CN113769084A - 一种免疫球蛋白和脂多糖复合免疫增强剂 - Google Patents

一种免疫球蛋白和脂多糖复合免疫增强剂 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种动物血液免疫球蛋白和胎盘脂多糖复合免疫增强剂，以动物血液免疫球蛋白和胎盘脂多糖为主要原料，加有无菌生理盐水以及辅料组成，配方为每100 mL中含有动物血液免疫球蛋白0.4‑1 g；胎盘脂多糖0.5‑1.0 g；玉米低聚肽粉2‑10 g；海藻酸钠1‑5 g；余量由无菌生理盐水补足。本发明复合免疫增强剂将动物血液免疫球蛋白和胎盘脂多糖完美的结合，使动物血液免疫球蛋白和胎盘脂多糖发挥协同作用，与市面上现有类似产品相比，生物利用度较高、免疫增效作用强、无毒副作用、能够促进动物生长，改善动物的健康状态，可减少服用次数，缩短疗程。有助于实现减抗替抗的目的，间接提高人类食品安全。

Description

一种免疫球蛋白和脂多糖复合免疫增强剂
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种动物血液免疫球蛋白和胎盘脂多糖复合免疫增强剂及其制备方法。
背景技术
动物胎盘脂多糖是由具有生物活性的多肽及核苷酸组成的混合物，它能够将供体细胞所具有的细胞免疫功能转移给受体细胞，非特异性地增强一般细胞免疫，提高受体的免疫功能，而且安全无毒、无药物残留，是一种新型的免疫调节剂。主要用于对病毒性感染及自身免疫性疾病的治疗，配合疫苗使用可显著提高抗体滴度，增强免疫效果。
免疫球蛋白(IG)是直接参与免疫反应的抗体蛋白的总称。动物血液中含有大量免疫球蛋白，是体液免疫的主要物质，它能凝集细菌、中和细菌毒素，并能在体内其他因素的参与下彻底杀死细菌和病毒，增强机体的免疫功能，预防消化道等疾病，促进营养吸收。据有关资料报导，免疫球蛋白可以作为幼畜饲料添加剂，特别是集约化养殖基地，将免疫球蛋白应用于早期断奶幼畜，可减少幼畜疾病，促进生长发育，目前在动物饲料添加剂市场供不应求。
寻求高效、安全的动物免疫调节剂是当前国内外养殖业研究的重要课题之一。将脂多糖及免疫球蛋白联用在养殖业上，可减少动物生病的机会，降低饲养成本，从而获得更大的效益。现有免疫球蛋白的产品多为单一产品作为免疫调节剂，尚未发现有关脂多糖及免疫球蛋白复合剂的使用、销售及报道。
发明内容
本发明解决的技术问题：提供一种动物血液免疫球蛋白和胎盘脂多糖复合免疫增强剂，该免疫增强剂生物利用度较高、免疫增效作用强、无毒副作用、能够促进动物生长，改善动物的健康状态，实现减抗替抗的目的，间接提高人类食品安全。
本发明采用的技术方案：一种动物血液免疫球蛋白和胎盘脂多糖复合免疫增强剂，由下述重量份的原料组成：以动物血液（猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅等）免疫球蛋白、动物胎盘（猪、牛、羊等胎盘）脂多糖为主要原料，加有无菌生理盐水以及辅料组成，其具体配方为每100 mL中含有动物血液免疫球蛋白0.4-1 g；胎盘脂多糖0.5-1.0 g；玉米低聚肽粉2-10 g；海藻酸钠1-5 g；余量由无菌生理盐水补足，pH为6.0-8.0。
其中的动物血液免疫球蛋白是通过以下提取工艺步骤得到的：
（1）收集经检疫合格的新鲜动物血用离心机3800-4000r/min离心8-10min，离心后倒掉滤渣；
（2）滤液中加入NaCI和硫酸铵，1L中加入20%-30%硫酸铵，用搅拌器搅拌30min后，再在3800-4000r/min离心8-10min，离心后倒掉上清液；
（3）滤渣中加入和离心前同样体积的生理盐水，并加入NaCI和硫酸铵，1L中加入35%的硫酸铵，用搅拌器搅拌30min后，再在3800-4000r/min离心8-10min，离心后倒掉上清液；
（4）滤渣中加入和离心前同体积的生理盐水，并加入NaCI和硫酸铵，1L中加入50%的硫酸铵，再在3800r/min离心10min，离心后倒掉滤渣；
（5）上清液装入截留分子量为8000-14000的透析袋，透析48小时；
（6）将透析袋内的免疫球蛋白液用氢氧化钠调节pH至8.5-9.0，使得碱性蛋白沉淀；
（7）透析上清液通过0.22μm膜过滤除菌，低温保存待用。
其中的动物胎盘脂多糖是通过以下提取工艺步骤得到的：
（1）以新鲜动物胎盘为原料，去除胎膜和脐带，用纯水冲洗干净，依次用绞肉机、胶体磨、研磨机粉碎后，放-20℃以下冷库速冻24-48 h，然后取出37℃水浴融化，如此冻融3-5次后置于反应釜中进行消化酶解；
（2）向反应釜中加2-3倍原料重的生理盐水，加入原料重量20-40%的新鲜胰浆，用饱和氢氧化钙调pH值至7.5-8.5，间隙搅拌下，加热至50-55℃，消化10-12 h后，加热至60℃，用超声波发生器中波处理20-30 min，冷却至室温。用过滤式离心机离心过滤，滤液为酶解液；
（3）将酶解液用醋酸调pH值至4.0-6.0，放冷藏室静置过夜，然后在8000 r/min以上高速，4-8℃条件下离心20-30 min，分别收集上清液和沉淀，上清液即为脂多糖多肽粗提液；
（4）将脂多糖粗提液用截留分子量10万的超滤装置进行超滤，透过液再经截留分子量1万超滤装置进行超滤，收集浓缩液即为脂多糖提取液。
本发明动物血液免疫球蛋白和胎盘脂多糖复合免疫增强剂的制备方法如下：
（1）先将玉米低聚肽粉和海藻酸钠按配方称重后混合，加入总体积50-80%的生理盐水，搅拌溶解均匀，加热至120-130℃保持30-40 min，密封，降至室温放置在万级净化室待用，为配料1。
（2）在万级净化室内分取动物血液免疫球蛋白液和胎盘脂多糖液按配方和生产用量混合后经过0.22μm除菌膜除菌，为配料2。
（3）在净化百级条件下无菌操作将灭菌后的配料1和配料2液体混合，用饱和氢氧化钙调pH值至6.0-8.0，搅拌均匀，最后用灭菌生理盐水加至总体积即为复合无菌液。
（4）将复合无菌液按规格要求直接灌封，冷冻保存。
本发明的有益效果：
1、本发明复合免疫增强剂将动物动物血液免疫球蛋白和胎盘脂多糖完美的结合，使动物血液免疫球蛋白和胎盘脂多糖发挥协同作用，与市面上现有类似产品相比，生物利用度较高、免疫增效作用强、无毒副作用、能够促进动物生长，改善动物的健康状态，可减少服用次数，缩短疗程。目前尚未见有此类配方报道。
2、发明产品配方组合科学适用，各组份均为纯生物原料，对人体无毒副作用，各个成分之间具有相互协同作用，适口性好，大大提高产品的食用舒适性，可实现减抗替抗的目的，间接提高人类食品安全。
3、本发明产品生产采用传统工艺与现代工艺相结合，简易设备与现代设备相结合，可操作性强；生产规模可大可小，利用猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅等动物的血液及猪、牛、羊等动物的胎盘，原料易于取得，极大降低了生产成本，经济效益显著。
4、本发明将动物和废物利用，符合资源循环利用的基本原则，同时对环境保护非常有益。
具体实施方式
以下通过具体实施例再对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅局限于以下的实施例。在不脱离本发明上述技术思想的情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更，均应包括在本发明的范围内。
实施例1
一种动物血液免疫球蛋白和胎盘脂多糖复合免疫增强剂，由下述重量份的原料组成：以猪血液免疫球蛋白、猪胎盘脂多糖为主要原料，加有无菌生理盐水以及辅料组成，其具体配方为每100 mL中含有动物血液免疫球蛋白0.4g；胎盘脂多糖0.5 g；玉米低聚肽粉 2g；海藻酸钠1g；余量由无菌生理盐水补足，pH为6.0。
其中的动物血液免疫球蛋白是通过以下提取工艺步骤得到的：
（1）收集经检疫合格的新鲜动物血用离心机3800r/min离心8min，离心后倒掉滤渣；
（2）滤液中加入NaCI和硫酸铵，1L中加入20%%硫酸铵，用搅拌器搅拌30min后，再在3800r/min离心8min，离心后倒掉上清液；
（3）滤渣中加入和离心前同样体积的生理盐水，并加入NaCI和硫酸铵，1L中加入35%的硫酸铵，用搅拌器搅拌30min后，再在3800r/min离心8min，离心后倒掉上清液；
（4）滤渣中加入和离心前同体积的生理盐水，并加入NaCI和硫酸铵，1L中加入50%的硫酸铵，再在3800r/min离心10min，离心后倒掉滤渣；
（5）上清液装入截留分子量为8000的透析袋，透析48小时；
（6）将透析袋内的免疫球蛋白液用氢氧化钠调节pH至8.5，使得碱性蛋白沉淀；
（7）透析上清液通过0.22μm膜过滤除菌，低温保存待用。
其中的动物胎盘脂多糖是通过以下提取工艺步骤得到的：
（1）以新鲜动物胎盘为原料，去除胎膜和脐带，用纯水冲洗干净，依次用绞肉机、胶体磨、研磨机粉碎后，放-20℃以下冷库速冻24 h，然后取出37℃水浴融化，如此冻融3次后置于反应釜中进行消化酶解；
（2）向反应釜中加2倍原料重的生理盐水，加入原料重量20%的新鲜胰浆，用饱和氢氧化钙调pH值至7.5，间隙搅拌下，加热至50℃，消化10后，加热至60℃，用超声波发生器中波处理20min，冷却至室温。用过滤式离心机离心过滤，滤液为酶解液；
（3）将酶解液用醋酸调pH值至4.0，放冷藏室静置过夜，然后在8000 r/min以上高速，4℃条件下离心20 min，分别收集上清液和沉淀，上清液即为脂多糖多肽粗提液；
（4）将脂多糖粗提液用截留分子量10万的超滤装置进行超滤，透过液再经截留分子量1万超滤装置进行超滤，收集浓缩液即为脂多糖提取液。
本发明动物血液免疫球蛋白和胎盘脂多糖复合免疫增强剂的制备方法如下：
（1）先将玉米低聚肽粉和海藻酸钠按配方称重后混合，加入总体积50%的生理盐水，搅拌溶解均匀，加热至120℃保持30 min，密封，降至室温放置在万级净化室待用，为配料1。
（2）在万级净化室内分取动物血液免疫球蛋白液和胎盘脂多糖液按配方和生产用量混合后经过0.22μm除菌膜除菌，为配料2。
（3）在净化百级条件下无菌操作将灭菌后的配料1和配料2液体混合，用饱和氢氧化钙调pH值至6.0，搅拌均匀，最后用灭菌生理盐水加至总体积即为复合无菌液。
（4）将复合无菌液按规格要求直接灌封，冷冻保存。
实施例2
一种动物血液免疫球蛋白和胎盘脂多糖复合免疫增强剂，由下述重量份的原料组成：以羊血液免疫球蛋白、羊胎盘脂多糖为主要原料，加有无菌生理盐水以及辅料组成，其具体配方为每100 mL中含有动物血液免疫球蛋白1 g；胎盘脂多糖1.0 g；玉米低聚肽粉 10g；海藻酸钠5 g；余量由无菌生理盐水补足，pH为8.0。
其中的动物血液免疫球蛋白是通过以下提取工艺步骤得到的：
（1）收集经检疫合格的新鲜羊血用离心机4000r/min离心10min，离心后倒掉滤渣；
（2）滤液中加入NaCI和硫酸铵，1L中加入30%硫酸铵，用搅拌器搅拌30min后，再在4000r/min离心10min，离心后倒掉上清液；
（3）滤渣中加入和离心前同样体积的生理盐水，并加入NaCI和硫酸铵，1L中加入35%的硫酸铵，用搅拌器搅拌30min后，再在4000r/min离心10min，离心后倒掉上清液；
（4）滤渣中加入和离心前同体积的生理盐水，并加入NaCI和硫酸铵，1L中加入50%的硫酸铵，再在3800r/min离心10min，离心后倒掉滤渣；
（5）上清液装入截留分子量为14000的透析袋，透析48小时；
（6）将透析袋内的免疫球蛋白液用氢氧化钠调节pH至9.0，使得碱性蛋白沉淀；
（7）透析上清液通过0.22μm膜过滤除菌，低温保存待用。
其中的羊胎盘脂多糖是通过以下提取工艺步骤得到的：
（1）以新鲜羊胎盘为原料，去除胎膜和脐带，用纯水冲洗干净，依次用绞肉机、胶体磨、研磨机粉碎后，放-20℃以下冷库速冻48 h，然后取出37℃水浴融化，如此冻融5次后置于反应釜中进行消化酶解；
（2）向反应釜中加2-3倍原料重的生理盐水，加入原料重量40%的新鲜胰浆，用饱和氢氧化钙调pH值至8.5，间隙搅拌下，加热至55℃，消化12 h后，加热至60℃，用超声波发生器中波处理30 min，冷却至室温。用过滤式离心机离心过滤，滤液为酶解液；
（3）将酶解液用醋酸调pH值至6.0，放冷藏室静置过夜，然后在8000 r/min以上高速，8℃条件下离心30 min，分别收集上清液和沉淀，上清液即为脂多糖多肽粗提液；
（4）将脂多糖粗提液用截留分子量10万的超滤装置进行超滤，透过液再经截留分子量1万超滤装置进行超滤，收集浓缩液即为脂多糖提取液。
本发明动物血液免疫球蛋白和胎盘脂多糖复合免疫增强剂的制备方法如下：
（1）先将玉米低聚肽粉和海藻酸钠按配方称重后混合，加入总体积80%的生理盐水，搅拌溶解均匀，加热至130℃保持40 min，密封，降至室温放置在万级净化室待用，为配料1。
（2）在万级净化室内分取动物血液免疫球蛋白液和胎盘脂多糖液按配方和生产用量混合后经过0.22μm除菌膜除菌，为配料2。
（3）在净化百级条件下无菌操作将灭菌后的配料1和配料2液体混合，用饱和氢氧化钙调pH值至8.0，搅拌均匀，最后用灭菌生理盐水加至总体积即为复合无菌液。
（4）将复合无菌液按规格要求直接灌封，冷冻保存。
实施例3
一种动物血液免疫球蛋白和胎盘脂多糖复合免疫增强剂，由下述重量份的原料组成：以牛血液免疫球蛋白、牛胎盘脂多糖为主要原料，加有无菌生理盐水以及辅料组成，其具体配方为每100 mL中含有动物血液免疫球蛋白0.7 g；胎盘脂多糖0.8 g；玉米低聚肽粉6 g；海藻酸钠3 g；余量由无菌生理盐水补足，pH为7.0。
其中的动物血液免疫球蛋白是通过以下提取工艺步骤得到的：
（1）收集经检疫合格的新鲜牛血用离心机3900r/min离心9min，离心后倒掉滤渣；
（2）滤液中加入NaCI和硫酸铵，1L中加入25%硫酸铵，用搅拌器搅拌30min后，再在3900r/min离心9min，离心后倒掉上清液；
（3）滤渣中加入和离心前同样体积的生理盐水，并加入NaCI和硫酸铵，1L中加入35%的硫酸铵，用搅拌器搅拌30min后，再在3900r/min离心9min，离心后倒掉上清液；
（4）滤渣中加入和离心前同体积的生理盐水，并加入NaCI和硫酸铵，1L中加入50%的硫酸铵，再在3800r/min离心10min，离心后倒掉滤渣；
（5）上清液装入截留分子量为8000-14000的透析袋，透析48小时；
（6）将透析袋内的免疫球蛋白液用氢氧化钠调节pH至8.8，使得碱性蛋白沉淀；
（7）透析上清液通过0.22μm膜过滤除菌，低温保存待用。
其中的动物胎盘脂多糖是通过以下提取工艺步骤得到的：
（1）以新鲜动物胎盘为原料，去除胎膜和脐带，用纯水冲洗干净，依次用绞肉机、胶体磨、研磨机粉碎后，放-20℃以下冷库速冻36 h，然后取出37℃水浴融化，如此冻融4次后置于反应釜中进行消化酶解；
（2）向反应釜中加2.5倍原料重的生理盐水，加入原料重量30%的新鲜胰浆，用饱和氢氧化钙调pH值至8.0，间隙搅拌下，加热至52℃，消化11 h后，加热至60℃，用超声波发生器中波处理25 min，冷却至室温。用过滤式离心机离心过滤，滤液为酶解液；
（3）将酶解液用醋酸调pH值至5.0，放冷藏室静置过夜，然后在8000 r/min以上高速，6℃条件下离心25 min，分别收集上清液和沉淀，上清液即为脂多糖多肽粗提液；
（4）将脂多糖粗提液用截留分子量10万的超滤装置进行超滤，透过液再经截留分子量1万超滤装置进行超滤，收集浓缩液即为脂多糖提取液。
本发明动物血液免疫球蛋白和胎盘脂多糖复合免疫增强剂的制备方法如下：
（1）先将玉米低聚肽粉和海藻酸钠按配方称重后混合，加入总体积60%的生理盐水，搅拌溶解均匀，加热至125℃保持35 min，密封，降至室温放置在万级净化室待用，为配料1。
（2）在万级净化室内分取动物血液免疫球蛋白液和胎盘脂多糖液按配方和生产用量混合后经过0.22μm除菌膜除菌，为配料2。
（3）在净化百级条件下无菌操作将灭菌后的配料1和配料2液体混合，用饱和氢氧化钙调pH值至7.0，搅拌均匀，最后用灭菌生理盐水加至总体积即为复合无菌液。
（4）将复合无菌液按规格要求直接灌封，冷冻保存。
上述实施例，只是本发明的较佳实施例，并非用来限制本发明实施范围，故凡以本发明权利要求所述内容所做的等效变化，均应包括在本发明权利要求范围之内。

Claims (5)

1.一种动物血液免疫球蛋白和胎盘脂多糖复合免疫增强剂，其特征在于，所述复合免疫增强剂，包括下述重量份的原料：以动物血液免疫球蛋白和胎盘脂多糖为主要原料，加有无菌生理盐水以及辅料组成，其具体配方为每100 mL中含有动物血液免疫球蛋白0.4-1 g；胎盘脂多糖0.5-1.0 g；玉米低聚肽粉2-10 g；海藻酸钠1-5 g；余量由无菌生理盐水补足，pH为6.0-8.0。
2.根据权利要求1所述的一种动物血液免疫球蛋白和胎盘脂多糖复合免疫增强剂，其特征在于，所述动物血液为猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅的血液，所述动物胎盘为猪、牛、羊的胎盘。
3.根据权利要求1所述的一种动物血液免疫球蛋白和胎盘脂多糖复合免疫增强剂，其特征在于，所述其中的动物血液免疫球蛋白是通过以下提取工艺步骤得到的：
（1）收集经检疫合格的新鲜动物血用离心机3800-4000r/min离心8-10min，离心后倒掉滤渣；
（2）滤液中加入NaCI和硫酸铵，1L中加入20%-30%硫酸铵，用搅拌器搅拌30min后，再在3800-4000r/min离心8-10min，离心后倒掉上清液；
（3）滤渣中加入和离心前同样体积的生理盐水，并加入NaCI和硫酸铵，1L中加入35%的硫酸铵，用搅拌器搅拌30min后，再在3800-4000r/min离心8-10min，离心后倒掉上清液；
（4）滤渣中加入和离心前同体积的生理盐水，并加入NaCI和硫酸铵，1L中加入50%的硫酸铵，再在3800r/min离心10min，离心后倒掉滤渣；
（5）上清液装入截留分子量为8000-14000的透析袋，透析48小时；
（6）将透析袋内的免疫球蛋白液用氢氧化钠调节pH至8.5-9.0，使得碱性蛋白沉淀；
（7）透析上清液通过0.22μm膜过滤除菌，低温保存待用。
4.根据权利要求1所述的一种动物血液免疫球蛋白和胎盘脂多糖复合免疫增强剂，其特征在于，所述其中的动物胎盘脂多糖是通过以下提取工艺步骤得到的：
（1）以新鲜动物胎盘为原料，去除胎膜和脐带，用纯水冲洗干净，依次用绞肉机、胶体磨、研磨机粉碎后，放-20℃以下冷库速冻24-48 h，然后取出37℃水浴融化，如此冻融3-5次后置于反应釜中进行消化酶解；
（2）向反应釜中加2-3倍原料重的生理盐水，加入原料重量20-40%的新鲜胰浆，用饱和氢氧化钙调pH值至7.5-8.5，间隙搅拌下，加热至50-55℃，消化10-12 h后，加热至60℃，用超声波发生器中波处理20-30 min，冷却至室温，用过滤式离心机离心过滤，滤液为酶解液；
（3）将酶解液用醋酸调pH值至4.0-6.0，放冷藏室静置过夜，然后在8000 r/min以上高速，4-8℃条件下离心20-30 min，分别收集上清液和沉淀，上清液即为脂多糖多肽粗提液；
（4）将脂多糖多肽粗提液用截留分子量10万的超滤装置进行超滤，透过液再经截留分子量1万超滤装置进行超滤，收集浓缩液即为脂多糖提取液。
5.一种如权利要求1所述的动物血液免疫球蛋白和胎盘脂多糖复合免疫增强剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）先将玉米低聚肽粉和海藻酸钠按配方称重后混合，加入总体积50-80%的生理盐水，搅拌溶解均匀，加热至120-130℃保持30-40 min，密封，降至室温放置在万级净化室待用，为配料1；
（2）在万级净化室内分取动物血液免疫球蛋白液和胎盘脂多糖液按配方和生产用量混合后经过0.22μm除菌膜除菌，为配料2；
（3）在净化百级条件下无菌操作将灭菌后的配料1和配料2液体混合，用饱和氢氧化钙调pH值至6.0-8.0，搅拌均匀，最后用灭菌生理盐水加至总体积即为复合无菌液；
（4）将复合无菌液按规格要求直接灌封，冷冻保存。
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