CN1634564A - 甘露聚糖肽口服颗粒剂的制备及用途 - Google Patents

Abstract

甘露聚糖肽口服颗粒剂的制备，其特征是：它将α－溶血链球菌菌种搭载往返式太空飞行器，在太空的特殊条件下导致α－溶血链球菌菌种遗传特性发生变异，返回地面后优选出其中的正变异、遗传特性稳定的菌种，该菌种已经在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，编号为CGMCCNo.1082，将该菌种作为生产菌种，再经菌种制备、一级发酵和二级发酵、提纯、加入载体干燥制粒，最终生产出口服颗粒剂。所述甘露聚糖肽口服颗粒剂用于治疗慢性胃炎；也用于治疗消化性溃疡，还可以用于治疗溃疡性结肠炎。这种甘露聚糖肽口服颗粒剂，它生产的甘露聚糖肽产量高，用途广，有效率高。

Description

甘露聚糖肽口服颗粒剂的制备及用途

                        技术领域

本发明涉及一种口服颗粒药物，特别是关于一种甘露聚糖肽口服颗粒剂的制备及用途。

                        背景技术

普通的α-溶血性链球菌33号生产的药物甘露聚糖肽早在1986年在国内上市，剂型有注射液，口服液，片剂，胶囊四种。并且它只作为一种免疫增强剂，药理作用是激活淋巴细胞，促进胸腺淋巴细胞分化增殖，促进机体的抗肿瘤免疫功能，激活巨噬细胞，使白细胞生成增加，促进补体生成，促进白细胞介素-1的生成，提高骨髓造血功能。原有技术发酵周期长，发酵单位低，生产成本高。注射给药患者痛苦大，胶囊，口服液和片剂给药患者服用后口感差，小儿服用不方便。因此有必要设计一种口服给药的新剂型。

                        发明内容

本发明的目的是提供一种甘露聚糖肽口服颗粒剂的制备及用途，它利用特殊环境使菌种遗传性质发生变异，优选出其中的正变异、遗传性质稳定的菌种，作为生产菌种，它生产的甘露聚糖肽产量高，用途广，有效率高。

本发明的技术方案是提供一种甘露聚糖肽口服颗粒剂的制备，其特征是：它将α-溶血链球菌菌种搭载往返式太空飞行器，在太空的特殊条件下导致α-溶血链球菌菌种遗传特性发生变异，返回地面后优选出其中的正变异、遗传特性稳定的菌种，该菌种已经在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，编号为CGMCCNo.1082，将该菌种作为生产菌种，再经菌种制备、一级发酵和二级发酵、提纯、加入载体干燥制粒，最终生产出口服颗粒剂。

所述甘露聚糖肽口服颗粒剂用于治疗慢性胃炎。

所述甘露聚糖肽口服颗粒剂用于治疗消化性溃疡。

所述甘露聚糖肽口服颗粒剂用于治疗溃疡性结肠炎。

所述甘露聚糖肽口服颗粒剂用于治疗帕金森氏综合症。

所述甘露聚糖肽口服颗粒剂用于治疗哮喘。

所述甘露聚糖肽口服颗粒剂用于治疗咽炎。

所述甘露聚糖肽口服颗粒剂用于治疗神经衰弱。

所述甘露聚糖肽口服颗粒剂用于改善睡眠。

所述甘露聚糖肽口服颗粒剂用于治疗小儿厌食症。

本发明的特点是：由于本发明将α-溶血链球菌菌种搭载返回式太空飞行器(宇宙飞船或返回式卫星)，利用太空中微(零)重力、宇宙射线、交变磁场、高真空、高热深冷等因素的综合作用，使菌株的DNA双链结构断裂，基因组发生重排，从而产生新的菌株。返回地面后，对经过太空搭载的菌株进行培养和筛选，通过研究其形态特征、培养特征、生理生化反应、代谢产物、遗传性状及蛋白表达、遗传稳定性、中试生产指标等内容，优选出其中的正变异、遗传特性稳定的菌种，经培养发酵后得到治疗各种疾病的药物。该菌种已经在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，编号为CGMCCNo.1082。

特别是α-溶血链球菌D33菌株经太空搭载诱变，地面上的筛选、分离和纯化后，选育出发酵单位更高、所分泌的甘露聚糖肽含量更高的高产、优质菌株T33株。通过中国科学院微生物研究所对T33菌株及D33菌株的全细胞蛋白SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)分析和菌株的基因组DNA限制性酶切分析(RFLP/PFGE)比较，可以证明空间诱变及地面筛选出的T33菌株其基因有变异。该突变菌株在遗传上稳定，有较强的生产适应性，由其发酵产生的甘露聚糖肽含量提高，多肽含量比国家标准(80％)提高3至5倍，西安市药品检验所送样测定达到271.6％，发酵含量比对照组产物含量平均高出三倍以上。该菌株经培养、发酵、提纯及精制等高科技手段制备而成的口服颗粒可对治疗各种疾病并具有增强免疫的作用。

(见附件：附件材料1：陕西省科学技术厅陕西省科学技术成果鉴定证书材料

附件材料2：太空诱变菌种生产的甘露聚糖肽生产菌株经“神舟三号”飞船搭载公证书。

附件材料3：太空诱变菌种生产的甘露聚糖肽生产菌株经“神舟三号”飞船搭载返回地面筛选报告

附件材料4：中国科学院微生物所关于“神舟三号”飞船搭载太空诱变菌种生产的甘露聚糖肽生产菌株与地面对照菌的形态生理生化鉴定报告书

附件材料5：中国科学院微生物所关于“神舟三号”飞船搭载太空诱变菌种生产的甘露聚糖肽生产菌株与地面对照菌的SDS-PAGE及RFLP/PFGE分析鉴定报告书

附件材料6：陕西省药品检验所“神舟三号”太空诱变菌种生产的甘露聚糖肽口服液检测报告

附件材料7：科技查新报告复印件

附件材料8：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏菌种保藏受理通知书复印件)

新药理作用试验分析验证：溃疡性结肠炎的病因与大肠杆菌的某些菌株释放出损伤肠粘膜的有害物质，人HLA-B27基因表达，结肠上皮40 KD抗原特异性抗体存在有关。患者结肠粘膜可能存在与遗传有关的原发性的上皮细胞的异常，这种异常的上皮细胞分泌异常的粘液糖蛋白，改变了正常结肠粘膜的通透性，使一般不易通过正常肠粘膜、对正常人无害的肠道共生菌群及食物等抗原，可能进入肠粘膜，从而激发一系列抗原特异性免疫反应。有关治疗溃疡性结肠炎甘露聚糖肽新的药理作用是：空太诱变菌种生产的甘露聚糖肽口服后在肠道内分解为甘露聚糖和多肽，甘露聚糖的作用是维护人体肠道的正常环境，促进双歧杆菌等有益菌群的自然增殖，对食物中各项主成份均有提升其营养吸收效率。多肽经消化上皮摄取进入肠淋巴结群。被淋巴结内巨噬细胞吞噬后发挥免疫活性。促进巨噬细胞分泌碱性成纤维细胞生长因子bFGF使溃疡性结肠炎创面修复并可维护肠屏障功能，降低肠道细菌向胰、肝、肾、脾和肠系膜淋巴结的移位率。它还具有激活淋巴细胞，促进胸腺淋巴细胞分化增殖，促进机体的抗肿瘤免疫功能，激活巨噬细胞，使白细胞生成增加，促进补体生成，促进白细胞介素-1的生成，提高骨髓造血功能。适用范围是：1.反复呼吸道感染2.各种恶性肿瘤的辅助治疗3.再生障碍性贫血及各种原因引起的WBC、血小板减少症。

动物实验证实口服甘露聚糖肽500微克/100克每天两次共三周治疗由同种动物结肠黏膜均浆加Freund佐剂，制成1∶1乳剂，给大鼠足趾肉垫内注射诱发的大鼠慢性溃疡性结肠炎模型，可以明显加速溃疡的愈合。

新用途验证：经过对一千例使用“神舟三号”甘露聚糖肽口服颗粒患者的调查发现56例溃疡性结肠炎患者，在服药四周后腹泻，粘液脓血便，腹痛等症状消失。三个月后回访无复发。其中19例经服药前后结肠镜检查对照溃疡完全愈合。有效率96％

新药理作用试验分析验证：慢性胃炎的感染因素可由太空诱变菌种生产的甘露聚糖肽的增强免疫作用消除。但是慢性胃炎进展中出现的肠上皮化生和不典型增生以及假幽门腺化生，与壁细胞受损自身抗原刺激集体免疫系统产生壁细胞抗体和内因子抗体有关。使用增强免疫治疗无效。太空诱变菌种生产的甘露聚糖肽治疗慢性胃炎粘膜病变的机理是促进胃粘膜再生修复，通过促进胃粘膜上皮细胞增生分化成熟，再生加速。逆转肠上皮化生和不典型增生以及假幽门腺化生而实现。动物实验证实表皮生长因子EGF在服药组中活性明显增强。切除大鼠颌下腺诱发的典型慢性胃炎粘膜病变通过口服太空诱变菌种生产的甘露聚糖肽可以消除。而表皮生长因子EGF在消化道中的生理作用是激活鸟氨酸脱羧酶ODC，促进黏膜细胞DNA合成。抑制胃酸分泌。促进上皮增生。增加胃粘膜血流量。促进肠粘膜对谷氨酰胺的转运和利用。

新用途验证：经过对一千例使用“神舟三号”太空诱变菌种生产的甘露聚糖肽口服颗粒患者的调查发现778例各种慢性炎症患者合并消化道功能障碍者，在服药一周后餐后上腹饱胀，无规律性隐痛，嗳气，反酸，烧灼感，食欲不振，恶心，呕吐等症状消失。其中反复呼吸道感染合并慢性胃炎者543例，慢性胆囊炎胆囊切除术后综合症59例，老年性骨关节炎服用解热镇痛药者96例，其他80例。既往有明确上消化道出血病史者26例，有酗酒史者4例。三个月后回访坚持服药的681例患者症状无反复，其中服药前有胃镜明确诊断的66例，服药后复查胃镜胃粘膜病变消失粘膜恢复正常。

治疗消化性溃疡甘露聚糖肽新的药理作用包括增强抗幽门螺杆菌感染的增强免疫作用，和促进胃十二指肠粘膜再生修复作用。概括为提高防御修复能力。消化性溃疡的感染因素以及幽门螺杆菌耐药可由甘露聚糖肽的增强免疫作用消除。甘露聚糖肽治疗消化性溃疡粘膜病变的主要机理是促进胃十二指肠粘膜再生修复，通过促进溃疡部位巨噬细胞分泌碱性成纤维细胞生长因子bFGF使消化性溃疡创面修复。动物实验证实口服甘露聚糖肽500微克/100克每天两次共三周治疗由半胱胺诱发的大鼠十二指肠溃疡，可以明显加速溃疡的愈合，且疗效优于口服西米替丁10毫克/100克，每天两次共三周。进一步研究发现用250微克/100克每天两次共三周治疗大鼠实验性胃溃疡(乙酸诱发)，溃疡面积缩小到每平方毫米(2.0±0.6)，而用西米替丁10毫克/100克溃疡面积为每平方毫米(7.5±2.1)，差别有显著差异。组织学检查还发现bFGF加西米替丁治疗能明显减轻溃疡周围的炎症反应和坏死程度。BFGF对ANP时肠粘膜损伤修复具有促进作用，可维护肠屏障功能，降低肠道细菌向胰、肝、肾、脾和肠系膜淋巴结的移位率，并降低血浆内毒素(LPS)和内皮素-1(ET-1)水平，可预防ANP继发感染，是一种减轻肠道损伤的有效生物活性物质。其机制有：①抑制脂质过氧化过程，减轻肠道脂质过氧化损伤；②促进肠粘膜DNA表达和蛋白质合成，有利于肠道损伤的修复；③减轻内毒素血症，阻止LPS介导炎症反应对肠道的进一步损伤；④bFGF的舒血管作用有利于开放微小血管，改善肠道局部微循环，缩血管活性物质(ET-1)生成减少，肠粘膜缺血性损害得以减轻；⑤肠粘膜上存在生长因子受体，当bFGF与之作用后，通过其促分裂效应而加速肠粘膜

上皮细胞的整复和增殖，促进已受损粘膜上皮修复。

>新用途验证：经过对一千例使用“神舟三号”甘露聚糖肽口服颗粒患者的调查发现268例消化性溃疡患者，在服药一周后节律性上腹痛，嗳气，反酸，饥饿样不适感，胀满，厌食等症状消失。三个月后回访无复发。其中56例经服药前后胃镜检查对照溃疡完全愈合。有效率93％

                        具体实施方案

菌种选育：在α-溶血链球菌生长规律的基础上，选定较合适生长时期的菌种，采用平皿生长的菌落、浸入其它物质中的菌悬液、带菌的砂土等方法，于2002年3月25日搭载“神舟三号”宇宙飞船。在太空轨道(近地点高度200公里、远地点高度350公里)进行了6天零18小时的在轨飞行。太空的特殊条件主要体现为微重力、高真空、高辐射、交变磁场等特殊环境。在外层空间飞行的菌种被置于一个与地球上的生态环境完全不同的环境中，主要包括来自磁场俘获的电子、质子及低能重粒子；来自银河系的宇宙射线如质子、粒子及更重的高能重粒子；来自太阳磁暴的质子及重粒子等。这些粒子作用于微生物细胞核中的DNA双链结构，可导致双链断裂。微重力、高真空环境可使DNA的碱基序列发生重组，即基因组的重组和变异。变异后产生的新菌株，其形态特征、培养特征、生理生化反应、代谢产物、遗传性状及蛋白表达、中试生产指标等均会发生不同程度的变化。在宇宙飞船返回地面后，经过进一步筛选，仅优选出其中0.2％的正变异且遗传特性稳定的菌株，经培育制成生产菌种。这种经航天搭载诱变后选育出的菌种已经在在2003年12月29日由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，编号为CGMCCNo.1082。

实验及中试生产结果表明，经空间诱变后的新型太空菌种在遗传特性上稳定，有较强的生产适应性，由其发酵产生的甘露聚糖肽含量提高，多肽含量比国家标准(80％)提高3至5倍，西安市药品检验所送样测定达到271.6％，发酵含量比对照组产物含量平均高出三倍以上，发酵周期大大缩短。

制备方法：

太空诱变菌种生产甘露聚糖肽的制备过程：

本发明所述的太空诱变菌种生产的甘露聚糖肽是由以下方法制备：太空菌种制备---一级发酵---二级发酵----发酵液提纯，最终生产出甘露聚糖肽。

①太空菌种制备：

以经过空间诱变育种精心选育的α-溶血链球菌作为生产菌种。

A.斜面种子培养基：牛肉膏0.5％，酵母膏0.6％，蛋白胨0.5％，葡萄糖0.4％，氯化钠0.5％，琼脂3％，绵羊血8％；pH 7.4。

斜面种子培养基灭菌温度121℃，时间30分钟，蒸汽压力0.12Mpa。

启封菌种冷冻管，用无菌肉汤培养基稀释，在无菌条件下接入血斜面，接种后置38℃恒温培养30小时。

B.肉汤种子培养基：牛肉膏0.5％，酵母膏0.6％，蛋白胨0.5％，葡萄糖0.4％，氯化钠0.5％；pH 7.4。

肉汤种子培养基灭菌温度121℃，时间30分钟，蒸汽压力0.12Mpa。

将培养好的斜面菌种在无菌条件下按9％接种量，接入肉汤种子培养基内，38℃恒温培养30小时。

②发酵过程：

发酵培养基：牛肉膏0.4％，酵母膏0.5％，蛋白胨0.5％，葡萄糖0.4％，氯化钠0.5％。

发酵培养基灭菌温度121℃，时间30分钟，蒸汽压力0.12Mpa。

A.一级发酵罐：将优良的肉汤菌种在无菌条件下按10％接种量，接入一级种子罐，在29℃恒温培养30小时，罐压不超过0.02Mpa，通气量以能翻动培养液为宜，连续充分搅拌。

B.二级发酵罐：将一级发酵培养液在无菌条件下按20％接种量，接入发酵罐，在29℃恒温培养70小时，罐压不0.02Mpa，灭活放罐。灭活采用加温使发酵液温度达到100℃，保温60分钟，冷却静置。

③提取过程：

a、发酵液进行浓缩，使浓缩液体积与发酵液体积比控制在1∶15-1∶20或酌情而定。

b、发酵液的浓缩液加入80-99％乙醇，体积量比控制在1∶1.5-1∶5.5或酌情而定。充分搅拌静置后，离心去除上清液，沉淀用蒸馏水溶解，调pH5.0，得到溶解液并将溶解液静置。

c、再将溶解液离心去除杂质得到上清液，准确量取清液体积，按上清液体积计算出所需乙醇量，调pH值，将乙醇缓慢加入到上清液中，并充分搅拌，静置后离心去除上清液得到沉淀物。

d、沉淀物再用蒸馏水溶解，调pH，离心，上清液再加乙醇沉淀。这样的工艺反复操作至中间检测合格为止，得到的沉淀物为太空诱变菌种生产的甘露聚糖肽粗品。真空干燥3-8小时，即得到太空诱变菌种生产的甘露聚糖肽产品。

上述方法得到的产品的检验：

[性状]本品为白色或微黄色无定形粉末；无臭、无味。

本品在水中易溶，在乙醇、氯仿及丙酮中不溶。

比旋度：取本品，精密称定，加水溶解并稀释成每1ml中约含10mg的溶液，依法测定(中国药典2000年版二部附录vIE)，比旋度为+70℃至+80℃。

[鉴别]1、取本品10mg，加水0.5ml使溶解，加a-萘酚乙醇溶液(5-100)1ml，摇匀，沿管壁缓缓加硫酸0.5ml，数分钟后，界面呈紫红色。

2、取本品，加水制成每1ml中含1mg的溶液，取约10ul点于滤纸上，晾干，用无水乙醇固定，置高硝酸溶液(取高碘酸1.2g，加水30ml溶解后.加0.2mol/L醋酸钠溶液1.5ml与乙醇100ml，混匀即得。置暗处保存，可使用数月)中浸泡5分钟，取出，用70％乙醇溶液冲洗，置还原液(取碘化钾5g，硫代硫酸钠5g，加水100ml使溶解，再加乙醇1 50ml、2mol/L盐酸液2.5ml，随加随搅拌，临用时配)中浸泡5分钟，取出，用70％乙醇溶液冲洗，置品红业硫酸试液中浸泡约30分钟，取出，用焦亚硫酸钠溶液(取焦亚硫酸钠0.4g，加盐酸1ml，加水溶解使成100ml，即得)，冲洗，晾干，在滤纸片点样处应呈紫红色。

3、取供试品和对照品适量，分别加氯化钠注射液制成每1ml中含1mg的溶液作为供试品溶液和对照品溶液，按甘露聚糖肽免疫原性测定法试验，供试品和对照品管应均无溶血发生。

[检查]1、酸度：取本品，加水制成每1ml中含I0mg的溶液，依法测定(中国药典2000年版二部附录VIH)，pH值应为3.0-5.0。

2、吸收度：取本品，加水制成每1ml中含0.4mg的溶液，照分光光度法(中国药典2000年版二部附录VIA)，在260nm的波长处，其吸收度不得大于0.25，在280nm的波长处，其吸收度不得大于0.20。

3、总氮量：取本品，照氮测定法(中国药典2000年版二部附录VIID第二法)测定。按干燥品计算，含总氮量应为0.8-2.0％。

4、免疫原性：取供试品和对照品适量，分别加氯化钠注射液制成每1ml中含10mg的溶液，再分别用磷酸盐缓冲液制成1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256的稀释液作为供试品溶液和对照品溶液，依法检查(附甘露聚糖肽免疫原性测定法)，供试品不溶血管的最低浓度应不得高于对照品相应浓度的一倍以上。

5、干燥失重  取本品，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过5.0％(中国药典2000年版二部附录VIIIL)。

6、重金属  取本品，在1.0g，依法检查(中国药典2000年版VIIIH)含重金属不得过百万分之二十。

7、异常毒性取本品，加氯化钠注射液制成每1ml中含0.5mg的溶液，依法检查(中国药典2000年版附录XIC)。按静脉注射法给药，应符合规定(供注射用)。

[含量测定]

1.对照品溶液的制备

精密称取经105℃干燥至恒重的D-甘露糖对照品0.1g置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度。摇匀；精密量取5ml，置100ml的量瓶中，加水至刻度，摇匀。每1ml中含甘露糖50ug。

2.供试品溶液备

取本品适量，精密称定，加水溶解制成每1ml中含40ug的溶液。

3.标准曲线的制备

精密称取对照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分别置具塞试管中，各加水至1.0ml，再加3％苯酚溶液1.0ml，摇匀，冲入硫酸4.5ml，摇匀，放置于室温，以0管为空白.照分光光度法(中国药典2000年版二部附录IVA)在490nm的波长处测定吸收度。以甘露糖ug数对相应的吸收度，计算回归方程。

4.测定法

精密量取供试品溶液1.0ml，照标准曲线制备项下自“再加3％苯酚溶液1.0ml”起，依法操作，测定吸收度，由回归方程计算甘露糖的含量。甘露聚糖肽免疫原性测定法(补体结合法)；

1、试液

A.酸盐缓冲液(pH7.2)

取氯化钠8.5g、磷酸氢二钠0.565g及磷酸二氢钾0.135g，加水至1000ml使其溶解，加10％硫酸镁溶液1ml，摇匀。

B.1％羊红细胞悬液

羊血红细胞的制备：由绵羊颈静脉无菌采血于盛有等量阿氏液(取葡萄糖20.5g、枸椽酸钠8.0g、氯化钠4.2g，枸椽酸5.5g，加水至1000mI使溶解，100℃灭菌30分钟)的无菌容器中，4C保存。

1％羊血红细胞悬液的制备：取上述羊血红细胞适量，用氯化钠注射液洗涤三次，每次离心5分钟(2000转/分)，取压积羊血红细胞，用氯化钠注射液制成1％羊血红细胞悬液。取悬液，用氯化钠注射液稀释20倍制成供试品溶液，另取等量悬液加水稀释20倍作为空白溶液，照分光光度法(中国药典2000年版二部附录IVA)，在541nm的波长处测定，其吸收度应为0.65-0.70，如超出限度应调节1％羊红细胞悬液的浓度。

C.溶血素及致敏羊血红细胞

溶血素的制备：取上述压积羊血红细胞，用氯化钠注射液制成25％羊血红细胞悬液.取家兔1只，静脉注射上述羊血红细胞悬液，每日一次，共七次，前三次3ml，后三次5ml，末次注射后七日采血。分离血清，56℃。30分钟灭活，分装，0℃以下保存。

溶血素单位的测定：取溶血素适量，加磷酸盐缓冲液分别制成1∶1000、1∶2000、1∶3000、1∶4000、1∶5000、1∶6000、1∶7000、1∶8000、1∶9000、1∶10000的稀释液，各取0.1ml置试管中，加1％羊血细胞悬液0.1ml，摇匀，加稀释度为1∶30的豚鼠血清(补体)0.2ml及磷酸盐缓冲液0.2ml，摇匀，37℃保温30分钟，完全溶血管的最高稀释度为1单位溶血素。

致敏羊血红细胞的制备：临用前，将2％的羊血红细胞悬液与2单位溶血索等体积混合，37℃保温15分钟即得。

补体：取三只以上的豚鼠，心脏采血，离心分离血清，0℃以下保存。

补体单位的测定：取补体适量，加磷酸盐缓冲液，分别制成1∶40、1∶60、1∶80、1∶100、1∶120、1∶140、1∶160、1∶180的稀释液，各取0.2ml置试管中，加0.2ml磷酸盐缓冲液，摇匀，37℃保温30分钟后，分别加致敏羊血红细胞0.2ml，摇匀，37℃再保温30分钟。完全溶血管的最高稀释度为1单位的补体。

抗体：取甘露聚糖肽对照品适量，加氯化钠注射液制成每1ml中含10mg的对照品溶液免疫家兔，隔日采用耳静脉注射对照品溶液一次。第一次注射0.2ml，第二次至第五次各注射0.5ml，第六次至第十次各注射1.0ml，第十一次至第十五次各注射2.0ml，末次注射后三日采血，离心分离血清，56℃下30分钟灭活，分装，0℃以下保存(临用前，需56℃30分钟再次灭活)。

抗体单位的测定：取抗体适量，加磷酸盐缓冲液分别制成1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32.1∶64、1∶128的稀释液，各取0.1ml置试管中，加甘露聚糖肽对照品溶液0.1ml及2单位补体0.2m]，摇匀，于4-8℃放置4小时以上，置37℃保温30分钟，不溶血管的最高稀释度为1单位抗体。同时设抗原(不加抗体，以0.1ml磷酸盐缓冲液代替)、抗体(不加抗原，以0.1ml磷酸盐缓冲液代替)、补体(不加抗原，抗体，以0.2ml磷酸盐缓冲液代替)对照管，以上三种对照管应全溶血；另设的致敏羊血红细胞(不加抗原、抗体和补体，以0.4ml磷酸盐缓冲液代替)对照管应不溶血。

2、免疫原性测定法

取甘露骤糖肽对照品与供试品适量，照药品项下的规定制成不同浓度的对照品溶液和供试品溶液，各取0.1ml置试管中，加入2单位抗体0.1ml及2单位补体0.2ml。摇匀，于4-8℃放置4小时以上，置37℃保温30分钟，加入致敏羊血红细胞0.2ml，摇匀，37℃再保温30分钟。观察各管的溶血情况，不溶血管的最低浓度代表甘露聚糖肽的免疫原性。同时设抗原(不加抗体，以0.1ml磷酸盐缓冲液代替)、抗体(不加抗原，以0.1ml磷酸盐缓冲液代替)、补体(不加抗原、抗体、以0.2ml磷酸盐缓冲液代替)对照管，以上三种对照管应全溶血：另设的致敏羊血红细胞(不加抗原、抗体和补体，以0.4ml磷酸盐缓冲液代替)对照管应不溶血。

甘露聚糖肽口服颗粒的制备方法

是以甘露聚糖肽为原药，加入适宜辅料制成的干燥颗粒，此颗粒既可吞服，也可溶解在水中服用，它的特点是：飞散性、附着性、聚集性、吸湿性等均较小，有利于分剂量；服用方便，适当加入芳香剂、矫味剂、着色剂等可制成色、香、味俱全的药物。其制备过程是：先将精粉粉碎、过筛，加入可溶性淀粉等混合，再加入有机溶剂、乙醇及色素，溶液在混合机上混合，再在制粒机上制粒烘干，或在沸腾制粒机上混合制粒，将芳香剂溶于乙醇中，均匀的喷入干颗粒中并密闭1-2小时，通过整粒最终制成一定粒度的均匀颗粒。

实施例1

制备规格为5mg/袋的甘露聚糖肽颗粒，每袋重5克。

工艺方法：先将甘露聚糖肽精粉及蔗糖粉碎过筛备用。

取经粉碎过滤的甘露聚糖肽1克，蔗糖800克，可溶性淀粉200克在混合机上加入经溶解柠檬黄0.05克的乙醇溶液适量，经40-100分钟混合后制成软材，移至制粒机上过14目筛，制粒再移至烘干室(机)烘干，烘干温度在55-65℃制成甘露聚糖肽颗粒，将食用香精溶解于适量乙醇中，均匀的喷入颗粒中，并密闭1-2小时，颗粒再经整粒，粒度要不能通过1号筛和能通过5号筛的总和不能超过15％，最终制得均匀颗粒，分装制成200袋中即得。

实施例2

制备规格为10mg/袋的甘露聚糖肽颗粒，每袋重5克。

工艺方法：先将甘露聚糖肽精粉及蔗糖粉碎过筛备用。

将称好的甘露聚糖肽2克，蔗糖800克，可溶性淀粉200克放入沸腾制粒机中，经溶解柠檬黄0.05克的乙醇溶液适量作为黏合剂加入，烘干温度在55-65℃，烘干40-100分钟制成甘露聚糖肽颗粒，将食用香精溶解于适量乙醇中，均匀的喷入颗粒中，并密闭1-2小时，颗粒再经整粒，粒度要不能通过1号筛和能通过5号筛的总和不能超过15％，最终制得均匀颗粒，分装制成200袋中即得。

实施例3：制备规格为0.25mg/袋的甘露聚糖肽颗粒，每袋重5克。

工艺方法：先将甘露聚糖肽精粉及蔗糖粉碎过筛备用。

取经粉碎过滤的甘露聚糖肽0.5克，蔗糖800克，可溶性淀粉200克在混合机上加入经溶解柠檬黄0.05克的乙醇溶液适量，经40-100分钟混合后制成软材，移至制粒机上过14目筛制粒，再移至烘干室(机)烘干，烘干温度在55-65℃，制成甘露聚糖肽颗粒，将食用香精溶解于适量乙醇中，均匀的喷入颗粒中，并密闭1-2小时，颗粒再经整粒，粒度要不能通过1号筛和能通过5号筛的总和不能超过15％，最终制得均匀颗粒，分装制成200袋中即得。

Claims (10)

1、甘露聚糖肽口服颗粒剂的制备，其特征是：它将α-溶血链球菌菌种搭载往返式太空飞行器，在太空的特殊条件下导致α-溶血链球菌菌种遗传特性发生变异，返回地面后优选出其中的正变异、遗传特性稳定的菌种，该菌种已经在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，编号为CGMCCNo.1082，将该菌种作为生产菌种，再经菌种制备、一级发酵和二级发酵、提纯、加入载体干燥制粒，最终生产出口服颗粒剂。

2、根据权利要求1所述的甘露聚糖肽口服颗粒剂的用途，其特征是：所述甘露聚糖肽口服颗粒剂用于治疗慢性胃炎。

3、根据权利要求1所述的甘露聚糖肽口服颗粒剂的用途，其特征是：所述甘露聚糖肽口服颗粒剂用于治疗消化性溃疡。

4、根据权利要求1所述的甘露聚糖肽口服颗粒剂的用途，其特征是：所述甘露聚糖肽口服颗粒剂用于治疗溃疡性结肠炎。

5、根据权利要求1所述的甘露聚糖肽口服颗粒剂的用途，其特征是：所述甘露聚糖肽口服颗粒剂用于治疗帕金森氏综合症。

6、根据权利要求1所述的甘露聚糖肽口服颗粒剂的用途，其特征是：所述甘露聚糖肽口服颗粒剂用于治疗哮喘。

7、根据权利要求1所述的甘露聚糖肽口服颗粒剂的用途，其特征是：所述甘露聚糖肽口服颗粒剂用于治疗咽炎。

8、根据权利要求1所述的甘露聚糖肽口服颗粒剂的用途，其特征是：所述甘露聚糖肽口服颗粒剂用于治疗神经衰弱。

9、根据权利要求1所述的甘露聚糖肽口服颗粒剂的用途，其特征是：所述甘露聚糖肽口服颗粒剂用于改善睡眠。

10、根据权利要求1所述的甘露聚糖肽口服颗粒剂的用途，其特征是：所述甘露聚糖肽口服颗粒剂用于治疗小儿厌食症。