CN104208678B - 一种兽用抗病毒组合物、冻干粉、制备方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种兽用抗病毒组合物、冻干粉、制备方法及应用，属于兽用饲料添加剂技术领域。该兽用抗病毒组合物主要由以下重量份数的组分组成：兽用抗病毒卵黄抗体85～100份、兽用抗病毒转移因子1～5份、α-干扰素1～5份；优选的，还包括以下重量份数的组分：黄芪多糖5～10份、当归多糖5～10份、枸杞多糖10～20份、甘草多糖10～30份。本发明将兽用抗病毒卵黄抗体、兽用抗病毒转移因子、α-干扰素与黄芪多糖、当归多糖、枸杞多糖、甘草多糖联用，具有针对性强、抗体效价高、生物活性好等优点，能够提高机体的免疫力和抗病能力，有效预防兽类病毒性疾病。
Description
技术领域
本发明具体涉及一种兽用抗病毒组合物，同时还涉及兽用抗病毒冻干粉，以及该冻干粉的制备方法和应用，属于兽用饲料添加剂技术领域。
背景技术
猪业在我国养殖业中占有较重的份额，但是随着猪肉需求的逐年递增，养猪过程中出现的问题也越来越多，其中猪瘟、猪细小病毒病、猪伪狂犬病、猪蓝耳病等病毒性疾病，给养猪业造成了巨大的经济损失。
目前，人们主要通过中药、西药、接种免疫等方法来防治病毒性疾病。其中，中药是主要研究方向之一，但是中药的种类较多，相同药材对不同禽畜疾病的作用差异极大，因此存在一定的局限性。而西药如抗生素类易产生药物残留，给肉类产品带来了极大的安全隐患，且抗生素类药物长期使用易产生抗性毒株。生物治疗如接种免疫的早期效果较好，但需要多次接种，操作麻烦，成本较高，容易使仔猪产生应激反应，且疫苗对保藏条件要求较高，需要在2～8℃条件下冷藏，室温条件下一段时间则失去效果。注射卵黄抗体也是较为常见的一种方法，但是单一注射卵黄抗体的免疫效果有时候不能满足实际需要。
发明内容
本发明的目的是提供一种兽用抗病毒组合物。
同时，本发明还提供一种兽用抗病毒冻干粉。
再者，本发明还提供一种兽用抗病毒冻干粉的制备方法。
最后，本发明还提供一种兽用抗病毒冻干粉作为饲料添加剂的应用。
为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：
一种兽用抗病毒组合物，主要由以下重量份数的组分组成：兽用抗病毒卵黄抗体85～100份、兽用抗病毒转移因子1～5份、α-干扰素1～5份。
优选的，一种兽用抗病毒组合物，还包括以下重量份数的组分：黄芪多糖5～10份、当归多糖5～10份、枸杞多糖10～20份、甘草多糖10～30份。
一种兽用抗病毒冻干粉，主要由以下重量份数的组分组成：兽用抗病毒卵黄抗体85～100份、兽用抗病毒转移因子1～5份、α-干扰素1～5份、防腐剂0.01～0.02份、灭活剂0.2～0.3份、耐热冻干保护剂3～6份。
优选的，一种兽用抗病毒冻干粉，还包括以下重量份数的组分：黄芪多糖5～10份、当归多糖5～10份、枸杞多糖10～20份、甘草多糖10～30份。
所述的兽用抗病毒卵黄抗体与兽用抗病毒转移因子所针对的病毒种类相同，如抗猪瘟卵黄抗体与抗猪瘟转移因子、抗猪细小病毒卵黄抗体与抗猪细小病毒转移因子、抗猪伪狂犬病卵黄抗体与抗猪伪狂犬病转移因子、抗猪蓝耳病卵黄抗体与抗猪蓝耳病转移因子、抗猪口蹄疫卵黄抗体与抗猪口蹄转移因子、抗犬瘟热卵黄抗体与抗犬瘟热转移因子、抗犬细小病毒卵黄抗体与抗犬细小病毒转移因子等。
所述的防腐剂为硫柳汞。
所述的灭活剂为甲醛。
所述的耐热冻干保护剂由以下重量份数的组分组成：维生素C0.5～1份、维生素E1～2份、聚乙烯吡咯烷酮1～2份、甘氨酸0.5～1份。
所述兽用抗病毒转移因子可以为市售商品，也可以采用以下方法制备得到：
（1）用灭菌后的生理盐水清洗采用兽病毒抗原免疫过的猪脾脏和/或胸腺，去其表面筋、脂肪等组织，再用生理盐水冲洗；
（2）将处理后的猪脾脏和/或胸腺破碎，加入2倍预冷的PBS缓冲液，用组织匀浆仪匀质得匀浆液；
（3）将匀浆液超声破碎处理5～10min得破碎液；
（4）将破碎液调至pH值为5.3～5.7，5000～6000rpm离心30min，收集上清液；
（5）将上清液用微滤膜过滤，截留分子量7000道尔顿的物质，收集滤液；
（6）将滤液用除菌滤膜过滤，得到兽用抗病毒转移因子原液，4℃保存或冻干备用。
所述的黄芪多糖可以为市售商品，也可以通过常规方法提取制备。其中黄芪含皂甙、蔗糖、多糖、多种氨基酸、叶酸及硒、锌、铜等多种微量元素。主要作用于肾，有利尿作用，能促进细胞中DNA的合成，加速肝的分化增殖，并能提高淋巴细胞的增殖，增强白细胞诱生干扰素的能力，从而间接提高和促进机体免疫力功能。
所述的当归多糖可以为市售商品，也可以通过常规方法提取制备。其中当归主要作用于心、肝脏器，能调节气血，增强机体免疫功能，还具有抗癌作用。
所述的枸杞多糖可以为市售商品，也可以通过常规方法提取制备。其中枸杞主要作用于肝、肾等脏器，可以调节机体免疫功能，有效抑制肿瘤生长和细胞突变，具有延缓衰老、抗脂肪肝、调节血脂和血糖、促进造血功能等功效。
所述的甘草多糖可以为市售商品，也可以通过常规方法提取制备。其中甘草主要作用于脾脏，能补益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛，调和诸药；用于脾胃虚弱、倦怠乏力、心悸气短、咳嗽痰多等，还能缓解药物毒性。
一种兽用抗病毒冻干粉的制备方法，包括以下步骤：
（1）分离毒株制备疫苗：取病毒株增殖、灭活后制得乳油剂疫苗备用；
（2）免疫健康鸡群制备高免蛋：取步骤（1）制备的疫苗免疫接种健康鸡群，当抗体效价达到1:256时，收集高免蛋清理、消毒后晾干备用；
（3）分离高免蛋卵黄：取步骤（2）制备的高免蛋分离卵黄，加入等体积的无菌水，充分搅拌至颜色发白得卵黄溶液，将卵黄溶液置于60～65℃水浴中加热20～30min，再加入pH值为4.9～5.2的预冷酸化水，加入量为卵黄溶液体积的6～8倍，混匀后室温下静置沉淀，取上清液离心分离；
（4）取步骤（3）离心后的上清液，滤过，使滤液中兽用抗病毒卵黄抗体的干重为85～100份，浓缩，以重量份数计，在浓缩液中加入防腐剂0.01～0.02份、灭活剂0.2～0.3份、耐热冻干保护剂3～6份，混匀后预冻、冻干备用；
（5）以重量份数计，在步骤（4）的干粉中加入兽用抗病毒转移因子1～5份、α-干扰素1～5份即得。
所述步骤（2）中每7天对健康鸡群免疫一次，共免疫三次，于第二次免疫后开始检测抗体效价。优选的，第一次免疫接种灭活疫苗1.5mL，第二次、第三次免疫增加1倍量。
所述步骤（3）中离心分离的转速为15000rpm，离心时间为20min。
所述步骤（4）中滤过先采用0.45μm的滤膜，以截留分子量大于200KD的大分子物质，再采用0.22μm的滤膜过滤。
所述步骤（5）中加入的兽用抗病毒转移因子为经冻干处理后得到的粉末，也可以在步骤（4）的浓缩液中加入以干重换算后的转移因子原液。
优选的，一种兽用抗病毒冻干粉的制备方法，以重量份数计，在步骤（5）的干粉中再加入黄芪多糖5～10份、当归多糖5～10份、枸杞多糖10～20份、甘草多糖10～30份。
用法与用量：肌注，每100ml注射液中含有抗病毒冻干粉2g，每日2次，连用5日。
一种兽用抗病毒冻干粉作为饲料添加剂的应用，包括以下步骤：以重量百分比计，将兽用抗病毒冻干粉以0.2～0.6%的量加入兽用饲料中即可。
本发明的有益效果：
本发明的兽用抗病毒组合物主要由兽用抗病毒卵黄抗体、兽用抗病毒转移因子、α-干扰素组成，其中卵黄抗体是一种免疫球蛋白，是由机体受到外界抗原刺激而产生的一种应激产物，可以与相应抗原结合，消除病因；转移因子携带有致敏淋巴细胞的特异性免疫信息，能够将特异性免疫信息呈递给受体淋巴细胞，使受体无活性的淋巴细胞转变为特异性致敏淋巴细胞，从而激发受体细胞介导的免疫反应；α-干扰素可通过细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白，同时还可增强自然杀伤细胞（NK细胞）、巨噬细胞和T淋巴细胞的活力，从而起到免疫调节作用，并增强抗病毒能力。本发明将上述三者联用可以增强机体抗病毒活性，大大提高攻守作用，对兽类病毒性疾病具有良好的防治功效。
本发明采用黄芪多糖、当归多糖、枸杞多糖、甘草多糖共4种多糖类物质，具有提高机体免疫力，增强机体适应力和抵抗力等作用，还能抗菌、抗病毒、调节机体代谢等。上述4种物质覆盖了机体的心、肝、脾、肺、肾、脾等脏器，保证了机体脏器之间的平衡运转，比单一运用的疗效强，不仅能加强机体脏器机能，还能加强机体免疫能力及调节机能，保证机体健康。
本发明将兽用抗病毒卵黄抗体、兽用抗病毒转移因子、α-干扰素与黄芪多糖、当归多糖、枸杞多糖、甘草多糖联用，具有针对性强、抗体效价高、生物活性好等优点，能够提高机体的免疫力和抗病能力，有效预防兽类病毒性疾病。本发明通过试验进一步证实其防治效果远远大于单一使用或者两两联合。
本发明将上述活性成分与耐热冻干保护剂复配，能延长冻干粉在常温下的保存时间，保证抗体效价及生物活性，安全有效，无毒副作用、无残留危害。将其按一定比例加入饲料配方中，可以预防和治疗兽类病毒性疾病，提高机体免疫力和成活率，使用方便。
本发明制备兽用抗病毒冻干粉的方法简单，易于操作，适于大规模生产及推广应用。采用健康鸡群作为免疫对象，能降低毒株返祖的可能性，同时可以快速提高抗体效价至1:256，通过鸡强化免疫后制成的卵黄抗体对病毒性疾病的防治效果突出，见效快、疗效显著、针对性强。
具体实施方式
下述实施例仅对本发明作进一步详细说明，但不构成对本发明的任何限制。
实施例1
本实施例中兽用抗病毒组合物，由以下重量份数的组分组成：抗猪瘟卵黄抗体85份、抗猪瘟转移因子5份、α-干扰素1份、黄芪多糖10份、当归多糖5份、枸杞多糖20份、甘草多糖10份。
本实施例中兽用抗病毒冻干粉，由以下重量份数的组分组成：抗猪瘟卵黄抗体85份、抗猪瘟转移因子5份、α-干扰素1份、黄芪多糖10份、当归多糖5份、枸杞多糖20份、甘草多糖10份、硫柳汞0.02份、甲醛0.2份、维生素C1份、维生素E1份、聚乙烯吡咯烷酮2份、甘氨酸0.5份。
本实施例中兽用抗病毒冻干粉的制备方法，包括以下步骤：
（1）分离毒株制备疫苗：取国家标准猪瘟病毒株增殖、灭活后制得乳油剂疫苗备用；
（2）免疫健康鸡群制备高免蛋：取步骤（1）制备的疫苗免疫接种健康鸡群，每7天对健康鸡群免疫一次，共免疫三次，第一次免疫接种灭活疫苗1.5mL，第二次、第三次免疫增加1倍量，于第二次免疫后开始检测抗体效价，当抗体效价达到1:256时，收集高免蛋清理、消毒后晾干备用；
（3）分离高免蛋卵黄：取步骤（2）制备的高免蛋分离卵黄，加入等体积的无菌水，充分搅拌至颜色发白得卵黄溶液，将卵黄溶液置于63℃水浴中加热30min，再加入pH值为5.0的4℃酸化水，加入量为卵黄溶液体积的6倍，混匀后室温下静置沉淀，取上清液在15000rpm的转速下离心分离20min；
（4）取步骤（3）离心后的上清液，先采用0.45μm的滤膜，以截留分子量大于200KD的大分子物质，再采用0.22μm的滤膜过滤，使滤液中抗猪瘟卵黄抗体的干重为85份，浓缩，在浓缩液中加入硫柳汞、甲醛、维生素C、维生素E、聚乙烯吡咯烷酮、甘氨酸，混匀后经预冻、冻干备用；
（5）在步骤（4）的干粉中加入抗猪瘟转移因子、α-干扰素、黄芪多糖、当归多糖、枸杞多糖及甘草多糖粉末，混匀即得。
所述的抗猪瘟转移因子的制备方法为：
（1）用灭菌后的生理盐水清洗采用猪瘟病毒抗原免疫过的猪脾脏，去其表面筋、脂肪等组织，再用生理盐水冲洗；
（2）将处理后的猪脾脏破碎，加入2倍预冷的PBS缓冲液，用组织匀浆仪匀质得匀浆液；
（3）将匀浆液超声破碎处理10min得破碎液；
（4）将破碎液调至pH值为5.5，5500rpm离心30min，收集上清液；
（5）将上清液用微滤膜过滤，截留分子量7000道尔顿的物质，收集滤液；
（6）将滤液用除菌滤膜过滤，得到抗猪瘟转移因子原液，冻干备用。
所述的α-干扰素购自长春生物制品研究所。
本实施例中兽用抗病毒冻干粉作为饲料添加剂的应用，包括以下步骤：以重量百分比计，将抗猪瘟冻干粉以0.4%的量加入猪饲料中即可。
实施例2
本实施例中兽用抗病毒组合物，由以下重量份数的组分组成：抗猪细小病毒卵黄抗体90份、抗猪细小病毒转移因子2份、α-干扰素3份、黄芪多糖8份、当归多糖7份、枸杞多糖15份、甘草多糖20份。
本实施例中兽用抗病毒冻干粉，由以下重量份数的组分组成：抗猪细小病毒卵黄抗体90份、抗猪细小病毒转移因子2份、α-干扰素3份、黄芪多糖8份、当归多糖7份、枸杞多糖15份、甘草多糖20份、硫柳汞0.015份、甲醛0.25份、维生素C0.8份、维生素E1.5份、聚乙烯吡咯烷酮1.5份、甘氨酸0.7份。
本实施例中兽用抗病毒冻干粉的制备方法及应用同实施例1，在制备方法的步骤（1）中采用国家标准猪细小病毒毒株。
实施例3
本实施例中兽用抗病毒组合物，由以下重量份数的组分组成：抗猪伪狂犬病卵黄抗体95份、抗猪伪狂犬病转移因子3份、α-干扰素4份、黄芪多糖6份、当归多糖8份、枸杞多糖16份、甘草多糖25份。
本实施例中兽用抗病毒冻干粉，由以下重量份数的组分组成：抗猪伪狂犬病卵黄抗体95份、抗猪伪狂犬病转移因子3份、α-干扰素4份、黄芪多糖6份、当归多糖8份、枸杞多糖16份、甘草多糖25份、硫柳汞0.016份、甲醛0.22份、维生素C0.7份、维生素E1.4份、聚乙烯吡咯烷酮1.6份、甘氨酸0.9份。
本实施例中兽用抗病毒冻干粉的制备方法及应用同实施例1，在制备方法的步骤（1）中采用国家标准猪伪狂犬病毒株。
实施例4
本实施例中兽用抗病毒组合物，由以下重量份数的组分组成：抗猪蓝耳病卵黄抗体97份、抗猪蓝耳病转移因子2份、α-干扰素2份、黄芪多糖8份、当归多糖6份、枸杞多糖17份、甘草多糖23份。
本实施例中兽用抗病毒冻干粉，由以下重量份数的组分组成：抗猪蓝耳病卵黄抗体97份、抗猪蓝耳病转移因子2份、α-干扰素2份、黄芪多糖8份、当归多糖6份、枸杞多糖17份、甘草多糖23份、硫柳汞0.013份、甲醛0.28份、维生素C0.9份、维生素E1.2份、聚乙烯吡咯烷酮1.8份、甘氨酸0.6份。
本实施例中兽用抗病毒冻干粉的制备方法及应用同实施例1，在制备方法的步骤（1）中采用国家标准猪蓝耳病毒株。
实施例5
本实施例中兽用抗病毒组合物，由以下重量份数的组分组成：抗猪口蹄疫卵黄抗体100份、抗猪口蹄疫转移因子1份、α-干扰素5份、黄芪多糖5份、当归多糖10份、枸杞多糖10份、甘草多糖30份。
本实施例中兽用抗病毒冻干粉，由以下重量份数的组分组成：抗猪口蹄疫卵黄抗体100份、抗猪口蹄疫转移因子1份、α-干扰素5份、黄芪多糖5份、当归多糖10份、枸杞多糖10份、甘草多糖30份、硫柳汞0.01份、甲醛0.3份、维生素C0.5份、维生素E2份、聚乙烯吡咯烷酮1份、甘氨酸1份。
本实施例中兽用抗病毒冻干粉的制备方法及应用同实施例1，在制备方法的步骤（1）中采用国家标准猪口蹄疫病毒株。
实施例6
本实施例中兽用抗病毒组合物，由以下重量份数的组分组成：抗犬瘟热卵黄抗体95份、抗犬瘟热转移因子1份、α-干扰素2份、黄芪多糖8份、当归多糖6份、枸杞多糖17份、甘草多糖23份。
本实施例中兽用抗病毒冻干粉，由以下重量份数的组分组成：抗犬瘟热卵黄抗体95份、抗犬瘟热转移因子1份、α-干扰素2份、黄芪多糖8份、当归多糖6份、枸杞多糖17份、甘草多糖23份、硫柳汞0.013份、甲醛0.28份、维生素C0.9份、维生素E1.2份、聚乙烯吡咯烷酮1.8份、甘氨酸0.6份。
本实施例中兽用抗病毒冻干粉的制备方法及应用同实施例1，在制备方法的步骤（1）中采用国家标准犬瘟热病毒株。
实施例7
本实施例中兽用抗病毒组合物，由以下重量份数的组分组成：抗犬细小病毒卵黄抗体94份、抗犬细小病毒转移因子2份、α-干扰素1份、黄芪多糖5份、当归多糖10份、枸杞多糖20份、甘草多糖20份。
本实施例中兽用抗病毒冻干粉，由以下重量份数的组分组成：抗犬细小病毒卵黄抗体94份、抗犬细小病毒转移因子2份、α-干扰素1份、黄芪多糖5份、当归多糖10份、枸杞多糖20份、甘草多糖20份、硫柳汞0.015份、甲醛0.25份、维生素C0.7份、维生素E1.5份、聚乙烯吡咯烷酮1.5份、甘氨酸0.7份。
本实施例中兽用抗病毒冻干粉的制备方法及应用同实施例1，在制备方法的步骤（1）中采用国家标准犬细小病毒毒株。
对比例1
本对比例中抗猪瘟冻干粉包括以下重量份数的组分：抗猪瘟卵黄抗体85份、黄芪多糖10份、当归多糖5份、枸杞多糖20份、甘草多糖10份，其他组分同实施例1。本对比例中冻干粉的制备方法采用常规方法。
对比例2
本对比例中抗猪瘟冻干粉包括以下重量份数的组分：抗猪瘟转移因子5份、黄芪多糖10份、当归多糖5份、枸杞多糖20份、甘草多糖10份，其他组分同实施例1。本对比例中冻干粉的制备方法采用常规方法。
对比例3
本对比例中抗猪瘟冻干粉包括以下重量份数的组分：α-干扰素1份、黄芪多糖10份、当归多糖5份、枸杞多糖20份、甘草多糖10份，其他组分同实施例1。本对比例中冻干粉的制备方法采用常规方法。
对比例4
本对比例中抗猪瘟冻干粉包括以下重量份数的组分：黄芪多糖10份、当归多糖5份、枸杞多糖20份、甘草多糖10份，其他组分同实施例1。本对比例中冻干粉的制备方法采用常规方法。
对比例5
本对比例中抗猪瘟冻干粉包括以下重量份数的组分：抗猪瘟卵黄抗体85份、抗猪瘟转移因子5份、黄芪多糖10份、当归多糖5份、枸杞多糖20份、甘草多糖10份，其他组分同实施例1。本对比例中冻干粉的制备方法采用常规方法。
对比例6
本对比例中抗猪瘟冻干粉包括以下重量份数的组分：抗猪瘟卵黄抗体85份、α-干扰素1份、黄芪多糖10份、当归多糖5份、枸杞多糖20份、甘草多糖10份，其他组分同实施例1。本对比例中冻干粉的制备方法采用常规方法。
对比例7
本对比例中抗猪瘟冻干粉包括以下重量份数的组分：抗猪瘟转移因子5份、α-干扰素1份、黄芪多糖10份、当归多糖5份、枸杞多糖20份、甘草多糖10份，其他组分同实施例1。本对比例中冻干粉的制备方法采用常规方法。
对比例8
本对比例中抗猪细小病毒冻干粉包括以下重量份数的组分：抗猪细小病毒卵黄抗体90份、黄芪多糖8份、当归多糖7份、枸杞多糖15份、甘草多糖20份，其他组分同实施例1。本对比例中冻干粉的制备方法采用常规方法。
对比例9
本对比例中抗猪细小病毒冻干粉包括以下重量份数的组分：抗猪细小病毒转移因子2份、黄芪多糖8份、当归多糖7份、枸杞多糖15份、甘草多糖20份，其他组分同实施例1。本对比例中冻干粉的制备方法采用常规方法。
对比例10
本对比例中抗猪细小病毒冻干粉包括以下重量份数的组分：α-干扰素3份、黄芪多糖8份、当归多糖7份、枸杞多糖15份、甘草多糖20份，其他组分同实施例1。本对比例中冻干粉的制备方法采用常规方法。
对比例11
本对比例中抗猪细小病毒冻干粉包括以下重量份数的组分：黄芪多糖8份、当归多糖7份、枸杞多糖15份、甘草多糖20份，其他组分同实施例1。本对比例中冻干粉的制备方法采用常规方法。
对比例12
本对比例中抗猪细小病毒冻干粉包括以下重量份数的组分：抗猪细小病毒卵黄抗体90份、抗猪细小病毒转移因子2份、黄芪多糖8份、当归多糖7份、枸杞多糖15份、甘草多糖20份，其他组分同实施例1。本对比例中冻干粉的制备方法采用常规方法。
对比例13
本对比例中抗猪细小病毒冻干粉包括以下重量份数的组分：抗猪细小病毒卵黄抗体90份、α-干扰素3份、黄芪多糖8份、当归多糖7份、枸杞多糖15份、甘草多糖20份，其他组分同实施例1。本对比例中冻干粉的制备方法采用常规方法。
对比例14
本对比例中抗猪细小病毒冻干粉包括以下重量份数的组分：抗猪细小病毒转移因子2份、α-干扰素3份、黄芪多糖8份、当归多糖7份、枸杞多糖15份、甘草多糖20份，其他组分同实施例1。本对比例中冻干粉的制备方法采用常规方法。
对比例15
本对比例中抗猪伪狂犬病冻干粉包括以下重量份数的组分：抗猪伪狂犬病卵黄抗体95份、黄芪多糖6份、当归多糖8份、枸杞多糖16份、甘草多糖25份，其他组分同实施例1。本对比例中冻干粉的制备方法采用常规方法。
对比例16
本对比例中抗猪伪狂犬病冻干粉包括以下重量份数的组分：抗猪伪狂犬病转移因子3份、黄芪多糖6份、当归多糖8份、枸杞多糖16份、甘草多糖25份，其他组分同实施例1。本对比例中冻干粉的制备方法采用常规方法。
对比例17
本对比例中抗猪伪狂犬病冻干粉包括以下重量份数的组分：α-干扰素4份、黄芪多糖6份、当归多糖8份、枸杞多糖16份、甘草多糖25份，其他组分同实施例1。本对比例中冻干粉的制备方法采用常规方法。
对比例18
本对比例中抗猪伪狂犬病冻干粉包括以下重量份数的组分：黄芪多糖6份、当归多糖8份、枸杞多糖16份、甘草多糖25份，其他组分同实施例1。本对比例中冻干粉的制备方法采用常规方法。
对比例19
本对比例中抗猪伪狂犬病冻干粉包括以下重量份数的组分：抗猪伪狂犬病卵黄抗体95份、抗猪伪狂犬病转移因子3份、黄芪多糖6份、当归多糖8份、枸杞多糖16份、甘草多糖25份，其他组分同实施例1。本对比例中冻干粉的制备方法采用常规方法。
对比例20
本对比例中抗猪伪狂犬病冻干粉包括以下重量份数的组分：抗猪伪狂犬病卵黄抗体95份、α-干扰素4份、黄芪多糖6份、当归多糖8份、枸杞多糖16份、甘草多糖25份，其他组分同实施例1。本对比例中冻干粉的制备方法采用常规方法。
对比例21
本对比例中抗猪伪狂犬病冻干粉包括以下重量份数的组分：抗猪伪狂犬病转移因子3份、α-干扰素4份、黄芪多糖6份、当归多糖8份、枸杞多糖16份、甘草多糖25份，其他组分同实施例1。本对比例中冻干粉的制备方法采用常规方法。
对比例22
本对比例中抗猪蓝耳病冻干粉包括以下重量份数的组分：抗猪蓝耳病卵黄抗体97份、黄芪多糖8份、当归多糖6份、枸杞多糖17份、甘草多糖23份，其他组分同实施例1。本对比例中冻干粉的制备方法采用常规方法。
对比例23
本对比例中抗猪蓝耳病冻干粉包括以下重量份数的组分：抗猪蓝耳病转移因子2份、黄芪多糖8份、当归多糖6份、枸杞多糖17份、甘草多糖23份，其他组分同实施例1。本对比例中冻干粉的制备方法采用常规方法。
对比例24
本对比例中抗猪蓝耳病冻干粉包括以下重量份数的组分：α-干扰素2份、黄芪多糖8份、当归多糖6份、枸杞多糖17份、甘草多糖23份，其他组分同实施例1。本对比例中冻干粉的制备方法采用常规方法。
对比例25
本对比例中抗猪蓝耳病冻干粉包括以下重量份数的组分：黄芪多糖8份、当归多糖6份、枸杞多糖17份、甘草多糖23份，其他组分同实施例1。本对比例中冻干粉的制备方法采用常规方法。
对比例26
本对比例中抗猪蓝耳病冻干粉包括以下重量份数的组分：抗猪蓝耳病卵黄抗体97份、抗猪蓝耳病转移因子2份、黄芪多糖8份、当归多糖6份、枸杞多糖17份、甘草多糖23份，其他组分同实施例1。本对比例中冻干粉的制备方法采用常规方法。
对比例27
本对比例中抗猪蓝耳病冻干粉包括以下重量份数的组分：抗猪蓝耳病卵黄抗体97份、α-干扰素2份、黄芪多糖8份、当归多糖6份、枸杞多糖17份、甘草多糖23份，其他组分同实施例1。本对比例中冻干粉的制备方法采用常规方法。
对比例28
本对比例中抗猪蓝耳病冻干粉包括以下重量份数的组分：抗猪蓝耳病转移因子2份、α-干扰素2份、黄芪多糖8份、当归多糖6份、枸杞多糖17份、甘草多糖23份，其他组分同实施例1。本对比例中冻干粉的制备方法采用常规方法。
试验例1
本发明实施例1～7制备冻干粉的质量检测。
试验方法：取本发明实施例1～7制备的冻干粉，置于37℃培养箱中，保存24个月，分别于1周、2周、1月、2月、4月、8月、12月、16月、20月、24月后采用琼脂扩散（AGP）法，测定每个时间点冻干粉样品中卵黄抗体的效价，试验结果详见下表1。
表1实施例1～7制备冻干粉中卵黄抗体的效价变化
卵黄抗体的质量检测：
[支原体检验]按《中国兽药典》进行，无支原体生长。
[外源病毒检验]按《中国兽药典》进行，符合规定。
[安全检验]用7日龄雏鸡5只，肌肉注射5羽份，观察2周，应全部健活，注射部位没有病变。
[保质期]根据常温效价检测实验结果，至少可以存放2年。
试验例2
本发明实施例1制备的冻干粉在防治猪瘟方面的效果分析。
试验方法：选取断奶仔猪200只，其中20只作为攻毒组隔离饲养，20只作为空白对照组隔离饲养；140只作为对照组，随机分为7组，每组20只，隔离饲养，对照组1～7依次采用对比例1～7制备的冻干粉；另外20只作为试验组，试验组采用实施例1制备的冻干粉。饲养方式为自由采食，自由饮水，24h后取试验组、对照组和攻毒组的猪肌注接种稀释后的猪瘟病毒液，感染后继续饲喂，治疗时试验组和对照组每100ml注射液中分别含有冻干粉2g，采用肌注方式给药，0.1ml/kg体重，每日2次，攻毒组肌注生理盐水，用法用量同上；记录120h后的治疗情况，结果详见下表2。
疗效判断标准：
治愈：采食正常，精神正常，无病症；
有效：采食不良，精神不振，但临床症状减轻；
无效：与用药前无变化。
表2各处理组的防治效果
从表2可以看出，试验组对猪瘟病的治愈率达90%，对照组的治愈率为60～70%。统计分析表明，试验组的治愈率显著高于对照组（P＜0.01）。
试验结果表明，本发明实施例1制备的冻干粉能有效防治猪瘟病，其药效显著优于单一使用或两两联用由抗猪瘟卵黄抗体、抗猪瘟转移因子、α-干扰素或中药提取物制备的冻干粉。
试验例3
本发明实施例2制备的冻干粉在防治猪细小病毒病方面的效果分析。
试验方法及疗效判断标准同试验例2，不同之处仅在于试验组采用实施例2制备的冻干粉，对照组1～7采用对比例8～14制备的冻干粉，采用猪细小病毒攻毒。试验结果详见下表3。
表3各处理组的防治效果
从表3可以看出，试验组对猪细小病毒病的治愈率达90%，对照组的治愈率为60～70%。统计分析表明，试验组的治愈率显著高于对照组（P＜0.01）。
试验结果表明，本发明实施例2制备的冻干粉能有效防治猪细小病毒病，其药效显著优于单一使用或两两联用由抗猪细小病毒卵黄抗体、抗猪细小病毒转移因子、α-干扰素或中药提取物制备的冻干粉。
试验例4
本发明实施例3制备的冻干粉在防治猪伪狂犬病方面的效果分析。
试验方法及疗效判断标准同试验例2，不同之处仅在于试验组采用实施例3制备的冻干粉，对照组1～7采用对比例15～21制备的冻干粉，采用猪伪狂犬病病毒攻毒。试验结果详见下表4。
表4各处理组的防治效果
从表4可以看出，试验组对猪伪狂犬病的治愈率达90%，对照组的治愈率为60～70%。统计分析表明，试验组的治愈率显著高于对照组（P＜0.01）。
试验结果表明，本发明实施例3制备的冻干粉能有效防治猪伪狂犬病，其药效显著优于单一使用或两两联用由抗猪伪狂犬病卵黄抗体、抗猪伪狂犬病转移因子、α-干扰素或中药提取物制备的冻干粉。
试验例5
本发明实施例4制备的冻干粉在防治猪蓝耳病方面的效果分析。
试验方法及疗效判断标准同试验例2，不同之处仅在于试验组采用实施例4制备的冻干粉，对照组1～7采用对比例22～28制备的冻干粉，采用猪蓝耳病病毒攻毒。试验结果详见下表5。
表5各处理组的防治效果
从表5可以看出，试验组对猪蓝耳病的治愈率达90%，对照组的治愈率为60～70%。统计分析表明，试验组的治愈率显著高于对照组（P＜0.01）。
试验结果表明，本发明实施例4制备的冻干粉能有效防治猪蓝耳病，其药效显著优于单一使用或两两联用由抗猪蓝耳病卵黄抗体、抗猪蓝耳病转移因子、α-干扰素或中药提取物制备的冻干粉。
Claims (6)
1.一种兽用抗病毒组合物，其特征在于：主要由以下重量份数的组分组成：兽用抗病毒卵黄抗体85～100份、兽用抗病毒转移因子1～5份、α-干扰素1～5份、黄芪多糖5～10份、当归多糖5～10份、枸杞多糖10～20份、甘草多糖10～30份；
所述的兽用抗病毒卵黄抗体和兽用抗病毒转移因子为抗猪瘟卵黄抗体与抗猪瘟转移因子、抗猪细小病毒卵黄抗体与抗猪细小病毒转移因子、抗猪伪狂犬病卵黄抗体与抗猪伪狂犬病转移因子、抗猪蓝耳病卵黄抗体与抗猪蓝耳病转移因子、抗猪口蹄疫卵黄抗体与抗猪口蹄转移因子、抗犬瘟热卵黄抗体与抗犬瘟热转移因子或抗犬细小病毒卵黄抗体与抗犬细小病毒转移因子。
2.一种兽用抗病毒冻干粉，其特征在于：主要由以下重量份数的组分组成：兽用抗病毒卵黄抗体85～100份、兽用抗病毒转移因子1～5份、α-干扰素1～5份、防腐剂0.01～0.02份、灭活剂0.2～0.3份、耐热冻干保护剂3～6份、黄芪多糖5～10份、当归多糖5～10份、枸杞多糖10～20份、甘草多糖10～30份；
所述的兽用抗病毒卵黄抗体和兽用抗病毒转移因子为抗猪瘟卵黄抗体与抗猪瘟转移因子、抗猪细小病毒卵黄抗体与抗猪细小病毒转移因子、抗猪伪狂犬病卵黄抗体与抗猪伪狂犬病转移因子、抗猪蓝耳病卵黄抗体与抗猪蓝耳病转移因子、抗猪口蹄疫卵黄抗体与抗猪口蹄转移因子、抗犬瘟热卵黄抗体与抗犬瘟热转移因子或抗犬细小病毒卵黄抗体与抗犬细小病毒转移因子。
3.根据权利要求2所述的兽用抗病毒冻干粉，其特征在于：所述的耐热冻干保护剂由以下重量份数的组分组成：维生素C0.5～1份、维生素E1～2份、聚乙烯吡咯烷酮1～2份、甘氨酸0.5～1份。
4.根据权利要求2所述的兽用抗病毒冻干粉，其特征在于：所述的兽用抗病毒转移因子的制备方法为：
（1）用灭菌后的生理盐水清洗采用兽病毒抗原免疫过的猪脾脏和/或胸腺，去其表面筋、脂肪组织，再用生理盐水冲洗；
（2）将处理后的猪脾脏和/或胸腺破碎，加入2倍预冷的PBS缓冲液，用组织匀浆仪匀质得匀浆液；
（3）将匀浆液超声破碎处理5～10min得破碎液；
（4）将破碎液调至pH值为5.3～5.7，5000～6000rpm离心30min，收集上清液；
（5）将上清液用微滤膜过滤，截留分子量7000道尔顿的物质，收集滤液；
（6）将滤液用除菌滤膜过滤，得到兽用抗病毒转移因子原液，4℃保存或冻干备用。
5.一种如权利要求2所述的兽用抗病毒冻干粉的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）分离毒株制备疫苗：取病毒株增殖、灭活后制得乳油剂疫苗备用；
（2）免疫健康鸡群制备高免蛋：取步骤（1）制备的疫苗免疫接种健康鸡群，当抗体效价达到1:256时，收集高免蛋清理、消毒后晾干备用；
（3）分离高免蛋卵黄：取步骤（2）制备的高免蛋分离卵黄，加入等体积的无菌水，充分搅拌至颜色发白得卵黄溶液，将卵黄溶液置于60～65℃水浴中加热20～30min，再加入pH值为4.9～5.2的预冷酸化水，加入量为卵黄溶液体积的6～8倍，混匀后室温下静置沉淀，取上清液离心分离；
（4）取步骤（3）离心后的上清液，滤过，使滤液中兽用抗病毒卵黄抗体的干重为85～100份，浓缩，以重量份数计，在浓缩液中加入防腐剂0.01～0.02份、灭活剂0.2～0.3份、耐热冻干保护剂3～6份，混匀后预冻、冻干备用；
（5）以重量份数计，在步骤（4）的干粉中加入兽用抗病毒转移因子1～5份、α-干扰素1～5份即得；
以重量份数计，在步骤（5）的干粉中再加入黄芪多糖5～10份、当归多糖5～10份、枸杞多糖10～20份、甘草多糖10～30份。
6.一种如权利要求2所述的兽用抗病毒冻干粉作为饲料添加剂的应用，其特征在于：包括以下步骤：以重量百分比计，将兽用抗病毒冻干粉以0.2～0.6%的量加入兽用饲料中即可。
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