CN104162157A - 一种抗猪瘟的组合物、饲料添加剂、制备方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种抗猪瘟的组合物、饲料添加剂、制备方法及应用，其中组合物包括以下重量份数的组分：抗猪瘟卵黄抗体95-97份、抗猪瘟转移因子0.9-2.1份；饲料添加剂包括以下重量份数的组分：抗猪瘟卵黄抗体95-97份、抗猪瘟转移因子0.9-2.1份、防腐剂0.01-0.02份、灭活剂0.2-0.3份、硒0.05-0.1份、维生素C0.5-1份、聚乙烯吡咯烷酮1-2份、甘氨酸0.5-1份。本发明将抗猪瘟卵黄抗体与抗猪瘟转移因子复配，可以显著提高防治猪瘟的效果，具有针对性强，常温下保存时间长，抗体效价高，生物活性良好的优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种抗猪瘟的组合物，同时还涉及含有该组合物的饲料添加剂、制备方法及应用，属于饲料添加剂领域。
背景技术
随着社会的发展和人民生活水平的提高，越来越多人将目光投向食品安全问题。猪业在我国养殖业中占有较重的份额，仅河南省2009年产出的猪肉就达410.32万吨，由此可以知道，我国每年对于猪肉的需求量非常大。但是随着猪肉需求的逐年递增，在养猪过程中也出现越来越多的问题，其中猪瘟是一种急性传染性疾病，给养猪业造成了巨大的经济损失。
猪瘟俗称“烂肠瘟”，是由黄病毒科猪瘟病毒属的猪瘟病毒（CSFV）引起的一种急性、发热、接触性传染病，具有高度传染性和致死性。主要特征是高温、微血管变性而引起全身出血、坏死、梗塞。猪瘟于1885年首先在美国发现，随后传播到世界各大洲。1903年美国兽医学家德希尼兹和多赛特鉴定该病的病原是黄病毒科的瘟病毒属（Pestivirus）中的猪瘟病毒。主要通过直接接触或接触污染的媒介物而发病。消化道、鼻腔粘膜和破裂的皮肤均是感染途径。
目前常见的防治猪瘟的方法较多，主要是使用西药、接种免疫、中草药防治。其中西药使用的泛滥给猪产品食用带来了极大的饮食隐患，药物残留已经成为影响猪产品安全的主要因素之一。接种免疫早期效果较好，但是需要多次接种，操作麻烦，成本较高，容易造成断奶猪产生应激反应；而且疫苗对于保藏条件要求较高，需要在2-8℃条件下冷藏，室温条件下一段时间则失去效果。中草药饲料添加剂也是目前的研究方向之一，但是由于中草药的种类较多，相同的中药材对不同的禽畜疾病的作用差异很大，且中草药对疾病的免疫效果极其有限，因此其应用也具有一定的局限性。注射卵黄抗体也是较为常见的一种方法，但是单一注射卵黄抗体的免疫效果有时候不能满足实际需求。
发明内容
本发明的目的是提供一种抗猪瘟的组合物，能够有效防治猪瘟。
为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是提供一种抗猪瘟的组合物，该组合物包括以下重量份数的组分：抗猪瘟卵黄抗体95-97份、抗猪瘟转移因子0.9-2.1份。
所述的抗猪瘟的组合物，包括以下重量份数的组分：抗猪瘟卵黄抗体95-97份、抗猪瘟转移因子1-2份。
卵黄抗体是一种免疫球蛋白，由于机体受到外界抗原的刺激而产生的一种应激产物，可以和相应抗原结合，消除病因。
本发明将猪疫苗免疫接种健康的鸡群，可以使蛋黄中产生有效的抗猪瘟卵黄抗体，同时减少了毒株返祖的可能性。
转移因子携带有致敏淋巴细胞的特异性免疫信息，能够将特异性免疫信息呈递给受体淋巴细胞，使受体无活性的淋巴细胞转变为特异性致敏淋巴细胞，从而激发受体细胞介导的免疫反应。
本发明将抗猪瘟卵黄抗体与抗猪瘟转移因子复配，可以显著提高防治猪瘟的效果，具有针对性强，常温下保存时间长，抗体效价高，生物活性良好的优点。经动物实验表明：本发明抗猪瘟卵黄抗体与抗猪瘟转移因子的组合物，防治猪瘟的效果要明显优于单一使用抗猪瘟卵黄抗体、抗猪瘟转移因子或猪瘟疫苗冻干粉和转移因子联用的效果。
本发明的目的还在于提供一种含有抗猪瘟的组合物的饲料添加剂。
本发明所采用的技术方案还在于提供一种含有抗猪瘟的组合物的饲料添加剂，该饲料添加剂包括以下重量份数的组分：抗猪瘟卵黄抗体95-97份、抗猪瘟转移因子0.9-2.1份、防腐剂0.01-0.02份、灭活剂0.2-0.3份、硒0.05-0.1份、维生素C0.5-1份、聚乙烯吡咯烷酮1-2份、甘氨酸0.5-1份。
所述的含有抗猪瘟的组合物的饲料添加剂，包括以下重量份数的组分：抗猪瘟卵黄抗体95-97份、抗猪瘟转移因子1-2份、防腐剂0.01-0.02份、灭活剂0.2-0.3份、硒0.05-0.1份、维生素C0.5-1份、聚乙烯吡咯烷酮1-2份、甘氨酸0.5-1份。
所述灭活剂为甲醛。
所述防腐剂为硫柳汞。
本发明将抗猪瘟组合物和多种辅料进行复配，并通过调整辅料的成分、控制其用量，进一步延长了卵黄抗体的保存时间，保证了卵黄抗体在常温下较长时间内的活性，降低了饲料添加剂的保存和运输成本，使用方便，具有广泛的应用前景。
本发明的目的还在于提供一种抗猪瘟的饲料添加剂的制备方法。
本发明所采用的技术方案还在于提供一种抗猪瘟的饲料添加剂的制备方法，包括以下步骤：
（1）将猪瘟病毒增殖并灭活制备成疫苗，免疫健康鸡群制得高免蛋，将高免蛋经过消毒、酸化处理、离心处理得到含有抗猪瘟卵黄抗体的上清液；
（2）将含有抗猪瘟卵黄抗体的上清液与抗猪瘟转移因子原液、防腐剂、灭活剂、硒、维生素C、聚乙烯吡咯烷酮、甘氨酸混合，再冻干即得。
本发明的饲料添加剂的制备方法具体包括以下步骤：
（1）将猪瘟病毒增殖并灭活制备成疫苗，每间隔7天对健康产蛋鸡群进行免疫，共免疫三次，第二次免疫后开始检测抗体效价，当抗体效价达到1：256时，收集高免蛋，将收集的高免蛋进行清理、消毒，晾干备用；
（2）分离高免蛋卵黄，加入等体积的无菌水，充分搅拌，得到卵黄抗体溶液；在卵黄抗体溶液加入pH=4.9-5.2的酸化水溶液，酸化水溶液加入量为卵黄抗体溶液体积的8倍，混匀，静置沉淀，取上清液；
（3）在上清液中加入体积分数0.8%的NaCl和Na2SO4混合物，15000rpm离心20min，得到含有抗猪瘟卵黄抗体的上清液，其中，NaCl和Na2SO4质量比为4:1；
（4）取步骤（3）含有抗猪瘟卵黄抗体的上清液中加入抗猪瘟转移因子原液；
（5）用0.45μm的滤膜对步骤（4）所得混合液过滤，截流分子量大于200KD的大分子物质，再将滤液经0.22μm滤膜过滤，留滤液；
（6）将步骤（5）的滤液浓缩，使滤液浓缩至2.5mL/500羽份；
（7）向步骤（6）的浓缩液中加入防腐剂、灭活剂、硒、维生素C、聚乙烯吡咯烷酮、甘氨酸，并在﹣80℃条件下充分冷冻；
（8）将步骤（7）的浓缩液冻干即得。
本发明的制备方法简单，操作方便，降低了人力物力成本，也便于工业化的推广。
本发明的目的还在于提供一种饲料添加剂在制备抗猪瘟的饲料中的应用。
本发明所采用的技术方案还在于提供一种饲料添加剂在制备抗猪瘟的饲料中的应用，所述饲料添加剂的加入量为饲料总重量的0.2-0.6%。
将少量本发明的饲料添加剂加入饲料中，即可有效防治猪瘟。
具体实施方式
本发明采用的抗猪瘟转移因子制备方法如下：
（1）用灭菌后的生理盐水将用猪瘟病毒抗原免疫过的猪脾脏，去其表面筋、脂肪等组织，再用生理盐水冲洗；
（2）将步骤（1）处理后的猪脾脏破碎，加入2倍预冷的PBS缓冲液，用组织匀浆仪将其匀质；
（3）将匀浆液用超声破碎仪处理10min；
（4）将步骤（3）的破碎液pH值调至5.5左右，6000rpm离心30min，收集上清液；
（5）将上清液用微滤膜过滤，截留分子量7000道尔顿的物质，收集上清液；
（6）将步骤（5）的上清液用除菌滤膜过滤，得到抗猪瘟转移因子原液，4℃保存备用。
实施例1
本实施例的抗猪瘟的组合物，包括以下重量份数的组分：抗猪瘟卵黄抗体95份、抗猪瘟转移因子2份。
本实施例的含有抗猪瘟的组合物的饲料添加剂，包括以下重量份数的组分：抗猪瘟卵黄抗体95份、抗猪瘟转移因子2份、硫柳汞0.02份、甲醛0.2份、硒0.05份、维生素C1份、聚乙烯吡咯烷酮2份、甘氨酸0.5份。
本实施例的抗猪瘟的饲料添加剂的制备方法，包括以下步骤：
（1）将猪瘟兔化弱毒株增殖并灭活制备成疫苗，每间隔7天对健康产蛋鸡群进行免疫，共免疫三次，第一次免疫健康鸡群接种灭活疫苗1.5mL，第二次、第三次免疫接种加量1倍，第二次免疫后开始检测抗体效价，当抗体效价达到1：256时，收集高免蛋，将收集的高免蛋进行清理、消毒，晾干备用；
（2）分离高免蛋卵黄，加入等体积的无菌水，充分搅拌，得到卵黄抗体溶液；在卵黄抗体溶液加入pH=5.0的酸化水溶液，酸化水溶液加入量为卵黄抗体溶液体积的8倍，混匀，静置沉淀，取上清液；
（3）在上清液中加入体积分数0.8%的NaCl和Na2SO4混合物，15000rpm离心20min，得到含有抗猪瘟卵黄抗体的上清液，其中，NaCl和Na2SO4质量比为4:1；
（4）取步骤（3）含有抗猪瘟卵黄抗体的上清液，加入抗猪瘟转移因子原液；
（5）用0.45μm的滤膜对步骤（4）所得混合液过滤，截流分子量大于200KD的大分子物质，再将滤液经0.22μm滤膜过滤，留滤液；
（6）将步骤（5）的滤液浓缩，使滤液浓缩至2.5mL/500羽份；
（7）向步骤（6）的浓缩液中加入硫柳汞、甲醛、硒、维生素C、聚乙烯吡咯烷酮、甘氨酸，并在﹣80℃条件下充分冷冻；
（8）将步骤（7）的浓缩液冻干即得。
实施例2
本实施例的抗猪瘟的组合物，包括以下重量份数的组分：抗猪瘟卵黄抗体97份、抗猪瘟转移因子1份。
本实施例的含有抗猪瘟的组合物的饲料添加剂，包括以下重量份数的组分：抗猪瘟卵黄抗体97份、抗猪瘟转移因子1份、硫柳汞0.01份、甲醛0.3份、硒0.1份、维生素C0.5份、聚乙烯吡咯烷酮1份、甘氨酸1份。
本实施例的抗猪瘟的饲料添加剂的制备方法同实施例1，不同之处在于各组分的用量。
实施例3
本实施例的抗猪瘟的组合物，包括以下重量份数的组分：抗猪瘟卵黄抗体96份、抗猪瘟转移因子1.5份。
本实施例的含有抗猪瘟的组合物的饲料添加剂，包括以下重量份数的组分：抗猪瘟卵黄抗体96份、抗猪瘟转移因子1.5份、硫柳汞0.015份、甲醛0.25份、硒0.08份、维生素C0.8份、聚乙烯吡咯烷酮1.5份、甘氨酸0.8份。
本实施例的抗猪瘟的饲料添加剂的制备方法同实施例1，不同之处在于各组分的用量。
对比例1
本对比例的抗猪瘟饲料添加剂，包括以下重量份数的组分：抗猪瘟卵黄抗体96份、硫柳汞0.01份、甲醛0.25份、硒0.08份、维生素C0.8份、聚乙烯吡咯烷酮1.5份、甘氨酸0.5份。
对比例2
本对比例的抗猪瘟饲料添加剂，包括以下重量份数的组分：抗猪瘟转移因子1.5份、硫柳汞0.01份、甲醛0.25份、硒0.08份、维生素C0.8份、聚乙烯吡咯烷酮1.5份、甘氨酸0.5份。
对比例3
本实施例的含有抗猪瘟的组合物的饲料添加剂，包括以下重量份数的组分：猪瘟疫苗冻干粉96份、抗猪瘟转移因子1.5份。
实验例1
本发明饲料添加剂的质量检测
实验方法：将本发明的饲料添加剂保存在37℃培养箱中，保存24个月，分别1周、2周、1月、2月、4月、8月、12月、16月、20月、24月后，用琼脂扩散（AGP）法，测定每个时间点取样品的卵黄抗体效价变化，结果见表1。
表1常温放置不同时间段效价的变化（项目：CSFV）
| 组别 | 1周 | 2周 | 1月 | 2月 | 4月 | 8月 | 12月 | 16月 | 20月 | 24月 |
| 实施例1 | 1：32 | 1：32 | 1：32 | 1：32 | 1：32 | 1：16 | 1；16 | 1：16 | 1：16 | 1：16 |
| 实施例2 | 1：32 | 1：32 | 1：32 | 1：32 | 1：32 | 1：32 | 1；16 | 1：16 | 1：16 | 1：16 |
| 实施例3 | 1：32 | 1：32 | 1：32 | 1：32 | 1：32 | 1：16 | 1；16 | 1：16 | 1：16 | 1：16 |
质量标准：
[性状]本品为淡黄色，呈致密的团块。
[支原体检验]按《中国兽药典》进行，无支原体生长。
[外源病毒检验]按《中国兽药典》进行，符合规定。
[安全检验]用7日龄雏鸡5只，肌肉注射5羽份，观察2周，应全部健活，注射部位没有病变。
[剩余水分测定]按《中国兽药典》进行，符合兽用生物制品通则规定。
[保质期]根据常温效价检测实验结果，可以存放2年。
实验例2
本发明的饲料添加剂预防猪瘟的效果分析
本实验例所用普通饲料为市售常规饲料。
实验方法：选取2月龄猪800只，其中100只作为攻毒组隔离饲养，喂食普通饲料，100只作为空白组隔离饲养，喂食普通饲料，300只作为对照组分为3组，每组100只，隔离饲养，分别喂食添加了添加量为0.6%的对比例1-3的饲料添加剂的普通饲料，另外300只作为试验组，分成3组，每组100只，分别喂食添加了添加量为0.6%的实施例1-3的饲料添加剂的普通饲料。饲养方式为自由采食，自由饮水，24h后，取试验组、对照组和攻毒组的猪肌注接种稀释后的猪瘟病毒液，记录120h后的死亡情况，结果如表2所示。
表2本发明的饲料添加剂预防猪瘟的效果分析
从表2中可以看出，喂食添加了本发明饲料添加剂的普通饲料，可以有效预防猪瘟，其效果要明显优于单一使用抗猪瘟卵黄抗体、抗猪瘟转移因子或猪瘟疫苗冻干粉和转移因子联用的效果。
实验例3
本发明的饲料添加剂治疗猪瘟的效果分析
实验方法：选取2月龄猪，对其进行点眼接种稀释后的猪瘟病毒液，感染12h后，选择其中感染的700只进行试验。其中100只作为空白组隔离饲养，喂食普通饲料，300只作为对照组分为3组，每组100只，隔离饲养，分别喂食添加了添加量为0.6%的对比例1-3的饲料添加剂的普通饲料，另外300只作为试验组，分成3组，每组100只，分别喂食添加了添加量为0.6%的实施例1-3的饲料添加剂的普通饲料。饲养方式为自由采食，自由饮水，记录120h后的情况，结果如表3所示。
表3本发明的饲料添加剂治疗猪瘟的效果分析
从表3中可以看出，喂食添加了本发明饲料添加剂的普通饲料，可以有效治疗猪瘟，其效果要明显优于单一使用抗猪瘟卵黄抗体、抗猪瘟转移因子或猪瘟疫苗冻干粉和转移因子联用的效果。
Claims (10)
1.一种抗猪瘟的组合物，其特征在于，所述组合物包括以下重量份数的组分：抗猪瘟卵黄抗体95-97份、抗猪瘟转移因子0.9-2.1份。
2.根据权利要求1所述的一种抗猪瘟的组合物，其特征在于，所述组合物包括以下重量份数的组分：抗猪瘟卵黄抗体95-97份、抗猪瘟转移因子1-2份。
3.一种含有如权利要求1所述的抗猪瘟的组合物的饲料添加剂，其特征在于，所述饲料添加剂包括以下重量份数的组分：抗猪瘟卵黄抗体95-97份、抗猪瘟转移因子0.9-2.1份、防腐剂0.01-0.02份、灭活剂0.2-0.3份、硒0.05-0.1份、维生素C0.5-1份、聚乙烯吡咯烷酮1-2份、甘氨酸0.5-1份。
4.根据权利要求3所述的含有抗猪瘟的组合物的饲料添加剂，其特征在于，所述饲料添加剂包括以下重量份数的组分：抗猪瘟卵黄抗体95-97份、抗猪瘟转移因子1-2份、防腐剂0.01-0.02份、灭活剂0.2-0.3份、硒0.05-0.1份、维生素C0.5-1份、聚乙烯吡咯烷酮1-2份、甘氨酸0.5-1份。
5.根据权利要求3所述的含有抗猪瘟的组合物的饲料添加剂，其特征在于，所述灭活剂为甲醛。
6.根据权利要求3所述的含有抗猪瘟的组合物的饲料添加剂，其特征在于，所述防腐剂为硫柳汞。
7.一种如权利要求3所述的含有抗猪瘟的组合物的饲料添加剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将猪瘟病毒增殖并灭活制备成疫苗，免疫健康鸡群制得高免蛋，将高免蛋经过消毒、酸化处理、离心处理得到含有抗猪瘟卵黄抗体的上清液；
（2）将含有抗猪瘟卵黄抗体的上清液与抗猪瘟转移因子原液、防腐剂、灭活剂、硒、维生素C、聚乙烯吡咯烷酮、甘氨酸混合，再冻干即得。
8.根据权利要求7所述的含有抗猪瘟的组合物的饲料添加剂的制备方法，其特征在于，具体制备方法包括以下步骤：
（1）将猪瘟病毒增殖并灭活制备成疫苗，每间隔7天对健康产蛋鸡群进行免疫，共免疫三次，第二次免疫后开始检测抗体效价，当抗体效价达到1：256时，收集高免蛋，将收集的高免蛋进行清理、消毒，晾干备用；
（2）分离高免蛋卵黄，加入等体积的无菌水，充分搅拌，得到卵黄抗体溶液；在卵黄抗体溶液加入pH=4.9-5.2的酸化水溶液，酸化水溶液加入量为卵黄抗体溶液体积的8倍，混匀，静置沉淀，取上清液；
（3）在上清液中加入体积分数0.8%的NaCl和Na2SO4混合物，15000rpm离心20min，得到含有抗猪瘟卵黄抗体的上清液，其中，NaCl和Na2SO4质量比为4:1；
（4）取步骤（3）含有抗猪瘟卵黄抗体的上清液中加入抗猪瘟转移因子原液；
（5）用0.45μm的滤膜对步骤（4）所得混合液过滤，截流分子量大于200KD的大分子物质，再将滤液经0.22μm滤膜过滤，留滤液；
（6）将步骤（5）的滤液浓缩，使滤液浓缩至2.5mL/500羽份；
（7）向步骤（6）的浓缩液中加入防腐剂、灭活剂、硒、维生素C、聚乙烯吡咯烷酮、甘氨酸，并在﹣80℃条件下充分冷冻；
（8）将步骤（7）的浓缩液冻干即得。
9.一种如权利要求3所述的饲料添加剂在制备抗猪瘟的饲料中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述饲料添加剂的加入量为饲料总重量的0.2-0.6%。
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