CN109549973A - 一种具有治疗和预防畜禽疾病的中药组合物、及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种中药组合物,该中药组合物的原料由金银花、葛根、黄芩、黄连、白芍、炙甘草组成。该中药组合物还可以含有稳定剂。本发明的中药组合物能作为预防和治疗畜禽的病毒性疾病和细菌性疾病的药物或辅助性药物之用,且其中的活性成分含量稳定,可长期储存。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药组合物,特别涉及一种具有治疗和预防畜禽疾病的中药组合物、制备方法和应用,属于兽药领域。
背景技术
近年来,我国畜牧养殖规模的不断扩大以及畜牧养殖品种的不断增加,给畜牧养殖业的持续发展打下了扎实的基础。然而,畜牧养殖规模的不断扩大也带来了畜牧家禽患病率不断增长、动物疫情扩散加重等问题。动物疾病呈现出复杂性、顽固性、难治愈等特点,控制好动物疾病和动物疫情的爆发成为当前广大畜牧养殖户需要考虑的重大问题。在防治动物疾病过程中常采用疫苗免疫及抗生素治疗,然而,部分疫苗免疫存在免疫抗体水平低、保护率不高的现象,当患免疫抑制性疾病时除了会直接造成与其他传染病相同的危害,更严重的是可能会使受感染动物的免疫功能受到损害,导致机体抵抗力下降而易受其他病原的继发感染,引起多种综合征,同时还造成对疫苗接种的副反应增强,甚至使免疫失败。另外,在预防和治疗方法中大肆滥用抗生素,导致治疗成本高,毒副作用较大,药物残留量严重,危及人类食品卫生安全。
近年来,中国传统中药以其无药物残留、毒副作用小、不易产生耐药性等优点,克服了抗生素易产生耐药性以及抗病毒药物可能被禁用等隐患,在治疗动物疾病的开发中,逐渐成为研究热点。某些中草药还能诱生抗生素,为动物的病毒性疾病的防治提供了更大的可能。
但是,将中药产品运用于禽畜疾病的防治仍存在一些弊端。运用传统的中药提取方法制备的中药组合物成分复杂,其中有机酸和黄酮类活性成分易在光照、有氧条件下分解,浓度不易控制,不易长期储存,无法确保中药产品的标准化生产及使用。因此,开发能够稳定储存、有效成分浓度可控、疗效确切、安全方便、价格低廉的纯中药复方药物是极为必要的。
发明内容
为解决上述问题,本发明提供了一种中药组合物,所述中药组合物能对多种畜禽的病毒性疾病和细菌性疾病的治疗、预防和与对疫苗的辅助治疗、预防有明显效果。
本发明还提供了一种中药组合物,所述中药组合物活性组分可以稳定存在并维持恒定浓度。
本发明还提供了一种中药组合物的制备方法,所述制备方法使得制备的中药组合物具有恒定的活性组分,在加速试验中放置1年,活性组分含量无变化。
本发明还涉及所述中药组合物在制备预防和治疗畜禽的病毒性疾病和细菌性疾病的药物中的应用。
本发明还涉及所述中药组合物在制备预防和治疗畜禽的病毒性疾病和细菌性疾病的辅助药物中的应用。
附图说明
图1A~C为辉县养殖场样品病原经RT-PCR鉴定的电泳图,其中,图1A、1B、1C分别为猪PEDV病毒RT-PCR鉴定结果、猪TGEV病毒RT-PCR鉴定结果、猪PoRV病毒RT-PCR鉴定结果,图1A、1B、1C中泳道标号1、2、3为不同仔猪粪便样品,泳道标号4为肠道组织样品,泳道标号+为阳性对照,泳道标号-为阴性对照,泳道标号M为Marker;
图2A~B为获嘉县养殖场样品病原经RT-PCR鉴定的电泳图,其中,图2A、2B分别为猪PEDV病毒RT-PCR鉴定结果、猪TGEV病毒RT-PCR鉴定结果及猪PoRV病毒RT-PCR鉴定结果,图2A、2B中泳道标号1、2为不同仔猪粪便样品,泳道标号+为阳性对照,泳道标号-为阴性对照,泳道标号M为Marker,图2B中Marker左边为猪TGEV病毒RT-PCR鉴定结果,图2B中Marker右边为猪PoRV病毒RT-PCR鉴定结果;
图3A~C为林州养殖场样品病原经RT-PCR鉴定的电泳图,其中,图3A、3B、3C分别为猪PEDV病毒RT-PCR鉴定结果、猪TGEV病毒RT-PCR鉴定结果、猪PoRV病毒RT-PCR鉴定结果,图3A、3B、3C中泳道标号1、2、3为不同仔猪粪便样品,泳道标号+为阳性对照,泳道标号-为阴性对照,泳道标号M为Marker。
具体实施方式
以下,对本发明的实施方式进行说明。
本发明涉及一种中药组合物,所述中药组合物的原料由以下成分组成:金银花为100-600份、葛根100-600份、黄芩20-200份、黄连20-200份、白芍20-200份、炙甘草20-200份,所述中药组合物还包括药学上可以接受的载体。
本发明的药物组合物能对畜禽的病毒性疾病和细菌性疾病具有预防和治疗作用,也能疫苗共同施用,起辅助的预防和治疗作用。
作为本发明的一种实施方式,本发明所述的中药组合物中,所述的中药组合物的原料由以下成分组成:金银花为280-320份、葛根280-320份、黄芩90-100份、黄连80-90份、白芍60份、炙甘草60份。
作为本发明的一种优选实施方式,本发明所述的中药组合物中,所述中药组合物中活性成分绿原酸含量为1.07mg/ml,葛根素含量为4.04m/ml,盐酸小檗碱含量为0.76m/ml。
作为本发明的一种优选实施方式,本发明所述的中药组合物中,所述的中药组合物的原料由以下成分组成:金银花为300份、葛根300份、黄芩90份、黄连90份、白芍60份、炙甘草60份。
作为本发明的一种优选实施方式,本发明所述的中药组合物中,所述的中药组合物的原料由以下成分组成:金银花为280份、葛根320份、黄芩100份、黄连80份、白芍60份、炙甘草60份。
作为本发明的一种优选实施方式,本发明所述的中药组合物中,所述的中药组合物的原料由以下成分组成:金银花为320份、葛根280份、黄芩100份、黄连80份、白芍60份、炙甘草60份。
本发明还涉及一种中药组合物,所述中药组合物由以下成分组成:金银花提取物300份、葛根提取物300份、黄芩提取物90份、黄连提取物90份、白芍提取物60份、炙甘草提取物60份,所述中药组合物还包括药学上可以接受的载体。
金银花提取物提取自金银花、山银花、忍冬、忍冬藤、忍冬叶、忍冬根、灰毡毛忍冬、红腺忍冬、华南忍冬等相关种属植物及其炮制品。
上述种属植物及其炮制品皆含有活性成分绿原酸,经本领域常规提取方法提取后,能作为金银花的替代原料。
葛根提取物提取自葛根、粉葛、甘葛、苦葛、湘葛、山葛、食用葛、密花葛、黄毛葛、云南葛、小花葛、三裂叶葛、思茅葛、峨眉葛、葛藤、葛花等同属植物及其炮制品。
上述种属植物及其炮制品皆含有活性成分葛根素,经本领域常规提取方法提取后,能作为葛根的替代原料。
黄连提取物提取自黄连、西藏黄连、峨眉野连、线萼黄连、日本黄连、小擘、三颗针、十大功劳、功劳木、黄连叶、黄连须等相关种属植物及其炮制品。
上述种属植物及其炮制品皆含有活性成分盐酸小檗碱,经本领域常规提取方法提取后,能作为黄连的替代原料。
黄芩提取物提取自黄芩、黄芩叶、粘毛黄芩、甘肃黄芩、滇黄芩、丽江黄芩、沙滩黄芩、并头黄芩、炒黄芩、酒黄芩、黄芩炭、焦黄芩、姜黄芩、蜜黄芩等同种属植物及其炮制品。
上述同种属植物及其炮制品能作为黄芩的替代原料。
白芍提取物提取自白芍、赤芍、毛果芍药、炒白芍、酒白芍、醋白芍、焦白芍等相关种属植物及其炮制品。
上述同种属植物及其炮制品能作为白芍的替代原料。
甘草提取物提取自甘草、乌拉尔甘草、黄甘草、蜜腺甘草、粗毛甘草、刺果甘草、炙甘草、蜜润甘草、炒甘草等同属植物及其炮制品。
上述同种属植物及其炮制品能作为甘草的替代原料。
所述金银花的提取物、葛根的提取物、黄芩的提取物、黄连的提取物、白芍的提取物和炙甘草的提取物是指根据本领域的常规技术手段从所述金银花、葛根、黄芩、黄连、白芍和炙甘草中提取,或根据饮片有效部位的性质将提取液采用不同的精制方法制备得到的物质。
作为本发明的一种实施方式,本发明所述的中药组合物中,所述金银花提取物提取自金银花、山银花、忍冬、忍冬藤、忍冬叶、忍冬根、灰毡毛忍冬、红腺忍冬、华南忍冬及其炮制品;所述葛根提取物提取自葛根、粉葛、甘葛、苦葛、湘葛、山葛、食用葛、密花葛、黄毛葛、云南葛、小花葛、三裂叶葛、思茅葛、峨眉葛、葛藤、葛花及其炮制品;所述黄连提取物提取自黄连、西藏黄连、峨眉野连、线萼黄连、日本黄连、小擘、三颗针、十大功劳、功劳木、黄连叶、黄连须及其炮制品;所述黄芩提取物提取自黄芩、黄芩叶、粘毛黄芩、甘肃黄芩、滇黄芩、丽江黄芩、沙滩黄芩、并头黄芩、炒黄芩、酒黄芩、黄芩炭、焦黄芩、姜黄芩、蜜黄芩及其炮制品;所述白芍提取物提取自白芍、赤芍、毛果芍药、炒白芍、酒白芍、醋白芍、焦白芍及其炮制品;以及所述甘草提取物提取自甘草、乌拉尔甘草、黄甘草、蜜腺甘草、粗毛甘草、刺果甘草、炙甘草、蜜润甘草、炒甘草及其炮制品。
作为本发明的一种实施方式,本发明所述的中药组合物中,所述中药组合物中活性成分绿原酸含量为1.07mg/ml,葛根素含量为4.04m/ml,盐酸小檗碱含量为0.76m/ml。
本发明的中药组合物能有效治疗和预防多种畜禽的病毒性疾病和细菌性疾病,或作为与疫苗共同施用的辅助药物。
作为本发明的一种实施方式,本发明所述的中药组合物中,所述中药提取物组合物还包含有稳定剂;所述稳定剂为抗氧化剂、惰性气体、金属离子络合剂和乳化剂。
所述抗氧化剂选自亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫脲、维生素C、D-异维生素C钠、茶多酚、酒石酸、和/或L-半胱氨酸;所述惰性气体选自N2和/或CO2;所述金属离子络合剂选自乙二胺四乙酸、和/或乙二胺四乙酸二钠;所述乳化剂选自吐温-80、司盘-80、卵磷脂、豆磷脂、果胶、黄原胶、羧甲基纤维素钠、藻酸丙二醇酯、胶原蛋白、乳清蛋白、大豆蛋白、单硬醋酸甘油酯、和/或蔗糖脂肪酸酯。
作为本发明的一种实施方式,本发明所述的中药组合物中,所述中药提取物组合物还包含pH值调节剂,所述pH值调节剂选自盐酸、氢氧化钠、枸橼酸、枸橼酸钠、和/或磷酸二氢钠。
本发明含有稳定剂的中药组合物,含有恒定的活性组分,在40℃、75%湿度条件的条件下放置1年,活性组分含量无变化。本发明的中药组合物能够使其中包含的中药活性组分稳定存在,并维持恒定浓度,延长了储存时间,保证了在防治畜禽疾病时的安全性与疗效稳定,利于中药制剂的标准化生产与使用。
作为本发明的一种实施方式,本发明所述的中药组合物中,所述中药制剂中还含有药学上可接受的载体。
作为本发明的一种优选实施方式,本发明所述的中药组合物中,所述载体为增溶剂、添加剂、和/或防腐剂。
作为本发明的一种优选实施方式,本发明所述的中药组合物中,所述增溶剂为水、甘油、吐温-80、乙醇、聚乙二醇;所述添加剂为蔗糖、甜菊素、糖精钠、新橙皮苷二氢查尔酮、阿斯巴甜;所述防腐剂为尼泊金乙酯、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾、苯乙醇。
作为本发明的一种优选实施方式,本发明所述的中药组合物中,所述载体选自吐温-80、糊精、硬铝酸镁、蔗糖、苯甲酸钠、乙二胺四乙酸二钠或其组合。
作为本发明的一种实施方式,本发明所述的中药组合物中,所述的中药组合物的剂型为口服液、散剂、药丸、片剂、包有肠溶衣的片剂、薄膜片剂、层片剂、持续释放制剂、长效制剂、糖锭剂、栓剂、膏药、糊剂、颗粒剂、微胶囊、微制剂、纳米制剂、胶囊、肠溶衣胶囊、舌下含片、冻干粉、粉末、软膏剂、油膏剂、凝胶剂、霜剂、分散剂、脂质体、糖浆、用于向眼、耳或鼻给药的滴液、悬浮液或注射液。
作为本发明的一种优选实施方式,本发明所述的中药组合物中,所述的中药组合物的剂型为口服液、颗粒剂、片剂、冻干粉、栓剂、胶囊、舌下含片或注射液。
作为本发明的一种更优选实施方式,本发明所述的中药组合物中,所述的中药组合物的剂型为口服液、颗粒剂或注射液。
本发明还涉及一种制备所述中药组合物的方法,所述方法包括:步骤(1)将所述原料中的金银花、葛根、黄芩、白芍和炙甘草,加入稳定剂A,用溶剂提取,提取液过滤;步骤(2)将所述原料中的黄连用溶剂提取,提取液过滤;以及步骤(3)将所述步骤(1)、步骤(2)中的所述过滤的提取液合并,减压浓缩,加入稳定剂B;
所述步骤(1)和步骤(2)中的溶剂为水、乙醇、或稀酸;所述步骤(1)中的稳定剂A和所述步骤(2)中的稳定剂B分别独立地为抗氧化剂、惰性气体、金属离子络合剂和乳化剂。
经上述方法制备的中药组合物,能长期储存而其中的活性成分含量恒定。
作为本发明的一种实施方式,本发明制备所述中药组合物的方法中,所述溶剂乙醇浓度为40%-95%;所述的溶剂稀酸为硫酸,浓度为0.1%-0.5%,当所述溶剂为稀酸时,所述步骤(2)中还加入pH值调节剂。
作为本发明的一种实施方式,本发明制备所述中药组合物的方法中,所述抗氧化剂选自亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫脲、维生素C、D-异维生素C钠、茶多酚、酒石酸、和/或L-半胱氨酸;所述惰性气体选自N2和/或CO2;所述金属离子络合剂选自乙二胺四乙酸、和/或乙二胺四乙酸二钠;所述乳化剂选自吐温-80、司盘-80、卵磷脂、豆磷脂、果胶、黄原胶、羧甲基纤维素钠、藻酸丙二醇酯、胶原蛋白、乳清蛋白、大豆蛋白、单硬醋酸甘油酯、和/或蔗糖脂肪酸酯。
所述pH值调节剂选自盐酸、氢氧化钠、枸橼酸、枸橼酸钠、和/或磷酸二氢钠。
作为本发明的一种优选实施方式,本发明制备所述中药组合物的方法中,所述稳定剂A为亚硫酸氢钠、维生素C、和N2其中的一种或其组合,稳定剂B为亚硫酸氢钠、维生素C、N2、黄原胶、羧甲基纤维素钠、蔗糖脂肪酸酯、和磷酸二氢钠其中的一种或其组合。
作为本发明的一种实施方式,本发明制备所述中药组合物的方法中,所述步骤(1)将所述原料中的金银花、葛根、黄芩、白芍和炙甘草,加入稳定剂,用14倍的水冷浸1h后,加入1g亚硫酸氢钠加热回流提取1h,第二次提取和第三次提取均为12倍水加热回流提取1h,过滤;所述步骤(2)将黄连加10倍50%乙醇冷浸1h后,加热回流提取1.5h,第二次提取和第三次提取均为8倍50%乙醇加热回流提取1.5h,过滤;以及所述步骤(3)将所述步骤(1)、步骤(2)中的所述过滤的提取液合并,在60℃-70℃减压浓缩,加入稳定剂。
作为本发明的一种实施方式,本发明制备所述中药组合物的方法中,所述方法还包括后续的处理步骤:加热,离心,加入防腐剂、过滤、灭菌。
作为本发明的一种优选实施方式,本发明制备所述中药组合物的方法中,所述后续处理步骤为将所述浓缩液加热煮沸30min,冷藏,离心,得上清液;将所述上清液加入苯甲酸钠、吐温-80,搅匀,滤过,灌装,灭菌。
本发明还涉及所述中药组合物在制备预防和治疗畜禽的病毒性疾病和细菌性疾病的药物或辅助性药物中的应用。
作为本发明的一种实施方式,所述畜禽的病毒性疾病和细菌性疾病为猪繁殖与呼吸综合征、猪呼吸道疾病、仔猪腹泻、禽大肠杆菌病。
作为本发明的一种实施方式,所述制备预防和治疗畜禽的病毒性疾病和细菌性疾病的辅助性药物为与疫苗联用的辅助性药物。
本发明所述的中药组合物能够有效预防及治疗猪繁殖与呼吸综合征、猪呼吸道疾病、仔猪腹泻泻病、禽大肠杆菌病,提供了一种疗效好的中药制剂,其疗效明显优于对照药物。长期使用不易产生耐药性及药物残留。与疫苗联用可以显著增强疫苗的效力。
下面结合具体实施例来进一步描述本发明,本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但实施例仅是范例性的,并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是,在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换,但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
下面结合具体实施例来进一步描述本发明,但不局限于例举:
下列实施例中所使用的金银花等饮片为购自河南千方药业有限公司的饮片,它们经检验符合《中华人民共和国兽药典》2015年版项下的规定,其它试验材料为本领域技术人员的常规试验选择。
制备实施例1本发明的中药组合物(口服液)的制备
1.1.配方
按重量份数(每份为0.5g时)称取金银花为300份、葛根300份、黄芩90份、黄连90份、白芍60份和炙甘草60份。
1.2制备方法
第一步:取金银花、葛根、黄芩(水沸后加入)、白芍、炙甘草,第一次加14倍水冷浸1h后,加入1g亚硫酸氢钠加热回流提取1h,第二次和第三次均为12倍水加热回流提取1h,过滤;黄连第一次加10倍50%乙醇冷浸1h后,加热回流提取1.5h,第二次和第三次均为8倍50%乙醇加热回流提取1.5h,过滤;上述滤液合并,在60℃-70℃减压浓缩至相对密度1.05-1.10(60℃-70℃),冷藏,离心,得浓缩液,加入0.25g乙二胺四乙酸二钠。
第二步:将上述浓缩液加热煮沸30min,冷藏,离心,得上清液。
第三步:将上述上清液加入3g苯甲酸钠、5g吐温-80,加水至1000ml,搅匀,滤过,灌装,灭菌,即得。
制备实施例2本发明的中药组合物(颗粒剂)的制备
2.1.配方
按重量份数(每份为1g时)称取金银花为300份、葛根300份、黄芩90份、黄连90份、白芍60份和炙甘草60份。
2.2.制备方法
第一步:取金银花、葛根、黄芩(水沸后加入)、白芍、炙甘草,第一次加14倍水冷浸1h后,加入0.25g乙二胺四乙酸二钠,加热回流提取1h,第二次和第三次均为12倍水加热回流提取1h,过滤;黄连第一次加10倍50%乙醇冷浸1h后,加热回流提取1.5h,第二次和第三次均为8倍50%乙醇加热回流提取1.5h,过滤;上述滤液合并,在60℃-70℃减压浓缩至相对密度1.05-1.10(60℃-70℃),冷藏,离心;上清液在60℃-70℃减压浓缩至相对密度1.15-1.25(60℃-70℃),得浓缩液。
第二步:将上述浓缩液加蔗糖500g与适量糊精、甜菊素,制成颗粒,干燥,制成1000g,即得。
制备实施例3本发明的中药组合物(颗粒剂)的制备
3.1.配方
按重量份数(每份为1g时)称取金银花280份、葛根320份、黄芩100份、黄连80份、白芍60份、炙甘草60份。
3.2.制备方法
第一步:取金银花、葛根、黄芩(水沸后加入)、白芍、炙甘草,第一次加12倍水提1.5h,加入1g L-半胱氨酸,第二次和第三次均为10倍水提1.5h,过滤,合并滤液,在60℃-70℃减压浓缩至相对密度1.08-1.10(70℃-80℃),离心;黄连第一次加10倍水提1.5h,第二次和第三次均为8倍水提1.5h,过滤,合并滤液,在60℃-70℃减压浓缩至相对密度1.05-1.10(70℃-80℃),离心;滤液与上述药液合并,在60℃-70℃减压浓缩至相对密度1.15-1.25(70℃-80℃)。
第二步:将上述浓缩液加环糊精500g与适量可溶性淀粉、蔗糖,制成颗粒,干燥,制成1000g,即得。
制备实施例4本发明的中药组合物(口服液)的制备
4.1.配方
按重量份数(每份为1g时)称取金银花320份、葛根280份、黄连80份、黄芩100份、白芍60份、炙甘草60份。
4.2.制备方法
第一步:取金银花、葛根、黄芩(水沸后加入)、白芍、炙甘草,第一次加14倍水冷浸1h后,加入0.25g乙二胺四乙酸二钠和1g亚硫酸氢钠,加热回流提取1h,第二次和第三次均为12倍水加热回流提取1h,过滤;黄连第一次加10倍50%乙醇冷浸1h后,加热回流提取1.5h,第二次和第三次均为8倍50%乙醇加热回流提取1.5h,过滤;上述滤液合并,在60℃-70℃减压浓缩至相对密度1.05-1.10(60℃-70℃),冷藏,离心,得浓缩液。
第二步:将上述浓缩液加热煮沸30min,冷藏,离心,得上清液。
第三步:将上述浓缩液加入1g山梨酸钾、2g吐温-80,加水至1000ml,搅匀,滤过,灌装,灭菌,即得。
实施例5:本发明制备的中药组合物的稳定性研究试验
利用实施例1制得的口服液进行加速试验研究。分别在40℃±2℃、相对湿度75%±5%条件下放置12个月,分别于第3、6、9、12月取样,采用高效液相色谱法,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,绿原酸的检测以乙腈为流动相A,0.4%磷酸水溶液为流动相B,按表1的规定进行梯度洗脱,检测波长为327nm,柱温25℃,理论板数按绿原酸峰计算应不低于1000。葛根素的检测以甲醇-0.4%磷酸水溶液(24:76)为流动相,检测波长为250nm,理论板数按葛根素峰计算应不低于4000。盐酸小檗碱的检测以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(50:50)(每100ml中加十二烷基硫酸钠0.4g,再以磷酸调节pH值为4.0)为流动相;检测波长为345nm;理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于5000。
表1绿原酸的检测条件
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0~12 | 11 | 89 |
12~13 | 40 | 60 |
13~18 | 40 | 60 |
18~19 | 11 | 89 |
19~25 | 11 | 89 |
加速实验检测结果见表2。
表2实施例1制备的中药组合物样品加速试验结果
由表2可见,采用实施例1制得的口服液,在加速试验(40℃、75%)条件下放置12个月,样品的活性成分含量几乎没有变化。
实施例6:本发明的中药组合物对猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗的辅助预防实验
实验药物:本发明实施例1制得的口服液,批号为20161001;猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗(NVDC-JXA1株),批号为20160801,普莱柯生物工程股份有限公司生产。
试验动物:选自位于河南省中牟县、尉氏县的五家养殖场。这些养殖场母猪存栏量均在100头左右、育肥猪存栏量2000头以下,且近几年受高致病性猪蓝耳病危害严重。选择60头健康状况良好的母猪,90头健康状况良好的仔猪作为试验动物。
动物分组及处理方法:
试验猪群分为空白对照组、疫苗免疫组和疫苗免疫+实施例1制备的中药组合物药物组。空白对照组不免疫猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗(NVDC-JXA1株);疫苗免疫程序为母猪配种前接种该疫苗4ml,仔猪每头接种2ml;疫苗免疫+实施例1药物组处理方法为免疫第2天给予实施例1的药物,剂量为0.3g/kg体重,2次/d,连用7d。其它饲养管理及消毒措施均相同。
在免疫前、免疫1月、2月、3月分别对试验猪群采集样品进行高致病性猪蓝耳病抗体监测,并统计试验组猪发病数量及发病情况,临床发病试验猪群进行高致病性猪蓝耳病荧光RT-PCR检测结果为阳性的记为发病,计算临床发病率。
试验结果:
表3试验母猪免疫前后高致病性猪蓝耳病抗体监测结果
表4试验仔猪高致病性猪蓝耳病抗体监测结果
表5试验过程中猪繁殖与呼吸综合征发病数量及发病率统计
由表3-表4可知,疫苗免疫+实施例1药物组在免疫1个月时,抗体水平均达到80%以上,比单纯的疫苗免疫抗体水平高5%-15%,说明采用实施例1的药物能明显增强猪群的高致病性猪蓝耳病的免疫效果。
由表5可知,疫苗免疫+实施例1药物组在试验期间,猪繁殖与呼吸综合征发病率为2%,比单纯的疫苗免疫组降低6%,比空白组降低10%,说明实施例1的药物与疫苗连用能大大降低高致病猪蓝耳病的发病率,有效预防高致病性猪蓝耳病的发生。
实施例7本发明的中药组合物对猪呼吸道疾病的治疗实验
试验药品:本发明实施例1制得的口服液,批号为20161001;麻杏石甘口服液,批号为20160901,洛阳惠中兽药有限公司生产。
试验动物:
100-130日龄育肥猪,选自位于河南洛宁县的2家养殖场。临床表现为体温升高、咳嗽、气喘、呼吸困难的症状,精神不振,食欲下降,卧地不起,并有5头猪无任何症状相继突然死亡。取死亡的1头生长猪剖检,观察到肺与胸膜粘连,肺脏除有坏死性结节或局部坏死灶外,肺边缘有虾肉样实变区,质地坚实,切面易碎,肺表面有纤维素渗出物,间质增宽,气管水肿出血,下颌淋巴结肿大充血。
动物分组:
将上述患有呼吸道疾病的65头猪只随机分为3组,第1组服用实施例1制备的药物,0.3ml/kg体重,2次/d,连用5d;第2组服用麻杏石甘口服液,1ml/kg体重,2次/d,连用5d;第3组不给药;其它饲养管理及消毒措施各组均相同。
疗效判断标准:
有效是指病猪经5天治疗,在停药的3天时间内,咳喘终止,呼吸基本正常,食欲逐渐恢复,精神状况,好转,体温恢复正常。
无效是指病猪经5天治疗,停药后3天无任何好转,甚至病情加重或改用其它药物,甚至死亡。
治疗结果:
使用卡方检验对试验数据进行统计分析,结果见表6。
表6本发明实施例1药物对猪呼吸道疾病的治疗效果
注:**表示与实施例1药物组比,差异极显著(p<0.01)。
结果表明,本发明药物治疗猪呼吸道疾病,实施例1药物有效率为86%,和空白对照组(48%)相比差异极显著,说明本发明药物对猪呼吸道疾病具有较好的疗效;和阳性对照组(77%)相比差异虽然不显著,这有可能与样本量小有关,但是从变化趋势上来说有增高的趋势,表明本发明中药组合物较市售治疗相同疾病的同类药疗效稍优。
实施例8:本发明中药组合物的仔猪腹泻的治疗试验
试验药品:本发明实施例1制得的口服液,批号为20161001;杨树花口服液,批号为20160601,普莱柯生物工程股份有限公司生产。
试验动物:
3-10日龄三元白猪(杜洛克×大白×长白),体重为1.5-2kg,选自位于河南省辉县、获嘉县和林州的三家养殖场。临床表现为仔猪精神沉郁、拉黄色水样粪便、部分仔猪呕吐出黄色内容物,剖检症状主要为:除小肠外,其余内脏器官无肉眼可见变化,小肠扩张,充满黄色内容物,肠系膜淋巴结肿大。镜检未发现细菌,RT-PCR检测结果表明,猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和轮状病毒(PRV)未检出,猪流行性腹泻病毒(PEDV)检出,结果如图1。临床诊断为猪流行性腹泻。
用相同的检测方法对获嘉县和林州进行病原检测,检测结果见图2和图3,获嘉县病猪的临床诊断为猪流行性腹泻,林州病猪的临床诊断为PEDV病毒和猪PoRV病毒混合感染。
动物分组:
对RT-PCR检测结果病毒为阳性的仔猪共计82头分为3组,第1组服用实施例1制得的本发明药物,1ml/次,2次/d,连用3d;第2组服用市售杨树花口服液,1ml/次,2次/d,连用3d;第3组不给药,其它饲养管理及消毒措施均相同。
疗效判断标准:
治疗期间,每天给药前观察每窝猪群的精神及粪便情况,记录死亡头数。精神状态判定标准:正常、沉郁、高度沉郁;粪便状态判定标准:正常便、软便、糊状便、水样便。治疗结束后,粪便转为软便或正常便,则视为有效;粪便次数与粪便状态无好转,病情加重或改用其它药物,甚至死亡,视为无效。
治疗结果:
使用卡方检验对试验数据进行统计分析,结果见表7。
表7本发明实施例1的药物对仔猪腹泻的治疗效果
注:**表示与实施例1药物组比,差异极显著(p<0.01),*表示与实施例1药物组比,差异显著(0.01<p<0.05)。
结果表明,本发明药物治疗仔猪腹泻,实施例1的药物有效率为89%,和空白对照组(13%)相比差异极显著,说明本发明药物对仔猪腹泻具有较好的疗效;和阳性对照组(70%)相比差异显著,表明本发明药物较市售治疗相同疾病的同类药疗效更优。
实施例9:本发明中药组合物对仔猪的生长性能、生理状况的促进试验
试验药品:本发明实施例1制得的口服液,批号为20161001。
试验动物及分组:
年龄胎次相近的预产期相近的健康产前母猪50头,选自位于河南省辉县和获嘉县的两家养殖场。随机分为A、B两组,A组为空白对照组,B组为实施例1药物组。产仔后因母猪不同,将仔猪分为a组、b组。
试验方法:
试验期间,A组母猪正常饲养,B组母猪临产1个月时开始给予实施例1药物,20ml/次,2次/d,连用7d,其它按照常规饲养管理进行。
评价指标:
平均初生重:以窝为单位测定初生仔猪的平均初生重。
断奶时均重:以窝为单位测定仔猪断奶时均重。
发病率:试验开始后,观察仔猪腹泻情况和因腹泻导致的死亡情况,计算每组仔猪的腹泻头数、死亡头数,发病率=(腹泻头数+死亡头数)/试验总头数。
治疗结果:
表8实施例1的药物经母猪给药对仔猪生产性能的影响
组别 | 产仔数 | 初生均重(kg) | 断奶时均重(kg) |
空白对照组 | 248 | 1.25±0.52 | 10.04±1.03 |
实施例1药物组 | 244 | 1.42±0.21* | 13.27±0.61* |
表9实施例1的药物经母猪给药对仔猪腹泻率与死亡率的影响
组别 | 产仔数 | 腹泻头数 | 死亡头数 | 发病率/% |
空白对照组 | 248 | 160 | 26 | 75% |
实施例1药物组 | 244 | 40 | 6 | 19% |
由表8可知,在母猪临产1个月时给予实施例1药物,产仔数没有明显差异,而实施例1药物组初生均重与断奶时均重均显著高于空白对照组,说明实施例1药物在母猪临产1个月给药,可有效提高仔猪生长性能。
由表9可知,在母猪临产1个月时给予实施例1药物,仔猪的生理状况有很大改善,腹泻头数和死亡头数均明显低于空白对照组,仔猪腹泻发病率由75%降低至19%。说明实施例1药物在母猪临产1个月给药,可有效预防仔猪腹泻的发生。
实施例10本发明中药组合物的鸡大肠杆菌病的治疗试验
试验药品:本发明实施例1药物,批号为20161001;阿莫西林可溶性粉,郑州百瑞动物药业有限公司生产。
试验动物及分组:
35只80日龄雏鸡,随机分为4组,每组20只,分别为空白对照组,模型对照组,阳性药对照组,实施例1药物治疗组。除空白对照组不染菌外,其余按0.8mL/只鸡腹腔注射2×108cfu/mL O2型鸡源性大肠杆菌菌液,感染20h后鸡出现精神迟钝、垂翅、呆立、食欲减少、拉稀和呼吸困难等症状。空白对照组、模型对照组鸡分别正常饲养,阳性药对照组采用0.5g/kg阿莫西林可溶性粉混饮治疗,连用5天,实施例1药物组采用20ml/kg实施例1药物治疗,连用5天。
疗效判断标准:
有效是指治疗5天后,再观察1周,鸡精神好转,饮食正常,粪便恢复正常或减轻。
无效是指治疗5天后,再观察1周,病情无好转,甚至加重,或改为其它药物治疗,甚至死亡。
治疗结果:
表10本发明实施例1所得药物对鸡大肠杆菌的治疗效果
由表10可知,造模后20h后鸡出现精神迟钝、垂翅、呆立、食欲减少、拉稀和呼吸困难等症状,而空白对照组无临床现象,证明造模成功;实施例1的药物治疗后,有效率为75%,死亡率由65%(13/20)降低到10%(2/20),表明实施例1的药物治疗鸡大肠杆菌效果较好。
以上所述仅是本发明的优选实施例而已,并非对本发明做任何形式上的限制,虽然本发明已以优选实施例揭露如上,然而并非用以限定本发明,任何熟悉本专业的技术人员,在不脱离本发明技术方案的范围内,当可利用上述揭示的技术内容作出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例,但凡是未脱离本发明技术方案的内容,依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰,均仍属于本发明技术方案的范围内。
Claims (11)
1.一种中药组合物,其特征在于,所述中药组合物的原料由以下成分组成:金银花为100-600份、葛根100-600份、黄芩20-200份、黄连20-200份、白芍20-200份、炙甘草20-200份,所述中药组合物还包括药学上可以接受的载体。
2.根据权利要求1所述的中药组合物,其特征在于,所述的中药组合物的原料由以下成分组成:金银花为280-320份、葛根280-320份、黄芩90-100份、黄连80-90份、白芍60份、炙甘草60份;
优选地,所述的中药组合物的原料由以下成分组成:金银花为300份、葛根300份、黄芩90份、黄连90份、白芍60份、炙甘草60份;或者
所述的中药组合物的原料由以下成分组成:金银花为280份、葛根320份、黄芩100份、黄连80份、白芍60份、炙甘草60份;或者
所述的中药组合物的原料由以下成分组成:金银花为320份、葛根280份、黄芩100份、黄连80份、白芍60份、炙甘草60份。
3.一种中药组合物,其特征在于,所述中药组合物由以下成分组成:金银花提取物300份、葛根提取物300份、黄芩提取物90份、黄连提取物90份、白芍提取物60份、炙甘草提取物60份,所述中药组合物还包括药学上可以接受的载体。;优选地,所述金银花提取物提取自金银花、山银花、忍冬、忍冬藤、忍冬叶、忍冬根、灰毡毛忍冬、红腺忍冬、华南忍冬及其炮制品;
所述葛根提取物提取自葛根、粉葛、甘葛、苦葛、湘葛、山葛、食用葛、密花葛、黄毛葛、云南葛、小花葛、三裂叶葛、思茅葛、峨眉葛、葛藤、葛花及其炮制品;
所述黄连提取物提取自黄连、西藏黄连、峨眉野连、线萼黄连、日本黄连、小擘、三颗针、十大功劳、功劳木、黄连叶、黄连须及其炮制品;
所述黄芩提取物提取自黄芩、黄芩叶、粘毛黄芩、甘肃黄芩、滇黄芩、丽江黄芩、沙滩黄芩、并头黄芩、炒黄芩、酒黄芩、黄芩炭、焦黄芩、姜黄芩、蜜黄芩及其炮制品;
所述白芍提取物提取自白芍、赤芍、毛果芍药、炒白芍、酒白芍、醋白芍、焦白芍及其炮制品;以及
所述甘草提取物提取自甘草、乌拉尔甘草、黄甘草、蜜腺甘草、粗毛甘草、刺果甘草、炙甘草、蜜润甘草、炒甘草及其炮制品。
4.根据权利要求2或3所述的中药组合物,其特征在于,所述中药组合物中活性成分绿原酸含量为1.07mg/ml,葛根素含量为4.04mg/ml,盐酸小檗碱含量为0.76mg/ml。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的中药提取物组合物,其特征在于,所述中药提取物组合物还包含有稳定剂;所述稳定剂为抗氧化剂、惰性气体、金属离子络合剂和乳化剂;
优选地,所述抗氧化剂选自亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫脲、维生素C、D-异维生素C钠、茶多酚、酒石酸、和/或L-半胱氨酸;
所述惰性气体选自N2和/或CO2;
所述金属离子络合剂选自乙二胺四乙酸、和/或乙二胺四乙酸二钠;
所述乳化剂选自吐温-80、司盘-80、卵磷脂、豆磷脂、果胶、黄原胶、羧甲基纤维素钠、藻酸丙二醇酯、胶原蛋白、乳清蛋白、大豆蛋白、单硬醋酸甘油酯、和/或蔗糖脂肪酸酯;
优选地,所述中药提取物组合物还包含有pH值调节剂,所述pH值调节剂选自盐酸、氢氧化钠、枸橼酸、枸橼酸钠、和/或磷酸二氢钠。
6.根据权利要求1~5任一项所述的中药组合物,其特征在于,所述中药制剂中还含有药学上可接受的载体;优选地,所述载体为增溶剂、添加剂、和/或防腐剂,所述增溶剂为水、甘油、吐温-80、乙醇、聚乙二醇;所述添加剂为蔗糖、甜菊素、糖精钠、新橙皮苷二氢查尔酮、阿斯巴甜;所述防腐剂为尼泊金乙酯、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾、苯乙醇;更优选地,所述载体选自水、吐温-80、糊精、硬铝酸镁、蔗糖、苯甲酸钠、乙二胺四乙酸二钠或其组合。
7.根据权利要求6所述的中药组合物,其特征在于,所述的中药组合物的剂型为口服液、散剂、药丸、片剂、包有肠溶衣的片剂、薄膜片剂、层片剂、持续释放制剂、长效制剂、糖锭剂、栓剂、膏药、糊剂、颗粒剂、微胶囊、微制剂、纳米制剂、胶囊、肠溶衣胶囊、舌下含片、冻干粉、粉末、软膏剂、油膏剂、凝胶剂、霜剂、分散剂、脂质体、糖浆、用于向眼、耳或鼻给药的滴液、悬浮液或注射液;优选地,所述的中药组合物的剂型为口服液、颗粒剂、片剂、冻干粉、栓剂、胶囊、舌下含片或注射液;更优选地,所述的中药组合物的剂型为口服液、颗粒剂或注射液。
8.一种制备权利要求1所述中药组合物的方法,其特征在于,所述方法包括:
步骤(1)将所述原料中的金银花、葛根、黄芩、白芍和炙甘草,加入稳定剂A,用溶剂提取,提取液过滤;
步骤(2)将所述原料中的黄连用溶剂提取,提取液过滤;
步骤(3)将所述步骤(1)、步骤(2)中的所述过滤的提取液合并,减压浓缩,加入稳定剂B;
所述步骤(1)和步骤(2)中的溶剂为水、乙醇、或稀酸;优选地,所述乙醇浓度为40%-95%;所述的稀酸为硫酸,浓度为0.1%-0.5%;
所述步骤(1)中的稳定剂A和所述步骤(2)中的稳定剂B分别独立地为抗氧化剂、惰性气体、金属离子络合剂、乳化剂;
优选地,所述抗氧化剂选自亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫脲、维生素C、D-异维生素C钠、茶多酚、酒石酸、和/或L-半胱氨酸;
所述惰性气体选自N2和/或CO2;
所述金属离子络合剂选自乙二胺四乙酸、和/或乙二胺四乙酸二钠;
所述乳化剂选自吐温-80、司盘-80、卵磷脂、豆磷脂、果胶、黄原胶、羧甲基纤维素钠、藻酸丙二醇酯、胶原蛋白、乳清蛋白、大豆蛋白、单硬醋酸甘油酯、和/或蔗糖脂肪酸酯;
当所述溶剂为稀酸时,所述步骤(2)还加入pH值调节剂,所述pH值调节剂选自盐酸、氢氧化钠、枸橼酸、枸橼酸钠、和/或磷酸二氢钠;
优选地,所述步骤(1)将所述原料中的金银花、葛根、黄芩、白芍和炙甘草,加入稳定剂,用14倍的水冷浸1h后,加入1g亚硫酸氢钠加热回流提取1h,第二次提取和第三次提取均为12倍水加热回流提取1h,过滤;
所述步骤(2)将黄连加10倍50%乙醇冷浸1h后,加热回流提取1.5h,第二次提取和第三次提取均为8倍50%乙醇加热回流提取1.5h,过滤;以及
所述步骤(3)将所述步骤(1)、步骤(2)中的所述过滤的提取液合并,在60℃-70℃减压浓缩,加入稳定剂。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述稳定剂A为亚硫酸氢钠、维生素C、和N2其中的一种或其组合,稳定剂B为亚硫酸氢钠、维生素C、N2、黄原胶、羧甲基纤维素钠、蔗糖脂肪酸酯、和磷酸二氢钠其中的一种或其组合。
10.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述方法还包括后续的处理步骤:加热,离心,加入防腐剂、过滤、灭菌;优选地,所述后续处理步骤为将所述浓缩液加热煮沸30min,冷藏,离心,得上清液;将所述上清液加入苯甲酸钠、吐温-80,搅匀,滤过,灌装,灭菌。
11.权利要求1~7所述中药组合物在制备预防和治疗畜禽的病毒性疾病和细菌性疾病的药物或辅助性药物中的应用;优选地,所述畜禽的病毒性疾病和细菌性疾病为猪繁殖与呼吸综合征、猪呼吸道疾病、仔猪腹泻、禽大肠杆菌病。
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