CN101062405B - 一种能预防和治疗禽流感的兽药 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种兽药，特别是一种能预防和治疗禽流感的兽药，其特征是：它是每1000ml含α-甘露聚糖肽500—5000mg的溶液；所述的溶液是将优选α-溶血性链球菌33#菌种进行太空搭载，经过太空诱变得菌珠作为生产菌种，经—级发酵和二级发酵，生产甘露聚糖肽发酵液，将发酵液提纯过滤后，加适量香精、矫味剂溶解配制，搅拌均匀后再过滤，灌装封口，热压灭菌后的发酵原液。它采用既治标又治本的方法，利用生化制剂增强机体免疫力，它具有疗效高、无耐药性、无配伍禁忌、无毒、无残留，符合国际兽药潮流。

Description

一种能预防和治疗禽流感的兽药

技术领域

本发明涉及一种兽药，特别是一种能预防和治疗禽流感的兽药。

背景技术

随着我国畜牧养殖业的发展，畜禽传染病已成为困扰畜牧业的一大难题。畜禽免疫失败、免疫力低下，常导致畜禽疾病复杂多变，特别是幼龄畜禽发病率和死亡率逐年增加。老病未除新病又不断出现，如鸡的传染性法氏囊病和猪的圆环病毒病均可使机体的免疫系统遭到破坏，导致机体反复发病反复治疗反复感染，用药量增加，提高了养殖业的成本。单一感染越来越少，混合感染的疾病越来越多。畜禽消化道疾病也不断发生，引起饲料利用率降低，生长缓慢，料耗增加，出栏时间延长。如鸡的球虫病导致鸡的肠道损伤出血下痢，引起鸡的肠炎和免疫力下降。虽然使用其他药物能使该病得到了控制和改善，但治标不治本，只能控制病情，复发率较高且导致药物残留，严重影响了肉蛋食品的质量和卫生。肠炎(病毒性、细菌性、霉菌性、寄生虫性)是动物的常发病、多发病，用于治疗单纯性肠炎的药物很多，也多有很好的疗效，但动物的肠炎常常反复发作或混合发作，造成畜禽肠道损伤严重，加之反复使用抗生素也是治疗效果不佳，病程冗长，甚至愈后不良，对畜牧业造成巨大损失。目前，用于肠道损伤修复的药物很少见到，仅有一些肠道粘膜保护剂的应用，但其疗效并不明显。因此，寻找和制备具有提高免疫功能、缩短疗程、降低药物的毒副作用和药物残留的兽药产品十分必要。

发明内容

本发明的目的是提供一种能预防和治疗禽流感的兽药，它采用既治标又治本的方法，利用生化制剂增强机体免疫力，它具有疗效高、无耐药性、无配伍禁忌、无毒、无残留，符合国际兽药潮流。

本发明的技术方案是设计一种能预防和治疗禽流感的兽药，其特征是：它是每1000ml含α-甘露聚糖肽500—5000mg的溶液。

所述的溶液是将优选α-溶血性链球菌33#菌种进行太空搭载，经过太空诱变精心选育的优良菌珠作为生产菌种，经—级发酵和二级发酵，生产甘露聚糖肽发酵液，将发酵液提纯过滤后，加适量香精、矫味剂溶解配制，搅拌均匀后再过滤，灌装封口，热压灭菌后的发酵原液。

所述的口服溶液每1000ml含有利巴韦林50-100g。

所述的能预防和治疗禽流感的兽药口服液的制备方法是：优选α-溶血性链球菌33#菌种进行太空搭载，经过太空诱变精心选育的α-溶血性链球菌33#菌珠作为生产菌种，经—级发酵和二级发酵，生产甘露聚糖肽发酵液，将发酵液提纯过滤后，加适量香精、矫味剂溶解配制，搅拌均匀后再过滤，灌装封口，热压灭菌105-121℃，20-30分钟，经灯检，按上述量取市售兽用利巴韦林原料药，经γ—射线照射，制成80—100目的粉剂，做无菌检验，合格后包装入库。

本发明的特点是：由于本发明在α—溶血链球菌生长规律的基础上，选定较合适生长时期的菌种，采用平皿生长的菌落、浸入其它物质中的菌悬液、带菌的砂土等方法，于2002年3月25日搭载“神舟三号”宇宙飞船。在太空轨道(近地点高度200公里、远地点高度350公里)进行了6天零18小时的在轨飞行。太空的特殊条件主要体现为微重力、高真空、高辐射、交变磁场等特殊环境。在外层空间飞行的菌种被置于一个与地球上的生态环境完全不同的环境中，主要包括来自磁场俘获的电子、质子及低能重粒子；来自银河系的宇宙射线如质子、粒子及更重的高能重粒子；来自太阳磁暴的质子及重粒子等。这些粒子作用于微生物细胞核中的DNA双链结构，可导致双链断裂。微重力、高真空环境可使DNA的碱基序列发生重组，即基因组的重组和变异。变异后产生的新菌株，其形态特征、培养特征、生理生化反应、代谢产物、遗传性状及蛋白表达、中试生产指标等均会发生不同程度的变化。在宇宙飞船返回地面后，经过进一步筛选，仅优选出其中0.2％的正变异且遗传特性稳定的菌株，经培育制成生产菌种。这种经航天搭载诱变后选育出的菌种已经在在2003年12月29日由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，编号为CGMCCNo.1082。(见附页)

特别是α—溶血链球菌D33菌株经太空搭载诱变，地面上的筛选、分离和纯化后，选育出发酵单位更高、所分泌的甘露聚糖肽含量更高的高产、优质菌株T33株。实验及中试生产结果表明，经空间诱变后的新型太空菌种在遗传特性上稳定，有较强的生产适应性，由其发酵产生的甘露聚糖肽含量提高，发酵含量比对照组产物含量平均高出三倍以上，发酵周期大大缩短。该菌株经培养、发酵、提纯及精制等高科技手段制备而成的口服液对治疗畜禽的消化道疾病有显著疗效。

药理及作用机理：

α—甘露聚糖肽进入肠道以后被水解为两部分，即甘露聚糖(低聚甘露糖)和碱性多肽。因为低聚甘露糖难以被胃肠吸收并且可以促进肠道内有益菌(双歧杆菌和乳酸菌)的生长繁殖，所以水解后生成的低聚甘露糖会直接进入大肠被有益菌利用。α—甘露聚糖肽即通过这两种水解产物发生作用。

调节免疫机能

甘露聚糖分子中含有磷酸成分。研究表明甘露聚糖中的磷酸含量较高时，对结合病原菌是不利的，但对免疫调节功能则是重要的。试验证明低聚甘露糖对巨嗜细胞和单核细胞有积极影响，增强其吞噬作用；提高血清中溶菌酶水平；刺激肿瘤坏死因子数(TNF)、白细胞介素(IL)、干扰素(IFN)和NO水平升高。TNF能抑制肿瘤细胞；IL和IFN是具有免疫活性的内源性肽，两者都可以激活或调节免疫应答中心；NO由巨嗜细胞产生，而NO具有直接杀伤肿瘤细胞的作用。

碱性多肽的功能

肽不仅是机体蛋白质代谢的底物，而且还具有其他重要的生物学作用。α—甘露聚糖肽水解产生的碱性多肽能作用于革兰氏阳性菌细胞成分-肽聚糖，切断连接N-乙肽葡胺和N-乙肽胞壁酸的聚糖链，丧失其坚韧性，细菌发生低渗透型的裂解，从而杀伤细菌。肽还有促进巨嗜细胞的吞噬作用，促进淋巴细胞和脾细胞的增殖作用，从而增强机体免疫力。

本发明对鸡禽流感预防和治疗试验：

1.试验鸡及分组：AA肉仔鸡，健雏400只，共4栋鸡舍，每栋鸡舍作为一个试验组。

2.饲养管理：各组均按统一供应的饲料，按标准饲养管理。

3.常规应激因子：饲养管理中不可避免的应激因素，如：消毒、换料、气候突变等(各组均同)。

4.实验方案：

(1)本发明的使用前三组为实验组，第1组鸡1日龄时饮用α-甘露聚糖肽，每天25ml，连续饮用7天，间隔7天再按同一剂量饮用7天；第2组鸡1日龄时饮用α-甘露聚糖肽+利巴韦林，每天25ml，连续饮用7天，间隔7天再按同一剂量饮用7天；第3组鸡1日龄时饮用利巴韦林，每天25ml，连续饮用7天，间隔7天再按同一剂量饮用7天。第4组，为对照组不使用本发明。第15天用禽流感强毒攻击。观察各组成活率和精神状态。

(2)实验结果见表1。

表1攻毒实验结果

 

分组	攻毒时存活只数	攻毒后12小时存活只数	阶段存活率(％)	攻毒后24小时存活只数	阶段存活率(％)	攻毒后48小时存活只数	阶段存活率(％)	总存活率(％)
									1	97	83	85.5	77	92.8	73	94.8	75.2
2	99	86	86.8	81	94.2	79	97.5	79.8
									3	98	81	82.6	70	86.4	64	91.4	65.3
4	95	66	69.4	54	81.8	13	24.1	13.7

由上表可以看出：单独使用α-甘露聚糖肽试验组鸡在攻毒后的总存活率为75.2％，高于利巴韦林饮用组的65.3％，α-甘露聚糖肽+利巴韦林饮用组在三个实验组中鸡的总存活率为79.8％，为最高；不使用本发明的对照组总存活率仅为13.7％。各实验组存活率与对照组经生物学统计，差异极显著(P<0.01)。

在攻毒后的各观察阶段，对照组鸡的采食、精神、粪便和呼吸症状均较明显的病理性变化，在攻毒后的12小时后即发生大量死亡，而各实验组虽有上述病理变化，但病理过程较慢。

5.结论：

(1)通过试验，说明本发明有显著的预防和治疗禽流感的作用，并可以缓解症状，提高受感染鸡群的存活率。

(2)本发明可以在禽流感受威胁区和发病地区商品肉鸡上大力推广

经大量的实验表明，经太空搭载菌种生产出的口服液具有如下特点：

1.显著的免疫增效作用：本发明可有效激活畜禽免疫系统的机能及其对抗原的反应能力，提高畜禽机体的抗体水平和免疫力。

2.极强的肠道损伤修复功能：本发明既可提高肠道粘膜组织SIgA、IgM等物质，又可增加大量细胞生长因子，促进肠道粘膜损伤的主动修复。

3.速清除畜禽肠道内的致病微生物，促进有益微生物的大量繁殖：本发明分子与肠道粘膜细胞上的特异性糖类受体结构相近似，并且与致病微生物的亲和力极强，它可以直接与肠道内的致病微生物直接结合，也可将已与肠粘膜细胞结合的致病微生物截取下来而排出体外。

4.良好的防病和促生长效果：经常使用本发明的畜禽，发病率(特别是免疫抑制性疾病：MD、IBD等)大幅度降低，还可刺激畜禽机体产生各类促生长因子，从而促进畜禽机体生长发育，提高饲料转化率。

适用动物：蛋鸡、肉鸡、鸭、肉鸽、鱼及水产类、猪、牛、羊、狗、猫等。

应用范围：

1.本发明作为幼龄畜禽的预防用药，可显著降低发病率、提高成活率和促进生长发育，提高大群发育整齐度。

2.配合畜禽免疫，可显著提高抗体水平，增强畜禽的抵抗力。

3.配合治疗畜禽病毒性疾病，如鸡新城疫、传支、鸭瘟、猪传染性胃肠炎等，用本发明配合治疗，可明显缩短疗程。

本发明对动物的作用：

1.增强动物免疫功能，提高畜禽对传染病的抵抗力。

2.抗病毒、抗感染。

具体实施方式

优选α-溶血性链球菌33#菌种进行太空搭载，经过太空诱变得α-溶血性链球菌33#菌珠作为生产菌种，经—级发酵和二级发酵，生产甘露聚糖肽发酵液，将发酵液提纯过滤后，加适量香精、矫味剂溶解配制，搅拌均匀后再过滤，灌装封口，热压灭菌105-121℃，20-30分钟，经灯检合格后包装入库，检验合格后最终生产出太空诱变菌种生产的本发明(α-甘露聚糖肽)。

①太空菌种制备：

以经过空间诱变得α-溶血链球菌作为生产菌种。

A.斜面种子培养基：牛肉膏0.2-0.8％，酵母膏0.2-0.8％，蛋白胨0.3-0.8％，葡萄糖0.1-0.8％，氯化钠0.2-0.6％，琼脂1-5％，绵羊血5-10％；pH7.2-7.4；

斜面种子培养基灭菌温度105-125℃，时间30分钟，蒸汽压力0.11-0.13Mpa；

启封菌种冷冻管，用无菌肉汤培养基稀释，在无菌条件下接入血斜面，接种后置30℃恒温培养24-30小时；

B.肉汤种子培养基：牛肉膏0.2-0.8％，酵母膏0.2-0.8％，蛋白胨0.3-0.8％，葡萄糖0.1-0.8％，氯化钠0.2-0.6％；pH7.0-7.4；

肉汤种子培养基灭菌温度105-125℃，时间30分钟，蒸汽压力0.11-0.13Mpa；将培养好的斜面菌种在无菌条件下按1-9％接种量接入肉汤种子培养基内，25-40℃恒温培养10-30小时。

②发酵过程：

所述发酵过程用发酵培养基；牛肉膏0.2-0.8％，酵母膏0.2-0.8％，蛋白胨0.3-0.8％，葡萄糖0.1-0.9％，氯化钠0.2-0.6％；发酵培养基灭菌温度105-125℃，时间30分钟，蒸汽压力0.11-0.13Mpa；

A.一级发酵罐：将优良的肉汤菌种在无菌条件下按1-10％接种量接入一级种子罐，在25-40℃恒温培养10-50小时，罐压不超过0.02Mpa，通气量以能翻动培养液为宜；

B.二级发酵罐：将一级发酵培养液在无菌条件下按2-20％接种量接入发酵罐，在25-40℃恒温培养50-100小时，罐压不超过0.02Mpa，灭活采用加温使发酵液温度达到70-120℃，保温20-60分钟，冷却静置。

③提纯过程：

发酵液进行浓缩，使浓缩液体积与发酵液体积比控制在1：15-1：35，控制pH7.0-7.4，加珍珠岩1-2.0％及活性炭2-4％，搅拌10-20分钟，过滤和抽滤提纯。

④配制：

经提纯后的甘露聚糖肽发酵液加0.01-0.015％香精(桔子香精、柠檬香精)、0.01-0.08％矫味剂(糖精钠、蛋白糖)溶解搅匀，加纯化水配制成含量为≥0.5mg/ml，pH4.0-6.0的配制液。

⑤灌装封口、灭菌：

将配制液按100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶、1000ml/瓶、2000ml/瓶、5000ml/瓶、10000ml/瓶、20000ml/瓶的不同包装规格进行灌装，封口，热压灭菌105-121℃，20-30分钟后，用亮兰色液抽真空检漏，真空压力-0.078-0.08Mpa。

⑥灯检、包装：

对灭菌后的α-甘露聚糖肽进行灯检，检查每瓶内不得有异物并挑净兰瓶。贴标签、装箱入库。

⑦检验：

按α-甘露聚糖肽的质量标准进行检验，合格后投入市场。

实施例1：取太空诱变菌种生产的含甘露聚糖肽的重量比为0.5mg/ml，pH4.0-6.0的甘露聚糖肽溶液1000ml，加入活性炭0.25g，搅匀，过滤，加入糖精钠0.1g，加入香精0.1ml、搅匀，灌装封口制成分别为：100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶、1000ml/瓶、2000ml/瓶、5000ml/瓶、10000ml/瓶、20000ml/瓶的不同包装规格的α-甘露聚糖肽，经流通蒸汽灭菌121℃，30分钟，灯检，包装，检验合格后投入市场，具体操做如上所述。

实施例2：与实施例1基本相同，所不同是甘露聚糖肽溶液中含甘露聚糖肽的重量比是3mg/ml或5mg/ml。

实施例3：取太空诱变菌种生产的含量为3mg/ml，pH4.0-6.0的甘露聚糖肽溶液1000ml，加入活性炭0.25g，搅匀，过滤，加入蛋白糖0.5g，加入香精0.1ml、搅匀，灌装封口制成分别为：100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶、1000ml/瓶、2000ml/瓶、5000ml/瓶、10000ml/瓶、20000ml/瓶的不同包装规格的α-甘露聚糖肽，经流通蒸汽灭菌121℃，30分钟，按上述量取市售兽用利巴韦林原料药，按每1000ml加入50g，还可以是100g经γ—射线照射，制成80—100目的粉剂，做无菌检验，灯检，包装，检验合格后投入市场。

实施例4与实施例3基本相同，所不同是按上述量取市售兽用利巴韦林原料药，按每1000ml加入70g或100g。

Claims (1)

1.一种能预防和治疗禽流感的兽药的制备方法：将中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，编号为CGMCCNo.1082的菌株作为生产菌种，经一级发酵和二级发酵，生产甘露聚糖肽发酵液，将发酵液提纯过滤后，加香精、矫味剂溶解配制，搅拌均匀后再过滤，灌装封口，热压灭菌105-121℃，20-30分钟，按终浓度50-100克/升的量加入市售兽用利巴韦林原料药，经γ-射线照射，制成80-100目的粉剂，做无菌检验，经灯检，合格后包装入库。