CN113855689B - 黄杞苷或其异构体在制备治疗子宫内膜异位症的药物中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明属于天然药物领域，具体涉及黄杞苷或其异构体在制备治疗子宫内膜异位症的药物中的用途。另外地，本发明涉及一种治疗子宫内膜异位症的药物组合物，其包含黄杞苷或其异构体和益生元。动物实验结果表明，黄杞苷或其异构体能够显著改善实验动物的子宫内膜异位症症状，以及将小剂量益生元与黄杞苷或其异构体联用能够显著增强黄杞苷或其异构体治疗子宫内膜异位症的疗效。可见，黄杞苷或其异构体以及包含黄杞苷或其异构体和益生元的药物组合物具有开发成治疗子宫内膜异位症药物的前景，具有重要的社会效益和经济效益。

Description

黄杞苷或其异构体在制备治疗子宫内膜异位症的药物中的 用途

技术领域

本发明属于天然药物领域，具体涉及一种黄杞苷或其异构体在制备治疗子宫内膜异位症的药物中的用途。

背景技术

子宫内膜异位症(endometriosis,EMS)是指有活性的内膜细胞种植在子宫内膜以外的位置而形成的一种女性常见妇科疾病。内膜细胞本该生长在子宫腔内，但由于子宫腔通过输卵管与盆腔相通，因此使得内膜细胞可经由输卵管进入盆腔异位生长。目前对此病发病的机制有多种说法，其中被普遍认可的是子宫内膜种植学说。本病多发生于生育年龄的女性，青春期前不发病，绝经后异位病灶可逐渐萎缩退化。子宫内膜异位症的主要病理变化为异位内膜周期性出血及其周围组织纤维化，形成异位结节，痛经、慢性盆腔痛、月经异常和不孕是其主要症状。病变可以波及所有的盆腔组织和器官，以卵巢、子宫直肠陷凹、宫骶韧带等部位最常见，也可发生于腹腔、胸腔、四肢等处。临床实践显示，患者多呈现渐进性加重的盆腔纤维化、粘连、疼痛及不孕(约30-50％的EMS患者继发不孕)，以致严重影响广大女性的身心健康和生活质量，乃至整个家庭和社会的和谐。

虽然历经近一个半世纪的研究，目前对于EMS的发病机制仍有太多的未解之谜。药物和手术治疗仍是目前主要的治疗措施，但是复发仍是一个令业内困惑的问题。因此，深入解析内异症的发病机制将为业内更好的理解这种疾病并找到更有效的治疗措施奠定基础，对提高妇女健康素质和整个家庭和社会的健康和谐具有重要的战略意义。

子宫内膜的经血逆流学说是最为人们所公认的学说，然而，经血逆流发生在大多数妇女的月经周期中，却只有10％-15％的妇女罹患EMS；有研究显示子宫内膜间质细胞(ESC)内在异常与EMS相关，包括基因异常表达，内膜对激素的反应，增高的神经密度以及氧化应激；在正常的情况下，逆流至盆腔的子宫内膜被机体的免疫系统识别为“异物”所清除了，而在EMS患者的盆腹腔内，局部的免疫微环境很可能发生了改变，免疫细胞功能异常不仅不能够有效的清除异位的子宫内膜细胞，甚至帮助其在异位种植、生长；因此，近年来越来越多的证据显示EMS患者盆腹腔局部免疫微环境异常在EMS的发生和发展中扮演了不可或缺的作用，尤其是异位灶中各种免疫细胞以及产生的细胞因子。

目前治疗子宫内膜异位症的药物疗法主要是采用药物来对抗或抑制卵巢的周期性内分泌刺激。最初是用睾丸酮类的雄性激素，因副作用较大，而且效力亦不够强，已逐渐摒弃不用。后来则逐渐发展成为假孕疗法及假绝经疗法。

(1)假孕疗法用孕激素类药物，以更大的剂量不间断地长期服用，使得月经停止来潮，子宫内膜及异位的子宫内膜在药物作用下发生类似妊娠的反应，所以又叫假孕疗法。用于这种疗法的药物很多，并且还在发展，口服的主要有安宫黄体酮、普维拉、内美通等，肌注的有己酸孕酮。这种疗法至少要持续六个月，才可以使异位内膜停止活动，最后发生萎缩，从而产生疗效。

(2)假绝经疗法丹那唑是一种雄激素的衍生物，效果较好，但有比较大的副作用。目前广泛使用促性腺激素释放激素激动剂(GnRHa)，常用的叫戈舍瑞林，它主要是能非常强烈地抑制卵巢的功能，使其几乎完全失去作用，从而达到治疗目的，而且由于这种药物是一种长效缓释制剂，只需一个月皮下注射一次，非常方便。这类药物能使子宫内膜产生类似绝经妇女内膜萎缩的现象，故称假绝经疗法。

从上述已知的药物治疗方法来看，其主要使用雄激素或者是孕激素类药物，部分患者对于激素类药物存在明显的抵抗情绪，且这些药物对患者的卵巢功能均有不同程度的抑制作用。中医药在调理妇科内分泌方面具有得天独厚的优势，中药作用于EMS的临床疗效得到广泛认同，其最大优势是对卵巢功能无抑制作用。但是，中药汤剂味重量大，还有可能对胃肠道产生刺激，以及携带不方便，导致患者用药依从性较差，使得患者难以坚持长期使用。同时，由于中药方剂中药味较多使其成本和安全隐患较高，不利于进行有效的质量控制和大规模生产。

有鉴于此，以现代化的药理学研究方法，通过对天然产物活性成分单体进行深入研究和筛选，进而开发出疗效好、副作用小且服用方便的用于治疗子宫内膜异位症的药物势在必行。

本发明人长期致力于对治疗子宫内膜异位症的药物的研发，具有从分子和细胞水平到动物水平以及临床水平的子宫内膜异位症完整的药物研发平台。并且，此前申请了多项相关药物领域的发明专利，例如，CN202110662689.4、CN202110020372.0等等。在前期工作的基础上，本发明人采用现代药物研究方法对天然产物进行开发利用，结合大量药效学实验筛选，首次发现了黄杞苷或其异构体在制备治疗子宫内膜异位症的药物中的用途。另外地，本发明人还首次发现了将小剂量益生元与黄杞苷或其异构体联用能够显著增强黄杞苷或其异构体治疗子宫内膜异位症的疗效。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术的不足，实现采用现代药物研究方法对天然产物进行开发利用，结合大量药效学实验筛选，提供了一种黄杞苷或其异构体在制备治疗子宫内膜异位症的药物中的用途。另外地，本发明还发现了将小剂量益生元与黄杞苷或其异构体联用能够显著增强黄杞苷或其异构体治疗子宫内膜异位症的疗效。

具体地，通过以下几个方面的技术方案实现了本发明：

在第一个方面中，本发明提供了黄杞苷或其异构体在制备治疗子宫内膜异位症的药物中的用途。

作为可选的方式，在所述用途中，所述药物缓解子宫内膜异位症导致的腹痛和/或月经异常。

作为可选的方式，在所述用途中，所述黄杞苷的异构体选自异黄杞苷、新黄杞苷或新异黄杞苷的一种或多种。

优选地，所述所述黄杞苷的异构体为异黄杞苷。

作为可选的方式，在所述用途中，所述黄杞苷或其异构体是所述药物中的唯一活性成分。

在第二个方面中，本发明提供了一种治疗子宫内膜异位症的药物组合物，所述药物组合物包含黄杞苷或其异构体和益生元，所述黄杞苷或其异构体与所述益生元的重量比为20：1-5：1。

作为可选的方式，在所述药物组合物中，所述黄杞苷的异构体选自异黄杞苷、新黄杞苷或新异黄杞苷的一种或多种，所述益生元选自低聚果糖、低聚半乳糖、低聚木糖、低聚异麦芽糖、低聚乳糖、低聚壳聚糖、大豆低聚糖、菊粉、聚葡萄糖中的一种或多种；所述黄杞苷或其异构体与所述益生元的重量比为19：1、18：1、17：1、16：1、15：1、14：1、13：1、12：1、10：1、9：1、8：1、7：1或6：1。

作为可选的方式，在所述药物组合物中，所述所述黄杞苷的异构体为异黄杞苷，所述益生元为低聚木糖，所述黄杞苷或其异构体与所述益生元的重量比为9：1。

在第三个方面中，本发明提供了一种治疗子宫内膜异位症的药物制剂，所述药物制剂包含上述第一个方面所述的药物或者上述第二个方面所述的药物组合物，以及药学上可接受的载体。

作为可选的方式，在所述药物制剂中，所述药物制剂为口服剂型。

作为可选的方式，在所述药物制剂中，所述口服剂型为粉剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂或口服液。

优选地，所述口服剂型为片剂或胶囊剂。

本发明相对于现有技术，具有以下有益效果：

(1)本发明结合我国在天然产物研究方面的优势，首次筛选出天然产物单体黄杞苷或其异构体在治疗子宫内膜异位症方面的新用途，为中医药现代化提供了一种新思路。

(2)经药理学实验证明，黄杞苷或其异构体在子宫内膜异位症大鼠模型上具有良好的治疗作用，且无毒副作用，有较好的临床应用前景。

(3)本发明使用的各种天然产物单体来源广泛，均能够通过成熟方法生产，使得本发明药物组合物便于工业化大规模生产。此外，通过加入可药用载体将本发明药物组合物制成常规口服制剂，使药物治疗稳定，完善药效的发挥，且服用方便。

(4)令人意外的是，在本发明药物黄杞苷或其异构体中加入益生元，或者将本发明药物与益生元联用，在治疗子宫内膜异位症方面甚至显示出比单独使用本发明药物更强的协同增效作用，为临床上治疗子宫内膜异位症提供了更多治疗选择。

具体实施方式

为了便于本领域技术人员的理解，下面对本发明中涉及的各种主要活性成分进行描述。

如本文所用，“黄杞苷”属于二氢黄酮醇苷类化合物，黄杞苷(Engelitin)的化学名为(2R,3R)5,7,4′-三羟基二氢黄酮醇-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷。黄杞苷也广泛存在于自然界多种植物中，具有抗炎、抗癌、抗氧化、治疗骨质疏松、保肝、治疗慢性肾损伤、抗糖尿病、降尿酸等多种药理活性。

如本文所用，”黄杞苷异构体”是指黄杞苷在C-2和C-3位上存在立体异构现象，(2R,3R)：黄杞苷、(2S,3S)：新黄杞苷、(2S,3R)：异黄杞苷、(2R,3S)：新异黄杞苷。

如本文所用，“益生元”的概念由国际“益生元之父”——格伦·吉布索于1995年提出，系指一些不被宿主消化吸收却能够选择性地促进体内有益菌的代谢和增殖，从而改善宿主健康的有机物质。

成功的益生元应是在通过上消化道时，大部分不被消化而能被肠道菌群所发酵的。最重要的是它只能刺激有益菌群的生长，而不刺激有潜在致病性或腐败活性的有害细菌。最基本的益生元为碳水化合物，但从定义上来讲并不排除被用作益生元的非碳水化合物物质。理论上，任何可以减少有害菌种，而有益于促进健康的菌种或活动的抗生素都可以叫做益生元。

由于益生元不能被人体分解、吸收和利用，通过消化道到达结肠后，有的能被结肠菌群分解和利用，而促进结肠菌群的生长，在改善肠道微生态、促进脂质、蛋白质与矿物类代谢方面具有重要意义，所以愈来愈广泛地被应用于食品、饲料等领域中。

常用的益生元有低聚糖类，包括低聚果糖、低聚半乳糖、低聚木糖、低聚异麦芽糖、大豆低聚糖、菊粉等，有些微藻类也可作为益生元，如螺旋藻、节旋藻等，此外多糖(如云芝多糖、胡萝含氮多糖)、蛋白质水解物(如酪蛋白的水解物、α-乳清蛋白、乳铁蛋白等)以及天然植物中的蔬菜、中草药、野生植物等也能作为益生元使用。

如本文所用，本发明药物组合物中的各种活性成分可以在同一药物制剂中施用，也可以在不同药物制剂中施用。在不同药物制剂中施用的情况下，各种活性成分的剂型可以是相同的，也可以是不同的。并且，各种活性成分可以同时或顺序施用。

如本文所用，本发明药物制剂的剂型为粉剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂或口服液。优选地，本发明的剂型为片剂或胶囊剂。

如本文所用，本发明的“药学上可接受的载体”是指药物制剂领域常规的药物载体，选自填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、润湿剂、色素、矫味剂、溶剂、表面活性剂中的一种或几种。

本发明所述填充剂包括但不限于淀粉、微晶纤维素、蔗糖、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖等；所述润滑剂包括但不限于硬脂酸镁、硬脂酸、氯化钠、油酸钠、月桂醇硫酸钠、泊洛沙姆等；所述粘合剂包括但不限于水、乙醇、淀粉浆、糖浆、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮等；所述崩解剂包括但不限于淀粉泡腾混合物即碳酸氢钠和枸橼酸、酒石酸、低取代羟丙基纤维素等；所述助悬剂包括但不限于多糖如金合欢胶、琼脂、藻酸、纤维素醚和羧甲基甲壳酯等；所述溶剂包括但不限于水、平衡的盐溶液等。

优选地，可以将本发明的药物制成各种固体口服制剂、液体口服制剂等。药剂学可接受的口服剂固体制剂有：粉剂、普通片剂、分散片、肠溶片、颗粒剂、胶囊剂、滴丸、散剂等，口服液体制剂有口服液、乳剂等。

上述各种剂型可以根据药物制剂领域的常规工艺制备而成。

如本文所用，本发明的各种天然产物活性成分可以采用常规生物提纯方法从含有该活性成分的植物中提取分离得到，也可以购自市售产品。

在上文所述的医药用途中，对于各种活性成分的给药时间、给药次数和给药频率等等，需要根据病情的具体诊断结果而定，这在本领域技术人员掌握的技术范围之内。例如，将对小鼠或大鼠的治疗方案应用于人体上，所有药物对人的有效剂量可以通过该药物对小鼠或大鼠的有效剂量进行换算，这对于本领域的普通技术人员而言也是容易实现的。

下面参照具体的实施例对本发明做进一步说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用于解释本发明，并不用于限定本发明的范围。

实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道购买得到的常规产品。

下面实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售产品。

除非另外说明，否则本发明中涉及的百分比和份数均为重量百分比和重量份数。

实施例

实施例1：建立子宫内膜异位症动物模型

在子宫内膜异位症的研究当中，临床患者的子宫内膜异位症组织的获取有限，因此建立子宫内膜异位症动物模型非常必要。发明人选用70只雌性成熟的SPF级SD大鼠，建立子宫内膜异位症模型，经鉴定有51只SD大鼠造模成功，成功率为72.9％。具体的动物实验步骤(参考CN202110020372.0)如下：

(1)从黑龙江中医药大学附属第一医院动物中心获得70只性成熟的SPF级健康未交配雌性SD大鼠；

(2)1％戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔注射麻醉；

(3)常规消毒后取大鼠下腹正中、耻骨联合上1cm做一约3cm的纵切口；

(4)进腹腔后在膀胱背侧找到子宫；

(5)游离右侧子宫，近端离子宫角约1cm处结扎，远端离卵巢约1cm处结扎；

(6)切除结扎线中间的子宫组织，迅速置于盛有无菌生理盐水的培养皿中，剪取5mm×5mm大小的子宫内膜组织(含肌层)三块；取内膜组织一块，用4-0号的可吸收线以内膜面贴于左侧卵巢周围的脂肪组织上，并且四角缝合；再取内膜组织一块，用4-0号的可吸收线以内膜面贴于右侧腹壁上，并且四角缝合；

(7)缝合腹直肌切口，并向腹腔滴入40万U/只注射用青霉素钠；

(8)在腹壁切口右侧，于腹肌的皮下筋膜层之间打一隧道，以正好能植入另一块子宫内膜组织为宜。取最后一块子宫内膜组织平整的植入右侧隧道底部，使内膜面紧贴腹肌；

(9)剩余子宫组织置于福尔马林溶液中；

(10)常规关腹；

(11)术后每只大鼠腹腔注射40万U注射用青霉素钠预防感染，连续3天；

(12)术后第5天开始，每只SD大鼠每5天肌注苯甲酸雌二醇注射液一次(0.1mg/kg)，连续3次；

(13)清洁环境饲养，4周后剖腹观察移植内膜组织生长情况；

(14)观察到移植后的异位子宫内膜生长良好，体积明显增大，呈隆起透亮的小囊状，内部充满积液，表面血管清晰可见。形态学检查可见子宫内膜上皮细胞、腺体及间质细胞生长，并有分泌活动以及陈旧性出血。根据该标准，70只大鼠中经过鉴定有51只建模成功，建模成功率为72.9％。

实施例2：检测本发明药物对子宫内膜异位症的治疗作用

1.使用的药物：

孕三烯酮胶囊，购自北京紫竹药业公司，给药溶液用生理盐水稀释。异黄杞苷和低聚木糖购自沈阳三度医药科技公司，给药溶液用生理盐水稀释。

2.实验步骤：

将造模成功的51只SD大鼠随机分为5组(每组10只，剩余1只正常喂养)，即模型对照组(生理盐水灌胃组，1mL/次)10只，阳性对照组(孕三烯酮灌胃组，每日0.5mg/kg，1mL/次)10只，异黄杞苷组(异黄杞苷灌胃组，每日90mg/kg，1mL/次)，低聚木糖组(低聚木糖灌胃组，每日10mg/kg，1mL/次)，药物联用组(异黄芪苷，每日90mg/kg，低聚木糖，每日10mg/kg，灌胃，1mL/次)，连续给药4周。

4周后再次剖腹，取相应部位的异位内膜组织，置于福尔马林溶液中,石蜡包埋，切片后HE染色。在显微镜下观察子宫内膜形态。

3.病理结果判读标准：

+++表示异位生长的子宫内膜生长状态良好，间质比较多，可见多个腺体；

++表示异位生长的子宫内膜生长状态欠佳，间质明显减少，可见1-2个扩张的腺腔；

+表示异位生长的子宫内膜呈萎缩状态，间质少(只有++的1/2左右)，只有1个扩张的腺腔；

-表示未见明显内膜组织，腺体消失。

4.结果：

将模型对照组、阳性对照组、异黄杞苷组、低聚木糖组和药物联用组中的效果+++、++、+、-分别评分为3、2、1、0。然后记录每组中平均评分的结果如下表1所示：

表1：本发明药物对子宫内膜异位症的治疗作用(x±s，n＝10)

注：与模型组比较，**P＜0.01，***P＜0.001。

从上表1可见，与模型对照组相比，阳性对照组、异黄杞苷组异位子宫内膜组织形态变化明显，差异具有显著的统计学意义(**P＜0.01)。说明异黄芪苷具有治疗子宫内膜异位症的作用，并且其效果甚至优于目前临床上常用的治疗子宫内膜异位症的药物孕三烯酮。

此外，从表1还可见，与模型对照组相比，单独使用低聚木糖对子宫内膜异位症没有治疗作用。但是，将低剂量的低聚木糖与异黄杞苷联用后，低聚木糖确能够极其显著地增强异黄芪苷治疗子宫内膜异位症的作用(***P＜0.001)，取得了预料不到的技术效果。

并且，在上述动物实验中，未观察到黄杞苷或其异构体和/或益生元存在明显的不良反应，实验动物对其具有良好的耐受性。

综上所述，黄杞苷或其异构体以及包含黄杞苷或其异构体和益生元的药物组合物具有开发成治疗子宫内膜异位症药物的前景，具有重要的社会效益和经济效益。

显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims (9)

1.异黄杞苷在制备治疗子宫内膜异位症的药物中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述药物缓解子宫内膜异位症导致的腹痛和/或月经异常。

3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述异黄杞苷是所述药物中的唯一活性成分。

4.一种治疗子宫内膜异位症的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物包含异黄杞苷和低聚木糖，所述异黄杞苷与所述低聚木糖的重量比为20：1-5：1。

5.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于：所述异黄杞苷与所述低聚木糖的重量比为19：1、18：1、17：1、16：1、15：1、14：1、13：1、12：1、10：1、9：1、8：1、7：1或6：1。

6.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于：所述异黄杞苷与所述低聚木糖的重量比为9：1。

7.一种治疗子宫内膜异位症的药物制剂，其特征在于：所述药物制剂包含权利要求4至6中任一项所述的药物组合物，以及药学上可接受的载体。

8.根据权利要求7所述的药物制剂，其特征在于：所述药物制剂为口服剂型。

9.根据权利要求8所述的药物制剂，其特征在于：所述口服剂型为粉剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂或口服液。