s,3H),1.05(dd,6H)

制备例2：丙酸(2S,3S)-2-(氟甲基)-3-((R)-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)-4,5-二氢异

唑-5-甲酰胺基)-5-氧代四氢呋喃-2-基酯

将尼氟卡生(1.0g,2.4mmol)溶解在二氯甲烷(20mL)中，然后向其中加入丙酰氯(0.23mL,2.65mmol,1.1当量)、三乙胺(0.5mL,3.61mmol,1.5当量)和4-二甲氨基吡啶(0.03g,0.24mmol,0.1当量)，同时保持温度为5℃或更低。将反应混合物在25℃搅拌约2小时，并通过加入10％碳酸氢钠水溶液(10mL)终止反应。加入水(10mL)并搅拌后，分离有机层并减压蒸馏。通过使用乙酸乙酯和己烷的1:2混合物(EtOAc:己烷＝1:2)对获得的混合物进行柱分离，获得0.25g(产率：23％)的标题化合物。

¹H NMR(400 MHz,CDCl₃)δ9.12(d,1H),8.55(d,1H),7.87(d,1H),7.74-7.69(m,3H),7.08(d,1H),5.22(m,1H),4.69(d,2H),4.03(d,1H),3.83(d,1H),2.98(m,2H),2.45(m,2H),2.37(m,1H),1.20(t,3H),1.05(dd,6H)

制备例3：异丁酸(2R,3S)-2-(氟甲基)-3-((R)-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)-4,5- 二氢异

唑-5-甲酰胺基)-5-氧代四氢呋喃-2-基酯

将尼氟卡生(1.0g,2.4mmol)溶解在二氯甲烷(20mL)中，然后向其中加入异丁酰氯(0.73g,2.65mmol,1.1当量)、三乙胺(0.5mL,3.61mmol,1.5当量)和4-二甲氨基吡啶(0.03g,0.24mmol,0.1当量)，同时保持温度为5℃或更低。将反应混合物在25℃搅拌约2小时，并通过加入10％碳酸氢钠水溶液(10mL)终止反应。加入水(10mL)并搅拌后，分离有机层并减压蒸馏。通过使用乙酸乙酯和己烷的1:2混合物(EtOAc:己烷＝1:2)对获得的混合物进行柱分离，获得0.06g(产率：5％)的标题化合物。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.12(d,1H),8.55(d,1H),7.88(d,1H),7.74-7.69(m,3H),7.09(d,1H),5.25(m,1H),4.69(d,2H),4.03(d,1H),3.83(d,1H),2.95(m,2H),2.63(m,1H),2.38(m,1H),1.26(dd,6H),1.05(dd,6H)

制备例4：新戊酸(2R,3S)-2-(氟甲基)-3-((R)-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)-4,5- 二氢异

唑-5-甲酰胺基)-5-氧代四氢呋喃-2-基酯

将尼氟卡生(0.5g,1.2mmol)溶解在二氯甲烷(20mL)中，然后向其中加入新戊酰氯(0.17g,1.4mmol,1.1当量)和4-二甲氨基吡啶(0.29g,2.4mmol,2.0当量)，同时保持温度为5℃或更低。将反应混合物在25℃搅拌约2小时，并通过加入10％碳酸氢钠水溶液(10mL)终止反应。加入水(10mL)并搅拌后，分离有机层并减压蒸馏。所得混合物在乙酸乙酯和己烷的1:5混合物(EtOAc:己烷＝1:5)中重结晶，获得0.1g(产率：17％)的标题化合物。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.11(d,1H),8.55(d,1H),7.88(d,1H),7.71(m,3H),7.11(d,1H),5.26(m,1H),4.68(d,2H),4.02(d,1H),3.83(d,1H),2.95(m,2H),2.39(m,1H),2.27(s,2H),1.28(s,9H),1.05(dd,6H)

制备例5：3-甲基丁酸(2S,3S)-2-(氟甲基)-3-((R)-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)- 4,5-二氢异

唑-5-甲酰胺基)-5-氧代四氢呋喃-2-基酯

将尼氟卡生(0.5g,1.2mmol)溶解在二氯甲烷(20mL)中，然后向其中加入异戊酰氯(0.17g,1.4mmol,1.1当量)、三乙胺(0.18g,1.8mmol,1.5当量)和4-二甲氨基吡啶(0.015g,0.12mmol,0.1当量)，同时保持温度为5℃或更低。将反应混合物在25℃搅拌约2小时，并通过加入10％碳酸氢钠水溶液(10mL)终止反应。加入水(10mL)并搅拌后，分离有机层并减压蒸馏。所得混合物在乙酸乙酯和己烷的1:5混合物(EtOAc:己烷＝1:5)中重结晶，获得0.13g(产率：17％)的标题化合物。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.11(d,1H),8.52(d,1H),7.86(d,1H),7.71(m,3H),7.11(d,1H),5.23(m,1H),4.71(d,2H),4.04(d,1H),3.83(d,1H),2.95(m,2H),2.35(m,1H),2.28(d,2H),2.15(m,1H),1.05(dd,12H)

制备例6：3,3-二甲基丁酸(2S,3S)-2-(氟甲基)-3-((R)-5-异丙基-3-(异喹啉-1- 基)-4,5-二氢异

唑-5-甲酰胺基)-5-氧代四氢呋喃-2-基酯

将尼氟卡生(0.5g,1.2mmol)溶解在二氯甲烷(20mL)中，然后向其中加入叔丁基乙酰氯(0.19g,1.4mmol,1.1当量)、三乙胺(0.18g,1.8mmol,1.5当量)和4-二甲氨基吡啶(0.015g,0.12mmol,0.1当量)，同时保持温度为5℃或更低。将反应混合物在25℃搅拌约2小时，并通过加入10％碳酸氢钠水溶液(10mL)终止反应。加入水(10mL)并搅拌后，分离有机层并减压蒸馏。所得混合物在乙酸乙酯和己烷的1:5混合物(EtOAc:己烷＝1:5)中重结晶，获得0.14g(产率：23％)的标题化合物。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.12(d,1H),8.55(d,1H),7.88(d,1H),7.71(m,3H),7.13(d,1H),5.23(m,1H),4.71(d,2H),4.04(d,1H),3.83(d,1H),2.95(m,2H),2.35(m,1H),2.27(s,2H),1.05(dd,15H)

制备例7：棕榈酸(2S,3S)-2-(氟甲基)-3-((R)-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)-4,5- 二氢异

唑-5-甲酰胺基)-5-氧代四氢呋喃-2-基酯

将尼氟卡生(1.0g,2.4mmol)溶解在二氯甲烷(20mL)中，然后向其中加入棕榈酰氯(0.73g,2.65mmol,1.1当量)、三乙胺(0.5mL,3.61mmol,1.5当量)和4-二甲氨基吡啶(0.03g,0.24mmol,0.1当量)，同时保持温度为5℃或更低。将反应混合物在25℃搅拌约2小时，并通过加入10％碳酸氢钠水溶液(10mL)终止反应。加入水(10mL)并搅拌后，分离有机层并减压蒸馏。通过使用乙酸乙酯和己烷的1:2混合物(EtOAc:己烷＝1:2)对获得的混合物进行柱分离，获得0.11g(产率：7％)的标题化合物。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.12(d,1H),8.55(d,1H),7.88(d,1H),7.74-7.69(m,3H),7.09(d,1H),5.23(m,1H),4.69(d,2H),4.03(d,1H),3.83(d,1H),2.95(m,2H),2.41(m,2H),2.38(m,1H),1.68(m,2H),1.35-1.24(m,24H),1.05(dd,6H),0.88(t,3H)

制备例8：苯甲酸(2S,3S)-2-(氟甲基)-3-((R)-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)-4,5- 二氢异

唑-5-甲酰胺基)-5-氧代四氢呋喃-2-基酯

将尼氟卡生(0.5g,1.2mmol)溶解在二氯甲烷(20mL)中，然后向其中加入苯甲酰氯(0.17g,1.4mmol,1.1当量)、三乙胺(0.18g,1.8mmol,1.5当量)和4-二甲氨基吡啶(0.15g,1.2mmol,1.0当量)，同时保持温度为5℃或更低。将反应混合物在25℃搅拌约2小时，并通过加入10％碳酸氢钠水溶液(10mL)终止反应。加入水(10mL)并搅拌后，分离有机层并减压蒸馏。所得混合物在乙酸乙酯和己烷的1:5混合物(EtOAc:己烷＝1:5)中重结晶，获得0.14g(产率：22％)的标题化合物。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.13(d,1H),8.55(d,1H),8.03(d,2H),7.85(d,1H),7.70(m,3H),7.63(t,1H),7.48(m,2H),7.09(d,1H),5.23(m,1H),4.81(d,2H),4.03(d,1H),3.74(d,1H),3.08(m,2H),2.20(m,1H),0.97(dd,6H)

制备例9：4-(三氟甲基)苯甲酸(2S,3S)-2-(氟甲基)-3-((R)-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)-4,5-二氢异

唑-5-甲酰胺基)-5-氧代四氢呋喃-2-基酯

将尼氟卡生(0.5g,1.2mmol)溶解在二氯甲烷(20mL)中，然后向其中加入4-三氟甲基苯甲酰氯(0.30g,1.4mmol,1.1当量)和4-二甲氨基吡啶(0.29g,2.4mmol,2.0当量)，同时保持温度为5℃或更低。将反应混合物在25℃搅拌约2小时，并通过加入10％碳酸氢钠水溶液(10mL)终止反应。加入水(10mL)并搅拌后，分离有机层并减压蒸馏。所得混合物在乙酸乙酯和己烷的1:5混合物(EtOAc:己烷＝1:5)中重结晶，获得0.1g(产率：13％)的标题化合物。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.12(d,1H),8.55(d,1H),8.14(d,2H),7.88(d,1H),7.74(m,3H),7.85(m,2H),7.09(d,1H),5.26(m,1H),4.82(d,2H),4.03(d,1H),3.83(d,1H),3.08(m,2H),2.19(m,1H),0.82(dd,6H)

制备例10：2-苯基乙酸(2S,3S)-2-(氟甲基)-3-((R)-5-异丙基-3-(异喹啉-1- 基)-4,5-二氢异

唑-5-甲酰胺基)-5-氧代四氢呋喃-2-基酯

将尼氟卡生(0.5g,1.2mmol)溶解在二氯甲烷(20mL)中，然后向其中加入苯乙酰氯(0.22g,1.4mmol,1.1当量)、三乙胺(0.18g,1.8mmol,1.5当量)和4-二甲氨基吡啶(0.015g,0.12mmol,0.1当量)，同时保持温度为5℃或更低。将反应混合物在25℃搅拌约2小时，并通过加入10％碳酸氢钠水溶液(10mL)终止反应。加入水(10mL)并搅拌后，分离有机层并减压蒸馏。所得混合物在乙酸乙酯和己烷的1:5混合物(EtOAc:己烷＝1:5)中重结晶，获得0.3g(产率：51％)的标题化合物。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.12(d,1H),8.55(d,1H),7.88(d,1H),7.74-7.69(m,3H),7.37(m,2H),7.30(m,3H),7.09(d,1H),5.23(m,1H),4.69(d,2H),4.03(d,1H),3.83(d,1H),3.74(s,2H),2.95(m,2H),2.38(m,1H),1.05(dd,6H)

制备例11-1：(S)-4,4-二乙氧基-5-氟-3-((R)-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)-4,5- 二氢异

唑-5-甲酰胺基)戊酸

(步骤A)(S)-5-氟-3-((R)-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)-4,5-二氢异

唑-5-甲酰胺基)-4-氧代戊酸乙酯

使尼氟卡生(500mg,1.2mmol)与对甲苯磺酸(114mg,0.6mmol)、三乙氧基甲烷(20ml,120mmol)和乙醇(20ml)在回流下反应6天。将反应混合物冷却至室温，向其中加入饱和氯化铵溶液，并用乙酸乙酯萃取。有机层经硫酸钠干燥，浓缩并通过使用MPLC纯化，获得标题化合物(230mg,37％)。

¹H-NMR(CDCl₃)δ9.15(d,1H),8.54(d,1H),7.84(d,1H),7.75～7.64(m,3H),4.75～4.86(m,1H)4.53(dd,1H),4.42(dd,1H),4.02(d,1H)3.97～3.67(m,5H),3.57～3.50(m,3H),2.71(dd,1H),2.52～2.36(m,2H),1.18～0.97(m,15H)

(步骤B)(S)-4,4-二乙氧基-5-氟-3-((R)-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)-4,5-二氢异

唑-5-甲酰胺基)戊酸

向(S)-5-氟-3-((R)-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)-4,5-二氢异

唑-5-甲酰胺基)-4-氧代戊酸乙酯(230mg,0.44mmol)和氢氧化锂(31.9mg,1.33mmol)中加入水(1.12ml)和四氢呋喃(THF,0.28ml)，并且在40℃进行反应3小时。将反应物冷却至室温，减压浓缩，加入1N氢氧化钠，并且水层用甲苯洗涤。然后，加入6N盐酸以调节pH至3，接着使用二氯甲烷萃取。萃取的有机层经硫酸钠干燥并减压过滤，获得标题化合物。所得标题化合物无需进一步纯化即可用于下一步反应。

制备例11-2：(5R)-N-((3S)-2-乙氧基-2-(氟甲基)-5-氧代四氢呋喃-3-基)-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)-4,5-二氢异

唑-5-甲酰胺

在0℃下向(S)-4,4-二乙氧基-5-氟-3-((R)-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)-4,5-二氢异

唑-5-甲酰胺基)戊酸(200mg,0.38mmol)中加入三氟乙酸(0.5ml)和二氯甲烷(5ml)，并在室温下搅拌2小时。搅拌2小时后，减压浓缩反应混合物并通过MPLC获得标题化合物(92mg,54％)。

¹H-NMR(CDCl₃)δ9.11(d,1H),8.56(d,1H),7.86(d,1H),7.75～7.64(m,3H),7.38(d,1H)4.94(q,1H)4.66(s,1H),4.54(s,1H),4.09(d,1H),4.02(d,1H)3.90～3.67(m,3H),2.92(dd,1H),2.59(dd,1H),2.36(p,1H),1.29～1.19(m,4H),1.06(t,6H)

制备例12-1：(S)-5-氟-3-((R)-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)-4,5-二氢异

唑-5- 甲酰胺基)-4,4-二甲氧基戊酸

(步骤A)(S)-5-氟-3-((R)-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)-4,5-二氢异

唑-5-甲酰胺基)-4,4-二甲氧基戊酸甲酯

使尼氟卡生(1g,2.4mmol)与对甲苯磺酸(229mg,1.2mmol)、三乙氧基甲烷(10ml,90mmol)和甲醇(20ml)在回流下反应4天。将反应混合物冷却至室温，向其中加入饱和氯化铵溶液，并用乙酸乙酯萃取。有机层经硫酸钠干燥，浓缩并通过使用MPLC纯化，获得标题化合物(561mg,49％)。

(步骤B)(S)-5-氟-3-((R)-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)-4,5-二氢异

唑-5-甲酰胺基)-4,4-二甲氧基戊酸

向(S)-5-氟-3-((R)-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)-4,5-二氢异

唑-5-甲酰胺基)-4,4-二甲氧基戊酸甲酯(562mg,1.18mmol)和氢氧化锂(134mg,5.59mmol)中加入水(3.42ml)和THF(0.85ml)，并在40℃下进行反应4小时。将反应物冷却至室温，减压浓缩，加入1N氢氧化钠，并且用甲苯洗涤水层。然后，加入6N盐酸以调节pH至3，接着使用二氯甲烷萃取。萃取的有机层经硫酸钠干燥并减压过滤，获得标题化合物。所得标题化合物无需进一步纯化即可用于下一步反应。

制备例12-2：(5R)-N-((3S)-2-(氟甲基)-2-甲氧基-5-氧代四氢呋喃-3-基)-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)-4,5-二氢异

唑-5-甲酰胺

在0℃下向(S)-5-氟-3-((R)-5-异丙基-3-(异喹啉-1-基)-4,5-二氢异

唑-5-甲酰胺基)-4,4-二甲氧基戊酸(441mg,0.9mmol)中加入三氟乙酸(0.5ml)和二氯甲烷(5ml)，并在室温下搅拌2小时。搅拌2小时后，将混合物减压浓缩并通过MPLC获得标题化合物(196mg,51％)。

¹H-NMR(CDCl₃)δ9.12(d,1H),8.56(d,1H),7.86(d,1H),7.75～7.64(m,3H),7.40(d,1H)4.91(q,1H)4.66(dd,1H),4.54(dd,1H),4.08(d,1H),4.80(d,1H),3.35(s,3H),2.90(dd,1H),2.56(dd,1H),2.36(p,1H),1.06(t,6H)

实施例1至6：包封前药的微球的制备

根据下表1中所示的组成，制备了包封有半胱天冬酶抑制剂前药的微球。

将半胱天冬酶抑制剂前药与PLGA(L/G比＝50:50、75:25或85:15，M.W.38,000-240,000)以1:5的重量比称重，加入用量为PLGA的重量或前药和PLGA的重量的10倍的有机溶剂二氯甲烷，并搅拌以制备分散相。

对于连续相，使用150mL或4,800mL的1％或2％的聚乙烯醇(M.W.31,000-50,000，水解度87-89％)，并通过膜乳化制备乳液。

所制备的乳液在室温下搅拌过夜以除去溶剂，用无菌净化水洗涤，然后冻干以获得微球。

[表1]

比较例：包封尼氟卡生的微球的制备

根据下表2中所示的组成，制备包封有尼氟卡生的微球。

将尼氟卡生和PLGA(L/G比＝50:50，M.W.38,000-54,000)按重量比1:5称重，加入用量为PLGA重量10倍的有机溶剂二氯甲烷，并搅拌以制备分散相。

对于连续相，使用150mL的2％聚乙烯醇(M.W.31,000-50,000，水解度87-89％)，并通过膜乳化制备乳液。

[表2]

实验例1：微球性质及药物包封率的分析

实施例和比较例中制备的微球的性质通过制造期间的药物沉淀、冻干微球的形态以及再分散时在水相中的漂浮来表征。

制造期间通过光学显微镜确认药物是否沉淀，并通过扫描电镜观察冻干微球的形态。通过将冻干微球再分散在水中来确认微球在水相中是否漂浮。

对于微球中包封的药物量，将30mg微球溶解在50mL乙腈中，并利用HPLC(高效液相色谱法)分析通过超速离心获得的上清液。通过测量包封率计算包封效率。

-包封率＝(被测药物的重量)/(被测微球的重量(MS))*100(％)

-包封效率＝(被测药物的重量)/(最初加入药物的重量)*100(％)

测量结果汇总并示于表3中。

[表3]

从表3可以看出，包封前药的实施例的微球显示很少的药物沉淀和优异的药物包封效率，而在包封尼氟卡生的比较例的微球中，在制备过程期间沉淀了大量的药物，并且与实施例相比，药物包封效率只有约一半。

实验例2：微球体外溶出试验

对实施例4和5中制备的微球进行体外溶出试验。微球在磷酸盐缓冲盐水(PBS，37℃)中振荡，在特定时间收集洗脱液并过滤，并且通过HPLC分析释放的药物量。由于前药在水溶液中通过水解转化为母体药物半胱天冬酶抑制剂，因此释放的药物量可通过利用HPLC测量的半胱天冬酶抑制剂的量来确定。

Claims

1.一种注射用药物组合物，所述注射用药物组合物包含作为活性成分的下式1的化合物或其药学上可接受的盐或异构体；和生物相容性聚合物：

[式1]

其中

R₁表示烷基、环烷基、芳基或-C(O)R₂；

2.根据权利要求1所述的注射用药物组合物，其中

R₁表示C₁-C₈烷基或-C(O)R₂；并且

R₂表示C₁-C₂₀烷基、C₆-C₁₀芳基或C₆-C₁₀芳基-C₁-C₇烷基。

3.根据权利要求1所述的注射用药物组合物，其中

R₁表示C₁-C₅烷基或-C(O)R₂；

R₂表示C₁-C₁₅烷基、C₆-C₁₀芳基或C₆-C₁₀芳基-C₁-C₅烷基；并且

所述取代基是烷基或卤代烷基。

4.根据权利要求1所述的注射用药物组合物，其中式1的化合物选自：

唑-5-甲酰胺基)-5-氧代四氢呋喃-2-基酯；

唑-5-甲酰胺基)-5-氧代四氢呋喃-2-基酯；

唑-5-甲酰胺基)-5-氧代四氢呋喃-2-基酯；

唑-5-甲酰胺基)-5-氧代四氢呋喃-2-基酯；

唑-5-甲酰胺基)-5-氧代四氢呋喃-2-基酯；

唑-5-甲酰胺基)-5-氧代四氢呋喃-2-基酯；

唑-5-甲酰胺基)-5-氧代四氢呋喃-2-基酯；

唑-5-甲酰胺基)-5-氧代四氢呋喃-2-基酯；

唑-5-甲酰胺基)-5-氧代四氢呋喃-2-基酯；

唑-5-甲酰胺基)-5-氧代四氢呋喃-2-基酯；

唑-5-甲酰胺；和

唑-5-甲酰胺。

5.根据权利要求1所述的注射用药物组合物，其中所述生物相容性聚合物是选自聚丙交酯、聚乙交酯、聚(丙交酯-共-乙交酯)、聚己内酯、聚原酸酯和聚磷嗪中的一种或多种。

6.根据权利要求5所述的注射用药物组合物，其中所述生物相容性聚合物是聚(丙交酯-共-乙交酯)。

7.根据权利要求6所述的注射用药物组合物，其中所述聚(丙交酯-共-乙交酯)的丙交酯与乙交酯的摩尔比为90:10至10:90。

8.根据权利要求7所述的注射用药物组合物，其中所述聚(丙交酯-共-乙交酯)的丙交酯与乙交酯的摩尔比为90:10至40:60。

9.根据权利要求8所述的注射用药物组合物，其中所述聚(丙交酯-共-乙交酯)的丙交酯与乙交酯的摩尔比为85:15至50:50。

10.根据权利要求1所述的注射用药物组合物，所述注射用药物组合物还包含溶剂。

11.根据权利要求10所述的注射用药物组合物，其中所述溶剂是水、盐水或磷酸盐缓冲盐水。

12.根据权利要求1所述的注射用药物组合物，所述注射用药物组合物用于预防或治疗选自细胞凋亡相关疾病、炎性疾病、骨关节炎、类风湿性关节炎、退行性关节炎和破坏性骨病的疾病。

13.根据权利要求12所述的注射用药物组合物，所述注射用药物组合物用于骨关节炎的预防、治疗或镇痛。