CN113854200B - 一种利用蜜蜂大规模收集待筛查转基因油菜花粉的方法 - Google Patents
一种利用蜜蜂大规模收集待筛查转基因油菜花粉的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113854200B CN113854200B CN202110988523.1A CN202110988523A CN113854200B CN 113854200 B CN113854200 B CN 113854200B CN 202110988523 A CN202110988523 A CN 202110988523A CN 113854200 B CN113854200 B CN 113854200B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- pollen
- beehive
- bees
- rape
- powder
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000257303 Hymenoptera Species 0.000 title claims abstract description 41
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 title claims abstract description 34
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 34
- 241000264877 Hippospongia communis Species 0.000 claims abstract description 18
- 241000256844 Apis mellifera Species 0.000 claims description 7
- 208000024780 Urticaria Diseases 0.000 claims description 2
- 241000256843 Apis mellifera ligustica Species 0.000 claims 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 26
- 238000005070 sampling Methods 0.000 abstract description 5
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 22
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 16
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 14
- 101150103518 bar gene Proteins 0.000 description 9
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 6
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 5
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 101150047832 hpt gene Proteins 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 3
- 235000014698 Brassica juncea var multisecta Nutrition 0.000 description 2
- 235000006008 Brassica napus var napus Nutrition 0.000 description 2
- 240000000385 Brassica napus var. napus Species 0.000 description 2
- 235000006618 Brassica rapa subsp oleifera Nutrition 0.000 description 2
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 description 2
- 240000004713 Pisum sativum Species 0.000 description 2
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 2
- 239000006101 laboratory sample Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 2
- 241000219194 Arabidopsis Species 0.000 description 1
- 235000016068 Berberis vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 description 1
- 240000006432 Carica papaya Species 0.000 description 1
- 235000009467 Carica papaya Nutrition 0.000 description 1
- 244000298479 Cichorium intybus Species 0.000 description 1
- 235000007542 Cichorium intybus Nutrition 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 244000241257 Cucumis melo Species 0.000 description 1
- 235000015510 Cucumis melo subsp melo Nutrition 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 244000004281 Eucalyptus maculata Species 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 241000219146 Gossypium Species 0.000 description 1
- 235000004431 Linum usitatissimum Nutrition 0.000 description 1
- 240000006240 Linum usitatissimum Species 0.000 description 1
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 1
- 241000220225 Malus Species 0.000 description 1
- 235000011430 Malus pumila Nutrition 0.000 description 1
- 235000015103 Malus silvestris Nutrition 0.000 description 1
- 240000004658 Medicago sativa Species 0.000 description 1
- 235000017587 Medicago sativa ssp. sativa Nutrition 0.000 description 1
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 1
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 244000141353 Prunus domestica Species 0.000 description 1
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 1
- 244000061458 Solanum melongena Species 0.000 description 1
- 235000002597 Solanum melongena Nutrition 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- FJJCIZWZNKZHII-UHFFFAOYSA-N [4,6-bis(cyanoamino)-1,3,5-triazin-2-yl]cyanamide Chemical compound N#CNC1=NC(NC#N)=NC(NC#N)=N1 FJJCIZWZNKZHII-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 210000001520 comb Anatomy 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 244000037666 field crops Species 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 239000012804 pollen sample Substances 0.000 description 1
- 238000012257 pre-denaturation Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000004080 punching Methods 0.000 description 1
- 238000007859 qualitative PCR Methods 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K59/00—Honey collection
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明提供了一种利用蜜蜂大规模收集待筛查转基因油菜花粉的方法，属于转基因植物检测技术领域。所述方法为准备蜂箱，在蜂箱中装有若干个有蜂王的巢脾，在蜂箱的出入口处安装脱粉器；将蜂箱置于盛花期油菜田中，在所述蜂箱的脱粉器下放置接粉盒，工蜂开始取粉；待取粉持续4～6h后，收集接粉盒中的花粉。利用蜜蜂大规模筛查田间种植油菜转基因成分的方法操作简便，可以减少人工成本，同时本发明所述方法与常用的多点抽样检测的方法相比，检测结果准确可靠，覆盖性更广，随机性更好。
Description
技术领域
本发明属于转基因植物检测技术领域，具体涉及一种利用蜜蜂大规模收集待筛查转基因油菜花粉的方法。
背景技术
在转基因监管工作中，对重点单位、重点区域、重点作物的大规模转基因成分筛查是必要手段。对田间作物的抽检，一般采用多点取样混合提取。根据《中华人民共和国国家标准农业部2031号公告-19-2013，转基因植物及其产品成分检测抽样》规定的方法，根据抽样计划和数量，利用对角线法抽取单个植株样品，每个植株抽样时，利用打孔器在植株叶片上打孔或剪刀剪取植株叶片获得份样。通常情况下，均匀批的每批份样数不低于50个，不均匀批的每批份样数不低于100个。抽取的样品混匀获得原始样品，对原始样品进行缩分，获得实验室样品。最后对获得的实验室样品进行核酸检测。然而，对大面积种植的油菜进行转基因成分筛查工作，一般采用多点单株取样混合提取DNA进行检测，但很难做到全覆盖。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种利用蜜蜂大规模收集待筛查转基因油菜花粉的方法，具有操作简便、覆盖面积广和收集的花粉检测准确性高的特点。
本发明提供了一种利用蜜蜂大规模收集待筛查转基因油菜花粉的方法，包括以下步骤：
1)准备蜂箱，在所述蜂箱中装有若干个有蜂王的巢脾，在所述蜂箱的出入口处安装脱粉器；
2)将步骤1)所述蜂箱置于盛花期油菜田中，在所述蜂箱的脱粉器下放置接粉盒，工蜂开始取粉；
3)待取粉持续4～6h后，收集接粉盒中的花粉。
优选的，步骤1)中每个蜂箱中装有6～10个有蜂王的巢脾。
优选的，所述巢脾在放入蜂箱前清除巢脾中原有花粉。
优选的，步骤2)中所述蜂箱的位置距离油菜田边缘为100～1500m。
优选的，步骤2)中所述蜂箱预先前一天晚上放置与油菜田中。
优选的，步骤2)中工蜂开始取粉的时间为晴朗天气的上午8点。
优选的，所述油菜田的面积为1～6000亩。
优选的，所述蜜蜂包括意大利蜜蜂。
本发明提供了一种利用蜜蜂大规模收集待筛查转基因油菜花粉的方法，本发明利用蜜蜂采集蜂蜜的性能，进行收集待筛查的转基因油菜花粉，在较大范围内只需放置1个蜂箱，检测1个花粉样品即可初步完成对蜂箱周边油菜田的转基因种植情况的筛查，与常用的多点抽样检测的方法相比，具有覆盖范围广、采集随机性好的特点，同时大大减少人工投入的成本，操作简便。以蜂箱为中心的覆盖面积为3799400m2，约6000亩。研究结果显示蜂箱花粉中转基因成分含量检出值要显著低于100～200m的蜂箱中花粉的检出值，但外源转基因元件的ΔCt值仍在2.85～6.66范围内，能较为准确的判定为阳性。蜜蜂采蜜的飞行距离一般在2千米左右，所以利用蜜蜂筛查油菜转基因成分的覆盖范围，仍有较大的提升空间。
附图说明
图1为蜂箱放置位置示意图。
具体实施方式
本发明提供了一种利用蜜蜂大规模收集待筛查转基因油菜花粉的方法，包括以下步骤：
1)准备蜂箱，在所述蜂箱中装有若干个有蜂王的巢脾，在所述蜂箱的出入口处安装脱粉器；
2)将步骤1)所述蜂箱置于盛花期油菜田中，在所述蜂箱的脱粉器下放置接粉盒，工蜂开始取粉；
3)待取粉持续4～6h后，收集接粉盒中的花粉。
本发明准备蜂箱，在所述蜂箱中装有若干个有蜂王的巢脾，在所述蜂箱的出入口处安装脱粉器。
本发明对所述蜂箱的规格没有特殊限制，采用本领域所熟知的蜂箱即可。在本发明实施例中，所述蜂箱的规格优选为0.51m×0.41m×0.26m。一个蜂箱中优选装有6～10个有蜂王的巢脾。所述巢脾为蜂脾相称。所述巢脾优选在放入蜂箱前清除巢脾中原有花粉，以便去除非采集地花粉的干扰。本发明对所述巢脾的来源没有特殊限制，采用本领域能正常采粉取蜜的巢脾即可。在本发明实施例中，所述巢脾购自武汉市洪山区绿色路一家养蜂场。本发明对所述蜜蜂的种类不做具体限制，采用本领域所熟知的密封品种即可。为了举例说明本发明利用蜜蜂采集油菜花粉的方法，以意大利蜜蜂为例进行说明，但不应理解为对本发明保护范围的限制。
在本发明中，在所述蜂箱的出入口处安装脱粉器，以便去除工蜂后足上采集的花粉团。本发明对所述脱粉器种类不做具体限定，采用本领域所熟知的脱粉器即可。
得到蜂箱后，本发明将所述蜂箱置于盛花期油菜田中，在所述蜂箱的脱粉器下放置接粉盒，工蜂开始取粉。
在本发明中，所述蜂箱优选预先前一天晚上放置与油菜田中，使蜂群稳定。所述蜂箱的位置距离油菜田边缘优选为100～1500m，更优选为500～1100m，更优选为800m。根据待筛选油菜花种植面积，还优选增设蜂箱。每两个蜂箱的间距不低于2000m。工蜂开始取粉的时间优选为晴朗天气的上午8点。蜜蜂的花粉采集高峰与所在地多数植物的散粉规律相关：油菜通常每天开花时间一般在上午7时到12时，以9～11时开花最盛。因此，在上午九点之前开始取粉有利于采集新鲜油菜花粉。所述油菜田的面积优选为1～6000亩。在本发明实施例中，花粉采集试验地点为中国农业科学院油料作物研究所汉川基地，位于湖北省汉川市汈汊湖区许家村，GPS定位为N30°40'41″，E113°43'39″。油菜花种植面积约6000亩。所述接粉盒的大小与脱粉器相适应，保证花粉团全部落入接粉盒中。
待取粉持续4～6h后，收集接粉盒中的花粉。
在取粉持续4～6h后，接粉盒中花粉量达到1.89～45.44g。取黄色蜜的油菜花粉进行转基因植物成分检测。
在本发明中，所述转基因植物成分检测依据国家标准，例如《中华人民共和国国家标准农业部2031号公告-19-2013，转基因植物及其产品成分检测抽样》、《SNT 1204—2016植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检验方法(油菜、玉米、大豆、番茄、水稻、马铃薯、棉花、甜菜、小麦、亚麻、苜蓿、木瓜、烟草、苹果、菊苣、剪股颖、李子、甜瓜、茄子、桉树、拟南芥、豌豆)》和《农业部1782号公告—2—2012转基因植物及其产品成分检测标记基因NPTII、HPT和PMI定性PCR方法》。
下面结合实施例对本发明提供的一种利用蜜蜂大规模收集待筛查转基因油菜花粉的方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
花粉采集试验地点为中国农业科学院油料作物研究所汉川基地，位于湖北省汉川市汈汊湖区许家村，转基因油菜试验种植规模为3亩，GPS定位为N30°40’41”，E113°43’39”。
花粉采集时间2019年3月31日。
步骤1：准备蜂箱。蜜蜂品种为意大利蜜蜂，蜂箱中放入有蜂王的巢脾，蜂箱至少6框巢脾，蜂脾相称。取检测用花粉前，清除巢脾中的花粉，在蜂箱蜜蜂出入口安装脱粉器。
步骤2：选择要筛查的油菜田，在取粉前一天晚上间隔一定距离放置蜂箱，使蜂群稳定，蜂箱放置位置见图1。
步骤3：在油菜盛花期晴朗天气的上午九点之前，在蜂箱脱粉器下方放置接粉盒，开始取粉。
步骤4：待取粉持续4～6个小时后收集接粉盒里的花粉，接粉盒中花粉量1.89～45.44g不等(见表1)。蜜黑色的是豌豆花粉，黄色的是油菜花粉，其他颜色的是杂花粉，挑取黄色花粉用密封袋封存编号带回实验室低温保存。
表1每个接粉盒中的花粉量
实施例2
对蜜蜂采集的油菜花粉进行转基因成分检测
步骤1：花粉DNA提取。按照新型植物基因组DNA提取试剂盒(CW0531M，康为世纪)说明书分离、纯化基因组DNA。将提取的基因组DNA稀释到50ng/μL浓度备用。
步骤2：花粉的转基因成分检测-荧光定量PCR。定量PCR反应的引物和探针见表2，PCR反应体系为20μL，其中TaqMan Universal PCR Master Mix 10μL，上下游引物各0.4μmol/L，探针0.4μmol/L，模板DNA2μL，用灭菌超纯水补齐至20μL。空白对照以超纯水代替模板DNA。PCR扩增反应采用两步法，95℃预变性3min，1个循环；95℃变性30s，60℃退火30s，40个循环。
结果判定方法：测试样品外源基因检测Ct值≥40，内源基因检测Ct值≤30，则可判定该样品不含所检基因或品系试样品外源基因检测Ct值≤35，内源基因检测Ct值≤30，判定该样品含有所检基因或品系。
试样品外源基因检测Ct值在35～40，应调整模板浓度，重做实时荧光PCR。再次扩增后的外源基因检测Ct值仍在35～40，则可判定为该样品含有所检基因或品系。再次扩增后的外源基因检测Ct值≥40，则可判定为该样品不含所检基因或品系。
表2检测转基因元件所用引物和探针
表3不同方向不同距离采集油菜花粉转基因成分检测结果
不同距离蜜蜂采集的油菜花粉成分Real-time PCR检测结果如表3所示，300～1100m蜂箱花粉的CaMV35S启动子、Bar基因和NPTII基因的ΔCt值显著高于100～200m的ΔCt值，其中CaMV35S启动子和NPTII基因的ΔCt值差异达到极显著水平，Bar基因的ΔCt值差异达到显著水平，NPTII基因的ΔCt值差异不显著。结果表明，300～1100m的蜂箱花粉中转基因成分含量比100～200m的蜂箱中的低。
距离油菜田500m不同方向蜜蜂采集的油菜花粉转基因成分Real-time PCR检测结果如表3所示，东北、东南和西南方向的蜂箱花粉均成功扩增出植物内标基因CruA、CaMV35S启动子、Bar基因、NPTII基因、HPT基因。西南500m蜂箱花粉的CaMV35S启动子、Bar基因、NPTII基因、HPT基因的ΔCt值显著高于东南500m和东北500m的ΔCt值；东南500m蜂箱花粉的CaMV35S启动子、Bar基因、NPTII基因、HPT基因的ΔCt值高于东北500m的ΔCt值，Bar基因的ΔCt值达到显著水平。结果表明，3个500m蜂箱中的花粉中的转基因成分含量东北方向最高，其次是东南方向，西南方向最低。
距离油菜田100m不同方向蜜蜂采集的油菜花粉转基因成分Real-time PCR检测结果如表3所示，东北、西北、正南、西南方向的蜂箱花粉均成功扩增出植物内标基因CruA、CaMV35S启动子、Bar基因、NPTII基因、HPT基因。四个方向HPT基因的ΔCt值大小为西南100m＞南100m＞东北100m＞西北100m，无显著差异。CaMV35S启动子、Bar基因和NPTII基因的ΔCt值大小为西南100m＞南100m＞西北100m＞东北100m。西南100m蜂箱花粉的CaMV35S启动子的ΔCt值高于南100m，未达到显著水平；高于西北100m和东北100m的ΔCt值，达到显著水平。西南100m蜂箱花粉的Bar基因ΔCt值显著高于南100m、西北100m和东北100m的ΔCt值；南100m的ΔCt值显著高于西北100m和东北100m的ΔCt值，西北100m和东北100m的ΔCt值无显著差异。西南100m和南100m蜂箱花粉的NPTII基因ΔCt值显著高于西北100m、东北100m的ΔCt值。结果表明，4个100m蜂箱中的花粉中的转基因成分含量东北方向最高，依次是西北、正南、西南方向。
研究结果显示，蜂箱花粉中转基因成分含量检出值要显著低于100～200m的蜂箱中花粉的检出值，但外源转基因元件的ΔCt值仍在2.85～6.66范围内，能较为准确的判定为阳性。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 中国农业科学院油料作物研究所
<120> 一种利用蜜蜂大规模收集待筛查转基因油菜花粉的方法
<160> 15
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
ggccagggtt tccgtgat 18
<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
ccgtcgttgt agaaccattg g 21
<210> 3
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
agtccttatg tgctccactt tctggtgca 29
<210> 4
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
gcctctgccg acagtggt 18
<210> 5
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
aagacgtggt tggaacgtct tc 22
<210> 6
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
caaagatgga cccccaccca cg 22
<210> 7
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
acaagcacgg tcaacttcc 19
<210> 8
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
gaggtcgtcc gtccactc 18
<210> 9
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
taccgagccg caggaacc 18
<210> 10
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
cagggtgtca cgttgcaaca 20
<210> 11
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
ccgctcgtct ggctaagatc 20
<210> 12
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
tgcctgaaac cgaactgccc gctg 24
<210> 13
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
aggatctcgt cgtgacccat 20
<210> 14
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
gcacgaggaa gcggtca 17
<210> 15
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
cacccagccg gccacagtcg at 22
Claims (5)
1.一种利用蜜蜂大规模收集待筛查转基因油菜花粉的方法，其特征在于，由以下步骤组成：
1）准备1个蜂箱，在所述蜂箱中装有若干个有蜂王的巢脾，在所述蜂箱的出入口处安装脱粉器；
2）将步骤1)所述蜂箱置于盛花期油菜田中，在所述蜂箱的脱粉器下放置接粉盒，工蜂开始取粉；所述蜂箱的位置距离油菜田中心点为300～1100m；所述油菜田的GPS定位为N30°40 '41″，E113°43 '39″；
3）待取粉持续4～6h后，收集接粉盒中的花粉；
所述蜜蜂为意大利蜜蜂；
所述油菜田的面积为6000亩。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤1)中蜂箱中装有6～10个有蜂王的巢脾。
3.根据权利要求1或2所述方法，其特征在于，所述巢脾在放入蜂箱前清除巢脾中原有花粉。
4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤2)中所述蜂箱预先前一天晚上放置与油菜田中。
5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤2)中工蜂开始取粉的时间为晴朗天气的上午8点。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110988523.1A CN113854200B (zh) | 2021-08-26 | 2021-08-26 | 一种利用蜜蜂大规模收集待筛查转基因油菜花粉的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110988523.1A CN113854200B (zh) | 2021-08-26 | 2021-08-26 | 一种利用蜜蜂大规模收集待筛查转基因油菜花粉的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113854200A CN113854200A (zh) | 2021-12-31 |
| CN113854200B true CN113854200B (zh) | 2023-10-03 |
Family
ID=78988530
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110988523.1A Active CN113854200B (zh) | 2021-08-26 | 2021-08-26 | 一种利用蜜蜂大规模收集待筛查转基因油菜花粉的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113854200B (zh) |
Citations (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN2879656Y (zh) * | 2006-01-24 | 2007-03-21 | 黄卫东 | 一种蜜蜂脱粉装置 |
| CN103096712A (zh) * | 2010-06-04 | 2013-05-08 | 孟山都技术公司 | 转基因芸苔属植物事件mon 88302及其使用方法 |
| CN104039131A (zh) * | 2011-08-26 | 2014-09-10 | 蜂自由股份有限公司 | 用于预防和治疗蜂群崩坏失调的方法、设备和组合物 |
| AU2015200750A1 (en) * | 2007-11-07 | 2015-03-05 | Beeologics, Inc. | Compositions for Conferring Tolerance to Viral Disease in Social Insects, and the Use Thereof |
| CN104969909A (zh) * | 2015-07-08 | 2015-10-14 | 中国农业科学院蜜蜂研究所 | 研究蜜蜂取食行为的方法以及装置 |
| CN106234316A (zh) * | 2016-08-18 | 2016-12-21 | 仁怀市长干山土蜂养殖专业合作社 | 一种刺梨花作为花源的蜜蜂养殖方法 |
| CN106259050A (zh) * | 2016-07-31 | 2017-01-04 | 成都诚克兄弟蜂业有限公司新都分公司 | 叠加式透明蜂箱体 |
| CN106754877A (zh) * | 2016-12-13 | 2017-05-31 | 淮阴师范学院 | 转基因油菜蜂花粉dna的提取方法 |
| CN108546737A (zh) * | 2018-05-10 | 2018-09-18 | 湖南农业大学 | 一种油菜转基因成分的检测方法 |
| CN109006706A (zh) * | 2018-08-13 | 2018-12-18 | 北京市农林科学院 | 一种蜜蜂补充饲喂防止盗蜂的处理方法 |
| WO2020055547A2 (en) * | 2018-08-18 | 2020-03-19 | Seed Health, Inc. | Methods and compositions for honey bee health |
-
2021
- 2021-08-26 CN CN202110988523.1A patent/CN113854200B/zh active Active
Patent Citations (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN2879656Y (zh) * | 2006-01-24 | 2007-03-21 | 黄卫东 | 一种蜜蜂脱粉装置 |
| AU2015200750A1 (en) * | 2007-11-07 | 2015-03-05 | Beeologics, Inc. | Compositions for Conferring Tolerance to Viral Disease in Social Insects, and the Use Thereof |
| CN103096712A (zh) * | 2010-06-04 | 2013-05-08 | 孟山都技术公司 | 转基因芸苔属植物事件mon 88302及其使用方法 |
| CN104039131A (zh) * | 2011-08-26 | 2014-09-10 | 蜂自由股份有限公司 | 用于预防和治疗蜂群崩坏失调的方法、设备和组合物 |
| CN104969909A (zh) * | 2015-07-08 | 2015-10-14 | 中国农业科学院蜜蜂研究所 | 研究蜜蜂取食行为的方法以及装置 |
| CN106259050A (zh) * | 2016-07-31 | 2017-01-04 | 成都诚克兄弟蜂业有限公司新都分公司 | 叠加式透明蜂箱体 |
| CN106234316A (zh) * | 2016-08-18 | 2016-12-21 | 仁怀市长干山土蜂养殖专业合作社 | 一种刺梨花作为花源的蜜蜂养殖方法 |
| CN106754877A (zh) * | 2016-12-13 | 2017-05-31 | 淮阴师范学院 | 转基因油菜蜂花粉dna的提取方法 |
| CN108546737A (zh) * | 2018-05-10 | 2018-09-18 | 湖南农业大学 | 一种油菜转基因成分的检测方法 |
| CN109006706A (zh) * | 2018-08-13 | 2018-12-18 | 北京市农林科学院 | 一种蜜蜂补充饲喂防止盗蜂的处理方法 |
| WO2020055547A2 (en) * | 2018-08-18 | 2020-03-19 | Seed Health, Inc. | Methods and compositions for honey bee health |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| 刘海珍.转基因 蜜蜂 油菜 花粉 采集.《营养与食品卫生》.广州出版社,2009,第189页. * |
| 徐环李 ; 杨俊伟 ; 孙洁茹 ; .我国野生传粉蜂的研究现状与保护策略.植物保护学报.2009,(第04期),全文. * |
| 杨光华.防虫网隔离对玉米花粉扩散的影响.河南农业科学.2018,第47卷(第3期),全文. * |
| 汪开治 ; .转基因作物对蜜蜂健康、蜜蜂产品食用安全和生态环境的潜在影响(下).生物技术通报.2008,(第05期),全文. * |
| 邢珍娟.作物 转基因 检测.《应用多重荧光PCR快速筛查作物中转基因成分研究》.玉米科学,2021, * |
| 马超.《现代无公害有机食品标准生产技术》.中国建材工业出版社,2017,(第1版),117. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113854200A (zh) | 2021-12-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN113774161B (zh) | 花生荚果和种仁大小主效qtl的kasp分子标记及应用 | |
| CN105603095A (zh) | 草木樨属18个物种植物条形码的目标条形码基因及其制备方法 | |
| CN112997796A (zh) | 茶树自交育种的方法 | |
| CN102703586A (zh) | 梅花ssr遗传图谱的构建方法 | |
| CN109628635B (zh) | 一种调控辣椒青果紫色基因标记的开发与应用 | |
| CN113575409B (zh) | 一种通过热处理方式来提高cenh3介导的单倍体诱导率的方法 | |
| CN113854200B (zh) | 一种利用蜜蜂大规模收集待筛查转基因油菜花粉的方法 | |
| CN103627799B (zh) | 一种基于est-ssr标记的龙眼杂交后代纯度鉴定方法 | |
| CN103233069B (zh) | 滇型杂交粳稻滇杂31种子纯度的分子鉴定方法及其专用引物 | |
| CN103014151A (zh) | 黄瓜种子纯度的快速检测方法 | |
| CN102220313B (zh) | 适用于作物ssr分子标记分析的基因组dna提取方法 | |
| CN111349716B (zh) | 一种鉴定云萝卜2号杂交种子纯度的ssr引物及方法 | |
| CN105296482B (zh) | 鉴定饲用燕麦国审品种的方法及其专用引物组 | |
| CN110643728B (zh) | 一种提高白杨杂交育种效率的方法 | |
| CN109554498B (zh) | 一种鉴定单季茭白早晚熟特性的分子标记及其应用、获取方法 | |
| CN109207629B (zh) | 一种检测甜菜种子粒性的SSR分子标记BvRE049及其应用 | |
| CN103789423B (zh) | 鉴定老芒麦种子真伪的特异分子标记试剂盒及其检测方法 | |
| CN102344968A (zh) | 一种检测转基因水稻根际土壤微生物结构变化的方法 | |
| CN115896336B (zh) | 用于扩增舒茶早ssr标记的引物组合及其在茶树自交育种中的应用 | |
| CN101897293A (zh) | 一种利用分子标记进行国兰杂交育种的方法 | |
| CN108977575B (zh) | 用于猕猴桃rc197品种鉴定的分子标记引物及应用 | |
| CN114182033B (zh) | 薄壳山核桃Mahan、Pawnee和Greenriver的SSR分子标记及其应用 | |
| CN110331230B (zh) | 一种柱花草不育基因的标记引物对及其应用 | |
| CN103651103A (zh) | 一种快速获得灯盏花三倍体的方法 | |
| CN113981131B (zh) | 鉴别无籽油棕的ssr标记引物、应用及方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |