CN110169992A - 一种改善肝内胆汁淤积的组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种改善肝内胆汁淤积的组合物，包括包膜处理的甘草酸盐衍生物/丁酸甘油酯颗粒、黄杞苷类‑大黄蒽醌类复合提取物、茵陈提取物以及选自槲皮素或二氢槲皮素的槲皮素类化合物，以及任选的益生菌活菌干粉制剂。本发明组合物副作用小，可以有效改善胆汁淤积症状和肠道内环境。

Description

一种改善肝内胆汁淤积的组合物及其制备方法

技术领域

本发明属于天然药物制剂技术领域，具体涉及一种改善肝内胆汁淤积的天然药物组合物及其制备方法。

背景技术

肝脏是人体重要的器官，除了储存糖原，在消化系统中也承担重要角色，其中胆汁分泌是肝脏的重要功能。由于各种因素致使肝细胞内胆汁排泌受损或胆管中胆汁流动受阻时，形成胆汁淤积。因此胆汁淤积也是一种从肝脏到十二指肠的胆汁流动减慢或阻塞的病症。胆汁淤积是临床上常见的肝部症状之一，临床上可表现为黄疸、皮肤瘙痒及食欲不振、乏力等。其中胆汁在胆管内淤积严重时，胆管内压力增高，毛细胆管破裂，胆汁进入淋巴，继而进入血液循环而导致黄疸。胆汁淤积是一种肝代谢的紊乱，进而可导致肝纤维化、肝硬化甚至肝功能衰竭。

根据发病原因的不同，胆汁淤积分为肝外胆汁淤积及肝内胆汁淤积两种。肝外胆汁淤积是指肝外及肝门处大胆管处发生阻塞，主要由于胆汁胆管腔内堵塞，以及胆管变窄而发生，目前对于肝外胆汁淤积的治疗主要采用手术手段。肝内胆汁淤积是由于肝细胞病变从而造成肝细胞胆汁排泄功能异常或毛细胆管胆汁摄取功能紊乱，继而发生病变产生胆汁淤积。其中，胆汁淤积症是婴儿较常见的疾病之一，目前主要治疗手段为护肝、退黄、病因及对症支持治疗。例如，熊去氧胆酸主要是通过钙途径和蛋白激酶C途径促进胆汁排出，改善胆汁酸的肠肝循环，调节脂质代谢，从而降低胆红素水平，并改善其他导致胆汁淤积的因素，防止肝脏组织学的病理改变。

妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)是妊娠中、晚期特有的并发症，以皮肤瘙痒和新生儿黄疸为主要临床表现，血清胆汁酸升高为特征。妊娠期肝内胆汁淤积症主要危害胎儿。

目前为止，已上市的治疗肝内淤积药物较少，副作用大，适合肝病较严重的情形，但是对于轻度和中度胆汁淤积，缺少相应的调理性药物组合物。

现有技术中，CN201610272580公开了用于预防胆汁淤积性黄疽并发症的颗粒剂及其制备方法，所述的颗粒剂主要包括以下重量份的成分：甲基斑蝥胺0.6-1.8份、芹菜素18-39份、熊果酸16.4-38.2份、染料木素15.1-35.3份、木犀草素13.6-32.3份、柠檬烯11.8-29.6份、棉子糖10.9-28.7份、黄芩提取物9.7-26.5份、茵陈提取物8.8-25.2份、矢车菊黄素7.5-23.3份、白桦脂酸6.6-21.4份、龙胆苦甙5.4-19.8份、填充剂53.8-128.4份、粘合剂45.7-103.3份、崩解剂14-35份、润滑剂1-5份、表面活性剂5.3-10.9份。

CN201710296758公开了一种用于治疗肝内胆汁淤积的中药，它是由以下重量配比的原料药材制备而成：茵陈蒿30份、跌破勒30份、海蓬子6份、川楝子6份、丝瓜络15份、吹云草15份、泽兰15份、赪桐叶30份。

CN201680072540公开了一种用于预防、改善或者治疗肝疾病的组合物以及预防或者治疗肝疾病的方法，其中组合物包含刺果瓜提取物或者其分级物作为有效成分，方法包括将上述组合物给药到肝疾病疑似个体的步骤。

CN201810871280公开了一种家禽胆转化物在制备抗胆汁淤积性肝病药物中的应用，所述家禽胆转化物的制备方法包括以下步骤：将家禽胆粉用溶液溶解后离心得到滤渣和滤液；

将步骤(1)得到的滤渣冷冻干燥保存；将滤液使用酶进行反应得到反应液；将步骤(2)得到的反应液冷冻干燥后与步骤(1)得到的滤渣进行混合得到家禽胆转化物。

CN201710474555公开了一种治疗胆汁淤积的中药组合物，所述中药组合物包括主要成分和辅助成分，所述主要成分按质量份数配比为：茵陈15-30份，栀子20-30份，溪黄草10-25份，金钱草20-30份，夏枯草10-20份，龙胆草15-25份，白花蛇舌草8-15份。

CN201710637626公开了一种葫芦烷型三萜皂苷及其制备方法和应用，该葫芦烷型三萜皂苷，其具有式Saxifraganoids A、Saxifraganoids B所示的结构。由篦齿虎耳草中提取的2种葫芦烷型三萜皂苷对肝癌细胞胆汁酸转运相关蛋白受体具有显著的调控作用，能显著上调胆盐输出泵BSEP与多药耐药相关蛋白3MRP3的表达。可进一步制备成治疗包括胆汁淤积型肝炎、原发性胆汁性肝硬化和非酒精性脂肪性肝病等的保肝利胆药物。

CN201610486420公开了一种用于治疗胆汁淤积性黄疽的复方制剂，所述的复方制剂是由以下重量份的成分组成：丁二磺酸腺苷蛋氨酸57～74份、甘草酸二铵49～63份、二羟基二丁醚42～51份、黄芩苷38～45份、甲硫氨酸27～36份、茴三硫22～33份、门冬氨酸钾镁17～25份、藏红花酸二甲酯14～19份、葡醛内酯12～17份、消胆胺酯9～13份、羟甲基烟酰胺3～7份、乳酸甲氧苄1～5份、布美他尼1～3份、枸橼酸哌嗪0.6～1份、硫唑嘌呤0.1～0.5份。其制备方法为：按所述配比将丁二磺酸腺苷蛋氨酸、甘草酸二铵、黄芩苷、甲硫氨酸、茴三硫、门冬氨酸钾镁、藏红花酸二甲酯、葡醛内酯、消胆胺酯、乳酸甲氧苄、羟甲基烟酰胺、布美他尼、枸橼酸哌嗪、硫唑嘌呤混合，在转速为800r/min的搅拌机中搅拌20～30min，搅拌的同时将所述重量份的二羟基二丁醚均匀的喷洒到混合粉中，制成所述的复方制剂。

在现有技术中，尽管存在诸多用于治疗胆汁淤积的天然药物类复方制剂，但是，要么组份繁多，配伍过于复杂，要么副作用大，效果单一，肝脏、肠道的综合调理效果差。因此，目前对于副作用小且可以有效改善胆汁淤积症状和肠道内环境的组合物制剂仍然存在迫切需求。

发明内容

本发明的目的提供一种用于改善肝内胆汁淤积的组合物及其制备方法，所述组合物同时可以调理受胆汁淤积影响的肠道微环境；所述组合物以天然产物为主要组分，副作用低，亦可用于调理婴儿胆汁淤积及孕妇妊娠期胆汁淤积症状。

具体地，本发明采用的技术方案如下：

本发明的第一个方面，提供一种改善肝内胆汁淤积的组合物，包括组分A、组分B，以及可选的组分C，其中各组分成分如下。

组分A：包膜处理的甘草酸盐衍生物/丁酸甘油酯颗粒；其中，所述的甘草酸盐衍生物优选为甘草酸-碱性氨基酸盐，所述甘草酸盐衍生物与丁酸甘油酯的质量比为1:0.05-0.5，优选地为1:0.05-0.2。

组分B：复合天然提取物颗粒，包括：黄杞苷类-大黄蒽醌类复合提取物、茵陈提取物以及选自槲皮素或二氢槲皮素的槲皮素类化合物；其中，黄杞苷类-大黄蒽醌类复合提取物、茵陈提取物、槲皮素类化合物的质量比为1:0.5-2:0.05-0.2，优选地，为1:0.5-1:0.05-0.1。

组分C：包括益生菌活菌干粉的制剂；其中，所述活菌为双歧杆菌(优选地，干粉制剂中活菌不低于10⁸cfu/g)。优选地，所述组分C还进一步包括益生元组分。其中，当包括益生元组分时，活菌干粉与益生元的质量比为1:10-30；所述益生元选自低聚果糖、低聚半乳糖中的至少一种。

优选地，所述双歧杆菌可选自乳双歧杆菌、两歧双歧杆菌、长双歧杆菌等本领域有益菌属，其干粉制剂可商购得到。

进一步优选地，选自长双歧杆菌属。

本发明所述组合物中，组分A、组分B与组分C(若存在时)中活菌干粉的质量比为1:(0.5-2):(1-15)；优选地，为1:(0.5-1):(1-10)。

本发明所述组合物可以制成胶囊剂、片剂、颗粒剂、丸剂的形式，优选地制成胶囊剂、片剂或颗粒剂的形式。

本发明的第二个方面，提供上述组合物的制备方法，包括步骤：

(1)由甘草酸制备甘草酸-碱性氨基酸盐，并对甘草酸盐/丁酸甘油酯混合物进行包膜处理；其中，所述甘草酸盐衍生物与丁酸甘油酯的质量用量比为1:0.05-0.5；

(2)制备黄杞苷类-大黄蒽醌类复合提取物；

(3)将比例量的黄杞苷类-大黄蒽醌类复合提取物、茵陈提取物以及槲皮素类化合物及辅料混合均匀，制备软材并造粒得到复合天然提取物颗粒；

(4)将上述步骤制备的包膜甘草酸盐衍生物/丁酸甘油酯颗粒、复合天然提取物颗粒以及可选的益生菌干粉制剂按比例量混合复配，从而得到所述的组合物。

优选地，本发明所述组合物包括益生菌干粉制剂。

其中，本发明所述组合物中所述包膜甘草酸盐衍生物/丁酸甘油酯颗粒、复合天然提取物颗粒以及益生菌干粉的质量比为1:0.5-2:1-15；优选为1:0.5-1:1-10。

进一步地，本发明还包括将上述组合物制成胶囊剂、片剂、颗粒剂、丸剂的步骤。其制备方法可按照本领域已知的常规方法进行。

具体地，本发明所述的组合物制备方法中，甘草酸盐衍生物的制备过程如下：

将甘草酸与精氨酸/赖氨酸组成的复合氨基酸按照重量比1:0.5-1的比例混合，置于带有搅拌的反应釜中，加入8-10倍重量的去离子水，加热至60-70℃，搅拌反应4-6h；将所得反应液蒸发浓缩至30-50wt％，冷却至室温，经冷冻干燥得到含有甘草酸氨基酸盐衍生物的结晶粉末。

其中，所述的复合氨基酸中精氨酸与赖氨酸的质量比为1:0.5-1。

本发明所述的制备方法中，包膜处理的甘草酸盐-丁酸甘油酯颗粒的制备过程如下：

(1)按重量份计，将丁酸甘油酯1-3份与5倍重量的β-环糊精在室温下搅拌包合均匀，形成丁酸甘油酯包埋物，然后与制备的甘草酸氨基酸盐衍生物10-12份混合均匀，备用；

(2)基于上述混合原料重量，向其中加入0.5-1倍重量的玉米淀粉，以及0.1-0.2倍质量的微晶纤维素，搅拌均匀，用1-2wt％的羟甲基纤维素钠溶液制备软材，在制粒机中制粒，控制粒度约为60目；

(3)在包衣机内向所得颗粒喷涂质量分数为1-2wt％的聚乙烯醇醋酸苯二甲酸酯-乙醇肠溶薄膜包衣溶液(薄膜包衣溶液喷涂量为颗粒产品的10-100wt％)；然后烘干干燥，40-60目筛分出料，得到包膜处理的甘草酸盐-丁酸甘油酯产品。

本发明所述的制备方法中，所述黄杞苷类-大黄蒽醌类复合提取物的制备过程如下：

(1)按重量份计，取干燥黄杞叶10-20份、制大黄5-10份，粉碎，加入相对于混合物8～10倍重量的体积浓度为60％～90％的乙醇水溶液，加热回流提取3～4次，每次提取1-2小时，过滤，合并提取液，回收乙醇，浓缩至每g生药对应1-3mL的药液浓度，过滤滤取上清液；

(2)将所得上清液用大孔吸附树脂柱进行柱层析纯化，用3-4BV去离子水洗涤所述大孔吸附树脂柱，弃流出液，然后以2-3BV/h的流速进行梯度洗脱，流程如下：用20-25％体积分数的乙醇作洗脱剂洗脱3-4BV，收集洗脱液组分A；再用70-75％的乙醇作洗脱剂洗脱3-5BV，收集洗脱液组分B；最后用95-100％的乙醇作流动相洗脱3BV，收集洗脱液组分C，将洗脱液组分A、B、C合并，减压浓缩并回收乙醇，浓缩至每g生药对应1-1.5ml的浓缩液，冷却；然后将所得浓缩液50-60℃减压真空干燥，粉碎得到黄杞苷类-大黄蒽醌类复合提取物；

其中，所述大孔树脂柱层析的合适种类可商购得到，例如LX-2000、D101型或HPD-200型。

(3)将所制得的黄杞苷类-大黄蒽醌类复合提取物与茵陈提取物、槲皮素或二氢槲皮素粉末产品按照10：2-10：0.1-0.5的重量比混合，得到干粉混合物；基于干粉混合物重量，加入4-5％的羧甲基纤维素钠，0.5-1倍重量的淀粉，用70-90％的乙醇溶液润湿制粒，干燥，得到包含复合提取物的颗粒组分。

其中，所述茵陈提取物、槲皮素类化合物可以商购得到，也可以按照本领域已知的一般方法提取得到。

优选地，本发明所述组合物可以制成胶囊的形式，例如基于100重量份的组合物，与5-8份重量份的硬脂酸镁或硬脂酸钙混合，然后分装入明胶胶囊中从而得到胶囊剂。

进一步地，也可以制成其他剂型形式。

本发明组合物可以使用本领域熟知的方法来制备药物剂型，可以根据常用的方法以散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、悬浊剂、乳剂、糖浆等的口服型剂型而使用，还可以包含适宜的载体、辅料以及稀释剂。例如，可包含的载体有，乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、淀粉、阿拉伯树胶、海藻酸钠、明胶、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素等。制剂化时，使用常用的填充剂、增量剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、表面活性剂等的稀释剂或者辅料来配制。

优选的用于口服给药的固体制剂包含片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂等，通过在淀粉、蔗糖或者乳糖、明胶等辅料来配制。另外，还可以使用硬脂酸镁、滑石粉等润滑剂。

本发明的组合物可以单独使用，也可以与其他药学活性化合物联合使用或者以适当的组合来使用。

另外，还可以食品辅助添加剂的形式使用本发明组合物。

本发明的第三个方面，提供上述组合物用于改善胆汁淤积和调理肠道微环境的用途。

示例性地，其用量为1-1000mg/kg/d，优选10-500mg/kg/d。

具体地，可以视情况1次给药或者分多次给药。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

(1)本发明组合物中甘草酸氨基酸盐-丁酸甘油酯颗粒具有良好的肠溶效果，避免了胃部损失；通过肠溶包衣增加了甘草酸、丁酸等有效组分的肠道吸收率和生物利用度。其中，甘草酸在药理研究中证明具有良好的抗炎、保肝、调节免疫功能以及稳定酶体膜等多方面的药理作用，没有激素样副作用。优良的抗炎作用减轻了胆汁淤积等带来的肝损伤，抑制肝内纤维化增生及肝细胞变性坏死等。甘草酸氨基酸盐为化学性质比较稳定的晶体，溶于水也不会发生聚合现象，肠溶包衣的甘草酸盐避免了直接使用甘草酸时在胃部环境下易聚合、肠道吸收率低，以及带来的生物利用度低的问题。

(2)通常情况下，由于胆汁淤积时由肝肠循环排泄到肠道的毒性代谢物质在肠道聚集，影响了肠道内环境，容易导致肠道菌群失调。双歧杆菌-益生元组分可以促进肝肠循环排泄到肠道的胆汁酸盐等毒性代谢物质的降解，减轻肠源性内毒素，从而达到改善胆汁淤积症状下肠道微环境、修复肠粘膜屏障的作用。

(3)丁酸甘油酯组分在肠内水解释放丁酸和甘油成分，修复肠道内环境，可进一步促进双歧杆菌及其他肠道有益菌数量增殖，维持肠道微生物菌群的稳定，从而达到协同调理肠道微生物菌群平衡的目的。

同时，本发明组合物中的益生元是双歧杆菌等有益菌的有益营养组分补充和活性增强剂，具有改善消化道菌群和促进胆汁酸盐水解的功能。

(4)本发明组合物中黄杞苷类-大黄蒽醌类复合提取物与茵陈提取物为传统中药的有效组分，具有保肝利胆、清湿热、退黄疸的作用。现有技术表明，茵陈提取物、黄杞苷类及大黄提取物可明显降低肝损伤模型的ALT值，促进肝细胞再生，同时可以疏通肝内毛细胆管，改善胆小管内胆汁瘀积，促进胆囊收缩、胆汁分泌和胆红素排泄。本发明在常用药材基础上进一步提取主要有效组分并复配其他天然例如槲皮素类化合物，上述有效组分的复配可以协同有效减少肝脏组织和血清中毒性胆酸盐浓度，且对ANIT诱导的胆汁淤积有显著的抑制作用，同时改善肝细胞损伤和胆汁排泄抑制。

具体实施方式

下面通过具体的制备例和实施例对本发明进行详细说明，但这些例举性实施方式的用途和目的仅用来例举本发明，并非对本发明的实际保护范围构成任何形式的任何限定，更非将本发明的保护范围局限于此。

以下本发明的优选实施方法的详述以及包括的实施例可更容易地理解本发明的内容。除非另有限定，本文使用的所有技术以及科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。当存在矛盾时，以本说明书中的定义为准。

本文所用术语“由…制备”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。

制备例1

制备包膜甘草酸盐-丁酸甘油酯颗粒

(1)将100g甘草酸与30g精氨酸、20g赖氨酸组成的复合氨基酸混合置于带有搅拌的反应釜中，加入1L去离子水，加热至65℃，搅拌反应4h；将所得反应液蒸发浓缩至约300g冷却至室温，冷冻干燥机内冷冻干燥得到含有甘草酸氨基酸盐衍生物的结晶粉末，色谱分析晶体中甘草酸残留量，测得甘草酸成盐率约94％。

(2)将单丁酸甘油酯10g与50gβ-环糊精在室温下搅拌包合均匀形成丁酸甘油酯包埋物，加入上述制备的甘草酸氨基酸盐100g混合均匀得到混合物；向其中加入80g玉米淀粉以及20g微晶纤维素，搅拌均匀，用1wt％的羟甲基纤维素钠溶液制备软材，在制粒机中制粒，过60目筛。

(3)在包衣机内向所得颗粒喷涂质量分数为2wt％的聚乙烯醇醋酸苯二甲酸酯-乙醇肠溶薄膜包衣溶液125ml；烘干干燥，60目筛分出料，得到包膜处理的甘草酸盐-丁酸甘油酯产品约0.28kg。

制备例2

制备复合天然提取物颗粒

(1)按重量份计，取干燥黄杞叶455g、制大黄242g，粉碎，用75％体积分数的乙醇水溶液加热回流提取，重复提取3次，每次提取1小时，过滤，合并提取液，回收乙醇，浓缩至1050mL，过滤取上清液。

(2)将所得上清液分批用D101型大孔吸附树脂柱进行柱层析纯化，每批纯化程序为：用3BV去离子水洗涤所述大孔吸附树脂柱，弃流出液，然后以3BV/h的流速依次进行梯度洗脱：先用20％体积分数的乙醇作洗脱剂洗脱3BV，收集得到洗脱液A；再用75％的乙醇作洗脱剂洗脱4BV，收集得到洗脱液B；最后用95％的乙醇作流动相洗脱3BV，收集得到洗脱液C。将所有的洗脱液组分合并减压浓缩至约700ml，冷却；然后将所得浓缩液50℃减压真空干燥，粉碎，得到黄杞苷类-大黄蒽醌类复合提取物。

(3)称取所制得的黄杞苷类-大黄蒽醌类复合提取物与商购的茵陈提取物、槲皮素，按照10:8:0.5的重量比混合，得到干粉混合物约51g；基于干粉混合物重量，加入4％的羧甲基纤维素钠，0.5倍重量的淀粉，用70％乙醇溶液喷雾制粒、干燥，得到复合天然提取物颗粒约84g。

制备例3

将上述制备的包膜甘草酸盐衍生物/丁酸甘油酯颗粒5g、复合天然提取物颗粒按照1:1的重量比混合复配，得到组合物10g。

可选地，可按照本领域一般方法与辅料混合并灌装于胶囊内，做成胶囊制剂。

制备例4

将上述制备的包膜甘草酸盐衍生物/丁酸甘油酯颗粒5g、复合天然提取物颗粒以及长双歧杆菌干粉按照1:0.8:1的重量比混合复配，得到组合物14g。

可选地，可按照本领域一般方法与辅料混合并灌装于胶囊内，做成胶囊制剂。

制备例5

将上述制备的包膜甘草酸盐衍生物/丁酸甘油酯颗粒5g、复合天然提取物颗粒以及长双歧杆菌干粉-益生元制剂(含低聚果糖成分，活菌与低聚果糖的质量比为1:10)按照1:1:10的重量比混合复配，得到所述组合物60g。

对比实施例

将上述制备例2制备的复合天然提取物颗粒5g以及淀粉按照1:1的重量比混合复配，得到对比组合物10g。

效果实施例

本发明组合物对α-异硫氰酸萘酯(ANIT)致肝内胆汁淤积模型大鼠的作用效果试验

实验动物：雄性Wistar大鼠(200-240g)，30只。

主要实验材料：ALT试剂盒，AST试剂盒，ALP试剂盒，T-Bil试剂盒，TBA试剂盒，α-萘异硫氰酸酯(ANIT；购自Sigma公司)；熊去氧胆酸(UDCA；购自TCI公司)。

实验方法：

1)称取α-萘异硫氰酸酯粉末用橄榄油溶解配制成10mg/mL溶液，造模时按照ANIT100mg/kg体重灌胃给予大鼠。UDCA用0.5％羧甲基纤维素钠溶解至10mg/mL备用。

2)将大鼠分为6组，每组5只，分别为正常组、ANIT模型组、UDCA组(熊去氧胆酸组,UDCA50mg/kg)、组合物1组(200mg/kg)、组合物2组(220mg/kg)、对比例组(200mg/kg)；其中组合物1为制备例3制得的组合物，组合物2为制备例4制得的组合物，对比例组为对比实施例制得的对比组合物。各组大鼠灌胃给药，正常组、模型组大鼠灌胃等体积生理盐水；每日给药一次，给药周期5天。第5次给药12h后，除正常组外，其余各组小鼠按照100mg(ANIT)/kg剂量灌胃给予大鼠ANIT造模。造模12h、36h后继续给药各一次。实验结束前12h禁食(不禁水)，所有组别在给予ANIT后48h(即末次给药12h后)乙醚麻醉摘眼球取血，进行血清生化指标测定。

3)大鼠经乙醚麻醉眼眶取血后，置于EP管中室温静置3h，4000rpm离心20min，收集上层血清，利用全自动生化分析仪测定血清中ALT(谷丙转氨酶)、AST(天冬氨酸氨基转移酶)、ALP(血清碱性磷酸酶)的酶活力(单位U/L)，以及血清总胆红素(T-BIL)、总胆汁酸(TBA)含量(单位：微摩尔/升)。实验数据采用SPSS软件统计分析，以单因素方差分析进行比较，数据以均数±标准差表示，结果见下表1-2。

表1 ANIT所致胆汁淤积小鼠血清ALT、AST、ALP生化参数

表2 ANIT所致胆汁淤积小鼠血清T-BIL、TBA含量(单位：微摩尔/升)

如表1-2所示，ANIT模型组小鼠血清学指标较空白组小鼠显著升高，且差异具有显著性(P＜0.05)。与模型组比较，本发明组合物连续给药后能显著降低ANIT造成的血清各项指标升高情况，差异具有统计学意义(P＜0.05)。其中组合物2组的血清指标整体上差于组合物1组，可能是由于活菌组分的加入使得其他组分有效含量降低所致。结果表明，本发明组合物对ANIT所致胆汁淤积具有改善作用，且一些指标的改善程度上优于UDCA。

大鼠肝脏左外侧叶组织切片经染色(H-E染色)后的组织病理学结果表明，模型组不仅ALT、AST、ALP、TBIL、TBA各项生化指标均显著升高，而且肝脏出现明显损伤以及胆汁淤积，证明造模成功；而本发明组合物实验组均能减轻肝炎症细胞浸润，表中血生化数据也表明本发明组合物可以显著降低各项损伤的血生化指标。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (8)

1.一种用于改善肝内胆汁淤积的组合物，其特征在于，包括以下组分：

(1)肠溶包膜处理的甘草酸盐衍生物/丁酸甘油酯颗粒；其中，所述的甘草酸盐衍生物为甘草酸-碱性氨基酸盐，所述甘草酸盐衍生物与丁酸甘油酯的质量比为1:0.05-0.5；

(2)复合天然提取物颗粒，包括：黄杞苷类-大黄蒽醌类复合提取物、茵陈提取物以及选自槲皮素或二氢槲皮素的槲皮素类化合物；其中，黄杞苷类-大黄蒽醌类复合提取物、茵陈提取物、槲皮素类化合物的质量比为1:0.5-2:0.05-0.2；优选为1:0.5-1:0.05-0.1；

(3)可选的益生菌活菌干粉制剂；其中，所述益生菌为双歧杆菌。

2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述的活菌干粉制剂进一步地包含益生元组分，所述益生元选自低聚果糖、低聚半乳糖中的至少一种；其中，活菌与益生元的质量比为1:10-30；所述双歧杆菌选自乳双歧杆菌、两歧双歧杆菌、长双歧杆菌。

3.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，肠溶包膜处理的甘草酸盐衍生物/丁酸甘油酯颗粒、复合天然提取物颗粒与益生菌活菌的质量比为1:(0.5-2):(1-15)。

4.如权利要求1-3所述组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)由甘草酸制备甘草酸-碱性氨基酸盐，并对甘草酸盐/丁酸甘油酯混合物进行包膜处理；其中，所述甘草酸盐衍生物与丁酸甘油酯的质量用量比为1:0.05-0.5；

(2)制备黄杞苷类-大黄蒽醌类复合提取物；

(3)将比例量的黄杞苷类-大黄蒽醌类复合提取物、茵陈提取物以及槲皮素类化合物及辅料混合均匀，制备软材并造粒得到复合天然提取物颗粒；

(4)将上述步骤制备的包膜甘草酸盐衍生物/丁酸甘油酯颗粒、复合天然提取物颗粒以及可选的益生菌干粉制剂按比例量混合复配，从而得到所述的组合物。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)具体如下：

(1)将甘草酸与精氨酸/赖氨酸组成的复合氨基酸按照重量比1:0.5-1的比例混合，置于带有搅拌的反应釜中，加入8-10倍重量的去离子水，加热至60-70℃，搅拌反应4-6h；将所得反应液蒸发浓缩至30-50wt％，冷却至室温，经冷冻干燥得到含有甘草酸氨基酸盐衍生物的结晶粉末；

(2)按重量份计，将丁酸甘油酯1-3份与5倍重量的β-环糊精在室温下搅拌包合均匀，形成丁酸甘油酯包埋物，然后与制备的甘草酸氨基酸盐衍生物10-12份混合均匀；

(3)基于上述混合原料重量，向其中加入0.5-1倍重量的玉米淀粉，以及0.1-0.2倍质量的微晶纤维素，搅拌均匀，用1-2wt％的羟甲基纤维素钠溶液制备软材，在制粒机中制粒，控制粒度约为60目。

(4)在包衣机内向所得颗粒喷涂质量分数为1-2wt％的聚乙烯醇醋酸苯二甲酸酯-乙醇肠溶薄膜包衣溶液(薄膜包衣溶液喷涂量为颗粒产品的10-100wt％)；然后烘干干燥，40-60目筛分出料，得到包膜处理的甘草酸盐-丁酸甘油酯产品。

6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)具体如下：

(1)按重量份计，取干燥黄杞叶10-20份、制大黄5-10份，粉碎，加入相对于混合物8～10倍重量的体积浓度为60％～90％的乙醇水溶液，加热回流提取3～4次，每次提取1-2小时，过滤，合并提取液，回收乙醇，浓缩至每g生药对应1-3mL的药液浓度，过滤滤取上清液；

(2)将所得上清液用大孔吸附树脂柱进行柱层析纯化，用3-4BV去离子水洗涤所述大孔吸附树脂柱，弃流出液，然后以2-3BV/h的流速进行梯度洗脱，流程如下：用20-25％体积分数的乙醇作洗脱剂洗脱3-4BV，收集洗脱液组分A；再用70-75％的乙醇作洗脱剂洗脱3-5BV，收集洗脱液组分B；最后用95-100％的乙醇作流动相洗脱3BV，收集洗脱液组分C，将洗脱液组分A、B、C合并，减压浓缩并回收乙醇，浓缩至每g生药对应1-1.5ml的浓缩液，冷却；然后将所得浓缩液50-60℃减压真空干燥，粉碎得到黄杞苷类-大黄蒽醌类复合提取物；

(3)将所制得的黄杞苷类-大黄蒽醌类复合提取物与茵陈提取物、槲皮素或二氢槲皮素粉末产品按照10：2-10：0.1-0.5的重量比混合，得到干粉混合物；基于干粉混合物重量，加入4-5％的羧甲基纤维素钠，0.5-1倍重量的淀粉，用70-90％的乙醇溶液润湿制粒，干燥，得到包含复合提取物的颗粒组分。

7.包含权利要求1-3所述组合物的药物制剂，选自散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、悬浊剂或乳剂。

8.权利要求1-3所述组合物用于改善胆汁淤积的用途。