CN118076607A - 新型plk1降解诱导化合物 - Google Patents
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Abstract
本公开涉及一种新型PLK1降解诱导化合物、以及其制备方法和用途。本公开的化合物具有诱导PLK1降解的作用。因此，本公开的化合物可有效地用于预防或治疗PLK1相关疾病。
Description
技术领域
本公开涉及一种新型PLK1降解诱导化合物、以及其制备方法和用途。其可以特异性地作用于异常细胞等，并且可以通过有效降解PLK1治疗各种疾病。
背景技术
Polo样激酶1(PLK1)是在细胞生长和分裂过程中参与G2/M期转换的丝氨酸/苏氨酸激酶。PLK1以脉冲形式从S期到G2/M期表达和激活，并在有丝分裂结束时迅速降解。
PLK1在如结肠癌、肺癌、膀胱癌和黑素瘤等各种癌中过表达，且过表达PLK1的癌细胞往往显示出对各种类型的抗癌药物的抗性。由于如上所述揭示的各种癌中的PLK1依赖性，已经尝试开发PLK1抑制剂化合物，例如volasertib(也称为BI6727)等。
然而，常规PLK1抑制剂在临床上安全的浓度下不能充分抑制PLK1活性。因此，存在的问题是：即使癌细胞的细胞周期暂时延迟，但某些癌细胞最终仍然重启其细胞周期，这样可能无法获得预期的临床效果(参见Gheghiani等人，细胞报导，2017等)。事实上，许多制药公司，例如Boehringer Ingelheim，GlaxoSmithKline等，已经尝试开发基于小分子化合物的PLK1抑制剂，但是它们中的大多数在临床试验阶段失败或停止。因此迄今为止，没有市售的PLK1抑制剂。这表明，遵循通过与PLK1的活性位点结合来抑制酶活性的方法的药理学机制(如小分子化合物抑制剂)在旨在通过抑制癌细胞的PLK1活性来产生抗癌作用的新药物的开发中不够有效。
近来，已经提出将蛋白水解靶向嵌合体(PROTAC)作为能够诱导体内靶蛋白的蛋白水解的基于小分子的平台技术。PROTAC是双功能化合物，其中结合疾病相关靶蛋白的配体分子和E3泛素连接酶结合部分通过化学连接子连接。理论上，PROTAC化合物能够通过将疾病相关的靶蛋白置于E3泛素连接酶附近而诱导靶蛋白的降解。基于不同于现有抑制剂的这种新机制，已经开发了许多PROTAC化合物作为癌症和炎性疾病等的治疗剂，且正在进行各种可扩展性研究(例如，作为ADC(抗体-药物缀合物)的有效负载)。然而，该化合物在所有范围的结合部分或连接子中不显示活性，且为了使PROTAC表现出所需水平的功效，通过若干研究已知每个结合部分和连接子须具有适当连接的结构(参见US2020-0325130A)。特别地，在CRBN(Cereblon)E3连接酶靶向部分的情况下，取决于结合部分的类型或与其连接的化合物的结构，存在降解CRBN新底物(GSPT1，IKZF1/3等)或相应地显示脱靶毒性的风险。因此，重要的是，选择合适的结合部分并优化整个化合物的结构，以便在PROTAC药物开发期间不会表现出意想不到的毒性。
在使用PLK1作为靶蛋白的PROTAC化合物的情况下，中国专利公开No.106543185A公开了一些双功能化合物，其中volasertib衍生化合物和E3泛素连接酶CRBN的结合部分通过化学连接子连接。然而，相关技术文献仅描述了PROTAC化合物的一些有限形式的合成实施例。通常，PROTAC的靶降解活性和选择性可根据靶蛋白部分、E3泛素连接酶结合部分等的选择而显著变化(参见Burslem和Crews，2017等)。
此外，上述文献中描述的PROTAC化合物的特征在于同时降解PLK1和BRD4，并降解各种蛋白质(例如，其它PLK家族蛋白质和BRD4等)的化合物。该化合物可因药物开发时的脱靶毒性而引起副作用。特别地，已知，BRD4活性的强烈抑制不可避免地伴随着靶标毒性如血液毒性和胃肠毒性以及药理学作用。因此，当更多的BRD4蛋白被降解时，上述文献中描述的PROTAC化合物将预期面临更大的临床副作用(参见Bolden等人，细胞报导，2014)。
此外，根据由上述文献的发明人公布的文献(参见Mu等人，BBRC，2019)，可以证实，同时降解PLK1和BRD4的PROTAC化合物在细胞水平上具有比PLK1降解能力强得多的BRD4降解能力，且其细胞周期几乎停止在G1期等。即，不管常规PLK1抑制剂发挥药理学作用的方式如何，PROTAC化合物实际上仅充当BRD4抑制剂。
因此，需要一种没有或具有最小副作用的有效PLK1降解诱导化合物。(例如，脱靶毒性)
发明内容
技术问题
本公开的一目的是提供新型PLK1降解诱导化合物。
本公开的另一目的是提供制备所述化合物的方法。
本公开的再一目的是提供所述化合物的用途。
问题解决方案
为了实现上述目的，本发明人努力研究，结果发现本发明的新型PROTAC化合物通过E3连接酶结合剂，靶结合部分和连接子的适当结构组合和优化而特异性地作用于过表达PLK1的异常细胞，以诱导有效的PLK1降解并使副作用最小化，并完成了本发明。
选择性PLK1降解诱导化合物
本公开提供了诱导有效的polo样激酶1(PLK1)降解的新化合物。具体地，本公开提供了一种双功能化合物，其中PLK1结合部分和E3泛素连接酶结合部分通过化学连接子连接。
一方面，提供了一种由下式I表示的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐：
[式I]
ULN-接头-PTM
在上面的式I中，
ULM为由下式1表示的部分；
[式1]
PTM为由下式2表示的部分；
[式2]
接头是化学连接ULM和PTM的基团；
U为-CH2-或-C(＝O)-；
RU为-H或-卤素；
R1为-C1-4烷基或3至7元环烷基；
R2为-H；
R3和R4各自独立地为-H、-C1-4烷基、-C1-4烯基或-卤素，或者R3和R4彼此连接形成3至6元环；
R5为-C1-4烷基；
R6为-C1-4烷基、-C1-4卤代烷基、-O-RP或-卤素；
R7为-H、-C1-4烷基、-C1-4卤代烷基、-卤素或5至6元杂环烷基{其中5至6元杂环烷基环的至少一个H可以被-C1-4烷基取代}，或与接头连接形成5至6元环；和
RP为-H、-C1-4烷基、-C1-4羟基烷基或-C1-4卤代烷基。
在本公开的一个实施方案中，
ULM为由下式1-1或式1-2表示的部分；
[式1-1]
[式1-2]
U为-CH2-或-C(＝O)-；和
RU为-H或-卤素。
在本公开的一个实施方案中，
ULM为
RU为-H或-卤素。
在本公开的一个实施方案中，
PTM为
R1为-异丙基、-环丙基、-环丁基或-环戊基；
R3和R4各自独立地为-H、-C1-4烷基、-C1-4烯基或-卤素，或者R3和R4彼此连接形成3元环；
R6为-C1-4烷基、-C1-4卤代烷基、-O-RP或-卤素；
R7为-H、-C1-4卤代烷基、-卤素或5至6元杂环烷基{其中5至6元杂环烷基的至少一个H可以被-C1-4烷基取代}，或与接头连接形成5至6元杂环烷基环；和
RP为-H、-C1-4烷基、-C1-4羟基烷基或-C1-4卤代烷基。
在本公开的一个实施方案中，
接头为-LU-L1-L2-L3-LP-；
LU为-(CH2)x-、-C≡C-、-NH-、-O-、-S-或不存在(空){其中LU与ULM连接[其中，当LU不存在(空)时，L1直接与ULM连接]，并且x为0、1、2、3或4}；
L1为杂环烷基或不存在(空){其中，当L1不存在(空)时，LU和L2直接连接，杂环烷基在环中含有至少一个N原子，并且杂环烷基环的至少一个H可以被-C1-4烷基、-C1-4卤代烷基、-C1-4烷氧基、-OH、-卤素或＝O取代}；
L2为-(CH2)y1-、-(CH2)y2-C(＝O)-(CH2)y3-、-C(＝O)-(CH2)y1-C(＝O)-、
-(CH2)y2-O-(CH2)y3-C(＝O)-、-(CH2)y2-NH-(CH2)y3-、-(CH2)y2-N(C1-4烷基)-(CH2)y3-、-(CH2)y2-O-(CH2)y3-、-(CH2)y1-(O-C1-4烷基)z-O-C1-4烷基-、-(CH2)y2-C1-4烯基-(CH2)y3-或-(CH2)y2-苯基-(CH2)y3-{其中y1至y3各自独立地为0、1、2、3、4、5或6，并且z为1、2、3、4、5或6}；
L3为环烷基、杂环烷基、苯基或不存在(空){其中，当L3不存在(空)时，L2和Lp直接连接，杂环烷基在环中含有至少一个N原子，并且环烷基、杂环烷基或苯环的至少一个H可以被-C1-4烷基、-C1-4卤代烷基或-卤素取代}；
LP为-(CH2)z-NRL-C(＝O)-、-环烷基-NH-C(＝O)-、-杂环烷基-NH-C(＝O)-、-C(＝O)-、-(CH2)z-O-或不存在(空){其中LP的-(C＝O)-或-O-与PTM连接[其中，当LP不存在(空)时，L3的环烷基或杂环烷基直接与PTM连接]，-(CH2)z-NRL-C(＝O)-的NRL与R7连接形成5至6元环，并且z为0、1、2、3或4}；和
RL为-H或-C1-4烷基。
在本公开的一个实施方案中，
LU为-(CH2)x-、-C≡C-、-NH-、-O-、-S-或不存在(空){其中LU与ULM连接[其中，当LU不存在(空)时，L1直接与ULM连接]，并且x为0或1}；
L1为4至12元杂环烷基或不存在(空){其中，当L1不存在(空)时，LU和L2直接相连，4至12元杂环烷基为单环、桥联双环或螺环，4至12元杂环烷基在环中含有至少一个N原子，并且4至12元杂环烷基环的至少一个H可被-OH或-卤素取代}；
L2为-(CH2)y1-、-(CH2)y2-C(＝O)-(CH2)y3-、-C(＝O)-(CH2)y1-C(＝O)-、-(CH2)y2-O-(CH2)y3-C(＝O)-、-(CH2)y2-N(C1-4烷基)-(CH2)y3-、-(CH2)y2-O-(CH2)y3-、-(CH2)y1-(O-C1-4烷基)z-O-C1-4烷基-、-(CH2)y2-C1-4烯基-(CH2)y3-或-(CH2)y2-苯基-(CH2)y3-{其中y1至y3各自独立地为0、1、2、3、4或5，并且z为1、2、3、4或5}；
L3为4至6元环烷基、4至12元杂环烷基、苯基或不存在(空){其中，当L3不存在(空)时，L2与Lp直接相连，4至12元杂环烷基为单环、桥联双环或螺环，4至12元杂环烷基在环中含有至少一个N原子，并且4至6元环烷基、4至12元杂环烷基或苯环的至少一个H可以被-卤素取代}；
LP为-(CH2)z-NRL-C(＝O)-、-环烷基-NH-C(＝O)-、-杂环烷基-NH-C(＝O)-、-C(＝O)-、-(CH2)z-O-或不存在(空){其中LP的-(C＝O)-或-O-与PTM连接[其中，当LP不存在(空)时，L3的环烷基或杂环烷基直接与PTM连接]，-(CH2)z-NRL-C(＝O)-的NRL可以与R7连接形成5至6元杂环烷基环，并且z为0或1}；和
RL为-H或-C1-4烷基。
在本公开的某个实施方案中，由式I表示的化合物为选自化合物1至225的化合物。
在本公开中，药学上可接受的盐是指具有相对无毒，无害且对患者具有有效作用的浓度的任何有机或无机酸加成盐，其中由该盐引起的副作用不损害由式I表示的化合物的有益功效。例如，药学上可接受的盐可以是无机酸如盐酸、磷酸、硫酸、硝酸等，或有机酸如甲磺酸、对甲苯磺酸、乙酸、三氟乙酸、马来酸、琥珀酸、草酸、苯甲酸、酒石酸、富马酸、扁桃酸、丙酸、柠檬酸、乳酸、乙醇酸、葡糖酸、半乳糖醛酸、谷氨酸、戊二酸、葡糖醛酸、天冬氨酸、抗坏血酸、碳酸、香草酸或氢碘酸，但不限于此。
选择性PLK1降解诱导化合物的用途
本公开的一实施方式为用于诱导PLK1降解的组合物，其包含由式I表示的化合物或其药学上可接受的盐。式I同上定义。
在本公开的实验例中，证实了本公开的化合物能够有效地诱导PLK1的蛋白质降解。
鉴于作用机制，本公开的PLK1降解诱导性PROTAC化合物能够从根本上降解靶蛋白PLK1，从而与抑制PLK1的简单活性的常规PLK1小分子抑制剂相比，实现优异的PLK1抑制作用。
因此，包含本公开的由式I表示的化合物或其药学上可接受的盐的组合物可有效地用于选择性降解PLK1。
本公开的一实施方式为用于预防或治疗PLK1相关疾病的组合物，其包含由式I表示的化合物或其药学上可接受的盐。本公开的另一实施方式为用于预防或治疗PLKI相关疾病的方法，其包括向有需要的受试者施用所述组合物。式I同上定义。
在本公开中，PLK1相关疾病是指任何能够通过诱导PLK1降解或抑制PLK1活性而被治疗、减轻、延迟、抑制或防止的疾病或病症。在一个实施方案中，PLK1相关疾病可以是癌症(恶性肿瘤)、良性肿瘤、神经疾病或由过度细胞分裂引起的其它遗传或非遗传疾病。
癌症包括由于抑制PLK1活性而能够表现出预防或治疗功效的所有癌症，并且可以是实体癌或血液癌。例如，癌症可以是选自下组的一种或多种：鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞状细胞癌、腹膜癌、皮肤癌、皮肤或眼内黑素瘤、直肠癌、肛门肌肉癌、食道癌、小肠癌、内分泌癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、慢性或急性白血病、淋巴细胞性淋巴瘤、肝细胞癌、胃肠癌、胃癌、胰腺癌、成胶质细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝肿瘤、乳腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、头颈癌，脑癌，骨肉瘤、实体瘤、血癌、骨癌、大细胞淋巴瘤、肾上腺类皮质激素肿瘤、T细胞淋巴瘤/白血病、神经内分泌癌、神经内分泌肿瘤、胆管癌、成神经细胞瘤、成胶质细胞瘤、神经胶质瘤等，但不限于此。癌症不仅包括原发性癌症，还包括转移性癌症。
良性肿瘤包括由于PLK1活性的抑制而能够对其表现出预防或治疗功效的所有良性肿瘤，例如，处于癌症前期的良性肿瘤，且可以是实体瘤或血液肿瘤。例如，肿瘤可以是选自Barrett食管、结肠腺瘤和息肉、乳腺纤维腺瘤和囊肿、未确定意义的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)、单克隆淋巴细胞增多症等的一种或多种，但不限于此。
神经疾病包括由于抑制PLK1活性而能够表现出预防或治疗功效的所有神经疾病，并且具体地，可以是选自下组的一种或多种，该组由以下各项组成：中枢神经系统疾病、神经变性疾病、阿尔茨海默病，帕金森病、多发性硬化、亨廷顿病、老年性痴呆、癫痫、拉格瑞、中风、以及脑或脊髓损伤后的神经损伤和轴突变性相关病症，但不限于此。
除了由上式I表示的化合物或其药学上可接受的盐外，本公开的药物组合物还可包含一种或多种活性成分。活性成分表现出相同或相似的医学效果。
本公开的一实施方式描述了一种通过向包括人的哺乳动物施用由式I表示的化合物或其药学上可接受的盐来降解PLK1的方法。
本公开的另一个实施方式描述了一种通过向体外样品施用由式I表示的化合物或其药学上可接受的盐来降解PLK1的方法。样品可以是包括人在内的哺乳动物的细胞、细胞培养物、体液或组织，但不限于此。
有益效果
本公开的化合物具有诱导PLK1降解的作用。因此，本公开的化合物可有效地预防或治疗PLK1相关疾病。
附图说明
图1显示用本发明的化合物1至化合物49处理的荧光素酶测定结果。
图2显示用本发明的化合物50至化合物90处理的荧光素酶测定结果。
图3显示用本发明的化合物91至化合物131处理的荧光素酶测定结果。
图4显示用本发明的化合物133至化合物180处理的荧光素酶测定结果。
图5显示用本发明的化合物182至化合物225处理的荧光素酶测定结果。
具体实施方式
除非另外定义，本文中使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。说明书中使用的术语仅用于描述特定实施方案，并不旨在限制本公开。
本公开提供了下表所示的化合物1至225的合成方法。
[表1]
根据以下方法纯化本公开的化合物并分析结构。
仪器
LCMS：Shimadzu LCMS-2020，Agilent 1200/G6110A，Agilent 1200/G1956A
HPLC：Agilent 1260II LC，Agilent1200/G6410B
NMR：BRUKER AVANCE III/400MHz
SFC：SHIMADZU LC-30ADsf，Agilent 1260
LCMS分析
使用配备有ESI(电喷雾电离)装置的Shimadzu LCMS-2020或Agilent 1200/G6110A或Agilent 1200/G1956A记录LCMS数据。使用0.0375％ TFA/水(溶剂A)和0.01875％TFA/ACN(溶剂B)或0.025％ NH3·H2O/水(溶剂A)和ACN(溶剂B)作为流动相。使用KinetexEVO C18(2.1×30mm，5μm)或HALO C18(3.0×30mm，2.7μm)作为柱。
HPLC分析
在HPLC分析中，使用Agilent 1260II LC或Agilent 1200/G6410B。使用0.0375％TFA的水溶液(溶剂A)和0.01875％ TFA的ACN溶液(溶剂B)作为流动相。使用ZobraxEclipse Plus C18(4.6×150mm，3.5μm)或YMC ODS A(4.6×150mm，3μm)作为柱。
NMR分析
使用Bruker AVANCE III 400MHz/5mm探针(BBO)记录1H NMR谱。
SFC分析
在SFC分析中，使用SHIMADZU LC-30ADsf或Agilent 1260。使用CO2(溶剂A)和0.05％ DEA/IPA+ACN(溶剂B)或CO2(溶剂A)和0.05％ DEA/甲醇+ACN(溶剂B)或0.05％DEA/ACN(溶剂A)和0.05％ DEA/乙醇(溶剂B)作为流动相。使用Chiralpak AD-3(50×4.6mm，3μm)或Chiralpak AS-3(50×4.6mm，3μm)或Chiralpak OJ-3(50×4.6mm，3μm)或Chiralpak IA-3(50×4.6mm，3μm)或Chiralpak OD(50×4.6mm，3μm)或Chiralpak IC-3(50×4.6mm，3μm)或(S，S)Whelk-O1(100×4.6mm，3.5μm)作为柱。
实施例1、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物1)的合成
步骤1、甲基2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((2-羟乙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(3)的合成
将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(5g，18.10mmol)、2-氨基乙醇(1.44g，23.53mmol，1.42mL)和TEA(4.58g，45.25mmol，6.30mL)在DMF(35mL)中的混合物在80℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到48％的所需质量。将混合物真空浓缩，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((2-羟乙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(7.97g)，其为绿色油状物，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝317.9
步骤2、2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基4-甲基苯磺酸酯(4)的合成
向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((2-羟乙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(7.97g，25.12mmol)在DCM(40mL)中的溶液中加入TEA(7.63g，75.36mmol，10.49mL)和TosCl(9.58g，50.24mmol)，将混合物在15℃搅拌16小时。LCMS显示2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((2-羟乙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮完全消耗并且检测到30％的所需质量。将反应混合物真空浓缩以除去大部分溶剂。将残余物用H2O(200mL)稀释并用EtOAc(200mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(300mL×5)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(20g 硅胶快速柱，12～30％/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基4-甲基苯磺酸酯(860mg，1.82mmol，7.26％产率)，其为绿色固体。MS(M+H)+＝472.2
步骤3、(1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(5)的合成
将2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基4-甲基苯磺酸酯(200mg，424.19μmol)、哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(101.95mg，509.03μmol)、DIEA(164.47mg，1.27mmol，221.66μL)和NaI(6.36mg，42.42μmol)在DMF(2mL)中的混合物在80℃搅拌5小时。LCMS显示2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基4-甲基苯磺酸酯完全消耗并且检测到72％的所需质量。将反应混合物用H2O(30mL)稀释并用EtOAc(30mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL×5)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(12g硅胶快速柱，25～75％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到(1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，200.18μmol，47.19％产率)，其为绿色固体。MS(M+H)+＝500.2
步骤4、4-((2-(4-氨基哌啶-1-基)乙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(6)的合成
向(1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，200.18μmol)在二氧六环(5mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，10mL)，将混合物在15℃搅拌2小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到81％的所需质量。将反应混合物真空浓缩，得到4-((2-(4-氨基哌啶-1-基)乙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(110mg，HCl盐)，其为绿色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝400.1
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物1)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(90mg，193.37μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入DIEA(149.95mg，1.16mmol，202.09μL)和HATU(110.29mg，290.06μmol)，将混合物在15℃搅拌15分钟，向混合物中加入4-((2-(4-氨基哌啶-1-基)乙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(109.58mg，251.38μmol，HCl盐)，将所得混合物在15℃搅拌3小时。LCMS显示4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸完全消耗并且检测到85％的所需质量。向混合物中加入CH3COOH以调节pH<7。将所得混合物通过制备型HPLC(柱：WatersXbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：48％-78％，min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi C18 150*25mm*10μm；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：16％-49％，11min)纯化，将洗脱液冷冻干燥，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(42.8mg，49.53μmol，25.61％产率，98％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝847.4
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(br s,1H),8.30(s,1H),8.24(d,J＝13.3Hz,1H),8.03(s,1H),7.96(dd,J＝3.0,7.5Hz,1H),7.59(dd,J＝7.3,8.4Hz,1H),7.19(d,J＝6.7Hz,1H),7.10(d,J＝8.7Hz,1H),7.03(d,J＝7.0Hz,1H),6.83-6.65(m,1H),5.05(dd,J＝5.5,12.9Hz,1H),4.90-4.75(m,1H),4.14-4.01(m,2H),3.91(s,3H),3.84-3.70(m,1H),3.44-3.35(m,5H),2.98-2.81(m,3H),2.64-2.52(m,4H),2.11(t,J＝10.7Hz,2H),2.06-1.91(m,3H),1.87-1.78(m,2H),1.77-1.69(m,2H),1.68-1.50(m,6H)。
实施例2、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物2)的合成
按照与实施例1中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物2。
MS(M+H)+＝848.7,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.10(s,1H),8.30(s,1H),8.24(d,J＝13.2Hz,1H),8.03(s,1H),7.89(dd,J＝2.9,7.6Hz,1H),7.85-7.78(m,1H),7.55(d,J＝8.6Hz,1H),7.45(d,J＝7.2Hz,1H),7.19(d,J＝6.6Hz,1H),5.17-5.04(m,1H),4.88-4.76(m,1H),4.39-4.26(m,2H),4.07(t,J＝13.9Hz,2H),3.91(s,3H),3.80-3.70(m,1H),3.44(s,3H),2.98(d,J＝10.0Hz,2H),2.93-2.82(m,1H),2.82-2.70(m,2H),2.64-2.53(m,2H),2.22(t,J＝10.8Hz,2H),2.08-1.88(m,3H),1.87-1.68(m,4H),1.68-1.47(m,6H)。
实施例3、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物3)的合成
步骤1、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-羟基异吲哚啉-1,3-二酮(2)的合成
向3-氨基哌啶-2,6-二酮(13.56g，82.36mmol，HCl盐)在CH3COOH(100mL)中的溶液中加入4-羟基邻苯二甲酸(10g，54.91mmol)和NaOAc(13.51g，164.72mmol)，将混合物在120℃搅拌16小时。LCMS显示所需质量，过滤混合物，将滤饼用水(10mL×3)、MeOH(10mL×3)洗涤，然后收集并真空干燥，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-羟基异吲哚啉-1,3-二酮(11g，粗品)，其为棕色粉末。MS(M+H)+＝274.9
步骤2、5-(2-氯乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(3)的合成向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-羟基异吲哚啉-1,3-二酮(2g，7.29mmol)在DMF(50mL)中的溶液中加入NaHCO3(3.68g，43.76mmol，1.70mL)和KI(242.14mg，1.46mmol)，然后加入1-溴-2-氯乙烷(3.14g，21.88mmol，1.81mL)，将所得混合物在60℃搅拌16小时。LCMS显示所需质量，将混合物用水(20mL)稀释，用EtOAc(20mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge C18 150*50mm*10μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：24％-54％，11min)纯化，将洗脱液冻干，得到5-(2-氯乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(340mg，918.85μmol，12.60％产率，91％纯度)，其为黄色粉末。MS(M+H)+＝336.9
步骤3、(1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(4)的合成
向5-(2-氯乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(140mg，415.77μmol)在DMF(8mL)中的溶液中加入DIPEA(161.21mg，1.25mmol，217.26μL)和NaI(12.46mg，83.15μmol)，然后加入哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(166.54mg，831.54μmol)，将混合物在50℃搅拌16小时。LCMS显示所需质量，将混合物用水(6mL)稀释，用EtOAc(10mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC(柱：PhenomenexSynergi Polar-RP 100*25mm*4μm；水(TFA)-ACN；B％：23％-43％，7min)纯化，将洗脱液冻干，得到(1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(50mg，94.90μmol，22.82％产率，95％纯度)，其为红色粉末。MS(M+H)+＝501.3
步骤4、5-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(5)的合成
向(1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(50mg，99.89μmol)在二氧六环(4mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，4mL)，将混合物在25℃搅拌1小时。LCMS显示所需质量，将混合物真空浓缩，得到5-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(52mg，粗品，HCl盐)，其为白色粉末。MS(M+H)+＝400.9
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物3)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(85mg，182.63μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(104.16mg，273.94μmol)和DIPEA(70.81mg，547.89μmol，95.43μL)，在25℃搅拌5分钟后，加入5-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(47.87mg，109.58μmol，HCl盐)，将所得混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将混合物用水(3mL)稀释，用EtOAc(5mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi Polar-RP 100*25mm*4μm；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：35％-55％，7min)和制备型HPLC(柱：WatersXbridge150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：43％-73％,8min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(38.2mg，41.18μmol，22.55％产率，91.4％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝848.1
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.13(s,1H),8.32-8.21(m,2H),8.05(s,1H),7.92(dd,J＝7.64,3.12Hz,1H),7.84(d,J＝8.31Hz,1H),7.47(d,J＝2.08Hz,1H),7.38(dd,J＝8.31,2.20Hz,1H),7.19(d,J＝6.60Hz,1H),5.13(dd,J＝12.96,5.38Hz,1H),4.82(br t,J＝8.01Hz,1H),4.30(t,J＝5.50Hz,2H),4.08(t,J＝13.82Hz,2H),3.92(s,3H),3.82-3.70(m,1H),3.34(s,3H),2.98-2.83(m,3H),2.75(t,J＝5.44Hz,2H),2.65-2.54(m,2H),2.17(t,J＝10.76Hz,2H),2.09-2.02(m,1H),1.96(d,J＝2.81Hz,2H),1.80(d,J＝10.76Hz,2H),1.73(s,2H),1.68-1.54(m,6H)。
实施例4、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物4)的合成
按照与实施例1中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物4。
MS(M+H)+＝862.3,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.10(s,1H),8.30(s,1H),8.24(d,J＝13.4Hz,1H),8.03(s,1H),7.88(dd,J＝3.3,7.6Hz,1H),7.81(dd,J＝7.4,8.4Hz,1H),7.53(d,J＝8.6Hz,1H),7.45(d,J＝7.3Hz,1H),7.19(d,J＝6.6Hz,1H),5.09(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.82(quin,J＝7.9Hz,1H),4.25(br t,J＝6.1Hz,2H),4.07(br t,J＝13.9Hz,2H),3.91(s,3H),3.81-3.69(m,1H),3.27(br s,3H),2.96-2.79(m,3H),2.64-2.52(m,2H),2.48-2.44(m,2H),2.07-1.99(m,3H),1.99-1.87(m,4H),1.80(br d,J＝10.1Hz,2H),1.73(br s,2H),1.68-1.58(m,4H),1.57-1.49(m,2H)。
实施例5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物5)的合成
按照与实施例1中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物5。
MS(M+H)+＝830.0,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.11(s,1H),8.29-8.25(m,2H),8.08(d,J＝7.8Hz,1H),7.97(s,1H),7.86-7.80(m,1H),7.57(d,J＝8.6Hz,1H),7.51-7.44(m,3H),5.10(dd,J＝5.4,12.9Hz,1H),4.82-4.71(m,1H),4.38-4.31(m,2H),4.07-4.02(m,2H),3.94(s,3H),3.82-3.72(m,1H),3.32-3.28(m,3H),3.06-3.02(m,2H),2.95-2.83(m,1H),2.81-2.78(m,2H),2.64-2.57(m,2H),2.26-2.19(m,2H),2.07-2.00(m,1H),1.98-1.89(m,2H),1.83-1.76(m,2H),1.74-1.68(m,2H),1.65-1.56(m,6H)。
实施例6、2-氯-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物6)的合成
按照与实施例1中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物6。
MS(M+H)+＝863.9,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.11(s,1H),8.40(s,1H),8.28(s,1H),8.24(d,J＝7.8Hz,1H),7.99(s,1H),7.85-7.79(m,1H),7.55(d,J＝8.6Hz,1H),7.46(d,J＝7.2Hz,1H),7.04(s,1H),5.09(dd,J＝5.4,12.7Hz,1H),4.92-4.80(m,1H),4.35-4.27(m,2H),4.13-4.03(m,2H),3.91(s,3H),3.80-3.72(m,1H),3.33(s,3H),3.02-2.83(m,2H),2.81-2.76(m,2H),2.64-2.54(m,3H),2.28-2.22(m,2H),2.06-1.94(m,3H),1.84-1.77(m,2H),1.76-1.71(m,2H),1.70-1.57(m,4H),1.55-1.47(m,2H)。
实施例7、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((3R)-1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙基)吡咯烷-3-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物7)的合成
步骤1、((3R)-1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(3)的合成
向4-(2-氯乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(500mg，1.48mmol)和(R)-吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯(276.56mg，1.48mmol)在DMF(7mL)中的溶液中加入KI(246.49mg，1.48mmol)和DIPEA(575.73mg，4.45mmol，775.92μL)。将混合物在50℃搅拌2小时。LCMS显示4-(2-氯乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮完全消耗以及具有所需质量的峰(19％)。将反应混合物用水(100mL)稀释并用EtOAc(30mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将粗产物通过反相HPLC(0.1％FA条件：柱：120g快速柱Welch Ultimate XB_C1820-40μm；流速：85mL/min；流动相：MeCN/H2O；梯度B％：5-30％20min；30-100％25min，仪器：TELEDYNE ISCOCombiFlashRf150)纯化，将洗脱液冻干，得到((3R)-1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(120mg，239.25μmol，16.11％产率，97％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝487.3
步骤2、4-(2-((R)-3-氨基吡咯烷-1-基)乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(4)的合成
将((3R)-1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙基)吡咯烷-3-氨基甲酸叔丁酯(100mg，205.54μmol)、HCl/二氧六环(4M，1.5mL)在DCM(1.5mL)中的混合物在25℃搅拌0.5小时。LCMS显示((3R)-1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯完全消耗以及具有所需质量的主峰(91％)。将反应混合物减压浓缩，得到4-(2-((R)-3-氨基吡咯烷-1-基)乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(100mg，粗品，HCl盐)，其为白色固体。MS(M+H)+＝387.2
步骤3、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((3R)-1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙基)吡咯烷-3-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物7)的合成
向4-(2-((R)-3-氨基吡咯烷-1-基)乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(100mg，236.48μmol，HCl盐)和4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(105.81mg，236.48μmol)在DMF(3mL)中的溶液中加入HATU(134.88mg，354.73μmol)和DIPEA(91.69mg，709.45μmol，123.57μL)。将混合物在25℃搅拌5小时。LCMS显示4-(2-((R)-3-氨基吡咯烷-1-基)乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮完全消耗以及具有所需质量的峰(77％)。将反应混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过柱色谱法(SiO2，MeOH/EtOAc＝0/1至1/10)纯化。然后通过制备型HPLC(中性条件：柱：Waters Xbridge 150x25mm x5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：40％-70％，10min)再纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((3R)-1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙基)吡咯烷-3-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(33.4mg，39.30μmol，16.62％产率，96％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝816.0
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.11(s,1H),8.37(d,J＝7.1Hz,1H),8.30-8.24(m,2H),7.97(s,1H),7.82(dd,J＝7.4,8.5Hz,1H),7.58-7.46(m,4H),5.13-5.04(m,1H),4.83-4.72(m,1H),4.48-4.38(m,1H),4.35-4.30(m,2H),4.06-3.98(m,2H),3.94(s,3H),3.33(s,3H),2.94-2.82(m,5H),2.66-2.58(m,3H),2.56-2.53(m,1H),2.21-2.10(m,1H),2.06-1.91(m,3H),1.85-1.75(m,1H),1.74-1.66(m,2H),1.65-1.56(m,4H)。
实施例8、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((3R)-1-(3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)丙基)吡咯烷-3-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物8)的合成
按照与实施例7中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物8。
MS(M+H)+＝830.3,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.11(s,1H),8.47(br d,J＝3.6Hz,1H),8.36-8.20(m,2H),7.99(s,1H),7.83(dd,J＝7.4,8.4Hz,1H),7.62-7.38(m,4H),5.07(dd,J＝5.4,12.6Hz,1H),4.76(quin,J＝8.1Hz,1H),4.54-4.41(m,1H),4.30(brt,J＝5.9Hz,2H),4.04(br t,J＝14.0Hz,2H),3.92(s,3H),3.32(br s,3H),3.02-2.78(m,6H),2.62-2.54(m,3H),2.28-2.25(m,1H),2.13-2.02(m,2H),2.02-1.86(m,4H),1.74-1.71(m,2H),1.65-1.48(m,4H)。
实施例9、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙基)吡咯烷-3-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物9)的合成
按照与实施例7中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物9。
MS(M+H)+＝816.0,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.11(s,1H),8.37(d,J＝7.2Hz,1H),8.31-8.22(m,2H),7.97(s,1H),7.82(dd,J＝7.4,8.5Hz,1H),7.57-7.44(m,4H),5.12-5.04(m,1H),4.79-4.69(m,1H),4.48-4.38(m,1H),4.37-4.31(m,2H),4.06-4.02(m,2H),3.94(s,3H),3.33(s,3H),2.94-2.83(m,5H),2.69-2.58(m,3H),2.57-2.54(m,1H),2.21-2.11(m,1H),2.05-1.91(m,3H),1.84-1.78(m,1H),1.74-1.67(m,2H),1.64-1.56(m,4H)。
实施例10、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)丙基)吡咯烷-3-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物10)的合成
步骤1、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(3-羟基丙氧基)异吲哚啉-1,3-二酮(2)的合成
向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-羟基异吲哚啉-1,3-二酮(3g，10.94mmol)和3-溴丙-1-醇(1.67g，12.03mmol，1.09mL)在DMF(100mL)中的溶液中加入Na2CO3(5.80g，54.70mmol)，将混合物在80℃搅拌16小时。LCMS显示2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-羟基异吲哚啉-1,3-二酮完全消耗以及具有所需质量的峰(82％)。将反应混合物用H2O(600mL)稀释并用EtOAc(300mL×4)萃取。将合并的有机层用盐水(500mL×5)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物与MTBE(30mL)和EtOAc(10mL)的混合物一起研磨10分钟，过滤混悬液，用MTBE(10mL)洗涤滤饼。收集滤饼并干燥，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(3-羟基丙氧基)异吲哚啉-1,3-二酮(910mg，2.74mmol，25.03％产率)，其为浅棕色固体。MS(M+H)+＝333.0
步骤2、3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)丙醛(3)的合成
向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(3-羟基丙氧基)异吲哚啉-1,3-二酮(410mg，1.23mmol)在DMSO(3mL)中的溶液中加入IBX(863.72mg，3.08mmol)，将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示残留痕量的起始材料并且检测到所需质量的主峰(95％)。直接使用反应混合物。得到化合物(3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)丙醛(410mg)，其为棕色液体。MS(M+H)+＝331.0
步骤3、((3S)-1-(3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)丙基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(5)的合成
向(S)-吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯(346.80mg，1.86mmol)和3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)丙醛(410mg，1.24mmol)在DCE(12mL)中的溶液中加入AcOH(7.45mg，124.13μmol，7.10μL)，将混合物在25℃搅拌30分钟，向混合物中加入NaBH(OAc)3(789.26mg，3.72mmol)，将所得混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示残留痕量的3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)丙醛并且检测到40％的所需质量。过滤反应混合物并用ACN(10mL)洗涤滤饼，真空浓缩滤液得到残余物。将残余物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge C18 150*50mm*10μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：24％-54％，11min)纯化，将洗脱液冷冻干燥，得到((3S)-1-(3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)丙基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(285mg，569.38μmol，45.87％产率)，其为灰白色固体。MS(M+H)+＝501.2
步骤4、4-(3-((S)-3-氨基吡咯烷-1-基)丙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(6)的合成
向((3S)-1-(3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)丙基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(150mg，299.67μmol)在二氧六环(1mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，1mL)，将混合物在25℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到94％的所需质量。将反应混合物在40℃真空浓缩，得到4-(3-((S)-3-氨基吡咯烷-1-基)丙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(130mg，HCl盐)，其为棕色固体，其直接使用。MS(M+H)+＝401.1
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)丙基)吡咯烷-3-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物10)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(80mg，178.80μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(101.98mg，268.20μmol)和DIPEA(138.65mg，1.07mmol，186.86μL)，将混合物在25℃搅拌15分钟，向混合物中加入4-(3-((S)-3-氨基吡咯烷-1-基)丙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(124.98mg，286.08μmol，HCl盐)，将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸完全消耗并且检测到59％的所需质量。向混合物中加入CH3COOH以调节pH<7。将混合物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex C18 75*30mm*3μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：18％-48％,7min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：WatersXbridge150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：30％-60％，8min)纯化，将洗脱液冷冻干燥得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)丙基)吡咯烷-3-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(29.3mg，34.25μmol，19.15％产率，97％纯度)，其为灰白色固体。MS(M+H)+＝830.3
实施例11、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)硫基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物11)的合成
步骤1、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-巯基异吲哚啉-1,3-二酮(2)的合成
于25℃，向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(5g，18.10mmol)在DMF(50mL)中的溶液中分批加入Na2S(1.84g，23.53mmol)。将所得溶液在25℃搅拌4小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将反应混合物倒入冰水(150mL)中，然后加入6N HCl溶液以调节pH至3。混合物的颜色从血红色变为浅黄色，并且形成大量白色固体。过滤混合物。用水(30mL×3)洗涤滤饼，然后用丙酮(30mL×3)洗涤。收集所得固体并干燥，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-巯基异吲哚啉-1,3-二酮(4.5g，15.50mmol，85.64％产率)，其为灰色固体。
步骤2、4-((2-溴乙基)硫基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(3)的合成
于25℃，向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-巯基异吲哚啉-1,3-二酮(1.2g，4.13mmol)和K2CO3(1.14g，8.27mmol)在DMF(15mL)中的混合物中加入1,2-二溴乙烷(1.01g，5.37mmol)。将所得混合物在25℃搅拌1小时。TLC(石油醚:EtOAc＝1:1，Rf＝0.75)显示起始材料完全消耗。将反应混合物倒入盐水(80mL)中并用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(15mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩，得到粗产物，将其通过快速硅胶色谱法(10g硅胶柱，EtOAc/石油醚＝10-40％，60mL/min)纯化，得到4-((2-溴乙基)硫基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(150mg，283.20μmol，产率6.85％，纯度75％)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝399.0
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.12(s,1H),7.81-7.78(m,2H),7.68-7.66(m,1H),5.14-5.09(m,1H),3.75-3.70(m,2H),3.67-3.63(m,2H),2.64-2.53(m,2H),2.52-2.51(m,1H),2.33-2.31(m,1H)。
步骤3、(1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)硫基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(5)的合成
于25℃，向4-((2-溴乙基)硫基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(150mg，377.60μmol)和N-(4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯(113.44mg，566.40μmol)在DMF(3mL)中的溶液中加入DIPEA(146.41mg，1.13mmol)和KI(6.27mg，37.76μmol)。将所得混合物在70℃搅拌14小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及所需质量。将反应混合物倒入盐水(20mL)中并用EtOAc(8mL×4)萃取。将合并的有机层用盐水(5mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩，得到粗产物，将其通过快速硅胶色谱法(4g硅胶柱，EtOAc/石油醚＝20-70％，50mL/min)纯化，得到(1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)硫基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(120mg，213.70μmol，56.59％产率，92％纯度)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝517.2
步骤4、4-((2-(4-氨基哌啶-1-基)乙基)硫基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(6)的合成
将(1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)硫代)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(将120mg，232.28μmol)和TFA(924.00mg，8.10mmol)在DCM(2mL)中的溶液中在25℃搅拌30分钟。TLC(石油醚:EtOAc＝0:1，Rf＝0)显示起始材料完全消耗。将反应溶液浓缩，得到4-((2-(4-氨基哌啶-1-基)乙基)硫基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(120mg，粗品，TFA)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝417.1
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)硫基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物11)的合成
于25℃，向4-((2-(4-氨基哌啶-1-基)乙基)硫基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(100mg，188.50μmol，TFA)、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(78.96mg，169.65μmol)和DIPEA(146.17mg，1.13mmol)在DMF(2mL)中的混合物中加入HATU(93.17mg，245.04μmol)。将所得混合物在25℃搅拌14小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将反应溶液倒入盐水(12mL)中并用EtOAc(5mL×4)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并浓缩，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法(4g硅胶柱，EtOAc/石油醚＝20-100％，然后MeOH/EtOAc＝20％，40mL/min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：48％-78％，10min)纯化并冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)硫基)乙基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(34mg，38.27μmol，20.30％产率，97.23％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝864.0
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.13(s,1H),8.29(s,1H),8.24(d,J＝14.4Hz,1H),8.04(s,1H),7.94-7.91(m,1H),7.81-7.75(m,2H),7.62(d,J＝8Hz,1H),7.19(d,J＝8Hz,1H),5.13-5.09(m,1H),4.84-4.80(m,1H),4.07(t,J＝16Hz,2H),3.91(s,3H),3.80-3.71(m,1H),3.33(s,3H),3.30-3.26(m,3H),2.94-2.88(m,2H),2.88-2.84(m,1H),2.67-2.64(m,2H),2.61-2.56(m,3H),2.13-2.03(m,3H),2.03-1.95(m,2H),1.80-1.78(m,2H),1.76-1.70(m,2H),1.60-1.53(m,4H)。
实施例12、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物12)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(哌啶-4-基)苯甲酰胺(40mg，70.67μmol，HCl)在MeOH(1mL)中的溶液中加入NaOAc(5.80mg，70.67μmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-甲醛(60mg，209.61μmol)，将混合物在20℃搅拌2小时。加入NaBH3CN(13.32mg，212.00μmol)，将混合物在20℃搅拌3小时。LCMS显示35％的所需质量。将混合物减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex C18 75*30mm*3μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：12％-42％,7min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(6.3mg，7.17μmol，10.14％产率，91％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝800.1
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.20-11.09(m,1H),8.33-8.23(m,2H),8.17-8.08(m,1H),8.01-7.79(m,4H),7.52-7.39(m,2H),5.26-5.06(m,1H),4.82-4.70(m,1H),4.09-4.00(m,2H),3.99-3.95(m,1H),3.95-3.91(m,3H),3.88-3.75(m,1H),3.32-3.30(m,3H),2.97-2.84(m,2H),2.65-2.57(m,1H),2.45-2.35(m,3H),2.25-2.12(m,2H),2.11-2.02(m,1H),1.99-1.88(m,2H),1.86-1.75(m,1H),1.74-1.52(m,9H)。
实施例13、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)乙基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物13)的合成
步骤1、4-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(2)的合成
向配备有搅拌棒的100mL小瓶中加入在DCE(10mL)中的4-溴-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(1g，2.97mmol)、(2-溴乙氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(922.48mg，3.86mmol)、Dtbbpy(5.90mg，14.83μmol)、TTMSS(737.59mg，2.97mmol，915.13μL)、Na2CO3(628.78mg，5.93mmol)。将小瓶密封并置于氮气下。将反应搅拌并用34W蓝色LED灯(距离7cm)照射，用冷却风扇将反应温度保持在25℃14小时。LCMS显示具有所需质量的峰(66％)。将反应混合物用盐水(20mL)稀释，用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。将滤液减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法(Biotage；20g 硅胶快速柱，20～70％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@40mL/min)纯化，得到4-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(1.1g，2.27mmol，76.56％产率，86％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝417.1
步骤2、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(2-羟乙基)异吲哚啉-1,3-二酮(3)的合成
向4-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(650mg，1.56mmol)在二氧六环(25mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，2.50mL)，将混合物在0℃搅拌0.5小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将反应混合物用H2O(20mL)稀释并用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。将滤液减压浓缩，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(2-羟乙基)异吲哚啉-1,3-二酮(460mg，粗品)，其为白色固体。MS(M+H)+＝303.3
步骤3、2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)乙基4-甲基苯磺酸酯(4)的合成
向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(2-羟乙基)异吲哚啉-1,3-二酮(500mg，1.65mmol)在DCM(5mL)中的溶液中加入TosCl(378.42mg，1.98mmol)、TEA(502.13mg，4.96mmol，690.68μL)，将混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的峰(50％)。将反应混合物用H2O(20mL)稀释。分离有机相，用EtOAc(10mL×2)萃取水相。将合并的有机层用盐水(20mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。将滤液减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法(Biotage；4g 硅胶快速柱，15～50％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@40mL)纯化，得到2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)乙基4-甲基苯磺酸酯(450mg，916.82μmol，55.43％产率，93％纯度)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝456.9
步骤4、(1-(2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(5)的合成
向2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)乙基4-甲基苯磺酸酯(440mg，963.92μmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入N-(4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯(212.36mg，1.06mmol)、DIPEA(124.58mg，963.92μmol，167.90μL)和NaI(14.45mg，96.39μmol)，将混合物在60℃搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的峰(46％)。将反应混合物用H2O(20mL)稀释，用EtOAc(10mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，将滤液减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法(Biotage；12g硅胶快速柱，20～70％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@40mL/min)纯化，得到(1-(2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(220mg，404.09μmol，41.92％产率，89％纯度)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝485.2
步骤5、4-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(6)的合成
向(1-(2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，206.38μmol)在二氧六环(2mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，2mL)，将混合物在25℃搅拌1小时。LCMS显示具有所需质量的峰(79％)。将反应混合物减压浓缩，得到4-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(86mg，粗品，HCl)，其为白色固体。MS(M+H)+＝385.0
步骤6、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)乙基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物13)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(85.05mg，190.07μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(108.41mg，285.11μmol)、DIPEA(73.70mg，570.22μmol，99.32μL)，将混合物在25℃搅拌0.5小时，加入4-(2-(4-氨基哌啶-1-基)乙基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(80mg，粗品，HCl)，将混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的峰(80％)。将反应混合物用H2O(5mL)稀释。分离有机相，用EtOAc(5mL×2)萃取水相。将合并的有机层用盐水(5mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，将滤液减压浓缩，得到残余物。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi C18 150*25mm*10μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：19％-55％，12min)纯化，然后通过HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：40％-70％，10min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Unisil 3-100C18 Ultra 150*50mm*3μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：15％-35％，10min)纯化。将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)乙基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(64.1mg，77.19μmol，40.61％产率，98％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝814.3
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.13(s,1H),8.35-8.23(m,2H),8.11(d,J＝7.6Hz,1H),7.96(s,1H),7.81-7.72(m,3H),7.53-7.44(m,2H),5.18-5.10(m,1H),4.81-4.70(m,1H),4.04(t,J＝14.1Hz,2H),3.93(s,3H),3.84-3.71(m,1H),3.32(s,3H),3.25-3.21(m,2H),3.00-2.94(m,2H),2.91-2.83(m,1H),2.64-2.54(m,4H),2.13-2.02(m,3H),1.99-1.89(m,2H),1.82-1.75(m,2H),1.74-1.66(m,2H),1.65-1.52(m,6H)
实施例14、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)丙基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物14)的合成
步骤1、(1-(丙-2-炔-1-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(2)的合成
向哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(2g，9.99mmol)在ACN(20mL)中的溶液中加入Cs2CO3(6.51g，19.97mmol)和3-溴丙-1-炔(1.48g，9.99mmol，1.08mL，80％纯度)，将混合物在25℃搅拌16小时。TLC(100％ EtOAc)通过用KMnO4展开显示出新的点。将混合物用水(10mL)稀释，用EtOAc(5mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将粗产物通过快速硅胶色谱法(Biotage，4g 硅胶快速柱，4～100％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@20mL/min)纯化，得到(1-(丙-2-炔-1-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.4g，5.87mmol，58.82％产率)，其为黄色粉末。MS(M+H)+＝239.3
步骤2、(1-(3-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)丙-2-炔-1-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(3)的合成
向4-溴-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(100mg，296.63μmol)和(1-(丙-2-炔-1-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(84.83mg，355.95μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入Pd(PPh3)2Cl2(20.82mg，29.66μmol)、CuI(5.65mg，29.66μmol)和TEA(300.15mg，2.97mmol，412.86μL)，将混合物在80℃搅拌16小时。LCMS显示所需质量，将混合物用水(5mL)稀释并用EtOAc(5mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将粗产物通过快速硅胶色谱法(Biotage，4g硅胶快速柱，4～100％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@35mL/min)纯化，得到(1-(3-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)丙-2-炔-1-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(130mg，252.36umol，85.08％产率，96％纯度)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝495.0
步骤3、(1-(3-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)丙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(4)的合成
在N2下向(1-(3-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)丙-2-炔-1-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(130mg，262.87μmol)在EtOH(2mL)中的溶液中加入Pd/C(1.30g，10％纯度)，然后将H2(529.90μg，262.87μmol)鼓泡入混合物中，将混合物在15psi的H2下在25℃搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的主峰，将混合物过滤并真空浓缩，得到(1-(3-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)丙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(120mg，粗品)，其为黄色油状物，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝499.0
步骤4、4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)丙基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(5)的合成
向(1-(3-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)丙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(120mg，240.69μmol)在二氧六环(1mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，1mL)，将混合物在25℃搅拌1小时。LCMS显示所需质量，将混合物真空浓缩，得到4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)丙基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(90mg，225.87μmol，产率93.84％)，其为黄色粉末。MS(M+H)+＝399.0
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)丙基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物14)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(90mg，201.15μmol)在DMF(1mL)中的溶液中加入HATU(114.72mg，301.72μmol)和DIEA(77.99mg，603.44μmol，105.11μL)，在25℃搅拌0.5小时后，然后加入4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)丙基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(87.48mg，201.15μmol，HCl盐)，将所得混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示所需质量。将混合物用水(3mL)稀释并用EtOAc(5mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，将粗产物通过快速硅胶色谱法(Biotage，4g 硅胶快速柱，4～10％MeOH/DCM@30mL/min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：45％-75％,8min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)丙基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(7.8mg，9.20μmol，4.57％产率，97.6％纯度)，其为白色粉末。MS(M+H)+＝828.0
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.13(s,1H),8.24-8.30(m,2H),8.11(br d,J＝7.58Hz,1H),7.96(s,1H),7.71-7.82(m,3H),7.46-7.52(m,2H),5.14(dd,J＝12.90,5.44Hz,1H),4.77(t,J＝8.07Hz,1H),4.05(t,J＝14.12Hz,2H),3.94(s,3H),3.72-3.81(m,1H),3.42(s,3H),3.04-3.09(m,2H),2.85-2.93(m,3H),2.62-2.70(m,2H),2.32-2.37(m,2H),2.03-2.11(m,1H),1.95(t,J＝10.58Hz,4H),1.69-1.84(m,6H),1.54-1.66(m,6H)。
实施例15、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-((3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)丙基)(甲基)氨基)环己基)-3-甲氧基苯甲酰胺(反式)(化合物15)的合成
步骤1、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(3-羟基丙氧基)异吲哚啉-1,3-二酮(2)的合成
向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-羟基异吲哚啉-1,3-二酮(5g，18.23mmol)和3-溴丙-1-醇(2.79g，20.06mmol，1.81mL)在DMF(130mL)中的溶液中加入Na2CO3(9.66g，91.16mmol)，将混合物在80℃搅拌16小时。LCMS显示所需质量。过滤反应混合物并用EtOAc(60mL)洗涤滤饼。将滤液用盐水(600mL)稀释并用EtOAc(400mL×5)萃取。将合并的有机层真空浓缩以除去一些溶剂，将所得混合物用盐水(300mL×5)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物与MTBE(25mL)和EtOAc(5mL)的混合物一起研磨10分钟，过滤混悬液，用MTBE(20mL)洗涤滤饼。收集滤饼并干燥，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(3-羟基丙氧基)异吲哚啉-1,3-二酮(2.3g，6.92mmol，产率37.96％)，其为灰白色固体。MS(M+H)+＝333.0
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.10(br s,1H),7.81(t,J＝7.9Hz,1H),7.52(d,J＝8.5Hz,1H),7.44(d,J＝7.3Hz,1H),5.08(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.56(t,J＝5.1Hz,1H),4.27(t,J＝6.2Hz,2H),3.60(q,J＝5.8Hz,2H),2.95-2.81(m,1H),2.63-2.52(m,2H),2.09-1.99(m,1H),1.95-1.85(m,2H)。
步骤2、3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)丙基4-甲基苯磺酸酯(3)的合成
向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(3-羟基丙氧基)异吲哚啉-1,3-二酮(1g，3.01mmol)在DCM(20mL)中的溶液中加入TEA(1.22g，12.04mmol，1.68mL)和TosCl(1.15g，6.02mmol)，将混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示残余17％的起始材料和65％的所需质量。将所得混合物真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(20g 硅胶快速柱，25～100％ EtOAc/石油醚至10～17％甲醇/EtOAc梯度洗脱液@100mL/min)纯化。将洗脱液真空浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150*40mm*15μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：32％-62％,10min)纯化，将洗脱液冷冻干燥，得到3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)丙基4-甲基苯磺酸酯(490mg，1.01mmol，产率33.47％)，其为白色固体。MS(M+H)+＝487.0。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.13(s,1H),7.77(dd,J＝7.5,8.3Hz,1H),7.68(d,J＝8.3Hz,2H),7.45(d,J＝7.3Hz,1H),7.34(d,J＝8.6Hz,1H),7.26(d,J＝8.1Hz,2H),5.10(dd,J＝5.5,12.7Hz,1H),4.28(t,J＝5.8Hz,2H),4.07(t,J＝5.6Hz,2H),2.96-2.82(m,1H),2.65-2.53(m,2H),2.20(s,3H),2.12-1.95(m,3H)。
步骤3、4-(3-(((1r,4r)-4-(二苄氨基)环己基)(甲基)氨基)丙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(反式)(5)的合成
向3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)丙基4-甲基苯磺酸酯(245mg，503.60μmol)和(1r,4r)-N1,N1-二苄基-N4-甲基环己烷-1,4-二胺(反式)(310.68mg，1.01mmol)在DMF(6mL)中的溶液中加入DIPEA(260.34mg，2.01mmol，350.87μL)和NaI(7.55mg，50.36μmol)，将混合物在60℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及所需质量。将所得混合物用H2O(60mL)稀释并用EtOAc(40mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL×5)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过制备型TLC(SiO2，DCM:甲醇＝5:1)纯化，得到4-(3-(((1r,4r)-4-(二苄基氨基)环己基)(甲基)氨基)丙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(反式)(195mg，313.13μmol，产率62.18％)，其为棕色固体。MS(M+H)+＝623.2
步骤4、4-(3-(((1r,4r)-4-氨基环己基)(甲基)氨基)丙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(反式)(6)的合成
在N2气氛下，向4-(3-(((1r,4r)-4-(二苄氨基)环己基)(甲基)氨基)丙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(反式)(185.00mg，297.07μmol)在CF3CH2OH(30mL)中的溶液中加入Pd(OH)2/C(100mg，10％纯度)、HCl(1M H2O，297.07μL)和Pd/C(100mg，10％纯度)，将混合物脱气并用H2鼓吹3次，在H2(15psi)气氛下将混悬液在50℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的主峰。过滤反应混合物并用CF3CH2OH(50mL)洗涤滤饼，真空浓缩滤液。将残余物通过制备型TLC(SiO2，DCM:甲醇＝5:1)纯化，得到4-(3-(((1r,4r)-4-氨基环己基)(甲基)氨基)丙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(反式)(180mg，HCl盐)，其为棕色固体。MS(M+H)+＝443.1
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-((3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)丙基)(甲基)氨基)环己基)-3-甲氧基苯甲酰胺(反式)(化合物15)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(105mg，234.67μmol)在DMF(3mL)中的溶液中加入HATU(116.00mg，305.07μmol)和DIPEA(151.65mg，1.17mmol，204.38μL)，将混合物在25℃搅拌15分钟。向混合物中加入4-(3-(((1r,4r)-4-氨基环己基)(甲基)氨基)丙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(179.84mg，375.47μmol，HCl盐)，将所得混合物在25℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及所需质量。向混合物中加入CH3COOH以调节pH<7。将所得混合物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex C18 75*30mm*3μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：18％-48％,7min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：48％-78％,8min)和制备型HPLC(柱：Phenomenex C18 75*30mm*3μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：18％-48％,7min)纯化，将洗脱液冷冻干燥，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-((3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)丙基)(甲基)氨基)环己基)-3-甲氧基苯甲酰胺(7.4mg，8.32μmol，3.54％产率，98％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝872.3
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(s,1H),8.33-8.24(m,2H),8.06(br d,J＝7.9Hz,1H),7.95(s,1H),7.87-7.76(m,1H),7.61-7.38(m,4H),5.10(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.87-4.66(m,1H),4.25(br t,J＝5.9Hz,2H),4.04(br t,J＝14.1Hz,2H),3.93(s,3H),3.71-3.60(m,1H),3.32(s,3H),2.95-2.85(m,1H),2.65-2.58(m,4H),2.45-2.35(m,1H),2.23(s,3H),2.07-2.00(m,1H),1.95-1.87(m,2H),1.91-1.81(m,4H),1.75-1.64(m,4H),1.65-1.51(m,4H),1.48-1.26(m,4H)。
实施例16、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1s,4s)-4-((3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丙基)(甲基)氨基)环己基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物16)的合成
按照与实施例15中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物16。
MS(M+H)+＝871.1,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.07(s,1H),8.31-8.22(m,2H),8.02-7.90(m,2H),7.63-7.54(m,1H),7.52-7.45(m,2H),7.11(d,J＝8.6Hz,1H),7.02(d,J＝7.1Hz,1H),6.78(t,J＝5.8Hz,1H),5.09-4.99(m,1H),4.83-4.70(m,1H),4.10-3.98(m,2H),3.98-3.88(m,4H),3.35-3.31(m,5H),2.93-2.80(m,1H),2.61-2.53(m,4H),2.37-2.30(m,1H),2.22(s,3H),2.04-1.90(m,3H),1.87-1.67(m,8H),1.65-1.43(m,8H)。
实施例17、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(20-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-3,6,9,12,15,18-六氧杂二十烷基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物17)的合成
按照与实施例1中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物17。
MS(M+H)+＝1111.9,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.09(s,1H),8.30(s,1H),8.24(d,J＝13.3Hz,1H),8.03(s,1H),7.91-7.83(m,1H),7.62-7.52(m,1H),7.19(d,J＝6.7Hz,1H),7.14(d,J＝8.5Hz,1H),7.03(d,J＝7.0Hz,1H),6.60(t,J＝5.8Hz,1H),5.11-4.99(m,1H),4.87-4.76(m,1H),4.13-3.99(m,2H),3.91(s,3H),3.78-3.68(m,1H),3.64-3.59(m,2H),3.57-3.44(m,24H),3.33(s,3H),2.94-2.80(m,3H),2.62-2.53(m,2H),2.48-2.44(m,2H),2.10-1.90(m,5H),1.81-1.68(m,4H),1.67-1.48(m,6H)
实施例18、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物18)的合成
按照与实施例1中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物18。
MS(M+H)+＝903.7,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.01(s,1H),8.33-8.26(m,2H),8.15-8.05(m,1H),7.97(s,1H),7.52-7.47(m,2H),7.30(t,J＝7.7Hz,1H),6.95(d,J＝7.4Hz,1H),6.82(d,J＝7.9Hz,1H),5.60(t,J＝5.8Hz,1H),5.15-5.05(m,1H),4.81-4.72(m,1H),4.27-4.01(m,4H),3.94(s,3H),3.78-3.71(m,1H),3.61(t,J＝5.9Hz,2H),3.58-3.49(m,7H),3.31(s,3H),2.93-2.86(m,3H),2.65-2.58(m,2H),2.46-2.42(m,2H),2.34-2.29(m,1H),2.07-1.94(m,5H),1.83-1.65(m,4H),1.64-1.50(m,6H)
实施例19、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物19)的合成
按照与实施例1中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物19。
MS(M+H)+＝904.7,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.05-10.91(m,1H),10.97(s,1H),8.33-8.23(m,2H),8.15-8.07(m,1H),7.97(s,1H),7.55-7.44(m,3H),7.39-7.25(m,2H),5.15-5.01(m,1H),4.86-4.69(m,1H),4.41-4.35(m,1H),4.29-4.20(m,3H),4.09-3.99(m,2H),3.94(s,3H),3.82-3.70(m,3H),3.65-3.59(m,2H),3.57-3.49(m,4H),3.32-3.29(m,3H),2.96-2.83(m,3H),2.60-2.56(m,1H),2.48-2.43(m,3H),2.07-1.91(m,5H),1.79-1.67(m,4H),1.67-1.52(m,6H)
实施例20、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(3-(3-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙氧基)丙氧基)丙基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物20)的合成
按照与实施例1中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物20。
MS(M+H)+＝849.6,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.94(s,1H),8.39-8.31(m,1H),8.30-8.20(m,2H),7.97(s,1H),7.55-7.45(m,3H),7.36-7.21(m,2H),5.16-5.07(m,1H),4.81-4.71(m,1H),4.41-4.32(m,1H),4.28-4.20(m,3H),4.12-3.99(m,2H),3.93(s,3H),3.76-3.69(m,2H),3.52(t,J＝6.5Hz,2H),3.45-3.37(m,6H),3.32-3.31(m,3H),2.96-2.84(m,1H),2.61-2.56(m,1H),2.48-2.41(m,1H),2.02-1.88(m,3H),1.80-1.68(m,6H),1.65-1.55(m,4H)。
实施例21、(S)-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氧基)甲基)苄基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物21)的合成
步骤1、(S)-(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基甲酸苄酯(2)的合成
在25℃向(S)-5-氨基-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-5-氧代戊酸(24g，85.63mmol)在THF(400mL)中的溶液中加入CDI(20g，123.34mmol)。在N2气氛下将混合物在70℃搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将反应混合物浓缩，然后用CHCl3(500mL)稀释。将混合物用盐水900mL(300mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩滤液。将粗产物与MTBE(300mL)在25℃研磨30分钟，过滤，将滤饼减压干燥，得到(S)-(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基甲酸苄酯(16.5g，62.91mmol，73.47％产率)，其为白色固体。MS(M+H)+＝263.2
步骤2、(S)-3-氨基哌啶-2,6-二酮(3)的合成
在N2气氛下向(S)-(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基甲酸苄酯(5g，19.06mmol)在CF3CH2OH(200mL)中的溶液中加入Pd/C(1g，10％纯度)，然后在H2气氛(15Psi)下将混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示检测到具有所需质量的主峰，并且没有起始材料的峰。过滤反应混合物，减压浓缩滤液，得到(S)-3-氨基哌啶-2,6-二酮(2.4g，18.73mmol，98.25％产率)，其为灰色固体。MS(M+H)+＝129.2
步骤3、3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-甲基苯甲酸甲酯(2B)的合成
在25℃向3-羟基-2-甲基苯甲酸甲酯(6g，36.11mmol，1eq)在DCM(120mL)中的溶液中加入咪唑(2.46g，36.11mmol)和TBSCl(9g，59.71mmol，7.32mL)。在N2气氛下将混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示检测到具有所需质量的主峰，并且没有起始材料的峰。将反应混合物浓缩，得到残余物，然后加入H2O(80mL)，将混合物用EtOAc 300mL(100mL×3)萃取，然后将合并的有机层用盐水(100mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩滤液。将残余物通过快速硅胶色谱法(Biotage；40g 硅胶快速柱，0～20％ EtOAc:石油醚梯度洗脱液，60mL/min)纯化，得到3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-甲基苯甲酸甲酯(10g，35.66mmol，98.76％产率)，其为浅黄色油状物。MS(M+H)+＝281.2
步骤4、2-(溴甲基)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)苯甲酸甲酯(4)的合成
在25℃向3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-甲基苯甲酸甲酯(4g，14.26mmol)在CCl4(15mL)中的溶液中加入NBS(2.80g，15.73mmol)和AIBN(240.00mg，1.46mmol)。在N2气氛下将混合物在80℃搅拌16小时。LCMS显示检测到具有所需质量的主峰，并且没有起始材料的峰。向反应混合物中加入Na2SO3(饱和水溶液，40mL)并用DCM(40mL×3)萃取，将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩滤液。将残余物通过快速硅胶色谱法(Biotage；40g硅胶快速柱，0～20％ EtOAc:石油醚梯度洗脱液，60mL/min)纯化，得到2-(溴甲基)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)苯甲酸甲酯(5g，13.91mmol，97.55％产率)，其为浅黄色油状物。MS(M+H)+＝359.1
步骤5、(S)-3-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(5)的合成
在25℃向(S)-3-氨基哌啶-2,6-二酮(600mg，4.68mmol)在ACN(20mL)中的溶液中加入DIPEA(2.23g，17.22mmol，3.0mL)和2-(溴甲基)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)苯甲酸甲酯(1.86g，5.18mmol)。在N2气氛下将混合物在90℃搅拌16小时。LCMS显示检测到75％具有所需质量的峰，并且没有起始材料的峰。将反应混合物减压浓缩。加入H2O(10mL)和MTBE(15mL)，将混合物在25℃搅拌1小时，然后过滤，滤饼用MTBE(10mL×2)洗涤并减压干燥，得到(S)-3-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(1.1g，粗品)，其为灰色固体。MS(M+H)+＝375.2
SFC显示两个峰(49.6％:50.3％)，该产物可能是外消旋化的。
步骤6、(S)-3-(4-羟基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(6)的合成
在0℃向(S)-3-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(500mg，1.34mmol)在THF(5mL)和CH3CN(5mL)中的溶液中加入HCl(5M，10.00mL)。在N2气氛下将混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将反应混合物减压浓缩，然后冻干，得到(S)-3-(4-羟基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(340mg，粗品)，其为浅黄色固体。MS(M+H)+＝261.2
步骤7、(S)-(1-(4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氧基)甲基)苄基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(7)的合成
在0℃向(S)-3-(4-羟基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(300mg，1.15mmol)在THF(50mL)中的溶液中加入PPh3(907.06mg，3.46mmol)、(1-(4-(羟甲基)苄基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(420mg，1.31mmol)和DIAD(1.23g，6.09mmol，1.18mL)。在N2气氛下将混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示具有8％所需质量的峰。将反应混合物减压浓缩，得到(S)-(1-(4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氧基)甲基)苄基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(600mg，粗品)，其为浅黄色油状物。MS(M+H)+＝563.4
步骤8、(S)-3-(4-((4-((4-氨基哌啶-1-基)甲基)苄基)氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(8)的合成
在25℃向(S)-(1-(4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氧基)甲基)苄基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(600mg，1.07mmol)在二氧六环(10mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，12.00mL)。在N2气氛下将混合物在25℃搅拌1小时。LCMS显示检测到13％的具有所需质量的峰，并且没有起始材料的峰。将反应混合物减压浓缩。向残余物中加入H2O(30mL)，将混合物用EtOAc(30mL×3)洗涤，将水相冷冻干燥并通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi Polar-RP 100*25mm*4μm；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：13％-33％，7min；柱温：30℃)纯化，然后冻干，得到(S)-3-(4-((4-((4-氨基哌啶-1-基)甲基)苄基)氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(190mg，329.54μmol，产率30.90％，TFA)，其为浅黄色固体。MS(M+H)+＝463.3
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.98(s,1H),8.18-8.05(m,3H),7.66-7.55(m,2H),7.54-7.45(m,3H),7.37-7.31(m,2H),5.30(s,2H),5.16-5.08(m,1H),4.49-4.39(m,1H),4.33-4.17(m,3H),3.29-3.15(m,2H),3.08-2.86(m,3H),2.65-2.56(m,1H),2.44-2.39(m,1H),2.15-1.96(m,4H),1.79-1.66(m,2H)
步骤9、(S)-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氧基)甲基)苄基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物21)的合成
在25℃向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(60mg，134.10μmol)在DMF(3mL)中的溶液中加入HATU(120.00mg，315.60μmol)、DIPEA(148.40mg，1.15mmol，200μL)和(S)-3-(4-((4-((4-氨基哌啶-1-基)甲基)苄基)氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(80mg，138.75μmol，TFA)。在N2气氛下将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示检测到45％的具有所需质量的峰，并且没有起始材料的峰。向反应混合物中加入H2O(10mL)，将混合物用EtOAc(30mL×2)萃取，将合并的有机层用盐水(20mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩滤液。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi Polar-RP 100*25mm*4μm；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：36％-56％,7min；柱温：30℃)纯化并通过制备型HPLC(柱：WatersXbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：46％-76％,9min；柱温：30℃)再纯化，然后冻干，得到(S)-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氧基)甲基)苄基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(28.1mg，29.93μmol，22.32％产率，95％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝892.4
SFC显示两个峰(45.6％:54.4％)，该产物可能是外消旋化的。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.97(s,1H),8.31-8.23(m,2H),8.15-8.08(m,1H),7.96(s,1H),7.52-7.42(m,5H),7.37-7.30(m,4H),5.24(s,2H),5.15-5.08(m,1H),4.82-4.71(m,1H),4.47-4.38(m,1H),4.31-4.20(m,1H),4.08-4.00(m,2H),3.94(s,3H),3.84-3.73(m,1H),3.49(s,2H),3.30(s,3H),2.93-2.81(m,3H),2.63-2.58(m,1H),2.09-1.91(m,6H),1.84-1.69(m,3H),1.66-1.51(m,7H)。
实施例22、(S)-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氧基)甲基)苄基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物22)的合成
步骤1、(1-(4-(羟甲基)苄基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(3)的合成
将(4-(氯甲基)苯基)甲醇(2g，12.77mmol)、哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(2.56g，12.77mmol)和TEA(2.58g，25.54mmol，3.56mL)在THF中的混合物(40mL)在25℃搅拌4小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(58％)。将反应物真空浓缩并通过快速硅胶色谱法(20g 硅胶快速柱，50～100％EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到(1-(4-(羟甲基)苄基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(2.36g，7.37mmol，57.67％产率)，其为白色固体。MS(M+H)+＝321.2
步骤2、(1-(4-(溴甲基)苄基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(4)的合成
在0℃向(1-(4-(羟甲基)苄基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(500mg，1.56mmol)在DCM(20mL)中的溶液中加入PPh3(613.92mg，2.34mmol)和CBr4(776.22mg，2.34mmol)，将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示具有所需质量的峰(30％)。将所得混合物真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(12g 硅胶快速柱，8～19％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到(1-(4-(溴甲基)苄基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(285mg，743.50μmol，47.65％产率)，其为棕色固体。MS(M+H)+＝383.0
步骤3、(S)-5-氨基-4-(5-((4-((4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)甲基)苄基)氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)-5-氧代戊酸叔丁酯(6)的合成
在0℃向(S)-5-氨基-4-(5-羟基-1-氧代异吲哚啉-2-基)-5-氧代戊酸叔丁酯(250mg，747.68μmol)和K2CO3(206.67mg，1.50mmol)在DMF(10mL)中的溶液中加入(1-(4-(溴甲基)苄基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(285mg，743.50μmol)在DMF(5mL)中的溶液，将所得混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示残余15％的(S)-5-氨基-4-(5-羟基-1-氧代异吲哚啉-2-基)-5-氧代戊酸叔丁酯和45％的所需质量。将反应混合物用H2O(80mL)稀释并用EtOAc(50mL×4)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL×5)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过制备型TLC(SiO2，EtOAc:甲醇＝10:1)纯化，然后通过制备型TLC(SiO2,EtOAc)纯化，得到(S)-5-氨基-4-(5-((4-((4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)甲基)苄基)氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)-5-氧代戊酸叔丁酯(145mg，227.71μmol，产率30.46％)，其为灰白色固体。MS(M+H)+＝637.2
步骤4、(S)-3-(5-((4-((4-氨基哌啶-1-基)甲基)苄基)氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(7)的合成
向(S)-5-氨基-4-(5-((4-((4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)甲基)苄基)氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)-5-氧代戊酸叔丁酯(110mg，172.75μmol)在ACN(6mL)中的溶液中加入苯磺酸(54.65mg，345.49μmol)，将混合物在80℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(45％)。将反应混合物在35℃真空浓缩，得到(S)-3-(5-((4-((4-氨基哌啶-1-基)甲基)苄基)氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(85mg)，其为棕色固体，其直接使用。MS(M+H)+＝463.1
步骤5、(S)-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氧基)甲基)苄基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物22)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(80mg，178.80μmol)在DMF(3mL)中的溶液中加入HATU(101.98mg，268.20μmol)和DIPEA(138.65mg，1.07mmol，186.86μL)，将混合物在15℃搅拌10分钟，然后加入(S)-3-(5-((4-((4-氨基哌啶-1-基)甲基)苄基)氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(82.70mg，178.80μmol)，将所得混合物在15℃搅拌30分钟。LCMS显示4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸完全消耗以及具有所需质量的峰(38％)。向混合物中加入CH3COOH以调节pH<7并通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi Polar-RP 100*25mm*4μm；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：33％-53％,7min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Shim-pack C18 150*25*10μm；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：18％-48％，10min)纯化。将不纯的产物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 150*25mm*10μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：14％-44％,10min)再纯化，将洗脱液冷冻干燥，得到(S)-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-)基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氧基)甲基)苄基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(7.9mg，8.68μmol，4.85％产率，98％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝892.3
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.97(s,1H),8.31-8.24(m,2H),8.12(d,J＝7.8Hz,1H),7.96(s,1H),7.64(d,J＝8.4Hz,1H),7.53-7.46(m,2H),7.45-7.40(m,2H),7.34(d,J＝8.1Hz,2H),7.26(d,J＝1.7Hz,1H),7.13(dd,J＝2.1,8.4Hz,1H),5.19(s,2H),5.07(dd,J＝5.0,13.3Hz,1H),4.84-4.69(m,1H),4.47-4.22(m,2H),4.04(br t,J＝14.1Hz,2H),3.93(s,3H),3.86-3.70(m,1H),3.49(s,2H),3.32(s,3H),2.98-2.76(m,3H),2.62-2.57(m,1H),2.48-2.34(m,3H),2.10-1.97(m,3H),1.97-1.88(m,2H),1.83-1.66(m,4H),1.62-1.56(m,4H)。
实施例23、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甘氨酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物23)的合成
步骤1、(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甘氨酸叔丁酯(2)的合成
将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(6g，21.72mmol)、甘氨酸叔丁酯(3.42g，26.06mmol)和DIEA(5.61g，43.44mmol，7.57mL)在DMSO(50mL)中的溶液在90℃搅拌24小时。LCMS显示具有2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮质量的峰(23％)以及具有所需质量的峰(43％)。在25℃将另一部分甘氨酸叔丁酯(1.71g，13.03mmol)加入到反应混合物中。将所得混合物在90℃再搅拌12小时。LCMS显示2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮完全消耗以及具有所需质量的峰(48％)。将混合物倒入水(150mL)中并用EtOAc(30mL×4)萃取。将合并的有机相用盐水(30mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(45g 硅胶快速柱，0～50％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@80mL/min)纯化，得到(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甘氨酸叔丁酯(1.8g，粗品)，其为黄色固体，其直接用于下一步。MS(M-56)+＝332.1
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.24(s,1H),7.51(dd,J＝7.2,8.3Hz,1H),7.15(d,J＝7.1Hz,1H),6.76(d,J＝8.4Hz,1H),4.99-4.88(m,1H),3.95(s,2H),2.97-2.63(m,3H),2.18-2.08(m,1H),1.50(s,9H)
步骤2、(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甘氨酸(3)的合成
在25℃向(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甘氨酸叔丁酯(1.8g，4.65mmol)在二氧六环(5mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，40mL)。将所得混合物在25℃搅拌24小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的主峰。将混合物减压浓缩，得到(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甘氨酸(1.5g，粗品)，其为黄色固体，其用于直接下一步。MS(M+H)+＝332.0
步骤3、(1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甘氨酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(4)的合成
在25℃向(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甘氨酸(500mg，1.51mmol)、HOBt(244.73mg，1.81mmol)、EDCI(347.20mg，1.81mmol)和TEA(458.17mg，4.53mmol，630.22μL)在DCM(5mL)中的溶液中加入哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(392.96mg，1.96mmol)。将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甘氨酸完全消耗以及具有所需质量的峰(69％)。将混合物用EtOAc(30mL)稀释并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(12g 硅胶快速柱，0～80％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@70mL/min)纯化，得到(1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甘氨酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(0.6g，1.09mmol，71.99％产率，93％纯度)，其为黄色固体，将其使用直接进行下一步。MS(M-56)+＝458.0
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.28-8.13(m,1H),7.50(dd,J＝7.3,8.2Hz,1H),7.13(d,J＝7.1Hz,1H),6.79(d,J＝7.9Hz,1H),4.94(dd,J＝5.4,12.2Hz,1H),4.65-4.49(m,2H),4.03(s,2H),3.79-3.63(m,2H),3.26-3.12(m,1H),2.94-2.73(m,4H),2.18-2.06(m,2H),1.99(d,J＝8.4Hz,2H),1.46(s,9H)
步骤4、4-((2-(4-氨基哌啶-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(5)的合成
在25℃向(1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甘氨酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(0.6g，1.17mmol)在二氧六环(2mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，10mL)。将所得混合物在25℃搅拌0.5小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的主峰。将混合物溶液减压浓缩，得到4-((2-(4-氨基哌啶-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.4g，粗品，HCl)，其为黄色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝414.0
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甘氨酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物23)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(60mg，128.91μmol，1eq)在DMF(1mL)中的溶液中加入HATU(73.53mg，193.37μmol，1.5eq)和DIPEA(49.98mg，386.74μmol，67.36μL)。将混合物在30℃搅拌10分钟。向混合物中加入4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(58.00mg，128.91μmol，HCl)。将混合物在30℃搅拌12小时。LCMS显示4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸完全消耗以及具有所需质量的主峰。将混合物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi Polar-RP 100x25 mmx4um；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：48％-68％，7min)纯化并通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150x 25mm x 5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：42％-72,min)再纯化并冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甘氨酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(18mg，20.07μmol，15.57％产率，96％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝861.3
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.33-10.80(m,1H),8.33-8.21(m,2H),8.09-7.98(m,2H),7.61(t,J＝7.8Hz,1H),7.20(d,J＝6.7Hz,1H),7.16-7.03(m,3H),5.07(dd,J＝5.4,12.9Hz,1H),4.91-4.75(m,1H),4.39-4.02(m,6H),3.98-3.86(m,4H),3.33-3.32(m,3H),3.20(t,J＝11.6Hz,1H),2.95-2.80(m,2H),2.63-2.55(m,2H),2.06-1.84(m,5H),1.75-1.41(m,8H)
实施例24、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物24)的合成
步骤1、(3-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-氧代丙基)氨基甲酸苄酯(3)的合成
向3-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸(0.5g，2.24mmol)和哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(448.60mg，2.24mmol)在DMF(7mL)中的溶液中加入HATU(1.28g，3.36mmol)和DIEA(868.47mg，6.72mmol，1.17mL)。将混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的峰(68％)。将反应混合物用水(100mL)稀释并用EtOAc(30mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过柱色谱法(SiO2，石油醚/EtOAc＝1/0至1/1)纯化，得到(3-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-氧代丙基)氨基甲酸苄酯(800mg，1.95mmol，87.20％产率，99％纯度)，其为黑棕色固体。MS(M+H)+＝406.2
步骤2、(1-(3-氨基丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(4)的合成
在N2气氛下向(3-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-氧代丙基)氨基甲酸苄酯(0.8g，1.97mmol)在EtOH(10mL)中的溶液中加入Pd/C(0.1g，10％纯度)。在H2(15psi)下将混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(73％)。过滤反应混合物并用EtOH(100mL)洗涤滤饼。将滤液真空浓缩，得到(1-(3-氨基丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(480mg，1.29mmol，65.45％产率，73％纯度)，其为无色油状物。MS(M+H)+＝272.2
步骤3、(1-(3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(6)的合成
向(1-(3-氨基丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(450mg，1.66mmol)在DMSO(7mL)中的溶液中加入TEA(503.42mg，4.98mmol，692.46μL)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(458.07mg，1.66mmol)。将混合物在80℃搅拌1小时。LCMS显示残余约44％的(1-(3-氨基丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯以及具有所需质量的峰(约37％)。将反应混合物用水(100mL)稀释并用EtOAc(30mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过柱色谱法(SiO2，石油醚/EtOAc＝1/0至0/1)纯化，得到(1-(3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯。MS(M-56+H)+＝472.0
步骤4、4-((3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(7)的合成
将(1-(3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，189.55umol)、HCl/二氧六环(2M，1mL)在DCM(2mL)中的混合物在25℃搅拌0.5小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到一个具有所需质量的主峰。将反应混合物减压浓缩，得到4-((3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(100mg，粗品，HCl盐)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝428.1
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物24)的合成
向4-((3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(100mg，233.94umol，HCl盐)和4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(108.88mg，233.94umol)在DMF(3mL)中的溶液中加入HATU(133.43mg，350.92umol)和DIEA(90.71mg，701.83umol，122.25μL)。将混合物在25℃搅拌5小时。LCMS显示4-((3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮完全消耗并且检测到一个具有所需质量的主峰。将反应混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(仪器：ACSWH-GX-K；柱：Phenomenex Gemini-NX C18 75x 30mm x 3μm；洗脱液A：0.225％甲酸水溶液，洗脱液B：乙腈；梯度：7min 42-72％ B；流速25ml/min；温度：室温；检测器：UV 220/254nm)纯化，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丙酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(40.6mg，45.48umol，19.44％产率，98％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝875.0
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.10(s,1H),8.31(s,1H),8.25(d,J＝13.3Hz,1H),8.09(s,1H),7.97-7.95(m,7.7Hz,1H),7.60(dd,J＝7.1,8.5Hz,1H),7.21(d,J＝6.8Hz,1H),7.16(d,J＝8.6Hz,1H),7.04(d,J＝7.0Hz,1H),6.80-6.75(m,1H),5.05(dd,J＝5.4,12.9Hz,1H),4.87-4.79(m,1H),4.35-4.31(m,1H),4.09-4.05(m,2H),4.04-3.98(m,1H),3.92(s,3H),3.90-3.81(m,1H),3.56-3.52(m,2H),3.34(s,3H),3.20-3.13(m,1H),2.93-2.74(m,2H),2.70-2.65(m,2H),2.63-2.55(m,2H),2.05-1.94(m,3H),1.89-1.81(m,2H),1.80-1.70(m,2H),1.68-1.58(m,4H),1.52-1.35(m,2H)。
实施例25、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物25)的合成
按照与实施例24中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物25。
MS(M+H)+＝871.3,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.30-8.25(m,2H),8.19-8.09(m,1H),7.97(s,1H),7.60(t,J＝7.7Hz,1H),7.51-7.45(m,2H),7.19(d,J＝8.8Hz,1H),7.03(d,J＝7.1Hz,1H),6.69(t,J＝5.9Hz,1H),5.09-5.01(m,1H),4.82-4.72(m,1H),4.45-4.37(m,1H),4.08-4.00(m,3H),3.93(s,3H),3.91-3.85(m,1H),3.32-3.28(m,5H),3.18-3.06(m,1H),2.95-2.81(m,1H),2.62-2.58(m,2H),2.45-2.40(m,3H),2.06-1.99(m,1H),1.98-1.91(m,2H),1.86-1.77(m,4H),1.74-1.67(m,2H),1.63-1.55(m,4H),1.49-1.36(m,2H)。
实施例26、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物26)的合成
步骤1、4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁酸叔丁酯(3)的合成
向3-(4-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(1g，3.86mmol)和4-溴丁酸叔丁酯(1.03g，4.63mmol)在DMF(10mL)中的溶液中加入DIPEA(997.01mg，7.71mmol，1.34mL)和NaI(57.82mg，385.71μmol)，将所得混合物在100℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成，将混合物倒入水(100mL)中并用EtOAc(50mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(20g 硅胶快速柱，0～50％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@80mL/min)纯化，得到4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁酸叔丁酯(390mg，0.689mmol，17.88％产率，71％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝402.2
步骤2、4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁酸(4)的合成
向4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁酸叔丁酯(390mg，971.47μmol)在二氧六环(5mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，5mL)，将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成，将混合物浓缩，得到4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁酸(350mg，0.917mmol，94.36％产率，HCl)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝346.0
步骤3、(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(5)的合成
向4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁酸(150mg，392.87μmol HCl)和N-(4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯(78.68mg，392.87μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(224.07mg，589.30μmol)和DIPEA(203.10mg，1.57mmol，273.72μL)，将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成，通过FA调节混合物pH＝7并浓缩，将残余物通过制备型HPLC(柱：Unisil 3-100C18Ultra 150*50mm*3μm；流动相：[水(0.225％ FA)-ACN]；B％：26％-56％，10min)纯化，浓缩洗脱液，得到(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(130mg，229.15umol，58.33％产率，93％纯度)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝528.2
步骤4、4-((4-(4-氨基哌啶-1-基)-4-氧代丁基)氨基)-2-(6-氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(6)的合成
向(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(130mg，246.39μmol)在二氧六环(2mL)中的溶液加入HCl/二氧六环(4M，2mL)，将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成，将混合物浓缩，得到4-((4-(4-氨基哌啶-1-基)-4-氧代丁基)氨基)-2-(6-氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.1g，233.92μmol，94.94％产率)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝428.2
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物26)的合成
向4-((4-(4-氨基哌啶-1-基)-4-氧代丁基)氨基)-2-(6-氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(60mg，129.32μmol，HCl)和4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(57.86mg，129.32μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(73.76mg，193.98μmol)和DIPEA(66.86mg，517.29μmol，90.10μL)，将所得混合物在20℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成，将混合物倒入水(20mL)中并用EtOAc(20mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：32％-62％,2min)纯化并通过制备型TLC(EtOAc/甲醇＝10/1)再纯化，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-((2-(2,6)-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(15mg，15.58umol，12.05％产率，89％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝857.5
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.00(s,1H),8.30-8.23(m,2H),8.13(d,J＝7.9Hz,1H),7.97(s,1H),7.49-7.45(m,2H),7.29(t,J＝7.6Hz,1H),6.95-6.90(m,1H),6.80(d,J＝8.1Hz,1H),5.68(t,J＝5.7Hz,1H),5.11(dd,J＝5.4,13.4Hz,1H),4.75(d,J＝8.3Hz,1H),4.41(d,J＝13.9Hz,1H),4.27-4.19(m,1H),4.16-4.10(m,1H),4.04(t,J＝14.3Hz,3H),3.93(s,3H),3.31-3.29(m,3H),3.20-3.09(m,2H),2.98-2.85(m,1H),2.71-2.58(m,2H),2.45-2.40(m,4H),2.35-2.32(m,1H),2.06-2.00(m,1H),1.95-1.92(m,2H),1.89-1.78(m,4H),1.73-1.68(m,2H),1.61-1.56(m,4H),1.52-1.33(m,2H)。
实施例27、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)-3-氟苯甲酰胺(化合物27)的合成
按照与实施例26中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物27。
MS(M+H)+＝859.0,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.21-10.93(m,1H),9.09(s,1H),8.26-8.19(m,2H),8.00(t,J＝8.3Hz,1H),7.74-7.64(m,2H),7.62-7.57(m,1H),7.19(d,J＝8.7Hz,1H),7.02(d,J＝7.0Hz,1H),6.69(br t,J＝6.1Hz,1H),5.05(dd,J＝5.3,12.9Hz,1H),4.73-4.63(m,1H),4.38(br d,J＝13.3Hz,1H),4.01(br t,J＝14.0Hz,3H),3.89(brd,J＝13.2Hz,1H),3.32(s,5H),3.11(br t,J＝12.2Hz,1H),2.95-2.82(m,1H),2.68(br d,J＝9.9Hz,1H),2.62-2.54(m,2H),2.43(br t,J＝7.1Hz,2H),2.07-1.97(m,1H),1.91-1.75(m,6H),1.72-1.61(m,2H),1.60-1.32(m,6H)。
实施例28、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)-3-(三氟甲氧基)苯甲酰胺(化合物28)的合成
步骤1、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-(三氟甲氧基)苯甲酸甲酯(3)的合成
在N2气氛下在20℃向2-氯-9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(200mg，631.45μmol)和4-氨基-3-(三氟甲氧基)苯甲酸甲酯(178.19mg，757.73μmol)在二氧六环(10mL)中的溶液中加入Pd(OAc)2(14.18mg，63.14μmol，)、BINAP(39.32mg，63.14μmol)和Cs2CO3(617.21mg，1.89mmol)，在N2气氛下将所得混合物在100℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(65％)。将反应混合物真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(10g 硅胶快速柱，0～15％EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到4-((9-环戊基-7,7-)二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-(三氟甲氧基)苯甲酸甲酯(316mg，588.55μmol，产率93.21％，纯度96％)，其为白色固体。MS(M+H)+＝516.1
步骤2、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-(三氟甲氧基)苯甲酸(4)的合成
在20℃向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-(三氟甲氧基)苯甲酸甲酯(316mg，613.08μmol)在THF(6mL)和MeOH(6mL)中的溶液中加入NaOH(2M，3mL)，将所得混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(35％)。将反应混合物用H2O(10mL)稀释，然后加入HCl(12N)调节PH<3。将混悬液真空浓缩。将粗产物与混合溶剂(MTBE/EtOAc(4mL/4mL))在20℃研磨0.5小时，然后过滤。将滤液真空浓缩，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-(三氟甲氧基)苯甲酸(256mg，500.35μmol，81.61％产率，98％纯度)，其为灰白色固体。MS(M+H)+＝502.2
步骤3、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)-3-(三氟甲氧基)苯甲酰胺(化合物28)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-(三氟甲氧基)苯甲酸(80mg，159.55μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(66.73mg，175.51μmol)和DIPEA(41.24mg，319.10μmol，55.58μL)，在20℃搅拌10分钟后，加入4-((4-(4-氨基哌啶-1-基)-4-氧代丁基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(77.48mg，175.51μmol)在DMF(2mL)中的溶液和DIPEA(41.24mg，319.10μmol，55.58μL)，将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(31％)。将反应混合物用H2O(12mL)稀释并用EtOAc(12mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：50％-80％，7min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)-3-(三氟甲氧基)苯甲酰胺(14.2mg，14.43μmol，9.05％产率，94％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝925.0
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.22-10.95(m,1H),9.01(s,1H),8.34(br d,J＝7.6Hz,1H),8.24(s,1H),8.15(d,J＝9.1Hz,1H),7.89-7.81(m,2H),7.60(dd,J＝7.3,8.4Hz,1H),7.19(d,J＝8.6Hz,1H),7.02(d,J＝7.0Hz,1H),6.69(br t,J＝6.1Hz,1H),5.05(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.73-4.62(m,1H),4.39(br d,J＝12.6Hz,1H),4.08-3.98(m,3H),3.89(br d,J＝13.1Hz,1H),3.34-3.30(m,5H),3.16-3.05(m,1H),2.93-2.83(m,1H),2.73-2.65(m,1H),2.62-2.53(m,2H),2.43(br t,J＝7.0Hz,2H),2.06-1.97(m,1H),1.89-1.77(m,6H),1.72-1.63(m,2H),1.60-1.45(m,5H),1.42-1.32(m,1H)。
实施例29、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁酰基)哌嗪-1-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物29)的合成
步骤1、4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁酸(3)的合成
向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(1g，3.62mmol，1eq)和4-氨基丁酸(485.32mg，4.71mmol)在DMSO(7mL)中的溶液中加入DIEA(2.34g，18.10mmol，3.15mL)。将混合物在120℃搅拌2小时。LCMS显示反应完成。向混合物中加入CH3COOH调节pH<7。所得溶液通过反相柱(TFA条件)(330g快速柱，WelchμLtimate XB_C18 20-40μm；120A，40％10min；％min 60min@100mL/min)纯化，得到(两批次不同纯度的产物)4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁酸(480mg，601.11μmol，产率16.60％，45％纯度)和4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁酸(410mg，353.71μmol，产率9.77％，31％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝360.1
步骤2、4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰氨基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(6)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(150mg，322.29μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(183.81mg，483.43μmol)和DIEA(166.61mg，1.29mmol，224.55μL)。将混合物在25℃搅拌15分钟。向混合物中加入4-氨基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(77.84mg，386.74μmol)，将所得混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成。将混合物用H2O(30mL)稀释并用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(12g 硅胶快速柱，25～75％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@80mL/min)纯化，得到4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰氨基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(160mg，246.66μmol，76.53％产率)，其为棕色固体。MS(M+H)+＝649.2
步骤3、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基-N-(哌嗪-1-基)苯甲酰胺(7)的合成
向4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰氨基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(160mg，246.66μmol)在二氧六环(3mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，5mL)。将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将反应混合物真空浓缩，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基-N-(哌嗪-1-基)苯甲酰胺(180mg，HCl盐)，其为白色固体。MS(M+H)+＝549.2
步骤4、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁酰基)哌嗪-1-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物29)的合成
向4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁酸(170mg，473.10μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(269.83mg，709.65μmol)和DIEA(305.72mg，2.37mmol，412.03μL)。将混合物在25℃搅拌15分钟。向混合物中加入4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基-N-(哌嗪-1-基)苯甲酰胺(166.06mg，283.86μmol，HCl盐)。将所得混合物在25℃搅拌1小时。LCMS显示反应完成。向反应混合物中加入CH3COOH调节pH<7。将所得混合物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150*40mm*15μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：38％-68％,10min)纯化，然后通过制备型TLC(SiO2，二氯甲烷:甲醇＝10:1)和制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：38％-68％,10min)纯化。将洗脱液冷冻干燥，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁酰基)哌嗪-1-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(16.3mg，17.95μmol，3.79％产率，98％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝890.2
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.12(s,1H),9.23(s,1H),8.41-8.19(m,2H),8.12-7.95(m,1H),7.60(t,J＝7.8Hz,1H),7.28-7.09(m,2H),7.02(d,J＝7.0Hz,1H),6.68(t,J＝5.9Hz,1H),5.05(dd,J＝5.3,13.0Hz,1H),4.90-4.72(m,1H),4.08(t,J＝13.8Hz,2H),3.98(s,3H),3.70-3.43(m,4H),2.98-2.73(m,5H),2.63-2.50(m,7H),2.41-2.35(m,2H),2.07-1.88(m,3H),1.86-1.76(m,2H),1.74-1.68(m,2H),1.52-1.38(m,4H)。
实施例30、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)丁酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物30)的合成
步骤1、(E)-(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)丁-2-烯酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(3)的合成
向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-羟基异吲哚啉-1,3-二酮(200mg，729.32μmol)和(E)-(1-(4-溴丁-2-烯酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(278.06mg，729.32μmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入NaHCO3(367.61mg，4.38mmol，170.19μL)和KI(121.07mg，729.32μmol)。将混合物在70℃搅拌10小时。LCMS显示2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-羟基异吲哚啉-1,3-二酮完全消耗，具有所需质量的峰(47％)。将反应混合物用水(100mL)稀释并用EtOAc(30mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过柱色谱法(SiO2，石油醚/EtOAc＝4/1至3/1)纯化，得到(E)-(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)丁-2-烯酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(200mg，344.60μmol，产率47.25％，99％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝575.1
步骤2、4-(4-(4-氨基哌啶-1-基)-4-氧代丁氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(4)的合成
在N2气氛下向(E)-(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)丁-2-烯酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(290mg，504.72μmol)在CF3CH2OH(6mL)中的溶液中加入Pd/C(10％，50mg)。将混悬液脱气并用H2鼓吹3次。在H2(15Psi)下将混合物在25℃搅拌10小时。LCMS显示(E)-(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)丁-2-烯酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯完全消耗以及具有所需质量的峰(88％)。过滤反应混合物，用EtOAc(100mL)洗涤滤饼，真空浓缩滤液，得到4-(4-(4-氨基哌啶-1-基)-4-氧代丁氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(210mg，粗品)，其为绿色固体。MS(M+H)+＝443.3
步骤3、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)丁酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物30)的合成
向4-(4-(4-氨基哌啶-1-基)-4-氧代丁氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(100mg，粗品)和4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(105.19mg，226.01μmol)在DMF(3mL)中的溶液中加入DIPEA(87.63mg，678.02μmol，118.10μL)和EDCI(64.99mg，339.01μmol)、HOBt(45.81mg，339.01μmol)。将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示4-(4-(4-氨基哌啶-1-基)-4-氧代丁氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮完全消耗以及具有所需质量的峰(38％)。将反应混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过柱色谱法(SiO2，MeOH/EtOAc＝1/10至1/5)和制备型HPLC(中性条件：柱：Waters Xbridge150x25mm x 5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：42％-72％，8min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)丁酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(12.5mg，13.63μmol，6.03％产率，96.8％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝890.6。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.25-10.98(m,1H),8.34-8.21(m,2H),8.05(s,1H),7.96(dd,J＝3.2,7.6Hz,1H),7.83(dd,J＝7.5,8.3Hz,1H),7.55(d,J＝8.6Hz,1H),7.46(d,J＝7.2Hz,1H),7.21(d,J＝6.7Hz,1H),5.09(dd,J＝5.3,12.9Hz,1H),4.91-4.73(m,1H),4.42-4.20(m,3H),4.17-4.00(m,3H),3.96-3.85(m,4H),3.34(s,3H),3.20-3.13(m,1H),2.96-2.84(m,1H),2.81-2.72(m,1H),2.63-2.56(m,4H),2.07-1.93(m,5H),1.91-1.78(m,2H),1.76-1.57(m,6H),1.53-1.34(m,2H)。
实施例31、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)丁酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物31)的合成
按照与实施例26中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物31。
MS(M+H)+＝872.0,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.16-10.96(m,1H),8.32-8.24(m,2H),8.14(d,J＝7.8Hz,1H),7.97(s,1H),7.87-7.78(m,1H),7.59-7.41(m,4H),5.09(dd,J＝5.4,12.9Hz,1H),4.81-4.68(m,1H),4.48-4.39(m,1H),4.27(t,J＝6.3Hz,2H),4.12-4.00(m,3H),3.97-3.92(m,4H),3.32(s,3H),3.20-3.07(m,1H),2.94-2.82(m,1H),2.75-2.65(m,1H),2.62-2.54(m,4H),2.06-1.80(m,7H),1.75-1.67(m,2H),1.66-1.55(m,4H),1.52-1.36(m,2H)。
实施例32、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氧基)丁酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物32)的合成
按照与实施例26中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物32。
MS(M+H)+＝858.4,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.98(s,1H),8.31-8.22(m,2H),8.14(d,J＝7.6Hz,1H),7.99(s,1H),7.53-7.43(m,3H),7.31(d,J＝7.5Hz,1H),7.25(d,J＝8.1Hz,1H),5.11(dd,J＝5.1,13.3Hz,1H),4.77(t,J＝8.2Hz,1H),4.40-4.37(m,2H),4.27-4.21(m,1H),4.16(t,J＝6.4Hz,2H),4.05(t,J＝14.1Hz,2H),3.93(s,3H),3.32-3.31(m,3H),3.12(t,J＝11.9Hz,1H),2.98-2.84(m,1H),2.73-2.66(m,1H),2.61-2.54(m,1H),2.44-2.42(m,4H),2.03-1.94(m,6H),1.88-1.82(m,2H),1.75-1.68(m,2H),1.65-1.42(m,6H)。
实施例33、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物33)的合成
步骤1、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸甲酯(3)的合成
将2-氯-7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-8,9-二氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6(7H)-酮(1g，3.44mmol)、4-氨基-2-氟-5-甲氧基苯甲酸甲酯(1.03g，5.16mmol)和TosOH(1.78g，10.32mmol)在二氧六环(15mL)中的混合物在100℃搅拌16小时。LCMS显示残留痕量的2-氯-7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-8,9-二氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6(7H)-酮并且检测到63％的所需质量。将混合物倒入H2O(100mL)中，用EtOAc(100mL×3)萃取混合物。将合并的有机层用饱和Na2CO3溶液(100mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(40g硅胶快速柱，10～80％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到粗产物，将粗产物与MTBE(15mL)研磨5分钟，过滤混悬液，用MTBE(15mL)洗涤滤饼，收集滤饼并干燥，得到4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基)-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸甲酯(980mg，2.16mmol，62.83％产率)，其为白色固体。MS(M+H)+＝454.1
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.35(d,J＝13.9Hz,1H),8.28(s,1H),8.09(s,1H),7.36(d,J＝6.7Hz,1H),4.98-4.83(m,1H),4.15-4.01(m,2H),3.93(s,3H),3.83(s,3H),3.23(s,3H),1.25(d,J＝6.7Hz,6H)。
步骤2、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(4)的合成
向4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸甲酯(980mg，2.16mmol)在THF(4mL)和MeOH(4mL)中的溶液中加入NaOH(2M在H2O中，4mL)，将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到98％的所需质量。将混合物真空浓缩以除去大部分有机溶剂。将残余物倒入H2O(30mL)中，向混合物中加入HCl(12M)调节pH<3，过滤混悬液，用H2O(30mL)洗涤滤饼，收集滤饼并干燥。将残余物用HCl溶液(20mL，4M)稀释并在25℃搅拌1小时，将混悬液在70℃真空浓缩，得到4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(1g，粗品)，其为灰白色固体，其直接使用。MS(M+H)+＝440.0
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.37(br s,1H),8.41(s,1H),8.10(br d,J＝13.1Hz,1H),7.41(br d,J＝6.6Hz,1H),4.98-4.91(m,1H),4.24(t,J＝12.4Hz,2H),3.91(s,3H),3.33(s,3H),1.28(br d,J＝6.6Hz,6H)。
步骤3、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物33)的合成
向4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(200mg，455.18μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入DIEA(235.31mg，1.82mmol，317.14μL)和HATU(224.99mg，591.73μmol)，将混合物在25℃搅拌15分钟，向混合物中加入4-((4-(4-氨基哌啶-1-基)-4-氧代丁基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(217.55mg，455.18μmol，HCl)，将所得混合物在25℃搅拌1小时。LCMS显示4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸完全消耗并且检测到90％的所需质量。将反应混合物与另一批次(50mg)合并以进行进一步后处理和纯化。向混合物中加入CH3COOH调节pH<7。将所得混合物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：40％-70％,9min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150*40mm*15μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：38％-68％，10min)纯化，将洗脱液冷冻干燥，得到4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(196.1mg，222.72μmol，48.93％产率，98％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝863.1
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.24-10.90(m,1H),8.38-8.22(m,2H),8.08-7.89(m,2H),7.68-7.55(m,1H),7.29-7.14(m,2H),7.02(d,J＝7.0Hz,1H),6.69(t,J＝6.0Hz,1H),5.05(dd,J＝5.3,12.9Hz,1H),4.95-4.80(m,1H),4.32(d,J＝13.4Hz,1H),4.13-3.97(m,3H),3.91(s,3H),3.89-3.77(m,1H),3.33-3.31(m,5H),3.13(t,J＝11.8Hz,1H),2.96-2.82(m,1H),2.75(t,J＝11.6Hz,1H),2.63-2.53(m,2H),2.42(t,J＝7.0Hz,2H),2.07-1.97(m,1H),1.91-1.72(m,4H),1.49-1.33(m,2H),1.25(d,J＝6.7Hz,6H)。
实施例34、4-((9-环丙基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物34)的合成
按照与实施例33中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物34。
MS(M+H)+＝861.7,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.33-10.81(m,1H),8.55(d,J＝13.7Hz,1H),8.38(s,1H),8.13(s,1H),7.93(dd,J＝3.5,7.5Hz,1H),7.59(dd,J＝7.3,8.4Hz,1H),7.29-7.12(m,2H),7.02(d,J＝7.0Hz,1H),6.67(t,J＝6.0Hz,1H),5.05(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.36-4.17(m,3H),4.07-3.97(m,1H),3.92(s,3H),3.84(d,J＝14.2Hz,1H),3.32-3.28(m,5H),3.19-3.05(m,1H),2.96-2.82(m,2H),2.75(t,J＝11.4Hz,1H),2.64-2.53(m,2H),2.41(t,J＝7.0Hz,2H),2.07-1.96(m,1H),1.92-1.69(m,4H),1.53-1.29(m,2H),0.92-0.78(m,2H),0.77-0.63(m,2H)。
实施例35、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物35)的合成
按照与实施例24中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物35。
MS(M+H)+＝889.6,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.06(s,1H),8.33-8.22(m,2H),8.05(s,1H),8.00-7.94(m,1H),7.58(d,J＝8.4Hz,1H),7.24-7.16(m,2H),6.97(d,J＝1.6Hz,1H),6.90-6.83(m,1H),5.10-4.97(m,1H),4.89-4.78(m,1H),4.40-4.28(m,1H),4.15-3.99(m,3H),3.92(s,3H),3.90-3.81(m,1H),3.47-3.40(m,1H),3.35-3.34(m,3H),3.26-3.11(m,2H),2.98-2.69(m,4H),2.47-2.44(m,2H),2.02-1.94(m,3H),1.89-1.79(m,4H),1.74-1.58(m,6H),1.52-1.32(m,2H)。
实施例36、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物36)的合成
步骤1、3-(5-硝基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(2)的合成
在25℃向2-(溴甲基)-4-硝基苯甲酸甲酯(2.8g，10.22mmol)在CH3CN(30mL)中的溶液中加入DIPEA(5.94g，45.93mmol，8mL)和3-氨基哌啶-2,6-二酮；盐酸盐(1.6g，9.72mmol)。在N2气氛下将混合物在90℃搅拌16小时。LCMS显示34％的具有所需质量的峰。向混合物中加入H2O(20mL)，将混合物在25℃搅拌1小时。过滤所得混合物，用MTBE(30mL×2)洗涤滤饼，减压干燥，得到3-(5-硝基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(1.7g，粗品)，其为灰色固体。MS(M+H)+＝290.1
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.06(s,1H),8.53(s,1H),8.40-8.32(m,1H),7.98(d,J＝8.4Hz,1H),5.26-5.10(m,1H),4.67-4.43(m,2H),2.99-2.87(m,1H),2.68-2.57(m,1H),2.48-2.38(m,1H),2.12-1.97(m,1H)
步骤2、3-(5-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(3)的合成
向3-(5-硝基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(1g，3.46mmol)在CF3CH2OH(60mL)中的溶液中加入Pd(OH)2/C(200mg，20％纯度)和Pd/C(200mg，10％纯度)，在H2气氛(15Psi)下将混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。过滤反应混合物，减压浓缩滤液，得到3-(5-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(500mg，粗品)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝260.2
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.93(s,1H),7.86-7.72(m,1H),7.43-7.37(m,2H),6.74-6.52(m,2H),5.07-4.90(m,1H),4.30-4.08(m,2H),2.96-2.82(m,1H),2.64-2.53(m,1H),2.38-2.26(m,1H),1.98-1.89(m,1H)
步骤3、4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨基)丁酸甲酯(4)的合成
向3-(5-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(350mg，1.35mmol)在MeOH(50mL)中的溶液中加入4-氧代丁酸甲酯(160mg，1.38mmol)和AcOH(81.07mg，1.35mmol，77.21μL)。将混合物在25℃搅拌2小时。然后在25℃将NaBH3CN(900mg，14.32mmol)加入到混合物中，将混合物在25℃搅拌14小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。向反应混合物中加入H2O(10mL)并将其浓缩。将混合物用EtOAc(20mL)稀释，然后加入NaHCO3(饱和的，20mL)以调节pH＝9。将混合物用EtOAc(30mL×3)萃取，然后将合并的有机层用盐水8(40mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩滤液。将残余物通过快速硅胶色谱法(Biotage；10g硅胶快速柱，30～100％ EtOAc:石油醚梯度洗脱液，50mL/min)纯化，得到4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨基)丁酸甲酯(480mg，1.34mmol，98.94％产量)，其为浅黄色油状物。MS(M+H)+＝360.2
步骤4、4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨基)丁酸(5)的合成
在N2气氛下，将4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨基)丁酸甲酯(300mg，834.78μmol)在HCl(5M，14.59mL)中的混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将反应混合物减压浓缩，然后冻干，得到4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨基)丁酸(280mg，粗品)，其为浅黄色油状物。MS(M+H)+＝346.1
步骤5、(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(6)的合成
在25℃，向4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨基)丁酸(240mg，694.95μmol)在DMF(15mL)中的溶液中加入DIPEA(534.24mg，4.13mmol，720.00μL)、HOBt(180.00mg，1.33mmol)、EDCI(240.00mg，1.25mmol)和哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(216.00mg，1.08mmol)。在N2气氛下将混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示68％的具有所需质量的峰，并且没有起始材料的峰。向反应混合物中加入H2O(20mL)，将混合物用EtOAc(40mL×2)萃取，将合并的有机层用盐水(30mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩滤液。将残余物通过快速硅胶色谱法(Biotage；10g 硅胶快速柱，0～20％甲醇:EtOAc梯度洗脱液，50mL/min)纯化，得到(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，189.53μmol，27.27％产率)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝528.3
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.92(s,1H),7.39(d,J＝8.3Hz,1H),6.93-6.80(m,1H),6.70-6.56(m,2H),6.41(t,J＝5.4Hz,1H),5.06-4.96(m,1H),4.30-4.20(m,2H),4.19-4.10(m,1H),3.85-3.75(m,1H),3.53-3.43(m,1H),3.11-3.05(m,2H),2.93-2.85(m,1H),2.73-2.59(m,2H),2.43-2.39(m,2H),1.98-1.91(m,1H),1.80-1.68(m,4H),1.39(s,9H),1.38-1.32(m,2H),1.29-1.18(m,2H)
步骤6、3-(5-((4-(4-氨基哌啶-1-基)-4-氧代丁基)氨基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(7)的合成
在20℃，向(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(260mg，492.79μmol)在二氧六环(10mL)中的混合物中加入HCl/二氧六环(4M，10mL)，在N2气氛下将混合物在20℃搅拌2小时。LCMS显示87％的具有所需质量的峰，并且没有起始材料的峰。将反应混合物减压浓缩，得到3-(5-((4-(4-氨基哌啶-1-基)-4-氧代丁基)氨基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(245mg，粗品，2HCl)，其为浅黄色固体。MS(M+H)+＝428.3
步骤7、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物36)的合成
在25℃，向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(220mg，472.69μmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入HATU(345.71mg，909.22μmol)、DIPEA(305.46mg，2.36mmol，411.67μL)和3-(5-((4-(4-氨基哌啶-1-基)-4-氧代丁基)氨基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(245mg，489.59μmol，2HCl)。在N2气氛下将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示具有所需质量的主峰，并且没有起始材料的峰。向反应混合物中加入H2O(20mL)，将混合物用EtOAc(40mL×2)萃取，将合并的有机层用盐水(30mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩滤液。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150*40mm*15μm；流动相：[水(HCl)-ACN]；B％：30％-60％，11min；柱温：30℃)纯化并通过制备型HPLC(柱：WatersXbridge C18 150*50mm*10μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：30％-60％，11min；柱温：30℃)再纯化，然后冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)氨基)丁酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(159.4mg，178.55μmol，37.77％产率，98％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝875.6
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.92(s,1H),8.32-8.23(m,2H),8.05-7.95(m,2H),7.39(d,m,1H),7.21(d,J＝6.7Hz,1H),6.71-6.61(m,2H),6.43(t,J＝5.3Hz,1H),5.05-4.95(m,1H),4.87-4.78(m,1H),4.37-4.25(m,2H),4.17-3.99(m,4H),3.92(s,3H),3.90-3.83(m,1H),3.33-3.31(m,3H),3.19-3.09(m,3H),2.94-2.83(m,1H),2.78-2.68(m,1H),2.62-2.55(m,1H),2.47-2.42(m,2H),2.38-2.30(m,1H),2.02-1.93(m,3H),1.88-1.71(m,6H),1.66-1.55(m,4H),1.54-1.36(m,2H)。
实施例37、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物37)的合成
步骤1、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-羟基异吲哚啉-1,3-二酮(2)的合成
在25℃，向4-羟基异苯并呋喃-1,3-二酮(25g，152.33mmol)在CH3COOH(400mL)中的混合物中一次性加入3-氨基哌啶-2,6-二酮(27.58g，167.57mmol，HCl)和AcONa(14.99g，182.80mmol，1.2eq)。将混合物在120℃搅拌12小时。LCMS显示4-羟基异苯并呋喃-1,3-二酮完全消耗以及具有所需质量的主峰。过滤反应混合物。将滤饼用H2O(80mL×3)和MeOH(60mL×3)洗涤。将滤饼真空干燥，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-羟基异吲哚啉-1,3-二酮(36g，131.28mmol，86.18％产率，100％纯度)，其为紫色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝275.1
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.18(s,1H),11.09(s,1H),7.65(dd,J＝7.3,8.4Hz,1H),7.32(d,J＝7.0Hz,1H),7.25(d,J＝8.2Hz,1H),5.07(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),2.96-2.79(m,1H),2.63-2.50(m,2H),2.08-1.96(m,1H)
步骤2、(1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(3)的合成
在25℃，向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-羟基异吲哚啉-1,3-二酮(500mg，1.82mmol)在DMF(10mL)中的溶液中加入K2CO3(377.99mg，2.73mmol)和(1-(2-氯乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(504.61mg，1.82mmol)。将混合物在25℃搅拌1小时。LCMS显示2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-羟基异吲哚啉-1,3-二酮完全消耗以及具有所需质量的峰(41％)。将反应混合物通过硅藻土垫过滤。将滤液通过制备型HPLC(柱：Phenomenex lunaC18 150x 40mm x 15μm；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：22％-52％，11min)纯化并冻干，得到(1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(0.5g，874.59μmol，47.97％产率，90％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝515.2
步骤3、4-(2-(4-氨基哌啶-1-基)-2-氧代乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(4)的合成
在25℃，向(1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(0.5g，971.77μmol)在二氧六环(2mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，10mL)。将所得混合物在25℃搅拌0.5小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的主峰。将混合物溶液减压浓缩，得到4-(2-(4-氨基哌啶-1-基)-2-氧代乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.4g，粗品，HCl)，其为白色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝415.0
步骤4、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物37)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(70mg，150.40μmol)在DMF(1mL)中的溶液中加入HATU(85.78mg，225.60μmol)和DIPEA(58.31mg，451.20μmol，78.59μL)。将混合物在25℃搅拌10分钟。向混合物中加入4-(2-(4-氨基哌啶-1-基)-2-氧代乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(67.81mg，150.40μmol，HCl)。将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示4-(2-(4-氨基哌啶-1-基)-2-氧代乙氧基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮完全消耗以及具有所需质量的主峰。将混合物通过制备型HPLC(柱：WatersXbridge 150x 25mm x 5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：40％-70,min)纯化并通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝20:1；Rf＝0.3)再纯化，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150x 25mm x 5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：39％-69％，9min)纯化并冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(46.6mg，48.66μmol，32.36％产率，90％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝862.1
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.36-10.82(m,1H),8.35-8.21(m,2H),8.12-7.96(m,2H),7.77(dd,J＝7.5,8.4Hz,1H),7.45(d,J＝7.2Hz,1H),7.32(d,J＝8.7Hz,1H),7.20(d,J＝6.6Hz,1H),5.32-5.15(m,2H),5.10(dd,J＝5.4,13.0Hz,1H),4.91-4.74(m,1H),4.31-4.16(m,1H),4.15-3.99(m,3H),3.92(s,3H),3.87-3.74(m,1H),3.33-3.27(m,3H),3.26-3.12(m,1H),2.96-2.78(m,2H),2.64-2.54(m,2H),2.06-1.82(m,5H),1.78-1.33(m,8H)。
实施例38、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物38)的合成
按照与实施例23中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物38。
MS(M+H)+＝844.2,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.10(s,1H),8.33-8.24(m,2H),8.21(d,J＝7.6Hz,1H),7.97(s,1H),7.83-7.73(m,1H),7.54-7.42(m,3H),7.33(d,J＝8.6Hz,1H),5.33-5.15(m,2H),5.10(dd,J＝5.3,12.9Hz,1H),4.84-4.69(m,1H),4.36-4.23(m,1H),4.13-3.99(m,3H),3.94(s,3H),3.91-3.80(m,1H),3.50-3.34(m,3H),3.19(t,J＝11.9Hz,1H),2.95-2.83(m,1H),2.83-2.73(m,1H),2.63-2.55(m,2H),2.07-2.00(m,1H),1.99-1.81(m,4H),1.78-1.67(m,2H),1.66-1.53(m,5H),1.52-1.39(m,1H)。
实施例39、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((3R)-1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰基)吡咯烷-3-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物39)的合成
按照与实施例23中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物39。
MS(M+H)+＝830.2,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.11(s,1H),8.58-8.37(m,1H),8.37-8.22(m,2H),7.99(d,J＝2.7Hz,1H),7.86-7.71(m,1H),7.59-7.48(m,2H),7.45(dd,J＝2.8,7.1Hz,1H),7.38(dd,J＝4.5,8.6Hz,1H),5.23-4.99(m,3H),4.83-4.70(m,1H),4.63-4.42(m,1H),4.15-4.01(m,2H),3.95(s,4H),3.79-3.45(m,3H),3.43-3.40(m,3H),2.98-2.81(m,1H),2.62-2.56(m,2H),2.30-2.10(m,1H),2.10-1.90(m,4H),1.70-1.72(m,2H),1.66-1.53(m,4H)。
实施例40、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙酰基)吡咯烷-3-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物40)的合成
按照与实施例23中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物40。
MS(M+H)+＝830.2,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.10(s,1H),8.52-8.36(m,1H),8.34-8.20(m,2H),7.99(d,J＝2.8Hz,1H),7.77(dt,J＝3.5,7.9Hz,1H),7.56-7.48(m,2H),7.45(dd,J＝2.8,7.2Hz,1H),7.38(dd,J＝4.4,8.6Hz,1H),5.17-4.97(m,3H),4.85-4.70(m,1H),4.64-4.41(m,1H),4.05(t,J＝14.1Hz,2H),3.99-3.82(m,4H),3.76-3.51(m,2H),3.48-3.39(m,1H),3.37(s,3H),2.96-2.83(m,1H),2.64-2.53(m,2H),2.29-2.10(m,1H),2.08-1.90(m,4H),1.84-1.72(m,2H),1.65-1.54(m,4H)。
实施例41、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)硫基)乙酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物41)的合成
通过与实施例11和23中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物41。
MS(M+H)+＝878.9,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.14(br s,1H),8.30(s,1H),8.25(d,J＝13.3Hz,1H),8.08-8.00(m,2H),7.88-7.74(m,2H),7.64(d,J＝6.8Hz,1H),7.20(d,J＝6.6Hz,1H),5.13(dd,J＝5.4,12.7Hz,1H),4.88-4.75(m,1H),4.37-4.22(m,3H),4.15-3.99(m,4H),3.92(s,3H),3.33(br s,3H),3.29-3.21(m,1H),2.96-2.77(m,2H),2.65-2.52(m,2H),2.10-1.81(m,5H),1.75-1.55(m,7H),1.49-1.33(m,1H)。
实施例42、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)硫代)丁酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物42)的合成
通过与实施例11和23中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物42。
MS(M+H)+＝906.4,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(br s,1H),8.32-8.21(m,2H),8.04(s,1H),7.96(dd,J＝3.2,7.7Hz,1H),7.90-7.84(m,1H),7.83-7.76(m,1H),7.63(d,J＝6.9Hz,1H),7.20(d,J＝6.8Hz,1H),5.11(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.88-4.75(m,1H),4.32(br d,J＝12.9Hz,1H),4.14-3.96(m,3H),3.95-3.80(m,4H),3.33(br s,3H),3.22-3.06(m,3H),2.94-2.82(m,1H),2.75(br t,J＝11.3Hz,1H),2.63-2.52(m,4H),2.09-1.79(m,7H),1.76-1.55(m,6H),1.53-1.31(m,2H)。
实施例43、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-4-氧代丁酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物43)的合成
步骤1、4-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-4-氧代丁酸甲酯(2)的合成
向N-(4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯(2g，9.99mmol)和TEA(3.03g，29.96mmol，4.17mL)在DCM(50mL)中的溶液中加入4-氯-4-氧代-丁酸甲酯(1.65g，10.98mmol，1.36mL)，将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成。将混合物倒入水(100mL)中并用DCM(50mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(45g硅胶快速柱，0～50％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@80mL/min)纯化，得到4-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-4-氧代丁酸甲酯(2.7g，7.13mmol，71.38％产率，83％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝315.1
步骤2、4-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-4-氧代丁酸(3)的合成
向4-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-4-氧代丁酸甲酯(2.5g，7.95mmol)在THF(10mL)和MeOH(10mL)中的溶液中加入NaOH(1.59g，39.76mmol)在H2O(10mL)中的溶液，将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成。浓缩有机溶剂，通过1M HCl调节残余物pH＝6，将所得混合物用EtOAc(50mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(100mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到4-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-4-氧代丁酸(1.6g，5.33mmol，产率66.99％)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝301.1
步骤3、(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-4-氧代丁酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(4)的合成
向4-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-4-氧代丁酸(1g，3.33mmol)和4-氨基-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(1.36g，4.99mmol)在DMF(20mL)中的溶液中加入T3P(12.71g，19.98mmol，11.88mL，50％纯度)和Py(2.63g，33.29mmol，2.69mL)，将所得混合物在80℃搅拌12小时。TLC(石油醚/EtOAc＝1/1)显示反应完成。将混合物倒入水(100mL)中并用EtOAc(50mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(10g 硅胶快速柱，0～50％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@50mL/min)纯化，得到(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-4-氧代丁酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(0.7g，1.26mmol，37.84％产率)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝556.2
步骤4、4-(4-氨基哌啶-1-基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-4-氧代丁酰胺(5)的合成
向(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-4-氧代丁酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(0.7g，1.26mmol)在二氧六环(5mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，5mL)，将混合物在25℃搅拌1小时。LCMS显示反应完成，将混合物浓缩，得到4-(4-氨基哌啶-1-基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-4-氧代丁酰胺(0.7g，粗品，HCl)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝456.0
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-4-氧代丁酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物43)的合成
向4-(4-氨基哌啶-1-基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-4-氧代丁酰胺(300mg,609.85μmol HCl)和4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(283.84mg，609.85μmol)在DMF(10mL)中的溶液中加入HOBt(123.61mg，914.78μmol)、EDCI(175.36mg，914.78μmol)和TEA(185.13mg，1.83mmol，254.65μL)，将所得混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成，将混合物倒入水(20mL)中并用EtOAc(20mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过制备型TLC(EtOAc/甲醇＝10/1)纯化并通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：43％-73％，10min)再纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-4-氧代丁酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(67.9mg，73.70umol，12.08％产率，98％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝903.0
1H NMR(DMSO-d6)δ＝11.15(br s,1H),9.76(s,1H),8.51(d,J＝8.4Hz,1H),8.34-8.22(m,2H),8.07-7.97(m,2H),7.89-7.78(m,1H),7.61(d,J＝7.3Hz,1H),7.21(d,J＝6.6Hz,1H),5.16(dd,J＝5.4,12.9Hz,1H),4.89-4.78(m,1H),4.29(d,J＝12.6Hz,1H),4.14-4.00(m,3H),3.95-3.91(m,4H),3.34(s,3H),3.18(t,J＝11.6Hz,1H),2.97-2.86(m,1H),2.82-2.54(m,8H),2.11-1.89(m,4H),1.82-1.61(m,6H),1.53-1.33(m,2H)。
实施例44、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)吡咯烷-3-基)乙酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物44)的合成
步骤1、3-(2-(4-(((苄氧基)羰基)氨基)哌啶-1-基)-2-氧代乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(2)的合成
向2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基)乙酸(500mg，2.18mmol)和哌啶-4-基氨基甲酸苄酯(510.95mg，2.18mmol)在DMF(10mL)中的溶液中加入HATU(1.24g，3.27mmol)和DIEA(845.57mg，6.54mmol，1.14mL)。将混合物在25℃搅拌2小时。TLC(石油醚:EtOAc＝1:1)显示2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基)乙酸完全消耗并且形成一个新斑点。将反应混合物用水(100mL)稀释并用EtOAc(30mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过柱色谱法(SiO2，石油醚/EtOAc＝2/1至1/1)纯化，得到3-(2-(4-(((苄氧基)羰基)氨基)哌啶-1-基)-2-氧代乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(830mg，1.79mmol，82.00％产率，96％纯度)，其为浅红色胶状物。MS(M+H)+＝446.6。
步骤2、(1-(2-(吡咯烷-3-基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(3)的合成
将3-(2-(4-(((苄氧基)羰基)氨基)哌啶-1-基)-2-氧代乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(830mg，1.86mmol)和HCl/二氧六环(4M，5mL)在DCM(5mL)中的混合物在25℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到一个具有所需质量的主峰。将反应混合物减压浓缩，得到(1-(2-(吡咯烷-3-基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(800mg，粗品，HCl盐)，其为浅黄色固体。MS(M+H)+＝346.2。
步骤3、(1-(2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)吡咯烷-3-基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(5)的合成
向(1-(2-(吡咯烷-3-基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(300mg，868.47umol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(239.89mg，868.47umol)在DMF(6mL)中的溶液中加入KI(144.17mg，868.47μmol)和DIEA(336.73mg，2.61mmol，453.82μL)。将混合物在80℃搅拌16小时。LCMS显示残余约66％的2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮并且检测到约27％的所需质量。将反应混合物用H2O(50mL)稀释并用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过柱色谱法(SiO2，石油醚/EtOAc＝1/0至0/1)纯化，得到(1-(2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)吡咯烷-3-基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(250mg，411.37umol，47.37％产率，99％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝602.1
步骤4、4-(3-(2-(4-氨基哌啶-1-基)-2-氧代乙基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(6)的合成
在N2气氛下向(1-(2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)吡咯烷-3-基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(100mg，166.21μmol)在CF3CH2OH(4mL)中的溶液中加入Pd/C(10％纯度，20mg)。将混悬液脱气并用H2鼓吹3次。在H2(15Psi)下将混合物在25℃搅拌4小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到一个具有所需质量的主峰。过滤反应混合物，用CF3CH2OH(50mL)洗涤滤饼，真空浓缩滤液，得到4-(3-(2-(4-氨基哌啶-1-基)-2-氧代乙基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(80mg，155.72umol，产率93.69％，纯度91％)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝468.1
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)吡咯烷-3-基)乙酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物44)的合成
向4-(3-(2-(4-氨基哌啶-1-基)-2-氧代乙基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(80mg，171.12μmol)和4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(79.64mg，171.12umol)在DMF(5mL)中的溶液中加入HATU(97.60mg，256.68umol)和DIEA(66.35mg，513.35μmol，89.42μL)。将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示4-(3-(2-(4-氨基哌啶-1-基)-2-氧代乙基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮完全消耗，检测到约72％的所需质量。将反应混合物用H2O(50mL)稀释并用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150x 25mm x 10μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：47％-77％，10min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150x 25mm x5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：44％-77％,10min)纯化。然后将不纯产物通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝10:1)和制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150x 25mm x 5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：45％-75％，10min)再纯化，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)吡咯烷-3-基)乙酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(23.6mg，25.79umol，15.07％产率)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝915.51H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.04(br s,1H),8.33-8.21(m,2H),8.05(s,1H),7.97-7.93(m,1H),7.57(dd,J＝7.1,8.4Hz,1H),7.21(d,J＝6.6Hz,1H),7.16-7.04(m,2H),5.11-5.04(m,1H),4.88-4.78(m,1H),4.38-4.26(m,1H),4.14-3.99(m,3H),3.92(s,3H),3.90-3.85(m,1H),3.72-3.59(m,2H),3.58-3.50(m,1H),3.34(s,3H),3.18-3.10(m,1H),2.93-2.82(m,1H),2.81-2.72(m,1H),2.64-2.54(m,5H),2.21-2.12(m,1H),2.06-1.93(m,3H),1.91-1.79(m,2H),1.78-1.55(m,8H),1.55-1.34(m,2H)。
实施例45、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)吡咯烷-3-基)乙酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物45)的合成
按照与实施例44中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物45。
MS(M+H)+＝915.5,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.07-11.02(m,1H),8.31-8.21(m,2H),8.06(s,1H),8.02-7.96(m,1H),7.64(d,J＝8.5Hz,1H),7.20(d,J＝6.6Hz,1H),6.88(d,J＝1.8Hz,1H),6.80(d,J＝1.9,8.6Hz,1H),5.05(dd,J＝5.4,12.9Hz,1H),4.88-4.77(m,1H),4.39-4.29(m,1H),4.12-3.99(m,3H),3.92(s,3H),3.90-3.83(m,1H),3.68-3.61(m,1H),3.33(s,3H),3.19-3.05(m,2H),2.94-2.73(m,3H),2.70-2.54(m,5H),2.27-2.16(m,1H),2.04-1.81(m,5H),1.79-1.56(m,8H),1.52-1.35(m,2H)。
实施例46、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)吡咯烷-3-基)甲基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物46)的合成
按照与实施例44中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物46。
MS(M+H)+＝869.5,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.05(s,1H),8.27-8.25(m,2H),8.10(d,J＝8.8Hz,1H),7.96(s,1H),7.58-7.54(m,1H),7.49-7.47(m,2H),7.13-7.08(m,2H),5.08-5.04(m,1H),4.78-4.74(m,1H),4.04(br t,J＝14.0Hz,2H),3.93(s,3H),3.82-3.74(m,1H),3.65-3.52(m,4H),3.43-3.40(m,1H),3.28(s,3H),2.93-2.83(m,3H),2.59-2.54(m,3H),2.34-2.32(m,2H),2.07-1.91(m,6H),1.79-1.58(m,10H)。
实施例47、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(((3S)-1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)吡咯烷-3-基)甲基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物47)的合成
按照与实施例44中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物47。
MS(M+H)+＝869.3,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.05(s,1H),8.31-8.22(m,2H),8.15-8.05(m,1H),7.96(s,1H),7.56(t,J＝7.8Hz,1H),7.52-7.43(m,2H),7.11(br t,J＝8.4Hz,2H),5.06(dd,J＝5.5,12.8Hz,1H),4.83-4.70(m,1H),4.04(br t,J＝14.1Hz,2H),3.93(s,3H),3.86-3.71(m,1H),3.68-3.39(m,5H),3.39-3.35(m,3H),3.03-2.80(m,3H),2.64-2.53(m,3H),2.39-2.31(m,2H),2.13-1.85(m,6H),1.81-1.53(m,10H)。
实施例48、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(((3S)-1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)吡咯烷-3-基)甲基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物48)的合成
按照与实施例44中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物48。
MS(M+H)+＝869.5,1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.49(d,J＝8.4Hz,1H),8.28-8.15(m,1H),8.06(s,1H),7.77(s,1H),7.66(d,J＝8.4Hz,1H),7.45(d,J＝1.6Hz,1H),7.36-7.28(m,2H),6.95(d,J＝1.8Hz,1H),6.73-6.66(m,1H),5.01-4.89(m,1H),4.89-4.77(m,1H),4.23-4.07(m,1H),3.99(s,3H),3.94-3.84(m,2H),3.71-3.59(m,1H),3.56-3.43(m,2H),3.41(s,3H),3.28-3.09(m,2H),2.94-2.68(m,5H),2.44-2.24(m,3H),2.20-2.03(m,6H),1.96-1.68(m,10H)。
实施例49、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(((3R)-1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)吡咯烷-3-基)甲基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物49)的合成
按照与实施例44中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物49。
MS(M+H)+＝869.7,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.06(s,1H),8.33-8.23(m,2H),8.10(d,J＝7.6Hz,1H),7.96(s,1H),7.65(d,J＝8.4Hz,1H),7.54-7.43(m,2H),6.89(d,J＝2.0Hz,1H),6.80(dd,J＝2.0,8.6Hz,1H),5.05(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.78-4.74(m,1H),4.05(t,J＝14.1Hz,2H),3.94(s,3H),3.86-3.74(m,1H),3.59-3.46(m,2H),3.46-3.37(m,1H),3.30(s,3H),3.18-3.13(m,1H),3.02-2.82(m,3H),2.68-2.52(m,4H),2.40-2.33(m,2H),2.15-1.90(m,6H),1.80-1.57(m,10H)。
实施例50、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1-(2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)吡咯烷-3-基)乙基)哌啶-4-基)甲基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物50)的合成
步骤1、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(3)的合成
向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(2g，7.24mmol)在DMSO(20mL)中的溶液中加入TEA(3.66g，36.20mmol，5.04mL)和哌啶-4-基甲醇(833.92mg，7.24mmol)。将混合物在100℃搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将反应混合物用盐水(60mL)稀释，用EtOAc(40mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。将滤液减压浓缩，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(2.7g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝371.9
步骤2、(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基4-甲基苯磺酸酯(4)的合成
向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(2.7g，粗品)和TosCl(2.08g，10.91mmol)在DCM(80mL)中的溶液中加入TEA(2.21g，21.81mmol，3.04mL)。将溶液在25℃搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将混合物减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法(25g硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基4-甲基苯磺酸酯(1.7g，3.01mmol，41.38％产率，93％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝525.9
步骤3、((1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸苄酯(5A)和((1-(2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)吡咯烷-3-基)乙基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸苄酯(5)的混合物的合成
向(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基4-甲基苯磺酸酯(200mg，380.54μmol)在DMF(4mL)中的溶液中加入(哌啶-4-基甲基)氨基甲酸苄酯(113.39mg，456.64μmol)、DIPEA(147.55mg，1.14mmol，198.85μL)，将混合物在60℃搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将反应混合物用盐水(10mL)稀释，用EtOAc(10mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。将滤液减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法(Biotage；10g 硅胶快速柱，20～100％EtOAc/石油醚至10％甲醇/EtOAc梯度洗脱液@40mL/min)纯化，得到((1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸苄酯和((1-(2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)吡咯烷-3-基)乙基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(160mg，265.92μmol，产率69.88％，纯度100％)的混合物，其为黄色固体。MS(M+H)+＝602.1
步骤4、4-(4-((4-(氨基甲基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(6A)和4-(3-(2-(4-(氨基甲基)哌啶-1-基)乙基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(6)的合成
将((1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸苄酯和((1-(2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)吡咯烷-3-基)乙基)哌啶将-4-基)甲基)氨基甲酸苄酯(160mg，265.92μmol)在TFA(2mL)中的混合物在60℃搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将混合物减压浓缩。将残余物通过反相HPLC(柱：Phenomenex Synergi Polar-RP 100*25mm*4μm；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：14％-34％，7min)纯化。将洗脱液冻干，得到4-(4-((4-(氨甲基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(20mg，29.51μmol，产率11.10％，纯度69％)和4-(3-(2-(4-(氨基甲基)哌啶-1-基)乙基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(70mg，146.72μmol，55.18％产率，98％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝468.0
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1-(2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)吡咯烷-3-基)乙基)哌啶-4-基)甲基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物50)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(66.99mg，149.71μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(85.39mg，224.57μmol)和DIPEA(58.05mg，449.14μmol，78.23μL)，将混合物在20℃搅拌0.5小时，加入4-(3-(2-(4-(氨甲基)哌啶-1-基)乙基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(70mg，149.71μmol)，将混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将反应混合物用盐水(10mL)稀释，用EtOAc(10mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。将滤液减压浓缩，得到残余物。将残余物通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝10:1)纯化并通过反相HPLC(柱：Waters Xbridge150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：40％-70％，9min)再纯化。将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1-(2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)吡咯烷)-3-基)乙基)哌啶-4-基)甲基)-3-甲氧基苯甲酰胺(50.2mg，54.29μmol，36.26％产率，97％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝897.0
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.05(s,1H),8.39-8.34(m,1H),8.28-8.23(m,2H),7.96(s,1H),7.58-7.46(m,3H),7.13-7.06(m,2H),5.11-5.02(m,1H),4.82-4.70(m,1H),4.04(t,J＝13.9Hz,2H),3.93(s,3H),3.68-3.55(m,2H),3.52-3.42(m,1H),3.31-3.27(m,5H),3.18-3.11(m,2H),2.95-2.80(m,3H),2.62-2.54(m,2H),2.33-2.29(m,2H),2.25-2.18(m,1H),2.13-2.06(m,1H),2.04-1.92(m,3H),1.87-1.77(m,2H),1.74-1.68(m,2H),1.67-1.62(m,3H),1.61-1.54(m,6H),1.23-1.12(m,2H)。
Ir[dF(CF3)ppy]2(dtbpy)(PF6)(33.28mg，29.66μmol),NiCl2
实施例51、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)吡咯烷-3-基)哌嗪-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物51)的合成
步骤1、4-(1-((苄氧基)羰基)吡咯烷-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2)的合成
向3-氧代吡咯烷-1-羧酸苄酯(1g，4.56mmol)在DCE(10mL)中的溶液中加入HOAc(328.70mg，5.47mmol，313.05μL)和哌嗪-1-羧酸叔丁酯(934.50mg，5.02mmol)。然后在0℃加入NaBH(OAc)3(1.93g，9.12mmol)，将所得混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示具有所需质量的峰(约90％)。在0℃将饱和碳酸氢钠溶液(150mL)缓慢加入到混合物中。然后用DCM(50mL×3)萃取混合物。将合并的有机层用饱和盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(20g 硅胶快速柱，0～20％石油醚:EtOAc/EtOH(v/v＝5/1)梯度洗脱液@60mL/min)纯化，得到4-(1-((苄氧基)羰基)吡咯烷-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.75g，4.43mmol，97.22％产率，98.7％纯度)，其为浅黄色油状物。MS(M+H)+＝390.3
步骤2、3-(哌嗪-1-基)吡咯烷-1-羧酸苄酯(3)的合成
在25℃向4-(1-((苄氧基)羰基)吡咯烷-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.75g，4.49mmol)在二氧六环(5mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，10mL)。将混合物在25℃搅拌2小时。TLC(石油醚:EtOAc＝1:2)显示形成一个新斑点。将混合物减压浓缩，得到3-(哌嗪-1-基)吡咯烷-1-羧酸苄酯(2g，3.89mmol，86.48％产率，63.3％纯度，HCl)，其为白色固体。MS(M+H)+＝290.2
步骤3、3-(4-亚硝基哌嗪-1-基)吡咯烷-1-羧酸苄酯(4)的合成
在0℃向3-(哌嗪-1-基)吡咯烷-1-羧酸苄酯(2g，6.14mmol，HCl)在H2O(5mL)中的溶液中加入NaNO2(635.25mg，9.21mmol)在H2O(5mL)和HOAc(552.91mg，9.21mmol，526.58μL)中的溶液。在N2下将混合物在25℃搅拌4小时。LCMS显示检测到约68％的所需质量。将反应混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层用饱和盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到3-(4-亚硝基哌嗪-1-基)吡咯烷-1-羧酸苄酯(2g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝319.2
步骤4、3-(4-氨基哌嗪-1-基)吡咯烷-1-羧酸苄酯(5)的合成
在0℃向3-(4-亚硝基哌嗪-1-基)吡咯烷-1-羧酸苄酯(2g，粗品)在MeOH(10mL)中的溶液中加入Zn(1.77g，27.07mmol)。然后在0℃将HOAc(754.49mg，12.56mmol，718.56μL)缓慢加入到混合物中。将混合物在25℃搅拌2小时。TLC(石油醚:EtOAc＝1:2)显示形成一个新斑点。将混合物过滤以除去不溶固体。将滤液减压浓缩，得到残余物。将残余物通过反向快速柱(柱：330g快速柱Welch Ultimate XB_C18 20-40μm；120A；流动相：[水(NH3*H2O)-ACN]；B％：0％-30％，20min)纯化，然后冻干，得到3-(4-氨基哌嗪-1-基)吡咯烷-1-羧酸苄酯(0.46g，1.27mmol，20.18％产率，83.9％纯度)，其为浅黄色油状物。MS(M+H)+＝305.1
步骤5、3-(4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)哌嗪-1-基)吡咯烷-1-羧酸苄酯(7)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(293.99mg，657.06μmol)在DMF(5mL)中溶液的中加入DIPEA(254.76mg，1.97mmol，343.34μL)和HATU(499.67mg，1.31mmol)。然后0.5小时后将3-(4-氨基哌嗪-1-基)吡咯烷-1-羧酸苄酯(0.2g，657.06μmol)加入到混合物中。将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示检测到约45％的所需质量。将反应混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层用饱和盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法(20g Sepa硅胶快速柱，0～70％石油醚:EtOAc/乙醇(1:1)梯度洗脱液@60mL/min)纯化，得到3-(4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)哌嗪-1-基)吡咯烷-1-羧酸苄酯(470mg，620.64μmol，产率94.46％，纯度96.9％)，其为棕色油状物。MS(M+H)+＝734.3
步骤6、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(4-(吡咯烷-3-基)哌嗪-1-基)苯甲酰胺(8)的合成
向Pd/C(0.1g，64.05μmol，10％纯度)在CF3CH2OH(10mL)中的混合物中加入3-(4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)哌嗪-1-基)吡咯烷-1-羧酸苄酯(0.47g，640.50μmol)。在H2(15psi)下将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示检测到约90％的所需质量。将混合物过滤以除去催化剂。将滤液减压浓缩，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(4-(吡咯烷-3-基)哌嗪-1-基)苯甲酰胺(320mg，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝600.3
步骤7、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)吡咯烷-3-基)哌嗪-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物51)的合成
在25℃向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(46.06mg，166.76μmol)在DMF(3mL)中的溶液中加入DIPEA(43.10mg，333.51μmol，58.09μL)和4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(4-(吡咯烷-3-基)哌嗪-1-基)苯甲酰胺(100mg，166.76μmol)。将混合物在60℃搅拌2小时。LCMS显示检测到约30％的所需质量。将反应混合物用水(20mL)稀释并用EtOAc(30mL×3)萃取。将合并的有机层用饱和盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150x 25mm x10μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：14％-44％，10min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150x 25mm x 5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：38％-68％,8min)纯化，然后冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)吡咯烷-3-基)哌嗪-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(15mg，17.21μmol，10.32％产率，98.2％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝856.2
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.06(s,1H),9.37(s,1H),8.32-8.23(m,2H),7.97(s,1H),7.57(t,J＝7.6Hz,1H),7.46-7.39(m,2H),7.17-7.09(m,2H),5.08(dd,J＝5.3,12.5Hz,1H),4.82-4.72(m,1H),4.04(t,J＝14.1Hz,2H),3.93(s,3H),3.71-3.51(m,4H),3.32-3.31(m,3H),3.01-2.83(m,6H),2.67-2.56(m,6H),2.25-2.16(m,1H),2.04-1.91(m,3H),1.85-1.69(m,3H),1.62-1.58(m,4H)。
实施例52、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)吡咯烷-3-基)哌嗪-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物52)的合成
步骤1、4-(1-((苄氧基)羰基)吡咯烷-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2)的合成在0℃向3-氧代吡咯烷-1-羧酸苄酯(9g，41.05mmol)和哌嗪-1-羧酸叔丁酯(7.65g，41.05mmol)在MeOH(100mL)中的溶液中加入AcOH(2.47g，41.05mmol，2.35mL)。然后在0℃缓慢加入NaBH3CN(7.74g，123.15mmol)，将所得混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到31％的具有所需质量的峰。将反应混合物真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(80g硅胶快速柱，0～80％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到4-(1-((苄氧基)羰基)吡咯烷-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(8.9g，22.85mmol，55.66％产率)，其为白色固体。MS(M+H)+＝390.2
步骤2、3-(哌嗪-1-基)吡咯烷-1-羧酸苄酯(3)的合成
在20℃向4-(1-((苄氧基)羰基)吡咯烷-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(8.9g，22.85mmol)在二氧六环(10mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，40mL)，将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰。将反应混合物真空浓缩，得到3-(哌嗪-1-基)吡咯烷-1-羧酸苄酯(7.5g，粗品，HCl盐)，其为白色固体。MS(M+H)+＝290.2
步骤3、3-(4-亚硝基哌嗪-1-基)吡咯烷-1-羧酸苄酯(4)的合成
在0℃向3-(哌嗪-1-基)吡咯烷-1-羧酸苄酯(7.5g，23.02mmol，HCl盐)在H2O(100mL)中的溶液中加入NaNO2(4.76g，69.05mmol)，然后在0℃滴加入AcOH(5.53g，92.07mmol，5.27mL)，将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(82％)。在0℃通过加入饱和NaHCO3调节反应混合物pH＝10，将所得混合物用EtOAc(150mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到3-(4-亚硝基哌嗪-1-基)吡咯烷-1-羧酸苄酯(4.74g，14.89mmol，产率64.68％)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝319.4
步骤4、3-(4-氨基哌嗪-1-基)吡咯烷-1-羧酸苄酯(5)的合成
在0℃向3-(4-亚硝基哌嗪-1-基)吡咯烷-1-羧酸苄酯(4.7g，14.76mmol)在THF(60mL)和H2O(20mL)中的溶液中加入NH4Cl(3.16g，59.05mmol)，然后在0℃分批加入Zn(3.86g，59.05mmol)，将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰。将反应混合物用THF(200mL)稀释并过滤。将滤液真空浓缩，得到3-(4-氨基哌嗪-1-基)吡咯烷-1-羧酸苄酯(9g，粗品)，其为白色固体。MS(M+H)+＝305.1
步骤5、3-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌嗪-1-基)吡咯烷-1-羧酸苄酯(6)的合成
在20℃向3-(4-氨基哌嗪-1-基)吡咯烷-1-羧酸苄酯(9g，29.57mmol)在THF(100mL)中的溶液中加入TEA(8.98g，88.70mmol，12.35mL)和(Boc)2O(6.45g，29.57mmol，6.79mL)，将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(79％)。将反应混合物用H2O(200mL)稀释并用EtOAc(200mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(50g 硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚至0～10％二氯甲烷/甲醇梯度@100mL/min)纯化并通过快速硅胶色谱法(50g 硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)再纯化，得到3-(4-((叔丁氧羰基)氨基)哌嗪-1-基)吡咯烷-1-羧酸苄酯(1.2g，2.82mmol，产率9.53％，纯度95％)，其为无色油状物。MS(M+H)+＝405.2
步骤6、(4-(吡咯烷-3-基)哌嗪-1-基)氨基甲酸叔丁酯(7)的合成
在N2气氛下向3-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌嗪-1-基)吡咯烷-1-羧酸苄酯(600mg，1.48mmol)在CF3CH2OH(12mL)中的溶液中加入Pd/C(0.2g，10％纯度)。将混悬液脱气并用H2鼓吹3次。在H2(15Psi)下将混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示残余42％的起始材料以及具有所需质量的峰。将反应混合物在40℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料完全消耗。将反应混合物用CF3CH2OH(15mL)稀释并过滤。将滤液真空浓缩，得到(4-(吡咯烷-3-基)哌嗪-1-基)氨基甲酸叔丁酯(404mg，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝271.1
步骤7、(4-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)吡咯烷-3-基)哌嗪-1-基)氨基甲酸叔丁酯(9)的合成
在20℃向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(200mg，724.06μmol)在DMSO(4mL)中的溶液中加入DIPEA(280.74mg，2.17mmol，378.36μL)和(4-(吡咯烷-3-基)哌嗪-1-基)氨基甲酸叔丁酯(195.76mg，724.06μmol)，将所得混合物在100℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(46％)。将反应混合物用H2O(12mL)稀释并用EtOAc(12mL×3)萃取。将有机层用盐水(12mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(10g 硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到(4-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)吡咯烷-3-基)哌嗪-1-基)氨基甲酸叔丁酯(134mg，249.38μmol，34.44％产率，98％纯度)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝527.3
步骤8、4-(3-(4-氨基哌嗪-1-基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(10)的合成
在20℃向(4-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)吡咯烷-3-基)哌嗪-1-基)氨基甲酸叔丁酯(134mg，254.47μmol)在DCM(2mL)中的溶液中加入TFA(145.08mg，1.27mmol，94.21μL)，将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(90％)。将反应混合物真空浓缩，得到4-(3-(4-氨基哌嗪-1-基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(138mg，粗品，TFA)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝427.3
步骤9、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)吡咯烷-3-基)哌嗪-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物52)的合成
向4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(80mg，189.84μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(79.40mg，208.83μmol)和DIPEA(49.07mg，379.69μmol，66.14μL)。将混合物在20℃搅拌10分钟，加入4-(3-(4-氨基哌嗪-1-基)吡咯烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(123.13mg，227.81μmol，TFA)和DIPEA(98.14mg，759.38μmol，132.27μL)在DMF(2mL)中的溶液，将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(70％)。将反应混合物用H2O(12mL)稀释并用EtOAc(12mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex SynergiPolar-RP 100*25mm*4μm；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：27％-47％,7min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)吡咯烷-3-基)哌嗪-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(62.3mg，61.38μmol，32.33％产率，93％纯度，TFA盐)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝830.4
1H NMR(400MHz,CD3CN)δ＝9.64(br s,1H),8.97(br d,J＝7.0Hz,1H),8.31(br s,1H),8.05(d,J＝8.4Hz,1H),7.92(s,1H),7.62-7.54(m,1H),7.47-7.36(m,2H),7.23(d,J＝7.0Hz,1H),7.12-7.04(m,1H),5.03-4.90(m,2H),4.29-4.13(m,2H),4.01(br t,J＝12.2Hz,2H),3.95-3.78(m,6H),3.76-3.62(m,3H),3.57-3.47(m,1H),3.31(s,7H),2.85-2.60(m,3H),2.52-2.32(m,2H),2.15-2.06(m,1H),1.23(d,J＝6.7Hz,6H)。
实施例53、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)哌啶-4-基)甲基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物53)的合成
步骤1、4-((4-((((苄氧基)羰基)氨基)甲基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(3)的合成
向4-甲酰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(500mg，2.34mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中加入(哌啶-4-基甲基)氨基甲酸苄酯(640.38mg，2.58mmol)和AcOH(14.08mg，234.44μmol，13.41μL)，将混合物在20℃搅拌0.5小时，然后加入NaBH3CN(220.99mg，3.52mmol)，将所得混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将反应混合物用H2O(20mL)稀释，用EtOAc(3×20mL)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。将滤液减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(Biotage；20g 硅胶快速柱，20～70％EtOAc/石油醚@40mL/min)纯化，得到4-((4-((((苄氧基)羰基)氨基)甲基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(800mg，1.47mmol，62.80％产率，82％纯度)，其为无色油状物。MS(M+H)+＝446.1
步骤2、((1-(哌啶-4-基甲基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸苄酯(4)的合成
向4-((4-((((苄氧基)羰基)氨基)甲基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(200mg，448.84μmol)在二氧六环(2mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，2mL,17.82eq)，将混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将混合物减压浓缩，得到((1-(哌啶-4-基甲基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸苄酯(150mg，粗品，HCl盐)，其为白色固体，将其直接用于下一步。MS(M+H)+＝346.0
步骤3、((1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸苄酯(6)的合成
向((1-(哌啶-4-基甲基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸苄酯(150mg，392.73μmol，HCl盐)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(130.18mg，471.28μmol)在DMSO(2mL)中的溶液中加入TEA(119.22mg，1.18mmol，163.99μL)，将混合物在100℃搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的峰(45％)。将反应混合物用H2O(10mL)稀释，用EtOAc(10mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。将滤液减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(Biotage；20g 硅胶快速柱，20～100％ EtOAc/石油醚至10％甲醇/EtOAc梯度洗脱液@40mL/min)纯化，得到((1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸苄酯(200mg，309.13μmol，78.71％产率，93％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝602.4
步骤4、4-(4-((4-(氨基甲基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(7)的合成
将((1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)哌啶-4-基)甲基)氨基甲酸苄酯(100mg，166.20μmol)在TFA(1mL)中的混合物在60℃搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的峰(78％)。将混合物减压浓缩，得到4-(4-((4-(氨甲基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(90mg，粗品，TFA盐)，其为棕色油状物，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝468.2
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)哌啶-4-基)甲基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物53)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(69.24mg，154.75μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(88.26mg，232.13μmol)和DIPEA(60.00mg，464.25μmol，80.86μL)，将混合物在20℃搅拌0.5小时。然后加入4-(4-((4-(氨甲基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(90mg，154.75μmol，TFA盐)，将所得混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的峰(47％)。将反应混合物用H2O(5mL)稀释，用EtOAc(5mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。将滤液减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝10:1)纯化并通过反相HPLC(柱：WatersXbridge150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：46％-76％，8min)再纯化。将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)哌啶-4-基)甲基)-3-甲氧基苯甲酰胺(28.7mg，31.36μmol，20.26％产率，98％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝897.4
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(s,1H),8.39(t,J＝5.7Hz,1H),8.29-8.24(m,2H),7.97(s,1H),7.70-7.64(m,1H),7.53-7.47(m,2H),7.32(t,J＝6.8Hz,2H),5.12-5.04(m,1H),4.81-4.71(m,1H),4.04(t,J＝14.1Hz,2H),3.93(s,3H),3.72-3.63(m,2H),3.35(s,3H),3.16(t,J＝5.8Hz,2H),2.95-2.79(m,5H),2.63-2.53(m,2H),2.18-2.12(m,2H),2.06-1.90(m,3H),1.89-1.75(m,4H),1.74-1.50(m,10H),1.37-1.11(m,4H)。
实施例54、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-3-基)甲基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物54)的合成
按照与实施例50中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物54。
MS(M+H)+＝883.0,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(s,1H),8.32-8.24(m,2H),8.06(d,J＝7.3Hz,1H),7.96(s,1H),7.70(t,J＝7.8Hz,1H),7.53-7.45(m,2H),7.38-7.30(m,2H),5.16-5.06(m,1H),4.83-4.72(m,1H),4.05(t,J＝14.0Hz,2H),3.94(s,3H),3.83-3.70(m,2H),3.68-3.59(m,1H),3.33(s,3H),3.32-3.29(m,1H),3.06-2.97(m,1H),2.94-2.83(m,2H),2.82-2.74(m,1H),2.66-2.56(m,2H),2.27-2.15(m,2H),2.08-1.89(m,6H),1.82-1.69(m,6H),1.67-1.52(m,7H),1.18-1.04(m,1H)。
实施例55、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-3-基)乙基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物55)的合成
步骤1、2-(哌啶-3-基)乙-1-醇(2)的合成
在0℃向LiAlH4(238.57mg，6.29mmol)在THF(5mL)中的混合物中加入2-(哌啶-3-基)乙酸(0.3g，2.10mmol)在THF(5mL)中的溶液。将混合物在60℃搅拌12小时。LCMS显示检测到所需质量。将混合物用饱和酒石酸钾钠溶液(20mL)淬灭。将混合物在25℃搅拌10分钟，然后过滤。将滤液减压浓缩，得到2-(哌啶-3-基)乙-1-醇(0.3g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝130.1
步骤2、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(3-(2-羟乙基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(4)的合成
在25℃向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(513.10mg，1.86mmol)在DMSO(10mL)中的溶液中加入TEA(704.88mg，6.97mmol，969.57μL)和2-(哌啶-3-基)乙-1-醇(0.3g，2.32mmo)。将混合物在80℃搅拌12小时。LCMS显示检测到80％的所需质量。将反应混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(50mL×4)萃取。将合并的有机层用饱和盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法(40g硅胶快速柱，0～40％石油醚:EtOAc/乙醇(v/v＝5/1)梯度洗脱液@60mL/min)纯化，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(3-(2-羟乙基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.89g，2.30mmol，98.95％产率，99.5％纯度)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝386.2
步骤3、2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-3-基)乙醛(5)的合成
向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(3-(2-羟乙基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.8g，2.08mmol)在DCM(20mL)中的溶液中加入DMP(1.76g，4.15mmol，1.29mL)。将混合物在25℃搅拌2小时。TLC(石油醚:EtOAc＝1:2)显示形成一个新斑点。将混合物过滤以除去不溶固体。将滤液减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法(40g硅胶快速柱，0～50％石油醚:EtOAc梯度洗脱液@80mL/min)纯化，得到2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-3-基)乙醛(0.47g，950.06μmol，45.77％产率，77.5％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝383.9
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝9.83(s,1H),8.02-7.89(m,1H),7.58(dd,J＝7.2,8.4Hz,1H),7.38(d,J＝7.2Hz,1H),7.22-7.17(m,1H),4.98-4.94(m,1H),3.71-3.57(m,2H),3.05-2.69(m,5H),2.56-2.38(m,3H),2.18-2.10(m,1H),1.97-1.80(m,3H),1.70-1.63(m,1H)。
步骤4、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-3-基)乙基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物55)的合成
向2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-3-基)乙醛(80mg，208.66μmol)在DCE(5mL)中的溶液中加入NaBH(OAc)3(132.67mg，625.98μmol)、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(哌啶-4-基)苯甲酰胺(124.02mg，219.09μmol，HCl)和AcOH(12.53mg，208.66μmol，11.93μL)。将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示检测到约75％的所需质量。将混合物用饱和碳酸氢钠溶液(50mL)猝灭，然后用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层用饱和盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi C18 150x 25mm x 10μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％:20％-50％,10min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150x 25mmx 5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：50％-80％,8min)纯化，然后冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-3-基)乙基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(54.6mg，59.17μmol，28.36％产率，97.2％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝897.2
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(s,1H),8.29-8.23(m,2H),8.10-8.07(m,1H),7.96(s,1H),7.72-7.65(m,1H),7.50-7.44(m,2H),7.37(d,J＝8.3Hz,1H),7.31(d,J＝7.0Hz,1H),5.09(dd,J＝5.2,12.7Hz,1H),4.82-4.72(m,1H),4.04(t,J＝14.1Hz,2H),3.93(s,3H),3.80-3.63(m,3H),3.36-3.34(m,3H),2.96-2.80(m,4H),2.64-2.52(m,5H),2.47-2.43(m,2H),2.03-1.89(m,4H),1.87-1.71(m,6H),1.63-1.35(m,8H),1.17-1.07(m,2H)。
实施例56、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)吡咯烷-3-基)哌嗪-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物56)的合成
按照与实施例51中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物56。
MS(M+H)+＝856.2,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.06(s,1H),9.36(s,1H),8.30-8.23(m,2H),7.97(s,1H),7.65(d,J＝8.4Hz,1H),7.45-7.40(m,2H),6.97(s,1H),6.85(d,J＝8.4Hz,1H),5.06(dd,J＝5.5,12.6Hz,1H),4.80-4.73(m,1H),4.04(t,J＝14.3Hz,2H),3.93(s,3H),3.75-3.66(m,1H),3.63-3.54(m,1H),3.43-3.38(m,1H),3.29-3.28(m,3H),3.23-3.20(m,1H),3.02-2.87(m,6H),2.63-2.59(m,6H),2.28-2.20(m,1H),2.03-1.86(m,4H),1.74-1.57(m,6H)。
实施例57、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-3-基)丙基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物57)的合成
步骤1、3-(哌啶-3-基)丙-1-醇(2)的合成
在25℃向3-(吡啶-3-基)丙-2-炔-1-醇(0.5g，3.76mmol)在AcOH(10mL)和EtOH(10mL)中的溶液中加入Pd/C(2g，18.78mmol，10％纯度)和PtO2(426.37mg，1.88mmol，100％纯度)。在H2(50psi)气氛下将混合物在50℃搅拌24小时。LCMS检测到所需质量的主峰。将混合物过滤以除去催化剂。将滤液减压浓缩，得到3-(哌啶-3-基)丙-1-醇(0.6g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝144.2
步骤2、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(3-(3-羟丙基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(4)的合成
在25℃向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(0.9g，3.26mmol)在DMSO(10mL)中的溶液中加入TEA(989.11mg，9.77mmol，1.36mL)和3-(哌啶-3-基)丙-1-醇(466.67mg，3.26mmol)。将混合物在90℃搅拌3小时。LCMS显示检测到44％的所需质量。将混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层用饱和盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法(20g 硅胶快速柱，0～80％石油醚:EtOAc梯度洗脱液@60mL/min)纯化，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(3-(3-羟丙基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.8g，1.83mmol，56.24％产率，91.5％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝400.0
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(s,1H),7.67(dd,J＝7.3,8.3Hz,1H),7.32(dd,J＝7.9,11.2Hz,2H),5.13-5.05(m,1H),4.38-4.35(m,1H),3.71-3.60(m,2H),3.39(q,J＝6.2Hz,2H),2.94-2.76(m,2H),2.63-2.54(m,2H),2.08-1.98(m,1H),1.85-1.82(m,1H),1.79-1.59(m,3H),1.54-1.39(m,2H),1.28-1.17(m,2H),1.09-0.99(m,1H)。
步骤3、3-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-3-基)丙基4-苯磺酸甲酯(5)的合成
向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(3-(3-羟丙基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.4g，1.00mmol)在DCM(5mL)中的溶液中加入TsCl(286.37mg，1.50mmol)和TEA(202.66mg，2.00mmol，278.76μL)。将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示残余约50％的2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(3-(3-羟丙基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮并且检测到约28％的所需质量。将TsCl(286.37mg，1.50mmol)、DMAP(24.47mg，200.28μmol)和TEA(303.99mg，3.00mmol，418.15μL)加入到混合物中。将混合物在25℃再搅拌4小时。TLC(石油醚:EtOAc＝1:2)显示形成一个新斑点。将反应混合物用水(50mL)稀释并用DCM(50mL×3)萃取。将合并的有机层用饱和盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法(20g 硅胶快速柱，0～20％石油醚:EtOAc/乙醇(v/v＝5/1)梯度洗脱液@80mL/min)纯化，得到3-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-3-基)丙基4-甲基苯磺酸酯(0.36g，617.10μmol，61.62％产率，94.9％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝554.1
步骤4、(1-(3-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-3-基)丙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(6)的合成
在25℃向3-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-3-基)丙基4-甲基苯磺酸酯(310mg，559.95μmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(134.57mg，671.93μmol)、DIPEA(144.74mg，1.12mmol，195.06μL)和NaI(41.97mg，279.97μmol)。将混合物在80℃搅拌12小时。TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)显示形成几个新斑点。将反应混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层用饱和盐水(150mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法(20g 硅胶快速柱，0～20％石油醚/二氯甲烷:甲醇(v:v＝2:1)梯度洗脱液@80mL/min)纯化，得到(1-(3-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-3-基)丙基)哌啶-4-氨基甲酸基叔丁酯(0.2g，337.97μmol，产率60.36％，纯度98.3％)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝582.6
步骤5、4-(3-(3-(4-氨基哌啶-1-基)丙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(7)的合成
向(1-(3-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-3-基)丙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(240mg，412.58μmol)在二氧六环(5mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，10mL)。将混合物在25℃搅拌2小时。TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)显示形成一个新斑点。过滤混合物。将滤饼减压干燥，得到4-(3-(3-(4-氨基哌啶-1-基)丙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.22g，粗品，HCl)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝482.3
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(s,1H),10.84-10.63(m,1H),8.39-8.38(m,2H),7.68(dd,J＝7.3,8.3Hz,1H),7.34(t,J＝7.8Hz,2H),5.16-5.07(m,1H),3.71-3.58(m,2H),3.57-3.54(m,1H),3.35-3.21(m,1H),3.10-2.79(m,6H),2.62-2.52(m,4H),2.19-1.57(m,12H),1.30-1.19(m,2H)。
步骤6、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-3-基)丙基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物57)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(80mg，178.80μmol)在DMF(3mL)中的溶液中加入HATU(101.98mg，268.20μmol)和DIPEA(69.32mg，536.39μmol，93.43μL)。然后，0.5小时后将4-(3-(3-(4-氨基哌啶-1-基)丙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(100.04mg，粗品，HCl)加入到混合物中。将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示检测到约70％的所需质量。将反应混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层用饱和盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150x 40mm x 15μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：23％-53％，10min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge150x 25mm x5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：54％-84％，10min)纯化，然后冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-3-基)丙基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(58.2mg，63.57μmol，35.55％产率，99.5％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝911.3
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.10(br s,1H),8.29-8.24(m,2H),8.10(d,J＝7.7Hz,1H),7.97(s,1H),7.67(t,J＝7.9Hz,1H),7.52-7.46(m,2H),7.39-7.30(m,2H),5.10(dd,J＝5.6,12.7Hz,1H),4.83-4.73(m,1H),4.05(t,J＝14.1Hz,2H),3.93(s,3H),3.80-3.61(m,3H),3.33-3.32(m,3H),2.93-2.78(m,4H),2.62-2.55(m,5H),2.29-2.23(m,2H),2.06-2.00(m,1H),1.96-1.89(m,4H),1.86-1.82(m,1H),1.79-1.67(m,6H),1.60-1.45(m,7H),1.27-1.20(m,2H),1.11-1.00(m,1H)。
实施例58、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(3-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)丙酰基)哌嗪-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物58)的合成
步骤1、4-(4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(8)的合成
向4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(400mg，949.22μmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入DIPEA(368.04mg，2.85mmol，496.01μL)和HATU(541.38mg，1.42mmol)。将混合物在25℃搅拌10分钟。然后加入4-氨基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(210.15mg，1.04mmol)，将所得混合物在25℃搅拌1小时。LCMS显示具有所需质量的峰(61％)。将混合物溶液倒入水(40mL)中并用EtOAc(20mL×4)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并浓缩。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150x 40mm x 15μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：35％-65％，10min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-(4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(260mg，417.10μmol，产率43.94％，97％纯度)，其为白色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝605.4
步骤2、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(哌嗪-1-基)苯甲酰胺(9)的合成
在25℃向4-(4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(220mg，363.85μmol)在二氧六环(2mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，24.44mL)。将所得混合物在25℃搅拌0.5小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的主峰。将混合物溶液减压浓缩，得到4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(哌嗪-1-基)苯甲酰胺(200mg，粗品，HCl盐)，其为棕色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝505.3
步骤3、3-(哌啶-4-基)丙酸甲酯(2)的合成
在25℃向4-(3-甲氧基-3-氧代丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1g，3.69mmol)在二氧六环(2mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，37.50mL)。将所得混合物在25℃搅拌0.5小时。TLC(石油醚:EtOAc＝3:1；Rf＝0)显示起始材料被完全消耗。将混合物溶液减压浓缩，得到3-(哌啶-4-基)丙酸甲酯(760mg，粗品，HCl盐)，其为白色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝172.2
步骤4、3-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)丙酸甲酯(3)的合成
在N2气氛下，在25℃向3-(哌啶-4-基)丙酸甲酯(208.89mg，粗品，HCl盐)、3-(4-溴-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(250mg，773.65μmol)和Cs2CO3(756.21mg，2.32mmol)在二氧六环(10mL)中的溶液中加入Pd-PEPPSI(37.63mg，38.68μmol)。在N2气氛下将混合物在100℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的主峰。将混合物用EtOAc(40mL)稀释并用盐水(10mL×3)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(12g 硅胶快速柱，0～60％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@60mL/min)纯化，得到3-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)丙酸甲酯(0.2g，粗品)，其为白色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝414.2
步骤5、3-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)丙酸(4)的合成
将3-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)丙酸甲酯(0.2g，483.72μmol)和三丁基(三丁基锡氧基)锡烷(1.17g，1.93mmol，999.13μL)在甲苯(5mL)中的混合物在110℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(11％)。将混合物倒入KF(2.5M，30mL)中并用EtOAc(20mL×5)萃取。将合并的有机相用盐水(20mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(12g硅胶快速柱，0～100％EtOAc/石油醚梯度洗脱液@60mL/min；0～50％甲醇/EtOAc洗脱液@60mL/min)纯化并通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi Polar-RP 100x25mm x 4μm；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：18％-38％，7min)再纯化，将洗脱液冻干，得到3-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)丙酸(100mg，粗品)，其为白色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝400.2
步骤6、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(3-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)丙酰基)哌嗪-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物58)的合成
向3-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)丙酸(80mg，粗品)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(114.23mg，300.42μmol)和DIPEA(77.65mg，600.84μmol，104.65μL)。将混合物在25℃搅拌10分钟。然后加入4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(哌嗪-1-基)苯甲酰胺(86.52mg，粗品，HCl盐)，将所得混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示具有所需质量的峰(58％)。将混合物用EtOAc(30mL)稀释并减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(4g 硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@60mL/min；0～50％甲醇/EtOAc洗脱液@60mL/min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge150x 25mm x5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：34％-64％，8min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(3-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)丙酰基)哌嗪-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(50.9mg，53.43μmol，26.68％产率，93％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝886.3
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.05-10.89(m,1H),9.43(s,1H),8.31(d,J＝8.3Hz,1H),8.22(s,1H),7.89(s,1H),7.48-7.37(m,3H),7.30(d,J＝6.9Hz,1H),7.17(d,J＝7.5Hz,1H),5.11(dd,J＝5.1,13.1Hz,1H),4.87(q,J＝6.8Hz,1H),4.49-4.37(m,1H),4.34-4.23(m,1H),4.03(t,J＝13.4Hz,2H),3.93(s,3H),3.62-3.52(m,4H),3.42-3.37(m,2H),3.32(s,3H),2.98-2.81(m,5H),2.76-2.65(m,2H),2.63-2.56(m,1H),2.48-2.35(m,3H),2.05-1.93(m,1H),1.80(d,J＝11.6Hz,2H),1.57-1.47(m,2H),1.45-1.36(m,1H),1.35-1.26(m,2H),1.24(d,J＝6.6Hz,6H)。
实施例59、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(3-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)丙酰基)哌嗪-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物59)的合成
按照与实施例58中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物59。
MS(M+H)+＝886.5,1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.48(d,J＝8.5Hz,1H),8.12-7.99(m,2H),7.79-7.67(m,2H),7.41(s,1H),7.38-7.27(m,1H),7.08-6.94(m,2H),6.88(d,J＝1.5Hz,1H),5.19(dd,J＝5.1,13.2Hz,1H),5.04-4.92(m,1H),4.47-4.33(m,1H),4.30-4.20(m,1H),3.98(s,3H),3.93-3.78(m,6H),3.71-3.61(m,2H),3.41(s,3H),3.06-2.98(m,3H),2.93-2.77(m,4H),2.48-2.26(m,3H),2.25-2.14(m,1H),1.83(d,J＝12.5Hz,2H),1.72-1.61(m,4H),1.45-1.34(m,2H),1.32(d,J＝6.8Hz,6H)。
实施例60、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物60)的合成
步骤1、4-(4-(3-氯丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(2)的合成
将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(500mg，1.46mmol)、1-溴-3-氯-丙烷(252.93mg，1.61mmol，158.08μL)、DIEA(566.28mg，4.38mmol，763.18μL)和NaI(21.89mg，146.05μmol)在DMF(5mL)中的混合物在70℃搅拌1小时。LCMS显示2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮完全消耗以及具有所需质量的主峰。将混合物溶液减压浓缩，得到4-(4-(3-氯丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(611mg，粗品)，其为棕色油状物，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝419.1
步骤2、(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(3)的合成
将4-(4-(3-氯丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(600mg，1.43mmol)、哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(372.94mg，1.86mmol)、DIEA(555.38mg，4.30mmol，748.48μL)和NaI(21.47mg，143.24μmol)在DMF(5mL)中的混合物在70℃搅拌1小时。LCMS显示4-(4-(3-氯丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮完全消耗，以及具有所需质量的峰(51％)。将混合物通过制备型HPLC(柱：Waters XbridgeC18 150x50mm x 10μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：28％-58％,11min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge C18 150x50mm x 10μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：28％-58％,11min)纯化并冻干，得到(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(0.3g，粗品)，其为黄色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝583.3
步骤3、4-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(4)的合成
在25℃向(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(0.3g，514.85μmol)在二氧六环(1mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，27.27mL)。将所得混合物在25℃搅拌0.5小时。LCMS显示起始材料完全消耗。将混合物溶液减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：PhenomenexSynergi Polar-RP 100x 25mm x 4μm；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：6％-26％，7min)纯化并冻干，得到4-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(50mg，82.13μmol，产率21.31％，纯度98％，TFA)，其为黄色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝483.1
步骤4、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物60)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(45mg，100.57μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(57.36mg，150.86μmol)和DIPEA(38.99mg，301.72μmol，52.55μL)。将混合物在25℃搅拌10分钟。向混合物中加入4-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(60.00mg，100.57μmol，TFA)。将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示4-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮完全消耗，以及具有所需质量的峰(54％)。将混合物倒入水(10mL)中并用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机相用盐水(10mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝8:1；Rf＝0.4)纯化，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150x 25mm x 5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：35％-68％,8min)纯化并冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(31.4mg，33.74μmol，33.55％产率，98％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝912.1
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(s,1H),8.30-8.23(m,2H),8.10(d,J＝7.6Hz,1H),7.96(s,1H),7.75-7.65(m,1H),7.54-7.44(m,2H),7.35(t,J＝7.5Hz,2H),5.09(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.76(q,J＝8.1Hz,1H),4.04(t,J＝14.1Hz,2H),3.93(s,3H),3.83-3.70(m,1H),3.32-3.26(m,7H),2.93-2.80(m,3H),2.65-2.58(m,1H),2.56-2.49(m,6H),2.42-2.25(m,5H),2.06-2.00(m,1H),1.99-1.89(m,4H),1.82-1.75(m,2H),1.74-1.66(m,2H),1.63-1.57(m,6H)。
实施例61、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物61)的合成
按照与实施例44中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物61。
MS(M+H)+＝930.0,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.94(s,1H),8.34-8.21(m,2H),8.07-7.92(m,2H),7.53(d,J＝8.8Hz,1H),7.21(d,J＝6.7Hz,1H),7.12-7.02(m,2H),5.11-5.00(m,1H),4.89-4.77(m,1H),4.38-4.17(m,3H),4.15-4.00(m,3H),3.97-3.85(m,4H),3.34-3.24(m,8H),3.21-3.12(m,1H),2.96-2.84(m,1H),2.79-2.71(m,1H),2.63-2.55(m,8H),2.40-2.32(m,1H),2.00-1.80(m,5H),1.77-1.69(m,2H),1.68-1.57(m,4H),1.55-1.35(m,2H)。
实施例62、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物62)的合成
按照与实施例44中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物62。
MS(M+H)+＝925.3,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.29-10.81(m,1H),8.36-8.22(m,2H),8.15(br d,J＝7.8Hz,1H),7.96(s,1H),7.67(dd,J＝7.2,8.3Hz,1H),7.58-7.40(m,2H),7.39-7.22(m,2H),5.09(dd,J＝5.5,12.9Hz,1H),4.76(quin,J＝8.1Hz,1H),4.48-4.33(m,1H),4.14-4.00(m,3H),3.93(s,4H),3.80-3.60(m,2H),3.43-3.32(m,3H),3.13(t,J＝12.4Hz,1H),2.96-2.77(m,3H),2.72-2.55(m,3H),2.39(t,J＝7.4Hz,2H),2.07-1.99(m,1H),1.99-1.86(m,3H),1.83-1.79(m,3H),1.72-1.69(m,2H),1.61-1.56(m,4H),1.55-1.42(m,4H),1.42-1.25(m,3H)。
实施例63、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-4-羟基哌啶-4-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物63)的合成
步骤1、4-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-炔-1-基)-4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(3)的合成
在-70℃向丙炔酸乙酯(1.70g，17.33mmol，1.70mL)在THF(10mL)中的溶液中缓慢加入n-BuLi(2.5M，9.30mL)，将混合物在-70℃搅拌15分钟。在约70℃缓慢加入4-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯(1g，5.02mmol)在THF(10mL)中的溶液，将混合物在约70℃搅拌1小时。LCMS显示检测到55％的所需质量。加入AcOH(1.17g，19.51mmol，1.12mL)，将混合物升温至20℃。将混合物用NaHCO3(20mL)和EtOAc(20mL)稀释，并用EtOAc(10mL x 2)萃取，将合并的有机层用H2O(10mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(12g 硅胶快速柱，10～100％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@50mL/min)纯化，得到4-(3-乙氧基-3-氧代丙酸)-1-炔-1-基)-4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.37g，4.15mmol，82.62％产率，90％纯度)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝298.3
步骤2、3-(1-(叔丁氧基羰基)-4-羟基哌啶-4-基)丙炔酸(4)的合成
向4-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-炔-1-基)-4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.17g，3.93mmol)在THF(12mL)、H2O(0.3mL)和MeOH(0.3mL)中的溶液中加入LiOHH2O(231mg，5.50mmol)，将混合物在25℃搅拌4小时。后处理后，LCMS显示检测到83％的所需质量。将与其他批次(0.2g规模)合并的混合物减压浓缩，得到3-(1-(叔丁氧基羰基)-4-羟基哌啶-4-基)丙炔酸(1.25g，粗品)，其为黑棕色固体。MS(M+H)+＝270.3
步骤3、4-(3-(4-(((苄氧基)羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-氧代丙-1-炔-1-基)-4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(5)的合成
向3-(1-(叔丁氧基羰基)-4-羟基哌啶-4-基)丙炔酸(1.25g，4.54mmol)和哌啶-4-基氨基甲酸苄酯(1.17g，5.00mmol)在DMF(20mL)中的溶液中加入EDCI(1.31g，6.81mmol)、HOBt(1.23g，9.08mmol)和DIPEA(1.76g，13.63mmol，2.37mL)，将混合物在25℃搅拌14小时。LCMS显示检测到63％的所需质量。将混合物用H2O(40mL)稀释并用EtOAc(15mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(10mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(12g 硅胶快速柱，10～40％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@50mL/min)纯化，得到4-(3-(4-(((苄氧基)羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-氧代丙-1-炔-1-基)-4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(850mg，1.72mmol，37.77％产率，98％纯度)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝486.2
步骤4、(1-(3-(4-羟基哌啶-4-基)丙炔酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(6)的合成
向4-(3-(4-(((苄氧基)羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-氧代丙-1-炔-1-基)-4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(300mg，617.83μmol)在DCM(6mL)中的溶液中加入TFA(415.80mg，3.65mmol，270μL)，将混合物在25℃搅拌14小时。LCMS显示检测到75％的所需质量。将混合物减压浓缩，得到(1-(3-(4-羟基哌啶-4-基)丙炔酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(310mg，粗品，TFA)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝386.0
步骤5、(1-(3-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-4-羟基哌啶-4-基)丙炔酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(8)的合成
向(1-(3-(4-羟基哌啶-4-基)丙炔酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(310mg，620.65μmol，TFA)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(163mg，590.11μmol)在DMSO(15mL)中的溶液中加入TEA(378.04mg，3.74mmol，520μL)，将混合物在100℃搅拌14小时。LCMS显示检测到92％的所需质量。过滤混合物，用EtOAc(30mL)和H2O(20mL)洗涤滤饼。用EtOAc(10mL×3)萃取滤液，将合并的有机层用盐水(20mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(5g 硅胶快速柱，20～98％EtOAc/石油醚梯度洗脱液@50mL/min)纯化，得到(1-(3-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-4-羟基哌啶-4-基)丙炔酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(0.3g，453.50μmol，73.07％产率，97％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝642.0
步骤6、4-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)-4-羟基哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(9)的合成
向(1-(3-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-4-羟基哌啶-4-基)丙炔酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(0.3g，467.53μmol)在CF3CH2OH(10mL)中的溶液中加入Pd/C(50mg，10％纯度)，在H2(15Psi)下将混合物在25℃搅拌14小时。LCMS显示检测到46％的所需质量。在H2(15Psi)下将混合物在50℃搅拌6小时。LCMS显示检测到80％的所需质量。将混合物用THF(10mL)稀释，然后过滤。将滤饼用THF(10mL)和CF3CH2OH(10mL)洗涤。将滤液减压浓缩，得到4-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)-4-羟基哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(240mg，粗品)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝512.0
步骤7、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-4-羟基哌啶-4-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物63)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(70mg，156.45μmol)和HATU(89.23mg，234.67μmol)在DMF(1.5mL)中的溶液中加入DIPEA(60.66mg，469.34μmol，81.75μL)，将混合物在20℃搅拌15分钟。加入4-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)-4-羟基哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(96.04mg，187.74μmol)的DMF(1mL)溶液，将混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示检测到79％的所需质量。将混合物用H2O(10mL)稀释并用EtOAc(10mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(10mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：37％-67％，9min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-4-羟基哌啶-4-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(44mg，44.42μmol，28.39％产率，95％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝941.1
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(s,1H),8.30-8.25(m,2H),8.18-8.13(m,1H),7.97(s,1H),7.69-7.65(m,1H),7.51-7.47(m,2H),7.36(d,J＝8.5Hz,1H),7.31(d,J＝7.0Hz,1H),5.11-5.05(m,1H),4.82-4.71(m,1H),4.45-4.36(m,2H),4.09-4.00(m,3H),3.97-3.90(m,4H),3.48-3.39(m,2H),3.32(s,3H),3.26-3.09(m,3H),2.93-2.82(m,1H),2.72-2.63(m,1H),2.62-2.53(m,2H),2.47-2.42(m,2H),2.06-1.79(m,5H),1.74-1.54(m,12H),1.52-1.33(m,2H)。
实施例64、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丁酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物64)的合成
按照与实施例60中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物64。
MS(M+H)+＝940.1,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(s,1H),8.31-8.23(m,2H),8.15(d,J＝7.6Hz,1H),7.96(s,1H),7.69(t,J＝7.8Hz,1H),7.51-7.46(m,2H),7.34(t,J＝7.6Hz,2H),5.09(dd,J＝5.3,12.8Hz,1H),4.82-4.71(m,1H),4.40(d,J＝12.2Hz,1H),4.04(t,J＝14.0Hz,3H),3.93(s,4H),3.34-3.30(m,7H),3.12(t,J＝11.9Hz,1H),2.93-2.81(m,1H),2.71-2.61(m,2H),2.57-2.52(m,4H),2.41-2.30(m,4H),2.07-1.77(m,6H),1.76-1.67(m,4H),1.65-1.54(m,4H),1.50-1.33(m,2H)
实施例65、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(5-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)戊酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物65)的合成
按照与实施例60中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物65。
MS(M+H)+＝954.1,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(br s,1H),8.29-8.25(m,2H),8.17-8.15(m,1H),7.96(s,1H),7.70-7.67(m,1H),7.50-7.46(m,2H),7.36-7.31(m,2H),5.11-5.07(m,1H),4.81-4.71(m,1H),4.45-4.36(m,1H),4.09-3.98(m,3H),3.93(s,3H),3.32(s,3H),3.31-3.28(m,4H),3.15-3.05(m,1H),2.92-2.81(m,1H),2.72-2.59(m,2H),2.55-2.51(m,4H),2.37-2.33(m,4H),2.06-1.98(m,1H),1.97-1.84(m,3H),1.81-1.80(m,1H),176 -1.32(m,13H)
实施例66、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物66)的合成
按照与实施例60中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物66。
MS(M+H)+＝900.4,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.25-10.90(m,1H),8.31(d,J＝8.3Hz,1H),8.22(s,1H),8.15(br d,J＝7.8Hz,1H),7.88(s,1H),7.70(dd,J＝7.4,8.3Hz,1H),7.56-7.46(m,2H),7.41-7.30(m,2H),5.09(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.88(td,J＝6.6,13.4Hz,1H),4.39(br d,J＝12.4Hz,1H),4.12-3.95(m,4H),3.93(s,3H),3.30(br s,6H),3.20-3.07(m,1H),2.93-2.82(m,1H),2.80-2.54(m,12H),2.11-1.97(m,1H),1.94-1.76(m,2H),1.59-1.33(m,2H),1.24(d,J＝6.8Hz,6H)。
实施例67、4-((9-环丙基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物67)的合成
步骤1、N-苄基环丙胺(3)的合成
向(氯甲基)苯(10g，79.00mmol，9.09mL)和环丙胺(11.28g，197.50mmol，13.68mL)在ACN(100mL)中的溶液中加入K2CO3(16.38g，118.50mmol)，将混合物在80℃搅拌4小时。TLC(石油醚:EtOAc＝10:1)显示(氯甲基)苯完全消耗，并且检测到两个具有较大极性的新斑点。过滤混合物，用ACN(100mL)洗涤滤饼，真空浓缩滤液。将残余物用甲苯(30mL)稀释并真空浓缩以除去大部分环丙胺，得到N-苄基环丙胺(11.35g)，其为黄色油状物，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝148.2
步骤2、N-((1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-基)甲基)-N-苄基环丙胺(5)的合成
将N-苄基环丙胺(11.35g，77.10mmol)和(1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-基)甲醇(11.50g，77.10mmol)在EtOH(100mL)中的混合物在25℃搅拌16小时。TLC(石油醚:EtOAc＝3:1)显示N-苄基环丙胺完全消耗，并且检测到一个极性较低的主要新斑点。将反应混合物真空浓缩以除去大部分溶剂。将残余物用H2O(100mL)和EtOAc(100mL)稀释，分离有机相，用EtOAc(100mL×1)萃取水相，将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到N-((1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-基)甲基)-N-苄基环丙胺(20.9g，粗品)，其为浅黄色油状物，其直接使用。MS(M+H)+＝279.4
步骤3、3-(苄基(环丙基)氨基)-2,2-二氟丙酸乙酯(7)的合成
在N2下，在0℃向Zn(12.27g，187.71mmol)在THF(100mL)中的混悬液中滴加入TMSCl(20.39g，187.71mmol，23.82mL)。在此期间，将温度保持在5℃以下。搅拌20分钟后，在N2下，在0℃缓慢加入2-溴-2,2-二氟乙酸乙酯(30.48g，150.17mmol，19.29mL)。在此期间，将温度保持在30℃以下。将混合物搅拌20分钟并冷却至0℃。在0℃加入N-((1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-基)甲基)-N-苄基环丙胺(20.9g，75.09mmol)的THF(100mL)溶液。在此期间，将温度保持在10℃以下。20分钟后，将混悬液升温至15℃并搅拌5小时。LCMS显示反应物1完全消耗并且检测到55％的所需质量。过滤混合物，用EtOAc(200mL)和THF(200mL)洗涤滤饼，真空浓缩滤液。过滤残余物，用溶剂(200mL，石油醚/EtOAc＝6/1)洗涤滤饼，真空浓缩滤液，得到3-(苄基(环丙基)氨基)-2,2-二氟丙酸乙酯(54.5g，粗品)，其为浅黄色油状物。MS(M+H)+＝284.1
步骤4、3-(环丙氨基)-2,2-二氟丙酸乙酯(8)的合成
在N2气氛下向3-(苄基(环丙基)氨基)-2,2-二氟丙酸乙酯(54.5g，192.37mmol)和HCl(12M，32.06mL)在EtOH(200mL)中的溶液中加入Pd(OH)22/C(10g，10％纯度)，在H2(15psi)下将混悬液在25℃搅拌16小时。LCMS显示残余48％的起始材料，在H2(15psi)下将混合物在25℃再搅拌24小时，LCMS显示残余痕量的起始材料并检测到所需质量。过滤反应混合物，用EtOH(500mL)洗涤滤饼，真空浓缩滤液，得到3-(环丙氨基)-2,2-二氟丙酸乙酯(45.4g，HCl)，其为红色胶状物，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝194.2
步骤5、3-((2-氯-5-硝基嘧啶-4-基)(环丙基)氨基)-2,2-二氟丙酸乙酯(10)的合成
在0℃向3-(环丙氨基)-2,2-二氟丙酸乙酯(45.4g，197.69mmol，HCl)和2,4-二氯-5-硝基嘧啶(19.17g，98.85mmol)在丙酮(400mL)中的溶液中加入K2CO3(81.97g，593.07mmol)，在此期间，将温度保持低于10℃。将混悬液在25℃搅拌16小时。LCMS显示3-(环丙氨基)-2,2-二氟丙酸乙酯完全消耗并且检测到34％的所需质量。反应混合物静置分层后，过滤上清液，滤饼用EtOAc(500mL)洗涤，沉淀物用H2O(500mL)稀释，用EtOAc(500mL×2)萃取。将合并的有机相真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(80g 硅胶快速柱，2～12％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，将洗脱液真空浓缩。将残余物与(石油醚:EtOAc＝15:1，20mL)研磨，过滤混悬液，用(20mL，石油醚:EtOAc＝15:1)洗涤滤饼，收集滤饼并干燥，得到(3-((2-氯-5-硝基嘧啶-4-基)(环丙基)氨基)-2,2-二氟丙酸乙酯(8.95g，25.52mmol，产率12.91％)，为白色固体。将滤液真空浓缩，得到产物2(3-((2-氯-5-硝基嘧啶-4-基)(环丙基)氨基)-2,2-二氟丙酸乙酯(1g)，为黄色胶状物。MS(M+H)+＝350.7
步骤6、2-氯-9-环丙基-7,7-二氟-8,9-二氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6(7H)-酮(11)的合成
将3-((2-氯-5-硝基嘧啶-4-基)(环丙基)氨基)-2,2-二氟丙酸乙酯(8.95g，25.52mmol)和Fe(5.70g，102.08mmol)在AcOH(80mL)中的混合物在60℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到97％的所需质量。将混合物真空浓缩以除去大部分溶剂。将残余物用H2O(300mL)和EtOAc(200mL)稀释，过滤混悬液，用EtOAc(100mL)洗涤滤饼，将滤液分层，收集有机层，用EtOAc(200mL x 2)萃取水相，将合并的有机层用NaHCO3溶液(100mL×2)洗涤，经Na2SO 4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物与MTBE(20mL)一起研磨10分钟，过滤混悬液，用MTBE(10mL)洗涤滤饼，收集滤饼并干燥，得到2-氯-9-环丙基-7,7-二氟-8,9-二氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6(7H)-酮(6.2g，22.57mmol，88.44％产率)，其为灰白色固体，这由H NMR证实。MS(M+H)+＝275.0。将滤液真空浓缩，得到2-氯-9-环丙基-7,7-二氟-8,9-二氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6(7H)-酮(0.6g)，其为棕色固体。MS(M+H)+＝275.7
步骤7、2-氯-9-环丙基-7,7-二氟-5-甲基-8,9-二氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6(7H)-酮(12)的合成
向2-氯-9-环丙基-7,7-二氟-8,9-二氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6(7H)-酮(6.2g，22.57mmol)在DMF(30mL)中的溶液中加入K2CO3(6.24g，45.15mmol)和MeI(4.17g，29.35mmol，1.83mL)，将混悬液在25℃搅拌3小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到93％的所需质量。在0℃通过加入H2O(30mL)来淬灭反应混合物，然后用冰水(300mL)稀释并用EtOAc(150mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(300mL×5)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(20g硅胶快速柱，9～40％EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到2-氯-9-环丙基-7,7-二氟-5-甲基-8,9-二氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6(7H)-酮(6.12g，21.20mmol，93.91％产率)，其为白色固体。MS(M+H)+＝288.7
步骤8、4-((9-环丙基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(14)的合成
向2-氯-9-环丙基-7,7-二氟-5-甲基-8,9-二氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6(7H)-酮(0.5g，1.73mmol)和4-氨基-3-甲氧基苯甲酸(434.29mg，2.60mmol)在EtOH(3mL)和H2O(12mL)中的溶液中加入HCl(12M，305.99μL)，将混合物在100℃搅拌16小时。LCMS显示反应物1完全消耗并且检测到77％的所需质量。将反应物真空浓缩。将残余物与H2O(10mL)一起研磨5分钟，过滤混悬液，用H2O(10mL)洗涤滤饼，将滤饼收集并干燥，得到粗产物。将粗产物与MTBE(10mL)一起研磨5分钟，过滤混悬液，用MTBE(10mL)洗涤滤饼，收集滤饼并干燥，得到4-((9-环丙基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(237mg，565.12μmol，产率32.63％)，其为灰色固体，这由H NMR证实。MS(M+H)+＝420.0
将滤液真空浓缩，得到4-((9-环丙基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(0.5g)，其为灰色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.76(s,1H),8.63-8.51(m,1H),8.40(s,1H),7.64(dd,J＝1.3,8.6Hz,1H),7.54(s,1H),4.30(t,J＝14.3Hz,2H),3.95(s,3H),3.30(s,3H),3.02-2.97(m,1H),0.95-0.81(m,2H),0.78-0.60(m,2H)。
步骤9、4-((9-环丙基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物67)的合成
向4-((9-环丙基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(70mg，166.91μmol)在DMF(1mL)中的溶液中加入HATU(82.50mg，216.99μmol)和DIEA(86.29mg，667.65μmol，116.29μL)，将混合物在25℃搅拌15分钟。向混合物中加入4-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(80.07mg，150.22μmol，HCl)，将混合物在25℃搅拌1小时。LCMS显示4-((9-环丙基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸完全消耗并且检测到91％的所需质量。向混合物中加入CH3COOH以调节pH<7。将混合物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：39％-69％，9min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Unisil 3-100℃18μLtra 150*50mm*3μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：13％-43％，10min)和(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：33％-63％，9min)纯化，将洗脱液冷冻干燥，得到4-((9-环丙基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(19.0mg，20.95μmol，12.55％产率，99％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝898.2
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.25-10.93(m,1H),8.58(d,J＝8.4Hz,1H),8.35(s,1H),8.14(d,J＝7.7Hz,1H),8.03(s,1H),7.70(t,J＝7.8Hz,1H),7.60-7.45(m,2H),7.35(t,J＝7.3Hz,2H),5.19-5.00(m,1H),4.39(d,J＝12.8Hz,1H),4.20(t,J＝15.5Hz,2H),4.11-3.88(m,5H),3.32-3.24(m,7H),3.20-3.07(m,1H),2.94-2.80(m,2H),2.73-2.54(m,11H),2.09-1.97(m,1H),1.95-1.74(m,2H),1.61-1.30(m,2H),0.83(br d,J＝5.9Hz,2H),0.72-0.55(m,2H)。
实施例68、4-((9-环丁基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物68)的合成
步骤1、N-苄基环丁胺(3)的合成
在25℃向(氯甲基)苯(5g，39.50mmol，4.55mL)在MeCN(50mL)中的溶液中加入K2CO3(16.38g，118.50mmol)和环丁胺(5.06g，71.10mmol，6.09mL)。将混合物在80℃搅拌5小时。TLC(石油醚:EtOAc＝5:1)显示形成一个新斑点。过滤混合物。将滤液减压浓缩。将残余物溶解在甲苯(30ml)中，然后减压浓缩，得到N-苄基环丁胺(7.1g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝162.3
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.32-7.27(m,5H),3.57(s,2H),3.11-3.07(m,1H),2.07 -2.01(m,2H),1.89-1.77(m,1H),1.71-1.62(m,2H),1.60-1.53(m,1H),1.52-1.46(m,1H)。
步骤2、N-((1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-基)甲基)-N-苄基环丁胺(5)的合成
在25℃向N-苄基环丁胺(7.1g，44.03mmol)在EtOH(80mL)中的溶液中加入(1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-基)甲醇(6.57g，44.03mmol)。将混合物在25℃搅拌12小时。TLC(石油醚:EtOAc＝1:1)显示形成一个新斑点。将反应混合物减压浓缩。将残余物用水(50mL)稀释并用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层用饱和盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到N-((1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-基)甲基)-N-苄基环丁胺(13g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝293.4
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.05(d,J＝8.0Hz,1H),7.69-7.67(m,1H),7.56-7.52(m,1H),7.46-7.39(m,1H),7.37-7.35(m,5H),5.44(s,2H),3.63(s,2H),3.30-3.26(m,1H),1.94-1.90(m,2H),1.87-1.82(m,2H),1.59-1.50(m,2H)。
步骤3、3-(苄基(环丁基)氨基)-2,2-二氟丙酸乙酯(7)的合成
在0℃向Zn(7.27g，111.16mmol)在THF(100ml)中的混合物中加入TMSCl(12.08g，111.16mmol，14.11mL)。搅拌30分钟后，在0℃将2-溴-2,2-二氟乙酸乙酯(18.05g，88.93mmol，11.42mL)加入到混合物中，在此期间，将温度保持在30℃以下。将混合物搅拌30分钟并冷却至0℃，然后在0℃加入N-((1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-基)甲基)-N-苄基环丁胺(13g，44.46mmol)的THF(100ml)溶液，在N2下将所得混合物在25℃搅拌4小时。LCMS显示检测到约50％的所需质量。过滤混合物，用EtOAc(200mL)和THF(200mL)洗涤滤饼，用饱和碳酸氢钠溶液(200mL)洗涤滤液并真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(40g硅胶快速柱，0～20％石油醚:EtOAc梯度洗脱液@80mL/min)纯化，得到3-(苄基(环丁基)氨基)-2,2-二氟丙酸乙酯(9.6g，21.63mmol，48.65％产率，67％纯度)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝298.1
步骤4、3-(环丁基氨基)-2,2-二氟丙酸乙酯(8)的合成
在氮气氛下，在25℃向3-(苄基(环丁基)氨基)-2,2-二氟丙酸乙酯(9.6g，32.29mmol)在EtOH(50mL)中的混合物中加入Pd(OH)2/C(2g，10％纯度)和HCl(12M，5.38mL)。在H2气氛(15psi)下将混合物在25℃搅拌14小时。TLC(石油醚:EtOAc＝5:1)显示形成两个新斑点。过滤混合物。将滤液减压浓缩，得到3-(环丁基氨基)-2,2-二氟丙酸乙酯(8g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝208.2
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)＝4.36-4.30(q,J＝7.2Hz,2H),3.45-3.40(q,J＝7.2Hz,1H),2.31-2.24(m,2H),2.18-2.13(m,2H),1.79-1.70(m,2H),1.28(t,J＝7.2Hz,3H),1.04(t,J＝6.8Hz,2H)。
步骤5、3-((2-氯-5-硝基嘧啶-4-基)(环丁基)氨基)-2,2-二氟丙酸乙酯(10)的合成
在25℃向3-(环丁基氨基)-2,2-二氟丙酸乙酯(8g，38.61mmol)在丙酮(50mL)中的溶液中加入K2CO3(10.67g，77.21mmol)和2,4-二氯-5-硝基嘧啶(8.24g，42.47mmol)。将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示检测到约46％的所需质量。过滤混合物。将滤液减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(40g 硅胶快速柱，0～10％石油醚:EtOAc醚梯度洗脱液@80mL/min)纯化，得到3-((2-氯-5-硝基嘧啶-4-基)(环丁基)氨基)-2,2-二氟丙酸乙酯(3.9g，10.41mmol，26.98％产率，97.4％纯度)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝364.9
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)＝9.05(s,1H),4.59(t,J＝14.8Hz,2H),4.28-4.22(q,J＝7.2Hz,2H),4.04-3.98(m,1H),2.02-1.98(m,4H),1.62-1.52(m,2H),1.20(t,J＝7.2Hz,3H)。
步骤6、2-氯-9-环丁基-7,7-二氟-8,9-二氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6(7H)-酮(11)的合成
在25℃向3-((2-氯-5-硝基嘧啶-4-基)(环丁基)氨基)-2,2-二氟丙酸乙酯(3.9g，10.69mmol)在HOAc(20mL)中的溶液中加入Fe(2.39g，42.77mmol)。将混合物在80℃搅拌5小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。过滤混合物。将滤液用水(100mL)稀释并用EtOAc(100mL×3)萃取。将合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液(200ml)和盐水(200mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到2-氯-9-环丁基-7,7-二氟-8,9-二氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6(7H)-酮(3g，粗品)，其为棕色固体。MS(M+H)+＝289.0
步骤7、2-氯-9-环丁基-7,7-二氟-5-甲基-8,9-二氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6(7H)-酮(12)的合成
在25℃向2-氯-9-环丁基-7,7-二氟-8,9-二氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6(7H)-酮(3g，10.39mmol)在DMF(30mL)中的溶液中加入K2CO3(4.31g，31.18mmol)和MeI(2.95g，20.78mmol，1.29mL)。将混合物在25℃搅拌5小时。LCMS显示检测到约60％的所需质量。将反应混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层用饱和盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(20g 硅胶快速柱，0～20％石油醚/EtOAc梯度洗脱液@60mL/min)纯化，得到2-氯-9-环丁基-7,7-二氟-5-甲基-8,9-二氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6(7H)-酮(2.3g，7.45mmol，71.65％产率，98％纯度)，其为浅黄色固体。MS(M+H)+＝303.1
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)8.41(s,1H),4.45-4.36(m,1H),4.18(t,J＝14.4Hz,2H),3.35(s,3H),2.21-2.20(m,2H),2.10-2.07(m,2H),1.70-1.66(m,2H)。
步骤8、4-((9-环丁基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(14)的合成
在25℃向2-氯-9-环丁基-7,7-二氟-5-甲基-8,9-二氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6(7H)-酮(0.5g，1.65mmol)在H2O(6mL)和EtOH(2mL)中的溶液中加入HCl(12M，275.00μL)和4-氨基-3-甲氧基苯甲酸(330.98mg，1.98mmol)。将混合物在100℃搅拌12小时。LCMS显示约60％的所需质量。将残余物与EtOAc/乙醇(v/v＝1:1)(10ml×3)一起研磨，得到4-((9-环丁基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(400mg，756.79μmol，产率45.87％，纯度82％)为灰色固体。MS(M+H)+＝434.1
步骤9、4-((9-环丁基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物68)的合成
在25℃向4-((9-环丁基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(0.2g，461.46μmol)在DMF(3mL)中的溶液中加入HATU(350.92mg，922.92μmol)和DIEA(178.92mg，1.38mmol，241.13μL)，搅拌0.5小时后，然后加入4-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(229.14mg，461.46μmol，HCl盐)，将所得混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示检测到约55％的所需质量。将反应混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(50mL×5)萃取。将合并的有机层用饱和盐水(150mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150x 40mm x 15μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：17％-47％,10min)纯化，并通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge150x25mm x 5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：38％-68％,10min)进一步纯化，然后冻干，得到4-((9-环丁基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(64.3mg，65.93μmol，14.29％产率，93.5％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝912.4
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(s,1H),8.35-8.32(m,2H),8.17(d,J＝8Hz,1H),7.99(s,1H),7.71-7.67(m,1H),7.53-7.51(dd,J＝8.4,1.6Hz,1H),7.49-7.48(m,1H),7.36-7.32(m,2H),5.10-5.05(m,1H),4.40-4.36(m,2H),4.07-3.97(m,4H),3.92(s,3H),3.33(s,3H),3.31-3.27(m,4H),3.16-3.13(m,1H),2.91-2.83(m,1H),2.59-2.55(m,11H),2.23-2.20(m,2H),2.06-2.00(m,3H),1.90-1.80(m,2H),1.71-1.65(m,2H),1.50-1.38(m,2H)。
实施例69、4-((7-烯丙基-9-环戊基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物69)的合成
步骤1、7-烯丙基-2-氯-9-环戊基-5-甲基-8,9-二氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6(7H)-酮(2)的合成
在-78℃向2-氯-9-环戊基-5-甲基-8,9-二氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6(7H)-酮(0.4g，1.42mmol)在THF(8mL)中的溶液中加入LDA(2M，854.85μL)，将混合物在-78℃搅拌30分钟，加入3-溴丙-1-烯(689.44mg，5.70mmol，4eq)，将所得混合物在-78℃搅拌2小时并在20℃再搅拌12小时。LCMS显示反应完成。将混合物用氯化铵(饱和水溶液，50mL)和水(20mL)淬灭，用EtOAc(2×50mL)萃取，将合并的有机萃取物用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(5g硅胶快速柱，0～50％EtOAc/石油醚梯度洗脱液@80mL/min)纯化，得到7-烯丙基-2-氯-9-环戊基-5-甲基-8,9-二氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6(7H)-酮(0.3g，907.06umol，63.66％产率，97％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝321.2
步骤2、7-烯丙基-2-氯-9-环戊基-5-甲基-8,9-二氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6(7H)-酮(3(峰1))和7-烯丙基-2-氯-9-环戊基-5-甲基-8,9-二氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6(7H)-酮(3(峰2))的合成
将7-烯丙基-2-氯-9-环戊基-5-甲基-8,9-二氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6(7H)-酮(0.3g，0.935mmol)通过SFC(柱：DAICEL CHIRALCEL OJ(250mm*30mm，10μm)；流动相：[0.1％ NH3H2O IPA]；B％：25％-25％，3.7min；30min)分离，得到7-烯丙基-2-氯-9-环戊基-5-甲基-8,9-二氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6(7H)-酮(110mg，336.02μmol，产率35.93％，纯度98％)(峰1)和7-烯丙基-2-氯-9-环戊基-5-甲基-8,9-二氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6(7H)-酮(120mg，370.31μmol，产率39.60％，纯度99％)(峰2)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝321.0
步骤3、4-((7-烯丙基-9-环戊基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(4)的合成
向7-烯丙基-2-氯-9-环戊基-5-甲基-8,9-二氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6(7H)-酮(峰1，100mg，311.70μmol)和4-氨基-3-甲氧基-苯甲酸(57.32mg，342.87μmol)在H2O(3mL)和EtOH(1.5mL)中的溶液中加入HCl(12M，57.15μL)，将混合物在90℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成。过滤混合物，收集滤饼，得到4-((7-烯丙基-9-环戊基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(110mg，238.75umol，76.60％产率，98％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝452.2
步骤4、4-((7-烯丙基-9-环戊基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物69)的合成
向4-((7-烯丙基-9-环戊基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(100.00mg，221.48μmol)和4-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(118.05mg，221.48μmol，HCl)在DMF(3mL)中的溶液中加入HATU(126.32mg，332.21μmol)和DIPEA(85.87mg，664.43μmol，115.73μL)，将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成。通过FA将反应调节至pH＝7，将所得混合物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18150*25mm*10μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：25％-55％，10min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((7-烯丙基-9-环戊基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(97.3mg，102.52umol，46.29％产率，98％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝930.4
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(s,1H),8.38(d,J＝8.9Hz,1H),8.17-8.11(m,2H),8.10(s,1H),7.76(s,1H),7.73-7.65(m,1H),7.50-7.45(m,2H),7.37-7.35(m,2H),5.86-5.73(m,1H),5.12-5.01(m,3H),4.87-4.78(m,1H),4.40(d,J＝12.9Hz,1H),4.10-4.03(m,1H),3.98-3.91(m,4H),3.45-3.35(m,3H),3.19(s,3H),3.18-3.08(m,2H),2.93-2.75(m,3H),2.72-2.56(m,11H),2.46-2.39(m,1H),2.08-1.99(m,3H),1.90-1.78(m,3H),1.76-1.53(m,6H),1.52-1.38(m,3H)。
实施例70、4-((7-烯丙基-9-环戊基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物70)的合成
步骤1、4-((7-烯丙基-9-环戊基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(5)的合成
向7-烯丙基-2-氯-9-环戊基-5-甲基-8,9-二氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6(7H)-酮(峰2，120mg，374.05μmol)和4-氨基-3-甲氧基-苯甲酸(68.78mg，411.45μmol)在H2O(3mL)和EtOH(1.5mL)中的溶液中加入HCl(12M，68.58μL)，将混合物在90℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成。过滤混合物，收集滤饼，得到4-((7-烯丙基-9-环戊基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(120mg，265.77umol，71.05％产率，100％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝452.2
步骤2、4-((7-烯丙基-9-环戊基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物70)的合成
向4-((7-烯丙基-9-环戊基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(120mg，265.77umol)和4-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(141.66mg，265.77μmol，HCl)在DMF(3mL)中的溶液中加入HATU(151.58mg，398.66umol)和DIPEA(103.04mg，797.31umol，138.87μL)，将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成。通过FA将反应调节至pH＝7，将所得混合物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18150*25mm*10μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B：25％-55％,10min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((7-烯丙基-9-环戊基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(144.3mg，140.44umol，52.84％产率，95％纯度，FA)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝930.4
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.11(s,1H),8.39(d,J＝8.8Hz,1H),8.20-8.12(m,2H),8.11(s,1H),7.78(s,1H),7.73(t,J＝7.8Hz,1H),7.50-7.47(m,2H),7.41-7.36(m,2H),5.85-5.76(m,1H),5.13-5.02(m,3H),4.86-4.82(m,1H),4.43-4.39(m,1H),4.07-4.03(m,1H),3.95(s,4H),3.42-3.41(m,3H),3.20(s,3H),3.17-3.12(m,2H),2.94-2.83(m,3H),2.82-2.56(m,11H),2.46-2.40(m,1H),2.09-2.00(m,3H),1.92-1.76(m,4H),1.71-1.57(m,5H),1.52-1.40(m,3H)。
实施例71、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲基苯甲酰胺(化合物71)的合成
步骤1、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲基苯甲酸甲酯(2)的合成
向2-氯-9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-8,9-二氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6(7H)-酮(100mg，315.72μmol)和4-氨基-3-甲基苯甲酸甲酯(62.58mg，378.87μmol)在t-BuOH(2mL)中的溶液中加入TsOH(163.10mg，947.17μmol)，将混合物在100℃下搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗，检测到68％的产物质量。将混合物真空浓缩，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲基苯甲酸甲酯(200mg)，其为棕色油状物，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝446.2
步骤2、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲基苯甲酸(3)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲基苯甲酸甲酯(200mg，448.97μmol)在MeOH(2mL)、THF(2mL)和H2O(2mL)中的溶液中加入NaOH(538.73mg，13.47mmol)，将混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗，检测到84％的所需质量。将混合物真空浓缩以除去大部分溶剂。在0℃向残余物中加入HCl溶液(12M)以调节pH<3。过滤混悬液，收集滤饼并干燥，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲基苯甲酸(140mg)，其为棕色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝432.2
步骤3、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲基苯甲酰胺(化合物71)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲基苯甲酸(65mg，150.66μmol)在DMF(3mL)中的溶液中加入HATU(68.74mg，180.79μmol)和DIEA(116.83mg，903.96μmol，157.45μL)，将混合物在15℃搅拌15分钟，向混合物中加入4-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(72.27mg，135.59μmol，HCl盐)，将所得混合物在15℃搅拌1小时。LCMS显示4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲基苯甲酸完全消耗并且检测到69％的所需质量。向混合物中加入CH3COOH以调节pH<7。将所得混合物通过制备型HPLC(柱：WatersXbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：34％-64％,min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150*25mm*10μm；流动相：[水(0.225％ FA)-ACN]；B％：14％-44％,10min)纯化，将洗脱液冷冻干燥，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲基苯甲酰胺(25.0mg，26.92μmol，17.87％产率，98％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝910.3
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.31-10.77(m,1H),8.59(s,1H),8.19(s,1H),8.12(d,J＝7.7Hz,1H),7.75(d,J＝8.5Hz,1H),7.73-7.67(m,2H),7.64(dd,J＝1.9,8.4Hz,1H),7.40-7.29(m,2H),5.08(dd,J＝5.3,12.9Hz,1H),4.60(q,J＝8.3Hz,1H),4.37(d,J＝13.1Hz,1H),4.07-3.89(m,4H),3.32-3.28(m,7H),3.13(t,J＝11.7Hz,1H),2.92-2.81(m,1H),2.67-2.52(m,11H),2.29(s,3H),2.07-1.97(m,1H),1.90-1.76(m,4H),1.65-1.60(m,2H),1.58-1.43(m,5H),1.43-1.37(m,1H)。
实施例72、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-羟基苯甲酰胺(化合物72)的合成
步骤1、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]
二氮杂-2-基)氨基)-3-羟基苯甲酸(2)的合成
向2-氯-9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-8,9-二氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6(7H)-酮(0.8g，2.53mmol)和4-氨基-3-羟基苯甲酸(348.11mg，2.27mmol)在EtOH(16mL)和H2O(48mL)中的溶液中加入HCl(12M，463.06μL)，将所得混合物在100℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成。将反应混合物浓缩，将残余物与EtOAc(20mL)一起研磨并过滤，收集滤饼，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-羟基苯甲酸(0.7g，1.50mmol，产率59.47％，纯度93％)，其为棕色固体。MS(M+H)+＝434.1
步骤2、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-羟基苯甲酰胺(化合物72)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-羟基苯甲酸(150mg，346.09μmol)和4-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(202.92mg，380.70μmol，HCl)在DMF(2mL)中的溶液中加入HOBt(70.15mg，519.14μmol)、EDCI(99.52mg，519.14μmol)和TEA(105.06mg，1.04mmol，144.52μL)，将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成，将混合物倒入水(20mL)中并用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150*25mm*10μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：13％-43％,10min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-羟基苯甲酰胺(136mg，137.71umol，39.79％产率，97％纯度，FA)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝912.1
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(s,1H),10.34(br s,1H),8.26(s,1H),8.18(s,1H),8.15(d,J＝8.4Hz,1H),8.10(d,J＝7.8Hz,1H),7.98(s,1H),7.71(dd,J＝7.3,8.4Hz,1H),7.40-7.32(m,4H),5.10(dd,J＝5.3,12.8Hz,1H),4.79(t,J＝8.1Hz,1H),4.38(d,J＝12.4Hz,1H),4.12-3.90(m,5H),3.35-3.32(m,4H),3.15-3.11(m,1H),2.93-2.85(m,1H),2.66-2.53(m,12H),2.07-1.78(m,6H),1.74-1.71(m,2H),1.67-1.58(m,4H),1.49-1.33(m,2H)。
实施例73、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-(2-羟基乙氧基)苯甲酰胺(化合物73)的合成
步骤1、3-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-硝基苯甲酸甲酯(2)的合成
向3-羟基-4-硝基苯甲酸甲酯(1g，5.07mmol)在DMF(10mL)中的溶液中加入K2CO3(1.40g，10.14mmol)，将混合物在15℃搅拌30分钟，然后在15℃向混合物中缓慢加入(2-溴乙氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(1.82g，7.61mmol)在DMF(5mL)中的溶液，在N2气氛下将所得混合物加热至100℃持续4小时。TLC(SiO2，石油醚:EtOAc＝5:1)显示起始材料完全消耗，并且检测到一个具有较低极性的主要新斑点。将混合物用H2O(200mL)稀释并用EtOAc(100mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL×5)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(20g 硅胶快速柱，5～80％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到3-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-硝基苯甲酸甲酯(1.5g，4.22mmol，83.19％产率)，其为灰白色固体。MS(M+H)+＝356.5
步骤2、4-氨基-3-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)苯甲酸甲酯(3)的合成
在N2气氛下向3-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-硝基苯甲酸甲酯(1.5g，4.22mmol)在MeOH(50mL)和EtOAc(20mL)中的溶液中加入Pd/C(1g，4.22mmol，10％纯度)。在H2(15psi)气氛下将混悬液在15℃搅拌48小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到89％的所需质量。将混合物真空脱气并用N2鼓吹数次，过滤混合物，将滤液真空浓缩，得到4-氨基-3-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)苯甲酸甲酯(1.5g)，其为棕色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝326.1
步骤3、3-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)苯甲酸甲酯(4)的合成
向4-氨基-3-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)苯甲酸甲酯(200mg，614.49μmol)、2-氯-9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-8,9-二氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6(7H)-酮(175.17mg，553.04μmol)、Pd2(dba)3(56.27mg，61.45μmol)和XPhos(43.94mg，92.17μmol)在t-BuOH(5mL)中的溶液中加入K2CO3(339.70mg，2.46mmol)，在N2气氛下将混悬液在100℃搅拌4小时。LCMS显示残余12％的4-氨基-3-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)苯甲酸甲酯并且检测到47％的所需质量。将反应混合物真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(12g硅胶快速柱，4～15％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到3-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)苯甲酸甲酯(220mg，363.19μmol，59.10％产率)，其为白色固体。MS(M+H)+＝606.2
步骤4、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-(2-羟基乙氧基)苯甲酸(5)的合成
向3-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9加入四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)苯甲酸甲酯(210mg，346.68μmol)在MeOH(2mL)和THF(2mL)中的溶液中加入NaOH(277.32mg，6.93mmol)在H2O(2mL)中的溶液，将混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到72％的4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-(2-羟基乙氧基)苯甲酸的所需质量。将混合物真空浓缩。将残余物用H2O(8mL)稀释并用EtOAc(10mL×2)萃取。向水相中加入HCl(12M水溶液)以提供pH<3，过滤混悬液，用H2O(15mL)洗涤滤饼，收集滤饼并干燥，得到4-[(9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-8H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-3-(2-羟基乙氧基)苯甲酸(130mg)，其为橙色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝478.1。
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-(2-羟基乙氧基)苯甲酰胺(化合物73)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-(2-羟基乙氧基)苯甲酸(65mg，136.14μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(77.65mg，204.21μmol)和DIEA(105.57mg，816.82μmol，142.28μL)，将混合物在15℃搅拌15分钟，向混合物中加入4-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(94.33mg，176.98μmol，HCl)，将所得混合物在15℃搅拌1小时。LCMS显示残余痕量的4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-(2-羟基乙氧基)苯甲酸并且检测到88％的所需质量。向混合物中加入CH3COOH以调节pH<7。将混合物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：31％-61％,min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150*25mm*10μm；流动相：[水(0.225％ FA)-ACN]；B％：15％-45％,10min)纯化，将洗脱液冷冻干燥，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-(2-羟基乙氧基)苯甲酰胺(26.3mg，26.96μmol，19.80％产率，98％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝956.3
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.22-10.90(m,1H),8.41(s,1H),8.36-8.22(m,2H),8.13(d,J＝7.8Hz,1H),7.70(dd,J＝7.3,8.3Hz,1H),7.54-7.43(m,2H),7.35(t,J＝7.2Hz,2H),5.22(s,1H),5.09(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.77(q,J＝7.8Hz,1H),4.39(d,J＝13.2Hz,1H),4.11(t,J＝4.6Hz,3H),3.95(d,J＝12.9Hz,1H),3.78(d,J＝3.4Hz,2H),3.33(bs,3H),3.30 -3.29(m,4H),3.13(t,J＝12.0Hz,1H),2.94-2.81(m,1H),2.70-2.52(m,11H),2.08-1.99(m,1H),1.99-1.90(m,2H),1.90-1.77(m,2H),1.77-1.67(m,2H),1.66-1.55(m,4H),1.53-1.34(m,2H)。
实施例74、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-(三氟甲氧基)苯甲酰胺(化合物74)的合成
步骤1、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-(三氟甲氧基)苯甲酸甲酯(2)的合成
将2-氯-9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-8,9-二氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6(7H)-酮(200mg，631.45μmol)、4-氨基-3-(三氟甲氧基)苯甲酸甲酯(148.49mg，631.45μmol)、BINAP(78.64mg，126.29μmol)、Cs2CO3[(617.21mg，1.89mmol)和Pd(OAc)2(14.18mg，63.14μmol)在二氧六环(2mL)中的混合物N2脱气，然后在N2下加热至100℃持续12小时。LCMS显示具有所需质量的峰(58％)。将反应混合物用H2O(10mL)稀释并用EtOAc(15mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(15mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法(Biotage，12g 硅胶快速柱，20～40％石油醚/EtOAc梯度60mL/min)纯化，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-(三氟甲氧基)苯甲酸甲酯(210mg，407.42μmol，产率64.52％)，其为白色固体。MS(M+H)+＝516.2
步骤2、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-(三氟甲氧基)苯甲酸(3)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-(三氟甲氧基)苯甲酸甲酯(210mg，407.42μmol)在THF(1mL)和MeOH(1mL)中的溶液中滴加入NaOH(81.48mg，2.04mmol)在H2O(1mL)中的溶液，将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示检测到具有质量[501+H2O+H]+的主峰。将混合物真空浓缩并加入1N HCl以调节pH＝3，将混合物真空浓缩，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-(三氟甲氧基)苯甲酸(290mg，粗品)，其为白色固体。MS(M+H)+＝502.2
步骤3、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-(三氟甲氧基)苯甲酰胺(化合物74)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-(三氟甲氧基)苯甲酸(50mg，99.72μmol)在DMF(1mL)中的溶液中加入HATU(75.83mg，199.44μmol)和DIPEA(38.66mg，299.16μmol，52.11μL)，将混合物在25℃搅拌10分钟，然后加入4-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(49.52mg，92.90μmol，HCl)，将混合物在25℃再搅拌1小时。LCMS显示具有所需质量的峰(77％)。将混合物通过制备型HPLC(柱：WatersXbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：41％-71％，min)纯化，然后冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-(三氟甲氧基)苯甲酰胺(26.9mg，26.08μmol，26.15％产率，95.0％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝980.3
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.10(s,1H),9.01(s,1H),8.38-8.32(m,1H),8.25(s,1H),8.15(d,J＝9.0Hz,1H),7.89-7.83(m,2H),7.73-7.67(m,1H),7.36(t,J＝7.2Hz,2H),5.13-5.06(m,1H),4.73-4.62(m,1H),4.43-4.34(m,1H),4.10-3.91(m,4H),3.33 -3.32(m,6H),3.17-3.10(m,1H),2.92-2.83(m,1H),2.67-2.53(m,12H),2.07-1.98(m,1H),1.91-1.80(m,4H),1.71-1.62(m,2H),1.60-1.46(m,5H),1.43-1.32(m,1H)
实施例75、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺(化合物75)的合成
步骤1、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(2)的合成
将2-氯-9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-8,9-二氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6(7H)-酮(150mg，473.58μmol)、4-氨基-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(114.17mg，520.94μmol)、Cs2CO3(462.91mg，1.42mmol)、BINAP(58.98mg，94.72μmol)和Pd(OAc)2(10.63mg，47.36μmol)在二氧六环(5mL)中的混合物N2脱气，然后在N2下加热至100℃持续12小时。LCMS显示具有所需质量的峰(41％)。将反应混合物用H2O(10mL)稀释并用EtOAc(20mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法(Biotage，20g 硅胶快速柱，10～30％石油醚/EtOAc梯度洗脱液@60mL/min)纯化，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(118mg，236.27μmol，产率49.89％)，其为白色固体。MS(M+H)+＝500.1
步骤2、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-(三氟甲基)苯甲酸(3)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(118mg，236.27μmol)在THF(1mL)和MeOH(1mL)中的溶液中滴加入NaOH(47.25mg，1.18mmol)在H2O(1mL)中的溶液，将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示检测到具有质量[485+H2O+H]+的主峰。将混合物真空浓缩并加入1N HCl以调节pH＝3，将混合物真空浓缩，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-(三氟甲基)苯甲酸(110mg，粗品)，其为白色固体。MS(M+H)+＝486.1
步骤3、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺(化合物75)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-(三氟甲基)苯甲酸(50mg，103.01μmol)和4-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(54.90mg，103.01μmol，HCl)在DMF(1mL)中的溶液中加入HATU(78.33mg，206.01μmol)和DIPEA(39.94mg，309.02μmol，53.83μL)，将混合物在25℃搅拌1小时。LCMS显示具有所需质量的峰(71％)。将混合物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi C18 150*25mm*10μm；流动相：[水(0.225％ FA)-ACN]；B％：19％-55％,12min)和制备型HPLC(柱：Waters Xbridge150*25mm*5μm；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：40％-70％,min)纯化，然后冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-(三氟甲基)苯甲酰胺(10.6mg，10.85μmol，10.53％产率，98.65％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝964.4
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.15-11.02(m,1H),8.58-8.44(m,2H),8.19(s,2H),8.12(d,J＝9.1Hz,1H),7.99-7.93(m,1H),7.70(t,J＝7.8Hz,1H),7.35(t,J＝7.3Hz,2H),5.13-5.05(m,1H),4.54-4.44(m,1H),4.42-4.32(m,1H),4.11-3.91(m,4H),3.32-3.31(m,6H),3.19-3.09(m,1H),2.93-2.81(m,1H),2.63-2.54(m,12H),2.06-1.97(m,1H),1.92-1.79(m,2H),1.79-1.70(m,2H),1.63-1.56(m,2H),1.55-1.46(m,3H),1.43-1.35(m,3H)。
实施例76、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(3-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)丙酰基)哌嗪-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物76)的合成
步骤1、4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(0.5g，1.12mmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(637.35mg，1.68mmol)和DIPEA(433.27mg，3.35mmol，583.92μL)。将混合物在30℃搅拌10分钟。向混合物中加入4-氨基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(247.40mg，1.23mmol)。将混合物在30℃搅拌12小时。LCMS显示4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸完全消耗以及具有所需质量的峰(42％)。将混合物用EtOAc(20mL)稀释并减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(5g硅胶快速柱，0～100％EtOAc/石油醚梯度洗脱液@50mL/min)纯化，得到4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.8g，粗品)，其为棕色油状物，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝631.2
步骤2、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(哌嗪-1-基)苯甲酰胺(4)的合成
在25℃向4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.8g，1.27mmol)在二氧六环(1mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，10mL)。将所得混合物在25℃搅拌0.5小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的主峰。将混合物溶液减压浓缩，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(哌嗪-1-基)苯甲酰胺(0.9g，粗品，HCl)，其为棕色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝531.1
步骤3、4-(3-(4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(5)的合成
向3-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)丙酸(300mg，1.17mmol)在DMF(4mL)中的溶液中加入HATU(664.93mg，1.75mmol)和DIPEA(452.02mg)，3.50mmol，609.19μL)。将混合物在25℃搅拌10分钟。向混合物中加入4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(哌嗪-1-基)苯甲酰胺(661.07mg，1.17mmol，HCl)。将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(哌嗪-1-基)苯甲酰胺完全消耗以及具有所需质量的峰(68％)。将混合物用EtOAc(30mL)稀释并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(12g 硅胶快速柱，0～100％EtOAc/石油醚梯度洗脱液@50mL/min；0～50％甲醇/EtOAc洗脱液@50mL/min)纯化，得到4-(3-(4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-)四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯，其为棕色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝770.1
步骤4、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(4-(3-(哌啶-4-基)丙酰基)哌嗪-1-基)苯甲酰胺(6)的合成
在25℃向4-(3-(4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.5g，649.45μmol)在二氧六环(2mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，20mL)。将所得混合物在25℃搅拌0.5小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的主峰。将混合物溶液减压浓缩，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(4-(3-(哌啶-4-基)丙酰基)哌嗪-1-基)苯甲酰胺(0.5g，粗品，HCl)，其为棕色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝670.4
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(3-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)丙酰基)哌嗪-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物76)的合成
将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(234.67mg，849.59μmol)、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(4-(3-(哌啶-4-基)丙酰基)哌嗪-1-基)苯甲酰胺(500mg，707.99μmol，HCl)和TEA(214.92mg，2.12mmol，295.63μL)在DMSO(5mL)中的溶液在90℃搅拌12小时。LCMS显示4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(4-(3-(哌啶-4-基)丙酰基)哌嗪-1-基)苯甲酰胺完全消耗以及具有所需质量的峰(33％)。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Phenomenexluna C18 150*40mm*15μm；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：32％-62％,11min)纯化并通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge C18 150*50mm*10μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：34％-64％,11min)再纯化，得到产物。将产物与其他批次合并，用冷去离子水(10mL)、ACN(30mL)溶解并冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(3-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)丙酰基)哌嗪-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(227.4mg，0.241mmol，98％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝926.5
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(s,1H),9.46(s,1H),8.32-8.23(m,2H),7.97(s,1H),7.68(dd,J＝7.1,8.4Hz,1H),7.46-7.39(m,2H),7.33(t,J＝7.4Hz,2H),5.09(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.84-4.69(m,1H),4.04(t,J＝14.0Hz,2H),3.93(s,3H),3.70(d,J＝11.1Hz,2H),3.57(d,J＝1.0Hz,3H),3.30(s,3H),3.02-2.78(m,7H),2.64-2.53(m,2H),2.41(t,J＝7.3Hz,2H),2.12-1.26(m,17H)
实施例77、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺(化合物77)的合成
步骤1、4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-甲基苯甲酰氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(100mg，223.50μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(127.47mg，335.24μmol)和DIPEA(86.65mg，670.49μmol，116.78μL)。将混合物在25℃搅拌10分钟。向混合物中加入4-(甲基氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(47.90mg，223.50μmol)。将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸完全消耗以及具有所需质量的主峰。将反应混合物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi Polar-RP 100x25 mmx4um；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：50％-70％,7min)纯化并冻干，得到4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-甲基苯甲酰氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(120mg，178.96μmol，80.07％产率，96％纯度)，其为棕色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝644.4
步骤2、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-甲基-N-(哌啶-4-基)苯甲酰胺(3)的合成
在25℃向4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-甲基苯甲酰氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(120mg，186.42μmol)在二氧六环(1mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，10mL)。将所得混合物在25℃搅拌0.5小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的主峰。将混合物减压浓缩，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-甲基-N-(哌啶-4-基)苯甲酰胺(100mg，粗品)，其为棕色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝544.2
步骤3、3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酸叔丁酯(7)的合成
将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.2g，584.20umol)、3-溴丙酸叔丁酯(122.14mg，584.20μmol，97.72μL)、DIEA(226.51mg，1.75mmol，305.26μL)和NaI(8.76mg，58.42μmol)在DMF(4mL)中的混合物在80℃搅拌2小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的主峰。将混合物溶液减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(25g 硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@70mL/min；0～50％甲醇/EtOAc洗脱液@70mL/min)纯化，得到3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酸叔丁酯(0.3g，粗品)，其为黄色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝471.2
步骤4、3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酸(8)的合成
在25℃向3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酸叔丁酯(0.3g，637.60μmol)在二氧六环(1mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，10mL)。将所得混合物在25℃搅拌0.5小时。TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1；Rf＝0.5)显示起始材料完全消耗并发现新的点。将混合物溶液减压浓缩，得到3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酸(260mg，粗品)，其为黄色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝415.0
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺(化合物77)的合成
在25℃向3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酸(50mg，120.65μmol)和4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-甲基-N-(哌啶-4-基)苯甲酰胺(69.99mg，120.65μmol，HCl)在DMF(1mL)中的溶液中加入HOBt(17.93mg，132.72μmol)、EDCI(25.44mg，132.72μmol)和TEA(36.63mg，361.96μmol，50.38μL，3eq)。将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-甲基-N-(哌啶-4-基)苯甲酰胺完全消耗以及具有所需质量的主峰。将混合物倒入水(10mL)中并用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机相用盐水(10mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi Polar-RP 100x 25mm x 4μm；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：31％-51％,7min)纯化并通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150x25mm x 5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：36％-66％,9min)再纯化并冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺(26mg，26.00μmol，21.55％产率，94％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝940.5
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.45(d,J＝8.1Hz,1H),8.23(br s,1H),8.06(s,1H),7.69(s,1H),7.62(t,J＝7.8Hz,1H),7.43(d,J＝7.1Hz,1H),7.18(d,J＝8.4Hz,1H),7.04-6.95(m,2H),4.96(dd,J＝5.3,12.1Hz,1H),4.88-4.71(m,2H),4.12-3.74(m,7H),3.49-3.35(m,7H),3.01-2.57(m,16H),2.19-2.02(m,3H),1.93-1.69(m,11H)。
实施例78、2-氯-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物78)的合成
步骤1、9-环戊基-7,7-二氟-2-((4-甲氧基苄基)氨基)-5-甲基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(3C)的合成
向2-氯-9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(2g，6.31mmol)和(4-甲氧基苯基)甲胺(1.30g，9.47mmol，1.23mL)在DMF(20mL)中的溶液中加入K2CO3(2.18g，15.79mmol)，在N2气氛下将混合物在100℃搅拌16小时。LCMS显示2-氯-9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮被完全消耗以及所需质量。向混合物中加入H2O(100mL)并用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL×5)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物与MTBE(5mL)和EtOAc(5mL)一起研磨5分钟，过滤混悬液，依次用EtOAc(5mL)和MTBE(10mL)洗涤滤饼，将滤液真空浓缩，得到9-环戊基-7,7-二氟-2-((4-甲氧基苄基)氨基)-5-甲基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(1.5g)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝418.0
步骤2、2-氨基-9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(3)的合成
将9-环戊基-7,7-二氟-2-((4-甲氧基苄基)氨基)-5-甲基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(1.5g)在TFA(15mL)中的混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及所需质量。将反应混合物真空浓缩。将残余物用EtOAc(50mL)稀释，将混合物用Na2CO3溶液(饱和的，30mL)洗涤，将有机相经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge C18 150x 50mm x 10μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：24％-54％,11min)纯化并冷冻干燥，得到2-氨基-9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(200mg，672.71μmol，产率28.08％)，其为棕色胶状物。MS(M+H)+＝298.2
步骤3、4-溴-2-氯-5-甲氧基苯甲酸甲酯(2)的合成
在0℃向2-氯-5-甲氧基苯甲酸甲酯(2.6g，12.96mmol)在CH3COOH(14mL)中的溶液中加入Br2(2.28g，14.26mmol，734.91μL)在CH3COOH(6mL)中的溶液。将混合物在25℃搅拌12小时。然后在0℃向混合物中加入Br2(2.07g，12.96mmol，668.10μL)在CH3COOH(4mL)中的溶液。将所得材料在25℃搅拌16小时。LCMS显示残余25％的起始材料并且检测到24％的所需质量。向混合物中加入Br2(2.07g，12.96mmol，668.10μL)在CH3COOH(4mL)中的溶液，将混合物在25℃搅拌12小时，LCMS显示残余8％的起始材料和31％的所需质量。将混合物倒入NaHCO3(300mL，饱和的)中。将所得混合物用EtOAc(100mL×3)萃取。将合并的有机层用NaHCO3(100mL，饱和的)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150x 40mm x 15μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：55％-65％，10min)纯化并冷冻干燥，得到4-溴-2-氯-5-甲氧基苯甲酸甲酯(270mg，965.96μmol，7.45％产率)，其为灰色固体。MS(M+H)+＝280.8
步骤4、2-氯-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-5-甲氧基苯甲酸甲酯(4)的合成
在氮气氛下，向4-溴-2-氯-5-甲氧基苯甲酸甲酯(130mg，465.09μmol)和2-氨基-9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(207.41mg，697.64μmol)在甲苯(20mL)中的混合物中加入Pd2(dba)3(42.59mg，46.51μmol)、Xantphos(40.37mg，69.76μmol)和Cs2CO3(454.61mg，1.40mmol)。在N2气氛下将所得混合物在100℃搅拌16小时。LCMS显示4-溴-2-氯-5-甲氧基苯甲酸甲酯完全消耗以及所需质量。过滤反应混合物，真空浓缩滤液。将残余物通过制备型TLC(SiO2，石油醚:EtOAc＝1:1)纯化，得到2-氯-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-5-甲氧基苯甲酸甲酯(218mg，439.60μmol，94.52％产率)，其为棕色固体。MS(M+H)+＝496.0
步骤5、2-氯-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-5-甲氧基苯甲酸(5)的合成
向2-氯-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b[1,4]二氮杂-2-基)氨基)-5-甲氧基苯甲酸甲酯(215mg，433.55μmol)在MeOH(3mL)、H2O(3mL)和THF(3mL)中的溶液中加入NaOH(2M的H2O溶液，0.7mL)，将所得混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示残留痕量的起始材料。向混合物中加入NaOH(2M的H2O溶液，0.5mL)，将所得混合物在25℃再搅拌4小时。LCMS显示残留痕量的起始材料。将混合物真空浓缩以除去大部分溶剂，将残余物用H2O(10mL)稀释。向混悬液中加入HCl溶液(12M)调节pH<3。向混合物中加入EtOAc(10mL)，将混悬液搅拌10分钟。过滤混悬液，将滤饼用MTBE(20mL)洗涤，收集并干燥。向残余物中加入HCl溶液(15mL，4M)，将混悬液搅拌5分钟。将混悬液真空浓缩，得到2-氯-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-5-甲氧基苯甲酸(200mg，415.04μmol，95.73％产率)，其为棕色固体。MS(M+H)+＝482.0
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.81(br s,1H),8.36(d,J＝10.1Hz,2H),7.47(s,1H),5.00-4.85(m,1H),4.18(br t,J＝13.2Hz,2H),3.93(s,3H),3.33(s,3H),2.02-1.91(m,2H),1.85-1.70(m,2H),1.7-1.50(m,5H)。
步骤6、2-氯-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物78)的合成
向2-氯-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-5-甲氧基苯甲酸(70mg，145.26μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(82.85mg，217.90μmol)和DIPEA(93.87mg，726.32μmol，126.51μL)，将混合物在25℃搅拌15分钟。向混合物中加入4-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(100.66mg，188.84μmol，HCl盐)。将所得混合物在25℃搅拌1小时。LCMS显示2-氯-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-5-甲氧基苯甲酸完全消耗以及所需质量。将混合物与另一批次(20mg)合并。向合并的反应混合物中加入CH3COOH调节pH<7。将混合物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi C18 150x 25mm x 10μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：15％-51％,11min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge150x25mm x 5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：45％-75％，7min)纯化并冷冻干燥，得到2-氯-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-5-甲氧基苯甲酰胺(69.7mg，71.85μmol，49.46％产率，99％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝960.3
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(br s,1H),8.45-8.36(m,1H),8.35-8.22(m,2H),7.98(s,1H),7.70(dd,J＝7.3,8.3Hz,1H),7.34(t,J＝7.4Hz,2H),7.05(s,1H),5.09(dd,J＝5.3,12.9Hz,1H),4.90-4.76(m,1H),4.26(br d,J＝13.3Hz,1H),4.06(br t,J＝13.9Hz,2H),4.00-3.91(m,1H),3.91(s,4H),3.32(br s,3H),3.30-3.25(m,4H),3.22-3.13(m,1H),2.93-2.75(m,2H),2.63-2.51(m,10H),2.08-1.94(m,3H),1.93-1.86(m,1H),1.84-1.75(m,1H),1.75-1.66(m,2H),1.63-1.50(m,4H),1.51-1.29(m,2H)。
实施例79、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)氧基)乙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物79)的合成
步骤1、4-(2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-2-氧代乙氧基)哌啶-1-羧酸苄酯(2)的合成
在0℃向4-羟基哌啶-1-羧酸苄酯(200mg，850.06μmol)在DMF(10mL)溶液中加入NaH(51.00mg，1.28mmol，纯度60％)，搅拌0.5小时后，然后加入(1-(2-氯乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(258.79mg，935.06μmol)，将所得混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示所需产物。将混合物用盐水(10mL)稀释，用EtOAc(5mL×3)萃取，将有机层经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将粗产物通过快速硅胶色谱法(Biotage，4g 硅胶快速柱，4～100％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@20mL/min)纯化，得到4-(2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-2-氧代乙氧基)哌啶-1-羧酸苄酯(210mg，362.09μmol，42.60％产率，82％纯度)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝476.1
步骤2、(1-(2-(哌啶-4-基氧基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(3)的合成
在N2下，向4-(2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-2-氧代乙氧基)哌啶-1-羧酸苄酯(160mg，336.43μmol)在CF3CH2OH(3mL)中的溶液中加入Pd/C(0.16g，33.64μmol，10％纯度)，然后在H2(15psi)下将H2(0.16g，79.37mmol)鼓泡入溶液中，将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示所需质量。过滤混合物。将滤液真空浓缩，得到(1-(2-(哌啶-4-基氧基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(180mg，437.55μmol，130.06％产率，83％纯度)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝342.1
步骤3、(1-(2-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)氧基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(4)的合成
向(1-(2-(哌啶-4-基氧基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(130mg，380.74μmol)在DMSO(2mL)中的溶液中加入TEA(115.58mg，1.14mmol，158.98μL)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(105.17mg，380.74μmol)，将混合物在90℃搅拌16小时。LCMS显示检测到所需质量，TLC(100％ EA)显示形成主点。将混合物用盐水(10mL)稀释，用EtOAc(10mL×3)萃取，将有机层经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将粗产物通过快速硅胶色谱法(Biotage，4g硅胶快速柱，4～100％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@30mL/min)纯化，得到(1-(2-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)氧基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(110mg，184.05μmol，产率48.34％，纯度100％)，其为黄色粉末。MS(M+H)+＝598.7
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.10(s,1H),7.72-7.64(m,1H),7.34(dd,J＝5.7,7.5Hz,2H),6.89(br d,J＝7.1Hz,1H),5.10(dd,J＝5.3,13.0Hz,1H),4.25-4.10(m,3H),3.85-3.73(m,1H),3.63-3.48(m,4H),3.12-2.98(m,4H),2.95-2.81(m,2H),2.76-2.64(m,2H),2.63-2.53(m,2H),2.03-2.12(m,2H),1.80-1.62(m,4H),1.38(s,9H)。
步骤4、4-(4-(2-(4-氨基哌啶-1-基)-2-氧代乙氧基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(5)的合成
向(1-(2-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)氧基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(50mg，83.66μmol)在二氧六环(1mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，20.91μL)，将混合物在25℃搅拌1小时。LCMS显示所需质量。将混合物真空浓缩，得到4-(4-(2-(4-氨基哌啶-1-基)-2-氧代乙氧基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)1,3-异吲哚啉-1,3-二酮(46mg，80.11μmol，产率95.76％，纯度93％，HCl盐)，其为黄色粉末，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝498.1
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)氧基)乙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物79)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(50mg，111.75μmol)在DMF(1mL)中的溶液中加入DIPEA(43.33mg，335.24μmol，58.39μL)和HATU(63.74mg，167.62μmol)，在25℃搅拌0.5小时后，然后加入4-(4-(2-(4-氨基哌啶-1-基)-2-氧代乙氧基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(41.77mg，78.22μmol，HCl盐)，将所得混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示所需质量。通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi Polar-RP 100*25mm*4μm；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：44％-64％,7min)和制备型HPLC(柱：WatersXbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：40％-70％)纯化，然后冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)氧基)乙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(28.3mg，30.04μmol，26.88％产率，98.4％纯度)，其为黄色粉末。MS(M+H)+＝927.1
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.17-10.94(m,1H),8.31-8.25(m,2H),8.18(d,J＝7.6Hz,1H),7.97(s,1H),7.69(t,J＝7.7Hz,1H),7.52-7.46(m,2H),7.35(t,J＝7.7Hz,2H),5.10(dd,J＝5.4,12.7Hz,1H),4.77(t,J＝7.9Hz,1H),4.35(d,J＝12.7Hz,1H),4.30-4.15(m,2H),4.05(t,J＝14.0Hz,3H),3.96-3.85(m,4H),3.64-3.50(m,3H),3.32(s,3H),3.18-3.03(m,3H),2.96-2.81(m,1H),2.78-2.65(m,1H),2.64-2.54(m,2H),2.09-1.78(m,7H),1.77-1.50(m,9H),1.49-1.36(m,1H)。
实施例80、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)乙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物80)的合成
步骤1、3-(2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-2-氧代乙氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯(2)的合成
在N2下，在20℃向3-羟基氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯(300mg，1.45mmol)在DMSO(8mL)中的溶液中加入NaOH(98.44mg，2.46mmol)在水(5mL)中的溶液，然后加入(1-(2-氯乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(480.80mg，1.74mmol)，将混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示所需质量。将混合物用盐水(10mL)稀释，用EtOAc(10mL×3)萃取，将有机层经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将粗产物通过快速硅胶色谱法(Biotage，4g 硅胶快速柱，1～100％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@30mL/min)纯化，得到3-(2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-2-氧代乙氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯(350mg，649.13μmol，44.84％产率，83％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝448.1
步骤2、(1-(2-(氮杂环丁烷-3-基氧基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(3)的合成
在N2下向3-(2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-2-氧代乙氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯(250mg，558.63μmol)在CF3CH2OH(6mL)中的溶液中加入Pd/C(200mg，187.93μmol，10％纯度)，在15psi H2下将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示所需质量。过滤混合物，得到滤液，将其真空浓缩，得到(1-(2-(氮杂环丁烷-3-基氧基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(190mg，297.07μmol，53.18)％产率，49％纯度)，其为黄色油状物，直接使用。MS(M+H)+＝314.0
步骤3、(1-(2-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(4)的合成
向(1-(2-(氮杂环丁烷-3-基氧基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(190mg，606.27μmol)在DMSO(10mL)中的溶液中加入TEA(184.04mg，1.82mmol)。mmol，253.16μL)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(167.46mg，606.27μmol)，将混合物在90℃搅拌16小时。LCMS显示所需产物，TLC(EA)显示一个主斑点。将混合物用盐水(10mL)稀释，用EtOAc(10mL×3)萃取，将有机层经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将粗产物通过快速硅胶色谱法(Biotage，4g 硅胶快速柱，4～100％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@30mL/min)纯化，得到(1-(2-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(224mg，334.27μmol，产率55.13％，纯度85％)，其为黄色粉末。MS(M+H)+＝570.1
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.58(t,J＝7.8Hz,1H),7.14(d,J＝6.8Hz,1H),6.88(d,J＝7.5Hz,1H),6.81(d,J＝8.4Hz,1H),5.06(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.47-4.36(m,3H),4.28-4.14(m,3H),4.03(q,J＝7.0Hz,2H),3.73-3.65(m,1H),3.54-3.42(m,1H),3.34-3.30(m,2H),3.08-2.96(m,1H),2.94-2.82(m,1H),2.77-2.66(m,1H),2.63-2.56(m,1H),1.99(s,2H),1.79-1.65(m,2H),1.41-1.37(m,9H)
步骤4、4-(3-(2-(4-氨基哌啶-1-基)-2-氧代乙氧基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(5)的合成
向(1-(2-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(90mg，158.00μmol)在DCM(4mL)中的溶液中加入2,6-二甲基吡啶(414.00mg，3.86mmol，450.00μL)，然后加入TMSOTf(553.50mg，2.49mmol，450.00μL)，将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示所需产物。混合物用水(2mL)稀释，用EtOAc(5mL×3)萃取，将水层冷冻干燥浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：10％-40％，min)纯化，然后冻干，得到4-(3-(2-(4-氨基哌啶-1-基)-2-氧代乙氧基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(20mg，40.47μmol，25.61％产率，95％纯度)，其为黄色粉末。MS(M+H)+＝470.0
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)乙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物80)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(20mg，44.70μmol)在DMF(1mL)中的溶液中加入HATU(17.00mg，44.70μmol)和DIEA(17.33mg，134.10μmol，23.36μL)，将混合物在25℃搅拌0.5小时，然后加入4-(3-(2-(4-氨基哌啶-1-基)-2-氧代乙氧基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(19.94mg，42.46μmol)，将混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将混合物用水(2mL)稀释，用EtOAc(2mL×3)萃取，将有机层经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将粗产物通过制备型TLC(DCM:MeOH＝10:1)和制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：38％-68％，min)纯化，然后冷冻干燥，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)乙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(18.2mg，19.56μmol，43.76％产率，96.6％纯度)，其为黄色粉末。MS(M+H)+＝899.0
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.28-10.90(m,1H),8.34-8.24(m,2H),8.18(d,J＝7.8Hz,1H),7.98(s,1H),7.59(t,J＝7.7Hz,1H),7.54-7.45(m,2H),7.15(d,J＝7.1Hz,1H),6.83(d,J＝8.4Hz,1H),5.06(dd,J＝5.3,12.8Hz,1H),4.83-4.71(m,1H),4.52-4.17(m,7H),4.11-4.00(m,5H),3.94(s,3H),3.85-3.77(m,1H),3.33(s,3H),3.17-3.04(m,1H),2.60-2.82(m,4H),2.04-1.82(m,5H),1.71-1.44(m,7H)。
实施例81、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物81)的合成
步骤1、4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(2)的合成
将3-(4-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(10g，38.57mmol)和双(2-氯乙基)胺(5.48g，30.69mmol，HCl)在四氢噻吩1,1-二氧化物(60mL)中的溶液在140℃加热12小时。LCMS显示残余反应物的峰(48％)，将混合物在140℃再加热12小时。LCMS显示具有所需质量的峰(45％)。向混合物中加入TEA(11.71g，115.71mmol，16.11mL)和CbzCl(6.58g，38.57mmol，5.48mL)在THF(20mL)中的溶液，将其在25℃再搅拌1小时。LCMS显示具有所需质量的峰(68％)。将反应混合物缓慢倒入H2O(300mL)中。过滤混合物，用EtOAc(400mL×2)萃取滤液。将合并的有机层经Na2SO4干燥，与滤饼合并，减压浓缩，得到残余物。将残余物通过硅胶柱色谱法(EtOAc:DCM＝10:1)纯化，得到4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(3.1g，6.70mmol，17.38％产率)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝463.1
步骤2、3-(1-氧代-4-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(3)的合成
在N2下向4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(2.5g，5.41mmol)在TFE(20mL)中的溶液中加入Pd/C(200mg，324.33μmol，10％纯度)。将混悬液在真空下脱气并用H2鼓吹数次。在H2(15psi)下将混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示残余反应物的峰(68％)，将混合物在20℃再搅拌12小时。LCMS显示具有所需质量的峰(89％)。过滤混合物，真空浓缩滤液，得到3-(1-氧代-4-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(2.1g，粗品)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝329.1
步骤3、(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(4)的合成
向3-(1-氧代-4-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(300mg，913.62μmol)和(1-(3-氯丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.06g，3.65mmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入DIPEA(354.24mg，2.74mmol，477.41μL)，将混合物在70℃加热24小时。LCMS显示具有所需质量的峰(36％)。将混合物真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(Biotage，12g硅胶快速柱，10～30％ EtOAc/MeOH梯度洗脱液@60mL/min)纯化，得到(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(170mg，291.75μmol，31.93％产率)，其为白色固体。MS(M+H)+＝583.2
步骤4、3-(4-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(5)的合成
将N-[1-[3-[4-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-氧代-异吲哚啉-4-基]哌嗪-1-基]丙酰基]-4-哌啶基]氨基甲酸叔丁酯(170mg，291.75μmol)和HCl/二氧六环(4M，2mL)在二氧六环(2mL)中的溶液在20℃搅拌1小时。LCMS显示具有所需质量的峰(61％)。将混合物真空浓缩，得到3-(4-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(150mg，粗品，HCl)，其为白色固体。MS(M+H)+＝483.2
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物81)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(68.96mg，154.13μmol)在DMF(1.5mL)中的溶液中加入HATU(117.21mg，308.26μmol)和DIPEA(59.76mg，462.40μmol，80.54μL)，将混合物在25℃搅拌10分钟，然后加入3-(4-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(80mg，154.13μmol，HCl)，将混合物在25℃再搅拌1小时。LCMS显示具有所需质量的峰(48％)。将反应混合物用H2O(8mL)稀释并用EtOAc(10mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：33％-63％,min)纯化，然后冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(26.1mg，26.59μmol，17.25％产率，92.9％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝912.3
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.98(s,1H),8.30-8.24(m,2H),8.15(d,J＝7.8Hz,1H),7.97(s,1H),7.51-7.41(m,3H),7.31(d,J＝7.3Hz,1H),7.16(d,J＝7.9Hz,1H),5.15-5.08(m,1H),4.81-4.71(m,1H),4.47-4.28(m,3H),4.08-4.00(m,3H),3.95-3.92(m,4H),3.31-3.31(m,3H),3.19-3.01(m,6H),2.97-2.87(m,1H),2.64-2.55(m,10H),2.02-1.88(m,4H),1.86-1.80(m,1H),1.72-1.69(m,2H),1.69-1.51(m,4H),1.51-1.36(m,2H)
实施例82、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物82)的合成
步骤1、2-(溴甲基)-4-硝基苯甲酸甲酯(2)的合成
向2-甲基-4-硝基苯甲酸甲酯(10g，51.24mmol)在CCl4(200mL)中的溶液中加入NBS(10.93g，61.43mmol)和BPO(266.67mg，1.10mmol)。将反应混合物在85℃搅拌12小时。TLC(石油醚:EtOAc＝10:1)显示起始材料被完全消耗并且形成一个具有更大极性的新斑点。将混合物用饱和NaHCO3(60mL)和盐水(150.0mL)洗涤。将有机层经无水NaSO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(Biotage；80g硅胶快速柱，0～2％EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到2-(溴甲基)-4-硝基苯甲酸甲酯(8.5g，31.01mmol，60.53％产率)，其为白色固体。MS(M+H)+＝275.1
步骤2、3-(5-硝基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(4)的合成
向2-(溴甲基)-4-硝基苯甲酸甲酯(2g，7.30mmol)在DMF(20mL)中的溶液中加入3-氨基哌啶-2,6-二酮(935.02mg，7.30mmol)和TEA(2.22g，21.89mmol，3.05mL)，将所得混合物在75℃搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将反应混合物用盐水(60mL)稀释，用EtOAc(60mL×5)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。在20℃将残余物与EtOAc(10mL)一起研磨10分钟，得到3-(5-硝基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(1.2g，3.69mmol，50.60％产率，89％纯度)，其为蓝色固体。MS(M+H)+＝290.0
步骤3、3-(5-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(5)的合成
将3-(5-硝基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(1.2g，4.15mmol)和Pd/C(100mg，10％纯度)在CF3CH2OH(120mL)中的混合物脱气并用H2鼓吹3次，在H2(15Psi)气氛下将所得混合物在20℃搅拌6小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。通过硅藻土垫过滤混悬液，用CF3CH2OH(100mL)洗涤滤饼。将合并的滤液浓缩至干，得到残余物。在20℃将残余物与EtOAc(20mL)一起研磨10分钟，得到3-(5-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(900mg，粗品)，其为蓝色固体。MS(M+H)+＝260.0
步骤4、4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(6)的合成
将3-(5-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(500mg，1.93mmol)和双(2-氯乙基)氨基甲酸叔丁酯(466.99mg，1.93mmol)在四氢噻吩1,1-二氧化物(10mL)中的混合物在140℃搅拌16小时。LCMS显示残余63％的3-(5-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮以及具有脱-Boc产物的质量峰(16％)。加入另外的双(2-氯乙基)氨基甲酸叔丁酯(500mg)，将混合物在140℃再搅拌24小时。LCMS显示存在痕量的3-(5-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮以及具有脱-Boc产物的质量峰(66％)。使用K2CO3(2M水溶液)将混合物调节至pH＝9，加入Boc2O(505.08mg，2.31mmol，531.67μL)。将所得混合物在20℃搅拌2小时。LCMS显示具有所需质量的峰(81％)。将反应混合物用盐水(20mL)稀释，用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。将滤液减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(Biotage；80g 硅胶快速柱，20～100％ EtOAc/石油醚梯度@100mL/min)纯化，然后在25℃与MTBE(10mL)一起研磨10分钟，得到4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(450mg，1.05mmol，产率54.46％，100％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝429.0
步骤5、3-(1-氧代-5-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(7)的合成
向4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(200mg，466.77μmol)在二氧六环(4mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，4mL)，将混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示具有所需质量的峰(98％)。将混合物减压浓缩，得到3-(1-氧代-5-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(170mg，粗品，HCl盐)，其为黄色的固体。MS(M+H)+＝329.0
步骤6、(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(9)的合成
向3-(1-氧代-5-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(150mg，411.16μmol，HCl盐)在DMF(5mL)中的溶液中加入(1-(3-氯丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(179.34mg，616.73μmol)、DIPEA(265.69mg，2.06mmol，358.08μL)和NaI(6.75mg，45.03μmol)，将所得混合物在60℃搅拌16小时。LCMS显示残余56％的3-(1-氧代-5-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮以及具有所需质量的峰(16％)。加入另外的(1-(3-氯丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(200mg)，将混合物在60℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(38％)。将反应混合物用盐水(15mL)稀释，然后用EtOAc(15mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(15mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。将滤液减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(Biotage；20g 硅胶快速柱，20～100％EtOAc/石油醚梯度洗脱液@80mL/min)纯化，得到(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(200mg，326.07μmol，79.31％产率，95％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝583.1
步骤7、3-(5-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(10)的合成
向(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(200mg，343.24μmol)在二氧六环(2mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，85.81μL)，将混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示具有所需质量的峰(97％)。将混合物减压浓缩，得到3-(5-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(160mg，粗品)，其为黄色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝483.3
步骤8、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物82)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(74.17mg，165.78μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(94.55mg，248.67μmol)、DIPEA(64.28mg，497.33μmol，86.63μL)，将混合物在20℃搅拌0.5小时，然后加入3-(5-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(80mg，165.78μmol)，将所得混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的峰(48％)。将反应混合物用盐水(10mL)稀释，然后用EtOAc(10mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。将滤液减压浓缩。将残余物通过反相HPLC(柱：Phenomenex Synergi C18 150*25mm*10μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：18％-51％，11min)纯化并通过反相HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：30％-60％,8min)再纯化。将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(33.1mg，35.21μmol，21.24％产率，97％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝912.1
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.94(s,1H),8.31-8.24(m,2H),8.15(d,J＝7.8Hz,1H),7.96(s,1H),7.55-7.45(m,3H),7.11-7.03(m,2H),5.09-5.00(m,1H),4.83-4.71(m,1H),4.45-4.15(m,3H),4.12-4.00(m,3H),3.98-3.88(m,4H),3.32-3.25(m,8H),3.18 -3.07(m,1H),2.97-2.83(m,1H),2.72-2.56(m,9H),2.40-2.31(m,1H),2.01-1.81(m,5H),1.75-1.66(m,2H),1.64-1.53(m,4H),1.52-1.35(m,2H)。
实施例83、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-(4-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)环己基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物83)的合成
步骤1、4-((4-((1r,4r)-4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰氨基)环己基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(3)的合成
在20℃向4-[(9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-8H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-2-氟-5-甲氧基-N-(4-哌嗪-1-基环己基)苯甲酰胺(150mg，237.83μmol)在DMF(4mL)中的溶液中加入DIPEA(92.21mg，713.49μmol，124.28μL)和4-(碘甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(85.07mg，261.61μmol)，将所得混合物在60℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到67％的具有所需质量的峰。将反应混合物用H2O(12mL)稀释并用EtOAc(12mL×3)萃取。将有机层用盐水(12mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(4g硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚至0～10％二氯甲烷/甲醇梯度洗脱液@60mL/min)纯化，得到4-((4-((1r,4r)-4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰氨基)环己基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(99mg，119.57μmol，50.27％产率)，其为橙色油状物。MS(M+H)+＝828.2
步骤2、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基-N-((1r,4r)-4-(4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪-1-基)环己基)苯甲酰胺(4)的合成
在20℃向4-((4-((1r,4r)-4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰氨基)环己基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(99mg，119.57μmol)在二氧六环(1mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，6mL)，将所得物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到84％的具有所需质量的峰。将反应混合物真空浓缩，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基-N-((1r,4r)-4-(4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪-1-基)环己基)苯甲酰胺(99mg，粗品，HCl)，其为灰白色固体。MS(M+H)+＝728.2
步骤3、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-(4-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)环己基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物83)的合成
在20℃向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基-N-((1r,4r)-4-(4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪-1-基)环己基)苯甲酰胺(99mg，129.53μmol，HCl)在DMSO(10mL)中的溶液中加入TEA(39.32mg，388.58μmol，54.09μL)和2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(42.93mg，155.43μmol)，将所得混合物在100℃搅拌16小时。LCMS显示残余75％的2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-氟-异吲哚啉-1,3-二酮，并且检测到17％的具有所需质量的峰。将反应混合物用H2O(12mL)稀释并用EtOAc(12mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Unisil 3-100C18μLtra 150*50mm*3μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：16％-46％,15min)纯化并冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-(4-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)环己基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(21mg，18.96μmol，产率14.64％，纯度93％，FA)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝984.1
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(br s,1H),8.35(s,1H),8.30(s,1H),8.24(d,J＝13.3Hz,1H),8.02(s,1H),7.82(dd,J＝3.5,7.9Hz,1H),7.70-7.64(m,1H),7.32(t,J＝7.0Hz,2H),7.18(d,J＝6.8Hz,1H),5.08(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.82(q,J＝8.0Hz,1H),4.07(t,J＝13.9Hz,2H),3.91(s,3H),3.68(d,J＝11.3Hz,3H),3.33(s,3H),2.94-2.80(m,3H),2.63-2.50(m,8H),2.41-2.29(m,3H),2.16(d,J＝7.0Hz,2H),2.06-1.88(m,5H),1.86-1.54(m,11H),1.42-1.20(m,6H)。
实施例84、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)丙酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物84)的合成
步骤1、3-(5-溴-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(2)的合成
在25℃向4-溴-2-(溴甲基)苯甲酸甲酯(6g，19.48mmol)在CH3CN(60mL)中的溶液中加入DIPEA(12.61g，97.60mmol，17mL)和3-氨基哌啶-2,6-二酮；盐酸盐(3.22g，19.56mmol)。在N2气氛下将混合物在90℃搅拌16小时。LCMS显示检测到34％的具有所需质量的峰。将混合物在25℃搅拌1小时，然后过滤，滤饼用MTBE(20mL×3)洗涤并减压干燥，得到3-(5-溴-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(3g，粗品)，其为灰色固体。MS(M+H)+＝323.1
步骤2、4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3)的合成
向3-(5-溴-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(500mg，1.55mmol)在DMSO(12mL)中的溶液中加入RuPhos Pd G4(200.00mg，235.18μmol)、KOAc(833.33mg，8.49mmol)和哌嗪-1-羧酸叔丁酯(500.00mg，2.68mmol)。在N2气氛下将混合物在100℃搅拌16小时。LCMS显示24％的具有所需质量的峰。将反应混合物过滤，向滤液中加入H2O(20mL)，将混合物用EtOAc(30mL×2)萃取，将合并的有机层用90mL盐水(30mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩滤液。将残余物通过快速硅胶色谱法(Biotage；20g 硅胶快速柱，0～10％甲醇:EtOAc醚梯度洗脱液，50mL/min)纯化，得到4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(400mg，933.53μmol，60.33％产率)，其为浅黄色固体。MS(M+H)+＝429.3
步骤3、3-(1-氧代-5-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(4)的合成
在25℃向4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(400mg，933.53μmol)在二氧六环(20mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，20mL)。在N2气氛下将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示具有所需质量的主峰并且没有残留起始材料的峰。将反应混合物减压浓缩，得到3-(1-氧代-5-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(370mg，粗品，2HCl)，其为浅色黄色固体。MS(M+H)+＝329.3
步骤4、((3S)-1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)丙酰基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(5)的合成
向3-(1-氧代-5-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(370mg，1.13mmol)在DMF(10mL)中的溶液中加入KI(200mg，1.20mmol)、DIPEA(890.40mg，6.89mmol，1.2mL)和(S)-(1-(3-氯丙酰基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(1.0g，3.61mmol)。在N2气氛下将混合物在60℃搅拌16小时。LCMS显示检测到所需质量并且未检测到起始材料的峰。过滤混合物，将滤液通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150*40mm*15μm；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：5％-35％,10min，柱温：30℃)纯化，然后冻干，得到((3S)-1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)丙酰基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(180mg，316.53μmol，28.09％产率)，其为浅黄色油状物。MS(M+H)+＝569.6
步骤5、3-(5-(4-(3-((S)-3-氨基吡咯烷-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2 6-二酮(6)的合成
在25℃向((3S)-1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)丙酰基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(180mg，316.53μmol)在二氧六环(5mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，7.53mL)。在N2气氛下将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示具有所需质量的主峰并且没有残留起始材料的峰。将反应混合物减压浓缩，得到3-(5-(4-(3-((S)-3-氨基吡咯烷-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(170mg，粗品，2HCl)，其为浅黄色固体。MS(M+H)+＝469.3
步骤6、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)丙酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物84)的合成
在25℃向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(120mg，257.83μmol)在DMF(4mL)中的溶液中加入HATU(203.08mg，534.09μmol)、DIPEA(222.60mg，1.72mmol，300.00μL)和3-(5-(4-(3-((S)-3-氨基吡咯烷-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(160mg，295.49μmol，2HCl)。在N2气氛下将混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示检测到54％的所需质量。向反应混合物中加入H2O(8mL)，用EtOAc(20mL×2)萃取混合物，将合并的有机层用盐水60mL(20mL×3)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩滤液。将残余物通过制备型HPLC(柱：3_Phenomenex Luna C18 75*30mm*3μm；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：28％-48％,7min，柱温：30℃)纯化并通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge C18150*50mm*10μm；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：26％-56％,11min，柱温：30℃)再纯化，然后冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)丙酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(78.0mg，80.05μmol，31.05％产率，94％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝916.6
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.94(s,1H),8.35-8.20(m,3H),8.04(s,1H),7.57-7.44(m,1H),7.20(d,J＝6.5Hz,1H),7.11-7.00(m,2H),5.08-4.99(m,1H),4.86-4.76(m,1H),4.52-4.38(m,1H),4.35-4.27(m,1H),4.24-4.15(m,1H),4.12-4.02(m,2H),3.91(d,J＝3.0Hz,3H),3.81-3.55(m,2H),3.53-3.39(m,2H),3.33-3.32(m,3H),3.30-3.26(m,4H),2.95-2.85(m,1H),2.64-2.51(m,9H),2.38-2.07(m,2H),2.02-1.86(m,4H),1.76-1.55(m,6H)。
实施例85、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(4-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)-4-氧代丁酰基)吡咯烷-3-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物85)的合成
按照与实施例81中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物85。
MS(M+H)+＝926.4,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.49-8.38(m,1H),8.31-8.25(m,2H),7.99(d,J＝2.3Hz,1H),7.53-7.48(m,2H),7.48-7.42(m,1H),7.35(d,J＝7.4Hz,1H),7.18(d,J＝7.6Hz,1H),5.17-5.09(m,1H),4.82-4.71(m,1H),4.57-4.39(m,2H),4.36-4.27(m,1H),4.05(br t,J＝13.9Hz,2H),3.94(s,3H),3.65-3.58(m,4H),3.45-3.36(m,1H),3.33-3.30(m,3H),3.30-3.23(m,1H),3.13-2.87(m,5H),2.64-2.56(m,3H),2.49-2.48(m,4H),2.27-2.17(m,1H),2.16-2.05(m,1H),2.03-1.90(m,4H),1.75-1.67(m,2H),1.65-1.52(m,4H)。
实施例86、4-(4-(2-(4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物86)的合成
按照与实施例81中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物86。
MS(M+H)+＝884.4,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(s,1H),8.23(s,1H),8.15(d,J＝8.4Hz,1H),7.99(s,1H),7.69(t,J＝0.8Hz,1H),7.34(t,J＝7.2Hz,2H),7.04(d,J＝1.6Hz,1H),6.96(dd,J＝1.2,8.0Hz,1H),5.10-5.06(m,1H),4.74-4.66(m,1H),4.02(t,J＝14Hz,2H),3.88(s,3H),3.56-3.43(m,4H),3.32(s,3H),3.29-3.27(m,4H),2.88-2.82(m,2H),2.59-2.51(m,6H),2.47-2.43(m,6H),2.03-1.89(m,4H),1.70-1.64(m,2H),1.58-1.54(m,4H)。
实施例87、4-(4-(3-(4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物87)的合成
按照与实施例60中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物87。
MS(M+H)+＝898.6,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.18-10.98(m,1H),8.23(s,1H),8.15(d,J＝8.1Hz,1H),7.98(s,1H),7.70(dd,J＝7.4,8.2Hz,1H),7.38-7.30(m,2H),7.04(d,J＝1.6Hz,1H),6.96(dd,J＝1.5,8.3Hz,1H),5.08(dd,J＝5.4,12.7Hz,1H),4.77-4.65(m,1H),4.02(t,J＝14.2Hz,2H),3.88(s,3H),3.58-3.47(m,4H),3.32(s,3H),3.30-3.26(m,4H),2.94-2.80(m,1H),2.63-2.53(m,6H),2.43-2.30(m,8H),2.08-1.97(m,1H),1.96-1.83(m,2H),1.73-1.51(m,8H)。
实施例88、4-(4-(4-(4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)丁基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物88)的合成
步骤1、(E)-4-(4-(4-氯丁-2-烯-1-基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(3)的合成
向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(1g，2.64mmol，HCl)和(E)-1,4-二氯丁-2-烯(1.66g，13.28mmol，1.41mL)在DMF(10mL)中溶液的中加入DIEA(1.04g，8.04mmol，1.40mL)和NaI(7.91mg，52.80μmol，在20℃搅拌混合物14小时。TLC(石油醚:EtOAc＝10:1)显示检测到所需的点。将混合物用H2O(10mL)稀释并用EtOAc(10mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(10mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(12g 硅胶快速柱，10～100％ EtOAc/石油醚至10～100％EtOH/EtOAc梯度洗脱液@50mL/min)纯化，得到(E)-4-(4-(4-氯丁-2-烯-1-基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(460mg，1.07mmol，40.44％产率)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝431.1
步骤2、(E)-4-(4-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丁-2-烯-1-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(5)的合成
向(E)-4-(4-(4-氯丁-2-烯-1-基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(460mg，1.07mmol)和哌嗪-1-羧酸叔丁酯(285.31mg，1.28mmol)在DMF(10mL)中的溶液中加入NaI(8.00mg，53.38μmol)和DIPEA(413.93mg，3.20mmol，557.86μL)，将混合物在20℃搅拌14小时。LCMS显示检测到91％的所需质量。将混合物用H2O(10mL)稀释并用EtOAc(10mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(10mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压浓缩。将残余物用MTBE(10mL)稀释并在20℃搅拌1小时。过滤混合物，用MTBE(10mL)洗涤滤饼。收集滤饼并减压干燥，得到(E)-4-(4-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-)基)哌嗪-1-基)丁-2-烯-1-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.4g，681.97μmol，63.88％产率，99％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝581.3
步骤3、4-(4-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丁基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(6)的合成
向(E)-4-(4-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丁-2-烯-1-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(200mg，344.43μmol)在EtOH(6mL)中的溶液中加入Pd/C(30mg，10％纯度)，在H2(15Psi)下将混合物在20℃搅拌14小时。LCMS显示检测到88％的所需质量。将混合物用THF(10mL)稀释，然后过滤，用EtOH(20mL)和THF(10mL)洗涤滤饼。将滤液减压浓缩，得到4-(4-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丁基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(150mg，239.41μmol，69.51％产率，93％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝583.4
步骤4、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(4-(4-(哌嗪-1-基)丁基)哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(7)的合成
向4-[4-[4-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]哌嗪-1-基]丁基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(150mg，257.43μmol)在二氧六环(2mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，4mL)，将混合物在20℃搅拌2小时。后处理后LCMS显示检测到76％的所需质量。将混合物减压浓缩，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(4-(4-(哌嗪-1-基)丁基)哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(120mg，粗品，HCl)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝483.1
步骤5、4-(4-(4-(4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)丁基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物88)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(80mg，178.80μmol)和HATU(101.98mg，268.20μmol)在DMF(1mL)中的溶液中加入DIPEA(46.22mg，357.59μmol，62.29μL)，将混合物在20℃搅拌15分钟。然后加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(4-(4-(哌嗪-1-基)丁基)哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(120mg，231.20μmol，HCl)和DIPEA(69.32mg，536.39μmol，93.43μL)在DMF(2mL)中的溶液，将混合物在20℃搅拌45分钟。LCMS显示检测到65％的所需质量。将混合物用H2O(10mL)稀释并用EtOAc(10mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(10mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化，得到4-(4-(4-(4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)丁基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(47.4mg，48.34μmol，27.03％产率，93％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝912.2
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(s,1H),8.23(s,1H),8.15(d,J＝8.3Hz,1H),7.98(s,1H),7.70(t,J＝7.8Hz,1H),7.34(t,J＝7.9Hz,2H),7.04(s,1H),6.96(d,J＝8.1Hz,1H),5.13-5.05(m,1H),4.76-4.66(m,1H),4.02(t,J＝14.2Hz,2H),3.88(s,3H),3.58-3.42(m,4H),3.31-3.25(m,7H),2.93-2.81(m,1H),2.68-2.53(m,6H),2.41-2.29(m,8H),2.06-1.97(m,1H),1.95-1.85(m,2H),1.71-1.63(m,2H),1.62-1.44(m,8H)。
实施例89、5-(4-(2-(4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物89)的合成
步骤1、4-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2)的合成
将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.4g，1.17mmol)、4-(2-溴乙基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(342.57mg，1.17mmol)、KI(19.40mg，116.84μmol)和DIPEA(453.02mg，3.51mmol，610.54μL)在DMF(5mL)中的混合物在70℃搅拌12小时。LCMS显示2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮完全消耗以及具有所需质量的主峰。将混合物用EtOAc(20mL)稀释，减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(10g 硅胶快速柱，0～100％EtOAc/石油醚梯度洗脱液@65mL/min；0～50％甲醇/EtOAc洗脱液@65mL/min)纯化，得到4-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.6g，1.05mmol，产率89.81％，纯度97％)，其为黄色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝555.2
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.18(br s,1H),7.71(d,J＝8.5Hz,1H),7.29(d,J＝2.3Hz,1H),7.07(dd,J＝2.3,8.6Hz,1H),5.00-4.90(m,1H),3.76-3.52(m,4H),3.52-3.42(m,4H),3.02-2.65(m,15H),2.20-2.10(m,1H),1.47(s,9H)。
步骤2、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-(2-(哌嗪-1-基)乙基)哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(3)的合成
在25℃向4-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.6g，1.08mmol)在二氧六环(2mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，20mL)。将所得混合物在25℃搅拌0.5小时。TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1；Rf＝0.5)显示起始材料已完全消耗并且发现了新的点。将混合物溶液减压浓缩，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-(2-(哌嗪-1-基)乙基)哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.4g，HCl)，其为黄色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝455.1
步骤3、5-(4-(2-(4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物89)的合成
向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-(2-(哌嗪-1-基)乙基)哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(76.81mg，156.45μmol，HCl)在DMF(1mL)中的溶液中加入HATU(89.23mg，234.67μmol)和DIPEA(60.66mg，469.34μmol，81.75μL)。将混合物在25℃搅拌10分钟。向混合物中加入4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(70mg，156.45μmol)。将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-(2-(哌嗪-1-基)乙基)哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮完全消耗以及所需质量的峰(67％)。将反应混合物通过制备型HPLC(柱：PhenomenexSynergi Polar-RP 100*25mm*4μm；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：28％-48％,7min)纯化并通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：38％-68,min)再纯化，并冻干，得到5-(4-(2-(4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7，8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(34.9mg，37.51μmol，23.97％产率，95％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝884.5
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(br s,1H),8.23(s,1H),8.15(d,J＝8.2Hz,1H),8.00(s,1H),7.67(d,J＝8.6Hz,1H),7.33(d,J＝1.8Hz,1H),7.25(dd,J＝2.0,8.7Hz,1H),7.04(d,J＝1.6Hz,1H),6.96(dd,J＝1.7,8.3Hz,1H),5.07(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.80-4.63(m,1H),4.02(t,J＝14.1Hz,2H),3.88(s,3H),3.68-3.45(m,4H),3.44-2.41(m,4H),3.32(s,3H),2.96-2.81(m,1H),2.64-2.51(m,11H),2.46-2.42(m,3H),2.08-1.97(m,1H),1.96-1.83(m,2H),1.75-1.63(m,2H),1.62-1.45(m,4H)。
实施例90、5-(4-(3-(4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物90)的合成
按照与实施例60中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物90。
MS(M+H)+＝898.6,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.33-10.77(m,1H),8.23(s,1H),8.15(d,J＝8.1Hz,1H),7.98(s,1H),7.67(d,J＝8.5Hz,1H),7.33(d,J＝2.0Hz,1H),7.25(dd,J＝2.2,8.7Hz,1H),7.04(d,J＝1.8Hz,1H),6.96(dd,J＝1.7,8.2Hz,1H),5.12-5.00(m,1H),4.80-4.63(m,1H),4.02(t,J＝14.1Hz,2H),3.88(s,3H),3.71-3.39(m,8H),3.30(s,3H),2.95-2.80(m,1H),2.62-2.51(m,6H),2.43-2.29(m,8H),2.08-1.97(m,1H),1.96-1.82(m,2H),1.71-1.50(m,8H)。
实施例91、5-(4-(4-(4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)丁基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物91)的合成
按照与实施例88中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物91。
MS(M+H)+＝912.2,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.01(s,1H),8.23(s,1H),8.15(d,J＝8.2Hz,1H),7.99(s,1H),7.67(d,J＝8.4Hz,1H),7.33(d,J＝1.7Hz,1H),7.25(dd,J＝1.8,8.7Hz,1H),7.03(d,J＝1.5Hz,1H),7.00-6.91(m,1H),5.07(dd,J＝5.3,12.9Hz,1H),4.81-4.63(m,1H),4.02(br t,J＝14.1Hz,2H),3.88(s,3H),3.42(br d,J＝4.4Hz,8H),3.32(s,3H),2.95-2.80(m,1H),2.63-2.56(m,2H),2.55-2.41(m,4H),2.43-2.25(m,8H),2.07-1.96(m,1H),1.96-1.82(m,2H),1.73-1.63(br s,2H),1.63-1.51(m,4H),1.48-1.35(m,4H)。
实施例92、(E)-5-(4-(4-(4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)丁-2-烯-1-基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物92)的合成
按照与实施例88中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物92。
MS(M+H)+＝910.4,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.20-10.94(m,1H),8.23(s,1H),8.14(d,J＝8.3Hz,1H),7.99(s,1H),7.67(d,J＝8.5Hz,1H),7.32(d,J＝1.9Hz,1H),7.24(dd,J＝2.1,8.7Hz,1H),7.04(d,J＝1.6Hz,1H),6.96(dd,J＝1.4,8.2Hz,1H),5.69-5.57(m,2H),5.06(dd,J＝5.3,12.9Hz,1H),4.71(quin,J＝8.1Hz,1H),4.02(br t,J＝14.1Hz,2H),3.88(s,3H),3.66-3.45(m,4H),3.43(br s,4H),3.32(s,3H),2.98(br s,4H),2.93-2.83(m,1H),2.62-2.54(m,2H),2.38(br s,8H),2.07-1.97(m,1H),1.95-1.83(m,2H),1.68(br s,2H),1.62-1.49(m,4H)。
实施例93、4-(4-((1-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物93)的合成
按照与实施例89中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物93。
MS(M+H)+＝869.2,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.13-11.05(m,1H),8.24(s,1H),8.13(d,J＝8.2Hz,1H),8.00(s,1H),7.73-7.68(m,1H),7.38-7.31(m,2H),7.04-7.01(m,1H),6.98-6.93(m,1H),5.13-5.06(m,1H),4.76-4.66(m,1H),4.03(t,J＝14.1Hz,2H),3.88(s,3H),3.33-3.26(m,7H),2.93-2.82(m,2H),2.63-2.53(m,7H),2.27-2.21(m,2H),2.07-1.98(m,1H),1.96-1.49(m,13H),1.18-1.03(m,2H)。
实施例94、4-(4-(2-(1-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物94)的合成
按照与实施例89中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物94。
MS(M+H)+＝883.1,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(s,1H),8.23(s,1H),8.13(d,J＝8.0Hz,1H),7.99(s,1H),7.70(t,J＝7.8Hz,1H),7.34(t,J＝8.2Hz,2H),7.02(s,1H),6.96-6.92(m,1H),5.12-5.05(m,1H),4.76-4.66(m,1H),4.07-3.97(m,2H),3.88(s,3H),3.29-3.25(m,7H),2.93-2.80(m,2H),2.63-2.52(m,7H),2.41-2.35(m,2H),2.06-1.98(m,1H),1.94-1.85(m,2H),1.75-1.41(m,13H),1.20-1.07(m,2H)。
实施例95、4-(4-(3-(1-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物95)的合成
按照与实施例89中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物95。
MS(M+H)+＝897.2,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.07(s,1H),8.23(s,1H),8.12(d,J＝8.2Hz,1H),7.98(s,1H),7.72-7.66(m,1H),7.34(t,J＝8.1Hz,2H),7.03-7.00(d,J＝1.5Hz,1H),6.96-6.92(m,1H),5.11-5.05(m,1H),4.76-4.65(m,1H),4.07-3.96(m,2H),3.87(s,3H),3.30-3.25(m,7H),2.92-2.80(m,2H),2.62-2.51(m,7H),2.36-2.29(m,2H),2.06-1.97(m,1H),1.95-1.84(m,2H),1.75-1.44(m,13H),1.31-1.21(m,2H),1.15-1.02(m,2H)。
实施例96、4-(4-(4-(1-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)丁基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物96)的合成
按照与实施例89中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物96。
MS(M+H)+＝911.3,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.07(s,1H),8.22(s,1H),8.11(d,J＝8.1Hz,1H),7.98(s,1H),7.71-7.66(m,1H),7.36-7.30(m,2H),7.02-7.00(m,1H),6.95-6.91(m,1H),5.11-5.03(m,1H),4.74-4.65(m,1H),4.06-3.96(m,2H),3.87(s,3H),3.30-3.25(m,7H),2.93-2.80(m,2H),2.62-2.53(m,7H),2.34-2.29(m,2H),2.05-1.96(m,1H),1.95-1.82(m,2H),1.76-1.40(m,13H),1.37-1.20(m,4H),1.14-1.00(m,2H)。
实施例97、5-(4-((1-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9)-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物97)的合成
按照与实施例89中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物97。
MS(M+H)+＝869.1,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(s,1H),8.23(s,1H),8.15-8.11(m,1H),7.99(s,1H),7.69(d,J＝8.3Hz,1H),7.36(s,1H),7.26(d,J＝7.5Hz,1H),7.02(s,1H),6.98-6.92(m,1H),5.07(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.76-4.65(m,1H),4.02(t,J＝14.1Hz,2H),3.88(s,3H),3.53-3.39(m,4H),3.33(s,3H),2.94-2.83(m,2H),2.63-2.51(m,7H),2.31-2.09(m,2H),2.04-1.97(m,1H),1.96-1.46(m,13H),1.18-1.05(m,2H)
实施例98、5-(4-(2-(1-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物98)的合成
按照与实施例89中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物98。
MS(M+H)+＝883.2,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(s,1H),8.23(s,1H),8.15-8.11(m,1H),8.01-7.98(m,1H),7.70(d,J＝8.4Hz,1H),7.38(s,1H),7.28(d,J＝8.4Hz,1H),7.02(d,J＝1.5Hz,1H),6.95(dd,J＝1.4,8.2Hz,1H),5.08(dd,J＝5.3,12.8Hz,1H),4.76-4.65(m,1H),4.02(t,J＝14.1Hz,2H),3.88(s,3H),3.57-3.41(m,4H),3.32(s,3H),2.93-2.82(m,2H),2.63-2.51(m,7H),2.27-1.83(m,5H),1.80-1.43(m,13H),1.20-1.09(m,2H)。
实施例99、5-(4-(3-(1-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物99)的合成
按照与实施例89中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物99。
MS(M+H)+＝897.0,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(s,1H),8.23(s,1H),8.15-8.11(m,1H),7.99(s,1H),7.68(d,J＝8.6Hz,1H),7.34(d,J＝1.6Hz,1H),7.25(dd,J＝2.0,8.7Hz,1H),7.02(d,J＝1.5Hz,1H),6.94(dd,J＝1.5,8.1Hz,1H),5.07(dd,J＝5.4,12.9Hz,1H),4.76-4.65(m,1H),4.02(t,J＝14.1Hz,2H),3.88(s,3H),4.00-3.42(m,4H),3.32(s,3H),2.94-2.82(m,2H),2.63-2.51(m,7H),2.32(t,J＝6.0Hz,2H),2.05-1.97(m,1H),1.94-1.86(m,2H),1.81-1.40(m,13H),1.31-1.21(m,2H),1.10-1.01(m,2H)。
实施例100、5-(4-(4-(1-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)丁基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物100)的合成
按照与实施例89中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物100。
MS(M+H)+＝911.2,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.07(br s,1H),8.29-8.23(m,1H),8.12(d,J＝8.2Hz,1H),7.98(s,1H),7.67(d,J＝8.6Hz,1H),7.33(s,1H),7.25(dd,J＝1.7,8.7Hz,1H),7.02(d,J＝1.2Hz,1H),6.94(d,J＝8.2Hz,1H),5.07(dd,J＝5.3,12.9Hz,1H),4.77-4.65(m,1H),4.02(t,J＝14.2Hz,2H),3.87(s,3H),3.42-3.40(m,4H),3.32(s,3H),2.94-2.82(m,2H),2.62-2.51(m,5H),2.48-2.47(m,2H),2.31(t,J＝7.1Hz,2H),2.05-1.97(m,1H),1.94-1.85(m,2H),1.79-1.39(m,13H),1.37-1.24(m,4H),1.16-1.01(m,2H)。
实施例101、5-(4-((1-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9)-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(化合物101)的合成
步骤1、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮(3)的合成
向5,6-二氟异苯并呋喃-1,3-二酮(10g，54.32mmol)和3-氨基哌啶-2,6-二酮(9.39g，57.04mmol，HCl盐)在AcOH(200mL)中的溶液中加入KOAc(5.86g，59.75mmol)，将所得混合物在90℃搅拌12小时。LCMS显示反应完全，将反应混合物倒入水(1000mL)中，过滤所得混悬液，收集滤饼并真空干燥，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮(13g，43.74mmol，80.53％产率，99％纯度)，其为棕色固体。MS(M+H)+＝295.1
步骤2、4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(5)的合成
向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮(3g，10.20mmol)和哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2.09g，11.22mmol)在NMP(30mL)中的溶液中加入DIPEA(3.95g，30.59mmol，5.33mL)，将所得混合物在110℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成。将混合物倒入水(100mL)中并用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到4-(2-(2,6-)二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4.3g，9.15mmol，89.75％产率，98％纯度)，其为黄色油状物。MS(M-55+H)+＝405.0
步骤3、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(6)的合成
向4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4.3g，9.34mmol)在二氧六环(20mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，20mL)，将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成，将混合物浓缩，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(3.5g，8.11mmol，86.90％产率，92％纯度，HCl盐)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝360.8
步骤4、4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(8)的合成
向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(2g，5.04mmol，HCl盐)和4-(碘甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.64g，5.04mmol)在DMF(50mL)中的溶液中加入DIPEA(1.95g，15.12mmol，2.63mL)，将所得混合物在60℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成，将混合物倒入水(300mL)中并用EtOAc(100mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(50g Sepa硅胶快速柱，0～10％MeOH/EtOAc梯度洗脱液@80mL/min)纯化，得到4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1g，1.79mmol，35.58％产率)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝558.3
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.38(s,1H),7.47(d,J＝11.0Hz,1H),7.39(br d,J＝7.1Hz,1H),4.98-4.85(m,1H),4.23-4.02(m,2H),3.45-3.22(m,4H),2.87-2.56(m,10H),2.41-2.23(m,2H),2.17-2.10(m,1H),1.88 -1.86(m,2H),1.46(s,9H),1.19-1.04(m,2H)。
步骤5、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(9)的合成
向4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1g，1.79mmol)在二氧六环(10mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，10.00mL)，将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示反应完成。将反应混合物浓缩，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(880mg，1.78mmol，产率99.34％，HCl盐)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝458.2
步骤6、5-(4-((1-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9)-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(化合物101)的合成
向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(880mg，1.78mmol，HCl盐)和4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(797.12mg，1.78mmol)在DMF(20mL)中的溶液中加入HATU(1.02g，2.67mmol)和DIPEA(690.75mg，5.34mmol)，将所得混合物在25℃搅拌1小时。LCMS显示反应完成，将混合物倒入水(100mL)中并用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(10g 硅胶快速柱，0～10％ MeOH/EtOAc梯度@100mL/min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge C18 150*50mm*10um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：43％-73％，11min)纯化，将洗脱液冻干，得到5-(4-((1-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6，7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(243mg，268.50μmol，15.07％产率，98％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝887.2
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.11(s,1H),8.24(s,1H),8.14(d,J＝8.3Hz,1H),8.00(s,1H),7.73(d,J＝11.5Hz,1H),7.46(d,J＝7.6Hz,1H),7.04(s,1H),6.96(d,J＝8.3Hz,1H),5.11(br dd,J＝5.4,13.0Hz,1H),4.77-4.66(m,1H),4.03(br t,J＝13.9Hz,2H),3.89(s,3H),3.32(br s,3H),3.27-3.25(m,4H),2.95-2.83(m,2H),2.70-2.54(m,7H),2.25-2.23(m,2H),2.10-1.99(m,1H),1.97-1.52(m,13H),1.21-1.03(m,2H)。
实施例102、4-(4-(3-(4-(6-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-7-甲氧基-1-氧代-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物102)的合成
步骤1、4-(2-氯乙基)-1-甲氧基-2-硝基苯(2)的合成
在0℃向1-(2-氯乙基)-4-甲氧基苯(10g，58.60mmol)在TFA(100mL)中的溶液中滴加入HNO3(6.14g，63.38mmol，4.39mL，65％纯度)。将所得混合物在25℃搅拌2小时。TLC(石油醚:EtOAc＝5:1，Rf＝0.4)显示起始材料完全消耗。将反应混合物倒入冰水(400mL)中并用EtOAc(50mL×4)萃取。将合并的有机层用NaHCO3(50mL×3)和盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩，得到4-(2-氯乙基)-1-甲氧基-2-硝基-苯(11g，粗品)，其为黑棕色油状物。MS(M+H)+＝216.6
步骤2、5-(2-氯乙基)-2-甲氧基苯胺(3)的合成
在25℃向4-(2-氯乙基)-1-甲氧基-2-硝基苯(9g，41.74mmol)和NH4Cl(11.16g，208.69mmol)在EtOH(60mL)和H2O(30mL)中的混合物中加入Fe(11.65g，208.69mmol)。将所得混合物在80℃搅拌1小时。HPLC显示起始材料完全消耗。将反应混合物趁热通过硅藻土垫过滤并用EtOH(50mL)洗涤。浓缩滤液以除去有机相。将残余物用水(100mL)稀释，用EtOAc(50mL×4)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并浓缩，得到5-(2-氯乙基)-2-甲氧基-苯胺(6.5g，粗品)，其为黑棕色油。MS(M+H)+＝186.1
步骤3、4-溴-5-(2-氯乙基)-2-甲氧基苯胺(4)的合成
在0℃向5-(2-氯乙基)-2-甲氧基苯胺(6.5g，35.01mmol)在DMF(60mL)中的溶液中滴加入NBS(5.61g，31.51mmol)在DMF(20mL)中的溶液。将所得溶液缓慢升温至25℃并搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的主峰。将反应混合物倒入水(400mL)中，然后用石油醚/EtOAc(10/1，200mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(40g硅胶柱，EtOAc/石油醚＝0-5％,100mL/min)纯化，得到4-溴-5-(2-氯乙基)-2-甲氧基苯胺(6g，22.68mmol，64.78％产率)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝266.0
步骤4、4-氨基-2-(2-氯乙基)-5-甲氧基苯甲酸甲酯(5)的合成
在25℃向4-溴-5-(2-氯乙基)-2-甲氧基苯胺(4.5g，17.01mmol)和TEA(8.61g，85.05mmol，11.84mL)在MeOH(80mL)中的溶液中加入Pd(dppf)Cl2(622.32mg，850.51μmol)。将所得混合物用CO鼓吹并脱气3次，加热至70℃并在CO(15Psi)下搅拌14小时。LCMS显示残余起始材料以及具有所需质量的峰。将反应混合物过滤。浓缩滤液，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法(40g硅胶柱，EtOAc/石油醚＝0-8％，80mL/min)纯化，得到4-氨基-2-(2-氯乙基)-5-甲氧基苯甲酸甲酯(600mg，2.46mmol，14.47％产率，N/A纯度)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝244.0
步骤5、4-(4-(3-(4-(6-氨基-7-甲氧基-1-氧代-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(6)的合成
将4-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(400mg，750.44μmol，HCl)、4-氨基-2-(2-氯乙基)-5-甲氧基苯甲酸甲酯(182.87mg，750.44μmol)和DIPEA(484.95mg，3.75mmol，653.57μL)在ACN(8mL)中的混合物在80℃搅拌16小时。LCMS显示残余起始材料以及具有所需质量的峰。将反应混合物在80℃再搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将反应混合物浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(4g硅胶柱，EtOAc/石油醚＝20-100％，然后甲醇/EtOAc＝10-30％，40mL/min)纯化，得到4-(4-(3-(4-(6-氨基-7-甲氧基-1-氧代-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(430mg，640.13μmol，85.30％产率，100％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝672.3
步骤6、4-(4-(3-(4-(6-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-7-甲氧基-1-氧代-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物102)的合成
在25℃向4-(4-(3-(4-(6-氨基-7-甲氧基-1-氧代-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(200mg，297.73μmol)、2-氯-9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(103.73mg，327.51μmol)在二氧六环(3mL)中的溶液中加入Cs2CO3(291.02mg，893.20μmol)、BINAP(92.69mg，148.87μmol)、Pd(OAc)2(16.71mg，74.43μmol)。在N2气氛下将混合物在100℃搅拌16小时。LCMS显示4-(4-(3-(4-(6-氨基-7-甲氧基-1-氧代-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮完全消耗，以及具有所需质量的峰(29％)。将混合物溶液减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi C18 150x 25mm x 10um；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：9％-39％，10min)纯化，将洗脱液冻干。将残余物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge BEH C18 150x 25mm x 5um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：50％-70，min)再纯化，将洗脱液冻干，得到4-(4-(3-(4-(6-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-7-甲氧基-1-氧代-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(12.9mg，12.74μmol，4.28％产率，94％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝952.5
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.43-10.80(m,1H),8.27(s,1H),8.16(s,1H),7.95(s,1H),7.70(dd,J＝7.3,8.4Hz,1H),7.51(s,1H),7.39-7.31(m,2H),5.09(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.83(quin,J＝8.4Hz,1H),4.30(t,J＝5.7Hz,2H),4.23-4.13(m,1H),4.11-3.94(m,3H),3.92-3.83(m,4H),3.31-3.17(m,7H),2.99-2.80(m,5H),2.76-2.72(m,1H),2.68-2.60(m,5H),2.59-2.52(m,2H),2.06-1.91(m,3H),1.82-1.25(m,12H)。
实施例103、4-(4-((1-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物103)的合成
步骤1、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(4-((1-(2-氟-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(2)的合成
向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(1.3g，2.73mmol，HCl盐)和1-溴-2-氟-5-甲氧基-4-硝基苯(614mg，2.46mmol)在DMF(15mL)中的溶液中加入K2CO3(1.13g，8.19mmol)，将混合物在80℃搅拌14小时。LCMS显示具有所需质量的峰(49％)。过滤混合物，用EtOAc(20mL)和H2O(20mL)洗涤滤饼。用EtOAc(15mL×3)萃取滤液，将合并的有机层用盐水(10mL×3)洗涤，减压浓缩。将粗品用EtOAc(20mL)稀释并在20℃搅拌1小时。过滤混合物，用EtOAc(10mL)洗涤滤饼。收集滤饼并真空干燥，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(4-((1-(2-氟-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(520mg，786.05μmol，28.78％产率，92％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝609.1
步骤2、4-(4-((1-(4-氨基-2-氟-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(3)的合成
向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(4-((1-(2-氟-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(520mg，854.40μmol)在EtOH(10mL)和H2O(10mL)中的溶液中加入Fe(286.28mg，5.13mmol)和HCl(12M，420μL)，将混合物在80℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料被消耗并且检测到所需质量。将混合物用DMF(20mL)和H2O(40mL)稀释，然后在0℃用饱和NaHCO3调节pH＝8。将混合物用EtOAc(20mL×3)萃取并用盐水(10mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到4-(4-((1-(4-氨基-2-氟-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(240mg，粗品)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝579.3
步骤3、4-(4-((1-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物103)的合成
向4-(4-((1-(4-氨基-2-氟-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(240mg，414.77μmol)和2-氯-9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(120.00mg，378.87μmol)在二氧六环(6mL)中的溶液中加入Pd(OAc)2(4.66mg，20.74μmol)、BINAP(25.83mg，41.48μmol)和Cs2CO3(405.42mg，1.24mmol)，将混合物在100℃搅拌14小时。LCMS显示具有所需质量的峰(22％)，并且残余36％的试剂1。加入另外的2-氯-9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(120mg，378.87μmol)、Pd(OAc)2(4.66mg，20.74μmol)和BINAP(25.83mg，41.48μmol)，将混合物在100℃搅拌14小时。LCMS显示具有所需质量的峰(28％)。将混合物用H2O(10mL)稀释并用EtOAc(10mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压浓缩。将粗品通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝20/1)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：60％-90％，10min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-(4-((1-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(33mg，35.73μmol，8.61％产率，93％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝859.0
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(br s,1H),8.20(s,1H),7.91-7.80(m,2H),7.73-7.68(m,1H),7.35(t,J＝7.2Hz,2H),6.69(d,J＝7.9Hz,1H),5.09(br dd,J＝5.4,13.0Hz,1H),4.74-4.63(m,1H),4.01(br t,J＝14.2Hz,2H),3.84(s,3H),3.32-3.28(m,7H),2.93-2.81(m,1H),2.71-2.63(m,3H),2.62-2.53(m,5H),2.28-2.23(m,2H),2.06-1.98(m,1H),1.94-1.50(m,13H),1.36-1.22(m,2H)。
实施例104、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(3-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物104)的合成
步骤1、4-(((3-(((苄氧基)羰基)氨基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(3)的合成
向4-((甲基氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1g，4.38mmol)和(3-氧代环丁基)氨基甲酸苄酯(960.17mg，4.38mmol)在MeOH(15mL)中的溶液中加入NaBH3CN(550.45mg，8.76mmol)和AcOH(263.01mg，4.38mmol，250.48μL)。将混合物在25℃搅拌2小时。LC-MS显示(3-氧代环丁基)氨基甲酸苄酯完全消耗，并且检测到一个具有所需质量的主峰。将反应混合物用水100mL稀释并用EtOAc(30mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水30mL洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过柱色谱法(SiO2，石油醚/EtOAc＝1/0至0/1)纯化，得到4-(((3-(((苄氧基)羰基)氨基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.2g，2.03mmol，46.35％产率，73％纯度)，其为无色油状物。MS(M+H)+＝432.2
步骤2、4-(((3-氨基环丁基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(4)的合成
在N2气氛下向4-(((3-(((苄氧基)羰基)氨基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.2g，2.78mmol)在EtOH(15mL)中的溶液中加入Pd/C(10％，150mg)。将混悬液脱气并用H2鼓吹3次。在H2(15Psi)下将混合物在25℃搅拌16小时。TLC(石油醚:EtOAc＝1:1)显示4-(((3-(((苄氧基)羰基)氨基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯完全消耗并且形成一个新斑点。过滤混合物，用EtOAc(100mL)洗涤滤饼，真空浓缩滤液，得到4-(((3-氨基环丁基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(700mg，2.35mmol，产率84.64％)，其为无色油状物。MS(M+H)+＝298.4
步骤3、4-((3-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(6)的合成
向4-(((3-氨基环丁基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(400mg，1.34mmol)和4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(601.72mg，1.34mmol)在DMF(8mL)中的溶液中加入HATU(767.02mg，2.02mmol)和DIPEA(521.43mg，4.03mmol，702.74μL)。将混合物在25℃搅拌1小时。LC-MS显示4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸完全消耗，并且检测到一个具有所需质量的主峰。将反应混合物用水100mL稀释并用EtOAc(30mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水30mL洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过柱色谱法(SiO2，石油醚/EtOAc＝1/0至0/1)纯化，得到4-(((3-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(630mg，589.39μmol，43.83％产率，68％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝727.4
步骤4、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(3-(甲基(哌啶-4-基甲基)氨基)环丁基)苯甲酰胺(7)的合成
将4-(((3-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(500mg，687.90μmol)和HCl/二氧六环(将(4M，3mL)在DCM(3mL)中的溶液在25℃搅拌1小时。LC-MS显示4-((3-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)环丁基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯完全消耗，并且检测到一个具有所需质量的主峰。将反应混合物减压浓缩以除去溶剂，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(3-(甲基(哌啶-4-基甲基)氨基)环丁基)苯甲酰胺(500mg，粗品，HCl盐)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝627.4
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(3-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物104)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(3-(甲基(哌啶-4-基甲基)氨基)环丁基)苯甲酰胺(200mg，301.57μmol，HCl盐)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(83.30mg，301.57μmol)在DMF(4mL)中的溶液中加入KI(50.06mg，301.57μmol)和DIPEA(116.93mg，904.71μmol，157.58μL)。将混合物在80℃搅拌2小时。LC-MS显示残留约9％的4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(3-(甲基(哌啶-4-基甲基)氨基)环丁基)苯甲酰胺，LC-MS上显示了几个新峰，检测到约18％的所需化合物。将反应混合物用水100mL稀释并用EtOAc(30mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水30mL洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 250x 50mm x15μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：21％-51％，10min)纯化，得到作为甲酸盐的产物。然后将残余物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150x 25mm x 5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：55％-85％,7min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(3-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)-3-甲氧基苯甲酰胺(29mg，32.52μmol，10.78％产率，99％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝883.2
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.07(s,1H),8.44(d,J＝7.6Hz,1H),8.31-8.23(m,2H),7.96(s,1H),7.65(d,J＝8.6Hz,1H),7.55-7.46(m,2H),7.31(d,J＝2.0Hz,1H),7.23(dd,J＝2.1,8.6Hz,1H),5.06(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.83-4.72(m,1H),4.17-4.00(m,5H),3.94(s,3H),3.31(s,3H),3.04-2.92(m,2H),2.90-2.83(m,1H),2.63-2.54(m,2H),2.46-2.36(m,3H),2.08-1.91(m,8H),1.87-1.69(m,7H),1.66-1.56(m,4H),1.19-1.07(m,2H)。
实施例105、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(3-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物105)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(3-(甲基(哌啶-4-基甲基)氨基)环丁基)苯甲酰胺(200mg，319.11μmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-向3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(88.15mg，319.11μmol)在DMF(4mL)中的溶液中加入KI(52.97mg，319.11μmol)和DIPEA(123.73mg，957.34μmol，166.75μL)。将混合物在90℃搅拌3小时。LC-MS显示残余约55％的2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮，约10％m/z＝517.1，检测到约30％的所需化合物。将反应混合物用水100mL稀释并用EtOAc(30mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水30mL洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 250x 50mm x15μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：21％-51％，10min)纯化，得到作为甲酸盐的产物。然后将残余物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge150x 25mm x5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：58％-88％,7min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(3-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)(甲基)氨基)环丁基)-3-甲氧基苯甲酰胺(33.6mg，37.67μmol，11.81％产率，99％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝883.3。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(s,1H),8.45(d,J＝7.6Hz,1H),8.31-8.24(m,2H),7.96(s,1H),7.68(dd,J＝7.3,8.3Hz,1H),7.55-7.48(m,2H),7.37-7.29(m,2H),5.08(dd,J＝5.4,12.7Hz,1H),4.83-4.72(m,1H),4.17-4.01(m,3H),3.95(s,3H),3.75-3.63(m,2H),3.33-3.29(m,3H),2.93-2.83(m,3H),2.63-2.57(m,2H),2.47-2.38(m,3H),2.14-2.00(m,7H),1.97-1.90(m,2H),1.89-1.81(m,4H),1.74-1.68(m,2H),1.65-1.57(m,4H),1.38-1.23(m,2H)。
实施例106、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(3-((2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)环丁基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物106)的合成
步骤1、4-(2-(苄基(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2)的合成
向4-(2-氧代乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.5g，6.60mmol)和N-甲基-1-苯基甲胺(799.69mg，6.60mmol，851.64μL)在MeOH(6mL)中的溶液中加入NaBH3CN(1.24g，19.80mmol)和AcOH(396.30mg，6.60mmol，377.43μL)。将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示N-甲基-1-苯基甲胺完全消耗以及一个具有所需质量的主峰。将反应混合物用水200mL稀释并用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过反相HPLC(0.1％ NH3*H2O)纯化，将洗脱液冻干，得到4-(2-(苄基(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2g，5.53mmol，83.86％产率，92％纯度)，其为无色油状物。MS(M+H)+＝333.4
步骤2、4-(2-(甲基氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(3)的合成
在N2气氛下向4-(2-(甲基氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.8g，5.41mmol)在EtOH(20mL)中的溶液中加入Pd/C(10％，200mg)。将混悬液脱气并用H2鼓吹3次。在H2(15Psi)下将混合物在25℃搅拌5小时。TLC(石油醚/EtOAc＝1/1)显示4-(2-(甲基氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯完全消耗并且形成一个新斑点。过滤混合物，用EtOAc(200mL)洗涤滤饼，真空浓缩滤液，得到4-(2-(甲基氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.3g，5.36mmol，99.08)％产率)，其为无色油状物。MS(M+H)+＝243.4
步骤3、4-(2-((3-(((苄氧基)羰基)氨基)环丁基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(5)的合成
向4-(2-(甲基氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(500mg，2.06mmol)和(3-氧代环丁基)氨基甲酸苄酯(452.30mg，2.06mmol)在MeOH(7mL)中的溶液加入NaBH3CN(324.12mg，5.16mmol)和AcOH(123.89mg，2.06mmol，117.99μL)。将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示(3-氧代环丁基)氨基甲酸苄酯完全消耗以及具有所需质量的峰(71％)。将反应混合物用水(100mL)稀释并用EtOAc(30mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水30mL洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过反相HPLC(0.1％ NH3*H2O)纯化，将洗脱液冻干，得到4-(2-((3-(((苄氧基)羰基)氨基)环丁基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(800mg，1.80mmol，87.02％产率)，其为无色油状物。MS(M+H)+＝446.8
步骤4、4-(2-((3-氨基环丁基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(6)的合成
在N2气氛下向4-(2-((3-(((苄氧基)羰基)氨基)环丁基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(800mg，1.80mmol)在EtOH(10mL)中的溶液中加入Pd/C(10％，80mg)。将混悬液脱气并用H2鼓吹3次。在H2(15Psi)下将混合物在25℃搅拌5小时。TLC(石油醚/EtOAc＝1/1)显示4-(2-((3-(((苄氧基)羰基)氨基)环丁基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯完全消耗并且形成一个新斑点。过滤反应混合物，用EtOAc(100mL)洗涤滤饼，真空浓缩滤液，得到4-(2-((3-氨基环丁基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(500mg，1.61mmol，产率89.42％)，其为无色油状物。MS(M+H)+＝312.5
步骤5、4-(2-((3-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)环丁基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(8)的合成
向4-(2-((3-氨基环丁基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(400mg，1.28mmol)和4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(574.63mg，1.28mmol)在DMF(6mL)中溶液中加入HATU(732.48mg，1.93mmol)和DIPEA(497.95mg，3.85mmol，671.09μL)。将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示4-(2-((3-氨基环丁基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯完全消耗以及一个具有所需质量的主峰。将反应混合物用水(100mL)稀释并用EtOAc(30mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过柱色谱法(SiO2，石油醚/EtOAc＝0/1至1/0)纯化，得到4-(2-((3-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)环丁基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(600mg，801.75μmol，62.43％产率，99％纯度)，其为浅黄色固体。MS(M+H)+＝741.6
步骤6、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(3-(甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基)环丁基)苯甲酰胺(9)的合成
将4-(2-((3-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)环丁基)(甲基)氨基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(400mg，539.90μmol)、HCl/二氧六环(4M，2.5mL)在DCM(2.5mL)中的混合物在25℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及一个具有所需质量的主峰。将反应混合物减压浓缩，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(3-(甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基)环丁基)苯甲酰胺(400mg，粗品，HCl盐)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝641.5
步骤7、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(3-((2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)环丁基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物106)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(3-(甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基)环丁基)苯甲酰胺(200mg，295.32μmol，HCl盐)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(81.57mg，295.32μmol)在DMF(4mL)中的溶液中加入KI(49.02mg，295.32μmol)和DIPEA(114.51mg，885.97μmol，154.32μL)。将混合物在90℃搅拌5小时。LCMS显示4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(3-(甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基)环丁基)苯甲酰胺完全消耗以及具有所需质量的峰(19％)。将反应混合物用水(100mL)稀释并用EtOAc(30mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(条件：柱：Waters Xbridge 150x 25mm x 5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]：B％：46％-76％,9min)纯化，将洗脱液冻干。将残余物通过柱色谱法(SiO2，石油醚/EtOAc＝1/1至0/1)纯化，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(3-((2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)环丁基)-3-甲氧基苯甲酰胺(26.1mg，28.81μmol，9.75％产率，99％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝897.0。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.07(s,1H),8.46(d,J＝7.7Hz,1H),8.31-8.23(m,2H),8.00-7.94(m,1H),7.65(d,J＝8.6Hz,1H),7.56-7.46(m,2H),7.29(s,1H),7.22(dd,J＝2.0,8.7Hz,1H),5.06(dd,J＝5.3,12.9Hz,1H),4.83-4.69(m,1H),4.21-4.10(m,1H),4.08-4.00(m,4H),3.93(s,3H),3.33(s,3H),2.98-2.84(m,3H),2.62-2.55(m,3H),2.48-2.37(m,2H),2.31-2.22(m,2H),2.02(s,3H),1.99-1.84(m,5H),1.79-1.68(m,4H),1.67-1.56(m,5H),1.38-1.32(m,2H),1.27-1.09(m,2H)。
实施例107、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(3-((2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)环丁基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物107)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(3-(甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基)环丁基)苯甲酰胺(200mg，295.32μmol，HCl盐)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(81.57mg，295.32μmol)在DMF(4mL)中的溶液中加入KI(49.02mg，295.32μmol)和DIPEA(114.51mg，885.97μmol，154.32μL)。将混合物在90℃搅拌5小时。LCMS显示4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(3-(甲基(2-(哌啶-4-基)乙基)氨基)环丁基)苯甲酰胺完全消耗以及具有所需质量的峰(46％)。将反应混合物用水(100mL)稀释并用EtOAc(30mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过柱色谱法(SiO2，石油醚/EtOAc＝1/1至0/1)纯化。将粗产物通过制备型HPLC(条件柱：WatersXbridge 150x 25mm x 5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：47％-77％,9min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(3-((2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)乙基)(甲基)氨基)环丁基)-3-甲氧基苯甲酰胺(51.9mg，57.28μmol，19.40％产率，99％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝897.0。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(s,1H),8.46(d,J＝7.7Hz,1H),8.30-8.23(m,2H),7.97(s,1H),7.75-7.62(m,1H),7.56-7.46(m,2H),7.37-7.27(m,2H),5.08(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.80-4.67(m,1H),4.21-4.10(m,1H),4.09-4.02(m,2H),3.94(s,3H),3.76-3.63(m,2H),3.33(s,3H),2.91-2.81(m,3H),2.63-2.53(m,3H),2.47-2.41(m,2H),2.28-2.22(m,2H),2.04(s,3H),2.01-1.84(m,5H),1.81-1.67(m,4H),1.65-1.55(m,4H),1.53-1.46(m,1H),1.44-1.30(m,4H)。
实施例108、4-(((R)-9-环戊基-7-氟-5-甲基-6-氧代-7-乙烯基-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物108)的合成
步骤1、3-(环戊基氨基)丙酸甲酯(2)的合成
向3-氨基丙酸乙酯(5g，32.55mmol，HCl)和环戊酮(3.01g，35.81mmol，3.17mL)在THF(100mL)中的溶液中加入NaBH(OAc)3(10.64g，50.19mmol)和NaOAc(2.95g，36.02mmol)，将所得混合物在20℃搅拌5小时。TLC(EtOAc)显示起始材料被消耗并且形成新的点。将混合物倒入水(200mL)中并用EtOAc(100mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(200mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到3-(环戊基氨基)丙酸甲酯(5.5g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝172.2
步骤2、3-((2-氯-5-硝基嘧啶-4-基)(环戊基)氨基)丙酸甲酯(3)的合成
向2,4-二氯-5-硝基-嘧啶(6.23g，32.12mmol)和3-(环戊基氨基)丙酸甲酯(5.5g，32.12mmol)在丙酮(100mL)中的溶液中加入K2CO3(8.88g，64.24mmol)，将所得混合物在20℃搅拌12小时。TLC(石油醚/EtOAc＝5/1)显示起始材料被消耗并且形成新的点；LCMS显示检测到74％的所需质量。过滤混合物，浓缩滤液，将残余物经硅胶柱(石油醚/EtOAc＝10/1-5/1)纯化，得到3-((2-氯-5-硝基嘧啶-4-基)(环戊基)氨基)丙酸甲酯(5.5g，15.56mmol，48.44％产率，93％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝329.1
步骤3、2-氯-9-环戊基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(4)的合成
向3-((2-氯-5-硝基嘧啶-4-基)(环戊基)氨基)丙酸甲酯(4.5g，13.69mmol)在AcOH(100mL)和H2O(100mL)中的溶液中加入Fe(4.59g，82.13mmol)和HCl(12M，3.6mL)，将所得混合物在60℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料被消耗并且检测到83％的所需质量。将混合物过滤并浓缩，将残余物用NaHCO3(饱和水溶液，100mL)稀释，将所得混合物用EtOAc(100mL×3)萃取，将合并的有机层用NaHCO3(200mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物与(50mL，石油醚/EtOAc＝5/1)一起研磨，过滤并收集滤饼，得到2-氯-9-环戊基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(3.2g，11.52mmol，产率84.14％，纯度96％)，其为棕色固体。MS(M+H)+＝467.1
步骤4、2-氯-9-环戊基-5-甲基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(5)的合成
向2-氯-9-环戊基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(2.7g，10.12mmol)在DMF(50mL)中的混合物加入MeI(1.58g，11.14mmol，693.20μL)和K2CO3(2.80g，20.25mmol)，将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料被消耗并且检测到86％的所需质量。将混合物倒入水(300mL)中并用EtOAc(100mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(300mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(50g硅胶快速柱，0～50％EtOAc/石油醚梯度洗脱液@80mL/min)纯化，得到2-氯-9-环戊基-5-甲基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(2g，7.05mmol，69.67％产率，99％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝281.1
步骤5、2-氯-9-环戊基-7-(1-羟乙基)-5-甲基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂6-酮(6)的合成
在-78℃向2-氯-9-环戊基-5-甲基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(1.5g，5.34mmol)在THF(30mL)中的溶液中加入LDA(2M，3.21mL)，将混合物在-78℃搅拌30分钟，加入乙醛(941.45mg，21.37mmol，1.20mL)，将所得混合物在-78℃搅拌2小时并在20℃再搅拌12小时。LCMS显示起始材料被消耗并且检测到83％的所需质量。用氯化铵(饱和水溶液，50mL)猝灭反应，将混合物用EtOAc(2×50mL)萃取，将合并的有机萃取物用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(20g硅胶快速柱，0～50％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@80mL/min)纯化，得到2-氯-9-环戊基-7-(1-羟乙基)-5-甲基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(2.0g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝452.2
步骤6、1-(2-氯-9-环戊基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-7-基)乙基甲磺酸酯(7)的合成
在0℃向2-氯-9-环戊基-7-(1-羟乙基)-5-甲基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(1.5g，4.62mmol)和TEA(934.61mg，9.24mmol，1.29mL)在DCM(30mL)中的溶液中加入MsCl(793mg，6.92mmol，535.81μL)，将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示起始物质被消耗并且检测到88％的所需质量，将反应混合物用冰水(100mL)稀释并用DCM(50mL×3)萃取，将有机层用盐水(100mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到1-(2-氯-9-环戊基-5-甲基-6-氧代-6，7，8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-7-基)乙基甲磺酸酯(1.6g，3.97mmol，85.99％产率)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝403.1
步骤7、2-氯-9-环戊基-7-亚乙基-5-甲基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(8)的合成
向1-(2-氯-9-环戊基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-7-基)乙基甲磺酸酯(1.6g，3.97mmol)在THF(50mL)中的溶液中加入DBU(1.81g，11.91mmol，1.80mL)，将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料被消耗并且检测到36％的所需质量。将反应混合物缓慢加入到冰冷水(20mL)中并用EtOAc(2×20mL)萃取，将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(20g硅胶快速柱，0～50％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@80mL/min)纯化，得到2-氯-9-环戊基-7-亚乙基-5-甲基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(600mg，1.96mmol，49.25％产率，100％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝307.1。
步骤8、rel-(R)-2-氯-9-环戊基-7-氟-5-甲基-7-乙烯基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(10(峰1))和rel-(S)-2-氯-9-环戊基-7-氟-5-甲基-7-乙烯基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(10(峰2))的合成
在-78℃向2-氯-9-环戊基-7-亚乙基-5-甲基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(0.3g，977.87μmol)在THF(10mL)中的溶液中加入LDA(2M，977.87μL)和HMPA(350.47mg，1.96mmol，343.60μL)，将所得混合物在-78℃搅拌0.5小时，然后加入N-(苯磺酰基)-N-氟-苯磺酰胺(616.72mg，1.96mmol)，将所得混合物在-78℃搅拌0.5小时，将温度升至0℃持续0.5小时。LCMS显示起始材料被消耗并且检测到所需质量。将混合物倒入水(50mL)中并用EtOAc(30mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(5g 硅胶快速柱，0～30％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@50mL/min)纯化，得到270mg内消旋体。将内消旋体用SFC(柱：DAICELCHIRALPAK AY-H(250mm*30mm，10um)；流动相：[0.1％ NH3H2OETOH]；B％：50％-50％，3.5；45min)分离，得到rel-(R)-2-氯-9-环戊基-7-氟-5-甲基-7-乙烯基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(10(峰1))(120mg，362.09μmol，产率18.51％，纯度98％)和rel-(S)-2-氯-9-环戊基-7-氟-5-甲基-7-乙烯基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(10(峰2))(100mg，301.74μmol，15.43％产率，98％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝325.1。
步骤9、(R)-4-((9-环戊基-7-氟-5-甲基-6-氧代-7-乙烯基-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(11)的合成
向rel-(R)-2-氯-9-环戊基-7-氟-5-甲基-7-乙烯基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b]溶液[1,4]二氮杂-6-酮(10(峰1))(100mg，307.90μmol)和4-氨基-3-甲氧基苯甲酸(77.20mg，461.85μmol)在EtOH(1mL)和H2O(3mL)中的溶液中加入HCl(12M，56.45μL)，将所得混合物在100℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料被消耗并且检测到60％的所需质量。将反应混合物浓缩，将残余物通过制备型HPLC(柱：3_Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；流动相：[水(HCl)-ACN]；B％：26％-46％,7min)纯化，将洗脱液冻干，得到(R)-4-((9-环戊基-7-氟-5-甲基-6-氧代-7-乙烯基-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(32mg，70.26μmol，22.82％产率)，其为棕色固体。MS(M+H)+＝456.1。
步骤10、4-(((R)-9-环戊基-7-氟-5-甲基-6-氧代-7-乙烯基-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物108)的合成
向(R)-4-((9-环戊基-7-氟-5-甲基-6-氧代-7-乙烯基-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(30mg，65.86μmol)和4-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(35.11mg，65.86μmol HCl)在DMF(1mL)中的溶液中加入HATU(37.57mg，98.79μmol)和DIPEA(25.54mg，197.58μmol，34.42μL)，将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料被消耗并且检测到所需质量，将混合物倒入水(20mL)中并用EtOAc(20mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，将所得混合物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：37％-67％,9min)纯化，得到4-(((R)-9-环戊基-7-氟-5-甲基-6-氧代-7-乙烯基-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(25mg，26.50μmol，40.24％产率，99％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝934.4。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.49(d,J＝8.5Hz,1H),8.15(br s,1H),7.96(s,1H),7.71(s,1H),7.60(dd,J＝3,8.3Hz,1H),7.45-7.39(m,2H),7.24(dd,J＝.6,8.5Hz,1H),7.18(d,J＝8.4Hz,1H),6.10-5.96(m,2H),5.50(dd,J＝2.1,17.3Hz,1H),5.37(d,J＝11.0Hz,1H),4.96(dd,J＝5.3,12.2Hz,2H),4.65(d,J＝13.8Hz,1H),4.31-4.17(m,1H),3.99(s,3H),3.95-3.90(m,1H),3.84-3.78(m,1H),3.78-3.68(m,1H),3.42-3.36(m,5H),3.27 -3.22(m,1H),2.93-2.79(m,5H),2.78-2.71(m,5H),2.65-2.59(m,2H),2.23 -2.19(m,1H),2.15-2.02(m,4H),1.81-1.66(m,5H),1.59-1.40(m,5H)。
实施例109、4-(((S)-9-环戊基-7-氟-5-甲基-6-氧代-7-乙烯基-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物109)的合成
步骤1、(S)-4-((9-环戊基-7-氟-5-甲基-6-氧代-7-乙烯基-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(12)的合成
向rel-(S)-2-氯-9-环戊基-7-氟-5-甲基-7-乙烯基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b]溶液[1,4]二氮杂-6-酮(10(峰2))(95mg，292.51μmol)和4-氨基-3-甲氧基苯甲酸(73.34mg，438.76μmol)在EtOH(1mL)和H2O(3mL)中的溶液中加入HCl(12M，53.63μL)，将所得混合物在100℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料被消耗并且检测到66％的所需质量，浓缩反应混合物，将残余物通过制备型HPLC(柱：3_Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；流动相：[水(HCl)-ACN]；B％：27％-47％,7min)纯化，将洗脱液冻干，得到(S)-4-((9-环戊基-7-氟-5-甲基-6-氧代-7-乙烯基-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(35mg，76.84μmol，26.27％产率)，其为棕色固体。MS(M+H)+＝456.2。
步骤2、4-(((S)-9-环戊基-7-氟-5-甲基-6-氧代-7-乙烯基-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物109)的合成
向(S)-4-((9-环戊基-7-氟-5-甲基-6-氧代-7-乙烯基-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(35mg，76.84μmol)和4-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(40.96mg，76.84μmol，HCl)在DMF(1mL)中的溶液中加入HATU(43.83mg，115.26μmol)和DIPEA(29.79mg，230.52μmol，40.15μL)，将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料被消耗，检测到所需质量。将混合物倒入水(20mL)中并用EtOAc(20mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得混合物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：36％-66％，9min)纯化，得到4-(((S)-9-环戊基-7-氟-5-甲基-6-氧代-7-乙烯基-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(24mg，25.18μmol，32.77％产率，98％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝934.4
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.49(d,J＝8.4Hz,1H),8.08(br s,1H),7.97(s,1H),7.71(s,1H),7.61(dd,J＝7.2,8.3Hz,1H),7.44-7.40(m,2H),7.24(dd,J＝1.9,8.6Hz,1H),7.18(d,J＝8.1Hz,1H),6.10-5.95(m,2H),5.51(dd,J＝2.1,17.3Hz,1H),5.37(d,J＝11.0Hz,1H),5.00-4.92(m,2H),4.65(d,J＝12.9Hz,1H),4.31-4.17(m,1H),3.99(s,3H),3.95 -3.91(m,1H),3.84-3.78(m,1H),3.78-3.67(m,1H),3.42-3.37(m,5H),3.27 -3.22(m,1H),2.95-2.80(m,5H),2.79-2.71(m,5H),2.67-2.63(m,2H),2.23-2.19(m,1H),2.15-2.01(m,4H),1.80-1.65(m,5H),1.57-1.40(m,5H)。
实施例110、4-(4-(2-(1-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物110)的合成
步骤1、2-(1-(2-氟-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)乙-1-醇(3)的合成
向1-溴-2-氟-5-甲氧基-4-硝基苯(1.5g，6.00mmol)和2-(哌啶-4-基)乙-1-醇(1g，7.74mmol)在DMF(15mL)中的溶液中加入K2CO3(1.66g，12.00mmol)，将混合物在80℃搅拌14小时。LCMS显示具有所需质量的主峰(100％)。将混合物用H2O(10mL)稀释并用EtOAc(10mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL×3)和饱和柠檬酸(10mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压浓缩，得到2-(1-(2-氟-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)乙-1-醇(1.1g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝299.0
步骤2、2-(1-(2-氟-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)乙基4-甲基苯磺酸酯(4)的合成
向2-(1-(2-氟-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)乙-1-醇(1.1g，3.69mmol)在DCM(20mL)中的溶液中加入TEA(1.12g，11.06mmol，1.54mL)和TosCl(1.41g，7.37mmol)，将混合物在25℃搅拌14小时。LCMS显示具有所需质量的峰(71％)。将混合物减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(12g 硅胶快速柱，30～70％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@50mL/min)纯化，得到2-(1-(2-氟-5-甲氧基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)乙基4-甲基苯磺酸酯(1.4g，3.00mmol，81.39％产率，97％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝453.2
步骤3、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(4-(2-(1-(2-氟-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)乙基)哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(6)的合成
向2-(1-(2-氟-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)乙基4-甲基苯磺酸酯(1.4g，3.09mmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(780mg，2.06mmol，HCl盐)在DMF(15mL)中的溶液中加入NaI(15.46mg，103.13μmol)和DIPEA(799.74mg，6.19mmol，1.08mL)，将混合物在50℃搅拌50小时。LCMS显示具有所需质量的峰(46％)。将混合物用H2O(20mL)稀释并用EtOAc(10mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压浓缩。将粗品用EtOAc(10mL)稀释并在25℃搅拌1小时。过滤混合物，用EtOAc(10mL)洗涤滤饼。收集滤饼并真空干燥，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(4-(2-(1-(2-氟-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶)-4-基)乙基)哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(590mg，871.77μmol，42.26％产率，92％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝623.0
步骤4、4-(4-(2-(1-(4-氨基-2-氟-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(7)的合成
向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(4-(2-(1-(2-氟-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)乙基)哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.59g，947.57μmol)在EtOH(5mL)和H2O(5mL)中的溶液中加入Fe(317.50mg，5.69mmol)和HCl(12M，470μL)，将混合物在80℃搅拌1小时。LCMS显示具有所需质量的主峰(94％)。在0℃用饱和NaHCO3将混合物调节至pH＝8，并用DMF(20mL)和H2O(40mL)稀释。过滤混合物，用DMF(50mL)洗涤滤饼。将滤液用EtOAc(20mL×3)萃取，将有机层用盐水(10mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到4-(4-(2-(1-(4-氨基-2-氟-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.4g，粗品)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝593.0
步骤5、4-(4-(2-(1-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物110)的合成
向2-氯-9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(118mg，372.55μmol)和4-(4-(2-(1-(4-氨基-2-氟-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(200mg，337.46μmol)在二氧六环(6mL)中的溶液中加入Pd(OAc)2(7.58mg，33.75μmol)、Cs2CO3(330.00mg，1.01mmol)和BINAP(42.03mg，67.49μmol)，将混合物在100℃搅拌28小时。LCMS显示具有所需质量的峰(41％)。将混合物用THF(5mL)和DCM(5mL)稀释，然后过滤。将滤饼用THF(10mL)和DCM(10mL)洗涤。将滤液减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(5g 硅胶快速柱，60～100％ EtOAc/石油醚至5％ MeOH/EtOAc梯度洗脱液@50mL/min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Unisil 3-100C18 Ultra 150*50mm*3um；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：15％-45％，10min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-(4-(2-(1-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(54.2mg，60.85μmol，18.03％产率，98％纯度，0.25FA)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝873.0
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(s,1H),8.32(s,0.25H),8.20(s,1H),7.88(d,J＝14.7Hz,1H),7.81(s,1H),7.73-7.67(m,1H),7.37-7.32(m,2H),6.68(d,J＝8.3Hz,1H),5.13-5.05(m,1H),4.74-4.64(m,1H),4.01(br t,J＝14.1Hz,2H),3.84(s,3H),3.37-3.32(m,7H),2.93-2.82(m,1H),2.66-2.64(m,1H),2.63-2.59(m,2H),2.58-2.55(m,5H),2.43-2.38(m,2H),2.07-1.98(m,1H),1.94-1.85(m,2H),1.82-1.75(m,2H),1.72-1.24(m,13H)。
实施例111、5-(4-((1-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物111)的合成
通过与实施例89和103中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物111。
MS(M+H)+＝859.4,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(s,1H),8.20(s,1H),7.88(d,J＝14.7Hz,1H),7.81(s,1H),7.68(d,J＝8.6Hz,1H),7.36-7.33(m,1H),7.28-7.23(m,1H),6.69(d,J＝8.2Hz,1H),5.07(dd,J＝5.4,13.0Hz,1H),4.74-4.62(m,1H),4.01(t,J＝14.1Hz,2H),3.84(s,3H),3.48-3.42(m,4H),3.31(s,3H),2.94-2.82(m,1H),2.73-2.64(m,2H),2.57-2.51(m,6H),2.27-2.22(m,2H),2.05-1.97(m,1H),1.95-1.79(m,4H),1.73-1.49(m,8H),1.36-1.21(m,3H)。
实施例112、5-(4-(2-(1-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物112)的合成
通过与实施例89和103中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物111。
MS(M+H)+＝873.0,1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.20(d,J＝14.7Hz,1H),8.07-8.04(m,1H),8.01(s,1H),7.71(d,J＝8.6Hz,1H),7.47(s,1H),7.31-7.29(m,1H),7.10-7.06(m,1H),6.57(d,J＝7.7Hz,1H),4.95(dd,J＝5.2,12.4Hz,1H),4.88-4.79(m,1H),3.94-3.83(m,5H),3.49-3.44(m,3H),3.42-3.36(m,4H),2.94-2.61(m,9H),2.55-2.46(m,2H),2.18-2.04(m,3H),1.87-1.73(m,7H),1.61-1.44(m,8H)。
实施例113、5-(4-(3-(1-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物113)的合成
按照与实施例110中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物113。
MS(M+H)+＝887.3,1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.34-8.13(m,2H),8.00(s,1H),7.71(d,J＝8.4Hz,1H),7.51(s,1H),7.31(d,J＝2.0Hz,1H),7.11-7.03(m,1H),6.57(d,J＝7.8Hz,1H),4.99-4.91(m,1H),4.90-4.79(m,1H),3.95-3.82(m,5H),3.53-3.46(m,4H),3.42-3.36(m,5H),2.93-2.64(m,9H),2.54-2.45(m,2H),2.16-2.06(m,4H),1.86-1.78(m,2H),1.76-1.72(m,3H),1.67-1.55(m,4H),1.49-1.41(m,2H),1.40-1.30(m,3H)。
实施例114、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-(4-(2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)乙基)哌嗪-1-基)环己基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物114)的合成
按照与实施例83中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物114。
MS(M+H)+＝998.1,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.07(br s,1H),8.29(s,1H),8.24(d,J＝13.3Hz,1H),8.02(s,1H),7.80(dd,J＝3.6,7.8Hz,1H),7.67(dd,J＝7.3,8.4Hz,1H),7.32(dd,J＝5.1,7.7Hz,2H),7.18(d,J＝6.8Hz,1H),5.08(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.87-4.76(m,1H),4.13-4.01(m,2H),3.91(s,3H),3.73-3.62(m,3H),3.30(s,3H),2.93-2.80(m,3H),2.63-2.52(m,8H),2.37-2.34(m,1H),2.31-2.25(m,2H),2.24-2.15(m,1H),2.06-1.87(m,5H),1.86-1.69(m,6H),1.68-1.22(m,14H)。
实施例115、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)氧基)环己基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物115)的合成
步骤1、((1r,4r)-4-(吡啶-4-基氧基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(2)的合成
在0℃向((1s,4s)-4-羟基环己基)氨基甲酸叔丁酯(3g，13.93mmol)、吡啶-4-醇(1.33g，13.93mmol)和PPh3(5.48g，20.90mmol)在THF(60mL)中的溶液中加入DIAD(4.23g，20.90mmol，4.06mL)。将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示具有所需质量的峰(5％)。将混合物倒入冷HCl(0.5M，80mL)中并用EtOAc(10mL×3)洗涤。将Na2CO3水溶液加入到水层中调节pH至9，并用EtOAc(20mL×4)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并浓缩，得到((1r,4r)-4-(吡啶-4-)酰氧基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(1g，粗品)，其为白色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝293.1
步骤2、((1r,4r)-4-(哌啶-4-基氧基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(3)的合成
向((1r,4r)-4-(吡啶-4-基氧基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(1.1g，3.76mmol)在AcOH(20mL)中的溶液中加入Pd/C(300mg，3.76mmol，10％纯度)、PtO2(512.60mg，2.26mmol)。在H2(45PSI)下将混合物在55℃搅拌24小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及所需质量。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，将滤液浓缩。将粗产物用去离子水(40mL)溶解并冻干，得到N-[4-(4-哌啶基氧基)环己基]氨基甲酸叔丁酯(130mg，粗品，HOAC)，其为白色固体，其用于下一步直接迈步。MS(M+H)+＝299.2
步骤3、((1r,4r)-4-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)氧基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(4)的合成
将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(150.26mg，543.98μmol)、N-[4-(4-哌啶氧基)环己基]氨基甲酸叔丁酯(130mg，362.65μmol，HOAC)、KI(25.15mg，151.43μL)和TEA(110.09mg，1.09mmol，151.43μL)在DMSO(3mL)中的混合物在80℃搅拌16小时。LCMS显示N-[4-(4-哌啶氧基)环己基]氨基甲酸叔丁酯完全消耗以及具有所需质量的峰(24％)。将混合物倒入水(80mL)中并用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机相用盐水(10mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法(5g硅胶快速柱，0～30％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@60mL/min)纯化，得到((1r,4r)-4-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)氧基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(0.2g，粗品)，其为黄色油状物，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝555.2
步骤4、4-(4-(((1r,4r)-4-氨基环己基)氧基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(6)的合成
在25℃向((1r,4r)-4-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)氧基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(0.2g，360.60μmol)在DCM(5mL)中的溶液中加入TFA(1.54g，13.51mmol，1mL)。将所得混合物在25℃搅拌0.5小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(62％)。将混合物减压浓缩，得到4-(4-(((1r,4r)-4-氨基环己基)氧基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.3g，粗品，TFA)，其为棕色油状物，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝455.1
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)氧基)环己基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物115)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(60mg，128.91μmol)在DMF(1mL)中的溶液中加入HATU(58.82mg，154.70μmol)和DIPEA(99.97mg，773.49μmol，134.72μL)。将混合物在25℃搅拌10分钟。向混合物中加入4-(4-(((1r,4r)-4-氨基环己基)氧基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(102.61mg，180.48μmol，TFA)。将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示4-(4-(((1r,4r)-4-氨基环己基)氧基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮完全消耗以及具有所需质量的主峰。将混合物溶液用EtOAc(20mL)稀释，减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法(4g硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@60mL/min；0～50％甲醇/EtOAc洗脱液@60mL/min)纯化，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150x25 mmx 5um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：52％-82％,8min)纯化并冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)氧基)环己基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(50.7mg，54.53μmol，42.30％产率，97％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝902.5
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(br s,1H),8.29(s,1H),8.24(d,J＝13.3Hz,1H),8.03(s,1H),7.85(dd,J＝3.4,7.6Hz,1H),7.68(dd,J＝7.3,8.3Hz,1H),7.33(t,J＝7.5Hz,2H),7.18(d,J＝6.6Hz,1H),5.10(dd,J＝5.4,12.9Hz,1H),4.82(q,J＝8.1Hz,1H),4.07(t,J＝13.9Hz,2H),3.91(s,3H),3.81-3.60(m,2H),3.59-3.48(m,2H),3.44-3.38(m,1H),3.33(s,3H),3.07(t,J＝9.4Hz,2H),2.95-2.80(m,1H),2.64-2.53(m,2H),2.05-1.82(m,9H),1.76-1.55(m,8H),1.45-1.22(m,4H)。
实施例116、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)氧基)环己基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物116)的合成
按照与实施例115中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物116。
MS(M+H)+＝902.5,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.17-10.94(m,1H),8.29(s,1H),8.24(d,J＝13.3Hz,1H),8.03(s,1H),7.84(dd,J＝3.2,7.3Hz,1H),7.65(d,J＝8.5Hz,1H),7.32(s,1H),7.24(dd,J＝1.8,8.7Hz,1H),7.18(d,J＝6.6Hz,1H),5.06(dd,J＝5.4,12.9Hz,1H),4.89-4.75(m,1H),4.07(t,J＝13.8Hz,2H),3.91(s,3H),3.85-3.66(m,4H),3.45-3.39(m,1H),3.33-3.30(m,3H),3.24(t,J＝10.1Hz,2H),2.94-2.82(m,1H),2.63-2.53(m,2H),2.06-1.84(m,9H),1.76-1.57(m,6H),1.51-1.22(m,6H)。
实施例117、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(2-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)-2-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物117)的合成
步骤1、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(7)的合成
在25℃向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(1g，3.62mmol)在DMSO(10mL)中的溶液中加入TEA(1.83g，18.10mmol，2.52mL)和哌啶-4-基甲醇(416.96mg，3.62mmol)。将混合物在100℃搅拌16小时。LCMS显示试剂1完全消耗以及具有所需质量的主峰。将混合物倒入水(80mL)中并用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机相经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(1.7g，粗品)，其为黄色油状物，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝372.1
步骤2、(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基4-甲基苯磺酸酯(5)的合成
在25℃向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(1.7g，4.58mmol)、TEA(1.39g，13.73mmol，1.91mL)在DCM(40mL)中的溶液中加入TosCl(1.31g，6.87mmol)，将所得混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示试剂1完全消耗以及具有所需质量的主峰。将混合物减压浓缩。将粗产物通过快速硅胶色谱法(25g Sepa硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基4-甲基苯磺酸酯(1.5g，2.65mmol，57.99％产率，93％纯度)，其为黄色固体，将其直接用于下一步。MS(M+H)+＝526.1
步骤3、7-氨基-2-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(2)的合成
向7-氧代-2-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(300mg，1.25mmol)在MeOH(15mL)中的溶液中加入HOAc(75.28mg，1.25mmol，71.70μL)和NH4OAc(450.00mg，5.84mmol)。将混合物在25℃搅拌1小时。然后在25℃加入NaBH3CN(600.00mg，9.55mmol)，将所得混合物在25℃搅拌14小时。LCMS显示具有所需质量的峰(21％)。在0℃向反应混合物中缓慢加入饱和Na2CO3(饱和水溶液，15mL)，并用EtOAc 90mL(30mL×3)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩滤液，得到7-氨基-2-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(300mg，粗品)，其为浅黄色油状物。MS(M+H)+＝241.2
步骤4、7-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)-2-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(3)的合成
在25℃向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(550mg，1.23mmol)在DMF(8mL)中的溶液中加入EDCI(550.00mg，2.87mmol)、HOBt(320.83mg，2.37mmol)、DIPEA(680.17mg，5.26mmol，916.67μL)和7-氨基-2-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(295.43mg，1.23mmol)。在N2气氛下将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示具有所需质量的峰(51％)。将反应混合物用H2O(20mL)稀释，并用EtOAc(50mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL×3)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤。将滤液减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(Biotage；20g硅胶快速柱，20～80％ EtOAc:石油醚梯度洗脱液，60mL/min)纯化，得到7-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)-2-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(500mg，746.54μmol，产率60.73％)，其为浅黄色固体。MS(M+H)+＝670.4
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.30-8.24(m,2H),8.03(br d,J＝4.4Hz,1H),7.96(s,1H),7.54-7.44(m,2H),4.84-4.71(m,1H),4.13-4.01(m,2H),3.94(s,3H),3.79-3.70(m,1H),3.61-3.48(m,4H),3.33(s,3H),3.18(d,J＝5.3Hz,1H),1.97-1.83(m,4H),1.79-1.68(m,4H),1.62-1.49(m,5H),1.39(s,9H),1.37-1.31(m,2H)。
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(2-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)苯甲酰胺(4)的合成
在25℃向7-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)-2-氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(0.1g，149.31μmol)在DCM(5mL)中的溶液中加入TFA(3.08)g，27.01mmol，2.00mL)，将所得混合物在25℃搅拌0.5小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的主峰。将混合物减压浓缩，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b[1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(2-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)苯甲酰胺(0.1g，粗品，TFA盐)，其为棕色油状物，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝570.2
步骤6、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(2-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)-2-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物117)的合成
在25℃向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(2-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)苯甲酰胺(0.1g，146.27μmol，TFA盐)和(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基4-甲基苯磺酸酯(92.25mg，175.52μmol)在DMF(1mL)中的溶液中加入DIPEA(56.71mg，438.81μmol，76.43μL)和NaI(4.38mg，29.25μmol)。将反应混合物加热至60℃持续16小时。LCMS显示4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(2-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)苯甲酰胺的质量峰(44％)。加入另外的(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基4-甲基苯磺酸酯(46.13mg，87.76μmol)，将所得混合物在60℃再搅拌12小时。LCMS显示具有所需质量的峰(18％)。将混合物减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(5g硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@60mL/min；0～50％甲醇/EtOAc洗脱液@60mL/min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi Polar-RP100x25mmx4um；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：35％-55％,7min)纯化，将洗脱液冻干。将残余物通过制备型TLC(DCM:甲醇＝10:1；Rf＝0.4)和制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150x25mmx 5um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：45％-75％，8min)再纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(2-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)-2-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(11.5mg，12.21μmol，8.35％产率，98％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝923.5
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.04(br s,1H),8.28-8.22(m,2H),8.02(br d,J＝7.6Hz,1H),7.94(s,1H),7.55(dd,J＝7.0,8.6Hz,1H),7.51-7.44(m,2H),7.14-7.04(m,2H),5.11-5.01(m,1H),4.83-4.70(m,1H),4.04(t,J＝14.0Hz,2H),3.93(s,3H),3.80-3.67(m,1H),3.66-3.54(m,2H),3.53-3.43(m,1H),3.32-3.32(m,3H),2.99-2.77(m,6H),2.62-2.53(m,2H),2.43(br t,J＝6.8Hz,2H),2.26-2.15(m,1H),2.13-2.04(m,1H),2.02-1.83(m,5H),1.71(br s,4H),1.65-1.54(m,5H),1.49-1.30(m,6H)。
实施例118、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-氟苯甲酰胺(化合物118)的合成
步骤1、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-氟苯甲酸(2)的合成
在20℃向2-氯-9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(200mg，631.45μmol)和4-氨基-3-氟-苯甲酸(127.34mg，820.88μmol)在EtOH(3mL)和H2O(9mL)中的溶液中加入HCl(12M，115.77μL)，将所得混合物在100℃搅拌32小时。LCMS显示2-氯-9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮完全消耗并检测到79％的具有所需质量的峰。将反应混合物真空浓缩。将粗产物与EtOAc(1mL)和ACN(1mL)和DMF(1mL)在20℃一起研磨0.5小时并过滤。将滤饼真空干燥，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-氟苯甲酸(202mg，454.66μmol，72.00％产率，98％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝436.1
步骤2、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-氟苯甲酰胺(化合物118)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-氟苯甲酸(80mg，183.74μmol)在DMF(4mL)中的溶液中加入HATU(76.85mg，202.11μmol)和DIPEA(47.49mg，367.48μmol，64.01μL)。将混合物在20℃搅拌10分钟，加入4-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6二-氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(107.73mg，202.11μmol，HCl)在DMF(4mL)中的溶液和DIPEA(47.49mg，367.48μmol，64.01μL)，将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到83％的具有所需质量的峰。将反应混合物用H2O(20mL)稀释并用EtOAc(20mL×3)萃取。将有机层用盐水(20mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：3_Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：24％-54％,7min)纯化并通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge BEH C18150*25mm*5um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：36％-66％,min)再纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-氟苯甲酰胺(30.8mg，33.36μmol，18.16％产率，99％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝914.1
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.07(br s,1H),9.07(s,1H),8.28-8.18(m,2H),8.01(t,J＝8.4Hz,1H),7.76-7.62(m,3H),7.40-7.30(m,2H),5.09(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.74-4.63(m,1H),4.37(br d,J＝12.8Hz,1H),4.09-3.89(m,4H),3.30(br s,7H),3.13(br t,J＝12.1Hz,1H),2.93-2.81(m,1H),2.75-2.68(m,1H),2.65-2.54(m,10H),2.07-1.97(m,1H),1.92-1.76(m,4H),1.70-1.61(m,2H),1.60-1.46(m,5H),1.43-1.32(m,1H)。
实施例119、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-5-甲氧基-2-(三氟甲基)苯甲酰胺(化合物119)的合成
步骤1、5-氟-4-硝基-2-(三氟甲基)苯甲酸(2)的合成
在0℃向5-氟-2-(三氟甲基)苯甲酸(5g，24.03mmol)在H2SO4(25mL)中的溶液中滴加入HNO3(35.00g，388.81mmol，25.00mL，70％纯度)，将所得混合物在100℃搅拌12小时。TLC(石油醚/EtOAc＝1/1)显示大部分起始材料被消耗并且形成新斑点。将反应混合物倒入冰水(300mL)中并用EtOAc(150mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(300mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到5-氟-4-硝基-2-(三氟甲基)苯甲酸(6g，11.85mmol，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝254.1
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝10.69(br s,1H),8.43(d,J＝6.6Hz,1H),7.83(d,J＝10.1Hz,1H)。
步骤2、5-氟-4-硝基-2-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(3)的合成
在0℃向5-氟-4-硝基-2-(三氟甲基)苯甲酸(6g，11.85mmol)在MeOH(20mL)和THF(80mL)中的溶液中加入TMSCHN2(2M，17.78mL)，将所得混合物在20℃搅拌1小时。TLC(石油醚/EtOAc＝3/1)显示5-氟-4-硝基-2-(三氟甲基)苯甲酸被消耗并且形成新的点。将反应物浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(40g硅胶快速柱，0～20％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@80mL/min)纯化，得到5-氟-4-硝基-2-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(2.9g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝268.1
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.47(d,J＝6.8Hz,1H),7.75(d,J＝10.1Hz,1H),3.99(s,3H)。
步骤3、5-甲氧基-4-硝基-2-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(4)的合成
向5-氟-4-硝基-2-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(1g，1.87mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中加入NaOMe(5M的MeOH溶液，1mL)，将所得混合物在20℃搅拌2小时。TLC(石油醚/EtOAc＝5/1)显示5-氟-4-硝基-2-(三氟甲基)苯甲酸被消耗并且形成新的点。将混合物倒入水(50mL)中并用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到5-甲氧基-4-硝基-2-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(1.1g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝280.2
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.22(s,1H),7.48(s,1H),4.07(s,3H),3.92(s,3H)。
步骤4、4-氨基-5-甲氧基-2-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(5)的合成
在N2下向5-甲氧基-4-硝基-2-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(1.1g，1.97mmol)在MeOH(20mL)中的溶液中加入Pd/C(100mg，10％纯度)，在H2(15psi)下将所得混合物在20℃搅拌12小时。TLC(石油醚/EtOAc＝5/1)显示起始材料被消耗并且形成新的点。将混合物过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(10g硅胶快速柱，0～20％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@80mL/min)纯化，得到4-氨基-5-甲氧基-2-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(450mg，1.81mmol，产率91.66％)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝235.2
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.29(s,1H),7.04(s,1H),5.89(s,2H),3.86(s,3H),3.77(s,3H)。
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(7)的合成
向4-氨基-5-甲氧基-2-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(0.35g，1.40mmol)和2-氯-9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(444.88mg，1.40mmol)在二氧六环(10mL)中的溶液中加入TsOH(725.61mg，4.21mmol)，将所得混合物在100℃搅拌12小时。LCMS显示4-氨基-5-甲氧基-2-(三氟甲基)苯甲酸甲酯被消耗以及具有所需质量的峰(75％)。将混合物倒入盐水(50mL)中并用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶柱(石油醚/EtOAc＝1/1)纯化，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(500mg，944.36μmol，67.23％产率，100％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝530.1
步骤6、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(三氟甲基)苯甲酸(8)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(250mg，472.18μmol)在THF(2.5mL)、H2O(2.5mL)和MeOH(2.5mL)中的溶液中加入NaOH(2M的H2O溶液，2.5mL)，将所得混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料被消耗以及具有水合物质量的峰(69％)。浓缩有机溶剂，通过1M HCl调节残余物的pH＝6，过滤混悬液并收集滤饼，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(三氟甲基)苯甲酸(180mg，349.22μmol，73.96％产率)，其为黄色固体。MS(M+H2O+H)+＝534.1
步骤7、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-5-甲氧基-2-(三氟甲基)苯甲酰胺(化合物119)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(三氟甲基)苯甲酸(100mg，194.01μmol)和4-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(103.41mg，194.01μmol，HCl)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(110.65mg，291.02μmol)和DIPEA(75.22mg，582.04μmol，101.38μL)，将所得混合物在25℃搅拌1小时。LCMS显示4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(三氟甲基)苯甲酸被消耗以及具有所需质量的峰(81％)。将混合物倒入水(20mL)中并用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得混合物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：40％-70％,10min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-5-甲氧基-2-(三氟甲基)苯甲酰胺(72mg，68.81μmol，35.47％产率，95％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝994.2。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(s,1H),8.58(s,1H),8.40(d,J＝7.6Hz,1H),8.29(s,1H),8.11(s,1H),7.74-7.65(m,1H),7.35(t,J＝7.7Hz,2H),7.11(s,1H),5.09(dd,J＝5.3,12.8Hz,1H),4.92-4.73(m,1H),4.36-4.21(m,1H),4.05(t,J＝14.0Hz,2H),4.00-3.85(m,5H),3.35-3.28(m,6H),3.22-3.14(m,1H),2.93-2.76(m,2H),2.64-2.53(m,11H),2.07-1.81(m,5H),1.73-1.64(m,2H),1.63-1.50(m,4H),1.46-1.29(m,2H)。
实施例120、4-((9'-环戊基-5'-甲基-6'-氧代-5',6',8',9'-四氢螺[环丙烷-1,7'-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂]-2'-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物120)的合成
步骤1、1-((环戊氨基)甲基)环丙烷-1-羧酸乙酯(2)的合成
向1-(氨甲基)环丙烷-1-羧酸乙酯(1g，6.98mmol)和环戊酮(587.47mg，6.98mmol，618.39μL)在DCM(20mL)中的溶液中加入NaBH(OAc)3(3.70g，17.46mmol)。将混合物在25℃搅拌2小时。TLC(石油醚:EtOAc＝1:1)显示1-(氨基甲基)环丙烷-1-羧酸乙酯完全消耗，并且形成一个新斑点。将反应混合物用水(200mL)稀释并用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤。用浓HCl将滤液调节至PH＝4并减压浓缩，得到1-((环戊基氨基)甲基)环丙烷-1-羧酸乙酯(350mg，1.41mmol，20.23％产率，HCl盐)，其为白色固体。MS(M+H)+＝212.3
步骤2、1-(((2-氯-5-硝基嘧啶-4-基)(环戊基)氨基)甲基)环丙烷-1-羧酸乙酯(4)的合成
向1-((环戊基氨基)甲基)环丙烷-1-羧酸乙酯(350mg，1.66mmol)在丙酮(5mL)中的溶液中加入K2CO3(686.78mg，4.97mmol)和2,4-二氯-5-硝基嘧啶(321.30mg，1.66mmol)。将混合物在25℃搅拌3小时。LCMS显示具有所需质量的峰(11％)。将反应混合物用水(100mL)稀释并用EtOAc(30mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤。将滤液减压浓缩。将残余物通过柱色谱法(SiO2，石油醚/EtOAc＝1/0至100/5)纯化，得到1-(((2-氯-5-硝基嘧啶-4-基)(环戊基)氨基)甲基)环丙烷-1-羧酸乙酯(250mg，671.07μmol，40.51％产率，99％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝369.1
步骤3、2'-氯-9'-环戊基-8',9'-二氢螺[环丙烷-1,7'-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂]-6'(5'H)-酮(5)的合成
向1-(((2-氯-5-硝基嘧啶-4-基)(环戊基)氨基)甲基)环丙烷-1-羧酸乙酯(200mg，542.28μmol)在AcOH(4mL)中的溶液中加入Fe(151.42mg，2.71mmol)。将混合物在60℃搅拌2小时。LCMS显示1-(((2-氯-5-硝基嘧啶-4-基)(环戊基)氨基)甲基)环丙烷-1-羧酸乙酯完全消耗以及一个具有所需质量的主峰。过滤反应混合物，用EtOAc(50mL)洗涤滤饼。将滤液用盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过柱色谱法(SiO2，石油醚/EtOAc＝5/1至3/1)纯化，得到2'-氯-9'-环戊基-8',9'-二氢螺[环丙烷-1,7'-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂]-6'(5'H)-酮(150mg，507.24μmol，93.54％产率，99％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝293.2。
步骤4、2'-氯-9'-环戊基-5'-甲基-8',9'-二氢螺[环丙烷-1,7'-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂]-6'(5'H)-酮(6)的合成
向2'-氯-9'-环戊基-8',9'-二氢螺[环丙烷-1,7'-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂]-6'(5'H)-酮(120mg，409.89μmol)在DMF(3mL)中的溶液中加入K2CO3(141.62mg，1.02mmol)和MeI(87.27mg，614.83μmol，38.28μL)。将混合物在10℃搅拌2小时。LCMS显示2'-氯-9'-环戊基-8',9'-二氢螺[环丙烷-1,7'-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂]-6'(5'H)-酮被完全消耗以及一个具有所需质量的主峰。将反应混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过柱色谱法(SiO2，石油醚/EtOAc＝3/1至1/1)纯化，得到2'-氯-9'-环戊基-5'-甲基-8',9'-二氢螺[环丙烷-1,7'-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂]-6'(5'H)-酮(100mg，322.70μmol，78.73％产率，99％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝307.2
步骤5、4-((9'-环戊基-5'-甲基-6'-氧代-5',6',8',9'-四氢螺[环丙烷-1,7'-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂]-2'-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(7)的合成
将2'-氯-9'-环戊基-5'-甲基-8',9'-二氢螺[环丙烷-1,7'-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂]-6'(5'H)-酮(100mg，325.96μmol)、4-氨基-3-甲氧基苯甲酸(54.49mg，325.96μmol)、HCl(12M，59.76μL)在H2O(3mL)和EtOH(1mL)中的混合物在100℃搅拌10小时。LCMS显示2'-氯-9'-环戊基-5'-甲基-8',9'-二氢螺[环丙烷-1,7'-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂]-6'(5'H)-酮完全消耗以及具有所需质量的峰(约73％)。将反应混合物减压浓缩，得到4-((9'-环戊基-5'-甲基-6'-氧代-5',6',8',9'-四氢螺[环丙烷-1,7'-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂]-2'-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(100mg，粗品)，其为灰色固体。MS(M+H)+＝438.3
步骤6、4-((9'-环戊基-5'-甲基-6'-氧代-5',6',8',9'-四氢螺[环丙烷-1,7'-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂]-2'-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物120)的合成
向4-((9'-环戊基-5'-甲基-6'-氧代-5',6',8',9'-四氢螺[环丙烷-1,7'-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂]-2'-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(80mg，182.86μmol)和4-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(97.47mg，182.86μmol，HCl盐)在DMF(3mL)中的溶液中加入HATU(104.29mg，274.29μmol)和DIPEA(70.90mg，548.58μmol，95.55μL)。将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示4-((9'-环戊基-5'-甲基-6'-氧代-5',6',8',9'-四氢螺[环丙烷-1,7'-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂]-2'-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸完全消耗以及具有所需质量的峰(71％)。将反应混合物用H2O(50mL)稀释并用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤。将滤液减压浓缩。将残余物通过柱色谱法(SiO2、MeOH/EtOAc＝0/1至1/10)纯化，然后通过制备型HPLC(中性条件：柱：Waters Xbridge 150x 25mm x 5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：36％-66％，10min)纯化，得到4-((9'-环戊基-5'-甲基-6'-氧代-5',6',8',9'-四氢螺[环丙烷-1,7'-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂]-2'-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(30.4mg，32.52μmol，17.79％产率，98％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝916.1
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(s,1H),8.41(d,J＝8.3Hz,1H),8.10-8.05(m,1H),7.99(s,1H),7.79-7.67(m,2H),7.53-7.45(m,2H),7.43-7.32(m,2H),5.11(dd,J＝5.4,12.7Hz,1H),4.93-4.82(m,1H),4.47-4.36(m,1H),4.14-4.02(m,1H),3.95(s,4H),3.48(s,2H),3.32-3.30(m,4H),3.17(s,4H),2.97-2.83(m,2H),2.77-2.71(m,1H),2.66-2.52(m,9H),2.09-2.00(m,1H),1.94-1.82(m,4H),1.74-1.66(m,2H),1.64-1.57(m,2H),1.56-1.40(m,4H),0.93-0.89(m,2H),0.70-0.65(m,2H)
实施例121、4-((9-环戊基-5,7,7-三甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物121)的合成
步骤1、3-氨基-2,2-二甲基丙酸乙酯(2)的合成
在N2气氛下向2-氰基-2-甲基-丙酸乙酯(15g，106.26mmol)在EtOH(150mL)和NH3.H2O(15mL)中的溶液中加入雷尼镍(18.21g，212.51mmol)。将混悬液脱气并用H2鼓吹3次。在H2(50Psi)下将混合物在20℃搅拌16小时。TLC(SiO2，石油醚:EtOAc＝2:1)显示起始材料完全消耗并且检测到一个新斑点。将反应混合物用EtOH(500mL)稀释并过滤。将滤液真空浓缩，得到3-氨基-2,2-二甲基丙酸乙酯(13.6g，粗品)，其为无色油状物。MS(M+H)+＝146.2
步骤2、3-(环戊基氨基)-2,2-二甲基丙酸乙酯(3)的合成
在20℃向3-氨基-2,2-二甲基丙酸乙酯(12.6g，86.78mmol)和环戊酮(8.76g，104.13mmol，9.22mL)在THF(126mL)和AcOH(12.6mL)中的溶液中加入NaBH(OAc)3(27.59g，130.17mmol)，将所得混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及所需质量。TLC(SiO2，石油醚:EtOAc＝3:1)显示起始材料完全消耗并且形成两个新斑点。将反应混合物用H2O(150mL)稀释并用EtOAc(150mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(150mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到3-(环戊基氨基)-2,2-丙酸二甲基乙酯(7.6g，35.63mmol，产率41.06％)，其为白色固体。MS(M+H)+＝214.3
步骤3、3-((2-氯-5-硝基嘧啶-4-基)(环戊基)氨基)-2,2-二甲基丙酸乙酯(4)的合成
在0℃向3-(环戊基氨基)-2,2-二甲基丙酸乙酯(6.6g，30.94mmol)和2,4-二氯-5-硝基-嘧啶(9.00g，46.41mmol)在MTBE(70mL)中的溶液中滴加入K2CO3(17.10g，123.76mmol)在H2O(35mL)中的溶液，将所得混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的峰(60％)。将反应混合物与另一批次(1g规模)合并进行后处理。将反应混合物用H2O(400mL)稀释并用EtOAc(400mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到3-((2-氯-5-硝基嘧啶-4-基)(环戊基)氨基)-2,2-二甲基丙酸乙酯(8.6g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝371.1
步骤4、2-氯-9-环戊基-7,7-二甲基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(5)的合成
在20℃向3-((2-氯-5-硝基嘧啶-4-基)(环戊基)氨基)-2,2-二甲基丙酸乙酯(8.6g，23.19mmol)在AcOH(80mL)中的溶液中加入Fe(5.18g，92.76mmol)，将所得混合物在60℃搅拌2小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(88％)。将反应混合物真空浓缩。将残余物用H2O(100mL)稀释并用EtOAc(100mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到2-氯-9-环戊基-7,7-二甲基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(7.2g，粗品)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝295.2
步骤5、2-氯-9-环戊基-5,7,7-三甲基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(6)的合成
在20℃向2-氯-9-环戊基-7,7-二甲基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(7.2g，24.43mmol)在DMF(80mL)中的溶液中加入K2CO3(10.13g，73.28mmol)和MeI(4.16g，29.31mmol，1.82mL)，将所得混合物在20℃搅拌4小时。LCMS显示残余起始材料的峰(23％)以及具有所需质量的峰(53％)。加入另外的MeI(2.08g，14.66mmol，912.33μL)，将所得混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(56％)。将反应混合物用H2O(160mL)稀释并用EtOAc(160mL×3)萃取。将有机层用盐水(160mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(40g硅胶快速柱，0～15％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到2-氯-9-环戊基-5,7,7-三甲基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(2.7g，8.39mmol，34.36％产率，96％纯度)，其为橙色固体。MS(M+H)+＝309.2
步骤6、4-((9-环戊基-5,7,7-三甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(7)的合成
在20℃向2-氯-9-环戊基-5,7,7-三甲基-5,7,8,9-四氢-6H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6-酮(300mg，971.48μmol)和4-氨基-3-甲氧基-苯甲酸(211.11mg，1.26mmol)在EtOH(3mL)和H2O(9mL)中的溶液中加入HCl(12M，178.11μL)，将所得混合物在100℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(68％)。将反应混合物真空浓缩。将粗产物与混合溶剂(EtOAc/EtOH/DMF(9mL，1/1/1))在25℃一起研磨0.5小时并过滤。将滤饼真空干燥，得到4-((9-环戊基-5,7,7-三甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(286mg，598.67μmol，61.62％产率，92％纯度)，其为灰白色固体。MS(M+H)+＝440.2
步骤7、4-((9-环戊基-5,7,7-三甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物121)的合成
向4-((9-环戊基-5,7,7-三甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(80mg，182.02μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(76.13mg，200.22μmol)和DIPEA(47.05mg，364.04μmol，63.41μL)。将混合物在20℃搅拌10分钟，加入4-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(97.02mg，182.02μmol，HCl)在DMF(2mL)中的溶液和DIPEA(47.05mg，364.04μmol，63.41μL)，将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(73％)。将反应混合物用H2O(15mL)稀释并用EtOAc(15mL×3)萃取。将有机层用盐水(15mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Unisil 3-100C18 Ultra 150*50mm*3μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：8％-38％,10min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-5,7,7-三甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(78mg，80.10μmol，44.00％产率，99％纯度，FA)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝918.2
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.10(s,1H),8.37(d,J＝8.3Hz,1H),8.29(s,1H),8.14(br d,J＝7.6Hz,1H),7.98(s,1H),7.74-7.66(m,2H),7.51-7.44(m,2H),7.35(t,J＝7.4Hz,2H),5.23-5.13(m,1H),5.09(dd,J＝5.5,12.7Hz,1H),4.40(br d,J＝11.9Hz,1H),4.11-4.00(m,1H),3.94(s,3H),3.30(br s,6H),3.21-3.08(m,5H),2.93-2.81(m,1H),2.66-2.54(m,10H),2.08-1.96(m,1H),1.93-1.78(m,4H),1.77-1.67(m,2H),1.61(br s,4H),1.52-1.33(m,2H),1.09(s,6H)。
实施例122、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)乙酰基)哌啶-3-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物122)的合成
按照与实施例81中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物122。
MS(M+H)+＝912.6,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.89-10.79(m,1H),8.30-8.23(m,2H),7.91(d,J＝6.3Hz,1H),7.86(s,1H),7.67(t,J＝7.7Hz,1H),7.52-7.47(m,2H),7.36-7.28(m,2H),5.05(dd,J＝5.4,12.7Hz,1H),4.81-4.70(m,1H),4.00(br t,J＝14.1Hz,4H),3.95(s,3H),3.40-3.20(m,12H),2.93-2.81(m,1H),2.69-2.62(m,6H),2.09-2.03(m,1H),2.00-1.94(m,3H),1.84-1.77(m,1H),1.75-1.69(m,2H),1.67-1.57(m,6H)。
实施例123、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-3-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物123)的合成
步骤1、(1-丙烯酰哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(3)的合成
向哌啶-3-基氨基甲酸叔丁酯(500mg，2.50mmol)在DCM(5mL)中的溶液中加入DIPEA(967.98mg，7.49mmol，1.30mL)，然后在0℃缓慢加入3-氯丙酰氯(633.97mg，4.99mmol，480.28μL)，将混合物在0℃搅拌0.5小时。LCMS显示具有所需质量的峰(38％)。将混合物减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(5g 硅胶快速柱，0～30％EtOAc/石油醚梯度洗脱液@20mL/min)纯化，得到(1-丙烯酰哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(530mg，1.60mmol，产率64.27％，纯度77％)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝255.1
步骤2、(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(5)的合成
向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(480.mg，1.27mmol，HCl盐)在ACN(10mL)中的溶液中加入DBU(447.96mg，2.94mmol，443.52μL)。然后加入(1-丙烯酰哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(480mg，1.45mmol，77％纯度)在ACN(5mL)中的溶液，将混合物在20℃搅拌14小时。LCMS显示出所需质量。将混合物用H2O(10mL)和EtOAc(10mL)稀释，然后用EtOAc(15mL×3)萃取。将合并的有机层减压浓缩。将残余物通过柱色谱法(SiO2，EtOAc/甲醇＝1/0至10/1)纯化，得到(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(160mg，260.11μmol，26.66％产率，97％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝597.3
步骤3、4-(4-(3-(3-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(6)的合成
向(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(160mg，268.15μmol)在二氧六环(2mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，2mL)。将混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示出所需质量。将混合物减压浓缩，得到4-(4-(3-(3-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(130mg，粗品，HCl盐)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝497.2
步骤4、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-3-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物123)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(80mg，178.80μmol)在DMF(1mL)中的溶液中加入HATU(101.71mg，267.51μmol)和DIPEA(44.52mg，344.47μmol，60.00μL)，将混合物在25℃搅拌15分钟。然后加入4-(4-(3-(3-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(130mg，243.89μmol，HCl盐)和DIPEA(44.52mg，344.47μmol，60μL)在DMF(1mL)中的溶液，将混合物在25℃搅拌1小时。将混合物用H2O(10mL)稀释并用EtOAc(10mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压浓缩。将粗品通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：39％-69％,10min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-3-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(54mg，54.23μmol，30.33％产率，93％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝926.1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.82(br s,1H),8.28(d,J＝8.3Hz,1H),8.25(s,1H),7.98-7.89(m,1H),7.86(s,1H),7.66(t,J＝7.8Hz,1H),7.54-7.46(m,2H),7.34-7.27(m,2H),5.05(dd,J＝5.6,12.6Hz,1H),4.81-4.71(m,1H),4.05-3.94(m,6H),3.89-3.78(m,1H),3.34(s,3H),3.33-3.28(m,4H),2.92-2.82(m,1H),2.71-2.66(m,2H),2.65-2.52(m,9H),2.11-1.90(m,5H),1.85-1.35(m,10H)。
实施例124、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物124)的合成
步骤1、(1-亚硝基哌啶-4-基)甲醇(2)的合成
在0℃向4-哌啶基甲醇(5g，43.41mmol)在H2O(40mL)中的溶液中分批加入NaNO2(5.99g，86.83mmol)。然后在0℃滴加入AcOH(7.82g，130.24mmol)。将所得混合物缓慢升温至25℃并搅拌4小时。TLC(EtOAc：甲醇＝10:1，Rf＝0.4)显示形成在254nm UV下有强吸收的大新斑点。LCMS显示具有所需质量的主峰。用NaHCO3溶液(约150mL)将反应溶液的pH调节至8。将所得混合物用EtOAc/甲醇(10:1,50mL x 10)萃取(注：该产物在水中具有良好的溶解度，这使得萃取变得困难)。将合并的有机层经Na2SO4干燥并浓缩，得到(1-亚硝基哌啶-4-基)甲醇(6.5g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝145.2。
步骤2、(1-氨基哌啶-4-基)甲醇(3)的合成
在0℃向(1-亚硝基哌啶-4-基)甲醇(6.5g，45.09mmol)在MeOH(60mL)中的溶液中加入Zn(15.57g，238.11mmol)，然后在0℃滴加入AcOH(40.61g，676.28mmol)。将所得混合物缓慢升温至25℃并搅拌1小时。TLC(EtOAc/甲醇＝10:1，Rf＝0)显示起始材料完全消耗。LCMS显示起始材料完全消耗以及所需质量。将反应混合物通过硅藻土垫过滤并用MeOH(200mL)洗涤。将滤液浓缩，得到黄色固体。将黄色固体用MeOH(80mL)处理并搅拌30分钟，形成白色固体(注：白色固体是无机盐)。过滤混合物，浓缩滤液，得到(1-氨基哌啶-4-基)甲醇(16g，粗品)，其为黄色油状物。该粗产物直接用于下一步。MS(M+H)+＝131.2。
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ＝3.43(d,J＝6.2Hz,2H),3.42-3.37(m,2H),2.78(br t,J＝11.4Hz,2H),1.91(br d,J＝14.2Hz,2H),1.68-1.58(m,1H),1.52-1.41(m,2H)
步骤3、(4-(羟甲基)哌啶-1-基)氨基甲酸叔丁酯(4)的合成
在25℃向(1-氨基哌啶-4-基)甲醇(14g，107.54mmol)在THF(100mL)中的溶液中加入NaOH(12.90g，322.61mmol)在H2O(60mL)中的溶液，然后加入Boc2O(23.47g，107.54mmol，24.71mL)。将所得混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示出所需质量。过滤反应混合物。LCMS显示滤饼中没有产物。将水(100mL)加入到滤液中，用EtOAc(60mL×4)萃取混合物。将合并的有机层经Na2SO4干燥并浓缩，得到粗产物。将粗产物用石油醚(50mL)处理并搅拌30分钟。过滤混合物。收集滤饼并干燥，得到黄色固体，将其用石油醚/EtOAc(30mL，10:1)处理30分钟。过滤混合物。收集滤饼并干燥，得到(4-(羟甲基)哌啶-1-基)氨基甲酸叔丁酯(4g，17.37mmol，16.15％产率)，其为白色固体。MS(M+Na)+＝253.1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.87(s,1H),4.43(s,1H),3.23-3.19(m,2H),2.86-2.81(m,2H),2.45-2.40(m,2H),1.63-1.58(m,2H),1.36(s,9H),1.26-1.21(m,1H),1.19-1.10(m,2H)。
步骤4、(1-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-4-基)甲基4-甲基苯磺酸酯(5)的合成
在25℃向(4-(羟甲基)哌啶-1-基)氨基甲酸叔丁酯(1g，4.34mmol)和TsCl(1.24g，6.51mmol)在DCM(20mL)中的溶液中加入TEA(1.32g，13.03mmol)和DMAP(53.05mg，434.21μmol)。将所得混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及所需质量。将反应溶液浓缩，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法(20g硅胶柱，EtOAc/石油醚＝10-35％，80mL/min)纯化，得到(1-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-4-基)甲基4-甲基苯磺酸酯(500mg，1.22mmol，28.15％产率，94％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝384.9。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.77(d,J＝8.0Hz,2H),7.35(d,J＝8.0Hz,2H),5.42-5.40(m,1H),3.83(d,J＝8.0Hz,2H),3.15-3.07(m,2H),2.46(s,3H),2.38-2.32(m,2H),1.71-1.67(m,2H),1.46-1.45(m,1H),1.44(s,9H),1.41-1.35(m,2H)。
步骤5、(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)氨基甲酸叔丁酯(6)的合成
在25℃向(1-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-4-基)甲基4-甲基苯磺酸酯(350mg，910.30μmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(378.02mg，910.30μmol，2HCl)在DMF(6mL)中的溶液中加入DIPEA(470.60mg，3.64mmol)和NaI(27.29mg，182.06μmol)。将所得混合物在60℃搅拌14小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及所需质量。将反应混合物倒入盐水(20mL)中。将混合物用EtOAc(10mL×4)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法(10g硅胶柱，EtOAc/石油醚＝20-70％，50mL/min)纯化，得到(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)氨基甲酸叔丁酯(80mg，粗品)，其为黄色固体，和(4-基)((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)氨基甲酸叔丁酯(180mg，粗品)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝555.3。
步骤6、4-(4-((1-氨基哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(7)的合成
将(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)氨基甲酸叔丁酯(90mg，162.27μmol)和TFA(770.00mg，6.75mmol，0.5mL)在DCM(2mL)中的溶液在25℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及所需质量。将反应溶液浓缩，得到4-(4-((1-氨基哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(90mg，粗品，TFA)，其为黄色油状物。该粗产物直接用于下一步。MS(M+H)+＝455.3。
步骤7、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物124)的合成
在25℃向4-(4-((1-氨基哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(90mg，粗品，TFA)、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(63.75mg，142.47μmol)和DIPEA(122.75mg，949.79μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(78.25mg，205.79μmol)。将所得混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将反应溶液倒入盐水(12mL)中。将所得混合物用EtOAc(5mL×4)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并浓缩，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法(4g硅胶柱，EtOAc/石油醚＝20-100％，然后MeOH/EtOAc＝20％，40mL/min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：44％-64％，10min)纯化并冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(10.6mg，11.30μmol，7.14％产率，94.2％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝884.4。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.47(d,J＝8.4Hz,1H),8.41-8.17(m,1H),8.06(s,1H),7.76(s,1H),7.64-7.56(m,1H),7.41(d,J＝6.7Hz,2H),7.23(s,1H),7.18(d,J＝8.4Hz,1H),7.04-6.81(m,1H),4.97(dd,J＝5.4,12.3Hz,1H),4.82(q,J＝8.4Hz,1H),3.98(s,3H),3.90(t,J＝13.4Hz,2H),3.41(s,3H),3.38-3.34(m,4H),3.32-3.34(m,1H),3.07-2.96(m,1H),2.94-2.81(m,2H),2.79-2.57(m,7H),2.50-2.38(m,2H),2.37-2.28(m,1H),2.20-2.00(m,5H),1.74-1.66(m,4H),1.64-1.54(m,4H)。
实施例125、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)氧基)甲基)苯基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物125)的合成
步骤1、4-((4-硝基苄基)氧基)哌啶(2)的合成
在0℃向4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(2g，9.94mmol)和4-硝基苯甲醛(1.50g，9.94mmol)在DCM(20mL)中的溶液中加入TESiH(3.47g，29.81mmol，4.76mL)。然后在0℃1小时后将TMSOTf(4.42g，19.87mmol，3.59mL)加入到混合物中。将混合物在25℃搅拌1小时。LCMS显示检测到35％的所需质量。将混合物溶液减压浓缩，得到4-((4-硝基苄基)氧基)哌啶(8g，粗品)，其为黄色油状物，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝237.1
步骤2、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(4-((4-硝基苄基)氧基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(4)的合成
在25℃向4-((4-硝基苄基)氧基)哌啶(8g，粗品)在DMSO(20mL)中的溶液中加入TEA(3.60g，35.55mmol，4.95mL)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(3.27g，11.85mmol)。将混合物在100℃搅拌12小时。LCMS显示检测到约35％的所需质量。将反应混合物用水(100mL)稀释并用EtOAc(100mL×3)萃取。将合并的有机层用饱和盐水(150mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法(80g 硅胶快速柱，0～70％石油醚:EtOAc梯度洗脱液@80mL/min)纯化，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(4-((4-硝基苄基)氧基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(1.82g，3.57mmol，30.12％产率，96.6％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝493.1
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(s,1H),8.22(d,J＝8.4Hz,2H),7.70-7.66(m,1H),7.65-7.63(m,2H),7.34(t,J＝8.4Hz,2H),5.11-5.07(m,1H),4.72(s,2H),3.69-3.66(m,1H),3.57-3.53(m,2H),3.13-3.08(m,2H),2.88-2.82(m,1H),2.63-2.60(m,1H),2.04-1.98(m,4H),1.79-1.72(m,2H)。
步骤3、4-(4-((4-氨基苄基)氧基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(5)的合成
在25℃向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(4-((4-硝基苄基)氧基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.3g，609.16μmol)在H2O(5mL)和EtOH(10mL)中的溶液中加入Fe(204.11mg，3.65mmol)和NH4Cl(195.51mg，3.65mmol)。将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示检测到具有所需质量的主峰。将反应混合物用水(30mL)稀释并用EtOAc(50mL×5)萃取。将合并的有机层用饱和盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到4-(4-((4-氨基苄基)氧基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.2g，327.35μmol，产率53.74％，纯度75.7％)，其为黄色油状物，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝463.2
步骤4、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)氧基)甲基)苯基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物125)的合成
在25℃向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(80mg，171.89μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(130.71mg，343.77μmol)和DIPEA(66.65mg，515.66μmol，89.82μL)。然后0.5小时后将4-(4-((4-氨基苄基)氧基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(105.02mg，171.89μmol，75.7％纯度)加入到混合物中。将混合物在25℃搅拌1小时。LCMS显示检测到约27％的所需质量。将反应混合物用水(30mL)稀释并用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层用饱和盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱(20g 硅胶快速柱，0～80％石油醚:EtOAc梯度@60mL/min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150x 25mm x 5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：58％-88％，10min)纯化，然后冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)氧基)甲基)苯基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(57mg，58.45μmol，34.00％产率，93.3％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝910.4。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(br s,1H),10.15(s,1H),8.32-8.29(m,2H),8.10(s,1H),7.70-7.65(m,3H),7.36-7.32(m,4H),7.27(d,J＝6.8Hz,1H),5.11-5.06(m,1H),4.85-4.81(m,1H),4.52(s,2H),4.07(t,J＝14Hz,2H),3.94(s,3H),3.62-3.60(m,1H),3.55-3.52(m,2H),3.33(s,3H),3.11-3.06(m,2H),2.90-2.82(m,1H),2.60-2.53(m,2H),2.03-1.96(m,5H),1.72-1.61(m,8H)。
实施例126、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)哌啶-3-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物126)的合成
按照与实施例60中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物126。
MS(M+H)+＝883.4,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.05(s,1H),8.31-8.21(m,2H),8.07-7.99(m,1H),7.95(s,1H),7.60-7.42(m,3H),7.14-7.05(m,2H),5.11-5.01(m,1H),4.83-4.70(m,1H),4.10-3.99(m,2H),3.98-3.87(m,4H),3.70-3.53(m,2H),3.53-3.45(m,1H),3.32(s,3H),2.97-2.72(m,3H),2.62-2.52(m,3H),2.42-2.34(m,2H),2.28-2.18(m,1H),2.15-2.08(m,1H),2.02-1.79(m,6H),1.75-1.66(m,3H),1.65-1.46(m,8H),1.44-1.29(m,1H)。
实施例127、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物127)的合成
按照与实施例60中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物127。
MS(M+H)+＝912.5,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(s,1H),8.23(s,1H),8.15-8.13(m,1H),8.00(s,1H),7.74(d,J＝8.0Hz,1H),7.68(d,J＝8.0Hz,1H),7.34(d,J＝2.0Hz,1H),7.27-7.24(m,1H),7.02(d,J＝1.6Hz,1H),6.96-6.94(m,1H),5.09-5.04(m,1H),4.72-4.68(m,1H),4.05-3.85(m,7H),3.49-3.47(m,4H),3.31-3.30(m,7H),2.99(s,2H),2.91-2.83(m,1H),2.61-2.56(m,5H),2.03-1.97(m,1H),1.92-1.85(m,2H),1.77-1.62(m,4H),1.60-1.44(m,6H)。
实施例128、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1s,4s)-4-((2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)乙基)(甲基)氨基)环己基)-3-甲氧基苯甲酰胺(顺式)(化合物128)的合成
步骤1、((1s,4s)-4-(二苄氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(顺式)(2A)的合成
将((1s,4s)-4-氨基环己基)氨基甲酸叔丁酯(顺式)(600.00mg，2.80mmol)、(溴甲基)苯(1.20g，7.00mmol，831.35μL)和K2CO3(1.55g，11.20mmol)在ACN(30mL)中的混合物在60℃搅拌16小时。LCMS显示((1s,4s)-4-氨基环己基)氨基甲酸叔丁酯(顺式)被消耗并且具有所需质量的峰(41％)。过滤混合物，用EtOAc(50mL)和ACN(30mL)洗涤滤饼，真空浓缩滤液，得到((1s,4s)-4-(二苄基氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(顺式)(1.1g，粗品)，其为白色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝395.2
步骤2、((1s,4s)-4-(二苄氨基)环己基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(顺式)(3A)的合成
在5℃向((1s,4s)-4-(二苄氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(顺式)(1g，2.53mmol)在THF(25mL)中的溶液中加入NaH(253.45mg，6.34mmol，60％纯度)，将混悬液在5℃搅拌30分钟。向混合物中加入碘甲烷(467.67mg，3.29mmol，205.12μL，1.3eq)，将混合物在25℃搅拌1.5小时。TLC(SiO2，石油醚:EtOAc＝10:1)显示起始材料被完全消耗并且检测到一个具有较低极性的主要新斑点。将混合物倒入0℃的冰水(60mL)中，然后用EtOAc(60mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(12g 硅胶快速柱，2～3％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，将洗脱液真空浓缩，得到((1s,4s)-4-(二苄氨基)环己基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(顺式)(820mg，2.01mmol，79.18％产率)，其为无色油状物。MS(M+H)+＝409.6
步骤3、(1s,4s)-N1,N1-二苄基-N4-甲基环己烷-1,4-二胺(顺式)(4)的合成
向((1s，4s)-4-(二苄氨基)环己基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(顺式)(820.00mg，2.01mmol)在二氧六环(5mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，10mL)，将混合物在25℃搅拌2小时。TLC(SiO2，石油醚:EtOAc＝20:1)显示起始材料已完全消耗，并且检测到一个具有较大极性的主要新斑点。将反应混合物真空浓缩。将残余物用H2O(30mL)稀释，向混合物中加入饱和NaHCO3溶液以调节pH>7，将所得混合物用EtOAc(30mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到(1s,4s)-N1,N1-二苄基-N4-甲基环己烷-1,4-二胺(顺式)(545mg，粗品)，其为棕色固体。MS(M+H)+＝309.2
步骤4、4-(4-(2,2-二乙氧基乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(2)的合成
向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(600mg，1.58mmol，HCl盐)和2-溴-1,1-二乙氧基乙烷(936.42mg，4.75mmol，714.83μL)在DMF(12mL)中的溶液中加入DIPEA(1.02g，7.92mmol，1.38mL)，将混合物在80℃搅拌16小时。LCMS显示2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮完全消耗以及具有所需质量的峰(77％)。将混合物与另一批次(200mg)合并。将所得混合物用H2O(100mL)稀释并用EtOAc(60mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL×5)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物与MTBE(15mL)和EtOAc(5mL)的混合物一起研磨10分钟，过滤混悬液，用MTBE(10mL)洗涤滤饼，收集滤饼并干燥，得到4-(4-(2,2-二乙氧基乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(679mg，1.48mmol，93.50％产率)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝459.1
步骤5、2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)乙醛(3)的合成
向4-(4-(2,2-二乙氧基乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(620mg，1.35mmol)在THF(5mL)中的溶液中加入HCl(1M，0.35mL)和HCl/二氧六环(4M，5mL)，将混合物在25℃搅拌3小时。LCMS显示残余25％的起始材料以及具有所需质量的峰(74％)。将反应混合物倒入冰水(100mL)中，加入NaHCO3溶液调节pH>7，将所得混合物用EtOAc(100mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)乙醛(550mg)，其为黄色固体，其直接使用。MS(M+H2O+H)+＝403.0
步骤6、4-(4-(2-(((1s,4s)-4-(二苄氨基)环己基)(甲基)氨基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(顺式)(5)的合成
向(1s,4s)-N1,N1-二苄基-N4-甲基环己烷-1,4-二胺(顺式)(110.34mg，357.72μmol)在DCE(10mL)中的溶液中加入2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)乙醛(275mg，715.43μmol)的DMF(2mL)和AcOH(4.30mg，71.54μmol，4.09μL)中的溶液，将混合物在25℃搅拌30分钟，在5℃向混合物中加入NaBH(OAc)3(454.89mg，2.15mmol)，将所得混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)乙醛完全消耗并且检测到所需质量。将反应混合物用H2O(100mL)稀释，向混合物中加入NaHCO3溶液调节pH>7，将混合物用EtOAc(100mL×4)稀释。向合并的有机层中加入FA调节pH<7，将有机相在35℃真空浓缩。将残余物与另一批次合并以进一步纯化。用DMF稀释残余物，向混合物中加入DIPEA调节pH>7，过滤所得混合物，将滤液通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge C18 150*50mm*10μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：62％-92％,11min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Waters XbridgeC18 150*50mm*10μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：50％-80％，11min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-(4-(2-(((1s,4s)-4-(二苄氨基)环己基)(甲基)氨基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(顺式)(135mg，199.45μmol，27.88％产率)，其为绿色固体。MS(M+H)+＝677.2
步骤7、4-(4-(2-(((1s,4s)-4-氨基环己基)(甲基)氨基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(顺式)(6)的合成
在N2气氛下向4-(4-(2-(((1s,4s)-4-(二苄基氨基)环己基)(甲基)氨基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(顺式)(135mg，199.45μmol)在CF3CH2OH(20mL)中的溶液中加入HCl(12M，8.31μL)、Pd(OH)2/C(100mg，10％纯度)和Pd/C(100mg，10％纯度)，将混悬液在真空下脱气并用H2鼓吹数次。在H2(15psi)下将混合物在60℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到所需质量。过滤反应混合物，滤饼用CF3CH2OH(30mL)洗涤，滤液真空浓缩，得到4-(4-(2-(((1s,4s)-4-氨基环己基)(甲基)氨基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(顺式)(130mg，HCl盐)，其为黄色胶状物，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝497.1
步骤8、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1s,4s)-4-((2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)乙基)(甲基)氨基)环己基)-3-甲氧基苯甲酰胺(顺式)(化合物128)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(80mg，178.80μmol)在DMF(3mL)中的溶液中加入HATU(101.98mg，268.20μmol)和DIPEA(115.54mg，893.99μmol，155.72μL)，将混合物在25℃搅拌15分钟，向混合物中加入4-(4-(2-(((1s,4s)-4-氨基环己基)(甲基)氨基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(顺式)(128.67mg，粗品，HCl盐)，将混合物在25℃搅拌1小时。LCMS显示4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸完全消耗以及具有所需质量的峰(35％)。向反应混合物中加入CH3COOH调节pH<7。将混合物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex C18 75*30mm*3μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：18％-48％，7min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：48％-78％,8min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1s,4s)-4-((2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)乙基)(甲基)氨基)环己基)-3-甲氧基苯甲酰胺(顺式)(7.3mg，7.33μmol，4.10％产率，93％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝926.4
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.21-10.95(m,1H),8.31-8.19(m,2H),8.02(d,J＝7.1Hz,1H),7.95(s,1H),7.73-7.64(m,1H),7.49(dd,J＝2.6,4.4Hz,2H),7.33(dd,J＝7.9,10.5Hz,2H),5.08(dd,J＝5.6,12.7Hz,1H),4.82-4.69(m,1H),4.03(t,J＝13.9Hz,2H),3.93(s,4H),3.32(s,3H),3.29(dd,J＝2.2,3.6Hz,4H),2.91-2.82(m,1H),2.65-2.55(m,8H),2.47-2.35(m,3H),2.24(s,3H),2.06-1.99(m,1H),1.97-1.90(m,2H),1.87-1.75(m,4H),1.74-1.67(m,2H),1.60-1.54(m,4H),1.55-1.44(m,4H)。
实施例129、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-((2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)乙基)(甲基)氨基)环己基)-3-甲氧基苯甲酰胺(反式)(化合物129)的合成
步骤1、((1r,4r)-4-(二苄氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(反式)(2)的合成向((1r,4r)-4-氨基环己基)氨基甲酸叔丁酯(反式)(5.00g，23.33mmol)在ACN(80mL)中的溶液中加入BnBr(7.98g，46.66mmol，5.54mL)和K2CO3(12.90g，93.33mmol)。将混合物在60℃搅拌5小时。LCMS显示((1r,4r)-4-氨基环己基)氨基甲酸叔丁酯(反式)完全消耗以及具有所需质量的峰(约53％)。过滤反应混合物，用ACN(100mL)洗涤滤饼，真空浓缩滤液，得到((1r,4r)-4-(二苄氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(反式)(6g，14.90mmol，63.88％产率，98％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝395.1
步骤2、((1r,4r)-4-(二苄氨基)环己基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(反式)(3)的合成
在0℃向((1r,4r)-4-(二苄氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(反式)(5.90g，14.95mmol)在THF(70mL)中的溶液中加入NaH(897.14mg，22.43mmol，60％纯度)，搅拌15分钟后，在0℃加入MeI(3.18g，22.43mmol，1.40mL)。将所得混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示((1r,4r)-4-(二苄氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(反式)完全消耗以及一个具有所需质量的主峰。在0℃通过加入水(400mL)来猝灭反应混合物，然后用EtOAc(100mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过柱色谱法(SiO2，石油醚/EtOAc＝1/0至3/10)纯化，得到((1r,4r)-4-(二苄基氨基)环己基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(反式)(5.2g，12.60mmol，84.26％产率，99％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝409.9
步骤3、(1r,4r)-N1,N1-二苄基-N4-甲基环己烷-1,4-二胺(反式)(4)的合成
在25℃将((1r,4r)-4-(二苄氨基)环己基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(反式)(5.00g，12.24mmol)和HCl/二氧六环(4M，3.06mL)在DCM(25mL)中的混合物搅拌1小时。LCMS显示((1r,4r)-4-(二苄氨基)环己基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(反式)完全消耗以及一个具有所需质量的主峰。将反应混合物减压浓缩。用饱和碳酸氢钠溶液将残余物调节至pH＝8并用DCM(100mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到(1r,4r)-N1,N1-二苄基-N4-甲基环己烷-1,4-二胺(反式)(3.5g，11.35mmol，92.72％产率)，其为白色固体。MS(M+H)+＝309.2
步骤4、4-(4-(2-(((1r,4r)-4-(二苄基氨基)环己基)(甲基)氨基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(反式)(6)的合成
向(1r,4r)-N1,N1-二苄基-N4-甲基环己烷-1,4-二胺(反式)(110.34mg，357.72μmol)在DCE(10mL)中的溶液中加入2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)乙醛(275mg，715.43μmol)在DMF(2mL)和AcOH(4.30mg，71.54μmol，4.09μL)中的溶液，将混合物在25℃搅拌30分钟，在5℃向混合物中加入NaBH(OAc)3(454.89mg，2.15mmol)，将混悬液在25℃搅拌12小时。LCMS显示(1r,4r)-N1,N1-二苄基-N4-甲基环己烷-1,4-二胺(反式)完全消耗并且检测到96％的所需质量。将反应混合物用H2O(100mL)稀释，向混合物中加入NaHCO3溶液调节pH>7，将混合物用EtOAc(100mL×4)萃取。将合并的有机层在35℃真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge C18150x50 mmx10μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：50％-80％,11min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-(4-(2-(((1r,4r)-4-(二苄氨基)环己基)(甲基)氨基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(反式)(150mg，221.62μmol，30.98％产率)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝677.3
步骤5、4-(4-(2-(((1r,4r)-4-氨基环己基)(甲基)氨基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(反式)(7)的合成
在N2气氛下向4-(4-(2-(((1r,4r)-4-(二苄基氨基)环己基)(甲基)氨基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(反式)(120mg，177.29μmol)在CF3CH2OH(5mL)中的溶液中加入Pd/C(10％,20mg)和Pd(OH)2/C(10％,20mg)、HCl(12M，73.87μL)。将混悬液脱气并用H2鼓吹3次。在H2(15Psi)下将混合物在60℃搅拌16小时。LCMS显示4-(4-(2-(((1r,4r)-4-(二苄基氨基)环己基)(甲基)氨基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮完全消耗，9％m/z＝587.5，19％甲苯，检测到73％的所需质量。过滤反应混合物，用EtOAc(50mL)洗涤滤饼，真空浓缩滤液，得到4-(4-(2-(((1r,4r)-4-氨基环己基)(甲基)氨基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(反式)(85mg，159.46μmol，产率89.94％，HCl盐)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝497.4
步骤6、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-((2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)乙基)(甲基)氨基)环己基)-3-甲氧基苯甲酰胺(反式)(化合物129)的合成
向4-(4-(2-(((1r,4r)-4-氨基环己基)(甲基)氨基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(反式)(85mg，171.16μmol)和4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(76.58mg，171.16μmol)在DMF(3mL)中的溶液中加入HATU(97.62mg，256.75μmol)和DIPEA(66.37mg，513.49μmol，89.44μL)。将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示4-(4-(2-(((1r,4r)-4-氨基环己基)(甲基)氨基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮完全消耗，具有所需质量的峰(69％)。将反应混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过柱色谱法(SiO2、MeOH/EtOAc＝0/1至1/10)纯化，然后通过制备型HPLC(中性条件：柱：Waters Xbridge 150x 25mm x 5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：40％-70％,10min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-((2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)乙基)(甲基)氨基)环己基)-3-甲氧基苯甲酰胺(33.3mg，33.80μmol，19.75％产率，93.8％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝926.6。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.18-10.97(m,1H),8.30-8.21(m,2H),8.08-8.04(m,1H),7.96(s,1H),7.71(dd,J＝7.2,8.3Hz,1H),7.53-7.44(m,2H),7.35(t,J＝7.7Hz,2H),5.09(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.83-4.71(m,1H),4.05-3.98(m,2H),3.94(s,3H),3.80-3.68(m,1H),3.33(s,3H),3.32-3.29(m,4H),2.93-2.83(m,1H),2.64-2.54(m,8H),2.46-2.37(m,3H),2.22(s,3H),2.06-1.88(m,5H),1.81-1.68(m,4H),1.65-1.55(m,4H),1.45-1.31(m,4H)。
实施例130、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物130)的合成
按照与实施例44中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物130。
MS(M+H)+＝886.4,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.95(s,1H),8.32(d,J＝8.3Hz,1H),8.23(s,1H),8.16(d,J＝8.0Hz,1H),7.89(s,1H),7.56-7.48(m,3H),7.14-7.04(m,2H),5.06(dd,J＝4.8,13.3Hz,1H),4.93-4.84(m,1H),4.44-4.30(m,2H),4.26-4.18(m,1H),4.12-3.96(m,4H),3.94(s,3H),3.32-3.24(m,7H),3.19-3.11(m,1H),2.97-2.91(m,1H),2.72-2.70(m,1H),2.62-2.53(m,9H),2.44-2.36(m,1H),2.01-1.93(m,1H),1.91-1.78(m,2H),1.55-1.38(m,2H),1.26(s,3H),1.24(s,3H)。
实施例131、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)环己基)-3-甲氧基苯甲酰胺(反式)(化合物131)的合成
按照与实施例51中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物131。
MS(M+H)+＝869.3,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(s,1H),8.31-8.17(m,3H),8.09(d,J＝7.9Hz,1H),7.96(s,1H),7.74-7.66(m,1H),7.52-7.44(m,2H),7.34(t,J＝7.6Hz,2H),5.09(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.82-4.70(m,1H),4.04(t,J＝14.0Hz,2H),3.93(s,3H),3.85-3.62(m,2H),3.32(s,3H),3.30-3.28(m,4H),2.93-2.82(m,1H),2.75-2.68(m,4H),2.63-2.54(m,2H),2.09-1.99(m,1H),1.98-1.85(m,6H),1.77-1.67(m,2H),1.66-1.54(m,4H),1.47-1.31(m,4H)
实施例132、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物132)的合成
步骤1、4-(4-硝基苯氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(3)的合成
在N2下在20℃向1-氟-4-硝基-苯(1.05g，7.45mmol，790.69μL)在THF(20mL)中的溶液中缓慢加入4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(1g，4.97mmol)和t-BuOK(1.12g，9.94mmol)，将所得混合物在20℃搅拌0.5小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量(-100)的峰(74％)。将反应混合物用H2O(40mL)稀释并用EtOAc(40mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(10g 硅胶快速柱，0～33％EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到4-(4-硝基苯氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.4g，3.95mmol，79.54％产率，91％纯度)，其为黄色油状物。MS(M-100+H)+＝223.1
步骤2、4-(4-硝基苯氧基)哌啶(4)的合成
在20℃向4-(4-硝基苯氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(500mg，1.55mmol)在二氧六环(5mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，12mL)，将所得混合物在20℃搅拌0.5小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的主峰(100％)。将反应混合物真空浓缩，得到4-(4-硝基苯氧基)哌啶(402mg，粗品，HCl盐)，其为白色固体。MS(M+H)+＝223.2
步骤3、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(4-(4-硝基苯氧基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(6)的合成
在20℃向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(450mg，1.63mmol)和4-(4-硝基苯氧基)哌啶(398.27mg，粗品)在DMSO(8mL)中的溶液中加入TEA(494.55mg，4.89mmol)，将所得混合物在100℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(84％)。将反应混合物用H2O(30mL)稀释并用EtOAc(30mL×3)萃取。将有机层用盐水(30mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(10g 硅胶快速柱，0～60％EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(4-(4-硝基苯氧基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(743mg，1.55mmol，95.32％产率)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝478.9
步骤4、4-(4-(4-氨基苯氧基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(7)的合成
在N2气氛下向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(4-(4-硝基苯氧基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(250mg，522.52μmol)在CF3CH2OH(10mL)中的溶液中加入Pd/C(80mg，10％纯度)。将混悬液脱气并用H2鼓吹3次。在H2(15Psi)下将混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(82％)。将反应混合物用H2O(20mL)稀释并过滤，将滤液真空浓缩，得到4-(4-(4-氨基苯氧基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(235mg，粗品)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝449.3
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物132)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(80mg，171.89μmol)在DMF(3mL)中的溶液中加入HATU(71.89mg，189.07μmol)和DIPEA(44.43mg，343.77μmol，59.88μL)。将混合物在20℃搅拌10分钟，加入4-(4-(4-氨基苯氧基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(92.50mg，206.26μmol)在DMF(3mL)和DIPEA(44.43mg，343.77μmol，59.88μL)中的溶液，将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(70％)。将反应混合物用H2O(16mL)稀释并用EtOAc(16mL×3)萃取。将有机层用盐水(16mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Unisil 3-100C18 Ultra 150*50mm*3μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：50％-80％，10min)纯化，并通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：66％-86％，8min)再纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(23.2mg，25.38μmol，14.76％产率，98％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝896.3
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.07(br s,1H),10.01(d,J＝1.3Hz,1H),8.37-8.25(m,2H),8.09(s,1H),7.74-7.59(m,3H),7.37(dd,J＝7.7,15.3Hz,2H),7.27(d,J＝6.6Hz,1H),7.01(d,J＝9.0Hz,2H),5.11(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.90-4.79(m,1H),4.59(d,J＝3.5Hz,1H),4.09(t,J＝13.9Hz,2H),3.95(s,3H),3.63-3.52(m,2H),3.34(s,3H),3.24(t,J＝9.0Hz,2H),2.94-2.82(m,1H),2.63-2.54(m,2H),2.16-2.06(m,2H),2.06-1.94(m,3H),1.89-1.77(m,2H),1.76-1.72(br s,2H),1.69-1.57(m,4H)。
实施例133、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物133)的合成
步骤1、(S)-(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基甲酸苄酯(2)的合成
向((苄氧基)羰基)-L-谷氨酰胺(25g，89.20mmol)在THF(500mL)中的溶液中加入CDI(21.70g，133.80mmol)。在N2气氛下将混合物在80℃搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将反应混合物减压浓缩并用EtOAc(500mL)稀释，用盐水(300mL×3)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，将滤液减压浓缩，然后在25℃与MTBE(300mL)一起研磨30分钟。然后将其过滤，滤饼减压干燥，得到(S)-(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基甲酸苄酯(20g，71.68mmol，80.37％产率，94％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝263.0
步骤2、(S)-3-氨基哌啶-2,6-二酮(3)的合成
在N2气氛下向(S)-(2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基甲酸苄酯(10g，38.13mmol)在CF3CH2OH(300mL)中的溶液中加入Pd/C(2g，10％纯度)，然后在H2气氛(15Psi)下将混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示没有具有所需质量的峰。TLC显示起始材料完全消耗并且检测到一个具有较大极性的主要新斑点。过滤反应混合物，将滤液减压浓缩得到残余物，得到(S)-3-氨基哌啶-2,6-二酮(10g，粗品)，其为蓝色固体。
步骤3、(S)-3-(4-硝基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(5)的合成
向2-(溴甲基)-3-硝基苯甲酸甲酯(6.42g，23.41mmol)在DMF(60mL)中的溶液中加入(S)-3-氨基哌啶-2,6-二酮(3g，粗品)、TEA(7.11g，70.24mmol，9.78mL)，将混合物在75℃搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的峰(91％)。将混合物倒入H2O(300mL)和EtOAc(200mL)中。然后过滤混合物，减压干燥滤饼。将滤饼与MTBE(20mL)在25℃一起研磨30分钟，得到(S)-3-(4-硝基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(5g，粗品)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝290.0
步骤4、(S)-3-(4-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(6)的合成
将(S)-3-(4-硝基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(5g，粗品)和Pd/C(1g，10％纯度)在CF3CH2OH(100mL)中的混合物脱气并用N2鼓吹3次，然后在H2气氛下将混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的峰(94％)。过滤反应混合物，减压浓缩滤液，得到(S)-3-(4-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(4g，粗品)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝260.0
步骤5、(S)-4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(7)的合成
将(S)-3-(4-氨基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(4g，粗品)和双(2-氯乙基)胺(5.51g，30.86mmol，HCl)在环丁砜(40mL)中的溶液在140℃搅拌14小时。LCMS显示检测到(S)-3-(1-氧代-4-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮质量。用K2CO3(2M，10mL)将混合物调节至pH＝9，加入Boc2O(4.04g，18.51mmol，4.25mL)，将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示残余(S)-3-(1-氧代-4-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮质量和检测到12％的(S)-4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯质量。加入K2CO3(2M，5.40mL)至pH＝9，将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示检测到所需质量。将混合物用H2O(100mL)稀释并用MTBE(100mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压浓缩。将粗品用MTBE(50mL)稀释并在25℃搅拌1小时。过滤混合物，用MTBE(50mL)洗涤滤饼。收集滤饼，得到(S)-4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.07g，2.40mmol，15.54％产率，96％纯度)，其为黄色固体。将滤液减压浓缩，然后通过快速硅胶色谱法(40g 硅胶快速柱，50～90％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@50mL/min)纯化，得到(S)-4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.43g，2.90mmol，18.82％产率，87％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝429.2
步骤6、(S)-3-(1-氧代-4-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(8)的合成向(S)-4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.07g，2.50mmol)在二氧六环(10mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，10mL)，将混合物在25℃搅拌1小时。后处理后LCMS显示检测到100％的所需质量。将混合物减压浓缩，得到(S)-3-(1-氧代-4-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(0.9g，粗品，HCl)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝329.1
步骤7、(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(10)的合成
向(S)-3-(1-氧代-4-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(0.8g，粗品，HCl)在DMF(10mL)中的溶液中加入K2CO3(912.00mg，6.60mmol)和(1-(3-氯丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.28g，4.39mmol)，将混合物在80℃搅拌14小时。LCMS显示检测到所需质量。将混合物用H2O(10mL)稀释并用EtOAc(10mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(10mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(12g硅胶快速柱，0～50％EtOH/EtOAc梯度洗脱液@50mL/min)纯化，得到(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(720mg，1.16mmol，52.97％产率，94％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝583.4
步骤8、3-(4-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(11)的合成
向(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(0.7g，1.20mmol)在二氧六环(10mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，10.45mL)，将混合物在25℃搅拌0.5小时。后处理后LCMS显示检测到89％的所需质量。将混合物减压浓缩，得到3-(4-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(630mg，粗品，HCl)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝483.1
步骤9、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物133)的合成
向4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(370mg，878.03μmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入HATU(400.62mg，1.05mmol)和DIPEA(137.27mg，1.06mmol，185.00μL)，将混合物在25℃搅拌15分钟。然后加入3-(4-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(595mg，粗品，2HCl)和DIPEA(274.54mg，2.12mmol，370.00μL)在DMF(5mL)中的溶液，将混合物在25℃搅拌1小时。LCMS显示检测到71％的所需质量。将混合物用H2O(20mL)稀释并用EtOAc(10mL×3)萃取，将合并的有机层用H2O(10mL)洗涤，用Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Waters XbridgeC18150*50mm*10μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：24％-54％，10min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(383mg，428.84μmol，48.84％产率，99.2％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝886.6
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.98(s,1H),8.31(d,J＝8.4Hz,1H),8.22(s,1H),8.17-8.12(m,1H),7.88(s,1H),7.53-7.47(m,2H),7.46-7.40(m,1H),7.31(d,J＝7.5Hz,1H),7.16(d,J＝7.7Hz,1H),5.12(dd,J＝5.1,13.3Hz,1H),4.91-4.83(m,1H),4.49-4.35(m,2H),4.34-4.26(m,1H),4.09-3.88(m,7H),3.31-3.29(m,3H),3.18-3.01(m,5H),2.97-2.86(m,1H),2.73-2.54(m,11H),2.04-1.95(m,1H),1.93-1.77(m,2H),1.55-1.33(m,2H),1.24(d,J＝6.7Hz,6H)。
实施例134、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氮杂环丁烷-3-基)甲基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物134)的合成
步骤1、3-((4-(((苄氧基)羰基)氨基)哌啶-1-基)甲基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(3)的合成
向3-甲酰氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(2.0g，10.80mmol)、哌啶-4-基氨基甲酸苄酯(2.53g，10.80mmol)和HOAc(1.95g，32.39mmol，1.85mL)在DCE中的混合物(20mL)中加入NaBH(OAc)3(6.87g，32.39mmol)。将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将反应混合物用水(100mL)稀释并用EtOAc(100mL×3)萃取。将合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液(50mL)洗涤，然后用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法(20g Sepa硅胶快速柱，0～30％石油醚:EtOAc/甲醇(v/v＝1/1)梯度@60mL/min)纯化，得到3-((4-(((苄氧基)羰基)氨基)哌啶-1-基)甲基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(4.8g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝404.3
步骤2、(1-(氮杂环丁烷-3-基甲基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(4)的合成
向3-((4-(((苄氧基)羰基)氨基)哌啶-1-基)甲基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(0.5g，1.24mmol)在DCM(4mL)中的溶液中加入TFA(141.29mg，1.24mmol，91.75μL)。将混合物在25℃搅拌1小时。TLC(甲醇:二氯甲烷＝10:1)显示起始材料完全消耗。将反应混合物减压浓缩，得到(1-(氮杂环丁烷-3-基甲基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(520mg，粗品，TFA)，其为黄色油状物，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝303.9
步骤3、(1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氮杂环丁烷-3-基)甲基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(6)的合成
在25℃向(1-(氮杂环丁烷-3-基甲基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(0.5g，1.20mmol，TFA)在DMF(8mL)中的溶液中加入KI(59.65mg，359.35μmol)、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(330.86mg，1.20mmol)和DIPEA(464.43mg，3.59mmol，625.92μL)。将混合物在90℃搅拌12小时。LCMS显示出所需质量。将反应混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(20mL×4)萃取。将合并的有机层用饱和盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法(20g Sepa硅胶快速柱，0～50％石油醚/EtOAc:乙醇(v/v＝1:1)梯度洗脱液@60mL/min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150x 40mm x 15μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：10％-40％,10min)纯化，然后冻干，得到(1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氮杂环丁烷-3-基)甲基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(120mg，213.15μmol，17.79％产率，99.4％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝560.3
步骤4、5-(3-((4-氨基哌啶-1-基)甲基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(7)的合成
在25℃向Pd/C(30mg，10％纯度)在CF3CH2OH(5mL)中的混合物中加入(1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氮杂环丁烷-3-基)甲基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(120mg，214.43μmol)。在H2气氛(15Psi)下将混合物在25℃搅拌12小时。TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)显示起始材料完全消耗并且形成一个新斑点。将混合物过滤以除去催化剂。将滤液减压浓缩，得到5-(3-((4-氨基哌啶-1-基)甲基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(90mg，粗品)，其为黄色油状物，无需进一步纯化即可直接使用。MS(M+H)+＝426.0
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氮杂环丁烷-3-基)甲基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物134)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(80mg，178.80μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(135.97mg，357.59μmol)和DIPEA(69.32mg，536.39μmol，93.43μL)。然后0.5小时后将5-(3-((4-氨基哌啶-1-基)甲基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(76.07mg，178.80μmol)加入到混合物中。将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示出所需质量。将反应混合物用水(20mL)稀释并用EtOAc(10mL×3)萃取。将合并的有机层用饱和盐水(10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150x 40mm x 15μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：18％-48％，10min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150x 25mm x 5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：38％-68％，8min)纯化，然后冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氮杂环丁烷-3-基)甲基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(21mg，24.34μmol，13.61％产率，99.1％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝855.7。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(s,1H),8.32-8.24(m,2H),8.22-8.10(m,1H),7.97(s,1H),7.64(d,J＝8.1Hz,1H),7.54-7.46(m,2H),6.78(s,1H),6.64(d,J＝8.6Hz,1H),5.05(dd,J＝5.1,12.8Hz,1H),4.82-4.71(m,1H),4.18-4.10(m,2H),4.05(t,J＝14.0Hz,2H),3.94(s,3H),3.90-3.66(m,3H),3.33(s,3H),3.14-2.82(m,4H),2.62-2.55(m,5H),2.07-1.90(m,4H),1.86-1.54(m,10H)。
实施例135、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氮杂环丁烷-3-基)甲基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物135)的合成
按照与实施例134中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物135。
MS(M+H)+＝855.3,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.07(s,1H),8.32-8.25(m,2H),8.13-8.11(m,1H),7.96(s,1H),7.59-7.53(m,1H),7.51-7.46(m,2H),7.11(d,J＝7.0Hz,1H),6.78(d,J＝8.6Hz,1H),5.05(dd,J＝5.3,12.7Hz,1H),4.78-4.74(m,1H),4.34-4.25(m,2H),4.04(t,J＝14.1Hz,2H),3.94(s,3H),3.92-3.69(m,4H),3.32-3.27(m,3H),2.98-2.80(m,4H),2.62-2.53(m,4H),2.05-1.91(m,4H),1.86-1.76(m,2H),1.74-1.68(m,2H),1.64-1.58(m,6H)。
实施例136、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(7-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物136)的合成
步骤1、2-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(2)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(796mg，1.78mmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入HATU(811.73mg，2.13mmol)和DIPEA(689.77mg，5.34mmol，929.60μL)。将混合物在25℃搅拌10分钟。向混合物中加入2-氨基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(427.57mg，1.78mmol)。将所得混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的主峰。将混合物倒入水(30mL)中并用EtOAc(10mL×3)萃取。将合并的有机相用盐水(10mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法(25g硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@70mL/min)纯化，得到2-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(1.2g，粗品)，其为棕色油状物，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝670.4
步骤2、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯甲酰胺(3)的合成
在25℃向2-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(1.2g，1.79mmol)在二氧六环(5mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，30mL)。将所得混合物在25℃搅拌0.5小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的主峰。将混合物溶液浓缩，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯甲酰胺(1.5g，粗品，HCl)，其为棕色固体，其用于直接下一步。MS(M+H)+＝570.3
步骤3、N-(7-((1-苄基哌啶-4-基)甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺(4)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯甲酰胺(1.3g，2.28mmol)、1-苄基哌啶-4-甲醛(463.91mg，2.28mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中加入HOAc(274.08mg，4.56mmol，261.03μL)。将混合物在25℃搅拌10分钟。在25℃向反应混合物中加入NaBH3CN(286.83mg，4.56mmol)。将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的主峰。将反应溶液浓缩以除去有机相。将粗产物用DCM(50mL)溶解，用饱和NaHCO33(30mL)洗涤，经Na2SO44干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法(10g 硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@70mL/min；0～50％甲醇/EtOAc洗脱液@70mL/min)纯化，得到N-(7-((1-苄基哌啶-4-基)甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基)-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺(1g，1.28mmol，56.15％产率，97％纯度)，其为白色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝757.3
步骤4、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(7-(哌啶-4-基甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯甲酰胺(5)的合成
向N-(7-((1-苄基哌啶-4-基)甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺(0.2g，264.23μmol)在CF3CH2OH(10mL)中的溶液中加入Pd/C(0.2g，264.23μmol，10％纯度)。在H2(15Psi)下将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示仍然残留大部分起始材料。在25℃将另一部分Pd/C(0.1g，264.23μmol，10％纯度)和Pd(OH)2/C(0.1g，264.23μmol，20％纯度)加入到反应混合物中。在H2(15Psi)下将所得混合物在60℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(53％)。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，将滤液浓缩，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(7-(哌啶-4-基甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯甲酰胺(176mg，粗品)，其为无色油状物，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝667.4
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(7-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物136)的合成
将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(32.81mg，118.78μmol)、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(7-(将哌啶-4-基甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)苯甲酰胺(88mg，131.97μmol)和TEA(40.06mg，395.92μmol，55.11μL)在DMSO(2mL)中的溶液在90℃搅拌4小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及所需质量。将混合物倒入水(30mL)中并用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机相用盐水(10mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将粗产物通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1；Rf＝0.4)纯化。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150x 25mm x 5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：47％-77％，8min)纯化并冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(7-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(26.1mg，27.99μmol，21.21％产率，99％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝923.4
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(s,1H),8.43(br d,J＝7.2Hz,1H),8.32-8.20(m,2H),7.96(s,1H),7.72-7.60(m,1H),7.55-7.41(m,2H),7.38-7.22(m,2H),5.08(dd,J＝5.4,12.7Hz,1H),4.82-4.70(m,1H),4.46-4.33(m,1H),4.11-3.98(m,2H),3.94(s,3H),3.68(br d,J＝10.4Hz,2H),3.33-3.32(m,3H),2.95-2.75(m,3H),2.64-2.54(m,2H),2.35-2.08(m,8H),2.07-1.89(m,3H),1.85-1.51(m,15H),1.38-1.21(m,2H)
实施例137、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(7-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)甲基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物137)的合成
按照与实施例136中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物137。
MS(M+H)+＝923.4,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.07(s,1H),8.42(br d,J＝7.4Hz,1H),8.30-8.23(m,2H),7.96(s,1H),7.64(d,J＝8.5Hz,1H),7.52-7.45(m,2H),7.30(s,1H),7.22(dd,J＝1.7,8.6Hz,1H),5.06(dd,J＝5.4,12.9Hz,1H),4.76(quin,J＝8.1Hz,1H),4.45-4.32(m,1H),4.11-3.97(m,4H),3.94(s,3H),3.30(br s,3H),3.02-2.82(m,3H),2.64-2.53(m,2H),2.34-2.08(m,8H),2.04-1.91(m,3H),1.84-1.53(m,15H),1.23-1.06(m,2H)。
实施例138、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)氮杂环丁烷-3-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物138)的合成
步骤1、(1-((1-苄基哌啶-4-基)甲基)氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(2)的合成
向1-苄基哌啶-4-甲醛(0.6g，2.95mmol)、氮杂环丁烷-3-基氨基甲酸叔丁酯(508.34mg，2.95mmol)在DCE(30mL)中的溶液中加入AcOH(177.24mg，2.95mmol，168.80μL)。将混合物在25℃搅拌10分钟。在25℃向混合物中加入NaBH(OAc)3(1.25g，5.90mmol)。将所得混合物在25℃搅拌12小时。TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1；Rf＝0)显示起始材料完全消耗并且形成新斑点。将混合物用饱和NaHCO3(20mL)稀释并用DCM(30mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(12g 硅胶快速柱，0～100％EtOAc/石油醚梯度洗脱液@60mL/min；0～50％甲醇/EtOAc洗脱液@60mL/min)纯化，得到(1-((1-苄基哌啶-4-基)甲基)氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(1.1g，粗品)，其为黄色油状物，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝360.2
步骤2、1-((1-苄基哌啶-4-基)甲基)氮杂环丁烷-3-胺(3)的合成
在25℃向(1-((1-苄基哌啶-4-基)甲基)氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(450mg，1.25mmol)在DCM(10mL)中的溶液中加入TFA(3.08g，27.01mmol，2mL)。将所得混合物在25℃搅拌0.5小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的主峰。将溶液减压浓缩，得到1-((1-苄基哌啶-4-基)甲基)氮杂环丁烷-3-胺(460mg，粗品，TFA)，其为黄色油状物，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝260.2
步骤3、N-(1-((1-苄基哌啶-4-基)甲基)氮杂环丁烷-3-基)-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺(4)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(450.95mg，1.01mmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(459.86mg，1.21mmol)和DIPEA(390.77mg，3.02mmol，526.64μL)。将混合物在25℃搅拌10分钟。向混合物中加入1-((1-苄基哌啶-4-基)甲基)氮杂环丁烷-3-胺(451.62mg，1.21mmol，TFA)。将所得混合物在25℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及所需质量。将混合物倒入水(40mL)中并用EtOAc(20mL×4)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150x40 mmx 15μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：10％-40％,10min)纯化并冻干，得到N-(1-((1-苄基哌啶-4-基)甲基)氮杂环丁烷-3-基)-4-((9-环戊基-7,7-二氟)-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺(0.2g，287.45μmol，产率28.52％，纯度99％)，其为黄色油状物，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝689.5
步骤4、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(1-(哌啶-4-基甲基)氮杂环丁烷-3-基)苯甲酰胺(5)的合成
在25℃向N-(1-((1-苄基哌啶-4-基)甲基)氮杂环丁烷-3-基)-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺(200mg，290.36μmol)在CF3CH2OH(15mL)中的溶液中加入Pd/C(100mg，10％纯度)和Pd(OH)2/C(100mg，20％纯度)。在H2(15Psi)下将混合物在50℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的主峰。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，将滤液浓缩，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(1-(哌啶-4-基甲基)氮杂环丁烷-3-基)苯甲酰胺(170mg，粗品)，其为黄色油状物，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝599.1
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)氮杂环丁烷-3-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物138)的合成
将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(33.33mg，120.68μmol)、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(1-(将哌啶-4-基甲基)氮杂环丁烷-3-基)苯甲酰胺(85mg，141.98μmol)和TEA(43.10mg，425.93μmol，59.28μL)在DMSO(2mL)中的溶液在90℃搅拌3小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的主峰。将混合物溶液倒入水(20mL)中并用EtOAc(10mL×4)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并浓缩，得到粗产物。将残余物通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1；Rf＝0.7)纯化，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150x25mmx 5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：44％-74％,8min)纯化并冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)氮杂环丁烷-3-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(22.4mg，25.94μmol，18.27％产率，99％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝855.5
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.50(d,J＝8.5Hz,1H),8.42-8.20(m,1H),8.07(s,1H),7.77(s,1H),7.57(dd,J＝7.3,8.3Hz,1H),7.47(d,J＝1.4Hz,1H),7.40-7.31(m,2H),7.17(d,J＝8.5Hz,1H),6.88-6.61(m,1H),4.96(dd,J＝5.3,12.2Hz,1H),4.90-4.73(m,2H),3.99(s,3H),3.90(t,J＝13.5Hz,2H),3.75(br t,J＝6.0Hz,4H),3.42(s,3H),3.21(br s,2H),2.94-2.67(m,5H),2.50(br d,J＝5.1Hz,2H),2.17-2.04(m,3H),1.87(br d,J＝11.3Hz,2H),1.82-1.63(m,9H)。
实施例139、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)甲基)氮杂环丁烷-3-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物139)的合成
按照与实施例138中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物139。
MS(M+H)+＝855.5,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.07(s,1H),8.62(d,J＝6.8Hz,1H),8.32-8.22(m,2H),7.97(s,1H),7.65(d,J＝8.5Hz,1H),7.54-7.46(m,2H),7.30(d,J＝1.8Hz,1H),7.22(dd,J＝2.1,8.7Hz,1H),5.06(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.83-4.71(m,1H),4.47(t,J＝6.9Hz,1H),4.13-3.98(m,4H),3.94(s,3H),3.58(t,J＝7.1Hz,2H),3.30(s,3H),3.05-2.81(m,5H),2.63-2.52(m,2H),2.36-2.32(m,2H),2.04-1.88(m,3H),1.83-1.67(m,4H),1.66-1.54(m,5H),1.26-1.10(m,2H)。
实施例140、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)苯基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物140)的合成
步骤1、4-(吡啶-4-基甲基)苯胺(2)的合成
在N2气氛下向4-(4-硝基苄基)吡啶(10g，46.68mmol)在EtOH(120mL)、H2O(3.89mL)和HCl(12M，3.89mL)中的溶液中加入的PtO2(778.21mg，3.43mmol)。将混悬液脱气并用H2鼓吹3次。在H2(50Psi)下将混合物在20℃搅拌16小时。TLC(SiO2，石油醚:EtOAc＝10:1)显示残留起始材料并且检测到一个新斑点。将反应混合物用EtOH(300mL)稀释并过滤。将滤液真空浓缩，得到4-(4-吡啶基甲基)苯胺(12g，粗品)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝185.1
步骤2、(4-(吡啶-4-基甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(3)的合成
在0℃向4-(4-吡啶基甲基)苯胺(5g，27.14mmol)在THF(200mL)中的溶液中滴加入(Boc)2O(6.69g，30.67mmol，7.05mL)在THF(30mL)中的溶液，将所得混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(87％)。将反应混合物真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(25g硅胶快速柱，0～33％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到(4-(吡啶-4-基甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(4.4g，13.31mmol，产率49.03％，纯度86％)，其为紫色油状物。MS(M+H)+＝285.2
步骤3、(4-(哌啶-4-基甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(4)的合成
在N2气氛下向(4-(吡啶-4-基甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(2g，7.03mmol)在AcOH(4mL)和EtOH(20mL)中的溶液中加入Pd/C(200mg，10％纯度)和PtO2(1.60g，7.03mmol)。将混悬液脱气并用H2鼓吹3次。在H2(50Psi)下将混合物在50℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(63％)。将反应混合物用EtOH(300mL)稀释并过滤。将滤液真空浓缩，得到(4-(哌啶-4-基甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(2g，粗品)，其为橙色油状物。MS(M+H)+＝291.4
步骤4、(4-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(6)的合成
在20℃2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(500mg，1.81mmol)和(4-(哌啶-4-基甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(735.93mg，粗品)在DMSO(8mL)中的溶液中加入到TEA(549.50mg，5.43mmol，755.85μL)，将所得混合物在100℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(55％)。将反应混合物用H2O(20mL)稀释并用EtOAc(20mL×3)萃取。将有机层用盐水(20mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(12g硅胶快速柱，0～50％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到(4-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(711mg，1.30mmol，71.86％产率)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝547.0
步骤5、4-(4-(4-氨基苄基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(7)的合成
在20℃向(4-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(200mg，365.89μmol)在二氧六环(3mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，12mL)，将所得混合物在20℃搅拌0.5小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的主峰(91％)。将反应混合物真空浓缩，得到4-(4-(4-氨基苄基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(177mg，粗品，HCl)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝447.2
步骤6、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)苯基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物140)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(80mg,171.89μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(71.89mg，189.07μmol)和DIPEA(44.43mg，343.77μmol，59.88μL)。将混合物在20℃搅拌10分钟，然后加入4-(4-(4-氨基苄基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(99.62mg，粗品，HCl)和DIPEA(44.43mg，343.77μmol，59.88μL)在DMF(2mL)中的溶液，将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(54％)。将反应混合物用H2O(20mL)稀释并用EtOAc(20mL×3)萃取。将有机层用盐水(20mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Unisil 3-100C18 Ultra 150*50mm*3μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：65％-95％,10min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)苯基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(33mg，36.18μmol，21.05％产率，98％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝894.1
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(s,1H),10.08(s,1H),8.36-8.26(m,2H),8.10(s,1H),7.71-7.59(m,3H),7.36-7.24(m,3H),7.18(d,J＝8.4Hz,2H),5.08(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.90-4.78(m,1H),4.14-4.02(m,2H),3.94(s,3H),3.73-3.63(m,2H),3.33-3.30(m,5H),2.93-2.77(m,3H),2.63-2.54(m,2H),2.07-1.91(m,3H),1.77-1.56(m,9H),1.48-1.34(m,2H)。
实施例141、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)乙氧基)苯基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物141)的合成
步骤1、4-(2-(4-硝基苯氧基)乙基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3)的合成
在N2下，在0℃向4-(2-羟乙基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2g，8.68mmol)和4-硝基苯酚(1.45g，10.42mmol)、PPh3(3.42g，13.03mmo)在THF(40mL)中的混合物中滴加入DEAD(2.27g，13.03mmol)，将在N2所得混合物下在20℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(27％)。将反应混合物真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(20g 硅胶快速柱，0～100％EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化并通过反相HPLC(方法：0.1％ FA。柱I.D.95mm*H365 mm Welch Ultimate XB_C18 20-40μm；120A样品溶解用溶剂将约4.10g样品溶解在45mL MeOH中；流速200mL/min；流动相MeCN/H2O；梯度B％5-35％30min；35％10min仪器Biotage Isolera One)再纯化。用EtOAc(200mL×3)萃取洗脱液。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到4-(2-(4-硝基苯氧基)乙基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2.5g，7.04mmol，81.10％产率，99％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝352.2
步骤2、1-(2-(4-硝基苯氧基)乙基)哌嗪(4)的合成
在20℃向4-(2-(4-硝基苯氧基)乙基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(600mg，1.71mmol)在二氧六环(6mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，12mL)，将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的主峰。将反应混合物真空浓缩，得到1-(2-(4-硝基苯氧基)乙基)哌嗪(521mg，粗品，HCl盐)，其为白色固体。MS(M+H)+＝252.4
步骤3、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(4-(2-(4-硝基苯氧基)乙基)哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(6)的合成
在20℃向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(400mg，1.45mmol)在DMSO(6mL)中的溶液中加入TEA(439.60mg，4.34mmol，604.68μL)和1-(2-(4-硝基苯氧基)乙基)哌嗪(500.02mg，粗品，HCl盐)，将所得混合物在100℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(80％)。将反应混合物用H2O(15mL)稀释，析出黄色固体。通过过滤收集固体。将滤饼真空干燥，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(4-(2-(4-硝基苯氧基)乙基)哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(560mg，1.08mmol，产率74.68％，纯度98％)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝508.2
步骤4、4-(4-(2-(4-氨基苯氧基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(7)的合成
在N2气氛下向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(4-(2-(4-硝基苯氧基)乙基)哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(400mg，788.19μmol)在CF3CH2OH(12mL)中的溶液中加入Pd/C(100mg，10％纯度)。将混悬液脱气并用H2鼓吹3次。在H2(15Psi)下将混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的主峰(94％)。将反应混合物用CF3CH2OH(20mL)稀释并过滤。将滤液真空浓缩，得到4-(4-(2-(4-氨基苯氧基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(300mg，628.26μmol，产率79.71％)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝478.2
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)乙氧基)苯基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物141)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(80mg,171.89μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(71.89mg，189.07μmol)和DIPEA(66.65mg，515.66μmol，89.82μL)。将混合物在20℃搅拌10分钟，加入4-(4-(2-(4-氨基苯氧基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(98.49mg，粗品)在DMF(2mL)中的溶液，将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(78％)。将反应混合物用H2O(15mL)稀释并用EtOAc(15mL×3)萃取。将有机层用盐水(15mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Unisil 3-100C18 Ultra 150*50mm*3μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：20％-50％，10min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)乙氧基)苯基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(66.4mg，71.79μmol，41.77％产率，95.9％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝925.3
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(br s,1H),10.01(s,1H),8.37-8.26(m,2H),8.09(s,1H),7.74-7.67(m,1H),7.63(d,J＝8.9Hz,2H),7.35(dd,J＝5.8,7.5Hz,2H),7.27(d,J＝6.5Hz,1H),6.95(d,J＝9.0Hz,2H),5.10(dd,J＝5.4,12.9Hz,1H),4.90-4.79(m,1H),4.18-4.03(m,4H),3.94(s,3H),3.34-3.33(m,3H),3.31-3.30(m,4H),2.93-2.82(m,1H),2.78(t,J＝5.1Hz,2H),2.72-2.68(m,4H),2.65-2.57(m,2H),2.06-1.94(m,3H),1.80-1.70(m,2H),1.69-1.57(m,4H)。
实施例142、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-7-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物142)的合成
步骤1、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4,7-二氟异吲哚啉-1,3-二酮(2)的合成
在100℃将3,6-二氟邻苯二甲酸(2g，9.90mmol)、3-氨基哌啶-2,6-二酮(2.12g，12.86mmol，HCl)和NaOAc(2.44g，29.69mmol)在AcOH(50mL)中的混合物搅拌14小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将反应混合物用水(50mL)稀释，然后过滤。收集滤饼并干燥，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4，7-二氟异吲哚啉-1,3-二酮(2.3g，7.82mmol，79.00％产率)，其为棕色固体。MS(M+H)+＝295.1
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.17(s,1H),7.83(t,J＝5.8Hz,2H),5.16(dd,J＝5.4,12.9Hz,1H),2.96-2.82(m,1H),2.65-2.57(m,1H),2.50-2.43(m,1H),2.13-2.00(m,1H)。
步骤2、4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-7-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3)的合成
向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4,7-二氟异吲哚啉-1,3-二酮(1g，3.40mmol)和哌嗪-1-羧酸叔丁酯(696.36mg，3.74mmol)在DMSO(10mL)中的溶液中加入DIPEA(878.58mg，6.80mmol，1.18mL)，将所得混合物在100℃搅拌12小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将混合物倒入水(50mL)中并用EtOAc(30mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物与MBTE(20mL)一起研磨，得到4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-7-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.5g，3.03mmol，89.13％产率，93％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝461.2
步骤3、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟-7-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(4)的合成
向4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-7-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.5g，3.26mmol)在二氧六环(10mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，10mL)，将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将反应物减压浓缩，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟-7-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(1.3g，粗品，HCl)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝361.2。
步骤4、(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-7-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(5)的合成
向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟-7-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.5g，1.26mmol，HCl)在DMF(10mL)中的溶液中加入(1-(3-氯丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.10g，3.78mmol)、DIPEA(488.57mg，3.78mmol，658.45μL)和NaI(18.89mg，126.01μmol)，将混合物在70℃搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的峰(40％)。将混合物倒入水(50mL)中并用EtOAc(30mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(25g 硅胶快速柱，0～50％MeOH/EtOAc梯度洗脱液@80mL/min)纯化，得到(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-7-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(260mg，372.24μmol，29.54％产率，88％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝615.4
步骤5、4-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-7-氟异吲哚啉-1,3-二酮(6)的合成
向(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-7-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(260mg，423.00μmol)在二氧六环(5mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，5mL)，将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将反应混合物减压浓缩，得到4-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-7-氟异吲哚啉-1,3-二酮(230mg，417.42μmol，98.68％产率，HCl)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝515.2
步骤6、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-7-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物142)的合成
向4-(4-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-7-氟异吲哚啉-1,3-二酮(110mg，199.63μmol，HCl)和4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(89.32mg，199.63μmol)在DMF(2.5mL)中的溶液中加入HATU(83.50mg，219.60μmol)和DIPEA(77.40mg，598.90μmol，104.32μL)，所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料被消耗以及所需质量。将混合物倒入水(10mL)中并用EtOAc(6mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：WatersXbridge C18 150*50mm*10μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：31％-61％，10min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-7-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(23.8mg，23.90μmol，11.97％产率，94.8％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝944.1
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.11(s,1H),8.31-8.25(m,2H),8.19-8.13(m,1H),7.98(s,1H),7.62-7.57(m,1H),7.51-7.47(m,2H),7.41(dd,J＝3.8,9.4Hz,1H),5.10(dd,J＝5.5,12.8Hz,1H),4.85-4.71(m,1H),4.45-4.36(m,1H),4.11-3.95(m,4H),3.94(s,3H),3.32(br s,3H),3.24-3.13(m,4H),2.89-2.86(m,1H),2.66-2.54(m,12H),2.08-1.77(m,5H),1.75-1.67(m,2H),1.61-1.58(m,4H),1.51-1.34(m,2H)。
实施例143、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-3-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物143)的合成
按照与实施例53中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物143。
MS(M+H)+＝898.3.,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(s,1H),8.32-8.21(m,2H),8.04(br d,J＝7.9Hz,1H),7.97(s,1H),7.75-7.63(m,1H),7.57-7.44(m,2H),7.33(dd,J＝7.8,11.6Hz,2H),5.09(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.76(quin,J＝8.2Hz,1H),4.05(br t,J＝14.0Hz,2H),3.94(s,4H),3.33(br s,3H),3.28(br s,4H),2.96-2.75(m,3H),2.66-2.56(m,5H),2.52-2.48(m,5H),2.09-1.86(m,5H),1.82-1.75(m,1H),1.77-1.66(m,3H),1.65-1.45(m,5H),1.44-1.31(m,1H)。
实施例144、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)丙基)哌啶-3-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物144)的合成
按照与实施例60中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物144。
MS(M+H)+＝912.3,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(s,1H),8.35-8.18(m,2H),8.04(br d,J＝7.9Hz,1H),7.96(s,1H),7.69(dd,J＝7.3,8.3Hz,1H),7.56-7.42(m,2H),7.40-7.23(m,2H),5.09(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.84-4.67(m,1H),4.04(br t,J＝14.0Hz,2H),3.98-3.85(m,4H),3.32(br s,3H),3.31-3.27(m,4H),2.96-2.82(m,2H),2.80-2.76(m,1H),2.62-2.52(m,6H),2.39-2.30(m,4H),2.07-1.99(m,1H),1.98-1.90(m,2H),1.90-1.77(m,3H),1.65-1.60(m,3H),1.66-1.46(m,7H),1.35-1.25(m,1H)。
实施例145、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-羰基)哌啶-3-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物145)的合成
步骤1、4-(3-(((苄氧基)羰基)氨基)哌啶-1-羰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3)的合成
向哌啶-3-基氨基甲酸苄酯(100mg，426.82μmol)在DCM(2mL)中的溶液中加入4-(氯羰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(100mg，402.08μmol)和DIPEA(155.90mg，1.21mmol，210.11μL)，将所得混合物在20℃搅拌4小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将反应混合物用H2O(2mL)稀释，分离有机相，用EtOAc(2mL×3)萃取水相。将合并的有机层用盐水(2mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。将滤液减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法(Biotage；10g硅胶快速柱，20～60％ EtOAc/石油醚@40mL/min)纯化，得到4-(3-(((苄氧基)羰基)氨基)哌啶-1-羰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(160mg，318.90μmol，79.31％产率，89％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝447.0
步骤2、(1-(哌嗪-1-羰基)哌啶-3-基)氨基甲酸苄酯(4)的合成
向4-(3-(((苄氧基)羰基)氨基)哌啶-1-羰基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(160mg，358.31μmol)在二氧六环(2mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，2mL)，将混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将混合物减压浓缩，得到(1-(哌嗪-1-羰基)哌啶-3-基)氨基甲酸苄酯(120mg，粗品)，其为白色固体。MS(M+H)+＝347.0
步骤3、(1-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-羰基)哌啶-3-基)氨基甲酸苄酯(6)的合成
向(1-(哌嗪-1-羰基)哌啶-3-基)氨基甲酸苄酯(120mg，346.40μmol)在DMSO(2mL)中的溶液中加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(95.68mg，346.40μmol)、TEA(105.15mg，1.04mmol，144.64μL)，将混合物在100℃搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的峰(41％)。将反应混合物用盐水(10mL)稀释，用EtOAc(10mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，将滤液减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法(Biotage；10g 硅胶快速柱，10～60％ EtOAc/石油醚@40mL/min)纯化，得到(1-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-羰基)哌啶-3-基)氨基甲酸苄酯(150mg，243.93μmol，产率70.42％，纯度98％)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝603.0
步骤4、4-(4-(3-氨基哌啶-1-羰基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(7)的合成
将(1-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-羰基)哌啶-3-基)氨基甲酸苄酯(100mg，165.94μmol)和Pd/C(20mg，10％纯度)在CF3CH2OH(10mL)中的混合物脱气并用H2鼓吹3次，在H2(15Psi)气氛下将所得混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将混合物通过硅藻土垫过滤，将滤液真空浓缩，得到4-(4-(3-氨基哌啶-1-羰基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(50mg，粗品)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝469.0
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-羰基)哌啶-3-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物145)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(47.75mg，106.72μmol)在DMF(1mL)中的溶液中的加入HATU(60.87mg，160.08μmol)和DIPEA(41.38mg，320.17μmol，55.77μL)，将混合物在20℃搅拌0.5小时。加入4-(4-(3-氨基哌啶-1-羰基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(50mg，106.72μmol)，将所得混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将反应混合物用盐水(3mL)稀释，用EtOAc(3mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(5mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。将滤液减压浓缩，得到残余物。将残余物通过制备型TLC(SiO2，DCM:MeOH＝10:1)纯化并通过反相HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：41％-71％,8min)再纯化。将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-羰基)哌啶-3-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(30.2mg，31.28μmol，29.31％产率，93％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝898.0
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(s,1H),8.34-8.21(m,3H),7.98(s,1H),7.76-7.69(m,1H),7.53-7.46(m,2H),7.42-7.33(m,2H),5.16-5.07(m,1H),4.83-4.72(m,1H),4.05(t,J＝14.1Hz,2H),3.97-3.84(m,4H),3.70-3.63(m,1H),3.58-3.49(m,1H),3.43-3.38(m,4H),3.33-3.25(m,7H),2.95-2.77(m,3H),2.64-2.56(m,2H),2.09-1.88(m,4H),1.81-1.51(m,9H)。
实施例146、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((3R)-1-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)乙酰基)哌啶-3-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物146)的合成
步骤1、2-(哌嗪-1-基)乙酸(2)的合成
向2-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)乙酸(1g，4.09mmol)在二氧六环(5mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，20mL)。将混合物在25℃搅拌2小时。TLC(石油醚:EtOAc＝1:1)显示形成一个新斑点。将反应混合物减压浓缩，得到2-(哌嗪-1-基)乙酸(600mg，3.95mmol，96.58％产率，95％纯度，HCl盐)，其为白色固体。
步骤2、2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)乙酸(3)的合成
向2-(哌嗪-1-基)乙酸(500mg，3.47mmol)在DMSO(5mL)中的溶液中加入DIPEA(1.34g，10.40mmol，1.81mL)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(957.96mg，3.47mmol)。将混合物在80℃搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的峰。将反应混合物用水(20mL)稀释并用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。将滤液减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18150*40mm*15μm；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：1％-25％，10min)纯化，将洗脱液冷冻干燥，得到2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1(1-基)乙酸(1g，2.50mmol，72.02％产率)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝400.9
步骤3、((3R)-1-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)乙酰基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(4)的合成
向2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)乙酸(350mg，874.16μmol)在DMF(3mL)中的溶液中加入HATU(398.86mg，1.05mmol)和DIPEA(225.96mg，1.75mmol，304.53μL)。将混合物在25℃搅拌10分钟，然后在25℃滴加入(R)-哌啶-3-基氨基甲酸叔丁酯(175.07mg，874.16μmol)和DIPEA(112.98mg，874.16μmol，152.26μL)在DMF(2mL)中的溶液。将所得混合物在25℃搅拌1小时。LCMS显示具有所需质量的峰。过滤反应混合物。浓缩滤液。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150*40mm*15μm；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：12％-42％，10min)纯化，将洗脱液冷冻干燥，得到((3R)-1-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)乙酰基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(400mg，686.52μmol，78.54％产率)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝583.1
步骤4、4-(4-(2-((R)-3-氨基哌啶-1-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(5)的合成
向((3R)-1-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)乙酰基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(80mg，137.30μmol)在二氧六环(1mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，34.33μL)。将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示具有所需质量的峰。将反应混合物减压浓缩，得到4-(4-(2-((R)-3-氨基哌啶-1-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(66mg，136.78μmol，产率99.62％，HCl盐)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝483.3
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((3R)-1-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)乙酰基)哌啶-3-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物146)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(61.20mg，136.78μmol)在DMF(1mL)中的溶液中加入HATU(62.41mg，164.13μmol)和DIPEA(88.39mg，683.89μmol，119.12μL)。将混合物在25℃搅拌10分钟，然后加入4-(4-(2-((R)-3-氨基哌啶-1-基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(66mg，136.78μmol，HCl盐)在DMF(0.5mL)中的溶液。将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示具有所需质量的峰。过滤混合物。将滤液通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：37％-67％，10min)纯化，将洗脱液冷冻干燥，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((3R)-1-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-)基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)乙酰基)哌啶-3-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(29mg，30.21μmol，22.09％产率，95％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝912.6
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.82(s,1H),8.29-8.25(m,1H),8.25-8.24(m,1H),7.93-7.88(m,1H),7.86(s,1H),7.70-7.64(m,1H),7.51-7.46(m,2H),7.35-7.28(m,2H),5.09-5.01(m,1H),4.80-4.70(m,1H),4.08-3.96(m,4H),3.95(s,3H),3.46-3.14(m,12H),2.92-2.85(m,1H),2.70-2.61(m,6H),2.10-2.03(m,1H),2.00-2.93(m,3H),1.84-1.77(m,1H),1.74-1.69(m,2H),1.67-1.56(m,6H)。
实施例147、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)乙酰基)哌啶-3-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物147)的合成
按照与实施例146中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物147。
MS(M+H)+＝912.4,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.98-10.69(m,1H),8.44-8.15(m,2H),8.02-7.83(m,2H),7.72-7.62(m,1H),7.56-7.45(m,2H),7.41-7.20(m,2H),5.16-4.98(m,1H),4.86-4.69(m,1H),4.22-3.98(m,4H),3.98-3.92(m,3H),3.53-3.20(m,12H),2.92-2.85(m,1H),2.72-2.63(m,6H),2.10-1.92(m,4H),1.87-1.54(m,9H)。
实施例148、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物148)的合成
步骤1、(1-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-4-基)甲基4-甲基苯磺酸酯(2)的合成
向(4-(羟甲基)哌啶-1-基)氨基甲酸叔丁酯(2.5g，10.86mmol)在DCM(20mL)中的溶液中加入4-甲基苯磺酰氯(3.10g，16.28mmol)、TEA(3.30g，32.57mmol，4.53mL)和DMAP(132.62mg，1.09mmol)，将混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示所需质量，将混合物用水(3mL)稀释，并用EtOAc(5mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将粗产物通过快速硅胶色谱法(Biotage，4g 硅胶快速柱，4～80％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@20mL/min)纯化，得到(1-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-4-基)甲基4-甲基苯磺酸酯(1.26g，2.95mmol，27.17％产率，90％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝385.2
步骤2、(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)氨基甲酸叔丁酯(3)和(3-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-)基)乙基)吡咯烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(3A)的合成
向(1-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-4-基)甲基4-甲基苯磺酸酯(500mg，1.30mmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(534.24mg，1.56mmol)在DMF(20mL)中的溶液中加入DIPEA(504.21mg，3.90mmol，679.53μL)和NaI(38.99mg，260.09μmol)，将混合物在80℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰。将反应混合物用水(10mL)稀释，用EtOAc(15mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将粗产物通过快速硅胶色谱法(Biotage，4g 硅胶快速柱，4～10％MeOH/DCM梯度洗脱液@20mL/min)纯化，得到(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)氨基甲酸叔丁酯(120mg，212.03μmol，产率16.30％，98％纯度)，其为黄色固体，和(3-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙基)吡咯烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(240mg，389.44μmol，29.95％产率，90％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝555.1
步骤3、5-(4-((1-氨基哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(4)的合成
向(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)氨基甲酸叔丁酯(120mg，216.36μmol)在二氧六环(4mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，54.09μL)，将所得混合物在25℃搅拌1小时。LCMS显示具有所需质量的峰。将混合物真空浓缩，得到5-(4-((1-氨基哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(100mg，粗品，HCl盐)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝455.2
步骤4、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物148)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(90mg，201.15μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(114.72mg，301.72μmol)和DIPEA(77.99mg，603.44μmol，105.11μL)，然后加入5-(4-((1-氨基哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(98.76mg，201.15μmol，HCl盐)，将所得混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰。将混合物用水(3mL)稀释，用EtOAc(5mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi Polar-RP 100*25mm*4μm；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：30％-50％，7min)和制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：39％-69％，10min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(15.8mg，17.14μmol，8.52％产率，95.9％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝884.4。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.06(s,1H),9.32(s,1H),8.31-8.23(m,2H),7.97(s,1H),7.68(d,J＝8.44Hz,1H),7.47-7.39(m,2H),7.34(s,1H),7.26(d,J＝7.09Hz,1H),5.07(dd,J＝12.78,5.44Hz,1H),4.83-4.70(m,1H),4.05(t,J＝14.06Hz,2H),3.94(s,3H),3.45(s,4H),3.33(s,3H),3.03(d,J＝9.66Hz,2H),2.92-2.84(m,1H),2.79(t,J＝10.33Hz,2H),2.64-2.57(m,2H),2.57-2.53(m,4H),2.22(d,J＝6.48Hz,2H),2.07-1.99(m,1H),1.95(s,2H),1.83-1.68(m,4H),1.59(d,J＝1.10Hz,5H),1.32-1.20(m,2H)。
实施例149、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(3-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物149)的合成
步骤1、5-(4-(2-(1-氨基吡咯烷-3-基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(6)的合成
向(3-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙基)吡咯烷-1-基)氨基甲酸叔丁酯(240.00mg，432.72μmol)在二氧六环(4mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，108.18μL)，将混合物在25℃搅拌1小时。LCMS显示具有所需质量的峰，将混合物真空浓缩，得到5-(4-(2-(1-氨基吡咯烷-3-基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(200mg，粗品，HCl盐)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝455.0
步骤2、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(3-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物149)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(90mg，201.15μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(114.72mg，301.72μmol)和DIPEA(77.99mg，603.44μmol，105.11μL)，然后加入5-(4-(2-(1-氨基吡咯烷-3-基)乙基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(98.76mg，201.15μmol，HCl盐)，将反应混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰。将反应混合物用水(3mL)稀释，用EtOAc(5mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex SynergiPolar-RP 100*25mm*4μm；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：30％-50％，7min)和制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：38％-68％，10min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(3-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(20.4mg，22.32μmol，11.09％产率，96.7％纯度)，其为黄色粉末。MS(M+H)+＝884.0。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.10(s,1H),9.40(s,1H),8.33-8.23(m,2H),7.98(s,1H),7.72(d,J＝8.38Hz,1H),7.50-7.36(m,3H),7.31(d,J＝8.25Hz,1H),5.09(dd,J＝12.82,5.32Hz,1H),4.77(t,J＝7.82Hz,1H),4.05(t,J＝13.95Hz,2H),3.93(s,3H),3.37-3.35(m,4H),3.33(s,3H),3.19-2.99(m,4H),2.94-2.82(m,2H),2.77-2.67(m,2H),2.65-2.52(m,5H),2.36-2.22(m,J＝14.57,7.22Hz,1H),2.07-1.89(m,4H),1.78-1.39(m,9H)。
实施例150、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)环己基)-3-甲氧基苯甲酰胺(反式)(化合物150)的合成
步骤1、((1r,4r)-4-(哌嗪-1-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(反式)(2)的合成
在N2气氛下向4-((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)哌嗪-1-羧酸苄酯(300mg，718.49μmol)在CF3CH2OH(6mL)中的溶液中加入Pd/C(0.1g，10％纯度)。将混悬液脱气并用H2鼓吹3次。在H2(15Psi)下将混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰。将反应混合物用CF3CH2OH(30mL)稀释并过滤。将滤液浓缩，得到((1r,4r)-4-(哌嗪-1-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(反式)(170mg，599.84μmol，83.49％产率)，其为灰白色固体。MS(M+H)+＝284.5
步骤2、((1r,4r)-4-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(反式)(4)的合成
在20℃向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(150mg，543.05μmol)在DMSO(4mL)中的溶液中加入TEA(164.85mg，1.63mmol，226.76μL)和((1r,4r)-4-(哌嗪-1-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(反式)(169.29mg，597.35μmol)，将所得混合物在100℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(77％)。将反应混合物用H2O(15mL)稀释并用EtOAc(15mL×3)萃取。将有机层用盐水(15mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(12g硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚，梯度为100mL/min)纯化，得到((1r,4r)-4-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(反式)(272mg，499.02μmol，91.89％产率，99％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝540.3
步骤3、5-(4-((1r,4r)-4-氨基环己基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(反式)(5)的合成
在20℃向((1r,4r)-4-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(反式)(272mg，504.06μmol)在二氧六环(3mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，12mL)，将所得混合物在20℃搅拌0.5小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(72％)。将反应混合物真空浓缩，得到5-(4-((1r,4r)-4-氨基环己基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(反式)(240mg，粗品，HCl盐)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝440.4
步骤4、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)环己基)-3-甲氧基苯甲酰胺(反式)(化合物150)的合成
向4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(60mg，142.38μmol)在DMF(1mL)中的溶液中加入HATU(59.55mg，156.62μmol)和DIPEA(36.80mg，284.77μmol，49.60μL)。将混合物在20℃搅拌10分钟，加入5-(4-((1r,4r)-4-氨基环己基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(反式)(81.32mg，170.86μmol，HCl盐)和DIPEA(36.80mg，284.77μmol，49.60μL)在DMF(1mL)中的溶液，将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(61％)。将反应混合物用H2O(10mL)稀释并用EtOAc(10mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：PhenomenexSynergi C18 150*25mm*10μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：11％-50％，13min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)环己基)-3-甲氧基苯甲酰胺(反式)(72.8mg，79.44μmol，55.79％产率，97％纯度，FA)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝843.1
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.10(s,1H),9.58-9.33(m,1H),8.31(d,J＝8.3Hz,1H),8.22(s,1H),8.18-8.12(m,1H),7.89(s,1H),7.77(br d,J＝8.6Hz,1H),7.54-7.44(m,2H),7.38(br d,J＝8.9Hz,1H),5.10(dd,J＝5.4,12.9Hz,1H),4.88(td,J＝6.7,13.5Hz,1H),4.40-4.16(m,2H),4.04(br t,J＝13.4Hz,2H),3.94(s,3H),3.86-3.76(m,1H),3.70-3.54(m,2H),3.32(s,3H),3.27-3.17(m,4H),2.95-2.84(m,1H),2.63-2.54(m,3H),2.22-2.09(m,2H),2.08-1.95(m,3H),1.71-1.55(m,2H),1.49-1.37(m,2H),1.24(d,J＝6.7Hz,6H)。
实施例151、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(3-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)乙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物151)的合成
按照与实施例149中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物151。
MS(M+H)+＝884.5,1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.48(d,J＝8.2Hz,1H),8.09-8.03(m,2H),7.76(s,1H),7.65-7.58(m,1H),7.42(br d,J＝6.6Hz,2H),7.24-7.22(m,1H),7.18(d,J＝8.6Hz,1H),6.96-6.84(m,1H),5.01-4.94(m,1H),4.87-4.79(m,1H),3.99(s,3H),3.90(t,J＝13.6Hz,2H),3.41(s,3H),3.39-3.34(m,4H),3.31-3.24(m,1H),3.06-2.98(m,1H),2.95-2.84(m,2H),2.83-2.63(m,7H),2.51-2.32(m,3H),2.21-2.03(m,5H),1.84-1.63(m,8H)。
实施例152、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)(甲基)氨基)环己基)-3-甲氧基苯甲酰胺(反式)(化合物152)的合成
步骤1、((1r,4r)-4-(二苄氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(反式)(2)的合成向((1r,4r)-4-氨基环己基)氨基甲酸叔丁酯(反式)(25.2g，117.59mmol)在MeCN(500mL)中的溶液中加入K2CO3(65.01g，470.36mmol)和BnBr(42.64g，249.29mmol，29.61mL)，将混合物在60℃搅拌16小时。TLC(SiO2，石油醚:EtOAc＝5:1)显示起始材料被完全消耗并且检测到一个具有较低极性的主要新斑点。将反应混合物在0℃用H2O(500mL)稀释，并在0℃用EtOAc(500mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物与石油醚(80mL)一起研磨10分钟，过滤混悬液，用石油醚(50mL)洗涤滤饼。收集滤饼并干燥，得到((1r,4r)-4-(二苄基氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(反式)(44.06g，111.67mmol，94.97％产率)，其为白色固体。MS(M+H)+＝395.2
步骤2、((1r,4r)-4-(二苄氨基)环己基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(反式)(3)的合成
在N2气氛下，在5℃缓慢地向((1r,4r)-4-(二苄氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(反式)(44.06g，111.67mmol)在THF(400mL)中的溶液中加入NaH(6.70g，167.51mmol，60％纯度)，将混悬液在5℃搅拌30分钟，然后在5℃滴加入MeI(19.02g，134.01mmol，8.34mL)，将所得化合物在15℃搅拌2.5小时。TLC(SiO2，石油醚:EtOAc＝5:1)显示起始材料被完全消耗并且检测到一个具有较低极性的主要新斑点。将混合物缓慢倒入冰水(300mL)中，在0℃向混合物中缓慢加入HCl溶液(1M)调节pH＝8～9，将所得混合物用EtOAc(400mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(500mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到((1r,4r)-4-(二苄基氨基)环己基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(反式)(48.5g)，其为浅棕色固体，其直接使用。MS(M+H)+＝409.2
步骤3、(1r,4r)-N1,N1-二苄基-N4-甲基环己烷-1,4-二胺(反式)(4)的合成
向((1r,4r)-4-(二苄氨基)环己基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(反式)(48.5g，118.71mmol)在DCM(100mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，148.35mL)，将混合物在15℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的主峰(99％)。将反应混合物真空浓缩。将残余物与MTBE(60mL)一起研磨10分钟，过滤混悬液，用MTBE(40mL)洗涤滤饼。收集滤饼并真空干燥，得到(1r,4r)-N1,N1-二苄基-N4-甲基环己烷-1,4-二胺(反式)(43.8g，2HCl盐)，其为浅黄色固体。MS(M+H)+＝309.2
步骤4、4-((((1r,4r)-4-(二苄基氨基)环己基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(反式)(6)的合成
在0℃向(1r,4r)-N1,N1-二苄基-N4-甲基环己烷-1,4-二胺(反式)(6g，15.73mmol，2HCl盐)和KOAc(3.86g，39.33mmol)在DMF(30mL)和THF(150mL)中的溶液中加入4-甲酰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(3.36g，15.73mmol)，将混合物在0℃搅拌30分钟，然后加入NaBH(OAc)3(6.67g，31.46mmol)，将所得混合物在10℃搅拌14小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的主峰(96％)。将反应混合物真空浓缩以除去大部分溶剂，将残余物用H2O(300mL)稀释并用DCM(150mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到4-((((1r,4r)-4-(二苄基氨基)环己基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(反式)(8.3g)，其为灰白色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝506.3
步骤5、4-((((1r,4r)-4-氨基环己基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(反式)(7)的合成
在N2气氛下向4-((((1r,4r)-4-(二苄基氨基)环己基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(反式)(8.3g，16.41mmol)在CF3CH2OH(100mL)中的溶液中加入Pd(OH)2/C(1g，10％纯度)，将混合物脱气并用H2鼓吹3次，在H2(15psi)气氛下将混悬液在15℃搅拌24小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且残余44％的4-((((1r,4r)-4-(苄基氨基)环己基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯，在H2(15psi)气氛下将反应混合物在15℃再搅拌32小时。LCMS显示起始材料被消耗。过滤混合物，用CF3CH2OH(100mL)洗涤滤饼，真空浓缩滤液。将残余物与MTBE(20mL)一起研磨20分钟，过滤混悬液，用MTBE(20mL)洗涤滤饼，真空浓缩滤液，得到4-((((1r,4r)-4-氨基环己基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(反式)(3.45g，10.60mmol，64.58％产率)，其为粉红色固体。MS(M+H)+＝326.2
步骤6、4-((((1r,4r)-4-(4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)环己基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(反式)(9)的合成
向4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(500mg，1.19mmol)在DMF(10mL)中的溶液中加入HATU(586.50mg，1.54mmol)和DIPEA(306.70mg，2.37mmol，413.34μL)，将混合物在15℃搅拌15分钟，然后加入4-((((1r,4r)-4-氨基环己基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(反式)(386.20mg，1.19mmol)，将所得混合物在15℃搅拌1小时。LCMS显示具有所需质量的峰(80％)。将残余物用H2O(100mL)稀释并用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(12g硅胶快速柱，100％ EtOAc至10％ DCM/甲醇，梯度为80mL/min)纯化，得到4-((((1r,4r)-4-(4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)环己基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(反式)(420mg，576.23μmol，48.56％产率)，其为棕色固体。MS(M+H)+＝729.3
步骤7、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-((1r,4r)-4-(甲基(哌啶-4-基甲基)氨基)环己基)苯甲酰胺(反式)(10)的合成
向4-((((1r,4r)-4-(4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)环己基)(甲基)氨基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(反式)(160mg，219.52μmol)在DCM(2mL)中的溶液中加入TFA(250.30mg，2.20mmol，162.53μL)，将混合物在15℃搅拌3小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(83％)。将反应混合物真空浓缩，得到4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-((1r,4r)-4-(甲基(哌啶-4-基甲基)氨基)环己基)苯甲酰胺(反式)(170mg，TFA盐)为棕色胶状物，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝629.4
步骤8、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)(甲基)氨基)环己基)-3-甲氧基苯甲酰胺(反式)(化合物152)的合成
将4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-((1r,4r)-4-(甲基(哌啶-4-基甲基)氨基)环己基)苯甲酰胺(反式)(85mg，114.44μmol，TFA盐)、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(41.09mg，148.77μmol)和DIPEA(147.90mg，1.14mmol，199.33μL)在DMSO(1.5mL)中的混合物在100℃搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的峰(75％)。向混合物中加入CH3COOH调节pH<7。将所得混合物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex C18 75*30mm*3μn；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：18％-48％，2min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：WatersXbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：48％-78％，8min)纯化，将洗脱液冷冻干燥，得到4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)甲基)(甲基)氨基)环己基)-3-甲氧基苯甲酰胺(反式)(20.2mg，21.68μmol，18.95％产率，95％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝885.3。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(br s,1H),8.35-8.25(m,1H),8.22(d,J＝1.6Hz,1H),8.05(br d,J＝6.9Hz,1H),7.87(s,1H),7.73-7.61(m,1H),7.56-7.43(m,2H),7.32(br t,J＝7.6Hz,2H),5.15-5.02(m,1H),4.95-4.80(m,1H),4.03(br t,J＝13.4Hz,2H),3.93(s,3H),3.80-3.61(m,3H),3.29(s,3H),2.87(br t,J＝11.1Hz,3H),2.64-2.56(m,2H),2.34-2.25(m,3H),2.22(s,3H),2.07-1.98(m,1H),1.97-1.88(m,2H),1.86-1.72(m,4H),1.66-1.55(m,1H),1.36(br s,4H),1.29(br d,J＝11.5Hz,2H),1.24(br d,J＝6.5Hz,6H)。
实施例153、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-(((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)甲基)(甲基)氨基)环己基)-3-甲氧基苯甲酰胺(反式)(化合物153)的合成
按照与实施例152中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物153。
MS(M+H)+＝885.3,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.07(s,1H),8.35-8.26(m,1H),8.21(s,1H),8.10-7.99(m,1H),7.86(s,1H),7.65(d,J＝8.5Hz,1H),7.56-7.41(m,2H),7.30(s,1H),7.26-7.17(m,1H),5.06(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.95-4.79(m,1H),4.15-3.97(m,4H),3.93(s,3H),3.79-3.63(m,1H),3.30(s,3H),2.97(t,J＝12.1Hz,2H),2.92-2.81(m,1H),2.62-2.59(m,2H),2.33-2.28(m,1H),2.24(d,J＝6.4Hz,2H),2.20(s,3H),2.06-1.97(m,1H),1.92-1.83(m,2H),1.85-1.62(m,5H),1.40-1.30(m,4H),1.24(d,J＝6.6Hz,6H),1.19-1.06(m,2H)。
实施例154、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物154)的合成
步骤1、4-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(2)的合成
向3-氧代吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(5g，26.99mmol)和哌嗪-1-羧酸苄酯(5.95g，26.99mmol，5.22mL)在DCE(50mL)中的溶液中加入AcOH(162.11mg，2.70mmol，154.39μL)，将混合物在20℃搅拌0.5小时，然后加入NaBH(OAc)3(17.16g，80.98mmol)，将所得混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示所需质量，将混合物用水(50mL)稀释，用EtOAc(30mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，将滤液真空浓缩，得到4-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基)哌嗪1-羧酸苄酯(9g，粗品)，其为黄色油状物，其直接使用。MS(M+H)+＝390.3
步骤2、4-(吡咯烷-3-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(3)的合成
向4-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(9g，23.11mmol)在二氧六环(10mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，8mL)，将混合物在20℃搅拌2小时。LCMS显示所需质量，过滤混合物。将滤饼真空干燥，得到4-(吡咯烷-3-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(6.3g，粗品，HCl盐)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝290.1
步骤3、4-(1-亚硝基吡咯烷-3-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(4)的合成
向4-(吡咯烷-3-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(6.3g，19.34mmol，HCl盐)在H2O(50mL)中的溶液中加入AcOH(56.70g，944.18mmol，54.00mL)和NaNO2(1.33g，19.34mmol)，将混合物在15℃搅拌16小时。LCMS显示所需质量，将混合物用水(50mL)稀释，并用NaHCO3调节pH至7～8，然后用EtOAc(50mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩滤液，得到4-(1-亚硝基吡咯烷-3-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(1.8g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝319.1
步骤4、4-(1-氨基吡咯烷-3-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(5)的合成
在-10℃向4-(1-亚硝基吡咯烷-3-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(0.9g，2.83mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中加入Zn(1.11g，16.96mmol)和AcOH(9.45g，157.36mmol，9.00mL)，加入后，将混悬液升温至15℃，并在15℃搅拌2小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰。过滤反应混合物，真空浓缩滤液，得到4-(1-氨基吡咯烷-3-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(500mg，粗品)，其为棕色油状物。MS(M+H)+＝305.1
步骤5、4-(1-(4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)吡咯烷-3-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(6)的合成
向4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(320mg，759.38μmol)在DMF(6mL)中的溶液中加入HATU(433.11mg，1.14mmol)和DIPEA(294.43mg，2.28mmol，396.81μL)，然后加入4-(1-氨基吡咯烷-3-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(300.49mg，987.19μmol)，将所得混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到所需产物。将反应混合物用水(3mL)稀释，并用EtOAc(5mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将粗产物通过快速硅胶色谱法(Biotage，4g 硅胶快速柱，10％ MeOH/DCM梯度@20mL/min)纯化，得到4-(1-(4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)吡咯烷-3-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(380mg，504.68μmol，66.46％产率，94％纯度)，其为棕色粉末。MS(M+H)+＝708.4
步骤6、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(3-(哌嗪-1-基)吡咯烷-1-基)苯甲酰胺(7)的合成
在N2气氛下向4-(1-(4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)吡咯烷-3-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(280mg，395.61μmol)在CF3CH2OH(12mL)中的溶液中加入Pd/C(419.35mg，395.61μmol，10％纯度)，将混合物脱气并用H2鼓吹3次。在H2(15psi)下将混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗，以及具有所需质量的峰。过滤混合物，真空浓缩滤液，得到4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(3-(哌嗪-1-基)吡咯烷-1-基)苯甲酰胺(250mg，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝574.4
步骤7、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物154)的合成
向4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(3-(哌嗪-1-基)吡咯烷-1-基)苯甲酰胺(80mg，139.46μmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(46.23mg，167.35μmol)在DMSO(2mL)中的溶液中加入DIPEA(54.07mg，418.38μmol，72.87μL)和NaI(4.18mg，27.89μmol)，将混合物在90℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗，具有所需质量的峰。将混合物用水(3mL)稀释，并用EtOAc(5mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将粗产物通过快速硅胶色谱法(Biotage，4g 硅胶快速柱，4～15％ MeOH/EtOAc梯度洗脱液@20mL/min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：32％-62％，10min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(7.6mg，8.98μmol，6.44％产率，98.0％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝830.4。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(s,1H),9.37(s,1H),8.32(d,J＝8.50Hz,1H),8.23(s,1H),7.89(s,1H),7.70(d,J＝8.50Hz,1H),7.48-7.42(m,2H),7.36(s,1H),7.28(d,J＝8.63Hz,1H),5.08(dd,J＝12.82,5.44Hz,1H),4.92-4.88(m,1H),4.05(t,J＝13.63Hz,2H),3.94(s,3H),3.55-3.46(m,4H),3.31(s,3H),3.20-3.09(m,2H),3.09-2.98(m,3H),2.98-2.82(m,2H),2.66-2.54(m,5H),2.07-1.96(m,2H),1.83-1.74(m,1H),1.25(d,J＝6.75Hz,6H)。
实施例155、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物155)的合成
按照与实施例154中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物155。
EtOAc
MS(M+H)+＝830.5,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(s,1H),9.38(s,1H),8.32(d,J＝8.75Hz,1H),8.23(s,1H),7.89(s,1H),7.72(t,J＝7.75Hz,1H),7.49-7.43(m,2H),7.40-7.32(m,2H),5.10(dd,J＝12.76,5.38Hz,1H),4.94-4.84(m,1H),4.04(t,J＝13.57Hz,2H),3.94(s,3H),3.33-3.32(m,4H),3.31(s,3H),3.20-3.10(m,2H),3.09-2.99(m,3H),2.99-2.82(m,2H),2.72-2.57(m,5H),2.08-1.96(m,2H),1.85-1.73(m,1H),1.25(d,J＝6.75Hz,6H)。
实施例156、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-((2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙基)(甲基)氨基)环己基)-3-甲氧基苯甲酰胺(反式)(化合物156)的合成
按照与实施例152中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物156。
MS(M+H)+＝900.6,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(br s,1H),8.34-8.28(m,1H),8.23(s,1H),8.07(br d,J＝7.3Hz,1H),7.88(s,1H),7.69(d,J＝8.8Hz,1H),7.53-7.48(m,2H),7.35(s,1H),7.27(br d,J＝9.0Hz,1H),5.08(dd,J＝5.8,12.4Hz,1H),4.94-4.84(m,1H),4.05(br t,J＝13.8Hz,2H),3.94(s,3H),3.79-3.70(m,1H),3.47-3.41(m,4H),3.31(s,3H),2.95-2.84(m,1H),2.53-2.43(m,9H),2.23(s,3H),2.07-1.98(m,2H),1.96-1.85(m,3H),1.82-1.75(m,2H),1.41-1.34(m,4H),1.28-1.21(m,6H)。
实施例157、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)甲基)-3,3-二氟哌啶-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物157)的合成
步骤1、(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)甲基)-3,3-二氟哌啶-1-基)氨基甲酸叔丁酯(3)的合成
在20℃向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(300mg，722.42μmol，2HCl)和(1-((叔丁氧羰基)氨基)-3,3-二氟哌啶-4-基)甲基4-甲基苯磺酸酯(350mg，832.40μmol)在DMF(6mL)中的溶液中加入DIPEA(373.46mg，2.89mmol)和NaI(21.66mg，144.48μmol)。将所得混合物在60℃搅拌14小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及所需质量。将混合物倒入水(10mL)中并用EtOAc(10mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并浓缩，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱法(4g硅胶柱，EtOAc/石油醚＝20-60％，40mL/min)纯化，得到粗产物，将其通过制备型TLC(纯EtOAc，Rf＝0.4)进一步纯化，得到(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)甲基)-3,3-二氟哌啶-1-基)氨基甲酸叔丁酯(40mg，67.73μmol，9.37％产率)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝591.3
步骤2、4-(4-((1-氨基-3,3-二氟哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(4)的合成
在20℃向(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)甲基)-3,3-二氟哌啶-1-基)氨基甲酸叔丁酯(30mg)在DCM(5mL)中的溶液中加入TFA(3.08g，2mL)。将所得溶液在20℃搅拌30分钟。LCMS显示具有所需质量的主峰。将反应溶液浓缩，得到4-(4-((1-氨基-3,3-二氟哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(15mg，粗品，2TFA)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝491.2
步骤3、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)甲基)-3,3-二氟哌啶-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物157)的合成
在20℃向4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(21.11mg，50.10μmol)、DIPEA(35.97mg，278.34μmol)和HATU(21.17mg，55.67μmol)在DMF(1mL)中的溶液中加入4-(4-((1-氨基-3,3-二氟哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(40mg，粗品，2TFA)。将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及所需质量。将反应溶液倒入水(10mL)中并用EtOAc(5mL×4)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：40％-70％，9min)进一步纯化并冻干，得到4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)甲基)-3,3-二氟哌啶-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(7.1mg，7.36μmol，13.23％产率，92.7％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝893.9
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.48(d,J＝8.6Hz,1H),8.04(s,1H),8.01(s,1H),7.74(s,1H),7.69(br s,1H),7.64-7.59(m,1H),7.42(d,J＝7.0Hz,1H),7.38(s,1H),7.26-7.21(m,1H),7.18(d,J＝8.4Hz,1H),5.03-4.93(m,2H),3.98(s,3H),3.88(t,J＝13.0Hz,2H),3.69-3.55(m,1H),3.52-3.33(m,9H),3.30-3.26(m,1H),2.95-2.84(m,2H),2.84-2.72(m,4H),2.70-2.59(m,2H),2.57-2.47(m,1H),2.19-2.02(m,3H),1.75-1.68(m,1H),1.33(d,J＝6.7Hz,6H)。
实施例158、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)甲基)-3,3-二氟哌啶-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物158)的合成
按照与实施例157中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物158。
MS(M+H)+＝880.4.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.48(d,J＝8.44Hz,1H),8.08-8.02(m,2H),7.77-7.69(m,2H),7.57(d,J＝7.21Hz,1H),7.45(t,J＝7.70Hz,1H),7.39(s,1H),7.25(s,1H),7.16(d,J＝7.95Hz,1H),5.26(dd,J＝13.14,5.07Hz,1H),5.02-4.93(m,1H),4.51-4.27(m,2H),3.98(s,3H),3.88(t,J＝13.08Hz,2H),3.73-3.56(m,1H),3.53-3.36(m,5H),3.33-3.25(m,1H),3.18-3.01(m,4H),2.99-2.86(m,2H),2.82-2.67(m,3H),2.61-2.52(m,2H),2.50-2.34(m,2H),2.29-2.19(m,1H),2.16-2.02(m,2H),1.74-1.67(m,1H),1.33(d,J＝6.85Hz,6H)。
实施例159、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物159)的合成
步骤1、4-(1-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(2)的合成
向哌嗪-1-羧酸苄酯(8g，36.32mmol，7.02mL)、3-氧代氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(6.22g，36.32mmol)在DCE(80mL)中的溶液中加入NaBH(OAc)3(15.40g，72.64mmol)和HOAc(1.09g，18.16mmol，1.04mL)。将混合物在25℃搅拌2小时。TLC(石油醚:EtOAc＝1:2)显示形成两个新斑点。在0℃将饱和碳酸氢钠溶液(200mL)缓慢加入到混合物中。然后用DCM(100mL×3)萃取混合物。将合并的有机层用盐水(150mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到4-(1-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(14g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝376.3
步骤2、4-(氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(3)的合成
向4-(1-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(14g，37.29mmol)在DCM(50mL)中的溶液中加入TFA(15.40g，135.06mmol，10mL)。将混合物在25℃搅拌14小时。LCMS显示检测到约60％的所需质量。将混合物减压浓缩，得到4-(氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(25g，粗品，TFA盐)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝275.9
步骤3、4-(1-亚硝基氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(4)的合成
向4-(氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(25g，粗品，TFA)在H2O(40mL)中的溶液中加入NaNO2(6.64g，96.31mmol)在H2O(40mL)和HOAc(5.78g，96.31mmol，5.51mL)中的溶液。将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示具有所需质量的峰(约70％)。通过饱和碳酸氢钠溶液将反应混合物的pH调节至约8并用EtOAc(100mL×3)萃取。将合并的有机层用饱和盐水(150mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到4-(1-亚硝基氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(12g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝305.2
步骤4、4-(1-氨基氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(5)的合成
在0℃向4-(1-亚硝基氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(12g，粗品)在THF(30mL)中的溶液中加入NH4Cl(8.44g，157.72mmol)在H2O(30mL)中的溶液和Zn(5.47g，83.65mmol)。将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示具有所需质量的峰(约55％)。过滤混合物。将滤液减压浓缩。将残余物通过反相HPLC(柱：330g快速柱Welch Ultimate XB_C18 20-40μm；120A，流动相：[水(NH3H2O)-ACN]；B％：0％-60％，100mL/min)纯化，然后冻干，得到4-(1-氨基氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(7.3g，23.13mmol，产率58.66％，纯度92％)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝291.1
步骤5、4-(1-(4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(7)的合成
向4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(1.18g，2.79mmol)在DMF(10mL)中的溶液中加入HATU(1.77g，4.65mmol)和DIPEA(1.20g，9.30mmol，1.62mL)。然后0.5小时后将4-(1-氨基氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(0.9g，3.10mmol)加入到混合物中。将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示具有所需质量的峰(约44％)。将反应混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(100mL×3)萃取。将合并的有机层用饱和盐水(150mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(20g Sepa硅胶快速柱，0～60％石油醚:EtOAc/乙醇(1:1)梯度洗脱液@60mL/min)纯化，得到4-(1-(4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(0.96g，1.35mmol，产率43.53％，纯度97.5％)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝694.4
步骤6、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(3-(哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-基)苯甲酰胺(8)的合成
在N2气氛下，向4-(1-(4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(0.96g，1.38mmol)在CF3CH2OH(30mL)中的溶液中加入Pd/C(0.1g，691.90μmol，10％纯度)。将混合物脱气并用H2鼓吹3次，在H2(15psi)下将混悬液在25℃搅拌12小时。LCMS显示具有所需质量的主峰(约90％)。过滤混合物。将滤液减压浓缩，得到4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(3-(哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-基)苯甲酰胺(720mg，粗品)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝560.4
步骤7、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物159)的合成
在25℃向4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(3-(哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-基)苯甲酰胺(100mg，粗品)在DMSO(2mL)中的溶液中加入TEA(54.25mg，536.09μmol，74.62μL)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(49.36mg，178.70μmol)。将混合物在100℃搅拌2小时。LCMS显示具有所需质量的峰(约17％)。将反应混合物用水(20mL)稀释并用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150x 25mm x 10μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：11％-41％，10min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge150x25mm x 5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：33％-63％，8min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(11.6mg，13.85μmol，7.75％产率，97.4％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝816.4。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(s,1H),9.53(s,1H),8.34-8.27(m,1H),8.22(s,1H),7.88(s,1H),7.69(d,J＝8.6Hz,1H),7.49-7.42(m,2H),7.37(s,1H),7.29(d,J＝8.6Hz,1H),5.08(dd,J＝5.3,12.9Hz,1H),4.92-4.82(m,1H),4.03(t,J＝13.5Hz,2H),3.93(s,3H),3.78(t,J＝6.4Hz,2H),3.67-3.63(m,2H),3.45-3.50(m,4H),3.29(s,3H),2.97-2.83(m,2H),2.61-2.56(m,2H),2.47-2.42(m,4H),2.07-1.98(m,1H),1.24(d,J＝6.7Hz,6H)。
实施例160、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(3-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物160)的合成
按照与实施例159中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物160。
MS(M+H)+＝816.4,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(s,1H),9.52(s,1H),8.34-8.28(m,1H),8.22(s,1H),7.88(s,1H),7.76-7.67(m,1H),7.49-7.41(m,2H),7.36(dd,J＝5.0,7.5Hz,2H),5.09(dd,J＝5.3,12.7Hz,1H),4.90-4.84(m,1H),4.04(t,J＝13.6Hz,2H),3.93(s,3H),3.77(t,J＝6.5Hz,2H),3.68-3.65(m,2H),3.36-3.33(m,4H),3.30(s,3H),3.01-2.82(m,2H),2.64-2.54(m,6H),2.09-1.98(m,1H),1.24(d,J＝6.7Hz,6H)。
实施例161、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(3-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)甲基)氮杂环丁烷-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物161)的合成
步骤1、(1-亚硝基氮杂环丁烷-3-基)甲醇(2)的合成
在0℃向氮杂环丁烷-3-基甲醇(9.5g，76.87mmol，HCl盐)在H2O(40mL)中的溶液中加入NaNO2(7.96g，115.31mmol)在H2O(40mL)和HOAc(6.92g，115.31mmol，6.59mL)中的溶液。将混合物在25℃搅拌5小时。TLC(石油醚:EtOAc＝1:2)显示氮杂环丁烷-3-基甲醇完全消耗并且形成一个新斑点。用饱和碳酸氢钠溶液将反应混合物的pH调节至7左右。然后用EtOAc/乙醇(v/v＝10/1)(100mL×15)萃取混合物。将合并的有机层减压浓缩，得到(1-亚硝基氮杂环丁烷-3-基)甲醇(9g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝117.2
步骤2、(1-氨基氮杂环丁烷-3-基)甲醇(3)的合成
在0℃向(1-亚硝基氮杂环丁烷-3-基)甲醇(9g，粗品)在THF(30mL)中的溶液中加入Zn(18.98g，290.26mmol)和NH4Cl(16.58g，310.03mmol)在H2O(30mL)中的溶液。将混合物在25℃搅拌2小时。TLC(石油醚:EtOAc＝10:1)显示(1-亚硝基氮杂环丁烷-3-基)甲醇完全消耗。将混合物过滤以除去不溶固体。将滤液减压浓缩，得到(1-氨基氮杂环丁烷-3-基)甲醇(19g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝103.1
步骤3、(3-(羟甲基)氮杂环丁烷-1-基)氨基甲酸苄酯(4)的合成
向(1-氨基氮杂环丁烷-3-基)甲醇(2g，19.58mmol)在THF(10mL)中的溶液中加入(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)碳酸苄酯(4.88g，19.58mmol)和NaOH(3.92g，97.91mmol)在H2O(10mL)中的溶液。将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示具有所需质量的峰(30％)。将反应混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到(3-(羟甲基)氮杂环丁烷-1-基)氨基甲酸苄酯(3.2g，9.75mmol，49.80％产率，72％纯度)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝237.2
步骤4、(1-(((苄氧基)羰基)氨基)氮杂环丁烷-3-基)甲基4-甲基苯磺酸酯(5)的合成
向(3-(羟甲基)氮杂环丁烷-1-基)氨基甲酸苄酯(3g，12.70mmol)在DCM(30mL)中的溶液中加入TosCl(2.42g，12.70mmol)、TEA(2.57g，25.40mmol，3.53mL)和DMAP(775.62mg，6.35mmol)。将混合物在20℃搅拌2小时。LCMS显示具有所需质量的峰(50％)。将反应混合物用水(50mL)稀释并用DCM(50mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(40g硅胶快速柱，0～50％石油醚:EtOAc梯度洗脱液@80mL/min)纯化，得到(1-(((苄氧基)羰基)氨基)氮杂环丁烷-3-基)甲基4-甲基苯磺酸酯(1.4g，3.44mmol，27.11％产率，96％纯度)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝391.1
步骤5、(3-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)甲基)氮杂环丁烷-1-基)氨基甲酸苄酯(7)的合成
向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(哌嗪-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(776.14mg，2.05mmol，HCl盐)在DMF(8mL)中的溶液加入(1-(((苄氧基)羰基)氨基)氮杂环丁烷-3-基)甲基4-甲基苯磺酸酯(0.8g，2.05mmol)、DIPEA(794.42mg，6.15mmol，1.07mL)和NaI(153.56mg，1.02mmol)。将混合物在80℃搅拌12小时。LCMS显示具有所需质量的峰(10％)。将混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(20g硅胶快速柱，0～60％石油醚:EtOAc/乙醇(v/v＝1/1)梯度洗脱液@80mL/min)纯化，得到(3-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)甲基)氮杂环丁烷-1-基)氨基甲酸苄酯(320mg，508.03μmol，24.80％产率，89％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝561.1
步骤6、4-(4-((1-氨基氮杂环丁烷-3-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(8)的合成
将(3-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)甲基)氮杂环丁烷-1-基)氨基甲酸苄酯(200mg，356.76μmol)在TFA(5mL)中的溶液在40℃搅拌4小时。LCMS显示具有所需质量的峰(15％)。将混合物减压浓缩，得到4-(4-((1-氨基氮杂环丁烷-3-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.2g，粗品，TFA盐)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝427.1
步骤7、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(3-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)甲基)氮杂环丁烷-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物161)的合成
向4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(60mg，142.38μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(81.21mg，213.58μmol)和DIPEA(92.01mg，711.92μmol，124.00μL)，搅拌0.5小时后。然后加入4-(4-((1-氨基氮杂环丁烷-3-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(192.39mg，粗品，TFA盐)，将所得混合物在25℃搅拌1小时。LCMS显示具有所需质量的峰(50％)。将反应混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(20g 硅胶快速柱，0～100％石油醚/甲醇梯度@80mL/min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150x 50mm x 10μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：27％-57％，10min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(3-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌嗪-1-基)甲基)氮杂环丁烷-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(47.24mg，53.57μmol，37.62％产率，94.1％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝830.4。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.07(s,1H),9.46(s,1H),8.32-8.27(m,1H),8.22(s,1H),7.88(s,1H),7.70(dd,J＝7.3,8.3Hz,1H),7.45-7.39(m,2H),7.35(dd,J＝7.9,9.8Hz,2H),5.09(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.90-4.84(m,1H),4.03(t,J＝13.5Hz,2H),3.93(s,3H),3.80(t,J＝6.6Hz,2H),3.55-3.47(m,2H),3.32-3.27(m,7H),2.95-2.83(m,1H),2.64-2.54(m,9H),2.07-1.98(m,1H),1.24(d,J＝6.6Hz,6H)。
实施例162、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氮杂环丁烷-3-基)甲基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物162)的合成
步骤1、(1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氮杂环丁烷-3-基)甲基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(3)的合成
向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮(500mg，1.70mmol)和(1-(氮杂环丁烷-3-基甲基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(1.14g，2.72mmol，TFA盐)在DMSO(10mL)中的溶液中加入DIPEA(1.10g，8.50mmol，1.48mL)，将混合物在100℃搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的峰(14％)。将反应混合物用H2O(100mL)稀释并用EtOAc(60mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL×5)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(12g 硅胶快速柱，0～5％甲醇/EtOAc梯度@100mL/min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Phenomenex C18 75*30mm*3μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：8％-38％，7min)纯化，将洗脱液冷冻干燥，得到(1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氮杂环丁烷-3-基)甲基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(350mg，605.95μmol，35.66％产率)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝578.1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(s,1H),7.58(d,J＝11.3Hz,1H),7.45-7.27(m,5H),7.23(br d,J＝7.8Hz,1H),6.89(d,J＝7.8Hz,1H),5.13-4.90(m,3H),4.24(br t,J＝7.3Hz,2H),3.80(br t,J＝6.2Hz,2H),3.50-3.37(m,1H),3.01-2.82(m,2H),2.77(br d,J＝11.1Hz,2H),2.64-2.53(m,4H),2.08-1.88(m,3H),1.71(br d,J＝10.5Hz,2H),1.49-1.28(m,2H)。
步骤2、5-(3-((4-氨基哌啶-1-基)甲基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(4)的合成
在N2气氛下向(1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氮杂环丁烷-3-基)甲基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(310mg，536.70μmol)在CF3CH2OH(20mL)中的溶液中加入Pd(OH)2/C(100mg，20％纯度)，将混悬液脱气并用H2鼓吹数次。在H2(15psi)下将混合物在15℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(87％)。将反应混合物过滤并用CF3CH2OH(100mL)洗涤。将滤液浓缩，得到5-(3-((4-氨基哌啶-1-基)甲基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(200mg)，其为黄色固体，其直接使用。MS(M+H)+＝444.2
步骤3、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氮杂环丁烷-3-基)甲基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物162)的合成
向4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(90mg，213.58μmol)在DMF(3mL)中的溶液中加入HATU(105.57mg，277.65μmol)和DIPEA(82.81mg，640.73μmol，111.60μL)，将混合物在15℃搅拌15分钟，然后得到5-(3-((4-氨基哌啶-1-基)甲基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(100mg，225.49μmol)，将所得混合物在15℃搅拌1小时。LCMS显示残余38％的4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸和22％的所需质量。向混合物中加入CH3COOH调节pH<7。将所得混合物通过制备型HPLC(柱：Shim-pack C18 150*25*10μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：10％-40％，10min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：WatersXbridge150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：43％-73％，8min)纯化，将洗脱液冷冻干燥，得到4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氮杂环丁烷-3-基)甲基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(8mg，8.97μmol，4.20％产率，95％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝847.1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.22-10.98(m,1H),8.37-8.27(m,1H),8.22(s,1H),8.15-8.05(m,1H),7.87(s,1H),7.59(d,J＝11.2Hz,1H),7.54-7.45(m,2H),6.90(d,J＝7.6Hz,1H),5.06(dd,J＝5.4,12.7Hz,1H),4.95-4.80(m,1H),4.27(br t,J＝7.5Hz,2H),4.04(br t,J＝13.6Hz,2H),3.94(s,3H),3.88-3.69(m,3H),3.30(s,3H),3.05-2.93(m,1H),2.93-2.75(m,3H),2.65-2.54(m,4H),2.09-1.98(m,3H),1.82-1.75(m,2H),1.64-1.53(m,2H),1.24(d,J＝6.7Hz,6H)。
实施例163、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-((3-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氮杂环丁烷-1-基)甲基)哌啶-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物163)的合成
步骤1、4-溴邻苯二甲酸二甲酯(2)的合成
在20℃向5-溴异苯并呋喃-1,3-二酮(10g，44.05mmol)在MeOH(100mL)中的溶液中加入氯磺酸(1.75g，15.02mmol，1.00mL)，将所得混合物在80℃搅拌16小时。TLC(SiO2，石油醚:EtOAc＝10:1)显示起始材料完全消耗并且形成一个主要的新斑点。将反应混合物真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(80g硅胶快速柱，0～9％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到4-溴邻苯二甲酸二甲酯(11.9g)，43.58mmol，98.92％产率)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝272.9
步骤2、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂硼烷-2-基)邻苯二甲酸二甲酯(4)的合成
在N2气氛下，在20℃向4-溴邻苯二甲酸二甲酯(11.9g，43.58mmol)和4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂硼烷)(13.28g，52.29mmol)在二氧六环(120mL)中的溶液中加入Pd(dppf)Cl2(1.59g，2.18mmol)和AcOK(8.55g，87.15mmol)，在N2气氛下将所得混合物在90℃搅拌16小时。TLC(SiO2，石油醚:EtOAc＝10:1)显示起始材料完全消耗并且形成一个主要的新斑点。过滤反应混合物，真空浓缩滤液。将残余物通过快速硅胶色谱法(80g 硅胶快速柱，0～5％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)邻苯二甲酸二甲酯(15.1g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝321.1
步骤3、4-(1-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-3-基)邻苯二甲酸二甲酯(6)的合成
在N2气氛下，在20℃向4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂硼烷-2-基)邻苯二甲酸二甲酯(4.6g，14.37mmol)在H2O(20mL)和二氧六环(60mL)中的溶液中加入3-碘氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(4.88g，17.24mmol)、Pd(dppf)Cl2DCM(1.17g，1.44mmol)和K3PO4(9.15g，43.11mmol)，在N2气氛下将所得混合物在90℃搅拌16小时。将反应混合物真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(80g 硅胶快速柱，0～33％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到4-(1-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-3-基)邻苯二甲酸二甲酯(2.3g，6.58mmol，45.82％产率)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝350
步骤4、4-(1-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-3-基)邻苯二甲酸(7)的合成
在20℃向4-(1-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-3-基)邻苯二甲酸二甲酯(2.3g，6.58mmol)在THF(6mL)和MeOH(6mL)和H2O(6mL)中的溶液中加入NaOH(1.32g，32.92mmol)，将所得混合物在80℃搅拌2小时。LCMS显示起始材料完全消耗。将反应混合物与另外2批次(1.2g和0.5g规模)合并以进行后处理。将反应混合物用H2O(20mL)稀释并用EtOAc(20mL×3)洗涤，弃去有机层。在0℃用HCl(12N)调节水相的PH＝6，用EtOAc(20mL×3)萃取所得混合物。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到4-(1-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-3-基)邻苯二甲酸(2.3g)，4.05mmol，61.46％产率)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝322.1
步骤5、3-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(9)的合成
在20℃向4-(1-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-3-基)邻苯二甲酸(2.3g，7.16mmol)在Py(20mL)中的溶液中加入3-氨基哌啶-2,6-二酮(2.36g，14.32mmol，HCl盐)，将所得混合物在120℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(48％)。将反应混合物用H2O(20mL)稀释并用EtOAc(20mL×3)萃取。将有机层用盐水(20mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(25g 硅胶快速柱，0～50％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到3-(2-(2,6-)二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(1.3g，3.14mmol，43.93％产率)，其为灰白色固体。MS(M-56+H)+＝358.3
步骤6、5-(氮杂环丁烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(10)的合成
在20℃向3-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(0.6g，1.45mmol)在DCM(3mL)中的溶液中加入TFA(827.41mg，7.26mmol，537.28μL)，将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(68％)。将反应混合物与另一批次(0.2g规模)合并以进行后处理。将合并的反应混合物真空浓缩，得到5-(氮杂环丁烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(1g，粗品，TFA盐)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝314.4
步骤7、(4-((3-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氮杂环丁烷-1-基)甲基)哌啶-1-基)氨基甲酸叔丁酯(12)的合成
在20℃，向5-(氮杂环丁烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(1g，3.19mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中加入NaOAc(1.57g，19.15mmol)，然后加入(4-甲酰基哌啶-1-基)氨基甲酸叔丁酯(2.91g，12.77mmol)，搅拌1小时。然后在20℃缓慢加入NaBH3CN(601.73mg，9.58mmol)，将所得混合物在20℃搅拌2小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(13％)。将反应混合物真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(12g 硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚至0～60％二氯甲烷/甲醇梯度洗脱液@100mL/min)纯化并通过制备型HPLC(柱：Shim-pack C18 150*25*10μm；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：8％-38％,10min)再纯化，将洗脱液冻干，得到(4-((3-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氮杂环丁烷-1-基)甲基)哌啶-1-基)氨基甲酸叔丁酯(253mg，395.55μmol，12.39％产率，TFA盐)，其为白色固体。MS(M+H)+＝526.3
步骤8、5-(1-((1-氨基哌啶-4-基)甲基)氮杂环丁烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(13)的合成
在20℃向(4-((3-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氮杂环丁烷-1-基)甲基)哌啶-1-基)氨基甲酸叔丁酯(128mg，243.53μmol)在DCM(2mL)中的溶液中加入TFA(138.84mg，1.22mmol，90.16μL)，将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰。将反应混合物真空浓缩，得到5-(1-((1-氨基哌啶-4-基)甲基)氮杂环丁烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(186mg，粗品，TFA盐)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝426.2
步骤9、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-((3-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氮杂环丁烷-1-基)甲基)哌啶-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物163)的合成
向4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(100mg，237.31μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入DIPEA(61.34mg，474.61μmol，82.67μL)和HATU(99.25mg，261.04μmol)。将混合物在20℃搅拌10分钟，加入5-(1-((1-氨基哌啶-4-基)甲基)氮杂环丁烷-3-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(185.64mg，344.09μmol，TFA盐)在DMF(2mL)中的溶液和DIPEA(122.68mg，949.22μmol，165.34μL)，将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(38％)。将反应混合物用H2O(15mL)稀释并用EtOAc(15mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi C18 150*25mm*10μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：19％-39％，10min)纯化，然后通过制备型TLC(SiO2，DCM：MeOH＝10:1)纯化，将残余物冻干，得到4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-((3-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氮杂环丁烷-1-基)甲基)哌啶-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(10.3mg，11.68μmol，23.60％产率，95％纯度，0.2FA盐)，其为白色固体。MS(M+H)+＝829.0
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.12(s,1H),9.26(s,1H),8.30(br d,J＝8.2Hz,1H),8.21(s,1H),8.15(s,0.2H),7.96(s,1H),7.93-7.83(m,3H),7.46-7.39(m,2H),5.15(dd,J＝5.3,12.8Hz,1H),4.92-4.82(m,1H),4.03(br t,J＝13.5Hz,2H),3.93(s,3H),3.87-3.79(m,1H),3.68(br t,J＝6.4Hz,2H),3.32(br s,3H),3.00(br d,J＝9.7Hz,2H),2.96-2.82(m,2H),2.74(br t,J＝9.8Hz,2H),2.64-2.54(m,3H),2.42(br s,2H),2.11-1.95(m,2H),1.74(br d,J＝9.2Hz,2H),1.31(br d,J＝5.7Hz,2H),1.25(s,3H),1.23(s,3H)。
实施例164、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(3-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)(甲基)氨基)环丁基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物164)的合成
步骤1、4-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)环丁基)氨基)哌啶-1-羧酸苄酯(2)的合成
在20℃向(3-氧代环丁基)氨基甲酸叔丁酯(1g，5.40mmol)和4-氨基哌啶-1-羧酸苄酯(1.26g，5.40mmol)在MeOH(15mL)中的溶液中加入AcOH(324.22mg，5.40mmol，308.78uL)，然后在20℃缓慢加入NaBH3CN(1.02g，16.20mmol)，将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示具有所需质量的峰(41％)。将反应混合物用H2O(30mL)稀释并用EtOAc(30mL×3)萃取。将合并的有机层用饱和NaHCO3(30mL×3)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤。将滤液浓缩，得到4-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)环丁基)氨基)哌啶-1-羧酸苄酯(2.1g，5.20mmol，96.39％产率)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝404.2
步骤2、4-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)环丁基)(甲基)氨基)哌啶-1-羧酸苄酯(3)的合成
向4-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)环丁基)氨基)哌啶-1-羧酸苄酯(0.9g，2.23mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中加入HOAc(133.94mg，2.23mmol，127.56μL)和HCHO(362.00mg，4.46mmol，332.11μL，37％纯度)，将混合物在20℃搅拌30分钟。然后加入NaBH3CN(420.49mg，6.69mmol)，将所得混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示所需质量。将反应混合物减压浓缩。将残余物用EtOAc(10mL)稀释并用H2O(20mL×3)洗涤。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到4-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)环丁基)(甲基)氨基)哌啶-1-羧酸苄酯(1.2g，粗品)，其为无色油状物。MS(M+H)+＝418.4
步骤3、(3-(甲基(哌啶-4-基)氨基)环丁基)氨基甲酸叔丁酯(4)的合成
在N2气氛下，向4-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)环丁基)(甲基)氨基)哌啶-1-羧酸苄酯(1.2g，2.87mmol)在CF3CH2OH(10mL)中的溶液中加入Pd/C(0.2g，187.93μmol，10％纯度)，将混合物脱气并用H2鼓吹3次，然后在H2(15psi)下将混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示大部分起始材料残留。加入HOAc(3mL)，在H2(15psi)下将混合物在20℃再搅拌16小时。LCMS显示所需质量。过滤反应混合物。将滤液减压浓缩，得到(3-(甲基(哌啶-4-基)氨基)环丁基)氨基甲酸叔丁酯(1.6g，粗品)，其为黑色固体。MS(M+H)+＝284.4
步骤4、(3-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)(甲基)氨基)环丁基)氨基甲酸叔丁酯(6)的合成
向(3-(甲基(哌啶-4-基)氨基)环丁基)氨基甲酸叔丁酯(1.6g，5.65mmol)在DMSO(10mL)中的溶液中加入DIPEA(1.09g，8.47mmol，1.48mL)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(779.71mg，2.82mmol)，将混合物在100℃搅拌16小时。LCMS显示所需质量。将反应混合物用H2O(100mL)稀释并用EtOAc(30mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(20g硅胶快速柱，50～100％ EtOAc/石油醚至～100％ MeOH/EtOAc梯度洗脱液@100mL/min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Luna C18 150x 40mm x15μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：8％-38％,10min)纯化，将洗脱液冻干，得到(3-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)(甲基)氨基)环丁基)氨基甲酸叔丁酯(120mg，175.68μmol，6.22％产率，79％纯度，黄色固体。MS(M+H)+＝540.5
步骤5、4-(4-((3-氨基环丁基)(甲基)氨基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(7)的合成
在0℃向(3-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)(甲基)氨基)环丁基)氨基甲酸叔丁酯(120mg，222.38μmol)在DCM(1mL)中的溶液中加入TFA(308.00mg，2.70mmol，0.2mL)，将混合物在20℃搅拌2小时。LCMS显示所需质量。减压浓缩反应混合物，得到4-(4-((3-氨基环丁基)(甲基)氨基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(130mg，粗品，TFA)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝440.4
步骤6、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(3-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)(甲基)氨基)环丁基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物164)的合成
在20℃，将4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮卓-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(89.07mg，211.37μmol)、DIPEA(91.06mg，704.57μmol，122.72μL)和HATU(133.95mg，352.28μmol)在DMF(2mL)中的溶液搅拌20分钟。然后加入4-(4-((3-氨基环丁基)(甲基)氨基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(130mg，234.86μmol，TFA盐)和DIPEA(151.77mg，1.17mmol，204.54μL)的DMF(2mL)溶液，将所得混合物在20℃搅拌2小时。LCMS显示所需质量。将反应混合物用H2O(50mL)稀释并用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150x 25mm x5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：42％-72％，8min)纯化，得到4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(3-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)(甲基)氨基)环丁基)-3-甲氧基苯甲酰胺(31.3mg，35.28μmol，15.02％产率，95％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝843.7
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(s,1H),8.43(br d,J＝7.8Hz,1H),8.30(br d,J＝8.3Hz,1H),8.22(s,1H),7.87(s,1H),7.68(t,J＝7.8Hz,1H),7.56-7.49(m,2H),7.37-7.29(m,2H),5.10(br dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.88(td,J＝6.8,13.4Hz,1H),4.21-4.12(m,1H),4.03(br t,J＝13.6Hz,2H),3.94(s,3H),3.76(br d,J＝10.9Hz,2H),3.29(br s,3H),2.95-2.81(m,4H),2.68-2.60(m,3H),2.42(br d,J＝6.0Hz,2H),2.10(s,3H),2.07-2.00(m,1H),1.99-1.89(m,2H),1.70(br s,4H),1.24(br d,J＝6.7Hz,6H)。
实施例165、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(3-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)(甲基)氨基)环戊基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物165)的合成
步骤1、(3-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)(甲基)氨基)环戊基)氨基甲酸叔丁酯(3)的合成
向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(4-(甲基氨基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(120mg，294.94μmol，HCl盐)和(3-氧代环戊基)氨基甲酸叔丁酯(105.78mg，530.89μmol)在DCE(2mL)中的溶液中加入TEA(59.69mg，589.88μmol，82.10μL)。将混合物在20℃搅拌2小时。然后加入NaBH(OAc)3(187.53mg，884.82μmol)，将混合物在50℃搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的峰(63％)。在0℃加入水(15mL)淬灭反应混合物，然后用二氯甲烷(25mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水(15mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，将残余物通过快速硅胶色谱法(12g硅胶快速柱，0～100％ MeOH/EtOAc@50mL/min)纯化，得到(3-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)(甲基)氨基)环戊基)氨基甲酸叔丁酯(160mg，288.99μmol，97.98％产率)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝554.2
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ＝7.72-7.65(m,1H),7.41-7.39(m,1H),7.34(d,J＝8.3Hz,1H),5.11(dd,J＝5.4,12.4Hz,1H),4.04-4.00(m,1H),3.95-3.85(m,2H),3.83-3.73(m,1H),3.05-2.93(m,2H),2.89-2.59(m,7H),2.50-2.37(m,1H),2.28-1.98(m,8H),1.95(s,2H),1.89-1.79(m,1H),1.74-1.51(m,2H),1.44(s,9H)
步骤2、4-(4-((3-氨基环戊基)(甲基)氨基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(4)的合成
向(3-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)(甲基)氨基)环戊基)氨基甲酸叔丁酯(160mg，288.99μmol)在DCM(1.5mL)中的溶液中加入TFA(770.00mg，6.75mmol，500.00μL)。将混合物在20℃搅拌0.5小时。LCMS一个具有所需质量的峰(80％)。将反应混合物减压浓缩，得到4-(4-((3-氨基环戊基)(甲基)氨基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(100mg，176.19μmol，产率60.97％，TFA盐)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝454.3
步骤3、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(3-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)(甲基)氨基)环戊基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物165)的合成
向4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(75mg，177.98μmol)和4-(4-((3-氨基环戊基)(甲基)氨基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(95.96mg，169.08μmol，TFA盐)在DMF(1.5mL)中的溶液中加入HATU(101.51mg，266.97μmol)和DIPEA(115.01mg，889.90μmol，155.00μL)。将混合物在20℃搅拌3小时。LCMS显示一个具有所需质量的峰(39％)。在0℃加入水(15mL)淬灭反应混合物，然后用EtOAc(30mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水(15mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物，将其通过制备型TLC(SiO2，DCM：MeOH＝10:1)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：40％-70％,8min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(3-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)(甲基)氨基)环戊基)-3-甲氧基苯甲酰胺(13.7mg，14.87μmol，42.47％产率，93％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝857.2
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(s,1H),8.37-8.29(m,1H),8.25-8.17(m,2H),7.92-7.83(m,1H),7.73-7.62(m,1H),7.55-7.44(m,2H),7.38-7.28(m,2H),5.14-5.03(m,1H),4.94-4.83(m,1H),4.33-4.31(m,1H),4.09-3.99(m,2H),3.94(s,3H),3.79-3.72(m,2H),3.30(s,3H),2.91-2.84(m,5H),2.77-2.75(m,2H),2.17(s,3H),2.05-2.03(m,2H),1.96-1.85(m,2H),1.79-1.71(m,4H),1.63-1.40(m,3H),1.28-1.23(m,6H)。
实施例166、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(3-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)哌啶-4-基)(甲基)氨基)环己基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物166)的合成
按照与实施例165中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物166。
MS(M+H)+＝871.2,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.07(s,1H),8.34-8.26(m,1H),8.21(s,1H),7.96(d,J＝7.1Hz,1H),7.86(s,1H),7.71-7.63(m,1H),7.53-7.44(m,2H),7.33(t,J＝7.0Hz,2H),5.12-5.05(m,1H),4.93-4.82(m,1H),4.27-4.16(m,1H),4.07-3.99(m,2H),3.93(s,3H),3.80-3.70(m,2H),3.32-3.29(m,3H),2.94-2.87(m,5H),2.72-2.70(m,2H),2.26-2.18(m,3H),2.08-1.89(m,3H),1.82-1.65(m,7H),1.62-1.53(m,2H),1.48-1.41(m,1H),1.27-1.20(m,6H)。
实施例167、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-3,3-二氟哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物167)的合成
步骤1、4-(1-(叔丁氧基羰基)-3,3-二氟-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(3)的合成
在N2下，在20℃向3,3-二氟-4-氧代-哌啶-1-羧酸叔丁酯(4.7g，19.98mmol)和哌嗪-1-羧酸苄酯(4.40g，19.98mmol，3.86mL)在甲苯(80mL)和ACN(40mL)中的溶液中加入AcOH(2.40g，39.96mmol，2.29mL)和4A MS(5g)，将所得混合物在120℃搅拌12小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(72％)。过滤反应混合物，真空浓缩滤液。将残余物通过快速硅胶色谱法(40g 硅胶快速柱，0～33％ EtOAc/石油醚梯度@100mL/min)纯化，得到4-(1-(叔丁氧基羰基)-3,3-二氟-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(7.2g，16.46mmol，82.37％产率，100％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝438.2
步骤2、3,3-二氟-4-(哌嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(4)的合成
在N2气氛下，向4-(1-(叔丁氧基羰基)-3,3-二氟-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(7.2g，16.46mmol)在THF(50mL)中的溶液中加入Pd/C(2g，10％纯度)。将混悬液脱气并用H2鼓吹3次。在H2(15Psi)下将混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰。将反应混合物用THF(280mL)稀释并过滤。将滤液真空浓缩，得到3,3-二氟-4-(哌嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(5.5g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝306.4
步骤3、3,3-二氟-4-(4-亚硝基哌嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(5)的合成
在0℃，向3,3-二氟-4-(哌嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(5.5g，18.01mmol)在H2O(60mL)中的溶液中加入NaNO2(3.73g，54.03mmol)。然后在0℃滴加入AcOH(4.33g，72.05mmol，4.12mL)，将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有质量(M-56)的主峰(93％)。用饱和NaHCO3(60mL)将反应混合物的pH调节至9，然后用EtOAc(120mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到3,3-二氟-4-(4-亚硝基哌嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(5.3g，15.85mmol，产率88.01％)，其为黄色固体。MS(M-56+H)+＝279.4
步骤4、4-(4-氨基哌嗪-1-基)-3,3-二氟哌啶-1-羧酸叔丁酯(6)的合成
在0℃，向3,3-二氟-4-(4-亚硝基哌嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(5.3g，15.85mmol)在THF(50mL)和H2O(10mL)中的溶液中加入NH4Cl(3.39g，63.40mmol)。然后在0℃分批加入Zn(4.15g，63.40mmol)，将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰。将反应混合物用THF(60mL)稀释并过滤。将滤液真空浓缩，得到4-(4-氨基哌嗪-1-基)-3,3-二氟哌啶-1-羧酸叔丁酯(5.3g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝321.4
步骤5、4-(4-(((苄氧基)羰基)氨基)哌嗪-1-基)-3,3-二氟哌啶-1-羧酸叔丁酯(8)的合成
在20℃，向4-(4-氨基哌嗪-1-基)-3,3-二氟哌啶-1-羧酸叔丁酯(5.3g，16.54mmol)在THF(60mL)中的溶液中加入TEA(8.37g，82.71mmol，11.51mL)和CbzCl(4.23g，24.81mmol，3.53mL)，将所得混合物在20℃搅拌6小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(63％)。将反应混合物用H2O(120mL)稀释并用EtAOc(60mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(40g硅胶快速柱，0～50％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到4-(4-(((苄氧基)羰基)氨基)哌嗪-1-基)-3,3-二氟哌啶-1-羧酸叔丁酯(3.2g，7.04mmol，42.56％产率)，其为白色固体。MS(M+H)+＝455.3
步骤6、(4-(3,3-二氟哌啶-4-基)哌嗪-1-基)氨基甲酸苄酯(9)的合成
在20℃，向4-(4-(((苄氧基)羰基)氨基)哌嗪-1-基)-3,3-二氟哌啶-1-羧酸叔丁酯(2g，4.40mmol)在二氧六环(10mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，40mL)，将所得混合物在20℃搅拌0.5小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的主峰(96％)。将反应混合物真空浓缩，得到(4-(3,3-二氟哌啶-4-基)哌嗪-1-基)氨基甲酸苄酯(1.6g，粗品，HCl)，其为白色固体。MS(M+H)+＝355.2
步骤7、(4-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-3,3-二氟哌啶-4-基)哌嗪-1-基)氨基甲酸苄酯(11)的合成
在20℃，向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(300mg，1.09mmol)在DMSO(4mL)中的溶液中加入DIPEA(561.47mg，4.34mmol，756.69μL)和(4-(3,3-二氟哌啶-4-基)哌嗪-1-基)氨基甲酸苄酯(424.50mg，1.09mmol，HCl盐)，将所得混合物在120℃搅拌36小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(40％)。将反应混合物用H2O(15mL)稀释并用EtOAc(15mL×3)萃取。将有机层用盐水(15mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(10g 硅胶快速柱，0～60％EtOAc/石油醚梯度@100mL/min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Phenomenex SynergiPolar-RP 100*25mm*4um；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：29％-49％,7min)纯化，将洗脱液冻干，得到(4-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-3,3-二氟哌啶-4-基)哌嗪-1-基)氨基甲酸苄酯(68mg，111.36μmol，10.25％产率)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝611.2
步骤8、4-(4-(4-氨基哌嗪-1-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(12)的合成
将(4-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-3,3-二氟哌啶-4-基)哌嗪-1-基)氨基甲酸基苄酯(68mg，111.36μmol)在TFA(3mL)中的混合物在50℃搅拌3小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(50％)。将反应混合物真空浓缩，得到4-(4-(4-氨基哌嗪-1-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(58mg，粗品，HCl盐)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝477.2
步骤9、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-3,3-二氟哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物167)的合成
向4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(30mg，71.19μmol)在DMF(1mL)中的溶液中加入HATU(29.78mg，78.31μmol)和DIPEA(18.40mg，142.38μmol，24.80μL)。将混合物在20℃搅拌10分钟，加入4-(4-(4-氨基哌嗪-1-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(54.65mg，92.55μmol，TFA盐)在DMF(1mL)中的溶液和DIPEA(18.40mg，142.38μmol，24.80μL)，将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(32％)。将反应混合物用H2O(10mL)稀释并用EtOAc(10mL×3)萃取。将有机层用盐水(10mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi Polar-RP 100*25mm*4um；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：28％-48％，7min)和制备型HPLC(柱：Phenomenex C18 75*30mm*3um；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：22％-52％,7min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-3,3-二氟哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(7.1mg，7.51μmol，10.55％产率，95％纯度，0.4FA)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝880.3
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.26-10.93(m,1H),9.30(s,1H),8.36-8.31(m,1H),8.22(s,1H),7.88(s,1H),7.71(t,J＝7.8Hz,1H),7.48-7.35(m,4H),5.11(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.93-4.83(m,1H),4.04(br t,J＝13.4Hz,2H),3.98-3.83(m,5H),3.32(br s,3H),3.24-3.03(m,3H),2.98-2.79(m,9H),2.64-2.57(m,2H),2.16-1.99(m,2H),1.98-1.86(m,1H),1.24(d,J＝6.7Hz,6H)。
实施例168、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)-3,3-二氟哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物168)的合成
按照与实施例167中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物168。
MS(M+H)+＝880.3,H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(br s,1H),9.29(s,1H),8.30(br d,J＝8.2Hz,1H),8.22(s,1H),7.88(s,1H),7.68(d,J＝8.4Hz,1H),7.43(br d,J＝11.4Hz,3H),7.38-7.32(m,1H),5.08(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.92-4.83(m,1H),4.46-4.35(m,1H),4.26-4.16(m,1H),4.09-3.99(m,2H),3.93(s,3H),3.44-3.36(m,1H),3.32(s,3H),3.25-3.10(m,2H),2.95-2.75(m,9H),2.62-2.54(m,2H),2.07-1.97(m,1H),1.96-1.79(m,2H),1.24(d,J＝6.7Hz,6H)。
实施例169、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-(1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基)哌啶-4-基)乙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物169)的合成
步骤1、4-(2-(4-(((苄氧基)羰基)氨基)哌啶-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2)的合成
在25℃，向2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)乙酸(0.96g，3.95mmol)和哌啶-4-基氨基甲酸苄酯(924.47mg，3.95mmol)在DCM(30mL)中的混合物中加入HOBt(586.47mg，4.34mmol)、EDCI(832.04mg，4.34mmol)和TEA(1.20g，11.84mmol，1.65mL)，将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示具有所需质量的峰(92％)。将混合物用盐水(10mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(5g 硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@60mL/min)纯化，得到4-(2-(4-(((苄氧基)羰基)氨基)哌啶-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.6g，3.45mmol，87.35％产率，99％纯度)，其为黄色油状物，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝460.2
步骤2、(1-(2-(哌啶-4-基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(3)的合成
在25℃，向4-(2-(4-(((苄氧基)羰基)氨基)哌啶-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.4g，870.37μmol)在DCM中的溶液中加入TFA(1.54g，13.51mmol，1mL)，将所得混合物在25℃搅拌0.5小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的主峰。将混合物溶液在30℃真空浓缩，得到(1-(2-(哌啶-4-基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(0.4g，819.46μmol，产率94.15％，纯度97％，TFA)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝360.1
步骤3、(1-(2-(1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基)哌啶-4-基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(4)的合成
在25℃，向(1-(2-(哌啶-4-基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(372.07mg，939.76μmol，TFA)、DIPEA(441.67mg，3.42mmol，595.24μL)在DMF(5mL)中的混合物中加入4-(溴甲基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(300mg，854.33μmol)，将混合物在25℃搅拌16小时。LCMS显示4-(溴甲基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮完全消耗以及具有所需质量的峰(60％)。将混合物倒入水(10mL)中并用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mLx3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(5g硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@50mL/min；0～50％甲醇/EtOAc洗脱液@50mL/min)纯化，得到(1-(2-(1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基)哌啶-4-基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(0.25g，381.13μmol，产率44.61％，纯度96％)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝630.2
步骤4、4-((4-(2-(4-氨基哌啶-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-1-基)甲基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(5)的合成
将(1-(2-(1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基)哌啶-4-基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(0.25g，397.01μmol)在TFA(3.08g，27.01mmol，2mL)中的溶液在40℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(62％)。将混合物溶液在40℃真空浓缩，得到4-((4-(2-(4-氨基哌啶-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-1-基)甲基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.28g，粗品，TFA)，其为棕色油状物。MS(M+H)+＝496.1
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-(1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基)哌啶-4-基)乙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物169)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(80mg，178.80μmol)在DMF(3mL)中的溶液中加入HATU(88.38mg，232.44μmol)和DIPEA(138.65mg，1.07mmol，186.86μL)，将混合物在25℃搅拌10分钟。向混合物中加入4-((4-(2-(4-氨基哌啶-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-1-基)甲基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(196.19mg，321.83μmol，TFA)，将所得混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示4-((4-(2-(4-氨基哌啶-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-1-基)甲基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮完全消耗以及具有所需质量的峰(75％)。将混合物溶液真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(5g 硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@50mL/min；0～50％甲醇/EtOAc洗脱液@50mL/min)纯化。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Unisil 3-100C18 ULtra 150x 50mm x 3um；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：10％-40％，10min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-(1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基)哌啶-4-基)乙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(37.9mg，38.11μmol，11.75％产率，93％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝925.2
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.12(s,1H),8.30-8.22(m,2H),8.18-8.10(m,1H),7.96(s,1H),7.92-7.87(m,1H),7.87-7.77(m,2H),7.51-7.43(m,2H),5.14(br d,J＝5.5Hz,1H),4.83-4.69(m,1H),4.45-4.40(m,1H),4.10-4.01(m,4H),3.96-3.86(m,5H),3.32(br s,3H),3.13-3.06(m,1H),2.94-2.80(m,3H),2.72-2.55(m,3H),2.55-2.51(m,2H),2.31-2.20(m,2H),2.12-2.02(m,2H),1.99-1.90(m,2H),1.89-1.76(m,2H),1.73-1.64(m,4H),1.63-1.50(m,4H),1.50-1.34(m,2H),1.32-1.19(m,2H)
实施例170、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基)哌啶-4-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物170)的合成
按照与实施例169中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物170。
MS(M+H)+＝939.3,H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.12(s,1H),8.33-8.22(m,2H),8.14(br d,J＝7.6Hz,1H),7.97(s,1H),7.93-7.87(m,1H),7.87-7.72(m,2H),7.53-7.39(m,2H),5.13(dd,J＝5.4,12.7Hz,1H),4.76(quin,J＝8.0Hz,1H),4.38(br d,J＝12.8Hz,1H),4.13-3.99(m,3H),3.98-3.82(m,6H),3.42(br d,J＝6.6Hz,3H),3.11(br t,J＝12.1Hz,1H),2.95-2.79(m,3H),2.66-2.55(m,3H),2.35-2.31(m,2H),2.11-1.98(m,3H),1.93(br dd,J＝3.7,6.7Hz,2H),1.89-1.78(m,2H),1.74-1.63(m,4H),1.63-1.50(m,4H),1.50-1.33(m,4H),1.28-1.12(m,3H)。
实施例171、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-((2R)-4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-)基)甲基)吗啉-2-基)乙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物171)的合成
步骤1、(S)-2-(((甲磺酰基)氧基)甲基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(2)的合成
在0℃，向(S)-2-(羟甲基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(5g，23.01mmol)在DCM(50mL)中的溶液中加入TEA(4.66g，46.03mmol，6.41mL)和MsCl(3.43g，29.92mmol，2.32mL)，将所得混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到一个具有所需质量的峰。在0℃将反应混合物倒入H2O(50mL)中。用DCM(50mL×3)萃取水相。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到(S)-2-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(7.1g，粗品)，其为橙色油状物。MS(M-100+H)+＝196.5
步骤2、(R)-2-(氰甲基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(3)的合成
在20℃，向(S)-2-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(7.1g，24.04mmol)在DMSO(80mL)中的溶液中加入KI(5.99g，36.06mmol)和KCN(1.64g，25.19mmol，1.08mL)，将所得混合物在100℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到具有所需质量(质量-99)的峰。将反应混合物用H2O(80mL)稀释并用EtOAc(80mL×3)萃取。将有机层用盐水(80mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(40g硅胶快速柱，0～33％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到(R)-2-(氰甲基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(4.1g，18.12mmol，75.38％产率)，其为白色固体。MS(M-100+H)+＝127.7
步骤3、(R)-2-(4-((苄氧基)羰基)吗啉-2-基)乙酸(4)的合成
在20℃，(R)-2-(氰基甲基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(4.1g，18.12mmol)在HCl(6M，40mL)中的混合物，将所得混合物在100℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且在0℃向该反应混合物中加入NaOH调节pH＝7。在20℃向反应混合物在THF(40mL)和H2O(30mL)中的溶液中加入K2CO3(7.51g，54.36mmol)和CbzCl(4.64g，27.18mmol，3.86mL)，将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到具有所需质量的峰。将反应混合物用EtOAc(30mL×3)萃取。向水相中加入HCl(12N)调节pH＝4并用EtOAc(30mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到(R)-2-(4-((苄氧基)羰基)吗啉-2-基)乙酸(3.4g，11.32mmol，62.48％产率，93％纯度)，其为黄色油状物。SFC(保留时间＝1.153，方法：“柱：Chiralpak AD-3 50×4.6mm I.D.3um流动相：相A为CO2，相B为MeOH(0.05％DEA)；梯度洗脱：在CO2中的MeOH(0.05％ DEA)，从5％到40％，流速：3mL/min；检测器：PDA；柱温：35℃；背压：100Bar”)。MS(M+H)+＝280.4
步骤4、(R)-2-(2-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-2-氧代乙基)吗啉-4-羧酸苄酯(5)的合成
向(R)-2-(4-((苄氧基)羰基)吗啉-2-基)乙酸(600mg，2.15mmol)在DCM(6mL)中的溶液中加入HATU(898.54mg，2.36mmol)和DIPEA(832.97mg，6.44mmol，1.12mL)。将混合物在20℃搅拌10分钟并在20℃滴加入N-(4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯(516.31mg，2.58mmol)在DCM(6mL)中的溶液，将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到具有所需质量的峰。将反应混合物真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(10g硅胶快速柱，0～50％EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到(R)-2-(2-(4-)((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-2-氧代乙基)吗啉-4-羧酸苄酯(910mg，1.75mmol，81.68％产率，89％纯度)，其为黄色油状物。MS(M-100+H)+＝362.2
步骤5、(R)-(1-(2-(吗啉-2-基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(6)的合成
在N2气氛下，向(R)-2-(2-(4-((叔丁氧羰基)氨基)哌啶-1-基)-2-氧代乙基)吗啉-4-羧酸苄酯(900mg，1.95mmol)在CF3CH2OH(10mL)中的溶液中加入Pd/C(90mg，195.00μmol，19.50μL，10％纯度)。将混悬液脱气并用H2鼓吹3次。在H2(15Psi)下将混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到具有所需质量的峰。将反应混合物用CF3CH2OH(30mL)稀释并过滤。将滤液真空浓缩，得到(R)-(1-(2-(吗啉-2-基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(601mg，粗品)，其为无色油状物。MS(M+H)+＝328.4
步骤6、(1-(2-((2R)-4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基)吗啉-2-基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(7)的合成
在20℃，向(R)-(1-(2-(吗啉-2-基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(341.26mg，1.04mmol)在DMF(6mL)中的溶液中加入DIPEA(336.77mg，2.61mmol，453.87μL)和4-(溴甲基)-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(305mg，868.57μmol)，将混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到一个具有所需质量的峰。将反应混合物用H2O(12mL)稀释并用EtOAc(12mL×3)萃取。将有机层用盐水(12mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(4g 硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@60mL/min)纯化，得到(1-(2-((2R)-4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基)吗啉-2-基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(410mg，651.71μmol，75.03％产率，95％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝598.2
步骤7、4-(((R)-2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)-2-氧代乙基)吗啉代)甲基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(8)的合成
在20℃，向(1-(2-((2R)-4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基)吗啉-2-基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(410mg，686.01μmol)在二氧六环(4mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，12mL)，将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到一个具有所需质量的峰。将反应混合物真空浓缩，得到4-(((R)-2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)-2-氧代乙基)吗啉代)甲基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(402mg，粗品，HCl)，其为白色固体。MS(M+H)+＝498.3
步骤8、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-((2R)-4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-)基)甲基)吗啉-2-基)乙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物171)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(120mg，268.20μmol)在DMF(3mL)中的溶液中加入HATU(112.17mg，295.02μmol)和DIPEA(69.32mg，536.39μmol，93.43μL)。将混合物在20℃搅拌10分钟，加入4-(((R)-2-(2-(4-氨基哌啶-1-基)-2-氧代乙基)吗啉基)甲基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(157.54mg，295.02μmol，HCl)在DMF(3mL)和DIPEA(69.32mg，536.39μmol，93.43μL)中的溶液，将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到一个具有所需质量的峰。将反应混合物用H2O(12mL)稀释并用EtOAc(12mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Unisil 3-100C18μLtra 150*50mm*3um；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：12％-42％，10min)纯化并冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-((2R)-4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基)吗啉-2-基)乙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(87.8mg，92.82μmol，34.61％产率，98％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝926.8
SFC(保留时间：峰1＝0.729，峰2＝3.253；方法：“柱：Chiralpak AD-3 50×4.6mmI.D.，3um流动相：相A为CO2，相B为IPA+ACN(0.05％DEA)；梯度洗脱：在CO2中的60％ IPA+ACN(0.05％ DEA)流速：3mL/min；检测器：PDA柱温度：35℃；背压：100Bar”)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.12(s,1H),8.23(s,1H),8.15(d,J＝8.3Hz,1H),7.99(s,1H),7.92(dd,J＝1.3,7.4Hz,1H),7.88-7.78(m,3H),7.02(d,J＝1.6Hz,1H),6.94(dd,J＝1.7,8.2Hz,1H),5.13(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.75-4.66(m,1H),4.57-4.09(m,1H),4.02(t,J＝14.1Hz,2H),3.95(s,2H),3.88(s,3H),3.86-3.67(m,4H),3.54-3.46(m,1H),3.32(s,3H),3.16-2.96(m,2H),2.92-2.80(m,1H),2.79-2.72(m,1H),2.70-2.52(m,3H),2.29-2.22(m,1H),2.19-2.11(m,2H),2.09-2.01(m,1H),1.95-1.84(m,3H),1.79-1.62(m,4H),1.62-1.47(m,4H),1.38-1.20(m,2H)。
实施例172、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-((2S)-4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基)吗啉-2-基)乙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物172)的合成
按照与实施例171中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物172。
MS(M+H)+＝927.1,H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.12(br s,1H),8.23(s,1H),8.15(d,J＝8.2Hz,1H),7.99(s,1H),7.92(d,J＝7.3Hz,1H),7.89-7.77(m,3H),7.02(d,J＝1.5Hz,1H),6.94(dd,J＝1.3,8.3Hz,1H),5.13(dd,J＝5.3,12.8Hz,1H),4.76-4.65(m,1H),4.41-4.09(m,1H),4.02(t,J＝14.1Hz,2H),3.95(s,2H),3.88(s,3H),3.85-3.69(m,4H),3.50(dd,J＝9.4,11.2Hz,1H),3.32(s,3H),3.15-2.96(m,2H),2.94-2.84(m,1H),2.76(brd,J＝10.9Hz,1H),2.69-2.60(m,2H),2.56(d,J＝11.2Hz,1H),2.29-2.21(m,1H),2.19-2.10(m,2H),2.08-2.05(m,1H),1.95-1.85(m,3H),1.79-1.63(m,4H),1.62-1.51(m,4H),1.38-1.21(m,2H)。
实施例173、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-((2R)-4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基)吗啉-2-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物173)的合成
步骤1、(S)-2-甲酰基吗啉-4-羧酸叔丁酯(2)的合成
在20℃，向(2S)-2-(羟甲基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(3g，13.81mmol)在DMSO(40mL)中的溶液中加入IBX(7.73g，27.62mmol)，将所得混合物在20℃搅拌16小时。TLC(SiO2，EtOAc)显示起始材料完全消耗以及三个新斑点。将反应混合物与其他规模(1g)合并后处理。过滤反应混合物。将滤液用H2O(30mL)稀释并用EtOAc(30mL×3)萃取。将有机层用盐水(30mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到(S)-2-甲酰基吗啉-4-羧酸叔丁酯(1.1g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝216.3
步骤2、(R,E)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(3)的合成
在20℃，向(S)-2-甲酰基吗啉-4-羧酸叔丁酯(1.1g，5.11mmol)在甲苯(10mL)中的溶液中加入2-(三苯基-λ5-亚膦基)乙酸乙酯(1.96g，5.62mmol)，将所得混合物在90℃搅拌16小时。TLC(SiO2，石油醚:EtOAc＝5:1)显示起始材料完全消耗以及两个新斑点。将反应混合物与其他规模(0.8g)合并后处理。将反应混合物真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(10g 硅胶快速柱，0～10％EtOAc/石油醚梯度@80mL/min)纯化，得到(R,E)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(844mg，1.65mmol，32.37％产率)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝286.3
步骤3、(R,E)-3-(4-(叔丁氧基羰基)吗啉-2-基)丙烯酸(4)的合成
在20℃，向(R,E)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(840mg，2.94mmol)在MeOH(8mL)、THF(8mL)和H2O(8mL)中的溶液中加入NaOH(1.18g，29.44mmol)，将所得混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的主峰。向该反应混合物中加入HCl(12M)调节pH＝5～6。用EtOAc(15mL×4)萃取水相。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到(R,E)-3-(4-(叔丁氧基羰基)吗啉-2-基)丙烯酸(715mg，2.78mmol，产率94.40％)，其为黄色油状物。MS(M+Na)+＝280.4
步骤4、(R,E)-2-(3-(4-(((苄氧基)羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-氧代丙-1-烯-1-基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(5)的合成
向(R,E)-3-(4-(叔丁氧基羰基)吗啉-2-基)丙烯酸(400mg，1.55mmol)在DCM(5mL)中的溶液中加入HATU(650.26mg，1.71mmol)和DIPEA(602.81mg，4.66mmol，812.41μL)。将混合物在20℃搅拌10分钟并在20℃滴加入N-(4-哌啶基)氨基甲酸苄酯(400.69mg，1.71mmol)在DCM(5mL)中的溶液，将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(71％)。将反应混合物真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(20g硅胶快速柱，0～60％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到(R,E)-2-(3-(4-(((苄氧基)羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-氧代丙-1-烯-1-基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(482mg，916.04μmol，58.92％产率，90％纯度)，其为黄色油状物。SFC(保留时间：1.572；方法：柱：Chiralcel OD-350×4.6mm I.D.,3um；流动相：相A为CO2，相B为MEOH(0.05％DEA)；梯度洗脱：在A中的B，从5％到40％；流速：3mL/min；检测器：DAD；柱温：35℃；背压：100Bar)。MS(M-56+H)+＝418.3
步骤5、(R,E)-(1-(3-(吗啉-2-基)丙烯酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(6)的合成
在20℃，向(R,E)-2-(3-(4-(((苄氧基)羰基)氨基)哌啶-1-基)-3-氧代丙-1-烯-1-基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(482mg，1.02mmol)在DCM(10mL)中的溶液中加入TFA(464.22mg，4.07mmol，301.44μL)，将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(87％)。将反应混合物真空浓缩，得到(R,E)-(1-(3-(吗啉-2-基)丙烯酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(496mg，粗品，TFA)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝374.4
步骤6、(1-((E)-3-((2R)-4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉)-4-基)甲基)吗啉-2-基)丙烯酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(7)的合成
在20℃，向4-(溴甲基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(100mg，284.78μmol)在DMF(4mL)中的溶液中加入DIPEA(184.03mg，1.42mmol，248.02μL)、NaI(8.54mg，56.96μmol)和(R,E)-(1-(3-(吗啉-2-基)丙烯酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(152.70mg，313.25μmol，TFA)。将混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(54％)。将反应混合物用H2O(12mL)稀释并用EtOAc(12mL×3)萃取。将有机层用盐水(12mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(4g，硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@60mL/min)纯化，得到(1-((E)-3-((2R)-4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基)吗啉-2-基)丙烯酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(132mg，186.61μmol，产率66.73％，纯度91％)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝644.1
步骤7、(1-(3-((2R)-4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基)吗啉-2-基)丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(8)的合成
在N2气氛下，向(1-((E)-3-((2R)-4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基)吗啉-2-基)丙烯酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(132mg，205.07μmol)在CF3CH2OH(5mL)中的溶液中加入Rh(PPh3)3Cl(189.73mg，205.07μmol)。将混悬液脱气并用H2鼓吹3次，在H2(15Psi)下将所得混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到具有所需质量的峰(23％)。将反应混合物真空浓缩，得到(1-(3-((2R)-4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基)吗啉-2-基)丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(202mg，96.98μmol，47.29％产率，31％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝646.1
步骤8、4-(((R)-2-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)吗啉代)甲基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(9)的合成
在20℃，向(1-(3-((2R)-4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基)吗啉-2-基)丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(202mg，96.98μmol，31％纯度)在DCM(4mL)中的溶液中加入TFA(110.58mg，969.80μmol，71.80μL)，将所得混合物50℃搅拌32小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(12％)。将反应混合物用H2O(10mL)稀释并用EtOAc(10mL×3)萃取。将水相冻干，得到产物A。将产物A通过制备型HPLC(柱：3_Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；流动相：[水(HCl)-ACN]；B％：0％-12％，7min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-(((R)-2-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)吗啉代)甲基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(15mg，26.82μmol，35.70％产率，98％纯度，HCl)，其为白色固体。MS(M+H)+＝512.2
步骤9、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-((2R)-4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基)吗啉-2-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物173)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(10mg，22.35μmol)在DMF(1mL)中的溶液中加入HATU(9.35mg，24.58μmol)和DIPEA(5.78mg，44.70μmol，7.79μL)。将混合物在20℃搅拌10分钟，加入4-(((R)-2-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)吗啉代)甲基)-2-(加入2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(12.25mg，22.35μmol，HCl)在DMF(1mL)中的溶液和DIPEA(5.78mg，44.70μmol，7.79μL)，将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(71％)。将反应混合物用H2O(8mL)稀释并用EtOAc(8mL×3)萃取。将有机层用盐水(8mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi C18 150*25mm*10um；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：14％-44％,10min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-((2R)-4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基)吗啉-2-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(7.8mg，7.93μmol，产率35.48％，纯度98％，0.5FA)，其为白色固体。SFC(保留时间：峰1＝0.595，峰2＝2.530；方法：“柱：Chiralpak AD-3 50×4.6mm I.D.，3um流动相：相A为CO2，相B为IPA+ACN(0.05％DEA)；梯度洗脱：在CO2中的60％ IPA+ACN(0.05％ DEA)，流速：3mL/min；检测器：PDA柱温度：35℃；背压：100Bar”)。MS(M+H)+＝941.0。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.21-10.99(m,1H),8.45-8.38(m,1H),8.30-8.24(m,2H),8.13(br dd,J＝3.1,7.4Hz,1H),7.96(s,1H),7.94-7.90(m,1H),7.87-7.80(m,2H),7.51-7.43(m,2H),5.13(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.82-4.71(m,1H),4.39-4.35(m,1H),4.09-4.01(m,3H),3.98-3.91(m,5H),3.91-3.83(m,1H),3.79-3.73(m,1H),3.54-3.38(m,5H),3.14-3.05(m,1H),2.94-2.83(m,1H),2.82-2.76(m,1H),2.65-2.53(m,4H),2.43-2.36(m,2H),2.20-2.11(m,1H),2.10-2.01(m,1H),1.98-1.77(m,5H),1.75-1.66(m,2H),1.65-1.52(m,6H),1.50-1.31(m,2H)。
实施例174、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-((2S)-4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基)吗啉-2-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物174)的合成
按照与实施例173中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物174。
MS(M+H)+＝941.4,1H NMR(400Hz,DMSO-d6)δ＝11.13(br s,1H),8.30-8.25(m,2H),8.15(br d,J＝3.4Hz,1H),7.98(s,1H),7.93(br d,J＝7.2Hz,1H),7.84(q,J＝7.5Hz,2H),7.50-7.46(m,2H),5.14(dd,J＝5.3,12.8Hz,1H),4.79-4.76(m,1H),4.40-4.33(m,1H),4.11-3.98(m,4H),3.97-3.92(m,2H),3.94(s,3H),3.89-3.87(m,1H),3.79-3.77(m,1H),3.52-3.41(m,1H),3.32(br s,3H),3.33-3.24(m,1H),3.11-3.09(m,1H),2.94-2.85(m,1H),2.79-2.76(m,1H),2.70-2.63(m,4H),2.40-2.38(m,2H),2.17-2.04(m,2H),1.99-1.77(m,6H),1.73-1.71(m,2H),1.60-1.57(m,4H),1.47-1.36(m,2H)。
实施例175、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物175)的合成
步骤1、(1-(3-(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(3)的合成
向3-(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酸(1.7g，3.99mmol)和哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(800mg，3.99mmol)在DMF(15mL)中的溶液中加入EDCI(1.15g，5.98mmol)、HOBt(1.08g，7.97mmol)和DIPEA(1.55g，11.96mmol，2.08mL)，将混合物在20℃搅拌14小时。LCMS显示检测到85％的所需质量并且起始材料被消耗。将混合物用H2O(30mL)稀释并用EtOAc(10mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(10mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(12g硅胶快速柱，2～30％ EtOH/EtOAc梯度洗脱液@50mL/min)纯化，得到(1-(3-(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(280mg，460.01μmol，11.54％产率，100％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝609.3
步骤2、4-(6-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(4)的合成
在-10℃向(1-(3-(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(130mg，213.58μmol)在DCM(1.3mL)中的溶液中加入TFA(400.40mg，3.51mmol，260.00μL)，将混合物在-10℃搅拌1.5小时。LCMS显示检测到74％的所需质量并且残余19％的起始材料。将混合物在-5℃搅拌30分钟。LCMS显示检测到97％的所需质量并且起始材料被消耗。将混合物减压浓缩，得到4-(6-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(160mg，粗品，2TFA)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝509.1
步骤3、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物175)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(70mg，150.40μmol)在DMF(1mL)中的溶液中加入HATU(86mg，226.18μmol)和DIPEA(29.68mg，229.64μmol，40μL)，将混合物在20℃搅拌15分钟。然后在-15℃加入4-(6-(3-(4-氨基哌啶-1-基)-3-氧代丙基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(160mg，217.21μmol，2TFA)和DIPEA(192.92mg，1.49mmol，260μL)在DMF(1mL)中的溶液，将混合物0℃搅拌45分钟。将混合物用H2O(10mL)稀释并用EtOAc(10mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(10mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化，得到产物(50mg，纯度93％)，然后通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge150*25mm*5um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：41％-71％，min)纯化并冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(32.7mg，33.52μmol，产率22.29％，纯度98％)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝956.3。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(s,1H),8.30(s,1H),8.25(d,J＝13.2Hz,1H),8.05(s,1H),8.01-7.97(m,1H),7.59-7.54(m,1H),7.20(d,J＝6.7Hz,1H),7.12(d,J＝7.1Hz,1H),6.78(d,J＝8.4Hz,1H),5.09-5.01(m,1H),4.86-4.77(m,1H),4.34-4.20(m,5H),4.08(t,J＝13.7Hz,2H),4.03-3.96(m,1H),3.92(s,3H),3.88-3.80(m,1H),3.30-3.24(m,7H),3.18-3.07(m,1H),2.94-2.81(m,2H),2.77-2.69(m,1H),2.62-2.53(m,2H),2.35-2.28(m,2H),2.04-1.93(m,3H),1.91-1.76(m,3H),1.76-1.69(m,2H),1.68-1.56(m,4H),1.52-1.31(m,2H)
实施例176、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺)[3.3]庚烷-2-基)丁酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物176)的合成
步骤1、4-(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丁酸甲酯(3)的合成
向6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯(1.1g，2.42mmol)在DCM(15mL)中的溶液中加入TFA(2.76g，24.20mmol，1.79mL)，将混合物在20℃搅拌5小时。LCMS显示检测到68％的2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮质量。在0℃加入TEA(2.45g，24.20mmol，3.37mL)，然后加入4-氧代丁酸甲酯(843mg，7.26mmol)在DCM(5mL)中的溶液，并在0℃搅拌混合物15分钟。加入NaBH(OAc)3(1.54g，7.26mmol)，将混合物在20℃搅拌14小时。LCMS显示检测到30％的所需质量。将混合物用H2O(30mL)稀释并用EtOAc(20mL×3)萃取，将合并的有机层用H2O(20mL)洗涤，用Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(12g 硅胶快速柱，0～30％MeOH/EtOAc梯度洗脱液@50mL/min)纯化，得到4-(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丁酸甲酯(420mg，776.28μmol，32.07％产率，84％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝455.1
步骤2、4-(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丁酸(4)的合成
向4-(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丁酸甲酯(420mg，776.28μmol，84％纯度)在甲苯(10mL)中的溶液中加入(Bu3Sn)2O(2.25g，3.77mmol，1.92mL)，将混合物在110℃搅拌28小时。在后处理后LCMS显示检测到所需质量并且残留痕量起始材料。将混合物减压浓缩，得到4-(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丁酸(2.5g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝441.5
步骤3、(1-(4-(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丁酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(5)的合成
向哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(1.14g，5.68mmol)和4-(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丁酸(2.5g，粗品)在DMF(10mL)中的溶液中加入DIPEA(2.20g，17.04mmol，2.97mL)、EDCI(1.63g，8.51mmol)和HOBt(1.53g，11.35mmol)，将混合物在20℃搅拌14小时。LCMS显示检测到60％的所需质量并且起始材料被消耗。将混合物用H2O(10mL)稀释并用EtOAc(10mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(10mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(12g硅胶快速柱，2～10％MeOH/EtOAc梯度洗脱液@50mL/min)纯化，得到(1-(4-(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丁酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(330mg，514.04umol，9.06％产率，97％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝623.0
步骤4、4-(6-(4-(4-氨基哌啶-1-基)-4-氧代丁基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(6)的合成
在-10℃向(1-(4-(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丁酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，160.59μmol)在DCM(1mL)中的溶液中加入TFA(308.00mg，2.70mmol，0.2mL)，将混合物在-10℃搅拌1小时。LCMS显示检测到66％的所需质量并且残余18％的起始材料。LCMS显示检测到92％的所需质量并且残余1％的起始材料。将混合物减压浓缩，得到4-(6-(4-(4-氨基哌啶-1-基)-4-氧代丁基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(130mg，粗品，2TFA)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝523.1。
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺)[3.3]庚烷-2-基)丁酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物176)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(60mg，128.91μmol)和HATU(73.71mg,193.87μmol)在DMF(1mL)中的溶液中加入DIPEA(29.68mg，229.64μmol，40μL)，将混合物在20℃搅拌15分钟。然后在-5℃加入4-(6-(4-(4-氨基哌啶-1-基)-4-氧代丁基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(130.00mg，173.19μmol，2TFA)和DIPEA(103.88mg，803.76μmol，140μL)在DMF(1mL)中的溶液，将混合物0℃搅拌45分钟。LCMS显示检测到70％的所需质量。将混合物用H2O(10mL)稀释并用EtOAc(10mL×3)萃取，将合并的有机层用H2O(10mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压浓缩。将粗品通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：41％-71％，min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丁酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(35mg，89％纯度)。然后将产物通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝10/1)纯化，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(4-(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丁酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(13.7mg，13.84μmol，10.74％产率，98％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝970.3。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.06(s,1H),8.30(s,1H),8.25(d,J＝13.3Hz,1H),8.03(s,1H),7.98-7.92(m,1H),7.58-7.53(m,1H),7.20(d,J＝6.7Hz,1H),7.11(d,J＝7.2Hz,1H),6.78(d,J＝8.7Hz,1H),5.08-5.01(m,1H),4.85-4.78(m,1H),4.33-4.22(m,5H),4.13-3.98(m,3H),3.93-3.81(m,4H),3.31-3.29(m,4H),3.26-3.22(m,3H),3.17-3.08(m,1H),2.93-2.81(m,1H),2.76-2.65(m,2H),2.61-2.55(m,2H),2.39-2.27(m,4H),2.03-1.92(m,3H),1.90-1.77(m,2H),1.75-1.69(m,2H),1.68-1.55(m,4H),1.52-1.43(m,3H)。
实施例177、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(3-(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物177)的合成
步骤1、3-(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酸甲酯(3)的合成
向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮(1.7g，3.63mmol，TFA)和丙烯酸甲酯(5.22g，60.63mmol，5.46mL)在ACN(30mL)中的溶液中加入DBU(11.11g，72.98mmol，11mL)，将混合物在-30℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料被消耗并且检测到68％的所需质量。将混合物在-5℃用H2O(20mL)稀释并用EtOAc(20mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(20mL×3)洗涤，干燥经Na2SO4过滤并过滤。将滤液减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(12g 硅胶快速柱，0～30％MeOH/EtOAc梯度洗脱液@50mL/min)纯化，得到3-(6-(2-(2,6-)二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酸甲酯(850mg，1.79mmol，49.45％产率，93％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝441.1
步骤2、3-(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酸(4)的合成
向3-(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酸甲酯(850mg，1.93mmol)在甲苯(20mL)中的溶液中加入(Bu3Sn)2O(2.81g，4.71mmol，2.40mL)，将混合物在110℃搅拌28小时。LCMS显示检测到85％的所需质量。将混合物减压浓缩，得到3-(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酸(3.4g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝427.1
步骤3、((3S)-1-(3-(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酰基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(6)的合成
向3-(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酸(1.7g，3.99mmol)和(S)-吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯(750mg，4.03mmol)在DMF(15mL)中的溶液中加入EDCI(1.15g，5.98mmol)、HOBt(1.08g，7.97mmol)和DIPEA(1.55g，11.96mmol，2.08mL)，将混合物在20℃搅拌14小时。LCMS显示检测到89％的所需质量并且起始材料被消耗。将混合物用H2O(30mL)稀释并用EtOAc(10mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(10mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(12g 硅胶快速柱，0～30％ EtOH/EtOAc梯度洗脱液@50mL/min)纯化，得到((3S)-1-(3-(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酰基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(350mg，553.26μmol，产率13.88％，纯度94％)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝595.1
步骤4、4-(6-(3-((S)-3-氨基吡咯烷-1-基)-3-氧代丙基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(7)的合成
在0℃向((3S)-1-(3-(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酰基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(130mg，218.61μmol)在DCM(1.3mL)中的溶液中加入TFA(400.40mg，3.51mmol，260.00μL)，将混合物在0℃搅拌3小时。LCMS显示检测到79％的所需质量。将反应混合物减压浓缩，得到4-(6-(3-((S)-3-氨基吡咯烷-1-基)-3-氧代丙基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(160mg，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝495.1
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(3-(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物177)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(80mg，171.89μmol)在DMF(1.5mL)中的溶液中加入HATU(98mg，257.74μmol)和DIPEA(59.36mg，459.29μmol，80.00μL)，将混合物在20℃搅拌15分钟。然后在0℃加入4-(6-(3-((S)-3-氨基吡咯烷-1-基)-3-氧代丙基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(160mg，221.43μmol，2TFA)和DIPEA(237.44mg，1.84mmol，320.00μL)在DMF(1.5mL)中的溶液，将混合物在20℃搅拌45分钟。LCMS显示检测到所需质量。将混合物用H2O(10mL)稀释并用EtOAc(10mL×3)萃取，将合并的有机层用盐水(10mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：WatersXbridge 150*25mm*5um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：37％-67％，min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(3-(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)丙酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(37.9mg，39.43μmol，22.94％产率，98％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝942.3。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.06(s,1H),8.30-8.20(m,3H),8.05-7.98(m,1H),7.57-7.48(m,1H),7.23-7.17(m,1H),7.12-7.04(m,1H),6.78-6.67(m,1H),5.08-4.99(m,1H),4.86-4.74(m,1H),4.50-4.35(m,1H),4.20(br d,J＝15.4Hz,4H),4.12-4.02(m,2H),3.91(s,3H),3.78-3.70(m,1H),3.62-3.40(m,4H),3.29-3.21(m,7H),2.94-2.81(m,1H),2.62-2.53(m,4H),2.27-2.16(m,2H),2.03-1.90(m,4H),1.77-1.54(m,6H)。
实施例178、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((3S)-1-(5-(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基)戊酰基)吡咯烷-3-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物178)的合成
按照与实施例177中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物178。
MS(M+H)+＝970.3,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08-11.04(m,1H),8.30-8.22(m,3H),8.03(s,1H),7.58-7.51(m,1H),7.19(d,J＝6.6Hz,1H),7.13-7.08(m,1H),6.75(t,J＝8.5Hz,1H),5.07-5.00(m,1H),4.86-4.78(m,1H),4.51-4.33(m,1H),4.28-4.19(m,4H),4.07(t,J＝14.0Hz,2H),3.91(s,3H),3.77-3.70(m,1H),3.61-3.53(m,2H),3.51-3.40(m,8H),2.93-2.81(m,1H),2.62-2.55(m,2H),2.40-2.29(m,2H),2.26-2.17(m,2H),2.03-1.90(m,4H),1.76-1.56(m,7H),1.53-1.44(m,2H),1.34-1.22(m,2H)。
实施例179、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(5-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)戊-4-炔酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物179)的合成
步骤1、(1-(戊-4-炔酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(3)的合成
向哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(500mg，2.50mmol)和4-炔酸戊酸(244.91mg，2.50mmol)在DMF(7mL)中的溶液中加入HATU(1.42g，3.74mmol)和DIEA(967.98mg，7.49mmol，1.30mL)。将混合物在25℃搅拌2小时。TLC(石油醚:EtOAc＝1:1)显示哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯完全消耗，并且形成一个新斑点。将反应混合物用水(100mL)稀释并用EtOAc(30mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过柱色谱法(SiO2，石油醚/EtOAc＝1/0至1/1)纯化，得到(1-(戊-4-炔酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(520mg，1.85mmol，74.29％产率)，其为白色固体。MS(M+H)+＝281.4
步骤2、(1-(5-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)戊-4-炔酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(5)的合成
向(1-(戊-4-炔酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(250mg，891.71umol)和4-溴-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(300.62mg，891.71umol)在DMF(5mL)中的溶液中加入Pd(PPh3)2Cl2(62.59mg，89.17umol)、CuI(33.97mg，178.34umol)和TEA(541.38mg，5.35mmol，744.68uL)。在N2气氛下将混合物在70℃搅拌0.5小时。LCMS显示(1-(戊-4-炔酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯完全消耗，检测到约40％的所需质量。将反应混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过柱色谱法(SiO2，石油醚/EtOAc＝1/0至1/1)纯化，得到(1-(5-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)戊-4-炔酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(360mg，530.03umol，59.44％产率，79％纯度)，其为浅黄色固体。MS(M+H)+＝537.1
步骤3、4-(5-(4-氨基哌啶-1-基)-5-氧代戊-1-炔-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(6)的合成
将(1-(5-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)戊-4-炔酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，186.37umol)和HCl/二氧六环(4M，1.5mL)在DCM(1.5mL)中的混合物在25℃搅拌0.5小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到一个具有所需质量的主峰。将反应混合物减压浓缩，得到4-(5-(4-氨基哌啶-1-基)-5-氧代戊-1-炔-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(100mg，粗品，HCl盐)，其为浅黄色固体。MS(M+H)+＝437.0
步骤4、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(5-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)戊-4-炔酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物179)的合成
向4-(5-(4-氨基哌啶-1-基)-5-氧代戊-1-炔-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(100mg，211.45umol，HCl盐)和4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(94.61mg，211.45umol)在DMF(4mL)中的溶液中加入HATU(120.60mg，317.18umol)和DIEA(81.99mg，634.36μmol，110.49μL)。将混合物在25℃搅拌5小时。LCMS显示4-(5-(4-氨基哌啶-1-基)-5-氧代戊-1-炔-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮完全消耗，检测到约57％所需质量。将反应混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150x25mm x 10um；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：42％-42％，10min)纯化，然后通过制备型TLC(SiO2，DCM：MeOH＝20:1)纯化，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(5-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)戊-4-炔酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(44.9mg，51.34umol，24.28％产率，99％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝866.5。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.15(s,1H),8.32-8.24(m,2H),8.20-8.13(m,1H),7.97(s,1H),7.90-7.78(m,3H),7.54-7.44(m,2H),5.19-5.09(m,1H),4.83-4.72(m,1H),4.45-4.35(m,1H),4.11-4.00(m,3H),3.98-3.95(m,1H),3.94(s,3H),3.33(s,3H),3.20-3.12(m,1H),2.95-2.84(m,1H),2.75(s,5H),2.64-2.57(m,2H),2.11-2.03(m,1H),1.99-1.81(m,4H),1.77-1.68(m,2H),1.66-1.55(m,4H),1.53-1.38(m,2H)。
实施例180、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(6-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)己-5-炔酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物180)的合成
按照与实施例179中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物180。
MS(M+H)+＝880.0,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.14(s,1H),8.32-8.24(m,2H),8.12(dd,J＝3.1,7.1Hz,1H),7.97(s,1H),7.91-7.81(m,3H),7.53-7.46(m,2H),5.14(dd,J＝5.4,12.6Hz,1H),4.83-4.71(m,1H),4.42(d,J＝11.9Hz,1H),4.12-3.90(m,7H),3.35(s,3H),3.14(t,J＝11.6Hz,1H),2.94-2.80(m,1H),2.73-2.58(m,7H),2.08-1.80(m,7H),1.73-1.40(m,8H)。
实施例181、4-((1'-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰基)-[1,4'-联哌啶]-4-基)乙炔基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物181)的合成
步骤1、4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)乙炔基)-[1,4'-联哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(3)的合成
4-乙炔基-[1,4'-联哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(100mg，341.98umol)和4-溴-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(115.29mg，341.98umol)在DMF(3mL)中的溶液中加入Pd(PPh3)2Cl2(24.00mg，34.20umol)、CuI(13.03mg，68.40umol)和TEA(103.81mg，1.03mmol，142.80uL)。将混合物在50℃搅拌0.5小时。LCMS显示4-乙炔基-[1,4'-联哌啶]-1'-羧酸叔丁酯完全消耗，具有所需质量的峰(25％)。将反应混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型TLC(SiO2,EtOAc:MeOH＝5:1)纯化，得到4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)乙炔基)-[1,4'-联哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(80mg，113.74umol，33.26％产率，78％纯度)，其为浅黄色固体。MS(M+H)+＝549.3
步骤2、4-([1,4'-联哌啶]-4-乙炔基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(4)的合成
将4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)乙炔基)-[1,4'-联哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(80mg，145.82umol)和HCl/二氧六环(4M，1mL)在DCM(1mL)中的混合物在25℃搅拌0.5小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到一个具有所需质量的主峰。将反应混合物减压浓缩，得到4-([1,4'-联哌啶]-4-基乙炔基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(80mg，粗品，HCl盐)，其为浅黄色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝449.3
步骤3、4-((1'-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰基)-[1,4'-联哌啶]-4-基)乙炔基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物181)的合成
向4-([1,4'-联哌啶]-4-乙炔基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(80mg，164.96umol，HCl盐)和4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(73.81mg，164.96umol)在DMF(3mL)中的溶液中加入HATU(94.08mg，247.44umol)和DIEA(63.96mg，494.87umol，86.20uL)。将混合物在25℃搅拌5小时。LCMS显示4-([1,4'-联哌啶]-4-乙炔基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮完全消耗，并且检测到一个具有所需质量的主峰。将反应混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18150x 25mm x 10um；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：16％-46％，10min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150x 25mm x 5um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：48％-78％)纯化，得到4-((1'-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰基)-[1,4'-联哌啶]-4-基)乙炔基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(20.8mg，23.46umol，14.22％产率，99％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝878.1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.13(s,1H),8.24(s,1H),8.14(d,J＝8.1Hz,1H),8.00(s,1H),7.90-7.78(m,3H),7.05(d,J＝1.6Hz,1H),6.97(dd,J＝1.6,8.2Hz,1H),5.15(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.76-4.65(m,1H),4.02(t,J＝14.1Hz,2H),3.89(s,3H),3.33(s,3H),2.94-2.79(m,4H),2.77-2.71(m,1H),2.64-2.59(m,1H),2.57-2.52(m,5H),2.43-2.32(m,2H),2.11-2.02(m,1H),1.92-1.85(m,4H),1.83-1.73(m,2H),1.71-1.63(m,4H),1.60-1.51(m,4H),1.48-1.36(m,2H)。
实施例182、5-((1'-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰基)-[1,4'-联哌啶]-4-基)乙炔基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物182)的合成
按照与实施例181中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物182。
MS(M+H)+＝878.6,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.14(s,1H),8.23(s,1H),8.13(d,J＝8.2Hz,1H),8.00(s,1H),7.93-7.81(m,3H),7.04(d,J＝1.3Hz,1H),6.96(dd,J＝1.3,8.3Hz,1H),5.16(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.77-4.66(m,1H),4.05-3.97(m,2H),3.88(s,3H),3.32(s,3H),2.93-2.84(m,2H),2.83-2.75(m,2H),2.73-2.66(m,1H),2.64-2.62(m,1H),2.61-2.53(m,5H),2.41-2.31(m,2H),2.11-2.02(m,1H),1.95-1.85(m,4H),1.82-1.72(m,2H),1.70-1.62(m,4H),1.61-1.48(m,4H),1.47-1.35(m,2H)。
实施例183、4-((3-(4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9)-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)丙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物183)的合成
步骤1、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((3-羟丙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(2)的合成
在25℃，向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(500mg，1.81mmol)在DMSO(10mL)中的混合物中加入3-氨基丙-1-醇(203.94mg，2.72mmol，209.38μL)和TEA(549.50mg，5.43mmol，755.85μL)。将混合物在90℃搅拌2小时。TLC(石油醚:EtOAc＝1:2)显示形成一个新斑点。将反应混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层用饱和盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((3-羟丙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.2g，301.82μmol，16.67％产率，50％纯度)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝332.1。
步骤2、3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丙基4-甲基苯磺酸酯(3)的合成
在25℃，向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((3-羟丙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(200mg，301.82μmol，50％纯度)在DCM(10mL)中的混合物中加入TosCl(115.08mg，603.64μmol)、TEA(91.62mg，905.46μmol，126.03μL)和DMAP(7.37mg，60.36μmol)。将混合物在25℃搅拌12小时。TLC(石油醚:EtOAc＝1:1)显示形成一个新斑点。将反应混合物(与另一批次合并)减压浓缩以除去DCM。将残余物用水(50mL)稀释并用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱(10g Sepa硅胶快速柱，0～80％石油醚:EtOAc梯度洗脱液@50mL/min)纯化，得到3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丙基4-甲基苯磺酸酯(160mg，322.96μmol，71.34％产率，98％纯度)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝486.0
步骤3、4-(3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丙基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4)的合成
在25℃，向3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丙基4-甲基苯磺酸酯(160mg，329.55μmol)在DMF(5mL)的溶液中加入DIEA(127.78mg，988.65μmol，172.21μL)、哌嗪-1-羧酸叔丁酯(73.65mg，395.46μmol)和NaI(9.88mg，65.91μmol)。将混合物在70℃搅拌12小时。LCMS显示检测到约97％的所需质量。将反应混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(50mL×4)萃取。将合并的有机层用饱和盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到4-[3-[[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-4-基]氨基]丙基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(160mg，294.66μmol，89.41％产率，92％纯度)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝500.3
步骤4、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((3-(哌嗪-1-基)丙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(5)的合成
在25℃，向4-(3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丙基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(160mg，320.28μmol)在二氧六环(1mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，1mL)。将混合物在25℃搅拌1小时。TLC(EtOAc:甲醇＝10:1)显示形成一个新斑点。将混合物减压浓缩，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((3-(哌嗪-1-基)丙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(130mg，167.01μmol，52.14％产率，56％纯度，HCl)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝400.1
步骤5、4-((3-(4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9)-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)丙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物183)的合成
在25℃，向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(48.53mg，104.28μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(79.30mg，208.55μmol)和DIPEA(67.39mg，521.38μmol，90.82μL)。0.5小时后将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((3-(哌嗪-1-基)丙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(50mg，114.70μmol，HCl)加入到混合物中。将混合物在25℃搅拌14小时。LCMS显示检测到约50％的所需质量。将反应混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(50mL×4)萃取。将合并的有机层用饱和盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过制备型HPLC(柱：YMC Triart 30x150mmx 7μm；流动相：[水(HCl)-ACN]；B％：26％-46％，7min)和制备型HPLC(柱:Waters Xbrige 150x25mm x 5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：48％-78％，10min)纯化，然后冻干，得到4-((3-(4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)丙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(18.6mg，21.77μmol，20.87％产率，99.1％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝847.3
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.10(br.s,1H),8.27(s,1H),8.11(d,J＝12Hz,1H),8.04(s,1H),7.58(t,J＝8.0Hz,1H),7.12(d,J＝8.8Hz,1H),7.02-6.97(m,2H),6.82(t,J＝5.6Hz,1H),5.04(dd,J＝5.2,12.8Hz,1H),4.79-4.75(m,1H),4.06(t,J＝14Hz,2H),3.88(s,3H),3.70-3.65(m,2H),3.43-3.40(m,2H),3.32-3.31(m,5H),2.92-2.88(m,1H),2.59-2.55(m,1H),2.42-2.33(m,6H),1.76-1.23(m,12H)。
实施例184、4-((4-(4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9)-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)丁基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物184)的合成
通过与实施例1和183中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物184。
MS(M+H)+＝861.1,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.07(s,1H),8.28(s,1H),8.18(d,J＝12.1Hz,1H),8.04(s,1H),7.63-7.54(m,1H),7.12(d,J＝8.6Hz,1H),7.01(dd,J＝6.6,16.9Hz,2H),6.57(t,J＝5.8Hz,1H),5.05(dd,J＝5.4,12.9Hz,1H),4.85-4.72(m,1H),4.07(t,J＝13.9Hz,2H),3.89(s,3H),3.68-3.56(m,2H),3.32-3.25(m,7H),2.95-2.81(m,1H),2.63-2.53(m,2H),2.45-2.30(m,6H),2.07-1.88(m,3H),1.74-1.48(m,10H)。
实施例185、4-((5-(4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)戊基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物185)的合成
按照与实施例183中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物185。
MS(M+H)+＝875.1,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(br s,1H),8.29(d,J＝1.6Hz,1H),8.18(br d,J＝11.6Hz,1H),8.04(br s,1H),7.63-7.54(m,1H),7.10(br d,J＝7.6Hz,1H),7.00(br dd,J＝5.4,17.1Hz,2H),6.54(br s,1H),5.05(br d,J＝8.5Hz,1H),4.85-4.73(m,1H),4.12-4.01(m,2H),3.89(br d,J＝1.0Hz,3H),3.52-3.69(m,2H),3.21-3.32(m,7H),2.95-2.83(m,1H),2.59-2.68(m,1H),2.44-2.27(m,6H),2.08-1.88(m,3H),1.77-1.30(m,13H)。
实施例186、5-((3-(4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)丙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物186)的合成
按照与实施例183中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物186。
MS(M+H)+＝847.1,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.05(s,1H),8.28(s,1H),8.17(d,J＝12.0Hz,1H),8.03(s,1H),7.56(d,J＝8.4Hz,1H),7.14(t,J＝5.3Hz,1H),7.01-6.95(m,2H),6.85(dd,J＝1.9,8.4Hz,1H),5.02(dd,J＝5.3,12.9Hz,1H),4.82-4.72(m,1H),4.06(t,J＝13.9Hz,2H),3.88(s,3H),3.70-3.62(m,2H),3.32-3.29(m,5H),3.26-3.17(m,2H),2.93-2.81(m,1H),2.61-2.54(m,1H),2.47-2.38(m,4H),2.38-2.31(m,2H),2.03-1.89(m,3H),1.78-1.51(m,9H)。
实施例187、5-((4-(4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)丁基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物187)的合成
按照与实施例183中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物187。
MS(M+H)+＝861.1,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.07(s,1H),8.28(s,1H),8.17(d,J＝12.1Hz,1H),8.05(s,1H),7.56(d,J＝8.4Hz,1H),7.13(t,J＝5.2Hz,1H),7.01-6.94(m,2H),6.85(dd,J＝2.0,8.4Hz,1H),5.03(dd,J＝5.3,12.9Hz,1H),4.84-4.73(m,1H),4.06(t,J＝13.9Hz,2H),3.88(s,3H),3.72-3.58(m,2H),3.35-3.27(m,5H),3.23-3.14(m,2H),2.94-2.81(m,1H),2.63-2.53(m,2H),2.50-2.25(m,6H),2.04-1.87(m,3H),1.74-1.51(m,10H)。
实施例188、5-((5-(4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)戊基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物188)的合成
按照与实施例183中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物188。
MS(M+H)+＝875.1,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.05(s,1H),8.28(s,1H),8.17(d,J＝12.1Hz,1H),8.04(s,1H),7.56(d,J＝8.3Hz,1H),7.11(t,J＝5.0Hz,1H),7.00-6.92(m,2H),6.85(dd,J＝1.9,8.4Hz,1H),5.03(dd,J＝5.3,12.9Hz,1H),4.79(q,J＝8.0Hz,1H),4.06(t,J＝13.9Hz,2H),3.89(s,3H),3.52-3.71(m,2H),3.29-3.38(m,5H),3.21-3.10(m,2H),2.95-2.79(m,1H),2.59-2.63(m,1H),2.45-2.38(m,2H),2.38-2.25(m,4H),2.05-1.87(m,3H),1.81-1.28(m,13H)。
实施例189、4-((2-(2-(4-(1-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物189)的合成
步骤1、4-(4-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(3)的合成
在20℃，向2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯(150mg，290.96μmol)和4-哌嗪-1-基哌啶-1-羧酸叔丁酯(86.22mg，320.06μmol)在DMF(6mL)中的溶液中加入NaI(8.72mg，58.19μmol)和DIPEA(112.81mg，872.88μmol，152.04μL)，将所得混合物在80℃搅拌16小时。LCMS显示2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯完全消耗并且检测到73％的具有所需质量的峰。将反应混合物用H2O(15mL)稀释并用EtOAc(15mL×3)萃取。将有机层用盐水(15mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(10g硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚至0～10％二氯甲烷/甲醇梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到4-(4-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(129mg，202.12μmol，产率69.47％，纯度96％)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝613.2
步骤2、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((2-(2-(4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(4)的合成
在20℃，向4-(4-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(129mg，210.54μmol)在二氧六环(1mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，9.44mL)，将所得混合物在20℃搅拌0.5小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到92％的具有所需质量的峰。将反应混合物真空浓缩，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((2-(2-(4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(120mg，粗品，HCl)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝513.3
步骤3、4-((2-(2-(4-(1-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物189)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(90mg,193.37μmol)在DMF(4mL)中的溶液中加入HATU(80.88mg，212.71μmol)和DIPEA(49.98mg，386.74μmol，67.36μL)。将混合物在20℃搅拌10分钟，加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((2-(2-(4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(116.79mg，212.71μmol，HCl)在DMF(4mL)中的溶液和DIPEA(49.98mg，386.74μmol，67.36μL)，将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗并且检测到72％的具有所需质量的峰。将反应混合物用H2O(12mL)稀释并用EtOAc(12mL×3)萃取。将有机层用盐水(12mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi C18 150*25mm*10um；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：15％-45％，10min)纯化，并通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：43％-73％，8min)再纯化，并冻干，得到4-((2-(2-(4-(1-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(34.1mg，35.17μmol，18.19％产率，99％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝959.9
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(br s,1H),8.26(s,1H),8.15(d,J＝12.0Hz,1H),8.03(s,1H),7.61-7.54(m,1H),7.14(d,J＝8.6Hz,1H),7.03(d,J＝7.1Hz,1H),6.97(d,J＝6.1Hz,1H),6.58(br t,J＝5.7Hz,1H),5.04(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.77(q,J＝7.9Hz,1H),4.49-4.40(m,1H),4.05(t,J＝13.9Hz,2H),3.87(s,3H),3.60-3.56(m,2H),3.52(t,J＝5.6Hz,3H),3.47-3.44(m,2H),3.32(s,3H),3.10-2.98(m,1H),2.92-2.76(m,2H),2.60-2.53(m,2H),2.47-2.31(m,11H),2.06-1.97(m,1H),1.97-1.89(m,2H),1.82-1.79(m,1H),1.75-1.69(m,3H),1.65-1.52(m,4H),1.36-1.22(m,2H)。
实施例190、4-((3-(2-(4-(1-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9)-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)乙氧基)丙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物190)的合成
按照与实施例189中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物190。
MS(M+H)+＝974.5,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(s,1H),8.27(s,1H),8.15(d,J＝12.0Hz,1H),8.02(s,1H),7.57(t,J＝8.0Hz,1H),7.08(d,J＝8Hz,1H),7.02(d,J＝8.0Hz,1H),6.98(d,J＝8.0Hz,1H),6.65(t,J＝4.0Hz,1H),5.06-5.02(m,1H),4.79-4.75(m,1H),4.46-4.43(m,1H),4.05(t,J＝12.0Hz,2H),3.87(s,3H),3.52-3.51(m,1H),3.48-3.45(m,4H),3.37-3.34(m,2H),3.29(s,3H),3.06-3.00(m,1H),2.92-2.77(m,2H),2.66-2.55(m,4H),2.45-2.35(m,9H),2.03-2.00(m,1H),1.94-1.92(m,2H),1.83-1.77(m,3H),1.73-1.66(m,3H),1.64-1.54(m,4H),1.33-1.27(m,2H)。
实施例191、5-((2-(2-(4-(1-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物191)的合成
步骤1、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-((2-(2-羟基乙氧基)乙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(2)的合成
在25℃，向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(2g，7.24mmol)在DMSO(10mL)中的溶液中加入2-(2-氨基乙氧基)乙醇(913.49mg，8.69mmol，869.99μL)和TEA(879.21mg，8.69mmol，1.21mL)。将混合物在90℃搅拌12小时。LCMS显示具有所需化合物质量的主峰。将反应混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(50mL×6)萃取。将合并的有机层用饱和盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法(20g Sepa硅胶快速柱，0～100％石油醚:EtOAc梯度洗脱液@80mL/min)纯化，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-((2-(2-羟基乙氧基)乙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.5g，1.38mmol，19.11％产率，100％纯度)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝362.2
步骤2、4-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(8)的合成
在25℃，向哌嗪-1-羧酸苄酯(5g，22.70mmol，4.39mL)在DCE(50mL)中的混合物中加入4-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯(4.52g，22.70mmol)、HOAc(1.43g)，23.83mmol，1.36mL)。然后在25℃搅拌2小时后将NaBH(OAc)3(19.24g，90.80mmol)加入到混合物中。将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示检测到约70％的所需质量。在0℃向反应混合物中加入H2O(100mL)，然后在0℃加入Na2CO3(饱和水溶液50mL)直至pH＝10，将合并的水层用EtOAc(100mL×3)萃取，然后将合并的有机层用盐水(100mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法(80g Sepa硅胶快速柱，0～50％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@80mL/min)纯化，得到4-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(6.2g，15.20mmol，66.94％产率，98.9％纯度)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝404.2
步骤3、4-(哌嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(4)的合成
在N2气氛下，在25℃向4-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(3g，7.43mmol)在CF3CH2OH(15mL)中的混合物中加入Pd/C(0.5g，1.49mmol，10纯度)在CF3CH2OH(5mL)中的混合物。在H2气氛(15PSI)下将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示4-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯消耗。将混合物过滤以除去催化剂。将滤液减压浓缩，得到4-(哌嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.5g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝270.4
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝3.94-3.83(m,4H),3.45-3.42(m,1H),2.66-2.63(m,4H),2.37-2.35(m,4H),2.30-2.23(m,1H),1.70-1.67(m,2H),1.38(s,9H),1.24-1.20(m,2H)。
步骤4、2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氨基)乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯(3)的合成
在25℃，向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-((2-(2-羟基乙氧基)乙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.5g，1.38mmol)在DCM(10mL)中的混合物中加入TosCl(395.70mg，2.08mmol)、DMAP(33.81mg，276.74μmol)和TEA(420.05mg，4.15mmol，577.79μL)。将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示检测到约78％的所需质量。将反应混合物减压浓缩以除去DCM。将残余物用水(50mL)稀释并用EtOAc(50mL×4)萃取。将合并的有机层用饱和盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法(20g Sepa硅胶快速柱，0～70％石油醚:EtOAc梯度洗脱液@60mL/min)纯化，得到2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氨基)乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯(330mg，640.11μmol，46.26％产率，100％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝516.2
步骤5、4-(4-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氨基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(5)的合成
在25℃，向2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氨基)乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯(330mg，640.11μmol)在DMF(3mL)中的溶液中加入DIEA(248.19mg，1.92mmol，334.49μL)、NaI(19.19mg，128.02μmol)和4-(哌嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(189.68mg，704.12μmol)。将混合物在70℃搅拌12小时。LCMS显示检测到约86％的所需质量。将反应混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层用饱和盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法(20g Sepa硅胶快速柱，0～60％ EtOAc:乙醇梯度洗脱液@80mL/min)纯化，得到4-(4-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氨基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.18g,264.40μmol，41.30％产率，90％纯度)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝613.4
步骤6、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-((2-(2-(4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(6)的合成
在25℃，向4-(4-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氨基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(180mg，293.77μmol)在二氧六环(2mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，2mL)。将混合物在25℃搅拌1小时。TLC(EtOAc:甲醇＝2:1)显示形成一个新斑点。将混合物减压浓缩，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-((2-(2-(4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(180mg，229.48μmol，78.12％产率，70％纯度，HCl)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝513.4
步骤7、5-((2-(2-(4-(1-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物191)的合成
在25℃，向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(60mg，128.91μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入DIPEA(83.31mg，644.57μmol，112.27μL)和HATU(147.05mg，386.74μmol)。0.5小时后将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-((2-(2-(4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(106.17mg，193.37μmol，HCl)加入到混合物中。将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示检测到约66％的所需质量。将反应混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(50mL×5)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过制备型HPLC(柱：YMC Triart 30x 150mm x 7μm；流动相：[水(HCl)-ACN]；B％：23％-43％，9min)和制备型HPLC(柱：Waters Xbridge150x 25mmx 5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：41％-71％，10min)纯化，然后冻干。得到5 5-((2-(2-(4-(1-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(28mg，27.12μmol，21.04％产率，93％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝960.4
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.05(br s,1H),8.27(s,1H),8.14(d,J＝12Hz,1H),8.03(s,1H),7.55(d,J＝8.4Hz,1H),7.15(t,J＝5.2Hz,1H),7.00-6.97(m,2H),6.88(dd,J＝2.0,8.4Hz,1H),5.02(dd,J＝4.8,12.4Hz,1H),4.79-4.75(m,1H),4.46-4.43(m,1H),4.05(t,J＝14Hz,2H),3.87(s,3H),3.56(t,J＝5.2Hz,2H),3.51(t,J＝6.0Hz,2H),3.32(s,3H),3.06-2.98(m,2H),2.89-2.74(m,4H),2.49-2.32(m,10H),1.99-1.54(m,14H),1.32-1.28(m,2H)。
实施例192、5-((3-(2-(4-(1-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9)-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)乙氧基)丙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物192)的合成
按照与实施例191中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物192。
MS(M+H)+＝974.0,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.05(s,1H),8.27(s,1H),8.15(d,J＝12Hz,1H),8.03(s,1H),7.55(d,J＝16Hz,1H),7.10(t,J＝8Hz,1H),6.98(d,J＝6Hz,1H),6.93(d,J＝1.6Hz,1H),6.84(dd,J＝8Hz,1.6Hz,1H),5.04-4.99(m,1H),4.81-4.73(m,1H),4.48-4.40(m,1H),4.05(t,J＝14Hz,2H),3.87(s,3H),3.52-3.42(m,5H),3.31-3.29(m,2H),3.24-3.19(m,2H),3.06-2.99(m,1H),2.91-2.74(m,2H),2.60-2.53(m,3H),2.46-2.35(m,10H),2.01-1.83(m,4H),1.83-1.55(m,10H),1.32-1.28(m,2H)。
实施例193、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-(4-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氨基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)环己基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物193)的合成
步骤1、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-((2-(2-羟基乙氧基)乙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(3)的合成
在25℃，向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(1.2g，4.34mmol)在DMSO(5mL)中的溶液中加入TEA(1.32g，13.03mmol，1.81mL)和2-(2-氨基乙氧基)乙醇(685.12mg，6.52mmol，652.49μL)。将混合物在90℃搅拌12小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将混合物用水(30mL)稀释并用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(12gSepa硅胶快速柱，0～100％石油醚:EtOAc梯度洗脱液@40mL/min)纯化，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-((2-(2-羟基乙氧基)乙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.4g，1.11mmol，25.48％产率，100％纯度)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝362.0
步骤2、2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氨基)乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯(4)的合成
在25℃，向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-((2-(2-羟基乙氧基)乙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.4g，1.11mmol)在DCM(10mL)中的溶液中加入TosCl(633.12mg，3.32mmol)和TEA(336.04mg，3.32mmol，462.23μL)。将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将反应混合物减压浓缩。将残余物用水(50mL)稀释并用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(20g 硅胶快速柱，0～80％石油醚:EtOAc梯度洗脱液@60mL/min)纯化，得到2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氨基)乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯(270mg，466.12μmol，42.11％产率，89％纯度)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝516.1
步骤3、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-(4-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氨基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)环己基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物193)的合成
在25℃，向2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氨基)乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯(150mg，290.96μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入NaI(8.72mg，58.19μmol)、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基-N-((1r,4r)-4-(哌嗪-1-基)环己基)苯甲酰胺(201.86mg，320.06μmol)和DIPEA(112.81mg，872.88μmol，152.04μL)。将混合物在70℃搅拌12小时。LCMS显示检测到约70％的所需质量。将反应混合物用水(30mL)稀释并用EtOAc(30mL×4)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：3_Phenomenex Luna C18 75x 30mm x 3μm；流动相：[水(HCl)-ACN]；B％：26％-46％，7min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge150x 25mm x 5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：42％-72％，9min)纯化，然后冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-(4-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氨基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)环己基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(56.2mg，57.47μmol，19.75％产率，99.6％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝974.5。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.05(s,1H),8.29(s,1H),8.23(d,J＝9.2Hz,1H),8.02(s,1H),7.82-7.79(m,1H),7.56(d,J＝8.0Hz,1H),7.17(d,J＝6.8Hz,1H),7.14(t,J＝5.6Hz,1H),7.01-7.00(m,1H),6.90-6.88(m,1H),5.06-5.01(m,1H),4.84-4.79(m,1H),4.07(t,J＝14Hz,2H),3.90(s,3H),3.68-3.65(m,1H),3.56(t,J＝5.2Hz,2H),3.52(t,J＝6.0Hz,2H),3.39-3.36(m,2H),3.30(s,3H),2.91-2.83(m,1H),2.59-2.53(m,1H),2.45-2.12(m,12H),2.01-1.58(m,13H),1.33-1.23(m,4H)。
实施例194、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-(4-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)环己基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物194)的合成
按照与实施例191中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物194。
MS(M+H)+＝956.4,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(s,1H),8.27-8.25(m,2H),8.05(d,J＝8.0Hz,1H),7.95(s,1H),7.58(t,J＝8.0Hz,1H),7.48-7.46(m,2H),7.15(d,J＝8.4Hz,1H),7.04(d,J＝7.2Hz,1H),6.59(t,J＝5.6Hz,1H),5.08-5.03(m,1H),4.78-4.74(m,1H),4.04(t,J＝14Hz,2H),3.93(s,3H),3.71-3.68(m,1H),3.59(t,J＝5.2Hz,2H),3.53(t,J＝5.6Hz,2H),3.48-3.44(m,2H),3.33(s,3H),2.94-2.85(m,1H),2.61-2.55(m,1H),2.45-2.38(m,10H),2.19-2.14(m,2H),2.04-1.58(m,13H),1.40-1.21(m,4H)。
实施例195、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-(4-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙酰基)哌嗪-1-基)环己基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物195)的合成
步骤1、2-(2-氨基乙氧基)乙酸(2)的合成
在20℃，向2-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙氧基)乙酸(0.7g，3.19mmol)在二氧六环(10mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，14.00mL，17.54eq)，将所得混合物在20℃搅拌1小时。TLC(SiO2，二氯甲烷:甲醇＝10:1)显示起始材料已完全消耗并且检测到一个新斑点。将反应混合物真空浓缩，得到2-(2-氨基乙氧基)乙酸(0.51g，粗品，HCl)，其为无色油状物。MS(M+H)+＝120.1
步骤2、2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙酸(4)的合成
在20℃，向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(800mg，2.90mmol)在DMSO(15mL)中的溶液中加入DIPEA(1.12g，8.69mmol，1.51mL)和2-(2-氨基乙氧基)乙酸(495.66mg，3.19mmol，HCl)，将所得混合物在130℃搅拌16小时。LCMS显示残余55％的2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-氟-异吲哚啉-1,3-二酮，并且检测到18％的具有所需质量的峰。将反应混合物用H2O(10mL)稀释并用EtOAc(10mL×3)萃取。将水相真空浓缩，得到粗产物(1.7g，43％纯度)。将粗产物通过制备型HPLC(柱：3_Phenomenex Luna C18 75*30mm*3um；流动相：[水(HCl)-ACN]；B％：13％-43％,7min)纯化并冻干，得到2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙酸(162mg，431.62μmol，产率14.90％)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝376.3
步骤3、((1r,4r)-4-(4-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙酰基)哌嗪-1-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(6)的合成
在20℃，向2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙酸(162mg，431.62μmol)和N-(4-哌嗪-1-基环己基)氨基甲酸叔丁酯(134.56mg，474.78μmol)在DMF(6mL)中的溶液中加入HOBt(87.48mg，647.43μmol)、EDCI(124.11mg，647.43μmol)和TEA(131.02mg，1.29mmol，180.23μL)，将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗并且检测到77％的具有所需质量的峰。将反应混合物用H2O(12mL)稀释并用EtOAc(12mL×3)萃取。将有机层用盐水(12mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(10g硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚至0～10％二氯甲烷/甲醇梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到((1r,4r)-4-(4-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙酰基)哌嗪-1-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(180mg，275.31μmol，产率63.79％，纯度98％)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝641.2
步骤4、4-((2-(2-(4-((1r,4r)-4-氨基环己基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙氧基)乙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(7)的合成
在20℃，向((1r,4r)-4-(4-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙酰基)哌嗪-1-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(180mg，280.93μmol)在二氧六环(2mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，10mL)，将所得混合物20℃搅拌0.5小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到85％的具有所需质量的峰。将反应混合物真空浓缩，得到4-((2-(2-(4-((1r,4r)-4-氨基环己基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙氧基)乙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(165mg，粗品，HCl)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝541.1
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-(4-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙酰基)哌嗪-1-基)环己基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物195)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(80mg,171.89μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(71.89mg，189.07μmol)和DIPEA(44.43mg，343.77μmol，59.88μL)。将混合物在20℃搅拌10分钟，加入4-((2-(2-(4-((1r,4r)-4-氨基环己基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙氧基)乙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(109.11mg，189.07μmol，HCl)在DMF(2mL)中的溶液和DIPEA(44.43mg，343.77μmol，59.88μL)，将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗并且检测到61％的具有所需质量的峰。将反应混合物用H2O(12mL)稀释并用EtOAc(12mL×3)萃取。将有机层用盐水(12mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi C18 150*25mm*10um；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：20％-50％，10min)纯化，并通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：41％-71％，8min)再纯化，并冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-(4-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙酰基)哌嗪-1-基)环己基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(24.7mg，22.75μmol，13.24％产率，91％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝987.5
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.10(s,1H),8.29(s,1H),8.23(d,J＝13.3Hz,1H),8.03(s,1H),7.81(dd,J＝3.5,7.8Hz,1H),7.62-7.55(m,1H),7.21-7.12(m,2H),7.05(d,J＝7.1Hz,1H),6.66(t,J＝5.7Hz,1H),5.06(dd,J＝5.4,13.0Hz,1H),4.87-4.76(m,1H),4.18(s,2H),4.12-4.02(m,2H),3.91(s,3H),3.73-3.62(m,3H),3.57-3.43(m,6H),3.33(s,3H),2.96-2.84(m,1H),2.63-2.54(m,2H),2.44-2.38(m,4H),2.30-2.18(m,1H),2.07-1.93(m,3H),1.93-1.87(m,2H),1.78-1.70(m,4H),1.68-1.56(m,4H),1.39-1.19(m,4H)。
实施例196、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-(4-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基)哌嗪-1-基)环己基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物196)的合成
步骤1、4-((1r,4r)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)环己基)哌嗪-1-羧酸苄酯(2)的合成
将4-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)环己基)哌嗪-1-羧酸苄酯(11g)通过制备型HPLC(柱：Kromasil Eternity XT 250*80mm*10um；流动相：[水(氢氧化氨v/v)-ACN]；B％：40％-70％，20min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((1r,4r)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)环己基)哌嗪-1-羧酸苄酯(5.4g，12.67mmol，66.15％产率，98％纯度)，其为白色固体。MS(M+H)+＝418.6，
SFC(保留时间：峰1＝1.589min；方法：柱：Chiralpak AD-3 50×4.6mm I.D.,3um；流动相：相A为CO2，相B为IPA(0.05％DEA)；梯度洗脱：在A中的B，从5％到40％；流速：3mL/min；检测器：DAD；柱温：35℃；背压：100Bar)。
步骤2、4-((1r,4r)-4-氨基环己基)哌嗪-1-羧酸苄酯(3)的合成
在20℃，向4-((1r,4r)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)环己基)哌嗪-1-羧酸苄酯(1g，2.39mmol)在二氧六环(10mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，20mL，33.40eq)，将所得混合物在20℃搅拌0.5小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰。将反应混合物真空浓缩，得到4-((1r,4r)-4-氨基环己基)哌嗪-1-羧酸苄酯(1g，粗品，HCl)，其为白色固体。MS(M+H)+＝318.2
步骤3、4-((1r,4r)-4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰氨基)环己基)哌嗪-1-羧酸苄酯(5)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(1g，2.15mmol)在DMF(10mL)中的溶液中加入HATU(898.65mg，2.36mmol)和DIPEA(555.38mg，4.30mmol，748.49μL)。将混合物在20℃搅拌10分钟，在20℃加入4-((1r,4r)-4-氨基环己基)哌嗪-1-羧酸苄酯(836.39mg，2.36mmol，HCl)在DMF(10mL)中的溶液和DIPEA(555.38mg，4.30mmol，748.49μL)，将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(84％)。将反应混合物用H2O(20mL)稀释并用EtOAc(20mL×3)萃取。将有机层用盐水(20mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(25g 硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到4-((1r,4r)-4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2((基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰氨基)环己基)哌嗪-1-羧酸苄酯(1.3g，1.65mmol，76.74％产率，97％纯度)，其为橙色固体。MS(M+H)+＝765.2
步骤4、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基-N-((1r,4r)-4-(哌嗪-1-基)环己基)苯甲酰胺(6)的合成
在N2气氛下，向4-((1r,4r)-4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰氨基)环己基)哌嗪-1-羧酸苄酯(1.3g，1.70mmol)在CF3CH2OH(20mL)中的溶液中加入Pd/C(300mg，169.97μmol，10％纯度)。将混悬液脱气并用H2鼓吹3次。在H2(15Psi)下将混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(93％)。将反应混合物用CF3CH2OH(60mL)稀释并过滤。将滤液真空浓缩，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基-N-((1r,4r)-4-(哌嗪-1-基)环己基)苯甲酰胺(1.1g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝631.2
步骤5、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((2-羟乙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(7B)的合成
在20℃，向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(0.5g，1.81mmol)在DMSO(10mL)中的溶液中加入DIPEA(701.85mg，5.43mmol，945.89μL)和2-氨基乙醇(132.68mg，2.17mmol，131.37μL)，将所得混合物在130℃搅拌12小时。LCMS显示2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-氟-异吲哚啉-1,3-二酮完全消耗以及具有所需质量的峰(95％)。将反应混合物用H2O(15mL)稀释并用EtOAc(15mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(10g硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((2-羟乙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(569mg，1.79mmol，99.07％产率)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝318.4
步骤6、2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基4-甲基苯磺酸酯(7)的合成
在20℃，向2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((2-羟乙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(569mg，1.79mmol)在DCM(10mL)中的溶液中加入TEA(544.38mg，5.38mmol，748.80μL)和TosCl(854.71mg，4.48mmol)，将所得混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-(2-羟乙基氨基)异吲哚啉-1,3-二酮完全消耗以及具有所需质量的峰(27％)。将反应混合物真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(10g 硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150*40mm*15um；流动相：[水(FA)-ACN]；B％:32％-62％,10min)再纯化，将洗脱液冻干，得到2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基4-甲基苯磺酸酯(117mg，248.15μmol，产率13.84％，纯度100％)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝472.0
步骤7、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-(4-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基)哌嗪-1-基)环己基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物196)的合成
在20℃，向2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基4-甲基苯磺酸酯(115mg，243.91μmol)和4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基-N-((1r,4r)-4-(哌嗪-1-基)环己基)苯甲酰胺(153.84mg，243.91μmol)在DMF(4mL)中的溶液中加入NaI(7.31mg，48.78μmol)和DIPEA(94.57mg，731.73μmol，127.46μL)，将所得混合物在60℃搅拌32小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(68％)。将反应混合物用H2O(10mL)稀释并用EtOAc(10mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Unisil3-100C18μLtra 150*50mm*3um；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：18％-48％，10min)纯化，将洗脱液冻干，得到产物A(106.6mg)。将产物A(106.6mg)通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge BEH C18 150*25mm*5um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：49％-79％,9min)再纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-(4-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙基)哌嗪-1-基)环己基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(47.6mg，46.58μmol，产率19.10％，纯度91％)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝929.9
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(s,1H),8.30(s,1H),8.24(d,J＝13.2Hz,1H),8.03(s,1H),7.82(br dd,J＝3.4,7.8Hz,1H),7.59(t,J＝7.8Hz,1H),7.18(d,J＝6.7Hz,1H),7.09(d,J＝8.6Hz,1H),7.03(d,J＝7.0Hz,1H),6.74(br s,1H),5.07(dd,J＝5.3,12.9Hz,1H),4.82(quin,J＝8.1Hz,1H),4.08(br t,J＝13.9Hz,2H),3.91(s,3H),3.75-3.62(m,1H),3.38-3.35(m,2H),3.32(s,3H),2.96-2.81(m,1H),2.63-2.53(m,6H),2.46-2.34(m,4H),2.24-2.20(m,1H),2.08-1.54(m,15H),1.40-1.24(m,4H)。
实施例197、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-(4-(3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丙基)哌嗪-1-基)环己基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物197)的合成
按照与实施例196中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物197。
MS(M+H)+＝943.9,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.10(s,1H),8.30(s,1H),8.24(d,J＝13.3Hz,1H),8.03(s,1H),7.81(br dd,J＝3.5,7.5Hz,1H),7.61-7.54(m,1H),7.19(d,J＝6.7Hz,1H),7.12(d,J＝8.6Hz,1H),7.02(d,J＝7.0Hz,1H),6.77(br t,J＝5.8Hz,1H),5.05(dd,J＝5.3,12.9Hz,1H),4.87-4.77(m,1H),4.08(br t,J＝13.9Hz,2H),3.91(s,3H),3.74-3.62(m,1H),3.32(s,5H),2.95-2.83(m,1H),2.64-2.53(m,6H),2.38-2.32(m,4H),2.21(m,1H),2.07-1.53(m,17H),1.39-1.23(m,4H)。
实施例198、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-((1r,4r)-4-(4-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氧基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)环己基)-3-甲氧基苯甲酰胺(反式)(化合物198)的合成
按照与实施例191中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物198。
MS(M+H)+＝943.6,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.98(br s,1H),8.29-8.24(m,2H),8.06(d,J＝7.9Hz,1H),7.95(s,1H),7.52-7.45(m,3H),7.32(d,J＝7.4Hz,1H),7.27(d,J＝8.1Hz,1H),5.16-5.08(m,1H),4.76(br t,J＝7.8Hz,1H),4.38-4.20(m,4H),4.04(br t,J＝14.1Hz,2H),3.93(s,3H),3.78-3.66(m,4H),3.60-3.56(m,2H),3.31(s,3H),3.02-2.88(m,2H),2.63-2.55(m,4H),2.44-2.38(m,6H),2.21-2.13(m,1H),2.00-1.86(m,5H),1.82-1.78(m,2H),1.71-1.68(m,2H),1.64-1.58(m,4H),1.42-1.24(m,4H)。
实施例199、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(6-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)己酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物199)的合成
步骤1、(1-(6-溴己酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(3)的合成
在25℃，向哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(2.06g，10.30mmol)在DCM(10mL)中的溶液中加入TEA(2.84g，28.10mmol，3.91mL)和6-溴己酰氯(2g，9.37mmol)。将混合物在25℃搅拌2小时。TLC(石油醚:EtOAc＝1:2)显示形成几个新斑点。将反应混合物减压浓缩以除去DCM。将残余物用水(50mL)稀释并用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层用饱和盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱(20g Sepa硅胶快速柱，0～50％石油醚:EtOAc梯度洗脱液@80mL/min)纯化，得到(1-(6-溴己酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(2.6g，6.66mmol，71.13％产率，96.7％纯度)，其为黄色油状物。MS(M-Boc+H)+＝323.0
步骤2、3-((6-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-6-氧代己基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯(5)的合成
在25℃，向(1-(6-溴己酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.0g，2.65mmol)在DMSO(10mL)中的溶液中加入NaOH(159.01mg，3.98mmol)在水(4mL)中的溶液和3-羟基氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯(1.65g，7.95mmol)。将混合物在25℃搅拌12小时。TLC(石油醚:EtOAc＝1:2)显示形成几个新斑点。将反应混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层用饱和盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(20g Sepa硅胶快速柱，0～100％石油醚:EtOAc梯度洗脱液@80mL/min)纯化，得到3-((6-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-6-氧代己基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯(1g，1.93mmol，72.90％产率，97.3％纯度)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝504.4
步骤3、(1-(6-(氮杂环丁烷-3-基氧基)己酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(6)的合成
在N2气氛下，在25℃向3-((6-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-6-氧代己基)氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯(1g，1.99mmol)在CF3CH2OH(10mL)中的混合物中加入Pd/C(0.2g，397.12μmol，10％纯度)。然后在H2(15Psi)下将混合物在25℃搅拌12小时。TLC(石油醚:EtOAc＝1:2)显示形成一个新斑点。将混合物过滤以除去催化剂。将滤液减压浓缩，得到(1-(6-(氮杂环丁烷-3-基氧基)己酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(0.8g，1.89mmol，产率95.19％，纯度87.3％)，其为浅黄色油状物。MS(M+H)+＝370.2
步骤4、(1-(6-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)己酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(8)的合成
在25℃，向(1-(6-(氮杂环丁烷-3-基氧基)己酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(0.8g，2.17mmol)在DMSO(10mL)中的溶液中加入TEA(657.25mg，6.50mmol，904.06μL)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(598.04mg，2.17mmol)。将混合物在90℃搅拌6小时。LCMS显示反应完成。将反应混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层用饱和盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(20g Sepa硅胶快速柱，0～100％石油醚:EtOAc梯度洗脱液@60mL/min)纯化，得到(1-(6-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)己酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.1g，1.69mmol，77.87％产率，95.9％纯度)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝626.2
步骤5、4-(3-((6-(4-氨基哌啶-1-基)-6-氧代己基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(9)的合成
在0℃，向(1-(6-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)己酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.1g，1.76mmol)在DCM(10mL)中的溶液中加入TMSOTf(976.82mg，4.40mmol，794.17μL)和2,6-二甲基吡啶(753.50mg，7.03mmol，819.02μL)。将混合物在25℃搅拌2小时。TLC(石油醚:EtOAc＝10:1)显示形成一个新斑点。将混合物减压浓缩，得到4-(3-((6-(4-氨基哌啶-1-基)-6-氧代己基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(3g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝526.1
步骤6、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(6-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)己酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物199)的合成
在25℃，向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(200mg，446.99μmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入DIPEA(173.31mg，1.34mmol，233.57μL)和HATU(339.92mg，893.99μmol)。然后0.5小时后将4-(3-((6-(4-氨基哌啶-1-基)-6-氧代己基)氧基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(469.87mg，893.99μmol)加入到混合物中。将混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将反应混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层用饱和盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(15g 硅胶快速柱，0～60％石油醚:(EtOAc/甲醇＝2/1)梯度洗脱液@50mL/min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：WatersXbridge 150x 25mm x 5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：40％-70％，9min)和制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150x 25mm x 5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：43％-73％，10min)纯化。将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2基)氨基)-N-(1-(6-((1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)己酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(80mg，81.67μmol，66.10％产率，97.5％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝955.4。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.05(brs,1H),8.22(s,1H),8.14(d,J＝8.0Hz,1H),7.98(s,1H),7.77(d,J＝8.0Hz,1H),7.57-7.53(m,1H),7.11(d,J＝6.8Hz,1H),7.01(d,J＝0.8Hz,1H),6.94-6.92(m,1H),6.78(d,J＝8.4Hz,1H),5.06-5.02(m,1H),4.72-4.68(m,1H),4.40-4.33(m,3H),4.05 -3.94(m,5H),3.87 -3.80(m,5H),3.41-3.40(m,1H),3.31(s,3H),3.08-3.01(m,1H),2.90-2.81(m,1H),2.59-2.53(m,2H),2.49-2.44(m,2H),2.05(t,J＝7.2Hz,2H),2.02-1.96(m,1H),1.93-1.85(m,2H),1.78-1.72(m,2H),1.69-1.64(m,2H),1.60-1.46(m,8H),1.36-1.25(m,4H)。
实施例200、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物200)的合成
步骤1、4-(1-((苄氧基)羰基)氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2)的合成
在20℃，向3-氧代氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯(10g，48.73mmol)和哌嗪-1-羧酸叔丁酯(9.08g，48.73mmol)在DCM(100mL)中的溶液中加入AcOH(2.93g，48.73mmol，2.79mL)，缓慢加入NaBH(OAc)3(30.98g，146.19mmol)，将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到51％的具有所需质量的峰。将反应混合物用H2O(200mL)稀释并用DCM(100mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(80g硅胶快速柱，0～33％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到4-(1-((苄氧基)羰基)氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(13.9g，37.02mmol，75.97％产率)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝376.2
步骤2、3-(哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯(3)的合成
在20℃，向4-(1-((苄氧基)羰基)氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(5g，13.32mmol)在二氧六环(20mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，50.00mL)，将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到71％的具有所需质量的峰。将反应混合物真空浓缩，得到3-(哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯(4.2g，粗品，HCl)，其为白色固体。MS(M+H)+＝276.2
步骤3、3-(4-亚硝基哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯(4)的合成
在0℃，向3-哌嗪-1-基氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯(4.2g，粗品，HCl)在H2O(60mL)中的溶液中加入NaNO2(1.86g，26.94mmol)，然后在0℃滴加入AcOH(2.43g，40.41mmol，2.31mL)，将所得混合物在20℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到91％的具有所需质量的峰。将饱和NaHCO3(60mL)加入到该反应混合物中调节pH＝9，并用EtOAc(60mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到3-(4-亚硝基哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯(3.9g，12.30mmol，91.33％产率，96％纯度)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝305.2
步骤4、3-(4-氨基哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯(5)的合成
在0℃，向3-(4-亚硝基哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯(3.9g，12.81mmol)在MeOH(100mL)中的溶液中缓慢加入Zn(4.36g，66.64mmol)，然后在0℃滴加入AcOH(11.54g，192.22mmol，10.99mL)，将所得混合物在20℃搅拌4小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到80％的具有所需质量的峰。将反应混合物用MeOH(100mL)稀释并过滤。将滤液真空浓缩，得到3-(4-氨基哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯(3.72g，粗品)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝291.2
步骤5、N-(4-(氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺(7)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(500mg，1.12mmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入HATU(467.39mg，1.23mmol)和DIPEA(288.85mg，2.23mmol，389.29μL)，将混合物在20℃搅拌10分钟，加入3-(4-氨基哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯(454.26mg，1.56mmol)和DIPEA(433.28mg，3.35mmol，583.94μL，3eq)在DMF(5mL)中的溶液，将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到63％的具有所需质量的峰。将反应混合物用H2O(30mL)稀释并用EtOAc(30mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(25g硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚至0～5％二氯甲烷/甲醇梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到N-(4-(氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺(783mg，1.09mmol，97.35％产率)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝720.2
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝9.64-9.22(m,1H),8.33-8.22(m,2H),7.98(s,1H),7.50-7.26(m,7H),5.05(s,2H),4.76(q,J＝7.8Hz,1H),4.29-3.62(m,10H),3.33(s,3H),3.12-2.84(m,4H),2.52(s,2H),2.49-2.34(m,2H),2.00-1.88(m,2H),1.77-1.62(m,2H),1.66-1.52(m,4H)
步骤6、N-(4-(氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺(8)的合成
在N2气氛下，向N-(4-(氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺(703mg，976.69μmol)在CF3CH2OH(15mL)中的溶液中加入Pd/C(200mg，10％纯度)。将混悬液脱气并用H2鼓吹3次，在H2(15Psi)下将所得混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示没有反应，在N2气氛下将Pd(OH)2/C(200mg，20％纯度)加入到该反应混合物中。将混悬液脱气并用H2鼓吹3次，在H2(15Psi)下将所得混合物在40℃搅拌16小时。LCMS显示残余58％的起始材料，并且检测到30％的具有所需质量的峰，在N2气氛下将Pd(OH)2/C(100mg，20％纯度)加入到该反应混合物中。将混悬液脱气并用H2鼓吹3次。在H2(15Psi)下将混合物在50℃搅拌16小时。LCMS显示残余17％的起始材料，并且检测到81％的具有所需质量的峰。将反应混合物用CF3CH2OH(40mL)稀释并过滤。将滤液真空浓缩，得到N-(4-(氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺(321mg，548.11μmol，产率56.12％)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝586.3
步骤7、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物200)的合成
在20℃，向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(50mg，181.02μmol)在DMSO(3mL)中的溶液中加入DIPEA(70.18mg，543.05μmol，94.59μL)和N-(4-(氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺(116.61mg，199.12μmol)，将所得混合物在80℃搅拌16小时。LCMS显示残余54％的2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-氟-异吲哚啉-1,3-二酮，并且检测到37％的具有所需质量的峰。将反应混合物用H2O(12mL)稀释并用EtAOc(12mL×3)萃取。将有机层用盐水(12mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Unisil 3-100C18 Ultra 150*50mm*3μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：16％-46％,7min)纯化，并通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：36％-66％，8min)再纯化，并冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(21.1mg，24.81μmol，13.71％产率，99％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝842.1
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.07(s,1H),9.39(s,1H),8.30-8.23(m,2H),7.97(s,1H),7.62-7.55(m,1H),7.45-7.38(m,2H),7.13(d,J＝7.0Hz,1H),6.81(d,J＝8.5Hz,1H),5.05(dd,J＝5.5,12.6Hz,1H),4.83-4.70(m,1H),4.38-4.20(m,2H),4.09-3.95(m,4H),3.93(s,3H),3.32-3.22(m,4H),3.01-2.82(m,5H),2.63-2.52(m,6H),2.05-1.89(m,3H),1.74-1.68(m,2H),1.65-1.52(m,4H)
实施例201、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物201)的合成
在20℃，向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(70mg，253.42μmol)和N-(4-(氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺(155.84mg，266.09μmol)在DMSO(5mL)中的溶液中加入DIPEA(98.26mg，760.26μmol，132.42μL)，所得混合物在80℃搅拌12小时。LCMS显示残余61％的2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-氟-异吲哚啉-1,3-二酮，并且检测到33％的具有所需质量的峰。将反应混合物用H2O(12mL)稀释并用EtAOc(12mL×3)萃取。将有机层用盐水(12mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Unisil 3-100C18 Ultra 150*50mm*3μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：16％-46％，7min)纯化，并通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：36％-66％,8min)再纯化，并冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(25.3mg，29.75μmol，11.74％产率，99％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝842.1
1H NMR(400MHz,CD3CN)δ＝8.94(br s,1H),8.47(d,J＝8.4Hz,1H),8.10(s,1H),7.86(s,1H),7.71(s,1H),7.64-7.57(m,1H),7.42-7.33(m,2H),6.78(d,J＝1.9Hz,1H),6.62(dd,J＝2.0,8.4Hz,1H),4.93(dd,J＝5.1,12.3Hz,1H),4.89-4.81(m,1H),4.15-4.07(m,2H),4.01-3.91(m,5H),3.86(dd,J＝5.0,8.4Hz,2H),3.39(q,J＝5.7Hz,1H),3.33(s,3H),3.02-2.96(m,4H),2.82-2.44(m,7H),2.12-2.06(m,1H),2.06-1.98(m,2H),1.81-1.71(m,2H),1.71-1.56(m,4H)。
实施例202、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-(1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基)氮杂环丁烷-3-基)乙基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物202)的合成
按照与实施例200中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物202。
MS(M+H)+＝883.1,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.14(br s,1H),8.34-8.28(m,2H),8.27(s,1H),8.00(s,1H),7.93(br d,J＝6.6Hz,1H),7.89-7.79(m,2H),7.49(br s,2H),5.14(td,J＝2.6,12.7Hz,1H),4.83-4.72(m,1H),4.22-3.99(m,5H),3.94(s,3H),3.90-3.83(m,1H),3.78-3.66(m,2H),3.56(br s,8H),3.33(s,3H),2.97-2.81(m,1H),2.64-2.57(m,2H),2.29-2.17(m,1H),2.10-2.00(m,3H),2.00-1.87(m,4H),1.87-1.78(m,1H),1.76-1.66(m,2H),1.66-1.53(m,4H)。
实施例203、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基)氮杂环丁烷-3-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物203)的合成
步骤1、(E)-3-(3-甲氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(3)的合成
在0℃，向2-(二甲氧基磷酰基)乙酸甲酯(1.18g，6.48mmol，936.90μL)在THF(10mL)中的溶液中加入DBU(904.12mg，5.94mmol，895.17μL)和LiCl(251.22mg，5.93mmol，121.36)μL)，将混合物在0℃搅拌10分钟。在0℃加入3-甲酰基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(1g，5.40mmol)在THF(10mL)中的溶液，将所得混合物在25℃搅拌30分钟。LCMS显示具有所需质量的主峰。将反应混合物用NH4Cl(20mL)稀释，用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。将滤液减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法(Biotage；20g 硅胶快速柱，0～15％ EtOAc EtOAc/石油醚梯度洗脱液@40mL/min)纯化，得到(E)-3-(3-甲氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(1.2g，4.97mmol，92.12％产率，100％纯度)，其为无色油状物。MS(M-56+H)+＝186.0
步骤2、3-(3-甲氧基-3-氧代丙基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(4)的合成
将(E)-3-(3-甲氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(1.2g，4.97mmol)和Pd/C(200mg，10％纯度)在CF3CH2OH(10mL)中的混合物脱气并用H2鼓吹3次，在H2(15Psi)气氛下将所得混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将混合物通过硅藻土垫过滤。将滤液真空浓缩，得到3-(3-甲氧基-3-氧代丙基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(1.2g，粗品)，其为无色油状物。MS(M-56+H)+＝188.0
步骤3、3-(1-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-3-基)丙酸(5)的合成
向3-(3-甲氧基-3-氧代丙基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(500mg，2.06mmol)在THF(10mL)和H2O(2mL)中的溶液中加入LiOH·H2O(172.48mg，4.11mmol)，将混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将混合物减压浓缩，得到3-(1-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-3-基)丙酸(480mg，粗品，Li)，其为白色固体。MS(M-56+H)+＝174.5
步骤4、3-(3-(4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)哌啶-1-基)-3-氧代丙基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(7)的合成
向3-(1-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-3-基)丙酸(143.39mg，625.43μmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入DIPEA(242.50mg，1.88mmol，326.81μL)、HATU(356.71mg，938.14μmol)，将混合物在25℃搅拌0.5小时，加入4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(哌啶-4-基)苯甲酰胺(360mg，625.43μmol，1eq，FA)，将所得混合物在25℃搅拌1小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将反应混合物用H2O(20mL)稀释，用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。将滤液减压浓缩，得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法(40g 硅胶快速柱，0～20％乙酸乙酯/MeOH@40mL/min)纯化，得到3-(3-(4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)哌啶-1-基)-3-氧代丙基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(430mg，568.82μmol，90.95％产率，98％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝741.5
步骤5、N-(1-(3-(氮杂环丁烷-3-基)丙酰基)哌啶-4-基)-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺(8)的合成
向3-(3-(4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)哌啶-1-基)-3-氧代丙基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(300mg，404.95μmol)在DCM(10mL)中的溶液中加入TFA(1.54g，13.51mmol，1.0mL)，将混合物在0℃搅拌0.5小时。LCMS显示具有所需质量的峰(32％)。将混合物真空浓缩。将残余物通过反相HPLC(柱：Phenomenex Synergi C18 150*25mm*10μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：14％-34％，10min)纯化。将洗脱液冻干，得到N-[1-[3-(氮杂环丁烷-3-基)丙酰基]-4-哌啶基]-4-[(9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-8H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-3-甲氧基-苯甲酰胺(100mg，131.05μmol，产率32.36％，纯度90％，FA)，白色固体。MS(M+H)+＝641.4
步骤6、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基)氮杂环丁烷-3-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物203)的合成
向N-(1-(3-(氮杂环丁烷-3-基)丙酰基)哌啶-4-基)-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺(80mg，116.49μmol，FA)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-甲醛(166.72mg，582.46μmol)在MeOH(0.5mL)中的溶液中加入AcOH(13.99mg，232.98μmol，13.32μL)，将混合物20℃搅拌2小时，加入NaBH3CN(21.96mg，349.47μmol)，将混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示具有所需质量的峰(22％)。将反应混合物减压浓缩，得到残余物。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi C18 150*25mm*10μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：19％-39％，10min)纯化，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(3-(1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基)氮杂环丁烷-3-基)丙酰基)哌啶-4-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(10.9mg，10.17μmol，8.73％产率，85％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝911.5。
1H NMR(400MHz,CD3CN)δ＝9.04(s,1H),8.47(d,J＝8.3Hz,1H),8.10(s,1H),8.00-7.95(m,1H),7.90(t,J＝7.5Hz,1H),7.86-7.80(m,1H),7.70(s,1H),7.46-7.39(m,2H),6.91-6.84(m,1H),5.10-4.99(m,1H),4.93-4.82(m,1H),4.81-4.64(m,2H),4.49-4.38(m,1H),4.26-3.80(m,11H),3.33(s,3H),3.19-3.09(m,1H),3.00-2.86(m,1H),2.85-2.63(m,4H),2.37-2.28(m,2H),2.05-1.95(m,7H),1.80-1.72(m,2H),1.70-1.58(m,4H),1.54-1.38(m,2H)。
实施例204、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氮杂环丁烷-3-基)乙酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物204)的合成
步骤1、2-(氮杂环丁烷-3-基)乙酸甲酯(2)的合成
在25℃，向3-(2-甲氧基-2-氧代乙基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(840mg，3.66mmol)在DCM(5mL)中的溶液中加入TFA(1.54g，13.51mmol，1mL)。将混合物在25℃搅拌1小时。TLC(石油醚:EtOAc＝1:1；Rf＝0)显示起始材料完全消耗并且形成新的点。将反应混合物减压浓缩，得到2-(氮杂环丁烷-3-基)乙酸甲酯(890mg，粗品，TFA)，其为无色油状物，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝130.2
步骤2、2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氮杂环丁烷-3-基)乙酸甲酯(3)的合成
将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(909.83mg，3.29mmol)、2-(氮杂环丁烷-3-基)乙酸甲酯(890mg，3.66mmol，TFA盐)和TEA(1.11g，10.98mmol，1.53mL)在DMSO(5mL)中的混合物在100℃搅拌12小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将混合物倒入水(50mL)中并用EtOAc(20mL×5)萃取。将合并的有机相用盐水(30mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氮杂环丁烷-3-基)乙酸甲酯(1.5g，粗品)，其为黄色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝386.1
步骤3、2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氮杂环丁烷-3-基)乙酸(4)的合成
将2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氮杂环丁烷-3-基)乙酸甲酯(1.5g，3.89mmol)和(n-Bu3Sn)2O(9.28g，15.57mmol，7.93mL)在甲苯(80mL)中的混合物在110℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的主峰。将混合物倒入KF(2.5M，100mL)中并用EtOAc(30mL×5)萃取。将合并的有机相用盐水(20mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(25g 硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@80mL/min)纯化，得到2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氮杂环丁烷-3-基)乙酸(1g，2.67mmol，68.49％产率，99％纯度)，其为黄色固体，其用于直接下一步。MS(M+H)+＝372.0
步骤4、(1-(2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氮杂环丁烷-3-基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(5)的合成
向2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氮杂环丁烷-3-基)乙酸(0.5g，1.35mmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入HATU(614.36mg，1.62mmol)和DIPEA(522.05mg，4.04mmol，703.57μL)。将混合物在25℃搅拌10分钟。然后加入哌啶-4-基氨基甲酸苄酯(378.56mg，1.62mmol)，将所得混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将混合物倒入水(60mL)中并用EtOAc(20mL×3)萃取。将合并的有机相用盐水(10mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(25g 硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@80mL/min)纯化，得到(1-(2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氮杂环丁烷-3-基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(0.4g，619.45μmol，46.01％产率，91％纯度)，其为黄色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝588.3
步骤5、4-(3-(2-(4-氨基哌啶-1-基)-2-氧代乙基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(6)的合成
向(1-(2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氮杂环丁烷-3-基)乙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(0.1g，170.18μmol)在CF3CH2OH(10mL)中的溶液中加入Pd/C(0.1g，170.18μmol，10％纯度)。在H2(15Psi)下将混合物在25℃搅拌4小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的主峰。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，将滤液浓缩，得到4-(3-(2-(4-氨基哌啶-1-基)-2-氧代乙基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(80mg，粗品)，其为黄色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝454.2
步骤6、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氮杂环丁烷-3-基)乙酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物204)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(90mg，193.37μmol)在DMF(3mL)中的溶液中加入HATU(88.23mg，232.05μmol)和DIPEA(74.97mg，580.12μmol，101.04μL)。将混合物在25℃搅拌10分钟。然后加入4-(3-(2-(4-氨基哌啶-1-基)-2-氧代乙基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(78.92mg，174.03μmol)，将所得混合物在25℃搅拌2小时。LCMS显示具有所需质量的主峰。将混合物用EtOAc(20mL)稀释并用盐水(6mL)洗涤。将有机相经Na2SO4干燥并减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(4g硅胶快速柱，0～100％EtOAc/石油醚梯度洗脱液@60mL/min；0～50％甲醇/EtOAc洗脱液@60mL/min)纯化，并通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150x25mmx 5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：40％-70％，9min)和制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1；Rf＝0.5)再纯化。将不纯的产物通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150x25mm x 5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：41％-71％，8min)进一步纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氮杂环丁烷-3-基)乙酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(18.2mg，19.80μmol，43.50％产率，98％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝901.2
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.24-10.84(m,1H),8.33-8.20(m,2H),8.04(s,1H),7.97(br dd,J＝2.8,7.4Hz,1H),7.58-7.51(m,1H),7.20(d,J＝6.8Hz,1H),7.09(d,J＝6.9Hz,1H),6.76(d,J＝8.5Hz,1H),5.03(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.89-4.75(m,1H),4.40-4.25(m,3H),4.13-3.96(m,3H),3.91(s,3H),3.89-3.74(m,3H),3.33(br s,3H),3.19-3.10(m,1H),2.98-2.71(m,5H),2.62-2.54(m,2H),2.05-1.91(m,3H),1.90-1.78(m,2H),1.76-1.57(m,6H),1.54-1.33(m,2H)。
实施例205、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氮杂环丁烷-3-基)乙酰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物205)的合成
按照与实施例204中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物205。
MS(M+H)+＝901.2,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.06(s,1H),8.30(s,1H),8.25(d,J＝13.4Hz,1H),8.04(s,1H),7.96(dd,J＝2.9,7.7Hz,1H),7.62(d,J＝8.3Hz,1H),7.20(d,J＝6.6Hz,1H),6.76(d,J＝1.8Hz,1H),6.63(dd,J＝1.9,8.4Hz,1H),5.05(dd,J＝5.3,12.8Hz,1H),4.87-4.76(m,1H),4.30(d,J＝12.9Hz,1H),4.18(t,J＝8.2Hz,2H),4.13-3.97(m,3H),3.91(s,3H),3.86(d,J＝14.1Hz,1H),3.72-3.63(m,2H),3.30(s,3H),3.19-3.09(m,1H),3.09-2.99(m,1H),2.95-2.70(m,4H),2.62-2.53(m,2H),2.08-1.91(m,3H),1.91-1.78(m,2H),1.76-1.56(m,6H),1.55-1.32(m,2H)。
实施例206、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-((2S,4S)-4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)吡咯烷-2-羰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物206)的合成
步骤1、1-(叔丁基)2-甲基(2S,4R)-4-(甲苯磺酰氧基)吡咯烷-1,2-二羧酸酯(2)的合成
在20℃，向1-(叔丁基)2-甲基(2S,4R)-4-羟基吡咯烷-1,2-二羧酸酯(5g，20.39mmol)在DCM(60mL)中的溶液中加入TEA(6.19g，61.16)mmol，8.51mL)和TosCl(5.05g，26.50mmol)，将所得混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示残余33％的起始材料以及具有所需质量的峰(20％)。将所得混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(65％)。将反应混合物真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(40g硅胶快速柱，0～18％EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到1-(叔丁基)2-甲基(2S,4R)-4-(甲苯磺酰氧基)吡咯烷-1,2-二羧酸酯(4.7g，11.53mmol，产率56.56％，纯度98％)，其为黄色油状物。MS(M-100+H)+＝300.3
步骤2、1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-叠氮吡咯烷-1,2-二羧酸酯(3)的合成
在20℃，向1-(叔丁基)2-甲基(2S,4R)-4-(甲苯磺酰氧基)吡咯烷-1,2-二羧酸酯(4.7g，11.77mmol)在DMF(50mL)中的溶液中加入NaN3(1.53g，23.53mmol)，将所得混合物在70℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到93％的具有所需质量的峰。将有机层用H2O(150mL)稀释并用EtOAc(150mL×3)萃取。将有机层用盐水(150mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-叠氮吡咯烷-1,2-二羧酸酯(5.3g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M-N3-55)+＝171.5
步骤3、1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-氨基吡咯烷-1,2-二羧酸酯(4)的合成
在N2气氛下，向1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-叠氮吡咯烷-1,2-二羧酸酯(5.3g，19.61mmol)在CF3CH2OH(60mL)中的溶液中加入Pd/C(1g，10％纯度)。将混悬液脱气并用H2鼓吹3次。在H2(15Psi)下将混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到具有所需质量的峰。将反应混合物用EtOH(200mL)稀释并过滤。将滤液浓缩，得到1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-氨基吡咯烷-1,2-二羧酸酯(4.9g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M-56+H)+＝189.5
步骤4、1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)吡咯烷-1,2-二羧酸酯(6)的合成
在20℃，向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-4-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(800mg，2.90mmol)在DMSO(12mL)中的溶液中加入TEA(879.20mg，8.69mmol，1.21mL)和1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-氨基吡咯烷-1,2-二羧酸酯(1.42g，5.79mmol)，将所得混合物在100℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到47％的具有所需质量的峰。将反应混合物用H2O(40mL)稀释并用EtOAc(40mL×3)萃取。将有机层用盐水(40mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(20g 硅胶快速柱，0～55％EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)吡咯烷-1,2-二羧酸酯(914mg，1.64mmol，产率56.75％，90％纯度)，其为黄色固体。MS(M-100+H)+＝401.2
步骤5、(2S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)吡咯烷-2-羧酸(7)的合成
在20℃，向1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)吡咯烷-1,2-二羧酸酯(400mg，799.20μmol)在甲苯(10mL)中的溶液中加入三丁基(三丁基锡氧基)锡烷(1.91g，3.20mmol，1.63mL)，将所得混合物在110℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到79％的具有所需质量的峰。将反应混合物真空浓缩，得到(2S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)吡咯烷-2-羧酸(389mg，粗品)，其为黄色油状物。MS(M-100+H)+＝387.3
步骤6、(2S,4S)-2-(4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰氨基)哌啶-1-羰基)-4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(9)的合成
在20℃，向(2S,4S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)吡咯烷-2-羧酸(239mg，491.29μmol)和4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基-N-(哌啶-4-基)苯甲酰胺(286.93mg，491.29μmol，HCl)在DMF(8mL)中的溶液中加入EDCI(141.27mg，736.94μmol)、HOBt(99.58mg，736.94μmol)和DIPEA(190.49mg，1.47mmol，256.72μL)，将所得混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗并且检测到60％的具有所需质量的峰。将反应混合物用H2O(25mL)稀释并用EtOAc(25mL×3)萃取。将有机层用盐水(25mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(12g 硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到(2S,4S)-2-(4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰氨基)哌啶-1-羰基)-4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(367mg，361.21μmol，73.52％产率)，其为黄色固体。MS(M-100+H)+＝916.1
步骤7、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-((2S,4S)-4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)吡咯烷-2-羰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物206)的合成
在20℃，向(2S,4S)-2-(4-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰氨基)哌啶-1-羰基)-4-((2-(2,6)-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(200mg，196.84μmol)在DCM(2mL)中的溶液中加入TFA(67.33mg，590.53μmol，43.72μL)，将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗并且检测到82％的具有所需质量的峰。将反应混合物真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18150*25mm*10μm；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％:19％-49％,10min)纯化并通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：39％-69％，8min)再纯化，并冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-((2S,4S)-4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)吡咯烷-2-羰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(44.2mg，47.29μmol，24.03％产率，98％纯度)，其为黄色固体。SFC(保留时间：峰1＝1.996，峰2＝3.296；方法：柱：Chiralpak AS-3 50×4.6mm I.D.，3μm；流动相：相A为CO2，相B为IPA+ACN(0.05％DEA)；梯度洗脱：在CO2中的40％IPA+ACN(0.05％ DEA)；流速：3mL/min；检测器：PDA柱温度：35℃；背压：100Bar)。MS(M+H)+＝916.1
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(br s,1H),8.31-8.21(m,2H),8.04(s,1H),8.02-7.90(m,1H),7.64-7.55(m,1H),7.20(d,J＝6.5Hz,1H),7.13(dd,J＝5.0,8.6Hz,1H),7.05(d,J＝7.1Hz,1H),6.53(dd,J＝7.6,12.2Hz,1H),5.05(dd,J＝5.3,12.6Hz,1H),4.87-4.76(m,1H),4.32(d,J＝12.7Hz,1H),4.24-4.14(m,1H),4.13-3.95(m,5H),3.91(s,3H),3.33(s,3H),3.27-3.10(m,2H),3.02(t,J＝10.8Hz,1H),2.94-2.84(m,2H),2.84-2.75(m,1H),2.63-2.55(m,2H),2.06-1.92(m,3H),1.91-1.80(m,2H),1.78-1.29(m,10H)
实施例207、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-((2R,4S)-4-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)吡咯烷-2-羰基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物207)的合成
按照与实施例206中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物207。
MS(M+H)+＝916.2,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.10(br s,1H),8.33-8.19(m,2H),8.07-7.90(m,2H),7.60(t,J＝7.9Hz,1H),7.20(d,J＝4.8Hz,1H),7.14(d,J＝8.6Hz,1H),7.07(d,J＝7.0Hz,1H),6.45(t,J＝7.4Hz,1H),5.05(dd,J＝5.4,12.7Hz,1H),4.87-4.76(m,1H),4.38-4.26(m,1H),4.19-3.98(m,5H),3.91(s,4H),3.33(s,3H),3.24-3.00(m,2H),2.93-2.75(m,2H),2.66-2.53(m,4H),2.10(dd,J＝3.9,5.7Hz,1H),2.07-1.91(m,4H),1.91-1.79(m,2H),1.78-1.55(m,6H),1.54-1.35(m,2H)。
实施例208、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物208)的合成
步骤1、2-(4-(((苄氧基)羰基)氨基)哌啶-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3)的合成
在25℃，向2-氧代-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(0.5g，2.09mmol)在DCE(10mL)中的溶液中加入哌啶-4-基氨基甲酸苄酯(538.47mg，2.30mmol)。搅拌0.5小时后，加入NaBH(OAc)3(664.23mg，3.13mmol)，将所得混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示检测到约97％的所需质量。将反应混合物用水(50mL)稀释并用DCM(50mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到2-(4-(((苄氧基)羰基)氨基)哌啶-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(960mg，粗品)，其为白色固体。MS(M+H)+＝458.2。
步骤2、(1-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(4)的合成
在25℃，向2-(4-(((苄氧基)羰基)氨基)哌啶-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(960mg，2.10mmol)在二氧六环(5mL)中的溶液中加入HCl/二氧六环(4M，5mL)。将混合物在25℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料被消耗。将混合物减压浓缩，得到(1-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(1.2g，粗品，HCl盐)，其为白色固体。MS(M+H)+＝358.3。
步骤3、(1-(7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(6)的合成
在25℃，向(1-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(100mg，253.84μmol，HCl盐)在DMSO(2mL)中的溶液中加入TEA(102.74mg，1.02mmol，141.32μL)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(73.62mg，266.53μmol)。将混合物在90℃搅拌4小时。LCMS显示检测到约90％的所需质量。将残余物通过制备型HPLC(柱：Shim-pack C18 150x 25x 10μm；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：10％-40％，10min)纯化，然后冻干，得到(1-(7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(120mg，176.37μmol，34.74％产率，90.2％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝614.3。
步骤4、4-(2-(4-氨基哌啶-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(7)的合成
在N2气氛下，在25℃向(1-(7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-4-基)氨基甲酸苄酯(120mg，195.53μmol)在CF3CH2OH(5mL)中的溶液中加入Pd/C(30mg，39.11μmol，10％纯度)。在H2气氛(15PSI)下将混合物在25℃搅拌3小时。LCMS显示检测到约83％的所需质量。过滤混合物。将滤液减压浓缩，得到4-(2-(4-氨基哌啶-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(60mg，99.71μmol，产率51.00％，纯度79.7％)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝480.3
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物208)的合成
在25℃，向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(58.23mg，125.11μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(118.93mg，312.78μmol)和DIEA(48.51mg，375.34μmol，65.38μL)，搅拌0.5小时后，然后加入4-(2-(4-氨基哌啶-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(60mg，125.11μmol)，将所得混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示检测到约60％的所需质量。将反应混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(50mL×4)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：YMC Triart 30x 150mmx 7μm；流动相：[水(HCl)-ACN]；B％：34％-54％，7min)和制备型HPLC(柱:Waters Xbrige 150x25 mmx5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：57％-87％，10min)纯化，然后冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(1-(7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-4-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(9mg，9.42umol，7.53％产率，97％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝927.4。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(br.s,1H),8.29(s,1H),8.24(d,J＝13.2Hz,1H),8.03(s,1H),7.90-7.87(m,1H),7.68-7.65(m,1H),7.32(t,J＝7.6Hz,2H),7.18(d,J＝6.8Hz,1H),5.10-5.06(dd,J＝5.2,12.8Hz,1H),4.84-4.80(m,1H),4.07(t,J＝14Hz,2H),3.91(s,3H),3.75-3.72(m,1H),3.30(s,3H),3.25-3.15(m,5H),2.88-2.69(m,4H),2.61-2.56(m,3H),2.02-1.95(m,3H),1.82-1.72(m,8H),1.64-1.48(m,10H)。
实施例209、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-1-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物209)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(440mg，945.37μmol)在DMF(3mL)中的溶液中加入HATU(395.41mg，1.04mmol)和DIPEA(366.55mg，2.84mmol，494.00μL)。将混合物在20℃搅拌10分钟，加入4-(2-(1-氨基哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(545.17mg，1.13mmol)在DMF(3mL)中的溶液，将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(38％)。将反应混合物用H2O(15mL)稀释并用EtOAc(15mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(15mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(10g硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚至0～50％二氯甲烷/甲醇梯度洗脱液@100mL/min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150*40mm*15um；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：20％-50％，10min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-1-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(207.9mg，189.55μmol，产率20.05％，纯度95％，2TFA)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝928.1
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.10(s,1H),10.06-9.91(m,1H),9.27(s,1H),8.30(s,1H),8.24(br d,J＝13.0Hz,1H),8.13(s,1H),7.74-7.66(m,1H),7.42-7.29(m,2H),7.14(d,J＝6.4Hz,1H),5.14-5.05(m,1H),4.83(td,J＝8.2,16.2Hz,1H),4.15-3.96(m,6H),3.91(s,3H),3.39-3.22(m,6H),3.19(br s,2H),3.11(br d,J＝9.5Hz,2H),2.95-2.83(m,1H),2.76(br t,J＝9.7Hz,2H),2.59(br d,J＝15.9Hz,2H),2.19-1.81(m,9H),1.79-1.69(m,2H),1.62-1.41(m,6H)。
实施例210、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-1-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物210)的合成
向4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(420mg，955.88μmol)在DMF(3mL)中的溶液中加入HATU(399.80mg，1.05mmol)和DIPEA(370.62mg，2.87mmol，499.49μL)。将混合物在20℃搅拌10分钟，加入4-(2-(1-氨基哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(551.22mg，1.15mmol)在DMF(3mL)中的溶液，将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(46％)。将反应混合物用H2O(15mL)稀释并用EtOAc(15mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(15mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(10g硅胶快速柱，0～100％EtOAc/石油醚至0～50％二氯甲烷/甲醇梯度洗脱液@100mL/min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150*40mm*15um；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：16％-46％，10min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-1-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(146.7mg，138.62μmol，产率14.50％，纯度96％，2TFA)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝902.1
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.11(s,1H),10.05-9.92(m,1H),9.25(s,1H),8.32-8.22(m,2H),8.08(s,1H),7.75-7.67(m,1H),7.41-7.32(m,2H),7.19-7.11(m,1H),5.11(brdd,J＝5.6,12.7Hz,1H),4.93-4.86(m,1H),4.12-4.05(m,6H),3.92(s,3H),3.37-3.27(m,6H),3.26-3.09(m,2H),3.12(br d,J＝8.6Hz,2H),2.94-2.84(m,1H),2.80-2.71(m,2H),2.64-2.57(m,2H),2.13-1.87(m,7H),1.58-1.40(m,2H),1.27(br d,J＝6.6Hz,6H)。
实施例211、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,7-二氮杂螺[3,5]壬烷-2-基)哌啶-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物211)的合成
步骤1、2-(1-((苄氧基)羰基)哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(2)的合成
在0℃，向2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(4g，17.67mmol)和4-氧代哌啶-1-羧酸苄酯(4.12g，17.67mmol，3.52mL)在MeOH(200mL)中的溶液中加入AcOH(1.06g，17.67mmol，1.01mL)。然后在0℃缓慢加入NaBH3CN(3.33g，53.02mmol)。将混合物在0～20℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(88％)。将反应混合物用H2O(300mL)稀释并用EtAOc(300mL×3)萃取。将合并的有机层用饱和NaHCO3(300mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤。将滤液浓缩，得到化合物2-(1-((苄氧基)羰基)哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(7.6g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝444.3
步骤2、2-(哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3)的合成
在N2气氛下，向2-(1-((苄氧基)羰基)哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(15g，33.82mmol)在CF3CH2OH(100mL)中的溶液中加入Pd/C(1.5g，10％纯度)和Pd(OH)2/C(1.5g，20％纯度)。将混悬液脱气并用H2鼓吹3次。在H2(15Psi)下将混合物在20～50℃搅拌16小时。LCMS显示残余起始材料以及具有所需质量的峰。在N2气氛下加入另外的Pd(OH)2/C(1.5g，20％纯度)和Pd/C(1.5g，10％纯度)。将混悬液脱气并用H2鼓吹3次。在H2(15Psi)下将混合物在60℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰。将反应混合物用CF3CH2OH(500mL)稀释并过滤。将滤液真空浓缩，得到2-(哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(18g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝310.54
步骤3、2-(1-亚硝基哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(4)的合成
在0℃，向2-(哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(18g，58.17mmol)在H2O(200mL)中的溶液中加入NaNO2(12.04g，174.51mmol)，然后在0℃滴加入AcOH(13.97g，232.67mmol，13.31mL)。将混合物在0～20℃搅拌2小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(94％)。在0℃用饱和NaHCO3(200mL)稀释，将反应混合物的pH调节至10左右，并用混合溶剂(EtOAc：甲醇＝10:1，200mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤。将滤液真空浓缩，得到2-(1-亚硝基哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(7.69g，22.72mmol，39.06％产率)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝339.2
步骤4、2-(1-(((苄氧基)羰基)氨基)哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(7)的合成
在0℃，向2-(1-亚硝基哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(7.69g，22.72mmol)在THF(80mL)和H2O(80mL)中的溶液中加入Zn(11.89g，181.77mmol)，然后分批加入NH4Cl(19.45g，363.55mmol)。将混合物在0～20℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有2-(1-氨基哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯质量的峰(97％)。过滤反应混合物。向滤液中加入NaOH(5.45g，136.33mmol)和(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)碳酸苄酯(11.33g，45.44mmol)，将所得混合物在20℃搅拌3小时。将反应混合物用EtOAc(200mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到副产物2-(1-((苄氧基)羰基)哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯。在20℃向水相中加入(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)碳酸苄酯(11.33g，45.44mmol)，将所得混合物在0～20℃搅拌24小时。LCMS显示残留2-(1-氨基哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯以及具有所需质量的峰(7％)。将反应混合物用EtOAc(200mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(25g 硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚至0～10％二氯甲烷/甲醇梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到标题化合物(1.1g，2.40mmol)，其为白色固体。在20℃向水相中加入(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)碳酸苄酯(11.33g，45.44mmol)，将混合物在0～20℃搅拌12小时。LCMS显示残留2-(1-氨基哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯以及具有所需质量的峰(9％)。将反应混合物用EtOAc(200mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(25g硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚至0～10％二氯甲烷/甲醇梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到标题化合物(1.9g，2.40mmol)，其为白色固体。在20℃向水相中加入(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)碳酸苄酯(11.33g，45.44mmol)，将混合物在0～20℃搅拌12小时。LCMS显示残留2-(1-氨基哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯以及具有所需质量的峰(6％)。将反应混合物用EtOAc(200mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(25g 硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚至0～10％二氯甲烷/甲醇梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到标题化合物(1g，2.40mmol)，其为白色固体。在20℃向水相中加入(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)碳酸苄酯(11.33g，45.44mmol)，将混合物在0～20℃搅拌12小时。LCMS显示具有所需质量的峰(1％)。将反应混合物用EtOAc(200mL×3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(25g 硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚至0～10％二氯甲烷/甲醇梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到标题化合物(337mg)，其为白色固体。MS(M+H)+＝459.26
步骤5、(4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-1-基)氨基甲酸苄酯(8)的合成
在20℃，向2-(1-(((苄氧基)羰基)氨基)哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(1.9g，4.14mmol)在DCM(8mL)中的溶液中加入TFA(5.67g，49.72mmol，3.68mL)。将混合物在20℃搅拌4小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(56％)。将反应混合物在20℃真空浓缩，得到(4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-1-基)氨基甲酸苄酯(3.1g，粗品，TFA盐)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝359.27
步骤6、(4-(7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-1-基)氨基甲酸苄酯(10)的合成
在20℃，向(4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-1-基)氨基甲酸苄酯(3.08g，6.52mmol，TFA盐)在DMSO(10mL)中的溶液中加入DIPEA(4.21g，32.58mmol，5.68mL)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(900mg，3.26mmol)。将混合物在20～100℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料1完全消耗以及具有所需质量的峰(44％)。将反应混合物用H2O(30mL)稀释并用EtOAc(30mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(25g 硅胶快速柱，0～100％EtOAc/石油醚至0～10％二氯甲烷/甲醇梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到化合物(4-(7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-1-基)氨基甲酸苄酯(1.27g，2.07mmol，63.41％产率，100％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝615.2
步骤8、4-(2-(1-氨基哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(11)的合成
在N2气氛下，向(4-(7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-1-基)氨基甲酸苄酯(1.17g，1.90mmol)在CF3CH2OH(20mL)中的溶液中加入Pd/C(0.6g，10％纯度)。将混悬液脱气并用H2鼓吹3次。在H2(15psi)下将混合物在15℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(73％)。将反应混合物用CF3CH2OH(90mL)稀释并过滤。将滤液真空浓缩，得到4-(2-(1-氨基哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(865mg，粗品)，其为绿色固体。MS(M+H)+＝481.39
步骤9、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物211)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(500mg，1.12mmol)在DMF(4mL)中的溶液中加入HATU(467.39mg，1.23mmol)和DIPEA(433.28mg，3.35mmol，583.94μL)。将混合物在20℃搅拌10分钟，然后加入4-(2-(1-氨基哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(644.42mg，1.34mmol)在DMF(4mL)中的溶液。将混合物搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(49％)。将反应混合物用H2O(30mL)稀释并用EtOAc(30mL×3)萃取。将有机层用盐水(30mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex luna C18 150*40mm*15um；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：15％-45％，10min)纯化，得到产物A(462mg)和产物B(242mg)。将产物A通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge C18 150*50mm*10um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：39％-69％,10min)再纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(155.9mg，162.76μmol，14.56％产率，95％纯度)，其为黄色固体。将产物B通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge C18 150*50mm*10um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：39％-69％，10min)再纯化，然后通过制备型HPLC(柱：PhenomenexSynergi Polar-RP 100*25mm*4um；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：32％-52％，7min)再纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(110mg，120.88μmol，10.82％产率)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝910.2
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(br s,1H),9.33(s,1H),8.32-8.20(m,2H),7.95(s,1H),7.67(br t,J＝7.8Hz,1H),7.47-7.39(m,2H),7.33(br d,J＝7.6Hz,2H),5.10(br dd,J＝5.4,12.7Hz,1H),4.76(br t,J＝7.8Hz,1H),4.04(br t,J＝14.0Hz,2H),3.93(s,3H),3.33(br s,3H),3.21(br s,4H),2.98(br s,4H),2.87-2.75(m,3H),2.71-2.50(m,1H),2.56(br d,J＝9.3Hz,2H),2.10(br s,1H),2.06-2.00(m,1H),1.94(br s,3H),1.83(br s,4H),1.70(br d,J＝10.4Hz,4H),1.59(br s,4H),1.31(br d,J＝9.3Hz,2H)。
实施例212、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物212)的合成
步骤1、2-(1-((苄氧基)羰基)哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(2)的合成
在0℃，向2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(2g，8.84mmol)和4-氧代哌啶-1-羧酸苄酯(2.06g，8.84mmol，1.76mL)在MeOH(50mL)中的溶液中加入AcOH(530.70mg，8.84mmol，505.42μL)，然后在0℃缓慢加入NaBH3CN(1.67g，26.51mmol)，将所得混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的主峰(99％)。将反应混合物用H2O(100mL)稀释并用EtOAc(100mL×3)萃取。将有机层用饱和NaHCO3(100mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到2-(1-((苄氧基)羰基)哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3.92g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝444.4
步骤2、2-(哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3)的合成
在N2气氛下，向2-(1-((苄氧基)羰基)哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3.92g，8.84mmol)在CF3CH2OH(50mL)中的溶液中加入Pd/C(1g，10％纯度)。将混悬液脱气并用H2鼓吹3次。在H2(15Psi)下将混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示残余79％的起始材料，在N2下加入另外的Pd/C(1g，10％纯度)，在H2(15Psi)下将所得混合物在20℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰。将反应混合物用EtOH(150mL)稀释并过滤。将滤液真空浓缩，得到2-(哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(4g，粗品)，其为无色油状物。MS(M+H)+＝310.3
步骤3、2-(1-亚硝基哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(4)的合成
在0℃，向2-(哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(4g，12.93mmol)在H2O(50mL)中的溶液中加入NaNO2(1.78g，25.85mmol)，然后在0℃滴加入AcOH(2.33g，38.78mmol，2.22mL)，将所得混合物在20℃搅拌4小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的主峰(98％)。向该反应混合物中加入饱和NaHCO3(150mL)调节pH＝9并用EtOAc(200mL×5)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到2-(1-亚硝基哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3g，8.86mmol，68.57％产率)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝339.4
步骤4、2-(1-氨基哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(5)的合成
在0℃，向2-(1-亚硝基哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3g，8.86mmol)在MeOH(50mL)中的溶液中缓慢加入Zn(3.01g，46.09mmol)，然后滴加入AcOH(7.98g，132.96mmol，7.60mL)，将所得混合物在20℃搅拌14小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰。过滤反应混合物，真空浓缩滤液，得到2-(1-氨基哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(9g，粗品)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝325.5
步骤5、2-(1-(4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5])-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰氨基)哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(6)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酸(400mg，893.99μmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入HATU(373.91mg，983.38μmol)和DIPEA(231.08mg，1.79mmol，311.43μL)，将混合物在20℃搅拌10分钟，然后加入2-(1-氨基哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(870.19mg，2.68mmol)和DIPEA(346.62mg，2.68mmol，467.15μL)在DMF(5mL)中的溶液中，将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(82％)。将反应混合物用H2O(30mL)稀释并用EtOAc(30mL×3)萃取。将有机层用盐水(30mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(12g 硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@100mL/min)纯化，得到2-[1-[[4-[(9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-8H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-3-甲氧基-苯甲酰基]氨基]-4-哌啶基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(302mg，400.59μmol，44.81％产率)，其为灰白色固体。MS(M+H)+＝754.2
步骤6、N-(4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-1-基)-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺(7)的合成
在20℃，向2-[1-[[4-[(9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-8H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基]-3-甲氧基-苯甲酰基]氨基]-4-哌啶基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(300mg，397.94μmol)在DCM(5mL)溶液加入TFA(272.25mg，2.39mmol，176.78μL)，将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(43％)。将反应混合物真空浓缩，得到N-(4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-1-基)-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺(763mg，粗品，TFA)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝654.3
步骤7、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物212)的合成
在20℃，向2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(30mg，108.61μmol)在DMSO(3mL)中的溶液中加入DIPEA(140.37mg，1.09mmol，189.18μL)和N-(4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-1-基)-4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基)-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺(213.32mg，119.47μmol，43％纯度，TFA)，将所得混合物在80℃搅拌16小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(33％)。将反应混合物用H2O(12mL)稀释并用EtAOc(12mL×3)萃取。将有机层用盐水(12mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过制备型TLC(SiO2，二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：37％-67％,8min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(9.3mg，9.91μmol，9.13％产率，97％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝910.1
1H NMR(400MHz,CD3CN)δ＝9.38-8.60(m,1H),8.46(d,J＝8.2Hz,1H),8.10(s,1H),7.82(s,1H),7.71(s,1H),7.65-7.58(m,1H),7.42-7.32(m,2H),7.28(d,J＝2.2Hz,1H),7.15(dd,J＝2.3,8.6Hz,1H),4.96-4.90(m,1H),4.89-4.81(m,1H),3.99-3.91(m,5H),3.44-3.35(m,4H),3.32(s,3H),3.10-3.03(m,2H),3.02(s,3H),2.79-2.60(m,6H),2.09-1.98(m,4H),1.82-1.77(m,4H),1.77-1.70(m,4H),1.69-1.59(m,4H),1.46-1.25(m,2H)。
实施例213、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物213)的合成
按照与实施例211中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物213。
MS(M+H)+＝884.3,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(br s,1H),9.28(s,1H),8.34-8.27(m,1H),8.22(s,1H),7.87(s,1H),7.68(dd,J＝7.3,8.3Hz,1H),7.47-7.41(m,2H),7.36-7.30(m,2H),5.10(dd,J＝5.4,12.9Hz,1H),4.87(td,J＝6.5,13.3Hz,1H),4.03(br t,J＝13.4Hz,2H),3.93(s,3H),3.32(s,3H),3.27-3.13(m,4H),2.97(br s,5H),2.86(dd,J＝5.4,17.1Hz,1H),2.82-2.73(m,2H),2.62-2.55(m,3H),2.14-2.07(m,1H),2.05-2.00(m,1H),1.84(br s,4H),1.73-1.63(m,2H),1.37-1.28(m,2H),1.24(dd,J＝0.6Hz6H)。
实施例214、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物214)的合成
按照与实施例211中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物214。
MS(M+H)+＝884.2,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(s,1H),10.11-9.91(m,1H),9.55-9.46(m,1H),8.25-8.22(m,2H),7.73-7.65(m,1H),7.49-7.35(m,3H),7.29(br d,J＝8.7Hz,1H),6.96-6.78(m,1H),5.07(td,J＝4.4,12.7Hz,1H),4.88(td,J＝6.4,13.3Hz,1H),4.13-3.97(m,6H),3.93(s,3H),3.76-3.60(m,1H),3.58-3.51(m,2H),3.48-3.39(m,2H),3.32(s,3H),3.10(br d,J＝9.0Hz,2H),2.94-2.83(m,3H),2.61(br d,J＝1.6Hz,2H),2.21-2.06(m,2H),2.06-1.94(m,3H),2.01-1.91(m,1H),1.90-1.68(m,1H),1.57-1.41(m,2H),1.24(d,J＝6.7Hz,6H)。
实施例215、5-(2-(1-(4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(化合物215)的合成
按照与实施例212中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物215。
MS(M+H)+＝887.2,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.13-11.06(m,1H),8.25-8.17(m,2H),7.87(s,1H),7.74-7.54(m,1H),7.44(d,J＝7.5Hz,1H),7.06-6.94(m,2H),5.14-5.03(m,1H),4.83(td,J＝6.7,13.4Hz,1H),4.01(br t,J＝13.6Hz,2H),3.89(s,3H),3.65-3.57(m,1H),3.32(s,3H),3.26-3.14(m,4H),3.04(br s,4H),2.93-2.83(m,1H),2.65-2.59(m,1H),2.58-2.52(m,2H),2.41(br d,J＝8.4Hz,1H),2.10-1.88(m,2H),1.87-1.49(m,6H),1.48-1.29(m,1H),1.21(d,J＝6.7Hz,8H)。
实施例216、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物216)的合成
按照与实施例212中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物216。
MS(M+H)+＝902.3,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.12(br s,1H),9.30(br s,1H),8.30(br d,J＝8.1Hz,1H),8.22(s,1H),7.87(s,1H),7.71(br d,J＝11.5Hz,1H),7.50-7.38(m,3H),5.10(br dd,J＝5.1,12.7Hz,1H),4.93-4.82(m,1H),4.04(br t,J＝13.5Hz,2H),3.93(s,3H),3.32(br s,3H),3.18(br s,4H),2.96(br s,4H),2.94-2.82(m,2H),2.77(br s,2H),2.64-2.54(m,3H),2.14-1.99(m,2H),1.81(br s,4H),1.67(br d,J＝2.3Hz,2H),1.38-1.27(m,2H),1.24(br d,J＝6.5Hz,6H)
实施例217、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-1-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物217)的合成
向4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酸(80mg，182.07μmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(76.15mg，200.28μmol)和DIPEA(70.59mg，546.21μmol，95.14μL)。将混合物在20℃搅拌10分钟，然后加入5-(2-(1-氨基哌啶-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(108.93mg，218.49μmol)在DMF(2mL)溶液，将所得混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示所有起始材料完全消耗以及具有所需质量的峰(48％)。将反应混合物用H2O(12mL)稀释并用EtOAc(12mL×3)萃取。将有机层用盐水(12mL×3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：PhenomenexSynergi Polar-RP 100*25mm*4μm；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：34％-54％，7min)纯化并通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge 150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：40％-70％，9min)再纯化，将洗脱液冻干，得到4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-1-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(10.6mg，11.06μmol，产率6.08％，96％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝920.2
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.10(s,1H),9.03(s,1H),8.31-8.22(m,2H),7.95(s,1H),7.70(d,J＝11.4Hz,1H),7.44(br d,J＝7.3Hz,1H),7.13(d,J＝6.5Hz,1H),5.10(br dd,J＝5.4,12.7Hz,1H),4.89(td,J＝6.8,13.4Hz,1H),4.11-4.00(m,2H),3.91(s,3H),3.33(br s,3H),3.18(br s,4H),2.98(br s,6H),2.93-2.82(m,3H),2.61(br s,2H),2.09(br d,J＝12.2Hz,1H),2.06-1.99(m,1H),1.82(br s,4H),1.72-1.64(m,2H),1.38-1.29(m,2H),1.26(br d,J＝6.6Hz,6H)。
实施例218、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬基-2-基)哌啶-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物218)的合成
步骤1、7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(3)的合成
向3-(4-溴-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(0.3g，928.39μmol)和2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(318.00mg，1.41mmol)在二氧六环(8mL)中的溶液中加入Cs2CO3(907.46mg，2.79mmol)和Pd-PEPPSI-IHeptCl(27.09mg，27.85μmol)。将反应混合物在100℃搅拌28小时。TLC(石油醚:EtOAc＝10:1)显示形成新斑点。过滤混合物，用MeCN(10mL)和DCM(10mL)洗涤滤饼。将滤液减压浓缩。将残余物通过柱色谱法(SiO2，石油醚/EtOAc＝20/1至0/1)纯化，然后通过制备型TLC(SiO2，石油醚:EtOAc＝10:1)再纯化，得到7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(30mg，54.42μmol，产率1.47％，纯度85％)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝469.2
步骤2、3-(1-氧代-4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(4)的合成
在0℃，向7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(50mg，106.71μmol)在DCM(0.3mL)中的溶液中加入TFA(154.00mg，1.35mmol，0.1mL)，将混合物在20℃搅拌1小时。LCMS显示起始材料被消耗并且检测到所需质量。将混合物减压浓缩，得到3-(1-氧代-4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(50mg，粗品(TFA盐)，其为黄色油状物。MS(M+H)+＝369.4
步骤3、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬基-2-基)哌啶-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物218)的合成
在0℃，向3-(1-氧代-4-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(50mg，103.64μmol，TFA盐)在DCE(1mL)中的溶液中加入TEA(109.05mg，1.08mmol，150μL)、4A MS(0.1g)和4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-3-甲氧基-N-(4-氧代哌啶-1-基)苯甲酰胺(60mg，115.94μmol)，将混合物在20℃搅拌0.5小时。加入NaBH(OAc)3(65.90mg，310.91μmol)，将混合物在20℃搅拌3小时。LCMS显示35％的所需质量。过滤混合物，用DCM(10mL)洗涤滤饼。将滤液减压浓缩。将粗品通过快速硅胶色谱法(5g硅胶快速柱，30～40％ MeOH/EtOAc梯度洗脱液@50mL/min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi Polar-RP 100*25mm*4um；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：27％-47％，10min)再纯化，将洗脱液冻干，得到4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌啶-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(17.9mg，14.67μmol，14.16％产率，90％纯度，2TFA)，其为白色固体。MS(M+H)+＝870.2
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.00(s,1H),10.06-9.94(m,1H),9.50(s,1H),8.26(br d,J＝8.1Hz,1H),8.23(s,1H),7.47-7.42(m,3H),7.33(d,J＝7.5Hz,1H),7.18(d,J＝7.8Hz,1H),5.13(dd,J＝5.3,13.3Hz,1H),4.90-4.85(m,1H),4.48-4.42(m,1H),4.32-4.27(m,1H),4.11-4.06(m,1H),4.05-4.02(m,3H),4.01-3.96(m,2H),3.93(s,3H),3.32(s,3H),3.14-3.05(m,4H),2.99-2.81(m,5H),2.65-2.57(m,2H),2.46-2.41(m,1H),2.05-1.95(m,5H),1.93-1.85(m,2H),1.56-1.43(m,2H),1.24(d,J＝6.7Hz,6H)。
实施例219、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬基-2-基)哌啶-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺(化合物219)的合成
按照与实施例211中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物219。
EtOAcEtOAc
MS(M+H)+＝871.0,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.95(s,1H),9.98-9.82(m,1H),9.50(br s,1H),8.29-8.14(m,2H),7.52(d,J＝8.4Hz,1H),7.46-7.40(m,2H),7.14-7.05(m,2H),5.08-5.02(m,1H),4.92-4.85(m,1H),4.35-4.29(m,1H),4.22-4.18(m,1H),4.12-4.07(m,1H),4.06-4.01(m,3H),4.00-3.96(m,2H),3.93(s,3H),3.42-3.37(m,2H),3.32(s,3H),3.30-3.25(m,2H),3.13-3.06(m,2H),2.96-2.80(m,3H),2.62-2.55(m,2H),2.41-2.34(m,1H),2.02-1.88(m,5H),1.87-1.80(m,2H),1.55-1.40(m,2H),1.24(d,J＝6.7Hz,6H)。
实施例220、4-((7,7-二氟-9-异丙基-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(4-(7-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬基-2-基)哌啶-1-基)-2-氟-5-甲氧基苯甲酰胺(化合物220)的合成
按照与实施例211中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物220。
MS(M+H)+＝888.5,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝10.94(s,1H),10.01-9.81(m,1H),8.29-8.21(m,2H),8.17-8.01(m,1H),7.52(d,J＝8.4Hz,1H),7.14(d,J＝6.5Hz,1H),7.12-7.06(m,2H),5.08-5.01(m,1H),4.93-4.86(m,1H),4.35-4.30(m,1H),4.22-4.18(m,1H),4.12-4.08(m,1H),4.05-3.93(m,5H),3.92-3.87(m,3H),3.42-3.36(m,2H),3.33(s,3H),3.29-3.24(m,2H),3.14-3.07(m,2H),2.96-2.84(m,1H),2.80-2.69(m,2H),2.62-2.54(m,2H),2.39-2.34(m,1H),2.02-1.88(m,5H),1.87-1.80(m,2H),1.55-1.39(m,2H),1.26(d,J＝6.6Hz,6H)。
实施例221、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)-5-甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺(化合物221)的合成
步骤1、5-甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-硝基苯甲酸甲酯(3)的合成
将2-氟-5-甲氧基-4-硝基苯甲酸甲酯(4g，17.45mmol)、1-甲基哌嗪(3.50g，34.91mmol，3.87mL)和K2CO3(7.24g，52.36mmol)在二氧六环(60mL)中的混合物在100℃搅拌12小时。LCMS显示具有所需质量的峰(66％)。TLC(石油醚:EtOAc＝3:1；Rf＝0.7)显示残留起始材料。过滤混合物，用二氯甲烷(50mL)洗涤滤饼。将滤液减压浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(25g硅胶快速柱，0～50％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@65mL/min)纯化，得到5-甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-硝基苯甲酸甲酯(2.7g，8.64mmol，产率49.51％，纯度99％)，其为棕色油状物，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝310.1
步骤2、4-氨基-5-甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯(4)的合成
在N2气氛下，向5-甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-硝基苯甲酸甲酯(2.7g，8.73mmol)在CF3CH2OH(80mL)中的溶液中加入Pd/C(500mg，10％纯度)。在H2(15psi)下将混合物在30℃搅拌12小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的主峰。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，将滤液浓缩。将粗产物用去离子水(20mL)和MeCN(10mL)稀释并冻干，得到4-氨基-5-甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯(2.4g，8.25mmol，产率94.49％，纯度96％)，其为白色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝280.1
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.19(s,1H),6.36(s,1H),5.49(s,2H),3.70(d,J＝10.9Hz,6H),2.83(br s,4H),2.43(br s,4H),2.20(s,3H)
步骤3、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯(6)的合成
在25℃，向4-氨基-5-甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯(0.5g，1.58mmol)、2-氯-9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-8,9-二氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6(7H)-酮(485.06mg，1.74mmol)在二氧六环(8mL)中的溶液中加入Cs2CO3(1.54g，4.74mmol)、BINAP(196.59mg，315.72μmol)和Pd(OAc)2(35.44mg，157.86μmol)。在N2气氛下将混合物在100℃搅拌16小时。LCMS显示2-氯-9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-8,9-二氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-6(7H)-酮被完全消耗，以及具有所需质量的主峰。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，将滤液浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法(25g 硅胶快速柱，0～100％ EtOAc/石油醚梯度洗脱液@80mL/min；0～50％甲醇/EtOAc洗脱液@80mL/min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge C18150*50mm*10um；流动相：[水(10mMNH4HCO3)-ACN]；B％：44％-74％，11min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯(0.5g，866.68μmol，产率54.90％，97％纯度)，其为白色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝560.3
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.35(s,1H),8.09(s,1H),7.73(s,1H),7.42(s,1H),4.79(quin,J＝8.3Hz,1H),3.97-3.89(m,4H),3.89-3.83(m,4H),3.41(s,3H),3.11(br t,J＝4.4Hz,4H),2.66(br s,4H),2.39(s,3H),2.16-2.06(m,2H),1.80-1.60(m,4H),1.60-1.46(m,2H)
步骤4、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸(7)的合成
将4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯(0.45g，804.14μmol)、LiOH(23.11mg，964.96μmol)在THF(5mL)和H2O(5mL)中的混合物在25℃搅拌12小时。LCMS显示残余起始材料(30％)，以及具有所需质量的主峰(65％)。在25℃加入另外的NaOH(321.63mg，8.04mmol)，将所得溶液在40℃再搅拌24小时。LCMS显示起始材料完全消耗以及具有所需质量的主峰。将混合物减压浓缩。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex lunaC18150*40mm*15um；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：9％-39％，11min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸(140mg，212.98μmol，产率23.24％，83％纯度)，其为白色固体，其直接用于下一步。MS(M+H)+＝546.3
步骤5、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)-5-甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺(化合物221)的合成
向4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸(150mg，274.94μmol)在DMF(3mL)中的溶液中加入HATU(156.81mg，412.40μmol)和DIPEA(106.60mg，824.81μmol，143.66μL)，将混合物在30℃搅拌10分钟。然后加入4-((2-(2-氨基乙氧基)乙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(54.55mg，137.47μmol，HCl盐)，将所得混合物在30℃搅拌12小时。LCMS显示4-((2-(2-氨基乙氧基)乙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮完全消耗以及具有所需质量的峰(49％)。将混合物减压浓缩。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Synergi Polar-RP 100*25mm*4um；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：35％-55％,7min)纯化，然后通过制备型HPLC(柱：Waters Xbridge150*25mm*5um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：42％-72,min)纯化，将洗脱液冻干，得到4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙基)-5-甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺(13.4mg，14.94μmol，5.43％产率，99％纯度)，其为黄色固体。MS(M+H)+＝888.4
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.06(s,1H),10.40-10.30(m,1H),8.30(s,1H),8.27(s,1H),7.94(s,1H),7.60(s,1H),7.56(t,J＝7.9Hz,1H),7.14(d,J＝8.4Hz,1H),7.02(d,J＝7.1Hz,1H),6.63(br t,J＝5.5Hz,1H),5.00(dd,J＝5.4,12.8Hz,1H),4.93-4.81(m,1H),4.03(br t,J＝14.1Hz,2H),3.89(s,3H),3.74-3.67(m,2H),3.66-3.59(m,2H),3.57-3.48(m,4H),3.33(br s,3H),2.82(br s,4H),2.49-2.32(m,7H),2.14(s,3H),2.05-1.88(m,3H),1.73-1.45(m,6H)。
实施例222、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙基)-5-甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺(化合物222)的合成
按照与实施例221中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物222。
MS(M+H)+＝932.5,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.08(s,1H),10.31(br t,J＝5.3Hz,1H),8.30(s,1H),8.27(s,1H),7.93(s,1H),7.60(s,1H),7.54(dd,J＝7.2,8.4Hz,1H),7.10(d,J＝8.6Hz,1H),7.01(d,J＝6.9Hz,1H),6.59(t,J＝5.7Hz,1H),5.03(dd,J＝5.4,12.9Hz,1H),4.87(quin,J＝8.1Hz,1H),4.04(t,J＝14.0Hz,2H),3.89(s,3H),3.66-3.56(m,8H),3.50(q,J＝5.3Hz,2H),3.43(q,J＝5.4Hz,2H),3.33(br s,3H),2.92-2.79(m,5H),2.61-2.51(m,3H),2.49-2.42(m,3H),2.22(s,3H),2.06-1.90(m,3H),1.73-1.48(m,6H)。
实施例223、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(2-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-5-甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺(化合物223)的合成
按照与实施例221中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物223。
MS(M+H)+＝976.6,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(s,1H),10.32(t,J＝5.3Hz,1H),8.32-8.25(m,2H),7.93(s,1H),7.61(s,1H),7.55(dd,J＝7.2,8.4Hz,1H),7.10(d,J＝8.6Hz,1H),7.01(d,J＝7.0Hz,1H),6.58(t,J＝5.8Hz,1H),5.04(dd,J＝5.4,12.9Hz,1H),4.94-4.81(m,1H),4.04(t,J＝14.1Hz,2H),3.89(s,3H),3.63-3.46(m,14H),3.42(q,J＝5.6Hz,2H),3.30(br s,3H),2.94-2.81(m,5H),2.62-2.51(m,4H),2.46(br d,J＝4.3Hz,2H),2.23(s,3H),2.07-1.91(m,3H),1.76-1.47(m,6H)。
实施例224、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(14-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-3,6,9,12-四氧杂十四烷基)-5-甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺(化合物224)的合成
按照与实施例221中描述的方法相似的方案中描述的方法合成化合物224。
MS(M+H)+＝1020.6,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(s,1H),10.38-10.21(m,1H),8.33-8.24(m,2H),7.94(s,1H),7.60(s,1H),7.56(dd,J＝7.2,8.4Hz,1H),7.11(d,J＝8.5Hz,1H),7.02(d,J＝7.0Hz,1H),6.58(t,J＝5.8Hz,1H),5.05(dd,J＝5.4,12.9Hz,1H),4.87(br t,J＝8.1Hz,1H),4.04(t,J＝14.1Hz,2H),3.89(s,3H),3.62-3.47(m,18H),3.43(q,J＝5.5Hz,2H),3.32-3.29(m,3H),2.95-2.81(m,5H),2.63-2.51(m,4H),2.49-2.42(m,2H),2.36-2.16(m,3H),2.07-1.91(m,3H),1.75-1.47(m,6H)。
实施例225、4-((9-环戊基-7,7-二氟-5-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5H-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂-2-基)氨基)-N-(17-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷基)-5-甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺(化合物225)的合成
按照与实施例221中描述的方法类似的方案中描述的方法合成化合物225。
MS(M+H)+＝1064.7,1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝11.09(s,1H),10.32(br s,1H),8.34-8.24(m,2H),7.94(s,1H),7.61(s,1H),7.56(dd,J＝7.2,8.4Hz,1H),7.12(d,J＝8.6Hz,1H),7.03(d,J＝7.0Hz,1H),6.59(t,J＝5.8Hz,1H),5.05(dd,J＝5.4,12.9Hz,1H),4.94-4.82(m,1H),4.04(t,J＝14.0Hz,2H),3.89(s,3H),3.61-3.42(m,24H),3.30(br s,3H),2.95-2.79(m,5H),2.63-2.52(m,4H),2.49-2.40(m,2H),2.25(br s,3H),2.07-1.91(m,3H),1.75-1.47(m,6H)。
<实验例>
1、PLK1的蛋白质印迹分析
(1)HeLa细胞系的培养
HeLa细胞系购自韩国首尔的韩国细胞系库(KCLB)。细胞培养的传代保持在P115-P125。
对于细胞计数，使用细胞计数器(Thermo Fisher Scientific Inc.,Catalog#AMQAX1000)和0.4％台盼蓝溶液。
对于细胞培养，使用DMEM(Gibco，目录号1195-65；批号2085318)，FBS(Gibco，目录号16000-044；批号2097593)，青霉素/链霉素(PS)(Gibco，目录号15140-122；批号2058855)，100mm2细胞培养皿(SPL，目录号20100)，150mm2细胞培养皿(SPL，目录号20150)，12孔培养板(SPL，目录号30012)，PBS pH7.4(Gibco，目录号10010-023；批号2085080)，TrypLETM Express(Gibco，目录号12605-010；批号2070638)，计数室(Hematocytometer)(Hirschmann，目录号8100204)，0.4％台盼蓝溶液(DYNEBIO，目录号CBT3710；批号20190723)。
(2)本公开化合物的治疗
在12孔板(SPL)的每个孔中接种2×105个细胞，在培养基中培养细胞，总体积为2mL。
将实施例的化合物完全溶于DMSO并用于实验，将胸苷完全溶于DW并用于实验。对于胸苷封闭，用2mM胸苷(Sigma-Aldrich，目录号T9250-5G)培养24h。
对于释放和化学处理，抽吸培养基并用1×PBS洗涤3次。加入完全培养基，然后在CO2培养箱中培养4h。将每种化合物从3μM的最高浓度稀释3倍至最低浓度，然后再培养6h。
(3)蛋白质印迹
对于SDS-PAGE和蛋白质印迹，使用1X RIPA裂解缓冲液(Rockland，目录号MB-030-0050；批号39751)，100X蛋白酶抑制剂混合物(Quartett，目录号PPI1015；批号PCO50038424)，PierceTM BCA蛋白测定试剂盒(ThermoScientific，目录号23225；批号UC276876)，白蛋白标准品(ThermoScientific，目录号23209；批号UB269561)，4-15％Mini-PROTEAN TGX无染色凝胶(Bio-rad，目录号4568085；批号L007041B)，10XTris/甘氨酸/SDS缓冲液(Bio-rad，目录号1610732；批号10000044375B)；10XTBS(Bio-rad，目录号1706435；批号1000045140B)，10％Tween20(目录号1610781；批号L004152B)，彩色蛋白标准宽范围(NEB，目录号P7719S；批号10040349)，4X Laemmli样品缓冲液(Bio-rad，目录号1610747；批号L004133B)，β-巯基乙醇(Sigma-Aldrich，目录号M3148；批号60-24-2)，SuperBlockTM T20(TBS)封闭缓冲液(ThermoScientific，目录号37536；批号UC282578)，1M叠氮化钠溶液(Sigma-Aldrich，目录No.08591-1mL-F；批号BCBV4989)，α-兔pAb抗小鼠IgG(abcam，目录号ab97046；批号GR3252115-1)，α-山羊pAb抗兔IgG(CST，目录号7074S；批号28)，α-GAPDH(abcam，目录号ab8245；批号GR3275542-2)，α-PLK1(CST，目录号208G4)，α-BRD4(CST，目录号13440S)，ECLTM Prime蛋白质印迹试剂(GE Healthcare，目录号RPN2232；批号17001655)，丽春红S溶液(Sigma-Aldrich，目录号P7170；批号SLBV4112)，DifcoTM脱脂乳(BD，目录号232100；批号8346795)，和2NC Regular stacks(Invitrogen，目录号IB23001；批号2NR110619-02)。
为了收获细胞，首先使用胰蛋白酶从板分离细胞，然后用培养基和PBS洗涤。具体而言，吸出培养基并用1mL PBS洗涤，吸出PBS。细胞用0.5mL TrypLETM Express在37℃处理7min以分离细胞，然后加入0.5mL完全培养基以收集1mL细胞培养液。然后，将1mL细胞收集溶液以8,000rpm离心120秒，除去上清液。用0.2mL PBS洗涤后，除去PBS。
对于细胞裂解，加入裂解缓冲液并除去细胞碎片以获得细胞裂解物。具体而言，用70μL含有蛋白酶抑制剂的1X RIPA缓冲液处理细胞并在冰上培养30min。然后，将细胞在4℃和15,000rpm下离心10min以获得细胞裂解物。
然后，使用BCA测定获得标准曲线，并通过替换曲线方程定量裂解物中的蛋白质质量。使用20μL标准或样品溶液和200μLBCA或Bradford溶液将混合物在37℃下培养30min，并在562nm下测量吸光度。通过加入4X样品缓冲液制备样品，使得加入到每个孔中的蛋白质的量为15μg。
十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)通过在120V下在4-15％Mini-PROTEAN TGX无染色凝胶(15孔)上设置100min的运行时间来进行。转移干印迹体系的P0模式下在2NC Mini堆叠上进行转移。用丽春红S溶液染色后，用封闭缓冲液(Thermo)封闭1h。用含有0.05％Tween20的1X TBS洗涤后，产物在4℃下与作为一抗的1X TBS-T中的抗PLK1(CST)抗体(1：500)，抗BRD4(细胞信号传导)抗体(1：1000)或抗GAPDH(abcam)抗体(1：10，000)反应16h。用含0.05％Tween20的1X TBS洗涤3次，每次10min后，产物在室温下与抗小鼠抗体(abcam)(1：10000)或抗兔抗体(CST)(1：5000)在1X TBS-T中反应1h，作为第二抗体。然后，用含有0.05％Tween20的1X TBS洗涤三次，每次10min后，用ECL工作溶液(1：1)检测产物。
为了分析结果，使用图像分析仪(GE)获得最终印迹数据。结果证实，本发明的所有化合物均显著降解PLK1蛋白。
2、针对PLK1的荧光素酶测定
(1)HeLa LgBit(Plk1-HiBit KI)细胞系的制备和培养
制备其中LgBit载体被转染并稳定表达的HeLa细胞系。然后，在构建gRNA和供体以在细胞中固有的Plk1基因的C末端后表HiBit氨基酸序列后，将其与能够表达CRISPR/Cas9的载体一起插入细胞中。仅选择、传代培养和使用完成插入和敲入的细胞。
对于细胞培养，使用DMEM(Gibco，目录号11995-065；批号2467189)，FBS(Gibco，目录号16000-044；批号2420173P)，青霉素/链霉素(PS)(Gibco，目录号15140-122；批号2321114)，100mm2细胞培养皿(SPL，目录号20100)，150mm2细胞培养皿(SPL，目录号20150)，96孔培养板(SPL，目录号30196)，PBS pH7.4(Gibco，目录号10010-023；批号2085080)，TrypLETM Express(Gibco，目录号12605-010；批号2323417)，计数室(Hematocytometer)(Marienfeld Superior，目录号0650010)和0.4％台盼蓝溶液(DYNEBIO，目录号CBT3710；批号20211201)。
(2)本公开化合物的处理和荧光素酶测定的方法
将实施例的化合物完全溶于DMSO(Sigma-Aldrich，目录号D2438，批号RNBJ566)，并在实验中使用。
在HeLa LgBit(Plk1-HiBit KI)的情况下，在胸苷阻断后释放后处理化合物，方法如下。胸苷(Sigma-Aldrich，目录号T9250-5G)完全溶解在DW中，并用于实验。对于胸苷封闭，用2mM胸苷处理产物，然后培养24h。对于释放和化学处理，抽吸培养基并用1×PBS洗涤。加入TrypLETM并在37℃CO2培养箱中培养5min。加入完全培养基中和的细胞通过计数器计数。对于96孔培养板(SPL)的每个孔，接种3.3×104个细胞和150μL的总培养基体积并在CO2培养箱中。
将每种细胞系在CO2培养箱中培养18h，并将Endurazine加入到每个孔中以补足总体积的4％。在96孔白色板(SPL)中加入本发明化合物至浓度为300nM后，将读板仪(BMGLabtech，CLARIOstar Plus)的波长设定为470-480nM，然后实时跟踪发光。9h后，获得发光值，并通过Excel程序显示为条形图。
结果如下表2和图1至图5所示。
[表2]
在表2中，活性表示各示例性化合物处理组对DMSO处理组的发光值的比率(+++：＜0.3,++＜0.6,+＜0.7).
3、H526细胞系的细胞活力测定
(1)NCI-H526细胞系的培养
NCI-H526(下文称为H526)细胞系购自韩国细胞系库(KCLB，韩国，首尔)。对于细胞培养，使用RPMI 1640(Gibco，目录号22400-089；批号2277021)，FBS(Gibco，目录号16000-044；批号2351176P)，青霉素/链霉素(PS)(Gibco，Cat。号15140-122；批号2321114)，75T细胞培养瓶(SPL，目录号71075)，175T细胞培养瓶(SPL，目录号71175)，96孔细胞培养板(SPL，目录号30096)，PBS pH 7.4(Gibco，目录号10010-023；批号2085080)，TrypLETM Express(Gibco，目录号12605-010；批号2323417)，计数室(Hematocytometer)(MarienfeldSuperior，目录号0650010)，0.4％台盼蓝溶液(DYNEBIO，目录号CBT3710；批号20211201)。
(2)本发明化合物的处理和细胞活力测定法
将实施例的化合物完全溶于DMSO(Sigma-Aldrich，目录号D2438，批号RNBJ566)，并在实验中使用。
在96孔板(SPL)的每个孔中接种3×104个细胞，并以150μL的总体积培养细胞。
将每种化合物从3000nM的最高浓度稀释3倍至0.46nM的最低浓度。在将化合物处理至各孔以使总体积为200μL后，将其在CO2培养箱(Thermo Fisher Science，目录号4111)中培养5天。
然后，在处理EZ-Cytox(DOGEN，目录号EZ-3000，批号DLS2109)每孔20μL，在CO2培养箱中培养4h。通过将平板读数器(BMG Labtech，CLARIOstarPlus)的波长设定为450nm来测量完全培养的样品的吸光度，并在测量前在平板读数器中振荡3min后进行测量。用Excel程序整理最终测量值，通过Prism-GraphPad程序显示图表，并测量IC50值。
结果如下表3所示。
[表3]
H526细胞系的细胞活力测定
在表3中，活性表示各示例性化合物处理组对H526细胞系IC50指值(A：＜30nM，B：＜50nM，C：＜100nM，D：＜200nM，E：＜400nM)。
4、MRC-5细胞系的细胞活力测定
(1)MRC-5细胞系的培养
MRC-5细胞系购自韩国首尔的韩国细胞系库(KCLB)。培养细胞的传代保持在P15内。
对于细胞培养，使用MEM/EBSS(Hyclone，目录号SH30024.01；批号AG29697698)，FBS(Gibco，目录号16000-044；批号2234018P)，青霉素/链霉素(PS)(Gibco，目录号15140-122；批号2211099)，175T细胞培养瓶(SPL，目录号71175)，96孔细胞培养板(SPL，目录号30096)，PBS pH 7.4(Gibco，目录号10010-023；批号2085080)，TrypLETM Express(Gibco，目录号12605-010；批号2070638)，计数室(Hematocytometer)(Hirschmann，目录号8100204)，0.4％台盼蓝溶液(DYNEBIO，目录号CBT3710；批号20190723)。
(2)本公开化合物的治疗
使用TrypLETM Express分离在175T细胞培养瓶中培养的MRC-5细胞系。在96孔板(SPL)的每个孔中接种6×103个细胞，并以150μL的总体积培养细胞。
将实施例的化合物完全溶解DMSO(sigma-aldrich，目录号D2438-50ML，批号RNBK6387)，并在实验中使用。将每种化合物从10000nM的最高浓度稀释3倍至1.52nM的最低浓度。将各孔与培养基混合并处理，并将体积设定为50μL，使得各孔的总体积为200μL。然后，将其在37℃CO2培养箱(thermofisher science，目录号4111，批号300512709)中培养5天。
使用以下化合物作为比较例，并且以与实施例的化合物中相同的方式进行细胞活力测定。
比较例1、Mu等人中描述的示例性化合物。BBRC，2020，521(4)：833(比较化合物1)
比较例2、BI2536(比较化合物2)
比较例3、Volasertib(比较化合物3)
比较例4、TAK960(比较化合物4)
(3)细胞毒性实验
使用EZ-Cytox(DOGEN，目录号EZ-3000，批号DLS2112)处理完全培养板每孔20μgL，37℃CO2培养箱培养4h。将96孔板置于读板器(BMG Labtech，Clariostarplus)中，混合2min，并在450nm波长下测量吸光度。使用Prism(ver.9)程序将数据转化成图。
结果示于下表4和表5中。
[表4]
MRC-5细胞系的细胞活力测定
在表4中，活性代表各示例性化合物处理组对MRC-5细胞系的IC50值(nM)。N.D.(未测定)意指细胞毒性直到10μM才出现。结果证实，本发明的所有化合物在癌细胞系，而不是正常细胞系中，特异性地表现出高水平的细胞毒性。
[表5]
MRC-5细胞系的细胞活力测定
| 比较化合物 | 活性 |
| 比较化合物1 | 106.6 |
| 比较化合物2 | 3085.4 |
| 比较化合物3 | 2939.3 |
| 比较化合物4 | 9152.5 |
在表5中，活性表示各比较化合物处理组对MRC-5细胞系的IC50值(nM)。特别地，发现与本发明的示例性化合物不同，对比化合物1(已知的PROTAC化合物)在正常细胞系中表现出高水平的细胞毒性。
Claims (16)
1.一种由下式I表示的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐：
[式I]
ULN-接头-PTM
在上面的式I中，
ULM为由下式1表示的部分；
[式1]
PTM为由下式2表示的部分；
[式2]
接头是化学连接ULM和PTM的基团；
U为-CH2-或-C(＝O)-；
RU为-H或-卤素；
R1为-C1-4烷基或3至7元环烷基；
R2为-H；
R3和R4各自独立地为-H、-C1-4烷基、-C1-4烯基或-卤素，或者R3和R4彼此连接形成3至6元环；
R5为-C1-4烷基；
R6为-C1-4烷基、-C1-4卤代烷基、-O-RP或-卤素；
R7为-H、-C1-4烷基、-C1-4卤代烷基、-卤素或5至6元杂环烷基{其中5至6元杂环烷基环的至少一个H可以被-C1-4烷基取代}，或与接头连接形成5至6元环；和
RP为-H、-C1-4烷基、-C1-4羟基烷基或-C1-4卤代烷基。
2.根据权利要求1所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，
ULM为由下式1-1或式1-2表示的部分；
[式1-1]
[式1-2]
U为-CH2-或-C(＝O)-；和
RU为-H或-卤素。
3.根据权利要求1所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，
ULM为 和
RU为-H或-卤素。
4.根据权利要求1所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，
PTM为
R1为-异丙基、-环丙基、-环丁基或-环戊基；
R3和R4各自独立地为-H、-C1-4烷基、-C1-4烯基或-卤素，或者R3和R4彼此连接形成3元环；
R6为-C1-4烷基、-C1-4卤代烷基、-O-RP或-卤素；
R7为-H、-C1-4卤代烷基、-卤素或5至6元杂环烷基{其中5至6元杂环烷基的至少一个H可以被-C1-4烷基取代}，或与接头连接形成5至6元杂环烷基环；和
RP为-H、-C1-4烷基、-C1-4羟基烷基或-C1-4卤代烷基。
5.根据权利要求1所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，
接头为-LU-L1-L2-L3-LP-；
LU为-(CH2)x-、-C≡C-、-NH-、-O-、-S-或不存在(空){其中LU与ULM连接[其中，当LU不存在(空)时，L1直接与ULM连接]，并且x为0、1、2、3或4}；
L1为杂环烷基或不存在(空){其中，当L1不存在(空)时，LU和L2直接连接，杂环烷基在环中含有至少一个N原子，并且杂环烷基环的至少一个H可以被-C1-4烷基、-C1-4卤代烷基、-C1-4烷氧基、-OH、-卤素或＝O取代}；
L2为-(CH2)y1-、-(CH2)y2-C(＝O)-(CH2)y3-、-C(＝O)-(CH2)y1-C(＝O)-、-(CH2)y2-O-(CH2)y3-C(＝O)-、-(CH2)y2-NH-(CH2)y3-、-(CH2)y2-N(C1-4烷基)-(CH2)y3-、-(CH2)y2-O-(CH2)y3-、-(CH2)y1-(O-C1-4烷基)z-O-C1-4烷基-、-(CH2)y2-C1-4烯基-(CH2)y3-或-(CH2)y2-苯基-(CH2)y3-{其中y1至y3各自独立地为0、1、2、3、4、5或6，并且z为1、2、3、4、5或6}；
L3为环烷基、杂环烷基、苯基或不存在(空){其中，当L3不存在(空)时，L2和Lp直接连接，杂环烷基在环中含有至少一个N原子，并且环烷基、杂环烷基或苯环的至少一个H可以被-C1-4烷基、-C1-4卤代烷基或-卤素取代}；
LP为-(CH2)z-NRL-C(＝O)-、-环烷基-NH-C(＝O)-、-杂环烷基-NH-C(＝O)-、-C(＝O)-、-(CH2)z-O-或不存在(空){其中LP的-(C＝O)-或-O-与PTM连接[其中，当LP不存在(空)时，L3的环烷基或杂环烷基直接与PTM连接]，-(CH2)z-NRL-C(＝O)-的NRL与R7连接形成5至6元环，并且z为0、1、2、3或4}；和
RL为-H或-C1-4烷基。
6.根据权利要求5所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，
LU为-(CH2)x-、-C≡C-、-NH-、-O-、-S-或不存在(空){其中LU与ULM连接[其中，当LU不存在(空)时，L1直接与ULM连接]，并且x为0或1}；
L1为4至12元杂环烷基或不存在(空){其中，当L1不存在(空)时，LU和L2直接相连，4至12元杂环烷基为单环、桥联双环或螺环，4至12元杂环烷基在环中含有至少一个N原子，并且4至12元杂环烷基环的至少一个H可被-OH或-卤素取代}；
L2为-(CH2)y1-、-(CH2)y2-C(＝O)-(CH2)y3-、-C(＝O)-(CH2)y1-C(＝O)-、-(CH2)y2-O-(CH2)y3-C(＝O)-、-(CH2)y2-N(C1-4烷基)-(CH2)y3-、-(CH2)y2-O-(CH2)y3-、-(CH2)y1-(O-C1-4烷基)z-O-C1-4烷基-、-(CH2)y2-C1-4烯基-(CH2)y3-或-(CH2)y2-苯基-(CH2)y3-{其中y1至y3各自独立地为0、1、2、3、4或5，并且z为1、2、3、4或5}；
L3为4至6元环烷基、4至12元杂环烷基、苯基或不存在(空){其中，当L3不存在(空)时，L2与Lp直接相连，4至12元杂环烷基为单环、桥联双环或螺环，4至12元杂环烷基在环中含有至少一个N原子，并且4至6元环烷基、4至12元杂环烷基或苯环的至少一个H可以被-卤素取代}；
LP为-(CH2)z-NRL-C(＝O)-、-环烷基-NH-C(＝O)-、-杂环烷基-NH-C(＝O)-、-C(＝O)-、-(CH2)z-O-或不存在(空){其中LP的-(C＝O)-或-O-与PTM连接[其中，当LP不存在(空)时，L3的环烷基或杂环烷基直接与PTM连接]，-(CH2)z-NRL-C(＝O)-的NRL可以与R7连接形成5至6元杂环烷基环，并且z为0或1}；和
RL为-H或-C1-4烷基。
7.根据权利要求1所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，其中式I表示的化合物选自以下化合物：
8.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至7中任一项所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐。
9.一种用于预防或治疗PLK1相关疾病的药物组合物，其包含根据权利要求1至7中任一项所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐。
10.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述PLK1相关疾病为选自癌症、良性肿瘤和神经障碍中的一种或多种。
11.根据权利要求10所述的药物组合物，其中所述癌症或良性肿瘤为选自以下中的一种或多种：鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞状细胞癌、腹膜癌、皮肤癌、皮肤或眼内黑素瘤、直肠癌、肛门肌肉癌、食道癌、小肠癌、内分泌癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、慢性或急性白血病、淋巴细胞淋巴瘤、肝细胞癌、胃肠癌、胃癌、胰腺癌、成胶质细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝肿瘤、乳腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、头颈癌、脑癌、骨肉瘤、巴雷特食管、结肠腺瘤和息肉、乳腺纤维腺瘤和囊肿、未确定意义的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)、单克隆淋巴细胞增多症、实体瘤、血癌、骨癌、大细胞淋巴瘤、肾上腺类皮质激素肿瘤、T细胞淋巴瘤/白血病、神经内分泌癌、神经内分泌肿瘤、胆管癌、成神经细胞瘤、成胶质细胞瘤和神经胶质瘤。
12.根据权利要求10所述的药物组合物，所述神经障碍为选自以下中的一种或多种：中枢神经系统疾病、神经变性疾病、阿尔茨海默病、帕金森病、多发性硬化、亨廷顿病、老年性痴呆、癫痫、拉格瑞、中风、以及脑或脊髓损伤后的神经损伤和轴突变性相关病症。
13.一种用于治疗或预防PLK1相关疾病的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至7中任一项所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐。
14.根据权利要求13所述的用于治疗或预防PLK1相关疾病的方法，其中所述化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐诱导PLK1蛋白的降解。
15.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐的用途。
16.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防PLK1相关疾病的药物中的用途。
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