CN115803030A - 用于kras靶向降解的化合物和方法 - Google Patents

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Abstract

本文描述了可用作Kirsten ras肉瘤蛋白(KRas或KRAS)调节剂的双官能化合物。特别地，本公开的异双官能化合物在一端含有与所述Von Hippel‑Lindau E3泛素连结酶结合的部分，并且在另一端含有结合KRas的部分，使得所述靶蛋白被安置成与泛素连结酶邻近从而实现靶蛋白的降解(和抑制)。本公开的异双功能化合物表现出广泛范围的与靶蛋白的降解/抑制相关的药理活性。用本公开的化合物和组合物治疗或预防由所述靶蛋白的异常调节引起的疾病或病症。

Description

用于KRAS靶向降解的化合物和方法
相关申请的交叉引用
本公开要求提交于2020年4月6日的名称为“COMPOUNDS A ND METHODS FORTARGETED DEGRADATION OF KRAS”的美国临时申请第63/006,000号和提交于2020年5月27日的名称为“COMPOUNDS AND METHODS FOR TARGETED DEGRADATION OF KRAS”的美国临时申请第63/030440号的权益和优先权，其通过引用方式以其整体并入本文用于所有目的。
以引用的方式并入
所有引用的参考文献均通过引用方式以其整体并入本文，包括提交于2016年3月18日的美国专利申请序列号15/074820(公布为美国专利申请公布号2016/0272639)；和提交于2014年7月11日的美国专利申请序列号14/371956(公布为美国专利申请公布号2014/0356322)；和提交于2018年12月18日的美国专利申请序列号16/224088(公布为美国专利申请公布号2019/0127359)；和提交于2019年4月4日的美国专利申请序列号16/375643(公布为美国专利申请公布号2019/0315732)。
关于联邦资助的研究的声明
本发明是根据美国国家卫生研究院(National Institutes of Health)的授权号NIH R35CA197589在政府支持下进行的。政府享有本发明的某些权利。
发明领域
本发明提供了包含靶蛋白结合部分和E3泛素连结酶结合部分的异双官能化合物以及相关的使用方法。该双官能化合物可用作具有G12C突变的Kirsten ras肉瘤蛋白的靶向泛素化的调节剂，然后该蛋白被降解和/或抑制。
背景技术
大多数小分子药物将酶或受体结合在密封且界限清楚的口袋中。另一方面，众所周知，由于小分子接触面大、涉及的沟浅或界面平坦，蛋白质-蛋白质相互作用难以使用小分子靶向。E3泛素连结酶(其中数百种在人类中已知)赋予底物以泛素化的特异性，并且因此，由于它们对某些蛋白质底物的特异性，它们是比一般蛋白酶体抑制剂更具吸引力的治疗靶标。E3连结酶配体的开发已被证明具有挑战性，部分原因是它们必须破坏蛋白质-蛋白质相互作用。然而，最近的开发提供了与这些连结酶结合的特定配体。例如，自从发现第一个小分子E3连结酶抑制剂奴林(nutlins)以来，已经报道了靶向E3连结酶的其他化合物。
Von Hippel-Lindau(VHL)肿瘤抑制因子是E3连结酶复合物VCB的底物识别亚基，该E3连结酶复合物VCB也由细长蛋白B和C、Cul2和Rbx1组成。VHL的主要底物是缺氧诱导因子1α(HIF-1α)，其是一种响应于低氧水平上调诸如促血管生成生长因子VEGF和红细胞诱导细胞因子促红细胞生成素的基因的转录因子。产生了Von Hippel Lindau(VHL)的针对E3连结酶的底物识别亚基的第一种小分子配体，并获得了晶体结构，从而证实该化合物模拟了VHL的主要底物转录因子HIF-1α的结合模式。
双官能化合物(诸如美国专利申请公开2015/0291562和2014/0356322中描述的那些(以引用的方式并入本文))起到将内源性蛋白质募集到E3泛素连结酶以进行泛素化和后续在蛋白酶体降解通路中的降解的作用。特别地，上面引用的出版物描述了双官能或蛋白水解靶向嵌合
Figure BDA0003980908660000031
蛋白质降解剂化合物，这些化合物可以用作多种多肽和蛋白质的靶向泛素化的调节剂，然后被双官能化合物降解和/或抑制。
Kirsten大鼠肉瘤(KRAS)基因是编码KRas的致癌基因，该KRas为小GTPase信号转导蛋白。Ras蛋白与质膜缔合，并且充当细胞外信号转导到细胞内反应的开关，从而调节例如细胞分裂。在正常细胞中，KRAS起分子开关的作用，在非活跃的GDP结合的“关闭”状态和活跃的GTP结合的“开启”状态之间循环(Milburn等人；Ito，Y.，等人，Regionalpolysterism in the GTP-bound form of the human c-Ha-Rasprotein.Biochemistry1997，36(30)，9109-9119)。该开关受到鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEF)蛋白(其将GDP交换为GTP)和GTP酶激活蛋白(GAP)(其增强KRAS的本质上缓慢的GTP酶活性)的严格调控(Bar-Sagi，D.，The Sos(Son of sevenless)protein.Trends Endocrinol Metab 1994，5(4)，165-9；Pierre，S.，等人，Understanding SOS(Son of Sevenless).Biochem Pharmacol2011，82(9)，1049-56；Harrell Stewart，D.R.，等人，Pumping the brakes on RAS-negative regulators and death effectors of RAS.J Cell Sci 2020，133(3))。GEF和GAP效应蛋白在KRAS上两个称为开关I(残基30-38)和开关II(残基59-76)的浅结合口袋中的一者或两者处结合，所述两个开关的构象在GDP结合的状态和GTP结合的状态之间发生显著变化(Ito等人；Boriack-Sjodin，P.A.等人，The structural basis of the activationof Ras by Sos.Nature 1998，394(6691)，337-43；Scheffzek，K.等人，The Ras-RasGAPcomplex：structural basisfor GTPase activation and its loss in oncogenicRasmutants.Science 1997，277(5324)，333-8)。
KRAS基因是癌症中最常发生突变的癌基因之一(Prior，I.A.；Lewis，P.D.；Mattos、C.，A comprehensive survey of Ras mutations in cancer.Cancer Res 2012，72(10)，2457-67；Land，H.；Parada，L.F.；Weinberg，R.A.，Tumorigenic conversion ofprimary embryofibroblasts requires at least two cooperating oncogenes.Nature1983，304(5927)，596-602；Newbold，R.F.；Overell，R.W.，Fibroblast Immortality Is aPrerequisite for Transformation by Ej C-Ha-Ras Oncogene.Nature 1983，304(5927)，648-651)。KRAS编码小膜结合GTP酶，该酶转送来自受体酪氨酸激酶(RTK)的信号，从而促进细胞增殖、细胞分化或细胞死亡(Milburn，M.V.，等人，Molecular Switch forSignal Transduction-Structural Differences between Active and Inactive Formsof Protooncogenic Ras Proteins.Science 1990，247(4945)，939-945；Simanshu，D.K.，等人，RAS Proteins and Their Regulators in Human Disease.Cell 2017，170(1)，17-33)。体细胞KRAS突变减弱了该蛋白的GAP介导的酶活性，导致GTP结合的活跃的KRAS蓄积和下游信号转导的过度激活，从而导致不受控制的细胞增殖(Prior等人；Simanshu等人)。KRas基因的许多激活或功能获得性突变是已知的，并且事实上，KRas是癌症中最常发生突变的基因。功能获得性KRas突变在所有人类癌症的大约30％癌症中被发现，该癌症包括例如胰腺癌(＞80％)、结肠癌(大约40-50％)、肺癌(大约30-50％)、非小细胞肺癌、胆道恶性肿瘤、子宫内膜癌、宫颈癌、膀胱癌、肝癌、髓系白血病和乳腺癌。这些激活突变削弱了KRas在活跃和非活跃状态之间切换的能力。已经确立了KRas突变体在各种癌症的起始、维持、进展和转移中的关键作用，并且突变常常与预后不良和对化学疗法和生物疗法(包括，例如，靶向表皮生长因子受体的疗法)的抗性增加相关。然而，尽管它在癌症中的关键作用和患病率，但缺乏直接靶向这种癌基因的有效疗法，导致它被认为是“无法用药的(undruggable)”。此外，尽管KRAS突变体在癌症中普遍存在并且经过多年广泛的研究努力，但鉴于其表面上缺乏传统的可用药的口袋，因此KRAS仍是具有挑战性的治疗靶标(Spencer-Smith，R.等人，Direct inhibition of RAS：Quest for the Holy Grail？SeminCancer Biol 2019，54，138-148)。
KRAS G12C突变在肺腺癌(LUAD)中非常普遍。KRASG12C突变体占所有KRAS突变体LUAD肿瘤的50％以上(占全部LUAD肿瘤的13％)(Prior等人2012)。此外，结直肠癌中的3％和所有其他实体瘤中的1％表达KRASG12C(Campbell，JD，等人，Distinct pattems ofsomatic genes changed in lung adenocarcinomas and squamous cellcancers.NatGenet 2016，48(6)，607-16)。这种突变大大降低了KRAS的内在GTP酶活性，从而允许GTP结合的活跃KRAS蓄积(Lu，S.，等人，GTP Binding and Oncogenic Mutations May AttenuateHypervariable Region(HVR)-Catalytic Domain Interactions in Small GTPase K-Ras4B，Exposing the Effector Binding Site.J Biol Chem 2015，290(48)，28887-900)。最初由Shokat小组领导的最新进展已经鉴定出共价且选择性地结合KRASG12C的突变半胱氨酸的分子(Ostrem，J.M.，等人，K-Ras(G12C)inhibitors allosterically control GTPaffinity and effector interactions.Nature 2013，503(7477)，548-51；Rudolph，J.，等人，Selective inhibition of mutant Ras protein through covalent binding.AngewChem Int Ed Engl 2014，53(15)，3777-9；Ostrem，J.M.，等人，Direct small-moleculeinhibitors of KRAS：from structural insights to mechanism-based design.Nat RevDrug Discov 2016，15(11)，771-785；Nnadi、C.I.，等人，Novel K-Ras G12C Switch-IICovalent Binders Destabilize Ras and Aceelerate Nucleotide Exchange.J ChemInf Model 2018，58(2)，464-471)。这些化合物在KRAS开关II区域内诱导出新的药物样的口袋(Ostrem等人2013)。负责结合半胱氨酸的亲电体的优化以及药物诱导的口袋内分子相互作用导致了口服可生物利用的KRASG12C抑制剂的开发。然而，尽管取得了这一成功，但已经报道了抑制剂治疗后的快速适应性抗性和MAPK信号转导再激活(Ryan，M.B.等人，Vertical Pathway Inhibition Overcomes Adaptive Feedback Resistance to KRAS(G12C)Inhibition.Clin Cancer Res 2019；Xue，J.Y.，等人，Rapid non-uniformadaptation to conformation-specific KRAS(G12C)inhibition.Nature 2020，577(7790)，421-425)。因此，互补治疗策略的开发可以帮助实现靶向KRAS突变体用于癌症治疗的全部潜力。
本领域对与KRas有关的疾病和病症(例如，胰腺癌、结肠癌、结直肠癌、肺癌、非小细胞肺癌、胆道恶性肿瘤、子宫内膜癌、宫颈癌、膀胱癌、肝癌、髓系白血病和乳腺癌)的有效治疗存在持续需求。
发明内容
本公开描述了起到将诸如突变或功能获得性KRas的Kirsten ras肉瘤蛋白(KRas或KRAS)募集到E3泛素连结酶以进行靶向泛素化和随后的蛋白酶体降解的作用的异双官能化合物，以及制备和使用所述化合物的方法。此外，本说明书提供了使用有效量的本公开的化合物治疗或改善疾病状况，诸如与KRas有关的疾病或病症，例如KRas蛋白或者突变的或功能获得性的KRas蛋白或错误折叠的KRas蛋白的蓄积或过度活跃、胰腺癌、结肠癌、结直肠癌、肺癌、非小细胞肺癌、胆道恶性肿瘤、子宫内膜癌、宫颈癌、膀胱癌、肝癌、髓系白血病和乳腺癌的方法。
因此，在一个方面，本公开提供了异双官能化合物，该异双官能化合物包含E3泛素连结酶结合部分(即，用于E3泛素连结酶的配体(“ULM”基团))和结合KRas或其突变型式的部分(即，蛋白质靶向部分或“PTM”基团，即，KRas靶向配体或“KTM”基团)，使得KRas蛋白因此被安置成与泛素连结酶邻近从而实现KRas蛋白的泛素化和随后的降解(和/或抑制)。在优选的实施方案中，ULM(泛素化连结酶结合部分)是Von Hippel-Lindau(VHL)E3泛素连结酶结合部分(VLM)。例如，双官能化合物的结构可以被描绘为：
Figure BDA0003980908660000061
PTM和ULM部分(例如，VLM)的各自位置，以及如本文所例示的它们的数目，仅作为实例提供，并不旨在以任何方式限制所述化合物。如本领域技术人员将理解的，如本文所述的双官能化合物可以被合成为使得各个官能部分的数目和位置可以根据需要改变。
在某些实施方案中，双官能化合物还包含化学接头(“L”)。在此实例中，双官能化合物的结构可以被描绘为：
Figure BDA0003980908660000071
其中PTM是KRas靶向部分(KTM)，L是接头，例如将PTM偶联至ULM的键或化学连接基团，并且ULM是VHL E3泛素连结酶结合部分(VLM)。
例如，双官能化合物的结构可以被描绘为：
Figure BDA0003980908660000072
其中：PTM是KRas靶向部分(KTM)；“L”是将PTM和VLM偶联的接头(例如键或化学连接基团)；并且VLM是结合至VHL E3泛素连结酶的VHL E3泛素连结酶结合部分。
在某些实施方案中，如本文所述的化合物包含多个独立选择的ULM、多个PTM、多个化学接头或它们的组合。
在本文所述的方面或实施方案中的任何方面或实施方案中，PTM是结合KRas或其突变体(诸如功能获得性KRas)的小分子。在本文所述的方面或实施方案中的任何方面或实施方案中，PTM是结合KRas的小分子。在本文所述的方面或实施方案中的任何方面或实施方案中，PTM是结合KRas野生型蛋白和KRas突变体(诸如具有功能获得性突变的KRas蛋白)两者的小分子。在本文所述的方面或实施方案中的任何方面或实施方案中，PTM是结合KRas野生型蛋白和KRas突变体(诸如但不限于功能获得性KRas突变体)两者的小分子。在本文所述的任何方面或实施方案中，该小分子结合如本文所述的KRas。
在一个实施方案中，VLM是反式-3-羟脯氨酸的衍生物，其中反式-3-羟脯氨酸中的氮和羧酸两者都被官能化为酰胺。其他考虑的VLM描述于美国专利申请公布第2016/0272639号、美国专利申请公布第2014/0356322号，其中每一者都通过引用方式以其整体并入本文。
在某些实施方案中，“L”是键。在另外的实施方案中，接头“L”是线性非氢原子数目在1至40范围内(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40)的连接体。连接体“L”可以含有但不限于一个或多个官能团，诸如醚、酰胺、烷烃、烯烃、炔烃、酮、羟基、羧酸、硫醚、亚砜和砜。接头可以含有芳族、杂芳族、环状、双环或三环部分。用诸如Cl、F、Br和I的卤素或诸如甲基、乙基、异丙基和叔丁基的烷基进行的取代可以包括在接头中在氟取代的情况下，可以包括单个或多个氟。
在另外的方面，本说明书提供了治疗组合物，其包含有效量的如本文所述的化合物或其盐形式，以及药学上可接受的载体。所述治疗组合物可被用于在患者或受试者(例如，诸如人的动物)中触发KRas或其突变型式的靶向降解以及/或者KRas或其突变型式的抑制，并且可被用于治疗或改善患者或受试者中一种或多种在因果关系上与KRas或其突变型式相关的疾病状态、病状或症状，所述治疗是通过降解或抑制患者或受试者中KRas蛋白或其突变型式，或控制或降低患者或受试者中KRas蛋白水平或其突变型式的蛋白水平来完成。在某些实施方案中，如本文所述的治疗组合物可被用于实现KRas或其突变或错误折叠形式的降解，以治疗或改善诸如例如KRas蛋白、其错误折叠形式或其突变形式(诸如功能获得性KRas蛋白)的蓄积、积聚或过度活跃的疾病，胰腺癌，结肠癌，结直肠癌，肺癌，非小细胞肺癌，胆道恶性肿瘤，子宫内膜癌，宫颈癌，膀胱癌，肝癌，髓系白血病或乳腺癌。
在又另一方面，本公开提供了在细胞中(例如，体外或体内)泛素化KRas或其突变形式的方法。在本文所述的任何方面或实施方案中，该方法包括施用如本文所述的异双官能化合物以实现KRas蛋白或其突变形式的降解，所述异双官能化合物包含结合KRas或其突变形式的PTM和优选通过如本文所述的化学接头部分连接的VLM。尽管不希望受到理论的限制，本发明人认为，根据本发明，当通过使用异双官能化合物将KRas野生型或突变蛋白安置成与E3泛素连结酶邻近时，将发生KRas野生型或突变蛋白的多泛素化，从而触发KRas或突变蛋白的经由蛋白酶体通路的后续降解以及细胞(诸如需要此类治疗的受试者的细胞)中的KRas蛋白水平的控制或降低。本公开提供的KRas蛋白或其突变形式的水平的控制或降低提供了对与KRas有因果关系的疾病状态、病状或相关症状的治疗，如通过降低受试者的细胞中的KRas蛋白或其突变形式的量所调节。
在又一方面，本说明书提供了用于治疗或改善受试者或患者(例如，动物，诸如人)中与KRas或其突变形式有因果关系的疾病、病状或其症状的方法，其包括向有此需要的受试者施用包含有效量(例如，治疗有效量)的如本文所述的异双官能化合物或其盐形式和药学上可接受的载体的组合物，其中所述组合物可有效治疗或改善受试者的疾病或病症或其症状。
在本文所述的任何方面或实施方案中，该方法进一步包括，在向受试者施用本公开的组合物或化合物之前，将患者鉴定为具有突变的KRas蛋白(例如，KRasG12C)。
在另一个方面，本说明书提供了使用根据本公开的化合物鉴定生物系统中KRas蛋白的降解的作用的方法。
在另一个方面，本说明书提供了用于制备本公开的异双官能化合物的工艺和中间体，所述异双官能化合物能够实现细胞(例如，体内或体外)中KRas蛋白的靶向泛素化和降解。
附图说明
并入本说明书并形成其一部分的附图阐明本公开的几个实施方案，并且连同说明书一起用来解释本公开的原理。附图仅用于说明本公开的实施方案，并且不应理解为对本公开的限制。本公开另外的目标、特征和优点由以下结合示出本公开例示性实施方案的附图的详细说明而变得明显。
图1A和图1B.异双官能蛋白质降解化合物的一般原理的说明。图1A.示例性异双官能蛋白质降解化合物包含蛋白质靶向部分(PTM；深阴影矩形)、泛素连结酶结合部分(ULM；浅阴影三角形)和任选的将PTM偶联至ULM的接头部分(L；黑线)。图1B例示如本文所述的异双官能蛋白质降解化合物(商业上称为
Figure BDA0003980908660000101
蛋白质降解化合物)的功能用途。简而言之，ULM(三角形)识别并结合至特异性E3泛素连结酶，而PTM(大矩形)结合并招募靶蛋白从而使其与E3泛素连结酶非常邻近。通常，E3泛素连结酶与E2泛素结合蛋白(E2)复合，并单独地或经由E2蛋白催化多个泛素分子(黑色圆圈)经由异肽键附接至靶蛋白上的赖氨酸。多泛素化蛋白(最右边)因此被细胞的蛋白酶体机制靶向降解。
图2A、图2B和图2C.MRTX849-VHL双官能化合物在NCI-H2030细胞中接合并降解内源性KRASG12C：(2A)MRTX849、LC-1、LC-2(活性双官能蛋白质降解化合物)和LC-2差向异构体的化学结构。(2B)LC-1以剂量依赖性方式接合KRASG12C。量化结果在右边。(2C)LC-2以剂量依赖性方式降解KRASG12C。量化结果在右边。量化数据代表平均值±SD。不显著(N.S.)；*p＜0.05；**p＜0.01；****p＜0.001。
图3A和图3B.MRTX849和LC-2降解的对接对KRASG12C有特异性。(3A)MRTX849(MRTX)向KRASG12C的晶体结构(PDB：5V9U)中的对接。MRTX以黄色显示，黑色箭头指示接头附接点。(3B)LC-2不会降解HCT116细胞中的KRASG12D。量化结果在右边。量化结果在右边。量化数据代表平均值±SD。
图4A、图4B和图4C.LC-2诱导多种突变细胞系中的KRASG12C降解。(4A)LC-2诱导杂合H358细胞中的KRASG12C降解，而LC-2差向异构体则未能如此。量化结果在右边。(4B)LC-2诱导纯合MIA PaCa-2细胞中的KRASG12C。量化结果在右边。(4C)LC-2诱导纯合、MRTX849抗性、SW1573细胞中的KRASG12C降解。(4D)LC-2诱导杂合NCI-H23中的KRASG12C降解。量化结果在右边。量化数据代表平均值±SD。*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.005；****p＜0.001。
图5A和图5B.内源性KRASG12C的降解是通过异双官能化合物进行的。(5A)在NCI-H2030细胞中，LC-2差向异构体在2.5μM下不诱导KRASG12C降解，并且LC-2诱导的降解被VHL配体竞争、用环氧霉素(Epox)进行的蛋白酶体抑制和用MLN4924(MLN)进行的类泛素化修饰(neddylation)抑制所挽救。量化结果在下边。(5B)类泛素化修饰的抑制可挽救LC-2诱导的NCI-H23细胞中的KRASG12C降解，而溶酶体酸化的抑制则未能如此。量化结果在下边。量化数据代表平均值±SD。不显著(N.S.)；***p＜0.005。
图6A和图6B.KRASG12C降解迅速，早在4小时的时候诱导了最大降解：(6A)NCI-H2030细胞中的时间过程。LC-2和LC-2差向异构体在1小时内接合，最大降解到8小时时观察到并维持了至多24小时。量化结果在右边。(6B)SW1573细胞中的时间过程。LC-2和LC-2差向异构体在1小时内接合KRAS，并且最大降解在12小时时观察到并维持了至多24小时。量化结果在右边。LC-2差向异构体是对更高分子量的双官能化合物差向异构体修饰条带的量化，以监测KRASG12C随时间的接合，而不是总KRAS水平。量化数据代表平均值±SD。不显著(N.S.)；*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.005；****p＜0.001。
图7A和图7B：在多个癌细胞系中，内源性KRASG12C的降解持续超过72小时。(7A)在MIA PaCa-2细胞中的72小时时间过程。降解发生在6小时时并维持了至多72小时。量化数据在右边。(7B)在NCI-H23细胞中的72小时时间过程。降解在6小时内发生，在24小时时达到最大值，并且到72小时时开始反弹。量化结果在右边。量化数据代表平均值±SD。不显著(N.S.)；**p＜0.01；***p＜0.005；****p＜0.001
图8：LC-2诱导的KRASG12C降解在SW1573中维持了超过72小时。LC-2诱导的KRASG12C在6小时内发生并维持了72小时。对LC-2差向异构体则没有观察到变化。
图9A和图9B：内源性KRASG12C的降解调节纯合和杂合KRASG12C细胞系中的Erk信号转导。(9A)纯合NCI-H2030细胞中的KRASG12C降解以剂量依赖性方式减弱pErk。量化数据在右边。(9B)杂合NCI-H23细胞中KRASG12C的降解以剂量依赖性方式降低pErk。量化结果在右边。统计分析见表2和表3。量化数据代表平均值±SD。
图10A和图10B：KRASG12C降解和抑制随时间对Erk信号转导的影响。(10A)KRASG12C抑制和降解降低纯合MIA PaCa-2细胞中在6和24小时时的pErk信号转导。量化数据在右边。(10B)KRASG12C的抑制和降解降低杂合NCI-H23中在6和24小时时的pErk信号转导。量化结果在右边。统计分析见表4和表5。量化数据代表平均值±SD。
图11：在SW1573细胞中在24小时LC-2处理期间Erk信号转导的变化。Erk信号转导由LC-2调节。pErk在整个时间过程中是降低的。量化结果在右边。量化数据代表平均值±SD。统计分析见表6。
图12：给出了示例性化合物LC-1、LC-2、LC-3、LC-4、LC-5和LC-6的化学结构、接头长度(从与吡咯烷的氮相邻的碳到与VHL羰基相邻的碳)和活性。较短的接头长度诱导较高水平的降解。a来自NCI-H2030细胞的数据。b来自SW1573细胞的数据。
具体实施方式
目前描述的是与以下令人惊讶的发现有关的化合物、组合物和方法：一旦E3泛素连结酶(例如，Von Hippel-Lindau(VHL)E3泛素连结酶)和KRas蛋白经由结合该E3泛素连结酶和该KRas蛋白二者的双官能化合物而被安置成邻近，该E3泛素连结酶就将该KRas蛋白或其突变形式泛素化。因此，本公开提供了包含E3泛素连结酶结合部分(“ULM”)的化合物和组合物，该E3泛素连结酶结合部分(“ULM”)通过键或化学连接基团(L)偶联至靶向KRas蛋白的蛋白质靶向部分(“PTM”)，这导致KRas蛋白的泛素化，并且导致由蛋白酶体引起的KRas蛋白降解(见图1A和图1B)。
在一个方面，本说明书提供了其中PTM结合至KRas蛋白和/或其变体形式的化合物。本公开还提供了组合物文库及其在细胞中产生KRas蛋白的靶向降解的用途。
在某些方面，本公开提供了包含配体例如小分子配体(即，具有低于2,000、1,000、500或200道尔顿的分子量的小分子配体)的异双官能化合物，该配体能够结合至E3泛素连结酶，诸如Von Hippel-Lindau E3泛素连结酶。该化合物还包含这样的小分子部分，该小分子部分能够结合至KRas蛋白或其突变形式，使得KRas蛋白或其突变形式被安置成与泛素连结酶邻近从而实现KRas蛋白或其突变形式的泛素化和降解(和/或抑制)。“小分子”意指，除上述之外，该分子是非肽基的，即，它不被认为是肽，例如，包含小于4个、3个或2个氨基酸残基。根据本说明书，PTM、ULM和异双官能分子中的每一者都是小分子。
如整个专利说明书中使用的术语“KRas”，除非特别地指出有相反情况，否则意图包括野生型KRas和其突变形式两者，诸如功能获得性KRas突变蛋白或具有一种或多种选自密码子12错义突变、密码子12错义突变、外显子2突变、G12V、G12C、G12D、G12A、G13D、外显子3突变、密码子61错义突变、外显子4突变、G12R、Q61H、G12S、A146T、G13C、Q61R、Q61L、A146V、密码子117错义突变、K117N、Q61K、G12F、密码子59错义突变、A59T或它们的组合或它们的组合的突变的KRas蛋白。
除非另外定义，否则本文使用的所有技术术语和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。本说明书中使用的术语仅仅是为了描述具体实施方案，并且并不意图限制本公开。
在提供数值范围时，应该理解在所述范围的上下限之间的每个中间值(除非上下文另外清楚地指出(诸如在含有多个碳原子的组的情况下，提供了落在范围内的每个碳原子数)，否则所述中间值达到下限单位的十分之一)和任何其它陈述的或在所陈述范围中的中间值涵盖在本公开内。这些较小范围的上限和下限可以独立地被包括在较小范围内并且也涵盖在本公开中，受所陈述范围内任何具体排除的限值的约束。在所陈述范围包括所述限值中的一个限值或两个限值的情况下，排除这些所包括的限值中的一个限值或两个限值的范围也包括在本公开中。
以下术语用于描述本公开。在本文未具体定义术语的情况下，术语被普通技术人员赋予本领域公认的含义，他们应用所述术语在其用途的上下文中描述本公开。
如本文和所附权利要求中使用的冠词“一个/种(a/an)”在本文中用于指代一个或多于一个(即，至少一个)的冠词的语法对象，除非上下文另有明确说明。举例来说，除非另有说明，“元素”是指一种元素或多于一种元素。
在权利要求以及上述专利说明书中，所有过渡性短语，诸如“包括/包含(comprising)”、“包括/包含(including)”、“携带(carrying)”、“具有(having)”、“含有(containing)”、“涉及(involving)”、“持有(holding)”、“由......组成(composed of)”等应被理解为是开放式的，即意味着包括但不限于。如美国专利局专利审查程序手册第2111.03节所述，只有过渡短语“由......组成(consisting of)”和“基本上由......组成(consisting essentially of)”应分别是封闭的或半封闭的过渡短语。
还应理解，在本文所述的包括多于一个步骤或动作的某些方法或工艺中，所述方法的步骤或动作的顺序不一定限于所述方法的步骤或动作被列举的顺序，除非上下文另有说明。
术语“共同施用(co-administration)”和“共施用(co-administrating)”或“组合疗法”是指并行施用(同时施用两种或更多种治疗剂)和时变施用(在与施用另外一种或多种治疗剂不同的时间施用一种或多种治疗剂)，只要该两种或更多种治疗剂在一定程度上，优选地以有效量在同一时间存在于患者中即可。在某些优选的方面，本文所述的一种或多种异双官能化合物与至少一种另外的生物活性剂(例如，抗癌剂)共施用。在特别优选的方面，此类化合物的共同施用导致协同活性和/或疗法，诸如，例如抗癌活性。
除非另有说明，否则如本文所用的术语“化合物”是指本文公开的任何特定的异双官能化合物、其药学上可接受的盐和溶剂化物，以及任何前述分子的氘代形式(如果适用的话)。所考虑的氘代化合物是药物分子中所含的一个或多个氢原子已被氘取代的化合物。此类氘化的化合物与等同的“未氘化”化合物相比优选具有一种或多种改进的药代动力学或药效学性质(例如，更长的半衰期)。
术语“泛素连结酶”是指促进一种或多种泛素转移至特定底物蛋白的蛋白质家族。几个泛素(多泛素化)的链的添加靶向底物蛋白以进行降解。例如，Von Hippel-Lindau是E3泛素连结酶，其单独或与E2泛素缀合酶结合，最终可以导致四个泛素的链附接到靶蛋白上的赖氨酸残基上，从而靶向该蛋白质以使其被蛋白酶体降解。泛素连结酶参与多泛素化，使得第一泛素附接到靶蛋白上的赖氨酸；第二泛素附接到第一泛素上；第三泛素附接到第二泛素上，并且第四泛素附接到第三泛素上。此类多泛素化标记蛋白质以使其被蛋白酶体降解。
术语“患者”或“受试者”在整个专利说明书中用于描述用本公开的组合物进行的治疗(包括预防性治疗)所被提供至的动物，优选人或驯养的动物。对于治疗特定动物(诸如人类患者)所特有的疾病、病状或症状，术语“患者”是指所述特定动物，包括驯养的动物(诸如狗或猫)或农场动物(诸如马、牛、羊等)。通常，在本公开中，术语“患者”和“受试者”是指人类患者，除非在使用此术语的上下文中另有说明或暗示。
术语“有效”和“治疗有效”被用于描述化合物或组合物的量，该量当在其预期用途的背景内使用以及在治疗方案的背景内以单剂量或更优选的多剂量后使用时实现预期结果，诸如疾病或病状的改善，或与疾病或病状相关的一种或多种症状的改善或减少。术语“有效”和“治疗有效”包括在本申请中以其他方式描述或使用的所有其他“有效量”或“有效浓度”术语。
化合物和组合物
在一个方面，本说明书提供了异双官能化合物，其包含E3泛素连结酶结合部分(“ULM”)，即VHL E3泛素连结酶结合部分(“VLM”)。该VLM共价偶联至结合到蛋白质的蛋白质靶向部分(PTM)，该偶联可通过键直接进行或通过根据以下结构的化学连接基团(L)进行：
(A)PTM-L-VLM
其中L是键或化学连接基团，并且PTM是结合至如本文所述的蛋白质KRas或其突变体形式的蛋白质靶向部分，其中PTM是KRas靶向部分(KTM)。术语VLM包括所有VHL结合部分。
在所述方面或实施方案中的任何方面或实施方案中，VLM对E3泛素连结酶(例如，VHL E3泛素连结酶)展现出小于约200μM的半数最大抑制浓度(IC50)。IC50可以根据本领域已知的任何合适的方法，例如荧光偏振测定来确定。
在某些实施方案中，本文所述的异双官能化合物展现出小于约100、50、10、1、0.5、0.1、0.05、0.01、0.005、0.001mM，或小于约100、50、10、1、0.5、0.1、0.05、0.01、0.005、0.001μM，或小于约100、50、10、1、0.5、0.1、0.05、0.01、0.005、0.001nM，或小于约100、50、10、1、0.5、0.1、0.05、0.01、0.005、0.001pM的IC50或半数最大降解浓度(DC50)。
在本文所述的任何方面或实施方案中，所述PTM由以下化学结构表示：
Figure BDA0003980908660000171
其中：
所述PTM的
Figure BDA0003980908660000172
是与VLM或将所述VLM偶联至所述PTM的L的附接位点；
Figure BDA0003980908660000173
是6元芳基、6元杂芳基或6元杂环烷基，每一者均任选地被1个或2个卤素(例如，Cl、F或Br)取代；
RPTM2是-C(＝O)C2-C4烯基，其任选地被甲基或卤素(例如，Cl、F、Br)取代；
RPTM3A是H、苯基或萘，每一者均任选地被1、2或3个独立地选自OH、卤素(例如，F、Cl、Br)或直链或具支链的C1-C3烷基(例如，甲基或乙基)的基团取代；
RPTM3B是H、卤素(例如，Cl、F、Br)或-ORPTM3C，其中RPTM3C是吲唑(例如，
Figure BDA0003980908660000181
)，其中RPTM3B任选地被1、2或3个独立地选自OH、卤素(例如，F、Cl、Br)或直链或具支链的C1-C3烷基(例如，甲基或乙基)的基团取代；
RPTM4A是1个或2个独立地选择的卤素(例如，Cl、F、Br)；
RPTM4B是(1)-CH2-CH2-CN或-CH2-CN，或(2)1个或2个独立地选择的C1-C3烷基(例如，甲基或乙基)；并且
每个XPTM单独地是CH或N。
术语“烷基”在其上下文中应指直链、具支链或环状的完全饱和烃基，优选为C1-C10烷基基团，优选为C1-C6烷基基团，或更优选为C1-C3烷基基团，其可以任选地被任何合适的一个或多个官能团取代。烷基基团的实例是甲基、乙基、正丁基、仲丁基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基、异丙基、2-甲基丙基、环丙基、环丙基甲基、环丁基、环戊基、环戊基乙基、环己基乙基和环己基等。在某些实施方案中，烷基基团用卤素基团(At、Br、Cl、F或I)封端。
术语“烯基”是指含有至少一个C＝C键的直链、具支链或环状的C2-C10(优选为C2-C6)烃基。
术语“炔基”是指含有至少一个C≡C键的直链、具支链或环状的C2-C10(优选为C2-C6)烃基。
术语“亚烷基”在使用时是指-(CH2)n-基团(n通常为0-6的整数)，其可任选地被取代。亚烷基基团在被取代时优选地在一个或多个亚甲基基团上被C1-C6烷基基团(包括环丙基基团或叔丁基基团)取代，但也可以被一个或多个卤代基基团，优选1至3个卤代基基团或一个或两个羟基、O-(C1-C6烷基)基团或如本文另外公开的氨基酸侧链取代。在某些实施方案中，亚烷基基团可以被氨基甲酸酯或烷氧基(或其他合适的官能团)取代，该氨基甲酸酯或烷氧基(或其他合适的官能团)可以进一步被聚乙二醇链(1至10个，优选1至6个，或更优选1至4个乙二醇单元的聚乙二醇链)取代，该聚乙二醇链(优选但不限于在该聚乙二醇链的远端)被烷基链取代，该烷基链被单个卤素基团(优选氯基团)取代。在另一些其他实施方案中，亚烷基(例如，亚甲基)基团可以被氨基酸的侧链基团取代，所述氨基酸侧链基团诸如天然或非天然氨基酸侧链基团，诸如丙氨酸、β-丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、色氨酸或酪氨酸。
术语“未取代(的)”应意指仅被氢原子取代。包含C0的碳原子范围意指碳不存在并被H取代。因此，C0-C6的碳原子范围包括1、2、3、4、5和6的碳原子，并且对于C0，H代替碳。
术语“取代(的)”或“任选取代(的)”应指在上下文中的分子上任何位置的碳(或氮)位置上独立(即，当发生多于一个取代时，每个取代基独立于另一个取代基选择)存在一个或多个取代基(独立地至多五个取代基，优选至多三个取代基，更优选在根据本公开的化合物中的一个部分上的1或2个取代基，并且可以包括本身可以被进一步取代的取代基)，并且包括可能的取代基：羟基、硫醇、羧基、氰基(C≡N)、硝基(NO2)、卤素(优选1、2或3个卤素，特别是在烷基上，特别是甲基诸如三氟甲基)、烷基(优选C1-C10，更优选C1-C6)、芳基(特别是苯基和取代的苯基，例如苄基或苯甲酰基)、烷氧基(优选C1-C6烷基或芳基，包括苯基和取代的苯基)、硫醚(优选C1-C6烷基或芳基)、酰基(优选C1-C6酰基)、酯或硫酯(优选C1-C6烷基或芳基，包括亚烷基酯(使得附接在亚烷基上，而不是优选被C1-C6烷基或芳基取代的酯官能团上))、卤素(优选F或Cl)、胺(包括五元或六元环状亚烷基胺，进一步包括C1-C6烷基胺或C1-C6二烷基胺，其中烷基基团可以被一个或两个羟基基团取代)或任选取代的-N(C0-C6烷基)C(O)(OC1-C6烷基)基团(其可以任选地被聚乙二醇链取代，所述聚乙二醇链进一步结合含有单个卤素，优选氯取代基的烷基)、肼、酰胺基，它们优选地被一个或两个C1-C6烷基(包括任选地被一个或两个C1-C6烷基取代的甲酰胺)、烷醇(优选C1-C6烷基或芳基)，或链烷酸(优选C1-C6烷基或芳基)。根据本公开的取代基可以包括例如-SiR1R2R3基团，其中R1和R2中的每一者如本文另外描述，并且R3是H或C1-C6烷基基团，优选R1、R2、R3一起是C1-C3烷基(包括异丙基或叔丁基)。上述基团中的每一者可以直接连接至取代的部分，或者可替代地，取代基可以通过任选取代的-(CH2)m-或可替代地任选取代的-(OCH2)m-、-(OCH2CH2)m-或-(CH2CH2O)m-基团(其可以被任何一种或多种上述取代基取代)连接到取代的部分(优选在芳基或杂芳基部分的情况下)。亚烷基基团-(CH2)m-或-(CH2)n-基团或如上所指出的其他链(诸如乙二醇链)可以在链上的任何位置被取代。亚烷基基团上优选的取代基包括卤素或C1-C6(优选C1-C3)烷基基团，其可以任选地被一个或两个羟基基团、一个或两个醚基团(OC1-C6基团)、至多三个卤素基团(优选F)，或如本文另外描述的氨基酸的侧链和任选取代的酰胺(优选如上所述的取代的甲酰胺)，或氨基甲酸酯基团(通常具有一个或两个C0-C6烷基取代基，其一个或多个基团可以被进一步取代)取代。在某些实施方案中，亚烷基基团(通常为单个亚甲基基团)被一个或两个任选取代的C1-C6烷基，优选C1-C4烷基，最常见为甲基或O-甲基基团，或如本文另外描述的氨基酸的侧链取代。在本公开中，分子中的部分可以任选地被至多五个取代基，优选至多三个取代基取代。最常见的是，在本公开中，被取代的部分被一个或两个取代基取代。
术语“取代(的)”(每个取代基独立于任何其他取代基)在其使用的上下文中还应意指C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、卤素、酰胺基、甲酰胺基、砜(包括磺酰胺)、酮基，羧基、C1-C6酯(氧代酯或羰基酯)、C1-C6酮、氨基甲酸酯-OC(O)-NR1R2或-N(R1)-C(O)-OR1、硝基、氰基和胺(尤其包括C1-C6亚烷基-NR1R2、单-或-二-C1-C6烷基取代的胺，其可以任选地被一个或两个羟基取代)。除非在上下文中另有说明，否则这些基团中的每一个基团均含有介于1个与6个之间的碳原子。在某些实施方案中，优选的取代基将包括例如-NH-、-NHC(O)-、-O-、＝O、-(CH2)m-(这里，m和n在上下文中是1、2、3、4、5或6)、-S-、-S(O)-、SO2-或-NH-C(O)-NH-、-(CH2)nOH、-(CH2)nSH、-(CH2)nCOOH、C1-C6烷基、-(CH2)nO-(C1-C6烷基)、-(CH2)nC(O)-(C1-C6烷基)、-(CH2)nOC(O)-(C1-C6烷基)、-(CH2)nC(O)O-(C1-C6烷基)、-(CH2)nNHC(O)-R1、-(CH2)nC(O)-NR1R2、-(OCH2)nOH、-(CH2O)nCOOH、C1-C6烷基、-(OCH2)nO-(C1-C6烷基)、-(CH2O)nC(O)-(C1-C6烷基)、-(OCH2)nNHC(O)-R1、-(CH2O)nC(O)-NR1R2、-S(O)2-Rs、-S(O)-Rs(RS是C1-C6烷基或-(CH2)m-NR1R2基团)、NO2、CN或卤素(F、Cl、Br、I，优选F或Cl)，这取决于使用该取代基的上下文。R1和R2在上下文中各自为H或C1-C6烷基(其可以任选地被一个或两个羟基或至多三个卤素基团，优选氟取代)。术语“取代(的)”在定义的化合物和使用的取代基的化学背景中还应意指任选取代的芳基或杂芳基或任选取代的杂环基，如本文另外所描述的。亚烷基基团也可以如本文另外公开的那样被取代，优选被任选取代的C1-C6烷基(甲基、乙基或羟甲基或羟乙基是优选的，因此提供手性中心)、如本文中另外描述的氨基酸基团的侧链、如上文描述的酰胺基基团或氨基甲酸酯基团OC(O)-NR1R2基团(其中R1和R2是如本文中另外描述的)取代，但许多其他基团也可用作取代基。各种任选取代的部分可以被3个或更多个取代基，优选不超过3个取代基取代，并且优选被1个或2个取代基取代。应注意，在化合物中在该分子的特定位置需要取代(主要是因为化合价)但未指明取代的情况下，则该取代基被解读或理解为H，除非该取代的上下文表明并非如此。
术语“芳基”或“芳族”在上下文中是指具有单环(例如，苯、苯基、苄基，或5、6、7或8元环)或稠环(例如，萘基、蒽基、菲基、10-16元环等)的取代(如本文另外描述的)或未取代的单价芳族基团(例如，5-16元环)，并且可以在一个或多个环上任何可用的稳定位置处或如所呈现的化学结构中另外指示的那样结合至根据本公开的化合物。芳基基团在上下文中的其他实例可以包括杂环芳环体系，在环(单环)中具有一个或多个氮、氧或硫原子的“杂芳基”基团(诸如咪唑、呋喃基、吡咯、呋喃基、噻吩、噻唑、吡啶、嘧啶、吡嗪、三唑、噁唑)或稠环体系(诸如吲哚、喹啉、吲嗪、氮杂吲嗪、苯并呋喃等)等等，它们可以如上所述任选地被取代。可以提及的杂芳基包括含氮杂芳基，诸如吡咯、吡啶、吡啶酮、哒嗪、嘧啶、吡嗪、吡唑、咪唑、三唑、三嗪、四唑、吲哚、异吲哚、吲嗪、氮杂吲嗪、嘌呤、吲唑、喹啉、二氢喹啉、四氢喹啉、异喹啉、二氢异喹啉、四氢异喹啉、喹嗪、酞嗪、萘啶、喹喔啉、喹唑啉、噌啉、蝶啶、咪唑并吡啶、咪唑并三嗪、吡嗪并哒嗪、吖啶、菲啶、咔唑、咔唑啉、嘧啶、菲咯啉、菲烯、噁二唑、苯并咪唑、吡咯并吡啶、吡咯并嘧啶和吡啶并嘧啶；含硫芳族杂环，诸如噻吩和苯并噻吩；含氧芳族杂环，诸如呋喃、吡喃、环戊吡喃、苯并呋喃和异苯并呋喃；以及包含2个或更多个选自氮、硫和氧的杂原子的芳族杂环，诸如噻唑、噻二唑、异噻唑、苯并噁唑、苯并噻唑、苯并噻二唑、吩噻嗪、异噁唑、呋呫(furazan)、吩噁嗪、吡唑并噁唑、咪唑并噻唑、噻吩并呋喃、呋喃并吡咯、吡啶并噁嗪、呋喃并吡啶、呋喃并嘧啶、噻吩并嘧啶和噁唑等，所有这些都可以任选地被取代。
术语“取代的芳基”是指由至少一个芳族环或多个稠环组成的芳族碳环基团，其中至少一个环是芳族的，其中一个或多个环被一个或多个取代基取代。例如，芳基基团可以包含选自以下的一个或多个取代基：-(CH2)nOH、-(CH2)n-O-(C1-C6)烷基、-(CH2)n-O-(CH2)n-(C1-C6)烷基、-(CH2)n-C(O)(C0-C6)烷基、-(CH2)n-C(O)O(C0-C6)烷基、-(CH2)n-OC(O)(C0-C6)烷基、胺、单-或二-(C1-C6烷基)胺(其中该胺上的烷基基团任选地被1个或2个羟基或至多三个卤代基(优选F、Cl)基团取代)、OH、COOH、C1-C6烷基(优选CH3)、CF3、OMe、OCF3、NO2，或CN基团(其中的每一者都可以在苯环的邻位、间位和/或对位取代，优选对位被取代)、任选取代的苯基(该苯基本身优选通过接头基团连接至PTM基团，包括ULM基团)，和/或F、Cl、OH、COOH、CH3、CF3、OMe、OCF3、NO2或CN基团中的至少一者(在苯环的邻位、间位和/或对位，优选对位)、可任选取代的萘基、任选取代的杂芳基、优选任选取代的异噁唑(包括甲基取代的异噁唑)、任选取代的噁唑(包括甲基取代的噁唑)、任选取代的噻唑(包括甲基取代的噻唑)、任选取代的异噻唑(包括甲基取代的异噻唑)、任选取代的吡咯(包括甲基取代的吡咯)、任选取代的咪唑(包括甲基咪唑)、任选取代的苯并咪唑或甲氧基苄基咪唑、任选取代的肟唑或甲基肟唑、任选取代的二唑基团(包括甲基二唑基团)、任选取代的三唑基团(包括甲基取代的三唑基团)、任选取代的吡啶基团(包括卤代基(优选F)或甲基取代的吡啶基团)或氧杂吡啶基团(其中吡啶基团通过氧与苯基连接)、任选取代的呋喃、任选取代的苯并呋喃、任选取代的二氢苯并呋喃、任选取代的吲哚、吲嗪或氮杂吲嗪(2、3或4-氮杂吲嗪)、任选取代的喹啉以及它们的组合。
“羧基”表示基团-C(O)OR，其中R是氢、烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、杂芳基或取代的杂芳基，而这些通用取代基的含义具有与本文所定义的相应基团的定义同一的定义。
术语“杂芳基(heteroaryl)”或“杂芳基(hetaryl)”可以意指但绝不限于5-16元杂芳基(例如，5、6、7或8元单环或具有多个稠环的10-16元杂芳基)、任选取代的喹啉(其可以附接至药效团或在喹啉环内的任何碳原子上被取代)、任选取代的吲哚(包括二氢吲哚)、任选取代的吲嗪、任选取代的氮杂吲嗪(2、3或4-氮杂吲嗪)、任选取代的苯并咪唑、苯并二唑、苯并呋喃、任选取代的咪唑、任选取代的异噁唑、任选取代的噁唑(优选甲基取代的)、任选取代的二唑、任选取代的三唑、四唑、任选取代的苯并呋喃、任选取代的噻吩，任选取代的噻唑(优选甲基和/或巯基取代的)、任选取代的异噻唑、任选取代的三唑(优选被甲基基团、三异丙基甲硅烷基基团、任选取代的-(CH2)m-OC1-C6烷基或任选取代的-(CH2)m-C(O)-O-C1-C6烷基取代的1，2，3-三唑)、任选取代的吡啶(2-、3-或4-吡啶)或根据以下化学结构的基团：
Figure BDA0003980908660000241
其中：
Sc是CHRSS、NRURE或O；
RHET是H、CN、NO2、卤代基(优选Cl或F)、任选取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基或至多三个卤代基基团取代(例如CF3))、任选取代的O(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基或至多三个卤代基基团取代)或任选取代的炔基-C≡CRa，其中Ra是H或C1-C6烷基基团(优选C1-C3烷基)；
RSS是H、CN、NO2、卤代基(优选F或C1)、任选取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基或至多三个卤代基基团取代)、任选取代的O-(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基或至多三个卤代基基团取代)或任选取代的-C(O)(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基或至多取代三个卤代基基团取代)；
RURE是H、C1-C6烷基(优选H或C1-C3烷基)或-C(O)(C1-C6烷基)，其中所述基团中的每一者任选地被一个或两个羟基或至多三个卤素(优选氟基团)取代，或任选取代的杂环(例如哌啶、吗啉、吡咯烷、四氢呋喃、四氢噻吩、哌啶、哌嗪，其中每一者都任选地被取代)，以及
YC是N或C-RYC，其中RYC是H、OH、CN、NO2、卤代基(优选Cl或F)、任选取代的C1-C6烷基(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基基团(例如，CF3)取代)、任选取代的O(C1-C6烷基)(优选被一个或两个羟基基团或至多三个卤代基基团取代)或任选取代的炔基基团-C≡C-Ra，其中Ra是H或C1-C6烷基基团(优选C1-C3烷基)。
术语“芳烷基”和“杂芳基烷基”是指包含根据上述定义的芳基或分别地杂芳基以及烷基和/或杂烷基和/或碳环和/或杂环烷基环体系的基团。
如本文所用，术语“芳基烷基”是指与上文定义的烷基附连的如上定义的芳基。芳基烷基基团通过烷基附接至母体部分，其中该烷基基团为1至6个碳原子。芳基烷基基团中的芳基基团可以如上所定义的那样被取代。
术语“杂环”是指含有至少一个杂原子例如N、O或S的环状基团，并且可以是芳族的(杂芳基)或非芳族的。因此，杂芳基部分被归入杂环的定义中，这取决于其使用的上下文。示例性杂芳基在上文中进行了描述。
示例性杂环包括：氮杂环丁烷基、苯并咪唑基、1，4-苯并二噁烷基、1，3-苯并二噁唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、二氢咪唑基、二氢吡喃基、二氢呋喃基、二噁烷基、二氧戊环基、亚乙基脲、1，3-二氧戊环、1，3-二噁烷、1，4-二噁烷、呋喃基、高哌啶基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、吲哚啉基、吲哚基、异喹啉基、异噻唑烷基、异噻唑基、异噁唑烷基、异噁唑基、吗啉基、萘啶基、噁唑烷基、噁唑基、吡啶酮、2-吡咯烷酮、吡啶、哌嗪基、N-甲基哌嗪基、哌啶基、邻苯二甲酰亚胺、琥珀酰亚胺、吡嗪基、吡唑啉基、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、吡咯基、喹啉基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢喹啉、噻唑烷基、噻唑基、噻吩基、四氢噻吩、噁烷、氧杂环丁基、氧硫杂环戊基、噻烷(thiane)等。
杂环基团可以任选地被选自由以下组成的组的成员取代：烷氧基、取代的烷氧基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、取代的氨基、氨基酰基、氨基酰氧基、氧氨基酰基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、酮基、硫酮基、羧基、羧基烷基、硫代芳氧基、硫代杂芳氧基、硫代杂环氧基、巯基、硫代烷氧基、取代的硫代烷氧基、芳基、芳氧基、杂芳基、杂芳氧基、杂环、杂环氧基、羟基氨基、烷氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-取代的烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO2-烷基、-SO2-取代的烷基、-SO2-芳基、氧代(＝O)和-SO2-杂芳基。此类杂环基团可以具有单环或多个稠环。氮杂环和杂芳基的实例包括但不限于吡咯、咪唑、吡唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、哒嗪、吲嗪、异吲哚、吲哚、吲唑、嘌呤、喹嗪、异喹啉、喹啉、酞嗪、萘基吡啶、喹喔啉、喹唑啉、噌啉、蝶啶、咔唑、咔啉、菲啶、吖啶、菲咯啉、异噻唑、吩嗪、异噁唑、吩噁嗪、吩噻嗪、咪唑烷、咪唑啉、哌啶、哌嗪、二氢吲哚、吗啉代、哌啶基、四氢呋喃基等以及含N-烷氧基-氮的杂环。术语“杂环”还包括其中任何杂环稠合至苯环或环己烷环或另一个杂环(例如，吲哚基、喹啉基、异喹啉基、四氢喹啉基等)的双环基团。
术语“环烷基”可以意指但绝不限于衍生自如本文所定义的单环或多环烷基或环烷烃的单价基团，例如在环中具有三至二十个碳原子的饱和单环烃基团，包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基等。术语“取代的环烷基”可以是指但绝不限于单环或多环烷基基团并且被一个或多个取代基例如氨基、卤素、烷基、取代的烷基、羰氧基、羰基巯基、芳基、硝基、巯基或磺基取代，而这些通用取代基基团的含义与如该图例中定义的相应基团的定义是同一的。
“杂环烷基”是指单环或多环烷基基团，其中其环状结构的至少一个环碳原子被选自由N、O、S或P组成的组的杂原子替代。“取代的杂环烷基”是指单环或多环烷基，其中其环状结构的至少一个环碳原子被选自由N、O、S或P组成的组的杂原子替代，并且该基团含有一个或多个选自由以下组成的组的取代基：卤素、烷基、取代的烷基、羰氧基、羰基巯基、芳基、硝基、巯基或磺基，而这些通用取代基基团的含义与该图例中定义的相应基团的定义是同一的。
术语“烃基”应意指含有碳和氢的化合物，并且其可以是完全饱和的、部分不饱和的或芳族的，并且包括芳基基团、烷基基团、烯基基团和炔基基团。
术语“独立地”在本文中用于指示该独立应用的变量在各应用之间独立地变化。
术语“低级烷基”是指甲基、乙基或丙基
术语“低级烷氧基”是指甲氧基、乙氧基或丙氧基。
示例性VLM
在本文所述的任何方面或实施方案中，所述ULM是VLM并且由以下化学结构表示：
Figure BDA0003980908660000271
Figure BDA0003980908660000281
其中：
R14是如本文所述的任何方面或实施方案中的R14、R14a或R14b中所定义；
R15是如本文所述的任何方面或实施方案中所定义；
R16是如本文所述的任何方面或实施方案中所定义；
o是如本文所述的任何方面或实施方案中所定义；并且
所述
Figure BDA0003980908660000282
表示至少一个PTM、另一个ULM(ULM’)或将至少一个PTM或ULM’或两者偶联至ULM的化学接头部分的附接位点。
例如，在本文所述的任何方面或实施方案中，所述ULM是VLM并且由以下化学结构表示：
Figure BDA0003980908660000283
Figure BDA0003980908660000291
其中：
R14是H或直链或具支链的C1-C3烷基(例如，甲基)；
R15是CN或具有一个或两个选自N、S和O的杂原子的任选地被甲基取代的5元杂芳基(例如，
Figure BDA0003980908660000292
)；
R16是卤代基、任选取代的C1-C3烷基、任选取代的C1-C3卤代烷基、羟基、任选取代的C1-C3烷氧基或任选取代的C1-C3卤代烷氧基；
o是从0至2的整数(例如，0、1或2)；并且
所述
Figure BDA0003980908660000293
表示至少一个PTM、另一个ULM(ULM’)或将至少一个PTM或ULM’或两者偶联至ULM的化学接头部分的附接位点。
在本文所述的任何方面或实施方案中，ULM是VLM并且包含选自基团ULM-a的化学结构：
Figure BDA0003980908660000301
其中：
所述
Figure BDA0003980908660000302
指示至少一个PTM、另一个ULM或VLM(即，ULM’或VLM’)，或化学接头部分(该化学接头部分将至少一个PTM、ULM’或VLM’偶联到该接头的另一端)的附接；
式ULM-a的X1、X2各自独立地选自由键、O、NRY3、CRY3RY4、C＝O、C＝S、SO和SO2组成的组；
式ULM-a的RY3、RY4各自独立地选自由H、直链或具支链的C1-6烷基(任选地被1个或多个卤代基取代)、任选取代的C1-6烷氧基(例如，任选地被0-3个RP基团取代)组成的组；
式ULM-a的RP是0、1、2或3个各自独立地选自由基团H、卤代基、-OH、C1-3烷基、C＝O组成的组的基团；
式ULM-a的W3选自由任选取代的T、任选取代的-T-N(R1aR1b)X3、任选取代的-T-N(R1aR1b)、任选取代的-T-芳基、任选取代的-T-杂芳基、任选取代的T-二杂芳基、任选取代的-T-杂环、任选取代的-T-二杂环、任选取代的-NR1-T-芳基、任选取代的-NR1-T-杂芳基或任选取代的-NR1-T-杂环组成的组；
式ULM-a的X3是C＝O、R1、R1a、R1b；
R1、R1a、R1b中的每一者都独立地选自由H、任选地被1个或多个卤代基或-OH基团取代的直链或具支链的C1-C6烷基、RY3C＝O、RY3C＝S、RY3SO、RY3SO2、N(RY3RY4)C＝O、N(RY3RY4)C＝S、N(RY3RY4)SO和N(RY3RY4)SO2组成的组；
式ULM-a的T选自由任选取代的烷基、-(CH2)n-基团、-(CH2)n-OC1-C6烷基(其是任选取代的、直链的、支链的)或任选取代的-(CH2)n-O-杂环基组成的组，其中亚甲基基团中的每一个亚甲基基团都任选地被一个或两个选自由以下组成的组的取代基取代：卤素、甲基、任选取代的烷氧基、任选地被1个或多个卤素取代的直链或具支链的C1-C6烷基基团、C(O)NR1R1a(或NR1R1a或R1和R1a联接形成任选取代的杂环)，或-OH基团或任选取代的氨基酸侧链；
式ULM-a的W4是任选取代的-NR1-T-芳基(其中所述芳基基团可以任选地被任选取代的5-6元杂芳基或任选取代的芳基取代)、任选取代的具有任选取代的芳基或任选取代的杂芳基的-NR1-T-杂芳基，或任选取代的-NR1-T-杂环，其中-NR1与X2共价键合，并且R1为H或CH3H，优选为H；
n为0至6，通常为0、1、2或3，优选为0或1；并且
所述
Figure BDA0003980908660000311
表示至少一个PTM、另一个ULM(ULM’)或将至少一个PTM或ULM’或两者偶联至ULM的化学接头部分的附接位点。
在本文所述的任何方面或实施方案中，T选自由任选取代的烷基、-(CH2)n-基团组成的组，其中所述亚甲基基团中的每一者都任选地被一个或两个选自由以下组成的组的取代基取代：卤素、甲基、任选取代的烷氧基、任选地被1个或多个卤素取代的直链或具支链的C1-C6烷基基团、C(O)NR1R1a(或NR1R1a或R1和R1a联接形成任选取代的杂环)，或-OH基团或任选取代的氨基酸侧链；并且n为0至6，通常为0、1、2或3，优选为0或1。
在本文所述的任何方面或实施方案中，式ULM-a的W4是
Figure BDA0003980908660000321
Figure BDA0003980908660000322
其中：
W5任选地被取代(例如，W5是任选取代的苯基、任选取代的萘基或任选取代的5-10元杂芳基)(例如，W5任选地被一个或多个[诸如1、2、3、4或5个]卤代基、CN、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、任选取代的烷氧基、羟基或任选取代的卤代烷氧基取代)，
R14a、R14b各自独立地选自由H、卤代烷基(例如，氟代烷基)、任选取代的烷基、任选取代的烷氧基、任选取代的羟烷基、任选取代的烷基胺、任选取代的杂烷基、任选取代的烷基-杂环烷基、任选取代的烷氧基-杂环烷基、COR26、CONR27aR27b、NHCOR26或NHCH3COR26组成的组；并且R14a和R14b中的另一者是H；或R14a、R14b与它们所附接的碳原子一起形成任选取代的3至5元环烷基、杂环烷基、螺环烷基或螺杂环基，其中所述螺杂环基不是环氧化物或氮丙啶；
o是从0至4的整数(例如，0、1、2、3或4)；并且
R16独立地选自由卤代基、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、羟基或任选取代的卤代烷氧基组成的组。
在本文所述的任何方面或实施方案中，式ULM-a的W5选自由任选取代的苯基、任选取代的萘基或任选取代的5-10元杂芳基组成的组(例如，W5任选地被一个或者多个[诸如1、2、3、4或5]卤代基、CN、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、任选取代的烷氧基、羟基或任选取代的卤代烷氧基取代)，
式ULM-a的R15选自由H、卤素、CN、OH、NO2、NR14aR14b、OR14a、CONR14aR14b、NR14aCOR14b、SO2NR14aR14b、NR14a SO2R14b、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、任选取代的卤代烷氧基；任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的环烷基或任选取代的环杂烷基组成的组；
在本文所述的任何方面或实施方案中，用于本公开的W4取代基还具体包括(且不限于所公开的具体化合物)存在于本文公开的标识的化合物中的W4取代基。这些W4取代基中的每一个W4取代基均可以与本文中也公开的任何数目的W3取代基结合使用。
在本文所述的任何方面或实施方案中，ULM-a任选地在吡咯烷部分中被0-3个RP基团取代。每个RP均独立地为H、卤代基、-OH、C1-3烷基、C＝O。
在本文所述的任何方面或实施方案中，式ULM-a的W3、W4可以独立地与附接一个或多个PTM基团的接头共价偶联。
并且其中所述
Figure BDA0003980908660000331
表示至少一个PTM、另一个ULM(ULM’)或将至少一个PTM或ULM’或两者偶联至ULM的化学接头部分的附接位点。
在本文所述的任何方面或实施方案中，ULM是VHL并且由以下结构表示：
Figure BDA0003980908660000332
Figure BDA0003980908660000341
其中：
式ULM-b的W3选自由任选取代的芳基、任选取代的杂芳基或
Figure BDA0003980908660000342
组成的组；
式ULM-b的R9和R10独立地为氢、任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的羟烷基、任选取代的杂芳基，或卤代烷基，或者R9、R10和它们所附接的碳原子形成任选取代的环烷基；
式ULM-b的R11选自由任选取代的杂环基、任选取代的烷氧基、任选取代的杂芳基、任选取代的芳基、
Figure BDA0003980908660000343
Figure BDA0003980908660000344
组成的组；
式ULM-b的R12选自由H或任选取代的烷基组成的组；
式ULM-b的R13选自由H、任选取代的烷基、任选取代的烷基羰基、任选取代的(环烷基)烷基羰基、任选取代的芳烷基羰基、任选取代的芳基羰基、任选取代的(杂环基)羰基或任选取代的芳烷基组成的组；
式ULM-b的R14a、R14b各自独立地选自由H、卤代烷基(例如，氟代烷基)、任选取代的烷基、任选取代的烷氧基、氨基烷基、烷基氨基甲基、烷氧基甲基、任选取代的羟烷基、任选取代的烷基胺、任选取代的杂烷基、任选取代的烷基-杂环烷基、任选取代的烷氧基-杂环烷基、CONR27aR27b、CH2NHCOR26或(CH2)N(CH3)COR26组成的组；并且R14a和R14b中的另一者是H；或者R14a和R14b与它们所附接的碳原子一起形成任选取代的3至6元环烷基、杂环烷基、螺环烷基或螺杂环基，其中所述螺杂环基不是环氧化物或氮丙啶；
式ULM-b的W5选自由任选取代的苯基或任选取代的5-10元杂芳基组成的组(例如，W5任选地被一个或者多个[诸如1、2、3、4或5个]卤代基、CN、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、任选取代的烷氧基、羟基或任选取代的卤代烷氧基取代)，
式ULM-b的R15选自由H、卤素、CN、OH、NO2、NR14aR14b、OR14a、CONR14aR14b、NR14aCOR14b、SO2NR14aR14b、NR14aSO2R14b、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、任选取代的卤代烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的环烷基或任选取代的环杂烷基组成的组；
式ULM-b的每个R16独立地选自由H、CN、卤代基、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、羟基或任选取代的卤代烷氧基组成的组；
式ULM-b的o是0、1、2、3或4；
式ULM-b的R18独立地选自由H、卤代基、任选取代的烷氧基、氰基、任选取代的烷基、卤代烷基、卤代烷氧基或接头组成的组；
式ULM-b的p是0、1、2、3或4，并且
所述
Figure BDA0003980908660000351
表示至少一个PTM、另一个ULM(ULM’)或将至少一个PTM或ULM’或两者偶联至ULM的化学接头部分的附接位点。
在本文所述的任何方面或实施方案中，式ULM-b的R15选自由H、卤素、CN、OH、NO2、NR27aR27b、OR27a、CONR27aR27b、NR27aCOR27b、SO2NR27aR27b、NR27aSO2R27b、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、任选取代的卤代烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的环烷基或任选取代的杂环基组成的组，其中每个R26独立地选自H、任选取代的烷基或NR27aR27b；每个R27a和R27b独立地是H、任选取代的烷基，或R27a和R27b与它们所附接的氮原子一起形成4-6元杂环基。
在本文所述的任何方面或实施方案中，式ULM-b的R15是
Figure BDA0003980908660000361
其中R17是H、卤代基、任选取代的C3-6环烷基、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C1-6烯基和C1-6卤代烷基；并且Xa是S或O。
在本文所述的任何方面或实施方案中，式ULM-b的R17选自基团甲基、乙基、异丙基和环丙基。
在本文所述的任何方面或实施方案中，式ULM-b的R15选自由以下组成的组：
Figure BDA0003980908660000362
Figure BDA0003980908660000371
在本文所述的任何方面或实施方案中，式ULM-b的R11选自由以下组成的组：
Figure BDA0003980908660000372
在本文所述的任何方面或实施方案中，式ULM-b的R14a、R14b各自独立地选自由以下组成的组：H、任选取代的卤代烷基、任选取代的烷基、任选取代的烷氧基、任选取代的羟烷基、任选取代的烷基胺，任选取代的杂烷基、任选取代的烷基-杂环烷基、任选取代的烷氧基-杂环烷基、CH2OR30、CH2NHR30、CH2NCH3R30、CONR27aR27b、CH2CONR27aR27b、CH2NHCOR26或CH2NCH3COR26；并且R14a和R14b中的另一者是H；或者R14a、R14b与它们所附接的碳原子一起形成任选取代的3元至6元环烷基、杂环烷基、螺环烷基或螺杂环基，其中螺杂环基不是环氧化物或氮丙啶，所述螺环烷基或螺杂环烷基本身任选地被烷基、卤代烷基或-COR33取代，其中R33是烷基或卤代烷基，
其中R30选自H、烷基、炔基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、芳基烷基或杂芳基烷基，它们进一步任选地被取代；R26和R27如上所描述。
在本文所述的任何方面或实施方案中，式ULM-b的R15选自H、卤素、CN、OH、NO2、NR27aR27b、OR27a、CONR27aR27b、NR27aCOR27b、SO2NR27aR27b、NR27a SO2R27b、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基(例如任选取代的氟代烷基)、任选取代的卤代烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的环烷基或任选取代的杂环基，其中所述芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基的任选取代包括CH2OR30、CH2NHR30、CH2NCH3R30、CONR27aR27b、CH2CONR27aR27b、CH2NHCOR26、CH2NCH3COR26或
Figure BDA0003980908660000381
其中R26、R27、R30和R14a如上所描述。
在本文所述的任何方面或实施方案中，式ULM-b的R14a、R14b各自独立地选自由以下组成的组：H、任选取代的卤代烷基、任选取代的烷基、CH2OR30、CH2NHR30、CH2NCH3R30、CONR27aR27b、CH2CONR27aR27b、CH2NHCOR26或CH2NCH3COR26；并且R14a和R14b中的另一者是H；或者R14a、R14b与它们所附接的碳原子一起形成任选取代的3元至6元螺环烷基或螺杂环基，其中螺杂环基不是环氧化物或氮丙啶，所述螺环烷基或螺杂环烷基本身任选地被烷基、卤代烷基或-COR33取代，其中R33是烷基或卤代烷基，其中R30选自H、烷基、炔基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、芳基烷基或杂芳基烷基，它们进一步任选地被取代；
式ULM-b的R15选自H、卤素、CN、OH、NO2、NR27aR27b、OR27a、CONR27aR27b、NR27aCOR27b、SO2NR27aR27b、NR27aSO2R27b、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、任选取代的卤代烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的环烷基或任选取代的杂环基，其中所述芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基的任选取代包括CH2OR30、CH2NHR30、CH2NCH3R30、CONR27aR27b、CH2CONR27aR27b、CH2NHCOR26、CH2NCH3COR26或
Figure BDA0003980908660000391
其中R26、R27、R30和R14a如上所描述。
在本文所述的任何方面或实施方案中，ULM具有选自由以下组成的组的化学结构：
Figure BDA0003980908660000392
其中：
式ULM-c、ULM-d和ULM-e的R1是H、乙基、异丙基、叔丁基、仲丁基、环丙基、环丁基、环戊基或环己基；任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的羟烷基、任选取代的杂芳基或卤代烷基；
式ULM-c、ULM-d和ULM-e的R14a是H、卤代烷基、任选取代的烷基、甲基、氟甲基、羟甲基、乙基、异丙基或环丙基；
式ULM-c、ULM-d和ULM-e的R15选自由H、卤素、CN、OH、NO2、任选取代的杂芳基、任选取代的芳基；任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、任选取代的卤代烷氧基、任选取代的环烷基或任选取代的环杂烷基组成的组；
式ULM-c、ULM-d和ULM-e的X是C、CH2或C＝O
式ULM-c、ULM-d和ULM-e的R3是不存在或任选取代的5元或6元杂芳基；并且
所述
Figure BDA0003980908660000401
表示至少一个PTM、另一个ULM(ULM’)或将至少一个PTM或ULM’或两者偶联至ULM的化学接头部分的附接位点。
在本文所述的任何方面或实施方案中，ULM包含根据以下化学结构的基团：
Figure BDA0003980908660000402
其中：
式ULM-f的R14a是H、卤代烷基、任选取代的烷基、甲基、氟甲基、羟甲基、乙基、异丙基或环丙基；
式ULM-f的R9是H；
式ULM-f的R10是H、乙基、异丙基、叔丁基、仲丁基、环丙基、环丁基、环戊基或环己基；
式ULM-f的R11是
Figure BDA0003980908660000403
Figure BDA0003980908660000404
Figure BDA0003980908660000411
或任选取代的杂芳基；
式ULM-f的p是0、1、2、3或4；
式ULM-f的每个R18独立地是卤代基、任选取代的烷氧基、氰基、任选取代的烷基、卤代烷基、卤代烷氧基或接头；
式ULM-f的R12是H、C＝O；
式ULM-f的R13是H、任选取代的烷基、任选取代的烷基羰基、任选取代的(环烷基)烷基羰基、任选取代的芳烷基羰基、任选取代的芳基羰基、任选取代的(杂环基)羰基或任选取代的芳烷基；
式ULM-f的R15选自由以下组成的组：H、卤素、Cl、CN、OH、NO2、任选取代的卤代烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的芳基；
Figure BDA0003980908660000412
Figure BDA0003980908660000413
和
式ULM-f的
Figure BDA0003980908660000421
表示至少一个PTM、另一个ULM(ULM’)或将至少一个PTM或ULM’或两者偶联至ULM的化学接头部分的附接位点。
在本文所述的任何方面或实施方案中，VLM通过R基团(诸如，RP、R1、R1a、R1b、RY3、RY4、R9、R10、R11、R12、R13、R14a、R14b、R15、R16、R17、R18、R26、R27a、R27b、R30、R33)、W3、W4、W5、X、X1、X2、X3或T共价联接至PTM或化学接头基团(L)。
在本文所述的任何方面或实施方案中，VLM通过RP、R1、R1a、R1b、RY3、RY4、R9、R10、R11、R12、R13、R14a、R14b、R15、R16、R17、R18、R26、R27a、R27b、R30、R33、W3、W4、W5、X、X1、X2、X3或T共价联接至PTM或化学接头基团(L)。
在本文所述的任何方面或实施方案中，RP、R1、R1a、R1b、RY3、RY4、R9、R10、R11、R12、R13、R14a、R14b、R15、R16、R17、R18、R26、R27a、R27b、R30、R33、W3、W4、X、X1、X2、X3或T可以独立地共价偶联至接头以及/或者共价偶联至附连至一个或多个PTM、ULM和VLM基团的接头。
在本文所述的任何方面或实施方案中，ULM选自以下结构：
Figure BDA0003980908660000422
Figure BDA0003980908660000431
Figure BDA0003980908660000441
其中所述
Figure BDA0003980908660000442
表示至少一个PTM、另一个ULM(ULM’)或将至少一个PTM或ULM’或两者偶联至ULM的化学接头部分的附接位点。
在本文所述的任何方面或实施方案中，ULM选自以下结构：
Figure BDA0003980908660000443
Figure BDA0003980908660000451
其中n是0或1，并且所述
Figure BDA0003980908660000452
表示至少一个PTM、另一个ULM(ULM’)或将至少一个PTM或ULM’或两者偶联至ULM的化学接头部分的附接位点。
在本文所述的任何方面或实施方案中，ULM选自以下结构：
Figure BDA0003980908660000453
Figure BDA0003980908660000461
Figure BDA0003980908660000471
Figure BDA0003980908660000481
其中，ULM-a1至ULM-a15、ULM-b1至ULM-b12、ULM-c1至ULM-c15和ULM-d1至ULM-d9中的苯环任选地被氟、低级烷基和烷氧基取代，并且其中所述
Figure BDA0003980908660000482
表示至少一个PTM、另一个ULM(ULM’)或将至少一个PTM或ULM’或两者偶联至ULM-a的化学接头部分的附接位点。
在本文所述的任何方面或实施方案中，可以将ULM-a1至ULM-a15、ULM-b1至ULM-b12、ULM-c1至ULM-c15和ULM-d1至ULM-d9中的苯基环官能化为酯以使它成为前药的一部分。
在本文所述的任何方面或实施方案中，ULM-a1至ULM-a15、ULM-b1至ULM-b12、ULM-c1至ULM-c15和ULM-d1至ULM-d9的吡咯烷环上的羟基分别包含酯连接的前药部分。
在本文所述的任何方面或实施方案中，所述ULM和存在时的ULM’各自独立地是根据以下化学结构的基团：
Figure BDA0003980908660000491
或其药学上可接受的盐，其中：
R1是H、任选取代的烷基或任选取代的环烷基；
R3是任选取代的5-6元杂芳基；
W5是任选取代的苯基、任选取代的萘基或任选取代的吡啶基；
R14a和R14b中的一者是H、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基(例如，氟代烷基)、任选取代的烷氧基、任选取代的羟烷基、任选取代的烷基胺、任选取代的杂烷基、任选取代的烷基-杂环烷基、任选取代的烷氧基-杂环烷基、COR26、CONR27aR27b、NHCOR26或NHCH3COR26；并且R14a和R14b中的另一者是H；或R14a、R14b与它们所附接的碳原子一起形成任选取代的3至6元环烷基、杂环烷基、螺环烷基或螺杂环基，其中所述螺杂环基不是环氧化物或氮丙啶；
R15是CN、任选取代的氟代烷基、
Figure BDA0003980908660000501
Figure BDA0003980908660000502
任选取代的
Figure BDA0003980908660000503
(例如，
Figure BDA0003980908660000504
Figure BDA0003980908660000505
其中R28a是卤代基、任选取代的烷基或氟代烷基)，或
Figure BDA0003980908660000506
每个R16独立地选自卤代基、CN、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、羟基或卤代烷氧基；
每个R26独立地为H、任选取代的烷基或NR27aR27b；
每个R27a和R27b独立地为H、任选取代的烷基，或者R27a和R27b与它们所附接的氮原子一起形成4-6元杂环基；
R28是H、任选取代的烷基、任选取代的烷氧基、任选取代的杂烷基、任选取代的烷基胺、任选取代的羟烷基、胺、任选取代的炔基或任选取代的环烷基；
o是0、1或2；并且
所述
Figure BDA0003980908660000507
表示至少一个PTM、另一个ULM(ULM’)或将至少一个PTM或ULM’或两者偶联至ULM的化学接头部分的附接位点。
在本文所述的方面或实施方案中的任何方面或实施方案中，ULM具有下式：
Figure BDA0003980908660000511
其中：
X4、X5和X6中的每一者都选自CH和N，其中不多于2者是N；
R1是C1-6烷基；
R3是任选取代的5-6元杂芳基；
R14a和R14b中的一者是H、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、任选取代的烷氧基、任选取代的羟烷基、任选取代的烷基胺、任选取代的杂烷基、任选取代的烷基-杂环烷基、任选取代的烷氧基-杂环烷基、COR26、CONR27aR27b、NHCOR26或NHCH3COR26；并且R14a和R14b中的另一者是H；或者R14a和R14b与它们所附接的碳原子一起形成任选取代的3至5元环烷基、杂环烷基、螺环烷基或螺杂环基，其中所述螺杂环基不是环氧化物或氮丙啶；
每个R27a和R27b独立地是H或C1-6烷基；
q是1、2、3或4；
R15是
Figure BDA0003980908660000512
R28是H、甲基、CH2N(Me)2、CH2OH、CH2O(C1-4烷基)、CH2NHC(O)C1-4烷基、NH2、
Figure BDA0003980908660000513
R28C是H、甲基、氟或氯；
R16是H、C1-4烷基、氟、氯、CN或C1-4烷氧基；并且
所述
Figure BDA0003980908660000521
表示至少一个PTM、另一个ULM(ULM’)或将至少一个PTM或ULM’或两者偶联至ULM的化学接头部分的附接位点。
在本文所述的任何方面或实施方案中，R14a和R14b选自：H、C1-4烷基、C1-4环烷基、C1-4卤代烷基、C1-4羟烷基、C1-4烷氧基烷基、C1-4烷基-NR27aR27b和CONR27aR27b。
在本文所述的任何方面或实施方案中，R14a和R14b中的至少一者是H(例如，R14a和R14b都是H)。
在本文所述的任何方面或实施方案中，R14a和R14b中的至少一者是任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、任选取代的烷氧基、任选取代的羟烷基、任选取代的烷基胺、任选取代的杂烷基、任选取代的烷基-杂环烷基、任选取代的烷氧基-杂环烷基、COR26、CONR27aR27b、NHCOR26或NHCH3COR26。可替代地，在本文所述的任何方面或实施方案中，R14a和R14b中的至少一者是任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基、任选取代的烷氧基、任选取代的羟烷基、任选取代的烷基胺、任选取代的杂烷基、任选取代的烷基-杂环烷基、任选取代的烷氧基-杂环烷基、COR26、CONR27aR27b、NHCOR26或NHCH3COR26；并且R14a和R14b中的另一者是H。
在本文所述的任何方面或实施方案中，R14a和R14b与它们所附接的碳原子一起形成
Figure BDA0003980908660000522
其中R23选自H、C1-4烷基、-C(O)C1-4烷基。
在本文所述的任何方面或实施方案中，ULM和存在时的ULM’各自独立地是根据以下化学结构的基团：
Figure BDA0003980908660000531
或其药学上可接受的盐，其中：
X是CH或N；
R1是H、任选取代的烷基或任选取代的环烷基；
R3是任选取代的5-6元杂芳基；
R14a和R14b中的一者是H、任选取代的烷基、任选取代的卤代烷基(例如，氟代烷基)、任选取代的烷氧基、任选取代的羟烷基、任选取代的烷基胺、任选取代的杂烷基、任选取代的烷基-杂环烷基、任选取代的烷氧基-杂环烷基、COR26、CONR27aR27b、NHCOR26或NHCH3COR26；并且R14a和R14b中的另一者是H；或R14a、R14b与它们所附接的碳原子一起形成任选取代的3至6元环烷基、杂环烷基、螺环烷基或螺杂环基，其中所述螺杂环基不是环氧化物或氮丙啶；
R15是CN、任选取代的氟代烷基、
Figure BDA0003980908660000532
Figure BDA0003980908660000533
任选取代的
Figure BDA0003980908660000534
(例如，
Figure BDA0003980908660000535
Figure BDA0003980908660000536
其中R28a是卤代基、任选取代的烷基或氟代烷基)，或
Figure BDA0003980908660000537
每个R26独立地为H、任选取代的烷基或NR27aR27b；
每个R27a和R27b独立地为H、任选取代的烷基，或者R27a和R27b与它们所附接的氮原子一起形成4-6元杂环基；
R28是H、任选取代的烷基、任选取代的烷氧基、任选取代的杂烷基、任选取代的烷基胺、任选取代的羟烷基、胺、任选取代的炔基或任选取代的环烷基；
所述
Figure BDA0003980908660000541
表示至少一个PTM、另一个ULM(ULM’)或将至少一个PTM或ULM’或两者偶联至ULM的化学接头部分的附接位点。
在本文所述的方面或实施方案中的任何方面或实施方案中，R1是C1-6烷基。
在本文所述的方面或实施方案中的任何方面或实施方案中，R14a和R14b中的一者是H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、任选取代的C1-4烷基胺、C1-6烷氧基、(CH2)qC1-6烷氧基、(CH2)qC1-6烷氧基-C3-C7杂环烷基、(CH2)qOH、(CH2)qNR27aR27b、(CH2)qNHCOC1-6烷基、C3-6环烷基或NR27aR27b；每个R26独立地为H、C1-6烷基或NR27aR27b；每个R27a和R27b独立地为H或C1-6烷基；并且q是1、2、3或4。
在本文所述的方面或实施方案中的任何方面或实施方案中，R14a和R14b中的一者是H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C1-4烷氧基、任选取代的C1-4烷基胺、(CH2)qC1-6烷氧基、(CH2)qC1-6烷氧基-C3-C7杂环烷基、(CH2)qOH、(CH2)qNR27aR27b、(CH2)qNHCOC1-6烷基、C3-6环烷基或NR27aR27b；每个R26独立地为H、C1-4烷基或NR27aR27b；每个R27a和R27b独立地为H或C1-4烷基；并且q是1或2。
在本文所述的方面或实施方案中的任何方面或实施方案中，R28是C1-6烷基、C3-6环烷基、C1-6卤代烷基、(CH2)qOC1-6烷基、(CH2)qOH、(CH2)qNR27aR27b、(CH2)qNHCOC1-6烷基或
Figure BDA0003980908660000542
R29是H、C1-6烷基、NR27aR27b或qNHCOC1-6烷基；并且
其中q是1或2。
在本文所述的方面或实施方案中的任何方面或实施方案中，R3是异噁唑基、4-氯异噁唑基、4-氟异噁唑基或吡唑基。在本文所述的方面或实施方案中的任何方面或实施方案中，X是CH。
在本文所述的任何方面或实施方案中，所述ULM是根据下式：
Figure BDA0003980908660000551
Figure BDA0003980908660000552
或其药学上可接受的盐，
其中：
R1、R14a和R14b如本文所描述；
X是CH或N；
R30是H、F或Cl；
R16是H、C1-4烷基、氟、氯、CN或C1-4烷氧基；
R28是H、甲基、CH2N(Me)2、CH2OH、CH2O(C1-4烷基)、CH2NHC(O)C1-4烷基、NH2，或
Figure BDA0003980908660000561
并且
所述
Figure BDA0003980908660000562
表示至少一个PTM、另一个ULM(ULM’)或将至少一个PTM或ULM’或两者偶联至ULM的化学接头部分的附接位点。
在本文所述的方面或实施方案中的任何方面或实施方案中，所述ULM是根据下式：
Figure BDA0003980908660000563
或其药学上可接受的盐，
其中：
R1、R14a、R14b中的每一者都如本文所描述；
R30是H、F或Cl；并且
所述
Figure BDA0003980908660000564
表示至少一个PTM、另一个ULM(ULM’)或将至少一个PTM或ULM’或两者偶联至ULM的化学接头部分的附接位点。
在本文所述的任何方面或实施方案中，VLM通过R基团(诸如，R1、R3、R14a、R14b、R15、R16、R23、R26、R27a、R27b、R28、R28a、R28C、R29、R30)、X、X4、X5或X6共价联接至PTM或化学接头基团(L)。
在本文所述的任何方面或实施方案中，VLM通过R1、R3、R14a、R14b、R15、R16、R23、R26、R27a、R27b、R28、R28a、R28C、R29、R30、X、X4、X5或X6共价联接至PTM或化学接头基团(L)。
在本文所述的任何方面或实施方案中，R1、R3、R14a、R14b、R15、R16、R23、R26、R27a、R27b、R28、R28a、R28C、R29、R30、X、X4、X5或X6可以独立地共价偶联至接头以及/或者共价偶联至附接至一个或多个PTM、ULM和VLM基团的接头。
在本文所述的方面或实施方案中的任何方面或实施方案中，如本文所述的ULM(或存在时的ULM’)可以是其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、溶剂化物或多晶型物。此外，在本文所述的方面或实施方案中的任何方面或实施方案中，如本文所述的ULM(或存在时的ULM’)可直接通过键或通过化学接头偶联至PTM。
示例性接头
在本文所述的任何方面或实施方案中，如本文所述的化合物包括通过化学接头(L)与ULM(例如，VLM)化学连接的PTM。在某些实施方案中，接头基团L包含一个或多个共价连接的结构单元(例如，-AL 1......(AL)q-或-(AL)q-)，其中AL 1是偶联到PTM的基团，并且(AL)q是偶联到ULM的基团。
在本文描述的任何方面或实施方案中，接头(L)与ULM(例如，VLM)连接是稳定的L-ULM连接。例如，在本文所述的任何方面或实施方案中，当接头(L)和ULM通过杂原子(例如，N、O、S)连接时，任何另外的杂原子(如果存在)均被至少一个碳原子(例如-CH2-)，诸如缩醛或缩醛胺基团分开。作为进一步的实例，在本文所述的任何方面或实施方案中，当接头(L)和ULM通过杂原子连接时，杂原子不是酯的一部分。
在本文所述的任何方面或实施方案中，接头基团L是键或由式-(AL)q-表示的化学接头基团，其中A是化学部分并且q是从1至100的整数(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79或80)，并且其中L与PTM和ULM都共价结合，并且提供了PTM与蛋白质靶标以及ULM与E3泛素连结酶的结合从而实现靶蛋白泛素化。
在本文所述的任何方面或实施方案中，接头基团L是键或由式-(AL)q-表示的化学接头基团，其中A是化学部分并且q是从6至30的整数(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25)，并且其中L与PTM和ULM都共价结合，并且提供了PTM与蛋白质靶标以及ULM与E3泛素连结酶的足够邻近的结合从而实现靶蛋白泛素化。
在本文所述的任何方面或实施方案中，接头基团L是-(AL)q-，其中：
(AL)q是将ULM(例如，VLM)连接到PTM(KTM)的基团；
接头的q是大于或等于1的整数；
每个AL独立地选自由以下组成的组：键、CRL1RL2、O、S、SO、SO2、NRL3、SO2NRL3、SONRL3、CONRL3、NRL3CONRL4、NRL3SO2NRL4、CO、CRL1＝CRL2、C≡C、SiRL1RL2、P(O)RL1、P(O)ORL1、NRL3C(＝NCN)NRL4、NRL3C(＝NCN)、NRL3C(＝CNO2)NRL4、C3-11环烷基(任选地被1-6个RL1和/或RL2基团取代)、C5-13螺环烷基(任选地被1-9个RL1和/或RL2基团取代)、C3-11杂环基(任选地被1-6个RL1和/或RL2基团取代)、C5-13螺杂环基(任选地被1-8个RL1和/或RL2基团取代)、芳基(任选地被1-6个RL1和/或RL2基团取代)、杂芳基(任选地被1-6个RL1和/或RL2基团取代)，其中RL1或RL2各自独立地任选地连接到其他基团以形成任选地被1-4个RL5基团取代的环烷基和/或杂环基部分；并且
RL1、RL2、RL3、RL4和RL5各自独立地为H、卤代基、C1-8烷基、OC1-8烷基、SC1-8烷基、NHC1-8烷基、N(C1-8烷基)2、C3-11环烷基、芳基、杂芳基、C3-11杂环基、OC3-8环烷基、SC3-8环烷基、NHC3-8环烷基、N(C3-8环烷基)2、N(C3-8环烷基)(C1-8烷基)、OH、NH2、SH、SO2C1-8烷基、P(O)(OC1-8烷基)(C1-8烷基)、P(O)(OC1-8烷基)2、CC-C1-8烷基、CCH、CH＝CH(C1-8烷基)、C(C1-8烷基)＝CH(C1-8烷基)、C(C1-8烷基)＝C(C1-8烷基)2、Si(OH)3、Si(C1-8烷基)3、Si(OH)(C1-8烷基)2、COC1-8烷基、CO2H、卤素、CN、CF3、CHF2、CH2F、NO2、SF5、SO2NHC1-8烷基、SO2N(C1-8烷基)2、SONHC1-8烷基、SON(C1-8烷基)2、CONHC1-8烷基、CON(C1-8烷基)2、N(C1-8烷基)CONH(C1-8烷基)、N(C1-8烷基)CON(C1-8烷基)2、NHCONH(C1-8烷基)、NHCON(C1-8烷基)2、NHCONH2、N(C1-8烷基)SO2NH(C1-8烷基)、N(C1-8烷基)SO2N(C1-8烷基)2、NH SO2NH(C1-8烷基)、NH SO2N(C1-8烷基)2、NH SO2NH2。
在本文所述的任何方面或实施例中，q是大于或等于1的整数。
在本文所述的任何方面或实施方案中，例如，当接头的q大于2时，(AL)q是为AL 1和(AL)q的基团，其中所述接头将PTM偶联至ULM。
在本文所述的任何方面或实施方案中，例如，当接头的q为2时，AL 2是连接至AL 1并且连接至ULM的基团。
在本文所述的任何方面或实施方案中，例如，当接头的q是1时，接头基团L的结构是-AL 1-，并且AL 1是将ULM部分连接到PTM部分的基团。
在本文所述的任何方面或实施方案中，接头(L)的单元AL包含由选自以下组成的组通用结构表示的基团：
-NR(CH2)n-(低级烷基)-、-NR(CH2)n-(低级烷氧基)-、-NR(CH2)n-(低级烷氧基)-OCH2-、-NR(CH2)n-(低级烷氧基)-(低级烷基)-OCH2-、-NR(CH2)n-(环烷基)-(低级烷基)-OCH2-、-NR(CH2)n-(杂环烷基)-、-NR(CH2CH2O)n-(低级烷基)-O-CH2-、-NR(CH2CH2O)n-(杂环烷基)-O-CH2-、-NR(CH2CH2O)n-Aryl-O-CH2-、-NR(CH2CH2O)n-(杂芳基)-O-CH2-、-NR(CH2CH2O)n-(环烷基)-O-(杂芳基)-O-CH2-、-NR(CH2CH2O)n-(环烷基)-O-芳基-O-CH2-、-NR(CH2CH2O)n-(低级烷基)-NH-芳基-O-CH2-、-NR(CH2CH2O)n-(低级烷基)-O-芳基-CH2、-NR(CH2CH2O)n-环烷基-O-芳基-、-NR(CH2CH2O)n-环烷基-O-(杂芳基)-、-NR(CH2CH2)n-(环烷基)-O-(杂环基)-CH2、-NR(CH2CH2)n-(杂环基)-(杂环基)-CH2和-N(R1R2)-(杂环基)-CH2；其中
接头的n可以是0到10；
接头的R可以是H或低级烷基；并且
接头的R1和R2可以与连接N形成环。
在本文所述的任何方面或实施方案中，接头(L)包括任选取代的C1-C50烷基(例如，C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10、C11、C12、C13、C14、C15、C16、C17、C18、C19、C20、C21、C22、C23、C24、C25、C26、C27、C28、C29、C30、C31、C32、C33、C34、C35、C36、C37、C38、C39、C40、C41、C42、C43、C44、C45、C46、C47、C48、C49或C50烷基，并且包括所有隐含的子范围，例如，C1-C10、C1-C20；C2-C10、C2-20；C10-C20、C10-C50等)，其中每个碳任选地被以下独立地取代或替代：(1)选自N、O、S、P或Si原子的杂原子，该杂原子具有适当数目的氢、取代或两者以完成化合价，(2)任选取代的环烷基或双环环烷基，(3)任选取代的杂环烷基或双环杂环烷基，(4)任选取代的芳基或双环芳基，或(5)任选取代的杂芳基或双环杂芳基。在本文所述的任何方面或实施方案中，接头(L)不具有杂原子-杂原子键合(例如，没有杂原子共价连接或位于邻近位置(adjacentlylocated))。
在本文所述的任何方面或实施方案中，接头(L)包括任选取代的C1-C50烷基(例如，C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10、C11、C12、C13、C14、C15、C16、C17、C18、C19、C20、C21、C22、C23、C24、C25、C26、C27、C28、C29、C30、C31、C32、C33、C34、C35、C36、C37、C38、C39、C40、C41、C42、C43、C44、C45、C46、C47、C48、C49或C50烷基)，其中：
每个碳任选地独立地被以下取代或替代：CRL1RL2、O、S、SO、SO2、NRL3、SO2NRL3、SONRL3、CONRL3、NRL3CONRL4、NRL3SO2NRL4、CO、CRL1＝CRL2、C≡C、SiRL1RL2、P(O)RL1、P(O)ORL1、NRL3C(＝NCN)NRL4、NRL3C(＝NCN)、NRL3C(＝CNO2)NRL4、C3-11环烷基(任选地被1-6个RL1和/或RL2基团取代)、C5-13螺环烷基(任选地被1-9个RL1和/或RL2基团取代)、C3-11杂环基(任选地被1-6个RL1和/或RL2基团取代)、C5-13螺杂环基(任选地被1-8个RL1和/或RL2基团取代)、芳基(任选地被1-6个RL1和/或RL2基团取代)、杂芳基(任选地被0-6个RL1和/或RL2基团取代)，其中RL1或RL2各自独立地任选地连接到其他基团以形成任选地被1-4个RL5基团取代的环烷基和/或杂环基部分；并且
RL1、RL2、RL3、RL4和RL5各自独立地为H、卤代基、C1-8烷基、OC1-8烷基、SC1-8烷基、NHC1-8烷基、N(C1-8烷基)2、C3-11环烷基、芳基、杂芳基、C3-11杂环基、OC3-8环烷基、SC3-8环烷基、NHC3-8环烷基、N(C3-8环烷基)2、N(C3-8环烷基)(C1-8烷基)、OH、NH2、SH、SO2C1-8烷基、P(O)(OC1-8烷基)(C1-8烷基)、P(O)(OC1-8烷基)2、CC-C1-8烷基、CCH、CH＝CH(C1-8烷基)、C(C1-8烷基)＝CH(C1-8烷基)、C(C1-8烷基)＝C(C1-8烷基)2、Si(OH)3、Si(C1-8烷基)3、Si(OH)(C1-8烷基)2、COC1-8烷基、CO2H、卤素、CN、CF3、CHF2、CH2F、NO2、SF5、SO2NHC1-8烷基、SO2N(C1-8烷基)2、SONHC1-8烷基、SON(C1-8烷基)2、CONHC1-8烷基、CON(C1-8烷基)2、N(C1-8烷基)CONH(C1-8烷基)、N(C1-8烷基)CON(C1-8烷基)2、NHCONH(C1-8烷基)、NHCON(C1-8烷基)2、NHCONH2、N(C1-8烷基)SO2NH(C1-8烷基)、N(C1-8烷基)SO2N(C1-8烷基)2、NH SO2NH(C1-8烷基)、NH SO2N(C1-8烷基)2、NH SO2NH2。
在本文所述的任何方面或实施方案中，接头基团是任选取代的C1-C50烷基(例如，C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10、C11、C12、C13、C14、C15、C16、C17、C18、C19、C20、C21、C22、C23、C24、C25、C26、C27、C28、C29、C30、C31、C32、C33、C34、C35、C36、C37、C38、C39、C40、C41、C42、C43、C44、C45、C46、C47、C48、C49或C50烷基，并且包括所有隐含的子范围，例如，C1-C10、C1-C20；C2-C10、C2-20；C10-C20、C10-C50等)，其中每个碳原子任选地被以下取代或替代：O、N、S、P或Si原子，其具有适当数目的氢、取代(例如，OH、卤代基、烷基、甲基、乙基、卤代烷基、羟烷基、烷氧基、甲氧基等)或两者以完成化合价；任选取代的芳基(例如，任选取代的C5或C6芳基)或双环芳基(例如，任选取代的C5-C20双环杂芳基)；任选取代的杂芳基(例如，任选取代的C5或C6杂芳基)或双环杂芳基(例如，任选取代的杂芳基或双环杂芳基，该任选取代的杂芳基或双环杂芳基具有一个或多个选自N、O、S、P和Si的杂原子，该杂原子具有适当数目的氢、取代(例如，OH、卤代基、烷基、甲基、乙基、卤代烷基、羟烷基、烷氧基、甲氧基等)或两者以完成化合价)；任选取代的C1-C6烷基；任选取代的C1-C6烯基；任选取代的C1-C6炔基；任选取代的环烷基(例如，任选取代的C3-C7环烷基)或双环环烷基(例如，任选取代的C5-C20双环环烷基)；或任选取代的杂环烷基(例如，任选取代的3-、4-、5-、6-或7元杂环基团)或双环杂烷基(例如，任选取代的杂环烷基双环杂烷基，该任选取代的杂环烷基双环杂烷基具有一个或多个选自N、O、S、P或Si原子的杂原子，该杂原子具有适当数目的氢、取代(例如，OH、卤代基、烷基、甲基、乙基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基、甲氧基等)或两者以完成化合价)。在本文所述的任何方面或实施方案中，任选取代的烷基接头任选地被一个或多个OH、卤代基、直链或具支链的C1-C6烷基(诸如甲基或乙基)、直链或具支链的C1-C6卤代烷基、直链或具支链的C1-C6羟烷基，或直链或具支链的C1-C6烷氧基(例如，甲氧基)取代。
在本文所述的任何方面或实施方案中，接头(L)不具有杂原子-杂原子键合(例如，没有杂原子共价连接或位于邻近位置(adjacently located))。
在本文所述的任何方面或实施方案中，接头(L)包括约1至约50(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50)个任选取代的亚烷基二醇单元，其中碳或氧可以被选自N、S、P或Si原子的杂原子取代或替代，该杂原子具有适当数目的氢以完成化合价。
在本文所述的任何方面或实施方案中，接头(L)由以下化学结构表示：
Figure BDA0003980908660000631
其中：
化学连接部分的
Figure BDA0003980908660000632
是与VLM或PTM的附接位点；
YL2是键或未取代的或取代的直链或具支链的C1-C4烷基(例如，任选地被卤素、C1-3烷基、甲基或乙基取代)；
WL3是3-7元环(例如，4-6元环烷基或杂环烷基)或8-12元螺环，每一者均具有0-4个杂原子(例如，0-4个独立地选自N、O和S的杂原子)并且任选地被卤素或甲基取代；
YL3是键或C1-C35烷基(C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10、C11、C12、C13、C14、C15、C16、C17、C18、C19、C20、C21、C22、C23、C24、C25、C26、C27、C28、C29、C30、C31、C32、C33、C34或C35烷基)，其中一个或多个C原子任选地被O，或
Figure BDA0003980908660000641
NH替代，并且每个碳任选地被卤素、＝O、甲基或乙基取代，并且每个氮任选地被卤素、甲基或乙基取代；
YL4是键、O或未取代的或取代的直链或具支链的C1-C6烷基，其中一个或多个碳任选地被O、NH或NCH3替代，并且任选地被卤素或甲基取代；
WL4是3-8元环(例如，4-6元环烷基或杂环烷基或
Figure BDA0003980908660000642
)或5-8元螺环，每一者均具有0-4个杂原子(例如，0-4个独立地选自N、O和S的杂原子)并且任选地被卤素(例如，F、Cl、Br)或甲基取代，并且
YL5是键或未取代的或取代的C1-C6烷基，其中一个或多个C原子任选地被O替代并且任选地被卤代基(例如，F、Cl、Br)或甲基取代。
在本文所述的任何方面或实施方案中，接头(L)的单元AL包含选自由以下组成的组的结构：
Figure BDA0003980908660000643
Figure BDA0003980908660000651
Figure BDA0003980908660000661
Figure BDA0003980908660000671
Figure BDA0003980908660000672
其中
Figure BDA0003980908660000673
表示与PTM或VLM的附接点。
在本文所述的任何方面或实施方案中，接头(L)的单元AL包含选自由以下组成的组的结构：
Figure BDA0003980908660000674
Figure BDA0003980908660000681
Figure BDA0003980908660000691
Figure BDA0003980908660000701
Figure BDA0003980908660000702
其中
Figure BDA0003980908660000703
表示与PTM或VLM的附接点。
在本文所述的任何方面或实施方案中，接头(L)包含选自以下所示结构的结构：
Figure BDA0003980908660000704
其中：
WL1和WL2各自独立地是不存在、具有0-4个杂原子的4-8元环，其任选地被RQ取代，每个RQ独立地是H、卤代基、OH、CN、CF3、任选取代的直链或具支链的C1-C6烷基、任选取代的直链或具支链的C1-C6烷氧基，或者2个RQ基团与它们所附接的原子一起形成含有0-4个杂原子的4-8元环体系；
YL1各自独立地是键、任选取代的直链或具支链的C1-C6烷基，并且任选地一个或多个C原子被O或NRYL1、任选取代的C1-C6烯烃替代，并且任选地一个或多个C原子被O、任选取代的C1-C6炔烃替代，并且任选地一个或多个C原子被O或任选取代的直链或具支链的C1-C6烷氧基替代；
RYL1是H或任选取代的直链或具支链的C1-6烷基；
n是0-10；并且
Figure BDA0003980908660000705
表示与PTM或ULM部分的附接点。
在本文所述的任何方面或实施方案中，接头(L)包含选自以下所示结构的结构：
Figure BDA0003980908660000711
其中：
WL1和WL2各自独立地是不存在、哌嗪、哌啶、吗啉，其任选地被RQ取代，每个RQ独立地是H、-Cl-、-F-、OH、CN、CF3、任选取代的直链或具支链的C1-C6烷基(例如甲基、乙基)、任选取代的直链或具支链的C1-C6烷氧基(例如甲氧基、乙氧基)；
YL1各自独立地是键、任选取代的直链或具支链的C1-C6烷基，并且任选地一个或多个C原子被O或NRYL1、任选取代的C1-C6烯烃替代，并且任选地一个或多个C原子被O、任选取代的C1-C6炔基替代，并且任选地一个或多个C原子被O或任选取代的直链或具支链的C1-C6烷氧基替代；
RYL1是H，或任选取代的直链或具支链的C1-6烷基(例如甲基、乙基)；
n是0-10；并且
Figure BDA0003980908660000712
表示与PTM或ULM部分的附接点。
在本文所述的任何方面或实施方案中，接头(L)包含选自以下所示结构的结构：
Figure BDA0003980908660000721
其中：
WL1和WL2各自独立地是不存在、芳基、杂芳基、环状、杂环、C1-6烷基，并且任选地一个或多个C原子被O或NRYL1、C1-6烯烃替代，并且任选地一个或多个C原子取代被O、C1-6炔烃替代，并且任选地一个或多个C原子被O、双环、二芳基、二杂芳基或双杂环替代，每一者均任选地被RQ取代，每个RQ独立地为H、卤代基、OH、CN、CF3、羟基、硝基、C≡CH、C2-6烯基、C2-6炔基、任选取代的直链或具支链的C1-C6烷基、任选取代的直链或具支链的C1-C6烷氧基、任选取代的OC1-3烷基(例如，任选地被1个或多个-F取代)、OH、NH2、NRY1RY2、CN，或者2个RQ基团与它们所附接至的原子一起形成含0-4个杂原子的4-8元环体系；
YL1各自独立地为键、NRYL1、O、S、NRYL2、CRYL1RYL2、C＝O、C＝S、SO、SO2、任选取代的直链或具支链的C1-C6烷基，并且任选地一个或多个C原子被O、任选取代的直链或具支链的C1-C6烷氧基替代；
QL是具有0-4个杂原子的3-6元脂环、双环或芳族环，其任选地被桥接，任选地被0-6个RQ取代，每个RQ独立地为H、任选取代的直链或具支链的C1-6烷基(例如，任选地被1个或多个卤代基、C1-6烷氧基取代)，或者2个RQ基团与它们所附接至的原子一起形成含有0-2个杂原子的3-8元环体系；
RYL1、RYL2各自独立地为H、OH、任选取代的直链或具支链的C1-6烷基(例如，任选地被1个或多个卤代基、C1-6烷氧基取代)，或者R1、R2与它们所附接至的原子一起形成含有0-2个杂原子的3-8元环体系；
n是0-10；并且
Figure BDA0003980908660000731
表示与PTM或ULM部分的附接点。
在本文所述的任何方面或实施方案中，接头(L)包含选自以下所示结构的结构：
Figure BDA0003980908660000732
其中：
WL1和WL2各自独立地是不存在、环己烷、环戊烷、哌嗪、哌啶、吗啉、C1-6烷基，并且任选地一个或多个C原子被O或NRYL1、C1-6烯烃替代并且任选地一个或多个C原子被O、C1-6烯烃替代，并且任选地一个或多个C原子被O或C1-6炔烃替代，并且任选地一个或多个C原子被O替代，每一者均任选地被RQ取代，每个RQ独立地为H、-Cl、-F、OH、CN、CF3、羟基、任选取代的直链或具支链的C1-C6烷基(例如，甲基、乙基)或任选取代的直链或具支链的C1-C6烷氧基；
YL1各自独立地为键、NRYL1、O、CRYL1RYL2、C＝O、任选取代的直链或具支链的C1-C6烷基，并且任选地一个或多个C原子被O或NRYL1、C1-6烯烃替代，并且任选地一个或多个C原子被O、C1-6炔烃替代，并且任选地一个或多个C原子被O或任选取代的直链或具支链的C1-C6烷氧基替代；
QL是3-6元杂环、杂双环或杂芳基环，其任选地被0-6个RQ取代，每个RQ独立地是H或任选取代的直链或具支链的C1-6烷基(例如，任选地被1个或多个卤代基、C1-6烷氧基取代)；
RYL1、RYL2各自独立地为H、任选取代的直链或具支链的C1-6烷基(例如，任选地被1个或多个卤代基、C1-6烷氧基取代的甲基、乙基)；
n是0-10；并且
Figure BDA0003980908660000741
表示与PTM或ULM部分的附接点。
示例性PTM
在本公开的一方面，PTM基团(也称为KTM基团)结合至靶蛋白KRas或其突变形式，诸如KRasG12C。
下面描述的组合物举例说明了可以根据本发明使用的KRas结合部分(例如，KRasG12C结合部分)的成员。这些结合部分优选通过化学连接基团连接至泛素连结酶结合部分(VLM)，以便在泛素连结酶邻近处呈递KRas蛋白(诸如KRasG12C)以进行泛素化和随后的降解。
在某些情形下，术语“靶蛋白”被用于指代KRas蛋白，其是RAS/MAPK通路的一个成员，是待被泛素化和降解的靶蛋白。在其他情形下，术语“靶蛋白”被用于指代KRas蛋白的突变形式，诸如功能获得性KRas突变蛋白或具有一种或多种选自由以下组成的组的突变的KRas蛋白：密码子12错义突变、密码子12错义突变、外显子2突变、G12V、G12C、G12D、G12A、G13D、外显子3突变、密码子61错义突变、外显子4突变、G12R、Q61H、G12S、A146T、G13C、Q61R、Q61L、A146V、密码子117错义突变、K117N、Q61K、G12F、密码子59错义突变、A59T或它们的组合。
在本文所述的方面或实施方案中的任何方面或实施方案中，PTM是与该PTM与野生型KRas的结合相比选择性地或优先地结合至具有至少一个作为G12C突变的突变的KRas蛋白(例如，KRasG12C)的小分子。在本文所述的方面或实施方案中的任何方面或实施方案中，PTM是能够选择性地结合具有至少一个作为G12C突变的突变的KRas蛋白(例如，KRasG12C)的小分子，其中与野生型KRas相比，对具有至少一个作为G12C突变的突变的KRas蛋白的选择性是至少1-60倍(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50倍)。在本文所述的方面或实施方案中的任何方面或实施方案中，PTM是结合具有至少一个作为G12C突变的突变的KRas蛋白(例如，KRasG12C)的小分子，其中与野生型KRas相比，对具有至少一个作为G12C突变的突变的KRas蛋白的选择性是至少1-1000倍(例如，50、100、200、300、400、500、600、700、800、900倍)。
术语“蛋白质靶标部分”或PTM被用于描述与KRas或其突变形式诸如KRasG12C结合的小分子，并且可以被用于靶向蛋白质以进行泛素化和降解。
本文所述的组合物举例说明了这些PTM中的一些PTM的用途。
在本文所述的任何方面或实施方案中，所述PTM由以下化学结构表示：
Figure BDA0003980908660000761
其中：
所述PTM的
Figure BDA0003980908660000762
是与VLM或将所述VLM偶联至所述PTM的L的附接位点；
Figure BDA0003980908660000763
是6元芳基、6元杂芳基或6元杂环烷基，每一者均任选地被1个或2个卤素(例如，Cl、F或Br)取代；
RPTM2是-C(＝O)C2-C4烯基，其任选地被甲基、卤素(例如，Cl、F、Br)、胺(例如，-NH2、-NHCH3或-N(CH3)2)或3-6元杂环烷基(例如，6元杂环烷基、具有选自O和N的杂原子的杂环烷基，或
Figure BDA0003980908660000764
)取代；
RPTM3A是H、苯基、吡啶基、异喹啉或萘(例如，
Figure BDA0003980908660000765
Figure BDA0003980908660000771
)，每一者均任选地被1、2或3个独立地选自OH、卤素(例如，F、Cl、Br)、胺(例如，-NH2、-NHCH3或-N(CH3)2)、直链或具支链的C1-C3卤代烷基(例如，直链或具支链的C1-C3氟代烷基或CF3)、-RPTM3C或直链或具支链的C1-C3烷基(例如，甲基或乙基)取代，其中RPTM3C是任选地被1、2或3个独立地选自OH、卤素(例如，F、Cl、Br)，或直链或具支链的C1-C3烷基(例如，甲基或乙基)的基团取代的吲唑(例如，
Figure BDA0003980908660000772
Figure BDA0003980908660000773
其中每个RPTM4D独立地选自氢、C1-C3烷基(例如甲基)或卤素(例如，F、Cl、Br))；
RPTM3B是H、卤素(例如，Cl、F、Br)或-ORPTM3C，其中RPTM3C任选地被1、2或3个独立地选自OH、卤素(例如，F、Cl、Br)，或直链或具支链的C1-C3烷基(例如甲基或乙基)的基团取代(例如，
Figure BDA0003980908660000774
其中每个RPTM4D独立地选自氢、C1-C3烷基(例如甲基)，或卤素(例如，F、Cl、Br))；
PTM-I和PTM-III的RPTM4A是不存在(或是H)或1个或2个独立地选择的卤素(例如，Cl、F、Br)；
PTM-II和PTM-IV的RPTM4A是不存在(或是H)或卤素(例如，Cl、F、Br)；
RPTM4B是(1)H或不存在，(2)-CH2-CH2-CN或-CH2-CN，或(3)1个或2个独立地选择的C1-C3烷基(例如，甲基或乙基)；并且
每个XPTM单独地是CH或N。
在本文所述的任何方面或实施方案中，所述PTM由以下化学结构表示：
Figure BDA0003980908660000781
Figure BDA0003980908660000791
其中：
所述PTM的
Figure BDA0003980908660000792
是与VLM或将所述VLM偶联至所述PTM的L的附接位点；
RPTM3A是任选地被1个或2个独立地选自OH、甲基和卤素(例如，F、Cl、Br)的基团取代的吲唑；
RPTM4B是(1)不存在(或是H)，(2)-CH2-CH2-CN或-CH2-CN，或(3)1个或2个独立地选择的C1-C3烷基(例如，甲基或乙基)；
RPTM4D是氢、C1-C3烷基(例如，甲基)或卤素(例如，F、Cl、Br)；
RPTM4C是H或卤素(例如，Cl、F、Br)；
RPTM4E是H、OH或胺(例如，-NH2或-NHCH3)；
RPTM4F是氢、C1-C3烷基(例如，甲基)、C1-C3卤代烷基(例如，C1-C3氟代烷基或CF3)或卤素(例如，F、Cl、Br)；并且
RPTM3B是任选地被1个或2个独立地选自OH、甲基和卤素(例如，F、Cl、Br)的基团取代的-O-吲唑。
在本文所述的任何方面或实施方案中，所述PTM由以下化学结构表示：
Figure BDA0003980908660000801
其中：
所述PTM的
Figure BDA0003980908660000802
是与VLM或将所述VLM偶联至所述PTM的L的附接位点；
RPTM3A是：
Figure BDA0003980908660000803
并且
RPTM4C是H或F。
在本文所述的任何方面或实施方案中，所述PTM由以下化学结构表示：
Figure BDA0003980908660000804
Figure BDA0003980908660000811
Figure BDA0003980908660000821
其中：RPTM4C、RPTM4D和RPTM4E各自独立地如本文所述的任何其他方面或实施方案中所定义；并且PTM的
Figure BDA0003980908660000822
是与VLM或将VLM偶联至PTM的L的附接位点。
在本文所述的任何方面或实施方案中，所述PTM由以下化学结构表示：
Figure BDA0003980908660000823
Figure BDA0003980908660000831
其中：RPTM4C、RPTM4D和RPTM4E各自独立地如本文所述的任何其他方面或实施方案中所定义；并且PTM的
Figure BDA0003980908660000841
是与VLM或将VLM偶联至PTM的L的附接位点。
在本文所述的任何方面或实施方案中，PTM选自由以下组成的组：
Figure BDA0003980908660000842
Figure BDA0003980908660000851
Figure BDA0003980908660000861
Figure BDA0003980908660000871
Figure BDA0003980908660000872
其中*表示作为与化学连接部分的附接位点的原子或与化学连接部分共享的原子，并且PTM的
Figure BDA0003980908660000873
是与VLM或将VLM偶联至PTM的L的附接位点。
在本文所述的任何方面或实施方案中，PTM具有由以下表示的化学结构：
Figure BDA0003980908660000874
Figure BDA0003980908660000881
其中：
Figure BDA0003980908660000882
是芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基；
XPTM是C或N；
WPTM选自由以下组成的组：任选取代的C3-C6环烷基以及任选取代的C3-C6杂烷基、任选取代的C3-C6杂环烷基、任选取代的芳基(例如，任选取代的C5-C7芳基)、任选取代的杂芳基(例如，任选取代的C5-C7杂芳基)；
RPTM1A是NRPTM9RPTM10、ORPTM9RPTM10、H、任选取代的烷基、任选取代的烷氧基、任选取代的C3-C6环烷基、任选取代的O-(C3-C6环烷基)、任选取代的C3-C6杂烷基、任选取代-O-C1-4烷基-C3-6环烷基、任选取代的O-(C3-C6杂烷基)、任选取代的O-C1-4烷基-C3-6杂烷基，任选取代的O-C1-4烷基-C3-6杂环烷基、任选取代的芳基(例如，任选取代的C5-C7芳基)、任选取代的O-芳基(例如，任选取代的O-(C5-C7芳基))、任选取代的杂芳基(例如，任选取代的C5-C7杂芳基)、任选取代的O-杂芳基(例如，任选取代的O-(C5-C7杂芳基))、任选取代的
Figure BDA0003980908660000883
(例如，任选地被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选地被烷基取代)、任选取代的
Figure BDA0003980908660000891
任选取代的
Figure BDA0003980908660000892
任选取代的
Figure BDA0003980908660000893
任选取代的
Figure BDA0003980908660000894
任选取代的
Figure BDA0003980908660000895
任选取代的
Figure BDA0003980908660000896
任选取代的
Figure BDA0003980908660000897
任选取代的
Figure BDA0003980908660000898
任选取代的
Figure BDA0003980908660000899
任选取代的
Figure BDA00039809086600008910
任选取代的
Figure BDA00039809086600008911
任选取代的
Figure BDA00039809086600008912
(例如，任选地被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选地被烷基取代)、任选取代的
Figure BDA00039809086600008913
(例如，任选地被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选地被烷基取代)、任选取代的
Figure BDA00039809086600008914
(例如，任选地被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选地被烷基取代)、任选取代的
Figure BDA00039809086600008915
(例如，任选地被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选地被烷基取代)、任选取代的
Figure BDA00039809086600008916
(例如，任选地被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选地被烷基取代)、任选取代的
Figure BDA0003980908660000901
(例如，任选地被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选地被烷基取代)，其中N*是接头(L)的杂环烷基(例如，C4-C8杂环烷基)的N原子；
RPTM1B是NRPTM9RPTM10、ORPTM9RPTM10、H、任选取代的烷基、任选取代的O-烷基、任选取代的C3-C6环烷基、任选取代的O-(C3-C6环烷基)、任选取代的-OC1-4烷基-C3-6环烷基、任选取代的C3-C6杂烷基、任选取代的O-(C3-C6杂烷基)、任选取代的OC1-4烷基-C3-6杂烷基、任选取代的芳基(例如，任选取代的C5-C7芳基)、任选取代的O-芳基(例如，任选取代的O-(C5-C7芳基))、任选取代的杂芳基(例如，任选取代的C5-C7杂芳基)、任选取代的O-杂芳基(例如，任选取代的O(C5-C7杂芳基))、任选取代的
Figure BDA0003980908660000902
(例如，任选地被至少一个烷基取代，诸如*碳可以任选地被烷基取代)、任选取代的
Figure BDA0003980908660000903
任选取代的
Figure BDA0003980908660000904
任选取代的
Figure BDA0003980908660000905
任选取代的
Figure BDA0003980908660000906
任选取代的
Figure BDA0003980908660000907
任选取代的
Figure BDA0003980908660000908
任选取代的
Figure BDA0003980908660000909
任选取代的
Figure BDA00039809086600009010
RPTM9和RPTM10各自独立地为H、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的脂肪族胺、任选取代的脂肪族酰胺；
RPTM2是H、(C＝O)RPTM2’、任选取代的直链或具支链的烷基；
RPTM2’是任选取代的直链或具支链的烷基、任选取代的烯烃、-N(RPTM8)2或-C(OH)2；
RPTM3是烷基、烷氧基、苯基或萘，每一者均独立地被OH、H、卤素取代；
RPTM4A是OH、H、卤素、任选取代的直链或具支链的C1-C6烷基；
RPTM4B是OH、H、卤素、任选取代的直链或具支链的C1-C6烷基；
RPTM5选自由以下组成的组：任选取代的芳基、任选取代的二芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的二杂芳基、任选取代的C3-C6环烷基、任选取代的C3-C6环杂烷基、卤素、H、任选取代的直链或具支链的烷基(例如，任选取代的直链或具支链的C1-C6烷基)、OH和烷氧基；
RPTM8是H或烷基(例如，C1烷基、C2烷基、C3烷基或C4烷基)；
t是0、1、2、3、4、5、6(诸如0、1、2、3)；并且
Figure BDA0003980908660000911
表示接头、ULM、ULM’、VLM、VLM’或它们的组合中的至少一者的附接位点
在本文所述的任何方面或实施方案中，杂双官能化合物由以下化学结构表示：
Figure BDA0003980908660000912
Figure BDA0003980908660000921
Figure BDA0003980908660000931
Figure BDA0003980908660000941
Figure BDA0003980908660000951
Figure BDA0003980908660000961
其中：
Figure BDA0003980908660000962
是6元芳基、6元杂芳基或6元杂环烷基，每一者均任选地被1个或2个卤素(例如，Cl、F或Br)取代；
每个XPTM均单独地为CH或N；
RPTM2是-C(＝O)C2-C4烯基，其任选地被甲基、卤素(例如，Cl、F、Br)、胺(例如，-NH2、-NHCH3或-N(CH3)2)或3-6元杂环烷基(例如，6元杂环烷基、具有选自O和N的杂原子的杂环烷基，或
Figure BDA0003980908660000963
)取代；
RPTM3A是H、苯基、吡啶基、异喹啉或萘(例如，
Figure BDA0003980908660000964
Figure BDA0003980908660000965
)，每一者均任选地被1、2或3个独立地选自OH、卤素(例如，F、Cl、Br)、胺(例如，-NH2、-NHCH3或-N(CH3)2)、直链或具支链的C1-C3卤代烷基(例如，直链或具支链的C1-C3氟代烷基或CF3)、-RPTM3C或直链或具支链的C1-C3烷基(例如，甲基或乙基)取代，其中RPTM3C是任选地被1、2或3个独立地选自OH、卤素(例如，F、Cl、Br)，或直链或具支链的C1-C3烷基(例如，甲基或乙基)的基团取代的吲唑(例如，
Figure BDA0003980908660000971
Figure BDA0003980908660000972
其中每个RPTM4D独立地选自氢、C1-C3烷基(例如甲基)或卤素(例如，F、Cl、Br))；
RPTM3B是H、卤素(例如，Cl、F、Br)或-O-RPTM3C，其中RPTM3B任选地被1、2或3个独立地选自OH、卤素(例如，F、Cl、Br)或直链或具支链的C1-C3烷基(例如，甲基或乙基)取代(例如，
Figure BDA0003980908660000973
其中每个RPTM4D独立地选自氢、C1-C3烷基(例如，甲基)或卤素(例如，F、Cl、Br))；
RPTM4A是1个或2个独立地选择的卤素(例如，Cl、F、Br)；
RPTM4B是(1)-CH2-CH2-CN或-CH2-CN，或(2)1个或2个独立地选择的C1-C3烷基(例如，甲基或乙基)；
R14是如本文所述的任何方面或实施方案中的R14、R14a或R14b中所定义；
R15是如本文所述的任何方面或实施方案中所定义；
R16是如本文所述的任何方面或实施方案中所定义；并且
o是如本文所述的任何方面或实施方案中所定义。
治疗组合物
本发明进一步提供了药物组合物，其包含与药学上可接受的载体、添加剂或赋形剂组合在一起的治疗有效量的至少一种如本文所述的双官能化合物。
在另外的方面，本说明书提供了治疗组合物，其包含有效量的如本文所述的化合物或其盐形式，以及药学上可接受的载体、添加剂或赋形剂，以及任选的另外的生物活性剂。治疗组合物在患者或受试者(例如，动物，诸如人)中实现靶向蛋白质降解，并且可以被用于治疗或改善通过降解靶蛋白来调节的疾病状态或病状。在某些实施方案中，如本文所述的治疗组合物可被用于实现蛋白质的降解，以治疗或改善与KRas有关的疾病或病症，例如KRas蛋白或者突变的或功能获得性的KRas蛋白、错误折叠的KRas蛋白的蓄积或过度活跃，胰腺癌，结肠癌，结直肠癌，肺癌，非小细胞肺癌，胆道恶性肿瘤，子宫内膜癌，宫颈癌，膀胱癌，肝癌，髓系白血病和乳腺癌。
在可替代的方面，本公开涉及治疗有需要的受试者中的疾病状态或改善有需要的受试者中的疾病或病状的一种或多种症状的方法，该方法通过降解KRas蛋白(例如，野生型KRas蛋白或KRas突变蛋白)(例如，功能获得性KRas突变蛋白或具有选自以下的一种或多种突变的KRas蛋白：密码子12错义突变、密码子12错义突变、外显子2突变、G12V、G12C、G12D、G12A、G13D、外显子3突变、密码子61错义突变、外显子4突变、G12R、Q61H、G12S、A146T、G13C、Q61R、Q61L、A146V、密码子117错义突变、K117N、Q61K、G12F、密码子59错义突变、A59T或它们的组合)来实现，该方法包括向所述患者或受试者施用有效量的(例如，治疗有效量的)至少一种如本文所述的化合物，该至少一种如本文所述的化合物任选地与药学上可接受的载体、添加剂或赋形剂组合，并且任选地与另外的生物活性剂共同施用，其中该组合物可有效治疗或改善受试者的疾病或病症或其一种或多种症状。根据本公开的方法可被用于通过施用有效量的至少一种本文所述化合物来治疗某些疾病状态、病状或症状，包括炎性疾病、自身免疫性疾病或癌症。例如，根据本公开的方法可被用于治疗以下中的一者或多者：KRas蛋白或者突变或功能获得性的KRas蛋白、错误折叠的KRas蛋白的蓄积或过度活跃，胰腺癌，结肠癌，结直肠癌，肺癌，非小细胞肺癌，胆道恶性肿瘤，子宫内膜癌，宫颈癌，膀胱癌，肝癌，髓系白血病和乳腺癌。在本文所述的任何方面或实施方案中，该方法进一步包括，在向受试者施用本公开的组合物或化合物之前，将患者鉴定为具有突变的KRas蛋白(例如，KRasG12C)。
本公开进一步包括药物组合物，其包含如本文所述的化合物的药学上可接受的盐，特别是酸或碱加成盐。用于制备可根据这一方面使用的前面提到的化合物的药学上可接受的酸加成盐的酸是那些形成无毒酸加成盐的酸，所述无毒酸加成盐即含有药理学上可接受的阴离子的盐，诸如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、乙酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、酒石酸氢盐、琥珀酸盐、马来酸盐、延胡索酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、苯甲酸盐、甲烷磺酸盐、乙烷磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐[即，1，1’-亚甲基-双-(2-羟基-3-萘甲酸盐)]等。
药学上可接受的碱加成盐也可被用于生产根据本公开的化合物的药学上可接受的盐形式。可用作用于制备本发明化合物的药学上可接受的碱盐的试剂的化学碱是那些与此类化合物形成无毒碱盐的化学碱。此类无毒碱盐包括但不限于衍生自此类药理学上可接受的阳离子(诸如碱金属阳离子(例如，钾和钠)和碱土金属阳离子(例如，钙、锌和镁))的碱盐、铵或水可溶性胺加成盐(诸如N-甲基葡糖胺-(葡甲胺))以及低级烷醇铵和药学上可接受的有机胺的其他碱盐等。
根据本公开，如本文所述的化合物可以通过经口、肠胃外或局部途径以单剂量或分剂量施用。活性化合物的施用范围可以从连续(静脉滴注)到每天几次经口施用(例如，Q.I.D.)，并且可以包括经口、局部、肠胃外、肌内、静脉内、皮下、透皮(其可以包含渗透增强剂)、经颊、舌下、鼻内、眼内、鞘内、阴道和栓剂施用以及其他施用途径。如本文中所用的术语“肠胃外”包括皮下、静脉内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内及颅内注射或输注技术。肠溶包衣口服片也可用于提高化合物从经口施用途径的生物利用度。最有效的剂型将取决于所选特定剂的药代动力学以及疾病、病状或症状的类型、部位和严重程度，以及患者的健康状况。也可以使用根据本公开的化合物作为喷雾剂、薄雾剂或气雾剂施用，以用于鼻内、气管内或肺部施用。因此，本公开还涉及药物组合物，其包含任选地与药学上可接受的载体、添加剂或赋形剂组合在一起的有效量的如本文所述的化合物。根据本公开的化合物可以以立即释放、中间释放或持续释放或受控释放形式施用。持续释放或受控释放形式优选经口施用，但也以栓剂和透皮或其他局部形式施用。脂质体形式或贮库制剂的肌内注射也可被用于控制或维持化合物在注射部位处的释放。
如本文所述的组合物可使用一种或多种药学上可接受的载体以常规方式配制，并且也可以以受控释放制剂的形式施用。这些药物组合物中可使用的药学上可接受的载体包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白(诸如人血清白蛋白)、缓冲物质(诸如磷酸盐)、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质(诸如硫酸鱼精蛋白)、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂，以及它们的组合。
如本文所述的组合物的无菌可注射形式可为水性或油性悬浮液。这些悬浮液可根据本领域中已知的技术，使用合适的分散剂或湿润剂和助悬剂来配制。无菌可注射制剂也可为在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如为在1，3-丁二醇中的溶液。在可使用的可接受媒介物和溶剂中有水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌、不挥发性油通常用作为溶剂或悬浮介质。为达成此目的，任何温和的不挥发性油均可被使用，包括合成的单甘油酯或二甘油酯。脂肪酸如油酸及其甘油酯衍生物可用于注射剂的制备，天然的药学上可接受的油如橄榄油或蓖麻油(尤其是处于其聚氧乙烯化型式)也是如此。这些油溶液或悬浮液也可以含有长链醇稀释剂或分散剂，诸如Ph.Helv或类似的醇。
如本文所述的药物组合物可以以任何经口可接受的剂型经口施用，所述剂型包括但不限于胶囊、片剂、水性悬浮液或溶液。在经口片剂的情况下，常用的载体包括乳糖和玉米淀粉，以及本领域已知的其他载体。对于胶囊形式的经口施用，有用的稀释剂包括乳糖和玉米淀粉。当需要用于经口使用的水性悬浮液时，可将活性成分与乳化剂和助悬剂组合在一起。如果需要，还可加入某些甜味剂、调味剂或着色剂。通常也加入润滑剂，诸如硬脂酸镁。
可替代地，如本文所述的药物组合物可以以栓剂的形式用于直肠施用。这些栓剂可以通过混合该剂与合适的非刺激性的赋形剂来制备，该赋形剂在室温下为固体但在直肠温度下为液体，因此将在直肠中融化从而使药物释放。此类材料包括可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。
如本文所述的药物组合物也可局部施用。对于局部应用，可将药物组合物配制成透皮贴剂，该透皮贴剂可以是包含与一种或多种载体、缓冲剂、吸收促进剂组合在一起的活性化合物并且提供1天至两周的连续施用的储库贴剂或基质贴剂。
可替代地，可将本公开的药物组合物配制成含有悬浮或溶解于一种或多种载体中的活性组分的合适膏剂。用于本公开的化合物的局部施用的载体包括但不限于矿物油、液体凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。
可替代地，可将本公开的药物组合物配制成含有悬浮或溶解于一种或多种药学上可接受的载体中的活性组分的合适洗剂或霜剂。合适的载体包括但不限于矿物油、单硬脂酸脱水山梨糖醇酯、聚山梨酯60、鲸蜡基酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苄醇和水。
可替代地，可将本公开的药物组合物配制用于眼科使用。例如，可在使用或不使用诸如氯苄烷铵的防腐剂的情况下，将药物组合物在等渗的、经pH调节的无菌盐水中配制成微粉化悬浮液，或者优选地，在等渗的、经pH调节的无菌盐水中配制成溶液。可替代地，对于眼科应用而言，可将药物组合物配制成诸如凡士林的膏剂。
如本文所述的药物组合物也可以通过鼻气雾剂或吸入来施用。根据药物配制领域中熟知的技术制备此类组合物，并且可采用苄醇或其他合适的防腐剂、增强生物利用率的吸收促进剂、碳氟化合物和/或其他常规增溶或分散剂将此类组合物制备成在生理盐水中的溶液。
如本文所述的药物组合物中可与载体材料组合以产生单一剂型的活性药物成分的量将根据受试者的状况和所治疗的疾病、病状或症状、特定的施用方式以及受试者的状况而变化。优选地，组合物应被配制成含有单独的或与根据本公开的另一种化合物组合的介于约0.05毫克和约750毫克或更多之间，更优选约1毫克至约600毫克，并且甚至更优选约10毫克至约500毫克的活性成分。
还应当理解，对任何特定患者的具体剂量和治疗方案将取决于多个因素，包括所用具体化合物的活性和生物利用率、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、施用时间、排泄率、药物组合、治疗医生的判断和进行治疗的特定疾病或病状的严重程度。
需要使用根据本文所述方法的化合物的疗法的患者或受试者可以通过向该患者(受试者)施用单独的或与另一种已知的治疗剂组合的任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中的有效量的根据本公开的化合物(取决于根据本公开的化合物的药学上可接受的盐或溶剂化物)来治疗。在本文所述的任何方面或实施方案中，该方法进一步包括，在向受试者施用本公开的组合物或化合物之前，将患者鉴定为具有突变的KRas蛋白(例如，KRasG12C)。
在某些方面，活性化合物可以足以向患者递送用于所需适应症的治疗有效量而不会对所治疗的患者造成过度程度的严重毒性作用的量与药学上可接受的载体或稀释剂组合。活性化合物对所有本文提及的病状的优选剂量在从约10纳克/千克(ng/kg)至300毫克/千克(mg/kg)的范围内，优选为每天0.1至100mg/kg，更一般地为每天0.5至约25mg/千克接受者/患者体重。典型的局部剂量范围将为合适的载体中0.01-5％wt/wt。
在某些方面，所述化合物以任何合适的单位剂量形式方便地施用，该合适的单位剂量形式包括但不限于每单位剂量形式含有小于1毫克(mg)、1mg至3000mg或5mg至500mg活性成分的剂量形式。约25mg-250mg的经口剂量通常是方便的。
在某些方面，活性成分优选被施用成实现约0.00001-30毫摩尔(mM)，优选约0.1-30微摩尔(μM)的活性化合物的峰值血浆浓度。这可以例如通过静脉内注射任选地在盐水或水性介质中或作为活性成分的药团(bolus)施用的活性成分的溶液或制剂来实现。经口施用也可能适合于产生活性剂的有效血浆浓度。
药物组合物中活性化合物的浓度将取决于药物的吸收、分布、失活和排泄速率以及本领域技术人员已知的其他因素。需要注意的是，剂量值也将随着要缓解的病状的严重程度而变化。应进一步理解，对于任何特定受试者，具体的剂量方案应根据个体需要和施用或监督组合物施用的人的专业判断随时间来调整，并且本文阐述的浓度范围仅为示例性的，并不旨在限制要求保护的组合物的范围或实践。活性成分可以一次施用，或者可以分成多个较小的剂量以不同的时间间隔施用。
经口组合物通常将包括惰性稀释剂或可食用载体。它们可以被封装在明胶胶囊中或压制成片剂。为了经口治疗性施用的目的，可将活性化合物或其前药衍生物与赋形剂结合并以片剂、锭剂或胶囊的形式使用。药学上相容的粘合剂和/或佐剂材料可被包含作为组合物的一部分。
片剂、丸剂、胶囊、锭剂等可以含有以下任何成分或类似性质的化合物：粘合剂，诸如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂，诸如淀粉或乳糖；分散剂，诸如海藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂，诸如硬脂酸镁或Sterotes；助流剂，诸如胶体二氧化硅；甜味剂，诸如蔗糖或糖精；或调味剂，诸如薄荷、水杨酸甲酯或橙味调味剂。当剂量单位形式是胶囊时，除以上类型的材料之外，它还可以含有液体载体，诸如脂肪油。此外，剂量单位形式可以含有改变剂量单位的物理形式的各种其他材料，例如糖、虫胶或肠溶剂的包衣。
活性化合物或其药学上可接受的盐可以作为酏剂、悬浮液、糖浆剂、圆片(wafer)、口香糖等的组分施用。除了活性化合物外，糖浆剂还可以含有蔗糖(作为甜味剂)和某些防腐剂、染料和色素以及调味剂。
活性化合物或其药学上可接受的盐也可以与不损害所需作用的其他活性材料混合，或与补充所需作用的材料诸如本文中所述的抗癌剂等混合。在本公开的某些优选方面，一种或多种根据本公开的化合物与如本文另外描述的另一种生物活性剂，诸如抗癌剂或伤口愈合剂(包括抗生素)共同施用。
用于肠胃外、皮内、皮下或局部应用的溶液或悬浮液可以包括以下组分：无菌稀释剂，诸如注射用水、盐水溶液、不挥发油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶剂；抗菌剂，诸如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，诸如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，诸如乙二胺四乙酸；缓冲剂，诸如醋酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，以及用于调节张力的剂，诸如氯化钠或右旋糖。肠胃外制品可以封装在由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多剂量小瓶中。
如果静脉内施用，优选的载体是生理盐水或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。
在任何方面或实施方案中，活性化合物被制备成与将防止该化合物从体内快速消除的载体一起，诸如包括植入物和微囊化递送系统的受控释放制剂。可以使用生物可降解、生物相容的聚合物，诸如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酯和聚乳酸。用于制备此类制剂的方法对本领域技术人员将是显而易见的。
脂质体悬浮液也可以是药学上可接受的载体。这些可以根据本领域技术人员已知的方法，例如，如美国专利第4,522,811号(其全部内容以引用的方式并入本文)中所述的方法来制备。例如，脂质体制剂可以通过如下方式来制备：将适当的一种或多种脂质(诸如硬脂酰磷脂酰乙醇胺、硬脂酰磷脂酰胆碱、花生酰磷脂酰胆碱和胆固醇)溶解在无机溶剂中，然后蒸发，从而使干燥的脂质薄膜留在容器的表面。然后将活性化合物的水溶液引入到容器中。然后用手涡旋容器以使脂质材料从容器的侧面脱离并分散脂质聚集体，从而形成脂质体悬浮液。
治疗方法
在另外的方面，本说明书提供了治疗方法，其包括施用有效量的如本文所述的化合物或其盐形式，以及药学上可接受的载体。该治疗方法可被用于在有需要的患者或受试者(例如，动物，诸如人)中实现蛋白质降解，以用于治疗或改善可通过靶向蛋白质降解治疗的疾病状态、病状或相关症状。
如本文所用的术语“治疗(treat)”、“治疗(treating)”和“治疗(treatment)”等是指可以为本发明化合物可被施用于的患者提供益处的任何动作，包括对与本发明化合物结合至的蛋白质有关的任何疾病状态、病状或症状的治疗。以上阐述了可以使用根据本公开的化合物治疗的疾病状态或病状，包括癌症。
本说明书提供了用于实现感兴趣的蛋白质降解以治疗或改善疾病(例如胰腺癌、结肠癌、结直肠癌、肺癌、非小细胞肺癌、胆道恶性肿瘤、子宫内膜癌、宫颈癌、膀胱癌、肝癌、髓系白血病和乳腺癌)的治疗方法。因此，在另一方面，本说明书提供了使细胞中的靶蛋白泛素化/降解的方法。在某些实施方案中，该方法包括施用本发明的双官能化合物。如本公开所提供的受试者细胞中特定蛋白质水平的控制或降低提供了对疾病状态、病状或症状的治疗。在任何方面或实施方案中，该方法包括施用有效量的如本文所述的化合物，任选地包括药学上可接受的赋形剂、载体、佐剂、另一种生物活性剂或它们的组合。
在另外的实施方案中，本说明书提供了用于治疗或改善受试者或患者(例如，动物，诸如人)的疾病、病症或其症状的方法，其包括向有此需要的受试者施用包含有效量(例如，治疗有效量)的如本文所述的化合物或其盐形式和药学上可接受的赋形剂、载体、佐剂、另一种生物活性剂或它们的组合的组合物，其中所述组合物可有效治疗或改善所述受试者的疾病或病症或其症状。
在本文所述的任何方面或实施方案中，该方法进一步包括，在向受试者施用本公开的组合物或化合物之前，将患者鉴定为具有突变的KRas蛋白(例如，KRasG12C)。
在另一个方面，本说明书提供了使用根据本公开的化合物鉴定生物系统中感兴趣的蛋白质的降解的影响的方法。
在另一个方面，本说明书提供了制备可以导致细胞内(例如，体内或体外)KRas降解的分子的方法，其包括以下步骤：(i)提供与KRas或其突变形式结合的小分子；(ii)提供E3泛素连结酶结合部分(ULM)，优选如本文所述的VLM；和(iii)通过化学连接基团(L)将步骤(i)的小分子与步骤(ii)的ULM共价偶联，从而形成与细胞中的VHL E3泛素连结酶和KRas蛋白和/或突变形式结合的化合物，使得VHL E3泛素连结酶邻近与其结合的KRas蛋白并使该KRas蛋白泛素化，从而使得泛素化的KRas随后被降解。
在另一个方面，本说明书提供了用于检测分子是否可以触发细胞中(例如，体内或体外)KRas蛋白降解的方法，所述方法包括以下步骤：(i)提供有待检测触发细胞中KRas蛋白降解的能力的分子，所述分子包含以下结构：VLM-L-PTM，其中VLM是能够结合细胞中VHLE3泛素连结酶的VHL E3泛素连结酶结合部分，所述VLM如本文所描述，是诸如反式-3-羟脯氨酸衍生物，其中反式-3-羟脯氨酸中的氮和羧酸都被官能化为酰胺；PTM是蛋白质靶向部分，该蛋白质靶向部分是与KRas和/或其突变KRas形式结合的小分子，所述KRas具有至少一个可被与该分子的VLM结合的VHL E3泛素连结酶泛素化的赖氨酸残基；并且L是化学连接基团，该化学连接基团将VLM与PTM共价连接以形成该分子；(ii)在步骤(i)的分子存在下孵育表达KRas蛋白的细胞；以及(iii)检测细胞中的KRas蛋白是否已经被降解。
在本文所述的方面或实施方案中的任何方面或实施方案中，能够结合KRas的小分子是结合KRas的小分子。在某些实施方案中，结合KRas的小分子如本文所描述。
在所述治疗的另一个方面，本公开提供了治疗需要对与KRas和/或KRas突变形式、表达、过表达、突变、聚集、蓄积、错误折叠或失调有因果关系的疾病状态、病状或症状进行所述治疗的人患者的方法，其中所述KRas蛋白的降解将在患者中产生治疗效果，所述方法包括向患者施用任选地与另一种生物活性剂组合的有效量的根据本公开的化合物。
所述疾病状态、病状或症状可能是由微生物因子或其他外源性因子诸如病毒、细菌、真菌、原生动物或其他微生物引起的，或者可能是这样的疾病状态，该疾病状态由导致疾病状态、病状或症状的蛋白质的表达、过表达、突变、错误折叠或失调引起。
在另一个方面，本公开提供了治疗或改善受试者的疾病或病状的至少一种症状的方法，其包括以下步骤：
提供被鉴定为具有与受试者的KRas蛋白和/或其突变形式的表达、过表达、突变、错误折叠或失调有因果关系的疾病或病状的症状的受试者，该疾病或病状的症状通过使受试者的细胞中KRas蛋白和/或其突变形式降解而得到治疗或改善；以及向受试者施用治疗有效量的包含本发明的小分子从而使得KRas蛋白和/或其突变形式被降解，由此治疗或改善受试者的疾病或病状的至少一种症状的化合物。
术语“疾病状态或病状”用于描述任何这样的疾病状态或病状，在此情况下发生蛋白质表达、过表达、突变、错误折叠或失调(例如，患者中表达的蛋白质的量升高)，并且在此情况下，用于降低或稳定患者中KRas蛋白(无论是否突变)的水平的KRas和/或其突变形式降解为有需要的患者提供了有益的疗法或症状缓解。在某些情况下，所述疾病状态、病状或症状可以被治愈。
可以使用根据本公开的化合物治疗的疾病状态、病状或症状包括，例如，胰腺癌、结肠癌、结直肠癌、肺癌、非小细胞肺癌、胆道恶性肿瘤、子宫内膜癌、宫颈癌、膀胱癌、肝癌、髓系白血病和乳腺癌。
术语“生物活性剂”用于描述除本公开的化合物之外的剂，该剂与本发明化合物组合作为具有生物活性的剂使用以帮助实现使用本发明化合物进行的预期疗法、抑制和/或预防/预防治疗。用于本文的优选的生物活性剂包括那些具有与使用或施用本发明化合物相似的药理活性的剂，并且包括例如抗癌剂、抗病毒剂，尤其包括抗HIV剂和抗HCV剂、抗微生物剂、抗真菌剂等。
术语“另外的抗自身免疫疾病剂”用于描述抗自身免疫疾病的治疗剂，该治疗剂可以与根据本公开的化合物组合以治疗自身免疫疾病。这些剂包括例如英夫利昔单抗、托法替尼、巴瑞替尼、苏金单抗、阿达木单抗、依那西普、戈利木单抗、赛妥珠单抗(certolizumabpepol)、抗增殖药物(例如，吗替麦考酚酯(mycophenolate mofetil))和皮质类固醇。
术语“药学上可接受的衍生物”在整个说明书中用于描述任何药学上可接受的前药形式(诸如酯、酰胺其他前药基团)，其在被施用给患者后直接或间接地提供本发明化合物或本发明化合物的活性代谢物。
实施例
缩写
CAN 乙腈
AcOH 乙酸
Boc 叔丁氧羰基
Dba 二亚苄基丙酮
DBU 1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯
DCM 二氯甲烷
DMA 二甲基乙酰胺
DME 二甲氧基乙烷
DMF 二甲基甲酰胺
DMSO 二甲亚砜
DMAC/DMA 二甲基乙酰胺
DIEA N，N-二异丙基乙胺
EDTA 乙二胺四乙酸
EtOAc/EA 乙酸乙酯
EtOH 乙醇
FA 甲酸
HPLC 高压液相色谱法
Hz 赫兹
IBX 2-碘氧基苯甲酸
LAH 氢化铝锂
LCMS 液相色谱/质谱联用法
LiHMDS 双(三甲基甲硅烷基)氨基锂
MHz 兆赫
NBS N-溴代琥珀酰亚胺
NCS N-氯代琥珀酰亚胺
NMR 核磁共振
NMP N-甲基-2-吡咯烷酮
MeOH 甲醇
MPLC 中压液相色谱法
MTBE 甲基叔丁基醚
PE 石油醚
Psi 每平方英寸磅力
RT或r.t. 室温
SFC 超临界流体色谱法
TEA 三乙胺
THF 四氢呋喃
TFA 三氟乙酸
TLC 薄层色谱法
TMS 三甲基甲硅烷基
一般合成方法
如本文所述的双官能分子的合成实现和优化可以逐步或模块化方式进行。例如，如果没有合适的配体直接可用，则结合至靶蛋白(即KRas)的化合物的鉴定可能涉及高通量或中通量筛选活动。通常初始配体需要迭代设计和优化循环来改善次优方面，如由来自合适的体外和药理学和/或ADMET测定的数据所鉴定的。优化/SAR活动的一部分将是探测配体的能耐受取代并且可能是附接本文前面提到的化学连接基团的合适位所的位置。在可获得晶体学或NMR结构数据的情况下，这些数据可被用于聚焦此类合成工作。
人们可以以非常类似的方式鉴定和优化E3连结酶的配体。
有了PTM和ULM(例如VLM)，本领域技术人员可以使用已知的合成方法将它们与或不与一种或多种化学连接基团组合。可以合成具有一系列组成、长度和柔韧性的一种或多种化学连接基团并对其进行官能化，以使PTM和ULM基团可以循序地附接到接头的远端。因此，双官能分子文库可以在体外和体内药理学和ADMET/PK研究中实现和分析。与PTM和ULM组一样，最终的双官能分子可以经受迭代设计和优化循环，以便鉴定具有所需特性的分子。
在某些情况下，可能需要保护基团策略和/或官能团互变(FGI)以促进所需材料的制备。此类化学过程对于合成有机化学家来说是众所周知的，并且其中的许多化学过程可以在诸如“Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis”(Peter GM Wuts和Theodora W.Greene(Wiley))以及“Organic Synthesis：The Disconnection Approach”(Stuart Warren和Paul Wyatt(Wiley))的文本中找到。
合成程序
一般合成方案
方案A
Figure BDA0003980908660001111
方案B
Figure BDA0003980908660001121
方案C
Figure BDA0003980908660001122
方案1
Figure BDA0003980908660001131
方案2
Figure BDA0003980908660001132
方案3
Figure BDA0003980908660001133
方案4
Figure BDA0003980908660001141
方案5
Figure BDA0003980908660001142
方案6
Figure BDA0003980908660001151
方案7
Figure BDA0003980908660001152
方案8
Figure BDA0003980908660001153
方案9
Figure BDA0003980908660001161
(2S)-4-[6-氯-2-(2，2-二甲氧基乙氧基)-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的示例性合成
步骤1：(R)-2-(羟甲基)哌嗪-1，4-二羧酸1-苄酯4-叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001162
向(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(10g，46.24mmol，1e)在EtOAc(50mL)和H2O(50mL)中的溶液中一次性加入NaHCO3(11.66g，138.80mmol，5.40mL，3.00eq)，然后加入CbzCl(11.88g，69.64mmol，9.90mL，1.51eq)，并将所得混合物在0℃下搅拌30分钟，然后在10℃下搅拌5小时。分离有机层并用水(10mL)洗涤。用EtOAc(100mL)萃取水相。将有机层合并，用水(3×30mL)、盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并在减压下浓缩。将所得黄色液体通过SiO2柱色谱法(含25-50EtOAc的石油醚)纯化，得到呈无色液体的所需产物(2S)-4-(6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(15g，36.81mmol，80％产率，86％纯度)。LC/LC/MS(ESI)m/z：373.1[M+Na]+。
步骤2：(R)-2-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)哌嗪-1，4-二羧酸1-苄酯4-叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001171
向(2S)-4-(6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(60g，171.23mmol，1eq)在CH2Cl2(500mL)中的溶液中一次性加入三乙胺(51.98g，513.69mmol，71.50mL，3eq)。在0℃下将甲磺酰氯(29.42g，256.84mmol，19.88mL，1.5eq)缓慢地加入到该溶液中并保持30分钟，并将所得混合物在25℃下搅拌2小时。将反应物倾倒在水(500mL)上，并将所得混合物用EtOAc(2×600mL)萃取。合并的有机萃取物依次用饱和NH4Cl水溶液(500mL)、饱和NaHCO3水溶液(500mL)和盐水洗涤，然后在减压下浓缩，从而得到呈无色液体的粗产物(R)-2-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)哌嗪-1，4-二羧酸1-苄酯4-叔丁酯(70g)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.42-7.34(m，5H)，5.17(s，2H)，4.50-4.42(m，1H)，4.25-4.15(m，2H)，4.10-3.93(m，3H)，3.08-3.06(m，2H)，2.94-2.92(m，4H)，1.48(s，9H)。
步骤3：(S)-2-(氰甲基)哌嗪-1，4-二羧酸1-苄酯4-叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001172
向(R)-2-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)哌嗪-1，4-二羧酸1-苄酯4-叔丁酯(70g，163.36mmol，1eq)在DMA(5mL)中的溶液中一次性加入KCN(16.06g，246.68mmol，10.57mL，1.51eq)，并将反应混合物在90℃下搅拌8小时。将反应物倒在EtOAc(2L)上，并将所得混合物用H2O(2×500mL)洗涤。将有机层用盐水(50mL)洗涤，然后在减压下浓缩。将所得黄色液体通过SiO2柱色谱法(含10-20％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈黄色液体的所需产物(S)-2-(氰甲基)哌嗪-1，4-二羧酸1-苄酯4-叔丁酯(28g，77.90mmol，47.69％产率)。LC/MS(ESI)m/z：260.2[M-Boc+H]+。
步骤4：(S)-2-(哌嗪-2-基)乙腈的制备
Figure BDA0003980908660001181
在N2下，向(S)-2-(氰甲基)哌嗪-1，4-二羧酸1-苄酯4-叔丁酯(6.5g，25.07mmol，1eq)在CH3OH(10mL)中的溶液中一次性加入NH4OH(4.84g，41.47mmol，5.32mL，30％纯度，1.65eq)和Pd/C(1g，10％纯度)。将悬浮液在真空下脱气，用H2吹扫数次，然后在H2(50.53mg，25.07mmol，1eq，15psi)下在10℃下搅拌1小时。过滤悬浮液，并在减压下浓缩所得澄清溶液。使得到的黄色液体与HCl(4N，在二噁烷中，40.0mL)反应，然后浓缩从而得到呈黄色液体的粗产物(S)-2-(哌嗪-2-基)乙腈(3g，23.97mmol，95.61％产率)。
步骤5：(2S)-4-(7-溴-2，6-二氯-8-氟-喹唑啉-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001182
向7-溴-2，4，6-三氯-8-氟-喹唑啉(7.50g，22.69mmol，1eq)和二异丙基乙胺(17.59g，136.13mmol，23.71mL，6eq)在CH2Cl2(50mL)中的溶液中滴加在CH2Cl2(10mL)中的(S)-2-(哌嗪-2-基)乙腈(2.84g，22.69mmol，1eq)并保持20分钟，并将反应混合物在0℃下搅拌30分钟。然后经10分钟分批加入(Boc)2O(9.91g，45.39mmol，10.43mL，2eq)，并将所得混合物在0℃下搅拌30分钟。将溶液在减压下浓缩，并将所得黄色固体通过SiO2柱色谱法(含0-25％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈黄色固体的所需产物(2S)-4-(7-溴-2，6-二氯-8-氟-喹唑啉-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(8.1g，15.60mmol，68.75％产率)。LC/MS(ESI)m/z：520.1[M+H]+。
步骤6：(2S)-4-[7-溴-6-氯-2-(2，2-二甲氧基乙氧基)-8-氟-喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001191
向(2S)-4-(7-溴-2，6-二氯-8-氟-喹唑啉-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(6g，11.56mmol，1eq)和2，2-二甲氧基乙醇(2.45g，23.11mmol，2eq)在CH3CN(50mL)中的溶液中一次性加入DABCO(129.63mg，1.16mmol，127.09uL，0.1eq)和Cs2CO3(4.89g，15.02mmol，1.3eq)，并将反应混合物在50℃下搅拌2小时。过滤悬浮液，并在减压下浓缩所得澄清黄色溶液，从而得到黄色固体。通过SiO2柱色谱法(含10-24％EtOAc的石油醚)纯化从而得到呈黄色固体的(2S)-4-[7-溴-6-氯-2-(2，2-二甲氧基乙氧基)-8-氟-喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(6.4g，10.87mmol，94.05％产率)。
步骤7：(2S)-4-[6-氯-2-(2，2-二甲氧基乙氧基)-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001201
将4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)萘-2-醇(2.94g，10.87mmol，286.80uL，1eq)、(2S)-4-[7-溴-6-氯-2-(2，2-二甲氧基乙氧基)-8-氟-喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(6.4g，10.87mmol，1eq)、K3PO4(1.5M，21.74mL，3eq)和XPhos Pd G3(459.99mg，543.43umol，0.05eq)在THF(15mL)中的混合物脱气，然后在N2气氛下在50℃下加热1小时。过滤所得悬浮液，并在减压下浓缩黄色滤液，从而得到黄色固体。通过制备性TLC(SiO2，50％EtOAc/石油醚)纯化从而得到呈黄色固体的(2S)-4-[6-氯-2-(2，2-二甲氧基乙氧基)-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(6.3g，9.66mmol，88.89％产率)。LC/MS(ESI)m/z：652.3[M+H]+。
(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(1R)-1-甲基-2-氧代-乙氧基]喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的示例性合成
步骤1：(R)-2-(苄氧基)丙酸甲酯的制备
Figure BDA0003980908660001202
将(2R)-2-苄氧基丙酸(20.00g，110.99mmol，1.00eq)在甲醇(150mL)中的溶液冷却至0℃，然后滴加二氯化亚硫(39.61g，332.96mmol，24.2mL，3.00eq)。然后将混合物在50℃下搅拌4小时。在减压下浓缩反应混合物得到残余物。将残余物用饱和碳酸氢钠溶液(200mL)稀释，然后用乙酸乙酯(200mL×2)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，从而得到呈黄色油状物的产物(2R)-2-苄氧基丙酸甲酯(21.96g)。LC/MS(ESI)m/z：217.1[M+23]+；1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.40-7.27(m，5H)，4.70(d，J＝11.6Hz，1H)，4.46(d，J＝11.6Hz，1H)，4.08(q，J＝6.8Hz，1H)，3.77(s，3H)，1.45(d，J＝6.8Hz，3H)。
步骤2：(R)-2-(苄氧基)丙醛的制备
Figure BDA0003980908660001211
将(2R)-2-苄氧基丙酸甲酯(20.96g，107.92mmol，1.00eq)在二氯甲烷(200mL)中的溶液冷却至-78℃，然后逐滴加入氢化二异丁基铝(1M，110mL，1.00eq)。将混合物在-78℃下搅拌1小时。用盐酸(1M，10mL)淬灭反应混合物，通过硅藻土过滤。将滤液用水(100mL)稀释，然后用二氯甲烷(100mL×2)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥、过滤并在减压下浓缩从而得到残余物。得到呈无色油状物的化合物(2R)-2-苄氧基丙醛(15.70g)。LC/MS(ESI)m/z：181.1[M+17]+；1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ9.68(d，J＝1.6Hz，1H)，7.42-7.33(m，5H)，4.68-4.60(m，2H)，3.95-3.86(m，1H)，1.34(d，J＝6.8Hz，3H)。
步骤3：(R)-(((1，1-二甲氧基丙-2-基)氧基)甲基)苯的制备
Figure BDA0003980908660001212
向(2R)-2-苄氧基丙醛(14.70g，89.52mmol，1eq)在三甲氧基甲烷(71.15g，670.46mmol，73.5mL，7.49eq)中的溶液中加入4-甲基苯磺酸吡啶(450mg，1.79mmol，0.02eq)。将混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物用水(100mL)稀释，然后用乙酸乙酯(100mL×2)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥、过滤并在减压下浓缩从而得到残余物。将残余物用硅胶柱色谱法(石油醚/乙酸乙酯＝25/1至20/1)纯化从而得到所需产品。获得呈无色油状物的化合物[(1R)-2，2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]甲苯(16.70g，79.42mmol，89％产率，100％纯度)。LC/MS(ESI)m/z：233.1[M+23]+；1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.39-7.27(m，5H)，4.68-4.61(m，2H)，4.22(d，J＝5.2Hz，1H)，3.62-3.53(m，1H)，3.44(d，J＝4.0Hz，6H)，1.20(d，J＝6.4Hz，3H)。
步骤4：(R)-1，1-二甲氧基丙-2-醇的制备
Figure BDA0003980908660001221
在氮气下，向[(1R)-2，2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]甲苯(9.00g，42.80mmol，1.00eq)在甲醇(80mL)中的溶液中加入在活性炭上的钯(500mg，5％纯度)和氢氧化钯(500mg，5％纯度)。将悬浮液在真空下脱气并用氢气吹扫数次。将混合物在氢气(15psi)下在60℃下搅拌8小时。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，并在减压下浓缩从而得到残余物。得到呈无色油状物的化合物(2R)-1，1-二甲氧基丙-2-醇(4.1g)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ4.08(d，J＝6.4Hz，1H)，3.81-3.73(m，1H)，3.45(d，J＝4.0Hz，6H)，1.20(d，J＝6.4Hz，3H)。
步骤5：(2S)-4-[7-溴-6-氯-2-[(1R)-2，2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]-8-氟-喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001222
向(2S)-4-(7-溴-2，6-二氯-8-氟-喹唑啉-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(500mg，0.96mmol，1.00eq)和(2R)-1，1-二甲氧基丙-2-醇(231mg，1.93mmol，2.00eq)在CH3CN(5mL)中的溶液中加入1，4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(11mg，0.01mmol，0.10eq)和Cs2CO3(408mg，1.25mmol，1.30eq)，并将反应混合物在45℃下搅拌2小时。在减压下除去溶剂，并将所得残余物通过SiO2柱色谱法(含15-25％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈淡黄色固体的(2S)-4-[7-溴-6-氯-2-[(1R)-2，2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]-8-氟-喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(250mg，0.41mmol，43％产率)。LC/MS(ESI)m/z：604.2[M+H]+。
步骤6：(2S)-4-[6-氯-2-[(1R)-2，2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001231
向(2S)-4-[7-溴-6-氯-2-[(1R)-2，2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]-8-氟-喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(250mg，0.41mmol，1.00eq)和4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)萘-2-醇(129mg，0.48mmol，1.15eq)在THF(3.0mL)中的溶液中加入[2-(2-氨基苯基)苯基]{二环己基-[2-(2，4，6-三异丙基苯基)苯基]膦}钯(1+)甲磺酸盐(35mg，0.04mmol，0.10eq)和K3PO4(1.5M，0.8mL 3.00eq)，并将反应混合物用N2气脱气并在45℃下搅拌9小时。然后加入水(30mL)，并将所得混合物用EtOAc(2×50mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过制备性薄层色谱法(EtOAc∶石油醚＝2∶3)纯化，从而得到呈淡红色固体的(2S)-4-[6-氯-2-[(1R)-2，2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(180mg，0.27mmol，65％产率)。LC/MS(ESI)m/z：666.4[M+H]+。
步骤7：(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(1R)-1-甲基-2-氧代-乙氧基]喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001241
向(2S)-4-[6-氯-2-[(1R)-2，2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(130mg，0.20mmol，1.00eq)在CH2Cl2(0.5mL)的溶液中加入TFA(1.54g，13.51mmol，1.0mL，69.21eq)，并将反应物在25℃下搅拌12小时。在减压下除去溶剂并在真空下干燥。将所得材料溶解在THF(1.5mL)和H2O(1.5mL)的混合物中。然后分批加入NaHCO3(292mg，3.47mmol，20.00eq)，然后加入二碳酸二叔丁酯(57mg，0.26mmol，1.50eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌12小时。然后，将混合物用H2O(20mL)稀释并用EtOAc(2×20mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过制备性薄层色谱法(CH2Cl2∶CH3OH＝30∶1)纯化，从而得到呈黄色固体的(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(1R)-1-甲基-2-氧代-乙氧基]喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(30mg，0.05mmol，28％产率)。LC/MS(ESI)m/z：620.3[M+H]+和720.3[M+Boc+1]+。
4-(6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-2-(((R)-1-氧代丙-2-基)氧基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的示例性合成
步骤5：(R)-4-(7-溴-6-氯-2-((1，1-二甲氧基丙-2-基)氧基)-8-氟喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001251
将4-(7-溴-2，6-二氯-8-氟-喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(300mg，0.62mmol，1eq)、(2R)-1，1-二甲氧基丙-2-醇(150.13mg，1.25mmol，2eq)、碳酸钾(259mg，1.87mmol，3eq)和1，4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(7mg，62.48umol，0.1eq)溶解于微波管中的乙腈(10mL)中。将密封管在微波下在100℃加热2小时。将反应混合物过滤，并在真空下浓缩滤液从而得到残余物。将残余物通过硅胶柱色谱法(含0-15％乙酸乙酯的石油醚)纯化，得到呈黄色固体的4-[7-溴-6-氯-2-[(1R)-2，2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]-8-氟-喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(706mg，1.10mmol，22％产率，87％纯度)。LC/MS(ESI)m/z：565.1[M+1]+。
步骤6：4-(6-氯-2-(((R)-1，1-二甲氧基丙-2-基)氧基)-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001252
向4-[7-溴-6-氯-2-[(1R)-2，2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]-8-氟-喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(608mg，1.08mmol，1eq)、4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)萘-2-醇(379mg，1.40mmol，1.3eq)在四氢呋喃(15mL)中的溶液中加入磷酸钾(1.5M，2.16mL，3eq)和(2-二环己基膦基-2’，4’，6’-三异丙基-1，1’-联苯基)[2-(2’-氨基-1，1’-联苯基)]钯(ii)甲磺酸盐(91mg，0.11mmol，0.1eq)。将反应混合物脱气并充入氮气3次，然后加热至65℃保持16小时。加入乙酸乙酯(30mL)，并用水(30mL)萃取混合物。将有机层经无水硫酸钠干燥，然后在减压下浓缩从而得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法(含0-60％乙酸乙酯的石油醚)纯化，得到粗产物(600mg)。将该粗产物通过半制备型反相HPLC纯化。将收集的级分在真空下浓缩以除去大部分乙腈。用饱和碳酸氢钠水溶液将混合物的pH值调节至8，然后用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，然后在真空下浓缩从而得到呈浅黄色固体的4-[6-氯-2-[(1R)-2，2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(400mg)。LC/MS(ESI)m/z：627.2[M+1]+。
步骤7：(2R)-2-((6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙醛的制备
Figure BDA0003980908660001261
向4-[6-氯-2-[(1R)-2，2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(400mg，0.64mmol，1eq)在二噁烷(20mL)中的溶液中加入盐酸(12M，2.00mL，37.63eq)。将反应混合物在25℃下搅拌1小时。将反应混合物在真空下浓缩，得到呈淡黄色胶状物的(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙醛(330mg，盐酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：481.1[M+1]+。
步骤8：4-(6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-2-(((R)-1-氧代丙-2-基)氧基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001271
将(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙醛(330mg，0.64mmol，1eq，盐酸盐)和二碳酸二叔丁酯(278.41mg，1.28mmol，2eq)在四氢呋喃(20mL)中的混合物冷却至0℃。然后加入饱和硫酸钠水溶液(322mg，3.83mmol，6mL，6eq)。将反应混合物在25℃下搅拌2小时。加入乙酸乙酯(30mL)和水(20mL)，并分离混合物。将有机层经无水硫酸钠干燥，然后在减压下浓缩从而得到残余物。将残余物通过硅胶柱色谱法用二氯甲烷(50mL)、然后用哪个乙酸乙酯(40mL)纯化，得到呈浅黄色固体的4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(1R)-1-甲基-2-氧代-乙氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(380mg)。LC/MS(ESI)m/z：581.2[M+1]+；1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ9.71(dd，J＝1.8，3.4Hz，1H)，7.80(d，J＝1.1Hz，1H)，7.76(d，J＝8.3Hz，1H)，7.44(dt，J＝1.5，7.3Hz，1H)，7.33-7.27(m，2H)，7.27-7.22(m，1H)，7.10(d，J＝2.4Hz，1H)，6.32-5.88(m，1H)，5.30-5.22(m，1H)，3.99-3.77(m，4H)，3.74-3.61(m，4H)，1.59-1.54(m，3H)，1.52(s，9H)。
(2S，4R)-1-((S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐的示例性合成
步骤1：(S)-(1-(4-溴苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001272
向250-mL圆底烧瓶中放入在二氯甲烷(100mL)中的(1S)-1-(4-溴苯基)乙-1-胺(10.0g，49.98mmol，1.00eq)、三乙胺(10.0g，99.01mmol，2.00eq)、二碳酸二叔丁酯(13.0g，59.63mmol，1.20eq)。将所得溶液在室温下搅拌2小时。将所得混合物在真空下浓缩。用乙酸乙酯/石油醚(1∶10)将残余物上样到硅胶柱上。这得到15.0g呈白色固体的N-[(1S)-1-(4-溴苯基)乙基]氨基甲酸叔丁酯。
步骤2：(S)-(1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001281
向用惰性氮气气氛吹扫和维持的250-mL圆底烧瓶中放入N-[(1S)-1-(4-溴苯基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(15.0g，49.97mmol，1.00eq)在N，N-二甲基乙酰胺(100mL)中的溶液、4-甲基-1，3-噻唑(9.9g，99.84mmol，2.00eq)、乙酸钾(9.8g，99.86mmol，2.00eq)、乙酸钯(II)(112.5mg，0.50mmol，0.01eq)。将所得溶液在120℃下搅拌2小时。通过加入水(500mL)将反应混合物淬灭。将所得溶液用乙酸乙酯(200mL×3)萃取并合并有机层，并在真空下浓缩。用乙酸乙酯/石油醚(1∶5)将残余物上样到硅胶柱上。这得到7.5g(47％)呈白色固体的N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1，3-噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯。LC/MS(ESI)m/z：319.13[M+Na]+。
步骤3：(S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙-1-胺盐酸盐的制备
Figure BDA0003980908660001282
向100-mL圆底烧瓶中放入N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1，3-噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(7.5g，23.55mmol，1.00eq)在甲醇(20mL)中的溶液，在室温下鼓入氯化氢(气体)。将所得溶液在室温下搅拌2小时。将所得混合物在真空下浓缩。这得到4.4g(86％)呈白色固体的(1S)-1-[4-(4-甲基-1，3-噻唑-5-基)苯基]乙-1-胺。
步骤4：(2S，4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001291
向100-mL圆底烧瓶中放入在N，N-二甲基甲酰胺(20mL)中的(2S，4R)-1-[(叔丁氧基)羰基]-4-羟基吡咯烷-2-羧酸(4.7g，20.32mmol，1.00eq)、N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(7.8g，60.35mmol，3.00eq)、o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(11.5g，30.26mmol，1.50eq)、(1S)-1-[4-(4-甲基-1，3-噻唑-5-基)苯基]乙-1-胺(4.4g，20.15mmol，1.00eq)。将所得溶液在室温下搅拌12小时。通过加入水(20mL)淬灭反应混合物。将所得溶液用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，并合并有机层并在烘箱中在减压下干燥，在真空下浓缩。用乙酸乙酯/石油醚(1∶1)将残余物上样到硅胶柱上。这得到5.0g(57％)呈黄色固体的(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基-1，3-噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯。LC/MS(ESI)m/z：432.15[M+1]+。
步骤5：(2S，4R)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐的制备
Figure BDA0003980908660001292
向500-mL圆底烧瓶中放入(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基-1，3-噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(5.0g，11.59mmol，1.00eq)在甲醇(200mL)中的溶液，然后在室温下将氯化氢(气体)鼓入到反应混合物中并保持2小时。将所得混合物在真空下浓缩。这得到3.2g(83％)呈红色固体的(2S，4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1，3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺。
步骤6：((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001301
向25-mL圆底烧瓶中放入在N，N-二甲基甲酰胺(30mL)中的(2S)-2-[(叔丁氧基)羰基]氨基-3，3-二甲基丁酸(2.0g，8.65mmol，0.99eq)、N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(3.4g，3.00eq)、o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(5.0g，1.50eq)、(2S，4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1，3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(3.2g，8.70mmol，1.00eq)。将所得溶液在室温下搅拌12小时。将所得溶液用乙酸乙酯(60mL×3)萃取并用水(100mL×2)洗涤。合并有机层并干燥，在真空下浓缩。用乙酸乙酯/石油醚(1∶3)将残余物上样到硅胶柱上。这得到4.0g(84％)呈黄色固体的N-[(2S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基-1，3-噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-基]-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基]氨基甲酸叔丁酯。LC/MS(ESI)m/z：545.30[M+1]+。
步骤7：(2S，4R)-1-((S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐
Figure BDA0003980908660001311
向100-mL圆底烧瓶中放入在甲醇(30mL)中的N-[(2S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基-1，3-噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-基]-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基]氨基甲酸叔丁酯(4.0g，7.34mmol，1.00eq)，然后在室温下将氯化氢(气体)鼓入到反应混合物中并保持2小时。将所得混合物在真空下浓缩。这得到3.5g呈黄色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1，3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐。LC/MS(ESI)m/z：445.05[M+1]+；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.99(s，1H)，8.57-8.55(d，J＝7.8Hz，1H)，8.01(b，3H)，7.46-7.43(d，J＝8.4Hz，2H)，7.39-7.37(d，J＝8.4Hz，2H)，4.98-4.90(m，1H)，4.57-4.51(m，1H)，4.34(b，1H)，3.94-3.92(m，1H)，3.69-3.66(m，1H)，3.53-3.49(m，1H)，2.52(s，3H)，2.10-2.07(m，1H)，1.83-1.81(m，1H)，1.40-1.30(m，3H)，1.03(s，9H)。
(2S，4R)-4-羟基-N-(2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-(3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：2-(3-甲基异噁唑-5-基)乙酸的制备
Figure BDA0003980908660001312
在-78℃、氮气下，向3，5-二甲基异噁唑(15g，154.46mmol，15mL，1eq)在四氢呋喃(150mL)的溶液中滴加正丁基锂(2.5M，77mL，1.25eq)，将混合物在-55℃下搅拌30分钟，然后将二氧化碳鼓入到混合物中并保持30分钟，将混合物在25℃下搅拌1小时。用饱和氯化铵溶液(50mL)将混合物淬灭，用乙酸乙酯(50mL)萃取混合物。将水相用盐酸水溶液(2M)调节至pH＝2，将混合物用乙酸乙酯(50mL，3次)萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，并将滤液浓缩从而得到呈棕色固体的2-(3-甲基异噁唑-5-基)乙酸(10g，70.86mmol，46％产率)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.74(br s，1H)，6.24(s，1H)，3.83(s，2H)，2.20(s，3H)。
步骤2：2-(3-甲基异噁唑-5-基)乙酸甲酯的制备
Figure BDA0003980908660001321
在0℃下，向2-(3-甲基异噁唑-5-基)乙酸(10g，70.86mmol，1eq)在甲醇(100mL)中的溶液中加入亚硫酰氯(12.65g，106.29mmol，7.71mL，1.5eq)，并将混合物在50℃下搅拌4小时。浓缩混合物从而得到粗产物。将该粗品用乙酸乙酯(200mL)稀释并用水(200mL)洗涤，然后用饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)和盐水(50mL)洗涤，将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩滤液，从而得到呈棕色油状物的2-(3-甲基异噁唑-5-基)乙酸甲酯(10g，64.45mmol，91％产率)。1H-NMR(400MHz、CDCl3)δ6.11(s，1H)，3.80(s，2H)，3.76(s，3H)，2.30(s，3H)。
步骤3：3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酸甲酯的制备
Figure BDA0003980908660001322
在0℃下，向2-(3-甲基异噁唑-5-基)乙酸甲酯(10g，64.45mmol，1eq)在四氢呋喃(100mL)中的溶液中加入氢化钠(3.87g，96.68mmol，60％纯度，1.5eq)，然后在0℃下加入2-碘丙烷(13.15g，77.34mmol，7.74mL，1.2eq)，将混合物在25℃下搅拌2小时。加入另外的2-碘丙烷(2.55g，15.00mmol，1.5mL)，并将混合物在25℃下搅拌10小时。将混合物用盐酸水溶液(1M，300mL)淬灭，并将混合物用乙酸乙酯(200mL，3次)萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，并将滤液浓缩从而得到呈棕色油状物的3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酸甲酯(13g)。
步骤4：3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酸的制备
Figure BDA0003980908660001331
向3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酸甲酯(12.7g，64.39mmol，1eq)在甲醇(90mL)和水(60mL)中的溶液中加入氢氧化钠(12.88g，321.96mmol，5eq)，将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物浓缩以除去甲醇，然后将残余物用水(200mL)稀释并用乙酸乙酯(200mL)萃取，将水相用盐酸水溶液(2M)调节至pH＝3，然后将混合物用二氯甲烷(200mL，3次)萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩滤液，从而得到呈棕色油状物的粗品，将该粗品通过快速制备型HPLC纯化，除去乙腈级分，并且用二氯甲烷(300mL×5)萃取残余物，将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，并浓缩滤液从而得到呈白色固体的产物3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酸(7.5g，40.94mmol，63％产率)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ6.26(s，1H)，3.58(d，J＝8.7Hz，1H)，2.33-2.23(m，1H)，2.21(s，3H)，0.95(d，J＝6.7Hz，3H)，0.82(d，J＝6.8Hz，3H)。
步骤5：2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄腈的制备
Figure BDA0003980908660001341
向4-溴-2-羟基-苄腈(15g，75.75mmol，1eq)和4-甲基噻唑(20.28g，204.53mmol，19mL，2.7eq)在N-甲基吡咯烷酮(150mL)中的溶液中加入乙酸钾(22.30g，227.25mmol，3eq)和乙酸钯(1.70g，7.58mmol，0.1eq))，将混合物在氮气下在110℃下搅拌6小时。用水(500mL)淬灭混合物，并用乙酸乙酯(300mL×3)萃取水相。将合并的有机相用盐水(200mL，两次)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩，然后将甲基叔丁基醚(500mL)加入到混合物中，并且用水(100mL)和盐水(100mL，两次)洗涤有机相。将残余物用硅胶柱色谱法(石油醚/乙酸乙酯＝3/1至1/1)纯化。得到呈黄色固体的化合物2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄腈(11g，50.87mmol，67％产率)。
步骤6：2-(氨基甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯酚的制备
Figure BDA0003980908660001342
在0℃下，向2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄腈(11g，50.87mmol，1eq)在四氢呋喃(150mL)中的溶液中加入氢化铝锂(7.72g，203.46mmol，4eq)，将混合物在50℃下搅拌3小时。在0℃下将混合物用水(8mL)淬灭，然后加入15％氢氧化钠水溶液(8mL)，然后加入水(8mL)，加入无水硫酸钠(30g)，将混合物在25℃下搅拌30分钟，过滤并将固体加入到二氯甲烷/甲醇(4/1，50mL)中，将混合物在25℃下搅拌1小时，过滤并将合并的滤液浓缩，从而得到呈棕色固体的2-(氨基甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯酚(7g，31.78mmol，62％产率)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.82(s，1H)，6.90(d，J＝7.5Hz，1H)，6.52(d，J＝1.6Hz，1H)，6.25(dd，J＝1.7，7.5Hz，1H)，3.59(s，2H)，2.41(s，3H)。
步骤7：(2S，4R)-4-羟基-2-((2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001351
向2-(氨基甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯酚(7g，31.78mmol，1eq)和(2S，4R)-1-叔丁氧羰基-4-羟基-吡咯烷-2-羧酸(7.35g，31.78mmol，1eq)在二甲基甲酰胺(70mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(12.32g，95.33mmol，16.60mL，3eq)，然后加入HATU(13.29g，34.95mmol，1.1eq)，将混合物在25℃下搅拌2小时。加入另外的(2S，4R)-1-叔丁氧羰基-4-羟基-吡咯烷-2-羧酸(7.35g，31.78mmol，1eq)和HATU(12.08g，31.78mmol，1eq)，将混合物在25℃下搅拌5小时。将混合物用水(300mL)稀释并用乙酸乙酯(300mL，两次)萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并将滤液浓缩，从而得到呈棕色油状物的粗产物，将该粗产物溶解在四氢呋喃/水(2/1，150mL)中并加入氢氧化锂(3g)，将混合物在25℃下搅拌1小时。将混合物用水(300mL)稀释并用盐酸水溶液(0.5M)调节至pH＝7，将混合物用乙酸乙酯(300mL，两次)萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩滤液从而得到粗产物，将该粗产物通过硅胶色谱法(含2-10％甲醇的二氯甲烷)纯化，从而得到呈黄色油状物的(2S，4R)-4-羟基-2-[[2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基氨基甲酰基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(6.9g，15.92mmol，50％产率)。LC/MS(ESI)m/z：434.1[M+1]+。
步骤8：(2S，4R)-4-羟基-N-(2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660001352
向(2S，4R)-4-羟基-2-[[2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基氨基甲酰基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(6.9g，15.92mmol，1eq)在甲醇(30mL)中的溶液中加入盐酸/二噁烷(4M，30mL，7.54eq)，将混合物在25℃下搅拌20分钟。浓缩混合物从而得到呈黄色固体的产物，将该粗产物用乙酸乙酯和石油醚(1∶1，20mL)研磨，过滤混合物并通过旋转蒸发器干燥固体从而得到呈黄色固体的产物(2S，4R)-4-羟基-N-[[2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺(4.83g，13.06mmol，82％产率，盐酸)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.03(br s，1H)，9.11-8.95(m，2H)，8.66(br s，1H)，7.20(d，J＝7.9Hz，1H)，7.04(d，J＝1.3Hz，1H)，6.90(dd，J＝1.7，7.8Hz，1H)，4.44(br s，1H)，4.40-4.26(m，3H)，3.41-3.27(m，1H)，3.13-3.02(m，1H)，2.46(s，3H)，2.33(br dd，J＝7.5，12.7Hz，1H)，1.96-1.85(m，1H)，1.33-1.24(m，1H)。
步骤9：(2S，4R)-4-羟基-N-(2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-(3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660001361
向(2S，4R)-4-羟基-N-[[2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺(4.83g，13.06mmol，1eq，盐酸盐)在二甲基甲酰胺(60mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(5.06g，39.18mmol，6.82mL，3eq)，然后加入3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-加入基)丁酸(2.39g，13.06mmol，1eq)和HATU(5.46g，14.36mmol，1.1eq)，将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物用水(200mL)稀释并用乙酸乙酯(300mL，两次)萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩滤液从而得到粗产物。将该粗产物经制备型HPLC纯化，除去乙腈级分，并用二氯甲烷(300mL×5)萃取残余物，将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩滤液从而得到呈白色固体的产物(2S，4R)-4-羟基-N-[[2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(4.0g，8.02mmol，61％产率)。1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.85(s，1H)，7.39-7.23(m，1H)，6.98-6.86(m，2H)，6.31-6.06(m，1H)，4.65-4.28(m，4H)，3.94-3.48(m，3H)，2.52-2.45(m，3H)，2.42-2.31(m，1H)，2.26-2.15(m，4H)，2.13-2.03(m，1H)，1.08-1.01(m，3H)，0.92-0.81(m，3H)。
(S)-4-(4-((苄氧基)羰基)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5，8-二氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-7(6H)-羧酸叔丁酯的示例性合成
步骤1：(S)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸苄酯的制备
Figure BDA0003980908660001371
向(2S)-2-(氰甲基)哌嗪-1，4-二羧酸O1-苄酯-O4-叔丁酯(900mg，2.50mmol，1.00eq)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中缓慢加入三氟乙酸(3.08g，27.00mmol，10.79eq)。将溶液在10℃下搅拌2小时。将溶液在减压下浓缩，从而得到呈黄色液体的(2S)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸苄酯(911mg，2.44mmol，97％产率，三氟乙酸盐)。
步骤2：(S)-4-(4-((苄氧基)羰基)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5，8-二氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-7(6H)-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001372
向(2S)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸苄酯(646mg，2.49mmol，1.00eq，三氟乙酸盐)和二异丙基乙胺(1.29g，9.96mmol，4.00eq)在二甲基亚砜(20mL)中的溶液中一次性加入2，4-二氯-5，6-二氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-7(8H)-羧酸叔丁酯(758mg，2.49mmol，1.00eq)。将所得溶液在50℃下搅拌9小时。用乙酸乙酯(200mL)和水(100mL)稀释反应溶液。分离并收集有机层，将其用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，在减压下浓缩从而得到黄色液体。将黄色液体通过柱色谱法(二氧化硅、石油醚/乙酸乙酯＝10/1至1/1)纯化从而得到呈黄色液体的4-[(3S)-4-苄氧基羰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-2-氯-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-7-羧酸叔丁酯(1.10g，2.09mmol，84％产率)。LC/MS(ESI)m/z：527.1[M+1]+；1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.46-7.32(m，5H)，5.26-5.14(m，2H)，4.67(d，J＝17.6Hz，2H)，4.51-4.42(m，1H)，4.21-4.05(m，2H)，3.93-3.75(m，2H)，3.40(d，J＝10.8Hz，2H)，3.12(dt，J＝3.2，12.4Hz，1H)，2.97-2.51(m，3H)，1.61(s，2H)，1.50(s，9H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-3，3-二甲基-2-[[2-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：4-(2-(2-乙氧基-2-氧代乙氧基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001381
向4-(2-羟基乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2g，8.15mmol，1eq)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入二乙酰氧基铑(90mg，0.41mmol，0.05eq)。在0℃下加入2-重氮乙酸乙酯(2.79g，24.46mmol，3eq)，将混合物在25℃下搅拌12小时。将反应混合物在真空下浓缩。将粗产物通过快速硅胶色谱法(石油醚∶乙酸乙酯＝9∶1至3∶1)纯化。得到呈无色油状物的化合物4-[2-(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.7g，5.13mmol，63％产率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ4.22(q，J＝7.1Hz，2H)，4.16(s，2H)，3.83-3.71(m，4H)，3.70-3.63(m，2H)，3.50(tt，J＝3.9，8.2Hz，1H)，3.07(ddd，J＝3.4，9.5，13.3Hz，2H)，1.89-1.79(m，2H)，1.58-1.48(m，2H)，1.46(s，9H)，1.32-1.27(m，3H)。
步骤2：2-(2-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)乙酸的制备
Figure BDA0003980908660001391
向4-[2-(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.6g，4.83mmol，1eq)在甲醇(3mL)和四氢呋喃(3mL)和水(3mL)中的溶液中加入氢氧化锂一水合物(405mg，9.66mmol，2eq)。将混合物在25℃下搅拌1小时。加入10mL水。用1M盐酸调节混合物的pH至3-4，然后用二氯甲烷和甲醇萃取水相(10∶1，30mL×3)。将合并的有机相经无水硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩。得到呈黄色固体的化合物2-[2-[(1-叔丁氧羰基-4-哌啶基)氧基]乙氧基]乙酸(1.2g，3.96mmol，82％产率)。
步骤3：4-(2-(2-(((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001392
向2-[2-[(1-叔丁氧羰基-4-哌啶基)氧基]乙氧基]乙酸(410mg，1.35mmol，1eq)和(2S，4R)-1-[(2S)-2-氨基-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(600mg，1.35mmol，1eq)在N，N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中加入羟基苯并三唑(274mg，2.03mmol，1.50eq)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(389mg，2.03mmol，1.50eq)和N，N-二异丙基乙胺(593mg，4.59mmol，0.8mL，3.40eq)。将混合物在25℃下搅拌12小时。加入水(50mL)，将水相用乙酸乙酯(40mL×3)萃取。将合并的有机相用盐水(20mL)洗涤，用无色硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(二氯甲烷∶甲醇＝1∶0至20∶1)纯化。得到呈黄色油状物的化合物4-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(690mg，0.95mmol，70％产率)。LC/MS(ESI)m/z：730.4[M+1]+。
步骤4：(2S，4R)-1-((S)-3，3-二甲基-2-(2-(2-(哌啶-4-基氧基)乙氧基)乙酰氨基)丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660001401
将4-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(690mg，0.95mmol，1.00eq)在盐酸/二噁烷(4.0M，15mL，63.47eq)的混合物在20℃下搅拌1.0小时。在减压下去除溶剂。将残余物用甲醇(10mL)和乙腈(30mL)稀释，再次除去溶剂并在真空下干燥。将(2S，4R)-1-[(2S)-3，3-二甲基-2-[[2-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(470mg，705.42umol，1eq，盐酸盐)和碳酸钾(975mg，7.05mmol，10.00eq)在二氯甲烷(8mL)和乙腈(16mL)混合物中的悬浮液在25℃下搅拌1.5小时。通过硅藻土垫过滤悬浮液，并用二氯甲烷(15mL)洗涤，将滤液浓缩并在真空下干燥。得到呈浅黄色固体的化合物(2S，4R)-1-[(2S)-3，3-二甲基-2-[[2-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(295mg，0.47mmol，66％产率)。
(2S，4R)-1-((S)-2-(2-(2-((1-((R)-2-(((S)-4-(4-丙烯酰哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺和(2S，4R)-1-((S)-2-(2-(2-((1-((R)-2-(((R)-4-(4-丙烯酰哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：4-(6-氯-8-氟-2-(((R)-1-(4-(2-(2-(((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)哌啶-1-基)丙-2-基)氧基)-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001411
向4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(1R)-1-甲基-2-氧代-乙氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(60mg，0.10mmol，1eq)和(2S，4R)-1-[(2S)-3，3-二甲基-2-[[2-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(78mg，0.12mmol，1.2eq)在甲醇(1mL)和二氯甲烷(2mL)的溶液中加入乙酸(12mg，0.20mmol，2eq)，然后在0℃下加入氰基硼氢化钠(19mg，0.31mmol，3eq)。将混合物在25℃下搅拌3小时。将混合物在真空下浓缩。将混合物通过制备型TLC(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)纯化从而得到产物。得到呈黄色固体的化合物4-[6-氯-8-氟-2-[(1R)-2-[4-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(63mg)。LC/MS(ESI)m/z：1194.2[M+1]+。
步骤2：(2S，4R)-1-((2S)-2-(2-(2-((1-((2R)-2-((6-氯-8-氟-7-(3-羟萘基-1-基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660001421
向4-[6-氯-8-氟-2-[(1R)-2-[4-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(61mg，0.05mmol，1eq)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中加入三氟乙酸(770mg，6.75mmol，0.5mL，132.28eq)。将混合物在25℃下搅拌0.5小时。将混合物在真空下浓缩。得到呈黄色油状物的化合物(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(61mg，0.05mmol，99％产率，三氟乙酸盐)。
步骤3：(2S，4R)-1-((2S)-2-(2-(2-((1-((2R)-2-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660001431
向(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(61mg，0.05mmol，1eq，三氟乙酸盐)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中加入2，6-二甲基吡啶(54mg，0.50mmol，10eq)，然后在-65℃下加入在二氯甲烷(4mL)中的丙-2-烯酰氯(4mg，0.045mmol，0.9eq)。将混合物在-65℃下搅拌10分钟。加入水(10mL)。将水相用二氯甲烷(15mL×3)萃取。将合并的有机相在真空下浓缩。将残余物通过半制备型反相HPLC纯化。然后将收集的级分浓缩以除去大部分乙腈。将溶液冻干。得到呈白色固体的化合物(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(19mg，0.02mmol，31％产率，99％纯度，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：574.8[M/2+1]+；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.13-9.89(m，1H)，8.98(s，1H)，8.41(br d，J＝7.1Hz，1H)，8.26(s，1H)，8.00(s，1H)，7.80(d，J＝9.2Hz，1H)，7.42(br d，J＝7.0Hz，3H)，7.39-7.26(m，4H)，7.21(br d，J＝8.3Hz，2H)，7.06(br d，J＝5.4Hz，1H)，6.83(dd，J＝10.6，16.9Hz，1H)，6.18(br d，J＝16.9Hz，1H)，5.74(br d，J＝10.6Hz，1H)，5.38(br s，1H)，5.12(br s，1H)，4.88(br d，J＝6.1Hz，1H)，4.52(d，J＝9.9Hz，1H)，4.43(t，J＝8.5Hz，1H)，4.27(br s，1H)，3.92(br d，J＝8.4Hz，6H)，3.85(br s，2H)，3.78(br s，2H)，3.54(br d，J＝14.1Hz，6H)，3.46-3.40(m，3H)，2.77(br s，2H)，2.61(br s，1H)，2.45(s，3H)，2.39(br s，1H)，2.15(br s，2H)，2.02(br d，J＝8.6Hz，1H)，1.77(br s，3H)，1.35(br d，J＝6.5Hz，3H)，1.30(br d，J＝6.1Hz，3H)，0.90(br s，9H)。
步骤4：4-[6-氯-8-氟-2-[(1R)-2-[4-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯的阻转异构体的分离
Figure BDA0003980908660001441
通过SFC(含60％异丙醇的0.1％NH4OH)分离4-[6-氯-8-氟-2-[(1R)-2-[4-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(105mg，0.088mmol，1eq)的阻转异构体。
步骤5：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660001451
向4-[6-氯-8-氟-2-[(1R)-2-[4-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(56mg，0.047mmol，1eq)在CH2Cl2(2mL)中的溶液中加入三氟乙酸(383mg，3.36mmol，71.72eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌1小时。将反应混合物在真空下浓缩，得到呈黄色胶状物的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(56mg，0.046mmol，99％产率，TFA盐)。
步骤6：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660001461
在-70℃下，向(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(56mg，0.046mmol，1eq，TFA盐)和2，6-二甲基吡啶(99mg，0.093mmol，20eq)在CH2Cl2(4mL)中的溶液中加入在CH2Cl2(0.34mL)中的丙-2-烯酰氯(3.77mg，0.042mmol，0.9eq)，并将反应混合物在-70℃下搅拌10分钟。将反应物用CH2Cl2(30mL)和水(20mL)稀释。分离有机相，并用CH2Cl2(10mL)进一步萃取水层。将合并的有机萃取物经Na2SO4干燥并浓缩。将所得残余物通过半制备型反相HPLC(含36-56％CH3CN的水(0.1％TFA))纯化，得到呈无色胶状物的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(26.5mg，0.021mmol，45％产率，99％纯度，TFA盐)。LC/MS(ESI)m/z：1148.5[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.12(s，1H)，10.20-9.88(m，1H)，9.18(s，1H)，9.01-8.96(m，1H)，8.82-8.68(m，1H)，8.44-8.35(m，1H)，8.09-8.04(m，1H)，7.87-7.78(m，1H)，7.49-7.38(m，4H)，7.38-7.32(m，3H)，7.31-7.28(m，1H)，7.26-7.16(m，2H)，7.10-7.05(m，1H)，6.89-6.77(m，1H)，6.15(s，1H)，5.80-5.73(m，1H)，5.70-5.58(m，1H)，4.89(br t，J＝7.0Hz，1H)，4.54(dd，J＝7.0，9.5Hz，1H)，4.44-4.39(m，1H)，4.32-4.22(m，2H)，3.96(br d，J＝5.3Hz，3H)，3.91(br s，2H)，3.87(br d，J＝1.0Hz，2H)，3.80(br s，2H)，3.66(br s，1H)，3.63-3.49(m，10H)，3.42-3.34(m，1H)，3.27-2.96(m，2H)，2.45(s，3H)，2.18-1.92(m，3H)，1.91-1.60(m，2H)，1.57-1.41(m，1H)，1.40-1.31(m，6H)，0.92(br d，J＝4.0Hz，9H)。
以相似方式得到下列相反的阻转异构体：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660001471
(TFA盐，无色胶状物)。LC/MS(ESI)m/z：1148.5[M+1]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.06(br s，1H)，9.44-9.19(m，1H)，8.99(s，1H)，8.40(s，1H)，8.07(s，1H)，7.44(br d，J＝8.2Hz，3H)，7.39-7.10(m，6H)，7.08-7.04(m，1H)，6.89-6.77(m，1H)，6.24-6.14(m，1H)，5.80-5.73(m，1H)，5.72-5.56(m，1H)，4.89(br t，J＝6.6Hz，1H)，4.55(br t，J＝9.1Hz，1H)，4.45-4.40(m，2H)，4.29(br s，2H)，4.03-3.94(m，6H)，3.87(br s，2H)，3.80(br s，2H)，3.68(br s，1H)，3.64-3.49(m，8H)，3.43-3.34(m，1H)，3.27-2.97(m，2H)，2.45(d，J＝2.0Hz，3H)，2.20-2.11(m，1H)，2.11-1.87(m，3H)，1.78(br s，2H)，1.49-1.31(m，6H)，0.93(br d，J＝5.5Hz，9H)。
(2S，4R)-1-((S)-3，3-二甲基-2-(2-(哌啶-4-基甲氧基)乙酰氨基)丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：4-[(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001481
在0℃下，向4-(羟甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.00g，9.29mmol，1.00eq)在CH2Cl2(50mL)中的溶液中加入二乙酰氧基铑(1.20g，4.64mmol，0.50eq)和2-重氮乙酸乙酯(12.00g，92.90mmol，10mL，10.00eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌12小时。将溶液在减压下浓缩并在真空下干燥。通过SiO2柱色谱法(含0-20％EtOAc的石油醚)纯化从而得到呈黄色油状物的4-[(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.50g，4.98mmol，54％产率)。LC/MS(ESI)m/z：202.2[M-Boc+1]+。
步骤2：2-[(1-叔丁氧羰基-4-哌啶基)甲氧基]乙酸的制备
Figure BDA0003980908660001482
向4-[(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.50g，4.98mmol，1.00eq)在THF(10mL)、CH3OH(5mL)和H2O(5mL)中的溶液中加入LiOH水合物(700mg，14.93mmol，3.00eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌12小时。用稀盐酸将反应物酸化(pH＝5)，并将所得混合物在减压下浓缩从而得到呈黄色油状物的2-[(1-叔丁氧羰基-4-哌啶基)甲氧基]乙酸(1.00g，3.66mmol，74％产率)。
步骤3：4-[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001491
向2-[(1-叔丁氧羰基-4-哌啶基)甲氧基]乙酸(115mg，0.42mmol，1.00eq)和(2S，4R)-1-[(2S)-2-氨基-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(200mg，0.42mmol，1.00eq，盐酸盐)在CH2Cl2(4mL)中的溶液中加入羟基苯并三唑(85mg，0.62mmol，1.50eq)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(120mg，0.62mmol，1.50eq)和二异丙基乙胺(270mg，2.08mmol，5.00eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌12小时。将溶液在减压下浓缩并在真空下干燥。通过薄层色谱法(EtOAc/CH3OH＝20/1)纯化提供呈黄色油状物的4-[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(210mg，0.30mmol，72％产率)。LC/MS(ESI)m/z：700.4[M+H]+。
步骤4：(2S，4R)-1-[(2S)-3，3-二甲基-2-[[2-(4-哌啶基甲氧基)乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660001501
向4-[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(100mg，0.14mmol，1.00eq)在CH2Cl2(2mL)中的溶液中加入HCl(4M，在二噁烷中，2mL)，并将反应混合物在25℃下搅拌0.5小时。将溶液在减压下浓缩并在真空下干燥，从而得到呈黄色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-3，3-二甲基-2-[[2-(4-哌啶基甲氧基)乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(90mg，0.14mmol，99％产率，盐酸盐)。
4-[[5-[1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的示例性合成
步骤1：4-[[5-(1-甲氧基羰基-2-甲基-丙基)异噁唑-3-基]氧甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001502
向4-(羟甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.30g，6.02mmol，1.2eq)和2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(1g，5.02mmol，1eq)在THP(10mL)中的溶液中加入Ph3P(1.58g，6.02mmol，1.2eq)和偶氮二羧酸二异丙酯(1.22g，6.02mmol，1.17mL，1.2eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌12小时。在减压下浓缩反应混合物，并将所得残余物通过快速硅胶色谱法(含0-60％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈白色固体的4-[[5-(1-甲氧基羰基-2-甲基-丙基)异噁唑-3-基]氧甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.8g，4.54mmol，90％产率)。LC/MS(ESI)m/z：297.2[M+H]+；1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ5.88(s，1H)，4.21-4.10(m，2H)，4.07(d，J＝6.4Hz，2H)，3.73(s，3H)，3.49(d，J＝8.7Hz，1H)，2.82-2.62(m，2H)，2.35(qd，J＝7.1，14.2Hz，1H)，1.96(br d，J＝3.4Hz，1H)，1.77(br d，J＝12.8Hz，2H)，1.46(s，9H)，1.29-1.22(m，2H)，1.00(d，J＝6.7Hz，3H)，0.93(d，J＝6.7Hz，3H)。
步骤2：2-[3-[(1-叔丁氧羟基-4-哌啶基)甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸的制备
Figure BDA0003980908660001511
向4-[[5-(1-甲氧基羰基-2-甲基-丙基)异噁唑-3-基]氧基甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.8g，4.54mmol，1eq)在THF(8mL)、CH3OH(5mL)和H2O(3mL)中的溶液中加入LiOH一水合物(544mg，22.70mmol，5eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。通过加入1M盐酸将反应混合物酸化(pH＝3)，并过滤所得沉淀物以得到呈白色固体的粗品2-[3-[(1-叔丁氧羰基-4-哌啶基)甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(1.9g)。
步骤3：4-[[5-[1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001521
在0℃下，向(2S，4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(96mg，0.26mmol，1eq，盐酸盐)和2-[3-[(1-叔丁氧羰基-4-哌啶基)甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(100mg，0.26mmol，1eq)在DMF(2mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(101mg，0.78mmol，137uL，3eq)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N，N-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(149mg，0.39mmol，1.5eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌1小时。将混合物在H2O和EtOAc之间分配。分离有机相，将其用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(SiO2，CH2Cl2∶CH3OH＝10∶1)纯化从而得到呈黄色固体的4-[[5-[1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(130mg，0.18mmol，70％产率，98％纯度)。LC/MS(ESI)m/z：696.3[M+H]+。通过SFC分离该物质从而得到4-[[5-[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯和4-[[5-[(1R)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。
1H NMR：4-[[5-[(1R)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.68(s，1H)，7.48(br d，J＝7.5Hz，1H)，7.39(q，J＝8.3Hz，4H)，5.88(s，1H)，5.07(t，J＝7.2Hz，1H)，4.67-4.60(m，2H)，4.19-4.02(m，4H)，3.80(dd，J＝5.1，10.5Hz，1H)，3.60(dd，J＝3.7，10.4Hz，1H)，3.53-3.48(m，1H)，2.78-2.66(m，2H)，2.58-2.47(m，4H)，2.46-2.35(m，1H)，1.96(ddd，J＝5.0，8.0，12.8Hz，2H)，1.75(br d，J＝12.1Hz，3H)，1.50(d，J＝7.0Hz，3H)，1.46(s，9H)，1.28-1.19(m，2H)，1.05(d，J＝6.6Hz，3H)，0.93(d，J＝6.7Hz，3H)。
1H NMR：4-[[5-[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.70-8.68(m，1H)，7.42-7.39(m，2H)，7.36-7.32(m，3H)，5.86(s，1H)，5.02-4.94(m，1H)，4.78(dd，J＝4.3，8.3Hz，1H)，4.66(quin，J＝5.4Hz，1H)，4.16-4.09(m，1H)，4.08-4.01(m，2H)，3.74-3.68(m，1H)，3.60-3.48(m，2H)，2.78-2.62(m，3H)，2.52-2.41(m，1H)，2.02-1.93(m，2H)，1.75(br d，J＝9.9Hz，6H)，1.46(s，9H)，1.38(d，J＝7.0Hz，3H)，1.30-1.18(m，3H)，1.06(d，J＝6.6Hz，3H)，0.94(d，J＝6.7Hz，3H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-[(5-氯-6-氟-1H-吲唑-4-基)氧基]-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：2，6-二氯-3-氟-吡啶-4-羧酸的制备
Figure BDA0003980908660001531
向冷却至-78℃的2，6-二氯-3-氟吡啶(14.2g，85.55mmol，1eq)在THF(200mL)中的溶液中滴加正丁基锂(2.5M，41.07mL，1.2eq)，并将反应混合物在-78℃下搅拌1小时。分批加入CO2(4.52g，102.66mmol，干冰，1.2eq)，并将反应混合物在-78℃下再搅拌2小时。加入饱和NH4Cl水溶液(30mL)，然后加入1N H2SO4水溶液，直至混合物被中和(pH＝7)。将所得混合物用2-甲氧基-2-甲基丙烷(2×50mL)萃取，并将合并的有机萃取物在真空下浓缩。通过加入1N H2SO4水溶液将水性萃取物酸化(pH＝1)。将所得混合物用EtOAc(2×150mL)萃取，并将合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，并在真空下浓缩从而得到呈黄色固体的2，6-二氯-3-氟-吡啶-4-羧酸(14g，66.67mmol，78％产率)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.85(d，J＝4.4，1H)。
步骤2：2，6-二氯-3-氟-吡啶-4-碳酰氯的制备
Figure BDA0003980908660001541
向2，6-二氯-3-氟-吡啶-4-羧酸(12g，57.15mmol，1eq)在亚硫酰氯(78.72g，661.68mmol，48.00mL，11.58eq)中的溶液中加入DMF(0.02g，0.27mmol，4.79e-3eq)，并将反应混合物在80℃下搅拌3小时。将反应混合物在真空下浓缩，并将得到的残余物溶解在甲苯(50mL)中，并浓缩混合物从而得到呈黄色胶状物的2，6-二氯-3-氟-吡啶-4-碳酰氯(13g，56.91mmol，99％产率)。
步骤3：2，6-二氯-3-氟-N-(甲基硫烷基碳亚氨基)吡啶-4-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660001542
在0℃下，向NaOH(10.24g，256.09mmol，4.5eq)在H2O(200mL)中的溶液中分批加入2-甲基异硫脲(15g，79.69mmol，1.40eq，硫酸盐)，并将得到的混合物搅拌10分钟。然后，在0-5℃下滴加2，6-二氯-3-氟-吡啶-4-碳酰氯(13g，56.91mmol，1eq)在THF(150mL)中的溶液，并将反应混合物在0-5℃下搅拌30分钟。加入EtOAc(150mL)和H2O(200mL)，分离各层，并用EtOAc(2×50mL)进一步萃取水层。将合并的有机萃取物用H2O(2×80mL)洗涤，然后用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO3干燥，并浓缩从而得到呈黄色固体的粗品2，6-二氯-3-氟-N-(甲基硫烷基碳亚氨基)吡啶-4-甲酰胺(16g)。
步骤4：6，8-二氯-2-甲基硫烷基-3H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-酮的制备
Figure BDA0003980908660001551
向2，6-二氯-3-氟-N-(甲基硫烷基碳亚氨基)吡啶-4-甲酰胺(16g，56.71mmol，1eq)在DMF(100mL)中的溶液中加入Cs2CO3(25.87g，79.40mmol，1.4eq)，并将反应混合物在90℃下搅拌5小时。将混合物冷却至25℃，用H2O(200mL)稀释，并通过加入3M乙酸水溶液进行酸化(pH＝6)。通过过滤收集所得沉淀，并用H2O(3×50mL)洗涤滤饼，然后在真空下干燥。将所得粗产物通过SiO2柱色谱法(含0-20％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈黄色固体的6，8-二氯-2-甲基硫烷基-3H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-酮(2.8g，10.68mmol，19％产率)。1H-NMR(400MHz、CDCl3)δ13.21(s，1H)，7.85(s，1H)，1.45(s，9H)，2.61(s，3H)。
步骤5：4，6，8-三氯-2-甲基硫烷基-吡啶并[3，4-d]嘧啶的制备
Figure BDA0003980908660001561
将6，8-二氯-2-甲基硫烷基-3H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-酮(2.5g，9.54mmol，1eq)和POCl3(30.94g，201.77mmol，18.75mL，21.15eq)的混合物在130℃下加热3小时。将混合物冷却至25℃，然后在真空下浓缩。将所得残余物溶解在EtOAc(30mL)中，并将所得有机混合物用水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并在真空下浓缩。将所得残余物通过SiO2柱色谱法(含0-20％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈黄色固体的4，6，8-三氯-2-甲基硫烷基-吡啶并[3，4-d]嘧啶(750mg，2.67mmol，28％产率)。
步骤6：4-(6，8-二氯-2-甲基硫烷基-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001562
向4，6，8-三氯-2-甲基硫烷基-吡啶并[3，4-d]嘧啶(750mg，2.67mmol，1eq)和三乙胺(541mg，5.35mmol，2eq)在CH2Cl2(12mL)中的溶液中加入哌嗪-1-羧酸叔丁酯(448mg，2.41mmol，0.9eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌3小时。将混合物在真空下浓缩，并将所得残余物通过SiO2快速色谱法(含0-10％EtOAc的石油醚)纯化，得到呈黄色胶状物的4-(6，8-二氯-2-甲基硫烷基-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(680mg，1.58mmol，59％产率)。
步骤7：3-溴-5-氟-2-甲基苯胺的制备
Figure BDA0003980908660001571
向在80℃下的1-溴-5-氟-2-甲基-3-硝基苯(15g，64.10mmol，1eq)和NH4Cl(17.14g，320.48mmol，5eq)在H2O(30mL)和乙醇(150mL)中的混合物中分批加入Fe(17.90g，320.48mmol，5eq)，并将反应混合物在80℃下搅拌14小时。过滤混合物，并用EtOAc(3×20mL)萃取滤液。将合并的有机萃取物用盐水(3×20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，并在真空下浓缩。将所得残余物通过SiO2柱色谱法(含0-100％EtOAc的石油醚)纯化从而得到所需产物(4.593g)。通过半制备型反相HPLC(含30-60％CH3CN的水(0.1％TFA))进一步纯化不纯的级分，得到另外的(4.684g)材料。得到呈棕色油状物的化合物3-溴-5-氟-2-甲基苯胺(9.28g，45.34mmol，71％产率，99％纯度)。1H-NMR(400MHz、CDCl3)δ7.75(dd，J＝2.4，10.0Hz，1H)，4.48(s，2H)，2.20(s，3H)。
步骤8：3-溴-4-氯-5-氟-2-甲基苯胺的制备
Figure BDA0003980908660001572
向3-溴-5-氟-2-甲基苯胺(9.28g，45.47mmol，1eq)在异丙醇(50mL)中的溶液中加入1-氯吡咯烷-2，5-二酮(6.68g，50.01mmol，1.1eq)，并将反应混合物在80℃下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩，并将所得残余物通过SiO2快速色谱法(含10-30％EtOAc的石油醚)纯化，随后通过半制备型反相HPLC[含45-75％CH3CN的水(0.05％HCl)]纯化，从而得到呈白色固体的3-溴-4-氯-5-氟-2-甲基苯胺(4.87g，20.36mmol，45％产率，99％纯度)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ6.62(d，J＝11.6Hz，1H)，2.18(m，3H)。
步骤9：4-溴-5-氯-6-氟-1H-吲唑的制备
Figure BDA0003980908660001581
向3-溴-4-氯-5-氟-2-甲基苯胺(4.87g，20.42mmol，1eq)在乙酸(40mL)中的溶液中加入NaNO2(1.80g，26.14mmol，1.28eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌7小时，然后在40℃下搅拌14小时。将混合物用水(200mL)稀释并用EtOAc(3×50mL)萃取。用盐水(3×30mL)洗涤合并的有机萃取物，将其经无水Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物通过SiO2柱色谱法(含10-100％CH2Cl2的石油醚)纯化。将产物用CH2Cl2(100mL)洗涤从而得到纯的4-溴-5-氯-6-氟-1H-吲唑(751mg，3.01mmol，14.74％产率)和另外的粗产物(1.42g)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.68(s，1H)，8.10(s，1H)，7.70(d，J＝9.2Hz，1H)。
步骤10：4-溴-5-氯-6-氟-1-四氢吡喃-2-基-吲唑的制备
Figure BDA0003980908660001582
向4-溴-5-氯-6-氟-1H-吲唑(1.2g，4.81mmol，1eq)在CH2Cl2(50mL)中的溶液中加入对甲苯磺酸(92mg，0.48mmol，0.1eq)和3，4-二氢-2H-吡喃(809mg，9.62mmol，2eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌0.5小时。将混合物用H2O(30mL)稀释并用EtOAc(3×20mL)萃取。用盐水(3×30mL)洗涤合并的有机萃取物，将其经无水Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物通过SiO2柱色谱法(含3-10％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈黄色油状物的4-溴-5-氯-6-氟-1-四氢吡喃-2-基-吲唑(1.26g，3.78mmol，78％产率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.86(s，1H)，7.27(d，J＝9.2Hz，1H)，5.53(dd，J＝2.4，9.2Hz，1H)，3.87-3.85(m，1H)，3.65-3.60(m，1H)，2.36-2.33(m，1H)，2.04-2.00(m，2H)，1.65-1.57(m，3H)。
步骤11：5-氯-6-氟-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-醇的制备
Figure BDA0003980908660001591
向4-溴-5-氯-6-氟-1-四氢吡喃-2-基-吲唑(2.24g，6.71mmol，1eq)在二噁烷(30mL)中的溶液中加入三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(307mg，0.34mmol，0.05eq)、二叔丁基-[2-(2，4，6-三异丙基苯基)苯基]膦(285mg，0.67mmol，0.1eq)，然后加入在H2O(8mL)中的KOH(1.13g，20.14mmol，3eq)，并将反应混合物脱气，并充入N2(3X)，然后在N2气氛下在90℃下搅拌16小时。将所得残余物分配在石油醚(50mL)和水之间。将水层用石油醚(3×30mL)萃取，并弃去合并的有机萃取物。通过加入1N HCl水溶液将水相酸化(pH＝3)，然后用EtOAc(3×30mL)萃取。将合并的有机萃取物用水(50mL)洗涤，然后用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并浓缩至干燥。将所得残余物通过SiO2快速色谱法(含0-20％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈黄色固体的5-氯-6-氟-1-四氢吡喃-2-基-吲唑-4-醇(1.44g，5.31mmol，79％产率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.08(s，1H)，7.07(d，J＝0.8Hz，1H)，6.31(s，1H)，5.60(dd，J＝2.4，9.2Hz，1H)，4.14-4.00(m，1H)，3.74-3.73(m，1H)，2.51-2.48(m，1H)，2.14-2.06(m，2H)，1.77-1.67(m，3H)。
步骤12：4-[6-氯-8-(5-氯-6-氟-1-四氢吡喃-2-基-吲唑-4-基)氧基-2-甲基硫烷基-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001601
向5-氯-6-氟-1-四氢吡喃-2-基-吲唑-4-醇(300mg，1.11mmol，1eq)和4-(6，8-二氯-2-甲基硫烷基-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(501mg，1.16mmol，1.05eq)在干燥DMA(6mL)中的混合物中加入Cs2CO3(541.65mg，1.66mmol，1.5eq)，并将反应混合物在85℃下搅拌5小时。将混合物冷却至25℃，然后在真空下浓缩。将所得残余物溶解在EtOAc(40mL)中，并用水(30mL)洗涤所得有机混合物，经Na2SO4干燥，并在真空下浓缩。将所得残余物通过SiO2柱色谱法(含0-20％EtOAc的石油醚)纯化，得到呈黄色固体的4-[6-氯-8-(5-氯-6-氟-1-四氢吡喃-2-基-吲唑-4-基)氧基-2-甲基硫烷基-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(420mg，0.63mmol，57％产率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.87(s，1H)，7.34(dd，J＝0.8，8.4Hz，1H)，7.32(s，1H)，4.08-4.04(m，1H)，3.84-3.82(m，4H)，3.79-3.76(m，1H)，3.69-3.66(m，4H)，2.60(s，3H)，2.70-2.48(m，1H)，2.17-2.13(m，1H)，1.79-1.71(m，3H)，1.52(s，9H)。
步骤13：4-(6-氯-8-((5-氯-6-氟-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)氧基)-2-(甲磺酰基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001611
向4-[6-氯-8-(5-氯-6-氟-1-四氢吡喃-2-基-吲唑-4-基)氧基-2-甲基硫烷基-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(320mg，0.48mmol，1eq)在CH2Cl2(8mL)中的溶液中加入3-氯苯并过氧酸(196mg，0.96mmol，85％纯度，2eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌16小时。将混合物用CH2Cl2(30mL)稀释，并用水(30mL)洗涤所得有机混合物，经Na2SO4干燥，并在真空下浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(含80％EtOAc的石油醚)纯化，得到呈黄色固体的4-[6-氯-8-(5-氯-6-氟-1-四氢吡喃-2-基-吲唑-4-基)氧基-2-甲磺酰基-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(230mg，0.33b mmol，68％产率)。LC/MS(ESI)m/z：696.1[M+H]+。
步骤13：4-[6-氯-8-(5-氯-6-氟-1-四氢吡喃-2-基-吲唑-4-基)氧基-2-[(1R)-2，2-二甲氧基-1-甲基乙氧基]吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001612
向在0℃下的4-[6-氯-8-(5-氯-6-氟-1-四氢吡喃-2-基-吲唑-4-基)氧基-2-甲磺酰基-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(100mg，0.14mmol，1eq)和(2R)-1，1-二甲氧基丙-2-醇(35mg，0.29mmol，2eq)在THF(3mL)中的溶液中加入LiHMDS(1M，0.22，1.5eq)，并将反应混合物在0-5℃下搅拌30分钟。加入饱和NH4Cl水溶液(15mL)和EtOAc(20mL)，并分离有机层，将其经Na2SO4干燥，并在真空下浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(含33％EtOAc的石油醚)纯化，得到呈黄色固体的4-[6-氯-8-(5-氯-6-氟-1-四氢吡喃-2-基-吲唑-4-基)氧基-2-[(1R)-2，2-二甲氧基-1-甲基乙氧基]吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(70mg，0.095mmol，66％产率)。
步骤14：(R)-2-((6-氯-8-((5-氯-6-氟-1H-吲唑-4-基)氧基)-4-(哌嗪-1-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基)氧基)丙醛的制备
Figure BDA0003980908660001621
向4-[6-氯-8-(5-氯-6-氟-1-四氢吡喃-2-基-吲唑-4-基)氧基-2-[(1R)-2，2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(70mg，0.095mmol，1eq)在二噁烷(3mL)中的溶液中加入HCl水溶液(12M，0.5mL，63.14eq)，并将反应混合物在15℃下搅拌1小时。将混合物在真空下浓缩，得到呈黄色固体的(R)-2-((6-氯-8-((5-氯-6-氟-1H-吲唑-4-基)氧基)-4-(哌嗪-1-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基)氧基)丙醛(61mg，0.095mmol，99％产率，盐酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：505.9[M+H]+。
步骤15：(2R)-2-[6-氯-8-[(5-氯-6-氟-1H-吲唑-4-基)氧基]-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基丙醛的制备
Figure BDA0003980908660001631
向(2R)-2-[6-氯-8-[(5-氯-6-氟-1H-吲唑-4-基)氧基]-4-哌嗪-1-基-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基丙醛(61mg，0.11mmol，1eq，盐酸盐)和NaHCO3(6.48g，3mL)在THF(3mL)中的混合物中加入丙-2-烯酰氯(10mg，0.11mmol，9.16uL，1eq)在THF(0.9mL)中的溶液，并将反应混合物在15℃下搅拌20分钟。加入EtOAc(20mL)和水(20mL)，并分离有机层，将其经Na2SO4干燥，并在真空下浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(含10％CH3OH的CH2Cl2)纯化，从而得到呈黄色固体的(2R)-2-[6-氯-8-[(5-氯-6-氟-1H-吲唑-4-基)氧基]-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基丙醛(37mg，0.066mmol，59％产率)。LC/MS(ESI)m/z：560.1[M+H]+。
步骤16：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-[(5-氯-6-氟-1H-吲唑-4-基)氧基]-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660001641
向(2S，4R)-1-[(2S)-3，3-二甲基-2-[[2-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(50mg，0.075mmol，1.2eq，盐酸盐)在CH3OH(1mL)中的溶液中加入NaOAc(15mg，187.38umol，3eq)，并将所得混合物在20℃下搅拌20分钟。然后，加入(2R)-2-[6-氯-8-[(5-氯-6-氟-1H-吲唑-4-基)氧基]-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基丙醛(35mg，0.062mmol，1eq)在CH2Cl2(1mL)中的溶液，并将所得混合物冷却至0℃。加入NaBH4CN(8mg，0.12mmol，2eq)，并将反应混合物在0-15℃下搅拌48小时。加入水(5mL)，并用CH2Cl2(5×3mL)萃取所得混合物。将合并的有机萃取物经无水Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物通过SiO2制备型TLC(CH2Cl2∶CH3OH＝9∶1)纯化，并冷冻干燥从而得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-[(5-氯-6-氟-1H-吲唑-4-基)氧基]-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(10.3mg，0.008mmol，31％产率，90％纯度)。LC/MS(ESI)m/z：1175.3[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.62-13.53(m，1H)，8.98(s，1H)，8.45-8.37(m，1H)，7.77(s，1H)，7.70-7.57(m，2H)，7.44-7.40(m，2H)，7.35(br d，J＝8.4Hz，2H)，6.86-6.76(m，1H)，6.17(dd，J＝2.3，17.0Hz，1H)，5.77-5.70(m，1H)，5.41-5.20(m，1H)，5.16-5.09(m，1H)，4.94-4.83(m，1H)，4.57-4.49(m，1H)，4.46-4.38(m，1H)，4.31-4.24(m，1H)，3.94(br s，6H)，3.85-3.73(m，4H)，3.62-3.54(m，4H)，3.53-3.47(m，2H)，2.84-2.70(m，2H)，2.45(s，4H)，2.22-2.09(m，3H)，2.07-1.93(m，3H)，1.81-1.71(m，3H)，1.39-1.32(m，5H)，1.30-1.25(m，3H)，0.91(s，9H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[[4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-7-(3-羟基-1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：4-[(3S)-4-苄氧基羰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-2-[(1R)-2，2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-7-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001651
向4-[(3S)-4-苄氧基羰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-2-氯-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-7-羧酸叔丁酯(2.50g，4.74mmol，1.00eq)和(2R)-1，1-二甲氧基丙-2-醇(1.70g，14.23mmol，3.00eq)在二噁烷(15mL)中的溶液中加入Cs2CO3(4.80g，14.23mmol，3.00eq)和[2-(2-氨基苯基)苯基]-甲磺酰氧基[二环己基-[2-(2，6-二异丙氧基苯基)苯基]膦]钯(278mg，0.33mmol，0.07eq)，并将反应混合物在90℃下搅拌6小时。将溶液浓缩，并将所得材料通过SiO2柱色谱法(含10-100％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈黄色固体的4-[(3S)-4-苄氧基羰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-2-[(1R)-2，2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-7-羧酸叔丁酯(1.00g，1.64mmol，35％产率)。LC/MS(ESI)m/z：611.2[M+H]+。
步骤2：(2S)-2-(氰甲基)-4-[2-[(1R)-2，2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸苄酯的制备
Figure BDA0003980908660001661
向4-[(3S)-4-苄氧基羰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-2-[(1R)-2，2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-7-羧酸叔丁酯(1.00g，1.64mmol，1.00eq)在CH2Cl2(10mL)中的溶液中加入TFA(1.50g，13.51mmol，1mL，8.25eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌2小时。通过加入NaHCO3中和混合物(pH＝7)，然后将其用EtOAc(2×100mL)萃取。将合并的有机萃取物在减压下浓缩，从而得到呈黄色固体的(2S)-2-(氰甲基)-4-[2-[(1R)-2，2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸苄酯(800mg，1.57mmol，96％产率)。LC/MS(ESI)m/z：511.5[M+H]+。
步骤3：(2S)-2-(氰甲基)-4-[2-[(1R)-2，2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]-7-[3-(甲氧基甲氧基)-1-萘基]-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸苄酯的制备
Figure BDA0003980908660001662
向(2S)-2-(氰甲基)-4-[2-[(1R)-2，2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸苄酯(800mg，1.57mmol，1.00eq)和1-溴-3-(甲氧基甲氧基)萘(465mg，1.72mmol，1.10eq)在二噁烷(10mL)中的溶液中加入[2-(2-氨基苯基)苯基]-甲磺酰氧基[二环己基-[2-(2，6-二异丙氧基苯基)苯基]膦]钯(90mg，0.11mmol，0.07eq)、Cs2CO3(1.50g，4.70mmol，3.00eq)和Pd(OAc)2(20mg，0.08mmol，0.05eq)，并将反应混合物在N2气氛下在90℃下搅拌6小时。浓缩混合物，并将所得材料通过SiO2柱色谱法(含10-100％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈黄色固体的(2S)-2-(氰甲基)-4-[2-[(1R)-2，2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]-7-[3-(甲氧基甲氧基)-1-萘基]-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸苄酯(480mg，0.69mmol，44％产率)。LC/MS(ESI)m/z：697.2[M+H]+。
步骤4：2-[(2S)-4-[2-[(1R)-2，2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]-7-[3-(甲氧基甲氧基)-1-萘基]-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈的制备
Figure BDA0003980908660001671
向(2S)-2-(氰甲基)-4-[2-[(1R)-2，2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]-7-[3-(甲氧基甲氧基)-1-萘基]-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸苄酯(460mg，0.66mmol，1.00eq)在CH3OH(15mL)中的溶液中加入Pd/C碳(100mg)和NH4OH(0.3mL，37％纯度)，并将反应混合物在H2气氛下在25℃下搅拌1小时。浓缩溶液以得到呈黄色固体的2-[(2S)-4-[2-[(1R)-2，2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]-7-[3-(甲氧基甲氧基)-1-萘基]-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(360mg，0.64mmol，96％产率)。LC/MS(ESI)m/z：563.4[M+H]+。
步骤5：2-[(2S)-4-[7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(1R)-1-甲基-2-氧代-乙氧基]-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈的制备
Figure BDA0003980908660001681
向2-[(2S)-4-[2-[(1R)-2，2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]-7-[3-(甲氧基甲氧基)-1-萘基]-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(210mg，0.37mmol，1.00eq)在CH2Cl2(3mL)的溶液中加入HCl(4N，在二噁烷中，1mL)，并将反应混合物在25℃下搅拌30分钟。在减压下浓缩溶液，并通过加入NaHCO3进行碱化(pH＝8)。将所得碱性混合物用EtOAc(2×50mL)萃取，并浓缩合并的有机萃取物，从而得到呈黄色固体的2-[(2S)-4-[7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(1R)-1-甲基-2-氧代-乙氧基]-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(170mg，0.36mmol，96％产率)。
步骤6：(2S)-2-(氰甲基)-4-[7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(1R)-1-甲基-2-氧代-乙氧基]-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001682
向2-[(2S)-4-[7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(1R)-1-甲基-2-氧代-乙氧基]-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(170mg，0.36mmol，1.00eq)在THF(3mL)和H2O(1mL)中的溶液中加入二碳酸二叔丁酯(88mg，0.36mmol，1.10eq)和NaHCO3(90mg，1.08mmol，3.00eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌3小时。将溶液浓缩，并将剩余材料通过薄层色谱法(CH2Cl2/CH3OH＝10/1)纯化从而得到呈黄色固体的(2S)-2-(氰甲基)-4-[7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(1R)-1-甲基-2-氧代-乙氧基]-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(90mg，0.16mmol，44％产率)。LC/MS(ESI)m/z：573.3[M+H]+。
步骤7：(2S)-2-(氰甲基)-4-[2-[(1R)-2-[4-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001691
向(2S)-2-(氰甲基)-4-[7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(1R)-1-甲基-2-氧代-乙氧基]-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(45mg，0.08mmol，1.05eq)和(2S，4R)-1-[(2S)-3，3-二甲基-2-[[2-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(50mg，0.07mmol，1.00eq，盐酸盐)在CH2Cl2(1mL)和CH3OH(1mL)中的溶液中加入NaOAc(20mg，0.23mmol，3.00eq)、2-甲基吡啶硼烷(40mg，0.38mmol，5.00eq)和乙酸(15mg，0.23mmol，3.00eq)，并将反应混合物在40℃下搅拌12小时。在减压下浓缩溶液，并将剩余材料通过薄层色谱法(CH2Cl2/CH3OH＝10/1)纯化从而得到呈黄色固体的(2S)-2-(氰甲基)-4-[2-[(1R)-2-[4-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(40mg，0.03mmo1，45％产率)。LC/MS(ESI)m/z：1186.5[M+H]+。
步骤8：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[[4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-7-(3-羟基-1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660001701
向(2S)-2-(氰甲基)-4-[2-[(1R)-2-[4-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(30mg，0.03mmol，1.00eq)在CH2Cl2(0.5mL)中的溶液中加入HCl(4N，在二噁烷中，0.5mL)，并将反应混合物在25℃下搅拌0.5小时。将溶液在减压下浓缩，并将剩余材料溶解在EtOAc和CH3CN中，并在真空下浓缩溶液多次，从而得到呈黄色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[[4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-7-(3-羟基-1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(28mg，0.02mmol，96％产率，两种盐酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：1086.2[M+H]+。
步骤9：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[[4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-7-(3-羟基-1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660001711
向(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[[4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-7-(3-羟基-1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(28mg，0.02mmol，1.00eq，两种盐酸盐)在CH2Cl2(15mL)中的溶液中加入2，6-二甲基吡啶(20mg，0.19mmol，8.00eq)和丙-2-烯酰氯(2mg，0.02mmol，1.00eq)，并将反应混合物在-75℃下搅拌0.5小时。在减压下浓缩溶液，并将剩余材料通过制备型HPLC[含30-60％CH3CN的水(10mM NH4HCO3)]纯化从而得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[[4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-7-(3-羟基-1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(4.0mg，14％产率，97％纯度)。LC/MS(ESI)m/z：1140.4[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.85(s，1H)，8.06(d，J＝8.8Hz，1H)，7.62(d，J＝8.0Hz，1H)，7.44-7.32(m，5H)，7.29-7.19(m，1H)，6.99-6.66(m，3H)，6.29(d，J＝16.8Hz，1H)，5.83(d，J＝11.2Hz，1H)，5.42(d，J＝2.8Hz，1H)，5.18-5.03(m，1H)，5.01-4.95(m，1H)，4.82-4.48(m，4H)，4.47-4.29(m，1H)，4.21-3.97(m，6H)，3.89-3.35(m，9H)，3.12-2.81(m，6H)，2.73(dd，J＝7.6，13.2Hz，1H)，2.52(dd，J＝2.8，13.6Hz，1H)，2.48-2.40(m，3H)，2.39-2.25(m，2H)，2.19(dd，J＝7.6，12.8Hz，1H)，2.03-1.79(m，3H)，1.64-1.53(m，2H)，1.47(d，J＝7.2Hz，3H)，1.33(d，J＝6.0Hz，3H)，1.02(s，9H)。
以下化合物可按照与(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[[4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-7-(3-羟基-1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺相似的方式制备
1.示例性化合物(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[[4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660001731
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1124.4[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.88(s，1H)，8.54(s，1H)，8.28-8.21(m，1H)，7.91-7.84(m，1H)，7.62(d，J＝8.0Hz，1H)，7.54-7.47(m，2H)，7.46-7.35(m，5H)，7.21(d，J＝7.2Hz，1H)，6.81(s，1H)，6.31(d，J＝16.4Hz，1H)，5.85(d，J＝10.0Hz，1H)，5.50(s，1H)，5.19-4.93(m，2H)，4.86-4.77(m，1H)，4.65-4.54(m，2H)，4.48-4.35(m，1H)，4.29-4.01(m，7H)，3.88-3.80(m，1H)，3.79-3.59(m，6H)，3.58-3.36(m，3H)，3.29-2.59(m，12H)，2.51-2.43(m，3H)，2.26-2.17(m，1H)，2.06-1.91(m，3H)，1.74(s，2H)，1.49(d，J＝7.2Hz，3H)，1.39(d，J＝6Hz，3H)，1.05(s，9H)。
2.示例性化合物(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[2-[[4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基]乙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660001741
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1123.6[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.94-8.76(m，1H)，8.52(d，J＝1.6Hz，1H)，7.66(dd，J＝7.6，17.2Hz，2H)，7.50-7.15(m，8H)，6.81(d，J＝2.4Hz，1H)，6.29(d，J＝16.0Hz，1H)，5.83(d，J＝11.2Hz，1H)，5.16-4.94(m，2H)，4.79(d，J＝7.6Hz，1H)，4.65-4.64(m，1H)，4.64-4.47(m，3H)，4.49-4.27(m，1H)，4.26-3.98(m，5H)，3.90-3.41(m，11H)，3.28-2.94(m，9H)，2.90(s，4H)，2.84-2.59(m，3H)，2.46(s，3H)，2.38-2.14(m，1H)，2.07-1.69(m，5H)，1.61-1.39(m，3H)，1.03(s，9H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(2R)-2-[[4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-7-(3-羟基-1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：(2S)-2-(氰甲基)-4-[2-[(1R)-2-[4-[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]甲基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001751
在25℃下，向(2S，4R)-1-[(2S)-3，3-二甲基-2-[[2-(4-哌啶基甲氧基)乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(45mg，0.07mmol，1.01eq，盐酸盐)和(2S)-2-(氰甲基)-4-[7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(1R)-1-甲基-2-氧代-乙氧基]-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(40mg，0.07mmo1，1.00eq)在CH2Cl2(0.7mL)和CH3OH(0.7mL)中的溶液中加入NaOAc(60mg，0.70mmol，10.00eq)和乙酸(催化剂)，并将所得混合物在25℃下搅拌2小时。在0℃下加入2-甲基吡啶硼烷(40mg，0.37mmol，5.35eq)，并将反应混合物在40℃下搅拌8小时。过滤混合物，并在减压下浓缩滤液。将所得残余物通过制备型薄层色谱法(CH2Cl2∶CH3OH＝10∶1)纯化从而得到呈棕色固体的(2S)-2-(氰甲基)-4-[2-[(1R)-2-[4-[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]甲基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(50mg，0.04mmol，61％产率)。LC/MS(ESI)m/z：1156.9[M+H]+。
步骤2：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(2R)-2-[[4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-7-(3-羟基-1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660001761
向(2S)-2-(氰甲基)-4-[2-[(1R)-2-[4-[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]甲基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(50mg，0.04mmol，1.00eq)在CH2Cl2(2mL)中的溶液中加入TFA(13.51mmol，1mL，312.38eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌10分钟。在减压下浓缩混合物，从而得到呈红色油状物的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(2R)-2-[[4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-7-(3-羟基-1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(50mg，0.04mmol，90％产率，2种三氟乙酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：1056.7[M+H]+。
步骤3：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(2R)-2-[[4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-7-(3-羟基-1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660001771
在-78℃下，向(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(2R)-2-[[4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-7-(3-羟基-1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(50mg，0.04mmol，1.00eq，2种三氟乙酸盐)在CH2Cl2(4mL)中的溶液中加入2，6-二甲基吡啶(0.40mmol，10.00eq)和丙-2-烯酰氯(4mg，0.04mmol，1.00eq)，并将反应混合物在-78℃下搅拌30分钟。然后在-78℃下加水，并将所得混合物在减压下浓缩。将所得残余物通过半制备型反相HPLC(含35-65％CH3CN的水(0.01MNH4HCO3))纯化，从而得到冻干后呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(2R)-2-[[4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-7-(3-羟基-1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(7.5mg，0.006mmol，16％产率，96％纯度)。LC/MS(ESI)m/z：1110.6[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.86(s，1H)，8.06(d，J＝8.4Hz，1H)，7.61(d，J＝8.0Hz，1H)，7.46-7.31(m，5H)，7.29-7.20(m，1H)，6.94-6.71(m，3H)，6.29(d，J＝16.4Hz，1H)，5.83(d，J＝10.0Hz，1H)，5.44(s，1H)，5.16-4.93(m，2H)，4.72-4.32(m，5H)，4.25-4.02(m，5H)，4.01-3.90(m，2H)，3.86-3.79(m，1H)，3.77-3.69(m，1H)，3.63(s，1H)，3.38(d，J＝6.0Hz，3H)，3.13-2.85(m，6H)，2.75(dd，J＝8.4，13.6Hz，1H)，2.59-2.50(m，1H)，2.46(s，3H)，2.25-2.09(m，3H)，1.96(dd，J＝4.0，9.2Hz，1H)，1.81-1.59(m，3H)，1.58-1.43(m，3H)，1.41-1.10(m，6H)，1.02(s，9H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(2R)-2-[[4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-7-(3-羟基-1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
Figure BDA0003980908660001781
向(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(2R)-2-[[4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-7-(3-羟基-1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(100mg，0.09mmol，1.00eq，盐酸盐)和2-氟丙-2-烯酸(8mg，0.09mmol，1.00eq)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(55mg，0.14mmol，1.50eq)和二异丙基乙胺(25mg，0.18mmol，2.00eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。在减压下浓缩溶液，并将剩余材料通过制备型HPLC(含25-55％CH3CN的水(0.225％甲酸))纯化，从而得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(2R)-2-[[4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-7-(3-羟基-1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(5.6mg，5％产率，99％纯度)。LC/MS(ESI)m/z：1129.6[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.79-8.74(m，1H)，7.97(d，J＝9.2Hz，1H)，7.52(d，J＝7.6Hz，1H)，7.36-7.22(m，7H)，7.16(s，1H)，6.77(d，J＝1.6Hz，1H)，6.69(d，J＝2.4Hz，1H)，5.42-5.27(m，1H)，5.26-5.05(m，2H)，4.92-4.88(m，1H)，4.57(s，1H)，4.46(s，2H)，4.38-4.22(m，1H)，4.16-4.00(m，5H)，3.93-3.79(m，3H)，3.77-3.38(m，4H)，3.30(d，J＝6.4Hz，4H)，3.09-3.01(m，4H)，3.00-2.89(m，2H)，2.67-2.51(m，1H)，2.36(s，3H)，2.32-2.00(m，4H)，1.84(dd，J＝4.0，12.8Hz，1H)，1.76-1.64(m，3H)，1.37(d，J＝7.2Hz，3H)，1.26(d，J＝6.4Hz，5H)，0.93-0.91(m，9H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[3-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：2-(4-哌啶氧基)乙酸乙酯的制备
Figure BDA0003980908660001791
将4-(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.7g，9.40mmol，1eq)和HCl(4M，在二噁烷中，15.00mL，6.39eq)在CH2Cl2(30mL)中的溶液在20℃下搅拌2小时。将反应物在减压下浓缩，从而得到呈灰白色固体的2-(4-哌啶氧基)乙酸乙酯(2.1g，9.39mmol，99.9％产率，盐酸)。
步骤2：2-[[1-(3-苄氧基丙基)-4-哌啶基]氧基]乙酸乙酯的制备
Figure BDA0003980908660001792
向4-甲基苯磺酸3-苄氧基丙基酯(1.19g，3.70mmol，1.2eq)和2-(4-哌啶氧基)乙酸乙酯(690mg，3.08mmol，1eq，盐酸)在DMF(3mL)中的溶液中加入K2CO3(853mg，6.17mmol，2eq)，并将反应混合物在50℃下搅拌12小时。然后加入水(30mL)，并用EtOAc(2×20mL)萃取所得混合物。将合并的有机萃取物用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物通过SiO2制备型TLC(CH2Cl2∶CH3OH＝10∶1)纯化从而得到呈无色油状物的2-[[1-(3-苄氧基丙基)-4-哌啶基]氧基]乙酸乙酯(570mg，1.70mmol，55.09％产率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.27(s，5H)，4.44(s，2H)，4.22-4.12(m，2H)，4.06-3.98(m，2H)，3.51-3.28(m，3H)，2.77-2.66(m，2H)，2.43-2.29(m，2H)，2.07(t，J＝9.7Hz，2H)，1.93-1.82(m，2H)，1.80-1.68(m，2H)，1.61(dtd，J＝3.6，9.3，12.8Hz，2H)，1.23(t，J＝7.1Hz，3H)。
步骤3：2-[[1-(3-羟丙基)-4-哌啶基]氧基]乙酸甲酯的制备
Figure BDA0003980908660001801
在N2气氛下，向2-[[1-(3-苄氧基丙基)-4-哌啶基]氧基]乙酸乙酯(570mg，1.70mmol，1eq)在CH3OH(10mL)中的溶液中加入Pd/C(50mg，5％)，并将所得悬浮液在真空下脱气并用H2吹扫数次。然后将所得混合物在H2(50psi)下在50℃下搅拌12小时。过滤反应物，并在减压下浓缩滤液，从而得到呈无色油状物的粗制2-[[1-(3-羟丙基)-4-哌啶基]氧基]乙酸甲酯(400mg)。
步骤4：4-[7-溴-6-氯-8-氟-2-[3-[4-(2-甲氧基-2-氧代-乙氧基)-1-哌啶基]丙氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001802
将2-[[1-(3-羟丙基)-4-哌啶基]氧基]乙酸甲酯(217mg，0.94mmol，1.5eq)、4-(7-溴-2，6-二氯-8-氟-喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(300mg，0.62mmol，1eq)、Cs2CO3(407mg，1.25mmol，2eq)和1，4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(21mg，0.19mmol，0.02mL，0.3eq)在CH3CN(20mL)中的混合物在50℃下搅拌2小时。过滤混合物，并在减压下浓缩滤液。将所得残余物通过半制备型反相HPLC(含30-60％CH3CN的水(0.225％甲酸))纯化，从而得到呈无色油状物的4-[7-溴-6-氯-8-氟-2-[3-[4-(2-甲氧基-2-氧代-乙氧基)-1-哌啶基]丙氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸丁酯(100mg，0.15mmol，23.7％产率)。LC/MS(ESI)m/z：676.2[M+H]+。
步骤5：4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[3-[4-(2-甲氧基-2-氧代-乙氧基)-1-哌啶基]丙氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001811
向4-[7-溴-6-氯-8-氟-2-[3-[4-(2-甲氧基-2-氧代-乙氧基)-1-哌啶基]丙氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(100mg，0.15mmol，1eq)和4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)萘-2-醇(40mg，0.15mmol，1eq)在THF(20mL)中的溶液中加入K3PO4(1.5M，0.3mL，3eq)和甲磺酸(2-二环己基膦基-2，4，6-三-异丙基-1，1-联苯基)(2-氨基-1，1-联苯-2-基)钯(II)(12.54mg，0.02mmol，0.1eq)，并将反应混合物在N2气氛下在50℃下搅拌12小时。然后加入水(30mL)，并用EtOAc(2×20mL)萃取所得混合物。将合并的有机萃取物用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物通过SiO2制备型TLC(CH2Cl2∶CH3OH＝10∶1)纯化，从而得到呈黄色油状物的4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[3-[4-(2-甲氧基-2-氧代-乙氧基)-1-哌啶基]丙氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(55mg，0.07mmol，45.8％产率，91％纯度)。LC/MS(ESI)m/z：738.3[M+H]+。
步骤6：2-[[1-[3-[4-(4-叔丁氧羰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙酸的制备
Figure BDA0003980908660001821
将4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[3-[4-(2-甲氧基-2-氧代-乙氧基)-1-哌啶基]丙氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(55mg，0.07mmol，1eq)和LiOH(9mg，0.22mmol，3eq)在水(0.5mL)、THF(0.5mL)和CH3OH(0.5mL)中的溶液在20℃下搅拌0.5小时。在减压下浓缩混合物，从而得到呈无色油状物的粗制2-[[1-[3-[4-(4-叔丁氧羰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙酸(53mg，0.07mmol，98.2％产率)。
步骤8：4-[6-氯-8-氟-2-[3-[4-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]-1-哌啶基]丙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001831
向(2S，4R)-1-[(2S)-2-氨基-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(35mg，0.07mmol，1eq，盐酸)和2-[[1-[3-[4-(4-叔丁氧羰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙酸(53mg，0.07mmol，1eq)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(56mg，0.15mmol，2eq)和二异丙基乙胺(28mg，0.22mmol，0.04mL，3eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌0.5小时。然后加入水(30mL)，并用EtOAc(2×20mL)萃取所得混合物。将合并的有机萃取物用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物通过SiO2制备型TLC(CH2Cl2∶CH3OH＝9∶1)得到呈无色油状物的4-[6-氯-8-氟-2-[3-[4-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]-1-哌啶基]丙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(47mg，0.04mmol，55.8％产率)。LC/MS(ESI)m/z：1150.6[M+H]+。
步骤9：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[3-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660001841
向4-[6-氯-8-氟-2-[3-[4-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]-1-哌啶基]丙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(47mg，0.04mmol，1eq)在CH2Cl2(7mL)中的溶液中加入TFA，并将反应混合物在20℃下搅拌0.5小时。在减压下浓缩混合物，从而得到呈无色油状物的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[3-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(47mg，0.04mmo1，99％产量，TFA盐)。LC/MS(ESI)m/z：1050.4[M+H]+。
步骤10：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[3-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660001842
在-78℃下，向(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[3-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(47mg，0.04mmol，1eq，三氟乙酸)和2，6-二甲基吡啶(130mg，1.21mmol，0.14mL，30eq)在CH2Cl2(3mL)中的溶液中滴加丙-2-烯酰氯(3.29mg，0.04mmol，0.003mL，0.9eq)在CH2Cl2(1mL)中的溶液，并将反应混合物在-78℃下搅拌30分钟。然后加入水(30mL)，并用CH2Cl2(2×20mL)萃取所得混合物。将合并的有机萃取物用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物通过半制备型反相HPLC(含20-50％CH3CN的水(0.225％甲酸))纯化，从而得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[3-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(7.47mg，0.006mmol，15％产率，94％纯度，甲酸)。LC/MS(ESI)m/z：1150.3[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ(s，1H)，8.45(d，J＝7.7Hz，1H)，8.37(s，1H)，8.01(s，1H)，7.80(d，J＝8.3Hz，1H)，7.49-7.40(m，3H)，7.39-7.26(m，4H)，7.25-7.18(m，2H)，7.07(d，J＝2.2Hz，1H)，6.83(dd，J＝10.3，16.7Hz，1H)，6.18(dd，J＝2.4，16.8Hz，1H)，5.79-5.69(m，1H)，4.88(t，J＝7.2Hz，1H)，4.52(d，J＝9.7Hz，1H)，4.48-4.32(m，3H)，4.27(s，1H)，4.02-3.46(m，12H)，2.75-2.68(m，1H)，2.53-2.52(m，2H)，2.45(s，3H)，2.44-2.39(m，3H)，2.33(s，1H)，2.13-2.02(m，3H)，1.93-1.74(m，5H)，1.52-1.43(m，2H)，1.36(d，J＝7.1Hz，3H)，0.92(s，9H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(1R，2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基环戊基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺和(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(1S，2S)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基环戊基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：4-((2-(叔丁氧基)-2-氧代乙氧基)甲基)哌啶-1-羧酸苄酯的制备
Figure BDA0003980908660001861
向4-(羟甲基)哌啶-1-羧酸苄酯(10g，40.1mmol，1eq)在THF(50mL)中的混合物中加入NaH(3.2g，80.2mmol，60％，2eq)，接着缓慢地加入2-溴乙酸叔丁酯(15.7g，80.2mmol，2eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌12小时。通过加入水(10mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(3×50mL)萃取所得混合物。将合并的有机萃取物用盐水(3×50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，并在真空下浓缩。将所得残余物通过硅胶色谱法(含10-20％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈无色油状物的4-[(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]哌啶-1-羧酸苄酯(3.6g，9.91mmol，25％产率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.42-7.30(m，4H)，5.14(s，2H)，4.19(d，J＝18.2Hz，2H)，3.96(s，2H)，3.38(d，J＝6.4Hz，2H)，2.81(s，2H)，1.79(d，J＝13.2Hz，3H)，1.53-1.47(m，9H)，1.26-1.13(m，2H)。
步骤2：2-(哌啶-4-基甲氧基)乙酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001862
在N2气氛下，向4-[(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]哌啶-1-羧酸苄酯(3.1g，8.53mmol，1eq)和NH4OH(107mg，0.85mmol，28％纯度，0.1eq)在CH3OH(30mL)中的溶液中加入Pd/C(300mg，10％)，并将所得悬浮液在真空下脱气并用H2吹扫数次。然后将反应混合物在H2(15psi)下在25℃下搅拌16小时。将混合物过滤并在真空下浓缩滤液。将所得残余物通过硅胶色谱法(含5-10％CH3OH的CH2Cl2)纯化，从而得到呈无色油状物的2-(4-哌啶基甲氧基)乙酸叔丁酯(1.8g，7.85mmol，92％产率)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ3.93(s，2H)，3.48-3.34(m，3H)，3.26(d，J＝6.0Hz，2H)，2.94(d，J＝12.0Hz，2H)，1.60(d，J＝12.0Hz，3H)，1.45-1.40(m，9H)，1.18-0.95(m，2H)。
步骤3：2-((1-((1S，2S)-2-羟基环戊基)哌啶-4-基)甲氧基)乙酸叔丁酯和2-((1-((1R，2R)-2-羟基环戊基)哌啶-4-基)甲氧基)乙酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001871
向2-(4-哌啶基甲氧基)乙酸叔丁酯(1.8g，7.85mmol，1eq)在乙醇(20mL)中的溶液中加入6-氧杂双环[3.1.0]己烷(1.3g，15.7mmol，2eq)，并将反应混合物在80℃下搅拌3小时。将混合物在真空下浓缩，并将所得残余物通过硅胶色谱法(含10％CH3OH的CH2Cl2)纯化，从而得到呈黄色油状物的2-[[1-(2-羟基环戊基)-4-哌啶基]甲氧基]乙酸叔丁基酯(1.8g，5.74mmol，73％产率)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ4.50(s，1H)，3.98-3.83(m，3H)，3.33-3.24(m，3H)，3.14-3.04(m，1H)，2.92-2.80(m，1H)，2.43-2.34(m，1H)，2.07-1.85(m，2H)，1.83-1.70(m，2H)，1.67-1.51(m，4H)，1.43(s，9H)，1.41-1.38(米，2H)，1.22-1.08(米，2H)。
步骤4：4-(7-溴-2-(((1R，2R)-2-(4-((2-(叔丁氧基)-2-氧代乙氧基)甲基)哌啶-1-基)环戊基)氧基)-6-氯-8-氟喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯和4-(7-溴-2-(((1S，2S)-2-(4-((2-(叔丁氧基)-2-氧代乙氧基)甲基)哌啶-1-基)环戊基)氧基)-6-氯-8-氟喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001881
向4-(7-溴-2，6-二氯-8-氟-喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3.5g，7.18mmol，1.5eq)、2-[[1-(2-羟基环戊基)-4-哌啶基]甲氧基]乙酸叔丁酯(1.5g，4.79mmol，1eq)和1，4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(54mg，0.48mmol，0.1eq)在CH3CN(10mL)中的混合物中加入Cs2CO3(3.1g，9.57mmol，2eq)，并将反应混合物在50℃下搅拌16小时。将混合物过滤，并在真空下浓缩滤液。将所得残余物通过制备型TLC(含50％EtOAc的石油醚)纯化，然后通过制备型HPLC(含75-100％CH3CN的水(10mM NH4HCO3))纯化。通过SFC进行另外的纯化得到呈黄色固体的4-[7-溴-2-[(1R，2R)-2-[4-[(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]-1-哌啶基]环戊氧基]-6-氯-8-氟-喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(400mg，0.53mmol，11％产率)和呈黄色固体的4-[7-溴-2-[(1S，2S)-2-[4-[(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]-1-哌啶基]环戊氧基]-6-氯-8-氟-喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(400mg，0.53mmol，11％产率)。
4-[7-溴-2-[(1R，2R)-2-[4-[(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]-1-哌啶基]环戊氧基]-6-氯-8-氟-喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯：SFC RT＝2.021min
4-[7-溴-2-[(1S，2S)-2-[4-[(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]-1-哌啶基]环戊氧基]-6-氯-8-氟-喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯：SFC RT＝2.176min
步骤5：4-[2-[(1R，2R)-2-[4-[(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]-1-哌啶基]环戊氧基]-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001891
在氮气下向4-[7-溴-2-[(1R，2R)-2-[4-[(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]-1-哌啶基]环戊氧基]-6-氯-8-氟-喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(400mg，0.53mmol，1eq)、甲磺酸(2-二环己基膦基-2，4，6-三异丙基-1，1-联苯基)(2-氨基-1，1-联苯基-2-基)钯(II)(22mg，0.03mmol，0.05eq)和4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)萘-2-醇(128mg，0.48mmol，0.9eq)在THF(10mL)中的混合物中加入K3PO4(1.5N，在水中，3eq)，并将反应混合物在50℃下搅拌16小时。加入水(30mL)，并用EtOAc(3×20mL)萃取所得混合物。将合并的有机萃取物用盐水(3×20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(含10％CH3OH的CH2Cl2)纯化，从而得到呈黄色固体的4-[2-[(1R，2R)-2-[4-[(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]-1-哌啶基]环戊氧基]-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(210mg，0.26mmol，48％产率)。LC/MS(ESI)m/z：820.4[M+H]+。
步骤6：2-[[1-[(1R，2R)-2-[4-(4-叔丁氧羰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基环戊基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酸的制备
Figure BDA0003980908660001901
将4-[2-[(1R，2R)-2-[4-[(2--叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]-1-哌啶基]环戊氧基]-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(150mg，0.18mmol，1eq)和LiOH(252mg，6mmol，33eq)在CH3OH(2mL)、H2O(2mL)和THF(2mL)中的混合物在25℃下搅拌1小时。通过加入1N HCl(10mL)将反应物的pH调节至6，并用EtOAc(3×30mL)萃取所得混合物。将合并的有机萃取物用盐水(3×30mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，从而得到呈黄色固体的2-[[1-[(1R，2R)-2-[4-(4-叔丁氧羰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基环戊基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酸(130mg，0.17mmol，93％产率)。LC/MS MS(ESI)m/z：764.4[M+H]+。
步骤7：4-[6-氯-8-氟-2-[(1R，2R)-2-[4-[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]甲基]-1-哌啶基]环戊氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660001911
向2-[[1-[(1R，2R)-2-[4-(4-叔丁氧羰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基环戊基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酸(130mg，0.17mmol，1eq)、(2S，4R)-1-[(2S)-2-氨基-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(98mg，0.20mmol，1.2eq，盐酸盐)、1-羟基苯并三唑(46mg，0.34mmol，2eq)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺盐酸盐(65mg，0.34mmol，2eq)在DMF(10mL)中的混合物中加入二异丙基乙胺(66mg，0.51mmol，3eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌16小时。然后加入水(20mL)，并用EtOAc(3×30mL)萃取所得混合物。将合并的有机萃取物用盐水(3×30mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(含10％CH3OH的CH2Cl2)纯化，从而得到呈黄色固体的4-[6-氯-8-氟-2-[(1R，2R)-2-[4-[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]甲基]-1-哌啶基]环戊氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(30mg，0.03mmol，15％产率)。LC/MS(ESI)m/z：1190.6[M+H]+。
步骤8：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(1R，2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基环戊基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660001921
向在CH2Cl2(5mL)中的4-[6-氯-8-氟-2-[(1R，2R)-2-[4-[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]甲基]-1-哌啶基]环戊氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(30mg，0.03mmol，1eq)中加入三氟乙酸(1.5g，13.5mmol，536eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌0.5小时。将混合物浓缩从而得到呈黄色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(1R，2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基环戊基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(30mg，0.02mmol，99％产率，三氟乙酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：1090.5[M+H]+。
步骤9：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(1R，2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基环戊基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660001931
向在-78℃下的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(1R，2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基环戊基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(30mg，0.02mmol，1eq，三氟乙酸盐)和2，6-二甲基吡啶(27mg，0.25mmol，10eq)在DMF(5mL)中的混合物中加入丙-2-烯酰氯(2mg，0.02mmol，1eq)，并将反应混合物在-78℃下搅拌0.5小时。然后加入水(20mL)，并用EtOAc(3×20mL)萃取所得混合物。将合并的有机萃取物用盐水(3×30mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过制备型HPLC(含28-58％CH3CN的水(0.225％甲酸))纯化，从而得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(1R，2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基环戊基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(12.7mg，0.01mmol，43％产率，97％纯度)。LC/MS(ESI)m/z：572.8[1/2M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.99(s，1H)，8.45(d，J＝7.6Hz，1H)，8.30(s，1H)，8.01(s，1H)，7.81(d，J＝8.4Hz，1H)，7.50-7.13(m，9H)，7.08(d，J＝2.0Hz，1H)，6.85-6.81(m，1H)，6.20-6.16(m，1H)，5.80-5.71(m，1H)，5.36(d，J＝3.6Hz，1H)，4.91-4.84(m，1H)，4.56-4.41(m，2H)，4.32-4.25(m，1H)，4.01-3.76(m，12H)，3.01-2.88(m，3H)，2.45(s，3H)，2.14-1.84(m，6H)，1.80-1.07(m，15H)，0.90(s，9H)。
以下化合物可以按照与(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺相似的方式制备
1.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2S)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660001941
LC/MS(ESI)m/z：1148.4[M]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.01(s，1H)，8.99(s，1H)，8.42-8.40(m，1H)，8.01(s，1H)，7.82-7.75(m，1H)，7.48-7.41(m，3H)，7.38-7.29(m，5H)，7.25-7.17(m，2H)，7.08-7.05(m，1H)，6.84-6.8(m，1H)，6.19-6.10(m，1H)，5.79-5.72(m，1H)，5.44-5.36(m，1H)，5.12-5.09(m，1H)，4.90-4.80(m，1H)，4.53-4.50(m，1H)，4.44-4.31(m，1H)，4.29(s，1H)，3.95-3.91(m，4H)，3.86(s，2H)，3.78(s，2H)，3.63-3.50(m，6H)，3.29-3.15(m，1H)，2.88-2.72(m，2H)，2.66-2.59(m，2H)，2.47-2.44(m，1H)，2.46(s，3H)，1.77-1.63(m，3H)，1.39-1.15(m，10H)，0.91(s，10H)。
2.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660001951
LC/MS(ESI)m/z：1368.7[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.04(br s，1H)，9.30(br s，1H)，8.98(s，1H)，8.79-8.36(m，1H)，8.07(s，1H)，7.81(d，J＝8.3Hz，1H)，7.47-7.41(m，3H)，7.40-7.33(m，3H)，7.30(d，J＝2.1Hz，1H)，7.25-7.16(m，2H)，7.07(dd，J＝2.3，9.2Hz，1H)，6.83(dd，J＝10.4，16.7Hz，1H)，6.19(dd，J＝2.2，16.7Hz，1H)，5.82-5.69(m，1H)，5.63(br s，1H)，4.90(br t，J＝7.1Hz，1H)，4.54(br d，J＝9.5Hz，1H)，4.43(br t，J＝8.1Hz，1H)，4.31-4.22(m，1H)，4.00-3.95(m，6H)，3.91(br s，2H)，3.63-3.55(m，10H)，3.52(br d，J＝3.1Hz，5H)，3.49(br d，J＝2.4Hz，16H)，3.18-2.97(m，3H)，2.45(s，3H)，2.12-2.02(m，3H)，1.91(br s，2H)，1.77(m，J＝4.6，8.6，12.9Hz，2H)，1.46-1.37(m，6H)，0.93(s，9H)。
3.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660001961
LC/MS(ESI)m/z：1457.8[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.07(s，1H)，8.98(s，1H)，8.43(d，J＝7.6Hz，1H)，8.20(s，1H)，8.01(s，1H)，7.81(d，J＝8.4Hz，1H)，7.50-7.41(m，1H)，7.50-7.41(m，1H)，7.50-7.41(m，1H)，7.50-7.33(m，1H)，7.29(d，J＝2.4Hz，1H)，7.25-7.14(m，2H)，7.07(dd，J＝2.4，5.2Hz，1H)，6.84(dd，J＝10.4，16.8Hz，1H)，6.24-6.12(m，1H)，5.80-5.70(m，1H)，5.39(qd，J＝6.0，11.6Hz，1H)，5.13(br s，1H)，4.95-4.86(m，1H)，4.55(d，J＝9.6Hz，1H)，4.45(t，J＝8.0Hz，1H)，4.29(br s，1H)，4.01-3.74(m，10H)，3.65-3.44(m，30H)，3.22(br dd，J＝4.4，9.2Hz，5H)，2.94-2.70(m，3H)，2.65-2.56(m，2H)，2.46(s，3H)，2.42-2.35(m，1H)，2.16-1.99(m，3H)，1.83-1.67(m，3H)，1.48-1.36(m，3H)，1.31(dd，J＝1.6，6.4Hz，3H)，1.27-1.21(m，1H)，0.94(s，9H)。
4.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺。
Figure BDA0003980908660001971
LC/MS(ESI)m/z：773.0[M/2+1]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.07(s，1H)，9.24(s，1H)，8.99(s，1H)，8.43-8.2(m，1H)，8.08(s，1H)，7.71-7.6(m，1H)，7.48-7.42(m，3H)，7.37-7.2(m，3H)，7.30-7.28(m，1H)，7.25-7.17(m，2H)，7.07-7.0(m，1H)，6.85-6.8(m，1H)，6.24-6.16(m，1H)，5.77-5.68(m，1H)，5.65(s，1H)，4.94-4.89(m，1H)，4.55-4.5(m，1H)，4.45-4.32(m，1H)，4.29(s，1H)，4.06-3.95(m，4H)，3.87(s，3H)，3.80(s，3H)，3.50-3.2(m，34H)，3.15-2.9(m，2H)，2.71-2.66(m，3H)，2.57-2.5(s，1H)，2.46(s，8H)，2.36-2.31(m，2H)，2.13-2.01(m，2H)，1.91-1.85(s，2H)，1.81-1.60(m，2H)，1.38-1.2(m，9H)，0.94(s，9H)。
5.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-[(2S)-2-甲基-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660001981
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1162.6[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.91-8.81(s，1H)，8.56-8.48(s，1H)，7.95(s，1H)，7.79-7.67(m，1H)，7.58-7.34(m，5H)，7.28-7.14(m，3H)，7.06-7.00(m，1H)，6.91-6.74(m，1H)，6.37-6.23(d，J＝13.2Hz，1H)，5.86-5.79(d，J＝12.4Hz，1H)，5.68-5.58(m，1H)，4.98-4.96(m，1H)，4.70-4.66(m，1H)，4.62-4.50(m，2H)，4.46-4.14(m，4H)，4.07-3.98(m，2H)，3.86-3.71(m，3H)，3.70-3.48(m，7H)，3.26-3.22(m，1H)，3.13(s，2H)，3.00-2.65(m，3H)，2.46(d，J＝3.2Hz，3H)，2.20(dd，J＝7.6，13.2Hz，1H)，2.04-1.86(m，3H)，1.82-1.64(m，2H)，1.55(d，J＝6.8Hz，1H)，1.49-1.34(m，8H)，1.06-0.88(s，9H)。
6.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-[(3R)-3-甲基-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660001991
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1162.6[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.90-8.82(s，1H)，8.66-8.44(m，1H)，8.02(s，1H)，7.74(d，J＝8.0Hz，1H)，7.45-7.34(m，5H)，7.30-7.14(m，3H)，7.07-6.99(m，1H)，6.79(dd，J＝10.8，16.0Hz，1H)，6.27(d，J＝16.4Hz，1H)，5.80(d，J＝10.8Hz，1H)，5.64(s，1H)，4.97(dd，J＝3.2，6.8Hz，1H)，4.65-4.51(m，4H)，4.43(s，2H)，4.25(d，J＝13.2Hz，1H)，4.08-3.96(m，2H)，3.83(d，J＝11.2Hz，2H)，3.74(dd，J＝3.6，11.2Hz，1H)，3.70-3.40(m，7H)，3.24-2.51(m，6H)，2.46(d，J＝2.8Hz，3H)，2.20(m，1H)，2.06-1.85(m，3H)，1.82-1.27(m，11H)，1.06-0.91(s，9H)。
7.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(2S，5R)-2，5-二甲基-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660001992
(甲酸盐，白色固体)。LCMS(ESI)m/z：1132.4[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.88-8.84(m，1H)，8.52(s，1H)，8.01-7.95(m，1H)，7.78-7.72(m，1H)，7.45-7.35(m，5H)，7.29-7.15(m，3H)，7.11-7.01(m，1H)，6.91-6.73(m，1H)，6.35-6.24(m，1H)，5.86-5.78(m，1H)，4.98(d，J＝2.0Hz，1H)，4.70(d，J＝13.2Hz，4H)，4.43(m，4H)，4.07-3.40(m，9H)，3.35(s，1H)，3.24-3.11(m，3H)，2.62-2.51(m，1H)，2.47(s，3H)，2.40-2.12(m，1H)，2.05-1.73(m，4H)，1.61-1.10(m，12H)，1.06-0.97(m，9H)。
8.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002001
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1116.5[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.93-8.77(m，1H)，8.53(s，1H)，7.94(s，1H)，7.52-7.18(m，5H)，6.88-6.63(m，3H)，6.28(dd，J＝1.6，16.8Hz，1H)，5.81(d，J＝12.0Hz，1H)，5.68-5.55(m，1H)，4.99(dd，J＝3.2，7.2Hz，1H)，4.84-4.76(m，1H)，4.69(s，1H)，4.58-4.56(m，1H)，4.55(d，J＝3.2Hz，1H)，4.44(s，1H)，4.09-4.02(m，2H)，3.99(d，J＝3.6Hz，4H)，3.90(s，4H)，3.86-3.80(m，1H)，3.78-3.43(m，7H)，3.10(s，3H)，3.00-2.63(m，2H)，2.50-2.44(m，3H)，2.21(dd，J＝8.0，12.7Hz，1H)，2.07-1.63(m，5H)，1.60-1.37(m，6H)，1.06-0.97(m，9H)。
9.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(2-氟-6-羟基-苯基)-4-[(3R)-3-甲基-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002011
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1130.5[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.91-8.82(s，1H)，8.53(s，1H)，8.00-7.89(m，1H)，7.47-7.24(m，5H)，6.87-6.65(m，3H)，6.31-6.23(d，J＝16.4Hz，1H)，5.79(d，J＝4.8Hz，1H)，5.68-5.56(m，1H)，4.98(d，J＝7.2Hz，1H)，4.59-4.52(m，4H)，4.47-4.33(m，2H)，4.28-4.18(m，1H)，4.09-3.98(m，2H)，3.87-3.71(m，3H)，3.71-3.42(m，7H)，3.15-2.86(m，3H)，2.81-2.52(m，2H)，2.50-2.45(s，3H)，2.20(m，1H)，2.02-1.85(m，3H)，1.76-1.27(m，12H)，1.08-0.96(s，9H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：4-[6-氯-8-氟-2-[(1R)-2-[4-[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]甲基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002021
向(2S，4R)-1-[(2S)-3，3-二甲基-2-[[2-(4-哌啶基甲氧基)乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(90mg，0.14mmol，1eq，盐酸盐)在CH3OH(2mL)中的溶液中加入NaOAc(23mg，0.28mmol，2eq)，并将所得混合物在25℃下搅拌20分钟。然后加入4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(1R)-1-甲基-2-氧代-乙氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(90mg，0.15mmol，1.10eq)在CH2Cl2(3mL)中的溶液，并将所得混合物冷却至0℃。加入NaBH3CN(18mg，0.28mmol，2eq)，并将反应混合物在0-25℃下搅拌14小时。在25℃下，通过加入水(1mL)淬灭反应混合物。将所得混合物用CH2Cl2(5mL)稀释，并用水(3×5mL)萃取。将有机萃取物用盐水(15mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(含10％CH3OH的CH2Cl2)纯化，从而得到呈黄色固体的4-[6-氯-8-氟-2-[(1R)-2-[4-[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]甲基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(53mg，0.045mmol，32％产率)。LC/MS(ESI)m/z：1164.5[M+H]+。
步骤2：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660002031
向4-[6-氯-8-氟-2-[(1R)-2-[4-[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]甲基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(53mg，0.045mmol，1eq)在CH2Cl2(5mL)中的溶液中加入TFA(770mg，6.75mmol，0.5mL，148.42eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩，得到呈黄色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(53mg，0.045mmol，99％产率，TFA盐)。
步骤3：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660002041
向在-78℃下的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(53mg，0.045mmol，1eq，三氟乙酸盐)和2，6-二甲基吡啶(96mg，0.89mmol，104.74uL，20eq)在CH2Cl2(5mL)中的混合物中加入丙-2-烯酰氯(4mg，0.040mmol，3.30uL，0.9eq)在CH2Cl2(0.5mL)中的溶液，并将反应混合物在-65℃下搅拌10分钟。将反应混合物用水(5mL)稀释并用CH2Cl2(4×5mL)萃取。将合并的有机萃取物经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过半制备型反相HPLC(含21-51％CH3CN的水(0.1％三氟乙酸))纯化。部分浓缩含有所需产物的级分，并通过加入NaHCO3中和所得混合物。然后用CH2Cl2(3×5mL)萃取水性混合物，并将合并的有机萃取物经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，从而得到冻干后呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧丙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(5.8mg，0.0049mmol，11％产率，96％纯度)。
LC/MS(ESI)m/z：1118.6[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.00(s，1H)，8.98(s，1H)，8.43(d，J＝7.6Hz，1H)，8.00(s，1H)，7.80(d，J＝8.3Hz，1H)，7.48-7.38(m，3H)，7.37-7.33(m，2H)，7.30-7.18(m，4H)，7.06(dd，J＝2.4，4.2Hz，1H)，6.83(dd，J＝10.5，16.6Hz，1H)，6.18(dd，J＝2.3，16.7Hz，1H)，5.77-5.72(m，1H)，5.44-5.34(m，1H)，5.12(d，J＝2.9Hz，1H)，4.88(quin，J＝6.9Hz，1H)，4.52(d，J＝9.6Hz，1H)，4.46-4.38(m，1H)，4.30-4.23(m，1H)，3.92(br s，4H)，3.88(s，3H)，3.78(br s，2H)，3.62-3.52(m，2H)，3.48-3.38(m，1H)，3.30(br s，2H)，3.26(br s，1H)，3.00-2.88(m，2H)，2.64-2.59(m，1H)，2.45(s，3H)，2.41-2.37(m，1H)，2.07-1.96(m，3H)，1.75(ddd，J＝4.4，8.7，12.9Hz，1H)，1.56(br s，2H)，1.53-1.42(m，2H)，1.35(dd，J＝2.4，6.9Hz，2H)，1.31(br d，J＝4.9Hz，2H)，1.23(s，1H)，1.16-1.07(m，2H)，0.90(br d，J＝1.6Hz，9H)。
以下化合物可以按照与(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺相似的方式制备
1.得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-8-甲基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002051
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.96-8.80(m，1H)，8.51(s，1H)，8.01(br s，1H)，7.63(br d，J＝7.9Hz，1H)，7.44-7.37(m，4H)，7.33-7.23(m，2H)，7.05(br d，J＝7.2Hz，1H)，6.89-6.78(m，2H)，6.29(dd，J＝1.7，16.8Hz，1H)，5.85-5.79(m，1H)，5.68(s，1H)，5.07-4.97(m，1H)，4.74-4.25(m，2H)，4.08-3.88(m，10H)，3.86-3.71(m，2H)，3.58-3.47(m，1H)，3.45-3.34(m，4H)，3.21-3.05(m，1H)，2.94-2.57(m，2H)，2.50-2.44(m，3H)，2.42-2.13(m，1H)，2.03(s，3H)，1.96-1.78(m，3H)，1.59-1.26(m，10H)，1.03-0.99(m，9H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]氮杂环丁烷-3-基]氧基乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：3-(2-乙氧基-2-氧代乙基氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002061
向在0℃下的3-羟基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(2.00g，11.55mmol，1.00eq)和醋酸铑(255mg，1.15mmol，0.10eq)在CH2Cl2(20mL)中的混合物中滴加在CH2Cl2(10mL)中的2-重氮乙酸乙酯(13.17g，115.47mmol，12mL，10.00eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌2小时。过滤混合物并浓缩滤液。将所得残余物通过硅胶色谱法(含0-50％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈无色油状物的3-(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(800mg，3.09mmol，26％产率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ4.34(m，1H)，4.25-4.22(m，2H)，4.13-4.08(m，2H)，4.05(s，2H)，3.96-3.90(m，2H)，1.46-1.43(s，9H)，1.30(t，J＝7.2Hz，3H)。
步骤2：2-(1-叔丁氧羰基氮杂环丁烷-3-基)氧乙酸的制备
Figure BDA0003980908660002071
向3-(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(800mg，3.09mmol，1.00eq)在CH3OH(5mL)和水(3mL)中的溶液中加入LiOH(194mg，4.63mmol，1.50eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌10分钟。在25℃下通过加入1N HCl水溶液中和混合物。浓缩所得混合物，将其用水(10mL)稀释，然后用EtOAc(3×5mL)萃取。在减压下浓缩合并的有机萃取物，从而得到呈无色油状物的2-(1-叔丁氧羰基氮杂环丁烷-3-基)氧乙酸(260mg，1.12mmol，36％产率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ4.33-4.25(m，1H)，4.08-4.00(m，4H)，3.91-3.79(m，2H)，1.39-1.35(s，9H)。
步骤3：3-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002072
向2-(1-叔丁氧羰基氮杂环丁烷-3-基)氧乙酸(120mg，0.52mmol，1.15eq)和(2S，4R)-1-[(2S)-2-氨基-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(200mg，0.45mmol，1.00eq)在DMF(3mL)中的溶液中加入1-羟基苯并三唑(91mg，0.67mmol，1.50eq)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺盐酸盐(129mg，0.67mmol，1.50eq)和二异丙基乙胺(290mg，2.25mmol，0.4mL，5.00eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌7小时。在减压下浓缩混合物，并将所得残余物通过制备型薄层色谱法(EtOAc∶CH3OH＝15∶1)纯化从而得到呈白色固体的3-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(210mg，0.32mmol，71％产率)。LC/MS(ESI)m/z：658.3[M+H]+。
步骤4：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-(氮杂环丁烷-3-基氧基)乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660002081
向3-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(105mg，0.16mmol，1.00eq)在CH2Cl2(2mL)中的溶液中加入三氟乙酸(770mg，6.75mmol，0.5mL，42.31eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌0.5小时。在减压下浓缩反应混合物，从而得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-(氮杂环丁烷-3-基氧基)乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(105mg，0.16mmol，98％产率，三氟乙酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：558.3[M+H]+。
步骤5：4-[6-氯-8-氟-2-[(1R)-2-[3-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]氮杂环丁烷-1-基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002091
在25℃下，向4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(1R)-1-甲基-2-氧代-乙氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(100mg，0.17mmol，1.10eq)和(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-(氮杂环丁烷-3-基氧基)乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(105mg，0.16mmol，1.00eq，三氟乙酸盐)在CH3OH(0.7mL)和CH2Cl2(0.7mL)中的溶液中加入NaOAc(128mg，1.56mmol，10.00eq)和乙酸(93ug，1.56umol，8.94e-2uL，0.01eq)，并将所得混合物在25℃下搅拌2小时。然后在0℃下，向该混合物中加入2-甲基吡啶硼烷(83mg，0.78mmol，5.00eq)，并将反应混合物在40℃下搅拌10小时。在减压下浓缩该混合物，并将所得残余物通过制备型薄层色谱法(CH2Cl2∶CH3OH＝10∶1)纯化从而得到呈白色固体的4-[6-氯-8-氟-2-[(1R)-2-[3-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]氮杂环丁烷-1-基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(80mg，0.07mmol，45％产率)。LC/MS(ESI)m/z：1122.5[M+H]+。
步骤6：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]氮杂环丁烷-3-基]氧基乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660002101
向4-[6-氯-8-氟-2-[(1R)-2-[3-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]氮杂环丁烷-1-基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(80mg，0.07mmol，1.00eq)在CH2Cl2(2mL)中的溶液中加入三氟乙酸(770mg，6.75mmol，0.5mL，94.77eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。在减压下浓缩反应混合物，从而得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]氮杂环丁烷-3-基]氧基乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(80mg，0.07mmol，98％产率，三氟乙酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：1022.5[M+H]+。
步骤7：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]氮杂环丁烷-3-基]氧基乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660002111
在-78℃下，向(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]氮杂环丁烷-3-基]氧基乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(80mg，0.07mmol，1.00eq，三氟乙酸盐)在CH2Cl2(5mL)中的溶液中加入2，6-二甲基吡啶(75mg，0.70mmol，10.00eq)和丙-2-烯酰氯(6.4mg，0.07mmol，1.00eq)，并将反应混合物在-78℃下搅拌0.5小时。然后加入水，并浓缩所得混合物。将所得残余物通过半制备型反相HPLC(含25-55％乙腈的水(0.225％甲酸))，从而得到冻干后呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]氮杂环丁烷-3-基]氧基乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(8.9mg，0.008mmol，11％产率，100％纯度，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：1076.4[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.91-8.82(s，1H)，8.51(s，1H)，8.02(d，J＝5.2Hz，1H)，7.75(d，J＝8.0Hz，1H)，7.45-7.31(m，5H)，7.29-7.15(m，3H)，7.08-6.99(m，1H)，6.89-6.73(m，1H)，6.28(d，J＝16.8Hz，1H)，5.81(d，J＝10.4Hz，1H)，5.52-5.38(m，1H)，4.99(d，J＝7.2Hz，1H)，4.62-4.49(m，3H)，4.45-4.23(m，2H)，4.07-3.97(m，5H)，3.96-3.86(m，6H)，3.82(d，J＝11.2Hz，1H)，3.75-3.69(m，1H)，3.62-3.45(m，2H)，3.20-2.95(m，2H)，2.50-2.41(m，3H)，2.39-2.14(m，1H)，1.94(m，1H)，1.56-1.44(m，3H)，1.40(d，J＝6.0Hz，3H)，1.00(s，9H)。
以下化合物按照与(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]氮杂环丁烷-3-基]氧基乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式制备
1.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]氮杂环丁烷-3-基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002121
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1090.5[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.92-8.86(m，1H)，8.13-8.04(m，1H)，7.78(d，J＝8.4Hz，1H)，7.47-7.39(m，5H)，7.31-7.20(m，3H)，7.07-7.03(m，1H)，6.89-6.78(m，1H)，6.35-6.27(m，1H)，5.88-5.80(m，1H)，5.55(s，1H)，5.05-4.96(m，1H)，4.64-4.58(m，2H)，4.56(d，J＝7.6Hz，1H)，4.38-4.23(m，1H)，4.18-4.06(m，7H)，3.95(s，4H)，3.85(d，J＝10.4Hz，1H)，3.78-3.72(m，1H)，3.65(d，J＝4.8Hz，2H)，3.56-3.47(m，2H)，3.17-3.07(m，1H)，2.53-2.46(m，3H)，2.27-2.17(m，1H)，2.00-1.90(m，1H)，1.59-1.42(m，7H)，1.03(s，9H)。
2.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002131
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1104.2[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.36-9.87(m，1H)，8.99(s，1H)，8.46(d，J＝7.8Hz，1H)，8.22(s，1H)，8.02(s，1H)，7.82(d，J＝8.1Hz，1H)，7.47-7.41(m，3H)，7.38-7.34(m，2H)，7.32-7.27(m，2H)，7.25-7.20(m，2H)，7.08(dd，J＝2.4，5.6Hz，1H)，6.84(dd，J＝10.4，16.6Hz，1H)，6.19(dd，J＝2.3，16.7Hz，1H)，5.79-5.71(m，1H)，5.48-5.35(m，1H)，5.23-5.05(m，1H)，4.95-4.82(m，1H)，4.51(d，J＝9.6Hz，1H)，4.47-4.37(m，1H)，4.31-4.22(m，1H)，3.99-3.89(m，6H)，3.86(br d，J＝4.6Hz，2H)，3.79(br d，J＝2.5Hz，2H)，3.61-3.53(m，2H)，2.86-2.71(m，2H)，2.67-2.60(m，1H)，2.46(s，3H)，2.45-2.36(m，2H)，2.25-2.12(m，2H)，2.09-2.00(m，1H)，1.82-1.71(m，3H)，1.48-1.40(m，1H)，1.40-1.31(m，7H)，0.90(br d，J＝4.0Hz，9H)。
3.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002141
(灰白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1132.5[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.06-9.90(m，1H)，9.02-8.92(m，1H)，8.48-8.35(m，1H)，8.05-7.96(m，1H)，7.86-7.75(m，1H)，7.42(br d，J＝7.9Hz，2H)，7.35(br d，J＝8.0Hz，1H)，7.33-7.14(m，3H)，7.12-7.02(m，1H)，6.82(br dd，J＝10.8，16.9Hz，1H)，6.18(br d，J＝16.1Hz，1H)，5.74(br d，J＝10.3Hz，1H)，5.46-5.32(m，1H)，5.11(br d，J＝2.4Hz，1H)，4.92-4.83(m，1H)，4.66-4.47(m，1H)，4.43(br t，J＝7.8Hz，1H)，4.33-4.18(m，1H)，3.92(br d，J＝1.4Hz，1H)，4.01-3.67(m，1H)，3.62-3.52(m，1H)，3.46(br d，J＝1.8Hz，2H)，3.25-3.09(m，2H)，3.06-2.83(m，2H)，2.65-2.55(m，1H)，2.47-2.36(m，4H)，2.28-1.87(m，4H)，1.83-1.69(m，1H)，1.67-1.51(m，2H)，1.49-1.39(m，1H)，1.51-1.39(m，1H)，1.38-1.12(m，8H)，1.10-0.97(m，2H)，0.96-0.44(m，9H)。
4.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[3-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基甲基-甲基-氨基]环丁氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002151
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1201.6[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.98(s，1H)，8.51-8.39(m，1H)，8.20(s，1H)，8.25-8.16(m，1H)，8.00(s，1H)，7.81(d，J＝8.4Hz，1H)，7.47-7.40(m，3H)，7.39-7.34(m，2H)，7.34-7.27(m，2H)，7.26-7.18(m，2H)，7.07(d，J＝1.1Hz，1H)，6.84(dd，J＝10.4，16.6Hz，1H)，6.18(dd，J＝2.2，16.8Hz，1H)，5.79-5.72(m，1H)，5.46-5.34(m，1H)，5.31-4.80(m，2H)，4.52(d，J＝9.7Hz，1H)，4.48-4.38(m，1H)，4.31-4.25(m，1H)，3.92(br s，4H)，3.85(br s，2H)，3.81(s，2H)，3.78(br s，2H)，3.76-3.69(m，2H)，3.61-3.53(m，4H)，2.95-2.84(m，2H)，2.66-2.56(m，1H)，2.46(s，3H)，2.42-2.35(m，3H)，2.30-2.23(m，1H)，2.09-1.99(m，2H)，1.96(br d，J＝3.5Hz，4H)，1.93-1.89(m，2H)，1.81-1.73(m，1H)，1.65-1.54(m，4H)，1.37(d，J＝7.0Hz，3H)，1.31(br d，J＝6.0Hz，3H)，0.92(s，9H)。
4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯的示例性合成
步骤1：4-[7-溴-6-氯-2-(2，2-二甲氧基乙氧基)-8-氟-喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002161
向4-(7-溴-2，6-二氯-8-氟-喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.50g，3.12mmol，1.00eq)和2，2-二甲氧基乙醇(663mg，6.25mmol，2.00eq)在CH3CN(15mL)中的溶液中加入Cs2CO3(1.32g，4.06mmol，1.30eq)，并将反应混合物在45℃下搅拌7小时。过滤混合物并浓缩滤液。所得残余物通过硅胶色谱法纯化(含3-7％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈浅黄色固体的4-[7-溴-6-氯-2-(2，2-二甲氧基乙氧基)-8-氟-喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.30g，2.36mmol，75％产率)。LC/MS(ESI)m/z：551.3[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.73-7.70(d，J＝2.0Hz，1H)，4.87-4.81(t，J＝5.2Hz，1H)，4.50(d，J＝5.2Hz，2H)，3.84-3.73(m，4H)，3.68-3.61(m，4H)，3.50-3.45(s，6H)，1.50(s，9H)。
步骤2：4-[6-氯-2-(2，2-二甲氧基乙氧基)-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002162
向4-[7-溴-6-氯-2-(2，2-二甲氧基乙氧基)-8-氟-喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.30g，2.36mmol，1.00eq)和4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)萘-2-醇(640mg，2.37mmol，1.00eq)在THF(12mL)中的溶液中加入K3PO4(1.5M，4.7mL，2.98eq)和甲磺酸(2-二环己基膦基-2，4，6-三异丙基-1，1-联苯基)(2-氨基-1，1-联苯-2-基)钯(ii)(200mg，0.23mmol，0.10eq)，并将反应混合物在45℃下搅拌5小时。过滤混合物并浓缩滤液。将所得残余物通过硅胶色谱法(含7-50％EtOAc的石油醚)纯化从而得到呈浅黄色固体的4-[6-氯-2-(2，2-二甲氧基乙氧基)-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.30g，2.12mmol，89％产率)。LC/MS(ESI)m/z：613.3[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.81-7.76(m，2H)，7.46(m，1H)，7.34-7.28(m，3H)，7.10(d，J＝2.8Hz，1H)，5.45(s，1H)，4.86(t，J＝5.6Hz，1H)，4.51(d，J＝5.2Hz，2H)，3.85(m，4H)，3.69(m，4H)，3.46(d，J＝1.2Hz，6H)，1.52(s，9H)。
步骤3：2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基乙醛的制备
Figure BDA0003980908660002171
向4-[6-氯-2-(2，2-二甲氧基乙氧基)-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.10g，1.79mmol，1.00eq)在二噁烷(8mL)中的溶液中加入HCl水溶液(12N，2mL，13.38eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。在减压下浓缩反应混合物，从而得到呈黄色固体的2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基乙醛(900mg，1.79mmol，100％％产率，盐酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：467.3[M+H]+。
步骤4：4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002181
向2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基乙醛(900mg，1.79mmol，1.00eq，盐酸盐)在THF(10mL)和水(4mL)中的溶液中加入NaHCO3(810mg，9.64mmol，5.38eq)和二碳酸二叔丁酯(841mg，3.86mmol，0.9mL，2.15eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。浓缩反应混合物，并将所得残余物用水(5mL)稀释并用CH2Cl2(3×5mL)萃取。浓缩合并的有机层，并将所得残余物通过硅胶色谱法(含7-50％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈黄色固体的4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(600mg，1.06mmol，59％产率)。LC/MS(ESI)m/z：567.4[M+H]+。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：4-[6-氯-8-氟-2-[2-[4-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]-1-哌啶基]乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002191
在25℃下，向(2S，4R)-1-[(2S)-3，3-二甲基-2-[[2-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(105mg，0.15mmol，1.00eq，盐酸盐)在二氯乙烷(1.5mL)中的溶液中加入NaOAc(123mg，1.49mmol，10.00eq)，并将所得混合物在25℃下搅拌0.5小时。然后在0℃下加入乙酸(0.09mg，0.001mmol，0.01eq)和4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(93mg，0.16umol，1.10eq)，并将混合物在0℃下搅拌0.5小时。然后加入NaBH3CN(18mg，0.30mmol，2.00eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌12小时。浓缩反应混合物，并将所得残余物通过制备型薄层色谱法(CH2Cl2∶CH3OH＝10∶1)纯化从而得到呈白色固体的4-[6-氯-8-氟-2-[2-[4-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]-1-哌啶基]乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(80mg，0.06mmol，45％产率)。LC/MS(ESI)m/z：1180.9[M+H]+。
步骤2：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660002201
向4-[6-氯-8-氟-2-[2-[4-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]-1-哌啶基]乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(80mg，0.06mmol，1.00eq)在CH2Cl2(2mL)中的溶液中加入HCl(4N，在二噁烷中，1.00mL，59.04eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。在减压下浓缩反应混合物，从而得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(78mg，67.61umol，100％产率，盐酸盐)。
步骤3：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660002211
在-78℃下，向(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(78mg，0.06mmol，1.00eq，二盐酸盐)在CH2Cl2(5mL)中的溶液中加入2，6-二甲基吡啶(72mg，0.6mmol，0.1mL，10.00eq)和丙-2-烯酰氯(6mg，0.06mmol，1.00eq)，并将反应混合物在-78℃下搅拌0.5小时。在-78℃下通过加入CH3OH淬灭反应混合物，并浓缩所得混合物。将所得残余物通过半制备型反相HPLC(含25-58％乙腈的水(0.1％甲酸))纯化从而得到冻干后呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(11.7mg，0.01mmol，15％产率，98％纯度)。LC/MS(ESI)m/z：1134.5[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.90-8.79(m，1H)，7.99(s，1H)，7.73(d，J＝7.6Hz，1H)，7.45-7.31(m，5H)，7.26(d，J＝2.0Hz，1H)，7.23-7.12(m，2H)，7.04(d，J＝2.0Hz，1H)，6.78(m，1H)，6.28(d，J＝16.4Hz，1H)，5.80(d，J＝10.4Hz，1H)，5.02-4.95(m，1H)，4.69(s，2H)，4.60-4.52(m，1H)，4.42(s，1H)，4.10-3.44(m，18H)，3.16(s，4H)，3.04-2.72(m，2H)，2.44(s，3H)，2.25-2.14(m，1H)，2.07-1.73(m，5H)，1.60-1.39(m，3H)，1.11-0.94(s，9H)。
以下化合物可以按照与(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式制备
1.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[[1-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002221
(甲酸盐；白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1178.2[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.90-8.80(m，1H)，8.52(d，J＝1.6Hz，1H)，8.04(s，1H)，7.75(d，J＝8.4Hz，1H)，7.48-7.31(m，5H)，7.30-7.12(m，3H)，7.07-7.01(m，1H)，6.82(dd，J＝10.8，16.8Hz，1H)，6.29(dd，J＝1.6，16.8Hz，1H)，5.82(dd，J＝1.6，10.8Hz，1H)，4.99(d，J＝7.2Hz，1H)，4.71(s，2H)，4.58-4.52(m，2H)，4.46-4.29(m，1H)，4.05(d，J＝1.6Hz，6H)，3.96-3.80(m，5H)，3.79-3.41(m，11H)，3.30-3.09(m，4H)，2.90-2.77(m，1H)，2.48-2.42(m，3H)，2.20(dd，J＝7.6，13.6Hz，1H)，2.04-1.67(m，5H)，1.60-1.39(m，3H)，1.07-0.98(m，9H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：4-[6-氯-8-氟-2-[2-[4-[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]甲基]-1-哌啶基]乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002231
向(2S，4R)-1-[(2S)-3，3-二甲基-2-[[2-(4-哌啶基甲氧基)乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(90mg，0.14mmol，1.00eq，盐酸盐)和4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(88mg，0.16mmol，1.10eq)在1，2-二氯乙烷(1.5mL)和CH3OH(1mL)中的溶液中加入乙酸(26mg，0.42mmol，3.00eq)、NaOAc(35mg，0.42mmol，3.00eq)和NaBH3CN(20mg，0.28mmol，2.00eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌12小时。浓缩溶液，并将剩余材料通过薄层色谱法(CH2Cl2/CH3OH＝10/1)纯化从而得到呈黄色油状物的4-[6-氯-8-氟-2-[2-[4-[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]甲基]-1-哌啶基]乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(40mg，0.03mmol，25％产率)。LC/MS(ESI)m/z：1151.2[M+H]+。
步骤2：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660002241
向4-[6-氯-8-氟-2-[2-[4-[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]甲基]-1-哌啶基]乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(40mg，0.03mmol，1.00eq)在CH2Cl2(2mL)中的溶液中加入HCl(4N，在二噁烷中，2mL)，并将反应混合物在25℃下搅拌10分钟。浓缩溶液得到呈黄色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(25mg，0.02mmol，66％产率，盐酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：1050.3[M+H]+。
步骤3：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660002251
在-75℃下，向(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(25mg，0.02mmol，1.00eq，盐酸盐)在CH2Cl2(10mL)中的溶液中加入2，6-二甲基吡啶(25mg，0.23mmol，10.00eq)和丙-2-烯酰氯(2mg，0.02mmol，1.00eq)，并将反应混合物在-75℃下搅拌0.5小时。将溶液浓缩，并将剩余材料通过制备型HPLC(甲酸条件)纯化，从而得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(5.9mg，21％产率，93％纯度，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：1104.5[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.89-8.83(m，1H)，8.52(s，1H)，8.03(s，1H)，7.78-7.70(m，1H)，7.45-7.33(m，5H)，7.29-7.15(m，3H)，7.04(d，J＝2.4Hz，1H)，6.81(dd，J＝10.8，16.8Hz，1H)，6.28(dd，J＝1.6，16.8Hz，1H)，5.85-5.76(m，1H)，4.97(d，J＝7.2Hz，1H)，4.70(d，J＝5.6Hz，2H)，4.58-4.50(m，2H)，4.43(s，1H)，4.08-3.68(m，12H)，3.47-3.32(m，4H)，3.16(s，2H)，2.72-2.49(m，2H)，2.46(s，3H)，2.40-2.16(m，1H)，2.04-1.73(m，4H)，1.62-1.37(m，5H)，1.08-0.95(m，9H)。
可通过SFC分离下列阻转异构体。
1.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002261
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1104.6[M+1]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.88(s，1H)，8.65-8.44(m，1H)，8.05(d，J＝1.6Hz，1H)，7.82-7.67(m，1H)，7.45-7.37(m，5H)，7.31-7.13(m，3H)，7.04(d，J＝2.4Hz，1H)，6.83(dd，J＝10.4，16.8Hz，1H)，6.29(dd，J＝1.6，16.8Hz，1H)，5.82(dd，J＝1.6，10.4Hz，1H)，5.06-4.92(m，3H)，4.81-4.65(m，2H)，4.64-4.49(m，1H)，4.48-4.35(m，1H)，4.05(s，4H)，3.99(s，1H)，3.97-3.90(m，5H)，3.88-3.80(m，1H)，3.79-3.69(m，1H)，3.43(d，J＝5.6Hz，4H)，3.22-3.06(m，2H)，2.48-2.44(m，3H)，2.35-2.09(m，1H)，2.04-1.74(m，4H)，1.47(d，J＝7.2Hz，5H)，1.05-1.01(m，9H)。
2.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002271
(甲酸盐，白色固体)。1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.92-8.81(m，1H)，8.52(s，1H)，8.05(s，1H)，7.75(d，J＝8.4Hz，1H)，7.49-7.32(m，5H)，7.30-7.13(m，3H)，7.03(d，J＝2.0Hz，1H)，6.82(dd，J＝10.4，16.8Hz，1H)，6.29(dd，J＝1.6，16.8Hz，1H)，5.81(dd，J＝1.6，10.4Hz，1H)，5.04-4.92(m，2H)，4.79-4.64(m，4H)，4.62-4.49(m，1H)，4.48-4.30(m，1H)，4.14-3.70(m，12H)，3.61-3.36(m，5H)，3.23-3.11(m，2H)，2.62(s，2H)，2.47(s，3H)，2.21(dd，J＝8.0，13.2Hz，1H)，2.07-1.75(m，4H)，1.62-1.40(m，5H)，1.10-0.93(m，9H)。
以下化合物可以按照与(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式制备
1.(2S，4S)-1-((2S)-2-(2-((1-(2-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)甲氧基)乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002281
(白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1104.4[M+1]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.0(s，1H)，8.98(s，1H)，8.39-8.37(m，1H)，8.13(s，1H)，8.04-8.03(m，1H)，7.50-7.10(m，9H)，7.07-7.06(m，1H)，6.83-6.82(m，1H)，6.24-6.19(m，1H)，5.76-5.73(m，1H)，5.32-5.30(m，1H)，4.90-4.80(m，1H)，4.60-4.20(m，4H)，3.94-3.83(m，12H)，3.35-3.29(m，12H)，2.56(s，3H)，1.64-1.60(m，4H)，1.36-1.23(m，3H)，0.93-0.92(m，9H)。
2.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[4-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]哌嗪-1-基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002282
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1119.5[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.98-8.78(m，1H)，8.06(s，1H)，7.76(d，J＝8.4Hz，1H)，7.46-7.38(m，5H)，7.31-7.19(m，3H)，7.05(d，J＝2.4Hz，1H)，6.84(d，J＝16.8Hz，1H)，6.31(d，J＝18.4Hz，1H)，5.83(d，J＝12.4Hz，1H)，5.00(d，J＝6.4Hz，1H)，4.68(s，1H)，4.56(s，1H)，4.44(s，1H)，4.09-3.92(m，10H)，3.82-3.71(m，6H)，3.37(s，2H)，3.13-2.87(m，11H)，2.47(d，J＝3.2Hz，3H)，2.18(s，1H)，1.89(d，J＝6.8Hz，2H)，1.50(d，J＝7.2Hz，3H)，1.07-1.02(m，9H)。
3.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[1-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002291
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1118.5[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.89-8.82(m，1H)，8.02(d，J＝1.2Hz，1H)，7.75(d，J＝8.4Hz，1H)，7.47-7.33(m，5H)，7.26(d，J＝2.0Hz，1H)，7.24-7.13(m，2H)，7.04(s，1H)，6.86-6.75(m，1H)，6.28(d，J＝16.8Hz，1H)，5.84(s，1H)，5.03-4.94(m，1H)，4.76-4.68(m，2H)，4.61-4.50(m，1H)，4.46-4.31(m，1H)，4.14-3.69(m，12H)，3.67-3.47(m，3H)，3.41(s，2H)，3.23(s，2H)，2.85-2.59(m，2H)，2.45(d，J＝2.0Hz，3H)，2.21(m，1H)，2.02-1.84(m，3H)，1.76-1.35(m，8H)，1.08-0.94(s，9H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-4-[4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
Figure BDA0003980908660002301
将(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(56mg，0.051mmol，1eq，盐酸盐)、2-氟丙-2-烯酸(5mg，0.051mmol，1eq)、三乙胺(10mg，0.010mmol，2eq)和HATU(29mg，0.076mmol，1.5eq)在DMF(1mL)中的混合物脱气并用氮气吹扫(3X)，并将反应混合物在氮气气氛下在25℃下搅拌0.5小时。加入水(0.01mL)，然后加入EtOAc(10mL)，所得混合物用水(3×5mL)萃取。将合并的有机萃取物经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过半制备型HPLC(含28％-58％CH3CN的水(0.225％甲酸))纯化从而得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-4-[4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(26.4mg，0.016mmol，32％产率，94％纯度，甲酸)。LC/MS(ESI)m/z：1136.3[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.08-9.96(m，1H)，8.99(s，1H)，8.44(d，J＝7.9Hz，1H)，8.16(s，1H)，8.01(s，1H)，7.81(d，J＝8.4Hz，1H)，7.47-7.41(m，3H)，7.36(dd，J＝1.3，8.2Hz，2H)，7.31-7.24(m，2H)，7.24-7.15(m，2H)，7.07(dd，J＝2.3，4.1Hz，1H)，5.45-5.33(m，2H)，5.25-5.11(m，1H)，4.95-4.81(m，1H)，4.53(d，J＝9.5Hz，1H)，4.48-4.40(m，1H)，4.32-4.22(m，1H)，3.96(br d，J＝1.0Hz，4H)，3.89(s，2H)，3.87-3.74(m，4H)，3.61-3.53(m，2H)，3.27-3.25(m，2H)，3.02-2.90(m，2H)，2.66-2.57(m，1H)，2.46(s，5H)，2.10-1.96(m，3H)，1.80-1.72(m，1H)，1.65-1.47(m，3H)，1.39-1.29(m，6H)，1.17-1.01(m，2H)，0.91(s，9H)。
1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-N-[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]哌啶-4甲酰胺的示例性合成
步骤1：4-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基甲酰基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002311
向(2S，4R)-1-[(2S)-2-氨基-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(200mg，0.45mmol，1eq)、1-叔丁氧羰基哌啶-4-羧酸(113mg，0.49mmol，1.1eq)、1-羟基苯并三唑(91mg，0.67mmol，1.5eq)和二碘丙基乙胺(174mg，1.35mmol，3eq)在DMF(10mL)中的混合物中加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺盐酸盐(129mg，0.67mmol，1.5eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌16小时。加入水(20mL)并将所得混合物用EtOAc(3×30mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(3×30mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过制备型TLC(CH2Cl2/CH3OH＝10/1)纯化从而得到呈白色固体的4-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基甲酰基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(100mg，0.15mmol，34％产率)。LC/MS(ESI)m/z：656.4[M+H]+。
步骤2：N-[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]哌啶-4甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660002321
向4-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基甲酰基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(50mg，0.08mmol，1eq)在CH2Cl2(5mL)中的混合物中加入三氟乙酸(154mg，1.35mmol，17.7eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。浓缩混合物从而得到呈黄色油状物的N-[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]哌啶-4甲酰胺(50mg，0.07mmol，98％产率，三氟乙酸盐)。
步骤3：1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-N-[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]哌啶-4甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660002331
向N-[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]哌啶-4甲酰胺(50mg，0.07mmol，1eq，TFA盐)在CH3OH(5mL)和CH2Cl2(5mL)中的溶液中加入NaOAc(61mg，0.75mmol，10eq)，并将所得混合物在25℃下搅拌0.2小时。加入(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙醛(44mg，0.08mol，1.1eq)、乙酸(0.4g，0.007mmol，0.1eq)、和NaBH3CN(7mg，0.11mmol，1.5eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。浓缩混合物，并将所得残余物通过半制备型反相HPLC(含25％-55％CH3CN的水(0.225％甲酸))纯化从而得到呈白色固体的1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-N-[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]哌啶-4甲酰胺(9.3mg，0.008mmol，11％产率，97％纯度)。LC/MS(ESI)m/z：1074.5[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.02(d，J＝5.2Hz，1H)，8.99(s，1H)，8.37(d，J＝7.6Hz，1H)，8.01(s，1H)，7.88-7.76(m，1H)，7.66(d，J＝9.6Hz，1H)，7.48-7.35(m，5H)，7.29(d，J＝2.0Hz，1H)，7.25-7.18(m，2H)，7.08(d，J＝2.4Hz，1H)，6.86-6.82(m，1H)，6.21-6.17(m，1H)，5.79-5.69(m，1H)，5.44-5.40(m，1H)，5.09(d，J＝2.4Hz，1H)，4.91(t，J＝7.2Hz，1H)，4.55-4.37(m，2H)，4.27(d，J＝1.2Hz，1H)，3.97-3.76(m，8H)，3.64-3.51(m，2H)，3.09-2.84(m，3H)，2.66-2.57(m，1H)，2.46(s，3H)，2.08-1.73(m，5H)，1.66-1.59(m，1H)，1.50-1.30(m，9H)，0.91(s，9H)。
以下化合物可以按照与1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-N-[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]哌啶-4甲酰胺类似的方式制备
1.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[3-[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]丙酰氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
步骤3：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[3-[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]丙酰氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660002341
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1102.5[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.95-8.75(m，1H)，8.53(s，1H)，8.03(d，J＝2.4Hz，1H)，7.75(d，J＝8.4Hz，1H)，7.48-7.29(m，5H)，7.29-7.16(m，3H)，7.04(t，J＝2.4Hz，1H)，6.81(m，1H)，6.29(d，J＝16.8Hz，1H)，5.85-5.78(d，J＝12.0Hz，1H)，5.64(d，J＝4.8Hz，1H)，5.03-4.96(m，1H)，4.59-4.31(m，3H)，4.02(s，4H)，3.96-3.82(m，5H)，3.73(dd，J＝3.6，10.8Hz，1H)，3.65-3.49(m，1H)，3.35(m，1H)，3.25(d，J＝12.8Hz，1H)，3.15-3.05(m，1H)，2.95-2.83(m，1H)，2.68-2.39(m，5H)，2.35-2.11(m，3H)，1.94(m，1H)，1.77(m，2H)，1.57-1.46(m，5H)，1.43(d，J＝6.0Hz，3H)，1.35-1.23(m，2H)，1.06-0.96(s，9H)。
2.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002351
(白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1088.4[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.17-9.93(m，1H)，8.99(s，1H)，8.37(br d，J＝7.7Hz，1H)，8.02(s，1H)，7.85-7.73(m，2H)，7.48-7.41(m，3H)，7.40-7.36(m，2H)，7.30(d，J＝2.3Hz，1H)，7.22(br d，J＝3.9Hz，2H)，7.08(dd，J＝2.4，4.8Hz，1H)，6.84(dd，J＝10.4，16.6Hz，1H)，6.19(dd，J＝2.3，16.7Hz，1H)，5.79-5.73(m，1H)，5.46-5.37(m，1H)，5.14-5.04(m，1H)，4.99-4.86(m，1H)，4.52-4.37(m，2H)，4.27(br s，1H)，3.93(br s，4H)，3.88-3.76(m，4H)，3.59(br s，2H)，3.33(br s，4H)，3.00-2.85(m，2H)，2.46(s，3H)，2.19-2.11(m，1H)，2.01(br d，J＝7.2Hz，3H)，1.78(ddd，J＝4.6，8.3，12.8Hz，1H)，1.65-1.48(m，3H)，1.37(br d，J＝6.8Hz，2H)，1.31(br d，J＝6.0Hz，3H)，1.17-1.02(m，2H)，0.91(br d，J＝7.9Hz，9H)。
(2S，4R)-N-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺和(2S，4R)-N-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：4-甲基苯磺酸2-苄氧基乙酯的制备
Figure BDA0003980908660002361
向2-苄氧基乙醇(50g，328.54mmol，46.73mL，1eq)和KOH(22.12g，394.24mmol，1.2eq)在THF(200mL)中的溶液中加入甲苯磺酰氯(56.37g，295.68mmol，0.9eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。加入EtOAc(1L)，过滤所得混合物，并用盐水(200mL)洗涤滤液，将其经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过SiO2快速色谱法(含15-25％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈黄色油状物的4-甲基苯磺酸2-苄氧基乙基酯(75g，243.82mmol，74％产率，99％纯度)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.85-7.79(m，2H)，7.38-7.31(m，4H)，7.30-7.26(m，2H)，7.31(s，1H)，4.51(s，2H)，4.26-4.19(m，2H)，3.73-3.65(m，2H)，2.50-2.40(m，3H)。
步骤2：4-(2-苄氧基乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002362
向在0℃下的4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(10.35g，51.41mmol，1.05eq)在DMF(150mL)中的溶液中加入NaH(2.15g，53.86mmol，60％纯度，1.1eq)，并将所得混合物在0℃下搅拌0.5小时。然后加入4-甲基苯磺酸2-苄氧基乙基酯(15g，48.96mmol，1eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。加入NH4Cl溶液(200mL)，并用EtOAc(3×200mL)萃取所得混合物。将合并的有机萃取物用盐水(2×100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过SiO2快速色谱法(含10-20％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈无色油状物的4-(2-苄氧基乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(14.5)。LC/MS(ESI)m/z：236.1[M-Boc+1]+.1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.41-7.30(m，5H)，4.60(s，2H)，3.80(br d，J＝9.9Hz，2H)，3.71-3.62(m，4H)，3.55-3.46(m，1H)，3.08(ddd，J＝3.5，9.5，13.3Hz，2H)，1.86(br d，J＝7.9Hz，2H)，1.60-1.50(m，2H)，1.47(s，9H)。
步骤3：4-(2-苄氧基乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002371
在氮气下向4-(2-苄氧基乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(5g，14.91mmol，1eq)在CH3OH(40mL)中的溶液中加入Pd/C(0.5g，10％纯度)，并将所得悬浮液在真空下脱气并用H2吹扫数次。将反应混合物在H2(15psi)和25℃下搅拌12小时，然后过滤并浓缩，从而得到呈无色油状物的4-(2-羟基乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(3g，12.23mmol，82％产率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ3.86-3.72(m，4H)，3.66-3.58(m，2H)，3.56-3.45(m，1H)，3.16-3.07(m，2H)，2.15-2.05(m，1H)，1.96-1.78(m，2H)，1.59-1.49(m，2H)，1.47(s，9H)。
步骤4：4-[2-(对甲苯磺酰氧基)乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002372
向在0℃下的4-(2-羟基乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(7.4g，30.17mmol，1eq)和三乙胺(9.16g，90.50mmol，12.60mL，3eq)在CH2Cl2(70mL)中的混合物中加入甲苯磺酰氯(8.63g，45.25mmol，1.5eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌12小时。浓缩混合物，并所得残余物通过SiO2快速色谱法(含20-50％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈黄色油状物的4-[2-(对甲苯磺酰氧基)乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(8.7g，21.78mmol，72％产率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.80(d，J＝8.3Hz，2H)，7.34(d，J＝8.1Hz，2H)，4.18-4.13(m，2H)，3.76-3.70(m，2H)，3.67-3.60(m，4H)，3.47-3.39(m，1H)，3.14-3.01(m，2H)，2.46-2.43(m，3H)，1.90-1.78(m，2H)，1.45(s，9H)。
步骤5：4-[2-[2-[[[(2S，4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]甲基]-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002381
向4-[2-(对甲苯磺酰氧基)乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(280mg，0.70mmol，1eq)和(2S，4R)-4-羟基-N-[[2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(350mg，0.70mmol，1eq)在CH3CN(8mL)中的混合物中加入K2CO3(194mg，1.40mmol，2eq)，并将反应混合物在85℃下搅拌16小时。过滤混合物，并将滤液通过制备型TLC(CH2Cl2∶CH3OH＝10∶1)纯化从而得到呈黄色固体的4-[2-[2-[[[(2S，4R)-4-羟基-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]甲基]-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(400mg，0.55mmol，79％产率)。LC/MS(ESI)m/z：726.3[M+H]+。将该材料通过制备型HPLC(含55％异丙醇的水(0.1％NH4OH))进一步纯化，从而得到呈白色固体的4-[2-[2-[[[(2S，4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]甲基]-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(200mg，0.27mmol，48％产率，97％纯度)和呈白色固体的4-[2-[2-[[[(2S，4R)-4-羟基-1-[(2S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]甲基]-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(150mg，0.20mmol，36％产率，97％纯度)。
步骤6：(2S，4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]-N-[[4-(4-甲基噻唑-5-基)-2-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660002391
向4-[2-[2-[[[(2S，4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]甲基]-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(200mg，0.27mmol，1eq)在CH2Cl2(5mL)中的溶液中加入HCl(4N，在二噁烷中，1mL)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。浓缩混合物，并将所得残余物通过制备型HPLC(含15-36％CH3CN的水(0.1％TFA))纯化，从而得到呈黄色固体的(2S，4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]-N-[[4-(4-甲基噻唑-5-基)-2-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺(80mg，0.12mmol，43.4％产率，99％纯度，盐酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：626.4[M+H]+。
步骤7：4-[6-氯-8-氟-2-[(1R)-2-[4-[2-[2-[[[(2S，4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]甲基]-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基]乙氧基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002401
向(2S，4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]-N-[[4-(4-甲基噻唑-5-基)-2-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺(80mg，0.12mmol，1eq，盐酸盐)在CH2Cl2(1mL)和CH3OH(3mL)中的溶液中加入NaOAc(20mg，0.24mmol，2eq)，并将所得混合物在25℃下搅拌30分钟。然后加入4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(1R)-1-甲基-2-氧代-乙氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(70mg，0.12mmol，1eq)和乙酸(14mg，0.24mmol，2eq)，并将所得混合物搅拌15分钟并冷却至0℃。然后加入NaBH3CN(23mg，0.36mmol，3eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌16小时。浓缩混合物，并将所得残余物通过制备型TLC(CH2Cl2∶CH3OH＝8∶1)纯化从而得到呈黄色固体的4-[6-氯-8-氟-2-[(1R)-2-[4-[2-[2-[[[(2S，4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]甲基]-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基]乙氧基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(80mg，0.07mmol，56％产率)。LC/MS(ESI)m/z：1189.3[M+H]+。
步骤8：(2S，4R)-N-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660002411
向4-[6-氯-8-氟-2-[(1R)-2-[4-[2-[2-[[[(2S，4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]甲基]-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基]乙氧基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(80mg，0.07mmol，1eq)在CH2Cl2(10mL)中的溶液中加入三氟乙酸(1.54g，13.51mmol，1mL，201.04eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。浓缩混合物从而得到呈黄色油状物的(2S，4R)-N-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(80mg，0.07mmol，99％产率，TFA盐)。LC/MS(ESI)m/z：545.9[M/2+H]+。
步骤9：(2S，4R)-N-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660002421
向(2S，4R)-N-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(80mg，0.07mmol，1eq，TFA盐)在DMF(1mL)和CH2Cl2(5mL)中的溶液中加入2，6-二甲基吡啶(36mg，0.33mmol，0.04mL，5eq)，并将所得混合物在-70℃下搅拌5分钟。然后加入丙-2-烯酰氯(6mg，0.07mmol，1eq)，并将反应混合物在-70℃下搅拌15分钟。加入水(5mL)并将所得混合物用CH2Cl2(60mL)萃取。将有机萃取物经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过制备型HPLC(含30-60％CH3CN的水(0.225％甲酸))纯化，从而得到呈白色固体的(2S，4R)-N-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(27.4mg，0.02mmol，35.3％产率，98％纯度，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：1144.5[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.01(br s，1H)，8.97(s，1H)，8.80-8.21(m，1H)，8.01(s，1H)，7.81(dd，J＝5.4，8.4Hz，1H)，7.49-7.36(m，1H)，7.33-7.16(m，4H)，7.10-7.06(m，1H)，7.04-7.01(m，1H)，7.00-6.93(m，1H)，6.84(dd，J＝10.4，16.8Hz，1H)，6.22-6.15(m，2H)，5.78-5.73(m，1H)，5.44-5.34(m，1H)，5.19-4.89(m，1H)，4.51-4.44(m，1H)，4.38-4.31(m，1H)，4.30-4.12(m，4H)，3.93(br s，4H)，3.89-3.68(m，8H)，3.62-3.49(m，2H)，2.87-2.59(m，3H)，2.48-2.43(m，3H)，2.42-2.32(m，1H)，2.27(br dd，J＝6.4，15.2Hz，1H)，2.21-2.16(m，2H)，2.13(d，J＝2.0Hz，3H)，2.10-2.01(m，1H)，1.95-1.86(m，1H)，1.77(br s，2H)，1.42-1.28(m，5H)，0.97(d，J＝6.8Hz，2H)，0.80(d，J＝6.8Hz，2H)，0.69(d，J＝6.4Hz，1H)，0.56(dd，J＝2.0，6.8Hz，1H)。
(2S，4R)-N-[[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002431
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1144.4[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.04(br s，1H)，8.97(s，1H)，8.65-8.27(m，1H)，8.01(s，1H)，7.81(dd，J＝5.2，8.4Hz，1H)，7.48-7.38(m，1H)，7.35(d，J＝7.6Hz，1H)，7.29(t，J＝2.0Hz，1H)，7.25-7.17(m，2H)，7.10-6.97(m，3H)，6.84(dd，J＝10.4，16.8Hz，1H)，6.26-6.14(m，2H)，5.94-5.72(m，1H)，5.39(dt，J＝6.0，12.4Hz，1H)，5.25-4.61(m，1H)，4.42-4.14(m，6H)，3.96-3.71(m，12H)，3.62-3.49(m，2H)，2.78(br d，J＝15.6Hz，2H)，2.68-2.58(m，1H)，2.48-2.43(m，3H)，2.42-2.34(m，1H)，2.30-2.24(m，1H)，2.21(s，4H)，2.14-2.09(m，1H)，2.08-1.98(m，1H)，1.92(ddd，J＝4.8，7.6，12.8Hz，1H)，1.77(br s，2H)，1.45-1.28(m，5H)，1.00-0.88(m，3H)，0.76(d，J＝6.4Hz，3H)。
以下化合物是按照与(2S，4R)-N-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺和(2S，4R)-N-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺相似的合成序列制备
1.(2S，4R)-N-[[2-[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002441
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1189.5[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.00(s，1H)，8.96(s，1H)，8.27-8.16(m，1H)，8.05-7.97(m，1H)，7.85-7.72(m，1H)，7.49-7.39(m，1H)，7.32-7.16(m，4H)，7.10-7.04(m，1H)，7.03-6.99(m，1H)，6.96(d，J＝7.5Hz，1H)，6.83(dd，J＝10.4，16.6Hz，1H)，6.24-6.13(m，2H)，5.78-5.70(m，1H)，5.45-5.29(m，1H)，5.11(s，1H)，4.48-4.14(m，6H)，3.93-3.75(m，9H)，3.59-3.43(m，5H)，3.23(d，J＝11.0Hz，3H)，2.75(s，2H)，2.60(dd，J＝6.5，12.7Hz，1H)，2.46-2.43(m，3H)，2.39-2.34(m，1H)，2.30-2.17(m，2H)，2.14-2.01(m，5H)，1.94-1.85(m，1H)，1.70(s，2H)，1.37-1.21(m，5H)，0.96(d，J＝6.7Hz，2H)，0.79(d，J＝6.7Hz，2H)，0.67(d，J＝6.5Hz，1H)，0.55(d，J＝6.5Hz，1H)。
2.(2S，4R)-N-[[2-[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002451
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1188.6[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.00(s，1H)，8.96(s，1H)，8.34-8.24(m，1H)，8.00(s，1H)，7.80(dd，J＝4.3，8.0Hz，1H)，7.43(d，J＝4.4Hz，1H)，7.34(d，J＝7.6Hz，1H)，7.28(s，1H)，7.24-7.18(m，2H)，7.08-6.96(m，3H)，6.83(dd，J＝10.5，16.6Hz，1H)，6.22-6.12(m，2H)，5.74(d，J＝12.5Hz，1H)，5.43-5.29(m，1H)，5.08(s，1H)，4.39-4.14(m，6H)，3.92-3.72(m，10H)，3.59-3.42(m，4H)，3.26-3.21(m，3H)，2.85-2.70(m，2H)，2.59(s，1H)，2.45-2.42(m，3H)，2.37(s，1H)，2.26(dd，J＝6.5，16.0Hz，1H)，2.19(s，2H)，2.13-1.82(m，5H)，1.70(s，2H)，1.30(d，J＝6.1Hz，5H)，0.95-0.89(m，3H)，0.75(d，J＝6.7Hz，3H)。
3.(2S，4R)-N-[[2-[2-[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002461
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1233.4[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.11-9.91(m，1H)，8.97(s，1H)，8.27-8.20(m，1H)，8.01(s，1H)，7.83-7.79(m，1H)，7.47-7.41(m，1H)，7.31-7.20(m，4H)，7.12-6.93(m，3H)，6.85-6.81(m，1H)，6.24-6.14(m，2H)，5.79-5.71(m，1H)，5.39-5.35(m，1H)，5.15-4.90(m，1H)，4.51-4.45(m，1H)，4.20(d，J＝6.0Hz，4H)，3.96-3.73(m，12H)，3.44(d，J＝3.2Hz，14H)，2.85-2.70(m，2H)，2.63-2.56(m，1H)，2.46(s，2H)，2.39-2.34(m，1H)，2.30-2.23(m，1H)，2.20(s，1H)，2.16-2.08(m，4H)，1.97-1.86(m，1H)，1.73-1.69(m，2H)，1.32-1.28(m，4H)，0.97(d，J＝6.8Hz，2H)，0.80(d，J＝6.8Hz，2H)，0.71-0.66(m，1H)，0.59-0.54(m，1H)。
4.(2S，4R)-N-[[2-[2-[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002471
(甲酸盐，灰白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1233.4[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.25-9.83(m，1H)，8.97(s，1H)，8.47-8.30(m，2H)，8.01(s，1H)，7.83-7.79(m，1H)，7.47-7.40(m，1H)，7.35(d，J＝7.6Hz，1H)，7.29(s，1H)，7.24-7.19(m，2H)，7.08-6.99(m，3H)，6.86-6.82(m，1H)，6.27-6.12(m，2H)，5.82-5.72(m，1H)，5.40-5.36(m，1H)，5.15-5.07(m，1H)，4.44-4.13(m，8H)，3.99-3.69(m，16H)，3.62-3.52(m，7H)，2.30-2.16(m，5H)，2.13-2.02(m，4H)，1.95-1.87(m，1H)，1.75-1.67(m，2H)，1.35-1.19(m，6H)，0.93(d，J＝6.8Hz，3H)，0.76(d，J＝6.8Hz，3H)。
5.(2S，4R)-N-[[2-[2-[2-[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002472
(TFA盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：638.8[M/2+1]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.06-10.05(m，1H)，9.4-9.27(m，1H)，9.36-9.20(m，1H)，9.36-9.20(m，1H)，8.98(s，1H)，8.29-8.20(m，1H)，8.08(s，1H)，7.82-7.80(m，1H)，7.45-7.40(m，1H)，7.32-7.16(m，5H)，7.09-6.97(m，3H)，6.83-6.8(m，1H)，6.24-6.16(m，2H)，5.76-5.72(m，1H)，5.63(s，1H)，4.51-4.43(m，1H)，4.40-4.32(m，1H)，4.31-4.18(m，3H)，4.16-4.12(m，2H)，3.99(s，4H)，3.89-3.75(m，8H)，3.68-3.57(m，10H)，3.20-2.96(m，2H)，2.47-2.43(m，4H)，2.27-2.21(m，1H)，2.20(s，1H)，2.14(s，3H)，2.08(s，3H)，1.96-1.85(m，2H)，1.77-1.44(m，2H)，1.41-1.34(m，3H)，1.27-1.06(m，1H)，0.97-0.95(m，2H)，0.80-0.78(m，2H)，0.70-0.65(m，1H)，0.58-0.53(m，1H)。
6.(2S，4R)-N-[[2-[2-[2-[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002481
(TFA盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：638.9[M/2+1]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.03(s，1H)，9.20(s，1H)，8.98(s，1H)，8.35-8.3(m，1H)，8.07(s，1H)，7.82-7.60(m，1H)，7.45-7.40(m，1H)，7.37-7.28(m，2H)，7.25-7.19(m，2H)，7.09-6.98(m，3H)，6.83-6.80(m，1H)，6.24-6.16(m，2H)，5.79-5.74(m，1H)，5.63(s，1H)，4.42-4.33(m，2H)，4.27-4.23(m，2H)，4.17-4.15(m，2H)，3.99-3.95(m，4H)，3.87-3.85(m，3H)，3.77-3.74(m，6H)，3.64-3.59(m，3H)，3.55-3.54(m，8H)，3.20-2.96(m，2H)，2.46(s，3H)，2.44(s，1H)，2.27-2.22(m，2H)，2.20(s，3H)，2.14-1.98(m，4H)，1.96-1.86(m，3H)，1.76-1.56(m，2H)，1.46(s，1H)，1.37-1.34(m，3H)，0.98-0.88(m，3H)，0.81-0.72(m，3H)。
7.(2S，4R)-N-[[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002491
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：661.8[M/2+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.32-9.78(m，1H)，8.97(s，1H)，8.27(s，1H)，8.00(s，1H)，7.80(d，J＝8.1Hz，1H)，7.43(s，1H)，7.34-7.15(m，4H)，7.06(dd，J＝2.4，4.9Hz，1H)，7.02(d，J＝1.5Hz，1H)，6.99-6.95(m，1H)，6.83(dd，J＝10.4，16.8Hz，1H)，6.25-6.12(m，2H)，5.79-5.69(m，1H)，5.45-5.30(m，1H)，5.19-4.87(m，1H)，4.51-4.13(m，6H)，3.94-3.89(m，3H)，3.87-3.72(m，7H)，3.62-3.56(m，3H)，3.55-3.50(m，3H)，3.49-3.42(m，13H)，2.85-2.69(m，2H)，2.64-2.58(m，1H)，2.46-2.44(m，3H)，2.40-2.35(m，1H)，2.29-2.18(m，2H)，2.16-2.00(m，5H)，1.95-1.83(m，1H)，1.78-1.62(m，2H)，1.38-1.16(m，5H)，0.99-0.94(m，2H)，0.80(d，J＝6.6Hz，2H)，0.69(d，J＝6.5Hz，1H)，0.56(d，J＝6.8Hz，1H)。
8.(2S，4R)-N-[[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002501
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：662.0[M/2+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.00(s，1H)，8.97(s，1H)，8.62-8.28(m，1H)，8.18-7.94(m，1H)，7.80(d，J＝8.4Hz，1H)，7.47-7.39(m，1H)，7.38-7.14(m，4H)，7.11-6.95(m，3H)，6.83(dd，J＝10.6，16.7Hz，1H)，6.27-5.89(m，2H)，5.80-5.65(m，1H)，5.48-5.31(m，1H)，5.09(br d，J＝1.3Hz，1H)，4.48-4.11(m，6H)，3.96-3.71(m，11H)，3.63-3.38(m，18H)，3.23-3.17(m，1H)，2.90-2.71(m，2H)，2.47-2.42(m，4H)，2.30-2.09(m，6H)，2.02(br d，J＝8.8Hz，1H)，1.97-1.85(m，1H)，1.72(br s，2H)，1.39-1.17(m，5H)，1.00-0.87(m，3H)，0.76(br d，J＝6.6Hz，3H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]氮杂环丁烷-3-基]氧基-1-哌啶基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：3-(4-吡啶氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002502
在0℃下向3-羟基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(10g，57.73mmol，1eq)和吡啶-4-醇(8.24g，86.60mmol，1.5eq)在THF(100mL)中的溶液中加入三苯基膦(18.17g，69.28mmol，1.2eq)和偶氮二羧酸二异丙酯(14g，69.28mmol，13mL，1.2eq)，并将反应混合物在40℃下搅拌12小时。将反应混合物用水(200mL)稀释并用EtOAc(3×200mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(3×200mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过制备型HPLC(含5-35％CH3CN的水(0.225％甲酸))纯化，从而得到呈白色固体的3-(4-吡啶氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(3.3g，13.18mmol，22％产率)。LC/MS(ESI)m/z：250.9[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.50-8.31(m，2H)，6.97-6.80(m，2H)，5.19-4.98(m，1H)，4.43-4.23(m，2H)，3.93-3.65(m，2H)，1.38(s，9H)。
步骤2：3-(1-苄基吡啶-1-鎓-4-基)氧基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002511
向3-(4-吡啶氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(3.1g，12.39mmol，1eq)在甲苯(40mL)中的溶液中加入苄基溴(2.12g，12.39mmol，1.47mL，1eq)，并将反应混合物在80℃下搅拌12小时。将混合物在减压下浓缩，并将所得粗产物用EtOAc(20mL)研磨，从而得到呈白色固体的3-(1-苄基吡啶-1-鎓-4-基)氧氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(4g，11.72mmol，产率94％)。LC/MS(ESI)m/z：340.9[M+H]+。
步骤3：3-[(1-苄基-3，6-二氢-2H-吡啶-4-基)氧基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002512
向在0℃下的3-(1-苄基吡啶-1-鎓-4-基)氧氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(4g，11.72mmol，1eq)在乙醇(80mL)中的溶液中加入NaBH4(2.66g，70.29mmol，6eq)，并将反应混合物在15℃下搅拌12小时。将反应混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(3×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3×50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物通过制备型HPLC(含20-50％CH3CN的水(0.225％甲酸))纯化，从而得到呈无色油状物的3-[(1-苄基-3，6-二氢-2H-吡啶-4-基)氧基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(2.5g，7.26mmol，61％产率)。LC/MS(ESI)m/z：345.0[M+H]+。
步骤4：3-(4-哌啶氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002521
向3-[(1-苄基-3，6-二氢-2H-吡啶-4-基)氧基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(2.3g，6.68mmol，1eq)在CH3OH(10mL)中的溶液中加入Pd/C(500mg，10％纯度)，并将反应混合物在氢气(15psi)下在40℃下搅拌12小时。过滤反应混合物，并在减压下浓缩滤液，从而得到呈无色油状物的3-(4-哌啶氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(1.5g，5.85mmol，87％产率)。LC/MS(ESI)m/z：257.0[M+H]+。
步骤5：3-[[1-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-4-哌啶基]氧基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002522
在0℃下向3-(4-哌啶氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(150mg，0.59mmol，1eq)在CH3CN(5mL)中的溶液中加入K2CO3(162mg，1.17mmol，2eq)和2-溴乙酸乙酯(98mg，0.59mmol，0.06mL，1eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。过滤混合物，并将滤液倾倒在饱和NH4Cl水溶液(3mL)上。用EtOAc(2×10mL)萃取所得混合物，并用盐水(2X15mL)洗涤合并的有机萃取物，将其经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过SiO2柱色谱法(含2-4％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈黄色油状物的3-[[1-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-4-哌啶基]氧基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(80mg，0.23mmol，40％产率)。
步骤6：2-[4-(1-叔-丁氧羰基氮杂环丁烷-3-基)氧基-1-哌啶基]乙酸的制备
Figure BDA0003980908660002531
向3-[[1-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-4-哌啶基]氧基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(80mg，0.23mmol，1eq)在水(0.5mL)、CH3OH(0.5mL)和THF(0.5mL)中的溶液中加入LiOH(29mg，0.70mmol，3eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。然后加入HCl水溶液(1N)以调节pH(7-8)，并将所得混合物浓缩从而得到呈无色油状物的粗制2-[4-(1-叔丁氧羰基氮杂环丁烷-3-基)氧基-1-哌啶基]乙酸(73mg，0.23mmol，99％产率)。
步骤7：3-[[1-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙基]-4-哌啶基]氧基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002532
向2-[4-(1-叔丁氧羰基氮杂环丁烷-3-基)氧基-1-哌啶基]乙酸(73mg，0.23mmol，1eq)和(2S，4R)-1-[(2S)-2-氨基-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(112mg，0.23mmol，1eq，盐酸盐)在DMF(3mL)中的溶液中加入HATU(177mg，0.46mmol，2eq)和二异丙基乙胺(90mg，0.70mmol，0.12mL，3eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物用水(30mL)稀释并用EtOAc(2×20mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物通过SiO2制备型TLC(CH2Cl2∶CH3OH＝9∶1)纯化，从而得到呈无色油状物的3-[[1-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙基]-4-哌啶基]氧基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(64mg，0.08mmol，33％产率，90％纯度)。LC/MS(ESI)m/z：741.1[M+H]+。
步骤8：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-1-哌啶基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660002541
向3-[[1-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙基]-4-哌啶基]氧基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(104mg，0.14mmol，1eq)在CH2Cl2(7mL)中的溶液中加入三氟乙酸(1.54g，13.51mmol，1mL，96.22eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。在减压下浓缩混合物，从而得到呈黄色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-1-哌啶基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(105mg，0.14mmol，99％产率，TFA盐)。
步骤9：4-[6-氯-8-氟-2-[(1R)-2-[3-[[1-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙基]-4-哌啶基]氧基]氮杂环丁烷-1-基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002551
向在0℃下的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-1-哌啶基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(105mg，0.14mmol，1eq，TFA盐)在CH3OH(3mL)中的溶液中加入NaOAc(57mg，0.70mmol，5eq)，并将所得混合物搅拌0.5小时。然后加入在CH2Cl2(1mL)中的4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(1R)-1-甲基-2-氧代-乙氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(80mg，0.14mmol，1eq)和乙酸(0.84mg，0.01mmol，7.96e-1uL，0.1eq)，并将所得混合物在25℃下0.5小时。加入NaBH3CN(17mg，0.28mmol，2eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌11小时。将反应混合物用水(30mL)淬灭，并用CH2Cl2(2×20mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物通过SiO2制备型TLC(CH2Cl2∶CH3OH＝8∶1)纯化，从而得到呈浅黄色油状物的4-[6-氯-8-氟-2-[(1R)-2-[3-[[1-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙基]-4-哌啶基]氧基]氮杂环丁烷-1-基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(100mg，0.08mmol，59％产率)。LC/MS(ESI)m/z：1205.2[M+H]+。
步骤10：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]氮杂环丁烷-3-基]氧基-1-哌啶基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660002561
向4-[6-氯-8-氟-2-[(1R)-2-[3-[[1-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙基]-4-哌啶基]氧基]氮杂环丁烷-1-基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(100mg，0.08mmol，1eq)在CH2Cl2(7mL)中的溶液中加入三氟乙酸(1.54g，13.51mmol，1mL，162.87eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。在减压下浓缩混合物，从而得到呈黄色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]氮杂环丁烷-3-基]氧基-1-哌啶基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(101mg，0.08mmol，99％产率，TFA盐)。
步骤11：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]氮杂环丁烷-3-基]氧基-1-哌啶基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660002571
向在-78℃下的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]氮杂环丁烷-3-基]氧基-1-哌啶基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(100mg，0.08mmol，1eq，TFA盐)和2，6-二甲基吡啶(351mg，3.28mmol，0.38mL，40eq)在CH2Cl2(3mL)中的溶液中滴加在CH2Cl2(1mL)中的丙-2-烯酰氯(6.68mg，73.78umol，0.006mL，0.9eq)，并将反应混合物在-78℃下搅拌30分钟。将反应混合物用水(30mL)稀释并用CH2Cl2(2×20mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物通过半制备型反相HPLC(18-48％CH3CN的水(0.225％甲酸)溶液)纯化，从而得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]氮杂环丁烷-3-基]氧基-1-哌啶基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(4.2mg，0.004mmol，4％yie1d，100％纯度，甲酸盐)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.04(s，1H)，8.98(s，1H)，8.43(d，J＝7.5Hz，1H)，8.15-8.01(m，1H)，7.86-7.65(m，2H)，7.46-7.42(m，2H)，7.37-7.35(m，1H)，7.29(d，J＝2.3Hz，1H)，7.26-7.17(m，2H)，7.07(dd，J＝2.4，3.4Hz，1H)，6.90-6.78(m，1H)，6.18(dd，J＝2.2，16.7Hz，1H)，5.79-5.70(m，1H)，5.27-5.13(m，1H)，4.89(quin，J＝7.0Hz，1H)，4.49-4.36(m，2H)，4.28(s，1H)，4.15-4.05(m，1H)，3.95-3.77(m，6H)，3.62-3.58(m，6H)，3.47-3.43(m，3H)，3.17(d，J＝5.3Hz，1H)，3.03-2.82(m，1H)，2.61(s，1H)，2.45(s，3H)，2.21-2.01(m，3H)，1.77-1.74(m，6H)，1.45(d，J＝6.8Hz，1H)，1.39-1.34(m，3H)，1.30(d，J＝6.1Hz，2H)，1.23(s，2H)，1.05(t，J＝7.0Hz，3H)，0.92(s，9H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[3-[3-[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]丙氧基]氮杂环丁烷-1-基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：4-[2-[2-(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)乙氧基]乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002581
向4-(3-羟丙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1g，4.11mmol，1eq)和4-甲基苯-1-磺酰氯(940mg，4.93mmol，1.2eq)在CH2Cl2(10mL)中的混合物中加入三乙胺(1.25g，12.33mmol，1.72mL，3eq)，并将反应混合物在氮气氛下在25℃下搅拌15小时。通过SiO2快速色谱法(含0-25％EtOAc的石油醚)纯化，得到呈无色油状物的4-[3-(对甲苯磺酰氧基)丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.45g，3.65mmol，88％产率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.10(d，J＝8.4Hz，2H)，7.37(d，J＝8.0Hz，2H)，4.05-4.02(m，4H)，2.64(t，J＝12.0Hz，2H)，2.47(s，3H)，1.66-1.60(m，2H)，1.59(d，J＝12.8Hz，2H)，1.46(s，9H)，1.30-1.25(m，3H)，1.10-1.00(m，2H)。
步骤2：4-[3-(1-苄氧基羰基氮杂环丁烷-3-基)氧基丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002591
向在0℃下的3-羟基氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯(313mg，1.51mmol，2eq)在DMF(5mL)中的溶液中加入NaH(60.37mg，1.51mmol，60％纯度，2eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。然后加入4-[3-(对甲苯磺酰氧基)丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(300mg，0.75mmol，1eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌14小时。用水(30mL)淬灭反应物，并用EtOAc(30mL)萃取所得混合物。将有机萃取物用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。将所得残余物通过SiO2柱色谱法(含0-20％EtOAc的石油醚)纯化，得到呈无色油状物的4-[3-(1-苄氧基羰基氮杂环丁烷-3-基)氧基丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(280mg，0.65mmol，85％产率)。LC/MS(ESI)m/z：455.2[M+Na]+.1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.41-7.34(m，1H)，7.35-7.30(m，1H)，5.15-5.09(m，2H)，4.27-4.22(m，1H)，4.20-4.03(m，4H)，3.92(dd，J＝4.2，9.9Hz，2H)，3.36(t，J＝6.5Hz，2H)，2.78-2.54(m，2H)，1.69-1.60(m，4H)，1.48(s，9H)，1.38(dtd，J＝3.6，7.1，10.5Hz，1H)，1.34-1.27(m，2H)，1.17-1.03(m，2H)。
步骤3：4-[3-(氮杂环丁烷-3-基氧基)丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002592
在氮气气氛下向4-[3-(1-苄氧基羰基氮杂环丁烷-3-基)氧基丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(280mg，0.65mmol，1eq)在三氟乙醇(30mL)中的溶液中加入Pd/C(50mg，5％纯度)，并将反应混合物用H2脱气(3X)，然后在25℃下搅拌16小时。过滤反应混合物并用CH3OH(20mL)洗涤固体。滤液浓缩从而得到呈无色胶状物的4-[3-(氮杂环丁烷-3-基氧基)丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(193mg，646.74umol，99.91％产率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ4.29(quin，J＝6.3Hz，1H)，4.15-4.00(m，2H)，3.72-3.65(m，1H)，3.63-3.56(m，2H)，3.32(t，J＝6.6Hz，2H)，2.67(br t，J＝11.8Hz，2H)，1.65(br d，J＝12.6Hz，2H)，1.60-1.53(m，2H)，1.46(s，9H)，1.37(ddd，J＝3.8，7.2，14.1Hz，1H)，1.33-1.24(m，2H)，1.14-1.01(m，2H)。
步骤4：4-[3-[1-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)氮杂环丁烷-3-基]氧基丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002601
向在0℃下的4-[3-(氮杂环丁烷-3-基氧基)丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(190mg，0.64mmol，1eq)和K2CO3(176mg，1.27mmol，2eq)在CH3CN(4mL)中的混合物中加入2-氯乙酸乙酯(78mg，0.64mmol，1eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌16小时。浓缩反应混合物，并将所得残余物通过硅胶色谱法(含0-2％CH3OH的CH2Cl2)纯化，得到呈无色胶状物的4-[3-[1-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)氮杂环丁烷-3-基]氧基丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(128mg，0.33mmol，52％产率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ4.22-3.85(m，5H)，3.82-3.76(m，1H)，3.66-3.28(m，4H)，3.05-2.93(m，1H)，2.90-2.58(m，3H)，1.69-1.62(m，2H)，1.59-1.52(m，2H)，1.46(s，9H)，1.41-1.32(m，1H)，1.31-1.23(m，5H)，1.14-0.97(m，2H)。
步骤5：2-[3-[3-(1-叔丁氧羰基-4-哌啶基)丙氧基]氮杂环丁烷-1-基]乙酸的制备
Figure BDA0003980908660002611
向4-[3-[1-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)氮杂环丁烷-3-基]氧基丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(128mg，0.33mmol，1eq)在CH3OH(0.5mL)和THF(1mL)中的溶液中加入LiOH一水合物(42mg，1.00mmol，3eq)和水(1mL)，并将反应混合物为在25℃下搅拌1小时。将反应物用THF(25mL)稀释并通过加入1N硫酸将pH调节至8。加入EtOAc(20mL)，并将所得混合物经Na2SO4干燥，浓缩从而得到呈无色胶状物的粗制2-[3-[3-(1-叔丁氧羰基-4-哌啶基)丙氧基]氮杂环丁烷-1-基]乙酸(120mg)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ4.48(br s，2H)，4.13-3.96(m，3H)，3.78-3.58(m，3H)，3.46-3.27(m，2H)，2.67(br s，2H)，1.71-1.50(m，4H)，1.48-1.41(m，9H)，1.40-1.32(m，1H)，1.29-1.23(m，2H)，1.14-0.96(m，2H)。
步骤6：4-[3-[1-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙基]氮杂环丁烷-3-基]氧基丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002612
向(2S，4R)-1-[(2S)-2-氨基-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(150mg，0.31mmol，1eq，盐酸盐)、2-[3-[3-(1-叔丁氧羰基-4-哌啶基)丙氧基]氮杂环丁烷-1-基]乙酸(118mg，0.33mmol，1.06eq)、羟基苯并三唑(63mg，0.47mmol，1.5eq)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(90mg，0.47mmol，1.5eq)在DMF(3mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(121mg，0.94mmol，3eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌14小时。将反应混合物浓缩，并将所得残余物通过SiO2制备型TLC(含10％CH3OH的CH2Cl2)纯化，得到呈无色胶状物的4-[3-[1-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙基]氮杂环丁烷-3-基]氧基丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(125mg，0.15mmol，47％产率，92％纯度)。LC/MS(ESI)m/z：783.3[M+H]+。
步骤7：(2S，4R)-1-[(2S)-3，3-二甲基-2-[[2-[3-[3-(4-哌啶基)丙氧基]氮杂环丁烷-1-基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660002621
向4-[3-[1-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙基]氮杂环丁烷-3-基]氧基丙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(125mg，0.16mmol，1eq)在CH2Cl2(2mL)中的溶液中加入三氟乙酸(616mg，5.40mmol，0.4mL，33.84eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。将反应混合物在真空下浓缩，得到呈无色胶状物的(2S，4R)-1-[(2S)-3，3-二甲基-2-[[2-[3-[3-(4-哌啶基)丙氧基]氮杂环丁烷-1-基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(127mg，0.16mmol，99％产率，TFA盐)。
步骤8：4-[6-氯-8-氟-2-[(1R)-2-[4-[3-[1-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙基]氮杂环丁烷-3-基]氧基丙基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002631
向(2S，4R)-1-[(2S)-3，3-二甲基-2-[[2-[3-[3-(4-哌啶基)丙氧基]氮杂环丁烷-1-基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(127mg，0.16mmol，1eq，TFA盐)在CH2Cl2(2mL)中的溶液中加入NaOAc(39.22mg，478.08umol，3eq)，并将所得混合物在25℃下搅拌30分钟。然后加入4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(1R)-1-甲基-2-氧代-乙氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(97mg，0.17mmol，1.05eq)在CH3OH(2mL)中的溶液，并将反应混合物冷却至0℃。加入NaBH3CN(20mg，0.32mmol，2eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌14小时。将反应混合物浓缩，并将所得残余物通过SiO2制备型TLC(含10％CH3OH的CH2Cl2)纯化，得到呈无色胶状物的4-[6-氯-8-氟-2-[(1R)-2-[4-[3-[1-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙基]氮杂环丁烷-3-基]氧基丙基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(62mg，0.050mol，31％产率)。LC/MS(ESI)m/z：1247.4.[M+H]+。
步骤9：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[3-[3-[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]丙氧基]氮杂环丁烷-1-基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660002641
向4-[6-氯-8-氟-2-[(1R)-2-[4-[3-[1-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙基]氮杂环丁烷-3-基]氧基丙基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(62mg，0.050mmol，1eq)在CH2Cl2(2mL)中的溶液中加入三氟乙酸(616mg，5.40mmol，0.4mL，108.74eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物，得到呈黄色胶状物的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[3-[3-[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]丙氧基]氮杂环丁烷-1-基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(62mg，0.049mmol，99％产率，TFA盐)。LC/MS(ESI)m/z：1148.6.[M+H]+。
步骤10：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[3-[3-[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]丙氧基]氮杂环丁烷-1-基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660002651
向在-78℃下的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[3-[3-[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]丙氧基]氮杂环丁烷-1-基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(62mg，0.049mmol，1eq，TFA盐)和2，6-二甲基吡啶(105mg，0.98mmol，20eq)在CH2Cl2(4mL)中的溶液中加入丙-2-烯酰氯(4.00mg，0.044mmol，0.9eq)在CH2Cl2(0.36mL)中的溶液，并将反应混合物在-78℃下搅拌10分钟。加入水(0.1mL)和DMF(0.5mL)并浓缩反应混合物。将所得残余物通过制备型HPLC(含20-50％CH3CN的水(0.225％甲酸))纯化，得到呈无色胶状物的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[3-[3-[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]丙氧基]氮杂环丁烷-1-基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(8.8mg，0.007mmol，14％产率，97％纯度)。LC/MS(ESI)m/z：1201.5[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.01(s，1H)，9.00-8.95(m，1H)，8.42(d，J＝7.9Hz，1H)，8.15(s，1H)，8.00(s，1H)，7.81(d，J＝8.3Hz，1H)，7.52(br d，J＝9.8Hz，1H)，7.47-7.40(m，4H)，7.39-7.33(m，2H)，7.29(d，J＝2.3Hz，1H)，7.25-7.17(m，2H)，7.06(dd，J＝2.3，4.9Hz，1H)，6.83(dd，J＝10.5，16.7Hz，1H)，6.21-6.15(m，1H)，5.78-5.69(m，1H)，5.46-5.34(m，1H)，5.15-5.08(m，1H)，4.98-4.83(m，1H)，4.50-4.45(m，1H)，4.45-4.39(m，1H)，4.30-4.23(m，1H)，4.10-4.03(m，1H)，3.92(br s，4H)，3.88-3.82(m，2H)，3.80-3.74(m，2H)，3.63-3.49(m，5H)，3.24(br t，J＝6.4Hz，2H)，3.09(br d，J＝8.4Hz，2H)，2.99-2.85(m，4H)，2.64-2.59(m，1H)，2.45(s，3H)，2.43-2.38(m，1H)，2.08-1.84(m，4H)，1.76(ddd，J＝4.2，8.6，12.9Hz，1H)，1.57-1.49(m，2H)，1.43(td，J＝6.1，8.1Hz，2H)，1.37(d，J＝6.8Hz，3H)，1.30(br d，J＝6.2Hz，3H)，1.17-1.09(m，3H)，0.91(s，9H)。
以下化合物是按照与(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[3-[3-[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]丙氧基]氮杂环丁烷-1-基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式制备
1.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[6-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]甲基]-2，6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002661
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1198.6[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.04(s，1H)，8.99(s，1H)，8.71-8.40(m，1H)，8.17(s，1H)，8.01(s，1H)，7.82(d，J＝8.4Hz，1H)，7.54-7.47(m，1H)，7.46-7.41(m，3H)，7.40-7.33(m，2H)，7.30(d，J＝2.3Hz，1H)，7.28-7.18(m，2H)，7.08(dd，J＝2.4，3.7Hz，1H)，6.84(dd，J＝10.4，16.7Hz，1H)，6.19(dd，J＝2.3，16.6Hz，1H)，5.79-5.73(m，1H)，5.46-5.34(m，1H)，5.29-4.96(m，1H)，4.95-4.84(m，1H)，4.57-4.35(m，2H)，4.32-4.21(m，1H)，3.97-3.89(m，4H)，3.88-3.76(m，4H)，3.62-3.51(m，3H)，3.34(br d，J＝6.8Hz，4H)，3.13-3.01(m，3H)，3.01-2.84(m，3H)，2.63(br dd，J＝6.8，12.6Hz，1H)，2.46(s，3H)，2.39(br dd，J＝3.0，11.6Hz，1H)，2.28(br t，J＝6.4Hz，2H)，2.08-1.87(m，3H)，1.77(ddd，J＝4.4，8.8，12.8Hz，1H)，1.57-1.47(m，2H)，1.38(d，J＝6.9Hz，3H)，1.31(br d，J＝6.1Hz，3H)，1.24-1.12(m，1H)，0.92(s，12H)。
2.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[3-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]氮杂环丁烷-1-基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002671
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1203.06[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.75-9.42(m，1H)，9.05-8.90(m，1H)，8.44(d，J＝7.6Hz，1H)，8.25(s，1H)，8.01(s，1H)，7.82(d，J＝8.0Hz，1H)，7.51(d，J＝9.6Hz，1H)，7.48-7.42(m，3H)，7.40-7.35(m，2H)，7.30(d，J＝2.0Hz，1H)，7.25-7.18(m，2H)，7.08(dd，J＝2.4，4.8Hz，1H)，6.84(dd，J＝10.4，16.4Hz，1H)，6.19(dd，J＝2.0，16.8Hz，1H)，5.79-5.71(m，1H)，5.45-5.34(m，1H)，4.95-4.86(m，1H)，4.51-4.40(m，2H)，4.28(br s，1H)，4.15-4.09(m，1H)，3.98-3.77(s，9H)，3.64-3.51(m，3H)，3.23-3.19(m，2H)，3.16-3.03(m，4H)，3.00-2.90(m，2H)，2.88-2.71(m，3H)，2.66-2.59(m，1H)，2.46(s，3H)，2.42-2.35(m，2H)，2.18-2.01(m，4H)，1.81-1.70(m，3H)，1.38(d，J＝7.2Hz，3H)，1.31(br dd，J＝2.0，6.0Hz，4H)，0.91(s，9H)。
3.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-[3-[4-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]哌嗪-1-基]丙基]哌嗪-1-基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002681
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1216.6[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.04(s，1H)，8.98(s，1H)，8.42(d，J＝7.7Hz，1H)，8.02(s，1H)，7.81(d，J＝8.4Hz，1H)，7.70(d，J＝8.2Hz，1H)，7.48-7.41(m，3H)，7.39-7.26(m，3H)，7.26-7.17(m，2H)，7.07(dd，J＝2.4，5.3Hz，1H)，6.83(dd，J＝10.5，16.7Hz，1H)，6.18(dd，J＝2.3，16.7Hz，1H)，5.80-5.70(m，1H)，5.41(s，1H)，5.15-4.83(m，2H)，4.53-4.24(m，3H)，3.99-3.72(m，9H)，3.62-3.53(m，1H)，3.13-2.90(m，4H)，2.83-2.53(m，16H)，2.45(s，8H)，2.09-1.99(m，1H)，1.81-1.60(m，3H)，1.35(dd，J＝6.5，19.7Hz，5H)，0.93(s，9H)。
4.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-[3-[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]丙基]哌嗪-1-基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002691
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1215.2[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.99(s，1H)，8.44(d，J＝7.6Hz，1H)，8.24(s，1H)，8.01(s，1H)，7.82(d，J＝8.0Hz，1H)，7.70(d，J＝9.6Hz，1H)，7.48-7.41(m，3H)，7.37(d，J＝8.4Hz，2H)，7.30(d，J＝2.4Hz，1H)，7.26-7.19(m，2H)，7.10-7.04(m，1H)，6.86-6.82(m，1H)，6.21-6.17(m，1H)，5.86-5.64(m，1H)，5.51-5.34(m，1H)，5.25-5.04(m，1H)，4.91-4.87(m，1H)，4.55-4.39(m，2H)，4.28(s，1H)，3.99-3.71(m，10H)，3.08-2.78(m，8H)，2.41-2.31(m，6H)，2.21(t，J＝7.2Hz，3H)，2.03(s，5H)，1.59-1.44(m，3H)，1.30(s，8H)，1.15-1.07(m，3H)，0.93(s，12H)。
5.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-[3-[4-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]哌嗪-1-基]丙基]-1-哌啶基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002701
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1215.6[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.98(s，1H)，8.44(d，J＝7.8Hz，1H)，8.30(s，1H)，8.01(s，1H)，7.82(d，J＝8.8Hz，1H)，7.73(d，J＝9.4Hz，1H)，7.47-7.42(m，3H)，7.39-7.34(m，2H)，7.30(d，J＝2.3Hz，1H)，7.25-7.18(m，2H)，7.10-7.04(m，1H)，6.84(dd，J＝10.4，16.7Hz，1H)，6.19(dd，J＝2.2，16.7Hz，1H)，5.85-5.64(m，1H)，5.49-5.35(m，1H)，5.20-5.07(m，1H)，4.89(t，J＝7.3Hz，1H)，4.53-4.38(m，2H)，4.32-4.22(m，1H)，4.00-3.75(m，9H)，3.62-3.51(m，4H)，2.90-2.73(m，5H)，2.28-1.94(m，13H)，1.72-1.58(m，3H)，1.42-1.29(m，9H)，1.21-1.11(m，5H)，0.92(s，9H)。
6.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-[2-[4-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]哌嗪-1-基]乙氧基]-1-哌啶基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002711
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1217.6[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.97(s，1H)，8.43(d，J＝7.7Hz，1H)，8.19(s，1H)，8.00(s，1H)，7.80(d，J＝8.4Hz，1H)，7.74(d，J＝9.5Hz，1H)，7.46-7.39(m，3H)，7.35(d，J＝8.2Hz，2H)，7.30-7.16(m，3H)，7.09-7.03(m，1H)，6.83(dd，J＝10.5，16.8Hz，1H)，6.17(dd，J＝2.2，16.8Hz，1H)，5.77-5.70(m，1H)，5.41(d，J＝5.6Hz，1H)，5.27-4.79(m，2H)，4.50-4.39(m，2H)，4.27(s，1H)，3.94-3.75(m，7H)，3.62-3.53(m，1H)，3.44(d，J＝6.2Hz，6H)，3.29-3.27(m，2H)，3.03-2.80(m，2H)，2.70-2.56(m，4H)，2.45(s，4H)，2.40-2.35(m，4H)，2.33-2.16(m，6H)，2.09-1.99(m，1H)，1.87-1.70(m，3H)，1.47-1.34(m，5H)，1.30(d，J＝6.2Hz，2H)，0.92(s，9H)。
7.(2S，4R)-1-((2S)-2-(2-(4-(2-((1-((2R)-2-((4-(4-丙烯酰基哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)氧基)乙基)哌嗪-1-基)乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002721
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1217.6[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.98(s，1H)，8.43(d，J＝7.6Hz，1H)，8.32(s，1H)，8.00(s，1H)，7.81(d，J＝8.4Hz，1H)，7.69(d，J＝9.6Hz，1H)，7.48-7.31(m，5H)，7.29-7.19(m，3H)，7.06(dd，J＝2.4，6.1Hz，1H)，6.83(dd，J＝10.4，16.7Hz，1H)，6.18(dd，J＝2.3，16.7Hz，1H)，5.79-5.71(m，1H)，5.45-5.36(m，1H)，5.12(s，1H)，4.93-4.85(m，1H)，4.50-4.34(m，2H)，4.28-4.21(m，1H)，3.94-3.75(m，7H)，3.61-3.53(m，1H)，3.45(s，4H)，3.31-3.31(m，2H)，3.01(d，J＝16.3Hz，2H)，2.89-2.70(m，4H)，2.61(dd，J＝7.0，12.6Hz，2H)，2.45-2.35(m，12H)，2.18-2.00(m，3H)，1.80-1.66(m，3H)，1.37(d，J＝6.9Hz，2H)，1.33-1.21(m，5H)，0.91(s，9H)。
8.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[3-[3-[4-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]哌嗪-1-基]丙氧基]氮杂环丁烷-1-基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002731
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1203.5[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.99(s，1H)，8.43(d，J＝7.6Hz，1H)，8.20(s，1H)，8.01(s，1H)，7.82(d，J＝8.1Hz，1H)，7.53(d，J＝9.6Hz，1H)，7.48-7.42(m，3H)，7.40-7.34(m，2H)，7.30(d，J＝2.2Hz，1H)，7.25-7.19(m，2H)，7.07(dd，J＝2.4，4.8Hz，1H)，6.84(dd，J＝10.4，16.8Hz，1H)，6.19(dd，J＝2.4，16.8Hz，1H)，5.79-5.72(m，1H)，5.41(dt，J＝6.4，12.4Hz，1H)，4.91(quin，J＝7.2Hz，1H)，4.53-4.40(m，2H)，4.28(br s，1H)，4.07(br t，J＝5.6Hz，1H)，3.97-3.79(m，9H)，3.61(brd，J＝6.8Hz，5H)，3.30(br s，4H)，3.10(br d，J＝8.8Hz，2H)，2.96(br dd，J＝6.8，16.4Hz，3H)，2.66-2.59(m，2H)，2.46(s，3H)，2.39(br d，J＝8.4Hz，2H)，2.27-2.20(m，4H)，2.09-2.01(m，1H)，1.77(ddd，J＝4.6，8.8，13.2Hz，1H)，1.62-1.53(m，2H)，1.38(d，J＝7.2Hz，3H)，1.31(dd，J＝2.0，6.4Hz，3H)，0.92(s，9H)。
9.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]氮杂环丁烷-3-基]哌嗪-1-基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002741
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1144.3[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.90-10.17(m，1H)，8.98(s，1H)，8.42(d，J＝7.6Hz，1H)，8.30(s，1H)，7.98-8.03(m，1H)，7.81(d，J＝8.3Hz，1H)，7.62-7.70(m，1H)，7.41-7.45(m，3H)，7.34-7.38(m，2H)，7.28(d，J＝2.0Hz，1H)，7.22(d，J＝3.8Hz，2H)，7.07(d，J＝2.3Hz，1H)，6.78-6.89(m，1H)，6.20(d，J＝2.1Hz，1H)，5.75(d，J＝12.6Hz，1H)，5.08-5.25(m，2H)，4.88(s，1H)，4.40-4.51(m，2H)，4.25-4.31(m，1H)，3.75-3.95(m，10H)，3.52-3.63(m，4H)，2.96-3.05(m，2H)，2.86-2.91(m，2H)，2.83(d，J＝5.5Hz，2H)，2.69-2.74(m，1H)，2.56-2.60(m，1H)，2.45(s，3H)，2.14-2.27(m，4H)，2.00-2.08(m，2H)，1.71-1.79(m，1H)，1.34-1.39(m，3H)，1.26-1.30(m，3H)，0.91(s，9H)。
10.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[3-[4-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]哌嗪-1-基]氮杂环丁烷-1-基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002751
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1144.4[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.16-9.93(m，1H)，8.98(s，1H)，8.44(d，J＝7.6Hz，1H)，8.02(s，1H)，7.82(d，J＝8.4Hz，1H)，7.53(d，J＝9.6Hz，1H)，7.48-7.18(m，9H)，7.09-7.05(m，1H)，6.86-6.82(m，1H)，6.21-6.17(m，1H)，5.79-5.72(m，1H)，5.48-5.36(m，1H)，5.14(d，J＝3.2Hz，1H)，4.92-4.88(m，1H)，4.49-4.38(m，2H)，4.28(s，1H)，4.00-3.70(m，9H)，3.64-3.54(m，2H)，3.07(s，2H)，2.99-2.75(m，4H)，2.66-2.60(m，1H)，2.46(s，4H)，2.23-1.97(m，6H)，1.78-1.74(m，1H)，1.42-1.18(m，9H)，0.91(s，9H)。
11.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]-1-哌啶基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002761
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1158.6[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.98(s，1H)，8.43(d，J＝7.2Hz，1H)，8.22(s，2H)，8.01(s，1H)，7.81(d，J＝8.1Hz，1H)，7.54-7.42(m，4H)，7.38-7.33(m，2H)，7.28(s，1H)，7.21(d，J＝6.4Hz，2H)，7.07(d，J＝4.4Hz，1H)，6.83(dd，J＝10.8，16.9Hz，1H)，6.18(d，J＝18.4Hz，1H)，5.75(d，J＝12.8Hz，1H)，5.39(d，J＝6.0Hz，1H)，4.89(br d，J＝8.0Hz，1H)，4.54-4.38(m，2H)，4.27(s，1H)，3.92(s，4H)，3.85(s，2H)，3.78(s，2H)，3.55(d，J＝10.0Hz，2H)，3.03(s，4H)，2.84(d，J＝10.0Hz，2H)，2.72(s，2H)，2.45(s，3H)，2.41(s，8H)，2.24(s，2H)，2.04(s，1H)，1.75(s，2H)，1.37(d，J＝4.8Hz，3H)，1.30(d，J＝6.4Hz，3H)，0.91(s，9H)。
12.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]氮杂环丁烷-3-基]甲基]哌嗪-1-基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002771
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1158.6[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.02(br s，1H)，8.99(s，1H)，8.74-8.34(m，1H)，8.17(s，1H)，8.02(s，1H)，7.82(d，J＝8.1Hz，1H)，7.68(br d，J＝9.4Hz，1H)，7.48-7.41(m，3H)，7.40-7.33(m，2H)，7.29(d，J＝2.3Hz，1H)，7.27-7.20(m，2H)，7.08(d，J＝2.3Hz，1H)，6.84(dd，J＝10.4，16.6Hz，1H)，6.19(dd，J＝2.3，16.6Hz，1H)，5.79-5.73(m，1H)，5.25-5.05(m，2H)，4.90(br t，J＝7.1Hz，1H)，4.51-4.35(m，2H)，4.28(br s，1H)，3.93(br s，4H)，3.86(br s，2H)，3.79(br s，3H)，3.63-3.50(m，3H)，3.49-3.41(m，4H)，3.04-2.79(m，5H)，2.71(br s，1H)，2.46(s，3H)，2.45-2.38(m，6H)，2.10-2.01(m，1H)，1.80-1.71(m，1H)，1.49-1.35(m，3H)，1.31-1.24(m，3H)，0.93(s，9H)。
(2S，4R)-1-((S)-2-(2-(2-(2-(((3R，5S)-5-(((4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：(S)-2-(氰甲基)-4-(2-(((2S，4R)-4-(2-(2-(2-乙氧基-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002781
在0℃下，向(2S)-2-(氰甲基)-4-[2-[[(2S，4R)-4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(300mg，0.43mmol，1eq)在二氯甲烷(10mL)中的混合物中加入乙酸铑(ii)二聚体(9mg，0.042mmol，0.1eq)，然后加入2-重氮乙酸乙酯(146mg，1.28mmol，3eq)，然后将反应混合物在25℃下搅拌12小时。将反应混合物在真空下浓缩。将残余物通过制备型TLC(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)纯化，得到呈黄色油状物的化合物(2S)-2-(氰甲基)-4-[2-[[(2S，4R)-4-[2-[2-(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(111mg，0.14mmol，33％产率)。LC/MS(ESI)m/z：788.3[M+1]+。
步骤2：2-(2-(2-(((3R，5S)-5-(((4-((S)-4-(叔丁氧羰基)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙酸的制备
Figure BDA0003980908660002782
向(2S)-2-(氰甲基)-4-[2-[[(2S，4R)-4-[2-[2-(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(110mg，0.14mmol，1eq)在水(1mL)和四氢呋喃(1mL)和甲醇(1mL)中的混合物中加入氢氧化锂一水合物(126mg，3mmol，21.49eq)，然后将反应混合物在25℃下搅拌2小时。加入四氢呋喃(5mL)和水(5mL)，然后将反应混合物的pH值调节至2-3，将水相用二氯甲烷和甲醇(10∶1)(20mL×4)萃取，用无水硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩从而得到呈黄色油状物的化合物2-[2-[2-[(3R，5S)-5-[[4-[(3S)-4-叔丁氧羰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙酸(131mg)。
步骤3：(S)-2-(氰甲基)-4-(2-(((2S，4R)-4-(2-(2-(2-(((S)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002791
向(2S，4R)-1-[(2S)-2-氨基-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(134mg，0.28mmol，2eq，盐酸盐)和2-[2-[2-[(3R，5S)-5-[[4-[(3S)-4-叔丁氧羰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙酸(106mg，0.14mmol，1eq)在N-甲基-2-吡咯烷酮(4mL)中的混合物中加入1-羟基苯并三唑(28mg，0.21mmol，1.5eq)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(40mg，0.21mmol，1.5eq)、N，N-二异丙基乙胺(108mg，0.84mmo1，0.1mL，6eq)，然后将反应混合物在20℃下搅拌12小时。将残余物倒入冰水(20mL)中。将水相用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。将合并的有机相用盐水(20mL)洗涤，用无色硫酸钠干燥，过滤并在真空中浓缩。将残余物通过制备型TLC(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)纯化从而得到呈黄色油状物的化合物(2S)-2-(氰甲基)-4-[2-[[(2S，4R)-4-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(90mg)。LC/MS(ESI)m/z：594.0[M/2+1]+
步骤4：(2S，4R)-1-((S)-2-(2-(2-(2-(((3R，5S)-5-(((4-((S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660002801
向(2S)-2-(氰甲基)-4-[2-[[(2S，4R)-4-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(35mg，0.030mmol，1eq)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中加入三氟乙酸(462mg，4.05mmol，0.3mL，137.35eq)。将混合物在15℃下搅拌20分钟。将反应混合物在真空下浓缩，得到呈黄色油状物的化合物(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[(3R，5S)-5-[[4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(35mg，0.030mmol，99％产率，三氟乙酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：1086.7[M+1]+。
步骤5：(2S，4R)-1-((S)-2-(2-(2-(2-(((3R，5S)-5-(((4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660002811
向(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[(3R，5S)-5-[[4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(30mg，0.025mmol，1eq，三氟乙酸盐)在二氯甲烷(5mL)中的混合物中加入2，6-二甲基吡啶(27mg，0.25mmol，10eq)，然后在-65℃下加入在二氯甲烷(1.8mL)中的丙-2-烯酰氯(2mg，0.022mmol，0.9eq)，然后将反应混合物在-65℃下搅拌10分钟。加入水(10mL)并搅拌0.5分钟。将水相用二氯甲烷(20mL×2)萃取并在真空下浓缩。将残余物通过半制备型反相HPLC纯化，然后浓缩收集的级分以除去大部分乙腈。将溶液冻干得到呈白色固体的化合物(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[(3R，5S)-5-[[4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(9.1mg，0.007mmol，30％产率，97％纯度，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：570.8[M/2+1]+；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.98(s，1H)，8.44(br d，J＝7.6Hz，1H)，8.30(s，1H)，8.22-8.14(m，1H)，7.97-7.88(m，1H)，7.64(d，J＝8.2Hz，1H)，7.59-7.49(m，2H)，7.48-7.39(m，3H)，7.38-7.33(m，2H)，7.22(d，J＝7.2Hz，1H)，6.88(br s，1H)，6.20(br d，J＝17.4Hz，1H)，5.78(brd，J＝11.6Hz，1H)，5.06-4.63(m，2H)，4.55(br d，J＝9.5Hz，1H)，4.45(br t，J＝8.1Hz，1H)，4.34-4.22(m，2H)，4.17-4.09(m，3H)，4.08-3.98(m，3H)，3.98-3.91(m，2H)，3.61(brd，J＝3.1Hz，2H)，3.58(br d，J＝3.9Hz，4H)，3.56-3.53(m，1H)，3.54(br s，2H)，3.53-3.48(m，4H)，3.29(br dd，J＝6.2，9.5Hz，2H)，3.24-3.17(m，2H)，3.07-2.90(m，4H)，2.78-2.63(m，2H)，2.45(s，3H)，2.34(s，3H)，2.19(br dd，J＝6.0，9.4Hz，1H)，2.10-2.00(m，1H)，1.92-1.72(m，3H)，1.37(br d，J＝7.0Hz，3H)，0.94(s，9H)。
以下化合物可以按照与(2S，4R)-1-((S)-2-(2-(2-(2-(((3R，5S)-5-(((4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成的合成类似的方式制备。
1.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[(3R，5S)-5-[[4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002831
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1316.8[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.67(s，1H)，8.26-8.14(m，1H)，7.90-7.81(m，1H)，7.61(d，J＝8.4Hz，1H)，7.54-7.46(m，3H)，7.46-7.33(m，6H)，7.14(d，J＝7.2Hz，1H)，6.67-6.53(m，1H)，6.39(d，J＝15.6Hz，1H)，5.83(d，J＝10.8Hz，1H)，5.13-5.04(m，1H)，4.73(t，J＝8.0Hz，1H)，4.57(d，J＝8.8Hz，2H)，4.49(s，1H)，4.37(dd，J＝4.8，11.6Hz，1H)，4.26(s，2H)，4.22-4.13(m，2H)，4.22-3.96(m，6H)，3.75-3.54(m，28H)，3.50-3.27(m，4H)，3.22-2.91(m，4H)，2.70(s，3H)，2.53(s，3H)，2.51-2.46(m，1H)，2.14-2.01(m，3H)，1.48(d，J＝6.8Hz，3H)，1.06(s，9H)
2.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[(3R，5S)-5-[[4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002841
(甲酸盐，灰白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1404.8[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.60(s，1H)，8.15-8.12(m，1H)，7.80-7.76(m，1H)，7.53(d，J＝8.0Hz，1H)，7.46-7.38(m，3H)，7.37-7.25(m，6H)，7.06(d，J＝7.2Hz，1H)，6.61-6.43(m，1H)，6.32(d，J＝16.4Hz，1H)，5.75(d，J＝10.8Hz，1H)，5.07-4.92(m，2H)，4.65(t，J＝8.0Hz，1H)，4.57-4.48(m，2H)，4.42(brs，1H)，4.30(dd，J＝5.2，11.6Hz，1H)，4.19(s，2H)，4.14-4.05(m，2H)，4.00-3.85(m，5H)，3.70-3.35(m，40H)，3.15-3.00(m，1H)，2.95-2.70(m，4H)，2.64(s，3H)，2.59(dd，J＝3.2，10.8Hz，1H)，2.45(s，3H)，2.44-2.35(m，1H)，2.18-2.10(m，1H)，2.05-1.95(m，2H)，1.40(d，J＝6.8Hz，3H)，0.99(s，9H)。
3.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[(3R，5S)-5-[[4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660002851
(甲酸盐，黄色固体)。LC/MS(ESI)m/z：747.1[M/2+1]+.1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.85(s，1H)，8.24-8.09(m，1H)，7.91-7.80(m，1H)，7.62(d，J＝8.0Hz，1H)，7.56-7.46(m，3H)，7.45-7.34(m，6H)，7.14(d，J＝7.2Hz，1H)，6.67-6.51(m，1H)，6.39(d，J＝16.4Hz，1H)，5.83(d，J＝10.8Hz，1H)，5.11-4.86(m，3H)，4.81-4.67(m，3H)，4.57(m，2H)，4.37-4.29(m，4H)，4.27-4.21(m，1H)，4.11-3.98(m，5H)，3.73-3.57(m，42H)，3.53-3.47(m，1H)，3.43-3.30(s，3H)，3.22(d，J＝8.4Hz，1H)，3.13(s，3H)，3.06-2.89(m，3H)，2.79-2.67(m，1H)，2.54(s，3H)，2.49-2.35(m，2H)，2.29-2.07(m，2H)，1.47(d，J＝6.8Hz，3H)，1.05(s，9H)。
(2S，4R)-N-(2-(2-(2-(((3R，5S)-5-(((4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-4-羟基-1-((R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：(2S，4R)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002852
向(2S，4R)-4-羟基-2-(羟甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(25g，115.07mmol，1eq)在二氯甲烷(400mL)中的溶液中加入三乙胺(23.29g，230.14mmol，32.03mL，2eq)和N，N-二甲基吡啶-4-胺(1.41g，11.51mmol，0.1eq)，然后在0℃下加入叔丁基二甲基氯硅烷(18.21g，120.82mmol，1.05eq)，将混合物在25℃下搅拌48小时。使用旋转蒸发器在水浴上在减压下蒸发溶液。将此粗产物通过硅胶柱色谱法(EA∶PE＝0∶1至1∶5)纯化，从而得到呈无色油状物的化合物(2S，4R)-2-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-4-羟基-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(40g)。1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ4.45(s，1H)，4.00-3.91(m，1H)，3.56-3.53(m，2H)，3.40(s，2H)，2.23-2.15(m，2H)，2.00-1.90(m，1H)，1.45(s，9H)，0.89(s，9H)，0.01(s，6H)。
步骤2：(2S，4R)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-4-(2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基的制备)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002861
在0℃下，向(2S，4R)-2-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-4-羟基-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(40g，120.66mmol，1eq)在四氢呋喃(500mL)中的溶液中加入氢化钠(7.24g，180.98mmol，60％，在矿物油中，1.5eq)。将反应混合物在25℃下搅拌1小时。然后加入4-甲基苯磺酸2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙酯(45.71g，132.72mmol，1.1eq)，并将反应混合物在25℃下再搅拌12小时。将反应混合物用饱和氯化铵水溶液(200mL)淬灭，然后用乙酸乙酯(100mL×3)萃取。合并有机层并在真空下蒸发从而得到残余物。将残余物通过硅胶柱色谱法(石油醚/乙酸乙酯＝1/0至2/1)纯化从而得到产物。得到呈浅黄色油状物的(2S，4R)-2-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-4-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(40.8g，83.79mmol，68％产率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ4.65-4.64(m，1H)，3.90-3.85(m，4H)，3.70-3.39(m，12H)，2.23-2.13(m，1H)，2.10-1.92(m，1H)，1.91-1.49(m，6H)，1.45(s，9H)，0.88(s，9H)，0.03(s，6H)。
步骤3：(2S，4R)-2-(羟甲基)-4-(2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基）乙氧基)乙氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002871
在25℃下，向(2S，4R)-2-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-4-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(10.8g，21.44mmol，1eq)在四氢呋喃(125mL)中的溶液中加入四丁基氟化铵(1M，23.6mL，1.1eq)。将混合物在25℃下搅拌12小时。在真空下除去溶剂从而得到残余物。将残余物通过硅胶柱色谱法(石油醚/乙酸乙酯＝10/1至1/1)纯化。得到呈浅黄色油状物的产物(2S，4R)-2-(羟甲基)-4-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(6.35g，16.30mmol，76％产率)。
步骤4：((2S，4R)-1-甲基-4-(2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)吡咯烷-2-基)甲醇的制备
Figure BDA0003980908660002872
在25℃下，向(2S，4R)-2-(羟甲基)-4-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(20g，51.35mmol，1eq)在四氢呋喃(350mL)中的溶液中加入氢化铝锂(4.87g，128.38mmol，2.5eq)。将混合物在60℃下搅拌16小时。将反应混合物用水(10mL)淬灭，然后加入硅藻土(20g)。过滤混合物并收集滤液，然后在真空下蒸发从而得到呈浅黄色油状物的[(2S，4R)-1-甲基-4-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]吡咯烷-2-基]甲醇(14g)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ4.64-4.63(m，1H)，4.01-3.97(m，1H)，3.87-3.85(m，2H)，3.70-3.46(m，9H)，3.40-3.38(m，2H)，2.63-2.61(m，1H)，2.40-2.36(m，1H)，2.33(s，3H)，2.13-2.02(m，1H)，1.88-1.43(m，8H)。
步骤5：4-((S)-4-((苄氧基)羰基)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基)-2-(((2S，4R)-1-甲基-4-(2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5，8-二氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-7(6H)-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002881
在氮气下向[(2S，4R)-1-甲基-4-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]吡咯烷-2-基]甲醇(6.22g，20.49mmol，1.2eq)和4-[(3S)-4-苄氧基羰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-2-氯-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-7-羧酸叔丁酯(9g，17.08mmol，1eq)在二噁烷(180mL)中的溶液中加入甲磺酸(2-二环己基膦基-2’，6’-二异丙氧基-1，1’-联苯基)(2’-氨基-1，1’-联苯-2-基)钯(II)(1.43g，1.71mmol，0.1eq)和碳酸铯(16.69g，51.23mmol，3eq)。将反应混合物在氮气下在90℃下搅拌6小时。在真空下除去溶剂，得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯)纯化从而得到产物。得到呈棕色固体的产物4-[(3S)-4-苄氧基羰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S，4R)-1-甲基-4-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]吡咯烷-2-基]甲氧基]-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-7-羧酸叔丁酯(7.4g，6.63mmol，39％产率，71％纯度)。LC/MS(ESI)m/z：794.5[M+1]+。
步骤6：(S)-2-(氰甲基)-4-(2-(((2S，4R)-4-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯的制备
Figure BDA0003980908660002891
向4-[(3S)-4-苄氧基羰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S，4R)-1-甲基-4-[2-(2-四氢吡喃-2-基氧基乙氧基)乙氧基]吡咯烷-2-基]甲氧基]-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-7-羧酸叔丁酯(7g，8.82mmol，1eq)在二氯甲烷(100mL)中的溶液中加入三氟乙酸(25.13g，220.42mmol，16.3mL，25eq)。将混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)淬灭，然后用二氯甲烷(30mL×3)萃取。将合并的有机层在真空下蒸发以除去溶剂，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC纯化。得到呈浅黄色固体的产物(2S)-2-(氰甲基)-4-[2-[[(2S，4R)-4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸苄酯(2.76g，4.13mmol，47％产率，91％纯度)。LC/MS(ESI)m/z：610.4[M+1]+；1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.40-7.37(m，5H)，5.19(s，2H)，4.65(s，1H)，4.37(dd，J＝11.2Hz，J＝4.4Hz，1H)，4.18-2.58(m，26H)，2.46(s，3H)，2.38(dd，J＝9.6Hz，J＝6.0Hz，1H)，2.01-1.95(m，3H)。
步骤7：(S)-2-(氰甲基)-4-(2-(((2S，4R)-4-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯的制备
Figure BDA0003980908660002892
在氮气下，向(2S)-2-(氰甲基)-4-[2-[[(2S，4R)-4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸苄酯(2.2g，3.61mmol，1eq)和1-溴萘(1.34g，6.49mmol，0.9mL，1.8eq)在二噁烷(50mL)中的溶液中加入甲磺酸(2-二环己基膦基-2’，6’-二异丙氧基-1，1’-联苯基)(2’-氨基-1，1’-联苯-2-基)钯(II)(301.8mg，0.36mmol，0.1eq)和碳酸铯(3.53g，10.82mmol，3eq)。在氮气下，将混合物在90℃下搅拌12小时。将反应混合物用水(50mL)淬灭，并用乙酸乙酯(40mL×3)萃取。合并有机层并在真空下蒸发从而得到残余物。将残余物通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化从而得到产物。得到呈黄色油状物的产物(2S)-2-(氰甲基)-4-[2-[[(2S，4R)-4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸苄酯(1.15g，1.39mmol，38％产率，89％纯度)。LC/MS(ESI)m/z：736.3[M+1]+；1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.22-8.20(m，1H)，7.87-7.85(m，1H)，7.62(d，J＝8.0Hz，1H)，7.51-7.36(m，8H)，7.15(d，J＝6.8Hz，1H)，5.21(s，2H)，4.70(s，1H)，4.38-4.10(m，8H)，3.76-3.31(m，14H)，3.10-2.72(m，6H)，2.47(s，3H)，2.39-2.35(m，1H)，2.14-2.08(m，1H)，2.03-1.96(m，1H)。
步骤8：2-((S)-4-(2-(((2S，4R)-4-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的制备
Figure BDA0003980908660002901
向(2S)-2-(氰甲基)-4-[2-[[(2S，4R)-4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸苄酯(1.38g，1.88mmol，1eq)和氢氧化铵(1.82g，12.98mmol，2mL，25％纯度，6.92eq)在甲醇(60mL)和四氢呋喃(3mL)中的溶液中加入在活性炭上的钯催化剂(200mg，10％纯度)。将混合物脱气并充入氢气，然后在25℃下在氢气(15psi)存在下搅拌12小时。向反应混合物中加入四氢呋喃(40mL)并过滤。在真空下除去有机溶剂，得到呈淡黄色固体的2-[(2S)-4-[2-[[(2S，4R)-4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(1.1g)。LC/MS(ESI)m/z：602.3[M+1]+；1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.23-8.21(m，1H)，7.87-7.85(m，1H)，7.62(d，J＝8.4Hz，1H)，7.51-7.49(m，2H)，7.43(t，J＝8.4Hz，1H)，7.15-7.13(m，1H)，4.41-4.39(m，1H)，4.26(s，2H)，4.22(dd，J＝11.2Hz，J＝6.4Hz，1H)，4.03(d，J＝12.0Hz，1H)，3.88(d，J＝12.0Hz，1H)，3.76-3.72(m，3H)，3.67-3.54(m，6H)，3.45-2.85(m，12H)，2.57-2.55(m，2H)，2.47(s，3H)，2.39(dd，J＝9.6Hz，J＝6.0Hz，1H)，2.11-1.84(m，2H)。
步骤9：(S)-2-(氰甲基)-4-(2-(((2S，4R)-4-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002911
向2-[(2S)-4-[2-[[(2S，4R)-4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(800mg，1.33mmol，1eq)在四氢呋喃(30mL)和水(30mL)中的溶液中加入碳酸氢钠(223.4mg，2.66mmol，0.1mL，2eq)和二碳酸二叔丁酯(1.45g，6.65mmol，1.5mL，5eq)。将混合物在25℃下搅拌6小时。通过加入水(20mL)淬灭反应混合物，然后用乙酸乙酯(30mL×3)萃取该混合物。将有机相用盐水(30mL×2)洗涤，在真空下蒸发从而得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化。得到呈浅黄色固体的(2S)-2-(氰甲基)-4-[2-[[(2S，4R)-4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(670mg，0.95mmol，72％产率)。LC/MS(ESI)m/z：702.4[M+1]+；1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.23-8.20(m，1H)，7.87-7.85(m，1H)，7.62(d，J＝8.4Hz，1H)，7.51-7.49(m，2H)，7.43(t，J＝8.4Hz，1H)，7.15-7.14(m，1H)，4.63(s，1H)，4.41-4.39(m，1H)，4.26-4.22(m，3H)，4.12(d，J＝12.0Hz，1H)，3.75-3.31(m，14H)，3.10-2.76(m，6H)，2.48(s，3H)，2.40(dd，J＝9.6Hz，J＝6.0Hz，1H)，2.37-2.05(m，2H)，1.52(s，9H)。
步骤10：(S)-2-(氰甲基)-4-(2-(((2S，4R)-1-甲基-4-(2-(2-(甲苯磺酰氧基)乙氧基)乙氧基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002921
向(2S)-2-(氰甲基)-4-[2-[[(2S，4R)-4-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(300mg，0.43mmol，1eq)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中加入三乙胺(129.8mg，1.28mmol，0.2mL，3eq)、对甲苯磺酰氯(163mg，0.85mmol，2eq)和二甲基氨基吡啶(10.4mg，0.09mmol，0.2eq)。将混合物在25℃下搅拌12小时。在真空下除去溶剂以得到残余物。将残余物通过制备型TLC(二氧化硅，二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化。得到呈浅黄色固体的产物(2S)-2-(氰甲基)-4-[2-[[(2S，4R)-1-甲基-4-[2-[2-(对甲苯磺酰氧基)乙氧基]乙氧基]吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(233mg，0.27mmol，64％产率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.22-8.20(m，1H)，7.87-7.85(m，1H)，7.81-7.75(m，2H)，7.62(d，J＝8.0Hz，1H)，7.51-7.49(m，2H)，7.43(t，J＝8.0Hz，1H)，7.35(d，J＝8.0Hz，2H)，7.15-7.12(m，1H)，4.63(s，1H)，4.43-4.39(m，1H)，4.27-3.93(m，8H)，3.72-3.27(m，12H)，3.07-2.75(m，6H)，2.49(s，3H)，2.45(s，3H)，2.41-2.36(m，1H)，2.09-1.98(m，2H)，1.52(s，9H)。
步骤11：(S)-2-(氰甲基)-4-(2-(((2S，4R)-4-(2-(2-(2-(((2S，4R)-4-羟基-1-((R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-甲酰氨基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯和(S)-2-(氰甲基)-4-(2-(((2S，4R)-4-(2-(2-(2-(((2S，4R)-4-羟基-1-((S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-甲酰氨基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)乙氧基)乙氧基)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660002941
向(2S)-2-(氰甲基)-4-[2-[[(2S，4R)-1-甲基-4-[2-[2-(对甲苯磺酰氧基)乙氧基]乙氧基]吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(250mg，0.29mmol，1eq)和(2S，4R)-4-羟基-N-[[2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-1-[3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(152.9mg，0.31mmol，1.05eq)在乙腈(8mL)中的溶液中加入碳酸铯(190.3mg，0.58mmol，2eq)。将混合物在80℃下搅拌14小时。加入水(30mL)后，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取混合物。在真空下蒸发合并的有机相，得到残余物。将残余物通过制备型TLC(二氧化硅，二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化。得到呈黄色固体的含有两种异构体的产物(255mg)。然后通过SFC进一步纯化产物。得到呈黄色油状物的产物(2S)-2-(氰甲基)-4-[2-[[(2S，4R)-4-[2-[2-[2-[[[(2S，4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]甲基]-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(80mg，0.06mmol，21％产率，92％纯度)。得到呈浅黄色固体的产物(2S)-2-(氰甲基)-4-[2-[[(2S，4R)-4-[2-[2-[2-[[[(2S，4R)-4-羟基-1-[(2S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]甲基]-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(120mg，0.096mmol，33％产率，95％纯度)。LC/MS(ESI)m/z：1182.7[M+1]+。
步骤12：(2S，4R)-N-(2-(2-(2-(((3R，5S)-5-(((4-((S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-4-羟基-1-((R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660002951
向(2S)-2-(氰甲基)-4-[2-[[(2S，4R)-4-[2-[2-[2-[[[(2S，4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]甲基]-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(80mg，0.067mmol，1eq)在二氯甲烷(8mL)中的溶液中加入三氟乙酸(3.08g，27.0mmol，2.0mL，400eq)。将混合物在20℃下搅拌2小时。在真空下蒸发反应混合物以得到呈黄色油状物的产物(2S，4R)-N-[[2-[2-[2-[(3R，5S)-5-[[4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(73mg)。
步骤13：(2S，4R)-N-(2-(2-(2-(((3R，5S)-5-(((4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-4-羟基-1-((R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660002961
在氮气下，向(2S，4R)-N-[[2-[2-[2-[(3R，5S)-5-[[4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(73mg，0.067mmol，1eq)和2，6-二甲基吡啶(230mg，2.15mmol，32eq)在二氯甲烷(8mL)和N，N-二甲基甲酰胺(1mL)中的混合溶剂中的溶液中加入在二氯甲烷(0.2mL)中的丙-2-烯酰氯(6.1mg，0.067mmol，1eq)。将混合物在-65℃下搅拌10分钟。将反应混合物用水(10mL)淬灭，然后升温至25℃，然后用二氯甲烷(20mL×3)萃取。合并合并的有机层并在真空下蒸发该有几层从而得到残余物。将残余物通过制备型HPLC纯化。得到呈浅黄色固体的产物(2S，4R)-N-[[2-[2-[2-[(3R，5S)-5-[[4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(44.1mg，0.034mmol，50％产率，96％纯度，三氟乙酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：1136.3[M+1]+；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.98(s，1H)，8.33-8.30(m，1H)，8.19-8.17(m，1H)，7.95-7.92(m，1H)，7.65(d，J＝8.0Hz，1H)，7.55-7.53(m，2H)，7.47(t，J＝7.6Hz，1H)，7.32-7.21(m，2H)，7.08-6.97(m，2H)，6.87(s，1H)，6.22-6.18(m，2H)，5.81-5.78(m，1H)，5.00-4.76(m，1H)，4.62-4.59(m，1H)，4.48-4.41(m，3H)，4.33-4.08(m，12H)，3.98-3.88(m，1H)，3.85(d，J＝8.4Hz，1H)，3.83-3.71(m，3H)，3.65-3.59(m，6H)，3.55-3.44(m，1H)，3.41-3.33(m，1H)，3.31-3.14(m，4H)，3.08-3.29(m，7H)，2.46-2.44(m，3H)，2.37-2.23(m，2H)，2.21-2.13(m，3H)，2.08-1.86(m，2H)，1.00-0.55(m，6H)。
(2S，4R)-N-(2-(2-(2-(((3R，5S)-5-(((4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-4-羟基-1-((S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：(2S，4R)-N-(2-(2-(2-(((3R，5S)-5-(((4-((S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-4-羟基-1-((S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660002981
向(2S)-2-(氰甲基)-4-[2-[[(2S，4R)-4-[2-[2-[2-[[[(2S，4R)-4-羟基-1-[(2S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]甲基]-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基]乙氧基]乙氧基]-1-甲基-吡咯烷-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(60mg，0.051mmol，1eq)在二氯甲烷(6mL)中的溶液中加入三氟乙酸(2.31g，20.26mmol，1.5mL，400eq)。将混合物在20℃下搅拌2小时。在真空下蒸发混合物从而得到呈浅黄色油状物的产物(2S，4R)-N-[[2-[2-[2-[(3R，5S)-5-[[4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(50mg)。
步骤2：(2S，4R)-N-(2-(2-(2-(((3R，5S)-5-(((4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-4-羟基-1-((S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660002991
在氮气下，向(2S，4R)-N-[[2-[2-[2-[(3R，5S)-5-[[4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(50mg，0.046mmol，1eq)和2，6-二甲基吡啶(184mg，1.72mmol，0.2mL，37eq)在二氯甲烷(4mL)和N，N-二甲基甲酰胺(0.5mL)的混合溶剂中的溶液中加入在二氯甲烷(0.2mL)中的丙-2-烯酰氯(3.7mg，0.042mmol，0.9eq)。将混合物在-65℃下搅拌10分钟。将混合物用水(10mL)淬灭并用二氯甲烷(20mL×3)萃取。合并有机层并在真空下蒸发该有机层从而得到残余物(50mg)。将残余物通过制备型HPLC纯化。得到呈灰白色固体的产物(2S，4R)-N-[[2-[2-[2-[(3R，5S)-5-[[4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(28.5mg，0.024mmol，52％产率，96％纯度，三氟乙酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：1136.3[M+1]+；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.99(s，1H)，8.65-8.37(m，1H)，8.20-8.17(m，1H)，7.95-7.93(m，1H)，7.67(d，J＝8.0Hz，1H)，7.56-7.54(m，2H)，7.47(t，J＝7.6Hz，1H)，7.36(d，J＝7.6Hz，1H)，7.24-7.22(m，1H)，7.06-7.00(m，2H)，6.88(s，1H)，6.23-6.18(m，2H)，5.81-5.78(m，1H)，4.99-4.78(m，1H)，4.63-4.59(m，1H)，4.48-4.17(m，12H)，4.10-4.07(m，3H)，3.96-3.92(m，1H)，3.82-3.73(m，5H)，3.67-3.55(m，5H)，3.46-3.37(m，2H)，3.30-3.17(m，4H)，3.00-2.97(m，7H)，2.48-2.44(m，3H)，2.39-2.22(m，2H)，2.21-2.13(m，3H)，2.09-1.88(m，2H)，0.97-0.93(m，3H)，0.79-0.76(m，3H)。
以下化合物可以按照与化合物(2S，4R)-N-(2-(2-(2-(((3R，5S)-5-(((4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-4-羟基-1-((R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-甲酰胺和(2S，4R)-N-(2-(2-(2-(((3R，5S)-5-(((4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)乙氧基)乙氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-4-羟基-1-((S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基)吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式制备。
1.(2S，4R)-N-[[2-[2-[(3R，5S)-5-[[4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660003001
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1092[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.99(s，1H)，8.69-8.33(m，1H)，8.32-8.25(m，1H)，8.22-8.14(m，1H)，7.88(s，1H)，7.65(d，J＝8.1Hz，1H)，7.59-7.51(m，2H)，7.47(t，J＝7.8Hz，1H)，7.39-7.33(m，1H)，7.39-7.16(m，1H)，7.11-6.98(m，2H)，6.96-6.75(m，1H)，6.30-5.92(m，2H)，5.82-5.73(m，1H)，5.06-4.74(m，1H)，4.50-4.33(m，2H)，4.32-4.22(m，3H)，4.18(br t，J＝4.5Hz，2H)，4.15(br s，2H)，4.13-4.07(m，2H)，4.03(br d，J＝11.4Hz，2H)，3.82-3.71(m，4H)，3.56(br d，J＝13.0Hz，1H)，3.43(br d，J＝9.6Hz，2H)，3.39(br s，1H)，3.33(br d，J＝3.5Hz，2H)，3.23-3.15(m，3H)，3.07-2.98(m，2H)，2.97-2.85(m，2H)，2.79-2.70(m，1H)，2.48-2.45(m，3H)，2.34(s，3H)，2.29-2.21(m，2H)，2.21-2.12(m，3H)，2.07-1.99(m，1H)，1.98-1.83(m，3H)，0.98-0.91(m，3H)，0.80-0.73(m，3H)。
2.(2S，4R)-N-[[2-[2-[(3R，5S)-5-[[4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-7-(1-萘基)-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-1-甲基-吡咯烷-3-基]氧基乙氧基]-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]-4-羟基-1-[(2S)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660003011
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1092[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.99(s，1H)，8.69-8.33(m，1H)，8.32-8.25(m，1H)，8.22-8.14(m，1H)，7.88(s，1H)，7.65(d，J＝8.1Hz，1H)，7.59-7.51(m，2H)，7.47(t，J＝7.8Hz，1H)，7.39-7.33(m，1H)，7.39-7.16(m，1H)，7.11-6.98(m，2H)，6.96-6.75(m，1H)，6.30-5.92(m，2H)，5.82-5.73(m，1H)，5.06-4.74(m，1H)，4.50-4.33(m，2H)，4.32-4.22(m，3H)，4.18(br t，J＝4.5Hz，2H)，4.15(br s，2H)，4.13-4.07(m，2H)，4.03(br d，J＝11.4Hz，2H)，3.82-3.71(m，4H)，3.56(br d，J＝13.0Hz，1H)，3.43(br d，J＝9.6Hz，2H)，3.39(br s，1H)，3.33(br d，J＝3.5Hz，2H)，3.23-3.15(m，3H)，3.07-2.98(m，2H)，2.97-2.85(m，2H)，2.79-2.70(m，1H)，2.48-2.45(m，3H)，2.34(s，3H)，2.29-2.21(m，2H)，2.21-2.12(m，3H)，2.07-1.99(m，1H)，1.98-1.83(m，3H)，0.98-0.91(m，3H)，0.80-0.73(m，3H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：2-[(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基]哌嗪-2-基]乙腈的制备
Figure BDA0003980908660003021
向(2S)-4-[6-氯-2-(2，2-二甲氧基乙氧基)-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4.3g，6.59mmol，1eq)在丙酮(10mL)中的溶液中加入HCl水溶液(12M，10mL，18.20eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。然后加入在H2O(20mL)中的NaHCO3(9.97g，118.69mmol，4.62mL，18eq)，并过滤所得沉淀并在减压下干燥，从而得到呈棕色固体的2-[(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(2.6g，4.82mmol，73％产率)。LC/MS(ESI)m/z：506.1[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.0-9.90(m，1H)，7.99-7.98(m，1H)，7.81-7.79(m，1H)，7，43-7.41(m，1H)，7.28-7.20(m，3H)，7.18-7.06(m，1H)，4.19-4.16(m，2H)，3.60-3.58(m，3H)，3.32-2.74(m，4H)，2.72-2.54(m，2H)。
步骤2：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660003031
向(2S，4R)-1-[(2S)-3，3-二甲基-2-[[2-(4-哌啶基甲氧基)乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(350mg，550.10umol，1eq，HCl)在异丙醇(4mL)中的溶液中加入NaOAc(225.64mg，2.75mmol，5eq)，然后加入在CH2Cl2(4mL)中的2-[(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(278.31mg，550.10umol，1eq)，并将所得混合物在25℃下搅拌1小时。然后加入2-甲基吡啶硼烷(294.20mg，2.75mmol，5eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌12小时。浓缩混合物，并将所得粗产物通过制备型HPLC(含22-52％CH3CN的水(0.1％TFA))纯化，从而得到呈黄色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(320mg，265.84umol，48％产率，TFA盐)。LC/MS(ESI)m/z：545.8[M/2+H]+。
步骤3：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660003041
向在-78℃下的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(170mg，151.82umol，1eq)在CH2Cl2(2mL)中的溶液中加入2，6-二甲基吡啶(162.68mg，1.52mmol，176.82uL，10eq)，然后加入丙-2-烯酰氯(13.74mg，151.82umol，12.38uL，1eq)，并将反应混合物在-78℃下搅拌10分钟。加入CH3OH(1mL)，并浓缩所得混合物。将所得黄色固体通过制备型HPLC(含20-50％CH3CN的水(0.225％甲酸))纯化，从而得到呈黄色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(104mg，84.41umol，56％产率，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：1173.5[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.86-8.88(m，1H)，8.53(s，1H)，8.10-8.09(m，1H)，7.75(d，J＝8.0Hz，1H)，7.44-7.39(m，6H)，7.39-7.21(m，3H)，7.05-7.04(m，1H)，7.03-6.81(m，1H)，6.35-6.30(m 1H)，5.88-5.84(m，1H)，5.10-4.98(m，2H)，4.73-4.71(m，2H)，4.57-4.51(m，4H)，4.07-4.06(m，2H)，3.86-3.60(m，12H)，3.20-3.15(m，4H)，3.15-2.60(m，3H)，2.46(s，3H)，2.24-2.22(m，1H)，2.05-1.86(m，5H)，1.58-1.48(m，3H)，1.05-1.03(m，9H)。
以下化合物可以按照与(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式制备
1.(2S，4S)-1-((2S)-2-(2-(2-((1-(2-((4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660003051
(白色固体，甲酸)。LC/MS(ESI)m/z：1173.4[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.00(s，1H)，8.99-8.95(m，1H)，8.40-8.33(m，1H)，8.15-8.08(m，2H)，7.84-7.78(m，1H)，7.47-7.27(m，8H)，7.24-7.13(m，2H)，7.08-7.04(m，1H)，6.98-6.75(m，1H)，6.25-6.17(m，1H)，5.83-5.73(m，1H)，5.35-5.30(m，1H)，5.01-4.84(m，2H)，4.54-4.46(m，2H)，4.40-4.29(m，3H)，4.28-4.08(m，3H)，3.96-3.93(m，2H)，3.90-3.80(m，2H)，3.66-3.50(m，7H)，3.42-3.37(m，2H)，3.29(br s，6H)，3.09-2.99(m，2H)，2.44(s，3H)，1.95-1.73(m，3H)，1.67-1.59(m，1H)，1.38-1.33(m，3H)，0.95-0.90(m，9H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660003061
向在异丙醇(10mL)中的2-[(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(500mg，988.28umol，1eq)中加入NaOAc(405.36mg，4.94mmol，5eq)，然后加入在CH2Cl2(10mL)中的(2S，4R)-1-[(2S)-3，3-二甲基-2-[[2-(4-哌啶基甲氧基)乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(628.79mg，988.28umol，1eq，HCl)，并将所得混合物在25℃下搅拌1小时。然后加入2-甲基吡啶硼烷(528.54mg，4.94mmol，5eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌12小时。在减压下浓缩混合物，并将所得残余物通过SiO2柱色谱法(石油醚/EtOAc＝1/1至CH2Cl2/CH3OH＝5/1)纯化，然后通过制备型HPLC(含13-43％CH3CN的水(0.1％TFA))纯化，从而得到呈黄色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(210mg，192.71umol，20％产率)。LC/MS(ESI)m/z：1089.6[M+H]+。
步骤2：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660003071
向在-78℃下的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(210mg，192.71umol，1eq)和2，6-二甲基吡啶(206.50mg，1.93mmol，224.45uL，10eq)在CH2Cl2(3mL)和DMF(3mL)中的混合物中加入丙-2-烯酰氯(17.44mg，192.71umol，15.71uL，1eq)，并将反应混合物在-78℃下搅拌0.5小时。将混合物用水(20mL)稀释并用CH2Cl2(3×25mL)萃取。用盐水(3×30mL)洗涤合并的有机萃取物，将其经无水Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得残余物通过制备型HPLC(含20-50％CH3CN的水(0.225％甲酸))纯化，从而得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(192.3mg，151.32umol，79％产率，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：1143.1[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.0(s，1H)，8.98(s，1H)，8.43(m，1H)，8.21(s，1H)，8.11(s，1H)，7.90-7.80(m，1H)，7.45-7.22(m，10H)，7.08-7.07(1H)，6.24-6.19(m，1H)，5.81-5.78(m，1H)，5.25-4.85(m，4H)，4.60-4.25(m，9H)，4.10-4.00(m，1H)，3.80(s，3H)，3.63-3.54(m，3H)，3.00-2.90(m，2H)，2.75-2.65(m，2H)，2.46(s，3H)，2.10-1.90(m，3H)，1.80-1.45(m，5H)，1.36-1.34(m，3H)，1.20-1.10(m，2H)，0.93-0.92(m，10H)。
以下化合物可以按照与(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式制备
1.(2S，4S)-1-((2S)-2-(2-((1-(2-((4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)甲氧基)乙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660003091
(白色固体，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：1143.4[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.04-10.00(m，1H)，8.99-8.96(m，1H)，8.41(s，1H)，8.15-8.10(m，1H)，7.83-7.76(m，1H)，7.46-7.35(m，6H)，7.32-7.26(m，2H)，7.25-7.12(m，3H)，7.08-7.04(m，1H)，6.76(s，1H)，6.25-6.18(m，1H)，5.83-5.77(m，1H)，5.33-5.28(m，1H)，5.03-4.83(m，2H)，4.67-4.46(m，3H)，4.41-4.30(m，3H)，4.28-4.05(m，3H)，3.97-3.50(m，8H)，3.42-3.36(m，2H)，3.29(brs，4H)，3.11-2.99(m，3H)，2.45(s，3H)，1.88-1.57(m，5H)，1.37-1.34(m，3H)，0.94(s，9H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
Figure BDA0003980908660003092
向(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(640mg，531.68umol，1eq，TFA)在DMF(3mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(206.15mg，1.60mmol，277.83uL，3eq)和HATU(606.48mg，1.60mmol，3eq)，然后逐滴加入2-氟丙-2-烯酸(57.46mg，638.01umol，1.2eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌2小时。将混合物倒在饱和K2CO3水溶液(30mL)上，并在搅拌30分钟后，用EtOAc/THF(40mL，1/1)萃取混合物。将有机萃取物经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩滤液。将所得粗产物通过制备型HPLC(含21-51％CH3CN的水(0.225％甲酸))纯化。将不纯的级分通过制备型HPLC(含28-58％CH3CN的水(0.225％甲酸))进一步纯化，得到呈淡黄色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(231.4mg，173.03umol，33％产率，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：1161.3[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.03(s，1H)，8.97(s，1H)，8.70-8.43(m，1H)，8.10(s，1H)，7.80-7.79(m，1H)，7.35-7.07(m，9H)，7.06(s，1H)，5.44-5.38(m，2H)，5，18-5.00(m，1H)，4.95-4.75(m，2H)，4.55-4.05(m，8H)，3.91(s，3H)，3.58-3.56(m，4H)，3.20-2.90(m，5H)，2.80-2.70(m 2H)，2.50(s，3H)，2.44-2.06(m，3H)，1.70-1.10(m，9H)，0.92(s，9H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：(2S)-4-[6-氯-8-氟-2-[(1R)-2-[4-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660003111
向(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(1R)-1-甲基-2-氧代-乙氧基]喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(40mg，0.06mmol，1.00eq)和(2S，4R)-1-[(2S)-3，3-二甲基-2-[[2-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(47mg，0.07mmol，1.10eq，盐酸盐)在CH2Cl2(0.5mL)和CH3OH(0.5mL)的混合物中的溶液中加入NaOAc(64mg，0.77mmol，12.00eq)，并将所得混合物在20℃下搅拌1小时。然后加入2-甲基吡啶硼烷(35mg，0.32mmol，5.00eq)，并将反应混合物在40℃下搅拌12小时。在减压下除去溶剂，并将所得残余物通过制备型薄层色谱法(CH2Cl2∶CH3OH＝20∶1)纯化从而得到呈黄色固体的(2S)-4-[6-氯-8-氟-2-[(1R)-2-[4-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(25mg，0.02mmol，31％产率)。LC/MS(ESI)m/z：1233.6[M+H]+。
步骤2：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660003121
向(2S)-4-[6-氯-8-氟-2-[(1R)-2-[4-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]乙氧基]-1-哌啶基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(25mg，0.02mmol，1.00eq)在CH2Cl2(0.6mL)中的溶液中加入三氟乙酸(770mg，6.75mmol，0.5mL，333.30eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌1小时。在减压下除去溶剂，从而得到呈黄色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(25mg，0.02mmol，91％产率，TFA盐)。LC/MS(ESI)m/z：1133.6[M+H]+。
步骤3：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660003131
向在-70℃下的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(25mg，0.02mmol，1.00eq，TFA盐)和2，6-二甲基吡啶(39mg，0.37mmol，20.00eq)在CH2Cl2(3mL)中的溶液中加入丙-2-烯酰氯(2mg，0.02mmol，1.05eq)在CH2Cl2(0.2mL)中的溶液，并将所得反应混合物在-70℃下搅拌0.5小时。在减压下除去溶剂，并将所得残余物通过制备型薄层色谱法(CH2Cl2∶CH3OH＝10∶1)纯化，随后通过半制备型反相HPLC(含38-58％CH3CN的水(10mmolNH4HCO3))纯化，从而得到呈黄色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(5.9mg，0.005mmol，26％产率)。LC/MS(ESI)m/z：1187.6[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.88(s，1H)，8.06(s，1H)，7.75(d，J＝8.4Hz，1H)，7.55-7.37(m，5H)，7.30-7.16(m，3H)，7.05(t，J＝2.4Hz，1H)，7.00-6.75(m，1H)，7.32(d，J＝16.8Hz，1H)，5.85(d，J＝10.0Hz，1H)，5.70-5.55(m，1H)，5.20-4.95(m，2H)，4.65-4.52(m，3H)，4.50-4.35(m，3H)，4.25-4.10(m，1H)，4.10-3.98(m，2H)，3.85-3.75(m，2H)，3.75(dd，J＝3.6，11.2Hz，1H)，3.70-3.58(m，5H)，3.45-3.35(m，1H)，3.10-2.75(m，5H)，2.63-2.51(m，1H)，2.48(d，J＝2.0Hz，3H)，2.45-2.25(m，2H)，2.25-2.15(m，1H)，2.14-1.82(m，3H)，1.62-1.45(m，5H)，1.40(d，J＝6.4Hz，3H)，1.03(s，9H)。
以下化合物可以按照与(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式制备
1.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(8-甲基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660003141
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1171.6[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.93-8.80(m，1H)，8.53(dd，J＝2.4，3.2Hz，1H)，8.07-7.96(m，2H)，7.84(d，J＝7.6Hz，1H)，7.55(dd，J＝2.4，7.6Hz，1H)，7.44-7.34(m，5H)，7.26(d，J＝7.2Hz，2H)，6.94-6.73(m，1H)，6.31(d，J＝16.4Hz，1H)，5.84(d，J＝10.4Hz，1H)，5.18-5.04(m，1H)，5.03-4.92(m，2H)，4.85-4.82(m，2H)，4.69(s，2H)，4.63-4.30(m，4H)，4.05(s，2H)，3.83(d，J＝11.6Hz，2H)，3.78-3.62(m，6H)，3.61-3.40(m，2H)，3.27-2.90(m，6H)，2.80-2.69(m，1H)，2.45(s，3H)，2.27-2.13(m，1H)，2.07(d，J＝5.6Hz，3H)，2.03-1.90(m，3H)，1.89-1.70(m，2H)，1.62-1.42(m，3H)，1.07-0.97(m，9H)。
(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：2-((2S)-1-丙烯酰基-4-(6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基)哌嗪-2-基)乙腈的制备
Figure BDA0003980908660003151
向在-78℃下的2-[(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(1.2g，2.21mmol，1eq，HCl)和2，6-二甲基吡啶(711.21mg，6.64mmol，773.05uL，3eq)在DMF(2mL)和CH2Cl2(8mL)中的混合物中逐滴加入丙-2-烯酰氯(180.22mg，1.99mmol，162.36uL，0.9eq)，并将反应混合物在-78℃下搅拌10分钟。加入水(5mL)，并用CH2Cl2(2×20mL)萃取所得混合物。将有机萃取物经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩滤液。将所得粗产物通过SiO2柱色谱法(含0-100％EtOAc的石油醚)纯化，随后通过制备型HPLC(含33-63％CH3CN的水(0.225％甲酸))纯化，从而得到呈棕色固体的2-[(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基]-1-丙-2-烯酰基-哌嗪-2-基]乙腈(570mg，851.99umol，39％产率)。LC/MS(ESI)m/z：560.1[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ9.79(s，1H)，7.84(s，1H)，7.77-7.75(m，1H)，7.33-7.23(m，5H)，7.22-7.10(m 1H)，6.65-6.60(m，1H)，6.45-6.41(m，1H)，5.87(d，J＝8.0Hz，1H)，5.04-4.99(m，2H)，4.39-4.33(m，2H)，4.00-3.64(m，4H)，3.10-2.90(m，2H)。
步骤2：4-(2-羟基乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660003161
在N2下向4-(2-苄氧基乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(50g，149.06mmol，1.00eq)在CH3OH(500mL)中的溶液中加入Pd/C(5g，10％纯度)，并在H2气氛下将反应混合物在50℃下搅拌12小时。过滤混合物，并在减压下浓缩滤液。通过SiO2色谱法(含10％-100％EOAc的石油醚，然后为含2-10％CH3OH的EtOAc)纯化，得到呈黄色油状物的4-(2-羟基乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(32g，130.44mmol，88％产率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ3.84-3.67(m，4H)，3.65-3.42(m，3H)，3.06(m，2H)，1.91-1.74(m，2H)，1.56-1.47(m，2H)，1.44(s，9H)。
步骤3：4-[2-[5-(1-甲氧基羰基-2-甲基-丙基)异噁唑-3-基]氧基乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660003162
向在0℃下的4-(2-羟基乙氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(18g，72.29mmol，1.20eq)和2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(12g，60.24mmol，1.00eq)在THF(30mL)中的溶液中加入Ph3P(19g，72.29mmol，1.20eq)，然后逐滴加入(E)-二氮烯-1，2-二羧酸二异丙酯(15g，72.29mmol，15mL，1.20eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌12小时。将混合物在减压下浓缩，并将剩余材料通过SiO2色谱法(含10-100％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈黄色油状物的4-[2-[5-(1-甲氧基羰基-2-甲基-丙基)异噁唑-3-基]氧基乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(18g，42.20mmol，70％产率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)65.92(s，1H)，4.45-4.28(m，1H)，4.46-4.26(m，1H)，3.84-3.74(m，4H)，3.73(s，3H)，3.60-3.42(m，2H)，3.08(m，2H)，2.35(td，J＝6.8，8.4Hz，1H)，1.92-1.73(m，2H)，1.55(dd，J＝4.0，8.8Hz，2H)，1.46(s，9H)，1.00(d，J＝6.8Hz，3H)，0.92(d，J＝6.8Hz，3H)。
步骤4：2-[3-[2-[(1-叔丁氧羰基-4-哌啶基)氧基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸的制备
Figure BDA0003980908660003171
向4-[2-[5-(1-甲氧基羰基-2-甲基-丙基)异噁唑-3-基]氧基乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(18g，42.20mmol，1.00eq)在THF(10mL)、CH3OH(5mL)和水(5mL)中的溶液中加入LiOH水合物(2.8g，63.31mmol，1.50eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌2小时。通过加入HCl水溶液将溶液pH调节至5，并用CH2Cl2(2×200mL)萃取所得混合物。在减压下浓缩合并的有机萃取物，从而得到呈黄色油状物的2-[3-[2-[(1-叔丁氧羰基-4-哌啶基)氧基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(17g，41.21mmol，98％产率)。
步骤5：4-[2-[5-[1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660003181
向2-[3-[2-[(1-叔丁氧羰基-4-哌啶基)氧基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(3.70g，8.97mmol，1.10eq)和(2S，4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(3g，8.15mmol，1.00eq，盐酸盐)在DMF(30mL)中的溶液中加入HATU(4.7g，12.23mmol，1.50eq)和二异丙基乙胺(3.2g，24.46mmol，5mL，3.00eq)，然后将反应混合物在25℃下搅拌12小时。将溶液在减压下浓缩，并将剩余材料质通过SiO2色谱法(含10-100％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈黄色油状物的4-[2-[5-[1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(5.5g，7.58mmol，93％产率)。通过SFC(含40％异丙醇的水(0.1％NH4OH))分离非对映异构体混合物，从而得到呈黄色固体的4-[2-[5-[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.2g，2.91mmol，22％产率)和呈黄色固体的4-[2-[5-[(1R)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.5g，1.98mmol，15％产率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)
步骤6：(2S，4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-[3-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660003191
向4-[2-[5-[(1R)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基乙氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.5g，2.07mmol，1.00eq)在CH2Cl2(10mL)中的溶液中加入HCl(4N，在二噁烷中，10mL)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。在减压下浓缩溶液，从而得到呈黄色固体的(2S，4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-[3-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(1.3g，1.96mmol，95％产率，盐酸盐)。1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ10.03(d，J＝2.8Hz，1H)，7.56(q，J＝8.0Hz，4H)，6.11-5.95(m，1H)，5.05(q，J＝7.2Hz，1H)，4.53(t，J＝8.4Hz，1H)，4.47-4.27(m，3H)，3.88-3.67(m，5H)，3.62(s，1H)，3.56-3.44(m，1H)，3.36-3.31(m，1H)，3.30-3.22(m，1H)，3.20-3.05(m，2H)，2.62(s，3H)，2.45-2.29(m，1H)，2.22(dd，J＝7.6，13.1Hz，1H)，2.09-1.82(m，5H)，1.66-1.58(m，1H)，1.53(d，J＝7.2Hz，2H)，1.05(d，J＝6.8Hz，3H)，0.89(d，J＝6.8Hz，3H)。
步骤7：(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660003201
向在0℃下的(2S，4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-[3-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(390mg，0.59mmol，1.10eq，盐酸盐)和2-[(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基]-1-丙-2-烯酰基-哌嗪-2-基]乙腈(300mg，0.54mmol，1.00eq)在CH2Cl2(5mL)和CH3OH(5mL)中的溶液中加入NaOAc(140mg，1.61mmol，3.00eq)和乙酸(100mg，1.61mmol，3.00eq)，然后加入NaBH3CN(101mg，1.61mmol，3.00eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌12小时。将混合物在减压下浓缩，并将剩余材料通过SiO2色谱法(含10-100％EtOAc的石油醚，然后为含2-10％CH3OH的CH2Cl2))纯化。通过HPLC(含30-50％CH3CN的水(0.225％甲酸))进一步纯化得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(151.3mg，0.12mmol，23％产率，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：1169.7[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.92-8.78(m，1H)，8.50(d，J＝2.0Hz，1H)，8.08(s，1H)，7.75(d，J＝8.4Hz，1H)，7.50-7.33(m，5H)，7.32-7.11(m，3H)，7.04(d，J＝2.0Hz，1H)，6.96-6.71(m，1H)，6.31(d，J＝16.8Hz，1H)，6.08-5.94(m，1H)，5.85(d，J＝10.0Hz，1H)，5.03(q，J＝7.2Hz，2H)，4.81-4.64(m，2H)，4.59-4.35(m，4H)，4.33-4.07(m，2H)，4.01-3.36(m，10H)，3.31-3.16(m，4H)，3.02(s，3H)，2.51-2.42(m，3H)，2.41-2.29(m，1H)，2.18(dd，J＝7.6，13.0Hz，1H)，2.07-1.78(m，5H)，1.63-1.45(m，3H)，1.04(d，J＝6.4Hz，3H)，0.93-0.82(m，3H)。
可以通过SFC分离阻转异构体的混合物。
(2S，4R)-1-((R)-2-(3-(2-((1-(2-(((S)-4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660003211
(白色固体。萘基团和异丙基基团两者的绝对构型都是暂时指定的)。1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.87-8.84(m，1H)，8.50-8.40(m，1H)，8.07-8.06(m，1H)，7.76-7.74(m，1H)，7.45-7.19(m，8H)，7.04-7.03(m，1H)，6.90-6.80(m，1H)，6.33-6.29(m，1H)，6.02-5.97(m，1H)，5.85-5.83(m，1H)，5.03-5.01(m，2H)，4.87-4.28(m，9H)，3.85-3.61(m，10H)，3.30-2.70(m，7H)，2.46(s，3H)，2.41-2.40(m，2H)，2.03-1.86(m，5H)，1.53-1.49(m，3H)，1.02-1.00(m，3H)，0.88-0.86(m，3H)。
(2S，4R)-1-((R)-2-(3-(2-((1-(2-(((R)-4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660003221
(白色固体。萘基团和异丙基基团两者的绝对构型都是暂时指定的)。1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.87-8.84(m，1H)，8.50-8.40(m，1H)，8.07-8.06(m，1H)，7.76-7.74(m，1H)，7.45-7.19(m，8H)，7.04-7.03(m，1H)，6.90-6.80(m，1H)，6.33-6.29(m，1H)，6.02-5.97(m，1H)，5.85-5.83(m，1H)，5.03-5.01(m，2H)，4.87-4.28(m，9H)，3.85-3.61(m，10H)，3.30-2.70(m，7H)，2.46(s，3H)，2.41-2.40(m，2H)，2.03-1.86(m，5H)，1.53-1.49(m，3H)，1.02-1.00(m，3H)，0.88-0.86(m，3H)。
以下化合物可以按照与(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式制备
1.(2S，4S)-1-((2S)-2-(3-(2-((1-(2-((4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660003231
(白色固体，甲酸盐。异丙基的绝对构型是暂时指定的)。LC/MS(ESI)m/z：1169.4[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.87-8.82(m，1H)，8.50-8.40(m，1H)，8.07-8.06(m，1H)，7.76-7.74(m，1H)，7.45-7.19(m，8H)，7.04-7.03(m，1H)，6.90-6.80(m，1H)，6.33-6.29(m，1H)，6.02-5.97(m，1H)，5.85-5.83(m，1H)，5.09-4.96(m，1H)，4.87-4.28(m，9H)，3.85-3.61(m，8H)，3.30-2.70(m，8H)，2.46(s，3H)，2.41-2.40(m，2H)，2.03-1.86(m，5H)，1.53-1.49(m，3H)，1.02-0.77(m，6H)。
2.(2S，4S)-1-((2R)-2-(3-(2-((1-(2-((4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基)-6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)乙基)哌啶-4-基)氧基)乙氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660003232
(白色固体，甲酸盐。异丙基的绝对构型是暂时指定的)。LC/MS(ESI)m/z：1169.4[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.87-8.82(m，1H)，8.50-8.40(m，1H)，8.07-8.06(m，1H)，7.76-7.74(m，1H)，7.45-7.19(m，8H)，7.04-7.03(m，1H)，6.90-6.80(m，1H)，6.33-6.29(m，1H)，6.02-5.97(m，1H)，5.85-5.83(m，1H)，5.09-4.96(m，1H)，4.87-4.28(m，9H)，3.85-3.61(m，8H)，3.30-2.70(m，8H)，2.46(s，3H)，2.41-2.40(m，2H)，2.03-1.86(m，5H)，1.53-1.49(m，3H)，1.02-1.00(m，3H)，0.88-0.86(m，3H)。
3.(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660003241
(白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1114.4[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.06-9.99(m，1H)，9.00-8.96(m，1H)，8.84-8.37(m，1H)，8.01(s，1H)，7.81(br d，J＝8.7Hz，1H)，7.49-7.31(m，6H)，7.29(d，J＝1.5Hz，1H)，7.24-7.17(m，2H)，7.08-7.05(m，1H)，6.83(dd，J＝10.4，16.8Hz，1H)，6.18(dd，J＝2.1，16.7Hz，1H)，6.04(d，J＝7.0Hz，1H)，5.78-5.72(m，1H)，5.47-5.35(m，1H)，5.09(d，J＝3.5Hz，1H)，4.95-4.85(m，1H)，4.39-4.32(m，1H)，4.27(br d，J＝1.3Hz，1H)，3.93(br s，6H)，3.85(br d，J＝2.1Hz，2H)，3.81-3.75(m，2H)，3.69(br dd，J＝4.5，10.0Hz，1H)，3.62(br d，J＝10.0Hz，1H)，3.45-3.39(m，2H)，3.06-2.86(m，2H)，2.64-2.57(m，1H)，2.46-2.44(m，3H)，2.44-2.35(m，1H)，2.22(br dd，J＝3.0，6.1Hz，1H)，2.09-1.94(m，3H)，1.81-1.73(m，1H)，1.71-1.54(m，3H)，1.44-1.36(m，3H)，1.34-1.30(m，3H)，0.98-0.92(m，3H)，0.81-0.74(m，3H)。
4.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[3-[[1-[(2R)-2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660003251
(白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1114.4[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.08-9.95(m，1H)，9.05-8.86(m，1H)，8.30-8.22(m，1H)，8.05-7.93(m，1H)，7.80(br d，J＝7.7Hz，1H)，7.49-7.27(m，6H)，7.23-7.16(m，2H)，7.09-7.04(m，1H)，6.88-6.75(m，1H)，6.22-6.13(m，1H)，6.12-6.02(m，1H)，5.74(br d，J＝10.8Hz，1H)，5.46-5.34(m，1H)，5.12-4.93(m，1H)，4.88(br t，J＝6.9Hz，1H)，4.54-4.35(m，1H)，4.31-4.21(m，1H)，3.97-3.90(m，4H)，3.85(br d，J＝1.7Hz，3H)，3.80-3.66(m，3H)，3.57-3.41(m，2H)，3.10-2.80(m，3H)，2.65-2.58(m，1H)，2.43(s，3H)，2.40-2.36(m，1H)，2.28-2.19(m，1H)，2.09-1.91(m，3H)，1.82-1.72(m，1H)，1.66-1.48(m，3H)，1.40-1.26(m，6H)，1.16-1.03(m，2H)，0.95(brd，J＝6.7Hz，2H)，0.80(br d，J＝6.6Hz，3H)，0.72(br d，J＝3.8Hz，1H)。
(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660003261
向2-[(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(300mg，592.97umol，1eq)和(2S，4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-[3-[2-(4-哌啶基氧基)乙氧基]异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(389.62mg，622.62umol，1.05eq)在二氯乙烷(2mL)和异丙醇(2mL)中的溶液中加入2-甲基吡啶硼烷(317.12mg，2.96mmol，5eq)、乙酸(3.56mg，59.30umol，3.39uL，0.1eq)和NaOAc(486.41mg，5.93mmol，10eq)，并将反应混合物在40℃下搅拌8小时。过滤悬浮液，并将滤液在减压下浓缩。将所得黄色固体通过SiO2制备型TLC(CH2Cl2/CH3OH10/1)纯化从而得到呈白色固体的化合物(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(300mg，268.89umol，45％产率)。
步骤2：(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660003271
向在20℃下的(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(280mg，250.96umol，1eq)在DMF(2mL)中的溶液中加入HATU(143.14mg，376.45umo1，1.5eq)和三乙胺(76.18mg，752.89umol，104.79uL，3eq)，然后加入2-氟丙-2-烯酸(27.12mg，301.16umol，1.80mL，1.2eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌6小时。加入CH3OH(1mL)，并将所得溶液在减压下浓缩。将所得黄色固体通过制备型HPLC(含29％-59％CH3CN的水(0.225％甲酸))纯化从而得到呈黄色固体的化合物(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(98.6mg，76.72umol，31％产率，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：1187.4[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.89-8.87(m，1H)，8.06-7.99(m，1H)，7.77-7.75(m，1H)，7.44-7.40(m，5H)，7.27-7.21(m，3H)，7.05(d，J＝2.4Hz，1H)，6.03-5.97(m，1H)，5.52-5.41(m，2H)，5.05-5.03(m，1H)，4.70-4.15(m，8H)，3.82-3.79(m，5H)，3.69-3.66(m，3H)，3.20-3.00(m，2H)，2.88-2.83(m，6H)，2.60(s，3H)，2.49-2.40(m，3H)，2.20-2.18(m，2H)，2.17-1.96(m，3H)，1.60-1.52(m，5H)，1.07-1.05(m，3H)，0.91-0.88(m，3H)。
(2S，4R)-1-((2R)-2-(3-((1-((2R)-2-((6-氯-8-氟-4-(4-(2-氟丙烯酰基)哌嗪-1-基)-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)甲氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：(2S，4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-[3-(4-哌啶基甲氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660003281
向4-(((5-((R)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)异噁唑-3-基)氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(80mg，0.11mmol，1eq)在CH2Cl2(1mL)中的溶液中加入HCl(4N，在二噁烷中，0.2mL，6.96eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌0.5小时。在减压下浓缩反应混合物，从而得到呈黄色固体的(2S，4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-[3-(4-哌啶基甲氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(72mg，0.11mmol，99％产率，盐酸盐)。
步骤2：4-(6-氯-8-氟-2-(((R)-1-(4-(((5-((R)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)异噁唑-3-基)氧基)甲基)哌啶-1-基)丙-2-基)氧基)-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660003291
向在0℃下的(2S，4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-[3-(4-哌啶基甲氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(125mg，0.2mmol，1eq，盐酸盐)在CH3OH(3mL)中的溶液中加入NaOAc(48.66mg，0.6mmol，3eq)和2-甲基吡啶硼烷(106mg，0.99mmol，5eq)，并将所得混合物在0℃下搅拌0.5小时。然后加入4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(1R)-1-甲基-2-氧代-乙氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(115mg，0.2mmol，1eq)和乙酸(1.19mg，0.02mmol，0.001mL，0.1eq)，并将反应混合物在40℃下搅拌11.5小时。在减压下浓缩混合物，并所得残余物通过SiO2制备型TLC(CH2Cl2∶CH3OH＝10∶1)纯化，从而得到呈黄色固体的4-(6-氯-8-氟-2-(((R)-1-(4-(((5-((R)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)异噁唑-3-基)氧基)甲基)哌啶-1-基)丙-2-基)氧基)-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(60mg，0.05mmol，25％产率)。LC/MS(ESI)m/z：581.3[M/2+H]+。
步骤3：(2S，4R)-1-((2R)-2-(3-((1-((2R)-2-((6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)甲氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660003301
向4-(6-氯-8-氟-2-(((R)-1-(4-(((5-((R)-1-((2S，4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)异噁唑-3-基)氧基)甲基)哌啶-1-基)丙-2-基)氧基)-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(60mg，0.05mmol，1eq)在CH2Cl2(3mL)中的溶液中加入HCl(4N，在二噁烷中，2.25mL，174.12eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌1小时。将混合物在减压下浓缩从而得到呈无色油状物的(2S，4R)-1-((2R)-2-(3-((1-((2R)-2-((6-氯-8-氟-7-(3-))羟基萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)甲氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(61mg，盐酸盐)。
步骤4：(2S，4R)-1-((2R)-2-(3-((1-((2R)-2-((6-氯-8-氟-4-(4-(2-氟丙烯酰基)哌嗪-1-基)-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)甲氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660003311
在氮气气氛下，将(2S，4R)-1-((2R)-2-(3-((1-((2R)-2-((6-氯-8-氟-7-(3-羟基萘-1)-基)-4-(哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)甲氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(61mg，0.05mmol，1eq，盐酸盐)、2-氟丙-2-烯酸(4.59mg，0.05mmol，1eq)、三乙胺(10mg，0.1mmol，0.01mL，2eq)和HATU(29.06mg，0.08mmol，1.5eq)在DMF(2mL)中的混合物在20℃下搅拌0.5小时。过滤混合物并将其在减压下浓缩。将所得残余物通过半制备型反相HPLC(含29-59％CH3CN的水(0.225％甲酸))纯化，随后通过制备型TLC(CH2Cl2∶CH3OH＝10∶1)纯化，从而得到呈白色固体的(2S，4R)-1-((2R)-2-(3-((1-((2R)-2-((6-氯-8-氟-4-(4-(2-氟丙烯酰基)哌嗪-1-基)-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)甲氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(3.0mg，0.002mmol，5％产率)。LC/MS(ESI)m/z：566.8[M/2+1]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.02(s，1H)，8.98(s，1H)，8.40(d，J＝7.8Hz，1H)，8.01(s，1H)，7.81(d，J＝8.0Hz，1H)，7.46-7.40(m，3H)，7.38-7.33(m，2H)，7.29(s，1H)，7.24-7.15(m，2H)，7.10-7.03(m，1H)，6.04(d，J＝6.5Hz，1H)，5.46-5.32(m，2H)，5.09(d，J＝3.8Hz，1H)，4.90(t，J＝7.2Hz，1H)，4.43-4.22(m，2H)，3.95(s，5H)，3.80(s，2H)，3.72-3.67(m，1H)，3.64-3.54(m，1H)，3.46-3.38(m，2H)，3.31(s，6H)，3.19-3.09(m，1H)，2.94(s，1H)，2.46-2.44(m，3H)，2.27-2.14(m，2H)，2.08-1.93(m，3H)，1.81-1.72(m，1H)，1.71-1.55(m，3H)，1.45-1.31(m，5H)，1.24-1.21(m，1H)，0.94(d，J＝6.5Hz，3H)，0.83-0.75(m，3H)。
以下化合物按照与(2S，4R)-1-((2R)-2-(3-((1-((2R)-2-((6-氯-8-氟-4-(4-(2-氟丙烯酰基)哌嗪-1-基)-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)甲氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式制备
1.(2S，4R)-1-((2S)-2-(3-((1-((2R)-2-((6-氯-8-氟-4-(4-(2-氟丙烯酰基)哌嗪-1-基)-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基)氧基)丙基)哌啶-4-基)甲氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660003321
(白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：566.8[M/2+1]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.03(s，1H)，9.02-8.87(m，1H)，8.27(d，J＝7.5Hz，1H)，8.00(s，1H)，7.80(d，J＝7.7Hz，1H)，7.49-7.36(m，4H)，7.29(d，J＝7.5Hz，2H)，7.24-7.16(m，2H)，7.08-7.03(m，1H)，6.13-6.01(m，1H)，5.42-5.33(m，2H)，5.23-5.06(m，1H)，5.02-4.83(m，1H)，4.40(t，J＝7.6Hz，1H)，4.25(s，1H)，3.97-3.86(m，5H)，3.79(s，3H)，3.73(d，J＝9.2Hz，1H)，3.56-3.39(m，6H)，3.03-2.84(m，2H)，2.66-2.57(m，1H)，2.43(d，J＝1.7Hz，3H)，2.41-2.36(m，1H)，2.23(dd，J＝6.9，15.3Hz，1H)，2.06-1.89(m，3H)，1.81-1.72(m，1H)，1.57(s，3H)，1.44(d，J＝6.8Hz，1H)，1.36-1.29(m，5H)，1.11(s，1H)，0.95(d，J＝6.6Hz，2H)，0.80(d，J＝6.8Hz，3H)，0.72(d，J＝6.4Hz，1H)。
2.(2S，4R)-1-[(2S)-2-[3-[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺
Figure BDA0003980908660003331
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：585.4[M/2+1]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.03-8.95(m，1H)，8.92(d，J＝7.8Hz，1H)，8.30(d，J＝7.7Hz，1H)，8.27(s，1H)，8.14-8.08(m，1H)，7.82(d，J＝8.3Hz，1H)，7.50-7.44(m，1H)，7.44-7.39(m，2H)，7.33-7.29(m，2H)，7.25-7.14(m，2H)，7.08(d，J＝2.3Hz，1H)，7.01-6.76(m，1H)，6.22(dd，J＝2.0，16.6Hz，1H)，6.17-6.06(m，1H)，5.87-5.69(m，1H)，5.06-4.96(m，1H)，4.93-4.85(m，1H)，4.54-4.39(m，3H)，4.38-4.31(m，1H)，4.29-4.18(m，5H)，4.29-3.78(m，1H)，3.77-3.64(m，4H)，3.57-3.53(m，1H)，3.49-3.45(m，2H)，3.41(br s，2H)，3.30(br d，J＝6.4Hz，2H)，3.14-2.99(m，2H)，2.83-2.74(m，2H)，2.71-2.65(m，2H)，2.45(s，3H)，2.30-2.22(m，1H)，2.18-2.09(m，2H)，2.08-2.00(m，1H)，1.88-1.74(m，3H)，1.48-1.38(m，2H)，1.35(d，J＝7.0Hz，3H)，0.96(d，J＝6.6Hz，2H)，0.83(d，J＝6.6Hz，3H)，0.75(d，J＝6.6Hz，1H)。
(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：(2S)-4-[6-氯-2-(2，2-二甲氧基乙氧基)-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
步骤2：2-[(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基]哌嗪-2-基]乙腈的制备
Figure BDA0003980908660003341
向(2S)-4-[6-氯-2-(2，2-二甲氧基乙氧基)-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(8.0g，12.27mmol，1.0eq)在CH3CN(22mL)中的溶液中加入HCl(21.6mL，223.6mmol，37％，在水中，18.23eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌20分钟。将混合物倒入饱和NaHCO3水溶液(500mL)中，并过滤所得沉淀。将该材料溶解在THF/EtOAc(1∶2，300mL)中，并将有机混合物经Na2SO4干燥，过滤，并在减压下干燥，从而得到呈黄色固体的2-[(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(6.21g)。LC/MS(ESI)m/z：506.1[M+H]+。
步骤3：(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660003351
向2-[(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(2.33g，4.61mmol，1.0eq)在异丙醇/CH2Cl2(1∶1；100mL)中的溶液中加入(2S，4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-[3-(4-哌啶基甲氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(2.47g，4.14mmol，0.9eq)、HOAc(1.11g，18.42mmol，1.05mL，4.0eq)和2-甲基吡啶硼烷(2.46g，23.03mmol，5.0eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。在减压下浓缩反应混合物，并将粗产物通过制备型HPLC(含40-63％CH3CN的水(10mM NH4HCO3))纯化，从而得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(2.85g，2.53mmol，55％产率)。LC/MS(ESI)m/z：1085.3[M+H]+。
步骤4：(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660003361
向在-78℃下的(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(2.4g，2.21mmol，1eq)在CH2Cl2(40mL)中的溶液中逐滴加入2，6-二甲基吡啶(947.5mg，8.84mmol，4eq)和丙-2-烯酰氯(220.1mg，2.43mmol，1.1eq)，并将反应混合物在-78℃下搅拌30分钟。然后加入水(2.0mL)，并将所得混合物在真空下浓缩。将所得残余物通过制备型HPLC(含10-48％CH3CN的水(0.225％甲酸))纯化，从而得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(1.30g，1.05mmol，48％产率，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：1139.5[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.90-8.85(m，1H)，8.47(s，1H)，8.09(s，1H)，7.75(d，J＝8.4Hz，1H)，7.47-7.35(m，5H)，7.27(d，J＝2.0Hz，1H)，7.24-7.14(m，2H)，7.03(d，J＝2.4Hz，1H)，6.31(d，J＝16.4Hz，1H)，5.99(s，1H)，5.89-5.78(m，1H)，5.14-4.97(m，2H)，4.81-4.72(m，3H)，4.56-4.46(m，3H)，4.46-4.37(m，1H)，4.22-4.13(m，1H)，4.11-4.03(m，2H)，3.97-3.80(m，3H)，3.69-3.65(m，2H)，3.42-3.33(m，2H)，3.07-2.97(m，2H)，2.92-2.72(m，2H)，2.48(s，3H)，2.43-2.28(m，1H)，2.23-2.14(m，1H)，2.12-1.91(m，4H)，1.66-1.57(m，2H)，1.52(d，J＝7.2Hz，3H)，1.05(d，J＝6.4Hz，3H)，0.95-0.83(m，3H)。
(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
Figure BDA0003980908660003371
向2-氟丙-2-烯酸(167.97mg，1.87mmol，1.5eq)在DMF(15mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(482mg，3.73mmol，0.650mL，3eq)、HATU(1.42g，3.73mmol，3eq)和(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(1.35g，1.24mmol，1eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌2小时。然后加入饱和K2CO3水溶液(10mL)，并将所得混合物在25℃下搅拌30分钟。将混合物用CH2Cl2(3×50mL)萃取，并将合并的萃取物经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过制备型HPLC(含15-45％CH3CN的水(0.225％甲酸))纯化，从而得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(795.6mg，0.660mmol，53％产率，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：1157.4[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.98(s，1H)，8.41(d，J＝7.2Hz，1H)，8.15(s，1H)，8.11(s，1H)，7.81(d，J＝8.4Hz，1H)，7.47-7.41(m，4H)，7.39-7.33(m，2H)，7.29(d，J＝2.4Hz，1H)，7.22(d，J＝3.6Hz，2H)，7.06(d，J＝2.4Hz，1H)，6.06(s，1H)，5.49-5.09(m，3H)，4.90(t，J＝7.2Hz，2H)，4.74-4.17(m，8H)，3.98(d，J＝5.6Hz，4H)，3.75-3.55(m，6H)，3.11-2.86(m，3H)，2.72(s，2H)，2.45(s，3H)，2.33(s，1H)，2.03(s，2H)，1.68(d，J＝11.6Hz，3H)，1.40-1.25(m，5H)，0.94(d，J＝6.4Hz，3H)，0.78(d，J＝6.8Hz，3H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660003381
向2-[(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(968mg，1.91mmol，1eq)和(2S，4R)-1-[(2S)-3，3-二甲基-2-[[2-(4-哌啶基甲氧基)乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(1.03g，1.72mmol，0.9eq)在异丙醇(30mL)和CH2Cl2(30mL)中的混合物中加入HOAc(460mg，7.65mmol，0.438mL，4eq)和2-甲基吡啶硼烷(1.02g，9.57mmol，5eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。将混合物在减压下浓缩，并将所得粗产物通过制备型HPLC(含CH3CN的水(0.05％NH4OH+10mM NH4HCO3))纯化，从而得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(935mg，0.79mmol，41％产率)。LC/MS(ESI)m/z：545.3[M/2+H]+。
步骤2：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660003391
向在-78℃下的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(2.66g，2.20mmol，90％纯度，1eq)和2，6-二甲基吡啶(1.18g，11.0mmol，1.28mL，5eq)在CH2Cl2(54mL)中的混合物中缓慢加入丙-2-烯酰氯(209mg，2.31mmol，0.188mL，1.05eq)在CH2Cl2(2mL)中的溶液，并将所得悬浮液在-78℃下搅拌30分钟。然后加入水(10mL)，并将所得混合物温热至室温。浓缩混合物，并将所得粗产物通过制备型HPLC(含CH3CN的水(0.225％甲酸))纯化从而得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(1.80g，1.56mmol，71％产率，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：1143.7[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.98(s，1H)，8.45(d，J＝7.6Hz，1H)，8.11(s，1H)，7.81(d，J＝8.4Hz，1H)，7.47-7.39(m，3H)，7.38-7.32(m，2H)，7.32-7.25(m，2H)，7.22(d，J＝3.6Hz，2H)，7.07(d，J＝2.4Hz，1H)，6.98-6.79(m，1H)，6.21(d，J＝16.4Hz，1H)，5.79(d，J＝10.8Hz，1H)，4.99(s，1H)，4.91-4.83(m，1H)，4.53(d，J＝9.6Hz，1H)，4.50-4.42(m，3H)，4.41-4.20(m，4H)，4.07(s，1H)，3.90(s，2H)，3.79-3.55(m，8H)，3.05-2.91(m，4H)，2.72(s，2H)，2.45(s，3H)，2.09-1.99(m，3H)，1.79-1.71(m，1H)，1.68-1.53(m，3H)，1.34(d，J＝6.8Hz，3H)，1.25-1.14(m，2H)，0.92(s，9H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
Figure BDA0003980908660003401
向(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(1.40g，1.28mmol，1eq)在DMF(17mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(498mg，3.85mmol，0.671mL，3eq)、HATU(1.47g，3.85mmol，3eq)和2-氟丙-2-烯酸(139mg，1.54mmol，1.2eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌2小时。然后加入饱和K2CO3水溶液(30mL)，并将所得混合物搅拌30分钟。将混合物用1∶1EtOAc/THF(3×30mL)萃取，并将合并的有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得粗产物通过制备型HPLC(含CH3CN的水(0.225％甲酸))纯化从而得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(931mg，0.74mmol，58％产率，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：1161.6[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.05(s，1H)，8.98(s，1H)，8.45(d，J＝7.6Hz，1H)，8.11(s，1H)，7.81(d，J＝8.4Hz，1H)，7.47-7.39(m，3H)，7.37-7.32(m，2H)，7.31-7.26(m，2H)，7.22(d，J＝4.0Hz，2H)，7.07(d，J＝2.4Hz，1H)，5.42(dd，J＝18.0，4.0Hz，2H)，5.26-5.09(m，1H)，4.96-4.76(m，2H)，4.53(d，J＝9.6Hz，1H)，4.50-4.40(m，3H)，4.40-4.25(m，3H)，3.91(s，2H)，3.64-3.48(m，2H)，3.33-3.31(m，6H)，3.08(d，J＝6.0Hz，1H)，3.06-2.95(m，3H)，2.78-2.71(m，2H)，2.45(s，3H)，2.13-1.99(m，3H)，1.79-1.70(m，1H)，1.70-1.52(m，3H)，1.34(d，J＝6.8Hz，3H)，1.27-1.14(m，2H)，0.92(s，9H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺是按照与(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式制备。
Figure BDA0003980908660003421
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1191.9[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.87(s，1H)，8.46(brs，1H)，8.09(s，1H)，7.76(d，J＝7.6Hz，1H)，7.59-7.30(m，6H)，7.28(s，1H)，7.25-7.15(m，2H)，7.05(s，1H)，5.44-5.32(m，2H)，5.05-4.93(m，2H)，4.81-4.70(m，3H)，4.60-4.40(m，4H)，4.35-4.10(m，1H)，4.06(s，2H)，3.90-3.60(m，10H)，3.55-3.35(m，4H)，3.20-3.00(m，4H)，2.46(d，J＝2.4Hz，3H)，2.30-2.15(m，1H)，2.10-1.85(m，5H)，1.57，1.48(d，J＝6.8Hz，3H)，1.04(s，9H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-[(E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰基]哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
Figure BDA0003980908660003431
向(E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酸(36.5mg，0.220mmol，2eq，盐酸盐)和二异丙基乙胺(142mg，1.10mmol，10eq)在CH2Cl2(12mL)中的溶液中加入(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(120mg，0.110mmol，1eq)，然后加入HATU(63mg，0.165mmol，1.5eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。浓缩混合物，并将所得残余物通过制备型HPLC(含10-60％CH3CN的水(0.225％甲酸))纯化从而得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-[(E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰基]哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(38.9mg，30.91umol，28％产率，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：1200.7[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.67(s，1H)，8.42(s，1H)，7.90(dd，J＝8.4，3.6Hz，1H)，7.81-7.73(m，2H)，7.59-7.49(m，2H)，7.43-7.31(m，6H)，7.30-7.25(m，2H)，7.27-7.15(m，2H)，6.30-6.21(m，1H)，5.14-5.00(m，1H)，4.79-4.65(m，3H)，4.62-4.46(m，2H)，4.40-4.19(m，2H)，4.10-3.96(m，2H)，3.92-3.84(m，1H)，3.64-3.57(m，1H)，3.49-3.05(m，15H)，2.68-2.55(m，2H)，2.51(d，J＝2.4Hz，3H)，2.45-2.39(m，2H)，2.34(s，6H)，1.89-1.64(m，4H)，1.60-1.49(m，2H)，1.46(dd，J＝8.4，7.2Hz，3H)，1.04(s，9H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-[(E)-4-吗啉代丁-2-烯酰基]哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：4-(2，2-二甲氧基乙基)吗啉的制备
Figure BDA0003980908660003441
向2，2-二甲氧基乙醛(15g，86.45mmol，60重量％，在水中，1eq)和吗啉(11.30g，129.68mmol，11.41mL，1.5eq)在CH3OH(120mL)中的溶液中加入AcOH(7.79g，129.68mmol，7.42mL，1.5eq)，并将所得混合物在20℃下搅拌3小时。然后加入NaBH3CN(7.06g，112.39mmol，1.3eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌16小时。通过加入饱和Na2CO3(100mL)水溶液淬灭反应混合物并搅拌0.5小时。过滤混合物，并用EtOAc(3×80mL)洗涤滤饼。将滤液用盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过SiO2快速色谱法(梯度：含0-20％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈无色油状物的4-(2，2-二甲氧基乙基)吗啉(10.03g，57.24mmol，66％产率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ4.53(t，J＝5.2Hz，1H)，3.75-3.69(m，4H)，3.37(s，6H)，2.56-2.49(m，6H)。
步骤2：(1-羟基-2-吗啉代乙基)磺酰氧基钠的制备
Figure BDA0003980908660003442
向在0℃下的HCl水溶液(12N，1.90mL，2eq)和H2O(1mL)的溶液中逐滴加入4-(2，2-二甲氧基乙基)吗啉(2g，11.41mmol，1eq)，并将反应混合物在40℃下搅拌3小时。将反应物冷却至0℃并加入Na2SO3(1.94g，15.41mmol，1.35eq)在H2O(5mL)中的悬浮液，保持温度低于20℃。在20℃下搅拌16小时后，将混合物用EtOH(10mL)稀释，冷却至0℃，然后搅拌1小时。过滤混合物并将其在真空下干燥，从而得到呈白色固体的(1-羟基-2-吗啉代乙基)磺酰氧基钠(1.36g，5.83mmol，51％产率)。1H-NMR(400MHz，D2O)δ4.91(dd，J＝10.4，2.8Hz，1H)，3.98(s，4H)，3.62(dd，J＝13.6，2.8Hz，1H)，3.58-3.28(m，5H)。
步骤3：(E)-4-吗啉代丁-2-烯酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660003451
向在0℃下的(1-羟基-2-吗啉代乙基)磺酰氧基钠(1.33g，5.71mmol，1.2eq)和2-二乙氧基磷酰乙酸叔丁酯(1.2g，4.76mmol，1eq)在H2O(3.6mL)中的溶液中逐滴加入NaOH水溶液(2.5M，7.14mL，3.75eq)，并将反应混合物在0℃下搅拌6小时。将混合物用MTBE(3×60mL)萃取，并将合并的萃取物用盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过SiO2快速色谱法(梯度：含0-15％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈黄色油状物的(E)-4-吗啉代丁-2-烯酸叔丁酯(585mg，2.57mmol，54％产率)。1-NMR(400MHz，CDCl3)δ6.90-6.77(m，1H)，5.91(d，J＝15.6Hz，1H)，3.79-3.65(m，4H)，3.10(dd，J＝6.4，1.2Hz，2H)，2.50-2.40(m，4H)，1.49(s，9H)。
步骤4：(E)-4-吗啉代丁-2-烯酸的制备
Figure BDA0003980908660003452
向(E)-4-吗啉代丁-2-烯酸叔丁酯(535mg，2.35mmol，1eq)在EtOAc(5mL)中的溶液中加入HCl(4N，在二噁烷中，17.65mL，30eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌6小时，从而得到白色悬浮液。将混合物浓缩，然后用i-Pr2O(40mL)稀释并搅拌2分钟。倾析混合物，并在真空下干燥固体，从而得到呈白色固体的(E)-4-吗啉代丁-2-烯酸(435mg，1.68mmol，71％产率，盐酸盐)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.87(br s，1H)，6.93-6.80(m，1H)，6.17(d，J＝15.6Hz，1H)，4.00-3.75(m，6H)，3.35-3.25(m，3H)，3.12-2.94(m，2H)。
步骤4：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-[(E)-4-吗啉代丁-2-烯酰基]哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-[(E)-4-吗啉代丁-2-烯酰基]哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺是按照与(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-[(E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰基]哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式使用(E)-4-吗啉代丁-2-烯酸制备。
Figure BDA0003980908660003461
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1242.8[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.66(s，1H)，8.42(s，1H)，7.94-7.85(m，1H)，7.85-7.72(m，2H)，7.60-7.49(m，2H)，7.43-7.31(m，6H)，7.27-7.26(m，1H)，7.25-7.15(m，2H)，6.32-6.23(m，1H)，5.12-5.03(m，1H)，4.99-4.82(m，1H)，4.77-4.65(m，3H)，4.60-4.55(m，1H)，4.53-4.47(m，1H)，4.42-4.30(m，1H)，4.29-4.20(m，1H)，4.09-3.96(m，2H)，3.92-3.84(m，1H)，3.79-3.70(m，3H)，3.65-3.58(m，1H)，3.52-3.04(m，13H)，2.65-2.59(m，1H)，2.56-2.47(m，6H)，2.45-2.36(m，1H)，2.14-2.04(m，1H)，1.89-1.67(m，3H)，1.64-1.50(m，2H)，1.46(t，J＝6.4Hz，3H)，1.10-0.94(m，9H)。
(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：(S)(1-(4-溴苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660003471
向(1S)-1-(4-溴苯基)乙胺(5.0g，24.99mmol，1.0eq)和NaHCO3(3.15g，37.49mmol，1.5eq)在THF(50mL)和水(15mL)中的混合物中加入(Boc)2O(6.54g，29.99mmol，1.2eq)，并将反应混合物在15℃下搅拌12小时。然后加入水(50mL)，并将所得悬浮液用EtOAc(2×100mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得粗产物在20℃下与EtOAc/石油醚(40mL，v/v＝1∶1)一起研磨30分钟。过滤悬浮液，并用石油醚(5mL×2)洗涤滤饼，并将其在真空下干燥从而得到呈白色固体的N-[(1S)-1-(4-溴苯基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(5.1g，17mmol，68％产率)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.49(d，J＝8.4Hz，2H)，7.43(d，J＝8.0Hz，1H)，7.24(d，J＝8.4Hz，2H)，4.57(t，J＝7.2Hz，1H)，1.35(s，9H)，1.27(d，J＝7.2Hz，3H)。
步骤2：N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660003481
向N-[(1S)-1-(4-溴苯基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(1.0g，3.33mmol，1.0eq)、(2-甲基吡唑-3-基)硼酸(503mg，4.00mmol，1.2eq)和Na2CO3(530mg，5.00mmol，1.5eq)在二噁烷(12mL)和水(1mL)中的溶液中加入Pd(dppf)Cl2(244mg，333.12umol，0.1eq)，并在N2下将反应混合物在100℃下搅拌12小时。将混合物用水(25mL)稀释并用CH2Cl2(3×45mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得粗产物通过快速硅胶色谱法(梯度：含0-40％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈黄色固体的N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(840mg，2.68mmol，80％产率)。LC/MS(ESI)m/z：302.0[M+H]+。
步骤3：(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙胺的制备
Figure BDA0003980908660003482
向N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(840mg，2.79mmol)在CH2Cl2(5.0mL)中的溶液中加入HCl(4N在二噁烷中，3.0mL)，并将反应混合物在20℃下搅拌2小时。浓缩混合物从而得到呈黄色泡沫的粗制(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙胺(651mg盐酸盐)，其将不经进一步纯化而直接用于下一步骤。
步骤4：(4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660003491
向(2S，4R)-1-叔丁氧羰基-4-羟基-吡咯烷-2-羧酸(696mg，3.01mmol，1.1eq)在DMF(8.0mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(1.41g，10.94mmol，4.0eq)和HATU(1.25g，3.28mmol，1.2eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌0.5小时。然后加入(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙胺盐酸盐(650mg，2.73mmol，1.0eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌12小时。将混合物用水(50mL)稀释并用EtOAc(4×80mL)萃取。将合并的萃取物用盐水(100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得粗产物通过快速硅胶色谱法(梯度：含0-8％CH3OH的EtOAc)纯化，从而得到呈黄色泡沫的(4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(684mg，1.64mmol，60％产率)。LC/MS(ESI)m/z：415.2[M+H]+。
步骤5：(4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660003492
向(4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(680mg，1.64mmol)在CH2Cl2(4.0mL)中的溶液中加入HCl(4N在二噁烷中，2.0mL)，并将反应混合物在20℃下搅拌1.5小时。将混合物在真空下浓缩，从而得到呈黄色油状物的(4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(580mg盐酸盐，粗品)，其将不经进一步纯化而直接用于下一步骤。
步骤6：4-[[5-[1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660003501
向2-[3-[(1-叔丁氧羰基-4-哌啶基)甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(3.00g，7.84mmol，1eq)在CH2Cl2(50mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(5.07g，39.2mmol，6.83mL，5eq)和HATU(3.88g，10.2mmol，1.3eq)，并在N2下将反应混合物在25℃下搅拌10分钟。然后加入(2S，4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(2.75g，7.84mmol，1eq，HCl)，并在N2下将反应混合物在25℃下搅拌3小时。将反应混合物倒在水(20mL)上并分离各层。将水层用CH2Cl2(20mL)进一步萃取。用盐水(30mL)洗涤合并的有机萃取物，将其经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得粗产物通过快速硅胶色谱法(梯度：0-90％EtOAc/石油醚)纯化两次，然后通过制备型HPLC(含45-62％CH3CN的水(0.05％NH4OH+10mM NH4HCO3))纯化，从而得到呈白色固体的4-[[5-[1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.41g，2.08mmol，27％产率)。LC/MS(ESI)m/z：679.5[M+H]+。
步骤7：4-[[5-[1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的手性分离
Figure BDA0003980908660003511
通过SFC(含35％异丙醇的水(0.1％NH4OH)分离4-[[5-[1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.10g，3.09)，从而得到呈白色固体的4-[[5-[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(522mg，0.769mmol，25％产率)(LC/MS(ESI)m/z：679.5[M+H]+)和呈白色固体的4-[[5-[(1R)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.52g，2.24mmol，72％产率)(LC/MS(ESI)m/z：679.5[M+H]+)。
步骤8：(2S，4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-[3-(4-哌啶基甲氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660003521
向4-[[5-[(1R)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.00g，1.47mmol，1eq)在CH3OH(10mL)中的溶液中加入HCl(4N在二噁烷中，10mL)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。浓缩反应物，并将所得残余物溶于水中。通过加入NaHCO3，将所得水性混合物的pH调节至～8。将水性混合物用10∶1CH2Cl2/MeOH(3×20mL)萃取，并用盐水(2×15mL)洗涤洗涤合并的有机萃取物，将其经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，从而得到呈黄色固体的(2S，4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-[3-(4-哌啶基甲氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(836mg，1.44mmol，98％产率)。LC/MS(ESI)m/z：579.5[M+H]+。
步骤9：(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660003531
向(2S，4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-[3-(4-哌啶基甲氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(1.04g，1.80mmol，1eq)和2-[(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(956mg，1.89mmol，1.05eq)在CH2Cl2(25mL)和异丙醇(25mL)中的溶液中加入AcOH(432mg，7.20mmol，0.412mL，4eq)和2-甲基吡啶硼烷络合物(963mg，9.00mmol，5eq)，并在N2下将反应混合物在25℃下搅拌45分钟。浓缩混合物，并将所得残余物通过制备型HPLC(含25-70％CH3CN的水(10mM NH4HCO3))纯化，从而得到呈黄色固体的(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(4.04g，3.78mmol，53％产率)。LC/MS(ESI)m/z：1068.4[M+H]+。
步骤10：(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660003541
向在-78℃下的(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(2.02g，1.74mmol，92％纯度，1eq)和2，6-二甲基吡啶(559mg，5.22mmol，0.608mL，3eq)在CH2Cl2(20mL)中的溶液中加入丙-2-烯酰氯(173mg，1.91mmol，0.156mL，1.1eq)，并在N2下将反应混合物在-78℃下搅拌0.5小时。浓缩反应混合物，并将所得粗产物通过制备型HPLC(含10-45％CH3CN的水(0.225％甲酸))纯化，从而得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(966.8mg，0.790mmol，45％产率，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：1122.6[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.47(s，1H)，8.10(s，1H)，7.75(d，J＝8.4Hz，1H)，7.52-7.35(m，6H)，7.31-7.13(m，3H)，7.03(d，J＝2.4Hz，1H)，6.98-6.74(m，1H)，6.38-6.26(m，2H)，6.00-5.92(m，1H)，5.85(d，J＝10.0Hz，1H)，5.16-4.94(m，2H)，4.81-4.75(m，2H)，4.56-4.37(m，4H)，4.26-3.99(m，3H)，3.90-3.72(m，6H)，3.67(d，J＝9.6Hz，1H)，3.65-3.43(m，4H)，3.39-3.32(m，2H)，3.12-2.93(m，2H)，2.90-2.67(m，2H)，2.43-2.31(m，1H)，2.23-2.14(m，1H)，2.11-1.87(m，4H)，1.67-1.45(m，5H)，1.05(d，J＝6.4Hz，3H)，0.94-0.81(m，3H)。
(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
Figure BDA0003980908660003551
向(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(2.00g，1.87mmol，1.0eq)在DMF(20mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(978uL，5.61mmol，3.0eq)和HATU(2.13g，5.61mmol，3.0eq)，然后缓慢加入2-氟丙-2-烯酸(202.25mg，2.25mmol，1.2eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌2小时。然后加入饱和K2CO3水溶液(30mL)，并将所得混合物搅拌30分钟。用EtOAc(3×30mL)萃取水性混合物，并经Na2SO4干燥合并的有机层，将其过滤并浓缩。将所得残余物通过制备型HPLC(含CH3CN的水(0.225％甲酸))纯化从而得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(1.06g，0.85mmol，46％产率，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：1140.4[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.43(d，J＝7.6Hz，1H)，8.11(s，1H)，7.81(d，J＝8.4Hz，1H)，7.50-7.43(m，4H)，7.40-7.36(m，2H)，7.29(d，J＝2.4Hz，1H)，7.22(d，J＝4.0Hz，2H)，7.07(d，J＝2.0Hz，1H)，6.37(d，J＝2.0Hz，1H)，6.06(s，1H)，5.46-5.23(m，2H)，5.11(s，1H)，4.97-4.86(m，2H)，4.49(s，2H)，4.40-4.33(m，2H)，4.31-4.26(m，2H)，3.98(d，J＝6.0Hz，2H)，3.84(s，3H)，3.74-3.59(m，7H)，3.11-2.96(m，3H)，2.78(s，2H)，2.29-1.95(m，5H)，1.81-1.66(m，4H)，1.48-1.20(m，6H)，0.98-0.93(m，3H)，0.82-0.75(m，3H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：N-[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660003561
在0℃下，向(2S，4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(9.30g，26.5mmol，1eq，盐酸盐)、二异丙基乙胺(17.07g，132.05mmol，23mL，4.98eq)和(2S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3，3-二甲基丁酸(7.36g，31.81mmol，1.2eq)在DMF(200mL)中的混合物中一次性加入HATU(15.1g，39.8mmol，1.5eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌12小时。将混合物倒在水(300mL)上，并用10∶1CH2Cl2/CH3OH(3×300mL)萃取所得混合物。用盐水(2×300mL)洗涤合并的有机萃取物，将其经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过SiO2快速色谱法(梯度：含0-70％THF的石油醚)纯化，从而得到呈白色固体的N-[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯(12.5g，23.69mmol，89％产率)。LC/MS(ESI)m/z：528.5[M+H]+。
步骤2：(2S，4R)-1-[(2S)-2-氨基-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660003571
在20℃下，向N-[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基甲酸叔丁酯(12.5g，23.7mmol，1eq)在CH3OH(30mL)中的混合物中一次性加入HCl(4N在CH3OH中，30mL)，并将反应混合物在20℃下搅拌30分钟。在减压下浓缩混合物，从而得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-氨基-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(10.9g，23.5mmol，99％产率，盐酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：428.2[M+H]+。
步骤3：4-[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代乙氧基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660003581
向2-[(1-叔丁氧羰基-4-哌啶基)甲氧基]乙酸(6.00g，22.0mmol，1.1eq)在CH2Cl2(120mL)中的溶液中加入HATU(15.2g，39.9mmol，2eq)和二异丙基乙胺(12.9g，99.8mmol，17.4mL，5eq)，并将所得混合物在25℃下搅拌0.5小时。然后加入(2S，4R)-1-[(2S)-2-氨基-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(9.26g，20.0mmol，1eq，盐酸盐)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。浓缩混合物，并将所得残余物通过SiO2快速色谱法(梯度：含0-13％CH3OH的EtOAc)纯化，从而得到呈黄色油状物的4-[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代乙氧基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(5.10g，6.72mmol，34％产率)。LC/MS(ESI)m/z：683.6[M+H]+。
步骤4：(2S，4R)-1-[(2S)-3，3-二甲基-2-[[2-(4-哌啶基甲氧基)乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660003582
向4-[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(5.10g，7.47mmol，1eq)在CH2Cl2(40mL)中的溶液中加入HCl(4N在二噁烷中，15mL)，并将反应混合物在25℃下搅拌2小时。通过加入饱和NaHCO3水溶液调节混合物的pH至～8，然后用CH2Cl2(150mL)萃取该混合物。将有机萃取物经Na2SO4干燥，过滤并浓缩从而得到呈黄色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-3，3-二甲基-2-[[2-(4-哌啶基甲氧基)乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(2.7g，4.63mmol，62％产率)。LC/MS(ESI)m/z：583.4[M+H]+。
步骤5：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660003591
在20℃下，向2-[(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(1.10g，2.17mmol，1.1eq)和(2S，4R)-1-[(2S)-3，3-二甲基-2-[[2-(4-哌啶基甲氧基)乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(1.15g，1.97mmol，1eq)在CH2Cl2(25mL)和异丙醇(25mL)中的混合物中一次性加入AcOH(0.452mL，7.90mmol，4eq)和2-甲基吡啶硼烷络合物(1.06g，9.86mmol，5eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌1小时。浓缩混合物，并将所得残余物通过制备型HPLC(含CH3CN的水(0.05％NH4OH+10mM NH4HCO3))纯化从而得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(1.13g，0.695mmol，66％纯度)。LC/MS(ESI)m/z：536.8[M/2+H]+。
步骤6：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660003601
在N2下向在-78℃下的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(1.13g，0.695mmol，66％纯度，1eq)和2，6-二甲基吡啶(372mg，3.47mmol，0.404mL，4.99eq)在CH2Cl2(50mL)中的混合物中逐滴加入丙-2-烯酰氯(0.062mL，0.76mmol，1.09eq)，并将反应混合物在-78℃下搅拌30分钟。然后加入水(0.5mL)，并将所得混合物温热至20℃。浓缩混合物，并将所得残余物通过制备型HPLC(含CH3CN的水(0.225％甲酸))纯化从而得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(350mg，0.298mmol，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：1126.8[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.46(d，J＝7.6Hz，1H)，8.24(s，2H)，8.11(s，1H)，7.81(d，J＝8.4Hz，1H)，7.50-7.42(m，5H)，7.40-7.35(m，2H)，7.31-7.26(m，2H)，7.23(d，J＝4.0Hz，2H)，7.08(d，J＝2.4Hz，1H)，6.98-6.78(m，1H)，6.37(d，J＝2.0Hz，1H)，6.22(d，J＝16.4Hz，1H)，5.80(d，J＝9.2Hz，1H)，4.99(d，J＝2.4Hz，1H)，4.95-4.85(m，2H)，4.71-4.63(m，1H)，4.54(d，J＝9.6Hz，1H)，4.50-4.42(m，2H)，4.41-4.31(m，2H)，4.25(d，J＝15.6Hz，3H)，4.16-4.03(m，2H)，3.91(s，2H)，3.84(s，5H)，3.12-3.03(m，3H)，3.01-2.92(m，3H)，2.71(t，J＝5.6Hz，3H)，2.12-1.98(m，2H)，1.76-1.53(m，3H)，1.36(d，J＝7.2Hz，3H)，1.27-1.14(m，2H)，0.93(s，9H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
Figure BDA0003980908660003611
在0℃下，向(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(2.33g，2.17mmol，1eq)、二异丙基乙胺(842mg，6.52mmol，3eq)和2-氟丙-2-烯酸(293mg，3.25mmol，1.5eq)在DMF(30mL)中的混合物中一次性加入HATU(2.48g，6.52mmol，3eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌1.5小时。然后加入饱和K2CO3(30mL)水溶液，并将所得混合物在20℃下搅拌30分钟。将混合物倒在水(100mL)上并用1∶1EtOAc/THF(3×100mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(2×100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过制备型HPLC(含CH3CN的水(0.225％甲酸))纯化从而得到呈白色固体的{(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(973.5mg，0.794mmol，37％产率，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：1144.8[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.04(s，1H)，8.47(d，J＝7.6Hz，1H)，8.14(s，1H)，8.12(s，1H)，7.82(d，J＝8.4Hz，1H)，7.50-7.42(m，5H)，7.37(d，J＝8.4Hz，2H)，7.32-7.27(m，3H)，7.22(d，J＝4.0Hz，2H)，7.07(d，J＝2.4Hz，1H)，6.37(d，J＝2.0Hz，1H)，5.48-5.36(m，2H)，5.32-5.23(m，1H)，5.14(d，J＝3.2Hz，1H)，4.96-4.86(m，2H)，4.57-4.24(m，10H)，3.92(s，3H)，3.84(s，4H)，3.62-3.53(m，2H)，3.11-2.97(m，3H)，2.84-2.72(m，3H)，2.20-1.99(m，2H)，1.84-1.56(m，4H)，1.36(d，J＝7.2Hz，3H)，1.29-1.14(m，2H)，0.93(s，9H)。
(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[7-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：3-甲基-2-[3-(1，1，2，2，3，3，4，4，4-九氟丁基磺酰氧基)异噁唑-5-基]丁酸甲酯的制备
Figure BDA0003980908660003631
在N2下向在0℃下的2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(20.0g，100mmol，1eq)和K2CO3(6.94g，50.2mmol，0.5eq)在CH3CN(100mL)中的混合物中逐滴加入1，1，2，2，3，3，4，4，4-九氟丁烷-1-磺酰氟(60.7g，201mmol，2eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌12小时。将混合物用EtOAc(100mL)稀释，并用饱和NH4Cl(100mL)洗涤。将水相用EtOAc(3×120mL)萃取，并用盐水(100mL)洗涤有机萃取物，将其经无水Na2SO4干燥并浓缩。将所得残余物通过SiO2快速色谱法(梯度：含0-1％THF的石油醚)纯化，从而得到呈无色油状物的3-甲基-2-[3-(1，1，2，2，3，3，4，4，4-九氟丁基磺酰氧基)异噁唑-5-基]丁酸甲酯(37.4g，71.5mmol，71％产率)。LC/MS(ESI)m/z：481.8[M+H]+。
步骤2：2-[5-(1-甲氧基羰基-2-甲基-丙基)异噁唑-3-基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸盐叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660003632
向2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(3.00g，13.3mmol，1eq)在DMA(60mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(5.14g，39.8mmol，3eq)和3-甲基-2-[3-(1，1，2，2，3，3，4，4，4-九氟丁基磺酰氧基)异噁唑-5-基]丁酸甲酯(7.66g，15.9mmol，1.2eq)，并在N2下将反应混合物在140℃下搅拌12小时。将所得残余物通过制备型HPLC(含30-70％CH3CN的水(0.05％HCl))纯化，从而得到呈白色固体的2-[5-(1-甲氧基羰基-2-甲基-丙基)异噁唑-3-基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(1.13g，2.63mmol，20％产率)。LC/MS(ESI)m/z：408.0[M+H]+。
步骤3：2-[3-(7-叔丁氧羰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸的制备
Figure BDA0003980908660003641
向2-[5-(1-甲氧基羰基-2-甲基-丙基)异噁唑-3-基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(1.13g，2.77mmol，1eq)在THF(10mL)、CH3OH(10mL)和H2O(10mL)中的溶液中加入LiOH·H2O(582mg，13.9mmol，5eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌1小时。将反应混合物用HCl水溶液(2N)调节至pH＝3，并然后冻干从而得到呈白色固体的2-[3-(7-叔丁氧羰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(1.09g，粗品)。LC/MS(ESI)m/z：394.0[M+H]+。
步骤4：2-[5-[1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660003642
向2-[3-(7-叔丁氧羰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(1.09g，2.77mmol，1eq)和(2S，4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(1.02g，2.77mmol，1eq，盐酸盐)在DMF(10mL)中的混合物中加入二异丙基乙胺(1.79g，13.9mmol，5eq)和HATU(1.05g，2.77mmol，1eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌2小时。然后加入水(20mL)，并用EtOAc(3×20mL)萃取所得混合物。用盐水(3×20mL)洗涤合并的有机萃取物，将其经Na2SO4干燥并浓缩。将所得残余物通过SiO2快速色谱法(梯度：含0-50％THF的石油醚)纯化，从而得到呈黄色固体的2-[5-[1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(1.96g，2.33mmol，84％纯度)。LC/MS(ESI)m/z：707.5[M+H]+。
步骤5：2-[5-[1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯的手性分离
Figure BDA0003980908660003651
通过SFC(含40％异丙醇的水(0.1％NH4OH))分离2-[5-[1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(1.70g，2.40mmol，1eq)，从而得到呈白色固体的2-[5-[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(800mg，0.985mmol，41％产率，87％纯度)(LC/MS(ESI)m/z：707.3[M+H]+)和呈白色固体的2-[5-[(1R)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(760mg，1.02mmol，42％产率)(LC/MS(ESI)m/z：707.4[M+H]+)。
步骤6：(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660003661
向2-[5-[(1R)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(760mg，1.08mmol，1eq)在CH2Cl2(3mL)中的溶液中加入TFA(1mL)，并在N2下将反应混合物在20℃下搅拌2.5小时。将反应混合物在减压下浓缩，并将所得残余物用水(10mL)稀释。将所得水性混合物用饱和NaHCO3水溶液调节至pH＝9，并用20∶1CH2Cl2/CH3OH(3×20mL)萃取。将合并的有机萃取物用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，从而得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(646mg，0.905mmol，85％纯度)。LC/MS(ESI)m/z：607.4[M+H]+。
步骤7：(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[7-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660003671
向2-[(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(549.40mg，1.09mmol，1.2eq)和(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(646mg，0.905mmol，85％纯度，1eq)在CH2Cl2(20mL)和异丙醇(20mL)中的溶液中加入AcOH(217mg，3.62mmol，4eq)和2-甲基吡啶硼烷络合物(484mg，4.52mmol，5eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌1小时。浓缩混合物，并将所得粗产物通过制备型HPLC(含40-85％CH3CN的水(10mM NH4HCO3)溶液)纯化，从而得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[7-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(366mg，0.334mmol，37％产率)。LC/MS(ESI)m/z：549.1[M/2+H]+。
步骤8：(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[7-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660003681
向(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[7-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(366mg，0.334mmol，1eq)、2-氟丙-2-烯酸(45mg，0.50mmol，1.5eq)和二异丙基乙胺(129mg，1.00mmol，3eq)在DMF(5mL)中的溶液中加入HATU(381mg，1.00mmol，3eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌2小时。然后加入饱和K2CO3水溶液(5mL)，并将所得混合物在25℃下搅拌0.5小时。用CH2Cl2(3×5mL)萃取混合物，并将合并的有机萃取物经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得粗产物通过制备型HPLC(含20-72％CH3CN的水(0.225％甲酸))纯化，从而得到呈白色固体的所需产物(88mg)。不纯的级分通过制备型HPLC(含10-60％CH3CN的水(0.225％甲酸))进一步纯化得到另外的的所需产物。合并纯化的材料从而得到(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[7-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(168.2mg，0.132mmol，40％产率，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：585.4[M/2+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.90-8.60(m，1H)，8.43(s，1H)，8.08(s，1H)，7.76(d，J＝8.4Hz，1H)，7.49-7.33(m，5H)，7.30-7.14(m，3H)，7.03(d，J＝2.4Hz，1H)，5.88-5.81(m，1H)，5.47-5.27(m，2H)，5.06-5.00(m，1H)，4.74(t，J＝4.8Hz，2H)，4.57-4.41(m，4H)，3.88-3.79(m，2H)，3.75-3.67(m，5H)，3.66-3.43(m，3H)，3.25-3.17(m，2H)，3.16-2.88(m，6H)，2.50-2.45(m，3H)，2.41-2.31(m，1H)，2.22-2.12(m，1H)，2.08-1.91(m，5H)，1.61-1.49(m，3H)，1.41-1.18(m，2H)，1.04(d，J＝6.4Hz，3H)，0.92-0.84(m，3H)。
(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[7-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
Figure BDA0003980908660003691
向在-78℃下的(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[7-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(480mg，0.438mmol，1eq)和2，6-二甲基吡啶(141mg，1.31mmol，3eq)在CH2Cl2(30mL)中的溶液中加入丙-2-烯酰氯(44mg，0.48mmol，1.1eq)，并在N2下将反应混合物在-78℃下搅拌0.5小时。通过加入水(1mL)淬灭反应混合物，并将其在减压下浓缩从而得到粗产物。通过制备型HPLC(含30-60％CH3CN的水(10mM NH4HCO3))纯化得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[7-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(232mg，0.195mmol，45％产率)。LC/MS(ESI)m/z：1150.5[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.89-8.84(m，1H)，8.06(s，1H)，7.75(d，J＝8.0Hz，1H)，7.50-7.34(m，5H)，7.29-7.15(m，3H)，7.04(d，J＝2.4Hz，1H)，6.96-6.75(m，1H)，6.31(d，J＝17.6Hz，1H)，5.89-5.78(m，2H)，5.05-4.99(m，1H)，4.64(t，J＝5.2Hz，2H)，4.49-4.37(m，3H)，4.28-4.06(m，1H)，3.90-3.79(m，2H)，3.76-3.43(m，9H)，3.08-2.97(m，2H)，2.91-2.81(m，2H)，2.74-2.51(m，4H)，2.50-2.45(m，3H)，2.39-2.30(m，1H)，2.23-2.12(m，1H)，2.10-1.73(m，6H)，1.60-1.49(m，3H)，1.04(d，J＝6.4Hz，3H)，0.92-0.84(m，3H)。
2-[5-[1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯的示例性合成
步骤1：2-[5-[1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660003701
向2-[3-(7-叔丁氧羰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(1.5g，3.81mmol，1.0eq)和(2S，4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(1.6g，4.57mmol，1.2eq，盐酸盐)在CH2Cl2(30mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(2.0g，15.25mmol，2.7mL，4.0eq)和HATU(2.9g，7.62mmol，2.0eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌2小时。浓缩混合物，并将所得残余物通过SiO2快速色谱法(梯度：含0-65％THF的石油醚)纯化，从而得到呈灰白色固体的2-[5-[1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(2.2g，3.03mmol，79％产率)。LC/MS(ESI)m/z：690.4[M+H]+。
步骤2：2-[5-[1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯的手性分离
Figure BDA0003980908660003711
通过SFC(含40％EtOH的水(0.1％NH4OH))纯化2-[5-[1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(2.3g，3.33mmol，1.0eq)，从而得到呈白色固体的2-[5-[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(1.1g，1.56mmol，46.87％产率)(LC/MS(ESI)m/z：690.5[M+H]+)和呈白色固体的2-[5-[(1R)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(830mg，1.18mmol，35％产率)(LC/MS(ESI)m/z：690.5[M+H]+)。
(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[7-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[7-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺是按照与(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[7-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式从2-[5-[(1R)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯开始制备的。
Figure BDA0003980908660003721
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1133.5[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.41(d，J＝7.6Hz，1H)，8.15(s，1H)，8.11(s，1H)，7.81(d，J＝7.6Hz，1H)，7.50-7.46(m，4H)，7.45-7.44(m，2H)，7.39(s，1H)，7.37-7.23(m，2H)，7.07(s，1H)，6.37(s，1H)，6.21(d，J＝15.6Hz，1H)，5.83-5.81(m，1H)，5.10(s，1H)，4.99-4.91(m，1H)，4.48-4.45(m，1H)，4.37(t，J＝7.6Hz 2H)，4.34-4.26(m，3H)，4.25-4.22(m，2H)，3.86-3.85(m，1H)，3.84(s，3H)，3.58-3.53(m，5H)，2.69-2.66(m，3H)，2.42-2.41(m，4H)，2.33(s，1H)，2.31(m，2H)，2.02-1.99(m，1H)，1.77-1.71(m，6H)，1.44(d，J＝7.2Hz，1H)，1.38(d，J＝7.2Hz，3H)，0.96-0.93(m，4H)，0.82-0.77(m，4H)。
(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[7-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[7-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺是按照与(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[7-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式从2-[5-[(1R)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯开始制备的。
Figure BDA0003980908660003741
(甲酸盐，黄色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1151.3[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.10(s，1H)，7.49-7.48(m，1H)，7.45(s，1H)，7.43-7.40(m，5H)，7.28(s，1H)，7.27-7.22(m，2H)，7.03(s，1H)，6.34(d，J＝2.0Hz，1H)，5.88(s，1H)，5.37-5.32(m，2H)，5.05-4.85(m，2H)，4.60-4.44(m，6H)，3.85-3.82(m，5H)，3.741(m，6H)，3.65-3.63(m，2H)，3.62-3.61(m 3H)，3.31-3.10(m，1H)，3.08(d，J＝3.6Hz，3H)，2.37-2.34(m，1H)，2.07-2.04(m，1H)，2.02-1.99(m，4H)，1.97-1.95(m，1H)，1.59-1.51(m，3H)，1.32-1.30(m，2H)，1.05(d，J＝7.6Hz，3H)，0.91-0.87(m，3H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：(2S)-4-[6-氯-2-(2，2-二甲氧基乙氧基)-8-氟-7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660003751
在N2下，向(2S)-4-[7-溴-6-氯-2-(2，2-二甲氧基乙氧基)-8-氟-喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(700mg，1.19mmol，1.0eq)、(5-甲基-1H-吲唑-4-基)硼酸(1.04g，5.95mmol，5.0eq)和K3PO4(1.5M，3.16mL，4.0eq)在1-甲氧基-2-(2-甲氧基乙氧基)乙烷(14mL)中的混合物中加入二叔丁基(环戊基)膦；二氯钯；铁(ditertbutyl(cyclopentyl)phosphane；dichloropalladium；iron)(117mg，0.18mmol，0.15eq)，并在微波条件下将反应混合物在130℃下搅拌1小时。将反应混合物用EtOAc(50mL)稀释，并将所得有机混合物用水(5×20mL)洗涤，然后用盐水(3×20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(梯度：含0-40％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到黄色油状物的(2S)-4-[6-氯-2-(2，2-二甲氧基乙氧基)-8-氟-7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(521mg，0.63mmol，77％纯度)。LC/MS(ESI)m/z：640.3[M+H]+。
步骤2：2-[(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基]哌嗪-2-基]乙腈的制备
Figure BDA0003980908660003752
向(2S)-4-[6-氯-2-(2，2-二甲氧基乙氧基)-8-氟-7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(369mg，0.44mmol，77％纯度，1.0eq)在丙酮(0.78mL)中的溶液中加入HCl(781uL，8.09mmol，37％纯度，18.23eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌20分钟。将混合物倒在饱和NaHCO3水溶液(15mL)上，并过滤所得沉淀。将该材料溶解在THF(30mL)中，并将所得有机溶液经Na2SO4干燥，过滤，并在减压下干燥从而得到呈黄色固体的2-[(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(219.24mg，粗品)，其不经进一步纯化即用于下一步骤。LC/MS(ESI)m/z：494.2[M+H]+。
步骤3：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺是按照与(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式从2-[(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基]哌嗪-2-基]乙腈开始制备的。
Figure BDA0003980908660003771
(甲酸盐，黄色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1131.7[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.18(s，1H)，8.98(s，1H)，8.45(d，J＝7.6Hz，1H)，8.12(s，1H)，7.61-7.49(m，2H)，7.45-7.32(m，5H)，7.28(d，J＝9.6Hz，1H)，6.95-6.77(m，1H)，6.21(d，J＝18.0Hz，1H)，5.79(d，J＝8.8Hz，1H)，5.28-4.80(m，3H)，4.53(d，J＝9.6Hz，1H)，4.50-4.41(m，3H)，4.40-4.15(m，4H)，4.07(s，1H)，3.90(s，2H)，3.58-3.55(m，1H)，3.41-3.30(m，5H)，3.05-2.89(m，4H)，2.71(t，J＝5.6Hz，2H)，2.45(s，3H)，2.16(d，J＝3.8Hz，3H)，2.10-1.98(m，3H)，1.78-1.71(m，1H)，1.69-1.52(m，3H)，1.34(dd，J＝2.0，6.8Hz，3H)，1.26-1.13(m，2H)，0.92(s，9H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[7-(3-氨基-1-异喹啉基)-6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：(2S)-4-[7-溴-6-氯-2-[2-[4-[(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]-1-哌啶基]乙氧基]-8-氟-喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660003781
在20℃下，向(2S)-4-(7-溴-2，6-二氯-8-氟-喹唑啉-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.0g，1.93mmol，1.0eq)在CH3CN(10mL)中的溶液中加入2-[[1-(2-羟乙基)-4-哌啶基]甲氧基]乙酸乙酯(614.24mg，2.50mmol，1.3eq)、Cs2CO3(815.81mg，2.50mmol，1.3eq)和DABCO(21.60mg，192.61umol，21.18uL，0.1eq)，并将反应混合物在50℃下搅拌3小时。过滤反应混合物，并在减压下浓缩滤液。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(梯度：含0-4％EtOH的CH2Cl2)纯化，从而得到呈黄色固体的(2S)-4-[7-溴-6-氯-2-[2-[4-[(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]-1-哌啶基]乙氧基]-8-氟-喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(808mg，1.04mmol，53.9％产率)。LC/MS(ESI)m/z：729.2[M+H]+。
步骤2：2-[[1-[2-[7-(3-氨基-1-异喹啉基)-4-[(3S)-4-叔丁氧羰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-6-氯-8-氟-喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酸的制备
Figure BDA0003980908660003782
向(2S)-4-[7-溴-6-氯-2-[2-[4-[(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]-1-哌啶基]乙氧基]-8-氟-喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(680mg，934umol，1.0eq)、1-三丁基锡烷基异喹啉-3-胺(809.25mg，1.87mmol，2.0eq)和LiCl(98.98mg，2.34mmol，2.5eq)在二噁烷(7mL)中的混合物中加入CuI(53.36mg，280.20umol，0.3eq)和Pd(PPh3)4(215.86mg，186.80umol，0.2eq)，并在N2下将反应混合物在110℃下搅拌15小时。过滤反应混合物，并用EtOAc(50mL)洗涤过滤器中的固体。浓缩滤液，并将所得粗产物通过制备型HPLC(含15-60％CH3CN的水(0.05％HCl))纯化，从而得到呈黄色固体的2-[[1-[2-[7-(3-氨基-1-异喹啉基)-4-[(3S)-4-叔丁氧羰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-6-氯-8-氟-喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酸(245mg，305.46umol，33％产率)。LC/MS(ESI)m/z：763.3[M+H]+。
步骤3：(2S)-4-[7-(3-氨基-1-异喹啉基)-6-氯-8-氟-2-[2-[4-[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]甲基]-1-哌啶基]乙氧基]喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660003791
向(2S，4R)-1-[(2S)-2-氨基-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(122.9mg，0.255mmol，1.0eq，盐酸盐)和2-[[1-[2-[7-(3-氨基-1-异喹啉基)-4-[(3S)-4-叔丁氧羰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-6-氯-8-氟-喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酸(195mg，0.255mmol，1.0eq)在DMF(6mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(198.1mg，1.53mmol，6.0eq)和HATU(97.1mg，0.255mmol，1.0eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌2小时。将混合物用EtOAc(100mL)稀释，并将所得有机混合物用盐水(4×30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，从而得到呈黄色固体的(2S)-4-[7-(3-氨基-1-异喹啉基)-6-氯-8-氟-2-[2-[4-[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]甲基]-1-哌啶基]乙氧基]喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(380mg，粗品)。LC/MS(ESI)m/z：595.6[M/2+H]+。
步骤4：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[7-(3-氨基-1-异喹啉基)-6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660003801
向(2S)-4-[7-(3-氨基-1-异喹啉基)-6-氯-8-氟-2-[2-[4-[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]甲基]-1-哌啶基]乙氧基]喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(350mg，0.294mmol，1.0eq)在CH2Cl2(2mL)中的溶液中加入TFA(637.3mg，5.59mmol，19.0eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌2小时。浓缩反应物，并通过加入Et3N使所得材料呈碱性。将残余物通过制备型HPLC(含30-60％CH3CN的水(NH4HCO3))纯化，从而得到呈黄色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[7-(3-氨基-1-异喹啉基)-6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(100mg，84.43umol，29％产率)。LC/MS(ESI)m/z：1089.5[M+H]+。
步骤5：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[7-(3-氨基-1-异喹啉基)-6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660003811
向在-78℃下的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[7-(3-氨基-1-异喹啉基)-6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(100mg，0.092mmol，1.0eq)和2，6-二甲基吡啶(39.3mg，0.367mmol，4.0eq)在CH2Cl2(5mL)中的溶液中逐滴加入丙-2-烯酰氯(8.3mg，0.092mmol，1.0eq)，并将反应混合物在-78℃下搅拌0.5小时。然后加入水(0.2mL)，并将所得混合物搅拌10分钟直到温度达到20℃。浓缩混合物，并将所得残余物通过制备型HPLC(含10-50％CH3CN的水(0.225％甲酸))纯化，从而得到呈黄色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[7-(3-氨基-1-异喹啉基)-6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(27.8mg，25％产率，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：1143.8[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.87(s，1H)，8.49(br s，1H)，8.10(s，1H)，7.75-7.59(m，1H)，7.57-7.23(m，6H)，7.19-7.07(m，1H)，7.02-6.90(m，1H)，6.88-6.73(m，1H)，6.42-6.19(m，1H)，5.97-5.76(m，1H)，5.18-4.95(m，3H)，4.72-4.38(m，7H)，4.27-4.09(m，1H)，4.06-3.68(m，6H)，3.64-3.39(m，6H)，3.13-2.96(m，2H)，2.94-2.66(m，2H)，2.47(s，3H)，2.29-2.14(m，1H)，2.10-1.80(m，4H)，1.70-1.37(m，5H)，1.03(s，9H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[7-[6-氨基-4-甲基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]-6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：6-溴-N，N-双[(4-甲氧基苯基)甲基]-4-甲基-吡啶-2-胺的制备
Figure BDA0003980908660003821
在N2下向在0℃下的6-溴-4-甲基-吡啶-2-胺(7.00g，37.4mmol，1eq)在DMF(70mL)中的溶液中缓慢加入NaH(5.24g，131mmol，60％在矿物油中，3.5eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌1小时。然后在0℃下逐滴加入PMB-Cl(13.5g，86.1mmol，11.72mL，2.3eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌16小时。然后在0℃下加入饱和NH4Cl水溶液(80mL)，并用EtOAc(3×100mL)萃取所得混合物。将合并的有机萃取物用盐水(5×60mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过SiO2快速色谱法(梯度：含0-5％EtOAc的石油醚)纯化两次，从而得到呈白色固体的6-溴-N，N-双[(4-甲氧基苯基)甲基]-4-甲基-吡啶-2-胺(12.2g，27.1mmol，72％产率)。LC/MS(ESI)m/z：426.8，428.8[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.20-7.12(m，4H)，6.90-6.82(m，4H)，6.59(s，1H)，6.16(s，1H)，4.64(s，4H)，3.80(s，6H)，2.13(s，3H)。
步骤2：N，N-双[(4-甲氧基苯基)甲基]-4-甲基-6-三丁基锡烷基-吡啶-2-胺的制备
Figure BDA0003980908660003831
向6-溴-N，N-双[(4-甲氧基苯基)甲基]-4-甲基吡啶-2-胺(6.17g，14.4mmol，1eq)和三丁基(三丁基锡烷基)锡烷(25.1g，43.3mmol，21.7mL，3eq)在二噁烷(40mL)中的溶液中加入Pd2(dba)3(1.32g，1.44mmol，0.1eq)、P(Cy)3(810mg，2.89mmol，0.2eq)和LiCl(3.06g，72.2mmol，5eq)，并在N2下将反应混合物在110℃下搅拌16小时。过滤反应混合物，并用EtOAc(3×50mL)洗涤滤饼。在减压下浓缩滤液，并将所得残余物通过SiO2快速色谱法(梯度：含0-4％THF的石油醚)纯化，从而得到呈黄色油状物的N，N-双[(4-甲氧基苯基)甲基]-4-甲基-6-三丁基锡烷基-吡啶-2-胺(6.28g，8.77mmol，61％产率)。LC/MS(ESI)m/z：639.4[M+H]+。
步骤3：(2S)-4-(7-溴-6-氯-2，8-二氟-喹唑啉-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660003832
向(2S)-4-(7-溴-2，6-二氯-8-氟-喹唑啉-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(5.62g，10.8mmol，1eq)在DMA(75mL)中的溶液中加入KF(25.2g，433mmol，40eq)，并在N2下将反应混合物在120℃下搅拌21小时。将混合物用EtOAc(400mL)稀释并过滤，并用盐水(5×60mL)洗涤滤液，将其经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过SiO2快速色谱法(梯度：含10-20％EtOAc的石油醚)纯化，然后通过SiO2快速色谱法(梯度：含10-60％CH2Cl2的石油醚)纯化，从而得到呈黄色固体的(2S)-4-(7-溴-6-氯-2，8-二氟-喹唑啉-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2.46g，4.26mmol，39％产率)。LC/MS(ESI)m/z：504.1[M+H]+。
步骤4：(2S)-4-[7-[6-[双[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-4-甲基-2-吡啶基]-6-氯-2，8-二氟-喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660003841
向(2S)-4-(7-溴-6-氯-2，8-二氟-喹唑啉-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.45g，2.88mmol，1eq)、N，N-双[(4-甲氧基苯基)甲基]-4-甲基-6-三丁基锡烷基-吡啶-2-胺(3.68g，5.77mmol，2eq)和LiCl(306mg，7.21mmol，2.5eq)在二噁烷(25mL)中的混合物中加入CuI(165mg，0.865mmol，0.3eq)和Pd(PPh3)4(667mg，0.577mmol，0.2eq)，并在N2下将反应混合物在110℃下搅拌16小时。过滤反应混合物，并浓缩滤液。将所得残余物通过SiO2快速色谱法(梯度：含5-20％THF的石油醚)纯化，从而得到呈黄色固体的(2S)-4-[7-[6-[双[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-4-甲基-2-吡啶基]-6-氯-2，8-二氟-喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.60g，2.04mmol，71％产率)。LC/MS(ESI)m/z：770.3[M+H]+。
步骤5：(2S)-4-[7-[6-[双[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-3-碘代-4-甲基-2-吡啶基]-6-氯-2，8-二氟-喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660003851
向(2S)-4-[7-[6-[双[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-4-甲基-2-吡啶基]-6-氯-2，8-二氟-喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.60g，2.08mmol，1eq)在DMF(15mL)中的溶液中加入NIS(2.34g，10.4mmol，5eq)和TsOH(17.9mg，0.104mmol，0.05eq)，并在N2下将反应混合物在25℃下搅拌16小时。然后加入EtOAc(250mL)，并用盐水(6×40mL)洗涤所得有机混合物，将其经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过SiO2快速色谱法(含5-20％THF的石油醚)纯化从而得到呈黄色固体的(2S)-4-[7-[6-[双[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-3-碘代-4-甲基-2-吡啶基]-6-氯-2，8-二氟-喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.60g，1.75mmol，84％产率)。LC/MS(ESI)m/z：448.7[M/2+H]+。
步骤6：(2S)-4-[7-[6-[双[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-4-甲基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]-6-氯-2，8-二氟-喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660003852
向(2S)-4-[7-[6-[双[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-3-碘代-4-甲基-2-吡啶基]-6-氯-2，8-二氟-喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.60g，1.79mmol，1eq)在DMA(50mL)中的溶液中加入CuI(3.40g，17.9mmol，10eq)和2，2-二氟-2-氟磺酰基-乙酸甲酯(8.57g，44.6mmol，5.68mL，25eq)，并在N2下将反应混合物在90℃下搅拌16小时。将混合物用EtOAc(250mL)稀释并过滤，并在减压下浓缩滤液。将所得残余物通过SiO2快速色谱法(梯度：含5-20％THF的石油醚)纯化，从而得到呈黄色油状物的(2S)-4-[7-[6-[双[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-4-甲基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]-6-氯-2，8-二氟-喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.86g，82％纯度)。LC/MS(ESI)m/z：419.8[M/2+H]+。
步骤7：(2S)-4-[7-[6-[双[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-4-甲基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]-2-[2-[4-[(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]-1-哌啶基]乙氧基]-6-氯-8-氟-喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660003861
向(2S)-4-[7-[6-[双[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-4-甲基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]-6-氯-2，8-二氟-喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(940mg，1.12mmol，1eq)和2-[[1-(2-羟乙基)-4-哌啶基]甲氧基]乙酸叔丁酯(552mg，2.02mmol，1.8eq)在DMF(5mL)和THF(5mL)中的混合物中加入Cs2CO3(585mg，1.79mmol，1.6eq)和DABCO(25mg，0.22mmol，0.2eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌16小时。将反应混合物用EtOAc(150mL)稀释，然后过滤。将滤液用盐水(4×30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过SiO2快速色谱法纯化(梯度：含0-70EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈黄色固体的(2S)-4-[7-[6-[双[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-4-甲基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]-2-[2-[4-[(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]-1-哌啶基]乙氧基]-6-氯-8-氟-喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(620mg，0.528mmol，43％产率)。LC/MS(ESI)m/z：1091.6[M+H]+。
步骤8：2-[[1-[2-[7-[6-[双[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-4-甲基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]-4-[(3S)-4-叔丁氧羰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-6-氯-8-氟-喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酸的制备
Figure BDA0003980908660003871
向(2S)-4-[7-[6-[双[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-4-甲基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]-2-[2-[4-[(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]-1-哌啶基]乙氧基]-6-氯-8-氟-喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(500mg，0.458mmol，1eq)在THF(5mL)和CH3OH(3mL)中的溶液中加入LiOH.H2O(577mg，13.7mmol，30eq)在H2O(3mL)中的溶液，并将反应混合物在0℃下搅拌1小时，然后在20℃下搅拌1小时。通过加入HCl水溶液(2N)调节反应混合物的pH值至pH＝7，并浓缩所得混合物。通过加入HCl水溶液(2N)酸化所得残余物直至pH＝3～4，并将混合物冻干从而得到呈黄色固体的2-[[1-[2-[7-[6-[双[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-4-甲基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]-4-[(3S)-4-叔丁氧羰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-6-氯-8-氟-喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酸(474mg，粗品)。LC/MS(ESI)m/z：518.3[M/2+H]+。
步骤9：(2S)-4-[7-[6-[双[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-4-甲基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]-6-氯-8-氟-2-[2-[4-[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]甲基]-1-哌啶基]乙氧基]喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660003881
向2-[[1-[2-[7-[6-[双[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-4-甲基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]-4-[(3S)-4-叔丁氧羰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-6-氯-8-氟-喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酸(420mg，粗品)和(2S，4R)-1-[(2S)-2-氨基-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(195mg，0.406mmol，1eq，盐酸盐)在DMF(8mL)中的混合物中加入二异丙基乙胺(262mg，2.03mmol，5eq)和HATU(154mg，0.406mmol，1eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌2小时。加入EtOAc(100mL)，并用盐水(4×30mL)洗涤所得有机混合物，将其经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过SiO2快速色谱法(梯度：含2-8％CH3OH的CH2Cl2)纯化从而得到呈黄色固体的(2S)-4-[7-[6-[双[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-4-甲基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]-6-氯-8-氟-2-[2-[4-[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]甲基]-1-哌啶基]乙氧基]喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(378mg，52％产率)。LC/MS(ESI)m/z：731.9[M/2+H]+。
步骤10：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[7-[6-氨基-4-甲基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]-6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660003891
向在0℃下的(2S)-4-[7-[6-[双[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-4-甲基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]-6-氯-8-氟-2-[2-[4-[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]甲基]-1-哌啶基]乙氧基]喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(225mg，0.154mmol，1eq)在TFA(4mL)中的溶液中逐滴加入TfOH(0.2mL)，并在N2下将反应混合物在0℃下搅拌30分钟。从50mg起始材料开始，按照此程序再重复该程序2次。合并3次反应混合物并浓缩该混合物。将所得残余物用饱和Na2CO3水溶液处理，直至所得水溶液的pH值达到pH＝9。然后用15∶1CH2Cl2/CH3OH(3×40mL)萃取该水性混合物，并用盐水(30mL)洗涤合并的有机萃取物，将其经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将所得粗产物通过制备型HPLC(含30-80％CH3CN的水(10mM NH4HCO3))纯化，从而得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[7-[6-氨基-4-甲基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]-6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(160mg)。LC/MS(ESI)m/z：561.1[M/2+H]+。
步骤11：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[7-[6-氨基-4-甲基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]-6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660003901
向在-78℃下的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[7-[6-氨基-4-甲基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]-6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-8-氟-喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(160mg，0.143mmol，1eq)、二异丙基乙胺(37mg，0.29mmol，2eq)和2，6-二甲基吡啶(31mg，0.29mmol，2eq)在CH2Cl2(5mL)中的混合物中逐滴加入丙-2-烯酰氯(12.9mg，0.143mmol，1eq)，并在N2下将反应混合物在-78℃搅拌0.5小时。然后加入水(0.2mL)，并将所得混合物搅拌10分钟直至其被温热至20℃。在减压下浓缩混合物，并将所得残余物通过制备型HPLC(含10-50％CH3CN的水(0.225％甲酸))纯化从而得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[7-[6-氨基-4-甲基-3-(三氟甲基)-2-吡啶基]-6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(55.7mg，0.047mmol，33％产率，甲酸盐)。LC/MS(ESI)m/z：1175.8[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.90-8.83(m，1H)，8.53(s，1H)，7.97(s，1H)，7.51-7.33(m，4H)，6.99-6.72(m，1H)，6.60(s，1H)，6.30(d，J＝16.4Hz，1H)，5.83(d，J＝10.4Hz，1H)，5.14-5.05(m，1H)，5.02-4.96(m，1H)，4.82-4.66(m，4H)，4.61-4.52(m，1H)，4.50-4.34(m，3H)，4.20-4.08(m，1H)，4.06-3.91(m，2H)，3.89-3.80(m，2H)，3.77-3.64(m，2H)，3.53-3.41(m，4H)，3.30-3.18(m，2H)，3.10-2.96(m，2H)，2.83-2.60(m，2H)，2.50-2.46(m，3H)，2.44(s，3H)，2.30-2.15(m，1H)，2.00-1.81(m，4H)，1.60-1.45(m，5H)，1.08-0.98(m，9H)。
(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-甲基-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：4-[[5-(1-甲氧基羰基-2-甲基-丙基)异噁唑-3-基]氧基甲基]-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660003911
向在0℃下的4-(羟甲基)-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.00g，8.72mmol，1eq)、2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(1.74g，8.72mmol，1eq)和PPh3(3.43g，13.1mmol，1.5eq)在THF(20mL)中的混合物中加入DIAD(2.65g，13.1mmol，2.54mL，1.5eq)，并在N2下将反应混合物在60℃下搅拌12小时。浓缩反应混合物，并将所得残余物通过SiO2快速色谱法(梯度：含0-3％THF的石油醚)纯化，从而得到呈无色油状物的4-[[5-(1-甲氧基羰基-2-甲基-丙基)异噁唑-3-基]氧基甲基]-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(3.10g，7.55mmol，87％产率)。LC/MS(ESI)m/z：411.3[M+H]+。
步骤2：2-[3-[(1-叔丁氧羰基-4-甲基-4-哌啶基)甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸的制备
Figure BDA0003980908660003912
向2-[3-[(1-叔丁氧羰基-4-甲基-4-哌啶基)甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(3.10g，7.55mmol，1eq)在CH3OH(15mL)和H2O(15mL)中的溶液中加入LiOH·H2O(1.58g，37.76mmol，5eq)，并在N2下将反应混合物在20℃下搅拌2小时。然后加入HCl水溶液(2N，2mL)，并将所得酸性混合物(pH～4至5)冻干从而得到呈白色固体的2-[3-[(1-叔丁氧羰基-4-甲基-4-哌啶基)甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(3.0g，粗品)。LC/MS(ESI)m/z：397.2[M+H]+。
步骤3：4-[[5-[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯和4-[[5-[(1R)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660003921
向2-[3-[(1-叔丁氧羰基-4-甲基-4-哌啶基)甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(1.40g，粗品)和二异丙基乙胺(456mg，3.53mmol，0.615mL，1eq)在CH2Cl2(15mL)中的溶液中加入HATU(1.34g，3.53mmol，1eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌0.5小时。然后加入(2S，4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(1.17g，3.53mmol，1eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌2小时。浓缩反应混合物，并将所得残余物通过SiO2快速色谱法(梯度：含0-3％THF的石油醚)纯化，从而得到呈黄色固体的所需产物(2.23g)的混合物。通过手性SFC(含0.1％NH4OH的EtOH)分离得到呈白色固体的4-[[5-[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(970mg，1.34mmol，38％产率)(LC/MS(ESI)m/z：710.6[M+H]+)和呈浅黄色固体的4-[[5-[(1R)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.10g，1.43mmol，40％产率)(LC/MS(ESI)m/z：710.6[M+H]+)。
步骤4：(2S，4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-[3-[(4-甲基-4-哌啶基)甲氧基]异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660003931
向4-[[5-[(1R)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.10g，1.43mmol，1eq)在CH2Cl2(7mL)中的溶液中加入HCl(4N在EtOAc中，7mL)，并将反应混合物在20℃下搅拌2小时。通过加入饱和NaHCO3水溶液调节反应混合物至pH～7-8。将水相用1∶10CH3OH/CH2Cl2(20mL)萃取，并将合并的有机萃取物用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，从而得到呈浅黄色固体的(2S，4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-[3-[(4-甲基-4-哌啶基)甲氧基]异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(510mg，粗品)，其将直接用于下一步骤中。LC/MS(ESI)m/z：610.4[M+H]+。
步骤5：(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-甲基-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-甲基-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺是按照与(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式从(2S，4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-[3-[(4-甲基-4-哌啶基)甲氧基]异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺开始制备的。
Figure BDA0003980908660003941
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1171.2[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.89-8.86(m，1H)，8.49-8.45(m，1H)，8.09(s，1H)，7.77-7.72(m，1H)，7.47-7.43(m，2H)，7.42-7.36(m，3H)，7.27(d，J＝2.0Hz，1H)，7.23-7.16(m，2H)，7.03(d，J＝2.0Hz，1H)，6.04-5.93(m，1H)，5.45-5.29(m，2H)，5.07-4.93(m，2H)，4.84-4.71(m，3H)，4.59-4.48(m，3H)，4.45-4.38(m，1H)，4.05-3.98(m，2H)，3.83(dd，J＝10.8，4.0Hz，2H)，3.77-3.57(m，4H)，3.54-3.36(m，3H)，3.29-3.24(m，1H)，3.16-3.04(m，4H)，2.49-2.45(m，3H)，2.40-2.32(m，1H)，2.22-2.14(m，1H)，2.06-1.95(m，1H)，1.94-1.86(m，2H)，1.64(d，J＝13.6Hz，2H)，1.58(d，J＝7.2Hz，3H)，1.15-1.12(m，3H)，1.07-1.03(m，3H)，0.91-0.86(m，3H)。
(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-甲基-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：4-[[5-[1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660003951
向2-[3-[(1-叔丁氧羰基-4-甲基-4-哌啶基)甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸(1.60g，4.04mmol，1eq)在CH2Cl2(40mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(2.61g，20.2mmol，3.51mL，5eq)和HATU(1.99g，5.25mmol，1.3eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌10分钟。然后加入(2S，4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(1.42g，4.04mmol，1eq，HCl)，并将反应混合物在20℃下搅拌1小时。将反应混合物倒在水(30mL)上并分离各层。用CH2Cl2(30mL)萃取水层，并将合并的有机萃取物经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得粗产物通过快速硅胶色谱法(梯度：0-60％THF/石油醚)纯化，从而得到呈黄色胶状物的4-[[5-[1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.20g，3.18mmol，79％产率)。LC/MS(ESI)m/z：693.5[M+H]+。
步骤2：4-[[5-[1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯的手性分离
Figure BDA0003980908660003961
通过SFC(含45％EtOH的0.1％NH4OH)分离4-[[5-[1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.00g，2.89mmol，1eq)，从而得到呈白色固体的4-[[5-[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(751mg，1.08mmol，38％产率)(LC/MS(ESI)m/z：693.6[M+H]+)和呈白色固体的4-[[5-[(1R)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(962mg，1.39mmol，48％产率)((LC/MS(ESI)m/z：693.6[M+H]+)。
步骤3：(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-甲基-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-甲基-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺是按照与(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式从4-[[5-[(1R)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯开始制备的。
Figure BDA0003980908660003971
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1154.5[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.52(s，1H)，8.07(s，1H)，7.75(d，J＝8.4Hz，1H)，7.50-7.37(m，6H)，7.29-7.14(m，3H)，7.05-7.00(m，1H)，6.36-6.30(m，1H)，6.02-5.93(m，1H)，5.46-5.25(m，2H)，5.08-4.95(m，2H)，4.78-4.70(m，2H)，4.57-4.37(m，4H)，4.05-3.95(m，2H)，3.86-3.45(m，9H)，3.26-3.00(m，6H)，2.97-2.78(m，2H)，2.43-2.14(m，2H)，2.06-1.90(m，1H)，1.88-1.73(m，2H)，1.64-1.48(m，5H)，1.33-1.25(m，1H)，1.14-1.08(m，3H)，1.05(d，J＝6.8Hz，3H)，0.92-0.83(m，3H)。
(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-氟-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：4-氟-4-[[5-(1-甲氧基羰基-2-甲基-丙基)异噁唑-3-基]氧基甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660003981
向在0℃下的4-氟-4-(羟甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.00g，8.57mmol，1eq)和2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(1.71g，8.57mmol，1eq)在甲苯(20mL)中的混合物中加入PPh3(3.37g，12.9mmol，1.5eq)和DIAD(4.33g，21.4mmol，4.17mL，2.5eq)，并在N2下将反应混合物在110℃下搅拌10小时。将反应混合物用水(15mL)稀释并用CH2Cl2(3×20mL)萃取。用盐水(3×20mL)洗涤合并的有机萃取物，将其经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(梯度：0-6％THF/石油醚)纯化，从而得到呈无色油状物的4-氟-4-[[5-(1-甲氧基羰基-2-甲基-丙基)异噁唑-3-基]氧基甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.15g，2.57mmol，60％产率)。LC/MS(ESI)m/z：415.1[M+H]+。
步骤2：2-[3-[(1-叔丁氧羰基-4-氟-4-哌啶基)甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸的制备
Figure BDA0003980908660003991
向4-氟-4-[[5-(1-甲氧基羰基-2-甲基-丙基)异噁唑-3-基]氧基甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.87g，4.51mmol，1eq)在THF(15mL)、H2O(15mL)和CH3OH(15mL)中的溶液中加入LiOH·H2O(946.58mg，22.56mmol，5eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。浓缩反应物，然后加入2N HCl水溶液以调节pH值(pH＝5)。然后加入水(15mL)，并用CH2Cl2(3×20mL)萃取所得水性混合物。将合并的有机萃取物用盐水(3x 20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，从而得到呈黄色油状物的2-[3-[(1-叔丁氧羰基-4-氟-4-哌啶基)甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(1.8g，粗品)。LC/MS(ESI)m/z：401.1[M+H]+。
步骤3：4-氟-4-[[5-[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯和4-氟-4-[[5-[(1R)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660003992
向2-[3-[(1-叔丁氧羰基-4-氟-4-哌啶基)甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(1.80g，粗品)在CH2Cl2(20mL)中的溶液中加入HATU(2.56g，6.74mmol，1.5eq)和二异丙基乙胺(2.90g，22.5mmol，3.91mL，5eq)，然后加入(2S，4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(1.65g，4.50mmol，1eq，HCl)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。然后加入水(10mL)，并用EtOAc(3×20mL)萃取所得混合物。将合并的有机萃取物用盐水(3×20mL)萃取，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得粗产物通过快速硅胶色谱法(梯度：含0-80％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈白色固体的产物混合物(1.6g)。通过制备型SFC(含40％EtOH的0.1％NH4OH)手性分离得到呈白色固体的4-氟-4-[[5-[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(950mg，1.27umol，28％产率)(LC/MS(ESI)m/z：714.1[M+H]+)和呈白色固体的4-氟-4-[[5-[(1R)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(566mg，0.789mmol，17％产率)(LC/MS(ESI)m/z：714.1[M+H]+)。
步骤4：(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-氟-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-氟-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺是按照与(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-甲基-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式从4-氟-4-[[5-[(1R)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]哌啶-1-羧酸酯开始制备的。
Figure BDA0003980908660004011
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1175.2[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.90-8.84(m，1H)，8.64(d，J＝7.2Hz，1H)，8.08(s，1H)，7.75(d，J＝8.4Hz，1H)，7.46-7.38(m，5H)，7.28-7.17(m，3H)，7.03(d，J＝2.6Hz，1H)，6.11-5.95(m，1H)，5.51-5.25(m，2H)，5.10-4.94(m，2H)，4.72-4.36(m，6H)，4.26(d，J＝19.2Hz，3H)，3.89-3.45(m，7H)，3.25-2.84(m，6H)，2.52-2.45(m，3H)，2.39-1.84(m，8H)，1.58-1.46(m，3H)，1.05(d，J＝6.4Hz，3H)，0.91-0.82(m，3H)。
(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-氟-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：4-氟-4-[[5-[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯和4-氟-4-[[5-[(1R)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004021
向2-[3-[(1-叔丁氧羰基-4-氟-4-哌啶基)甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(2.4g，5.99mmol，1.0eq)在DMF(24mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(5.22mL，29.97mmol，5.0eq)和HATU(2.73g，7.19mmol，1.2eq，)，并将反应混合物在25℃下搅拌0.5小时。然后加入(2S，4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(2.10g，5.99mmol，1.0eq，HCl)，并将所得悬浮液在25℃下搅拌1小时。将反应混合物用EtOAc(150mL)稀释，并用水(3×50mL)洗涤，然后用盐水(4×50mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(梯度：0-71％THF/石油醚)纯化，从而得到呈棕色油状物的4-氟-4-[[5-[1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.72g，3.49mmol，58.27％产率)。LC/MS(ESI)m/z：697.4[M+H]+。通过SFC(含45％EtOH的0.1％NH4OH)手性分离得到呈白色固体的4-氟-4-[[5-[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(735mg，1.04mmol，26.60％产率)(LC/MS(ESI)m/z：697.3[M+H]+)和呈白色固体的4-氟-4-[[5-[(1R)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(796mg，1.13mmol，29％产率)(LC/MS(ESI)m/z：697.5[M+H]+)。
步骤2：(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-氟-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-氟-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺是按照与(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-甲基-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式从4-氟-4-[[5-[(1R)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(2-甲基吡唑-3-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯开始制备的。
Figure BDA0003980908660004031
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1158.5[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.06(s，1H)，8.43(d，J＝7.6Hz，1H)，8.11(s，1H)，7.81(d，J＝8.4Hz，1H)，7.48-7.42(m，4H)，7.40-7.36(m，2H)，7.29(d，J＝2.0Hz，1H)，7.23-7.19(m，2H)，7.06(d，J＝2.4Hz，1H)，6.37(d，J＝2.0Hz，1H)，6.14(s，1H)，5.42(dd，J＝4.0，18.0Hz，1H)，5.32(d，J＝19.2Hz，1H)，5.11(d，J＝3.2Hz，1H)，5.00-4.82(m，2H)，4.54-4.45(m，2H)，4.40-4.33(m，2H)，4.33-4.15(m，5H)，3.84(s，3H)，3.73-3.53(m，6H)，3.06(dd，J＝6.0，17.2Hz，2H)，2.95-2.78(m，4H)，2.46-2.31(m，2H)，2.30-2.15(m，1H)，2.07-1.73(m，6H)，1.38(d，J＝6.8Hz，3H)，0.98-0.93(m，3H)，0.83-0.77(m，3H)。
(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-氟-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-氟-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺是按照与(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式从4-氟-4-[[5-[(1R)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯和2-[(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基]哌嗪-2-基]乙腈开始制备的。
Figure BDA0003980908660004041
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1157.3[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.88(s，1H)，8.46(s，1H)，8.07(s，1H)，7.76(d，J＝8.0Hz，1H)，7.49-7.34(m，5H)，7.29-7.17(m，3H)，7.04(d，J＝2.4Hz，1H)，6.93-6.73(m，1H)，6.31(d，J＝16.4Hz，1H)，6.06-5.95(m，1H)，5.89-5.81(m，1H)，5.16-4.95(m，2H)，4.74-4.56(m，4H)，4.56-4.38(m，4H)，4.29-4.17(m，2H)，3.85-3.82(m，2H)，3.78-3.57(m，3H)，3.56-3.44(m，1H)，3.03(s，6H)，2.76-2.56(m，2H)，2.48(s，3H)，2.39-1.88(m，6H)，1.52(d，J＝7.2Hz，3H)，1.05(d，J＝6.8Hz，3H)，0.88(d，J＝6.8Hz，3H)。
(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-甲基-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-甲基-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺是按照与(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式从4-[[5-[(1R)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]氧基甲基]-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯和2-[(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基]哌嗪-2-基]乙腈开始制备的。
Figure BDA0003980908660004061
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1153.7[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.91-8.83(m，1H)，8.55-8.49(m，1H)，8.13-8.03(m，1H)，7.80-7.71(m，1H)，7.47-7.35(m，5H)，7.27(d，J＝2.0Hz，1H)，7.25-7.15(m，2H)，7.06-7.01(m，1H)，6.96-6.76(m，1H)，6.36-6.26(m，1H)，6.03-5.92(m，1H)，5.90-5.81(m，1H)，5.18-4.94(m，2H)，4.76-4.70(m，2H)，4.62-4.57(m，1H)，4.54-4.38(m，4H)，4.22-3.92(m，3H)，3.90-3.79(m，2H)，3.77-3.43(m，4H)，3.23-3.13(m，2H)，3.08-2.98(m，3H)，2.96-2.80(m，2H)，2.49-2.45(m，3H)，2.40-2.31(m，1H)，2.22-2.13(m，1H)，2.04-1.90(m，1H)，1.86-1.75(m，2H)，1.61-1.49(m，5H)，1.14-1.08(m，3H)，1.05(d，J＝6.4Hz，3H)，0.92-0.84(m，3H)。
(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲基-甲基-氨基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：3-甲基-2-[3-(1，1，2，2，3，3，4，4，4-九氟丁基磺酰氧基)异噁唑-5-基]丁酸甲酯的制备
Figure BDA0003980908660004062
向在0℃下的2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(2.00g，10.0mmol，1eq)和K2CO3(763mg，5.52mmol，0.55eq)在CH3CN(20mL)中的混合物中逐滴加入1，1，2，2，3，3，4，4，4-九氟丁烷-1-磺酰氟(6.07g，20.1mmol，3.53mL，2eq)，并在N2下将反应混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物倒在饱和NH4Cl水溶液(30mL)上，并用EtOAc(3×30mL)萃取所得混合物。将合并的有机萃取物用盐水(30mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得粗产物通过快速硅胶色谱法(梯度：含0-2％THF的石油醚)纯化，从而得到呈无色油状物的3-甲基-2-[3-(1，1，2，2，3，3，4，4，4-九氟丁基磺酰氧基)异噁唑-5-基]丁酸甲酯(3.58g，7.44mmol，74％产率)。LC/MS(ESI)m/z：482.0[M+H]+。
步骤2：4-[[[5-(1-甲氧基羰基-2-甲基-丙基)异噁唑-3-基]-甲基-氨基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004071
向4-(甲基氨基甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(500mg，2.19mmol，1eq)在DMA(10mL)中的溶液中加入三乙胺(288mg，2.85mmol，0.396mL，1.3eq)和3-甲基-2-[3-(1，1，2，2，3，3，4，4，4-九氟丁基磺酰氧基)异噁唑-5-基]丁酸甲酯(1.05g，2.19mmol，1eq)，并在N2下将反应混合物在140℃下搅拌4小时。然后加入另外的3-甲基-2-[3-(1，1，2，2，3，3，4，4，4-九氟丁基磺酰氧基)异噁唑-5-基]丁酸甲酯(1.05g，2.19mmol，1eq)和三乙胺(288mg，2.85mmol，0.396mL，1.3eq)，并在N2下将反应混合物在140℃下搅拌4小时。将反应物冷却至室温，然后倾倒在水(30mL)上。用EtOAc(3×30mL)萃取所得混合物，并将合并的有机萃取物用盐水(3×30mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得粗产物通过快速硅胶色谱法(梯度：含0-10％THF的石油醚)纯化，从而得到呈黄色油状物的4-[[[5-(1-甲氧基羰基-2-甲基-丙基)异噁唑-3-基]-甲基-氨基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(635mg，1.55mmol，71％产率)。LC/MS(ESI)m/z：410.3[M+H]+。
步骤3：2-[3-[(1-叔丁氧羰基-4-哌啶基)甲基-甲基-氨基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸的制备
Figure BDA0003980908660004081
向4-[[[5-(1-甲氧基羰基-2-甲基-丙基)异噁唑-3-基]-甲基-氨基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(780mg，1.90mmol，1eq)在THF(4mL)中的溶液中加入LiOH·H2O(160mg，3.81mmol，2eq)在水(4mL)中的溶液，并在N2下将反应混合物在50℃下搅拌4小时。将混合物在减压下浓缩以除去THF，并用水(10mL)稀释所得混合物。通过加入2N HCl水溶液调节pH值至～5，并将所得混合物冻干，从而得到呈黄色油状物的2-[3-[(1-叔丁氧羰基-4-哌啶基)甲基-甲基-氨基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(750mg，粗品)。LC/MS(ESI)m/z：396.3[M+H]+。
步骤4：4-[[[5-[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]-甲基-氨基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯和4-[[[5-[(1R)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]-甲基-氨基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004082
向2-[3-[(1-叔丁氧羰基-4-哌啶基)甲基-甲基-氨基]异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(750mg，1.90mmol，1eq)在CH2Cl2(15mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(1.23g，9.48mmol，1.65mL，5eq)、HATU(865mg，2.28mmol，1.2eq)和(2S，4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(698mg，1.90mmol，1eq，HCl)，并在N2下将反应混合物在25℃下搅拌1小时。将反应混合物倒在水(40mL)上，并用CH2Cl2(2×30mL)萃取。用盐水(30mL)洗涤合并的有机萃取物，将其经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得粗产物通过快速硅胶色谱法(梯度：含0-100％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈黄色固体的4-[[[5-[1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]-甲基-氨基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.08g，1.52mmol，80％产率)。LC/MS(ESI)m/z：709.4[M+H]+。通过SFC(含35％异丙醇的0.1％NH4OH)分离该材料(990mg，1.40mmol，1eq)，从而得到呈白色固体的4-[[[5-[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]-甲基-氨基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(520mg，0.734mmol，53％产率)(LC/MS(ESI)m/z：709.5[M+H]+)和呈白色固体的4-[[[5-[(1R)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]-甲基-氨基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(281mg，0.396mmol，28％产率)(LC/MS(ESI)m/z：709.4[M+H]+)。
步骤5：(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲基-甲基-氨基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲基-甲基-氨基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺是按照与(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式从4-[[[5-[(1R)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]-甲基-氨基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯和2-[(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基]哌嗪-2-基]乙腈开始制备的。
Figure BDA0003980908660004101
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1152.7[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.93-8.82(m，1H)，8.52(s，1H)，8.09(s，1H)，7.75(d，J＝8.4Hz，1H)，7.50-7.33(m，5H)，7.30-7.13(m，3H)，7.04(d，J＝2.4Hz，1H)，6.97-6.74(m，1H)，6.31(d，J＝16.8Hz，1H)，6.05-5.93(m，1H)，5.85(d，J＝9.2Hz，1H)，5.05-5.01(m，1H)，4.75-4.69(m，2H)，4.55-4.10(m，5H)，4.02-3.66(m，4H)，3.59(d，J＝10.0Hz，2H)，3.44-3.34(m，2H)，3.25-2.98(m，6H)，2.97-2.87(m，3H)，2.69-2.50(m，2H)，2.49-2.43(m，3H)，2.41-2.30(m，1H)，2.22-2.11(m，1H)，2.06-1.72(m，4H)，1.64-1.24(m，6H)，1.11-0.98(m，3H)，0.95-0.80(m，3H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-甲基-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：4-[(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004111
向在0℃下的4-(羟甲基)-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.00g，4.36mmol，1eq)和Rh2(OAc)4(96mg，0.22mmol，0.05eq)在CH2Cl2(15mL)中的混合物中缓慢加入2-重氮乙酸乙酯(597mg，5.23mmol，1.2eq)在CH2Cl2(5mL)中的溶液，并将所得悬浮液在25℃下搅拌12小时。将反应混合物用水(20mL)稀释并用CH2Cl2(3×20mL)萃取。合并有机萃取物，并将其用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过SiO2快速色谱法(梯度：含0-10％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈无色油状物的4-[(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(530mg，1.68mmol，39％产率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ4.24-4.18(m，2H)，4.06(s，2H)，3.66-3.57(m，2H)，3.26(s，2H)，3.25-3.15(m，2H)，1.58-1.49(m，2H)，1.46(s，9H)，1.33-1.27(m，5H)，1.03(s，3H)。
步骤2：2-[(1-叔丁氧羰基-4-甲基-4-哌啶基)甲氧基]乙酸的制备
Figure BDA0003980908660004112
向4-[(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(530mg，1.68mmol，1eq)在THF(5mL)和H2O(5mL)中的溶液中加入LiOH·H2O(353mg，8.40mmol，5eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌2小时。通过加入2N HCl水溶液将反应混合物的pH值调节至～4-5，并将所得酸性混合物冻干，从而得到呈无色油状物的粗品2-[(1-叔丁氧羰基-4-甲基-4-哌啶基)甲氧基]乙酸(470mg)。1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ4.06(s，2H)，3.64-3.52(m，2H)，3.33-3.32(m，2H)，3.30-3.18(m，2H)，1.60-1.51(m，2H)，1.47(s，9H)，1.34-1.27(m，2H)，1.03(s，3H)。
步骤3：4-[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]甲基]-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004121
向2-[(1-叔丁氧羰基-4-甲基-4-哌啶基)甲氧基]乙酸(470mg，1.64mmol，1eq)在CH2Cl2(8mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(21mg，1.64mmol，0.285mL，1eq)和HATU(622mg，1.64mmol，1eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌0.5小时。然后加入(2S，4R)-1-[(2S)-2-氨基-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(727mg，1.64mmol，1eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌2小时。用盐水(15mL)洗涤混合物，将其用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过SiO2快速色谱法(梯度：含0-100％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈浅黄色固体的4-[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]甲基]-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.09g，1.53mmol，93％产率)。LC/MS(ESI)m/z：714.2[M+H]+。
步骤4：(2S，4R)-1-[(2S)-3，3-二甲基-2-[[2-[(4-甲基-4-哌啶基)甲氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660004131
向4-[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]甲基]-4-甲基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.09g，1.53mmol，1.0eq)在CH2Cl2(5mL)中的溶液中加入HCl(4N在CH3OH中，5mL)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。在真空下浓缩混合物，并用水(15mL)稀释所得残余物。通过加入饱和NaHCO3水溶液调节水性混合物的pH值至～7-8，并用EtOAc(3×20mL)萃取所得碱性水性混合物。将合并的有机萃取物用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，从而得到呈黄色油状物的(2S，4R)-1-[(2S)-3，3-二甲基-2-[[2-[(4-甲基-4-哌啶基)甲氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(730mg，1.09mmol，72％产率)。614.5[M+H]+。
步骤5：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-甲基-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-甲基-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺是按照与(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式从(2S，4R)-1-[(2S)-3，3-二甲基-2-[[2-[(4-甲基-4-哌啶基)甲氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺和2-[(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基]哌嗪-2-基]乙腈开始制备的。
Figure BDA0003980908660004141
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1157.7[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.88-8.82(m，1H)，8.57-8.51(m，1H)，8.09-8.02(m，1H)，7.78-7.71(m，1H)，7.46-7.33(m，5H)，7.30-7.14(m，3H)，7.04(d，J＝2.0Hz，1H)，6.95-6.72(m，1H)，6.38-6.26(m，1H)，5.90-5.79(m，1H)，5.14-4.95(m，3H)，4.76-4.72(m，2H)，4.60-4.55(m，2H)，4.53-4.47(m，2H)，4.45-4.41(m，1H)，4.07(s，1H)，4.05-3.92(m，2H)，3.91-3.81(m，2H)，3.79-3.67(m，2H)，3.62-3.48(m，1H)，3.44-3.33(m，2H)，3.28-3.24(m，1H)，3.19-3.08(m，2H)，3.07-2.88(m，4H)，2.49-2.42(m，3H)，2.26-2.16(m 1H)，1.99-1.89(m，1H)，1.87-1.73(m，2H)，1.62-1.53(m，2H)，1.46(d，J＝7.0Hz，3H)，1.09(s，3H)，1.06-0.98(m，9H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-[(2S)-2-甲基-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：4-[(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]哌啶-1-羧酸苄酯的制备
Figure BDA0003980908660004151
在0℃下，在N2下向4-(羟甲基)哌啶-1-羧酸苄酯(10g，40.11mmol，1eq)在DMF(150mL)中的溶液中一次性加入NaH(3.21g，80.22mmol，60％纯度，2eq)，并将所得混合物在0℃下搅拌15分钟。然后加入2-溴乙酸叔丁酯(15.65g，80.22mmol，11.85mL，2eq)，并将所得混合物在20℃下搅拌16小时。将反应混合物用水(150mL)淬灭，并搅拌15分钟。将水相用EtOAc(3×200mL)萃取，并且将合并的有机萃取物用盐水(3×150mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过SiO2快速色谱法(梯度：含0-13％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈无色油状物的4-[(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]哌啶-1-羧酸苄酯(3.9g，10.73mmol，27％产率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.37-7.32(m，5H)，5.13(s，2H)，4.21(s，2H)，3.94(s，2H)，3.37(d，J＝4.0Hz，2H)，2.79(s，2H)，1.84-1.74(m，3H)，1.48(s，9H)，1.25-1.17(m，2H)。
步骤2：2-(4-哌啶基甲氧基)乙酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004152
在N2下，向4-[(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]哌啶-1-羧酸苄酯(3.9g，10.73mmol，1eq)和NH4OH(283.92mg，2.27mmol，28％纯度)在CH3OH(100mL)中的溶液中加入Pd/C(400mg，10％纯度)，并在真空下给所得悬浮液脱气，并将该悬浮液用H2吹扫数次。然后在H2(15psi)下将反应混合物在20℃下搅拌16小时。过滤反应混合物，并浓缩滤液从而得到呈黄色油状物的2-(4-哌啶基甲氧基)乙酸叔丁酯(2.4g，10.47mmol，98％产率)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ3.93(s，2H)，3.25(d，J＝4.0Hz，2H)，2.94(d，J＝12.0Hz，2H)，2.44(s，2H)，1.59(d，J＝12.0Hz，3H)，1.42(s，9H)，1.11-1.02(m，2H)。
步骤3：2-[[1-(2-羟乙基)-4-哌啶基]甲氧基]乙酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004161
向2-(4-哌啶基甲氧基)乙酸叔丁酯(1.8g，7.85mmol，1eq)在CH3CN(20mL)中的溶液中加入2-碘乙醇(2g，11.77mmol，1.5eq)，然后加入K2CO3(2g，15.70mmol，2eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌12小时。过滤反应混合物，并浓缩滤液。将所得残余物通过SiO2快速色谱法(梯度：含0-40％THF的CH2Cl2)纯化，从而得到呈黄色油状物的2-[[1-(2-羟乙基)-4-哌啶基]甲氧基]乙酸叔丁酯(1.14g，4.17mmol，53％产率)。LC/MS(ESI)m/z：274.2[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ3.95(s，2H)，3.68-3.63(m，2H)，3.38(d，J＝8.0Hz，2H)，3.06-2.97(m，2H)，2.63-2.57(m，2H)，2.21-2.11(m，2H)，1.88-1.78(m，2H)，1.77-1.65(m，1H)，1.48(s，9H)，1.45-1.42(m，1H)，1.42-1.31(m，2H)。
步骤4：(3S)-4-(7-溴-2，6-二氯-8-氟-喹唑啉-4-基)-3-甲基-哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004171
向7-溴-2，4，6-三氯-8-氟喹唑啉(500mg，1.51mmol，1eq)和(3S)-3-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(303mg，1.51mmol，1eq)在CH2Cl2(10mL)中的混合物中加入二异丙基乙胺(586mg，4.54mmol，3eq)，并在N2下将反应混合物在20℃下搅拌2小时。将混合物倒在水(20mL)上，并用CH2Cl2(3×20mL)萃取。用盐水洗涤合并的有机萃取物，将其经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过SiO2快速色谱法(梯度：含0-10％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈黄色固体的(3S)-4-(7-溴-2，6-二氯-8-氟-喹唑啉-4-基)-3-甲基-哌嗪-1-羧酸叔丁酯(580mg，1.16mmol，77％产率)。LC/MS(ESI)m/z：494.9[M+H]+。
步骤5：(3S)-4-[7-溴-2-[2-[4-[(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]-1-哌啶基]乙氧基]-6-氯-8-氟-喹唑啉-4-基]-3-甲基-哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004172
在N2气氛下向在25℃下的(3S)-4-(7-溴-2，6-二氯-8-氟-喹唑啉-4-基)-3-甲基-哌嗪-1-羧酸叔丁酯(580mg，1.17mmol，1eq)在CH3CN(3mL)中的溶液中加入2-[[1-(2-羟乙基)-4-哌啶基]甲氧基]乙酸叔丁酯(417mg，1.53mmol，1.3eq)、Cs2CO3(497mg，1.53mmol，1.3eq)和DABCO(13mg，0.117mmol，0.1eq)，并将反应混合物在50℃下搅拌2小时。然后加入水(10mL)，并用EtOAc(3×20mL)萃取所得混合物。用盐水(20mL)洗涤合并的有机萃取物，将其经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过SiO2快速色谱法(梯度：含0-50％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈黄色固体的(3S)-4-[7-溴-2-[2-[4-[(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]-1-哌啶基]乙氧基]-6-氯-8-氟-喹唑啉-4-基]-3-甲基-哌嗪-1-羧酸叔丁酯(656mg，780.64umol，66.5％产率)。LC/MS(ESI)m/z：732.3[M+H]+。
步骤6：(3S)-4-[2-[2-[4-[(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]-1-哌啶基]乙氧基]-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]-3-甲基-哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004181
向(3S)-4-[7-溴-2-[2-[4-[(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]-1-哌啶基]乙氧基]-6-氯-8-氟-喹唑啉-4-基]-3-甲基-哌嗪-1-羧酸叔丁酯(300mg，0.41mmol，1eq)和4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)萘-2-醇(144mg，0.533mmol，1.3eq)在THF(3mL)中的溶液中加入XPhos-Pd-G3(17mg，0.021mmol，0.05eq)和K3PO4(1.5M，821uL，3eq)，并在N2下将反应混合物在50℃下搅拌2小时。然后加入水(10mL)，并用EtOAc(3×20mL)萃取所得混合物。将合并的有机萃取物用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过SiO2快速色谱法(梯度：含0-60％THF的石油醚)纯化，从而得到呈黄色固体的(3S)-4-[2-[2-[4-[(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]-1-哌啶基]乙氧基]-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]-3-甲基-哌嗪-1-羧酸叔丁酯(240mg，302.13umol，74％产率)。LC/MS(ESI)m/z：794.5[M+H]+。
步骤7：2-[[1-[2-[4-[(2S)-4-叔丁氧羰基-2-甲基-哌嗪-1-基]-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酸的制备
Figure BDA0003980908660004191
向在20℃下的(3S)-4-[2-[2-[4-[(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]-1-哌啶基]乙氧基]-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]-3-甲基-哌嗪-1-羧酸叔丁酯(240mg，0.302mmol，1eq)在CH3OH(1mL)、H2O(1mL)和THF(1mL)中的溶液中加入LiOH·H2O(380mg，9.06mmol，30eq)，并将反应混合物在氩气下搅拌2小时。通过加入HCl水溶液(2N)调节反应混合物的pH值至～3，并将所得酸性混合物冻干，从而得到呈白色固体的2-[[1-[2-[4-[(2S)-4-叔丁氧羰基-2-甲基-哌嗪-1-基]-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酸(223mg，302mmol)。LC/MS(ESI)m/z：738.3[M+H]+。
步骤8：(3S)-4-[6-氯-8-氟-2-[2-[4-[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]甲基]-1-哌啶基]乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]-3-甲基-哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004201
向在20℃下的2-[[1-[2-[4-[(2S)-4-叔丁氧羰基-2-甲基-哌嗪-1-基]-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酸(223mg，0.302mmol，1eq)和(2S，4R)-1-[(2S)-2-氨基-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(134mg，0.279mmol，9.24e-1eq，HCl)在DMF(6mL)中的混合物中加入二异丙基乙胺(195mg，1.51mmol，5eq)和HATU(115mg，0.302mmol，1eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌2小时。然后加入饱和K2CO3水溶液(6mL)，并将所得混合物搅拌0.5小时。将混合物用水(10mL)稀释并用EtOAc(3×30mL)萃取。用盐水(30mL)洗涤合并的有机萃取物并浓缩。将所得残余物通过SiO2快速色谱法(梯度：含0-1％CH3OH的THF)纯化，从而得到呈黄色固体的(3S)-4-[6-氯-8-氟-2-[2-[4-[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]甲基]-1-哌啶基]乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]-3-甲基-哌嗪-1-羧酸叔丁酯(289mg)。LC/MS(ESI)m/z：583.2[M/2+H]+。
步骤9：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-[(2S)-2-甲基哌嗪-1-基]喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660004211
向(3S)-4-[6-氯-8-氟-2-[2-[4-[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙氧基]甲基]-1-哌啶基]乙氧基]-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]-3-甲基-哌嗪-1-羧酸叔丁酯(200mg，0.172mmol，1eq)在CH2Cl2(3mL)中的溶液中加入HCl(4N在二噁烷中，429uL，10eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌1小时。分离出有机相并对其进行浓缩，并将所得残余物通过制备型HPLC(含30-90％CH3CN的水(10mM NH4HCO3))纯化，从而得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-[(2S)-2-甲基哌嗪-1-基]喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(200mg，152.16umol，89％产率)。LC/MS(ESI)m/z：1065.9[M+H]+。
步骤10：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-[(2S)-2-甲基-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660004221
向在-78℃下的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-[(2S)-2-甲基哌嗪-1-基]喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(200mg，0.169mmol，90％纯度，1eq)和2，6-二甲基吡啶(91mg，0.845mmol，5eq)在CH2Cl2(4mL)中的混合物中逐滴加入丙-2-烯酰氯(15mg，0.169mmol，1eq)，并将反应混合物在-78℃下搅拌0.5小时。在-78℃用水(1mL)淬灭混合物，然后将其在减压下浓缩。将所得残余物通过制备型HPLC(含44-74％CH3CN的水(10mM NH4HCO3))纯化，从而得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-[(2S)-2-甲基-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(49mg，0.044mmol，26％产率)。LC/MS(ESI)m/z：1118.8[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.01(d，J＝4.0Hz，1H)，8.99-8.95(m，1H)，8.43(d，J＝8.0Hz，1H)，7.91(s，1H)，7.80(d，J＝8.0Hz，1H)，7.45-7.40(m，3H)，7.35-7.32(m，2H)，7.29-7.25(m，2H)，7.20(d，J＝4.0Hz，2H)，7.05(d，J＝4.0，1H)，6.90-6.77(m，1H)，6.23-6.14(m，1H)，5.77-5.72(m，1H)，5.12(d，J＝4.0Hz，1H)，4.86(s，1H)，4.52(d，J＝8.0Hz，1H)，4.48-4.34(m，4H)，4.30-4.08(m，4H)，3.90(s，2H)，3.72-3.61(m，2H)，3.59-3.50(m，3H)，3.02-2.88(m，2H)，2.72-2.65(m，2H)，2.44(s，4H)，2.12-1.92(m，3H)，1.67-1.48(m，3H)，1.40-1.28(m，7H)，1.26-1.07(m，3H)，0.91(s，9H)。
(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[(2R)-2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[(2R)-2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺是按照与(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式从2-[(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(1R)-1-甲基-2-氧代-乙氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-2-基]乙腈和(2S，4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-[3-(4-哌啶基甲氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺开始制备的。
Figure BDA0003980908660004231
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1153.7[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.99(s，1H)，8.42(d，J＝8.0Hz，1H)，8.17(s，1H)，8.13-8.09(m，1H)，7.82(d，J＝8.8Hz，1H)，7.48-7.41(m，2H)，7.39-7.33(m，2H)，7.29(s，1H)，7.25-7.15(m，2H)，7.10-7.05(m，1H)，6.97-6.77(m，1H)，6.26-6.17(m，1H)，6.04(d，J＝5.6Hz，1H)，5.89-5.77(m，1H)，5.47-5.34(m，1H)，5.14-4.97(m，1H)，4.96-4.84(m，1H)，4.84-4.81(m，1H)，4.43-4.17(m，5H)，4.14-4.03(m，1H)，3.97-3.82(m，3H)，3.73-3.59(m，4H)，3.11-2.91(m，5H)，2.70-2.61(m，1H)，2.47(s，3H)，2.29-2.15(m，2H)，2.07-1.95(m，4H)，1.77(m，1H)，1.72-1.56(m，4H)，1.40-1.30(m，6H)，1.22-1.10(m，2H)，0.99-0.91(m，3H)，0.83-0.74(m，3H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺是按照与(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式从2-[(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(1R)-1-甲基-2-氧代-乙氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-2-基]乙腈和(2S，4R)-1-[(2S)-3，3-二甲基-2-[[2-(4-哌啶基甲氧基)乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺开始制备的。
Figure BDA0003980908660004251
(游离碱，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1157.7[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.92-8.83(m，1H)，8.07(s，1H)，7.74(d，J＝8.4Hz，1H)，7.48-7.33(m，4H)，7.28-7.15(m，3H)，7.03(s，1H)，6.98-6.74(m，1H)，6.31(d，J＝17.2Hz，1H)，5.90-5.79(m，1H)，5.70-5.52(m，1H)，5.17-4.94(m，1H)，4.85-4.80(m，1H)，4.69-4.52(m，5H)，4.50-4.40(m，3H)，4.22-4.09(m，1H)，3.96-3.80(m，4H)，3.77-3.63(m，2H)，3.59-3.47(m，1H)，3.17-2.96(m，4H)，2.85-2.70(m，1H)，2.59-2.51(m，1H)，2.47(s，3H)，2.26-2.15(m，2H)，2.14-2.07(m，1H)，2.01-1.90(m，1H)，1.77-1.59(m，3H)，1.57-1.44(m，3H)，1.39(d，J＝6.0Hz，3H)，1.27-1.12(m，2H)，1.01(s，9H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-氟-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-氟-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺是按照与(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-甲基-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式从4-氟-4-(羟甲基)哌啶-1-羧酸酯开始制备的。
Figure BDA0003980908660004261
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1161.4[M+H]+.1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.12-9.95(m，1H)，8.98(s，1H)，8.44(d，J＝8.0Hz，1H)，8.18-8.10(m，1H)，7.81(d，J＝8.4Hz，2H)，7.45-7.35(m，5H)，7.30-7.21(m，3H)，7.07(d，J＝2.0Hz，1H)，6.21(d，J＝16.4Hz，1H)，5.79(d，J＝10.0Hz，1H)，5.20-4.76(m，4H)，4.56-4.40(m，5H)，4.38-4.17(m，4H)，3.99(s，2H)，3.62-3.49(m，6H)，2.75-2.74(s，8H)，2.45(s，3H)，2.36-2.29(m，2H)，2.10-2.02(m，1H)，1.82-1.68(m，4H)，1.35(d，J＝6.8Hz，3H)，0.92(s，9H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲基-甲基-氨基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：4-[[(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-甲基-氨基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004271
向4-(甲基氨基甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.00g，4.38mmol，1eq)在CH3CN(10mL)中的溶液中加入K2CO3(908mg，6.57mmol，1.5eq)和2-溴乙酸乙酯(731mg，4.38mmol，1eq)，并在N2下将反应混合物在80℃下搅拌4小时。过滤反应混合物，并在减压下浓缩滤液。将所得粗产物通过快速硅胶色谱法(梯度：含0-30％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈无色油状物的4-[[(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-甲基-氨基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.18g，3.75mmol，86％产率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ4.19(q，J＝7.2Hz，2H)，4.14-3.97(m，2H)，3.28(s，2H)，2.80-2.60(m，2H)，2.55-2.25(m，5H)，1.82-1.63(m，3H)，1.46(s，9H)，1.29(t，J＝7.2Hz，3H)，1.16-1.01(m，2H)。
步骤2：2-[(1-叔丁氧羰基-4-哌啶基)甲基-甲基-氨基]乙酸的制备
Figure BDA0003980908660004272
向4-[[(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-甲基-氨基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.18g，3.75mmol，1eq)在THF(6mL)中的溶液中加入LiOH·H2O(315mg，7.51mmol，2eq)在水(6mL)中的溶液，并在N2下将反应混合物在25℃下搅拌1小时。将反应混合物在减压下浓缩，并将所得残余物用水(10mL)稀释。通过加入HCl(2N在水中)调节水性混合物的pH值至～5。冻干得到呈白色固体的粗制2-[(1-叔丁氧羰基-4-哌啶基)甲基-甲基-氨基]乙酸(1.01g)。
步骤3：4-[[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙基]-甲基-氨基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004281
向2-[(1-叔丁氧羰基-4-哌啶基)甲基-甲基-氨基]乙酸(500mg，1.75mmol，1eq)在CH2Cl2(15mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(1.13g，8.73mmol，1.52mL，5eq)和HATU(797mg，2.10mmol，1.2eq)，并在N2下将所得混合物在25℃下搅拌10分钟。然后加入(2S，4R)-1-[(2S)-2-氨基-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(840mg，1.75mmol，1eq，HCl)，并在N2下将反应混合物在25℃下搅拌0.5小时。将反应混合物倒在水(20mL)上并分离各层。用CH2Cl2(20mL)萃取水层，并将合并的有机萃取物用盐水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得粗产物通过快速硅胶色谱法(梯度：含0-100％EtOAc的石油醚至含10％CH3OH的CH2Cl2)纯化，从而得到呈白色固体的4-[[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙基]-甲基-氨基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(922mg，1.29mmol，74％产率)。LC/MS(ESI)m/z：357.4[M/2+H]+。
步骤4：(2S，4R)-1-[(2S)-3，3-二甲基-2-[[2-[甲基(4-哌啶基甲基)氨基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660004291
将4-[[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙基]-甲基-氨基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(300mg，0.421mmol，1eq)在CH3OH(2mL)和HCl(4N在二噁烷中，5mL)中的混合物在25℃下搅拌1小时。浓缩反应混合物从而得到残余物，将残余物溶解于水(3mL)中。通过加入饱和NaHCO3水溶液调节水性混合物的pH值至～8，并将所得碱性混合物在减压下浓缩从而得到残余物。然后加入CH2Cl2/CH3OH(33mL，10/1)，过滤所得悬浮液，并在减压下浓缩滤液，从而得到呈白色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-3，3-二甲基-2-[[2-[甲基(4-哌啶基甲基)氨基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(250mg，0.408mmol，97％产率)。LC/MS(ESI)m/z：307.3[M/2+H]+。
步骤5：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲基-甲基-氨基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲基-甲基-氨基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺是按照与(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式从2-[(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(1R)-1-甲基-2-氧代-乙氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-2-基]乙腈开始和从(2S，4R)-1-[(2S)-3，3-二甲基-2-[[2-[甲基(4-哌啶基甲基)氨基]乙酰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺和2-[(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基]哌嗪-2-基]乙腈开始制备的。
Figure BDA0003980908660004301
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1156.8[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.90-8.80(m，1H)，8.53(s，1H)，8.08(s，1H)，7.79-7.71(m，1H)，7.47-7.32(m，5H)，7.29-7.12(m，3H)，7.06-7.01(m，1H)，6.97-6.72(m，1H)，6.31(d，J＝16.8Hz，1H)，5.85(d，J＝10.0Hz，1H)，4.56-4.39(m，4H)，4.26-4.02(m，1H)，3.86-3.81(m，1H)，3.76-3.70(m，1H)，3.59-3.37(m，3H)，3.14-2.96(m，4H)，2.70-2.59(m，1H)，2.49-2.41(m，3H)，2.34-2.17(m，5H)，2.03-1.86(m，3H)，1.77-1.64(m，1H)，1.58-1.28(m，6H)，1.09-0.93(m，9H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[7-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：2-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004311
向2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(500mg，2.21mmol，1eq)和2-氧代乙酸乙酯(451mg，2.21mmol，50％纯度，1eq)在CH3OH(3mL)中的混合物中加入乙酸(531mg，8.84mmol，0.505mL，4eq)和2-甲基吡啶硼烷络合物(1.18g，11.1mmol，5eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。浓缩反应物，并将所得残余物通过快速硅胶色谱法(梯度：含0-30％THF的石油醚)纯化，从而得到呈无色油状物的2-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(350mg，1.01mmol，46％产率)。LC/MS(ESI)m/z：313.3[M+H]+。
步骤2：2-(7-叔丁氧羰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)乙酸的制备
Figure BDA0003980908660004312
向2-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(350mg，1.12mmol，1eq)在THF(5mL)和H2O(5mL)中的溶液中加入LiOH·H2O(235mg，5.60mmol，5eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。浓缩反应物以除去THF，然后加入2N HCl水溶液直至pH＝5。将混合物冻干得到呈白色固体的2-(7-叔丁氧羰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)乙酸(318mg，粗品)。LC/MS(ESI)m/z：285.2[M+H]+。
步骤3：2-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004321
向2-(7-叔丁氧羰基-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)乙酸(318mg，1.12mmol，1eq)在DMF(10mL)中的溶液中加入HATU(638mg，1.68mmol，1.5eq)和二异丙基乙胺(723mg，5.59mmol，0.974mL，5eq)，然后加入(2S，4R)-1-[(2S)-2-氨基-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(538mg，粗品，HCl)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。然后加入水(10mL)，并用CH2Cl2(3×20mL)萃取所得混合物。用盐水(3×20mL)洗涤合并的有机萃取物，将其经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得粗产物通过快速硅胶色谱法(梯度：含0-100％EtOAc的石油醚，然后为含10％CH3OH的CH2Cl2)纯化，从而得到呈黄色固体的2-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(640mg，0.729mmol，65％产率)。LC/MS(ESI)m/z：711.3[M+H]+。
步骤4：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660004331
向2-[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(640mg，900.24umol，1eq)在CH3OH(3mL)中的溶液中加入HCl(4N在二噁烷中，3mI)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。浓缩反应混合物，并用水(10mL)稀释所得残余物。将饱和NaHCO3水溶液加入到水性混合物中直至pH＝8。冻干得到呈黄色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(550mg，粗品)。LC/MS(ESI)m/z：306.4[M/2+H]+。
步骤5：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[7-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[7-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺是按照与(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式从(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-(2，7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺和2-[(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基]哌嗪-2-基]乙腈开始制备的。
Figure BDA0003980908660004341
(游离碱，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1154.7[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.88-8.83(m，1H)，8.03(s，1H)，7.74(d，J＝8.4Hz，1H)，7.43-7.36(m，5H)，7.28-7.17(m，3H)，7.07-7.01(m，1H)，6.88-6.72(m，1H)，6.30(d，J＝16.8Hz，1H)，5.84(d，J＝10.0Hz，1H)，5.05-4.94(m，3H)，4.58-4.36(m，7H)，3.90-3.49(m，6H)，3.21-3.13(m，6H)，3.02(s，2H)，2.81(t，J＝5.6Hz，2H)，2.54(s，2H)，2.47(s，3H)，2.24-2.15(m，1H)，1.97-1.88(m，1H)，1.81(s，4H)，1.59-1.30(m，4H)，1.05-1.00(m，9H)。
(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
(2S，4R)-1-[(2R)-2-[3-[[1-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺是按照与(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[2-[[1-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯酰基哌嗪-1-基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式从4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯和(2S，4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-[3-(4-哌啶基甲氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺开始制备的。
Figure BDA0003980908660004351
(甲酸盐，灰白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1100.4[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.89-8.86(m，1H)，8.50(s，1H)，8.05(s，1H)，7.75(d，J＝8.4Hz，1H)，7.48-7.34(m，5H)，7.29-7.14(m，3H)，7.04(d，J＝2.4Hz，1H)，6.83(dd，J＝16.4，10.4Hz，1H)，6.29(dd，J＝16.4，1.6Hz，1H)，6.00-5.92(m，1H)，5.82(dd，J＝10.8，2.0Hz，1H)，4.54-4.33(m，3H)，4.10-4.02(m，6H)，3.97-3.89(m，4H)，3.83(dd，J＝10.8，4.0Hz，1H)，3.67(d，J＝10.0Hz，1H)，3.61(d，J＝10.8Hz，1H)，3.56-3.35(m，3H)，3.25-3.17(m，2H)，2.81-2.55(m，3H)，2.51-2.43(m，3H)，2.40-2.31(m，1H)，2.23-2.13(m，1H)，2.03-1.87(m，4H)，1.60-1.48(m，5H)，1.05(d，J＝6.4Hz，3H)，0.88(d，J＝6.4Hz，3H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-氟-4-哌啶基]甲基-甲基-氨基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：4-[[(2-苄氧基-2-氧代-乙基)氨基]甲基]-4-氟-哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004361
向4-(氨基甲基)-4-氟哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.00g，8.61mmol，1eq)和2-溴乙酸苄酯(1.99g，8.67mmol，1.01eq)在CH2Cl2(20mL)中的溶液中加入K2CO3(3.57g，25.8mmol，3eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌10小时。过滤混合物，并在减压下浓缩滤液。将所得粗产物通过快速硅胶色谱法(梯度：含0-15％THF的石油醚)纯化，从而得到呈黄色油状物的4-[[(2-苄氧基-2-氧代-乙基)氨基]甲基]-4-氟-哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.30g，6.05mmol，70％产率)。LC/MS(ESI)m/z：381.1[M+H]+。
步骤2：4-[[(2-苄氧基-2-氧代-乙基)-甲基-氨基]甲基]-4-氟-哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004362
向在25℃下的4-[[(2-苄氧基-2-氧代-乙基)氨基]甲基]-4-氟-哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.30g，6.05mmol，1eq)和HCHO(1.47g，18.1mmol，1.35mL，37％纯度，3eq)在CH3OH(15mL)和CH2Cl2(15mL)中的混合物中一次性加入AcOH(545mg，9.07mmol，1.5eq)和NaBH(OAc)3(5.13g，24.2mmol，4eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌10小时。将混合物用饱和Na2CO3溶液(20mL)淬灭并搅拌30分钟。将混合物用CH2Cl2(3×20mL)萃取，并将合并的萃取物经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗产物通过快速硅胶色谱法(梯度：含0-15％THF的石油醚)纯化，从而得到呈无色油状物的4-[[(2-苄氧基-2-氧代-乙基)-甲基-氨基]甲基]-4-氟-哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.70g，4.31mmol，71％产率)。LC/MS(ESI)m/z：395.2[M+H]+。
步骤3：2-[(1-叔丁氧羰基-4-氟-4-哌啶基)甲基-甲基-氨基]乙酸的制备
Figure BDA0003980908660004371
向4-[[(2-苄氧基-2-氧代-乙基)-甲基-氨基]甲基]-4-氟-哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.70g，4.31mmol，1eq)在THF(2mL)、CH3OH(2mL)和H2O(2mL)中的溶液中加入LiOH·H2O(542mg，12.9mmol，3eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌1小时。然后加入水(10mL)并用EtOAc(3×10mL)萃取所得混合物。通过加入2N HCl水溶液调节水相的pH值至～5，并将所得酸性混合物冻干。将粗产物与CH2Cl2(20mL)一起研磨。过滤所得悬浮液，并在减压下浓缩滤液，从而得到呈白色固体的根据LCMS：EB777-592-P1A1证实的2-[(1-叔丁氧羰基-4-氟-4-哌啶基)甲基-甲基-氨基]乙酸(1.1g，粗品)，其不经纯化即可用于下一步骤。LC/MS(ESI)m/z：305.1[M+H]+。
步骤4：4-氟-4-[[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙基]-甲基-氨基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004372
向2-[(1-叔丁氧羰基-4-氟-4-哌啶基)甲基-甲基-氨基]乙酸(500mg，1.64mmol，1eq)在DMF(7mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(1.08g，8.32mmol，1.45mL，5.07eq)和HATU(937mg，2.46mmol，1.5eq)，然后加入(2S，4R)-1-[(2S)-2-氨基-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(790mg，1.64mmol，1eq，HCl)，并将反应混合物在20℃下搅拌1小时。将混合物用水(20mL)稀释并用CH2Cl2(3×20mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(30mL×3)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得粗产物通过快速硅胶色谱法(梯度：含0-60％THF的石油醚)纯化，从而得到呈白色固体的4-氟-4-[[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙基]-甲基-氨基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.00g，1.37mmol，83％产率)。LC/MS(ESI)m/z：731.4[M+H]+。
步骤5：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[(4-氟-4-哌啶基)甲基-甲基-氨基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660004381
将4-氟-4-[[[2-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基]-2-氧代-乙基]-甲基-氨基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(600mg，0.821mmol，1eq)在HCl(6mL，4N，在二噁烷中)在20℃下搅拌1小时。将反应混合物在30℃下浓缩，并用水(10mL)稀释所得残余物。通过加入Na2CO3水溶液调节水性混合物的pH值至～8，并用10∶1CH2Cl2/CH3OH(3×20mL)萃取所得碱性混合物。用盐水(3×30mL)洗涤合并的有机萃取物，将其经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，从而得到(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[(4-氟-4-哌啶基)甲基-甲基-氨基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(490mg，粗品)。LC/MS(ESI)m/z：631.1[M+H]+。
步骤6：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-氟-4-哌啶基]甲基-甲基-氨基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-氟-4-哌啶基]甲基-甲基-氨基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺是按照与(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式从(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[(4-氟-4-哌啶基)甲基-甲基-氨基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺和2-[(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-(2-氧代乙氧基)喹唑啉-4-基]哌嗪-2-基]乙腈开始制备的。
Figure BDA0003980908660004401
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1174.4[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.97-8.70(m，1H)，8.39(s，1H)，8.08(s，1H)，7.74(d，J＝8.0Hz，1H)，7.45-7.31(m，5H)，7.30-7.12(m，3H)，7.07-6.98(m，1H)，6.93-6.72(m，1H)，6.31(d，J＝16.8Hz，1H)，5.84(d，J＝10.4Hz，1H)，5.13-4.90(m，2H)，4.75-4.36(m，7H)，4.12-3.43(m，6H)，3.28-2.62(m，12H)，2.46-2.34(m，6H)，2.26-1.78(m，6H)，1.45(d，J＝7.2Hz，3H)，1.06-0.97(m，9H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(5-羟基-2，3-二甲基-苯基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：3，4-二甲基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯酚的制备
Figure BDA0003980908660004402
向3-溴-4，5-二甲基苯酚(200mg，0.995mol，1eq)和4，4，5，5-四甲基-2-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1，3，2-二氧杂环戊硼烷(328mg，1.29mmol，1.3eq)在二噁烷(5mL)中的溶液中加入KOAc(244mg，2.49mmol，2.5eq)和Pd(dppf)Cl2(73mg，0.099mmol，0.1eq)，并在N2下将反应混合物在90℃下搅拌5小时。将反应混合物在减压下浓缩，并所得粗产物通过快速硅胶色谱法(梯度：含0-5％THF的石油醚)纯化，从而得到呈黄色固体的3，4-二甲基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯酚(207mg，0.834mmol，84％产率)。LC/MS(ESI)m/z：249.2[M+H]+。
步骤2：(2S)-4-[6-氯-2-[2-[4-[(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]-1-哌啶基]乙氧基]-8-氟-7-(5-羟基-2，3-二甲基-苯基)喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004411
向(2S)-4-[7-溴-6-氯-2-[2-[4-[(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]-1-哌啶基]乙氧基]-8-氟-喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(100mg，0.137mmol，1.0eq)和3，4-二甲基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯酚(51mg，0.21mmol，1.5eq)在二噁烷(5mL)中的溶液中加入K3PO4(1.5M，0.275mL，3eq)和XPhos Pd G3(12mg，0.014mmol，0.1eq)，并在N2下将反应混合物在100℃下搅拌16小时。过滤反应混合物，并将滤液经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得粗产物通过快速硅胶色谱法(梯度：含0-50％THF的石油醚)纯化，从而得到呈黄色固体的(2S)-4-[6-氯-2-[2-[4-[(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]-1-哌啶基]乙氧基]-8-氟-7-(5-羟基-2，3-二甲基-苯基)喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(135mg，0.128mmol，93％产率)。LC/MS(ESI)m/z：769.3[M+H]+。
步骤3：2-[[1-[2-[4-[(3S)-4-叔丁氧羰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-6-氯-8-氟-7-(5-羟基-2，3-二甲基-苯基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酸的制备
Figure BDA0003980908660004421
向(2S)-4-[6-氯-2-[2-[4-[(2-乙氧基-2-氧代-乙氧基)甲基]-1-哌啶基]乙氧基]-8-氟-7-(5-羟基-2，3-二甲基-苯基)喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(135mg，0.128mmol，73％纯度，1eq)在THF(0.5mL)、水(0.5mL)和EtOH(0.5mL)中的溶液中加入LiOH·H2O(27mg，0.64mmol，5eq)，并在N2下将反应混合物在20℃下搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩，并将所得残余物溶解于水(15mL)中。用2N HCl水溶液调节水性混合物至pH＝6，并通过冻干对该混合物进行干燥，从而得到呈黄色固体的2-[[1-[2-[4-[(3S)-4-叔丁氧羰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-6-氯-8-氟-7-(5-羟基-2，3-二甲基-苯基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酸(90mg，粗品)。LC/MS(ESI)m/z：741.2[M+H]+。
步骤4：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(5-羟基-2，3-二甲基-苯基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(5-羟基-2，3-二甲基-苯基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺是按照与(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-[(2S)-2-甲基-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式从2-[[1-[2-[4-[(3S)-4-叔丁氧羰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-6-氯-8-氟-7-(5-羟基-2，3-二甲基-苯基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酸开始制备的。
Figure BDA0003980908660004431
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1122.1[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.93-8.84(m，1H)，8.53(s，1H)，8.02(s，1H)，7.49-7.35(m，4H)，6.99-6.67(m，2H)，6.45(d，J＝2.4Hz，1H)，6.32(d，J＝16.8Hz，1H)，5.86(d，J＝10.0Hz，1H)，5.01(q，J＝6.8Hz，1H)，4.78-4.74(m，2H)，4.71(s，1H)，4.60-4.36(m，5H)，4.20-3.93(m，3H)，3.89-3.72(m，4H)，3.65-3.45(m，5H)，3.10-2.95(m，2H)，2.80-2.58(m，2H)，2.54-2.46(m，3H)，2.44-2.16(m，5H)，2.09-1.80(m，8H)，1.60-1.46(m，5H)，1.09-0.99(m，9H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(8-甲基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：1-溴-8-甲基萘的制备
Figure BDA0003980908660004432
向在0℃下的1，8-二溴萘(21.2g，74.0mmol，1eq)在THF(400mL)中的溶液中逐滴加入MeLi(1.6M，50.9mL，1.1eq)，并搅拌反应混合物0.5小时。然后在N2下加入CH3I(42.0g，296.1mmol，4eq)，并将反应混合物在25℃下搅拌3小时。在0℃下通过加入水(80mL)淬灭反应物，并用EtOAc(2×300mL)萃取所得混合物。将合并的有机萃取物用盐水(80mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过制备型HPLC(含55-95％CH3CN的水(0.225％甲酸))纯化，从而得到呈黄色固体的1-溴-8-甲基-萘(10.5g，45.1mmol，61％产率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.85(d，J＝7.6Hz，1H)，7.80(d，J＝8.0Hz，1H)，7.76-7.70(m，1H)，7.40-7.35(m，2H)，7.23(t，J＝8.0Hz，1H)，3.15(s，3H)。
步骤2：4，4，5，5-四甲基-2-(8-甲基-1-萘基)-1，3，2-二氧杂环戊硼烷的制备
Figure BDA0003980908660004441
在N2气氛下向在DMF(30mL)中的1-溴-8-甲基-萘(2.00g，9.05mmol，1eq)中加入KOAc(2.66g，27.1mmol，3eq)、4，4，5，5-四甲基-2-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1，3，2-二氧杂环戊硼烷(4.59g，18.1mmol，2eq)和Pd(dppf)Cl2(662mg，0.905mmol，0.1eq)，并将反应混合物在90℃下搅拌15小时。冷却反应混合物并将其用EtOAc(100mL)稀释。将所得混合物用水(3×20mL)、盐水(3×20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过快速硅胶色谱法(梯度：含0-4％EtOAc的石油醚)纯化，接着通过制备型HPLC(含25-90％CH3CN的水(10mM NH4HCO3))纯化，从而得到呈黄色固体的4，4，5，5-四甲基-2-(8-甲基-1-萘基)-1，3，2-二氧杂环戊硼烷(1.35g，5.01mmol，55％产率)。LC/MS(ESI)m/z：269.4[M+H]+。
步骤3：(2S)-4-[6-氯-2-(2，2-二甲氧基乙氧基)-8-氟-7-(8-甲基-1-萘基)喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004451
向(2S)-4-[7-溴-6-氯-2-(2，2-二甲氧基乙氧基)-8-氟-喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(880mg，1.49mmol，1eq)和4，4，5，5-四甲基-2-(8-甲基-1-萘基)-1，3，2-二氧杂环戊硼烷(601mg，2.24mmol，1.5eq)在二噁烷(14mL)中的溶液中加入K3PO4水溶液(1.5M，3.49mL，3.5eq)和XPhos Pd G3(126.5mg，0.149mmol，0.1eq)，并在N2下将反应混合物在100℃下搅拌16小时。将反应混合物用EtOAc(120mL)稀释，并用盐水(30mL)洗涤有机相，将其经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过SiO2快速色谱法(梯度：含10-25％EtOAc的石油醚)纯化，接着通过制备型HPLC(含50-80％CH3CN的水(0.225％甲酸))纯化。合并纯的级分并且将其用固体NaHCO3调节至pH＝8，并在真空下浓缩以除去大部分CH3CN。将所得混合物用EtOAc(3×100mL)萃取，并将所得有机萃取物用盐水(40mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，从而得到呈黄色固体的(2S)-4-[6-氯-2-(2，2-二甲氧基乙氧基)-8-氟-7-(8-甲基-1-萘基)喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(450mg，45％产率)。LC/MS(ESI)m/z：650.3[M+H]+。
步骤4：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(8-甲基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(8-甲基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺是按照与(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式从(2S)-4-[6-氯-2-(2，2-二甲氧基乙氧基)-8-氟-7-(8-甲基-1-萘基)喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯开始制备的。
Figure BDA0003980908660004461
(甲酸盐，灰白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1141.7[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.87(s，1H)，8.53(s，1H)，8.11-7.93(m，2H)，7.84(d，J＝7.6Hz，1H)，7.60-7.49(m，1H)，7.48-7.32(m，5H)，7.32-7.21(m，2H)，7.01-6.72(m，1H)，6.40-6.24(m，1H)，5.84(d，J＝8.4Hz，1H)，5.07-5.00(m，1H)，4.75-4.40(m，10H)，4.05-3.67(m，6H)，3.62-3.31(m，4H)，3.25-2.96(m，4H)，2.73-2.51(m，2H)，2.46(s，3H)，2.27-2.16(m，1H)，2.07(s，3H)，2.00-1.77(m，4H)，1.62-1.47(m，2H)，1.46(d，J＝5.2Hz，3H)，1.02(s，9H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：2-[(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(1R)-1-甲基-2-氧代-乙氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-2-基]乙腈的制备
Figure BDA0003980908660004471
向在0℃下的(2S)-4-[6-氯-2-[(1R)-2，2-二甲氧基-1-甲基-乙氧基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(800mg，1.20mmol，1eq)在丙酮(1.82mL)中的溶液中加入浓HCl(1.82mL)，并将反应混合物在20℃下搅拌0.5小时。将混合物用水(5mL)稀释，用饱和NaHCO3水溶液调节至pH＝～7，然后过滤。将滤饼用THF(60mL)稀释，并将所得混合物经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，从而得到呈黄色固体的2-[(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(1R)-1-甲基-2-氧代-乙氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(630mg，粗品)。LC/MS(ESI)m/z：520.1[M+H]+。
步骤2：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[(2R)-2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基丙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺是按照与(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式从2-[(2S)-4-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-2-[(1R)-1-甲基-2-氧代-乙氧基]喹唑啉-4-基]哌嗪-2-基]乙腈开始制备的。
Figure BDA0003980908660004481
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1157.7[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.92-8.83(m，1H)，8.07(s，1H)，7.74(d，J＝8.4Hz，1H)，7.48-7.33(m，4H)，7.28-7.15(m，3H)，7.03(s，1H)，6.98-6.74(m，1H)，6.31(d，J＝17.2Hz，1H)，5.90-5.79(m，1H)，5.70-5.52(m，1H)，5.17-4.94(m，1H)，4.85-4.80(m，1H)，4.69-4.52(m，5H)，4.50-4.40(m，3H)，4.22-4.09(m，1H)，3.96-3.80(m，4H)，3.77-3.63(m，2H)，3.59-3.47(m，1H)，3.17-2.96(m，4H)，2.85-2.70(m，1H)，2.59-2.51(m，1H)，2.47(s，3H)，2.26-2.15(m，2H)，2.14-2.07(m，1H)，2.01-1.90(m，1H)，1.77-1.59(m，3H)，1.57-1.44(m，3H)，1.39(d，J＝6.0Hz，3H)，1.27-1.12(m，2H)，1.01(s，9H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[3-[[4-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]哌嗪-1-基]甲基]环丁氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：3-(苄氧基甲基)环丁醇的制备
Figure BDA0003980908660004491
向在-70℃下的3-(苄氧基甲基)环丁酮(25.0g，131mmol，1eq)在THF(100mL)中的溶液中逐滴加入三仲丁基硼氢化锂(L-selectride)(151mL，151mmol，1.15eq，1M在THF中)，并将反应混合物在20℃下搅拌16小时。用饱和NH4Cl水溶液(100mL)淬灭反应物，并用EtOAc(3×150mL)萃取所得混合物。用盐水(300mL)洗涤合并的有机萃取物，将其经无水Na2SO4干燥并浓缩。将所得粗产物通过快速硅胶色谱法(梯度：含0-20％THF的石油醚)纯化，从而得到呈无色油状物的3-(苄氧基甲基)环丁醇(23.2g，121mmol，92％产率)。LC/MS(ESI)m/z：193.2[M+H]+。
步骤2：[3-(苄氧基甲基)环丁基]4-硝基苯甲酸酯的制备
Figure BDA0003980908660004492
在N2下向在0℃下的3-(苄氧基甲基)环丁醇(10.0g，52.0mmol，1eq)、4-硝基苯甲酸(10.4g，62.4mmol，1.2eq)和PPh3(17.7g，67.6mmol，1.3eq)在THF(200mL)中的溶液中加入DIAD(13.7g，67.6mmol，13.2mL，1.3eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌6小时。在减压下浓缩反应混合物，并将所得粗产物通过快速硅胶色谱法(梯度：含0-10％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈白色固体的[3-(苄氧基甲基)环丁基]4-硝基苯甲酸酯(16.1g，47.2mmol，91％产率)。LC/MS(ESI)m/z：342.0[M+H]+。
步骤3：3-(苄氧基甲基)环丁醇的制备
Figure BDA0003980908660004493
向[3-(苄氧基甲基)环丁基]4-硝基苯甲酸酯(16.1g，47.2mmol，1eq)在THF(80mL)中的溶液中加入NaOH(3.77g，94.3mmol，2eq)在H2O(80mL)中的溶液，并将反应混合物在20℃下搅拌16小时。用EtOAc(3×100mL)萃取混合物，并用盐水(2×80mL)洗涤合并的有机萃取物，将其经无水Na2SO4干燥并浓缩。将所得粗产物通过快速硅胶色谱法(梯度：含0-15％THF的石油醚)纯化，从而得到呈无色油状物的3-(苄氧基甲基)环丁醇(8.55g，44.5mmol，94％产率)。LC/MS(ESI)m/z：193.2[M+H]+。
步骤4：2-[3-(苄氧基甲基)环丁氧基]乙酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004501
向在0℃下的3-(苄氧基甲基)环丁醇(300mg，1.56mmol，1eq)在DMF(3mL)中的溶液中加入NaH(100mg，2.50mmol，60％纯度，1.6eq)，并在N2下将反应混合物在20℃下搅拌15分钟。然后加入2-溴乙酸叔丁酯(396mg，2.03mmol，1.3eq)，并在N2下将反应混合物在20℃下搅拌16小时。通过加入水(15mL)淬灭反应混合物，然后用EtOAc(3×15mL)萃取该混合物。用盐水(3×15mL)洗涤合并的有机萃取物，将其经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得粗产物通过制备型TLC(酸性硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)纯化，从而得到呈无色油状物的2-[3-(苄氧基甲基)环丁氧基]乙酸叔丁酯(253mg，0.826mmol，53％产率)。LC/MS(ESI)m/z：251.2[M+H]+。
步骤5：2-[3-(羟甲基)环丁氧基]乙酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004502
向2-[3-(苄氧基甲基)环丁氧基]乙酸叔丁酯(1.19g，3.88mmol，1eq)在EtOH(30mL)中的溶液中加入Pd/C(120mg，0.777mmol，10％纯度，0.2eq)，并在H2(50psi)下将反应混合物在65℃下搅拌24小时。过滤反应混合物，并在减压下浓缩滤液，从而得到呈无色油状物的2-[3-(羟甲基)环丁氧基]乙酸叔丁酯(829mg，3.83mmol，99％产率)。
步骤6：2-[3-(对甲苯磺酰氧基甲基)环丁氧基]乙酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004511
向在0℃下的2-[3-(羟甲基)环丁氧基]乙酸叔丁酯(829mg，3.83mmol，1eq)、TEA(1.16g，11.5mmol，1.60mL，3eq)和DMAP(234mg，1.92mmol，0.5eq)在DCM(20mL)中的溶液中加入TosCl(1.46g，7.67mmol，2eq)，并在N2下将反应混合物在20℃下搅拌16小时。将反应混合物倾倒在水(20mL)上，并用CH2Cl2(2×20mL)萃取所得水性混合物。用盐水(20mL)洗涤合并的有机萃取物，将其经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得粗产物通过快速硅胶色谱法(梯度：含0-15％THF的石油醚)纯化，从而得到呈无色油状物的2-[3-(对甲苯磺酰氧基甲基)环丁氧基]乙酸叔丁酯(1.33g，3.59mmol，94％产率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.80(d，J＝8.4Hz，2H)，7.36(d，J＝8.0Hz，2H)，4.13-4.04(m，1H)，4.02(d，J＝6.8Hz，2H)，3.84(s，2H)，2.61-2.50(m，1H)，2.46(s，3H)，2.24-2.14(m，2H)，2.11-2.01(m，2H)，1.47(s，9H)。
步骤7：4-[[3-(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)环丁基]甲基]哌嗪-1-羧酸苄酯的制备
Figure BDA0003980908660004512
向哌嗪-1-羧酸苄酯(856mg，3.89mmol，1.2eq)在CH3CN(20mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(628mg，4.86mmol，1.5eq)、KI(108mg，0.648mmol，0.2eq)和2-[3-(对甲苯磺酰氧基甲基)环丁氧基]乙酸叔丁酯(1.20g，3.24mmol，1eq)，并在N2下将反应混合物在80℃下搅拌24小时。将反应混合物倾倒在水(30mL)上，并用EtOAc(3×30mL)萃取所得水性混合物。用盐水(2×30mL)洗涤合并的有机萃取物，将其经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得粗产物通过快速硅胶色谱法(梯度：含0～5％THF的石油醚)纯化，从而得到呈无色油状物的4-[[3-(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)环丁基]甲基]哌嗪-1-羧酸苄酯(1.07g，2.56mmol，79％产率)。LC/MS(ESI)m/z：419.3[M+H]+。
步骤8：2-[3-(哌嗪-1-基甲基)环丁氧基]乙酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004521
向4-[[3-(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)环丁基]甲基]哌嗪-1-羧酸苄酯(1.16g，2.77mmol，1eq)在异丙醇(20mL)中的溶液中加入Pd/C(120mg，0.554mmol，10％纯度，0.2eq)，并在H2(15psi)下将反应混合物在35℃下搅拌24小时。过滤反应混合物，并在减压下浓缩滤液，从而得到呈无色油状物的2-[3-(哌嗪-1-基甲基)环丁氧基]乙酸叔丁酯(820mg，粗品)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ4.19-4.10(m，1H)，3.87(s，2H)，3.00-2.93(m，3H)，2.53-2.45(m，4H)，2.45-2.42(m，2H)，2.24-2.14(m，3H)，2.07-1.97(m，3H)，1.48(s，9H)。
步骤9：(2S)-4-[7-溴-2-[4-[[3-(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)环丁基]甲基]哌嗪-1-基]-6-氯-8-氟-喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004531
向2-[3-(哌嗪-1-基甲基)环丁氧基]乙酸叔丁酯(300mg，1.05mmol，1eq)和(2S)-4-(7-溴-2，6-二氯-8-氟-喹唑啉-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(545mg，1.05mmol，1eq)在THF(10mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(204mg，1.58mmol，1.5eq)，并在N2下将反应混合物在50℃下搅拌2小时。加入另外的2-[3-(哌嗪-1-基甲基)环丁氧基]乙酸叔丁酯(100mg，0.352mmol，0.33eq)，并在N2下将反应混合物在50℃下搅拌12小时。在减压下浓缩反应混合物，并将所得粗产物通过快速硅胶色谱法(梯度：含0-70％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈黄色油状物的(2S)-4-[7-溴-2-[4-[[3-(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)环丁基]甲基]哌嗪-1-基]-6-氯-8-氟-喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(610mg，0.795mmol，76％产率)。LC/MS(ESI)m/z：768.4[M+H]+。
步骤10：(2S)-4-[2-[4-[[3-(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)环丁基]甲基]哌嗪-1-基]-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004532
向(2S)-4-[7-溴-2-[4-[[3-(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)环丁基]甲基]哌嗪-1-基]-6-氯-8-氟-喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(610mg，0.795mmol，1eq)在THF(5mL)中的溶液中加入4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)萘-2-醇(215mg，0.795mmol，1eq)、K3PO4水溶液(1.5M，1.59mL，2.39mmol，3eq)和XPhos Pd G3(34mg，0.040mmol，0.05eq)，并在N2下将反应混合物在50℃下搅拌2小时。用EtOAc(50mL)稀释反应混合物，并将所得混合物经无水Na2SO4干燥并过滤。在减压下浓缩滤液，并将所得粗产物经快速硅胶色谱法(梯度：含0-60％THF的石油醚)纯化，从而得到呈黄色固体的(2S)-4-[2-[4-[[3-(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)环丁基]甲基]哌嗪-1-基]-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(423mg，0.509mmol，64％产率)。
步骤11：2-[3-[[4-[4-[(3S)-4-叔丁氧羰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]哌嗪-1-基]甲基]环丁氧基]乙酸的制备
Figure BDA0003980908660004541
向(2S)-4-[2-[4-[[3-(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)环丁基]甲基]哌嗪-1-基]-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(220mg，0.265mmol，1eq)在THF(1mL)、水(1mL)和CH3OH(1mL)中的溶液中加入LiOH·H2O(334mg，7.95mmol，30eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌0.5小时。将反应混合物用水(10mL)稀释，并用2N HCl水溶液调节所得水性混合物至pH＝5。用3∶1EtOAc/THF(3×20mL)萃取混合物，并用盐水(2×15mL)洗涤合并的有机萃取物，将其经无水Na2SO4干燥，并在减压下浓缩从而得到呈黄色固体的2-[3-[[4-[4-[(3S)-4-叔丁氧羰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]哌嗪-1-基]甲基]环丁氧基]乙酸(204mg，0.263mmol，99％产率)。LC/MS(ESI)m/z：774.6[M+H]+。
步骤12：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[3-[[4-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]哌嗪-1-基]甲基]环丁氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[3-[[4-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]哌嗪-1-基]甲基]环丁氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺是按照与(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-[(2S)-2-甲基-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式从2-[3-[[4-[4-[(3S)-4-叔丁氧羰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]哌嗪-1-基]甲基]环丁氧基]乙酸开始制备的。
Figure BDA0003980908660004551
(甲酸盐，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1154.5[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.91-8.78(m，1H)，8.42(s，1H)，7.88(s，1H)，7.74(d，J＝8.4Hz，1H)，7.48-7.31(m，5H)，7.29-7.10(m，3H)，7.04-6.96(m，1H)，6.94-6.70(m，1H)，6.30(d，J＝16.8Hz，1H)，5.84(d，J＝11.2Hz，1H)，5.03-4.96(m，3H)，4.63-4.51(m，2H)，4.47-4.28(m，2H)，4.24-3.69(m，10H)，3.68-3.38(m，4H)，3.08-2.60(m，8H)，2.50-2.39(m，3H)，2.36-2.06(m，5H)，2.03-1.88(m，1H)，1.59-1.43(m，3H)，1.10-0.97(m，9H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-[(2S)-2-[[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基甲基]吡咯烷-1-基]丁氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：2-(4-羟基丁氧基)乙酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004561
向丁烷-1，4-二醇(13.86g，153.80mmol，3eq)在CH2Cl2(128mL)中的溶液中加入四丁基溴化铵(16.53g，51.27mmol，1eq)和NaOH水溶液(12.08M 96.13mL，35重量％，22.65eq)，然后逐滴加入2-溴乙酸叔丁酯(10.0g，51.27mmol，7.58mL，1eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌16小时。过滤混合物，并用CH2Cl2(150mL)洗涤滤饼。分离有机相，并用CH2Cl2(3×100mL)进一步萃取水相。用水(100mL)和盐水(80mL)洗涤合并的有机萃取物，将其经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过SiO2快速色谱法(梯度：含10-30％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈无色油状物的2-(4-羟基丁氧基)乙酸叔丁酯(2.07g，10.13mmol，20％产率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ3.97(s，2H)，3.69(t，J＝6.0Hz，2H)，3.57(t，J＝6.0Hz，2H)，1.99(br s，1H)，1.80-1.63(m，4H)，1.49(s，9H)。
步骤2：2-[4-(对甲苯磺酰氧基)丁氧基]乙酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004562
向2-(4-羟基丁氧基)乙酸叔丁酯(300mg，1.47mmol，1eq)、Et3N(520.2mg，5.14mmol，3.5eq)和DMAP(9.0mg，0.073mmol，0.05eq)在CH2Cl2(12mL)中的溶液中加入TosCl(308.0mg，1.62mmol，1.1eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌16小时。然后加入水(15mL)，并用CH2Cl2(3×20mL)萃取所得混合物。用盐水(30mL)洗涤合并的有机萃取物，将其经无水硫酸钠干燥、过滤并浓缩。将所得残余物通过SiO2快速色谱法(梯度：含0-15％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈无色油状物的2-[4-(对甲苯磺酰氧基)丁氧基]乙酸叔丁酯(280mg，0.781mmol，53％产率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.80(d，J＝8.4Hz，2H)，7.35(d，J＝8.0Hz，2H)，4.08(t，J＝6.4Hz，2H)，3.90(s，2H)，3.48(t，J＝6.0Hz，2H)，2.46(s，3H)，1.85-1.73(m，2H)，1.70-1.60(m，2H)，1.47(s，9H)。
步骤3：2-三甲基甲硅烷基乙基(2S)-2-(羟甲基)吡咯烷-1-羧酸酯的制备
Figure BDA0003980908660004571
向[(2S)-吡咯烷-2-基]甲醇(2g，19.77mmol，1.92mL，1eq)和Na2CO3(2.51g，23.73mmol，1.2eq)在THF(15mL)和H2O(15mL)中的溶液中分批加入(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)2-三甲基甲硅烷基乙基碳酸酯(3.08g，11.86mmol，0.6eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌16小时。将反应混合物在水(15mL)和EtOAc(30mL)之间分配。分离有机相，并用EtOAc(3×30mL)进一步萃取水相。用盐水(40mL)洗涤合并的有机萃取物，将其经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过SiO2快速色谱法(梯度：含0-15％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈无色油状物的2-三甲基甲硅烷基乙基(2S)-2-(羟甲基)吡咯烷-1-羧酸酯(2.13g，8.25mmol，42％产率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ4.20(dd，J＝9.2，7.6Hz，2H)，4.06-3.92(m，1H)，3.73-3.58(m，2H)，3.56-3.46(m，1H)，3.40-3.30(m，1H)，2.09-1.97(m，1H)，1.93-1.73(m，2H)，1.58(s，1H)，1.09-0.98(m，2H)，0.05(s，9H)。
步骤4：(2S)-4-[7-溴-6-氯-8-氟-2-[[(2S)-1-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基羰基)吡咯烷-2-基]甲氧基]喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004581
向(2S)-4-(7-溴-2，6-二氯-8-氟-喹唑啉-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.2g，2.31mmol，1eq)在CH3CN(20mL)中的溶液中加入DABCO(25.9mg，0.231mmol，0.1eq)、Cs2CO3(979.0mg，3.00mmol，1.3eq)和2-三甲基甲硅烷基乙基(2S)-2-(羟甲基)吡咯烷-1-羧酸酯(850.7mg，3.47mmol，1.5eq)，并将反应混合物在40℃下搅拌2小时。过滤反应混合物，并浓缩滤液。将所得残余物通过SiO2快速色谱法(梯度：含5-25％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈油状黄色固体的(2S)-4-[7-溴-6-氯-8-氟-2-[[(2S)-1-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基羰基)吡咯烷-2-基]甲氧基]喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.55g，1.81mmol，78％产率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.77-7.69(m，1H)，4.76-4.62(m，2H)，4.33-4.15(m，6H)，4.05-3.94(m，1H)，3.85-3.57(m，2H)，3.52-3.29(m，4H)，2.97-2.68(m，2H)，2.12-2.07(m，1H)，2.03-1.96(m，1H)，1.93-1.76(m，2H)，1.51(s，9H)，1.08-0.95(m，2H)，0.05(s，9H)。
步骤5：(2S)-4-[7-溴-6-氯-8-氟-2-[[(2S)-吡咯烷-2-基]甲氧基]喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004591
向(2S)-4-[7-溴-6-氯-8-氟-2-[[(2S)-1-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基羰基)吡咯烷-2-基]甲氧基]喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.4g，1.92mmol，1eq)在DMF(20mL)中的溶液中加入CsF(1.46g，9.61mmol，5eq)，并将反应混合物在60℃下搅拌2小时。将反应物用EtOAc(120mL)稀释，然后用水(4×30mL)、盐水(2×30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过SiO2快速色谱法(梯度：含10-32％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈黄色固体的(2S)-4-[7-溴-6-氯-8-氟-2-[[(2S)-吡咯烷-2-基]甲氧基]喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.6g，51％产率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.56(d，J＝2.0Hz，1H)，4.78-4.62(m，1H)，4.37-4.19(m，2H)，4.17-4.02(m，2H)，3.98-3.88(m，1H)，3.86-3.78(m，1H)，3.77-3.68(m，1H)，3.66-3.57(m，1H)，3.55-3.45(m，1H)，3.41-3.18(m，2H)，2.91-2.71(m，2H)，2.29-2.14(m，1H)，2.03-1.93(m，1H)，1.93-1.83(m，1H)，1.78-1.65(m，1H)，1.52(s，9H)，1.27(t，J＝7.2Hz，1H)。
步骤6：(2S)-4-[7-溴-2-[[(2S)-1-[4-(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)丁基]吡咯烷-2-基]甲氧基]-6-氯-8-氟-喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004592
向(2S)-4-[7-溴-6-氯-8-氟-2-[[(2S)-吡咯烷-2-基]甲氧基]喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(330.0mg，0.565mmol，1eq)和2-[4-(对甲苯磺酰氧基)丁氧基]乙酸叔丁酯(607.8mg，1.70mmol，3.0eq)在CH3CN(10mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(292.2mg，2.26mmol，4eq)，并在微波条件下将反应混合物在130℃下搅拌16小时。浓缩该混合物，并将所得残余物通过SiO2快速色谱法(梯度：含5-17％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈黄色固体的(2S)-4-[7-溴-2-[[(2S)-1-[4-(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)丁基]吡咯烷-2-基]甲氧基]-6-氯-8-氟-喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(230mg，0.299mmol，38％产率)。LC/MS(ESI)m/z：771.2[M+H]+。
步骤7：(2S)-4-[2-[[(2S)-1-[4-(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)丁基]吡咯烷-2-基]甲氧基]-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004601
向(2S)-4-[7-溴-2-[[(2S)-1-[4-(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)丁基]吡咯烷-2-基]甲氧基]-6-氯-8-氟-喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(230mg，0.299mmol，1eq)和4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)萘-2-醇(145.2mg，0.538mmol，1.8eq)在THF(4mL)中的溶液中加入K3PO4(1.5M，0.80mL，4.0eq)和XPhos Pd G3(12.6mg，0.015mmol，0.05eq)，并在N2下将反应混合物在50℃下搅拌16小时。用EtOAc(80mL)稀释反应混合物，并将有机相用盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将所得残余物通过SiO2快速色谱法(梯度：含5-30％EtOAc的石油醚)纯化，从而得到呈黄色固体的(2S)-4-[2-[[(2S)-1-[4-(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)丁基]吡咯烷-2-基]甲氧基]-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(140mg，52％产率)。LC/MS(ESI)m/z：833.7[M+H]+。
步骤8：2-[4-[(2S)-2-[[4-[(3S)-4-叔丁氧羰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基甲基]吡咯烷-1-基]丁氧基]乙酸的制备
Figure BDA0003980908660004611
向(2S)-4-[2-[[(2S)-1-[4-(2-叔丁氧基-2-氧代-乙氧基)丁基]吡咯烷-2-基]甲氧基]-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-4-基]-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(140mg，0.168mmol，1eq)在THF(1mL)和CH3OH(1mL)中的溶液中加入LiOH·H2O(141.0mg，3.36mmol，20eq)在H2O(3mL)中的溶液，并将反应混合物在20℃下搅拌1.5小时。用HCl水溶液(2N)调节混合物至pH＝7，然后在真空下浓缩该混合物。用HCl水溶液(2N)将所得残余物酸化至pH＝3～4，然后冻干该残余物从而得到呈黄色固体的2-[4-[(2S)-2-[[4-[(3S)-4-叔丁氧羰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基甲基]吡咯烷-1-基]丁氧基]乙酸(130mg，95％产率)。LC/MS(ESI)m/z：777.2[M+H]+。
步骤9：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-[(2S)-2-[[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基甲基]吡咯烷-1-基]丁氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-[(2S)-2-[[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基甲基]吡咯烷-1-基]丁氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺是按照与(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[2-[[1-[2-[6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)-4-[(2S)-2-甲基-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]乙酰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式从2-[4-[(2S)-2-[[4-[(3S)-4-叔丁氧羰基-3-(氰甲基)哌嗪-1-基]-6-氯-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基甲基]吡咯烷-1-基]丁氧基]乙酸开始制备的。
Figure BDA0003980908660004621
(游离碱，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1157.8[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.75-8.65(m，1H)，7.73(dd，J＝8.4，4.0Hz，1H)，7.62(s，1H)，7.44-7.29(m，7H)，7.25-7.09(m，3H)，6.71-6.51(m，1H)，6.41(d，J＝16.4Hz，1H)，5.84(d，J＝10.0Hz，1H)，5.34-4.98(m，2H)，4.81-4.66(m，1H)，4.61-4.44(m，2H)，4.43-4.05(m，4H)，3.85-3.29(m，14H)，3.07-2.76(m，2H)，2.57-2.40(m，4H)，2.19-1.91(m，5H)，1.81-1.52(m，8H)，1.50-1.39(m，3H)，1.03(s，9H)。
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[1-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]环丙烷羰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的示例性合成
步骤1：4-(三氟甲基磺酰氧基甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004631
向在-78℃下的4-(羟甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(200mg，0.929mmol，1eq)和2，6-二甲基吡啶(109mg，1.02mmol，1.1eq)在CH2Cl2(20mL)中的溶液中逐滴加入Tf2O(288mg，1.02mmol，1.1eq)，并将反应混合物在-78℃下搅拌1小时。用CH2Cl2(25mL)稀释反应混合物，并依次用饱和NH4Cl(25mL)和水(25mL)洗涤该混合物。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并蒸发，从而得到呈红色油状物的4-(三氟甲基磺酰氧基甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(321mg，0.924mmol，99.5％产率)。1H-NMR(400MHz、CDCl3)δ4.46-3.92(m，4H)，2.80-2.62(m，2H)，2.10-1.90(m，1H)，1.81-1.71(m，2H)，1.47(s，9H)，1.32-1.18(m，2H)。
步骤2：1-[(1-叔丁氧羰基-4-哌啶基)甲氧基]环丙烷羧酸的制备
Figure BDA0003980908660004632
向在-78℃下的1-羟基环丙烷羧酸乙酯(100mg，0.768mmol，1eq)在THF(5mL)中的溶液中加入LiHMDS(1M，0.922mL，1.2eq)，并在N2下将反应混合物在-78℃下搅拌1小时。然后在-78℃下加入4-(三氟甲基磺酰氧基甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(320mg，0.922mmol，1.2eq)在THF(5mL)中的溶液，并将反应混合物温热至20℃，并在20℃下搅拌16小时。通过加入饱和NH4Cl水溶液(20mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(3×20mL)萃取所得水性混合物。用盐水(2×20mL)洗涤合并的有机萃取物，将其经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。向在CH3OH(2mL)、THF(2mL)和水(2mL)中的所得残余物中加入LiOH·H2O(98mg，2.3mmol，3eq)，并在N2下将反应混合物在50℃下搅拌16小时。在减压下浓缩反应混合物从而得到残余物。然后加入水(20mL)，并用EtOAc(3×10mL)萃取所得混合物。弃去有机萃取物，并将水层用2N HCl水溶液调节至pH＝5，并冻干从而得到呈红色油状物的1-[(1-叔丁氧羰基-4-哌啶基)甲氧基]环丙烷羧酸(94mg，粗品)。
步骤3：4-[[1-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基甲酰基]环丙氧基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003980908660004641
向(2S，4R)-1-[(2S)-2-氨基-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(150mg，0.312mmol，1eq，HCl)和1-[(1-叔丁氧羰基-4-哌啶基)甲氧基]环丙烷羧酸(93mg，0.312mmol，1eq)在DMF(2mL)中的溶液中加入二异丙基乙胺(202mg，1.56mmol，5eq)和HATU(178mg，0.468mmol，1.5eq)，并将反应混合物在20℃下搅拌2小时。通过加入水(50mL)淬灭反应混合物，然后将其在20℃下搅拌10分钟。过滤所得悬浮液，并将滤饼溶解在CH2Cl2(30mL)中。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得粗产物通过制备型TLC(酸性硅胶，CH3OH/CH2Cl2＝1∶10)纯化，从而得到呈黄色固体的4-[[1-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基甲酰基]环丙氧基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(81mg，0.11mmol，36％产率)。LC/MS(ESI)m/z：726.4[M+H]+。
步骤4：(2S，4R)-1-[(2S)-3，3-二甲基-2-[[1-(4-哌啶基甲氧基)环丙烷羰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
Figure BDA0003980908660004651
将4-[[1-[[(1S)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基]氨基甲酰基]环丙氧基]甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(81mg，0.11mmol，1eq)在CH2Cl2(1.5mL)和TFA(0.5mL)中的溶液在20℃下搅拌2小时。在减压下浓缩所得混合物并将残余物溶解于水(5mL)中。用饱和Na2CO3溶液调节所得水性混合物至pH＝9，并用1∶10CH3OH/CH2Cl2(3×30mL)萃取该混合物。用盐水(2×30mL)洗涤合并的有机萃取物，将其经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，从而得到呈黄色固体的(2S，4R)-1-[(2S)-3，3-二甲基-2-[[1-(4-哌啶基甲氧基)环丙烷羰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(65mg，0.10mmol，93％产率)。LC/MS(ESI)m/z：626.4[M+H]+。
步骤5：(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[1-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]环丙烷羰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺的制备
(2S，4R)-1-[(2S)-2-[[1-[[1-[2-[6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-丙-2-烯酰基-哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基-1-萘基)喹唑啉-2-基]氧基乙基]-4-哌啶基]甲氧基]环丙烷羰基]氨基]-3，3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺是按照与(2S，4R)-1-[(2S)-2-[2-({1-[2-({6-氯-4-[(3S)-3-(氰甲基)-4-(丙-2-烯酰基)哌嗪-1-基]-8-氟-7-(3-羟基萘-1-基)喹唑啉-2-基}氧基)乙基]哌啶-4-基}甲氧基)乙酰氨基]-3，3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1，3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺类似的方式从(2S，4R)-1-[(2S)-3，3-二甲基-2-[[1-(4-哌啶基甲氧基)环丙烷羰基]氨基]丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺开始制备的。
Figure BDA0003980908660004661
(游离碱，白色固体)。LC/MS(ESI)m/z：1169.5[M+H]+.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.86(s，1H)，8.05(s，1H)，7.74(d，J＝8.8Hz，1H)，7.55-7.35(m，5H)，7.28-7.17(m，3H)，7.05-7.00(m，1H)，6.94-6.75(m，1H)，6.36-6.26(m，1H)，5.90-5.79(m，1H)，5.18-5.04(m，1H)，5.00-4.95(m，1H)，4.70-4.62(m，4H)，4.52-4.40(m，3H)，3.93-3.67(m，4H)，3.40(d，J＝6.0Hz，2H)，3.21-3.14(m，2H)，3.09-2.82(m，4H)，2.46(s，3H)，2.34-2.15(m，3H)，2.01-1.90(m，1H)，1.87-1.64(m，3H)，1.56-1.27(m，6H)，1.25-0.97(m，14H)。
3的合成：
Figure BDA0003980908660004662
Figure BDA0003980908660004671
(R)-2-(羟甲基)哌嗪-1，4-二羧酸1-苄酯4-叔丁酯(1)
向(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(5.0g，1.0eq)在乙酸乙酯(100mL)中的溶液中加入NaHCO3(3.0eq)、H2O(50mL)和氯甲酸苄酯(1.30eq)。将混合物在25℃下搅拌12小时。完成后分离有机相，将其用水(100mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。在真空下除去溶剂，从而得到呈黄色油状物的标题化合物(7.0g，86％产率)，其不经进一步纯化即用于下一步骤。
LCMS[ESI，M+1]：351。
Figure BDA0003980908660004672
(S)-2-(氰甲基)哌嗪-1，4-二羧酸1-苄酯4-叔丁酯(2)
向(2R)-2-(羟甲基)哌嗪-1，4-二羧酸1-苄酯4-叔丁酯(7.0g，1.0eq)在THF(100mL)中的溶液中加入TEA(3.0eq)和甲磺酰氯(1.2eq)。将混合物在20℃下搅拌1小时。通过在20℃加入H2O 50mL淬灭反应混合物。用乙酸乙酯(100mL×2)萃取反应混合物。用H2O(100mL)洗涤有机层，将其经Na2SO4干燥并过滤。在真空下除去溶剂，得到呈黄色油状物的(2R)-2-(甲基磺酰氧基甲基)哌嗪-1，4-二羧酸1-苄酯4-叔丁酯。粗产物无需进一步纯化即直接用于下一步骤。
向(2R)-2-(甲基磺酰氧基甲基)哌嗪-1，4-二羧酸1-苄酯4-叔丁酯在DMA(150mL)中的溶液中加入NaCN(4eq.)。将混合物在60℃下搅拌12小时。在真空下除去溶剂，从而得到油状残余物。用H2O(40mL)稀释残余物并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取该残余物。用饱和盐水洗涤合并的有机层，将其经饱和Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩从而得到残余物。将残余物通过柱色谱法(SiO2，己烷/乙酸乙酯＝5∶1至3∶1)纯化从而得到呈黄色油状物的标题化合物(6.0g，两个步骤产率84％)。
1H NMR(600MHz，CDCl3)δ7.40-7.32(m，5H)，5.16(s，2H)，4.55(s，1H)，4.25-3.80(m，3H)，2.95-3.25(m，2H)，2.85(s，1H)，2.60(d，J＝50.2Hz，1H)，2.74-2.40(m，2H)。
13C NMR(150MHz，CDCl3)δ154.9，154.6，135.8，128.6，128.4，128.2，116.7，81.0，68.0，48.2，45.3，42.4，39.2，28.3，19.1。
HRMS[C19H25N3O4Na+]计算值：382.1737；观测值：382.1743。
Figure BDA0003980908660004681
(S)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸苄酯(3)
向(2S)-2-(氰甲基)哌嗪-1，4-二羧酸1-苄酯4-叔丁酯(6.0g，1.0eq)在二噁烷(20.8mL)中的溶液中加入4.0M的在二噁烷中的HCl(20.8mL，5.0eq)。将混合物在20℃下搅拌1小时。然后向反应混合物中加入NaHCO3，直到达到pH＞7，然后在减压下浓缩反应物以除去二噁烷。用H2O(50mL)稀释残余物，并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取该残余物。用H2O(20mL)洗涤合并的有机层，将其经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩从而得到残余物。得到呈黄色油状物的产物(2S)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸苄酯(4.1g，95％产率)。
15的合成：
Figure BDA0003980908660004682
3-(3-羟基丙氧基)丙酸叔丁酯(14)
向丙烷-1，3-二醇(20mmol，1.5g，1.0eq.)在乙腈(20mL)中的溶液中加入Triton B(0.3eq.)和3-(3-羟基丙氧基)丙酸叔丁酯(1.0eq.)。将混合物在20℃下搅拌过夜，并在真空下浓缩。将残余物通过柱色谱法(SiO2，己烷/乙酸乙酯＝5∶1至1∶1)纯化，从而得到呈无色油状物的标题化合物(1.85g，45％产率)。
1H NMR(600MHz，CDCl3)δ3.77-3.72(m，2H)，3.67(t，J＝6.2Hz，2H)，3.65-3.60(m，2H)，2.48(t，J＝6.2Hz，2H)，1.83-1.78(m，2H)，1.44(s，9H)。
13C NMR(150MHz，CDCl3)δ171.1，80.8，70.1，66.7，61.8，36.2，31.9，28.0。
Figure BDA0003980908660004691
3-(3-碘代丙氧基)丙酸叔丁酯(15)
将14(1.85g，1.0eq.)溶解在二氯甲烷(30mL)中并加入三苯基膦(1.1eq.)，然后加入咪唑(1.2eq.)。分批加入I2(1.1eq.)并将反应混合物在20℃下搅拌过夜。用饱和硫代硫酸钠水溶液淬灭反应混合物并且将其搅拌20分钟。分离有机层并用二氯甲烷萃取水层。合并有机层，将其用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并在真空下浓缩。将残余物通过柱色谱法(SiO2，己烷/乙酸乙酯＝0∶1至3∶1)纯化从而得到标题化合物(2.01g，80％产率)。
1H NMR(600MHz，CDCl3)δ3.66(t，J＝6.4Hz，2H)，3.48(t，J＝5.8Hz，2H)，3.25(t，J＝6.8Hz，2H)，2.46(t，J＝6.4Hz，2H)，2.03(tt，J＝6.9，5.8Hz，2H)，1.44(s，9H)。
13C NMR(150MHz，CDCl3)δ170.8，80.5，70.1，66.5，36.3，33.3，28.1，3.3。
HRMS[C10H19INaO3 +]计算值：337.0271；观测值：337.2077。
6的合成：
Figure BDA0003980908660004701
(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)吡咯烷(4)
向(S)-(+)-2-吡咯烷甲醇(1.0g，1.0eq.)在THF中的溶液中加入叔丁基-氯-二苯基-硅烷(1.2eq.)、DMAP(0.1eq.)和TEA(3.0eq.)。将混合物在20℃下搅拌过夜，并在真空下浓缩。将残余物通过柱色谱法(SiO2，DCM/甲醇＝1∶0至10∶1)纯化，从而得到呈黄色油状物的标题化合物(2.9g，86％产率)。
1H NMR(600MHz，CDCl3)δ7.68-7.65(m，4H)，7.44-7.35(m，6H)，3.68(dd，J＝10.3，4.8Hz，1H)，3.61(dd，J＝10.1，6.1Hz，1H)，3.32-3.26(m，1H)，3.04-2.98(m，1H)，2.93-2.87(m，1H)，1.84-1.70(m，3H)，1.55-1.47(m，1H)，1.06(s，9H)。
13C NMR(150MHz，CDCl3)δ135.6，133.5，133.4，129.6，127.7，66.0，59.9，46.3，27.4，26.9，25.16，19.3。
HRMS[C21H30NOSi+]计算值：340.2091；观测值：340.2088。
Figure BDA0003980908660004702
(S)-3-(3-(2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)吡咯烷-1-基)丙氧基)丙酸叔丁酯(5)
向4(2.0g，1.0eq.)在DMF中的溶液中加入3-(3-碘代丙氧基)丙酸叔丁酯(1.0eq.)和TEA(3.0eq.)。将混合物在20℃下搅拌过夜，并在真空下浓缩。将残余物通过柱色谱法(SiO2，DCM/甲醇＝1∶0至10∶1)纯化，从而得到呈黄色油状物的标题化合物(3.0g，97％产率)。
1H NMR(600MHz，CDCl3)δ7.80-7.56(m，4H)，7.51-7.37(m，6H)，4.56-3.79(m，4H)，3.66-3.44(m，5H)，3.36(s，1H)，3.06(s，1H)，2.53-2.31(m，3H)，2.26-1.99(m，5H)，1.90-1.78(m，1H)，1.60(s，2H)，1.43(s，9H)，1.08(s，9H)。
13C NMR(150MHz，CDCl3)δ171.1，135.7，135.5，130.2，128.1，128.0，80.8，70.5，68.2，66.4，62.7，54.9，35.9，28.1，26.9，25.5，22.07，19.1。
HRMS[C31H48NO4Si+]计算值：526.3347；观测值：526.3353。
Figure BDA0003980908660004711
(S)-3-(3-(2-(羟甲基)吡咯烷-1-基)丙氧基)丙酸叔丁酯(6)
向5(3.0g，1.0eq.)在THF中的溶液中加入TBAF(1.0M在THF中，2.0eq.)。将混合物在20℃下搅拌过夜，并在真空下浓缩。将残余物通过柱色谱法(SiO2，DCM/甲醇＝1∶0至5∶1)纯化，从而得到呈黄色油状物的标题化合物(1.5g，92％产率)。
HRMS[C15H30NO4 +]计算值：288.2169；观测值：288.2175。
LC-2的合成(US 2018/0072723 A1)：
Figure BDA0003980908660004721
4-羟基-2-(甲硫基)-5，8-二氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-7(6H)-羧酸叔丁酯(7)
步骤1：向在氮气下在20℃下的搅拌着的3-氧代哌啶-1，4-二羧酸1-叔丁酯4-乙酯(17.0g，1.0eq)在MeOH(300mL)中的溶液中加入NaOMe(5.0eq)，然后以固体形式加入2-甲基异硫脲(1.80eq.)。将反应混合物在20℃下搅拌16小时。用HCl(2M)酸化反应混合物直到pH～5，然后在减压下浓缩混合物以除去MeOH。将残余物重新悬浮在300mL乙酸乙酯和300mL水中并快速搅拌。过滤悬浮液并收集白色固体。分离滤液并用水(1×300mL)和盐水(1×200mL)洗涤有机相。分离有机相，将其经Na2SO4干燥，过滤并浓缩至白色固体，4-羟基-2-甲基硫烷基-6，8-二氢-5H-吡啶并[3，4-d]嘧啶-7-羧酸叔丁酯(17.2g，92％产率)是以白色固体形式获得的并且不经进一步纯化直接用于下一步骤。
LCMS[M+1]：298。
Figure BDA0003980908660004731
2-(甲硫基)-4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-5，8-二氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-7(6H)-羧酸叔丁酯(8)
步骤2：在氮气下向在0℃下的搅拌着的7(10g，1.0eq)在DCM(200mL)中的悬浮液中加入DIEA(2.0eq)，然后加入Tf2O(1.5eq)。立即形成棕色溶液。在25℃下搅拌16小时后，浓缩反应物从而得到棕色油状物。将该棕色油状物用柱色谱法(SiO2，己烷/乙酸乙酯＝1/0至10/1)纯化从而得到呈黄色固体的标题化合物(5.1g，35％产率)。
HRMS[C14H19F3N3O5S2+]计算值：430.0713；观测值：430.0718。
Figure BDA0003980908660004732
(S)-4-(4-((苄氧基)羰基)-3-(氰甲基)哌嗪-1-基)-2-(甲硫基)-5，8-二氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-7(6H)-羧酸叔丁酯(9)
步骤3：将8(1.24g，1.0eq)、苄基-(2S)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸酯(1.05eq)和DIEA(3.0eq)在DMF(10mL)中的混合物脱气并用N2吹扫3次，然后在N2气氛下将混合物在100℃下搅拌1小时。完成后，在真空下除去溶剂。将残余物通过柱色谱法(SiO2，己烷/乙酸乙酯＝3/1至1∶1)纯化，从而得到呈黄色固体的标题化合物(1.36g，86％产率)。
1H NMR(600MHz，CDCl3)δ7.43-7.30(m，5H)，5.17(s，2H)，4.72-4.55(m，2H)，4.36(d，J＝19.1Hz，1H)，4.02-3.71(m，3H)，3.40-3.21(m，4H)，2.98(t，J＝12.2Hz，1H)，2.75-2.57(m，4H)，2.49(s，3H)，1.47(s，9H)。
13C NMR(151MHz，CDCl3)δ168.61，164.66，135.82，128.68，128.65，128.45，128.29，128.26，128.23，117.00，111.12，68.07，60.39，48.50，47.84，28.41，28.02，25.88，21.05，19.16，17.59，14.19，14.05。
HRMS[C27H35N6O4S+]计算值：539.2435；观测值：539.2438。
Figure BDA0003980908660004741
(S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(甲硫基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸苄酯(10)
步骤4：将9(1.36g，1.0eq)、TFA(6.8mL)在DCM(6.8mL)中的混合物脱气并用N2吹扫3次，然后在N2气氛下将混合物在20℃下搅拌1小时。完成后，用饱和NaHCO3溶液淬灭反应混合物。用乙酸乙酯(3×50mL)萃取该混合物，并将有机层经Na2SO4干燥并过滤。在真空下除去溶剂从而得到呈黄色固体的(S)-2-(氰甲基)-4-(2-(甲硫基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(1.11g，粗品)，其无需进一步纯化即用于下一步骤。
步骤5：(2S)-2-(氰甲基)-4-(2-甲基硫烷基-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(1.11g，1.0eq.)、1-溴-8-氯-萘(1.8eq.)、Pd2(dba)3(0.1eq.)、RuPhos(0.2eq.)和Cs2CO3(3.6eq.)在甲苯(10mL)中的混合物脱气并用N2吹扫3次，然后在N2气氛下将混合物在100℃下搅拌12小时。完成后，过滤反应混合物。在真空下除去有机溶剂，从而得到油状残余物。将该残余物通过柱色谱法(SiO2，己烷/乙酸乙酯＝5∶1至3∶1)纯化，从而得到呈深黄色油状物的标题化合物(0.77g，两个步骤产率45％)。
HRMS[C32H32ClN6O2S+]计算值：599.1990；观测值：599.1996。
Figure BDA0003980908660004751
(2S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(甲基亚磺酰基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸苄酯(11)
步骤6：将10(734mg，1.0eq)、m-CPBA(0.6eq.)在DCM(8mL)中的混合物在0℃下搅拌30分钟。然后，加入另一批m-CPBA(0.6eq.)，并将混合物在0℃下再搅拌30分钟。完成后，用水(10mL)淬灭反应物。用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合物。将合并的有机层用Na2SO4干燥并过滤。除去溶剂从而得到油状残余物。将该残余物通过柱色谱法(SiO2，甲醇/乙酸乙酯＝0∶1至1∶10)纯化从而得到呈黄色固体的标题化合物(350mg，46％产率)。
LC-MS[ESI，M+1]＝616。
Figure BDA0003980908660004761
(S)-4-(2-(((S)-1-(3-(3-(叔丁氧基)-3-氧代丙氧基)丙基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(8-氯萘-1-基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-羧酸苄酯(12)
步骤7：向11(350mg，1.0eq.)和(S)-3-(3-(2-(羟甲基)吡咯烷-1-基)丙氧基)丙酸叔丁酯(6)(3.0eq.)在甲苯(5mL)中的溶液中加入t-BuONa(3.0eq.)。将混合物在0℃下搅拌0.5小时。完成后，将混合物加入冷水(5mL)中并用乙酸乙酯(3×5mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将所得产物通过柱色谱法(SiO2，乙酸乙酯∶甲醇＝1∶0至10∶1)纯化，从而得到呈黄色固体的标题化合物(230mg，44％产率)。
LC-MS[ESI，M+1]＝838。
Figure BDA0003980908660004762
3-(3-((S)-2-(((7-(8-氯萘-1-基)-4-((S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙烯酰基)哌嗪-1-基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯烷-1-基)丙氧基)丙酸叔丁酯(13)
步骤8：在N2下向12(230mg，1.0eq.)在MeOH(3mL)中的溶液中加入7N在MeOH(3mL)中的NH3和Pd/C(100mg，10％纯度)。将悬浮液在真空下脱气并用H2吹扫数次。在H2(15psi)下将混合物在20℃下搅拌4小时。然后，加入另一批的Pd/C(100mg，10％纯度)。在H2下将混合物搅拌过夜。完成后，滤出催化剂并将滤液在真空下浓缩，从而得到呈黄色固体的标题化合物(100mg，52％产率)，其不经进一步纯化而直接用于下一步骤。LC-MS[ESI，M+1]＝704。
步骤9：向上面的产物(141mg，1.0eq.)在DMF中的溶液中加入2-氟丙-2-烯酰氧基钠(2.0eq.)、HATU(1.5eq.)和TEA(4.0eq.)。将混合物在室温下搅拌1小时。完成后，将残余物用H2O(15mL)稀释，用EtOAc(3×15mL)萃取，经Na2SO4干燥，在真空下浓缩并通过制备型TLC(DCM∶甲醇∶氨水＝200∶10∶1)纯化。得到呈无色油状物的标题化合物(42mg，27％产率)。
LC-MS[ESI，M+1]＝776。
Figure BDA0003980908660004771
(2S，4R)-1-((S)-2-(3-(3-((S)-2-(((7-(8-氯萘-1-基)-4-((S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙烯酰基)哌嗪-1-基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯烷-1-基)丙氧基)丙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(LC-2)
步骤10：向13(21mg，1.0eq.)在DCM(1mL)中的溶液中加入TFA(1mL)。将混合物在室温下搅拌0.5小时，在真空下浓缩，并且未经进一步纯化即用于下一步骤。
向上面的产物(1.0eq.)在DMF(1mL)中的溶液中加入(1R)-1-[(2S，4R)-4-羟基-2-[[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基(1.2eq.)、HATU(1.3eq.)和TEA(5.0eq.)。将混合物在室温搅拌1小时。完成后，将混合物用H2O(5mL)稀释，用EtOAc(3×5mL)萃取，经Na2SO4干燥，在真空下浓缩并通过反相HPLC纯化。得到呈无色油状物的标题化合物(10mg，33％产率)。
1H NMR(600MHz，丙酮-d6)δ8.82(s，1H)，7.86(t，J＝7.9Hz，2H)，7.70(dd，J＝8.0，3.9Hz，1H)，7.55(dd，J＝7.3，3.6Hz，1H)，7.53-7.48(m，1H)，7.45(dd，J＝7.8，4.2Hz，2H)，7.43-7.39(m，1H)，7.39-7.33(m，3H)，7.29-7.24(m，1H)，5.33-5.20(m，2H)，4.64(dd，J＝9.3，1.6Hz，1H)，4.60-4.48(m，3H)，4.39-4.27(m，3H)，4.24-4.08(m，2H)，3.87-3.78(m，2H)，3.78-3.70(m，2H)，3.67-3.53(m，3H)，3.53-3.43(m，3H)，3.37(dd，J＝13.8，3.8Hz，1H)，3.34-3.24(m，2H)，3.25-3.12(m，4H)，3.13-2.96(m，4H)，2.81-2.75(m，1H)，2.71-2.65(m，1H)，2.48-2.39(m，4H)，2.39-2.32(m，1H)，2.26-2.18(m，1H)，2.18-2.11(m，1H)，2.11-2.06(m，1H)，1.91-1.82(m，1H)，1.79-1.61(m，6H)，0.96(s，9H)。
13C NMR(151MHz，丙酮-d6)δ172.63，171.41，171.34，170.96，167.67，166.06，163.77，157.79(d，J＝269.1Hz)，151.29，149.67，149.41，149.18，140.54，138.50，132.37，131.35，130.64，130.53，129.92，129.43，128.76，127.78，126.77，126.71，125.92(d，J＝11.3Hz)，119.93，118.28，110.17，77.33，70.71，69.85，69.83，67.74，63.39，60.60，59.97，59.75，57.59，57.46，54.95，53.23，51.27，51.21，43.20，38.44，38.43，37.41，36.50，32.70，26.98，26.86，26.41，24.05，23.39，20.89，19.43，16.41，14.56，14.41。
HRMS[C59H72ClFN11O7S+]计算值：1132.5004；观测值：1132.5010。
Figure BDA0003980908660004791
(2S，4S)-1-((S)-2-(3-(3-((S)-2-(((7-(8-氯萘-1-基)-4-((S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙烯酰基)哌嗪-1-基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯烷-1-基)丙氧基)丙酰氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(LC-2-差向异构体)
向13(21mg，1.0eq.)在DCM(1mL)中的溶液中加入TFA(1mL)。将混合物在室温下搅拌0.5小时，在真空下浓缩，并且未经进一步纯化即用于下一步骤。
向上面的产物(1.0eq.)在DMF(1mL)中的溶液中加入(1R)-1-[(2S，4S)-4-羟基-2-[[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基(1.2eq.)、HATU(1.3eq.)和TEA(5.0eq.)。将混合物在室温搅拌1小时。完成后，将混合物用H2O(5mL)稀释，用EtOAc(3×5mL)萃取，经Na2SO4干燥，在真空下浓缩并通过反相HPLC纯化。得到呈无色油状物的标题化合物(4.4mg，15％产率)。
1H NMR(400MHz，丙酮-d6)δ8.82(s，1H)，7.87(d，J＝8.5Hz，1H)，7.70(dd，J＝8.1，2.6Hz，1H)，7.59-7.53(m，1H)，7.52-7.32(m，7H)，7.24(dd，J＝9.4，3.3Hz，1H)，5.37-5.17(m，2H)，5.00-4.83(m，1H)，4.67-4.57(m，2H)，4.51(d，J＝9.6Hz，1H)，4.40-4.22(m，4H)，4.21-3.95(m，4H)，3.87-3.71(m，4H)，3.66-3.46(m，7H)，3.33-3.25(m，2H)，3.23-3.11(m，2H)，2.83-2.62(m，4H)，2.53-2.33(m，6H)，2.32-2.24(m，2H)，2.22-2.11(m，2H)，1.95(d，J＝2.8Hz，1H)，1.91(s，2H)，1.78-1.62(m，4H)，0.97(s，9H)。
HRMS[C59H72ClFN11O7S+]计算值：1132.5004；观测值：1132.4999。
Figure BDA0003980908660004801
(2S，4R)-1-((S)-2-(叔丁基)-16-((S)-2-(((7-(8-氯萘-1-基)-4-((S)-3-(氰甲基)-4-(2-氟丙烯酰基)哌嗪-1-基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯烷-1-基)-4，14-二氧代-7，10-二氧杂-3，13-二氮杂十六碳酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(LC-1)
LC-1是使用与LC-2相同的程序合成的，不同之处在于：在步骤7中使用(S)-3-(2-(羟甲基)吡咯烷-1-基)丙酸叔丁酯代替(S)-3-(3-(2-(羟甲基)吡咯烷-1-基)丙氧基)丙酸叔丁酯(6)，并且在步骤10中使用(2S，4R)-1-((S)-2-(3-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)丙酰胺基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺代替(1R)-1-[(2S，4S)-4-羟基-2-[[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基。
1H NMR(600MHz，甲醇-d4)δ8.84(s，1H)，7.80(d，J＝8.2Hz，1H)，7.65(dd，J＝8.2，3.7Hz，1H)，7.52-7.49(m，1H)，7.46(dd，J＝7.8，7.8Hz，1H)，7.43-7.40(m，2H)，7.39-7.33(m，3H)，7.32-7.27(m，1H)，5.38-5.23(m，2H)，4.63(s，1H)，4.55(t，J＝8.4Hz，1H)，4.48(d，J＝11.6Hz，2H)，4.41-4.36(m，1H)，4.35-4.24(m，4H)，4.16(d，J＝13.6Hz，1H)，4.11-4.02(m，2H)，3.87(d，J＝10.9Hz，1H)，3.77(dd，J＝11.0，3.9Hz，1H)，3.72-3.52(m，5H)，3.46(dt，J＝7.4，5.5Hz，2H)，3.38-3.27(m，9H)，3.25-3.04(m，6H)，2.91(dd，J＝17.1，6.9Hz，1H)，2.79-2.58(m，2H)，2.54-2.36(m，8H)，2.23-2.16(m，1H)，2.10-2.02(m，2H)，1.90-1.71(m，3H)，1.40-1.25(m，3H)，0.99(d，J＝1.8Hz，9H)。
13C NMR(151MHz，甲醇-d4)δ174.57，174.51，173.14，173.07(d，J＝220.9Hz)，167.96，167.80，166.82，163.67，152.99，149.85(d，J＝21.0Hz)，149.19，140.42，139.06，133.53，131.67，131.08，131.02，130.94，130.51，129.73，129.12，127.96，127.23，126.96，126.52，126.49，120.29，111.58，110.40，71.20，70.56，69.91，68.15，64.89，61.69，61.01，60.59，60.44，59.03，58.23，55.36，52.77，52.73，51.29，43.84，40.51，39.16，37.78，37.37，36.98，35.24，30.93，29.22，27.64，27.51，27.13，24.15，21.01，16.02，14.61，11.58。
HRMS[C63H79ClFN12O9S+]计算值：1233.5481；观测值：1233.5490。
蛋白质水平控制
本说明书还提供了用于控制细胞内蛋白质水平的方法。该方法基于如本文所述的化合物的使用使得靶蛋白KRas体内降解，由此将导致生物系统中靶蛋白的量减少，从而优选地提供特定的治疗益处。
以下实施例用于帮助描述本公开，但不应被视为以任何方式限制本公开。
在某些实施方案中，本说明书提供以下示例性KRas降解双官能分子(表7的化合物或示例性化合物1-172)，包括它们的盐、多晶型物、类似物、衍生物和氘代形式。
基于MRTX849的募集VHL的双官能蛋白质降解化合物接合和降解纯合和杂合突变细胞系中的内源性KRASG12C。MRTX849.MRTX向KRASG12C的“开关II”口袋中的对接揭示吡咯烷基团暴露在溶剂中(PDB：5V9U；图3A)(Janes等人，2018)。为了避免在吡咯烷的2、3或4位引入另一个立体中心并进一步使合成路线复杂化，决定从吡咯烷的N-甲基部分构建接头。使用LC-1观察到KRAS接合的第一个证据(图2A和2B)。当用不断增加的浓度的LC-1处理NCI-H2030细胞24小时时，我们观察到在1、2.5、10和25μM处有明显的条带偏移，这表明存在与异双官能化合物缀合的KRAS(图2B)。然而，仅观察到小幅不显著的KRAS水平降低。因此，这些数据表明LC-1可以与KRASG12C接合，但不能有效地使该蛋白质降解。因此，LC-1随后被用作双官能化合物筛选过程中KRAS接合的阳性对照。
LC-1在接头内具有可水解的酰胺。为了解决这个问题，使后续双官能化合物的接头直接从吡咯烷环的氮延伸。筛选了具有比LC-1短和长几个原子的接头长度的异双官能化合物的小文库，并且从该筛选中，LC-2(在本文中也称为示例性化合物90)被鉴定为强效的KRASG12C降解双官能化合物(图2A)。LC-2通过PTM或弹头共价结合KRASG12C，并募集E3连结酶VHL，从而诱导快速和持续的KRASG12C降解，导致纯合和杂合KRASG12C细胞系中MAPK信号转导受到抑制。LC-2证实了异双官能化合物介导的降解是减弱癌细胞中致癌KRAS水平和下游信号转导的可行选择。LC-2在NCI-H2030细胞中在低至2.5μM的浓度下诱导了内源性KRASG12C的最大降解，其中DMax＞75％，且DC50为0.59±0.2μM(图2C)。在10μM LC-2下，观察到与LC-1修饰的KRASG12C具有相同分子量的KRASG12C条带。这种未降解的较高分子量条带的出现表明在高LC-2浓度下开始出现“钩状效应(hook-effect)”。“钩状效应”是双官能蛋白质降解化合物的标志，由此在高药物浓度下，具有靶标或具有E3连结酶的无用(unproductive)二聚体的形成胜过降解所需的三元复合物的形成(Buckley，D.L.，等人，HaloPROTACS：Use ofSmall Molecule PROTACs to Induce Degradation of HaloTag Fusion Proteins.AcsChem Biol 2015，10(8)，1831-7)。
已知MRTX对突变KRASG12C的选择性高于对其他KRAS突变体的选择性(Hallin等人，2020)。为了探索LC-2的特异性，检查了HCT 116细胞中的KRAS降解，该细胞具有杂合KRASG13D突变。在高达10μM的LC-2存在下，未观察到KRASG13D的接合或降解(图3B)。这些数据进一步表明LC-2选择性地接合和降解突变KRASG12C蛋白。
此外，LC-2在5种不同KRASG12C细胞系中并且观察到的DC50值在0.25和0.76μM之间以及DMax值在从＞75-90％的范围内(表1)。LC-2可以使对MRTX具有不同敏感性的纯合细胞系和杂合细胞系中的突变KRAS降解(Hallin等人，2020)。在杂合的NCI-H23细胞中观察到大于50％的降解。理论上，由于这些细胞携带一种野生型和一种突变KRASG12c等位基因，因此如果表达相同，人们预计最多50％降解，正如我们在NCI-H358细胞中看到的那样(图4A)。然而，在使用KRASG12C特异性siRNA的siRNA敲除实验中，在NCI-H23细胞中观察到KRAS几乎完全丧失，这与使用LC-2观察到的降解一致(Sunaga，N.，等人，Knockdown of oncogenicKRAS in non-small cell lung cancers suppresses tumor growth and sensitizestumor cells to targeted therapy.MolCancer Ther 2011，10(2)，336-46)。累积起来，这些数据表明，基于MRTX的募集VHL的双官能化合物可以接合和降解多种癌细胞系中的KRASG12C。
表1.LC-2诱导多个KRAS突变癌细胞系中的内源性KRASG12C的降解：双官能化合物在一组KRASG12C癌细胞系中的活性
Figure BDA0003980908660004831
Figure BDA0003980908660004841
达到最大降解(Dmax)的50％时的DC50。
VHL配体的羟基脯氨酸部分赋予与E3连结酶的结合，而4-羟基脯氨酸部分的绝对立体化学的反转消除了VHL结合(Buckley等人，2012)。因此，LC-2差向异构体(图2A)是作为无法募集VHL的理化匹配的阴性对照分子被合成的。当用2.5μM LC-2差向异构体处理NCI-H2030细胞4小时时，仅观察到KRAS接合，而2.5μM LC-2则诱导显著降解(～65％；图5A)。
双官能蛋白质降解化合物靶向蛋白质以通过促进其泛素化来经由蛋白酶体进行降解，这取决于靶蛋白、双官能化合物和E3连结酶——在本例中为VHL之间三元复合物的形成(Sakamoto等人2001；Bondeson等人2015；Bondeson等人2018)。由于过量的VHL配体抑制三元复合物形成，因此在用2.5μM LC-2处理前用摩尔过量的VHL配体预处理1小时的NCI-H2030细胞中进行了竞争实验。LC-2与VHL配体的竞争通过阻止双官能化合物与VHL接合来挽救了KRASG12C水平(图5A)。然而，在LC-2处理后观察到的较高分子量KRASG12C条带证实了双官能化合物仍然能够接合KRASG12C。
CUL2(一种VHL衔接蛋白)的类泛素化修饰(Neddylation)是VHL E3连结酶复合物的正确组装和功能是所必需的(Merlet，J.等人，Regulation of cullin-RING E3ubiquitin-ligases by neddylation and dimerization.Cell Mol Life Sci 2009，66(11-12)，1924-38)。为了进一步研究LC-2诱导的KRASG12C降解是否通过真正的双官能蛋白质降解复合机制发生，用1μM类泛素化修饰抑制剂MLN4924或1μM蛋白酶体抑制剂环氧霉素(epoxomicin)处理NCI-H2030细胞，然后用2.5μM LC-2处理该细胞(Meng，L.，等人，Epoxomicin，a potent and selective proteasome inhibitor，exhibits in vivoantiinflammatory activity.Proc Natl Acad Sci U S A 1999，96(18)，10403-8；Soucy，T.A.，等人，An inhibitor of NEDD8-activating enzyme as a new approach to treatcancer.Nature 2009，458(7239)，732-U67)。这两种抑制剂都挽救了KRASG12C水平，表明LC-2对KRASG12C的降解对蛋白酶体和类泛素化修饰都有依赖性(图5A)。
KRAS栓连至质膜，并且KRASG12C的单泛素化可能会通过溶酶体途径诱导KRASG12C的内吞作用和降解(Lu，A.，等人，A clathrin-dependent pathway leads to KRassignaling on late endosomes en route to lysosomes.J Cell Biol 2009，184(6)，863-879)45。因此，我们还测试了溶酶体酸化抑制剂巴弗洛霉素A1(BafA1)是否可以挽救KRASG12C降解(Oda，K.，等人，Bafilomycin-A1 Inhibits the Targeting of LysosomalAcid-Hydrolases in Cultured-Hepatocytes.Biochem Bioph Res Co 1991，178(1)，369-377)。用BafA1预处理NCI-H23无法挽救LC-2诱导的KRASG12C降解，而类泛素化修饰抑制再次挽救KRAS降解(图5B)。综合这些数据表明，LC-2诱导的KRASG12C降解依赖于与VHL和功能性泛素蛋白酶体系统形成三元复合物，但不依赖于溶酶体。
LC-2在多种癌细胞系中诱导快速和持续的KRASG12C降解。为了探索异双官能蛋白降解化合物诱导的KRASG12C降解的动力学，使用2.5μM LC-2作为固定浓度在NCI-H2030细胞和SW1573细胞中执行了时间进程实验，因为它在24小时内在所有细胞系中诱导最大降解(图2A和图4A至图4D)。为了区分靶接合速率和降解速率，使用LC-2差向异构体作为阴性对照来监测KRASG12C接合。通过仅比较LC-2差向异构体修饰条带的强度与DMSO处理样本中未结合KRAS的强度实现接合的量化。对于NCI-H2030细胞，早在1小时的时候就观察到LC-2和LC-2差向异构体的KRASG12C结合(图6A)。最大接合和显著降解发生在4小时内。最大降解到8小时时在NCI-H2030细胞中达到并持续至多24小时。SW1573细胞表现出更快的动力学，在1小时时接近最大接合。然而，降解速率比NCI-H2030细胞慢，因为直到12小时才观察到最大降解(图6B)。
在我们的双官能蛋白质降解化合物筛选过程中，观察到0.1μM的MRTX和10μM的LC-1增加了KRAS蛋白水平(图2C)。虽然Hallin等人使用MRTX没有观察到增加的KRASG12C蛋白水平，但我们的数据与之前使用KRASG12C抑制剂ARS1620得到的观察结果一致(Janes等人2018；Hallin等人2020)。因此，检查了用LC-2进行更长时间的处理对KRASG12C水平的影响。用2.5μM LC-2处理MIA PaCa-2、NCI-H23和SW1573细胞6、24、48和72小时。在所有三种细胞系中，最大的KRAS降解都发生在24小时内，并持续至多72小时(图7A、图7B和图8)。LC-2差向异构体在SW1573细胞中完全接合KRASG12C，但没有像预期的那样降低蛋白质水平(图8)。在NCI-H23细胞中，KRASG12C在72小时时开始反弹。综合这些数据表明，LC-2能够在纯合和杂合细胞系中快速和持续地降解KRASG12C。克服增加的KRASG12C表达的能力表明，对于延长的下游信号转导减弱，降解可能比抑制更有益，正如之前用BRD4降解剂所观察到的(Lu，J.，等人，Hijacking the E3 Ubiquitin Ligase Cereblon to Efficiently Target BRD4.ChemBiol 2015，22(6)，755-63)。
LC-2诱导的KRASG12C降解调节纯合和杂合KRAS突变细胞系中的Erk信号转导。在24小时剂量反应期间在NCI-H2030和NCI-H23细胞中研究了LC-2调节Erk信号转导的能力。在NCI-H2030细胞中，检测到pErk并观察到信号转导的剂量依赖性降低(图9A)。此外，总Erk水平以剂量依赖性方式升高。NCI-H23细胞显示出类似的剂量依赖性pErk降低(图9B)。此外，总Erk水平以剂量依赖性方式升高。
在用2.5μM LC-2处理的MIA PaCa2、NCI-H23和SW1573细胞中，在24小时的时间过程期间监测了信号转导动力学。MRTX和LC-2对Erk信号转导的调节在MIA PaCa-2和NCI-H23细胞中都发生在6小时内(图10A、图10B和图11)。在每个细胞系中，这两种化合物在6小时和24小时时都抑制了pErk。在SW1573细胞中，2.5μM LC-2在1小时至4小时之间抑制了磷酸化的Erk，但是pErk水平在8至24小时之间反弹(图11)。尽管如此，在24小时时LC-2处理的细胞中pErk水平仍然显著低于DMSO处理的细胞。与DMSO处理的细胞相比，LC-2处理的细胞中总Erk在所有时间点时均增加，表明在KRASG12C降解和pErk抑制后正反馈回路启动。总之，这些数据表明LC-2诱导的KRASG12C降解能够调节下游信号转导，并且抑制和降解之间的信号转导差异是细胞系依赖性的。
图12呈现了示例性化合物LC-1、LC-2、LC-3(在本文中也称为示例性化合物91)、LC-4(在本文中也称为示例性化合物92)、LC-5(在本文中也称为示例性化合物93)和LC-6(在本文中也称为示例性化合物94)中每一者的接头长度(从与吡咯烷的氮相邻的碳到与VHL羰基相邻的碳)和活性。较短的接头长度诱导较高水平的降解。a来自NCI-H2030细胞的数据。b来自SW1573细胞的数据。
表2.图9A的双因素ANOVA分析。不显著(N.S.)；*p＜0.05；p＜0.001。
LC-2对Erk信号转导的影响
NCI-H2030
Figure BDA0003980908660004871
表3.图9B的双因素ANOVA分析。不显著(N.S.)；*p＜0.05；**p＜0.01。
LC-2对Erk信号转导的影响
NCI-H23
Figure BDA0003980908660004881
表4.图10A的双因素ANOVA分析。不显著(N.S.)；*p＜0.05；**p＜0.01；****p＜0.001。
在6小时和24小时时LC-2对Erk信号转导的影响
MIA PaCa-2
Figure BDA0003980908660004882
表5.图10B的双因素ANOVA分析。不显著(N.S.)；*p＜0.05；**p＜0.01；****p＜0.001。
在6小时和24小时时LC-2对KRAS信号转导的影响
NCI-H23
Figure BDA0003980908660004883
Figure BDA0003980908660004891
LC-2将共价KRASG12C抑制剂MRTX与VHL配体偶联。VHL向KRASG12C的募集诱导内源性KRAS泛素化和降解，DC50值范围为0.25至0.76μM。在几种KRASG12C突变细胞系中观察到快速接合、持续的KRAS降解和减弱的pErk信号转导至多72小时。该化合物将有助于进一步探索KRAS降解如何影响下游信号转导和KRASG12C突变癌细胞的活力，与基于核酸的敲除方法相比具有更精确的时间控制。
进一步的研究将集中于了解KRASG12C配体、募集的E3连结酶或这两个因素的组合在赋予LC-2活性方面的重要性。通过SPR进行三元复合物测定和/或通过使用串联泛素结合实体(TUBE)下拉(pulldowns)并接着进行免疫印迹来监测这些化合物诱导泛素化的能力可以解决这些问题(Hjerpe，R.，等人，Efficient protection and isolation ofubiquitylated proteins using tandem ubiquitin-binding entities.Embo Rep 2009，10(11)，1250-1258)。
确定单独的降解是否可以克服Erk信号转导再激活和/或KRAS降解与RTK抑制的组合是否可以进一步增强抗增殖作用将是很有意义的。除了敏感细胞的重新接线(re-wiring)外，还有对KRASG12C抑制的抗增殖作用具有固有抗性的已知细胞系，诸如SW1573(用于本工作)和NCI-H1792。最近，研究表明siRNA介导这些细胞中的敲除，而不是KRASG12C抑制，导致细胞活力降低～50％(Misale等人2019)。因此，确定LC-2对KRASG12C诱导的KRASG12C降解在这些细胞系中是否也具有类似的抗增殖作用将是很有意义的。
材料和方法：
细胞系和试剂：
NCI-H2030(CRL-5914)、MIA PaCa-2(CRL-1420)、NCI-H23(CRL-5800)、NCI-H358(CRL-5807)和HCT-116(CCL-247)细胞是从ATCC获得，立即扩增并冷冻。将小瓶解冻并在20次传代内使用。SW1573细胞是来自Arvinas的赠品，并按相同方式处理。NCI-H2030、NCI-H23和NCI-H358在补充有10％FBS(Biological Industries；目录号S1480)和1％青霉素-链霉素(ThermoFisher；目录号15140122)的RPMI(ATCC 30-2001)中培养。将HCT-116细胞维持在如上那样补充的高葡萄糖DMEM(ThermoFisher；目录号11965084)中。将MIA PaCa-2细胞在补充有10％FBS、2.5％马血清(ThermoFisher；目录号26050-088；批次2109875)和1％青霉素-链霉素的高葡萄糖DMEM中培养。将SW1573细胞维持在含有GlutaMAX补充剂(ThermoFisher；目录号10565018)的DMEM/F12营养混合物中，该补充剂添加有10％FBS和1％青霉素-链霉素。DPBS(ThermoFisher；目录号14190250)被用于洗涤细胞，并且0.25％胰蛋白酶-EDTA(ThermoFisher；目录号252000-056)被用于解离细胞以进行传代。MRTX849购自ChemieTek(目录号CT-MRTX849)，环氧霉素购自Astatech(目录号41576)，MLN4924(pevonedistat)购自Selleckchem(目录号S7109)，巴弗洛霉素A1购自Millipore Sigma(目录号B1793)。VHL配体由Arvinas慷慨提供。
时间过程测定：
将介于2.5×105至6.0×105个之间的细胞接种到6孔板(Corning；目录号353046)中。第二天，除去培养基并用2.5μM LC-2处理细胞1、2、4、8、12或24小时。用100nM MRTX849和2.5μM LC-2处理细胞6、24、48或72小时，以进行更长时间过程的实验。对于24小时时间过程实验，在指示的时间处理细胞并同时在如前所述的那样补充的RIPA缓冲液中裂解该细胞。对于更长的时间过程实验和其中用LC-2或LC-2差向异构体处理细胞的时间过程，同时用任何一种化合物处理细胞，然后在指示的时间点通过在RIPA缓冲液中搔刮来裂解该细胞。
竞争、蛋白酶体抑制和类泛素化修饰抑制实验
将介于2.5×105至5.0×105个之间的细胞接种到6孔板中。第二天，用DMSO、500μM或1mM VHL配体、1μM环氧霉素、1μM MLN4924或100nM M巴弗洛霉素A1预处理细胞1小时。然后除去培养基，并且将细胞用DMSO、2.5μM LC-2加DMSO、2.5μM LC-2差向异构体加DMSO处理，或用2.5μM LC-2和相应的竞争剂/抑制剂共同处理。将H2030细胞处理4小时，并将H23细胞处理24小时，然后通过在如前所述的那样补充的RIPA缓冲液中搔刮来裂解该细胞。
免疫印迹：
将细胞裂解物在4℃下以21000×g澄清15分钟。通过使用双金鸡宁酸(bicinchoninic acid)溶液(Millipore Sigma；目录号B9643)和4％(w/v)硫酸铜(II)溶液(Millipore Sigma；目录号C2284)的50∶1混合物在37℃下温育30分钟来对蛋白质水平进行量化。在EnVision 2101Multilabel Reader(PerkinElmer)上读取560nm处的吸光度值。使用26孔Criterion TGX预制4-15％(目录号5671085)或8-16％(目录号5671105)梯度中型凝胶分离蛋白质。分离后，在4℃下以76V将蛋白质转移到硝酸纤维素膜或PVDF膜上并保持2小时。然后在含有5％牛奶的含吐温20的tris缓冲盐水(TBST；20mM Tris，150mM NaCl，0.02％吐温20)中封闭印迹。封闭后，将印迹在一抗中以4℃温育过夜(12-18小时)或者以生产商指示的稀释度在含有5％牛奶或5％BSA的TBST中在轻度搅动下室温温育2小时。然后在室温下用TBST洗涤印迹三次，持续5分钟。洗涤后，将印迹与稀释于5％牛奶中的1∶5,000-1∶10,000的驴抗兔(GE Life Sciences；NA934)或绵羊抗小鼠(GE Life Sciences；NA931)二抗一起在轻度搅动下室温温育1小时。将印迹再次用TBST洗涤三次，持续5分钟。使用Amersham ECLPrime蛋白质印迹检测试剂(GE Life Sciences；目录号RPN2232)或SuperSignal WestFemto最大灵敏度底物(ThermoFisher；目录号34095)产生化学发光信号。使用Bio-RadChemiDoc Imager获得图像。利用使用Alexa488滤光片的Bio-Rad ChemiDoc Imager收集荧光α-微管蛋白图像。该工作中使用的一抗包括：KRAS(LSBio；克隆2Cl；目录号LS-C175665)、p-p42/44MAPK(磷酸T202/Y204)(pErk；Cell Signaling Technologies(CST)；目录号4370S或9106S)、p42/44MAPK(Erk1/2；CST；目录号4695S)、α-微管蛋白(CST；2144S)和含AlexaFluor488的α-微管蛋白(Millipore；目录号16-232)。
量化和统计分析：
使用BioRad的Image Lab软件对条带强度进行量化。通过使用跨越两个条带的分析框量化缀合的KRASG12C和未结合的KRAS(野生型或突变体)的水平来检查总KRAS水平。除了图6A和图6B中的LC-2差向异构体外，使用这种相同大小的框来量化DMSO处理样本中未结合的KRAS以解释背景。为了量化LC-2差向异构体的接合，仅量化顶部双官能化合物结合的条带，并且将条带强度针对使用类似大小的分析框的DMSO处理样本中未结合的KRAS作归一化。通过使用多重比较计算单因素ANOVA分析或双因素ANOVA分析(针对分组的数据)来分析数据，其中使用GraphPad Prism 7将DMSO的平均值与所有处理平均值进行比较。对于时间过程，针对每个时间点将蛋白质水平与DMSO进行比较。DC50和DMax是通过使用GraphPadPrism 7将数据拟合到抑制剂与剂量反应非线性回归来量化的。
化学合成：
一般考虑因素。用于合成的化学品购自商业来源，并且无需进一步纯化即可使用。快速色谱法是使用快速色谱系统进行的，该系统使用预装柱。1H NMR和13C NMR光谱是在Agilent DD2600NMR光谱仪上记录的(1H光谱为600MHz，13C光谱为151MHz)。化学位移(δ)的值以p.p.m.报告。耦合常数(J)以Hz报告。高分辨率质谱(HRMS)是在使用Waters AcquityUPLC的利用ESI的Waters Xevo QTOF LCMS上记录的。HPLC纯化是使用Gilson HPLC系统在反相柱上进行的。
用于测试由表8A和表8B的化合物(包括设计用于靶向KRas试剂的示例性异双官能 化合物)驱动的KRas降解的测定
试剂。SW1573(CRL-2170)和MiaPaCa-2(CRL-1420)细胞购自ATCC。这两种细胞系对KRAS中的G12C突变而言都是纯合的。将SW1573细胞在补充有10％FBS(ThermofisherScientific，#2060357)和1％抗生素-抗真菌剂(Thermofisher Scientific，#15240096)的DMEM+F12+谷氨酰胺(+碳酸氢钠，+丙酮酸钠，Thermofisher Scientific，#10565)中培养。将MiaPaCa-2细胞在补充有10％FBS(Thermofisher Scientific，#2060357)和1％抗生素-抗真菌剂(Thermofisher Scientific，#15240096)的DMEM+谷氨酰胺(ThermofisherScientific，#10566)中培养。对于降解测定，384孔板购自Corning(
Figure BDA0003980908660004941
384孔平底透明黑色聚苯乙烯微孔板，低法兰(Low Flange)，#3770)。藤黄酸购自Selleckchem(#S2448)。阿尔玛蓝(Alamar blue)购自ThermofisherScientific(A50101)，并根据制造商说明使用。
Figure BDA0003980908660004942
HiBit Lytic检测系统和
Figure BDA0003980908660004943
HiBit Blotting系统购自Promega(#N3050和#N2410)并根据制造商说明使用。
HiBit标记的细胞系制取。为了创建SW1573 HiBit-KRASG12C细胞系，将编码来自Promega的11个氨基酸HiBit标签的核苷酸序列(Schwinn，M.K.等人(2018年)CRISPR-mediated tagging of endogenous proteins with a luminescent peptide.ACSChem.Biol.13(2)，467-474)附连到KRASG12C编码序列的N末端。在胸苷激酶(TK)启动子的控制下这种合成的DNA被克隆到经修饰的pcDNA3.1载体中。将这种HiBit-KRASG12C表达质粒转染到亲本SW1573细胞中，并使用400μg/mL博来霉素(Zeocin)选择集落。使用
Figure BDA0003980908660004944
HiBit Blotting系统针对HiBit-KRASG12C蛋白的表达筛选所得克隆系。在几个克隆中检测到HiBit-KRASG12C的正确大小的发光条带。选择克隆E6用于进一步研究。
为了创建MiaPaCa-2HiBit-KRASG12C细胞系，使用CRISPR-Cas9将HiBit标签插入到四个内源性KRASG12C等位基因中的一个或多个内源性KRASG12C等位基因的N末端上。敲入该标签后，通过单细胞稀释分离各个克隆，并通过PCR针对HiBit插入筛选该克隆。对含有HiBit标签的克隆进行测序，并鉴定出在一个等位基因处含有所需HiBit-KRASG12C序列，而其余三个KRASG12C等位基因不受影响的一个克隆。将这种系用于所有后续研究。
降解测定。将SW1573 HiBit-KRasG12C或MiaPaCa-2 HiBit-KRasG12C细胞均以9000个细胞/孔平板接种于384孔板(Corning#3770)中。将示例性异双官能分子和阳性对照稀释于适当的细胞培养基中并施加到平板接种的细胞，从而导致在0.1％或0.5％二甲基亚砜(DMSO)中的最终浓度滴定值为10μM至20nM。用藤黄酸作为细胞毒性的阳性对照，并从10μM滴定到78nM。所有测定均按一式三份进行。在含有5％CO2的温育箱中，在37℃下用化合物处理细胞24小时。处理后，使用阿尔玛蓝来确定任何化合物是否会在24小时后导致细胞活力丧失。按照制造商的建议，加入10X阿尔玛蓝试剂至终浓度1X，并将细胞放回温育箱中并保持4小时。然后使板平衡至室温，并使用Perkin-Elmer EnVision测量荧光。完成荧光读取后，移除每个孔的液体，并用PBS洗涤细胞。根据制造商的说明制备
Figure BDA0003980908660004951
HiBiT检测试剂，并且将其在移除PBS洗涤液后加入到每个孔中。在室温下温育45分钟后，在Envision仪器上使用超灵敏发光孔径读取发光值。
数据分析。将来自阿尔玛蓝处理的荧光值对针对每个化合物滴定值的仅DMSO对照作归一化。我们假设导致不依赖KRAS的SW1573HiBit-KRasG12C细胞的细胞活力丧失≥50％的化合物可能通常具有细胞毒性，并且来自这些化合物的HiBit-KRASG12C信号的丧失可能是由于较低的细胞数目而不是特定的KRASG12C降解。因此，这些点被排除在降解数据分析之外。将HiBit发光值对仅DMSO对照作归一化，并将部分HiBit信号(fractional HiBitsignal)与示例性化合物浓度的对数作图，并拟合至4参数剂量反应模型以获得导致半数最大降解(DC50)以及观察到的最大降解(Dmax，通常表示为占对照的百分比)的示例性化合物的浓度，表7的示例性化合物的这些值列在以下表8A和表8B中。
Figure BDA0003980908660004971
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Figure BDA0003980908660004991
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Figure BDA0003980908660005761
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Figure BDA0003980908660005811
Figure BDA0003980908660005821
Figure BDA0003980908660005831
表8A.本公开的示例性双官能化合物的降解和表征
Figure BDA0003980908660005841
Figure BDA0003980908660005851
Figure BDA0003980908660005861
Figure BDA0003980908660005871
Figure BDA0003980908660005881
Figure BDA0003980908660005891
*DC50(nM)C≥1000；100≤B＜1000；A＜100
**DMax(％)：C≤35；35＜B＜70；A≥70
***IC50(nM)C≥1000；100≤B＜1000；A＜100
表8B.本公开的示例性双官能化合物的降解和表征
Figure BDA0003980908660005892
Figure BDA0003980908660005901
Figure BDA0003980908660005911
Figure BDA0003980908660005921
Figure BDA0003980908660005931
*DC50(nM)C≥1000；100≤B＜1000；A＜100
**DMax(％)：C≤35；35＜B＜70；A≥70
***IC50(nM)C≥1000；100≤B＜1000；A＜100
表9A.本公开的示例性化合物
Figure BDA0003980908660005932
Figure BDA0003980908660005941
Figure BDA0003980908660005951
Figure BDA0003980908660005961
Figure BDA0003980908660005971
Figure BDA0003980908660005981
Figure BDA0003980908660005991
Figure BDA0003980908660006001
Figure BDA0003980908660006011
Figure BDA0003980908660006021
Figure BDA0003980908660006031
Figure BDA0003980908660006041
Figure BDA0003980908660006051
Figure BDA0003980908660006061
Figure BDA0003980908660006071
Figure BDA0003980908660006081
Figure BDA0003980908660006091
Figure BDA0003980908660006101
Figure BDA0003980908660006111
Figure BDA0003980908660006121
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Figure BDA0003980908660006181
Figure BDA0003980908660006191
Figure BDA0003980908660006201
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Figure BDA0003980908660006251
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Figure BDA0003980908660006271
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Figure BDA0003980908660006291
Figure BDA0003980908660006301
Figure BDA0003980908660006311
示例性实施方案
在本文所述的任何方面或实施方案中，所述异双官能化合物具有下面的化学结构：
PTM-L-VLM，
或其药学上可接受的盐或溶剂化物，
其中：
(a)所述PTM是与KRasG12C结合的小分子Kirsten ras肉瘤蛋白(KRas)靶向部分，并且由以下化学结构表示：
Figure BDA0003980908660006321
其中：
Figure BDA0003980908660006322
是6元芳基、6元杂芳基或6元杂环烷基，每一者均任选地被1个或2个卤素(例如，Cl、F或Br)取代；
RPTM2是-C(＝O)C2-C4烯基，其任选地被甲基或卤素(例如，Cl、F、Br)取代；
RPTM3A是H、苯基或萘，每一者均任选地被1、2或3个独立地选自OH、卤素(例如，F、Cl、Br)或直链或具支链的C1-C3烷基(例如，甲基或乙基)的基团取代；
RPTM3B是H、卤素(例如，Cl、F、Br)或-ORPTM3C，其中RPTM3C是吲唑(例如，
Figure BDA0003980908660006331
)，其中RPTM3B任选地被1、2或3个独立地选自OH、卤素(例如，F、Cl、Br)或直链或具支链的C1-C3烷基(例如，甲基或乙基)的基团取代；
PTM-I或PTM＝III的RPTM4A是不存在(或是H)或1个或2个独立地选择的卤素(例如，Cl、F、Br)；
PTM-II和PTM-IV的RPTM4A是不存在(或是H)或卤素(例如，Cl、F、Br)；
RPTM4B是(1)不存在(或是H)，(2)-CH2-CH2-CN或-CH2-CN，或(3)1个或2个独立地选择的C1-C3烷基(例如，甲基或乙基)；和
每个XPTM均单独地为CH或N；
(b)所述VLM是结合Von Hippel-Lindau(VHL)E3泛素连结酶的小分子E3泛素连结酶结合部分，并且由以下化学结构表示：
Figure BDA0003980908660006332
Figure BDA0003980908660006341
其中：
R14是H或直链或具支链的C1-C3烷基(例如，甲基)；
R15是具有一个或两个选自N、S和O的杂原子，任选地被甲基取代的5元杂芳基；
R16是卤代基、任选取代的C1-C3烷基、任选取代的C1-C3卤代烷基、羟基、任选取代的C1-C3烷氧基或任选取代的C1-C3卤代烷氧基；并且
o是从0至2的整数(例如，0、1或2)；并且
(c)L是将VLM共价偶联到PTM的化学连接部分。
在本文所述的任何方面或实施方案中，所述化合物由以下化学结构表示：
Figure BDA0003980908660006342
Figure BDA0003980908660006351
在本文所述的任何方面或实施方案中，所述PTM由以下化学结构表示：
Figure BDA0003980908660006361
其中：
RPTM4B是(1)H或不存在，(2)-CH2-CH2-CN或-CH2-CN，或(3)1个或2个独立地选择的C1-C3烷基(例如，甲基或乙基)；
RPTM4D是氢、C1-C3烷基(例如，甲基)或卤素(例如，F、Cl、Br)；
RPTM4C是H或卤素(例如，Cl、F、Br)；
RPTM4E是H或OH；并且
RPTM3B是任选地被1个或2个独立地选自OH和卤素(例如，F、Cl、Br)的基团取代的-O-吲唑。
在本文所述的任何方面或实施方案中，PTM具有以下化学结构：
Figure BDA0003980908660006371
其中：
RPTM3A是：
Figure BDA0003980908660006372
并且
RPTM4C是H或F。
在本文所述的任何方面或实施方案中，存在以下情况中的一者：
(a)所述PTM选自：
Figure BDA0003980908660006373
Figure BDA0003980908660006381
或
(b)所述PTM选自：
Figure BDA0003980908660006382
在本文所述的任何方面或实施方案中，所述PTM由以下化学结构表示：
Figure BDA0003980908660006391
Figure BDA0003980908660006401
在本文所述的任何方面或实施方案中，所述VLM具有由以下表示的化学结构：
Figure BDA0003980908660006411
Figure BDA0003980908660006421
在本文所述的任何方面或实施方案中，接头(L)包含以下化学结构：
Figure BDA0003980908660006422
YL2是键或未取代的或取代的直链或具支链的C1-C4烷基(例如，任选地被卤素、C1-3烷基、甲基或乙基取代)；
WL3是具有0-4个杂原子的3-7元环(例如4-6元环烷基或杂环烷基)，其任选地被卤代基或甲基取代；
YL3是键或C1-C32烷基(C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10、C11、C12、C13、C14、C15、C16、C17、C18、C19、C20、C21、C22、C23、C24、C25、C26、C27、C28、C29、C30、C31或C32烷基)，其中一个或多个C原子任选地被O替代，并且每个碳任选地被卤素、甲基或乙基取代；
YL4是键、O或未取代的或取代的直链或具支链C1-C6烷基，其中一个或多个碳任选地被O、NH或NCH3替代，并任选地被卤代基或甲基取代；
WL4是3-8元环(例如，4-6元环烷基或杂环烷基)或5-8元螺环，每一者均具有0-4个杂原子并且任选地被卤代基(例如，F、Cl、Br)或甲基取代；并且
YL5是键或未取代的或取代的C1-C6烷基，其中一个或多个C原子任选地被O替代并任选地被卤代基(例如，F、Cl、Br)或甲基取代。
在本文所述的任何方面或实施方案中，接头具有由以下表示的化学结构：
Figure BDA0003980908660006431
Figure BDA0003980908660006441
Figure BDA0003980908660006451
Figure BDA0003980908660006461
在本文所述的任何方面或实施方案中，接头(L)由以下表示：
Figure BDA0003980908660006462
Figure BDA0003980908660006471
Figure BDA0003980908660006481
Figure BDA0003980908660006491
在本文所述的任何方面或实施方案中，存在以下中的至少一者：PTM是选自表7中的化合物1-90的PTM；ULM是选自表7中的化合物1-90的ULM；L是选自表7中的化合物1-90的L。
在本文所述的任何方面或实施方案中，所述化合物选自由表7中的化合物1-90组成的组。
在本文所述的任何方面或实施方案中，所述组合物包含有效量的如本文所述的双官能化合物，以及药学上可接受的载体。
在本文所述的任何方面或实施方案中，所述组合物还包含如本文所述的另外的生物活性剂或第二双官能化合物中的至少一者。
在本文所述的任何方面或实施方案中，所述另外的生物活性剂是抗炎剂、化疗剂或免疫调节剂。
在本文所述的任何方面或实施方案中，所述组合物包含药学上可接受的载体和有效量的至少一种如本文所述的用于治疗受试者中与KRas有因果关系的疾病、病症或症状的化合物，其中所述组合物可有效地治疗或改善所述疾病、病症或所述疾病或病症的至少一种症状。
在本文所述的任何方面或实施方案中，所述疾病或病症是胰腺癌、结肠癌、结直肠癌、肺癌、非小细胞肺癌、胆道恶性肿瘤、子宫内膜癌、宫颈癌、膀胱癌、肝癌、髓系白血病和乳腺癌。
在本文所述的任何方面或实施方案中，治疗或预防与KRas相关的疾病、病症或症状的方法包括提供有需要的患者，以及向所述患者施用有效量的如本文所述的化合物或包含所述化合物的组合物，其中所述化合物或组合物可有效地治疗或改善所述疾病、病症或所述疾病或病症的至少一种症状。
在本文所述的任何方面或实施方案中，所述异双官能化合物具有下面的化学结构：
PTM-L-VLM，
或其药学上可接受的盐或溶剂化物，
其中：
(a)所述PTM是与KRasG12C结合的小分子Kirsten ras肉瘤蛋白(KRas)靶向部分，并且由以下化学结构表示：
Figure BDA0003980908660006501
其中：
Figure BDA0003980908660006511
是6元芳基、6元杂芳基或6元杂环烷基，每一者均任选地被1个或2个卤素(例如，Cl、F或Br)取代；
RPTM2是-C(＝O)C2-C4烯基，其任选地被甲基或卤素(例如，Cl、F、Br)取代；
RPTM3A是H、苯基或萘，每一者均任选地被1、2或3个独立地选自OH、卤素(例如，F、Cl、Br)或直链或具支链的C1-C3烷基(例如，甲基或乙基)的基团取代；
RPTM3B是H、卤素(例如，Cl、F、Br)或-ORPTM3C，其中RPTM3C是吲唑(例如，
Figure BDA0003980908660006512
)，其中RPTM3B任选地被1、2或3个独立地选自OH、卤素(例如，F、Cl、Br)或直链或具支链的C1-C3烷基(例如，甲基或乙基)的基团取代；
PTM-I或PTM＝III的RPTM4A是不存在(或是H)或1个或2个独立地选择的卤素(例如，Cl、F、Br)；
PTM-II和PTM-IV的RPTM4A是不存在(或是H)或卤素(例如，Cl、F、Br)；
RPTM4B是(1)不存在(或是H)，(2)-CH2-CH2-CN或-CH2-CN，或(3)1个或2个独立地选择的C1-C3烷基(例如，甲基或乙基)；和
每个XPTM均单独地为CH或N；
(b)所述VLM是结合Von Hippel-Lindau(VHL)E3泛素连结酶的小分子E3泛素连结酶结合部分，并且由以下化学结构表示：
Figure BDA0003980908660006521
其中：
R14是H或直链或具支链的C1-C3烷基(例如，甲基)；
R15是具有一个或两个选自N、S和O的杂原子，任选地被甲基取代的5元杂芳基；
R16是卤代基、任选取代的C1-C3烷基、任选取代的C1-C3卤代烷基、羟基、任选取代的C1-C3烷氧基或任选取代的C1-C3卤代烷氧基；并且
o是从0至2的整数(例如，0、1或2)；并且
(c)L是将VLM共价偶联到PTM的化学连接部分。
在本文所述的任何方面或实施方案中，所述化合物由以下化学结构表示：
Figure BDA0003980908660006531
Figure BDA0003980908660006541
在本文所述的任何方面或实施方案中，所述PTM由以下化学结构表示：
Figure BDA0003980908660006542
其中：
RPTM4B是(1)H或不存在，(2)-CH2-CH2-CN或-CH2-CN，或(3)1个或2个独立地选择的C1-C3烷基(例如，甲基或乙基)；
RPTM4D是氢、C1-C3烷基(例如，甲基)或卤素(例如，F、Cl、Br)；
RPTM4C是H或卤素(例如，Cl、F、Br)；
RPTM4E是H或OH；并且
RPTM3B是任选地被1个或2个独立地选自OH和卤素(例如，F、Cl、Br)的基团取代的-O-吲唑。
在本文所述的任何方面或实施方案中，PTM具有以下化学结构：
Figure BDA0003980908660006551
其中：
RPTM3A是：
Figure BDA0003980908660006552
并且
RPTM4C是H或F。
在本文所述的任何方面或实施方案中，存在以下情况中的一者：
(a)所述PTM选自：
Figure BDA0003980908660006553
Figure BDA0003980908660006561
Figure BDA0003980908660006562
或
(b)所述PTM选自：
Figure BDA0003980908660006563
Figure BDA0003980908660006571
在本文所述的任何方面或实施方案中，所述PTM由以下化学结构表示：
Figure BDA0003980908660006572
Figure BDA0003980908660006581
Figure BDA0003980908660006591
在本文所述的任何方面或实施方案中，所述VLM具有由以下表示的化学结构：
Figure BDA0003980908660006592
Figure BDA0003980908660006601
在本文所述的任何方面或实施方案中，接头(L)包含以下化学结构：
Figure BDA0003980908660006602
其中：
YL2是键或未取代的或取代的直链或具支链的C1-C4烷基(例如，任选地被卤素、C1-3烷基、甲基或乙基取代)；
WL3是具有0-4个杂原子的3-7元环(例如4-6元环烷基或杂环烷基)，其任选地被卤代基或甲基取代；
YL3是键或C1-C32烷基(C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10、C11、C12、C13、C14、C15、C16、C17、C18、C19、C20、C21、C22、C23、C24、C25、C26、C27、C28、C29、C30、C31或C32烷基)，其中一个或多个C原子任选地被O替代，并且每个碳任选地被卤素、＝O、甲基或乙基取代；
YL4是键、O或未取代的或取代的直链或具支链C1-C6烷基，其中一个或多个碳任选地被O、NH或NCH3替代，并任选地被卤代基或甲基取代；
WL4是3-8元环(例如，4-6元环烷基或杂环烷基)或5-8元螺环，每一者均具有0-4个杂原子并且任选地被卤代基(例如，F、Cl、Br)或甲基取代；并且
YL5是键或未取代的或取代的C1-C6烷基，其中一个或多个C原子任选地被O替代并任选地被卤代基(例如，F、Cl、Br)或甲基取代。
在本文所述的任何方面或实施方案中，接头具有由以下表示的化学结构：
Figure BDA0003980908660006611
Figure BDA0003980908660006621
Figure BDA0003980908660006631
Figure BDA0003980908660006641
在本文所述的任何方面或实施方案中，接头(L)由以下表示：
Figure BDA0003980908660006642
Figure BDA0003980908660006651
Figure BDA0003980908660006661
Figure BDA0003980908660006671
Figure BDA0003980908660006681
在本文所述的任何方面或实施方案中，存在以下中的至少一者：PTM是选自表7中的化合物1-94的PTM；ULM是选自表7中的化合物1-94的ULM；并且L是选自表7中的化合物1-94的L。
在本文所述的任何方面或实施方案中，所述化合物选自由表7中的化合物1-94组成的组。
在本文所述的任何方面或实施方案中，所述组合物包含有效量的本公开的双官能化合物，以及药学上可接受的载体。
在本文所述的任何方面或实施方案中，所述组合物还包含本公开的另外的生物活性剂或第二双官能化合物中的至少一者。
在本文所述的任何方面或实施方案中，所述另外的生物活性剂是抗炎剂、化疗剂或免疫调节剂。
在本文所述的任何方面或实施方案中，所述组合物包含药学上可接受的载体和有效量的至少一种本公开的用于治疗受试者中与KRas有因果关系的疾病、病症或症状的化合物，其中所述组合物可有效地治疗或改善所述疾病、病症或所述疾病或病症的至少一种症状。
在本文所述的任何方面或实施方案中，所述疾病或病症是胰腺癌、结肠癌、结直肠癌、肺癌、非小细胞肺癌、胆道恶性肿瘤、子宫内膜癌、宫颈癌、膀胱癌、肝癌、髓系白血病和乳腺癌。
在本文所述的任何方面或实施方案中，治疗或预防与KRas相关的疾病、病症或症状的方法包括提供有需要的患者，以及向所述患者施用有效量的如本文所述的化合物或包含所述化合物的组合物，其中所述化合物或组合物可有效地治疗或改善所述疾病、病症或所述疾病或病症的至少一种症状。
描述了新型双官能分子，其含有KRas募集部分和E3泛素连结酶募集部分。本公开的双官能分子主动降解KRas，导致稳健的细胞增殖抑制和细胞凋亡诱导。由本公开的双官能化合物介导的蛋白质降解提供了通过传统方法靶向“不可用药的”病理蛋白质的有前景的策略。
前述一般实用性领域仅作为实例给出，并不旨在限制本公开和所附权利要求的范围。根据本发明的权利要求、说明书和实施例，本领域普通技术人员将理解与本公开的组合物、方法和工艺相关的另外的目的和优点。例如，本公开的各个方面和实施方案可以以多种组合使用，本说明书明确考虑了所有这些组合。这些另外的方面和实施方案明确地包括在本公开的范围内。本文使用的阐明本公开的背景以及在特定情况下提供关于实践的另外的细节的出版物和其他材料以引用的方式并入。
因此，本领域技术人员将认识到，或者能够仅仅使用常规实验来确定本文所描述的公开的具体实施方案的很多等效方案。所述等效物意图被所附权利要求涵盖。应当理解，本文描述的详细实施例和实施方案仅出于说明性目的以实例的方式给出，决不被认为是对本公开的限制。本领域技术人员将能想到根据本发明的各种修改或变化，这些修改或变化均包括在本申请的精神和权限内并且被视为在所附权利要求的范围内。例如，可以改变成分的相对量以优化所需效果，可以加入另外的成分，以及/或者可以用类似的成分替代一种或多种所述的成分。与本公开的系统、方法和工艺相关联的另外的有利特征和功能从所附权利要求将是显而易见的。此外，本领域技术人员将能认识到，或者能够仅仅使用常规实验来确定本文所描述的公开的具体实施方案的很多等效方案。所述等效物意图被所附权利要求涵盖。

Claims (27)

1.一种具有以下化学结构的异双官能化合物：
PTM―L―VLM，
或其药学上可接受的盐或溶剂化物，
其中：
(a)PTM是与KRasG12C结合的小分子Kirsten ras肉瘤蛋白(KRas)靶向部分，并且由以下化学结构表示：
Figure FDA0003980908650000011
其中：
所述PTM的
Figure FDA0003980908650000012
是与将VLM偶联至所述PTM的L的附接位点；
Figure FDA0003980908650000013
是6元芳基、6元杂芳基或6元杂环烷基，每一者均任选地被1个或2个卤素(例如，Cl、F或Br)取代；
RPTM2是–C(＝O)C2-C4烯基，其任选地被甲基、卤素(例如，Cl、F、Br)、胺(例如，-NH2、-NHCH3或-N(CH3)2)或3-6元杂环烷基(例如，6元杂环烷基、具有选自O和N的杂原子的杂环烷基，或
Figure FDA0003980908650000021
)取代；
RPTM3A是H、苯基、吡啶基、异喹啉或萘(例如，
Figure FDA0003980908650000022
Figure FDA0003980908650000023
)，每一者均任选地被1、2或3个独立地选自OH、卤素(例如，F、Cl、Br)、胺(例如，-NH2、-NHCH3或-N(CH3)2)、直链或具支链的C1-C3卤代烷基(例如，直链或具支链的C1-C3氟代烷基或CF3)、-RPTM3C(例如，
Figure FDA0003980908650000024
其中每个RPTM4D独立地选自氢、C1-C3烷基(例如，甲基)或卤素(例如，F、Cl、Br))或直链或具支链的C1-C3烷基(例如，甲基或乙基)的基团取代；
RPTM3C是任选地被1、2或3个独立地选自OH、卤素(例如，F、Cl、Br)或直链或具支链的C1-C3烷基(例如，甲基或乙基)的基团取代的吲唑；
RPTM3B是H、卤素(例如，Cl、F、Br)或-O-RPTM3C(例如，
Figure FDA0003980908650000025
其中每个RPTM4D独立地选自氢、C1-C3烷基(例如，甲基)或卤素(例如，F、Cl、Br))；
PTM-I或PTM-III的RPTM4A是不存在或(为H)或1个或2个独立地选择的卤素(例如，Cl、F、Br)；
PTM-II和PTM-IV的RPTM4A是不存在(或是H)或卤素(例如，Cl、F、Br)；
RPTM4B是(1)不存在(或是H)，(2)–CH2-CH2-CN或–CH2-CN，或(3)1个或2个独立地选择的C1-C3烷基(例如，甲基或乙基)；并且
每个XPTM均单独地为CH或N；
(b)所述VLM是结合Von Hippel-Lindau(VHL)E3泛素连结酶的小分子E3泛素连结酶结合部分，并且由以下化学结构表示：
Figure FDA0003980908650000031
其中：
所述VLM的
Figure FDA0003980908650000032
是与将所述VLM偶联至所述PTM的L的附接位点；
R14是H或直链或具支链的C1-C3烷基(例如，甲基)；
R15是CN或具有一个或两个选自N、S和O的杂原子的任选地被甲基取代的5元杂芳基(例如，
Figure FDA0003980908650000033
)；
R16是卤代基、任选取代的C1-C3烷基、任选取代的C1-C3卤代烷基、羟基、任选取代的C1-C3烷氧基或任选取代的C1-C3卤代烷氧基；并且
o是从0至2的整数(例如，0、1或2)；并且
(c)所述L是将所述VLM共价偶联至所述PTM的化学连接部分。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中化合物由以下化学结构表示：
Figure FDA0003980908650000041
Figure FDA0003980908650000051
Figure FDA0003980908650000061
3.根据权利要求1或2所述的化合物，其中所述PTM由以下化学结构表示：
Figure FDA0003980908650000062
Figure FDA0003980908650000071
其中：
所述PTM的
Figure FDA0003980908650000072
是与将所述VLM偶联至所述PTM的所述化学连接部分的附接位点；
RPTM3A是任选地被1个或2个独立地选自OH、甲基和卤素(例如，F、Cl、Br)的基团取代的吲唑；
RPTM4B是(1)H或不存在，(2)–CH2-CH2-CN或–CH2-CN，或(3)1个或2个独立地选择的C1-C3烷基(例如，甲基或乙基)；
RPTM4D是氢、C1-C3烷基(例如，甲基)或卤素(例如，F、Cl、Br)；
RPTM4C是H或卤素(例如，Cl、F、Br)；
RPTM4E是H、OH或胺(例如，-NH2或-NHCH3)；
RPTM4F是氢、C1-C3烷基(例如，甲基)、C1-C3卤代烷基(例如，C1-C3氟代烷基或CF3)或卤素(例如，F、Cl、Br)；并且
RPTM3B是任选地被1个或2个独立地选自OH、甲基和卤素(例如，F、Cl、Br)的基团取代的-O-吲唑。
4.根据权利要求1或2所述的化合物，其中所述PTM由以下化学结构表示：
Figure FDA0003980908650000081
其中：
所述PTM的
Figure FDA0003980908650000091
是与将所述VLM偶联至所述PTM的所述化学连接部分的附接位点；
RPTM4B是(1)H或不存在，(2)–CH2-CH2-CN或–CH2-CN，或(3)1个或2个独立地选择的C1-C3烷基(例如，甲基或乙基)；
RPTM4D是氢、C1-C3烷基(例如，甲基)或卤素(例如，F、Cl、Br)；
RPTM4C是H或卤素(例如，Cl、F、Br)；
RPTM4E是H或OH；并且
RPTM3B是任选地被1个或2个独立地选自OH和卤素(例如，F、Cl、Br)的基团取代的-O-吲唑。
5.根据权利要求1或2所述的化合物，其中所述PTM具有以下化学结构：
Figure FDA0003980908650000092
其中：
所述PTM的
Figure FDA0003980908650000093
是与将所述VLM偶联至所述PTM的所述化学连接部分的附接位点；
RPTM3A是：
Figure FDA0003980908650000094
并且
RPTM4C是H或F。
6.根据权利要求1或2所述的化合物，其中所述PTM具有以下化学结构：
Figure FDA0003980908650000101
其中：
所述PTM的
Figure FDA0003980908650000102
是与将所述VLM偶联至所述PTM的所述化学连接部分的附接位点；
RPTM3A是：
Figure FDA0003980908650000103
并且
RPTM4C是H或F。
7.根据权利要求1-3中任一项所述的化合物，其中：
(a)所述PTM选自：
Figure FDA0003980908650000104
Figure FDA0003980908650000111
其中：
所述PTM的
Figure FDA0003980908650000112
是与将所述VLM偶联至所述PTM的所述化学连接部分的附接位点；
每个RPTM4D独立地选自氢、C1-C3烷基(例如，甲基)和卤素(例如，F、Cl、Br)；或
(b)所述PTM选自：
Figure FDA0003980908650000121
其中：
所述PTM的
Figure FDA0003980908650000122
是与将所述VLM偶联至所述PTM的所述化学连接部分的附接位点；
每个RPTM4D独立地选自氢、C1-C3烷基(例如，甲基)和卤素(例如，F、Cl、Br)。
8.根据权利要求1、2或4所述的化合物，其中：
(a)所述PTM选自：
Figure FDA0003980908650000131
Figure FDA0003980908650000132
其中所述PTM的
Figure FDA0003980908650000133
是与将所述VLM偶联至所述PTM的所述化学连接部分的附接位点；或
(b)所述PTM选自：
Figure FDA0003980908650000141
Figure FDA0003980908650000142
其中所述PTM的
Figure FDA0003980908650000143
是与将所述VLM偶联至所述PTM的所述化学连接部分的附接位点。
9.根据权利要求1-4和6-8中任一项所述的化合物，其中所述PTM由以下化学结构表示：
Figure FDA0003980908650000144
Figure FDA0003980908650000151
Figure FDA0003980908650000161
其中所述PTM的
Figure FDA0003980908650000162
是与将所述VLM偶联至所述PTM的所述化学连接部分的附接位点。
10.根据权利要求1-5中任一项所述的化合物，其中所述PTM由以下化学结构表示：
Figure FDA0003980908650000163
其中所述PTM的
Figure FDA0003980908650000164
是与将所述VLM偶联至所述PTM的所述化学连接部分的附接位点。
11.如权利要求1-4和6-8中任一项所述的化合物，其中所述PTM由以下化学结构表示：
Figure FDA0003980908650000171
Figure FDA0003980908650000181
其中*表示作为与所述化学连接部分的附接位点的原子或与所述化学连接部分共享的原子，并且所述PTM的
Figure FDA0003980908650000182
是与将所述VLM偶联至所述PTM的所述化学连接部分的附接位点。
12.如权利要求1-11中任一项所述的化合物，其中所述VLM具有由以下表示的化学结构：
Figure FDA0003980908650000183
Figure FDA0003980908650000191
Figure FDA0003980908650000201
其中所述VLM的
Figure FDA0003980908650000202
是与将所述PTM偶联至所述VLM的所述化学连接部分的附接位点。
13.如权利要求1-11中任一项所述的化合物，其中所述VLM具有由以下表示的化学结构：
Figure FDA0003980908650000203
其中所述VLM的
Figure FDA0003980908650000204
是与将所述PTM偶联至所述VLM的所述化学连接部分的附接位点。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的化合物，其中所述化学连接部分包含以下化学结构：
Figure FDA0003980908650000211
其中：
所述化学连接部分的
Figure FDA0003980908650000212
是与所述VLM或所述PTM的附接位点；
YL2是键或未取代的或取代的直链或具支链的C1-C4烷基(例如，任选地被卤素、C1-3烷基、甲基或乙基取代)；
WL3是3-7元环(例如，4-6元环烷基或杂环烷基)或8-12元螺环，每一者均具有0-4个杂原子(例如，0-4个独立地选自N、O和S的杂原子)并且任选地被卤素或甲基取代；
YL3是键或C1-C32烷基(C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10、C11、C12、C13、C14、C15、C16、C17、C18、C19、C20、C21、C22、C23、C24、C25、C26、C27、C28、C29、C30、C31或C32烷基)，其中一个或多个C原子任选地被O
Figure FDA0003980908650000213
或NH替代，并且每个碳任选地被卤素、＝O、甲基或乙基取代，并且每个氮任选地被甲基或乙基取代；
YL4是键、O或未取代的或取代的直链或具支链的C1-C6烷基，其中一个或多个碳任选地被O、NH或NCH3替代，并且任选地被卤素或甲基取代；
WL4是3-8元环(例如，4-6元环烷基或杂环烷基或
Figure FDA0003980908650000214
)或5-8元螺环，每一者均具有0-4个杂原子(例如，0-4个独立地选自N、O和S的杂原子)并且任选地被卤素(例如，F、Cl、Br)或甲基取代，并且
YL5是键或未取代的或取代的C1-C6烷基，其中一个或多个C原子任选地被O替代并任选地被卤代基(例如，F、Cl、Br)或甲基取代。
15.如权利要求1-14中任一项所述的化合物，其中所述化学连接部分具有由以下表示的化学结构：
Figure FDA0003980908650000221
Figure FDA0003980908650000231
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其中所述化学连接部分的
Figure FDA0003980908650000253
指示与所述PTM或所述VLM的附接点。
16.如权利要求1-14中任一项所述的化合物，其中所述化学连接部分具有由以下表示的化学结构：
Figure FDA0003980908650000254
其中所述化学连接部分的
Figure FDA0003980908650000255
指示与所述PTM或所述VLM的附接点。
17.如权利要求1-14中任一项所述的化合物，其中所述接头(L)由以下表示：
Figure FDA0003980908650000261
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其中所述化学连接部分的
Figure FDA0003980908650000293
指示与所述PTM或所述VLM的附接点。
18.如权利要求1-14中任一项所述的化合物，其中所述接头(L)由以下表示：
Figure FDA0003980908650000294
Figure FDA0003980908650000301
Figure FDA0003980908650000302
其中所述化学连接部分的
Figure FDA0003980908650000303
指示与所述PTM或所述VLM的附接点。
19.根据权利要求1所述的化合物，其中存在以下中的至少一者：
所述PTM是选自表7中的化合物的PTM；
所述VLM是选自表7中的化合物的VLM；并且
所述L是选自表7中的化合物的L。
20.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自由表7中的化合物1-94组成的组：
Figure FDA0003980908650000304
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21.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自由表7中的化合物95-173组成的组：
Figure FDA0003980908650000552
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Figure FDA0003980908650000781
Figure FDA0003980908650000791
22.一种组合物，其包含有效量的权利要求1-21中任一项所述的双官能化合物以及药学上可接受的载体。
23.如权利要求22所述的组合物，其中所述组合物还包含另外的生物活性剂或权利要求1-21中任一项所述的第二双官能化合物中的至少一者。
24.如权利要求23所述的组合物，其中所述另外的生物活性剂是抗炎剂、化疗剂或免疫调节剂。
25.一种组合物，其包含药学上可接受的载体和有效量的至少一种权利要求1-21中任一项所述的化合物，所述组合物用于治疗受试者的与KRas有因果关系的疾病、病症或症状，其中所述组合物有效地治疗或改善所述疾病、病症或所述疾病或病症的至少一种症状。
26.如权利要求25所述的组合物，其中所述疾病或病症是胰腺癌、结肠癌、结直肠癌、肺癌、非小细胞肺癌、胆道恶性肿瘤、子宫内膜癌、宫颈癌、膀胱癌、肝癌、髓系白血病和乳腺癌。
27.一种治疗或预防与KRas相关的疾病、病症或症状的方法，所述方法包括提供有需要的患者，以及向所述患者施用有效量的如本文所述的化合物或包含所述化合物的组合物，其中所述化合物或组合物有效地治疗或改善所述疾病、病症或所述疾病或病症的至少一种症状。
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