KR102662205B1 - 신규 plk1 분해 유도 화합물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 신규 PLK1 분해 유도 화합물, 이의 제조방법, 및 이의 용도에 관한 것이다. 본 발명의 화합물은 PLK1 분해를 유도하는 효과를 나타낸다. 그러므로, 본 발명의 화합물은 PLK1 관련 질환의 예방 또는 치료에 효과적으로 사용될 수 있다.

Description

신규 PLK1 분해 유도 화합물
본 발명은 신규 PLK1 분해 유도 화합물, 이의 제조방법, 및 이의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 PLK1의 효과적인 분해를 통해 비정상적인 세포 등에 특이적으로 작용할 수 있으며, 다양한 질환의 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
Polo-like kinase 1 (PLK1)은 세린/트레오닌 인산화효소로서 세포 성장 및 분열 중에 G2/M기의 전환에 관여하는 것으로 알려져 있다. PLK1은 S phase부터 G2/M기까지 펄스 형태로 발현되고 활성화되었다가, 유사분열이 종료되면서 빠르게 분해된다.
PLK1은 대장암, 폐암, 방광암, 흑색종 등 다양한 암종에서 과발현되는 양상을 띄며, PLK1이 과발현된 암세포는 여러 종류의 항암제에 대해 저항성을 나타내는 경향을 보인다. 이와 같이 다양한 암종에서 PLK1 의존성이 밝혀짐에 따라, 볼라설팁(volasertib; BI6727로도 알려짐) 등 PLK1 억제제 화합물들의 개발이 시도된 바 있다.
그러나, 기존 PLK1 억제제들은 임상적으로 안전성이 확보된 농도에서 PLK1 활성을 충분히 억제하지 못하여, 암세포의 세포 주기를 일시적으로 지연시키더라도 결국 일부 암세포에서 세포 주기가 재개시되어, 충분한 임상적 효과를 거두지 못한 문제가 있다(문헌[Gheghiani et al. CULM Reports, 2017] 등). 실제로 베링거잉겔하임, GSK(GlaxoSmithKline) 등 다수 제약사들이 저분자화합물 기반의 PLK1 억제제 개발을 시도하였으나 대부분 임상시험 단계에서 실패하거나 중단되어 현재까지 상용화된 PLK1 억제제는 전무한 상태이다. 이는 암세포의 PLK1 활성을 억제하여 항암효과를 도출하고자 하는 신약개발 의도에 있어서, 저분자화합물 억제제와 같이 PLK1의 활성부위에 결합하여 효소 활성을 억제하는 방식의 약리 기전이 충분히 효과적이지 않음을 보여준다.
최근 들어, 표적 단백질의 체내 단백질 분해(proteolysis)를 유도할 수 있는 저분자 화합물 기반 플랫폼 기술로서 PROTAC(Proteolysis targeting chimera)이 제시된 바 있다. PROTAC이란 질환 관련 표적 단백질에 결합하는 리간드 분자와 E3 유비퀴틴 라이게이즈 결합 모이어티가 화학적 링커로 연결된 이기능성 화합물이다. 이론적으로 PROTAC 화합물은 질환 관련 표적 단백질을 E3 유비퀴틴 라이게이즈 근처에 위치시킴으로써, 표적 단백질의 분해를 유도할 수 있다. 이렇게 기존의 저해제와 다른 새로운 기전에 기반하여, 많은 PROTAC 화합물들이 암, 염증성 질환 등의 치료제로 개발되고 있으며, 다양한 확장성을 가지고 연구되고 있다 (예를 들어, ADC(항체-약물 컨쥬게이트)의 페이로드). 하지만 모든 범위의 결합 모이어티 또는 링커에서 PROTAC이 활성을 나타내는 것은 아니며, 실제로 PROTAC이 원하는 수준의 효능을 나타내기 위해서는 각 결합 모이어티와 링커가 적절하게 연결된 구조를 가져야 함이 여러 연구를 통해 알려져 있다(문헌[US2020-0325130A]). 특히, CRBN(세레블론) E3 라이게이즈를 표적하는 모이어티의 경우, 그 결합 모이어티의 종류 또는 그에 연결되는 화합물의 구조에 따라 CRBN의 네오-기질(neo-substrate) (GSPT1, IKZF1/3 등)을 분해하거나 그에 따른 오프-타겟 독성을 나타낼 우려가 있다. 따라서, PROTAC 약물 개발시 예상치 못한 독성을 나타내지 않도록 적절한 결합 모이어티를 선정하고 전체 화합물의 구조를 최적화하는 것이 중요하다.
PLK1을 타겟 단백질로 하는 PROTAC 화합물의 경우, 중국 공개특허 제106543185 A호는 볼라설팁 유도체 화합물과 E3 유비퀴틴 라이게이즈 CRBN에 대한 결합 모이어티를 화학적 링커로 연결한 이기능성 화합물을 일부 개시한다. 그러나, 상기 선행문헌에는 오직 일부 제한된 형태의 PROTAC 화합물의 합성예가 기재되어 있는데, 일반적으로 표적 단백질 모이어티, E3 유비퀴틴 라이게이즈 결합 모이어티 등의 선택에 따라 PROTAC의 타겟 분해 활성 및 선택성은 현저히 달라질 수 있다 (문헌[Burslem and Crews, 2017] 등).
또한, 위 문헌에 기재된 PROTAC 화합물은 PLK1 및 BRD4를 동시에 분해하는 것에 발명의 특징이 있는 화합물이며 PLK1 이외의 다른 PLK 패밀리 단백질 및 BRD4 등 다양한 단백질 분해 역시 유도하므로 약물 개발 시 오프 타겟 독성으로 인한 부작용 발생의 문제가 있다. 특히 BRD4의 활성을 강하게 억제하면 약리 효과와 함께 혈액독성 및 위장관 독성 같은 온 타겟 부작용(on target toxicity)이 필연적으로 동반된다는 사실이 이미 알려져 있음을 감안하면, 위 문헌에 기재된 PROTAC 화합물이 BRD4를 효과적으로 분해하면 할수록 임상적 부작용이 커질 것으로 예상된다 (문헌[Bolden et al. CULM Reports, 2014] 등).
더욱이, 위 문헌의 발명자에 의해 공개된 문헌[Mu et al. BBRC, 2019]에 따르면, 상기 PLK1 및 BRD4를 동시에 분해하는 PROTAC 화합물은 세포 수준에서 BRD4 분해능력이 PLK1 분해능력보다 월등히 강하고 세포 주기가 거의 G1 phase에 멈추는 등 기존 PLK1 억제제가 약리효과를 내는 방식과 전혀 상관없이 사실상 BRD4 억제제로서만 작용하는 것을 확인할 수 있다.
따라서, 부작용(예를 들어, 오프 타겟 독성)이 없거나 이를 최소화하는 효과적인 PLK1 분해 유도 화합물에 대한 미충족된 수요가 존재한다.
본 발명의 목적은 신규 PLK1 분해 유도 화합물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 신규 PLK1 분해 유도 화합물의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 신규 PLK1 분해 유도 화합물의 용도를 제공하는 것이다.
위와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명자들은 E3 라이게이즈 바인더, 타겟 결합 모이어티, 링커의 적절한 구조적 조합 및 최적화를 통해 PLK1을 과발현하는 비정상적인 세포에 특이적으로 작용하여 PLK1의 효과적인 분해를 유도하고 부작용을 최소화하는 신규 PROTAC 화합물을 발굴함으로써 본 발명을 완성하였다.
PLK1 선택적 분해 유도 화합물
본 발명은 PLK1의 효과적인 분해를 유도하는 신규 화합물을 제공한다. 구체적으로, 본 발명은 PLK1 결합 모이어티와 E3 유비퀴틴 라이게이즈 결합 모이어티가 화학적 링커로 연결된 이기능성 화합물을 제공한다.
본 발명의 일 실시양태는 하기 화학식 I로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염이다:
[화학식 I]
상기 화학식 I에서,
ULM은 하기 화학식 1로 표시되는 모이어티이고;
[화학식 1]
PTM은 하기 화학식 2로 표시되는 모이어티이고;
[화학식 2]
Linker는 ULM과 PTM을 화학적으로 연결하는 기이고;
U는 -CH2- 또는 -C(=O)-이고;
RU는 -H 또는 -할로이고;
R1은 -C1-4알킬 또는 3-7원 사이클로알킬이고;
R2는 -H이고;
R3 및 R4는 각각 독립적으로 -H, -C1-4알킬, -C1-4알케닐, 또는 -할로이고, 또는 R3 및 R4는 서로 연결되어 3-6원 고리를 형성하는 것이고;
R5는 -C1-4알킬이고;
R6는 -C1-4알킬, -C1-4할로알킬, -O-RP, 또는 -할로이고;
R7은 -H, -C1-4알킬, -C1-4할로알킬, -할로, 또는 5-6원 헤테로사이클로알킬이고 {여기서, 상기 5-6원 헤테로사이클로알킬 고리의 하나 이상의 H는 -C1-4알킬로 치환될 수 있음}, 또는 상기 Linker와 연결되어 5-6원 고리를 형성하는 것이고;
RP는 -H, -C1-4알킬, -C1-4하이드록시알킬, 또는 -C1-4할로알킬이다.
본 발명의 일 실시양태에서,
ULM은 하기 화학식 1-1 또는 화학식 1-2로 표시되는 모이어티이고;
[화학식 1-1]
[화학식 1-2]
U는 -CH2- 또는 -C(=O)-이고; 및
RU는 -H 또는 -할로이다.
본 발명의 일 실시양태에서,
ULM은 , , , 또는 이고;
RU는 -H 또는 -할로이다.
본 발명의 일 실시양태에서,
PTM은 이고;
R1은 -아이소프로필, -사이클로프로필, -사이클로부틸, 또는 -사이클로펜틸이고;
R3 및 R4는 각각 독립적으로 -H, -C1-4알킬, -C1-4알케닐, 또는 -할로이고, 또는 R3 및 R4는 서로 연결되어 3원 고리를 형성하는 것이고;
R6는 -C1-4알킬, -C1-4할로알킬, -O-RP, 또는 -할로이고;
R7은 -H, -C1-4할로알킬, -할로, 또는 5-6원 헤테로사이클로알킬이고 {여기서, 상기 5-6원 헤테로사이클로알킬의 하나 이상의 H는 -C1-4알킬로 치환될 수 있음}, 또는 상기 Linker와 연결되어 5-6원 헤테로사이클로알킬 고리를 형성하는 것이고;
RP는 -H, -C1-4알킬, -C1-4하이드록시알킬, 또는 -C1-4할로알킬이다.
본 발명의 일 실시양태에서,
Linker는 -LU-L1-L2-L3-LP-이고;
LU는 -(CH2)x-, -C≡C-, -NH-, -O-, -S-, 또는 아무 것도 아니고(null) {여기서, LU는 ULM과 연결되고 [이때, 상기 LU가 아무 것도 아닌 경우(null) L1이 ULM과 직접 연결됨], 상기 x는 0, 1, 2, 3, 또는 4임};
L1은 헤테로사이클로알킬 또는 아무 것도 아니고(null) {여기서, 상기 L1이 아무 것도 아닌 경우(null) LU와 L2가 직접 연결되고, 상기 헤테로사이클로알킬은 고리 내 하나 이상의 N 원자를 포함하고, 상기 헤테로사이클로알킬 고리의 하나 이상의 H는 -C1-4알킬, -C1-4할로알킬, -C1-4알콕시, -OH, -할로, 또는 =O로 치환될 수 있음};
L2는 -(CH2)y1-, -(CH2)y2-C(=O)-(CH2)y3-, -C(=O)-(CH2)y1-C(=O)-, -(CH2)y2-O-(CH2)y3-C(=O)-, -(CH2)y2-NH-(CH2)y3-, -(CH2)y2-N(C1-4알킬)-(CH2)y3-, -(CH2)y2-O-(CH2)y3-, -(CH2)y1-(O-C1-4알킬)z-O-C1-4알킬-, -(CH2)y2-C1-4알케닐-(CH2)y3-, 또는 -(CH2)y2-페닐-(CH2)y3-이고 {여기서, 상기 y1 내지 y3는 각각 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6이고, 상기 z는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6임};
L3는 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 페닐, 또는 아무 것도 아니고(null) {여기서, 상기 L3가 아무 것도 아닌 경우(null) L2와 Lp가 직접 연결되고, 상기 헤테로사이클로알킬은 고리 내 하나 이상의 N 원자를 포함하고, 상기 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 또는 페닐 고리의 하나 이상의 H는 -C1-4알킬, -C1-4할로알킬, 또는 -할로로 치환될 수 있음};
LP는 -(CH2)z-NRL-C(=O)-, -사이클로알킬-NH-C(=O)-, -헤테로사이클로알킬-NH-C(=O)-, -C(=O)-, -(CH2)z-O-, 또는 아무 것도 아닌 것이고(null) {여기서, 상기 LP의 -(C=O)- 또는 -O-가 PTM과 연결되고 [이때, 상기 LP가 아무 것도 아닌 경우(null) L3의 사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬이 PTM과 직접 연결됨], 상기 -(CH2)z-NRL-C(=O)-의 NRL은 R7과 연결되어 5-6원 고리를 형성할 수 있고, 상기 z는 0, 1, 2, 3, 또는 4임};
RL은 -H 또는 -C1-4알킬이다.
본 발명의 일 실시양태에서,
LU는 -(CH2)x-, -C≡C-, -NH-, -O-, -S-, 또는 아무 것도 아니고(null) {여기서, LU는 ULM과 연결되고 [이때, 상기 LU가 아무 것도 아닌 경우(null) L1이 ULM과 직접 연결됨], 상기 x는 0 또는 1임};
L1은 4-12원 헤테로사이클로알킬 또는 아무 것도 아니고(null) {여기서, 상기 L1이 아무 것도 아닌 경우(null) LU와 L2가 직접 연결되고, 상기 4-12원 헤테로사이클로알킬은 단일 고리, 다리 연결된(bridged) 이중 고리, 또는 스파이로(spiro) 고리이고, 상기 4-12원 헤테로사이클로알킬은 고리 내 하나 이상의 N 원자를 포함하고, 상기 4-12원 헤테로사이클로알킬 고리의 하나 이상의 H는 -OH 또는 -할로로 치환될 수 있음};
L2는 -(CH2)y1-, -(CH2)y2-C(=O)-(CH2)y3-, -C(=O)-(CH2)y1-C(=O)-, -(CH2)y2-O-(CH2)y3-C(=O)-, -(CH2)y2-N(C1-4알킬)-(CH2)y3-, -(CH2)y2-O-(CH2)y3-, -(CH2)y1-(O-C1-4알킬)z-O-C1-4알킬-, -(CH2)y2-C1-4알케닐-(CH2)y3-, 또는 -(CH2)y2-페닐-(CH2)y3-이고 {여기서, 상기 y1 내지 y3는 각각 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 또는 5이고, 상기 z는 1, 2, 3, 4, 또는 5임};
L3는 4-6원 사이클로알킬, 4-12원 헤테로사이클로알킬, 페닐, 또는 아무 것도 아니고(null) {여기서, 상기 L3가 아무 것도 아닌 경우(null) L2과 Lp가 직접 연결되고, 상기 4-12원 헤테로사이클로알킬은 단일 고리, 다리 연결된(bridged) 이중 고리, 또는 스파이로(spiro) 고리이고, 상기 4-12원 헤테로사이클로알킬은 고리 내 하나 이상의 N 원자를 포함하고, 상기 4-6원 사이클로알킬, 4-12원 헤테로사이클로알킬, 또는 페닐 고리의 하나 이상의 H는 -할로로 치환될 수 있음};
LP는 -(CH2)z-NRL-C(=O)-, -사이클로알킬-NH-C(=O)-, -헤테로사이클로알킬-NH-C(=O)-, -C(=O)-, -(CH2)z-O-, 또는 아무 것도 아닌 것이고(null) {여기서, 상기 LP의 -(C=O)- 또는 -O-가 PTM과 연결되고 [이때, 상기 LP가 아무 것도 아닌 경우(null) L3의 사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬이 PTM과 직접 연결됨], 상기 -(CH2)z-NRL-C(=O)-의 NRL은 R7과 연결되어 5-6원 헤테로사이클로알킬 고리를 형성할 수 있고, 상기 z는 0 또는 1임};
RL은 -H 또는 -C1-4알킬이다.
본 발명의 구체적인 실시양태에 따르면, 화학식 I로 표시되는 화합물은 하기 화합물 1 내지 225로 구성된 군에서 선택된 화합물이다.
본 발명에서 약학적으로 허용가능한 염이란 환자에게 비교적 비독성이고 무해한 유효작용을 갖는 농도로서 이 염에 기인한 부작용이 화학식 I로 표시되는 화합물의 이로운 효능을 저하시키지 않는 임의의 유기산 또는 무기산 부가염을 의미한다. 예컨대, 약학적으로 허용가능한 염은 무기산으로는 염산, 인산, 황산, 또는 질산 등일 수 있고, 유기산으로는 메탄술폰산, p-톨루엔술폰산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 말레인산, 숙신산, 옥살산, 벤조산, 타르타르산, 푸마르산, 만데르산, 프로피온산, 구연산, 젖산, 글리콜산, 글루콘산, 갈락투론산, 글루탐산, 글루타르산, 글루쿠론산, 아스파르트산, 아스코르브산, 카본산, 바닐릭산 또는 요오드화수소산일 수 있으나, 이들에 제한되지 않는다.
PLK1 선택적 분해 유도 화합물의 용도
본 발명의 일 실시양태는 화학식 I로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 PLK1 분해 유도용 조성물이다. 화학식 I는 위에서 정의된 바와 같다.
본 발명의 실험예에서, 본 발명의 화합물은 PLK1 단백질 분해를 효과적으로 유도한다는 점을 확인하였다.
본 발명의 PLK1 분해 유도 PROTAC 화합물은 작용 기전의 관점에서 타겟 단백질인 PLK1를 원천 분해할 수 있으므로, PLK1의 단순 활성을 억제하는 종래 PLK1 저분자 억제제와 비교하여서도 우수한 PLK1 억제 효과를 달성한다.
따라서, 본 발명의 화학식 I로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 조성물은 PLK1의 선택적 분해를 위해 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 일 실시양태는 화학식 I로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 PLK1 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물이다. 본 발명의 또 다른 실시양태는 이러한 조성물을 투여하여 PLK1 관련 질환을 예방 또는 치료하는 방법이다. 화학식 I는 위에서 정의된 바와 같다.
본 발명에서 PLK1 관련 질환은 PLK1의 분해 유도 또는 활성 억제로부터 치료, 경감, 지연, 저해 또는 예방될 수 있는 임의의 질환 또는 병태를 의미한다. 일 실시양태에서, PLK1 관련 질환은 암(악성 종양), 양성 종양, 신경질환, 또는 그 외 지나친 세포 분열로 인해 일어나는 유전적 또는 비유전적 질환일 수 있다.
상기　암은 PLK1의 활성 억제로 인해 예방 또는 치료 효능을 나타낼 수 있는 모든 암을 포함하며, 고형암　또는 혈액암일 수 있다. 예컨대, 상기 암은 편평상피세포암, 소세포폐암, 비소세포폐암, 폐의 선암, 폐의 편평상피암, 복막암, 피부암, 피부 또는 안구내 흑색종, 직장암, 항문부근암, 식도암, 소장암, 내분비선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 만성 또는 급성 백혈병, 림프구 림프종, 간세포암, 위장암, 위암, 췌장암, 교아종, 경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간종양, 유방암, 결장암, 대장암, 자궁내막 또는 자궁암, 침샘암, 신장암, 전립선암, 음문암, 갑상선암, 두경부암, 뇌암, 골육종, 고형암, 혈액암, 골암, 거대세포 림프종, 부신피질 종양, T-세포성 림프종/백혈병, 신경내분비암, 신경내분비종양, 담관암, 신경모세포종, 교모세포종, 신경교종 등으로 구성된 군에서 선택된 1종 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기　암은 원발성　암뿐 아니라 전이성　암도 포함한다.
상기 양성 종양은 PLK1의 활성 억제로 인해 예방 또는 치료 효능을 나타낼 수 있는 모든 양성 종양, 예컨대 암 이전 단계의 양성 종양을 포함하며, 고형 종양 또는 혈액 종양일 수 있다. 예컨대, 상기 종양은 배럿 식도, 대장 선종 및 용종, 유방 섬유선종 및 낭종, 단세포 감마글로불린병증 (MGUS), 단클론 림프구증가증 등으로 구성된 군에서 선택된 1종 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 신경질환은 PLK1의 활성 억제로 인해 예방 또는 치료 효능을 나타낼 수 있는 모든　신경질환을 포함하며, 구체적으로 중추 신경계 질환, 퇴행성　신경질환, 알츠하이머병, 파킨슨병, 다발성경화증, 헌팅톤병, 노인성 치매, 간질, 루게릭, 뇌졸증, 및 뇌 또는 척수 손상에 이은 신경손상과 축삭 변성 관련 장애 중에서 선택된 1종 이상일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 약학적 조성물은 화학식 I 로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 외에 동일 또는 유사한 약효를 나타내는 유효성분을 1종 이상 더 포함할 수 있다.
본 발명의 일 실시양태는 화학식 I로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 인간을 포함하는 포유류에 투여하여 PLK1 단백질을 분해하는 방법이다.
본 발명의 또다른 일 실시양태는 화학식 I로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 체외에서 샘플에 투여하여 PLK1 단백질을 분해하는 방법이다. 상기 샘플은 세포, 세포 배양물, 사람을 포함한 포유동물의 체액 또는 조직일 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 화합물은 PLK1의 분해를 유도하는 효과를 나타낸다. 따라서 본 발명의 화합물은 PLK1 관련 질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 화합물 1 내지 49의 루시퍼라제 분석 결과를 나타낸다.
도 2은 본 발명의 화합물 50 내지 90의 루시퍼라제 분석 결과를 나타낸다.
도 3은 본 발명의 화합물 91 내지 131의 루시퍼라제 분석 결과를 나타낸다.
도 4은 본 발명의 화합물 133 내지 180의 루시퍼라제 분석 결과를 나타낸다.
도 5은 본 발명의 화합물 182 내지 225의 루시퍼라제 분석 결과를 나타낸다.
달리 정의되지 않는한, 본원에서 사용된 모든 기술적, 과학적 용어들은 본 명세서가 속한 기술분야의 통상의 기술자에게 흔하게 이해되는 용어과 같은 의미를 가진다. 명세서에서 사용된 용어는 특정 실시양태를 설명하기 위한 것일뿐 본원을 제한하려는 의도가 아니다.
본 발명은 하기 표에 표시된 화합물 1 내지 225에 대한 합성 방법을 제공한다.
화합물 구조
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222
223
224
225
본 발명의 화합물을 아래 방법에 따라 정제하고 구조를 분석하였다.
기기
LCMS : Shimadzu LCMS-2020, Agilent 1200/G6110A, Agilent 1200/G1956A
HPLC : Agilent 1260 II LC, Agilent 1200/G6410B
NMR : BRUKER AVANCE/400MHz
SFC : SHIMADZU LC-30ADsf, Agilent 1260
LCMS 분석
LCMS 데이터는 ESI(전자 분사 이온화; Electron Spray Ionization) 장치가 장착된 Shimadzu LCMS-2020 또는 Agilent 1200/G6110A 또는 Agilent 1200/G1956A으로 기록하였다. 물 내 0.0375 % TFA (용매 A)와 ACN 내 0.01875 % TFA (용매 B) 또는 물 내 0.025% NH3·H2O (용매 A)와 ACN (용매 B)를 이동상으로 사용하였다. 컬럼은 Kinetex EVO C18 (2.1 x 30 mm, 5 μm) 또는 HALO C18 (3.0 x 30 mm, 2.7 μm)를 사용하였다.
HPLC 분석
HPLC 분석에서, Agilent 1260 II LC 또는 Agilent 1200/G6410B를 사용하였다. 물 내 0.0375 % TFA (용매 A)와 ACN 내 0.01875 % TFA (용매 B)를 이동상으로 사용하였다. 컬럼은 Zobrax Eclipse Plus C18 (4.6 x 150 mm, 3.5 μm) 또는 YMC ODS A (4.6 x 150 mm, 3 μm)를 사용하였다.
NMR 분석
1H NMR 스펙트럼을 Bruker AVANCE III 400MHz/5mm Probe (BBO)로 기록하였다.
SFC 분석
SFC 분석에서, SHIMADZU LC-30ADsf 또는 Agilent 1260를 사용하였다. CO2 (용매 A)와 IPA + ACN 내 0.05 % DEA (용매 B) 또는 CO2 (용매 A)와 MeOH + ACN 내 0.05 % DEA (용매 B) 또는 ACN 내 0.05 % DEA (용매 A)와 EtOH 내 0.05 % DEA (용매 B)를 이동상으로 사용하였다. 컬럼은 Chiralpak AD-3 (50 x 4.6 mm, 3 μm) 또는 Chiralpak AS-3 (50 x 4.6 mm, 3 μm) 또는 Chiralpak OJ-3 (50 x 4.6 mm, 3 μm) 또는 Chiralpak IA-3 (50 x 4.6 mm, 3 μm) 또는 Chiralpak OD (50 x 4.6 mm, 3 μm) 또는 Chiralpak IC-3 (50 x 4.6 mm, 3 μm) 또는 (S,S)Whelk-O1 (100 x 4.6 mm, 3.5 μm)를 사용하였다.
실시예 1. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에틸)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 1)의 합성
단계 1. 메틸 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-((2-히드록시에틸)아미노)이소인돌린-1,3-디온 (3)의 합성
DMF (35 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (5 g, 18.10 mmol), 2-아미노에탄올 (1.44 g, 23.53 mmol, 1.42 mL) 및 TEA (4.58 g, 45.25 mmol, 6.30 mL) 혼합물을 80°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 48%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 진공 농축하여 청색 오일의 메틸 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-((2-히드록시에틸)아미노)이소인돌린-1,3-디온 (7.97 g)을 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=317.9
단계 2. 2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에틸 4-메틸벤젠술포네이트 (4)의 합성
DCM (40 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-((2-히드록시에틸)아미노)이소인돌린-1,3-디온 (7.97 g, 25.12 mmol) 용액에 TEA (7.63 g, 75.36 mmol, 10.49 mL) 및 TosCl (9.58 g, 50.24 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 15°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-((2-히드록시에틸)아미노)이소인돌린-1,3-디온이 완전히 소모됨 및 30%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하여 대부분의 용매를 제거했다. 잔여물을 H2O (200 mL)로 희석 후 EtOAc (200 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (300 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (20 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 12~30% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 청색 고체의 2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에틸 4-메틸벤젠술포네이트 (860 mg, 1.82 mmol, 7.26% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=472.2
단계 3. tert-부틸 (1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (5)의 합성
DMF (2 mL) 내 2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에틸 4-메틸벤젠술포네이트 (200 mg, 424.19 μmol), tert-부틸 피페리딘-4-일카바메이트 (101.95 mg, 509.03 μmol), DIEA (164.47 mg, 1.27 mmol, 221.66 μL) 및 NaI (6.36 mg, 42.42 μmol) 혼합물을 80°C에서 5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에틸 4-메틸벤젠술포네이트가 완전히 소모됨 및 72%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (30 mL)로 희석 후 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (50 mL x 3)로 세척 후 Na2SO4 로 건조, 여과 및 진공 농축했다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (12 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 25~75% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 녹색 고체의 tert-부틸 (1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (100 mg, 200.18 μmol, 47.19% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=500.2
단계 4. 4-((2-(4-아미노피페리딘-1-일)에틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (6)의 합성
디옥산 (5 mL) 내 tert-부틸 (1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (100 mg, 200.18 μmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 10 mL)를 첨가하고 혼합물을 15°C에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 81%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 진공 농축하여 녹색 고체의 4-((2-(4-아미노피페리딘-1-일)에틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (100 mg, HCl 염)을 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=400.1
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에틸)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 1)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (90 mg, 193.37 μmol) 용액에 DIEA (149.95 mg, 1.16 mmol, 202.09 μL) 및 HATU (110.29 mg, 290.06 μmol)를 첨가하고 혼합물을 15°C에서 15분 동안 교반한 이후 혼합물에 4-((2-(4-아미노피페리딘-1-일)에틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (109.58 mg, 251.38 μmol, HCl 염)를 첨가하고 혼합물을 15°C에서 3시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산이 완전히 소모됨 및 85%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물에 CH3COOH를 첨가하여 pH<7로 조정하였다. 생성된 혼합물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25 mm* 5μm; 이동상: [물(10 mM NH4HCO3)-ACN];B%: 48%-78%,분)에 이어 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi C18 150*25mm* 10μm; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN];B%: 16%-49%, 11 분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에틸)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (42.8 mg, 49.53 μmol, 25.61% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=847.4
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.09 (br s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.24 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.96 (dd, J = 3.0, 7.5 Hz, 1H), 7.59 (dd, J = 7.3, 8.4 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.83 - 6.65 (m, 1H), 5.05 (dd, J = 5.5, 12.9 Hz, 1H), 4.90 - 4.75 (m, 1H), 4.14 - 4.01 (m, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.84 - 3.70 (m, 1H), 3.44 - 3.35 (m, 5H), 2.98 - 2.81 (m, 3H), 2.64 - 2.52 (m, 4H), 2.11 (t, J = 10.7 Hz, 2H), 2.06 - 1.91 (m, 3H), 1.87 - 1.78(m, 2H), 1.77 - 1.69 (m, 2H), 1.68 - 1.50 (m, 6H).
실시예 2. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)에틸)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 2)의 합성
화합물 2는 실시예 1에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=848.7, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.10 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.24 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.89 (dd, J = 2.9, 7.6 Hz, 1H), 7.85 - 7.78 (m, 1H), 7.55 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 5.17 - 5.04 (m, 1H), 4.88 - 4.76 (m, 1H), 4.39 - 4.26 (m, 2H), 4.07 (t, J = 13.9 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.80 - 3.70 (m, 1H), 3.44 (s, 3H), 2.98 (d, J = 10.0 Hz, 2H), 2.93 - 2.82 (m, 1H), 2.82 - 2.70 (m, 2H), 2.64 - 2.53 (m, 2H), 2.22 (t, J = 10.8 Hz, 2H), 2.08 - 1.88 (m, 3H), 1.87 - 1.68 (m, 4H), 1.68 - 1.47 (m, 6H).
실시예 3. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)옥시)에틸)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 3)의 합성
단계 1. 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-히드록시이소인돌린-1,3-디온 (2)의 합성
CH3COOH (100 mL) 내 3-아미노피페리딘-2,6-디온 (13.56 g, 82.36 mmol, HCl 염) 용액에 4-히드록시프탈산 (10 g, 54.91 mmol) 및 NaOAc (13.51 g, 164.72 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 120 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량을 확인하고, 혼합물을 여과하고, 여과 케이크를 물 (10 mL x 3), MeOH (10 mL x 3)로 세척한 후, 모아서 진공 건조하여 갈색 파우더의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-히드록시이소인돌린-1,3-디온 (11 g, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+= 274.9
단계 2. 5-(2-클로로에톡시)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (3)의 합성
DMF (50 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-히드록시이소인돌린-1,3-디온 (2 g, 7.29 mmol) 용액에 NaHCO3 (3.68 g, 43.76 mmol, 1.70 mL) 및 KI (242.14 mg, 1.46 mmol)를 첨가한 후, 1-브로모-2-클로로에탄 (3.14 g, 21.88 mmol, 1.81 mL)을 첨가하고 반응 혼합물을 60 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량을 확인하고, 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고, EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고 진공 농축하였다. 조 생성물을 Prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge C18 150*50mm*10μm; 이동상:[물(NH4HCO3)-ACN]; B%: 24%-54%, 11분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 황색 파우더의 5-(2-클로로에톡시)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (340 mg, 918.85 μmol, 12.60% 수율, 91% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=336.9
단계 3. tert-부틸 (1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)옥시)에틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (4)의 합성
DMF (8 mL) 내 5-(2-클로로에톡시)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (140 mg, 415.77 μmol) 용액에 DIPEA (161.21 mg, 1.25 mmol, 217.26 μL) 및 NaI (12.46 mg, 83.15 μmol)를 첨가한 후, tert-부틸 피페리딘-4-일카바메이트 (166.54 mg, 831.54 μmol)를 첨가하고 혼합물을 50 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량을 확인하고, 혼합물을 물 (6 mL)로 희석하고, EtOAc (10 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고 진공 농축하였다. 조 생성물을 Prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi Polar-RP 100*25mm*4μm; 물 (TFA)-ACN; B%: 23%-43%, 7분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 적색 파우더의 tert-부틸 (1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)옥시)에틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (50 mg, 94.90 μmol, 22.82% 수율, 95% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=501.3
단계 4. 5-(2-(4-아미노피페리딘-1-일)에톡시)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (5)의 합성
디옥산 (4 mL) 내 tert-부틸 (1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)옥시)에틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (50 mg, 99.89 μmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 4 mL)를 첨가하고, 혼합물을 25 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량을 확인하고, 혼합물을 진공 농축하여 백색 파우더의 5-(2-(4-아미노피페리딘-1-일)에톡시)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (52 mg, crude, HCl 염)을 수득하였다. MS(M+H)+=400.9
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)옥시)에틸)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 3)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (85 mg, 182.63 μmol) 용액에 HATU (104.16 mg, 273.94 μmol) 및 DIPEA (70.81 mg, 547.89 μmol, 95.43 μL)를 첨가하고, 25 °C 에서 5분간 교반한 후, 5-(2-(4-아미노피페리딘-1-일)에톡시)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (47.87 mg, 109.58 μmol, HCl 염)을 첨가하고 반응 혼합물을 25 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물을 물 (3 mL)로 희석하고 EtOAc (5 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고 진공 농축하였다. 조 생성물을 Prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi Polar-RP 100*25mm*4μm; 이동상:[물 (TFA)-ACN]; B%: 35%-55%, 7분) 및 Prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25mm*5μm; 이동상:[물(NH4HCO3)-ACN]; B%: 43%-73%, 8분)로 정제하고, 용출물을 동결 건조하여 백색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)옥시)에틸)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (38.2 mg, 41.18 μmol, 22.55% 수율, 91.4% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=848.1, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.13 (s, 1 H), 8.32-8.21 (m, 2 H), 8.05 (s, 1 H), 7.92 (dd, J = 7.64, 3.12 Hz, 1 H), 7.84 (d, J = 8.31 Hz, 1 H), 7.47 (d, J = 2.08 Hz, 1 H), 7.38 (dd, J = 8.31, 2.20 Hz, 1 H), 7.19 (d, J = 6.60 Hz, 1 H), 5.13 (dd, J = 12.96, 5.38 Hz, 1 H), 4.82 (br t, J = 8.01 Hz, 1 H), 4.30 (t, J = 5.50 Hz, 2 H), 4.08 (t, J = 13.82 Hz, 2 H), 3.92 (s, 3 H), 3.82-3.70 (m, 1 H), 3.34 (s, 3 H), 2.98-2.83 (m, 3 H), 2.75 (t, J = 5.44 Hz, 2 H), 2.65-2.54 (m, 2 H), 2.17 (t, J = 10.76 Hz, 2 H), 2.09-2.02 (m, 1 H), 1.96 (d, J = 2.81 Hz, 2 H), 1.80 (d, J = 10.76 Hz, 2 H), 1.73 (s, 2 H), 1.68-1.54 (m, 6 H).
실시예 4. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)프로필)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 4)의 합성
화합물 4는 실시예 1에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=862.3, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.10 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.24 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.88 (dd, J = 3.3, 7.6 Hz, 1H), 7.81 (dd, J = 7.4, 8.4 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 5.09 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.82 (quin, J = 7.9 Hz, 1H), 4.25 (br t, J = 6.1 Hz, 2H), 4.07 (br t, J = 13.9 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.81-3.69 (m, 1H), 3.27 (br s, 3H), 2.96-2.79 (m, 3H), 2.64-2.52 (m, 2H), 2.48-2.44 (m, 2H), 2.07-1.99 (m, 3H), 1.99-1.87 (m, 4H), 1.80 (br d, J = 10.1 Hz, 2H), 1.73 (br s, 2H), 1.68-1.58 (m, 4H), 1.57-1.49 (m, 2H).
실시예 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)에틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 5)의 합성
화합물 5는 실시예 1에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=830.0, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.11 (s, 1H), 8.29 - 8.25 (m, 2H), 8.08 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.86 - 7.80 (m, 1H), 7.57 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.51 - 7.44 (m, 3H), 5.10 (dd, J = 5.4, 12.9 Hz, 1H), 4.82 - 4.71 (m, 1H), 4.38 - 4.31 (m, 2H), 4.07 - 4.02 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.82 - 3.72 (m, 1H), 3.32 - 3.28 (m, 3H), 3.06 - 3.02 (m, 2H), 2.95 - 2.83 (m, 1H), 2.81 - 2.78 (m, 2H), 2.64 - 2.57 (m, 2H), 2.26 - 2.19 (m, 2H), 2.07 - 2.00 (m, 1H), 1.98 - 1.89 (m, 2H), 1.83 - 1.76 (m, 2H), 1.74 - 1.68 (m, 2H), 1.65 - 1.56 (m, 6H).
실시예 6. 2-클로로-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)에틸)피페리딘-4-일)-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 6)의 합성
화합물 6은 실시예 1에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=863.9, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.11 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.24 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.85 - 7.79 (m, 1H), 7.55 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.04 (s, 1H), 5.09 (dd, J = 5.4, 12.7 Hz, 1H), 4.92 - 4.80 (m, 1H), 4.35 - 4.27 (m, 2H), 4.13 - 4.03 (m, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.80 - 3.72 (m, 1H), 3.33 (s, 3H), 3.02 - 2.83 (m, 2H), 2.81 - 2.76 (m, 2H), 2.64 - 2.54 (m, 3H), 2.28 - 2.22(m, 2H), 2.06 - 1.94 (m, 3H), 1.84 - 1.77 (m, 2H), 1.76 - 1.71 (m, 2H), 1.70 - 1.57 (m, 4H), 1.55 - 1.47 (m, 2H).
실시예 7. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((3R)-1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)에틸)피롤리딘-3-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 7)의 합성
단계 1. tert-부틸 ((3R)-1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)에틸)피롤리딘-3-일)카바메이트 (3)의 합성
DMF (7 mL) 내 4-(2-클로로에톡시)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (500 mg, 1.48 mmol) 및 tert-부틸 (R)-피롤리딘-3-일카바메이트 (276.56 mg, 1.48 mmol) 용액에 KI (246.49 mg, 1.48 mmol) 및 DIPEA (575.73 mg, 4.45 mmol, 775.92 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 50 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-(2-클로로에톡시)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(19%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)로 희석하고 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하였다. 조 생성물을 역상 HPLC (0.1% FA condition: 컬럼: 120 g 플래시 컬럼 Welch Ultimate XB_C18 20-40 μm; Flow rate: 85 mL/분; 이동상: MeCN/H2O; Gradient B%: 5-30% 20 분; 30-100% 25분, Instrument: TELEDYNE ISCO CombiFlashRf150)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 백색 고체의 tert-부틸 ((3R)-1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)에틸)피롤리딘-3-일)카바메이트 (120 mg, 239.25 μmol, 16.11% 수율, 97% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=487.3
단계 2. 4-(2-((R)-3-아미노피롤리딘-1-일)에톡시)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (4)의 합성
DCM (1.5 mL) 내 tert-부틸 ((3R)-1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)에틸)피롤리딘-3-일)카바메이트 (100 mg, 205.54 μmol), HCl/디옥산 (4 M, 1.5 mL) 혼합물을 25 °C 에서 0.5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 tert-부틸 ((3R)-1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)에틸)피롤리딘-3-일)카바메이트가 완전히 소진되었음 및 원하는 질량의 주 피크(91%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하여 백색 고체의 4-(2-((R)-3-아미노피롤리딘-1-일)에톡시)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (100 mg, crude, HCl 염)을 수득하였다. MS(M+H)+=387.2
단계 3. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((3R)-1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)에틸)피롤리딘-3-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 7)의 합성
DMF (3 mL) 내 4-(2-((R)-3-아미노피롤리딘-1-일)에톡시)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (100 mg, 236.48 μmol, HCl 염) 및 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (105.81 mg, 236.48 μmol) 용액에 HATU (134.88 mg, 354.73 μmol) 및 DIPEA (91.69 mg, 709.45 μmol, 123.57 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-(2-((R)-3-아미노피롤리딘-1-일)에톡시)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(77%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하였다. 잔여물을 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, MeOH/EtOAc=0/1 to 1/10)로 정제하였다. 이후 prep-HPLC (중성 조건: 컬럼: Waters Xbridge 150x25mmx5μm; 이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN]; B%: 40%-70%, 10분)로 재정제하고 용출물을 동결 건조하여 백색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((3R)-1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)에틸)피롤리딘-3-일)-3-메톡시벤즈아미드 (33.4 mg, 39.30 μmol, 16.62% 수율, 96% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=816.0
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.11 (s, 1H), 8.37 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 8.30-8.24 (m, 2H), 7.97 (s, 1H), 7.82 (dd, J = 7.4, 8.5 Hz, 1H), 7.58-7.46 (m, 4H), 5.13-5.04 (m, 1H), 4.83-4.72 (m, 1H), 4.48-4.38 (m, 1H), 4.35-4.30 (m, 2H), 4.06-3.98 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.33 (s, 3H), 2.94-2.82 (m, 5H), 2.66-2.58 (m, 3H), 2.56-2.53 (m, 1H), 2.21-2.10 (m, 1H), 2.06-1.91 (m, 3H), 1.85-1.75 (m, 1H), 1.74-1.66 (m, 2H), 1.65-1.56 (m, 4H).
실시예 8. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((3R)-1-(3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)프로필)피롤리딘-3-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 8)의 합성
화합물 8은 실시예 7에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=830.3, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.11 (s, 1H), 8.47 (br d, J = 3.6 Hz, 1H), 8.36-8.20 (m, 2H), 7.99 (s, 1H), 7.83 (dd, J = 7.4, 8.4 Hz, 1H), 7.62-7.38 (m, 4H), 5.07 (dd, J = 5.4, 12.6 Hz, 1H), 4.76 (quin, J = 8.1 Hz, 1H), 4.54-4.41 (m, 1H), 4.30 (br t, J = 5.9 Hz, 2H), 4.04 (br t, J = 14.0 Hz, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.32 (br s, 3H), 3.02-2.78 (m, 6H), 2.62-2.54 (m, 3H), 2.28-2.25 (m, 1H), 2.13-2.02 (m, 2H), 2.02-1.86 (m, 4H), 1.74-1.71 (m, 2H), 1.65-1.48 (m, 4H).
실시예 9. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((3S)-1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)에틸)피롤리딘-3-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 9)의 합성
화합물 9는 실시예 7에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=816.0, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.11 (s, 1H), 8.37 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.31-8.22 (m, 2H), 7.97 (s, 1H), 7.82 (dd, J = 7.4, 8.5 Hz, 1H), 7.57-7.44 (m, 4H), 5.12-5.04 (m, 1H), 4.79-4.69 (m, 1H), 4.48-4.38 (m, 1H), 4.37-4.31 (m, 2H), 4.06-4.02 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.33 (s, 3H), 2.94-2.83 (m, 5H), 2.69-2.58 (m, 3H), 2.57-2.54 (m, 1H), 2.21-2.11 (m, 1H), 2.05-1.91 (m, 3H), 1.84-1.78 (m, 1H), 1.74-1.67 (m, 2H), 1.64-1.56 (m, 4H).
실시예 10. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((3S)-1-(3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)프로필)피롤리딘-3-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 10)의 합성
단계 1. 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(3-히드록시프로폭시)이소인돌린-1,3-디온 (2)의 합성
DMF (100 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-히드록시이소인돌린-1,3-디온 (3 g, 10.94 mmol) 및 3-브로모프로판-1-올 (1.67 g, 12.03 mmol, 1.09 mL) 용액에 Na2CO3 (5.80 g, 54.70 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 80 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-히드록시이소인돌린-1,3-디온이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(82%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (600 mL)로 희석하고 EtOAc (300 mL x 4)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (500 mL x 5)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하고 진공 농축하였다. 잔여물을 MTBE (30 mL) 및 EtOAc (10 mL) 혼합물로 10분간 분쇄하고, 현탁액을 여과하고 여과 케이크를 MTBE (10 mL)로 세척하였다. 여과 케이크를 모아서 건조하여 밝은 갈색 고체의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(3-히드록시프로폭시)이소인돌린-1,3-디온 (910 mg, 2.74 mmol, 25.03% 수율)을 수득하였다. MS(M+H)+=333.0
단계 2. 3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)프로판알 (3)의 합성
DMSO (3 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(3-히드록시프로폭시)이소인돌린-1,3-디온 (410 mg, 1.23 mmol) 용액에 IBX (863.72 mg, 3.08 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 미량의 출발물질이 남아있음 및 원하는 질량의 주 피크(95%)가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 바로 사용하였다. 갈색 액체의 화합물 3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)프로판알 (410 mg)을 수득하였다. MS(M+H)+=331.0
단계 3. tert-부틸 ((3S)-1-(3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)프로필)피롤리딘-3-일)카바메이트 (5)의 합성
DCE (12 mL) 내 tert-부틸 (S)-피롤리딘-3-일카바메이트 (346.80 mg, 1.86 mmol) 및 3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)프로판알(410 mg, 1.24 mmol) 용액에 AcOH (7.45 mg, 124.13 μmol, 7.10 μL)를 첨가하고, 혼합물을 25 °C 에서 30분간 교반 하고, 혼합물에 NaBH(OAc)3 (789.26 mg, 3.72 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 25 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 미량의 3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)프로판알이 남아있음 및 40%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여과 케이크를 ACN (10 mL)로 세척하고, 여과물을 진공 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge C18 150*50mm*10μm; 이동상:[물(NH4HCO3)-ACN];B%: 24%-54%, 11분)로 정제하고, 용출물을 동결 건조하여 황백색 고체의 tert-부틸 ((3S)-1-(3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)프로필)피롤리딘-3-일)카바메이트 (285 mg, 569.38 μmol, 45.87% 수율)을 수득하였다. MS(M+H)+=501.2
단계 4. 4-(3-((S)-3-아미노피롤리딘-1-일)프로폭시)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (6)의 합성
디옥산 (1 mL) 내 tert-부틸 ((3S)-1-(3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)프로필)피롤리딘-3-일)카바메이트 (150 mg, 299.67 μmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 1 mL)을 첨가하고, 혼합물을 25 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 94%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 40 °C 에서 진공 농축하여 갈색 고체의 4-(3-((S)-3-아미노피롤리딘-1-일)프로폭시)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (130 mg, HCl 염)을 수득하였고, 바로 사용하였다. MS(M+H)+=401.1
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((3S)-1-(3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)프로필)피롤리딘-3-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 10)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (80 mg, 178.80 μmol) 용액에 HATU (101.98 mg, 268.20 μmol) 및 DIPEA (138.65 mg, 1.07 mmol, 186.86 μL)를 첨가하고, 혼합물을 25 °C 에서 15분간 교반하고, 혼합물에 4-(3-((S)-3-아미노피롤리딘-1-일)프로폭시)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (124.98 mg, 286.08 μmol, HCl 염)을 첨가하고, 혼합물을 25 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산이 완전히 소모되었음 및 59%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물에 CH3COOH를 첨가하여 pH < 7 로 조정하였다. 혼합물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex C18 75*30mm*3μm;이동상:[물(FA)-ACN];B%: 18%-48%, 7분) 후 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25mm*5μm;이동상:[물(NH4HCO3)-ACN];B%: 30%-60%, 8분)로 정제하고, 용출물을 동결 건조하여 황백색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((3S)-1-(3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)프로필)피롤리딘-3-일)-3-메톡시벤즈아미드 (29.3 mg, 34.25 μmol, 19.15% 수율, 97% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=830.3
실시예 11. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)티오)에틸)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 11)의 합성
단계 1. 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-머캅토이소인돌린-1,3-디온 (2)의 합성
DMF (50 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (5 g, 18.10 mmol) 용액에 25°C에서 Na2S (1.84 g, 23.53 mmol)를 한 번에 첨가하였다. 생성된 용액을 25 °C 에서 4시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물에 얼음물 (150 mL)을 첨가 후 6N HCl용액을 첨가하여 pH를 3으로 조정했다. 혼합물의 색상이 적색에서 밝은 황색으로 바뀌었고 많은 양의 백색 고체가 형성되었다. 혼합물을 여과하였다. 여과 케이크를 물 (30 mL x 3)로 세척한 후 아세톤 (30 mL x 3)으로 세척했다. 생성된 고체를 모으고 건조하여 회색 고체의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-머캅토이소인돌린-1,3-디온 (4.5 g, 15.50 mmol, 85.64% 수율)을 수득하였다.
단계 2. 4-((2-브로모에틸)티오)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (3)의 합성
DMF (15 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-머캅토이소인돌린-1,3-디온 (1.2 g, 4.13 mmol) 및 K2CO3 (1.14 g, 8.27 mmol) 혼합물에 25°C에서 1,2-디브로모에탄 (1.01 g, 5.37 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25°C에서 1시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터: EtOAc = 1:1, Rf = 0.75)로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였다. 반응 혼합물을 염수 (80 mL)에 부은 후 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (15 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 로 건조하고 농축하여 조 생성물을 얻고, 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (10 g 실리카 겔 컬럼, EtOAc/석유 에터 = 10-40%, 60 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 4-((2-브로모에틸)티오)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (150 mg, 283.20 μmol, 6.85% 수율, 75% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=399.0
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.12 (s, 1H), 7.81 - 7.78 (m, 2H), 7.68 - 7.66 (m, 1H), 5.14-5.09 (m, 1H), 3.75 - 3.70 (m, 2H), 3.67 - 3.63 (m, 2H), 2.64 - 2.53 (m, 2H), 2.52 - 2.51 (m, 1H), 2.33 - 2.31 (m, 1H).
단계 3. tert-부틸 (1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)티오)에틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (5)의 합성
DMF (3 mL) 내 4-((2-브로모에틸)티오)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (150 mg, 377.60 μmol) 및 tert-부틸 N-(4-피페리딜) 카바메이트 (113.44 mg, 566.40 μmol) 용액에 25°C에서 DIPEA (146.41 mg, 1.13 mmol) 및 KI (6.27 mg, 37.76 μmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 70°C에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량을 확인하였다. 반응 혼합물을 염수 (20 mL)에 부은 후 EtOAc (8 mL x 4)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (5 mL x 2)로 세척 후 Na2SO4 로 건조하고농축하여 조 생성물을 얻고,플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (4 g 실리카 겔 컬럼, EtOAc/석유 에터 = 20-70%, 50 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 tert-부틸 (1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)티오)에틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (120 mg, 213.70 μmol, 56.59% 수율, 92% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=517.2
단계 4. 4-((2-(4-아미노피페리딘-1-일)에틸)티오)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (6)의 합성
DCM (2 mL) 내 tert-부틸 (1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)티오)에틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (120 mg, 232.28 μmol) 및 TFA (924.00 mg, 8.10 mmol) 용액을 25°C에서 30분 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터: EtOAc = 10:1, Rf = 0)에서 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였다. 반응 혼합물을 농축하여 황색 오일의 4-((2-(4-아미노피페리딘-1-일)에틸)티오)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (120 mg, crude, TFA)을 수득하였다. MS(M+H)+=417.1
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)티오)에틸)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 11)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((2-(4-아미노피페리딘-1-일)에틸)티오)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일) 이소인돌린-1,3-디온 (100 mg, 188.50 μmol, TFA), 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (78.96 mg, 169.65 μmol) 및 DIPEA (146.17 mg, 1.13 mmol) 혼합물에 25°C에서 HATU (93.17 mg, 245.04 μmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25°C에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 염수 (12 mL)에 부은 후 EtOAc (5 mL x 4)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4 로 건조하고 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (4 g 실리카 겔 컬럼, EtOAc/석유 에터 = 20-100% 이후 MeOH/EtOAc = 20%, 40 mL/분) 이후 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25mm*5μm; 이동상: [물(NH4HCO3) -ACN]; B%: 48%-78%, 10분)로 정제하고 동결 건조하여 백색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)티오)에틸)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (34 mg, 38.27 μmol, 20.30% 수율, 97.23% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=864.0
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.13 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.24 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.94 - 7.91 (m, 1H), 7.81 - 7.75 (m, 2H), 7.62 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 8 Hz, 1H), 5.13 - 5.09 (m, 1H), 4.84 - 4.80 (m, 1H), 4.07 (t, J = 16 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.80 - 3.71 (m, 1H), 3.33 (s, 3H), 3.30 - 3.26 (m, 3H), 2.94 - 2.88 (m, 2H), 2.88 - 2.84 (m, 1H), 2.67 - 2.64 (m, 2H), 2.61 - 2.56 (m, 3H), 2.13 - 2.03 (m, 3H), 2.03 - 1.95 (m, 2H), 1.80 - 1.78 (m, 2H), 1.76 - 1.70 (m, 2H), 1.60 - 1.53 (m, 4H).
실시예 12. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 12)의 합성
MeOH (1 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(피페리딘-4-일)벤즈아미드 (40 mg, 70.67 μmol, HCl) 용액에 NaOAc (5.80 mg, 70.67 μmol) 및 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-카브알데히드 (60 mg, 209.61 μmol)를 첨가하고 혼합물을 20 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. NaBH3CN (13.32 mg, 212.00 μmol)를 첨가하고 혼합물을 20 °C 에서 3시간 동안 교반 하였다. LCMS로 35%의 원하는 질량을 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex C18 75*30 mm*3μm; 이동상:[물 (FA)-ACN];B%: 12%-42%, 7분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 백색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (6.3 mg, 7.17 μmol, 10.14% 수율, 91% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=800.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ = 11.20-11.09 (m, 1H), 8.33-8.23 (m, 2H), 8.17-8.08 (m, 1H), 8.01-7.79 (m, 4H), 7.52-7.39 (m, 2H), 5.26-5.06 (m, 1H), 4.82-4.70 (m, 1H), 4.09-4.00 (m, 2H), 3.99-3.95 (m, 1H), 3.95-3.91 (m, 3H), 3.88-3.75 (m, 1H), 3.32-3.30 (m, 3H), 2.97-2.84 (m, 2H), 2.65-2.57 (m, 1H), 2.45-2.35 (m, 3H), 2.25-2.12 (m, 2H), 2.11-2.02 (m, 1H), 1.99-1.88 (m, 2H), 1.86-1.75 (m, 1H), 1.74-1.52 (m, 9H).
실시예 13. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)에틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 13)의 합성
단계 1. 4-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (2)의 합성
교반자가 장착된 100 mL 바이알에 DCE (10 mL) 내 4-브로모-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (1 g, 2.97 mmol), (2-브로모에톡시)(tert-부틸)디메틸실란 (922.48 mg, 3.86 mmol), Dtbbpy (5.90 mg, 14.83 μmol), TTMSS (737.59 mg, 2.97 mmol, 915.13 μL), Na2CO3 (628.78 mg, 5.93 mmol)를 넣었다. 바이알을 N2 기체 하에서 밀봉하여 두었다. 냉각팬으로 반응온도를 25 °C 로 유지하면서 14시간 동안 34 W blue LED lamp (7 cm away)로 반응물을 교반하고 방사선을 조사하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(66%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 염수 (20 mL)로 희석하고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (20 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하였다. 여과물을 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (Biotage; 20 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 20~70% EtOAc/석유 에터 gradient @ 40 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 4-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (1.1 g, 2.27 mmol, 76.56% 수율, 86% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=417.1
단계 2. 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(2-히드록시에틸)이소인돌린-1,3-디온 (3)의 합성
디옥산 (25 mL) 내 4-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (650 mg, 1.56 mmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 2.50 mL)을 첨가하고, 혼합물을 0 °C 에서 0.5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (50 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하였다. 여과물을 감압 농축하여 백색 고체의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(2-히드록시에틸)이소인돌린-1,3-디온 (460 mg, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=303.3
단계 3. 2-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)에틸 4-메틸벤젠설포네이트 (4)의 합성
DCM (5 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(2-히드록시에틸)이소인돌린-1,3-디온 (500 mg, 1.65 mmol) 용액에 TosCl (378.42 mg, 1.98 mmol) 및 TEA (502.13 mg, 4.96 mmol, 690.68 μL)를 첨가하고, 혼합물을 25 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(50%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하였다. 유기상을 분리하고, 수층을 EtOAc (10 mL x 2)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (20 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하였다. 여과물을 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (Biotage; 4 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 15~50% EtOAc/석유 에터 gradient @ 40 mL)로 정제하여 황색 오일의 2-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)에틸 4-메틸벤젠설포네이트 (450 mg, 916.82 μmol, 55.43% 수율, 93% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=456.9
단계 4. tert-부틸 (1-(2-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)에틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (5)의 합성
DMF (5 mL) 내 2-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)에틸 4-메틸벤젠설포네이트 (440 mg, 963.92 μmol) 용액에 tert-부틸 N-(4-피페리딜)카바메이트 (212.36 mg, 1.06 mmol), DIPEA (124.58 mg, 963.92 μmol, 167.90 μL) 및 NaI (14.45 mg, 96.39 μmol)를 첨가하고, 혼합물을 60 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(46%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고, EtOAc (10 mL x 2)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (20 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 여과물을 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (Biotage; 12 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 20~70% EtOAc/석유 에터 gradient @ 40 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 tert-부틸 (1-(2-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)에틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (220 mg, 404.09 μmol, 41.92% 수율, 89% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=485.2
단계 5. 4-(2-(4-아미노피페리딘-1-일)에틸)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (6)의 합성
디옥산 (2 mL) 내 tert-부틸 (1-(2-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)에틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (100 mg, 206.38 μmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 2 mL)를 첨가하고, 혼합물을 25 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(79%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하여 백색 고체의 4-(2-(4-아미노피페리딘-1-일)에틸)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (86 mg, crude, HCl)을 수득하였다. MS(M+H)+=385.0
단계 6. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)에틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 13)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (85.05 mg, 190.07 μmol) 용액에 HATU (108.41 mg, 285.11 μmol) 및 DIPEA (73.70 mg, 570.22 μmol, 99.32 μL)를 첨가하고, 혼합물을 25 °C 에서 0.5시간 동안 교반 하였다. 4-(2-(4-아미노피페리딘-1-일)에틸)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (80 mg, crude, HCl)을 첨가하고, 혼합물을 25 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(80%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (5 mL)로 희석하였다. 유기상을 분리하고, 수층을 EtOAc (5 mL Х 2)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (5 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 여과물을 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi C18 150*25mm*10μm; 이동상:[물 (FA)-ACN];B%: 19%-55%, 12 분) 및 HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25mm*5μm; 이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN];B%: 40%-70%, 10 분) 이어서 prep-HPLC (컬럼: Unisil 3-100 C18 Ultra 150*50mm*3μm; 이동상:[물 (FA)-ACN];B%: 15%-35%, 10분)로 정제하였다. 용출물을 동결 건조하여 백색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)에틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (64.1 mg, 77.19 μmol, 40.61% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=814.3
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.13 (s, 1H), 8.35-8.23 (m, 2H), 8.11 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.81-7.72 (m, 3H), 7.53-7.44 (m, 2H), 5.18-5.10 (m, 1H), 4.81-4.70 (m, 1H), 4.04 (t, J = 14.1 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.84-3.71 (m, 1H), 3.32 (s, 3H), 3.25-3.21 (m, 2H), 3.00-2.94 (m, 2H), 2.91-2.83 (m, 1H), 2.64-2.54 (m, 4H), 2.13-2.02 (m, 3H), 1.99-1.89 (m, 2H), 1.82-1.75 (m, 2H), 1.74-1.66 (m, 2H), 1.65-1.52 (m, 6H)
실시예 14. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)프로필)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 14)의 합성
단계 1. tert-부틸 (1-(프로프-2-인-1-일)피페리딘-4-일)카바메이트 (2)의 합성
ACN (20 mL) 내 tert-부틸 피페리딘-4-일카바메이트 (2 g, 9.99 mmol) 용액에 Cs2CO3 (6.51 g, 19.97 mmol) 및 3-브로모프로프-1-인 (1.48 g, 9.99 mmol, 1.08 mL, 80% 순도)를 첨가하고, 혼합물을 25°C에서 16시간 동안 교반 하였다. TLC (100% EtOAc)로 새로운 스팟을 KMnO4를 사용하여 확인하였다. 혼합물을 물 (10 mL)로 희석하고, EtOAc (5 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4 로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (Biotage, 4 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 4~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 20 mL/분)로 정제하여 황색 파우더의 tert-부틸 (1-(프로프-2-인-1-일)피페리딘-4-일)카바메이트 (1.4 g, 5.87 mmol, 58.82% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=239.3
단계 2. tert-부틸 (1-(3-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)프로프-2-인-1-일)피페리딘-4-일) 카바메이트 (3)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-브로모-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (100 mg, 296.63 μmol) 및 tert-부틸(1-(프로프-2-인-1-일)피페리딘-4-일)카바메이트 (84.83 mg, 355.95 μmol) 용액에 Pd(PPh3)2Cl2 (20.82 mg, 29.66 μmol), CuI (5.65 mg, 29.66 μmol) 및 TEA (300.15 mg, 2.97 mmol, 412.86 μL)를 첨가하고, 혼합물을 80°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량을 확인하였고, 혼합물을 물 (5 mL)로 희석하고 EtOAc (5 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4 로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (Biotage, 4 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 4~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 35 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 tert-부틸 (1-(3-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)프로프-2-인-1-일)피페리딘-4-일) 카바메이트 (130 mg, 252.36 μmol, 85.08% 수율, 96% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=495.0
단계 3. tert-부틸 (1-(3-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)프로필)피페리딘-4-일)카바메이트 (4)의 합성
EtOH (2 mL) 내 tert-부틸 (1-(3-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)프로프-2-인-1-일)피페리딘-4-일)카바메이트 (130 mg, 262.87 μmol) 용액에 N2 하 Pd/C (1.30 g, 10% 순도)를 첨가 후 혼합물에 H2 (529.90 μg, 262.87 μmol)를 버블링하고, 혼합물을 H2 (15 psi) 하 25°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였고, 혼합물을 여과하고 진공 농축하여 황색 오일의 tert-부틸 (1-(3-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)프로필)피페리딘-4-일)카바메이트 (120 mg, crude)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=499.0
단계 4. 4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)프로필)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (5)의 합성
디옥산 (1 mL) 내 tert-부틸 (1-(3-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)프로필)피페리딘-4-일)카바메이트 (120 mg, 240.69 μmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 1 mL)를 첨가하고, 혼합물을 25°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량을 확인하였고, 혼합물을 진공 농축하여 황색 파우더의 4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)프로필)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (90 mg, 225.87 μmol, 93.84% 수율)을 수득하였다. MS(M+H)+=399.0
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)프로필)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 14)의 합성
DMF (1 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (90 mg, 201.15 μmol) 용액에 HATU (114.72 mg, 301.72 μmol) 및 DIEA (77.99 mg, 603.44 μmol, 105.11 μL)를 첨가 후 25°C에서 0.5시간 동안 교반 하고, 4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)프로필)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (87.48 mg, 201.15 μmol, HCl 염)를 첨가하고 생성된 혼합물을 25°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량을 확인하였다. 혼합물을 물 (3 mL)로 희석하고 EtOAc (5 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4 로 건조하고, 여과하여 진공 농축하고, 조 생성물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (Biotage, 4 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 4~10% MeOH/DCM@ 30 mL/분) 및 Prep-HPLC(컬럼: Waters Xbridge 150*25mm* 5μm; 이동상: [물(NH4HCO3) - ACN]; B%: 45% - 75%, 8분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 백색 파우더의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)프로필)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (7.8 mg, 9.20 μmol, 4.57% 수율, 97.6% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=828.0
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ =11.13 (s, 1 H), 8.24 - 8.30 (m, 2 H), 8.11 (br d, J=7.58 Hz, 1 H), 7.96 (s, 1 H), 7.71 - 7.82 (m, 3 H), 7.46 - 7.52 (m, 2 H), 5.14 (dd, J=12.90, 5.44 Hz, 1 H), 4.77 (t, J=8.07 Hz, 1 H), 4.05 (t, J=14.12 Hz, 2 H), 3.94 (s, 3 H), 3.72 - 3.81 (m, 1 H), 3.42 (s, 3 H), 3.04 - 3.09 (m, 2 H), 2.85 - 2.93 (m, 3 H), 2.62 - 2.70 (m, 2 H), 2.32 - 2.37 (m, 2 H), 2.03 - 2.11 (m, 1 H), 1.95 (t, J=10.58 Hz, 4 H), 1.69 - 1.84 (m, 6 H), 1.54 - 1.66 (m, 6 H).
실시예 15. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-((3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)프로필)(메틸)아미노)시클로헥실)-3-메톡시벤즈아미드 (트랜스) (화합물 15)의 합성
단계 1. 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(3-히드록시프로폭시)이소인돌린-1,3-디온 (2)의 합성
DMF (130 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-히드록시이소인돌린-1,3-디온 (5 g, 18.23 mmol) 및 3-브로모프로판-1-올 (2.79 g, 20.06 mmol, 1.81 mL) 용액에 Na2CO3 (9.66 g, 91.16 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 80 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량을 확인하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여과 케이크를 EtOAc (60 mL)로 세척하였다. 여과물을 염수 (600 mL)로 희석하고 EtOAc (400 mL x 5)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 진공 농축하여 용매를 제거하고, 생성된 혼합물을 염수 (300 mL x 5)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 잔여물을 MTBE (25 mL) 및 EtOAc (5 mL) 혼합물로 10분간 분쇄하고, 현탁액을 여과하고 여과 케이크를 MTBE (20 mL)로 세척하였다. 여과 케이크를 모아서 건조하여 황백색 고체의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(3-히드록시프로폭시)이소인돌린-1,3-디온 (2.3 g, 6.92 mmol, 37.96% 수율)을 수득하였다. MS(M+H)+=333.0
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.10 (br s, 1H), 7.81 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 5.08 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.56 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 4.27 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.60 (q, J = 5.8 Hz, 2H), 2.95-2.81 (m, 1H), 2.63-2.52 (m, 2H), 2.09-1.99 (m, 1H), 1.95-1.85 (m, 2H).
단계 2. 3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)프로필 4-메틸벤젠설포네이트 (3)의 합성
DCM (20 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(3-히드록시프로폭시)이소인돌린-1,3-디온 (1 g, 3.01 mmol) 용액에 TEA (1.22 g, 12.04 mmol, 1.68 mL) 및 TosCl (1.15 g, 6.02 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 25 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 17%의 출발물질이 남아있음 및 65%의 원하는 질량을 확인하였다. 생성된 혼합물을 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (20 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of from 25~100% EtOAc/석유 에터 to 10~17% MeOH / EtOAc gradient @ 100 mL/분)로 정제하였다. 용출물을 진공 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex luna C18 150*40mm*15μm; 이동상:[물(FA)-ACN]; B%: 32%-62%, 10분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 백색 고체의 3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)프로필 4-메틸벤젠설포네이트 (490 mg, 1.01 mmol, 33.47% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=487.0
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.13 (s, 1H), 7.77 (dd, J = 7.5, 8.3 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.45 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 5.10 (dd, J = 5.5, 12.7 Hz, 1H), 4.28 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 4.07 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.96-2.82 (m, 1H), 2.65-2.53 (m, 2H), 2.20 (s, 3H), 2.12-1.95 (m, 3H).
단계 3. 4-(3-(((1r,4r)-4-(디벤질아미노)시클로헥실)(메틸)아미노)프로폭시)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (트랜스) (5)의 합성
DMF (6 mL) 내 3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)프로필 4-메틸벤젠설포네이트 (245 mg, 503.60 μmol) 및 (1r,4r)-N1,N1-디벤질-N4-메틸시클로헥산-1,4-디아민 (트랜스) (310.68 mg, 1.01 mmol) 용액에 DIPEA (260.34 mg, 2.01 mmol, 350.87 μL) 및 NaI (7.55 mg, 50.36 μmol)를 첨가하고, 혼합물을 60 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량을 확인하였다. 생성된 혼합물을 물 (60 mL)로 희석하고 EtOAc (40 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (20 mL x 5)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여진공 농축하였다. 잔여물을 pre-TLC (SiO2, DCM: 메탄올 = 5:1)로 정제하여 갈색 고체의 4-(3-(((1r,4r)-4-(디벤질아미노)시클로헥실)(메틸)아미노)프로폭시)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (트랜스) (195 mg, 313.13 μmol, 62.18% 수율)을 수득하였다. MS(M+H)+=623.2
단계 4. 4-(3-(((1r,4r)-4-아미노시클로헥실)(메틸)아미노)프로폭시)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (트랜스) (6)의 합성
CF3CH2OH (30 mL) 내 4-(3-(((1r,4r)-4-(디벤질아미노)시클로헥실)(메틸)아미노)프로폭시)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (트랜스) (185.00 mg, 297.07 μmol) 용액에 Pd(OH)2/C (100 mg, 10% 순도), HCl (1 M in H2O, 297.07 μL) 및 Pd/C (100 mg, 10% 순도)를 N2 기체 하에서 첨가하고, 혼합물을 탈기하고 H2로 3차례 퍼징하고, 현탁액을 H2 기체 (15 Psi) 하 50 °C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여과 케이크를 CF3CH2OH (50 mL)로 세척하고, 여과물을 진공 농축하였다. 잔여물을 prep-TLC (SiO2, DCM: 메탄올 = 5: 1)로 정제하여 갈색 고체의 4-(3-(((1r,4r)-4-아미노시클로헥실)(메틸)아미노)프로폭시)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (트랜스) (180 mg, HCl 염)을 수득하였다. MS(M+H)+=443.1
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-((3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)프로필)(메틸)아미노)시클로헥실)-3-메톡시벤즈아미드 (트랜스) (화합물 15)의 합성
DMF (3 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (105 mg, 234.67 μmol) 용액에 HATU (116.00 mg, 305.07 μmol) 및 DIPEA (151.65 mg, 1.17 mmol, 204.38 μL)를 첨가하고, 혼합물을 25 °C 에서 15분간 교반 하였다. 혼합물에 4-(3-(((1r,4r)-4-아미노시클로헥실)(메틸)아미노)프로폭시)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (179.84 mg, 375.47 μmol, HCl 염)을 첨가하고 생성된 혼합물을 25 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량을 확인하였다. 혼합물에 CH3COOH를 첨가하여 pH < 7로 조정하였다. 생성된 혼합물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex C18 75*30mm*3μm; 이동상:[물(FA)-ACN]; B%: 18%-48%, 7분) 후 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25mm*5μm; 이동상:[물(NH4HCO3)-ACN]; B%: 48%-78%, 8분)로 정제한 후, prep-HPLC (컬럼: Phenomenex C18 75*30mm*3μm; 이동상:[물(FA)-ACN]; B%: 18%-48%, 7분)로 정제하고, 용출물을 동결 건조하여 백색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-((3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)프로필)(메틸)아미노)시클로헥실)-3-메톡시벤즈아미드 (트랜스) (7.4 mg, 8.32 μmol, 3.54% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=872.3
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.09 (s, 1H), 8.33-8.24 (m, 2H), 8.06 (br d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.87-7.76 (m, 1H), 7.61-7.38 (m, 4H), 5.10 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.87-4.66 (m, 1H), 4.25 (br t, J = 5.9 Hz, 2H), 4.04 (br t, J = 14.1 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.71-3.60 (m, 1H), 3.32 (s, 3H), 2.95-2.85 (m, 1H), 2.65-2.58 (m, 4H), 2.45-2.35 (m, 1H), 2.23 (s, 3H), 2.07-2.00 (m, 1H), 1.95-1.87 (m, 2H), 1.91-1.81 (m, 4H), 1.75-1.64 (m, 4H), 1.65-1.51 (m, 4H), 1.48-1.26 (m, 4H).
실시예 16. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1s,4s)-4-((3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)프로필)(메틸)아미노)시클로헥실)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 16)의 합성
화합물 16은 실시예 15에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=871.1, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.07 (s, 1H), 8.31-8.22 (m, 2H), 8.02-7.90 (m, 2H), 7.63-7.54 (m, 1H), 7.52-7.45 (m, 2H), 7.11 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 6.78 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 5.09-4.99 (m, 1H), 4.83-4.70 (m, 1H), 4.10-3.98 (m, 2H), 3.98-3.88 (m, 4H), 3.35-3.31 (m, 5H), 2.93-2.80 (m, 1H), 2.61-2.53 (m, 4H), 2.37-2.30 (m, 1H), 2.22 (s, 3H), 2.04-1.90 (m, 3H), 1.87-1.67 (m, 8H), 1.65-1.43 (m, 8H).
실시예 17. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(20-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)-3,6,9,12,15,18-헥사옥사이코실)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 17)의 합성
화합물 17은 실시예 1에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=1111.9, 1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ = 11.09 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.24 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.91-7.83 (m, 1H), 7.62 - 7.52 (m, 1H), 7.19 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.60 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 5.11 - 4.99 (m, 1H), 4.87 - 4.76 (m, 1H), 4.13 - 3.99 (m, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.78 - 3.68 (m, 1H), 3.64 - 3.59 (m, 2H), 3.57 - 3.44 (m, 24H), 3.33 (s, 3H), 2.94 - 2.80 (m, 3H), 2.62 - 2.53 (m, 2H), 2.48 - 2.44 (m, 2H), 2.10 - 1.90 (m, 5H), 1.81 - 1.68 (m, 4H), 1.67 - 1.48 (m, 6H).
실시예 18. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)아미노)에톡시)에톡시)에틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 18)의 합성
화합물 18은 실시예 1에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=903.7, 1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ = 11.01 (s, 1H), 8.33 - 8.26 (m, 2H), 8.15 - 8.05 (m, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.52 - 7.47 (m, 2H), 7.30 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 5.60 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 5.15 - 5.05 (m, 1H), 4.81 - 4.72 (m, 1H), 4.27 - 4.01 (m, 4H), 3.94 (s, 3H), 3.78 - 3.71 (m, 1H), 3.61 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 3.58 - 3.49 (m, 7H), 3.31 (s, 3H), 2.93 - 2.86 (m, 3H), 2.65 - 2.58 (m, 2H), 2.46 - 2.42 (m, 2H), 2.34 - 2.29 (m, 1H), 2.07 - 1.94 (m, 5H), 1.83 - 1.65 (m, 4H), 1.64 - 1.50 (m, 6H).
실시예 19. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-(2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)옥시)에톡시)에톡시)에틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 19)의 합성
화합물 19은 실시예 1에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=904.7, 1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ = 11.05 - 10.91 (m, 1H), 10.97 (s, 1H), 8.33 - 8.23 (m, 2H), 8.15 - 8.07 (m, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.55 - 7.44 (m, 3H), 7.39 - 7.25 (m, 2H), 5.15 -5 .01 (m, 1H), 4.86 - 4.69 (m, 1H), 4.41 - 4.35 (m, 1H), 4.29 - 4.20 (m, 3H), 4.09 - 3.99 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.82 - 3.70 (m, 3H), 3.65 - 3.59 (m, 2H), 3.57 - 3.49 (m, 4H), 3.32 - 3.29 (m, 3H), 2.96 - 2.83 (m, 3H), 2.60 - 2.56 (m, 1H), 2.48 - 2.43 (m, 3H), 2.07 - 1.91 (m, 5H), 1.79 - 1.67 (m, 4H), 1.67 - 1.52 (m, 6H).
실시예 20. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(3-(3-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)옥시)에톡시)프로폭시)프로필)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 20)의 합성
화합물 20은 실시예 1에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=849.6, 1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ=10.94 (s, 1H), 8.39 - 8.31 (m, 1H), 8.30 - 8.20 (m, 2H), 7.97 (s, 1H), 7.55 - 7.45 (m, 3H), 7.36 - 7.21 (m, 2H), 5.16 - 5.07 (m, 1H), 4.81 - 4.71 (m, 1H), 4.41 - 4.32 (m, 1H), 4.28 - 4.20 (m, 3H), 4.12 - 3.99 (m, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.76 - 3.69 (m, 2H), 3.52 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.45 - 3.37 (m, 6H), 3.32 - 3.31 (m, 3H), 2.96 - 2.84 (m, 1H), 2.61 - 2.56 (m, 1H), 2.48 - 2.41 (m, 1H), 2.02 - 1.88 (m, 3H), 1.80 - 1.68 (m, 6H), 1.65 - 1.55 (m, 4H).
실시예 21. (S)-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)옥시)메틸)벤질)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 21)의 합성
단계 1. (R)-tert-부틸 2-포르밀모르폴린-4-카복실레이트 (2)의 합성
THF (400 mL) 내 (S)-5-아미노-2-(((벤질옥시)카보닐)아미노)-5-옥소펜타노산 (24 g, 85.63 mmol) 용액에 25°C에서 CDI (20 g, 123.34 mmol)를 첨가하였다. 혼합물은 N2 기체 하 70°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 농축하고, CHCl3 (500 mL)로 희석하였다. 혼합물을 염수 900 mL (300 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 로 건조하고, 여과하여 감압 농축하였다. 조 생성물을 25°C에서 30분 동안 MTBE (300 mL)로 분쇄하고, 여과 후 여과 케이크를 감압 건조하여 백색 고체의 (R)-tert-부틸 2-포르밀모르폴린-4-카복실레이트 (16.5 g, 62.91 mmol, 73.47% 수율)을 수득하였다. MS(M+H)+=263.2
단계 2. (S)-3-아미노피페리딘-2,6-디온 (3)의 합성
CF3CH2OH (200 mL) 내 (S)-벤질(2,6-디옥소피페리딘-3-일)카바메이트 (5g, 19.06mmol) 용액에 N2 기체 하 Pd/C (1 g, 10% 순도)를 첨가 후 혼합물을 H2 기체 (15 Psi) 하 20°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크가 검출됨 및 출발물질의 피크가 없음을 확인하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 감압 농축하여 회색 고체의 (S)-3-아미노피페리딘-2,6-디온 (2.4 g, 18.73 mmol, 98.25% 수율)을 수득하였다. MS(M+H)+=129.2
단계 3. 메틸 3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-2-메틸벤조에이트 (2B)의 합성
DCM (120 mL) 내 메틸 3-하이드록시-2-메틸벤조에이트 (6 g, 36.11 mmol, 1 eq) 용액에 25°C에서 이미다졸 (2.46 g, 36.11 mmol) 및 TBSCl (9 g, 59.71 mmol, 7.32 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 N2 기체 하 25°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크가 검출됨 및 출발물질의 피크가 없음을 확인하였다. 반응 혼합물을 농축하여 잔여물을 얻은 후 H2O (80 mL)을 첨가하고, 혼합물을 EtOAc 300 mL (100 mL x 3)로 추출하고, 합쳐진 유기상을 염수 (100 mL x 2)로 세척 후 Na2SO4 로 건조하고, 여과한 후 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (Biotage; 40 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0 ~ 20% EtOAc: 석유 에터 gradient, 60 mL/분)로 정제하여 밝은 황색 오일의 메틸 3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-2-메틸벤조에이트 (10 g, 35.66 mmol, 98.76% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=281.2
단계 4. 메틸 2-(브로모메틸)-3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)벤조에이트 (4)의 합성
CCl4 (15 mL) 내 메틸 3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-2-메틸벤조에이트 (4 g, 14.26 mmol) 용액에 25°C에서 NBS (2.80 g, 15.73 mmol) 및 AIBN (240.00 mg, 1.46 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 기체 하 80°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크가 검출됨 및 출발물질의 피크가 없음을 확인하였다. 반응 혼합물에 Na2SO3 (sat. aq, 40 mL)를 첨가하고 DCM (40 mL x 3)으로 추출하고, 합쳐진 유기상을 Na2SO4 로 건조하고, 여과한 후 여과물을 감압 농축했다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (Biotage; 40 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0 ~ 20% EtOAc: 석유 에터 gradient, 60 mL/분)로 정제하여 밝은 황색 오일의 메틸 2-(브로모메틸)-3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)벤조에이트 (5 g, 13.91 mmol, 97.55% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=359.1
단계 5. (S)-3-(4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (5)의 합성
ACN (20 mL) 내 (S)-3-아미노피페리딘-2,6-디온 (600 mg, 4.68 mmol) 용액에 25°C에서 DIPEA (2.23 g, 17.22 mmol, 3.0 mL) 및 메틸 2-(브로모메틸)-3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)벤조에이트 (1.86 g, 5.18 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 기체 하 90°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 75% 피크가 검출됨 및 출발물질의 피크가 없음을 확인하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하였다. H2O (10 mL) 및 MTBE (15 mL)를 첨가하고 혼합물을 25°C에서 1시간 동안 교반 하였다. 이후 이를 여과한 후 여과 케이크를 MTBE (10 mL x 2)로 세척하고 감압 건조하여 회색 고체의 (S)-3-(4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (1.1 g, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=375.2
SFC로 2개의 피크 (49.6% : 50.3%)가 관찰되었고 생성물은 라세미화 가능성이 있다.
단계 6. (S)-3-(4-히드록시-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (6)의 합성
THF (5 mL) 및 CH3CN (5 mL) 내 (S)-3-(4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (500 mg, 1.34 mmol) 용액에 0°C에서 HCl (5 M, 10.00 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 기체 하 25°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 감압 농축 후 동결 건조하여 밝은 황색 고체의 (S)-3-(4-히드록시-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (340 mg, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=261.2
단계 7. (S)-tert-부틸 (1-(4-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)옥시)메틸)벤질)피페리딘-4-일) 카바메이트 (7)의 합성
THF (50 mL) 내 (S)-3-(4-히드록시-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (300 mg, 1.15 mmol) 용액에 0°C에서 PPh3 (907.06 mg, 3.46 mmol), tert-부틸(1-(4-(히드록시메틸)벤질)피페리딘-4-일)카바메이트 (420 mg, 1.31 mmol) 및 DIAD (1.23 g, 6.09 mmol, 1.18 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 기체 하 25°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하던 질량의 8% 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하여 밝은 황색 오일의 (S)-tert-부틸 (1-(4-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)옥시)메틸)벤질)피페리딘-4-일) 카바메이트 (600 mg, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+=563.4
단계 8. (S)-3-(4-((4-((4-아미노피페리딘-1-일)메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (8)의 합성
디옥산 (10 mL) 내 (S)-tert-부틸 (1-(4-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)옥시)메틸)벤질)피페리딘-4-일) 카바메이트 (600 mg, 1.07 mmol) 용액에 25°C에서 HCl/디옥산 (4 M, 12.00 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 기체 하 25°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하던 질량의 13% 피크가 검출됨 및 출발물질의 피크가 없음을 확인하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하였다. 잔여물에 H2O (30 mL)를 첨가하고, 혼합물을 EtOAc (30 mL x 3)로 세척하고, 수층을 동결 건조 후 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi Polar-RP 100*25 mm*4μm; 이동상: [물 (TFA) - ACN]; B%: 13% - 33%, 7분; 컬럼 온도: 30 °C)로 정제하고 동결 건조하여 밝은 황색 고체의 (S)-3-(4-((4-((4-아미노피페리딘-1-일)메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (190 mg, 329.54 μmol, 30.90% 수율, TFA)을 수득하였다. MS(M+H)+=463.3
1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ = 10.98 (s, 1H), 8.18 - 8.05 (m, 3H), 7.66 - 7.55 (m, 2H), 7.54 - 7.45 (m, 3H), 7.37 - 7.31 (m, 2H), 5.30 (s, 2H), 5.16 - 5.08 (m, 1H), 4.49 - 4.39 (m, 1H), 4.33 - 4.17 (m, 3H), 3.29 - 3.15 (m, 2H), 3.08 - 2.86 (m, 3H), 2.65 - 2.56 (m, 1H), 2.44 - 2.39 (m, 1H), 2.15 - 1.96 (m, 4H), 1.79 - 1.66 (m, 2H).
단계 9. (S)-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)옥시)메틸)벤질)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 21)의 합성
DMF (3 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (60 mg, 134.10 μmol) 용액에 25°C에서 HATU (120.00 mg, 315.60 μmol), DIPEA (148.40 mg, 1.15 mmol, 200 μL) 및 (S)-3-(4-((4-((4-아미노피페리딘-1-일)메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (80 mg, 138.75 μmol, TFA)을 첨가하였다. 혼합물을 N2 기체 하 25°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하던 질량의 45% 피크가 검출됨 및 출발물질의 피크가 없음을 확인하였다. 반응 혼합물에 H2O (10 mL)를 첨가하고, 혼합물을 EtOAc (30 mL x 2)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 로 건조하고, 여과 후 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi Polar-RP 100*25 mm*4μm; 이동상: [물 (TFA) - ACN];B%: 36% - 56%, 7분; 컬럼 온도: 30 °C)로 정제 후 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25mm*5μm; 이동상: [물 (NH4HCO3) - ACN]; B%: 46% - 76%, 9 분; 컬럼 온도: 30 °C)로 재정제 후 동결 건조하여 백색 고체의 (S)-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)옥시)메틸)벤질)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (28.1 mg, 29.93 μmol, 22.32% 수율, 95% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=892.4
SFC로 2개의 피크 (45.6% : 54.4%)가 관찰되었고 생성물은 라세미화 가능성이 있다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ = 10.97 (s, 1H), 8.31 - 8.23 (m, 2H), 8.15 - 8.08 (m, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.52 - 7.42 (m, 5H), 7.37 - 7.30 (m, 4H), 5.24 (s, 2H), 5.15 - 5.08 (m, 1H), 4.82 - 4.71 (m, 1H), 4.47 - 4.38 (m, 1H), 4.31 - 4.20 (m, 1H), 4.08 - 4.00 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.84 - 3.73 (m, 1H), 3.49 (s, 2H), 3.30 (s, 3H), 2.93 - 2.81 (m, 3H), 2.63 - 2.58 (m, 1H), 2.09 - 1.91 (m, 6H), 1.84 - 1.69 (m, 3H), 1.66 - 1.51 (m, 7H).
실시예 22. (S)-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)옥시)메틸)벤질)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 22)의 합성
단계 1. tert-부틸 (1-(4-(히드록시메틸)벤질)피페리딘-4-일)카바메이트 (3)의 합성
THF (40 mL) 내 (4-(클로로메틸)페닐)메탄올 (2 g, 12.77 mmol), tert-부틸 피페리딘-4-일카바메이트 (2.56 g, 12.77 mmol) 및 TEA (2.58 g, 25.54 mmol, 3.56 mL) 혼합물을 25 °C 에서 4시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(58%)를 확인하였다. 반응물을 진공 농축하고 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (20 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 50~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 백색 고체의 tert-부틸 (1-(4-(히드록시메틸)벤질)피페리딘-4-일)카바메이트 (2.36 g, 7.37 mmol, 57.67% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=321.2
단계 2. tert-부틸 (1-(4-(브로모메틸)벤질)피페리딘-4-일)카바메이트 (4)의 합성
DCM (20 mL) 내 tert-부틸 (1-(4-(히드록시메틸)벤질)피페리딘-4-일)카바메이트 (500 mg, 1.56 mmol) 용액에 PPh3 (613.92 mg, 2.34 mmol) 및 CBr4 (776.22 mg, 2.34 mmol)를 0 °C 에서 첨가하고, 혼합물을 25 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(30%)를 확인하였다. 생성된 혼합물을 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (12 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 8~19% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 갈색 고체의 tert-부틸 (1-(4-(브로모메틸)벤질)피페리딘-4-일)카바메이트 (285 mg, 743.50 μmol, 47.65% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=383.0
단계 3. tert-부틸 (S)-5-아미노-4-(5-((4-((4-((tert-부톡시카보닐)아미노)피페리딘-1-일)메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-5-옥소펜타노에이트 (6)의 합성
DMF (10 mL) 내 tert-부틸 (S)-5-아미노-4-(5-히드록시-1-옥소이소인돌린-2-일)-5-옥소펜타노에이트 (250 mg, 747.68 μmol) 및 K2CO3 (206.67 mg, 1.50 mmol) 용액에 DMF (5 mL) 내 tert-부틸 (1-(4-(브로모메틸)벤질)피페리딘-4-일)카바메이트 (285 mg, 743.50 μmol) 용액을 0 °C 에서 한 방울씩 첨가하고, 생성된 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 15%의 tert-부틸 (S)-5-아미노-4-(5-히드록시-1-옥소이소인돌린-2-일)-5-옥소펜타노에이트가 남아있음 및 45%의 원하는 질량을 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (80 mL)로 희석하고 EtOAc (50 mL x 4)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (100 mL x 5)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 감압 농축하였다. 잔여물을 pre-TLC (SiO2, EtOAc: 메탄올 = 10: 1) 후 prep-TLC (SiO2, EtOAc)로 정제하여 황백색 고체의 tert-부틸 (S)-5-아미노-4-(5-((4-((4-((tert-부톡시카보닐)아미노)피페리딘-1-일)메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-5-옥소펜타노에이트 (145 mg, 227.71 μmol, 30.46% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=637.2
단계 4. (S)-3-(5-((4-((4-아미노피페리딘-1-일)메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (7)의 합성
ACN (6 mL) 내 tert-부틸 (S)-5-아미노-4-(5-((4-((4-((tert-부톡시카보닐)아미노)피페리딘-1-일)메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)-5-옥소펜타노에이트 (110 mg, 172.75 μmol) 용액에 벤젠설폰산 (54.65 mg, 345.49 μmol)을 첨가하고, 혼합물을 80 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(45%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 35 °C 에서 진공 농축하여 갈색 고체의 (S)-3-(5-((4-((4-아미노피페리딘-1-일)메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (85 mg)을 수득하였고, 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=463.1
단계 5. (S)-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)옥시)메틸)벤질)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 22)의 합성
DMF (3 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (80 mg, 178.80 μmol) 용액에 HATU (101.98 mg, 268.20 μmol) 및 DIPEA (138.65 mg, 1.07 mmol, 186.86 μL)를 첨가하고, 혼합물을 15 °C 에서 10분간 교반한 후 (S)-3-(5-((4-((4-아미노피페리딘-1-일)메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (82.70 mg, 178.80 μmol)을 첨가하고 생성된 혼합물을 15 °C 에서 30분간 교반 하였다. LCMS로 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(38%)를 확인하였다. 혼합물에 CH3COOH를 첨가하여 pH < 7 로 조정하고, prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi Polar-RP 100*25mm*4μm; 이동상:[물(TFA)-ACN]; B%: 33%-53%, 7분) 후 prep-HPLC (컬럼: Shim-pack C18 150*25*10 μm; 이동상:[물(TFA)-ACN]; B%: 18%-48%, 10분)로 정제하였다. 불순물이 섞인 생성물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Luna C18 150*25mm*10μm; 이동상:[물(FA)-ACN];B%: 14%-44%, 10분)로 재정제하고, 용출물을 동결 건조하여 백색 고체의 (S)-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-(((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)옥시)메틸)벤질)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (7.9 mg, 8.68 μmol, 4.85% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=892.3
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 10.97 (s, 1H), 8.31-8.24 (m, 2H), 8.12 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.64 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.53-7.46 (m, 2H), 7.45-7.40 (m, 2H), 7.34 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.26 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.13 (dd, J = 2.1, 8.4 Hz, 1H), 5.19 (s, 2H), 5.07 (dd, J = 5.0, 13.3 Hz, 1H), 4.84-4.69 (m, 1H), 4.47-4.22 (m, 2H), 4.04 (br t, J = 14.1 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.86-3.70 (m, 1H), 3.49 (s, 2H), 3.32 (s, 3H), 2.98-2.76 (m, 3H), 2.62-2.57 (m, 1H), 2.48-2.34 (m, 3H), 2.10-1.97 (m, 3H), 1.97-1.88 (m, 2H), 1.83-1.66 (m, 4H), 1.62-1.56 (m, 4H).
실시예 23. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)글리실)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 23)의 합성
단계 1. tert-부틸 (2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)글리시네이트 (2)의 합성
DMSO (50 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (6 g, 21.72 mmol), tert-부틸 글리시네이트 (3.42 g, 26.06 mmol) 및 DIEA (5.61 g, 43.44 mmol), 7.57 mL) 용액을 90°C에서 24시간 동안 교반 하였다. LCMS로 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온의 질량 피크(23%) 및 원하는 질량의 피크(43%)를 확인하였다. 추가의 tert-부틸 글리시네이트 (1.71 g, 13.03 mmol)를 25°C에서 반응 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90°C에서 다른 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(48%)를 확인하였다. 혼합물을 물 (150 mL)로 부은 후 EtOAc (30 mL x 4)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (30 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 로 건조하고, 여과하여 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (45 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~50% EtOAc/석유 에터 gradient @ 80 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 tert-부틸 (2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)글리시네이트 (1.8 g, crude)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M-56)+=332.1
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.24 (s, 1H), 7.51 (dd, J = 7.2, 8.3 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 6.76 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.99 - 4.88 (m, 1H), 3.95 (s, 2H), 2.97 - 2.63 (m, 3H), 2.18 - 2.08 (m, 1H), 1.50 (s, 9H).
단계 2. (2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)글리신 (3)의 합성
디옥산 (5 mL) 내 tert-부틸 (2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)글리시네이트 (1.8 g, 4.65 mmol) 용액에 25°C에서 HCl/디옥산 (4 M, 40 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25°C에서 24시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하여 황색 고체의 (2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)글리신 (1.5 g, crude)을 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=332.0
단계 3. tert-부틸 (1-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)글리실)피페리딘-4-일)카바메이트 (4)의 합성
DCM (5 mL) 내 (2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)글리신 (500 mg, 1.51 mmol), HOBt (244.73 mg, 1.81 mmol), EDCI (347.20 mg, 1.81 mmol) 및 TEA (458.17 mg, 4.53 mmol, 630.22 μL) 용액에 25°C에서 tert-부틸 피페리딘-4-일카바메이트 (392.96 mg, 1.96 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 (2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)글리신이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(69%)를 확인하였다. 혼합물을 EtOAc (30 mL x 4)로 희석하고 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (12 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~80% EtOAc/석유 에터 gradient @ 70 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 tert-부틸 (1-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)글리실)피페리딘-4-일)카바메이트 (0.6 g, 1.09 mmol, 71.99% 수율, 93% 순도)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M-56)+=458.0
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.28 - 8.13 (m, 1H), 7.50 (dd, J = 7.3, 8.2 Hz, 1H), 7.13 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 6.79 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 4.94 (dd, J = 5.4, 12.2 Hz, 1H), 4.65 - 4.49 (m, 2H), 4.03 (s, 2H), 3.79 - 3.63 (m, 2H), 3.26 - 3.12 (m, 1H), 2.94 - 2.73 (m, 4H), 2.18 - 2.06 (m, 2H), 1.99 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 1.46 (s, 9H).
단계 4. tert-부틸 (1-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)글리실)피페리딘-4-일)카바메이트 (5)의 합성
디옥산 (2 mL) 내 tert-부틸 (1-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)글리실)피페리딘-4-일)카바메이트 (0.6 g, 1.17mmol) 용액에 25°C에서 HCl/디옥산 (4 M, 10 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25°C에서 0.5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하여 황색 고체의 tert-부틸 (1-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)글리실)피페리딘-4-일)카바메이트 (0.4 g, crude, HCl)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=414.0
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)글리실)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 23)의 합성
DMF (1 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (60 mg, 128.91 μmol, 1 eq) 용액에 HATU (73.53 mg, 193.37 μmol, 1.5 eq) 및 DIPEA (49.98 mg, 386.74 μmol, 67.36 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 30°C에서 10분간 교반 하였다. 혼합물에 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (58.00 mg, 128.91 μmol, HCl)를 첨가하였다. 혼합물을 30°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi Polar-RP 100x25mmx4μm; 이동상: [물 (TFA) -ACN];B%: 48%-68%, 7분)로 정제 및 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150x25mmx5μm; 이동상: [물 (NH4HCO3) -ACN];B%: 42%-72%, 분)로 재정제 후 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)글리실)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (18 mg, 20.07 μmol, 15.57% 수율, 96% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=861.3
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.33 - 10.80 (m, 1H), 8.33 - 8.21 (m, 2H), 8.09 - 7.98 (m, 2H), 7.61 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.16 - 7.03 (m, 3H), 5.07 (dd, J = 5.4, 12.9 Hz, 1H), 4.91 - 4.75 (m, 1H), 4.39 - 4.02 (m, 6H), 3.98 - 3.86 (m, 4H), 3.33 - 3.32 (m, 3H), 3.20 (t, J = 11.6 Hz, 1H), 2.95 - 2.80 (m, 2H), 2.63 - 2.55 (m, 2H), 2.06 - 1.84 (m, 5H), 1.75 - 1.41 (m, 8H).
실시예 24. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)프로파노일)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 24)의 합성
단계 1. 벤질 (3-(4-((tert-부톡시카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)카바메이트 (3)의 합성
DMF (7 mL) 내 3-(((벤질옥시)카보닐)아미노)프로판산 (0.5 g, 2.24 mmol) 및 tert-부틸 피페리딘-4-일카바메이트 (448.60 mg, 2.24 mmol) 용액에 HATU (1.28 g, 3.36 mmol) 및 DIEA (868.47 mg, 6.72 mmol, 1.17 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(68%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)로 희석 후 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하여 감압 농축하였다. 잔여물을 실리카 겔 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에터/EtOAc=1/0 to 1/1)로 정제하여 흑갈색 고체의 벤질 (3-(4-((tert-부톡시카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)카바메이트 (800 mg, 1.95 mmol, 87.20% 수율, 99% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=406.2
단계 2. tert-부틸 (1-(3-아미노프로파노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (4)의 합성
EtOH (10 mL) 내 벤질 (3-(4-((tert-부톡시카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)카바메이트 (0.8 g, 1.97 mmol) 용액에 N2 기체 하 Pd/C (0.1 g, 10% 순도)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 H2 기체 (15 psi) 하 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(73%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 여과 후 여과 케이크를 EtOH (100 mL)로 세척하였다. 여과물을 진공 농축하여 무색 오일의 tert-부틸 (1-(3-아미노프로파노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (480 mg, 1.29 mmol, 65.45% 수율, 73% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=272.2
단계 3. tert-부틸 (1-(3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)프로파노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (6)의 합성
DMSO (7 mL) 내 tert-부틸(1-(3-아미노프로파노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (450 mg, 1.66 mmol) 용액에 TEA (503.42 mg, 4.98 mmol, 692.46 μL) 및 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (458.07 mg, 1.66 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 80°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 ~44%의 tert-부틸(1-(3-아미노프로파노일)피페리딘-4-일)카바메이트가 남아있음 및 원하던 질량의 피크(~37%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)로 희석하고 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하여 감압 농축하였다. 잔여물을 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에터/EtOAc=1/0 to 0/1)로 정제하여 tert-부틸 (1-(3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)프로파노일)피페리딘-4-일)카바메이트를 수득하였다. MS(M-56+H)+=472.0
단계 4. 4-((3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (7)의 합성
DCM (2 mL) 내 tert-부틸 (1-(3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)프로파노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (100 mg, 189.55μmol), HCl/디옥산 (2M, 1mL) 혼합물을 25°C에서 0.5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 하나의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하여 황색 고체의 4-((3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (100 mg, crude, HCl 염)을 수득하였다. MS(M+H)+=428.1
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)프로파노일)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 24)의 합성
DMF (3 mL) 내 4-((3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (100 mg, 233.94 μmol, HCl 염) 및 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (108.88 mg, 233.94 μmol) 용액에 HATU (133.43 mg, 350.92 μmol) 및 DIEA (90.71 mg, 701.83 μmol, 122.25 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-((3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 하나의 주 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (60 mL x 3)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하여 감압 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (Instrμment: ACSWH-GX-K; 컬럼: Phenomenex Ge분i-NX C18 75x30mmx3μm; eluent A: 0.225% H2O 내 formic acid, eluent B: acetonitrile; gradient: 7분 42-72% B; flow 25 ml/분; 온도: 상온; 검출기: UV 220/254 nm)로 정제하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)프로파노일)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (40.6 mg, 45.48 μmol, 19.44% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=875.0
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.10 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.25 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.97-7.95 (m, 7.7 Hz, 1H), 7.60 (dd, J = 7.1, 8.5 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.80-6.75 (m, 1H), 5.05 (dd, J = 5.4, 12.9 Hz, 1H), 4.87-4.79 (m, 1H), 4.35-4.31 (m, 1H), 4.09-4.05 (m, 2H), 4.04-3.98 (m, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.90 - 3.81 (m, 1H), 3.56-3.52 (m, 2H), 3.34 (s, 3H), 3.20-3.13 (m, 1H), 2.93 - 2.74 (m, 2H), 2.70-2.65 (m, 2H), 2.63 - 2.55 (m, 2H), 2.05 - 1.94 (m, 3H), 1.89 - 1.81 (m, 2H), 1.80-1.70 (m, 2H), 1.68 - 1.58 (m, 4H), 1.52 - 1.35 (m, 2H).
실시예 25. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)부타노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 25)의 합성
화합물 25는 실시예 24에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=871.3,1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.30 - 8.25 (m, 2H), 8.19 - 8.09 (m, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.60 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.51 - 7.45 (m, 2H), 7.19 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 6.69 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 5.09 - 5.01 (m, 1H), 4.82 - 4.72 (m, 1H), 4.45 - 4.37 (m, 1H), 4.08 - 4.00 (m, 3H), 3.93 (s, 3H), 3.91 - 3.85 (m, 1H), 3.32 - 3.28 (m, 5H), 3.18 - 3.06 (m, 1H), 2.95 - 2.81 (m, 1H), 2.62 - 2.58 (m, 2H), 2.45 - 2.40 (m, 3H), 2.06 - 1.99 (m, 1H), 1.98 - 1.91 (m, 2H), 1.86 - 1.77 (m, 4H), 1.74 - 1.67 (m, 2H), 1.63 - 1.55 (m, 4H), 1.49 - 1.36 (m, 2H).
실시예 26. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)아미노)부타노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 26)의 합성
단계 1. tert-부틸 4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)아미노)부타노에이트 (3)의 합성
DMF (10 mL) 내 3-(4-아미노-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (1 g, 3.86 mmol) 및 tert-부틸 4-브로모부타노에이트 (1.03 g, 4.63 mmol) 용액에 DIPEA (997.01 mg, 7.71 mmol, 1.34 mL) 및 NaI (57.82 mg, 385.71 μmol)를 첨가 후 100°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 반응이 완료됨을 확인하고, 혼합물에 물 (100 mL)를 붓고 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하고, 합쳐진 유기상을 염수 (100 mL)로 세척하고, Na2SO4 로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO; 20 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~50% EtOAc/석유 에터 gradient @ 80 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 tert-부틸 4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)아미노)부타노에이트 (390 mg, 0.689 mmol, 17.88% 수율, 71% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=402.2
단계 2. 4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)아미노)부탄산 (4)의 합성
디옥산 (5 mL) 내 tert-부틸 4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)아미노)부타노에이트 (390 mg, 971.47 μmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 5 mL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 반응이 완료됨을 확인하고, 혼합물을 농축하여 황색 고체의 4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)아미노)부탄산 (350 mg, 0.917 mmol, 94.36% 수율, HCl)을 수득하였다. MS(M+H)+=346.0
단계 3. tert-부틸 (1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)아미노)부타노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (5)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)아미노)부탄산 (150 mg, 392.87 μmol HCl) 및 tert-부틸 N-(4-피페리딜) 카바메이트 (78.68 mg, 392.87 μmol) 용액에 HATU (224.07 mg, 589.30 μmol) 및 DIPEA (203.10 mg, 1.57 mmol, 273.72 μL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 반응이 완료됨을 확인하고, 혼합물에 FA를 첨가하여 pH=7로 조정하고, 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Unisil 3-100 C18 Ultra 150*50mm*3μm; 이동상: [물 (0.225%FA) - ACN]; B%: 26%-56%, 10분)로 정제하고 용출물을 농축하여 황색 오일의 tert-부틸 (1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)아미노)부타노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (130 mg, 229.15 μmol, 58.33% 수율, 93% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=528.2
단계 4. 4-((4-(4-아미노피페리딘-1-일)-4-옥소부틸)아미노)-2-(6-옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (6)의 합성
디옥산 (2 mL) 내 tert-부틸 (1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)아미노)부타노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (130 mg, 246.39 μmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 2 mL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 반응이 완료됨을 확인하고, 혼합물을 농축하여 황색 고체의 4-((4-(4-아미노피페리딘-1-일)-4-옥소부틸)아미노)-2-(6-옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (0.1 g, 233.92 μmol, 94.94% 수율)을 수득하였다. MS(M+H)+=428.2
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)아미노)부타노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 26)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((4-(4-아미노피페리딘-1-일)-4-옥소부틸)아미노)-2-(6-옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (60 mg, 129.32 μmol, HCl) 및 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (57.86 mg, 129.32 μmol) 용액에 HATU (73.76 mg, 193.98 μmol) 및 DIPEA (66.86 mg, 517.29 μmol, 90.10 μL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 반응이 완료됨을 확인하고, 혼합물에 물 (20 mL)를 붓고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (50 mL)로 세척 후 Na2SO4 로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25mm*5μm; 이동상: [물 (10mM NH4HCO3) - ACN]; B%: 32%-62%, 2 분)로 정제 및 prep-TLC (EtOAc/MeOH = 10/1)로 재정제하여 백색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)아미노)부타노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (15 mg, 15.58 μmol, 12.05% 수율, 89% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=857.5
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ = 11.00 (s, 1H), 8.30 - 8.23 (m, 2H), 8.13 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.49 - 7.45 (m, 2H), 7.29 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 6.95 - 6.90 (m, 1H), 6.80 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.68 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 5.11 (dd, J = 5.4, 13.4 Hz, 1H), 4.75 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.41 (d, J = 13.9 Hz, 1H), 4.27 - 4.19 (m, 1H), 4.16 - 4.10 (m, 1H), 4.04 (t, J = 14.3 Hz, 3H), 3.93 (s, 3H), 3.31 - 3.29 (m, 3H), 3.20 - 3.09 (m, 2H), 2.98 - 2.85 (m, 1H), 2.71 - 2.58 (m, 2H), 2.45 - 2.40 (m, 4H), 2.35 - 2.32 (m, 1H), 2.06 - 2.00 (m, 1H), 1.95 - 1.92 (m, 2H), 1.89 - 1.78 (m, 4H), 1.73 - 1.68 (m, 2H), 1.61 - 1.56 (m, 4H), 1.52 - 1.33 (m, 2H).
실시예 27. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)부타노일)피페리딘-4-일)-3-플루오로벤즈아미드 (화합물 27)의 합성
화합물 27은 실시예 26에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=859.0, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.21 - 10.93 (m, 1H), 9.09 (s, 1H), 8.26 - 8.19 (m, 2H), 8.00 (t, J = 8.3 Hz, 1H), 7.74 - 7.64 (m, 2H), 7.62 - 7.57 (m, 1H), 7.19 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.69 (br t, J = 6.1 Hz, 1H), 5.05 (dd, J = 5.3, 12.9 Hz, 1H), 4.73 - 4.63 (m, 1H), 4.38 (br d, J = 13.3 Hz, 1H), 4.01 (br t, J = 14.0 Hz, 3H), 3.89 (br d, J = 13.2 Hz, 1H), 3.32 (s, 5H), 3.11 (br t, J = 12.2 Hz, 1H), 2.95 - 2.82 (m, 1H), 2.68 (br d, J = 9.9 Hz, 1H), 2.62 - 2.54 (m, 2H), 2.43 (br t, J = 7.1 Hz, 2H), 2.07 - 1.97 (m, 1H), 1.91 - 1.75 (m, 6H), 1.72 - 1.61 (m, 2H), 1.60 - 1.32 (m, 6H).
실시예 28. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)부타노일)피페리딘-4-일)-3-(트리플루오로메톡시)벤즈아미드 (화합물 28)의 합성
단계 1. 메틸 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-(트리플루오로메톡시)벤조에이트 (3)의 합성
디옥산 (10 mL) 내 2-클로로-9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-5,7,8,9-테트라히드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (200 mg, 631.45 μmol) 및 메틸 4-아미노-3-(트리플루오로메톡시) 벤조에이트 (178.19 mg, 757.73 μmol) 용액에 Pd(OAc)2 (14.18 mg, 63.14 μmol), BINAP (39.32 mg, 63.14 μmol) 및 Cs2CO3 (617.21 mg, 1.89 mmol)을 °CN2 기체 하 20 °C에서 첨가하고, 생성된 혼합물을 °CN2 기체 하 100 °C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(65%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (10 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~15% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 백색 고체의 메틸 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-(트리플루오로메톡시)벤조에이트 (316 mg, 588.55 μmol, 93.21% 수율, 96% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=516.1
단계 2. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-(트리플루오로메톡시)벤조산 (4)의 합성
THF (6 mL) 및 MeOH (6 mL) 내 메틸 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-(트리플루오로메톡시)벤조에이트 (316 mg, 613.08 μmol) 용액에 NaOH (2 M, 3 mL)를 20 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(35%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (10 mL)로 희석하고, HCl (12 N)을 첨가하여 pH<3 으로 조정하였다. 현탁액을 진공 농축하였다. 조 생성물을 혼합용매 (MTBE/EtOAc (4 mL/4 mL))로 20 °C 에서 0.5시간 동안 분쇄하고 여과하였다. 여과물을 진공 농축하여 황백색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-(트리플루오로메톡시)벤조산 (256 mg, 500.35 μmol, 81.61% 수율, 98% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=502.2
단계 3. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)부타노일)피페리딘-4-일)-3-(트리플루오로메톡시)벤즈아미드 (화합물 28)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-(트리플루오로메톡시)벤조산 (80 mg, 159.55 μmol) 용액에 HATU (66.73 mg, 175.51 μmol) 및 DIPEA (41.24 mg, 319.10 μmol, 55.58 μL)를 첨가하고, 20 °C 에서 10분간 교반한 후 DMF (2 mL) 내 4-((4-(4-아미노피페리딘-1-일)-4-옥소부틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (77.48 mg, 175.51 μmol) 용액 및 DIPEA (41.24 mg, 319.10 μmol, 55.58 μL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(31%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (12 mL)로 희석하고 EtOAc (12 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25mm*5μm; 이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN]; B%: 50%-80%, 7분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)부타노일)피페리딘-4-일)-3-(트리플루오로메톡시)벤즈아미드 (14.2 mg, 14.43 μmol, 9.05% 수율, 94% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=925.0
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.22-10.95 (m, 1H), 9.01 (s, 1H), 8.34 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.15 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.89-7.81 (m, 2H), 7.60 (dd, J = 7.3, 8.4 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.69 (br t, J = 6.1 Hz, 1H), 5.05 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.73-4.62 (m, 1H), 4.39 (br d, J = 12.6 Hz, 1H), 4.08-3.98 (m, 3H), 3.89 (br d, J = 13.1 Hz, 1H), 3.34-3.30 (m, 5H), 3.16-3.05 (m, 1H), 2.93-2.83 (m, 1H), 2.73-2.65 (m, 1H), 2.62-2.53 (m, 2H), 2.43 (br t, J = 7.0 Hz, 2H), 2.06-1.97 (m, 1H), 1.89-1.77 (m, 6H), 1.72-1.63 (m, 2H), 1.60-1.45 (m, 5H), 1.42-1.32 (m, 1H).
실시예 29. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)부타노일)피페라진-1-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 29)의 합성
단계 1. 4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)부탄산 (3)의 합성
DMSO (7 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (1 g, 3.62 mmol, 1 eq) 및 4-아미노부탄산 (485.32 mg, 4.71 mmol) 용액에 DIEA (2.34 g, 18.10 mmol, 3.15 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 120°C에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 반응이 완료됨을 확인하였다. 혼합물에 CH3COOH를 첨가하여 pH<7로 조정했다. 생성된 혼합물을 역상 컬럼 (TFA condition) (330g Flash 컬럼, Welch Ultimate XB_C18 20-40μm; 120 A, 40% 10분;% 60분 @ 100mL/분)로 정제하여 (순도가 다른 2개 배치의 생성물) 황색 고체의 4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)부탄산 (480 mg, 601.11 μmol, 16.60% 수율, 45% 순도) 및 (410 mg, 353.71 μmol, 9.77% 수율, 31% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=360.1
단계 2. tert-부틸 4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미도)피페라진-1-카복실레이트 (6)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (150 mg, 322.29 μmol) 용액에 HATU (183.81 mg, 483.43 μmol) 및 DIEA (166.61 mg, 1.29 mmol, 224.55 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 15분 동안 교반 하였다. 혼합물에 tert-부틸 4-아미노피페라진-1-카복실레이트 (77.84 mg, 386.74 μmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 25°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 반응이 완료됨을 확인하였다. 혼합물을 H2O (30 mL)로 희석하고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (10 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (12 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 25~75% EtOAc/석유 에터 gradient @ 80 mL/분)로 정제하여 갈색 고체의 tert-부틸 4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미도)피페라진-1-카복실레이트 (160 mg, 246.66 μmol, 76.53% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=649.2
단계 3. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시-N-(피페라진-1-일)벤즈아미드 (7)의 합성
디옥산 (3 mL) 내 tert-부틸 4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미도)피페라진-1-카복실레이트 (160 mg, 246.66 μmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 5 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하여 백색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시-N-(피페라진-1-일)벤즈아미드 (180 mg, HCl 염)를 수득하였다. MS(M+H)+=549.2
단계 4. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)부타노일)피페라진-1-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 29)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)부탄산 (170 mg, 473.10 μmol) 용액에 HATU (269.83 mg, 709.65 μmol) 및 DIEA (305.72 mg, 2.37 mmol, 412.03 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 15분 동안 교반 하였다. 혼합물에 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시-N-(피페라진-1-일)벤즈아미드 (166.06 mg, 283.86 μmol, HCl 염)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 반응이 완료됨을 확인하였다. 반응 혼합물에 CH3COOH를 첨가하여 pH<7로 조정했다. 생성된 혼합물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex luna C18 150*40mm*15μm; 이동상: [물(FA)-ACN];B%: 38%-68%, 10분) 및 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25mm*5μm; 이동상: [물(NH4HCO3)-ACN];B%: 38%-68%, 10분)로 정제하였다. 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2 -일)아미노)-N-(4-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)부타노일)피페라진-1-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (16.3 mg, 17.95 μmol, 3.79% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=890.2
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.12 (s, 1H), 9.23 (s, 1H), 8.41 - 8.19 (m, 2H), 8.12 - 7.95 (m, 1H), 7.60 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.28 - 7.09 (m, 2H), 7.02 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.68 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 5.05 (dd, J = 5.3, 13.0 Hz, 1H), 4.90 - 4.72 (m, 1H), 4.08 (t, J = 13.8 Hz, 2H), 3.98 (s, 3H), 3.70 - 3.43 (m, 4H), 2.98 - 2.73 (m, 5H), 2.63-2.50 (m, 7H), 2.41 - 2.35 (m, 2H), 2.07 - 1.88 (m, 3H), 1.86 - 1.76 (m, 2H), 1.74 - 1.68 (m, 2H), 1.52-1.38 (m, 4H).
실시예 30. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)부타노일)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 30)의 합성
단계 1. 벤질 (E)-(1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)부트-2-엔오일)피페리딘-4-일)카바메이트 (3)의 합성
DMF (5 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-히드록시이소인돌린-1,3-디온 (200 mg, 729.32 μmol) 및 벤질 (E)-(1-(4-브로모부트-2-엔오일)피페리딘-4-일)카바메이트 (278.06 mg, 729.32 μmol) 용액에 NaHCO3 (367.61 mg, 4.38 mmol, 170.19 μL) 및 KI (121.07 mg, 729.32 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 70 °C 에서 10시간 동안 교반 하였다. LCMS로 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-히드록시이소인돌린-1,3-디온이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(47%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)로 희석하고 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하여 감압 농축하였다. 잔여물을 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에터/EtOAc=4/1 to 3/1)로 정제하여 백색 고체의 벤질 (E)-(1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)부트-2-엔오일)피페리딘-4-일)카바메이트 (200 mg, 344.60 μmol, 47.25% 수율, 99% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=575.1
단계 2. 4-(4-(4-아미노피페리딘-1-일)-4-옥소부톡시)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (4)의 합성
CF3CH2OH (6 mL) 내 벤질 (E)-(1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)부트-2-엔오일)피페리딘-4-일)카바메이트 (290 mg, 504.72 μmol) 용액에 Pd/C (10%, 50 mg)를 N2 기체 하에서 첨가하였다. 현탁액을 탈기하고 H2로 3차례 퍼징하였다. 혼합물을 25 °C H2 (15 Psi) 하에서 10시간 동안 교반 하였다. LCMS로 벤질 (E)-(1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)부트-2-엔오일)피페리딘-4-일)카바메이트가 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(88%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여과 케이크를 EtOAc (100 mL)로 세척하고, 여과물을 진공 농축하여 녹색 고체의 4-(4-(4-아미노피페리딘-1-일)-4-옥소부톡시)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (210 mg, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=443.3
단계 3. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)부타노일)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 30)의 합성
DMF (3 mL) 내 4-(4-(4-아미노피페리딘-1-일)-4-옥소부톡시)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (100 mg, crude) 및 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (105.19 mg, 226.01 μmol) 용액에 DIPEA (87.63 mg, 678.02 μmol, 118.10 μL) 및 EDCI (64.99 mg, 339.01 μmol), HOBt (45.81 mg, 339.01 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-(4-(4-아미노피페리딘-1-일)-4-옥소부톡시)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(38%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하여 감압 농축하였다. 잔여물을 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, MeOH/EtOAc=1/10 to 1/5) 및 prep-HPLC (neutral condition: 컬럼: Waters Xbridge 150x25mmx5μm; 이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN]; B%: 42%-72%, 8분)로 정제하고, 용출물을 동결 건조하여 백색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)부타노일)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (12.5 mg, 13.63 μmol, 6.03% 수율, 96.8% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=890.6
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.25-10.98 (m, 1H), 8.34-8.21 (m, 2H), 8.05 (s, 1H), 7.96 (dd, J = 3.2, 7.6 Hz, 1H), 7.83 (dd, J = 7.5, 8.3 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 5.09 (dd, J = 5.3, 12.9 Hz, 1H), 4.91-4.73 (m, 1H), 4.42-4.20 (m, 3H), 4.17-4.00 (m, 3H), 3.96-3.85 (m, 4H), 3.34 (s, 3H), 3.20-3.13 (m, 1H), 2.96-2.84 (m, 1H), 2.81-2.72 (m, 1H), 2.63-2.56 (m, 4H), 2.07-1.93 (m, 5H), 1.91-1.78 (m, 2H), 1.76-1.57 (m, 6H), 1.53-1.34 (m, 2H).
실시예 31. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)부타노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 31)의 합성
화합물 31은 실시예 26에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=872.0, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.16-10.96 (m, 1H), 8.32-8.24 (m, 2H), 8.14 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.87-7.78 (m, 1H), 7.59-7.41 (m, 4H), 5.09 (dd, J = 5.4, 12.9 Hz, 1H), 4.81-4.68(m, 1H), 4.48-4.39 (m, 1H), 4.27 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 4.12-4.00 (m, 3H), 3.97-3.92 (m, 4H), 3.32 (s, 3H), 3.20-3.07 (m, 1H), 2.94-2.82 (m, 1H), 2.75-2.65 (m, 1H), 2.62-2.54 (m, 4H), 2.06-1.80 (m, 7H), 1.75-1.67 (m, 2H), 1.66-1.55 (m, 4H), 1.52-1.36 (m, 2H).
실시예 32. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)옥시)부타노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 32)의 합성
화합물 32는 실시예 26에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=858.4, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ = 10.98 (s, 1H), 8.31 - 8.22 (m, 2H), 8.14 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.53 - 7.43 (m, 3H), 7.31 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.25 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.11 (dd, J = 5.1, 13.3 Hz, 1H), 4.77 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 4.40 - 4.37 (m, 2H), 4.27 - 4.21 (m, 1H), 4.16 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 4.05 (t, J = 14.1 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.32 - 3.31 (m, 3H), 3.12 (t, J = 11.9 Hz, 1H), 2.98 - 2.84 (m, 1H), 2.73 - 2.66 (m, 1H), 2.61 - 2.54 (m, 1H), 2.44 - 2.42 (m, 4H), 2.03 - 1.94 (m, 6H), 1.88 - 1.82 (m, 2H), 1.75 - 1.68 (m, 2H), 1.65 - 1.42 (m, 6H).
실시예 33. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)부타노일)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 33) 합성
단계 1. 메틸 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조에이트 (3)의 합성
디옥산 (15 mL) 내 2-클로로-7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-8,9-디히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6(7H)-온 (1 g, 3.44 mmol), 메틸 4-아미노-2-플루오로-5-메톡시벤조에이트 (1.03 g, 5.16 mmol) 및 TosOH (1.78 g, 10.32 mmol) 혼합물을 100°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 미량의 2-클로로-7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-8,9-디히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6(7H)-온이 남아있음 및 63%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물에 H2O (100 mL)를 붓고, 혼합물을 EtOAc (100 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 포화 Na2CO3 용액 (100 mL x 2)으로 세척 후 Na2SO4로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (40 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 10~80% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 조 생성물을 얻고, 조 생성물을 MTBE (15 mL)로 5분 동안 분쇄하고, 현탁액을 여과하여 여과 케이크를 MTBE (15 mL)로 세척하고, 여과 케이크를 모아서 건조하여 백색 고체의 메틸 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조에이트 (980 mg, 2.16 mmol, 62.83% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=454.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.35 (d, J = 13.9 Hz, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.36 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 4.98 - 4.83 (m, 1H), 4.15 - 4.01 (m, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.83 (s, 3H), 3.23 (s, 3H), 1.25 (d, J = 6.7 Hz, 6H).
단계 2. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (4)의 합성
THF (4 mL) 및 MeOH (4 mL) 내 메틸 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조에이트 (980 mg, 2.16 mmol) 혼합물에 NaOH (2 M in H2O, 4 mL)를 첨가하고, 혼합물을 25°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 98%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 진공 농축하여 대부분의 유기 용매를 제거하였다. 잔여물에 H2O (30 mL)를 붓고, 혼합물에 HCl (12 M)를 첨가하여 pH<3으로 조정하고, 현탁액을 여과 후 여과 케이크를 H2O (30 mL)로 세척하고, 여과 케이크를 모아서 건조하였다. 잔여물을 HCl 용액 (20 mL, 4 M)으로 희석 후 25°C에서 1시간 동안 교반하였다. 현탁액을 70°C에서 진공 농축하여 황백색 고체의 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (1 g, crude)을 수득하였고, 이를 바로 사용하였다. MS(M+H)+=440.0
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 9.37 (br s, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.10 (br d, J = 13.1 Hz, 1H), 7.41 (br d, J = 6.6 Hz, 1H), 4.98 - 4.91 (m, 1H), 4.24 (t, J = 12.4 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.33 (s, 3H), 1.28 (br d, J = 6.6 Hz, 6H).
단계 3. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)부타노일)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 33) 합성
DMF (2 mL) 내 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (200 mg, 455.18 μmol) 용액에 DIEA (235.31 mg, 1.82 mmol, 317.14 μL) 및 HATU (224.99 mg, 591.73 μmol)를 첨가하고, 혼합물을 25°C에서 15분 동안 교반한 후 혼합물에 4-((4-(4-아미노피페리딘-1-일)-4-옥소부틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (217.55 mg, 455.18 μmol, HCl)를 첨가하고 생성된 혼합물을 25°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산이 완전히 소모되었음 및 90%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 워크업 및 정제를 위해 다른 배치 (50 mg)와 반응 혼합물을 합쳤다. 혼합물에 CH3COOH를 첨가하여 pH<7로 조정하였다. 생성된 혼합물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25mm*5μm; 이동상: [물(NH4HCO3)-ACN];B%: 40%-70%, 9분) 및 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex luna C18 150*40mm*15μm; 이동상: [물(FA)-ACN];B%: 38%-68%, 10분)로 정제하고, 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)부타노일)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (196.1 mg, 222.72 μmol, 48.93% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=863.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.24 - 10.90 (m, 1H), 8.38 - 8.22 (m, 2H), 8.08 - 7.89 (m, 2H), 7.68 - 7.55 (m, 1H), 7.29 - 7.14 (m, 2H), 7.02 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.69 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 5.05 (dd, J = 5.3, 12.9 Hz, 1H), 4.95 - 4.80 (m, 1H), 4.32 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 4.13 - 3.97 (m, 3H), 3.91 (s, 3H), 3.89 - 3.77 (m, 1H), 3.33 - 3.31 (m, 5H), 3.13 (t, J = 11.8 Hz, 1H), 2.96 - 2.82 (m, 1H), 2.75 (t, J = 11.6 Hz, 1H), 2.63 - 2.53 (m, 2H), 2.42 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 2.07 - 1.97 (m, 1H), 1.91 - 1.72 (m, 4H), 1.49 - 1.33 (m, 2H), 1.25 (d, J = 6.7 Hz, 6H).
실시예 34. 4-((9-시클로프로필-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)부타노일)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 34)의 합성
화합물 34는 실시예 33에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=861.7, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.33 - 10.81 (m, 1H), 8.55 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.93 (dd, J = 3.5, 7.5 Hz, 1H), 7.59 (dd, J = 7.3, 8.4 Hz, 1H), 7.29 - 7.12 (m, 2H), 7.02 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.67 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 5.05 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.36 - 4.17 (m, 3H), 4.07 - 3.97 (m, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.84 (d, J = 14.2 Hz, 1H), 3.32 - 3.28 (m, 5H), 3.19 - 3.05 (m, 1H), 2.96 - 2.82 (m, 2H), 2.75 (t, J = 11.4 Hz, 1H), 2.64 - 2.53 (m, 2H), 2.41 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 2.07 - 1.96 (m, 1H), 1.92 - 1.69 (m, 4H), 1.53 - 1.29 (m, 2H), 0.92 - 0.78 (m, 2H), 0.77 - 0.63 (m, 2H).
실시예 35. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아미노)부타노일)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 35)의 합성
화합물 35는 실시예 24에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=889.6, 1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ = 11.06 (s, 1H), 8.33 - 8.22 (m, 2H), 8.05 (s, 1H), 8.00 - 7.94 (m, 1H), 7.58 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.24 - 7.16 (m, 2H), 6.97 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.90 - 6.83 (m, 1H), 5.10 - 4.97(m, 1H), 4.89 - 4.78 (m, 1H), 4.40 - 4.28 (m, 1H), 4.15 - 3.99 (m, 3H), 3.92 (s, 3H), 3.90 - 3.81 (m, 1H), 3.47 - 3.40 (m, 1H), 3.35 - 3.34 (m, 3H), 3.26 - 3.11 (m, 2H), 2.98 - 2.69 (m, 4H), 2.47 - 2.44 (m, 2H), 2.02 - 1.94 (m, 3H), 1.89 - 1.79 (m, 4H), 1.74 - 1.58 (m, 6H), 1.52 - 1.32 (m, 2H).
실시예 36. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)아미노)부타노일)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 36)의 합성
단계 1. 3-(5-니트로-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (2)의 합성
CH3CN (30 mL) 내 메틸 메틸 2-(브로모메틸)-4-니트로벤조에이트 (2.8 g, 10.22 mmol) 용액에 25°C에서 DIPEA (5.94 g, 45.93 mmol, 8 mL) 및 3-아미노피페리딘-2,6-디온; HCl염 (1.6 g, 9.72 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 N2 기체 하 90°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 34% 피크의 원하는 질량을 확인하였다. 혼합물에 H2O (20 mL)을 첨가하고 혼합물을 25°C에서 1시간 동안 교반하고 생성된 혼합물을 여과한 후 여과 케이크를 MTBE (30 mL x 2)로 세척하고 감압 농축하여 회색 고체의 3-(5-니트로-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (1.7 g, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=290.1
1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ = 11.06 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.40 - 8.32 (m, 1H), 7.98 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.26 - 5.10 (m, 1H), 4.67 - 4.43 (m, 2H), 2.99 - 2.87 (m, 1H), 2.68 - 2.57(m, 1H), 2.48 - 2.38 (m, 1H), 2.12 - 1.97 (m, 1H).
단계 2. 3-(5-아미노-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (3)의 합성
CF3CH2OH (60 mL) 내 3-(5-니트로-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온(1 g, 3.46 mmol) 용액에 Pd(OH)2/C (200 mg, 20% 순도) 및 Pd/C (200 mg, 10% 순도)를 첨가 후 H2 기체 (15 Psi) 하 20°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 감압 농축하여 황색 고체의 3-(5-아미노-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (500 mg, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=260.2
1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ = 10.93 (s, 1H), 7.86 - 7.72 (m, 1H), 7.43 - 7.37 (m, 2H), 6.74 - 6.52 (m, 2H), 5.07 - 4.90 (m, 1H), 4.30 - 4.08 (m, 2H), 2.96 - 2.82 (m, 1H), 2.64 - 2.53 (m, 1H), 2.38 - 2.26 (m, 1H), 1.98 - 1.89 (m, 1H).
단계 3. 메틸 4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)아미노)부타노에이트 (4)의 합성
MeOH (50 mL) 내 3-(5-아미노-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (350 mg, 1.35 mmol) 용액에 메틸 4-옥소부타노에이트 (160 mg, 1.38 mmol) 및 AcOH (81.07 mg, 1.35 mmol, 77.21 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 2시간 동안 교반 하였다. 이후 혼합물에 NaBH3CN (900 mg, 14.32 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 25°C에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물에 H2O (10 mL)를 첨가하고 농축하였다. 혼합물을 EtOAc (20 mL)로 희석 후 NaHCO3 (sat. 20 mL)를 첨가하여 pH = 9 로 조정하고, 혼합물을 EtOAc (30 mL x 3)로 추출 후 합쳐진 유기상을 염수 8 (40 mL x 2)으로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과한 후 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (Biotage; 10 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 30 ~ 100% EtOAc: 석유 에터 gradient, 50 mL/분)로 정제하여 밝은 황색 오일의 메틸 4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)아미노)부타노에이트 (480 mg, 1.34 mmol, 98.94% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=360.2
단계 4. 4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)아미노)부탄산 (5)의 합성
HCl (5 M, 14.59 mL) 내 메틸 4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)아미노)부타노에이트 (300 mg, 834.78 μmol) 혼합물을 N2 기체 하 25°C에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 감압 농축 후 동결 건조하여 밝은 황색 오일의 4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)아미노)부탄산 (280 mg, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=346.1
단계 5. tert-부틸 (1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)아미노)부타노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (6)의 합성
DMF (15 mL) 내 4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)아미노)부탄산 (240 mg, 694.95 μmol) 용액에 25°C에서 DIPEA (534.24 mg, 4.13 mmol, 720.00 μL), HOBt (180.00 mg, 1.33 mmol), EDCI (240.00 mg, 1.25 mmol) 및 tert-부틸 피페리딘-4-일카바메이트 (216.00 mg, 1.08 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 기체 하 25°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 68%의 원하는 질량의 피크를 확인하였고 출발물질의 피크가 없음을 확인하였다. 반응 혼합물에 H2O (20 mL)를 첨가하고, 혼합물을 EtOAc (40 mL x 2)로 추출하고, 합쳐진 유기상을 염수 (30 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과 후 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (Biotage; 10 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0 ~ 20% MeOH: EtOAc gradient, 50 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 tert-부틸 (1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)아미노)부타노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (100 mg, 189.53 μmol, 27.27% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=528.3
1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ = 10.92 (s, 1H), 7.39 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.93 - 6.80 (m, 1H), 6.70 - 6.56 (m, 2H), 6.41 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 5.06 - 4.96 (m, 1H), 4.30 - 4.20 (m, 2H), 4.19 - 4.10 (m, 1H), 3.85 - 3.75 (m, 1H), 3.53 - 3.43 (m, 1H), 3.11 - 3.05 (m, 2H), 2.93 - 2.85 (m, 1H), 2.73 - 2.59 (m, 2H), 2.43 - 2.39 (m, 2H), 1.98 - 1.91 (m, 1H), 1.80 - 1.68 (m, 4H), 1.39 (s, 9H), 1.38-1.32 (m, 2H), 1.29 - 1.18 (m, 2H)
단계 6. 3-(5-((4-(4-아미노피페리딘-1-일)-4-옥소부틸)아미노)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (7)의 합성
디옥산 (10 mL) 내 tert-부틸 (1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)아미노)부타노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (260 mg, 492.79 μmol) 혼합물에 20°C에서 HCl/디옥산 (4 M, 10 mL)를 첨가하고, 혼합물을 N2 기체 하 20°C에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 87%의 원하는 질량의 피크를 확인하였고 출발물질의 피크가 없음을 확인하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하여 밝은 황색 고체의 3-(5-((4-(4-아미노피페리딘-1-일)-4-옥소부틸)아미노)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (245 mg, crude, 2 HCl)을 수득하였다. MS(M+H)+=428.3
단계 7. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)아미노)부타노일)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 36)의 합성
DMF (5 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (220 mg, 472.69 μmol) 용액에 25°C에서 HATU (345.71 mg, 909.22 μmol), DIPEA (305.46 mg, 2.36 mmol, 411.67 μL) 및 3-(5-((4-(4-아미노피페리딘-1-일)-4-옥소부틸)아미노)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (245 mg, 489.59 μmol, 2HCl)을 첨가하였다. 혼합물을 N2 기체 하 25°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였고 출발물질의 피크가 없음을 확인하였다. 반응 혼합물에 H2O (20 mL)를 첨가하고, 혼합물을 EtOAc (40 mL x 2)로 추출 후 합쳐진 유기상을 염수 (30 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex luna C18 150*40mm*15μm; 이동상: [물 (HCl) - ACN]; B%: 30% - 60%, 11 분 ;컬럼 온도: 30 °C)로 정제 및 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge C18 150*50mm*10μm; 이동상: [물 (NH4HCO3) - ACN]; B%: 30% - 60%, 11 분; 컬럼 온도: 30 °C)로 재정제 후 동결 건조하여 백색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)아미노)부타노일)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (159.4 mg, 178.55 μmol, 37.77% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=875.6
1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ = 10.92 (s, 1H), 8.32 - 8.23 (m, 2H), 8.05 - 7.95 (m, 2H), 7.39 (d, m, 1H), 7.21 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 6.71 - 6.61 (m, 2H), 6.43 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 5.05 - 4.95 (m, 1H), 4.87 - 4.78 (m, 1H), 4.37 - 4.25 (m, 2H), 4.17 - 3.99 (m, 4H), 3.92 (s, 3H), 3.90 - 3.83 (m, 1H), 3.33 - 3.31 (m, 3H), 3.19 - 3.09 (m, 3H), 2.94 - 2.83 (m, 1H), 2.78 - 2.68 (m, 1H), 2.62 - 2.55 (m, 1H), 2.47 - 2.42 (m, 2H), 2.38 - 2.30 (m, 1H), 2.02 - 1.93 (m, 3H), 1.88 - 1.71 (m, 6H), 1.66 - 1.55 (m, 4H), 1.54 - 1.36 (m, 2H).
실시예 37. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)아세틸)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 37)의 합성
단계 1. 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-히드록시이소인돌린-1,3-디온 (2)의 합성
AcOH (400 mL) 내 4-히드록시이소벤조푸란-1,3-디온 (25 g, 152.33 mmol) 혼합물에 25°C에서 3-아미노피페리딘-2,6-디온 (27.58 g, 167.57 mmol, HCl) 및 AcONa (14.99 g, 182.80 mmol, 1.2 eq)를 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 120°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-히드록시이소벤조푸란-1,3-디온이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 여과하였다. 여과 케이크을 H2O (80 mL x 3) 및 MeOH (60 mL x 3)으로 세척하였다. 여과 케이크를 진공 건조하여 보라색 고체의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-히드록시이소인돌린-1,3-디온 (36 g, 131.28 mmol, 86.18% 수율, 100% 순도)을 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=275.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ = 11.18 (s, 1H), 11.09 (s, 1H), 7.65 (dd, J = 7.3, 8.4 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.25 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.07 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 2.96 - 2.79 (m, 1H), 2.63 - 2.50 (m, 2H), 2.08 - 1.96 (m, 1H).
단계 2. tert-부틸 (1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (3)의 합성
DMF (10 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-히드록시이소인돌린-1,3-디온 (500 mg, 1.82 mmol) 용액에 25°C에서 K2CO3 (377.99 mg, 2.73 mmol) 및 tert-부틸 (1-(2-클로로아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (504.61 mg, 1.82 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-히드록시이소인돌린-1,3-디온이 완전히 소모됨을 확인하였고, 원하는 질량의 피크(41%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드로 여과하였다. 여과물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex luna C18 150x40mmx15μm; 이동상: [물 (TFA) -ACN];B%: 22%-52%, 11분)로 정제 및 동결 건조하여 백색 고체의 tert-부틸 (1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (0.5 g, 874.59 μmol, 47.97% 수율, 90% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=515.2
단계 3. 4-(2-(4-아미노피페리딘-1-일)-2-옥소에톡시)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (4)의 합성
디옥산 (2 mL) 내 tert-부틸 (1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (0.5 g, 971.77 μmol) 용액에 25°C에서 HCl/디옥산 (4 M, 10 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25°C에서 0.5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고, 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물 용액을 감압 농축하여 백색 고체의 4-(2-(4-아미노피페리딘-1-일)-2-옥소에톡시)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (0.4 g, crude, HCl)을 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=415.0
단계 4. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)아세틸)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 37)의 합성
DMF (1 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (70 mg, 150.40 μmol) 용액에 HATU (85.78 mg, 225.60 μmol) 및 DIPEA (58.31 mg, 451.20 μmol, 78.59 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 10분 동안 교반 하였다. 혼합물에 4-(2-(4-아미노피페리딘-1-일)-2-옥소에톡시)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (67.81 mg, 150.40 μmol, HCl)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150x25mmx5μm; 이동상: [물 (NH4HCO3) -ACN];B%: 40%-70%, 분)로 정제 후 prep-TLC (디클로로메탄 : 메탄올 = 20:1; Rf = 0.3)로 재정제하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150x25 mmx 5μm; 이동상: [물 (NH4HCO3) -ACN];B%: 39%-69%, 9 분)로 정제 후 동결 건조하여 백색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)아세틸)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (46.6 mg, 48.66 μmol, 32.36% 수율, 90% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=862.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.36 - 10.82 (m, 1H), 8.35 - 8.21 (m, 2H), 8.12 - 7.96 (m, 2H), 7.77 (dd, J = 7.5, 8.4 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 5.32 - 5.15 (m, 2H), 5.10 (dd, J = 5.4, 13.0 Hz, 1H), 4.91 - 4.74 (m, 1H), 4.31 - 4.16 (m, 1H), 4.15 - 3.99 (m, 3H), 3.92 (s, 3H), 3.87 - 3.74 (m, 1H), 3.33 - 3.27 (m, 3H), 3.26 - 3.12 (m, 1H), 2.96 - 2.78 (m, 2H), 2.64 - 2.54 (m, 2H), 2.06 - 1.82 (m, 5H), 1.78 - 1.33 (m, 8H).
실시예 38. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)아세틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 38)의 합성
화합물 38은 실시예 23에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=844.2, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.10 (s, 1H), 8.33 - 8.24 (m, 2H), 8.21 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.83 - 7.73 (m, 1H), 7.54 - 7.42 (m, 3H), 7.33 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.33 - 5.15 (m, 2H), 5.10 (dd, J = 5.3, 12.9 Hz, 1H), 4.84 - 4.69 (m, 1H), 4.36 - 4.23 (m, 1H), 4.13 - 3.99 (m, 3H), 3.94 (s, 3H), 3.91 - 3.80 (m, 1H), 3.50 - 3.34 (m, 3H), 3.19 (t, J = 11.9 Hz, 1H), 2.95 - 2.83 (m, 1H), 2.83 - 2.73 (m, 1H), 2.63 - 2.55 (m, 2H), 2.07 - 2.00 (m, 1H), 1.99 - 1.81 (m, 4H), 1.78 - 1.67 (m, 2H), 1.66 - 1.53 (m, 5H), 1.52 - 1.39 (m, 1H).
실시예 39. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((3R)-1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)아세틸)피롤리딘-3-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 39)의 합성
화합물 39는 실시예 23에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=830.2, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.11 (s, 1H), 8.58 - 8.37 (m, 1H), 8.37 - 8.22 (m, 2H), 7.99 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.86 - 7.71 (m, 1H), 7.59 - 7.48 (m, 2H), 7.45 (dd, J = 2.8, 7.1 Hz, 1H), 7.38 (dd, J = 4.5, 8.6 Hz, 1H), 5.23 - 4.99 (m, 3H), 4.83 - 4.70 (m, 1H), 4.63 - 4.42 (m, 1H), 4.15 - 4.01 (m, 2H), 3.95 (s, 4H), 3.79 - 3.45 (m, 3H), 3.43 - 3.40 (m, 3H), 2.98 - 2.81 (m, 1H), 2.62 - 2.56 (m, 2H), 2.30 - 2.10 (m, 1H), 2.10 - 1.90 (m, 4H), 1.70-1.72 (m, 2H), 1.66 - 1.53 (m, 4H).
실시예 40. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((3S)-1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)옥시)아세틸)피롤리딘-3-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 40)의 합성
화합물 40은 실시예 23에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=830.2, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.10 (s, 1H), 8.52 - 8.36 (m, 1H), 8.34 - 8.20 (m, 2H), 7.99 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.77 (dt, J = 3.5, 7.9 Hz, 1H), 7.56 - 7.48 (m, 2H), 7.45 (dd, J = 2.8, 7.2 Hz, 1H), 7.38 (dd, J = 4.4, 8.6 Hz, 1H), 5.17 - 4.97 (m, 3H), 4.85-4.70 (m, 1H), 4.64 - 4.41 (m, 1H), 4.05 (t, J = 14.1 Hz, 2H), 3.99 - 3.82 (m, 4H), 3.76 - 3.51 (m, 2H), 3.48 - 3.39 (m, 1H), 3.37 (s, 3H), 2.96 - 2.83 (m, 1H), 2.64 - 2.53 (m, 2H), 2.29 - 2.10 (m, 1H), 2.08 - 1.90 (m, 4H), 1.84-1. 72 (m, 2H), 1.65 - 1.54 (m, 4H).
실시예 41. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)티오)아세틸)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 41)의 합성
화합물 41은 실시예 11 및 23에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=878.9, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ = 11.14 (br s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.25 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 8.08 - 8.00 (m, 2H), 7.88 - 7.74 (m, 2H), 7.64 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 5.13 (dd, J = 5.4, 12.7 Hz, 1H), 4.88 - 4.75 (m, 1H), 4.37 - 4.22 (m, 3H), 4.15 - 3.99 (m, 4H), 3.92 (s, 3H), 3.33 (br s, 3H), 3.29 - 3.21 (m, 1H), 2.96 - 2.77 (m, 2H), 2.65 - 2.52 (m, 2H), 2.10 - 1.81 (m, 5H), 1.75 - 1.55 (m, 7H), 1.49 - 1.33 (m, 1H).
실시예 42. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)티오)부타노일)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 42)의 합성
화합물 42는 실시예 11 및 23에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=906.4, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.09 (br s, 1H), 8.32 - 8.21 (m, 2H), 8.04 (s, 1H), 7.96 (dd, J = 3.2, 7.7 Hz, 1H), 7.90 - 7.84 (m, 1H), 7.83 - 7.76 (m, 1H), 7.63 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 5.11 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.88 - 4.75 (m, 1H), 4.32 (br d, J = 12.9 Hz, 1H), 4.14 - 3.96 (m, 3H), 3.95 - 3.80 (m, 4H), 3.33 (br s, 3H), 3.22 - 3.06 (m, 3H), 2.94 - 2.82 (m, 1H), 2.75 (br t, J = 11.3 Hz, 1H), 2.63 - 2.52 (m, 4H), 2.09 - 1.79 (m, 7H), 1.76 - 1.55 (m, 6H), 1.53 - 1.31 (m, 2H).
실시예 43. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)-4-옥소부타노일)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 43)의 합성
단계 1. 메틸 4-(4-((tert-부톡시카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-4-옥소부타노에이트 (2)의 합성
DCM (50 mL) 내 tert-부틸 N-(4-피페리딜) 카바메이트 (2 g, 9.99 mmol) 및 TEA(3.03 g, 29.96 mmol, 4.17 mL) 용액에 메틸 4-클로로-4-옥소-부타노에이트 (1.65 g, 10.98 mmol, 1.36 mL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 반응이 완료됨을 확인하였다. 혼합물을 물 (100 mL)에 붓고 DCM (50 mL x 3)으로 추출 후 합쳐진 유기상을 염수 (200 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (45 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~50% EtOAc/석유 에터 gradient @ 80 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 메틸 4-(4-((tert-부톡시카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-4-옥소부타노에이트 (2.7 g, 7.13 mmol, 71.38% 수율, 83% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=315.1
단계 2. 4-(4-((tert-부톡시카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-4-옥소부탄산 (3)의 합성
THF (10 mL) 및 MeOH (10 mL) 내 메틸 4-(4-((tert-부톡시카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-4-옥소부타노에이트 (2.5 g, 7.95 mmol) 용액에 H2O (10 mL) 내 NaOH (1.59 g, 39.76 mmol) 용액을 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 반응이 완료됨을 확인하였다. 유기 용매를 농축하고 잔여물을 1M HCl로 pH = 6으로 조정하고, 생성된 혼합물을 EtOAc (50 mL x 3)로 추출 후 합쳐진 유기상을 염수 (100 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4로 건조, 여과 및 농축하여황색 고체의 4-(4-((tert-부톡시카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-4-옥소부탄산 (1.6 g, 5.33 mmol, 66.99% 수율)을 수득하였다. MS(M+H)+=301.1
단계 3. tert-부틸 (1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)-4-옥소부타노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (4)의 합성
DMF (20 mL) 내 4-(4-((tert-부톡시카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-4-옥소부탄산 (1 g, 3.33 mmol) 및 4-아미노-2-(2,6-디옥소-3-피페리딜)이소인돌린-1,3-디온 (1.36 g, 4.99 mmol) 용액에 T3P (12.71 g, 19.98 mmol, 11.88 mL, 50% 순도) 및 Py (2.63 g, 33.29 mmol, 2.69 mL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 80°C에서 12시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터/EtOAc = 1/1)로 반응이 완료됨을 확인하였다. 혼합물에 물 (100 mL)를 붓고 EtOAc (50 mL x 3)로 추출 후 합쳐진 유기상을 염수 (100 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (10 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~50% EtOAc/석유 에터 gradient @ 50 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 tert-부틸 (1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)-4-옥소부타노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (0.7 g, 1.26 mmol, 37.84% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=556.2
단계 4. 4-(4-아미노피페리딘-1-일)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-4-옥소부탄아미드 (5)의 합성
디옥산 (5 mL) 내 tert-부틸 (1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)-4-옥소부타노일)피페리딘-4-일)카바메이트(0.7g, 1.26mmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 5 mL)를 첨가하고 혼합물을 25°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 반응이 완료됨을 확인하였고, 혼합물을 농축하여 황색 오일의 4-(4-아미노피페리딘-1-일)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-4-옥소부탄아미드 (0.7g, crude, HCl)를 수득하였다. MS(M+H)+=456.0
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)-4-옥소부타노일)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 43)의 합성
DMF (10 mL) 내 4-(4-아미노피페리딘-1-일)-N-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-4-옥소부탄아미드 (300 mg, 609.85 μmol HCl) 및 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (283.84 mg, 609.85 μmol) 용액에 HOBt (123.61 mg, 914.78 μmol), EDCI (175.36 mg, 914.78 μmol) 및 TEA (185.13 mg, 1.83 mmol, 254.65 μL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 25°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 반응이 완료됨을 확인하였고, 혼합물을 물 (20 mL)에 붓고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출 후 합쳐진 유기상을 염수 (50 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 잔여물을 prep-TLC (EtOAc/MeOH = 10/1)로 정제 및 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25mm*5μm; 이동상: [물 (NH4HCO3) - ACN]; B%: 43%-73%, 10 분)로 재정제하고 용출물을 동결 건조하여 백색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)-4-옥소부타노일)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (67.9 mg, 73.70 μmol, 12.08% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=903.0
1H NMR (DMSO-d 6) δ = 11.15 (br s, 1H), 9.76 (s, 1H), 8.51 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.34 - 8.22 (m, 2H), 8.07 - 7.97 (m, 2H), 7.89 - 7.78 (m, 1H), 7.61 (d, J =7 .3 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 5.16 (dd, J = 5.4, 12.9 Hz, 1H), 4.89 - 4.78 (m, 1H), 4.29 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 4.14 - 4.00 (m, 3H), 3.95 - 3.91 (m, 4H), 3.34 (s, 3H), 3.18 (t, J = 11.6 Hz, 1H), 2.97 - 2.86 (m, 1H), 2.82 - 2.54 (m, 8H), 2.11 - 1.89 (m, 4H), 1.82 - 1.61 (m, 6H), 1.53 - 1.33 (m, 2H).
실시예 44. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피롤리딘-3-일)아세틸)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 44)의 합성
단계 1. tert-부틸 3-(2-(4-(((벤질옥시)카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-2-옥소에틸)피롤리딘-1-카복실레이트 (2)의 합성
DMF (10 mL) 내 2-(1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-3-일)아세트산 (500 mg, 2.18 mmol) 및 벤질 피페리딘-4-일카바메이트 (510.95 mg, 2.18 mmol) 용액에 HATU (1.24 g, 3.27 mmol) 및 DIEA (845.57 mg, 6.54 mmol, 1.14 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 2시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터: EtOAc = 1:1)로 출발물질이 완전히 소모됨 및 새로운 하나의 스팟이 형성됨을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)로 희석하고 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (30 mL)로 세척 후 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하여 감압 농축하였다. 잔여물을 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에터/EtOAc= 2/1 to 1/1)로 정제하여 밝은 갈색 점성 물질의 tert-부틸 3-(2-(4-(((벤질옥시)카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-2-옥소에틸)피롤리딘-1-카복실레이트 (830 mg, 1.79 mmol, 82.00% 수율, 96% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=446.6
단계 2. 벤질 (1-(2-(피롤리딘-3-일)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (3)의 합성
DCM (10 mL) 내 tert-부틸 3-(2-(4-(((벤질옥시)카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-2-옥소에틸)피롤리딘-1-카복실레이트 (830 mg, 1.86 mmol) 및 HCl/디옥산 (4 M, 5mL) 혼합물을 25°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 하나의 주 피크가 검출됨을 확인하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하여 밝은 황색 고체의 벤질 (1-(2-(피롤리딘-3-일)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (800 mg, crude, HCl 염)를 수득하였다. MS(M+H)+=346.2
단계 3. 벤질 (1-(2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피롤리딘-3-일)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (5)의 합성
DMF (10 mL) 내 벤질(1-(2-(피롤리딘-3-일)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (300 mg, 868.47 μmol) 및 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (239.89 mg, 868.47 μmol) 용액에 KI (144.17 mg, 868.47 μmol) 및 DIEA (336.73 mg, 2.61 mmol, 453.82 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 80°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 ~66%의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온이 남아있음 및 ~27%의 원하는 질량이 검출됨을 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (50 mL)로 희석하고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (20 mL x 3)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하여 감압 농축하였다. 잔여물을 컬럼크로마토그래피 (SiO2, 석유 에터/EtOAc=1/0 to 0/1)로 정제하여 황색 고체의 벤질 (1-(2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피롤리딘-3-일)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (250 mg, 411.37 μmol, 47.37% 수율, 99% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=602.1
단계 4. 4-(3-(2-(4-아미노피페리딘-1-일)-2-옥소에틸)피롤리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (6)의 합성
CF3CH2OH (4 mL) 내 벤질 (1-(2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피롤리딘-3-일)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (100 mg, 166.21 μmol) 용액에 N2 기체 하 Pd/C (10% 순도, 20 mg)를 첨가하였다. 현탁액을 H2로 3차례 탈기 및 퍼지 하였다. 혼합물을 H2 (15 Psi)하 25°C에서 4시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 하나의 주 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 여과 후 여과 케이크를 CF3CH2OH (50 mL)로 세척하고, 여과물을 진공 농축하여 황색 고체의 4-(3-(2-(4-아미노피페리딘-1-일)-2-옥소에틸)피롤리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (80 mg, 155.72 μmol, 93.69% 수율, 91% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=468.1
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피롤리딘-3-일)아세틸)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 44)의 합성
DMF (5 mL) 내 4-(3-(2-(4-아미노피페리딘-1-일)-2-옥소에틸)피롤리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (80 mg, 171.12 μmol) 및 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (79.64 mg, 171.12 μmol) 용액에 HATU (97.60 mg, 256.68 μmol) 및 DIEA (66.35 mg, 513.35 μmol, 89.42 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-(3-(2-(4-아미노피페리딘-1-일)-2-옥소에틸)피롤리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온이 완전히 소모됨 및 ~72%의 원하는 질량이 검출됨을 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (50 mL)로 희석하고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하여 감압 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex luna C18 150 x 25mm x 10μm; 이동상: [물 (FA) - ACN]; B%: 47% - 77%, 10 분) 및 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150 x 25mm x 5μm; 이동상: [물 (NH4HCO3) - ACN]; B%: 44% - 77%, 10 분)로 정제하였다. 불순물이 섞인 생성물을 prep-TLC (SiO2, DCM: MeOH = 10:1) 및 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150 x 25mm x 5μm; 이동상: [물(NH4HCO3) - ACN]; B%: 45% - 75%, 10 분)로 재정제하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피롤리딘-3-일)아세틸)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (23.6 mg, 25.79 μmol, 15.07% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=915.5, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.04 (br s, 1H), 8.33 - 8.21 (m, 2H), 8.05 (s, 1H), 7.97-7.93 (m, 1H), 7.57 (dd, J = 7.1, 8.4 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 7.16 - 7.04 (m, 2H), 5.11-5.04 (m, 1H), 4.88 - 4.78 (m, 1H), 4.38-4.26 (m, 1H), 4.14 - 3.99 (m, 3H), 3.92 (s, 3H), 3.90-3.85 (m, 1H), 3.72 - 3.59 (m, 2H), 3.58 - 3.50 (m, 1H), 3.34 (s, 3H), 3.18-3.10 (m, 1H), 2.93 - 2.82 (m, 1H), 2.81 - 2.72 (m, 1H), 2.64 - 2.54 (m, 5H), 2.21-2.12 (m, 1H), 2.06 - 1.93 (m, 3H), 1.91 - 1.79 (m, 2H), 1.78 - 1.55 (m, 8H), 1.55 - 1.34 (m, 2H).
실시예 45. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피롤리딘-3-일)아세틸)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 45)의 합성
화합물 45는 실시예 44에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=915.5, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.07-11.02 (m, 1H), 8.31 - 8.21 (m, 2H), 8.06 (s, 1H), 8.02-7.96 (m, 1H), 7.64 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 1.9, 8.6 Hz, 1H), 5.05 (dd, J = 5.4, 12.9 Hz, 1H), 4.88 - 4.77 (m, 1H), 4.39 - 4.29 (m, 1H), 4.12 - 3.99 (m, 3H), 3.92 (s, 3H), 3.90-3.83 (m, 1H), 3.68 - 3.61 (m, 1H), 3.33 (s, 3H), 3.19 - 3.05 (m, 2H), 2.94 - 2.73 (m, 3H), 2.70 - 2.54 (m, 5H), 2.27 - 2.16 (m, 1H), 2.04 - 1.81 (m, 5H), 1.79 - 1.56 (m, 8H), 1.52 - 1.35 (m, 2H).
실시예 46. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피롤리딘-3-일)메틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 46)의 합성
화합물 46은 실시예 44에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=869.5, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.05 (s, 1H), 8.27-8.25 (m, 2H), 8.10 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.58-7.54 (m, 1H), 7.49-7.47 (m, 2H), 7.13-7.08 (m, 2H), 5.08-5.04 (m, 1H), 4.78-4.74 (m, 1H), 4.04 (br t, J = 14.0 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.82-3.74 (m, 1H), 3.65-3.52 (m, 4H), 3.43-3.40 (m, 1H), 3.28 (s, 3H), 2.93-2.83 (m, 3H), 2.59-2.54 (m, 3H), 2.34-2.32 (m, 2H), 2.07-1.91 (m, 6H), 1.79-1.58 (m, 10H).
실시예 47. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(((3S)-1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피롤리딘-3-일)메틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 47)의 합성
화합물 47은 실시예 44에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=869.3, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ = 11.05 (s, 1H), 8.31-8.22 (m, 2H), 8.15-8.05 (m, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.56 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.52-7.43 (m, 2H), 7.11 (br t, J = 8.4 Hz, 2H), 5.06 (dd, J = 5.5, 12.8 Hz, 1H), 4.83-4.70 (m, 1H), 4.04 (br t, J = 14.1 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.86-3.71 (m, 1H), 3.68-3.39 (m, 5H), 3.39-3.35 (m, 3H), 3.03-2.80 (m, 3H), 2.64-2.53 (m, 3H), 2.39-2.31 (m, 2H), 2.13-1.85 (m, 6H), 1.81-1.53 (m, 10H).
실시예 48. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(((3S)-1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피롤리딘-3-일)메틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 48)의 합성
화합물 48은 실시예 44에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=869.5, 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.49 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.28-8.15 (m, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.66 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.36-7.28 (m, 2H), 6.95 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 6.73-6.66 (m, 1H), 5.01-4.89 (m, 1H), 4.89-4.77 (m, 1H), 4.23-4.07 (m, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.94-3.84 (m, 2H), 3.71-3.59 (m, 1H), 3.56-3.43 (m, 2H), 3.41 (s, 3H), 3.28-3.09 (m, 2H), 2.94-2.68 (m, 5H), 2.44-2.24 (m, 3H), 2.20-2.03 (m, 6H), 1.96-1.68 (m, 10H).
실시예 49. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(((3R)-1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피롤리딘-3-일)메틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 49)의 합성
화합물 49는 실시예 44에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=869.7, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.06 (s, 1H), 8.33-8.23 (m, 2H), 8.10 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.65 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.54-7.43 (m, 2H), 6.89 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.80 (dd, J = 2.0, 8.6 Hz, 1H), 5.05 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.78 - 4.74 (m, 1H), 4.05 (t, J = 14.1 Hz, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.86-3.74 (m, 1H), 3.59-3.46 (m, 2H), 3.46-3.37 (m, 1H), 3.30 (s, 3H), 3.18 - 3.13 (m, 1H), 3.02-2.82 (m, 3H), 2.68-2.52 (m, 4H), 2.40 - 2.33 (m, 2H), 2.15-1.90 (m, 6H), 1.80-1.57 (m, 10H).
실시예 50. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1-(2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피롤리딘-3-일)에틸)피페리딘-4-일)메틸)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 50)의 합성
단계 1. 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-(히드록시메틸)피페리딘-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (3)의 합성
DMSO (20 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (2 g, 7.24 mmol) 용액에 TEA (3.66 g, 36.20 mmol, 5.04 mL) 및 피페리딘-4-일메탄올 (833.92 mg, 7.24 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 100 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 염수 (60 mL)로 희석하고, EtOAc (40 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (100 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하였다. 여과물을 감압 농축하여 황색 오일의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-(히드록시메틸)피페리딘-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (2.7 g, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=371.9
단계 2. (1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸 4-메틸벤젠설포네이트 (4)의 합성
DCM (80 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-(히드록시메틸)피페리딘-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (2.7 g, crude), TosCl (2.08 g, 10.91 mmol) 용액에 TEA (2.21 g, 21.81 mmol, 3.04 mL)를 첨가하였다. 용액을 25 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (25 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 (1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸 4-메틸벤젠설포네이트 (1.7 g, 3.01 mmol, 41.38% 수율, 93% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=525.9
단계 3. 벤질 ((1-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)피페리딘-4-일)메틸)카바메이트 (5A) 및 벤질 ((1-(2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피롤리딘-3-일)에틸)피페리딘-4-일)메틸)카바메이트 (5) 혼합물의 합성
DMF (4 mL) 내 (1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸 4-메틸벤젠설포네이트 (200 mg, 380.54 μmol) 용액에 벤질 (피페리딘-4-일메틸)카바메이트 (113.39 mg, 456.64 μmol), DIPEA (147.55 mg, 1.14 mmol, 198.85 μL)를 첨가하고, 혼합물을 60 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 염수 (10 mL)로 희석하고 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (20 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하였다. 여과물을 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (Biotage; 10 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 20~100% EtOAc/석유 에터 to 10% MeOH/ EtOAc gradient @ 40 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 벤질 ((1-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)피페리딘-4-일)메틸)카바메이트 (5A) 및 벤질 ((1-(2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피롤리딘-3-일)에틸)피페리딘-4-일)메틸)카바메이트 (160 mg, 265.92 μmol, 69.88% 수율, 100% 순도) 혼합물을 수득하였다. MS(M+H)+=602.1
단계 4. 4-(4-((4-(아미노메틸)피페리딘-1-일)메틸)피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (6A) 및 4-(3-(2-(4-(아미노메틸)피페리딘-1-일)에틸)피롤리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (6)의 합성
TFA (2 mL) 내 벤질 ((1-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)피페리딘-4-일)메틸)카바메이트 및 벤질 ((1-(2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피롤리딘-3-일)에틸)피페리딘-4-일)메틸)카바메이트 (160 mg, 265.92 μmol) 혼합물을 60 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하였다. 잔여물을 역상 HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi Polar-RP 100*25 mm*4 μm; 이동상:[물 (TFA)-ACN]; B%: 14%-34%, 7 분)로 정제하였다. 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-(4-((4-(아미노메틸)피페리딘-1-일)메틸)피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (20 mg, 29.51 μmol, 11.10% 수율, 69% 순도) 및 4-(3-(2-(4-(아미노메틸)피페리딘-1-일)에틸)피롤리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (70 mg, 146.72 μmol, 55.18% 수율, 98% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=468.0
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1-(2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피롤리딘-3-일)에틸)피페리딘-4-일)메틸)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 50)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (66.99 mg, 149.71 μmol) 용액에 HATU (85.39 mg, 224.57 μmol), DIPEA (58.05 mg, 449.14 μmol, 78.23 μL)를 첨가하고, 혼합물을 20 °C 에서 0.5시간 교반 하였다. 4-(3-(2-(4-(아미노메틸)피페리딘-1-일)에틸)피롤리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (70 mg, 149.71 μmol)을 첨가하고, 혼합물을 20 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 염수 (10 mL)로 희석하고 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (20 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하였다. 여과물을 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 prep-TLC (SiO2, DCM: MeOH = 10:1)로 정제하고, 역상 HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25 mm* 5 μm; 이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN]; B%: 40%-70%, 9 분)로 재정제하였다. 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1-(2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피롤리딘-3-일)에틸)피페리딘-4-일)메틸)-3-메톡시벤즈아미드 (50.2 mg, 54.29 μmol, 36.26% 수율, 97% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=897.0
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.05 (s, 1H), 8.39-8.34 (m, 1H), 8.28-8.23 (m, 2H), 7.96 (s, 1H), 7.58-7.46 (m, 3H), 7.13-7.06 (m, 2H), 5.11-5.02 (m, 1H), 4.82-4.70 (m, 1H), 4.04 (t, J = 13.9 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.68-3.55 (m, 2H), 3.52-3.42 (m, 1H), 3.31-3.27 (m, 5H), 3.18-3.11 (m, 2H), 2.95-2.80 (m, 3H), 2.62-2.54 (m, 2H), 2.33-2.29 (m, 2H), 2.25-2.18 (m, 1H), 2.13-2.06 (m, 1H), 2.04-1.92 (m, 3H), 1.87-1.77 (m, 2H), 1.74-1.68 (m, 2H), 1.67-1.62 (m, 3H), 1.61-1.54 (m, 6H), 1.23-1.12 (m, 2H).
실시예 51. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피롤리딘-3-일)피페라진-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 51)의 합성
단계 1. tert-부틸 4-(1-((벤질옥시)카보닐)피롤리딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (2)의 합성
DCE (10 mL) 내 벤질 3-옥소피롤리딘-1-카복실레이트 (1 g, 4.56 mmol) 용액에 HOAc (328.70 mg, 5.47 mmol, 313.05 μL) 및 tert-부틸 피페라진-1-카복실레이트 (934.50 mg, 5.02 mmol)를 첨가하였다. NaBH(OAc)3 (1.93 g, 9.12 mmol)를 0 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 25 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(~90%)를 확인하였다. 포화 소듐 바이카보네이트 (150 mL)를 0 °C 에서 천천히 첨가하였다. 혼합물을 DCM (50 mL x 3)으로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하여 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO; 20 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~20% 석유 에터: EtOAc/EtOH (v/v=5/1) gradient @ 60 mL/분)로 정제하여 밝은 황색 오일의 tert-부틸 4-(1-((벤질옥시)카보닐)피롤리딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (1.75 g, 4.43 mmol, 97.22% 수율, 98.7% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=390.3
단계 2. 벤질 3-(피페라진-1-일)피롤리딘-1-카복실레이트 (3)의 합성
디옥산 (5 mL) 내 tert-부틸 4-(1-((벤질옥시)카보닐)피롤리딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (1.75 g, 4.49 mmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 10 mL)을 25 °C 에서 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터: EtOAc=1:2)로 새로운 스팟 형성을 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하여 백색 고체의 벤질 3-(피페라진-1-일)피롤리딘-1-카복실레이트 (2 g, 3.89 mmol, 86.48% 수율, 63.3% 순도, HCl)를 수득하였다. MS(M+H)+=290.2
단계 3. 벤질 3-(4-니트로소피페라진-1-일)피롤리딘-1-카복실레이트 (4)의 합성
H2O (5 mL) 내 벤질 3-(피페라진-1-일)피롤리딘-1-카복실레이트 (2 g, 6.14 mmol, HCl) 용액에 H2O (5 mL) 및 HOAc (552.91 mg, 9.21 mmol, 526.58 μL) 내 NaNO2 (635.25 mg, 9.21 mmol) 용액을 0°C 에서 첨가하였다. 혼합물을 N2 하 °C25 °C에서 4시간 동안 교반 하였다. LCMS로 ~68%의 원하는 질량이 검출됨을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 포화 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 황색 오일의 벤질 3-(4-니트로소피페라진-1-일)피롤리딘-1-카복실레이트 (2 g, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+=319.2
단계 4. 벤질 3-(4-아미노피페라진-1-일)피롤리딘-1-카복실레이트 (5)의 합성
MeOH (10 mL) 내 벤질 3-(4-니트로소피페라진-1-일)피롤리딘-1-카복실레이트 (2 g, crude) 용액에 Zn (1.77 g, 27.07 mmol)을 0 °C 에서 첨가하였다. HOAc (754.49 mg, 12.56 mmol, 718.56 μL)를 0 °C 에서 천천히 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터: EtOAc = 1:2)로 새로운 스팟 형성을 확인하였다. 혼합물을 여과하여 불용성 고체를 제거하였다. 여과물을 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 역상 플래시 컬럼 (컬럼: 330g 플래시 컬럼 Welch Ultimate XB_C18 20-40 μm; 120 A; 이동상:[물 (NH3·H2O)-ACN]; B%: 0%-30%, 20 분)으로 정제하고 동결 건조하여 밝은 황색 오일의 벤질 3-(4-아미노피페라진-1-일)피롤리딘-1-카복실레이트 (0.46 g, 1.27 mmol, 20.18% 수율, 83.9% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=305.1
단계 5. 벤질 3-(4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)피페라진-1-일)피롤리딘-1-카복실레이트 (7)의 합성
DMF (5 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (293.99 mg, 657.06 μmol) 용액에 DIPEA (254.76 mg, 1.97 mmol, 343.34 μL) 및 HATU (499.67 mg, 1.31 mmol)를 첨가하였다. 30분 후 벤질 3-(4-아미노피페라진-1-일)피롤리딘-1-카복실레이트 (0.2 g, 657.06 μmol)를 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 ~45%의 원하는 질량이 검출됨을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 포화 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO; 20 g Sepa Flash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~70% 석유 에터: EtOAc/ 에탄올 (1:1) gradient @ 60 mL/분)로 정제하여 갈색 오일의 벤질 3-(4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)피페라진-1-일)피롤리딘-1-카복실레이트 (470 mg, 620.64 μmol, 94.46% 수율, 96.9% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=734.3
단계 6. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(4-(피롤리딘-3-일)피페라진-1-일)벤즈아미드 (8)의 합성
CF3CH2OH (10 mL) 내 Pd/C (0.1 g, 64.05 μmol, 10% 순도) 혼합물에 벤질 3-(4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)피페라진-1-일)피롤리딘-1-카복실레이트 (0.47 g, 640.50 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 H2°C (15 psi) 하 25 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 ~90%의 원하는 질량이 검출됨을 확인하였다. 혼합물을 여과하여 촉매를 제거하였다. 여과물을 감압 농축하여 황색 오일의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(4-(피롤리딘-3-일)피페라진-1-일)벤즈아미드 (320 mg, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+=600.3
단계 7. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피롤리딘-3-일)피페라진-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 51)의 합성
DMF (3 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (46.06 mg, 166.76 μmol) 용액에 DIPEA (43.10 mg, 333.51 μmol, 58.09 μL) 및 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(4-(피롤리딘-3-일)피페라진-1-일)벤즈아미드 (100 mg, 166.76 μmol)를 25 °C 에서 첨가하였다. 혼합물을 60 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 ~30%의 원하는 질량이 검출됨을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 포화 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex luna C18 150 x 25 mm x 10 μm; 이동상:[물(FA)-ACN]; B%: 14%-44%, 10분) 후 prep-HPLC(컬럼: Waters Xbridge 150 x 25 mm x 5 μm; 이동상:[물( NH4HCO3)-ACN]; B%: 38%-68%, 8 분)로 정제하고 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피롤리딘-3-일)피페라진-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (15 mg, 17.21 μmol, 10.32% 수율, 98.2% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=856.2
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.06 (s, 1H), 9.37 (s, 1H), 8.32-8.23 (m, 2H), 7.97 (s, 1H), 7.57 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.46-7.39 (m, 2H), 7.17-7.09 (m, 2H), 5.08 (dd, J = 5.3, 12.5 Hz, 1H), 4.82-4.72 (m, 1H), 4.04 (t, J = 14.1 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.71-3.51 (m, 4H), 3.32-3.31 (m, 3H), 3.01-2.83 (m, 6H), 2.67-2.56 (m, 6H), 2.25-2.16 (m, 1H), 2.04-1.91 (m, 3H), 1.85-1.69 (m, 3H), 1.62-1.58 (m, 4H).
실시예 52. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피롤리딘-3-일)피페라진-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 52)의 합성
단계 1. tert-부틸 4-(1-((벤질옥시)카보닐)피롤리딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (2)의 합성
MeOH (100 mL) 내 벤질 3-옥소피롤리딘-1-카복실레이트 (9 g, 41.05 mmol) 및 tert-부틸 피페라진-1-카복실레이트 (7.65 g, 41.05 mmol) 용액에 AcOH (2.47 g, 41.05 mmol, 2.35 mL)를 0 °C 에서 첨가하였다. NaBH3CN (7.74 g, 123.15 mmol)를 0 °C 에서 천천히 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 31% 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (80 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~80% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 백색 고체의 tert-부틸 4-(1-((벤질옥시)카보닐)피롤리딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (8.9 g, 22.85 mmol, 55.66% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=390.2
단계 2. 벤질 3-(피페라진-1-일)피롤리딘-1-카복실레이트 (3)의 합성
디옥산 (10 mL) 내 tert-부틸 4-(1-((벤질옥시)카보닐)피롤리딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (8.9 g, 22.85 mmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 40 mL)를 20 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하여 백색 고체의 벤질 3-(피페라진-1-일)피롤리딘-1-카복실레이트 (7.5 g, crude, HCl 염)를 수득하였다. MS(M+H)+=290.2
단계 3. 벤질 3-(4-니트로소피페라진-1-일)피롤리딘-1-카복실레이트 (4)의 합성
H2O (100 mL) 내 벤질 3-(피페라진-1-일)피롤리딘-1-카복실레이트 (7.5 g, 23.02 mmol, HCl 염) 용액에 NaNO2 (4.76 g, 69.05 mmol)를 0 °C 에서 첨가하고, AcOH (5.53 g, 92.07 mmol, 5.27 mL)를 0 °C 에서 천천히 한 방울씩 첨가 후 생성된 혼합물을 20 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(82%)를 확인하였다. 반응 혼합물에 포화 NaHCO3를 0 °C 에서 첨가하여 pH=10로 조정하고, 생성된 혼합물을 EtOAc (150 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고 농축하여 황색 오일의 벤질 3-(4-니트로소피페라진-1-일)피롤리딘-1-카복실레이트 (4.74 g, 14.89 mmol, 64.68% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=319.4
단계 4. 벤질 3-(4-아미노피페라진-1-일)피롤리딘-1-카복실레이트 (5)의 합성
THF (60 mL) 및 H2O (20 mL) 내 벤질 3-(4-니트로소피페라진-1-일)피롤리딘-1-카복실레이트 (4.7 g, 14.76 mmol) 용액에 NH4Cl (3.16 g, 59.05 mmol)를 0 °C 에서 첨가하고, Zn (3.86 g, 59.05 mmol)을 0 °C 에서 조금씩 첨가 후 생성된 혼합물을 20 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 THF (200 mL)로 희석하고 여과하였다. 여과물을 진공 농축하여 백색 고체의 벤질 3-(4-아미노피페라진-1-일)피롤리딘-1-카복실레이트 (9 g, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+=305.1
단계 5. 벤질 3-(4-((tert-부톡시카보닐)아미노)피페라진-1-일)피롤리딘-1-카복실레이트 (6)의 합성
THF (100 mL) 내 벤질 3-(4-아미노피페라진-1-일)피롤리딘-1-카복실레이트 (9 g, 29.57 mmol) 용액에 TEA (8.98 g, 88.70 mmol, 12.35 mL) 및 (Boc)2O (6.45 g, 29.57 mmol, 6.79 mL)를 20 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(79%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (200 mL)로 희석하고 EtOAc (200 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (50 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 to 0~10% DCM/MeOH gradient @ 100 mL/분)로 정제하고 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (50 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 재정제하여 무색 오일의 벤질 3-(4-((tert-부톡시카보닐)아미노)피페라진-1-일)피롤리딘-1-카복실레이트 (1.2 g, 2.82 mmol, 9.53% 수율, 95% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=405.2
단계 6. tert-부틸 (4-(피롤리딘-3-일)피페라진-1-일)카바메이트 (7)의 합성
CF3CH2OH (12 mL) 내 벤질 3-(4-((tert-부톡시카보닐)아미노)피페라진-1-일)피롤리딘-1-카복실레이트 (600 mg, 1.48 mmol) 용액에 Pd/C (0.2 g, 10% 순도)를 N2 기체 하에서 첨가하였다. 현탁액을 탈기하고 H2로 3차례 퍼징하였다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하 20 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 42%의 출발물질이 남아있음 및 원하는 질량의 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 40 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 CF3CH2OH (15 mL)로 희석하고 여과하였다. 여과물을 진공 농축하여 황색 오일의 tert-부틸 (4-(피롤리딘-3-일)피페라진-1-일)카바메이트 (404 mg, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+=271.1
단계 7. tert-부틸 (4-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피롤리딘-3-일)피페라진-1-일)카바메이트 (9)의 합성
DMSO (4 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (200 mg, 724.06 μmol) 용액에 DIPEA (280.74 mg, 2.17 mmol, 378.36 μL) 및 tert-부틸 (4-(피롤리딘-3-일)피페라진-1-일)카바메이트 (195.76 mg, 724.06 μmol)를 20 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 100 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(46%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (12 mL)로 희석하고 EtOAc (12 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 염수 (12 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (10 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 tert-부틸 (4-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피롤리딘-3-일)피페라진-1-일)카바메이트 (134 mg, 249.38 μmol, 34.44% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=527.3
단계 8. 4-(3-(4-아미노피페라진-1-일)피롤리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (10)의 합성
DCM (2 mL) 내 tert-부틸 (4-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피롤리딘-3-일)피페라진-1-일)카바메이트 (134 mg, 254.47 μmol) 용액에 TFA (145.08 mg, 1.27 mmol, 94.21 μL)를 20 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(90%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하여 황색 오일의 4-(3-(4-아미노피페라진-1-일)피롤리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (138 mg, crude, TFA)을 수득하였다. MS(M+H)+=427.3
단계 9. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피롤리딘-3-일)피페라진-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 52)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (80 mg, 189.84 μmol) 용액에 HATU (79.40 mg, 208.83 μmol) 및 DIPEA (49.07 mg, 379.69 μmol, 66.14 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 20 °C 에서 10분간 교반 후 DMF (2 mL) 및 DIPEA (98.14 mg, 759.38 μmol, 132.27 μL) 내 4-(3-(4-아미노피페라진-1-일)피롤리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (123.13 mg, 227.81 μmol, TFA) 용액을 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(70%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (12 mL)로 희석하고 EtOAc (12 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi Polar-RP 100*25 mm*4 μm;이동상:[물 (TFA)-ACN]; B%: 27%-47%, 7 분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피롤리딘-3-일)피페라진-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (62.3 mg, 61.38 μmol, 32.33% 수율, 93% 순도, TFA 염)를 수득하였다. MS(M+H)+=830.4
1H NMR (400 MHz, CD3CN) δ = 9.64 (br s, 1H), 8.97 (br d, J = 7.0 Hz, 1H), 8.31 (br s, 1H), 8.05 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.62-7.54 (m, 1H), 7.47-7.36 (m, 2H), 7.23 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.12-7.04 (m, 1H), 5.03-4.90 (m, 2H), 4.29-4.13 (m, 2H), 4.01 (br t, J = 12.2 Hz, 2H), 3.95-3.78 (m, 6H), 3.76-3.62 (m, 3H), 3.57-3.47 (m, 1H), 3.31 (s, 7H), 2.85-2.60 (m, 3H), 2.52-2.32 (m, 2H), 2.15-2.06 (m, 1H), 1.23 (d, J = 6.7 Hz, 6H).
실시예 53. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)피페리딘-4-일)메틸)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 53)의 합성
단계 1. tert-부틸 4-((4-((((벤질옥시)카보닐)아미노)메틸)피페리딘-1-일)메틸)피페리딘-1-카복실레이트 (3)의 합성
MeOH (10 mL) 내 tert-부틸 4-포르밀피페리딘-1-카복실레이트 (500 mg, 2.34 mmol) 용액에 벤질 (피페리딘-4-일메틸)카바메이트 (640.38 mg, 2.58 mmol), AcOH (14.08 mg, 234.44 μmol, 13.41 μL)를 첨가하고, 혼합물을 20 °C 에서 0.5시간 동안 교반한 후, NaBH3CN (220.99 mg, 3.52 mmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (20 mL)로 희석하고, EtOAc (3 Х 20 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (20 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (Biotage; 20 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 20~70% EtOAc/석유 에터 @ 40 mL/분)로 정제하여 무색 오일의 tert-부틸 4-((4-((((벤질옥시)카보닐)아미노)메틸)피페리딘-1-일)메틸)피페리딘-1-카복실레이트 (800 mg, 1.47 mmol, 62.80% 수율, 82% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=446.1
단계 2. 벤질 ((1-(피페리딘-4-일메틸)피페리딘-4-일)메틸)카바메이트 (4)의 합성
디옥산 (2 mL) 내 tert-부틸 4-((4-((((벤질옥시)카보닐)아미노)메틸)피페리딘-1-일)메틸)피페리딘-1-카복실레이트 (200 mg, 448.84 μmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 2 mL, 17.82 eq)을 첨가하고, 혼합물을 20 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하여 백색 고체의 벤질 ((1-(피페리딘-4-일메틸)피페리딘-4-일)메틸)카바메이트 (150 mg, crude, HCl 염)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=346.0
단계 3. 벤질 ((1-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)피페리딘-4-일)메틸)카바메이트 (6)의 합성
DMSO (2 mL) 내 벤질 ((1-(피페리딘-4-일메틸)피페리딘-4-일)메틸)카바메이트 (150 mg, 392.73 μmol, HCl 염) 및 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (130.18 mg, 471.28 μmol) 용액에 TEA (119.22 mg, 1.18 mmol, 163.99 μL)를 첨가하고, 혼합물을 100 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(45%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (10 mL)로 희석하고 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (20 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (Biotage; 20 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 20~100% EtOAc/석유 에터 to 10% MeOH/ EtOAc gradient @ 40 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 벤질 ((1-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)피페리딘-4-일)메틸)카바메이트 (200 mg, 309.13 μmol, 78.71% 수율, 93% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=602.4
단계 4. 4-(4-((4-(아미노메틸)피페리딘-1-일)메틸)피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (7)의 합성
TFA (1 mL) 내 벤질 ((1-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)피페리딘-4-일)메틸)카바메이트 (100 mg, 166.20 μmol) 혼합물을 60 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(78%)를 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하여 갈색 오일의 4-(4-((4-(아미노메틸)피페리딘-1-일)메틸)피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (90 mg, crude, TFA 염)을 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=468.2
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)피페리딘-4-일)메틸)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 53)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (69.24 mg, 154.75 μmol) 용액에 HATU (88.26 mg, 232.13 μmol), DIPEA (60.00 mg, 464.25 μmol, 80.86 μL)를 첨가하고, 혼합물을 20 °C 에서 0.5시간 동안 교반 하였다. 4-(4-((4-(아미노메틸)피페리딘-1-일)메틸)피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (90 mg, 154.75 μmol, TFA 염)을 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(47%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (5 mL)로 희석하고 EtOAc (5 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (10 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 prep-TLC (SiO2, DCM: MeOH = 10:1)로 정제하고 역상 HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25mm*5μm; 이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN]; B%: 46%-76%, 8 분)로 재정제하였다. 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)피페리딘-4-일)메틸)-3-메톡시벤즈아미드 (28.7 mg, 31.36 μmol, 20.26% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=897.4
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.09 (s, 1H), 8.39 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 8.29-8.24 (m, 2H), 7.97 (s, 1H), 7.70-7.64 (m, 1H), 7.53-7.47 (m, 2H), 7.32 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 5.12-5.04 (m, 1H), 4.81-4.71 (m, 1H), 4.04 (t, J = 14.1 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.72-3.63 (m, 2H), 3.35 (s, 3H), 3.16 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 2.95-2.79 (m, 5H), 2.63-2.53 (m, 2H), 2.18-2.12 (m, 2H), 2.06-1.90 (m, 3H), 1.89-1.75 (m, 4H), 1.74-1.50 (m, 10H), 1.37-1.11 (m, 4H).
실시예 54. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-3-일)메틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 54)의 합성
화합물 54는 실시예 50에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=883.0, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.09 (s, 1H), 8.32-8.24 (m, 2H), 8.06 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.70 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.53-7.45 (m, 2H), 7.38-7.30 (m, 2H), 5.16-5.06 (m, 1H), 4.83-4.72 (m, 1H), 4.05 (t, J = 14.0 Hz, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.83-3.70 (m, 2H), 3.68-3.59 (m, 1H), 3.33 (s, 3H), 3.32-3.29 (m, 1H), 3.06-2.97 (m, 1H), 2.94-2.83 (m, 2H), 2.82-2.74 (m, 1H), 2.66-2.56 (m, 2H), 2.27-2.15 (m, 2H), 2.08-1.89 (m, 6H), 1.82-1.69 (m, 6H), 1.67-1.52 (m, 7H), 1.18-1.04 (m, 1H).
실시예 55. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-3-일)에틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 55)의 합성
단계 1. 2-(피페리딘-3-일)에탄-1-올 (2)의 합성
THF (5 mL) 내 LiAlH4 (238.57 mg, 6.29 mmol) 혼합물에 THF (5 mL) 내 2-(피페리딘-3-일)아세트산 (0.3 g, 2.10 mmol) 용액을 0°C 에서 첨가하였다. 혼합물을 60 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크를 확인하였다. 혼합물을 포화 주석산 칼륨 나트륨 용액 (20 mL)으로 켄칭하였다. 혼합물을 25 °C 에서 10분간 교반하고 여과하였다. 여과물을 감압 농축하여 황색 오일의 2-(피페리딘-3-일)에탄-1-올 (0.3 g, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=130.1
단계 2. 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(3-(2-히드록시에틸)피페리딘-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (4)의 합성
DMSO (10 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (513.10 mg, 1.86 mmol) 용액에 TEA (704.88 mg, 6.97 mmol, 969.57 μL) 및 2-(피페리딘-3-일)에탄-1-올 (0.3 g, 2.32 mmo)을 25 °C 에서 첨가하였다. 혼합물을 80 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 80%의 원하는 질량이 검출됨을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고 EtOAc (50 mL x 4)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO; 40 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~40% 석유 에터 : EtOAc / 에탄올(v/v=5/1) gradient @ 60 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(3-(2-히드록시에틸)피페리딘-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (0.89 g, 2.30 mmol, 98.95% 수율, 99.5% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=386.2
단계 3. 2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-3-일)아세트알데히드 (5)의 합성
DCM (20 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(3-(2-히드록시에틸)피페리딘-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (0.8 g, 2.08 mmol) 용액에 DMP (1.76 g, 4.15 mmol, 1.29 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터: EtOAc=1:2)로 하나의 새로운 스팟 형성을 확인하였다. 혼합물을 여과하여 불용성 고체를 제거하였다. 여과물을 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO; 40 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~50% 석유 에터: EtOAc gradient @ 80 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-3-일)아세트알데히드 (0.47 g, 950.06 μmol, 45.77% 수율, 77.5% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=383.9
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 9.83 (s, 1H), 8.02-7.89 (m, 1H), 7.58 (dd, J = 7.2, 8.4 Hz, 1H), 7.38 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.22-7.17 (m, 1H), 4.98-4.94 (m, 1H), 3.71-3.57 (m, 2H), 3.05-2.69 (m, 5H), 2.56-2.38 (m, 3H), 2.18-2.10 (m, 1H), 1.97-1.80 (m, 3H), 1.70-1.63 (m, 1H).
단계 4. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-3-일)에틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 55)의 합성
DCE (5 mL) 내 2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-3-일)아세트알데히트(80 mg, 208.66 μmol) 용액에 NaBH(OAc)3 (132.67 mg, 625.98 μmol), 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(피페리딘-4-일)벤즈아미드 (124.02 mg, 219.09 μmol, HCl) 및 AcOH (12.53 mg, 208.66 μmol, 11.93 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 ~75%의 원하는 질량이 검출됨을 확인하였다. 혼합물을 포화 소듐 바이카보네이트 용액 (50 mL)으로 켄칭 후 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 포화 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi C18 150 x 25 mm x 10 μm; 이동상:[물 (FA)-ACN]; B%: 20%-50%,10 분) 후 prep-HPLC(컬럼: Waters Xbridge 150 x 25 mm x 5 μm; 이동상:[물( NH4HCO3)-ACN]; B%: 50%-80%, 8 분)로 정제하고 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-3-일)에틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (54.6 mg, 59.17 μmol, 28.36% 수율, 97.2% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=897.2
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.08 (s, 1H), 8.29-8.23 (m, 2H), 8.10-8.07 (m, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.72-7.65 (m, 1H), 7.50-7.44 (m, 2H), 7.37 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 5.09 (dd, J = 5.2, 12.7 Hz, 1H), 4.82-4.72 (m, 1H), 4.04 (t, J = 14.1 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.80-3.63 (m, 3H), 3.36-3.34 (m, 3H), 2.96-2.80 (m, 4H), 2.64-2.52 (m, 5H), 2.47-2.43 (m, 2H), 2.03-1.89 (m, 4H), 1.87-1.71 (m, 6H), 1.63-1.35 (m, 8H), 1.17-1.07 (m, 2H).
실시예 56. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피롤리딘-3-일)피페라진-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 56)의 합성
화합물 56은 실시예 51에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=856.2, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.06 (s, 1H), 9.36 (s, 1H), 8.30-8.23 (m, 2H), 7.97 (s, 1H), 7.65 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.45-7.40 (m, 2H), 6.97 (s, 1H), 6.85 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.06 (dd, J = 5.5, 12.6 Hz, 1H), 4.80-4.73 (m, 1H), 4.04 (t, J = 14.3 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.75-3.66 (m, 1H), 3.63-3.54 (m, 1H), 3.43-3.38 (m, 1H), 3.29-3.28 (m, 3H), 3.23-3.20 (m, 1H), 3.02-2.87 (m, 6H), 2.63-2.59 (m, 6H), 2.28-2.20 (m, 1H), 2.03-1.86 (m, 4H), 1.74-1.57 (m, 6H).
실시예 57. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-3-일)프로필)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 57)의 합성
단계 1. 3-(피페리딘-3-일)프로판-1-올 (2)의 합성
AcOH (10 mL) 및 EtOH (10 mL) 내 3-(피리딘-3-일)프로-2-핀-1-올 (0.5 g, 3.76 mmol) 용액에 Pd/C (2 g, 18.78 mmol, 10% 순도) 및 PtO2 (426.37 mg, 1.88 mmol, 100% 순도)를 25 °C 에서 첨가하였다. 혼합물을 H2 기체 (50 psi) 하 50 °C 에서 24시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크가 검출됨을 확인하였다. 혼합물을 여과하여 촉매를 제거하였다. 여과물을 감압 농축하여 황색 오일의 3-(피페리딘-3-일)프로판-1-올 (0.6 g, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=144.2
단계 2. 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(3-(3-히드록시프로필)피페리딘-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (4)의 합성
DMSO (10 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (0.9 g, 3.26 mmol) 용액에 TEA (989.11 mg, 9.77 mmol, 1.36 mL) 및 3-(피페리딘-3-일)프로판-1-올 (466.67 mg, 3.26 mmol)을 25 °C 에서 첨가하였다. 혼합물을 90 °C 에서 3시간 동안 교반 하였다. LCMS로 44%의 원하는 질량이 검출됨을 확인하였다. 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 포화 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO; 20 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~80% 석유 에터: EtOAc gradient @ 60 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(3-(3-히드록시프로필)피페리딘-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (0.8 g, 1.83 mmol, 56.24% 수율, 91.5% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=400.0
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.08 (s, 1H), 7.67 (dd, J = 7.3, 8.3 Hz, 1H), 7.32 (dd, J = 7.9, 11.2 Hz, 2H), 5.13-5.05 (m, 1H), 4.38-4.35 (m, 1H), 3.71-3.60 (m, 2H), 3.39 (q, J = 6.2 Hz, 2H), 2.94-2.76 (m, 2H), 2.63-2.54 (m, 2H), 2.08-1.98 (m, 1H), 1.85-1.82 (m, 1H), 1.79-1.59 (m, 3H), 1.54-1.39 (m, 2H), 1.28-1.17 (m, 2H), 1.09-0.99 (m, 1H).
단계 3. 3-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-3-일)프로필4-메틸벤젠설포네이트 (5)의 합성
DCM (5 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(3-(3-히드록시propyl)피페리딘-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (0.4 g, 1.00 mmol) 용액에 TsCl (286.37 mg, 1.50 mmol) 및 TEA (202.66 mg, 2.00 mmol, 278.76 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 ~50%의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(3-(3-히드록시프로필)피페리딘-1-일)이소인돌린-1,3-디온이 남아있음 및 ~28%의 원하는 질량이 검출됨을 확인하였다. TsCl (286.37 mg, 1.50 mmol), DMAP (24.47 mg, 200.28 μmol) 및 TEA (303.99 mg, 3.00 mmol, 418.15 μL)를 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 추가로 4시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터: EtOAc=1:2)로 하나의 새로운 스팟 형성을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고 DCM (50 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 포화 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO; 20 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~20% 석유 에터 : EtOAc/에탄올(v/v=5/1) gradient @ 80 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 3-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-3-일)프로필4-메틸벤젠설포네이트 (0.36 g, 617.10 μmol, 61.62% 수율, 94.9% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=554.1
단계 4. tert-부틸 (1-(3-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-3-일)프로필)피페리딘-4-일)카바메이트 (6)의 합성
DMF (5 mL) 내 3-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-3-일)프로필 4-메틸벤젠설포네이트 (310 mg, 559.95 μmol) 용액에 tert-부틸 피페리딘-4-일카바메이트 (134.57 mg, 671.93 μmol), DIPEA (144.74 mg, 1.12 mmol, 195.06 μL) 및 NaI (41.97 mg, 279.97 μmol)를 25 °C 에서 첨가하였다. 혼합물을 80 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. TLC (디클로로메탄: 메탄올=10:1)로 여러 개의 새로운 스팟 형성을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 포화 염수 (150 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO; 20 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~20% 석유 에터/디클로로메탄 : 메탄올 (v:v=2:1) gradient @ 80 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 tert-부틸 (1-(3-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-3-일)프로필)피페리딘-4-일)카바메이트 (0.2 g, 337.97 μmol, 60.36% 수율, 98.3% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=582.6
단계 5. 4-(3-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)프로필)피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (7)의 합성
디옥산 (5 mL) 내 tert-부틸 (1-(3-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-3-일)프로필)피페리딘-4-일)카바메이트 (240 mg, 412.58 μmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 10 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. TLC (디클로로메탄: 메탄올=10:1)로 하나의 새로운 스팟 형성을 확인하였다. 혼합물을 여과하였다. 여과 케이크를 감압 농축하여 황색 고체의 4-(3-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)프로필)피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (0.22 g, crude, HCl)을 수득하였다. MS(M+H)+=482.3
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ = 11.09 (s, 1H), 10.84-10.63 (m, 1H), 8.39-8.38 (m, 2H), 7.68 (dd, J = 7.3, 8.3 Hz, 1H), 7.34 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 5.16-5.07 (m, 1H), 3.71-3.58 (m, 2H), 3.57-3.54 (m, 1H), 3.35-3.21 (m, 1H), 3.10-2.79 (m, 6H), 2.62-2.52 (m, 4H), 2.19-1.57 (m, 12H), 1.30-1.19 (m, 2H).
단계 6. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-3-일)프로필)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 57)의 합성
DMF (3 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (80 mg, 178.80 μmol) 용액에 HATU (101.98 mg, 268.20 μmol) 및 DIPEA (69.32 mg, 536.39 μmol, 93.43 μL)를 첨가하였다. 30분 후 4-(3-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)프로필)피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (100.04 mg, crude, HCl)을 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 ~70%의 원하는 질량이 검출됨을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 포화 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex luna C18 150 x 40 mm x 15 μm; 이동상:[물(FA)-ACN]; B%: 23%-53%, 10분) 후 prep-HPLC(컬럼: Waters Xbridge 150 x 25 mm x 5 μm; 이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN]; B%: 54%-84%, 10 분)로 정제하고, 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-3-일)프로필)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (58.2 mg, 63.57 μmol, 35.55% 수율, 99.5% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=911.3
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.10 (br s, 1H), 8.29-8.24 (m, 2H), 8.10 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.67 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.52-7.46 (m, 2H), 7.39-7.30 (m, 2H), 5.10 (dd, J = 5.6, 12.7 Hz, 1H), 4.83-4.73 (m, 1H), 4.05 (t, J = 14.1 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.80-3.61 (m, 3H), 3.33-3.32 (m, 3H), 2.93-2.78 (m, 4H), 2.62-2.55 (m, 5H), 2.29-2.23 (m, 2H), 2.06-2.00 (m, 1H), 1.96-1.89 (m, 4H), 1.86-1.82 (m, 1H), 1.79-1.67 (m, 6H), 1.60-1.45 (m, 7H), 1.27-1.20 (m, 2H), 1.11-1.00 (m, 1H).
실시예 58. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(3-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)프로파노일)피페라진-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 58)의 합성
단계 1. tert-부틸 4-(4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)피페라진-1-카복실레이트 (8)의 합성
DMF (5 mL) 내 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (400 mg, 949.22 μmol) 용액에 DIPEA (368.04 mg, 2.85 mmol, 496.01 μL) 및 HATU (541.38 mg, 1.42 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 10분간 교반 하였다. tert-부틸 4-아미노피페라진-1-카복실레이트 (210.15 mg, 1.04 mmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 25 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(61%)를 확인하였다. 혼합물 용액을 물 (40 mL)에 붓고 EtOAc (20 mL x 4)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조하고 농축하였다. 조 생성물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex luna C18 150x40 mmx 15 μm;이동상:[물 (FA)-ACN]; B%: 35%-65%, 10 분)로 정제하고, 용출물을 동결 건조하여 백색 고체의 tert-부틸 4-(4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)피페라진-1-카복실레이트 (260 mg, 417.10 μmol, 43.94% 수율, 97% 순도)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=605.4
단계 2. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(피페라진-1-일)벤즈아미드 (9)의 합성
디옥산 (2 mL) 내 tert-부틸 4-(4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)피페라진-1-카복실레이트 (220 mg, 363.85 μmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 24.44 mL)을 25 °C 에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25 °C 에서 0.5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물 용액을 감압 농축하여 갈색 고체의 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(피페라진-1-일)벤즈아미드 (200 mg, crude, HCl 염)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=505.3
단계 3. 메틸 3-(피페리딘-4-일)프로파노에이트 (2)의 합성
디옥산 (2 mL) 내 tert-부틸 4-(3-메톡시-3-옥소프로필)피페리딘-1-카복실레이트 (1 g, 3.69 mmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 37.50 mL)을 25 °C 에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25 °C 에서 0.5시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터 : EtOAc = 3:1; Rf = 0)로 출발물질이 완전히 소모되었음을 확인하였다. 혼합물 용액을 감압 농축하여 백색 고체의 메틸 3-(피페리딘-4-일)프로파노에이트 (760 mg, crude, HCl 염)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=172.2
단계 4. 메틸 3-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)프로파노에이트 (3)의 합성
디옥산 (10 mL) 내 메틸 3-(피페리딘-4-일)프로파노에이트 (208.89 mg, crude, HCl 염), 3-(4-브로모-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (250 mg, 773.65 μmol) 및 Cs2CO3 (756.21 mg, 2.32 mmol) 용액에 Pd-PEPPSI (37.63 mg, 38.68 μmol)를 25 °C N2 기체 하에서 첨가하였다. 혼합물을 100 °C N2 기체 하에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물을 EtOAc (40 mL)로 희석하고 염수 (10 mL x 3)로 세척하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하여 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (12 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~60% EtOAc/석유 에터 gradient @ 60 mL/분)로 정제하여 백색 고체의 메틸 3-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)프로파노에이트 (0.2 g, crude)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=414.2
단계 5. 3-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)프로판산 (4)의 합성
톨루엔 (5 mL) 내 메틸 3-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)프로파노에이트 (0.2 g, 483.72 μmol) 및 트리부틸(트리부틸스타닐옥시)스타난 (1.17 g, 1.93 mmol, 999.13 μL) 혼합물을 110 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(11%)를 확인하였다. 혼합물을 KF (2.5M, 30 mL)에 붓고 EtOAc (20 mL x 5)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4으로 건조하고, 여과하고 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (12 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 60 mL/분; Eluent of 0~50% MeOH/EtOAc @ 60 mL/분)로 정제하고 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi Polar-RP 100x25 mmx4 μm;이동상:[물 (TFA)-ACN]; B%: 18%-38%, 7 분)로 재정제하고, 용출물을 동결 건조하여 백색 고체의 3-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)프로판산 (100 mg, crude)을 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=400.2
단계 6. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(3-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)프로파노일)피페라진-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 58)의 합성
DMF (2 mL) 내 3-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)프로판산 (80 mg, crude) 용액에 HATU (114.23 mg, 300.42 μmol) 및 DIPEA (77.65 mg, 600.84 μmol, 104.65 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 10분간 교반 하였다. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(피페라진-1-일)벤즈아미드 (86.52 mg, crude, HCl 염)를 첨가하고 생성된 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(58%)를 확인하였다. 혼합물을 EtOAc (30 mL)로 희석하고 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (4 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 60 mL/분; Eluent of 0~50% MeOH / EtOAc @ 60 mL/분) 이후 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150x25 mmx 5 μm; 이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN]; B%: 34%-64%, 8 분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 백색 고체의 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(3-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)프로파노일)피페라진-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (50.9 mg, 53.43 μmol, 26.68% 수율, 93% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=886.3
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.05-10.89 (m, 1H), 9.43 (s, 1H), 8.31 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.48-7.37 (m, 3H), 7.30 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 5.11 (dd, J = 5.1, 13.1 Hz, 1H), 4.87 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 4.49-4.37 (m, 1H), 4.34-4.23 (m, 1H), 4.03 (t, J = 13.4 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.62-3.52 (m, 4H), 3.42-3.37 (m, 2H), 3.32 (s, 3H), 2.98-2.81 (m, 5H), 2.76-2.65 (m, 2H), 2.63-2.56 (m, 1H), 2.48-2.35 (m, 3H), 2.05-1.93 (m, 1H), 1.80 (d, J = 11.6 Hz, 2H), 1.57-1.47 (m, 2H), 1.45-1.36 (m, 1H), 1.35-1.26 (m, 2H), 1.24 (d, J = 6.6 Hz, 6H).
실시예 59. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(3-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)피페리딘-4-일)프로파노일)피페라진-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 59)의 합성
화합물 59는 실시예 58에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+= 886.5, 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.48 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.12-7.99 (m, 2H), 7.79-7.67 (m, 2H), 7.41 (s, 1H), 7.38-7.27 (m, 1H), 7.08-6.94 (m, 2H), 6.88 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.19 (dd, J = 5.1, 13.2 Hz, 1H), 5.04-4.92 (m, 1H), 4.47-4.33 (m, 1H), 4.30-4.20 (m, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.93-3.78 (m, 6H), 3.71-3.61 (m, 2H), 3.41 (s, 3H), 3.06-2.98 (m, 3H), 2.93-2.77 (m, 4H), 2.48-2.26 (m, 3H), 2.25-2.14 (m, 1H), 1.83 (d, J = 12.5 Hz, 2H), 1.72-1.61 (m, 4H), 1.45-1.34 (m, 2H), 1.32 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
실시예 60. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로필)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 60)의 합성
단계 1. 4-(4-(3-클로로프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (2)의 합성
DMF (5 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (500 mg, 1.46 mmol), 1-브로모-3-클로로프로판 (252.93 mg, 1.61 mmol, 158.08 μL), DIEA (566.28 mg, 4.38 mmol, 763.18 μL) 및 NaI (21.89 mg, 146.05 μmol) 혼합물을 70°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물 용액을 감압 농축하여 갈색 오일의 4-(4-(3-클로로프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (611 mg, crude)을 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=419.1
단계 2. tert-부틸 (1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로필)피페리딘-4-일)카바메이트 (3)의 합성
DMF (5 mL) 내 4-(4-(3-클로로프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (600 mg, 1.43 mmol), tert-부틸 피페리딘-4-일카바메이트 (372.94 mg, 1.86 mmol), DIEA (555.38 mg, 4.30 mmol, 748.48 μL) 및 NaI (21.47 mg, 143.24 μmol) 혼합물을 70°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-(4-(3-클로로프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 피크 (51%)를 확인하였다. 혼합물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge C18 150x50 mmx 10μm; 이동상: [물 (NH4HCO3) -ACN];B%: 28%-58%, 11 분) 및 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge C18 150x50 mmx 10μm; 이동상: [물 (NH4HCO3) -ACN];B%: 28%-58%, 11 분)로 정제 후 동결 건조하여 황색 고체의 tert-부틸 (1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로필)피페리딘-4-일)카바메이트 (0.3 g, crude)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=583.3
단계 3. 4-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (4)의 합성
디옥산 (1 mL) 내 tert-부틸 (1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로필)피페리딘-4-일)카바메이트 (0.3 g, 514.85 μmol) 용액에 25°C에서 HCl/디옥산 (4 M, 27.27 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25°C에서 0.5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였다. 혼합물 용액을 감압 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi Polar-RP 100x25mmx4μm; 이동상: [물 (TFA) -ACN]; B%: 6%-26%, 7분)로 정제 후 동결 건조하여 황색 고체의 4-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (50 mg, 82.13 μmol, 21.31% 수율, 98% 순도, TFA)을 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=483.1
단계 4. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로필)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 60)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (45 mg, 100.57 μmol) 용액에 HATU (57.36 mg, 150.86 μmol) 및 DIPEA (38.99 mg, 301.72 μmol, 52.55 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 10분 동안 교반 하였다. 혼합물에 4-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (60.00 mg, 100.57 μmol, TFA)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 피크 (54 %)를 확인하였다. 혼합물을 물 (10 m)에 붓고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (10 mL x 3)로 세척하고. Na2SO4로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 prep-TLC (디클로로메탄 : 메탄올 = 8:1; Rf = 0.4)로 정제하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150x25 mmx 5μm; 이동상: [물 (NH4HCO3) -ACN];B%: 35%-68%, 8 분)로 정제 후 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로필)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (31.4 mg, 33.74 μmol, 33.55% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=912.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.09 (s, 1H), 8.30 - 8.23 (m, 2H), 8.10 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.75 - 7.65 (m, 1H), 7.54 - 7.44 (m, 2H), 7.35 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 5.09 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.76 (q, J = 8.1 Hz, 1H), 4.04 (t, J = 14.1 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.83 - 3.70 (m, 1H), 3.32 - 3.26 (m, 7H), 2.93 - 2.80 (m, 3H), 2.65 - 2.58 (m, 1H), 2.56 - 2.49 (m, 6H), 2.42 - 2.25 (m, 5H), 2.06 - 2.00 (m, 1H), 1.99 - 1.89 (m, 4H), 1.82 - 1.75 (m, 2H), 1.74 - 1.66 (m, 2H), 1.63 - 1.57 (m, 6H).
실시예 61. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 61)의 합성
화합물 61은 실시예 44에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=930.0, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 10.94 (s, 1H), 8.34 - 8.21 (m, 2H), 8.07 - 7.92 (m, 2H), 7.53 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.12 - 7.02 (m, 2H), 5.11 - 5.00 (m, 1H), 4.89 - 4.77 (m, 1H), 4.38 - 4.17 (m, 3H), 4.15 - 4.00 (m, 3H), 3.97 - 3.85 (m, 4H), 3.34 - 3.24 (m, 8H), 3.21 - 3.12 (m, 1H), 2.96 - 2.84 (m, 1H), 2.79 - 2.71 (m, 1H), 2.63 - 2.55 (m, 8H), 2.40 - 2.32 (m, 1H), 2.00 - 1.80 (m, 5H), 1.77 - 1.69 (m, 2H), 1.68 - 1.57 (m, 4H), 1.55 - 1.35 (m, 2H).
실시예 62. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 62)의 합성
화합물 62는 실시예 44에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=925.3, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.29 - 10.81 (m, 1H), 8.36 - 8.22 (m, 2H), 8.15 (br d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.67 (dd, J = 7.2, 8.3 Hz, 1H), 7.58 - 7.40 (m, 2H), 7.39 - 7.22 (m, 2H), 5.09 (dd, J = 5.5, 12.9 Hz, 1H), 4.76 (quin, J = 8.1 Hz, 1H), 4.48 - 4.33 (m, 1H), 4.14 - 4.00 (m, 3H), 3.93 (s, 4H), 3.80 - 3.60 (m, 2H), 3.43 - 3.32 (m, 3H), 3.13 (t, J = 12.4 Hz, 1H), 2.96 - 2.77 (m, 3H), 2.72 - 2.55 (m, 3H), 2.39 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.07 - 1.99 (m, 1H), 1.99 - 1.86 (m, 3H), 1.83 - 1.79 (m, 3H), 1.72 - 1.69 (m, 2H), 1.61 - 1.56 (m, 4H), 1.55 - 1.42 (m, 4H), 1.42 - 1.25 (m, 3H).
실시예 63. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-4-히드록시피페리딘-4-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 63)의 합성
단계 1. tert-부틸 4-(3-에톡시-3-옥소프로프-1-인-1-일)-4-하이드록시피페리딘-1-카복실레이트 (3)의 합성
THF (10 mL) 내 에틸 프로피올레이트 (1.70 g, 17.33 mmol, 1.70 mL) 용액에 -70°C에서 n-BuLi (2.5 M, 9.30 mL)를 천천히 첨가하고 혼합물을 -70°C에서 15분 동안 교반 하였다. 이후 -70°C에서 THF (10 mL) 내 tert-부틸 4-옥소피페리딘-1-카복실레이트 (1 g, 5.02 mmol) 용액을 천천히 첨가하고 혼합물을 -70°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 55%의 원하는 질량이 검출됨을 확인하였다. AcOH (1.17 g, 19.51 mmol, 1.12 mL)를 첨가하고 혼합물을 20°C로 승온하였다. 혼합물을 NaHCO3 (20 mL) 및 EtOAc (20 mL)로 희석하고, EtOAc (10 mL x 2)로 추출 후 합쳐진 유기상을 H2O (10 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 로 건조하여 여과하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (12 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 10~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 50 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 tert-부틸 4-(3-에톡시-3-옥소프로프-1-인-1-일)-4-하이드록시피페리딘-1-카복실레이트 (1.37 g, 4.15 mmol, 82.62% 수율, 90% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=298.3
단계 2. 3-(1-(tert-부톡시카보닐)-4-히드록시피페리딘-4-일)프로피올산 (4)의 합성
THF (12 mL), H2O (0.3 mL) 및 MeOH (0.3 mL) 내 tert-부틸 4-(3-에톡시-3-옥소프로프-1-인-1-일)-4-하이드록시피페리딘-1-카복실레이트 (1.17 g, 3.93 mmol) 용액에 LiOH. H2O (231 mg, 5.50 mmol)를 첨가하고 혼합물을 25°C에서 4시간 동안 교반 하였다. 워크업 후 LCMS로 83%의 원하는 질량이 검출됨을 확인하였다. 혼합물을 다른 배치 (0.2 g 스케일)과 합친 후 감압 농축하여 흑갈색 고체의 3-(1-(tert-부톡시카보닐)-4-히드록시피페리딘-4-일)프로피올산 (1.25 g, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=270.3
단계 3. tert-부틸 4-(3-(4-(((벤질옥시)카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-3-옥소프로프-1-인-1-일)-4-히드록시피페리딘-1-카복실레이트 (5)의 합성
DMF (20 mL) 내 3-(1-(tert-부톡시카보닐)-4-하이드록시피페리딘-4-일)프로피올산 (1.25 g, 4.54 mmol) 및 벤질 피페리딘-4-일카바메이트 (1.17 g, 5.00 mmol) 용액에 EDCI (1.31 g, 6.81 mmol), HOBt (1.23 g, 9.08 mmol) 및 DIPEA (1.76 g, 13.63 mmol, 2.37 mL) 용액을 첨가하고 혼합물을 25°C에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 63%의 원하는 질량이 검출됨을 확인하였다. 혼합물을 H2O (40 mL)로 희석하고 EtOAc (15 mL x 3)로 추출 후 합쳐진 유기상을 염수 (10 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하여 여과하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (12 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 10~40% EtOAc/석유 에터 gradient @ 50 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 tert-부틸 4-(3-(4-(((벤질옥시)카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-3-옥소프로프-1-인-1-일)-4-히드록시피페리딘-1-카복실레이트 (850 mg, 1.72 mmol, 37.77% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=486.2
단계 4. 벤질 (1-(3-(4-히드록시피페리딘-4-일)프로피올로일)피페리딘-4-일)카바메이트 (6)의 합성
DCM (6 mL) 내 tert-부틸 4-(3-(4-(((벤질옥시)카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-3-옥소프로프-1-인-1-일)-4-히드록시피페리딘-1-카복실레이트 (300 mg, 617.83μmol) 용액에 TFA (415.80 mg, 3.65 mmol, 270 μL)를 첨가하고 혼합물을 25°C에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 75%의 원하는 질량이 검출됨을 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하여 황색 오일의 벤질 (1-(3-(4-히드록시피페리딘-4-일)프로피올로일)피페리딘-4-일)카바메이트 (310 mg, crude, TFA)를 수득하였다. MS(M+H)+=386.0
단계 5. 벤질 (1-(3-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-4-히드록시피페리딘-4-일)프로피올로일)피페리딘-4-일)카바메이트 (8)의 합성
DMSO (15 mL) 내 벤질 (1-(3-(4-히드록시피페리딘-4-일)프로피올로일)피페리딘-4-일)카바메이트 (310 mg, 620.65 μmol, TFA) 및 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4 -플루오로이소인돌린-1,3-디온 (163 mg, 590.11 μmol) 용액에 TEA (378.04 mg, 3.74 mmol, 520 μL)를 첨가하고 혼합물을 100°C에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 92%의 원하는 질량이 검출됨을 확인하였다. 혼합물을 여과 후 여과 케이크를 EtOAc (30 mL) 및 H2O (20 mL)로 세척하였다. 여과물을 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하고, 합쳐진 유기상을 염수 (20 mL x 3)로 세척하고 Na2SO4로 건조하여 여과하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (5 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 20~98% EtOAc/석유 에터 gradient @ 50 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 벤질 (1-(3-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-4-히드록시피페리딘-4-일)프로피올로일)피페리딘-4-일)카바메이트 (0.3 g, 453.50 μmol, 73.07% 수율, 97% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=642.0
단계 6. 4-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)-4-히드록시피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (9)의 합성
CF3CH2OH (10 mL) 내 벤질 (1-(3-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-4-히드록시피페리딘-4-일)프로피올로일)피페리딘-4- 일)카바메이트 (0.3 g, 467.53 μmol) 용액에 Pd/C (50 mg, 10% 순도)를 첨가하고 혼합물을 H2 (15 Psi) 하 25°C에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 46%의 원하는 질량이 검출됨을 확인하였다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하 50°C에서 6시간 동안 교반 하였다. LCMS로 80%의 원하는 질량이 검출됨을 확인하였다. 혼합물을 THF (10 mL)로 희석 후 여과하였다. 여과 케이크를 THF (10 mL) 및 CF3CH2OH (10 mL)로 세척하였다. 여과물을을 감압 농축하여 황색 고체의 4-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)-4-히드록시피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (240 mg, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=512.0
단계 7. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-4-히드록시피페리딘-4-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 63)의 합성
DMF (1.5 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (70 mg, 156.45 μmol) 및 HATU (89.23 mg, 234.67 μmol) 용액에 DIPEA (60.66 mg, 469.34 μmol, 81.75 μL)를 첨가하고 혼합물을 20°C에서 15분 동안 교반 하였다. 이후 DMF (1 mL) 내 4-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)-4-히드록시피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (96.04 mg, 187.74 μmol) 용액을 첨가하고 혼합물을 20°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 79%의 원하는 질량이 검출됨을 확인하였다. 혼합물을 H2O (10 mL)로 희석하고, EtOAc (10 mL x 3)로 추출 후 합쳐진 유기상을 염수 (10 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하여 여과하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25 mm* 5μm; 이동상: [물 (NH4HCO3) -ACN]; B%: 37%-67%, 9분)로 정제 후 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-4-히드록시피페리딘-4-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (44 mg, 44.42 μmol, 28.39% 수율, 95% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=941.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.08 (s, 1H), 8.30 - 8.25 (m, 2H), 8.18 - 8.13 (m, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.69 - 7.65 (m, 1H), 7.51 - 7.47 (m, 2H), 7.36 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 5.11 - 5.05 (m, 1H), 4.82 - 4.71 (m, 1H), 4.45 - 4.36 (m, 2H), 4.09 - 4.00 (m, 3H), 3.97 - 3.90 (m, 4H), 3.48 - 3.39 (m, 2H), 3.32 (s, 3H), 3.26 - 3.09 (m, 3H), 2.93 - 2.82 (m, 1H), 2.72 - 2.63 (m, 1H), 2.62 - 2.53 (m, 2H), 2.47 - 2.42 (m, 2H), 2.06 - 1.79 (m, 5H), 1.74 - 1.54 (m, 12H), 1.52 - 1.33 (m, 2H)
실시예 64. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)부타노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 64)의 합성
화합물 64는 실시예 60에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=940.1, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.08 (s, 1H), 8.31 - 8.23 (m, 2H), 8.15 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.69 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.51 - 7.46 (m, 2H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 5.09 (dd, J = 5.3, 12.8 Hz, 1H), 4.82 - 4.71 (m, 1H), 4.40 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 4.04 (t, J = 14.0 Hz, 3H), 3.93 (s, 4H), 3.34 - 3.30 (m, 7H), 3.12 (t, J = 11.9 Hz, 1H), 2.93 - 2.81 (m, 1H), 2.71 - 2.61 (m, 2H), 2.57 - 2.52 (m, 4H), 2.41 - 2.30 (m, 4H), 2.07 - 1.77 (m, 6H), 1.76 - 1.67 (m, 4H), 1.65 - 1.54 (m, 4H), 1.50 - 1.33 (m, 2H).
실시예 65. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(5-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)펜타노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 65)의 합성
화합물 65는 실시예 60에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=954.1, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.08 (br s, 1H), 8.29 - 8.25 (m, 2H), 8.17 - 8.15 (m, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.70 - 7.67 (m, 1H), 7.50-7.46 (m, 2H), 7.36 - 7.31 (m, 2H), 5.11 - 5.07 (m, 1H), 4.81-4.71 (m, 1H), 4.45 - 4.36 (m, 1H), 4.09 - 3.98 (m, 3H), 3.93 (s, 3H), 3.32 (s, 3H), 3.31-3.28 (m, 4H), 3.15 - 3.05 (m, 1H), 2.92 - 2.81 (m, 1H), 2.72 - 2.59 (m, 2H), 2.55 - 2.51 (m, 4H), 2.37 - 2.33 (m, 4H), 2.06 - 1.98 (m, 1H), 1.97-1.84 (m, 3H), 1.81-1.80 (m, 1H), 176 -1.32 (m, 13H).
실시예 66. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 66)의 합성
화합물 66은 실시예 60에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=900.4, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.25 - 10.90 (m, 1H), 8.31 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.15 (br d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.70 (dd, J = 7.4, 8.3 Hz, 1H), 7.56 - 7.46 (m, 2H), 7.41 - 7.30 (m, 2H), 5.09 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.88 (td, J = 6.6, 13.4 Hz, 1H), 4.39 (br d, J = 12.4 Hz, 1H), 4.12 - 3.95 (m, 4H), 3.93 (s, 3H), 3.30 (br s, 6H), 3.20 - 3.07 (m, 1H), 2.93 - 2.82 (m, 1H), 2.80 - 2.54 (m, 12H), 2.11 - 1.97 (m, 1H), 1.94 - 1.76 (m, 2H), 1.59 - 1.33 (m, 2H), 1.24 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
실시예 67. 4-((9-시클로프로필-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 67)의 합성
단계 1. N-벤질시클로프로판아민 (3)의 합성
ACN (100 mL) 내 (클로로메틸)벤젠 (10 g, 79.00 mmol, 9.09 mL) 및 사이클로프로판아민 (11.28 g, 197.50 mmol, 13.68 mL) 용액에 K2CO3 (16.38 g, 118.50 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 80°C에서 4시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터 : EtOAc = 10 : 1)로 (클로로메틸)벤젠이 완전히 소모됨 및 높은 극성의 2개의 새로운 스팟이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 여과 후 여과 케이크를 ACN (100 mL)로 세척하고, 여과물을 진공 농축하였다. 잔여물을 톨루엔 (30 mL)로 희석하고 대부분의 사이클로프로판아민을 제거하기 위해 진공 농축하여 황색 오일의 N-벤질시클로프로판아민 (11.35 g)을 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=148.2
단계 2. N-((1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸-1-일)메틸)-N-벤질시클로프로판아민 (5)의 합성
EtOH (100 mL) 내 N-벤질시클로프로판아민 (11.35 g, 77.10 mmol) 및 (1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸-1-일)메탄올 (11.50 g, 77.10 mmol) 혼합물을 25°C에서 16시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터 : EtOAc = 3:1)에서 N-벤질시클로프로판아민이 완전히 소모됨 및 낮은 극성의 새로운 하나의 주 스팟이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하여 대부분의 용매를 제거하였다. 잔여물을 H2O (100 mL) 및 EtOAc (100 mL)로 희석하여 유기상을 분리하고, 수층을 EtOAc (100 mL x 1)로 추출 후 합쳐진 유기상을 Na2SO4 로 건조하고, 여과하고 진공 농축하여 밝은 황색 오일의 N-((1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸-1-일)메틸)-N-벤질시클로프로판아민 (20.9 g, crude)을 수득하였고, 이를 바로 사용하였다. MS(M+H)+=279.4
단계 3. 에틸 3-(벤질(시클로프로필)아미노)-2,2-디플루오로프로파노에이트 (7)의 합성
THF (100 mL) 내 Zn (12.27 g, 187.71 mmol) 현탁액에 0°C N2 하 TMSCl (20.39 g, 187.71 mmol, 23.82 mL)를 한 방울씩 첨가하였다. 반응 온도를 5°C 아래로 유지하였다. 20 분동안 교반 후, 0°C N2 하 에틸 2-브로모-2,2-디플루오로아세테이트(30.48 g, 150.17 mmol, 19.29 mL)를 천천히 첨가하였다. 반응 온도를 30°C 아래로 유지하였다. 혼합물을 20분 동안 교반 후 0°C로 온도 하강했다. THF (100 mL) 내 N-((1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸-1-일)메틸)-N-벤질시클로프로판아민 (20.9 g, 75.09 mmol) 용액을 0°C에서 첨가했다. 반응 온도를 10°C 아래로 유지하였다. 20분 후 현탁액을 15°C로 온도 상승 후 5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 시약 1이 완전히 소모됨 및 55%의 원하는 질량이 검출됨을 확인하였다. 혼합물을 여과 후 여과 케이크를 EtOAc (200 mL) 및 THF (200 mL)로 세척하고, 여과물을 진공 농축하였다. 잔여물을 여과 후 여과 케이크를 용매(200 mL, 석유 에터/EtOAc = 6/1)로 세척하고, 여과물을 진공 농축하여 밝은 황색 오일의 에틸 3-(벤질(시클로프로필)아미노)-2,2-디플루오로프로파노에이트 (54.5 g, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+=284.1
단계 4. 에틸 3-(시클로프로필아미노)-2,2-디플루오로프로파노에이트 (8)의 합성
EtOH (200 mL) 내 에틸 3-(벤질(시클로프로필)아미노)-2,2-디플루오로프로파노에이트 (54.5 g, 192.37 mmol) 및 HCl (12 M, 32.06 mL) 용액에 N2 기체 하 Pd(OH)2/C (10 g, 10% 순도)를 첨가하고, 현탁액을 H2 (15 psi) 하 25°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 48%의 출발물질이 남아있음을 확인하고, 혼합물을 H2 (15 psi) 하 25°C에서 24시간 동안 추가 교반하고, LCMS로 미량의 출발물질이 남아있음 및 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 여과 후 여과 케이크를 EtOH (500 mL)로 세척 후 여과물을 진공 농축하여 갈색 점성 물질의 에틸 3-(시클로프로필아미노)-2,2-디플루오로프로파노에이트 (45.4 g, HCl)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=194.2
단계 5. 에틸 3-((2-클로로-5-니트로피리미딘-4-일)(시클로프로필)아미노)-2,2-디플루오로프로파노에이트 (10)의 합성
아세톤 (400 mL) 내 에틸 3-(시클로프로필아미노)-2,2-디플루오로프로파노에이트 (45.4 g, 197.69 mmol, HCl) 및 2,4-디클로로-5-니트로피리미딘 (19.17 g, 98.85 mmol) 용액에 0°C에서 K2CO3 (81.97 g, 593.07 mmol)를 첨가하고, 온도를 10°C 아래로 유지하였다. 현탁액을 25°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 에틸 3-(시클로프로필아미노)-2,2-디플루오로프로파노에이트가 완전히 소모됨 및 34%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 방치 후층분리하여 상층액을 여과하여 여과 케이크를 EtOAc (500 mL)로 세척하고, 침전물을 H2O (500 mL)로 희석 후 EtOAc (500 mL x 2)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (80 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 2~12% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하고, 용출물을 진공 농축하였다. 잔여물을 (석유 에터 : EtOAc = 15 : 1, 20 mL)로 분쇄하고, 현탁액을 여과하여 여과 케이크를 (20 mL, 석유 에터 : EtOAc = 15 : 1)로 세척하고, 여과 케이크를 모아서 건조하여 백색 고체의 에틸 3-((2-클로로-5-니트로피리미딘-4-일)(시클로프로필)아미노)-2,2-디플루오로프로파노에이트 (8.95 g, 25.52 mmol, 12.91% 수율)를 수득하였다. 여과물을 진공 농축하여 황색 점성 물질의 에틸 3-((2-클로로-5-니트로피리미딘-4-일)(시클로프로필)아미노)-2,2-디플루오로프로파노에이트 (1 g)를 수득하였다. MS(M+H)+=350.7
단계 6. 2-클로로-9-시클로프로필-7,7-디플루오로-8,9-디히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6(7H)-온 (11)의 합성
AcOH (80 mL) 내 에틸 3-((2-클로로-5-니트로피리미딘-4-일)(사이클로프로필)아미노)-2,2-디플루오로프로파노에이트 (8.95 g, 25.52 mmol) 및 Fe (5.70 g, 102.08 mmol) 혼합물을 60°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 97%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 진공 농축하여 대부분의 용매를 제거하였다. 잔여물을 H2O (300 mL) 및 EtOAc (200 mL)로 희석하고, 현탁액을 여과 후 여과 케이크를 EtOAc (100 mL)로 세척하고, 여과물을 층분리하여 유기상을 모으고, 수층을 EtOAc (200 mL x 2)로 추출하고, 합쳐진 유기상을 NaHCO3 용액 (100 mL x 2) 으로 세척 후 Na2SO4 로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 잔여물을 MTBE (20 mL)로 10분간 분쇄하고, 현탁액을 여과하여 여과 케이크를 MTBE (10 mL)로 세척하고, 여과 케이크를 모으고 건조하여 황백색 고체의 2-클로로-9-시클로프로필-7,7-디플루오로-8,9-디히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6(7H)-온 (6.2 g, 22.57 mmol, 88.44% 수율)을 수득하였고, 이를 H NMR로 확인하였다. MS(M+H)+=275.0. 여과물을 진공 농축하여 갈색 고체의 2-클로로-9-시클로프로필-7,7-디플루오로-8,9-디히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6(7H)-온 (0.6 g)을 수득하였다. MS(M+H)+=275.7
단계 7. 2-클로로-9-시클로프로필-7,7-디플루오로-5-메틸-8,9-디히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6(7H)-온 (12)의 합성
DMF (30 mL) 내 2-클로로-9-시클로프로필-7,7-디플루오로-8,9-디히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6(7H)-온 (6.2 g, 22.57 mmol) 용액에 K2CO3 (6.24 g, 45.15 mmol) 및 MeI (4.17 g, 29.35 mmol, 1.83 mL)를 첨가하고, 현탁액을 25°C에서3시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 93%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물에 0°C에서 H2O (30 mL)을 첨가하여 켄칭하였고 얼음물 (300 mL)로 희석 후 EtOAc (150 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (300 mL x 5)로 세척하고, Na2SO4 로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (20 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 9~40% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 백색 고체의 2-클로로-9-시클로프로필-7,7-디플루오로-5-메틸-8,9-디히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6(7H)-온 (6.12 g, 21.20 mmol, 93.91% 수율)을 수득하였다. MS(M+H)+=288.7
단계 8. 4-((9-시클로프로필-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (14)의 합성
EtOH (3 mL) 및 H2O (12 mL) 내 2-클로로-9-시클로프로필-7,7-디플루오로-5-메틸-8,9-디히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6(7H)-온 (0.5 g, 1.73mmol) 및 4-아미노-3-메톡시벤조산 (434.29 mg, 2.60 mmol) 용액에 HCl (12 M, 305.99 μL)를 첨가하고, 혼합물을 100°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 시약 1이 완전히 소모됨 및 77%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하였다. 잔여물을 H2O (10 mL)로 5분간 분쇄하였고, 현탁액을 여과하여 여과 케이크를 H2O (10 mL)로 세척하고, 여과 케이크를 모으고 건조하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 MTBE (10 mL)로 5분간 분쇄하였고, 현탁액을 여과하여 여과 케이크를 MTBE (10 mL)로 세척하고, 여과 케이크를 모으고 건조하여 회색 고체의 4-((9-시클로프로필-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (237 mg, 565.12 μmol, 32.63% 수율)을 수득하였고 H NMR로 확인하였다. MS(M+H)+=420.0
여과물을 진공 농축하여 회색 고체의 4-((9-시클로프로필-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (0.5 g)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.76 (s, 1H), 8.63 - 8.51 (m, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.64 (dd, J = 1.3, 8.6 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 4.30 (t, J = 14.3 Hz, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.30 (s, 3H), 3.02 - 2.97 (m, 1H), 0.95 - 0.81 (m, 2H), 0.78 - 0.60 (m, 2H).
단계 9. 4-((9-시클로프로필-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 67)의 합성
DMF (1 mL) 내 4-((9-시클로프로필-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (70 mg, 166.91 μmol) 용액에 HATU (82.50 mg, 216.99 μmol) 및 DIEA (86.29 mg, 667.65 μmol, 116.29 μL)를 첨가하고, 혼합물을 25°C에서 15분 동안 교반 하였다. 혼합물에 4-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (80.07 mg, 150.22 μmol, HCl)를 첨가하고, 혼합물을 25°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-((9-시클로프로필-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산이 완전히 소모됨 및 91%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물에 CH3COOH를 첨가하여 pH<7로 조정하였다. 혼합물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25 mm* 5μm; 이동상: [물(NH4HCO3)-ACN];B%: 39%-69%, 9 분) 및 prep-HPLC (컬럼: Unisil 3-100 C18 Ultra 150*50 mm*3 μm; 이동상: [물(FA)-ACN];B%: 13%-43%, 10 분) 및 (컬럼: Waters Xbridge 150*25 mm* 5μm; 이동상: [물(NH4HCO3)-ACN];B%: 33%-63%, 9 분)로 정제하고, 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로프로필-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (19.0 mg, 20.95 μmol, 12.55% 수율, 99% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=898.2
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.25 - 10.93 (m, 1H), 8.58 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.14 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.70 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.60 - 7.45 (m, 2H), 7.35 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 5.19 - 5.00 (m, 1H), 4.39 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 4.20 (t, J = 15.5 Hz, 2H), 4.11 - 3.88 (m, 5H), 3.32 - 3.24 (m, 7H), 3.20 - 3.07 (m, 1H), 2.94 - 2.80 (m, 2H), 2.73 - 2.54 (m, 11H), 2.09 - 1.97 (m, 1H), 1.95 - 1.74 (m, 2H), 1.61 - 1.30 (m, 2H), 0.83 (br d, J = 5.9 Hz, 2H), 0.72 - 0.55 (m, 2H).
실시예 68. 4-((9-시클로부틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 68)의 합성
단계 1. N-벤질시클로부탄아민 (3)의 합성
MeCN (50 mL) 내 (클로로메틸)벤젠 (5 g, 39.50 mmol, 4.55 mL) 용액에 25°C에서 K2CO3 (16.38 g, 118.50 mmol) 및 시클로부탄아민 (5.06 g, 71.10 mmol, 6.09 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 80°C에서 5시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터: EtOAc = 5:1)로 하나의 새로운 스팟이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 여과하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 톨루엔 (30 mL)에 용해 후 감압 농축하여 황색 오일의 N-벤질시클로부탄아민 (7.1 g, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=162.3
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 7.32 - 7.27 (m, 5H), 3.57 (s, 2H), 3.11 - 3.07 (m, 1H), 2.07 -2.01 (m, 2H), 1.89 - 1.77 (m, 1H), 1.71 - 1.62 (m, 2H), 1.60 - 1.53 (m, 1H), 1.52 - 1.46 (m, 1H).
단계 2. N-((1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸-1-일)메틸)-N-벤질시클로부탄아민 (5)의 합성
EtOH (80 mL) 내 N-벤질시클로부탄아민 (7.1 g, 44.03 mmol) 용액에 25°C에서 (1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸-1-일)메탄올 (6.57 g, 44.03 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 12시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터: EtOAc = 1:1)로 하나의 새로운 스팟 형성을 확인하였다. 반응 혼합물을 감압 농축했다. 잔여물을 물 (50 mL)로 희석 후 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 포화 염수 (50 mL)로 세척 후 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 황색 오일의 N-((1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸-1-일)메틸)-N-벤질시클로부탄아민 (13 g, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=293.4
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.05 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.69 - 7.67 (m, 1H), 7.56 - 7.52 (m, 1H), 7.46 - 7.39 (m, 1H), 7.37 - 7.35 (m, 5H), 5.44 (s, 2H), 3.63 (s, 2H), 3.30 - 3.26 (m, 1H), 1.94 - 1.90 (m, 2H), 1.87 - 1.82 (m, 2H), 1.59 - 1.50 (m, 2H).
단계 3. 에틸 3-(벤질(시클로부틸)아미노)-2,2-디플루오로프로파노에이트 (7)의 합성
THF (100 mL) 내 Zn (7.27 g, 111.16 mmol) 혼합물에 0°C에서 TMSCl (12.08 g, 111.16 mmol, 14.11 mL)를 첨가하였다. 30분 동안 교반 후, 0°C에서 에틸 2-브로모-2,2-디플루오로아세테이트 (18.05 g, 88.93 mmol, 11.42 mL)를 혼합물에 첨가 후 온도를 30°C 아래로 유지하였다. 혼합물을 30분 동안 교반하고 0°C로 온도를 내린 후 THF (100 mL) 내 N-((1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸-1-일)메틸)-N-벤질시클로부탄아민 (13 g, 44.46 mmol)을 0°C에서 첨가하고 생성된 혼합물을 N2 하 25°C에서 4시간 동안 교반 하였다. LCMS로 ~50%의 원하는 질량이 검출됨을 확인하였다. 혼합물을 여과 후 여과 케이크를 EtOAc (200 mL) 및 THF (200 mL)로 세척하고, 여과물을 포화 소듐 바이카보네이트 용액 (200 mL)로 세척하고 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 ISCO; 40 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~20% 석유 에터: EtOAc gradient @ 80 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 에틸 3-(벤질(시클로부틸)아미노)-2,2-디플루오로프로파노에이트 (9.6 g, 21.63 mmol, 48.65% 수율, 67% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=298.1
단계 4. 에틸 3-(시클로부틸아미노)-2,2-디플루오로프로파노에이트 (8)의 합성
EtOH (50 mL) 내 에틸 3-(벤질(시클로부틸)아미노)-2,2-디플루오로프로파노에이트 (9.6 g, 32.29 mmol) 혼합물에 N2 기체 하 25°C에서 Pd(OH)2/C (2 g, 10% 순도) 및 HCl (12 M, 5.38 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C H2 기체 (15 psi) 하 14시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터 : EtOAc=5 : 1)로 2개의 새로운 스팟 형성을 확인하였다. 혼합물을 여과하였다. 여과물을 감압 농축하여 황색 오일의 에틸 3-(시클로부틸아미노)-2,2-디플루오로프로파노에이트 (8 g, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+=208.2
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) = 4.36 - 4.30 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.45 - 3.40 (q, J = 7.2 Hz, 1H), 2.31 - 2.24 (m, 2H), 2.18 - 2.13 (m, 2H), 1.79 - 1.70 (m, 2H), 1.28 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.04 (t, J = 6.8 Hz, 2H).
단계 5. 에틸 3-((2-클로로-5-니트로피리미딘-4-일)(시클로부틸)아미노)-2,2-디플루오로프로파노에이트 (10)의 합성
아세톤 (50 mL) 내 에틸 3-(시클로부틸아미노)-2,2-디플루오로프로파노에이트 (8 g, 38.61 mmol) 용액에 25°C에서 K2CO3 (10.67 g, 77.21 mmol) 및 2,4-디클로로-5-니트로피리미딘 (8.24 g, 42.47 mmol)을 첨가 후 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 ~46%의 질량이 검출됨을 확인하였다. 혼합물을 여과하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO; 40 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~10% 석유 에터: EtOAc ether gradient @ 80 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 에틸 3-((2-클로로-5-니트로피리미딘-4-일)(시클로부틸)아미노)-2,2-디플루오로프로파노에이트 (3.9 g, 10.41 mmol, 26.98% 수율, 97.4% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=364.9
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) = 9.05 (s, 1H), 4.59 (t, J = 14.8 Hz, 2H), 4.28 - 4.22 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.04 - 3.98 (m, 1H), 2.02 - 1.98 (m, 4H), 1.62 - 1.52 (m, 2H), 1.20 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
단계 6. 3-클로로-9-시클로부틸-7,7-디플루오로-8,9-디히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6(7H)-온 (11)의 합성
AcOH (20 mL) 내 에틸 3-((2-클로로-5-니트로피리미딘-4-일)(시클로부틸)아미노)-2,2-디플루오로프로파노에이트 (3.9 g, 10.69 mmol) 용액에 25°C에서 Fe (2.39 g, 42.77 mmol)를 첨가 후 80°C에서 5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물을 여과하였다. 여과물을 물 (100 mL)로 희석 후 EtOAc (100 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 포화 소듐 바이카보네이트 용액 (200 mL) 및 염수 (200 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 갈색 고체의 3-클로로-9-시클로부틸-7,7-디플루오로-8,9-디히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6(7H)-온 (3 g, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=289.0
단계 7. 2-클로로-9-시클로부틸-7,7-디플루오로-5-메틸-8,9-디히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6(7H)-온 (12)의 합성
DMF (30 mL) 내 2-클로로-9-시클로부틸-7,7-디플루오로-8,9-디히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6(7H)-온 (3 g, 10.39 mmol) 용액에 25°C에서 K2CO3 (4.31 g, 31.18 mmol) 및 MeI (2.95 g, 20.78 mmol, 1.29 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 ~60%의 원하는 질량이 검출됨을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석 후 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (50 mL)로 세척 후 무수 소듐 설페이트 로 건조하고, 여과하여 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO; 20 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, eluent of 0~20% 석유 에터 /EtOAc gradient @ 60 mL/분)로 정제하여 밝은 황색 고체의 2-클로로-9-시클로부틸-7,7-디플루오로-5-메틸-8,9-디히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6(7H)-온 (2.3 g, 7.45 mmol, 71.65% 수율, 98% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=303.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) = 8.41 (s, 1H), 4.45 - 4.36 (m, 1H), 4.18 (t, J = 14.4 Hz, 2H), 3.35 (s, 3H), 2.21 - 2.20 (m, 2H), 2.10 - 2.07 (m, 2H), 1.70 - 1.66 (m, 2H).
단계 8. 4-((9-시클로부틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (14)의 합성
H2O (6 mL) 및 EtOH (2 mL) 내 2-클로로-9-시클로부틸-7,7-디플루오로-5-메틸-8,9-디히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6(7H)-온 (0.5 g, 1.65 mmol) 용액에 25°C에서 HCl (12 M, 275.00 μL) 및 4-아미노-3-메톡시벤조산 (330.98 mg, 1.98 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 100°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 ~60%의 원하는 질량을 확인하였다. 잔여물을 EtOAc/에탄올 (v/v=1:1) (10 ml x 3)로 분쇄하여 회색 고체의 4-((9-시클로부틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (400 mg, 756.79 μmol, 45.87% 수율, 82% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=434.1
단계 9. 4-((9-시클로부틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 68)의 합성
DMF (3 mL) 내 4-((9-시클로부틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (0.2 g, 461.46 μmol) 용액에 25°에서 HATU (350.92 mg, 922.92μmol) 및 DIEA (178.92 mg, 1.38 mmol, 241.13 μL)를 첨가하고, 0.5시간 동안 교반 후 4-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (229.14 mg, 461.46 μmol, HCl 염)를 첨가하고 생성된 혼합물을 25°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 ~55%의 원하는 질량이 검출됨을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석 후 EtOAc (50 mL x 5)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 포화 염수 (150 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하여 감압 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex luna C18 150 x 40mm x 15 μm; 이동상: [물 (FA) - ACN]; B%: 17% - 47%, 10 분)로 정제 및 prep-HPLC(컬럼: Waters Xbridge 150 x 25 mm x 5 μm; 이동상: [물(NH4HCO3) - ACN]; B%: 38% - 68%, 10 분)로 추가 정제 후 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로부틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (64.3 mg, 65.93 μmol, 14.29% 수율, 93.5% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=912.4
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.08 (s, 1H), 8.35 - 8.32 (m, 2H), 8.17 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.71 - 7.67 (m, 1H), 7.53 - 7.51 (dd, J = 8.4, 1.6 Hz, 1H), 7.49 - 7.48 (m, 1H), 7.36 - 7.32 (m, 2H), 5.10 - 5.05 (m, 1H), 4.40 - 4.36 (m, 2H), 4.07 - 3.97 (m, 4H), 3.92 (s, 3H), 3.33 (s, 3H), 3.31- 3.27 (m, 4H), 3.16 - 3.13 (m, 1H), 2.91 - 2.83 (m, 1H), 2.59 - 2.55 (m, 11H), 2.23 - 2.20 (m, 2H), 2.06 - 2.00 (m,3H), 1.90 - 1.80 (m, 2H), 1.71 - 1.65 (m, 2H), 1.50 - 1.38 (m, 2H).
실시예 69. 4-((7-알릴-9-사이클로펜틸-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 69)의 합성
단계 1. 7-알릴-2-클로로-9-시클로펜틸-5-메틸-8,9-디히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6(7H)-온 (2)의 합성
THF (8 mL) 내 2-클로로-9-사이클로펜틸-5-메틸-8,9-디하이드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6(7H)-온 (0.4 g, 1.42 mmol) 용액에 -78°C에서 LDA (2 M, 854.85 μL)를 첨가하고, 혼합물을 -78°C에서 30분 동안 교반 후 3-브로모프로프-1-엔 (689.44 mg, 5.70 mmol, 4 eq)를 첨가하고 생성된 혼합물을 -78°C에서 2시간 교반하고 20°C에서 12시간 동안 추가로 교반 하였다. LCMS로 반응이 완료됨을 확인하였다. 혼합물을 암모늄 클로라이드 (sat. aq., 50 mL) 및 물 (20 mL) 로 켄칭하고, EtOAc (2 x 50 mL) 로 추출 후 합쳐진 유기상을 염수 (50 mL)로 세척하고, Na2SO4 로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (5 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~50% EtOAc/석유 에터 gradient @ 80 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 7-알릴-2-클로로-9-시클로펜틸-5-메틸-8,9-디히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6(7H)-온 (0.3 g, 907.06 μmol, 63.66% 수율, 97% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=321.2
단계 2. 7-알릴-2-클로로-9-사이클로펜틸-5-메틸-8,9-디하이드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6(7H)-온 (3 (피크1)) 및 7-알릴-2-클로로-9-시클로펜틸-5-메틸-8,9-디히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6(7H)-온 (3 (피크2))의 합성
7-알릴-2-클로로-9-사이클로펜틸-5-메틸-8,9-디하이드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6(7H)-온 (0.3 g, 0.935 mmol)를 SFC (컬럼: DAICEL CHIRALCEL OJ (250 mm * 30 mm, 10 μm); 이동상: [0.1% NH3H2O IPA]; B%: 25%-25%, 3.7 분; 30 분)로 분리하여 황색 오일의 7-알릴-2-클로로-9-사이클로펜틸-5-메틸-8,9-디하이드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6(7H)-온 (피크1) (110 mg, 336.02 μmol, 35.93% 수율, 98% 순도) 및 7-알릴-2-클로로-9-사이클로펜틸-5-메틸-8,9-디하이드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6(7H)-온 (피크2) (120 mg, 370.31 μmol, 39.60% 수율, 99% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=321.0
단계 3. 4-((7-알릴-9-사이클로펜틸-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (4)의 합성
H2O (3 mL) 및 EtOH (1.5 mL) 내 7-알릴-2-클로로-9-사이클로펜틸-5-메틸-8,9-디하이드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6(7H)-온 (Peak 1, 100 mg, 311.70 μmol) 및 4-아미노-3-메톡시-벤조산 (57.32 mg, 342.87 μmol) 용액에 HCl (12 M, 57.15 μL)를 첨가하고 혼합물을 90°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 반응이 완료됨을 확인하였다. 혼합물을 여과 후 여과 케이크를 모아 백색 고체의 4-((7-알릴-9-사이클로펜틸-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (110 mg, 238.75 μmol, 76.60% 수율, 98% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=452.2
단계 4. 4-((7-알릴-9-사이클로펜틸-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 69)의 합성
DMF (3 mL) 내 4-((7-알릴-9-사이클로펜틸-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (100.00 mg, 221.48 μmol) 및 4-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (118.05 mg, 221.48 μmol, HCl) 용액에 HATU (126.32 mg, 332.21 μmol) 및 DIPEA (85.87 mg, 664.43 μmol, 115.73 μL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 반응이 완료됨을 확인하였다. 반응물에 FA를 첨가하여 pH=7로 조정하고, 생성된 혼합물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Luna C18 150 * 25 mm * 10 μm; 이동상: [물 (FA) -ACN]; B%: 25%-55%, 10 분)로 정제 후 동결 건조하여 황색 고체의 4-((7-알릴-9-사이클로펜틸-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (97.3 mg, 102.52 μmol, 46.29% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=930.4
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.09 (s, 1H), 8.38 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 8.17 - 8.11 (m, 2H), 8.10 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.73 - 7.65 (m, 1H), 7.50 - 7.45 (m, 2H), 7.37 - 7.35 (m, 2H), 5.86 - 5.73 (m, 1H), 5.12 - 5.01 (m, 3H), 4.87 - 4.78 (m, 1H), 4.40 (d, J = 12.9 Hz, 1H), 4.10 - 4.03 (m, 1H), 3.98 - 3.91 (m, 4H), 3.45 - 3.35 (m, 3H), 3.19 (s, 3H), 3.18 - 3.08 (m, 2H), 2.93 - 2.75 (m, 3H), 2.72 - 2.56 (m, 11H), 2.46 - 2.39 (m, 1H), 2.08 - 1.99 (m, 3H), 1.90 - 1.78 (m, 3H), 1.76 - 1.53 (m, 6H), 1.52 - 1.38 (m, 3H).
실시예 70. 4-((7-알릴-9-사이클로펜틸-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드(화합물 70)의 합성
단계 1. 4-((7-알릴-9-사이클로펜틸-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (5)의 합성
H2O (3 mL) 및 EtOH (1.5 mL) 내 7-알릴-2-클로로-9-사이클로펜틸-5-메틸-8,9-디하이드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6(7H)-온 (피크2, 120 mg, 374.05 μmol) 및 4-아미노-3-메톡시-벤조산 (68.78 mg, 411.45 μmol) 용액에 HCl (12 M, 68.58 μL)를 첨가하고 혼합물을 90°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 반응이 완료됨을 확인하였다. 혼합물을 여과 후 여과 케이크를 모아 백색 고체의 4-((7-알릴-9-사이클로펜틸-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (120 mg, 265.77 μmol, 71.05% 수율, 100% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=452.2
단계 2. 4-((7-알릴-9-사이클로펜틸-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 70)의 합성
DMF (3 mL) 내 4-((7-알릴-9-사이클로펜틸-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (120 mg, 265.77 μmol) 및 4-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (141.66 mg, 265.77 μmol, HCl) 용액에 HATU (151.58 mg, 398.66 μmol) 및 DIPEA (103.04 mg, 797.31 μmol, 138.87 μL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 반응이 완료됨을 확인하였다. 반응물에 FA를 첨가하여 pH = 7 로 조정하고, 생성된 혼합물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Luna C18 150 * 25 mm * 10 μm; 이동상: [물 (FA) -ACN]; B%: 25%-55%, 10 분)로 정제 후 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((7-알릴-9-사이클로펜틸-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (144.3 mg, 140.44 μmol, 52.84% 수율, 95% 순도, FA)를 수득하였다. MS(M+H)+=930.4
1H NMR (DMSO-d 6) δ = 11.11 (s, 1H), 8.39 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.20 - 8.12 (m, 2H), 8.11 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.73 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.50 - 7.47 (m, 2H), 7.41 - 7.36 (m, 2H), 5.85 - 5.76 (m, 1H), 5.13 - 5.02 (m, 3H), 4.86 - 4.82 (m, 1H), 4.43 - 4.39 (m, 1H), 4.07 - 4.03 (m, 1H), 3.95 (s, 4H), 3.42 - 3.41 (m, 3H), 3.20 (s, 3H), 3.17 - 3.12 (m, 2H), 2.94 - 2.83 (m, 3H), 2.82 - 2.56 (m, 11H), 2.46 - 2.40 (m, 1H), 2.09 - 2.00 (m, 3H), 1.92 - 1.76 (m, 4H), 1.71 - 1.57 (m, 5H), 1.52 - 1.40 (m, 3H).
실시예 71. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메틸벤즈아미드 (화합물 71)의 합성
단계 1. 메틸 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메틸벤조에이트 (2)의 합성
t-BuOH (2 mL) 내 2-클로로-9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-8,9-디히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6(7H)-온 (100 mg, 315.72 μmol) 및 메틸 4-아미노-3-메틸벤조에이트 (62.58 mg, 378.87 μmol) 용액에 TsOH (163.10 mg, 947.17 μmol)를 첨가하고, 혼합물을 100°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 68%의 원하는 질량의 생성물이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 진공 농축하여 갈색 오일의 메틸 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메틸벤조에이트 (200 mg)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=446.2
단계 2. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메틸벤조산 (3)의 합성
MeOH (2 mL), THF (2 mL) 및 H2O (2 mL) 내 메틸 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메틸벤조에이트(200 mg, 448.97 μmol) 용액에 NaOH (538.73 mg, 13.47 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 25°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 84%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 진공 농축하여 대부분의 용매를 제거하였다. 잔여물에 0°C에서 HCl 용액 (12 M)을 첨가 후 pH < 3으로 조정하였다. 현탁액을 여과 후 여과 케이크를 모으고 건조하여 갈색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메틸벤조산 (140 mg)을 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=432.2
단계 3. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메틸벤즈아미드 (화합물 71)의 합성
DMF (3 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메틸벤조산 (65 mg, 150.66 μmol) 용액에 HATU (68.74 mg, 180.79 μmol) 및 DIEA (116.83 mg, 903.96 μmol, 157.45 μL)를 첨가하고, 혼합물을 15°C에서 15분 동안 교반하고, 혼합물에 4-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (72.27 mg, 135.59 μmol, HCl 염)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 15°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메틸벤조산이 완전히 소모됨 및 69%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물에 CH3COOH를 첨가하여 pH < 7로 조정하였다. 생성된 혼합물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25 mm* 5μm; 이동상: [물(10 mM NH4HCO3)-ACN];B%: 34%-64%,분) 및 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex luna C18 150*25 mm* 10μm; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN];B%: 14%-44%, 10 분)로 정제하고, 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메틸벤즈아미드 (25.0 mg, 26.92 μmol, 17.87% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=910.3
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.31 - 10.77 (m, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.12 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.73 - 7.67 (m, 2H), 7.64 (dd, J = 1.9, 8.4 Hz, 1H), 7.40 - 7.29 (m, 2H), 5.08 (dd, J = 5.3, 12.9 Hz, 1H), 4.60 (q, J = 8.3 Hz, 1H), 4.37 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 4.07 - 3.89 (m, 4H), 3.32 - 3.28 (m, 7H), 3.13 (t, J = 11.7 Hz, 1H), 2.92 - 2.81 (m, 1H), 2.67 - 2.52 (m, 11H), 2.29 (s, 3H), 2.07 - 1.97 (m, 1H), 1.90 - 1.76 (m, 4H), 1.65 - 1.60 (m, 2H), 1.58 - 1.43 (m, 5H), 1.43 - 1.37 (m, 1H).
실시예 72. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-히드록시벤즈아미드 (화합물 72)의 합성
단계 1. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-하이드록시벤조산 (2)의 합성
EtOH (16 mL) 및 H2O (48 mL) 내 2-클로로-9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-8,9-디히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6(7H)-온 (0.8 g, 2.53mmol) 및 4-아미노-3-하이드록시벤조산 (348.11 mg, 2.27 mmol) 용액에 HCl (12 M, 463.06 μL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 100°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 반응이 완료됨을 확인하였다. 반응 혼합물을 농축하고, 잔여물을 EtOAc (20 mL)로 분쇄하고 여과 후 여과 케이크를 모아 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-하이드록시벤조산 (0.7 g, 1.50 mmol, 59.47% 수율, 93% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=434.1
단계 2. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-히드록시벤즈아미드 (화합물 72)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-하이드록시벤조산 (150 mg, 346.09 μmol) 및 4-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (202.92 mg, 380.70 μmol, HCl) 용액에 HOBt (70.15 mg, 519.14 μmol), EDCI (99.52 mg, 519.14 μmol) 및 TEA (105.06 mg, 1.04 mmol, 144.52 μL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 반응이 완료됨을 확인하였고, 혼합물을 물 (20 mL)에 붓고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (50 mL)로 세척하고, Na2SO4 로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex luna C18 150*25 mm* 10μm; 이동상: [물 (FA) -ACN]; B%: 13%-43%, 10 분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-히드록시벤즈아미드 (136 mg, 137.71 μmol, 39.79% 수율, 97% 순도, FA)를 수득하였다. MS(M+H)+=912.1
1H NMR (DMSO-d 6) δ = 11.09 (s, 1H), 10.34 (br s, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.15 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.10 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.71 (dd, J = 7.3, 8.4 Hz, 1H), 7.40 - 7.32 (m, 4H), 5.10 (dd, J = 5.3, 12.8 Hz, 1H), 4.79 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 4.38 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 4.12 - 3.90 (m, 5H), 3.35 - 3.32 (m, 4H), 3.15 - 3.11 (m, 1H), 2.93 - 2.85 (m, 1H), 2.66 - 2.53 (m, 12H), 2.07 - 1.78 (m, 6H), 1.74 - 1.71 (m, 2H), 1.67 - 1.58 (m, 4H), 1.49 - 1.33 (m, 2H).
실시예 73. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-(2-히드록시에톡시)벤즈아미드 (화합물 73)의 합성
단계 1. 메틸 3-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-니트로벤조에이트 (2)의 합성
DMF (10 mL) 내 메틸 3-하이드록시-4-니트로벤조에이트 (1 g, 5.07 mmol) 용액에 K2CO3 (1.40 g, 10.14 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 15°C에서 30분 동안 교반하고, 혼합물에 DMF (5 mL) 내 (2-브로모에톡시)(tert-부틸)디메틸실란 (1.82 g, 7.61 mmol) 용액을 15°C에서 천천히 투입하고, 생성된 혼합물을 100°C N2 기체 하 4시간 동안 교반 하였다. TLC (SiO2, 석유 에터 : EtOAc = 5 : 1)로 출발물질이 완전히 소모됨 및 낮은 극성의 새로운 하나의 주 스팟이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 H2O (200 mL)로 희석하고 EtOAc (100 mL x 2)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (100 mL x 5)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (20 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 5~80% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 황백색의 메틸 3-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-니트로벤조에이트 (1.5 g, 4.22 mmol, 83.19% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=356.5
단계 2. 메틸 4-아미노-3-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)벤조에이트 (3)의 합성
MeOH (50 mL) 및 EtOAC (20 mL) 내 메틸 3-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-니트로벤조에이트 (1.5 g, 4.22 mmol) 용액에 N2 기체 하 Pd/C (1 g, 4.22 mmol, 10% 순도)를 첨가하였다. 현탁액을 15°C H2 (15 psi) 하 48시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 89%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 진공 하에 탈기하고 N2로 수차례 퍼지하고, 혼합물을 여과 후 여과물을 진공 농축하여 갈색 고체의 메틸 4-아미노-3-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)벤조에이트 (1.5 g)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=326.1
단계 3. 메틸 3-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)벤조에이트 (4)의 합성
t-BuOH (5 mL) 내 메틸 4-아미노-3-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)벤조에이트 (200 mg, 614.49 μmol), 2-클로로-9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-8,9-디하이드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6(7H)-온 (175.17 mg, 553.04 μmol), Pd2(dba)3 (56.27 mg, 61.45 μmol) 및 XPhos (43.94 mg, 92.17μmol) 용액에 K2CO3 (339.70 mg, 2.46 mmol)를 첨가하고, 현탁액을 100°C에서 N2 기체 하 4시간 동안 교반 하였다. LCMS로 12%의 메틸 4-아미노-3-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)벤조에이트가 남아있음 및 47%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (12 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 4~15% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 백색 고체의 메틸 3-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)벤조에이트 (220 mg, 363.19 μmol, 59.10% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=606.2
단계 4. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-(2-히드록시에톡시)벤조산 (5)의 합성
MeOH (2 mL) 및 THF (2 mL) 내 메틸 3-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)벤조에이트 (210 mg, 346.68 μmol) 용액에 H2O (2 mL) 내 NaOH (277.32 mg, 6.93 mmol) 용액을 첨가하고, 혼합물을 25°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 72%의 원하는 질량의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-(2-히드록시에톡시)벤조산이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 진공 농축하였다. 잔여물을 H2O (8 mL)로 희석 후 EtOAc (10 mL x 2)로 추출하였다. 수층에 HCl (물 내 12 M)를 첨가하여 pH < 3으로 조정하고, 현탁액을 여과하고, 여과 케이크를 H2O (15 mL)로 세척하고 여과 케이크를 모으고 건조하여 주황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-(2-히드록시에톡시)벤조산 (130 mg)을 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=478.1
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-(2-히드록시에톡시)벤즈아미드 (화합물 73)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-(2-하이드록시에톡시)벤조산 (65 mg, 136.14 μmol) 용액에 HATU (77.65 mg, 204.21 μmol) 및 DIPEA (105.57 mg, 816.82 μmol, 142.28 μL)를 첨가하고, 혼합물을 15°C에서 15분 동안 교반하고, 혼합물에 4-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (94.33 mg, 176.98 μmol, HCl)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 15°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 미량의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-(2-하이드록시에톡시)벤조산이 남아있음 및 88%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물에 CH3COOH를 첨가하여 pH < 7로 조정하였다. 혼합물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25 mm* 5μm; 이동상: [물(10 mM NH4HCO3)-ACN];B%: 31%-61%,분) 및 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex luna C18 150*25 mm* 10μm; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN];B%: 15%-45%, 10 분)로 정제하고, 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-(2-히드록시에톡시)벤즈아미드 (26.3 mg, 26.96 μmol, 19.80% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=956.3
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.22 - 10.90 (m, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.36 - 8.22 (m, 2H), 8.13 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.70 (dd, J = 7.3, 8.3 Hz, 1H), 7.54 - 7.43 (m, 2H), 7.35 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 5.22 (s, 1H), 5.09 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.77 (q, J = 7.8 Hz, 1H), 4.39 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 4.11 (t, J = 4.6 Hz, 3H), 3.95 (d, J = 12.9 Hz, 1H), 3.78 (d, J = 3.4 Hz, 2H), 3.33 (bs, 3H), 3.30 -3.29 (m, 4H), 3.13 (t, J = 12.0 Hz, 1H), 2.94 - 2.81 (m, 1H), 2.70 - 2.52 (m, 11H), 2.08 - 1.99 (m, 1H), 1.99 - 1.90 (m, 2H), 1.90 - 1.77 (m, 2H), 1.77 - 1.67 (m, 2H), 1.66 - 1.55 (m, 4H), 1.53 - 1.34 (m, 2H).
실시예 74. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-(트리플루오로메톡시)벤즈아미드 (화합물 74)의 합성
단계 1. 메틸 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-(트리플루오로메톡시)벤조에이트 (2)의 합성
디옥산 (10 mL) 내 2-클로로-9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-8,9-디히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6(7H)-온 (200 mg, 631.45 μmol), 메틸 4-아미노-3-(트리플루오로메톡시)벤조에이트 (148.49 mg, 631.45 μmol), BINAP (78.64 mg, 126.29 μmol), Cs2CO3 (617.21 mg, 1.89 mmol) 및 Pd(OAc)2 (14.18 mg, 63.14 μmol) 혼합물을 N2로 탈기 후 100°C N2 하 12시간 동안 가열하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크 (58%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (10 mL)로 희석 후 EtOAc (15 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (15 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (Biotage, 12 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 20~40% 석유 에터/EtOAc gradient @ 60 mL/분)로 정제하여 백색 고체의 메틸 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-(트리플루오로메톡시)벤조에이트 (210 mg, 407.42 μmol, 64.52% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=516.2
단계 2. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-(트리플루오로메톡시)벤조산 (3)의 합성
THF (1 mL) 및 MeOH (1 mL) 내 메틸 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-(트리플루오로메톡시)벤조에이트 (210 mg, 407.42 μmol) 용액에 H2O (1 mL) 내 NaOH (81.48 mg, 2.04 mmol) 용액을 한 방울씩 첨가하고, 혼합물을 25°C에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 질량 [501+H2O+H]+의 주 피크가 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 진공 농축 후 1N HCl를 첨가하여 pH=3으로 조정하고, 혼합물을 진공 농축하여 백색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-(트리플루오로메톡시)벤조산 (290 mg, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=502.2
단계 3. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-(트리플루오로메톡시)벤즈아미드 (화합물 74)의 합성
DMF (1 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-(트리플루오로메톡시)벤조산 (50 mg, 99.72 μmol) 용액에 HATU (75.83 mg, 199.44 μmol) 및 DIPEA (38.66 mg, 299.16 μmol, 52.11 μL)을 첨가하고, 혼합물을 25°C에서 10분 동안 교반하고, 4-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (49.52 mg, 92.90 μmol, HCl)를 첨가하고, 혼합물을 25°C에서 1시간 동안 추가로 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크 (77 %)를 확인하였다. 혼합물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25mm* 5μm; 이동상: [물 (10mM NH4HCO3) -ACN];B%: 41%-71%, 분)로 정제 후 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-(트리플루오로메톡시)벤즈아미드 (26.9 mg, 26.08 μmol, 26.15% 수율, 95.0% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=980.3
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.10 (s, 1H), 9.01 (s, 1H), 8.38 - 8.32 (m, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.15 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.89 - 7.83 (m, 2H), 7.73 - 7.67 (m, 1H), 7.36 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 5.13 - 5.06 (m, 1H), 4.73 - 4.62 (m, 1H), 4.43 - 4.34 (m, 1H), 4.10 - 3.91 (m, 4H), 3.33 -3.32 (m, 6H), 3.17 - 3.10 (m, 1H), 2.92 - 2.83 (m, 1H), 2.67 - 2.53 (m, 12H), 2.07 - 1.98 (m, 1H), 1.91 - 1.80 (m, 4H), 1.71 - 1.62 (m, 2H), 1.60 - 1.46 (m, 5H), 1.43 - 1.32 (m, 1H)
실시예 75. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 (화합물 75)의 합성
단계 1. 메틸 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-(트리플루오로메틸)벤조에이트 (2)의 합성
디옥산 (5 mL) 내 2-클로로-9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-8,9-디히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6(7H)-온 (150 mg, 473.58 μmol), 메틸 4-아미노-3-(트리플루오로메틸)벤조에이트 (114.17 mg, 520.94 μmol), Cs2CO3 (462.91 mg, 1.42 mmol), BINAP (58.98 mg, 94.72 μmol) 및 Pd(OAc)2 (10.63 mg, 47.36 μmol) 혼합물을 N2로 탈기 후 N2 하 100°C에서 12시간 동안 가열하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크 (41 %)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (10 mL)로 희석 후 EtOAc (20 mL x 2)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (20 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (Biotage, 20 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 10~30% 석유 에터/EtOAc gradient @ 60 mL/분)로 정제하여 백색 고체의 메틸 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-(트리플루오로메틸)벤조에이트 (118 mg, 236.27 μmol, 49.89% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=500.1
단계 2. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-(트리플루오로메틸)벤조산 (3)의 합성
THF (1 mL) 및 MeOH (1 mL) 내 메틸 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-(트리플루오로메틸)벤조에이트 (118 mg, 236.27 μmol) 용액에 H2O (1 mL) 내 NaOH (47.25 mg, 1.18 mmol) 용액을 한 방울씩 첨가하고, 혼합물을 25°C에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 질량 [485+H2O+H]+의 주 피크가 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 진공 농축 후 1N HCl을 첨가하여 pH=3으로 조정하고, 혼합물을 진공 농축하여 백색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-(트리플루오로메틸)벤조산 (110 mg, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=486.1
단계 3. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 (화합물 75)의 합성
DMF (1 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-(트리플루오로메틸)벤조산 (50 mg, 103.01 μmol) 및 4-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (54.90 mg, 103.01 μmol, HCl) 용액에 HATU (78.33 mg, 206.01 μmol) 및 DIPEA (39.94 mg, 309.02 μmol, 53.83 μL)를 첨가하고, 혼합물을 25°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크 (71 %)를 확인하였다. 혼합물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi C18 150*25 mm* 10μm; 이동상: [물 (0.225%FA) -ACN];B%: 19%-55%, 12분) 및 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25mm* 5μm; 이동상: [물 (10mM NH4HCO3) -ACN];B%: 40%-70%, 분)로 정제 후 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 (10.6 mg, 10.85 μmol, 10.53% 수율, 98.65% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=964.4
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.15 - 11.02 (m, 1H), 8.58 - 8.44 (m, 2H), 8.19 (s, 2H), 8.12 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.99 - 7.93 (m, 1H), 7.70 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.35 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 5.13 - 5.05 (m, 1H), 4.54 - 4.44 (m, 1H), 4.42 - 4.32 (m, 1H), 4.11 - 3.91 (m, 4H), 3.32 - 3.31 (m, 6H), 3.19 - 3.09 (m, 1H), 2.93 - 2.81 (m, 1H), 2.63 - 2.54 (m, 12H), 2.06 - 1.97 (m, 1H), 1.92 - 1.79 (m, 2H), 1.79 - 1.70 (m, 2H), 1.63 - 1.56 (m, 2H), 1.55 - 1.46 (m, 3H), 1.43 - 1.35 (m, 3H).
실시예 76. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(3-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)프로파노일)피페라진-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 76)의 합성
단계 1. tert-부틸 4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1),4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)피페라진-1-카복실레이트 (3)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (0.5 g, 1.12 mmol) 용액에 HATU (637.35 mg, 1.68 mmol) 및 DIPEA (433.27 mg, 3.35 mmol, 583.92 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 30°C에서10분 동안 교반 하였다. 혼합물에 tert-부틸 4-아미노피페라진-1-카복실레이트 (247.40 mg, 1.23 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 피크 (42%)를 확인하였다. 혼합물을 EtOAc (20 mL)로 희석하고 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (5 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터gradient @ 50 mL/분)로 정제하여 갈색 오일의 tert-부틸 4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1),4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)피페라진-1-카복실레이트 (0.8 g, crude)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=631.2
단계 2. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(피페라진-1-일)벤즈아미드 (4)의 합성
디옥산 (1 mL) 내 tert-부틸 4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1),4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)피페라진-1-카복실레이트 (0.8 g, 1.27 mmol) 용액에 25°C에서 HCl/디옥산 (4 M, 10 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0.5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물 용액을 감압 농축하여 갈색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(피페라진-1-일)벤즈아미드 (0.9 g, crude, HCl)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+ = 531.1
단계 3. tert-부틸 4-(3-(4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도)[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)피페리딘-1-카복실레이트 (5)의 합성
DMF (4 mL) 내 3-(1-(tert-부톡시카보닐)피페리딘-4-일)프로판산 (300 mg, 1.17 mmol) 용액에 HATU (664.93 mg, 1.75 mmol) 및 DIPEA (452.02 mg, 3.50 mmol, 609.19 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 10분 동안 교반 하였다. 혼합물에 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(피페라진-1-일)벤즈아미드 (661.07 mg, 1.17 mmol, HCl)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(피페라진-1-일)벤즈아미드가 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 피크 (68 %)를 확인하였다. 혼합물을 EtOAc (30 mL)로 희석 후 농축했다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (12 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 50 mL/분; Eluent of 0~50% MeOH / EtOAc @ 50 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 tert-부틸 4-(3-(4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도)[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)피페리딘-1-카복실레이트를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+ = 770.1
단계 4. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(4-(3-(피페리딘-4-일)프로파노일)피페라진-1-일)벤즈아미드 (6)의 합성
디옥산 (2 mL) 내 tert-부틸 4-(3-(4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도)[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)피페라진-1-일)-3-옥소프로필)피페리딘-1-카복실레이트 (0.5 g, 649.45 μmol) 용액에 25°C에서 HCl/디옥산 (4 M, 20 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 0.5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물 용액을 감압 농축하여 갈색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(4-(3-(피페리딘-4-일)프로파노일)피페라진-1-일)벤즈아미드 (0.5 g, crude, HCl)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+ = 670.4
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(3-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)프로파노일)피페라진-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 76)의 합성
DMSO (5 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (234.67 mg, 849.59 μmol), 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6)-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(4-(3-(피페리딘-4-일)프로파노일)피페라진-1-일)벤즈아미드 (500 mg, 707.99 μmol, HCl) 및 TEA (214.92 mg, 2.12 mmol, 295.63 μL) 용액을 90°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6)-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(4-(3-(피페리딘-4-일)프로파노일)피페라진-1-일)벤즈아미드가 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 피크 (33 %)를 확인하였다. 조 생성물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex luna C18 150*40 mm* 15μm; 이동상: [물 (TFA) -ACN];B%: 32%-62%, 11 분)로 정제 및 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge C18 150*50 mm* 10μm; 이동상: [물 (NH4HCO3) -ACN];B%: 34%-64%, 11 분)로 재정제 하여 생성물을 얻었다. 생성물을 다른 배치와 합친 후 차가운 탈이온수 (10 mL), ACN (30 mL)에 용해하고 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(3-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)프로파노일)피페라진-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (227.4 mg, 0.241 mmol, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 926.5
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ = 11.08 (s, 1H), 9.46 (s, 1H), 8.32 - 8.23 (m, 2H), 7.97 (s, 1H), 7.68 (dd, J = 7.1, 8.4 Hz, 1H), 7.46 - 7.39 (m, 2H), 7.33 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 5.09 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.84 - 4.69 (m, 1H), 4.04 (t, J = 14.0 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.70 (d, J = 11.1 Hz, 2H), 3.57 (d, J = 1.0 Hz, 3H), 3.30 (s, 3H), 3.02 - 2.78 (m, 7H), 2.64 - 2.53 (m, 2H), 2.41 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.12 - 1.26 (m, 17H).
실시예 77. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시-N-메틸벤즈아미드 (화합물 77)의 합성
단계 1. tert-부틸 4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1),4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-메틸벤즈아미도)피페리딘-1-카복실레이트 (2)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (100 mg, 223.50 μmol) 용액에 HATU (127.47 mg, 335.24 μmol) 및 DIPEA (86.65 mg, 670.49 μmol, 116.78 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 10분 동안 교반 하였다. 혼합물에 tert-부틸 4-(메틸아미노)피페리딘-1-카복실레이트 (47.90 mg, 223.50 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi Polar-RP 100x25 mm x 4μm; 이동상: [물 (TFA) -ACN];B%: 50%-70%, 7 분)로 정제 후 동결 건조하여 갈색 고체의 tert-부틸 4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1),4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-메틸벤즈아미도)피페리딘-1-카복실레이트 (120 mg, 178.96 μmol, 80.07% 수율, 96% 순도)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=644.4
단계 2. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-메틸-N-(피페리딘-4-일)벤즈아미드 (3)의 합성
디옥산 (1 mL) 내 tert-부틸 4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-메틸벤즈아미도)피페리딘-1-카복실레이트 (120 mg, 186.42 μmol) 용액에 25°C에서 HCl/디옥산 (4 M, 10 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25°C에서 0.5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하여 갈색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-메틸-N-(피페리딘-4-일)벤즈아미드 (100 mg, crude)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=544.2
단계 3. tert-부틸 3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노에이트 (7)의 합성
DMF (4 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (0.2 g, 584.20 μmol), tert-부틸 3-브로모프로파노에이트 (122.14 mg, 584.20 μmol, 97.72 μL), DIEA (226.51 mg, 1.75 mmol, 305.26 μL) 및 NaI (8.76 mg, 58.42 μmol) 혼합물을 80°C에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물 용액을 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (25 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 70mL/분; Eluent of 0~50% MeOH / EtOAc @ 70mL/분)로 정제하여 황색 고체의 tert-부틸 3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노에이트 (0.3 g, crude)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=471.2
단계 4. 3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로판산 (8)의 합성
디옥산 (1 mL) 내 tert-부틸 3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노에이트 (0.3 g, 637.60 μmol) 용액에 25°C에서 HCl/디옥산 (4 M, 10 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25°C에서 0.5시간 동안 교반 하였다. TLC (디클로로메탄:메탄올 = 10:1; Rf = 0.5)로 출발물질이 완전히 소모됨 및 새로운 스팟이 관찰되었음을 확인하였다. 혼합물 용액을 감압 농축하여 황색 고체의 3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로판산 (260 mg, crude)을 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=415.0
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시-N-메틸벤즈아미드 (화합물 77)의 합성
DMF (1 mL) 내 3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로판산 (50 mg, 120.65 μmol) 및 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-메틸-N-(피페리딘-4-일)벤즈아미드 (69.99 mg, 120.65 μmol, HCl) 혼합물에 25°C에서 HOBt (17.93 mg, 132.72 μmol), EDCI (25.44 mg, 132.72 μmol) 및 TEA (36.63 mg, 361.96 μmol, 50.38 μL, 3 eq)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-메틸-N-(피페리딘-4-일)벤즈아미드가 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물을 물 (10 mL)에 붓고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (60 mL x 3)로 세척 후 Na2SO4로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi Polar-RP 100x25 mmx4μm; 이동상: [물 (TFA) -ACN];B%: 31%-51%, 7 분)로 정제 및 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150x25 mmx 5μm; 이동상: [물 (NH4HCO3) -ACN];B%: 36%-66%, 9 분)로 재정제 후 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시-N-메틸벤즈아미드 (26 mg, 26.00 μmol, 21.55% 수율, 94% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=940.5
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.45 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.23 (br s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.62 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.04 - 6.95 (m, 2H), 4.96 (dd, J = 5.3, 12.1 Hz, 1H), 4.88 - 4.71 (m, 2H), 4.12 - 3.74 (m, 7H), 3.49 - 3.35 (m, 7H), 3.01 - 2.57 (m, 16H), 2.19 - 2.02 (m, 3H), 1.93 - 1.69 (m, 11H).
실시예 78. 2-클로로-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 78)의 합성
단계 1. 9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-2-((4-메톡시벤질)아미노)-5-메틸-5,7,8,9-테트라히드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (3C)의 합성
DMF (20 mL) 내 2-클로로-9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-5,7,8,9-테트라히드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (2 g, 6.31 mmol) 및 (4-메톡시페닐)메탄아민 (1.30 g, 9.47 mmol, 1.23 mL) 용액에 K2CO3 (2.18 g, 15.79 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 100 °C N2 기체 하에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 2-클로로-9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-5,7,8,9-테트라히드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온이 완전히 소모됨 및 원하는 질량을 확인하였다. 혼합물에 H2O (100 mL)를 첨가하고 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (20 mL x 5)로 세척하고, Na2SO4 로 건조, 여과 및 진공 농축하였다. 잔여물을 MTBE (5 mL) 및 EtOAc (5 mL)로 5분 동안 분쇄하고, 현탁액을 여과하고 여과 케이크를 EtOAc (5 mL) 및 MTBE (10 mL)로 순차적으로 세척하고, 여과물을 진공 농축하여 황색 고체의 9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-2-((4-메톡시벤질)아미노)-5-메틸-5,7,8,9-테트라히드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (1.5 g)을 수득하였다. MS(M+H)+=418.0
단계 2. 2-아미노-9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-5,7,8,9-테트라히드로-6H- 피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (3)의 합성
TFA (15 mL) 내 9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-2-((4-메톡시벤질)아미노)-5-메틸-5,7,8,9-테트라히드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (1.5 g) 혼합물을 25 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량을 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하였다. 잔여물을 EtOAc (50 mL)로 희석하고, 혼합물을 Na2CO3 용액 (sat, 30 mL)으로 세척하고, 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge C18 150 x 50mmx 10μm;이동상: [물(NH4HCO3)-ACN];B%: 24%-54%, 11분)로 정제하고 동결 건조하여 갈색 점성 물질의 2-아미노-9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-5,7,8,9-테트라히드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (200 mg, 672.71 μmol, 28.08% 수율)을 수득하였다. MS(M+H)+=298.2
단계 3. 메틸 4-브로모-2-클로로-5-메톡시벤조에이트 (2)의 합성
CH3COOH (14 mL) 내 메틸 2-클로로-5-메톡시벤조에이트 (2.6 g, 12.96 mmol) 용액에 CH3COOH (6 mL) 내 Br2 (2.28 g, 14.26 mmol, 734.91 μL) 용액을 0 °C 에서 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. 혼합물에 CH3COOH (4 mL) 내 Br2 (2.07 g, 12.96 mmol, 668.10 μL) 용액을 0 °C 에서 첨가하였다. 생성된 물질을 25 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 25%의 출발물질이 남아있음 및 24%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물에 CH3COOH (4 mL) 내 Br2 (2.07 g, 12.96 mmol, 668.10 μL) 용액을 첨가하고, 혼합물을 25 °C 에서 12시간 동안 교반하고, LCMS로 8%의 출발물질이 남아있음 및 31%의 원하는 질량을 확인하였다. 혼합물을 NaHCO3 (300 mL, sat)에 부었다. 생성된 혼합물을 EtOAc (100 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 NaHCO3 (100 mL, sat)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 잔여물을 pre-HPLC (컬럼: Phenomenex luna C18 150 x 40mm x 15μm;이동상: [물(FA)-ACN];B%: 55%-65%, 10분)로 정제하고 동결 건조하여 회색 고체의 메틸 4-브로모-2-클로로-5-메톡시벤조에이트 (270 mg, 965.96 μmol, 7.45% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=280.8
단계 4. 메틸 2-클로로-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9- 테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-5-메톡시벤조에이트 (4)의 합성
톨루엔 (20 mL) 내 메틸 4-브로모-2-클로로-5-메톡시벤조에이트 (130 mg, 465.09 μmol) 및 2-아미노-9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-5,7,8,9-테트라히드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (207.41 mg, 697.64 μmol) 혼합물에 Pd2(dba)3 (42.59 mg, 46.51 μmol), Xantphos (40.37 mg, 69.76 μmol), Cs2CO3 (454.61 mg, 1.40 mmol)를 N2 기체 하에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100 °C N2 기체 하에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 메틸 4-브로모-2-클로로-5-메톡시벤조에이트가 완전히 소모됨 및 원하는 질량을 확인하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 진공 농축하였다. 잔여물을 prep-TLC (SiO2, 석유 에터 : EtOAc = 1 : 1)로 정제하여 갈색 고체의 메틸 2-클로로-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-5-메톡시벤조에이트 (218 mg, 439.60 μmol, 94.52% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=496.0
단계 5. 2-클로로-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-5-메톡시벤조산 (5)의 합성
MeOH (3 mL), H2O (3 mL) 및 THF (3 mL) 용액 내 메틸 2-클로로-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-5-메톡시벤조에이트 (215 mg, 433.55 μmol)에 NaOH (2 M in H2O, 0.7 mL)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 25 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 일부 남아 있는 것을 확인하였다. 생성된 혼합물에 NaOH (2 M in H2O, 0.5 mL)를 첨가하고 25 °C 에서 4시간을 추가로 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 일부 남아있음을 확인하였다. 혼합물을 진공 농축하여 대부분의 용매를 제거하고, 잔여물을 H2O (10 mL)로 희석하였다. 현탁액에 HCl 용액 (12 M)을 첨가하여 pH < 3으로 조절하였다. 혼합물에 EtOAc (10 mL)를 첨가하고 현탁액을 10분간 교반 하였다. 현탁액을 여과하고 여과 케이크를 MTBE (20 mL)로 세척하고, 모아서 건조하였다. 잔여물에 HCl 용액 (15 mL, 4 M)을 첨가하고 현탁액을 5분간 교반 하였다. 현탁액을 진공 농축하여 갈색 고체의 2-클로로-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-5-메톡시벤조산 (200 mg, 415.04 μmol, 95.73% 수율)을 수득하였다. MS(M+H)+=482.0
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.81 (br s, 1H), 8.36 (d, J = 10.1 Hz, 2H), 7.47 (s, 1H), 5.00 - 4.85 (m, 1H), 4.18 (br t, J = 13.2 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.33 (s, 3H), 2.02 - 1.91 (m, 2H), 1.85-1.70 (m, 2H), 1.7-1.50 (m, 5H).
단계 6. 2-클로로-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 78)의 합성
DMF (2 mL) 내 2-클로로-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-5-메톡시벤조산 (70 mg, 145.26 μmol) 용액에 HATU (82.85 mg, 217.90 μmol) 및 DIPEA (93.87 mg, 726.32 μmol, 126.51 μL)를 첨가하고, 25 °C 에서 15분간 교반 하였다. 혼합물에 4-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (100.66 mg, 188.84 μmol, HCl 염)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 2-클로로-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-5-메톡시벤조산이 완전히 소모됨 및 원하는 질량을 확인하였다. 혼합물을 다른 배치 (20mg)와 합쳤다. 합쳐진 반응 혼합물에 CH3COOH를 첨가하여 pH < 7로 조절하였다. 혼합물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi C18 150 x 25mm x 10μm;이동상: [물(FA)- ACN]; B%: 15% - 51%, 11분) 이후 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150 x 25mm x 5μm;이동상: [물(NH4HCO3)-ACN]; B%: 45% - 75%, 7 분)로 정제하고, 동결 건조하여 황색 고체의 2-클로로-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-5-메톡시벤즈아미드 (69.7 mg, 71.85 μmol, 49.46% 수율, 99% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=960.3
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.08 (br s, 1H), 8.45 - 8.36 (m, 1H), 8.35 - 8.22 (m, 2H), 7.98 (s, 1H), 7.70 (dd, J = 7.3, 8.3 Hz, 1H), 7.34 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 7.05 (s, 1H), 5.09 (dd, J = 5.3, 12.9 Hz, 1H), 4.90 - 4.76 (m, 1H), 4.26 (br d, J = 13.3 Hz, 1H), 4.06 (br t, J = 13.9 Hz, 2H), 4.00-3.91 (m, 1H), 3.91 (s, 4H), 3.32 (br s, 3H), 3.30-3.25 (m, 4H), 3.22 - 3.13 (m, 1H), 2.93 - 2.75 (m, 2H), 2.63 - 2.51 (m, 10H), 2.08 - 1.94 (m, 3H), 1.93 - 1.86 (m, 1H), 1.84-1.75 (m, 1H), 1.75 - 1.66 (m, 2H), 1.63-1.50 (m, 4H), 1.51 - 1.29 (m, 2H).
실시예 79. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)옥시)아세틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 79)의 합성
단계 1. 벤질 4-(2-(4-((tert-부톡시카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-2-옥소에톡시)피페리딘-1-카복실레이트 (2)의 합성
DMF (10 mL) 내 벤질 4-히드록시피페리딘-1-카복실레이트 (200 mg, 850.06 μmol) 용액에 0°C에서 NaH (51.00 mg, 1.28 mmol, 60% 순도)를 첨가하고 0.5시간 동안 교반 후 tert-부틸(1-(2-클로로아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (258.79 mg, 935.06 μmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 25°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 생성물을 확인하였다. 혼합물을 염수 (10 mL)로 희석하고, EtOAc (5 mL x 3)로 추출하고, 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (Biotage, 4 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 4~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 20 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 벤질 4-(2-(4-((tert-부톡시카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-2-옥소에톡시)피페리딘-1-카복실레이트 (210 mg, 362.09 μmol, 42.60% 수율, 82% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=476.1
단계 2. tert-부틸 (1-(2-(피페리딘-4-일옥시)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (3)의 합성
CF3CH2OH (3 mL) 내 벤질 4-(2-(4-((tert-부톡시카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-2-옥소에톡시)피페리딘-1-카복실레이트 (160 mg, 336.43 μmol) 용액에 N2 하 Pd/C (0.16 g, 33.64 μmol, 10% 순도)를 첨가하고, 용액에 H2 (0.16 g, 79.37 mmol)로 버블링하고, 혼합물을 H2 (15 psi) 하 25°C에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 생성물을 확인하였다. 혼합물을 여과하였다. 여과물을 진공 농축하여 황색 오일의 tert-부틸 (1-(2-(피페리딘-4-일옥시)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (180 mg, 437.55 μmol, 130.06% 수율, 83% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=342.1
단계 3. tert-부틸 (1-(2-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)옥시)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (4)의 합성
DMSO (3 mL) 내 tert-부틸 (1-(2-(피페리딘-4-일옥시)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (130 mg, 380.74 μmol) 용액에 TEA (115.58 mg, 1.14 mmol, 158.98 μL) 및 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (105.17 mg, 380.74 μmol)를 첨가하고, 혼합물을 90°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량이 검출됨을 확인하였고 TLC (100 % EA)로 주 스팟 형성을 확인하였다. 혼합물을 염수 (10 mL)로 희석하고, EtOAc (10 mL x 3)로 추출하고, 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (Biotage, 4 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 4~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 30 mL/분)로 정제하여 황색 파우더의 tert-부틸 (1-(2-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)옥시)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (110 mg, 184.05 μmol, 48.34% 수율, 100% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=598.7
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.10 (s, 1H), 7.72 - 7.64 (m, 1H), 7.34 (dd, J = 5.7, 7.5 Hz, 2H), 6.89 (br d, J = 7.1 Hz, 1H), 5.10 (dd, J = 5.3, 13.0 Hz, 1H), 4.25 - 4.10 (m, 3H), 3.85 - 3.73 (m, 1H), 3.63 - 3.48 (m, 4H), 3.12 - 2.98 (m, 4H), 2.95 - 2.81 (m, 2H), 2.76 - 2.64 (m, 2H), 2.63 - 2.53 (m, 2H), 2.03-2.12 (m, 2H), 1.80 - 1.62 (m, 4H), 1.38 (s, 9H).
단계 4. 4-(4-(2-(4-아미노피페리딘-1-일)-2-옥소에톡시)피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (5)의 합성
디옥산 (1 mL) 내 tert-부틸 (1-(2-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)옥시)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (50 mg, 83.66 μmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 20.91 μL)를 첨가하고, 혼합물을 25°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량을 확인하였다. 혼합물을 진공 농축하여 황색 파우더의 4-(4-(2-(4-아미노피페리딘-1-일)-2-옥소에톡시)피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (46 mg, 80.11 μmol, 95.76% 수율, 93% 순도, HCl 염)을 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=498.1
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)옥시)아세틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 79)의 합성
DMF (1 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (50 mg, 111.75 μmol) 용액에 DIPEA (43.33 mg, 335.24 μmol, 58.39 μL) 및 HATU (63.74 mg, 167.62 μmol)를 첨가하고, 25°C에서 0.5시간 동안 교반 후 4-(4-(2-(4-아미노피페리딘-1-일)-2-옥소에톡시)피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (41.77 mg, 78.22 μmol, HCl 염)을 첨가하고 생성된 혼합물을 25°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량을 확인하였다. 혼합물을 Prep-HPLC(컬럼: Phenomenex Synergi Polar-RP 100*25mm*4μm; 이동상: [물 (TFA) - ACN]; B%: 44% - 64%, 7 분) 및 Prep-HPLC(컬럼: Waters Xbridge 150*25mm* 5μm; 이동상: [물(NH4HCO3) - ACN]; B%: 40% - 70%)로 정제 후 동결 건조하여 황색 파우더의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)옥시)아세틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (28.3 mg, 30.04 μmol, 26.88% 수율, 98.4% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=927.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.17 - 10.94 (m, 1H), 8.31 - 8.25 (m, 2H), 8.18 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.69 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.52 - 7.46 (m, 2H), 7.35 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 5.10 (dd, J = 5.4, 12.7 Hz, 1H), 4.77 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 4.35 (d, J = 12.7 Hz, 1H), 4.30 - 4.15 (m, 2H), 4.05 (t, J = 14.0 Hz, 3H), 3.96 - 3.85 (m, 4H), 3.64 - 3.50 (m, 3H), 3.32 (s, 3H), 3.18 - 3.03 (m, 3H), 2.96 - 2.81 (m, 1H), 2.78 - 2.65 (m, 1H), 2.64 - 2.54 (m, 2H), 2.09 - 1.78 (m, 7H), 1.77 - 1.50 (m, 9H), 1.49 - 1.36 (m, 1H).
실시예 80. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아제티딘-3-일)옥시)아세틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 80)의 합성
단계 1. 벤질 3-(2-(4-((tert-부톡시카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-2-옥소에톡시)아제티딘-1-카복실레이트 (2)의 합성
DMSO (8 mL) 내 벤질 3-하이드록시아제티딘-1-카복실레이트 (300 mg, 1.45 mmol) 용액에 N2 하 20°C에서 H2O (5 mL) 내 NaOH (98.44 mg, 2.46 mmol) 용액을 첨가한 후 tert-부틸(1-(2-클로로아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (480.80 mg, 1.74 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 20°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량을 확인하였다. 혼합물을 염수 (10 mL)로 희석하고, EtOAc (10 mL x 3)로 추출하고, 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (Biotage, 4 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 1~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 30 mL/분)로 정제하여 백색 고체의 벤질 3-(2-(4-((tert-부톡시카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-2-옥소에톡시)아제티딘-1-카복실레이트 (350 mg, 649.13 μmol, 44.84% 수율, 83% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=448.1
단계 2. tert-부틸 (1-(2-(아제티딘-3-일옥시)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (3)의 합성
CF3CH2OH (6 mL) 내 벤질 3-(2-(4-((tert-부톡시카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-2-옥소에톡시)아제티딘-1-카복실레이트 (250 mg, 558.63 μmol) 용액에 N2 하 Pd/C (200 mg, 187.93 μmol, 10% 순도)를 첨가하고, 혼합물을 15 psi의 H2 하 25°C에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량을 확인하였다. 혼합물을 여과하여 여과 액체 물질을 얻었고, 이를 진공 농축하여 황색 오일의 tert-부틸 (1-(2-(아제티딘-3-일옥시)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (190 mg, 297.07 μmol, 53.18% 수율, 49% 순도)를 수득하였고, 바로 사용하였다. MS(M+H)+=314.0
단계 3. tert-부틸 (1-(2-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아제티딘-3-일)옥시)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (4)의 합성
DMSO (10 mL) 내 tert-부틸 (1-(2-(아제티딘-3-일옥시)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (190 mg, 606.27 μmol) 용액에 TEA (184.04 mg, 1.82 mmol, 253.16 μL) 및 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (167.46 mg, 606.27 μmol)를 첨가하고, 혼합물을 90°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 생성물을 확인하였고, TLC (EA)로 주 스팟을 확인하였다. 혼합물을 염수 (10 mL)로 희석하고, EtOAc (10 mL x 3)로 추출하고, 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (Biotage, 4 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 4~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 30 mL/분)로 정제하여 황색 파우더의 tert-부틸 (1-(2-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아제티딘-3-일)옥시)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (224 mg, 334.27 μmol, 55.13% 수율, 85% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=570.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 7.58 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.81 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.06 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.47 - 4.36 (m, 3H), 4.28 - 4.14 (m, 3H), 4.03 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.73 - 3.65 (m, 1H), 3.54 - 3.42 (m, 1H), 3.34 - 3.30 (m, 2H), 3.08 - 2.96 (m, 1H), 2.94 - 2.82 (m, 1H), 2.77 - 2.66 (m, 1H), 2.63 - 2.56 (m, 1H), 1.99 (s, 2H), 1.79 - 1.65 (m, 2H), 1.41 - 1.37 (m, 9H)
단계 4. 4-(3-(2-(4-아미노피페리딘-1-일)-2-옥소에톡시)아제티딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (5)의 합성
DCM (4 mL) 내 tert-부틸 (1-(2-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아제티딘-3-일)옥시)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (90 mg, 158.00 μmol) 용액에 2,6-루티딘 (414.00 mg, 3.86 mmol, 450.00 μL) 및 TMSOTf (553.50 mg, 2.49 mmol, 450.00 μL)를 첨가하고, 혼합물을 25°C에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 생성물을 확인하였다. 혼합물을 물 (2 mL)로 희석하고, EtOAc (5 mL x 3)로 추출하고, 수층을 동결 건조하여 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 Prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25mm* 5μm; 이동상: [물(NH4HCO3)-ACN];B%: 10%-40%,분)로 정제 후 동결 건조하여 황색 파우더의 4-(3-(2-(4-아미노피페리딘-1-일)-2-옥소에톡시)아제티딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (20 mg, 40.47 μmol, 25.61% 수율, 95% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=470.0
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아제티딘-3-일)옥시)아세틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 80)의 합성
DMF (1 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (20 mg, 44.70 μmol) 용액에 HATU (17.00 mg, 44.70 μmol) 및 DIEA (17.33 mg, 134.10 μmol, 23.36 μL)를 첨가하고, 혼합물을 25°C에서 0.5시간 동안 교반 후 4-(3-(2-(4-아미노피페리딘-1-일)-2-옥소에톡시)아제티딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (19.94 mg, 42.46 μmol)를 첨가하고, 혼합물을 25°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물을 물 (2 mL)로 희석하고, EtOAc (2 mL x 3)로 추출하고, 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 조 생성물을 prep-TLC (DCM : MeOH=10:1) 및 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25mm* 5μm; 이동상: [물(NH4HCO3)-ACN];B%: 38%-68%,분)로 정제 후 동결 건조하여 황색 파우더의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아제티딘-3-일)옥시)아세틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (18.2 mg, 19.56 μmol, 43.76% 수율, 96.6% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=899.0
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.28 - 10.90 (m, 1H), 8.34 - 8.24 (m, 2H), 8.18 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.59 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.54 - 7.45 (m, 2H), 7.15 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 6.83 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.06 (dd, J = 5.3, 12.8 Hz, 1H), 4.83 - 4.71 (m, 1H), 4.52 - 4.17 (m, 7H), 4.11 - 4.00 (m, 5H), 3.94 (s, 3H), 3.85 - 3.77 (m, 1H), 3.33 (s, 3H), 3.17 - 3.04 (m, 1H), 2.60-2.82 (m, 4H), 2.04 - 1.82 (m, 5H), 1.71 - 1.44 (m, 7H).
실시예 81. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 81)의 합성
단계 1. 벤질 4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (2)의 합성
싸이올레인 1,1-디옥사이드 (10 mL) 내 3-(4-아미노-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (10 g, 38.57 mmol) 및 비스(2-클로로에틸)아민 (5.48 g, 30.69 mmol, HCl) 용액을 140°C에서 12시간 동안 가열하였다. LCMS로 반응물의 피크 (48 %)가 남아있음을 확인하였고, 혼합물을 140°C에서 12시간 동안 추가로 가열 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크 (45 %)가 검출되었다. 혼합물에 TEA (11.71 g, 115.71 mmol, 16.11 mL)및 THF (20 mL) 내 CbzCl (6.58 g, 38.57 mmol, 5.48 mL) 용액을 첨가하고 이를 25°C에서 1시간 동안 추가로 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크 (68 %)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (300 mL)에 천천히 부었다. 혼합물을 여과하고, 여과물을 EtOAc (400 mL x 2)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4 로 건조하고, 여과 케이크를 모으고 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (EtOAc:DCM=10:1)로 정제하여 황색 고체의 벤질 4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (3.1 g, 6.70 mmol, 17.38% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=463.1
단계 2. 3-(1-옥소-4-(피페라진-1-일)이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (3)의 합성
TFE (20 mL) 내 벤질 4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (2.5 g, 5.41 mmol) 용액에 N2 하 Pd/C (200 mg, 324.33 μmol, 10% 순도)를 첨가하였다. 현탁액을 진공 하 탈기하고 H2로 수차례 퍼지하였다. 혼합물을 H2 (15 psi) 하 20°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 반응물의 피크 (68 %)가 남아있음을 확인하였고, 혼합물을 20°C에서 12시간 동안 추가로 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크 (89 %)를 확인하였다. 혼합물을 여과하고, 여과물을 진공 농축하여 황색 고체의 3-(1-옥소-4-(피페라진-1-일)이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (2.1 g, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=329.1
단계 3. tert-부틸 (1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (4)의 합성
DMF (5 mL) 내 3-(1-옥소-4-(피페라진-1-일)이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (300 mg, 913.62 μmol) 및 tert-부틸 (1-(3-클로로프로파노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (1.06g, 3.65mmol) 용액에 DIPEA (354.24 mg, 2.74 mmol, 477.41 μL)를 첨가하고, 혼합물을 70°C에서 24시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크 (36 %)를 확인하였다. 혼합물을 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (Biotage, 12 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 10~30% EtOAc/MeOH gradient @ 60 mL/분)로 정제하여 백색 고체의 tert-부틸 (1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (170 mg, 291.75 μmol, 31.93% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=583.2
단계 4. 3-(4-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (5)의 합성
디옥산 (2 mL) 내 tert-부틸 N-[1-[3-[4-[2-(2,6-디옥소-3-피페리딜)-1-옥소-이소인돌린-4-일]피페라진-1-일]프로파노일]-4-피페리딜]카바메이트 (170 mg, 291.75 μmol) 및 HCl/디옥산 (4 M, 2 mL) 용액을 20°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크 (61 %)를 확인하였다. 혼합물을 진공 농축하여 백색 고체의 3-(4-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (150 mg, crude, HCl)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 483.2
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 81)의 합성
DMF (1.5 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (68.96 mg, 154.13 μmol) 용액에 HATU (117.21 mg, 308.26 μmol) 및 DIPEA (59.76 mg, 462.40 μmol, 80.54 μL)를 첨가하고, 혼합물을 25°C에서 10분 동안 교반 후 3-(4-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (80 mg, 154.13μmol, HCl)를 첨가하고, 혼합물을 25°C에서 1시간 동안 추가로 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크 (48 %)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (8 mL)로 희석 후 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4 로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25mm* 5μm; 이동상: [물 (10mM NH4HCO3) -ACN];B%: 33%-63%, 분)로 정제 후 동결 건조하여 백색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (26.1 mg, 26.59 μmol, 17.25% 수율, 92.9% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=912.3
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 10.98 (s, 1H), 8.30 - 8.24 (m, 2H), 8.15 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.51 - 7.41 (m, 3H), 7.31 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 5.15 - 5.08 (m, 1H), 4.81 - 4.71 (m, 1H), 4.47 - 4.28 (m, 3H), 4.08 - 4.00 (m, 3H), 3.95 - 3.92 (m, 4H), 3.31 - 3.31 (m, 3H), 3.19 - 3.01 (m, 6H), 2.97 - 2.87 (m, 1H), 2.64 - 2.55 (m, 10H), 2.02 - 1.88 (m, 4H), 1.86 - 1.80 (m, 1H), 1.72 - 1.69 (m, 2H), 1.69 - 1.51 (m, 4H), 1.51 - 1.36 (m, 2H).
실시예 82. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 82)의 합성
단계 1. 메틸 2-(브로모메틸)-4-니트로벤조에이트 (2)의 합성
CCl4 (200 mL) 내 메틸 2-메틸-4-니트로벤조에이트 (10 g, 51.24 mmol) 용액에 NBS (10.93 g, 61.43 mmol) 및 BPO (266.67 mg, 1.10 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 85°C에서 12시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터 : EtOAc = 10 : 1)로 출발물질이 완전히 소모됨 및 높은 극성의 하나의 새로운 스팟 형성을 확인하였다. 혼합물을 포화 NaHCO3 (60 mL) 및 염수 (150.0 mL)로 세척했다. 유기상을 무수 Na2SO4 로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (Biotage; 80 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~2% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 백색 고체의 메틸 2-(브로모메틸)-4-니트로벤조에이트 (8.5 g, 31.01 mmol, 60.53% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=275.1
단계 2. 3-(5-니트로-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (4)의 합성
DMF (20 mL) 내 메틸 2-(브로모메틸)-4-니트로벤조에이트 (2 g, 7.30 mmol) 용액에 3-아미노피페리딘-2,6-디온 (935.02 mg, 7.30 mmol) 및 TEA (2.22 g, 21.89 mmol, 3.05 mL)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 75°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 염수 (60 mL)로 희석 후 EtOAc (60 mL x 5)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (60 mL)로 세척하고, Na2SO4 로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 잔여물을 20°C에서 10분 동안 EtOAc (10 mL)로 분쇄하여 청색 고체의 3-(5-니트로-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (1.2 g, 3.69 mmol, 50.60% 수율, 89% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=290.0
단계 3. 3-(5-아미노-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (5)의 합성
CF3CH2OH (120 mL) 내 3-(5-니트로-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (1.2 g, 4.15 mmol) 및 Pd/C (100 mg, 10% 순도) 용액을 H2로 3차례 탈기 및 퍼지하고, 생성된 혼합물을 H2 (15 Psi) 기체 하 20°C에서 6시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 현탁액을 셀라이트 패드로 여과 후 여과 케이크를 CF3CH2OH (100 mL)로 세척하였다. 합쳐진 잔여물을 농축 건조하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 20°C에서 10분 동안 EtOAc (20 mL)로 분쇄하여 청색 고체의 3-(5-아미노-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (900 mg, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=260.0
단계 4. tert-부틸 4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-카복실레이트 (6)의 합성
싸이올레인1,1-디옥사이드 (10 mL) 내 3-(5-아미노-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (500 mg, 1.93 mmol) 및 tert-부틸 비스(2-클로로에틸)카바메이트 (466.99 mg, 1.93 mmol) 혼합물을 140°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 63%의 3-(5-아미노-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온이 남아있음 및 de-Boc 생성물 질량의 피크 (16%)를 확인하였다. 추가적인 tert-부틸 비스(2-클로로에틸)카바메이트 (500 mg)를 첨가하고 혼합물을 140°C에서 24시간 동안 추가로 교반 하였다. LCMS로 미량의 3-(5-아미노-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온이 남아있음 및 de-Boc 생성물 질량의 피크 (66%)를 확인하였다. 혼합물을 K2CO3 (aq., 2 M)를 사용하여 pH = 9로 조정하였고, Boc2O (505.08 mg, 2.31 mmol, 531.67 μL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크 (81%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 염수 (20 mL)로 희석하고, EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (20 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4 로 건조하고, 여과하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (Biotage; 80 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 20~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제 후 25°C에서 10분 동안 MTBE (10 mL)로 분쇄하여 황색 고체의 tert-부틸 4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-카복실레이트 (450 mg, 1.05 mmol, 54.46% 수율, 100% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=429.0
단계 5. 3-(1-옥소-5-(피페라진-1-일)이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (7)의 합성
디옥산 (4 mL) 내 tert-부틸 4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 466.77 μmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 4 mL)를 첨가하고 혼합물을 20°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크 (98%)를 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하여 황색 고체의 3-(1-옥소-5-(피페라진-1-일)이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (170 mg, crude, HCl 염)을 수득하였다. MS(M+H)+=329.0
단계 6. tert-부틸 (1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (9)의 합성
DMF (5 mL) 내 3-(1-옥소-5-(피페라진-1-일)이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (150 mg, 411.16 μmol, HCl 염) 용액에 tert-부틸(1-(3-클로로프로파노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (179.34 mg, 616.73 μmol), DIPEA (265.69 mg, 2.06 mmol, 358.08 μL) 및 NaI (6.75 mg, 45.03 μmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 60°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 56%의 3-(1-옥소-5-(피페라진-1-일)이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온이 남아있음 및 원하는 질량의 피크 (16%)를 확인하였다. 추가적인 tert-부틸(1-(3-클로로프로파노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (200 mg)를 첨가하고 혼합물을 60°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 피크 (38%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 염수 (15 mL)로 희석 후 EtOAc (15 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (15 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4 로 건조하고, 여과하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (Biotage; 20 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 20~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 80 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 tert-부틸 (1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (200 mg, 326.07 μmol, 79.31% 수율, 95% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=583.1
단계 7. 3-(5-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (10)의 합성
디옥산 (2 mL) 내 tert-부틸 (1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (200 mg, 343.24 μmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 85.81 μL)를 첨가하고, 혼합물을 20°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크 (97%)를 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하여 황색 고체의 3-(5-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (160 mg, crude)을 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=483.3
단계 8. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 82)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (74.17mg, 165.78μmol) 용액에 HATU (94.55 mg, 248.67 μmol), DIPEA (64.28 mg, 497.33 μmol, 86.63 μL)를 첨가하고, 혼합물을 20°C에서 0.5시간 동안 교반 후 3-(5-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (80 mg, 165.78μmol)을 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크 (48%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 염수 (10 mL)로 희석 후 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (10 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4 로 건조하고, 여과하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 역상 HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi C18 150*25 mm* 10μm; 이동상: [물 (FA) - ACN]; B%: 18% - 51%, 11 분)로 정제 후 역상 HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25 mm* 5μm; 이동상: [물 (NH4HCO3) - ACN]; B%: 30% - 60%, 8 분)로 재정제하였다. 용출물을 동결 건조하여 백색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (33.1 mg, 35.21 μmol, 21.24% 수율, 97% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=912.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 10.94 (s, 1H), 8.31 - 8.24 (m, 2H), 8.15 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.55 - 7.45 (m, 3H), 7.11 - 7.03 (m, 2H), 5.09 - 5.00 (m, 1H), 4.83 - 4.71 (m, 1H), 4.45 - 4.15 (m, 3H), 4.12 - 4.00 (m, 3H), 3.98 - 3.88 (m, 4H), 3.32 - 3.25 (m, 8H), 3.18 -3.07 (m, 1H), 2.97 - 2.83 (m, 1H), 2.72 - 2.56 (m, 9H), 2.40 - 2.31 (m, 1H), 2.01 - 1.81 (m, 5H), 1.75 - 1.66 (m, 2H), 1.64 - 1.53 (m, 4H), 1.52 - 1.35 (m, 2H).
실시예 83. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-(4-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-일)시클로헥실)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 83)의 합성
단계 1. tert-부틸 4-((4-((1r,4r)-4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로)-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미도)시클로헥실)피페라진-1-일)메틸)피페리딘-1-카복실레이트 (3)의 합성
DMF (4 mL) 내 4-[(9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-8H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노]-2-플루오로-5-메톡시-N-(4-피페라진-1-일시클로헥실) 벤즈아미드 (150 mg, 237.83 μmol) 용액에 20°C에서 DIPEA (92.21 mg, 713.49 μmol, 124.28 μL) 및 tert-부틸 4-(요오도메틸)피페리딘-1-카복실레이트 (85.07 mg, 261.61 μmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 60°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 67%의 원하는 질량의 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (12 mL)로 희석 후 EtOAc (12 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 염수 (12 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (4 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100 % EtOAc/석유 에터 to 0~10% DCM/MeOH gradient @ 60 mL/분)로 정제하여 주황 오일의 tert-부틸 4-((4-((1r,4r)-4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로)-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미도)시클로헥실)피페라진-1-일)메틸)피페리딘-1-카복실레이트 (99 mg, 119.57 μmol, 50.27% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=828.2
단계 2. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시-N-((1r,4r)-4-(4-(피페리딘-4-일메틸)피페라진-1-일)사이클로헥실)벤즈아미드 (4)의 합성
디옥산 (1 mL) 내 tert-부틸 4-((4-((1r,4r)-4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로)-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미도)시클로헥실)피페라진-1-일)메틸)피페리딘-1-카복실레이트 (99 mg, 119.57μmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 6 mL)를 첨가하고 결과물을 20°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 84%의 원하는 질량의 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하여 황백색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시-N-((1r,4r)-4-(4-(피페리딘-4-일메틸)피페라진-1-일)사이클로헥실)벤즈아미드 (99 mg, crude, HCl)를 수득하였다. MS(M+H)+=728.2
단계 3. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-(4-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-일)시클로헥실)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 83)의 합성
DMSO (10 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시-N-((1r,4r)-4-(4-(피페리딘-4-일메틸)피페라진-1-일)시클로헥실)벤즈아미드 (99 mg, 129.53 μmol, HCl) 용액에 20°C에서 TEA(39.32 mg, 388.58 μmol, 54.09 μL) 및 2-(2,6-디옥소-3-피페리딜)-4-플루오로-이소인돌린-1,3-디온 (42.93 mg, 155.43 μmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 100°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 75%의 2-(2,6-디옥소-3-피페리딜)-4-플루오로-이소인돌린-1,3-디온이 남아있음 및 17%의 원하는 질량의 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (12 mL)로 희석하고, EtOAc (12 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Unisil 3-100 C18 Ultra 150*50 mm*3 μm; 이동상: [물 (FA) -ACN];B%: 16%-46%, 15 분)로 정제 후 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-(4-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-일)시클로헥실)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (21 mg, 18.96 μmol, 14.64% 수율, 93% 순도, FA)를 수득하였다. MS(M+H)+=984.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.09 (br s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.24 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.82 (dd, J = 3.5, 7.9 Hz, 1H), 7.70 - 7.64 (m, 1H), 7.32 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 7.18 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 5.08 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.82 (q, J = 8.0 Hz, 1H), 4.07 (t, J = 13.9 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.68 (d, J = 11.3 Hz, 3H), 3.33 (s, 3H), 2.94 - 2.80 (m, 3H), 2.63 - 2.50 (m, 8H), 2.41 - 2.29 (m, 3H), 2.16 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 2.06 - 1.88 (m, 5H), 1.86 - 1.54 (m, 11H), 1.42 - 1.20 (m, 6H).
실시예 84. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((3S)-1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)프로파노일)피롤리딘-3-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 84)의 합성
단계 1. 3-(5-브로모-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (2)의 합성
CH3CN (60 mL) 내 메틸 4-브로모-2-(브로모메틸)벤조에이트 (6 g, 19.48 mmol) 용액에 25°C에서 DIPEA (12.61 g, 97.60 mmol, 17 mL) 및 3-아미노피페리딘-2,6-디온; HCl (3.22 g, 19.56 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을N2 기체 하 90°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 34%의 원하는 질량의 피크가 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 25°C에서 1시간 동안 교반하고, 이를 여과하여 여과 케이크를 MTBE (20 mL x 3)로 세척 하고, 감압 건조하여 회색 고체의 3-(5-브로모-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (3 g, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=323.1
단계 2. tert-부틸 4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-카복실레이트 (3)의 합성
DMSO (12 mL) 내 3-(5-브로모-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (500 mg, 1.55 mmol) 용액에 RuPhos Pd G4 (200.00 mg, 235.18 μmol), KOAc (833.33 mg, 8.49 mmol) 및 tert-부틸 피페라진-1-카복실레이트 (500.00 mg, 2.68 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 기체 하 100°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 24% 피크의 원하는 질량을 확인하였다. 반응 혼합물을 여과 후 여과물에 H2O (20 mL)를 첨가하고, 혼합물을 EtOAc (30 mL x 2)로 추출 후 합쳐진 유기상을 염수 90 mL (30 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (Biotage; 20 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0 ~ 10% MeOH : EtOAc ether gradient, 50 mL/분)로 정제하여 밝은 황색 고체의 tert-부틸 4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-카복실레이트 (400 mg, 933.53 μmol, 60.33% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=429.3
단계 3. 3-(1-옥소-5-(피페라진-1-일)이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (4)의 합성
디옥산 (20 mL) 내 tert-부틸 4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-카복실레이트 (400 mg, 933.53 μmol) 용액에 25°C에서 HCl/디옥산 (4 M, 20 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 기체 하 25°C에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였고 출발물질의 피크가 남지 않음을 확인하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하여 밝은 황색 고체의 3-(1-옥소-5-(피페라진-1-일)이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (370 mg, crude, 2HCl)을 수득하였다. MS(M+H)+=329.3
단계 4. tert-부틸 ((3S)-1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)프로파노일)피롤리딘-3-일)카바메이트 (5)의 합성
DMF (10 mL) 내 3-(1-옥소-5-(피페라진-1-일)이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (370 mg, 1.13 mmol) 용액에 KI (200 mg, 1.20 mmol), DIPEA (890.40 mg, 6.89 mmol, 1.2mL) 및 (S)-tert-부틸(1-(3-클로로프로파노일)피롤리딘-3-일)카바메이트 (1.0 g, 3.61 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 기체 하 60°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량이 검출되었고 출발물질의 피크가 검출되지 않음을 확인하였다. 혼합물을 여과 후 여과물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex luna C18 150*40 mm* 15μm; 이동상: [물 (0.225%FA) - ACN]; B%: 5% - 35%, 10 분, 컬럼 온도: 30 °C)로 정제 후 동결 건조하여 밝은 황색 오일의 tert-부틸 ((3S)-1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)프로파노일)피롤리딘-3-일)카바메이트 (180 mg, 316.53 μmol, 28.09% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=569.6
단계 5. 3-(5-(4-(3-((S)-3-아미노피롤리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (6)의 합성
디옥산 (5 mL) 내 tert-부틸 ((3S)-1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)프로파노일)피롤리딘-3-일)카바메이트 (180 mg, 316.53 μmol) 용액에 25°C에서 HCl/디옥산 (4 M, 7.53 mL)를 첨가하였다. N2 기체 하 25°C에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였고 출발물질의 피크가 남지 않음을 확인하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하여 밝은 황색 고체의 3-(5-(4-(3-((S)-3-아미노피롤리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (170 mg, crude, 2HCl)을 수득하였다. MS(M+H)+=469.3
단계 6. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((3S)-1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)프로파노일)피롤리딘-3-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 84)의 합성
DMF (4 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (120 mg, 257.83 μmol) 용액에 25°C에서 HATU (203.08 mg, 534.09 μmol), DIPEA (222.60 mg, 1.72 mmol, 300.00 μL) 및 3-(5-(4-(3-((S)-3-아미노피롤리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (160 mg, 295.49 μmol, 2HCl)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 기체 하 25°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 54%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물에 H2O (8 mL)을 첨가하고, 혼합물을 EtOAc (20 mL x 2)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 60 mL (20 mL x 3)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고, 여과 후 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: 3_Phenomenex Luna C18 75*30 mm*3μm; 이동상: [물 (0.1%TFA) - ACN]; B%: 28% - 48%, 7 분, 컬럼 온도: 30 °C)로 정제 및 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge C18 150*50 mm* 10μm; 이동상: [물 (10 mM NH4HCO3) - ACN]; B%: 26%-56%, 11 분, 컬럼 온도: 30 °C)로 재정제 후 동결 건조하여 백색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((3S)-1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)프로파노일)피롤리딘-3-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (78.0 mg, 80.05 μmol, 31.05% 수율, 94% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=916.6
1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ = 10.94 (s, 1H), 8.35 - 8.20 (m, 3H), 8.04 (s, 1H), 7.57 - 7.44 (m, 1H), 7.20 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 7.11 - 7.00 (m, 2H), 5.08 - 4.99 (m, 1H), 4.86 - 4.76 (m, 1H), 4.52 - 4.38 (m, 1H), 4.35 - 4.27 (m, 1H), 4.24 - 4.15 (m, 1H), 4.12 - 4.02 (m, 2H), 3.91 (d, J = 3.0 Hz, 3H), 3.81 - 3.55 (m, 2H), 3.53 - 3.39 (m, 2H), 3.33-3.32 (m, 3H), 3.30 - 3.26 (m, 4H), 2.95 - 2.85 (m, 1H), 2.64-2.51 (m, 9H), 2.38 - 2.07 (m, 2H), 2.02 - 1.86 (m, 4H), 1.76 - 1.55 (m, 6H).
실시예 85. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((3S)-1-(4-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)-4-옥소부타노일)피롤리딘-3-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 85)의 합성
화합물 85는 실시예 81에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=926.4, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 8.49 - 8.38 (m, 1H), 8.31 - 8.25 (m, 2H), 7.99 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.53 - 7.48 (m, 2H), 7.48 - 7.42 (m, 1H), 7.35 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.17 - 5.09 (m, 1H), 4.82 - 4.71 (m, 1H), 4.57 - 4.39 (m, 2H), 4.36 - 4.27 (m, 1H), 4.05 (br t, J = 13.9 Hz, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.65 - 3.58 (m, 4H), 3.45 - 3.36 (m, 1H), 3.33 - 3.30 (m, 3H), 3.30 - 3.23 (m, 1H), 3.13 - 2.87 (m, 5H), 2.64 - 2.56 (m, 3H), 2.49 - 2.48 (m, 4H), 2.27 - 2.17 (m, 1H), 2.16 - 2.05 (m, 1H), 2.03 - 1.90 (m, 4H), 1.75 - 1.67 (m, 2H), 1.65-1.52 (m, 4H).
실시예 86. 4-(4-(2-(4-(4-((9-사이클로펜틸-7,7-다이플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도))[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조일)피페라진-1-일)에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일) 이소인돌린-1,3-디온 (화합물 86)의 합성
화합물 86은 실시예 81에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=884.4, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.08 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.15 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.69 (t, J = 0.8 Hz, 1H), 7.34 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 7.04 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.96 (dd, J = 1.2, 8.0 Hz, 1H), 5.10 - 5.06 (m, 1H), 4.74 - 4.66 (m, 1H), 4.02 (t, J = 14 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.56 - 3.43 (m, 4H), 3.32 (s, 3H), 3.29 - 3.27 (m, 4H), 2.88 - 2.82 (m, 2H), 2.59 - 2.51 (m, 6H), 2.47 - 2.43 (m, 6H), 2.03 - 1.89 (m, 4H), 1.70 - 1.64 (m, 2H), 1.58 - 1.54 (m, 4H).
실시예 87. 4-(4-(3-(4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도))[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조일)피페라진-1-일)프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일) 이소인돌린-1,3-디온 (화합물 87)의 합성
화합물 87은 실시예 60에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=898.6, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.18 - 10.98 (m, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.15 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.70 (dd, J = 7.4, 8.2 Hz, 1H), 7.38 - 7.30 (m, 2H), 7.04 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.96 (dd, J = 1.5, 8.3 Hz, 1H), 5.08 (dd, J = 5.4, 12.7 Hz, 1H), 4.77 - 4.65 (m, 1H), 4.02 (t, J = 14.2 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.58 - 3.47 (m, 4H), 3.32 (s, 3H), 3.30 - 3.26 (m, 4H), 2.94 - 2.80 (m, 1H), 2.63 - 2.53 (m, 6H), 2.43 - 2.30 (m, 8H), 2.08 - 1.97 (m, 1H), 1.96 - 1.83 (m, 2H), 1.73 - 1.51 (m, 8H).
실시예 88. 4-(4-(4-(4-(4-((9-사이클로펜틸-7,7-다이플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도))[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조일)피페라진-1-일)부틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일) 이소인돌린-1,3-디온 (화합물 88)의 합성
단계 1. (E)-4-(4-(4-클로로부트-2-엔-1-일)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (3)의 합성
DMF (10 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (1 g, 2.64 mmol, HCl) 및 (E)-1,4-디클로로부트-2-엔 (1.66 g, 13.28 mmol, 1.41 mL) 용액에 DIEA (1.04 g, 8.04 mmol, 1.40 mL) 및 NaI (7.91 mg, 52.80 μmol)를 첨가하고 혼합물을 20°C에서 14시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터 : EtOAc=10 : 1)로 원하는 스팟이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 H2O (10 mL)로 희석 후 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하고, 합쳐진 유기상을 염수 (10 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 로 건조하여 여과하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (12 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 10~100% EtOAc/석유 에터 to 10~100% EtOH/EtOAc gradient @ 50 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 (E)-4-(4-(4-클로로부트-2-엔-1-일)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (460 mg, 1.07 mmol, 40.44% 수율)을 수득하였다. MS(M+H)+=431.1
단계 2. (E)-tert-부틸 4-(4-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)부트-2-엔-1-일)피페라진-1-카복실레이트 (5)의 합성
DMF (10 mL) 내 (E)-4-(4-(4-클로로부트-2-엔-1-일)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (460 mg, 1.07 mmol) 및 tert-부틸 피페라진-1-카복실레이트 (285.31 mg, 1.28 mmol) 용액에 NaI (8.00 mg, 53.38 μmol) 및 DIPEA (413.93 mg, 3.20 mmol, 557.86 μL)를 첨가하고 혼합물을 20°C에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 91%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 H2O (10 mL)로 희석 후 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하고, 합쳐진 유기상을 염수 (10 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 로 건조하여 여과하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 MTBE (10 mL)로 희석 후 20°C에서 1시간 동안 교반 하였다. 혼합물을 여과 후 여과 케이크를 MTBE (10 mL)로 세척했다. 여과 케이크를 모으고 감압 건조하여 황색 고체의 (E)-tert-부틸 4-(4-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)부트-2-엔-1-일)피페라진-1-카복실레이트 (0.4 g, 681.97 μmol, 63.88% 수율, 99% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=581.3
단계 3. tert-부틸 4-(4-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)부틸)피페라진-1-카복실레이트 (6)의 합성
EtOH (6 mL) 내 (E)-tert-부틸 4-(4-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)부트-2-엔-1-일)피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 344.43 μmol) 용액에 Pd/C (30 mg, 10% 순도)를 첨가하고 혼합물을 H2 (15 Psi) 하 20°C에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 88%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 THF (10 mL)로 희석 후 여과하여 여과 케이크를 EtOH (20 mL) 및 THF (10 mL)로 세척했다. 여과물을 감압 농축하여 황색 고체의 tert-부틸 4-(4-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)부틸)피페라진-1-카복실레이트 (150 mg, 239.41 μmol, 69.51% 수율, 93% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=583.4
단계 4. 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-(4-(피페라진-1-일)부틸)피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (7)의 합성
디옥산 (2 mL) 내 tert-부틸 4-[4-[4-[2-(2,6-디옥소-3-피페리딜)-1,3-디옥소-이소인돌린-4-일]피페라진-1-일]부틸]피페라진-1- 카복실레이트 (150 mg, 257.43 μmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 4 mL)를 첨가하고 혼합물을 20°C에서 2시간 동안 교반 하였다. 워크업 후 LCMS로 76%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하여 황색 고체의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-(4-(피페라진-1-일)부틸)피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (120 mg, cdrude, HCl)을 수득하였다. MS(M+H)+=483.1
단계 5. 4-(4-(4-(4-(4-((9-사이클로펜틸-7,7-다이플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도))[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조일)피페라진-1-일)부틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일) 이소인돌린-1,3-디온 (화합물 88)의 합성
DMF (1 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (80 mg, 178.80 μmol) 및 HATU (101.98 mg, 268.20 μmol) 용액에 DIPEA (46.22 mg, 357.59 μmol, 62.29 μL)를 첨가하고 혼합물을 20°C에서 15분 동안 교반 하였다. 이후 DMF (2 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-(4-(피페라진-1-일)부틸)피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (120 mg, 231.20 μmol, HCl) 및 DIPEA (69.32 mg, 536.39 μmol, 93.43 μL) 용액을 첨가하고 혼합물을 20°C에서 45분 동안 교반 하였다. LCMS로 65%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 H2O (10 mL)로 희석 후 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하고 합쳐진 유기상을 염수 (10 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 로 건조하여 여과하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 prep-TLC (디클로로메탄 : 메탄올=10 : 1)로 정제하여 황색 고체의 4-(4-(4-(4-(4-((9-사이클로펜틸-7,7-다이플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도))[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조일)피페라진-1-일)부틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일) 이소인돌린-1,3-디온 (47.4 mg, 48.34 μmol, 27.03% 수율, 93% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=912.2
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.08 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.15 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.70 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.34 (t, J = 7.9 Hz, 2H), 7.04 (s, 1H), 6.96 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.13 - 5.05 (m, 1H), 4.76 - 4.66 (m, 1H), 4.02 (t, J = 14.2 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.58 - 3.42 (m, 4H), 3.31 - 3.25 (m, 7H), 2.93 - 2.81 (m, 1H), 2.68 - 2.53 (m, 6H), 2.41 - 2.29 (m, 8H), 2.06 - 1.97 (m, 1H), 1.95 - 1.85 (m, 2H), 1.71 - 1.63 (m, 2H), 1.62 - 1.44 (m, 8H)
실시예 89. 5-(4-(2-(4-(4-((9-사이클로펜틸-7,7-다이플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도))[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조일)피페라진-1-일)에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일) 이소인돌린-1,3-디온 (화합물 89)의 합성
단계 1. tert-부틸 4-(2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)에틸)피페라진-1-카복실레이트 (2)의 합성
DMF (5 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-(피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (0.4 g, 1.17 mmol), tert-부틸 4-(2-브로모에틸)피페라진-1-카복실레이트 (342.57 mg, 1.17 mmol), KI (19.40 mg, 116.84 μmol) 및 DIPEA (453.02 mg, 3.51 mmol, 610.54μL) 혼합물을 70°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-(피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물을 EtOAc (20 mL)로 희석 후 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (10 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 65 mL/분; Eluent of 0~50% MeOH / EtOAc @ 65 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 tert-부틸 4-(2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)에틸)피페라진-1-카복실레이트 (0.6 g, 1.05 mmol, 89.81% 수율, 97% 순도)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=555.2
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.18 (br s, 1H), 7.71 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.07 (dd, J = 2.3, 8.6 Hz, 1H), 5.00 - 4.90 (m, 1H), 3.76 - 3.52 (m, 4H), 3.52 - 3.42 (m, 4H), 3.02 - 2.65 (m, 15H), 2.20 - 2.10 (m, 1H), 1.47 (s, 9H).
단계 2. 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-(4-(2-(피페라진-1-일)에틸)피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (3)의 합성
디옥산 (2 mL) 내 tert-부틸 4-(2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)에틸)피페라진-1-카복실레이트 (0.6 g, 1.08 mmol) 용액에 25°C에서 HCl/디옥산 (4 M, 20 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0.5시간 동안 교반 하였다. TLC (디클로로메탄 : 메탄올 = 10:1; Rf = 0.5)로 출발물질이 완전히 소모됨 및 새로운 스팟이 관찰됨을 확인하였다. 생성된 혼합물을 감압 농축하여 황색 고체의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-(4-(2-(피페라진-1-일)에틸)피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (0.4 g, HCl)을 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=455.1
단계 3. 5-(4-(2-(4-(4-((9-사이클로펜틸-7,7-다이플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도))[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조일)피페라진-1-일)에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일) 이소인돌린-1,3-디온 (화합물 89)의 합성
DMF (1 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-(4-(2-(피페라진-1-일)에틸)피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (76.81 mg, 156.45 μmol, HCl) 용액에 HATU (89.23 mg, 234.67 μmol) 및 DIPEA (60.66 mg, 469.34 μmol, 81.75 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 10분 동안 교반 하였다. 혼합물에 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (70 mg, 156.45 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-(4-(2-(피페라진-1-일)에틸)피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 피크 (67%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi Polar-RP 100*25 mm*4μm; 이동상: [물(TFA) -ACN];B%: 28%-48%, 7 분)로 정제 및 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25 mm* 5μm; 이동상: [물(NH4HCO3) -ACN];B%: 38%-68%, 분)로 재정제하고 동결 건조하여 황색 고체의 5-(4-(2-(4-(4-((9-사이클로펜틸-7,7-다이플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도))[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조일)피페라진-1-일)에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일) 이소인돌린-1,3-디온 (34.9 mg, 37.51 μmol, 23.97% 수율, 95% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=884.5
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.08 (br s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.15 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.67 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.25 (dd, J = 2.0, 8.7 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.96 (dd, J = 1.7, 8.3 Hz, 1H), 5.07 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.80 - 4.63 (m, 1H), 4.02 (t, J = 14.1 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.68 - 3.45 (m, 4H), 3.44 - 2.41 (m, 4H), 3.32 (s, 3H), 2.96 - 2.81 (m, 1H), 2.64 - 2.51 (m, 11H), 2.46 - 2.42 (m, 3H), 2.08 - 1.97 (m, 1H), 1.96 - 1.83 (m, 2H), 1.75 - 1.63 (m, 2H), 1.62 - 1.45 (m, 4H).
실시예 90. 5-(4-(3-(4-(4-((9-사이클로펜틸-7,7-다이플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도))[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조일)피페라진-1-일)프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일) 이소인돌린-1,3-디온 (화합물 90)의 합성
화합물 90은 실시예 60에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=898.6, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.33 - 10.77 (m, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.15 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.67 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.25 (dd, J = 2.2, 8.7 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 6.96 (dd, J = 1.7, 8.2 Hz, 1H), 5.12 - 5.00 (m, 1H), 4.80 - 4.63 (m, 1H), 4.02 (t, J = 14.1 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.71 - 3.39 (m, 8H), 3.30 (s, 3H), 2.95 - 2.80 (m, 1H), 2.62 - 2.51 (m, 6H), 2.43 - 2.29 (m, 8H), 2.08 - 1.97 (m, 1H), 1.96 - 1.82 (m, 2H), 1.71 - 1.50 (m, 8H).
실시예 91. 5-(4-(4-(4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도))[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조일)피페라진-1-일)부틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일) 이소인돌린-1,3-디온 (화합물 91)의 합성
화합물 91은 실시예 88에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=912.2, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.01 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.15 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.67 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.25 (dd, J = 1.8, 8.7 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.00 - 6.91 (m, 1H), 5.07 (dd, J = 5.3, 12.9 Hz, 1H), 4.81 - 4.63 (m, 1H), 4.02 (br t, J = 14.1 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.42 (br d, J = 4.4 Hz, 8H), 3.32 (s, 3H), 2.95 - 2.80 (m, 1H), 2.63 - 2.56 (m, 2H), 2.55 - 2.41 (m, 4H), 2.43 - 2.25 (m, 8H), 2.07 - 1.96 (m, 1H), 1.96 - 1.82 (m, 2H), 1.73 - 1.63 (br s, 2H), 1.63 - 1.51 (m, 4H), 1.48-1.35 (m, 4H).
실시예 92. (E)-5-(4-(4-(4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-))피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조일)피페라진-1-일)부트-2-엔-1-일)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (화합물 92)의 합성
화합물 92는 실시예 88에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=910.4, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.20 - 10.94 (m, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.14 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.67 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.24 (dd, J = 2.1, 8.7 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.96 (dd, J = 1.4, 8.2 Hz, 1H), 5.69 - 5.57 (m, 2H), 5.06 (dd, J = 5.3, 12.9 Hz, 1H), 4.71 (quin, J = 8.1 Hz, 1H), 4.02 (br t, J = 14.1 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.66 - 3.45 (m, 4H), 3.43 (br s, 4H), 3.32 (s, 3H), 2.98 (br s, 4H), 2.93 - 2.83 (m, 1H), 2.62 - 2.54 (m, 2H), 2.38 (br s, 8H), 2.07 - 1.97 (m, 1H), 1.95 - 1.83 (m, 2H), 1.68 (br s, 2H), 1.62 - 1.49 (m, 4H).
실시예 93. 4-(4-((1-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조일)피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (화합물 93)의 합성
화합물 93은 실시예 89에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=869.2, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.13 - 11.05 (m, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.13 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.73 - 7.68 (m, 1H), 7.38 - 7.31 (m, 2H), 7.04 - 7.01 (m, 1H), 6.98 - 6.93 (m, 1H), 5.13 - 5.06 (m, 1H), 4.76 - 4.66 (m, 1H), 4.03 (t, J = 14.1 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.33 - 3.26 (m, 7H), 2.93 - 2.82 (m, 2H), 2.63 - 2.53 (m, 7H), 2.27 - 2.21 (m, 2H), 2.07 - 1.98 (m, 1H), 1.96 - 1.49 (m, 13H), 1.18 - 1.03 (m, 2H).
실시예 94. 4-(4-(2-(1-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도)[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조일)피페리딘-4-일)에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일) 이소인돌린-1,3-디온 (화합물 94)의 합성
화합물 94는 실시예 89에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=883.1, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.08 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.13 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.70 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.34 (t, J = 8.2 Hz, 2H), 7.02 (s, 1H), 6.96 - 6.92 (m, 1H), 5.12 - 5.05 (m, 1H), 4.76 - 4.66 (m, 1H), 4.07 - 3.97 (m, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.29 - 3.25 (m, 7H), 2.93 - 2.80 (m, 2H), 2.63 - 2.52 (m, 7H), 2.41 - 2.35 (m, 2H), 2.06 - 1.98 (m, 1H), 1.94 - 1.85 (m, 2H), 1.75 - 1.41 (m, 13H), 1.20 - 1.07 (m, 2H).
실시예 95. 4-(4-(3-(1-(4-((9-사이클로펜틸-7,7-다이플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도))[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조일)피페리딘-4-일)프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일) 이소인돌린-1,3-디온 (화합물 95)의 합성
화합물 95는 실시예 89에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=897.2, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.07 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.12 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.72 - 7.66 (m, 1H), 7.34 (t, J = 8.1 Hz, 2H), 7.03 - 7.00 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 6.96 - 6.92 (m, 1H), 5.11 - 5.05 (m, 1H), 4.76 - 4.65 (m, 1H), 4.07 - 3.96 (m, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.30 - 3.25 (m, 7H), 2.92 - 2.80 (m, 2H), 2.62 - 2.51 (m, 7H), 2.36 - 2.29 (m, 2H), 2.06 - 1.97 (m, 1H), 1.95 - 1.84 (m, 2H), 1.75 - 1.44 (m, 13H), 1.31 - 1.21 (m, 2H), 1.15 - 1.02 (m, 2H).
실시예 96. 4-(4-(4-(1-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도))[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조일)피페리딘-4-일)부틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일) 이소인돌린-1,3-디온 (화합물 96)의 합성
화합물 96은 실시예 89에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=911.3, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.07 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.11 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.71 - 7.66 (m, 1H), 7.36 - 7.30 (m, 2H), 7.02 - 7.00 (m, 1H), 6.95 - 6.91 (m, 1H), 5.11 - 5.03 (m, 1H), 4.74 - 4.65 (m, 1H), 4.06 - 3.96 (m, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.30 - 3.25 (m, 7H), 2.93 - 2.80 (m, 2H), 2.62 - 2.53 (m, 7H), 2.34 - 2.29 (m, 2H), 2.05 - 1.96 (m, 1H), 1.95 - 1.82 (m, 2H), 1.76 - 1.40 (m, 13H), 1.37 - 1.20 (m, 4H), 1.14 - 1.00 (m, 2H).
실시예 97. 5-(4-((1-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조일)피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (화합물 97)의 합성
화합물 97은 실시예 89에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=869.1, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.08 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.15 - 8.11 (m, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.69 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.26 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.02 (s, 1H), 6.98 - 6.92 (m, 1H), 5.07 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.76 - 4.65 (m, 1H), 4.02 (t, J = 14.1 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.53 - 3.39 (m, 4H), 3.33 (s, 3H), 2.94 - 2.83 (m, 2H), 2.63 - 2.51 (m, 7H), 2.31 - 2.09 (m, 2H), 2.04 - 1.97 (m, 1H), 1.96 - 1.46 (m, 13H), 1.18 - 1.05 (m, 2H).
실시예 98. 5-(4-(2-(1-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도))[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조일)피페리딘-4-일)에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일) 이소인돌린-1,3-디온 (화합물 98)의 합성
화합물 98은 실시예 89에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=883.2, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.09 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.15 - 8.11 (m, 1H), 8.01 - 7.98 (m, 1H), 7.70 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.28 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 6.95 (dd, J = 1.4, 8.2 Hz, 1H), 5.08 (dd, J = 5.3, 12.8 Hz, 1H), 4.76 - 4.65 (m, 1H), 4.02 (t, J = 14.1 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.57 - 3.41 (m, 4H), 3.32 (s, 3H), 2.93 - 2.82 (m, 2H), 2.63 - 2.51 (m, 7H), 2.27 - 1.83 (m, 5H), 1.80 - 1.43 (m, 13H), 1.20 - 1.09 (m, 2H).
실시예 99. 5-(4-(3-(1-(4-((9-사이클로펜틸-7,7-다이플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도))[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조일)피페리딘-4-일)프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일) 이소인돌린-1,3-디온 (화합물 99)의 합성
화합물 99는 실시예 89에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=897.0, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.09 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.15 - 8.11 (m, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.68 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.25 (dd, J = 2.0, 8.7 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 6.94 (dd, J = 1.5, 8.1 Hz, 1H), 5.07 (dd, J = 5.4, 12.9 Hz, 1H), 4.76 - 4.65 (m, 1H), 4.02 (t, J = 14.1 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 4.00 - 3.42 (m, 4H), 3.32 (s, 3H), 2.94 - 2.82 (m, 2H), 2.63 - 2.51 (m, 7H), 2.32 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.05 - 1.97 (m, 1H), 1.94 - 1.86 (m, 2H), 1.81 - 1.40 (m, 13H), 1.31 - 1.21 (m, 2H), 1.10 - 1.01 (m, 2H).
실시예 100. 5-(4-(4-(1-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도))[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조일)피페리딘-4-일)부틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일) 이소인돌린-1,3-디온 (화합물 100)의 합성
화합물 100은 실시예 89에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=911.2, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.07 (br s, 1H), 8.29 - 8.23 (m, 1H), 8.12 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.67 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.25 (dd, J = 1.7, 8.7 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.07 (dd, J = 5.3, 12.9 Hz, 1H), 4.77 - 4.65 (m, 1H), 4.02 (t, J = 14.2 Hz, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.42 - 3.40 (m, 4H), 3.32 (s, 3H), 2.94 - 2.82 (m, 2H), 2.62 - 2.51 (m, 5H), 2.48 - 2.47 (m, 2H), 2.31 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 2.05 - 1.97 (m, 1H), 1.94 - 1.85 (m, 2H), 1.79 - 1.39 (m, 13H), 1.37 - 1.24 (m, 4H), 1.16 - 1.01 (m, 2H).
실시예 101. 5-(4-((1-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조일)피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-6-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (화합물 101)의 합성
단계 1. 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5,6-디플루오로이소인돌린-1,3-디온 (3)의 합성
AcOH (200 mL) 내 5,6-디플루오로이소벤조푸란-1,3-디온 (10 g, 54.32 mmol) 및 3-아미노피페리딘-2,6-디온 (9.39 g, 57.04 mmol, HCl 염) 용액에 KOAc (5.86 g, 59.75 mmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 90°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 반응이 완료됨을 확인하였고, 반응 혼합물을 물 (1000 mL)에 붓고 생성된 현탁액을 여과하고, 여과 케이크를 모으고 진공 건조하여 갈색 고체의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5,6-디플루오로이소인돌린-1,3-디온 (13 g, 43.74 mmol, 80.53% 수율, 99% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=295.1
단계 2. tert-부틸 4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-6-플루오로-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-카복실레이트 (5)의 합성
NMP (200 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5,6-디플루오로이소인돌린-1,3-디온 (3 g, 10.20 mmol) 및 tert-부틸 피페라진-1-카복실레이트 (2.09 g, 11.22 mmol) 용액에 DIPEA (3.95 g, 30.59 mmol, 5.33 mL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 110°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 반응이 완료됨을 확인하였다. 혼합물을 물 (100 mL)에 붓고 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (100 mL)로 세척하고, Na2SO4 로 건조, 여과 및 농축하여 황색 오일의 tert-부틸 4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-6-플루오로-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-카복실레이트 (4.3 g, 9.15 mmol, 89.75% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M-55+H)+=405.0
단계 3. 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-플루오로-6-(피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (6)의 합성
디옥산 (20 mL) 내 tert-부틸 4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-6-플루오로-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-카복실레이트 (4.3 g, 9.34 mmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 20 mL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 반응이 완료됨을 확인하였고, 혼합물을 농축하여 황색 고체의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-플루오로-6-(피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (3.5 g, 8.11 mmol, 86.90% 수율, 92% 순도, HCl 염)을 수득하였다. MS(M+H)+=360.8
단계 4. tert-부틸 4-((4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-6-플루오로-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)메틸)피페리딘-1-카복실레이트 (8)의 합성
DMF (50 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-플루오로-6-(피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (2 g, 5.04 mmol, HCl 염) 및 tert-부틸 4- (요오도메틸)피페리딘-1-카복실레이트 (1.64 g, 5.04 mmol) 용액에 DIPEA (1.95 g, 15.12 mmol, 2.63 mL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 60°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 반응이 완료됨을 확인하였고, 혼합물을 물 (300 mL)에 붓고 EtOAc (100 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (200 mL)로 세척하고, Na2SO4 로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO; 50 g Sepa Flash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~10% MeOH/EtOAc gradient @ 80 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 tert-부틸 4-((4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-6-플루오로-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)메틸)피페리딘-1-카복실레이트 (1 g, 1.79 mmol, 35.58% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=558.3
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.38 (s, 1H), 7.47 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 7.39 (br d, J = 7.1 Hz, 1H), 4.98 - 4.85 (m, 1H), 4.23 - 4.02 (m, 2H), 3.45 - 3.22 (m, 4H), 2.87 - 2.56 (m, 10H), 2.41 - 2.23 (m, 2H), 2.17 - 2.10 (m, 1H), 1.88 -1.86 (m, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.19 - 1.04 (m, 2H).
단계 5. 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-플루오로-6-(4-(피페리딘-4-일메틸)피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (9)의 합성
디옥산 (10 mL) 내 tert-부틸 4-((4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-6-플루오로-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)메틸)피페리딘-1-카복실레이트 (1 g, 1.79 mmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 10.00 mL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 반응이 완료됨을 확인하였다. 반응 혼합물을 농축하여 황색 고체의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-플루오로-6-(4-(피페리딘-4-일메틸)피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (880 mg, 1.78 mmol, 99.34% 수율, HCl 염)을 수득하였다. MS(M+H)+=458.2
단계 6. 5-(4-((1-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조일)피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-6-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (화합물 101)의 합성
DMF (20 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-플루오로-6-(4-(피페리딘-4-일메틸)피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (880 mg, 1.78 mmol, HCl 염) 및 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4 ]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (797.12 mg, 1.78 mmol) 용액에 HATU (1.02 g, 2.67 mmol) 및 DIPEA (690.75 mg, 5.34 mmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 25°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 반응이 완료됨을 확인하였고, 혼합물을 물 (100 mL)에 붓고 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (100 mL)로 세척하고, Na2SO4 로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (10 g Sepa Flash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~10% MeOH/EtOAc gradient @ 100 mL/분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 5-(4-((1-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조일)피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-6-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (243 mg, 268.50 μmol, 15.07% 수율, 98% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=887.2
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.11 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.14 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.73 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.04 (s, 1H), 6.96 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 5.11 (br dd, J = 5.4, 13.0 Hz, 1H), 4.77 - 4.66 (m, 1H), 4.03 (br t, J = 13.9 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.32 (br s, 3H), 3.27 - 3.25 (m, 4H), 2.95 - 2.83 (m, 2H), 2.70 - 2.54 (m, 7H), 2.25 - 2.23 (m, 2H), 2.10 - 1.99 (m, 1H), 1.97 - 1.52 (m, 13H), 1.21 - 1.03 (m, 2H).
실시예 102. 4-(4-(3-(4-(6-((9-사이클로펜틸-7,7-다이플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도))[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-7-메톡시-1-옥소-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (화합물 102)의 합성
단계 1. 4-(2-클로로에틸)-1-메톡시-2-니트로벤젠 (2)의 합성
TFA (100 mL) 내 1-(2-클로로에틸)-4-메톡시벤젠 (10 g, 58.60 mmol) 용액에 0°C에서 HNO3 (6.14 g, 63.38 mmol, 4.39 mL, 65% 순도)를 한 방울씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25°C에서 2시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터:EtOAc = 5:1, Rf = 0.4)에서 출발물질이 완전히 소모됨을 확인했다. 반응 혼합물을 얼음물 (400 mL)에 붓고 EtOAc (50 mL x 4)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 NaHCO3 (50 mL x 3) 및 염수 (30 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 로 건조하고 농축하여 흑갈색 오일의 4-(2-클로로에틸)-1-메톡시-2-니트로벤젠 (11 g, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=216.6
단계 2. 5-(2-클로로에틸)-2-메톡시아닐린 (3)의 합성
EtOH (60 mL) 및 H2O (30 mL) 내 4-(2-클로로에틸)-1-메톡시-2-니트로벤젠 (9 g, 41.74 mmol) 및 NH4Cl (11.16 g, 208.69 mmol) 혼합물에 25°C에서 Fe (11.65 g, 208.69 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80°C에서 1시간 동안 교반 하였다. HPLC에서 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였다. 반응 혼합물을 뜨거운 상태에서 셀라이트 패드로 여과 후 EtOH (50 mL)로 세척했다. 여과물을 농축하여 유기상을 제거했다. 잔여물을 물 (100 mL)로 희석 후 EtOAc (50 mL x 4)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4 로 건조하고 농축하여 흑갈색 오일의 5-(2-클로로에틸)-2-메톡시아닐린 (6.5 g, curde)을 수득하였다. MS(M+H)+=186.1
단계 3. 4-브로모-5-(2-클로로에틸)-2-메톡시아닐린 (4)의 합성
DMF (60 mL) 내 5-(2-클로로에틸)-2-메톡시아닐린 (6.5 g, 35.01 mmol) 용액에 0°C에서 DMF (60 mL) 내 NBS (5.61 g, 31.51 mmol) 용액을 한 방울씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25°C로 천천히 승온 후 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (400 mL)에 부은 후 석유 에터/EtOAc (10/1, 200 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (100 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 로 건조하여 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (40 g 실리카 겔 컬럼, EtOAc/석유 에터 = 0-5%, 100 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 4-브로모-5-(2-클로로에틸)-2-메톡시아닐린 (6 g, 22.68 mmol, 64.78% 수율)을 수득하였다. MS(M+H)+=266.0
단계 4. 메틸 4-아미노-2-(2-클로로에틸)-5-메톡시벤조에이트 (5)의 합성
MeOH (80 mL) 내 4-브로모-5-(2-클로로에틸)-2-메톡시아닐린 (4.5 g, 17.01 mmol) 및 TEA (8.61 g, 85.05 mmol, 11.84 mL) 용액에 25°C에서 Pd(dppf)Cl2 (622.32 mg, 850.51 μmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 CO로 3차례 퍼지 및 탈기하고, 70°C로 가열 후 CO (15 Psi) 하 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 남아있음 및 원하는 질량의 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 여과하였다. 여과물을 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (40 g 실리카 겔 컬럼, EtOAc/석유 에터 = 0-8%, 80 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 메틸 4-아미노-2-(2-클로로에틸)-5-메톡시벤조에이트 (600 mg, 2.46 mmol, 14.47% 수율, N/A 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=244.0
단계 5. 4-(4-(3-(4-(6-아미노-7-메톡시-1-옥소-3,4-디하이드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (6)의 합성
ACN (8 mL) 내 4-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (400 mg, 750.44 μmol, HCl), 메틸 4-아미노-2-(2-클로로에틸)-5-메톡시벤조에이트 (182.87 mg, 750.44 μmol) 및 DIPEA (484.95 mg, 3.75 mmol, 653.57 μL) 혼합물을 80°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 남아있음 및 원하는 질량의 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 80°C에서 16시간 동안 추가로 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (4 g 실리카 겔 컬럼, EtOAc/석유 에터 = 20-100% 이후 MeOH/EtOAc = 10-30%, 40 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 4-(4-(3-(4-(6-아미노-7-메톡시-1-옥소-3,4-디하이드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (430 mg, 640.13 μmol, 85.30% 수율, 100% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=672.3
단계 6. 4-(4-(3-(4-(6-((9-사이클로펜틸-7,7-다이플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도))[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-7-메톡시-1-옥소-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (화합물 102)의 합성
디옥산 (3 mL) 내 4-(4-(3-(4-(6-아미노-7-메톡시-1-옥소-3,4-디하이드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (200 mg, 297.73 μmol), 2-클로로-9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-5,7,8,9-테트라하이드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (103.73 mg, 327.51 μmol) 용액에 25°C에서 Cs2CO3 (291.02 mg, 893.20 μmol), BINAP (92.69 mg, 148.87 μmol), Pd(OAc)2 (16.71 mg, 74.43 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 기체 하 100°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-(4-(3-(4-(6-아미노-7-메톡시-1-옥소-3,4-디하이드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 피크 (29%)를 확인하였다. 혼합물 용액을 감압 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi C18 150 x 25 mm x 10 μm; 이동상: [물 (FA) - ACN]; B%: 9%-39%, 10 분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge BEH C18 150 x 25 mm x 5μm; 이동상: [물 (NH4HCO3) - ACN]; B%: 50%-70%, 분)로 재정제하고 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-(4-(3-(4-(6-((9-사이클로펜틸-7,7-다이플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도))[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-7-메톡시-1-옥소-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-일)피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (12.9 mg, 12.74 μmol, 4.28% 수율, 94% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=952.5
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ = 11.43 - 10.80 (m, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.70 (dd, J = 7.3, 8.4 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.39 - 7.31 (m, 2H), 5.09 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.83 (quin, J = 8.4 Hz, 1H), 4.30 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 4.23 - 4.13 (m, 1H), 4.11 - 3.94 (m, 3H), 3.92 - 3.83 (m, 4H), 3.31 - 3.17 (m, 7H), 2.99 - 2.80 (m, 5H), 2.76 - 2.72 (m, 1H), 2.68 - 2.60 (m, 5H), 2.59 - 2.52 (m, 2H), 2.06 - 1.91 (m, 3H), 1.82 - 1.25 (m, 12H).
실시예 103. 4-(4-((1-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시페닐)피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3- 일)이소인돌린-1,3-디온 (화합물 103)의 합성
단계 1. 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-((1-(2-플루오로-5-메톡시-4-니트로페닐)피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (2)의 합성
DMF (15 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-(피페리딘-4-일메틸)피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (1.3 g, 2.73 mmol, HCl 염) 및 1-브로모-2-플루오로-5-메톡시-4-니트로벤젠 (614 mg, 2.46 mmol) 용액에 K2CO3 (1.13 g, 8.19 mmol)를 첨가하고 혼합물을 80°C에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크 (49 %)가 검출되었다. 혼합물을 여과 후 여과 케이크를 EtOAc (20 mL) 및 H2O (20 mL)로 세척했다. 여과물을 EtOAc (15 mL x 3)로 추출하고, 합쳐진 유기상을 염수 (10 mL x 3)로 세척하고, 감압 농축하였다. 조 생성물을 EtOAc (20 mL)로 희석 후 20°C에서 1시간 동안 교반 하였다. 혼합물을 여과 후 여과 케이크를 EtOAc (10 mL)로 세척하였다. 여과 케이크를 모으고 진공 건조하여 황색 고체의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-((1-(2-플루오로-5-메톡시-4-니트로페닐)피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (520 mg, 786.05 μmol, 28.78% 수율, 92% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=609.1
단계 2. 4-(4-((1-(4-아미노-2-플루오로-5-메톡시페닐)피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (3)의 합성
EtOH (10 mL) 및 H2O (10 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-((1-(2-플루오로-5-메톡시-4-니트로페닐)피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (520 mg, 854.40 μmol) 용액에 Fe (286.28 mg, 5.13 mmol) 및 HCl (12 M, 420 μL)를 첨가하고 혼합물을 80°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 DMF (20 mL) 및 H2O (40 mL)로 희석하고, 0°C에서 포화 NaHCO3를 첨가하여 pH = 8로 조정했다. 혼합물을 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하고 염수 (10 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과 후 감압 농축하여 황색 고체의 4-(4-((1-(4-아미노-2-플루오로-5-메톡시페닐)피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (240 mg, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=579.3
단계 3. 4-(4-((1-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시페닐)피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3- 일)이소인돌린-1,3-디온 (화합물 103)의 합성
디옥산 (6 mL) 내 4-(4-((1-(4-아미노-2-플루오로-5-메톡시페닐)피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (240 mg, 414.77 μmol) 및 2-클로로-9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-5,7,8,9-테트라히드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (120.00 mg, 378.87 μmol) 용액에 Pd(OAc)2 (4.66 mg, 20.74 μmol), BINAP (25.83 mg, 41.48 μmol) 및 Cs2CO3 (405.42 mg, 1.24 mmol)를 첨가하고 혼합물을 100°C에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크 (22%)를 확인하였고 36%의 시약 1이 남아있음을 확인하였다. 추가적인 2-클로로-9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-5,7,8,9-테트라히드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (120 mg, 378.87 μmol), Pd(OAc)2 (4.66 mg, 20.74 μmol) 및 BINAP (25.83 mg, 41.48 μmol)를 첨가하고 혼합물을 100°C에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크 (28 %)를 확인하였다. 혼합물을 H2O (10 mL)로 희석 후 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (10 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 조 생성물을 prep-TLC (디클로로메탄: 메탄올=20:1)로 정제 후 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25 mm* 5μm; 이동상: [물 (NH4HCO3) -ACN]; B%: 60%-90%, 10분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-(4-((1-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시페닐)피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3- 일)이소인돌린-1,3-디온 (33 mg, 35.73 μmol, 8.61% 수율, 93% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=859.0
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.09 (br s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.91 - 7.80 (m, 2H), 7.73 - 7.68 (m, 1H), 7.35 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 6.69 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 5.09 (br dd, J = 5.4, 13.0 Hz, 1H), 4.74 - 4.63 (m, 1H), 4.01 (br t, J = 14.2 Hz, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.32 - 3.28 (m, 7H), 2.93 - 2.81 (m, 1H), 2.71 - 2.63 (m, 3H), 2.62 - 2.53 (m, 5H), 2.28 - 2.23 (m, 2H), 2.06 - 1.98 (m, 1H), 1.94 - 1.50 (m, 13H), 1.36 - 1.22 (m, 2H).
실시예 104. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(3-(((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페리딘-4-일)메틸)(메틸)아미노)시클로부틸)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 104)의 합성
단계 1. tert-부틸 4-(((3-(((벤질옥시)카보닐)아미노)시클로부틸)(메틸)아미노) 메틸)피페리딘-1-카복실레이트 (3)의 합성
MeOH (15 mL) 내 tert-부틸 4-((메틸아미노)메틸)피페리딘-1-카복실레이트 (1 g, 4.38 mmol) 및 벤질 (3-옥소시클로부틸)카바메이트 (960.17 mg, 4.38 mmol) 용액에 NaBH3CN (550.45 mg, 8.76 mmol) 및 AcOH (263.01 mg, 4.38 mmol, 250.48 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LC-MS로 벤질 (3-옥소시클로부틸)카바메이트가 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 하나의 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)로 희석하고 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에터/EtOAc=1/0 to 0/1)로 정제하여 무색 오일의 tert-부틸 4-(((3-(((벤질옥시)카보닐)아미노)시클로부틸)(메틸)아미노) 메틸)피페리딘-1-카복실레이트 (1.2 g, 2.03 mmol, 46.35% 수율, 73% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=432.2
단계 2. tert-부틸 4-(((3-아미노시클로부틸)(메틸)아미노)메틸)피페리딘-1-카복실레이트 (4)의 합성
EtOH (15 mL) 내 tert-부틸 4-(((3-(((벤질옥시)카보닐)아미노)시클로부틸)(메틸)아미노)메틸)피페리딘-1-카복실레이트 (1.2 g, 2.78 mmol) 용액에 Pd/C (10%, 150 mg)를 N2 기체 하에서 첨가하였다. 현탁액을 탈기하고 H2로 3차례 퍼징하였다. 혼합물을 25 °C H2 (15 Psi) 하에서 16시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터 : EtOAc = 1: 1)는 tert-부틸 4-(((3-(((벤질옥시)카보닐)아미노)시클로부틸)(메틸)아미노)메틸)피페리딘-1-카복실레이트가 완전히 소모되었음 및 하나의 새로운 스팟이 형성되었음을 확인하였다. 혼합물을 여과하고 여과 케이크를 EtOAc (100 mL)로 세척하고, 여과물을 진공 농축하여 무색 오일의 tert-부틸 4-(((3-아미노시클로부틸)(메틸)아미노)메틸)피페리딘-1-카복실레이트 (700 mg, 2.35 mmol, 84.64% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=298.4
단계 3. tert-부틸 4-(((3-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)시클로부틸)(메틸)아미노)메틸)피페리딘-1-카복실레이트 (6)의 합성
DMF (8 mL) 내 tert-부틸 4-(((3-아미노시클로부틸)(메틸)아미노)메틸)피페리딘-1-카복실레이트 (400 mg, 1.34 mmol) 및 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (601.72 mg, 1.34 mmol) 용액에 HATU (767.02 mg, 2.02 mmol) 및 DIPEA (521.43 mg, 4.03 mmol, 702.74 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LC-MS로 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 하나의 주 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)로 희석하고 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에터/EtOAc=1/0 to 0/1)로 정제하여 황색 고체의 tert-부틸 4-(((3-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)시클로부틸)(메틸)아미노)메틸)피페리딘-1-카복실레이트 (630 mg, 589.39 μmol, 43.83% 수율, 68% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=727.4
단계 4. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(3-(메틸(피페리딘-4-일메틸)아미노)시클로부틸)벤즈아미드 (7)의 합성
DCM (3 mL) 내 tert-부틸 4-(((3-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)시클로부틸)(메틸)아미노)메틸)피페리딘-1-카복실레이트 (500 mg, 687.90 μmol) 및 HCl/디옥산 (4 M, 3 mL) 혼합물을 25 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 tert-부틸 4-(((3-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)시클로부틸)(메틸)아미노)메틸)피페리딘-1-카복실레이트가 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 하나의 주 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하여 용매를 제거하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(3-(메틸(피페리딘-4-일메틸)아미노)시클로부틸)벤즈아미드 (500 mg, crude, HCl 염)를 수득하였다. MS(M+H)+=627.4
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(3-(((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페리딘-4-일)메틸)(메틸)아미노)시클로부틸)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 104)의 합성
DMF (4 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(3-(메틸(피페리딘-4-일메틸)아미노)시클로부틸)벤즈아미드 (200 mg, 301.57 μmol, HCl 염) 및 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (83.30 mg, 301.57 μmol) 용액에 KI (50.06 mg, 301.57 μmol) 및 DIPEA (116.93 mg, 904.71 μmol, 157.58 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 80 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 ~9%의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(3-(메틸(피페리딘-4-일메틸)아미노)시클로부틸)벤즈아미드가 남아있음을 확인하였고, 여러 개의 새로운 피크를 LC-MS로 확인하였고, ~18%의 원하는 화합물이 검출되었다. 반응 혼합물을 물 100 mL로 희석하고 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 30 mL로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex luna C18 250 x 50 mm x15μm; 이동상: [물 (FA) -ACN]; B%: 21%-51%, 10분)로 정제하여 포름산 염 형태의 생성물을 수득하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150 x 25mm x 5μm; 이동상: [물 (NH4HCO3) -ACN]; B%: 55%-85%, 7분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(3-(((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페리딘-4-일)메틸)(메틸)아미노)시클로부틸)-3-메톡시벤즈아미드 (29 mg, 32.52 μmol, 10.78% 수율, 99% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=883.2
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.07 (s, 1H), 8.44 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.31 - 8.23 (m, 2H), 7.96 (s, 1H), 7.65 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.55 - 7.46 (m, 2H), 7.31 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.23 (dd, J = 2.1, 8.6 Hz, 1H), 5.06 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.83 - 4.72 (m, 1H), 4.17 - 4.00 (m, 5H), 3.94 (s, 3H), 3.31 (s, 3H), 3.04 - 2.92 (m, 2H), 2.90 - 2.83 (m, 1H), 2.63 - 2.54 (m, 2H), 2.46 - 2.36 (m, 3H), 2.08 - 1.91 (m, 8H), 1.87 - 1.69 (m, 7H), 1.66 - 1.56 (m, 4H), 1.19 - 1.07 (m, 2H).
실시예 105. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(3-(((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)(메틸)아미노)시클로부틸)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 105)의 합성
DMF (4 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(3-(메틸(피페리딘-4-일메틸)아미노)시클로부틸)벤즈아미드 (200 mg, 319.11 μmol) 및 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (88.15 mg, 319.11 μmol) 용액에 KI (52.97 mg, 319.11 μmol) 및 DIPEA (123.73 mg, 957.34 μmol, 166.75 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 90 °C 에서 3시간 동안 교반 하였다. LC-MS로 ~55%의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온이 남아있음 및 ~10% m/z= 517.1, ~30%의 원하는 화합물이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 100 mL로 희석하고 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 30 mL로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex luna C18 250 x 50 mm x 15μm; 이동상: [물 (FA) -ACN]; B%: 21%-51%, 10분)로 정제하여 포름산 염 형태의 생성물을 수득하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150 x 25mm x 5μm;이동상: [물 (NH4HCO3) -ACN]; B%: 58%-88%, 7분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(3-(((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)(메틸)아미노)시클로부틸)-3-메톡시벤즈아미드 (33.6 mg, 37.67 μmol, 11.81% 수율, 99% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=883.3
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.08 (s, 1H), 8.45 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.31 - 8.24 (m, 2H), 7.96 (s, 1H), 7.68 (dd, J = 7.3, 8.3 Hz, 1H), 7.55 - 7.48 (m, 2H), 7.37 - 7.29 (m, 2H), 5.08 (dd, J = 5.4, 12.7 Hz, 1H), 4.83-4.72 (m, 1H), 4.17 - 4.01 (m, 3H), 3.95 (s, 3H), 3.75-3.63 (m, 2H), 3.33 - 3.29 (m, 3H), 2.93 - 2.83 (m, 3H), 2.63 - 2.57 (m, 2H), 2.47-2.38 (m, 3H), 2.14 - 2.00 (m, 7H), 1.97-1.90 (m, 2H), 1.89 - 1.81 (m, 4H), 1.74 - 1.68 (m, 2H), 1.65 - 1.57 (m, 4H), 1.38-1.23 (m, 2H).
실시예 106. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(3-((2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페리딘-4-일)에틸)(메틸)아미노)시클로부틸)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 106)의 합성
단계 1. tert-부틸 4-(2-(벤질(메틸)아미노)에틸)피페리딘-1-카복실레이트 (2)의 합성
MeOH (6 mL) 내 tert-부틸 4-(2-옥소에틸)피페리딘-1-카복실레이트 (1.5 g, 6.60 mmol) 및 N-메틸-1-페닐메탄아민 (799.69 mg, 6.60 mmol, 851.64 μL) 용액에 NaBH3CN (1.24 g, 19.80 mmol) 및 AcOH (396.30 mg, 6.60 mmol, 377.43 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 N-메틸-1-페닐메탄아민이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 하나의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 물 200 mL로 희석하고 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하였다. 잔여물을 역상 HPLC (0.1% NH3·H2O)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 무색 오일의 tert-부틸 4-(2-(벤질(메틸)아미노)에틸)피페리딘-1-카복실레이트 (2 g, 5.53 mmol, 83.86% 수율, 92% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=333.4
단계 2. tert-부틸 4-(2-(메틸아미노)에틸)피페리딘-1-카복실레이트 (3)의 합성
EtOH (20 mL) 내 tert-부틸 4-(2-(메틸아미노)에틸)피페리딘-1-카복실레이트 (1.8 g, 5.41 mmol) 용액에 N2 기체 하에서 Pd/C (10%, 200 mg)를 첨가하였다. 현탁액을 탈기하고 H2로 3차례 퍼징하였다. 혼합물을 25 °C H2 (15 Psi) 하에서 5시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터/EtOAc = 1/1)는 tert-부틸 4-(2-(메틸아미노)에틸)피페리딘-1-카복실레이트가 완전히 소모되었음 및 하나의 새로운 스팟이 형성되었음을 확인하였다. 혼합물을 여과하고 여과 케이크를 EtOAc (200 mL)로 세척하고, 여과물을 진공 농축하여 무색 오일의 tert-부틸 4-(2-(메틸아미노)에틸)피페리딘-1-카복실레이트 (1.3 g, 5.36 mmol, 99.08% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=243.4
단계 3. tert-부틸 4-(2-((3-(((벤질옥시)카보닐)아미노)시클로부틸)(메틸)아미노)에틸)피페리딘-1-카복실레이트 (5)의 합성
MeOH (7 mL) 내 tert-부틸 4-(2-(메틸아미노)에틸)피페리딘-1-카복실레이트 (500 mg, 2.06 mmol) 및 벤질(3-옥소시클로부틸)카바메이트 (452.30 mg, 2.06 mmol) 용액에 NaBH3CN (324.12 mg, 5.16 mmol) 및 AcOH (123.89 mg, 2.06 mmol, 117.99 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 벤질(3-옥소시클로부틸)카바메이트가 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(71%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)로 희석하고 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 30 mL로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하였다. 잔여물을 역상 HPLC (0.1% NH3·H2O)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 무색 오일의 tert-부틸 4-(2-((3-(((벤질옥시)카보닐)아미노)시클로부틸)(메틸)아미노)에틸)피페리딘-1-카복실레이트 (800 mg, 1.80 mmol, 87.02% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=446.8
단계 4. tert-부틸 4-(2-((3-아미노시클로부틸)(메틸)아미노)에틸)피페리딘-1-카복실레이트 (6)의 합성
EtOH (10 mL) 내 tert-부틸 4-(2-((3-(((벤질옥시)카보닐)아미노)시클로부틸)(메틸)아미노)에틸)피페리딘-1-카복실레이트 (800 mg, 1.80 mmol) 용액에 N2 기체 하에서 Pd/C (10%, 80 mg)를 첨가하였다. 현탁액을 탈기하고 H2로 3차례 퍼징하였다. 혼합물을 25 °C H2 (15 Psi) 하에서 5시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터/EtOAc = 1/1)로 tert-부틸 4-(2-((3-(((벤질옥시)카보닐)아미노)시클로부틸)(메틸)아미노)에틸)피페리딘-1-카복실레이트가 완전히 소모되었음 및 하나의 새로운 스팟이 형성되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여과 케이크를 EtOAc (100 mL)로 세척하고, 여과물을 진공 농축하여 무색 오일의 tert-부틸 4-(2-((3-아미노시클로부틸)(메틸)아미노)에틸)피페리딘-1-카복실레이트 (500 mg, 1.61 mmol, 89.42% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=312.5
단계 5. tert-부틸 4-(2-((3-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)시클로부틸) (메틸)아미노)에틸)피페리딘-1-카복실레이트 (8)의 합성
DMF (6 mL) 내 tert-부틸 4-(2-((3-아미노시클로부틸)(메틸)아미노)에틸)피페리딘-1-카복실레이트 (400 mg, 1.28 mmol) 및 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (574.63 mg, 1.28 mmol) 용액에 HATU (732.48 mg, 1.93 mmol) 및 DIPEA (497.95 mg, 3.85 mmol, 671.09 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 tert-부틸 4-(2-((3-아미노시클로부틸)(메틸)아미노)에틸)피페리딘-1-카복실레이트가 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 하나의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)로 희석하고 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하였다. 잔여물을 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에터/EtOAc=0/1 to 1/0)로 정제하여 밝은 황색 고체의 tert-부틸 4-(2-((3-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)시클로부틸) (메틸)아미노)에틸)피페리딘-1-카복실레이트 (600 mg, 801.75 μmol, 62.43% 수율, 99% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=741.6
단계 6. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(3-(메틸(2-(피페리딘-4-일)에틸)아미노)시클로부틸)벤즈아미드 (9)의 합성
DCM (2.5 mL) 내 tert-부틸 4-(2-((3-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)시클로부틸)(메틸)아미노)에틸)피페리딘-1-카복실레이트 (400 mg, 539.90 μmol) 및 HCl/디옥산 (4 M, 2.5 mL) 혼합물을 25 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 하나의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하여 황색 고체의 -((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(3-(메틸(2-(피페리딘-4-일)에틸)아미노)시클로부틸)벤즈아미드 (400 mg, crude, HCl 염)를 수득하였다. MS(M+H)+=641.5
단계 7. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(3-((2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페리딘-4-일)에틸)(메틸)아미노)시클로부틸)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 106)의 합성
DMF (4 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(3-(메틸(2-(피페리딘-4-일)에틸)아미노)시클로부틸)벤즈아미드 (200 mg, 295.32 μmol, HCl 염) 및 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (81.57 mg, 295.32 μmol) 용액에 KI (49.02 mg, 295.32 μmol) 및 DIPEA (114.51 mg, 885.97 μmol, 154.32 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 90 °C 에서 5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(3-(메틸(2-(피페리딘-4-일)에틸)아미노)시클로부틸)벤즈아미드가 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크 (19%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)로 희석하고 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (condition: 컬럼: Waters Xbridge 150 x 25 mm x 5μm; 이동상: [물(NH4HCO3)-ACN]; B%: 46%-76%, 9 분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하였다. 잔여물을 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에터/EtOAc=1/1 to 0/1)로 정제하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(3-((2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페리딘-4-일)에틸)(메틸)아미노)시클로부틸)-3-메톡시벤즈아미드 (26.1 mg, 28.81 μmol, 9.75% 수율, 99% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=897.0
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.07 (s, 1H), 8.46 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 8.31 - 8.23 (m, 2H), 8.00 - 7.94 (m, 1H), 7.65 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.56 - 7.46 (m, 2H), 7.29 (s, 1H), 7.22 (dd, J = 2.0, 8.7 Hz, 1H), 5.06 (dd, J = 5.3, 12.9 Hz, 1H), 4.83 - 4.69 (m, 1H), 4.21 - 4.10 (m, 1H), 4.08 - 4.00 (m, 4H), 3.93 (s, 3H), 3.33 (s, 3H), 2.98 - 2.84 (m, 3H), 2.62 - 2.55 (m, 3H), 2.48 - 2.37 (m, 2H), 2.31 - 2.22 (m, 2H), 2.02 (s, 3H), 1.99 - 1.84 (m, 5H), 1.79 - 1.68 (m, 4H), 1.67 - 1.56 (m, 5H), 1.38 - 1.32 (m, 2H), 1.27 - 1.09 (m, 2H).
실시예 107. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(3-((2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)에틸)(메틸)아미노)시클로부틸)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 107)
DMF (4 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(3-(메틸(2-(피페리딘-4-일)에틸)아미노)시클로부틸)벤즈아미드 (200 mg, 295.32 μmol, HCl 염) 및 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (81.57 mg, 295.32 μmol) 용액에 KI (49.02 mg, 295.32 μmol) 및 DIPEA (114.51 mg, 885.97 μmol, 154.32 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 90 °C 에서 5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(3-(메틸(2-(피페리딘-4-일)에틸)아미노)시클로부틸)벤즈아미드가 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(46%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)로 희석하고 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하였다. 잔여물을 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에터/EtOAc = 1/1 to 0/1)로 정제하였다. 조 생성물을 prep-HPLC (condition 컬럼: Waters Xbridge 150 x 25 mm x 5μm; 이동상: [물 (NH4HCO3) - ACN]; B%: 47%-77%, 9 분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(3-((2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)에틸)(메틸)아미노)시클로부틸)-3-메톡시벤즈아미드 (51.9 mg, 57.28 μmol, 19.40% 수율, 99% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=897.0
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.09 (s, 1H), 8.46 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 8.30 - 8.23 (m, 2H), 7.97 (s, 1H), 7.75 - 7.62 (m, 1H), 7.56 - 7.46 (m, 2H), 7.37 - 7.27 (m, 2H), 5.08 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.80 - 4.67 (m, 1H), 4.21 - 4.10 (m, 1H), 4.09 - 4.02 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.76 - 3.63 (m, 2H), 3.33 (s, 3H), 2.91 - 2.81 (m, 3H), 2.63 - 2.53 (m, 3H), 2.47 - 2.41 (m, 2H), 2.28 - 2.22 (m, 2H), 2.04 (s, 3H), 2.01 - 1.84 (m, 5H), 1.81 - 1.67 (m, 4H), 1.65 - 1.55 (m, 4H), 1.53 - 1.46 (m, 1H), 1.44 - 1.30 (m, 4H).
실시예 108. 4-(((R)-9-사이클로펜틸-7-플루오로-5-메틸-6-옥소-7-비닐-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드(화합물 108)의 합성
단계 1. 메틸 3-(시클로펜틸아미노)프로파노에이트 (2)의 합성
THF (100 mL) 내 에틸 3-아미노프로파노에이트 (5 g, 32.55 mmol, HCl) 및 사이클로펜타논 (3.01 g, 35.81 mmol, 3.17 mL) 용액에 NaBH(OAc)3 (10.64 g, 50.19 mmol) 및 NaOAc (2.95 g, 36.02 mmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 5시간 동안 교반 하였다. TLC (EtOAc)로 출발물질이 완전히 소모됨 및 새로운 스팟의 형성을 확인하였다. 혼합물을 물 (200 mL)로 희석 후 EtOAc (100 mL x 3)로 추출하고, 합쳐진 유기상을 염수 (200 mL x 2)로 세척 후 Na2SO4 로 건조, 여과 및 농축하여 황색 오일의 메틸 3-(시클로펜틸아미노)프로파노에이트 (5.5 g, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+=172.2
단계 2. 메틸 3-((2-클로로-5-니트로피리미딘-4-일)(사이클로펜틸)아미노)프로파노에이트 (3)의 합성
아세톤 (100 mL) 내 2,4-디클로로-5-니트로-피리미딘 (6.23 g, 32.12 mmol) 및 메틸 3-(시클로펜틸아미노)프로파노에이트 (5.5 g, 32.12 mmol) 용액에 K2CO3 (8.88 g, 64.24 mmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 12시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터/EtOAc = 5/1)로 출발물질이 소모됨 및 새로운 스팟의 형성을 확인하였다; LCMS로 74%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 여과 후 여과물을 농축하고, 잔여물을 플래시 실리카 겔 컬럼 (석유 에터/EtOAc = 10/1 - 5/1)로 정제하여 황색 고체의 메틸 3-((2-클로로-5-니트로피리미딘-4-일)(사이클로펜틸)아미노)프로파노에이트 (5.5 g, 15.56 mmol, 48.44% 수율, 93% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=329.1
단계 3. 2-클로로-9-사이클로펜틸-5,7,8,9-테트라하이드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (4)의 합성
AcOH (100 mL) 및 H2O (100 mL) 내 메틸 3-((2-클로로-5-니트로피리미딘-4-일)(사이클로펜틸)아미노)프로파노에이트 (4.5 g, 13.69 mmol) 용액에 Fe (4.59 g, 82.13 mmol) 및 HCl (12M, 3.6 mL)을 첨가하고 생성된 혼합물을 60°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 83%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 여과 후 농축하고, 잔여물을 NaHCO3 (sat, aq. 100 mL)로 희석하고, 생성된 혼합물을 EtOAc (100 mL x 3)로 추출 후 합쳐진 유기상을 NaHCO3 (200 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 (50 mL, 석유 에터/EtOAc = 5/1)로 분쇄하고 여과 케이크를 모아서 갈색 고체의 2-클로로-9-사이클로펜틸-5,7,8,9-테트라하이드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (3.2 g, 11.52 mmol, 84.14% 수율, 96% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=467.1
단계 4. 2-클로로-9-사이클로펜틸-5-메틸-5,7,8,9-테트라하이드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (5)의 합성
DMF (50 mL) 내 2-클로로-9-사이클로펜틸-5,7,8,9-테트라하이드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (2.7 g, 10.12 mmol) 용액에 MeI (1.58 g, 11.14 mmol, 693.20 μL) 및 K2CO3 (2.80 g, 20.25 mmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 86% 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 물 (300 mL)에 붓고 EtOAc (100 mL x 3)로 추출하고, 합쳐진 유기상을 염수 (300 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (50 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~50% EtOAc/석유 에터 gradient @ 80 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 2-클로로-9-사이클로펜틸-5-메틸-5,7,8,9-테트라하이드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (2 g, 7.05 mmol, 69.67% 수율, 99% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=281.1
단계 5. 2-클로로-9-사이클로펜틸-7-(1-하이드록시에틸)-5-메틸-5,7,8,9-테트라하이드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (6)의 합성
THF (30 mL) 내 2-클로로-9-사이클로펜틸-5-메틸-5,7,8,9-테트라하이드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (1.5 g, 5.34 mmol) 용액에 -78°C에서 LDA (2 M, 3.21 mL)를 첨가하고, 혼합물을 -78°C에서 30분 동안 교반 후 -78°C에서 아세트알데히드 (941.45 mg, 21.37 mmol, 1.20 mL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 -78°C에서 2시간 동안 교반하고 20°C에서 12시간 동안 추가로 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 83%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 반응물을 암모늄 클로라이드 (sat. aq. 50 mL) 로 켄칭하고, 혼합물을 EtOAc (50 mL x 2)로 추출하고 합쳐진 유기상을 염수 (100 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (20 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~50% EtOAc/석유 에터 gradient @ 80 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 2-클로로-9-사이클로펜틸-7-(1-하이드록시에틸)-5-메틸-5,7,8,9-테트라하이드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (2.0 g, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=452.2
단계 6. 1-(2-클로로-9-사이클로펜틸-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-7-일)에틸 메탄설포네이트 (7)의 합성
DCM (30 mL) 내 2-클로로-9-사이클로펜틸-7-(1-하이드록시에틸)-5-메틸-5,7,8,9-테트라하이드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (1.5 g, 4.62 mmol) 및 TEA (934.61 mg, 9.24 mmol, 1.29 mL) 용액에 0°C에서 MsCl (793 mg, 6.92 mmol, 535.81 μL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 88%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였고, 반응 혼합물을 얼음물 (100 mL) 로 희석하고 DCM (50 mL x 3)으로 추출 후 유기상을 염수 (100 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조, 여과 및 농축하여 황색 오일의 1-(2-클로로-9-사이클로펜틸-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-7-일)에틸 메탄설포네이트 (1.6 g, 3.97 mmol, 85.99% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=403.1
단계 7. 2-클로로-9-시클로펜틸-7-에틸리덴-5-메틸-5,7,8,9-테트라히드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (8)의 합성
THF (50 mL) 내 1-(2-클로로-9-사이클로펜틸-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-7-일) 에틸 메탄설포네이트 (1.6 g, 3.97 mmol) 용액에 DBU (1.81 g, 11.91 mmol, 1.80 mL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 36%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 얼음물 (20 mL)에 천천히 첨가 후 EtOAc (20 mL x 2)로 추출하고, 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조, 여과 및 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (20 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~50% EtOAc/석유 에터 gradient @ 80 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 2-클로로-9-시클로펜틸-7-에틸리덴-5-메틸-5,7,8,9-테트라히드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (600 mg, 1.96 mmol, 49.25% 수율, 100% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=307.1
단계 8. rel-(R)-2-클로로-9-사이클로펜틸-7-플루오로-5-메틸-7-비닐-5,7,8,9-테트라하이드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (10 (피크1)) 및 rel-(S)-2-클로로-9-사이클로펜틸-7-플루오로-5-메틸-7-비닐-5,7,8,9-테트라하이드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (10 (피크2))의 합성
THF (10 mL) 내 2-클로로-9-사이클로펜틸-7-에틸리덴-5-메틸-5,7,8,9-테트라하이드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (0.3 g, 977.87 μmol) 용액에 -78°C에서 LDA (2 M, 977.87 μL) 및 HMPA (350.47 mg, 1.96 mmol, 343.60 μL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 -78°C에서 0.5시간 동안 교반하고, 온도를 0°C까지 승온하여 0.5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 물 (50 mL)에 붓고 EtOAc (30 mL x 3)로 추출 후 합쳐진 유기상을 염수 (100 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조, 여과 및 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (5 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~30% EtOAc/석유 에터 gradient @ 50 mL/분)로 정제하여 270mg의 메조머를 수득하였다. 메조머를 SFC (컬럼: DAICEL CHIRALPAK AY-H (250 mm♂30 mm, 10 μm); 이동상: [0.1%NH3H2O ETOH]; B%: 50%-50%, 3.5; 45 분)로 분리하여 황색 고체의 rel-(R)-2-클로로-9-사이클로펜틸-7-플루오로-5-메틸-7-비닐-5,7,8,9-테트라하이드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (10 (피크1)) (120 mg, 362.09 μmol, 18.51% 수율, 98% 순도) 및 rel-(S)-2-클로로-9-사이클로펜틸-7-플루오로-5-메틸-7-비닐-5,7,8,9-테트라하이드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (10 (피크2)) (100 mg, 301.74 μmol, 15.43% 수율, 98% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=325.1
단계 9. (R)-4-((9-시클로펜틸-7-플루오로-5-메틸-6-옥소-7-비닐-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (11)의 합성
EtOH (1 mL) 및 H2O (3 mL) 내 rel-(R)-2-클로로-9-사이클로펜틸-7-플루오로-5-메틸-7-비닐-5,7,8,9-테트라하이드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (10 (Peak1)) (100 mg, 307.90 μmol) 및 4-아미노-3-메톡시벤조산 (77.20 mg, 461.85 μmol) 용액에 HCl (12 M, 56.45 μL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 100°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 60%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 농축하고, 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: 3_Phenomenex Luna C18 75 * 30 mm * 3 μm; 이동상: [물 (HCl) - ACN]; B%: 26% - 46%, 7 분)로 정제 및 동력 건조하여 갈색 고체의 (R)-4-((9-시클로펜틸-7-플루오로-5-메틸-6-옥소-7-비닐-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (32 mg, 70.26 μmol, 22.82% 수율)을 수득하였다. MS(M+H)+=456.1
단계 10. 4-(((R)-9-사이클로펜틸-7-플루오로-5-메틸-6-옥소-7-비닐-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 108)의 합성
DMF (1 mL) 내 (R)-4-((9-시클로펜틸-7-플루오로-5-메틸-6-옥소-7-비닐-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (30 mg, 65.86 μmol) 및 4-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (35.11 mg, 65.86 μmol HCl) 용액에 HATU (37.57 mg, 98.79 μmol) 및 DIPEA (25.54 mg, 197.58 μmol, 34.42 μL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였고, 혼합물을 물 (20 mL)에 붓고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출 후 합쳐진 유기상을 염수 (50 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조, 여과 및 농축하고, 생성된 혼합물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150 * 25 mm * 5 μm; 이동상: [물 (NH4HCO3) - ACN]; B% : 37% - 67%, 9 분)로 정제하여 황색 고체의 4-(((R)-9-사이클로펜틸-7-플루오로-5-메틸-6-옥소-7-비닐-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (25 mg, 26.50 μmol, 40.24% 수율, 99% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=934.4
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.49 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.15 (br s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.60 (dd, J = 3, 8.3 Hz, 1H), 7.45 - 7.39 (m, 2H), 7.24 (dd, J = .6, 8.5 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.10 - 5.96 (m, 2H), 5.50 (dd, J = 2.1, 17.3 Hz, 1H), 5.37 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 4.96 (dd, J = 5.3, 12.2 Hz, 2H), 4.65 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 4.31 - 4.17 (m, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.95 - 3.90 (m, 1H), 3.84 - 3.78 (m, 1H), 3.78 - 3.68 (m, 1H), 3.42 - 3.36 (m, 5H), 3.27 -3.22 (m, 1H), 2.93 - 2.79 (m, 5H), 2.78 - 2.71 (m, 5H), 2.65 - 2.59 (m, 2H), 2.23 -2.19 (m, 1H), 2.15 - 2.02 (m, 4H), 1.81 - 1.66 (m, 5H), 1.59 - 1.40 (m, 5H).
실시예 109. 4-(((S)-9-사이클로펜틸-7-플루오로-5-메틸-6-옥소-7-비닐-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 109)의 합성
단계 1. (S)-4-((9-시클로펜틸-7-플루오로-5-메틸-6-옥소-7-비닐-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (12)의 합성
EtOH (1 mL) 및 H2O (3 mL) 내 rel-(S)-2-클로로-9-사이클로펜틸-7-플루오로-5-메틸-7-비닐-5,7,8,9-테트라하이드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (10(피크2)) (9 5 mg, 292.51 μmol) 및 4-아미노-3-메톡시벤조산 (73.34 mg, 438.76 μmol) 용액에 HCl (12 M, 53.63 μL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 100°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 66% 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였고, 반응 혼합물을 농축하고, 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: 3_Phenomenex Luna C18 75 * 30 mm * 3 μm; 이동상: [물 (HCl) - ACN]; B%: 27% - 47%, 7 분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 갈색 고체의 (S)-4-((9-시클로펜틸-7-플루오로-5-메틸-6-옥소-7-비닐-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (35 mg, 76.84 μmol, 26.27% 수율)을 수득하였다. MS(M+H)+=456.2
단계 2. 4-(((S)-9-사이클로펜틸-7-플루오로-5-메틸-6-옥소-7-비닐-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 109)의 합성
DMF (1 mL) 내 (S)-4-((9-시클로펜틸-7-플루오로-5-메틸-6-옥소-7-비닐-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (35 mg, 76.84 μmol) 및 4-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (40.96 mg, 76.84 μmol, HCl) 용액에 HATU (43.83 mg, 115.26 μmol) 및 DIPEA (29.79 mg, 230.52 μmol, 40.15 μL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 물 (20 mL)에 붓고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하고, 합쳐진 유기상을 염수 (50 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조, 여과 및 농축하였다. 생성된 혼합물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150 * 25 mm * 5μm; 이동상: [물 (NH4HCO3) - ACN]; B%: 36%-66%, 9 분)로 정제하여 황색 고체의 4-(((S)-9-사이클로펜틸-7-플루오로-5-메틸-6-옥소-7-비닐-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (24 mg, 25.18 μmol, 32.77% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=934.4
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.49 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.08 (br s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.61 (dd, J = 7.2, 8.3 Hz, 1H), 7.44 - 7.40 (m, 2H), 7.24 (dd, J = 1.9, 8.6 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.10 - 5.95 (m, 2H), 5.51 (dd, J = 2.1, 17.3 Hz, 1H), 5.37 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 5.00 - 4.92 (m, 2H), 4.65 (d, J = 12.9 Hz, 1H), 4.31 - 4.17 (m, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.95 -3.91 (m, 1H), 3.84 - 3.78 (m, 1H), 3.78 - 3.67 (m, 1H), 3.42 - 3.37 (m, 5H), 3.27 -3.22 (m, 1H), 2.95 - 2.80 (m, 5H), 2.79 - 2.71 (m, 5H), 2.67 - 2.63 (m, 2H), 2.23 - 2.19 (m, 1H), 2.15 - 2.01 (m, 4H), 1.80 - 1.65 (m, 5H), 1.57 - 1.40 (m, 5H).
실시예 110. 4-(4-(2-(1-(4-((9-사이클로펜틸-7,7-다이플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도))[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시페닐)피페리딘-4-일)에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (화합물 110)의 합성
단계 1. 2-(1-(2-플루오로-5-메톡시-4-니트로페닐)피페리딘-4-일)에탄-1-올 (3)의 합성
DMF (15 mL) 내 1-브로모-2-플루오로-5-메톡시-4-니트로벤젠 (1.5 g, 6.00 mmol) 및 2-(피페리딘-4-일)에탄-1-올 (1 g, 7.74 mmol) 용액에 K2CO3 (1.66 g, 12.00 mmol)를 첨가하고 혼합물을 80°C에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크 (100 %)를 확인하였다. 혼합물을 H2O (10 mL)로 희석 후 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (10 mL x 3) 및 포화 시트르산 (10 mL x 3)로 세척 후 Na2SO4로 건조하여 여과하였다. 여과물을 감압 농축하여 황색 오일의 2-(1-(2-플루오로-5-메톡시-4-니트로페닐)피페리딘-4-일)에탄-1-올 (1.1 g, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=299.0
단계 2. 2-(1-(2-플루오로-5-메톡시-4-니트로페닐)피페리딘-4-일)에틸4-메틸벤젠설포네이트 (4)의 합성
DCM (20 mL) 내 2-(1-(2-플루오로-5-메톡시-4-니트로페닐)피페리딘-4-일)에탄-1-올 (1.1 g, 3.69 mmol) 용액에 TEA (1.12 g, 11.06 mmol, 1.54 mL) 및 TosCl (1.41 g, 7.37 mmol)를 첨가하고 혼합물을 25°C에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크 (71 %)를 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (12 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 30~70% EtOAc/석유 에터 gradient @ 50 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 2-(1-(2-플루오로-5-메톡시-4-니트로페닐)피페리딘-4-일)에틸4-메틸벤젠설포네이트 (1.4 g, 3.00 mmol, 81.39% 수율, 97% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=453.2
단계 3. 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-(2-(1-(2-플루오로-5-메톡시-4-니트로페닐)피페리딘-4-일)에틸)피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (6)의 합성
DMF (15 mL) 내 2-(1-(2-플루오로-5-메톡시-4-니트로페닐)피페리딘-4-일)에틸 4-메틸벤젠설포네이트 (1.4 g, 3.09mmol) 및 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (780 mg, 2.06 mmol, HCl 염) 용액에 NaI (15.46 mg, 103.13 μmol) 및 DIPEA (799.74 mg, 6.19 mmol, 1.08 mL)를 첨가하고 혼합물을 50°C에서 50시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크 (46 %)를 확인하였다. 혼합물을 H2O (20 mL)로 희석 후 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (10 mL x 3)로 세척 후 Na2SO4로 건조하여 여과하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 조 생성물을 EtOAc (10 mL)로 희석하고, 25°C에서 1시간 동안 교반 하였다. 혼합물을 여과 후 여과 케이크를 EtOAc (10 mL)로 세척하였다. 여과 케이크를 모으고 진공 건조하여 황색 고체의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-(2-(1-(2-플루오로-5-메톡시-4-니트로페닐)피페리딘-4-일)에틸)피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (590 mg, 871.77 μmol, 42.26% 수율, 92% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=623.0
단계 4. 4-(4-(2-(1-(4-아미노-2-플루오로-5-메톡시페닐)피페리딘-4-일)에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (7)의 합성
EtOH (5 mL) 및 H2O (5 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-(2-(1-(2-플루오로-5-메톡시-4-니트로페닐)피페리딘-4-일)에틸)피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (0.59 g, 947.57 μmol) 용액에 Fe (317.50 mg, 5.69 mmol) 및 HCl (12 M, 470 μL)를 첨가하고 혼합물을 80°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크 (94 %)를 확인하였다. 혼합물을 0°C에서 포화 NaHCO3를 첨가하여 pH=8로 조정하고, DMF (20 mL) 및 H2O (40 mL)로 희석했다. 혼합물을 여과 후 여과 케이크를 DMF (50 mL)로 세척했다. 여과물을 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하고, 유기상을 염수 (10 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4로 건조, 여과 및 감압 농축하여 황색 고체의 4-(4-(2-(1-(4-아미노-2-플루오로-5-메톡시페닐)피페리딘-4-일)에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (0.4 g, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=593.0
단계 5. 4-(4-(2-(1-(4-((9-사이클로펜틸-7,7-다이플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도))[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시페닐)피페리딘-4-일)에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (화합물 110)의 합성
디옥산 (6 mL) 내 2-클로로-9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-5,7,8,9-테트라히드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (118 mg, 372.55 μmol) 및 4-(4-(2-(1-(4-아미노-2-플루오로-5-메톡시페닐)피페리딘-4-일)에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (200 mg, 337.46 μmol) 용액에 Pd(OAc)2 (7.58 mg, 33.75 μmol), Cs2CO3 (330.00 mg, 1.01 mmol) 및 BINAP (42.03 mg, 67.49 μmol)를 첨가하고 혼합물을 100°C에서 28시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크 (41 %)를 확인하였다. 혼합물을 THF (5 mL) 및 DCM (5 mL)로 희석 후 여과했다. 여과 케이크를 THF (10 mL) 및 DCM (10 mL)로 세척했다. 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (5 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 60~100% EtOAc/석유 에터 to 5% MeOH/ EtOAc gradient @ 50 mL/분)로 정제 후 prep-HPLC (컬럼: Unisil 3-100 C18 Ultra 150*50 mm*3 μm; 이동상: [물 (FA) - ACN]; B%: 15% - 45%, 10 분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-(4-(2-(1-(4-((9-사이클로펜틸-7,7-다이플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-피리미도))[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시페닐)피페리딘-4-일)에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (54.2 mg, 60.85 μmol, 18.03% 수율, 98% 순도, 0.25FA)을 수득하였다. MS(M+H)+=873.0
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.09 (s, 1H), 8.32 (s, 0.25H), 8.20 (s, 1H), 7.88 (d, J = 14.7 Hz, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.73 - 7.67 (m, 1H), 7.37 - 7.32 (m, 2H), 6.68 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 5.13 - 5.05 (m, 1H), 4.74 - 4.64 (m, 1H), 4.01 (br t, J = 14.1 Hz, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.37 - 3.32 (m, 7H), 2.93 - 2.82 (m, 1H), 2.66 - 2.64 (m, 1H), 2.63 - 2.59 (m, 2H), 2.58 - 2.55 (m, 5H), 2.43 - 2.38 (m, 2H), 2.07 - 1.98 (m, 1H), 1.94 - 1.85 (m, 2H), 1.82 - 1.75 (m, 2H), 1.72 - 1.24 (m, 13H).
실시예 111. 5-(4-((1-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시페닐)피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (화합물 111)의 합성
화합물 111은 실시예 89 및 103에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=859.4, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.08 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.88 (d, J = 14.7 Hz, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.68 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.36 - 7.33 (m, 1H), 7.28 - 7.23 (m, 1H), 6.69 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.07 (dd, J = 5.4, 13.0 Hz, 1H), 4.74 - 4.62 (m, 1H), 4.01 (t, J = 14.1 Hz, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.48 - 3.42 (m, 4H), 3.31 (s, 3H), 2.94 - 2.82 (m, 1H), 2.73 - 2.64 (m, 2H), 2.57 - 2.51 (m, 6H), 2.27 - 2.22 (m, 2H), 2.05 - 1.97 (m, 1H), 1.95 - 1.79 (m, 4H), 1.73 - 1.49 (m, 8H), 1.36 - 1.21 (m, 3H).
실시예 112. 5-(4-(2-(1-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시페닐)피페리딘-4-일)에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (화합물 112)의 합성
화합물 112는 실시예 89 및 103에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=873.0, 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.20 (d, J = 14.7 Hz, 1H), 8.07 - 8.04 (m, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.71 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.31 - 7.29 (m, 1H), 7.10 - 7.06 (m, 1H), 6.57 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.95 (dd, J = 5.2, 12.4 Hz, 1H), 4.88 - 4.79 (m, 1H), 3.94 - 3.83 (m, 5H), 3.49 - 3.44 (m, 3H), 3.42 - 3.36 (m, 4H), 2.94 - 2.61 (m, 9H), 2.55 - 2.46 (m, 2H), 2.18 - 2.04 (m, 3H), 1.87 - 1.73 (m, 7H), 1.61 - 1.44 (m, 8H).
실시예 113. 5-(4-(3-(1-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시페닐)피페리딘-4-일)프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (화합물 113)의 합성
화합물 113은 실시예 110에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=887.3, 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.34 - 8.13 (m, 2H), 8.00 (s, 1H), 7.71 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.31 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.11 - 7.03 (m, 1H), 6.57 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.99 - 4.91 (m, 1H), 4.90 - 4.79 (m, 1H), 3.95 - 3.82 (m, 5H), 3.53 - 3.46 (m, 4H), 3.42 - 3.36 (m, 5H), 2.93 - 2.64 (m, 9H), 2.54 - 2.45 (m, 2H), 2.16 - 2.06 (m, 4H), 1.86 - 1.78 (m, 2H), 1.76 - 1.72 (m, 3H), 1.67 - 1.55 (m, 4H), 1.49 - 1.41 (m, 2H), 1.40 - 1.30 (m, 3H).
실시예 114. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-(4-(2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일))피페리딘-4-일)에틸)피페라진-1-일)시클로헥실)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 114)의 합성
화합물 114는 실시예 83에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=998.1, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.07 (br s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.24 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.80 (dd, J = 3.6, 7.8 Hz, 1H), 7.67 (dd, J = 7.3, 8.4 Hz, 1H), 7.32 (dd, J = 5.1, 7.7 Hz, 2H), 7.18 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 5.08 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.87 - 4.76 (m, 1H), 4.13 - 4.01 (m, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.73 - 3.62 (m, 3H), 3.30 (s, 3H), 2.93 - 2.80 (m, 3H), 2.63 - 2.52 (m, 8H), 2.37 - 2.34 (m, 1H), 2.31 - 2.25 (m, 2H), 2.24 - 2.15 (m, 1H), 2.06 - 1.87 (m, 5H), 1.86 - 1.69 (m, 6H), 1.68 - 1.22 (m, 14H).
실시예 115. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)옥시)시클로헥실)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 115)의 합성
단계 1. tert-부틸 ((1r,4r)-4-(피리딘-4-일옥시)시클로헥실)카바메이트 (2)의 합성
THF (60 mL) 내 tert-부틸((1s,4s)-4-하이드록시사이클로헥실)카바메이트 (3 g, 13.93 mmol), 피리딘-4-올 (1.33 g, 13.93 mmol) 및 PPh3 (5.48 g, 20.90 mmol) 용액에 0°C에서 DIAD (4.23 g, 20.90 mmol, 4.06 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크 (5 %)를 확인하였다. 혼합물을 차가운 HCl (0.5 M, 80 mL)에 붓고 EtOAc (10 mL x 3)로 세척했다. Na2CO3 수용액을 수층에 첨가하여 pH를 9로 조정하고, EtOAc (20 mL x 4)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조하고 농축하여 백색 고체의 tert-부틸 ((1r,4r)-4-(피리딘-4-일옥시)시클로헥실)카바메이트 (1 g, crude)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=293.1
단계 2. tert-부틸 ((1r,4r)-4-(피페리딘-4-일옥시)시클로헥실)카바메이트 (3)의 합성
AcOH (20 mL) 내 tert-부틸 ((1r,4r)-4-(피리딘-4-일옥시)시클로헥실)카바메이트 (1.1 g, 3.76 mmol) 용액에 Pd/C (300 mg, 3.76 mmol, 10% 순도), PtO2 (512.60 mg, 2.26 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 H2 (45 Psi) 하 55°C에서 24시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량을 확인하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드로 여과 후 여과물을 농축하였다. 조 생성물을 탈이온수 (40 mL)로 용해 후 동결 건조하여 백색 고체의 tert-부틸 ((1r,4r)-4-(피페리딘-4-일옥시)시클로헥실)카바메이트 (130mg, crude, HOAC)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=299.2
단계 3. tert-부틸 ((1r,4r)-4-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)옥시)시클로헥실)카바메이트 (4)의 합성
DMSO (3 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (150.26 mg, 543.98 μmol), tert-부틸 N-[4-(4-피페리딜옥시)사이클로헥실]카바메이트 (130 mg, 362.65 μmol, HOAC), KI (25.15 mg, 151.43 μL) 및 TEA (110.09 mg, 1.09 mmol, 151.43 μL) 혼합물을 80°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 tert-부틸 N-[4-(4-피페리딜옥시)사이클로헥실]카바메이트가 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 피크 (24 %)를 확인하였다. 혼합물을 물 (80 mL)에 붓고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출했다. 합쳐진 유기상을 염수 (10 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조, 여과 및 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (5 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~30% EtOAc/석유 에터 gradient @ 60 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 tert-부틸 ((1r,4r)-4-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)옥시)시클로헥실)카바메이트 (0.2 g, crude)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=555.2
단계 4. 4-(4-(((1r,4r)-4-아미노시클로헥실)옥시)피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (5)의 합성
DCM (5 mL) 내 ((1r,4r)-4-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)옥시)시클로헥실)카바메이트 (0.2 g, 360.60 μmol) 용액에 25°C에서 TFA (1.54 g, 13.51 mmol, 1 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25°C에서 0.5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 피크 (62 %)를 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하여 갈색 오일의 4-(4-(((1r,4r)-4-아미노시클로헥실)옥시)피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (0.3 g, crude, TFA)을 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=455.1
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)옥시)시클로헥실)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 115)의 합성
DMF (1 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (60 mg, 128.91 μmol) 용액에 HATU (58.82 mg, 154.70 μmol) 및 DIPEA (99.97 mg, 773.49 μmol, 134.72 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 10분 동안 교반 하였다. 혼합물에 4-(4-(((1r,4r)-4-아미노시클로헥실)옥시)피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (102.61 mg, 180.48μmol, TFA)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-(4-(((1r,4r)-4-아미노시클로헥실)옥시)피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물 용액을 EtOAc (20 mL)로 희석하고 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (4 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 60 mL/분; Eluent of 0~50% MeOH / EtOAc @ 60 mL/분)로 정제하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150x25 mmx 5μm; 이동상: [물 (NH4HCO3) -ACN];B%: 52%-82%, 8 분)로 정제하고 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)옥시)시클로헥실)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (50.7 mg, 54.53 μmol, 42.30% 수율, 97% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=902.5
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.08 (br s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.24 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.85 (dd, J = 3.4, 7.6 Hz, 1H), 7.68 (dd, J = 7.3, 8.3 Hz, 1H), 7.33 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.18 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 5.10 (dd, J = 5.4, 12.9 Hz, 1H), 4.82 (q, J = 8.1 Hz, 1H), 4.07 (t, J = 13.9 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.81 - 3.60 (m, 2H), 3.59 - 3.48 (m, 2H), 3.44 - 3.38 (m, 1H), 3.33 (s, 3H), 3.07 (t, J = 9.4 Hz, 2H), 2.95 - 2.80 (m, 1H), 2.64 - 2.53 (m, 2H), 2.05 - 1.82 (m, 9H), 1.76 - 1.55 (m, 8H), 1.45 - 1.22 (m, 4H).
실시예 116. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페리딘-4-일)옥시)시클로헥실)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 116)의 합성
화합물 116은 실시예 115에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=902.5, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.17 - 10.94 (m, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.24 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.84 (dd, J = 3.2, 7.3 Hz, 1H), 7.65 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.24 (dd, J = 1.8, 8.7 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 5.06 (dd, J = 5.4, 12.9 Hz, 1H), 4.89 - 4.75 (m, 1H), 4.07 (t, J = 13.8 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.85 - 3.66 (m, 4H), 3.45 - 3.39 (m, 1H), 3.33 - 3.30 (m, 3H), 3.24 (t, J = 10.1 Hz, 2H), 2.94 - 2.82 (m, 1H), 2.63 - 2.53 (m, 2H), 2.06 - 1.84 (m, 9H), 1.76 - 1.57 (m, 6H), 1.51 - 1.22 (m, 6H).
실시예 117. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(2-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 117)의 합성
단계 1. 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-(히드록시메틸)피페리딘-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (7)의 합성
DMSO (10 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (1 g, 3.62 mmol) 용액에 25°C에서 TEA (1.83 g, 18.10 mmol, 2.52 mL) 및 피페리딘-4-일메탄올 (416.96 mg, 3.62 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 100°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 시약 1이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물을 물 (80 mL)에 붓고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조, 여과 및 감압 농축하여 황색 오일의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-(히드록시메틸)피페리딘-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (1.7 g, crude)을 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=372.1
단계 2. (1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸 4-메틸벤젠술포네이트 (5)의 합성
DCM (40 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-(히드록시메틸)피페리딘-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (1.7 g, 4.58 mmol), TEA (1.39 g, 13.73 mmol, 1.91 mL) 용액에 25°C에서 TosCl (1.31 g, 6.87 mmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 25°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 시약 1이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하였다. 조 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (25 g Sepa Flash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 (1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸 4-메틸벤젠술포네이트 (1.5 g, 2.65 mmol, 57.99% 수율, 93% 순도)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=526.1
단계 3. tert-부틸 7-아미노-2-아자스피로[3.5]노난-2-카복실레이트 (2)의 합성
MeOH (15 mL) 내 tert-부틸 7-옥소-2-아자스피로[3.5]노난-2-카복실레이트 (300 mg, 1.25 mmol) 용액에 HOAc (75.28 mg, 1.25 mmol, 71.70 μL) 및 NH4OAc (450.00 mg, 5.84 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 1시간 동안 교반 하였다. 이후 25°C에서 NaBH3CN (600.00 mg, 9.55 mmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 25°C에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크 (21 %)를 확인하였다. 반응 혼합물에 0°C 에서 포화 Na2CO3 (sat. Aq, 15 mL)를 천천히 첨가 후 EtOAc (30 mL x3)로 추출했다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조 및 여과하고 여과물을 감압 농축하여 밝은 황색 오일의 tert-부틸 7-아미노-2-아자스피로[3.5]노난-2-카복실레이트 (300 mg, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+=241.2
단계 4. tert-부틸 7-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)-2-아자스피로[3.5]노난-2-카복실레이트 (3)의 합성
DMF (8 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (550 mg, 1.23 mmol) 용액에 25°C에서 EDCI (550.00 mg, 2.87 mmol), HOBt (320.83 mg, 2.37 mmol), DIPEA (680.17 mg, 5.26 mmol, 916.67 μL) 및 tert-부틸 7-아미노-2-아자스피로[3.5]노난-2-카복실레이트 (295.43 mg, 1.23mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C N2 기체 하 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크 (51 %)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (20 mL)로 희석 후 EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (30 mL x 3)로 세척 후 Na2SO4로 건조하고 여과하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (Biotage; 20 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 20 ~ 80% EtOAc: 석유 에터 gradient, 60 mL/분)로 정제하여 밝은 황색 고체의 tert-부틸 7-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)-2-아자스피로[3.5]노난-2-카복실레이트 (500 mg, 746.54 μmol, 60.73% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=670.4
1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ = 8.30 - 8.24 (m, 2H), 8.03 (br d, J=4.4 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.54 - 7.44 (m, 2H), 4.84 - 4.71 (m, 1H), 4.13 - 4.01 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.79 - 3.70 (m, 1H), 3.61 - 3.48 (m, 4H), 3.33 (s, 3H), 3.18 (d, J=5.3 Hz, 1H), 1.97 - 1.83 (m, 4H), 1.79 - 1.68 (m, 4H), 1.62 - 1.49 (m, 5H), 1.39 (s, 9H), 1.37 - 1.31 (m, 2H).
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(2-아자스피로[3.5]노난-7-일)벤즈아미드 (4)의 합성
DCM (5 mL) 내 tert-부틸 7-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)-2-아자스피로[3.5]노난-2-카복실레이트 (0.1 g, 149.31 μmol) 용액에 25°C에서 TFA (3.08 g, 27.01 mmol, 2.00 mL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 25°C에서 0.5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하여 갈색 오일의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(2-아자스피로[3.5]노난-7-일)벤즈아미드 (0.1 g, curde, TFA 염)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=570.2
단계 6. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(2-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 117)의 합성
DMF (1 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(2-아자스피로[3.5]노난-7-일)벤즈아미드 (0.1 g, 146.27 μmol, TFA 염) 및 (1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸4-메틸벤젠술포네이트 (92.25 mg, 175.52 μmol) 용액에 25°C에서 DIPEA (56.71 mg, 438.81 μmol, 76.43 μL) 및 NaI (4.38 mg, 29.25 μmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 60°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(2-아자스피로[3.5]노난-7-일)벤즈아미드의 질량의 피크 (44%)를 확인하였다. 추가적인 (1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸4-메틸벤젠술포네이트 (46.13 mg, 87.76 μmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 60°C에서 12시간 동안 추가로 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크 (18 %)를 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (5 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 60 mL/분; Eluent of 0~50% MeOH / EtOAc @ 60 mL/분) 및 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi Polar-RP 100x25 mmx4μm; 이동상: [물 (TFA) - ACN]; B%: 35% - 55%, 7 분)로 정제하고 용출물을 동결 건조했다. 잔여물을 prep-TLC (DCM : 메탄올 = 10:1; Rf = 0.4) 및 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150x25 mmx 5μm; 이동상: [물 (NH4HCO3) - ACN]; B%: 45% - 75%, 8 분)로 재정제하고 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(2-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)-2-아자스피로[3.5]노난-7-일)-3-메톡시벤즈아미드 (11.5 mg, 12.21 μmol, 8.35% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=923.5
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.04 (br s, 1H), 8.28 - 8.22 (m, 2H), 8.02 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.55 (dd, J = 7.0, 8.6 Hz, 1H), 7.51 - 7.44 (m, 2H), 7.14 - 7.04 (m, 2H), 5.11 - 5.01 (m, 1H), 4.83 - 4.70 (m, 1H), 4.04 (t, J = 14.0 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.80 - 3.67 (m, 1H), 3.66 - 3.54 (m, 2H), 3.53 - 3.43 (m, 1H), 3.32 - 3.32 (m, 3H), 2.99 - 2.77 (m, 6H), 2.62 - 2.53 (m, 2H), 2.43 (br t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.26 - 2.15 (m, 1H), 2.13 - 2.04 (m, 1H), 2.02 - 1.83 (m, 5H), 1.71 (br s, 4H), 1.65 - 1.54 (m, 5H), 1.49 - 1.30 (m, 6H).
실시예 118. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-플루오로벤즈아미드 (화합물 118)의 합성
단계 1. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2 -일)아미노)-3-플루오로벤조산 (2)의 합성
EtOH (3 mL) 및 H2O (9 mL) 내 2-클로로-9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-5,7,8,9-테트라히드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (200 mg, 631.45μmol) 및 4-아미노-3-플루오로-벤조산 (127.34 mg, 820.88 μmol) 용액에 20°C에서 HCl (12 M, 115.77 μL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 100°C에서 32시간 동안 교반 하였다. LCMS로 2-클로로-9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-5,7,8,9-테트라히드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 79% 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하였다. 조 생성물을 20°C에서 0.5시간 동안 EtOAc (1 mL), ACN (1 mL) 및 DMF (1 mL)로 분쇄 후 여과했다. 여과 케이크를 진공 건조하여 백색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-플루오로벤조산 (202 mg, 454.66 μmol, 72.00% 수율, 98% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=436.1
단계 2. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-플루오로벤즈아미드 (화합물 118)의 합성
DMF (4 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-플루오로벤조산 (80 mg, 183.74 μmol) 용액에 HATU (76.85 mg, 202.11 μmol) 및 DIPEA (47.49 mg, 367.48 μmol, 64.01 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 20°C에서 10분 동안 교반 후 DMF (4 mL) 내 4-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (107.73 mg, 202.11 μmol, HCl) 용액 및 DIPEA (47.49 mg, 367.48 μmol, 64.01 μL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 83% 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석 후 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 로 건조 및 여과하여 농축했다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: 3_Phenomenex Luna C18 75*30 mm*3μm; 이동상: [물 (TFA) - ACN]; B%: 24% - 54%, 7 분)로 정제 후 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge BEH C18 150*25 mm*5μm; 이동상: [물 (NH4HCO3) - ACN]; B%: 36% - 66%, 분)로 재정제하고 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-플루오로벤즈아미드 (30.8 mg, 33.36 μmol, 18.16% 수율, 99% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=914.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.07 (br s, 1H), 9.07 (s, 1H), 8.28 - 8.18 (m, 2H), 8.01 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 7.76 - 7.62 (m, 3H), 7.40 - 7.30 (m, 2H), 5.09 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.74 - 4.63 (m, 1H), 4.37 (br d, J = 12.8 Hz, 1H), 4.09 - 3.89 (m, 4H), 3.30 (br s, 7H), 3.13 (br t, J = 12.1 Hz, 1H), 2.93 - 2.81 (m, 1H), 2.75 - 2.68 (m, 1H), 2.65 - 2.54 (m, 10H), 2.07 - 1.97 (m, 1H), 1.92 - 1.76 (m, 4H), 1.70 - 1.61 (m, 2H), 1.60 - 1.46 (m, 5H), 1.43 - 1.32 (m, 1H).
실시예 119. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-5-메톡시-2-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 (화합물 119)의 합성
단계 1. 5-플루오로-4-니트로-2-(트리플루오로메틸)벤조산 (2)의 합성
H2SO4 (25 mL) 내 5-플루오로-2-(트리플루오로메틸)벤조산 (5 g, 24.03 mmol) 용액에 HNO3 (35.00 g, 388.81 mmol, 25.00 mL, 70% 순도)를 0 °C 에서 한 방울씩 첨가하고 생성된 혼합물을 100 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터/EtOAc = 1/1)로 대부분의 출발물질이 소모되었음 및 새로운 스팟 형성을 확인하였다. 반응 혼합물을 얼음물 (300 mL)에 붓고 EtOAc (150 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (300 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과 및 감압 농축하여 황색 오일의 5-플루오로-4-니트로-2-(트리플루오로메틸)벤조산 (6 g, 11.85 mmol, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=254.1
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 10.69 (br s, 1H), 8.43 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 7.83 (d, J = 10.1 Hz, 1H).
단계 2. 메틸 5-플루오로-4-니트로-2-(트리플루오로메틸)벤조에이트 (3)의 합성
MeOH (20 mL) 및 THF (80 mL) 내 5-플루오로-4-니트로-2-(트리플루오로메틸)벤조산 (6 g, 11.85 mmol) 용액에 TMSCHN2 (2 M, 17.78 mL)를 0 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터/EtOAc = 3/1)로 5-플루오로-4-니트로-2-(트리플루오로메틸)벤조산이 소모되었음 및 새로운 스팟 형성을 확인하였다. 반응물을 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (40 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~20% EtOAc/석유 에터 gradient @ 80 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 메틸 5-플루오로-4-니트로-2-(트리플루오로메틸)벤조에이트 (2.9 g, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+=268.1
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.47 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 3.99 (s, 3H).
단계 3. 메틸 5-메톡시-4-니트로-2-(트리플루오로메틸)벤조에이트 (4)의 합성
MeOH (10 mL) 내 메틸 5-플루오로-4-니트로-2-(트리플루오로메틸)벤조에이트 (1 g, 1.87 mmol) 용액에 NaOMe (5 M in MeOH, 1 mL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터/EtOAc = 5/1)로 5-플루오로-4-니트로-2-(트리플루오로메틸)벤조산이 소모되었음 및 새로운 스팟 형성을 확인하였다. 혼합물을 물 (50 mL)에 붓고 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (100 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 황색 오일의 메틸 5-메톡시-4-니트로-2-(트리플루오로메틸)벤조에이트 (1.1 g, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+=280.2
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.22 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 4.07 (s, 3H), 3.92 (s, 3H).
단계 4. 메틸 4-아미노-5-메톡시-2-(트리플루오로메틸)벤조에이트 (5)의 합성
MeOH (20 mL) 내 메틸 5-메톡시-4-니트로-2-(트리플루오로메틸)벤조에이트 (1.1 g, 1.97 mmol) 용액에 Pd/C (100 mg, 10% 순도)를 N2 하에서 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C H2 (15 psi) 하에서 12시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터/EtOAc = 5/1)로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 새로운 스팟 형성을 확인하였다. 혼합물을 여과하고 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (10 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~20% EtOAc/석유 에터 gradient @ 80 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 메틸 4-아미노-5-메톡시-2-(트리플루오로메틸)벤조에이트 (450 mg, 1.81 mmol, 91.66% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=235.2
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ = 7.29 (s, 1H), 7.04 (s, 1H), 5.89 (s, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.77 (s, 3H).
단계 5. 메틸 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-5-메톡시-2-(트리플루오로메틸)벤조에이트 (7)의 합성
디옥산 (10 mL) 내 메틸 4-아미노-5-메톡시-2-(트리플루오로메틸)벤조에이트 (0.35 g, 1.40 mmol) 및 2-클로로-9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-5,7,8,9-테트라히드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (444.88 mg, 1.40 mmol) 용액에 TsOH (725.61 mg, 4.21 mmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 100 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 메틸 4-아미노-5-메톡시-2-(트리플루오로메틸)벤조에이트가 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(75%)를 확인하였다. 혼합물을 염수 (50 mL)에 붓고 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과 및 농축하였다. 잔여물을 실리카 겔 컬럼 (석유 에터/EtOAc = 1/1)으로 정제하여 황색 고체의 메틸 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-5-메톡시-2-(트리플루오로메틸)벤조에이트 (500 mg, 944.36 μmol, 67.23% 수율, 100% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=530.1
단계 6. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-5-메톡시-2-(트리플루오로메틸)벤조산 (8)의 합성
THF (2.5 mL), H2O (2.5 mL) 및 MeOH (2.5 mL) 내 메틸 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-5-메톡시-2-(트리플루오로메틸)벤조에이트 (250 mg, 472.18 μmol) 용액에 NaOH (2 M in H2O, 2.5 mL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 25 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 수화된 질량의 피크(69%)를 확인하였다. 유기 용매를 농축하고 잔여물을 1M HCl로 pH=6으로 조정하고, 현탁액을 여과하고 여과 케이크를 모아서 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-5-메톡시-2-(트리플루오로메틸)벤조산 (180 mg, 349.22 μmol, 73.96% 수율)을 수득하였다. MS(M+H2O+H)+=534.1
단계 7. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-5-메톡시-2-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 (화합물 119)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-5-메톡시-2-(트리플루오로메틸)벤조산 (100 mg, 194.01 μmol) 및 4-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (103.41 mg, 194.01 μmol, HCl) 용액에 HATU (110.65 mg, 291.02 μmol) 및 DIPEA (75.22 mg, 582.04 μmol, 101.38 μL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 25 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-5-메톡시-2-(트리플루오로메틸)벤조산이 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(81%)를 확인하였다. 혼합물을 물 (20 mL)에 붓고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (50 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 생성된 혼합물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150 * 25 mm * 5 μm; 이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN]; B%: 40%-70%, 10 분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-5-메톡시-2-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 (72 mg, 68.81 μmol, 35.47% 수율, 95% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=994.2
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.09 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.40 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.74-7.65 (m, 1H), 7.35 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.11 (s, 1H), 5.09 (dd, J = 5.3, 12.8 Hz, 1H), 4.92-4.73 (m, 1H), 4.36-4.21 (m, 1H), 4.05 (t, J = 14.0 Hz, 2H), 4.00-3.85 (m, 5H), 3.35-3.28 (m, 6H), 3.22-3.14 (m, 1H), 2.93-2.76 (m, 2H), 2.64-2.53 (m, 11H), 2.07-1.81 (m, 5H), 1.73-1.64 (m, 2H), 1.63-1.50 (m, 4H), 1.46-1.29 (m, 2H).
실시예 120. 4-((9'-시클로펜틸-5'-메틸-6'-옥소-5',6',8',9'-테트라히드로스피로[시클로프로판-1,7'-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀]-2'-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 120)의 합성
단계 1. 에틸 1-((시클로펜틸아미노)메틸)시클로프로판-1-카복실레이트 (2)의 합성
DCM (20 mL) 내 에틸 1-(아미노메틸)시클로프로판-1-카복실레이트 (1 g, 6.98 mmol) 및 시클로펜탄온 (587.47 mg, 6.98 mmol, 618.39 μL) 용액에 NaBH(OAc)3 (3.70 g, 17.46 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터 : EtOAc = 1: 1)로 에틸 1-(아미노메틸)시클로프로판-1-카복실레이트가 완전히 소모되었음 및 하나의 새로운 스팟 형성을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (200 mL)로 희석하고 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하였다. 여과물을 농축 HCl로 pH=5로 조정하고 감압 농축하여 백색 고체의 에틸 1-((시클로펜틸아미노)메틸)시클로프로판-1-카복실레이트 (350 mg, 1.41 mmol, 20.23% 수율, HCl 염)를 수득하였다. MS(M+H)+=212.3
단계 2. 에틸 1-(((2-클로로-5-니트로피리미딘-4-일)(시클로펜틸)아미노)메틸)시클로프로판-1-카복실레이트 (4)의 합성
아세톤 (5 mL) 내 에틸 1-((시클로펜틸아미노)메틸)시클로프로판-1-카복실레이트 (350 mg, 1.66 mmol) 용액에 K2CO3 (686.78 mg, 4.97 mmol) 및 2,4-디클로로-5-니트로피리미딘 (321.30 mg, 1.66 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 3시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(11%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)로 희석하고 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에터/EtOAc=1/0 to 100/5)로 정제하여 백색 고체의 에틸 1-(((2-클로로-5-니트로피리미딘-4-일)(시클로펜틸)아미노)메틸)시클로프로판-1-카복실레이트 (250 mg, 671.07 μmol, 40.51% 수율, 99% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=369.1
단계 3. 2'-클로로-9'-시클로펜틸-8',9'-디히드로스피로[시클로프로판-1,7'-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀]-6'(5'H)-온 (5)의 합성
AcOH (4 mL) 내 에틸 1-(((2-클로로-5-니트로피리미딘-4-일)(시클로펜틸)아미노)메틸)시클로프로판-1-카복실레이트 (200 mg, 542.28 μmol) 용액에 Fe (151.42 mg, 2.71 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 60 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 에틸 1-(((2-클로로-5-니트로피리미딘-4-일)(시클로펜틸)아미노)메틸)시클로프로판-1-카복실레이트가 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 하나의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여과 케이크를 EtOAc (50 mL)로 세척하였다. 여과물을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에터/EtOAc = 5/1 to 3/1)로 정제하여 백색 고체의 2'-클로로-9'-시클로펜틸-8',9'-디히드로스피로[시클로프로판-1,7'-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀]-6'(5'H)-온 (150 mg, 507.24 μmol, 93.54% 수율, 99% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=293.2
단계 4. 2'-클로로-9'-시클로펜틸-5'-메틸-8',9'-디히드로스피로[시클로프로판-1,7'-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀]-6'(5'H)-온 (6)의 합성
DMF (3 mL) 내 2'-클로로-9'-시클로펜틸-8',9'-디히드로스피로[시클로프로판-1,7'-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀]-6'(5'H)-온 (120 mg, 409.89 μmol) 용액에 K2CO3 (141.62 mg, 1.02 mmol) 및 MeI (87.27 mg, 614.83 μmol, 38.28 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 10 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 2'-클로로-9'-시클로펜틸-8',9'-디히드로스피로[시클로프로판-1,7'-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀]-6'(5'H)-온이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하였다. 잔여물을 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에터/EtOAc=3/1 to 1/1)로 정제하여 백색 고체의 2'-클로로-9'-시클로펜틸-5'-메틸-8',9'-디히드로스피로[시클로프로판-1,7'-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀]-6'(5'H)-온 (100 mg, 322.70 μmol, 78.73% 수율, 99% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=307.2
단계 5. 4-((9'-시클로펜틸-5'-메틸-6'-옥소-5',6',8',9'-테트라히드로스피로[시클로프로판-1,7'-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀]-2'-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (7)의 합성
H2O (3 mL) 및 EtOH (1 mL) 내 2'-클로로-9'-시클로펜틸-5'-메틸-8',9'-디히드로스피로[시클로프로판-1,7'-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀]-6'(5'H)-온 (100 mg, 325.96 μmol), 4-아미노-3-메톡시벤조산 (54.49 mg, 325.96 μmol), HCl (12 M, 59.76 μL) 혼합물을 100 °C 에서 10시간 동안 교반 하였다. LCMS로 2'-클로로-9'-시클로펜틸-5'-메틸-8',9'-디히드로스피로[시클로프로판-1,7'-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀]-6'(5'H)-온이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(~73%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하여 회색 고체의 4-((9'-시클로펜틸-5'-메틸-6'-옥소-5',6',8',9'-테트라히드로스피로[시클로프로판-1,7'-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀]-2'-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (100 mg, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=438.3
단계 6. 4-((9'-시클로펜틸-5'-메틸-6'-옥소-5',6',8',9'-테트라히드로스피로[시클로프로판-1,7'-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀]-2'-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 120)의 합성
DMF (3 mL) 내 4-((9'-시클로펜틸-5'-메틸-6'-옥소-5',6',8',9'-테트라히드로스피로[시클로프로판-1,7'-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀]-2'-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (80 mg, 182.86 μmol) 및 4-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (97.47 mg, 182.86 μmol, HCl 염) 용액에 HATU (104.29 mg, 274.29 μmol) 및 DIPEA (70.90 mg, 548.58 μmol, 95.55 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-((9'-시클로펜틸-5'-메틸-6'-옥소-5',6',8',9'-테트라히드로스피로[시클로프로판-1,7'-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀]-2'-일)아미노)-3-메톡시벤조산이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(71%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (50 mL)로 희석하고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, MeOH/EtOAc=0/1 to 1/10) 후 prep-HPLC (neutral condition: 컬럼: Waters Xbridge 150x25 mmx 5 μm; 이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN]; B%: 36%-66%, 10 분)로 정제하여 황색 고체의 4-((9'-시클로펜틸-5'-메틸-6'-옥소-5',6',8',9'-테트라히드로스피로[시클로프로판-1,7'-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀]-2'-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (30.4 mg, 32.52 μmol, 17.79% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=916.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ = 11.09 (s, 1H), 8.41 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.10-8.05 (m, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.79-7.67 (m, 2H), 7.53-7.45 (m, 2H), 7.43-7.32 (m, 2H), 5.11 (dd, J = 5.4, 12.7 Hz, 1H), 4.93-4.82 (m, 1H), 4.47-4.36 (m, 1H), 4.14-4.02 (m, 1H), 3.95 (s, 4H), 3.48 (s, 2H), 3.32-3.30 (m, 4H), 3.17 (s, 4H), 2.97-2.83 (m, 2H), 2.77-2.71 (m, 1H), 2.66-2.52 (m, 9H), 2.09-2.00 (m, 1H), 1.94-1.82 (m, 4H), 1.74-1.66 (m, 2H), 1.64-1.57 (m, 2H), 1.56-1.40 (m, 4H), 0.93-0.89 (m, 2H), 0.70-0.65 (m, 2H).
실시예 121. 4-((9-시클로펜틸-5,7,7-트리메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 121)의 합성
단계 1. 에틸 3-아미노-2,2-디메틸프로파노에이트 (2)의 합성
EtOH (150 mL) 및 NH3.H2O (15 mL) 내 에틸 2-시아노-2-메틸-프로파노에이트 (15 g, 106.26 mmol) 용액에 Raney-Ni (18.21 g, 212.51 mmol)를 N2 기체 하에서 첨가하였다. 현탁액을 탈기하고 H2로 3차례 퍼지하였다. 혼합물을 20 °C H2 (50 Psi) 하에서 16시간 동안 교반 하였다. TLC (SiO2, 석유 에터: EtOAc = 2:1)로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 하나의 새로운 스팟 형성을 확인하였다. 반응 혼합물을 EtOH (500 mL)로 희석하고 여과하였다. 여과물을 진공 농축하여 무색 오일의 에틸 3-아미노-2,2-디메틸프로파노에이트 (13.6 g, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+=146.2
단계 2. 에틸 3-(시클로펜틸아미노)-2,2-디메틸프로파노에이트 (3)의 합성
THF (126 mL) 및 AcOH (12.6 mL) 내 에틸 3-아미노-2,2-디메틸프로파노에이트 (12.6 g, 86.78 mmol) 및 시클로펜탄온 (8.76 g, 104.13 mmol, 9.22 mL) 용액에 NaBH(OAc)3 (27.59 g, 130.17 mmol)를 20 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량을 확인하였다. TLC (SiO2, 석유 에터: EtOAc = 3:1)로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 2개의 새로운 스팟 형성을 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (150 mL)로 희석하고 EtOAc (150 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (150 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조, 여과 및 농축하여 백색 고체의 에틸 3-(시클로펜틸아미노)-2,2-디메틸프로파노에이트 (7.6 g, 35.63 mmol, 41.06% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=214.3
단계 3. 에틸 3-((2-클로로-5-니트로피리미딘-4-일)(시클로펜틸)아미노)-2,2-디메틸프로파노에이트 (4)의 합성
MTBE (70 mL) 내 에틸 3-(시클로펜틸아미노)-2,2-디메틸프로파노에이트 (6.6 g, 30.94 mmol) 및 2, 4-디클로로-5-니트로-피리미딘 (9.00 g, 46.41 mmol) 용액에 H2O (35 mL) 내 K2CO3 (17.10 g, 123.76 mmol) 용액을 0 °C 에서 한 방울씩 첨가하고, 생성된 혼합물을 20 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(60%)를 확인하였다. 워크업을 위해 반응 혼합물을 다른 배치 (1g 스케일)와 합쳤다. 반응 혼합물을 H2O (400 mL)로 희석하고 EtOAc (400 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조, 여과 및 농축하여 황색 오일의 에틸 3-((2-클로로-5-니트로피리미딘-4-일)(시클로펜틸)아미노)-2,2-디메틸프로파노에이트 (8.6 g, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+=371.1
단계 4. 2-클로로-9-시클로펜틸-7,7-디메틸-5,7,8,9-테트라히드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (5)의 합성
AcOH (80 mL) 내 에틸 3-((2-클로로-5-니트로피리미딘-4-일)(시클로펜틸)아미노)-2,2-디메틸프로파노에이트 (8.6 g, 23.19 mmol) 용액에 Fe (5.18 g, 92.76 mmol)를 20 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 60 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(88%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하였다. 잔여물을 H2O (100 mL)로 희석하고 EtOAc (100 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과 및 진공 농축하여 황색 고체의 2-클로로-9-시클로펜틸-7,7-디메틸-5,7,8,9-테트라히드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (7.2 g, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=295.2
단계 5. 2-클로로-9-시클로펜틸-5,7,7-트리메틸-5,7,8,9-테트라히드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (6)의 합성
DMF (80 mL) 내 2-클로로-9-시클로펜틸-7,7-디메틸-5,7,8,9-테트라히드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (7.2 g, 24.43 mmol) 용액에 K2CO3 (10.13 g, 73.28 mmol) 및 MeI (4.16 g, 29.31 mmol, 1.82 mL)를 20 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 4시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질의 피크 (23%)가 남아있음 및 원하는 질량의 피크 (53%)를 확인하였다. 추가적인 MeI (2.08 g, 14.66 mmol, 912.33 μL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(56%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (160 mL)로 희석하고 EtOAc (160 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 염수 (160 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (40 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~15% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 주황색 고체의 2-클로로-9-시클로펜틸-5,7,7-트리메틸-5,7,8,9-테트라히드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (2.7 g, 8.39 mmol, 34.36% 수율, 96% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=309.2
단계 6. 4-((9-시클로펜틸-5,7,7-트리메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (7)의 합성
EtOH (3 mL) 및 H2O (9 mL) 내 2-클로로-9-시클로펜틸-5,7,7-트리메틸-5,7,8,9-테트라히드로-6H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6-온 (300 mg, 971.48 μmol) 및 4-아미노-3-메톡시-벤조산 (211.11 mg, 1.26 mmol) 용액에 HCl (12 M, 178.11 μL)을 20 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 100 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(68%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하였다. 조 생성물을 혼합 용매 (EtOAc/EtOH/DMF (9 mL, 1/1/1))로 25 °C 에서 0.5시간 동안 분쇄하고 여과하였다. 여과 케이크를 진공 건조하여 황백색 고체의 4-((9-시클로펜틸-5,7,7-트리메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (286 mg, 598.67 μmol, 61.62% 수율, 92% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=440.2
단계 7. 4-((9-시클로펜틸-5,7,7-트리메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 121)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-5,7,7-트리메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (80 mg, 182.02 μmol) 용액에 HATU (76.13 mg, 200.22 μmol) 및 DIPEA (47.05 mg, 364.04 μmol, 63.41 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 20 °C 에서 10분간 교반한 후 DMF (2 mL) 내 4-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (97.02 mg, 182.02 μmol, HCl) 용액 및 DIPEA (47.05 mg, 364.04 μmol, 63.41 μL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 모든 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(73%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (15 mL)로 희석하고 EtOAc (15 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 염수 (15 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Unisil 3-100 C18 Ultra 150*50 mm*3 μm; 이동상:[물 (FA)-ACN]; B%: 8%-38%, 10 분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-5,7,7-트리메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (78 mg, 80.10 μmol, 44.00% 수율, 99% 순도, FA)를 수득하였다. MS(M+H)+=918.2
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.10 (s, 1H), 8.37 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.14 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.74-7.66 (m, 2H), 7.51-7.44 (m, 2H), 7.35 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 5.23-5.13 (m, 1H), 5.09 (dd, J = 5.5, 12.7 Hz, 1H), 4.40 (br d, J = 11.9 Hz, 1H), 4.11-4.00 (m, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.30 (br s, 6H), 3.21-3.08 (m, 5H), 2.93-2.81 (m, 1H), 2.66-2.54 (m, 10H), 2.08-1.96 (m, 1H), 1.93-1.78 (m, 4H), 1.77-1.67 (m, 2H), 1.61 (br s, 4H), 1.52-1.33 (m, 2H), 1.09 (s, 6H).
실시예 122. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)아세틸)피페리딘-3-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 122)의 합성
화합물 122는 실시예 81에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=912.6, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 10.89 - 10.79 (m, 1H), 8.30 - 8.23 (m, 2H), 7.91 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.67 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.52 - 7.47 (m, 2H), 7.36 - 7.28 (m, 2H), 5.05 (dd, J = 5.4, 12.7 Hz, 1H), 4.81 - 4.70 (m, 1H), 4.00 (br t, J = 14.1 Hz, 4H), 3.95 (s, 3H), 3.40 - 3.20 (m, 12H), 2.93 - 2.81 (m, 1H), 2.69 - 2.62 (m, 6H), 2.09 - 2.03 (m, 1H), 2.00 - 1.94 (m, 3H), 1.84 - 1.77 (m, 1H), 1.75 - 1.69 (m, 2H), 1.67 - 1.57 (m, 6H).
실시예 123. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-3-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 123)의 합성
단계 1. tert-부틸 (1-아크릴로일피페리딘-3-일)카바메이트 (3)의 합성
DCM (5 mL) 내 tert-부틸 피페리딘-3-일카바메이트 (500 mg, 2.50 mmol) 용액에 DIPEA (967.98 mg, 7.49 mmol, 1.30 mL)를 첨가한 후, 3-클로로프로파노일 클로라이드 (633.97 mg, 4.99 mmol, 480.28 μL)를 0 °C 에서 천천히 첨가하고 혼합물을 0 °C 에서 0.5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(38%)를 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (5 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~30% EtOAc/석유 에터 gradient @ 20 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 tert-부틸 (1-아크릴로일피페리딘-3-일)카바메이트 (530 mg, 1.60 mmol, 64.27% 수율, 77% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=255.1
단계 2. tert-부틸 (1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-3-일)카바메이트 (5)의 합성
ACN (10 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (480. mg, 1.27 mmol, HCl 염) 용액에 DBU (447.96 mg, 2.94 mmol, 443.52 μL)를 첨가한 후, ACN (5 mL) 내 tert-부틸 (1-아크릴로일피페리딘-3-일)카바메이트 (480 mg, 1.45 mmol, 77% 순도) 용액을 첨가하고 혼합물을 20 °C 에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량을 확인하였다. 혼합물을 H2O (10 mL) 및 EtOAc (10 mL)로 희석한 후, EtOAc (15 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 감압 농축하였다. 잔여물을 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, EtOAc/MeOH=1/0 to 10/1)로 정제하여 황색 고체의 tert-부틸 (1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-3-일)카바메이트 (160 mg, 260.11 μmol, 26.66% 수율, 97% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=597.3
단계 3. 4-(4-(3-(3-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (6)의 합성
디옥산 (2 mL) 내 tert-부틸 (1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-3-일)카바메이트 (160 mg, 268.15 μmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 2 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 20 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량을 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하여 황색 고체의 4-(4-(3-(3-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (130 mg, crude, HCl 염)을 수득하였다. MS(M+H)+=497.2
단계 4. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-3-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 123)의 합성
DMF (1 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (80 mg, 178.80 μmol) 용액에 HATU (101.71 mg, 267.51 μmol) 및 DIPEA (44.52 mg, 344.47 μmol, 60.00 μL)를 첨가하고 혼합물을 25 °C 에서 15분동안 교반 하였다. DMF (1 mL) 내 4-(4-(3-(3-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (130 mg, 243.89 μmol, HCl 염) 및 DIPEA (44.52 mg, 344.47 μmol, 60 μL) 용액을 첨가하고 혼합물을 25 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. 혼합물을 H2O (10 mL)로 희석하고 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (10 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 조 생성물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25 mm* 5 μm; 이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN]; B%: 39%-69%, 10 분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-3-일)-3-메톡시벤즈아미드 (54 mg, 54.23 μmol, 30.33% 수율, 93% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=926.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 10.82 (br s, 1H), 8.28 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.98-7.89 (m, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.66 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.54-7.46 (m, 2H), 7.34-7.27 (m, 2H), 5.05 (dd, J = 5.6, 12.6 Hz, 1H), 4.81-4.71 (m, 1H), 4.05-3.94 (m, 6H), 3.89-3.78 (m, 1H), 3.34 (s, 3H), 3.33-3.28 (m, 4H), 2.92-2.82 (m, 1H), 2.71-2.66 (m, 2H), 2.65-2.52 (m, 9H), 2.11-1.90 (m, 5H), 1.85-1.35 (m, 10H).
실시예 124. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-((4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)메틸)피페리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 124)의 합성
단계 1. (1-니트로소피페리딘-4-일)메탄올 (2)의 합성
H2O (40 mL) 내 4-피페리딜메탄올 (5 g, 43.41 mmol) 용액에 NaNO2 (5.99 g, 86.83 mmol)를 0 °C 에서 첨가하였다. AcOH (7.82 g, 130.24 mmol)를 0 °C 에서 한 방울씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25 °C 까지 천천히 승온하고 4시간 동안 교반 하였다. TLC (EtOAc: 메탄올 = 10:1, Rf = 0.4)로 254 nm UV에서 강한 흡광을 갖는 새로운 큰 스팟 형성을 확인하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 용액에 NaHCO3 용액 (약 150 mL)을 첨가하여 pH=8로 조정하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc/메탄올 (10:1, 50 mL x 10) (노트: 생성물은 물에 대한 용해도가 좋아 추출이 어렵다.)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조하고 농축하여 황색 오일의 (1-니트로소피페리딘-4-일)메탄올 (6.5 g, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=145.2
단계 2. (1-아미노피페리딘-4-일)메탄올 (3)의 합성
MeOH (60 mL) 내 (1-니트로소피페리딘-4-일)메탄올 (6.5 g, 45.09 mmol) 용액에 Zn (15.57 g, 238.11 mmol)을 0 °C 에서 첨가 후 AcOH (40.61 g, 676.28 mmol)를 0 °C에서 한 방울씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25 °C 까지 천천히 승온하고 1시간 동안 교반 하였다. TLC (EtOAc/메탄올 = 10:1, Rf = 0)로 출발물질이 완전히 소모되었음을 확인하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량을 확인하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드로 여과하고 MeOH (200 mL)로 세척하였다. 여과물을 농축하여 황색 고체를 얻었다. 황색 고체에 MeOH (80 mL)을 처리하고 30분간 교반하여 백색 고체가 형성되었다 (노트: 백섹 고체는 무기염이다). 혼합물을 여과하고 여과물을 농축하여 황색 오일의 (1-아미노피페리딘-4-일)메탄올 (16 g, crude)을 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=131.2
1H NMR (400 MHz, MeOH-d 4) δ = 3.43 (d, J = 6.2 Hz, 2H), 3.42-3.37 (m, 2H), 2.78 (br t, J = 11.4 Hz, 2H), 1.91 (br d, J = 14.2 Hz, 2H), 1.68-1.58 (m, 1H), 1.52-1.41 (m, 2H)
단계 3. tert-부틸 (4-(히드록시메틸)피페리딘-1-일)카바메이트 (4)의 합성
THF (100 mL) 내 (1-아미노피페리딘-4-일)메탄올 (14 g, 107.54 mmol) 용액에 H2O (60 mL) 내 NaOH (12.90 g, 322.61 mmol) 용액을 25 °C 에서 첨가한 후 Boc2O (23.47 g, 107.54 mmol, 24.71 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량을 확인하였다. 반응 혼합물을 여과하였다. LCMS로 여과 케이크에 생성물이 없음을 확인하였다. 물 (100 mL)를 여과물에 첨가하고 혼합물을 EtOAc (60 mL x 4)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 석유 에터 (50 mL)로 처리하고 30분간 교반 하였다. 혼합물을 여과하였다. 여과 케이크를 모으고 건조하여 황색 고체를 얻고 석유 에터/EtOAc (30 mL, 10:1)로 30분간 처리하였다. 혼합물을 여과하였다. 여과 케이크를 모으고 건조하여 백색 고체의 tert-부틸 (4-(히드록시메틸)피페리딘-1-일)카바메이트 (4 g, 17.37 mmol, 16.15% 수율)를 수득하였다. MS(M+Na)+=253.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 7.87 (s, 1H), 4.43 (s, 1H), 3.23-3.19 (m, 2H), 2.86-2.81 (m, 2H), 2.45-2.40 (m, 2H), 1.63-1.58 (m, 2H), 1.36 (s, 9H), 1.26-1.21 (m, 1H), 1.19-1.10 (m, 2H).
단계 4. (1-((tert-부톡시카보닐)아미노)피페리딘-4-일)메틸 4-메틸벤젠설포네이트 (5)의 합성
DCM (20 mL) 내 tert-부틸 (4-(히드록시메틸)피페리딘-1-일)카바메이트 (1 g, 4.34 mmol) 및 TsCl (1.24 g, 6.51 mmol) 용액에 TEA (1.32 g, 13.03 mmol) 및 DMAP (53.05 mg, 434.21 μmol)를 25 °C에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량을 확인하였다. 반응 혼합물을 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (20 g 실리카 겔 컬럼, EtOAc/석유 에터 = 10-35%, 80 mL/분)로 정제하여 백색 고체의 (1-((tert-부톡시카보닐)아미노)피페리딘-4-일)메틸 4-메틸벤젠설포네이트 (500 mg, 1.22 mmol, 28.15% 수율, 94% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=384.9
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.77 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.42-5.40 (m, 1H), 3.83 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 3.15-3.07 (m, 2H), 2.46 (s, 3H), 2.38-2.32 (m, 2H), 1.71-1.67 (m, 2H), 1.46-1.45 (m, 1H), 1.44 (s, 9H), 1.41-1.35 (m, 2H).
단계 5. tert-부틸 (4-((4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)메틸)피페리딘-1-일)카바메이트 (6)의 합성
DMF (6 mL) 내 (1-((tert-부톡시카보닐)아미노)피페리딘-4-일)메틸 4-메틸벤젠설포네이트 (350 mg, 910.30 μmol) 및 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (378.02 mg, 910.30 μmol, 2HCl) 용액에 DIPEA (470.60 mg, 3.64 mmol) 및 NaI (27.29 mg, 182.06 μmol)를 25 °C에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60 °C 에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량을 확인하였다. 반응 혼합물을 염수 (20 mL)에 붓고 EtOAc (10 mL x 4)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (10 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (10 g 실리카 겔 컬럼, EtOAc/석유 에터 = 20-70%, 50 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 tert-부틸 (4-((4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)메틸)피페리딘-1-일)카바메이트 (80 mg, crude) 및 황색 고체의 tert-부틸 (4-((4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)메틸)피페리딘-1-일)카바메이트 (180 mg, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+=555.3
단계 6. 4-(4-((1-아미노피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (7)의 합성
DCM (2 mL) 내 tert-부틸 (4-((4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)메틸)피페리딘-1-일)카바메이트 (90 mg, 162.27 μmol) 및 TFA (770.00 mg, 6.75 mmol, 0.5 mL) 용액을 25 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량을 확인하였다. 반응 혼합물을 농축하여 황색 오일의 4-(4-((1-아미노피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (90 mg, crude, TFA)을 수득하였다. 조 생성물을 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=455.3
단계 7. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-((4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)메틸)피페리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 124)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-(4-((1-아미노피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (90 mg, crude, TFA), 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (63.75 mg, 142.47 μmol) 및 DIPEA (122.75 mg, 949.79 μmol) 용액에 HATU (78.25 mg, 205.79 μmol)를 25 °C 에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 염수 (12 mL)에 부었다. 생성된 혼합물을 EtOAc (5 mL x 4)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조하고 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (4 g 실리카 겔 컬럼, EtOAc/석유 에터 = 20-100% and then MeOH/EtOAc = 20%, 40 mL/분)로 정제하고, prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25 mm* 5 μm;이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN];B%: 44%-64%, 10 분)로 정제한 후 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-((4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)메틸)피페리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (10.6 mg, 11.30 μmol, 7.14% 수율, 94.2% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=884.4
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.47 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.41-8.17 (m, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.64-7.56 (m, 1H), 7.41 (d, J = 6.7 Hz, 2H), 7.23 (s, 1H), 7.18 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.04-6.81 (m, 1H), 4.97 (dd, J = 5.4, 12.3 Hz, 1H), 4.82 (q, J = 8.4 Hz, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.90 (t, J = 13.4 Hz, 2H), 3.41 (s, 3H), 3.38-3.34 (m, 4H), 3.32-3.34 (m, 1H), 3.07-2.96 (m, 1H), 2.94-2.81 (m, 2H), 2.79-2.57 (m, 7H), 2.50-2.38 (m, 2H), 2.37-2.28 (m, 1H), 2.20-2.00 (m, 5H), 1.74-1.66 (m, 4H), 1.64-1.54 (m, 4H).
실시예 125. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)옥시)메틸)페닐)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 125)의 합성
단계 1. 4-((4-니트로벤질)옥시)피페리딘 (2)의 합성
DCM (20 mL) 내 tert-부틸 4-히드록시피페리딘-1-카복실레이트 (2 g, 9.94 mmol) and 4-니트로벤즈알데히드 (1.50 g, 9.94 mmol) 용액에 TESiH (3.47 g, 29.81 mmol, 4.76 mL)를 0 °C 에서 첨가하였다. 1시간 후 TMSOTf (4.42 g, 19.87 mmol, 3.59 mL)를 0 °C 에서 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 35%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물 용액을 감압 농축하여 황색 오일의 4-((4-니트로벤질)옥시)피페리딘 (8 g, crude)을 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=237.1
단계 2. 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-((4-니트로벤질)옥시)피페리딘-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (4)의 합성
DMSO (20 mL) 내 4-((4-니트로벤질)옥시)피페리딘 (8 g, crude) 용액에 TEA (3.60 g, 35.55 mmol, 4.95 mL) 및 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (3.27 g, 11.85 mmol)을 25 °C 에서 첨가하였다. 혼합물을 100 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 ~35%의 원하는 질량을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)로 희석하고 EtOAc (100 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 포화 염수 (150 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO; 80 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~70% 석유 에터: EtOAc gradient @ 80mL/분)로 정제하여 황색 고체의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-((4-니트로벤질)옥시)피페리딘-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (1.82 g, 3.57 mmol, 30.12% 수율, 96.6% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=493.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.08 (s, 1H), 8.22 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.70-7.66 (m, 1H), 7.65-7.63 (m, 2H), 7.34 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 5.11-5.07 (m, 1H), 4.72 (s, 2H), 3.69-3.66 (m, 1H), 3.57-3.53 (m, 2H), 3.13-3.08 (m, 2H), 2.88-2.82 (m, 1H), 2.63-2.60 (m, 1H), 2.04-1.98 (m, 4H), 1.79-1.72 (m, 2H).
단계 3. 4-(4-((4-아미노벤질)옥시)피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (5)의 합성
H2O (5 mL) 및 EtOH (10 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-((4-니트로벤질)옥시)피페리딘-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (0.3 g, 609.16 μmol) 용액에 Fe (204.11 mg, 3.65 mmol) 및 NH4Cl (195.51 mg, 3.65 mmol)를 25 °C 에서 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (30 mL)로 희석하고 EtOAc (50 mL x 5)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 포화 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 황색 오일의 4-(4-((4-아미노벤질)옥시)피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (0.2 g, 327.35 μmol, 53.74% 수율, 75.7% 순도)을 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=463.2
단계 4. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)옥시)메틸)페닐)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 125)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (80 mg, 171.89 μmol) 용액에 HATU (130.71 mg, 343.77 μmol) 및 DIPEA (66.65 mg, 515.66 μmol, 89.82 μL)를 25 °C 에서 첨가하였다. 0.5시간 후 4-(4-((4-아미노벤질)옥시)피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (105.02 mg, 171.89 μmol, 75.7% 순도)을 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 ~27%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (30 mL)로 희석하고 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 포화 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO; 20 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~80% 석유 에터: EtOAc gradient @ 60 mL/분) 후 prep-HPLC(컬럼: Waters Xbridge 150 x 25mm x 5 μm; 이동상:[물( NH4HCO3)-ACN]; B%: 58%-88%, 10분)로 정제하고, 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)옥시)메틸)페닐)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (57 mg, 58.45 μmol, 34.00% 수율, 93.3% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=910.4
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.08 (br s, 1H), 10.15 (s, 1H), 8.32-8.29 (m, 2H), 8.10 (s, 1H), 7.70-7.65 (m, 3H), 7.36-7.32 (m, 4H), 7.27 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 5.11-5.06 (m, 1H), 4.85-4.81 (m, 1H), 4.52 (s, 2H), 4.07(t, J = 14 Hz, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.62-3.60 (m, 1H), 3.55-3.52 (m, 2H), 3.33 (s, 3H), 3.11-3.06 (m, 2H), 2.90-2.82 (m, 1H), 2.60-2.53 (m, 2H), 2.03-1.96 (m, 5H), 1.72-1.61 (m, 8H).
실시예 126. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)피페리딘-3-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 126)의 합성
화합물 126은 실시예 60에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=883.4, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.05 (s, 1H), 8.31-8.21 (m, 2H), 8.07-7.99 (m, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.60-7.42 (m, 3H), 7.14-7.05 (m, 2H), 5.11-5.01 (m, 1H), 4.83-4.70 (m, 1H), 4.10-3.99 (m, 2H), 3.98-3.87 (m, 4H), 3.70-3.53 (m, 2H), 3.53-3.45 (m, 1H), 3.32 (s, 3H), 2.97-2.72 (m, 3H), 2.62-2.52 (m, 3H), 2.42 - 2.34 (m, 2H), 2.28-2.18 (m, 1H), 2.15-2.08 (m, 1H), 2.02-1.79 (m, 6H), 1.75-1.66 (m, 3H), 1.65-1.46 (m, 8H), 1.44-1.29 (m, 1H).
실시예 127. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)아세틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 127)의 합성
화합물 127은 실시예 60에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=912.5, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.08 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.15-8.13 (m, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.74 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.27-7.24 (m, 1H), 7.02 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.96-6.94 (m, 1H), 5.09-5.04 (m, 1H), 4.72-4.68 (m, 1H), 4.05-3.85 (m, 7H), 3.49-3.47 (m, 4H), 3.31-3.30 (m, 7H), 2.99 (s, 2H), 2.91-2.83 (m, 1H), 2.61-2.56 (m, 5H), 2.03-1.97 (m, 1H), 1.92-1.85 (m, 2H), 1.77-1.62 (m, 4H), 1.60-1.44 (m, 6H).
실시예 128. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1s,4s)-4-((2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)에틸)(메틸)아미노)시클로헥실)-3-메톡시벤즈아미드 (시스) (화합물 128)의 합성
단계 1. tert-부틸 ((1s,4s)-4-(디벤질아미노)시클로헥실)카바메이트 (시스) (2A)의 합성
ACN (30 mL) 내 tert-부틸 ((1s,4s)-4-아미노시클로헥실)카바메이트 (시스) (600.00 mg, 2.80 mmol), (브로모메틸)벤젠 (1.20 g, 7.00 mmol, 831.35 μL) 및 K2CO3 (1.55 g, 11.20 mmol) 혼합물에 60 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 tert-부틸 ((1s,4s)-4-아미노시클로헥실)카바메이트 (시스)가 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(41%)를 확인하였다. 혼합물을 여과하고 여과 케이크를 EtOAc (50 mL) 및 ACN (30 mL)으로 세척하고, 여과물을 진공 농축하여 백색 고체의 tert-부틸 ((1s,4s)-4-(디벤질아미노)시클로헥실)카바메이트 (시스) (1.1 g, crude)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=395.2
단계 2. tert-부틸 ((1s,4s)-4-(디벤질아미노)시클로헥실)(메틸)카바메이트 (시스) (3A)의 합성
THF (25 mL) 내 tert-부틸 ((1s,4s)-4-(디벤질아미노)시클로헥실)카바메이트 (시스) (1 g, 2.53 mmol) 용액에 NaH (253.45 mg, 6.34 mmol, 60% 순도)를 5 °C 에서 첨가하고, 현탁액을 5 °C 에서 30분간 교반 하였다. 혼합물에 아이오도메탄 (467.67 mg, 3.29 mmol, 205.12 μL, 1.3 eq)를 첨가하고, 혼합물을 25 °C 에서 1.5시간 동안 교반 하였다. TLC (SiO2, 석유 에터: EtOAc = 10: 1)로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 낮은 극성의 하나의 새로운 주 스팟 형성을 확인하였다. 혼합물을 0 °C 에서 얼음물 (60 mL)에 붓고 EtOAc (60 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (100 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (12 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 2~3% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하고, 용출물을 진공 농축하여 무색 오일의 tert-부틸 ((1s,4s)-4-(디벤질아미노)시클로헥실)(메틸)카바메이트 (시스) (820 mg, 2.01 mmol, 79.18% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=409.6
단계 3. (1s,4s)-N1,N1-디벤질-N4-메틸시클로헥산-1,4-디아민 (시스) (4)의 합성
디옥산 (5 mL) 내 tert-부틸 ((1s,4s)-4-(디벤질아미노)시클로헥실)(메틸)카바메이트 (시스) (820.00 mg, 2.01 mmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 10 mL)를 첨가하고, 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. TLC (SiO2, 석유 에터 : EtOAc = 20:1)로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 높은 극성의 하나의 새로운 주 스팟 형성을 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하였다. 잔여물을 H2O (30 mL)로 희석하고, 혼합물에 포화 NaHCO3 용액을 첨가하여 pH > 7로 조정하고, 생성된 혼합물을 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고 진공 농축하여 갈색 고체의 (1s,4s)-N1,N1-디벤질-N4-메틸시클로헥산-1,4-디아민 (시스) (545 mg, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=309.2
단계 4. 4-(4-(2,2-디에톡시에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (2)의 합성
DMF (12 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (600 mg, 1.58 mmol, HCl 염) 및 2-브로모-1,1-디에톡시에탄 (936.42 mg, 4.75 mmol, 714.83 μL) 용액에 DIPEA (1.02 g, 7.92 mmol, 1.38 mL)를 첨가하고, 혼합물을 80 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(77%)를 확인하였다. 혼합물을 다른 배치 (200 mg)와 합쳤다. 생성된 혼합물을 H2O (100 mL)로 희석하고 EtOAc (60 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (100 mL x 5)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하고 진공 농축하였다. 잔여물을 MTBE (15 mL) 및 EtOAc (5 mL) 혼합물로 10분간 분쇄한 후, 현탁액을 여과하고 여과 케이크를 MTBE (10 mL)로 세척하고, 여과 케이크를 모으고 건조하여 황색 고체의 4-(4-(2,2-디에톡시에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (679 mg, 1.48 mmol, 93.50% 수율)을 수득하였다. MS(M+H)+=459.1
단계 5. 2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)아세트알데히드 (3)의 합성
THF (5 mL) 내 4-(4-(2,2-디에톡시에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (620 mg, 1.35 mmol) 용액에 HCl (1 M, 0.35 mL) 및 HCl/디옥산 (4 M, 5 mL)를 첨가하고, 혼합물을 25 °C 에서 3시간 동안 교반 하였다. LCMS로 25%의 출발물질이 남아있음 및 원하는 질량의 피크(74%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 얼음물 (100 mL)에 붓고, NaHCO3 용액을 첨가하여 pH > 7로 조정하고, 생성된 혼합물을 EtOAc (100 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고 진공 농축하여 황색 고체의 2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)아세트알데히드 (550 mg)를 수득하였고, 이를 바로 사용하였다. MS(M+H2O+H)+=403.0
단계 6. 4-(4-(2-(((1s,4s)-4-(디벤질아미노)시클로헥실)(메틸)아미노)에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (시스) (5)의 합성
DCE (10 mL) 내 (1s,4s)-N1,N1-디벤질-N4-메틸시클로헥산-1,4-디아민 (시스) (110.34 mg, 357.72 μmol) 용액에 DMF (2 mL) 및 AcOH (4.30 mg, 71.54 μmol, 4.09 μL) 내 2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)아세트알데히드 (275 mg, 715.43 μmol) 용액을 첨가하고, 혼합물을 25 °C 에서 30분간 교반 후 혼합물에 NaBH(OAc)3 (454.89 mg, 2.15 mmol)를 5 °C 에서 첨가하고, 생성된 혼합물을 25 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)아세트알데히드가 완전히 소모되었음 및 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (100 mL)로 희석하고, 혼합물에 NaHCO3 용액을 첨가하여 pH > 7로 조정하고, 혼합물을 EtOAc (100 mL x 4)로 추출하였다. 합쳐진 유기상에 FA를 첨가하여 pH < 7로 조정하고, 유기상을 35 °C 에서 진공 농축하였다. 잔여물을 추가 정제를 위해 다른 배치와 합쳤다. 잔여물을 DMF로 희석하고 혼합물에 DIPEA를 첨가하여 pH > 7로 조정하고, 생성된 혼합물을 여과 후 여과물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge C18 150*50mm* 10 μm;이동상:[물(NH4HCO3)-ACN];B%: 62%-92%, 11분) 후 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge C18 150*50mm* 10 μm;이동상:[물(NH4HCO3)-ACN];B%: 50%-80%, 11분)로 정제하고, 용출물을 동결 건조하여 녹색 고체의 4-(4-(2-(((1s,4s)-4-(디벤질아미노)시클로헥실)(메틸)아미노)에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (시스) (135 mg, 199.45 μmol, 27.88% 수율)을 수득하였다. MS(M+H)+=677.2
단계 7. 4-(4-(2-(((1s,4s)-4-아미노시클로헥실)(메틸)아미노)에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (시스) (6)의 합성
CF3CH2OH (20 mL) 내 4-(4-(2-(((1s,4s)-4-(디벤질아미노)시클로헥실)(메틸)아미노)에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (시스) (135 mg, 199.45 μmol) 용액에 HCl (12 M, 8.31 μL), Pd(OH)2/C (100 mg, 10% 순도) 및 Pd/C (100 mg, 10% 순도)를 N2 기체 하에서 첨가하고, 현탁액을 진공 하 탈기하고 H2로 수차례 퍼지하였다. 혼합물을 60 °C H2 (15 Psi) 하에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여과 케이크를 CF3CH2OH (30 mL)로 세척하고, 여과물을 진공 농축하여 황색 점성 물질의 4-(4-(2-(((1s,4s)-4-아미노시클로헥실)(메틸)아미노)에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (시스) (130 mg, HCl 염)을 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=497.1
단계 8. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1s,4s)-4-((2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)에틸)(메틸)아미노)시클로헥실)-3-메톡시벤즈아미드 (시스) (화합물 128)의 합성
DMF (3 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (80 mg, 178.80 μmol) 용액에 HATU (101.98 mg, 268.20 μmol) 및 DIPEA (115.54 mg, 893.99 μmol, 155.72 μL)를 첨가하고, 혼합물을 25 °C 에서 15분간 교반 후 혼합물에 4-(4-(2-(((1s,4s)-4-아미노시클로헥실)(메틸)아미노)에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (시스) (128.67 mg, crude, HCl 염)를 첨가하고, 혼합물을 25 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(35%)를 확인하였다. 반응 혼합물에 CH3COOH를 첨가하여 pH < 7로 조정하였다. 혼합물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex C18 75*30mm*3 μm;이동상:[물(FA)-ACN];B%: 18%-48%, 7분) 후 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25mm* 5 μm;이동상:[물(NH4HCO3)-ACN];B%: 48%-78%, 8분)로 정제하고, 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1s,4s)-4-((2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)에틸)(메틸)아미노)시클로헥실)-3-메톡시벤즈아미드 (시스) (7.3 mg, 7.33 μmol, 4.10% 수율, 93% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=926.4
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.21-10.95 (m, 1H), 8.31-8.19 (m, 2H), 8.02 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.73-7.64 (m, 1H), 7.49 (dd, J = 2.6, 4.4 Hz, 2H), 7.33 (dd, J = 7.9, 10.5 Hz, 2H), 5.08 (dd, J = 5.6, 12.7 Hz, 1H), 4.82-4.69 (m, 1H), 4.03 (t, J = 13.9 Hz, 2H), 3.93 (s, 4H), 3.32 (s, 3H), 3.29 (dd, J = 2.2, 3.6 Hz, 4H), 2.91-2.82 (m, 1H), 2.65-2.55 (m, 8H), 2.47-2.35 (m, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.06-1.99 (m, 1H), 1.97-1.90 (m, 2H), 1.87-1.75 (m, 4H), 1.74-1.67 (m, 2H), 1.60-1.54 (m, 4H), 1.55-1.44 (m, 4H).
실시예 129. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-((2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)에틸)(메틸)아미노)시클로헥실)-3-메톡시벤즈아미드 (트랜스) (화합물 129)의 합성
단계 1. tert-부틸 ((1r,4r)-4-(디벤질아미노)시클로헥실)카바메이트 (트랜스) (2)의 합성
ACN (80 mL) 내 tert-부틸 ((1r,4r)-4-아미노시클로헥실)카바메이트 (트랜스) (5.00 g, 23.33 mmol) BnBr (7.98 g, 46.66 mmol, 5.54 mL) 및 K2CO3 (12.90 g, 93.33 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 60 °C 에서 5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 tert-부틸 ((1r,4r)-4-아미노시클로헥실)카바메이트 (트랜스)가 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(~53%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여과 케이크를 ACN (100 mL)으로 세척한 후, 여과물을 진공 농축하여 백색 고체의 tert-부틸 ((1r,4r)-4-(디벤질아미노)시클로헥실)카바메이트 (트랜스) (6 g, 14.90 mmol, 63.88% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=395.1
단계 2. tert-부틸 ((1r,4r)-4-(디벤질아미노)시클로헥실)(메틸)카바메이트 (트랜스) (3)의 합성
THF (70 mL) 내 tert-부틸 ((1r,4r)-4-(디벤질아미노)시클로헥실)카바메이트 (트랜스) (5.90 g, 14.95 mmol) 용액에 NaH (897.14 mg, 22.43 mmol, 60% 순도)를 0 °C 에서 첨가하고, 15분간 교반한 후, MeI (3.18 g, 22.43 mmol, 1.40 mL)를 0 °C 에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 tert-부틸 ((1r,4r)-4-(디벤질아미노)시클로헥실)카바메이트 (트랜스)가 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 하나의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물에 물 (400 mL)를 첨가하여 0 °C 에서 켄칭한 후, EtOAc (100 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하였다. 잔여물을 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에터/EtOAc=1/0 to 3/10)로 정제하여 백색 고체의 tert-부틸 ((1r,4r)-4-(디벤질아미노)시클로헥실)(메틸)카바메이트 (트랜스) (5.2 g, 12.60 mmol, 84.26% 수율, 99% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=409.9
단계 3. (1r,4r)-N1,N1-디벤질-N4-메틸시클로헥산-1,4-디아민 (트랜스) (4)의 합성
DCM (25 mL) 내 tert-부틸 ((1r,4r)-4-(디벤질아미노)시클로헥실)(메틸)카바메이트 (트랜스) (5.00 g, 12.24 mmol) 및 HCl/디옥산 (4 M, 3.06 mL) 혼합물을 25 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 tert-부틸 ((1r,4r)-4-(디벤질아미노)시클로헥실)(메틸)카바메이트 (트랜스)가 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 하나의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하였다. 잔여물을 포화 소듐 바이카보네이트 용액으로 pH=8로 조정하고 DCM (100 mL x 3)으로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고, 감압 농축하여 백색 고체의 (1r,4r)-N1,N1-디벤질-N4-메틸시클로헥산-1,4-디아민 (트랜스) (3.5 g, 11.35 mmol, 92.72% 수율)을 수득하였다. MS(M+H)+=309.2
단계 4. 4-(4-(2-(((1r,4r)-4-(디벤질아미노)시클로헥실)(메틸)아미노)에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온(트랜스) (6)의 합성
DCE (10 mL) 내 (1r,4r)-N1,N1-디벤질-N4-메틸시클로헥산-1,4-디아민 (트랜스) (110.34 mg, 357.72 μmol) 용액에 DMF (2 mL) 및 AcOH (4.30 mg, 71.54 μmol, 4.09 μL) 내 2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)아세트알데히드 (275 mg, 715.43 μmol) 용액을 첨가하고, 혼합물을 25 °C 에서 30분간 교반 후 혼합물에 NaBH(OAc)3 (454.89 mg, 2.15 mmol)를 5 °C 에서 첨가하고, 현탁액을 25 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 (1r,4r)-N1,N1-디벤질-N4-메틸시클로헥산-1,4-디아민 (트랜스)이 완전히 소모되었음 및 96%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (100 mL)로 희석하고, 혼합물에 NaHCO3 용액을 첨가하여 pH > 7로 조정하고, 혼합물을 EtOAc (100 mL x 4)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 35 °C 에서 진공 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge C18 150x50 mmx 10 μm; 이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN]; B%: 50%-80%, 11 분)로 정제하고, 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-(4-(2-(((1r,4r)-4-(디벤질아미노)시클로헥실)(메틸)아미노)에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온(트랜스) (150 mg, 221.62 μmol, 30.98% 수율)을 수득하였다. MS(M+H)+=677.3
단계 5. 4-(4-(2-(((1r,4r)-4-아미노시클로헥실)(메틸)아미노)에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (트랜스) (7)의 합성
CF3CH2OH (5 mL) 내 4-(4-(2-(((1r,4r)-4-(디벤질아미노)시클로헥실)(메틸)아미노)에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (트랜스) (120 mg, 177.29 μmol) 용액에 Pd/C (10%, 20 mg) 및 Pd(OH)2/C (10%, 20 mg), HCl (12 M, 73.87 μL)를 N2 기체 하에서 첨가하였다. 현탁액을 탈기하고 H2로 3차례 퍼지하였다. 혼합물을 60 °C H2 (15 Psi) 하에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-(4-(2-(((1r,4r)-4-(디벤질아미노)시클로헥실)(메틸)아미노)에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온이 완전히 소모되었음 및 9% m/z= 587.5, 19%의 톨루엔, 73%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여과 케이크를 EtOAc (50 mL)로 세척하고, 여과물을 진공 농축하여 황색 고체의 4-(4-(2-(((1r,4r)-4-아미노시클로헥실)(메틸)아미노)에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (트랜스) (85 mg, 159.46 μmol, 89.94% 수율, HCl 염)을 수득하였다. MS(M+H)+=497.4
단계 6. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-((2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)에틸)(메틸)아미노)시클로헥실)-3-메톡시벤즈아미드 (트랜스) (화합물 129)의 합성
DMF (3 mL) 내 4-(4-(2-(((1r,4r)-4-아미노시클로헥실)(메틸)아미노)에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (트랜스) (85 mg, 171.16 μmol) 및 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (76.58 mg, 171.16 μmol) 용액에 HATU (97.62 mg, 256.75 μmol) 및 DIPEA (66.37 mg, 513.49 μmol, 89.44 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-(4-(2-(((1r,4r)-4-아미노시클로헥실)(메틸)아미노)에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(69%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하여 감압 농축하였다. 잔여물을 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, MeOH/EtOAc=0/1 to 1/10) 후 prep-HPLC (neutral condition: 컬럼: Waters Xbridge 150x25 mmx 5 μm; 이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN]; B%: 40%-70%, 10분)로 정제하고, 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-((2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)에틸)(메틸)아미노)시클로헥실)-3-메톡시벤즈아미드 (트랜스) (33.3 mg, 33.80 μmol, 19.75% 수율, 93.8% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=926.6
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.18-10.97 (m, 1H), 8.30-8.21 (m, 2H), 8.08-8.04 (m, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.71 (dd, J = 7.2, 8.3 Hz, 1H), 7.53-7.44 (m, 2H), 7.35 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 5.09 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.83-4.71 (m, 1H), 4.05-3.98 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.80-3.68 (m, 1H), 3.33 (s, 3H), 3.32-3.29 (m, 4H), 2.93-2.83 (m, 1H), 2.64-2.54 (m, 8H), 2.46-2.37 (m, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.06-1.88 (m, 5H), 1.81-1.68 (m, 4H), 1.65-1.55 (m, 4H), 1.45-1.31 (m, 4H).
실시예 130. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 130)의 합성
화합물 130은 실시예 44에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=886.4, 1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ = 10.95 (s, 1H), 8.32 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.16 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.56-7.48 (m, 3H), 7.14-7.04 (m, 2H), 5.06 (dd, J = 4.8, 13.3 Hz, 1H), 4.93-4.84 (m, 1H), 4.44-4.30 (m, 2H), 4.26-4.18 (m, 1H), 4.12-3.96 (m, 4H), 3.94 (s, 3H), 3.32-3.24 (m, 7H), 3.19-3.11 (m, 1H), 2.97-2.91 (m, 1H), 2.72-2.70 (m, 1H), 2.62-2.53 (m, 9H), 2.44-2.36 (m, 1H), 2.01-1.93 (m, 1H), 1.91-1.78 (m, 2H), 1.55-1.38 (m, 2H), 1.26 (s, 3H), 1.24 (s, 3H).
실시예 131. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)시클로헥실)-3-메톡시벤즈아미드 (트랜스) (화합물 131)의 합성
화합물 131은 실시예 51에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=869.3, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.09 (s, 1H), 8.31-8.17 (m, 3H), 8.09 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.74-7.66 (m, 1H), 7.52-7.44 (m, 2H), 7.34 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 5.09 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.82-4.70 (m, 1H), 4.04 (t, J = 14.0 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.85-3.62 (m, 2H), 3.32 (s, 3H), 3.30-3.28 (m, 4H), 2.93-2.82 (m, 1H), 2.75-2.68 (m, 4H), 2.63-2.54 (m, 2H), 2.09-1.99 (m, 1H), 1.98-1.85 (m, 6H), 1.77-1.67 (m, 2H), 1.66-1.54 (m, 4H), 1.47-1.31 (m, 4H).
실시예 132. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)옥시)페닐)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 132)의 합성
단계 1. tert-부틸 4-(4-니트로페녹시)피페리딘-1-카복실레이트 (3)의 합성
THF (20 mL) 내 1-플루오로-4-니트로-벤젠 (1.05 g, 7.45 mmol, 790.69 μL) 용액에 tert-부틸 4-히드록시피페리딘-1-카복실레이트 (1 g, 4.97 mmol) 및 t-BuOK (1.12 g, 9.94 mmol)를 20 °C N2 하에서 천천히 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 0.5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(74%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (40 mL)로 희석하고 EtOAc (40 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (10 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~33% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 tert-부틸 4-(4-니트로페녹시)피페리딘-1-카복실레이트 (1.4 g, 3.95 mmol, 79.54% 수율, 91% 순도)를 수득하였다. MS(M-100+H)+=223.1
단계 2. 4-(4-니트로페녹시)피페리딘 (4)의 합성
디옥산 (5 mL) 내 tert-부틸 4-(4-니트로페녹시)피페리딘-1-카복실레이트 (500 mg, 1.55 mmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 12 mL)를 20 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 0.5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(100%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하여 백색 고체의 4-(4-니트로페녹시)피페리딘 (402 mg, crude, HCl 염)을 수득하였다. MS(M+H)+=223.2
단계 3. 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-(4-니트로페녹시)피페리딘-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (6)의 합성
DMSO (8 mL) 내 2-(2, 6-디옥소-3-피페리딜)-4-플루오로-이소인돌린-1,3-디온 (450 mg, 1.63 mmol) 및 4-(4-니트로페녹시)피페리딘 (398.27 mg, crude) 용액에 TEA (494.55 mg, 4.89 mmol)를 20 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 100 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(84%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (30 mL)로 희석하고 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 염수 (30 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (10 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~60% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-(4-니트로페녹시)피페리딘-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (743 mg, 1.55 mmol, 95.32% 수율)을 수득하였다. MS(M+H)+=478.9
단계 4. 4-(4-(4-아미노페녹시)피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (7)의 합성
CF3CH2OH (10 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-(4-니트로페녹시)피페리딘-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (250 mg, 522.52 μmol) 용액에 Pd/C (80 mg, 10% 순도)를 N2 기체 하에서 첨가하였다. 현탁액을 탈기하고 H2로 3차례 퍼지하였다. 혼합물을 20 °C H2 (15 Psi) 하에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(82%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (20 mL)로 희석하고, 여과하고, 여과물을 진공 농축하여 황색 고체의 4-(4-(4-아미노페녹시)피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (235 mg, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=449.3
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)옥시)페닐)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 132)의 합성
DMF (3 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (80 mg, 171.89 μmol) 용액에 HATU (71.89 mg, 189.07 μmol) 및 DIPEA (44.43 mg, 343.77 μmol, 59.88 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 20 °C 에서 10분간 교반 후 DMF (3 mL) 내 4-(4-(4-아미노페녹시)피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (92.50 mg, 206.26 μmol) 용액 및 DIPEA (44.43 mg, 343.77 μmol, 59.88 μL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS 로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(70%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (16 mL)로 희석하고 EtOAc (16 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 염수 (16 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하고 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Unisil 3-100 C18 Ultra 150*50 mm*3 μm; 이동상:[물 (FA)-ACN]; B%: 50%-80%, 10 분)로 정제하고 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25 mm* 5 μm; 이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN]; B%: 66%-86%, 8 분)로 재정제하고, 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)옥시)페닐)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (23.2 mg, 25.38 μmol, 14.76% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=896.3
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.07 (br s, 1H), 10.01 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 8.37-8.25 (m, 2H), 8.09 (s, 1H), 7.74-7.59 (m, 3H), 7.37 (dd, J = 7.7, 15.3 Hz, 2H), 7.27 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 5.11 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.90-4.79 (m, 1H), 4.59 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 4.09 (t, J = 13.9 Hz, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.63-3.52 (m, 2H), 3.34 (s, 3H), 3.24 (t, J = 9.0 Hz, 2H), 2.94-2.82 (m, 1H), 2.63-2.54 (m, 2H), 2.16-2.06 (m, 2H), 2.06-1.94 (m, 3H), 1.89-1.77 (m, 2H), 1.76-1.72 (br s, 2H), 1.69-1.57 (m, 4H).
실시예 133. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 133)의 합성
단계 1. 벤질 (S)-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)카바메이트 (2)의 합성
THF (500 mL) 내 ((벤질옥시)카보닐)-L-글루타민 (25 g, 89.20 mmol) 용액에 CDI (21.70 g, 133.80 mmol)를 첨가하고, 80 °C N2 기체 하에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하고, EtOAc (500 mL)로 희석하고, 염수 (300 mL x 3)로 세척하였다. 유기상을 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 여과물을 감압 농축한 후 MTBE (300 mL)로 25 °C 에서 30분간 분쇄하였다. 이후 이를 여과하고 여과 케이크를 감압 건조하여 백색 고체의 벤질 (S)-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)카바메이트 (20 g, 71.68 mmol, 80.37% 수율, 94% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=263.0
단계 2. (S)-3-아미노피페리딘-2,6-디온 (3)의 합성
CF3CH2OH (300 mL) 내 벤질 (S)-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)카바메이트 (10 g, 38.13 mmol) 용액에 Pd/C (2 g, 10% 순도)를 N2 기체 하에서 첨가하고, 혼합물을 20 °C H2 기체 (15Psi) 하에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크가 없음을 확인하였다. TLC로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 높은 극성의 하나의 새로운 주 스팟 형성을 확인하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 감압 농축하여 잔여물을 얻어 청색 고체의 (S)-3-아미노피페리딘-2,6-디온 (10 g, crude)을 수득하였다.
단계 3. (S)-3-(4-니트로-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (5)의 합성
DMF (60 mL) 내 메틸 2-(브로모메틸)-3-니트로벤조에이트 (6.42 g, 23.41 mmol) 용액에 (S)-3-아미노피페리딘-2,6-디온 (3 g, crude), TEA (7.11 g, 70.24 mmol, 9.78 mL)를 첨가하고, 혼합물을 75 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(91%)를 확인하였다. 혼합물을 물 (300 mL) 및 EtOAc (200 mL)에 부었다. 혼합물을 여과 하고 여과 케이크를 감압 건조하였다. 여과 케이크를 MTBE (20 mL)로 25°C 에서 30분간 분쇄하여 황색 고체의 (S)-3-(4-니트로-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (5 g, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=290.0
단계 4. (S)-3-(4-아미노-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (6)의 합성
CF3CH2OH (100 mL) 내 (S)-3-(4-니트로-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (5 g, crude) 및 Pd/C (1 g, 10% 순도) 혼합물을 탈기하고 N2로 3차례 퍼지하였고, 혼합물을 25 °C H2 기체 하에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(94%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 감압 농축하여 황색 고체의 (S)-3-(4-아미노-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (4 g, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=260.0
단계 5. tert-부틸 (S)-4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (7)의 합성
설포란 (40 mL) 내 (S)-3-(4-아미노-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (4 g, crude) 및 비스(2-클로로에틸)아민 (5.51 g, 30.86 mmol, HCl) 용액을 140 °C 에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 (S)-3-(1-옥소-4-(피페라진-1-일)이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온의 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물에 K2CO3 (2 M, 10 mL), Boc2O (4.04 g, 18.51 mmol, 4.25 mL)를 첨가하여 pH=9로 조정하고, 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 (S)-3-(1-옥소-4-(피페라진-1-일)이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온의 질량이 남아있음 및 12%의 tert-부틸 (S)-4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-카복실레이트의 질량이 검출되었음을 확인하였다. K2CO3 (2 M, 5.40 mL)를 첨가하여 pH=9로 조정하고 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 H2O (100 mL)로 희석하고 MTBE (100 mL x 3)로 추출하고, 합쳐진 유기상을 염수 (100 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조하여 여과하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 조 생성물을 MTBE (50 mL)로 희석하고 25 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. 혼합물을 여과하고 여과 케이크를 MTBE (50 mL)로 세척하였다. 여과 케이크를 모아서 황색 고체의 tert-부틸 (S)-4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (1.07 g, 2.40 mmol, 15.54% 수율, 96% 순도)를 수득하였다. 여과물을 감압 농축 후 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (40 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 50~90% EtOAc/석유 에터 gradient @ 50 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 tert-부틸 (S)-4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (1.43 g, 2.90 mmol, 18.82% 수율, 87% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=429.2
단계 6. (S)-3-(1-옥소-4-(피페라진-1-일)이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (8)의 합성
디옥산 (10 mL) 내 tert-부틸 (S)-4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (1.07 g, 2.50 mmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 10 mL)를 첨가하고 25 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. 워크업 후 LCMS로 100%의 원하는 질량을 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하여 황색 고체의 (S)-3-(1-옥소-4-(피페라진-1-일)이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (0.9 g, crude, HCl)을 수득하였다. MS(M+H)+=329.1
단계 7. tert-부틸 (1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (10)의 합성
DMF (10 mL) 내 (S)-3-(1-옥소-4-(피페라진-1-일)이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (0.8 g, crude, HCl) 용액에 K2CO3 (912.00 mg, 6.60 mmol) 및 tert-부틸 (1-(3-클로로프로파노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (1.28 g, 4.39 mmol)를 첨가하고 혼합물을 80 °C 에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 H2O (10 mL)로 희석하고 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하고, 합쳐진 유기상을 염수 (10 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하여 여과하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (12 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~50% EtOH/EtOAc gradient @ 50 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 tert-부틸 (1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (720 mg, 1.16 mmol, 52.97% 수율, 94% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=583.4
단계 8. 3-(4-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (11)의 합성
디옥산 (10 mL) 내 tert-부틸 (1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (0.7 g, 1.20 mmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 10.45 mL)을 첨가하고 혼합물을 25 °C 에서 0.5시간 동안 교반 하였다. 워크업 후 LCMS로 89%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하여 황색 고체의 3-(4-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (630 mg, crude, HCl)을 수득하였다. MS(M+H)+=483.1
단계 9. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 133)의 합성
DMF (5 mL) 내 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (370 mg, 878.03 μmol) 용액에 HATU (400.62 mg, 1.05 mmol) 및 DIPEA (137.27 mg, 1.06 mmol, 185.00 μL)를 첨가하고 혼합물을 25 °C 에서 15분간 교반 하였다. DMF (5 mL) 내 3-(4-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (595 mg, crude, 2HCl) 및 DIPEA (274.54 mg, 2.12 mmol, 370.00 μL) 용액을 첨가하고 혼합물을 25 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 71%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 H2O (20 mL)로 희석하고, EtOAc (10 mL x 3)로 추출 후 합쳐진 유기상을 H2O (10 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조하여 여과하였다.. 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge C18 150*50 mm* 10 μm; 이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN]; B%: 24%-54%, 10분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 백색 고체의 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (383 mg, 428.84 μmol, 48.84% 수율, 99.2% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=886.6
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 10.98 (s, 1H), 8.31 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.17-8.12 (m, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.53-7.47 (m, 2H), 7.46-7.40 (m, 1H), 7.31 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 5.12 (dd, J = 5.1, 13.3 Hz, 1H), 4.91-4.83 (m, 1H), 4.49-4.35 (m, 2H), 4.34-4.26 (m, 1H), 4.09-3.88 (m, 7H), 3.31-3.29 (m, 3H), 3.18-3.01 (m, 5H), 2.97-2.86 (m, 1H), 2.73-2.54 (m, 11H), 2.04-1.95 (m, 1H), 1.93-1.77 (m, 2H), 1.55-1.33 (m, 2H), 1.24 (d, J = 6.7 Hz, 6H)
실시예 134. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아제티딘-3-일)메틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 134)의 합성
단계 1. tert-부틸 3-((4-(((벤질옥시)카보닐)아미노)피페리딘-1-일)메틸)아제티딘-1-카복실레이트 (3)의 합성
DCE (20 mL) 내 tert-부틸 3-포르밀아제티딘-1-카복실레이트 (2.0 g, 10.80 mmol), 벤질 피페리딘-4-일카바메이트 (2.53 g, 10.80 mmol) 및 HOAc (1.95 g, 32.39 mmol, 1.85 mL) 혼합물에 NaBH(OAc)3 (6.87 g, 32.39 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)로 희석하고 EtOAc (100 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 포화 소듐 바이카보네이트 용액 (50 mL)으로 세척한 후 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO; 20g Sepa Flash 실리카 플래시 컬럼, eluent of 0~30% 석유 에터: EtOAc / 메탄올 (v/v=1/1) gradient @ 60 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 tert-부틸 3-((4-(((벤질옥시)카보닐)아미노)피페리딘-1-일)메틸)아제티딘-1-카복실레이트 (4.8 g, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+=404.3
단계 2. 벤질 (1-(아제티딘-3-일메틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (4)의 합성
DCM (4 mL) 내 tert-부틸 3-((4-(((벤질옥시)카보닐)아미노)피페리딘-1-일)메틸)아제티딘-1-카복실레이트 (0.5 g, 1.24 mmol) 용액에 TFA (141.29 mg, 1.24 mmol, 91.75 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. TLC (메탄올: 디클로로메탄=10:1)로 출발물질이 완전히 소모되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하여 황색 오일의 벤질 (1-(아제티딘-3-일메틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (520 mg, crude, TFA)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=303.9
단계 3. 벤질 (1-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아제티딘-3-일)메틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (6)의 합성
DMF (8 mL) 내 벤질 (1-(아제티딘-3-일메틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (0.5 g, 1.20 mmol, TFA) 용액에 KI (59.65 mg, 359.35 μmol), 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (330.86 mg, 1.20 mmol) 및 DIPEA (464.43 mg, 3.59 mmol, 625.92 μL)를 25 °C 에서 첨가하였다. 혼합물을 90 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량을 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (50 mL)로 희석하고 EtOAc (20 mL x 4)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 포화 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO; 20 g Sepa Flash 실리카 플래시 컬럼, eluent of 0~50% 석유 에터 /EtOAc: 에탄올 (v/v=1:1) gradient @ 60 mL/분) 후 prep-HPLC(컬럼: Phenomenex luna C18 150 x 40 mm x 15 μm; 이동상:[물(FA)-ACN]; B%: 10%-40%, 10 분)로 정제하고, 동결 건조하여 황색 고체의 벤질 (1-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아제티딘-3-일)메틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (120 mg, 213.15 μmol, 17.79% 수율, 99.4% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=560.3
단계 4. 5-(3-((4-아미노피페리딘-1-일)메틸)아제티딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일) 이소인돌린-1,3-디온 (7)의 합성
CF3CH2OH (5 mL) 내 Pd/C (30 mg, 10% 순도) 혼합물에 벤질 (1-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아제티딘-3-일)메틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (120 mg, 214.43 μmol)를 25 °C 에서 첨가하였다. 혼합물을 25 °C H2 기체 (15 Psi) 하에서 12시간 동안 교반 하였다. TLC (디클로로메탄: 메탄올=10:1)로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 하나의 새로운 스팟 형성을 확인하였다. 혼합물을 여과하여 촉매를 제거하였다. 여과물을 감압 농축하여 황색 오일의 5-(3-((4-아미노피페리딘-1-일)메틸)아제티딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일) 이소인돌린-1,3-디온 (90 mg, crude)을 수득하였고, 이를 추가 정제 없이 바로 사용하였다. MS(M+H)+=426.0
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아제티딘-3-일)메틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 134)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (80 mg, 178.80 μmol) 용액에 HATU (135.97 mg, 357.59 μmol) 및 DIPEA (69.32 mg, 536.39 μmol, 93.43 μL)를 첨가하였다. 0.5시간 후 5-(3-((4-아미노피페리딘-1-일)메틸)아제티딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (76.07 mg, 178.80 μmol)을 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 포화 염수 (10 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex luna C18 150 x 40 mm x 15 μm; 이동상:[물(FA)-ACN]; B%: 18%-48%, 10 분) 후 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150 x 25 mm x 5 μm; 이동상:[물( NH4HCO3)-ACN]; B%: 38%-68%, 8분)로 정제하고 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아제티딘-3-일)메틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (21 mg, 24.34 μmol, 13.61% 수율, 99.1% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=855.7
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ = 11.08 (s, 1H), 8.32-8.24 (m, 2H), 8.22-8.10 (m, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.64 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.54-7.46 (m, 2H), 6.78 (s, 1H), 6.64 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.05 (dd, J = 5.1, 12.8 Hz, 1H), 4.82-4.71 (m, 1H), 4.18 - 4.10 (m, 2H), 4.05 (t, J = 14.0 Hz, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.90-3.66 (m, 3H), 3.33 (s, 3H), 3.14-2.82 (m, 4H), 2.62 - 2.55 (m, 5H), 2.07-1.90 (m, 4H), 1.86-1.54 (m, 10H).
실시예 135. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아제티딘-3-일)메틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 135)의 합성
화합물 135는 실시예 134에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=855.3, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.07 (s, 1H), 8.32-8.25 (m, 2H), 8.13 - 8.11 (m, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.59-7.53 (m, 1H), 7.51-7.46 (m, 2H), 7.11 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.78 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.05 (dd, J = 5.3, 12.7 Hz, 1H), 4.78 - 4.74 (m, 1H), 4.34 - 4.25 (m, 2H), 4.04 (t, J = 14.1 Hz, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.92-3.69 (m, 4H), 3.32-3.27 (m, 3H), 2.98-2.80 (m, 4H), 2.62-2.53 (m, 4H), 2.05-1.91 (m, 4H), 1.86-1.76 (m, 2H), 1.74-1.68 (m, 2H), 1.64-1.58 (m, 6H).
실시예 136. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(7-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)-7-아자스피로[3.5]노난-2-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 136)의 합성
단계 1. tert-부틸 2-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (2)의 합성
DMF (5 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (796 mg, 1.78 mmol) 용액에 HATU (811.73 mg, 2.13 mmol) 및 DIPEA (689.77 mg, 5.34 mmol, 929.60 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 10분간 교반 하였다. 혼합물에 tert-부틸 2-아미노-7-아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (427.57 mg, 1.78 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물을 물 (30 mL)에 붓고 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (10 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (25 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 70 mL/분)로 정제하여 갈색 오일의 tert-부틸 2-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (1.2 g, crude)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+ = 670.4
단계 2. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(7-아자스피로[3.5]노난-2-일)벤즈아미드 (3)의 합성
디옥산 (5 mL) 내 tert-부틸 2-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (1.2 g, 1.79 mmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 30 mL)을 25 °C 에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25 °C 에서 0.5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물 용액을 농축하여 갈색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(7-아자스피로[3.5]노난-2-일)벤즈아미드 (1.5 g, crude, HCl)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+ =570.3
단계 3. N-(7-((1-벤질피페리딘-4-일)메틸)-7-아자스피로[3.5]노난-2-일)-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미드 (4)의 합성
MeOH (5 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(7-아자스피로[3.5]노난-2-일)벤즈아미드 (1.3 g, 2.28 mmol), 1-벤질피페리딘-4-카브알데히드 (463.91 mg, 2.28 mmol) 용액에 HOAc (274.08 mg, 4.56 mmol, 261.03 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 10분간 교반 하였다. 반응 혼합물에 NaBH3CN (286.83 mg, 4.56 mmol)를 25 °C 에서 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 농축하여 유기상을 제거하였다. 조 생성물을 DCM (50 mL)에 용해시키고, 포화 NaHCO3 (30 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (10 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 70 mL/분; Eluent of 0~50% 메탄올 / EtOAc @ 70 mL/분)로 정제하여 백색 고체의 N-(7-((1-벤질피페리딘-4-일)메틸)-7-아자스피로[3.5]노난-2-일)-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미드 (1 g, 1.28 mmol, 56.15% 수율, 97% 순도)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+ =757.3
단계 4. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(7-(피페리딘-4-일메틸)-7-아자스피로[3.5]노난-2-일)벤즈아미드 (5)의 합성
CF3CH2OH (10 mL) 내 N-(7-((1-벤질피페리딘-4-일)메틸)-7-아자스피로[3.5]노난-2-일)-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미드 (0.2 g, 264.23 μmol) 용액에 Pd/C (0.2 g, 264.23 μmol, 10% 순도)를 첨가하였다. 혼합물을 25 °C H2 (15 Psi) 하에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 대부분의 출발물질이 여전히 남아있음을 확인하였다. Pd/C (0.1 g, 264.23 μmol, 10% 순도) 및 Pd(OH)2/C (0.1 g, 264.23 μmol, 20% 순도)를 추가로 반응 혼합물에 25 °C 에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60 °C H2 (15 Psi) 하에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(53%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드로 여과하고, 여과물을 농축하여 무색 오일의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(7-(피페리딘-4-일메틸)-7-아자스피로[3.5]노난-2-일)벤즈아미드 (176 mg, crude)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+ =667.4
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(7-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)-7-아자스피로[3.5]노난-2-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 136)의 합성
DMSO (2 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (32.81 mg, 118.78 μmol), 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(7-(피페리딘-4-일메틸)-7-아자스피로[3.5]노난-2-일)벤즈아미드 (88 mg, 131.97 μmol) 및 TEA (40.06 mg, 395.92 μmol, 55.11 μL) 용액을 90 °C 에서 4시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량을 확인하였다. 혼합물을 물 (30 mL)에 붓고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (10 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 prep-TLC (디클로로메탄 : 메탄올 = 10:1; Rf = 0.4)로 정제하였다. 조 생성물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150x25 mmx 5 μm;이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN];B%: 47%-77%, 8 분)로 정제하고 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(7-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)-7-아자스피로[3.5]노난-2-일)-3-메톡시벤즈아미드 (26.1 mg, 27.99 μmol, 21.21% 수율, 99% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ =923.4
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ = 11.08 (s, 1H), 8.43 (br d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.32-8.20 (m, 2H), 7.96 (s, 1H), 7.72-7.60 (m, 1H), 7.55-7.41 (m, 2H), 7.38-7.22 (m, 2H), 5.08 (dd, J = 5.4, 12.7 Hz, 1H), 4.82-4.70 (m, 1H), 4.46-4.33 (m, 1H), 4.11-3.98 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.68 (br d, J = 10.4 Hz, 2H), 3.33-3.32 (m, 3H), 2.95-2.75 (m, 3H), 2.64-2.54 (m, 2H), 2.35-2.08 (m, 8H), 2.07-1.89 (m, 3H), 1.85-1.51 (m, 15H), 1.38-1.21 (m, 2H).
실시예 137. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(7-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페리딘-4-일)메틸)-7-아자스피로[3.5]노난-2-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 137)의 합성
화합물 137은 실시예 136에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+ =923.4, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ = 11.07 (s, 1H), 8.42 (br d, J = 7.4 Hz, 1H), 8.30-8.23 (m, 2H), 7.96 (s, 1H), 7.64 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.52-7.45 (m, 2H), 7.30 (s, 1H), 7.22 (dd, J = 1.7, 8.6 Hz, 1H), 5.06 (dd, J = 5.4, 12.9 Hz, 1H), 4.76 (quin, J = 8.1 Hz, 1H), 4.45-4.32 (m, 1H), 4.11-3.97 (m, 4H), 3.94 (s, 3H), 3.30 (br s, 3H), 3.02-2.82 (m, 3H), 2.64-2.53 (m, 2H), 2.34-2.08 (m, 8H), 2.04-1.91 (m, 3H), 1.84-1.53 (m, 15H), 1.23-1.06 (m, 2H).
실시예 138. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)아제티딘-3-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 138)의 합성
단계 1. tert-부틸 (1-((1-벤질피페리딘-4-일)메틸)아제티딘-3-일)카바메이트 (2)의 합성
DCE (30 mL) 내 1-벤질피페리딘-4-카브알데히드 (0.6 g, 2.95 mmol), tert-부틸 아제티딘-3-일카바메이트 (508.34 mg, 2.95 mmol) 용액에 AcOH (177.24 mg, 2.95 mmol, 168.80 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 10분간 교반 하였다. 혼합물에 NaBH(OAc)3 (1.25 g, 5.90 mmol)를 25 °C 에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. TLC (디클로로메탄: 메탄올 = 10:1; Rf = 0)로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 새로운 스팟 형성을 확인하였다. 혼합물을 포화 NaHCO3 (20 mL)로 희석하고 DCM (30 mLx3)으로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조하고 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (12 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 60 mL/분; Eluent of 0~50% 메탄올 / EtOAc @ 60 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 tert-부틸 (1-((1-벤질피페리딘-4-일)메틸)아제티딘-3-일)카바메이트 (1.1 g, crude)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+ = 360.2
단계 2. 1-((1-벤질피페리딘-4-일)메틸)아제티딘-3-아민 (3)의 합성
DCM (10 mL) 내 tert-부틸 (1-((1-벤질피페리딘-4-일)메틸)아제티딘-3-일)카바메이트 (450 mg, 1.25 mmol) 용액에 TFA (3.08 g, 27.01 mmol, 2 mL)를 25 °C 에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25 °C 에서 0.5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하여 황색 오일의 1-((1-벤질피페리딘-4-일)메틸)아제티딘-3-아민 (460 mg, crude, TFA)을 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+ = 260.2
단계 3. N-(1-((1-벤질피페리딘-4-일)메틸)아제티딘-3-일)-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미드 (4)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (450.95 mg, 1.01 mmol) 용액에 HATU (459.86 mg, 1.21 mmol) 및 DIPEA (390.77 mg, 3.02 mmol, 526.64 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 10분간 교반 하였다. 혼합물에 1-((1-벤질피페리딘-4-일)메틸)아제티딘-3-아민 (451.62 mg, 1.21 mmol, TFA)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량을 확인하였다. 혼합물을 물 (40 mL)에 붓고 EtOAc (20 mL x 4)로 추출하였다. 합쳐진 Na2SO4로 건조하고 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex luna C18 150x40 mmx 15 μm;이동상:[물 (FA)-ACN];B%: 10%-40%, 10 분)로 정제하고 동결 건조하여 황색 오일의 N-(1-((1-벤질피페리딘-4-일)메틸)아제티딘-3-일)-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미드 (0.2 g, 287.45 μmol, 28.52% 수율, 99% 순도)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+ = 689.5
단계 4. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(1-(피페리딘-4-일메틸)아제티딘-3-일)벤즈아미드 (5)의 합성
CF3CH2OH (15 mL) 내 N-(1-((1-벤질피페리딘-4-일)메틸)아제티딘-3-일)-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미드 (200 mg, 290.36 μmol) 용액에 Pd/C (100 mg, 10% 순도) 및 Pd(OH)2/C (100 mg, 20% 순도)를 25 °C 에서 첨가하였다. 혼합물을 50 °C H2 (15 Psi) 하에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드로 여과하고, 여과물을 농축하여 황색 오일의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(1-(피페리딘-4-일메틸)아제티딘-3-일)벤즈아미드 (170 mg, crude)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+ = 599.1
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)아제티딘-3-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 138)의 합성
DMSO (2 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (33.33 mg, 120.68 μmol), 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(1-(피페리딘-4-일메틸)아제티딘-3-일)벤즈아미드 (85 mg, 141.98 μmol) 및 TEA (43.10 mg, 425.93 μmol, 59.28 μL) 용액을 90 °C 에서 3시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물 용액을 물 (20 mL)에 붓고 EtOAc (10 mL x 4)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 농축하여 조 생성물을 얻었다. 잔여물을 prep-TLC (디클로로메탄: 메탄올 = 10:1; Rf = 0.7)로 정제하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150x25 mmx 5 μm;이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN];B%: 44%-74%, 8 분)로 정제하고 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)아제티딘-3-일)-3-메톡시벤즈아미드 (22.4 mg, 25.94 μmol, 18.27% 수율, 99% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ =855.5
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.50 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.42-8.20 (m, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.57 (dd, J = 7.3, 8.3 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 7.40-7.31 (m, 2H), 7.17 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.88-6.61 (m, 1H), 4.96 (dd, J = 5.3, 12.2 Hz, 1H), 4.90-4.73 (m, 2H), 3.99 (s, 3H), 3.90 (t, J = 13.5 Hz, 2H), 3.75 (br t, J = 6.0 Hz, 4H), 3.42 (s, 3H), 3.21 (br s, 2H), 2.94-2.67 (m, 5H), 2.50 (br d, J = 5.1 Hz, 2H), 2.17-2.04 (m, 3H), 1.87 (br d, J = 11.3 Hz, 2H), 1.82-1.63 (m, 9H).
실시예 139. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페리딘-4-일)메틸)아제티딘-3-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 139)의 합성
화합물 139는 실시예 138에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+ = 855.5, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.07 (s, 1H), 8.62 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.32-8.22 (m, 2H), 7.97 (s, 1H), 7.65 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.54-7.46 (m, 2H), 7.30 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.22 (dd, J = 2.1, 8.7 Hz, 1H), 5.06 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.83-4.71 (m, 1H), 4.47 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 4.13-3.98 (m, 4H), 3.94 (s, 3H), 3.58 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 3.30 (s, 3H), 3.05-2.81 (m, 5H), 2.63-2.52 (m, 2H), 2.36-2.32 (m, 2H), 2.04-1.88 (m, 3H), 1.83-1.67 (m, 4H), 1.66-1.54 (m, 5H), 1.26-1.10 (m, 2H).
실시예 140. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)페닐)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 140)의 합성
단계 1. 4-(피리딘-4-일메틸)아닐린 (2)의 합성
EtOH (120 mL), H2O (3.89 mL) 및 HCl (12 M, 3.89 mL) 내 4-(4-니트로벤질)피리딘 (10 g, 46.68 mmol) 용액에 PtO2 (778.21 mg, 3.43 mmol)를 N2 기체 하에서 첨가하였다. 현탁액을 탈기하고 H2로 3차례 퍼지하였다. 혼합물을 20 °C H2 (50 Psi) 하에서 16시간 동안 교반 하였다. TLC (SiO2, 석유 에터: EtOAc = 10:1)로 출발물질이 남아있음 및 하나의 새로운 스팟이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 EtOH (300 mL)로 희석하고 여과하였다. 여과물을 진공 농축하여 황색 고체의 4-(피리딘-4-일메틸)아닐린 (12 g, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=185.1
단계 2. tert-부틸 (4-(피리딘-4-일메틸)페닐)카바메이트 (3)의 합성
THF (200 mL) 내 4-(4-피리딜메틸)아닐린 (5 g, 27.14 mmol) 용액에 THF (30 mL) 내 (Boc)2O (6.69 g, 30.67 mmol, 7.05 mL)를 0 °C 에서 한 방울씩 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(87%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (25 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~33% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 보라색 오일의 tert-부틸 (4-(피리딘-4-일메틸)페닐)카바메이트 (4.4 g, 13.31 mmol, 49.03% 수율, 86% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=285.2
단계 3. tert-부틸 (4-(피페리딘-4-일메틸)페닐)카바메이트 (4)의 합성
AcOH (4 mL) 및 EtOH (20 mL) 내 tert-부틸 (4-(피리딘-4-일메틸)페닐)카바메이트 (2 g, 7.03 mmol) 용액에 Pd/C (200 mg, 10% 순도) 및 PtO2 (1.60 g, 7.03 mmol)를 N2 기체 하에서 첨가하였다. 현탁액을 탈기하고 H2로 3차례 퍼지하였다. 혼합물을 50 °C H2 (50 Psi) 하에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(63%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 EtOH (300 mL)로 희석하고, 여과하였다. 여과물을 진공 농축하여 주황색 오일의 tert-부틸 (4-(피페리딘-4-일메틸)페닐)카바메이트 (2 g, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+=291.4
단계 4. tert-부틸 (4-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)페닐)카바메이트 (6)의 합성
DMSO (8 mL) 내 2-(2, 6-디옥소-3-피페리딜)-4-플루오로-이소인돌린-1,3-디온 (500 mg, 1.81 mmol) 및 tert-부틸 (4-(피페리딘-4-일메틸)페닐)카바메이트 (735.93 mg, crude) 용액에 TEA (549.50 mg, 5.43 mmol, 755.85 μL)를 20 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 100 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(55%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (20 mL)로 희석하고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 염수 (20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (12 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~50% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 tert-부틸 (4-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)페닐)카바메이트 (711 mg, 1.30 mmol, 71.86% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=547.0
단계 5. 4-(4-(4-아미노벤질)피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (7)의 합성
디옥산 (3 mL) 내 tert-부틸 (4-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)페닐)카바메이트 (200 mg, 365.89 μmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 12 mL)을 20 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 0.5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 주 피크(91%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하여 황색 고체의 4-(4-(4-아미노벤질)피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (177 mg, crude, HCl)을 수득하였다. MS(M+H)+=447.2
단계 6. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)페닐)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 140)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (80 mg, 171.89 μmol) 용액에 HATU (71.89 mg, 189.07 μmol) 및 DIPEA (44.43 mg, 343.77 μmol, 59.88 μL)를 첨가하고, 혼합물을 20 °C 에서 10분간 교반한 후, DMF (2 mL) 내 4-(4-(4-아미노벤질)피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (99.62 mg, crude, HCl) 및 DIPEA (44.43 mg, 343.77 μmol, 59.88 μL) 용액을 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(54%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (20 mL)로 희석하고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 염수 (20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Unisil 3-100 C18 Ultra 150*50 mm*3 μm; 이동상:[물 (FA)-ACN]; B%: 65%-95%, 10 분)로 정제하고, 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)페닐)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (33 mg, 36.18 μmol, 21.05% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=894.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.08 (s, 1H), 10.08 (s, 1H), 8.36-8.26 (m, 2H), 8.10 (s, 1H), 7.71-7.59 (m, 3H), 7.36-7.24 (m, 3H), 7.18 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.08 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.90-4.78 (m, 1H), 4.14-4.02 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.73-3.63 (m, 2H), 3.33-3.30 (m, 5H), 2.93-2.77 (m, 3H), 2.63-2.54 (m, 2H), 2.07-1.91 (m, 3H), 1.77-1.56 (m, 9H), 1.48-1.34 (m, 2H).
실시예 141. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)에톡시)페닐)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 141)의 합성
단계 1. tert-부틸 4-(2-(4-니트로페녹시)에틸)피페라진-1-카복실레이트 (3)의 합성
THF (40 mL) 내 tert-부틸 4-(2-히드록시에틸) 피페라진-1-카복실레이트 (2 g, 8.68 mmol) 및 4-니트로페놀 (1.45 g, 10.42 mmol), PPh3 (3.42 g, 13.03 mmol) 혼합물에 DEAD (2.27 g, 13.03 mmol, 2.37 mL)를 0 °C N2 하에서 한 방울씩 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C N2 하에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS 로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(27%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (20 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하고 역상 HPLC (method: 0.1% FA. 컬럼 I. D.95 mm*H365 mm Welch Ultimate XB_C18 20-40 μm; 120 A Solvent for sample dissolution about 4.10 grams of sample dissolved in 45 mL of MeOH; Flow rate 200 mL/분; 이동상 MeCN/H2O; Gradient B% 5-35% 30 분; 35% 10 분 Instrument Biotage Isolera One)로 재정제하였다. 용출물을 EtOAc (200 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고 농축하여 황색 고체의 tert-부틸 4-(2-(4-니트로페녹시)에틸)피페라진-1-카복실레이트 (2.5 g, 7.04 mmol, 81.10% 수율, 99% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=352.2
단계 2. 1-(2-(4-니트로페녹시)에틸)피페라진 (4)의 합성
디옥산 (6 mL) 내 tert-부틸 4-(2-(4-니트로페녹시)에틸)피페라진-1-카복실레이트 (600 mg, 1.71 mmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 12 mL)을 20 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하여 백색 고체의 1-(2-(4-니트로페녹시)에틸)피페라진 (521 mg, crude, HCl 염)을 수득하였다. MS(M+H)+=252.4
단계 3. 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-(2-(4-니트로페녹시)에틸)피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (6)의 합성
DMSO (6 mL) 내 2-(2, 6-디옥소-3-피페리딜)-4-플루오로-이소인돌린-1, 3-디온 (400 mg, 1.45 mmol) 용액에 TEA (439.60 mg, 4.34 mmol, 604.68 μL) 및 1-(2-(4-니트로페녹시)에틸)피페라진 (500.02 mg, crude, HCl 염)을 20 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 100 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(80%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (15 mL)로 희석하고, 황색 고체를 침전하였다. 고체를 여과하여 모았다. 여과 케이크를 진공 건조하여 황색 고체의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-(2-(4-니트로페녹시)에틸)피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (560 mg, 1.08 mmol, 74.68% 수율, 98% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=508.2
단계 4. 4-(4-(2-(4-아미노페녹시)에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (7)의 합성
CF3CH2OH (12 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-(2-(4-니트로페녹시)에틸)피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (400 mg, 788.19 μmol) 용액에 Pd/C (100 mg, 10% 순도)를 N2 기체 하에서 첨가하였다. 현탁액을 탈기하고 H2로 3차례 퍼지하였다. 혼합물을 20 °C H2 (15 Psi) 하에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 주 피크(94%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 CF3CH2OH (20 mL)로 희석하고 여과하였다. 여과물을 진공 농축하여 황색 고체의 4-(4-(2-(4-아미노페녹시)에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (300 mg, 628.26 μmol, 79.71% 수율)을 수득하였다. MS(M+H)+=478.2
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)에톡시)페닐)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 141)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (80 mg, 171.89 μmol) 용액에 HATU (71.89 mg, 189.07 μmol) 및 DIPEA (66.65 mg, 515.66 μmol, 89.82 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 20 °C 에서 10분간 교반 후 DMF (2 mL) 내 4-(4-(2-(4-아미노페녹시)에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (98.49 mg, crude) 용액을 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(78%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (15 mL)로 희석하고 EtOAc (15 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 염수 (15 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Unisil 3-100 C18 Ultra 150*50 mm*3 μm; 이동상:[물 (FA)-ACN]; B%: 20%-50%, 10 분)로 정제하고, 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)에톡시)페닐)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (66.4 mg, 71.79 μmol, 41.77% 수율, 95.9% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=925.3
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.08 (br s, 1H), 10.01 (s, 1H), 8.37-8.26 (m, 2H), 8.09 (s, 1H), 7.74-7.67 (m, 1H), 7.63 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.35 (dd, J = 5.8, 7.5 Hz, 2H), 7.27 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 5.10 (dd, J = 5.4, 12.9 Hz, 1H), 4.90-4.79 (m, 1H), 4.18-4.03 (m, 4H), 3.94 (s, 3H), 3.34-3.33 (m, 3H), 3.31-3.30 (m, 4H), 2.93-2.82 (m, 1H), 2.78 (t, J = 5.1 Hz, 2H), 2.72-2.68 (m, 4H), 2.65-2.57 (m, 2H), 2.06-1.94 (m, 3H), 1.80-1.70 (m, 2H), 1.69-1.57 (m, 4H).
실시예 142. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-7-플루오로-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 142)의 합성
단계 1. 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4,7-디플루오로이소인돌린-1,3-디온 (2)의 합성
AcOH (50 mL) 내 3,6-디플루오로글루타르산 (2 g, 9.90 mmol), 3-아미노피페리딘-2,6-디온 (2.12 g, 12.86 mmol, HCl) 및 NaOAc (2.44 g, 29.69 mmol) 혼합물을 100 °C 에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석한 후 여과하였다. 여과 케이크를 모으고 건조하여 갈색 고체의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4,7-디플루오로이소인돌린-1,3-디온 (2.3 g, 7.82 mmol, 79.00% 수율)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 295.1
1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ = 11.17 (s, 1H), 7.83 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 5.16 (dd, J = 5.4, 12.9 Hz, 1H), 2.96-2.82 (m, 1H), 2.65-2.57 (m, 1H), 2.50-2.43 (m, 1H), 2.13-2.00 (m, 1H).
단계 2. tert-부틸 4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-7-플루오로-1,3-디옥소이소인돌린-4-일) 피페라진-1-카복실레이트 (3)의 합성
DMSO (10 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4,7-디플루오로이소인돌린-1,3-디온 (1 g, 3.40 mmol) 및 tert-부틸 피페라진-1-카복실레이트 (696.36 mg, 3.74 mmol) 용액에 DIPEA (878.58 mg, 6.80 mmol, 1.18 mL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 100 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물을 물 (50 mL)에 붓고 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (50 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 MBTE (20 mL)로 분쇄하여 황색 고체의 tert-부틸 4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-7-플루오로-1,3-디옥소이소인돌린-4-일) 피페라진-1-카복실레이트 (1.5 g, 3.03 mmol, 89.13% 수율, 93% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 461.2
단계 3. 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로-7-(피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (4)의 합성
디옥산 (10 mL) 내 tert-부틸 4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-7-플루오로-1,3-디옥소이소인돌린-4-일) 피페라진-1-카복실레이트 (1.5 g, 3.26 mmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 10 mL)을 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하여 황색 고체의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로-7-(피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (1.3 g, crude, HCl)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 361.2
단계 4. tert-부틸 (1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-7-플루오로-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (5)의 합성
DMF (10 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로-7-(피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (0.5 g, 1.26 mmol, HCl) 용액에 tert-부틸 (1-(3-클로로프로파노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (1.10 g, 3.78 mmol), DIPEA (488.57 mg, 3.78 mmol, 658.45 μL) 및 NaI (18.89 mg, 126.01 μmol)를 첨가하고, 혼합물을 70 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(40%)를 확인하였다. 혼합물을 물 (50 mL)에 붓고 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하고, 합쳐진 유기상을 염수 (50 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (25 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~50% MeOH/EtOAc gradient @ 80 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 tert-부틸 (1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-7-플루오로-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (260 mg, 372.24 μmol, 29.54% 수율, 88% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 615.4
단계 5. 4-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-7-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (6)의 합성
디옥산 (5 mL) 내 tert-부틸 (1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-7-플루오로-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (260 mg, 423.00 μmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 5 mL)을 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하여 황색 고체의 4-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-7-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (230 mg, 417.42 μmol, 98.68% 수율, HCl)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 515.2
단계 6. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-7-플루오로-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 142)의 합성
DMF (2.5 mL) 내 4-(4-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-7-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (110 mg, 199.63 μmol, HCl) 및 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (89.32 mg, 199.63 μmol) 용액에 HATU (83.50 mg, 219.60 μmol) 및 DIPEA (77.40 mg, 598.90 μmol, 104.32 μL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 소모되었음 및 원하는 질량을 확인하였다. 혼합물을 물 (10 mL)에 붓고 EtOAc (6 mL x 3)로 추출하고, 합쳐진 유기상을 염수 (10 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge C18 150 * 50 mm * 10 μm; 이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN]; B%: 31%-61%, 10 분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-7-플루오로-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (23.8 mg, 23.90 μmol, 11.97% 수율, 94.8% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 944.1
1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ = 11.11 (s, 1H), 8.31-8.25 (m, 2H), 8.19-8.13 (m, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.62-7.57 (m, 1H), 7.51-7.47 (m, 2H), 7.41 (dd, J = 3.8, 9.4 Hz, 1H), 5.10 (dd, J = 5.5, 12.8 Hz, 1H), 4.85-4.71 (m, 1H), 4.45-4.36 (m, 1H), 4.11-3.95 (m, 4H), 3.94 (s, 3H), 3.32 (br s, 3H), 3.24-3.13 (m, 4H), 2.89-2.86 (m, 1H), 2.66-2.54 (m, 12H), 2.08-1.77 (m, 5H), 1.75-1.67 (m, 2H), 1.61 - 1.58 (m, 4H), 1.51-1.34 (m, 2H).
실시예 143. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)에틸)피페리딘-3-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 143)의 합성
화합물 143은 실시예 53에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=898.3, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.09 (s, 1H), 8.32-8.21 (m, 2H), 8.04 (br d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.75-7.63 (m, 1H), 7.57-7.44 (m, 2H), 7.33 (dd, J = 7.8, 11.6 Hz, 2H), 5.09 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.76 (quin, J = 8.2 Hz, 1H), 4.05 (br t, J = 14.0 Hz, 2H), 3.94 (s, 4H), 3.33 (br s, 3H), 3.28 (br s, 4H), 2.96-2.75 (m, 3H), 2.66-2.56 (m, 5H), 2.52-2.48 (m, 5H), 2.09-1.86 (m, 5H), 1.82-1.75 (m, 1H), 1.77-1.66 (m, 3H), 1.65-1.45 (m, 5H), 1.44-1.31 (m, 1H).
실시예 144. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)프로필)피페리딘-3-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 144)의 합성
화합물 144는 실시예 60에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=912.3, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.09 (s, 1H), 8.35-8.18 (m, 2H), 8.04 (br d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.69 (dd, J = 7.3, 8.3 Hz, 1H), 7.56-7.42 (m, 2H), 7.40-7.23 (m, 2H), 5.09 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.84-4.67 (m, 1H), 4.04 (br t, J = 14.0 Hz, 2H), 3.98-3.85 (m, 4H), 3.32 (br s, 3H), 3.31-3.27 (m, 4H), 2.96-2.82 (m, 2H), 2.80-2.76 (m, 1H), 2.62-2.52 (m, 6H), 2.39-2.30 (m, 4H), 2.07-1.99 (m, 1H), 1.98-1.90 (m, 2H), 1.90-1.77 (m, 3H), 1.65-1.60 (m, 3H), 1.66-1.46 (m, 7H), 1.35-1.25 (m, 1H).
실시예 145. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-카보닐)피페리딘-3-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 145)의 합성
단계 1. tert-부틸 4-(3-(((벤질옥시)카보닐)아미노)피페리딘-1-카보닐) 피페라진-1-카복실레이트 (3)의 합성
DCM (2 mL) 내 벤질 피페리딘-3-일카바메이트 (100 mg, 426.82 μmol) 용액에 tert-부틸 4-(클로로카보닐)피페라진-1-카복실레이트 (100 mg, 402.08 μmol) 및 DIPEA (155.90 mg, 1.21 mmol, 210.11 μL)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 20 °C 에서 4시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (2 mL)로 희석하고, 유기상을 분리하고, 수층을 EtOAc (2 mL Х 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (20 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하였다. 여과물을 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (Biotage; 10 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 20~60% EtOAc/석유 에터 @ 40 mL/분)로 정제하여 백색 고체의 tert-부틸 4-(3-(((벤질옥시)카보닐)아미노)피페리딘-1-카보닐) 피페라진-1-카복실레이트 (160 mg, 318.90 μmol, 79.31% 수율, 89% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=447.0
단계 2. 벤질 (1-(피페라진-1-카보닐)피페리딘-3-일)카바메이트 (4)의 합성
디옥산 (2 mL) 내 tert-부틸 4-(3-(((벤질옥시)카보닐)아미노)피페리딘-1-카보닐)피페라진-1-카복실레이트 (160 mg, 358.31 μmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 2 mL)을 첨가하고, 혼합물을 20 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하여 백색 고체의 벤질 (1-(피페라진-1-카보닐)피페리딘-3-일)카바메이트 (120 mg, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+=347.0
단계 3. 벤질 (1-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-카보닐)피페리딘-3-일)카바메이트 (6)의 합성
DMSO (2 mL) 내 벤질 (1-(피페라진-1-카보닐)피페리딘-3-일)카바메이트 (120 mg, 346.40 μmol) 용액에 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (95.68 mg, 346.40 μmol) 및 TEA (105.15 mg, 1.04 mmol, 144.64 μL)을 첨가하고, 혼합물을 100 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(41%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 염수 (10 mL)로 희석하고, EtOAc (10 mL Х 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (20 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하고 여과물을 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (Biotage; 10 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 10~60% EtOAc/석유 에터 @ 40 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 벤질 (1-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-카보닐)피페리딘-3-일)카바메이트 (150 mg, 243.93 μmol, 70.42% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=603.0
단계 4. 4-(4-(3-아미노피페리딘-1-카보닐)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (7)의 합성
CF3CH2OH (10 mL) 내 벤질 (1-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-카보닐)피페리딘-3-일)카바메이트 (100 mg, 165.94 μmol) 및 Pd/C (20 mg, 10% 순도) 혼합물을 탈기하고 H2로 3차례 퍼지하고, 생성된 혼합물을 20 °C H2 (15 Psi) 기체 하에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물을 셀라이트 패드로 여과하고 여과물을 진공 농축하여 황색 고체의 4-(4-(3-아미노피페리딘-1-카보닐)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (50 mg, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+= 469.0
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-카보닐)피페리딘-3-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 145)의 합성
DMF (1 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (47.75 mg, 106.72 μmol) 용액에 HATU (60.87 mg, 160.08 μmol) 및 DIPEA (41.38 mg, 320.17 μmol, 55.77 μL)를 첨가하고, 혼합물을 20 °C 에서 0.5시간 동안 교반 하였다. 4-(4-(3-아미노피페리딘-1-카보닐)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (50 mg, 106.72 μmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 20 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 염수 (3 mL)로 희석하고 EtOAc (3 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (5 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하였다. 여과물을 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 prep-TLC (SiO2, DCM: MeOH = 10:1)로 정제하고 역상 HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25 mm* 5 μm; 이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN]; B%: 41%-71%, 8 분)로 재정제하였다. 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-카보닐)피페리딘-3-일)-3-메톡시벤즈아미드 (30.2 mg, 31.28 μmol, 29.31% 수율, 93% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=898.0
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.09 (s, 1H), 8.34-8.21 (m, 3H), 7.98 (s, 1H), 7.76-7.69 (m, 1H), 7.53-7.46 (m, 2H), 7.42-7.33 (m, 2H), 5.16-5.07 (m, 1H), 4.83-4.72 (m, 1H), 4.05 (t, J = 14.1 Hz, 2H), 3.97-3.84 (m, 4H), 3.70-3.63 (m, 1H), 3.58-3.49 (m, 1H), 3.43-3.38 (m, 4H), 3.33-3.25 (m, 7H), 2.95-2.77 (m, 3H), 2.64-2.56 (m, 2H), 2.09-1.88 (m, 4H), 1.81-1.51 (m, 9H).
실시예 146. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((3R)-1-(2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)아세틸)피페리딘-3-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 146)의 합성
단계 1. 2-(피페라진-1-일)아세트산 (2)의 합성
디옥산 (5 mL) 내 2-(4-(tert-부톡시카보닐)피페라진-1-일)아세트산 (1 g, 4.09 mmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 20 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터 : EtOAc = 1:1)로 하나의 새로운 스팟 형성을 확인하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하여 백색 고체의 2-(피페라진-1-일)아세트산 (600 mg, 3.95 mmol, 96.58% 수율, 95% 순도，HCl 염)을 수득하였다.
단계 2. 2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)아세트산 (3)의 합성
DMSO (5 mL) 내 2-(피페라진-1-일)아세트산 (500 mg, 3.47 mmol) 용액에 DIPEA (1.34 g, 10.40 mmol, 1.81 mL) 및 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (957.96 mg, 3.47 mmol)을 첨가하고, 80 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (10 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex luna C18 150*40 mm* 15 μm;이동상:[물 (TFA)-ACN]; B%: 1%-25%, 10 분)로 정제하고, 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)아세트산 (1 g, 2.50 mmol, 72.02% 수율)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 400.9
단계 3. tert-부틸 ((3R)-1-(2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)아세틸)피페리딘-3-일)카바메이트 (4)의 합성
DMF (3 mL) 내 2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)아세트산 (350 mg, 874.16 μmol) 용액에 HATU (398.86 mg, 1.05 mmol) 및 DIPEA (225.96 mg, 1.75 mmol, 304.53 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 10분간 교반 후 DMF (2 mL) 내 tert-부틸 (R)-피페리딘-3-일카바메이트 (175.07 mg, 874.16 μmol) 및 DIPEA (112.98 mg, 874.16 μmol, 152.26 μL) 용액을 25 °C 에서 한 방울씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 여과하였다. 여과물을 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex luna C18 150*40 mm* 15 μm; 이동상:[물 (TFA)-ACN]; B%: 12%-42%, 10 분)로 정제하고, 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 tert-부틸 ((3R)-1-(2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)아세틸)피페리딘-3-일)카바메이트 (400 mg, 686.52 μmol, 78.54% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 583.1
단계 4. 4-(4-(2-((R)-3-아미노피페리딘-1-일)-2-옥소에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (5)의 합성
디옥산 (1 mL) 내 tert-부틸 ((3R)-1-(2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)아세틸)피페리딘-3-일)카바메이트 (80 mg, 137.30 μmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 34.33 μL)을 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하여 황색 고체의 4-(4-(2-((R)-3-아미노피페리딘-1-일)-2-옥소에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (66 mg, 136.78 μmol, 99.62% 수율, HCl 염)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 483.3
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((3R)-1-(2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)아세틸)피페리딘-3-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 146)의 합성
DMF (1 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (61.20 mg, 136.78 μmol) 용액에 HATU (62.41 mg, 164.13 μmol) 및 DIPEA (88.39 mg, 683.89 μmol, 119.12 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 10분간 교반 후 DMF (0.5 mL) 내 4-(4-(2-((R)-3-아미노피페리딘-1-일)-2-옥소에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (66 mg, 136.78 μmol, HCl 염)을 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크를 확인하였다. 혼합물을 여과하였다. 여과물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25 mm* 5 μm; 이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN]; B%: 37%-67%, 10 분)로 정제하고, 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((3R)-1-(2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)아세틸)피페리딘-3-일)-3-메톡시벤즈아미드 (29 mg, 30.21 μmol, 22.09% 수율, 95% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=912.6
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 10.82 (s, 1H), 8.29-8.25 (m, 1H), 8.25-8.24 (m, 1H), 7.93-7.88 (m, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.70-7.64 (m, 1H), 7.51-7.46 (m, 2H), 7.35-7.28 (m, 2H), 5.09-5.01 (m, 1H), 4.80-4.70 (m, 1H), 4.08-3.96 (m, 4H), 3.95 (s, 3H), 3.46-3.14 (m, 12H), 2.92-2.85 (m, 1H), 2.70-2.61 (m, 6H), 2.10-2.03 (m, 1H), 2.00-2.93 (m, 3H), 1.84-1.77 (m, 1H), 1.74-1.69 (m, 2H), 1.67-1.56 (m, 6H).
실시예 147. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((3S)-1-(2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)아세틸)피페리딘-3-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 147)의 합성
화합물 147은 실시예 146에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+ = 912.4, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 10.98-10.69 (m, 1H), 8.44-8.15 (m, 2H), 8.02-7.83 (m, 2H), 7.72-7.62 (m, 1H), 7.56-7.45 (m, 2H), 7.41-7.20 (m, 2H), 5.16-4.98 (m, 1H), 4.86-4.69 (m, 1H), 4.22-3.98 (m, 4H), 3.98-3.92 (m, 3H), 3.53-3.20 (m, 12H), 2.92-2.85 (m, 1H), 2.72-2.63 (m, 6H), 2.10-1.92 (m, 4H), 1.87-1.54 (m, 9H).
실시예 148. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-((4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)메틸)피페리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 148)의 합성
단계 1. (1-((tert-부톡시카보닐)아미노)피페리딘-4-일)메틸 4-메틸벤젠설포네이트 (2)의 합성
DCM (20 mL) 내 tert-부틸 (4-(히드록시메틸)피페리딘-1-일)카바메이트 (2.5 g, 10.86 mmol) 용액에 4-메틸벤젠설포닐 클로라이드 (3.10 g, 16.28 mmol), TEA (3.30 g, 32.57 mmol, 4.53 mL) 및 DMAP (132.62 mg, 1.09 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 25 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크를 확인하고, 혼합물을 물 (3 mL)로 희석하고 EtOAc (5 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (Biotage, 4 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 4~80% EtOAc/석유 에터 gradient @ 20 mL/분)로 정제하여 백색 고체의 (1-((tert-부톡시카보닐)아미노)피페리딘-4-일)메틸 4-메틸벤젠설포네이트 (1.26 g, 2.95 mmol, 27.17% 수율, 90% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=385.2
단계 2. tert-부틸 (4-((4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)메틸)피페리딘-1-일)카바메이트 (3) 및 tert-부틸 (3-(2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)에틸)피롤리딘-1-일)카바메이트 (3A)의 합성
DMF (20 mL) 내 (1-((tert-부톡시카보닐)아미노)피페리딘-4-일)메틸 4-메틸벤젠설포네이트 (500 mg, 1.30 mmol) 및 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-(피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (534.24 mg, 1.56 mmol) 용액에 DIPEA (504.21 mg, 3.90 mmol, 679.53 μL) 및 NaI (38.99 mg, 260.09 μmol)를 첨가하고, 혼합물을 80 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (10 mL)로 희석하고, EtOAc (15 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (Biotage, 4 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 4~10% MeOH/DCM gradient @ 20 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 tert-부틸 (4-((4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)메틸)피페리딘-1-일)카바메이트 (120 mg, 212.03 μmol, 16.30% 수율, 98% 순도) 및 황색 고체의 tert-부틸 (3-(2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)에틸)피롤리딘-1-일)카바메이트 (240 mg, 389.44 μmol, 29.95% 수율, 90% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+= 555.1
단계 3. 5-(4-((1-아미노피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (4)의 합성
디옥산 (4 mL) 내 tert-부틸 (4-((4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)메틸)피페리딘-1-일)카바메이트 (120 mg, 216.36 μmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 54.09 μL)을 첨가하고 생성된 혼합물을 25 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크를 확인하였다. 혼합물을 진공 농축하여 황색 고체의 5-(4-((1-아미노피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (100 mg, crude, HCl 염)을 수득하였다. MS(M+H)+=455.2
단계 4. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-((4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)메틸)피페리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 148)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (90 mg, 201.15 μmol) 용액에 HATU (114.72 mg, 301.72 μmol) 및 DIPEA (77.99 mg, 603.44 μmol, 105.11 μL)를 첨가한 후, 5-(4-((1-아미노피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (98.76 mg, 201.15 μmol, HCl 염)을 첨가하고 생성된 혼합물을 25 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크를 확인하였다. 혼합물을 물 (3 mL)로 희석하고, EtOAc (5 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 조 생성물을 Prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi Polar-RP 100*25mm*4 μm; 이동상:[물 (TFA)-ACN]; B%: 30%-50%, 7 분) 및 Prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25mm*5 μm; 이동상:[물(NH4HCO3)-ACN]; B%: 39%-69%, 10 분)로 정제하고, 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-((4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)메틸)피페리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (15.8 mg, 17.14 μmol, 8.52% 수율, 95.9% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=884.4
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.06 (s, 1H), 9.32 (s, 1H), 8.31-8.23 (m, 2H), 7.97 (s, 1H), 7.68 (d, J=8.44 Hz, 1H), 7.47-7.39 (m, 2H), 7.34 (s, 1H), 7.26 (d, J=7.09 Hz, 1H), 5.07 (dd, J=12.78, 5.44 Hz, 1H), 4.83-4.70 (m, 1H), 4.05 (t, J=14.06 Hz, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.45 (s, 4H), 3.33 (s, 3H), 3.03 (d, J=9.66 Hz, 2H), 2.92-2.84 (m, 1H), 2.79 (t, J=10.33 Hz, 2H), 2.64-2.57 (m, 2H), 2.57-2.53 (m, 4H), 2.22 (d, J=6.48 Hz, 2H), 2.07-1.99 (m, 1H), 1.95 (s, 2H), 1.83-1.68 (m, 4H), 1.59 (d, J=1.10 Hz, 5H), 1.32-1.20 (m, 2H).
실시예 149. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(3-(2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)에틸)피롤리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 149)의 합성
단계 1. 5-(4-(2-(1-아미노피롤리딘-3-일)에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (6)의 합성
디옥산 (4 mL) 내 tert-부틸 (3-(2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)에틸)피롤리딘-1-일)카바메이트 (240.00 mg, 432.72 μmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 108.18 μL)를 첨가하고, 혼합물을 25 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크를 확인하고, 혼합물을 진공 농축하여 황색 고체의 5-(4-(2-(1-아미노피롤리딘-3-일)에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (200 mg, crude, HCl 염)을 수득하였다. MS(M+H)+=455.0
단계 2. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(3-(2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)에틸)피롤리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 149)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (90 mg, 201.15 μmol) 용액에 HATU (114.72 mg, 301.72 μmol) 및 DIPEA (77.99 mg, 603.44 μmol, 105.11 μL)를 첨가한 후, 5-(4-(2-(1-아미노피롤리딘-3-일)에틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (98.76 mg, 201.15 μmol, HCl 염)을 첨가하고 반응 혼합물을 25 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (3 mL)로 희석하고 EtOAc (5 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 조 생성물을 Prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi Polar-RP 100*25mm*4 μm; 이동상:[물(TFA)-ACN]; B%: 30%-50%, 7 분) 및 Prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25mm*5 μm; 이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN]; B%: 38%-68%, 10 분)로 정제하고, 용출물을 동결 건조하여 황색 파우더의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(3-(2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)에틸)피롤리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (20.4 mg, 22.32 μmol, 11.09% 수율, 96.7% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=884.0
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.10 (s, 1H), 9.40 (s, 1H), 8.33-8.23 (m, 2H), 7.98 (s, 1H), 7.72 (d, J=8.38 Hz, 1H), 7.50-7.36 (m, 3H), 7.31 (d, J=8.25 Hz, 1H), 5.09 (dd, J=12.82, 5.32 Hz, 1H), 4.77 (t, J=7.82 Hz, 1H), 4.05 (t, J=13.95 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.37-3.35 (m, 4H), 3.33 (s, 3H), 3.19-2.99 (m, 4H), 2.94-2.82 (m, 2H), 2.77-2.67 (m, 2H), 2.65-2.52 (m, 5H), 2.36-2.22 (m, J=14.57, 7.22 Hz, 1H), 2.07-1.89 (m, 4H), 1.78-1.39 (m, 9H).
실시예 150. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)시클로헥실)-3-메톡시벤즈아미드 (트랜스) (화합물 150)의 합성
단계 1. tert-부틸 ((1r,4r)-4-(피페라진-1-일)시클로헥실)카바메이트 (트랜스) (2)의 합성
CF3CH2OH (6 mL) 내 벤질 4-((1r,4r)-4-((tert-부톡시카보닐)아미노)시클로헥실)피페라진-1-카복실레이트 (300 mg, 718.49 μmol) 용액에 Pd/C (0.1 g, 10% 순도)를 N2 기체 하에서 첨가하였다. 현탁액을 탈기하고 H2로 3차례 퍼지하였다. 혼합물을 20 °C H2 (15 Psi) 하에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 CF3CH2OH (30 mL)로 희석하고 여과하였다. 여과물을 농축하여 황백색 고체의 tert-부틸 ((1r,4r)-4-(피페라진-1-일)시클로헥실)카바메이트 (트랜스) (170 mg, 599.84 μmol, 83.49% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=284.5
단계 2. tert-부틸 ((1r,4r)-4-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)시클로헥실)카바메이트 (트랜스) (4)의 합성
DMSO (4 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (150 mg, 543.05 μmol) 용액에 TEA (164.85 mg, 1.63 mmol, 226.76 μL) 및 tert-부틸 ((1r,4r)-4-(피페라진-1-일)시클로헥실)카바메이트 (트랜스) (169.29 mg, 597.35 μmol)를 20 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 100 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(77%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (15 mL)로 희석하고 EtOAc (15 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 염수 (15 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (12 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 tert-부틸 ((1r,4r)-4-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)시클로헥실)카바메이트 (트랜스) (272 mg, 499.02 μmol, 91.89% 수율, 99% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=540.3
단계 3. 5-(4-((1r,4r)-4-아미노시클로헥실)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (트랜스) (5)의 합성
디옥산 (3 mL) 내 tert-부틸 ((1r,4r)-4-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)시클로헥실)카바메이트 (트랜스) (272 mg, 504.06 μmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 12 mL)를 20 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 0.5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(72%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하여 황색 고체의 5-(4-((1r,4r)-4-아미노시클로헥실)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (트랜스) (240 mg, crude, HCl 염)을 수득하였다. MS(M+H)+=440.4
단계 4. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)시클로헥실)-3-메톡시벤즈아미드 (트랜스) (화합물 150)의 합성
DMF (1 mL) 내 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (60 mg, 142.38 μmol) 용액에 HATU (59.55 mg, 156.62 μmol) 및 DIPEA (36.80 mg, 284.77 μmol, 49.60 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 20 °C 에서 10분간 교반 후 DMF (1 mL) 내 5-(4-((1r,4r)-4-아미노시클로헥실)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (트랜스) (81.32 mg, 170.86 μmol, HCl 염) 및 DIPEA (36.80 mg, 284.77 μmol, 49.60 μL) 용액을 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(61%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (10 mL)로 희석하고 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi C18 150*25 mm* 10 μm; 이동상:[물 (FA)-ACN]; B%: 11%-50%, 13 분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)시클로헥실)-3-메톡시벤즈아미드 (트랜스) (72.8 mg, 79.44 μmol, 55.79% 수율, 97% 순도, FA)를 수득하였다. MS(M+H)+=843.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.10 (s, 1H), 9.58-9.33 (m, 1H), 8.31 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.18-8.12 (m, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.77 (br d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.54-7.44 (m, 2H), 7.38 (br d, J = 8.9 Hz, 1H), 5.10 (dd, J = 5.4, 12.9 Hz, 1H), 4.88 (td, J = 6.7, 13.5 Hz, 1H), 4.40-4.16 (m, 2H), 4.04 (br t, J = 13.4 Hz, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.86-3.76 (m, 1H), 3.70-3.54 (m, 2H), 3.32 (s, 3H), 3.27-3.17 (m, 4H), 2.95-2.84 (m, 1H), 2.63-2.54 (m, 3H), 2.22-2.09 (m, 2H), 2.08-1.95 (m, 3H), 1.71-1.55 (m, 2H), 1.49-1.37 (m, 2H), 1.24 (d, J = 6.7 Hz, 6H).
실시예 151. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(3-(2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)에틸)피롤리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 151)의 합성
화합물 151은 실시예 149에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=884.5, 1H NMR (400 MHz,CDCl3) δ = 8.48 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 8.09-8.03 (m, 2H), 7.76 (s, 1H), 7.65-7.58 (m, 1H), 7.42 (br d, J = 6.6 Hz, 2H), 7.24-7.22 (m, 1H), 7.18 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.96-6.84 (m, 1H), 5.01-4.94 (m, 1H), 4.87-4.79 (m, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.90 (t, J = 13.6 Hz, 2H), 3.41 (s, 3H), 3.39-3.34 (m, 4H), 3.31-3.24 (m, 1H), 3.06-2.98 (m, 1H), 2.95-2.84 (m, 2H), 2.83-2.63 (m, 7H), 2.51-2.32 (m, 3H), 2.21-2.03 (m, 5H), 1.84-1.63 (m, 8H).
실시예 152. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-(((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)(메틸)아미노)시클로헥실)-3-메톡시벤즈아미드 (트랜스) (화합물 152)의 합성
단계 1. tert-부틸 ((1r,4r)-4-(디벤질아미노)시클로헥실)카바메이트 (트랜스) (2)의 합성
MeCN (500 mL) 내 tert-부틸 ((1r,4r)-4-아미노시클로헥실)카바메이트 (트랜스) (25.2 g, 117.59 mmol) 용액에 K2CO3 (65.01 g, 470.36 mmol) 및 BnBr (42.64 g, 249.29 mmol, 29.61 mL)을 첨가하고, 혼합물을 60 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. TLC (SiO2, 석유 에터: EtOAc = 5: 1)로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 낮은 극성의 하나의 새로운 주 스팟이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 0 °C 에서 H2O (500 mL)로 희석하고, 0 °C 에서 EtOAc (500 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고 진공 농축하였다. 잔여물을 석유 에터 (80 mL)로 10분간 분쇄하고, 현탁액을 여과하고 여과 케이크를 석유 에터 (50 mL)로 세척하였다. 여과 케이크를 모으고 건조하여 백색 고체의 tert-부틸 ((1r,4r)-4-(디벤질아미노)시클로헥실)카바메이트 (트랜스) (44.06 g, 111.67 mmol, 94.97% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=395.2
단계 2. tert-부틸 ((1r,4r)-4-(디벤질아미노)시클로헥실)(메틸)카바메이트 (트랜스) (3)의 합성
THF (400 mL) 내 tert-부틸 ((1r,4r)-4-(디벤질아미노)시클로헥실)카바메이트 (트랜스) (44.06 g, 111.67 mmol) 용액에 NaH (6.70 g, 167.51 mmol, 60% 순도)를 5 °C N2 기체 하에서 천천히 첨가하고, 현탁액을 5 °C 에서 30분간 교반 후 MeI (19.02 g, 134.01 mmol, 8.34 mL)를 5 °C 에서 한 방울씩 첨가하고, 생성된 혼합물을 15 °C 에서 2.5시간 동안 교반 하였다. TLC (SiO2, 석유 에터: EtOAc = 5: 1)로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 낮은 극성의 하나의 새로운 주 스팟이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 얼음물 (300 mL)에 천천히 붓고, 혼합물에 HCl (1 M)을 0 °C 에서 천천히 첨가하여 pH = 8 ~ 9로 조정하고, 생성된 혼합물을 EtOAc (400 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (500 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하고 진공 농축하여 밝은 갈색 고체의 tert-부틸 ((1r,4r)-4-(디벤질아미노)시클로헥실)(메틸)카바메이트 (트랜스) (48.5 g)를 수득하였고, 이를 바로 사용하였다. MS(M+H)+=409.2
단계 3. (1r,4r)-N1,N1-디벤질-N4-메틸시클로헥산-1,4-디아민 (트랜스) (4)의 합성
DCM (100 mL) 내 tert-부틸 ((1r,4r)-4-(디벤질아미노)시클로헥실)(메틸)카바메이트 (트랜스) (48.5 g, 118.71 mmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 148.35 mL)을 첨가하고, 혼합물을 15 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(99%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하였다. 잔여물을 MTBE (60 mL)로 10분간 분쇄하고, 현탁액을 여과하고 여과 케이크를 MTBE (40 mL)로 세척하였다. 여과 케이크를 모으고 진공 건조하여 밝은 황색 고체의 (1r,4r)-N1,N1-디벤질-N4-메틸시클로헥산-1,4-디아민 (트랜스) (43.8 g, 2HCl 염)을 수득하였다. MS(M+H)+=309.2
단계 4. tert-부틸 4-((((1r,4r)-4-(디벤질아미노)시클로헥실)(메틸)아미노)메틸) 피페리딘-1-카복실레이트 (트랜스) (6)의 합성
DMF (30 mL) 및 THF (150 mL) 내 (1r,4r)-N1,N1-디벤질-N4-메틸시클로헥산-1,4-디아민(트랜스) (6 g, 15.73 mmol, 2HCl 염) 및 KOAc (3.86 g, 39.33 mmol) 용액에 tert-부틸 4-포르밀피페리딘-1-카복실레이트 (3.36 g, 15.73 mmol)를 0 °C 에서 첨가하고, 혼합물을 0 °C 에서 30분간 교반한 후 NaBH(OAc)3 (6.67 g, 31.46 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 10 °C 에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 주 피크(96%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하여 대부분의 용매를 제거하고, 잔여물을 H2O (300 mL)로 희석하고 DCM (150 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 황백색 고체의 tert-부틸 4-((((1r,4r)-4-(디벤질아미노)시클로헥실)(메틸)아미노)메틸) 피페리딘-1-카복실레이트 (트랜스) (8.3 g)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=506.3
단계 5. tert-부틸 4-((((1r,4r)-4-아미노시클로헥실)(메틸)아미노)메틸)피페리딘-1-카복실레이트 (트랜스) (7)의 합성
CF3CH2OH (100 mL) 내 tert-부틸 4-((((1r,4r)-4-(디벤질아미노)시클로헥실)(메틸)아미노)메틸)피페리딘-1-카복실레이트 (트랜스) (8.3 g, 16.41 mmol) 용액에 Pd(OH)2/C (1 g, 10% 순도)를 N2 기체 하에서 첨가하고, 혼합물을 탈기하고 H2로 3차례 퍼지하고, 현탁액을 15°C H2 (15 Psi) 기체 하에서 24시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 44%의 tert-부틸 4-((((1r,4r)-4-(벤질아미노)시클로헥실)(메틸)아미노)메틸)피페리딘-1-카복실레이트가 남아있음을 확인하고, 반응 혼합물을 15°C H2 (15 psi) 기체 하에서 32시간 동안 추가로 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 소모되었음을 확인하였다. 혼합물을 여과하고 여과 케이크를 CF3CH2OH (100 mL)로 세척하고, 여과물을 진공 농축하였다. 잔여물을 MTBE (20 mL)로 20분간 분쇄하고, 현탁액을 여과하고 여과 케이크를 MTBE (20 mL)로 세척 후 여과 케이크를 진공 농축하여 분홍색 고체의 tert-부틸 4-((((1r,4r)-4-아미노시클로헥실)(메틸)아미노)메틸)피페리딘-1-카복실레이트 (트랜스) (3.45 g, 10.60 mmol, 64.58% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=326.2
단계 6. tert-부틸 4-((((1r,4r)-4-(4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)시클로헥실)(메틸)아미노)메틸)피페리딘-1-카복실레이트 (트랜스) (9)의 합성
DMF (10 mL) 내 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (500 mg, 1.19 mmol) 용액에 HATU (586.50 mg, 1.54 mmol) 및 DIPEA (306.70 mg, 2.37 mmol, 413.34 μL)를 첨가하고, 혼합물을 15 °C 에서 15분간 교반 후 tert-부틸 4-((((1r,4r)-4-아미노시클로헥실)(메틸)아미노)메틸)피페리딘-1-카복실레이트 (트랜스) (386.20 mg, 1.19 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 15 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(80%)를 확인하였다. 잔여물을 H2O (100 mL)로 희석하고 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (100 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (12 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 100% EtOAc to 10% DCM/MeOH gradient @ 80 mL/분)로 정제하여 갈색 고체의 tert-부틸 4-((((1r,4r)-4-(4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)시클로헥실)(메틸)아미노)메틸)피페리딘-1-카복실레이트 (트랜스) (420 mg, 576.23 μmol, 48.56% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=729.3
단계 7. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-((1r,4r)-4-(메틸(피페리딘-4-일메틸)아미노)시클로헥실)벤즈아미드 (트랜스) (10)의 합성
DCM (2 mL) 내 tert-부틸 4-((((1r,4r)-4-(4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)시클로헥실)(메틸)아미노)메틸)피페리딘-1-카복실레이트 (트랜스) (160 mg, 219.52 μmol) 용액에 TFA (250.30 mg, 2.20 mmol, 162.53 μL)를 첨가하고, 혼합물을 15 °C 에서 3시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(83%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하여 갈색 점성 물질의 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-((1r,4r)-4-(메틸(피페리딘-4-일메틸)아미노)시클로헥실)벤즈아미드 (트랜스) (170 mg, TFA 염)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=629.4
단계 8. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-(((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)(메틸)아미노)시클로헥실)-3-메톡시벤즈아미드 (트랜스) (화합물 152)의 합성
DMSO (1.5 mL) 내 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-((1r,4r)-4-(메틸(피페리딘-4-일메틸)아미노)시클로헥실)벤즈아미드 (트랜스) (85 mg, 114.44 μmol, TFA 염), 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (41.09 mg, 148.77 μmol) 및 DIPEA (147.90 mg, 1.14 mmol, 199.33 μL) 혼합물을 100 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(75%)를 확인하였다. 혼합물에 CH3COOH를 첨가하여 pH < 7 로 조정하였다. 생성된 혼합물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex C18 75*30mm*3 μm; 이동상:[물(FA)-ACN]; B%: 18%-48%, 2 분) 후 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25mm* 5 μm; 이동상:[물(NH4HCO3)-ACN]; B%: 48%-78%, 8 분)로 정제하고, 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-(((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)메틸)(메틸)아미노)시클로헥실)-3-메톡시벤즈아미드 (트랜스) (20.2 mg, 21.68 μmol, 18.95% 수율, 95% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=885.3
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.08 (br s, 1H), 8.35-8.25 (m, 1H), 8.22 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.05 (br d, J = 6.9 Hz, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.73-7.61 (m, 1H), 7.56-7.43 (m, 2H), 7.32 (br t, J = 7.6 Hz, 2H), 5.15-5.02 (m, 1H), 4.95-4.80 (m, 1H), 4.03 (br t, J = 13.4 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.80-3.61 (m, 3H), 3.29 (s, 3H), 2.87 (br t, J = 11.1 Hz, 3H), 2.64-2.56 (m, 2H), 2.34-2.25 (m, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.07-1.98 (m, 1H), 1.97-1.88 (m, 2H), 1.86-1.72 (m, 4H), 1.66-1.55 (m, 1H), 1.36 (br s, 4H), 1.29 (br d, J = 11.5 Hz, 2H), 1.24 (br d, J = 6.5 Hz, 6H).
실시예 153. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-(((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페리딘-4-일)메틸)(메틸)아미노)시클로헥실)-3-메톡시벤즈아미드 (트랜스) (화합물 153)의 합성
화합물 153은 실시예 152에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=885.3, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.07 (s, 1H), 8.35-8.26 (m, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.10-7.99 (m, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.65 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.56-7.41 (m, 2H), 7.30 (s, 1H), 7.26-7.17 (m, 1H), 5.06 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.95-4.79 (m, 1H), 4.15-3.97 (m, 4H), 3.93 (s, 3H), 3.79-3.63 (m, 1H), 3.30 (s, 3H), 2.97 (t, J = 12.1 Hz, 2H), 2.92-2.81 (m, 1H), 2.62-2.59 (m, 2H), 2.33-2.28 (m, 1H), 2.24 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 2.20 (s, 3H), 2.06-1.97 (m, 1H), 1.92-1.83 (m, 2H), 1.85-1.62 (m, 5H), 1.40-1.30 (m, 4H), 1.24 (d, J = 6.6 Hz, 6H), 1.19-1.06 (m, 2H).
실시예 154. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)피롤리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 154)의 합성
단계 1. 벤질 4-(1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (2)의 합성
DCE (50 mL) 내 tert-부틸 3-옥소피롤리딘-1-카복실레이트 (5 g, 26.99 mmol) 및 벤질 피페라진-1-카복실레이트 (5.95 g, 26.99 mmol, 5.22 mL) 용액에 AcOH (162.11 mg, 2.70 mmol, 154.39 μL)를 첨가하고, 혼합물을 20 °C 에서 0.5시간 동안 교반 후 NaBH(OAc)3 (17.16 g, 80.98 mmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량을 확인하고, 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고, EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고 여과물을 진공 농축하여 황색 오일의 벤질 4-(1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (9 g, crude)를 수득하였고, 바로 사용하였다. MS(M+H)+=390.3
단계 2. 벤질 4-(피롤리딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (3)의 합성
디옥산 (10 mL) 내 벤질 4-(1-(tert-부톡시카보닐)피롤리딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (9 g, 23.11 mmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 8 mL)을 첨가하고, 혼합물을 20 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량을 확인하고, 혼합물을 여과하였다. 여과 케이크를 진공 건조하여 황색 고체의 벤질 4-(피롤리딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (6.3 g, crude, HCl 염)를 수득하였다. MS(M+H)+= 290.1
단계 3. 벤질 4-(1-니트로소피롤리딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (4)의 합성
H2O (50 mL) 내 벤질 4-(피롤리딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (6.3 g, 19.34 mmol, HCl 염) 용액에 AcOH (56.70 g, 944.18 mmol, 54.00 mL) 및 NaNO2 (1.33 g, 19.34 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 15 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량을 확인하고, 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고, NaHCO3로 pH=7~8로 조정하고, EtOAc (50 mL x 3)를 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고, 여과물을 진공 농축하여 황색 오일의 벤질 4-(1-니트로소피롤리딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (1.8 g, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+=319.1
단계 4. 벤질 4-(1-아미노피롤리딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (5)의 합성
MeOH (10 mL) 내 벤질 4-(1-니트로소피롤리딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (0.9 g, 2.83 mmol) 용액에 Zn (1.11 g, 16.96 mmol) 및 AcOH (9.45 g, 157.36 mmol, 9.00 mL)를 -10 °C 에서 첨가하고, 현탁액을 15 °C 로 승온하고 15 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 진공 농축하여 갈색 오일의 벤질 4-(1-아미노피롤리딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (500 mg, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+=305.1
단계 5. 벤질 4-(1-(4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)피롤리딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (6)의 합성
DMF (6 mL) 내 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (320 mg, 759.38 μmol) 용액에 HATU (433.11 mg, 1.14 mmol) 및 DIPEA (294.43 mg, 2.28 mmol, 396.81 μL)를 첨가 후 벤질 4-(1-아미노피롤리딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (300.49 mg, 987.19 μmol)을 첨가하고 생성된 혼합물을 25 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 생성물이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (3 mL)로 희석하고, EtOAc (5 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (Biotage, 4 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 10% MeOH/DCM gradient @ 20 mL/분)로 정제하여 갈색 파우더의 벤질 4-(1-(4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)피롤리딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (380 mg, 504.68 μmol, 66.46% 수율, 94% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=708.4
단계 6. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(3-(피페라진-1-일)피롤리딘-1-일)벤즈아미드 (7)의 합성
CF3CH2OH (12 mL) 내 벤질 4-(1-(4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)피롤리딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (280 mg, 395.61 μmol) 용액에 Pd/C (419.35 mg, 395.61 μmol, 10% 순도)를 N2 기체 하에서 첨가하고, 혼합물을 탈기하고 H2로 3차례 퍼지하였다. 혼합물을 20 °C H2 (15 Psi) 하에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크를 확인하였다. 혼합물을 여과하고, 여과물을 진공 농축하여 황색 오일의 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(3-(피페라진-1-일)피롤리딘-1-일)벤즈아미드 (250 mg, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+=574.4
단계 7. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)피롤리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 154)의 합성
DMSO (2 mL) 내 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(3-(피페라진-1-일)피롤리딘-1-일)벤즈아미드 (80 mg, 139.46 μmol) 및 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (46.23 mg, 167.35 μmol) 용액에 DIPEA (54.07 mg, 418.38 μmol, 72.87 μL) 및 NaI (4.18 mg, 27.89 μmol)를 첨가하고, 혼합물을 90 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크를 확인하였다. 혼합물을 물 (3 mL)로 희석하고 EtOAc (5 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (Biotage, 4 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 4~15% MeOH/EtOAc gradient @ 20 mL/분)로 정제한 후 Prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25mm* 5 μm; 이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN];B%: 32%-62%, 10 분)로 정제하고, 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)피롤리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (7.6 mg, 8.98 μmol, 6.44% 수율, 98.0% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=830.4
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.08 (s, 1H), 9.37 (s, 1H), 8.32 (d, J=8.50 Hz, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.70 (d, J=8.50 Hz, 1H), 7.48-7.42 (m, 2H), 7.36 (s, 1H), 7.28 (d, J=8.63 Hz, 1H), 5.08 (dd, J=12.82, 5.44 Hz, 1H), 4.92-4.88 (m, 1H), 4.05 (t, J=13.63 Hz, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.55-3.46 (m, 4H), 3.31 (s, 3H), 3.20-3.09 (m, 2H), 3.09-2.98 (m, 3H), 2.98-2.82 (m, 2H), 2.66-2.54 (m, 5H), 2.07-1.96 (m, 2H), 1.83-1.74 (m, 1H), 1.25 (d, J=6.75 Hz, 6H).
실시예 155. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)피롤리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 155)의 합성
화합물 155는 실시예 154에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=830.5, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.09 (s, 1H), 9.38 (s, 1H), 8.32 (d, J=8.75 Hz, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.72 (t, J=7.75 Hz, 1H), 7.49-7.43 (m, 2H), 7.40-7.32 (m, 2H), 5.10 (dd, J=12.76, 5.38 Hz, 1H), 4.94-4.84 (m, 1H), 4.04 (t, J=13.57 Hz, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.33-3.32 (m, 4H), 3.31 (s, 3H), 3.20-3.10 (m, 2H), 3.09-2.99 (m, 3H), 2.99-2.82 (m, 2H), 2.72-2.57 (m, 5H), 2.08-1.96 (m, 2H), 1.85-1.73 (m, 1H), 1.25 (d, J=6.75 Hz, 6H).
실시예 156. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-((2-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)에틸)(메틸)아미노)시클로헥실)-3-메톡시벤즈아미드 (트랜스) (화합물 156)의 합성
화합물 156은 실시예 152에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=900.6, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.09 (br s, 1H), 8.34-8.28 (m, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.07 (br d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.69 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.53-7.48 (m, 2H), 7.35 (s, 1H), 7.27 (br d, J = 9.0 Hz, 1H), 5.08 (dd, J = 5.8, 12.4 Hz, 1H), 4.94-4.84 (m, 1H), 4.05 (br t, J = 13.8 Hz, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.79-3.70 (m, 1H), 3.47-3.41 (m, 4H), 3.31 (s, 3H), 2.95-2.84 (m, 1H), 2.53-2.43 (m, 9H), 2.23 (s, 3H), 2.07-1.98 (m, 2H), 1.96-1.85 (m, 3H), 1.82-1.75 (m, 2H), 1.41-1.34 (m, 4H), 1.28-1.21 (m, 6H).
실시예 157. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-((4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)메틸)-3,3-디플루오로피페리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 157)의 합성
단계 1. tert-부틸 (4-((4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)메틸)-3,3-디플루오로피페리딘-1-일)카바메이트 (3)의 합성
DMF (6 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (300 mg, 722.42 μmol, 2HCl) 및 (1-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3,3-디플루오로피페리딘-4-일)메틸 4-메틸벤젠설포네이트 (350 mg, 832.40 μmol) 용액에 DIPEA (373.46 mg, 2.89 mmol) 및 NaI (21.66 mg, 144.48 μmol)를 20 °C 에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60 °C 에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량을 확인하였다. 혼합물을 물 (10 mL)에 붓고 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (4 g 실리카 겔 컬럼, EtOAc/석유 에터 = 20-60%, 40 mL/분)로 정제하여 조 생성물을 수득하였고 이를 prep-TLC (pure EtOAc, Rf = 0.4)로 추가 정제하여 황색 고체의 tert-부틸 (4-((4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)메틸)-3,3-디플루오로피페리딘-1-일)카바메이트 (40 mg, 67.73 μmol, 9.37% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=591.3
단계 2. 4-(4-((1-아미노-3,3-디플루오로피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (4)의 합성
DCM (5 mL) 내 tert-부틸 (4-((4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)메틸)-3,3-디플루오로피페리딘-1-일)카바메이트 (30 mg) 용액에 TFA (3.08 g, 2 mL)를 20 °C 에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 20 °C 에서 30분간 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 농축하여 황색 오일의 4-(4-((1-아미노-3,3-디플루오로피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (15 mg, crude, 2TFA)을 수득하였다. MS(M+H)+=491.2
단계 3. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-((4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)메틸)-3,3-디플루오로피페리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 157)의 합성
DMF (1 mL) 내 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (21.11 mg, 50.10 μmol), DIPEA (35.97 mg, 278.34 μmol) 및 HATU (21.17 mg, 55.67 μmol) 용액에 4-(4-((1-아미노-3,3-디플루오로피페리딘-4-일)메틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (40 mg, crude, 2TFA)을 20 °C 에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 20 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (10 mL)에 붓고 EtOAc (5 mL x 4)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조하고 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25 mm* 5 μm;이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN];B%: 40%-70%, 9 분)로 추가 정제하고 동결 건조하여 황색 고체의 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-((4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)메틸)-3,3-디플루오로피페리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (7.1 mg, 7.36 μmol, 13.23% 수율, 92.7% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=893.9
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.48 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.69 (br s, 1H), 7.64-7.59 (m, 1H), 7.42 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.26-7.21 (m, 1H), 7.18 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.03-4.93 (m, 2H), 3.98 (s, 3H), 3.88 (t, J = 13.0 Hz, 2H), 3.69-3.55 (m, 1H), 3.52-3.33 (m, 9H), 3.30-3.26 (m, 1H), 2.95-2.84 (m, 2H), 2.84-2.72 (m, 4H), 2.70-2.59 (m, 2H), 2.57-2.47 (m, 1H), 2.19-2.02 (m, 3H), 1.75-1.68 (m, 1H), 1.33 (d, J = 6.7 Hz, 6H).
실시예 158. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-((4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)메틸)-3,3-디플루오로피페리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 158)의 합성
화합물 158은 실시예 157에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=880.4, 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.48 (d, J = 8.44 Hz, 1 H), 8.08-8.02 (m, 2 H), 7.77-7.69 (m, 2 H), 7.57 (d, J = 7.21 Hz, 1 H), 7.45 (t, J = 7.70 Hz, 1 H), 7.39 (s, 1 H), 7.25 (s, 1 H), 7.16 (d, J = 7.95 Hz, 1 H), 5.26 (dd, J = 13.14, 5.07 Hz, 1 H), 5.02-4.93 (m, 1 H), 4.51-4.27 (m, 2 H), 3.98 (s, 3 H), 3.88 (t, J = 13.08 Hz, 2 H), 3.73-3.56 (m, 1 H), 3.53-3.36 (m, 5 H), 3.33-3.25 (m, 1 H), 3.18-3.01 (m, 4 H), 2.99-2.86 (m, 2 H), 2.82-2.67 (m, 3 H), 2.61-2.52 (m, 2 H), 2.50-2.34 (m, 2 H), 2.29-2.19 (m, 1 H), 2.16-2.02 (m, 2 H), 1.74-1.67 (m, 1 H), 1.33 (d, J = 6.85 Hz, 6 H).
실시예 159. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)아제티딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 159)의 합성
단계 1． 벤질 4-(1-(tert-부톡시카보닐)아제티딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (2)의 합성
DCE (80 mL) 내 벤질 피페라진-1-카복실레이트 (8 g, 36.32 mmol, 7.02 mL), tert-부틸 3-옥소아제티딘-1-카복실레이트 (6.22 g, 36.32 mmol) 용액에 NaBH(OAc)3 (15.40 g, 72.64 mmol) 및 HOAc (1.09 g, 18.16 mmol, 1.04 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터: EtOAc=1:2)로 2개의 새로운 스팟 형성을 확인하였다. 포화 소듐 바이카보네이트 용액 (200mL)을 0 °C 에서 혼합물에 천천히 첨가하였다. 혼합물을 DCM (100 mL x 3)으로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (150 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 황색 오일의 벤질 4-(1-(tert-부톡시카보닐)아제티딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (14 g, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+=376.3
단계 2． 벤질 4-(아제티딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (3)의 합성
DCM (50 mL) 내 벤질 4-(1-(tert-부톡시카보닐)아제티딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (14 g, 37.29 mmol) 용액에 TFA (15.40 g, 135.06 mmol, 10 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 ~60%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하여 황색 오일의 벤질 4-(아제티딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (25 g, crude, TFA 염)를 수득하였다. MS(M+H)+=275.9
단계 3. 벤질 4-(1-니트로소아제티딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (4)의 합성
H2O (40 mL) 내 벤질 4-(아제티딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (25 g, crude, TFA) 용액에 H2O (40 mL) 내 NaNO2 (6.64 g, 96.31 mmol) 용액 및 HOAc (5.78 g, 96.31 mmol, 5.51 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(~70%)를 확인하였다. 포화 소듐 바이카보네이트 용액을 첨가하여 반응 혼합물의 pH를 8 정도로 조정하고, EtOAc (100 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 포화 염수 (150 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 황색 오일의 벤질 4-(1-니트로소아제티딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (12 g, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+=305.2
단계 4. 벤질 4-(1-아미노아제티딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (5)의 합성
THF (30 mL) 내 벤질 4-(1-니트로소아제티딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (12 g, crude) 용액에 H2O (30 mL) 내 NH4Cl (8.44 g, 157.72 mmol) 용액 및 Zn (5.47 g, 83.65 mmol)을 0°C 에서 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(~55%)를 확인하였다. 혼합물을 여과하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 역상 HPLC (컬럼: 330g 플래시 컬럼 Welch Ultimate XB_C18 20-40 μm; 120 A, 이동상:[물(NH3·H2O)-ACN]; B%: 0%-60%, 100 mL/분)로 정제하고 동결 건조하여 황색 오일의 벤질 4-(1-아미노아제티딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (7.3 g, 23.13 mmol, 58.66% 수율, 92% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=291.1
단계 5. 벤질 4-(1-(4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)아제티딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (7)의 합성
DMF (10 mL) 내 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (1.18 g, 2.79 mmol) 용액에 HATU (1.77 g, 4.65 mmol) 및 DIPEA (1.20 g, 9.30 mmol, 1.62 mL)를 첨가하였다. 0.5시간 후 벤질 4-(1-아미노아제티딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (0.9 g, 3.10 mmol)를 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(~44%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고 EtOAc (100 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 포화 염수 (150 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO; 20 g Sepa Flash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~60% 석유 에터: EtOAc/ 에탄올 (1:1) gradient @ 60 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 벤질 4-(1-(4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)아제티딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (0.96 g, 1.35 mmol, 43.53% 수율, 97.5% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=694.4
단계 6. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(3-(피페라진-1-일)아제티딘-1-일)벤즈아미드 (8)의 합성
CF3CH2OH (30 mL) 내 벤질 4-(1-(4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)아제티딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (0.96 g, 1.38 mmol) 용액에 Pd/C (0.1 g, 691.90 μmol, 10% 순도)를 N2 기체 하에서 첨가하였다. 혼합물을 탈기하고 H2로 3차례 퍼지하고, 현탁액을 25 °C H2 (15 Psi) 하에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크(~90%)를 확인하였다. 혼합물을 여과하였다. 여과물을 감압 농축하여 황색 고체의 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(3-(피페라진-1-일)아제티딘-1-일)벤즈아미드 (720 mg, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+=560.4
단계 7. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)아제티딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 159)의 합성
DMSO (2 mL) 내 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(3-(피페라진-1-일)아제티딘-1-일)벤즈아미드 (100 mg, crude) 용액에 TEA (54.25 mg, 536.09 μmol, 74.62 μL) 및 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (49.36 mg, 178.70 μmol)을 25 °C 에서 첨가하였다. 혼합물을 100 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(~17%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex luna C18 150 x 25 mm x 10 μm; 이동상:[물(FA)-ACN]; B%: 11%-41%, 10 분) 후 prep-HPLC(컬럼: Waters Xbridge 150 x 25 mm x 5 μm; 이동상:[물( NH4HCO3)-ACN]; B%: 33%-63%, 8 분)로 정제하고, 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)피페라진-1-일)아제티딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (11.6 mg, 13.85 μmol, 7.75% 수율, 97.4% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=816.4
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.08 (s, 1H), 9.53 (s, 1H), 8.34-8.27 (m, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.69 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.49-7.42 (m, 2H), 7.37 (s, 1H), 7.29 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.08 (dd, J = 5.3, 12.9 Hz, 1H), 4.92-4.82 (m, 1H), 4.03 (t, J = 13.5 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.78 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.67-3.63 (m, 2H), 3.45-3.50 (m, 4H), 3.29 (s, 3H), 2.97-2.83 (m, 2H), 2.61-2.56 (m, 2H), 2.47-2.42 (m, 4H), 2.07-1.98 (m, 1H), 1.24 (d, J = 6.7 Hz, 6H).
실시예 160. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(3-(4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)아제티딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 160)의 합성
화합물 160은 실시예 159에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=816.4, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.09 (s, 1H), 9.52 (s, 1H), 8.34-8.28 (m, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.76-7.67 (m, 1H), 7.49-7.41 (m, 2H), 7.36 (dd, J = 5.0, 7.5 Hz, 2H), 5.09 (dd, J = 5.3, 12.7 Hz, 1H), 4.90-4.84 (m, 1H), 4.04 (t, J = 13.6 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.77 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.68-3.65 (m, 2H), 3.36-3.33 (m, 4H), 3.30 (s, 3H), 3.01-2.82 (m, 2H), 2.64-2.54 (m, 6H), 2.09-1.98 (m, 1H), 1.24 (d, J = 6.7 Hz, 6H).
실시예 161. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(3-((4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)메틸)아제티딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 161)의 합성
단계 1. (1-니트로소아제티딘-3-일)메탄올 (2)의 합성
H2O (40 mL) 내 아제티딘-3-일메탄올 (9.5 g, 76.87 mmol, HCl 염) 용액에 H2O (40 mL) 및 HOAc (6.92 g, 115.31 mmol, 6.59 mL) 내 NaNO2 (7.96 g, 115.31 mmol) 용액을 0 °C 에서 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 5시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터 : EtOAc = 1:2)로 아제티딘-3-일메탄올이 완전히 소모되었음 및 하나의 새로운 스팟 형성을 확인하였다. 포화 소듐 바이카보네이트 용액을 첨가하여 반응혼합물을 pH=7로 조정하였다. 혼합물을 EtOAc/에탄올 (v/v=10/1) (100 mL x 15)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 감압 농축하여 황색 오일의 (1-니트로소아제티딘-3-일)메탄올 (9 g, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=117.2
단계 2. (1-아미노아제티딘-3-일)메탄올 (3)의 합성
THF (30 mL) 내 (1-니트로소아제티딘-3-일)메탄올 (9 g, crude) 용액에 Zn (18.98 g, 290.26 mmol) 및 H2O (30 mL) 내 NH4Cl (16.58 g, 310.03 mmol) 용액을 0 °C 에서 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터: EtOAc = 10:1)로 (1-니트로소아제티딘-3-일)메탄올이 완전히 소모되었음을 확인하였다. 혼합물을 여과하여 불용성 고체를 제거하였다. 여과물을 감압 농축하여 황색 오일의 (1-아미노아제티딘-3-일)메탄올 (19 g, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=103.1
단계 3. 벤질 (3-(히드록시메틸)아제티딘-1-일)카바메이트 (4)의 합성
THF (10 mL) 내 (1-아미노아제티딘-3-일)메탄올 (2 g, 19.58 mmol) 용액에 벤질 (2,5-디옥소피롤리딘-1-일) 카보네이트 (4.88 g, 19.58 mmol) 및 H2O (10 mL) 내 NaOH (3.92 g, 97.91 mmol) 용액을 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(30%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 황색 오일의 벤질 (3-(히드록시메틸)아제티딘-1-일)카바메이트 (3.2 g, 9.75 mmol, 49.80% 수율, 72% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=237.2
단계 4. (1-(((벤질옥시)카보닐)아미노)아제티딘-3-일)메틸 4-메틸벤젠설포네이트 (5)의 합성
DCM (30 mL) 내 벤질 (3-(히드록시메틸)아제티딘-1-일)카바메이트 (3 g, 12.70 mmol) 용액에 TosCl (2.42 g, 12.70 mmol), TEA (2.57 g, 25.40 mmol, 3.53 mL) 및 DMAP (775.62 mg, 6.35 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 20 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(50%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고 DCM (50 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO; 40 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~50% 석유 에터: EtOAc gradient @ 80 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 (1-(((벤질옥시)카보닐)아미노)아제티딘-3-일)메틸 4-메틸벤젠설포네이트 (1.4 g, 3.44 mmol, 27.11% 수율, 96% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=391.1
단계 5. 벤질 (3-((4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)메틸)아제티딘-1-일)카바메이트 (7)의 합성
DMF (8 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(피페라진-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (776.14 mg, 2.05 mmol, HCl 염) 용액에 (1-(((벤질옥시)카보닐)아미노)아제티딘-3-일)메틸 4-메틸벤젠설포네이트 (0.8 g, 2.05 mmo), DIPEA (794.42 mg, 6.15 mmol, 1.07 mL) 및 NaI (153.56 mg, 1.02 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 80 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(10%)를 확인하였다. 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO; 20 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~60% 석유 에터 : EtOAc/에탄올 (v/v=1/1) gradient @ 80 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 벤질 (3-((4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)메틸)아제티딘-1-일)카바메이트 (320 mg, 508.03 μmol, 24.80% 수율, 89% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=561.1
단계 6. 4-(4-((1-아미노아제티딘-3-일)메틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (8)의 합성
TFA (5 mL) 내 벤질 (3-((4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)메틸)아제티딘-1-일)카바메이트 (200 mg, 356.76 μmol) 혼합물을 40 °C 에서 4시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(15%)를 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하여 황색 오일의 4-(4-((1-아미노아제티딘-3-일)메틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (0.2 g, crude, TFA 염)을 수득하였다. MS(M+H)+=427.1
단계 7. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(3-((4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)메틸)아제티딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 161)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (60 mg, 142.38 μmol) 용액에 HATU (81.21 mg, 213.58 μmol) 및 DIPEA (92.01 mg, 711.92 μmol, 124.00 μL)를 첨가하고, 0.5시간 동안 교반 하였다. 4-(4-((1-아미노아제티딘-3-일)메틸)피페라진-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (192.39 mg, crude, TFA 염)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 25 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(50%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하고 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO; 20 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% 석유 에터/ MeOH gradient @ 80 mL/분) 후 prep-HPLC(컬럼: Waters Xbridge 150 x 50 mm x 10 μm; 이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN]; B%: 27%-57%, 10 분)로 정제하고, 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(3-((4-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페라진-1-일)메틸)아제티딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (47.24 mg, 53.57 μmol, 37.62% 수율, 94.1% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=830.4
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.07 (s, 1H), 9.46 (s, 1H), 8.32-8.27 (m, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.70 (dd, J = 7.3, 8.3 Hz, 1H), 7.45-7.39 (m, 2H), 7.35 (dd, J = 7.9, 9.8 Hz, 2H), 5.09 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.90-4.84 (m, 1H), 4.03 (t, J = 13.5 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.80 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 3.55-3.47 (m, 2H), 3.32-3.27 (m, 7H), 2.95-2.83 (m, 1H), 2.64-2.54 (m, 9H), 2.07-1.98 (m, 1H), 1.24 (d, J = 6.6 Hz, 6H)
실시예 162. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-6-플루오로-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아제티딘-3-일)메틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 162)의 합성
단계 1. 벤질 (1-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-6-플루오로-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아제티딘-3-일)메틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (3)의 합성
DMSO (10 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5,6-디플루오로이소인돌린-1,3-디온 (500 mg, 1.70 mmol) 및 벤질 (1-(아제티딘-3-일메틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (1.14 g, 2.72 mmol, TFA 염)　용액에 DIPEA (1.10 g, 8.50 mmol, 1.48 mL)를 첨가하고, 혼합물을 100 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(14%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (100 mL)로 희석하고 EtOAc (60 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (100 mL x 5)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하고 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (12 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~5% MeOH/EtOAc gradient @ 100 mL/분) 후 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex C18 75*30mm*3 μm; 이동상:[물(FA)-ACN]; B%: 8%-38%, 7 분)로 정제하고, 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 벤질 (1-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-6-플루오로-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아제티딘-3-일)메틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (350 mg, 605.95 μmol, 35.66% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=578.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.08 (s, 1H), 7.58 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 7.45-7.27 (m, 5H), 7.23 (br d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 5.13-4.90 (m, 3H), 4.24 (br t, J = 7.3 Hz, 2H), 3.80 (br t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.50-3.37 (m, 1H), 3.01-2.82 (m, 2H), 2.77 (br d, J = 11.1 Hz, 2H), 2.64-2.53 (m, 4H), 2.08-1.88 (m, 3H), 1.71 (br d, J = 10.5 Hz, 2H), 1.49-1.28 (m, 2H).
단계 2. 5-(3-((4-아미노피페리딘-1-일)메틸)아제티딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-6-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (4)의 합성
CF3CH2OH (20 mL) 내 벤질 (1-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-6-플루오로-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아제티딘-3-일)메틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (310 mg, 536.70 μmol) 용액에 Pd(OH)2/C (100 mg, 20% 순도)를 N2 기체 하에서 첨가하고, 현탁액을 탈기하고 H2로 수차례 퍼지하였다. 혼합물을 15 °C H2 (15 Psi) 하에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(87%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 여과하고 CF3CH2OH (100 mL)로 세척하였다. 여과물을 감압 농축하여 황색 고체의 5-(3-((4-아미노피페리딘-1-일)메틸)아제티딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-6-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (200 mg)을 수득하였고, 이를 바로 사용하였다. MS(M+H)+=444.2
단계 3. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-6-플루오로-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아제티딘-3-일)메틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 162)의 합성
DMF (3 mL) 내 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (90 mg, 213.58 μmol) 용액에 HATU (105.57 mg, 277.65 μmol) 및 DIPEA (82.81 mg, 640.73 μmol, 111.60 μL)를 첨가하고, 혼합물을 15 °C 에서 15분간 교반한 후, 5-(3-((4-아미노피페리딘-1-일)메틸)아제티딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-6-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (100 mg, 225.49 μmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 15 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 38%의 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산이 남아있음 및 22%의 원하는 질량을 확인하였다. 혼합물에 CH3COOH를 첨가하여 pH < 7 로 조정하였다. 생성된 혼합물을 prep-HPLC (컬럼: Shim-pack C18 150*25*10 μm; 이동상:[물 (FA)-ACN]; B%: 10%-40%, 10 분) 후 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25mm* 5 μm; 이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN]; B%: 43%-73%, 8 분)로 정제하고, 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-6-플루오로-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아제티딘-3-일)메틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (8 mg, 8.97 μmol, 4.20% 수율, 95% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=847.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.22-10.98 (m, 1H), 8.37-8.27 (m, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.15-8.05 (m, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.59 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 7.54-7.45 (m, 2H), 6.90 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.06 (dd, J = 5.4, 12.7 Hz, 1H), 4.95-4.80 (m, 1H), 4.27 (br t, J = 7.5 Hz, 2H), 4.04 (br t, J = 13.6 Hz, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.88-3.69 (m, 3H), 3.30 (s, 3H), 3.05-2.93 (m, 1H), 2.93-2.75 (m, 3H), 2.65-2.54 (m, 4H), 2.09-1.98 (m, 3H), 1.82-1.75 (m, 2H), 1.64-1.53 (m, 2H), 1.24 (d, J = 6.7 Hz, 6H).
실시예 163. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-((3-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아제티딘-1-일)메틸)피페리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 163)의 합성
단계 1. 디메틸 4-브로모프탈레이트 (2)의 합성
MeOH (100 mL) 내 5-브로모이소벤조퓨란-1,3-디온 (10 g, 44.05 mmol) 용액에 클로로황산 (1.75 g, 15.02 mmol, 1.00 mL)을 20 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 80 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. TLC (SiO2, 석유 에터: EtOAc = 10:1)로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 하나의 새로운 주 스팟 형성을 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (80 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~9% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 디메틸 4-브로모프탈레이트 (11.9 g, 43.58 mmol, 98.92% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=272.9
단계 2. 디메틸 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보로란-2-일)프탈레이트 (4)의 합성
디옥산 (120 mL) 내 디메틸 4-브로모프탈레이트 (11.9 g, 43.58 mmol) 및 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-비(1,3,2-디옥사보로란) (13.28 g, 52.29 mmol) 용액에 Pd(dppf)Cl2 (1.59 g, 2.18 mmol) 및 AcOK (8.55 g, 87.15 mmol)를 20 °C N2 기체 하에서 첨가하고 생성된 혼합물을 90 °C N2 기체 하에서 16시간 동안 교반 하였다. TLC (SiO2, 석유 에터: EtOAc = 10:1)로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 하나의 새로운 주 스팟 형성을 확인하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (80 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~5% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 디메틸 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보로란-2-일)프탈레이트 (15.1 g, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+=321.1
단계 3. 디메틸 4-(1-(tert-부톡시카보닐)아제티딘-3-일)프탈레이트 (6)의 합성
H2O (20 mL) 및 디옥산 (60 mL) 내 디메틸 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보로란-2-일)프탈레이트 (4.6 g, 14.37 mmol) 용액에 tert-부틸 3-요오드아제티딘-1-카복실레이트 (4.88 g, 17.24 mmol), Pd(dppf)Cl2·DCM (1.17 g, 1.44 mmol) 및 K3PO4 (9.15 g, 43.11 mmol)를 20 °C N2 기체 하에서 첨가하고 생성된 혼합물을 90 °C N2 기체 하에서 16시간 동안 교반 하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (80 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~33% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 디메틸 4-(1-(tert-부톡시카보닐)아제티딘-3-일)프탈레이트 (2.3 g, 6.58 mmol, 45.82% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=350
단계 4. 4-(1-(tert-부톡시카보닐)아제티딘-3-일)프탈산 (7)의 합성
THF (6 mL), MeOH (6 mL) 및 H2O (6 mL) 내 디메틸 4-(1-(tert-부톡시카보닐)아제티딘-3-일)프탈레이트 (2.3 g, 6.58 mmol) 용액에 NaOH (1.32 g, 32.92 mmol)를 20 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 80 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음을 확인하였다. 워크업을 위해 반응 혼합물을 다른 2개의 배치 (1.2 g 및 0.5 g 스케일)와 합쳤다. 반응 혼합물을 H2O (20 mL)로 희석하고 EtOAc (20 mL x 3)로 세척하고, 유기상을 버렸다. 수층을 0 °C 에서 HCl (12 N)를 첨가하여 pH=6 으로 조정하고, 생성된 혼합물을 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고 농축하여 황색 오일의 4-(1-(tert-부톡시카보닐)아제티딘-3-일)프탈산 (2.3 g, 4.05 mmol, 61.46% 수율)을 수득하였다. MS(M+H)+=322.1
단계 5. tert-부틸 3-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아제티딘-1-카복실레이트 (9)의 합성
Py (20 mL) 내 4-(1-(tert-부톡시카보닐)아제티딘-3-일)프탈산 (2.3 g, 7.16 mmol) 용액에 3-아미노피페리딘-2,6-디온 (2.36 g, 14.32 mmol, HCl 염)을 20 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 120 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(48%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (20 mL)로 희석하고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 염수 (20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (25 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~50% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 황백색 고체의 tert-부틸 3-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아제티딘-1-카복실레이트 (1.3 g, 3.14 mmol, 43.93% 수율)를 수득하였다. MS(M-56+H)+=358.3
단계 6. 5-(아제티딘-3-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (10)의 합성
DCM (3 mL) 내 tert-부틸 3-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아제티딘-1-카복실레이트 (0.6 g, 1.45 mmol) 용액에 TFA (827.41 mg, 7.26 mmol, 537.28 μL)를 20 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(68%)를 확인하였다. 워크업을 위해 반응 혼합물을 다른 배치 (0.2 g 스케일)와 합쳤다. 합쳐진 반응 혼합물을 진공 농축하여 황색 오일의 5-(아제티딘-3-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (1 g, crude, TFA 염)을 수득하였다. MS(M+H)+=314.4
단계 7. tert-부틸 (4-((3-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아제티딘-1-일)메틸)피페리딘-1-일)카바메이트 (12)의 합성
MeOH (10 mL) 내 5-(아제티딘-3-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (1 g, 3.19 mmol) 용액에 NaOAc (1.57 g, 19.15 mmol) 및 tert-부틸 (4-포르밀피페리딘-1-일)카바메이트 (2.91 g, 12.77 mmol)를 20 °C 에서 순차적으로 첨가하고, 1시간 동안 교반 하였다. NaBH3CN (601.73 mg, 9.58 mmol)을 20 °C 에서 천천히 첨가하고, 20 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(13%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (12 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 to 0~60% DCM/MeOH gradient @ 100 mL/분)로 정제하고 prep-HPLC (컬럼: Shim-pack C18 150*25*10 μm; 이동상:[물 (TFA)-ACN]; B%: 8%-38%, 10 분)로 재정제하고, 용출물을 동결 건조하여 백색 고체의 tert-부틸 (4-((3-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아제티딘-1-일)메틸)피페리딘-1-일)카바메이트 (253 mg, 395.55 μmol, 12.39% 수율, TFA 염)를 수득하였다. MS(M+H)+=526.3
단계 8. 5-(1-((1-아미노피페리딘-4-일)메틸)아제티딘-3-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (13)의 합성
DCM (2 mL) 내 tert-부틸 (4-((3-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아제티딘-1-일)메틸)피페리딘-1-일)카바메이트 (128 mg, 243.53 μmol) 용액에 TFA (138.84 mg, 1.22 mmol, 90.16 μL)를 20 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하여 황색 오일의 5-(1-((1-아미노피페리딘-4-일)메틸)아제티딘-3-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (186 mg, crude, TFA 염)을 수득하였다. MS(M+H)+=426.2
단계 9. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-((3-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아제티딘-1-일)메틸)피페리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 163)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (100 mg, 237.31 μmol) 용액에 DIPEA (61.34 mg, 474.61 μmol, 82.67 μL) 및 HATU (99.25 mg, 261.04 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 20 °C 에서 10분간 교반 후 DMF (2 mL) 내 5-(1-((1-아미노피페리딘-4-일)메틸)아제티딘-3-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (185.64 mg, 344.09 μmol, TFA 염) 및 DIPEA (122.68 mg, 949.22 μmol, 165.34 μL) 용액을 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(38%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (15 mL)로 희석하고 EtOAc (15 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고 진공 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi C18 150*25 mm* 10 μm; 이동상:[물 (FA)-ACN]; B%: 19%-39%, 10 분) 후 prep-TLC (SiO2, DCM: MeOH = 10:1)로 정제하고, 잔여물을 동결 건조하여 백색 고체의 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-((3-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아제티딘-1-일)메틸)피페리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (10.3 mg, 11.68 μmol, 23.60% 수율, 95% 순도, 0.2FA 염)를 수득하였다. MS(M+H)+=829.0
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.12 (s, 1H), 9.26 (s, 1H), 8.30 (br d, J = 8.2 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.15 (s, 0.2H), 7.96 (s, 1H), 7.93-7.83 (m, 3H), 7.46-7.39 (m, 2H), 5.15 (dd, J = 5.3, 12.8 Hz, 1H), 4.92-4.82 (m, 1H), 4.03 (br t, J = 13.5 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.87-3.79 (m, 1H), 3.68 (br t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.32 (br s, 3H), 3.00 (br d, J = 9.7 Hz, 2H), 2.96-2.82 (m, 2H), 2.74 (br t, J = 9.8 Hz, 2H), 2.64-2.54 (m, 3H), 2.42 (br s, 2H), 2.11-1.95 (m, 2H), 1.74 (br d, J = 9.2 Hz, 2H), 1.31 (br d, J = 5.7 Hz, 2H), 1.25 (s, 3H), 1.23 (s, 3H).
실시예 164. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(3-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)(메틸)아미노)시클로부틸)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 164)의 합성
단계 1. 벤질 4-((3-((tert-부톡시카보닐)아미노)시클로부틸)아미노)피페리딘-1-카복실레이트 (2)의 합성
MeOH (15 mL) 내 tert-부틸 (3-옥소시클로부틸)카바메이트 (1 g, 5.40 mmol) 및 벤질 4-아미노피페리딘-1-카복실레이트 (1.26 g, 5.40 mmol) 용액에 AcOH (324.22 mg, 5.40 mmol, 308.78 μL)를 20 °C에서 첨가한 후, NaBH3CN (1.02 g, 16.20 mmol)을 20 °C 에서 천천히 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(41%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (30 mL)로 희석하고 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 포화 NaHCO3 (30 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하였다. 여과물을 농축하여 황색 오일의 벤질 4-((3-((tert-부톡시카보닐)아미노)시클로부틸)아미노)피페리딘-1-카복실레이트 (2.1 g, 5.20 mmol, 96.39% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+= 404.2
단계 2. 벤질 4-((3-((tert-부톡시카보닐)아미노)시클로부틸)(메틸)아미노)피페리딘-1-카복실레이트 (3)의 합성
MeOH (10 mL) 내 벤질 4-((3-((tert-부톡시카보닐)아미노)시클로부틸)아미노)피페리딘-1-카복실레이트 (0.9 g, 2.23 mmol) 용액에 HOAc (133.94 mg, 2.23 mmol, 127.56 μL) 및 HCHO (362.00 mg, 4.46 mmol, 332.11 μL, 37% 순도)를 첨가하고, 혼합물을 20 °C 에서 30분간 교반 하였다. 이후 NaBH3CN (420.49 mg, 6.69 mmol)을 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량을 확인하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하였다. 잔여물을 EtOAc (10 mL)로 희석하고 H2O (20 mL x 3)로 세척하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 무색 오일의 벤질 4-((3-((tert-부톡시카보닐)아미노)시클로부틸)(메틸)아미노)피페리딘-1-카복실레이트 (1.2 g, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+= 418.4
단계 3. tert-부틸 (3-(메틸(피페리딘-4-일)아미노)시클로부틸)카바메이트 (4)의 합성
CF3CH2OH (10 mL) 내 벤질 4-((3-((tert-부톡시카보닐)아미노)시클로부틸)(메틸)아미노)피페리딘-1-카복실레이트 (1.2 g, 2.87 mmol) 용액에 N2 기체 하에서 Pd/C (0.2 g, 187.93 μmol, 10% 순도)를 첨가하고, 혼합물을 탈기하고 H2로 3차례 퍼지하고, 혼합물을 20 °C H2 (15 Psi) 하에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 대부분의 출발물질이 남아있음을 확인하였다. HOAc (3 mL)를 첨가하고, 혼합물을 20 °C H2 (15 Psi) 하에서 16시간 동안 추가로 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량을 확인하였다. 반응 혼합물을 여과하였다. 여과물을 감압 농축하여 흑색 고체의 tert-부틸 (3-(메틸(피페리딘-4-일)아미노)시클로부틸)카바메이트 (1.6 g, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+= 284.4
단계 4. tert-부틸 (3-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)(메틸)아미노)시클로부틸)카바메이트 (6)의 합성
DMSO (10 mL) 내 tert-부틸 (3-(메틸(피페리딘-4-일)아미노)시클로부틸)카바메이트 (1.6 g, 5.65 mmol) 용액에 DIPEA (1.09 g, 8.47 mmol, 1.48 mL) 및 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (779.71 mg, 2.82 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 100 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량을 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (100 mL)로 희석하고 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (30 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하고 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO; 20 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 50~100% EtOAc/석유 에터 to ~100% MeOH/EtOAc gradient @ 100 mL/분)로 정제한 후 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Luna C18 150 x 40 mm x 15μm; 이동상: [물 (FA) -ACN];B%: 8%-38%, 10 분)로 정제하고, 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 tert-부틸 (3-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)(메틸)아미노)시클로부틸)카바메이트 (120 mg, 175.68 μmol, 6.22% 수율, 79% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+= 540.5
단계 5. 4-(4-((3-아미노시클로부틸)(메틸)아미노)피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (7)의 합성
DCM (1 mL) 내 tert-부틸 (3-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)(메틸)아미노)시클로부틸)카바메이트 (120 mg, 222.38 μmol) 용액에 TFA (308.00 mg, 2.70 mmol, 0.2 mL)를 0 °C 에서 첨가하고, 혼합물을 20 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량을 확인하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하여 황색 오일의 4-(4-((3-아미노시클로부틸)(메틸)아미노)피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (130 mg, crude, TFA)을 수득하였다. MS(M+H)+= 440.4
단계 6. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(3-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)(메틸)아미노)시클로부틸)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 164)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (89.07 mg, 211.37 μmol), DIPEA (91.06 mg, 704.57 μmol, 122.72 μL) 및 HATU (133.95 mg, 352.28 μmol) 혼합물을 20 °C 에서 20분간 교반 하였다. 이후 DMF (2 mL) 내 4-(4-((3-아미노시클로부틸)(메틸)아미노)피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (130 mg, 234.86 μmol, TFA 염) 및 DIPEA (151.77 mg, 1.17 mmol, 204.54 μL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량을 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (50 mL)로 희석하고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (20 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하고 감압 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150 x 25 mm x 5μm; 이동상: [물 (NH4HCO3) - ACN]; B%: 42% - 72%, 8 분)로 정제하여 황색 고체의 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(3-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)(메틸)아미노)시클로부틸)-3-메톡시벤즈아미드 (31.3 mg, 35.28 μmol, 15.02% 수율, 95% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+= 843.7
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.08 (s, 1H), 8.43 (br d, J = 7.8 Hz, 1H), 8.30 (br d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.68 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.56 - 7.49 (m, 2H), 7.37 - 7.29 (m, 2H), 5.10 (br dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.88 (td, J = 6.8, 13.4 Hz, 1H), 4.21 - 4.12 (m, 1H), 4.03 (br t, J = 13.6 Hz, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.76 (br d, J = 10.9 Hz, 2H), 3.29 (br s, 3H), 2.95 - 2.81 (m, 4H), 2.68 - 2.60 (m, 3H), 2.42 (br d, J = 6.0 Hz, 2H), 2.10 (s, 3H), 2.07 - 2.00 (m, 1H), 1.99 - 1.89 (m, 2H), 1.70 (br s, 4H), 1.24 (br d, J = 6.7 Hz, 6H).
실시예 165. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(3-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)(메틸)아미노)시클로펜틸)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 165)의 합성
단계 1. tert-부틸 (3-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)(메틸)아미노)시클로펜틸)카바메이트 (3)의 합성
DCE (2 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(4-(메틸아미노)피페리딘-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (120 mg, 294.94 μmol, HCl 염) 및 tert-부틸 (3-옥소시클로펜틸)카바메이트 (105.78 mg, 530.89 μmol) 용액에 TEA (59.69 mg, 589.88 μmol, 82.10 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 20 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. NaBH(OAc)3 (187.53 mg, 884.82 μmol)를 첨가하고, 혼합물을 50 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(63%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 0 °C 에서 물 (15 mL)을 첨가하여 켄칭하고, 디클로로메탄 (25 mL x 2)으로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (15 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 감압 농축하고, 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO; 12 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% MeOH/EtOAc@ 50 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 tert-부틸 (3-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)(메틸)아미노)시클로펜틸)카바메이트 (160 mg, 288.99 μmol, 97.98% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=554.2
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 7.72-7.65 (m, 1H), 7.41-7.39 (m, 1H), 7.34 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 5.11 (dd, J = 5.4, 12.4 Hz, 1H), 4.04-4.00 (m, 1H), 3.95-3.85 (m, 2H), 3.83-3.73 (m, 1H), 3.05-2.93 (m, 2H), 2.89-2.59 (m, 7H), 2.50-2.37 (m, 1H), 2.28-1.98 (m, 8H), 1.95 (s, 2H), 1.89-1.79 (m, 1H), 1.74-1.51 (m, 2H), 1.44 (s, 9H).
단계 2. 4-(4-((3-아미노시클로펜틸)(메틸)아미노)피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (4)의 합성
DCM (1.5 mL) 내 tert-부틸 (3-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)(메틸)아미노)시클로펜틸)카바메이트 (160 mg, 288.99 μmol) 용액에 TFA (770.00 mg, 6.75 mmol, 500.00 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 20 °C 에서 0.5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 하나의 피크(80%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하여 황색 고체의 4-(4-((3-아미노시클로펜틸)(메틸)아미노)피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (100 mg, 176.19 μmol, 60.97% 수율, TFA 염)을 수득하였다. MS(M+H)+=454.3
단계 3. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(3-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)(메틸)아미노)시클로펜틸)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 165)의 합성
DMF (1.5 mL) 내 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (75 mg, 177.98 μmol) 및 4-(4-((3-아미노시클로펜틸)(메틸)아미노)피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (95.96 mg, 169.08 μmol, TFA 염) 용액에 HATU (101.51 mg, 266.97 μmol) 및 DIPEA (115.01 mg, 889.90 μmol, 155.00 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 20 °C 에서 3시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 하나의 피크(39%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 0 °C 에서 물 (15 mL)을 첨하가여 켄칭하고, EtOAc (30 mL x 2)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (15 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 잔여물을 얻었고, 이를 prep-TLC (SiO2, DCM: MeOH = 10:1) 후 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25 mm* 5 μm; 이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN]; B%: 40%-70%, 8 분)로 정제하고, 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(3-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)(메틸)아미노)시클로펜틸)-3-메톡시벤즈아미드 (13.7 mg, 14.87 μmol, 42.47% 수율, 93% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=857.2
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.09 (s, 1H), 8.37-8.29 (m, 1H), 8.25-8.17 (m, 2H), 7.92-7.83 (m, 1H), 7.73-7.62 (m, 1H), 7.55-7.44 (m, 2H), 7.38-7.28 (m, 2H), 5.14-5.03 (m, 1H), 4.94-4.83 (m, 1H), 4.33-4.31 (m, 1H), 4.09-3.99 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.79-3.72 (m, 2H), 3.30 (s, 3H), 2.91-2.84 (m, 5H), 2.77-2.75 (m, 2H), 2.17 (s, 3H), 2.05-2.03 (m, 2H), 1.96-1.85 (m, 2H), 1.79-1.71 (m, 4H), 1.63-1.40 (m, 3H), 1.28-1.23 (m, 6H).
실시예 166. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(3-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)피페리딘-4-일)(메틸)아미노)시클로헥실)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 166)의 합성
화합물 166은 실시예 165에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=871.2, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.07 (s, 1H), 8.34-8.26 (m, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.96 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.71-7.63 (m, 1H), 7.53-7.44 (m, 2H), 7.33 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 5.12-5.05 (m, 1H), 4.93-4.82 (m, 1H), 4.27-4.16 (m, 1H), 4.07-3.99 (m, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.80-3.70 (m, 2H), 3.32-3.29 (m, 3H), 2.94-2.87 (m, 5H), 2.72-2.70 (m, 2H), 2.26-2.18 (m, 3H), 2.08-1.89 (m, 3H), 1.82-1.65 (m, 7H), 1.62-1.53 (m, 2H), 1.48-1.41 (m, 1H), 1.27-1.20 (m, 6H).
실시예 167. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-3,3-디플루오로피페리딘-4-일)피페라진-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 167)의 합성
단계 1. 벤질 4-(1-(tert-부톡시카보닐)-3,3-디플루오로-1,2,3,6-테트라히드로피리딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (3)의 합성
톨루엔 (80 mL) 및 ACN (40 mL) 내 tert-부틸 3,3-디플루오로-4-옥소-피페리딘-1-카복실레이트 (4.7 g, 19.98 mmol) 및 벤질 피페라진-1-카복실레이트 (4.40 g, 19.98 mmol, 3.86 mL) 용액에 N2 하 20°C에서 AcOH (2.40 g, 39.96 mmol, 2.29 mL) 및 4A MS(5 g)를 첨가하고 생성된 혼합물을 120°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 모든 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량 피크(72%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여과물을 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (40 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~33% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 백색 고체의 벤질 4-(1-(tert-부톡시카보닐)-3,3-디플루오로-1,2,3,6-테트라히드로피리딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (7.2 g, 16.46 mmol, 82.37% 수율, 100% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 438.2
단계 2. tert-부틸 3,3-디플루오로-4-(피페라진-1-일)피페리딘-1-카복실레이트 (4)의 합성
THF (50 mL) 내 벤질 4-(1-(tert-부톡시카보닐)-3,3-디플루오로-1,2,3,6-테트라히드로피리딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (7.2 g, 16.46 mmol) 용액에 N2 기체 하 Pd/C (2 g, 10% 순도)를 첨가하였다. 현탁액을 H2로 3차례 퍼지 및 탈기하였다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하 20°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 THF (280 mL)로 희석하고 여과하였다. 여과물을 진공 농축하여 황색 오일의 tert-부틸 3,3-디플루오로-4-(피페라진-1-일)피페리딘-1-카복실레이트 (5.5 g, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 306.4
단계 3. tert-부틸 3,3-디플루오로-4-(4-니트로소피페라진-1-일)피페리딘-1-카복실레이트 (5)의 합성
H2O (60 mL) 내 tert-부틸 3,3-디플루오로-4-(피페라진-1-일)피페리딘-1-카복실레이트 (5.5 g, 18.01 mmol) 용액에 0°C에서 NaNO2 (3.73 g, 54.03 mmol)를 첨가하였다. 이후 0°C에서 AcOH (4.33 g, 72.05 mmol, 4.12 mL)를 한 방울씩 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 질량 (M-56)의 주 피크 (93%)를 확인하였다. 반응 혼합물의 pH를 포화 NaHCO3 (60 mL)로 9로 조정 후 EtOAc (120 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4 로 건조, 여과 및 농축하여 황색 고체의 tert-부틸 3,3-디플루오로-4-(4-니트로소피페라진-1-일)피페리딘-1-카복실레이트 (5.3 g, 15.85 mmol, 88.01% 수율)를 수득하였다. MS(M-56+H)+ = 279.4
단계 4. tert-부틸 4-(4-아미노피페라진-1-일)-3,3-디플루오로피페리딘-1-카복실레이트 (6)의 합성
THF (50 mL) 및 H2O (10 mL) 내 tert-부틸 3,3-디플루오로-4-(4-니트로소피페라진-1-일)피페리딘-1-카복실레이트 (5.3 g, 15.85 mmol) 용액에 0°C에서 NH4Cl (3.39 g, 63.40 mmol)를 첨가하였다. 이후 0°C에서 Zn (4.15 g, 63.40 mmol)를 조금씩 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 THF (60 mL)로 희석하고 여과하였다. 여과물을 진공 농축하여 황색 오일의 tert-부틸 4-(4-아미노피페라진-1-일)-3,3-디플루오로피페리딘-1-카복실레이트 (5.3 g, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 321.4
단계 5. tert-부틸 4-(4-(((벤질옥시)카보닐)아미노)피페라진-1-일)-3,3-디플루오로피페리딘-1-카복실레이트 (8)의 합성
THF (60 mL) 내 tert-부틸 4-(4-아미노피페라진-1-일)-3,3-디플루오로피페리딘-1-카복실레이트 (5.3 g, 16.54 mmol) 용액에 20°C에서 TEA (8.37 g, 82.71 mmol, 11.51 mL) 및 CbzCl (4.23 g, 24.81 mmol, 3.53 mL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 6시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 피크 (63%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (120 mL)로 희석 후 EtOAc (60 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (40 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~50% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 백색 고체의 tert-부틸 4-(4-(((벤질옥시)카보닐)아미노)피페라진-1-일)-3,3-디플루오로피페리딘-1-카복실레이트 (3.2 g, 7.04 mmol, 42.56% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 455.3
단계 6. 벤질 (4-(3,3-디플루오로피페리딘-4-일)피페라진-1-일)카바메이트 (9)의 합성
디옥산 (10 mL) 내 tert-부틸 4-(4-(((벤질옥시)카보닐)아미노)피페라진-1-일)-3,3-디플루오로피페리딘-1-카복실레이트 (2 g, 4.40 mmol) 용액에 20°C에서 HCl/디옥산 (4 M, 40 mL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 0.5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 주 피크 (96%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하여 백색 고체의 벤질 (4-(3,3-디플루오로피페리딘-4-일)피페라진-1-일)카바메이트 (1.6 g, crude, HCl)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 355.2
단계 7. 벤질 (4-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-3,3-디플루오로피페리딘-4-일)피페라진-1-일)카바메이트 (11)의 합성
DMSO (4 mL) 내 2-(2,6-디옥소-3-피페리딜)-4-플루오로-이소인돌린-1,3-디온 (300 mg, 1.09 mmol) 용액에 20°C에서 DIPEA (561.47 mg, 4.34mmol, 756.69 μL) 및 벤질(4-(3,3-다이플루오로피페리딘-4-일)피페라진-1-일)카바메이트 (424.50 mg, 1.09 mmol, HCl 염)를 첨가하고 생성된 혼합물을 120°C에서 36시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 피크 (40%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (15 mL)로 희석 후 EtOAc (15 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 염수 (15 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (10 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~60% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)에 이어 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi Polar-RP 100*25 mm*4μm; 이동상: [물 (TFA) - ACN]; B%: 29% - 49%, 7 분) 로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 벤질 (4-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-3,3-디플루오로피페리딘-4-일)피페라진-1-일)카바메이트 (68 mg, 111.36 μmol, 10.25% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 611.2
단계 8. 4-(4-(4-아미노피페라진-1-일)-3,3-디플루오로피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (12)의 합성
TFA (3 mL) 내 벤질 (4-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-3,3-디플루오로피페리딘-4-일)피페라진-1-일)카바메이트 (68 mg, 111.36 μmol) 혼합물을 50°C에서 3시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 피크 (50%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하여 황색 오일의 4-(4-(4-아미노피페라진-1-일)-3,3-디플루오로피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (58 mg, crude, HCl 염)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 477.2
단계 9. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-3,3-디플루오로피페리딘-4-일)피페라진-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 167)의 합성
DMF (1 mL) 내 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (30 mg, 71.19 μmol) 용액에 HATU (29.78 mg, 78.31 μmol) 및 DIPEA (18.40 mg, 142.38 μmol, 24.80 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 20°C에서 10분 동안 교반하고 DMF (1 mL) 내 4-(4-(4-아미노피페라진-1-일)-3,3-디플루오로피페리딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (54.65 mg, 92.55μmol, TFA 염) 용액을 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 피크 (32%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (10 mL)로 희석 후 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 염수 (10 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi Polar-RP 100*25 mm*4μm; 이동상: [물 (TFA) - ACN]; B%: 28% - 48%, 7 분) 및 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex C18 75*30 mm*3μm; 이동상: [물 (FA) -ACN];B%: 22%-52%, 7 분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-3,3-디플루오로피페리딘-4-일)피페라진-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (7.1 mg, 7.51 μmol, 10.55% 수율, 95% 순도, 0.4FA)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 880.3
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.26 - 10.93 (m, 1H), 9.30 (s, 1H), 8.36 - 8.31 (m, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.71 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.48 - 7.35 (m, 4H), 5.11 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.93 - 4.83 (m, 1H), 4.04 (br t, J = 13.4 Hz, 2H), 3.98 - 3.83 (m, 5H), 3.32 (br s, 3H), 3.24 - 3.03 (m, 3H), 2.98 - 2.79 (m, 9H), 2.64 - 2.57 (m, 2H), 2.16 - 1.99 (m, 2H), 1.98 - 1.86 (m, 1H), 1.24 (d, J = 6.7 Hz, 6H).
실시예 168. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)-3,3-디플루오로피페리딘-4-일)피페라진-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 168)의 합성
화합물 168은 실시예 167에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+ = 880.3, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.08 (br s, 1H), 9.29 (s, 1H), 8.30 (br d, J = 8.2 Hz, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.68 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.43 (br d, J = 11.4 Hz, 3H), 7.38 - 7.32 (m, 1H), 5.08 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.92 - 4.83 (m, 1H), 4.46 - 4.35 (m, 1H), 4.26 - 4.16 (m, 1H), 4.09 - 3.99 (m, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.44 - 3.36 (m, 1H), 3.32 (s, 3H), 3.25 - 3.10 (m, 2H), 2.95 - 2.75 (m, 9H), 2.62 - 2.54 (m, 2H), 2.07 - 1.97 (m, 1H), 1.96 - 1.79 (m, 2H), 1.24 (d, J = 6.7 Hz, 6H).
실시예 169. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-(1-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸)피페리딘-4-일)아세틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 169)의 합성
단계 1. tert-부틸 4-(2-(4-(((벤질옥시)카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-2-옥소에틸)피페리딘-1-카복실레이트 (2)의 합성
DCM (30 mL) 내 2-(1-(tert-부톡시카보닐)피페리딘-4-일)아세트산 (0.96 g, 3.95 mmol) 및 벤질 피페리딘-4-일카바메이트 (924.47 mg, 3.95 mmol) 혼합물에 25°C에서 HOBt (586.47 mg, 4.34 mmol), EDCI (832.04 mg, 4.34 mmol) 및 TEA (1.20 g, 11.84 mmol, 1.65 mL)를 첨가하고 혼합물을 25°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크 (92%)를 확인하였다. 혼합물을 염수 (10 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 (5 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 60 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 tert-부틸 4-(2-(4-(((벤질옥시)카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-2-옥소에틸)피페리딘-1-카복실레이트 (1.6 g, 3.45 mmol, 87.35% 수율, 99% 순도)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+ = 460.2
단계 2. 벤질 (1-(2-(피페리딘-4-일)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (3)의 합성
DCM (5 mL) 내 tert-부틸 4-(2-(4-(((벤질옥시)카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-2-옥소에틸)피페리딘-1-카복실레이트 (0.4 g, 870.37 μmol) 용액에 25°C에서 TFA (1.54 g, 13.51 mmol, 1 mL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 25°C에서 0.5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물 용액을 30°C에서 진공 농축하여 황색 오일의 벤질 (1-(2-(피페리딘-4-일)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (0.4 g, 819.46 μmol, 94.15% 수율, 97% 순도, TFA)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 360.1
단계 3. 벤질 (1-(2-(1-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸)피페리딘-4-일)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (4)의 합성
DMF (5 mL) 내 벤질(1-(2-(피페리딘-4-일)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (372.07 mg, 939.76 μmol, TFA), DIPEA (441.67 mg, 3.42 mmol, 595.24 μL) 혼합물에 25°C에서 4-(브로모메틸)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (300 mg, 854.33 μmol)를 첨가하고 혼합물을 25°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-(브로모메틸)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 피크 (60 %)를 확인하였다. 혼합물을 물 (10 mL)에 붓고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (10 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (5 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 50 mL/분; Eluent of 0~50% MeOH/EtOAc @ 50 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 벤질 (1-(2-(1-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸)피페리딘-4-일)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (0.25 g, 381.13 μmol, 44.61% 수율, 96% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 630.2
단계 4. 4-((4-(2-(4-아미노피페리딘-1-일)-2-옥소에틸)피페리딘-1-일)메틸)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (5)의 합성
TFA (3.08 g, 27.01 mmol, 2 mL) 내 벤질 (1-(2-(1-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸)피페리딘-4-일)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (0.25 g, 397.01 μmol) 용액을 40°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 피크 (62 %)를 확인하였다. 혼합물 용액을 진공 농축하여 갈색 오일의 4-((4-(2-(4-아미노피페리딘-1-일)-2-옥소에틸)피페리딘-1-일)메틸)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (0.28 g, crude, TFA)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 496.1
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-(1-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸)피페리딘-4-일)아세틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 169)의 합성
DMF (3 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (80 mg, 178.80 μmol) 용액에 HATU (88.38 mg, 232.44 μmol) 및 DIPEA (138.65 mg, 1.07 mmol, 186.86 μL)를 첨가하고 혼합물을 25°C에서 10분 동안 교반 하였다. 혼합물에 4-((4-(2-(4-아미노피페리딘-1-일)-2-옥소에틸)피페리딘-1-일)메틸)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (196.19 mg, 321.83 μmol, TFA)을 첨가하고 생성된 혼합물을 25°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-((4-(2-(4-아미노피페리딘-1-일)-2-옥소에틸)피페리딘-1-일)메틸)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 피크 (75%)를 확인하였다. 혼합물 용액을 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (5 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 50 mL/분; Eluent of 0~50% MeOH/EtOAc @ 50 mL/분)로 정제하였다. 조 생성물을 prep-HPLC (컬럼: Unisil 3-100 C18 Ultra 150 x 50 mm x 3 μm; 이동상: [물 (FA) - ACN]; B%: 10%-40%, 10 분)로 재정제하고 용출물을 동결 건조하여 백색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-(1-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸)피페리딘-4-일)아세틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (37.9 mg, 38.11 μmol, 11.75% 수율, 93% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 925.2
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.12 (s, 1H), 8.30 - 8.22 (m, 2H), 8.18 - 8.10 (m, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.92 - 7.87 (m, 1H), 7.87 - 7.77 (m, 2H), 7.51 - 7.43 (m, 2H), 5.14 (br d, J = 5.5 Hz, 1H), 4.83 - 4.69 (m, 1H), 4.45 - 4.40 (m, 1H), 4.10 - 4.01 (m, 4H), 3.96 - 3.86 (m, 5H), 3.32 (br s, 3H), 3.13 - 3.06 (m, 1H), 2.94 - 2.80 (m, 3H), 2.72 - 2.55 (m, 3H), 2.55 - 2.51 (m, 2H), 2.31 - 2.20 (m, 2H), 2.12 - 2.02 (m, 2H), 1.99 - 1.90 (m, 2H), 1.89 - 1.76 (m, 2H), 1.73 - 1.64 (m, 4H), 1.63 - 1.50 (m, 4H), 1.50 - 1.34 (m, 2H), 1.32 - 1.19 (m, 2H)
실시예 170. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(1-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸)피페리딘-4-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 170)의 합성
화합물 170은 실시예 169에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+ = 939.3, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.12 (s, 1H), 8.33 - 8.22 (m, 2H), 8.14 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.93 - 7.87 (m, 1H), 7.87 - 7.72 (m, 2H), 7.53 - 7.39 (m, 2H), 5.13 (dd, J = 5.4, 12.7 Hz, 1H), 4.76 (quin, J = 8.0 Hz, 1H), 4.38 (br d, J = 12.8 Hz, 1H), 4.13 - 3.99 (m, 3H), 3.98 - 3.82 (m, 6H), 3.42 (br d, J = 6.6 Hz, 3H), 3.11 (br t, J = 12.1 Hz, 1H), 2.95 - 2.79 (m, 3H), 2.66 - 2.55 (m, 3H), 2.35 - 2.31 (m, 2H), 2.11 - 1.98 (m, 3H), 1.93 (br dd, J = 3.7, 6.7 Hz, 2H), 1.89 - 1.78 (m, 2H), 1.74 - 1.63 (m, 4H), 1.63 -1.50 (m, 4H), 1.50 - 1.33 (m, 4H), 1.28 - 1.12 (m, 3H).
실시예 171. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-((2R)-4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸)모르폴린-2-일)아세틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 171)의 합성
단계 1. (S)-tert-부틸 2-(((메틸술포닐)옥시)메틸)모르폴린-4-카복실레이트 (2)의 합성
DCM (50 mL) 내 (S)-tert-부틸 2-(히드록시메틸)모르폴린-4-카복실레이트 (5 g, 23.01 mmol) 용액에 0°C에서 TEA (4.66 g, 46.03 mmol, 6.41 mL) 및 MsCl (3.43 g, 29.92 mmol, 2.32 mL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 하나의 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 0°C에서 H2O (50 mL)에 부었다. 수층을 DCM (50 mL x 3)으로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조, 여과 및 농축하여 주황색 오일의 (S)-tert-부틸 2-(((메틸술포닐)옥시)메틸)모르폴린-4-카복실레이트 (7.1 g, crude)를 수득하였다. MS(M-100+H)+ = 196.5
단계 2. (R)-tert-부틸 2-(시아노메틸)모르폴린-4-카복실레이트 (3)의 합성
DMSO (80 mL) 내 (S)-tert-부틸 2-(((메틸술포닐)옥시)메틸)모르폴린-4-카복실레이트 (7.1 g, 24.04 mmol) 용액에 20°C에서 KI (5.99 g, 36.06 mmol) 및 KCN (1.64 g, 25.19 mmol, 1.08 mL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 100°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량 (질량-99)의 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (80 mL)로 희석 후 EtOAc (80 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 염수 (80 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조, 여과 및 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (40 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~33% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 백색 고체의 (R)-tert-부틸 2-(시아노메틸)모르폴린-4-카복실레이트 (4.1 g, 18.12 mmol, 75.38% 수율)를 수득하였다. MS(M-100+H)+ = 127.7
단계 3. (R)-2-(4-((벤질옥시)카보닐)모르폴린-2-일)아세트산 (4)의 합성
20°C에서 HCl (6M, 40 mL) 내 (R)-tert-부틸 2-(시아노메틸)모르폴린-4-카복실레이트 (4.1 g, 18.12 mmol) 혼합물 및 생성된 혼합물을 100°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 NaOH를 반응 혼합물에 0°C에서 첨가하여 pH=7로 조정하였다. 반응 혼합물 용액에 THF (40 mL) 및 H2O (30 mL) 내 K2CO3 (7.51 g, 54.36 mmol) 및 CbzCl (4.64 g, 27.18 mmol, 3.86 mL) 용액을 20°C에서 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. HCl (12 N)을 수층에 첨가하여 pH = 4로 조정하였고 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조, 여과 및 농축하여 황색 오일의 (R)-2-(4-((벤질옥시)카보닐)모르폴린-2-일)아세트산 (3.4 g, 11.32 mmol, 62.48% 수율, 93% 순도)을 수득하였다. SFC (retention time=1.153, method: "컬럼: Chiralpak AD-3 50Х4.6 mm I. D. 3μm 이동상: Phase A for CO2, 및 Phase B for MeOH (0.05%DEA); Gradient elution:MeOH (0.05% DEA) in CO2 from 5% to 40% Flow rate: 3mL/분;검출기: PDA;컬럼 온도: 35C;Back Pressure: 100Bar"). MS(M+H)+ = 280.4
단계 4. (R)-벤질 2-(2-(4-((tert-부톡시카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-2-옥소에틸)모르폴린-4-카복실레이트 (5)의 합성
DCM (6 mL) 내 (R)-2-(4-((벤질옥시)카보닐)모르폴린-2-일)아세트산 (600 mg, 2.15 mmol) 용액에 HATU (898.54 mg, 2.36 mmol) 및 DIPEA (832.97 mg, 6.44 mmol, 1.12 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 20°C에서 10분 동안 교반 후 DCM (6 mL) 내 tert-부틸 N-(4-피페리딜)카바메이트 (516.31 mg, 2.58 mmol) 용액을 20°C에서 한 방울씩 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (10 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~50% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 (R)-벤질 2-(2-(4-((tert-부톡시카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-2-옥소에틸)모르폴린-4-카복실레이트 (910 mg, 1.75 mmol, 81.68% 수율, 89% 순도)를 수득하였다. MS(M-100+H)+ = 362.2
단계 5. (R)-tert-부틸 (1-(2-(모르폴린-2-일)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (6)의 합성
CF3CH2OH (10 mL) 내 (R)-벤질 2-(2-(4-((tert-부톡시카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-2-옥소에틸)모르폴린-4-카복실레이트 (900 mg, 1.95 mmol) 용액에 N2 기체 하 Pd/C (90 mg, 195.00 μmol, 19.50 μL, 10% 순도)를 첨가하였다. 현탁액을 H2로 3차례 탈기 및 퍼지하였다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하 20°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 CF3CH2OH (30 mL)로 희석 후 여과했다. 여과물을 진공 농축하여 무색 오일의 (R)-tert-부틸 (1-(2-(모르폴린-2-일)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (601 mg, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 328.4
단계 6. tert-부틸 (1-(2-((2R)-4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸)모르폴린-2-일)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (7)의 합성
DMF (6 mL) 내 (R)-tert-부틸 (1-(2-(모르폴린-2-일)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (341.26 mg, 1.04 mmol) 용액에 20°C에서 DIPEA (336.77 mg, 2.61 mmol, 453.87 μL) 및 4-(브로모메틸)-2-(2,6-디옥소-3-피페리딜) 이소인돌린-1,3-디온 (305 mg, 868.57 μmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 하나의 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (12 mL)로 희석 후 EtOAc (12 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 염수 (12 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조, 여과 및 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (4 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 60 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 tert-부틸 (1-(2-((2R)-4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸)모르폴린-2-일)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (410 mg, 651.71 μmol, 75.03% 수율, 95% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 598.2
단계 7. 4-(((R)-2-(2-(4-아미노피페리딘-1-일)-2-옥소에틸)모르폴리노)메틸)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (8)의 합성
디옥산 (4 mL) 내 tert-부틸 (1-(2-((2R)-4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸)모르폴린-2-일)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (410 mg, 686.01 μmol) 용액에 20°C에서 HCl/디옥산 (4 M, 12 mL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 하나의 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하여 백색 고체의 4-(((R)-2-(2-(4-아미노피페리딘-1-일)-2-옥소에틸)모르폴리노)메틸)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (402 mg, crude, HCl)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 498.3
단계 8. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-((2R)-4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸)모르폴린-2-일)아세틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 171)의 합성
DMF (3 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2일)아미노)-3-메톡시벤조산 (120 mg, 268.20 μmol) 용액에 HATU (112.17 mg, 295.02 μmol) 및 DIPEA (69.32 mg, 536.39 μmol, 93.43 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 20°C에서 10분 동안 교반 후 DMF (3 mL) 내 4-(((R)-2-(2-(4-아미노피페리딘-1-일)-2-옥소에틸)모르폴리노)메틸)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (157.54 mg, 295.02 μmol, HCl) 용액 및 DIPEA (69.32 mg, 536.39 μmol, 93.43 μL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 하나의 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (12 mL)로 희석 후 EtOAc (12 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조, 여과 및 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Unisil 3-100 C18 Ultra 150*50 mm*3 μm; 이동상: [물 (FA) -ACN];B%: 12%-42%, 10분)로 정제 후 동결 건조하여 백색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-((2R)-4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸)모르폴린-2-일)아세틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (87.8 mg, 92.82 μmol, 34.61% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 926.8
SFC (retention time: peak 1=0.729, peak 2=3.253; method:"컬럼: Chiralpak AD-3 50Х4.6mm I. D., 3μm이동상: Phase A for CO2, 및 Phase B for IPA+ACN (0.05%DEA);Gradient elution: 60% IPA+ACN (0.05% DEA) in CO2 Flow rate: 3mL/분;검출기: PDA 컬럼 온도: 35C;Back Pressure: 100Bar").
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.12 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.15 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.92 (dd, J = 1.3, 7.4 Hz, 1H), 7.88 - 7.78 (m, 3H), 7.02 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.94 (dd, J = 1.7, 8.2 Hz, 1H), 5.13 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.75 - 4.66 (m, 1H), 4.57 - 4.09 (m, 1H), 4.02 (t, J = 14.1 Hz, 2H), 3.95 (s, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.86 - 3.67 (m, 4H), 3.54 - 3.46 (m, 1H), 3.32 (s, 3H), 3.16 - 2.96 (m, 2H), 2.92 - 2.80 (m, 1H), 2.79 - 2.72 (m, 1H), 2.70 - 2.52 (m, 3H), 2.29 - 2.22 (m, 1H), 2.19 - 2.11 (m, 2H), 2.09 - 2.01 (m, 1H), 1.95 - 1.84 (m, 3H), 1.79 - 1.62 (m, 4H), 1.62 - 1.47 (m, 4H), 1.38 - 1.20 (m, 2H).
실시예 172. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-((2S)-4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸)모르폴린-2-일)아세틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 172)의 합성
화합물 172는 실시예 171에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+ = 927.1, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.12 (br s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.15 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.92 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.89 - 7.77 (m, 3H), 7.02 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 6.94 (dd, J = 1.3, 8.3 Hz, 1H), 5.13 (dd, J = 5.3, 12.8 Hz, 1H), 4.76 - 4.65 (m, 1H), 4.41 - 4.09 (m, 1H), 4.02 (t, J = 14.1 Hz, 2H), 3.95 (s, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.85 - 3.69 (m, 4H), 3.50 (dd, J = 9.4, 11.2 Hz, 1H), 3.32 (s, 3H), 3.15 - 2.96 (m, 2H), 2.94 - 2.84 (m, 1H), 2.76 (br d, J = 10.9 Hz, 1H), 2.69 - 2.60 (m, 2H), 2.56 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 2.29 - 2.21 (m, 1H), 2.19 - 2.10 (m, 2H), 2.08 - 2.05 (m, 1H), 1.95 - 1.85 (m, 3H), 1.79 - 1.63 (m, 4H), 1.62 - 1.51 (m, 4H), 1.38 - 1.21 (m, 2H).
실시예 173. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-((2R)-4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸)모르폴린-2-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 173)의 합성
단계 1. tert-부틸 (S)-2-포르밀모르폴린-4-카복실레이트 (2)의 합성
DMSO (40 mL) 내 tert-부틸 (2S)-2-(히드록시메틸)모르폴린-4-카복실레이트 (3 g, 13.81 mmol) 용액에 20°C에서 IBX (7.73 g, 27.62 mmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 16시간 동안 교반 하였다. TLC (SiO2, EtOAc)에서 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 3개의 새로운 스팟을 확인하였다. 반응 혼합물을 워크업을 위해 다른 스케일 (1 g)과 합쳤다. 반응 혼합물을 여과하였다. 여과물을 H2O (30 mL)로 희석 후 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 염수 (30 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 로 건조하고, 여과하고 농축하여 황색 오일의 tert-부틸 (S)-2-포르밀모르폴린-4-카복실레이트 (1.1 g, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 216.3
단계 2. tert-부틸 (R,E)-2-(3-에톡시-3-옥소프로프-1-엔-1-일)모르폴린-4-카복실레이트 (3)의 합성
톨루엔 (10 mL) 내 tert-부틸 (S)-2-포르밀모르폴린-4-카복실레이트 (1.1 g, 5.11 mmol) 용액에 20°C에서 에틸 2-(트리페닐-λ5-포스파닐리덴)아세테이트 (1.96 g, 5.62 mmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 90°C에서 16시간 동안 교반 하였다. TLC (SiO2, 석유 에터: EtOAc = 5:1)에서 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 2개의 새로운 스팟을 확인하였다. 반응 혼합물을 워크업을 위해 다른 스케일 (0.8 g)과 합쳤다. 반응 혼합물을 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (10 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~10 % EtOAc/석유 에터 gradient @ 80 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 tert-부틸 (R,E)-2-(3-에톡시-3-옥소프로프-1-엔-1-일)모르폴린-4-카복실레이트 (844 mg, 1.65 mmol, 32.37% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 286.3
단계 3. (R,E)-3-(4-(tert-부톡시카보닐)모르폴린-2-일)아크릴산 (4)의 합성
MeOH (8 mL), THF (8 mL) 및 H2O (8 mL) 내 tert-부틸 (R,E)-2-(3-에톡시-3-옥소프로프-1-엔-1-일)모르폴린-4-카복실레이트 (840 mg, 2.94 mmol) 용액에 20°C에서 NaOH (1.18 g, 29.44 mmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. HCl (12 M)를 반응 혼합물에 첨가하여 pH=5~6으로 조정했다. 수층을 EtOAc (15 mL x 4)로 추출했다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과 후 농축하여 황색 오일의 (R,E)-3-(4-(tert-부톡시카보닐)모르폴린-2-일)아크릴산 (715 mg, 2.78 mmol, 94.40% 수율)을 수득하였다. MS(M+Na)+ = 280.4
단계 4. (R,E)-2-(3-(4-(((벤질옥시)카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-3-옥소프로프-1-엔-1-일)모르폴린-4-카복실레이트 (5)의 합성
DCM (5 mL) 내 (R,E)-3-(4-(tert-부톡시카보닐)모르폴린-2-일)아크릴산 (400 mg, 1.55 mmol) 용액에 HATU (650.26 mg, 1.71 mmol) 및 DIPEA (602.81 mg, 4.66 mmol, 812.41 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 20°C에서 10분 동안 교반 후 DCM (5 mL) 내 벤질 N-(4-피페리딜) 카바메이트 (400.69 mg, 1.71 mmol) 용액을 20°C에서 한 방울씩 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 모든 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 피크 (71 %)를 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (20 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~60% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 (R,E)-2-(3-(4-(((벤질옥시)카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-3-옥소프로프-1-엔-1-일)모르폴린-4-카복실레이트 (482 mg, 916.04 μmol, 58.92% 수율, 90% 순도)를 수득하였다. SFC (retention time: 1.572; method: 컬럼: Chiralcel OD-350Х4.6 mm I.D., 3μm; 이동상: Phase A for CO2, 및 Phase B for MeOH (0.05% DEA); Gradient elution: B in A from 5% to 40%; Flow rate: 3 mL/분; 검출기: DAD; 컬럼 온도: 35 oC; Back Pressure: 100 Bar). MS(M-56+H)+=418.3
단계 5. 벤질 (R,E)-(1-(3-(모르폴린-2-일)아크릴로일)피페리딘-4-일)카바메이트 (6)의 합성
DCM (10 mL) 내 tert-부틸 (R,E)-2-(3-(4-(((벤질옥시)카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-3-옥소프로프-1-엔-1-일)모르폴린-4-카복실레이트 (482 mg, 1.02 mmol) 용액에 20°C에서 TFA (464.22 mg, 4.07 mmol, 301.44 μL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 피크 (87 %)를 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하여 황색 오일의 벤질 (R,E)-(1-(3-(모르폴린-2-일)아크릴로일)피페리딘-4-일)카바메이트 (496 mg, crude, TFA)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 374.4
단계 6. 벤질 (1-((E)-3-((2R)-4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸)모르폴린-2-일)아크릴로일)피페리딘-4-일)카바메이트 (7)의 합성
DMF (4 mL) 내 4-(브로모메틸)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (100 mg, 284.78 μmol) 용액에 20°C에서 DIPEA (184.03 mg, 1.42 mmol, 248.02 μL), NaI (8.54 mg, 56.96 μmol) 및 벤질(R,E)-(1-(3-(모르폴린-2-일)아크릴로일)피페리딘-4-일)카바메이트 (152.70 mg, 313.25 μmol, TFA)를 첨가하였다. 혼합물을 20°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 피크 (54%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (12 mL)로 희석 후 EtOAc (12 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 염수 (12 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (4 g, SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 60 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 벤질 (1-((E)-3-((2R)-4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸)모르폴린-2-일)아크릴로일)피페리딘-4-일)카바메이트 (132 mg, 186.61 μmol, 66.73% 수율, 91% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 644.1
단계 7. 벤질 (1-(3-((2R)-4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸)모르폴린-2-일)프로파노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (8)의 합성
CF3CH2OH (5 mL) 내 벤질 (1-((E)-3-((2R)-4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸)모르폴린-2-일)아크릴로일)피페리딘-4-일)카바메이트 (132mg, 205.07μmol) 용액에 N2 기체 하 Rh(PPh3)3Cl (189.73 mg, 205.07 μmol)를 첨가했다. 현탁액을 H2 하 3차례 탈기 및 퍼지하고 생성된 혼합물을 H2 (15 Psi)하 20°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 피크 (23 %)가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하여 황색 고체의 벤질 (1-(3-((2R)-4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸)모르폴린-2-일)프로파노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (202 mg, 96.98 μmol, 47.29% 수율, 31% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 646.1
단계 8. 4-(((R)-2-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)모르폴리노)메틸)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (9)의 합성
DCM (4 mL) 내 벤질 (1-(3-((2R)-4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸)모르폴린-2-일)프로파노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (202 mg, 96.98 μmol, 31% 순도) 용액에 20°C에서 TFA (110.58 mg, 969.80 μmol, 71.80 μL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 50°C에서 32시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 피크 (12 %)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (10 mL)로 희석 후 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하였다. 수층을 동결 건조하여 생성물 A를 수득하였다. 생성물 A를 prep-HPLC (컬럼: 3_Phenomenex Luna C18 75 * 30 mm * 3 μm; 이동상: [물 (HCl) - ACN]; B%: 0%-12%, 7 분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 백색 고체의 4-(((R)-2-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)모르폴리노)메틸)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (15 mg, 26.82 μmol, 35.70% 수율, 98% 순도, HCl)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 512.2
단계 9. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-((2R)-4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸)모르폴린-2-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 173)의 합성
DMF (1 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (10 mg, 22.35 μmol) 용액에 HATU (9.35 mg, 24.58 μmol) 및 DIPEA (5.78 mg, 44.70 μmol, 7.79 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 20°C에서 10분 동안 교반 후 DMF (1 mL) 내 4-(((R)-2-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)모르폴리노)메틸)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (12.25 mg, 22.35 μmol, HCl) 용액 및 DIPEA (5.78 mg, 44.70 μmol, 7.79 μL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 모든 출발물질이 완전히 소모됨을 확인하였고 원하는 질량의 피크 (71 %)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (8 mL)로 희석 후 EtOAc (8 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 염수 (8 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi C18 150 * 25 mm * 10 μm; 이동상: [물 (FA) - ACN]; B%: 14%-44%, 10 분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 백색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-((2R)-4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸)모르폴린-2-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (7.8 mg, 7.93 μmol, 35.48% 수율, 98% 순도, 0.5FA)를 수득하였다. SFC (retention time: peak 1 = 0.595, peak 2 = 2.530; method: "컬럼: Chiralpak AD-3 50Х4.6 mm I.D., 3μm이동상: Phase A for CO2, 및 Phase B for IPA+ACN (0.05%DEA); Gradient elution: 60% IPA+ACN (0.05% DEA) in CO2 Flow rate: 3 mL/분; 검출기: PDA컬럼 온도: 35 oC;Back Pressure: 100 Bar "). MS(M+H)+ = 941.0
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.21 - 10.99 (m, 1H), 8.45 - 8.38 (m, 1H), 8.30 - 8.24 (m, 2H), 8.13 (br dd, J = 3.1, 7.4 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.94 - 7.90 (m, 1H), 7.87 - 7.80 (m, 2H), 7.51 - 7.43 (m, 2H), 5.13 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.82 - 4.71 (m, 1H), 4.39 - 4.35 (m, 1H), 4.09 - 4.01 (m, 3H), 3.98 - 3.91 (m, 5H), 3.91 - 3.83 (m, 1H), 3.79 - 3.73 (m, 1H), 3.54 - 3.38 (m, 5H), 3.14 - 3.05 (m, 1H), 2.94 - 2.83 (m, 1H), 2.82 - 2.76 (m, 1H), 2.65 - 2.53 (m, 4H), 2.43 - 2.36 (m, 2H), 2.20 - 2.11 (m, 1H), 2.10 - 2.01 (m, 1H), 1.98 - 1.77 (m, 5H), 1.75 - 1.66 (m, 2H), 1.65 - 1.52 (m, 6H), 1.50 - 1.31 (m, 2H).
실시예 174. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-((2S)-4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸)모르폴린-2-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 174)의 합성
화합물 174는 실시예 173에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+ = 941.4, 1H NMR (400 Hz, DMSO-d 6) δ = 11.13 (br s, 1H), 8.30 - 8.25 (m, 2H), 8.15 (br d, J = 3.4 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.93 (br d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.84 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 7.50 - 7.46 (m, 2H), 5.14 (dd, J = 5.3, 12.8 Hz, 1H), 4.79 - 4.76 (m, 1H), 4.40 - 4.33 (m, 1H), 4.11 - 3.98 (m, 4H), 3.97 - 3.92 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.89 - 3.87 (m, 1H), 3.79 - 3.77 (m, 1H), 3.52 - 3.41 (m, 1H), 3.32 (br s, 3H), 3.33 - 3.24 (m, 1H), 3.11 - 3.09 (m, 1H), 2.94 - 2.85 (m, 1H), 2.79 - 2.76 (m, 1H), 2.70 - 2.63 (m, 4H), 2.40 - 2.38 (m, 2H), 2.17 - 2.04 (m, 2H), 1.99 - 1.77 (m, 6H), 1.73 - 1.71 (m, 2H), 1.60 - 1.57 (m, 4H), 1.47 - 1.36 (m, 2H).
실시예 175. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 175)의 합성
단계 1. tert-부틸 (1-(3-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)프로파노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (3)의 합성
DMF (15 mL) 내 3-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)프로판산 (1.7 g, 3.99 mmol) 및 tert-부틸 피페리딘-4-일카바메이트 (800 mg, 3.99 mmol) 용액에 EDCI (1.15 g, 5.98 mmol), HOBt (1.08 g, 7.97 mmol) 및 DIPEA (1.55 g, 11.96 mmol, 2.08 mL)를 첨가하고 혼합물을 20°C에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 85%의 원하는 질량이 검출됨 및 출발물질이 소모되었음을 확인하였다. 혼합물을 H2O (30 mL)로 희석 후 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하고, 합쳐진 유기상을 염수 (10 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하여 여과하였다. 잔여물을 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (12 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 2~30% EtOH/EtOAc gradient @ 50 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 tert-부틸 (1-(3-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)프로파노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (280 mg, 460.01 μmol, 11.54% 수율, 100% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 609.3
단계 2. 4-(6-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (4)의 합성
DCM (15 mL) 내 tert-부틸 (1-(3-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)프로파노일)피페리딘-4-일)카바메이트(130 mg, 213.58 μmol) 용액에 -10°C에서 TFA (400.40 mg, 3.51 mmol, 260.00 μL)를 첨가하고 혼합물을 -10°C에서 1.5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 74%의 원하는 질량이 검출됨 및 19%의 출발물질이 남아있음을 확인하였다. 혼합물을 -5°C에서 30분동안 교반 하였다. LCMS로 97%의 원하는 질량이 검출됨 및 출발물질이 소모됨을 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하여 황색 오일의 4-(6-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (160 mg, crude, 2TFA)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 509.1
단계 3. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 175)의 합성
DMF (1 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (70 mg, 150.40 μmol) 용액에 HATU (86 mg, 226.18 μmol) 및 DIPEA (29.68 mg, 229.64 μmol, 40 μL)를 첨가하고 혼합물을 20°C에서 15분 동안 교반 하였다. 이후 DMF (1 mL) 내 4-(6-(3-(4-아미노피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (160 mg, 217.21 μmol, 2TFA) 및 DIPEA (192.92 mg, 1.49 mmol, 260 μL) 용액을 -15°C에서 첨가하고 혼합물을 0°C에서 45분 동안 교반 하였다. 혼합물을 H2O (10 mL)로 희석 후 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하고, 합쳐진 유기상을 염수 (10 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 로 건조하여 여과하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 prep-TLC (디클로로메탄: 메탄올=10:1)로 정제하여 생성물 (50 mg, 93% 순도)를 수득하였고 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25mm* 5μm; 이동상: [물(10mM NH4HCO3)-ACN];B%: 41%-71%, 분)로 정제 및 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (32.7 mg, 33.52 μmol, 22.29% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 956.3
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.08 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.25 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 8.01 - 7.97 (m, 1H), 7.59 - 7.54 (m, 1H), 7.20 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 6.78 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.09 - 5.01 (m, 1H), 4.86 - 4.77 (m, 1H), 4.34 - 4.20 (m, 5H), 4.08 (t, J = 13.7 Hz, 2H), 4.03 - 3.96 (m, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.88 - 3.80 (m, 1H), 3.30 - 3.24 (m, 7H), 3.18 - 3.07 (m, 1H), 2.94 - 2.81 (m, 2H), 2.77 - 2.69 (m, 1H), 2.62 - 2.53 (m, 2H), 2.35 - 2.28 (m, 2H), 2.04 - 1.93 (m, 3H), 1.91 - 1.76 (m, 3H), 1.76 - 1.69 (m, 2H), 1.68 - 1.56 (m, 4H), 1.52 - 1.31 (m, 2H).
실시예 176. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)부타노일)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 176)의 합성
단계 1. 메틸 4-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)부타노에이트 (3)의 합성
DCM (15 mL) 내 tert-부틸 6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-카복실레이트 (1.1 g, 2.42 mmol) 용액에 TFA (2.76 g, 24.20 mmol, 1.79 mL)를 첨가하고 혼합물을 20°C에서 5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 68%의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)이소인돌린-1,3-디온 질량이 검출되었음을 확인하였다. TEA (2.45 g, 24.20 mmol, 3.37 mL)를 0°C에서 첨가 후 DCM (5 mL) 내 메틸 4-옥소부타노에이트(843 mg, 7.26 mmol) 용액을 첨가하고 혼합물을 0°C에서 15분 동안 교반 하였다. NaBH(OAc)3 (1.54 g, 7.26 mmol)를 첨가하고 혼합물을 20°C에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 30%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 H2O (30 mL)로 희석 후 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하고, 합쳐진 유기상을 H2O (20 mL)로 세척하고, Na2SO4 로 건조하여 여과하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (12 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~30% MeOH/EtOAc gradient @ 50 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 메틸 4-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)부타노에이트 (420 mg, 776.28 μmol, 32.07% 수율, 84% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 455.1
단계 2. 메틸 4-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)부타노에이트 (4)의 합성
톨루엔 (15 mL) 내 메틸 4-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)부타노에이트 (420 mg, 776.28μmol, 84% 순도) 용액에 (Bu3Sn)2O (2.25 g, 3.77 mmol, 1.92 mL)를 첨가하고 혼합물을 110°C에서 28시간 동안 교반 하였다. 워크업 이후 LCMS로 원하는 질량이 검출됨 및 미량의 출발물질이 남아있음을 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하여 황색 오일의 메틸 4-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)부타노에이트 (2.5 g, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 441.5
단계 3. tert-부틸 (1-(4-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)부타노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (5)의 합성
DMF (10 mL) 내 tert-부틸 피페리딘-4-일카바메이트 (1.14 g, 5.68 mmol) 및 4-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6 -디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)부탄산 (2.5 g, crude) 용액에 DIPEA (2.20 g, 17.04 mmol, 2.97 mL), EDCI (1.63 g, 8.51 mmol) 및 HOBt (1.53 g, 11.35 mmol)를 첨가하고 혼합물을 20°C에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 60%의 원하는 질량이 검출됨 및 출발물질이 소모되었음을 확인하였다. 혼합물을 H2O (10 mL)로 희석 후 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하고, 합쳐진 유기상을 염수 (10 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 로 건조하여 여과하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (12 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 2~10% MeOH/EtOAc gradient @ 50 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 tert-부틸 (1-(4-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)부타노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (330 mg, 514.04 μmol, 9.06% 수율, 97% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 623.0
단계 4. 4-(6-(4-(4-아미노피페리딘-1-일)-4-옥소부틸)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (6)의 합성
DCM (1 mL) 내 tert-부틸 (1-(4-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)부타노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (100 mg, 160.59 μmol) 용액에 -10°C에서 TFA (308.00 mg, 2.70 mmol, 0.2 mL)를 첨가하고 혼합물을 -10°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 66%의 원하는 질량이 검출됨 및 18%의 출발물질이 남아있음을 확인하였다. LCMS로 92%의 원하는 질량이 검출됨 및 1%의 출발물질이 남아있음을 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하여 황색 오일의 4-(6-(4-(4-아미노피페리딘-1-일)-4-옥소부틸)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (130 mg, crude, 2TFA)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 523.1
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)부타노일)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 176)의 합성
DMF (1 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (60 mg, 128.91 μmol) 및 HATU (73.71 mg, 193.87 μmol) 용액에 DIPEA (29.68 mg, 229.64 μmol, 40 μL)를 첨가하고 혼합물을 20°C에서 15분 동안 교반 하였다. 이후 DMF (1 mL) 내 4-(6-(4-(4-아미노피페리딘-1-일)-4-옥소부틸)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (130.00 mg, 173.19 μmol, 2TFA) 및 DIPEA (103.88 mg, 803.76 μmol, 140 μL) 용액을 -5°C에서 첨가하고 혼합물을 0°C에서 45분 동안 교반 하였다. LCMS로 70%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 H2O (10 mL)로 희석 후 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하고, 합쳐진 유기상을 H2O (10 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 로 건조하여 여과하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 조 생성물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25 mm* 5μm; 이동상: [물(10mM NH4HCO3) -ACN]; B%: 41%-71%, 분)로 정제하고 용출물을 동결 건조 하여 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)부타노일)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (35 mg, 89 % 순도)를 수득하였다. 이후 생성물을 prep-TLC (디클로로메탄: 메탄올=10:1)로 정제하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(4-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)부타노일)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (13.7 mg, 13.84 μmol, 10.74% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 970.3
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.06 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.25 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.98 - 7.92 (m, 1H), 7.58 - 7.53 (m, 1H), 7.20 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.78 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 5.08 - 5.01 (m, 1H), 4.85 - 4.78 (m, 1H), 4.33 - 4.22 (m, 5H), 4.13 - 3.98 (m, 3H), 3.93 - 3.81 (m, 4H), 3.31 - 3.29 (m, 4H), 3.26 - 3.22 (m, 3H), 3.17 - 3.08 (m, 1H), 2.93 - 2.81 (m, 1H), 2.76 - 2.65 (m, 2H), 2.61 - 2.55 (m, 2H), 2.39 - 2.27 (m, 4H), 2.03 - 1.92 (m, 3H), 1.90 - 1.77 (m, 2H), 1.75 - 1.69 (m, 2H), 1.68 - 1.55 (m, 4H), 1.52 - 1.43 (m, 3H).
실시예 177. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((3S)-1-(3-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)프로파노일)피롤리딘-3-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 177)의 합성
단계 1. 3-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)프로파노에이트 (3)의 합성
ACN (30 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-(2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)이소인돌린-1,3-디온 (1.7 g, 3.63 mmol, TFA) 및 메틸 아크릴레이트 (5.22 g, 60.63 mmol, 5.46 mL) 용액에 DBU (11.11 g, 72.98 mmol, 11 mL)를 첨가하고 혼합물을 -30°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 소모됨 및 68%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 -5°C에서 H2O (20 mL)로 희석 후 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하고, 합쳐진 유기상을 염수 (20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 로 건조하여 여과하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (12 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~30% MeOH/EtOAc gradient @ 50 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 3-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)프로파노에이트 (850 mg, 1.79 mmol, 49.45% 수율, 93% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 441.1
단계 2. 3-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)프로판산 (4)의 합성
톨루엔 (20 mL) 내 메틸 3-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)프로파노에이트 (850 mg, 1.93mmol) 용액에 (Bu3Sn)2O (2.81 g, 4.71 mmol, 2.40 mL)를 첨가하고 혼합물을 110°C에서 28시간 동안 교반 하였다. LCMS로 85%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하여 황색 오일의 3-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)프로판산 (3.4 g, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 427.1
단계 3. tert-부틸 ((3S)-1-(3-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)프로파노일)피롤리딘-3-일)카바메이트 (6)의 합성
DMF (15 mL) 내 3-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)프로판산 (1.7 g, 3.99 mmol) 및 (S)-tert-부틸 피롤리딘-3-일카바메이트 (750 mg, 4.03 mmol) 용액에 EDCI (1.15 g, 5.98 mmol), HOBt (1.08 g, 7.97 mmol) 및 DIPEA (1.55 g, 11.96 mmol, 2.08 mL)을 첨가하고 혼합물을 20°C에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 89%의 원하는 질량이 검출됨 및 출발물질이 소모되었음을 확인하였다. 혼합물을 H2O (30 mL)로 희석 후 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하고, 합쳐진 유기상을 염수 (10 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 로 건조하여 여과하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (12 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~30% EtOH/EtOAc gradient @ 50 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 tert-부틸 ((3S)-1-(3-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)프로파노일)피롤리딘-3-일)카바메이트 (350 mg, 553.26 μmol, 13.88% 수율, 94% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 595.1
단계 4. 4-(6-(3-((S)-3-아미노피롤리딘-1-일)-3-옥소프로필)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (7)의 합성
DCM (1.3 mL) 내 tert-부틸 ((3S)-1-(3-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)프로파노일)피롤리딘-3-일)카바메이트 (130 mg, 218.61 μmol) 용액에 0°C에서 TFA (400.40 mg, 3.51 mmol, 260.00 μL)를 첨가하고 혼합물을 0°C에서 3시간 동안 교반 하였다. LCMS로 79%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하여 황색 오일의 4-(6-(3-((S)-3-아미노피롤리딘-1-일)-3-옥소프로필)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (160 mg, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 495.1
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((3S)-1-(3-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)프로파노일)피롤리딘-3-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 177)의 합성
DMF (1.5 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (80 mg, 171.89 μmol) 용액에 HATU (98 mg, 257.74 μmol) 및 DIPEA (59.36 mg, 459.29 μmol, 80.00 μL)를 첨가하고 혼합물을 20°C에서 15분 동안 교반 하였다. 이후 DMF (15 mL) 내 4-(6-(3-((S)-3-아미노피롤리딘-1-일)-3-옥소프로필)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (160 mg, 221.43 μmol, 2TFA) 및 DIPEA (237.44 mg, 1.84 mmol, 320.00 μL) 용액을 0°C 에서 첨가하고 혼합물을 20°C에서 45분 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 H2O (10 mL)로 희석 후 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하고, 합쳐진 유기상을 염수 (10 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 로 건조하여 여과하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 prep-TLC (디클로로메탄: 메탄올=10:1) 및 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25 mm* 5μm; 이동상: [물 (10mM NH4HCO3) -ACN]; B%: 37%-67%, 분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((3S)-1-(3-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)프로파노일)피롤리딘-3-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (37.9 mg, 39.43 μmol, 22.94% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 942.3
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.06 (s, 1H), 8.30 - 8.20 (m, 3H), 8.05 - 7.98 (m, 1H), 7.57 - 7.48 (m, 1H), 7.23 - 7.17 (m, 1H), 7.12 - 7.04 (m, 1H), 6.78 - 6.67 (m, 1H), 5.08 - 4.99 (m, 1H), 4.86 - 4.74 (m, 1H), 4.50 - 4.35 (m, 1H), 4.20 (br d, J = 15.4 Hz, 4H), 4.12 - 4.02 (m, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.78 - 3.70 (m, 1H), 3.62 - 3.40 (m, 4H), 3.29 - 3.21 (m, 7H), 2.94 - 2.81 (m, 1H), 2.62 - 2.53 (m, 4H), 2.27 - 2.16 (m, 2H), 2.03 - 1.90 (m, 4H), 1.77 - 1.54 (m, 6H).
실시예 178. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((3S)-1-(5-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,6-디아자스피로[3.3]헵탄-2-일)펜타노일)피롤리딘-3-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 178)의 합성
화합물 178은 실시예 177에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+ = 970.3, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.08 - 11.04 (m, 1H), 8.30 - 8.22 (m, 3H), 8.03 (s, 1H), 7.58 - 7.51 (m, 1H), 7.19 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 7.13 - 7.08 (m, 1H), 6.75 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 5.07 - 5.00 (m, 1H), 4.86 - 4.78 (m, 1H), 4.51 - 4.33 (m, 1H), 4.28 - 4.19 (m, 4H), 4.07 (t, J = 14.0 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.77 - 3.70 (m, 1H), 3.61 - 3.53 (m, 2H), 3.51 - 3.40 (m, 8H), 2.93 - 2.81 (m, 1H), 2.62 - 2.55 (m, 2H), 2.40 - 2.29 (m, 2H), 2.26 - 2.17 (m, 2H), 2.03 - 1.90 (m, 4H), 1.76 - 1.56 (m, 7H), 1.53 - 1.44 (m, 2H), 1.34 - 1.22 (m, 2H).
실시예 179. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(5-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)펜트-4-이노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 179)의 합성
단계 1. tert-부틸 (1-(펜트-4-이노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (3)의 합성
DMF (2 mL) 내 tert-부틸 피페리딘-4-일카바메이트 (500 mg, 2.50 mmol) 및 펜트-4-이노산 (244.91 mg, 2.50 mmol) 용액에 HATU (1.42 g, 3.74 mmol) 및 DIEA (967.98 mg, 7.49 mmol, 1.30 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 2시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터 : EtOAc = 1: 1)로 tert-부틸 피페리딘-4-일카바메이트가 완전히 소모됨 및 하나의 새로운 스팟 형성을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)로 희석 후 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하여 감압 농축하였다. 잔여물을 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에터/EtOAc=1/0 to 1/1)로 정제하여 백색 고체의 tert-부틸 (1-(펜트-4-이노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (520 mg, 1.85 mmol, 74.29% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 281.4
단계 2. tert-부틸 (1-(5-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)펜트-4-이노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (5)의 합성
DMF (5 mL) 내 tert-부틸(1-(펜트-4-이노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (250 mg, 891.71 μmol) 및 4-브로모-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (300.62 mg, 891.71 μmol) 용액에 Pd(PPh3)2Cl2 (62.59 mg, 89.17 μmol), CuI (33.97 mg, 178.34 μmol) 및 TEA (541.38 mg, 5.35 mmol, 744.68 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 70°C에서 N2 기체 하 0.5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 tert-부틸(1-(펜트-4-이노일)피페리딘-4-일)카바메이트가 완전히 소모됨 및 ~40%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석 후 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하여 감압 농축하였다. 잔여물을 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에터/EtOAc=1/0 to 1/1)로 정제하여 밝은 황색 고체의 tert-부틸 (1-(5-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)펜트-4-이노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (360 mg, 530.03 μmol, 59.44% 수율, 79% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 537.1
단계 3. 4-(5-(4-아미노피페리딘-1-일)-5-옥소펜트-1-인-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (6)의 합성
DCM (1.5 mL) 내 tert-부틸 (1-(5-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)펜트-4-이노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (100 mg, 186.37 μmol) 및 HCl/디옥산 (4 M, 1.5 mL) 혼합물을 25°C에서 0.5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 하나의 주 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하여 밝은 황색 고체의 4-(5-(4-아미노피페리딘-1-일)-5-옥소펜트-1-인-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (100 mg, crude, HCl 염)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 437.0
단계 4. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(5-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)펜트-4-이노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 179)의 합성
DMF (4 mL) 내 4-(5-(4-아미노피페리딘-1-일)-5-옥소펜트-1-인-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (100 mg, 211.45 μmol, HCl 염) 및 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b) ][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (94.61 mg, 211.45 μmol) 용액에 HATU (120.60 mg, 317.18 μmol) 및 DIEA (81.99 mg, 634.36 μmol, 110.49 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-(5-(4-아미노피페리딘-1-일)-5-옥소펜트-1-인-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온이 완전히 소모됨 및 ~57%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석 후 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하여 감압 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex luna C18 150 x 25mm x 10μm; 이동상: [물 (FA) - ACN]; B%: 42% - 42%, 10 분) 및 prep-TLC (SiO2, DCM: MeOH = 20:1)로 정제하여 백색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(5-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)펜트-4-이노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (44.9 mg, 51.34 μmol, 24.28% 수율, 99% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 866.5
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.15 (s, 1H), 8.32 - 8.24 (m, 2H), 8.20 - 8.13 (m, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.90 - 7.78 (m, 3H), 7.54 - 7.44 (m, 2H), 5.19 - 5.09 (m, 1H), 4.83 - 4.72 (m, 1H), 4.45-4.35 (m, 1H), 4.11 - 4.00 (m, 3H), 3.98 - 3.95 (m, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.33 (s, 3H), 3.20 - 3.12 (m, 1H), 2.95-2.84 (m, 1H), 2.75 (s, 5H), 2.64 - 2.57 (m, 2H), 2.11 - 2.03 (m, 1H), 1.99 - 1.81 (m, 4H), 1.77-1.68 (m, 2H), 1.66 - 1.55 (m, 4H), 1.53 - 1.38 (m, 2H).
실시예 180. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(6-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)헥스-5-이노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 180)의 합성
화합물 180은 실시예 179에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+ = 880.0, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.14 (s, 1H), 8.32 - 8.24 (m, 2H), 8.12 (dd, J = 3.1, 7.1 Hz, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.91 - 7.81 (m, 3H), 7.53 - 7.46 (m, 2H), 5.14 (dd, J = 5.4, 12.6 Hz, 1H), 4.83 - 4.71 (m, 1H), 4.42 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 4.12 - 3.90 (m, 7H), 3.35 (s, 3H), 3.14 (t, J = 11.6 Hz, 1H), 2.94 - 2.80 (m, 1H), 2.73 - 2.58 (m, 7H), 2.08 - 1.80 (m, 7H), 1.73 - 1.40 (m, 8H).
실시예 181. 4-((1'-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b])[1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조일)-[1,4'-비피페리딘]-4-일)에티닐)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (화합물 181)의 합성
단계 1. tert-부틸 4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)에티닐)-[1,4'-비피페리딘]-1'-카복실레이트 (3)의 합성
DMF (3 mL) 내 tert-부틸 4-에티닐-[1,4'-비피페리딘]-1'-카복실레이트 (100 mg, 341.98 μmol) 및 4-브로모-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (115.29 mg, 341.98 μmol) 용액에 Pd(PPh3)2Cl2 (24.00 mg, 34.20 μmol), CuI (13.03 mg, 68.40 μmol) 및 TEA (103.81 mg, 1.03 mmol, 142.80 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 50°C에서 0.5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 tert-부틸 4-에티닐-[1,4'-비피페리딘]-1'-카복실레이트가 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 피크 (25%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석 후 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하여 감압 농축하였다. 잔여물을 prep-TLC (SiO2, EtOAc : MeOH = 5 : 1)로 정제하여 밝은 황색 고체의 tert-부틸 4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)에티닐)-[1,4'-비피페리딘]-1'-카복실레이트 (80 mg, 113.74 μmol, 33.26% 수율, 78% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 549.3
단계 2. 4-([1,4'-비피페리딘]-4-일에티닐)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (4)의 합성
DCM (1 mL) 내 tert-부틸 4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)에티닐)-[1,4'-비피페리딘]-1'-카복실레이트 (80 mg, 145.82 μmol) 및 HCl/디옥산 (4 M, 1 mL) 혼합물을 25°C에서 0.5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 하나의 주 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하여 밝은 황색 고체의 4-([1,4'-비피페리딘]-4-일에티닐)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (80 mg, crude, HCl 염)을 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+ = 449.3
단계 3. 4-((1'-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b])[1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조일)-[1,4'-비피페리딘]-4-일)에티닐)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (화합물 181)의 합성
DMF (3 mL) 내 4-([1,4'-비피페리딘]-4-일에티닐)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (80 mg, 164.96 μmol, HCl 염) 및 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (73.81 mg, 164.96 μmol) 용액에 HATU (94.08 mg, 247.44 μmol) 및 DIEA (63.96 mg, 494.87 μmol, 86.20 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-([1,4'-비피페리딘]-4-일에티닐)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 하나의 주 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석 후 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하여 감압 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex luna C18 150 x 25mm x 10μm; 이동상: [물 (FA) - ACN]; B%: 16% - 46%, 10 분) 및 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150 x 25mm x 5μm; 이동상: [물(NH4HCO3) - ACN]; B%: 48% - 78%)로 정제하여 백색 고체의 4-((1'-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b])[1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조일)-[1,4'-비피페리딘]-4-일)에티닐)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (20.8 mg, 23.46 μmol, 14.22% 수율, 99% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 878.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.13 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.14 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.90 - 7.78 (m, 3H), 7.05 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.97 (dd, J = 1.6, 8.2 Hz, 1H), 5.15 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.76-4.65 (m, 1H), 4.02 (t, J = 14.1 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.33 (s, 3H), 2.94 - 2.79 (m, 4H), 2.77 - 2.71 (m, 1H), 2.64-2.59 (m, 1H), 2.57-2.52 (m, 5H), 2.43 - 2.32 (m, 2H), 2.11 - 2.02 (m, 1H), 1.92-1.85 (m, 4H), 1.83-1.73 (m, 2H), 1.71 - 1.63 (m, 4H), 1.60 - 1.51 (m, 4H), 1.48 - 1.36 (m, 2H).
실시예 182. 5-((1'-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b])[1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조일)-[1,4'-비피페리딘]-4-일)에티닐)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (화합물 182)의 합성
화합물 182는 실시예 181에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+ = 878.6, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.14 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.13 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.93 - 7.81 (m, 3H), 7.04 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 6.96 (dd, J = 1.3, 8.3 Hz, 1H), 5.16 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.77 - 4.66 (m, 1H), 4.05 - 3.97 (m, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.32 (s, 3H), 2.93 - 2.84 (m, 2H), 2.83 - 2.75 (m, 2H), 2.73 - 2.66 (m, 1H), 2.64 - 2.62 (m, 1H), 2.61 - 2.53 (m, 5H), 2.41 - 2.31 (m, 2H), 2.11 - 2.02 (m, 1H), 1.95 - 1.85 (m, 4H), 1.82 - 1.72 (m, 2H), 1.70 - 1.62 (m, 4H), 1.61 - 1.48 (m, 4H), 1.47 - 1.35 (m, 2H).
실시예 183. 4-((3-(4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도)[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조일)피페라진-1-일)프로필)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린- 1,3-디온 (화합물 183)의 합성
단계 1. 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-((3-히드록시프로필)아미노)이소인돌린-1,3-디온 (2)의 합성
DMSO (30 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (500 mg, 1.81 mmol) 용액에 25°C에서 3-아미노프로판-1-올 (203.94 mg, 2.72 mmol, 209.38 μL) 및 TEA (549.50 mg, 5.43 mmol, 755.85 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 90°C에서 2시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터: EtOAc =1:2)로 하나의 새로운 스팟 형성을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석 후 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과 후 감압 농축하여 황색 오일의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-((3-히드록시프로필)아미노)이소인돌린-1,3-디온 (0.2 g, 301.82 μmol, 16.67% 수율, 50% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 332.1
단계 2. 3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)프로필 4-메틸벤젠술포네이트 (3)의 합성
DCM (10 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-((3-히드록시프로필)아미노)이소인돌린-1,3-디온 (200 mg, 301.82 μmol, 50% 순도) 혼합물에 25°C에서 TosCl (115.08 mg, 603.64 μmol), TEA (91.62 mg, 905.46 μmol, 126.03 μL) 및 DMAP (7.37 mg, 60.36 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 12시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터: EtOAc =1:1)로 하나의 새로운 스팟 형성을 확인하였다. 반응 혼합물을 (다른 배치와 합침) 감압 농축하여 DCM을 제거했다. 잔여물을 물 (50 mL)로 희석 후 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과 및 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO; 10 g Sepa Flash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~80% 석유 에터: EtOAc gradient @50 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)프로필 4-메틸벤젠술포네이트 (160 mg, 322.96 μmol, 71.34% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 486.0
단계 3. tert-부틸 4-(3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)프로필)피페라진-1-카복실레이트 (4)의 합성
DMF (5 mL) 내 3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)프로필 4-메틸벤젠술포네이트 (160 mg, 329.55 μmol) 용액에 25°C에서 DIEA (127.78 mg, 988.65 μmol, 172.21 μL), tert-부틸 피페라진-1-카복실레이트 (73.65 mg, 395.46 μmol) 및 NaI (9.88 mg, 65.91 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 70°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 ~97%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석 후 EtOAc (50 mL x 4)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과 및 감압 농축하여 황색 오일의 tert-부틸 4-(3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)프로필)피페라진-1-카복실레이트 (160 mg, 294.66 μmol, 89.41% 수율, 92% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 500.3
단계 4. 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-((3-(피페라진-1-일)프로필)아미노)이소인돌린-1,3-디온 (5)의 합성
디옥산 (1 mL) 내 tert-부틸 4-(3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)프로필)피페라진-1-카복실레이트 (160 mg, 320.28 μmol) 용액에 25°C에서 HCl/디옥산 (4 M, 1 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 1시간 동안 교반 하였다. TLC (EtOAc: 메탄올= 10:1)로 하나의 새로운 스팟 형성을 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하여 황색 고체의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-((3-(피페라진-1-일)프로필)아미노)이소인돌린-1,3-디온 (130 mg, 167.01 μmol, 52.14% 수율, 56% 순도, HCl)을 수득하였다. MS(M+H)+=400.1
단계 5. 4-((3-(4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도)[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조일)피페라진-1-일)프로필)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (화합물 183)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (48.53 mg, 104.28 μmol) 용액에 25°C에서 HATU (79.30 mg, 208.55 μmol) 및 DIPEA (67.39 mg, 521.38 μmol, 90.82 μL)를 첨가하였다. 0.5시간 이후 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-((3-(피페라진-1-일)프로필)아미노)이소인돌린-1,3-디온 (50 mg, 114.70 μmol, HCl)를 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 ~50%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석 후 EtOAc (50 mL x 4)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 포화 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과 및 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: YMC Triart 30x150 mmx 7 μm; 이동상: [물(HCl)-ACN];B%: 26%-46%,7분) 및 prep-HPLC(컬럼: Waters Xbrige 150x25 mmx5 μm; 이동상: [물(NH4HCO3)-ACN];B%: 48%-78%,10분)으로 정제 후 동결 건조하여 황색 고체의 4-((3-(4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도)[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조일)피페라진-1-일)프로필)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (18.6 mg, 21.77 μmol, 20.87% 수율, 99.1% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 847.3
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.10 (br. s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.11 (d, J = 12 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.58 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.02 - 6.97 (m, 2H), 6.82 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 5.04 (dd, J = 5.2, 12.8 Hz, 1H), 4.79 - 4.75 (m, 1H), 4.06 (t, J = 14 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.70 - 3.65 (m, 2H), 3.43 - 3.40 (m, 2H), 3.32 - 3.31 (m, 5H), 2.92 - 2.88 (m, 1H), 2.59 - 2.55 (m, 1H), 2.42 - 2.33 (m, 6H), 1.76 - 1.23 (m, 12H).
실시예 184. 4-((4-(4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조일)피페라진-1-일)부틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린- 1,3-디온 (화합물 184)의 합성
화합물 184는 실시예 183에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+ = 861.1, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.07 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.18 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.63 - 7.54 (m, 1H), 7.12 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.01 (dd, J = 6.6, 16.9 Hz, 2H), 6.57 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 5.05 (dd, J = 5.4, 12.9 Hz, 1H), 4.85 - 4.72 (m, 1H), 4.07 (t, J = 13.9 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.68 - 3.56 (m, 2H), 3.32 - 3.25 (m, 7H), 2.95 - 2.81 (m, 1H), 2.63 - 2.53 (m, 2H), 2.45 - 2.30 (m, 6H), 2.07 - 1.88 (m, 3H), 1.74 - 1.48 (m, 10H).
실시예 185. 4-((5-(4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조일)피페라진-1-일)펜틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린- 1,3-디온 (화합물 185)의 합성
화합물 185는 실시예 183에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+ = 875.1, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.09 (br s, 1H), 8.29 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.18 (br d, J = 11.6 Hz, 1H), 8.04 (br s, 1H), 7.63 - 7.54 (m, 1H), 7.10 (br d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.00 (br dd, J = 5.4, 17.1 Hz, 2H), 6.54 (br s, 1H), 5.05 (br d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.85 - 4.73 (m, 1H), 4.12 - 4.01 (m, 2H), 3.89 (br d, J = 1.0 Hz, 3H), 3.52 -3.69 (m, 2H), 3.21 -3.32 (m, 7H), 2.95 - 2.83 (m, 1H), 2.59 - 2.68 (m, 1H), 2.44 - 2.27 (m, 6H), 2.08 - 1.88 (m, 3H), 1.77 - 1.30 (m, 13H).
실시예 186. 5-((3-(4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조일)피페라진-1-일)프로필)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (화합물 186)의 합성
화합물 186은 실시예 183에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+ = 847.1, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.05 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.17 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.56 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.14 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 7.01 - 6.95 (m, 2H), 6.85 (dd, J = 1.9, 8.4 Hz, 1H), 5.02 (dd, J = 5.3, 12.9 Hz, 1H), 4.82 - 4.72 (m, 1H), 4.06 (t, J = 13.9 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.70 - 3.62 (m, 2H), 3.32 - 3.29 (m, 5H), 3.26 - 3.17 (m, 2H), 2.93 - 2.81 (m, 1H), 2.61 - 2.54 (m, 1H), 2.47 - 2.38 (m, 4H), 2.38 - 2.31 (m, 2H), 2.03 - 1.89 (m, 3H), 1.78 - 1.51 (m, 9H).
실시예 187. 5-((4-(4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조일)피페라진-1-일)부틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린- 1,3-디온 (화합물 187)의 합성
화합물 187은 실시예 183에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+ = 861.1, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.07 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.17 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.56 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.13 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 7.01 - 6.94 (m, 2H), 6.85 (dd, J = 2.0, 8.4 Hz, 1H), 5.03 (dd, J = 5.3, 12.9 Hz, 1H), 4.84 - 4.73 (m, 1H), 4.06 (t, J = 13.9 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.72 - 3.58 (m, 2H), 3.35 - 3.27 (m, 5H), 3.23 - 3.14 (m, 2H), 2.94 - 2.81 (m, 1H), 2.63 - 2.53 (m, 2H), 2.50 - 2.25 (m, 6H), 2.04 - 1.87 (m, 3H), 1.74 - 1.51 (m, 10H).
실시예 188. 5-((5-(4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조일)피페라진-1-일)펜틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린- 1,3-디온 (화합물 188)의 합성
화합물 188은 실시예 183에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+ = 875.1, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.05 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.17 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.56 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.11 (t, J = 5.0 Hz, 1H), 7.00 - 6.92 (m, 2H), 6.85 (dd, J = 1.9, 8.4 Hz, 1H), 5.03 (dd, J = 5.3, 12.9 Hz, 1H), 4.79 (q, J = 8.0 Hz, 1H), 4.06 (t, J = 13.9 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.52 - 3.71(m, 2H), 3.29 -3.38 (m, 5H), 3.21 - 3.10 (m, 2H), 2.95 - 2.79 (m, 1H), 2.59 - 2.63 (m, 1H), 2.45 - 2.38 (m, 2H), 2.38 - 2.25 (m, 4H), 2.05 - 1.87 (m, 3H), 1.81 - 1.28 (m, 13H).
실시예 189. 4-((2-(2-(4-(1-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-)피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조일)피페리딘-4-일)피페라진-1-일)에톡시)에틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (화합물 189)의 합성
단계 1. tert-부틸 4-(4-(2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에톡시)에틸)피페라진-1-일)피페리딘-1-카복실레이트 (3)의 합성
DMF (6 mL) 내 2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에톡시)에틸 4-메틸벤젠술포네이트 (150 mg, 290.96 μmol) 및 tert-부틸 4-피페라진-1-일피페리딘-1-카복실레이트 (86.22 mg, 320.06 μmol) 용액에 20°C에서 NaI (8.72 mg, 58.19 μmol) 및 DIPEA (112.81 mg, 872.88 μmol, 152.04 μL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 80°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에톡시)에틸 4-메틸벤젠술포네이트가 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 73% 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (15 mL)로 희석 후 EtOAc (15 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 염수 (15 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (10 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100 % EtOAc/석유 에터 to 0~10% 디클로로메탄/메탄올 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 tert-부틸 4-(4-(2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에톡시)에틸)피페라진-1-일)피페리딘-1-카복실레이트 (129 mg, 202.12 μmol, 69.47% 수율, 96% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 613.2
단계 2. 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-((2-(2-(4-(피페리딘-4-일)피페라진-1-일)에톡시)에틸)아미노)이소인돌린-1,3-디온 (4)의 합성
디옥산 (1 mL) 내 tert-부틸 4-(4-(2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에톡시)에틸)피페라진-1-일)피페리딘-1-카복실레이트 (129 mg, 210.54 μmol) 용액에 20°C에서 HCl/디옥산 (4 M, 9.44 mL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 0.5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 92% 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하여 황색 고체의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-((2-(2-(4-(피페리딘-4-일)피페라진-1-일)에톡시)에틸)아미노)이소인돌린-1,3-디온 (120 mg, crude, HCl)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 513.3
단계 3. 4-((2-(2-(4-(1-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-)피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조일)피페리딘-4-일)피페라진-1-일)에톡시)에틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (화합물 189)의 합성
DMF (4 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (90 mg, 193.37 μmol) 용액에 HATU (80.88 mg, 212.71 μmol) 및 DIPEA (49.98 mg, 386.74 μmol, 67.36 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 20°C에서 10분 동안 교반 후 DMF (4 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-((2-(2-(4-(피페리딘-4-일)피페라진-1-일)에톡시)에틸)아미노)이소인돌린-1,3-디온 (116.79 mg, 212.71 μmol, HCl) 및 DIPEA (49.98 mg, 386.74 μmol, 67.36 μL) 용액을 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 모든 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 72% 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (12 mL)로 희석 후 EtOAc (12 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 염수 (12 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi C18 150*25 mm* 10μm; 이동상: [물 (FA) -ACN];B%: 15%-45%, 10 분)로 정제 후 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25 mm* 5μm; 이동상: [물 (NH4HCO3) -ACN];B%: 43%-73%, 8 분)로 재정제하고 동결 건조하여 황색 고체의 4-((2-(2-(4-(1-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-)피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조일)피페리딘-4-일)피페라진-1-일)에톡시)에틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (34.1 mg, 35.17 μmol, 18.19% 수율, 99% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 959.9
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.09 (br s, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.15 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.61 - 7.54 (m, 1H), 7.14 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 6.58 (br t, J = 5.7 Hz, 1H), 5.04 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.77 (q, J = 7.9 Hz, 1H), 4.49 - 4.40 (m, 1H), 4.05 (t, J = 13.9 Hz, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.60 - 3.56 (m, 2H), 3.52 (t, J = 5.6 Hz, 3H), 3.47 - 3.44 (m, 2H), 3.32 (s, 3H), 3.10 - 2.98 (m, 1H), 2.92 - 2.76 (m, 2H), 2.60 - 2.53 (m, 2H), 2.47 - 2.31 (m, 11H), 2.06 - 1.97 (m, 1H), 1.97 - 1.89 (m, 2H), 1.82 - 1.79 (m, 1H), 1.75 - 1.69 (m, 3H), 1.65 - 1.52 (m, 4H), 1.36 - 1.22 (m, 2H).
실시예 190. 4-((3-(2-(4-(1-(4-((9-사이클로펜틸-7,7-다이플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라하이드로-5H-)피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조일)피페리딘-4-일)피페라진-1-일)에톡시)프로필)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (화합물 190)의 합성
화합물 190은 실시예 189에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+ = 974.5, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.08 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.15 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.57 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.65 (t, J = 4.0 Hz, 1H), 5.06 - 5.02 (m, 1H), 4.79 - 4.75 (m, 1H), 4.46 - 4.43 (m, 1H), 4.05 (t, J = 12.0 Hz, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.52 - 3.51 (m, 1H), 3.48 - 3.45 (m, 4H), 3.37 - 3.34 (m, 2H), 3.29 (s, 3H), 3.06 - 3.00 (m, 1H), 2.92 - 2.77 (m, 2H), 2.66 - 2.55 (m, 4H), 2.45 - 2.35 (m, 9H), 2.03 - 2.00 (m, 1H), 1.94 - 1.92 (m, 2H), 1.83 - 1.77 (m, 3H), 1.73 - 1.66 (m, 3H), 1.64 - 1.54 (m, 4H), 1.33 - 1.27 (m, 2H).
실시예 191. 5-((2-(2-(4-(1-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조일)피페리딘-4-일)피페라진-1-일)에톡시)에틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (화합물 191)의 합성
단계 1. 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-((2-(2-히드록시에톡시)에틸)아미노)이소인돌린-1,3-디온 (2)의 합성
DMSO (10 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (2 g, 7.24 mmol) 용액에 25°C에서 2-(2-아미노에톡시)에탄올 (913.49 mg, 8.69 mmol, 869.99 μL) 및 TEA (879.21 mg, 8.69 mmol, 1.21 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 90°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 화합물 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석 후 EtOAc (50 mL x 6)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 포화 염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과 및 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO; 20 g Sepa Flash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% 석유 에터: EtOAc gradient @ 80 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-((2-(2-히드록시에톡시)에틸)아미노)이소인돌린-1,3-디온 (0.5 g, 1.38 mmol, 19.11% 수율, 100% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 362.2
단계 2. 벤질 4-(1-(tert-부톡시카보닐)피페리딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (8)의 합성
DCE (50 mL) 내 벤질 피페라진-1-카복실레이트 (5 g, 22.70 mmol, 4.39 mL) 혼합물에 25°C에서 tert-부틸 4-옥소피페리딘-1-카복실레이트 (4.52 g, 22.70 mmol) 및 HOAc (1.43 g, 23.83 mmol, 1.36 mL)를 첨가하였다. 25°C에서 2시간 동안 교반한 후 NaBH(OAc)3 (19.24 g, 90.80 mmol)를 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 ~70%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물에 0°C에서 H2O (100 mL)를 첨가 후 0°C에서 Na2CO3 (sat. aq. 50 mL)를 pH = 10이 될 때까지 첨가하고, 합쳐진 수층을 EtOAc (100 mL x 3)로 추출 후 합쳐진 유기상을 염수 (100 mL x 2)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과 후 여과물을 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (80 g Sepa Flash 실리카 플래시 컬럼, eluent of 0~50% EtOAc/석유 에터 gradient @80 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 벤질 4-(1-(tert-부톡시카보닐)피페리딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (6.2 g, 15.20 mmol, 66.94% 수율, 98.9% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 404.2
단계 3. tert-부틸 4-(피페라진-1-일)피페리딘-1-카복실레이트 (4)의 합성
CF3CH2OH (5 mL) 내 벤질 4-(1-(tert-부톡시카보닐)피페리딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트 (3 g, 7.43 mmol) 혼합물에 CF3CH2OH (5 mL) 내 Pd/C (0.5 g, 1.49 mmol, 10 순도) 용액을 N2 기체 하 25°C에서 첨가하였다. 혼합물을 H2 기체 (15 Psi) 하 25°C에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 벤질 4-(1-(tert-부톡시카보닐)피페리딘-4-일)피페라진-1-카복실레이트가 소모됨을 확인하였다. 혼합물을 여과하여 촉매를 제거했다. 여과물을 감압 농축하여 황색 오일의 tert-부틸 4-(피페라진-1-일)피페리딘-1-카복실레이트 (2.5 g, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 270.4
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ =3.94 - 3.83 (m, 4H), 3.45 - 3.42 (m, 1H), 2.66 - 2.63 (m, 4H), 2.37 - 2.35 (m, 4H), 2.30 - 2.23 (m, 1H), 1.70 - 1.67 (m, 2H), 1.38 (s, 9H), 1.24 - 1.20 (m, 2H).
단계 4. 2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아미노)에톡시)에틸 4-메틸벤젠술포네이트 (3)의 합성
DCM (10 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-((2-(2-히드록시에톡시)에틸)아미노)이소인돌린-1,3-디온 (0.5 g, 1.38 mmol) 혼합물에 25°C에서 TosCl (395.70 mg, 2.08 mmol), DMAP (33.81 mg, 276.74 μmol) 및 TEA (420.05 mg, 4.15 mmol, 577.79 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 ~78%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하여 DCM을 제거했다. 잔여물을 물 (50 mL)로 희석 후 EtOAc (50 mL x 4)로 추출했다. 합쳐진 유기상을 포화 염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과 및 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO; 20 g Sepa Flash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~70% 석유 에터: EtOAc gradient @60 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아미노)에톡시)에틸 4-메틸벤젠술포네이트 (330 mg, 640.11 μmol, 46.26% 수율, 100% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 516.2
단계 5. tert-부틸 4-(4-(2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아미노)에톡시)에틸)피페라진-1-일)피페리딘-1-카복실레이트 (5)의 합성
DMF (3 mL) 내 2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아미노)에톡시)에틸 4-메틸벤젠술포네이트 (330 mg, 640.11 μmol) 용액에 25°C에서 DIEA (248.19 mg, 1.92 mmol, 334.49 μL), NaI (19.19 mg, 128.02 μmol) 및 tert-부틸 4-(피페라진-1-일)피페리딘-1-카복실레이트 (189.68 mg, 704.12 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 70°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 ~86%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석 후 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 포화 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과 및 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO; 20 g Sepa Flash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~60% EtOAc : 에탄올 gradient @ 80 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 tert-부틸 4-(4-(2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아미노)에톡시)에틸)피페라진-1-일)피페리딘-1-카복실레이트 (0.18 g, 264.40 μmol, 41.30% 수율, 90% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 613.4
단계 6. 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-((2-(2-(4-(피페리딘-4-일)피페라진-1-일)에톡시)에틸)아미노)이소인돌린-1,3-디온 (6)의 합성
디옥산 (2 mL) 내 tert-부틸 4-(4-(2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아미노)에톡시)에틸)피페라진-1-일)피페리딘-1-카복실레이트 (180 mg, 293.77 μmol) 용액에 25°C에서 HCl/디옥산 (4 M, 2 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 1시간 동안 교반 하였다. TLC (EtOAc: 메탄올= 2:1)로 하나의 새로운 스팟 형성을 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하여 황색 고체의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-((2-(2-(4-(피페리딘-4-일)피페라진-1-일)에톡시)에틸)아미노)이소인돌린-1,3-디온 (180 mg, 229.48 μmol, 78.12% 수율, 70% 순도, HCl)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 513.4
단계 7. 5-((2-(2-(4-(1-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조일)피페리딘-4-일)피페라진-1-일)에톡시)에틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (화합물 191)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (60 mg, 128.91 μmol) 용액에 25°C에서 DIPEA (83.31 mg, 644.57 μmol, 112.27 μL) 및 HATU (147.05 mg, 386.74 μmol)를 첨가하였다. 0.5시간 이후 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-((2-(2-(4-(피페리딘-4-일)피페라진-1-일)에톡시)에틸)아미노)이소인돌린-1,3-디온 (106.17 mg, 193.37 μmol, HCl)를 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 ~66%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석 후 EtOAc (50 mL x 5)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과 및 감압 농축하여 잔여물을 얻었다.잔여물을 prep-HPLC (컬럼: YMC Triart 30 x 150 mm x 7 μm; 이동상: [물 (HCl)-ACN]; B%: 23%-43%, 9 분) 및 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150 x 25 mm x 5 μm; 이동상: [물 (NH4HCO3)-ACN]; B%: 41%-71%, 10 분)로 정제 후 동결 건조하여 황색 고체의 5-((2-(2-(4-(1-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조일)피페리딘-4-일)피페라진-1-일)에톡시)에틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (28 mg, 27.12 μmol, 21.04% 수율, 93% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 960.4
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.05 (br s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.14 (d, J = 12 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.55 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.15 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 7.00 - 6.97 (m, 2H), 6.88 (dd, J = 2.0, 8.4 Hz, 1H), 5.02 (dd, J = 4.8, 12.4 Hz, 1H), 4.79 - 4.75 (m, 1H), 4.46 - 4.43 (m, 1H), 4.05 (t, J = 14 Hz, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.56 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.51 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.32 (s, 3H), 3.06 - 2.98 (m, 2H), 2.89 - 2.74 (m, 4H), 2.49 - 2.32 (m, 10H), 1.99 - 1.54 (m, 14H), 1.32 - 1.28 (m, 2H).
실시예 192. 5-((3-(2-(4-(1-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조일)피페리딘-4-일)피페라진-1-일)에톡시)프로필)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (화합물 192)의 합성
화합물 192는 실시예 191에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+ = 974.0, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.05 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.15 (d, J =12 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.55 (d, J = 16 Hz, 1H), 7.10 (t, J = 8 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 6 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.84 (dd, J = 8 Hz, 1.6 Hz, 1H), 5.04 - 4.99 (m, 1H), 4.81 - 4.73 (m, 1H), 4.48 - 4.40 (m, 1H), 4.05 (t, J = 14 Hz, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.52 - 3.42 (m, 5H), 3.31 - 3.29 (m, 2H), 3.24 - 3.19 (m, 2H), 3.06 - 2.99 (m, 1H), 2.91 - 2.74 (m, 2H), 2.60 - 2.53 (m, 3H), 2.46 - 2.35 (m, 10H), 2.01 - 1.83 (m, 4H), 1.83 - 1.55 (m, 10H), 1.32 - 1.28 (m, 2H).
실시예 193. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-(4-(2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일))-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아미노)에톡시)에틸)피페라진-1-일)시클로헥실)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 193)의 합성
단계 1. 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-((2-(2-히드록시에톡시)에틸)아미노)이소인돌린-1,3-디온 (3)의 합성
DMSO (5 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (1.2 g, 4.34 mmol) 용액에 25°C에서 TEA (1.32 g, 13.03 mmol, 1.81 mL) 및 2-(2-아미노에톡시)에탄올 (685.12 mg, 6.52 mmol, 652.49 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 90°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물을 물 (30 mL)로 희석 후 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과 및 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO; 12 g Sepa Flash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% 석유 에터: EtOAc gradient @ 40 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-((2-(2-히드록시에톡시)에틸)아미노)이소인돌린-1,3-디온 (0.4 g, 1.11 mmol, 25.48% 수율, 100% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 362.0
단계 2. 2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아미노)에톡시)에틸 4-메틸벤젠술포네이트 (4)의 합성
DCM (10 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-5-((2-(2-히드록시에톡시)에틸)아미노)이소인돌린-1,3-디온 (0.4 g, 1.11 mmol) 용액에 25°C에서 TosCl (633.12 mg, 3.32 mmol) 및 TEA (336.04 mg, 3.32 mmol, 462.23 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하였다. 잔여물을 물 (50 mL)로 희석 후 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과 및 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO; 20 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~80% 석유 에터: EtOAc gradient @ 60 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아미노)에톡시)에틸 4-메틸벤젠술포네이트 (270 mg, 466.12 μmol, 42.11% 수율, 89% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 516.1
단계 3. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-(4-(2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일))-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아미노)에톡시)에틸)피페라진-1-일)시클로헥실)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 193)의 합성
DMF (2 mL) 내 2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아미노)에톡시)에틸 4-메틸벤젠설포네이트 (150 mg, 290.96 μmol) 용액에 25°C에서 NaI (8.72 mg, 58.19 μmol), 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b)][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시-N-((1r,4r)-4-(피페라진-1-일)시클로헥실) 벤즈아미드 (201.86 mg, 320.06 μmol) 및 DIPEA (112.81 mg, 872.88 μmol, 152.04 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 70°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 ~70%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (30 mL)로 희석 후 EtOAc (30 mL x 4)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하여 감압 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: 3_Phenomenex Luna C18 75 x 30 mm x 3 μm; 이동상: [물(HCl) - ACN]; B%: 26%-46%,7분) 및 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150 x 25mm x 5 μm; 이동상: [물(NH4HCO3) - ACN]; B%: 42% - 72%, 9 분)로 정제 후 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-(4-(2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일))-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아미노)에톡시)에틸)피페라진-1-일)시클로헥실)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (56.2 mg, 57.47 μmol, 19.75% 수율, 99.6% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 974.5
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.05 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.23 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.82 - 7.79 (m, 1H), 7.56 (d, J = 8.0 Hz, 1H),7.17 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.14 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 7.01 - 7.00 (m, 1H), 6.90 - 6.88 (m, 1H), 5.06 - 5.01 (m, 1H), 4.84 - 4.79 (m, 1H), 4.07 (t, J = 14 Hz, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.68 - 3.65 (m, 1H), 3.56 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.52 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.39 - 3.36 (m, 2H), 3.30(s, 3H), 2.91 - 2.83 (m, 1H), 2.59 - 2.53 (m, 1H), 2.45 - 2.12 (m, 12H), 2.01 - 1.58 (m, 13H), 1.33 - 1.23 (m, 4H).
실시예 194. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-(4-(2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에톡시)에틸)피페라진-1-일)시클로헥실)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 194)의 합성
화합물 194는 실시예 191에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+ = 956.4, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.09 (s, 1H), 8.27 - 8.25 (m, 2H), 8.05 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.58 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.48 - 7.46 (m, 2H), 7.15 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.59 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 5.08 - 5.03 (m, 1H), 4.78 - 4.74 (m, 1H), 4.04 (t, J = 14 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.71 - 3.68 (m, 1H), 3.59 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.53 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.48 - 3.44 (m, 2H), 3.33 (s, 3H), 2.94 - 2.85 (m, 1H), 2.61 - 2.55 (m, 1H), 2.45 - 2.38 (m, 10H), 2.19 - 2.14 (m, 2H), 2.04 - 1.58 (m, 13H), 1.40 - 1.21 (m, 4H).
실시예 195. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-(4-(2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에톡시)아세틸)피페라진-1-일)시클로헥실)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 195)의 합성
단계 1. 2-(2-아미노에톡시)아세트산 (2)의 합성
디옥산 (10 mL) 내 2-(2-((tert-부톡시카보닐)아미노)에톡시)아세트산 (0.7 g, 3.19 mmol) 용액에 20°C에서 HCl/디옥산 (4 M, 14.00 mL, 17.54 eq)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 1시간 동안 교반 하였다. TLC (SiO2, 디클로로메탄: 메탄올 = 10:1)로 출발물질이 완전히 소모됨 및 하나의 새로운 스팟이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하여 무색 오일의 2-(2-아미노에톡시)아세트산 (0.51 g, crude, HCl)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 120.1
단계 2. 2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에톡시)아세트산 (4)의 합성
DMSO (15 mL) 내 2-(2,6-디옥소-3-피페리딜)-4-플루오로-이소인돌린-1,3-디온 (800 mg, 2.90 mmol) 용액에 20°C에서 DIPEA (1.12 g, 8.69 mmol, 1.51 mL) 및 2-(2-아미노에톡시)아세트산 (495.66 mg, 3.19 mmol, HCl)를 첨가하고 생성된 혼합물을 130°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS에서 55%의 2-(2,6-디옥소-3-피페리딜)-4-플루오로-이소인돌린-1,3-디온이 남아있음 및 원하는 질량의 18% 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (10 mL)로 희석 후 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하였다. 수층을 진공 농축하여 조 생성물 (1.7 g, 43% 순도)을 수득하였다. 조 생성물을 prep-HPLC (컬럼: 3_Phenomenex Luna C18 75*30 mm*3μm; 이동상: [물 (HCl) -ACN];B%: 13%-43%, 7 분)로 정제 후 동결 건조하여 황색 고체의 2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에톡시)아세트산 (162 mg, 431.62 μmol, 14.90% 수율)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 376.3
단계 3. tert-부틸 ((1r,4r)-4-(4-(2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에톡시)아세틸)피페라진-1-일)시클로헥실)카바메이트 (6)의 합성
DMF (6 mL) 내 2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에톡시)아세트산 (162 mg, 431.62 μmol) 및 tert-부틸 N-(4-피페라진-1-일사이클로헥실)카바메이트 (134.56 mg, 474.78 μmol) 용액에 20°C에서 HOBt (87.48 mg, 647.43 μmol), EDCI (124.11 mg, 647.43 μmol) 및 TEA (131.02 mg, 1.29 mmol, 180.23 μL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 모든 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 77% 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (12 mL)로 희석 후 EtOAc (12 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 염수 (12 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (10 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 to 0~10% 디클로로메탄/메탄올 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 tert-부틸 ((1r,4r)-4-(4-(2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에톡시)아세틸)피페라진-1-일)시클로헥실)카바메이트 (180 mg, 275.31 μmol, 63.79% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 641.2
단계 4. 4-((2-(2-(4-((1r,4r)-4-아미노시클로헥실)피페라진-1-일)-2-옥소에톡시)에틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (7)의 합성
디옥산 (2 mL) 내 tert-부틸 ((1r,4r)-4-(4-(2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에톡시)아세틸)피페라진-1-일)사이클로헥실)카바메이트 (180 mg, 280.93 μmol) 용액에 20°C에서 HCl/디옥산 (4 M, 10 mL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 0.5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 85% 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하여 황색 고체의 4-((2-(2-(4-((1r,4r)-4-아미노시클로헥실)피페라진-1-일)-2-옥소에톡시)에틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (165 mg, crude, HCl)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 541.1
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-(4-(2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에톡시)아세틸)피페라진-1-일)시클로헥실)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 195)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (80 mg, 171.89 μmol) 용액에 HATU (71.89 mg, 189.07 μmol) 및 DIPEA (44.43 mg, 343.77 μmol, 59.88 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 20°C에서 10분 동안 교반 후 DMF (2 mL) 내 4-((2-(2-(4-((1r,4r)-4-아미노시클로헥실)피페라진-1-일)-2-옥소에톡시)에틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (109.11 mg, 189.07 μmol, HCl) 및 DIPEA (44.43 mg, 343.77 μmol, 59.88 μL) 용액을 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 모든 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 61% 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (12 mL)로 희석 후 EtOAc (12 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 염수 (12 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi C18 150*25 mm* 10μm; 이동상: [물 (FA) -ACN];B%: 20%-50%, 10 분) 로 정제 후 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25 mm* 5μm; 이동상: [물 (NH4HCO3) -ACN];B%: 41%-71%, 8 분)로 재정제하고 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-(4-(2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에톡시)아세틸)피페라진-1-일)시클로헥실)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (24.7 mg, 22.75 μmol, 13.24% 수율, 91% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 987.5
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.10 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.23 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.81 (dd, J = 3.5, 7.8 Hz, 1H), 7.62 - 7.55 (m, 1H), 7.21 - 7.12 (m, 2H), 7.05 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 6.66 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 5.06 (dd, J = 5.4, 13.0 Hz, 1H), 4.87 - 4.76 (m, 1H), 4.18 (s, 2H), 4.12 - 4.02 (m, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.73 - 3.62 (m, 3H), 3.57 - 3.43 (m, 6H), 3.33 (s, 3H), 2.96 - 2.84 (m, 1H), 2.63 - 2.54 (m, 2H), 2.44 - 2.38 (m, 4H), 2.30 - 2.18 (m, 1H), 2.07 - 1.93 (m, 3H), 1.93 - 1.87 (m, 2H), 1.78 - 1.70 (m, 4H), 1.68 - 1.56 (m, 4H), 1.39 - 1.19 (m, 4H).
실시예 196. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-(4-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에틸)피페라진-1-일)시클로헥실)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 196)의 합성
단계 1. 벤질 4-((1r,4r)-4-((tert-부톡시카보닐)아미노)시클로헥실)피페라진-1-카복실레이트 (2)의 합성
벤질 4-(4-((tert-부톡시카보닐)아미노)시클로헥실)피페라진-1-카복실레이트 (11 g)을 prep-HPLC (컬럼: Kromasil Eternity XT 250 * 80 mm *10 μm; 이동상: [물 (암모니아 히드록시드 v/v) - ACN]; B%: 40%-70%, 20 분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 백색 고체의 벤질 4-((1r,4r)-4-((tert-부톡시카보닐)아미노)시클로헥실)피페라진-1-카복실레이트 (5.4 g, 12.67 mmol, 66.15% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=418.6
SFC (retention time: peak 1 = 1.589 분; method: 컬럼: Chiralpak AD-3 50Х4.6 mm I. D., 3 μm; 이동상: Phase A for CO2 및 Phase B for IPA (0.05%DEA); Gradient elution: B in A from 5% to 40%; Flow rate: 3 mL/분; 검출기: DAD; 컬럼 온도: 35 oC; Back Pressure: 100 Bar).
단계 2. 벤질 4-((1r,4r)-4-아미노시클로헥실)피페라진-1-카복실레이트 (3)의 합성
디옥산 (10 mL) 내 벤질 4-((1r,4r)-4-((tert-부톡시카보닐)아미노)시클로헥실)피페라진-1-카복실레이트 (1 g, 2.39 mmol) 용액에 20°C에서 HCl/디옥산 (4 M, 20 mL, 33.40 eq)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 0.5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하여 백색 고체의 벤질 4-((1r,4r)-4-아미노시클로헥실)피페라진-1-카복실레이트 (1 g, crude, HCl)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 318.2
단계 3. 벤질 4-((1r,4r)-4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미도)시클로헥실)피페라진-1-카복실레이트 (5)의 합성
DMF (10 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (1 g, 2.15 mmol) 용액에 HATU (898.65 mg, 2.36 mmol) 및 DIPEA (555.38 mg, 4.30 mmol, 748.49 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 20°C에서 10분 동안 교반 후 DMF (10 mL) 내 벤질 4-((1r,4r)-4-아미노시클로헥실)피페라진-1-카복실레이트 (836.39 mg, 2.36 mmol, HCl) 용액 및 DIPEA (555.38 mg, 4.30 mmol, 748.49 μL)를 20°C에서 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 피크 (84 %)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (20 mL)로 희석 후 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 염수 (20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (25 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100 % EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 주황색 고체의 벤질 4-((1r,4r)-4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미도)시클로헥실)피페라진-1-카복실레이트 (1.3 g, 1.65 mmol, 76.74% 수율, 97% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 765.2
단계 4. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시-N-((1r,4r)-4-(피페라진-1-일)사이클로헥실)벤즈아미드 (6)의 합성
CF3CH2OH (20 mL) 내 벤질 4-((1r,4r)-4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미도)시클로헥실)피페라진-1-카복실레이트 (1.3 g, 1.70 mmol) 용액에 N2 기체 하 Pd/C (300 mg, 169.97 μmol, 10% 순도)를 첨가하였다. 현탁액을 H2 하 3차례 탈기 및 퍼지하였다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하 20°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 피크 (93 %)를 확인하였다. 반응 혼합물을 CF3CH2OH (60 mL)로 희석하고 여과하였다. 여과물을 진공 농축하여 황색 오일의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시-N-((1r,4r)-4-(피페라진-1-일)사이클로헥실)벤즈아미드 (1.1 g, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 631.2
단계 5. 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-((2-히드록시에틸)아미노)이소인돌린-1,3-디온 (7B)의 합성
DMSO (10 mL) 내 2-(2,6-디옥소-3-피페리딜)-4-플루오로-이소인돌린-1,3-디온 (0.5 g, 1.81 mmol) 용액에 20°C에서 DIPEA (701.85 mg, 5.43 mmol, 945.89 μL) 및 2-아미노에탄올 (132.68 mg, 2.17 mmol, 131.37 μL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 130°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 2-(2,6-디옥소-3-피페리딜)-4-플루오로-이소인돌린-1,3-디온이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 피크 (95 %)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (15 mL)로 희석 후 EtOAc (15 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (10 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-((2-히드록시에틸)아미노)이소인돌린-1,3-디온 (569 mg, 1.79 mmol, 99.07% 수율)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 318.4
단계 6. 2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에틸 4-메틸벤젠술포네이트 (7)의 합성
DCM (10 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-((2-히드록시에틸)아미노)이소인돌린-1,3-디온 (569 mg, 1.79 mmol) 용액에 20°C에서 TEA (544.38 mg, 5.38 mmol, 748.80 μL) 및 TosCl (854.71 mg, 4.48 mmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-((2-히드록시에틸)아미노)이소인돌린-1,3-디온이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 피크 (27 %)를 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (10 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100 % EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하였다. 조 생성물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex luna C18 150 * 40 mm * 15 μm; 이동상: [물 (FA) - ACN]; B%: 32%-62%, 10 분)로 재정제하고 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에틸 4-메틸벤젠술포네이트 (117 mg, 248.15 μmol, 13.84% 수율, 100% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 472.0
단계 7. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-(4-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에틸)피페라진-1-일)시클로헥실)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 196)의 합성
DMF (4 mL) 내 2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에틸 4-메틸벤젠술포네이트 (115 mg, 243.91 μmol) 및 4-((9-시클로펜틸- 7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시-N-((1r,4r)-4-(피페라진-1-일)시클로헥실)벤즈아미드 (153.84 mg, 243.91 μmol) 용액에 20°C에서 NaI (7.31 mg, 48.78 μmol) 및 DIPEA (94.57 mg, 731.73 μmol, 127.46 μL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 60°C에서 32시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 피크 (68 %)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (10 mL)로 희석 후 EtOAc (10 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Unisil 3-100 C18 Ultra 150 * 50 mm * 3 μm; 이동상: [물 (FA) - ACN]; B%: 18%-48%, 10 분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 생성물 A (106.6 mg)를 수득하였다. 생성물 A (106.6 mg)를 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge BEH C18 150 * 25 mm * 5 μm; 이동상: [물 (NH4HCO3) - ACN]; B%: 49%-79%, 9 분)로 재정제하고 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-(4-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에틸)피페라진-1-일)시클로헥실)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (47.6 mg, 46.58 μmol, 19.10% 수율, 91% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 929.9
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.09 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.24 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.82 (br dd, J = 3.4, 7.8 Hz, 1H), 7.59 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.74 (br s, 1H), 5.07 (dd, J = 5.3, 12.9 Hz, 1H), 4.82 (quin, J = 8.1 Hz, 1H), 4.08 (br t, J = 13.9 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.75 - 3.62 (m, 1H), 3.38 - 3.35 (m, 2H), 3.32 (s, 3H), 2.96 - 2.81 (m, 1H), 2.63 - 2.53 (m, 6H), 2.46 - 2.34 (m, 4H), 2.24 - 2.20 (m, 1H), 2.08 - 1.54 (m, 15H), 1.40 - 1.24 (m, 4H).
실시예 197. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-(4-(3-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)프로필)피페라진-1-일)시클로헥실)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 197)의 합성
화합물 197은 실시예 196에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+ = 943.9, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.10 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.24 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.81 (br dd, J = 3.5, 7.5 Hz, 1H), 7.61 - 7.54 (m, 1H), 7.19 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.77 (br t, J = 5.8 Hz, 1H), 5.05 (dd, J = 5.3, 12.9 Hz, 1H), 4.87 - 4.77 (m, 1H), 4.08 (br t, J = 13.9 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.74 - 3.62 (m, 1H), 3.32 (s, 5H), 2.95 - 2.83 (m, 1H), 2.64 - 2.53 (m, 6H), 2.38 - 2.32 (m, 4H), 2.21 (m, 1H), 2.07 - 1.53 (m, 17H), 1.39 - 1.23 (m, 4H).
실시예 198. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-((1r,4r)-4-(4-(2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)옥시)에톡시)에틸)피페라진-1-일)시클로헥실)-3-메톡시벤즈아미드 (트랜스) (화합물 198)의 합성
화합물 198은 실시예 191에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=943.6, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 10.98 (br s, 1H), 8.29-8.24 (m, 2H), 8.06 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.52-7.45 (m, 3H), 7.32 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.16-5.08 (m, 1H), 4.76 (br t, J = 7.8 Hz, 1H), 4.38-4.20 (m, 4H), 4.04 (br t, J = 14.1 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.78-3.66 (m, 4H), 3.60-3.56 (m, 2H), 3.31 (s, 3H), 3.02-2.88 (m, 2H), 2.63-2.55 (m, 4H), 2.44-2.38 (m, 6H), 2.21-2.13 (m, 1H), 2.00-1.86 (m, 5H), 1.82-1.78 (m, 2H), 1.71-1.68 (m, 2H), 1.64-1.58 (m, 4H), 1.42-1.24 (m, 4H).
실시예 199. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(6-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아제티딘-3-일)옥시)헥사노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 199)의 합성
단계 1. tert-부틸 (1-(6-브로모헥사노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (3)의 합성
DCM (10 mL) 내 tert-부틸 피페리딘-4-일카바메이트 (2.06 g, 10.30 mmol) 용액에 25°C에서 TEA (2.84 g, 28.10 mmol, 3.91 mL) 및 6-브로모헥사노일 클로라이드 (2 g, 9.37 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 2시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터: EtOAc = 1:2)로 여러 개의 새로운 스팟 형성을 확인하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하여 DCM을 제거했다. 잔여물을 물 (50 mL)로 희석 후 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 포화 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하여 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO; 20 g Sepa Flash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~50% 석유 에터: EtOAc gradient @ 80 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 tert-부틸 (1-(6-브로모헥사노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (2.6 g, 6.66 mmol, 71.13% 수율, 96.7% 순도)를 수득하였다. MS(M-Boc+H)+ = 323.0
단계 2. 벤질 3-((6-(4-((tert-부톡시카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-6-옥소헥실)옥시)아제티딘-1-카복실레이트 (5)의 합성
DMSO (10 mL) 내 tert-부틸(1-(6-브로모헥사노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (1.0 g, 2.65 mmol) 용액에 25°C에서 물 (4 mL) 내 NaOH (159.01 mg, 3.98 mmol) 용액 및 벤질 3-하이드록시아제티딘-1-카복실레이트(1.65g, 7.95mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 12시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터: EtOAc = 1:2)로 여러 개의 새로운 스팟 형성을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석 후 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 포화 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고 여과하여 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO; 20 g Sepa Flash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% 석유 에터: EtOAc gradient @ 80 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 벤질 3-((6-(4-((tert-부톡시카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-6-옥소헥실)옥시)아제티딘-1-카복실레이트 (1 g, 1.93 mmol, 72.90% 수율, 97.3% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 504.4
단계 3. tert-부틸 (1-(6-(아제티딘-3-일옥시)헥사노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (6)의 합성
CF3CH2OH (10 mL) 내 벤질 3-((6-(4-((tert-부톡시카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-6-옥소헥실)옥시)아제티딘-1-카복실레이트 (1 g, 1.99 mmol) 혼합물에 N2 기체 하 25°C에서 Pd/C (0.2 g, 397.12 μmol, 10% 순도)를 첨가하였다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하 25°C에서 12시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터: EtOAc = 1:2)로 하나의 새로운 스팟 형성을 확인하였다. 혼합물을 여과하여 촉매를 제거하였다. 여과물을 감압 농축하여 밝은 황색 오일의 tert-부틸 (1-(6-(아제티딘-3-일옥시)헥사노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (0.8 g, 1.89 mmol, 95.19% 수율, 87.3% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 370.2
단계 4. tert-부틸 (1-(6-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아제티딘-3-일)옥시)헥사노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (8)의 합성
DMSO (10 mL) 내 tert-부틸 (1-(6-(아제티딘-3-일옥시)헥사노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (0.8 g, 2.17 mmol) 용액에 25°C에서 TEA (657.25 mg, 6.50 mmol, 904.06μL) 및 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (598.04 mg, 2.17 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 90°C에서 6시간 동안 교반 하였다. LCMS로 반응이 완료됨을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석 후 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 포화 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하여 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO; 20 g Sepa Flash 실리카 플래시 컬럼, eluent of 0~100% 석유 에터: EtOAc gradient @ 60 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 tert-부틸 (1-(6-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아제티딘-3-일)옥시)헥사노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (1.1 g, 1.69 mmol, 77.87% 수율, 95.9% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 626.2
단계 5. 4-(3-((6-(4-아미노피페리딘-1-일)-6-옥소헥실)옥시)아제티딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (9)의 합성
DCM (10 mL) 내 tert-부틸 (1-(6-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아제티딘-3-일)옥시)헥사노일)피페리딘-4-일)카바메이트 (1.1 g, 1.76 mmol) 용액에 0°C에서 TMSOTf (976.82 mg, 4.40 mmol, 794.17 μL) 및 2,6-루티딘 (753.50 mg, 7.03 mmol, 819.02 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 2시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터: EtOAc = 10:1)로 하나의 새로운 스팟 형성을 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하여 황색 오일의 4-(3-((6-(4-아미노피페리딘-1-일)-6-옥소헥실)옥시)아제티딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (3 g, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 526.1
단계 6. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(6-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아제티딘-3-일)옥시)헥사노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 199)의 합성
DMF (5 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (200 mg, 446.99 μmol) 용액에 25°C에서 DIPEA (173.31 mg, 1.34 mmol, 233.57 μL) 및 HATU (339.92 mg, 893.99 μmol)를 첨가하였다. 0.5시간 이후 4-(3-((6-(4-아미노피페리딘-1-일)-6-옥소헥실)옥시)아제티딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (469.87 mg, 893.99 μmol)을 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석 후 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 포화 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하여 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO; 15 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~60% 석유 에터: (EtOAc/메탄올=2/1) gradient @ 50 mL/분) 정제 후 prep-HPLC(컬럼: Waters Xbridge 150 x 25 mm x 5 μm; 이동상: [물(NH4HCO3)-ACN]; B%: 40%-70%, 9분) 및 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150 x 25 mm x 5 μm; 이동상: [물(NH4HCO3)-ACN]; B%: 43%-73%,10분)로 정제하였다. 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(6-((1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아제티딘-3-일)옥시)헥사노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (80 mg, 81.67 μmol, 66.10% 수율, 97.5% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 955.4
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.05 (brs, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.14 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.77 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.57 - 7.53 (m, 1H), 7.11 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 6.94 - 6.92 (m, 1H), 6.78 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.06 - 5.02 (m, 1H), 4.72 - 4.68 (m, 1H), 4.40 - 4.33 (m, 3H), 4.05 -3.94 (m, 5H), 3.87 -3.80 (m, 5H), 3.41 - 3.40 (m, 1H), 3.31 (s, 3H), 3.08 - 3.01 (m, 1H), 2.90 - 2.81 (m, 1H), 2.59 - 2.53 (m, 2H), 2.49- 2.44 (m, 2H), 2.05 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.02 - 1.96 (m, 1H), 1.93 - 1.85 (m, 2H), 1.78 - 1.72 (m, 2H), 1.69 - 1.64 (m, 2H), 1.60 - 1.46 (m, 8H), 1.36 - 1.25 (m, 4H).
실시예 200. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아제티딘-3-일)피페라진-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 200)의 합성
단계 1. tert-부틸 4-(1-((벤질옥시)카보닐)아제티딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (2)의 합성
DCM (100 mL) 내 벤질 3-옥소아제티딘-1-카복실레이트 (10 g, 48.73 mmol) 및 tert-부틸 피페라진-1-카복실레이트 (9.08 g, 48.73 mmol) 용액에 AcOH (2.93 g, 48.73 mmol, 2.79 mL)를 20 °C 에서 첨가하고, NaBH(OAc)3 (30.98 g, 146.19 mmol)를 천천히 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 51% 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (200 mL)로 희석하고 DCM (100 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (80 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~33% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 tert-부틸 4-(1-((벤질옥시)카보닐)아제티딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (13.9 g, 37.02 mmol, 75.97% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=376.2
단계 2. 벤질 3-(피페라진-1-일)아제티딘-1-카복실레이트 (3)의 합성
디옥산 (20 mL) 내 tert-부틸 4-(1-((벤질옥시)카보닐)아제티딘-3-일)피페라진-1-카복실레이트 (5 g, 13.32 mmol) 용액에 HCl/디옥산 (4 M, 50.00 mL)를 20 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 71% 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하여 백색 고체의 벤질 3-(피페라진-1-일)아제티딘-1-카복실레이트 (4.2 g, crude, HCl)를 수득하였다. MS(M+H)+=276.2
단계 3. 벤질 3-(4-니트로소피페라진-1-일)아제티딘-1-카복실레이트 (4)의 합성
H2O (60 mL) 내 벤질 3-피페라진-1-일아제티딘-1-카복실레이트 (4.2 g, crude, HCl) 용액에 NaNO2 (1.86 g, 26.94 mmol)를 0 °C 에서 첨가한 후, AcOH (2.43 g, 40.41 mmol, 2.31 mL)를 0 °C 에서 한 방울씩 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 91% 피크가 검출되었음을 확인하였다. 포화 NaHCO3 (60 mL)를 이 반응 혼합물에 첨가하여 pH=9로 조정하고 EtOAc (60 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고 농축하여 황색 오일의 벤질 3-(4-니트로소피페라진-1-일)아제티딘-1-카복실레이트 (3.9 g, 12.30 mmol, 91.33% 수율, 96% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=305.2
단계 4. 벤질 3-(4-아미노피페라진-1-일)아제티딘-1-카복실레이트 (5)의 합성
MeOH (100 mL) 내 벤질 3-(4-니트로소피페라진-1-일)아제티딘-1-카복실레이트 (3.9 g, 12.81 mmol) 용액에 Zn (4.36 g, 66.64 mmol)을 0 °C에서 천천히 첨가한 후, AcOH (11.54 g, 192.22 mmol, 10.99 mL)을 0 °C에서 한 방울씩 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 4시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 80% 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 MeOH (100 mL)로 희석하고 여과하였다. 여과물을 진공 농축하여 황색 고체의 벤질 3-(4-아미노피페라진-1-일)아제티딘-1-카복실레이트 (3.72 g, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+=291.2
단계 5. N-(4-(아제티딘-3-일)피페라진-1-일)-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미드 (7)의 합성
DMF (5 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (500 mg, 1.12 mmol) 용액에 HATU (467.39 mg, 1.23 mmol) 및 DIPEA (288.85 mg, 2.23 mmol, 389.29 μL)를 첨가하고, 혼합물을 20 °C 에서 10분간 교반 후 DMF (5 mL) 내 벤질 3-(4-아미노피페라진-1-일)아제티딘-1-카복실레이트 (454.26 mg, 1.56 mmol) 및 DIPEA (433.28 mg, 3.35 mmol, 583.94 μL, 3 eq) 용액을 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 63% 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (30 mL)로 희석하고 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (25 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 0~5% 디클로로메탄 / 메탄올 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 N-(4-(아제티딘-3-일)피페라진-1-일)-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미드 (783 mg, 1.09 mmol, 97.35% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=720.2
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 9.64-9.22 (m, 1H), 8.33-8.22 (m, 2H), 7.98 (s, 1H), 7.50-7.26 (m, 7H), 5.05 (s, 2H), 4.76 (q, J = 7.8 Hz, 1H), 4.29-3.62 (m, 10H), 3.33 (s, 3H), 3.12-2.84 (m, 4H), 2.52 (s, 2H), 2.49-2.34 (m, 2H), 2.00-1.88 (m, 2H), 1.77-1.62 (m, 2H), 1.66-1.52 (m, 4H).
단계 6. N-(4-(아제티딘-3-일)피페라진-1-일)-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미드 (8)의 합성
CF3CH2OH (15 mL) 내 N-(4-(아제티딘-3-일)피페라진-1-일)-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미드 (703 mg, 976.69 μmol) 용액에 Pd/C (200 mg, 10% 순도)를 N2 기체 하에서 첨가하였다. 현탁액을 탈기하고 H2로 3차례 퍼지하고 생성된 혼합물을 20 °C H2 (15 Psi) 하에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 반응이 없음을 확인하고, Pd(OH)2/C (200 mg, 20% 순도)를 이 반응 혼합물에 N2 기체 하에서 첨가하였다. 현탁액을 탈기하고 H2로 3차례 퍼지하고 생성된 혼합물을 40 °C H2 (15 Psi) 하에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 58%의 출발물질이 남아있음 및 원하는 질량의 30% 피크가 검출되었음을 확인하고 Pd(OH)2/C (100 mg, 20% 순도)를 이 반응 혼합물에 N2 기체 하에서 첨가하였다. 현탁액을 탈기하고 H2로 3차례 퍼지하였다. 혼합물을 50 °C H2 (15 Psi) 하에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 17%의 출발물질이 남아있음 및 원하는 질량의 81% 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 CF3CH2OH (40 mL)로 희석하고 여과하였다. 여과물을 진공 농축하여 황색 오일의 N-(4-(아제티딘-3-일)피페라진-1-일)-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미드 (321 mg, 548.11 μmol, 56.12% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=586.3
단계 7. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아제티딘-3-일)피페라진-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 200)의 합성
DMSO (3 mL) 내 2-(2,6-디옥소-3-피페리딜)-4-플루오로-이소인돌린-1,3-디온 (50 mg, 181.02 μmol) 용액에 DIPEA (70.18 mg, 543.05 μmol, 94.59 μL) 및 N-(4-(아제티딘-3-일)피페라진-1-일)-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미드 (116.61 mg, 199.12 μmol)를 20 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 80 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 54%의 2-(2,6-디옥소-3-피페리딜)-4-플루오로-이소인돌린-1,3-디온이 남아있음 및 원하는 질량의 37% 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (12 mL)로 희석하고 EtOAc (12 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 염수 (12 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Unisil 3-100 C18 Ultra 150*50 mm*3 μm;이동상:[물 (FA)-ACN];B%: 16%-46%, 7 분)로 정제하고, prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25 mm* 5 μm;이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN];B%: 36%-66%, 8 분)로 재정제하고 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아제티딘-3-일)피페라진-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (21.1 mg, 24.81 μmol, 13.71% 수율, 99% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=842.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.07 (s, 1H), 9.39 (s, 1H), 8.30-8.23 (m, 2H), 7.97 (s, 1H), 7.62-7.55 (m, 1H), 7.45-7.38 (m, 2H), 7.13 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.81 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 5.05 (dd, J = 5.5, 12.6 Hz, 1H), 4.83-4.70 (m, 1H), 4.38-4.20 (m, 2H), 4.09-3.95 (m, 4H), 3.93 (s, 3H), 3.32-3.22 (m, 4H), 3.01-2.82 (m, 5H), 2.63-2.52 (m, 6H), 2.05-1.89 (m, 3H), 1.74-1.68 (m, 2H), 1.65-1.52 (m, 4H).
실시예 201. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아제티딘-3-일)피페라진-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 201)의 합성
DMSO (5 mL) 내 2-(2,6-디옥소-3-피페리딜)-5-플루오로-이소인돌린-1,3-디온 (70 mg, 253.42 μmol) 및 N-(4-(아제티딘-3-일)피페라진-1-일)-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미드 (155.84 mg, 266.09 μmol) 용액에 DIPEA (98.26 mg, 760.26 μmol, 132.42 μL)를 20 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 80 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 61%의 2-(2,6-디옥소-3-피페리딜)-5-플루오로-이소인돌린-1,3-디온이 남아있음 및 원하는 질량의 33% 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (12 mL)로 희석하고 EtOAc (12 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 염수 (12 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Unisil 3-100 C18 Ultra 150*50 mm*3 μm;이동상:[물 (FA)-ACN];B%: 16%-46%, 7 분)로 정제하고, prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25 mm* 5 μm;이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN];B%: 36%-66%, 8 분)로 재정제하고 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아제티딘-3-일)피페라진-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (25.3 mg, 29.75 μmol, 11.74% 수율, 99% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=842.1
1H NMR (400 MHz, CD3CN) δ = 8.94 (br s, 1H), 8.47 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.64-7.57 (m, 1H), 7.42-7.33 (m, 2H), 6.78 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 6.62 (dd, J = 2.0, 8.4 Hz, 1H), 4.93 (dd, J = 5.1, 12.3 Hz, 1H), 4.89-4.81 (m, 1H), 4.15-4.07 (m, 2H), 4.01-3.91 (m, 5H), 3.86 (dd, J = 5.0, 8.4 Hz, 2H), 3.39 (q, J = 5.7 Hz, 1H), 3.33 (s, 3H), 3.02-2.96 (m, 4H), 2.82-2.44 (m, 7H), 2.12-2.06 (m, 1H), 2.06-1.98 (m, 2H), 1.81-1.71 (m, 2H), 1.71-1.56 (m, 4H).
실시예 202. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-(1-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸)아제티딘-3-일)에틸)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 202)의 합성
화합물 202는 실시예 200에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=883.1, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.14 (br s, 1H), 8.34-8.28 (m, 2H), 8.27 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.93 (br d, J = 6.6 Hz, 1H), 7.89-7.79 (m, 2H), 7.49 (br s, 2H), 5.14 (td, J = 2.6, 12.7 Hz, 1H), 4.83-4.72 (m, 1H), 4.22-3.99 (m, 5H), 3.94 (s, 3H), 3.90-3.83 (m, 1H), 3.78-3.66 (m, 2H), 3.56 (br s, 8H), 3.33 (s, 3H), 2.97-2.81 (m, 1H), 2.64-2.57 (m, 2H), 2.29-2.17 (m, 1H), 2.10-2.00 (m, 3H), 2.00-1.87 (m, 4H), 1.87-1.78 (m, 1H), 1.76-1.66 (m, 2H), 1.66-1.53 (m, 4H).
실시예 203. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(1-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸)아제티딘-3-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 203)의 합성
단계 1. tert-부틸 (E)-3-(3-메톡시-3-옥소프로-1-펜-1-일)아제티딘-1-카복실레이트 (3)의 합성
THF (10 mL) 내 메틸 2-(디메톡시포스포릴)아세테이트 (1.18 g, 6.48 mmol, 936.90 μL) 용액에 DBU (904.12 mg, 5.94 mmol, 895.17 μL) 및 LiCl (251.22 mg, 5.93 mmol, 121.36 μL)를 0 °C 에서 첨가하고, 혼합물을 0 °C 에서 10분간 교반 하였다. THF (10 mL) 내 tert-부틸 3-포르밀아제티딘-1-카복실레이트 (1 g, 5.40 mmol) 용액을 0 °C 에서 첨가하고, 생성된 혼합물을 25 °C 에서 30분간 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 NH4Cl (20 mL)로 희석하고, EtOAc (20 mL Х 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (20 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하였다. 여과물을 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (Biotage; 20 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~15% EtOAc/석유 에터 gradient @ 40 mL/분)로 정제하여 무색 오일의 tert-부틸 (E)-3-(3-메톡시-3-옥소프로-1-펜-1-일)아제티딘-1-카복실레이트 (1.2 g, 4.97 mmol, 92.12% 수율, 100% 순도)를 수득하였다. MS(M-56+H)+=186.0
단계 2. tert-부틸 3-(3-메톡시-3-옥소프로필)아제티딘-1-카복실레이트 (4)의 합성
CF3CH2OH (10 mL) 내 tert-부틸 (E)-3-(3-메톡시-3-옥소프로-1-펜-1-일)아제티딘-1-카복실레이트 (1.2 g, 4.97 mmol) 및 Pd/C (200 mg, 10% 순도) 혼합물을 탈기하고 H2로 3차례 퍼지하고, 생성된 혼합물을 20 °C H2 (15 Psi) 기체 하에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물을 셀라이트 패드로 여과하였다. 여과물을 진공 농축하여 무색 오일의 tert-부틸 3-(3-메톡시-3-옥소프로필)아제티딘-1-카복실레이트 (1.2 g, crude)를 수득하였다. MS(M-56+H)+=188.0
단계 3. 3-(1-(tert-부톡시카보닐)아제티딘-3-일)프로판산 (5)의 합성
THF (10 mL) 및 H2O (2 mL) 내 tert-부틸 3-(3-메톡시-3-옥소프로필)아제티딘-1-카복실레이트 (500 mg, 2.06 mmol) 용액에 LiOH·H2O (172.48 mg, 4.11 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하여 백색 고체의 3-(1-(tert-부톡시카보닐)아제티딘-3-일)프로판산 (480 mg, crude, Li)을 수득하였다. MS(M-56+H)+=174.5
단계 4. tert-부틸 3-(3-(4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)아제티딘-1-카복실레이트 (7)의 합성
DMF (5 mL) 내 3-(1-(tert-부톡시카보닐)아제티딘-3-일)프로판산 (143.39 mg, 625.43 μmol) 용액에 DIPEA (242.50 mg, 1.88 mmol, 326.81 μL) 및 HATU (356.71 mg, 938.14 μmol)를 첨가하고, 혼합물을 25 °C 에서 0.5시간 동안 교반 후 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(피페리딘-4-일)벤즈아미드 (360 mg, 625.43 μmol, 1 eq, FA)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 25 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (20 mL)로 희석하고, EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (20 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하였다. 여과물을 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (ISCO; 40 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~20 % EtOAc/MeOH @ 40 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 tert-부틸 3-(3-(4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)아제티딘-1-카복실레이트 (430 mg, 568.82 μmol, 90.95% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=741.5
단계 5. N-(1-(3-(아제티딘-3-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미드 (8)의 합성
DCM (10 mL) 내 tert-부틸 3-(3-(4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)피페리딘-1-일)-3-옥소프로필)아제티딘-1-카복실레이트 (300 mg, 404.95 μmol) 용액에 TFA (1.54 g, 13.51 mmol, 1.0 mL)를 첨가하고, 혼합물을 0 °C 에서 0.5시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(32%)를 확인하였다. 혼합물을 진공 농축하였다. 잔여물을 역상 HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi C18 150*25 mm* 10 μm; 이동상:[물 (FA)-ACN];B%: 14%-34%, 10 분)로 정제하였다. 용출물을 동결 건조하여 백색 고체의 N-(1-(3-(아제티딘-3-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미드 (100 mg, 131.05 μmol, 32.36% 수율, 90% 순도, FA)를 수득하였다. MS(M+H)+=641.4
단계 6. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(1-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸)아제티딘-3-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 203)의 합성
MeOH (0.5 mL) 내 N-(1-(3-(아제티딘-3-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미드 (80 mg, 116.49 μmol, FA) 및 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-카브알데히드 (166.72 mg, 582.46 μmol) 용액에 AcOH (13.99 mg, 232.98 μmol, 13.32 μL)를 첨가하고, 혼합물을 20 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. NaBH3CN (21.96 mg, 349.47 μmol)를 첨가하고, 혼합물을 20 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크(22%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하여 잔여물을 얻었다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi C18 150*25 mm* 10 μm; 이동상:[물 (FA)-ACN];B%: 19%-39%, 10 분)로 정제하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(3-(1-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸)아제티딘-3-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (10.9 mg, 10.17 μmol, 8.73% 수율, 85% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=911.5
1H NMR (400 MHz, CD3CN) δ = 9.04 (s, 1H), 8.47 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.10 (s, 1H), 8.00-7.95 (m, 1H), 7.90 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.86-7.80 (m, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.46-7.39 (m, 2H), 6.91-6.84 (m, 1H), 5.10-4.99 (m, 1H), 4.93-4.82 (m, 1H), 4.81-4.64 (m, 2H), 4.49-4.38 (m, 1H), 4.26-3.80 (m, 11H), 3.33 (s, 3H), 3.19-3.09 (m, 1H), 3.00-2.86 (m, 1H), 2.85-2.63 (m, 4H), 2.37-2.28 (m, 2H), 2.05-1.95 (m, 7H), 1.80-1.72 (m, 2H), 1.70-1.58 (m, 4H), 1.54-1.38 (m, 2H).
실시예 204. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아제티딘-3-일)아세틸)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 204)의 합성
단계 1. 메틸 2-(아제티딘-3-일)아세테이트 (2)의 합성
DCM (5 mL) 내 tert-부틸 3-(2-메톡시-2-옥소에틸)아제티딘-1-카복실레이트 (840 mg, 3.66 mmol) 용액에 TFA (1.54 g, 13.51 mmol, 1 mL)를 25 °C 에서 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터 : EtOAc = 1:1; Rf = 0)로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 새로운 스팟 형성을 확인하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하여 무색 오일의 메틸 2-(아제티딘-3-일)아세테이트 (890 mg, crude, TFA)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=130.2
단계 2. 메틸 2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아제티딘-3-일)아세테이트 (3)의 합성
DMSO (5 mL) 내 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (909.83 mg, 3.29 mmol), 메틸 2-(아제티딘-3-일)아세테이트 (890 mg, 3.66 mmol, TFA 염) 및 TEA (1.11 g, 10.98 mmol, 1.53 mL) 혼합물을 100 °C 에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물을 물 (50 mL)에 붓고 EtOAc (20 mL x 5)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (30 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하고 감압 농축하여 황색 고체의 메틸 2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아제티딘-3-일)아세테이트 (1.5 g, crude)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=386.1
단계 3. 2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아제티딘-3-일)아세트산 (4)의 합성
톨루엔 (80 mL) 내 메틸 2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아제티딘-3-일)아세테이트 (1.5 g, 3.89 mmol) 및 (n-Bu3Sn)2O (9.28 g, 15.57 mmol, 7.93 mL) 혼합물에 110 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물을 KF (2.5M, 100mL)에 붓고 EtOAc (30 mL x 5)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (25 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 80 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아제티딘-3-일)아세트산 (1 g, 2.67 mmol, 68.49% 수율, 99% 순도)을 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=372.0
단계 4. 벤질 (1-(2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아제티딘-3-일)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (5)의 합성
DMF (5 mL) 내 2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아제티딘-3-일)아세트산 (0.5 g, 1.35 mmol) 용액에 HATU (614.36 mg, 1.62 mmol) 및 DIPEA (522.05 mg, 4.04 mmol, 703.57 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 10분간 교반 하였다. 이후 벤질 피페리딘-4-일카바메이트 (378.56 mg, 1.62 mmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물을 물 (60 mL)에 붓고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (10 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (25 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 80 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 벤질 (1-(2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아제티딘-3-일)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (0.4 g, 619.45 μmol, 46.01% 수율, 91% 순도)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=588.3
단계 5. 4-(3-(2-(4-아미노피페리딘-1-일)-2-옥소에틸)아제티딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (6)의 합성
CF3CH2OH (10 mL) 내 벤질 (1-(2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아제티딘-3-일)아세틸)피페리딘-4-일)카바메이트 (0.1 g, 170.18 μmol) 용액에 Pd/C (0.1 g, 170.18 μmol, 10% 순도)를 첨가하였다. 혼합물을 25 °C H2 (15 Psi) 하에서 4시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드로 여과하고 여과물을 농축하여 황색 고체의 4-(3-(2-(4-아미노피페리딘-1-일)-2-옥소에틸)아제티딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (80 mg, crude)을 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+=454.2
단계 6. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아제티딘-3-일)아세틸)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 204)의 합성
DMF (3 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (90 mg, 193.37 μmol) 용액에 HATU (88.23 mg, 232.05 μmol) 및 DIPEA (74.97 mg, 580.12 μmol, 101.04 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 25 °C 에서 10분동안 교반 하였다. 이후 4-(3-(2-(4-아미노피페리딘-1-일)-2-옥소에틸)아제티딘-1-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (78.92 mg, 174.03 μmol)을 첨가하고 생성된 혼합물을 25 °C 에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물을 EtOAc (20 mL)로 희석하고 염수 (6 mL)로 세척하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (4 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 60 mL/분; Eluent of 0~50 % MeOH / EtOAc @ 60 mL/분)로 정제하고 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150x25 mmx 5 μm; 이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN]; B%: 40%-70%, 9 분) 및 prep-TLC (디클로로메탄 : 메탄올 = 10:1; Rf = 0.5)로 재정제하였다. 불순물을 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150x25 mmx 5 μm; 이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN]; B%: 41%-71%, 8 분)로 정제하고, 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아제티딘-3-일)아세틸)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (18.2 mg, 19.80 μmol, 43.50% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=901.2
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.24-10.84 (m, 1H), 8.33-8.20 (m, 2H), 8.04 (s, 1H), 7.97 (br dd, J = 2.8, 7.4 Hz, 1H), 7.58-7.51 (m, 1H), 7.20 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 6.76 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 5.03 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.89-4.75 (m, 1H), 4.40-4.25 (m, 3H), 4.13-3.96 (m, 3H), 3.91 (s, 3H), 3.89-3.74 (m, 3H), 3.33 (br s, 3H), 3.19-3.10 (m, 1H), 2.98-2.71 (m, 5H), 2.62-2.54 (m, 2H), 2.05-1.91 (m, 3H), 1.90-1.78 (m, 2H), 1.76-1.57 (m, 6H), 1.54-1.33 (m, 2H).
실시예 205. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(2-(1-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)아제티딘-3-일)아세틸)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 205)의 합성
화합물 205는 실시예 204에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=901.2, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.06 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.25 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.96 (dd, J = 2.9, 7.7 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 6.76 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 6.63 (dd, J = 1.9, 8.4 Hz, 1H), 5.05 (dd, J = 5.3, 12.8 Hz, 1H), 4.87-4.76 (m, 1H), 4.30 (d, J = 12.9 Hz, 1H), 4.18 (t, J = 8.2 Hz, 2H), 4.13-3.97 (m, 3H), 3.91 (s, 3H), 3.86 (d, J = 14.1 Hz, 1H), 3.72-3.63 (m, 2H), 3.30 (s, 3H), 3.19-3.09 (m, 1H), 3.09-2.99 (m, 1H), 2.95-2.70 (m, 4H), 2.62-2.53 (m, 2H), 2.08-1.91 (m, 3H), 1.91-1.78 (m, 2H), 1.76-1.56 (m, 6H), 1.55-1.32 (m, 2H).
실시예 206. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-((2S,4S)-4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)피롤리딘-2-카보닐)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 206)의 합성
단계 1. 1-(tert-부틸) 2-메틸 (2S,4R)-4-(토실옥시)피롤리딘-1,2-디카복실레이트 (2)의 합성
DCM (60 mL) 내 1-(tert-부틸) 2-메틸 (2S,4R)-4-히드록시피롤리딘-1,2-디카복실레이트 (5 g, 20.39 mmol) 용액에 TEA (6.19 g, 61.16 mmol, 8.51 mL) 및 TosCl (5.05 g, 26.50 mmol)을 20 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 33%의 출발물질이 남아있음 및 원하는 질량의 피크(20%)를 확인하였다. 생성된 혼합물을 20 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(65%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (40 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~18% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 황색 오일의 1-(tert-부틸) 2-메틸 (2S,4R)-4-(토실옥시)피롤리딘-1,2-디카복실레이트 (4.7 g, 11.53 mmol, 56.56% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. MS(M-100+H)+ = 300.3
단계 2. 1-(tert-부틸) 2-메틸 (2S,4S)-4-아지도피롤리딘-1,2-디카복실레이트 (3)의 합성
DMF (50 mL) 내 1-(tert-부틸) 2-메틸 (2S,4R)-4-(토실옥시)피롤리딘-1,2-디카복실레이트 (4.7 g, 11.77 mmol) 용액에 NaN3 (1.53 g, 23.53 mmol)를 20 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 70 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 93% 피크가 검출되었음을 확인하였다. 유기상을 H2O (150 mL)로 희석하고 EtOAc (150 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 염수 (150 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하고 농축하여 황색 오일의 1-(tert-부틸) 2-메틸 (2S,4S)-4-아지도피롤리딘-1,2-디카복실레이트 (5.3 g, crude)를 수득하였다. MS(M-N3-55)+=171.5
단계 3. 1-(tert-부틸) 2-메틸 (2S,4S)-4-아미노피롤리딘-1,2-디카복실레이트 (4)의 합성
CF3CH2OH (60 mL) 내 1-(tert-부틸) 2-메틸 (2S,4S)-4-아지도피롤리딘-1,2-디카복실레이트 (5.3 g, 19.61 mmol) 용액에 Pd/C (1 g, 10% 순도)를 N2 기체 하에서 첨가하였다. 현탁액을 탈기하고 H2로 3차례 퍼지하였다. 혼합물을 20 °C H2 (15 Psi) 하에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 EtOH (200 mL)로 희석하고 여과하였다. 여과물을 농축하여 황색 오일의 1-(tert-부틸) 2-메틸 (2S,4S)-4-아미노피롤리딘-1,2-디카복실레이트 (4.9 g, crude)를 수득하였다. MS(M-56+H)+=189.5
단계 4. 1-(tert-부틸) 2-메틸 (2S,4S)-4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)피롤리딘-1,2-디카복실레이트 (6)의 합성
DMSO (12 mL) 내 2-(2, 6-디옥소-3-피페리딜)-4-플루오로-이소인돌린-1,3-디온 (800 mg, 2.90 mmol) 용액에 TEA (879.20 mg, 8.69 mmol, 1.21 mL) 및 1-(tert-부틸) 2-메틸 (2S,4S)-4-아미노피롤리딘-1,2-디카복실레이트 (1.42 g, 5.79 mmol)를 20 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 100 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 47% 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (40 mL)로 희석하고 EtOAc (40 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 염수 (40 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (20 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~55% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 1-(tert-부틸) 2-메틸 (2S,4S)-4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)피롤리딘-1,2-디카복실레이트 (914 mg, 1.64 mmol, 56.75% 수율, 90% 순도)를 수득하였다. MS(M-100+H)+=401.2
단계 5. (2S,4S)-1-(tert-부톡시카보닐)-4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)피롤리딘-2-카복실산 (7)의 합성
톨루엔 (10 mL) 내 1-(tert-부틸) 2-메틸 (2S,4S)-4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)피롤리딘-1,2-디카복실레이트 (400 mg, 799.20 μmol) 용액에 트리부틸(트리부틸스타닐옥시) 스타난 (1.91 g, 3.20 mmol, 1.63 mL)를 20 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 110 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 79% 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하여 황색 오일의 (2S,4S)-1-(tert-부톡시카보닐)-4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)피롤리딘-2-카복실산 (389 mg, crude)을 수득하였다. MS(M-100+H)+=387.3
단계 6. tert-부틸 (2S,4S)-2-(4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미도)피페리딘-1-카보닐)-4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)피롤리딘-1-카복실레이트 (9)의 합성
DMF (8 mL) 내 (2S,4S)-1-(tert-부톡시카보닐)-4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)피롤리딘-2-카복실산 (239 mg, 491.29 μmol) 및 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시-N-(피페리딘-4-일)벤즈아미드 (286.93 mg, 491.29 μmol, HCl) 용액에 EDCI (141.27 mg, 736.94 μmol), HOBt (99.58 mg, 736.94 μmol) 및 DIPEA (190.49 mg, 1.47 mmol, 256.72 μL)를 20 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 모든 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 60% 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (25 mL)로 희석하고 EtOAc (25 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 염수 (25 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (12 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 황색 고체의 tert-부틸 (2S,4S)-2-(4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미도)피페리딘-1-카보닐)-4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)피롤리딘-1-카복실레이트 (367 mg, 361.21 μmol, 73.52% 수율)를 수득하였다. MS(M-100+H)+=916.1
단계 7. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-((2S,4S)-4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)피롤리딘-2-카보닐)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 206)의 합성
DCM (2 mL) 내 tert-부틸 (2S,4S)-2-(4-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미도)피페리딘-1-카보닐)-4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)피롤리딘-1-카복실레이트 (200 mg, 196.84 μmol) 용액에 TFA (67.33 mg, 590.53 μmol, 43.72 μL)를 20 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 82% 피크가 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex luna C18 150*25 mm* 10 μm; 이동상:[물 (TFA)-ACN];B%: 19%-49%, 10 분)로 정제하고 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25 mm* 5 μm; 이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN];B%: 39%-69%, 8 분)로 재정제하고 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-((2S,4S)-4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)피롤리딘-2-카보닐)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (44.2 mg, 47.29 μmol, 24.03% 수율, 98% 순도)를 수득하였다. SFC (retention time: peak 1=1.996, peak 2=3.296; method: 컬럼: Chiralpak AS-3 50Х4.6 mm I. D., 3 μm; 이동상: Phase A for CO2, and Phase B for IPA+ACN (0.05%DEA); Gradient elution: 40% IPA+ACN (0.05% DEA) in CO2; Flow rate: 3 mL/분; 검출기: PDA컬럼 온도: 35C; Back Pressure: 100Bar). MS(M+H)+=916.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.09 (br s, 1H), 8.31-8.21 (m, 2H), 8.04 (s, 1H), 8.02-7.90 (m, 1H), 7.64-7.55 (m, 1H), 7.20 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 7.13 (dd, J = 5.0, 8.6 Hz, 1H), 7.05 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 6.53 (dd, J = 7.6, 12.2 Hz, 1H), 5.05 (dd, J = 5.3, 12.6 Hz, 1H), 4.87-4.76 (m, 1H), 4.32 (d, J = 12.7 Hz, 1H), 4.24-4.14 (m, 1H), 4.13-3.95 (m, 5H), 3.91 (s, 3H), 3.33 (s, 3H), 3.27-3.10 (m, 2H), 3.02 (t, J = 10.8 Hz, 1H), 2.94-2.84 (m, 2H), 2.84-2.75 (m, 1H), 2.63-2.55 (m, 2H), 2.06-1.92 (m, 3H), 1.91-1.80 (m, 2H), 1.78-1.29 (m, 10H).
실시예 207. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-((2R,4S)-4-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)피롤리딘-2-카보닐)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 207)의 합성
화합물 207은 실시예 206에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=916.2, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.10 (br s, 1H), 8.33-8.19 (m, 2H), 8.07-7.90 (m, 2H), 7.60 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.45 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 5.05 (dd, J = 5.4, 12.7 Hz, 1H), 4.87-4.76 (m, 1H), 4.38-4.26 (m, 1H), 4.19-3.98 (m, 5H), 3.91 (s, 4H), 3.33 (s, 3H), 3.24-3.00 (m, 2H), 2.93-2.75 (m, 2H), 2.66-2.53 (m, 4H), 2.10 (dd, J = 3.9, 5.7 Hz, 1H), 2.07-1.91 (m, 4H), 1.91-1.79 (m, 2H), 1.78-1.55 (m, 6H), 1.54-1.35 (m, 2H).
실시예 208. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(7-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-7-아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 208)의 합성
단계 1. tert-부틸 2-(4-(((벤질옥시)카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (3)의 합성
DCE (10 mL) 내 tert-부틸 2-옥소-7-아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (0.5 g, 2.09 mmol) 용액에 25°C에서 벤질 피페리딘-4-일카바메이트 (538.47 mg, 2.30 mmol)를 첨가하였다. 0.5시간 동안 교반 후 NaBH(OAc)3 (664.23 mg, 3.13 mmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 25°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 ~ 97%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석 후 DCM (50 mL x 3)으로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과 및 감압 농축하여 백색 고체의 tert-부틸 2-(4-(((벤질옥시)카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (960 mg, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 458.2
단계 2. 벤질 (1-(7-아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-4-일)카바메이트 (4)의 합성
디옥산 (5 mL) 내 tert-부틸 2-(4-(((벤질옥시)카보닐)아미노)피페리딘-1-일)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (960 mg, 2.10 mmol) 용액에 25°C에서 HCl/디옥산 (4 M, 5 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 25°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 소모됨을 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하여 백색 고체의 벤질(1-(7-아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-4-일)카바메이트 (1.2 g, crude, HCl 염)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 358.3
단계 3. 벤질 (1-(7-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-7-아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-4-일)카바메이트 (6)의 합성
DMSO (2 mL) 내 벤질(1-(7-아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-4-일)카바메이트 (100 mg, 253.84 μmol, HCl 염) 용액에 25°C에서 TEA (102.74 mg, 1.02 mmol, 141.32 μL) 및 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (73.62 mg, 266.53 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 90°C에서 4시간 동안 교반 하였다. LCMS로 ~90%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Shim-pack C18 150 x 25 x 10 μm; 이동상: [물 (FA) - ACN]; B%: 10% - 40%, 10 분)로 정제 후 동결 건조하여 황색 고체의 벤질 (1-(7-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-7-아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-4-일)카바메이트 (120 mg, 176.37 μmol, 34.74% 수율, 90.2% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 614.3
단계 4. 4-(2-(4-아미노피페리딘-1-일)-7-아자스피로[3.5]노난-7-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (7)의 합성
CF3CH2OH (5 mL) 내 벤질 (1-(7-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-7-아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-4-일)카바메이트 (120 mg, 195.53 μmol) 용액에 N2 기체 하 25°C 에서 Pd/C (30 mg, 39.11 μmol, 10% 순도)를 첨가하였다. 혼합물을 H2 기체 (15 Psi) 하 25°C 에서 3시간 동안 교반 하였다. LCMS로 ~83%의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 여과하였다. 여과물을 감압 농축하여 황색 오일의 4-(2-(4-아미노피페리딘-1-일)-7-아자스피로[3.5]노난-7-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (60 mg, 99.71 μmol, 51.00% 수율, 79.7% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 480.3
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(7-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-7-아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 208)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (58.23 mg, 125.11 μmol) 용액에 25°C에서 HATU (118.93 mg, 312.78 μmol) 및 DIEA (48.51 mg, 375.34 μmol, 65.38 μL)를 첨가하고, 0.5시간 동안 교반 후 4-(2-(4-아미노피페리딘-1-일)-7-아자스피로[3.5]노난-7-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (60 mg, 125.11 μmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 25°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 ~60 %의 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석 후 EtOAc (50 mL x 4)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 소듐 설페이트로 건조하고, 여과하여 감압 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: YMC Triart 30 x 150 mmx 7 μm; 이동상: [물(HCl)-ACN]; B%: 34%-54%,7분) 및 prep-HPLC(컬럼: Waters Xbrige 150x25 mmx5 μm; 이동상: [물(NH4HCO3) - ACN]; B%: 57% - 87%,10 분)로 정제 후 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(1-(7-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-7-아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-4-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (9 mg, 9.42 μmol, 7.53% 수율, 97% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 927.4
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.08 (br. s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.24 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.90 - 7.87 (m, 1H), 7.68 - 7.65 (m, 1H), 7.32 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.18 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 5.10 - 5.06 (dd, J = 5.2, 12.8 Hz, 1H), 4.84 - 4.80 (m, 1H), 4.07 (t, J = 14 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.75 - 3.72 (m, 1H), 3.30 (s, 3H), 3.25 - 3.15 (m, 5H), 2.88 - 2.69 (m, 4H), 2.61 - 2.56 (m, 3H), 2.02 - 1.95 (m, 3H), 1.82 - 1.72 (m, 8H), 1.64 - 1.48 (m, 10H).
실시예 209. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(7-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-1-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 209)의 합성
DMF (3 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (440mg, 945.37μmol) 용액에 HATU (395.41 mg, 1.04 mmol) 및 DIPEA (366.55 mg, 2.84 mmol, 494.00 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 20°C에서 10분 동안 교반하고 DMF (3 mL) 내 4-(2-(1-아미노피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (545.17mg, 1.13mmol) 용액을 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 모든 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 피크 (38 %)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (15 mL)로 희석 후 EtOAc (15 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (15 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 로 건조하고, 여과하여 농축하였다.잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (10 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 0~50% 디클로로메탄/메탄올 gradient @ 100 mL/분) 및 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex luna C18 150*40 mm* 15μm;이동상: [물 (TFA) -ACN];B%: 20%-50%, 10 분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2 -일)아미노)-N-(4-(7-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난- 2-일)피페리딘-1-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (207.9 mg, 189.55 μmol, 20.05% 수율, 95% 순도, 2TFA)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 928.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.10 (s, 1H), 10.06 - 9.91 (m, 1H), 9.27 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.24 (br d, J = 13.0 Hz, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.74 - 7.66 (m, 1H), 7.42 - 7.29 (m, 2H), 7.14 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 5.14 - 5.05 (m, 1H), 4.83 (td, J = 8.2, 16.2 Hz, 1H), 4.15 - 3.96 (m, 6H), 3.91 (s, 3H), 3.39 - 3.22 (m, 6H), 3.19 (br s, 2H), 3.11 (br d, J = 9.5 Hz, 2H), 2.95 - 2.83 (m, 1H), 2.76 (br t, J = 9.7 Hz, 2H), 2.59 (br d, J = 15.9 Hz, 2H), 2.19 - 1.81 (m, 9H), 1.79 - 1.69 (m, 2H), 1.62 - 1.41 (m, 6H).
실시예 210. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(7-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-1-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 210)의 합성
DMF (3 mL) 내 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (420mg, 955.88μmol) 용액에 HATU (399.80 mg, 1.05 mmol) 및 DIPEA (370.62 mg, 2.87 mmol, 499.49 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 20°C에서 10분 동안 교반하고 DMF (3 mL) 내 4-(2-(1-아미노피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (551.22mg, 1.15mmol) 용액을 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 모든 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 피크 (46 %)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (15 mL)로 희석 후 EtOAc (15 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (15 mL x 3)로 세척 후 Na2SO4 로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (10 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 0~50% 디클로로메탄/메탄올 gradient @ 100 mL/분) 및 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex luna C18 150*40 mm* 15μm; 이동상: [물 (TFA) -ACN]; B%: 16% - 46%, 10 분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(7-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-1-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (146.7 mg, 138.62 μmol, 14.50% 수율, 96% 순도, 2TFA)를 수득하였다. MS(M+H)+=902.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.11 (s, 1H), 10.05 - 9.92 (m, 1H), 9.25 (s, 1H), 8.32 - 8.22 (m, 2H), 8.08 (s, 1H), 7.75 - 7.67 (m, 1H), 7.41 - 7.32 (m, 2H), 7.19 - 7.11 (m, 1H), 5.11 (br dd, J = 5.6, 12.7 Hz, 1H), 4.93 - 4.86 (m, 1H), 4.12 - 4.05 (m, 6H), 3.92 (s, 3H), 3.37 - 3.27 (m, 6H), 3.26 - 3.09 (m, 2H), 3.12 (br d, J = 8.6 Hz, 2H), 2.94 - 2.84 (m, 1H), 2.80 - 2.71 (m, 2H), 2.64 - 2.57 (m, 2H), 2.13 - 1.87 (m, 7H), 1.58 - 1.40 (m, 2H), 1.27 (br d, J = 6.6 Hz, 6H).
실시예 211. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(7-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 211)의 합성
단계 1. tert-부틸 2-(1-((벤질옥시)카보닐)피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (2)의 합성
MeOH (200 mL) 내 tert-부틸 2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트(4g, 17.67mmol) 및 벤질 4-옥소피페리딘-1-카복실레이트 (4.12g, 17.67mmol, 3.52mL) 용액에 0°C에서 AcOH (1.06 g, 17.67 mmol, 1.01 mL)를 첨가하였다. 이후 0°C에서 NaBH3CN (3.33 g, 53.02 mmol)를 천천히 첨가하였다. 혼합물을 0~20°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 피크 (88%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (300 mL)로 희석 후 EtOAc (300 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 포화 NaHCO3 (300 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하여 여과하였다. 잔여물을 농축하였다. 황색 오일의 화합물 tert-부틸 2-(1-((벤질옥시)카보닐)피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (7.6 g, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 444.3
단계 2. tert-부틸 2-(피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (3)의 합성
CF3CH2OH (100 mL) 내 tert-부틸 2-(1-((벤질옥시)카보닐)피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (15 g, 33.82 mmol) 용액에 N2 기체 하 Pd/C (1.5 g, 10% 순도) 및 Pd(OH)2/C (1.5 g, 20% 순도)를 첨가하였다. 현탁액을 탈기하고 H2로 3회 퍼지하였다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하 20~50 °C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 남아있음 및 원하는 질량의 피크를 확인하였다. 추가적인 Pd(OH)2/C (1.5 g, 20% 순도) 및 Pd/C (1.5 g, 10% 순도)를 N2 기체 하에서 첨가하였다. 현탁액을 탈기하고 H2로 3회 퍼지하였다. 혼합물을 H2 (15 Psi) 하 60 °C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 CF3CH2OH (500 mL)로 희석 후 여과하였다. 여과물을 진공 농축하여 황색 오일의 tert-부틸 2-(피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (18 g, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 310.54
단계 3. tert-부틸 2-(1-니트로소피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (4)의 합성
H2O (200 mL) 내 tert-부틸 2-(피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (18 g, 58.17 mmol) 용액에 0°C에서 NaNO2 (12.04 g, 174.51 mmol)를 첨가 후 0°C에서 AcOH (13.97 g, 232.67 mmol, 13.31 mL)를 한 방울씩 첨가하였다. 혼합물을 0~20 °C에서 2시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 피크 (94%)를 확인하였다. 반응 혼합물의 pH를 0°C에서 포화 NaHCO3 (200 mL)로 희석하여 약 10으로 조정하고 혼합 용매 (EtOAc : MeOH = 10 : 1, 200 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4로 건조 후 여과하였다. 여과물을 진공 농축하여 황색 고체의 tert-부틸 2-(1-니트로소피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (7.69 g, 22.72 mmol, 39.06% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+= 339.2
단계 4. tert-부틸 2-(1-(((벤질옥시)카보닐)아미노)피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (7)의 합성
THF (80 mL) 및 H2O (80 mL) 내 tert-부틸 2-(1-니트로소피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (7.69 g, 22.72 mmol) 용액에 Zn (11.89 g, 181.77 mmol)를 첨가 후 0°C에서 NH4Cl (19.45 g, 363.55 mmol)를 조금씩 첨가하였다. 혼합물을 0~20 °C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 tert-부틸 2-(1-아미노피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3,5]노난-7-카복실레이트의 질량 (97%)의 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 여과하였다. 여과물에 NaOH (5.45 g, 136.33 mmol) 및 벤질 (2,5-디옥소피롤리딘-1-일) 카보네이트 (11.33 g, 45.44 mmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 20°C에서 3시간 동안 교반 하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (200 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4 로 건조하고, 여과 및 진공 농축하여 부생성물 tert-부틸 2-(1-((벤질옥시)카보닐)피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트를 수득하였다. 수층에 20°C에서 벤질 (2,5-디옥소피롤리딘-1-일) 카보네이트 (11.33 g, 45.44 mmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 0~20 °C에서 24시간 동안 교반 하였다. LCMS로 tert-부틸 2-(1-아미노피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3,5]노난-7-카복실레이트가 남아있음 및 원하는 질량의 피크 (7%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (200 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (25 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 to 0~10% of 디클로로메탄/메탄올 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 백색 고체의 표제 화합물 (1.1g, 2.40 mmol)을 수득하였다. 수층에 20°C에서 벤질 (2,5-디옥소피롤리딘-1-일) 카보네이트 (11.33 g, 45.44 mmol)를 첨가하고 혼합물을 0~20 °C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 tert-부틸 2-(1-아미노피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3,5]노난-7-카복실레이트가 남아있음 및 원하는 질량의 피크 (9%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (200 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (25 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 to 0~10% of 디클로로메탄/메탄올 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 백색 고체의 표제 화합물 (1.9 g, 2.40 mmol)을 수득하였다. 수층에 20°C에서 벤질 (2,5-디옥소피롤리딘-1-일) 카보네이트 (11.33 g, 45.44 mmol)를 첨가하고 혼합물을 0~20 °C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 tert-부틸 2-(1-아미노피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3,5]노난-7-카복실레이트가 남아있음 및 원하는 질량의 피크 (6%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (200 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (25 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 to 0~10% of 디클로로메탄/메탄올 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 백색 고체의 표제 화합물 (1 g, 2.40 mmol)을 수득하였다. 수층에 20°C에서 벤질 (2,5-디옥소피롤리딘-1-일) 카보네이트 (11.33 g, 45.44 mmol)를 첨가하고 혼합물을 0~20 °C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크 (1%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (200 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하여 진공 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (25 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 to 0~10% of 디클로로메탄/메탄올 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 백색 고체의 표제 화합물 (337 mg)을 수득하였다. MS(M+H)+= 459.26
단계 5. 벤질 (4-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-1-일)카바메이트 (8)의 합성
DCM (8 mL) 내 tert-부틸 2-(1-(((벤질옥시)카보닐)아미노)피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (1.9 g, 4.14 mmol) 용액에 20°C에서 TFA (5.67 g, 49.72 mmol, 3.68 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 20°C에서 4시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 피크 (56%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 20°C에서 진공 농축하여 황색 오일의 벤질 (4-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-1-일)카바메이트 (3.1 g, crude, TFA 염)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 359.27
단계 6. 벤질 (4-(7-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-1-일)카바메이트 (10)의 합성
DMSO (10 mL) 내 벤질(4-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-1-일)카바메이트 (3.08g, 6.52mmol, TFA 염) 용액에 20°C에서 DIPEA (4.21g, 32.58mmol, 5.68mL) 및 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (900mg, 3.26mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 20~100°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질 1이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 피크 (44%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (30 mL)로 희석 후 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 염수 (30 mL x 3)로 세척 후 Na2SO4 로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (25 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100 % EtOAc/석유 에터 to 0~10% 디클로로메탄/메탄올 gradient @ 100 mL/분)로 정제하였다. 황색 고체의 화합물 벤질 (4-(7-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-1-일)카바메이트 (1.27 g, 2.07 mmol, 63.41% 수율, 100% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+= 615.2
단계 7. 4-(2-(1-아미노피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (11)의 합성
CF3CH2OH (20 mL) 내 벤질 (4-(7-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-1-일)카바메이트 (1.17g, 1.90mmol) 용액에 N2 기체 하 Pd/C (0.6 g, 10% 순도)를 첨가하였다. 현탁액을 탈기하고 H2로 3번 퍼지하였다. 혼합물을 H2 (15psi) 하 15°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 피크 (73%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 CF3CH2OH (90 mL)로 희석 후 여과하였다. 여과물을 진공 농축하여 녹색 고체의 4-(2-(1-아미노피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (865 mg, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 481.39
단계 8. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(7-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 211)의 합성
DMF (4 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (500mg, 1.12mmol) 용액에 HATU (467.39 mg, 1.23 mmol) 및 DIPEA (433.28 mg, 3.35 mmol, 583.94 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 20°에서 10분 동안 교반 후 DMF (4 mL) 내 4-(2-(1-아미노피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (644.42mg, 1.34mmol) 용액을 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 피크 (49%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (30 mL)로 희석 후 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 염수 (30 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex luna C18 150*40 mm* 15μm; 이동상: [물 (FA) -ACN]; B%: 15% - 45%, 10 분)로 정제하여 생성물 A (462mg)와 생성물 B (242mg)를 수득하였다. 생성물 A를 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge C18 150*50mm* 10μm; 이동상: [물 (NH4HCO3) -ACN]; B%: 39%-69%, 10분)로 재정제하고 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(7-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (155.9 mg, 162.76 μmol, 14.56% 수율, 95% 순도)을 수득하였다. 생성물 B를 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge C18 150*50mm* 10μm; 이동상: [물 (NH4HCO3) - ACN]; B%: 39% - 69%, 10 분) 및 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi Polar-RP 100*25mm*4μm; 이동상: [물 (TFA) -ACN]; B%: 32% - 52%, 7 분)로 재정제하고 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(7-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (110 mg, 120.88 μmol, 10.82% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 910.2
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.09 (br s, 1H), 9.33 (s, 1H), 8.32 - 8.20 (m, 2H), 7.95 (s, 1H), 7.67 (br t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.47 - 7.39 (m, 2H), 7.33 (br d, J = 7.6 Hz, 2H), 5.10 (br dd, J = 5.4, 12.7 Hz, 1H), 4.76 (br t, J = 7.8 Hz, 1H), 4.04 (br t, J = 14.0 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.33 (br s, 3H), 3.21 (br s, 4H), 2.98 (br s, 4H), 2.87 - 2.75 (m, 3H), 2.71-2.50 (m, 1H), 2.56 (br d, J = 9.3 Hz, 2H), 2.10 (br s, 1H), 2.06 - 2.00 (m, 1H), 1.94 (br s, 3H), 1.83 (br s, 4H), 1.70 (br d, J = 10.4 Hz, 4H), 1.59 (br s, 4H), 1.31 (br d, J = 9.3 Hz, 2H).
실시예 212. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(7-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 212)의 합성
단계 1. tert-부틸 2-(1-((벤질옥시)카보닐)피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (2)의 합성
MeOH (50 mL) 내 tert-부틸 2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (2 g, 8.84 mmol) 및 벤질 4-옥소피페리딘-1-카복실레이트 (2.06 g, 8.84 mmol, 1.76 mL) 용액에 AcOH (530.70 mg, 8.84 mmol, 505.42 μL)를 0 °C 에서 첨가한 후, NaBH3CN (1.67 g, 26.51 mmol)을 0 °C 에서 천천히 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 주 피크(99%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (100 mL)로 희석하고 EtOAc (100 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 포화 NaHCO3 (100 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하고 농축하여 황색 오일의 tert-부틸 2-(1-((벤질옥시)카보닐)피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (3.92 g, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+=444.4
단계 2. tert-부틸 2-(피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (3)의 합성
CF3CH2OH (50 mL) 내 tert-부틸 2-(1-((벤질옥시)카보닐)피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (3.92 g, 8.84 mmol) 용액에 Pd/C (1 g, 10% 순도)를 N2 기체 하에서 첨가하였다. 현탁액을 탈기하고 H2로 3차례 퍼지하였다. 혼합물을 20 °C H2 (15 Psi) 하에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 79%의 출발물질이 남아있음을 확인하고, 추가적인 Pd/C (1 g, 10% 순도)를 N2 하에서 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C H2 (15 Psi) 하에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 EtOH (150 mL)로 희석하고, 여과하였다. 여과물을 진공 농축하여 무색 오일의 tert-부틸 2-(피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (4 g, crude)를 수득하였다. MS(M+H)+=310.3
단계 3. tert-부틸 2-(1-니트로소피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (4)의 합성
H2O (50 mL) 내 tert-부틸 2-(피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (4 g, 12.93 mmol) 용액에 NaNO2 (1.78 g, 25.85 mmol)를 0 °C 에서 첨가한 후 AcOH (2.33 g, 38.78 mmol, 2.22 mL)를 0 °C 에서 한 방울씩 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 4시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 주 피크(98%)를 확인하였다. 포화 NaHCO3 (150 mL)를 이 반응 혼합물에 첨가하여 pH=9로 조정하고 EtOAc (200 mL x 5)로 추출하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조하고, 여과하고 농축하여 황색 오일의 tert-부틸 2-(1-니트로소피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (3 g, 8.86 mmol, 68.57% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=339.4
단계 4. tert-부틸 2-(1-아미노피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (5)의 합성
MeOH (50 mL) 내 tert-부틸 2-(1-니트로소피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (3 g, 8.86 mmol) 용액에 Zn (3.01 g, 46.09 mmol)을 0 °C 에서 천천히 첨가한 후, AcOH (7.98 g, 132.96 mmol, 7.60 mL)를 0 °C 에서 한 방울씩 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 14시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 여과하고 진공 농축하여 황색 오일의 tert-부틸 2-(1-아미노피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (9 g, crude)을 수득하였다. MS(M+H)+=325.5
단계 5. tert-부틸 2-(1-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (6)의 합성
DMF (5 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (400 mg, 893.99 μmol) 용액에 HATU (373.91 mg, 983.38 μmol) 및 DIPEA (231.08 mg, 1.79 mmol, 311.43 μL)를 첨가하고, 혼합물을 20 °C 에서 10분간 교반한 후 DMF (5 mL) 내 tert-부틸 2-(1-아미노피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (870.19 mg, 2.68 mmol) 및 DIPEA (346.62 mg, 2.68 mmol, 467.15 μL) 용액을 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 모든 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(82%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (30 mL)로 희석하고 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 염수 (30 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (12 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 100 mL/분)로 정제하여 황백색 고체의 tert-부틸 2-(1-(4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미도)피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (302 mg, 400.59 μmol, 44.81% 수율)를 수득하였다. MS(M+H)+=754.2
단계 6. N-(4-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-1-일)-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미드 (7)의 합성
DCM (5 mL) 내 tert-부틸 2-[1-[[4-[(9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-8H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노]-3-메톡시-벤조일]아미노]-4-피페리딜]-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 (300 mg, 397.94 μmol) 용액에 TFA (272.25 mg, 2.39 mmol, 176.78 μL)를 20 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(43%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하여 황색 오일의 N-(4-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-1-일)-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미드 (763 mg, crude, TFA)를 수득하였다. MS(M+H)+=654.3
단계 7. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(7-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 212)의 합성
DMSO (3 mL) 내 2-(2,6-디옥소-3-피페리딜)-5-플루오로-이소인돌린-1,3-디온 (30 mg, 108.61 μmol) 용액에 DIPEA (140.37 mg, 1.09 mmol, 189.18 μL) 및 N-(4-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-1-일)-4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤즈아미드 (213.32 mg, 119.47 μmol, 43% 순도, TFA)를 20 °C 에서 첨가하고 생성된 혼합물을 80 °C 에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크(33%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (12 mL)로 희석하고 EtOAc (12 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 염수 (12 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 prep-TLC (SiO2, 디클로로메탄: 메탄올 = 10:1) 후 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25 mm* 5 μm;이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN]; B%: 37%-67%, 8 분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(7-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (9.3 mg, 9.91 μmol, 9.13% 수율, 97% 순도)을 수득하였다. MS(M+H)+=910.1
1H NMR (400 MHz, CD3CN) δ = 9.38-8.60 (m, 1H), 8.46 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.65-7.58 (m, 1H), 7.42-7.32 (m, 2H), 7.28 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.15 (dd, J = 2.3, 8.6 Hz, 1H), 4.96-4.90 (m, 1H), 4.89-4.81 (m, 1H), 3.99-3.91 (m, 5H), 3.44-3.35 (m, 4H), 3.32 (s, 3H), 3.10-3.03 (m, 2H), 3.02 (s, 3H), 2.79-2.60 (m, 6H), 2.09-1.98 (m, 4H), 1.82-1.77 (m, 4H), 1.77-1.70 (m, 4H), 1.69-1.59 (m, 4H), 1.46-1.25 (m, 2H).
실시예 213. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(7-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 213)의 합성
화합물 213은 실시예 211에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=884.3, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.08 (br s, 1H), 9.28 (s, 1H), 8.34 - 8.27 (m, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.68 (dd, J = 7.3, 8.3 Hz, 1H), 7.47 - 7.41 (m, 2H), 7.36 - 7.30 (m, 2H), 5.10 (dd, J = 5.4, 12.9 Hz, 1H), 4.87 (td, J = 6.5, 13.3 Hz, 1H), 4.03 (br t, J = 13.4 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.32 (s, 3H), 3.27 - 3.13 (m, 4H), 2.97 (br s, 5H), 2.86 (dd, J = 5.4, 17.1 Hz, 1H), 2.82 - 2.73 (m, 2H), 2.62 - 2.55 (m, 3H), 2.14 - 2.07 (m, 1H), 2.05 - 2.00 (m, 1H), 1.84 (br s, 4H), 1.73 - 1.63 (m, 2H), 1.37 - 1.28 (m, 2H), 1.24 (dd, J = 0.6 Hz 6H).
실시예 214. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(7-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 214)의 합성
화합물 214는 실시예 211에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+ = 884.2, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.08 (s, 1H), 10.11 - 9.91 (m, 1H), 9.55 - 9.46 (m, 1H), 8.25 - 8.22 (m, 2H), 7.73 - 7.65 (m, 1H), 7.49 - 7.35 (m, 3H), 7.29 (br d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.96 - 6.78 (m, 1H), 5.07 (td, J = 4.4, 12.7 Hz, 1H), 4.88 (td, J = 6.4, 13.3 Hz, 1H), 4.13 - 3.97 (m, 6H), 3.93 (s, 3H), 3.76 - 3.60 (m, 1H), 3.58 - 3.51 (m, 2H), 3.48 - 3.39 (m, 2H), 3.32 (s, 3H), 3.10 (br d, J = 9.0 Hz, 2H), 2.94 - 2.83 (m, 3H), 2.61 (br d, J = 1.6 Hz, 2H), 2.21 - 2.06 (m, 2H), 2.06 - 1.94 (m, 3H), 2.01 - 1.91 (m, 1H), 1.90 - 1.68 (m, 1H), 1.57 - 1.41 (m, 2H), 1.24 (d, J = 6.7 Hz, 6H).
실시예 215. 5-(2-(1-(4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시벤조일)피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-6-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (화합물 215)의 합성
화합물 215는 실시예 212에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=887.2, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.13-11.06 (m, 1H), 8.25-8.17 (m, 2H), 7.87 (s, 1H), 7.74-7.54 (m, 1H), 7.44 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.06-6.94 (m, 2H), 5.14-5.03 (m, 1H), 4.83 (td, J = 6.7, 13.4 Hz, 1H), 4.01 (br t, J = 13.6 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.65-3.57 (m, 1H), 3.32 (s, 3H), 3.26-3.14 (m, 4H), 3.04 (br s, 4H), 2.93-2.83 (m, 1H), 2.65-2.59 (m, 1H), 2.58-2.52 (m, 2H), 2.41 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 2.10-1.88 (m, 2H), 1.87-1.49 (m, 6H), 1.48-1.29 (m, 1H), 1.21 (d, J = 6.7 Hz, 8H).
실시예 216. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(7-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-6-플루오로-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 216)의 합성
화합물 216은 실시예 212에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+ = 902.3, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.12 (br s, 1H), 9.30 (br s, 1H), 8.30 (br d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.71 (br d, J = 11.5 Hz, 1H), 7.50 - 7.38 (m, 3H), 5.10 (br dd, J = 5.1, 12.7 Hz, 1H), 4.93 - 4.82 (m, 1H), 4.04 (br t, J = 13.5 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.32 (br s, 3H), 3.18 (br s, 4H), 2.96 (br s, 4H), 2.94 - 2.82 (m, 2H), 2.77 (br s, 2H), 2.64 - 2.54 (m, 3H), 2.14 - 1.99 (m, 2H), 1.81 (br s, 4H), 1.67 (br d, J = 2.3 Hz, 2H), 1.38 - 1.27 (m, 2H), 1.24 (br d, J = 6.5 Hz, 6H).
실시예 217. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(7-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-6-플루오로-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-1-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 217)의 합성
DMF (2 mL) 내 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-2-플루오로-5-메톡시벤조산 (80 mg, 182.07 μmol) 용액에 HATU (76.15 mg, 200.28 μmol) 및 DIPEA (70.59 mg, 546.21 μmol, 95.14 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 20 °C 에서 10분간 교반한 후 DMF (2 mL) 내 5-(2-(1-아미노피페리딘-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-일)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-6-플루오로이소인돌린-1,3-디온 (108.93 mg, 218.49 μmol) 용액을 첨가하고 생성된 혼합물을 20 °C 에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 모든 출발물질이 완전히 소모되었음 및 원하는 질량의 피크 (48%)를 확인하였다. 반응 혼합물을 H2O (12 mL)로 희석하고 EtOAc (12 mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 염수 (12 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4로 건조하고, 여과하여 농축하였다. 잔여물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi Polar-RP 100*25 mm*4 μm; 이동상:[물 (TFA)-ACN]; B%: 34%-54%, 7 분)로 정제하고, prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25 mm* 5 μm; 이동상:[물 (NH4HCO3)-ACN]; B%: 40%-70%, 9 분)로 재정제하고, 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(7-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-6-플루오로-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-1-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (10.6 mg, 11.06 μmol, 6.08% 수율, 96% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+=920.2
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.10 (s, 1H), 9.03 (s, 1H), 8.31-8.22 (m, 2H), 7.95 (s, 1H), 7.70 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 7.44 (br d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.13 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 5.10 (br dd, J = 5.4, 12.7 Hz, 1H), 4.89 (td, J = 6.8, 13.4 Hz, 1H), 4.11-4.00 (m, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.33 (br s, 3H), 3.18 (br s, 4H), 2.98 (br s, 6H), 2.93-2.82 (m, 3H), 2.61 (br s, 2H), 2.09 (br d, J = 12.2 Hz, 1H), 2.06-1.99 (m, 1H), 1.82 (br s, 4H), 1.72-1.64 (m, 2H), 1.38-1.29 (m, 2H), 1.26 (br d, J = 6.6 Hz, 6H).
실시예 218. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(7-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 218)의 합성
단계 1. tert-부틸 7-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카복실레이트 (3)의 합성
디옥산 (8 mL) 내 3-(4-브로모-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (0.3 g, 928.39 μmol) 및 tert-부틸 2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카복실레이트 (318.00 mg, 1.41 mmol) 용액에 Cs2CO3 (907.46 mg, 2.79 mmol) 및 Pd-PEPPSI-IHeptCl (27.09 mg, 27.85 μmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 100°C에서 28시간 동안 교반 하였다. TLC (석유 에터: EtOAc=10:1)에서 새로운 스팟 형성을 확인하였다. 혼합물을 여과 후 여과 케이크를 MeCN (10 mL) 및 DCM (10 mL)로 세척하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에터/EtOAc=20/1 to 0/1), 이후 prep-TLC (SiO2, 석유 에터: EtOAc= 10:1)로 재정제하여 황색 고체의 tert-부틸 7-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카복실레이트 (30 mg, 54.42 μmol, 1.47% 수율, 85% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 469.2
단계 2. 3-(1-옥소-4-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-일)이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (4)의 합성
DCM (0.3 mL) 내 tert-부틸 7-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카복실레이트 (50 mg, 106.71 μmol) 용액에 0°C에서 TFA (154.00 mg, 1.35 mmol, 0.1 mL)를 첨가하고 혼합물을 20°C에서 1시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량이 검출되었음을 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하여 황색 오일의 3-(1-옥소-4-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-일)이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (50 mg, crude, TFA 염)을 수득하였다. MS(M+H)+ = 369.4
단계 3. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(7-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 218)의 합성
DCE (1 mL) 내 3-(1-옥소-4-(2,7-디아자스피로[3.5]노난-7-일)이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 (50 mg, 103.64 μmol, TFA 염) 용액에 0°C에서 TEA (109.05 mg, 1.08 mmol, 150 μL), 4A MS(0.1 g) 및 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로)-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-3-메톡시-N-(4-옥소피페리딘-1-일)벤즈아미드 (60 mg, 115.94 μmol)를 첨가하고 혼합물을 20°C에서 0.5시간 동안 교반 하였다. NaBH(OAc)3 (65.90 mg, 310.91 μmol)를 첨가하고 혼합물을 20°C에서 3시간 동안 교반 하였다. LCMS로 35%의 원하는 질량을 확인하였다. 혼합물을 여과 후 여과 케이크를 DCM (10 mL)로 세척하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (5 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 30~40% MeOH/EtOAc gradient @ 50 mL/분)로 정제 후 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi Polar-RP 100*25 mm*4μm; 이동상: [물 (TFA) - ACN]; B%: 27% - 47%, 10 분)로 재정제하고 용출물을 동결 건조하여 백색 고체의 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(7-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-4-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (17.9 mg, 14.67 μmol, 14.16% 수율, 90% 순도, 2TFA)를 수득하였다. MS(M+H)+ = 870.2
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.00 (s, 1H), 10.06 - 9.94 (m, 1H), 9.50 (s, 1H), 8.26 (br d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.47 - 7.42 (m, 3H), 7.33 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 5.13 (dd, J = 5.3, 13.3 Hz, 1H), 4.90 - 4.85 (m, 1H), 4.48 - 4.42 (m, 1H), 4.32 - 4.27 (m, 1H), 4.11 - 4.06 (m, 1H), 4.05 - 4.02 (m, 3H), 4.01 - 3.96 (m, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.32 (s, 3H), 3.14 - 3.05 (m, 4H), 2.99 - 2.81 (m, 5H), 2.65 - 2.57 (m, 2H), 2.46 - 2.41 (m, 1H), 2.05 - 1.95 (m, 5H), 1.93 - 1.85 (m, 2H), 1.56 - 1.43 (m, 2H), 1.24 (d, J = 6.7 Hz, 6H).
실시예 219. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(7-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (화합물 219)의 합성
화합물 219는 실시예 211에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=871.0, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 10.95 (s, 1H), 9.98 - 9.82 (m, 1H), 9.50 (br s, 1H), 8.29 - 8.14 (m, 2H), 7.52 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.46 - 7.40 (m, 2H), 7.14 - 7.05 (m, 2H), 5.08 - 5.02 (m, 1H), 4.92 - 4.85 (m, 1H), 4.35 - 4.29 (m, 1H), 4.22 - 4.18 (m, 1H), 4.12 - 4.07 (m, 1H), 4.06 - 4.01 (m, 3H), 4.00 - 3.96 (m, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.42 - 3.37 (m, 2H), 3.32 (s, 3H), 3.30 - 3.25 (m, 2H), 3.13 - 3.06 (m, 2H), 2.96 - 2.80 (m, 3H), 2.62 - 2.55 (m, 2H), 2.41 - 2.34 (m, 1H), 2.02 - 1.88 (m, 5H), 1.87 - 1.80 (m, 2H), 1.55 - 1.40 (m, 2H), 1.24 (d, J = 6.7 Hz, 6H).
실시예 220. 4-((7,7-디플루오로-9-이소프로필-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(4-(7-(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린-5-일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-일)피페리딘-1-일)-2-플루오로-5-메톡시벤즈아미드 (화합물 220)의 합성
화합물 220은 실시예 211에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+=888.5, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 10.94 (s, 1H), 10.01-9.81 (m, 1H), 8.29-8.21 (m, 2H), 8.17-8.01 (m, 1H), 7.52 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 7.12-7.06 (m, 2H), 5.08-5.01 (m, 1H), 4.93-4.86 (m, 1H), 4.35-4.30 (m, 1H), 4.22-4.18 (m, 1H), 4.12-4.08 (m, 1H), 4.05-3.93 (m, 5H), 3.92-3.87 (m, 3H), 3.42-3.36 (m, 2H), 3.33 (s, 3H), 3.29-3.24 (m, 2H), 3.14-3.07 (m, 2H), 2.96-2.84 (m, 1H), 2.80-2.69 (m, 2H), 2.62-2.54 (m, 2H), 2.39-2.34 (m, 1H), 2.02-1.88 (m, 5H), 1.87-1.80 (m, 2H), 1.55-1.39 (m, 2H), 1.26 (d, J = 6.6 Hz, 6H).
실시예 221. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2 -일)아미노)-N-(2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에톡시)에틸)-5-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)벤즈아미드(화합물 221)의 합성
단계 1. 메틸 5-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)-4-니트로벤조에이트 (3)의 합성
디옥산 (60 mL) 내 메틸 2-플루오로-5-메톡시-4-니트로벤조에이트 (4g, 17.45mmol), 1-메틸피페라진 (3.50g, 34.91mmol, 3.87mL) 및 K2CO3 (7.24g, 52.36mmol) 용액을 100°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 원하는 질량의 피크 (66%)를 확인하였다. TLC (석유 에터 : EtOAc=3:1; Rf=0.7)로 출발물질이 남아있음을 확인하였다. 혼합물을 여과 후 여과 케이크를 디클로로메탄 (50 mL)으로 세척하였다. 여과물을 감압 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (25 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~50% EtOAc/석유 에터 gradient @ 65 mL/분)로 정제하여 갈색 오일의 메틸 5-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)-4-니트로벤조에이트 (2.7 g, 8.64 mmol, 49.51% 수율, 99% 순도)을 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+= 310.1
단계 2. 메틸 4-아미노-5-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)벤조에이트 (4)의 합성
CF3CH2OH (80 mL) 내 5-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)-4-니트로벤조에이트(2.7g, 8.73mmol) 용액에 N2 기체 하 Pd/C (500 mg, 10% 순도)를 첨가하였다. 혼합물을 H2 (15 psi) 하 30°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드로 여과하고 여과물을 농축하였다. 조 생성물을 탈이온수 (20 mL) 및 MeCN (10mL)로 희석 후 동결 건조하여 백색 고체의 메틸 4-아미노-5-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)벤조에이트 (2.4 g, 8.25 mmol, 94.49% 수율, 96% 순도)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+= 280.1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 7.19 (s, 1H), 6.36 (s, 1H), 5.49 (s, 2H), 3.70 (d, J = 10.9 Hz, 6H), 2.83 (br s, 4H), 2.43 (br s, 4H), 2.20 (s, 3H).
단계 3. 메틸 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-5-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)벤조에이트 (6)의 합성
디옥산 (8 mL) 내 메틸 4-아미노-5-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)벤조에이트(0.5g, 1.58mmol), 2-클로로-9-사이클로펜틸-7,7-다이플루오로-5-메틸-8,9-디히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6(7H)-온 (485.06 mg, 1.74 mmol) 용액에 25°C에서 Cs2CO3 (1.54 g, 4.74 mmol), BINAP (196.59 mg, 315.72 μmol) 및 Pd(OAc)2 (35.44 mg, 157.86 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 기체 하 100°C에서 16시간 동안 교반 하였다. LCMS로 2-클로로-9-사이클로펜틸-7,7-다이플루오로-5-메틸-8,9-디히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-6(7H)-온이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드로 여과하고 여과물을 농축하였다. 잔여물을 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (25 g SepaFlash 실리카 플래시 컬럼, Eluent of 0~100% EtOAc/석유 에터 gradient @ 80 mL/분; Eluent of 0~50% 메탄올 / EtOAc @ 80 mL/분) 및 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge C18 150*50 mm* 10μm; 이동상: [물 (10 mM NH4HCO3) - ACN]; B%: 44% - 74%, 11 분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 백색 고체의 메틸 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-5-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)벤조에이트 (0.5 g, 866.68 μmol, 54.90% 수율, 97% 순도)를 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+= 560.3
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.35 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.42 (s, 1H), 4.79 (quin, J = 8.3 Hz, 1H), 3.97 - 3.89 (m, 4H), 3.89 - 3.83 (m, 4H), 3.41 (s, 3H), 3.11 (br t, J = 4.4 Hz, 4H), 2.66 (br s, 4H), 2.39 (s, 3H), 2.16 - 2.06 (m, 2H), 1.80 - 1.60 (m, 4H), 1.60 - 1.46 (m, 2H).
단계 4. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-5-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)벤조산 (7)의 합성
THF (5 mL) 및 (5 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-5-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)벤조에이트 (0.45g, 804.14μmol) 및 LiOH (23.11mg, 964.96μmol) 혼합물을 25°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질 (30%)이 남아있음 및 원하는 질량의 주 피크 (65%)를 확인하였다. 추가적인 NaOH (321.63 mg, 8.04 mmol)를 25°C에서 첨가하고 생성된 용액을 40°C에서 다른 24시간 동안 교반 하였다. LCMS로 출발물질이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 주 피크를 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하였다. 조 생성물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex luna C18 150*40 mm* 15 μm; 이동상: [물 (0.1%TFA) - ACN]; B%: 9% - 39%, 11 분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 백색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-5-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)벤조산 (140 mg, 212.98 μmol, 23.24% 수율, 83% 순도)을 수득하였고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. MS(M+H)+= 546.3
단계 5. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에톡시)에틸)-5-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)벤즈아미드 (화합물 221)의 합성
DMF (3 mL) 내 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-5-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)벤조산 (150mg, 274.94μmol) 용액에 HATU (156.81 mg, 412.40 μmol) 및 DIPEA (106.60 mg, 824.81 μmol, 143.66 μL)를 첨가하고 혼합물을 30°C에서 10분 동안 교반 하였다. 이후 4-((2-(2-아미노에톡시)에틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온 (54.55 mg, 137.47 μmol, HCl 염)를 첨가하고 생성된 혼합물을 30°C에서 12시간 동안 교반 하였다. LCMS로 4-((2-(2-아미노에톡시)에틸)아미노)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린-1,3-디온이 완전히 소모됨 및 원하는 질량의 피크 (49%)를 확인하였다. 혼합물을 감압 농축하였다. 조 생성물을 prep-HPLC (컬럼: Phenomenex Synergi Polar-RP 100*25 mm*4μm; 이동상: [물 (0.1%TFA) - ACN]; B%: 35% - 55%, 7 분) 및 prep-HPLC (컬럼: Waters Xbridge 150*25 mm* 5μm; 이동상: [물 (10 mM NH4HCO3) -ACN]; B%: 42% - 72%, 분)로 정제하고 용출물을 동결 건조하여 황색 고체의 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에톡시)에틸)-5-메톡시 -2-(4-메틸피페라진-1-일)벤즈아미드 (13.4 mg, 14.94 μmol, 5.43% 수율, 99% 순도)를 수득하였다. MS(M+H)+= 888.4
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.06 (s, 1H), 10.40 - 10.30 (m, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.56 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 6.63 (br t, J = 5.5 Hz, 1H), 5.00 (dd, J = 5.4, 12.8 Hz, 1H), 4.93 - 4.81 (m, 1H), 4.03 (br t, J = 14.1 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.74 - 3.67 (m, 2H), 3.66 - 3.59 (m, 2H), 3.57 - 3.48 (m, 4H), 3.33 (br s, 3H), 2.82 (br s, 4H), 2.49 - 2.32 (m, 7H), 2.14 (s, 3H), 2.05 - 1.88 (m, 3H), 1.73 - 1.45 (m, 6H).
실시예 222. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(2-(2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에톡시)에톡시)에틸)-5-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)벤즈아미드 (화합물 222)의 합성
화합물 222는 실시예 221에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+= 932.5, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.08 (s, 1H), 10.31 (br t, J = 5.3 Hz, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.54 (dd, J = 7.2, 8.4 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 6.59 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 5.03 (dd, J = 5.4, 12.9 Hz, 1H), 4.87 (quin, J = 8.1 Hz, 1H), 4.04 (t, J = 14.0 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.66 - 3.56 (m, 8H), 3.50 (q, J = 5.3 Hz, 2H), 3.43 (q, J = 5.4 Hz, 2H), 3.33 (br s, 3H), 2.92 - 2.79 (m, 5H), 2.61 - 2.51 (m, 3H), 2.49 - 2.42 (m, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.06 - 1.90 (m, 3H), 1.73 - 1.48 (m, 6H).
실시예 223. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(2-(2-(2-(2-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)에톡시) 에톡시)에톡시)에틸)-5-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)벤즈아미드 (화합물 223)의 합성
화합물 223은 실시예 221에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+= 976.6, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.09 (s, 1H), 10.32 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 8.32 - 8.25 (m, 2H), 7.93 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.55 (dd, J = 7.2, 8.4 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.58 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 5.04 (dd, J = 5.4, 12.9 Hz, 1H), 4.94 - 4.81 (m, 1H), 4.04 (t, J = 14.1 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.63 - 3.46 (m, 14H), 3.42 (q, J = 5.6 Hz, 2H), 3.30 (br s, 3H), 2.94 - 2.81 (m, 5H), 2.62 - 2.51 (m, 4H), 2.46 (br d, J = 4.3 Hz, 2H), 2.23 (s, 3H), 2.07 - 1.91 (m, 3H), 1.76 - 1.47 (m, 6H).
실시예 224. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(14-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)-3,6,9,12-테트라옥사테트라데실)-5-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)벤즈아미드 (화합물 224)의 합성
화합물 224는 실시예 221에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+= 1020.6, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.09 (s, 1H), 10.38 - 10.21 (m, 1H), 8.33 - 8.24 (m, 2H), 7.94 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.56 (dd, J = 7.2, 8.4 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.58 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 5.05 (dd, J = 5.4, 12.9 Hz, 1H), 4.87 (br t, J = 8.1 Hz, 1H), 4.04 (t, J = 14.1 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.62 - 3.47 (m, 18H), 3.43 (q, J = 5.5 Hz, 2H), 3.32 - 3.29 (m, 3H), 2.95 - 2.81 (m, 5H), 2.63 - 2.51 (m, 4H), 2.49 - 2.42 (m, 2H), 2.36 - 2.16 (m, 3H), 2.07 - 1.91 (m, 3H), 1.75 - 1.47 (m, 6H).
실시예 225. 4-((9-시클로펜틸-7,7-디플루오로-5-메틸-6-옥소-6,7,8,9-테트라히드로-5H-피리미도[4,5-b][1,4]디아제핀-2-일)아미노)-N-(17-((2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)아미노)-3,6,9,12,15-펜타옥사헵타데실)-5-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)벤즈아미드 (화합물 225)의 합성
화합물 225는 실시예 221에서 기재된 방법과 유사하게 스킴에 기재된 방법에 따라 합성되었다.
MS(M+H)+= 1064.7, 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 11.09 (s, 1H), 10.32 (br s, 1H), 8.34 - 8.24 (m, 2H), 7.94 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.56 (dd, J = 7.2, 8.4 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.59 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 5.05 (dd, J = 5.4, 12.9 Hz, 1H), 4.94 - 4.82 (m, 1H), 4.04 (t, J = 14.0 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.61 - 3.42 (m, 24H), 3.30 (br s, 3H), 2.95 - 2.79 (m, 5H), 2.63 - 2.52 (m, 4H), 2.49 - 2.40 (m, 2H), 2.25 (br s, 3H), 2.07 - 1.91 (m, 3H), 1.75 - 1.47 (m, 6H).
<실험예>
1. PLK1 웨스턴 블롯 분석
(1) HeLa 세포주의 배양
HeLa 세포주를 한국세포주은행에서 구입하였다. 배양 세포의 계대(Passage)를 P115 내지 P125로 유지하였다.
세포 계수를 위해, 세포 계수기(Thermo Fisher Scientific Inc., Catalog # AMQAX1000) 및 0.4% 트립판 블루(Trypan blue) 용액을 사용하였다.
세포 배양을 위해, DMEM(Gibco, Cat. No. 1195-65; Lot. No. 2085318), FBS(Gibco, Cat. No. 16000-044; Lot. No. 2097593), 페니실린/스트렙토마이신(PS)(Gibco, Cat. No. 15140-122; Lot. No. 2058855), 100　㎟　세포배양 디쉬(SPL, Cat. No. 20100), 150　㎟　세포배양 디쉬(SPL, Cat. No. 20150), 12-웰 배양 플레이트(SPL, Cat. No. 30012), PBS pH 7.4(Gibco, Cat. No. 10010-023; Lot. No. 2085080), TrypLETM　Express(Gibco, Cat. No. 12605-010; Lot. No. 2070638), 카운팅 챔버(Hematocytometer)(Hirschmann, Cat. No. 8100204), 및 0.4% 트립판 블루 용액(DYNEBIO, Cat. No. CBT3710; Lot. No. 20190723)를 사용하였다.
(2) 본 발명의 화합물 처리
12-웰 플레이트(SPL사)의 각 웰마다 2Х105개의 세포를 시딩하였고, 배양 배지 부피를 총 2mL로 하여 세포를 배양하였다.
실시예 화합물은 DMSO에 완전 용해시켜 실험에 사용하였고, 티미딘(thymidine)은 DW에 완전 용해시켜 실험에 사용하였다. 티미딘 블록을 위해, 티미딘(Sigma-Aldrich Cat. No. T9250-5G) 2mM 처리 후, 24 시간 동안 인큐베이션하였다.
방출(release) 및 화학적 처리를 위해, 배지를 석션하고 1× PBS로 3 회 세척하였다. 완전 배지(complete media)를 넣고 CO2 인큐베이터에서 4 시간 인큐베이션하였다. 각각의 화합물을 최고 농도 3uM에서 3 fold 희석하여 최저 농도 처리한 후 다시 6 시간 인큐베이션하였다.
(3) 웨스턴 블롯팅
SDS-PAGE 및 웨스턴 블롯팅을 위해, 1X RIPA 용해 버퍼(Rockland, Cat. No. MB-030-0050; Lot no. 39751), 100X 프로테아제 억제제 칵테일(Quartett, Cat. No. PPI1015; Lot no. PCO50038424), Pierce™ BCA protein assay kit(ThermoScientific, Cat. No. 23225; Lot no. UC276876), 알부민 standard(ThermoScientific, Cat. No. 23209; Lot no. UB269561), 4-15 % Mini-PROTEAN TGX stain-free gel(Bio-rad, Cat. No. 4568085; Lot no. L007041B), 10X Tris/Glycine/SDS buffer(Bio-rad, Cat. No. 1610732; Lot no. 10000044375B); 10X TBS(Bio-rad, Cat. No. 1706435; Lot no. 1000045140B), 10% Tween 20 용액(Cat. No. 1610781; Lot no. L004152B), Color protein standard broad range(NEB, Cat. No. P7719S; Lot no. 10040349), 4X　Laemmli　sample buffer(Bio-rad, Cat. No. 1610747; Lot no. L004133B), β-머캡토에탄올(Sigma-Aldrich, Cat. No. M3148; Lot no. 60-24-2), SuperBlock™ T20 (TBS) blocking buffer(ThermoScientific, Cat. No. 37536; Lot no. UC282578), 1M 소듐 아자이드 용액(Sigma-Aldrich, Cat. No. 08591-1mL-F; Lot no. BCBV4989), α-Rabbit pAb to Ms IgG(abcam, Cat. No. ab97046; Lot no. GR3252115-1), α-Goat pAb to Rb IgG(CST, Cat. No. 7074S; Lot no. 28), α-GAPDH(abcam, Cat. No. ab8245; Lot no. GR3275542-2), α-PLK1(CST, Cat. No. 208G4), α-BRD4(CST, Cat. No. 13440S), ECL™ Prime western blotting reagents(GE Healthcare, Cat. No. RPN2232; Lot no. 17001655), Ponceau S 용액(Sigma-Aldrich, Cat. No. P7170; Lot no. SLBV4112), Difco™ Skim milk(BD, Cat. No. 232100; Lot no. 8346795), iBlot®　2 NC Regular stacks(Invitrogen, Cat. No. IB23001; Lot no. 2NR110619-02)을 사용하였다.
세포 수확을 위해, 트립신을 사용하여 세포를 플레이트에서 분리한 뒤 배지 및 PBS로 세척하였다. 구체적으로, 배지를 석션한 뒤 1 mL PBS로 세척하고, PBS를 석션하였다. 0.5 mL TrypLE™ Express를 37　℃에서 7 분 동안 처리하여 세포를 분리시킨 다음, 0.5 mL 완전 배지를 첨가하여 1 mL의 세포 배양액을 수집하였다. 그 다음, 1 mL의 세포 수집액을 8,000 rpm에서 120 초 동안 원심분리하고, 상층액을 제거하였다. 0.2 mL의 PBS로 세척한 후, PBS를 제거하였다.
세포 용해(lysis)를 위해, 용해 버퍼(lysis buffer)를 첨가하고 세포 파쇄물(debris)을 제거하여 세포 용해물(lysate)을 얻었다. 구체적으로, 세포에 프로테아제 억제제가 함유된 70 μL의 1X RIPA 버퍼를 처리하고 얼음 위에서 30 분 동안 인큐베이션하였다. 그 후, 세포를 4 ℃ 15,000 rpm에서 10 분 동안 원심분리하여 세포 용해물을 얻었다.
그 다음, BCA 어세이를 이용하여 표준 커브를 구하고 이를 대입하여 용해물 내 단백질 질량을 정량하였다. 혼합물에는 20 μL의 표준 또는 샘플 용액, 200 μL의 BCA 또는 브래드포드 용액을 사용하여 37 ℃에서 30 분 동안 인큐베이션하였고, 562 nm 흡광도에서 측정하였다. 샘플은 각 웰당 15μg이 되도록 4X 샘플 버퍼를 넣어 준비하였다.
4-15 % Mini-PROTEAN TGX stain-free gel (15　wULM)에 120 V로 100 분의 러닝 타임을 설정하여 SDS-PAGE를 수행하였다. iBlot®　2 NC　Mini stacks에 Dry blotting system의 P0 mode를 사용하여 트랜스퍼하였다. Ponceau S 용액을 사용하여 염색한 뒤, 블로킹 버퍼(Thermo)로 1 시간 동안 블로킹하였다. 0.05% Tween20를 포함한 1X TBS로 세척한 후, 1차 항체로서 1X TBS-T 내 항-PLK1(CST) 항체(1:500), 항-BRD4 (CULM signaling) 항체 (1:1000) 또는 항-GAPDH(abcam) 항체(1:10,000)와 함께 4 ℃에서 16 시간 동안 반응시켰다. 0.05% Tween20를 포함한 1X TBS로 10 분 동안 3회 세척한 후, 2차 항체로서 1X TBS-T 내 항-마우스 항체(abcam)(1:10,000) 또는 항-래빗 항체(CST)(1:5,000)와 함께 상온에서 1 시간 동안 반응시켰다. 그 다음, 0.05% Tween 20을 포함한 1X TBS로 10 분 동안 3회 세척한 후, ECL 워킹 용액(1:1)으로 검출하였다.
결과 분석을 위해, 이미지 애널라이저(GE)를 사용하여 최종 블롯 데이터를 얻었다. 그 결과, 본 발명의 모든 화합물이 우수한 PLK1 단백질 분해능을 갖는 것을 확인하였다.
2. PLK1 루시퍼라제 분석
(1) HeLa LgBit (Plk1-HiBit KI) 세포주의 제작 및 배양
HeLa 세포주에 LgBit 벡터를 형질주입하여 안정적으로 발현시킨 세포주를 제작하였다. 그 다음, 세포 내 내재하고 있는 Plk1 유전자 C-말단 뒤에 HiBit 아미노산 서열을 발현할 수 있도록 gRNA와 donor를 제작한 후 CRISPR/Cas9을 발현할 수 있는 벡터와 함께 세포 내 삽입하였다. 삽입이 완료되어 Knock-in이 진행된 세포만을 선별한 뒤 계대하여 사용하였다.
세포 배양을 위해, DMEM (Gibco, Cat. No. 11995-065; Lot. No. 2467189), FBS (Gibco, Cat. No. 16000-044; Lot. No. 2420173P), 페니실린/스트렙토마이신 (PS)(Gibco, Cat. No. 15140-122; Lot. No. 2321114), 100　㎟　세포배양 디쉬 (SPL, Cat. No. 20100), 150　㎟　세포배양 디쉬 (SPL, Cat. No. 20150), 96-웰 화이트 플레이트 (SPL, Cat. No. 30196), PBS pH 7.4 (Gibco, Cat. No. 10010-023; Lot. No. 2085080), TrypLETM　Express (Gibco, Cat. No. 12605-010; Lot. No. 2323417), 카운팅 챔버 (Hematocytometer)(Marienfeld Superior, Cat. No. 0650010) 및 0.4 % 트립판 블루 용액(DYNEBIO, Cat. No. CBT3710; Lot. No. 20211201)을 사용하였다.
(2) 본 발명의 화합물 처리 및 루시퍼라제 분석 실험법
실시예 화합물은 DMSO (Sigma-Aldrich Cat. No. D2438, Lot. No. RNBJ9566)에 완전 용해시켜 실험에 사용하였다.
HeLa LgBit (Plk1-HiBit KI)의 경우 티미딘 블록 후 방출한 후 화합물을 처리하였고 그 과정은 아래와 같다. 티미딘 (Sigma-Aldrich Cat. No. T9250-5G)은 DW에 완전 용해시켜 실험에 사용하였다. 티미딘 블록을 위해, 티미딘 2 mM 처리 후 24 시간 동안 인큐베이션하였다. 방출 및 화학적 처리를 위해, 배지를 석션한 후 1× PBS로 세척하였다. TrypLETM을 넣고 37 ℃ CO2 인큐베이터에서 5 분 동안 인큐베이션하였다. 완전 배지를 넣어 중화된 세포를 계수기를 통해 카운팅하였다. 96-웰 화이트 플레이트 (SPL사)의 각 웰마다 3.3 x 104 개 만큼 배지 총 부피는 150 μL로 하여 시딩 후 CO2 인큐베이터에서 인큐베이션하였다.
각각의 세포주를 CO2 인큐베이터에서 18 시간 동안 인큐베이션 한 뒤 Endurazine을 총 부피의 4 %가 될 수 있도록 각 웰에 첨가하였다. 본 발명의 화합물의 농도가 300 nM이 되도록 96-웰 화이트 플레이트 (SPL사)에 넣어준 뒤 플레이트 리더기 (BMG Labtech, CLARIOstar Plus)의 파장을 470 - 480 nM로 설정 후 흡광도를 실시간으로 측정하였다. 9 시간이 지난 시점에 발광값을 구한 뒤 엑셀 프로그램을 통해 막대 그래프로 표시하였다.
결과는 하기 표 2 및 도 1 내지 5와 같다.
실시예 화합물 활성도
화합물 1 ++
화합물 2 ++
화합물 3 ++
화합물 5 ++
화합물 6 +++
화합물 9 ++
화합물 11 ++
화합물 14 ++
화합물 15 ++
화합물 16 +
화합물 17 ++
화합물 18 ++
화합물 20 ++
화합물 22 +
화합물 24 +
화합물 25 ++
화합물 26 ++
화합물 27 ++
화합물 28 ++
화합물 29 ++
화합물 30 ++
화합물 31 +++
화합물 32 ++
화합물 33 ++
화합물 35 +
화합물 37 ++
화합물 38 ++
화합물 39 ++
화합물 40 ++
화합물 41 ++
화합물 42 ++
화합물 44 ++
화합물 45 ++
화합물 46 ++
화합물 47 ++
화합물 48 +
화합물 49 ++
화합물 50 ++
화합물 51 ++
화합물 52 ++
화합물 53 +++
화합물 55 ++
화합물 56 ++
화합물 57 +
화합물 58 ++
화합물 59 ++
화합물 60 ++
화합물 61 ++
화합물 62 +++
화합물 63 +++
화합물 64 ++
화합물 65 ++
화합물 66 +++
화합물 67 ++
화합물 68 +++
화합물 70 ++
화합물 71 ++
화합물 72 ++
화합물 73 ++
화합물 74 ++
화합물 75 ++
화합물 76 +++
화합물 77 ++
화합물 78 +++
화합물 79 +++
화합물 80 ++
화합물 81 ++
화합물 82 ++
화합물 84 ++
화합물 86 ++
화합물 87 ++
화합물 88 ++
화합물 89 ++
화합물 90 ++
화합물 91 ++
화합물 92 ++
화합물 93 ++
화합물 94 ++
화합물 95 ++
화합물 96 ++
화합물 97 ++
화합물 98 ++
화합물 99 ++
화합물 100 ++
화합물 101 ++
화합물 102 ++
화합물 103 ++
화합물 104 ++
화합물 105 ++
화합물 106 +++
화합물 107 ++
화합물 108 ++
화합물 109 +
화합물 111 +
화합물 112 +
화합물 114 ++
화합물 115 ++
화합물 116 ++
화합물 118 ++
화합물 119 ++
화합물 120 +++
화합물 121 ++
화합물 122 +++
화합물 123 ++
화합물 124 ++
화합물 126 +
화합물 127 ++
화합물 128 ++
화합물 129 +++
화합물 130 ++
화합물 131 ++
화합물 133 ++
화합물 134 +++
화합물 135 +++
화합물 136 +++
화합물 137 ++
화합물 138 ++
화합물 139 ++
화합물 141 ++
화합물 142 ++
화합물 143 ++
화합물 144 ++
화합물 145 +++
화합물 146 +++
화합물 147 +++
화합물 148 ++
화합물 149 ++
화합물 150 ++
화합물 151 ++
화합물 152 ++
화합물 153 ++
화합물 154 ++
화합물 155 +
화합물 156 ++
화합물 157 ++
화합물 158 +++
화합물 159 ++
화합물 161 ++
화합물 162 ++
화합물 164 ++
화합물 165 ++
화합물 166 +
화합물 167 +++
화합물 168 ++
화합물 173 +
화합물 174 ++
화합물 179 ++
화합물 180 ++
화합물 182 ++
화합물 183 +
화합물 184 +
화합물 186 ++
화합물 187 +
화합물 189 ++
화합물 190 ++
화합물 191 ++
화합물 192 ++
화합물 193 ++
화합물 194 ++
화합물 195 ++
화합물 196 ++
화합물 197 ++
화합물 198 ++
화합물 199 +
화합물 200 +
화합물 201 +++
화합물 204 +
화합물 205 ++
화합물 206 +
화합물 208 ++
화합물 209 ++
화합물 210 ++
화합물 211 +++
화합물 212 ++
화합물 213 ++
화합물 214 +
화합물 215 ++
화합물 216 ++
화합물 217 ++
화합물 218 ++
화합물 219 ++
화합물 221 +
화합물 222 ++
화합물 223 ++
화합물 224 ++
화합물 225 ++
표 2에서, 활성도는 각 실시예 화합물 처리군과 DMSO 처리군의 형광값 비율에 따라 표기하였다. (+++: < 0.3, ++ < 0.6, + < 0.7).
3. 세포 생존능 분석
(1) NCI-H526 세포주 배양
NCI-H526 (이하, H526) 세포주는 한국세포주은행(KCLB, 서울, 한국)에서 분양받았다. 세포 배양을 위해 RPMI 1640 (Gibco, Cat. No. 22400-089; Lot. No. 2277021), FBS (Gibco, Cat. No. 16000-044; Lot. No. 2351176P), 페니실린/스트렙토마이신 (PS)(Gibco, Cat. No. 15140-122; Lot. No. 2321114), 75T 세포배양 플라스크 (SPL, Cat. No. 71075), 175T 세포배양 플라스크 (SPL, Cat. No. 71175), 96-웰 세포배양 플레이트 (SPL, Cat. No. 30096), PBS pH 7.4 (Gibco, Cat. No. 10010-023; Lot. No. 2085080), TrypLETM　Express (Gibco, Cat. No. 12605-010; Lot. No. 2323417), 카운팅 챔버 (Hematocytometer)(Marienfeld Superior, Cat. No. 0650010), 및 0.4 % 트립판 블루 용액 (DYNEBIO, Cat. No. CBT3710; Lot. No. 20211201)을 사용하였다.
(2) 본 발명의 화합물 처리 및 세포 생존능 분석 실험법
실시예 화합물은 DMSO (Sigma-Aldrich Cat. No. D2438, Lot. No. RNBJ9566)에 완전 용해시켜 실험에 사용하였다.
H526 세포주를 96-웰 세포배양 플레이트에 각 웰 당 3 X 104개가 되도록 시딩하였으며, 각 웰의 배지 부피는 150 μL가 되도록 맞추었다.
본 발명의 화합물의 세포 내 처리 용량은 최대 농도 3000 nM이 되도록 하고, 이를 1/3 씩 희석하여 농도 별로 처리하였으며, 최저 농도는 0.46 nM이 되도록 하였다. 각 웰 마다 전체 용액의 부피가 200 μL가 되도록 화합물을 처리한 후 5 일 동안 CO2 인큐베이터 (Thermo Fisher Science, Cat. No. 4111)에서 배양 하였다.
이후 각 웰에 EZ-Cytox (DOGEN, Cat.NO. EZ-3000, Lot. No. DLS2109)를 20 μL씩 처리 후 CO2 인큐베이터에서 4 시간 배양 하였다. 플레이트 리더기 (BMG Labtech, CLARIOstar Plus)의 파장을 450 nM로 설정하여 배양이 종료된 샘플의 흡광도를 측정하였으며, 측정 전 플레이트 리더기 내에서 3 분간 교반한 후 측정하였다. 최종 측정값은 엑셀 파일로 정리 후 Prism-GraphPad 프로그램을 통해 그래프를 표시하고, IC50 값을 측정하였다.
결과는 하기 표 3과 같다.
H526 세포주에서의 세포 생존능 분석
실시예 화합물 활성도
화합물 2 D
화합물 5 E
화합물 6 E
화합물 15 B
화합물 18 A
화합물 20 D
화합물 25 B
화합물 26 B
화합물 29 A
화합물 30 C
화합물 31 C
화합물 32 B
화합물 33 D
화합물 37 E
화합물 38 D
화합물 39 C
화합물 40 D
화합물 41 D
화합물 42 C
화합물 44 C
화합물 45 C
화합물 49 B
화합물 50 A
화합물 51 A
화합물 52 A
화합물 53 B
화합물 55 C
화합물 56 A
화합물 58 B
화합물 59 A
화합물 60 A
화합물 62 C
화합물 63 B
화합물 66 B
화합물 68 C
화합물 71 B
화합물 72 C
화합물 74 D
화합물 76 C
화합물 77 C
화합물 78 C
화합물 79 C
화합물 81 B
화합물 82 A
화합물 86 E
화합물 89 E
화합물 90 E
화합물 91 E
화합물 92 D
화합물 94 E
화합물 97 E
화합물 98 E
화합물 99 E
화합물 102 E
화합물 103 D
화합물 106 C
화합물 107 C
화합물 108 C
화합물 114 D
화합물 115 E
화합물 118 B
화합물 119 D
화합물 120 B
화합물 121 D
화합물 122 A
화합물 123 C
화합물 124 A
화합물 127 C
화합물 128 B
화합물 129 A
화합물 130 A
화합물 131 B
화합물 133 B
화합물 134 A
화합물 135 B
화합물 136 A
화합물 137 A
화합물 138 B
화합물 139 B
화합물 142 C
화합물 143 C
화합물 144 B
화합물 145 B
화합물 146 B
화합물 147 B
화합물 148 B
화합물 149 B
화합물 150 B
화합물 151 B
화합물 152 B
화합물 153 B
화합물 154 C
화합물 155 C
화합물 156 B
화합물 157 C
화합물 158 B
화합물 159 A
화합물 161 A
화합물 162 C
화합물 164 A
화합물 165 A
화합물 167 A
화합물 190 A
화합물 194 B
화합물 197 B
화합물 201 B
화합물 205 B
화합물 208 C
화합물 209 B
화합물 210 B
화합물 211 A
화합물 212 A
화합물 213 A
화합물 215 E
화합물 216 D
화합물 217 E
화합물 218 B
화합물 219 A
표 3에서, 활성도는 H526 세포주에 각 실시예 화합물을 처리한 군의 IC50 값에 따라 표기하였다 (A: < 30 nM, B: < 50 nM, C: < 100 nM, D: < 200 nM, E: < 400 nM).
4. MRC-5 세포주에서의 세포 생존능 분석
(1) MRC-5 세포주의 배양
MRC-5 세포주를 한국세포주은행(KCLB, 서울, 한국)에서 구입하였다. 배양 세포의 계대(Passage)를 P15 내로 유지하였다.
세포 배양을 위해, MEM/EBSS(Hyclone, Cat. No. SH30024.01; Lot. No. AG29697698), FBS(Gibco, Cat. No. 16000-044; Lot. No. 2234018P), 페니실린/스트렙토마이신(PS)(Gibco, Cat. No. 15140-122; Lot. No. 2211099), 175T　세포배양 플라스크(SPL, Cat. No. 71175), 96-웰 배양 플레이트(SPL, Cat. No. 30096), PBS pH7.4(Gibco, Cat. No. 10010-023; Lot. No. 2085080), TrypLETM　Express(Gibco, Cat. No. 12605-010; Lot. No. 2070638), 카운팅 챔버 (Hematocytometer)(Hirschmann, Cat. No. 8100204), 및 0.4 % 트립판 블루 용액(DYNEBIO, Cat. No. CBT3710; Lot. No. 20190723)을 사용하였다.
(2) 본 발명의 화합물 처리
175T 세포배양 플라스크에서 배양 중인 MRC-5 세포주를 TrypLETM Express을 이용하여 플라스크로부터 세포를 분리하였다. 96-웰 플레이트(SPL사)의 각 웰마다 6 X 103 개의 세포를 시딩하였고, 배양 배지 부피를 총 150 μL로 하여 세포를 배양하였다.
실시예 화합물은 DMSO(Sigma-Aldrich, Cat. No. D2438-50ML, Lot. No. RNBK6387)에 완전 용해시켜 실험에 사용하였고, 10 μM를 최고농도로 하여 1/3씩 희석하여 최저 농도가 1.52nM이 되도록 계산하여 처리하였다. 각 웰에는 배지와 함께 혼합하여 처리하였으며, 부피는 50 μL가 되도록 하여 각 웰의 총 부피는 200 μL가 되도록 하였다. 이 후, 37℃ CO2 인큐베이터(Thermo Fisher Science, Cat. No. 4111, Lot. No. 300512709)에서 5일간 배양 하였다.
하기의 화합물들은 비교예로서 사용되었으며, 실시예 화합물과 동일한 방법으로 세포 생존능 분석을 수행하였다.
비교예 1. Mu et al. BBRC, 2020, 521(4): 833 문헌에 기재된 예시 화합물 (비교 화합물 1)
비교예 2. BI2536 (비교 화합물 2)
비교예 3. 볼라설팁 (비교 화합물 3)
비교예 4. TAK960 (비교 화합물 4)
(3) 세포독성 실험
배양이 끝난 플레이트의 각 웰에 Easy-cytox(DOGEN, Cat. No. EZ-3000, Lot. No. DLS2012) 용액을 20 μL씩 처리 후 4시간 동안 37℃ CO2 인큐베이터에서 배양하였다. 96-웰 플레이트를 플레이트 리더기(BMG Labtech, Clariostar Plus)에 넣고 2분간 혼합 후, 450nM 파장에서 흡광도를 측정하였다. 데이터는 Prism (ver.9) 프로그램을 이용하여 그래프로 변환하였다.
결과는 하기의 표 4 및 표 5와 같다.
MRC-5 세포주에서의 세포 생존능 분석
실시예 화합물 활성도
화합물 5 20032
화합물 9 N.D.
화합물 15 16696
화합물 18 N.D.
화합물 25 N.D.
화합물 26 N.D.
화합물 28 N.D.
화합물 30 N.D.
화합물 31 N.D.
화합물 32 N.D.
화합물 38 N.D.
화합물 39 N.D.
화합물 40 N.D.
화합물 41 N.D.
화합물 44 N.D.
화합물 45 N.D.
화합물 49 N.D.
화합물 50 11265
화합물 51 N.D.
화합물 55 3812
화합물 56 N.D.
화합물 58 N.D.
화합물 59 N.D.
화합물 60 4188
화합물 62 N.D.
화합물 63 N.D.
화합물 66 N.D.
화합물 68 N.D.
화합물 71 N.D.
화합물 72 N.D.
화합물 74 N.D.
화합물 76 N.D.
화합물 77 N.D.
화합물 78 N.D.
화합물 79 N.D.
화합물 81 N.D.
화합물 82 N.D.
화합물 89 N.D.
화합물 90 N.D.
화합물 91 N.D.
화합물 92 N.D.
화합물 98 N.D.
화합물 102 14419
화합물 106 N.D.
화합물 107 N.D.
화합물 108 N.D.
화합물 114 N.D.
화합물 115 N.D.
화합물 118 N.D.
화합물 119 N.D.
화합물 120 N.D.
화합물 121 N.D.
화합물 123 N.D.
화합물 124 N.D.
화합물 128 18754
화합물 129 17331
화합물 130 N.D.
화합물 131 N.D.
화합물 133 N.D.
화합물 136 6519
화합물 137 16911
화합물 138 N.D.
화합물 139 N.D.
화합물 142 N.D.
화합물 143 N.D.
화합물 144 4077
화합물 148 13226
화합물 149 N.D.
화합물 150 19285
화합물 151 N.D.
화합물 152 6171
화합물 153 15824
화합물 154 N.D.
화합물 155 N.D.
화합물 156 N.D.
화합물 157 N.D.
화합물 158 39332
화합물 159 4905
화합물 161 N.D.
화합물 162 N.D.
화합물 164 N.D.
화합물 165 N.D.
화합물 167 N.D.
화합물 182 9751
화합물 194 N.D.
화합물 197 18032
화합물 201 N.D.
화합물 205 N.D.
화합물 208 N.D.
화합물 209 5310
화합물 210 18151
화합물 211 N.D.
화합물 212 N.D.
화합물 213 N.D.
화합물 215 16157
화합물 216 27002
화합물 217 16410
화합물 219 12980
표 4에서, 활성도는 MRC-5 세포주에 각 실시예 화합물을 처리한 군의 IC50 값 (nM)에 따라 표기하였다. N.D. (not determined)는 10 μM 까지 세포독성이 나타나지 않았음을 의미한다. 그 결과, 본 발명의 모든 화합물이 정상 세포주보다 암 세포주에서 높은 수준의 세포독성을 특이적으로 나타냄을 확인하였다.
MRC-5 세포주에서의 세포 생존능 분석
비교화합물 활성도
비교화합물 1 106.6
비교화합물 2 3085.4
비교화합물 3 2939.3
비교화합물 4 9152.5
표 5에서, 활성도는 MRC-5 세포주에 각 실시예 화합물을 처리한 군의 IC50 값 (nM)에 따라 표기하였다. 특히 공지의 PROTAC 화합물인 비교화합물 1은 본 발명의 실시예 화합물과 달리 정상 세포주에서 높은 수준의 세포독성을 나타내었다.

Claims (16)

  1. 삭제
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. 삭제
  7. 하기 화합물 1 내지 225로 이루어진 군으로부터 선택되는, 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염:
    .
  8. 삭제
  9. 제 7 항에 따른 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 PLK1 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로서,
    상기 PLK1 관련 질환은 암, 양성 종양 및 신경질환으로 구성된 군에서 선택된 1종 이상인, 약학적 조성물.
  10. 삭제
  11. 제 9 항에 있어서,
    상기 암 또는 양성 종양은 편평상피세포암, 소세포폐암, 비소세포폐암, 폐의 선암, 폐의 편평상피암, 복막암, 피부암, 피부 또는 안구내 흑색종, 직장암, 항문부근암, 식도암, 소장암, 내분비선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 만성 또는 급성 백혈병, 림프구 림프종, 간세포암, 위장암, 위암, 췌장암, 교아종, 경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간종양, 유방암, 결장암, 대장암, 자궁내막 또는 자궁암, 침샘암, 신장암, 전립선암, 음문암, 갑상선암, 두경부암, 뇌암, 골육종, 배럿 식도, 대장 선종 및 용종, 유방 섬유선종 및 낭종, 단세포 감마글로불린병증 (MGUS), 단클론 림프구증가증, 고형암, 혈액암, 골암, 거대세포 림프종, 부신피질 종양, T-세포성 림프종/백혈병, 신경내분비암, 신경내분비종양, 담관암, 신경모세포종, 교모세포종, 신경교종으로 구성된 군에서 선택된 1종 이상인, 약학적 조성물.
  12. 제 9 항에 있어서,
    상기 신경질환은 중추 신경계 질환, 퇴행성　신경질환, 알츠하이머병, 파킨슨병, 다발성경화증, 헌팅톤병, 노인성 치매, 간질, 루게릭, 뇌졸증, 및 뇌 또는 척수 손상에 이은 신경손상과 축삭 변성 관련 장애로 구성된 군에서 선택된 1종 이상인, 약학적 조성물.
  13. 삭제
  14. 삭제
  15. 삭제
  16. 삭제
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021194319A1 (en) * 2020-03-27 2021-09-30 Uppthera Vanillin derivative compounds inducing selective degradation of plk1

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009153197A1 (en) 2008-06-18 2009-12-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Halo-substituted pyrimidodiazepines as plkl inhibitors
CN106977584A (zh) 2017-04-19 2017-07-25 吉林大学 靶向泛素化降解plk1和brd4蛋白的化合物及其应用
CN109879877A (zh) * 2019-03-04 2019-06-14 吉林大学 一种可降解plk1和brd4蛋白的化合物及其应用
US20200038513A1 (en) 2018-07-26 2020-02-06 Arvinas Operations, Inc. Modulators of fak proteolysis and associated methods of use
WO2021061894A1 (en) * 2019-09-27 2021-04-01 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Erk5 degraders as therapeutics in cancer and inflammatory diseases

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2008013110A (es) * 2006-04-12 2009-03-06 Vertex Pharma 4-5-dihidro-[1,2,4]triazolo[4,3-f]pteridinas como inhibidores de la proteina-cinasa plk1 para el tratamiento de trastornos proliferativos.
US9694084B2 (en) * 2014-12-23 2017-07-04 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Methods to induce targeted protein degradation through bifunctional molecules
WO2017079267A1 (en) 2015-11-02 2017-05-11 Yale University Proteolysis targeting chimera compounds and methods of preparing and using same
CN106543185B (zh) 2016-11-10 2017-12-15 吉林大学 一种靶向泛素化降解plk1和brd4蛋白的化合物及其应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009153197A1 (en) 2008-06-18 2009-12-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Halo-substituted pyrimidodiazepines as plkl inhibitors
CN106977584A (zh) 2017-04-19 2017-07-25 吉林大学 靶向泛素化降解plk1和brd4蛋白的化合物及其应用
US20200038513A1 (en) 2018-07-26 2020-02-06 Arvinas Operations, Inc. Modulators of fak proteolysis and associated methods of use
CN109879877A (zh) * 2019-03-04 2019-06-14 吉林大学 一种可降解plk1和brd4蛋白的化合物及其应用
WO2021061894A1 (en) * 2019-09-27 2021-04-01 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Erk5 degraders as therapeutics in cancer and inflammatory diseases

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