KR100863336B1

KR100863336B1 - 신규 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 허혈성 심장질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물

Info

Publication number: KR100863336B1
Application number: KR1020060095840A
Authority: KR
Inventors: 이규양; 이선경; 윤성준; 이병호; 오광석
Original assignee: 한국화학연구원
Priority date: 2006-09-29
Filing date: 2006-09-29
Publication date: 2008-10-15
Also published as: KR20080030146A

Abstract

본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 신규 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 허혈성 심장질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체는 나트륨/수소 교환통로인 NHE-1에 대하여 강력한 억제작용을 나타내고, 적출 허혈심장모델에서 허혈/재관류에 의한 심장기능 손상의 회복을 증진시키며, 생체 내 허혈동물 모델에서 심근경색의 크기를 유의성있게 감소시켜 우수한 심장보호효과를 나타내므로 심근경색, 부정맥, 협심증 등의 허혈성 심장질환의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있으며, 관동맥우회술, 관동맥경피성형술 등 심장시술 시 또는 혈전용해제 등의 재관류요법에 대한 심장보호제 등으로 유용하게 사용될 수 있다.

<화학식 1>

(상기 식에서, R¹, R² 및 X는 본 명세서에서 정의한 바와 같다)

옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체, NHE-1, 허혈성 심장질환, 심장보호제

Description

신규 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 허혈성 심장질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물{Novel oxazol-4-yl-carbonylguanidine derivatives, pharmaceutically acceptable salt thereof, preparation method and a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of ischemic heart diseases containing the same as an active ingredient}

본 발명은 신규 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 허혈성 심장질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.

허혈성 심장질환은 심장으로 공급되는 혈류가 차단됨으로써 심근의 산소 공급량이 요구량에 비해 현저하게 부족하게 되는 현상을 말한다. 이와 같은 허혈성 심장질환은 궁극적으로 비가역적인 심근의 손상, 즉 세포 및 조직의 괴사로 이어지게 된다. 손상의 정도가 가역적인 초기에는 관동맥경피성형술 및 관동맥우회술 등 의 수술요법이나 혈전용해제 등을 이용하는 약물요법과 같은 재관류요법에 의해 비가역적 손상을 막을 수 있으나, 이러한 재관류요법 후에도 심근 경색의 재발, 심장 기능 저하, 부정맥, 신경인지능력 저하 등 재관류 손상이 높은 비율로 나타나는 것으로 알려져 있다[Robert, M. (2003) Ann. Thorac. Surg. 75: S700-708]. 이러한 허혈/재관류 시의 심근 세포 손상과 심기능 저하에 의해 발생하는 심근 경색, 부정맥, 심부전증 등의 허혈성 심장 질환은 유병률 및 사망률이 높고 완치가 어려워 지난 50년 동안 집중적인 기초 연구 및 임상 연구가 진행되어 왔다[Wang, QD. et al., (2002) Cardiovasc. Res. 55: 25-37].

허혈성 심장질환의 원인인 상기 허혈/재관류 손상은 대사, 면역반응 및 이온항상성의 변화, 산소유리기 등 다양한 생리학적 기전이 관여된다. 따라서, 이를 예방 및 치료하기 위한 시도로써 면역조절 물질, 세포사멸 관련물질, 이온통로 조절물질 등 다양한 분야에서 연구가 이루어지고 있다[Hearse, DJ. (1998) Prog.Cariovasc. Dis. 30: 381-402]. 이러한 종래의 기전연구와 함께 새로운 작용점에 의한 치료제의 개발 및 외과적 시술의 개발 등이 활발히 이루어졌으나 허혈/재관류로부터 심근세포를 보호할 수 있는 기술은 아직 상용화될 수 있을 만큼의 임상적 성공을 거두지는 못하였다. 따라서, 허혈에 의한 심근세포 손상의 진행을 늦추고 재관류 손상을 완화시킬 수 있는 허혈성 심장 질환의 예방 및 치료제, 또는 심장 보호제의 개발이 요구되고 있다.

한편, NHE(sodium-hydrogen exchanger)는 다양한 세포종에서 발현되는 이온통로로, 세포내의 수소이온 한개를 밖으로 내보내고 Na⁺ 한개를 세포내로 들여옴으로써 정전기적으로는 중성이며 세포내 pH 조절에 중요한 역할을 하는 막 단백질이다. 현재까지 7개의 아형이 확인되었으며 심근세포의 주아형이며 세포내 pH, 나트륨이온농도 및 세포크기를 유지하는데 중요한 역할을 하는 NHE-1은 허혈-재관류 손상에 주요 역할을 하는 것으로 알려져 있다[Avkiran, M. et. al., (2002) J. Am. Coll. Cardiol . 39: 747-753].

구체적으로 상기 NHE-1은 정상적인 생리적 pH(=7.2)에서는 반응하지 않으나 산소가 부족한 허혈 상태에서는 에너지생성을 해당작용(glycolysis)에 의존함으로써 세포 내 수소이온 농도가 증가하여 산성화(pH=6.4)되기 때문에 그 결과, NHE-1은 수소이온을 감지하여 활성화되어 수소이온을 내보내고 나트륨이온을 세포내로 들여오므로 세포내의 나트륨이온의 농도가 증가하게 된다. 허혈시에는 ATP에너지 생성의 감소로 Na⁺/K⁺ ATPase가 억제되므로 나트륨 펌프에 의해 세포내에 축적된 나트륨이온을 내보낼 수 없게 된다. 따라서 정상상태에서는 칼슘을 내보내고 나트륨을 들여오는 나트륨/칼슘 통로인 NCX(Na⁺/Ca⁺⁺ exchanger)가 높아진 나트륨 농도를 조절하기 위해 역방향으로 작동하여 나트륨이온을 내보내고 칼슘이온을 들여와 세포내 칼슘이온의 농도가 높아지게 된다. 세포 내 칼슘이온농도의 증가는 프로테아제, 포스포리파제, 엔도누클레아제 등의 효소를 활성화시켜 각종 단백질 분해, 지방대사장애에 의한 활성산소 유리기의 증가, DNA변형 등을 일으켜 세포손상을 일으 킨다.

따라서, NHE-1의 억제로 세포 내 나트륨이온농도의 증가를 막음으로써 NCX의 역방향 작동을 억제할 수 있고, 세포 내 칼슘이온농도의 증가를 억제하여 허혈/재관류에 의한 세포손상을 보호할 수 있다. 증가된 수소이온은 다른 이온통로에 의해 조절됨으로써 NHE-1의 억제에 의한 세포 내 산성화는 일어나지 않는 것으로 보고되었다.

NHE-1 저해제에 의해 세포 내 나트륨이온농도 저하가 감소되고 칼슘의 과부하가 억제됨으로서 심기능저하 및 세포괴사와 같은 허혈/재관류에 의한 손상이 보호된다는 연구결과가 동물실험에서 확인되어 상기 허혈/재관류 손상에 대한 보호제로서 NHE-1 저해제 연구가 진행 중에 있다[Avkiran, M.; Marber, M. S. (2002) J. Am. Coll. Cardiol . 39, 747]. NHE 저해제로 처음으로 알려진 약물은 이뇨제인 피라진 유도체 아밀로라이드(amiloride)이다[Benos, DJ. (1982) A. J. Physiol . 242: C131]. 상기 아밀로라이드는 NHE-1에 대한 억제작용이 있으며 랫트 적출심장 실험에서 허혈/재관류 후에 심기능의 회복을 증진시키는 것이 확인되었으나, NHE-1 이외에도 NHE-2 및 소듐채널을 억제하는 등 선택성이 부족하여 심장보호제로서는 문제가 있었다.

따라서, NHE-1에 대해 선택성이 있는 약물개발 연구가 진행되었으며 훽스트 마리온 러셀(Hoechst Marion Roussel; 현재 Aventis)에 의하여 NHE-1에 대해 높은 선택성을 갖는 벤조일구아니딘 유도체 카리포라이드(cariporide; HOE-694)[Scholz, W. et. al., (1993) Br. J. Pharmacol . 109: 562]가 개발되었다. 상기 카리포라이드는 동물모델에서 우수한 심장보호효과를 나타내었다. 현재까지 알려진 거의 대부분의 NHE-1 억제제들은 아실구아니딘으로서 조니포라이드(zoniporide), 사비포라이드, EMD-7580 등 다수의 약물들이 선택적 NHE-1 억제제로 임상개발 중에 있다.

이에 본 발명자들은 NHE-1에 대해 선택적으로 억제하여 허혈에 의한 심근세포 손상의 진행을 늦추고, 재관류 손상을 완화시킬 수 있으며, 높은 안정성 및 우수한 효과를 갖는 약물을 개발하기 위한 연구를 수행하던 중, 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체를 합성하게 되었고, 이들 화합물이 선택적으로 NHE-1 억제 효과를 나타내고, 허혈/재관류에 의한 심장기능 손상의 회복을 증진시키며, 심근경색의 크기를 유의성있게 감소시켜 우수한 심장보호효과가 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 NHE-1에 대한 선택적 억제 효과가 우수한 신규 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체를 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적은 상기 신규 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체를 제조하는 방법을 제공하는 데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 신규 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 하는 허혈성 심장질환 예방 및 치 료용 약학적 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 신규 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 하는, 수술요법 또는 약물요법 시술시에 심장보호 용도로 사용되는 약학적 조성물을 제공하는 데 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체를 제공한다.

상기 화학식 1에서, R¹ 및 R²는 각각 독립적으로 수소, 할로겐 원자, C₁ _~C₅의 직쇄 또는 측쇄 알킬기, 할로겐으로 치환된 C₁ _~C₅의 직쇄 또는 측쇄 알킬기, 니트로기, 아미노기, 메틸설포닐기, 또는 알콕시기(OR³) 이며, 이 경우, R³는 수소, 트리플루오로메틸, C₁ _~C₅의 직쇄 또는 측쇄 알킬기, 또는 페닐기이고,

X는 수소, C₁ _~C₅의 직쇄 또는 측쇄 알킬기이다.

바람직하게는 R¹ 및 R²는 각각 독립적으로 수소, 불소, 염소 또는 메톡시기이고,

X는 수소 또는 메틸기이다.

본 발명의 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체 중 바람직한 화합물은 구체적으로 하기와 같다.

1) (2-페닐옥사졸-4-일카르보닐)구아니딘

2) [2-(2-메틸페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

3) [2-(3-메틸페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

4) [2-(4-메틸페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

5) [2-(2,3-다이메틸페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

6) [2-(2,5-다이메틸페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

7) [2-(3,5-다이메틸페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘 메탄설포네이트,

8) [2-(2-메톡시페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

9) [2-(2,3-다이메톡시페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

10) [2-(2,5-다이메톡시페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

11) [2-(2-플루오로페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

12) [2-(3-플루오로페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

13) [2-(4-플루오로페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

14) [2-(2,3-다이플루오로페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

15) [2-(2,5-다이플루오로페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

16) [2-(3,5-다이플루오로페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

17) [2-(2-클로로페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

18) [2-(3-클로로페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

19) [2-(4-클로로페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

20) [2-(2,3-다이클로로페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

21) [2-(2,5-다이클로로페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

22) [2-(3,5-다이클로로페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

23) [2-(2-메톡시-5-플루오로페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

24) [2-(2-메톡시-5-클로로페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

25) [2-(2-메틸-5-플루오로페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

26) (2-페닐-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

27) [2-(2-메틸페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

28) [2-(3-메틸페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

29) [2-(4-메틸페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

30) [2-(2,3-다이메틸페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

31) [2-(2,5-다이메틸페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

32) [2-(3,5-다이메틸페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

33) [2-(3-메톡시페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

34) [2-(4-메톡시페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

35) [2-(2,3-다이메톡시페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘 메탄설포네이트,

36) [2-(2-플루오로페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

37) [2-(3-플루오로페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

38) [2-(4-플루오로페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

39) [2-(2,3-다이플루오로페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘 메탄설포네이트,

40) [2-(2,5-다이플루오로페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

41) [2-(3,5-다이플루오로페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

42) [2-(2-클로로페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

43) [2-(3-클로로페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

44) [2-(4-클로로페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

45) [2-(2,3-다이클로로페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

46) [2-(2,5-다이클로로페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

47) [2-(3,5-다이클로로페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

48) [2-(2-메톡시-5-플루오로페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘,

49) [2-(2-메톡시-5-클로로페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘.

하기 표에는 본 발명에 따른 화학식 1의 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체 의 구조를 정리하여 나타내었다.

화합물	구조	화합물	구조
1		2
3		4
5		6
7		8
9		10
11		12
13		14
15		16
17		18
19		20
21		22
23		24
25		26
27		28
29		30
31		32
33		34
35		36
37		38
39		40
41		42
43		44
45		46
47		48
49

상기 화학식 1로 표시되는 본 발명의 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체는 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산부가염이 유용하다. 유리산으로는 무기산과 유기산을 사용할 수 있으며, 무기산으로는 염산, 브롬산, 황산, 인산 등을 사용할 수 있고, 유기산으로는 구연산, 초산, 젖산, 말레산, 푸마린산, 글루콘산, 메탄설폰산, 아세트산, 글리콘산, 숙신산, 타타르산, 4-톨루엔술폰산, 갈룩투론산, 엠본산, 글루탐산 또는 아스파르트산 등을 사용할 수 있다. 바람직하게는 무기산으로는 염산, 유기산으로는 메탄설폰산을 사용할 수 있다.

또한, 본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체는 약학적으로 허용되는 염뿐만 아니라, 통상의 방법에 의해 제조될 수 있는 모든 염, 수화물 및 용매화물을 모두 포함한다.

본 발명에 따른 부가염은 통상의 방법으로 제조할 수 있으며, 예를 들면 화학식 1의 화합물을 수혼화성 유기용매, 예를 들면 아세톤, 메탄올, 에탄올, 또는 아세토니트릴 등에 녹이고 과량의 유기산을 가하거나 무기산의 산 수용액을 가한 후 침전시키거나 결정화시켜서 제조할 수 있다. 이어서 이 혼합물에서 용매나 과량의 산을 증발시킨 후 건조시켜서 부가염을 얻거나 또는 석출된 염을 흡인 여과시켜 제조할 수 있다.

또한, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 신규 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체를 제조하는 방법을 제공한다.

이하, 이를 구체적으로 설명한다.

제법 1

본 발명에 따른 화학식 1의 유도체의 제조방법은 하기 반응식 1로 표시되는 바와 같이, 카복실산 유도체(2)와 정량 또는 과량의 구아니딘을 반응시키거나, 염기 존재하에서 카복실산 유도체(2)와 당량의 구아니딘을 반응시키는 단계를 포함하여 이루어진다.

(상기 반응식 1에서, R¹, R² 및 X는 화학식 1에서 정의한 바와 같고, L은 구아니딘에 의해 용이하게 이탈될 수 있는 이탈기이다)

본 발명에 따른 제법 1에 있어서, 출발물질로 사용되는 화학식 2의 카복실산 유도체로는 에스터(ester), 아실 할라이드(acyl halide), 카복실산 무수물(acid anhydride) 유도체 등을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 에스터 유도체를 사용할 수 있다.

상기 카복실산 유도체(2)는 쉽게 이탈될 수 있는 이탈기(L)를 가지고 있기 때문에, 구아니딘과의 반응시 용이하게 치환될 수 있다. 이러한 이탈기(L)로는 할라이드, 히드록시기, 메실레이트(mesylate)기, 토실레이트(tosylate)기 등이 있다. 본 명세서에서 상기 이탈기(leaving group)란 상대적으로 안정된 약염기성 분자나 이온을 의미하며, 안정할수록 더 잘 이탈된다. 안정성은 그 화학종의 염기도와 관련이 있으며, 안정할수록 약염기가 된다.

또한, 상기 에스터 유도체로는 메틸 에스터, 에틸 에스터 등의 일반적인 알킬 에스터; p-나이트로페닐 에스터, N-하이드록시석신이미드 에스터, 펜타플루오로페닐 에스터 등의 활성 에스터(active ester) 유도체 등을 사용할 수 있다. 이러한 카복실산 유도체들은 통상적인 공지의 방법으로 카복실산으로부터 쉽게 제조될 수 있다.

본 발명에 따른 상기 반응식 1의 제조방법에 있어서, 상기 카복실산 유도체(2)는 사용되는 유도체의 종류에 따라 정량 또는 과량의 구아니딘과 반응시키거나, 적절한 염기하에서 당량의 구아니딘과 반응시킬 수 있다.

1) 상기 카복실산 유도체(2)가 알킬 에스터나 활성 에스터인 경우, 적절한 용매를 사용하여 정량 또는 과량의 구아니딘과 반응하여 화학식 1의 화합물을 제조할 수 있다.

이때, 반응용매는 메탄올, 에탄올, 아이소프로판올과 같은 알콜계 용매, 테트라하이드로퓨란, 다이옥산, 1,2-다이메톡시에탄과 같은 에테르(ether)계 용매, 다이메틸포름아마이드(DMF) 또는 이들의 혼합용매를 사용할 수 있다. 반응은 상온에서 용매의 비등점의 온도 범위 내에서 수행될 수 있다.

2) 상기 카복실산 유도체(2)가 아실할라이드나 산 무수물인 경우, 적절한 용매에서 과량의 구아니딘과 반응시키거나 염기 존재하에 구아니딘과 반응하여 화학식 1의 화합물을 제조할 수 있다. 이때, 사용 가능한 염기로는 수산화나트륨, 수산화칼륨, 소듐카보네이트 등의 무기염기 또는 트리에틸아민, 피리딘 등의 유기염기를 사용할 수 있으며, 반응용매는 벤젠, 톨루엔 등의 방향족 하이드로카본 용매, 테트라하이드로퓨란 등의 에테르계 용매, 다이클로로메탄, 클로로포름 등의 할로겐화 하이드로카본 용매 또는 다이메틸포름아마이드 등을 사용하거나 이들의 혼합용매를 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 상기 반응식 1의 제조방법에 있어서, 적절한 염기의 사용없이 과량의 구아니딘을 카복실산 유도체(2)와 반응시키는 경우, 상기 구아니딘의 당량은 상기 카복실산 유도체(2)에 대하여 1 ~ 10 당량인 것이 바람직하다.

또한 본 발명에 따른 상기 제법 1은, 상기 카복실산 유도체(2)의 치환기 R¹, R², 및 X는 반응에 영향을 받는 치환기가 있어서 보호기로 보호할 필요가 있는 경우, 반응 전에 적당한 보호기로 보호하여 반응을 수행한 후 상기 보호기를 제거하는 단계를 더 포함할 수 있다.

제법 2

또한, 본 발명에 따른 화학식 1의 유도체의 제조방법은 하기 반응식 2로 표시되는 바와 같이, 카복실산 화합물(3)을 축합제(condensing agent) 존재하에 구아니딘과 반응하는 단계를 포함하여 이루어진다.

(상기 식에서, R¹, R² 및 X는 화학식 1에서 정의한 바와 같다)

본 발명에 따른 제법 2에 있어서, 상기 카복실산 화합물(3)을 적절한 반응용매에서 축합제 존재하에 당량 또는 과량의 구아니딘과 반응하여 화합물(1)을 제조한다. 이때, 반응은 상온에서 용매의 비등점의 온도 범위 내에서 수행될 수 있다.

상기 축합제로는 N,N-카르보닐다이이미다졸(N,N-carbonyldiimidazole), 다이 사이클로헥실카르보다이이미드(dicyclohexylcarbodiimide), 다이아이소프로필카르보다이이미드(diisopropylcarbodiimide), 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카르보다이이미드(1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide), 다이페닐포스포닐아자이드(diphenylphosphonylazide) 등을 사용하는 것이 바람직하다.

상기 용매로는 테트라하이드로퓨란, 1,4-다이옥산 등의 에테르계 용매, 벤젠, 톨루엔 등의 방향족 하이드로카본 용매, 다이클로로메탄, 클로로포름 등의 할로겐화 하이드로카본 용매, 다이메틸포름아미드(DMF) 또는 이들의 혼합용매를 사용하는 것이 바람직하다.

또한, 본 발명에 따른 상기 제법 2는 상기 카복실산 유도체(3)의 치환기 R¹, R², 및 X는 반응에 영향을 받는 치환기가 있어서 보호기로 보호할 필요가 있는 경우, 반응 전에 적당한 보호기로 보호하여 반응을 수행한 후 상기 보호기를 제거하는 단계를 더 포함할 수 있다.

이하에서는 상기 제법 1 또는 제법 2의 출발물질인 화학식 2 또는 화학식 3의 카복실산 유도체를 제조하는 방법을 설명한다.

출발물질의 제조 1 : 카복실산 유도체(2)의 제조

상기 제법 1에서 사용한 카복실산 유도체가 하기 반응식 3의 에틸 에스터 화 합물(L = OC₂H₅)인 경우(2a), 염기 및 촉매 존재하에 페닐보론산 화합물(4)과 5-할로옥사졸 유도체(5)를 스즈키형(Suzuki-type) 커플링 반응을 시켜서 제조할 수 있다.

(상기 식에서, R¹ 및 R²는 화학식 1에서 정의한 바와 같고, Y는 B(OH)₂, BCl₂, BBr₂,

이고, Z는 할로겐이다)

상기 화학식 4의 페닐보론산은 상업적으로 시판되는 화합물을 사용하거나, 페닐할라이드로부터 공지의 방법으로 제조하여 사용할 수 있다.

상기 촉매로는 팔라듐, 니켈, 플래티늄 착체 등의 금속촉매를 사용할 수 있으며, 이들 중 팔라듐 촉매를 사용하는 것이 더욱 바람직하다. 상기 팔라듐 촉매로는 Pd(PPh₃)₄, Pd-C, PdCl₂(PPh₃)₂, Pd₂(dba)₃, PdCl₂(dppf), [PdCl(allyl)]₂, Pd(OAc)₂ 또는 PdCl₂ 등을 사용할 수 있다.

상기 반응식 3의 반응에서 반응을 촉진하고 수율을 높이기 위하여 PPh₃, P- (o-tolyl)₃, PBu₃ 등의 포스핀 화합물을 부가물로 사용하거나, 염화리튬, 브롬화리튬, 요오드화리튬 등의 염을 부가물로 사용할 수 있다.

상기 염기로는 트라이에틸아민, 이소프로필에틸아민과 같은 삼차아민 유기염기, 탄산나트륨, 탄산칼륨, 수산화칼륨, 수산화나트륨, 탄산세슘, 수산화바륨 등과 같은 무기염기를 사용할 수 있으며, 1 내지 3 당량 사용하는 것이 바람직하다. 무기염기가 유기 용매에 용해되지 않을 때는 무기염기를 물에 용해시켜서 가할 수 있는데 이때 무기 염기가 0.5 내지 4 M 정도의 농도가 되도록 하여 사용하는 것이 바람직하다.

상기 반응 3의 스즈키 반응의 용매로는 테트라하이드로퓨란, 다이옥산, 1,2-다이메톡시에탄과 같은 에터계 용매, 벤젠, 톨루엔, 자일렌과 같은 방향족 탄화수소 화합물계 용매, 메탄올, 에탄올과 같은 알코올계 용매, 다이메틸포름아미드(DMF), 아세토나이트릴, 에틸 아세테이트 등을 단독으로 사용하거나 혼합하여 사용할 수 있다. 이때, 반응은 상온에서 용매의 비등점까지의 온도 범위내에서 수행될 수 있다.

또한, 상기 반응식 3의 2-할로옥사졸 유도체(5)는 하기 반응식 4에 나타낸 바와 같이, 2-아미노옥사졸 유도체(7)로부터 제조할 수 있다.

(상기 식에서, X 및 Z는 상기 반응식 3에서 정의한 바와 같다.)

상기 반응식 4의 출발물질인 2-케토-3-브로모카복실산 에스터 유도체(6)는 상업적으로 시판되는 화합물을 사용하거나, 2-케토카복실산 에스터 유도체(8)로부터 공지의 α-브롬화반응에 의해 제조하여 사용할 수 있다.

(X는 상기 반응식 3에서 정의한 바와 같다.)

상기 브롬화반응에서는 화학식 8과 함께 반응물로 Br₂, CuBr₂, NBS 등을 사용할 수 있으며, 용매로는 메틸렌클로라이드, 클로포름, 사염화탄소같은 할로겐화 하이드로카본용매, 테트라하이드로퓨란, 1,4-다이오산 등의 에테르용매 또는 에틸아세테이트, 아세토니트릴 등이 사용될 수 있다. 이때, 상기 반응은 0 ℃에서 용매의 비등점까지의 온도 범위 내에서 수행될 수 있다.

상기 2-아미노옥사졸 유도체(7)는 2-케토-3-브로모카복실산 에스터 화합물(6)과 우레아의 축합반응에 의해 제조된다. 이때, 반응용매로는 메탄올, 에탄올, 또는 이소프로판올같은 알코올계 용매나 DMF 등을 사용할 수 있으며, 반응온도는 실온에서 용매의 비등점의 범위 내에서 수행될 수 있다.

상기 2-할로옥사졸 유도체(5)는 1 ~ 3 당량의 t-부틸나이트라이트와 커퍼(Ⅱ) 할라이드를 사용하여 2-아미노옥사졸 유도체(7)로부터 제조할 수 있다. 이때 사용되는 용매는 주로 아세토니트릴을 사용하며, 반응은 0 ℃에서 용매의 비등점의 온도범위 내에서 수행될 수 있다.

출발물질의 제조 2 : 카복실산 유도체(3)의 제조

상기 제법 2의 출발물질인 카복실산 유도체(3)는 상기 반응식 3에서 제조한 에스터 유도체(2a)를 염기를 사용하여 통상의 방법에 의해 가수분해하여 제조할 수 있다.

상기 제법 1의 출발물질(2)이 에틸 에스터 유도체 이외의 다른 유도체인 경우에는 상기 반응식 3과 같은 방법으로 제조하거나 상기 카복실산 유도체(3)로부터 통상의 방법에 의하여 제조할 수 있다.

상기와 같이 본 발명에 따라 제조된 신규 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체 들은 제조 후, 적외선 분광법, 핵자기 공명 스펙트럼, 질량 분광법, 액체 크로마토그래피법, X-선 구조결정법, 선광도 측정법 및 대표적인 화합물의 원소분석 계산치와 실측치의 비교에 의해 분자구조를 확인할 수 있다.

또한, 본 발명은 상기 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체 및 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 하는 허혈성 심장질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물, 또는 관동맥우회술, 관동맥경피성형술 등 심장시술 시 또는 혈전용해제 등 재관류요법에 대한 심장보호제를 제공한다.

본 발명의 유도체 및 이의 약학적으로 허용가능함 염은 사람 NHE-1을 발현시킨 세포에서 NHE-1에 대하여 강력한 억제효과를 나타내고(실험예 1 및 표 2 참조), 흰쥐의 적출 심장을 이용한 랑겐돌프의 허혈심장 모델에서도 재관류후 심장 기능(좌심실 발생압, LVDP)의 회복을 증진시켜 허혈/재관류에 대해 우수한 심장보호작용을 나타내며(실험예 2 및 표 3 참조), 마취된 흰쥐를 이용한 허혈심근 모델에서 심근경색의 크기를 유의적으로 감소시켜 우수한 항허혈 작용을 나타낸다(실험예 3 및 표 4 참조). 따라서, 본 발명의 화합물들은 NHE-1에 대한 강력한 억제효과, 생체 외(in vitro) 및 생체 내(in vivo) 모델에서 허혈/재관류에 대해 우수한 심장보호작용을 나타내므로, 심근경색, 심부전증, 협심증 등 허혈성 심장질환의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있으며, 관동맥우회술, 관동맥경피성형술 등 심장시술 시 또는 혈전용해제 등 재관류요법에 대한 심장보호제로 사용될 수 있다.

본 발명의 화합물은 임상 투여시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있으며, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조된다.

경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환자, 산제, 과립제, 캡슐제, 트로키제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 본 발명의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose) 또는 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제, 동결건조제제, 좌제 등이 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다.

또한, 본 발명의 화합물의 인체에 대한 투여량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 몸무게가 70 ㎏인 성인 환자를 기준으로 할 때, 일반적으로 0.1 ~ 1,000 ㎎/일이며, 바람직하게는 1 ~ 500 ㎎/일이며, 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정시간 간격으로 1일 1회 내지 수회로 분할 투여할 수도 있다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예 및 실험예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예 및 실험예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

< 제조예 1> 2- 아미노옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

에틸 브로모피루베이트(5 g, 25.6 mmol)와 우레아(4.6 g, 76.9 mmol)를 에탄올(150 ㎖)에 녹인 후 16시간 동안 가열 환류시켰다. 감압 하에서 에탄올을 제거하고 물을 가한 후, 수산화나트륨 수용액으로 염기성화하여 에틸아세테이트로 3번 추출하였다. 유기층을 황산마그네슘으로 건조시키고 여과하여 감압하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그라피(헥산:에틸 아세테이트 = 1:1)로 정제하여 흰색 고체의 목적화합물(2.8 g, 17.9 mmol, 70%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.36(t, 3H, J = 6.2 Hz), 4.35(q, 2H, J = 6.2 Hz), 7.74(s, 1H); MS 128(M⁺).

< 제조예 2> 2- 클로로옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

t-부틸나이트라이트(1.3 ㎖, 9.61 mmol)와 염화코발트(Ⅱ)(1.3 g, 9.61 mmol)를 아세토니트릴(20 ㎖)에 녹여 60 ℃로 가온한 후, 제조예 1에서 만든 화합물(1g, 6.41 mmol)을 아세토니트릴에 녹여서 가하고 80 ℃에서 16시간 동안 교반하여 반응시켰다. 이후, 반응용액을 냉각시킨 후 1 N의 염산을 넣고 메틸렌클로라이드로 3번 추출하여 소금물로 세척하였다. 세척 후, 황산마그네슘으로 건조시킨 후 여과하여 감압하에서 농축시키고, 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그라피(헥산:다이에틸에테르 = 3:1)로 정제하여 흰색 고체의 목적화합물(850 mg, 4.84 mmol, 76%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.38(t, 3H, J = 7.2 Hz), 4.40(q, 2H, J = 7.2 Hz), 8.19(s, 1H); MS 175(M⁺).

< 제조예 3> 2- 페닐옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

상기 제조예 2에서 얻은 화합물(200 mg, 1.14 mmol)을 톨루엔(10 ㎖)에 녹이고, 페닐 보론산(208 mg, 1.71 mmol), 2 M의 탄산칼륨 수용액(1.14 ㎖, 2.28 mmol), 촉매량의 Pd(PPh₃)₄(105 mg, 8 mmol%)를 가하여 2시간 동안 가열 환류시켰다. 반응이 완결된 후, 물을 넣고 에틸 아세테이트로 2번 추출하여 소금물로 세척하였다. 세척후 황산 마그네슘으로 건조시킨 후 여과하여 감압하에서 농축시키고 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그라피(헥산:에틸 아세테이트 = 9:1)로 정제하여 흰색 고체의 목적화합물(235 mg, 1.08 mmol, 95%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.41(t, 3H, J = 7.1 Hz), 4.43(q, 2H, J = 7.1 Hz), 7.43-7.49(m, 3H), 8.10-8.13(m, 2H), 8.27(s, 1H); MS 217(M⁺).

< 제조예 4> 2-(2- 메틸페닐 ) 옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 2-메틸페닐 보론산을 사용하여 제조예 3과 같은 방법으로 수행하여 오일형태의 목적화합물(183 mg, 70%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.40(t, 3H, J = 7.1 Hz), 2.69(s, 3H), 4.41(q, 2H, J = 7.1 Hz), 7.31(m, 2H), 7.37(dd, 1H, J = 5.8, 8.2 Hz), 8.02(d, 1H, J = 1.8, 7.4 Hz), 8.29(s, 1H); MS 231(M⁺).

< 제조예 5> 2-(3- 메틸페닐 ) 옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 3-메틸페닐 보론산을 사용하여 제조예 3과 같은 방법으로 수행하여 오일형태의 목적화합물(252 mg, 96%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.41(t, 3H, J = 7.1 Hz), 2.41(s, 3H), 4.43(q, 2H, J = 7.1 Hz), 7.38-7.28(m, 2H), 7.89(d, 1H, J = 1.2 Hz), 7.97(d, 1H, J = 7.5 Hz), 8.26(s, 1H); MS 231(M⁺).

< 제조예 6> 2-(4- 메틸페닐 ) 옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 4-메틸페닐 보론산을 사용하여 제조예 3과 같은 방법으로 수행하여 오일형태의 목적화합물(200 mg, 76%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.40(t, 3H, J = 7.1 Hz), 2.41(s, 3H), 4.43(q, 2H, J = 7.1 Hz), 7.27(d, 2H, J = 8.2 Hz), 8.00(d, 2H, J = 8.2 Hz), 8.24(s, 1H); MS 231(M⁺).

< 제조예 7> 2-(2,3- 다이메틸페닐 ) 옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 2,3-다이메틸페닐 보론산을 사용하여 제조예 3과 같은 방법으로 수행하여 오일형태의 목적화합물(260 mg, 92%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.40(t, 3H, J = 7.2 Hz), 2.35(s, 3H), 2.55(s, 3H), 4.42(q, 2H, J = 7.2 Hz), 7.18(dd, 1H, J = 7.5, 7.5 Hz), 7.27(dd, 1H, J = 1.7, 7.5 Hz), 7.72(dd, 1H, J = 1.7, 7.5 Hz), 8.29(s, 1H); MS 247(M⁺).

< 제조예 8> 2-(2,5- 다이메틸페닐 ) 옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 2,5-다이메틸페닐 보론산을 사용하여 제조예 3과 같은 방법으로 수행하여 오일형태의 목적화합물(241 mg, 86%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.40(t, 3H, J = 7.1 Hz), 2.36(s, 3H), 2.63(s, 3H), 4.42(q, 2H, J = 7.1 Hz), 7.17(m, 2H), 7.85(s, 1H), 8.29(s, 1H); MS 245(M⁺).

< 제조예 9> 2-(3,5- 다이메틸페닐 ) 옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 3,5-다이메틸페닐 보론산을 사용하여 제조예 3과 같은 방법으로 수행하여 오일형태의 목적화합물(150 mg, 54%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃)δ 1.36(t, 3H, J = 7.2 Hz), 2.26(s, 3H), 2.32(s, 3H), 4.35(q, 2H, J = 7.2 Hz), 6.92(s, 2H), 7.89(s, 1H), 8.26(s, 1H); MS 245(M⁺).

< 제조예 10> 2-(2- 메톡시페닐 ) 옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 2-메톡시페닐 보론산을 사용하여 제조예 3과 같은 방법으로 수행하여 오일형태의 목적화합물(240 mg, 85%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.40(t, 3H, J = 7.2 Hz), 3.95(s, 3H), 4.42(q, 2H, J = 7.2 Hz), 7.03(m, 2H), 7.46(ddd, 1H, J = 1.5, 7.5, 7.8 Hz), 8.01(dd, 1H, J = 1.5, 7.5 Hz), 8.30(s, 1H); MS 247(M⁺).

< 제조예 11> 2-(2,3- 다이메톡시페닐 ) 옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 2,3-다이메톡시페닐 보론산을 사용하여 제조예 3과 같은 방법으로 수행하여 오일형태의 목적화합물(293 mg, 93%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.40(t, 3H, J = 7.2 Hz), 3.91(s, 3H), 3.93(s, 3H), 4.42(q, 2H, J = 7.2 Hz), 7.05(dd, 1H, J = 1.5, 8.1 Hz), 7.12(dd, 1H, J = 8.1, 8.1 Hz), 7.61(dd, 1H, J = 1.5, 8.1 Hz), 8.33(s, 1H); MS 277(M⁺).

< 제조예 12> 2-(2,5- 다이메톡시페닐 ) 옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 2,5-다이메톡시페닐 보론산을 사용하여 제조예 3과 같은 방법으로 수행하여 오일형태의 목적화합물(234 mg, 74%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.40(t, 3H, J = 7.2 HZ), 3.83(s, 3H), 3.90(s, 3H), 4.42(q, 2H, J = 7.2 HZ), 7.00(m, 2H), 7.55(d, 1H), 8.30(s, 1H); MS 277(M⁺).

< 제조예 13> 2-(2- 플루오로페닐 ) 옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 2-플루오로페닐 보론산을 사용하여 제조예 3과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(230 mg, 86%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.41(t, 3H, J = 7.2 Hz), 4.43(q, 2H, J = 7.2 Hz), 7.18～7.24(m, 2H), 7.48(m, 1H), 8.14(ddd, 1H, J = 1.8, 7.5, 7.5 Hz), 8.33(s, 1H), ; MS 235(M⁺).

< 제조예 14> 2-(3- 플루오로페닐 ) 옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 3-플루오로페닐 보론산을 사용하여 제조예 3과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(233 mg, 87%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.41(t, 3H, J = 7.2 Hz), 4.43(q, 2H, J = 7.2 Hz), 7.19(ddd, 1H, J = 2.7, 7.8, 7.8 Hz), 7.42-7.49(m, 1H), 7.82(dd, 1H, J = 2.1, 9.3 Hz), 7.91(d, 1H, J = 7.8 Hz), 8.28(s, 1H); MS 235(M⁺).

< 제조예 15> 2-(4- 플루오로페닐 ) 옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 4-플루오로페닐 보론산을 사용하여 제조예 3과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(133 mg, 50%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.40(t, 3H, J = 7.1 Hz), 4.42(q, 2H, J = 7.1 Hz), 7.16(m, 2H), 8.11(m, 2H), 8.26(s, 1H).

< 제조예 16> 2-(2,3- 다이플루오로페닐 ) 옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

상기 제조예 2에서 만든 화합물(200 mg, 1.14 mmol)과 2,3-다이플루오로페닐 보론산(270 mg, 1.71 mmol)을 다이메톡시에탄(10 ㎖)에 녹이고, 물 1 ㎖과 Ba(OH)₂H₂O(324 mg, 1.71 mmol)를 가하였다. 촉매량의 Pd(PPh₃)₄(53 mg, 4 mmol)를 가하고 80 ℃에서 5시간 동안 반응시킨 후 물을 넣고 에틸 아세테이트로 2번 추출하여 소금물로 세척하였다. 세척후 황산마그네슘으로 건조시킨 후 여과하여 감압하에서 농축시키고 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그라피(헥산:에틸 아세테이트 = 9:1)로 정제하여 흰색 고체의 목적화합물(212 mg, 0.84 mmol, 74%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.41(t, 3H, J = 7.1 Hz), 4.43(q, 2H, J = 7.1 Hz), 7.19-7.23(m, 1H), 7.27-7.33(m, 1H), 7.91(m, 1H), 8.35(s, 1H); MS 253(M⁺).

< 제조예 17> 2-(2,5- 다이플루오로페닐 ) 옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

2,3-다이플루오로페닐 보론산 대신 2,5-다이플루오로페닐 보론산을 사용하여 제조예 16과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(220 mg, 76%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.41(t, 3H, J = 6.9 Hz), 4.43(q, 2H, J = 6.9 Hz), 7.18(m, 2H), 7.85(m, 1H), 8.33(s, 1H); MS 253(M⁺).

< 제조예 18> 2-(3,5- 다이플루오로페닐 ) 옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 3,5-다이플루오로페닐 보론산을 사용하여 제조예 3과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(160 mg, 56%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.41(t, 3H, J = 7.2 Hz), 4.43(q, 2H, J = 7.2 Hz), 7.64-7.68(m, 2H), 8.19(s, 1H); MS 253(M⁺).

< 제조예 19> 2-(2- 클로로페닐 ) 옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 2-클로로페닐 보론산을 사용하여 제조예 3과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(226 mg, 81%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.41(t, 3H, J = 7.2 Hz), 4.43(q, 2H, J = 7.2 Hz), 7.36-7.45(m, 2H), 7.51(dd, 1H, J = 1.8, 7.5 Hz), 8.04(dd, 1H, J = 2.1, 7.5 Hz), 8.35(s, 1H); MS 251(M⁺).

< 제조예 20> 2-(3- 클로로페닐 ) 옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 3-클로로페닐 보론산을 사용하여 제조예 3과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(252 mg, 88%)을 얻었다.

¹H NMR(200 MHz, CDCl₃) δ 1.41(t, 3H, J = 7.2 Hz), 4.45(q, 2H, J = 7.2 Hz), 7.41-7.50(m, 2H), 7.97-8.02(m, 1H), 8.13(dd, 1H, J = 1.2, 1.5 Hz), 8.28(s, 1H); MS 251(M⁺).

< 제조예 21> 2-(4- 클로로페닐 ) 옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 4-클로로페닐 보론산을 사용하여 제조예 3과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(234 mg, 82%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.41(t, 3H, J = 7.2 Hz), 4.43(q, 2H, J = 7.2 Hz), 7.46(dd, 2H, J = 2.1, 6.6 Hz), 8.05(dd, 2H, J = 2.1, 6.6 Hz), 8.27(s, 1H); MS 251(M⁺).

< 제조예 22> 2-(2,3- 다이클로로페닐 ) 옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 2,3-다이클로로페닐 보론산을 사용하여 제조예 3과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(240 mg, 74%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.41(t, 3H, J = 7.1 Hz), 4.43(q, 2H, J = 7.1 Hz), 7.31(dd, 1H, J = 8.0, 8.0 Hz), 7.61(dd, 1H, J = 1.5, 8.0 Hz), 7.92(dd, 1H, J = 1.5, 8.0 Hz), 8.36(s, 1H); MS 285(M⁺).

< 제조예 23> 2-(2,5- 다이클로로페닐 ) 옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 2,5-다이클로로페닐 보론산을 사용하여 제조예 3과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(261 mg, 80%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.41(t, 3H, J = 7.2 Hz), 4.44(q, 2H, J = 7.2 Hz), 7.36-7.46(m, 2H), 8.09(d, 1H, J = 2.4 Hz), 8.36(s, 1H); MS 285(M⁺).

< 제조예 24> 2-(3,5- 다이클로로페닐 ) 옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 3,5-다이클로로페닐 보론산을 사용하여 제조예 3과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(261 mg, 60%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.41(t, 3H, J = 7.2 Hz), 4.44(q, 2H, J = 7.2 Hz), 7.47(t, 1H, J = 1.8 Hz), 8.01(d, 2H, J = 1.8 Hz), 8.29(s, 1H); MS 285(M⁺).

< 제조예 25> 2-(2- 메톡시 -5- 플루오로페닐 ) 옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 2-메톡시-5-플루오로페닐 보론산을 사용하여 제조예 3과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(250 mg, 83%)을 얻었다.

¹H NMR(200 MHz, CDCl₃) δ 1.41(t, 3H, J = 7.1 Hz), 3.93(s, 3H), 4.42(q, 2H, J = 7.1 Hz), 6.99(m,1H), 7.14(m, 1H), 7.75(m, 1H), 8.31(s, 1H); MS 265(M⁺).

< 제조예 26> 2-(2- 메톡시 -5- 클로로페닐 ) 옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 2-메톡시-5-클로로페닐 보론산을 사용하여 제조예 3과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(272 mg, 85%)을 얻었다.

¹H NMR(200 MHz, CDCl₃) δ 1.41(t, 3H, J = 7.1 Hz), 3.94(s, 3H), 4.42(q, 2H, J = 7.1 Hz), 6.96(d,1H, J = 8.9 Hz), 7.40(dd, 1H, J = 2.7, 8.9 Hz), 8.03(d, 1H, J = 2.7 Hz), 8.31(s, 1H); MS 281(M⁺).

< 제조예 27> 2-(2- 메틸 -5- 플루오로페닐 ) 옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 2-메틸-5-플루오로페닐 보론산을 사용하여 제조예 3과 같 은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(270 mg, 95%)을 얻었다.

¹H NMR(200 MHz, CDCl₃) δ 1.41(t, 3H, J = 7.2 Hz), 2.66(s, 3H), 4.42(q, 2H, J = 7.2 Hz), 7.09(m, 1H), 7.25(m, 1H), 7.73(dd, 1H, J = 2.7, 9.6 Hz), 8.30(s, 1H); MS 249(M⁺).

< 제조예 28> 에틸 2- 케토부티레이트의 제조

에탄올에 2-케토부틸산(5g, 49.0 mmol)을 녹인 후, 진한 황산(0.2 당량)을 가하고 8시간 동안 가열 환류시켰다. 반응 후, 감압 하에서 에탄올을 제거하고 잔류물을 에틸 아세테이트에 녹인 후 1 N 수산화나트륨 수용액과 물로 세척하고 황산마그네슘으로 건조시킨 뒤 여과하였다. 여액을 감압하에서 농축시키고 실리카겔 컬럼 크로마토그라피(헥산:에틸 아세테이트 = 9:1)로 정제하여 오일 형태의 목적화합물(6.2 g, 47.6 mmol, 97%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.13(t, 3H), 1.36(t, 3H), 2.86(q, 2H), 4.43(q, 2H); MS 130(M⁺).

< 제조예 29> 에틸 2- 케토 -3- 브로모부티레이트의 제조

CuBr₂(Ⅱ)(31 g, 0.14 mol)를 에틸 아세테이트(300 ㎖)에 녹인 후 상기 제조 예 28에서 만든 화합물(6.1 g, 46.89 mmol)을 클로로포름(150㎖)에 녹여 가하고, 16시간 동안 가열환류시켰다. 반응종료 후 상온으로 식힌 뒤, 셀라이트를 통과하여 여과하고 여액을 감암하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그라피(헥산:에틸 아세테이트 = 4:1)로 정제하여 노란색 액체 형상의 목적화합물(5.4 g, 2.83 mmol, 58%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.40(t, 3H), 1.81(t, 3H), 4.43(q, 2H), 5.15(q, 1H); MS 209(M⁺).

< 제조예 30> 2-아미노-5- 메틸옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

상기 제조예 29에서 얻은 화합물(5 g, 23.92 mmol)과 우레아(4.3 g, 71.76 mmol)를 에탄올(150 ㎖)에 녹인 후 16시간 동안 가열 환류시켰다. 반응후 감압 하에서 에탄올을 날리고 물을 가한 후 수산화나트륨 수용액으로 염기성화하여 에틸아세테이트로 3번 추출하였다. 유기층을 황산마그네슘으로 건조시키고 여과하여 감압하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그라피(헥산:에틸 아세테이트 = 1:1)로 정제하여 흰색 고체의 목적화합물(3.5 g, 20.6 mmol, 85%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.38(t, 3H), 2.49(s, 3H), 4.32(q, 2H); MS 170(M⁺).

< 제조예 31> 2- 클로로 -5- 메틸옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

상기 제조예 30에서 얻은 화합물(3 g, 17.6 mmol)을 사용하여 상기 제조예 2와 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(2.7 g, 50%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.39(t, 3H), 2.62(s, 3H), 4.36(q, 2H); MS 189(M⁺).

< 제조예 32> 2- 페닐 -5- 메틸옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

상기 제조예 31에서 얻은 화합물(200 mg, 1.06 mmol)을 톨루엔(10 ㎖)에 녹이고, 페닐 보론산(193 mg, 1.58 mmol), 2 M의 탄산칼륨 수용액(1.06 ㎖, 2.12 mmol), 촉매량의 Pd(PPh₃)₄(98 mg, 8 mmol%)를 가하여 5시간 동안 가열 환류시켰다. 반응이 완결된 후, 물을 넣고 에틸 아세테이트로 2번 추출하여 소금물로 세척하였다. 세척후 황산마그네슘으로 건조시킨 후 여과하여 감압하에서 농축시키고 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그라피(헥산:에틸 아세테이트 = 9:1)로 정제하여 오일형태의 목적화합물(210 mg, 0.91 mmol, 86%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.42(t, 3H, J = 7.1 Hz), 2.71(s, 3H), 4.43(q, 2H, J = 7.1 Hz), 7.45(m, 3H), 8.06(m, 2H); MS 231(M⁺).

< 제조예 33> 2-(2- 메틸페닐 )-5- 메틸옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 2-메틸페닐 보론산을 사용하여 제조예 32와 같은 방법으로 수행하여 오일형태의 목적화합물(240 mg, 93%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.41(t, 3H, J = 1.8, 7.57.2 Hz); MS 245(M⁺).

< 제조예 34> 2-(3- 메틸페닐 )-5- 메틸옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 3-메틸페닐 보론산을 사용하여 제조예 32와 같은 방법으로 수행하여 오일형태의 목적화합물(191 mg, 74%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.42(t, 3H, J = 7.1 Hz), 2.40(s, 3H), 2.70(s, 3H), 4.42(q, 2H, J = 7.1 Hz), 7.31(m, 2H), 7.85(d, 1H, J = 7.5 Hz), 7.92(s, 1H); MS 245(M⁺).

< 제조예 35> 2-(4- 메틸페닐 )-5- 메틸옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 4-메틸페닐 보론산을 사용하여 제조예 32와 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(248 mg, 96%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.41(t, 3H, J = 7.1 Hz), 2.39(s, 3H), 2.69(s, 3H), 4.42(q, 2H, J = 7.1 Hz), 7.25(d, 2H, J = 7.8 Hz), 7.96(d, 2H, J = 7.8 Hz); MS 246(M+1)⁺.

< 제조예 36> 2-(2,3- 다이메틸페닐 )-5- 메틸옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

상기 제조예 31에서 제조된 화합물(150 mg, 0.79 mmol)과 2,3-다이메틸페닐 보론산(179 mg, 1.19 mmol)을 다이메톡시에탄(6 ㎖)에 녹이고, 여기에 물 1 ㎖과 Ba(OH)₂H₂O(225 mg, 1.19 mmol)를 가하였다. 이후 촉매량의 Pd(PPh₃)₄(73 mg, 8 mmol%)를 가하고 80 ℃에서 16시간 동안 반응시킨 후, 물을 넣고 에틸 아세테이트로 2번 추출하여 소금물로 세척하였다. 세척후 황산마그네슘으로 건조시켜 여과한 후 감압하에서 농축시키고 잔류물울 실리카겔 컬럼 크로마토그라피(헥산:에틸 아세테이트 = 9:1)로 정제하여 오일형태의 목적화합물(157 mg, 0.61 mmol, 77%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.40(t, 3H, J = 7.2 Hz), 2.34(s, 3H), 2.53(s, 3H), 2.70(s, 3H), 4.41(q, 2H J = 7.2 Hz), 7.15(dd, 1H, J = 7.5, 7.8 Hz), 7.25(d, 1H, J = 7.8 Hz), 7.68(d, 1H, J = 7.5 Hz); MS 259(M⁺).

< 제조예 37> 2-(2,5- 다이메틸페닐 )-5- 메틸옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 2,5-다이메틸페닐 보론산을 사용하여 제조예 32와 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(260 mg, 95%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.40(t, 3H, J = 7.1 Hz), 2.26(s, 3H), 2.35(s, 3H), 2.70(s, 3H), 4.40(q, 2H, J = 7.1 Hz), 7.15(m, 2H), 7.80(s, 1H); MS 259(M⁺).

< 제조예 38> 2-(3,5- 다이메틸페닐 )-5- 메틸옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 3,5-다이메틸페닐 보론산을 사용하여 제조예 32와 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(196 mg, 72%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.43(t, 3H, J = 7.2 Hz), 2.35(s, 6H), 2.70(s, 3H), 4.43(q, 2H, J = 7.2 Hz), 7.08(s, 1H), 7.70(s, 2H); MS 259(M⁺).

< 제조예 39> 2-(2- 메톡시페닐 )-5- 메틸옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 2-메톡시페닐 보론산을 사용하여 제조예 32와 같은 방법으로 수행하여 오일형태의 목적화합물(156 mg, 55%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.41(t, 3H, J = 7.1 Hz), 2.70(s, 3H), 3.93(s, 3H), 4.41(q, 2H, J = 7.1 Hz), 7.02(m, 2H), 7.42(ddd, 1H, J = 1.7, 7.6, 8.9 Hz), 7.94(dd, 1H, J = 1.7, 8.5 Hz); MS 261(M⁺).

< 제조예 40> 2-(3- 메톡시페닐 )-5- 메틸옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 3-메톡시페닐 보론산을 사용하여 제조예 32와 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(253 mg, 92%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃) δ 1.42(t, 3H, J = 7.1 Hz), 2.70(s, 3H), 3.87(s, 3H), 4.42(q, 2H, J = 7.1 Hz), 7.00(ddd, 1H, J = 1.6, 1.8, 8.1 Hz), 7.35(dd, 1H, J = 8.1, 8.1 Hz), 7.59-7.66(m, 2H); MS 262(M+1)⁺.

< 제조예 41> 2-(4- 메톡시페닐 )-5- 메틸옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 4-메톡시페닐 보론산을 사용하여 제조예 32와 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(220 mg, 80%)을 얻었다.

¹H NMR(200 MHz, CDCl₃) δ 1.40(t, 3H, J = 7.2 Hz), 2.74(s, 3H), 3.93(s, 3H), 4.49(q, 2H, J = 7.1 Hz), 7.03(d, 2H, J = 8.7 Hz), 8.10(d, 2H, J = 8.7 Hz); MS 262(M+1)⁺.

< 제조예 42> 2-(2,3- 다이메톡시페닐 )-5- 메틸옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

2,3-다이메틸페닐 보론산 대신 2,3-다이메톡시페닐 보론산을 사용하여 제조예 36과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(196mg, 72%)을 얻었다.

¹H NMR(200 MHz, CDCl₃) δ 1.49(t, 3H, J = 7.1 Hz), 2.76(s, 3H), 3.93(s, 3H), 3.95 (s, 3H), 4.41(q, 2H, J = 7.2 Hz), 7.11(m, 2H), 7.56(dd, 1H, J = 1.5, 7.8 Hz); MS 291(M⁺).

< 제조예 43> 2-(2- 플루오로페닐 )-5- 메틸옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 2-플루오로메톡시페닐 보론산을 사용하여 제조예 32와 같은 방법으로 수행하여 오일형태의 목적화합물(174 mg, 66%)을 얻었다.

¹H NMR(200 MHz, CDCl₃) δ 1.43(t, 3H, J = 7.1 Hz), 2.73(s, 3H), 4.43(q, 2H, J = 7.1 Hz), 7.17(m, 2H), 7.24(m, 1H), 8.09(m, 1H); MS 249(M⁺).

< 제조예 44> 2-(3- 플루오로페닐 )-5- 메틸옥사졸 -4- 카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 3-플루오로메톡시페닐 보론산을 사용하여 제조예 32와 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(175 mg, 66%)을 얻었다.

¹H NMR(200 MHz, CDCl₃) δ 1.42(t, 3H, J = 7.2 Hz), 2.71(s, 3H), 4.43(q, 2H, J = 7.2 Hz), 7.16(m, 1H), 7.42(m, 1H), 7.77(m, 1H), 7.86(dd, 1H); MS 249(M⁺).

< 제조예 45> 2-(4- 플루오로페닐 )-5- 메틸옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 4-플루오로메톡시페닐 보론산을 사용하여 제조예 32와 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(250 mg, 95%)을 얻었다.

¹H NMR(200 MHz, CDCl₃) δ 1.42(t, 3H, J = 7.2 Hz), 2.70(s, 3H), 4.42(q, 2H, J = 7.2 Hz), 7.14(ddd, 2H, J = 2.1, 8.9, 9.5 Hz), 8.06(dd, 2H, J = 2.1, 5.2, 8.9 Hz); MS 249(M⁺).

< 제조예 46> 2-(2,3- 다이플루오로페닐 )-5- 메틸옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

2,3-다이메틸페닐 보론산 대신 2,3-다이플루오로메톡시페닐 보론산을 사용하여 제조예 36과 같은 방법으로 수행하여 연노랑색 고체의 목적화합물(91 mg, 43%) 을 얻었다.

¹H NMR(200 MHz, CDCl₃) δ 1.42(t, 3H, J = 7.2 Hz), 2.73(s, 3H), 4.43(q, 2H, J = 7.2 Hz), 7.18(m, 1H), 7.24(m, 1H), 7.85(m, 1H); MS 267(M⁺).

< 제조예 47> 2-(2,5- 다이플루오로페닐 )-5- 메틸옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

상기 제조예 31에서 제조된 화합물(200 mg, 1.06 mmol)과, 2,3-다이메틸페닐 보론산 대신 2,5-다이플루오로메톡시페닐 보론산을 사용하여 제조예 36와 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(210 mg, 75%)을 얻었다.

¹H NMR(200MHz, CDCl₃) δ 1.43(t, 3H, J = 7.2 Hz), 2.72(s, 3H), 4.43(q, 2H, J = 7.2 Hz), 7.12-7.19(m, 2H), 7.77-7.82(m, 1H); MS 267(M⁺).

< 제조예 48> 2-(3,5- 다이플루오로페닐 )-5- 메틸옥사졸 -4- 카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 3,5-다이플루오로메톡시페닐 보론산을 사용하여 제조예 32와 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(185 mg, 66%)을 얻었다.

¹H NMR(200 MHz, CDCl₃) δ 1.41(t, 3H, J = 7.2 Hz), 2.70(s, 3H), 4.42(q, 2H, J = 7.2 Hz), 6.90(m, 2H), 7.57-7.62(m, 2H); MS 267(M⁺).

< 제조예 49> 2-(2- 클로로페닐 )-5- 메틸옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 2-클로로메톡시페닐 보론산을 사용하여 제조예 32와 같은 방법으로 수행하여 오일형태의 목적화합물(226 mg, 81%)을 얻었다.

¹H NMR(200 MHz, CDCl₃) δ 1.41(t, 3H, J = 6.8 Hz), 2.72(s, 3H), 4.42(q, 2H, J = 6.8 Hz), 7.36(m, 2H), 7.48(dd, 1H, J = 0.8, 6.8 Hz), 7.98(m, 1H); MS 265(M⁺).

< 제조예 50> 2-(3- 클로로페닐 )-5- 메틸옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 3-클로로메톡시페닐 보론산을 사용하여 제조예 32와 같은 방법으로 수행하여 흰색고체의 목적화합물(246 mg, 88%)을 얻었다.

¹H NMR(200 MHz, CDCl₃) δ 1.42(t, 3H, J = 7.1 Hz), 2.71(s, 3H), 4.43(q, 2H, J = 7.1 Hz), 7.41(m, 2H), 7.95(dd, 1H, J = 1.2, .2 Hz), 8.08(s, 1H, J = 1.2 Hz); MS 265(M⁺).

< 제조예 51> 2-(4- 클로로페닐 )-5- 메틸옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 4-클로로메톡시페닐 보론산을 사용하여 제조예 32와 같은 방법으로 수행하여 흰색고체의 목적화합물(245 mg, 88%)을 얻었다.

¹H NMR(200 MHz, CDCl₃) δ 1.41(t, 3H, J = 7.5 Hz), 2.70(s, 3H), 4.43(q, 2H, J = 7.5 Hz), 7.43(dd, 2H, J = 1.8, 8.2 Hz), 8.00(dd, 2H, J = 1.8, 8.2 Hz); MS 265(M⁺).

< 제조예 52> 2-(2,3- 다이클로로페닐 )-5- 메틸옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

2,3-다이메틸페닐 보론산 대신 2,3-다이클로로메톡시페닐 보론산을 사용하여 제조예 36과 같은 방법으로 수행하여 흰색고체의 목적화합물(52 mg, 22%)을 얻었다.

¹H NMR(200 MHz, CDCl₃) δ 1.42(t, 3H, J = 7.1 Hz), 2.73(s, 3H), 4.42(q, 2H, J = 7.1 Hz), 7.30(dd, 1H, J = 7.8, 8.0 Hz), 7.57(dd, 1H, J = 1.1, 8.0 Hz), 7.87(dd, 1H, J = 1.1, 7.8 Hz); MS 299(M⁺).

< 제조예 53> 2-(2,5- 다이클로로페닐 )-5- 메틸옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 2,5-다이클로로메톡시페닐 보론산을 사용하여 제조예 32와 같은 방법으로 수행하여 흰색고체의 목적화합물(160 mg, 51%)을 얻었다.

¹H NMR(200 MHz, CDCl₃) δ 1.42(t, 3H, J = 6.9 Hz), 2.73(s, 3H), 4.43(q, 2H, J = 6.9 Hz), 7.35(dd, 1H, J = 2.2, 8.7 Hz), 7.43(d, 1H, J = 8.7 Hz), 8.03(d, 1H, J = 2.2 Hz); MS 299(M⁺).

< 제조예 54> 2-(3,5- 다이클로로페닐 )-5- 메틸옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 3,5-다이클로로메톡시페닐 보론산을 사용하여 제조예 32와 같은 방법으로 수행하여 흰색고체의 목적화합물(163 mg, 51%)을 얻었다.

¹H NMR(200 MHz, CDCl₃) δ 1.42(t, 3H, J = 7.2 Hz), 2.71(s, 3H), 4.43(q, 2H, J = 7.2 Hz), 7.44(t, 1H, J = 1.8 Hz), 7.97(d, 2H, J = 1.8 Hz); MS 299(M⁺).

< 제조예 55> 2-(2- 메톡시 -5- 플루오로페닐 )-5- 메틸옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 2-메톡시-5-플루오로페닐 보론산을 사용하여 제조예 32와 같은 방법으로 수행하여 흰색고체의 목적화합물(280 mg, 95%)을 얻었다.

¹H NMR(200 MHz, CDCl₃) δ 1.41(t, 3H, J = 6.9 Hz), 2.71(s, 3H), 3.92(s, 3H), 4.41(q, 2H, J = 6.9 Hz), 6.95(m, 1H), 7.12(m, 1H), 7.68(dd, 1H, J = 3.0, 9.0 Hz); MS 279(M⁺).

< 제조예 56> 2-(2- 메톡시 -5- 클로로페닐 )-5- 메틸옥사졸 -4-카복실산 에틸 에스터의 제조

페닐 보론산 대신 2-메톡시-5-클로로페닐 보론산을 사용하여 제조예 32와 같은 방법으로 수행하여 흰색고체의 목적화합물(240 mg, 77%)을 얻었다.

¹H NMR(200 MHz, CDCl₃) δ 1.41(t, 3H, J = 7.2 Hz), 2.71(s, 3H), 3.93(s, 3H), 4.41(q, 2H, J = 7.2 Hz), 6.94(d, 1H, J = 9.0 Hz), 7.37(dd, 1H, J = 2.7, 9.0 Hz), 7.95(d, 1H, J = 2.7 Hz); MS 295(M⁺).

< 실시예 1> (2- 페닐옥사졸 -4- 일카르보닐 )구아니딘의 제조

2 M의 구아니딘 메탄올 용액(1.4 ㎖, 2.8 mmol)을 감압하에 증발시키고, 상기 제조예 3에서 얻은 화합물 100 mg(0.46 mmol)을 디메틸포름아미드(이하, DMF)(3 ㎖)에 녹인 용액을 가한 후 상온에서 20분 동안 교반하였다. 반응 후, 물을 넣어 형성된 고체를 여과한 후, 물과 다이에틸에테르로 여러 번 씻고 건조시켜 흰색 고체의 목적화합물(70 mg, 66%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 7.51-7.56(m, 3H), 8.09-8.12(m, 2H), 8.36(s, 1H); MS 244(M⁺).

< 실시예 2> [2-(2- 메틸페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 4에서 얻은 화합물(150 mg, 0.65 mmol)을 사용하여 상기 실시예 1과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(111 mg, 70%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 2.68(s, 3H), 7.30-7.44(m, 3H), 7.96(d, 1H, J = 7.7 Hz), 8.39(s, 1H); MS 244(M⁺).

< 실시예 3> [2-(3- 메틸페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 5에서 얻은 화합물(210 mg, 0.91 mmol)을 사용하여 상기 실시예 1과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(165 mg, 74%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 2.44(s, 3H), 7.40(m, 2H), 7.88(d, 1H, J = 0.6 Hz), 7.92 (d, 1H, J = 6.7 Hz), 8.60(s, 1H); MS 244(M⁺).

< 실시예 4> [2-(4- 메틸페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 6에서 얻은 화합물(180 mg, 0.78 mmol)을 사용하여 상기 실시예 1과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(190 mg, 90%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 2.44(s, 3H), 7.34(d, 2H, J = 8.2 Hz), 7.98 (d, 1H, J = 8.2 Hz), 8.32(s, 1H); MS 244(M⁺).

< 실시예 5> [2-(2,3- 다이메틸페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 7에서 얻은 화합물(260 mg, 1.05 mmol)을 사용하여 상기 실시예 1과 같은 방법으로 반응시켜 흰색 고체의 목적화합물(170 mg, 63%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 2.38 (s, 3H), 2.53(s, 3H), 7.22 (dd, 1H, J = 7.7, 7.7 Hz) 7.34(d, 2H, J = 7.7 Hz), 7.66 (d, 1H, J = 7.7 Hz), 8.38(s, 1H); MS 258(M⁺).

< 실시예 6> [2-(2,5- 다이메틸페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 8에서 얻은 화합물(240 mg, 0.98 mmol)을 사용하여 상기 실시예 1과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(120 mg, 47%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 2.37(s, 3H), 2.61(s, 3H), 7.21(m, 2H) 7.79(s, 1H), 7.66(d, 1H), 8.37(s, 1H); MS 258(M⁺).

< 실시예 7> [2-(3,5- 다이메틸페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘 메탄설포네 이트의 제조

2 M의 구아니딘 메탄올 용액(0.6 ㎖, 1.2 mmol)을 감압하에 증발시키고, DMF(3 ㎖)에 녹인 제조예 9에서 얻은 화합물 50 mg(0.20 mmol)을 가반 후 상온에서 2 시간동안 교반하였다. 물을 가하여 생성된 고체를 에틸 아세테이를 가하여 2회 추출하였다. 유기층을 소금물로 세척하고 황산마그네슘으로 건조시킨 후 여과하여 감압하에서 농축시켰다. 잔류물을 아세톤에 다시 녹이고 메탄설폰산을 가하여 2-3방울 가하여 고체를 생성시켰다. 고체를 여과하고 다이에틸에테르로 세척한 후 건조시켜 목적화합물(25 mg, 38%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 2.42(s, 3H), 2.71(s, 3H), 7.26(s, 1H), 7.78(s, 1H), 8.81(s, 1H); MS 258(M⁺).

< 실시예 8> [2-(2- 메톡시페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 10에서 얻은 화합물(100 mg, 0.41 mmol)을 사용하여 상기 실시예 1과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(70 mg, 67%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 3,89(s, 3H), 7.03(m, 1H), 7.14(d, 1H, J = 7.5 Hz) 7.48(m, 1H), 7.85(m, 1H), 8.30(s, 1H); MS 260(M⁺).

< 실시예 9> [2-(2,3- 다이메톡시페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 11에서 얻은 화합물(260 mg, 0.94 mmol)을 사용하여 상기 실시예 1과 같은 방법으로 반응시켜 흰색 고체의 목적화합물(220 mg, 81%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 4.01(s, 3H), 4.03(s, 3H), 7.34(m, 2H), 7.62(m, 1H)7.48(m, 1H), 8.50(s, 1H); MS 290(M⁺).

< 실시예 10> [2-(2,5- 다이메톡시페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 12에서 얻은 화합물(220 mg, 0.79 mmol)을 사용하여 상기 실시예 1과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(200 mg, 87%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 3.83(s, 3H), 3.86(s, 3H), 7.09(m, 2H), 7.51(d, 1H, J = 7.2 Hz) 8.35(s, 1H); MS 290(M⁺).

< 실시예 11> [2-(2- 플루오로페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 13에서 얻은 화합물(200 mg, 0.85 mmol)을 사용하여 상기 실시예 1과 같은 방법으로 반응시켜 흰색 고체의 목적화합물(170 mg, 81%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 7.32(m, 2H), 7.57(m, 1H), 8.12(ddd, 1H, J = 1.8, 7.5, 7.5 Hz) 8.42(s, 1H); MS 248(M⁺).

< 실시예 12> [2-(3- 플루오로페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 14에서 얻은 화합물(200 mg, 0.85 mmol)을 사용하여 상기 실시예 1과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(122 mg, 58%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 7.28(m, 1H), 7.82(d, 1H, J = 9.6 Hz), 7.92(d, 1H, J = 7.8 Hz) 8.38(s, 1H); MS 248(M⁺).

< 실시예 13> [2-(4- 플루오로페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 15에서 얻은 화합물(130 mg, 0.55 mmol)을 사용하여 상기 실시예 1과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(60 mg, 44%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 7.28(m, 2H), 8.15(m, 2H), 8.35(s, 1H); MS 248(M⁺).

< 실시예 14> [2-(2,3- 다이플루오로페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 16에서 얻은 화합물(135 mg, 0.53 mmol)을 사용하여 상기 실시예 1과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(80 mg, 56%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 7.33(m, 1H), 7.45(m, 1H), 7.92 (m, 1H), 8.45(s, 1H); MS 266(M⁺).

< 실시예 15> [2-(2,5- 다이플루오로페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 17에서 얻은 화합물(160 mg, 0.63 mmol)을 사용하여 상기 실시예 1과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(80 mg, 48%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 7.35(m, 2H), 7.85(m, 1H), 8.43(s, 1H); MS 266(M⁺).

< 실시예 16> [2-(3,5- 다이플루오로페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 18에서 얻은 화합물(130 mg, 0.51 mmol)을 사용하여 상기 실시예 1과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(20 mg, 15%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 7.16(m, 1H), 7.70(dd, 2H, J = 2.3, 8.2 Hz), 8.40(s, 1H); MS 266(M⁺).

< 실시예 17> [2-(2- 클로로페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 19에서 얻은 화합물(100 mg, 0.40 mmol)을 사용하여 상기 실시예 1과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물 80 mg(수율 76%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 7.44-7.55(m, 2H), 7.59(dd, 1H, J = 1.5, 7.8 Hz), 8.00(dd, 1H, J = 1.8, 7.3 Hz), 8.44(s, 1H); MS 264(M⁺).

< 실시예 18> [2-(3- 클로로페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 20에서 얻은 화합물(200 mg, 0.80 mmol)을 사용하여 실시예 1과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(126 mg, 60%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 7.52-7.60(m, 2H), 8.02(dd, 1H, J = 1.6, 6.2 Hz), 8.10(d, 1H, J = 1.8 Hz), 8.38(s, 1H); MS 264(M⁺).

< 실시예 19> [2-(4- 클로로페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 21에서 얻은 화합물(180 mg, 0.72 mmol)을 사용하여 상기 실시예 1과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(100 mg, 53%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 7.56(dd, 2H, J = 1.8, 6.8 Hz), 8.09(dd, 2H, J = 1.8, 6.8 Hz), 8.37(s, 1H); MS 264(M⁺).

< 실시예 20> [2-(2,3- 다이클로로페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 22에서 얻은 화합물(200 mg, 0.70 mmol)을 사용하여 상기 실시예 1과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(161 mg, 77%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 7.63(dd, 2H, J = 7.8, 8.1 Hz), 7.79(dd, 2H, J = 1.5, 8.1 Hz), 8.06 (dd, 1H, J = 1.5, 7.8 Hz), 8.60(s, 1H); MS 298(M⁺).

< 실시예 21> [2-(2,5- 다이클로로페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 23에서 얻은 화합물(220 mg, 0.77 mmol)을 사용하여 상기 실시예 1과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(110 mg, 48%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 7.51-7.63(m, 2H), 8.07(d, 1H, J = 2.1 Hz), 8.46(s, 1H); MS 298(M⁺).

< 실시예 22> [2-(3,5- 다이클로로페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 24에서 얻은 화합물(180 mg, 0.63 mmol)을 사용하여 상기 실시예 1과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(110 mg, 60%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 7.63(t, 1H, J = 1.8 Hz), 8.07(d, 1H, J = 2.1 Hz), 8.46(s, 1H); MS 298(M⁺).

< 실시예 23> [2-(2- 메톡시 -5- 플루오로페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 25에서 얻은 화합물(200 mg, 0.75 mmol)을 사용하여 상기 실시예 1과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(148 mg, 71%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 3.45(s, 3H), 7.36(m, 1H), 7.50(m, 1H), 7.73(m, 1H), 8.52(s, 1H); MS 278(M⁺).

< 실시예 24> [2-(2- 메톡시 -5- 클로로페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 26에서 얻은 화합물(250 mg, 0.89 mmol)을 사용하여 상기 실시예 1과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(142 mg, 71%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 3.94(s, 3H), 7.19(d, 1H, J = 8.7 Hz), 7.49(dd, 1H, J = 2.4, 8.7 Hz), 7.73(d, 1H, J = 2.4 Hz), 8.63(s, 1H); MS 294(M⁺).

< 실시예 25> [2-(2- 메틸 -5- 플루로로페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 27에서 얻은 화합물(240 mg, 0.96 mmol)을 사용하여 상기 실시예 1과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(210 mg, 83%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 2.59(s, 3H), 7.10(m, 1H), 7.33(m, 1H), 7.64(dd, 1H, J = 2.8, 9.7 Hz), 8.59(s, 1H); MS 262(M⁺).

< 실시예 26> (5- 메틸 -2- 페닐옥사졸 -4- 일카르보닐 )구아니딘의 제조

2 M의 구아니딘 메탄올 용액(2.0 ㎖, 4.0 mmol)을 감압하에 증발시키고, 상기 제조예 3에서 얻은 화합물 100 mg(0.46 mmol)을 디메틸포름아미드(이하, DMF)(3 ㎖)에 녹인 용액을 가한 후 상온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 후, 물을 넣어 형성된 고체를 여과한 후, 물과 다이에틸에테르로 여러 번 씻고 건조시켜 흰색 고체의 목적화합물(110 mg, 70%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 2.72(s, 3H), 7.48(m, 3H), 8.03(m, 2H); MS 244(M⁺).

< 실시예 27> [5- 메틸 -2-(2- 메틸페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 33에서 얻은 화합물(120 mg, 0.49 mmol)을 사용하여 상기 실시 예 26과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(90 mg, 71%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 2.72(s, 3H), 2.80(s, 3H), 7.33-7.48(m, 3H), 8.00(d, 1H, J = 7.8 Hz); MS 258(M⁺).

< 실시예 28> [5- 메틸 -2-(3- 메틸페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 34에서 얻은 화합물(150 mg, 0.61 mmol)을 사용하여 상기 실시예 26과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(90 mg, 57%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 2.42(s, 3H), 2.73(s, 3H), 7.35(m, 2H), 7.84(d, 1H, J = 7.6 Hz), 7.89(s, 1H); MS 258(M⁺).

< 실시예 29> [5- 메틸 -2-(4- 메틸페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 35에서 얻은 화합물(220 mg, 0.90 mmol)을 사용하여 상기 실시예 26과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(160 mg, 69%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 2.41(s, 3H), 2.72(s, 3H), 7.33(d, 2H, J = 8.1 Hz), 7.93(d, 2H, J = 8.1 Hz); MS 258(M⁺).

< 실시예 30> [5- 메틸 -2-(2,3- 다이메틸페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 36에서 얻은 화합물(70 mg, 0.27 mmol)을 사용하여 상기 실시예 26과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(50 mg, 68%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 2.37(s, 3H), 2.52(s, 3H), 2.74(s, 3H), 7.19(dd, 1H, J = 7.3, 7.4 Hz), 7.29(d, 1H, J = 7.3 Hz), 7.62(d, 1H, J = 7.4 Hz); MS 272(M⁺).

< 실시예 31> [5- 메틸 -2-(2,5- 다이메틸페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 37에서 얻은 화합물(260 mg, 1.0 mmol)을 사용하여 상기 실시예 26과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(190 mg, 70%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 2.37(s, 3H), 2.60(s, 3H), 2.74(s, 3H), 7.23(m, 2H), 7.75(s, 1H); MS 272(M⁺).

< 실시예 32> [5- 메틸 -2-(3,5- 다이메틸페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 38에서 얻은 화합물(150 mg, 0.58 mmol)을 사용하여 상기 실시예 26과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(30 mg, 20%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 2.38(s, 6H), 2.73(s, 3H), 7.15(s, 1H), 7.68(s, 2H); MS 272(M⁺).

< 실시예 33> [5- 메틸 -2-(3- 메톡시페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 39에서 얻은 화합물(180 mg, 0.69 mmol)을 사용하여 상기 실시예 26과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(160 mg, 85%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 2.74(s, 3H), 3.88(s, 3H), 7.05(m, 1H), 7.39(m, 1H), 7.62(m, 2H); MS 274(M⁺).

< 실시예 34> [5- 메틸 -2-(4- 메톡시페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 40에서 얻은 화합물(180 mg, 0.69 mmol)을 사용하여 상기 실시예 26과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(160 mg, 85%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 2.72(s, 3H), 3.88(s, 3H), 7.01-7.08(m, 2H), 7.95-8.00(m, 2H); MS 275(M+1)⁺.

< 실시예 35> [5- 메틸 -2-(2,3- 다이메톡시페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘 메탄설포네이트의 제조

상기 제조예 41에서 얻은 화합물(50 mg, 0.17 mmol)을 사용하여 상기 실시예 7과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(10 mg, 15%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 2.71(s, 3H), 2.78(s, 3H), 3.92(s, 3H), 3.94(s, 3H), 7.24(m, 2H), 7.55(dd, 1H, J = 2.1, 7.8 Hz); MS 304(M⁺).

< 실시예 36> [5- 메틸 -2-(2- 플루오로페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘 메탄설포네이트의 제조

상기 제조예 42에서 얻은 화합물(80 mg, 0.31 mmol)을 사용하여 상기 실시예 7과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(40 mg, 35%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 2.72(s, 3H), 2.79(s, 3H), 7.36(m, 2H), 7.61(m, 1H), 8.12(ddd, 1H, J = 1.5, 7.4, 9.5 Hz); MS 262(M⁺).

< 실시예 37> [5- 메틸 -2-(3- 플루오로페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 43에서 얻은 화합물(150 mg, 0.60 mmol)을 사용하여 상기 실시예 26과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(80 mg, 51%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 2.62(s, 3H), 7.07-7.14(m, 1H), 7.35-7.43(m, 1H), 7.64(dd, 1H, J = 2.1, 9.6 Hz), 7.73(d, 1H, J = 7.5 Hz); MS 262(M⁺).

< 실시예 38> 5- 메틸 -2-(4- 플루오로페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 44에서 얻은 화합물(240 mg, 0.96 mmol)을 사용하여 상기 실시예 26과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(190 mg, 75%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 2.74(s, 3H), 7.22(ddd, 2H, J = 2,1, 8.9, 9.5 Hz), 8.08(ddd, 2H, J = 2,1, 5.2, 8.9 Hz); MS 262(M⁺).

< 실시예 39> 5- 메틸 -2-(2,3- 다이플루오로페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘 메탄설포네이트의 제조

상기 제조예 45에서 얻은 화합물(80 mg, 0.30 mmol)을 사용하여 상기 실시예 7과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(19 mg, 23%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 2.72(s, 3H), 2.79(s, 3H), 7.26(m, 1H), 7.40(m, 1H), 7.80(m, 1H); MS 280(M⁺).

< 실시예 40> 5- 메틸 -2-(2,5- 다이플루오로페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘 의 제조

상기 제조예 46에서 얻은 화합물(180 mg, 0.67 mmol)을 사용하여 상기 실시예 26과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(80 mg, 42%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 2.76(s, 3H), 7.23-7.36(m, 2H), 7.82(m, 1H); MS 280(M⁺).

< 실시예 41> 5- 메틸 -2-(3,5- 다이플루오로페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 47에서 얻은 화합물(150 mg, 0.56 mmol)을 사용하여 상기 실시예 26과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(100 mg, 64%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 2.76(s, 3H), 7.12(m, 1H), 7.63-7.67(m, 2H); MS 280(M⁺).

< 실시예 42> 5- 메틸 -2-(2- 클로로페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 48에서 얻은 화합물(200 mg, 0.75 mmol)을 사용하여 상기 실시예 26과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(120 mg, 57%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 2.75(s, 3H), 7.47(m, 2H), 7.56(m, 1H), 7.96(dd, 1H, J = 1.8, 7.3 Hz); MS 278(M⁺).

< 실시예 43> 5- 메틸 -2-(3- 클로로페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 49에서 얻은 화합물(200 mg, 0.75 mmol)을 사용하여 상기 실시예 26과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(160 mg, 76%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 2.76(s, 3H), 7.49-7.54(m, 2H), 7.98(m, 1H), 8.06(d, 1H, J = 1.2 Hz); MS 278(M⁺).

< 실시예 44> 5- 메틸 -2-(4- 클로로페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 50에서 얻은 화합물(210 mg, 0.79 mmol)을 사용하여 상기 실시예 26과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(160 mg, 73%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 2.72(s, 3H), 7.53(d, 2H, J = 8.6 Hz), 8.03(d, 2H, J = 8.6 Hz); MS 278(M⁺).

< 실시예 45> 5- 메틸 -2-(2,3- 다이클로로페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 51에서 얻은 화합물(50 mg, 0.17 mmol)을 사용하여 상기 실시예 26과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(40 mg, 77%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 2.76(s, 3H), 7.45(dd, 1H, J = 7.9, 8.1 Hz), 7.71(dd, 1H, J = 1.5, 8.1 Hz), 7.89(d, 1H, J = 1.5, 7.9 Hz); MS 312(M⁺).

< 실시예 46> 5- 메틸 -2-(2,5- 다이클로로페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 52에서 얻은 화합물(100 mg, 0.33 mmol)을 사용하여 상기 실시예 26과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(70 mg, 67%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 2.82(s, 3H), 7.49(dd, 1H, J = 2.4, 8.6 Hz), 7.58(d, 1H, J = 8.6 Hz), 8.04(d, 1H, J = 2.4 Hz); MS 312(M⁺).

< 실시예 47> 5- 메틸 -2-(3,5- 다이클로로페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 53에서 얻은 화합물(130 mg, 0.43 mmol)을 사용하여 상기 실시예 26과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(100 mg, 74%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 2.76(s, 3H), 7.58(t, 1H, J = 1.8 Hz), 7.99(d, 1H, J = 1.8 Hz); MS 312(M⁺).

< 실시예 48> 5- 메틸 -2-(2- 메톡시 -5- 플루오로페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 54에서 얻은 화합물(200 mg, 0.72 mmol)을 사용하여 상기 실시예 26과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(180 mg, 86%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 2.73(s, 3H), 3.91(s, 3H), 7.12-7.26(m, 2H), 7.66(dd, 1H, J = 3.3, 9.1 Hz); MS 292(M⁺).

< 실시예 49> 5- 메틸 -2-(2- 메톡시 -5- 클로로페닐 ) 옥사졸 -4- 일카르보닐 ]구아니딘의 제조

상기 제조예 55에서 얻은 화합물(190 mg, 0.64 mmol)을 사용하여 상기 실시예 26과 같은 방법으로 수행하여 흰색 고체의 목적화합물(150 mg, 76%)을 얻었다.

¹H NMR(300 MHz, CD₃OD) δ 2.73(s, 3H), 3.93(s, 3H), 7.17(d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.47(dd, 1H, J = 1.5, 8.8 Hz), 7.90(d, 1H, J = 1.5 Hz); MS 308(M⁺).

< 실험예 1> NHE -1 억제효과

본 발명에 따른 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체의 NHE-1 억제효과를 세포단계에서 측정하기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.

<1-1> PS120 / NHE -1 세포 준비

CCL39에서 유래된 PS120 세포에 사람 NHE-1를 발현시켜 사용하였으며, 10% 소태아혈청과 1% 페니실린/스트렙토마이신(100X solution), 1% L-글루타민(200mM 수용액)이 보충된 DMEM(Dulbecco's modified Eagle's medium) 배지에서 세포를 배양하였다. 직경 100 ㎜ 디쉬에서 약 80 ~ 90% 키운 PS120/NHE-1 세포를 트립신으로 처리한 후, PBS(phosphate buffer saline)로 1회, 나트륨 없는 완충액(Na-free buffer; 138.2 mM 염화 콜린(choline chloride), 4.9 mM KCl, 1.5 mM CaCl₂ _·2H₂O, 1.2 mM MgSO₄·7H₂O, 1.2 mM KH₂PO₄, 15mM D-글루코스, 20 mM HEPES, pH 7.4)으로 1회 세척하였다. 이것을 원심분리하여 침전물을 20 mM NH₄Cl 및 10 μM BCECF-AM[2',7'-bis(2-carboxyethyl)-5,6-carboxy-fluorescein acetoxymethyl ester]을 함유하는 나트륨 없는 완충액에 부유시킨 후, 37℃, CO₂ 배양기에서 30분간 배양시켰다. NH₄Cl을 제거하고 동시에 세포 밖에 남아있는 BCECF-AM를 세척해주기 위하여, PS120/NHE-1 세포를 원심분리한 후 나트륨 없는 완충액으로 1회 세척하고, 세포수가 2.5×10⁴ 세포/10 ㎕ 되도록 부유액을 만들어 4 ℃의 암실에 보관하였다.

<1-2> NHE -1 억제효과 측정

96 웰 플레이트에 180 ㎕ HBS 완충액(137 mM NaCl, 4.9 mM KCl, 1.5 mM CaCl_2·2H₂O, 1.2 mM MgSO₄·7H₂O, 1.2 mM KH₂PO₄, 15 mM D-글루코스, 20 mM HEPES, pH 7.4)과 DMSO 또는 DMSO에 녹인 화합물(0.03 ~ 10 μM) 10 ㎕씩을 분주하여 잘 섞어준 후, 마지막으로 세포 내 산성화가 유발된 PS120/NHE-1 세포를 10 ㎕씩 첨가하여 교반시켰다. 세포를 첨가하고 4분 후에 96 웰 플레이트용 형광분광광도계(XEMINI-XS; Molecular Device)를 사용하여 형광(여기:485/444㎚, 방출:535㎚)을 측정하였다. 측정된 형광값은 칼륨양이온/나이제리신 테크닉(high-K+/nigericin technique)을 이용하여 pH로 환산하였다. NH₄Cl 프리펄스(prepulse)로 세포 내 산성화를 유발시킨 세포는 NHE-1의 작동에 의해 세포 내 산성화가 다시 정상으로 회복되게 되는데, 이때 세포 내 산성화의 회복을 50% 억제시키는 화합물의 농도를 구하여(IC₅₀ 값) NHE-1에 대한 억제효과를 측정하였다. 대조물질로는 카리포라이드(cariporide, 심장보호제)를 사용하여 실험하고, 그 결과를 표 2에 나타내었다.

화합물	IC₅₀(μM)	화합물	IC₅₀(μM)	화합물	IC₅₀(μM)
카리포라이드	1.0	실시예 27	0.37	실시예 40	2.3
실시예 1	> 30	실시예 28	5.5	실시예 41	2.8
실시예 17	17	실시예 29	> 30	실시예 42	0.50
실시예 18	> 30	실시예 30	1.2	실시예 43	1.42.8
실시예 19	> 30	실시예 31	0.18	실시예 44	> 30
실시예 20	17	실시예 32	5.9	실시예 45	0.50
실시예 21	1.7	실시예 33	2.6	실시예 46	0.06
실시예 22	16	실시예 34	> 30	실시예 47	0.74
실시예 23	> 30	실시예 35	9.4	실시예 48	1.2
실시예 24	5.4	실시예 36	3.3	실시예 49	0.32
실시예 25	4.1	실시예 37	3.5
실시예 26	6.9	실시예 38	10

표 2에 나타낸 바와 같이, 실시예 21, 25, 27, 30, 31, 33, 36, 37, 40~43, 45~49의 화합물들은 5.0 μM 이하의 IC₅₀를 나타냄으로써 NHE-1에 대한 우수한 억제효과를 나타내었다. 특히, 실시예 27, 31, 42, 45, 46 및 49의 화합물들은 각각 0.37, 0.18, 0.50, 0.50, 0.06 및 0.32의 IC₅₀값을 갖는 바, 이는 종래 심장보호제의 하나로 사용되고 있는 상기 카리포라이드(IC₅₀=1.0 μM)와 비교하여 3 ~ 16 배에 가까운 NHE-1 억제효과를 나타냄을 알 수 있다. 이로부터, 본 발명에 따른 신규 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체들은 NHE-1 억제를 통하여 허혈/재관류 손상에 대한 보호제로서 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있다.

<실험예 2> 흰쥐의 적출 허혈심장에 대한 심장보호효과

본 발명의 화학식 1의 신규 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체들이 적출심장에서 허혈 심장의 기능 회복을 증진시켜 심장보호작용을 나타내는지 알아보기 위하여, 흰쥐에 대하여 하기와 같은 적출심장 실험을 수행하였다.

수컷 흰쥐(300 ~ 450 g, 한국화학연구소 실험동물실)에 펜토바비탈 나트륨염 (Sodium pentobarbital) 100 ㎎/㎏을 복강 내 주사하여 마취시킨 후 헤파린 1000 U/㎏을 정맥 투여하고 심장을 적출하였다. 구체적으로 기관에 캐뉼라(cannula, PE 240)를 삽입하고 설치류 호흡기(rodent ventilator)를 이용해 인공호흡시키면서, 대동맥 캐뉼라를 대동맥에 삽입하고 역행성 관류 하에 심장을 적출하여 랑겐돌프 기기(Langendorff Apparatus)에 재빨리 매달고 심장에 붙어있는 불필요한 조직을 제거한 후, 정압 관류(85 mmHg) 하에서 95% O₂/ 5% CO₂로 포화된 37 ℃의 생리액(modified Krebs-Henseleit bicarbonate buffer; 조성 <mM/L>: 116 염화나트륨, 4.7 염화칼륨, 1.1 황산마그네슘, 1.17 제일인산칼륨, 24.9 탄산수소나트륨, 2.52 염화칼슘, 8.32 글루코스, 2.0 피루베이트)으로 관류시켰다. 에탄올과 증류수 혼합액(1:1 부피비)으로 채운 고무 풍선(latex balloon)이 연결된 금속 캐뉼라를 폐정맥을 통해 좌심실에 삽입시키고 풍선에 전달되는 좌심실압을 압력 변압기(pressure transducer)를 통해 등량적으로 (isovolumetric) 확대기(Plugsys bridge amplifier)로 처리하여 기록계 (Linearcorder mark 8 WR 3500)에 기록하였다. 심장을 15분 동안 안정화시킨 후, 좌심실 이완기말압(LVEDP, left ventricular enddiastolic pressure)을 5 mmHg로 가하고 상기 풍선 부피를 전 실험기간 동안 유지시켰다.

이후, 기조(Baseline) 심장 수축 기능과 심박동수(HR, heart rate) 및 관상혈류(CF, coronary flow)를 측정하였다. 심장 수축 기능을 평가하는 지표인 좌심실 발생압(LVDP, left ventricular developed pressure)은 좌심실 최대 수축기압(LVSP, left ventricular peak systolic pressure)과 좌심실 이완기말압(LVEDP, left ventricular end diastolic pressure)의 차이로 산출하였다. 생체 내 심장과 달리 심장 박출량(cardiac output)을 측정할 수 없는 랑겐돌프 심장(Langendorff heart)에서 간접적으로 심장의 기능(cardiac performance)을 알아보는 중요한 지표인 심박동수-압력의 곱[Double product RPP(rate-pressure product)]은 심박동수(HR)에 좌심실 발생압(LVDP)을 곱하여 계산하였다. 심장의 온도는 실험 전 기간에 걸쳐 심장을 95% O₂/ 5% CO₂가 지속적으로 공급되는 37 ℃의 생리액에 담금으로써 일정하게 유지하였다. 안정화 후, 0.04% 디메틸술폭사이드(DMSO) 용매 또는 일정 농도의 본 발명에 의한 화합물 또는 대조약물을 함유하는 용액을 관류액으로 하여 각각 10분 동안 심장에 관류시킨 후, 심장 수축 기능과 심박동수 및 관상혈류를 측정한 후 관류액 공급을 완전히 차단하여 30분 동안 전허혈(global ischemia)을 유발시켰다. 이후 30분 동안 관류액을 재관류한 후에 각 지표(LVDP, HR, LVEDP)를 재차 측정하였다. 음성대조군으로는 0.04%의 DMSO 용매만을 관류액으로 사용하였으며, 대조물질로는 카리포라이드를 사용하고, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.

화합물	농도 (μM)	LVDP × HR (%)	LVEDP (%)
음성대조군	-	15.5	55.3
카리포라이드	10	47.6	22.4
실시예 21	10	44.6	36.0
실시예 31	10	59.4	9.0
LVDP : 좌심실압(left venticular developing pressure) HR : 심박동수(heart rate) LVEDP: 좌심실이완기말압(left ventricular end diastolic pressure)

표 3에 나타난 바와 같이, 흰쥐의 적출심장을 이용한 적출 허혈심장 실험에서, 음성대조군으로부터는 심장의 수축기능을 잘 반영하는 좌심실 발생압(LVDP)과 심박동수(HR)의 곱(Double Product parameter, LVDP x HR)이 허혈유발 전의 15.5%로 심장의 수축기능이 현저히 저하되었음을 알 수 있으며, 허혈/재관류에 의한 심근의 수축(contracture)을 나타내어 심장보호작용의 또 다른 지표인 재관류 좌심실이완기말압도 5 mmHg에서 55.3 mmHg로 유의성 있게 증가되었다.

반면, 실시예 21 및 실시예 31의 화합물은 10 μM 처리에 의해 허혈/재관류에 의해 저하된 심근 수축 기능(LVDP x HR)을 각각 허혈 유발전의 44.5% 및 59.4%로 음성대조군(15.5%)에 비하여 유의성있게 회복되었고, 좌심실이완기말압 지표도 각각 36.0 및 9.0 mmHg로 저하시켜 우수한 허혈/재관류 심장에 대한 보호효과를 나타내었다. 특히, 실시예 31의 경우에는 심근 수축 기능(LVDP x HR)이 허혈 유발전의 59.4%로 나타남으로써 비교군인 카리포라이드(47.6%)에 비하여 유의성있게 회복되었고, 좌심실이완기말압 지표도 9.0 mmHg로 저하시켜 카리포라이드보다 우수한 허혈/재관류 심장에 대한 보호효과를 나타내었다.

이로부터, 본 발명의 신규 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체들은 허혈/재관류 손상에 의한 심장기능의 회복을 증진시킴으로써, 허혈성 심장에 대한 보호작용이 우수하므로, 허혈성 심혈관 질환에 관련된 질환의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있음을 확인하였다.

< 실험예 3> 흰쥐의 생체 내( in vivo ) 허혈심장 모델에 대한 심장 보호작용

본 발명의 화학식 1의 신규 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체들이 생체 내 허혈 심장을 보호하는 작용을 나타내는지 알아보기 위하여, 흰쥐에 대한 항허혈 효과(Antiischemic effects; 심근경색 감소 효과)를 하기와 같은 실험을 수행하였다.

수컷 흰쥐(350 ~ 450g, 한국화학연구소 실험동물실)에 펜토바비탈 (pentobarbital)을 75㎎/㎏로 복강주사하여 상기 흰쥐를 마취시켰다. 상기 흰쥐에 기관절개술(tracheotomy)을 실시한 후, 10 ㎖/㎏의 일회 심박출량(stroke volume), 분당 60 회의 심박수로 인공호흡을 하였다. 이후, 대퇴정맥과 대퇴동맥에 캐뉼러를 삽입하여 각각 약물 투여 및 혈압 측정에 이용하였다.

한편, 허혈성 심근손상 모델에서 체온은 결과에 중요한 영향을 미치므로, 직장에 삽입한 체온 측정용 탐침(probe)과 항온 피복 조절 유니트(Homeothermic blanket control unit)를 사용하여 쥐의 체온을 37 ℃로 일정하게 유지시켰다. 이후, 실험기간 동안 쥐의 평균 동맥압(mean arterial blood pressure)과 심박동수(HR)를 계속해서 측정하였다. 이때, 혈압 측정에는 슈타탐 P23XL 압력 변환기(Statham P23XL pressure transducer, Grass Ins., MA, 미국)를 사용하고 심박동수 측정에는 심전도/심박동수 카플러(ECG/RATE Coupler, Hugo Sachs Electronic, 독일)를 사용하였다. 또한, 그래프텍 리니어코더 차트 리코더(Graphtec Linearcorder WR 3310, Hugo Sachs Electronic)를 사용하여 모든 변화를 연속적으로 기록하였다.

좌관상 동맥은 셀리(Selye H.)의 방법에 의해 하기와 같이 결찰시켰다. 즉, 좌개흉술(left thoracotomy)에 의해 쥐의 가슴 일부를 열고 왼손의 장지(長指)로 마취된 흰쥐의 오른쪽 가슴에 압력을 가하여 심장을 외부로 밀어내어 왼손의 엄지와 검지 손가락으로 심장을 가볍게 고정시켰다. 이후, 수술사(5 ~ 0 silk ligature)가 부착된 봉합용(suture) 바늘로 조심스럽게 좌심실 하행성 관상동맥(left anterior desending coronary artery, LAD)을 포함하는 부분을 뜬 뒤, 재빨리 심장을 흉곽강 (thoracic cavity)에 재위치시키고 수술사 양끝을 외부에 위치시켰다. 수술사 양끝은 PE 튜브(PE100, 2.5 ㎝)에 통과시킨 후 20분 동안 그대로 두어 안정화시켰다. 그 후, 대퇴정맥에 삽입된 캐뉼러를 통해 실시예 31 또는 41에서 제조한 화합물을 용매(vehicle)에 녹여 투여하였고, 음성대조군으로는 상기 용매(vehicle)만 투여하였으며, 비교군의 약물로는 카리포라이드를 사용하였다. 이후, 약물의 효과가 충분히 나타나도록 30분간 그대로 두었다.

이후 실에 끼워 놓았던 PE 튜브를 심장에 밀어 넣고 튜브의 끝부분 실을 지혈(hemostatic) 핀셋으로 당겨 PE 튜브를 관상동맥에 수직으로 밀착시켜 압력을 가하였으며, 45분 동안 그대로 두어 관상동맥을 결찰(occlusion)시킨 뒤 지혈 핀셋을 제거하고 90분간 재관류시켰다.

상기 방법에 의해 관상동맥을 재결찰(reocclusion)시키고, 1% 에반스 블루 용액(Evans blue) 2 ㎖를 정맥투여하였다. 이후 펜토바비탈을 과량 정맥 투여하여 흰쥐를 도살시키고 심장을 떼어내어 우심실과 양쪽 심방을 제거하였다. 좌심실은 심첨으로부터 5 ~ 6 개의 절편(slice)으로 수평 절단하고, 절편 각각의 무게를 측정하였다. 심장 절편 각각의 표면은 콤팩트 미세 영상 측정장치(compact micro vision system)인 하이-스코프(Hi-scope)와 화상분석용 컴퓨터 프로그램(Image pro plus)을 이용해 컴퓨터에 입력시키고, 이로부터 각 절편에서 푸른색으로 착색된 정상혈류 조직의 면적과 착색되지 않은 영역의 면적을 측정하였다. 각 절편의 총면적에 대하여 착색되지 않은 영역의 면적비를 구하고 여기에 각 절편의 무게를 곱하여 각 절편의 위험영역인 AAR(area at risk)을 계산하였다. 이렇게 구한 각 절편에 대한 AAR를 모두 합하고 이것을 전체 좌심실 무게로 나누어, 하기 수학식 1에 의해 AAR(%)을 구하였다.

또한, 심장 절편을 1%의 2,3,5-트리페닐테트라졸륨 클로라이드 인산 완충 용액 [2,3,5-triphenyltetrazolium chloride(TTC) phosphate buffer, 37 ℃, pH 7.4)에서 15분 동안 배양시키고 10% 포르말린(formalin) 용액에서 20 ~ 24시간 동안 고정시켰다. 이렇게 함으로써 심근의 탈수소효소(dehydrogenase)와 보조인자(cofactor)인 NADH에 의해 2,3,5-트리페닐테트라졸륨 클로라이드가 환원되어 포르마잔 염료(formazan dye)가 되므로, 조직의 정상 부위는 붉은 벽돌색(brick-red color)을 띠게 된다. 반면 조직의 경색 부위에는 탈수소효소와 보조인자가 없으므로 2,3,5-트리페닐테트라졸륨 클로라이드가 환원되지 않고, 따라서 붉은 벽돌색을 띠지 않게 된다.

상기와 같이 2,3,5-트리페닐테트라졸륨 클로라이드에 의해 조직 부위가 착색되는지 여부에 의해 각 절편의 정상 영역 및 경색 영역(Infarct zone)을 상기 AAR 측정시와 동일한 방법으로 구하였다. 이렇게 구한 각 절편에 대한 경색 영역을 모두 합하고 이것을 전체 AAR 무게 또는 전체 좌심실 무게로 나누어, 하기 수학식 2에 의해 IS(%)(Infarct Size)를 구하였다. 이 실험 모델에 있어서는, IS(%)가 낮을수록 경색부위가 적은 것이므로 시험물질의 항허혈 효과가 강한 것으로 판정하였다.

상기 수학식 1 및 2에 의해 구해진 AAR에 대한 IS의 비를 심근경색율로 계산하고 그 결과를 표 4에 나타내었다.

화합물	투여량(mg/kg)	심근경색율(IS/AAR, %)
음성대조군	-	58.6
카리포라이드	0.1	40.5
실시예 31	0.1	46.8
실시예 41	0.1	38.8

표 4에 나타난 바와 같이, 흰쥐를 이용한 생체 내 허혈 심근 손상 모델에서도 본 발명의 신규 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체들은 위험영역에 대한 심근경색율이 유의적으로 감소된 수치를 나타내었다. 구체적으로 음성대조군은 위험영역(AAR)에 대한 심근경색율(IS/AAR, %)이 58.6%로서 허혈에 의한 심근 손상이 매우 심한 것을 알 수 있고, 비교군인 카리포라이드를 투여한 경우에는 심근경색율은 0.1 ㎎/㎏ 투여에 의해 40.5%로서 유의성 있는 항허혈 작용을 나타내었다. 실시예 31 및 실시예 41의 화합물은 0.1 ㎎/㎏ 투여로 46.8%, 38.8%의 심근경색율을 나타내어 음성대조군보다 유의성있는 감소를 나타내었으며, 특히 실시예 41의 화합물은 동일량이 투여된 카리포라이드(40.5%)보다 심근경색율이 더 낮음으로써, 우수한 허혈심장 보호효과를 나타내었다.

따라서, 본 발명의 신규 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체는 생체 내 허혈심장 모델에서 심근경색율을 감소시켜 허혈심장에 대한 보호작용이 우수하므로, 심근경색, 부정맥, 협심증 등의 허혈성 심장질환의 예방 및 치료제로 사용할 수 있으며, 관동맥우회술,관동맥경피성형술 등 심장시술 시의 심장보호제 등으로 사용할 수 있다.

< 실험예 4> 랫트에 대한 경구투여 급성 독성실험

본 발명의 화학식 1의 신규 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체의 급성 독성을 알아보기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다.

6주령의 특정병원부재(SPF) SD계 랫트를 사용하여 급성독성실험을 실시하였다. 군당 2 마리씩의 동물에 실시예 1 ~ 49에서 제조한 화학식 1의 화합물을 각각 0.5% 메틸셀룰로오스 용액에 현탁하여 10 ㎎/㎏/ 15 ㎖의 용량으로 단회 경구 투여하였다. 시험물질 투여 후 동물의 폐사 여부, 임상증상 및 체중변화 등을 관찰하고 혈액학적 검사와 혈액생화학적 검사를 실시하였으며, 부검하여 육안으로 복강장기와 흉강장기의 이상 여부를 관찰하였다.

실험 결과, 상기 실시예 1 ~ 49에서 제조한 화학식 1의 화합물인 시험물질을 투여한 모든 랫트에서 특기할 만한 임상증상은 없었고 폐사된 동물도 없었으며, 또한 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학 검사, 부검소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다.

이로부터 본 발명의 화학식 1의 신규 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체는 모두 랫트에서 10 ㎎/㎏까지 독성변화를 나타내지 않으며, 경구 투여 최소치사량(LD₅₀)은 적어도 100 ㎎/㎏ 이상인 안전한 물질로 판단되었다.

한편, 본 발명에 따른 상기 화합물은 목적에 따라 여러 형태로 제제화가 가능하다. 하기는 본 발명에 따른 상기 화합물을 활성성분으로 함유시킨 몇몇 제제화 방법을 예시한 것으로 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.

< 제제예 1> 정제(직접 가압)

본 발명의 화학식 1의 화합물 5.0㎎을 체로 친 후, 락토스 14.1 ㎎, 크로스포비돈 USNF 0.8 ㎎ 및 마그네슘 스테아레이트 0.1 ㎎을 혼합하고 가압하여 정제로 제조하였다.

< 제제예 2> 정제(습식 조립)

본 발명의 화학식 1의 화합물 5.0 ㎎을 체로 친 후, 락토스 16.0 ㎎과 녹말 4.0㎎을 섞었다. 폴리솔베이트 80 0.3 ㎎을 순수한 물에 녹인 후 이 용액의 적당량을 첨가한 다음, 미립화하였다. 건조 후에 미립을 체질한 후 콜로이달 실리콘 디옥사이드 2.7 ㎎ 및 마그네슘 스테아레이트 2.0 ㎎과 섞었다. 미립을 가압하여 정제로 제조하였다.

< 제제예 3> 분말과 캡슐제

본 발명의 화학식 1의 화합물 5.0 ㎎을 체로 친 후에, 락토스 14.8 ㎎, 폴리비닐 피롤리돈 10.0 ㎎, 마그네슘 스테아레이트 0.2 ㎎와 함께 혼합하였다. 상기 혼합물을 적당한 장치를 사용하여 단단한 No. 5 젤라틴 캡슐에 넣어 캡슐제를 제조하였다.

< 제제예 4> 주사제

본 발명의 화학식 1의 화합물 100 mg, 만니톨 180 mg, Na₂HPO₄12H₂O 26 mg 및 증류수 2974 mg를 혼합하였다. 상기 혼합 용액을 투명 유리로 된 앰틀 중에 충전시키고, 유리를 용해시킴으로써 상부 격자하에 봉입시키고, 120 ℃에서 15분 이상 오토클레이브시켜 살균하여 주사제를 제조하였다.

이상에서 살펴본 바와 같이, 본 발명에 따른 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체는 나트륨/수소 교환통로인 NHE-1에 대하여 강력한 억제작용을 나타내고, 적출 허혈심장모델에서 허혈/재관류에 의한 심장기능 손상의 회복을 증진시키며, 생체 내 허혈동물 모델에서 심근경색의 크기를 유의성있게 감소시켜 우수한 심장보호효과를 나타내므로 심근경색, 부정맥, 협심증 등의 허혈성 심장질환의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있으며, 관동맥우회술, 관동맥경피성형술 등 심장시술 시 또는 혈전용해제 등의 재관류요법에 대한 심장보호제 등으로 유용하게 사용될 수 있다.

Claims

하기 화학식 1로 표시되는 신규 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.

<화학식 1>

(상기 화학식 1에서, R¹ 및 R²는 각각 독립적으로 수소, 할로겐 원자, C_1~C₅의 직쇄 또는 측쇄 알킬기, 할로겐으로 치환된 C_1~C₅의 직쇄 또는 측쇄 알킬기, 니트로기, 아미노기, 메틸설포닐기 및 알콕시기(OR³)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나이며, 이 경우, 상기 R³는 수소, 트리플루오로메틸, C_1~C₅의 직쇄 또는 측쇄 알킬기 및 페닐기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나이고,

X는 수소, 또는 C_1~C₅의 직쇄 또는 측쇄 알킬기이다.)
제1항에 있어서, 상기 화학식 1의 R¹ 및 R²는 각각 독립적으로 수소, 불소, 염소 및 메톡시기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나이고, X는 수소 또는 메틸기인 것을특징으로 하는 신규 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
제1항에 있어서, 상기 화학식 1의 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체는

1) (2-페닐옥사졸-4-일카르보닐)구아니딘;

2) [2-(2-메틸페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

3) [2-(3-메틸페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

4) [2-(4-메틸페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

5) [2-(2,3-다이메틸페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

6) [2-(2,5-다이메틸페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

7) [2-(3,5-다이메틸페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘 메탄설포네이트;

8) [2-(2-메톡시페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

9) [2-(2,3-다이메톡시페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

10) [2-(2,5-다이메톡시페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

11) [2-(2-플루오로페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

12) [2-(3-플루오로페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

13) [2-(4-플루오로페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

14) [2-(2,3-다이플루오로페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

15) [2-(2,5-다이플루오로페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

16) [2-(3,5-다이플루오로페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

17) [2-(2-클로로페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

18) [2-(3-클로로페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

19) [2-(4-클로로페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

20) [2-(2,3-다이클로로페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

21) [2-(2,5-다이클로로페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

22) [2-(3,5-다이클로로페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

23) [2-(2-메톡시-5-플루오로페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

24) [2-(2-메톡시-5-클로로페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

25) [2-(2-메틸-5-플루오로페닐)옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

26) (2-페닐-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

27) [2-(2-메틸페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

28) [2-(3-메틸페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

29) [2-(4-메틸페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

30) [2-(2,3-다이메틸페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

31) [2-(2,5-다이메틸페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

32) [2-(3,5-다이메틸페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

33) [2-(3-메톡시페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

34) [2-(4-메톡시페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

35) [2-(2,3-다이메톡시페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘 메탄설포네이트;

36) [2-(2-플루오로페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

37) [2-(3-플루오로페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

38) [2-(4-플루오로페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

39) [2-(2,3-다이플루오로페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘 메탄설포네이트;

40) [2-(2,5-다이플루오로페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

41) [2-(3,5-다이플루오로페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

42) [2-(2-클로로페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

43) [2-(3-클로로페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

44) [2-(4-클로로페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

45) [2-(2,3-다이클로로페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

46) [2-(2,5-다이클로로페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

47) [2-(3,5-다이클로로페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘;

48) [2-(2-메톡시-5-플루오로페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘; 및

49) [2-(2-메톡시-5-클로로페닐)-5-메틸옥사졸-4-일카르보닐]구아니딘으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 신규 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
하기 반응식 1로 표시되는 바와 같이, 카복실산 유도체(2)와 정량 또는 과량의 구아니딘을 반응시키거나, 염기 존재하에서 카복실산 유도체(2)와 당량의 구아니딘을 반응시키는 단계를 포함하여 이루어지는 제1항의 신규 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체의 제조방법.

<반응식 1>

(상기 반응식 1에서, R¹, R² 및 X는 제1항의 화학식 1에서 정의한 바와 같고, 화학식 2의 L은 구아니딘에 의해 용이하게 이탈될 수 있는 할라이드, 히드록시기, 메실레이트기 및 토실레이트기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나이다)
제4항에 있어서, 염기 없이 상기 카복실산 유도체(2)를 정량 또는 과량으로 사용하여 구아니딘과 반응시키는 경우의 반응용매는 메탄올, 에탄올 및 아이소프로판올로 이루어지는 군으로부터 선택되는 알콜계 용매; 테트라하이드로퓨란, 다이옥산 및 1,2-다이메톡시에탄으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 에테르계 용매; 및 다이메틸포름아마이드로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 또는 이들의 혼합 용매인 것을 특징으로 하는 제1항의 신규 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체의 제조방법.
제4항에 있어서, 염기 존재하에서 카복실산 유도체(2)를 당량의 구아니딘과 반응시키는 경우,

상기 염기는 수산화나트륨, 수산화칼륨, 소듐카보네이트, 트리에틸아민 및 피리딘으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 무기 또는 유기염기이고; 그리고,

반응용매로는 벤젠 또는 톨루엔을 포함하는 방향족 하이드로카본 용매; 테트라하이드로퓨란을 포함하는 에테르계 용매; 다이클로로메탄 또는 클로로포름을 포함하는 할로겐화 하이드로카본 용매; 및 다이메틸포름아마이드로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 또는 이들의 혼합용매를 사용하는 것을 특징으로 하는 제1항의 신규 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체의 제조방법.
하기 반응식 2로 표시되는 바와 같이, 카복실산 화합물(3)을 축합제 존재하에 당량 또는 과량의 구아니딘과 반응하는 단계를 포함하여 이루어지는 제1항의 신규 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체의 제조방법.

<반응식 2>

(R¹, R² 및 X는 제1항의 화학식 1에서 정의한 바와 같다)
제7항에 있어서, 상기 축합제는 N,N-카르보닐다이이미다졸, 다이사이클로헥실카르보다이이미드, 다이아이소프로필카르보다이이미드, 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카르보다이이미드 및 다이페닐포스포닐아자이드로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 제1항의 신규 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체의 제조방법.
제7항에 있어서, 카복실산 화합물(3)을 축합제 존재하에 당량 또는 과량의 구아니딘과 반응하는 단계는 테트라하이드로퓨란 또는 1,4-다이옥산을 포함하는 에테르계 용매; 벤젠 또는 톨루엔을 포함하는 방향족 하이드로카본 용매; 다이클로로메탄 또는 클로로포름을 포함하는 할로겐화 하이드로카본 용매 및 다이메틸포름아미드로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 또는 이들의 혼합용매를 반응용매로 사용하는 것을 특징으로 하는 제1항의 신규 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체의 제조방법.
제4항, 제5항 또는 제7항에 있어서, 상기 구아니딘의 당량은 카복실산 유도체(2)에 대하여 1 ~ 10 당량인 것을 특징으로 하는 제1항의 신규 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체의 제조방법.
제1항의 화학식 1로 표시되는 신규 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 허혈성 심장질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
제11항에 있어서, 상기 허혈성 심장질환은 심근경색, 심부전증 또는 협심증인 것을 특징으로 하는 허혈성 심장질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
제1항의 화학식 1로 표시되는 신규 옥사졸-4-카르보닐구아니딘 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 수술요법 또는 약물요법 시술시에 심장보호용 약학적 조성물.
제13항에 있어서, 상기 수술요법은 관동맥우회술 또는 관동맥경피성형술이고, 상기 약물요법은 혈전 용해제를 이용한 재관류 요법인 것을 특징으로 하는 심장보호용 약학적 조성물.