CN113198014A - 一种益生菌发酵中药复合免疫球蛋白制剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明的目的在于提供一种益生菌发酵中药复合免疫球蛋白制剂及其制备方法,其特征是以免疫球蛋白(IG)、益生菌粉及发酵中药复配而成,每100g发酵中药中免疫球蛋白按重量计添加量为1‑15%,益生菌的数量为5.0×105—5.0×1010CFU;该制剂将中药和益生菌及免疫球蛋白完美的结合,能够调整动物肠道微生态平衡、净化肠道环境,提高动物免疫力,激发机体一切抗菌的积极因素。本发明制剂充分发挥中药、益生菌及免疫球蛋白三者的协同效应达到预防和治疗多种感染性疾病的作用,降低幼畜禽和宠物幼子的发病率、死亡率,改善其生长发育现状。
Description
技术领域
本发明属于药物制备技术领域,尤其涉及一种益生菌发酵中药复合免疫球蛋白制剂及其制备方法。
背景技术
随着抗生素的滥用及畜产品药物残留问题的日益严重,食品安全问题日益受到人们的关注。为了相应国家“减抗”、“禁抗”政策,寻找饲用抗生素替代品,最终做到无抗养殖,中药以其“安全、绿色、无残留”的优势成为大家研究的焦点,中药和益生素等成为取代抗生素的替代品。利用一些有益微生物发酵中药而制得的集“中药、益生素”为一体的中药免疫调节剂,将会更加有力地推动畜牧水产业的健康发展。
微生物菌群在生长代谢过程中能产生纤维素酶、木质素酶、脂酶等多种酶类,同时具有氧化、酯化、甲基化、羟基化、还原化等多种生物转化能力。中药中含有蛋白质、糖、脂肪、氨基酸、维生素、微量元素、有机酸类、酶类、生物碱、多糖、甙类、鞣质等多种营养物质。微生物发酵中药是将现代微生物与中药研究相结合,将中药以优选的肠道益生菌菌群中一种或几种、一株或几株益生菌为菌种,在适宜的环境条件下,对中药有效成分进行生物学转化,将中药中的大分子物质转化成为能够被动物体肠道直接吸收的小分子物质,使中药成为快速吸收、定量疗效的新型药物。微生物发酵中药能够增加中药有效成分的利用率,提高中药的药效。通过发酵可发挥益生菌与中药的协同作用,中药可以促进益生菌的增殖,益生菌也可以促进中药的吸收和利用。微生物发酵后的中药,能通过对动物机体的整体调节和激发机体一切抗菌的积极因素,即非特异性免疫抗菌因子,在动物机体内全方位杀灭病原菌,同时不产生抗药性。采用有益微生物发酵中药而制得的集“中药、益生素”为一体的免疫调节剂,将在促进养殖动物机体的生长发育,提高机体免疫力,维护机体胃肠道的微生态菌群平衡等方面发挥积极作用。
益生菌通过调整肠道菌群,通过占位排挤有害菌,产生有机酸及多种天然抗菌物质,不仅可以保护动物肠道黏膜,还可排除肠道内的有害菌,许多益生菌在胃肠道内可促进机体产生B族维生素、乳酸和乙酸等各种消化酶,促进机体对钙、锌、铁和维生素D的吸收,促进机体对蛋白质的消化、吸收、利用和合成各种氨基酸,帮助动物消化所摄入的饲料及吸收营养成分。益生菌也可激活免疫系统,促进吞噬细胞的活性,增强免疫力,促进免疫细胞产生黏膜分泌抗体,预防和治疗某些疾病如生殖系统感染、过敏、肠道综合症、胃溃疡、胃肠道感染和呼吸道感染等。
免疫球蛋白(IG)是直接参与免疫反应的抗体蛋白的总称。动物血液中含有大量免疫球蛋白,是体液免疫的主要物质,它能凝集细菌、中和细菌毒素,并能在体内其他因素的参与下彻底杀死细菌和病毒,增强机体的免疫功能,预防消化道等疾病,促进营养吸收。据有关资料报导,免疫球蛋白可以作为幼畜饲料添加剂,特别是集约化养殖基地,将免疫球蛋白应用于早期断奶幼畜,可减少幼畜疾病,促进生长发育,目前在动物饲料添加剂市场供不应求。
寻求高效、安全的动物免疫调节剂是当前国内外养殖业研究的重要课题之一。将中药、益生菌及免疫球蛋白联用在养殖业上,可减少动物生病的机会,降低饲养成本,从而获得更大的效益。现有益生菌加中药的产品均为单一的发酵产品作为免疫调节剂,尚未发现有关中药、益生菌及免疫球蛋白复合剂的使用、销售及报道。
发明内容
本发明的目的在于克服上述不足之处,提供一种组方合理、无药物残留、无耐药性、生物利用度高、效果明显的可有效增强动物机体免疫力的益生菌发酵中药复合免疫球蛋白制剂。该制剂将中药和益生菌及免疫球蛋白完美的结合,能够调整动物肠道微生态平衡、净化肠道环境,提高动物免疫力,激发机体一切抗菌的积极因素。本发明制剂充分发挥中药、益生菌及免疫球蛋白三者的协同效应达到预防和治疗多种感染性疾病的作用,降低幼畜禽和宠物幼子的发病率、死亡率,改善其生长发育现状。同时提供其相应的便于规模化生产、绿色环保的制备方法是本发明的另一个发明目的。
本发明的目的是通过如下技术方案来实现的:一种益生菌发酵中药复合免疫球蛋白制剂,其特征在于,是以免疫球蛋白(IG)冻干粉、益生菌粉及发酵中药复合而成,每100g发酵中药中免疫球蛋白按重量计添加量为1-15%,益生菌的数量为5.0×105—5.0×1010CFU。
所述益生菌粉包括双歧杆菌、丁酸梭菌、嗜酸乳杆菌、产朊假丝酵母、植物乳杆菌、地衣芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、肠连球菌、乳酸片球菌或枯草芽孢杆菌中两种以上的混合。
所述发酵中药由按重量份计的以下原料混合发酵而成:原料药:红枣320-420份、女贞子145-170份、益母草145-170份、黄芪145-170份、党参145~170份、刺五加145-170份、白术145-170份、甘草145-170份、当归145-170份、菟丝子145-170份;益生菌发酵液:添加量为3~8%。
所述一种益生菌发酵中药复合免疫球蛋白制剂的制备方法,其特征是按如下步骤进行:
(一)发酵中药的制备:
(1)超微粉碎:将组方中的各种中药成分分别超微粉碎后过500目筛;
(2)投料混合:按照配比规定准确称取过500目筛后的所需各原料,投入料罐中,干混20-40min,搅拌均匀;
(3)加菌液:在上述料罐中加入所投原料重量3~8%的益生菌发酵液,搅拌均匀,待用;
(4)加水:将步骤(3)中搅拌均匀的原料装入恒温自动搅拌发酵容器中,加入原料重量8-10倍的温水,加水时分少量多次加入,搅拌均匀;
(5)发酵:将发酵容器封口,使发酵容器完全封闭,不透气,制造厌氧环境,进行厌氧发酵,发酵容器设定温度为35-40℃;持续发酵7-9d;
(6)过滤:发酵时间结束,将发酵容器内发酵产物过滤,合并滤液,减压浓缩至相对密度1.05,灭菌,按照比例加入IG冻干粉,搅拌均匀使IG完全溶解,既可以直接灌封作为口服液使用,也可以经冷冻干燥机冷冻成冻干粉或喷雾干燥制成粉剂使用。灌封,即得。
(二)免疫球蛋白(IG)冻干粉的制备:
(1)收集经检疫合格的新鲜动物血用离心机3800-4000r/min离心8-10min,离心后倒掉滤渣。
(2)滤液中加入NaCI和硫酸铵(1L中加入20%硫酸铵),用搅拌器搅拌30min后,再在3800-4000r/min离心8-10min,离心后倒掉上清液;
(3)滤渣中加入和离心前同样体积的生理盐水,并加入NaCI和硫酸铵(1L中加入35%的硫酸铵),用搅拌器搅拌30min后,再在3800-4000r/min离心8-10min,离心后倒掉上清液;
(4)滤渣中加入和离心前同体积的生理盐水,并加入NaCI和硫酸铵(1L中加入50%的硫酸铵),再在3800r/min离心10min,离心后倒掉滤渣;
(5)上清液装入截留分子量为8000-14000的透析袋,透析48小时;
(6)将透析袋内的免疫球蛋白液用氢氧化钠调节pH至8.5-9.0,使得碱性蛋白沉淀;
(7)透析上清液通过0.22μm膜过滤除菌,低温冷冻干燥制成免疫球蛋白冻干粉,低温保存待用。
与现有技术相比,本发明的有益效果具体为:
(1)本发明制备的制剂将中药和益生菌及免疫球蛋白完美的结合,能够调整动物肠道微生态平衡、净化肠道环境,提高动物免疫力,激发机体一切抗菌的积极因素。
(2)本发明提供的益生菌发酵中药复合免疫球蛋白制剂组方合理、无药物残留、无耐药性、生物利用度高、效果明显,可有效增强动物机体免疫力。
(3)本发明制剂充分发挥中药、益生菌及免疫球蛋白三者的协同效应达到预防和治疗多种感染性疾病的作用,降低幼畜禽和宠物幼子的发病率、死亡率,改善其生长发育现状。同时能提高动物对营养物质的消化吸收,增强机体对多种细菌和病毒的非特异免疫力,抵御感染。
(4)本发明制备工艺绿色环保,便于工业化规模化生产,制备过程中不使用任何有机溶剂,无废弃物排放,具有良好的经济效益和社会效益。
具体实施方式
以下通过具体实施例再对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅局限于以下的实施例。在不脱离本发明上述技术思想的情况下,根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更,均应包括在本发明的范围内。
实施例1
一种益生菌发酵中药复合免疫球蛋白制剂,其特征在于,是以免疫球蛋白(IG)冻干粉、益生菌粉及发酵中药复合而成,每100g发酵中药中免疫球蛋白按重量计添加量为1%,益生菌的数量为5.0×105CFU。
所述益生菌粉包括双歧杆菌、丁酸梭菌、嗜酸乳杆菌、产朊假丝酵母、植物乳杆菌的混合。
所述发酵中药由按重量份计的以下原料混合发酵而成:原料药:红枣320份、女贞子145份、益母草145份、黄芪145份、党参145份、刺五加145份、白术145份、甘草145份、当归145份、菟丝子145份;益生菌发酵液:添加量为3%。
所述一种益生菌发酵中药复合免疫球蛋白制剂的制备方法,其特征是按如下步骤进行:
(一)发酵中药的制备:
(1)超微粉碎:将组方中的各种中药成分分别超微粉碎后过500目筛;
(2)投料混合:按照配比规定准确称取过500目筛后的所需各原料,投入料罐中,干混20min,搅拌均匀;
(3)加菌液:在上述料罐中加入所投原料重量3%的益生菌发酵液,搅拌均匀,待用;
(4)加水:将步骤(3)中搅拌均匀的原料装入恒温自动搅拌发酵容器中,加入原料重量8倍的温水,加水时分少量多次加入,搅拌均匀;
(5)发酵:将发酵容器封口,使发酵容器完全封闭,不透气,制造厌氧环境,进行厌氧发酵,发酵容器设定温度为35℃;持续发酵7d;
(6)过滤:发酵时间结束,将发酵容器内发酵产物过滤,合并滤液,减压浓缩至相对密度1.05,灭菌,按照比例加入IG冻干粉,搅拌均匀使IG完全溶解,既可以直接灌封作为口服液使用,也可以经冷冻干燥机冷冻成冻干粉或喷雾干燥制成粉剂使用。灌封,即得。
(二)免疫球蛋白(IG)冻干粉的制备:
(1)收集经检疫合格的新鲜动物血用离心机3800r/min离心8min,离心后倒掉滤渣。
(2)滤液中加入NaCI和硫酸铵(1L中加入20%硫酸铵),用搅拌器搅拌30min后,再在3800r/min离心8min,离心后倒掉上清液;
(3)滤渣中加入和离心前同样体积的生理盐水,并加入NaCI和硫酸铵(1L中加入35%的硫酸铵),用搅拌器搅拌30min后,再在3800r/min离心8min,离心后倒掉上清液;
(4)滤渣中加入和离心前同体积的生理盐水,并加入NaCI和硫酸铵(1L中加入50%的硫酸铵),再在3800r/min离心10min,离心后倒掉滤渣;
(5)上清液装入截留分子量为8000的透析袋,透析48小时;
(6)将透析袋内的免疫球蛋白液用氢氧化钠调节pH至8.5,使得碱性蛋白沉淀;
(7)透析上清液通过0.22μm膜过滤除菌,低温冷冻干燥制成免疫球蛋白冻干粉,低温保存待用。
实施例2
一种益生菌发酵中药复合免疫球蛋白制剂,其特征在于,是以免疫球蛋白(IG)冻干粉、益生菌粉及发酵中药复合而成,每100g发酵中药中免疫球蛋白按重量计添加量为15%,益生菌的数量为5.0×1010CFU。
所述益生菌粉包括双歧杆菌植物乳杆菌、地衣芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、肠连球菌、乳酸片球菌的混合。
所述发酵中药由按重量份计的以下原料混合发酵而成:原料药:红枣420份、女贞子170份、益母草170份、黄芪170份、党参170份、刺五加170份、白术170份、甘草170份、当归170份、菟丝子170份;益生菌发酵液:添加量为8%。
所述一种益生菌发酵中药复合免疫球蛋白制剂的制备方法,其特征是按如下步骤进行:
(一)发酵中药的制备:
(1)超微粉碎:将组方中的各种中药成分分别超微粉碎后过500目筛;
(2)投料混合:按照配比规定准确称取过500目筛后的所需各原料,投入料罐中,干混40min,搅拌均匀;
(3)加菌液:在上述料罐中加入所投原料重量8%的益生菌发酵液,搅拌均匀,待用;
(4)加水:将步骤(3)中搅拌均匀的原料装入恒温自动搅拌发酵容器中,加入原料重量10倍的温水,加水时分少量多次加入,搅拌均匀;
(5)发酵:将发酵容器封口,使发酵容器完全封闭,不透气,制造厌氧环境,进行厌氧发酵,发酵容器设定温度为40℃;持续发酵9d;
(6)过滤:发酵时间结束,将发酵容器内发酵产物过滤,合并滤液,减压浓缩至相对密度1.05,灭菌,按照比例加入IG冻干粉,搅拌均匀使IG完全溶解,既可以直接灌封作为口服液使用,也可以经冷冻干燥机冷冻成冻干粉或喷雾干燥制成粉剂使用。灌封,即得。
(二)免疫球蛋白(IG)冻干粉的制备:
(1)收集经检疫合格的新鲜动物血用离心机4000r/min离心10min,离心后倒掉滤渣。
(2)滤液中加入NaCI和硫酸铵(1L中加入20%硫酸铵),用搅拌器搅拌30min后,再在4000r/min离心10min,离心后倒掉上清液;
(3)滤渣中加入和离心前同样体积的生理盐水,并加入NaCI和硫酸铵(1L中加入35%的硫酸铵),用搅拌器搅拌30min后,再在4000r/min离心10min,离心后倒掉上清液;
(4)滤渣中加入和离心前同体积的生理盐水,并加入NaCI和硫酸铵(1L中加入50%的硫酸铵),再在3800r/min离心10min,离心后倒掉滤渣;
(5)上清液装入截留分子量为14000的透析袋,透析48小时;
(6)将透析袋内的免疫球蛋白液用氢氧化钠调节pH至9.0,使得碱性蛋白沉淀;
(7)透析上清液通过0.22μm膜过滤除菌,低温冷冻干燥制成免疫球蛋白冻干粉,低温保存待用。
实施例3
一种益生菌发酵中药复合免疫球蛋白制剂,其特征在于,是以免疫球蛋白(IG)冻干粉、益生菌粉及发酵中药复合而成,每100g发酵中药中免疫球蛋白按重量计添加量为10%,益生菌的数量为5.0×108CFU。
所述益生菌粉包括双歧杆菌、丁酸梭菌、嗜酸乳杆菌、产朊假丝酵母、植物乳杆菌肠连球菌、乳酸片球菌的混合。
所述发酵中药由按重量份计的以下原料混合发酵而成:原料药:红枣380份、女贞子165份、益母草165份、黄芪165份、党参165份、刺五加165份、白术165份、甘草165份、当归165份、菟丝子165份;益生菌发酵液:添加量为5%。
所述一种益生菌发酵中药复合免疫球蛋白制剂的制备方法,其特征是按如下步骤进行:
(一)发酵中药的制备:
(1)超微粉碎:将组方中的各种中药成分分别超微粉碎后过500目筛;
(2)投料混合:按照配比规定准确称取过500目筛后的所需各原料,投入料罐中,干混30min,搅拌均匀;
(3)加菌液:在上述料罐中加入所投原料重量5%的益生菌发酵液,搅拌均匀,待用;
(4)加水:将步骤(3)中搅拌均匀的原料装入恒温自动搅拌发酵容器中,加入原料重量9倍的温水,加水时分少量多次加入,搅拌均匀;
(5)发酵:将发酵容器封口,使发酵容器完全封闭,不透气,制造厌氧环境,进行厌氧发酵,发酵容器设定温度为38℃;持续发酵8d;
(6)过滤:发酵时间结束,将发酵容器内发酵产物过滤,合并滤液,减压浓缩至相对密度1.05,灭菌,按照比例加入IG冻干粉,搅拌均匀使IG完全溶解,既可以直接灌封作为口服液使用,也可以经冷冻干燥机冷冻成冻干粉或喷雾干燥制成粉剂使用。灌封,即得。
(二)免疫球蛋白(IG)冻干粉的制备:
(1)收集经检疫合格的新鲜动物血用离心机3900r/min离心9min,离心后倒掉滤渣。
(2)滤液中加入NaCI和硫酸铵(1L中加入20%硫酸铵),用搅拌器搅拌30min后,再在3900r/min离心9min,离心后倒掉上清液;
(3)滤渣中加入和离心前同样体积的生理盐水,并加入NaCI和硫酸铵(1L中加入35%的硫酸铵),用搅拌器搅拌30min后,再在3900r/min离心9min,离心后倒掉上清液;
(4)滤渣中加入和离心前同体积的生理盐水,并加入NaCI和硫酸铵(1L中加入50%的硫酸铵),再在3800r/min离心10min,离心后倒掉滤渣;
(5)上清液装入截留分子量为9000的透析袋,透析48小时;
(6)将透析袋内的免疫球蛋白液用氢氧化钠调节pH至8.8,使得碱性蛋白沉淀;
(7)透析上清液通过0.22μm膜过滤除菌,低温冷冻干燥制成免疫球蛋白冻干粉,低温保存待用。
Claims (5)
1.一种益生菌发酵中药复合免疫球蛋白制剂,其特征在于,是以免疫球蛋白冻干粉、益生菌粉及发酵中药复合而成,每100g发酵中药中免疫球蛋白按重量计添加量为1-15%,益生菌的数量为5.0×105—5.0×1010CFU。
2.根据权利要求1所述的一种益生菌发酵中药复合免疫球蛋白制剂,其特征在于,所述发酵中药由按重量份计的以下原料混合发酵而成:原料药:红枣320~420份、女贞子145-170份、益母草145-170份、黄芪145-170份、党参145~170份、刺五加145-170份、白术145-170份、甘草145-170份、当归145-170份、菟丝子145-170份;益生菌发酵液:添加量为3~8%。
3.根据权利要求1所述的一种益生菌发酵中药复合免疫球蛋白制剂,其特征在于,所述益生菌粉包括双歧杆菌、丁酸梭菌、嗜酸乳杆菌、产朊假丝酵母、植物乳杆菌、地衣芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、肠连球菌、乳酸片球菌或枯草芽孢杆菌中两种以上的混合。
4.根据权利要求1所述的一种益生菌发酵中药复合免疫球蛋白制剂的制备方法,其特征是按如下步骤进行:
(1)超微粉碎:将组方中的各种中药成分分别超微粉碎后过500目筛;
(2)投料混合:按照配比规定准确称取过500目筛后的所需各原料,投入料罐中,干混20~40min,搅拌均匀;
(3)加菌液:在上述料罐中加入所投原料重量3~8%的益生菌发酵液,搅拌均匀,待用;
(4)加水:将步骤(3)中搅拌均匀的原料装入恒温自动搅拌发酵容器中,加入原料重量8-10倍的温水,加水时分少量多次加入,搅拌均匀;
(5)发酵:将发酵容器封口,使发酵容器完全封闭,不透气,制造厌氧环境,进行厌氧发酵,发酵容器设定温度为35-40℃;持续发酵7-9d;
(6)过滤:发酵时间结束,将发酵容器内发酵产物过滤,合并滤液,减压浓缩至相对密度1.05,灭菌,按照比例加入IG冻干粉,搅拌均匀使IG完全溶解,既可以直接灌封作为口服液使用,也可以经冷冻干燥机冷冻成冻干粉或喷雾干燥制成粉剂使用;灌封,即得。
5.根据权利要求1所述的一种益生菌发酵中药复合免疫球蛋白制剂的制备方法,其特征在于所述免疫球蛋白冻干粉的制备是按如下步骤进行:
(1)收集经检疫合格的新鲜动物血用离心机3800-4000r/min离心8-10min,离心后倒掉滤渣;
(2)滤液中加入NaCI和硫酸铵,1L中加入20%硫酸铵,用搅拌器搅拌30min后,再在3800-4000r/min离心8-10min,离心后倒掉上清液;
(3)滤渣中加入和离心前同样体积的生理盐水,并加入NaCI和硫酸铵,1L中加入35%的硫酸铵,用搅拌器搅拌30min后,再在3800-4000r/min离心8-10min,离心后倒掉上清液;
(4)滤渣中加入和离心前同体积的生理盐水,并加入NaCI和硫酸铵,1L中加入50%的硫酸铵,再在3800r/min离心10min,离心后倒掉滤渣;
(5)上清液装入截留分子量为8000-14000的透析袋,透析48小时;
(6)将透析袋内的免疫球蛋白液用氢氧化钠调节pH至8.5-9.0,使得碱性蛋白沉淀;
(7)透析上清液通过0.22μm膜过滤除菌,低温冷冻干燥制成免疫球蛋白冻干粉,低温保存待用。
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