CN113784969A - Plk1选择性降解诱导化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了诱导选择性polo样激酶1(PLK1)降解的新型化合物。具体地，本发明提供了一种双官能化合物，其中PLK1结合部分和E3泛素连接酶结合部分通过化学连接基团相连。本发明提供了所述化合物、用于制备其的方法及其用途。所述化合物可以有效地用于预防或治疗PLK1相关疾病。

Description

PLK1选择性降解诱导化合物
技术领域
本发明涉及选择性PLK1降解诱导化合物、用于制备其的方法及其用途。
背景技术
Polo样激酶1(PLK1)是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，其参与细胞生长和分裂期间的G2/M期的转换。PLK1从S期到G2/M期以脉冲形式表达和激活，并且随着有丝分裂结束而迅速降解。
PLK1在多种癌(诸如结肠癌、肺癌、膀胱癌和黑素瘤等)中过表达，并且过表达PLK1的癌细胞往往对多种类型的抗癌药物表现出耐药性。由于如上所述揭示了各种癌中的PLK1依赖性，因此已经尝试开发PLK1抑制剂化合物，诸如volasertib(也称为BI6727)等。
然而，常规的PLK1抑制剂在临床安全的浓度下不能充分抑制PLK1活性。因此，存在这样一个问题：即使癌细胞的细胞周期暂时延迟，一些癌细胞最终也会重新启动细胞周期，这可能不会获得足够的临床效果(参见Gheghiani等人，Cell Reports，2017等)。事实上，许多制药公司(诸如Boehringer Ingelheim、GlaxoSmithKline等)已经尝试开发基于小分子化合物的PLK1抑制剂，但是它们中的大多数都失败或停在临床试验阶段，并且因此迄今还没有可商购获得的PLK1抑制剂。这表明，依照通过与PLK1的活性位点结合来抑制酶活性的方法的药理机制(如小分子化合物抑制剂)在开发意图通过抑制癌细胞的PLK1活性产生抗癌效果的新药时不是足够有效的。
最近，已经提出蛋白水解靶向嵌合体(PROTAC)作为一种能够诱导体内靶蛋白的蛋白水解的基于小分子的平台技术。PROTAC是一种双官能化合物，其中与疾病相关靶蛋白结合的配体分子和E3泛素连接酶结合部分通过化学连接基团连接。理论上，PROTAC化合物能够通过将疾病相关的靶蛋白置于E3泛素连接酶附近来诱导靶蛋白的降解。
在使用PLK1作为靶蛋白的PROTAC化合物的情况中，中国专利公开号106543185 A公开了一些双官能化合物，其中volasertib衍生化合物和用于E3泛素连接酶CRBN的结合部分通过化学连接基团连接。然而，相关技术文献仅描述了一些有限形式的PROTAC化合物的合成实例，其中一般而言，PROTAC的目标降解活性和选择性可能根据靶蛋白部分、E3泛素连接酶结合部分等的选择而显著变化(参见Burslem和Crews，2017等)。
此外，上述文献中描述的PROTAC化合物的特征在于这样的化合物，其同时降解PLK1和BRD4，并且降解多种蛋白(诸如其他PLK家族蛋白和BRD4等)，这在药物开发时可能由于脱靶效应而引起副作用。特别地，已知BRD4活性的强抑制不可避免地伴随着中靶(on-target)毒性(诸如血液毒性和胃肠毒性)连同药理作用。因此，随着更多BRD4蛋白降解，上述文献中描述的PROTAC化合物预期将面临更大的临床副作用(参见Bolden等人，CellReports，2014)。
此外，根据上述文献的发明人所发表的文献(参见Mu等人，BBRC，2019)，可以确认的是同时降解PLK1和BRD4的PROTAC化合物在细胞水平上具有比PLK1降解能力强得多的BRD4降解能力，并且其细胞周期几乎停止在G1期等，即，PROTAC化合物实际上仅充当BRD4抑制剂，而与常规的PLK1抑制剂发挥药理作用的方式无关。
因此，对于没有副作用或具有最小副作用的有效且选择性的PLK1降解诱导化合物的需求未得到满足。
发明内容
技术问题
本发明的一个目的是提供选择性PLK1降解诱导化合物。
本发明的另一个目的是提供一种用于制备所述化合物的方法。
本发明的又一个目的是提供所述化合物的用途。
技术方案
选择性PLK1降解诱导化合物
本发明提供了诱导选择性polo样激酶1(PLK1)降解的新型化合物。具体地，本发明提供了一种双官能化合物，其中PLK1结合部分和E3泛素连接酶结合部分通过化学连接基团相连。
在一个一般方面，提供了由下式I表示的化合物、其立体异构体或其药用盐：
[式I]
ULM-连接基团-PTM
在上式I中，
ULM是CRBN或VHL E3泛素连接酶结合部分；
PTM是由下式II表示的PLK1结合部分：
[式II]
Figure BPA0000310075650000031
{在上式II中，
R1是氢、C1-5烷基或C3-6环烷基；
R1A是氢或C1-3烷基；
R2是氢、卤素、C1-6烷基或-OR2A；
R2A是C1-4烷基或C3-6环烷基，任选地被一个或多个卤素或羟基取代；
R3是氢、卤素、-NO2、-CN、-OH、C1-4烷基或-OC1-4烷基；
R4选自由以下各项组成的组：单键，
Figure BPA0000310075650000032
R5是氢或C1-4烷基}；并且
连接基团是连接ULM和PTM的化学基团。
在式II中，
Figure BPA0000310075650000033
表示将PTM与连接基团相连的共价键。
(1)E3泛素连接酶结合部分(ULM)
在本发明的一个实施方案中，ULM是CRBN E3泛素连接酶结合部分。
在本发明中，CRBN意指Cereblon E3泛素连接酶。CRBN与DDB1、Cul4A和ROC1一起构成E3泛素连接酶复合物，其中CRBN是复合物的底物识别亚基。一些能够结合CRBN E3泛素连接酶的化合物是本领域已知的。例如，在已知沙利度胺与CRBN E3泛素连接酶结合后(参见Ito等人2010)，已经报道了许多免疫调节亚胺药物(IMiD)(包括来那度胺和泊马度胺)具有CRBN结合能力(参见Chamberlain和Brian.2019；Akuffo等人2018；和Burslem等人2018；等等)。
在一个实施方案中，式I中的CRBN E3泛素连接酶结合部分由下式A-1表示：
[式A-1]
Figure BPA0000310075650000041
其中：
Figure BPA0000310075650000042
是选自由以下各项组成的组的环：
Figure BPA0000310075650000043
Figure BPA0000310075650000044
X1是单键、-CH2-、-NH-、-O-、-CH2CH2-、-CC--CO-、-COO-、-NHCO-或-CONH-；
X2是-CH2-、-CH(C1-4烷基)-、-NH-、-N(C1-4烷基)-、-O-、-CO-、-CH2-CH2-、-NH-CH2-、-NH-CH(C1-4烷基)-、-N＝CH-、-N＝C(C1-4烷基)-或-N＝N-；
X3是氢或C1-4烷基；并且
X4是氢、卤素、C1-6烷基、CN、NH2、NO2、OH、COH、COOH或CF3。
在一个实施方案中，式A-1由下式A-2表示：
[式A-2]
Figure BPA0000310075650000045
其中：
X2是-CH2-、-CH(C1-4烷基)-、-CO-或-N＝N-；并且
X3是氢或C1-3烷基。
在特定实施方案中，式A-2选自由以下各项组成的组：
Figure BPA0000310075650000051
式A-1或A-2的CRBN E3泛素连接酶结合部分的一个实例可以衍生自具有以下结构的化合物(Chamberlain和Brian.2019；Akuffo等人2018；等等)：
Figure BPA0000310075650000052
式A-1或A-2的CRBN E3泛素连接酶结合部分的另一个实例可以衍生自具有以下结构的化合物(Burslem等人2018；等等)：
Figure BPA0000310075650000053
Figure BPA0000310075650000061
在具体实例中，本发明的CRBN E3泛素连接酶结合部分具有以下结构中的一个：
Figure BPA0000310075650000062
在本发明的另一个实施方案中，ULM是VHL E3泛素连接酶配体结合部分。
在本发明中，VHL意指冯希佩尔-林道(von Hippel-Lindau)肿瘤抑制物。VHL与Elongin B、Elongin C、CUL2和Rbx1一起构成VCB E3连接复合物，其中VHL是复合物的底物识别亚基。一些能够结合VHL E3泛素连接酶的化合物是本领域已知的。例如，在已知肽诸如Ala-Leu-Ala-(Hy)Pro-Tyr-Ile-Pro七肽(参见Schneekloth等人2004)和Leu-Ala-(Hy)Pro-Tyr-Ile五肽(参见Rodriguez-Gonzalez等人2008)之后，已经报道了改进的低分子VHLE3泛素连接酶结合化合物(参见Buckley等人J.Am.Chem.Soc.2012；Buckley等人Ang.Chem.Int.Ed.2012；Galdeano等人2014；Soares等人2017；等等)。
在一个实施方案中，式I中的VHL E3泛素连接酶结合部分由下式B-1表示：
[式B-1]
Figure BPA0000310075650000071
其中：
n是1至3的整数；
Figure BPA0000310075650000072
是5至6元环烷基、苯基、5至6元杂环烷基或5至6元杂芳基，其中所述杂环烷基或所述杂芳基含有一个至三个N、O或S原子；
Y1是氢或C1-4烷基；
Y2是C1-4烷基、羟基(C1-4烷基)、-(C0-2烷基)-COH、C3-8环烷基或苯基；
Y3是氢、
Figure BPA0000310075650000073
Y4是氢、卤素、C1-4烷基、-O(C1-4烷基)、C3-6环烷基或4至6元杂环烷基，任选地被卤素、-OH、-CN、-NHCOH、-NHCOCH3、-COH或-COCH3取代；并且
Y5是氢或C1-4烷基。
在一个实施方案中，式B-1中的VHL E3泛素连接酶结合部分选自由下式B-2-1和B-2-2组成的组：
[式B-2-1]
Figure BPA0000310075650000081
[式B-2-2]
Figure BPA0000310075650000082
其中：
Figure BPA0000310075650000083
是选自由以下各项组成的组的5元杂芳基环：噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、吡唑、三唑、噁二唑、吡咯、吡咯烷、呋喃、二氢呋喃和四氢呋喃；
Y1是氢或C1-3烷基；并且
Y4是C1-4烷基或C3-5环烷基，任选地被氢或卤素取代。
在特定实例中，式B-2-1由选自由以下各项组成的组的部分表示：
Figure BPA0000310075650000084
在特定实例中，式B-2-2由选自由以下各项组成的组的部分表示：
Figure BPA0000310075650000091
式B-1、B-2-1或B-2-2的CRBN E3泛素连接酶结合部分的一个实例可以衍生自具有以下结构的化合物(Galdeano等人(2014)；等等)：
Figure BPA0000310075650000092
式B-1、B-2-1或B-2-2的CRBN E3泛素连接酶结合部分的另一个实例可以衍生自具有以下结构的化合物(Soares等人2017；等等)：
Figure BPA0000310075650000093
Figure BPA0000310075650000101
在本发明中，ULM具有附接于展现PROTAC的双官能性所需的位置处的连接基团。在本发明中，连接基团可以通过在式A-1、A-2、B-1、B-2-1和B-2-2中表示的
Figure BPA0000310075650000102
共价连接。如果并未显示
Figure BPA0000310075650000103
则E3泛素连接酶结合化合物的部分中的一个氢可以被取代成单键以连接至连接基团。
(2)蛋白质靶标部分(PTM)
在由式I表示的化合物中，PTM(即执行靶蛋白配体功能的部分)是由上式II表示的polo样激酶1(PLK1)结合部分。
单独由式II表示的化合物是嘧啶并二氮杂
Figure BPA0000310075650000105
酮衍生物，其可以与PLK1的活性位点结合(参见Nie，Zhe等人Bioorganic&medicinal).chemistry letters 23.12(2013)：3662-3666.]和国际专利公开号WO2009/042711；等等)。
在一个实施方案中，式II由下式III表示：
[式III]
Figure BPA0000310075650000104
其中：
R1是C1-5烷基或C3-7环烷基；
R2是氢或-OR2A；
R2A是C1-6烷基、C3-7环烷基、CF3或-(C1-3亚烷基)-OH；
R3是氢或卤素。
在一个实施方案中，PTM部分是包括在选自由化合物1至175组成的组的化合物中的PTM部分。
(3)连接基团
在本发明的一个实施方案中，如式I中定义的连接基团由下式L表示：
[式L]
Figure BPA0000310075650000111
其中：
Figure BPA0000310075650000112
和-----各自独立地是键；
LULM通过与其连接的
Figure BPA0000310075650000113
共价键合至ULM部分，
LPTM通过与其连接的
Figure BPA0000310075650000114
共价键合至PTM部分，
LULM、LPTM和LINT独立地选自由以下各项组成的组：不存在、单键、-CH2-、-NH-、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-CO-、-CH2CH2-、-CHCH-、-CC-、-CH2CH2O-、-OCH2CH2-、-CH2CH2S-、-SCH2CH2-、-COO-、-CONH-、-NHCO-和
Figure BPA0000310075650000115
任选地被一个或多个C1-6烷基、C3-8环烷基、卤素、羟基、氨基、硝基、氰基或卤代烷基取代{其中
Figure BPA0000310075650000116
是环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基}；并且
p是1至30的整数。
在一个实施方案中，p是1以上；5以上；10以上；15以上；20以上；或25以上。在另一个实施方案中，p是25以下；20以下；15以下；10以下；5以下。
在上式L中，LULM可以是
Figure BPA0000310075650000117
其中：
LU1选自由以下各项组成的组：单键、-CH2-、-CH2CH2-、-CH＝CH-、-C≡C-、-NH-、-NCH3-、-CO-、-NHCO-和-O-；
LU2选自由以下各项组成的组：单键、-CH2-、-NH-、-O-、-CO-和-CONH-；并且
Figure BPA0000310075650000121
是不存在或选自由以下各项组成的组的环：3至10元环烷基、4至10元杂环烷基、6至10元芳基和5至10元杂芳基。
在特定实施方案中，
Figure BPA0000310075650000122
选自由以下各项组成的组：-CH2-、-CC-、-NH-、-NHCO-、-NHCO-CH2-O-、-NH-CH2-CONH-、-O-、-OCH2-CONH-、
Figure BPA0000310075650000123
在上式L中，LULM可以是
Figure BPA0000310075650000124
其中：
LP1选自由以下各项组成的组：单键、-O-、-S-、-NH-、-N(C1-4烷基)-、-CH2-、-CH(C1-4烷基)-、-CH2NH-和-CH2CH2-；
LP2选自由以下各项组成的组：单键、-CO-、-COCH2-、-NHCO-、-NHCOCH2-、-HET-和-HET-CH2-{其中HET是含有一个或多个N、S或O原子的5至6元杂环基或杂芳基}；并且
Figure BPA0000310075650000125
是不存在、氨基取代的C1-8烷基或选自由以下各项组成的组的环：3至10元环烷基、4至10元杂环烷基、6至10元芳基和5至10元杂芳基。
在特定实施方案中，
Figure BPA0000310075650000126
选自由以下各项组成的组：
Figure BPA0000310075650000131
Figure BPA0000310075650000132
Figure BPA0000310075650000133
并且例如选自由以下各项组成的组：
Figure BPA0000310075650000134
Figure BPA0000310075650000135
在特定实施方案中，
Figure BPA0000310075650000136
是
Figure BPA0000310075650000137
其中X1是CH或N；X2和X3各自独立地是氢、CH3或CH2CH3。
在特定实施方案中，
Figure BPA0000310075650000138
选自由以下各项组成的组：
Figure BPA0000310075650000141
Figure BPA0000310075650000142
并且例如
Figure BPA0000310075650000143
在上式L中，
Figure BPA0000310075650000144
可以是
Figure BPA0000310075650000145
其中：
Figure BPA0000310075650000146
是不存在或选自由以下各项组成的组的环：3至10元环烷基、4至10元杂环烷基、6至10元芳基和5至10元杂芳基。
LINT1和LINT2各自独立地选自由以下各项组成的组：CH2-、-NH-、-NCH3-、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-CO-、-CH2CH2O-、-OCH2CH2-、-CH2CH2S-、-SCH2CH2-、-COO-、-CONH-和-NHCO-；并且
q和r各自独立地是1至10的整数。
在一个实施方案中，连接基团是包括在选自由化合物1至175组成的组的化合物中的连接基团。
在本发明的特定实施方案中，由式I表示的化合物是选自由化合物1至175组成的组的化合物。
在本发明中，药用盐是指具有相对无毒的、无害的并且对患者具有有效作用的浓度的任何有机或无机酸加成盐，其中由该盐引起的副作用不劣化由式I表示的化合物的有益功效。例如，药用盐可以是无机酸诸如盐酸、磷酸、硫酸、硝酸等，或有机酸诸如甲磺酸、对甲苯磺酸、乙酸、三氟乙酸、马来酸、琥珀酸、草酸、苯甲酸、酒石酸、富马酸、扁桃酸、丙酸、柠檬酸、乳酸、乙醇酸、葡萄糖酸、半乳糖醛酸、谷氨酸、戊二酸、葡萄糖醛酸、天冬氨酸、抗坏血酸、碳酸、香草酸或氢碘酸，但是不限于此。
用于制备选择性PLK1降解诱导化合物的方法
在本发明中，由上式I表示的化合物、其立体异构体或其药用盐可以通过有机化学领域中已知的合成方法或对本领域技术人员显而易见的改进技术经由诸如以下反应方案1至3的反应制备。
[反应方案1]
Figure BPA0000310075650000151
[反应方案2]
Figure BPA0000310075650000152
[反应方案3]
(i)
Figure BPA0000310075650000153
(ii)
Figure BPA0000310075650000154
(iii)
Figure BPA0000310075650000155
在以上反应方案1至3中，PTM、连接基团和ULM是以上定义的基团或其合适的衍生物。RG1、RG2、RG2a、RG2b、RG3、RG3a、RG3b和RG4是包含在有机合成领域中能够通过形成共价键而与由式I表示的PROTAC化合物的中间体连接在一起的合适的反应性基团的部分。取决于特定反应基团，共价键的形成可以通过合成反应(诸如酰胺形成，酯形成，氨基甲酸酯形成，脲形成，醚形成，胺形成，和各种碳之间的单键、双键形成，点击化学等)实现，但是不限于此。
以上反应方案中的每一个步骤的变化都可以包括一个或多个合成步骤。产物的分离和纯化可以通过有机化学领域的技术人员已知的标准程序来完成。
在一个实施方案中，本发明的化合物可以通过一个或多个合成步骤经由反应方案1制备。
在反应方案1的一个实例中，当ULM是式A-1时，本发明的化合物可以经由以下反应方案1-A制备(参见实施例40)。
[反应方案1-A]
Figure BPA0000310075650000161
在反应方案1的一个实例中，当ULM是式B-1时，本发明的化合物可以经由以下反应方案1-B制备。
[反应方案1-B]
Figure BPA0000310075650000171
在反应方案2的一个实例中，当ULM是式A-1时，本发明的化合物可以经由以下反应方案2-A制备(参见实施例1-39、41-60、63-79、90-122、124-158、162-175)。
[反应方案2-A]
Figure BPA0000310075650000172
在反应方案2的一个实例中，当ULM是式B-1时，本发明的化合物可以经由以下反应方案2-B制备(参见实施例80-89)。
[反应方案2-B]
Figure BPA0000310075650000181
在反应方案3的一个实例中，当ULM是式A-1时，本发明的化合物可以经由以下反应方案3-A制备(参见实施例61、62、123、159、160、161)。
[反应方案3-A]
Figure BPA0000310075650000191
在反应方案3的一个实例中，当ULM是式B-1时，本发明的化合物可以经由以下反应方案3-B制备。
[反应方案3-B]
Figure BPA0000310075650000201
在以上方案中，RG1、RG2和RG2a各自独立地是LPTM或其任何反应前体，RG3、RG4和RG3a各自独立地是LULM或其任何反应前体，并且RG1、RG2、RG2a、RG3、RG3a和RG4可以根据目标化合物的结构和连接基团位置适当地选择。
在以上反应方案中，由PTM和ULM表示的每个化合物可以由本领域技术人员参照有机化学领域中已知的文献、本发明实施例的描述等来合成。
本发明还提供了由PTM-连接基团-RG3或PTM-连接基团1-RG2b表示的化合物，其是由式I表示的化合物的反应中间体。
选择性PLK1降解诱导化合物的用途
本发明的一个实施方案是一种用于诱导PLK1降解的组合物，所述组合物包含由式I表示的化合物或其药用盐。式I与上文所定义的相同。
在本发明的实验例中，证实了本发明的化合物有效地诱导PLK1的蛋白质降解(表3)。具体地，与作为现有技术文献的CN 106543185 A中公开的化合物相比，本发明的化合物具有显著优越的PLK1的蛋白质降解性(图1和2)。此外，本发明的化合物对BRD4(一种不同于PLK1的靶蛋白)具有很小的降解性或不具有降解性。因此，由于现有技术文献中公开的化合物中出现的脱靶降解而具有使副作用最小化的优点(图2)。
从作用机制上看，本发明的PLK1降解诱导PROTAC化合物能够根本性地降解靶蛋白PLK1，从而与抑制PLK1的简单活性的常规PLK1小分子抑制剂相比实现了优异的PLK1抑制效果。
因此，包含本发明的由式I表示的化合物或其药用盐的组合物可以有效地用于PLK1的选择性降解。
本发明的一个实施方案是一种用于预防或治疗PLK1相关疾病的组合物，所述组合物包含由式I表示的化合物或其药用盐。本发明的另一个实施方案是一种用于预防或治疗PLK相关疾病的方法，所述方法包括向需要其的受试者施用所述组合物。式I与上文所定义的相同。
在本发明中，PLK1相关疾病是指能够基于PLK1的降解诱导或PLK1的活性抑制而被治疗、缓解、延迟、抑制或预防的任何疾病或病况。在一个实施方案中，PLK1相关疾病可以是癌症(恶性肿瘤)、良性肿瘤、神经疾病或由过度细胞分裂引起的其他遗传或非遗传疾病。
癌症包括由于抑制PLK1活性而能够展现出预防或治疗功效的所有癌症，并且可以是实体癌或血癌。例如，癌症可以是选自由以下各项组成的组的一种或多种：鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma)、小细胞肺癌(small cell lung cancer)、非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer)、肺腺癌(lung adenocarcinoma)、肺鳞状细胞癌(lungsquamous cell carcinoma)、腹膜癌(peritoneal cancer)、皮肤癌(skin cancer)、皮肤或眼内黑素瘤(skin or intraocular melanoma)、直肠癌(rectal cancer)、肛门肌肉癌(anal muscle cancer)、食道癌(esophageal cancer)、小肠癌(small intestinecancer)、内分泌癌(endocrine cancer)、甲状旁腺癌(parathyroid cancer)、肾上腺癌(adrenal cancer)、软组织肉瘤(soft tissue sarcoma)、尿道癌(urethral cancer)、慢性或急性白血病(chronic or acute leukemia)、淋巴细胞性淋巴瘤(lymphocyticlymphoma)、肝细胞癌(hepatocellular carcinoma)、胃肠癌(gastrointestinal cancer)、胃癌(gastric cancer)、胰腺癌(pancreatic cancer)、胶质母细胞瘤(glioblastoma)、宫颈癌(cervical cancer)、卵巢癌(ovarian cancer)、肝癌(liver cancer)、膀胱癌(bladder cancer)、肝肿瘤(liver tumor)、乳腺癌(breast cancer)、结肠癌(coloncancer)、结肠直肠癌(colorectal cancer)、子宫内膜癌或子宫癌(endometrial oruterine cancer)、唾液腺癌(salivary gland cancer)、肾癌(kidney cancer)、前列腺癌(prostate cancer)、外阴癌(vulvar cancer)、甲状腺癌(thyroid cancer)、头颈癌(headand neck cancer)、脑癌(brain cancer)、骨肉瘤(osteosarcoma)等，但是不限于此。癌症不仅包括原发癌，而且还包括转移癌。
良性肿瘤包括由于抑制PLK1活性而能够展现出预防或治疗功效的所有良性肿瘤，诸如癌前阶段的良性肿瘤，并且可以是实体瘤或血液肿瘤。例如，肿瘤可以是选自由以下各项组成的组的一种或多种：巴雷特食管(Barrett’s esophagus)、结肠腺瘤和息肉、乳腺纤维腺瘤和囊肿、意义未明的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)、单克隆淋巴细胞增多症等，但是不限于此。
神经疾病包括由于抑制PLK1活性而能够展现出预防或治疗功效的所有神经疾病，并且具体地可以是选自由以下各项组成的组的一种或多种：中枢神经系统疾病(centralnervous system disease)、神经退行性疾病(neurodegenerative disease)、阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease)、帕金森病(Parkinson’s disease)、多发性硬化(multiplesclerosis)、亨廷顿病(Huntington’s disease)、老年性痴呆(senile dementia)、癫痫(epilepsy)、卢·格里克病(Lou Gehrig)、中风(stroke)以及脑或脊髓损伤后的神经损伤和轴索变性相关疾病(nerve damage and axonal degeneration-related disordersfollowing brain or spinal cord injury)，但是不限于此。
除了由上式I表示的化合物或其药用盐以外，本发明的药物组合物还可以包含一种或多种展现出相同或相似药效的活性成分。
本发明的一个实施方案是一种通过向哺乳动物(包括人)施用由式I表示的化合物或其药用盐来降解PLK1的方法。
本发明的另一个实施方案是一种在体外通过向样品施用由式I表示的化合物或其药用盐来降解PLK1的方法。样品可以是哺乳动物(包括人)的细胞、细胞培养物、体液或组织，但是不限于此。
本发明的有利效果
本发明的化合物展现出诱导PLK1降解的效果。因此，本发明的药物化合物可以有效地用于预防或治疗PLK1相关疾病。
附图说明
图1显示了来自根据本发明的双官能化合物的PLK1的蛋白质降解性的测量的蛋白质印迹结果；并且
图2显示了来自选择性PLK1蛋白质降解性和除PLK1以外的脱靶降解性的测量的蛋白质印迹结果的结果。
具体实施方式
除非另有定义，本文中使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域中的普通技术人员通常理解的相同的含义。本说明书中使用的术语仅用于描述特定实施方案，并且不旨在限制本公开。
本发明提供了用于下表所示的化合物1至175的合成方法。
[表1]
Figure BPA0000310075650000231
Figure BPA0000310075650000241
Figure BPA0000310075650000251
Figure BPA0000310075650000261
Figure BPA0000310075650000271
Figure BPA0000310075650000281
Figure BPA0000310075650000291
Figure BPA0000310075650000301
Figure BPA0000310075650000311
Figure BPA0000310075650000321
Figure BPA0000310075650000331
Figure BPA0000310075650000341
Figure BPA0000310075650000351
Figure BPA0000310075650000361
Figure BPA0000310075650000371
Figure BPA0000310075650000381
Figure BPA0000310075650000391
Figure BPA0000310075650000401
Figure BPA0000310075650000411
Figure BPA0000310075650000421
Figure BPA0000310075650000431
Figure BPA0000310075650000441
Figure BPA0000310075650000451
Figure BPA0000310075650000461
Figure BPA0000310075650000471
Figure BPA0000310075650000481
Figure BPA0000310075650000491
Figure BPA0000310075650000501
Figure BPA0000310075650000511
Figure BPA0000310075650000521
Figure BPA0000310075650000531
Figure BPA0000310075650000541
Figure BPA0000310075650000551
Figure BPA0000310075650000561
Figure BPA0000310075650000571
根据以下方法纯化本发明的化合物并且对结构进行分析。
仪器
LCMS：Shimadzu LCMS-2020
NMR：BRUKER AVANCE III/400MHz
HPLC：Shimadzu LC-20AB，Shimadzu LC-20AD，Agilent 1100 LC，Agilent 1200LC，Agilent 1290 LC
LCSM分析
使用配备有电子喷雾电离装置的Shimadzu LCMS-2020来记录LCMS数据。在水(溶剂A)中的0.0375％TFA和在乙腈(溶剂B)中的0.01875％TFA用作流动相。Kinetex EVO C18(2.1*30)mm，5um用作柱。
HPLC分析
在HPLC分析中，使用Shimadzu LC-20AB、Shimadzu LC-20AD、Agilent 1100 LC、Agilent 1200 LC或Agilent 1290 LC。在水(溶剂A)中的0.0375％TFA和在乙腈(溶剂B)中的0.01875％TFA或者在水(溶剂A)和乙腈(溶剂B)中的0.025％NH3·H2O用作流动相。XBridge C18(2.1*50)mm，5um，或Kinetex C18 LC柱(4.6*50)mm，5um，或Eclipse plus C18(4.6*150)mm，3.5um，或Waters
Figure BPA0000310075650000581
C18(4.6*150)mm，3.5μm用作柱。
NMR分析
使用Bruker AVANCE III 400MHz/5mm探针(BBO)来记录1H NMR光谱。
实施例1. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650000582
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650000591
步骤1：2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-((2-(2-羟基乙氧基)乙基)氨基)异吲哚啉- 1，3-二酮(3)的合成
向2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1，3-二酮(4g，14.48mmol)和2-(2-氨基乙氧基)乙醇(2.10g，19.97mmol，2mL)在DMSO(60mL)中的溶液中添加TEA(4.40g，43.44mmol，6.05mL)。将反应混合物在90℃搅拌16小时。LCMS显示具有期望质量的一个主峰。将反应混合物用H2O(200mL)稀释并且用EtOAc(150mL x 3)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤。将滤液在真空中浓缩，得到标题化合物(3.5g，9.69mmol，66.89％收率)，为绿色油状物，将其直接用于下一个步骤。MS(M+H)+＝362.1。
步骤2：4-甲基苯磺酸2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉- 4-基)氨基)乙氧基)乙酯(4)的合成
向2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-((2-(2-羟基乙氧基)乙基)氨基)异吲哚啉-1，3-二酮(3.5g，9.69mmol)和TosCl(2.22g，11.62mmol)在DCM(100mL)中的溶液中添加TEA(2.94g，29.06mmol，4.04mL)。将混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示具有期望质量的峰(55％)。将反应在真空中浓缩。将残余物通过反相MPLC(FA，MeCN/H2O)纯化，将洗脱液冷冻干燥，得到标题化合物(1g，1.94mmol，20.03％收率)，为黄色固体。MS(M+H)+＝516.1。
步骤3：(1-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨 基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(6)的合成
向4-甲基苯磺酸2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙酯(1g，1.94mmol)和哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(582.73mg，2.91mmol)在二噁烷(15mL)中的溶液中添加DIPEA(752.09mg，5.82mmol，1.01mL)和NaI(29.08mg，193.97μmol)，将反应混合物在65℃搅拌3小时。LCMS显示仍然存在50％的材料，将反应混合物在65℃搅拌另外16小时。LCMS显示具有期望质量的一个主峰。将反应混合物用H2O(50mL)稀释并且用EtOAc(60mL x 2)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，EA/MeOH＝100％～8％)纯化，将洗脱液在真空中浓缩，得到标题化合物(600mg，1.09mmol，56.33％收率，99％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝544.2。
步骤4：4-((2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶- 3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(7)的合成
向(1-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(600mg，1.10mmol)在二噁烷(5mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，16.22mL)，将混合物在20℃搅拌3小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有期望质量的一个主峰(74％)。将反应混合物在真空中浓缩，得到4-((2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(810mg，粗制，HCl盐)，为黄色固体。MS(M+H)+＝444.2。
步骤5：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650000613
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异 吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物1)的合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650000611
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(174.55mg，375.03μmol)在DMF(7mL)中的溶液中添加HATU(356.50mg，937.59μmol)和DIEA(403.92mg，3.13mmol，544.37μL)，将混合物在20℃搅拌2小时。然后向该混合物中添加4-((2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(300mg，粗制，HCl盐)，将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示反应物完全消耗以及具有期望质量的一个主峰(85％)。将反应混合物过滤，并且将滤液通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150*40mm*15um；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：22％-52％，10分钟)纯化，将洗脱液冷冻干燥，得到标题化合物(237.5mg，224.52μmol，35.92％收率，95％纯度，TFA盐)，为黄色固体。MS(M+H)+＝891.6。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.09-11.08(m，1H)，9.53-9.36(m，1H)，8.34-8.22(m，2H)，8.22-8.08(m，2H)，7.61(dd，J1＝8.4Hz，J2＝7.2Hz，1H)，7.25-7.13(m，2H)，7.10-7.01(m，1H)，6.63(s，1H)，5.08(dd，J1＝12.8Hz，J2＝5.4Hz，1H)，4.84(t，J＝8.1Hz，1H)，4.15-4.05(m，3H)，3.95-3.92(m，3H)，3.80(s，2H)，3.71-3.66(m，2H)，3.57-3.48(m，4H)，3.33(s，3H)，3.32-3.27(m，2H)，3.20-3.08(m，1H)，2.94-2.80(m，1H)，2.58-2.51(m，1H)，2.16-1.83(m，6H)，1.82-1.47(m，8H)。
实施例2. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650000612
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650000621
根据反应方案，以类似于上述实施例的方式，获得标题化合物(126.5mg，133.95umol，31.17％收率，99％纯度)，为黄色固体。
MS(M+H)+＝935.5
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝9.15(br s，1H)，8.38(d，J＝14.6Hz，1H)，8.07(s，1H)，7.86(s，1H)，7.56-7.43(m，2H)，7.09(d，J＝7.0Hz，1H)，6.94(d，J＝8.8Hz，1H)，6.88-6.79(m，1H)，6.48-6.45(m，1H)，5.01-4.98(m，1H)，4.87(t，J＝8.6Hz，1H)，4.25(br s，1H)，4.04-3.87(m，7H)，3.77-3.69(m，6H)，3.49-3.46(m，2H)，3.42(s，3H)，3.40-325(m，2H)，3.09-3.06(m，2H)，2.93-2.71(m，3H)，2.30-2.02(m，6H)，1.85-1.77(m，3H)，1.70-1.56(m，6H)。
实施例3. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650000622
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(112.5mg，113.76umol，26.47％收率，99％纯度)，为黄色固体。
MS(M+H)+＝979.4
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.11(s，1H)，8.30(s，1H)，8.24(d，J＝13.3Hz，1H)，8.03(s，1H)，7.87(dd，J＝7.6，3.2Hz，1H)，7.61-7.55(m，1H)，7.17(dd，J＝21.8，7.6Hz，2H)，7.04(d，J＝7.0Hz，1H)，6.61(t，J＝5.8Hz，1H)，5.06(dd，J＝12.9，5.5Hz，1H)，4.81(q，J＝8.5Hz，1H)，4.08(t，J＝13.8Hz，2H)，3.91(s，3H)，3.75-3.68(m，1H)，3.63(t，J＝5.5Hz，2H)，3.59-3.56(m，2H)，3.55-3.53(m，2H)，3.52-3.50(m，2H)，3.49-3.46(m，6H)，3.31-3.26(m，2H)，2.94-2.79(m，3H)，2.66-2.51(m，3H)，2.43(t，J＝6.1Hz，2H)，2.07-2.00(m，3H)，2.00-1.93(m，2H)，1.81-1.69(m，4H)，1.67-1.57(m，4H)，1.56-1.46(m，2H)。
实施例4. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650000631
-2-基)氨基)-N-(1-(14-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(97.2mg，95.01umol，27.64％收率，100％纯度)，为黄色固体。
MS(M+H)+＝1023.5
1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ9.08(s，1H)，8.33(d，J＝14.9Hz，1H)，8.05(s，1H)，7.84(s，1H)，7.55-7.37(m，2H)，7.06(d，J＝7.1Hz，1H)，6.96-6.77(m，2H)，6.51-6.40(m，1H)，5.02-4.78(m，2H)，4.34-4.09(m，1H)，3.98-3.85(m，5H)，3.82(t，J＝4.9Hz，2H)，3.78-3.59(m，17H)，3.53-3.42(m，3H)，3.40(s，3H)，3.37-3.17(m，2H)，3.12-3.01(m，1H)，2.90-2.65(m，3H)，2.26(d，J＝13.7Hz，1H)，2.18-2.01(m，5H)，1.79-1.69(m，4H)，1.65-1.50(m，2H)。
实施例5. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650000632
-2-基)氨基)-N-(1-(17-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-3，6，9，12，15-五氧杂十七烷基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650000641
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(36.5mg，31.81μmol，13.77％收率，93％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝1067.9
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.07(br s，1H)，8.30(s，1H)，8.24(d，J＝13.3Hz，1H)，8.02(s，1H)，7.90-7.81(m，1H)，7.62-7.54(m，1H)，7.23-7.11(m，2H)，7.03(d，J＝7.1Hz，1H)，6.60(br t，J＝5.5Hz，1H)，5.10-4.99(m，1H)，4.88-4.75(m，1H)，4.07(br t，J＝13.8Hz，2H)，3.91(s，3H)，3.75-3.69(m，1H)，3.65-3.59(m，2H)，3.56-3.48(m，18H)，3.47-3.44(m，2H)，3.33-3.21(m，3H)，2.88-2.79(m，2H)，2.62-2.54(m，2H)，2.48-2.42(m，2H)，2.10-1.92(m，6H)，1.81-1.68(m，5H)，1.67-1.47(m，5H)。
实施例6. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650000651
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基-N-(1-(2-(2-(2-((2-(1-甲基-2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650000661
步骤1：4-氟-2-(1-甲基-2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(2)的合成
向2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1，3-二酮(5g，18.10mmol)和MeI(3.08g，21.72mmol，1.35mL)在DMF(50mL)中的混合物中添加K2CO3(2.75g，19.91mmol)，并且将所得混合物在25℃搅拌14小时。LCMS显示起始材料消耗以及具有期望质量的一个主峰(89％)。添加EtOAc(100mL)和水(100mL)，并且将层分离。将水相用EtOAc(100mL x 2)萃取。将合并的萃取物用盐水(100mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤。将滤液在真空下浓缩。将残余物通过硅胶色谱(石油醚/乙酸乙酯＝2/1至1/1)纯化，得到标题化合物(2.5g，8.53mmol，47.11％收率，99％纯度)，为白色固体。MS(M+H)+＝291.1
步骤2：4-((2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(1-甲基-2，6-二氧代哌 啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(3)的合成
向4-氟-2-(1-甲基-2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(1g，3.42mmol)在DMF(25mL)中的溶液中添加2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙醇(510.46mg，3.42mmol)和DIPEA(884.43mg，6.84mmol，1.19mL)，并且将所得混合物加热至90℃达16小时。LCMS显示反应物完全消耗，并且检测到37％的期望质量。将混合物与另一批次(1g规模)合并。将合并的混合物用H2O(80mL)稀释并且用EtOAc(80mL x 2)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，PE/EtOAc～50％～100％)纯化，得到标题化合物(1.45g，3.34mmol，97.54％收率，97％纯度)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝420.1
步骤3：4-甲基苯磺酸2-(2-(2-((2-(1-甲基-2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代 异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙酯(4)的合成
向4-((2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(1-甲基-2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(1.45g，3.46mmol和TosCl(3.30g，17.29mmol)在DCM(20mL)中的溶液中添加Py(2.19g，27.66mmol，2.23mL)，并且将所得混合物在15℃搅拌16小时。LCMS显示具有期望质量的一个峰(30％)。将混合物用H2O(60mL)稀释并且用DCM(80mL x 2)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤。将滤液在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，PE/EtOAc，50％～100％)纯化，得到标题化合物(1.64g，2.77mmol，80.22％收率，97％纯度)，为绿色油状物。
MS(M+H)+＝574.1
步骤4：(1-(2-(2-(2-((2-(1-甲基-2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚 啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(6)的合成
向4-甲基苯磺酸2-(2-(2-((2-(1-甲基-2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙酯(1.64g，2.86mmol)和哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(1.15g，5.72mmol)在二噁烷(20mL)中的溶液中添加DIPEA(1.11g，8.58mmol，1.49mL)和NaI(42.86mg，285.91umol)，并且将所得混合物加热至80℃达16小时。LCMS显示具有期望质量的一个主峰。将混合物用H2O(50mL)稀释并且用EtOAc(50mL x 2)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥并且过滤。将滤液在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，EtOAc(100％)～DCM/MeOH(10％)纯化，得到标题化合物(1.46g，2.38mmol，83.17％收率，98％纯度)，为绿色油状物。MS(M+H)+＝602.3
步骤5：4-((2-(2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(1-甲 基-2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(7)的合成
将(1-(2-(2-(2-((2-(1-甲基-2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.46g，2.43mmol溶解在二噁烷(10mL)中，并且添加HCl/二噁烷(4M，10mL)。将混合物在15℃搅拌16小时。LCMS显示具有期望质量的一个主峰。将混合物在真空中浓缩，得到标题化合物(1.4g，粗制，HCl盐)，为褐色油状物。Ms(M+H)+＝502.1
步骤6：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650000681
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基-N-(1-(2-(2-(2-((2-(1-甲基-2，6-二氧代 哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)苯甲酰胺 (化合物6)的合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650000682
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(300mg，644.57umol在DMF(6mL)中的溶液中添加HATU(367.63mg，966.86umol)和DIPEA(249.92mg，1.93mmol，336.82uL)，在搅拌10分钟后，添加4-((2-(2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(1-甲基-2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(416.16mg，773.49umol，HCl盐)，并且将所得混合物在15℃搅拌2小时。LCMS显示具有期望质量的一个主峰。将混合物用H2O(30mL)稀释并且用EtOAc(30mL x 2)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤。将滤液在真空中浓缩。将残余物用MeCN稀释，并且通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18150*25mm*10um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：25％-55％，10分钟)纯化，得到两个批次，并且将洗脱液冻干，得到标题化合物(第1批次：108mg，110.16umol，17.09％收率，96.8％纯度)，为黄色固体，以及标题化合物(第2批次：72mg，75.87umol，11.77％收率，FA盐，100％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝949.2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝8.51(s，1H)，8.39(d，J＝15.1Hz，1H)，8.09(s，1H)，7.84(s，1H)，7.58-7.47(m，2H)，7.12(d，J＝6.9Hz，1H)，6.95(d，J＝8.5Hz，1H)，6.73(br dd，J＝7.7，14.9Hz，1H)，6.50(t，J＝5.5Hz，1H)，5.01-4.82(m，2H)，4.15-4.05(m，1H)，4.02-3.88(m，5H)，3.78-3.73(m，4H)，3.71-3.65(m，4H)，3.50(q，J＝5.4Hz，2H)，3.44(s，3H)，3.25-3.15(m，5H)，3.02-2.96(m，1H)，2.88-2.76(m，4H)，2.55-2.47(m，2H)，2.19-2.05(m，5H)，1.87-1.72(m，6H)，1.69-1.56(m，2H)。
实施例7. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650000691
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基-N-(1-(14-((2-(1-甲基-2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)哌啶-4-基)苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650000701
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，得到两个批次并且冻干。作为第一批次，获得标题化合物(103mg，92.36umol，14.33％收率，93％纯度)，为黄色固体。作为第二批次，获得标题化合物(99mg，95.46umol，14.81％收率，100％纯度)，为黄色固体。
Ms(M+H)+＝1037.4
1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ8.37(d，J＝15.0Hz，1H)，8.05(s，1H)，7.87-7.80(m，1H)，7.51-7.44(m，2H)，7.08(d，J＝7.0Hz，1H)，6.91(d，J＝8.5Hz，1H)，6.79(dd，J＝14.7，7.7Hz，1H)，6.46(t，J＝5.7Hz，1H)，5.00-4.80(m，2H)，4.29-4.16(m，1H)，4.00-3.87(m，7H)，3.71(t，J＝5.4Hz，2H)，3.67-3.53(m，14H)，3.46(q，J＝5.5Hz，2H)，3.41(s，3H)，3.19(s，3H)，3.18-3.12(m，2H)，3.00-2.88(m，3H)，2.82-2.70(m，2H)，2.28-2.16(m，4H)，2.16-2.04(m，3H)，1.84-1.71(m，4H)，1.67-1.51(m，2H)。
实施例8. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650000712
-2-基)氨基)-N-(1-(4-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650000711
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(234.1mg，244.03μmol，37.74％收率，96％纯度，FA盐)，为黄色固体。MS(M+H)+＝875.7。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.10(s，1H)，8.36-8.20(m，2H)，8.14(s，1H)，8.10-7.97(m，2H)，7.60(dd，J1＝8.3Hz，J2＝7.4Hz，1H)，7.23-7.08(m，2H)，7.04(d，J＝7.0Hz，1H)，6.61(t，J＝5.8Hz，1H)，5.05(dd，J1＝12.8Hz，J2＝5.3Hz，1H)，4.86-4.82(m，1H)，4.08(t，J＝13.9Hz，2H)，3.96-3.87(m，4H)，3.23-3.02(m，6H)，2.90-2.83(m，1H)，2.78-2.70(m，2H)，2.69-2.41(m，4H)，2.06-1.88(m，5H)，1.86-1.39(m，13H)。
实施例9. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650000721
-2-基)氨基)-N-(1-(5-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)戊基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650000731
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(224.8mg，230.13μmol，42.84％收率，91％纯度，FA盐)，为黄色固体。MS(M+H)+＝889.3
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.09(s，1H)，8.29(s，1H)，8.26(s，1H)，8.21(d，J＝10.4Hz，1H)，8.03(s，1H)，7.88(dd，J＝3.2，7.2Hz，1H)，7.58(dd，J＝7.2，8.4Hz，1H)，7.19(d，J＝6.6Hz，1H)，7.10(d，J＝8.8Hz，1H)，7.02(d，J＝7.0Hz，1H)，6.53(t，J＝5.8Hz，1H)，5.04(dd，J＝5.4，12.8Hz，1H)，4.86-4.76(m，1H)，4.12-4.02(m，2H)，3.91(s，3H)，3.81-3.67(m，2H)，3.33(s，3H)，2.93-2.82(m，3H)，2.63-2.52(m，3H)，2.34-2.27(m，2H)，2.07-1.91(m，5H)，1.83-1.68(m，4H)，1.66-1.43(m，10H)，1.40-1.29(m，2H)。
实施例10. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650000742
-2-基)氨基)-N-(1-(6-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)己基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650000741
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(23.2mg，23.89umol，28.13％收率，93％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝903.7
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝9.21-8.79(m，1H)，8.38(d，J＝15.2Hz，1H)，8.07(s，1H)，7.86(s，1H)，7.55-7.47(m，2H)，7.11(d，J＝7.1Hz，1H)，6.94-6.81(m，2H)，6.20(br t，J＝5.5Hz，1H)，4.97-4.90(m，1H)，4.89-4.82(m，1H)，4.40-4.18(m，1H)，3.97(s，3H)，3.92(m，2H)，3.63-3.49(m，2H)，3.42(s，3H)，3.30(q，J＝5.6Hz，2H)，3.04-2.68(m，8H)，2.16-2.11(m，5H)，1.88-1.72(m，7H)，1.71-1.64(m，2H)，1.60(m，2H)，1.51-1.40(m，4H)。
实施例11. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650000751
-2-基)氨基)-N-(1-(7-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)庚基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650000761
步骤1：2-(7-羟基庚基)异吲哚啉-1，3-二酮(2)的合成
将7-溴庚-1-醇(5g，25.63mmol)和1，3-二氧代异吲哚啉-2-化钾(7.12g，38.44mmol)在DMF(20mL)中的混合物在85℃搅拌16小时。LCMS显示没有反应物，并且检测到64％的期望质量。将反应混合物用H2O(150mL)稀释并且用EtOAc(100mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(200mL x 5)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且在真空中浓缩。将残余物通过硅胶色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝10/1至5/1)纯化，得到2-(7-羟基庚基)异吲哚啉-1，3-二酮(6.4g，24.49mmol，95.56％收率)，为白色固体。MS(M+H)+＝262.0。
步骤2：7-氨基庚-1-醇(3)的合成
向2-(7-羟基庚基)异吲哚啉-1，3-二酮(6.4g，24.49mmol)在EtOH(120mL)中的溶液中添加N2H4·H2O(14.42g，244.91mmol，14.00mL，85％纯度，于H2O中)，将混合物在80℃搅拌4小时。TLC(EtOAc∶MeOH＝10∶1)指示起始材料完全消耗，并且检测到具有较大极性的一个主要的新斑点。将反应混合物在真空中浓缩以移除大部分溶剂，将残余物用DCM(50mL)稀释并且过滤，将滤液在真空中浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(20g
Figure BPA0000310075650000771
硅胶快速柱，洗脱液为0～14％MeOH/乙酸乙酯梯度@100mL/min)纯化，得到7-氨基庚-1-醇(1.3g，9.91mmol，40.45％收率)，为浅黄色油状物。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.43-3.30(m，4H)，1.54-1.37(m，2H)，1.37-1.30(m，2H)，1.30-1.18(m，6H)。
步骤3：2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-((7-羟基庚基)氨基)异吲哚啉-1，3-二酮 (4)的合成
在N2气氛下，将2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1，3-二酮(2.3g，8.33mmol)、7-氨基庚-1-醇(1.20g，9.16mmol)和TEA(2.53g，24.98mmol，3.48mL)在DMSO(20mL)中的混合物在85℃搅拌16小时。LCMS显示反应物完全消耗，并且检测到61％的期望质量。将反应混合物用H2O(200mL)稀释并且用EtOAc(200mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(400mL x 5)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且在真空中浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(40g
Figure BPA0000310075650000772
硅胶快速柱，洗脱液为50～65％乙酸乙酯/石油醚梯度@80mL/min)纯化，得到2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-((7-羟基庚基)氨基)异吲哚啉-1，3-二酮(1.74g，4.49mmol，53.94％收率)，为绿色油状物。MS(M+H)+＝388.2。
步骤4：4-甲基苯磺酸7-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4- 基)氨基)庚酯(5)的合成
向2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-((7-羟基庚基)氨基)异吲哚啉-1，3-二酮(1.74g，4.49mmol)在DCM(25mL)中的溶液中添加TEA(1.82g，17.96mmol，2.50mL)和TosCl(1.71g，8.98mmol)，将混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示仍然存在痕量的起始材料，并且检测到69％的期望质量。将反应混合物在真空中浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(40g
Figure BPA0000310075650000781
硅胶快速柱，洗脱液为50～70％乙酸乙酯/石油醚梯度@100mL/min)纯化，得到4-甲基苯磺酸7-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)庚酯(1.64g，3.03mmol，67.42％收率)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝542.2。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.09(s，1H)，7.77(d，J＝8.3Hz，2H)，7.58(dd，J＝7.2Hz，J＝8.5Hz，1H)，7.47(d，J＝8.1Hz，2H)，7.07(d，J＝8.6Hz，1H)，7.02(d，J＝7.0Hz，1H)，6.51(t，J＝5.9Hz，1H)，5.05(dd，J＝5.4Hz，J＝12.8Hz，1H)，4.02-3.96(m，2H)，3.25(q，J＝6.7Hz，2H)，2.94-2.82(m，1H)，2.68-2.51(m，2H)，2.40(s，3H)，2.07-1.99(m，1H)，1.60-1.44(m，4H)，1.32-1.19(m，6H)。
步骤5：(1-(7-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)庚 基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(6)的合成
向4-甲基苯磺酸7-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)庚酯(1.64g，3.03mmol)、哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(909.66mg，4.54mmol)和DIEA(978.36mg，7.57mmol，1.32mL)在二噁烷(20mL)中的溶液中添加NaI(45.39mg，302.80μmol)，将混合物在60℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且检测到96％的期望质量。将反应混合物在真空中浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(40g
Figure BPA0000310075650000782
硅胶快速柱，洗脱液为60～100％乙酸乙酯/石油醚梯度@100mL/min)纯化，得到(1-(7-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)庚基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.21g，2.12mmol，70.14％收率)，为黄色固体。MS(M+H)+＝570.6。
步骤6：4-((7-(4-氨基哌啶-1-基)庚基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚 啉-1，3-二酮(7)的合成
向(1-(7-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)庚基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.21g，2.12mmol)在二噁烷(10mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，20mL)，将混合物在20℃搅拌3小时。LCMS显示起始材料完全消耗。将反应混合物在真空中浓缩，得到4-((7-(4-氨基哌啶-1-基)庚基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(1.52g，HCl盐，粗制)，为黄色固体，将其直接用于下一个步骤。MS(M+H)+＝470.4。
步骤7：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650000791
-2-基)氨基)-N-(1-(7-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚 啉-4-基)氨基)庚基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物11)的合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650000792
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(252.93mg，543.44μmol)在DMF(8mL)中的溶液中添加HATU(563.54mg，1.48mmol)和DIEA(766.21mg，5.93mmol，1.03mL)，将混合物在20℃搅拌15分钟，向该混合物中添加4-((7-(4-氨基哌啶-1-基)庚基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(500mg，988.07μmol，HCl盐)，将所得混合物在20℃搅拌2小时。LCMS显示仍然存在痕量的反应物，并且检测到68％的期望质量。将反应混合物过滤，并且将滤液通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18150*40mm*15um；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：26％-56％，10分钟)纯化，随后通过制备型HPLC(柱：Phenomenexluna C18150*40mm*15um；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：27％-57％，10分钟)纯化，将洗脱液冷冻干燥，得到标题化合物(181.6mg，169.09μmol，17.11％收率，96％纯度，TFA盐)，为黄色固体。MS(M+H)+＝917.2。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.11(s，1H)，9.47-9.34(m，1H)，8.43-8.08(m，4H)，7.59(t，J＝7.7Hz，1H)，7.19-7.17(m，1H)，7.09(d，J＝8.5Hz，1H)，7.03(d，J＝6.9Hz，1H)，6.54(s，1H)，5.05(dd，J＝5.1Hz，J＝12.6Hz，1H)，4.86-4.79(m，1H)，4.10(t，J＝13.7Hz，2H)，3.91(s，3H)，3.52(d，J＝10.3Hz，2H)，3.40-3.27(m，5H)，3.12-2.97(m，4H)，2.93-2.83(m，1H)，2.62-2.56(m，1H)，2.23-1.84(m，6H)，1.84-1.48(m，12H)，1.46-1.21(m，6H)。
实施例12. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650000801
-2-基)氨基)-N-(1-(8-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)辛基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650000811
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(191.9mg，176.77μmol，22.98％收率，90％纯度，FA盐)，为黄色固体。MS(M+H)+＝931.8。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.09(br s，1H)，8.28(s，1H)，8.25(d，J＝13.4Hz，1H)，8.05(s，1H)，8.09-8.01(m，2H)，7.58(dd，J＝7.2，8.4Hz，1H)，7.21-7.15(m，1H)，7.09(d，J＝8.5Hz，1H)，7.02(d，J＝6.9Hz，1H)，6.51(t，J＝5.8Hz，1H)，5.04(dd，J＝5.4，12.7Hz，1H)，4.86-4.77(m，1H)，4.06(br t，J＝13.9Hz，3H)，3.96-3.83(m，5H)，3.32(s，3H)，3.15(br d，J＝11.0Hz，2H)，2.91-2.84(m，1H)，2.71-2.55(m，5H)，2.04-1.87(m，5H)，1.80-1.45(m，13H)，1.30(br d，J＝12.1Hz，8H)。
实施例13. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650000821
-2-基)氨基)-N-(1-(9-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)壬基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650000831
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(312.6mg，283.36μmol，30.27％收率，96％纯度，TFA盐)，为黄色固体。MS(M+H)+＝945.6。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.10(s，1H)，9.56-9.24(m，1H)，8.31(s，1H)，8.19-8.27(m，2H)，8.17(s，1H)，7.66-7.55(m，1H)，7.26-7.16(m，1H)，7.13-7.07(m，1H)，7.06-7.00(m，1H)，6.53(s，1H)，5.06(dd，J1＝12.8Hz，J2＝5.3Hz，1H)，4.82-4.86(m，1H)，4.21-4.02(m，3H)，3.92(s，3H)，3.52(d，J＝10.8Hz，2H)，3.37-3.27(m，5H)，3.09-2.99(m，3H)，2.94-2.84(m，1H)，2.63-2.57(m，1H)，2.29-1.87(m，6H)，1.86-1.50(m，12H)，1.39-1.22(m，10H)。
实施例14. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650000842
-2-基)氨基)-N-(1-(10-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)癸基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650000841
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(144.2mg，124.97μmol，19.57％收率，93％纯度，TFA盐)，为黄色固体。MS(M+H)+＝959.7。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.09(s，1H)，9.39-9.08(m，1H)，8.30(s，1H)，8.29-8.17(m，2H)，8.13(s，1H)，7.62-7.54(m，1H)，7.25-7.15(m，1H)，7.12-7.06(m，1H)，7.05-7.00(m，1H)，6.52(s，1H)，5.05(dd，J1＝12.7Hz，J2＝5.4Hz，1H)，4.83(t，J＝8.3Hz，1H)，4.13-4.06(m，2H)，3.91(s，3H)，3.52(d，J＝10.9Hz，2H)，3.33(s，3H)，3.31-2.26(m，2H)，3.13-2.95(m，4H)，2.93-2.84(m，1H)，2.62-2.56(m，1H)，2.17-1.85(m，6H)，1.84-1.68(m，4H)，1.66-1.54(m，8H)，1.36-1.25(m，12H)。
实施例15. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-5H，6H，7H，8H，9H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650000851
-2-基)氨基)-N-(1-(11-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代-2，3-二氢-1H-异吲哚-4-基)氨基)十一烷基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650000861
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(215.1mg，210.00μmol，39.35％收率，95％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝973.3。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.09(s，1H)，8.29(s，1H)，8.24(d，J＝13.3Hz，1H)，8.03(s，1H)，7.86(dd，J1＝7.4Hz，J2＝3.4Hz，1H)，7.57(dd，J1＝8.4Hz，J2＝7.3Hz，1H)，7.19(d，J＝6.6Hz，1H)，7.08(d，J＝8.6Hz，1H)，7.01(d，J＝7.0Hz，1H)，6.52(t，J＝5.6Hz，1H)，5.04(dd，J1＝12.5Hz，J2＝5.4Hz，1H)，4.88-4.76(m，1H)，4.07(t，J＝13.9Hz，2H)，3.91(s，3H)，3.78-3.65(m，1H)，3.30-3.24(m，3H)，2.94-2.85(m，1H)，2.80(d，J＝11.4Hz，2H)，2.64-2.55(m，2H)，2.22(t，J＝7.3Hz，2H)，2.04-1.90(m，5H)，1.82-1.69(m，4H)，1.66-1.50(m，8H)，1.49-1.13(m，18H)。
实施例16. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650000871
-2-基)氨基)-N-(1-(13-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)十三烷基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650000881
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(142.5mg，142.34μmol，17.87％收率)，为黄色固体。MS(M+H)+＝1001.4。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.09(s，1H)，8.34-8.20(m，2H)，8.03(s，1H)，7.87(dd，J1＝7.7Hz，J2＝3.5Hz，1H)，7.57(dd，J1＝8.4Hz，J2＝7.2Hz，1H)，7.18(d，J＝6.7Hz，1H)，7.08(d，J＝8.5Hz，1H)，7.01(d，J＝6.9Hz，1H)，6.52(t，J＝5.8Hz，1H)，5.04(dd，J1＝12.9Hz，J2＝5.4Hz，1H)，4.89-4.73(m，1H)，4.07(t，J＝13.9Hz，2H)，3.91(s，3H)，3.76-3.67(m，1H)，3.31-3.26(m，3H)，2.94-2.85(m，1H)，2.84-2.76(m，2H)，2.85-2.75(m，2H)，2.23(t，J＝7.3Hz，2H)，2.05-1.90(m，5H)，1.81-1.68(m，4H)，1.66-1.49(m，8H)，1.43-1.17(m，22H)。
实施例17. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-5H，6H，7H，8H，9H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650000891
-2-基)氨基)-N-(1-(14-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代-2，3-二氢-1H-异吲哚-4-基)氨基)十四烷基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650000901
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(80.7mg，75.52μmol，22.82％收率，95％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝1015.5。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝8.37(d，J＝15.2Hz，1H)，8.07(s，1H)，7.83(s，1H)，7.57(d，J＝7.1Hz，1H)，7.49(dd，J＝7.3，8.4Hz，1H)，7.09(d，J＝7.1Hz，1H)，6.89(d，J＝8.6Hz，1H)，6.70(dd，J＝7.5，15.2Hz，1H)，6.23(t，J＝5.4Hz，1H)，4.97-4.80(m，2H)，4.13-4.00(m，1H)，3.99-3.87(m，5H)，3.42(s，3H)，3.31-3.23(m，2H)，3.00-2.68(m，5H)，2.48-2.31(m，2H)，2.26-2.04(m，7H)，1.86-1.69(m，6H)，1.53-1.49(m，2H)，1.45-1.39(m，2H)，1.36-1.22(m，22H)。
实施例18. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650000911
-2-基)氨基)-N-(1-(3-(3-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丙氧基)丙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650000921
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(58.7mg，58.13umol，85.97％收率，91％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝919.7
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝8.39(d，J＝15.2Hz，1H)，8.07(s，1H)，7.85(s，1H)，7.57-7.48(m，2H)，7.11(d，J＝6.8Hz，1H)，6.94-6.82(m，2H)，6.59(t，J＝5.2Hz，1H)，5.00-4.93(m，1H)，4.90-4.82(m，1H)，4.45-4.25(m，1H)，3.97(s，3H)，3.92(t，J＝13.4Hz，2H)，3.64-3.46(m，6H)，3.42(s，3H)，3.09-3.02(m，2H)，2.92-2.72(m，6H)，2.19-2.12(m，8H)，2.01-1.92(m，3H)，1.84-1.75(m，5H)，1.67-1.54(m，3H)
实施例19. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650000931
-2-基)氨基)-N-(1-(4-(3-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丙氧基)丁基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650000941
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(37.2mg，35.88μmol，6.68％收率，90％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝933.4
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝8.39(d，J＝15.2Hz，1H)，8.07(s，1H)，7.84(s，1H)，7.55-7.47(m，2H)，7.10(d，J＝7.1Hz，1H)，6.91(d，J＝8.6Hz，1H)，6.82(dd，J＝7.9，14.7Hz，1H)，6.72-6.65(m，1H)，4.98-4.90(m，1H)，4.90-4.82(m，1H)，4.33-4.12(m，1H)，3.97(s，3H)，3.96-3.88(m，2H)，3.63-3.43(m，6H)，3.42(s，3H)，3.03-2.56(m，8H)，2.17-2.07(m，6H)，1.97-1.86(m，6H)，1.75-1.52(m，8H)
实施例20. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650000951
-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁氧基)丙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650000961
步骤1：3-(4-(苄氧基)丁氧基)丙酸乙酯(3)的合成
将4-苄氧基丁-1-醇(8.0g，44.38mmol，7.77mL)、Cs2CO3(28.92g，88.77mmol)、丙-2-烯酸乙酯(44.44g，443.85mmol，48.25mL)在CH3CN(100mL)中的溶液在25℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成。将混合物过滤；将滤液在真空中浓缩。将粗产物通过反相HPLC(0.1％FA条件，MeCN/水)纯化，得到标题化合物(9.04g，粗制)，为无色油状物。MS(M+H)+＝281.0
步骤2：3-(4-(苄氧基)丁氧基)丙-1-醇(4)的合成
在0℃向3-(4-苄氧基丁氧基)丙酸乙酯(9.04g，32.24mmol)在THF(100mL)中的溶液中添加LAH(1.47g，38.69mmol)，将混合物在25℃搅拌2小时。TLC(石油醚/EtOAc＝3/1)显示反应完成。将混合物依次用水(1.5mL)、1.5mL 15％NaOH(aq)和水(4.5mL)猝灭。将混合物在25℃搅拌30分钟，将混合物过滤，并且将滤液在真空下浓缩，得到标题化合物(8.41g，粗制)，为无色油状物。
步骤3：4-甲基苯磺酸3-(4-(苄氧基)丁氧基)丙酯(5)的合成
向3-(4-苄氧基丁氧基)丙-1-醇(8.41g，35.29mmol)在DCM(100mL)中的溶液中添加TEA(4.28g，42.35mmol，5.89mL)，随后添加TosCl(8.07g，42.35mmol)。将反应混合物在20℃搅拌3小时。LCMS显示检测到期望质量。将反应混合物用H2O(250mL)稀释并且用DCM(200mL x 3)萃取，将合并的有机层用盐水(50mL x 1)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且在减压下浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(20g
Figure BPA0000310075650000971
硅胶快速柱，洗脱液为10～30％乙酸乙酯/石油醚梯度@60mL/min)纯化，得到标题化合物(6.8g，17.32mmol，49.09％收率)，为无色油状物。MS(M+H)+＝393.0
步骤4：(1-(3-(4-(苄氧基)丁氧基)丙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(6)的合成
向4-甲基苯磺酸3-(4-苄氧基丁氧基)丙酯(3.4g，8.66mmol)和哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(2.60g，12.99mmol)在二噁烷(20mL)中的溶液中添加NaI(129.84mg，866.22μmol)和DIEA(2.24g，17.32mmol，3.02mL)，将混合物在60℃加热12小时。LCMS显示检测到期望质量。将混合物在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝2/1至EtOAc/MeOH＝10/1)纯化，得到标题化合物(3.05g，7.25mmol，83.72％收率)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝421.2
步骤5：(1-(3-(4-羟基丁氧基)丙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(7)的合成
在N2下向(1-(3-(4-(苄氧基)丁氧基)丙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(2.4g，5.71mmol)在EtOAc(20mL)中的溶液中添加Pd/C(400mg，10％纯度)和Pd(OH)2/C(400mg，10％纯度)。将悬浮液在真空下脱气并且用H2吹扫数次。将混合物在H2(50psi)下在60℃搅拌24小时。TLC(EtOAc/MeOH＝10/1)显示仍然存在反应物，并且检测到期望产物。将混合物过滤，将滤液在真空中浓缩，得到标题化合物(1.9g，4.52mmol，79.17％收率)，为无色油状物。
步骤6：4-甲基苯磺酸4-(3-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)丙氧基)丁酯 (8)的合成
向(1-(3-(4-羟基丁氧基)丙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.69g，5.11mmol)在DCM(20mL)中的溶液中添加TEA(1.55g，15.34mmol，2.14mL)和TosCl(1.46g，7.67mmol)，将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示检测到期望质量。将混合物在真空中浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(Biotage，25g
Figure BPA0000310075650000982
硅胶快速柱，洗脱液为30～100％乙酸乙酯/石油醚梯度@80mL/min)纯化，得到标题化合物(1.23g，2.09mmol，40.84％收率，82.3％纯度)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝485.3。
步骤7：(1-(3-(4-(1，3-二氧代异吲哚啉-2-基)丁氧基)丙基)哌啶-4-基)氨基甲 酸叔丁酯(9)的合成
4-甲基苯磺酸4-(3-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)丙氧基)丁酯(1.23g，2.54mmol)和(1，3-二氧代异吲哚啉-2-基)钾(940.15mg，5.08mmol)在DMF(15mL)中的溶液，将混合物在80℃加热12小时。LCMS显示检测到期望质量。将反应混合物用盐水(10mL)稀释并且用EtOAc(30mL x 2)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且在减压下浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(Biotage，25g
Figure BPA0000310075650000981
硅胶快速柱，洗脱液为30-100％乙酸乙酯/石油醚梯度@80mL/min)纯化，得到标题化合物(600mg，1.30mmol，51.34％收率，99.8％纯度)，为无色油状物。MS(M+H)+＝460.2。
步骤8：(1-(3-(4-氨基丁氧基)丙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(10)的合成
将(1-(3-(4-(1，3-二氧代异吲哚啉-2-基)丁氧基)丙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(0.78g，1.70mmol)和NH2NH2·H2O(999.56mg，16.97mmol，970.45μL，85％纯度)置于50mL圆底烧瓶中，并且添加EtOH(10mL)。将混合物在75℃搅拌2小时。TLC(乙酸乙酯/甲醇＝10/1)显示反应完成。停止加热，通过过滤移除不溶性固体，将滤液浓缩，得到标题化合物(0.5g，1.52mmol，89.41％收率)，为黄色油状物。
1H NMR(400MHz，MeOD)δ＝3.51-3.41(m，4H)，3.40-3.35(m，1H)，2.92(d，J＝11.6Hz，2H)，2.73(t，J＝7.0Hz，2H)，2.51-2.38(m，2H)，2.17-2.06(m，2H)，1.90-1.81(m，2H)，1.82-1.73(m，2H)，1.65-1.55(m，4H)，1.48-1.40(m，11H)。
步骤9：(1-(3-(4-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨 基)丁氧基)丙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(11)的合成
向(1-(3-(4-氨基丁氧基)丙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(440mg，1.34mmol)和2-(2，6-二氧代-3-哌啶基)-4-氟-异吲哚啉-1，3-二酮(400mg，1.45mmol)在DMSO(5mL)中的溶液中添加TEA(439.60mg，4.34mmol，604.68μL)，并且将混合物在60℃搅拌12小时。TLC(乙酸乙酯/甲醇＝10/1)显示反应完成，将混合物倒入水(30mL)中并且用EtOAc(20mL x 3)萃取，将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过硅胶柱(乙酸乙酯/甲醇＝10/1)纯化，得到标题化合物(160mg，264.99μmol，18.30％收率，97％纯度)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝586.2
步骤10：4-((4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)丙氧基)丁基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶- 3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(12)的合成
向(1-(3-(4-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁氧基)丙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(160mg，273.18μmol)在二噁烷(5mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，5mL)，并且将混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示反应完成。将混合物浓缩，得到标题化合物(140mg，268.18μmol，98.17％收率，HCl)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝486.5。
步骤11：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4， 5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001001
-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代 异吲哚啉-4-基)氨基)丁氧基)丙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物20)的合 成
向4-((4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)丙氧基)丁基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(140mg，268.18μmol，HCl)和4-[(9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-8H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001002
-2-基)氨基]-2-氟-5-甲氧基-苯甲酸(124.82mg，268.18μmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加HATU(203.94mg，536.36μmol)和DIPEA(103.98mg，804.54μmol，140.14μL)，并且将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示反应完成，将混合物倒入水(20mL)中并且用EtOAc(20mL x 3)萃取，将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Unisil 3-100 C18μLtra 150*50mm*3um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：33％-53％，10分钟)纯化，并且将洗脱液冻干，得到标题化合物(14.8mg，15.55μmol，5.80％收率，98％纯度，FA)，为黄色固体。MS(M+H)+＝933.3
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.10(s，1H)，8.30(s，1H)，8.26(d，J＝13.2Hz，1H)，8.14(s，1H)，8.08-7.99(m，2H)，7.65-7.54(m，1H)，7.19(d，J＝6.8Hz，1H)，7.11(d，J＝8.6Hz，1H)，7.04(d，J＝6.8Hz，1H)，6.61-6.54(m，1H)，5.12-5.00(m，1H)，4.89-4.77(m，1H)，4.08(t，J＝13.6Hz，2H)，3.95-4.83(m，5H)，3.42-3.41(m，8H)，3.18-3.07(m，1H)，2.95-2.82(m，2H)，2.70-2.56(m，5H)，1.97-1.95(m，2H)，1.89-1.88(m，2H)，1.76-1.72(m，4H)，1.71-1.55(m，12H)。
实施例21. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001003
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(3-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)丙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001011
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(199.8mg，200.01μmol，46.55％收率，95％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝949.2。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.10(s，1H)，8.30(s，1H)，8.26(d，J＝13.2Hz，1H)，8.16-8.15(m，1H)，8.06(s，1H)，7.61-7.57(m，1H)，7.25-7.14(m，2H)，7.05(d，J＝6.8Hz，1H)，6.66-6.65(m，1H)，5.13-5.05(m，1H)，4.81-4.73(m，1H)，4.13-4.06(m，2H)，4.12-3.95(m，4H)，3.69-3.64(m，2H)，3.60-3.56(m，2H)，3.53-3.46(m，8H)，3.33(s，3H)，3.27-3.18(m，2H)，3.15-3.05(m，2H)，2.78-2.69(m，1H)，2.58-2.50(m，2H)，2.05-1.94(m，5H)，1.87-1.73(m，6H)，1.67-1.56(m，4H)。
实施例22. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001021
-2-基)氨基)-N-(1-(2-((8-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)辛基)氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001031
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(172.4mg，164.09μmol，55.14％收率，97％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝1019.3。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝9.09(s，1H)，8.36(d，J＝15.2Hz，1H)，8.06(s，1H)，7.87(s，1H)，7.49-7.45(m，2H)，7.07(d，J＝6.8Hz，1H)，6.92-6.87(m，2H)，6.54-6.51(m，1H)，4.97-4.94(m，1H)，4.89-4.83(m，1H)，4.34-4.16(m，1H)，3.94-3.91(m，5H)，3.78-3.77(m，3H)，3.70-3.65(m，2H)，3.49-3.41(m，11H)，3.19-3.11(m，2H)，2.81-2.78(m，3H)，2.31-2.25(m，2H)，2.19-2.07(m，5H)，1.78-1.71(m，6H)，1.62-1.49(m，6H)，1.42-4.33(m，2H)，1.32-1.21(m，6H)。
实施例23. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001041
-2-基)氨基)-N-(1-(4-(3-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)丙氧基)丁基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001051
Figure BPA0000310075650001061
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(6.3mg，5.80μmol，8.85％收率，94％纯度，FA盐)，为黄色固体。MS(M+H)+＝1021.8。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.10(br s，1H)，8.31(s，1H)，8.25(d，J＝13.2Hz，1H)，8.18(s，1H)，8.04(s，1H)，7.94-7.86(m，1H)，7.62-7.55(m，1H)，7.19(d，J＝6.6Hz，1H)，7.15(d，J＝8.6Hz，1H)，7.05(d，J＝7.0Hz，1H)，6.61(t，J＝5.6Hz，1H)，5.11-5.02(m，1H)，4.87-4.79(m，1H)，4.08(t，J＝14.0Hz，2H)，3.92(s，3H)，3.83-3.72(m，2H)，3.63(t，J＝5.3Hz，2H)，3.59-3.55(m，2H)，3.51-3.40(m，13H)，2.95-2.82(m，2H)，2.63-2.56(m，4H)，2.53(s，3H)，2.37-2.31(m，2H)，2.12-1.96(m，4H)，1.87-1.78(m，2H)，1.75-1.68(m，4H)，1.64-1.55(m，4H)，1.50-1.42(m，2H)。
实施例24. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001062
-2-基)氨基)-N-(1-(3-(3-(3-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)丙氧基)丙氧基)丙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001071
Figure BPA0000310075650001081
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(134.7mg，120.05μmol，35.21％收率，91％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝1021.7。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ＝8.41(d，J＝14.8Hz，1H)，8.21(s，1H)，7.56-7.52(m，1H)，7.33(d，J＝6.4Hz，1H)，7.09-7.04(m，2H)，5.08-5.06(m，1H)，4.94-4.92(m，1H)，4.62-4.55(m，2H)，4.24-4.12(m，1H)，4.07-3.98(m，5H)，3.70-3.66(m，2H)，3.57-3.48(m，14H)，3.04(s，3H)，3.26-3.25(m，2H)，3.15-3.10(m，1H)，2.76-2.72(m，1H)，2.70-2.65(m，2H)，2.21-2.28(m，2H)，2.11-2.18(m，3H)，2.03-1.97(m，2H)，1.80-1.75(m，4H)，1.69-1.62(m，4H)。
实施例25. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001082
-2-基)氨基)-N-(1-(1-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-3，6，9，13-四氧杂十五烷-15-基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001091
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(21.3mg，17.21μmol，11.44％收率，93％纯度，TFA)，为黄色固体。MS(M+H)+＝1037.5
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ＝8.36-8.29(m，1H)，8.21(s，1H)，7.53(dd，J＝7.2，8.6Hz，1H)，7.37-7.32(m，1H)，7.08-7.03(m，2H)，5.06(dd，J＝5.6，12.6Hz，1H)，4.99-4.94(m，1H)，4.08(t，J＝13.0Hz，2H)，3.98(s，3H)，3.77-3.70(m，6H)，3.67-3.63(m，6H)，3.60-3.56(m，6H)，3.49(t，J＝5.4Hz，3H)，3.41(s，3H)，3.37-3.30(m，2H)，3.21-3.13(m，2H)，2.93-2.80(m，1H)，2.78-2.67(m，2H)，2.32-2.26(m，2H)，2.15-2.07(m，4H)，1.93-1.83(m，5H)，1.77-1.70(m，4H)。
实施例26. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001101
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001111
步骤1：2-(2-(2-氯乙氧基)乙氧基)乙酸叔丁酯(3)的合成
在20℃向2-(2-氯乙氧基)乙醇(10g，80.28mmol，8.47mL)和2-溴乙酸叔丁酯(31.32g，160.56mmol，23.73mL)在THF(100mL)中的混合物中一次性地添加TBAB(25.88g，80.28mmol)和t-BuOK(9.01g，80.28mmol)，并且将所得混合物在20℃搅拌16小时。TLC(SiO2，石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1)指示仍然存在2-(2-氯乙氧基)乙醇，并且检测到三个新斑点。将反应混合物在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝10/1至5/1)纯化，得到标题化合物(3g，12.57mmol，15.66％收率)，为黄色油状物。
步骤2：2-(2-(2-(4-(((苄氧基)羰基)氨基)哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙酸叔丁 酯(4)的合成
在20℃向2-(2-(2-氯乙氧基)乙氧基)乙酸叔丁酯(1.5g，6.28mmol)和哌啶-4-基氨基甲酸苄酯(1.77g，7.54mmol)在ACN(20mL)中的混合物中一次性地添加K2CO3(2.61g，18.85mmol)，并且将所得混合物在60℃搅拌16小时。LCMS显示仍然存在64％的2-(2-(2-氯乙氧基)乙氧基)乙酸叔丁酯，并且检测到14％的具有期望质量的峰。在20℃向该反应混合物中添加NaI(188.38mg，1.26mmol)，并且将所得混合物在80℃搅拌12小时。LCMS显示仍然存在51％的2-(2-(2-氯乙氧基)乙氧基)乙酸叔丁酯，并且检测到36％的期望质量，并且将反应混合物在真空中浓缩。将残余物在20℃用二噁烷(20mL)稀释，并且将所得混合物在90℃搅拌16小时。LCMS显示仍然存在46％的2-(2-(2-氯乙氧基)乙氧基)乙酸叔丁酯，并且检测到38％的期望质量。将反应混合物在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝3/1至0/1)纯化，得到标题化合物(860mg，1.77mmol，28.22％收率，90％纯度)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝437.2
步骤3：2-(2-(2-(4-(((苄氧基)羰基)氨基)哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙酸(5) 的合成
在20℃向2-(2-(2-(4-(((苄氧基)羰基)氨基)哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙酸叔丁酯(750mg，1.72mmol)在二噁烷(5mL)中的混合物中一次性地添加HCl/二噁烷(4M，10mL)，并且将所得混合物在20℃搅拌2小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物在真空中浓缩，得到标题化合物(680mg，粗制)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝381.2
步骤4：(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基) 氨基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(6)的合成
在20℃向2-(2-(2-(4-(((苄氧基)羰基)氨基)哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙酸(650mg，1.71mmol)和4-氨基-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(560.23mg，2.05mmol)在DMF(4mL)中的混合物中一次性地添加T3P(6.52g，10.25mmol，6.10mL，50％纯度，于EtOAc溶液中)和Py(1.35g，17.09mmol，1.38mL)，并且将所得混合物在80℃搅拌16小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物用H2O(15mL)稀释并且用EtOAc(15mL x 3)萃取。将有机层用盐水(15mL x 3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18150*40mm*15um；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：17％-47％，10分钟)纯化，然后冻干，得到标题化合物(910mg，1.40mmol，82.11％收率，98％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝636.1
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ＝8.79(d，J＝8.6Hz，1H)，7.84-7.76(m，1H)，7.61(d，J＝7.4Hz，1H)，7.34-7.26(m，5H)，5.15(dd，J＝5.6，12.8Hz，1H)，5.04(s，2H)，4.22(s，2H)，3.90(t，J＝5.0Hz，2H)，3.85-3.83(m，3H)，3.75-3.54(m，3H)，3.50-3.33(m，2H)，3.29-3.05(m，2H)，2.94-2.65(m，3H)，2.24-1.91(m，4H)，1.86-1.56(m，2H)
步骤5：2-(2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)-N-(2-(2，6-二氧代哌啶-3- 基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)乙酰胺(7)的合成
在N2下向(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(810mg，1.27mmol)在THF(10mL)中的溶液中添加Pd/C(0.1g，10％纯度)。将悬浮液在真空下脱气并且用H2吹扫数次。将混合物在H2(15psi)下在20℃搅拌16小时。LCMS显示仍然存在72％的起始材料，并且检测到18％的具有期望质量的峰。在N2下向该反应混合物中添加Pd/C(0.4g，127.43μmol，10％纯度)。将反应混合物在H2(15psi)下在20℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物用THF(20mL)稀释并且过滤。将滤液在真空中浓缩，得到标题化合物(563mg，1.04mmol，81.93％收率，93％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝502.1
步骤6：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001131
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代 异吲哚啉-4-基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺 (化合物26)的合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001141
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(120mg，257.83μmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加HATU(98.03mg，257.83μmol)和DIPEA(99.97mg，773.49μmol，134.73μL)。将混合物在20℃搅拌10分钟，并且在20℃逐滴添加2-(2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)-N-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)乙酰胺(168.10mg，粗制)在DMF(2mL)中的溶液，并且将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物用H2O(10mL x 3)稀释并且用EtOAc(10mLx 3)萃取。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：3_Phenomenex Luna C1875*30mm*3um；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：34％-54％，7分钟)纯化，然后冻干，得到标题化合物(105.3mg，95.10μmol，36.88％收率，96％纯度，TFA)，为白色固体。MS(M+H)+＝949.0
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ＝8.85-8.74(m，1H)，8.38-8.29(m，1H)，8.23-8.20(m，1H)，7.83-7.76(m，1H)，7.62-7.53(m，1H)，7.31(d，J＝6.8Hz，1H)，5.17(dd，J＝5.4，12.8Hz，1H)，4.99-4.94(m，1H)，4.26-4.21(m，2H)，4.08(t，J＝13.2Hz，2H)，3.99(s，3H)，3.93(t，J＝4.8Hz，2H)，3.90-3.84(m，4H)，3.73-3.69(m，1H)，3.50-3.44(m，1H)，3.40(s，3H)，3.39-3.35(m，2H)，3.25-3.11(m，2H)，2.96-2.69(m，3H)，2.26-2.03(m，6H)，1.93-1.78(m，4H)，1.76-1.66(m，4H)
实施例27. 14-(4-(4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001142
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺基)哌啶-1-基)-N-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)-3，6，9，12-四氧杂十四酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001151
Figure BPA0000310075650001161
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(22.6mg，20.70μmol，9.64％收率，95％纯度)，为白色固体。MS(M+H)+＝1037.3
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.20(br s，1H)，10.36(s，1H)，8.72(d，J＝8.4Hz，1H)，8.29(s，1H)，8.23(d，J＝13.4Hz，1H)，8.04(s，1H)，7.94-7.81(m，2H)，7.62(d，J＝7.6Hz，1H)，7.17(d，J＝6.8Hz，1H)，5.16(dd，J＝5.6，12.8Hz，1H)，4.88-4.73(m，1H)，4.20(s，2H)，4.08(t，J＝13.6Hz，2H)，3.90(s，3H)，3.80-3.73(m，2H)，3.72-3.63(m，3H)，3.58-3.35(m，12H)，2.95-2.79(m，3H)，2.69-2.53(m，2H)，2.43(t，J＝5.9Hz，2H)，2.14-1.99(m，3H)，1.97-1.87(m，，2H)，1.79-1.69(m，4H)，1.69-1.44(m，7H).
实施例28. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001162
-2-基)氨基)-N-(1-(2-((8-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-2-氧代乙氧基)辛基)氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001171
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(14.1mg，12.15μmol，6.30％收率，89％纯度)，为白色固体。MS(M+H)+＝1033.4
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.17(s，1H)，10.35(s，1H)，8.74(d，J＝8.4Hz，1H)，8.30(s，1H)，8.24(d，J＝13.6Hz，1H)，8.03(s，1H)，7.89-7.84(m，2H)，7.63(d，J＝7.2Hz，1H)，7.18(d，J＝6.4Hz，1H)，5.18-5.14(m，1H)，4.86-4.77(m，1H)，4.14-4.08(m，5H)，3.91(s，4H)，3.76-3.69(m，1H)，3.61-3.57(m，3H)，3.46-3.43(m，1H)，2.88-2.86(m，2H)，2.63-2.54(m，2H)，2.15-2.10(m，2H)，2.05-1.95(m，2H)，1.76-1.73(m，5H)，1.65-1.61(m，10H)，1.47-1.39(m，5H)，1.28-1.19(m，9H)。
实施例29. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001181
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙酰胺基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001191
步骤1：2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙酸叔 丁酯(3)的合成
向2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1，3-二酮(5g，18.10mmol)和2-氨基乙酸叔丁酯(2.37g，18.10mmol)在DMSO(50mL)中的溶液中添加DIPEA(4.68g，36.20mmol，6.31mL)。将反应混合物在90℃搅拌24小时。LCMS显示检测到51％的期望质量。将混合物倒入H2O(100mL)中并且用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取。将合并的有机相用盐水(30mL x 3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤。将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱(1000目硅胶，用石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1至1∶1洗脱)纯化，得到标题化合物(4.4g，粗制)，为绿色固体。MS(M-56+H)+＝332.0
步骤2：2-((2-(2，6-氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙酸(4) 的合成
向2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙酸叔丁酯(4g，10.33mmol)在二噁烷(5mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，40mL)，并且将所得混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示具有期望质量的一个峰(72％)。将混合物在减压下浓缩。将残余物与石油醚∶乙酸乙酯(10∶1，40mL)一起研磨并且搅拌20分钟。然后将悬浮液过滤。将滤饼收集并且在真空中干燥，得到标题化合物(3.3g，粗制)，为黄色固体。MS(M+H)+＝332.0
步骤3：2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-N-(2- (2-羟基乙氧基)乙基)乙酰胺(5)的合成
向2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙酸(3.15g，9.51mmol)和2-(2-氨基乙氧基)乙醇(1.40g，13.31mmol，1.33mL)在DCM(40mL)中的混合物中添加HOBt(1.54g，11.41mmol)、EDCI(2.19g，11.41mmol)和TEA(2.89g，28.53mmol，3.97mL)，并且将所得混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示具有期望质量的一个峰(83％)。将混合物在减压下浓缩。将残余物通过反相HPLC(0.1％FA条件)纯化，得到标题化合物(1.79g，4.28mmol，44.99％收率，100％纯度)，为绿色固体。MS(M+H)+＝419.2
步骤4：4-甲基苯磺酸2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚 啉-4-基)氨基)乙酰胺基)乙氧基)乙酯(6)的合成
在25℃向2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)N-(2-(2-羟基乙氧基)乙基)乙酰胺(1.69g，4.04mmol)和TEA(1.63g，16.16mmol，2.25mL)在DCM(20mL)中的溶液中添加TosCl(3.08g，16.16mmol)。将溶液在25℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有期望质量的峰(15％)。将混合物在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱(1000目硅胶，用石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1至0∶1洗脱)纯化，得到标题化合物(1.7g，2.67mmol，66.15％收率，90％纯度)，为褐色油状物。MS(M+H)+＝573.1
步骤5：(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基) 氨基)乙酰胺基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(8)的合成
向4-甲基苯磺酸2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙酰胺基)乙氧基)乙酯(787.00mg，3.93mmol)N-(4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯(787.00mg，3.93mmol)在二噁烷(20mL)中的溶液中添加DIPEA(1.02g，7.86mmol，1.37mL)和NaI(196.34mg，1.31mmol)。将反应混合物在100℃搅拌16小时。LCMS显示具有期望质量的一个峰(72％)。将混合物在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱(1000目硅胶，用石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1至0∶1；乙酸乙酯∶甲醇＝10∶1洗脱)纯化，得到标题化合物(0.8g，1.31mmol，49.82％收率，98％纯度)，为绿色固体。MS(M+H)+＝601.2
步骤6：N-(2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)乙基)-2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3- 基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙酰胺(9)的合成
将(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙酰胺基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.2g，2.00mmol)在HCl/二噁烷(4M，40mL)中的溶液在25℃搅拌2小时。LCMS显示具有期望质量的一个峰(41％)。将混合物在减压下浓缩。将残余物通过反相HPLC(0.1％HCl条件)纯化，得到标题化合物(500mg，粗制，HCl盐)，为黄色固体。MS(M+H)+＝501.3
步骤7：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001211
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代 异吲哚啉-4-基)氨基)乙酰胺基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合 物29)的合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001221
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(150mg，322.29μmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加HATU(134.80mg，354.51μmol)和DIPEA(83.31mg，644.57μmol，112.27μL)。将混合物在25℃搅拌10分钟，并且添加N-(2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)乙基)-2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙酰胺(224.99mg，418.97μmol，HCl盐)、DIPEA(83.31mg，644.57μmol，112.27μL)在DMF(2mL)中的溶液，并且将所得混合物在25℃搅拌1小时。LCMS显示仍然存在起始材料。添加另外的HATU(110.29mg，290.06μmol)，并且将所得混合物在25℃搅拌另外12小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有期望质量的主峰。将混合物在减压下浓缩。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18150*40mm*15um；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：19％-49％，10分钟)纯化，并且将洗脱液冻干，得到标题化合物(94.1mg，82.41μmol，25.57％收率，95％纯度，TFA盐)，为黄色固体。MS(M+H)+＝948.2。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ＝8.36(d，J＝13.9Hz，1H)，8.21(s，1H)，7.64-7.55(m，1H)，7.40-7.31(m，1H)，7.17-7.10(m，1H)，6.97-6.90(m，1H)，4.97(br dd，J＝7.0，11.6Hz，2H)，4.11-4.03(m，4H)，4.00(s，3H)，3.84-3.75(m，2H)，3.69-3.56(m，4H)，3.54-3.42(m，3H)，3.41(s，3H)，3.31-3.41(m，1H)，3.22-3.06(m，2H)，2.65-2.83(m，3H)，2.29-1.84(m，8H)，1.84-1.64(m，6H)。
实施例30. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001222
-2-基)氨基)-N-(1-(1-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-l，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-2-氧代-6，9，12-三氧杂-3-氮杂十四烷-14-基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001231
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(99.4mg，83.84μmol，26.01％收率，97％纯度，TFA盐)，为黄色固体。MS(M+H)+＝1036.8
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ＝8.30(d，J＝13.8Hz，1H)，8.19(s，1H)，7.51(dd，J＝7.2，8.4Hz，1H)，7.32(d，J＝6.8Hz，1H)，7.07(d，J＝7.0Hz，1H)，6.83(d，J＝8.4Hz，1H)，5.06(dd，J＝5.4，12.4Hz，2H)，4.07(m，2H)，3.99-3.95(m，5H)，3.85-3.79(m，2H)，3.72(m，2H)，3.68-3.63(m，4H)，3.60(s，3H)，3.55(m，2H)，3.50-3.42(m，3H)，3.41(s，3H)，3.36(m，2H)，3.25-3.10(m，2H)，2.93-2.81(m，1H)，2.79-2.67(m，2H)，2.35-1.86(m，8H)，1.84-1.63(m，6H)。
实施例31. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001241
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001251
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(35.3mg，36.80μmol，83.25％收率，94.330％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝905.4
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝9.91-9.22(m，1H)，8.44-8.31(m，1H)，8.08(s，1H)，7.84(br d，J＝7.5Hz，1H)，7.72-7.48(m，2H)，7.13(t，J＝6.7Hz，1H)，6.95-6.85(m，1H)，6.81-6.66(m，1H)，6.58-6.48(m，1H)，4.98-4.78(m，2H)，4.60-4.47(m，1H)，4.45-4.21(m，2H)，4.19-4.08(m，1H)，4.06-3.87(m，6H)，3.82-3.70(m，2H)，3.60-3.46(m，2H)，3.42(s，3H)，3.36-3.22(m，1H)，2.99-2.66(m，4H)，2.26-2.03(m，5H)，1.85-1.70(m，4H)，1.61-1.55(m，2H)，1.53-1.34(m，2H)。
实施例32. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001261
-2-基)氨基)-N-(1-(3-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)丙酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001271
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(82.1mg，86.66μmol，33.61％收率，97％纯度)，为黄色固体。Ms(M+H)+＝918.8
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.29-10.79(m，1H)，8.32-8.22(m，2H)，8.03(s，1H)，7.94(dd，J＝3.1，7.6Hz，1H)，7.62-7.55(m，1H)，7.20(d，J＝6.7Hz，1H)，7.14(d，J＝8.7Hz，1H)，7.04(d，J＝7.1Hz，1H)，6.59(t，J＝5.6Hz，1H)，5.06(dd，J＝5.3，13.2Hz，1H)，4.84-4.80(m，，1H)，4.29(d，J＝12.1Hz，1H)，4.07(t，J＝13.9Hz，2H)，4.03-3.96(m，1H)，3.91(s，3H)，3.89-3.86(m，1H)，3.68(t，J＝6.5Hz，2H)，3.63-3.58(m，2H)，3.47(q，J＝5.2Hz，2H)，3.33(s，3H)，3.12(t，J＝12.3Hz，1H)，2.93-2.83(m，1H)，2.77-2.69(m，1H)，2.63-2.55(m，4H)，2.06-1.94(m，3H)，1.87-1.78(m，2H)，1.71-1.67(m，2H)，1.67-1.57(m，4H)，1.49-1.34(m，2H)
实施例33. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001282
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001281
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(20.5mg，21.39μmol，11.06％收率，99％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝949.4
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.20-10.96(m，1H)，8.30(s，1H)，8.24(d，J＝13.3Hz，1H)，8.03(s，1H)，7.95(dd，J＝3.2，7.7Hz，1H)，7.62-7.53(m，1H)，7.23-7.11(m，2H)，7.03(d，J＝7.0Hz，1H)，6.61(t，J＝5.8Hz，1H)，5.04(dd，J＝5.2，12.9Hz，1H)，4.82(brt，J＝7.8Hz，1H)，4.30-4.20(m，1H)，4.19-4.14(m，2H)，4.12-3.98(m，3H)，3.91(s，3H)，3.83-3.72(m，1H)，3.66-3.55(m，6H)，3.51-3.44(m，2H)，3.17-3.00(m，1H)，2.93-2.81(m，1H)，2.80-2.69(m，1H)，2.64-2.51(m，5H)，2.09-1.89(m，3H)，1.88-1.77(m，2H)，1.76-1.54(m，6H)，1.54-1.29(m，2H)。
实施例34.4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001291
-2-基)氨基)-N-(1-(14-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-3，6，9，12-四氧杂十四烷酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001301
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(75.6mg，69.98μmol，32.57％收率，96％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝1037.4。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.09(s，1H)，8.30(s，1H)，8.24(d，J＝13.3Hz，1H)，8.06(s，1H)，7.96(dd，J1＝3.0，J2＝7.5Hz，1H)，7.57(dd，J1＝7.2，J2＝8.5Hz，1H)，7.20(d，J＝6.7Hz，1H)，7.13(d，J＝8.5Hz，1H)，7.03(d，J＝7.0Hz，1H)，6.64-6.54(m，1H)，5.05(dd，J1＝5.3，J2＝12.9Hz，1H)，4.82(brt，J＝7.5Hz，1H)，4.24(br d，J＝11.9Hz，1H)，4.13(brd，J＝12.5Hz，2H)，4.10-3.95(m，3H)，3.91(s，3H)，3.79(br d，J＝12.8Hz，1H)，3.63-3.59(m，2H)，3.58-3.50(m，12H)，3.46(br d，J＝6.0Hz，2H)，3.33(s，3H)，3.09(br t，J＝11.9Hz，1H)，2.93-2.83(m，1H)，2.80-2.71(m，1H)，2.62-2.55(m，2H)，2.06-1.91(m，3H)，1.89-1.78(m，2H)，1.77-1.65(m，2H)，1.68-1.56(m，4H)，1.55-1.45(m，1H)，1.44-1.33(m，1H)。
实施例35. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001312
-2-基)氨基)-N-(1-(2-((2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)氨基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001311
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(170.2mg，163.19μmol，49.11％收率，91％纯度)，为浅黄色固体。MS(M+H)+＝948.3
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.10(s，1H)，8.31(s，1H)，8.25(d，J＝13.4Hz，1H)，8.04(s，1H)，7.87(dd，J＝3.4，7.5Hz，1H)，7.69(br t，J＝5.9Hz，1H)，7.62-7.54(m，1H)，7.21-7.11(m，2H)，7.04(d，J＝7.0Hz，1H)，6.61(t，J＝5.6Hz，1H)，5.09-5.03(m，1H)，4.87-4.77(m，1H)，4.08(br t，J＝13.7Hz，2H)，3.92(s，3H)，3.80-3.68(m，1H)，3.64-3.58(m，2H)，3.53-3.46(m，4H)，3.31-3.28(m，2H)，2.96-2.85(m，3H)，2.81-2.75(m，2H)，2.61-2.53(m，4H)，2.17(t，J＝10.6Hz，2H)，2.06-1.92(m，3H)，1.83-1.50(m，11H)。
实施例36. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001321
-2-基)氨基)-N-(1-(14-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-2-氧代-6，9，12-三氧杂-3-氮杂十四烷基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001331
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(53.8mg，50.89μmol，15.79％收率，98％纯度)，为浅黄色固体。MS(M+H)+＝1036.6
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.08(br s，1H)，8.30(s，1H)，8.25(d，J＝13.3Hz，1H)，8.03(s，1H)，7.88(dd，J＝3.5，7.5Hz，1H)，7.65(t，J＝5.7Hz，1H)，7.60-7.54(m，1H)，7.19(d，J＝6.7Hz，1H)，7.13(d，J＝8.7Hz，1H)，7.03(d，J＝7.0Hz，1H)，6.59(t，J＝5.6Hz，1H)，5.10-5.02(m，1H)，4.87-4.77(m，1H)，4.08(t，J＝13.9Hz，2H)，3.91(s，3H)，3.80-3.69(m，1H)，3.65-3.59(m，2H)，3.58-3.53(m，4H)，3.53-3.48(m，4H)，3.47-3.40(m，4H)，3.34(s，3H)，3.28-3.22(m，2H)，2.93-2.84(m，3H)，2.82-2.75(m，2H)，2.62-2.55(m，2H)，2.17(t，J＝10.9Hz，2H)，2.06-1.93(m，3H)，1.85-1.58(m，10H)。
实施例37. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001341
-2-基)氨基)-N-(1-(4-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-4-氧代丁基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001351
步骤1：4-溴丁酸苄酯(2)的合成
在20℃向4-溴丁酸(5g，29.94mmol)和苯甲醇(4.21g，38.92mmol，4.05mL)在环己烷(50mL)中的混合物中一次性地添加TsOH(257.79mg，1.50mmol)，并且将所得混合物在90℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且未检测到具有期望质量的峰。TLC(SiO2，石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1)指示起始材料完全消耗，并且检测到两个新斑点。将反应混合物在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝1/0至10/1)纯化，得到标题化合物(6.5g，25.28mmol，84.43％收率)，为黄色油状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝7.46-7.32(m，5H)，5.17(s，2H)，3.49(t，J＝6.5Hz，2H)，2.59(t，J＝7.2Hz，2H)，2.18-2.25(m，2H)。
步骤2：4-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)丁酸苄酯(3)的合成
在20℃向4-溴丁酸苄酯(6.5g，25.28mmol)和哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(7.59g，37.92mmol)在二噁烷(60mL)中的混合物中一次性地添加NaI(378.93mg，2.53mmol)和DIPEA(9.80g，75.84mmol，13.21mL)，并且将所得混合物在80℃搅拌16小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝1/1至0/1到二氯甲烷∶甲醇＝1/0至10/1)纯化，得到标题化合物(6.8g，16.26mmol，64.30％收率，90％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝377.4
步骤3：4-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)丁酸(4)的合成
在N2下向4-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)丁酸苄酯(3.4g，9.03mmol)在MeOH(40mL)中的溶液中添加Pd/C(340mg，10％纯度)。将悬浮液在真空下脱气并且用H2吹扫数次。将混合物在H2(15psi)下在20℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物用MeOH(40mL)稀释并且过滤。将滤液在真空中浓缩，得到标题化合物(2.7g，粗制)，为白色油状物。MS(M+H)+＝287.2
步骤4：(1-(4-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)- 4-氧代丁基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(6)的合成
在20℃向4-氨基-2-(2，6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1，3-二酮(1.5g，5.49mmol)和4-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)丁酸(2.04g，7.14mmol)在DMF(15mL)中的混合物中一次性地添加T3P(20.96g，32.94mmol，19.59mL，50％纯度，于EtOAc溶液中)和Py(4.34g，54.90mmol，4.43mL)，并且将所得混合物在80℃搅拌16小时。LCMS显示4-氨基-2-(2，6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1，3-二酮完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物用H2O(30mL)稀释并且用EtOAc(30mL x 3)萃取。将有机层用盐水(30mL x3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝1/1至0/1到二氯甲烷/甲醇＝1/0至10/1)纯化，得到标题化合物(825mg，1.49mmol，27.19％收率，98％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝542.2
步骤5：4-(4-氨基哌啶-1-基)-N-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚 啉-4-基)丁酰胺(7)的合成
在20℃向(1-(4-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-4-氧代丁基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(825mg，1.52mmol)在二噁烷(5mL)中的混合物中一次性地添加HCl/二噁烷(4M，10mL)，并且将所得混合物在20℃搅拌1小时。TLC(SiO2，二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)指示起始材料完全消耗，并且检测到一个新斑点。将反应混合物在真空中浓缩，得到标题化合物(730mg，粗制，HCl)，为灰白色固体。
步骤6：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001371
-2-基)氨基)-N-(1-(4-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚 啉-4-基)氨基)-4-氧代丁基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物37)的合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001372
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(200mg，429.71μmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加HATU(179.73mg，472.69μmol)和DIPEA(111.08mg，859.43μmol，149.70μL)。将混合物在20℃搅拌10分钟，并且添加4-(4-氨基哌啶-1-基)-N-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)丁酰胺(246.62mg，粗制，HCl)在DMF(3mL)中的溶液和DIPEA(111.08mg，859.43μmol，149.70μL)，并且将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物用H2O(10mL)稀释并且用EtOAc(10mL x 3)萃取。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18150*40mm*15um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：17％-47％，10分钟)纯化，然后冻干，得到标题化合物(116.9mg，124.94μmol，29.07％收率，95％纯度)，为白色固体。MS(M+H)+＝888.7
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)8＝11.16(s，1H)，9.71(s，1H)，8.48(d，J＝8.3Hz，1H)，8.30-8.25(m，1H)，8.22(d，J＝5.5Hz，1H)，8.04(s，1H)，7.91-7.77(m，2H)，7.61(d，J＝7.2Hz，1H)，7.18(d，J＝6.7Hz，1H)，5.19-5.10(m，1H)，4.89-4.75(m，1H)，4.13-4.02(m，2H)，3.91(s，3H)，3.81-3.63(m，2H)，3.33(s，3H)，2.94-2.81(m，3H)，2.69-2.54(m，3H)，2.38-2.32(m，2H)，2.09-1.93(m，5H)，1.81-1.46(m，12H)
实施例38. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001381
-2-基)氨基)-N-(1-(8-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-8-氧代辛基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001391
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(230.9mg，239.45umol，46.44％收率，98％纯度)，为浅黄色固体。MS(M+H)+＝945.6
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.69-8.63(m，1H)，8.35-8.28(m，1H)，8.23(s，1H)，7.81(dd，J＝7.4，8.4Hz，1H)，7.63-7.58(m，1H)，7.37(d，J＝6.5Hz，1H)，5.20-5.12(m，1H)，5.07-5.00(m，1H)，4.13(t，J＝12.9Hz，2H)，4.01(s，3H)，3.72-3.63(m，2H)，3.42(s，3H)，3.23-3.08(m，4H)，2.96-2.85(m，1H)，2.83-2.71(m，2H)，2.55(t，J＝7.3Hz，2H)，2.30(d，J＝14.6Hz，2H)，2.22-2.05(m，4H)，1.94-1.71(m，12H)，1.55-1.42(m，6H)
实施例39. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001402
-2-基)氨基)-N-(1-(4-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001401
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(202.8mg，221.31μmol，51.50％收率，97％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝889.0
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ＝8.39(d，J＝14.0Hz，1H)，8.20(s，1H)，7.56(dd，J＝7.2，8.6Hz，1H)，7.32(d，J＝6.6Hz，1H)，7.12(d，J＝8.4Hz，1H)，7.04(d，J＝7.0Hz，1H)，5.04(dd，J＝5.0，12.2Hz，1H)，4.49(d，J＝11.8Hz，1H)，4.18-4.10(m，1H)，4.07-4.00(m，2H)，3.98(s，3H)，3.52-3.41(m，2H)，3.40(s，3H)，3.25-3.17(m，1H)，2.89-2.79(m，2H)，2.78-2.68(m，2H)，2.54(t，J＝6.7Hz，2H)，2.15-1.92(m，8H)，1.87-1.62(m，7H)，1.58-1.44(m，2H)
实施例40. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001411
-2-基)氨基)-N-(1-(4-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)苄基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001421
步骤1：4-(2-(((苄氧基)羰基)氨基)乙氧基)苯甲酸乙酯(3)的合成
向4-羟基苯甲酸乙酯(3g，18.05mmol)和(2-溴乙基)氨基甲酸苄酯(4.19g，16.25mmol)在MeCN(70mL)中的溶液中添加K2CO3(4.99g，36.11mmol)。将反应混合物加热至85℃达4小时。LCMS显示具有期望质量的一个峰(69％)。将反应混合物用H2O(150mL)稀释并且用EtOAc(150M1 x 2)萃取。将合并的有机层用NaOH(100mL，3M)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤。将滤液在真空中浓缩，得到标题化合物(5g，14.56mmol，80.66％收率)，为白色固体。MS(M+H)+＝344.1
步骤2：(2-(4-(羟基甲基)苯氧基)乙基)氨基甲酸苄酯(4)的合成
在0℃向4-(2-(((苄氧基)羰基)氨基)乙氧基)苯甲酸乙酯(5g，14.56mmol)在THF(80mL)中的溶液中分批添加LiAlH4(718.47mg，18.93mmol)。将反应混合物在20℃搅拌2小时。在LCMS上显示一个主峰。将反应混合物用H2O(0.8mL)、NaOH(0.8mL，15％溶液)和H2O(2.4mL)猝灭。将悬浮液用THF(120mL)稀释，用Na2SO4干燥，过滤。将滤液在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，PE/EtOAc＝30％～50％)纯化，得到标题化合物(2.2g，7.15mmol，49.14％收率，98％纯度)，为白色固体。MS(M-OH+H)+＝284.1
步骤3：(2-(4-(氯甲基)苯氧基)乙基)氨基甲酸苄酯(5)的合成
在20℃向(2-(4-(羟基甲基)苯氧基)乙基)氨基甲酸苄酯(1.5g，4.98mmol)在DCM(15mL)中的混合物中一次性地添加SOCl2(710.65mg，5.97mmol，433.33μL)，并且将所得混合物在20℃搅拌2小时。LCMS显示仍然存在75％的起始材料以及具有期望质量的峰(21％)。添加另外的SOCl2(710.65mg，5.97mmol，433.33μL)，并且将所得混合物在20℃搅拌另外2小时。LCMS显示仍然存在70％的起始材料。添加另外的SOCl2(710.65mg，5.97mmol，433.33μL)，并且将所得混合物在20℃继续搅拌16小时。TLC(SiO2，石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)指示起始材料完全消耗，并且检测到一个新斑点。将反应混合物在真空中浓缩，得到标题化合物(1.6g，粗制)，为白色固体。MS(M+Na)+＝342.3
步骤4：N-[1-[[4-[2-(苄氧基羰基氨基)乙氧基]苯基]甲基]-4-哌啶基]氨基甲酸 叔丁酯(6)的合成
在20℃向(2-(4-(氯甲基)苯氧基)乙基)氨基甲酸苄酯(1.6g，5.00mmol)和哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(1.20g，6.00mmol)在ACN(20mL)中的混合物中一次性地添加K2CO3(2.07g，15.01mmol)，并且将所得混合物在60℃搅拌2小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1至0/1)纯化，得到标题化合物(2.3g，4.71mmol，94.10％收率，99％纯度)，为白色固体。MS(M+H)+＝484.4
步骤5：(2-(4-((4-氨基哌啶-1-基)甲基)苯氧基)乙基)氨基甲酸苄酯(7)的合成
在20℃向N-[1-[[4-[2-(苄氧基羰基氨基)乙氧基]苯基]甲基]-4-哌啶基]氨基甲酸叔丁酯(1g，2.07mmol)在二噁烷(5mL)中的混合物中一次性地添加HCl/二噁烷(4M，10mL)，并且将所得混合物在20℃搅拌2小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物在真空中浓缩，得到标题化合物(890mg，粗制，HCl盐)，为白色固体。MS(M+H)+＝384.2
步骤6：(2-(4-((4-(4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H- 嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001441
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺基)哌啶-1-基)甲基) 苯氧基)乙基)氨基甲酸苄酯(9)的合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001442
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(0.5g，1.07mmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加HATU(449.32mg，1.18mmol)和DIPEA(277.69mg，2.15mmol，374.24μL)，将混合物在20℃搅拌10分钟，并且添加(2-(4-((4-氨基哌啶-1-基)甲基)苯氧基)乙基)氨基甲酸苄酯(541.37mg，1.29mmol，HCl盐)在DMF(5mL)中的溶液与DIPEA(277.69mg，2.15mmol，374.24μL)，并且将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物用H2O(20mL)稀释并且用EtOAc(20mL x 3)萃取。将有机层用盐水(20mL x 3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝1/1至0/1到二氯甲烷/甲醇＝1/0至10/1)纯化，得到标题化合物(612mg，714.46μmol，66.51％收率，97％纯度)，为白色油状物。MS(M+H)+＝831.1
步骤7：N-(1-(4-(2-氨基乙氧基)苄基)哌啶-4-基)-4-((9-环戊基-7，7-二氟-5- 甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001451
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧 基苯甲酰胺(10)的合成
在20℃向(2-(4-((4-(4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001452
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺基)哌啶-1-基)甲基)苯氧基)乙基)氨基甲酸苄酯(612mg，736.56μmol)在ACN(10mL)中的混合物中一次性地添加TMSI(221.07mg，1.10mmol，150.39μL)，并且将所得混合物在20℃搅拌2小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有期望质量的一个峰。向反应混合物中添加TEA(223.59mg，2.21mmol，307.56μL)并且在20℃搅拌1小时。将反应混合物在真空中浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18150*40mm*15um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：10％-40％，10分钟)纯化，并且将洗脱液冻干，得到标题化合物(393mg，547.12μmol，74.28％收率，97％纯度)，为白色固体。MS(M+H)+＝697.2
步骤8：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001453
-2-基)氨基)-N-(1-(4-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异 吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)苄基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物40)的合成
向2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1，3-二酮(150mg，543.05μmol)和N-(1-(4-(2-氨基乙氧基)苄基)哌啶-4-基)-4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001454
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(378.37mg，543.05μmol)在DMSO(5mL)中的混合物中一次性地添加TEA(164.85mg，1.63mmol，226.75μL)，并且将所得混合物在80℃搅拌16小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物用H2O(12mL)稀释并且用EtOAc(12mL x 3)萃取。将有机层用盐水(12mL x 3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18150*40mm*15um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：18％-48％，10分钟)纯化，并且将洗脱液冻干，得到标题化合物(30mg，29.59μmol，5.45％收率，94％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝953.3
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ＝8.41(d，J＝14.1Hz，1H)，8.22(s，1H)，7.59(dd，J＝7.2，8.5Hz，1H)，7.35-7.28(m，3H)，7.20(d，J＝8.6Hz，1H)，7.09(d，J＝7.1Hz，1H)，6.97(d，J＝8.7Hz，2H)，5.07(br dd，J＝5.5，12.5Hz，1H)，4.97-4.93(m，1H)，4.24(t，J＝5.1Hz，2H)，4.05(br t，J＝13.5Hz，2H)，4.00(s，3H)，3.79-3.64(m，4H)，3.42(s，3H)，3.12-3.01(m，2H)，2.89-2.70(m，2H)，2.54-2.29(m，2H)，2.22-1.96(m，6H)，1.90-1.64(m，9H)。
实施例41. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001461
-2-基)氨基)-N-(1-(4-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苄基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001471
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(112.4mg，92.44μmol，20.80％收率，95％纯度，TFA盐)，为黄色固体。MS(M+H)+＝1042.1。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ＝8.32(d，J＝13.7Hz，1H)，8.24-8.22(m，1H)，7.55(dd，J1＝8.5Hz，J2＝7.2Hz，1H)，7.43-7.31(m，3H)，7.14-7.07(m，1H)，7.07-6.97(m，3H)，5.07-4.99(m，2H)，4.33-4.23(m，2H)，4.22-4.05(m，5H)，4.03-3.97(m，3H)，3.93-3.85(m，2H)，3.78-3.68(m，6H)，3.62-3.46(m，4H)，3.42(s，3H)，3.20-3.03(m，2H)，2.91-2.78(m，1H)，2.75-2.70(m，1H)，2.34-2.20(m，2H)，2.19-2.00(m，4H)，1.92-1.67(m，8H)。
实施例42. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001481
-2-基)氨基)-N-(1-(4-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-2-氧代乙基)苯乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001491
步骤1：2-(4-乙烯基苯基)乙酸乙酯(2)的合成
在N2下在20℃向2-(4-溴苯基)乙酸乙酯(10g，41.14mmol)和三氟(乙烯基)硼酸钾(6.61g，49.36mmol)在H2O(20mL)和二噁烷(100mL)中的混合物中一次性地添加K2CO3(17.06g，123.41mmol)和Pd(dppf)Cl2(1.50g，2.06mmol)。将悬浮液在真空下脱气并且用N2吹扫数次，并且将所得混合物在100℃搅拌16小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。TLC(SiO2，石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1)指示2-(4-溴苯基)乙酸乙酯完全消耗，并且检测到两个新斑点。将反应混合物用H2O(100mL)稀释并且用EtOAc(100mL x 3)萃取。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝1/0至100/1)纯化，得到标题化合物(5.3g，25.91mmol，62.99％收率，93％纯度)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝191.5
步骤2：2-(4-(2-羟基乙基)苯基)乙酸乙酯(3)的合成
在N2下在0℃向2-(4-乙烯基苯基)乙酸乙酯(2.3g，12.09mmol)在THF(20mL)中的混合物中逐滴添加BH3·Me2S(10M，1.81mL)，并且将所得混合物在20℃搅拌2小时。TLC(SiO2，石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1)指示起始材料完全消耗，并且检测到一个主要的新斑点。然后，在0℃向该反应中依次添加H2O(8.28g，459.61mmol，8.28mL)、NaOH(3M，4.60mL)和H2O2(9.77g，86.17mmol，8.28mL，30％纯度)，并且使所得混合物在20℃搅拌另外2小时。TLC(SiO2，石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1)指示起始材料完全消耗，并且检测到四个新斑点。将反应混合物用饱和Na2SO3(50mL)猝灭并且用EtOAc(50mL x 3)萃取。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝10/1至5/1)纯化，得到标题化合物(1.2g，4.84mmol，40.03％收率，84％纯度)，为白色油状物。MS(M+H)+＝209.2
步骤3：2-(4-(2-(甲苯磺酰基氧基)乙基)苯基)乙酸乙酯(4)的合成
在20℃向2-(4-(2-羟基乙基)苯基)乙酸乙酯(1.2g，4.84mmol，84％纯度)在DCM(12mL)中的混合物中一次性地添加TEA(1.47g，14.52mmol，2.02mL)和TosCl(1.38g，7.26mmol)，并且将所得混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示2-(4-(2-羟基乙基)苯基)乙酸乙酯完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。TLC(SiO2，石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1)指示2-(4-(2-羟基乙基)苯基)乙酸乙酯完全消耗，并且检测到三个新斑点。将反应混合物在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝10/1至5/1)纯化，得到2-(4-(2-(甲苯磺酰基氧基)乙基)苯基)乙酸乙酯(1.7g，4.60mmol，94.97％收率，98％纯度)，为白色固体。MS(M+NH4)+＝380.2
步骤4：2-(4-(2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)乙基)苯基)乙酸乙酯(5) 的合成
在20℃向2-(4-(2-(甲苯磺酰基氧基)乙基)苯基)乙酸乙酯(1.7g，4.69mmol)和N-(4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯(1.88g，9.38mmol)在二噁烷(10mL)中的混合物中一次性地添加NaI(140.61mg，938.09μmol)和DIPEA(1.82g，14.07mmol，2.45mL)，并且将所得混合物在60℃搅拌16小时。LCMS显示仍然存在2-(4-(2-(甲苯磺酰基氧基)乙基)苯基)乙酸乙酯，并且检测到具有期望质量的一个峰。TLC(SiO2，石油醚∶乙酸乙酯＝1∶3)指示仍然存在2-(4-(2-(甲苯磺酰基氧基)乙基)苯基)乙酸乙酯，并且检测到四个新斑点。将反应混合物在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝2/1至1/3)纯化，得到标题化合物(1.36g，3.27mmol，69.79％收率，94％纯度)，为白色固体。MS(M+H)+＝391.4
步骤5：2-(4-(2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)乙基)苯基)乙酸(6)的合 成
在20℃向2-(4-(2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)乙基)苯基)乙酸乙酯(600mg，1.54mmol)在EtOH(6mL)和THF(6mL)中的混合物中一次性地添加NaOH(2M，1.54mL)，并且将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。在0℃向该反应混合物中添加HCl(12N)以调节pH＝7。将反应混合物在真空中浓缩，得到标题化合物(710mg，粗制)，为白色固体。MS(M-H)+＝361.0
步骤6：(1-(4-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨 基)-2-氧代乙基)苯乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(7)的合成
在20℃向4-氨基-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(400mg，1.46mmol)和2-(4-(2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)乙基)苯基)乙酸(689.79mg，1.90mmol)在DMF(5mL)中的混合物中一次性地添加T3P(2.79g，8.78mmol，50％纯度，EtOAc溶液，2.61mL)和Py(1.16g，14.64mmol，1.18mL)，并且将所得混合物在80℃搅拌16小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。TLC(SiO2，二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)指示所有起始材料完全消耗，并且检测到一个主要的新斑点。将反应混合物用H2O(15mL)稀释并且用EtOAc(15mL x 3)萃取。将有机层用盐水(15mL x 3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝1/1至0/1到二氯甲烷/甲醇＝1/0至10/1)纯化，得到标题化合物(618mg，930.47μmol，63.56％收率，93％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝618.2
步骤7：2-(4-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙基)苯基)-N-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)- 1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)乙酰胺(8)的合成
在20℃向(1-(4-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-2-氧代乙基)苯乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(615mg，995.64μmol)在二噁烷(3mL)中的混合物中一次性地添加HCl/二噁烷(4M，9mL)，并且将所得混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物在真空中浓缩，得到标题化合物(556mg，粗制，HCl)，为白色固体。MS(M+H)+＝518.2
步骤8：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001521
-2-基)氨基)-N-(1-(4-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异 吲哚啉-4-基)氨基)-2-氧代乙基)苯乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物 42)的合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001522
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(250mg，537.14μmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加HATU(224.66mg，590.86μmol)和DIPEA(138.84mg，1.07mmol，187.12μL)。将混合物在20℃搅拌10分钟，并且添加2-(4-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙基)苯基)-N-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)乙酰胺(357.12mg，粗制，HCl)在DMF(3mL)中的溶液和DIPEA(138.84mg，1.07mmol，187.12μL，2当量)，并且将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物用H2O(15mL)稀释并且用EtOAc(15mL x 3)萃取。将有机层用盐水(15mL x 3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18150*40mm*15um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：20％-50％，10分钟)纯化，然后冻干，得到标题化合物(132.9mg，130.84μmol，24.36％收率，95％纯度)，为灰白色固体。MS(M+H)+＝965.2
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.33-10.96(m，1H)，9.79(s，1H)，8.49(d，J＝8.4Hz，1H)，8.30(s，1H)，8.24(d，J＝13.6Hz，1H)，8.03(s，1H)，7.88(dd，J＝3.2，7.2Hz，1H)，7.82(t，J＝7.9Hz，1H)，7.60(d，J＝7.2Hz，1H)，7.31-7.25(m，2H)，7.23-7.16(m，3H)，5.12(dd，J＝5.4，12.8Hz，1H)，4.85-4.77(m，1H)，4.07(t，J＝13.9Hz，2H)，3.91(s，3H)，3.85-3.68(m，4H)，3.33(s，3H)，2.94-2.84(m，3H)，2.76-2.56(m，4H)，2.11-1.93(m，5H)，1.85-1.48(m，11H)
实施例43. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001531
-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)甲基)-1H-咪唑-1-基)丙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001541
步骤1：1-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙基)-1H-咪唑-4-甲酸甲酯(2)的 合成
向1H-咪唑-4-甲酸甲酯(10g，79.29mmol)在CH3CN(200mL)中的溶液中添加K2CO3(35g，253.25mmol)和3-溴丙氧基-叔丁基-二甲基-硅烷(25.78g，101.80mmol)。将混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示具有期望质量的主峰。将反应混合物过滤，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝10∶1-0∶1)纯化，得到标题化合物(8.2g，27.20mmol，34.30％收率，99％纯度)，为浅黄色油状物。MS(M+H)+＝299.1
步骤2：1-(3-羟基丙基)-1H-咪唑-4-甲酸甲酯(3)的合成
在25℃向1-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙基)-1H-咪唑-4-甲酸甲酯(6.5g，21.78mmol)在二噁烷(20mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，86.67mL)。将混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示具有期望质量的主峰。将反应混合物在减压下浓缩，得到标题化合物(4.0g，粗制)，为浅黄色油状物。MS(M+H)+＝185.2
步骤3：1-(3-(甲苯磺酰基氧基)丙基)-1H-咪唑-4-甲酸甲酯(4)的合成
在25℃向1-(3-羟基丙基)-1H-咪唑-4-甲酸甲酯(4g，21.72mmol)在DCM(50mL)中的溶液中添加TEA(18.18g，179.61mmol，25mL)和TosCl(13.33g，69.94mmol)。将混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示26％的具有期望质量的峰。将反应混合物在减压下浓缩，得到残余物。然后添加H2O(40mL)，将混合物用EtOAc(80mL x 3)萃取，将合并的有机层用盐水180ml(60mL x 3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1～0∶1)纯化，得到标题化合物(4.5g，13.30mmol，61.24％收率)，为浅黄色油状物。MS(M+H)+＝339.2
步骤4：1-(3-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)丙基)-1H-咪唑-4-甲酸甲酯 (5)的合成
在25℃向1-(3-(甲苯磺酰基氧基)丙基)-1H-咪唑-4-甲酸甲酯(2g，5.91mmol)在二噁烷(40mL)中的溶液中添加NaI(400.00mg，2.67mmol)、DIPEA(2.97g，22.96mmol，4.00mL)和哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(2.00g，9.99mmol)。将混合物在80℃搅拌16小时。LCMS显示56％的具有期望质量的峰。将反应混合物在减压下浓缩，得到残余物。将残余物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge BEH C18250*50mm*10um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：10％-40％，25分钟，柱温：30℃)纯化，随后冻干，得到标题化合物(1.5g，4.09mmol，69.25％收率)，为浅黄色油状物。MS(M+H)+＝367.1。
步骤5：(1-(3-(4-(羟基甲基)-1H-咪唑-1-基)丙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯 (6)的合成
在-20℃向1-(3-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)丙基)-1H-咪唑-4-甲酸甲酯(1.5g，4.09mmol)在THF(20mL)中的溶液中添加LiAlH4(300mg，7.90mmol)。将混合物在20℃搅拌3小时。LCMS显示检测到具有质量[M+Li]的主峰。将反应混合物在0℃用H2O(2mL)和NaOH溶液(15％，3mL)猝灭，然后添加Na2SO4(25g)，将混合物过滤，并且将滤液在减压下浓缩，得到标题化合物(1.3g，粗制)，为浅黄色油状物。MS(M+Li)+＝345.1。
步骤6：(1-(3-(4-(叠氮基甲基)-1H-咪唑-1-基)丙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁 酯(7)的合成
在0℃向(1-(3-(4-(羟基甲基)-1H-咪唑-1-基)丙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.3g，3.84mmol)在THF(30mL)中的溶液中添加DPPA(2.54g，9.23mmol，2mL)和DBU(2.02g，13.27mmol，2mL)。在N2气氛下将混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示32％的具有期望质量的峰。向反应混合物中添加H2O(20mL)，将混合物用EtOAc(50mL x 2)萃取，将合并的有机层用盐水(30mL x 3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，乙酸乙酯∶甲醇＝1∶0-3∶1)纯化，得到标题化合物(850mg，2.34mmol，60.88％收率)，为浅黄色油状物。MS(M+H)+＝364.1
步骤7：(1-(3-(4-(氨基甲基)-1H-咪唑-1-基)丙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯 (8)的合成
在25℃向(1-(3-(4-(叠氮基甲基)-1H-咪唑-1-基)丙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(680mg，1.87mmol，1当量)在THF(30mL)中的溶液中添加Pd/C(200mg，10％纯度)。在H2气氛(15Psi)下将混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示40％的具有期望质量的峰。将反应混合物过滤，并且将滤液在减压下浓缩，得到标题化合物(600mg，粗制)，为浅黄色油状物。MS(M+H)+＝338.3
步骤8：(1-(3-(4-(((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨 基)甲基)-1H-咪唑-1-基)丙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(9)的合成
在25℃向(1-(3-(4-(氨基甲基)-1H-咪唑-1-基)丙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(600mg，1.78mmol)在DMSO(15mL)中的溶液中添加TEA(727.00mg，7.18mmol，1mL)和2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1，3-二酮(400mg，1.45mmol)。在N2气氛下将混合物在100℃搅拌16小时。LCMS显示33％的具有期望质量的峰。向反应混合物中添加H2O(20mL)，将混合物用EtOAc(30mL x 2)萃取，将合并的有机层用盐水(30mL x 3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，DCM/MeOH＝30/1～10/1)纯化，得到标题化合物(400mg，673.77μmol，37.90％收率)，为浅黄色油状物。MS(M+H)+＝594.5
步骤9：4-(((1-(3-(4-氨基哌啶-1-基)丙基)-1H-咪唑-4-基)甲基)氨基)-2-(2， 6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(10)的合成
在25℃向(1-(3-(4-(((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)甲基)-1H-咪唑-1-基)丙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(400mg，673.77μmol)在二噁烷(10mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，10mL)。在N2气氛下将混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示62％的具有期望质量的峰。将反应混合物在减压下浓缩，得到标题化合物(350mg，粗制，2HCl)，为浅黄色固体。MS(M+H)+＝494.4
步骤10：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4， 5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001571
-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代 异吲哚啉-4-基)氨基)甲基)-1H-咪唑-1-基)丙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺 (化合物43)的合成
在25℃向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001572
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(200mg，429.71μmol)在DMF(4mL)中的溶液中添加HATU(400mg，1.05mmol)、DIPEA(445.20mg，3.44mmol，600μL)和4-(((1-(3-(4-氨基哌啶-1-基)丙基)-1H-咪唑-4-基)甲基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(300mg，529.59μmol，2HCl)。在N2气氛下将混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示39％的具有期望质量的峰。向反应混合物中添加H2O(10mL)，将混合物用EtOAc(30mL x2)萃取，将合并的有机层用盐水(30mL x 3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5um；流动相：[水(10mMNH4HCO3)-ACN]；B％：42％-62％，9分钟，柱温：30℃)纯化，随后冻干，得到标题化合物(84.7mg，83.7lμmol，19.48％收率，93％纯度)，为浅黄色固体。MS(M+H)+＝941.7
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.08(br s，1H)，8.31(s，1H)，8.25(d，J＝13.3Hz，1H)，8.04(s，1H)，7.87(dd，J＝3.1，7.7Hz，1H)，7.61-7.50(m，2H)，7.23-7.14(m，2H)，7.09(s，1H)，7.04(d，J＝7.0Hz，1H)，6.89(t，J＝5.8Hz，1H)，5.05(dd，J＝5.5，12.7Hz，1H)，4.86-4.77(m，1H)，4.40-4.33(m，2H)，4.08(t，J＝13.9Hz，2H)，3.97-3.93(m，2H)，3.92(s，3H)，3.80-3.59(m，1H)，3.34(s，3H)，2.95-2.83(m，1H)，2.81-2.73(m，2H)，2.62-2.54(m，2H)，2.22-2.14(m，2H)，2.06-1.87(m，6H)，1.83-1.72(m，5H)，1.64-1.47(m，6H)
实施例44. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001581
-2-基)氨基)-N-(1-((1-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)-1H-1，2，3-三唑-4-基)甲基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001591
步骤1：4-((2-(2-叠氮基乙氧基)乙基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚 啉-1，3-二酮(2)的合成
向4-甲基苯磺酸2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙酯(2g，3.88mmol)在DMF(20mL)中的溶液中添加NaN3(450mg，6.92mmol)。将混合物在70℃搅拌16小时。LCMS显示具有期望质量的主峰。将反应混合物倒入H2O(20mL)中并且用EA(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL x 3)洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩，得到标题化合物(1.40g，粗制)，为浅黄色固体。MS(M+H)+＝387.1
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.15(s，1H)，7.64(dd，J＝7.2，8.4Hz，1H)，7.21(d，J＝8.6Hz，1H)，7.10(d，J＝7.0Hz，1H)，6.68(t，J＝5.9Hz，1H)，5.15-5.05(m，1H)，3.74-3.66(m，4H)，3.55(q，J＝5.5Hz，2H)，3.49-3.43(m，2H)，2.99-2.89(m，1H)，2.69-2.57(m，2H)，2.12-2.04(m，1H)。
步骤2：(1-((1-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基) 氨基)乙氧基)乙基)-1H-1，2，3-三唑-4-基)甲基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(4)的合成
在25℃向(1-(丙-2-炔-1-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(900mg，3.78mmol)在MeOH(20mL)中的溶液中添加CuSO4(750mg，4.70mmol，721.15μL)、左旋抗坏血酸钠(1g，5.05mmol)和4-((2-(2-叠氮基乙氧基)乙基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(1.2g，3.11mmol)。将混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示90％的具有期望质量的峰。将反应混合物过滤，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi Max-RP 250*50mm*10um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：32％-62％，14分钟，柱温：30℃)纯化，随后冻干，得到标题化合物(1.5g，2.40mmol，63.59％收率)，为浅黄色固体。MS(M+H)+＝625.5
步骤3：4-((2-(2-(4-((4-氨基哌啶-1-基)甲基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)乙氧基) 乙基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(5)的合成
向(1-((1-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)-1H-1，2，3-三唑-4-基)甲基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(500mg，800.40μmol)在二噁烷(10mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，10mL)。将混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示82％的具有期望质量的峰。将反应混合物浓缩，得到残余物，得到标题化合物(450mg，粗制，2HCl)，为浅黄色固体。
MS(M+H)+＝525.4
步骤4：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001601
-2-基)氨基)-N-(1-((1-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧 代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)-1H-1，2，3-三唑-4-基)甲基)哌啶-4-基)-2-氟-5- 甲氧基苯甲酰胺(化合物44)的合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001602
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(200mg，429.71μmol)在DMF(4mL)中的溶液中添加HATU(400mg，1.05mmol)、DIPEA(445.20mg，3.44mmol，600μL)和4-((2-(2-(4-((4-氨基哌啶-1-基)甲基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(350mg，585.78μmol，2HCl)。将混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示46％的具有期望质量的峰。向反应混合物中添加H2O(10mL)，将混合物用EtOAc(30mL x 2)萃取，将合并的有机层用盐水90mL(30mL x 3)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：3_Phenomenex Luna C1875*30mm*3um；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：32％-52％，7分钟，柱温：30℃)纯化，随后冻干，得到标题化合物(101.3mg，0.0886mmol，20.62％收率，95％纯度，TFA)，为浅黄色固体。MS(M+H)+＝972.7
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.12(s，1H)，9.95-9.72(m，1H)，8.35-8.08(m，5H)，7.58(t，J＝7.8Hz，1H)，7.17-7.05(m，2H)，6.56(s，1H)，5.11-5.06(m，1H)，4.88-4.79(m，1H)，4.62(t，J＝4.9Hz，2H)，4.44-4.36(m，2H)，4.13-4.06(m，1H)，3.94-3.92(m，2H)，3.91(s，3H)，3.89-3.88(m，2H)，3.68-3.60(m，2H)，3.51-3.43(m，4H)，3.33(s，3H)，3.12-2.91(m，2H)，2.68-2.55(m，2H)，2.16-1.83(m，6H)，1.78-1.53(m，8H)。
实施例45. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001611
-2-基)氨基)-N-(1-((1-(2-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-1H-1，2，3-三唑-4-基)甲基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001621
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(75.3mg，66.77μmol，15.54％收率，94％纯度，TFA)，为浅黄色固体。
MS(M+H)+＝1060.8
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.10(s，1H)，9.91-9.71(m，1H)，8.32-8.09(m，5H)，7.62-7.53(m，1H)，7.16-7.04(m，2H)，6.60(s，1H)，5.06(dd，J＝5.2，13.0Hz，1H)，4.89-4.79(m，1H)，4.62-4.55(m，2H)，4.48-4.39(m，2H)，4.09(t，J＝13.9Hz，1H)，3.94-3.92(m，2H)，3.91-3.89(m，3H)，3.86-3.82(m，2H)，3.64-3.61(m，2H)，3.56-3.44(m，12H)，3.34(s，3H)，3.14-2.90(m，2H)，2.67-2.53(m，2H)，2.11-1.91(m，6H)，1.78-1.55(m，8H)。
实施例46. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001632
-2-基)氨基)-N-(1-((1-(4-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-4-氧代丁基)-1H-1，2，3-三唑-4-基)甲基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001631
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(42.5mg，36.85μmol，8.58％收率，94％纯度，TFA)，为白色固体。MS(M+H)+＝970.2
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.15(s，1H)，9.93-9.67(m，2H)，8.39(d，J＝8.2Hz，1H)，8.30(d，J＝5.8Hz，1H)，8.28-8.17(m，2H)，8.11(s，1H)，7.84(t，J＝7.8Hz，1H)，7.64(d，J＝7.4Hz，1H)，7.23-7.15(m，1H)，5.13(dd，J＝5.2，12.8Hz，1H)，4.85-4.79(m，1H)，4.52(t，J＝7.0Hz，2H)，4.46-4.39(m，2H)，4.13-4.09(m，1H)，4.08(t，J＝13.8Hz，2H)，4.02-3.93(m，2H)，3.91(s，3H)，3.33(s，3H)，3.30-3.03(m，4H)，2.65-2.53(m，4H)，2.22-2.12(m，2H)，2.10-2.00(m，2H)，2.00-1.90(m，2H)，1.80-1.68(m，4H)，1.66-1.56(m，4H)
实施例47. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001641
-2-基)氨基)-N-(1-((1-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙酰胺基)乙基)-1H-1，2，3-三唑-4-基)甲基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001651
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(7.5mg，7.46μmol，3.19％收率，98％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝985.3
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝8.45-8.28(m，1H)，8.13-7.97(m，2H)，7.58-7.48(m，2H)，7.26-7.22(m，1H)，7.18(d，J＝7.3Hz，1H)，7.15-7.10(m，1H)，7.07(d，J＝7.3Hz，1H)，6.87-6.74(m，1H)，5.02-4.81(m，2H)，4.63-4.45(m，2H)，4.41-5.36(m，1H)，4.34-4.21(m，2H)，4.13-4.02(m，1H)，4.00-3.86(m，6H)，3.85-3.71(m，3H)，3.44-3.41(m，3H)，2.91-2.71(m，3H)，2.28-2.22(m，2H)，2.24-2.07(m，3H)，1.80-1.78(m，4H)，1.68-1.59(m，7H)。
实施例48. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001661
-2-基)氨基)-N-(1-(((1R，2S)-2-(((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001671
步骤1：(1R，2S)-2-氨基甲酰基环丙烷甲酸(2)的合成
在100mL的密封管中，将3-氧杂二环[3.1.0]己烷-2，4-二酮(5g，44.61mmol)在NH3·H2O(50mL)中的溶液在20℃搅拌16小时。TLC(SiO2，石油醚∶乙酸乙酯＝1∶2)指示起始材料完全消耗，并且检测到一个新斑点。将反应混合物在真空中浓缩，得到(1R，2S)-2-氨基甲酰基环丙烷甲酸(6.2g，粗制)，为灰白色固体。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.37(br s，1H)，6.82-6.38(m，2H)，1.71-1.63(m，1H)，1.59-1.50(m，1H)，1.20-1.10(m，1H)，1.10-1.00(m，1H)
步骤2：(((1S，2R)-2-(羟基甲基)环丙基)甲基)氨基甲酸苄酯(3)的合成
在N2下在20℃向(1R，2S)-2-氨基甲酰基环丙烷甲酸(6.2g，48.02mmol)在THF(100mL)中的混合物中逐滴添加BH3·Me2S(10M，48.02mL)，并且将所得混合物在60℃搅拌16小时。将反应混合物用HCl(1N)猝灭，并且将反应混合物在60℃搅拌4小时。在20℃向该反应混合物中添加NaOH(2M，72.03mL)和CbzCl(12.29g，72.03mmol，10.24mL)，并且将反应混合物在60℃搅拌12小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的峰。将反应混合物用H2O(100mL)稀释并且用EtOAc(100mL x 3)萃取。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将粗产物通过反相HPLC(方法：FA)纯化，然后冻干，得到标题化合物(5.4g，22.49mmol，46.84％收率，98％纯度)，为白色油状物。MS(M+Na)+＝258.4
步骤3：4-甲基苯磺酸((1R，2S)-2-((((苄氧基)羰基)氨基)甲基)环丙基)甲酯(4) 的合成
在20℃向(((1S，2R)-2-(羟基甲基)环丙基)甲基)氨基甲酸苄酯(2.7g，11.48mmol)在DCM(30mL)中的混合物中一次性地添加TEA(3.48g，34.43mmol，4.79mL)和TosCl(3.28g，17.21mmol)，并且将所得混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1至0/1)纯化，得到标题化合物(2.4g，6.16mmol，53.70％收率)，为黄色油状物。MS(M+Na)+＝412.1
步骤4：N-[1-[[2-(苄氧基羰基氨基甲基)环丙基]甲基]-4-哌啶基]氨基甲酸叔丁 酯(5)的合成
在20℃向4-甲基苯磺酸((1R，2S)-2-((((苄氧基)羰基)氨基)甲基)环丙基)甲酯和N-(4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯(1.60g，8.01mmol)在二噁烷(30mL)中的混合物中一次性地添加DIPEA(2.39g，18.49mmol，3.22mL)和NaI(184.74mg，1.23mmol)，并且将所得混合物在80℃搅拌16小时。LCMS显示4-甲基苯磺酸((1R，2S)-2-((((苄氧基)羰基)氨基)甲基)环丙基)甲酯完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝1/1至0/1)纯化，得到标题化合物(1.4g，3.15mmol，51.15％收率，94％纯度)，为白色油状物。MS(M+H)+＝418.3
步骤5：(1-(((1R，2S)-2-(氨基甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯 (6)的合成
在N2下向N-[1-[[2-(苄氧基羰基氨基甲基)环丙基]甲基]-4-哌啶基]氨基甲酸叔丁酯(1.40g，3.35mmol)在MeOH(15mL)中的溶液中添加Pd/C(0.2g，10％纯度)。将悬浮液在真空下脱气并且用H2吹扫数次。将混合物在H2(15psi)下在20℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物用MeOH(60mL)稀释并且过滤。将滤液在真空中浓缩，得到标题化合物(920mg，粗制)，为白色油状物。MS(M+H)+＝284.3
步骤6：(1-(((1R，2S)-2-(((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉4- 基)氨基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(8)的合成
在20℃向2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1，3-二酮(0.8g，2.90mmol)和(1-(((1R，2S)-2-(氨基甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(902.90mg，3.19mmol)在DMSO(5mL)中的混合物中一次性地添加TEA(879.20mg，8.69mmol，1.21mL)，并且将所得混合物在80℃搅拌16小时。LCMS显示2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1，3-二酮完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物用H2O(15mL)稀释并且用EtOAc(15mL x 3)萃取。将有机层用盐水(15mL x 3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝10/1至1/4)纯化，得到标题化合物(850mg，1.56mmol，53.84％收率，99％纯度)，为绿色固体。MS(M+H)+＝540.2
步骤7：4-((((1S，2R)-2-((4-氨基哌啶-1-基)甲基)环丙基)甲基)氨基)-2-(2，6- 二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(9)的合成
在20℃向(1-(((1R，2S)-2-(((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(850mg，1.58mmol)在二噁烷(4mL)中的混合物中一次性地添加HCl/二噁烷(4M，8mL，20.32当量)，并且将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物在真空中浓缩，得到标题化合物(760mg，粗制，HCl)，为绿色固体。MS(M+H)+＝440.3
步骤8：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001701
-2-基)氨基)-N-(1-(((1R，2S)-2-(((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二 氧代异吲哚啉-4-基)氨基)甲基)环丙基)甲基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合 物48)的合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001702
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(200mg，429.71μmol)在DMF(4mL)中的溶液中添加HATU(163.39mg，429.71μmol)和DIPEA(111.08mg，859.43μmol，149.70μL)。将混合物在20℃搅拌10分钟，并且在20℃逐滴添加4-((((1S，2R)-2-((4-氨基哌啶-1-基)甲基)环丙基)甲基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(226.63mg，粗制，HCl)在DMF(4mL)中的溶液和DIPEA(111.08mg，859.43μmol，149.70μL)，并且将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物用H2O(12mL)稀释并且用EtOAc(12mL x 3)萃取。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18150*40mm*15um；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：30％-40％，10分钟)纯化并且通过制备型HPLC(柱：3_PhenomenexLuna C1875*30mm*3um；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：34％-54％，7分钟)再次纯化，然后冻干，得到标题化合物(104mg，100.79μmol，23.45％收率，97％纯度，TFA)，为黄色固体。MS(M+H)+＝887.2
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ＝8.33(d，J＝13.6Hz，1H)，8.21(s，1H)，7.64-7.57(m，1H)，7.38-7.34(m，1H)，7.16-7.08(m，2H)，5.12-5.06(m，1H)，5.04-4.91(m，2H)，4.25-4.14(m，1H)，4.09(t，J＝13.0Hz，2H)，4.00(s，3H)，3.79(d，J＝12.4Hz，1H)，3.60-3.45(m，2H)，3.40(s，3H)，3.29-3.12(m，4H)，2.94-2.82(m，1H)，2.79-2.66(m，2H)，2.38-2.19(m，2H)，2.17-2.05(m，3H)，1.99-1.67(m，8H)，1.64-1.53(m，1H)，1.36-1.26(m，1H)，1.17-1.11(m，1H)，0.59-0.51(m，1H)
实施例49. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001711
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-((2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基)(甲基)氨基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001721
步骤1：N-(2-(2-羟基乙氧基)乙基)甲酰胺(2)的合成
将2-(2-氨基乙氧基)乙醇(7g，66.58mmol，6.67mL)在甲酸乙酯(32.24g，435.15mmol，35.00mL)中的溶液在90℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成。将混合物与中试(0.5g规模)合并并且浓缩，得到标题化合物(8g，60.08mmol，90.24％收率)，为黄色油状物。
MS(M+H)+＝134.1
步骤2：2-(2-(甲基氨基)乙氧基)乙醇(3)的合成
向LAH(2.57g，67.60mmol)在THF(100mL)中的混合物中添加N-(2-(2-羟基乙氧基)乙基)甲酰胺(6g，45.06mmol)在THF(10mL)中的溶液，并且将所得混合物在20℃搅拌3小时。TLC(乙酸乙酯/甲醇＝10/1)显示反应完成。将混合物依次用水(2.5mL)、2.5mL 15％NaOH(于水中)和水(7.5mL)猝灭。将混合物在25℃搅拌30分钟，将混合物过滤，并且将滤液在真空下浓缩，得到标题化合物(9.7g，粗制)，为黄色油状物。
步骤3：(2-(2-羟基乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸苄酯(4)的合成
向2-(2-(甲基氨基)乙氧基)乙醇(9.7g，81.40mmol)和K2CO3(22.50g，162.80mmol)在THF(40mL)和H2O(20mL)中的混合物中添加CbzCl(20.83g，122.10mmol，17.36mL)，并且将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成。将混合物与中试(1.3g规模)合并，并且倒入水(100mL)中并且用EtOAc(50mL x 3)萃取，将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化，得到标题化合物(7.6g，30.00mmol，36.86％收率)，为黄色油状物。
步骤4：4-甲基苯磺酸2-(2-(((苄氧基)羰基)(甲基)氨基)乙氧基)乙酯(5)的合成
向(2-(2-羟基乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸苄酯(7.6g，30.00mmol)和TEA(9.11g，90.01mmol，12.53mL)在DCM(50mL)中的混合物中添加TosCl(8.58g，45.01mmol)，并且将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成。将混合物在真空下浓缩。将残余物通过硅胶色谱(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)纯化，得到标题化合物(7.6g，14.92mmol，49.73％收率，80％纯度)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝408.1
步骤5：(2-(2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲 酸苄酯(6)的合成
向4-甲基苯磺酸2-(2-(((苄氧基)羰基)(甲基)氨基)乙氧基)乙酯(4g，7.85mmol，80％纯度)和哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(2.36g，11.78mmol)在二噁烷(20mL)中的混合物中添加NaI(117.71mg，785.31μmol)和DIPEA(2.03g，15.71mmol，2.74mL)，并且将所得混合物在80℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成。将混合物在真空下浓缩。将残余物通过硅胶色谱(乙酸乙酯)纯化，得到标题化合物(1.8g，4.05mmol，51.57％收率，98％纯度)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝436.1
步骤6：(1-(2-(2-(甲基氨基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(7)的合 成
向(2-(2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基甲酸苄酯(1.8g，4.13mmol)在MeOH(20mL)中的溶液中添加Pd/C(0.2g，4.13mmol，10％纯度)，并且在H2(15psi)下将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成。将混合物过滤并且浓缩，得到标题化合物(1.2g，3.98mmol，96.33％收率)，为褐色油状物。MS(M+H)+＝302.2
步骤7：N-[1-[2-[2-[2-(苄氧基羰基氨基)乙基-甲基-氨基]乙氧基]乙基]-4-哌 啶基]氨基甲酸叔丁酯(9)的合成
向(1-(2-(2-(甲基氨基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1g，3.32mmol)和(2-溴乙基)氨基甲酸苄酯(1.03g，3.98mmol)在二噁烷(4mL)中的溶液中添加NaI(49.73mg，331.76μmol)和DIPEA(857.55mg，6.64mmol，1.16mL)，并且将所得混合物在80℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成。将混合物与中试(0.2g规模)合并并且浓缩。将残余物通过反相柱(方法：FA，MeCN/水)纯化，得到标题化合物(0.9g，1.77mmol，53.28％收率，94％纯度)，为红色油状物。MS(M+H)+＝479.4
步骤8：(1-(2-(2-((2-氨基乙基)(甲基)氨基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸 叔丁酯(10)的合成
向N-[1-[2-[2-[2-(苄氧基羰基氨基)乙基-甲基-氨基]乙氧基]乙基]-4-哌啶基]氨基甲酸叔丁酯(0.9g，1.88mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中添加Pd/C(0.1g，10％纯度)，并且在H2(15psi)下将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成。将混合物过滤并且浓缩，得到标题化合物(0.5g，1.45mmol，77.19％收率)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝345.2
步骤9：(1-(2-(2-((2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基) 氨基)乙基)(甲基)氨基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(11)的合成
向2-(2，6-二氧代-3-哌啶基)-4-氟-异吲哚啉-1，3-二酮(0.3g，1.09mmol)和(1-(2-(2-((2-氨基乙基)(甲基)氨基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(340mg，986.96μmol)在DMSO(5mL)中的溶液中添加TEA(329.70mg，3.26mmol，453.51μL)，并且将所得混合物在60℃搅拌12小时。TLC(乙酸乙酯/甲醇＝10/1)显示反应完成。将混合物与中试(50mg规模)合并，并且倒入水(30mL)中并且用EtOAc(20mL x 3)萃取，将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过硅胶柱(乙酸乙酯/甲醇＝10/1)纯化，得到标题化合物(0.12g，193.77μmol，17.84％收率，97％纯度)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝601.3
步骤10：4-((2-((2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基)乙基)氨 基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(12)的合成
向(1-(2-(2-((2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基)(甲基)氨基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(120mg，199.77μmol)在二噁烷(5mL)中的混合物中添加HCl/二噁烷(4M，5mL)，并且将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示反应完成。将混合物浓缩，得到标题化合物(110mg，粗制，HCl)，为黄色油状物。
步骤11：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4， 5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001751
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-((2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二 氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基)(甲基)氨基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯 甲酰胺(化合物49)的合成
向4-((2-((2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)乙基)(甲基)氨基)乙基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(110mg，204.82μmol，HCl)和4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001752
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(95.33mg，204.82μmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加HATU(155.76mg，409.65μmol)和DIPEA(105.89mg，819.29μmol，142.71μL)，并且将混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示反应完成。将混合物倒入水(20mL)中并且用EtOAc(20mL x 3)萃取，将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩，将残余物通过制备型HPLC(柱：Unisil3-100 C18μLtra 150*50mm*3um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：30％-50％，10分钟)纯化，并且将洗脱液冻干。将固体溶解在DMF中，通过DIPEA将混合物调节至pH＝8，并且将所得混合物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：43％-76％，8分钟)再次纯化，随后通过制备型TLC(乙酸乙酯/甲醇＝6/1)纯化，得到标题化合物(10.7mg，10.61μmol，15.03％收率，94％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝948.3
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.09(s，1H)，8.30(s，1H)，8.24(d，J＝13.2Hz，1H)，8.03(s，1H)，7.86-7.84(m，1H)，7.58-7.56(m，1H)，7.18(d，J＝7.2Hz，1H)，7.08(d，J＝8.8Hz，1H)，7.02(d，J＝6.8Hz，1H)，6.75-6.71(m，1H)，5.07-5.04(m，1H)，4.84-4.79(m，1H)，4.11-4.03(m，3H)，3.91(s，3H)，3.73-3.65(m，2H)，3.52-3.45(m，4H)，2.91-2.80(m，3H)，2.65-2.58(m，2H)，2.58-2.55(m，4H)，2.45-2.42(m，2H)，2.26(s，3H)，2.01-1.98(m，6H)，1.77-1.72(m，5H)，1.70-1.60(m，4H)，1.49-1.41(m，3H)。
实施例50. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001761
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-5-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001771
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(69mg，69.37μmol，18.18％收率，94％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝935.4。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝8.29(d，J＝14.9Hz，1H)，8.00(s，1H)，7.74(s，1H)，7.54(d，J＝8.3Hz，1H)，7.48(d，J＝7.2Hz，1H)，6.97-6.91(m，1H)，6.71(dd，J＝2.1，8.3Hz，1H)，6.68-6.60(m，1H)，5.33-5.24(m，1H)，4.88-4.72(m，2H)，4.04-3.92(m，1H)，3.90(s，3H)，3.87-3.80(m，2H)，3.67(t，J＝5.0Hz，2H)，3.62-3.53(m，6H)，3.37-3.30(m，5H)，2.91-2.61(m，5H)，2.56(t，J＝5.4Hz，2H)，2.27-2.11(m，2H)，2.08-1.95(m，5H)，1.77-1.63(m，5H)，1.55-1.47(m，3H)。
实施例51. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001772
-2-基)氨基)-N-(1-(14-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-5-基)氨基)-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001781
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(45.6mg，36.89μmol，9.03％收率，92％纯度，TFA盐)，为褐色固体。MS(M+H)+＝1023.3。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ＝8.29(d，J＝13.8Hz，1H)，8.23-8.15(m，1H)，7.55-7.53(m，1H)，7.36(d，J＝6.7Hz，1H)，7.01(d，J＝1.9Hz，1H)，6.83(dd，J1＝8.4Hz，J2＝2.1Hz，1H)，5.05-5.00(m，2H)，4.09(t，J＝13.1Hz，3H)，4.01-3.95(m，3H)，3.83-3.79(m，2H)，3.74-3.62(m，16H)，3.53-3.46(m，1H)，3.44-3.35(m，7H)，3.19-3.13(m，1H)，2.92-2.81(m，1H)，2.75-2.70(m，1H)，2.35-2.21(m，2H)，2.18-2.02(m，4H)，1.98-1.77(m，4H)，1.78-1.67(m，4H)。
实施例52和53. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001791
-2-基)氨基)-N-(1-(15-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)-3，6，9，12-四氧杂十五碳-14-炔-1-基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺和4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001792
-2-基)氨基)-N-(1-(15-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)-3，6，9，12-四氧杂十五烷基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001801
Figure BPA0000310075650001811
步骤1：4-碘异苯并呋喃-1，3-二酮(2)的合成
将3-碘邻苯二甲酸(25g，85.61mmol)在Ac2O(100mL)中的混合物在80℃搅拌16小时。LCMS显示反应完成。将反应混合物在真空中浓缩。将粗产物用石油醚(40mL x 5)洗涤，并且在真空中干燥，得到标题化合物(22.4g，粗制)，为白色固体。MS(M+Na)+＝296.2
步骤2：2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-碘异吲哚啉-1，3-二酮(3)的合成
向4-碘异苯并呋喃-1，3-二酮(10g，36.49mmol)在AcOH(100mL)中的溶液中一次性地添加3-氨基哌啶-2，6-二酮(6.61g，40.14mmol，HCl)、NaOAc(3.59g，43.79mmol)，并且将混合物在140℃搅拌16小时。TLC(EtOAc)指示反应完成。将反应混合物过滤，并且将滤饼用H2O(100mL x 3)洗涤，将滤饼在真空中干燥，得到标题化合物(13g，粗制)，为黑色固体。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.2(s，1H)，8.27(d，J＝7.6，1H)，7.92(d，J＝7.2，1H)，7.58(d，J＝7.6，1H)，5.18-5.14(m，1H)，2.96-2.83(m，1H)，2.63-2.53(m，2H)，2.09-2.05(m，1H)。
步骤3：2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-(1-羟基-3，6，9，12-四氧杂十五碳-14-炔- 15-基)异吲哚啉-1，3-二酮(4)的合成
向2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-碘异吲哚啉-1，3-二酮(2g，5.21mmol)和2-[2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙醇(1.81g，7.81mmol)在DMF(20mL)中的混合物中添加Pd(PPh3)2Cl2(380.97mg，520.67μmol)、CuI(198.32mg，1.04mmol)和TEA(5.27g，52.07mmol，7.25mL)，并且在N2下在微波下将混合物在60℃搅拌0.5小时。LCMS指示反应完成。将反应混合物浓缩。将残余物通过硅胶柱(EtOAc)纯化，得到标题化合物(2g，4.09mmol，78.64％收率)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝489.1
步骤4：4-甲基苯磺酸15-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4- 基)-3，6，9，12-四氧杂十五碳-14-炔-1-基酯(5)的合成
向2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-(1-羟基-3，6，9，12-四氧杂十五碳-14-炔-15-基)异吲哚啉-1，3-二酮(2g，4.09mmol)和TEA(1.24g，12.28mmol，1.71mL)在DCM(10mL)中的混合物中添加TosCl(1.17g，6.14mmol)，并且将混合物在20℃搅拌16小时。LCMS指示反应完成。将反应混合物浓缩。将残余物通过硅胶柱(EtOAc)纯化，得到标题化合物(1.8g，2.49mmol，60.88％收率，89％纯度)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝643.1
步骤5：(1-(15-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)-3，6，9， 12-四氧杂十五碳-14-炔-1-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(6)的合成
向4-甲基苯磺酸15-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)-3，6，9，12-四氧杂十五碳-14-炔-1-基酯(1g，1.56mmol)和哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(467.45mg，2.33mmol)在二噁烷(10mL)中的溶液中添加NaI(23.32mg，155.60μmol)和DIPEA(402.21mg，3.11mmol，542.06μL)，并且将所得混合物在80℃搅拌12小时。TLC(乙酸乙酯/甲醇＝10/1)显示反应完成。将混合物浓缩，并且将残余物通过硅胶柱(乙酸乙酯/甲醇＝10/1)纯化，得到标题化合物(0.9g，1.29mmol，82.78％收率，96％纯度)，为黄色油状物。
MS(M+H)+＝671.2
步骤6：4-(1-(4-氨基哌啶-1-基)-3，6，9，12-四氧杂十五碳-14-炔-15-基)-2-(2， 6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(7)的合成
向(1-(15-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)-3，6，9，12-四氧杂十五碳-14-炔-1-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(0.9g，1.34mmol)在二噁烷(10mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，10mL)，并且将所得混合物在25-C搅拌2小时。LCMS显示反应完成。将混合物在真空下浓缩，得到4-(1-(4-氨基哌啶-1-基)-3，6，9，12-四氧杂十五碳-14-炔-15-基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(0.8g，1.32mmol，98.21％收率，HCl)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝571.2
步骤7：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001831
-2-基)氨基)-N-(1-(15-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚 啉-4-基)-3，6，9，12-四氧杂十五碳-14-炔-1-基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化 合物52)的合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001832
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(300mg，644.57μmol)、4-(1-(4-氨基哌啶-1-基)-3，6，9，12-四氧杂十五碳-14-炔-15-基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(391.32mg，644.57μmol，HCl)和HATU(490.17mg，1.29mmol)在DMF(4mL)中的溶液中添加DIPEA(249.91mg，1.93mmol，336.81μL)，并且将所得混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成。将混合物倒入水(20mL)中并且用EtOAc(20mL x 3)萃取，将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenexluna C18150*40mm*15um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：27％-57％，10分钟)纯化，并且将洗脱液冻干，得到标题化合物(229.4mg，218.57μmol，33.91％收率，97％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝1018.6
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.15(s，1H)，9.38-9.09(m，1H)，8.30(s，1H)，8.28-8.08(m，3H)，7.94-7.83(m，3H)，7.26-7.14(m，1H)，5.16(dd，J＝5.3，12.8Hz，1H)，4.83(t，J＝7.9Hz，1H)，4.55-4.47(m，2H)，4.10(t，J＝13.8Hz，2H)，4.04-3.96(m，1H)，3.94-3.89(m，3H)，3.80-3.70(m，4H)，3.64-3.53(m，12H)，3.34(s，3H)，3.27(d，J＝4.6Hz，2H)，3.12(d，J＝12.0Hz，1H)，2.95-2.85(m，1H)，2.65-2.54(m，2H)，2.10-2.04(m，2H)，1.98(d，J＝5.4Hz，3H)，1.87-1.70(m，4H)，1.57-1.47(m，4H)o
步骤8：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001833
-2-基)氨基)-N-(1-(15-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚 啉-4-基)-3，6，9，12-四氧杂十五烷基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物53)的 合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001841
-2-基)氨基)-N-(1-(15-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)-3，6，9，12-四氧杂十五碳-14-炔-1-基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(70mg，68.76μmol)在EtOAc(5mL)中的溶液中添加Pd/C(20mg，10％纯度)，并且在H2(15psi)下将所得混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成。将混合物与中试(50mg规模)合并并且过滤，并且将滤液浓缩，将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi C18150*25mm*10um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：19％-49％，分钟)纯化，并且将洗脱液冻干，得到标题化合物(23mg，21.60μmol，31.42％收率，96％纯度，FA盐)，为白色固体。MS(M+H)+＝1022.7
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.12(s，1H)，8.30(s，1H)，8.24(t，J＝6.6Hz，2H)，8.03(s，1H)，7.87(dd，J＝3.3，7.6Hz，1H)，7.80-7.73(m，2H)，7.72-7.69(m，1H)，7.19(d，J＝6.8Hz，1H)，5.18-5.04(m，1H)，4.87-4.76(m，1H)，4.08(t，J＝13.9Hz，2H)，3.91(s，3H)，3.79-3.67(m，1H)，3.53-3.48(m，18H)，3.34(s，3H)，3.10-3.03(m，2H)，2.95-2.80(m，4H)，2.65-2.53(m，2H)，2.48-2.45(m，2H)，2.11-2.03(m，2H)，1.99-1.93(m，2H)，1.89-1.82(m，2H)，1.80-1.71(m，4H)，1.61-1.52(m，4H)。
实施例54. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001842
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-((3-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)丙-2-炔-1-基)氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001851
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(36.2mg，36.35μmol，6.29％收率，98％纯度，FA盐)，为白色固体。MS(M+H)+＝930.3。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ＝8.49(br s，1H)，8.40(d，J＝14.2Hz，1H)，8.21(s，1H)，7.86-7.74(m，3H)，7.30(d，J＝6.8Hz，1H)，5.15-5.11(m，1H)，4.98-4.96(m，1H)，4.66-5.47(m，2H)，4.55(s，2H)，4.08-3.99(m，5H)，3.97-3.92(m，1H)，3.91-3.74(m，5H)，3.51(d，J＝11.8Hz，2H)，3.41(s，3H)，3.25-3.16(m，2H)，3.07-2.94(m，2H)，2.94-2.83(m，1H)，2.81-2.64(m，2H)，2.18-2.09(m，4H)，1.90-1.77(m，4H)，1.76-1.65(m，4H)。
实施例55. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001862
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(3-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)丙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001861
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(118.1mg，121.39μmol，42.33％收率，96％纯度)，为白色固体。MS(M+H)+＝934.7。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.13(s，1H)，8.30(s，1H)，8.24(d，J＝13.2Hz，1H)，8.03(s，1H)，7.90-7.84(m，1H)，7.81-7.72(m，2H)，7.72-7.65(m，1H)，7.18(d，J＝6.8Hz，1H)，5.16-5.08(m，1H)，4.87-4.77(m，1H)，4.07(t，J＝13.8Hz，2H)，3.91(s，3H)，3.76-3.66(m，1H)，3.54-3.45(m，6H)，3.42(t，J＝6.4Hz，2H)，3.33(s，3H)，3.07(t，J＝7.6Hz，2H)，2.97-2.77(m，3H)，2.67-2.51(m，3H)，2.45(t，J＝5.8Hz，2H)，2.06-1.93(m，4H)，1.89-1.80(m，2H)，1.79-1.68(m，4H)，1.67-1.50(m，6H)。
实施例56. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001871
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001881
步骤1：2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)-N-(2- (2-羟基乙氧基)乙基)乙酰胺(2)的合成
向2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酸(6.95g，20.93mmol)和2-(2-氨基乙氧基)乙醇(2.0g，19.02mmol，1.90mL)在DMF(20mL)中的溶液中添加EDCI(5.47g，28.53mmol)、HOBt(3.86g，28.53mmol)和TEA(11.55g，114.14mmol，15.89mL)，并且将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成。将混合物在真空中浓缩。将残余物通过反相HPLC(0.1％FA条件，MeCN，水)纯化，得到2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)-N-(2-(2-羟基乙氧基)乙基)乙酰胺(5.6g，13.35mmol，70.19％收率)，为灰色固体。MS(M+H)+＝420.0
步骤2：4-甲基苯磺酸2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚 啉-4-基)氧基)乙酰胺基)乙氧基)乙酯(3)的合成
向2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)-N-(2-(2-羟基乙氧基)乙基)乙酰胺(2.5g，5.96mmol)在DCM(20mL)中的溶液中添加TEA(723.84mg，7.15mmol，995.65μL)和TosCl(1.36g，7.15mmol)，并且将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成。将混合物过滤，并且将滤液用H2O(20mL)稀释并且用DCM(50mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(15mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且在减压下浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(25g
Figure BPA0000310075650001891
硅胶快速柱，洗脱液为20～60％乙酸乙酯/石油醚梯度@60mL/min)纯化，得到标题化合物(2.0g，4.77mmol，80.00％收率)，为灰色固体。MS(M+H)+＝574.0
步骤3：(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基) 氧基)乙酰胺基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(4)的合成
向4-甲基苯磺酸2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺基)乙氧基)乙酯(350mg，610.21μmol)和哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(183.32mg，915.32μmol)在二噁烷(5mL)中的溶液中添加NaI(9.15mg，61.02μmol)和DIPEA(78.87mg，610.21μmol，106.29μL)，并且将所得混合物在60℃搅拌24小时。LCMS显示反应完成。将反应混合物用H2O(20mL)稀释并且用EtOAc(20mL x 3)萃取，将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且在减压下浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(12g
Figure BPA0000310075650001892
硅胶快速柱，洗脱液为30～100％乙酸乙酯/石油醚梯度@60mL/min)纯化，得到标题化合物(166mg，275.91μmol，45.22％收率)，为白色固体。
MS(M+H)+＝602.2
步骤4：N-(2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)乙基)-2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3- 基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺(5)的合成
向(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(166mg，275.91μmol)在二噁烷(2mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，3mL)，并且将所得混合物在25℃搅拌2小时。TLC(EA/MeOH＝10∶1)显示反应完成。将混合物浓缩，得到标题化合物(150mg，粗制，HCl)，为白色固体。MS(M+H)+＝502.2
步骤5：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001901
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代 异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合 物56)的合成
向N-(2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)乙基)-2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺(150mg，278.81μmol，HCl)和4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001902
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(129.77mg，278.81μmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加HATU(212.03mg，557.63μmol)和DIPEA(108.10mg，836.44μmol，145.69μL)，并且将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示反应完成。将混合物倒入水(20mL)中并且用EtOAc(20mL x 3)萃取，将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Unisil 3-100C18 μLtra 150*50mm*3um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：28％-48％，10分钟)纯化，并且将洗脱液冻干，得到标题化合物(114mg，118.93umol，42.66％收率，99％纯度，FA)，为黄色固体。MS(M+H)+＝949.2。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.13(s，1H)，9.19(br s，1H)，8.31(s，1H)，8.27(d，J＝13.2Hz，1H)，8.14(s，1H)，8.06(s，1H)，8.01(t，J＝5.5Hz，1H)，7.83(dd，J＝7.5，8.4Hz，1H)，7.52(d，J＝7.2Hz，1H)，7.43(d，J＝8.6Hz，1H)，7.18(s，1H)，5.18-5.06(m，1H)，4.89-4.77(m，3H)，4.09(t，J＝13.9Hz，2H)，3.92(s，4H)，3.75(s，2H)，3.55(t，J＝5.4Hz，2H)，3.43-3.37(m，3H)，3.34(s，3H)，3.29-3.05(m，3H)，2.96-2.84(m，1H)，2.65-2.52(m，5H)，2.13-1.93(m，5H)，1.82-1.55(m，7H)。
实施例57. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001903
-2-基)氨基)-N-(1-(1-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)-2-氧代-6，9，12-三氧杂-3-氮杂十四烷-14-基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001911
步骤1：2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)-N-(2- (2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)乙酰胺(2)的合成
向2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酸(1.89g，5.69mmol)和2-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙醇(1g，5.17mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加EDCI(1.49g，7.76mmol)、HOBt(1.05g，7.76mmol)和TEA(3.14g，31.05mmol，4.32mL)，并且将所得混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示反应完成。将混合物通过反相柱(0.1％FA条件，MeCN/水)纯化，得到标题化合物(1.63g，3.18mmol，61.45％收率，99％纯度)，为白色固体。MS(M+H)+＝508.1
步骤2：4-甲基苯磺酸1-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4- 基)氧基)-2-氧代-6，9，12-三氧杂-3-氮杂十四烷-14-基酯(3)的合成
向2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)-N-(2-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)乙酰胺(1.63g，3.21mmol)在DCM(20mL)中的溶液中添加TosCl(1.22g，6.42mmol)和TEA(975.02mg，9.64mmol，1.34mL)，并且将混合物在25℃搅拌40小时。LCMS显示仍然存在一些起始材料。向反应中添加TosCl(1.22g，6.42mmol)和TEA(975.02mg，9.64mmol，1.34mL)，并且将所得混合物在25℃搅拌另外40小时。LCMS显示反应完成。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，乙酸乙酯/MeOH＝1/0至10/1)纯化，得到标题化合物(1.56g，2.05mmol，63.86％收率，87％纯度)，为白色固体。MS(M+H)+＝662.1
步骤3：(1-(1-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)- 2-氧代-6，9，12-三氧杂-3-氮杂十四烷-14-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(4)的合成
向4-甲基苯磺酸1-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)-2-氧代-6，9，12-三氧杂-3-氮杂十四烷-14-基酯(1.56g，2.36mmol)和哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(708.28mg，3.54mmol)在二噁烷(15mL)中的溶液中添加NaI(35.34mg，235.77μmol)和DIPEA(304.71mg，2.36mmol，410.66μL)，并且将混合物在80℃搅拌16小时。LCMS显示反应完成。将反应混合物倒入H2O(50mL)中并且用EtOAc(100mL x 3)萃取，将合并的有机层用盐水(100mL x 3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，乙酸乙酯/MeOH＝1/0至10/1)纯化，得到标题化合物(1.15g，1.57mmol，66.47％收率，94％纯度)，为红色固体。MS(M+H)+＝690.3
步骤4：N-(2-(2-(2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-2- ((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺(5)的合成
向(1-(1-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)-2-氧代-6，9，12-三氧杂-3-氮杂十四烷-14-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.15g，1.67mmol)在二噁烷(10mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，20.03mL)，并且将混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示反应完成。将混合物在真空中浓缩，得到标题化合物(1.1g，粗制，HCl)，为白色固体。MS(M+H)+＝590.2
步骤5：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001931
-2-基)氨基)-N-(1-(1-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚 啉-4-基)氧基)-2-氧代-6，9，12-三氧杂-3-氮杂十四烷-14-基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧 基苯甲酰胺(化合物57)的合成
向N-(2-(2-(2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺(250mg，399.30μmol，HCl)和4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001932
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(185.84mg，399.30μmol)在DMF(4mL)中的溶液中添加HATU(303.65mg，798.60μmol)和DIPEA(154.82mg，1.20mmol，208.65μL)，并且将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示反应完成。将混合物倒入水(20mL)中并且用EtOAc(20mL x3)萃取，将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Unisil 3-100 C18 μL tra 150*50mm*3um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：28％-48％，10分钟)纯化，并且将洗脱液冻干，得到标题化合物(170.3mg，162.57μmol，40.71％收率，99％纯度，FA)，为黄色固体。MS(M+H)+＝1037.2。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.13(s，1H)，9.53-9.03(m，1H)，8.31(s，1H)，8.26(d，J＝13.3Hz，1H)，8.14(s，1H)，8.05(s，1H)，7.99(t，J＝5.0Hz，1H)，7.81(t，J＝8.0Hz，1H)，7.51(d，J＝7.1Hz，1H)，7.40(d，J＝8.4Hz，1H)，7.19(br d，J＝6.1Hz，1H)，5.17-5.06(m，1H)，4.88-4.76(m，3H)，4.09(t，J＝13.8Hz，2H)，4.02-3.90(m，4H)，3.73(s，2H)，3.61-3.52(m，9H)，3.50-3.46(m，3H)，3.34(s，3H)，3.21-3.00(m，4H)，2.97-2.85(m，1H)，2.71-2.53(m，5H)，2.13-1.90(m，5H)，1.78-1.57(m，7H)。
实施例58. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001941
-2-基)氨基)-N-(1-(1-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)-2-氧代-6，9，12，15，18，21，24-七氧杂-3-氮杂二十六烷-26-基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001951
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(43.2mg，31.25μmol，9.70％收率，96％纯度，TFA)，为白色固体。MS(M+H)+＝1213.7
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.11(s，1H)，9.52-9.29(m，1H)，8.30(s，1H)，8.28-8.24(m，1H)，8.23-8.19(m，1H)，8.15(s，1H)，8.00(t，J＝5.6Hz，1H)，7.81(dd，J＝7.3，8.4Hz，1H)，7.50(d，J＝7.2Hz，1H)，7.40(d，J＝8.4Hz，1H)，7.25-7.16(m，1H)，5.11(dd，J＝5.4，12.8Hz，1H)，4.86-4.78(m，3H)，4.13-4.05(m，4H)，3.91(s，3H)，3.77-3.74(m，2H)，3.61-3.58(m，2H)，3.57(br d，J＝1.7Hz，2H)，3.53-3.47(m，22H)，3.47-3.43(m，2H)，3.33(s，3H)，3.31(br d，J＝5.7Hz，2H)，3.29-3.25(m，2H)，3.21-3.03(m，2H)，2.94-2.85(m，1H)，2.64-2.54(m，2H)，2.07-2.03(m，2H)，1.99-1.95(m，2H)，1.86-1.69(m，4H)，1.68-1.57(m，4H)
实施例59. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001961
-2-基)氨基)-N-(1-(5-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺基)戊基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650001971
步骤1：(5-羟基戊基)氨基甲酸苄酯(2)的合成
在0℃向5-氨基戊-1-醇(10g，96.93mmol)和NaHCO3(24.43g，290.80mmol，11.31mL)在THF(100mL)和H2O(20mL)中的溶液中添加CbzCl(21.50g，126.02mmol，17.91mL)，并且将反应混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示具有期望质量的一个峰(60％)。将反应混合物用H2O(100mL)稀释并且用EtOAc(100mL x 2)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤。将滤液在真空中浓缩，得到标题化合物(22g，粗制)，为无色油状物。
步骤2：4-甲基苯磺酸5-(((苄氧基)羰基)氨基)戊酯(3)的合成
向(5-羟基戊基)氨基甲酸苄酯(10g，42.14mmol)在DCM(120mL)中的溶液中添加TEA(8.53g，84.28mmol，11.73mL)和TosCl(10.44g，54.78mmol)。将混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示具有期望质量的一个峰(72％)。将反应混合物用H2O(60mL)稀释，并且将DCM层分离。将有机层用Na2SO4干燥，过滤。将滤液在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，PE/EtOAc＝10/1～3/1)纯化，得到标题化合物(7.8g，17.53mmol，41.61％收率，88％纯度)，为无色油状物。MS(M+H)+＝392.1
步骤3：N-[1-[5-(苄氧基羰基氨基)戊基]-4-哌啶基]氨基甲酸叔丁酯(5)的合成
向4-甲基苯磺酸5-(((苄氧基)羰基)氨基)戊酯(5g，12.77mmol)在二噁烷(60mL)中的溶液中添加哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(3.33g，16.60mmol)、DIPEA(4.95g，38.32mmol，6.67mL)和NaI(191.45mg，1.28mmol)。将反应混合物加热至60℃达16小时。LCMS显示仍然存在起始材料。添加另外的3g反应物，并且将反应混合物在60℃搅拌另外16小时。将反应混合物用H2O(100mL)稀释并且用EtOAc(100mL x 2)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且在真空中浓缩。将残余物通过反相HPLC(FA)纯化，得到标题化合物(5g，11.92mmol，93.31％收率)，为白色固体。MS(M+H)+＝420.2
步骤4：(1-(5-氨基戊基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(6)的合成
在N2气氛下向N-[1-[5-(苄氧基羰基氨基)戊基]-4-哌啶基]氨基甲酸叔丁酯(5g，11.92mmol)在EtOH(60mL)中的溶液中添加Pd/C(500mg，10％纯度)。在H2(15psi)下将反应混合物在20℃搅拌16小时。TLC(DCM/MeOH＝10/1)显示起始材料消耗。将反应混合物过滤，并且将滤液在真空中浓缩，得到标题化合物(3.4g，粗制)，为无色油状物。
步骤5：(1-(5-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧 基)乙酰胺基)戊基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(8)的合成
向2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酸(500mg，1.50mmol)和(1-(5-氨基戊基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(515.42mg，1.81mmol)在DMF(8mL)中的溶液中添加HATU(686.61mg，1.81mmol)和DIPEA(583.46mg，4.51mmol，786.34uL)。将反应混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示具有期望质量的一个主峰。将反应混合物用H2O(50mL)稀释并且用EtOAc(50mL x 2)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且在真空中浓缩，得到标题化合物(1g，粗制)，为褐色油状物。MS(M+H)+＝600.2
步骤6：N-(5-(4-氨基哌啶-1-基)戊基)-2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二 氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺(9)的合成
将(1-(5-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺基)戊基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1g，1.67mmol)溶解在HCl/二噁烷(4M，416.89uL)中，并且将反应混合物在15℃搅拌1小时。LCMS显示具有期望质量的一个主峰。将反应混合物在真空中浓缩，得到标题化合物(1g，粗制，HCl盐)，为褐色油状物。MS(M+H)+＝500.4
步骤7：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001991
-2-基)氨基)-N-(1-(5-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异 吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺基)戊基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物59)的合 成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650001992
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(250mg，537.14μmol)在DMF(4mL)中的溶液中添加HATU(204.24mg，537.14μmol)和DIPEA(138.84mg，1.07mmol，187.12μL)。将混合物在20℃搅拌10分钟，并且添加N-(5-(4-氨基哌啶-1-基)戊基)-2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺(575.84mg，1.07mmol，HCl盐)在DMF(4mL)中的溶液与DIPEA(138.84mg，1.07mmol，187.12μL)，并且将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物用H2O(15mL)稀释并且用EtOAc(15mL x 3)萃取。将有机层用盐水(15mL x 3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150*40mm*15um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：18％-48％，10分钟)纯化，并且将洗脱液冻干，得到4标题化合物(82.2mg，78.12μmol，14.54％收率，90％纯度，FA盐)，为白色固体。MS(M+H)+＝946.7
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ＝8.41(d，J＝14.0Hz，1H)，8.21(s，1H)，7.83(dd，J＝7.4，8.4Hz，1H)，7.56(d，J＝7.0Hz，1H)，7.46(d，J＝8.5Hz，1H)，7.33(d，J＝6.6Hz，1H)，5.14(dd，J＝5.6，12.4Hz，1H)，4.93(br d，J＝8.4Hz，1H)，4.78(s，2H)，4.18-4.00(m，3H)，3.99(s，3H)，3.52-3.43(m，2H)，3.40(s，3H)，3.39-3.35(m，2H)，3.03-2.67(m，7H)，2.23-2.06(m，5H)，1.91-1.63(m，12H)，1.49-1.39(m，2H)。
实施例60. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002001
-2-基)氨基)-N-(1-(3-((7-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺基)庚基)氨基)-3-氧代丙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002011
步骤1：3-溴丙酸苄酯(2)的合成
在20℃向3-溴丙酸(5g，32.69mmol，3.38mL)和苯甲醇(4.59g，42.49mmol，4.42mL)在己烷(100mL)中的混合物中一次性地添加TsOH(281.42mg，1.63mmol)，并且将所得混合物在90℃搅拌16小时。TLC(SiO2，石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1)指示起始材料完全消耗，并且检测到两个新斑点。将反应混合物在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝100/1至10/1)纯化，得到标题化合物(7.8g，32.09mmol，98.17％收率)，为白色油状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝7.44-7.35(m，5H)，5.21(s，2H)，3.62(t，J＝6.8Hz，2H)，2.99(t，J＝6.8Hz，2H)
步骤2：3-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)丙酸苄酯(3)的合成
在20℃向3-溴丙酸苄酯(7.8g，32.09mmol)和N-(4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯(7.71g，38.50mmol)在二噁烷(80mL)中的混合物中一次性地添加DIPEA(12.44g，96.26mmol，16.77mL)、NaI(961.90mg，6.42mmol)，并且将所得混合物在80℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且检测到期望质量。将反应混合物在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝10/1至1/2)纯化，得到标题化合物(9.3g，25.66mmol，79.97％收率)，为橙色固体。MS(M+H)+＝363.4
步骤3：3-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)丙酸(INT1)的合成
在N2下向3-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)丙酸苄酯(9.3g，25.66mmol)在MeOH(100mL)中的溶液中添加Pd/C(1g，10％纯度)。将悬浮液在真空下脱气并且用H2吹扫数次。将混合物在H2(15psi)下在20℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且检测到期望质量。将反应混合物过滤，并且将滤液在真空中浓缩，得到标题化合物(6.7g，24.60mmol，95.88％收率)，为白色固体。MS(M+H)+＝273.2
步骤4：(7-氨基庚基)氨基甲酸苄酯(INT2)的合成
在5℃向庚烷-1，7-二胺(9g，69.11mmol)在DCM(396mL)中的混合物中添加MeOH(396mL)，然后在5℃逐滴添加CbzCl(10.61g，62.20mmol，8.84mL)在MeOH(396mL)中的溶液，并且将所得混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物在真空中浓缩。将粗产物通过反相HPLC(方法：0.1％FA，MeCN/水)纯化，得到标题化合物(4.1g，15.04mmol，21.77％收率，97％纯度)，为白色固体。MS(M+H)+＝265.4
步骤5：(7-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙 酰胺基)庚基)氨基甲酸苄酯(6)的合成
将2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酸(1g，3.01mmol)、(7-氨基庚基)氨基甲酸苄酯(1.03g，3.91mmol)、EDCI(865.43mg，4.51mmol)、HOBt(610.01mg，4.51mmol)和TEA(913.63mg，9.03mmol，1.26mL)在DMF(10mL)中的混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物用H2O(20mL)稀释并且用EtOAc(20mL x 3)萃取。将有机层用盐水(20mL x 3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝3/1至0/1)纯化，得到标题化合物(1.7g，2.67mmol，88.84％收率，91％纯度)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝579.2
步骤6：N-(7-氨基庚基)-2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉- 4-基)氧基)乙酰胺(7)的合成
在20℃向(7-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺基)庚基)氨基甲酸苄酯(1.7g，2.94mmol)在ACN(10mL)中的溶液中添加TMSI(1.76g，8.81mmol，1.20mL)，并且将所得混合物在20℃搅拌2小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。在20℃向该反应混合物中添加TEA(891.90mg，8.81mmol，1.23mL)，并且将所得混合物在20℃搅拌2小时。将反应混合物在真空中浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150*40mm*15um；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：6％-36％，10分钟)纯化，然后冻干，得到标题化合物(920mg，2.07mmol，70.45％收率)，为黄色固体。MS(M+H)+＝445.2
步骤7：(1-(3-((7-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基) 氧基)乙酰胺基)庚基)氨基)-3-氧代丙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(8)的合成
在20℃向3-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)丙酸(500mg，1.84mmol)和N-(7-氨基庚基)-2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺(816.04mg，1.84mmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加EDCI(527.93mg，2.75mmol)、HOBt(372.12mg，2.75mmol)和TEA(557.33mg，5.51mmol，766.62μL)，并且将所得混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物用H2O(15m)稀释并且用EtOAc(15mL X 3)萃取。将有机层用盐水(15mL x 3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝1/1至0/1到二氯甲烷/甲醇＝1/0至10/1)纯化，得到标题化合物(1.1g，1.43mmol，78.02％收率，91％纯度)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝699.2
步骤8：3-(4-氨基哌啶-1-基)-N-(7-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧 代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺基)庚基)丙酰胺(9)的合成
在20℃向(1-(3-((7-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺基)庚基)氨基)-3-氧代丙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.1g，1.57mmol)在二噁烷(10mL)中的混合物中一次性地添加HCl/二噁烷(4M，10mL)，并且将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物在真空中浓缩，得到标题化合物(1g，粗制，HCl)，为黄色固体。MS(M+H)+＝599.2
步骤9：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002041
-2-基)氨基)-N-(1-(3-((7-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧 代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺基)庚基)氨基)-3-氧代丙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基 苯甲酰胺(化合物60)的合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002042
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(200mg，429.71μmol)在DMF(4mL)中的溶液中添加HATU(179.73mg，472.69μmol)和DIPEA(111.08mg，859.43μmol，149.70μL)。将混合物在20℃搅拌10分钟，并且添加3-(4-氨基哌啶-1-基)-N-(7-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺基)庚基)丙酰胺(327.52mg，粗制，HCl)在DMF(4mL)中的溶液和DIPEA(111.08mg，859.43μmol，149.70μL)，并且将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物用H2O(12mL)稀释并且用EtOAc(12mL x 3)萃取。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：3_Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：34％-54％，7分钟)纯化，然后冻干，得到标题化合物(48.5mg，40.97μmol，9.53％收率，98％纯度，TFA)，为白色固体。MS(M+H)+＝1046.7
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ＝8.34(d，J＝13.8Hz，1H)，8.21(s，1H)，7.85-7.77(m，1H)，7.54(d，J＝7.4Hz，1H)，7.43(d，J＝8.4Hz，1H)，7.35(d，J＝6.7Hz，1H)，5.14(dd，J＝5.6，12.6Hz，1H)，5.02-4.94(m，1H)，4.75(s，2H)，4.25-4.14(m，1H)，4.08(t，J＝13.2Hz，2H)，3.99(s，3H)，3.79-3.62(m，2H)，3.56-3.47(m，1H)，3.46-3.41(m，2H)，3.40(s，3H)，3.24-3.12(m，4H)，2.96-2.84(m，1H)，2.80(s，1H)，2.76-2.70(m，3H)，2.38-2.21(m，2H)，2.19-2.04(m，4H)，1.99-1.86(m，2H)，1.85-1.78(m，2H)，1.76-1.65(m，4H)，1.62-1.48(m，4H)，1.44-1.28(m，6H)
实施例61. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002051
-2-基)氨基)-N-(1-(3-((2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺基)甲基)苄基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002061
步骤1：3-(羟基甲基)苄基氨基甲酸苄酯(2)的合成
在20℃向(3-(氨基甲基)苯基)甲醇(1g，7.29mmol)在THF(10mL)和H2O(5mL)中的混合物中添加Na2CO3(1.55g，14.58mmol)。然后在20℃逐滴添加CbzCl(1.37g，8.02mmol，1.14mL)，并且将所得混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示(3-(氨基甲基)苯基)甲醇完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物用H2O(20mL)稀释并且用EtOAc(20mLx 3)萃取。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝10/1至2/1)纯化，得到标题化合物(1.7g，5.89mmol，80.80％收率，94％纯度)，为白色固体。MS(M+Na)+＝294.3
步骤2：3-(氯甲基)苄基氨基甲酸苄酯(3)的合成
在20℃向3-(羟基甲基)苄基氨基甲酸苄酯(1.7g，6.27mmol)在DCM(15mL)中的混合物中一次性地添加SOCl2(1.12g，9.40mmol，681.81μL)，并且将所得混合物在20℃搅拌2小时。TLC(SiO2，石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1)指示起始材料完全消耗，并且检测到一个新斑点。将反应混合物在真空中浓缩，得到标题化合物(1.6g，5.52mmol，88.13％收率)，为白色固体。
步骤3：N-[1-[[3-(苄氧基羰基氨基甲基)苯基]甲基]-4-哌啶基]氨基甲酸叔丁酯 (4)的合成
在20℃向3-(氯甲基)苄基氨基甲酸苄酯(1.6g，5.52mmol)和哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(1.44g，7.18mmol)在ACN(20mL)中的混合物中一次性地添加K2CO3(2.29g，16.57mmol)，并且将所得混合物在20℃搅拌4小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1至1/4)纯化，得到标题化合物(2.4g，5.29mmol，95.82％收率)，为白色固体。MS(M+H)+＝454.3
步骤4：3-((4-氨基哌啶-1-基)甲基)苄基氨基甲酸苄酯(5)的合成
在20℃向N-[1-[[3-(苄氧基羰基氨基甲基)苯基]甲基]-4-哌啶基]氨基甲酸叔丁酯(2.4g，5.29mmol)在二噁烷(10mL)中的混合物中一次性地添加HCl/二噁烷(4M，20mL)，并且将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物在真空中浓缩，得到标题化合物(2.1g，粗制，HCl)，为白色固体。MS(M+H)+＝354.4
步骤5：3-((4-(4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶 并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002071
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺基)哌啶-1-基)甲基)苄基 氨基甲酸苄酯(6)的合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002081
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(0.7g，1.50mmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加HATU(629.05mg，1.65mmol)和DIPEA(388.76mg，3.01mmol，523.94μL)。将反应混合物在20℃搅拌10分钟，并且添加3-((4-氨基哌啶-1-基)甲基)苄基氨基甲酸苄酯(821.01mg，2.11mmol，HCl)在DMF(5mL)中的溶液和DIPEA(388.76mg，3.01mmol，523.94μL)，并且将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的-个峰。将反应混合物用H2O(20mL)稀释并且用EtOAc(20mL x 3)萃取。将有机层用盐水(20mLx 3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝3/1至1/2)纯化，得到标题化合物(362mg，424.89μmol，28.25％收率，94％纯度)，为白色油状物。MS(M+H)+＝801.4
步骤6：N-(1-(3-(氨基甲基)苄基)哌啶-4-基)-4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基- 6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002083
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯 甲酰胺(7)的合成
在20℃向3-((4-(4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002082
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺基)哌啶-1-基)甲基)苄基氨基甲酸苄酯(360mg，449.51μmol)在ACN(2mL)中的混合物中一次性地添加TMSI(179.89mg，899.03μmol，122.37μL)，并且将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示仍然存在起始材料，并且检测到具有期望质量的一个峰。在20℃向该反应混合物中添加TMSI(89.94mg，449.51μmol，61.19μL)，并且将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且检测到期望质量。在20℃向该反应混合物中添加TEA(136.46mg，1.35mmol，187.70μL)。将反应混合物在20℃搅拌2小时。将反应混合物在真空中浓缩，得到标题化合物(330mg，粗制)，为橙色固体。MS(M+H)+＝667.3
步骤7：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002084
-2-基)氨基)-N-(1-(3-((2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异 吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺基)甲基)苄基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物 61)的合成
向2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酸(150mg，451.45μmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加HATU(188.82mg，496.59μmol)和DIPEA(175.04mg，1.35mmol，235.90μL)。将混合物在20℃搅拌10分钟，并且添加N-(1-(3-(氨基甲基)苄基)哌啶-4-基)-4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002091
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(316.05mg，474.02μmol)在DMF(2mL)中的溶液，并且将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物用H2O(12mL)稀释并且用EtOAc(12mLx 3)萃取。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：3_Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：32％-52％，7分钟)纯化，然后冻干，得到两个批次的产物，具有59％和42％纯度。将它们通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：46％-76％，10分钟)再次纯化，并且将洗脱液合并以冻干，得到具有75％纯度(通过LCMS和HPLC)的产物。将其通过制备型HPLC(柱：3_Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：32％-52％，7分钟)再次纯化，然后冻干，得到4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002092
-2-基)氨基)-N-(1-(3-((2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺基)甲基)苄基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(9.5mg，9.59μmol，2.12％收率，99％纯度，TFA)，为白色固体。MS(M+H)+＝981.2
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ＝8.33(br d，J＝13.7Hz，1H)，8.20(s，1H)，7.85-7.78(m，1H)，7.56(d，J＝7.3Hz，1H)，7.51-7.40(m，5H)，7.33(d，J＝6.6Hz，1H)，5.12(dd，J＝5.4，12.8Hz，1H)，4.98-4.93(m，2H)，4.57(s，2H)，4.44-4.32(s，2H)，4.28-4.13(m，1H0，4.07(t，J＝13.1Hz，2H)，3.98(s，3H)，3.55(d，J＝12.5Hz，2H)，3.40(s，3H)，3.16(t，J＝12.4Hz，2H)，2.93-2.82(m，1H)，2.78-2.62(m，2H)，2.24(d，J＝13.3Hz，2H)，2.17-2.03(m，4H)，1.91-1.79(m，4H)，1.77-1.64(m，4H)
实施例62. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002102
-2-基)氨基)-N-(1-((5-((2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺基)甲基)吡啶-3-基)甲基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002101
Figure BPA0000310075650002111
步骤1：2-((5-溴吡啶-3-基)甲基)异吲哚啉-1，3-二酮(2)的合成
在N2下在0℃向(5-溴-3-吡啶基)甲醇(7g，37.23mmol)和邻苯二甲酰亚胺(5.48g，37.23mmol)、PPh3(14.65g，55.84mmol)在THF(50mL)中的混合物中逐滴添加DEAD(9.73g，55.84mmol，10.15mL)，并且将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物用盐水(150mL)稀释并且用EtOAc(150mL x 3)萃取。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝10/1至4/1)纯化，得到标题化合物(8.2g，25.86mmol，69.46％收率)，为白色固体。MS(M+H)+＝317.0
步骤2：(5-溴吡啶-3-基)甲胺(3)的合成
在20℃向2-((5-溴吡啶-3-基)甲基)异吲哚啉-1，3-二酮(8.2g，25.86mmol)在EtOH(80mL)中的混合物中一次性地添加N2H4·H2O(15.23g，258.56mmol，14.78mL，85％纯度)，并且将所得混合物在80℃搅拌4小时。TLC(SiO2，石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1)指示起始材料完全消耗，并且检测到一个新斑点。将反应混合物用EtOH(160mL)稀释并且过滤。将滤液在真空中浓缩。将残余物用DCM(160mL)稀释并且过滤。将滤液在真空中浓缩，得到标题化合物(7.2g，粗制)，为黄色油状物。
步骤3：((5-溴吡啶-3-基)甲基)氨基甲酸苄酯(4)的合成
在20℃向(5-溴吡啶-3-基)甲胺(7.2g，38.50mmol)在THF(70mL)和H2O(35mL)中的混合物中添加K2CO3(10.64g，76.99mmol)。然后在20℃逐滴添加CbzCl(7.22g，42.34mmol，6.02mL)，并且将所得混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物用H2O(30mL)稀释并且用EtOAc(70mL x 3)萃取。将有机物用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝10/1至3/1)纯化，得到标题化合物(4.4g，12.33mmol，32.03％收率，90％纯度)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝321.0
步骤4：5-((((苄氧基)羰基)氨基)甲基)烟酸甲酯(5)的合成
向((5-溴吡啶-3-基)甲基)氨基甲酸苄酯(4.4g，13.70mmol)在MeOH(50mL)中的溶液中添加Pd(dppf)Cl2(501.22mg，685.00μmol)、TEA(4.16g，41.10mmol，5.72mL，3当量)。将悬浮液在真空下脱气并且用CO吹扫数次。将混合物在CO(50psi)下在80℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物用MeOH(200mL)稀释并且过滤。将滤液在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1至1/1)纯化，得到标题化合物(3.42g，9.79mmol，71.49％收率，86％纯度)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝301.1
步骤5：((5-(羟基甲基)吡啶-3-基)甲基)氨基甲酸苄酯(6)的合成
在0℃向LiAlH4(554.32mg，14.60mmol)在THF(30mL)中的悬浮液中逐滴添加5-((((苄氧基)羰基)氨基)甲基)烟酸甲酯(3.4g，9.74mmol，86％纯度)在THF(15mL)中的溶液，并且将所得混合物在20℃搅拌2小时。TLC(SiO2，石油醚∶乙酸乙酯＝1∶2)指示起始材料完全消耗，并且检测到一个新斑点。将反应混合物用H2O(1mL)、NaOH(15％当量，1mL)和H2O(3mL)猝灭。将反应混合物过滤。将滤液在真空中浓缩，得到标题化合物(3g，粗制)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝273.3
步骤6：((5-(氯甲基)吡啶-3-基)甲基)氨基甲酸苄酯(7)的合成
在20℃向((5-(羟基甲基)吡啶-3-基)甲基)氨基甲酸苄酯(2.8g，10.28mmol)在DCM(20mL)中的混合物中一次性地添加SOCl2(1.47g，12.34mmol，895.13μL)，并且将所得混合物在20℃搅拌2小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物在真空中浓缩，得到标题化合物(3g，粗制)，为黄色固体。MS(M+H)+＝291.3
步骤7：N-[1-[[5-(苄氧基羰基氨基甲基)-3-吡啶基]甲基]-4-哌啶基]氨基甲酸 叔丁酯(8)的合成
在20℃向((5-(氯甲基)吡啶-3-基)甲基)氨基甲酸苄酯(2.7g，9.29mmol)和N-(4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯(2.23g，11.14mmol)在ACN(30mL)中的混合物中一次性地添加K2CO3(3.85g，27.86mmol)，并且将所得混合物在60℃搅拌4小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物过滤，并且将滤液在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝1/1至0/1)纯化，得到标题化合物(3.7g，7.49mmol，80.64％收率，92％纯度)，为灰白色固体。MS(M+H)+＝455.4
步骤8：((5-((4-氨基哌啶-1-基)甲基)吡啶-3-基)甲基)氨基甲酸苄酯(9)的合成
在20℃向N-[1-[[5-(苄氧基羰基氨基甲基)-3-吡啶基]甲基]-4-哌啶基]氨基甲酸叔丁酯(1g，2.20mmol)在二噁烷(5mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，10mL)，并且将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物在真空中浓缩，得到标题化合物(910mg，粗制，HCl)，为橙色固体。MS(M+H)+＝355.3
步骤9：((5-((4-(4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧 啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002131
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺基)哌啶-1-基)甲基)吡 啶-3-基)甲基)氨基甲酸苄酯(11)的合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002132
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(525.24mg，1.13mmol)在DMF(4mL)中的溶液中添加HATU(472.01mg，1.24mmol)和DIPEA(291.71mg，2.26mmol，393.14μL)。将混合物在20℃搅拌10分钟，并且添加((5-((4-氨基哌啶-1-基)甲基)吡啶-3-基)甲基)氨基甲酸苄酯(400.00mg，粗制，HCl)在DMF(4mL)中的溶液和DIPEA(291.71mg，2.26mmol，393.14μL)，并且将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物用H2O(12mL)稀释并且用EtOAc(12mL x 3)萃取。将有机层用盐水(12mL x 3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝1/1至0/1到二氯甲烷/甲醇＝1/0至10/1)纯化，得到标题化合物(426mg，531.27μmol，47.08％收率)，为灰白色固体。MS(M+H)+＝802.1
步骤10：N-(1-((5-(氨基甲基)吡啶-3-基)甲基)哌啶-4-基)-4-((9-环戊基-7，7- 二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002144
-2-基)氨基)-2- 氟-5-甲氧基苯甲酰胺(12)的合成
在20℃向((5-((4-(4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002141
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺基)哌啶-1-基)甲基)吡啶-3-基)甲基)氨基甲酸苄酯(426mg，531.27μmol)在ACN(10mL)中的混合物中一次性地添加TMSI(159.45mg，796.90μmol，108.47μL)，并且将所得混合物在20℃搅拌2小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。在20℃向该反应混合物中添加TEA(161.28mg，1.59mmol，221.84μL)，并且将所得混合物在20℃搅拌1小时。将反应混合物在真空中浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150*40mm*15um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：7％-37％，10分钟)纯化，然后冻干，得到标题化合物(212mg，307.97μmol，57.97％收率，97％纯度)，为白色固体。MS(M+H)+＝668.2
步骤11：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4， 5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002142
-2-基)氨基)-N-(1-((5-((2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧 代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺基)甲基)吡啶-3-基)甲基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯 甲酰胺(化合物62)的合成
在20℃向2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酸(100mg，300.97μmol)和N-(1-((5-(氨基甲基)吡啶-3-基)甲基)哌啶-4-基)-4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002143
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(211.01mg，316.01μmol)在DMF(4mL)中的混合物中一次性地添加T3P(1.15g，1.81mmol，1.07mL，50％纯度，于EtOAc溶液中)和Py(238.06mg，3.01mmol，242.92μL)，并且将所得混合物在80℃搅拌16小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物用H2O(12mL)稀释并且用EtOAc(12mL x 3)萃取。将有机层用盐水(12mL x 3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150*40mm*15um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：18％-48％，10分钟)纯化，然后冻干，得到具有89％纯度(通过LCMS和HPLC)的产物A(24mg)，以及产物B(72mg)。将产物A通过制备型HPLC(柱：3_Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：28％-48％，7分钟)再次纯化。将产物B通过制备型HPLC(柱：3_Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：30％-50％，7分钟)再次纯化。将两个批次的洗脱液合并并且冻干，得到标题化合物(64.4mg，64.27μmol，21.35％收率，98％纯度，TFA盐)，为白色固体。MS(M+H)+＝981.7
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ＝8.71(d，J＝1.7Hz，1H)，8.64(d，J＝1.8Hz，1H)，8.27(d，J＝13.4Hz，1H)，8.21(s，1H)，8.03(s，1H)，7.86-7.78(m，1H)，7.56(d，J＝7.2Hz，1H)，7.46(d，J＝8.6Hz，1H)，7.34(d，J＝6.6Hz，1H)，5.13(dd，J＝5.4，12.8Hz，1H)，5.05-4.90(m，2H)，4.81-4.74(m，1H)，4.63(s，2H)，4.44(s，2H)，4.25-4.04(m，3H)，3.98(s，3H)，3.69-3.45(m，2H)，3.40(s，3H)，3.26-3.11(m，2H)，2.93-2.83(m，1H)，2.80-2.67(m，2H)，2.31-2.18(m，2H)，2.17-2.06(m，3H)，1.98-1.66(m，8H)
实施例63. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002151
-2-基)氨基)-N-(1-(7-(3-((2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺基)甲基)苯基)庚基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002161
步骤1：3-溴苄基氨基甲酸苄酯(2)的合成
在25℃向(3-溴苯基)甲胺(5g，26.87mmol)在THF(50mL)中的溶液中逐滴添加K2CO3(7.43g，53.75mmol)在H2O(25mL)中的溶液，随后逐滴添加CbzCl(5.50g，32.25mmol，4.58mL)，并且将所得混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。TLC(SiO2，石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1)指示起始材料完全消耗，并且检测到两个新斑点。将反应混合物用H2O(50mL)稀释并且用EtOAc(50mL x 3)萃取。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝1/O至5/1)纯化，得到标题化合物(6.8g，20.60mmol，76.66％收率，97％纯度)，为白色固体。MS(M+H)+＝320.0
步骤2：3-(7-羟基庚-1-炔-1-基)苄基氨基甲酸苄酯(4)的合成
在N2下在20℃向3-溴苄基氨基甲酸苄酯(6g，18.74mmol)和庚-6-炔-1-醇(3.15g，28.11mmol)在DMF(60mL)中的混合物中一次性地添加CuI(713.78mg，3.75mmol)、TEA(5.69g，56.22mmol，7.82mL)和Pd(PPh3)4(1.08g，936.97μmol)，并且将所得混合物在80℃搅拌16小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。TLC(SiO2，石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)指示起始材料完全消耗，并且检测到三个新斑点。将反应混合物用H2O(120mL)稀释并且用EtOAc(120mL x 3)萃取。将有机层用盐水(120mL x 3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝10/1至1/1)纯化，得到标题化合物(6.8g，16.06mmol，85.70％收率，83％纯度)，为黄色油状物。MS(M+Na)+＝374.4
步骤3：4-甲基苯磺酸7-(3-((((苄氧基)羰基)氨基)甲基)苯基)庚-6-炔-1-基酯 (5)的合成
在20℃向3-(7-羟基庚-1-炔-1-基)苄基氨基甲酸苄酯(6.8g，16.06mmol，83％纯度)在DCM(70mL)中的混合物中一次性地添加TEA(4.88g，48.18mmol，6.71mL)和TosCl(4.59g，24.09mmol)，并且将所得混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗，并且检测到期望质量。TLC(SiO2，石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1)指示起始材料完全消耗，并且检测到一个主要的新斑点。将反应混合物在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝10/1至2/1)纯化，得到标题化合物(6.2g，12.02mmol，74.83％收率，98％纯度)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝506.4
步骤4：N-[1-[7-[3-(苄氧基羰基氨基甲基)苯基]庚-6-炔基]-4-哌啶基]氨基甲 酸叔丁酯(6)的合成
在N2下在20℃向4-甲基苯磺酸7-(3-((((苄氧基)羰基)氨基)甲基)苯基)庚-6-炔-1-基酯(3.1g，6.13mmol)和哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(2.46g，12.26mmol)在二噁烷(40mL)中的混合物中一次性地添加NaI(91.90mg，613.10μmol)和DIPEA(2.38g，18.39mmol，3.20mL)，并且将所得混合物在60℃搅拌16小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。TLC(SiO2，石油醚∶乙酸乙酯＝1∶2)指示起始材料完全消耗，并且检测到三个新斑点。将反应混合物在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝10/1至1/2)纯化，得到标题化合物(2.4g，4.50mmol，73.35％收率)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝534.3
步骤5：(1-(7-(3-(氨基甲基)苯基)庚基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(7)的合成
在N2下向N-[1-[7-[3-(苄氧基羰基氨基甲基)苯基]庚-6-炔基]-4-哌啶基]氨基甲酸叔丁酯(2.4g，4.50mmol)在MeOH(24mL)中的溶液中添加Pd/C(1g，10％纯度)。将悬浮液在真空下脱气并且用H2吹扫数次。将混合物在H2(15psi)下在20℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物用MeOH(80mL)稀释并且过滤。将滤液在真空中浓缩，得到标题化合物(1.3g，粗制)，为白色油状物。MS(M+H)+＝404.5
步骤6：(1-(7-(3-((2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基) 氧基)乙酰胺基)甲基)苯基)庚基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(9)的合成
在20℃向2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酸(800mg，2.41mmol)和(1-(7-(3-(氨基甲基)苯基)庚基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.17g，2.89mmol)在DMF(10mL)中的混合物中一次性地添加HATU(915.49mg，2.41mmol)和DIPEA(933.54mg，7.22mmol，1.26mL)，并且将所得混合物在20℃搅拌2小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。TLC(SiO2，石油醚∶乙酸乙酯＝1∶3)指示起始材料完全消耗，并且检测到四个新斑点。将反应混合物用H2O(30mL)稀释并且用EtOAc(30mL x 3)萃取。将有机层用盐水(30mL x 3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1至0/1)纯化，得到标题化合物(1.17g，1.63mmol，67.69％收率)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝718.2
步骤7：N-(3-(7-(4-氨基哌啶-1-基)庚基)苄基)-2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3- 基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺(10)的合成
在20℃向(1-(7-(3-((2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺基)甲基)苯基)庚基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.17g，1.63mmol)在二噁烷(5mL)中的混合物中一次性地添加HCl/二噁烷(4M，10mL)，并且将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物在真空中浓缩，得到标题化合物(1.5g，粗制，HCl)，为黄色固体。MS(M+H)+＝618.2
步骤8：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002191
-2-基)氨基)-N-(1-(7-(3-((2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧 代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺基)甲基)苯基)庚基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺 (化合物63)的合成
在20℃向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002192
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(250mg，537.14μmol)和N-(3-(7-(4-氨基哌啶-1-基)庚基)苄基)-2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺(421.68mg，粗制，HCl)在DMF(3mL)中的混合物中一次性地添加HATU(224.66mg，590.86μmol)和DIPEA(208.27mg，1.61mmol，280.68μL)，并且将所得混合物在20℃搅拌2小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且检测到期望质量。将反应混合物用甲苯(15mL)稀释，并且将反应混合物在真空中浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenexluna C18 150*40mm*15um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：30％-60％，10分钟)纯化，然后冻干，得到具有59％纯度的产物(192mg)。将产物通过制备型HPLC(柱：Shim-pack C18150*25*10um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：31％-57％，13分钟)再次纯化，然后冻干，得到标题化合物(81.2mg，72.42μmol，69.25％收率，95％纯度)，为白色固体。MS(M+H)+＝1065.4
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.11(s，1H)，8.50(t，J＝6.0Hz，1H)，8.30(s，1H)，8.26(d，J＝13.4Hz，1H)，8.13(s，1H)，8.06(s，1H)，7.81(dd，J＝7.4，8.4Hz，1H)，7.51(d，J＝7.2Hz，1H)，7.41(d，J＝8.6Hz，1H)，7.27-7.14(m，2H)，7.12-7.01(m，3H)，5.11(dd，J＝5.4，12.8Hz，1H)，4.87(s，2H)，4.85-4.76(m，1H)，4.34(d，J＝6.0Hz，2H)，4.14-4.03(m，2H)，4.02-3.95(m，1H)，3.92(s，3H)，3.33(s，3H)，3.00-2.81(m，4H)，2.69-2.51(m，7H)，2.09-1.88(m，5H)，1.84-1.67(m，4H)，1.67-1.48(m，8H)，1.35-1.21(m，6H)
实施例64. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002201
-2-基)氨基)-N-(1-(7-(5-((2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺基)甲基)吡啶-3-基)庚基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002211
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(161.2mg，137.59μmol，32.02％收率，91％纯度)，为白色固体。MS(M+H)+＝1065.6
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.12(br s，1H)，8.58(t，J＝5.9Hz，1H)，8.34-8.28(m，3H)，8.25(d，J＝13.3Hz，1H)，8.20(s，1H)，8.03(s，1H)，7.88(dd，J＝3.5，7.5Hz，1H)，7.80(dd，J＝7.4，8.4Hz，1H)，7.53-7.46(m，2H)，7.40(d，J＝8.4Hz，1H)，7.20(d，J＝6.8Hz，1H)，5.11(dd，J＝5.4，12.9Hz，1H)，4.88(s，2H)，4.86-4.77(m，1H)，4.37(d，J＝6.0Hz，2H)，4.08(t，J＝13.9Hz，2H)，3.92(s，3H)，3.34(s，3H)，2.97-2.79(m，4H)，2.58-2.54(m，3H)，2.28(t，J＝7.3Hz，2H)，2.06-1.94(m，5H)，1.83-1.70(m，4H)，1.66-1.50(m，8H)，1.46-1.37(m，2H)，1.32-1.20(m，6H)
实施例65. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002221
-2-基)氨基)-N-(1-((1-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002231
步骤1：4-((4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-甲酸苄酯(3)的合 成
向4-甲酰基哌啶-1-甲酸苄酯(5g，20.22mmol)在DCE(80mL)中的溶液中添加哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(4.50g，22.47mmol)和HOAc(1.21g，20.22mmol，1.16mL)。将混合物在20℃搅拌2小时。然后在20℃向混合物中添加NaBH(OAc)3(16.00g，75.49mmol)，将混合物在20℃搅拌14小时。LCMS显示起始材料消耗以及具有期望质量的主峰。在0℃向反应混合物中添加H2O(100mL)，并且在0℃通过饱和Na2CO3溶液调节至pH＝9，将水相用乙酸乙酯(200mL x3)萃取，然后将合并的有机层用盐水(250mL x 2)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且将滤液在减压下浓缩，得到残余物。在20℃下将粗产物与石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1(120mL)一起研磨30分钟，然后将其过滤，并且将滤饼在减压下干燥，得到标题化合物(8g，18.54mmol，91.68％收率)，为白色固体。MS(M+H)+＝432.3
步骤2：(1-(哌啶-4-基甲基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(4)的合成
向4-((4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-甲酸苄酯(4g，9.27mmol)在MeOH(100mL)中的溶液中添加Pd/C(0.4g，10％纯度)和Pd(OH)2/C(0.4g，20％纯度)，在H2气氛(15Psi)下将混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料消耗，并且检测到期望质量。将反应混合物过滤，并且将滤液在减压下浓缩，得到标题化合物(2.6g，粗制)，为浅黄色油状物。MS(M+H)+＝298.3
步骤3：(1-((1-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4- 基)甲基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(5)的合成
向2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1，3-二酮(800mg，2.90mmol)在DMSO(3mL)中的溶液中添加TEA(1.16g，11.50mmol，1.60mL)和(1-(哌啶-4-基甲基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.0g，3.36mmol)。在N2气氛下将混合物在100℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料消耗以及具有期望质量的主峰。向反应混合物中添加H2O(20mL)，将混合物用EtOAc(50mL x 2)萃取，将合并的有机层用盐水(40mL x 3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(Biotage；10g
Figure BPA0000310075650002241
硅胶快速柱，洗脱液为0～10％甲醇∶乙酸乙酯梯度，50mL/min)纯化，得到标题化合物(1.5g，2.71mmol，93.55％收率)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝554.5
步骤4：4-(4-((4-氨基哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基) 异吲哚啉-1，3-二酮(6)的合成
在20℃向(1-((1-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.5g，2.71mmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，10mL)。在N2气氛下将混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料消耗以及具有期望质量的主峰。将反应混合物在减压下浓缩，得到标题化合物(1.4g，粗制，2HCl)，为浅黄色固体。MS(M+H)+＝454.5
步骤5：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002251
-2-基)氨基)-N-(1-((1-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚 啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物65)的合成
在25℃向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002252
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(150mg，322.29μmol)在DMF(4mL)中的溶液中添加HATU(245.09mg，644.58μmol)、DIPEA(222.60mg，1.72mmol，300μL)和4-(4-((4-氨基哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(200mg，379.90μmol，2HCl)。在N2气氛下将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示起始材料消耗以及具有期望质量的主峰。向反应混合物中添加H2O(10mL)，将混合物用EtOAc(30mL x2)萃取，将合并的有机层用盐水90mL(30mL x 3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]：B％：48％-81％，9分钟；柱温：30℃)纯化，随后冻干，得到标题化合物(123.3mg，127.28μmol，39.49％收率，93％纯度)，为浅黄色固体。MS(M+H)+＝901.6
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.10(s，1H)，8.35-8.22(m，2H)，8.04(s，1H)，7.95-7.83(m，1H)，7.68(t，J＝7.8Hz，1H)，7.33(t，J＝7.3Hz，2H)，7.20(d，J＝6.6Hz，1H)，5.09(dd，J＝5.3，12.9Hz，1H)，4.88-4.78(m，1H)，4.09(t，J＝13.9Hz，2H)，3.92(s，3H)，3.83-3.67(m，3H)，3.32(s，3H)，2.93-2.75(m，5H)，2.63-2.57(m，2H)，2.25-2.14(m，2H)，2.08-1.95(m，5H)，1.84-1.56(m，13H)，1.37-1.25(m，2H)
实施例66. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002253
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(4-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002261
步骤1：(1-(2-氯乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(2)的合成
将哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(10g，49.93mmol)、1-溴-2-氯乙烷(10.74g，74.90mmol，6.21mL)和K2CO3(20.70g，149.79mmol)在丙酮(100mL)中的混合物在15℃搅拌16小时。LCMS显示反应物完全消耗，并且检测到100％的期望质量。将反应混合物过滤，并且将滤液在真空中浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(25g
Figure BPA0000310075650002262
硅胶快速柱，洗脱液为20～51％乙酸乙酯/石油醚梯度@100mL/min)纯化，得到标题化合物(2g，7.61mmol，15.24％收率)，为白色固体。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝6.75(br d，J＝7.5Hz，1H)，3.64(t，J＝6.8Hz，2H)，3.26-3.12(m，1H)，2.80(br d，J＝11.5Hz，2H)，2.59(br t，J＝6.8Hz，2H)，2.05-1.95(m，2H)，1.65(br d，J＝11.0Hz，2H)，1.41-1.29(m，11H)。
步骤2：(1-(2-(4-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪- 1-基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(4)的合成
向2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1，3-二酮(200mg，527.97μmol，HCl盐)在DMF(3mL)中的溶液中添加DIEA(204.71mg，1.58mmol，275.89μL)和(1-(2-氯乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(194.23mg，739.16μmol)，将混合物在15℃搅拌16小时。LCMS显示仍然存在15％的反应物，并且检测到66％的期望质量。将反应混合物用H2O(50mL)稀释并且用EtOAc(50mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(80mL x 5)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且在真空中浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(12g
Figure BPA0000310075650002271
硅胶快速柱，洗脱液为0～18％MeOH/乙酸乙酯梯度@60mL/min)纯化，得到标题化合物(110mg，193.44μmol，36.64％收率)，为黄色固体。MS(M+H)+＝569.6。
步骤3：4-(4-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3- 基)异吲哚啉-1，3-二酮(5)的合成
向(1-(2-(4-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(110mg，193.44μmol)在二噁烷(5mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，于二噁烷中，10mL)，将混合物在15℃搅拌16小时。LCMS显示反应物完全消耗，并且检测到期望质量。将反应混合物在真空中浓缩，得到标题化合物(160mg，粗制，HCl盐)，为黄色固体。MS(M+H)+＝469.2。
步骤4：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002272
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(4-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲 哚啉-4-基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物66)的合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002273
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(90mg，193.37μmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加HATU(110.29mg，290.06μmol)和DIEA(99.97mg，773.49μmol，134.73μL)，将混合物在15℃搅拌15分钟，然后添加4-(4-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(156.25mg，309.39μmol，HCl盐)，并且将所得混合物在15℃搅拌1小时。LCMS显示反应物完全消耗，并且检测到91％的期望质量。向混合物中添加CH3COOH以调节pH＜7。将所得混合物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：40％-70％，8分钟)纯化，随后通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150*25mm*10um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：18％-38％，10分钟)纯化，得到标题化合物(32.4mg，32.54μmol，16.83％收率，92％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝916.3。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.09(s，1H)，8.30(s，1H)，8.24(d，J＝13.4Hz，1H)，8.03(s，1H)，7.89(br dd，J1＝3.3，J2＝7.5Hz，1H)，7.70(dd，J1＝7.3，J2＝8.3Hz，1H)，7.40-7.28(m，2H)，7.19(d，J＝6.6Hz，1H)，5.09(dd，J1＝5.5，J2＝12.8Hz，1H)，4.90-4.76(m，1H)，4.08(br t，J＝13.9Hz，2H)，3.91(s，3H)，3.80-3.67(m，1H)，3.31-3.23(m，4H)，2.96-2.78(m，3H)，2.65-2.57(m，4H)，2.57-2.51(m，9H)，2.09-1.91(m，5H)，1.85-1.68(m，4H)，1.68-1.48(m，6H)。
实施例67. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002282
-2-基)氨基)-N-(1-((1-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)甲基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002281
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(129.2mg，130.50μmol，40.49％收率，91％纯度)，为浅黄色固体。MS(M+H)+＝901.5
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.07(br s，1H)，8.31-8.22(m，2H)，8.03(s，1H)，7.87(dd，J＝3.4，7.5Hz，1H)，7.64(d，J＝8.5Hz，1H)，7.29(d，J＝1.6Hz，1H)，7.24-7.18(m，2H)，5.06(dd，J＝5.4，12.9Hz，1H)，4.87-4.78(m，1H)，4.12-3.98(m，4H)，3.91(s，3H)，3.78-3.70(m，1H)，3.33(s，3H)，2.99-2.79(m，5H)，2.63-2.54(m，2H)，2.15-2.08(m，2H)，2.03-1.93(m，5H)，1.81-1.55(m，13H)，1.18-1.09(m，2H)
实施例68. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002292
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(4-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002291
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(79.1mg，84.63μmol，39.39％收率，98％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝917.0
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.09(s，1H)，8.30(s，1H)，8.24(d，J＝13.3Hz，1H)，8.04(d，J＝1.3Hz，1H)，7.90(dd，J＝7.8，3.4Hz，1H)，7.68(d，J＝8.5Hz，1H)，7.34(d，J＝2.2Hz，1H)，7.25(dd，J＝8.7，2.3Hz，1H)，7.19(d，J＝6.7Hz，1H)，5.07(dd，J＝12.9，5.3Hz，1H)，4.91-4.74(m，1H)，4.08(t，J＝13.9Hz，2H)，3.91(s，3H)，3.80-3.67(m，1H)，3.50-3.37(m，4H)，3.31(s，3H)，2.97-2.78(m，3H)，2.65-2.51(m，6H)，2.47-2.44(m，4H)，2.08-1.92(m，5H)，1.83-1.68(m，4H)，1.66-1.49(m，6H)。
实施例69. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002301
-2-基)氨基)-N-(1-(4-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-羰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002311
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(78.3mg，83.78μmol，25.99％收率，98％纯度)，为浅黄色固体。MS(M+H)+＝916.6
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.07(br s，1H)，8.34-8.23(m，2H)，8.04(s，1H)，7.96(dd，J＝3.0，7.7Hz，1H)，7.73(dd，J＝7.3，8.2Hz，1H)，7.38(dd，J＝7.8，12.0Hz，2H)，7.21(d，J＝6.7Hz，1H)，5.11(dd，J＝5.4，12.9Hz，1H)，4.87-4.75(m，1H)，4.08(t，J＝13.9Hz，2H)，4.02-3.97(m，1H)，3.92(s，3H)，3.65(d，J＝12.7Hz，2H)，3.40-3.37(m，2H)，3.32-3.30(m，5H)，2.96-2.84(m，3H)，2.64-2.52(m，6H)，2.06-1.90(m，3H)，1.86-1.79(m，2H)，1.75-1.50(m，8H)。
实施例70. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002321
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(4-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002322
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(81.8mg，86.20μmol，33.43％收率，98％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝930.1
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.08(s，1H)，8.31-8.22(m，2H)，8.07-7.93(m，2H)，7.70(dd，J＝7.2，8.2Hz，1H)，7.39-7.31(m，2H)，7.19(d，J＝6.8Hz，1H)，5.14-5.04(m，1H)，4.87-4.76(m，1H)，4.35-4.24(m，1H)，4.12-4.01(m，4H)，3.91(s，3H)，3.33(s，3H)，3.19-3.10(m，2H)，2.95-2.68(m，3H)，2.65-2.53(m，10H)，2.04-1.81(m，5H)，1.72-1.50(m，7H)，1.46-1.32(m，1H)
实施例71. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002331
-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002332
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(62.2mg，64.57μmol，25.05％收率，98％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝943.9
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.08(s，1H)，8.34-8.23(m，2H)，8.06-7.93(m，2H)，7.73-7.67(m，1H)，7.35(t，J＝7.0Hz，2H)，7.20(d，J＝6.6Hz，1H)，5.09(dd，J＝5.4，12.6Hz，1H)，4.88-4.76(m，1H)，4.36-4.26(m，1H)，4.11-4.04(m，2H)，3.91(s，3H)，3.33(s，3H)，3.27-3.06(m，5H)，2.89-2.82(m，1H)，2.78-2.70(m，1H)，2.69-2.65(m，1H)，2.65-2.51(m，10H)，2.07-1.78(m，6H)，1.76-1.68(m，2H)，1.68-1.56(m，4H)，1.53-1.45(m，1H)，1.42-1.32(m，1H)
实施例72. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002341
-2-基)氨基)-N-(1-(4-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-羰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002342
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(39.9mg，42.69μmol，13.25％收率，98％纯度)，为浅黄色固体。MS(M+H)+＝916.6
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.06(br s，1H)，8.32-8.24(m，2H)，8.04(s，1H)，7.98(dd，J＝3.0，7.5Hz，1H)，7.71(d，J＝8.5Hz，1H)，7.36(d，J＝1.8Hz，1H)，7.26(dd，J＝2.0，8.7Hz，1H)，7.21(d，J＝6.8Hz，1H)，5.08(dd，J＝5.3，12.9Hz，1H)，4.83(t，J＝8.0Hz，1H)，4.08(t，J＝13.9Hz，2H)，4.02-3.97(m，1H)，3.92(s，3H)，3.65(d，J＝13.1Hz，2H)，3.53-3.45(m，4H)，3.32-3.29(m，3H)，2.97-2.85(m，3H)，2.65-2.51(m，6H)，2.04-1.91(m，3H)，1.83(d，J＝10.4Hz，2H)，1.76-1.52(m，8H)。
实施例73. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002351
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(4-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002352
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(51.8mg，54.59μmol，25.41％收率，98％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝930.7。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.06(br s，1H)，8.45-8.16(m，2H)，8.13-7.91(m，2H)，7.68(d，J＝8.6Hz，1H)，7.35(d，J＝1.7Hz，1H)，7.25(dd，J1＝1.9，J2＝8.7Hz，1H)，7.19(d，J＝6.7Hz，1H)，5.07(dd，J1＝5.4，J2＝12.8Hz，1H)，4.81(br t，J＝7.9Hz，1H)，4.29(brd，J＝11.7Hz，1H)，4.16-3.97(m，4H)，3.91(s，3H)，3.52-3.35(m，8H)，3.20-3.06(m，2H)，2.94-2.82(m，1H)，2.81-2.71(m，1H)，2.63-2.53(m，6H)，2.10-1.91(m，3H)，1.91-1.75(m，2H)，1.71-1.60(m，2H)，1.67-1.47(m，5H)，1.46-1.30(m，1H)。
实施例74. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002361
-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002371
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(29.8mg，30.94μmol，28.80％收率，98％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝944.8。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.07(s，1H)，8.30(s，1H)，8.24(d，J＝13.3Hz，1H)，8.04(s，1H)，7.97(br dd，J1＝2.7，J2＝7.2Hz，1H)，7.67(d，J＝8.4Hz，1H)，7.34(s，1H)，7.31-7.23(m，1H)，7.20(d，J＝6.7Hz，1H)，5.07(dd，J1＝5.4，J2＝12.8Hz，1H)，4.82(br t，J＝8.1Hz，1H)，4.31(br d，J＝12.6Hz，1H)，4.14-3.99(m，3H)，3.98-3.84(m，4H)，3.48-3.38(m，7H)，3.15(br t，J＝12.5Hz，1H)，2.94-2.81(m，1H)，2.74(br t，J＝11.4Hz，1H)，2.63-2.54(m，10H)，2.09-1.92(m，3H)，1.91-1.78(m，2H)，1.72(br d，J＝1.2Hz，2H)，1.68-1.54(m，4H)，1.53-1.43(m，1H)，1.43-1.29(m，1H)。
实施例75. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002381
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002382
步骤1：(1-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(2) 的合成
向4-甲基苯磺酸2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙酯(4.0g，13.14mmol)和N-(4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯(3.95g，19.71mmol)在二噁烷(20mL)中的溶液中添加NaI(197.00mg，1.31mmol)和DIPEA(1.70g，13.14mmol，2.29mL)，并且将所得混合物在60℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成。将混合物用H2O(100mL)稀释并且用EtOAc(300mL x 3)萃取，将合并的有机层用盐水(100mL x 1)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且在减压下浓缩，得到标题化合物(5.55g，粗制)，为黄色固体。MS(M+H)+＝333.4
步骤2：4-甲基苯磺酸2-(2-(2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)乙氧基)乙 氧基)乙酯(3)的合成
向(1-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(5.55g，16.70mmol)在DCM(30mL)中的溶液中添加TEA(5.07g，50.09mmol，6.97mL)，随后添加TosCl(6.37g，33.39mmol)，并且将混合物在15℃搅拌16小时。LCMS显示反应完成。将混合物在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，EtOAc/MeOH＝10/1)纯化，得到标题化合物(4.27g，8.77mmol，52.56％收率)，为褐色油状物。MS(M+H)+＝487.2
步骤3：(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基) 乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(4)的合成
向4-甲基苯磺酸2-(2-(2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙酯(4.27g，8.77mmol)和3-(4-氨基-1-氧代-异吲哚啉-2-基)哌啶-2，6-二酮(2.73g，10.53mmol)在DMF(30mL)中的溶液中添加DIEA(1.13g，8.77mmol，1.53mL)，并且将混合物在110℃搅拌16小时。LCMS显示反应完成。将反应混合物用H2O(30mL)稀释并且用EtOAc(500mLx 3)萃取，将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且在减压下浓缩。将残余物通过反相HPLC(0.1％FA条件，MeCN/水)纯化，得到标题化合物(200mg，0.322mmol，3.68％收率，FA)，为褐色固体。MS(M+H)+＝574.3
步骤4：3-(4-((2-(2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-1-氧代 异吲哚啉-2-基)哌啶-2，6-二酮(5)的合成
向(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(200mg，348.63μmol)在二噁烷(2mL)中的混合物中添加HCl/二噁烷(4M，2mL)，并且将所得混合物在25℃搅拌0.5小时。LCMS显示反应完成。将混合物浓缩，得到标题化合物(178mg，粗制，HCl盐)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝474.2
步骤5：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002401
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲 哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物75) 的合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002402
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(160mg，343.77μmol)、3-(4-((2-(2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2，6-二酮(175.33mg，343.77μmol，HCl盐)和HATU(261.42mg，687.54μmol)在DMF(4mL)中的混合物中添加DIPEA(133.29mg，1.03mmol，179.64μL)，并且将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成。将混合物倒入水(50mL)中并且用EtOAc(50mL x 3)萃取，将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150*40mm*15um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：18％-48％，10分钟)纯化，并且将洗脱液冻干，得到标题化合物(44.3mg，44.73μmol，13.01％收率，93％纯度)，为黑褐色固体。MS(M+H)+＝921.7。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.02(s，1H)，8.30(s，1H)，8.25(d，J＝13.3Hz，1H)，8.16(s，1H)，8.05(s，1H)，7.94(dd，J＝7.8，3.3Hz，1H)，7.29(t，J＝7.8Hz，1H)，7.19(d，J＝6.7Hz，1H)，6.95(d，J＝7.4Hz，1H)，6.81(d，J＝8.1Hz，1H)，5.61(t，J＝5.7Hz，1H)，5.12(dd，J＝13.3，5.1Hz，1H)，4.91-4.74(m，1H)，4.23(d，J＝17.2Hz，1H)，4.17-4.02(m，3H)，3.91(s，3H)，3.82-3.73(m，1H)，3.62-3.58(m，2H)，3.58-3.51(m，7H)，3.32(s，3H)，3.00-2.85(m，3H)，2.66-2.54(m，3H)，2.38-2.16(m，3H)，2.08-1.90(m，3H)，1.87-1.77(m，2H)，1.76-1.69(m，2H)，1.68-1.53(m，6H)。
实施例76. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002403
-2-基)氨基)-N-(1-(14-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002411
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(41.3mg，34.20μmol，6.20％收率，93％纯度，TFA盐)，为浅褐色固体。MS(M+H)+＝1009.1
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ＝8.30-8.13(m，2H)，7.42-7.23(m，2H)，7.13-7.00(m，1H)，6.86(d，J＝8.0Hz，1H)，5.21-5.10(m，1H)，5.05-4.97(m，1H)，4.38-4.22(m，2H)，4.21-4.05(m，3H)，4.01-3.94(m，3H)，3.85-3.54(m，18H)，3.48-3.35(m，6H)，3.28-3.25(m，1H)，3.12-3.06(m，1H)，2.98-2.85(m，1H)，2.83-2.74(m，1H)，2.5-2.38(m，1H)，2.33-2.14(m，3H)，2.13-2.00(m，3H)，1.98-1.65(m，8H)。
实施例77. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002421
-2-基)氨基)-N-(1-(8-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基)辛基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002422
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(17.7mg，18.14μmol，8.44％收率，94％纯度)。MS(M+H)+＝917.8。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.01(br s，1H)，8.30(s，1H)，8.25(d，J＝13.3Hz，1H)，8.04(s，1H)，7.88(br dd，J＝3.3，7.6Hz，1H)，7.28(t，J＝7.7Hz，1H)，7.19(d，J＝6.6Hz，1H)，6.93(d，J＝7.4Hz，1H)，6.74(d，J＝7.9Hz，1H)，5.56(br t，J＝5.2Hz，1H)，5.12(dd，J＝5.0，13.3Hz，1H)，4.89-4.75(m，1H)，4.27-4.11(m，2H)，4.11-4.02(m，2H)，3.92(s，3H)，3.79-3.67(m，1H)，3.33-3.29(m，3H)，3.15-3.08(m，2H)，2.98-2.88(m，1H)，2.81(brd，J＝11.4Hz，2H)，2.65-2.59(m，1H)，2.35-2.28(m，1H)，2.24(br t，J＝7.4Hz，2H)，2.08-1.89(m，5H)，1.90-1.65(m，4H)，1.68-1.48(m，8H)，1.45-1.22(m，10H)。
实施例78. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002431
-2-基)氨基)-N-(1-(14-((3-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3，4-二氢苯并[d][1，2，3]三嗪-5-基)氨基)-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002441
步骤1：3-(5-((14-羟基-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)氨基)-4-氧代苯并[d][1，2， 3]三嗪-3(4H)-基)哌啶-2，6-二酮(2)的合成
在25℃向3-(5-氟-4-氧代苯并[d][1，2，3]三嗪-3(4H)-基)哌啶-2，6-二酮(1g，3.62mmol)和TEA(1.10g，10.86mmol，1.51mL)在二噁烷(10mL)中的溶液中添加2-[2-[2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙醇(944.97mg，3.98mmol)，并且将所得混合物在110℃搅拌14小时。LCMS显示具有期望质量的主峰。将混合物在减压下浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(硅胶快速柱，洗脱液为0～15％乙酸乙酯/甲醇@30mL/min)纯化，得到标题化合物(1.6g，3.05mmol，84.18％收率，94％纯度)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝494.2
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(25.8mg，24.21μmol，11.27％收率，96％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝1023.3
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.20(br s，1H)，8.32(t，J＝5.4Hz，1H)，8.29(s，1H)，8.23(d，J＝13.6Hz，1H)，8.05(s，1H)，7.96-7.86(m，1H)，7.79(t，J＝8.0Hz，1H)，7.19(dd，J＝7.2，18.8Hz，2H)，7.00(d，J＝8.8Hz，1H)，5.86(dd，J＝4.8，11.6Hz，1H)，4.97-4.69(m，1H)，4.08(br t，J＝14.0Hz，2H)，3.90(s，3H)，3.66(br t，J＝5.2Hz，3H)，3.59-3.53(m，4H)，3.50-3.46(m，7H)，3.46-3.44(m，3H)，3.34-3.31(m，4H)，3.01-2.88(m，1H)，2.83(brd，J＝11.6Hz，2H)，2.71-2.61(m，2H)，2.43(t，J＝5.8Hz，2H)，2.29-2.17(m，1H)，2.05-1.90(m，4H)，1.82-1.42(m，11H)。
实施例79. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002451
-2-基)氨基)-N-(1-(8-((3-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氧代-3，4-二氢苯并[d][1，2，3]三嗪-5-基)氨基)辛基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002461
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(49.1mg，51.68μmol，24.05％收率，98％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝931.8。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.18(s，1H)，8.30(s，1H)，8.27-8.16(m，2H)，8.03(s，1H)，7.86(dd，J1＝7.8Hz，J2＝3.4Hz，1H)，7.79(t，J＝8.2Hz，1H)，7.19(dd，J1＝8.3Hz，J2＝7.4Hz，2H)，6.96(d，J＝8.5Hz，1H)，5.86(dd，J1＝11.9Hz，J2＝5.2Hz，1H)，4.90-4.73(m，1H)，4.07(t，J＝13.9Hz，2H)，3.91(s，3H)，3.78-3.65(m，1H)，3.33(s，3H)，3.25-3.20(m，2H)，2.99-2.88(m，1H)，2.80(d，J＝11.1Hz，2H)，2.70-2.61(m，2H)，2.28-2.18(m，3H)，2.01-1.88(m，4H)，1.82-1.68(m，4H)，1.66-1.44(m，8H)，1.43-1.23(m，10H)。
实施例80.(2S，4R)-1-((S)-2-(2-(2-(2-(4-(4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002471
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺基)哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙酰胺基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002481
步骤1：2-(2-(2-(甲苯磺酰基氧基)乙氧基)乙氧基)乙酸乙酯(2)的合成
向4-甲基苯磺酸2-(2-羟基乙氧基)乙酯(500mg，1.92mmol)和Rh(OAc)2(42mg，190.05μmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加2-重氮基乙酸乙酯(327.00mg，2.87mmol，300μL)，并且将混合物在20℃搅拌14小时。LCMS显示检测到期望质量，并且仍然存在起始材料。添加另外的2-重氮基乙酸乙酯(218.00mg，1.91mmol，200μL)，并且将混合物在30℃搅拌另外3小时。TLC(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)显示起始材料消耗，并且检测到新斑点。将混合物在减压下浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(5g
Figure BPA0000310075650002491
硅胶快速柱，洗脱液为10～30％乙酸乙酯/石油醚梯度@50mL/min)纯化，得到标题化合物(460mg，1.33mmol，69.14％收率)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝347.3
步骤2：2-(2-(2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙酸乙酯 (3)的合成
向2-(2-(2-(甲苯磺酰基氧基)乙氧基)乙氧基)乙酸乙酯(460mg，1.33mmol)和哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(240mg，1.20mmol)在二噁烷(10mL)中的溶液中添加NaI(39.87mg，266.00μmol)和K2CO3(551.44mg，3.99mmol)，并且将混合物在80℃搅拌14小时。LCMS显示检测到期望质量。将混合物过滤，并且将滤饼用EtOAc(30mL)洗涤。将滤液在减压下浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(5g
Figure BPA0000310075650002492
硅胶快速柱，洗脱液为20～90％MeOH/乙酸乙酯梯度@50mL/min)纯化，得到标题化合物(370mg，938.66μmol，70.58％收率，95％纯度)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝375.5。
步骤3：2-(2-(2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙酸(4) 的合成
向2-(2-(2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙酸乙酯(370mg，988.06μmol)在THF(3mL)中的溶液中添加LiOH.H2O(49.76mg，1.19mmol)在H2O(1.5mL)中的溶液，并且将混合物在40℃搅拌14小时。LCMS显示检测到期望质量。将混合物在减压下浓缩，得到标题化合物(350mg，粗制)，为黄色固体。
步骤4：(1-(2-(2-(2-(((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄 基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙氧 基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(5)的合成
向2-(2-(2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙酸(300mg，851.42μmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加HATU(647.47mg，1.70mmol)和DIPEA(222.60mg，1.72mmol，300.00μL)，并且将混合物在20℃搅拌15分钟。然后添加(2S，4R)-1-((S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(360mg，770.84μmol，HCl盐)和DIPEA(222.60mg，1.72mmol，300.00μL)在DMF(3mL)中的溶液，并且将混合物在20℃搅拌14小时。LCMS显示仍然存在起始材料，并且检测到痕量的期望质量。添加另外的HATU(647.47mg，1.70mmol)，并且将混合物在40℃搅拌另外14小时。LCMS显示检测到期望质量。将混合物用H2O(10mL)稀释并且用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用H2O(10mL)和盐水(10mL x 2)洗涤，用Na2SO4干燥，并且过滤。将滤液在减压下浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(5g
Figure BPA0000310075650002501
硅胶快速柱，洗脱液为50～100％乙酸乙酯/石油醚到0～50％MeOH/EtOAc梯度@50mL/min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge C18150*50mm*10um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：26％-56％，分钟)再次纯化，得到标题化合物(80mg，100.14μmol，11.76％收率，95％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝759.8。
步骤5：(2S，4R)-1-((S)-2-(2-(2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙酰胺 基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(6)的 合成
向(1-(2-(2-(2-(((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(80mg，105.41μmol)在二噁烷(2mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，2mL)，并且将混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示在后处理后检测到期望质量。将反应在减压下浓缩，得到标题化合物(70mg，HCl盐)，为黄色固体。MS(M+H)+＝659.7。
步骤6：(2S，4R)-1-((S)-2-(2-(2-(2-(4-(4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧 代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002502
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰 胺基)哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙酰胺基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基 噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物80)的合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002511
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(45mg，96.69μmol)在DMF(1mL)中的溶液中添加HATU(55mg，144.65μmol)和DIPEA(22.26mg，172.23μmol，30μL)，之后在20℃搅拌15分钟。然后添加(2S，4R)-1-((S)-2-(2-(2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙酰胺基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(70mg，95.66μmol，HCl盐)在DMF(1mL)中的溶液，并且将混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示检测到期望质量。将混合物用H2O(10mL)稀释并且用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用H2O(10mL)和盐水(10mL x 2)洗涤，用Na2SO4干燥，并且过滤。将滤液在减压下浓缩。将粗制物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：43％-73％，10分钟)纯化，并且将洗脱液冻干，得到标题化合物(23.8mg，20.44μmol，21.37％收率，95％纯度)，为白色固体。MS(M+H)+＝1106.6。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.98(s，1H)，8.62-8.57(m，1H)，8.30(s，1H)，8.24(d，J＝13.3Hz，1H)，8.03(s，1H)，7.88-7.82(m，1H)，7.45-7.38(m，5H)，7.19(d，J＝6.6Hz，1H)，5.17-5.14(m，1H)，4.86-4.79(m，1H)，4.57(br d，J＝9.7Hz，1H)，4.47-4.41(m，1H)，4.39-4.34(m，1H)，4.29-4.23(m，1H)，4.08(br t，J＝13.9Hz，3H)，3.98(s，2H)，3.94-3.89(s，4H)，3.71-3.65(m，2H)，3.64-3.59(m，4H)，3.58-3.54(m，2H)，3.30(br s，3H)，2.86-2.80(m，2H)，2.53-2.52(m，2H)，2.44(s，3H)，2.09-1.90(m，6H)，1.79-1.69(m，4H)，1.65-1.49(m，6H)，0.95(s，9H)。
实施例81.(2S，4R)-1-((S)-2-(叔丁基)-14-(4-(4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002512
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺基)哌啶-1-基)-4-氧代-6，9，12-三氧杂-3-氮杂十四烷酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002521
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(51.9mg，41.06μmol，27.41％收率，91％纯度)，为白色固体。MS(M+H)+＝1150.7
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.97(s，1H)，8.59(t，J＝6.0Hz，1H)，8.29(s，1H)，8.23(d，J＝13.3Hz，1H)，8.02(s，1H)，7.86(br s，1H)，7.44-7.35(m，5H)，7.18(d，J＝6.8Hz，1H)，5.15(d，J＝3.4Hz，1H)，4.85-4.77(m，1H)，4.56(d，J＝9.7Hz，1H)，4.47-4.32(m，3H)，4.28-4.19(m，1H)，4.07(br t，J＝13.8Hz，2H)，3.96(s，2H)，3.90(s，3H)，3.69-3.43(m，15H)，2.82(br s，2H)，2.43(s，3H)，2.10-1.85(m，7H)，1.82-1.44(m，12H)，0.96-0.91(m，9H)。
实施例82.(2S，4R)-1-((S)-2-(叔丁基)-17-(4-(4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002531
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺基)哌啶-1-基)-4-氧代-6，9，12，15-四氧杂-3-氮杂十七烷酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002541
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(14.1mg，11.33μmol，4.40％收率，96％纯度)，为白色固体。
MS(M+H)+＝1194.6
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.98(s，1H)，8.59(br t，J＝6.0Hz，1H)，8.30(s，1H)，8.24(d，J＝13.3Hz，1H)，8.02(s，1H)，7.86(br dd，J＝3.4，7.6Hz，1H)，7.46-7.36(m，5H)，7.19(d，J＝6.7Hz，1H)，5.17(br s，1H)，4.82(br t，J＝8.2Hz，1H)，4.56(d，J＝9.7Hz，1H)，4.47-4.32(m，3H)，4.26(m，1H)，4.07(br t，J＝13.9Hz，2H)，3.97(s，2H)，3.91(s，3H)，3.66-3.57(m，6H)，3.56-3.52(m，4H)，3.50-3.45(m，6H)，3.33(br s，3H)，2.83(br d，J＝11.4Hz，2H)，2.44(s，3H)，2.11-1.99(m，4H)，1.98-1.86(m，3H)，1.82-1.67(m，5H)，1.67-1.48(m，7H)，0.97-0.91(s，9H)。
实施例83.(2S，4R)-1-((S)-2-(叔丁基)-20-(4-(4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002551
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺基)哌啶-1-基)-4-氧代-6，9，12，15，18-五氧杂-3-氮杂二十烷酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002561
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(31.7mg，25.34μmol，9.83％收率，99％纯度)，为白色固体。
MS(M+H)+＝1238.9
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.98(s，1H)，8.59(t，J＝6.1Hz，1H)，8.30(s，1H)，8.24(d，J＝13.3Hz，1H)，8.02(s，1H)，7.87(dd，J＝3.3，7.8Hz，1H)，7.43-7.37(m，5H)，7.19(d，J＝6.6Hz，1H)，5.16-5.14(m，1H)，4.84-4.76(m，1H)，4.57-4.55(m，1H)，4.47-4.33(m，3H)，4.28-4.21(m，1H)，4.07(t，J＝13.9Hz，2H)，3.96(s，2H)，3.91(s，3H)，3.71-3.51(m，13H)，3.50-3.46(m，10H)，3.33(s，3H)，2.85-2.82(m，2H)，2.44(s，3H)，2.08-1.91(m，6H)，1.76-1.52(m，10H)，0.94(s，9H)
实施例84.(2S，4R)-1-((S)-2-(2-((8-(4-(4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002571
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺基)哌啶-1-基)辛基)氧基)乙酰胺基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002581
步骤1：2-((8-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)辛基)氧基)乙酸乙酯(2)的 合成
在0℃向(1-(8-羟基辛基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(5.5g，16.74mmol)和Rh(OAc)2(37.00mg，167.43μmol)在DCM(50mL)中的溶液中逐滴添加2-重氮基乙酸乙酯(2.48g，21.77mmol，2.28mL)在DCM(10mL)中的溶液。将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示仍然存在大部分的起始材料。在25℃向反应混合物中添加另一份Rh(OAc)2(185.01mg，837.17μmol)。将所得混合物在40℃搅拌另外6小时。LCMS显示76％的期望质量。将混合物溶液在减压下浓缩。将粗产物通过硅胶柱色谱(1000目硅胶，用石油醚∶乙酸乙酯＝10/1至0/1洗脱)纯化，得到2-((8-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)辛基)氧基)乙酸乙酯(4.5g，粗制)，为黄色油状物，将其直接用于下一个步骤。MS(M+H)+＝415.2
步骤2：2-((8-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)辛基)氧基)乙酸(3)的合成
将2-((8-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)辛基)氧基)乙酸乙酯(4.5g，10.85mmol)、LiOH(519.89mg，21.71mmol)在THF(30mL)和H2O(30mL)中的混合物在45℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料完全消耗。将反应溶液浓缩以移除有机相。将残余水溶液用EtOAc(50mL x 3)洗涤。向悬浮液中添加1M HCl水溶液以将pH调节至6。将水层用EtOAc(50mL x 4)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，并且浓缩。将粗产物通过反相HPLC(0.1％NH3·H2O条件，MeCN/H2O)纯化，得到2-((8-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)辛基)氧基)乙酸(1.8g，4.66mmol，42.90％收率，100％纯度)，为白色固体，将其直接用于下一个步骤。MS(M-H)+＝385.4
步骤3：(1-(8-(2-(((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨 基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-2-氧代乙氧基)辛基)哌啶- 4-基)氨基甲酸叔丁酯(5)的合成
向2-((8-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)辛基)氧基)乙酸(300mg，776.15μmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加HATU(442.67mg，1.16mmol)和DIPEA(300.93mg，2.33mmol，405.56μL)。将混合物在25℃搅拌10分钟。向混合物中添加(2S，4R)-1-((S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(289.98mg，620.92μmol，0.8当量，HCl)。将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示63％的具有期望质量的峰。将溶液用乙酸乙酯(30mL)稀释并且在减压下浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(20g
Figure BPA0000310075650002591
硅胶快速柱，洗脱液为0～100％乙酸乙酯/石油醚梯度@100mL/min；洗脱液为0～50％乙酸乙酯/甲醇梯度@100mL/min)纯化，得到标题化合物(0.5g，粗制)，为褐色油状物，将其直接用于下一个步骤。MS(M+H)+＝799.4
步骤4：(2S，4R)-1-((S)-2-(2-((8-(4-氨基哌啶-1-基)辛基)氧基)乙酰胺基)-3， 3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(6)的合成
在25℃向(1-(8-(2-(((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-((4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-2-氧代乙氧基)辛基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(0.5g，625.73μmol)在二噁烷(2mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，10mL，63.93当量)。将所得混合物在25℃搅拌0.5小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有期望质量的主峰。将混合物溶液在减压下浓缩，得到标题化合物(380mg，粗制，HCl)，为褐色固体，将其直接用于下一个步骤。MS(M+H)+＝699.4
步骤5：(2S，4R)-1-((S)-2-(2-((8-(4-(4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧 代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002601
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰 胺基)哌啶-1-基)辛基)氧基)乙酰胺基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑- 5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(化合物84)的合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002602
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(70mg，150.40μmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加HATU(85.78mg，225.60μmol)和DIPEA(58.31mg，451.20μmol，78.59μL)。将混合物在25℃搅拌10分钟。向混合物中添加(2S，4R)-1-((S)-2-(2-((8-(4-氨基哌啶-1-基)辛基)氧基)乙酰胺基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(110.61mg，150.40μmol，HCl)。将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示具有期望质量的主峰。将混合物溶液在减压下浓缩。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：58％-88％，10分钟)纯化并且冻干，得到标题化合物(22.9mg，19.18μmol，12.75％收率，96％纯度)，为白色固体。MS(M+H)+＝1146.4
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.98(s，1H)，8.62(t，J＝5.9Hz，1H)，8.34-8.17(m，2H)，8.03(s，1H)，7.86(dd，J＝3.4，7.7Hz，1H)，7.44-7.36(m，4H)，7.34(d，J＝9.6Hz，1H)，7.19(d，J＝6.8Hz，1H)，5.29-5.07(m，1H)，4.88-4.70(m，1H)，4.55(d，J＝9.6Hz，1H)，4.48-4.32(m，3H)，4.30-4.18(m，1H)，4.07(t，J＝13.9Hz，2H)，3.94-3.87(m，5H)，3.77-3.55(m，3H)，3.50-3.45(m，2H)，2.77(d，J＝11.0Hz，2H)，2.46-2.42(m，4H)，2.19(t，J＝7.3Hz，2H)，2.11-2.02(m，1H)，2.00-1.80(m，5H)，1.82-1.69(m，4H)，1.66-1.43(m，9H)，1.40-1.31(m，4H)，1.30-1.15(m，7H)，0.94(s，9H)。
实施例85.(2S，4R)-N-(2-(2-(2-(4-(4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002611
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺基)哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002621
步骤1：4-甲基苯磺酸2-(2-羟基乙氧基)乙酯(3)的合成
向2，2’-氧基二乙醇(20g，188.47mmol，17.86mL)在DCM(200mL)中的溶液中添加TosCl(35.93g，188.47mmol)、KI(6.26g，37.69mmol)和氧化银(65.51g，282.71mmol)。将混合物在20℃搅拌14小时。LCMS显示检测到期望质量。将混合物过滤，并且将滤饼用EtOAc(100mL)洗涤。将滤液在减压下浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(120g
Figure BPA0000310075650002631
硅胶快速柱，洗脱液为0～100％乙酸乙酯/石油醚到0～50％MeOH/EtOAc梯度@80mL/min)纯化，得到(27.1g，104.11mmol，55.24％收率)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝261.1。
步骤2：(2S，4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷甲酰胺基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基- N-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(4)的合 成
向(2S，4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷甲酰胺基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(500mg，938.74μmol)和4-甲基苯磺酸2-(2-羟基乙氧基)乙酯(293mg，1.13mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加NaI(70.35mg，469.37μmol)和K2CO3(389.23mg，2.82mmol)。将反应混合物在100℃搅拌14小时。LCMS显示检测到期望质量。将混合物用H2O(10mL)稀释并且用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用H2O(10mL)和盐水(10mL x 2)洗涤，用Na2SO4干燥，并且过滤。将滤液在减压下浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(5g
Figure BPA0000310075650002632
硅胶快速柱，洗脱液为50～100％乙酸乙酯/石油醚到0～20％MeOH/EtOAc梯度@50mL/min)纯化，得到标题化合物(460mg，741.06μmol，78.94％收率)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝621.4。
步骤3：4-甲基苯磺酸2-(2-(2-(((2S，4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷甲酰胺基)-3， 3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙氧 基)乙酯(5)的合成
向(2S，4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷甲酰胺基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(510mg，821.61μmol)在DCM(8mL)中的溶液中添加TEA(501.63mg，4.96mmol，690μL)，以及TosCl(469.91mg，2.46mmol)在DCM(2mL)中的溶液。将混合物在20℃搅拌14小时。TLC(乙酸乙酯∶甲醇＝10∶1)显示检测到期望的斑点。将混合物在减压下浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(5g
Figure BPA0000310075650002641
硅胶快速柱，洗脱液为20～100％乙酸乙酯/石油醚梯度@50mL/min)纯化，得到(0.3g，387.14μmol，47.12％收率)，为白色固体。MS(M+H)+＝775.6。
步骤4：(1-(2-(2-(2-(((2S，4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷甲酰胺基)-3，3-二甲基 丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙氧基)乙基) 哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(6)的合成
向4-甲基苯磺酸2-(2-(2-(((2S，4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷甲酰胺基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙氧基)乙酯(300mg，387.14μmol)和哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(74mg，369.49μmol)在二噁烷(6mL)中的溶液中添加NaI(5.80mg，38.71μmol)和K2CO3(160.51mg，1.16mmol)，并且将混合物在80℃搅拌14小时。LCMS显示检测到期望质量。将混合物在减压下浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(5g
Figure BPA0000310075650002642
硅胶快速柱，洗脱液为0～100％MeOH/乙酸乙酯梯度@50mL/min)纯化，得到标题化合物(280mg，348.70μmol，90.07％收率)，为黄色固体。MS(M+H)+＝803.8。
步骤5：(2S，4R)-N-(2-(2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻 唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷甲酰胺基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2- 甲酰胺(7)的合成
向(1-(2-(2-(2-(((2S，4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷甲酰胺基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(280mg，348.70μmol)在二噁烷(4mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，4mL)，并且将混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示在后处理后检测到期望质量。将反应混合物在减压下浓缩，得到标题化合物(260mg，粗制，HCl盐)，为黄色固体。MS(M+H)+＝703.7。
步骤6：(2S，4R)-N-(2-(2-(2-(4-(4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7， 8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002643
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺基)哌 啶-1-基)乙氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷甲酰胺 基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(8)的合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002651
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(60mg，128.91μmol)在DMF(1mL)中的溶液中添加HATU(74mg，194.62μmol)和DIPEA(37.10mg，287.06μmol，50μL)，并且将混合物在20℃搅拌15分钟。然后添加(2S，4R)-N-(2-(2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷甲酰胺基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(120mg，137.00μmol，HCl盐)和DIPEA(44.52mg，344.47μmol，60μL)在DMF(1mL)中的溶液，并且将混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示检测到期望质量。将混合物用H2O(10mL)稀释并且用EtOAc(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用H2O(10mL)和盐水(10mL x2)洗涤，用Na2SO4干燥，并且过滤。将滤液在减压下浓缩。将粗制物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：49％-79％，10分钟)纯化，并且将洗脱液冻干，得到标题化合物(32.0mg，26.43μmol，20.50％收率，95％纯度)，为白色固体。MS(M+H)+＝1150.5
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.98(s，1H)，8.49(br t，J＝5.9Hz，1H)，8.30(s，1H)，8.24(d，J＝13.3Hz，1H)，8.03(s，1H)，7.85-7.80(m，1H)，7.41(d，J＝7.7Hz，1H)，7.31-7.26(m，1H)，7.19(d，J＝6.6Hz，1H)，7.05(s，1H)，6.96(br d，J＝8.1Hz，1H)，5.17-5.14(m，1H)，4.85-4.78(m，1H)，4.59(br d，J＝9.2Hz，1H)，4.51(br t，J＝8.2Hz，1H)，4.36-4.28(m，2H)，4.23-4.16(m，3H)，4.07(br t，J＝13.9Hz，2H)，3.91(s，3H)，3.77(br d，J＝3.3Hz，2H)，3.73-3.69(m，1H)，3.63-3.58(m，4H)，3.33-3.33(m，3H)，2.89-2.82(m，2H)，2.53-2.52(m，2H)，2.46(s，3H)，2.11-2.02(m，4H)，2.00-1.89(m，4H)，1.76-1.71(m，2H)，1.64-1.57(m，4H)，1.55-1.49(m，2H)，1.40-1.32(m，2H)，1.24-1.19(m，2H)，0.95(s，9H)。
实施例86.(2S，4R)-N-(2-(2-(2-(2-(4-(4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002652
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺基)哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002661
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(49.5mg，37.72μmol，29.26％收率，91％纯度)，为白色固体。MS(M+H)+＝1193.6
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.97(s，1H)，8.49(br t，J＝6.0Hz，1H)，8.30(s，1H)，8.24(d，J＝13.4Hz，1H)，8.03(s，1H)，7.85(dd，J＝3.2，7.6Hz，1H)，7.41(d，J＝7.6Hz，1H)，7.29(dd，J＝2.8，9.0Hz，1H)，7.18(d，J＝6.8Hz，1H)，7.04(d，J＝1.4Hz，1H)，6.97(s，1H)，5.17(d，J＝3.6Hz，1H)，4.91-4.77(m，1H)，4.59(d，J＝8.8Hz，1H)，4.51(t，J＝8.2Hz，1H)，4.39-4.27(m，2H)，4.25-4.15(m，3H)，4.07(br t，J＝14.0Hz，2H)，3.91(s，3H)，3.84-3.77(m，2H)，3.77-3.56(m，6H)，3.56-3.41(m，6H)，2.92-2.78(m，2H)，2.42-2.51(m，4H)，2.07(br d，J＝8.8Hz，3H)，1.95(br d，J＝4.0Hz，3H)，1.81-1.69(m，4H)，1.67-1.45(m，7H)，1.43-1.30(m，2H)，1.21(br dd，J＝3.6，8.8Hz，2H)，0.95(s，9H)。
实施例87.(2S，4R)-N-(2-(2-(2-(2-(2-(4-(4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002671
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺基)哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002681
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(15.5mg，11.26μmol，6.55％收率，90％纯度)，为白色固体。MS(M+H)+＝1238.7
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.98(s，1H)，8.51(t，J＝5.9Hz，1H)，8.30(s，1H)，8.24(d，J＝13.3Hz，1H)，8.04(s，1H)，7.93-7.83(m，1H)，7.41(d，J＝7.8Hz，1H)，7.34-7.23(m，1H)，7.18(d，J＝6.7Hz，1H)，7.04(d，J＝1.7Hz，1H)，6.99-6.92(m，1H)，5.19(s，1H)，4.90-4.75(m，1H)，4.65-4.43(m，2H)，4.42-4.25(m，2H)，4.25-4.12(m，3H)，4.08(t，J＝13.9Hz，2H)，3.94-3.87(m，4H)，3.79(t，J＝4.6Hz，2H)，3.75-3.65(m，2H)，3.65-3.60(m，3H)，3.59-3.53(m，3H)，3.53-3.45(m，7H)，2.82(d，J＝10.9Hz，2H)，2.47-2.41(m，5H)，2.12-1.99(m，3H)，1.98-1.88(m，3H)，1.80-1.69(m，4H)，1.66-1.57(m，4H)，1.56-1.46(m，2H)，1.42-1.31(m，2H)，1.25-1.22(m，1H)，1.22-1.19(m，1H)，0.95(s，9H)。
实施例88.(2S，4R)-N-(2-((14-(4-(4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002691
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺基)哌啶-1-基)-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002701
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(16mg，11.73μmol，10.65％收率，94％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝1283.2
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.97(s，1H)，8.50-8.45(m，1H)，8.30(s，1H)，8.24(d，J＝13.3Hz，1H)，8.02(s，1H)，7.88-7.83(m，1H)，7.40(d，J＝7.7Hz，1H)，7.31-7.25(m，1H)，7.18(d，J＝6.7Hz，1H)，7.05-7.02(m，1H)，6.98-6.94(m，1H)，5.16(d，J＝3.5Hz，1H)，4.86-4.76(m，1H)，4.59(br d，J＝9.0Hz，1H)，4.51(t，J＝8.3Hz，1H)，4.39-4.27(m，2H)，4.24-4.15(m，3H)，4.07(br t，J＝13.9Hz，2H)，3.91(s，3H)，3.82-3.76(m，2H)，3.75-3.68(m，1H)，3.65-3.59(m，3H)，3.57-3.53(m，2H)，3.52-3.46(m，11H)，3.30(s，3H)，2.86-2.80(m，2H)，2.47-2.44(m，5H)，2.11-1.89(m，8H)，1.81-1.69(m，3H)，1.67-1.47(m，5H)，1.42-1.31(m，2H)，1.26-1.18(m，2H)，0.95(s，9H)。
实施例89.(2S，4R)-N-(2-((8-(4-(4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002711
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺基)哌啶-1-基)辛基)氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002721
步骤1：(1-(8-(2-(((2S，4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷甲酰胺基)-3，3-二甲基丁酰 基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)辛基)哌啶-4-基)氨 基甲酸叔丁酯(2)的合成
向(2S，4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷甲酰胺基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(0.5g，938.74μmol)和4-甲基苯磺酸8-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)辛酯(589.04mg，1.22mmol)在MeCN(2mL)中的溶液中添加K2CO3(259.48mg，1.88mmol)和NaI(70.36mg，469.37μmol)，并且将所得混合物加热至60℃达16小时。LCMS显示仍然存在33％的反应物。添加另外的4-甲基苯磺酸8-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)辛酯(543.74mg，1.12mmol)，并且将所得混合物在60℃搅拌另外24小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有期望质量的主峰。将混合物用乙酸乙酯(30mL)稀释并且过滤。将滤液浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(25g
Figure BPA0000310075650002731
硅胶快速柱，洗脱液为0～100％乙酸乙酯/石油醚梯度@50mL/min；洗脱液为0～20％甲醇/乙酸乙酯@100mL/min)纯化，得到标题化合物(0.6g，粗制)，为黄色油状物，将其直接用于下一个步骤。MSM+H)+＝843.7
步骤2：(2S，4R)-N-(2-((8-(4-氨基哌啶-1-基)辛基)氧基)-4-(4-甲基噻唑-5- 基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷甲酰胺基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰 胺(3)的合成
在0℃向(1-(8-(2-(((2S，4R)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷甲酰胺基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)辛基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(0.6g，711.66μmol)在二噁烷(5mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，15mL)。将混合物在25℃搅拌0.5小时。TLC(乙酸乙酯∶甲醇＝10∶1；Rf＝0)显示起始材料完全消耗，并且形成新斑点。将反应混合物在减压下浓缩，得到标题化合物(0.9g，粗制，HCl盐)，为黄色固体，将其直接用于下一个步骤。MS(M+H)+＝743.7
步骤3：(2S，4R)-N-(2-((8-(4-(4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8， 9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002732
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺基)哌啶- 1-基)辛基)氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷甲酰胺基)-3，3-二 甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(化合物89)的合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002733
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(60mg，128.91μmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加HATU(122.54mg，322.27μmol)和DIPEA(33.32mg，257.82μmol，44.91μL)，将混合物在20℃搅拌10分钟。然后添加(2S，4R)-N-(2-((8-(4-氨基哌啶-1-基)辛基)氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-2-(1-氟环丙烷甲酰胺基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺(120.57mg，154.69μmol，HCl盐)在DMF(2mL)中的溶液和DIPEA(33.32mg，257.82μmol，44.91μL)，并且将所得混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有期望质量的主峰。将混合物溶液在减压下浓缩。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：62％-92％，10分钟)纯化，并且将洗脱液冻干，得到标题化合物(58.4mg，47.10μmol，36.53％收率，96％纯度)，为白色固体。MS(M+H)+＝1190.9
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝8.97(s，1H)，8.48(t，J＝5.8Hz，1H)，8.33-8.18(m，2H)，8.03(s，1H)，7.85(dd，J＝3.4，7.6Hz，1H)，7.40(d，J＝7.6Hz，1H)，7.29(dd，J＝2.8，9.2Hz，1H)，7.19(d，J＝6.8Hz，1H)，7.03-6.90(m，2H)，5.17(br s，1H)，4.89-4.74(m，1H)，4.59(d，J＝8.8Hz，1H)，4.51(t，J＝8.2Hz，1H)，4.40-4.14(m，3H)，4.13-3.99(m，4H)，3.91(s，3H)，3.79-3.68(m，1H)，3.68-3.42(m，2H)，2.80(br d，J＝11.0Hz，2H)，2.53-2.51(m，1H)，2.45(s，3H)，2.23(br t，J＝7.2Hz，2H)，2.14-2.04(m，1H)，2.01-1.88(m，5H)，1.84-1.49(m，13H)，1.48-1.18(m，15H)，0.95(s，9H)。
实施例90. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002741
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-5-乙氧基-2-氟苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002751
步骤1：5-乙氧基-2-氟-4-硝基苯甲酸(2)的合成
在0℃向乙醇(499.02mg，10.83mmol，633.27μL)在THF(10mL)中的溶液中添加NaH(787.71mg，19.69mmol，60％纯度，于矿物油中)，将混合物在0℃搅拌15分钟。在0℃向该混合物中缓慢添加2，5-二氟-4-硝基苯甲酸(2g，9.85mmol)在THF(10mL)中的溶液，将所得混合物在15℃搅拌3小时。TLC(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝1/1)指示起始材料完全消耗，并且检测到具有较低极性的一个主要的新斑点。将反应混合物通过添加H2O(50mL)猝灭，并且通过HCl溶液(1M)调节至pH＝5HCl。将所得混合物用EtOAc(80mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL x 2)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且在真空中浓缩，得到标题化合物(2.4g，9.74mmol，98.91％收率，93％纯度)，为灰色固体，将其直接用于下一个步骤。
步骤2：5-乙氧基-2-氟-4-硝基苯甲酸甲酯(3)的合成
向5-乙氧基-2-氟-4-硝基苯甲酸(2.4g，9.74mmol，93％纯度)在甲苯(30mL)中的溶液中缓慢添加TMSCHN2(2M，7.30mL)在甲苯(6mL)和MeOH(6mL)中的溶液，将混合物在15℃搅拌2小时。TLC(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝2/1)指示仍然存在痕量的起始材料，并且检测到具有较低极性的一个主要的新斑点。将反应混合物通过添加H2O(80mL)猝灭，然后用EtOAc(100mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(150mL x 2)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且在真空中浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(25g
Figure BPA0000310075650002761
硅胶快速柱，洗脱液为12～50％乙酸乙酯/石油醚梯度@65mL/min)纯化，得到标题化合物(1.1g，4.52mmol，46.44％收率)，为褐色固体。
步骤3：4-氨基-5-乙氧基-2-氟苯甲酸甲酯(4)的合成
在N2气氛下向5-乙氧基-2-氟-4-硝基苯甲酸甲酯(1.1g，4.52mmol)在MeOH(20mL)中的溶液中添加Pd/C(600mg，10％纯度)，将混合物脱气并且用H2吹扫3次，在H2气氛(15psi)下将混合物在15℃搅拌16小时。LCMS显示反应物完全消耗，并且检测到80％的期望质量。将反应混合物过滤，并且将滤液在真空中浓缩，得到标题化合物(940mg，3.53mmol，77.98％收率，80％纯度)，为褐色固体，将其直接用于下一个步骤。MS(M+H)+＝214.2。
步骤4：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002762
-2-基)氨基)-5-乙氧基-2-氟苯甲酸甲酯(5)的合成
将2-氯-9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-8，9-二氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002763
-6(7H)-酮(300mg，947.17μmol)、4-氨基-5-乙氧基-2-氟苯甲酸甲酯(378.64mg，1.42mmol，80％纯度)和TsOH(326.21mg，1.89mmol)在1，4-二噁烷(8mL)中的混合物在100℃搅拌12小时。LCMS显示仍然存在13％的反应物，并且检测到39％的期望质量。向该混合物中添加4-氨基-5-乙氧基-2-氟-苯甲酸甲酯(126.21mg，473.59μmol，80％纯度)，随后添加TsOH(163.10mg，947.17μmol)，将所得混合物在100℃搅拌12小时。LCMS显示反应物完全消耗，并且检测到37％的期望质量。将反应混合物在真空中浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：60％-90％，10分钟)纯化，将洗脱液冷冻干燥，得到标题化合物(80mg，162.11μmol，17.12％收率)，为褐色固体。MS(M+H)+＝494.3。
步骤5：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002771
-2-基)氨基)-5-乙氧基-2-氟苯甲酸(6)的合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002772
-2-基)氨基)-5-乙氧基-2-氟苯甲酸甲酯(80mg，162.11μmol)在THF(2mL)和MeOH(2mL)中的溶液中添加NaOH(2M，于H2O中，2mL)，将混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示反应物完全消耗，并且检测到90％的期望质量。将反应混合物通过添加HCl溶液(1M)猝灭以调节pH＝5。将所得混合物在真空中浓缩，得到标题化合物(310mg，646.57μmol，398.84％收率)，为褐色固体，将其直接用于下一个步骤。MS(M+H)+＝480.1。
步骤6：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002773
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代 异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-5-乙氧基-2-氟苯甲酰胺(化合物 90)的合成
向4-((2-(2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(65mg，115.97μmol，2HCl盐)、4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002774
-2-基)氨基)-5-乙氧基-2-氟苯甲酸(233.54mg，487.09μmol)和HATU(66.15mg，173.96μmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加DIEA(89.93mg，695.85μmol，121.20μL)，将混合物在15℃搅拌2小时。LCMS显示仍然存在17％的反应物，并且检测到33％的期望质量。向该混合物中添加4-[2-[2-[2-(4-氨基-1-哌啶基)乙氧基]乙氧基]乙基氨基]-2-(2，6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1，3-二酮(13.00mg，23.19μmol，2HCl盐)，将所得混合物在15℃搅拌2小时。将反应混合物与另一批次(20mg)合并。将反应混合物过滤，并且将滤液通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：36％-69％，10分钟)纯化，随后通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18150*40mm*15um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：18％-48％，10分钟)纯化，将洗脱液冷冻干燥，得到标题化合物(29.2mg，29.54μmol，25.47％收率，96％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝949.6。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝8.35(d，J＝15.0Hz，1H)，8.07(s，1H)，7.85(s，1H)，7.64-7.41(m，2H)，7.11(d，J＝7.1Hz，1H)，6.92(d，J＝8.6Hz，1H)，6.76-6.60(m，1H)，6.53(s，1H)，5.03-4.69(m，2H)，4.20(q，J＝6.8Hz，2H)，4.03(m，1H)，3.92(t，J＝13.3Hz，2H)，3.75-3.71(m，2H)，3.70-3.59(m，6H)，3.47(m，2H)，3.42(s，3H)，3.06-2.84(m，3H)，2.83-2.69(m，2H)，2.66-2.61(m，2H)，2.30-2.23(m，2H)，2.20-2.07(m，3H)，2.07-2.00(m，2H)，1.92-1.74(m，5H)，1.69-1.55(m，4H)，1.54-1.45(m，3H)。
实施例91. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002781
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-异丙氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002791
步骤1-5在以上反应方案中描述。
步骤6：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002792
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代 异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-异丙氧基苯甲酰胺(化合 物91)的合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002793
-2-基)氨基)-2-氟-5-异丙氧基苯甲酸(306.93mg，621.98μmol)、4-((2-(2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(83mg，148.09μmol，2HCl盐)和HATU(84.46mg，222.14μmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加DIEA(95.70mg，740.45μmol，128.97μL)，将混合物在15℃搅拌2小时。LCMS显示反应物完全消耗，并且检测到82％的期望质量。将反应混合物过滤，并且将滤液通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge BEH C18150*25mm*5um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：53％-83％，10分钟)纯化，得到标题化合物(38.4mg，38.28μmol，25.85％收率，96％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝963.6。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝8.35(d，J＝15.3Hz，1H)，8.07(s，1H)，7.86(s，1H)，7.58(d，J＝7.3Hz，1H)，7.50(dd，J1＝8.3Hz，J2＝7.3Hz，1H)，7.11(d，J＝7.0Hz，1H)，6.92(d，J＝8.6Hz，1H)，6.69(dd，J＝7.6，14.9Hz，1H)，6.53(t，J＝5.4Hz，1H)，4.98-4.79(m，2H)，4.73-4.71(m，1H)，4.11-3.99(m，1H)，3.92(t，J＝13.4Hz，2H)，3.78-3.61(m，8H)，3.48-3.47(m，2H)，3.42(s，3H)，3.04-2.91(m，2H)，2.90-2.83(m，1H)，2.84-2.77(m，1H)，2.77-2.71(m，1H)，2.69-2.56(m，2H)，2.27(t，J＝10.8Hz，2H)，2.19-2.09(m，3H)，2.06-2.03(m，2H)，1.88-1.69(m，9H)，1.40(d，J＝6.1Hz，6H)。
实施例92. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002801
-2-基)氨基)-5-环丙氧基-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002811
步骤1-5在以上反应方案中描述。
步骤6：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002812
-2-基)氨基)-5-环丙氧基-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3- 基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟苯甲酰胺 (化合物92)的合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002813
-2-基)氨基)-5-环丙氧基-2-氟苯甲酸(180mg，366.25umol)在DMF(4mL)中的溶液中添加HATU(181.04mg，476.13umol)和DIPEA(236.68mg，1.83mmol，318.97uL)，在搅拌20分钟后，添加4-((2-(2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(211.11mg，402.88umol，HCl盐)，并且将所得混合物在15℃搅拌3小时。LCMS显示具有期望质量的一个峰(78％)。将反应混合物用H2O(50mL)稀释并且用EtOAc(40mL x 2)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤。将滤液在真空中浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150*40mm*15um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：18％-48％，10分钟)纯化，随后通过制备型HPLC(柱：PhenomenexGemini-NX C18 75*30mm*3um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：38％-68％，8分钟)纯化，得到标题化合物(60mg，60.56umol，16.54％收率，95％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝961.6
1H NMR(400MHz，MeOD)δ＝8.41-8.33(m，1H)，8.19(s，1H)，7.66(d，J＝7.0Hz，1H)，7.55(dd，J＝7.2，8.5Hz，1H)，7.10(d，J＝8.6Hz，1H)，7.05(d，J＝7.1Hz，1H)，5.05(dd，J＝5.5，12.5Hz，1H)，4.95-4.92(m，1H)，4.08-3.87(m，4H)，3.76-3.63(m，8H)，3.53-3.47(m，2H)，3.40(s，3H)，3.02(br d，J＝10.0Hz，2H)，2.91-2.81(m，1H)，2.78-2.69(m，2H)，2.68-2.60(m，2H)，2.37-2.22(m，2H)，2.15-2.05(m，3H)，1.94(br d，J＝12.2Hz，2H)，1.85-1.63(m，8H)，0.94-0.88(m，2H)，0.87-0.79(m，2H)。
实施例93. 5-环丁氧基-4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002821
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002831
步骤1-5在以上反应方案中描述。
步骤6：5-环丁氧基-4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H- 嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002832
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3- 基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟苯甲酰胺 (化合物93)的合成
向5-环丁氧基-4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002833
-2-基)氨基)-2-氟苯甲酸(268.00mg，530.18umol)在DMF(4mL)中的溶液中添加HATU(262.07mg，689.23umol)和DIPEA(342.60mg，2.65mmol，461.73uL)，在搅拌20分钟后，添加4-((2-(2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(305.60mg，583.20umol，HCl盐)，并且将所得混合物在15℃搅拌3小时。LCMS显示具有期望质量的一个峰(87％)。将反应混合物用H2O(50mL)稀释并且用EtOAc(40mL x 2)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤。将滤液在真空中浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150*40mm*15um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：25％-55％，10分钟)纯化，随后通过制备型HPLC(柱：PhenomenexGemini-NX C18 75*30mm*3um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：42％-72％，8分钟)纯化，得到标题化合物(69.1mg，69.45umol，13.10％收率，98％纯度)，为黄色固体。
MS(M+H)+＝975.5
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ＝8.40(d，J＝14.1Hz，1H)，8.22(s，1H)，7.57(dd，J＝7.1，8.6Hz，1H)，7.21(d，J＝6.8Hz，1H)，7.12(d，J＝8.6Hz，1H)，7.06(d，J＝7.1Hz，1H)，5.06(dd，J＝5.5，12.5Hz，1H)，4.99-4.82(m，1H)，4.07(t，J＝13.4Hz，2H)，3.96-3.85(m，1H)，3.75(t，J＝5.2Hz，2H)，3.72-3.61(m，6H)，3.57-3.49(m，2H)，3.43(s，3H)，3.00(br d，J＝12.6Hz，2H)，2.93-2.82(m，1H)，2.80-2.70(m，2H)，2.66-2.52(m，4H)，2.33-2.20(m，4H)，2.18-2.07(m，3H)，2.00-1.52(m，13H)。
实施例94. 5-(仲丁氧基)-4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002841
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002851
步骤1-5在以上反应方案中描述。
步骤6：5-(仲丁氧基)-4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氧- 5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002852
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3- 基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟苯甲酰胺 (化合物94)的合成
向5-(仲丁氧基)-4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002853
-2-基)氨基)-2-氟苯甲酸(180mg，354.68umol)在DMF(8mL)中的溶液中添加HATU(175.32mg，461.08umol)和DIPEA(229.19mg，1.77mmol，308.88uL)，在搅拌20分钟后，添加4-((2-(2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(204.44mg，390.14umol，HCl盐)，并且将所得混合物在15℃搅拌3小时。LCMS显示具有期望质量的一个峰(67％)。将反应混合物用H2O(50mL)稀释并且用EtOAc(40mL x 2)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤。将滤液在真空中浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150*40mm*15um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：25％-55％，10分钟)纯化，获得172.5mg的产物(具有92％纯度)，将其用碱性离子交换树脂处理并且冻干，得到5-(仲丁氧基)-4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002861
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟苯甲酰胺(134.9mg，125.64umol，35.42％收率，91％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝977.6
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ＝8.41(d，J＝14.1Hz，1H)，8.22(s，1H)，7.57(dd，J＝7.1，8.6Hz，1H)，7.36(d，J＝6.8Hz，1H)，7.12(d，J＝8.7Hz，1H)，7.09-7.04(m，1H)，5.07(dd，J＝5.5，12.5Hz，1H)，4.99-4.92(m，1H)，4.57-4.48(m，1H)，4.07(t，J＝13.4Hz，2H)，3.99-3.89(m，1H)，3.76(t，J＝5.2Hz，2H)，3.73-3.63(m，6H)，3.58-3.50(m，2H)，3.42(s，3H)，3.07(brd，J＝11.1Hz，2H)，2.94-2.82(m，1H)，2.80-2.65(m，4H)，2.43-2.30(m，2H)，2.18-2.07(m，3H)，1.97(br d，J＝11.1Hz，2H)，1.91-1.62(m，10H)，1.39(d，J＝6.0Hz，3H)，1.06(t，J＝7.5Hz，3H)。
实施例95. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002862
-2-基)氨基)-5-(环戊基氧基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002871
步骤1-5在以上反应方案中描述。
步骤6：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002872
-2-基)氨基)-5-(环戊基氧基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶- 3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟苯甲酰胺 (化合物95)的合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002873
-2-基)氨基)-5-(环戊基氧基)-2-氟苯甲酸(108.00mg，207.89umol)在DMF(8mL)中的溶液中添加HATU(102.76mg，270.25umol)和DIPEA(134.34mg，1.04mmol，181.05uL)，在搅拌20分钟后，添加4-((2-(2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(119.83mg，228.67umol，HCl盐)，并且将所得混合物在15℃搅拌3小时。LCMS显示具有期望质量的一个峰(84％)。将反应混合物用H2O(50mL)稀释并且用EtOAc(40mL x 2)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤。将滤液在真空中浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150*40mm*15um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：22％-52％，10分钟)纯化。将产物用碱性离子交换树脂处理并且冻干，得到(64.7mg，59.53umol，28.64％收率，91％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝990.4
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ＝8.40(d，J＝14.1Hz，1H)，8.22(s，1H)，7.57(dd，J＝7.2，8.5Hz，1H)，7.35(d，J＝6.8Hz，1H)，7.12(d，J＝8.6Hz，1H)，7.07(d，J＝7.1Hz，1H)，5.07(dd，J＝5.4，12.5Hz，1H)，5.02-4.93(m，2H)，4.07(t，J＝13.4Hz，2H)，4.01-3.90(m，1H)，3.79-3.64(m，8H)，3.59-3.48(m，3H)，3.42(s，3H)，3.18-3.06(m，2H)，2.94-2.82(m，1H)，2.81-2.67(m，3H)，2.55-2.34(m，2H)，2.17-1.64(m，21H)。
实施例96. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002881
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002891
步骤1：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002893
-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸甲酯(3)的合成
将4-氨基-3-甲氧基苯甲酸甲酯(514.85mg，2.84mmol)、2-氯-9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-8，9-二氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002894
-6(7H)-酮(300mg，947.17μmol)和TosOH(148.01mg，2.84mmol)在1，4-二噁烷(10mL)中的混合物在100℃搅拌16小时。LCMS显示仍然存在39％的4-氨基-3-甲氧基苯甲酸甲酯，并且检测到55％的期望质量。将反应混合物用H O(30mL)稀释，并且向所得混合物中添加NaHCO溶液以调节pH＝8，并且用EtOAc(50mLx 3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL x 3)洗涤，用Na SO干燥，过滤，并且在真空中浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(12g
Figure BPA0000310075650002892
硅胶快速柱，洗脱液为0～20％乙酸乙酯/石油醚梯度@65mL/min)纯化，得到标题化合物(1g，1.76mmol，185.32％收率，81％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝462.3。
步骤2：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002901
-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(4)的合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002902
-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸甲酯(900mg，1.54mmol，79％纯度)在THF(8mL)和MeOH(8mL)中的溶液中添加NaOH(2M，于H2O中，8mL)，将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且检测到63％的期望质量。将反应混合物用HCl溶液(1M)酸化以调节pH＝5，然后用H2O(30mL)稀释并且用EtOAc(40mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL x 2)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且在真空中浓缩，得到标题化合物(160mg，318.26μmol，20.66％收率，89％纯度)，为白色固体。
步骤3：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002903
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代 异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物96)的 合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002904
-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(383.19mg，856.42μmol)在DMF(6mL)中的溶液中添加HATU(305.29mg，802.90μmol)和DIEA(276.72mg，2.14mmol，372.93μL)，将混合物在15℃搅拌15分钟，然后添加4-((2-(2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(300mg，535.27μmol，2HCl)，并且将所得混合物在15℃搅拌2小时。LCMS显示反应物完全消耗，并且检测到68％的期望质量。将反应混合物通过制备型HPLP(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5um；流动相：[水(10mMMH4HCO3)-ACN]；B％：33％-63％，9分钟)纯化，随后通过制备型HPLC(柱：Phenomenex lunaC18150*40mm*15um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：15％-45％，10分钟)纯化两次并且冷冻干燥，得到标题化合物(71mg，75.88μmol，14.18％收率，98％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝917.5。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝8.46(d，J＝8.4Hz，1H)，8.06(s，1H)，7.75(s，1H)，7.50(dd，J＝8.3Hz，7.3Hz，1H)，7.44(d，J＝1.6Hz，1H)，7.24(d，J＝1.6Hz，1H)，7.11(d，J＝7.0Hz，1H)，6.92(d，J＝8.7Hz，1H)，6.55(t，J＝5.7Hz，1H)，6.06(d，J＝8.3Hz，1H)，4.98-4.76(m，2H)，4.05-3.96(m，4H)，3.90(t，J＝13.5Hz，2H)，3.74(t，J＝5.3Hz，2H)，3.70-3.63(m，6H)，3.50-3.45(m，2H)，3.41(s，3H)，3.09-2.93(m，2H)，2.90-2.75(m，2H)，2.74-2.60(m，3H)，2.31-2.21(m，2H)，2.16-2.07(m，3H)，2.06-2.00(m，2H)，1.88-1.50(m，9H)。
实施例97. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002911
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-(2-羟基乙氧基)苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002921
步骤1-5在以上反应方案中描述。
步骤6：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002922
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代 异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-(2-羟基乙氧基)苯甲酰 胺(化合物97)的合成
向4-((2-(2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(200mg，356.84μmol，2HCl盐)、4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002923
-2-基)氨基)-2-氟-5-(2-羟基乙氧基)苯甲酸(210.47mg，356.84μmol，84％纯度)和HATU(203.52mg，535.27μmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加DIEA(161.42mg，1.25mmol，217.55μL)，将混合物在15℃搅拌3小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且检测到68％的期望质量。将反应混合物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Gemini-NX C1875*30mm*3um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：28％-58％，8分钟)纯化两次，随后通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18150*40mm*15um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：20％-50％，10分钟)纯化，并且冻干，得到标题化合物(40.7mg，40.49μmol，11.35％收率，96％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝965.7。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝8.30(d，J＝15.1Hz，1H)，8.23(s，1H)，8.09(s，1H)，7.56(d，J＝7.2Hz，1H)，7.52-7.43(m，1H)，7.10(d，J＝7.2Hz，1H)，6.92(d，J＝8.5Hz，1H)，6.67-6.61(m，1H)，6.51(t，J＝5.5Hz，1H)，5.00-4.81(m，2H)，4.20(t，J＝4.1Hz，2H)，4.06-3.96(m，3H)，3.91(t，J＝13.1Hz，2H)，3.733.71(t，J＝5.3Hz，2H)，3.69-3.60(m，6H)，3.50-3.44(m，2H)，3.39(s，3H)，2.98-2.84(m，3H)，2.83-2.72(m，2H)，2.62(t，J＝5.7Hz，2H)，2.31-1.97(m，9H)，1.83-1.71(m，4H)，1.62-1.59(m，4H)。
实施例98. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002931
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-3-(2-羟基乙氧基)苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002941
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(57.5mg，59.50μmol，11.12％收率，98％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝947.7。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝8.35(d，J＝8.4Hz，1H)，8.15(s，1H)，8.04(s，1H)，7.46(dd，J＝8.3Hz，7.4Hz，1H)，7.40(d，J＝1.5Hz，1H)，7.30(dd，J＝8.5Hz，1.5Hz，1H)，7.07(d，J＝7.0Hz，1H)，6.91(d，J＝8.7Hz，1H)，6.52(t，J＝5.5Hz，1H)，6.43(d，J＝7.9Hz，1H)，4.94-4.78(m，2H)，4.18(d，J＝3.0Hz，2H)，4.01-3.92(m，3H)，3.87(t，J＝13.3Hz，2H)，3.72(t，J＝5.3Hz，2H)，3.63(dt，J＝11.2Hz，5.1Hz，6H)，3.47(q，J＝5.4Hz，2H)，3.36(s，3H)，2.95(d，J＝9.3Hz，2H)，2.89-2.51(m，6H)，2.17(t，J＝11.9Hz，2H)，2.11-2.01(m，3H)，2.00-1.92(m，2H)，1.78-1.52(m，8H)。
实施例99. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002951
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-(三氟甲氧基)苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650002961
步骤1：5-氟-2-(三氟甲氧基)苯胺(2)的合成
向Pd/C(0.2g，10％纯度)在MeOH(20mL)中的悬浮液中添加4-氟-2-硝基-1-(三氟甲氧基)苯(2g，8.89mmol)，并且在H2(15psi)下将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示反应物消耗以及100％期望质量。将混合物过滤并且浓缩，得到标题化合物(1.4g，7.18mmol，80.76％收率)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝195.9
步骤2：4-溴-5-氟-2-(三氟甲氧基)苯胺(3)的合成
向5-氟-2-(三氟甲氧基)苯胺(0.8g，4.10mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加NBS(875.72mg，4.92mmol)，并且将所得混合物在25℃搅拌12小时。TLC(石油醚∶乙酸乙酯＝5/1)显示大部分起始材料消耗，并且形成新斑点。将混合物倒入水(50mL)中并且用EtOAc(50mL x 3)萃取，将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过硅胶柱(石油醚∶乙酸乙酯＝10/1)纯化，得到标题化合物(1.4g，粗制)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝274.1
步骤3：4-氨基-2-氟-5-(三氟甲氧基)苯甲酸(4)的合成
向4-溴-5-氟-2-(三氟甲氧基)苯胺(1g，粗制)在DMF(10mL)中的溶液中添加DCC(1.51g，7.30mmol，1.48mL)、HCOOH(1.23g，25.55mmol)、Pd(OAc)2(81.93mg，364.95μmol)、Xantphos(211.17mg，364.95μmol)、TEA(738.58mg，7.30mmol，1.02mL)，并且将所得混合物在80℃搅拌12小时。LCMS显示反应物3消耗，并且检测到期望质量。将混合物倒入Na2CO3饱和水溶液(50mL)中并且用EtOAc(50mL x 2)萃取，将合并的有机层弃去，将水层用浓HCl调节pH＝4，然后用EtOAc(50mL x 3)萃取，将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩，得到标题化合物(540mg，2.26mmol，61.88％收率)，为黄色固体。MS(M+H)+＝240.1
步骤4：4-氨基-2-氟-5-(三氟甲氧基)苯甲酸甲酯(7)的合成
在0℃向4-氨基-2-氟-5-(三氟甲氧基)苯甲酸(200mg，836.39umol)在DCM(3mL)和MeOH(3mL)中的溶液中添加TMSCHN2(2M，1.2mL)。将混合物在25℃搅拌1小时。TLC(石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1)显示起始材料消耗，并且检测到新斑点。将反应混合物在减压下浓缩，得到标题化合物(200mg，粗制)，为浅黄色固体。MS(M+H)+＝253.8
步骤5：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002971
-2-基)氨基)-2-氟-5-(三氟甲氧基)苯甲酸甲酯(8)的合成
向2-氯-9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-5，7，8，9-四氢-6H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002972
-6-酮(340mg，1.07mmol)在二噁烷(20mL)中的溶液中添加Cs2CO3(1.2g，3.68mmol)、BINAP(1.02g，1.64mmol)、Pd(OAc)2(100mg，445.41μmol)和4-氨基-2-氟-5-(三氟甲氧基)苯甲酸甲酯(298.92mg，1.18mmol)。在N2气氛下将混合物在100℃搅拌16小时。LCMS显示检测到17％的具有期望质量的峰。将反应混合物过滤，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝10∶1-2∶1)纯化，得到标题化合物(300mg，562.41μmol，52.39％收率)，为白色固体。MS(M+H)+＝534.0
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.44(s，1H)，8.41-8.30(m，2H)，7.80(dd，J＝1.3，7.0Hz，1H)，4.81(quin，J＝8.3Hz，1H)，4.08(t，J＝13.8Hz，2H)，3.84(s，3H)，3.34(s，3H)，1.98-1.85(m，2H)，1.74-1.68(m，2H)，1.66-1.47(m，4H)。
步骤6：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002981
-2-基)氨基)-2-氟-5-(三氟甲氧基)苯甲酸(9)的合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002982
-2-基)氨基)-2-氟-5-(三氟甲氧基)苯甲酸甲酯(200mg，374.94μmol)在THF(5mL)和MeOH(5mL)中的溶液中添加LiOH·H2O(157.34mg，3.75mmol)。将混合物在20℃搅拌2小时。LCMS显示检测到具有期望质量[M+H+H2O]的主峰。将反应混合物在减压下浓缩，得到残余物。向残余物中添加H2O(10mL)，将混合物用EtOAc 30mL(10mL x 3)萃取，在0℃将水相缓慢地用HCl(1M)调节至pH＝7，然后冷冻干燥，得到标题化合物(190mg，粗制)，为浅黄色固体。MS(M+H+H2O)+＝538.4。
步骤7：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002983
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代 异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-(三氟甲氧基)苯甲酰胺 (化合物99)的合成
在20℃向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002984
-2-基)氨基)-2-氟-5-(三氟甲氧基)苯甲酸(80mg，154.03μmol)在DMF(4mL)中的溶液中添加HATU(151.71mg，399.00μmol)、DIPEA(150.09mg，1.16mmol，202.28μL)和4-((2-(2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(110mg，196.26μmol，2HCl)。将混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示检测到60％的具有期望质量的峰。向反应混合物中添加H2O(15mL)，将混合物用EtOAc(30mL x 2)萃取，将合并的有机层用盐水(30mL x 3)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤，并且将滤液在减压下浓缩，得到残余物。将残余物通过制备型HPLC(柱：Unisil 3-100 C18uLtra150*50mm*3um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：35％-55％，10分钟，柱温：30℃)纯化，随后通过制备型HPLC(柱：Unisil 3-100 C18uLtra 150*50mm*3um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：35％-55％，10分钟，柱温：30℃)纯化，随后通过制备型HPLC(柱：Unisil 3-100 C18uLtra 150*50mm*3um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：30％-50％，10分钟，柱温：30℃)再次纯化，并且冻干，得到标题化合物(29.0mg，12.28μmol，7.97％收率，92％纯度，FA)，为浅黄色固体。MS(M+H)+＝989.5。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.08(s，1H)，9.16(s，1H)，8.32(s，1H)，8.29(s，1H)，8.22(d，J＝13.1Hz，1H)，8.06(d，J＝6.0Hz，1H)，7.61-7.51(m，2H)，7.15(d，J＝8.6Hz，1H)，7.03(d，J＝6.9Hz，1H)，6.60(t，J＝5.6Hz，1H)，5.09-5.00(m，1H)，4.78(t，J＝8.2Hz，1H)，4.09-4.05(m，2H)，3.64-3.60(m，2H)，3.58-3.55(m，2H)，3.53-3.46(m，8H)，3.33(s，3H)，2.91-2.78(m，3H)，2.43-2.39(m，2H)，2.09-1.99(m，3H)，1.95-1.87(m，2H)，1.79-1.63(m，5H)，1.62-1.44(m，6H)。
实施例100. 4-((7，7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650002991
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003001
步骤1：N-苄基丙-2-胺(2)的合成
向氯甲基苯(55.00g，434.50mmol，50mL)和丙-2-胺(128.42g，2.17mol，186.65mL)在MeCN(1000mL)中的溶液中添加K2CO3(180.16g，1.30mol)，并且将混合物在80℃搅拌16小时。TLC指示反应完成。将反应混合物过滤。将滤液在真空中浓缩，得到标题化合物(56.5g，378.60mmol，87.14％收率)，为黄色油状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝7.44-7.19(m，5H)，3.68(s，2H)，2.80-2.50(m，1H)，1.75(s，1H)，1.03-0.98(m，6H)。
步骤2：N-((1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-基)甲基)-N-苄基丙-2-胺(3)的合成
向N-苄基丙-2-胺(36.72g，246.06mmol，40.53mL)在EtOH(150mL)中的溶液中添加苯并三唑-1-基甲醇(36.7g，246.06mmol)，并且将混合物在25℃搅拌12小时。TLC指示反应完成。将反应混合物在真空中浓缩。将残余物用H2O(200mL)稀释并且用EtOAc(300mL x 2)萃取，将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤。将滤液在真空中浓缩，得到标题化合物(77g，粗制)，为黄色油状物。
步骤3：3-(苄基(异丙基)氨基)-2，2-二氟丙酸乙酯(4)的合成
向Zn(23.32g，356.68mmol)在THF(500mL)中的悬浮液中逐滴添加TMSCl(29.06g，267.51mmol，33.95mL)。在搅拌20分钟后，在0℃缓慢添加2-溴-2，2-二氟-乙酸乙酯(54.30g，267.51mmol，34.37mL)，并且将混合物在0℃搅拌20分钟并且冷却至-10℃。在-10℃添加在THF(250mL)中的N-(苯并三唑-1-基甲基)-N-苄基-丙-2-胺(50g，178.34mmol)。20分钟后，温热至25℃并且在25℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成。将反应混合物过滤，并且将滤液在真空中浓缩，得到标题化合物(100g，粗制)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝286.2
步骤4：2，2-二氟-3-(异丙基氨基)丙酸乙酯(5)的合成
向3-(苄基(异丙基)氨基)-2，2-二氟丙酸乙酯(100g，350.47mmol)在EtOH(700mL)中的溶液中添加Pd/C(10g，10％纯度)和HCl(12M，14.60mL)，并且在H2(15psi)下将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成。将反应混合物过滤，并且将滤液在真空中浓缩，得到标题化合物(68g，粗制)，为黄色油状物。
步骤5：3-((2-氯-5-硝基嘧啶-4-基)(异丙基)氨基)-2，2-二氟丙酸乙酯(6)的合 成
向2，2-二氟-3-(异丙基氨基)丙酸乙酯(68g，348.35mmol)在丙酮(500mL)中的溶液中添加K2CO3(57.80g，418.22mmol)和2，4-二氯-5-硝基-嘧啶(33.79g，174.17mmol)，并且将混合物在25℃搅拌16小时。TLC指示反应完成。将反应混合物过滤，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝1/0至5/1)纯化，得到标题化合物(11g，24.33mmol，6.98％收率，78％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝353.1
步骤6：2-氯-7，7-二氟-9-异丙基-8，9-二氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003021
-6 (7H)-酮(7)的合成
向3-((2-氯-5-硝基嘧啶-4-基)(异丙基)氨基)-2，2-二氟丙酸乙酯(10g，28.35mmol)在AcOH(100mL)中的溶液中添加Fe(9.50g，170.11mmol)和HCl(12M，14.18mL)，并且将混合物在85℃搅拌5小时。LCMS显示反应完成。将混合物与中试(2g规模)合并并且过滤，浓缩，将残余物用NaHCO3(饱和水溶液300mL)稀释，并且将所得混合物用EtOAc(300mL x3)萃取，将合并的有机层用盐水(500mL x 2)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝1/0至5/1)纯化，得到标题化合物(5.1g，18.06mmol，63.72％收率，98％纯度)，为灰色固体。MS(M+H)+＝277.1
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.0(s，1H)，8.09(s，1H)，4.93-4.86(m，1H)，4.05-3.95(m，2H)，1.19-1.17(m，6H)。
步骤7：2-氯-7，7-二氟-9-异丙基-5-甲基-8，9-二氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二 氮杂
Figure BPA0000310075650003022
-6(7H)-酮(8)的合成
向2-氯-7，7-二氟-9-异丙基-8，9-二氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003023
-6(7H)-酮(5.1g，18.43mmol)和K2CO3(5.10g，36.87mmol)在DMF(50mL)中的混合物中添加MeI(2.88g，20.28mmol，1.26mL)，并且将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成。将混合物倒入水(200mL)中并且用EtOAc(100mL x 3)萃取，将合并的有机层用盐水(300mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩，得到标题化合物(4.5g，15.02mmol，81.46％收率，97％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝291.1
步骤8：4-((7，7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003031
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸甲酯(9)的合成
向2-氯-7，7-二氟-9-异丙基-5-甲基-8，9-二氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003032
-6(7H)-酮(1g，3.44mmol)和4-氨基-2-氟-5-甲氧基-苯甲酸甲酯(1.03g，5.16mmol)在二噁烷(20mL)中的溶液中添加TsOH(1.78g，10.32mmol)，并且将混合物在100℃搅拌16小时。LCMS显示反应完成。将混合物倒入水(100mL)中并且用EtOAc(100mL x 3)萃取，将合并的有机层用盐水(300mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝1/0至2/1)纯化，得到标题化合物(1.5g，3.24mmol，94.25％收率，98％纯度)，为白色固体。MS(M+H)+＝454.2
步骤9：4-((7，7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003033
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(10)的合成
向4-((7，7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003034
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸甲酯(1.5g，3.31mmol)在THF(6mL)和MeOH(6mL)中的溶液中添加NaOH(2M，6.00mL，于水中)，并且将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成。将有机溶剂浓缩，并且将残余物用1M HCl调节pH＝6，将悬浮液过滤并且收集滤饼，得到标题化合物(590mg，1.34mmol，40.59％收率，100％纯度)，为白色固体。MS(M+H)+＝440.1
步骤10：(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基) 氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(12)的合成
向4-甲基苯磺酸2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙酯(600mg，1.07mmol)和哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(429.48mg，2.14mmol)在二噁烷(10mL)中的混合物中添加DIPEA(415.73mg，3.22mmol，560.28μL)和NaI(16.07mg，107.22μmol)，并且将混合物加热至80℃达16小时。TLC(EtOAc/MeOH＝10/1)显示反应完成。将反应混合物用H2O(30mL)稀释并且用EtOAc(30mL x 2)萃取，将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，EtOAc～EtOAc/MeOH＝10/1)纯化，得到标题化合物(590mg，973.86umol，90.83％收率，97％纯度)，为黄色固体。
MS(M+H)+＝588.3
步骤11：4-((2-(2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2，6- 二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(13)的合成
向(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(590mg，1.00mmol)在二噁烷(10mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，10mL)，并且将反应混合物在25℃搅拌3小时。LCMS显示反应完成。将反应混合物在真空中浓缩，得到标题化合物(0.7g，1.44mmol，143.01％收率)，为黄色固体。MS(M+H)+＝488.2
步骤12：4-((7，7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4， 5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003041
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧 代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合 物100)的合成
向4-((2-(2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(0.2g，381.67μmol，HCl)和4-((7，7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003042
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(167.70mg，381.67μmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加HATU(290.25mg，763.35μmol)和DIPEA(147.99mg，1.15mmol，199.44μL)，并且将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示反应完成。将混合物倒入水(20mL)中并且用EtOAc(20mL x 3)萃取，将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：PhenomenexGemini-NX C1875*30mm*3um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：18％-48％，7分钟)纯化，并且将洗脱液冻干。将固体倒入NaHCO3饱和水溶液(20mL)中并且用EtOAc(20mL x 3)萃取，将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩，得到标题化合物(86.4mg，90.30μmol，74.62％收率，95％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝909.5。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.14(s，1H)，8.31-8.25(m，2H)，8.02(s，1H)，7.95-7.86(m，1H)，7.63-7.57(m，1H)，7.21-7.14(m，2H)，7.05(d，J＝8.0Hz，1H)，6.61(t，J＝5.7Hz，1H)，5.14-5.07(m，1H)，5.01-4.92(m，1H)，4.07(t，J＝13.4Hz，2H)，3.92(s，3H)，3.82-3.71(m，1H)，3.66-3.62(m，2H)，3.60-3.58(m，2H)，3.57-3.50(m，6H)，3.02-2.85(m，3H)，2.70-2.60(m，4H)，2.52-2.45(m，3H)，2.14-2.05(m，3H)，1.84-1.77(m，2H)，1.67-1.52(m，2H)，1.32(d，J＝6.6Hz，6H)。
实施例101. 4-((7，7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003052
-2-基)氨基)-N-(1-(14-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003051
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(16.5mg，16.22μmol，7.13％收率，98％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝997.7
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.10(s，1H)，8.26(br t，J＝6.0Hz，2H)，7.99-7.78(m，2H)，7.58(dd，J＝7.2，8.4Hz，1H)，7.22-7.11(m，2H)，7.03(d，J＝7.0Hz，1H)，6.67-6.55(m，1H)，5.05(dd，J＝5.6，12.8Hz，1H)，4.96-4.82(m，1H)，4.06(br t，J＝13.6Hz，2H)，3.91(s，3H)，3.76-3.67(m，1H)，3.64-3.59(m，2H)，3.59-3.53(m，4H)，3.53-3.43(m，12H)，3.31-3.28(m，2H)，2.97-2.77(m，3H)，2.62-2.51(m，3H)，2.48-2.39(m，2H)，2.14-1.89(m，3H)，1.86-1.68(m，2H)，1.62-1.45(m，2H)，1.26(s，3H)，1.25(s，3H)。
实施例102. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003061
-2-基)氨基)-N-(1-(4-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003071
步骤1-5在以上反应方案中描述。
步骤6：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003072
-2-基)氨基)-N-(1-(4-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚 啉-4-基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)苯甲酰胺(化合物102)的合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003073
-2-基)氨基)苯甲酸(130mg，311.45μmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加HATU(130.26mg，342.59μmol)和DIPEA(80.50mg，622.89μmol，108.50μL)。将混合物在20℃搅拌10分钟，并且在反应混合物中逐滴添加4-((4-(4-氨基哌啶-1-基)-4-氧代丁基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(163.74mg，342.59μmol，HCl)在DMF(2mL)中的溶液和DIPEA(80.50mg，622.89μmol，108.50μL)，并且将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且检测到期望质量。将反应混合物用H2O(12mL)稀释并且用EtOAc(12mL x 3)萃取。将有机层用盐水(12mL x 3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Unisil 3-100 C18μLtra 150*50mm*3um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：32％-62％，10分钟)纯化，随后冻干，得到标题化合物(185.8mg，214.33μmol，68.82％收率，97％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝840.9
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.09(s，1H)，9.67(s，1H)，8.27(s，1H)，8.06(d，J＝7.7Hz，1H)，7.81-7.74(m，4H)，7.60(dd，J＝7.3，8.4Hz，1H)，7.19(d，J＝8.7Hz，1H)，7.02(d，J＝7.0Hz，1H)，6.68(t，J＝6.1Hz，1H)，5.05(dd，J＝5.4，12.8Hz，1H)，4.83-4.73(m，1H)，4.39(d，J＝12.2Hz，1H)，4.08-4.00(m，2H)，3.88(d，J＝13.4Hz，1H)，3.33(s，3H)，3.11(t，J＝11.8Hz，1H)，2.94-2.83(m，1H)，2.73-2.66(m，1H)，2.62-2.51(m，4H)，2.45-2.40(m，3H)，2.07-1.96(m，3H)，1.88-1.78(m，4H)，1.75-1.69(m，2H)，1.67-1.57(m，4H)，1.47-1.35(m，2H)
实施例103. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003081
-2-基)氨基)-N-((1r，4r)-4-(4-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)环己基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003091
步骤1：2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-((2-(2-羟基乙氧基)乙基)氨基)异吲哚啉- 1，3-二酮(3)的合成
在20℃向2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1，3-二酮(8g，28.96mmol)在DMSO(50mL)中的混合物中一次性地添加TEA(8.79g，86.89mmol，12.09mL)和2-(2-氨基乙氧基)乙醇(3.96g，37.65mmol，3.77mL)，并且将混合物在80℃搅拌16小时。LC-MS显示反应完成。将反应混合物在H2O(300mL)和EtOAc(600mL)之间分配。将有机相分离，用盐水(100mL x3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝1/0至0/1)纯化，得到标题化合物(10.4g，27.92mmol，96.39％收率，97％纯度)，为绿色固体。MS(M+H)+＝362.1
步骤2：4-甲基苯磺酸2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉- 4-基)氨基)乙氧基)乙酯(4)的合成
向2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-((2-(2-羟基乙氧基)乙基)氨基)异吲哚啉-1，3-二酮(10.4g，28.78mmol)在DCM(100mL)中的溶液中添加TEA(4.37g，43.17mmol，6.01mL)和TosCl(6.58g，34.54mmol)，并且将混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示反应完成。将混合物在真空下浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝1/0至1/3)纯化，得到标题化合物(4.65g，8.57mmol，29.77％收率，95％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝516.1
步骤3：4-((1r，4r)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)环己基)哌嗪-1-甲酸苄酯(6)的合 成
在N2下在20℃向哌嗪-1-甲酸苄酯(5g，22.70mmol，4.39mL)和N-(4-氧代环己基)氨基甲酸叔丁酯(5.81g，27.24mmol，5.81mL)、AcOH(2.04g，34.05mmol，1.95mL)在ACN(200mL)中的混合物中缓慢添加NaBH(OAc)3(19.24g，90.80mmol)，并且将混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示反应完成，将反应混合物用饱和NaHCO3(水溶液)稀释以调节pH＞10并且用EtOAc(200mL x 3)萃取，将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝3/1至1/1)纯化，得到标题化合物(9.1g，18.96mmol，83.53％收率，87％纯度)，为白色固体。将2.0g的4-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)环己基)哌嗪-1-甲酸苄酯通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge BEH C18 250*50mm*10um；流动相：[水(0.05％氢氧化氨v/v)-ACN]；B％：40％-65％，20分钟)纯化，得到标题化合物(412mg，986.73umol，20.60％收率)，为白色固体。MS(M+H)+＝418.4
步骤4：((1r，4r)-4-(哌嗪-1-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(7)的合成
在N2气氛下向4-((1r，4r)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)环己基)哌嗪-1-甲酸苄酯(200mg，479.00μmol)在EtOAc(30mL)中的溶液中添加Pd/C(100mg，10％纯度)，并且将所得混合物在H2(15psi)下在20℃搅拌16小时。TLC指示反应完成。将反应混合物过滤，并且将滤液在真空中浓缩，得到标题化合物(120mg，粗制)，为白色固体。
步骤5：((1r，4r)-4-(4-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚 啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(8)的合成
向4-甲基苯磺酸2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙酯(167.91mg，325.71μmol)和((1r，4r)-4-(哌嗪-1-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(120mg，423.42μmol)在二噁烷(5mL)中的溶液中添加DIPEA(126.29mg，977.12μmol，170.20μL)和NaI(4.88mg，32.57μmol)，并且将混合物在80℃搅拌16小时。LCMS显示反应完成。将反应混合物与中试反应(0.2g规模)合并并且在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝1/0至0/1)纯化，得到标题化合物(620mg，粗制)，为白色固体。MS(M+H)+＝627.4
步骤6：4-((2-(2-(4-((1r，4r)-4-氨基环己基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)氨基)- 2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(9)的合成
向((1r，4r)-4-(4-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(620mg，989.24μmol)在二噁烷(6mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，12mL，48.52当量)，并且将混合物在20℃搅拌6小时。LCMS显示反应完成。将混合物在真空中浓缩，得到标题化合物(520mg，987.42μmol，99.82％收率，100％纯度，HCl)，为白色固体。MS(M+H)+＝527.2
步骤7：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003111
-2-基)氨基)-N-((1r，4r)-4-(4-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1， 3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)环己基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰 胺(化合物103)的合成
向4-((2-(2-(4-((1r，4r)-4-氨基环己基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(0.2g，355.18μmol HCl)和4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003121
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(165.31mg，355.18μmol)在DMF(4mL)中的混合物中添加HATU(270.10mg，710.37μmol)和DIPEA(137.72mg，1.07mmol，185.60μL)，并且将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成。将混合物倒入水(20mL)中并且用EtOAc(20mL x 3)萃取，将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩，将残余物通过制备型HPLC(柱：Unisil 3-100 C18μLtra 150*50mm*3um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：30％-50％，10分钟)纯化，并且将洗脱液冻干，得到标题化合物(151.3mg，152.23μmol，42.86％收率，98％纯度，FA盐)，为黄色固体。MS(M+H)+＝974.2。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.12(s，1H)，9.34-8.85(m，1H)，8.31(s，1H)，8.26(d，J＝13.3Hz，1H)，8.06(s，1H)，7.95(s，1H)，7.61(dd，J＝7.3，8.3Hz，1H)，7.22-7.15(m，2H)，7.08(d，J＝7.0Hz，1H)，6.61(s，1H)，5.15-5.03(m，1H)，4.91-4.70(m，1H)，4.09(br t，J＝13.9Hz，2H)，3.92(s，3H)，3.79-3.34(m，14H)，3.21-2.80(m，4H)，2.66-2.52(m，5H)，2.44-2.35(m，1H)，2.14-1.91(m，6H)，1.81-1.49(m，8H)，1.47-1.19(m，3H)。
实施例104. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003122
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003131
步骤1-2在以上反应方案中描述。
步骤3：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003132
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代 异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物 104)的合成
向4-((2-(2-(2-(3-氨基哌啶-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(230mg，471.75μmol)和4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003141
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(219.56mg，471.75μmol)在DMF(4mL)中的悬浮液中添加HATU(358.75mg，943.50μmol)和DIPEA(182.91mg，1.42mmol，246.51μL)，并且将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示反应完成，将混合物倒入水(20mL)中并且用EtOAc(20mL x 3)萃取，将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Unisil 3-100C18μLtra 150*50mm*3um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：33％-53％，10分钟)纯化，并且将洗脱液冻干，得到标题化合物(156mg，161.85μmol，34.31％收率，97％纯度，FA)，为黄色固体。MS(M+H)+＝935.3
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ＝8.37-8.27(m，1H)，8.22(d，J＝3.2Hz，1H)，7.48-7.39(m，1H)，7.34(d，J＝6.8Hz，1H)，7.02-6.88(m，2H)，5.12-5.04(m，1H)，4.96-4.92(m，1H)，4.41-4.32(m，1H)，4.06(t，J＝13.4Hz，2H)，3.97(s，3H)，3.95-3.84(m，2H)，3.81-3.68(m，7H)，3.53-3.42(m，6H)，3.41-3.34(m，2H)，3.09-2.83(m，3H)，2.79-2.64(m，2H)，2.19-2.01(m，5H)，1.98-1.89(m，1H)，1.86-1.67(m，7H)。
实施例105. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003142
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)哌啶-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003151
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(56.8mg，61.84μmol，19.79％收率，97％纯度，FA)，为黄色固体。Ms(M+H)+＝891.3
1H NMR(400MHz，MeOD)δ＝8.39(dd，J＝3.6，14.2Hz，1H)，8.23(s，1H)，7.57-7.49(m，1H)，7.31(dd，J＝6.8，10.2Hz，1H)，7.09(d，J＝6.8Hz，1H)，6.99(t，J＝7.8Hz，1H)，5.08-5.02(m，1H)，4.99-4.93(m，1H)，4.37-4.28(m，1H)，4.06(t，J＝13.4Hz，2H)，3.97(s，3H)，3.92-3.82(m，2H)，3.84-3.78(m，2H)，3.74-3.64(m，1H)，3.61-3.55(m，2H)，3.51-3.37(m，6H)，3.16-2.98(m，2H)，2.90-2.80(m，1H)，2.78-2.62(m，2H)，2.16-2.02(m，5H)，1.98-1.64(m，8H)。
实施例106. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003152
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003161
步骤1-2在以上反应方案中描述。
步骤3：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003162
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异 吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物106)的 合成
向4-((2-(2-(3-氨基吡咯烷-1-基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(166.09mg，386.74μmol，HCl)和4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003163
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(180mg，386.74μmol)在DMF(3mL)中的悬浮液中添加HATU(294.10mg，773.49μmol)和DIPEA(149.95mg，1.16mmol，202.09μL)，并且将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示反应完成。将混合物倒入水(20mL)中并且用EtOAc(20mL x 3)萃取，将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Unisil 3-100C18μLtra 150*50mm*3um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：35％-55％，10分钟)纯化，并且将洗脱液冻干，得到标题化合物(97.8mg，109.30μmol，28.26％收率，98％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝877.0。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ＝8.42-8.34(m，1H)，8.23(d，J＝1.8Hz，1H)，7.61-7.46(m，1H)，7.35(dd，J＝3.2，6.8Hz，1H)，7.11(dd，J＝6.8，8.4Hz，1H)，6.98(t，J＝6.8Hz，1H)，5.04-4.93(m，4H)，4.66-4.60(m，2H)，4.06(t，J＝13.4Hz，2H)，3.94(s，3H)，3.90-3.82(m，4H)，3.58-3.52(m，2H)，3.43(s，3H)，3.13-2.96(m，3H)，2.88-2.66(m，4H)，2.51-2.37(m，1H)，2.15-2.05(m，3H)，1.97-1.87(m，1H)，1.86-1.67(m，5H)
实施例107. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003171
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003181
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(40.9mg，39.97μmol，12.40％收率，90％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝921.6。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝8.34(d，J＝14.9Hz，1H)，8.07(d，J＝1.7Hz，1H)，7.82(d，J＝1.7Hz，1H)，7.55(dd，J1＝7.2Hz，J2＝4.0Hz，1H)，7.47(dd，J1＝8.3Hz，J2＝7.3Hz，1H)，7.09(d，J＝7.0Hz，2H)，6.90(d，J＝8.4Hz，1H)，6.55-6.46(m，1H)，4.92-4.82(m，2H)，4.74-4.62(m，1H)，3.97-3.92(m，4H)，3.93-3.85(m，2H)，3.72(t，J＝5.4Hz，2H)，3.69-3.62(m，6H)，3.48-3.42(m，2H)，3.42(s，3H)，3.02-2.93(m，1H)，2.88-2.79(m，3H)，2.77-2.67(m，3H)，2.49-2.34(m，2H)，2.15-2.08(m，3H)，1.71-1.52(m，7H)。
实施例108. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003192
-2-基)氨基)-N-(1-(14-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-3，6，9，12-四氧杂十四烷基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003191
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(61.4mg，57.81μmol，17.29％收率，95％纯度，FA)，为黄色固体。MS(M+H)+＝1009.3。
1H NMR(400MHz，MeOD)δ＝8.35-8.24(m，1H)，8.20(s，1H)，7.50(dd，J＝7.2，8.5Hz，1H)，7.46-7.34(m，1H)，7.08-6.94(m，2H)，5.08-4.90(m，3H)，4.74-4.56(m，1H)，4.15-4.05(m，2H)，4.07-3.94(m，4H)，3.89-3.76(m，3H)，3.72-3.59(m，13H)，3.55-3.36(m，8H)，3.27-3.16(m，1H)，2.92-2.79(m，1H)，2.78-2.39(m，3H)，2.26-2.16(m，1H)，2.15-2.01(m，3H)，1.88-1.77(m，2H)，1.74-1.51(m，4H)。
实施例109. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003202
-2-基)氨基)-N-(1-(5-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)戊基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003201
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(41.5mg，45.54μmol，10.56％收率，96％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝875.2。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ＝8.42(d，J＝14.4Hz，1H)，8.21(s，1H)，7.57-7.53(m，1H)，7.44-7.33(m，1H)，7.08-7.03(m，2H)，5.06-5.02(m，1H)，4.95-4.92(m，2H)，4.70-4.60(m，3H)，4.11-3.95(m，5H)，3.80-3.71(m，1H)，3.40-3.37(m，5H)，3.26-3.24(m，2H)，2.85-2.75(m，1H)，2.71-2.50(m，3H)，2.32-2.16(m，1H)，2.11-2.08(m，3H)，1.78-1.71(m，10H)1.60-1.50(m，2H)。
实施例110. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003211
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(3-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丙氧基)乙基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003221
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(67.9mg，70.88μmol，34.02％收率，93％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝891.0
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.10(s，1H)，8.30(s，1H)，8.27(d，J＝13.6Hz，1H)，8.05-8.02(m，2H)，7.57(t，J＝7.8Hz，1H)，7.24(d，J＝6.8Hz，1H)，7.09(d，J＝8.8Hz，1H)，7.01(d，J＝7.0Hz，1H)，6.67(t，J＝5.6Hz，1H)，5.09-4.98(m，1H)，4.89-4.74(m，1H)，4.37-4.30(m，1H)，4.09(t，J＝13.8Hz，2H)，3.91(s，3H)，3.57-3.45(m，4H)，3.47-3.39(m，8H)，2.94-2.76(m，2H)，2.71-2.55(m，5H)，2.19-2.06(m，1H)，2.05-1.90(m，3H)，1.85-1.79(m，2H)，1.75-1.70(m，3H)，1.69-1.52(m，3H)。
实施例111. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003231
-2-基)氨基)-N-(1-(3-(3-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丙氧基)丙基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003241
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(98.4mg，106.56μmol，17.55％收率，98％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝905.7。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.09(s，1H)，8.36-8.16(m，2H)，8.11-7.93(m，2H)，7.57(dd，J1＝7.3Hz，J2＝8.4Hz，1H)，7.20(d，J＝6.7Hz，1H)，7.08(d，J＝8.7Hz，1H)，7.01(d，J＝7.0Hz，1H)，6.66(t，J＝5.6Hz，1H)，5.04(dd，J1＝12.9Hz，J2＝5.4Hz，1H)，4.90-4.71(m，1H)，4.43-4.28(m，1H)，4.07(t，J＝13.9Hz，2H)，3.91(s，3H)，3.51-3.35(m，9H)，2.94-2.82(m，1H)，2.72(dd，J1＝9.1Hz，J2＝7.3Hz，1H)，2.65-2.53(m，3H)，2.48-2.37(m，5H)，2.18-2.09(m，1H)，2.05-1.91(m，3H)，1.85-1.77(m，2H)，1.73-1.67(m，4H)，1.66-1.56(m，4H)。
实施例112. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003251
-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙酰胺基)乙氧基)乙基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003261
步骤1：2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-N-(2- (2-羟基乙氧基)乙基)乙酰胺(3)的合成
将2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙酸(500mg，1.36mmol，HCl盐)、2-(2-氨基乙氧基)乙醇(214.42mg，2.04mmol，204.21μL)、EDCI(390.97mg，2.04mmol)、HOBt(275.58mg，2.04mmol)和TEA(412.75mg，4.08mmol，567.74μL)在DCM(5mL)中的混合物在15℃搅拌16小时。LCMS显示仍然存在4％的反应物，并且检测到79％的期望质量。将反应混合物在真空中浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(12g
Figure BPA0000310075650003271
硅胶快速柱，洗脱液为0～9％MeOH/乙酸乙酯梯度@60mL/min)纯化，得到标题化合物(400mg，粗制)，为绿色固体。MS(M+H)+＝419.1。
步骤2：4-甲基苯磺酸2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚 啉-4-基)氨基)乙酰胺基)乙氧基)乙酯(4)的合成
向2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-N-(2-(2-羟基乙氧基)乙基)乙酰胺(400mg，956.02μmol)在DCM(15mL)中的溶液中添加TosCl(328.07mg，1.72mmol)和TEA(290.22mg，2.87mmol，399.20μL)，并且将混合物在15℃搅拌16小时。LCMS显示仍然存在15％的反应物，并且检测到35％的期望质量。添加另外的TosCl(273.39mg，1.43mmol)和TEA(193.48mg，1.91mmol，266.13μL)，并且将所得混合物在15℃搅拌另外3小时。LCMS显示仍然存在8％的反应物，并且检测到38％的期望质量。将反应混合物在真空中浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(20g
Figure BPA0000310075650003272
硅胶快速柱，洗脱液为25～85％乙酸乙酯/石油醚梯度@100mL/min)纯化，得到标题化合物(410mg，716.05μmol，74.90％收率，N/A纯度)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝573.0。
步骤3：((3S)-1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉- 4-基)氨基)乙酰胺基)乙氧基)乙基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(6)的合成
将4-甲基苯磺酸2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙酰胺基)乙氧基)乙酯(410mg，716.05μmol)、(S)-吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯(266.73mg，1.43mmol)、NaI(10.73mg，71.60μmol)和DIEA(277.63mg，2.15mmol，374.17μL)在DMF(6mL)中的混合物在60℃搅拌16小时。LCMS显示反应物完全消耗，并且检测到83％的期望质量。将反应混合物用H2O(50mL)稀释并且用盐水(50mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(80mL x 5)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且在减压下浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(12g
Figure BPA0000310075650003273
硅胶快速柱，洗脱液为0～5％MeOH/乙酸乙酯梯度@60mL/min)纯化，得到标题化合物(160mg，272.74μmol，38.09％收率)，为黄色固体。MS(M+H)+＝587.2。
步骤4：N-(2-(2-((S)-3-氨基吡咯烷-1-基)乙氧基)乙基)-2-((2-(2，6-二氧代哌 啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙酰胺(7)的合成
向((3S)-1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙酰胺基)乙氧基)乙基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(160mg，272.74μmol)在二噁烷(5mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，10mL)，将混合物在15℃搅拌2小时。LCMS显示反应物完全消耗，并且检测到100％的期望质量。将反应混合物在真空中浓缩，得到标题化合物(220mg，粗制，HCl)，为黄色固体，将其直接用于下一个步骤。MS(M+H)+＝487.2。
步骤5：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003281
-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3- 二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙酰胺基)乙氧基)乙基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲 酰胺(化合物112)的合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003282
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(120mg，257.83μmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加HATU(147.05mg，386.74μmol)和DIEA(133.29mg，1.03mmol，179.64μL)，并且将所得混合物在15℃搅拌15分钟，然后添加N-(2-(2-((S)-3-氨基吡咯烷-1-基)乙氧基)乙基)-2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙酰胺(215.74mg，412.53μmol，HCl盐)，并且将所得混合物在15℃搅拌12小时。LCMS显示反应物完全消耗，并且检测到79％的期望质量。向混合物中添加CH3COOH以调节pH＜7。将所得混合物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：37％-67％，10分钟)纯化，随后通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18150*25mm*10um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：15％-55％，13分钟)纯化，得到标题化合物(58.2mg，60.45μmol，23.44％收率，97％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝934.2。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.09(s，1H)，8.29(s，1H)，8.23(d，J＝13.4Hz，1H)，8.14(t，J＝5.5Hz，1H)，8.09-7.94(m，2H)，7.57(dd，J1＝7.5，J2＝8.2Hz，1H)，7.19(d，J＝6.7Hz，1H)，7.05(d，J＝7.0Hz，1H)，6.93(t，J＝5.5Hz，1H)，6.84(d，J＝8.6Hz，1H)，5.07(dd，J1＝5.4，J2＝12.9Hz，1H)，4.89-4.74(m，1H)，4.39-4.27(m，1H)，4.07(t，J＝13.9Hz，2H)，4.01-3.78(m，5H)，3.48(t，J＝5.9Hz，2H)，3.45-3.39(m，2H)，3.33(s，3H)，3.30-3.25(m，2H)，2.95-2.83(m，1H)，2.79(dd，J1＝7.3，J2＝9.3Hz，1H)，2.69-2.60(m，2H)，2.59-2.52(m，4H)，2.45-2.40(m，1H)，2.17-2.08(m，1H)，2.07-1.90(m，3H)，1.78-1.52(m，7H)。
实施例113. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003292
-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(3-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙酰胺基)丙酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003291
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(40.8mg，43.38μmol，13.61％收率，97.6％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝918.2
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.09(s，1H)，8.34-8.20(m，3H)，8.16-8.07(m，1H)，8.04(s，1H)，7.63-7.47(m，1H)，7.25-7.15(m，1H)，7.11-7.03(m，1H)，6.94(t，J＝5.5Hz，1H)，6.89-6.82(m，1H)，5.11-5.03(m，1H)，4.87-4.76(m，1H)，4.52-4.35(m，1H)，4.07(t，J＝13.9Hz，2H)，3.91(d，J＝2.0Hz，5H)，3.75-3.45(m，3H)，3.33-3.21(m，5H)，2.94-2.83(m，1H)，2.63-2.54(m，2H)，2.45-2.37(m，2H)，2.26-1.84(m，6H)，1.72(d，J＝0.9Hz，2H)，1.51-1.68(m，4H)
实施例114. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003301
-2-基)氨基)-N-(1-(3-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)丙酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003311
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(71mg，76.89μmol，22.37％收率，98％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝905.0
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.08(br s，1H)，8.30(s，1H)，8.28-8.19(m，2H)，8.03(s，1H)，7.62-7.53(m，1H)，7.22-7.16(m，1H)，7.13(dd，J＝6.8，8.4Hz，1H)，7.02(t，J＝6.8Hz，1H)，6.62-6.54(m，1H)，5.10-5.02(m，1H)，4.87-4.77(m，1H)，4.53-4.36(m，1H)，4.07(t，J＝13.8Hz，2H)，3.91(d，J＝2.1Hz，3H)，3.72-3.65(m，2H)，3.64-3.56(m，3H)，3.54-3.36(m，6H)，3.34-3.32(m，3H)，3.27-3.21(m，1H)，2.96-2.80(m，1H)，2.62-2.53(m，2H)，2.10-1.86(m，5H)，1.74-1.57(m，6H)
实施例115. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003322
-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003321
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(53.2mg，55.20μmol，21.41％收率，97％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝935.5
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.07(br s，1H)，8.35-8.17(m，3H)，8.03(br s，1H)，7.62-7.51(m，1H)，7.25-7.08(m，2H)，7.06-6.97(m，1H)，6.60(q，J＝5.6Hz，1H)，5.04(brdd，J＝5.1，12.5Hz，1H)，4.89-4.75(m，1H)，4.55-4.31(m，1H)，4.16-4.00(m，4H)，3.91(d，J＝4.0Hz，3H)，3.75-3.56(m，7H)，3.55-3.36(m，5H)，2.96-2.79(m，1H)，2.65-2.51(m，5H)，2.19-1.86(m，5H)，1.78-1.52(m，6H)。
实施例116. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003332
-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(14-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-3，6，9，12-四氧杂十四烷酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003331
标题化合物(70.7mg，67.04μmol，31.20％收率，97％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝1023.4。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.09(s，1H)，8.35-8.18(m，3H)，8.09(s，1H)，7.62-7.53(m，1H)，7.20(d，J＝6.7Hz，1H)，7.14(dd，J1＝3.7，J2＝8.6Hz，1H)，7.04(dd，J1＝1.8，J2＝6.8Hz，1H)，6.60(br s，1H)，5.06(br dd，J1＝5.3，J2＝13.0Hz，1H)，4.88-4.78(m，1H)，4.50-4.39(m，1H)，4.13-4.04(m，4H)，3.92(s，3H)，3.75-3.70(m，1H)，3.62(br d，J＝4.8Hz，2H)，3.57-3.50(m，12H)，3.49-3.44(m，4H)，3.34(br s，3H)，2.91-2.87(m，1H)，2.59-2.51(m，2H)，2.21-2.13(m，1H)，2.08-1.88(m，5H)，1.78-1.69(m，2H)，1.68-1.55(m，4H)。
实施例117. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003342
-2-基)氨基)-N-(1-(5-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)戊酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003341
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(76mg，79.52μmol，19.00％收率，93％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝889.3
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.08(s，1H)，8.33-8.21(m，3H)，8.04(s，1H)，7.64-7.51(m，1H)，7.19(d，J＝6.6Hz，1H)，7.10(dd，J＝3.3，8.6Hz，1H)，7.01(dd，J＝2.6，7.0Hz，1H)，，6.62-6.50(m，1H)，5.13-4.97(m，1H)，4.89-4.73(m，1H)，4.56-4.32(m，1H)，4.07(t，J＝13.8Hz，2H)，3.91(s，3H)，3.87-3.73(m，1H)，3.64-3.53(m，1H)，3.52-3.42(m，1H)，3.38-3.36(m，1H)，3.29-3.23(m，5H)，2.94-2.82(m，1H)，2.62-2.51(m，2H)，2.35-2.24(m，2H)，2.18-1.89(m，5H)，1.76-1.56(m，10H)。
实施例118. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003352
-2-基)氨基)-N-(1-(6-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)己酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003351
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(143.1mg，152.15μmol，37.43％收率，96％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝903.6
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.10(s，1H)，8.35-8.20(m，3H)，8.05(s，1H)，7.61-7.53(m，1H)，7.19(d，J＝6.6Hz，1H)，7.08(dd，J＝8.7，5.9Hz，1H)，7.01(dd，J＝7.1，4.5Hz，1H)，6.58-6.50(m，1H)，5.10-4.99(m，1H)，4.89-4.76(m，1H)，4.52-4.32(m，0H)，4.07(t，J＝13.8Hz，2H)，3.91(d，J＝1.4Hz，3H)，3.80-3.53(m，1H)，3.53-3.40(m，1H)，3.31(s，3H)，3.29-3.28(m，1H)，2.96-2.82(m，0H)，2.71-2.52(m，1H)，2.29-2.18(m，2H)，2.11-1.85(m，4H)，1.78-1.68(m，2H)，1.67-1.49(m，8H)，1.41-1.30(m，2H)。
实施例119. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003361
-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(6-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)己酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003371
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(64mg，68.76μmol，26.67％收率，97％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝903.1
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.09(s，1H)，8.32-8.20(m，3H)，8.04(s，1H)，7.63-7.50(m，1H)，7.19(d，J＝6.8Hz，1H)，7.08(dd，J＝5.8，8.6Hz，1H)，7.01(dd，J＝4.4，7.0Hz，1H)，6.53(q，J＝5.8Hz，1H)，5.08-5.01(m，1H)，4.86-4.76(m，1H)，4.52-4.35(m，1H)，4.07(t，J＝13.8Hz，2H)，3.91(s，3H)，3.79-3.36(m，3H)，3.31-3.22(m，3H)，2.94-2.82(m，1H)，2.63-2.51(m，4H)，2.30-1.77(m，8H)，1.76-1.68(m，2H)，1.65-1.50(m，8H)，1.43-1.31(m，2H)
实施例120. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003382
-2-基)氨基)-N-((3R)-1-(6-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)己酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003381
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(39.1mg，40.71μmol，12.63％收率，94％纯度)，为浅黄色固体。MS(M+H)+＝903.7
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.07(br s，1H)，8.31-8.23(m，3H)，8.04(s，1H)，7.61-7.54(m，1H)，7.20(d，J＝6.6Hz，1H)，7.09(dd，J＝5.8，8.6Hz，1H)，7.01(dd，J＝4.4，7.0Hz，1H)，6.58-6.50(m，1H)，5.03(dd，J＝5.1，13.0Hz，1H)，4.87-4.76(m，1H)，4.52-4.36(m，1H)，4.08(t，J＝13.9Hz，2H)，3.92(s，3H)，3.77-3.51(m，2H)，3.49-3.41(m，1H)，3.34(s，3H)，2.93-2.78(m，1H)，2.65-2.55(m，4H)，2.29-1.91(m，8H)，1.80-1.70(m，2H)，1.69-1.54(m，8H)，1.42-1.33(m，2H)
实施例121. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003391
-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(2-((2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)氨基)-2-氧代乙基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003401
步骤1-4在以上反应方案中描述。
步骤5：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003402
-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(2-((2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3- 二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)氨基)-2-氧代乙基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲 氧基苯甲酰胺(化合物121)的合成
向4-[(9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-8H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003403
-2-基)氨基]-2-氟-5-甲氧基-苯甲酸(177.99mg，382.42μmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加HATU(290.82mg，764.85μmol)和DIPEA(197.70mg，1.53mmol，266.44μL)，将混合物在25℃搅拌10分钟。然后添加2-((S)-3-氨基吡咯烷-1-基)-N-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)乙酰胺(200mg，382.42μmol，HCl盐)，并且将所得混合物在25℃搅拌另外1小时。LCMS显示具有期望质量的峰(55％)。将混合物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：38％-68％，10分钟)和制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5um；流动相：[水(10mMNH4HCO3)-ACN]；B％：40％-70％，10分钟)纯化，得到标题化合物(15.8mg，15.72μmol，36.70％收率，92.920％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝934.3
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.17-10.96(m，1H)，8.29(s，1H)，8.22(d，J＝13.4Hz，1H)，8.14(br d，J＝4.3Hz，1H)，8.00(s，1H)，7.81(t，J＝5.9Hz，1H)，7.58-7.48(m，1H)，7.19(d，J＝6.6Hz，1H)，7.10(d，J＝8.4Hz，1H)，7.00(d，J＝7.1Hz，1H)，6.62-6.50(m，1H)，5.09-4.96(m，1H)，4.85-4.77(m，1H)，4.52-4.33(m，1H)，4.12-4.03(m，2H)，3.90(s，3H)，3.61-3.56(m，2H)，3.50-3.41(m，4H)，3.30(s，3H)，3.12-2.99(m，2H)，2.94-2.68(m，4H)，2.47-2.43(m，5H)，2.22-2.11(m，1H)，2.04-1.93(m，3H)，1.71(br d，J＝6.8Hz，3H)，1.65-1.54(m，4H)。
实施例122. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003411
-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(2-((3-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丙基)氨基)-2-氧代乙基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003421
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(48mg，52.57μmol，27.83％收率，99％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝904.9
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.14(br s，1H)，8.33(d，J＝3.9Hz，1H)，8.29-8.22(m，2H)，8.13-8.00(m，2H)，7.60(t，J＝7.8Hz，1H)，7.24(dd，J＝.9，6.7Hz，1H)，7.10(dd，J＝2.3，8.6Hz，1H)，7.02(dd，J＝3.9，7.0Hz，1H)，6.79-6.71(m，1H)，5.15-5.05(m，1H)，4.91-4.76(m，1H)，4.55-4.44(m，1H)，4.13(t，J＝14.0Hz，2H)，3.96(s，3H)，3.39-3.37(m，3H)，3.34-3.26(m，3H)，3.25-3.16(m，2H)，3.10-3.03(m，1H)，3.00-2.90(m，1H)，2.88-2.80(m，2H)，2.69-2.62(m，3H)，2.30-2.21(m，1H)，2.10-1.99(m，3H)，1.83-1.62(m，10H)。
实施例123. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003433
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)氮杂环丁烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003431
步骤1：3-(4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并 [4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003434
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁 酯(2)的合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003435
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(300mg，644.57μmol)和3-氨基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(111.01mg，644.57μmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加HATU(490.17mg，1.29mmol)和DIPEA(333.22mg，2.58mmol，449.08μL)，并且将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示检测到76％的期望质量。将反应混合物用H2O(20mL)稀释并且用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(80mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤。将滤液在减压下浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(Biotage，20g
Figure BPA0000310075650003432
硅胶快速柱，洗脱液为30～100％乙酸乙酯/石油醚梯度@60mL/min)纯化，得到标题化合物(360mg，580.99μmol，90.14％收率)，为无色油状物。MS(M+H)+＝620.5
步骤2：N-(氮杂环丁烷-3-基)-4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8， 9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003441
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(3)的合 成
向3-(4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003442
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(180mg，290.49μmol)在DCM(2mL)中的溶液中添加TFA(1.54g，13.51mmol，1mL)，并且将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示具有期望质量的峰(97％)。将混合物浓缩。将残余物溶解在二噁烷(2mL)中并且添加碱性树脂(200mg)，将悬浮液在20℃搅拌1小时，然后过滤。将滤液直接用于下一个步骤。MS(M+H)+＝520.3
步骤3：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003443
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代 异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)氮杂环丁烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺 (化合物123)的合成
向N-(氮杂环丁烷-3-基)-4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003444
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(150mg，288.73umol)和4-甲基苯磺酸2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙酯(161.57mg，288.73umol)在二噁烷(3mL)中的溶液中添加NaI(4.33mg，28.87umol)和DIPEA(111.95mg，866.19umol，150.87uL)，并且将所得混合物在60℃搅拌12小时。TLC(石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1)显示大部分反应物消耗，并且形成新斑点。将混合物倒入水(20mL)中并且用EtOAc(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤。将滤液浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Waters XbridgeC18 150*50mm*10um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：35％-65％，分钟)纯化，得到标题化合物(7.8mg，7.81umol，3.54％收率，90.8％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝907.2
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.23-10.96(m，1H)，8.41-8.36(m，1H)，8.32-8.23(m，2H)，8.13-7.95(m，1H)，7.60-7.55(m，1H)，7.21-7.13(m，2H)，7.03(d，J＝7.0Hz，1H)，6.66-6.56(m，1H)，5.08-5.02(m，1H)，4.87-4.79(m，1H)，4.45-4.38(m，1H)，4.11-4.04(m，2H)，3.91(s，3H)，3.66-3.59(m，3H)，3.57-3.46(m，10H)，3.38-3.37(m，2H)，3.34-3.33(m，3H)，3.02-2.95(m，2H)，2.92-2.83(m，1H)，2.09-1.83(m，4H)，1.74-1.57(m，6H)。
实施例124. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003452
-2-基)氨基)-N-((1-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)吡咯烷-2-基)甲基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003451
步骤1：N-[[1-[2-[2-[[2-(2，6-二氧代-3-哌啶基)-1，3-二氧代-异吲哚啉-4-基] 氨基]乙氧基]乙基]吡咯烷-2-基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(3)的合成
向4-甲基苯磺酸2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙酯(400mg，775.89μmol)和(吡咯烷-2-基甲基)氨基甲酸叔丁酯(155.39mg，775.89μmol)在二噁烷(5mL)中的溶液中添加NaI(11.63mg，77.59μmol)和DIEA(200.56mg，1.55mmol，270.29μL)，将混合物在80℃加热12小时。LCMS显示检测到期望质量。将混合物在真空中浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(Biotage，12g
Figure BPA0000310075650003461
硅胶快速柱，洗脱液为30～100％乙酸乙酯/石油醚梯度@60mL/min)纯化，得到标题化合物(337mg，607.53μmol，78.30％收率，98％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝544.2
步骤2：4-((2-(2-(2-(氨基甲基)吡咯烷-1-基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2，6-二氧 代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(4)的合成
向((1-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)吡咯烷-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(337mg，619.93μmol)在二噁烷(4mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，2mL)，并且将混合物在25℃搅拌30分钟。LCMS显示检测到期望质量。将混合物在真空中浓缩，得到标题化合物(450mg，粗制，HCl盐)，为黄色固体。Ms(M+H)+＝444.1
步骤3：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003462
-2-基)氨基)-N-((1-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异 吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)吡咯烷-2-基)甲基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物 124)的合成
向4-((2-(2-(2-(氨基甲基)吡咯烷-1-基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(150mg，312.53μmol，HCl盐)和4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003463
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(121.22mg，260.44μmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加HATU(198.05mg，520.88μmol)和DIEA(100.98mg，781.32μmol，136.09μL)，将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示检测到期望质量。将反应混合物在真空中浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex lunaC18 150*40mm*15um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：20％-50％，10分钟)纯化，得到标题化合物(128.4mg，138.93μmol，53.35％收率，96.4％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝891.3
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.09(s，1H)，8.29(s，1H)，8.25(d，J＝13.9Hz，1H)，8.16-8.03(m，2H)，7.54(t，J＝7.8Hz，1H)，7.29(d，J＝6.8Hz，1H)，7.15-7.10(m，1H)，7.02-6.98(m，1H)，6.64-6.56(m，1H)，5.06-5.00(m，1H)，4.84-4.76(m，1H)，4.08(t，J＝13.8Hz，2H)，3.89(d，J＝1.3Hz，3H)，3.81-3.61(m，6H)，3.58-3.47(m，6H)，3.34(s，3H)，2.95-2.81(m，2H)，2.57(d，J＝18.7Hz，2H)，2.06-1.92(m，5H)，1.74-1.72(m，4H)，1.67-1.59(m，4H)。
实施例125. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003472
-2-基)氨基)-N-((1-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)哌啶-3-基)甲基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003471
步骤1：((1-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨 基)乙氧基)乙基)哌啶-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(2)的合成
向4-甲基苯磺酸2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙酯(400mg，775.89μmol)和(哌啶-3-基甲基)氨基甲酸叔丁酯(332.55mg，1.55mmol)在二噁烷(5mL)中的溶液中添加NaI(11.63mg，77.59μmol)和DIPEA(200.56mg，1.55mmol，270.29μL)，将混合物在80℃加热12小时。LCMS显示检测到期望质量。将混合物在真空中浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(Biotage，12g
Figure BPA0000310075650003481
硅胶快速柱，洗脱液为10～20％EtOAc/MeOH梯度@60mL/min)纯化，得到标题化合物(613mg，粗制)，为黄色固体。MS(M+H)+＝558.2
步骤2：4-((2-(2-(3-(氨基甲基)哌啶-1-基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2，6-二氧代 哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(3)的合成
将((1-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)哌啶-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(613mg，1.10mmol)和HCl/二噁烷(4M，4mL)在二噁烷(2mL)中的溶液在25℃搅拌12小时。LCMS显示检测到期望质量。将混合物在真空中浓缩，得到标题化合物(540mg，粗制，HCl盐)，为黄色固体。MS(M+H)+＝458.1
步骤3：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003482
-2-基)氨基)-N-((1-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异 吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)哌啶-3-基)甲基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物125) (4)的合成
向4-((2-(2-(3-(氨基甲基)哌啶-1-基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(150mg，303.65μmol，HCl盐)和4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003483
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(117.77mg，253.05μmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加HATU(192.43mg，506.09μmol)和DIEA(98.11mg，759.14μmol，132.22μL)，将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示检测到期望质量。将混合物在真空中浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Shim-pack C18 150*25*10um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：27％-51％，12分钟)纯化。获得化合物4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003484
-2-基)氨基)-N-((1-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)哌啶-3-基)甲基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(82.6mg，88.54μmol，34.99％收率，97％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝905.3
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.09(s，1H)，8.29(s，1H)，8.23(d，J＝13.6Hz，1H)，8.17-8.09(m，1H)，8.03(s，1H)，7.55(t，J＝7.6Hz，1H)，7.24(d，J＝6.8Hz，1H)，7.10(d，J＝8.5Hz，1H)，7.01(d，J＝6.9Hz，1H)，6.58(t，J＝6.0Hz，1H)，5.12-4.98(m，1H)，4.86-4.75(m，1H)，4.13-4.03(m，2H)，3.90(s，3H)，3.80-3.69(m，2H)，3.63(t，J＝4.5Hz，2H)，3.50-3.35(m，12H)，2.98-2.81(m，2H)，2.63-2.54(m，3H)，2.08-1.87(m，4H)，1.85-1.48(m，9H)。
实施例126. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003492
-2-基)氨基)-N-((1-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)哌啶-2-基)甲基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003491
步骤1：((1-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨 基)乙氧基)乙基)哌啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(2)的合成
向4-甲基苯磺酸2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙酯(400mg，775.89μmol)、(哌啶-2-基甲基)氨基甲酸叔丁酯(166.28mg，775.89μmol)在二噁烷(5mL)中的溶液中添加NaI(11.63mg，77.59μmol)和DIPEA(200.56mg，1.55mmol，270.29μL)，将混合物在80℃加热12小时。LCMS显示仍然存在反应物，添加另外的(哌啶-2-基甲基)氨基甲酸叔丁酯(332.56mg，1.55mmol)，并且将所得混合物在80℃加热另外12小时。LCMS显示检测到期望质量。将混合物在真空中浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(Biotage，12g
Figure BPA0000310075650003501
硅胶快速柱，洗脱液为EtOAc/MeOH＝10∶1梯度@60mL/min)纯化，得到标题化合物(268mg，478.68μmol，61.69％收率，99.6％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝558.1
步骤2：4-((2-(2-(2-(氨基甲基)哌啶-1-基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2，6-二氧代 哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(3)的合成
将((1-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)哌啶-2-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(268mg，480.60μmol)和HCl/二噁烷(4M，2mL)在二噁烷(2mL)中的溶液在25℃搅拌12小时。LCMS显示检测到期望质量。将混合物在真空中浓缩，得到标题化合物(235mg，粗制，HCl盐)，为黄色固体。MS(M+H)+＝458.2
步骤3：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003502
-2-基)氨基)-N-((1-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异 吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)哌啶-2-基)甲基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物126) (4)的合成
向4-((2-(2-(2-(氨基甲基)哌啶-1-基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(150mg，303.65μmol，HCl盐)和4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003503
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(117.77mg，253.05μmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加HATU(192.43mg，506.09μmol)和DIEA(98.11mg，759.14μmol，132.23μL)，将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示检测到期望质量。将混合物在真空中浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Unisil 3-100 C18μLtra150*50mm*3um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：30％-50％，10分钟)纯化，并且将洗脱液冷冻干燥。将残余物用H2O(3mL)稀释，然后用NaHCO3(2mL)碱化，然后用EtOAc(15mL×2)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤。将滤液在减压下浓缩，得到标题化合物(90.9mg，98.34μmol，90.81％收率，97.9％纯度)，为黄色固体。Ms(M+H)+＝905.4
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.21-11.01(m，1H)，8.29(s，1H)，8.24-8.13(m，1H)，8.01(s，1H)，7.73(s，1H)，7.52-7.42(m，1H)，7.25(d，J＝7.0Hz，1H)，7.08-7.02(m，1H)，7.01-6.89(m，1H)，6.63-6.48(m，1H)，5.07-4.99(m，1H)，4.84-4.75(m，1H)，4.12-4.03(m，2H)，3.88(s，3H)，3.61-3.56(m，3H)，3.54-3.48(m，2H)，3.30-3.50(m，4H)，2.96-2.80(m，4H)，2.31-2.25(m，1H)，2.05-1.89(m，4H)，1.75-1.43(m，11H)，1.40-1.18(m，5H)。
实施例127. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003511
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺基)乙氧基)乙基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003521
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(10.1mg，10.06umol，6.54％收率，93.1％纯度)，为白色固体。MS(M+H)+＝935.3
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.13(s，1H)，9.74-9.45(m，1H)，8.32-8.25(m，2H)，8.08(s，1H)，8.00(s，1H)，7.79(s，1H)，7.53-7.46(m，1H)，7.43-7.36(m，1H)，7.25(d，J＝2.4Hz，1H)，5.15-5.09(m，1H)，4.88-4.76(m，3H)，4.67-4.54(m，1H)，4.09(t，J＝13.9Hz，2H)，3.91(s，3H)，3.72(s，2H)，3.56(d，J＝5.4Hz，2H)，3.50-3.30(m，3H)，2.95-2.86(m，1H)，2.65-2.53(m，10H)，2.14-1.89(m，5H)，1.77-1.70(m，2H)，1.68-1.58(m，4H)。
实施例128. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003532
-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003531
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(13.2mg，13.69μmol，9.42％收率，96％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝926.4
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝8.48(d，J＝8.5Hz，1H)，8.37(br d，J＝10.4Hz，1H)，8.06(s，1H)，7.77(s，1H)，7.64(dd，J＝7.4，8.3Hz，1H)，7.50-7.41(m，2H)，7.29(br d，J＝1.8Hz，1H)，7.18(d，J＝8.3Hz，1H)，6.14(br d，J＝8.0Hz，1H)，4.97(dd，J＝5.3，12.2Hz，1H)，4.82(quin，J＝8.4Hz，1H)，4.62(br d，J＝13.8Hz，1H)，4.33-4.15(m，1H)，3.99(s，3H)，3.94-3.86(m，3H)，3.55(br s，4H)，3.41(s，3H)，3.26-3.18(m，2H)，3.14(br s，3H)，2.97-2.86(m，2H)，2.84-2.77(m，3H)，2.26-1.97(m，6H)，1.87-1.30(m，10H)。
实施例129. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003542
-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003541
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(16.8mg，17.06μmol，11.87％收率，97％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝896.1
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝9.45(br d，J＝7.0Hz，1H)，8.06(s，1H)，7.77-7.71(m，2H)，7.70-7.64(m，3H)，7.60(dd，J＝7.3，8.3Hz，1H)，7.41(d，J＝7.0Hz，1H)，7.17(d，J＝8.4Hz，1H)，6.14(br dd，J＝7.8，16.3Hz，1H)，4.97(dd，J＝5.4，12.3Hz，1H)，4.83(quin，J＝8.3Hz，1H)，4.63(br d，J＝13.0Hz，1H)，4.29-4.15(m，1H)，3.89(br t，J＝13.3Hz，3H)，3.40(s，3H)，3.37(br d，J＝4.6Hz，3H)，3.21(br t，J＝12.4Hz，1H)，2.93-2.80(m，4H)，2.72(br s，4H)，2.64-2.55(m，2H)，2.27-1.95(m，6H)，1.80-1.39(m，10H)。
实施例130. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003552
-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(2-(4-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)乙酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003551
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(22.8mg，23.90μmol，11.12％收率，96％纯度)，为浅黄色固体。MS(M+H)+＝916.6
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.08(br s，1H)，8.32-8.23(m，3H)，8.05(s，1H)，7.72-7.64(m，1H)，7.37-7.27(m，2H)，7.21(d，J＝6.7Hz，1H)，5.11-5.08(m，1H)，4.86-4.78(mz，1H)，4.53-4.39(m，1H)，4.08(t，J＝13.9Hz，2H)，3.91(d，J＝7.3Hz，3H)，3.85-3.60(m，2H)，3.57-3.43(m，2H)，3.32(s，3H)，3.28-3.26(m，2H)，3.21-3.15(m，2H)，2.93-2.82(m，1H)，2.70-2.59(m，6H)，2.23-2.03(m，2H)，2.02-1.82(m，4H)，1.79-1.54(m，7H)。
实施例131. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003562
-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(3-(4-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003561
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(70.4mg，69.65μmol，21.61％收率，92％纯度)，为浅黄色固体。MS(M+H)+＝930.6
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.08(br s，1H)，8.32-8.22(m，3H)，8.04(s，1H)，7.72-7.64(m，1H)，7.37-7.27(m，2H)，7.21(d，J＝6.7Hz，1H)，5.16-5.05(m，1H)，4.87-4.78(m，1H)，4.54-4.40(m，1H)，4.08(t，J＝13.9Hz，2H)，3.92(d，J＝2.9Hz，3H)，3.83-3.56(m，2H)，3.55-3.40(m，2H)，3.34(s，3H)，3.29-3.27(m，4H)，2.94-2.82(m，1H)，2.64-2.56(m，8H)，2.25-2.03(m，2H)，2.03-1.84(m，4H)，1.78-1.41(m，7H)。
实施例132. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003572
-2-基)氨基)-N-((3R)-1-(3-(4-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003571
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(94.1mg，95.42μmol，33.02％收率，94.3％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝930.2
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.08(s，1H)，8.31-8.22(m，3H)，8.04(s，1H)，7.72-7.64(m，1H)，7.37-7.26(m，2H)，7.20(d，J＝6.6Hz，1H)，5.13-5.05(m，1H)，4.86-4.75(m，1H)，4.55-4.37(m，1H)，4.07(t，J＝14.0Hz，2H)，3.91(d，J＝2.8Hz，3H)，3.53-3.35(m，2H)，3.33(s，3H)，3.28(d，J＝5.1Hz，2H)，2.94-2.81(m，1H)，2.65-2.55(m，8H)，2.69-2.52(m，4H)，2.50-2.32(m，2H)，2.25-2.14(m，1H)，2.04-1.92(m，4H)，1.76-1.69(m，2H)，1.66-1.57(m，4H)。
实施例133. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003581
-2-基)氨基)-N-((3R)-1-(4-(4-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丁酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003591
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(37.2mg，37.44μmol，11.62％收率，95％纯度)，为浅黄色固体。MS(M+H)+＝944.8
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.08(br s，1H)，8.34-8.23(m，3H)，8.04(s，1H)，7.74-7.65(m，1H)，7.38-7.29(m，2H)，7.20(d，J＝6.5Hz，1H)，5.07(dd，J＝5.5，12.6Hz，1H)，4.89-4.76(m，1H)，4.52-4.36(m，1H)，4.08(t，J＝13.9Hz，2H)，3.92(s，3H)，3.83-3.53(m，2H)，3.52-3.38(m，2H)，3.34(s，3H)，3.29(s，3H)，2.92-2.81(m，1H)，2.65-2.55(m，4H)，2.40-2.25(m，5H)，2.21-2.09(m，1H)，2.08-1.82(m，5H)，1.81-1.54(m，9H)。
实施例134. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003602
-2-基)氨基)-N-((3R)-1-(5-(4-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)戊酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003601
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(13.2mg，13.50umol，5.91％收率，98％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝958.4
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.07(s，1H)，8.30-8.21(m，3H)，8.05(s，1H)，7.81-7.72(m，1H)，7.48-7.38(m，2H)，7.22-7.17(m，1H)，5.01-5.11(m，1H)，4.87-4.7(m，1H)，4.364.51m，1H)，4.07(br t，J＝13.8Hz，2H)，3.91(s，3H)，3.8-3.7(m，1H)，3.67-3.52(m，2H)，3.55-3.41(m，2H)，3.45-3.33(m，12H)，2.95-2.81(m，1H)，2.68-2.50(m，2H)，2.37-2.28(m，2H)，2.13-1.88(m，5H)，1.74-1.48(m，10H)。
实施例135. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003612
-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(2-(4-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003611
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(58.0mg，61.42μmol，19.06％收率，97％纯度)，为浅黄色固体。MS(M+H)+＝916.6
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.07(br s，1H)，8.32-8.19(m，3H)，8.04(d，J＝11.7Hz，1H)，7.76-7.61(m，1H)，7.38-7.29(m，1H)，7.28-7.13(m，2H)，5.09-5.05(m，1H)，4.87-4.74(m，1H)，4.54-4.39(m，1H)，4.08(t，J＝13.9Hz，2H)，3.95-3.87(m，3H)，3.85-3.60(m，2H)，3.60-3.43(m，4H)，3.41(s，3H)，3.24-3.13(m，2H)，2.94-2.83(m，1H)，2.66-2.54(m，7H)，2.23-1.75(m，6H)，1.74-1.54(m，6H)。
实施例136. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003622
-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(3-(4-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)丙酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003621
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(77.2mg，82.19μmol，25.45％收率，99％纯度)，为浅黄色固体。MS(M+H)+＝930.7
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.08(s，1H)，8.32-8.20(m，3H)，8.05-8.00(m，1H)，7.65(dd，J＝8.5，14.8Hz，1H)，7.35-7.19(m，3H)，5.11-5.03(m，1H)，4.86-4.76(m，1H)，4.51-4.38(m，1H)，4.08(t，J＝13.8Hz，2H)，3.91(d，J＝5.9Hz，3H)，3.82-3.57(m，2H)，3.54-3.44(m，2H)，3.41-3.37(m，3H)，2.94-2.85(m，1H)，2.65-2.52(m，8H)，2.49-2.39(m，4H)，2.22-2.03(m，2H)，2.02-1.87(m，4H)，1.81-1.53(m，7H)
实施例137. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003632
-2-基)氨基)-N-((3R)-1-(3-(4-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)丙酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003631
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(21.5mg，20.86μmol，29.53％收率，90.24％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝930.4
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.07(s，1H)，8.32-8.18(m，3H)，8.11-7.95(m，1H)，7.73-7.58(m，1H)，7.37-7.15(m，3H)，5.11-5.02(m，1H)，4.89-4.72(m，1H)，4.52-4.37(m，1H)，4.14-4.01(m，2H)，3.94-3.86(m，3H)，3.83-3.70(m，1H)，3.67-3.48(m，3H)，3.46-3.35(m，3H)，3.33(s，3H)，2.93-2.83(m，1H)，2.64-2.53(m，11H)，2.24-1.92(m，5H)，1.76-1.68(m，2H)，1.66-1.52(m，4H)。
实施例138. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003641
-2-基)氨基)-N-((3R)-1-(4-(4-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)丁酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003651
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(51.0mg，52.95μmol，16.43％收率，98％纯度)，为浅黄色固体。MS(M+H)+＝944.7
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.08(s，1H)，8.33-8.23(m，3H)，8.04(s，1H)，7.66(dd，J＝4.3，8.5Hz，1H)，7.36-7.30(m，1H)，7.26-7.18(m，2H)，5.07(dd，J＝5.4，13.0Hz，1H)，4.82(t，J＝7.7Hz，1H)，4.53-4.39(m，1H)，4.08(t，J＝13.9Hz，2H)，3.93-3.91(m，3H)，3.82-3.57(m，2H)，3.52-3.45(m，5H)，3.34(s，3H)，2.94-2.83(m，1H)，2.71-2.57(m，4H)，2.39-2.23(m，5H)，2.21-1.89(m，6H)，1.79-1.58(m，9H)。
实施例139. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003652
-2-基)氨基)-N-((3R)-1-(5-(4-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)戊酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003661
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(13.2mg，13.50umol，5.91％收率，98％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝958.4
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.07(s，1H)，8.36-8.19(m，3H)，8.03(d，J＝7.3Hz，1H)，7.70-7.60(m，1H)，7.38-7.14(m，3H)，5.06(d，J＝12.7Hz，1H)，4.87-4.76(m，1H)，4.44(dd，J＝33.7，7.1Hz，1H)，4.07(t，J＝13.9Hz，2H)，3.91(d，J＝5.2Hz，3H)，3.82-3.45(m，3H)，3.46-3.35(m，6H)，2.95-2.80(m，1H)，2.69-2.53(m，4H)，2.47-2.41(m，3H)，2.38-2.21(m，5H)，2.20-1.86(m，5H)，1.79-1.69(m，2H)，1.67-1.57(m，4H)，1.57-1.42(m，4H)。
实施例140. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003672
-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(4-(4-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003671
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(94.1mg，95.28μmol，36.96％收率，97％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝958.0
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.09(s，1H)，8.34-8.23(m，3H)，8.05(s，1H)，7.76-7.68(m，1H)，7.42-7.33(m，2H)，7.21(dd，J＝3.2，6.6Hz，1H)，5.11(dd，J＝5.4，12.8Hz，1H)，4.87-4.77(m，1H)，4.54-4.37(m，1H)，4.07(t，J＝13.8Hz，2H)，3.92(s，3H)，3.89-3.77(m，1H)，3.71-3.51(m，6H)，3.51-3.40(m，3H)，3.33(br s，3H)，3.27-3.24(m，3H)，2.93-2.83(m，1H)，2.63-2.59(m，2H)，2.59-2.53(m，2H)，2.52-2.50(m，1H)，2.14-1.87(m，5H)，1.77-1.68(m，2H)，1.68-1.57(m，4H)
实施例141. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003682
-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(4-(4-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰基)吡咯烷-3-基)-3-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003681
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(20.9mg，21.12μmol，13.59％收率，95％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝940.1。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.02(br s，1H)，8.48-8.35(m，1H)，8.33-8.23(m，2H)，7.98(d，J＝2.4Hz，1H)，7.72(t，J＝7.6Hz，1H)，7.56-7.46(m，2H)，7.37(dd，J＝7.8，16.4Hz，2H)，5.11(dd，J＝5.5，12.8Hz，1H)，4.77(quin，J＝7.9Hz，1H)，4.58-4.38(m，1H)，4.04(br t，J＝14.0Hz，2H)，3.94(s，3H)，3.84(br dd，J＝6.9，10.3Hz，1H)，3.77-3.58(m，5H)，3.58-3.48(m，1H)，3.37-3.46(m，1H)，3.34-3.37(m，5H)，3.22-3.28(m，2H)，2.95-2.82(m，1H)，2.65-2.52(m，6H)，2.27-2.08(m，1H)，2.07-1.87(m，4H)，1.78-1.66(m，2H)，1.66-1.52(m，4H)。
实施例142. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003692
-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(4-(4-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰基)吡咯烷-3-基)苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003691
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(32.2mg，32.38μmol，65.47％收率，91.5％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝910.0
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.08(s，1H)，9.68(d，J＝1.5Hz，1H)，8.38-8.28(m，1H)，8.27(s，1H)，7.79(d，J＝3.5Hz，4H)，7.72(t，J＝7.9Hz，1H)，7.42-7.33(m，2H)，5.13-5.09(m，1H)，4.84-4.74(m，1H)，4.53-4.38(m，1H)，4.04(br t，J＝14.1Hz，2H)，3.88-3.75(m，1H)，3.73-3.39(m，8H)，3.33(br s，3H)，3.29(s，1H)，3.26(br d，J＝4.8Hz，1H)，2.93-2.83(m，1H)，2.79-2.70(m，1H)，2.61(br d，J＝5.0Hz，3H)，2.56(br d，J＝7.3Hz，1H)，2.27-2.14(m，1H)，2.13-1.86(m，6H)，1.76-1.68(m，2H)，1.65-1.56(m，4H)。
实施例143. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003702
-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(5-(4-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003701
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(63.3mg，63.82μmol，24.75％收率，98％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝972.0
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.10(br s，1H)，8.35-8.23(m，3H)，8.04(s，1H)，7.75-7.68(m，1H)，7.41-7.32(m，2H)，7.19(d，J＝6.4Hz，1H)，5.11(dd，J＝5.4，12.8Hz，1H)，4.86-4.77(m，1H)，4.53-4.36(m，1H)，4.12-4.03(m，2H)，3.91(s，3H)，3.69-3.60(m，4H)，3.59-3.42(m，4H)，3.33(s，3H)，3.25-3.17(m，3H)，2.92-2.83(m，1H)，2.62-2.54(m，2H)，2.42-2.37(m，2H)，2.29(q，J＝7.6Hz，2H)，2.22-1.87(m，6H)，1.79-1.68(m，4H)，1.66-1.54(m，4H)
实施例144. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003711
-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(4-(4-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003721
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(31.9mg，30.64μmol，12.96％收率，92％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝958.3。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.03(s，1H)，8.37-8.19(m，3H)，8.04(s，1H)，7.70(d，J＝8.5Hz，1H)，7.34(d，J＝2.3Hz，1H)，7.30-7.15(m，2H)，5.06(dd，J＝12.8，5.4Hz，1H)，4.92-4.75(m，1H)，4.45(dd，J＝37.6，6.3Hz，1H)，4.07(t，J＝13.8Hz，2H)，3.92(s，3H)，3.85-3.50(m，8H)，3.50-3.35(m，5H)，3.29-3.17(m，2H)，2.94-2.80(m，1H)，2.70-2.53(m，6H)，2.26-2.06(m，1H)，2.05-1.87(m，J＝7.0，6.2Hz，4H)，1.80-1.68(m，2H)，1.68-1.53(m，4H)。
实施例145. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003731
-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(4-(4-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰基)吡咯烷-3-基)-3-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003741
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(24.9mg，25.17μmol，14.08％收率，97％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝940.1。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.35-10.65(m，1H)，8.50-8.35(m，1H)，8.34-8.23(m，2H)，7.98(d，J＝2.9Hz，1H)，7.70(d，J＝8.5Hz，1H)，7.59-7.45(m，2H)，7.34(d，J＝1.8Hz，1H)，7.29-7.19(m，1H)，5.07(dd，J＝5.4，12.9Hz，1H)，4.84-4.70(m，1H)，4.57-4.38(m，1H)，4.04(t，J＝14.1Hz，2H)，3.94(s，3H)，3.88-3.80(m，1H)，3.71-3.58(m，5H)，3.58-3.49(m，3H)，3.48-3.44(m，2H)，3.43-3.37(m，1H)，3.36-3.32(m，3H)，2.93-2.81(m，1H)，2.65-2.53(m，6H)，2.27-2.08(m，1H)，2.06-1.87(m，4H)，1.77-1.67(m，2H)，1.66-1.53(m，4H)。
实施例146. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003752
-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(4-(4-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰基)吡咯烷-3-基)苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003751
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(15.4mg，16.42μmol，8.57％收率，94％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝911.0。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.08(br s，1H)，9.70(d，J＝2.5Hz，1H)，8.40-8.29(m，1H)，8.27(s，1H)，7.79(d，J＝3.6Hz，4H)，7.70(d，J＝8.5Hz，1H)，7.35(d，J＝1.9Hz，1H)，7.24(dd，J＝1.8，8.6Hz，1H)，5.08(dd，J＝5.3，12.9Hz，1H)，4.85-4.73(m，1H)，4.54-4.35(m，1H)，4.04(t，J＝14.1Hz，2H)，3.85-3.64(m，3H)，3.63-3.52(m，5H)，3.51-3.41(m，3H)，3.41-3.33(m，3H)，3.30-3.22(m，1H)，2.95-2.83(m，1H)，2.64-2.56(m，3H)，2.56-2.52(m，3H)，2.24-2.08(m，1H)，2.04-1.91(m，4H)，1.76-1.68(m，2H)，1.65-1.54(m，4H)。
实施例147. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003762
-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(5-(4-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003761
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(45.3mg，45.67μmol，21.26％收率，98％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝972.8。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.07(br s，1H)，8.36-8.20(m，3H)，8.03(s，1H)，7.68(dd，J1＝3.2，J2＝8.5Hz，1H)，7.33(br s，1H)，7.28-7.21(m，1H)，7.19(dd，J1＝1.6，J2＝6.6Hz，1H)，5.07(dd，J1＝5.4，J2＝13.1Hz，1H)，4.90-4.72(m，1H)，4.54-4.35(m，1H)，4.07(br t，J＝13.9Hz，2H)，3.91(s，3H)，3.76-3.55(m，6H)，3.54-3.38(m，9H)，2.94-2.82(m，1H)，2.70-2.56(m，2H)，2.44-2.37(m，2H)，2.34-2.26(m，2H)，2.19-2.05(m，1H)，2.05-1.89(m，4H)，1.80-1.68(m，4H)，1.68-1.54(m，4H)。
实施例148. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003772
-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(4-(6-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2，6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-4-氧代丁酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003771
步骤1：6-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2，6-二氮杂 螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(2)的合成
将2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1，3-二酮(1.6g，5.79mmol)、6-(叔丁氧基羰基)-6-氮杂-2-氮阳离子螺[3.3]庚烷草酸盐(3.10g，6.37mmol)和DIEA(2.25g，17.38mmol，3.03mL)在DMSO(15mL)中的混合物在80℃搅拌40小时。LCMS显示仍然存在30％的反应物，并且检测到51％的期望质量。将反应混合物用H2O(100mL)稀释并且用EtOAc(80mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL x 5)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤。将滤液在真空中浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(12g
Figure BPA0000310075650003781
硅胶快速柱，洗脱液为33～45％乙酸乙酯/石油醚梯度@60mL/min)纯化，得到标题化合物(1.36g，2.99mmol，51.66％收率)，为黄色固体。MS(M+H)+＝455.1。
步骤2：2-(2，6-二二氧代哌啶-3-基)-4-(2，6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)异吲哚啉- 1，3-二酮(3)的合成
在0℃向6-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2，6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(300mg，660.10μmol)在DCM(3mL)中的溶液中添加TFA(3.31g，29.04mmol，2.15mL)，将混合物在15℃搅拌0.5小时。LCMS显示起始材料完全消耗。在0℃向混合物中添加TEA以调节pH＞7，将所得混合物直接用于下一个步骤。MS(M+H)+＝355.1。
步骤3：((3S)-1-(4-(6-(2-(2，6-二二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4- 基)-2，6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-4-氧代丁酰基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(4)的合 成
向2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-(2，6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)异吲哚啉-1，3-二酮(230mg，649.06μmol)、(S)-4-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)吡咯烷-1-基)-4-氧代丁酸(223.01mg，778.87μmol)、EDCI(248.85mg，1.30mmol)和HOBt(175.41mg，1.30mmol)在DCM(4mL)中的溶液中添加TEA(262.71mg，2.60mmol，361.36μL)，并且将所得混合物在15℃搅拌16小时。LCMS显示反应物完全消耗，并且检测到75％的期望质量。在0℃向混合物中添加CH3COOH以调节pH＜7，用N2将大部分溶剂吹走，将残余物用DMF稀释，并且通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi C18 150*25mm*10um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：25％-55％，10分钟)纯化，并且将洗脱液冷冻干燥，得到标题化合物(200mg，321.20μmol，49.49％收率)，为黄色固体。MS(M+H)+＝623.2。
步骤4：4-(6-(4-((S)-3-氨基吡咯烷-1-基)-4-氧代丁酰基)-2，6-二氮杂螺[3.3] 庚-2-基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(5)的合成
在0℃向((3S)-1-(4-(6-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2，6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-4-氧代丁酰基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(200mg，321.20μmol)在DCM(2mL)中的溶液中添加TFA(1.61g，14.13mmol，1.05mL)，将混合物在15℃搅拌0.5小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且检测到89％的期望质量。在0℃向混合物中添加TEA以调节pH＞7，用N2将大部分溶剂吹走，将残余物用DMF稀释，并且通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：11％-41％，10分钟)纯化，将洗脱液冷冻干燥，得到标题化合物(110mg，210.51μmol，65.54％收率)，为黄色固体。MS(M+H)+＝523.0。
步骤5：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003791
-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(4-(6-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧 代异吲哚啉-4-基)-2，6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-4-氧代丁酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5- 甲氧基苯甲酰胺(化合物148)的合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003792
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(85mg，182.63μmol)在DMF(1mL)中的溶液中添加HATU(83.33mg，219.15μmol)和DIEA(59.01mg，456.57μmol，79.53μL)，将混合物在15℃搅拌15分钟，然后向混合物中添加4-(6-(4-((S)-3-氨基吡咯烷-1-基)-4-氧代丁酰基)-2，6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(104.98mg，200.89μmol)，并且将所得混合物在15℃搅拌1小时。LCMS显示反应物完全消耗，并且检测到78％的期望质量。将反应混合物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：35％-65％，10分钟)纯化，将洗脱液冷冻干燥，得到标题化合物(71.8mg，72.54μmol，39.72％收率，98％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝970.4。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.21-10.75(m，1H)，8.32-8.24(m，3H)，8.04(s，1H)，7.57(t，J＝7.8Hz，1H)，7.20(dd，J＝2.5，6.3Hz，1H)，7.13(d，J＝7.0Hz，1H)，6.79(d，J＝8.5Hz，1H)，5.05(dd，J＝5.3，12.6Hz，1H)，4.91-4.72(m，1H)，4.54-4.40(m，1H)，4.34(m，5H)，4.14-3.98(m，4H)，3.92(s，3H)，3.76(m，1H)，3.54(m，1H)，3.47-3.37(m，1H)，3.31(m，3H)，3.31-3.22(m，1H)，2.96-2.79(m，1H)，2.64-2.51(m，3H)，2.48-2.40(m，2H)，2.30-2.21(m，2H)，2.21-2.08(m，1H)，2.06-1.87(m，4H)，1.73(m，2H)，1.68-1.52(m，4H)。
实施例149. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003801
-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(5-(6-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2，6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-5-氧代戊酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003811
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(47.1mg，47.39μmol，36.76％收率，99％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝984.0。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.02(br s，1H)，8.38-8.14(m，3H)，8.03(s，1H)，7.56(ddd，J＝2.6，7.0，8.5Hz，1H)，7.20(dd，J＝1.0，6.6Hz，1H)，7.13(dd，J＝1.3，6.9Hz，1H)，6.77(dd，J＝4.3，8.4Hz，1H)，5.05(dd，J＝5.4，12.7Hz，1H)，4.81(quin，J＝7.9Hz，1H)，4.52-4.38(m，1H)，4.26-4.37(m，4H)，4.27(br d，J＝3.4Hz，2H)，4.14-3.98(m，4H)，3.91(s，3H)，3.72(dd，J＝6.6，10.3Hz，1H)，3.64-3.52(m，1H)，3.51-3.42(m，1H)，3.34-3.40(m，2H)，3.26-3.32(m，2H)，2.93-2.80(m，1H)，2.63-2.51(m，2H)，2.21-2.29(m，2H)，2.20-2.04(m，3H)，2.03-1.87(m，4H)，1.67-1.78(m，4H)，1.66-1.53(m，4H)。
实施例150. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003822
-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003821
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(40.6mg，42.76μmol，24.23％收率，97％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝921.5
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.01(br s，1H)，8.32-8.24(m，4H)，8.05(s，1H)，7.31-7.25(m，1H)，7.22-7.17(m，1H)，6.97-6.91(m，1H)，6.83-6.77(m，1H)，5.64-5.57(m，1H)，5.16-5.05(m，1H)，4.86-4.76(m，1H)，4.51-4.36(m，1H)，4.27-4.20(m，1H)，4.17-4.11(m，1H)，4.11-4.03(m，4H)，3.91(d，J＝3.8Hz，3H)，3.75-3.68(m，1H)，3.65-3.54(m，6H)，3.53-3.41(m，4H)，3.33-3.27(m，2H)，2.99-2.86(m，1H)，2.61(br d，J＝17.4Hz，1H)，2.31-2.24(m，1H)，2.19-2.10(m，1H)，2.08-1.85(m，5H)，1.78-1.54(m，6H)。
实施例151. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003832
-2-基)氨基)-N-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003831
步骤1：(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙 氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(3)的合成
在20℃向2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1，3-二酮(1g，3.62mmol)在DMSO(5mL)中的混合物中一次性地添加TEA(1.10g，10.86mmol，1.51mL)和(2-(2-氨基乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(887.41mg，4.34mmol)，并且将所得混合物在80℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且检测到期望质量。将反应混合物用H2O(20mL)稀释并且用EtOAC(20mL x 3)萃取。将有机层用盐水(20mL x 3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1至1/1)纯化，得到标题化合物(687mg，1.46mmol，40.39％收率，98％纯度)，为绿色油状物。MS(M-100+H)+＝361.3
步骤2：4-((2-(2-氨基乙氧基)乙基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉- 1，3-二酮(4)的合成
在20℃向(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(680mg，1.48mmol)在二噁烷(5mL)中的混合物中一次性地添加HCl/二噁烷(4M，10mL)，并且将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且检测到期望质量。将反应混合物在真空中浓缩，得到标题化合物(590mg，粗制，HCl)，为黄色固体。MS(M+H)+＝361.3
步骤3：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003841
-2-基)氨基)-N-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚 啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物151)的合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003842
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(150mg，322.29μmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加HATU(134.80mg，354.51μmol)和DIPEA(83.31mg，644.57μmol，112.27μL)。将混合物在20℃搅拌10分钟，并且逐滴添加4-((2-(2-氨基乙氧基)乙基)氨基)-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(166.26mg，418.97μmol，HCl)在DMF(2mL)中的溶液和DIPEA(83.31mg，644.57μmol，112.27μL)，并且将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且检测到期望质量。将反应混合物用H2O(10mL)稀释并且用EtOAc(10mL x3)萃取。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：3_Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：46％-66％，7分钟)纯化，然后冻干，得到标题化合物(95.9mg，101.96μmol，31.64％收率，98％纯度，TFA)，为黄色固体。MS(M+H)+＝808.1
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ＝8.22-8.17(m，2H)，7.51(dd，J＝7.2，8.6Hz，1H)，7.42(d，J＝6.7Hz，1H)，7.09(d，J＝8.6Hz，1H)，7.00(d，J＝7.2Hz，1H)，5.06-4.98(m，1H)，4.98-4.92(m，1H)，4.13(t，J＝12.8Hz，2H)，3.98(s，3H)，3.79-3.75(m，2H)，3.74-3.70(m，2H)，3.65-3.59(m，2H)，3.54-3.49(m，2H)，3.42(s，3H)，2.78-2.50(m，3H)，2.08-1.93(m，3H)，1.85-1.66(m，6H)
实施例152. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003852
-2-基)氨基)-N-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003851
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(167.6mg，190.85μmol，44.41％收率，97％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝852.6
1H NMR(400MHz，MeOD)δ＝8.23(d，J＝14.6Hz，1H)，8.19(s，1H)，7.39-7.33(m，2H)，6.90(dd，J＝7.8，11.8Hz，2H)，4.98(dd，J＝5.5，12.7Hz，1H)，4.84-4.79(m，1H)，4.04(t，J＝13.4Hz，2H)，3.95(s，3H)，3.77-3.70(m，8H)，3.64-3.60(m，2H)，3.42-3.39(m，5H)，2.89-2.78(m，1H)，2.75-2.60(m，2H)，2.13-2.03(m，3H)，1.86-1.76(m，2H)，1.74-1.61(m，4H)
实施例153. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003862
-2-基)氨基)-N-(2-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003861
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(80.8mg，88.39μmol，21.43％收率，98％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝896.7。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.10(s，1H)，8.29(s，1H)，8.25(d，J＝13.8Hz，1H)，8.04(s，1H)，7.88-7.99(m，1H)，7.55(dd，J1＝8.3Hz，J2＝7.3Hz，1H)，7.28(d，J＝6.8Hz，1H)，7.10(d，J＝8.7Hz，1H)，7.01(d，J＝7.0Hz，1H)，6.58(t，J＝5.7Hz，1H)，5.05(dd，J1＝12.9Hz，J2＝5.4Hz，1H)，4.88-4.73(m，1H)，4.07(t，J＝13.9Hz，2H)，3.90(s，3H)，3.65-3.48(m，12H)，3.48-3.39(m，7H)，2.93-2.79(m，1H)，2.62-2.52(m，2H)，2.06-1.86(m，3H)，1.78-1.51(m，6H)。
实施例154. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003872
-2-基)氨基)-N-(8-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)辛基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003871
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(122.3mg，141.36μmol，61.76％收率，98％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝848.6。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.08(s，1H)，8.34-8.18(m，2H)，8.07-7.95(m，2H)，7.57(dd，J＝8.6，7.0Hz，1H)，7.23(d，J＝6.7Hz，1H)，7.08(d，J＝8.6Hz，1H)，7.01(d，J＝7.0Hz，1H)，6.52(t，J＝5.9Hz，1H)，5.04(dd，J＝12.9，5.4Hz，1H)，4.81(t，J＝8.0Hz，1H)，4.07(t，J＝13.9Hz，2H)，3.90(s，3H)，3.29-3.16(m，6H)，2.95-2.81(m，1H)，2.62-2.52(m，3H)，2.08-1.90(m，3H)，1.77-1.46(m，10H)，1.41-1.26(m，8H)。
实施例155. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003882
-2-基)氨基)-N-(2-(3-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丙氧基)乙基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003881
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(50.4mg，57.65μmol，26.83％收率，94％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝822.6。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.08(s，1H)，8.29(s，1H)，8.22(d，J＝13.8Hz，1H)，8.04(s，1H)，7.96(q，J＝5.4Hz，1H)，7.54(dd，J1＝7.2，J2＝8.4Hz，1H)，7.28(d，J＝6.9Hz，1H)，7.07(d，J＝8.6Hz，1H)，6.98(d，J＝7.0Hz，1H)，6.69(t，J＝5.9Hz，1H)，5.03(dd，J1＝5.4，J2＝12.9Hz，1H)，4.88-4.70(m，1H)，4.07(t，J＝13.9Hz，2H)，3.89(s，3H)，3.59-3.51(m，4H)，3.50-3.47(m，2H)，3.42-3.33(m，5H)，2.93-2.80(m，1H)，2.60-2.52(m，2H)，2.05-1.88(m，3H)，1.82(br t，J＝6.1Hz，2H)，1.75-1.50(m，6H)。
实施例156. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003892
-2-基)氨基)-N-(2-(3-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)丙氧基)乙基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003891
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(27.6mg，27.89μmol，12.98％收率，99％纯度，TFA)，为黄色固体。MS(M+H)+＝866.3
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ＝8.20(s，1H)，8.11(d，J＝13.8Hz，1H)，7.45-7.39(m，2H)，6.95(t，J＝7.4Hz，2H)，5.01(dd，J＝5.4，12.8Hz，1H)，4.98-4.90(m，1H)，4.15(t，J＝12.6Hz，2H)，3.97(s，3H)，3.65-3.59(m，10H)，3.45-3.42(m，2H)，3.41(s，3H)，2.89-2.80(m，1H)，2.76-2.62(m，2H)，2.15-2.02(m，3H)，1.90-1.81(m，4H)，1.77-1.68(m，4H)
实施例157. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003901
-2-基)氨基)-N-(3-(3-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)丙氧基)丙基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003911
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(74.7mg，72.15μmol，16.79％收率，96％纯度，TFA)，为黄色固体。MS(M+H)+＝880.0
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ＝8.21-8.14(m，2H)，7.52-7.40(m，2H)，7.04-6.96(m，2H)，5.02(br dd，J＝5.6，12.4Hz，1H)，4.99-4.95(m，1H)，4.13(t，J＝12.6Hz，2H)，3.98(s，3H)，3.65-3.61(m，2H)，3.61-3.55(m，6H)，3.51(t，J＝6.6Hz，2H)，3.44-3.41(m，2H)，3.40(s，3H)，2.89-2.63(m，3H)，2.13-2.02(m，3H)，1.89-1.66(m，10H)
实施例158. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003923
-2-基)氨基)-N-(8-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-8-氧代辛基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003921
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(66.7mg，64.93μmol，15.11％收率，95％纯度)，为浅黄色固体。MS(M+H)＝862.6。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.63(d，J＝8.4Hz，1H)，8.25-8.14(m，2H)，7.79-7.69(m，1H)，7.54(d，J＝7.3Hz，1H)，7.38(d，J＝6.7Hz，1H)，5.17-5.09(m，1H)，5.05-4.98(m，1H)，4.13(t，J＝12.7Hz，2H)，3.98(s，3H)，3.43-3.40(m，2H)，2.91-2.81(m，1H)，2.78-2.66(m，2H)，2.50(t，J＝7.4Hz，2H)，2.15-2.03(m，3H)，1.84-1.60(m，10H)，1.52-1.38(m，6H)
实施例159. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003922
-2-基)氨基)-N-(2-(3-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丙酰基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003931
步骤1：6-(4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并 [4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003933
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2- 甲酸叔丁酯(2)的合成
将4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003932
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(100mg，214.86μmol)、6-氨基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(54.73mg，257.83μmol)、EDCI(61.78mg，322.29μmol)、HOBt(43.55mg，322.29μmol)和TEA(65.22mg，644.57μmol，89.72μL)在DCM(2mL)中的混合物在15℃搅拌12小时。LCMS显示反应物完全消耗，并且检测到87％的期望质量。将反应混合物与另一批次(30mg规模)合并并且在真空中浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(4g
Figure BPA0000310075650003941
硅胶快速柱，洗脱液为25～41％乙酸乙酯/石油醚梯度@60mL/min)纯化，得到标题化合物(190mg，288.01μmol，134.05％收率)，为褐色固体。MS(M+H)+＝660.6。
步骤2：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003943
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基-N-(2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)苯甲酰胺(3) 的合成
在0℃向6-(4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003944
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(160mg，242.54μmol)在DCM(2mL)中的溶液中添加TFA(1.23g，10.80mmol，800μL)，并且将混合物在15℃搅拌0.5小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且检测到93％的期望质量。向反应混合物中添加TEA以调节pH＞7，将所得混合物直接用于下一个步骤。MS(M+H)+＝560.5。
步骤3：3-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丙酸叔 丁酯(5)的合成
将2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1，3-二酮(300mg，1.09mmol)、3-氨基丙酸叔丁酯(205.01mg，1.41mmol)和DIEA(421.11mg，3.26mmol，567.53μL)在DMSO(6mL)中的混合物在80℃搅拌12小时。LCMS显示仍然存在痕量的起始材料，并且检测到50％的期望质量。将反应混合物与另一批次(30mg规模)合并，将合并的混合物用H2O(100mL)稀释并且用EtOAc(50mL x 5)萃取。将合并的有机层用盐水(80mL x 5)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤。将滤液在真空中浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(12g
Figure BPA0000310075650003942
硅胶快速柱，洗脱液为18～45％乙酸乙酯/石油醚梯度@100mL/min)纯化，得到标题化合物(240mg，597.89μmol，55.05％收率)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝402.4。
步骤4：3-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丙酸 (6)的合成
向3-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丙酸叔丁酯(240mg，597.89μmol)在二噁烷(5mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，10mL)，将混合物在15℃搅拌12小时。LCMS显示仍然存在痕量的起始材料，并且检测到84％的期望质量。将反应混合物在真空中浓缩，得到标题化合物(170mg，粗制)，为黄色固体，将其直接用于下一个步骤。MS(M+H)+＝345.9。
步骤5：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003951
-2-基)氨基)-N-(2-(3-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚 啉-4-基)氨基)丙酰基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物159)的 合成
向在DCM(2mL)中的来自步骤2的上述混合物中添加3-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丙酸(100mg，289.60μmol)、EDCI(83.27mg，434.40μmol)、HOBt(58.70mg，434.40μmol)和TEA(146.52mg，1.45mmol，201.54μL)，并且将所得混合物在15℃搅拌16小时。LCMS显示检测到44％的期望质量。将反应混合物在真空中浓缩以移除大部分溶剂，向残余物中添加CH3COOH以调节pH＜7。将所得混合物用DMF稀释，将混合物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：41％-71％，10分钟)纯化，随后通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi C18 150*25mm*10um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：43％-73％，10分钟)纯化，将洗脱液冷冻干燥，得到标题化合物(28.9mg，30.96μmol，10.69％收率，95％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝887.7。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.11-11.03(m，1H)，8.30(s，1H)，8.25(br d，J＝13.3Hz，2H)，8.04(s，1H)，7.63-7.55(m，1H)，7.20(d，J＝6.4Hz，1H)，7.14(dd，J＝3.1，8.8Hz，1H)，7.04(dd，J＝1.9，7.0Hz，1H)，6.79-6.68(m，1H)，5.05(dd，J＝5.0，12.7Hz，1H)，4.88-4.76(m，1H)，4.32-4.23(m，1H)，4.17(s，1H)，4.13-4.02(m，3H)，3.91(s，4H)，3.79(s，1H)，3.51(q，J＝6.0Hz，2H)，3.34-3.33(m，3H)，2.94-2.82(m，1H)，2.63-2.55(m，2H)，2.48-2.42(m，2H)，2.36(q，J＝6.8Hz，2H)，2.28-2.19(m，2H)，2.06-1.91(m，3H)，1.73(m，2H)，1.68-1.55(m，4H)。
实施例160. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003962
-2-基)氨基)-N-(2-(4-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁酰基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003961
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(75.4mg，82.02umol，22.67％收率，98％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝901.0。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.04-11.00(m，1H)，8.30(s，1H)，8.27-8.23(m，2H)，8.04(s，1H)，7.58(t，J＝7.8Hz，1H)，7.20(d，J＝6.5Hz，1H)，7.15(dd，J＝2.1，8.6Hz，1H)，7.02(dd，J＝1.6，7.0Hz，1H)，6.69-6.56(m，1H)，5.05(ddd，J＝2.9，5.3，12.8Hz，1H)，4.82(quin，J＝8.0Hz，1H)，4.28(m，1H)，4.20-3.98(m，4H)，3.91(s，4H)，3.78(s，1H)，3.33(s，3H)，3.30(m，2H)，2.95-2.80(m，1H)，2.63-2.52(m，2H)，2.47(m，2H)，2.30-2.18(m，2H)，2.11(q，J＝6.7Hz，2H)，2.06-2.00(m，1H)，1.96(m，2H)，1.82-1.69(m，4H)，1.68-1.55(m，4H)。
实施例161. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003963
-2-基)氨基)-N-(2-(5-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)戊酰基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003971
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(38.3mg，41.02μmol，30.63％收率，98％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝915.1。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.11-11.00(m，1H)，8.30(s，1H)，8.25(br d，J＝13.4Hz，2H)，8.04(s，1H)，7.62-7.51(m，1H)，7.20(d，J＝6.6Hz，1H)，7.10(dd，J＝3.1，8.6Hz，1H)，7.02(dd，J＝1.6，6.9Hz，1H)，6.57(q，J＝5.1Hz，1H)，5.10-5.00(m，1H)，4.82(quin，J＝8.0Hz，1H)，4.28(m，1H)，4.17(s，1H)，4.13-3.99(m，3H)，3.94-3.82(m，4H)，3.77(s，1H)，3.33(br s，3H)，3.30(m，2H)，2.96-2.81(m，1H)，2.63-2.51(m，4H)，2.25(br t，J＝9.6Hz，2H)，2.10-1.91(m，5H)，1.79-1.68(m，2H)，1.68-1.50(m，8H)。
实施例162. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650003972
-2-基)氨基)-N-(5-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺基)戊基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650003981
步骤1：2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-羟基异吲哚啉-1，3-二酮(3)的合成
向3-氨基哌啶-2，6-二酮(16.55g，100.54mmol，HCl)和4-羟基异苯并呋喃-1，3-二酮(15g，91.40mmol)在AcOH(300mL)中的溶液中添加KOAc(27.81g，283.34mmol)，并且将所得混合物在120℃搅拌24小时。LCMS显示反应完成。将混合物与中试(10g规模)合并并且过滤，将滤饼用H2O(300mL)洗涤并且在真空中干燥，得到标题化合物(36.59g，粗制)，为黑色固体。MS(M+H)+＝275.1
步骤2：2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酸叔 丁酯(5)的合成
向2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-羟基异吲哚啉-1，3-二酮(10g，36.47mmol)在DMF(200mL)中的溶液中添加K2CO3(7.56g，54.70mmol)和2-溴乙酸叔丁酯(7.11g，36.47mmol，5.39mL)，并且将混合物在20℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。将混合物倒入H2O(450mL)中并且用EtOAc(450mL x 3)萃取，将合并的有机层用盐水(1000mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝1/0至0/1)纯化，得到标题化合物(12g，30.90mmol，84.73％收率)，为白色固体。MS(M+H)+＝389.1
步骤3：2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酸 (6)的合成
向2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酸叔丁酯(12g，30.90mmol)在二噁烷(50mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，50mL)，并且将混合物在20℃搅拌6小时。LCMS显示反应完成。将反应混合物在真空中浓缩，得到标题化合物(10.27g，粗制)，为白色固体。MS(M+H)+＝333.1
步骤4：(5-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙 酰胺基)戊基)氨基甲酸叔丁酯(8)的合成
在20℃向2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酸(1g，3.01mmol)和N-(5-氨基戊基)氨基甲酸叔丁酯(608.83mg，3.01mmol，626.37μL)在DMF(10mL)中的溶液中添加T3P(11.49g，18.06mmol，10.74mL，50％纯度)和Py(2.38g，30.10mmol，2.43mL)，并且将混合物在80℃搅拌16小时。LCMS显示反应完成。将反应混合物倒入H2O(80mL)中并且用EtOAc(30mL x 3)萃取，将有机相用盐水(30mL x 3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝1/0至0/1)纯化，得到标题化合物(1.33g，2.50mmol，82.99％收率，97％纯度)，为黄色油状物。MS(M+H)+＝517.2
步骤5：N-(5-氨基戊基)-2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉- 4-基)氧基)乙酰胺(9)的合成
向(5-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺基)戊基)氨基甲酸叔丁酯(1.33g，2.57mmol)在二噁烷(20mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，20mL)，并且将混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示反应完成。将反应混合物在真空中浓缩，得到标题化合物(1.29g，HCl)，为白色固体。MS(M+H)+＝417.1
步骤6：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650004001
-2-基)氨基)-N-(5-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚 啉-4-基)氧基)乙酰胺基)戊基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物162)的合成
向N-(5-氨基戊基)-2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰胺(0.2g，441.61μmol，HCl)和4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650004002
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(205.54mg，441.61μmol)在DMF(4mL)中的溶液中添加HATU(335.83mg，883.22μmol)和DIPEA(171.23mg，1.32mmol，230.76μL)，并且将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示反应完成。将混合物倒入水(20mL)中并且用EtOAc(20mL x 3)萃取，将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150*25mm*10um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：41％-71％，10分钟)纯化，并且将洗脱液冻干，将固体通过制备型HPLC(柱：3_Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：40％-60％，7分钟)再次纯化，并且将洗脱液冻干，得到标题化合物(94.8mg，94.04μmol，21.29％收率，97％纯度，TFA)，为白色固体。MS(M+H)+＝864.2。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.13(s，1H)，8.34-8.26(m，2H)，8.19(d，J＝13.3Hz，1H)，8.06(d，J＝4.5Hz，1H)，7.96(t，J＝5.6Hz，1H)，7.86-7.77(m，1H)，7.49(d，J＝7.3Hz，1H)，7.40(d，J＝8.4Hz，1H)，7.25(d，J＝6.7Hz，1H)，5.18-5.09(m，1H)，4.84(t，J＝8.2Hz，1H)，4.77(s，2H)，4.12(t，J＝13.6Hz，2H)，3.94-3.90(m，3H)，3.34(s，3H)，3.28-3.22(m，2H)，3.20-3.13(m，2H)，2.97-2.85(m，1H)，2.66-2.55(m，2H)，2.09-1.93(m，3H)，1.75-1.46(m，10H)，1.38-1.25(m，2H)。
实施例163. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650004003
-2-基)氨基)-N-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-5-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650004011
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(31.1mg，35.05μmol，4.05％收率，96％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝852.3。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.31-10.73(m，1H)，8.33-8.14(m，2H)，8.04(s，1H)，7.96(q，J＝5.6Hz，1H)，7.52(d，J＝8.4Hz，1H)，7.28(d，J＝6.9Hz，1H)，7.13(t，J＝5.4Hz，1H)，6.98(d，J＝1.8Hz，1H)，6.86(dd，J1＝8.4Hz，J2＝2.0Hz，1H)，5.02(dd，J1＝12.9Hz，J2＝5.4Hz，1H)，4.90-4.70(m，1H)，4.07(t，J＝13.8Hz，2H)，3.90(s，3H)，3.67-3.48(m，8H)，3.47-3.32(m，7H)，2.94-2.80(m，1H)，2.61-2.53(m，1H)，2.49-2.40(m，1H)，2.04-1.86(m，3H)，1.79-1.68(m，2H)，1.66-1.54(m，4H)。
实施例164. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650004012
-2-基)氨基)-N-(6-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)己基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650004021
步骤1：2-(己-5-炔-1-基)异吲哚啉-1，3-二酮(2A)的合成
在20℃向6-氯己-1-炔(5g，42.89mmol，5.20mL)的混合物中添加在DMF(50mL)中的1，3-二氧代异吲哚啉-2-化钾(15.89g，85.77mmol)，并且将所得混合物在85℃搅拌16小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。TLC(SiO2，石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1)指示6-氯己-1-炔完全消耗，并且检测到两个新斑点。将反应混合物用H2O(100mL)稀释并且用EtOAc(100mL x 3)萃取。将有机层用盐水(100mL x 3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝8/1至2/1)纯化，得到标题化合物(8.3g，35.43mmol，82.61％收率，97％纯度)，为白色固体。MS(M+H)+＝228.4
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝7.87-7.81(m，2H)，7.75-7.67(m，2H)，3.71(t，J＝7.1Hz，2H)，2.29-2.21(m，2H)，1.94(t，J＝2.7Hz，1H)，1.87-1.76(m，2H)，1.63-1.52(m，2H)
步骤2：己-5-炔-1-胺(3A)的合成
在20℃向2-(己-5-炔-1-基)异吲哚啉-1，3-二酮(8.3g，36.52mmol)在EtOH(90mL)中的混合物中一次性地添加N2H4·H2O(21.51g，365.20mmol，20.88mL，85％纯度)，并且将所得混合物在80℃搅拌4小时。TLC(SiO2，石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1)指示起始材料完全消耗，并且检测到一个新斑点。将反应混合物用EtOH(200mL)稀释并且过滤。将滤液在真空中浓缩。将残余物用DCM(150mL)稀释并且过滤。将滤液在真空中浓缩，得到标题化合物(4.7g，粗制)，为无色油状物。
步骤3：己-5-炔-1-基氨基甲酸叔丁酯(4A)的合成
在0℃向己-5-炔-1-胺(4.7g，48.37mmol)在THF(50mL)和H2O(50mL)中的混合物中逐滴添加NaHCO3(8.13g，96.75mmol，3.76mL)，随后逐滴添加(Boc)2O(13.72g，62.89mmol，14.45mL)，并且将所得混合物在20℃搅拌16小时。TLC(SiO2，石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1)指示己-5-炔-1-胺完全消耗，并且检测到两个新斑点。将反应混合物用H2O(100mL)稀释并且用EtOAc(100mL x 3)萃取。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝10/1至3/1)纯化，得到标题化合物(1.8g，9.12mmol，18.86％收率)，为无色油状物。
步骤4：3-溴-2-(溴甲基)苯甲酸甲酯(2)的合成
在20℃向3-溴-2-甲基-苯甲酸甲酯(10g，43.65mmol)在CHCl3(100mL)中的混合物中一次性地添加NBS(8.55g，48.02mmol)和BPO(528.72mg，2.18mmol)，并且将所得混合物在85℃搅拌16小时。LCMS显示未检测到具有期望质量的峰。TLC(SiO2，石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1)指示仍然存在少量3-溴-2-甲基-苯甲酸酯，并且检测到一个新斑点。将反应混合物用饱和Na2SO3(100mL)猝灭并且用DCM(100mL x 3)萃取。将有机层用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝1/1至200/1)纯化，得到标题化合物(9.4g，30.52mmol，69.92％收率)，为橙色油状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝7.86(d，J＝7.7Hz，1H)，7.74(d，J＝7.5Hz，1H)，7.21(t，J＝7.9Hz，1H)，5.12(s，2H)，3.94(s，3H)
步骤5：3-(4-溴-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2，6-二酮(3)的合成
在20℃向3-溴-2-(溴甲基)苯甲酸甲酯(9.4g，30.52mmol)和3-氨基哌啶-2，6-二酮；盐酸盐(6.03g，36.63mmol)在ACN(100mL)中的混合物中一次性地添加DIPEA(19.72g，152.61mmol，26.58mL)，并且将所得混合物在90℃搅拌16小时。TLC(SiO2，石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1)指示3-溴-2-(溴甲基)苯甲酸甲酯完全消耗，并且检测到一个新斑点。将反应混合物用ACN(200mL)稀释并且过滤。将滤饼用甲基叔丁基醚(20mL x 4)洗涤。将滤饼在真空中干燥，得到标题化合物(7.6g，23.52mmol，77.05％收率)，为紫色固体。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.02(s，1H)，7.87(dd，J＝0.6，7.9Hz，1H)，7.79-7.75(m，1H)，7.54-7.48(m，1H)，5.15(dd，J＝5.0，13.3Hz，1H)，4.46-4.38(m，1H)，4.30-4.22(m，1H)，2.98-2.85(m，1H)，2.65-2.54(m，1H)，2.49-2.38(m，1H)，2.06-1.97(m，1H)
步骤6：(6-(2-(2，6-二二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)己-5-炔-1-基) 氨基甲酸叔丁酯(4)的合成
在N2下在20℃向3-(4-溴-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2，6-二酮(2g，6.19mmol)和己-5-炔-1-基氨基甲酸叔丁酯(1.47g，7.43mmol)在DMF(20mL)中的混合物中一次性地添加CuI(235.75mg，1.24mmol)、TEA(6.26g，61.89mmol，8.61mL)、Pd(PPh3)2Cl2(217.21mg，309.46μmol)，并且将所得混合物在80℃搅拌16小时。LCMS显示仍然存在15％的3-(4-溴-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2，6-二酮，并且检测到80％的具有期望质量的峰。TLC(SiO2，石油醚∶乙酸乙酯＝1∶2)指示仍然存在3-(4-溴-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2，6-二酮，并且检测到三个新斑点。将反应混合物用H2O(60mL)稀释并且用EtOAc(60mL x 3)萃取。将有机层用盐水(60mL x 3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过柱色谱(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1至1/2)纯化并且通过反相HPLC(方法：FA，MeCN/水)再次纯化，然后冻干，得到标题化合物(819mg，1.66mmol，26.80％收率，89％纯度)，为白色固体。MS(M-100+H)+＝340.4
步骤7：(6-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)己基)氨基甲酸叔 丁酯(5)的合成
在N2下向(6-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)己-5-炔-1-基)氨基甲酸叔丁酯(810mg，1.64mmol，89％纯度)在EtOAc(8mL)和THF(2mL)中的溶液中添加Pd/C(0.4mg，164.03μmol，10％纯度)。将悬浮液在真空下脱气并且用H2吹扫数次。在H2(15psi)下将混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物用THF(20mL)稀释并且过滤。将滤液在真空中浓缩，得到标题化合物(449mg，1.01mmol，61.72％收率)，为白色固体。MS(M-100+H)+＝344.3
步骤8：3-(4-(6-氨基己基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2，6-二酮(6)的合成
在20℃向(6-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)己基)氨基甲酸叔丁酯(449mg，1.01mmol)在二噁烷(5mL)中的混合物中一次性地添加HCl/二噁烷(4M，5mL)，并且将所得混合物在20℃搅拌1小时。TLC(SiO2，石油醚∶乙酸乙酯＝1∶2)指示起始材料完全消耗，并且检测到一个新斑点。将反应混合物在真空中浓缩，得到标题化合物(398mg，粗制，HCl)，为白色固体。
步骤9：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5- b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650004051
-2-基)氨基)-N-(6-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基) 己基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物164)的合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650004052
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(150mg，322.29μmol)在DMF(2mL)中的溶液中添加HATU(122.54mg，322.29μmol)和DIPEA(83.31mg，644.57μmol，112.27μL)。将混合物在20℃搅拌20分钟，并且添加3-(4-(6-氨基己基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2，6-二酮(183.65mg，483.43μmol，HCl)在DMF(2mL)中的溶液和DIPEA(83.31mg，644.57μmol，112.27μL)，并且将所得混合物在20℃搅拌2小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗，并且检测到具有期望质量的一个峰。将反应混合物用H2O(15mL)稀释并且用EtOAc(15mL x 3)萃取。将有机层用盐水(15mL x 3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150*25mm*10um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：45％-75％，11分钟)纯化，然后冻干，得到标题化合物(104mg，130.19μmol，40.40％收率，99％纯度)，为白色固体。MS(M+H)+＝791.6
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝10.98(br s，1H)，8.32-8.27(m，1H)，8.24(d，J＝13.4Hz，1H)，8.07-7.98(m，2H)，7.59-7.53(m，1H)，7.48-7.41(m，2H)，7.23(d，J＝6.8Hz，1H)，5.12(dd，J＝5.1，13.2Hz，1H)，4.87-4.76(m，1H)，4.50-4.42(m，1H)，4.35-4.26(m，1H)，4.07(t，J＝13.9Hz，2H)，3.90(s，3H)，3.33(s，3H)，3.27-3.21(m，2H)，2.97-2.86(m，1H)，2.67-2.56(m，3H)，2.46-2.36(m，1H)，2.05-1.90(m，3H)，1.74-1.48(m，10H)，1.42-1.32(m，4H)
实施例165. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650004061
-2-基)氨基)-N-(5-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)戊基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650004071
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(37.1mg，46.80μmol，55.59％收率，98％纯度)，为浅黄色固体。MS(M+H)+＝777.6
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.42(d，J＝14.3Hz，1H)，8.23(s，1H)，7.67-7.61(m，1H)，7.51-7.44(m，2H)，7.36(d，J＝6.8Hz，1H)，5.19(d，J＝5.4Hz，1H)，5.16(d，J＝5.3Hz，1H)，4.62-4.45(m，2H)，4.06(t，J＝13.6Hz，2H)，4.01-3.98(m，3H)，3.43(s，3H)，3.42-3.36(m，2H)，3.09-2.83(m，2H)，2.78-2.74(m，2H)，2.55-2.37(m，1H)，2.26-2.07(m，3H)，1.87-1.67(m，10H)，1.55-1.46(m，2H)
实施例166. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650004072
-2-基)氨基)-N-(7-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)庚基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650004081
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(67.9mg，77.61μmol，59.43％收率，92％纯度)，为浅黄色固体。
MS(M+H)+＝805.6
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.98(br s，1H)，8.30(s，1H)，8.24(d，J＝13.4Hz，1H)，8.07-8.00(m，2H)，7.59-7.54(m，1H)，7.47-7.43(m，2H)，7.24(d，J＝6.8Hz，1H)，5.13(dd，J＝5.1，13.3Hz，1H)，4.86-4.77(m，1H)，4.49-4.43(m，1H)，4.34-4.28(m，1H)，4.08(t，J＝13.9Hz，2H)，3.91(s，3H)，3.37-3.36(m，3H)，3.26-3.21(m，2H)，2.97-2.87(m，1H)，2.67-2.63(m，2H)，2.48-2.38(m，2H)，2.05-1.93(m，3H)，1.73-1.50(m，10H)，1.37-1.29(m，6H)。
实施例167. 4-((7，7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650004092
-2-基)氨基)-N-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650004091
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(65.0mg，77.93μmol，17.18％收率，99％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝826.6。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.09(s，1H)，8.36-8.13(m，2H)，8.08-7.74(m，2H)，7.53(dd，J1＝8.4Hz，J2＝7.3Hz，1H)，7.26(d，J＝6.8Hz，1H)，7.10(d，J＝8.7Hz，1H)，6.99(d，J＝7.1Hz，1H)，6.59(t，J＝5.6Hz，1H)，5.04(dd，J1＝12.9，J2＝5.3Hz，1H)，4.94-4.81(m，1H)，4.05(t，J＝13.4Hz，2H)，3.90(s，3H)，3.66-3.60(m，2H)，3.60-3.51(m，6H)，3.49-3.38(m，7H)，2.94-2.81(m，1H)，2.63-2.52(m，2H)，2.07-1.95(m，1H)，1.24(d，J＝6.7Hz，6H)。
实施例168. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650004093
-2-基)氨基)-N-(2-(2-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)-3-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650004101
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(38.6mg，45.37μmol，12.69％收率，98％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝834.6。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.06(s，1H)，8.43(t，J＝5.4Hz，1H)，8.35-8.21(m，2H)，7.95(s，1H)，7.62-7.42(m，3H)，7.10(d，J＝8.7Hz，1H)，7.01(d，J＝7.1Hz，1H)，6.59(t，J＝5.7Hz，1H)，5.05(dd，J1＝12.8Hz，J2＝5.4Hz，1H)，4.85-4.68(m，1H)，4.04(t，J＝14.1Hz，2H)，3.92(s，3H)，3.64-3.50(m，8H)，3.45-3.39(m，4H)，3.33(s，3H)，2.94-2.81(m，1H)，2.63-2.54(m，2H)，2.06-1.85(m，3H)，1.78-1.66(m，2H)，1.65-1.49(m，4H)。
实施例169. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650004102
-2-基)氨基)-N-(3-(3-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)丙氧基)丙基)-3-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650004111
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(29.7mg，33.43μmol，18.69％收率，97％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝862.1
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.07(br s，1H)，8.33(t，J＝5.6Hz，1H)，8.29-8.23(m，2H)，7.95(s，1H)，7.60-7.54(m，1H)，7.51-7.43(m，2H)，7.13(d，J＝8.5Hz，1H)，7.03(d，J＝7.0Hz，1H)，6.60(t，J＝5.6Hz，1H)，5.06(dd，J＝5.4，12.9Hz，1H)，4.82-4.70(m，1H)，4.04(t，J＝14.0Hz，2H)，3.92(s，3H)，3.60-3.54(m，2H)，3.49(t，J＝6.4Hz，2H)，3.45-3.38(m，6H)，3.33(s，3H)，3.30-3.27(m，2H)，2.94-2.82(m，1H)，2.62-2.58(m，1H)，2.57-2.54(m，1H)，2.06-1.98(m，1H)，1.98-1.89(m，2H)，1.79-1.68(m，6H)，1.65-1.55(m，4H)
实施例170. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650004122
-2-基)氨基)-N-(3-(3-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)丙氧基)丙基)苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650004121
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(20.7mg，23.64μmol，12.33％收率，95％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝832.1
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.07(s，1H)，9.66(s，1H)，8.26(s，1H)，8.23(t，J＝5.6Hz，1H)，7.80-7.73(m，4H)，7.60-7.54(m，1H)，7.13(d，J＝8.6Hz，1H)，7.03(d，J＝7.0Hz，1H)，6.60(t，J＝5.6Hz，1H)，5.06(dd，J＝5.4，12.9Hz，1H)，4.78(t，J＝8.1Hz，1H)，4.08-4.00(m，2H)，3.59-3.55(m，2H)，3.50-3.47(m，2H)，3.46-3.43(m，2H)，3.43-3.38(m，4H)，3.33(s，3H)，3.29-3.25(m，2H)，2.90-2.81(m，1H)，2.64-2.55(m，1H)，2.56-2.54(m，1H)，2.08-1.99(m，2H)，1.96-1.92(m，1H)，1.78-1.68(m，6H)，1.68-1.50(m，4H)
实施例171. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650004132
-2-基)氨基)-N-(3-(3-(2-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)丙氧基)丙基)-3-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650004131
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(26mg，29.74μmol，16.64％收率，97％纯度)，为白色固体。MS(M+H)+＝848.1
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝8.94(br s，1H)，8.46(d，J＝8.3Hz，1H)，8.07(s，1H)，7.84(s，1H)，7.43(d，J＝1.7Hz，1H)，7.37-7.32(m，1H)，7.30(dd，J＝1.7，8.4Hz，1H)，7.28-7.26(m，2H)，6.83(t，J＝5.0Hz，1H)，6.78(d，J＝7.8Hz，1H)，5.22(dd，J＝5.3，13.1Hz，1H)，4.87-4.77(m，1H)，4.33(d，J＝15.5Hz，1H)，4.12(d，J＝15.5Hz，1H)，3.95(s，3H)，3.89(t，J＝13.4Hz，2H)，3.64(t，J＝5.0Hz，2H)，3.61-3.51(m，8H)，3.43-3.31(m，5H)，2.92-2.75(m，2H)，2.34-2.21(m，1H)，2.21-2.13(m，1H)，2.10-2.02(m，2H)，1.89(m，4H)，1.78-1.73(m，2H)，1.72-1.66(m，2H)，1.62-1.55(m，2H)
实施例172. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650004142
-2-基)氨基)-N-(1-(23-((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-3，6，9，12，15，18，21-七氧杂二十三烷基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650004141
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(26.4mg，21.02μmol，12.23％收率，92％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝1155.4。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.35-10.83(m，1H)，8.30(s，1H)，8.24(d，J＝13.3Hz，1H)，8.03(s，1H)，7.87(dd，J＝3.5，7.6Hz，1H)，7.58(dd，J＝7.3，8.4Hz，1H)，7.18(d，J＝6.7Hz，1H)，7.14(d，J＝8.7Hz，1H)，7.03(d，J＝7.1Hz，1H)，6.60(t，J＝5.6Hz，1H)，5.05(dd，J＝5.4，13.0Hz，1H)，4.88-4.76(m，1H)，4.07(br t，J＝13.9Hz，2H)，3.91(s，3H)，3.75-3.69(m，1H)，3.63-3.60(m，2H)，3.58-3.51(m，6H)，3.51-3.48(m，19H)，3.48-3.44(m，4H)，2.90-2.81(m，3H)，2.63-2.52(m，4H)，2.47-2.43(m，2H)，2.09-2.00(m，3H)，1.99-1.92(m，2H)，1.81-1.69(m，4H)，1.66-1.50(m，6H)。
实施例173. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650004152
-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(5-(4-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)戊酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650004151
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(119.3mg，119.80μmol，33.29％收率，96.2％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝958.3。
1H NMR(400MHz，CD3CN)δ＝8.92-8.91(m，1H)，8.41-8.34(m，1H)，8.11(s，1H)，7.80-7.74(m，1H)，7.64-7.54(m，1H)，7.37(t，J＝7.5Hz，1H)，7.32-7.16(m，2H)，7.03-6.91(m，1H)，5.00-4.93(m，1H)，4.91-4.84(m，1H)，4.64-4.49(m，1H)，4.02-3.89(m，6H)，3.84-3.76(m，1H)，3.67-3.36(m，4H)，3.35-3.20(m，8H)，2.74-2.66(m，2H)，2.60-2.49(m，3H)，2.41-2.34(m，2H)，2.31-2.22(m，2H)，2.07-2.00(m，4H)，1.81-1.73(m，2H)，1.69-1.57(m，6H)，1.56-1.49(m，2H)。
实施例174. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650004162
-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(3-(4-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)丙酰基)吡咯烷-3-基)-3-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650004161
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(44.2mg，47.98μmol，21.47％收率，99％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝912.3
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.11-11.03(m，1H)，8.41(dd，J＝6.5，19.3Hz，1H)，8.31-8.21(m，2H)，7.97(d，J＝7.7Hz，1H)，7.66(dd，J＝8.6，11.9Hz，1H)，7.49(dd，J＝1.8，5.6Hz，2H)，7.32(dd，J＝1.9，16.2Hz，1H)，7.28-7.18(m，1H)，5.06(ddd，J＝2.9，5.3，13.0Hz，1H)，4.82-4.68(m，1H)，4.56-4.35(m，1H)，4.04(brt，J＝14.1Hz，2H)，3.93(d，J＝5.0Hz，3H)，3.82(dd，J＝6.6，10.2Hz，1H)，3.69-3.61(m，1H)，3.61-3.49(m，2H)，3.44-3.33(m，7H)，2.93-2.82(m，1H)，2.60(br t，J＝6.3Hz，8H)，2.47-2.42(m，2H)，2.24-2.08(m，1H)，2.05-1.88(m，4H)，1.81-1.65(m，2H)，1.65-1.53(m，4H)。
实施例175. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650004171
-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(4-(6-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2，6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)丁酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺的合成
Figure BPA0000310075650004181
根据以上反应方案，以类似于其他实施例的方式，获得标题化合物(17.5mg，17.39μmol，16.19％收率，95％纯度)，为黄色固体。MS(M+H)+＝956.3
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝11.05-11.03(m，1H)，8.30-8.23(m，3H)，8.03(s，1H)，7.58-7.51(m，1H)，7.20(d，J＝6.4Hz，1H)，7.13-7.08(m，1H)，6.76(t，J＝8.4Hz，1H)，5.08-4.99(m，1H)，4.87-4.76(m，1H)，4.51-4.37(m，1H)，4.26-4.21(m，3H)，4.07(br t，J＝14.0Hz，2H)，3.92-3.90(m，2H)，3.79-3.70(m，1H)，3.62-3.53(m，1H)，3.52-3.42(m，2H)，3.38-3.34(m，2H)，3.33-3.32(m，3H)，3.27-3.20(m，4H)，2.92-2.81(m，1H)，2.61-2.54(m，2H)，2.47-2.42(m，1H)，2.36-2.29(m，2H)，2.26-2.17(m，2H)，2.03-1.86(m，4H)，1.76-1.56(m，6H)，1.53-1.43(m，2H)。
比较例1.CN 106543185 A中公开的示例性化合物
Figure BPA0000310075650004191
比较例2.CN 106543185 A中公开的示例性化合物
Figure BPA0000310075650004192
比较例3. 4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650004193
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基-N-(1-(2-(2-(2-(苯基氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)苯甲酰胺
Figure BPA0000310075650004201
步骤1-11在以上反应方案中描述。
步骤12：4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4， 5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650004211
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基-N-(1-(2-(2-(2-(苯基氨基)乙氧基)乙 氧基)乙基)哌啶-4-基)苯甲酰胺(比较化合物1)的合成
向4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650004212
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(200mg，429.71umol)和HATU(326.78mg，859.43umol)在DMF(5mL)中的溶液中添加DIPEA(166.61mg，1.29mmol，224.55uL)，将混合物在25℃搅拌10分钟，添加1-(2-(2-(2-(苯基氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-胺(184.00mg，483.76umol，2HCl盐)，并且将所得混合物在25℃搅拌1小时。LCMS显示反应完成。将混合物倒入水(20mL)中并且用EtOAc(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：WatersXbridge C18 150*50mm*10um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：45％-75％，11.5分钟)纯化，得到4-((9-环戊基-7，7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂
Figure BPA0000310075650004213
-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基-N-(1-(2-(2-(2-(苯基氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)苯甲酰胺(106.2mg，139.29umol，32.41％收率，99％纯度)，为灰白色固体。
MS(M+H)+＝755.5
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝8.37(d，J＝15.0Hz，1H)，8.07(s，1H)，7.82(s，1H)，7.57(d，J＝7.2Hz，1H)，7.22-7.14(m，2H)，6.75-6.56(m，5H)，4.86(q，J＝8.5Hz，1H)，4.04(br s，1H)，3.97(s，3H)，3.92(t，J＝13.2Hz，2H)，3.72(t，J＝5.2Hz，2H)，3.68-3.58(m，6H)，3.42(s，3H)，3.31(t，J＝5.2Hz，2H)，2.91(br s，2H)，2.64(br s，2H)，2.29(br s，2H），2.17-2.02(m，4H)，1.84-1.68(m，4H)，1.65-1.52(br s，4H)。
实验例
1.HeLa细胞系的培养
HeLa细胞系购自韩国首尔的韩国细胞系库(Korea Cell Line Bank，KCLB)。细胞培养中的传代维持在P115至P125。
对于细胞计数，使用细胞计数器(Thermo Fisher Scientific Inc.，目录号AMQAX1000)和0.4％台盼蓝溶液。
对于细胞培养，使用DMEM(Gibco，目录号1195-65；批号2085318)、FBS(Gibco，目录号16000-044；批号2097593)、青霉素/链霉素(PS)(Gibco，目录号15140-122；批号2058855)、100mm2细胞培养皿(SPL，目录号20100)、150mm2细胞培养皿(SPL，目录号20150)、12孔培养板(SPL，目录号30012)、PBS pH 7.4(Gibco，目录号10010-023；批号2085080)、TrypLETMExpress(Gibco，目录号12605-010；批号2070638)、计数室(Counting Chamber)(血细胞计数器)(Hirschmann，目录号8100204)和0.4％台盼蓝溶液(DYNEBIO，目录号CBT3710；批号20190723)。
2.本发明的化合物的处理
12孔板(SPL)的每个孔接种2×105个细胞，并且将细胞在培养基中培养，总体积为2ml。
将实施例的化合物完全溶于DMSO并且用于实验，并且将胸苷完全溶于DW并且用于实验。对于胸苷阻断，将产物用2mM的胸苷(Sigma-Aldrich，目录号T9250-5G)处理，然后温育24小时。
对于释放和化学处理，吸出培养基并且用1×PBS洗涤3次。添加完全培养基，随后在CO2培养箱中温育4小时。每种化合物在10个点中从3μM的最高浓度到最低浓度稀释三倍，然后再次温育6小时。
3.蛋白质印迹
对于SDS-PAGE和蛋白质印迹，使用1X RIPA裂解缓冲液(Rockland，目录号MB-030-0050；批号39751)、100X蛋白酶抑制剂混合物(Quartett，目录号PPI1015；批号PCO50038424)、PierceTM BCA蛋白质测定试剂盒(ThermoScientific，目录号23225；批号UC276876)、白蛋白标准品(ThermoScientific，目录号23209；批号UB269561)、4-15％Mini-PROTEAN TGX未染色凝胶(Bio-rad，目录号4568085；批号L007041B)、10X Tris/甘氨酸/SDS缓冲液(Bio-rad，目录号1610732；批号10000044375B)；10X TBS(Bio-rad，目录号1706435；批号1000045140B)、10％吐温20(目录号1610781；批号L004152B)、颜色蛋白质标准宽范围(Color protein standard broad range)(NEB，目录号P7719S；批号10040349)、4XLaemmli样品缓冲液(Bio-rad，目录号1610747；批号L004133B)、β-巯基乙醇(Sigma-Aldrich，目录号M3148；批号60-24-2)、SuperBlockTM T20(TBS)封闭缓冲液(ThermoScientific，目录号37536；批号UC282578)、1M叠氮化钠溶液(Sigma-Aldrich，目录号08591-1mL-F；批号BCBV4989)、对Ms IgG的α-兔pAb(abcam，目录号ab97046；批号GR3252115-1)、对Rb IgG的α-山羊pAb(CST，目录号7074S；批号28)、α-GAPDH(abcam，目录号ab8245；批号GR3275542-2)、α-Plk1(CST，目录号208G4)、α-BRD4(CST，目录号13440S)、ECLTMPrime蛋白质印迹试剂(GE Healthcare，目录号RPN2232；批号17001655)、丽春红S(PonceauS)溶液(Sigma-Aldrich，目录号P7170；批号SLBV4112)、DifcoTM脱脂牛奶(BD，目录号232100；批号8346795)和
Figure BPA0000310075650004231
2 NC常规堆(Regular stacks)(Invitrogen，目录号IB23001；批号2NR110619-02)。
对于细胞收获，首先使用胰蛋白酶将细胞与板分离，然后用培养基和PBS洗涤。具体地，吸出培养基并且用1mL的PBS洗涤，并且吸出PBS。将细胞在37℃用0.5mL TrypLETMExpress处理7分钟以分离细胞，然后添加0.5mL的完全培养基以收集1mL的细胞培养液。然后，将1mL的细胞收集液以8，000rpm离心120秒，并且移除上清液。用0.2mL的PBS洗涤后，移除PBS。
对于细胞裂解，添加裂解缓冲液并且移除细胞碎片以获得细胞裂解物。具体地，将细胞用70μL的含有蛋白酶抑制剂的1X RIPA缓冲液处理，并且在冰上温育30分钟。然后，将细胞在4℃和15,000rpm下离心10分钟以获得细胞裂解物。
然后，使用BCA测定获得标准曲线，并且通过代入曲线方程来定量裂解物中的蛋白质质量。使用20μL的标准溶液或样品溶液以及200μL的BCA或Bradford溶液，将混合物在37℃温育30分钟，并且在562nm处测量吸光度。通过添加4X样品缓冲液来制备样品，使得添加到每个孔中的蛋白质的量为15μg。
在4-15％Mini-PROTEAN TGX未染色凝胶(15孔)上，在120V下，通过设置100分钟的运行时间，进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。在
Figure BPA0000310075650004232
2 NC Mini堆上以干印迹系统的P0模式进行转移。使用丽春红S溶液染色后，用封闭缓冲液(Thermo)封闭1小时。用含有0.05％吐温20的1X TBS洗涤后，在4℃将产物与作为一抗的在1X TBS-T中的抗-Plk1(CST)抗体(1∶500)、抗-BRD4(Cell signaling)抗体(1∶1000)或抗-GAPDH(abcam)抗体(1∶10,000)反应16小时。用含有0.05％吐温20的1X TBS洗涤三次达10分钟，在室温将产物与作为二抗的在1X TBS-T中的抗-小鼠抗体(abcam)(1∶10000)或抗-兔抗体(CST)(1∶5000)反应1小时。然后，在用含有0.05％吐温20的1X TBS洗涤三次达10分钟后，用ECL工作液(1∶1)检测产物。
为了分析结果，使用图像分析仪(GE)获得最终印迹数据。使用ImageQuant TL(版本8.2.0)程序计算每个样品的PLK1与GAPDH的比率。将每个计算值输入到Graphpad Prism9程序的每个单元格中，并且自动计算图形以确认对应于蛋白质降解能力的Dmax值(A：Dmax为80％以上；B：Dmax为80％以下至60％以上；C：小于60％)。如果Dmax的等级为A或B，则还测量DC50值(等级A：DC50为50nM以下；B：500nM以下；C：大于500nM)。
4.本发明的化合物的PLK1降解性
作为实验的结果，测量了本发明的化合物的Dmax和DC50值，如下表所示。
[表2]
Figure BPA0000310075650004241
Figure BPA0000310075650004251
Figure BPA0000310075650004261
Figure BPA0000310075650004271
特别地，证实了与CN106543185A的PLK PROTAC(比较化合物1和2)以及其中苯胺基团通过连接基团连接的比较化合物3相比，本发明的化合物1和2展现优异的PLK1蛋白质降解性(图1)。
5.本发明的化合物的选择性PLK1降解性
除了与比较化合物1和2(其蛋白质靶标部分是来自BI的PLK1抑制剂)相比具有优异的PLK1降解性以外，还证实了本发明的化合物2至4并未展现出Brd4(一种不同于PLK1的靶蛋白)的蛋白质降解性(图2)。这表明本发明的化合物具有优异的选择性PLK1降解性。
整个本申请中引用的所有参考文献、专利、未决专利申请和公开专利的内容通过引用明确结合于此。
本领域技术人员将认识到，或者能够仅使用常规实验确定，本文所述的公开内容的具体实施方案的许多等价物。这样的等价物旨在涵盖于以下权利要求中。应当理解，本文所述的详细实施例和实施方案仅出于说明性目的通过示例的方式给出，并且决不被认为是对本公开的限制。本领域技术人员将根据其提出各种修改或变化，并且包括在本申请的精神和范围内并且被认为在所附权利要求的范围内。例如，可以改变成分的相对量以优化所需的效果，可以添加另外的成分，和/或类似的成分可以替代一种或多种所述成分。根据所附权利要求，与本公开的系统、方法和过程相关的另外的有利特征和功能将是显而易见的。此外，本领域技术人员将认识到，或者能够仅使用常规实验确定，本文所述的公开内容的具体实施方案的许多等价物。这样的等价物旨在涵盖于以下权利要求中。

Claims (15)

1.一种由下式I表示的化合物、其立体异构体或其药用盐：
[式I]
ULM-连接基团-PTM
在上式I中，
ULM是CRBN或VHL E3泛素连接酶结合部分；
PTM是由下式II表示的PLK1结合部分：
Figure FPA0000310075640000011
{在上式II中，
R1是氢、C1-5烷基或C3-6环烷基；
R1A是氢或C1-3烷基；
R2是氢、卤素、C1-6烷基或-OR2A；
R2A是C1-4烷基或C3-6环烷基，任选地被一个或多个卤素或羟基取代；
R3是氢、卤素、-NO2、-CN、-OH、C1-4烷基或-OC1-4烷基；
R4选自由以下各项组成的组：单键，
Figure FPA0000310075640000012
R5是氢或C1-4烷基}；并且
连接基团是连接ULM和PTM的化学基团。
2.根据权利要求1所述的化合物，ULM是由下式A-1表示的CRBN E3泛素连接酶结合部分：
Figure FPA0000310075640000013
其中：
Figure FPA0000310075640000021
是选自由以下各项组成的组的环：
Figure FPA0000310075640000022
Figure FPA0000310075640000023
X1是单键、-CH2-、-NH-、-O-、-CH2CH2-、-CC-、-CO-、-COO-、-NHCO-或-CONH-；
X2是-CH2-、-CH(C1-4烷基)-、-NH-、-N(C1-4烷基)-、-O-、-CO-、-CH2-CH2-、-NH-CH2-、-NH-CH(C1-4烷基)-、-N＝CH-、-N＝C(C1-4烷基)-或-N＝N-；
X3是氢或C1-4烷基；并且
X4是氢、卤素、C1-6烷基、CN、NH2、NO2、OH、COH、COOH或CF3。
3.根据权利要求2所述的化合物，ULM是由下式A-2表示的CRBN E3泛素连接酶结合部分：
Figure FPA0000310075640000024
其中：
X2是-CH2-、-CH(C1-4烷基)-、-CO-或-N＝N-；并且
X3是氢或C1-3烷基。
4.根据权利要求1所述的化合物，ULM是由下式B-1表示的VHL E3泛素连接酶结合部分：
Figure FPA0000310075640000025
Figure FPA0000310075640000031
其中：
n是1至3的整数；
Figure FPA0000310075640000032
是5至6元环烷基、苯基、5至6元杂环烷基或5至6元杂芳基，其中所述杂环烷基或所述杂芳基含有一个至三个N、O或S原子；
Y1是氢或C1-4烷基；
Y2是C1-4烷基、羟基(C1-4烷基)、-(C0-2烷基)-COH、C3-8环烷基或苯基；
Y3是氢、
Figure FPA0000310075640000033
Y4是氢、卤素、C1-4烷基、-O(C1-4烷基)、C3-6环烷基或4至6元杂环烷基，任选地被卤素、-OH、-CN、-NHCOH、-NHCOCH3、-COH或-COCH3取代；并且
Y5是氢或C1-4烷基。
5.根据权利要求4所述的化合物，ULM是选自由下式B-2-1和B-2-2组成的组的VHL E3泛素连接酶结合部分：
Figure FPA0000310075640000034
Figure FPA0000310075640000041
其中：
Figure FPA0000310075640000042
是选自由以下各项组成的组的5元杂芳基环：噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、吡唑、三唑、噁二唑、吡咯、吡咯烷、呋喃、二氢呋喃和四氢呋喃；
Y1是氢或C1-3烷基；并且
Y4是C1-4烷基或C3-5环烷基，任选地被氢或卤素取代。
6.根据权利要求1所述的化合物，式II由下式III表示：
Figure FPA0000310075640000043
其中：
R1是C1-5烷基或C3-7环烷基；
R2是氢或-OR2A；
R2A是C1-6烷基、C3-7环烷基、CF3或-(C1-3亚烷基)-OH；
R3是氢或卤素。
7.根据权利要求1所述的化合物，连接基团由下式L表示：
Figure FPA0000310075640000044
其中：
Figure FPA0000310075640000045
和-----各自独立地是键；
LULM通过与其连接的
Figure FPA0000310075640000046
共价键合至ULM部分，
LPTM通过与其连接的
Figure FPA0000310075640000051
共价键合至PTM部分，
LULM、LPTM和LINT独立地选自由以下各项组成的组：不存在、单键、-CH2-、-NH-、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-CO-、-CH2CH2-、-CHCH-、-CC-、-CH2CH2O-、-OCH2CH2-、-CH2CH2S-、-SCH2CH2-、-COO-、-CONH-、-NHCO-和
Figure FPA0000310075640000052
任选地被一个或多个C1-6烷基、C3-8环烷基、卤素、羟基、氨基、硝基、氰基或卤代烷基取代{其中
Figure FPA0000310075640000053
是环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基}；并且
p是1至30的整数。
8.根据权利要求7所述的化合物，其中：
LULM是
Figure FPA0000310075640000054
LU1选自由以下各项组成的组：单键、-CH2-、-CH2CH2-、-CH＝CH-、-C≡C-、-NH-、-NCH3-、-CO-、-NHCO-和-O-；
LU2选自由以下各项组成的组：单键、-CH2-、-NH-、-O-、-CO-和-CONH-；并且
Figure FPA0000310075640000055
是不存在或选自由以下各项组成的组的环：3至10元环烷基、4至10元杂环烷基、6至10元芳基和5至10元杂芳基。
9.根据权利要求7所述的化合物，其中：
LPTM是
Figure FPA0000310075640000056
LP1选自由以下各项组成的组：单键、-O-、-S-、-NH-、-N(C1-4烷基)-、-CH2-、-CH(C1-4烷基)-、-CH2NH-和-CH2CH2-；
LP2选自由以下各项组成的组：单键、-CO-、-COCH2-、-NHCO-、-NHCOCH2-、-HET-和-HET-CH2-{其中HET是含有一个或多个N、S或O原子的5至6元杂环基或杂芳基}；并且
Figure FPA0000310075640000061
是不存在、氨基取代的C1-8烷基或选自由以下各项组成的组的环：3至10元环烷基、4至10元杂环烷基、6至10元芳基和5至10元杂芳基。
10.根据权利要求7所述的化合物，其中：
Figure FPA0000310075640000062
是
Figure FPA0000310075640000063
其中
Figure FPA0000310075640000064
是不存在或选自由以下各项组成的组的环：3至10元环烷基、4至10元杂环烷基、6至10元芳基和5至10元杂芳基。
LINT1和LINT2各自独立地选自由以下各项组成的组：CH2-、-NH-、-NCH3-、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-CO-、-CH2CH2O-、-OCH2CH2-、-CH2CH2S-、-SCH2CH2-、-COO-、-CONH-和-NHCO-；并且
q和r各自独立地是1至10的整数。
11.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物是选自由化合物1至175组成的组的化合物。
12.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物是诱导PLK1蛋白质降解的双官能化合物。
13.根据权利要求12所述的化合物，其中所述化合物诱导选择性PLK1蛋白质降解。
14.一种用于预防或治疗PLK1相关疾病的组合物，所述组合物包含根据权利要求1-13中任一项所述的化合物、其立体异构体或其药用盐。
15.根据权利要求14所述的组合物，所述PLK1相关疾病是选自由癌症、良性肿瘤和神经疾病组成的组的一种。
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