CN107998332B - 一种治疗猪蓝耳病的中药组合物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及中药技术领域，公开了一种治疗猪蓝耳病的中药组合物及其应用。本发明所述中药组合物包括藏红花、砂仁、紫苏、生地黄、天麻、灵芝多糖、艾叶、女贞子、刺五加和蒲公英。本发明通过不同中药成分的配合使用，立足于生猪免疫系统的增强和修复，使所述中药组合物具有增强单核巨噬细胞的吞噬功能，激活淋巴细胞，促进机体的免疫应答，增强和调节体液免疫的功能，并且依靠各中药活性成分的共同作用，直接消灭蓝耳病毒，控制病毒血症的发展，同时能够有效地提高猪蓝耳病抗体水平，增强猪的免疫功能和抗病能力。

Description

一种治疗猪蓝耳病的中药组合物及其应用
技术领域
本发明涉及中药技术领域，具体涉及一种治疗猪蓝耳病的中药组合物及其应用。
背景技术
蓝耳病，正式名称为猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)，曾用过“神秘猪病”、“猪不孕与呼吸综合征”、“猪流行性流产和呼吸综合征”、“猪生殖与呼吸综合征”等。
PRRSV通过呼吸道进入肺后，首先进入肺泡上皮细胞，在其内大量复制并促其增生，很快便进入肺毛细血管的内皮细胞，刺激其肿大、活化、增生和坏死脱落。随着病情发展，大面积的肺泡毛细血管受到损伤不能进行正常的气体交换，血液中还原血红蛋白增多，因此临床上出现呼吸困难和皮肤发绀。病毒随着血液达到全身各处的血管，引起广泛性出血，形成的微血栓可导致肺、肾、心、肝、脑等多处缺氧。病毒进入脑各级血管的内皮细胞引起广泛性血管炎，致静脉血管扩张，引起神经细胞变性、坏死和胶质细胞增生；病毒在巨噬细胞内复制并破坏其结构，引起广泛性的血管炎和其他组织的破坏，从而形成免疫器官的广泛坏死，致使免疫系统遭受严重损伤，机体终因心衰、肺衰、免疫功能丧失而死亡。
各种组织的巨噬细胞对PRRSV均易感，PRRSV侵入机体后，造成的组织损伤主要在肺，肺泡巨噬细胞是PRRSV的靶细胞，尤其是青年猪的肺泡巨噬细胞，造成严重的间质肺炎，感染后第二天即可对肺造成损害，7天左右损伤可波及整个肺尖叶、心叶、隔叶，呈多中心性病灶，也可能某一区域极为严重。免疫病理变化主要表现在肺和淋巴结，因为PRRSV主要是在单核巨噬细胞系统内进行复制的，PRRSV侵害免疫器官是因为淋巴结核脾脏含有丰富的血管及大量的游离或固定的巨噬细胞。由于淋巴结、淋巴小结和副皮质区及白髓和红髓都受到了广泛性的破坏，致使机体的体液免疫和细胞免疫能力降低。
在猪蓝耳病防治领域，接种疫苗是目前最为有效的手段。然而，对于未接种疫苗或接种疫苗未产生抗体而爆发蓝耳病的情形，往往会发生急性感染，出现大比例的病毒血症，这时需要通过抑制病毒降低病毒血症的比例，使整体蓝耳病血清血趋于稳定，方能补种疫苗。目前用于猪蓝耳病方面的中药产品，从猪免疫系统出发的较少，在实际应用中缺少针对性，并且针对猪蓝耳病的病毒血症的更是少见报道。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种治疗猪蓝耳病的中药组合物，使得所述组合物能够有效防治猪蓝耳病，特别是猪蓝耳病的病毒血症；
本发明的另外一个目的在于提供一种治疗猪蓝耳病的中药组合物，使得所述组合物能够显著提高动物的基础免疫水平；
本发明的另外一个目的在于提供一种治疗猪蓝耳病的中药组合物，使得所述组合物能够显著提高猪蓝耳病抗体水平；
本发明的另外一个目的在于提供所述中药组合物在上述各方面的应用。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种治疗猪蓝耳病的中药组合物，包括藏红花、砂仁、紫苏、生地黄、天麻、灵芝多糖、艾叶、女贞子、刺五加和蒲公英。
本发明选择适宜的多种中药组分，利用各中药活性成分的协同作用，干扰蓝耳病病毒对巨噬细胞膜上受体的寻找和结合，阻碍病毒附着巨噬细胞；可促进巨噬细胞增殖，提高巨噬细胞溶酶体活性，杀灭蓝耳病毒，消除蓝耳病毒对巨噬细胞免疫传导功能造成的干扰，减少巨噬细胞凋亡，进一步激活T细胞、B细胞，诱导机体产生干扰素和抗体，修复免疫系统。
作为优选，本发明所述中药组合物以重量份计，包括藏红花10-18份、砂仁23-39份、紫苏15-23份、生地黄18-24份、天麻18-34份、灵芝多糖5-13份、艾叶9-19份、女贞子9-13份、刺五加18-27份和蒲公英15-23份。
在本发明具体实施方式中，所述中药组合物以重量份计，藏红花12份、砂仁35份、紫苏17份、生地黄22份、天麻23份、灵芝多糖7份、艾叶17份、女贞子11份、刺五加21份和蒲公英19份。
同时，根据上述本发明中药组合物配方，在具体应用时也可分为两个不同用量范围，具体如下：
(1)藏红花10-13份、砂仁23-27份、紫苏15-19份、生地黄18-22份、天麻18-29份、灵芝多糖5-9份、艾叶9-11份、女贞子9-11份、刺五加18-22份和蒲公英15-19份；更为具体地，藏红花10份、砂仁33份、紫苏15份、生地黄18份、天麻18份、灵芝多糖5份、艾叶9份、女贞子9份、刺五加18份和蒲公英15份。
(2)藏红花15-18份、砂仁27-39份、紫苏19-23份、生地黄20-24份、天麻29-34份、灵芝多糖9-13份、艾叶11-19份、女贞子11-13份、刺五加22-27份和蒲公英18-23份；更为具体地，藏红花17份、砂仁39份、紫苏23份、生地黄24份、天麻33份、灵芝多糖13份、艾叶19份、女贞子13份、刺五加27份和蒲公英23份。
本发明中药组合物采用中药破壁技术，粒径＜45μm，全成份入药，充分利用中药天然活性成份杀灭蓝耳病毒，通过给规模化猪场做蓝耳病抗体检测，对于蓝耳病抗体阳性率，抗体离散度均偏高的猪场，采用本发明中药组合物防控方案，能在15天时间，迅速控制蓝耳病的病毒血症，将蓝耳病免疫抗体S/P值降到0.8-1.8的安全范围，迅速的提高了猪的免疫抵抗力。临床上能迅速控制蓝耳病引起的母猪繁殖障碍，产死胎，返情率高，屡配不孕，奶水不足，断奶仔猪慢性消瘦，被毛粗乱，育肥猪呼吸道疾病。
同时，本发明中药组合物通过三个不同剂量组三个重复进行小鼠体内实验和体外实验，说明本发明中药组合物能显著提高小鼠的脾脏指数、胸腺指数，提高小鼠血清溶血素(抗体)的产生水平，提高巨噬细胞数量和吞噬活性，表明本中药组合物对动物的基础免疫水平有明显的提高作用。
此外，本发明中药组合物能够有效地提高猪蓝耳病抗体水平，增强猪的免疫功能和抗病能力。
基于上述多种有益效果，本发明提出了所述中药组合物在制备饲料添加剂、制备治疗猪蓝耳病药物、制备动物免疫机能增强剂或制备提高猪蓝耳病抗体水平的药物中的应用。
其中，所述免疫机能包括脾脏指数、胸腺指数、巨噬细胞吞噬指数、巨噬细胞吞噬率和血清溶血素抗体中的一种或两种以上。
在制备本发明所述中药组合物时，称取藏红花、砂仁、紫苏、生地黄、天麻、灵芝多糖、艾叶、女贞子、刺五加和蒲公英。分别破壁粉碎，然后混合均匀，获得所述中药组合物。其中，所述破壁粉碎为破壁粉碎至粒径＜45μm，将细胞破壁后，细胞内的水份油份迁出，使微粒子表面呈现出半湿润状态，粒子和粒子之间会形成稳定的粒子团，每个粒子团都包含相同比例的中药成分，使有效成份极容易被吸收，固本养元，柔润肝体，补脾健胃，诱导机体产生干扰素，具有直接灭活蓝耳病毒，大大的提高了生物利用度。
由以上技术方案可知，本发明通过不同中药成分的配合使用，立足于生猪免疫系统的增强和修复，使所述中药组合物具有增强单核巨噬细胞的吞噬功能，激活淋巴细胞，促进机体的免疫应答，增强和调节体液免疫的功能，并且依靠各中药活性成分的共同作用，直接消灭蓝耳病毒，控制病毒血症的发展，同时能够有效地提高猪蓝耳病抗体水平，增强猪的免疫功能和抗病能力。
附图说明
图1所示为使用本发明中药组合物前的猪蓝耳病病毒抗体S/P值柱形图；
图2所示为使用本发明中药组合物后的猪蓝耳病病毒抗体S/P值柱形图；其中，横坐标血清编号因区域面积受限未能显示完全，图中靠上直线代表阳性临界值，靠下直线代表抗体平均值。
具体实施方式
本发明公开了一种治疗猪蓝耳病的中药组合物及其应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明所述中药组合物及其制备方法和应用经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的中药组合物及其应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
以下就本发明所提供的一种治疗猪蓝耳病的中药组合物及其应用做进一步说明。
实施例1：制备本发明所述中药组合物
1、组成
藏红花10份、砂仁33份、紫苏15份、生地黄18份、天麻18份、灵芝多糖5份、艾叶9份、女贞子9份、刺五加18份和蒲公英15份。
2、制备方法
称取藏红花、砂仁、紫苏、生地黄、天麻、灵芝多糖、艾叶、女贞子、刺五加和蒲公英，分别破壁粉碎至粒径＜45μm，然后混合均匀，获得所述中药组合物。
实施例2：制备本发明所述中药组合物
1、组成
藏红花12份、砂仁35份、紫苏17份、生地黄22份、天麻23份、灵芝多糖7份、艾叶17份、女贞子11份、刺五加21份和蒲公英19份。
2、制备方法
称取藏红花、砂仁、紫苏、生地黄、天麻、灵芝多糖、艾叶、女贞子、刺五加和蒲公英，分别破壁粉碎至粒径＜45μm，然后混合均匀，获得所述中药组合物。
实施例3：制备本发明所述中药组合物
1、组成
藏红花17份、砂仁39份、紫苏23份、生地黄24份、天麻33份、灵芝多糖13份、艾叶19份、女贞子13份、刺五加27份和蒲公英23份。
2、制备方法
称取藏红花、砂仁、紫苏、生地黄、天麻、灵芝多糖、艾叶、女贞子、刺五加和蒲公英，分别破壁粉碎至粒径＜45μm，然后混合均匀，获得所述中药组合物。
实施例4：本发明中药组合物对蓝耳病病毒的防控试验
本发明中药组合物：
藏红花12份、砂仁35份、紫苏17份、生地黄22份、天麻23份、灵芝多糖7份、艾叶17份、女贞子11份、刺五加21份和蒲公英19份。
1、使用前抗体检测
试验地点：江西省万年林海牧业养殖有限公司
动物品种：猪
样品种类：血清
样品份数：41份
检测项目：PRRSV(蓝耳病毒)抗体
抗体检测情况(检测采样均为种猪)
判定标准：PRRSV(蓝耳病毒)：S/P≥0.40为阳性；S/P＜0.40为阴性。
使用试剂盒：IDEXX猪蓝耳病毒抗体检测试剂盒，批号：03-40959。
检测单位：哈尔滨维科生物技术开发公司技术服务中心检测室
检测结果见表1和图1(为表1对应的柱状分析图)。
表1
Figure BDA0001569828260000061
Figure BDA0001569828260000071
根据表1和图1结果分析，蓝耳病的抗体阳性合格率比较高，但抗体离散度偏高，其中蓝耳病抗体S/P高于2.5以上的有13个样，比率高达31.7％；高于2.5以上提示有蓝耳病的病毒血症，理论上存在不断排毒且持续感染的可能。其中个别S/P值高于3.5(提示蓝耳病的急性感染)；对其中3头仔猪活体的抗原检测均测到蓝耳病毒，且2头是高致病性毒株。结合该场实际生产存在一定程度的母猪繁殖障碍，如发情延迟、返情、配种率低等情况；综合分析猪场蓝耳病的血清学极不稳定，正处于蓝耳病毒的高度活跃之中。
由于目前猪群蓝耳病的不稳定因素，30％以上的猪处于蓝耳病毒血症期间，此时注射蓝耳病疫苗存在极大风险。
2、使用后抗体检测
每吨饲料添加本发明中药组合物2kg，连续使用15天，对上述种猪群再次进行采血并送检进行血清学检测(40份血清样本)，结果见表2-3和图2(为表2对应的柱状分析图)。
表2
Figure BDA0001569828260000072
Figure BDA0001569828260000081
表3
样品数 阳性数 可疑数 阴性数 阳性率 抗体平均值 离散度
PRRSV抗体 40 36 --- 4 90％ 1.237 58.69％
根据表2-3和图2结果分析，蓝耳病抗体阳性率和使用前比较差异不显著；抗体离散度均偏高，提示应补打蓝耳病疫苗。蓝耳病S/P值超过2.5的比率已经从31.7％下降至5％，且该样的检测值为S/P值2.5处于临界值；无超过3.5的样品。整体的S/P值平均值从3月份的1.973下降至1.237，处于蓝耳病理想免疫抗体(S/P值0.8-1.8)的黄金点。说明本发明所述中药组合物防控方案在蓝耳病的病毒血症、免疫提升方面起到了很好的效果。
实施例5：本发明中药组合物对小鼠基础免疫水平的作用
高剂量组：藏红花17份、砂仁39份、紫苏23份、生地黄24份、天麻33份、灵芝多糖13份、艾叶19份、女贞子13份、刺五加27份、蒲公英23份；
中剂量组：藏红花12份、砂仁35份、紫苏17份、生地黄22份、天麻23份、灵芝多糖7份、艾叶17份、女贞子11份、刺五加21份、蒲公英19份；
低剂量组：藏红花10份、砂仁33份、紫苏15份、生地黄18份、天麻18份、灵芝多糖5份、艾叶9份、女贞子9份、刺五加18份、蒲公英15份；
对照组1：牡丹皮30份、赤芍20份、生地黄20份、黄芩20份；
对照组2：黄芩20份、葛根30份、蒲公英20份、赤芍20份；
对照组3：藏红花10份、淫羊藿15份、女贞子10份、甘草30份；
通过上述3个剂量组和3个对照组的中药组合物(均为粉碎混合)给小鼠灌胃给药后，取脾脏、胸腺称质量，计算脾指数、胸腺指数；取肺部观察巨噬细胞吞噬功能，计算对鸡红细胞的吞噬指数，评价小鼠血清溶血素(抗体)的产生水平。结果见表4-6。
表4
Figure BDA0001569828260000091
Figure BDA0001569828260000101
注：p<0.05具有统计学意义；p<0.01具有高度统计学意义；
本发明中药化合物高剂量组在用药剂量400mg/㎏，对照组1、对照组2、对照组3用药剂量600mg/kg的情况下，比对照组小鼠的脾脏指数分别提高73.40％，11.02％，9.95％，胸腺指数分别提高21.63％，11.70％，13.45％，能很显著提高小鼠的脾脏指数、胸腺指数，差异极显著；在同样都是用药600mg/kg的情况下，本发明中药化合物中剂量组比对照组1、对照组2、对照组3脾脏指数分别提高67.34％，7.13％，6.10％，胸腺指数分别提高16.83％，7.28％，8.97％，能很显著提高小鼠的脾脏指数、胸腺指数，差异显著；本发明中药化合物低剂量组在用药剂量加倍的情况下，能显著提高小鼠的脾脏指数和胸腺指数。
结论：本发明中药化合物高剂量组、中剂量组均能明显提高小鼠的脾脏指数和胸腺指数，与对照组1、对照组2、对照组3差异显著，考虑到临床应用成本，中剂量组比较适合应用于市场。
表5
组别 n 用药剂量 吞噬率/％ P值 吞噬指数/％ P值
空白组 10 0.2ml/10g 46.3±7.6 >0.05 136.7±7.4 >0.05
高剂量组 10 400mg/㎏ 66.5±2.9 <0.05 156.1±10.4 <0.05
中剂量组 10 600mg/㎏ 58.8±10.6 <0.05 151.2±5.0 <0.05
低剂量组 10 800mg/㎏ 54.6±16.7 >0.05 149.7±12.7 >0.05
对照组1 10 600 48.5±15.4 >0.05 122.1±8.6 >0.05
对照组2 10 600 51.3±13.1 >0.05 137.2±14.8 >0.05
对照组3 10 600 57.6±8.3 <0.05 145.3±6.6 >0.05
注：p<0.05具有统计学意义；p<0.01具有高度统计学意义；
结论：表5中对照组1、对照组2和低剂量组p值都>0.05，没有统计学意义，对照组3的吞噬指数p值>0.05，也没有统计学意义，本发明中药组合物高剂量组、中剂量组能显著提高巨噬细胞数量和吞噬活性，且基本与给药量呈正相关关系，说明本中药制剂对动物的基础免疫水平有明显的提高作用，考虑到临床成本，选择中剂量组比较合适。
表6
组别 n 用药剂量 溶血素(D540nm) P值
空白组 10 0.2ml/10g 0.453±0.071 >0.05
高剂量组 10 400mg/㎏ 0.625±0.236 <0.01
中剂量组 10 600mg/㎏ 0.584±0.185 <0.05
低剂量组 10 800mg/㎏ 0.553±0.127 <0.05
对照组1 10 600mg/㎏ 0.536±0.145 <0.05
对照组2 10 600mg/㎏ 0.561±0.107 <0.05
对照组3 10 600mg/㎏ 0.542±0.067 <0.05
注：p<0.05具有统计学意义；p<0.01具有高度统计学意义；
结论：本发明三个剂量组的本中药制剂均可明显提高小鼠血清溶血素(抗体)的产生水平，增加脾脏抗体形成细胞的数量，增强机体的体液免疫功能，且高剂量组差异极显著。对照组也都可明显提高小鼠血清溶血素(抗体)的产生水平，本发明高剂量组的溶血素生成量比对照组1、对照组2、对照组3分别提高16.6％，11.4％，15.3％，且用药剂量只有400mg/㎏体重；再同样都是600mg/㎏体重的情况下，本发明中剂量组的溶血素生成量比对照组1、对照组2、对照组3分别提高8.9％，4.1％，7.7％，综合考虑，还是本发明专利的中剂量组更适合于临床应用。
实施例6：本发明中药组合物对猪蓝耳病抗体的作用
1、材料与方法：
试验组：本发明中药组合物：
藏红花12份、砂仁35份、紫苏17份、生地黄22份、天麻23份、灵芝多糖7份、艾叶17份、女贞子11份、刺五加21份和蒲公英19份。
对照组1：牡丹皮30份、赤芍20份、生地黄20份、黄芩20份；
对照组2：黄芩20份、葛根30份、蒲公英20份、赤芍20份；
对照组3：藏红花10份、淫羊藿15份、女贞子10份、甘草30份；
2、试验动物与试验日粮
选用20头28±3d(天)断奶，体重相近的长×大二元杂交仔猪，断奶后继续饲喂14d(天)乳猪料，然后更换仔猪料，预饲2天后，35龄正式开始试验。试验仔猪按体重、性别、窝别的原则随机分为6组，每组设30头猪。第1组为空白组，饲基础日粮；第2组在基础日粮中添加1000g/t的本发明中药组合物；第3组在基础日粮中添加2000g/t的本发明中药组合物；第4-6组在基础日粮中分别添加1000g/t的对照组1、对照组2、对照组3的中药组合物。基础日粮配方按照NRC(1998)猪饲养标准进行配制。
3、试验场地与饲养管理
试验在海南省罗牛山股份有限公司下属海口市琼中猪场进行。试验仔猪于28日龄断奶，断奶后继续喂两周乳猪全价料，于42日龄更换仔猪全价料，预饲2d(天)，于35日龄正式开始试验，试验期28天。网床饲养，半漏缝地板，舍温保持在22-25℃，猪栏面积为2m×2m。自动喂料槽，乳头式饮水器。粉料饲喂，自由采食和饮水。按猪场正常管理程序进行驱虫和免疫。
4、试验过程与样品制备
预饲2d(天)，试验开始前和在试验第28d(天)清晨，每个试验组猪前腔静脉采血10mL分成3份，3000r/min离心，制备血清-20℃保存待测。
5、检测指标及测定方法
测定猪蓝耳病抗体水平，均采用ELISA检测方法(试验中ELISA试剂购自武汉科前动物生物制品有限责任公司，判定标准：蓝耳病：S/P≥0.40为阳性；S/P＜0.40为阴性)。蓝耳抗体水平分别在35d，64d前腔静脉采血，分离血清，测定抗体。
6、统计分析
应用SPSS模型进行单因素方差分析，结果表示为平均值±标准差(x±SD)。
7、结果与分析
本发明中药组合物对仔猪蓝耳疫苗免疫后抗体水平的影响见表7。由表中可以看出，第2组、第3组猪蓝耳病毒抗体水平与第1组和第4-6相比有显著提高(P<0.05)，第3组的蓝耳病S/P值接近1.0左右的最佳值，蓝耳病达到最佳防控状态，4-6对照组的蓝耳病S/P值还是有点偏高，在临床应用上，断奶仔猪使用量以每吨饲料添加2公斤本发明中药化合物会达到最佳使用效果。
表7
Figure BDA0001569828260000121
注:同行肩标小写字母相同者差异不显著P>0.05；同行肩标小写字母相异者差异显著(P<0.05).
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种治疗猪蓝耳病的中药组合物，其特征在于，以重量份计，由藏红花10-18份、砂仁23-39份、紫苏15-23份、生地黄18-24份、天麻18-34份、灵芝多糖5-13份、艾叶9-19份、女贞子9-13份、刺五加18-27份和蒲公英15-23份组成。
2.根据权利要求1所述中药组合物，其特征在于，以重量份计，由藏红花10-13份、砂仁23-27份、紫苏15-20份、生地黄18-22份、天麻18-32份、灵芝多糖5-9份、艾叶9-11份、女贞子9-11份、刺五加18-22份和蒲公英15-19份组成。
3.根据权利要求1所述中药组合物，其特征在于，以重量份计，由藏红花15-18份、砂仁27-39份、紫苏19-23份、生地黄20-24份、天麻30-24份、灵芝多糖9-13份、艾叶15-19份、女贞子11-13份、刺五加22-27份和蒲公英18-23份组成。
4.权利要求1-3任意一项所述中药组合物在制备饲料添加剂、制备治疗猪蓝耳病药物、制备动物免疫机能增强剂或制备提高猪蓝耳病抗体水平的药物中的应用。
5.根据权利要求4所述应用，其特征在于，所述免疫机能包括脾脏指数、胸腺指数、巨噬细胞吞噬指数、巨噬细胞吞噬率和血清溶血素抗体中的一种或两种以上。
6.权利要求1所述中药组合物的制备方法，其特征在于，称取藏红花、砂仁、紫苏、生地黄、天麻、灵芝多糖、艾叶、女贞子、刺五加和蒲公英，分别破壁粉碎，然后混合均匀，获得所述中药组合物。
7.根据权利要求6所述制备方法，其特征在于，所述破壁粉碎为破壁粉碎至粒径＜45μm。
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