CN100450543C - 一种能增强畜禽免疫功能的兽药 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种兽药，特别是一种能增强畜禽免疫功能的兽药。它是每1000ml含α-甘露聚糖肽500-5000mg的溶液；所述的溶液是将优选α-溶血性链球菌33#菌种进行太空搭载，经过太空诱变精心选育的优良菌珠作为生产菌种，经一级发酵和二级发酵，生产甘露聚糖肽发酵液，将发酵液提纯过滤后，加适量香精、矫味剂溶解配制，搅拌均匀后再过滤，灌装封口，热压灭菌后的发酵原液；所述的溶液中含黄芪多糖10-20g。它采用既治标又治本的方法，利用生化制剂增强机体免疫力，它具有疗效高、无耐药性、无配伍禁忌、无毒、无残留，符合国际兽药潮流。

Description

一种能增强畜禽免疫功能的兽药

技术领域

本发明涉及一种兽药，特别是一种能增强畜禽免疫功能的兽药。

背景技术

随着我国畜牧养殖业的发展，畜禽传染病已成为困扰畜牧业的一大难题。畜禽免疫失败、免疫力低下，常导致畜禽疾病复杂多变，特别是幼龄畜禽发病率和死亡率逐年增加。老病未除新病又不断出现，如鸡的传染性法氏囊病和猪的圆环病毒病均可使机体的免疫系统遭到破坏，导致机体反复发病反复治疗反复感染，用药量增加，提高了养殖业的成本。单一感染越来越少，混合感染的疾病越来越多。畜禽消化道疾病也不断发生，引起饲料利用率降低，生长缓慢，料耗增加，出栏时间延长。如鸡的球虫病导致鸡的肠道损伤出血下痢，引起鸡的肠炎和免疫力下降。虽然使用其他药物能使该病得到了控制和改善，但治标不治本，只能控制病情，复发率较高且导致药物残留，严重影响了肉蛋食品的质量和卫生。肠炎(病毒性、细菌性、霉菌性、寄生虫性)是动物的常发病、多发病，用于治疗单纯性肠炎的药物很多，也多有很好的疗效，但动物的肠炎常常反复发作或混合发作，造成畜禽肠道损伤严重，加之反复使用抗生素也是治疗效果不佳，病程冗长，甚至愈后不良，对畜牧业造成巨大损失。目前，用于肠道损伤修复的药物很少见到，仅有一些肠道粘膜保护剂的应用，但其疗效并不明显。因此，寻找和制备具有提高免疫功能、缩短疗程、降低药物的毒副作用和药物残留的兽药产品十分必要。

发明内容

本发明的目的是提供一种能增强畜禽免疫功能的兽药，它采用既治标又治本的方法，利用生化制剂增强机体免疫力，它具有疗效高、无耐药性、无配伍禁忌、无毒、无残留，符合国际兽药潮流。

本发明的技术方案是：一种能增强畜禽免疫功能的兽药，其特征是：它是每1000ml含α-甘露聚糖肽500-5000mg的溶液。

所述的溶液是将优选α-溶血性链球菌33#菌种进行太空搭载，经过太空诱变精心选育的优良菌珠作为生产菌种，经一级发酵和二级发酵，生产甘露聚糖肽发酵液，将发酵液提纯过滤后，加适量香精、矫味剂溶解配制，搅拌均匀后再过滤，灌装封口，热压灭菌后的发酵原液。

所述的溶液中含每1000ml含黄芪多糖10-20g。

所述的溶液中每1000ml含左旋咪唑1.25-37.5g。

本发明的特点是：由于本发明在α-溶血链球菌生长规律的基础上，选定较合适生长时期的菌种，采用平皿生长的菌落、浸入其它物质中的菌悬液、带菌的砂土等方法，于2002年3月25日搭载“神舟三号”宇宙飞船。在太空轨道(近地点高度200公里、远地点高度350公里)进行了6天零18小时的在轨飞行。太空的特殊条件主要体现为微重力、高真空、高辐射、交变磁场等特殊环境。在外层空间飞行的菌种被置于一个与地球上的生态环境完全不同的环境中，主要包括来自磁场俘获的电子、质子及低能重粒子；来自银河系的宇宙射线如质子、粒子及更重的高能重粒子；来自太阳磁暴的质子及重粒子等。这些粒子作用于微生物细胞核中的DNA双链结构，可导致双链断裂。微重力、高真空环境可使DNA的碱基序列发生重组，即基因组的重组和变异。变异后产生的新菌株，其形态特征、培养特征、生理生化反应、代谢产物、遗传性状及蛋白表达、中试生产指标等均会发生不同程度的变化。在宇宙飞船返回地面后，经过进一步筛选，仅优选出其中0.2％的正变异且遗传特性稳定的菌株，经培育制成生产菌种。这种经航天搭载诱变后选育出的菌种已经在在2003年12月29日由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，编号为CGMCCNo.1082。(见附页)

特别是α-溶血链球菌D33菌株经太空搭载诱变，地面上的筛选、分离和纯化后，选育出发酵单位更高、所分泌的甘露聚糖肽含量更高的高产、优质菌株T33株。实验及中试生产结果表明，经空间诱变后的新型太空菌种在遗传特性上稳定，有较强的生产适应性，由其发酵产生的甘露聚糖肽含量提高，发酵含量比对照组产物含量平均高出三倍以上，发酵周期大大缩短。该菌株经培养、发酵、提纯及精制等高科技手段制备而成的口服液对治疗畜禽的消化道疾病有显著疗效。

药理及作用机理：

α-甘露聚糖肽进入肠道以后被水解为两部分，即甘露聚糖(低聚甘露糖)和碱性多肽。因为低聚甘露糖难以被胃肠吸收并且可以促进肠道内有益菌(双歧杆菌和乳酸菌)的生长繁殖，所以水解后生成的低聚甘露糖会直接进入大肠被有益菌利用。α-甘露聚糖肽即通过这两种水解产物发生作用。

甘露聚糖分子中含有磷酸成分。研究表明甘露聚糖中的磷酸含量较高时，对结合病原菌是不利的，但对免疫调节功能则是重要的。试验证明低聚甘露糖对巨嗜细胞和单核细胞有积极影响，增强其吞噬作用；提高血清中溶菌酶水平；刺激肿瘤坏死因子数(TNF)、白细胞介素(IL)、干扰素(IFN)和NO水平升高。TNF能抑制肿瘤细胞；IL和IFN是具有免疫活性的内源性肽，两者都可以激活或调节免疫应答中心；NO由巨嗜细胞产生，而NO具有直接杀伤肿瘤细胞的作用。

降低霉菌毒素的免疫抑制作用。

霉菌毒素由需氧菌产生，可以产生很强的毒副作用，是动物营养的最大挑战之一，而低聚甘露糖或者分解后可以产生低聚甘露糖的物质可以很好的结合霉菌毒素。Diaz(1999)在奶牛精料混合物中添加500g/T的甘露聚糖可以使奶中的黄曲霉素水平下降，从而减少霉菌素对人和动物的毒副作用，降低霉菌素的免疫抑制作用。

肽不仅是机体蛋白质代谢的底物，而且还具有其他重要的生物学作用。α-甘露聚糖肽水解产生的碱性多肽能作用于革兰氏阳性菌细胞成分-肽聚糖，切断连接N-乙肽葡胺和N-乙肽胞壁酸的聚糖链，丧失其坚韧性，细菌发生低渗透型的裂解，从而杀伤细菌。肽还有促进巨嗜细胞的吞噬作用，促进淋巴细胞和脾细胞的增殖作用，从而增强机体免疫力。

黄芪多糖可促进机体的抗体生成，使抗体形成细胞数(即溶血空斑数)和溶血测定值显著增加，使血清免疫球蛋白IgA、IgM、lgG水平(包括抗体分泌细胞及T、B淋巴细胞和NK细胞)明显增高。黄芪多糖能增加体内巨噬细胞数量，增强巨噬细胞吞噬功能。黄芪多糖还能促进体内淋巴细胞转化，提高白细胞渗出干扰素的能力，提高免疫球蛋白的含量，抑制病毒的繁殖。

左旋咪唑主要作用于T淋巴细胞，同时诱生干扰素，增强单核细胞的趋化和吞噬作用，激活巨噬细胞，调控B细胞产生抗体的作用。

本发明增强肉鸡免疫力试验：

1.试验地点、时间：西北农林科技大学教学实验基地，2004年7-8月。

2.试验动物及分组：种鸡场自繁AA肉鸡，健雏7200只，共4栋鸡舍，每栋鸡舍作为一个试验组，前3组在疫苗接种前3天和免疫后3天，分别饮用α-甘露聚糖肽溶液(含量为每1000ml:500mg)，α-甘露聚糖肽(含量为每1000ml:500g)+黄芪多糖溶液含量为每1000ml:10g，α-甘露聚糖肽(含量为每1000ml:500g)+左旋咪唑溶液含量为每1000ml:1.25g，并依次名为A、B、C组，第4组只做上述疫苗的常规免疫，为D组。

3.饲养管理：各组均按统一供应的饲料，按相同标准饲养饮喂饲养管理。

4.疫苗免疫方案：实验鸡群的四个实验组肉鸡在7日龄同时进行新城疫VI系疫苗饮水免疫，剂量为市售标示剂量，即每只1头份。同一试验鸡群，14日龄均用禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗(H₅亚型灭活疫苗)同时注射免疫，免疫剂量为市售标示剂量，即每只1头份。

5.抗体检测方案与方法

(1)新城疫(ND)免疫抗体监测4个组在新城疫免疫后每隔3天每组随机抽样20只采血，连续二次采样，按农业部实验技术操作规范进行新城疫血凝抑制抗体(HI)检测。

(2)禽流感抗体检测4个组在14日龄免疫后每隔3天每组随机抽样20只采血，连续二次采样，按农业部实验技术操作规范进行禽流感血凝抑制抗体(HI)检测。

6.试验结果与分析

表1.新城疫血凝抑制抗体(HI)抗体检测结果

表2.禽流感血凝抑制抗体(H1)抗体检测结果

由以上的实验结果可以看出，鸡只饮用α-甘露聚糖肽溶液，α-甘露聚糖肽复方黄芪多糖溶液，α-甘露聚糖肽复方左旋咪唑溶液均可明显提高新城疫和禽流感血凝抑制抗体(HI)滴度，与对照组相比在免疫后的前三天即能产生较高的抗体水平，并持续升高。三个试验组中以复方溶液效果好，在复方溶液中，以α-甘露聚糖肽复方黄芪多糖溶液的效果最为显著。

7.结论

(1)本发明使机体抗体上升快速，产生抗体滴度高，抗体较为均匀且维持较高的水平，其免疫增效作用明显。

(2)本发明可用于预防病毒病新城疫、禽流感感染的配合用药，提高治疗效果，缩短疗程，减少损失。

(3)可用于这些突发性、危害严重疾病的预防治疗，特别是在临床发病后的紧急免疫接种用药上意义重大，推广应用价值很高。

经大量的研究实验表明，经太空搭载菌种生产出的口服液具有：

1.显著的免疫增效作用：本发明可有效激活畜禽免疫系统的机能及其对抗原的反应能力，提高畜禽机体的抗体水平和免疫力。

2.本发明既可提高肠道粘膜组织SIgA、IgM等物质，又可增加大量细胞生长因子，促进肠道粘膜损伤的主动修复，防止病原侵袭。

3.本发明无药残，符合国家要求生产健康动物源性食品的产业方向，可以在养鸡生产上大力推广。

适用动物：蛋鸡、肉鸡、鸭、肉鸽、鱼及水产类、猪、牛、羊、狗、猫等。

应用范围：

1.本发明作为畜禽的预防用药，配合畜禽疫苗接种，可显著提高抗体水平，增强畜禽的抵抗力。

2.可用于配合治疗畜禽病毒性疾病，如鸡新城疫、禽流感等，用本发明配合治疗，可明显缩短疗程。

具体实施方式

优选α-溶血性链球菌33#菌种进行太空搭载，经过太空诱变精心选育的α-溶血性链球菌33#菌珠作为生产菌种，经一级发酵和二级发酵，生产甘露聚糖肽发酵液，将发酵液提纯过滤后，加适量香精、矫味剂溶解配制，搅拌均匀后再过滤，灌装封口，热压灭菌105-121℃，20-30分钟，经灯检合格后包装入库，检验合格后最终生产出太空诱变菌种生产的本发明(α-甘露聚糖肽)。

①太空菌种制备：

以经过空间诱变育种精心选育的α-溶血链球菌作为生产菌种。

A.斜面种子培养基：牛肉膏0.2-0.8％，酵母膏0.2-0.8％，蛋白胨0.3-0.8％，葡萄糖0.1-0.8％，氯化钠0.2-0.6％，琼脂1-5％，绵羊血5-10％；pH7.2-7.4；

斜面种子培养基灭菌温度105-125℃，时间30分钟，蒸汽压力0.11-0.13Mpa；

启封菌种冷冻管，用无菌肉汤培养基稀释，在无菌条件下接入血斜面，接种后置30℃恒温培养24-30小时；

B.肉汤种子培养基：牛肉膏0.2-0.8％，酵母膏0.2-0.8％，蛋白胨0.3-0.8％，葡萄糖0.1-0.8％，氯化钠0.2-0.6％；pH7.0-7.4；

肉汤种子培养基灭菌温度105-125℃，时间30分钟，蒸汽压力0.11-0.13Mpa；将培养好的斜面菌种在无菌条件下按1-9％接种量接入肉汤种子培养基内，25-40℃恒温培养10-30小时。

②发酵过程：

所述发酵过程用发酵培养基；牛肉膏0.2-0.8％，酵母膏0.2-0.8％，蛋白胨0.3-0.8％，葡萄糖0.1-0.9％，氯化钠0.2-0.6％；发酵培养基灭菌温度105-125℃，时间30分钟，蒸汽压力0.11-0.13Mpa；

A.一级发酵罐：将优良的肉汤菌种在无菌条件下按1-10％接种量接入一级种子罐，在25-40℃恒温培养10-50小时，罐压不超过0.02Mpa，通气量以能翻动培养液为宜；

B.二级发酵罐：将一级发酵培养液在无菌条件下按2-20％接种量接入发酵罐，在25-40℃恒温培养50-100小时，罐压不超过0.02Mpa；灭活放罐，灭活采用加温使发酵液温度达到70-120℃，保温20-60分钟，冷却静置。

③提纯过程：

发酵液进行浓缩，使浓缩液体积与发酵液体积比控制在1∶15-1∶35，控制pH7.0-7.4，加珍珠岩1-2.0％及活性炭2-4％，搅拌10-20分钟，过滤和抽滤提纯。

④配制：

经提纯后的甘露聚糖肽发酵液加0.01-0.015％香精(桔子香精、柠檬香精)、0.01-0.08％矫味剂(糖精钠、蛋白糖)溶解搅匀，加纯化水配制成含量为≥0.5mg/ml，pH4.0-6.0的配制液。

⑤灌装封口、灭菌：

将配制液按100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶、1000ml/瓶、2000ml/瓶、5000ml/瓶、10000ml/瓶、20000ml/瓶的不同包装规格进行灌装，封口，热压灭菌105-121℃，20-30分钟后，用亮兰色液抽真空检漏，真空压力-0.078-0.08Mpa。

⑥灯检、包装：

对灭菌后的α-甘露聚糖肽进行灯检，检查每瓶内不得有异物并挑净兰瓶。贴标签、装箱入库。

⑦检验：

按α-甘露聚糖肽的质量标准进行检验，合格后投入市场。

实施例1：取太空诱变菌种生产的含量为0.5mg/ml，pH4.0-6.0的甘露聚糖肽溶液1000ml，加入活性炭0.25g，搅匀，过滤，加入糖精钠0.1g，加入香精0.1ml，搅匀，灌装封口制成分别为：100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶、1000ml/瓶、2000ml/瓶、5000ml/瓶、10000ml/瓶、20000ml/瓶的不同包装规格的α-甘露聚糖肽，经流通蒸汽灭菌121℃，30分钟，灯检，包装，检验合格后投入市场，具体操做如上所述。

实施例2取太空诱变菌种生产的含量为3mg/ml，pH4.0-6.0的甘露聚糖肽溶液1000ml，加入活性炭0.25g，搅匀，过滤，加入蛋白糖0.5g，加入香精0.1ml，搅匀，灌装封口制成分别为：100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶、1000ml/瓶、2000ml/瓶、5000ml/瓶、10000ml/瓶、20000ml/瓶的不同包装规格的α-甘露聚糖肽，经流通蒸汽灭菌121℃，30分钟，灯检，包装，检验合格后投入市场。

实施例3取太空诱变菌种生产的含量为5mg/ml，pH4.0-6.0的甘露聚糖肽溶液1000ml，加入活性炭0.25g，搅匀，过滤，加入蛋白糖0.5g，搅匀，灌装封口制成分别为：100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶、1000ml/瓶、2000ml/瓶、5000ml/瓶、10000ml/瓶、20000ml/瓶的不同包装规格的α-甘露聚糖肽，经流通蒸汽灭菌121℃，30分钟，灯检，包装，检验合格后投入市场。

实施例4取空诱变菌种生产的含量为0.5mg/ml，pH4.0-6.0的甘露聚糖肽溶液1000ml，加入活性炭0.25g，搅匀，过滤，加入糖精钠0.1g，加入香精0.12ml，搅匀加纯化水配制成含量为0.5mg/ml，pH 4.0-6.0的配制液。取市售黄芪多糖原料药10g。按上述配方所列添加量无菌操作加入本发明的甘露聚糖肽配制液中混合均匀。灌装封口制成分别为：100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶、1000ml/瓶、2000ml/瓶、5000ml/瓶、10000ml/瓶、20000ml/瓶的不同包装规格的α-甘露聚糖肽，经流通蒸汽灭菌121℃，30分钟，灯检，取市售黄芪多糖原料药按每1000ml溶液10g添加量，经γ-射线照射，无菌操作加入。检验合格后投入市场，具体生产工艺如上所述制成溶液。

实施例5与实施例4操作过程相同，所不同的是取太空诱变菌种生产的含量为3mg/ml，pH4.0-6.0的甘露聚糖肽溶液1000ml，黄芪多糖为15g。

实施例6与实施例4操作过程相同，所不同的是取太空诱变菌种生产的含量为5mg/ml，pH4.0-6.0的甘露聚糖肽溶液1000ml，黄芪多糖为20g。

实施例7：取太空诱变菌种生产的含量为0.5mg/ml，pH4.0-6.0的甘露聚糖肽溶液1000ml，加入活性炭0.25g，搅匀，过滤，加入蛋白糖0.5g，加入香精0.1ml，搅匀，灌装封口制成分别为：100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶、1000ml/瓶、2000ml/瓶、5000ml/瓶、10000ml/瓶、20000ml/瓶的不同包装规格的α-甘露聚糖肽，经流通蒸汽灭菌121℃，30分钟，灯检，取市售左旋咪唑原料药按每1000ml溶液1.25g添加量，经γ-射线照射，无菌操作加入。检验合格后投入市场，具体生产工艺如上所述制成溶液。

实施例8与实施例7操作过程相同，所不同的是取太空诱变菌种生产的含量为3mg/ml，pH4.0-6.0的甘露聚糖肽溶液1000ml，左旋咪唑为13g。

实施例9与实施例7操作过程相同，所不同的是取太空诱变菌种生产的含量为5mg/ml，pH4.0-6.0的甘露聚糖肽溶液1000ml，左旋咪唑为37.5g。

Claims (1)

1、一种能增强畜禽免疫功能的兽药，其特征是：它是每1000ml含α-甘露聚糖肽500-5000mg的溶液，每1000ml溶液中含左旋咪唑37.5g；所述的溶液是将中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，编号为CGMCCNo.1082的菌株作为生产菌种，经一级发酵和二级发酵，生产甘露聚糖肽发酵液，将发酵液进行浓缩，控制浓缩液体积与发酵液体积比和pH，加珍珠岩及活性炭，搅拌10-20分钟，过滤和抽滤提纯后，加适量香精、矫味剂溶解配制，搅拌均匀后再过滤，灌装封口，热压灭菌后即为含有α-甘露聚糖肽的溶液；然后取市售左旋咪唑原料药按每1000ml溶液37.5g添加量，经γ-射线照射，无菌操作加入。