CN104491861A - 一种猪瘟病卵黄抗体口服液及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种猪瘟病卵黄抗体口服液及其制备方法。其配方在于,包括以下按照体积比计算的原料:含卵黄抗体的全蛋水溶液95-105、辛酸0.2-0.3、甲醛0.2-0.3、硫柳汞0.01-0.02;还包括800-1000单位/毫升口服液的青链霉素。制备时采用高免蛋全蛋得到澄清卵黄抗体口服液。这种方法制备的卵黄抗体口服液不仅使生产过程中损失少、免疫活性物质强多、生物活性高、无临床副作用,同时,含有蛋清中大量的各种蛋白质,可以减少口服时对抗体的不良影响。
Description
技术领域
本发明属于猪用生物制品技术领域,涉及一种猪瘟病卵黄抗体口服液及其制备方法。
背景技术
猪瘟俗称“烂肠瘟”,是由黄病毒科猪瘟病毒属的猪瘟病毒(CSFV)引起的一种急性、发热、接触性传染病,具有高度传染性和致死性。主要特征是高温、微血管变性而引起全身出血、坏死、梗塞。猪瘟于1885年首先在美国发现,随后传播到世界各大洲。1903年美国兽医学家德希尼兹和多赛特鉴定该病的病原是黄病毒科的瘟病毒属(Pestivirus)中的猪瘟病毒,主要通过直接接触或接触污染的媒介物而发病;消化道、鼻腔粘膜和破裂的皮肤均是感染途径。
卵黄抗体IgY是的一种免疫球蛋白Ig,IgY在功能上相当于哺乳动物IgG,但结构上有所不同,具有典型的的免疫球蛋白的空间构象。卵黄抗体具有很多优越性。(1)由于鸟类与哺乳类动物种系发生学的差距,鸟类更适于生产抗哺乳动物抗原的特异性抗体。卵黄抗体不会激发补体系统,不与抗哺乳动物抗原的抗体发生反应,不与哺乳动物和细菌的Fc受体结合,这在免疫诊断中具有重要意义。(2)卵黄抗体作为一种具有生物活性的免疫球蛋白,在贮存、生产、加工、摄食及消化过程中保证其稳定性是非常关键的。多项试验表明,IgY具有较好的稳定性,耐酸、耐碱、耐热。卵黄抗体较易保存,4℃条件下存放5年或室温条件下存放6个月对抗体活性无明显影响。
发明内容
本发明提供一种猪瘟病卵黄抗体口服液及其制备方法,解决注射用的猪瘟病卵黄抗体使用不方便的问题。
本发明的目的是通过以下形式实现的:
一种猪瘟病卵黄抗体口服液,包括以下按照体积比计算的原料:含卵黄抗体的全蛋水溶液95-105、辛酸0.2-0.3、甲醛0.2-0.3、硫柳汞0.01-0.02;还包括800-1000单位/毫升口服液的青链霉素。
制备步骤是:
1)采用猪瘟细胞灭活疫苗对鸡只进行强化免疫:采用三次免疫程序,每次间隔10天,每只鸡每次疫苗用量为2ml,当抗体效价达到1:(128-256)时,进行高免蛋收集;
2)使用0.1-0.2%新洁尔灭对高免蛋进行消毒;
3)将2)中高免蛋的全蛋液进行乳化,乳化时间7-10min,然后加入pH为4.2-4.3的、温度为4-6℃的盐酸酸化水,盐酸酸化水的加入量为全蛋液体积的5.5-6.5倍,混匀后,降温至3-5℃,静置18-24小时;
4)取3)中的上层清液,升温到25-32℃,加入辛酸,搅拌1-2h,然后静置10-12h,过滤;其中辛酸体积量:上层清液体积量为(0.2-0.3):(95-105);
5)加入甲醛、硫柳汞、青链霉素,使卵黄抗体的全蛋水溶液:辛酸:甲醛:硫柳汞的体积比为(95-105):(0.2-0.3):(0.2-0.3):(0.01-0.02),青链霉素的含量为800-1000单位/毫升口服液;
6)分装,保存。
步骤4)过滤时依次通过1.0mm、0.45mm、0.22mm的滤膜进行过滤。
本发明通过对高免蛋全蛋提取、低温酸化处理、辛酸处理后得到澄清卵黄抗体口服液。本发明将全蛋使用到卵黄抗体的提取中,可以直接在临床上进行口服使用,蛋清中含有大量的各类蛋白质,可充分利用高免蛋的价值,提高动物机体的免疫力和应激能力,生物利用度高,具有生物活性不受影响的优点。
具体实施方式
实施例1:
一种猪瘟病卵黄抗体口服液的配方包括以下原料:含卵黄抗体的全蛋水溶液105 L、辛酸0.2 L、甲醛0.3 L、硫柳汞0.02 L,以及1000单位/毫升口服液的青链霉素。
其制备方法包括以下步骤:
1)采用市售的猪瘟细胞灭活疫苗进行强化免疫,每只鸡每次疫苗用量为2ml,每次间隔10天,进行三次免疫程序,当抗体效价达到1:256时,开始收集高免蛋。
2)将收集高免蛋整理,0.2%新洁尔灭消毒,备用。
3)水稀释法酸化处理:将2)步高免蛋全蛋打入巴氏罐体内进行充分乳化,乳化时间7min,然后将乳化后的全蛋液加入pH为4.2、温度为4℃的盐酸酸化水,盐酸酸化水加入量为全蛋液体积的6倍,混匀,放置4℃环境中18小时静置沉淀,取上清液;其中,盐酸酸化水是在水中加入盐酸使其PH值达到4.2。
4)辛酸处理;将步骤3)的上清液,即含卵黄抗体的全蛋水溶液进行称量,升温到25℃,加入辛酸,充分混匀1h,然后静置10h;其中,按体积比,上层清液:辛酸=105:0.2;
5)对步骤4)所得澄清液依次用1.0mm、0.45mm、0.22mm的滤膜过滤,留取滤液;
6)向步骤5)所得滤液加入甲醛、硫柳汞、青链霉素;按体积比,含卵黄抗体的全蛋全蛋水溶液:辛酸:甲醛:硫柳汞=105:0.2:0.3:0.02;青链霉素在该口服液中的含量为1000单位/毫升;
7)分装,保存。
为确定卵黄抗体口服液在常温下的放置有效期,做了以下试验:将本品保存在37℃培养箱中,保存24个月,分别1周、2周、1月、2月、4月、8月、12月、16月、20月、24月后,用琼脂扩散(AGP)法,测定每个时间点取样品的卵黄抗体效价变化,结果见表1。
表1.常温放置口服液不同时间段效价的变化
结果显示:卵黄抗体在常温的保存下可以存放16个月。
质量标准:
[性状]本品为淡黄色液体。
[无菌检验] 按《中国兽药典》进行,无菌生长。
[支原体检验] 按《中国兽药典》进行,无支原体生长。
[外源病毒检验] 按《中国兽药典》进行,符合规定。
[安全检验] 用7日龄雏鸡5只,各口服5头份,观察2周,应全部健活。
[效力检验]
1)保护力检测:用7日龄雏猪30只,其中10只,每只口服5头份卵黄抗体,另20只对照隔离饲养。24h,取试验组和对照组中的10只雏猪肌注接种CSFV稀释后病毒液,记录96h死亡情况,试验组的保护率在90%以上,攻毒对照组死亡率在85%以上,空白对照组雏猪无任何变化。
2)治愈力测定:用7日龄雏猪120只,40只作阴性对照,80只点眼接种PRRS稀释的病毒液,感染12h后,其中40只,每只口服本品3头份,每日1次,连续3日,另40只做阳性对照,隔离饲养。治疗后72h,记录各组死亡情况,攻毒阳性对照组死亡率在90%以上,治疗组存活率在95%以上,健康阴性对照组40只无任何变化。
实施例2:
一种猪瘟病卵黄抗体口服液的配方包括以下原料:含卵黄抗体的全蛋水溶液100 L、辛酸0.2 L、甲醛0.2 L、硫柳汞0.01 L,以及800单位/毫升口服液的青链霉素。
其制备方法包括以下步骤:
1)采用市售的猪瘟细胞灭活疫苗进行强化免疫,每只鸡每次疫苗用量为2ml,每次间隔10天,进行三次免疫程序,当抗体效价达到1:128时,开始收集高免蛋。
2)将收集高免蛋整理,0.1%新洁尔灭消毒,备用。
3)水稀释法酸化处理:将2)步高免蛋全蛋打入巴氏罐体内进行充分乳化,乳化时间10min,然后将乳化后的全蛋液加入pH为4.3、温度为6℃的盐酸酸化水,盐酸酸化水加入量为全蛋液体积的5.5倍,混匀,放置3℃环境中24小时静置沉淀,取上清液;其中,盐酸酸化水是在水中加入盐酸使其PH值达到4.3。
4)辛酸处理;将步骤3)的上清液,即含卵黄抗体的全蛋水溶液进行称量,升温到32℃,加入辛酸,充分混匀2h,然后静置12h;其中,按体积比,上层清液:辛酸=100:0.2;
5)对步骤4)所得澄清液依次用1.0mm、0.45mm、0.22mm的滤膜过滤,留取滤液;
6)向步骤5)所得滤液加入甲醛、硫柳汞、青链霉素;按体积比,含卵黄抗体的全蛋全蛋水溶液:辛酸:甲醛:硫柳汞=100:0.2:0.2:0.01;青链霉素在该口服液中的含量为800单位/毫升;
7)分装,保存。
为确定卵黄抗体口服液在常温下的放置有效期,做了以下试验:将本品保存在37℃培养箱中,保存24个月,分别1周、2周、1月、2月、4月、8月、12月、16月、20月、24月后,用琼脂扩散(AGP)法,测定每个时间点取样品的卵黄抗体效价变化,结果见表1。结果见表2。
表2.常温放置注射液不同时间段效价的变化
结果显示:卵黄抗体在常温的保存下可以存放16个月。
质量标准:
[性状]本品为淡黄色液体。
[无菌检验] 按《中国兽药典》进行,无菌生长。
[支原体检验] 按《中国兽药典》进行,无支原体生长。
[外源病毒检验] 按《中国兽药典》进行,符合规定。
[安全检验] 用7日龄雏鸡5只,各口服5头份,观察2周,应全部健活。
[效力检验]
1)保护力检测:用7日龄雏猪30只,其中10只,每只口服2羽份卵黄抗体,另20只对照隔离饲养。24h,取试验组和对照组中的10只雏猪肌注接种CSFV稀释后病毒液,记录96h死亡情况,试验组的保护率在95%以上,攻毒对照组死亡率在89%以上,空白对照组雏猪无任何变化。
2)治愈力测定:用7日龄雏猪120只,40只作阴性对照,80只点眼接种CSFV稀释的病毒液,感染12h后,其中40只,每只口服本品3头份,每日1次,连续3日,另40只做阳性对照,隔离饲养。治疗后72h,记录各组死亡情况,攻毒阳性对照组死亡率在85%以上,治疗组存活率在90%以上,健康阴性对照组40只无任何变化。
实施例3:
一种猪瘟病卵黄抗体口服液的配方包括以下原料:含卵黄抗体的全蛋水溶液95 L、辛酸0.3 L、甲醛0.3 L、硫柳汞0.02 L,以及1000单位/毫升口服液的青链霉素。
其制备方法包括以下步骤:
1)采用市售的猪瘟脾脏灭活疫苗进行强化免疫,每只鸡每次疫苗用量为2ml,每次间隔10天,进行三次免疫程序,当抗体效价达到1:256时,开始收集高免蛋。
2)将收集高免蛋整理,0.2%新洁尔灭消毒,备用。
3)水稀释法酸化处理:将2)步高免蛋全蛋打入巴氏罐体内进行充分乳化,乳化时间8min,然后将乳化后的全蛋液加入pH为4.3、温度为5℃的盐酸酸化水,盐酸酸化水加入量为全蛋液体积的6.5倍,混匀,放置5℃环境中20小时静置沉淀,取上清液;其中,盐酸酸化水是在水中加入盐酸使其PH值达到4.3。
4)辛酸处理;将步骤3)的上清液,即含卵黄抗体的全蛋水溶液进行称量,升温到30℃,加入辛酸,充分混匀2h,然后静置11h;其中,按体积比,上层清液:辛酸=95:0.3;
5)对步骤4)所得澄清液依次用1.0mm、0.45mm、0.22mm的滤膜过滤,留取滤液;
6)向步骤5)所得滤液加入甲醛、硫柳汞、青链霉素;按体积比,含卵黄抗体的全蛋全蛋水溶液:辛酸:甲醛:硫柳汞=95:0.3:0.3:0.02;青链霉素在该口服液中的含量为1000单位/毫升;
7)分装,保存。
实施例4:
一种猪瘟病卵黄抗体口服液的配方包括以下原料:含卵黄抗体的全蛋水溶液102 L、辛酸0.3 L、甲醛0.2 L、硫柳汞0.01 L,以及1000单位/毫升口服液的青链霉素。
其制备方法包括以下步骤:
1)采用市售的猪瘟细胞灭活疫苗进行强化免疫,每只鸡每次疫苗用量为2ml,每次间隔10天,进行三次免疫程序,当抗体效价达到1:128时,开始收集高免蛋。
2)将收集高免蛋整理,0.1%新洁尔灭消毒,备用。
3)水稀释法酸化处理:将2)步高免蛋全蛋打入巴氏罐体内进行充分乳化,乳化时间9min,然后将乳化后的全蛋液加入pH为4.3、温度为6℃的盐酸酸化水,盐酸酸化水加入量为全蛋液体积的5.5倍,混匀,放置5℃环境中22小时静置沉淀,取上清液;其中,盐酸酸化水是在水中加入盐酸使其PH值达到4.3。
4)辛酸处理;将步骤3)的上清液,即含卵黄抗体的全蛋水溶液进行称量,升温到28℃,加入辛酸,充分混匀2h,然后静置12h;其中,按体积比,上层清液:辛酸=102:0.3;
5)对步骤4)所得澄清液依次用1.0mm、0.45mm、0.22mm的滤膜过滤,留取滤液;
6)向步骤5)所得滤液加入甲醛、硫柳汞、青链霉素;按体积比,含卵黄抗体的全蛋全蛋水溶液:辛酸:甲醛:硫柳汞=105:0.3:0.2:0.01;青链霉素在该口服液中的含量为1000单位/毫升;
7)分装,保存。
用7日龄雏猪90只,第一组30只喂服实施例3产品,第二组30只喂服实施例4产品,第三组30只作为阳性对照,隔离饲养,肌肉接种CSFV稀释的病毒液,表现出临床症状时,开始治疗,一组、二组每头口服实施例产品5ml,每日1次,连续3日,第三组生理盐水2 ml,每日1次,连续3日。治疗后72h,记录各组发病及治疗情况。见表3。
表 3 实验情况
实施例5:
一种猪瘟病卵黄抗体口服液的配方包括以下原料:含卵黄抗体的全蛋水溶液98 L、辛酸0.2 L、甲醛0.3 L、硫柳汞0.01 L,以及800单位/毫升口服液的青链霉素。
其制备方法包括以下步骤:
1)采用市售的猪瘟细胞灭活疫苗进行强化免疫,每只鸡每次疫苗用量为2ml,每次间隔10天,进行三次免疫程序,当抗体效价达到1:256时,开始收集高免蛋。
2)将收集高免蛋整理,0.2%新洁尔灭消毒,备用。
3)水稀释法酸化处理:将2)步高免蛋全蛋打入巴氏罐体内进行充分乳化,乳化时间10min,然后将乳化后的全蛋液加入pH为4.2、温度为4℃的盐酸酸化水,盐酸酸化水加入量为全蛋液体积的6倍,混匀,放置5℃环境中24小时静置沉淀,取上清液;其中,盐酸酸化水是在水中加入盐酸使其PH值达到4.2。
4)辛酸处理;将步骤3)的上清液,即含卵黄抗体的全蛋水溶液进行称量,升温到30℃,加入辛酸,充分混匀2h,然后静置12h;其中,按体积比,上层清液:辛酸=98:0.2;
5)对步骤4)所得澄清液依次用1.0mm、0.45mm、0.22mm的滤膜过滤,留取滤液;
6)向步骤5)所得滤液加入甲醛、硫柳汞、青链霉素;按体积比,含卵黄抗体的全蛋全蛋水溶液:辛酸:甲醛:硫柳汞=98:0.2:0.3:0.01;青链霉素在该口服液中的含量为800单位/毫升;
7)分装,保存。
Claims (3)
1.一种猪瘟病卵黄抗体口服液,其特征在于:包括以下按照体积比计算的原料:含卵黄抗体的全蛋水溶液95-105、辛酸0.2-0.3、甲醛0.2-0.3、硫柳汞0.01-0.02;还包括800-1000单位/毫升口服液的青链霉素。
2.一种如权利要求1所述猪瘟病卵黄抗体口服液的制备方法,其特征在于具体步骤是:
1)采用猪瘟细胞灭活疫苗对鸡只进行强化免疫:采用三次免疫程序,每次间隔10天,每只鸡每次疫苗用量为2ml,当抗体效价达到1:(128-256)时,进行高免蛋收集;
2)使用0.1-0.2%新洁尔灭对高免蛋进行消毒;
3)将2)中高免蛋的全蛋液进行乳化,乳化时间7-10min,然后加入pH为4.2-4.3的、温度为4-6℃的盐酸酸化水,盐酸酸化水的加入量为全蛋液体积的5.5-6.5倍,混匀后,降温至3-5℃,静置18-24小时;
4)取3)中的上层清液,升温到25-32℃,加入辛酸,搅拌1-2h,然后静置10-12h,过滤;其中辛酸体积量:上层清液体积量为(0.2-0.3):(95-105);
5)加入甲醛、硫柳汞、青链霉素,使卵黄抗体的全蛋水溶液:辛酸:甲醛:硫柳汞的体积比为(95-105):(0.2-0.3):(0.2-0.3):(0.01-0.02),青链霉素的含量为800-1000单位/毫升口服液;
6)分装,保存。
3. 根据权利要求2所述的猪瘟病卵黄抗体口服液的制备方法,其特征在于: 步骤4)过滤时依次通过1.0mm、0.45mm、0.22mm的滤膜进行过滤。
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CN201410762716.5A CN104491861A (zh) | 2014-12-14 | 2014-12-14 | 一种猪瘟病卵黄抗体口服液及其制备方法 |
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Cited By (1)
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CN107177001A (zh) * | 2016-03-09 | 2017-09-19 | 北京大伟嘉生物技术股份有限公司 | 一种防治猪流行性腹泻病的卵黄抗体及其制备方法 |
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2014
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张小莺 等: "《卵黄抗体技术》", 31 May 2011 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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CN107177001A (zh) * | 2016-03-09 | 2017-09-19 | 北京大伟嘉生物技术股份有限公司 | 一种防治猪流行性腹泻病的卵黄抗体及其制备方法 |
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