CN113748111A

CN113748111A - 具有抗乙型肝炎病毒(hbv)活性的新型草酰哌嗪类化合物

Info

Publication number: CN113748111A
Application number: CN202080032036.1A
Authority: CN
Inventors: 苏珊娜·邦斯曼; 阿拉斯泰尔·唐纳德; 安德烈亚斯·乌尔班; 托马斯·戈德纳尔; 米克尔·安吉尔·佩里卡斯布朗多; 埃丝特·阿尔扎·巴里奥斯; 埃琳娜·德塔; 贾斯汀·雷蒙德
Original assignee: Aicuris GmbH and Co KG
Current assignee: Aicuris GmbH and Co KG
Priority date: 2019-04-30
Filing date: 2020-04-29
Publication date: 2021-12-03
Also published as: AU2020266258A2; AU2020266258A1; EP3962909B1; MX2021013105A; JP2022533008A; SG11202111493WA; ECSP21080338A; UY38684A; CL2021002798A1; WO2020221811A1; EP3962909A1; CA3138380A1; TWI753418B; CU20210090A7; IL287269A; KR20220003023A; BR112021021652A2; US20220227737A1; TW202106678A

Abstract

本发明总体上涉及新型抗病毒剂。具体来说，本发明涉及可以抑制由乙型肝炎病毒(HBV)编码的蛋白质或干扰HBV复制周期的功能的化合物，包含此类化合物的组合物，抑制HBV病毒复制的方法，治疗或预防HBV感染的方法，以及制造所述化合物的方法和中间体。

Description

具有抗乙型肝炎病毒(HBV)活性的新型草酰哌嗪类化合物

技术领域

本发明总体上涉及新型抗病毒剂。具体来说，本发明涉及可以抑制由乙型肝炎病毒(HBV)编码的蛋白质或干扰HBV复制周期功能的化合物，包含此类化合物的组合物，抑制HBV病毒复制的方法，治疗或预防HBV感染的方法，以及制造所述化合物的方法。

背景技术

慢性HBV感染是一个重要的全球性健康问题，影响了超过5％的世界人口(全球超过3.5亿人，美国有125万人)。尽管有预防性HBV疫苗可用，但由于在发展中国家的大多数地区未达最佳标准的治疗选择和持续不断的新感染率，慢性HBV感染的负担仍然是一个重大的尚未解决的世界性医学问题。当前的治疗不提供治愈并且限于仅仅两类药剂(干扰素α和病毒聚合酶的核苷类似物/抑制剂)；耐药性、低功效和耐受性问题限制了它们的影响。

HBV的低治愈率至少部分归因于以下事实：使用单一抗病毒剂难以实现病毒产生的完全抑制，以及受感染肝细胞的细胞核中共价闭合环状DNA(cccDNA)的存在和持久存留。然而，持续抑制HBV DNA可减缓肝脏疾病进展并有助于预防肝细胞癌(HCC)。

当前对HBV感染的患者的治疗目标是将血清HBV DNA降低到低水平或不可检测的水平，并最终减少或防止肝硬化和HCC的发展。

HBV是嗜肝DNA病毒科(Hepadnaviridae)的一种有包膜的部分双链DNA(dsDNA)病毒。HBV衣壳蛋白(HBV-CP)在HBV复制中起着不可缺少的作用。HBV-CP的主要生物学功能是充当结构蛋白来包裹前基因组RNA并形成不成熟的衣壳粒子，所述衣壳粒子自发地从细胞质中的衣壳蛋白二聚体的许多拷贝自组装。

HBV-CP还通过其C末端磷酸化位点的不同磷酸化状态来调控病毒DNA合成。此外，HBV-CP可能利用位于HBV-CP的C末端区域的富含精氨酸结构域的核定位信号来促进病毒的松弛环状基因组的核易位。

在细胞核中，作为病毒cccDNA微型染色体的一个组成部分，HBV-CP可以在cccDNA微型染色体的功能中发挥结构和调控作用。HBV-CP还与内质网(ER)中的病毒大包膜蛋白相互作用，并触发完整病毒粒子从肝细胞中释放。

与HBV-CP相关的抗HBV化合物已有报道。例如，包括命名为AT-61和AT-130的化合物在内的苯基丙烯酰胺衍生物(Feld J.等人,Antiviral Res.2007,76,168)，和来自Valeant的一类噻唑烷-4-酮(W02006/033995)，已被证明可以抑制前基因组RNA(pgRNA)包装。

F.Hoffmann-La Roche AG已公开了用于治疗HBV的一系列3-取代的四氢-吡唑并[1,5-a]吡嗪(WO2016/113273、WO2017/198744、WO2018/011162、WO2018/011160、WO2018/011163)。

上海恒瑞医药(Shanghai Hengrui Pharma)已公开了一系列用于HBV治疗的杂芳基哌嗪(WO2019/020070)。上海长森药业(Shanghai Longwood Biopharmaceuticals)已公开了一系列具有抗HBV活性的双环杂环化合物(WO2018/202155)。

挚盟医药(Zhimeng Biopharma)已公开了吡唑-

唑烷酮化合物具有抗HBV活性(WO2017/173999)。

在基于组织培养的筛选中发现了杂芳基二氢嘧啶类化合物(HAP)(Weber等人,Antiviral Res.2002,54,69)。这些HAP类似物充当合成的变构活化剂并且能够诱导导致HBV-CP降解的异常衣壳形成(WO 99/54326、WO 00/58302、WO 01/45712、WO 01/6840)。也已经描述了其他HAP类似物(J.Med.Chem.2016,59(16),7651-7666)。

来自F.Hoffman-La Roche的HAP的一个亚类也显示出对抗HBV的活性(WO2014/184328、WO2015/132276和WO2016/146598)。来自Sunshine Lake Pharma的相似亚类也显示出对抗HBV的活性(WO2015/144093)。其他HAP也已显示出具有对抗HBV的活性(WO2013/102655，Bioorg.Med.Chem.2017,25(3)第1042-1056页)，并且来自Enanta Therapeutics的相似亚类也显示出类似的活性(WO2017/011552)。来自Medshine Discovery的另一个亚类显示出类似的活性(WO2017/076286)。另一个亚类(Janssen Pharma)显示出类似的活性(WO2013/102655)。

哒嗪酮和三嗪酮的一个亚类(F.Hoffman-La Roche)也显示出对抗HBV的活性(WO2016/023877)，四氢吡啶并吡啶的一个亚类也是如此(WO2016/177655)。来自Roche的三环4-吡啶酮-3-甲酸衍生物的一个亚类也显示出类似的抗HBV活性(WO2017/013046)。

来自Novira Therapeutics(现为Johnson&Johnson Inc.的一部分)的氨磺酰基-芳基酰胺的一个亚类也显示出对抗HBV的活性(W02013/006394、W02013/096744、WO2014/165128、W02014/184365、WO2015/109130、WO2016/089990、WO2016/109663、WO2016/109684、WO2016/109689、WO2017/059059)。硫醚-芳基酰胺的相似亚类(也来自NoviraTherapeutics)显示出对抗HBV的活性(WO2016/089990)。另外，芳基-氮杂环庚烷的一个亚类(也来自Novira Therapeutics)显示出对抗HBV的活性(WO2015/073774)。来自EnantaTherapeutics的芳基酰胺的相似亚类显示出对抗HBV的活性(WO2017/015451)。

来自Janssen Pharma的氨磺酰基衍生物也已显示具有对抗HBV的活性(WO2014/033167、WO2014/033170、WO2017/001655，J.Med.Chem,2018,61(14)6247-6260)。

同样来自Janssen Pharma的乙醛酰胺取代的吡咯酰胺衍生物的一个亚类也已显示具有对抗HBV的活性(WO2015/011281)。也已描述了乙醛酰胺取代的吡咯酰胺的一个相似类别(Gilead Sciences)(WO2018/039531)。

来自Enanta Therapeutics的氨磺酰基-和草酰基-杂联芳基的一个亚类也显示出对抗HBV的活性(WO2016/161268、WO2016/183266、WO2017/015451、WO2017/136403和US20170253609)。

来自Assembly Biosciences的苯胺-嘧啶的一个亚类也显示出对抗HBV的活性(WO2015/057945、WO2015/172128)。来自Assembly Biosciences的稠合三环的一个亚类(二苯并-硫氮杂

酮、二苯并-二氮杂

酮、二苯并-氧氮杂

酮)显示出对抗HBV的活性(WO2015/138895、WO2017/048950)。来自Assembly Biosciences的另一个系列(WO2016/168619)也显示出抗HBV活性。

Assembly Biosciences已描述了一系列环状磺酰胺作为HBV-CP功能的调节剂(WO2018/160878)。

Arbutus Biopharma已公开了一系列用于治疗HBV的苯甲酰胺(WO2018/052967、WO2018/172852)。还公开了类似化合物与CYP3A抑制剂组合的组合物和用途(WO2019/046287)。

来自密苏里大学(University of Missouri)的一系列噻吩-2-甲酰胺已被描述为HBV抑制剂(US2019/0092742)。

还已显示，小分子双-ANS充当分子“楔”并干扰正常衣壳蛋白的几何结构和衣壳形成(Zlotnick A等人,J.Virol.2002,4848)。

直接作用于HBV的抗病毒药物可能遇到的问题是毒性、诱变性、缺乏选择性、功效差、生物利用度差、溶解度低和合成困难。因此需要用于治疗、改善或预防HBV的其他抑制剂，其可以克服这些缺点中的至少一个或者具有额外的优点，例如增加的效力或增加的安全窗口。

将此类治疗剂作为单一疗法或与其他HBV治疗或辅助治疗组合施用于HBV感染的患者，将导致病毒负荷显著降低、预后改善、疾病进展减小和/或血清转化率提高。

发明内容

本文提供了可用于在有需要的对象中治疗或预防HBV感染的化合物，以及可用于其制备的中间体。本发明的主题内容是一种用于在对象中预防或治疗HBV感染的式I化合物

其中

-R1、R2、R3和R4对于每个位置来说独立地选自H、D和C1-C6烷基

-R5和R6独立地选自H、C6芳基、C3-C5杂芳基、C1-C6烷基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、C3-C7环烷基、C3-C7杂环烷基、C2-C6羟基烷基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C1-C2烷基-C3-C5环烷基、C1-C2烷基-C3-C5杂芳基和C1-C2烷基-C3-C5杂环烷基，任选地被1、2或3个各自独立地选自OH、卤素、苯基、羧基苯基、C3-C7杂环烷基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基、C1-C4烷氧基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C(＝O)NH₂、C(＝O)N(H)CH₃和羧基的基团取代

-R5和R6任选地连接以形成C4-C8杂环基环

-n是0、1或2

-m是0、1或2

-Q是吲哚-2-基，任选地被1、2、3或4个独立地选自H、D、F、Cl、Br、I、CF₃、CF₂H、C1-C4烷基、CF₂CH₃、环丙基、氰基和硝基的基团取代；或

-吲哚嗪-2-基，任选地被1、2、3、4、5或6个独立地选自H、D、F、Cl、Br、I、CF₃、CF₂H、C1-C4烷基、CF₂CH₃、环丙基、氰基、C2-C5烯基和硝基的基团取代，

其中杂芳基和杂环烷基各自具有1或2个各自独立地选自N、O和S的杂原子。

-在本发明的一个实施方式中，本发明的主题内容是一种用于在对象中预防或治疗HBV感染的式I化合物，其中R1、R2、R3和R4对于每个位置来说独立地选自H、D和C1-C6烷基

-R5和R6任选地连接以形成C4-C8杂环基环

-n是0、1或2

-m是0、1或2

-Q是吲哚-2-基，任选地被1、2、3或4个独立地选自H、D、F、Cl、Br、I、CF₃、CF₂H、C1-C4烷基、CF₂CH₃、环丙基、氰基和硝基的基团取代；其中杂芳基和杂环烷基各自具有1或2个各自独立地选自N、O和S的杂原子。

-R5和R6独立地选自H、C6芳基、C1-C6烷基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、C3-C7环烷基、C3-C7杂环烷基、C2-C6羟基烷基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C1-C2烷基-C3-C5环烷基、C1-C2烷基-C3-C5杂芳基和C1-C2烷基-C3-C5杂环烷基，任选地被1、2或3个各自独立地选自OH、C3-C7杂环烷基、C1-C6烷基、C1-C6羟基烷基、C1-C4烷氧基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C(＝O)NH₂和C(＝O)N(H)CH₃的基团取代

-R5和R6任选地连接以形成C4-C8杂环基环

-n是0、1或2

-m是0、1或2

吲哚嗪-2-基，任选地被1、2、3、4、5或6个独立地选自H、D、F、Cl、Br、I、CF₃、CF₂H、C1-C4烷基、CF₂CH₃、环丙基、氰基、C2-C5烯基和硝基的基团取代，

在本发明的一个实施方式中，本发明的主题内容是一种用于在对象中预防或治疗HBV感染的式I化合物，其中

-R1、R2、R3和R4对于每个位置来说独立地选自H、D和C1-C6烷基

-R5和R6任选地连接以形成C4-C8杂环基环

-n是0、1或2

-m是0、1或2

-R1、R2、R3和R4对于每个位置来说独立地选自H、D和C1-C6烷基

-R5和R6独立地选自H、C6芳基、C3-C5杂芳基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C3-C6环烷基、C3-C7杂环烷基、C2-C6羟基烷基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C1-C2烷基-C3-C5环烷基和C1-C2烷基-C3-C5杂环烷基，任选地被1、2或3个各自独立地选自OH、卤素、苯基、羧基苯基、C3-C7杂环烷基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基、C(＝O)N(H)CH₃和羧基的基团取代

-R5和R6任选地连接以形成C4-C8杂环基环

-n是0、1或2

-m是0、1或2

-R1、R2、R3和R4对于每个位置来说独立地选自H、D和C1-C6烷基

-R5和R6任选地连接以形成C4-C8杂环基环

-n是0、1或2

-m是0、1或2

在本发明的一个实施方式中，本发明的主题内容是用于在对象中预防或治疗HBV感染的式I化合物的立体异构体

其中

-R1、R2、R3和R4对于每个位置来说独立地选自H、D和C1-C6烷基

-R5和R6任选地连接以形成C4-C8杂环基环

-n是0、1或2

-m是0、1或2

本发明的一个实施方式是根据本发明的用于在对象中预防或治疗HBV感染的式I化合物或其可药用盐。

本发明的一个实施方式是一种药物组合物，其包含根据本发明的式I化合物或其可药用盐以及可药用载体，所述药物组合物用于在对象中预防或治疗HBV感染。

本发明的一个实施方式是一种在有需要的个体中治疗HBV感染的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的根据本发明的式I化合物或其可药用盐。

本发明的另一个实施方式是根据本发明的式I化合物或其可药用盐，用于在有需要的对象中预防或治疗HBV感染。

本发明的另一个实施方式是根据本发明的式II化合物或其可药用盐，用于在有需要的对象中预防或治疗HBV感染

其中

-R1、R2、R3和R4对于每个位置来说独立地选自H、D和C1-C6烷基

-R5和R6独立地选自H、C6芳基、C3-C5杂芳基、C1-C6烷基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、C3-C7环烷基、C3-C7杂环烷基、C2-C6羟基烷基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C1-C2烷基-C3-C5环烷基、C1-C2烷基-C3-C5杂芳基和C1-C2烷基-C3-C5杂环烷基，任选地被1、2或3个各自独立地选自OH、卤素、苯基、羧基苯基、C3-C7杂环烷基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基、C1-C4烷氧基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C(＝O)NH₂、C(＝O)N(H)CH3和羧基的基团取代

-R5和R6任选地连接以形成C4-C8杂环基环

-n是0、1或2

-m是0、1或2

-R7、R8、R9和R10独立地选自H、D、F、Cl、Br、I、CF₃、CF₂H、C1-C4烷基、CF₂CH₃、环丙基和氰基，

在本发明的一个实施方式中，本发明的主题内容是一种用于在对象中预防或治疗HBV感染的式II化合物，其中

-R1、R2、R3和R4对于每个位置来说独立地选自H、D和C1-C6烷基

-R5和R6任选地连接以形成C4-C8杂环基环

-n是0、1或2

-m是0、1或2

-R1、R2、R3和R4对于每个位置来说独立地选自H、D和C1-C6烷基

-R5和R6任选地连接以形成C4-C8杂环基环

-n是0、1或2

-m是0、1或2

-R1、R2、R3和R4对于每个位置来说独立地选自H、D和C1-C6烷基

-R5和R6任选地连接以形成C4-C8杂环基环

-n是0、1或2

-m是0、1或2

本发明的一个实施方式是根据本发明的用于在对象中预防或治疗HBV感染的式II化合物或其可药用盐。

本发明的一个实施方式是一种药物组合物，其包含根据本发明的式II化合物或其可药用盐以及可药用载体，所述药物组合物用于在对象中预防或治疗HBV感染。

本发明的一个实施方式是一种在有需要的个体中治疗HBV感染的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的根据本发明的式II化合物或其可药用盐。

本发明的另一个实施方式是根据本发明的式II化合物或其可药用盐，用于在有需要的对象中预防或治疗HBV感染。

本发明的另一个实施方式是根据本发明的式IIa化合物或其可药用盐，用于在有需要的对象中预防或治疗HBV感染

其中

-R1、R2、R3和R4对于每个位置来说独立地选自H、D和C1-C6烷基

-R5选自H、C6芳基、C3-C5杂芳基、C1-C6烷基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、C3-C7环烷基、C3-C7杂环烷基、C2-C6羟基烷基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C1-C2烷基-C3-C5环烷基、C1-C2烷基-C3-C5杂芳基和C1-C2烷基-C3-C5杂环烷基，任选地被1、2或3个各自独立地选自OH、卤素、苯基、羧基苯基、C3-C7杂环烷基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基、C1-C4烷氧基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C(＝O)NH₂、C(＝O)N(H)CH₃和羧基的基团取代

-n是0、1或2

-m是0、1或2

在本发明的一个实施方式中，本发明的主题内容是一种用于在对象中预防或治疗HBV感染的式IIa化合物，其中

-R1、R2、R3和R4对于每个位置来说独立地选自H、D和C1-C6烷基

-n是0、1或2

-m是0、1或2

-R1、R2、R3和R4对于每个位置来说独立地选自H、D和C1-C6烷基

-R5选自H、C6芳基、C3-C5杂芳基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C3-C6环烷基、C3-C7杂环烷基、C2-C6羟基烷基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C1-C2烷基-C3-C5环烷基和C1-C2烷基-C3-C5杂环烷基，任选地被1、2或3个各自独立地选自OH、卤素、苯基、羧基苯基、C3-C7杂环烷基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基、C(＝O)N(H)CH3和羧基的基团取代

-n是0、1或2

-m是0、1或2

-R1、R2、R3和R4对于每个位置来说独立地选自H、D和C1-C6烷基

-R5选自H、C6芳基、C1-C6烷基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、C3-C7环烷基、C3-C7杂环烷基、C2-C6羟基烷基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C1-C2烷基-C3-C5环烷基、C1-C2烷基-C3-C5杂芳基和C1-C2烷基-C3-C5杂环烷基，任选地被1、2或3个各自独立地选自OH、C3-C7杂环烷基、C1-C6烷基、C1-C6羟基烷基、C1-C4烷氧基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C(＝O)NH₂和C(＝O)N(H)CH₃的基团取代

-n是0、1或2

-m是0、1或2

本发明的一个实施方式是根据本发明的用于在对象中预防或治疗HBV感染的式IIa化合物或其可药用盐。

本发明的一个实施方式是一种药物组合物，其包含根据本发明的式IIa化合物或其可药用盐以及可药用载体，所述药物组合物用于在对象中预防或治疗HBV感染。

本发明的一个实施方式是一种在有需要的个体中治疗HBV感染的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的根据本发明的式IIa化合物或其可药用盐。

本发明的另一个实施方式是根据本发明的式IIa化合物或其可药用盐，用于在有需要的对象中预防或治疗HBV感染。

本发明的另一个实施方式是根据本发明的式IIb化合物或其可药用盐，用于在有需要的对象中预防或治疗HBV感染

其中

在本发明的一个实施方式中，本发明的主题内容是一种用于在对象中预防或治疗HBV感染的式IIb化合物，其中

-R5选自H、C6芳基、C3-C5杂芳基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C3-C6环烷基、C3-C7杂环烷基、C2-C6羟基烷基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C1-C2烷基-C3-C5环烷基和C1-C2烷基-C3-C5杂环烷基，任选地被1、2或3个各自独立地选自OH、卤素、苯基、羧基苯基、C3-C7杂环烷基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基、C(＝O)N(H)CH₃和羧基的基团取代

-R5选自H、C6芳基、C1-C6烷基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、C3-C7环烷基、C3-C7杂环烷基、C2-C6羟基烷基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C1-C2烷基-C3-C5环烷基、C1-C2烷基-C3-C5杂芳基和C1-C2烷基-C3-C5杂环烷基，任选地被1、2或3个各自独立地选自OH、C3-C7杂环烷基、C1-C6烷基、C1-C6羟基烷基、C1-C4烷氧基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C(＝O)NH₂和C(＝O)N(H)CH₃的基团取代，

本发明的一个实施方式是根据本发明的用于在对象中预防或治疗HBV感染的式IIb化合物或其可药用盐。

本发明的一个实施方式是一种药物组合物，其包含根据本发明的式IIb化合物或其可药用盐以及可药用载体，所述药物组合物用于在对象中预防或治疗HBV感染。

本发明的一个实施方式是一种在有需要的个体中治疗HBV感染的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的根据本发明的式IIb化合物或其可药用盐。

本发明的另一个实施方式是根据本发明的式IIb化合物或其可药用盐，用于在有需要的对象中预防或治疗HBV感染。

本发明的另一个实施方式是根据本发明的式III化合物或其可药用盐，用于在有需要的对象中预防或治疗HBV感染

其中

-R1、R2、R3和R4对于每个位置来说独立地选自H、D和C1-C6烷基

-R5和R6任选地连接以形成C4-C8杂环基环

-n是0、1或2

-m是0、1或2

-R7、R8、R9和R10独立地选自H、D、F、Cl、Br、I、CF₃、CF₂H、C1-C4烷基、CF₂CH₃、环丙基和氰基

-R11和R12独立地选自H、D、F、Cl、Br、I、CF₃、CF₂H、C1-C4烷基、C2-C5烯基、CF₂CH₃、环丙基、氰基和硝基，

在本发明的一个实施方式中，本发明的主题内容是一种用于在对象中预防或治疗HBV感染的式III化合物，其中

-R1、R2、R3和R4对于每个位置来说独立地选自H、D和C1-C6烷基

-R5和R6独立地选自H、C6芳基、C3-C5杂芳基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C3-C6环烷基、C3-C7杂环烷基、C2-C6羟基烷基、C1-C6烷基-O-C1-C6烷基、C1-C2烷基-C3-C5环烷基和C1-C2烷基-C3-C5杂环烷基，任选地被1、2或3个各自独立地选自OH、卤素、苯基、羧基苯基、C3-C7杂环烷基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6羟基烷基、C(＝O)N(H)CH3和羧基的基团取代

-R5和R6任选地连接以形成C4-C8杂环基环

-n是0、1或2

-m是0、1或2

本发明的一个实施方式是根据本发明的用于在对象中预防或治疗HBV感染的式III化合物或其可药用盐。

本发明的一个实施方式是一种药物组合物，其包含根据本发明的式III化合物或其可药用盐以及可药用载体，所述药物组合物用于在对象中预防或治疗HBV感染。

本发明的一个实施方式是一种在有需要的个体中治疗HBV感染的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的根据本发明的式III化合物或其可药用盐。

本发明的另一个实施方式是根据本发明的式III化合物或其可药用盐，用于在有需要的对象中预防或治疗HBV感染。

本发明的另一个实施方式是根据本发明的式IIIa化合物或其可药用盐，用于在有需要的对象中预防或治疗HBV感染

其中

-R1、R2、R3和R4对于每个位置来说独立地选自H、D和C1-C6烷基

-n是0、1或2

-m是0、1或2

在本发明的一个实施方式中，本发明的主题内容是一种用于在对象中预防或治疗HBV感染的式IIIa化合物，其中

-R1、R2、R3和R4对于每个位置来说独立地选自H、D和C1-C6烷基

-n是0、1或2

-m是0、1或2

-R11和R12独立地选自H、D、F、Cl、Br、I、CF₃、CF₂H、C1-C4烷基、C2-C5烯基、CF₂CH₃、环丙基、氰基和硝基，其中杂芳基和杂环烷基各自具有1或2个各自独立地选自N、O和S的杂原子。

本发明的一个实施方式是根据本发明的用于在对象中预防或治疗HBV感染的式IIIa化合物或其可药用盐。

本发明的一个实施方式是一种药物组合物，其包含根据本发明的式IIIa化合物或其可药用盐以及可药用载体，所述药物组合物用于在对象中预防或治疗HBV感染。

本发明的一个实施方式是一种在有需要的个体中治疗HBV感染的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的根据本发明的式IIIa化合物或其可药用盐。

本发明的另一个实施方式是根据本发明的式IIIa化合物或其可药用盐，用于在有需要的对象中预防或治疗HBV感染。

本发明的另一个实施方式是根据本发明的式IIIb化合物或其可药用盐，用于在有需要的对象中预防或治疗HBV感染

其中

在本发明的一个实施方式中，本发明的主题内容是一种用于在对象中预防或治疗HBV感染的式IIIb化合物，其中

本发明的一个实施方式是根据本发明的用于在对象中预防或治疗HBV感染的式IIIb化合物或其可药用盐。

本发明的一个实施方式是一种药物组合物，其包含根据本发明的式IIIb化合物或其可药用盐以及可药用载体，所述药物组合物用于在对象中预防或治疗HBV感染。

本发明的一个实施方式是一种在有需要的个体中治疗HBV感染的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的根据本发明的式IIIb化合物或其可药用盐。

本发明的另一个实施方式是根据本发明的式IIIb化合物或其可药用盐，用于在有需要的对象中预防或治疗HBV感染。

在一些实施方式中，本发明化合物的剂量为约1mg至约2,500mg。在一些实施方式中，用于本文所述组合物中的本发明化合物的剂量小于约10,000mg、或小于约8,000mg、或小于约6,000mg、或小于约5,000mg、或小于约3,000mg、或小于约2,000mg、或小于约1,000mg、或小于约500mg、或小于约200mg、或小于约50mg。类似地，在一些实施方式中，如本文所述的第二化合物(即用于HBV治疗的另一种药物)的剂量小于约1,000mg、或小于约800mg、或小于约600mg、或小于约500mg、或小于约400mg、或小于约300mg、或小于约200mg、或小于约100mg、或小于约50mg、或小于约40mg、或小于约30mg、或小于约25mg、或小于约20mg、或小于约15mg、或小于约10mg、或小于约5mg、或小于约2mg、或小于约1mg、或小于约0.5mg，以及其任何和所有整数或分数增量。所有之前提到的剂量是指每位患者的日剂量。

一般来说，预期抗病毒有效的每日量为约0.01至约50mg/kg，或约0.01至约30mg/kg体重。全天以适当的时间间隔将所需剂量作为两个、三个、四个或更多个子剂量施用可能是适当的。所述子剂量可配制成单位剂型，例如每单位剂型含有约1至约500mg、或约1至约300mg或约1至约100mg、或约2至约50mg的活性成分。

本发明的化合物根据其结构可以以盐、溶剂化物或水合物的形式存在。因此，本发明还涵盖盐、溶剂化物或水合物及其各自的混合物。

本发明的化合物根据其结构可以以互变异构或立体异构形式(对映异构体、非对映异构体)存在。因此，本发明还涵盖互变异构体、对映异构体或非对映异构体及其各自的混合物。立体异构均匀的成分可以以已知方式从对映异构体和/或非对映异构体的此类混合物中分离。

本发明的主题内容是用于在对象中预防或治疗HBV感染的式I、II、IIa、IIb、III、IIIa、IIIb的化合物或其可药用盐，或者所述化合物的溶剂化物或水合物，或者所述溶剂化物或水合物的可药用盐，或者所述化合物的前药，或者所述前药的可药用盐，或者所述前药的溶剂化物或水合物，或者所述前药的所述溶剂化物或水合物的可药用盐。

此外，本发明的主题内容是一种药物组合物，其包含式I、II、IIa、IIb、III、IIIa、IIIb的化合物或其可药用盐，或者所述化合物的溶剂化物或水合物，或者所述溶剂化物或水合物的可药用盐，或者所述化合物的前药，或者所述前药的可药用盐，或者所述前药的溶剂化物或水合物，或者所述前药的所述溶剂化物或水合物的可药用盐，以及可药用载体，所述药物组合物用于在对象中预防或治疗HBV感染。

此外，本发明的主题内容是一种在有需要的个体中治疗HBV感染的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的式I、II、IIa、IIb、III、IIIa、IIIb的化合物或其可药用盐，或者所述化合物的溶剂化物或水合物，或者所述溶剂化物或水合物的可药用盐，或者所述化合物的前药，或者所述前药的可药用盐，或者所述前药的溶剂化物或水合物，或者所述前药的所述溶剂化物或水合物的可药用盐。

此外，本发明的主题内容是一种制备本发明化合物的方法。因此，本发明的主题内容是一种制备根据本发明的式I化合物的方法，所述方法包括使式IV化合物

其中Q如上定义，与式V化合物反应

其中

-R1、R2、R3和R4对于每个位置来说独立地选自H、D和C1-C6烷基

-R5和R6任选地连接以形成C4-C8杂环基环

-n是0、1或2

-m是0、1或2。

在一个实施方式中，本发明的主题内容是一种制备根据本发明的式I化合物的方法，所述方法包括使式IV化合物

其中Q如上定义，与式V化合物反应

其中

-R1、R2、R3和R4对于每个位置来说独立地选自H、D和C1-C6烷基

-R5和R6任选地连接以形成C4-C8杂环基环

-n是0、1或2

-m是0、1或2。

定义

下面列出的是用于描述本发明的各种术语的定义。这些定义适用于在整个本说明书和权利要求书中使用的术语，除非在特定情况下单独地或作为更大组的一部分另有限制。

除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语通常具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。通常，本文所用的命名法以及细胞培养、分子遗传学、有机化学和肽化学中的实验室程序是本领域熟知和常用的那些。

如本文所用，冠词“一个”和“一种”指代所述冠词的一个或多于一个(即至少一个)语法对象。举例来说，“一个要素”是指一个要素或多于一个要素。此外，术语术语“包括”以及例如“包含”、“含有”和“涵盖”的其他形式的使用不是限制性的。

如本文所用，术语“衣壳组装调节剂”是指破坏或加速或抑制或阻碍或延迟或减少或改变正常衣壳组装(例如在成熟期间)或正常衣壳解体(例如在感染期间)或扰乱衣壳稳定性，从而诱导异常衣壳形态或异常衣壳功能的化合物。在一个实施方式中，衣壳组装调节剂加速衣壳组装或解体，从而诱导异常衣壳形态。在另一个实施方式中，衣壳组装调节剂与主要衣壳组装蛋白(HBV-CP)相互作用(例如在活性位点结合，在变构位点结合，或改变和/或阻碍折叠等)，从而破坏衣壳组装或解体。在又一个实施方式中，衣壳组装调节剂引起HBV-CP结构或功能(例如HBV-CP组装、解体、结合底物，折叠成合适的构象等，从而减弱病毒感染性和/或对病毒致死的能力)的扰动。

如本文所用，术语“治疗”定义为向患者应用或施用治疗剂，即本发明的化合物(单独或与其他医药剂组合)，或者向来自具有HBV感染、HBV感染症状或有可能发展为HBV感染的患者的分离组织或细胞系应用或施用治疗剂(例如用于诊断或离体应用)，目的是医治、治愈、减轻、缓解、改变、补救、改善、改进或影响HBV感染、HBV感染症状或发展为HBV感染的可能性。此类治疗可基于从药物基因组学领域获得的知识进行专门定制或修改。

如本文所用，术语“预防”是指如果没有发生任何病症或疾病，则其不发展病症或疾病，或者如果病症或疾病已经发展，则没有进一步的病症或疾病发展。还考虑化合物预防与病症或疾病相关的一些或全部症状的能力。

如本文所用，术语“患者”、“个体”或“对象”是指人类或非人类哺乳动物。非人类哺乳动物包括例如家畜和宠物，例如绵羊、牛、猪、猫和鼠类哺乳动物。优选地，患者、对象或个体是人类。

如本文所用，术语“有效量”、“药学有效量”和“治疗有效量”是指无毒但足以提供所需生物学结果的药剂的量。该结果可以是减少和/或减轻疾病的体征、症状或病因，或任何其他期望的生物系统改变。本领域普通技术人员可以使用常规实验确定在任何个别情况下的适合治疗量。

如本文所用，术语“可药用的”是指不消除化合物的生物学活性或特性并且相对无毒的材料如载体或稀释剂，即所述材料可以施用于个体而不引起不希望的生物学作用或以有害方式与组合物中包含的任何组分相互作用。

如本文所用，术语“可药用盐”是指所公开化合物的衍生物，其中母体化合物通过将现有酸或碱部分转化为其盐形式而被修饰。可药用盐的实例包括但不限于碱性残基如胺的无机或有机酸盐；酸性残基如羧酸的碱金属盐或有机盐；等等。本发明的可药用盐包括例如由无毒的无机或有机酸形成的母体化合物的常规无毒盐。本发明的可药用盐可以由含有碱性或酸性部分的母体化合物通过常规化学方法合成。通常，这些盐可以通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计算量的适当碱或酸在水中或在有机溶剂中或在两者的混合物中反应来制备；一般优选非水性介质如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。合适盐的列表见于Remington's Pharmaceutical Sciences第17版.Mack Publishing Company,Easton,Pa.,1985第1418页和Journal of Pharmaceutical Science,66,2(1977)，每篇文献均通过引用整体并入本文。根据本发明的化合物的可药用盐包括酸加成盐，例如但不限于盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸、富马酸、马来酸和苯甲酸的盐。根据本发明的化合物的可药用盐还包括常规碱的盐，例如但不限于碱金属盐(例如钠盐和钾盐)、碱土金属盐(例如钙盐和镁盐)以及衍生自氨或具有1至16个碳原子的有机胺如乙胺、二乙胺、三乙胺、乙基二异丙胺、单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二环己胺、二甲氨基乙醇、普鲁卡因、二苄胺、N-甲基吗啉、精氨酸、赖氨酸、乙二胺和N-甲基哌啶的铵盐。

如本文所用，术语“溶剂化物”是指通过与溶剂分子配位形成固态或液态络合物的化合物。合适的溶剂包括但不限于甲醇、乙醇、乙酸和水。水合物是一种特殊形式的溶剂化物，其中与水发生配位。

如本文所用，术语“组合物”或“药物组合物”是指至少一种在本发明中有用的化合物与可药用载体的混合物。药物组合物有助于将化合物施用于患者或对象。本领域中存在的施用化合物的多种技术包括但不限于静脉内、口服、气雾剂、经直肠、肠胃外、经眼、经肺和局部施用。

如本文所用，术语“可药用载体”是指可药用材料、组合物或载体，例如液体或固体填充剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂、稀释剂、赋形剂、增稠剂、溶剂或包封材料，可药用载体涉及将在本发明中有用的化合物在患者体内的携载或转运或者携载或转运到患者，以使得所述化合物可以执行其预期功能。通常，此类构建体从一个器官或身体的一部分携载或转运到另一个器官或身体的另一部分。每个载体必须在与本发明内使用的包括化合物的制剂的其他成分相容并且对患者无害的意义上是“可接受的”。可用作可药用载体的材料的一些实例包括：糖类，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；粉状黄蓍胶；麦芽、明胶、滑石粉；赋形剂，如可可脂和栓剂蜡；油类，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇类，如丙二醇；多元醇，如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；酯类，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；表面活性剂；海藻酸；无热原水；等渗盐水；林格氏溶液；乙醇；磷酸盐缓冲溶液以及药物制剂中使用的其他无毒相容物质。如本文所用，“可药用载体”还包括与本发明中有用的化合物的活性相容并且为患者生理上可接受的任何和所有包衣、抗细菌剂和抗真菌剂以及吸收延迟剂等。补充性活性化合物也可以并入到组合物中。“可药用载体”还可以包括在本发明中有用的化合物的可药用盐。可以包含在本发明实践中使用的药物组合物中的其他额外成分是本领域已知的并且描述于例如通过引用并入本文的Remington's Pharmaceutical Sciences(Genaro,主编，Mack PublishingCompany,Easton,Pa.,1985)中。

如本文所用，术语“取代的”是指一个原子或原子团已代替了氢作为附连到另一个基团的取代基。

如本文所用，术语“包括”还涵盖选项“由……组成”。

如本文所用，除非另有说明，否则术语“烷基”本身或作为另一取代基的一部分是指具有指定碳原子数的直链或支链烃(即C1-C6烷基是指1至6个碳原子)并且包括直链和支链。实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、新戊基和己基。此外，术语“烷基”本身或作为另一取代基的一部分也可以指用C3-C5碳环取代的C1-C3直链烃。实例包括(环丙基)甲基、(环丁基)甲基和(环戊基)甲基。为避免疑问，当一个基团中存在两个烷基部分时，所述烷基部分可以相同或不同。

如本文所用，术语“烯基”表示衍生自含有至少两个碳原子和至少一个E或Z立体化学的碳碳双键的烃部分的单价基团。双键可能是或可能不是与另一个基团的附连点。烯基基团(例如C2-C8烯基)包括但不限于例如乙烯基、丙烯基、丙-1-烯-2-基、丁烯基、甲基-2-丁烯-1-基、庚烯基和辛烯基。为避免疑问，当一个基团中存在两个烯基部分时，所述烷基部分可以相同或不同。

如本文所用，C2-C6炔基基团或部分是含有2至6个碳原子的直链或支链炔基基团或部分，例如含有2至4个碳原子的C2-C4炔基基团或部分。示例性的炔基基团包括-C≡CH或-CH₂-C≡C，以及1-丁炔基和2-丁炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-戊炔基、2-己炔基、3-己炔基、4-己炔基和5-己炔基。为避免疑问，当一个基团中存在两个炔基部分时，它们可以相同或不同。

如本文所用，除非另有说明，否则术语“卤代”或“卤素”单独或作为另一取代基的一部分是指氟、氯、溴或碘原子，优选氟、氯或溴，更优选氟或氯。为避免疑问，当一个基团中存在两个卤素部分时，它们可以相同或不同。

如本文所用，C1-C6烷氧基基团或C2-C6烯氧基基团通常是分别附连到氧原子的所述C1-C6烷基(例如C1-C4烷基)或所述C2-C6烯基(例如C2-C4烯基)基团。

如本文所用，除非另有说明，否则术语“羧基”及其本身或作为另一取代基的一部分是指式C(＝O)OH的基团。

如本文所用，除非另有说明，否则术语“氰基”本身或作为另一取代基的一部分是指式C≡N的基团。

如本文所用，除非另有说明，否则术语“硝基”本身或作为另一取代基的一部分是指式NO₂的基团。

如本文所用，除非另有说明，否则术语“羧基酯”本身或作为另一取代基的一部分是指式C(＝O)OX的基团，其中X选自C1-C6烷基、C3-C7环烷基和芳基。

如本文所用，羧基苯基基团通常是用所述羧基基团取代的所述苯基基团。

如本文所用，单独使用或与其他术语组合使用的术语“芳基”，除非另有说明，否则是指含有一个或多个环(通常为一个、两个或三个环)的碳环芳族系统，其中这些环可以以侧基方式附连在一起，例如联苯，或者可以稠合，例如萘。芳基基团的实例包括苯基、蒽基和萘基。优选的实例是苯基(例如C6芳基)和联苯基(例如C12芳基)。在一些实施方式中，芳基基团具有六至十六个碳原子。在一些实施方式中，芳基基团具有六至十二个碳原子(例如C6-C12芳基)。在一些实施方式中，芳基基团具有六个碳原子(例如C6芳基)。

如本文所用，术语“杂芳基”和“杂芳族”是指含有一个或多个环(通常为一个、两个或三个环)的具有芳族特性的杂环，其含有一至四个各自独立地选自氧、硫和氮的环杂原子。杂芳基取代基可由碳原子数定义，例如C1-C9杂芳基表示杂芳基基团中包含的碳原子数，而不包括杂原子数。例如，C1-C9杂芳基将包含额外的一至四个杂原子。多环杂芳基可包含一个或多个部分饱和的环。杂芳基的非限制性实例包括：

杂芳基基团的其他非限制性实例包括吡啶基、吡嗪基、嘧啶基(包括例如2-嘧啶基和4-嘧啶基)、哒嗪基、噻吩基、呋喃基、吡咯基(包括例如2-吡咯基)、咪唑基、噻唑基、

唑基、吡唑基(包括例如3-吡唑基和5-吡唑基)、异噻唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,3,4-三唑基、四唑基、1,2,3-噻二唑基、1,2,3-

二唑基，1,3,4-噻二唑基和1,3,4-

二唑基。多环杂环和杂芳基的非限制性实例包括吲哚基(包括3-吲哚基、4-吲哚基、5-吲哚基、6-吲哚基和7-吲哚基)、吲哚啉基、喹啉基、四氢喹啉基、异喹啉基(包括例如1-异喹啉基和5-异喹啉基)、1,2,3,4-四氢异喹啉基、噌啉基、喹喔啉基(包括例如2-喹喔啉基和5-喹喔啉基)、喹唑啉基、酞嗪基、1,8-萘啶基、1,4-苯并二

烷基、香豆素、二氢香豆素、1,5-萘啶基、苯并呋喃基(包括例如3-苯并呋喃基、4-苯并呋喃基、5-苯并呋喃基、6-苯并呋喃基和7-苯并呋喃基)、2,3-二氢苯并呋喃基、1,2-苯并异

唑基、苯并噻吩基(包括例如3-苯并噻吩基、4-苯并噻吩基、5-苯并噻吩基、6-苯并噻吩基和7-苯并噻吩基)、苯并

唑基、苯并噻唑基(包括例如2-苯并噻唑基和5-苯并噻唑基)、嘌呤基、苯并咪唑基(包括例如2-苯并咪唑基)、苯并三唑基、硫代黄嘌呤基、咔唑基、咔啉基、吖啶基、吡咯里西啶基(pyrrolizidinyl)和喹诺里西啶基(quinolizidinyl)。

如本文所用，术语“卤代烷基”通常分别是其中任何一个或多个碳原子被一个或多个如上定义的所述卤素原子取代的所述烷基、烯基、烷氧基或烯氧基基团。卤代烷基包括单卤代烷基、二卤代烷基和多卤代烷基基团。术语“卤代烷基”包括但不限于氟甲基、1-氟乙基、二氟甲基、2,2-二氟乙基、2,2,2-三氟乙基、三氟甲基、氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、五氟乙基、二氟甲氧基和三氟甲氧基。

如本文所用，C1-C6羟基烷基基团是被一个或多个羟基基团取代的所述C1-C6烷基基团。通常，它被一个、两个或三个羟基基团取代。优选地，它被单个羟基基团取代。

如本文所用，C1-C6氨基烷基基团是被一个或多个氨基基团取代的所述C1-C6烷基基团。通常，它被一个、两个或三个氨基基团取代。优选地，它被单个氨基基团取代。

如本文所用，C1-C4羧基烷基基团是被羧基基团取代的所述C1-C4烷基基团。

如本文所用，C1-C4甲酰胺基烷基基团是被取代或未取代的甲酰胺基团取代的所述C1-C4烷基基团。

如本文所用，C1-C4酰基磺酰胺-烷基基团是被通式为C(＝O)NHSO₂CH₃或C(＝O)NHSO₂-c-Pr的酰基磺酰胺基团取代的所述C1-C4烷基基团。

如本文所用，术语“环烷基”是指单环或多环非芳族基团，其中形成环的每个原子(即骨架原子)是碳原子。在一个实施方式中，环烷基基团是饱和或部分不饱和的。在另一个实施方式中，环烷基基团与芳环稠合。环烷基基团包括具有3至10个环原子的基团(C3-C10环烷基)、具有3至8个环原子的基团(C3-C8环烷基)、具有3至7个环原子的基团(C3-C7环烷基)和具有3至6个环原子的基团(C3-C6环烷基)。环烷基基团的说明性实例包括但不限于以下部分：

单环环烷基包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。双环环烷基包括但不限于四氢萘基、茚满基和四氢并环戊二烯。多环环烷基包括金刚烷和降冰片烷。术语环烷基包括“不饱和非芳族碳环基”或“非芳族不饱和碳环基”基团，两者均指如本文定义的非芳族碳环，其中含有至少一个碳碳双键或一个碳碳三键。

如本文所用，术语“卤代环烷基”通常是其中任何一个或多个碳原子被一个或多个如上定义的所述卤素原子取代的所述环烷基。卤代环烷基包括单卤代烷基、二卤代烷基和多卤代烷基基团。卤代环烷基包括3,3-二氟-环丁基、3-氟环丁基、2-氟环丁基、2,2-二氟环丁基和2,2-二氟环丙基。

如本文所用，术语“杂环烷基”和“杂环基”是指含有一个或多个环(通常为一个、两个或三个环)的杂脂环基团，其含有一到四个各自选自氧、硫和氮的环杂原子。在一个实施方式中，每个杂环基基团在其环系中具有3至10个原子，条件是所述基团的环不含两个相邻的氧或硫原子。在一个实施方式中，每个杂环基基团具有在环系中具有3至10个原子的稠合双环环系，同样条件是所述基团的环不含两个相邻的氧或硫原子。在一个实施方式中，每个杂环基基团具有在环系中具有3至10个原子的桥连双环环系，同样条件是所述基团的环不含两个相邻的氧或硫原子。在一个实施方式中，每个杂环基基团具有在环系中具有3至10个原子的螺双环环系，同样条件是所述基团的环不含两个相邻的氧或硫原子。杂环基取代基可替代地由碳原子数定义，例如C2-C8杂环基表示杂环基团中包含的碳原子数，而不包括杂原子数。例如，C2-C8杂环基包括额外的一至四个杂原子。在另一个实施方式中，杂环烷基基团与芳环稠合。在另一个实施方式中，杂环烷基基团与杂芳环稠合。在一个实施方式中，氮和硫杂原子可以任选地被氧化并且氮原子可以任选地被季铵化。除非另有说明，否则杂环系统可以附连在提供稳定结构的任何杂原子或碳原子上。3元杂环基基团的实例包括且不限于氮杂环丙烷。4元杂环烷基基团的实例包括且不限于氮杂环丁烷和β-内酰胺。5元杂环基基团的实例包括且不限于吡咯烷、

唑烷和噻唑烷二酮。6元杂环烷基基团的实例包括且不限于哌啶、吗啉、哌嗪、N-乙酰基哌嗪和N-乙酰基吗啉。杂环基基团的其他非限制性实例是

杂环的实例包括单环基团如氮杂环丙烷、氧杂环丙烷、硫杂环丁烷、氮杂环丁烷、氧杂环丁烷、硫杂环丁烷、吡咯烷、吡咯啉、吡唑烷、咪唑啉、二氧杂环戊烷、环丁砜、2,3-二氢呋喃、2,5-二氢呋喃、四氢呋喃、噻吩烷、哌啶、1,2,3,6-四氢吡啶、1,4-二氢吡啶、哌嗪、吗啉、硫代吗啉、吡喃、2,3-二氢吡喃、四氢吡喃、1,4-二

烷、1,3-二

烷、1,3-二氧杂环戊烷、高哌嗪、高哌啶、1,3-二氧杂环庚烷、47-二氢-l,3-二氧杂环庚烯和六亚甲基氧。术语“C3-C7杂环烷基”包括但不限于四氢呋喃-2-基、四氢呋喃-3-基、3-氧杂双环[3.1.0]己-6-基、3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基、四氢吡喃-4-基、四氢吡喃-3-基、四氢吡喃-2-基和氮杂环丁烷-3-基。

如本文所用，术语“芳族”是指具有一个或多个多不饱和环并具有芳族特性的碳环或杂环，即具有(4n+2)个离域π(pi)电子的碳环或杂环，其中n为整数。

如本文所用，除非另有说明，否则单独使用或与其他术语组合使用的术语“酰基”是指经由羰基基团连接的烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基基团。

如本文所用，除非另有说明，否则单独使用或与其他术语组合使用的术语“氨甲酰基”和“取代的氨甲酰基”是指与氨基基团连接的羰基基团，所述氨基基团任选地被氢、烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基单取代或双取代。在一些实施方式中，氮取代基将连接以形成如上定义的杂环基环。

术语“前药”是指药物的前体，这是一种在施用于患者后必须通过代谢过程进行化学转化，然后变成活性医药剂的化合物。式I化合物的说明性前药是酯和酰胺，优选脂肪酸酯的烷基酯。此处的前药制剂包含通过简单转化(包括以酶促方式、代谢方式或以任何其他方式水解、氧化或还原)形成的所有物质。合适的前药含有例如经由酶促可切割接头(例如氨基甲酸酯、磷酸酯、N-糖苷或二硫化物基团)与溶解改善物质(例如四甘醇、糖类、甲酸或葡萄糖醛酸等)结合的通式I的物质。根据本发明的化合物的这种前药可以应用于患者，并且该前药可以转化为通式I的物质，从而获得所需的药理作用。

具体实施方式

现在参考以下实施例描述本发明。提供这些实施例仅用于说明的目的，并且本发明不限于这些实施例，而是涵盖由于本文提供的教导而显而易见的所有变化。

所需的取代的吲哚-2-甲酸可以多种方式制备；使用的主要路线概述于方案1-4中。对于本领域的化学家来说，显然还有其他方法可以实现这些中间体的制备。

取代的吲哚-2-甲酸可以经由Hemetsberger-Knittel反应制备(OrganicLetters,2011,13(8)第2012-2014页；Journal of the American Chemical Society,2007,第7500-7501页；和Monatshefte für Chemie,103(1),第194-204页)(方案1)。

方案1：来自乙烯基叠氮化物的吲哚

取代的吲哚也可以使用Fischer方法制备(Berichte der Deutschen ChemischenGesellschaft.17(1):559–568)(方案2)。

方案2：Fischer吲哚合成

用于制备取代的吲哚的另一种方法是钯催化的炔烃环化反应(Journal of theAmerican Chemical Society,1991,第6690-6692页)(方案3)。

方案3：经由炔烃环化制备吲哚

另外，吲哚可以从其他适当官能化(卤化)的吲哚制备(例如经由钯催化的交叉偶联或亲核取代反应)，如方案4中所示。

方案4：钯催化的卤化吲哚的官能化

本领域的化学家会理解，其他方法可用于合成适当官能化的吲哚-2-甲酸及其活化酯。

所需的取代的吲哚嗪-2-甲酸可以多种方式制备，使用的主要路线概述于方案5-7中。对于本领域的化学家来说，显然还有其他方法可以实现这些中间体的制备。

取代的吲哚嗪-2-甲酸可以通过Morita-Bayliss-Hilmann反应用适当取代的吡啶-2-甲醛制备，如方案5所示。

方案5：吲哚嗪-2-甲酸的Morita-Bayliss-Hilmann合成

在方案5的步骤1中，适当官能化的吡啶-2-甲醛与丙-2-烯酸甲酯(丙烯酸甲酯)和叔胺例如1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(DABCO)反应，得到Morita-Bayliss-Hillman加成物。在步骤2中，该加成物然后被例如乙酸酐酰化得到酯，其然后在步骤3中加热环化得到吲哚嗪-2-甲酸酯。在步骤4中，将酯用例如氢氧化钠水溶液水解，得到所需的吲哚嗪-2-甲酸。

取代的吲哚嗪-2-甲酸也可以通过Chichibabin反应，使用适当官能化的2-甲基-吡啶(2-甲基吡啶)制备，如方案6所示。

方案6：吲哚嗪-2-甲酸的Chichibabin合成

在方案6的步骤1中，适当官能化的2-甲基-吡啶(甲基吡啶)与溴丙酮酸的酯例如溴丙酮酸乙酯(如图所示)或3-溴-2-氧代丙酸叔丁酯反应，得到吡锭盐。该加成物然后在步骤2中在碱性条件下通过例如碳酸铯环化得到吲哚嗪酯。在步骤3中，将羧酸酯用例如氢氧化钠水溶液水解得到所需的吲哚嗪-2-甲酸。

取代的吲哚嗪-2-甲酸也可以通过取代的吲哚嗪的进一步官能化来制备，如方案7所示。

方案7：吲哚嗪-2-甲酸的官能化

在方案7的步骤1中，适当官能化的吲哚嗪与甲酰化试剂或卤化试剂例如N-溴-琥珀酰亚胺或溴反应，得到取代的吲哚嗪。在步骤2中，该加成物然后可以通过本领域众所周知的方法，例如通过金属化-淬灭、钯催化的交叉偶联反应或Wittig反应进一步官能化。在步骤3中，将羧酸酯用例如氢氧化钠水溶液水解得到吲哚嗪-2-甲酸。

本领域的化学家会理解，其他方法可用于合成适当官能化的吲哚嗪-2-甲酸及其活化酯。

在一个优选的实施方式中，式I化合物可以如以下方案8所示来制备。

方案8：式I化合物的合成

在步骤1中，将方案8中所述的化合物1用文献(A.El-Faham,F.Albericio,Chem.Rev.2011,111,6557-6602)中已知的方法，例如用HATU酰化，产生结构2的化合物。例如用HCl进行氮保护基团(绘制为Boc，但不限于此)的脱保护(A.Isidro-Llobet等人,Chem.Rev.,2009,109,2455-2504)，得到胺3。在步骤3中用乙基乙二酰氯酯酰化(J.Med.Chem.60(16)第6942-6990页)，产生结构4的化合物。酯(绘制为乙酯，但不限于此)的氨解，得到式I化合物。

在另一个实施方式中，式I化合物可以如以下方案9所示来制备。

方案9：式I化合物的合成

在步骤1中，将方案9中所述的化合物5用乙基乙二酰氯酯酰化(J.Med.Chem.60(16)第6942-6990页)，获得具有通式结构6的化合物。例如用HCl进行氮保护基团(绘制为Boc，但不限于此)的脱保护(A.Isidro-Llobet等人,Chem.Rev.,2009,109,2455-2504)，得到胺7。在步骤3中，使用文献(A.El-Faham,F.Albericio,Chem.Rev.2011,111,6557-6602)中已知的方法，例如用HATU进行酰胺偶联，产生结构8的化合物。酯(绘制为乙酯，但不限于此)的氨解，得到式I化合物。

在另一个实施方式中，式I化合物可以如以下方案10所示来制备。

方案10：式I化合物的合成

在步骤1中，将方案10中所述的化合物9用乙基乙二酰氯酯酰化(J.Med.Chem.60(16)第6942-6990页)，获得具有通式结构10的化合物。酯(绘制为乙酯，但不限于此)的氨解，产生结构11的化合物。例如用HCl进行氮保护基团(绘制为Boc，但不限于此)的脱保护(A.Isidro-Llobet等人,Chem.Rev.,2009,109,2455-2504)，得到胺12。在步骤5中，使用文献(A.El-Faham,F.Albericio,Chem.Rev.2011,111,6557-6602)中已知的方法，例如用HATU进行酰胺偶联，产生式I化合物。

在另一个实施方式中，式I化合物可以如以下方案11所示来制备。

方案11：式I化合物的合成

在步骤1中，将方案11中所述的化合物13用乙基乙二酰氯酯酰化(J.Med.Chem.60(16)第6942-6990页)，获得具有通式结构14的化合物。例如用HCl进行氮保护基团(绘制为Boc，但不限于此)的脱保护(A.Isidro-Llobet等人,Chem.Rev.,2009,109,2455-2504)，得到胺15。在步骤3中，使用文献(A.El-Faham,F.Albericio,Chem.Rev.2011,111,6557-6602)中已知的方法，例如用HATU进行酰胺偶联，产生结构16的化合物。用例如氢氧化钠水溶液进行酯(绘制为乙酯，但不限于此)的水解，得到通式结构17的羧酸。在步骤5中，使用文献(A.El-Faham,F.Albericio,Chem.Rev.2011,111,6557-6602)中已知的方法，例如用HATU进行酰胺偶联，产生式I化合物。

在另一个实施方式中，式II化合物可以如以下方案12所示来制备。

方案12：式II化合物的合成

在步骤1中，将方案12中所述的化合物18使用文献(A.El-Faham,F.Albericio,Chem.Rev.2011,111,6557-6602)中已知的方法，例如用HATU酰化，产生结构19的化合物。例如用HCl进行氮保护基团(绘制为Boc，但不限于此)的脱保护(A.Isidro-Llobet等人,Chem.Rev.,2009,109,2455-2504)，得到胺20。在步骤3中用乙基乙二酰氯酯酰化(J.Med.Chem.60(16)第6942-6990页)，产生结构21的化合物。酯(绘制为乙酯，但不限于此)的氨解，得到式II化合物。

在另一个实施方式中，式II化合物可以如以下方案13所示来制备。

方案13：式II化合物的合成

在步骤1中，将方案13中所述的化合物22使用文献(A.El-Faham,F.Albericio,Chem.Rev.2011,111,6557-6602)中已知的方法，例如用HATU酰化，产生结构23的化合物。例如用HCl进行氮保护基团(绘制为Boc，但不限于此)的脱保护(A.Isidro-Llobet等人,Chem.Rev.,2009,109,2455-2504)，得到胺24。在步骤3中用乙基乙二酰氯酯酰化(J.Med.Chem.60(16)第6942-6990页)，产生结构25的化合物。用例如氢氧化钠水溶液进行酯(绘制为乙酯，但不限于此)的水解，得到结构26的酸，所述酸然后可以使用文献(A.El-Faham,F.Albericio,Chem.Rev.2011,111,6557-6602)中已知的方法，例如用HATU进行酰胺化，得到式II化合物。

在另一个实施方式中，式III化合物可以如以下方案14所示来制备。

方案14：式III化合物的合成

在步骤1中，将方案14中所述的化合物27使用文献(A.El-Faham,F.Albericio,Chem.Rev.2011,111,6557-6602)中已知的方法，例如用HATU酰化，产生结构28的化合物。例如用HCl进行氮保护基团(绘制为Boc，但不限于此)的脱保护(A.Isidro-Llobet等人,Chem.Rev.,2009,109,2455-2504)，得到胺29。在步骤3中用乙基乙二酰氯酯酰化(J.Med.Chem.60(16)第6942-6990页)，产生结构30的化合物。酯(绘制为乙酯，但不限于此)的氨解，得到式III化合物。

在另一个实施方式中，式III化合物可以如以下方案15所示来制备。

方案15：式III化合物的合成

在步骤1中，将方案15中所述的化合物31使用文献(A.El-Faham,F.Albericio,Chem.Rev.2011,111,6557-6602)中已知的方法，例如用HATU酰化，产生结构32的化合物。例如用HCl进行氮保护基团(绘制为Boc，但不限于此)的脱保护(A.Isidro-Llobet等人,Chem.Rev.,2009,109,2455-2504)，得到胺33。在步骤3中用乙基乙二酰氯酯酰化(J.Med.Chem.60(16)第6942-6990页)，产生结构34的化合物。用例如氢氧化钠水溶液进行酯(绘制为乙酯，但不限于此)的水解，得到结构35的酸，所述酸然后可以使用文献(A.El-Faham,F.Albericio,Chem.Rev.2011,111,6557-6602)中已知的方法，例如用HATU进行酰胺化，得到式III化合物。

使用以下缩写：

A–DNA核碱基腺嘌呤

ACN–乙腈

Ar–氩气

BODIPY-FL–4,4-二氟-5,7-二甲基-4-硼杂-3a,4a-二氮杂-s-引达省-3-丙酸(荧光染料)

Boc–叔丁氧基羰基

BnOH–苯甲醇

n-BuLi–正丁基锂

t-BuLi–叔丁基锂

C–DNA核碱基胞嘧啶

CC₅₀–半最大细胞毒性浓度

CO₂–二氧化碳

CuCN–氰化铜(I)

DABCO–1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷

DCE–二氯乙烷

DCM–二氯甲烷

戴斯-马丁高碘烷–1,1,1-三乙酰氧基-1,1-二氢-1,2-苯碘酰-3(1H)-酮

DIPEA–二异丙基乙胺

DIPE–二异丙醚

DMAP–4-二甲氨基吡啶

DMF–N,N-二甲基甲酰胺

DMP–戴斯-马丁高碘烷

DMSO–二甲基亚砜

DNA–脱氧核糖核酸

DPPA–二苯基磷酰叠氮化物

DTT–二硫苏糖醇

EC₅₀–半最大有效浓度

EDCI–N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐

Et₂O–二乙醚

EtOAc–乙酸乙酯

EtOH–乙醇

FL-–用荧光素标记的5'端

NEt₃–三乙胺

ELS–蒸发光散射

g–克

G–DNA核碱基鸟嘌呤

HBV–乙型肝炎病毒

HATU–2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯

HCl–盐酸

HEPES–4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙磺酸

HOAt–1-羟基-7-氮杂苯并三唑

HOBt–1-羟基苯并三唑

HPLC–高效液相色谱

IC₅₀–半最大抑制浓度

LC640-–用荧光染料

Red 640的3'端修饰

LC/MS–液相色谱/质谱

LiAlH₄–氢化铝锂

LiOH–氢氧化锂

Me–甲基

MeOH–甲醇

MeCN–乙腈

MgSO₄–硫酸镁

mg–毫克

min–分钟

mol–摩尔

mmol–毫摩尔

mL–毫升

MTBE–甲基叔丁基醚

N₂–氮气

Na₂CO₃–碳酸钠

NaHCO₃–碳酸氢钠

Na₂SO₄–硫酸钠

NdeI–识别CA^TATG位点的限制酶

NEt₃–三乙胺

NaH–氢化钠

NaOH–氢氧化钠

NH₃–氨

NH₄Cl–氯化铵

NMR–核磁共振

PAGE–聚丙烯酰胺凝胶电泳

PCR–聚合酶链反应

qPCR–定量PCR

Pd/C–碳载钯

-PH–3'端磷酸修饰

pTSA–4-甲苯磺酸

Rt–保留时间

r.t.–室温

sat.–饱和水溶液

SDS–十二烷基硫酸钠

SI–选择性指数(＝CC₅₀/EC₅₀)

STAB–三乙酰氧基硼氢化钠

T–DNA核碱基胸腺嘧啶

TBAF–四丁基氟化铵

TEA–三乙胺

TFA–三氟乙酸

THF–四氢呋喃

TLC–薄层色谱

Tris–三(羟基甲基)-氨基甲烷

XhoI–识别C^TCGAG位点的限制酶

化合物鉴定-NMR

对于许多化合物，使用配备了5mm反向三重共振探头的Bruker DPX400谱仪对于质子而言在400MHz下而对于碳而言在100MHz下运行)，在400MHz、300MHz或500MHz(¹H)和100MHz ¹³C{¹H}下运行的Bruker Advance谱仪(在室温下在CDCl3或DMSO-d6中)，或使用配备有5mm反向三重共振探头的Bruker DRX500谱仪(对于质子而言在500MHz下而对于碳而言在125MHz下运行)，记录NMR谱。氘代溶剂为氯仿-d(氘代氯仿，CDCl₃)或d6-DMSO(氘代DMSO，d6-二甲基亚砜)。化学位移以相对于用作内标的四甲基硅烷(TMS)的百万分率(ppm)报告。起始材料和试剂购自Sigma-Aldrich、Alfa Aesar、Acros和Fluorochem，并且除非另有说明，否则按所提供原样使用。经由薄层色谱(TLC)在预涂铝背板上监测反应。通过紫外光(254nm)和/或利用Ehrlich试剂染色使产物可视化。

使用VapourTec R2+R4进行连续流动实验。使用HPLC Agilent进行HPLC分析。使用60目硅胶和干填充柱进行快速色谱纯化。

化合物鉴定–HPLC/MS

对于许多化合物，使用以下分析方法记录LC-MS谱。

方法A

柱-反相Waters Xselect CSH C18(50x2.1mm,3.5微米)

流速-0.8mL/min，25摄氏度

洗脱剂A–95％乙腈+5％10mM碳酸铵的水溶液(pH 9)

洗脱剂B–10mM碳酸铵水溶液(pH 9)

线性梯度t＝0min 5％A,t＝3.5min 98％A.t＝6min 98％A

方法A2

柱-反相Waters Xselect CSH C18(50x2.1mm,3.5微米)

流速-0.8mL/min，25摄氏度

洗脱剂A–95％乙腈+5％10mM碳酸铵的水溶液(pH 9)

洗脱剂B–10mM碳酸铵水溶液(pH 9)

线性梯度t＝0min 5％A,t＝4.5min 98％A.t＝6min 98％A

方法B

柱-反相Waters Xselect CSH C18(50x2.1mm,3.5微米)

流速-0.8mL/min，35摄氏度

洗脱剂A–0.1％甲酸的乙腈溶液

洗脱剂B–0.1％甲酸的水溶液

线性梯度t＝0min 5％A,t＝3.5min 98％A.t＝6min 98％A

方法B2

柱-反相Waters Xselect CSH C18(50x2.1mm,3.5微米)

流速-0.8mL/min，40摄氏度

洗脱剂A–0.1％甲酸的乙腈溶液

洗脱剂B–0.1％甲酸的水溶液

线性梯度t＝0min 5％A,t＝4.5min 98％A.t＝6min 98％A

方法C

柱-反相Waters Xselect CSH C18(50x2.1mm,3.5微米)

流速-1mL/min，35摄氏度

洗脱剂A–0.1％甲酸的乙腈溶液

洗脱剂B–0.1％甲酸的水溶液

线性梯度t＝0min 5％A,t＝1.6min 98％A.t＝3min 98％A

方法D

柱-Phenomenex Gemini NX C18(50x2.0mm,3.0微米)

流速-0.8mL/min，35摄氏度

洗脱剂A–95％乙腈+5％10mM碳酸氢铵的水溶液

洗脱剂B–10mM碳酸氢铵的水溶液pH＝9.0

线性梯度t＝0min 5％A,t＝3.5min 98％A.t＝6min 98％A

方法E

柱-Phenomenex Gemini NX C18(50x2.0mm,3.0微米)

流速–0.8mL/min，25摄氏度

洗脱剂A–95％乙腈+5％10mM碳酸氢铵的水溶液

洗脱剂B–10mM碳酸氢铵的水溶液(pH 9)

线性梯度t＝0min 5％A,t＝3.5min 30％A.t＝7min 98％A,t＝10min 98％A

方法F

柱-Waters XSelect HSS C18(150x4.6mm,3.5微米)

流速–1.0mL/min，25摄氏度

洗脱剂A–0.1％TFA的乙腈溶液

洗脱剂B–0.1％TFA的水溶液

线性梯度t＝0min 2％A,t＝1min 2％A,t＝15min 60％A,t＝20min60％A

方法G

柱-Zorbax SB-C18 1.8μm 4.6x15mm快速离析筒(PN 821975-932)

流速-3mL/min

洗脱剂A–0.1％甲酸的乙腈溶液

洗脱剂B–0.1％甲酸的水溶液

线性梯度t＝0min 0％A,t＝1.8min 100％A

方法H

柱-Waters Xselect CSH C18(50x2.1mm,2.5微米)

流速–0.6mL/min

洗脱剂A–0.1％甲酸的乙腈溶液

洗脱剂B–0.1％甲酸的水溶液

线性梯度t＝0min 5％A,t＝2.0min 98％A,t＝2.7min 98％A

方法J

柱-反相Waters Xselect CSH C18(50x2.1mm,2.5微米)

流速–0.6mL/min

洗脱剂A–100％乙腈

洗脱剂B–10mM碳酸氢铵的水溶液(pH 7.9)

线性梯度t＝0min 5％A,t＝2.0min 98％A,t＝2.7min 98％A

方法K

柱-Luna 3u 100A C18(2)100x2.0mm

流速-0.5mL/min

洗脱剂A-H₂O

洗脱剂B-MeCN

线性梯度-0-3min 95至50％水；3-13min 50至5％水

方法L

柱-Zorbax Eclipse C18 100x4.6mm,3.5μm

流速-1mL/min

洗脱剂A-H₂O

洗脱剂B-MeOH

线性梯度50％MeOH至100％，在10'内，保持5

吲哚-2-甲酸的合成

4-氯-7-氟-1H-吲哚-2-甲酸的制备

步骤A：将化合物1·HCl(17.0g,86.2mmol)、乙酸钠(7.10g,86.6mmol)和丙酮酸乙酯(10.0g,86.1mmol)于乙醇(100mL)中的混合物回流1h，冷却至室温，并用水(100mL)稀释。通过过滤收集沉淀的固体并干燥，获得20.0g(77.3mmol,90％)作为顺式和反式异构体混合物的化合物2。

步骤B：将前一步骤中获得的化合物2(20.0g,77.3mmol)和BF₃·Et₂O(50.0g,352mmol)于乙酸(125mL)中的混合物回流18h并减压蒸发。将残余物与水(100mL)混合并用MTBE(2×50mL)萃取。合并的有机萃取物经Na₂SO₄干燥并减压蒸发。残余物通过硅胶柱色谱法纯化，得到3.00g(12.4mmol,16％)的化合物3。

步骤C：将化合物3(3.00g,12.4mmol)和NaOH(0.500g,12.5mmol)于乙醇(30mL)中的混合物回流30min并减压蒸发。将残余物与水(30mL)混合并滤出不溶物。滤液用浓盐酸(5mL)酸化。通过过滤收集沉淀的固体，用水(3mL)洗涤并干燥，获得2.41g(11.3mmol,91％)的4-氯-7-氟-1H-吲哚-2-甲酸。

Rt(方法G)1.24min,m/z 212[M-H]^-

7-氟-4-甲基-1H-吲哚-2-甲酸的制备

步骤D：向甲醇钠(21.6g,400mmol)于甲醇(300mL)中的-10℃溶液中滴加化合物4(26.4g,183mmol)和化合物5(59.0g,457mmol)于甲醇(100mL)中的溶液。将反应物质搅拌3h，保持温度低于5℃，然后用冰水淬灭。将所得混合物搅拌10min，过滤并用水洗涤，得到35.0g(156mmol,72％)呈白色固体的化合物6。

步骤E：将前一步骤中获得的化合物6(35.0g,156mmol)于二甲苯(250mL)中的溶液在氩气气氛下回流1h，然后减压蒸发。将残余物从己烷-乙酸乙酯混合物(60:40)中重结晶，得到21.0g(103mmol,60％)的化合物7。

步骤F：向化合物7(21.0g,101mmol)于乙醇(200mL)中的溶液中加入2N氢氧化钠水溶液(47mL)。将混合物在60℃下搅拌2h。蒸发溶剂并且残余物用盐酸水溶液酸化至pH 5-6。将所得沉淀物过滤，用水洗涤并干燥，获得18.0g(93.2mmol,92％)的7-氟-4-甲基-1H-吲哚-2-甲酸。

Rt(方法G)1.12min,m/z 192[M-H]^-

6,7-二氟-1H-吲哚-2-甲酸的制备

步骤G：将化合物8(5.00g,34.7mmol)、乙酸(1mL)和丙酮酸乙酯(5.00g,43.1mmol)于乙醇(20mL)中的混合物回流1h，冷却至室温，并用水(20mL)稀释。通过过滤收集沉淀的固体并干燥，获得5.50g(22.7mmol,66％)作为顺式和反式异构体混合物的化合物9。

步骤H：将前一步骤中获得的化合物9(5.50g,22.7mmol)和BF₃·Et₂O(10.0g,70.5mmol)于乙酸(25mL)中的混合物回流18h并减压蒸发。将残余物与水(30mL)混合并用MTBE(2×30mL)萃取。合并的有机萃取物经Na₂SO₄干燥并减压蒸发。残余物通过硅胶柱色谱法纯化，得到0.460g(2.04mmol,9％)的化合物10。

步骤I：将化合物10(0.450g,2.00mmol)和NaOH(0.100g,2.50mmol)于乙醇(10mL)中的混合物回流30min并减压蒸发。将残余物与水(10mL)混合并滤出不溶物。滤液用浓盐酸(1mL)酸化。通过过滤收集沉淀的固体，用水(3mL)洗涤并干燥，获得0.38g(1.93mmol,95％)的6,7-二氟-1H-吲哚-2-甲酸。

Rt(方法G)1.10min,m/z 196[M-H]^-

4-氰基-1H-吲哚-2-甲酸的制备

步骤J：向搅拌的化合物11(5.00g,19.7mmol)于DMF(50mL)中的溶液中加入CuCN(3.00g,33.5mmol)。将混合物在150℃下搅拌4h。然后将混合物冷却至室温，并加入水(100mL)。所得混合物用乙酸乙酯(4×100mL)萃取。合并的有机萃取物用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥并减压蒸发，得到2.50g(12.5mmol,63％)的化合物12，其纯度足以用于下一步骤。

步骤K：向化合物12(2.50g,12.5mmol)于乙醇(30mL)中的溶液中加入LiOH·H₂O(0.600g,13.0mmol)。将混合物回流10h。减压蒸发溶剂并用水(50mL)稀释残余物。水层用10％盐酸水溶液酸化至pH 6，并且通过过滤收集沉淀的固体。残余物用水洗涤并真空干燥，得到1.20g(6.45mmol,52％)呈白色固体的4-氰基-1H-吲哚-2-甲酸。

Rt(方法G)1.00min,m/z 197[M+H]⁺

4-氰基-7-氟-1H-吲哚-2-甲酸的制备

步骤L：向搅拌的化合物13(5.00g,18.4mmol)于DMF(50mL)中的溶液中加入CuCN(2.80g,31.2mmol)。将混合物在150℃下搅拌4h。然后将混合物冷却至室温，并加入水(100mL)。所得混合物用乙酸乙酯(4×100mL)萃取。合并的有机萃取物用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥并减压蒸发，得到1.50g(6.87mmol,37％)的化合物14，其纯度足以用于下一步骤。

步骤M：向化合物14(1.50g,6.87mmol)于乙醇(20mL)中的溶液中加入LiOH·H₂O(0.400g,9.53mmol)。将混合物回流10h。减压蒸发溶剂并用水(40mL)稀释残余物。水层用10％盐酸水溶液酸化至pH 6.0，并且通过过滤收集沉淀物。残余物用水洗涤并真空干燥，得到0.400g(1.95mmol,28％)呈白色固体的4-氰基-7-氟-1H-吲哚-2-甲酸。

Rt(方法G)1.02min,m/z 203[M-H]^-

4-氰基-5-氟-1H-吲哚-2-甲酸的制备

步骤N：向化合物15(5.00g,19.4mmol)于DMF(50mL)中的溶液中加入NaHCO₃(1.59g,18.9mmol)和碘甲烷(3mL)。将所得混合物在室温下搅拌过夜，然后用水(50mL)稀释并用二乙醚(3×50mL)萃取。合并的有机萃取物经Na₂SO₄干燥，并减压蒸发，获得4.90g(18.0mmol,90％)呈白色固体的化合物16。

步骤O：向搅拌的化合物16(4.80g,17.6mmol)于DMF(50mL)中的溶液中加入CuCN(2.70g,30.1mmol)。将混合物在150℃下搅拌4h。然后将混合物冷却至室温，加入水(100mL)。所得混合物用乙酸乙酯(4×100mL)萃取。合并的有机萃取物用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥并减压蒸发，得到1.40g(6.42mmol,36％)的化合物17，其纯度足以用于下一步骤。

步骤P：向化合物17(1.40g,6.42mmol)于乙醇(20mL)中的溶液中加入LiOH·H₂O(0.350g,8.34mmol)。将混合物回流10h。减压蒸发溶剂并用水(30mL)稀释残余物。水层用10％盐酸水溶液酸化至pH 6.0，并且通过过滤收集沉淀物。残余物用水洗涤并真空干燥，得到0.500g(2.45mmol,38％)呈白色固体的4-氰基-5-氟-1H-吲哚-2-甲酸。

Rt(方法G)1.10min,m/z 203[M-H]^-

4,5,6-三氟-1H-吲哚-2-甲酸的制备

步骤Q：向甲醇钠(23.0g,426mmol)于甲醇(200mL)中的-10℃溶液中滴加化合物18(15.0g,93.7mmol)和化合物5(26.0g,201mmol)于甲醇(100mL)中的溶液。将反应混合物搅拌3h，保持温度低于5℃，然后用冰水淬灭。将所得混合物搅拌10min，并且通过过滤收集沉淀物。固体用水洗涤并干燥，得到12.0g(46.7mmol,72％)呈白色固体的化合物19。

步骤R：将前一步骤中获得的化合物19(12.0g,46.7mmol)于二甲苯(250mL)中的溶液在氩气气氛下回流1h，然后减压蒸发。将残余物从己烷-乙酸乙酯混合物(60:40)中重结晶，得到7.00g(30.5mmol,65％)的化合物20。

步骤S：向化合物20(7.00g,30.5mmol)于乙醇(50mL)中的溶液中加入2N氢氧化钠水溶液(18mL)。将混合物在60℃下搅拌2h。蒸发溶剂并用盐酸水溶液将残余物酸化至pH 5-6。通过过滤收集所得沉淀物，用水洗涤并干燥，获得5.00g(23.2mmol,76％)4,5,6-三氟-1H-吲哚-2-甲酸。

¹H NMR(400MHz,d6-dmso)7.17(1H,s),7.22(1H,dd),12.3(1H,br s),13.3(1H,brs)

4,6,7-三氟-1H-吲哚-2-甲酸的制备

步骤T：向甲醇钠(23.0g,426mmol)于甲醇(200mL)中的-10℃溶液中滴加化合物21(15.0g,90.3mmol)和化合物5(26.0g,201mmol)于甲醇(100mL)中的溶液。将反应混合物搅拌3h，保持温度低于5℃，然后用冰水淬灭。将所得混合物搅拌10min。通过过滤收集沉淀物，用水洗涤并干燥，得到10.0g(38.0mmol,42％)呈白色固体的化合物22。

步骤U：将前一步骤中获得的化合物22(10.0g,38.0mmol)于二甲苯(200mL)中的溶液在氩气气氛下回流1h，然后减压浓缩。将残余物从己烷-乙酸乙酯混合物(60:40)中重结晶，得到6.00g(26.2mmol,69％)的化合物23。

步骤V：向化合物23(7.00g,30.5mmol)于乙醇(40mL)中的溶液中加入2N氢氧化钠水溶液(16mL)。将混合物在60℃下搅拌2h。蒸发溶剂并用盐酸水溶液将残余物酸化至pH 5-6。通过过滤收集所得沉淀物，用水洗涤并干燥，获得4.10g(19.1mmol,62％)的4,6,7-三氟-1H-吲哚-2-甲酸。

Rt(方法G)1.16min,m/z 214[M-H]^-

4-氰基-6-氟-1H-吲哚-2-甲酸的制备

步骤W：向甲醇钠(65.0g,1203mmol)于甲醇(500mL)中的-10℃溶液中滴加化合物24(60.0g,296mmol)和化合物5(85.0g,658mmol)于甲醇(200mL)中的溶液。将反应混合物搅拌3h，保持温度低于5℃，然后用冰水淬灭。将所得混合物搅拌10min。通过过滤收集沉淀物，用水洗涤并干燥，得到45.0g(143mmol,48％)的化合物25。

步骤X：将前一步骤中获得的化合物25(35.0g,111mmol)于二甲苯(250mL)中的溶液在氩气气氛下回流1h，然后减压蒸发。将残余物从己烷-乙酸乙酯混合物(60:40)中重结晶，得到11.0g(38.4mmol,35％)的化合物26。

步骤Y：向搅拌的化合物26(11.0g,38.4mmol)于DMF(20mL)中的溶液中加入CuCN(6.60g,73.7mmol)。将混合物在150℃下搅拌4h。然后将混合物冷却至室温，并加入水(70mL)。混合物用乙酸乙酯(4×50mL)萃取。合并的有机萃取物用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥并减压蒸发，得到2.40g(10.3mmol,27％)的化合物27，其纯度足以用于下一步骤。

步骤Z：向化合物27(2.40g,6.42mmol)于乙醇(30mL)中的溶液中加入LiOH·H₂O(0.600g,14.3mmol)。将混合物回流10h。减压浓缩混合物并用水(50mL)稀释残余物。水层用10％盐酸水溶液酸化至pH 6并通过过滤收集沉淀物。固体用水洗涤并真空干燥，得到1.20g(5.88mmol,57％)呈白色固体的4-氰基-6-氟-1H-吲哚-2-甲酸。

Rt(方法G)1.06min,m/z 203[M-H]^-

4-乙基-1H-吲哚-2-甲酸的制备

步骤AA：在0℃下用10M BH₃的THF溶液(53mL,53.0mmol BH₃)处理化合物28(70.0g,466mmol)于无水THF(500mL)中的溶液。将反应物质在室温下搅拌24h，然后向其中缓慢加入甲醇(150mL)。将所得混合物搅拌45min，并减压蒸发，得到55.0g(404mmol,87％)的化合物29，其纯度足以用于下一步骤。

步骤AB：向化合物29(55.0g,404mmol)于CH₂Cl₂(400mL)中的冷却(0℃)溶液中逐份加入戴斯-马丁高碘烷(177g,417mmol)。在室温下搅拌1h后，将反应混合物用饱和Na₂S₂O₃水溶液(300mL)和饱和NaHCO₃水溶液(500mL)淬灭。混合物用CH₂Cl₂(3×300mL)萃取。合并的有机萃取物用水和盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并浓缩，得到51.0g呈黄色固体的粗制化合物30。

步骤AC：向甲醇钠(107g,1981mmol)于甲醇(600mL)中的-10℃溶液中滴加在前一步骤中获得的化合物30(51.0g)和化合物5(126g,976mmol)于甲醇(300mL)中的溶液。将反应混合物搅拌4h，保持温度低于5℃，然后用冰水淬灭。将所得混合物搅拌10min，并且通过过滤收集沉淀物。固体用水洗涤并干燥，得到35.0g(151mmol,37％，经2个步骤)的化合物31。

步骤AD：将前一步骤中获得的化合物31(35.0g,151mmol)于二甲苯(500mL)中的溶液在氩气气氛下回流1h，然后减压浓缩。将残余物从己烷-乙酸乙酯混合物(60:40)中重结晶，得到21.0g(103mmol,68％)的化合物32。

步骤AE：向化合物32(21.0g,103mmol)于乙醇(200mL)中的溶液中加入2N氢氧化钠水溶液(47mL)。将混合物在60℃下搅拌2h。减压浓缩混合物，并且用盐酸水溶液将残余物酸化至pH 5-6。通过过滤收集沉淀物，用水洗涤并干燥，获得19g(100mmol,97％)的4-乙基-1H-吲哚-2-甲酸。

Rt(方法G)1.20min,m/z 188[M-H]^-

¹H NMR(400MHz,d6-dmso)δ1.25(t,3H),2.88(q,2H),6.86(1H,d),7.08-7.20(2H,m),7.26(1H,d),11.7(1H,br s),12.9(1H,br s)

4-环丙基-1H-吲哚-2-甲酸的制备

步骤AF：向经脱气的化合物33(2.00g,7.80mmol)、环丙基硼酸(0.754g,8.78mmol)、K₃PO₄(5.02g,23.6mmol)、三环己基膦(0.189g,0.675mmol)和水(2.0mL)于甲苯(60.0mL)中的悬浮液中加入乙酸钯(II)(0.076g,0.340mmol)。将反应混合物在100℃搅拌4h。通过用水稀释反应混合物的等分试样并用乙酸乙酯萃取来监测反应进程。将有机层点样在分析硅胶TLC板上并使用254nm紫外光可视化。随着极点的形成，反应进行到完成。起始材料和产物的R_f值分别为0.3和0.2。使反应混合物冷却至室温并通过硅藻土垫过滤。减压浓缩滤液，并且粗产物通过使用230-400目硅胶并用10％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱的快速柱纯化，得到1.10g(5.11mmol,63％)呈棕色液体的化合物34。TLC系统：5％乙酸乙酯的石油醚溶液。

步骤AG：将化合物34(1.10g,5.11mmol)于乙醇(40mL)和2N氢氧化钠水溶液(15mL)中的混合物在60℃下搅拌2h。减压浓缩混合物，并用盐酸水溶液将残余物酸化至pH 5-6。通过过滤收集沉淀物，用水洗涤并干燥，得到1.01g(5.02mmol,92％)的4-环丙基-1H-吲哚-2-甲酸。

Rt(方法G)1.17min,m/z 200[M-H]^-

4-氯-5-氟-1H-吲哚-2-甲酸的制备

步骤AH：向甲醇钠(39.9g,738mmol)于甲醇(300mL)中的-10℃溶液中滴加化合物36(28.8g,182mmol)和叠氮乙酸甲酯(52.1g,404mmol)于甲醇(150mL)中的溶液。将反应混合物搅拌3h，保持温度低于5℃，然后用冰水淬灭。将所得混合物搅拌10min。通过过滤收集沉淀物，用水洗涤并干燥，得到20.0g(78.2mmol,43％)的化合物37。

步骤AI：将化合物37(19.4g,76.0mmol)于二甲苯(250mL)中的溶液在氩气气氛下回流1h，然后减压浓缩。将残余物从己烷-乙酸乙酯(50:50)中重结晶，得到9.00g(39.5mmol,52％)的化合物38。

步骤AJ：向化合物38(8.98g,39.4mmol)于乙醇(100mL)中的溶液中加入2N氢氧化钠水溶液(18mL)。将混合物在60℃下搅拌2h。减压浓缩混合物，并用盐酸水溶液将残余物酸化至pH 5-6。通过过滤收集所得沉淀物，用水洗涤并干燥，获得7.75g(36.3mmol,92％)的4-氯-5-氟-1H-吲哚-2-甲酸。

Rt(方法G)1.15min,m/z 212[M-H]^-

¹H NMR(400MHz,d6-dmso)7.08(1H,s),7.28(1H,dd)7.42(1H,dd),12.2(1H,brs),13.2(1H,br s)

5-氟-4-(1-羟基乙基)-1H-吲哚-2-甲酸的制备

步骤AK：向甲醇钠(50.0g,926mmol)于甲醇(300mL)中的-10℃溶液中滴加化合物39(45.0g,222mmol)和叠氮乙酸甲酯(59.0g,457mmol)于甲醇(100mL)中的溶液。将反应混合物搅拌3h，保持温度低于5℃，然后用冰水淬灭。将所得混合物搅拌10min。通过过滤收集沉淀物，用水洗涤并干燥，得到35.0g(133mmol,60％)呈白色固体的化合物40。

步骤AL：将前一步骤中获得的化合物40(35.0g,133mmol)于二甲苯(250mL)中的溶液在氩气气氛下回流1h，然后减压蒸发。将残余物从己烷-乙酸乙酯(60:40)中重结晶，得到21.0g(77.2mmol,58％)的化合物41。

步骤AM：在氮气下向经脱气的化合物41(4.00g,14.7mmol)和三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡烷(5.50g,15.2mmol)于甲苯(50mL)中的溶液中加入双(三苯基膦)钯(II)二氯化物(1.16g,1.65mmol)。将反应混合物在60℃下搅拌20h。将反应混合物冷却至室温并过滤。减压浓缩滤液，并且残余物通过硅胶色谱法纯化，得到2.50g(9.50mmol,65％)呈浅黄色固体的化合物42。

步骤AN：向化合物42(2.40g,9.12mmol)于1,4-二

烷(30mL)中的溶液中加入2M盐酸(15mL)。将所得混合物在室温下搅拌30min。真空浓缩混合物，并且残余物在乙酸乙酯和水之间分配。有机萃取物用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残余物用5％乙醚的异己烷溶液湿磨并干燥，得到1.80g(7.65mmol,84％)呈白色固体的化合物43。

步骤AO：将化合物43(1.70g,7.23mmol)和NaBH₄(2.50g,66.1mmol)于乙醇(13mL)中的悬浮液回流2h，然后冷却至室温，并过滤。减压浓缩滤液并将残余物溶解在乙酸乙酯中。溶液用1N盐酸和盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，并减压蒸发，得到1.60g(6.74mmol,93％)呈无色油状物的化合物44。

步骤AP：向化合物44(1.50g,6.32mmol)于甲醇(40mL)中的溶液中加入2N NaOH水溶液(10mL)。将混合物在60℃下搅拌2h。减压浓缩混合物，并且残余物用10％盐酸酸化至pH5-6。通过过滤收集沉淀物，用水(3×15mL)洗涤并干燥，获得1.30g(5.82mmol,92％)的5-氟-4-(1-羟基乙基)-1H-吲哚-2-甲酸。

Rt(方法G)1.00min,m/z 222[M-H]^-

4-乙基-5-氟-1H-吲哚-2-甲酸的制备

步骤AQ：在氮气下向化合物41(4.00g,14.7mmol)于无水DMF(10mL)中的加热(90℃)溶液中加入三正丁基(乙烯基)锡(3.60g,11.4mmol)和Pd(PPh₃)₂Cl₂(0.301g,0.757mmol)。将所得混合物在90℃下搅拌1h。然后将混合物冷却至室温并通过硅胶柱色谱法(60-80％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化，得到2.20g(10.0mmol,68％)呈黄色固体的化合物45。

步骤AR：将化合物45(1.50g,6.84mmol)和Pd/C(0.300g,10重量％)于甲醇(20mL)中的混合物在氢气气氛下在室温下搅拌16h。将混合物过滤，然后减压浓缩，得到1.45g(6.55mmol,96％)的化合物46。

步骤AS：向化合物46(1.40g,6.33mmol)于甲醇(40mL)中的溶液中加入2N NaOH水溶液(10mL)。将混合物在60℃下搅拌2h。真空浓缩混合物，然后用10％盐酸将残余物酸化至pH 5-6。通过过滤收集沉淀物，用水(3×15mL)洗涤并干燥，获得1.20g(5.79mmol,91％)目标化合物4-乙基-5-氟-1H-吲哚-2-甲酸。

Rt(方法G)1.33min,m/z 206[M-H]^-

4-乙基-6-氟-1H-吲哚-2-甲酸的制备

步骤AT：向甲醇钠(50.0g,926mmol)于甲醇(300mL)中的-10℃溶液中滴加化合物47(45.0g,202mmol)和叠氮乙酸甲酯(59.0g,457mmol)于甲醇(100mL)中的溶液。将反应混合物搅拌3h，保持温度低于5℃，然后用冰水淬灭。将所得混合物搅拌10min。通过过滤收集沉淀物，用水洗涤并干燥，得到38.5g(128mmol,63％)呈白色固体的化合物48。

步骤AU：将前一步骤中获得的化合物48(38.5g,128mmol)于二甲苯(250mL)中的溶液在氩气气氛下回流1h，然后减压浓缩。将残余物从己烷-乙酸乙酯(60:40)中重结晶，得到18.0g(67.3mmol,53％)的化合物49。

步骤AV：在氮气下，向化合物49(4.00g,14.7mmol)于无水DMF(10mL)中的加热(90℃)溶液中加入三正丁基(乙烯基)锡(3.60g,11.4mmol)和Pd(PPh₃)₂Cl₂(0.301g,0.757mmol)。将所得混合物在90℃下搅拌1h。然后将混合物冷却至室温并通过硅胶柱色谱法(60-80％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化，得到2.00g(9.12mmol,62％)呈黄色固体的化合物50。

步骤AW：将化合物50(1.50g,6.84mmol)和Pd/C(0.300g,10重量％)于甲醇(20mL)中的混合物在氢气气氛下在室温下搅拌16h。将混合物过滤并浓缩，得到1.40g(6.33mmol,93％)的化合物51。

步骤AX：向化合物51(1.10g,4.97mmol)于甲醇(40mL)中的溶液中加入2N NaOH水溶液(10mL)。将混合物在60℃下搅拌2h。减压浓缩混合物，然后用10％盐酸酸化至pH 5-6。通过过滤收集沉淀物，用水(3×15mL)洗涤并干燥，获得0.900g(4.34mmol,87％)目标化合物4-乙基-6-氟-1H-吲哚-2-甲酸。

Rt(方法G)1.29min,m/z 206[M-H]^-

6-氟-4-(1-羟基乙基)-1H-吲哚-2-甲酸的制备

步骤AY：在氮气下向经脱气的化合物49(4.00g,14.7mmol)和三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡烷(5.50g,15.2mmol)于甲苯(50mL)中的溶液中加入双(三苯基膦)钯(II)二氯化物(1.16g,1.65mmol)。将反应混合物在60℃下搅拌20h。将反应混合物冷却至室温并过滤。减压浓缩滤液，并且残余物通过硅胶色谱法纯化，得到2.10g(7.98mmol,54％)呈浅黄色固体的化合物52。

步骤AZ：向化合物52(2.10g,7.98mmol)于1,4-二

烷(30mL)中的溶液中加入2M盐酸(15mL)。将所得混合物在室温下搅拌30min。减压浓缩混合物，并且残余物在乙酸乙酯和水之间分配。有机萃取物用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。残余物用5％乙醚的异己烷溶液湿磨并干燥，得到1.70g(7.23mmol,91％)呈白色固体的化合物53。

步骤BA：将化合物53(1.70g,7.23mmol)和NaBH₄(2.50g,66.1mmol)于乙醇(13mL)中的悬浮液回流2h，冷却至室温并过滤。减压浓缩滤液并将残余物溶解在乙酸乙酯中。溶液用1N盐酸和盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩，得到1.60g(6.74mmol,93％)呈无色油状物的化合物54。

步骤BB：向化合物54(1.40g,5.90mmol)于甲醇(40mL)中的溶液中加入2N NaOH水溶液(10mL)。将混合物在60℃下搅拌2h。浓缩混合物，并且残余物用10％盐酸酸化至pH 5-6。通过过滤收集沉淀物，用水(3×15mL)洗涤并干燥，获得1.10g(4.93mmol,48％)目标化合物6-氟-4-(1-羟基乙基)-1H-吲哚-2-甲酸。

Rt(方法G)1.00min,m/z 222[M-H]^-

4-乙基-7-氟-1H-吲哚-2-甲酸的制备

步骤BC：向甲醇钠(50.0g,926mmol)于甲醇(300mL)中的-10℃溶液中滴加化合物55(45.0g,222mmol)和叠氮乙酸甲酯(59.0g,457mmol)于甲醇(100mL)中的溶液。将反应混合物搅拌3h，保持温度低于5℃，然后用冰水淬灭。将所得混合物搅拌10min。通过过滤收集沉淀物，用水洗涤并干燥，得到33.0g(110mmol,50％)呈白色固体的化合物56。

步骤BD：将前一步骤中获得的化合物56(33.0g,110mmol)于二甲苯(250mL)中的溶液在氩气气氛下回流1h，然后减压浓缩。将残余物从己烷-乙酸乙酯(60:40)中重结晶，得到21.5g(79.0mmol,72％)的化合物57。

步骤BE：在氮气下，向化合物57(4.00g,14.7mmol)于无水DMF(10mL)中的加热(90℃)溶液中加入三正丁基(乙烯基)锡(3.60g,11.4mmol)和Pd(PPh₃)₂Cl₂(0.301g,0.757mmol)。将所得混合物在90℃下搅拌1h。将混合物冷却至室温并通过硅胶柱色谱法(60-80％EtOAc的己烷溶液)纯化。将产物的合并产物级分浓缩，用水(3×100mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥并浓缩，得到1.80g(8.21mmol,56％)呈黄色固体的化合物58。

步骤BF：将化合物58(1.50g,6.84mmol)和Pd/C(0.300g,10重量％)于甲醇(20mL)中的混合物在氢气气氛下在室温下搅拌16h。将混合物过滤并浓缩，得到1.25g(5.65mmol,83％)的化合物59。

步骤BG：向化合物59(1.40g,6.33mmol)于甲醇(40mL)中的溶液中加入2N NaOH水溶液(10mL)。将混合物在60℃下搅拌2h。减压浓缩混合物，并用10％盐酸将残余物酸化至pH5-6。通过过滤收集沉淀物，用水(3×15mL)洗涤并干燥，获得1.25g(6.03mmol,95％)目标化合物4-乙基-7-氟-1H-吲哚-2-甲酸。

Rt(方法G)1.27min,m/z 206[M-H]^-

7-氟-4-(1-羟基乙基)-1H-吲哚-2-甲酸的制备

步骤BH：在氮气下向经脱气的化合物57(4.00g,14.7mmol)和三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡烷(5.50g,15.2mmol)于甲苯(50mL)中的溶液中加入双(三苯基膦)钯(II)二氯化物(1.16g,1.65mmol)。将反应混合物在60℃下搅拌20h。将混合物冷却至室温并过滤。减压浓缩滤液，并且残余物通过硅胶色谱法纯化，得到2.70g(10.3mmol,70％)呈浅黄色固体的化合物60。

步骤BI：向化合物60(2.40g,9.12mmol)于1,4-二

烷(30mL)中的溶液中加入2M盐酸(15mL)。将混合物在室温下搅拌30min。蒸发大多数溶剂并将残余物在乙酸乙酯和水之间分配。合并的有机萃取物用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。残余物用5％乙醚的异己烷溶液湿磨并干燥，得到1.90g(8.08mmol,86％)呈白色固体的化合物61。

步骤BJ：将化合物61(1.70g,7.23mmol)和NaBH₄(2.50g,66.1mmol)于乙醇(13mL)中的悬浮液回流2h，冷却至室温并过滤。减压蒸发滤液，并且将残余物溶解在乙酸乙酯中。溶液用1N盐酸和盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并减压蒸发，得到1.50g(6.32mmol,87％)呈无色油状物的化合物62。

步骤BK：向化合物62(1.50g,6.32mmol)于甲醇(40mL)中的溶液中加入2N NaOH水溶液(10mL)。将混合物在60℃下搅拌2h。减压浓缩混合物，并用10％盐酸将残余物酸化至pH5-6。通过过滤收集沉淀物，用水(3×15mL)洗涤并干燥，获得1.35g(6.05mmol,96％)目标化合物7-氟-4-(1-羟基乙基)-1H-吲哚-2-甲酸。

Rt(方法G)0.90min,m/z 222[M-H]^-

4-(羟基甲基)-1H-吲哚-2-甲酸的制备

步骤BL：向化合物33(10.0g,39.4mmol)于二

烷(200mL)和水(50mL)的混合物中的溶液中加入乙烯基三氟硼酸钾(11.0g,82.1mmol)、三乙胺(30mL,248mmol)和Pd(dppf)Cl₂(1.0g,1.37mmol)。将混合物在80℃下搅拌48h。真空浓缩混合物，并将残余物溶解在乙酸乙酯中。将溶液用水洗涤并减压浓缩。所得物质通过硅胶柱色谱法纯化，得到2.50g(12.4mmol,38％)的化合物63。

步骤BM：向化合物63(2.50g,12.4mmol)、丙酮(200mL)和水(40mL)的混合物中加入OsO₄(0.100g,0.393mmol)和NaIO₄(13.4g,62.6mmol)。反应在室温下搅拌10h。蒸馏掉丙酮并且剩余的水溶液用二氯甲烷萃取。有机层用饱和NaHCO₃溶液(2×50mL)和盐水(2×50mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩，获得1.50g(7.40mmol,60％)的化合物64。

步骤BN：向化合物64(1.50g,7.38mmol)于THF/甲醇混合物(100mL)中的冷却(0℃)溶液中加入NaBH₄(0.491g,13.0mmol)。将反应混合物在室温下搅拌12h。然后将混合物冷却至0℃，用2N盐酸(40mL)处理并浓缩。残余物用乙酸乙酯萃取。有机萃取物用水洗涤，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩，获得1.00g(4.87mmol,65％)的化合物65，其纯度足以用于下一步骤。

步骤BO：向前一步骤中获得的化合物65(1.00g,4.87mmol)于THF(50mL)中的溶液中加入1N LiOH水溶液(9mL)。将所得混合物在室温下搅拌48h，然后浓缩并用1N NaHSO₄水溶液(9mL)稀释。混合物用乙酸乙酯萃取。有机萃取物经Na₂SO₄干燥，并减压浓缩。将残余物从MTBE中重结晶，获得0.250g(1.30mmol,27％)目标化合物4-(羟基甲基)-1H-吲哚-2-甲酸。

Rt(方法G)0.98min,m/z 190[M-H]^-

4-(2-羟基丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酸的制备

步骤BP和BQ：在氩气下向经脱气的化合物33(1.00g,3.94mmol)和三丁基-(1-乙氧基乙烯基)锡烷(1.58g,4.37mmol)于DMF(25mL)中的溶液中加入双(三苯基膦)钯(II)二氯化物(0.100g,0.142mmol)。在室温下搅拌反应混合物直至TLC显示反应完成(约7天)。减压浓缩混合物，并且残余物在乙酸乙酯和水之间分配。有机层通过硅胶塞过滤，经MgSO4干燥，并减压浓缩。将所得黑色油状物溶解在甲醇(100mL)中，用5N盐酸(100mL)处理，并在室温下搅拌过夜。浓缩混合物并将残余物溶解在乙酸乙酯中。用水洗涤溶液，经Na₂SO₄干燥，并减压浓缩。粗产物通过硅胶柱色谱法纯化，得到0.500g(2.30mmol,58％)的化合物67。

步骤BR：向化合物67(1.00g,4.60mmol)于THF(50mL)中的溶液中加入1N LiOH水溶液(7mL)。将所得混合物在室温下搅拌48h，然后减压浓缩并用1N NaHSO4水溶液(7mL)稀释。混合物用乙酸乙酯萃取。有机萃取物经MgSO₄干燥，并减压浓缩。将残余物从MTBE中重结晶，获得0.900g(4.43mmol,96％)的化合物68。

步骤BS：在氩气下向化合物68(0.900g,4.43mmol)于THF(50mL)中的冷却(0℃)溶液中加入MeMgCl(16mL)于己烷中的1N溶液。将所得混合物在室温下搅拌48h。混合物用1NNaHSO₄小心地淬灭并用乙酸乙酯萃取。有机萃取物经Na₂SO₄干燥，并减压浓缩。将残余物从MTBE中重结晶，获得0.250g(1.14mmol,26％)目标化合物4-(2-羟基丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酸。

Rt(方法G)0.99min,m/z 202[M-H]^-

4-(1-羟基乙基)-1H-吲哚-2-甲酸的制备

步骤BS：向化合物67(1.00g,4.60mmol)于THF/甲醇混合物(50mL)中的冷却(0℃)溶液中加入NaBH₄(0.385g,10.2mmol)。在室温下搅拌反应混合物12h。将混合物冷却至0℃，用2N盐酸(20mL)处理并浓缩。残余物用乙酸乙酯萃取。有机萃取物用水洗涤，经Na₂SO₄干燥，并减压蒸发，获得0.800g(3.65mmol,79％)的化合物69，其纯度足以用于下一步骤。

步骤BT：向前一步骤中获得的化合物69(0.800g,3.65mmol)于THF(50mL)中的溶液中加入1N LiOH水溶液(6mL)。将所得混合物在室温下搅拌48h，然后浓缩并用1N NaHSO₄水溶液(6mL)稀释。混合物用乙酸乙酯萃取。有机萃取物经MgSO₄干燥并减压浓缩。将残余物从MTBE中重结晶，获得0.300g(1.46mmol,40％)目标化合物4-(1-羟基乙基)-1H-吲哚-2-甲酸。

Rt(方法G)0.82min,m/z 204[M-H]^-

4-(丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酸的制备

步骤BU：向甲醇钠(10.0g,185mmol)于甲醇(150mL)中的-10℃溶液中滴加化合物70(15.0g,101mmol)和叠氮乙酸甲酯(12.0g,104mmol)于甲醇(100mL)中的溶液。将反应混合物搅拌3h，保持温度低于5℃，然后用冰水淬灭。将所得混合物搅拌10min。然后通过过滤收集沉淀物，用水洗涤并干燥，得到7.00g(23.3mmol,23％)呈白色固体的化合物71。

步骤BV：将前一步骤中获得的化合物71(7.00g,23.3mmol)于二甲苯(200mL)中的溶液在氩气气氛下回流1h，然后减压浓缩。将残余物从己烷-乙酸乙酯(60:40)中重结晶，得到3.50g(16.1mmol,69％)的化合物72。

步骤BW：向化合物72(3.50g,16.1mmol)于甲醇(100mL)中的溶液中加入2N NaOH水溶液(40mL)。将混合物在60℃下搅拌2h。减压浓缩混合物，然后用10％盐酸将残余物酸化至pH 5-6。通过过滤收集沉淀物，用水(3×50mL)洗涤并干燥，获得2.70g(13.3mmol,83％)目标化合物4-(丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酸。

Rt(方法G)1.32min,m/z 202[M-H]^-

4-乙烯基-1H-吲哚-2-甲酸的制备

步骤BX：向化合物63(0.900g,4.47mmol)于THF(50mL)中的溶液中加入1N LiOH水溶液(8mL)。将所得混合物在室温下搅拌48h，然后减压浓缩并用1N NaHSO₄水溶液(8mL)稀释。混合物用乙酸乙酯萃取。有机萃取物经MgSO₄干燥并减压浓缩。将残余物从MTBE中重结晶，获得0.500g(2.67mmol,59％)目标化合物4-乙烯基-1H-吲哚-2-甲酸。

Rt(方法G)1.14min,m/z 186[M-H]^-

4-乙炔基-1H-吲哚-2-甲酸的制备

步骤BY：在氩气下向化合物33(1.00g,3.94mmol)于THF(50mL)中的溶液中加入TMS-乙炔(0.68mL,4.80mmol)、CuI(0.076g,0.399mmol)、三乙胺(2.80mL,20.0mmol)和Pd(dppf)Cl₂(0.100g,0.137mmol)。将混合物在60℃下搅拌直至TLC显示反应完成(约5天)。减压浓缩混合物，并将残余物溶解在乙酸乙酯中。溶液用水洗涤，经Na₂SO₄干燥，并减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法纯化，得到0.600g(2.14mmol,56％)的化合物73。

步骤BZ：向化合物73(0.840g,3.10mmol)于THF(50mL)中的溶液中加入1N LiOH水溶液(7mL)。将所得混合物在室温下搅拌48h，然后减压浓缩并用1N NaHSO₄水溶液(7mL)稀释。混合物用乙酸乙酯萃取。有机萃取物经MgSO₄干燥并减压浓缩。将残余物从MTBE中重结晶，获得0.400g(2.17mmol,70％)目标化合物4-乙炔基-1H-吲哚-2-甲酸。

Rt(方法G)1.12min,m/z 184[M-H]^-

4-(1,1-二氟乙基)-1H-吲哚-2-甲酸的制备

步骤CA：向2-溴苯乙酮(63.0g,317mmol)、水(0.5mL)和二氯甲烷(100mL)的混合物中加入三氟硫基吗啉(121mL,992mmol)。所得混合物在室温下搅拌28天。然后将反应混合物倒入饱和NaHCO₃水溶液(1000mL)中并用乙酸乙酯(2×500mL)萃取。有机层经Na₂SO₄干燥并减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法纯化，得到16.8g(76.0mmol,12％)的化合物74。

步骤CB：在Ar下，经30min向化合物74(16.8g,76.0mmol)于THF(300mL)中的冷却(-85℃)溶液中加入2.5M n-BuLi的己烷(36.5mL,91.5mmol)溶液。将所得混合物在-85℃下搅拌1h。然后加入DMF(8.80mL,114mmol)(保持温度低于-80℃)并将反应再搅拌45min。反应用饱和NH₄Cl水溶液(100mL)淬灭并用水(600mL)稀释。所得混合物用乙酸乙酯(2×500mL)萃取。合并的有机萃取物经Na₂SO₄干燥，并减压浓缩，获得12.5g(73.6mmol,97％)的化合物75(其纯度足以用于下一步骤)。

步骤CC：在Ar下向化合物75(12.5g,73.5mmol)、乙醇(500mL)和叠氮乙酸乙酯(28.5g,221mmol)的冷却(-30℃)混合物中逐份加入新鲜制备的甲醇钠溶液(通过混合Na(5.00g,217mmol)和甲醇(100mL)而制备)(保持温度低于-25℃)。将反应混合物升温至15℃并搅拌12h。将所得混合物倒入饱和NH₄Cl水溶液(2500mL)中并搅拌20min。通过过滤收集沉淀物，用水洗涤并干燥，获得10.0g(35.6mmol,51％)的化合物76。

步骤CD：将化合物76(10.0g,35.6mmol)于二甲苯(500mL)中的溶液回流直至气体逸出停止(约2h)，然后减压浓缩。所得的橙色油状物用己烷/乙酸乙酯(5:1)湿磨，通过过滤收集并干燥，获得1.53g(6.04mmol,17％)的化合物77。

步骤CE：向化合物77(1.53g,6.04mmol)于THF/水9:1混合物(100mL)中的溶液中加入LiOH·H₂O(0.590g,14.1mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。蒸发挥发物并将残余物与水(50mL)和1N盐酸(10mL)混合。混合物用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。合并的有机萃取物经Na₂SO₄干燥，并减压浓缩。粗产物通过硅胶柱色谱法纯化，得到0.340g(1.33mmol,24％)的4-(1,1-二氟乙基)-1H-吲哚-2-甲酸。

Rt(方法G)1.16min,m/z 224[M-H]^-

4-(三甲基甲硅烷基)-1H-吲哚-2-甲酸的制备

步骤CF：在Ar下向4-溴-1H-吲哚(5.00g,25.5mmol)于THF(100mL)中的冷却(-78℃)溶液中加入2.5M n-BuLi的己烷(23mL,57.5mmol)溶液。将所得混合物搅拌30min。加入TMSCl(16mL,126mmol)并将反应混合物升温至室温。1h后，混合物用MTBE(250mL)稀释，用水(2×200mL)和盐水(200mL)洗涤，然后经Na₂SO₄干燥，并减压浓缩。残余物在甲醇(100mL)中回流1h。然后蒸馏掉溶剂，获得3.60g(19.0mmol,74％)的化合物78。

步骤CG：在Ar下向化合物78(1.50g,7.92mmol)于THF(50mL)中的冷却(-78℃)溶液中加入2.5M n-BuLi的己烷(3.8mL,9.5mmol)溶液。将所得混合物搅拌20min。然后将CO₂(2L)鼓泡通过混合物10min，并将反应混合物升温至室温。蒸发挥发物并将残余物溶解在THF(50mL)中。将溶液冷却至-78℃，并加入1.7M t-BuLi溶液(5.6mL，9.50mmol)。将混合物加热至-30℃，然后再次冷却至-78℃。将CO₂(2L)鼓泡通过溶液10min。使所得溶液缓慢升温至室温，然后减压浓缩。将残余物溶解在水(50mL)中，用MTBE(2×50mL)洗涤，然后酸化至pH4，并用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。有机萃取物用水(2×50mL)和盐水(50mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，并减压蒸发。粗产物用正己烷洗涤并干燥，获得1.24g(5.31mmol,67％)目标化合物4-(三甲基甲硅烷基)-1H-吲哚-2-甲酸。

Rt(方法G)1.47min,m/z 232[M-H]^-

6-氯-5-氟-1H-吲哚-2-甲酸的制备

步骤CH：向(3-氯-4-氟苯基)肼(80.0g,498mmol)于乙醇(200mL)中的溶液中加入丙酮酸乙酯(58.0g,499mmol)。将混合物回流1h，然后减压浓缩，并用水(300mL)稀释。通过过滤收集固体，然后干燥，获得122g(472mmol,95％)的化合物79。

步骤CI：将化合物79(122g,472mmol)和pTSA(81.5g,473mmol)于甲苯(500mL)中的悬浮液回流48h，然后冷却至室温。通过过滤收集沉淀物并通过从甲苯中分步结晶来纯化，获得4.00g(16.6mmol,4％)的化合物80。

步骤CJ：向化合物80(4.00g,16.6mmol)于乙醇(30mL)中的回流溶液中加入NaOH(0.660g,16.5mmol)。将混合物回流1h，然后减压浓缩。残余物用温水(80℃,50mL)湿磨，并且溶液用浓盐酸酸化(pH 2)。通过过滤收集沉淀物，用水(2×10mL)洗涤并干燥，获得3.18g(14.9mmol,90％)目标化合物6-氯-5-氟-1H-吲哚-2-甲酸。

Rt(方法G)1.23min,m/z 212[M-H]^-

4-(二氟甲基)-6-氟-1H-吲哚-2-甲酸的制备

步骤CK：向甲醇钠(50.0g,926mmol)于甲醇(300mL)中的-10℃溶液中滴加2-溴-4-氟苯甲醛(222mmol)和叠氮乙酸甲酯(59.0g,457mmol)于甲醇(100mL)中的溶液。将反应混合物搅拌3h，保持温度低于5℃，然后用冰水淬灭。将所得混合物搅拌10min，并通过过滤收集固体。用水洗涤所述固体，得到呈白色固体的化合物81(62％产率)。

步骤CL：将化合物81(133mmol)于二甲苯(250mL)中的溶液在氩气气氛下回流1h，然后减压浓缩。将残余物从己烷-乙酸乙酯混合物(60:40)中重结晶，得到化合物82(58％产率)。

步骤CM：在氮气下向化合物82(14.7mmol)于无水DMF(10mL)中的加热(90℃)溶液中加入三正丁基(乙烯基)锡(3.60g,11.4mmol)和Pd(PPh3)2Cl2(0.301g,0.757mmol)并且将所得混合物在90℃下搅拌1h。将混合物冷却至室温并通过硅胶柱色谱法(60-80％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化。将合并的产物级分浓缩，用水(3×100mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，并减压浓缩，得到呈黄色固体的化合物83(60％产率)。

步骤CN：向化合物83(12.4mmol)、丙酮(200mL)和水(40mL)的混合物中加入OsO₄(0.100g,0.393mmol)和NaIO₄(13.4g,62.6mmol)并将反应在室温下搅拌10h。蒸馏掉丙酮并用二氯甲烷萃取水溶液。合并的有机层用饱和NaHCO₃溶液(2×50mL)和盐水(2×50mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩，得到化合物84(33％产率)。

步骤CO：向化合物84(11.0mmol)于二氯甲烷(50mL)中的溶液中加入三氟硫基吗啉(4.10mL,33.6mmol)。搅拌所得混合物直至等分试样的NMR显示反应完成(2-5天)。将反应混合物滴加至冷的饱和NaHCO₃溶液(1000mL)中。所得混合物用乙酸乙酯萃取。有机层经MgSO₄干燥并浓缩。残余物通过柱色谱法纯化，得到呈黄色固体的化合物85(48％产率)。

步骤CP：向化合物85(4.50mmol)于THF(50mL)中的溶液中加入1N LiOH水溶液(8mL)。将所得混合物在室温下搅拌48h，然后减压浓缩并用1N NaHSO₄水溶液(8mL)稀释。所得混合物用乙酸乙酯萃取。有机萃取物经MgSO₄干燥并减压浓缩。将残余物从MTBE中重结晶，获得4-(二氟甲基)-6-氟-1H-吲哚-2-甲酸(87％)。

Rt(方法G)1.22min,m/z 228[M-H]^-

4-(二氟甲基)-7-氟-1H-吲哚-2-甲酸的制备

按照关于4-(二氟甲基)-6-氟-1H-吲哚-2-甲酸所述，从2-溴-5-氟苯甲醛起始来制备(2.5％总产率)。

Rt(方法G)1.13min,m/z 228[M-H]^-

4-(二氟甲基)-1H-吲哚-2-甲酸的制备

按照关于4-(二氟甲基)-6-氟-1H-吲哚-2-甲酸所述，从4-溴-1H-吲哚-2-甲酸起始来制备(11％总产率)。

Rt(方法G)1.17min,m/z 210[M-H]^-

4-(1,1-二氟乙基)-6-氟-1H-吲哚-2-甲酸的制备

步骤CQ：在氮气下向2-溴-5-氟苯甲腈(10.0g,48.5mmol)于无水四氢呋喃(100mL)中的溶液中加入甲基溴化镁(3.2M于乙醚中的溶液，19mL,60.0mmol)。将所得混合物加热回流4h。然后将反应混合物冷却，倒入2N盐酸(100mL)中，并用甲醇(100mL)稀释。除去有机溶剂并沉淀出粗产物。反应混合物用乙酸乙酯萃取，经MgSO₄干燥并浓缩。残余物通过柱色谱法(庚烷/二氯甲烷)纯化，得到4.88g(21.9mmol,45％)呈粉红色油状物的化合物86。

步骤CR：在室温下向化合物86(110mmol)于二氯甲烷(50mL)中的溶液中加入三氟硫基吗啉(41mL,336mmol)和几滴水。所得混合物在室温下搅拌48天；每7天添加一份额外的三氟硫基吗啉(41mL,336mmol)。反应完成后，将混合物小心地滴加到冷的饱和NaHCO₃水溶液中。产物用乙酸乙酯萃取，并且有机萃取物经MgSO₄干燥并浓缩。残余物通过柱色谱法纯化，得到呈无色液体的87(37％产率)。

步骤CS：向化合物87(21.0mmol)于THF(150mL)中的冷却(-80℃)溶液中缓慢加入2.5M n-BuLi的己烷溶液(10.0mL，25.0mmol n-BuLi)。将混合物搅拌1h，然后加入DMF(2.62mL,33.8mmol)并将混合物再搅拌1h。反应用饱和NH₄Cl水溶液(250mL)淬灭并用Et₂O(3×150mL)萃取。有机层经Na₂SO₄干燥并减压浓缩。残余物通过硅胶色谱法(乙酸乙酯/己烷1:9)纯化，得到化合物88(52％产率)。

步骤CT：向甲醇钠(50.0g,926mmol)于甲醇(300mL)中的-10℃溶液中滴加化合物88(222mmol)和叠氮乙酸甲酯(59.0g,457mmol)于甲醇(100mL)中的溶液。将反应混合物搅拌3h，保持温度低于5℃，然后用冰水淬灭。将所得混合物搅拌10min。通过过滤收集获得的固体，并用水洗涤，得到呈白色固体的化合物89(66％产率)。

步骤CU：将化合物89(120mmol)于二甲苯(250mL)中的溶液在氩气气氛下回流1h，然后减压浓缩。将残余物从己烷-乙酸乙酯中重结晶，得到化合物90(70％产率)。

步骤CV：向化合物90(4.40mmol)于THF(50mL)中的溶液中加入1N LiOH水溶液(8mL)。将所得混合物在室温下搅拌48h，然后减压浓缩并用1N NaHSO₄水溶液(8mL)稀释。所得残余物用乙酸乙酯萃取。有机萃取物经MgSO₄干燥并减压浓缩。将残余物从MTBE中重结晶，获得目标化合物4-(1,1-二氟乙基)-6-氟-1H-吲哚-2-甲酸(95％产率)。

Rt(方法G)1.26min,m/z 242[M-H]^-

4-(1,1-二氟乙基)-7-氟-1H-吲哚-2-甲酸的制备

按照关于4-(1,1-二氟乙基)-6-氟-1H-吲哚-2-甲酸所述，从2-溴-4-氟苯乙酮起始来制备(3.6％总产率)。

Rt(方法G)1.23min,m/z 242[M-H]^-

吲哚嗪-2-甲酸的合成

1-氰基吲哚嗪-2-甲酸的合成

步骤1：1-氰基吲哚嗪-2-甲酸乙酯

将2-(吡啶-2-基)乙腈(2.42g,20.51mmol)和3-溴-2-氧代丙酸乙酯(2.0g,10.26mmol)在丙酮(50mL)中混合并回流5h。将混合物冷却，除去沉淀的固体，并浓缩滤液。将残余物用水(50ml)湿磨，搅拌1h，并且通过过滤收集产物，得到呈棕色固体的1-氰基吲哚嗪-2-甲酸乙酯(1.9g,8.87mmol,86.5％产率)。

步骤2：1-氰基吲哚嗪-2-甲酸

向1-氰基吲哚嗪-2-甲酸乙酯(400.44mg,1.87mmol)于THF/H₂O(3mL/3mL)中的悬浮液中加入氢氧化锂一水合物(313.77mg,7.48mmol)。将混合物在室温下搅拌10h。浓缩混合物；将残余物溶解在水(10ml)中并用10％HCl水溶液酸化至pH 3。通过过滤收集沉淀的固体并干燥，得到呈棕色固体的1-氰基吲哚嗪-2-甲酸(237.0mg,1.27mmol,68.1％产率)。

Rt(方法G)1.29分钟,m/z 215[M+H]⁺

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ6.98(t,J＝6.8Hz,1H),7.25(dd,J＝9.1,6.7Hz,1H),7.64(d,J＝9.1Hz,1H),8.21(s,1H),8.51(d,J＝7.0Hz,1H),13.10(br.s,1H)。

8-(三氟甲基)吲哚嗪-2-甲酸的合成

步骤1：2-{羟基[3-(三氟甲基)吡啶-2-基]甲基}丙-2-烯酸甲酯

向3-(三氟甲基)吡啶-2-甲醛(5.1g,29.12mmol)和丙-2-烯酸甲酯(7.52g,87.37mmol,7.92mL)于二

烷/H₂O(1/1v/v,150mL)中的溶液中加入1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(3.27g,29.12mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。然后将反应混合物用500mL H₂O稀释并用MTBE(300mL)萃取。有机相用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩，得到呈棕色油状物的2-羟基[3-(三氟甲基)吡啶-2-基]甲基丙-2-烯酸甲酯(6.1g,23.35mmol,80.2％产率)。

步骤2：2-[(乙酰氧基)[3-(三氟甲基)吡啶-2-基]甲基]丙-2-烯酸甲酯

将2-羟基[3-(三氟甲基)吡啶-2-基]甲基丙-2-烯酸甲酯(5.9g,22.59mmol)溶解在乙酸酐(57.65g,564.75mmol,53.38mL)中并在100℃下加热2h。减压浓缩反应混合物，残余物用MTBE(80mL)湿磨并且用NaHCO₃饱和水溶液50mL淬灭溶液。分离有机相，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩，得到6g棕色液体，其为2-[(乙酰氧基)[3-(三氟甲基)吡啶-2-基]甲基]丙-2-烯酸甲酯(6.0g,50.0％纯度,9.89mmol,43.8％产率)和环化吲哚嗪的～1/1混合物，如¹H NMR所示。该混合物无需进一步纯化即可用于下一步骤。

步骤3：8-(三氟甲基)吲哚嗪-2-甲酸甲酯

将2-[(乙酰氧基)[3-(三氟甲基)吡啶-2-基]甲基]丙-2-烯酸甲酯(6.0g,19.79mmol)于100mL二甲苯中的溶液加热回流过夜。冷却至室温后，反应混合物用MTBE(200mL)稀释并用Na₂CO₃、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩，得到呈灰白色结晶固体的8-(三氟甲基)吲哚嗪-2-甲酸甲酯(4.67g,19.2mmol,97％产率)。

步骤4：8-(三氟甲基)吲哚嗪-2-甲酸

向8-(三氟甲基)吲哚嗪-2-甲酸甲酯(230.0mg,945.79μmol)于甲醇(15mL)中的溶液中加入氢氧化钠(113.63mg,2.84mmol)于H₂O(5mL)中的溶液。所得混合物在室温下搅拌过夜。减压浓缩反应混合物并且将残余物用H₂O(50mL)湿磨。所得溶液用HCl 5N酸化至pH～2并用MTBE(30mL)萃取。合并的有机萃取物经Na₂SO₄干燥并真空浓缩，得到呈浅棕色固体的8-(三氟甲基)吲哚嗪-2-甲酸(180.0mg,785.49μmol,82.9％产率)。

Rt(方法G)1.19分钟,m/z 228[M-H]^-,m/z 230[M+H]⁺

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.61(s,1H),8.55(d,J＝7.1Hz,1H),8.24(d,J＝1.6Hz,1H),7.29(d,J＝6.9Hz,1H),6.79(t,J＝7.9Hz,1H),6.76(s,1H)。

8-氟吲哚嗪-2-甲酸的合成

步骤1：2-[(3-氟吡啶-2-基)(羟基)甲基]丙-2-烯酸甲酯

向3-氟吡啶-2-甲醛(500.0mg,4.0mmol)于二

烷(10mL)和H₂O(2mL)中的溶液中加入丙-2-烯酸甲酯(412.89mg,4.8mmol,430.0μl)和1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(224.16mg,2.0mmol)。将混合物在室温下搅拌24小时并且减压除去挥发物。粗残余物在CHCl₃(15mL)和3％H₃PO₄水溶液(20mL)之间分配，并且用CHCl₃(2×10mL)萃取产物。将合并的有机萃取物经Na₂SO₄干燥并减压浓缩，得到呈黄色油状物的2-[(3-氟吡啶-2-基)(羟基)甲基]丙-2-烯酸甲酯(430.0mg,2.04mmol,54.6％产率)。

步骤2：8-氟吲哚嗪-2-甲酸甲酯

将2-[(3-氟吡啶-2-基)(羟基)甲基]丙-2-烯酸甲酯(430.34mg,2.04mmol)和乙酸酐(5.4g,52.9mmol,5.0mL)的混合物在100℃下加热1h，然后140℃保持4小时，然后冷却并浓缩。将残余物溶解在EtOAc中，并且将混合物用饱和NaHCO₃水溶液洗涤，经Na₂SO₄干燥并浓缩。通过快速柱色谱法(己烷-EtOAc 3:2)纯化残余物，得到呈黄色固体的8-氟吲哚嗪-2-甲酸甲酯(260.0mg,1.35mmol,50.4％产率)。

步骤3：8-氟吲哚嗪-2-甲酸

向8-氟吲哚嗪-2-甲酸甲酯(259.87mg,1.35mmol)于MeOH-THF(5ml/5mL)中的溶液中加入10％氢氧化钠水溶液(107.61mg,2.69mmol)。将混合物在65℃下搅拌5h。浓缩反应混合物，并且将残余物溶解在H₂O(10mL)中并用10％HCl水溶液酸化至pH 4。通过过滤收集沉淀物并干燥，得到呈米色固体的8-氟吲哚嗪-2-甲酸(200.0mg,1.12mmol,83％产率)。

Rt(方法G)1.11分钟,m/z 178[M-H]^-,m/z 180[M+H]⁺

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.53(s,1H),8.23–7.99(m,2H),6.79(s,1H),6.72–6.52(m,2H)。

6-氟吲哚嗪-2-甲酸的合成

步骤1：5-氟吡啶-2-甲酸甲酯

向无水MeOH(25mL)的冷却(0℃)溶液中滴加亚硫酰氯(2.53g,21.26mmol)。加入5-氟吡啶-2-甲酸(2.0g,14.18mmol)并将反应混合物在55℃加热5h。将反应混合物冷却至室温并浓缩。残余物用NaHCO₃(20ml饱和水溶液)湿磨并用EtOAc(3×15mL)萃取H₂O相。合并的有机相经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩，得到呈白色固体的5-氟吡啶-2-甲酸甲酯(1.8g,11.6mmol,81.9％产率)。

步骤2：(5-氟吡啶-2-基)甲醇

在Ar下向搅拌的5-氟吡啶-2-甲酸甲酯(1.8g,11.6mmol)于无水DCM(50mL)中的冷却(-60℃)溶液中滴加氢化二异丁基铝(4.13g,29.01mmol,5.29mL)。将反应混合物升温至室温并搅拌过夜。将混合物冷却至-10℃并滴加HCl 1M。将混合物在室温下搅拌1h并分离有机相。用DCM(20mL)萃取H₂O相。合并的有机相经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩，得到呈黄色油状物的(5-氟吡啶-2-基)甲醇(850.0mg,6.69mmol,57.6％产率)。

步骤3：5-氟吡啶-2-甲醛

在室温下向搅拌的(5-氟吡啶-2-基)甲醇(850.0mg,6.69mmol)于无水DCM(15mL)中的溶液中逐份加入1,1,1-三(乙酰氧基)-1,1-二氢-1,2-苯碘酰-3(1H)-酮(2.84g,6.69mmol)。将混合物搅拌2h并冷却至0℃，然后在搅拌下滴加20％NaOH水溶液(1.2g,30.09mmol)。分离有机相，经Na₂SO₄干燥并浓缩，得到呈黄色固体的5-氟吡啶-2-甲醛(300.0mg,2.4mmol,35.9％产率)。

步骤4：2-[(5-氟吡啶-2-基)(羟基)甲基]丙-2-烯酸甲酯

向5-氟吡啶-2-甲醛(299.08mg,2.39mmol)于二

烷(10mL)和H₂O(2mL)中的溶液中加入丙-2-烯酸甲酯(247.0mg,2.87mmol,260.0μl)和1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(134.09mg,1.2mmol)。24小时后，减压除去挥发物并将粗残余物在CHCl₃(15mL)和H₂O(25mL)之间分配。用CHCl₃(2×10mL)萃取产物。将合并的有机萃取物经Na₂SO₄干燥并减压浓缩，得到呈棕色油状物的2-[(5-氟吡啶-2-基)(羟基)甲基]丙-2-烯酸甲酯(410.0mg,1.94mmol,81.2％产率)。

步骤5：6-氟吲哚嗪-2-甲酸甲酯

将2-[(5-氟吡啶-2-基)(羟基)甲基]丙-2-烯酸甲酯(410.0mg,1.94mmol)和乙酸酐(5.4g,52.9mmol,5.0mL)的混合物在100℃下加热2h(通过LCMS检查O-乙酰基中间体的形成)。然后将混合物在140℃下加热15h，冷却并真空浓缩。在室温下将残余物溶解在EtOAc(30mL)中并用NaHCO₃饱和水溶液(40mL)洗涤1h。分离有机相，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱法(己烷-EtOAc 10:1)纯化残余物，得到呈白色固体的6-氟吲哚嗪-2-甲酸甲酯(140.0mg,724.74μmol,37.3％产率)。

步骤6：6-氟吲哚嗪-2-甲酸

向6-氟吲哚嗪-2-甲酸甲酯(140.18mg,725.66μmol)于MeOH/THF/H₂O(4/4/1)中的溶液中加入20％氢氧化钠水溶液(58.05mg,1.45mmol)。将混合物在65℃加热过夜。减压除去溶剂，并且将所得残余物溶解在H₂O中。用1M HCl将溶液酸化至pH 3-4。通过过滤收集沉淀的固体，用H₂O洗涤并溶解在EtOAc-THF(2:1)中。溶液经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩，得到呈米色固体的6-氟吲哚嗪-2-甲酸(105.0mg,586.11μmol,80.8％产率)。

Rt(方法G)1.07分钟,m/z 178[M-H]^-,m/z 180[M+H]⁺

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.57–12.02(m,1H),8.47(s,1H),8.06–7.91(m,1H),7.61–7.44(m,1H),6.91–6.73(m,2H)。

7-氯吲哚嗪-2-甲酸的合成

步骤1：2-[(4-氯吡啶-2-基)(羟基)甲基]丙-2-烯酸甲酯

向4-氯吡啶-2-甲醛(500.0mg,3.53mmol)于二

烷(10mL)和H₂O中的溶液中加入20mL丙-2-烯酸甲酯(364.9mg,4.24mmol,380.0μl)和1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(198.11mg,1.77mmol)。将混合物在室温下搅拌24小时。减压除去挥发物并将粗残余物在CHCl₃和稀磷酸水溶液之间分配。用CHCl₃(2×10mL)萃取产物。将合并的有机萃取物经Na₂SO₄干燥并减压浓缩，得到呈黄色油状物的2-[(4-氯吡啶-2-基)(羟基)甲基]丙-2-烯酸甲酯(430.0mg,1.89mmol,53.5％产率)。

步骤2：2-[(乙酰氧基)(4-氯吡啶-2-基)甲基]丙-2-烯酸甲酯

将2-[(4-氯吡啶-2-基)(羟基)甲基]丙-2-烯酸甲酯(430.0mg,1.89mmol)和乙酸酐(5.4g,52.9mmol,5.0mL)的混合物在100℃下加热1h。将混合物冷却至室温，真空浓缩，并且将残余物在CHCl₃(20mL)和饱和NaHCO₃水溶液(30mL)之间分配。分离有机相；H₂O相另外用CHCl₃(2×5mL)萃取。合并的有机相经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩，得到呈棕色油状物的2-[(乙酰氧基)(4-氯吡啶-2-基)甲基]丙-2-烯酸甲酯(490.0mg,1.82mmol,96.2％产率)，其用于下一步骤中。

步骤3：7-氯吲哚嗪-2-甲酸甲酯

将2-[(乙酰氧基)(4-氯吡啶-2-基)甲基]丙-2-烯酸甲酯(490.02mg,1.82mmol)和乙酸酐(2.16g,21.16mmol,2.0mL)的混合物回流加热3h。将反应混合物冷却，真空浓缩并将残余物溶解在EtOAc(15mL)中。溶液用饱和NaHCO₃水溶液洗涤，然后经Na₂SO₄干燥并浓缩。通过快速柱色谱法(EtOAC-己烷2:3)纯化残余物，得到呈橙色固体的7-氯吲哚嗪-2-甲酸甲酯(215.0mg,1.03mmol,56.4％产率)。

步骤4：7-氯吲哚嗪-2-甲酸

向7-氯吲哚嗪-2-甲酸甲酯(215.0mg,1.03mmol)于MeOH/THF/H₂O(4/4/1)中的溶液中加入20％氢氧化钠水溶液(82.04mg,2.05mmol)。将混合物在80℃下回流过夜。减压除去有机溶剂。将剩余溶液冷却(冰浴，0-5℃)并用1M HCl调节至pH 3-4。将悬浮液搅拌30分钟，然后通过过滤收集产物并干燥，得到呈黄色固体的7-氯吲哚嗪-2-甲酸(160.0mg,817.99μmol,79.8％产率)。

Rt(方法G)1.17分钟,m/z 194/196[M-H]^-,m/z 196/198[M+H]⁺

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.47(s,1H),8.30(d,J＝7.5Hz,1H),8.04(s,1H),7.59(s,1H),6.75–6.57(m,2H)。

6-氯吲哚嗪-2-甲酸的合成

步骤1：2-[(5-氯吡啶-2-基)(羟基)甲基]丙-2-烯酸甲酯

向5-氯吡啶-2-甲醛(1.0g,7.08mmol)于20ml二

烷和H₂O(4mL)中的溶液中加入丙-2-烯酸甲酯(731.5mg,8.5mmol,770.0μl)和1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(397.16mg,3.54mmol)。24小时后减压除去挥发物，并且将粗制混合物在CHCl₃和H₂O之间分配。用CHCl₃(2×10mL)萃取产物。将合并的有机萃取物经Na₂SO₄干燥并减压浓缩，得到呈黄色油状物的2-[(5-氯吡啶-2-基)(羟基)甲基]丙-2-烯酸甲酯(1.48g,6.5mmol,91.8％产率)。

步骤2：6-氯吲哚嗪-2-甲酸甲酯

将2-[(5-氯吡啶-2-基)(羟基)甲基]丙-2-烯酸甲酯(1.48g,6.5mmol)和乙酸酐(16.2g,158.69mmol,15.0mL)的混合物在100℃下加热2h(通过LCMS检查O-乙酰基中间体的形成)。将混合物在140℃加热10h，然后冷却并真空浓缩。将残余物溶解在EtOAc中，加入饱和NaHCO₃水溶液并将混合物在室温下搅拌1h。分离有机相，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。残余物用二氧化硅柱色谱法(己烷-EtOAc 10:1至4:1梯度)纯化，得到呈白色固体的6-氯吲哚嗪-2-甲酸甲酯(400.0mg,1.91mmol,29.3％产率)。

步骤3：6-氯吲哚嗪-2-甲酸

向6-氯吲哚嗪-2-甲酸甲酯(399.75mg,1.91mmol)于MeOH/THF/H₂O(4/4/1)中的溶液中加入20％氢氧化钠水溶液(152.54mg,3.81mmol)。将混合物在65℃加热过夜。减压除去溶剂。将残余物溶解在H₂O中并用1M HCl将溶液调节至pH 3-4。将悬浮液搅拌30分钟，并且通过过滤收集产物并经Na₂SO₄干燥，得到呈米色固体的6-氯吲哚嗪-2-甲酸(305.0mg,1.56mmol,81.8％产率)。

Rt(方法G)1.05分钟,m/z 194/196[M-H]^-,m/z 196/198[M+H]⁺

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.46(s,1H),8.55(s,1H),8.01(s,1H),7.51(d,J＝9.6Hz,1H),6.86–6.70(m,2H)。

7-氯-6-氟吲哚嗪-2-甲酸的合成

步骤1：5-氟-2-甲基吡啶-1-鎓-1-醇负离子

向5-氟-2-甲基吡啶(15.0g,134.99mmol)(1.0当量)于CH₂Cl₂(300mL)中的冷却(5℃)溶液中逐份加入3-氯苯-1-过氧甲酸(34.94g,202.49mmol)(1.5当量)。将所得溶液在室温下搅拌过夜。搅拌16小时后，溶液用碳酸氢钠水溶液洗涤并且用二氯甲烷(3×200mL)再萃取水相。将合并的有机部分干燥并浓缩，得到粗制5-氟-2-甲基吡啶-1-鎓-1-醇负离子(11.0g,93.0％纯度,80.48mmol,59.6％产率)。

步骤2：5-氟-2-甲基-4-硝基吡啶-1-鎓-1-醇负离子

在冰冷却(5℃)和搅拌下，经10min将H₂SO₄(50mL浓)和发烟硝酸(81mL)的混合物滴加到5-氟-2-甲基吡啶-1-鎓-1-醇负离子(11.0g,86.53mmol)于浓硫酸(40mL)中的溶液中。使混合物经1h升温至室温，然后在蒸汽浴上加热2h。冷却后，将溶液倒在冰上并通过加入固体碳酸铵来中和。混合物用CHCl₃(3×35mL)萃取，干燥(Na₂SO₄)并真空浓缩成固体，其用石油醚(60/80)湿磨，得到呈黄色固体的5-氟-2-甲基-4-硝基吡啶-1-鎓-1-醇负离子(8.37g,90.0％纯度,43.77mmol,50.6％产率)。

步骤3：4-氯-5-氟-2-甲基吡啶-1-鎓-1-醇负离子

在Ar下将含三氯氧磷(22.37g,145.91mmol,13.6mL)(3当量)的二氯甲烷(170mL)滴加至冷却(5-10℃)的搅拌的5-氟-2-甲基-4-硝基吡啶-1-氧化物(8.37g,48.64mmol)(1当量)于二氯甲烷(170mL)中的溶液中。室温静置16小时后，将溶液回流4h，冷却并倒在冰(350g)上。将混合物搅拌10min，然后在冷却下使用40％氢氧化钠调节至pH13。分离水相，然后用二氯甲烷萃取。将合并的萃取物干燥(Na₂SO₄)并真空浓缩。所得固体用石油醚(60/80)湿磨，通过过滤收集并干燥，得到4-氯-5-氟-2-甲基吡啶-1-鎓-1-醇负离子(6.72g,97.0％纯度,40.35mmol,83％产率)。

步骤4：(4-氯-5-氟吡啶-2-基)甲醇

经1min向搅拌的4-氯-5-氟-2-甲基吡啶-1-鎓-1-醇负离子(450.0mg,2.79mmol)(1当量)于二氯甲烷(10mL)中的冷却(10-15℃)溶液中滴加2,2,2-三氟乙酸三氟乙酰酯(1.76g,8.36mmol,1.17mL)(3当量)。将溶液升温至室温并放置7天。将其倒在冰上，通过添加K₂CO₃饱和水溶液和40％NaOH水溶液将pH调节至13。分离水层并进一步用二氯甲烷(15mL)萃取，并且合并的有机层经K₂CO₃干燥并浓缩，得到呈红色油状物的粗产物。通过HPLC纯化后获得纯(4-氯-5-氟吡啶-2-基)甲醇(92.0mg,97.0％纯度,552.36μmol,19.8％产率)。

步骤5：4-氯-5-氟吡啶-2-甲醛

向(4-氯-5-氟吡啶-2-基)甲醇(500.0mg,3.09mmol)于DCM(30mL)中的冷却(0℃)溶液中以整份加入1,1,1-三(乙酰氧基)-1,1-二氢-1,2-苯碘酰-3(1H)-酮(1.44g,3.41mmol)。反应完成后(通过¹H NMR监测)，将混合物倒入搅拌的NaHCO₃和Na₂S₂O₃水溶液中并搅拌直至有机相变得透明(约1h)。分离各层并用DCM(3×50mL)萃取水层。合并的有机萃取物用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩，得到4-氯-5-氟吡啶-2-甲醛(400.0mg,90.0％纯度,2.26mmol,72.9％产率)。

步骤6：2-[(4-氯-5-氟吡啶-2-基)(羟基)甲基]丙-2-烯酸甲酯

向4-氯-5-氟吡啶-2-甲醛(1.21g,7.6mmol)于18ml二

烷和H₂O(6mL)中的溶液中加入丙-2-烯酸甲酯(850.0mg,9.87mmol,890.0μl)和1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(76.69mg,683.7μmol)。24小时后，减压除去挥发物，并且残余物在CHCl₃(100mL)和H₂O(30mL)之间分配。用CHCl₃(2×30mL)萃取H₂O层。合并的有机萃取物经Na₂SO₄干燥并减压浓缩，得到呈黄色油状物的2-[(4-氯-5-氟吡啶-2-基)(羟基)甲基]丙-2-烯酸甲酯(1.5g,95.0％纯度,5.8mmol,76.4％产率)。

步骤7：2-[(乙酰氧基)(4-氯-5-氟吡啶-2-基)甲基]丙-2-烯酸甲酯

在配备有磁力搅拌器和回流冷凝器的单颈圆底烧瓶中装入乙酸酐(43.65g,427.54mmol)和2-[(4-氯-5-氟吡啶-2-基)(羟基)甲基]丙-2-烯酸甲酯(1.5g,6.11mmol)。将反应混合物在100℃下搅拌3小时，得到呈Ac₂O溶液形式的2-[(乙酰氧基)(4-氯-5-氟吡啶-2-基)甲基]丙-2-烯酸甲酯(1.5g,95.0％纯度,4.95mmol,81.1％产率)。

步骤8：7-氯-6-氟吲哚嗪-2-甲酸甲酯

将2-[(乙酰氧基)(4-氯-5-氟吡啶-2-基)甲基]丙-2-烯酸甲酯(1.5g,5.21mmol)于Ac₂O中的溶液在N₂下回流加热96小时。将反应混合物冷却至室温，然后倒入冰和饱和NaHCO₃水溶液的混合物中，并搅拌1小时。混合物用乙酸乙酯(3×25mL)萃取。合并的有机萃取物经无水Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。粗产物通过用己烷/乙酸乙酯(3/1)洗脱的硅胶柱色谱法纯化，得到呈白色固体的7-氯-6-氟吲哚嗪-2-甲酸甲酯(770.0mg,98.0％纯度,3.32mmol,63.6％产率)。

步骤9：7-氯-6-氟吲哚嗪-2-甲酸

向7-氯-6-氟吲哚嗪-2-甲酸甲酯(600.0mg,2.64mmol)于MeOH/THF/H₂O(4/4/1)(20mL)中的溶液中加入氢氧化钠(527.13mg,13.18mmol)。将混合物在80℃回流6h。减压除去挥发物。将剩余溶液冷却(0～5℃)并用1M HCl调节至pH 3～4。将悬浮液搅拌30分钟并通过过滤收集产物。干燥滤饼，得到呈黄色固体的7-氯-6-氟吲哚嗪-2-甲酸(440.0mg,98.0％纯度,2.02mmol,76.6％产率)。

Rt(方法G)1.24分钟,m/z 212/214[M-H]^-,m/z 214/216[M+H]⁺

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.56(s,1H),8.69(d,J＝5.6Hz,1H),8.03(s,1H),7.84(d,J＝7.6Hz,1H),6.79(s,1H)。

6,8-二氯吲哚嗪-2-甲酸的合成

步骤1：2-[(3,5-二氯吡啶-2-基)(羟基)甲基]丙-2-烯酸甲酯

向3,5-二氯吡啶-2-甲醛(462.0mg,2.62mmol)和丙-2-烯酸甲酯(677.97mg,7.88mmol,710.0μl)于二

烷/H₂O(1/1v/v)(15mL)中的溶液中加入1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(294.46mg,2.63mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物用H₂O(200mL)稀释并用50mL MTBE萃取。有机相用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩，得到呈棕色油状物的2-[(3,5-二氯吡啶-2-基)(羟基)甲基]丙-2-烯酸甲酯(570.0mg,2.17mmol,82.8％产率)。

步骤2：2-[(乙酰氧基)(3,5-二氯吡啶-2-基)甲基]丙-2-烯酸甲酯

将2-[(3,5-二氯吡啶-2-基)(羟基)甲基]丙-2-烯酸甲酯(570.0mg,2.17mmol)溶解在乙酸酐(5.55g,54.34mmol,5.14mL)中并在100℃下加热2h。减压浓缩反应混合物，将残余物溶于20mL MTBE中并且将所得混合物用饱和NaHCO₃水溶液淬灭。分离有机相，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩，得到呈棕色液体的2-[(乙酰氧基)(3,5-二氯吡啶-2-基)甲基]丙-2-烯酸甲酯(450.0mg,1.48mmol,68.1％产率)。

步骤3：6,8-二氯吲哚嗪-2-甲酸甲酯

将2-[(乙酰氧基)(3,5-二氯吡啶-2-基)甲基]丙-2-烯酸甲酯(440.0mg,1.45mmol)溶解在15mL二甲苯中并回流过夜。将反应混合物冷却至室温，用MTBE(50mL)稀释，用NaHCO₃水溶液(30mL)淬灭，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩，得到呈浅黄色晶体的6,8-二氯吲哚嗪-2-甲酸甲酯(360.0mg,1.47mmol,98.9％产率)。

步骤4：6,8-二氯吲哚嗪-2-甲酸

向6,8-二氯吲哚嗪-2-甲酸甲酯(360.0mg,1.47mmol)于甲醇50(mL)中的溶液中加入氢氧化钠(589.92mg,14.75mmol)于H₂O(10mL)中的溶液。将所得混合物在室温下搅拌过夜。减压浓缩反应混合物并将残余物溶于H₂O(100mL)中。所得溶液用5N HCl酸化至pH～2并用MTBE(2×100mL)萃取。将合并的有机萃取物经Na₂SO₄干燥并真空浓缩，得到呈黄色粉末的6,8-二氯吲哚嗪-2-甲酸(220.0mg,956.32μmol,64.8％产率)。

Rt(方法G)1.29分钟,m/z 228/230[M-H]^-,m/z 230/232[M+H]⁺

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.62(s,1H),8.62(s,1H),8.14(d,J＝1.7Hz,1H),7.15(d,J＝1.5Hz,1H),6.85(s,1H)。

5-甲基吲哚嗪-2-甲酸的合成

步骤1：2-[羟基(6-甲基吡啶-2-基)甲基]丙-2-烯酸甲酯

向6-甲基吡啶-2-甲醛(500.0mg,4.13mmol)于二

烷(10mL)和H₂O(2mL)中的溶液中加入丙-2-烯酸甲酯(426.24mg,4.95mmol,450.0μl)和1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(231.41mg,2.06mmol)。将混合物搅拌24小时，减压除去挥发物并将粗制混合物在CHCl₃和H₂O之间分配。用CHCl₃(2×10mL)萃取产物。将合并的有机萃取物经Na₂SO₄干燥并减压浓缩，得到呈白色固体的2-[羟基(6-甲基吡啶-2-基)甲基]丙-2-烯酸甲酯(580.0mg,2.8mmol,67.8％产率)。

步骤2：5-甲基吲哚嗪-2-甲酸甲酯

将2-[羟基(6-甲基吡啶-2-基)甲基]丙-2-烯酸甲酯(580.46mg,2.8mmol)和乙酸酐(5.4g,52.9mmol,5.0mL)的混合物在100℃下加热3h。将混合物冷却并减压浓缩。将残余物溶解在EtOAc(20mL)中并用饱和NaHCO₃水溶液洗涤。有机相经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。通过快速柱色谱法(己烷-EtOAc 3:1)纯化残余物，得到呈米色固体的5-甲基吲哚嗪-2-甲酸甲酯(350.0mg,1.85mmol,66％产率)。

步骤3：5-甲基吲哚嗪-2-甲酸

向5-甲基吲哚嗪-2-甲酸甲酯(350.05mg,1.85mmol)于MeOH(5mL)中的溶液中加入20％氢氧化钠的H₂O溶液(147.99mg,3.7mmol)。将反应混合物在65℃加热3h。将混合物冷却并浓缩；将残余物溶解在H₂O中并用2M HCl 2M酸化至pH 4。通过过滤收集沉淀的固体并干燥，得到呈灰色固体的5-甲基吲哚嗪-2-甲酸(250.0mg,1.43mmol,77.1％产率)。

Rt(方法G)1.16分钟,m/z 176[M+H]⁺

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.35(s,1H),7.79(s,1H),7.40(d,J＝9.1Hz,1H),6.80(s,1H),6.76(dd,J＝9.3,6.8Hz,1H),6.56(d,J＝6.6Hz,1H),2.52(s,3H)。

1-丙基吲哚嗪-2-甲酸的合成

步骤1：1-甲酰基吲哚嗪-2-甲酸甲酯

将三氯氧磷(14.89g,97.09mmol,9.05mL)(1.7当量)于DMF(300mL)中的溶液在0℃下搅拌1h。向吲哚嗪-2-甲酸甲酯(10.01g,57.11mmol)于无水CH₂Cl₂(1100mL)中的冷却(0℃)搅拌溶液中加入2/3的先前制备的POCl₃于DMF(200ml,1.1当量)中的溶液。在室温下搅拌2h后，用饱和NaHCO₃水溶液淬灭反应混合物。有机层用H₂O(0.5L)洗涤，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩，得到3-甲酰基吲哚嗪-2-甲酸甲酯(8.0g,95.0％纯度,37.4mmol,65.5％产率)，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。

步骤2：1-[(1E)-丙-1-烯-1-基]吲哚嗪-2-甲酸甲酯

在Ar下，向溴化乙基(三苯基)鏻(13.7g,36.91mmol)于无水THF(200mL)中的冷却(-15℃)溶液中缓慢加入n-BuLi(16mL,2.5M于正己烷中)。将混合物加热至室温并搅拌1.5h。然后将3-甲酰基吲哚嗪-2-甲酸甲酯(2.5g,12.3mmol)于无水THF(50mL)中的溶液滴加到所述溶液中，并将反应在室温下再搅拌24h。将反应混合物冷却并通过加入H₂O(200mL)淬灭。加入MTBE(150mL)并将所得混合物在室温下搅拌15min。分离有机层，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩滤液。粗产物通过HPLC纯化，得到3-[(1E)-丙-1-烯-1-基]吲哚嗪-2-甲酸甲酯(500.0mg,95.0％纯度,2.21mmol,17.9％产率)。

步骤3：1-丙基吲哚嗪-2-甲酸甲酯

向3-[(1E)-丙-1-烯-1-基]吲哚嗪-2-甲酸甲酯(150.0mg,696.85μmol)于THF(5mL)中的溶液中加入10％Pd/碳(5％质量)。将混合物在1巴下氢化，然后在室温下搅拌1h(¹H NMR监测)。过滤反应混合物。减压浓缩滤液，得到粗制3-丙基吲哚嗪-2-甲酸甲酯(150.0mg,91.0％纯度,628.27μmol,90.2％产率)，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。

步骤4：1-丙基吲哚嗪-2-甲酸

将3-丙基吲哚嗪-2-甲酸甲酯(399.81mg,1.84mmol)和氢氧化锂一水合物(108.11mg,2.58mmol)在THF:H₂O:CH3OH(v/v 3:1:1,50mL)的混合物中在50℃下搅拌18h。然后减压浓缩反应混合物并用柠檬酸的饱和溶液酸化至pH 4。通过过滤收集产物，用H₂O(3×50mL)洗涤，然后在45℃真空干燥，得到呈黄色固体的3-丙基吲哚嗪-2-甲酸(244.0mg,94.0％纯度,1.13mmol,61.3％产率)。

Rt(方法G)1.32分钟,m/z 204[M+H]⁺

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.17(s,1H),8.11(d,J＝7.1Hz,1H),7.41(d,J＝9.0Hz,1H),6.75–6.67(m,2H),6.63(t,J＝6.4Hz,1H),3.22(t,J＝7.7Hz,2H),1.56(h,J＝7.4Hz,2H),0.89(t,J＝7.4Hz,3H)。

5-氯吲哚嗪-2-甲酸的合成

步骤1：6-氯吡啶甲醛

在氩气流下向冷却(-78℃)、搅拌的6-氯吡啶甲腈(15.0g,108mmol)于二氯甲烷(500mL)中的溶液中加入DIBAL-H(23mL)。将反应混合物搅拌3h，保持温度低于-60℃。然后，将混合物冷却至-78℃，并用H₂O(46mL)淬灭反应。将所得悬浮液加热至室温并用盐酸(约50mL)酸化至pH 4。分离有机层，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，并减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯8:2)纯化，得到4.15g(29.3mmol,27％)的6-氯吡啶甲醛。

步骤2：2-((6-氯吡啶-2-基)(羟基)甲基)丙烯酸甲酯

向6-氯吡啶甲醛(3.15g,22.3mmol)、二

烷(27mL)和H₂O(9mL)的混合物中加入甲基丙烯酸甲酯(2.30g,23.0mmol)和DABCO(0.250g,2.23mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。混合物用H₂O(50mL)稀释并用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。合并的有机萃取物用H₂O和盐水洗涤，然后经Na₂SO₄干燥，并减压蒸发，获得5.00g(22.0mmol,99％)的2-((6-氯吡啶-2-基)(羟基)甲基)丙烯酸甲酯。

步骤3：2-[(乙酰氧基)(6-氯吡啶-2-基)甲基]丙-2-烯酸甲酯

将2-((6-氯吡啶-2-基)(羟基)甲基)丙烯酸甲酯(5.00g,22.0mmol)和乙酸酐(40mL)的混合物在100℃搅拌过夜，冷却至室温，并且无需进一步纯化即可用于下一步骤。

步骤4：5-氯吲哚嗪-2-甲酸甲酯

将上一步骤中获得的2-(乙酰氧基(6-氯吡啶-2-基)甲基)丙烯酸甲酯溶液倒入H₂O(250mL)中并用MTBE(2×70mL)萃取。有机萃取物用H₂O(3×100mL)和NaHCO₃溶液(3×100mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，并减压浓缩。所得固体通过硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯8:2)纯化，得到2.00g(9.54mmol,44％)的化合物5-氯吲哚嗪-2-甲酸甲酯。

步骤5：5-氯吲哚嗪-2-甲酸

向5-氯吲哚嗪-2-甲酸甲酯(1.20g,5.72mmol)、THF(8mL)、甲醇(8mL)和H₂O(4mL)的混合物中加入NaOH(0.275g,6.88mmol)于H₂O(3mL)中的溶液。将混合物在室温下搅拌1h。蒸发挥发物并将残余物与H₂O(10mL)混合。所得溶液用NaHSO₄(3.00g)酸化。通过过滤收集沉淀的固体，用H₂O洗涤并干燥，得到1.10g(5.62mmol,98％)的5-氯吲哚嗪-2-甲酸。

Rt(方法G)1.18分钟,m/z 196[M+H]⁺

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.63(s,1H),7.97(s,1H),7.57(d,J＝9.0Hz,1H),7.04–6.90(m,2H),6.84(t,J＝8.0Hz,1H)。

8-氯吲哚嗪-2-甲酸的合成

步骤1：2-((3-氯吡啶-2-基)(羟基)甲基)丙烯酸甲酯

向3-氯吡啶甲醛(7.10g,50.2mmol)、二

烷(60mL)和H₂O(20mL)的混合物中加入丙烯酸甲酯(5.40mL,59.6mmol)和DABCO(0.340g,3.03mmol。将反应混合物在室温下搅拌过夜。混合物用乙酸乙酯(100mL)和H₂O(50mL)稀释。分离水层并用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。合并的有机萃取物用H₂O和盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩，获得8.00g(35.1mmol,70％)的2-((3-氯吡啶-2-基)(羟基)甲基)丙烯酸甲酯。

步骤2：2-[(乙酰氧基)(3-氯吡啶-2-基)甲基]丙-2-烯酸

将2-((3-氯吡啶-2-基)(羟基)甲基)丙烯酸甲酯(8.00g,35.1mmol)和乙酸酐(100mL)的混合物在100℃下搅拌3h，然后减压浓缩(80℃)。残余物无需进一步纯化即可用于下一步骤。

步骤3：8-氯吲哚嗪-2-甲酸甲酯

将2-(乙酰氧基(3-氯吡啶-2-基)甲基)丙烯酸甲酯与H₂O混合并用MTBE萃取。有机萃取物用饱和NaHCO₃水溶液洗涤，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩，得到5.90g(28.1mmol,经2个步骤后80％)的8-氯吲哚嗪-2-甲酸甲酯。

步骤4：8-氯吲哚嗪-2-甲酸

向8-氯吲哚嗪-2-甲酸甲酯(2.50g,11.9mmol)、THF(8mL)、甲醇(8mL)和H₂O(2mL)的混合物中加入NaOH(1.43g,35.7mmol)于H₂O(7mL)中的溶液。将混合物在室温下搅拌过夜，然后蒸发挥发物并将残余物与H₂O混合。所得浆液用乙酸乙酯洗涤，然后用盐酸酸化。通过过滤收集沉淀物，然后干燥，获得2.00g(10.2mmol,86％)的8-氯吲哚嗪-2-甲酸。

Rt(方法G)1.08分钟,m/z 194[M-H]^-

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.55(s,1H),8.31(d,J＝7.0Hz,1H),8.17(d,J＝1.8Hz,1H),6.97(d,J＝7.1Hz,1H),6.78(s,1H),6.67(t,J＝7.1Hz,1H)。

5-(三氟甲基)吲哚嗪-2-甲酸的合成

步骤1：6-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯

向搅拌的6-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸(8.8g,46.05mmol)于无水MeOH(150mL)中的溶液中小心地加入硫酸(6.77g,69.07mmol,3.76mL)。将所得混合物回流过夜。减压浓缩反应混合物并且将残余物在MTBE(200mL)和饱和NaHCO₃水溶液(200mL)之间分配。有机相用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩，得到呈浅黄色结晶固体的6-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸甲酯(8.0g,39.0mmol,84.7％产率)。

步骤2：[6-(三氟甲基)吡啶-2-基]甲醇

在室温下向搅拌的6-(三氟甲基)吡啶甲酸甲酯(8.0g,39.0mmol)于无水甲苯(200mL)中的溶液中滴加二异丁基氢化铝(16.64g,117.0mmol,112.5mL)。将所得混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用HCl(1M,50mL)溶液淬灭，然后用10％NaOH水溶液碱化直至沉淀物溶解。有机相用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩，得到呈黄色液体的[6-(三氟甲基)吡啶-2-基]甲醇(6.0g,96.0％纯度,32.52mmol,83.4％产率)。

步骤3：6-(三氟甲基)吡啶-2-甲醛

向(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)甲醇(6.0g,33.87mmol)于100mL DCM中的溶液中分几份加入1,1,1-三(乙酰氧基)-1,1-二氢-1,2-苯碘酰-3(1H)-酮(17.24g,40.65mmol)，保持温度低于30℃(H₂O冷却浴)。反应完成后(通过¹H NMR监测)，将混合物倒入搅拌的Na₂CO₃和Na₂S₂O₃水溶液中，并搅拌至有机相变透明(约15min)。分离各层并用DCM(50mL)萃取水层。合并的有机萃取物用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩，得到呈浅棕色液体的6-(三氟甲基)吡啶-2-甲醛(9.0g,33.0％纯度,16.96mmol,50.1％产率)。

步骤4：2-{羟基[6-(三氟甲基)吡啶-2-基]甲基}丙-2-烯酸甲酯

向6-(三氟甲基)吡啶-2-甲醛(3.3g,18.85mmol)和丙-2-烯酸甲酯(4.87g,56.53mmol,5.12mL)于二

烷/H₂O(1/1v/v)(100mL)中的溶液中加入1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(2.11g,18.84mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。混合物然后用H₂O(300mL)稀释并用MTBE(3×100mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩，得到呈棕色油状物的2-羟基[6-(三氟甲基)吡啶-2-基]甲基丙-2-烯酸甲酯(2.7g,10.34mmol,54.9％产率)。

步骤5：2-[(乙酰氧基)[6-(三氟甲基)吡啶-2-基]甲基]丙-2-烯酸甲酯

将2-羟基[6-(三氟甲基)吡啶-2-基]甲基丙-2-烯酸甲酯(2.7g,10.34mmol)溶解在乙酸酐(26.39g,258.46mmol,24.43mL)中并在100℃加热2h。减压浓缩反应混合物，将残余物用100mL MTBE湿磨，并且用饱和NaHCO₃水溶液淬灭所得混合物。分离有机相，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩，得到呈棕色液体的2-[(乙酰氧基)[6-(三氟甲基)吡啶-2-基]甲基]丙-2-烯酸甲酯(3.0g,9.89mmol,95.7％产率)。

步骤6：5-(三氟甲基)吲哚嗪-2-甲酸甲酯

将2-[(乙酰氧基)[6-(三氟甲基)吡啶-2-基]甲基]丙-2-烯酸甲酯(3.0g,9.89mmol)溶解在二甲苯(70mL)中并回流一周。将反应混合物冷却至室温，用MTBE(50mL)稀释，用NaHCO₃水溶液淬灭，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩，得到深棕色油状物，其通过快速色谱法(Companion comb flash；SiO2(120g)，石油醚/MTBE，其中MTBE为0～12％，流速＝85mL/min，Rv＝7CV)纯化，得到呈浅黄色晶体的5-(三氟甲基)吲哚嗪-2-甲酸甲酯(67.0mg,275.51μmol,2.8％产率)。

步骤7：5-(三氟甲基)吲哚嗪-2-甲酸

向5-(三氟甲基)吲哚嗪-2-甲酸甲酯(67.0mg,275.51μmol)于MeOH(4mL)中的溶液中加入氢氧化锂一水合物(12.71mg,302.9μmol)于1mL H₂O中的溶液。将所得混合物在室温下搅拌过夜。减压浓缩反应混合物并将残余物用H₂O(15mL)湿磨。所得溶液用2N HCl酸化至pH～2并用MTBE(4×20mL)萃取。合并的有机萃取物经Na₂SO₄干燥并真空浓缩，得到呈浅黄色固体的5-(三氟甲基)吲哚嗪-2-甲酸(47.0mg,205.1μmol,74.5％产率)。

Rt(方法G)1.10分钟,m/z 230[M+H]⁺

吲哚嗪-2-甲酸的合成

步骤1：2-(羟基(吡啶-2-基)甲基)丙烯酸甲酯

将吡啶-2-甲醛(0.85g,1当量)、丙烯酸甲酯(3当量)溶解在二

烷/H₂O(1/1)的混合物中，并在DABCO(1当量)存在下在室温下搅拌。反应完成后(通过TLC监测)，混合物用MTBE稀释并萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并减压除去溶剂。产物通过柱色谱法纯化，得到2-(羟基(吡啶-2-基)甲基)丙烯酸甲酯(1g,65％产率)。

步骤2：吲哚嗪-2-甲酸甲酯

反应容器装有2-(羟基(吡啶-2-基)甲基)丙烯酸甲酯(0.74g)和乙酸酐。然后向反应混合物中通入Ar并加热回流4小时。将冷却的溶液倒在具有饱和NaHCO₃水溶液的冰上并搅拌1小时，然后用DCM(3×25mL)萃取所得混合物。合并的有机层经Na₂SO₄干燥并减压浓缩。产物通过HPLC纯化，得到吲哚嗪-2-甲酸甲酯(0.2g,30％产率)。

步骤3：吲哚嗪-2-甲酸

将甲酯(0.164g)溶解在MeOH/THF/H₂O(4/4/1)中并加入NaOH(20％水溶液，1.5当量)。所得混合物在80℃下回流12小时。然后将混合物减压浓缩1/2，并将所得溶液在0-5℃下酸化至pH＝3-4(用HCl 1N)。将沉淀物过滤并干燥，得到吲哚嗪-2-甲酸(0.13g,86％产率)。

Rt(方法G)0.91分钟,m/z 160[M-H]^-

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.28(s,1H),8.26(d,J＝7.1Hz,1H),8.01(d,J＝1.6Hz,1H),7.43(d,J＝9.1Hz,1H),6.74(dd,J＝9.1,6.5Hz,1H),6.69(s,1H),6.62(t,J＝6.7Hz,1H)。

8-甲基吲哚嗪-2-甲酸的合成

步骤1：2-[羟基(3-甲基吡啶-2-基)甲基]丙-2-烯酸甲酯

从3-甲基吡啶-2-甲醛开始，按照关于吲哚嗪-2-甲酸所述进行(58％产率)。

步骤2：2-[(乙酰氧基)(3-甲基吡啶-2-基)甲基]丙-2-烯酸甲酯

按照关于吲哚嗪-2-甲酸所述进行(42％产率)

步骤3：8-甲基吲哚嗪-2-甲酸

按照关于吲哚嗪-2-甲酸所述进行(83％产率)

Rt(方法G)1.11分钟,m/z 174[M-H]^-

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.27(s,1H),8.21–8.10(m,1H),8.01(s,1H),6.69(s,1H),6.63–6.49(m,2H),2.33(s,3H)。

1-硝基-吲哚嗪-2-甲酸的合成

步骤1：硝酸丙酯

将硝酸(22.15g,351.46mmol,14.67mL)(2.2当量)缓慢加入(经2-3min)到冷却(冰浴)硫酸(34.47g,351.45mmol,19.15mL)(2.2当量)中。将所得混合物搅拌10min。然后将含丙-1-醇(9.6g,159.75mmol)(1当量)的CH₂Cl₂(150mL)滴加到反应混合物中(在0℃)。反应混合物的温度保持低于5℃。在室温下搅拌18h后，将反应混合物用冰-水(200mL)稀释并加入CH₂Cl₂(300mL)以进行萃取。分离有机层，用H₂O(2×50mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥并减压浓缩(冷水浴～10℃)，得到硝酸丙酯(13.0g,98.0％纯度,121.23mmol,75.9％产率)，其无需额外纯化即可用于下一步骤。

步骤2：2-(硝基甲基)吡啶

向LDA(2.1M于THF中，41mL,1.7当量)于无水THF(250mL)中的冷却(-40℃)溶液中加入2-甲基吡啶(4.72g,50.63mmol,5.0mL)。搅拌5min后，尽可能快地加入含硝酸丙酯(15.96g,151.89mmol)(2.3当量)的50mL THF，同时温度保持低于-40℃。将混合物在-40℃下搅拌1h并且然后在室温下搅拌4h。然后在冷却浴(25-30℃)中浓缩反应混合物并向所得残余物中加入Et₂O。过滤沉淀物，得到粗制硝酸锂。将其溶于水(50mL)中并且在室温下用冰醋酸(10mL)酸化所得溶液。将溶液用氯仿萃取，经Na₂SO₄干燥，然后真空浓缩萃取物。粗产物通过柱色谱法纯化，得到2-(硝基甲基)吡啶(700.0mg,95.0％纯度,4.81mmol,9.5％产率)。

步骤3：1-硝基吲哚嗪-2-甲酸乙酯

向搅拌的2-(硝基甲基)吡啶(220.57mg,1.6mmol)于丙酮(5mL)中的溶液中加入3-溴-2-氧代丙酸乙酯(155.7mg,0.8mmol)。将所得混合物回流2h。蒸发丙酮并且残余物在H₂O(20mL)和CHCl₃(50mL)之间分配。有机层经Na₂SO₄干燥并蒸发，得到1-硝基吲哚嗪-2-甲酸乙酯(150.0mg,91.0％纯度,608.43μmol,76.2％产率)。

步骤4：1-硝基吲哚嗪-2-甲酸

向搅拌的1-硝基吲哚嗪-2-甲酸乙酯(220.0mg,939.34μmol)于MeOH/THF/H₂O(4/4/1)(18mL)中的溶液中加入氢氧化锂一水合物(110.84mg,2.64mmol)。将所得混合物在50℃下搅拌18h。减压除去溶剂。将剩余溶液冷却至0～5℃并用NaHSO₄(水溶液)调节至pH 3～4。将所得悬浮液搅拌30分钟并通过过滤收集产物。将滤饼减压干燥，得到呈黄色固体的1-硝基吲哚嗪-2-甲酸(50.0mg,98.0％纯度,237.69μmol,29.7％产率)。

1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.17(br.s,1H),8.61(d,J＝6.9Hz,1H),8.20(d,J＝9.2Hz,1H),8.04(s,1H),7.61(dd,J＝9.2,6.9Hz,1H),7.19(t,J＝6.9Hz,1H)。

以下实施例说明了本发明某些特定化合物的制备和性质。

实施例1

N-(3-溴苯基)-2-[4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基]-2-氧代乙酰胺

实施例5

2-[4-(7-溴-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基]-N-丁基-2-氧代乙酰胺

实施例6

N-丁基-2-[4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基]-2-氧代乙酰胺

实施例7

2-[4-(7-溴-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基]-N-环戊基-2-氧代乙酰胺

合成方法1

步骤1：向2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸乙酯(50mg,0.15mmol)于EtOH(1mL)中的溶液中加入(四氢呋喃-3-基)甲胺(38uL,0.37mmol)。将混合物升温至80℃持续15h。然后，蒸发反应混合物并通过柱色谱法纯化，得到所需产物(50.6mg,88％产率)。

按照合成方法1制备以下实施例。

实施例4

2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代-N-((四氢呋喃-3-基)甲基)乙酰胺

¹H NMR(500MHz,氯仿-d)δ9.33(s,1H),7.66(m,1H),7.44(m,1H),7.31(m,1H),7.16(m,1H),6.80(m,1H),4.36–4.29(m,2H),4.03(s,4H),3.94–3.87(m,1H),3.85–3.72(m,4H),3.56(m,1H),3.37–3.30(m,2H),2.52(m,1H),2.07(m,1H),1.68–1.58(m,1H)。

GC分析：保留时间＝18.054min，峰面积：99％，方法L；质量(m/z):384.1。

实施例10

2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-(呋喃-3-基甲基)-2-氧代乙酰胺

¹H NMR(500MHz,氯仿-d)δ9.19(s,1H),7.69–7.62(m,2H),7.43(m,1H),7.38(m,1H),7.31(ddd,J＝8.3,7.0,1.1Hz,1H),7.16(ddd,J＝8.1,7.0,1.0Hz,1H),6.79(dd,J＝2.2,0.9Hz,1H),6.34(m,J＝3.2,1.9Hz,1H),6.28(m,1H),4.49(d,J＝5.9Hz,2H),4.37–4.30(m,2H),4.02(s,4H),3.82–3.74(m,2H)。

GC分析：保留时间＝16.553min，峰面积：99％，方法L；质量(m/z):380.1。

实施例11

2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-己基-2-氧代乙酰胺

¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ9.70(s,1H),7.65(dt,J＝8.1,1.0Hz,1H),7.48–7.40(m,2H),7.29(ddd,J＝8.3,7.0,1.2Hz,1H),7.14(ddd,J＝8.0,7.0,1.0Hz,1H),6.78(dd,J＝2.2,0.9Hz,1H),4.35–4.27(m,2H),4.02(s,4H),3.82–3.74(m,2H),3.30(m,2H),1.60–1.48(m,2H),1.30(m,6H),0.92–0.86(m,3H)。

GC分析：保留时间＝16.335min，峰面积：97％，方法L；质量(m/z):384.2。

合成方法2

步骤1：在室温下向哌嗪-1-甲酸叔丁酯(4.0g,21.48mmol)于CH₂Cl₂(45ml)中的溶液中加入NEt₃(4.49ml,32.2mmol)。然后，在0℃下加入含2-氯-2-氧代乙酸乙酯(2.64ml,23.62mmol)的CH₂Cl₂(72ml)并且将所得混合物在室温下搅拌过夜。减压除去溶剂并且将粗制混合物稀释于EtOAc中。加入水并将其用EtOAc(×3)萃取。合并的有机相用饱和NH₄Cl溶液、饱和NaHCO₃溶液、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并且减压除去溶剂，得到4-(2-乙氧基-2-氧代乙酰基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(5.9g,96％产率)。

步骤2：向4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2.95g,10.3mmol)于CH₂Cl₂(47mL)中的溶液中缓慢加入三氟乙酸(15.78mL,206mmol)。在搅拌2h后，减压除去溶剂。将粗制混合物真空浓缩，得到(1H-吲哚-2-基)(哌嗪-1-基)甲酮(1.8g,94％产率)。

步骤3：向1H-吲哚-2-甲酸(1.7g,10.55mmol)于无水THF(65mL)中的溶液中加入CDI)(1.42g,8.76mmol)。将混合物在惰性气氛下在50℃下搅拌1h。然后，加入哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.8g,9.70mmol)并且将所得混合物在惰性气氛下在50℃下搅拌过夜。减压除去溶剂并稀释于EtOAc和饱和NaHCO₃溶液中。用EtOAc(×3)萃取水层。合并的有机相用水、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并减压除去溶剂。然后，用最少量的EtOH稀释粗物质并加水进行结晶，得到呈白色固体的产物沉淀，4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2.70g,73％产率)。

步骤4：向密封管中装入含2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸乙酯(50mg,0.152mmol)和(3-甲基四氢呋喃-3-基)甲胺(26.2mg,0.228mmol)的EtOH(0.5mL)，并且将混合物在80℃下搅拌过夜。然后，减压除去溶剂并且所得残余物通过硅胶快速柱色谱法(0至10％MeOH的CH₂Cl₂溶液，梯度)纯化，得到呈固体的2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-((3-甲基四氢呋喃-3-基)甲基)-2-氧代乙酰胺(40mg,66％产率)(92％纯度，基于HPLC)。

*在使用相应的胺盐酸盐的情况下，需要额外的碱并且在每种情况下对其进行指定。

按照合成方法2制备以下实施例。

实施例12

2-[4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基]-N-[(3-甲基氧杂环戊烷-3-基)甲基]-2-氧代乙酰胺

Rt(方法K)4.73min,m/z 399[M+H]+

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.18(br s,1H),7.67(dq,J＝8.1,1.0Hz,1H),7.57(s,1H),7.44(dq,J＝8.3,0.9Hz,1H),7.31(ddd,J＝8.3,7.0,1.1Hz,1H),7.16(ddd,J＝8.0,7.0,1.0Hz,1H),6.80(dd,J＝2.1,0.9Hz,1H),4.36–4.29(m,2H),4.03(br s,4H),3.95(td,J＝8.5,5.9Hz,1H),3.87(td,J＝8.5,6.6Hz,1H),3.82–3.76(m,2H),3.65(d,J＝8.7Hz,1H),3.42(d,J＝8.7Hz,1H),3.33(dd,J＝6.5,1.4Hz,2H),1.84(ddd,J＝12.5,8.3,6.6Hz,1H),1.70(ddd,J＝12.5,8.3,5.9Hz,1H),1.15(s,3H)。

实施例13

2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-((1-甲氧基环丙基)甲基)-2-氧代乙酰胺

从2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸乙酯(50mg,0.152mmol)、(1-甲氧基环丙基)甲胺盐酸盐(31.3mg,0.228mmol)和三乙胺(32μL,0.228mmol)，按照上述方法2，获得呈固体的2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-((1-甲氧基环丙基)甲基)-2-氧代乙酰胺(24.8mg,43％产率)(93％纯度，基于HPLC)。

Rt(方法K)4.79min,m/z 385[M+H]+

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ9.24(br s,1H),7.66(dd,J＝8.1,1.0Hz,1H),7.64–7.54(m,1H),7.44(dd,J＝8.3,1.0Hz,1H),7.31(ddd,J＝8.3,7.0,1.2Hz,1H),7.16(ddd,J＝8.0,7.0,1.0Hz,1H),6.80(dd,J＝2.1,0.9Hz,1H),4.32–4.24(m,2H),4.02(br s,4H),3.86–3.74(m,2H),3.46(d,J＝5.7Hz,2H),3.31(s,3H),0.90–0.83(m,2H),0.64–0.56(m,2H)。

实施例14

2-[4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基]-2-氧代-N-[(5-氧代吡咯烷-2-基)甲基]乙酰胺

从2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸乙酯(50mg,0.152mmol)和5-(氨基甲基)吡咯烷-2-酮(26mg,0.228mmol)，按照上述方法2，获得呈固体的2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-((1-甲氧基环丙基)甲基)-2-氧代乙酰胺(35.8mg,59％产率)(96％纯度，基于HPLC)。

Rt(方法K)4.28min,m/z 398[M+H]+

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.83(t,J＝5.9Hz,1H),7.68–7.51(m,2H),7.43(dq,J＝8.3,0.9Hz,1H),7.19(ddd,J＝8.2,6.9,1.2Hz,1H),7.05(ddd,J＝8.0,6.9,1.0Hz,1H),6.86(dd,J＝2.3,0.9Hz,1H),3.90–3.72(m,4H),3.68–3.52(m,5H),3.26–3.10(m,2H),2.24–1.99(m,3H),1.80–1.61(m,1H)。

实施例15

2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代-N-(丙-2-炔-1-基)乙酰胺

从2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸乙酯(50mg,0.152mmol)和丙-2-炔-1-胺(12.54mg,0.228mmol)，按照上述方法2，获得呈固体的2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代-N-(丙-2-炔-1-基)乙酰胺(15.2mg,30％产率)(96％纯度，基于HPLC)。

Rt(方法K)4.79min,m/z 339[M+H]+

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ9.19(br s,1H),7.68–7.64(m,1H),7.60–7.52(m,1H),7.47–7.41(m,1H),7.31(ddd,J＝8.2,7.0,1.1Hz,1H),7.16(ddd,J＝8.0,7.0,1.0Hz,1H),6.80(dd,J＝2.2,0.9Hz,1H),4.35–4.30(m,2H),4.10(dd,J＝5.6,2.6Hz,2H),4.02(br s,4H),3.84–3.76(m,2H),2.28(t,J＝2.6Hz,1H)。

实施例16

2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-((1s,4s)-4-羟基环己基)-2-氧代乙酰胺

从2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸乙酯(40mg,0.121mmol)、(1s,4s)-4-氨基环己-1-醇盐酸盐(27.6mg,0.182mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(32μL,0.182mmol)，按照上述方法2，获得呈固体的2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-((1s,4s)-4-羟基环己基)-2-氧代乙酰胺(3.6mg,7％产率)(91％纯度，基于HPLC)。

Rt(方法K)4.42min,m/z 399[M+H]+

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ9.11(br s,1H),7.69(d,J＝8.1Hz,1H),7.46(d,J＝8.3Hz,1H),7.41–7.28(m,2H),7.18(t,J＝7.5Hz,1H),6.83–6.80(m,1H),4.45–4.28(m,2H),4.14–3.92(m,5H),3.92–3.71(m,3H),1.97–1.65(m,8H)。

实施例17

2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-((1r,3r)-3-羟基环丁基)-2-氧代乙酰胺

从2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸乙酯(100mg,0.304mmol)、(1r,3r)-3-氨基环丁-1-醇盐酸盐(56mg,0.455mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(79μL,0.455mmol)，按照上述方法2，获得呈固体的2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-((1r,3r)-3-羟基环丁基)-2-氧代乙酰胺(30mg,27％产率)(98％纯度，基于HPLC)。

Rt(方法K)4.20min,m/z 371[M+H]+

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.62(dd,J＝8.0,1.1Hz,1H),7.44(dd,J＝8.3,0.9Hz,1H),7.23(ddd,J＝8.3,7.0,1.2Hz,1H),7.11–7.00(m,1H),6.87(d,J＝0.9Hz,1H),4.47–4.36(m,2H),3.94(br s,4H),3.77–3.68(m,4H),2.37–2.28(m,4H)。

实施例18

2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-((1-羟基环丙基)甲基)-2-氧代乙酰胺

从2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸乙酯(100mg,0.304mmol)、1-(氨基甲基)环丙-1-醇盐酸盐(56.3mg,0.455mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(79μL,0.455mmol)，按照上述方法2，获得呈固体的2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-((1-羟基环丙基)甲基)-2-氧代乙酰胺(67.7mg,70％产率)(100％纯度，基于HPLC)。

Rt(方法K)4.42min,m/z 371[M+H]+

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ9.17(br s,1H),7.75(br s,1H),7.67(dd,J＝8.1,1.0Hz,1H),7.44(dd,J＝8.3,1.0Hz,1H),7.34–7.28(m,1H),7.16(ddd,J＝8.0,7.0,1.0Hz,1H),6.80(dd,J＝2.2,0.9Hz,1H),4.31(dd,J＝6.5,4.1Hz,2H),4.03(br s,4H),3.80(dd,J＝6.6,4.2Hz,2H),3.46(d,J＝6.0Hz,2H),0.90–0.83(m,2H),0.68–0.59(m,2H)。

实施例19

2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代-N-((2-氧代-1-氮杂螺[3.3]庚-6-基)甲基)乙酰胺

从2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸乙酯(40mg,0.121mmol)和6-(氨基甲基)-1-氮杂螺[3.3]庚-2-酮(25.5mg,0.182mmol)，按照上述方法2，获得呈固体的2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代-N-((2-氧代-1-氮杂螺[3.3]庚-6-基)甲基)乙酰胺(31.5mg,61％产率)(99％纯度，基于HPLC)。

Rt(方法K)4.42min,m/z 424[M+H]+

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ9.20(br s,1H),7.66(dd,J＝8.1,1.0Hz,1H),7.49–7.42(m,2H),7.31(ddd,J＝8.3,7.0,1.1Hz,1H),7.16(ddd,J＝8.0,7.0,0.9Hz,1H),6.80(dd,J＝2.2,0.9Hz,1H),6.04(br s,1H),4.36–4.32(m,2H),4.03(br s,4H),3.81–3.77(m,2H),3.40(dd,J＝7.7,6.3Hz,2H),3.03(d,J＝1.7Hz,2H),2.58–2.48(m,2H),2.48–2.36(m,1H),2.23–2.15(m,2H)。

实施例20

1-((2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酰胺基)甲基)环丁烷-1-甲酰胺

从2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸乙酯(60mg,0.182mmol)、1-(氨基甲基)环丁烷-1-甲酰胺盐酸盐(45mg,0.273mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(48μL,0.273mmol)，按照上述方法2，获得呈固体的1-((2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酰胺基)甲基)环丁烷-1-甲酰胺(22.9mg,31％产率)(95％纯度，基于HPLC)。

Rt(方法K)4.41min,m/z 412[M+H]+

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.60(s,1H),8.62(t,J＝6.1Hz,1H),7.61(d,J＝8.0Hz,1H),7.43(dd,J＝8.2,1.0Hz,1H),7.23–7.15(m,2H),7.05(ddd,J＝8.0,6.9,1.0Hz,1H),6.95(s,1H),6.85(d,J＝1.2Hz,1H),3.80(br s,4H),3.61–3.54(m,4H),3.51(d,J＝6.2Hz,2H),2.22(ddd,J＝11.8,9.3,7.0Hz,2H),1.97–1.64(m,4H)。

实施例21

1-((2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酰胺基)甲基)-3,3-二氟环丁烷-1-甲酰胺

从2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸乙酯(30mg,0.091mmol)、1-(氨基甲基)-3,3-二氟环丁烷-1-甲酰胺盐酸盐(27.4mg,0.137mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(24μL,0.137mmol)，按照上述方法2，获得呈固体的1-((2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酰胺基)甲基)-3,3-二氟环丁烷-1-甲酰胺(15.3mg,38％产率)(93％纯度，基于HPLC)。

Rt(方法K)4.68min,m/z 448[M+H]+

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.61(s,1H),8.87(t,J＝6.2Hz,1H),7.58(dd,J＝8.0,1.0Hz,1H),7.46(s,1H),7.43–7.37(m,1H),7.22–7.13(m,2H),7.02(ddd,J＝8.0,7.0,1.0Hz,1H),6.82(dd,J＝2.2,0.9Hz,1H),3.76(br s,4H),3.56(d,J＝5.9Hz,4H),3.53–3.48(m,2H),2.82(q,J＝13.5Hz,2H),2.63(q,J＝12.8Hz,2H)。

实施例22

1-((2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酰胺基)甲基)-N-甲基环丁烷-1-甲酰胺

从2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸乙酯(100mg,0.304mmol)、1-(氨基甲基)-3,3-二氟环丁烷-1-甲酰胺盐酸盐(81mg,0.455mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(79μL,0.455mmol)，按照上述方法2，获得呈固体的1-((2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酰胺基)甲基)-N-甲基环丁烷-1-甲酰胺(41.9mg,32％产率)(100％纯度，基于HPLC)。

Rt(方法K)4.52min,m/z 426[M+H]+

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ9.43(br s,1H),7.72(t,J＝6.2Hz,1H),7.66(dd,J＝8.0,1.1Hz,1H),7.44(dd,J＝8.3,1.0Hz,1H),7.30(ddd,J＝8.2,6.9,1.1Hz,1H),7.15(ddd,J＝8.0,6.9,1.0Hz,1H),6.79–6.76(m,1H),5.84(br s,1H),4.22–4.15(m,2H),4.00(br s,4H),3.78–3.73(m,2H),3.67(d,J＝6.2Hz,2H),2.83(d,J＝4.8Hz,3H),2.38–2.26(m,2H),2.13–1.86(m,4H)。

合成方法3

步骤1：向冷却(0℃)的搅拌的哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2g,10.74mmol)于MeCN(20mL)中的溶液中加入三乙胺(2.24mL,16mmol)和2-氯-2-氧代乙酸乙酯(1.32mL,12mmol)于MeCN(33mL)中的混合物。将混合物升温至室温并搅拌过夜。将反应混合物浓缩，与水(15mL)混合，并用EtOAc(3×15mL)萃取。合并的有机萃取物用饱和NaHCO₃水溶液洗涤，然后用饱和NaCl水溶液(15mL)洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并浓缩。获得呈橙色/棕色油状物的所需产物，其在静置时自发结晶(2.75g,89％产率)。

步骤2：向密封管中4-(2-乙氧基-2-氧代乙酰基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(746mg,2.61mmol)于EtOH(3mL)中的溶液中加入丁-1-胺(2.58mL,26mmol)。将混合物在80℃下加热15h。通过蒸发除去过量乙醇和过量丁-1-胺，得到呈无色油状物的所需产物(703mg,86％产率)。

步骤3：将三氟乙酸加入到4-(2-乙氧基-2-氧代乙酰基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(817mg,2.85mmol)于DCM中的溶液中并在室温下搅拌直至完成(TLC)(DCM:MeOH:TEA/90:10:1)。通过缓慢加入冰来淬灭反应。将混合物浓缩并通过氧化铝柱色谱法纯化，得到所需产物(382mg,63％产率)。

步骤4：向6-氟-1H-吲哚-2-甲酸(86.6mg,0.48mmol)于无水Me-THF(1mL)中的溶液中加入CDI(86mg,0.53mmol)于Me-THF(1mL)中的溶液。将所得混合物在50℃下搅拌1h。加入含N-丁基-2-氧代-2-(哌嗪-1-基)乙酰胺(119mg,0.56mmol)的Me-THF(1mL)并且将混合物在80℃下搅拌12h。浓缩粗制混合物并通过快速柱色谱法纯化，得到N-丁基-2-[4-(6-氟-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基]-2-氧代乙酰胺(120mg66％产率)

按照合成方法3制备以下实施例。

实施例23

N-丁基-2-(4-(6-氟-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酰胺

GC分析：保留时间＝15.165min，峰面积：100％，方法L；质量(m/z):374.1。

¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ9.21(s,1H),7.42–7.32(m,2H),7.29(m,J＝9.2,2.5,0.7Hz,1H),7.07(td,J＝9.1,2.5Hz,1H),6.75(dd,J＝2.2,0.9Hz,1H),4.40–4.25(m,2H),4.01(s,4H),3.84–3.74(m,2H),3.31(td,J＝7.1,6.1Hz,2H),1.56(m,2H),1.43–1.32(m,2H),0.95(t,J＝7.3Hz,3H)。

实施例24

N-丁基-2-(4-(7-甲基-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酰胺

GC分析：保留时间＝15.567min，峰面积：100％，方法L；质量(m/z):370.3。

¹H NMR(500MHz,氯仿-d)δ9.11(s,1H),7.28(m,1H),7.21(m,1H),6.95(m,1H),6.80(dd,1H),4.37–4.32(m,2H),4.03(s,4H),3.82–3.78(m,2H),3.31(m,2H),2.56(s,3H),1.57–1.52(m,2H),1.38(m,2H),0.95(t,J＝7.3Hz,3H).)。

实施例9

N-丁基-2-(4-(4,6-二氟-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酰胺

GC分析：保留时间＝14.772min，峰面积：100％，方法L；质量(m/z):392.1。

¹H NMR(500MHz,氯仿-d)δ9.38(s,1H),6.92(ddd,J＝8.8,2.4,0.9Hz,1H),6.83(dd,J＝2.3,0.9Hz,1H),6.65(td,J＝10.0,2.0Hz,1H),4.38–4.32(m,2H),4.01(s,4H),3.82–3.77(m,2H),3.31(td,J＝7.2,6.1Hz,2H),1.56(tt,J＝7.8,6.8Hz,2H),1.39(m,2H),0.95(t,J＝7.4Hz,3H).)。

实施例25

N-丁基-2-(4-(7-氟-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酰胺

GC分析：保留时间＝14.979min，峰面积：100％，方法L；质量(m/z):374.1。

¹H NMR(500MHz,氯仿-d)δ9.29(s,1H),7.34(s,1H),7.24–7.19(m,2H),6.87(dd,J＝2.3,0.7Hz,1H),6.85–6.77(m,1H),4.38–4.32(m,2H),4.02(s,4H),3.82–3.77(m,2H),3.31(td,J＝7.1,6.1Hz,2H),1.59–1.51(m,2H),1.43–1.34(m,2H),0.95(t,J＝7.4Hz,3H)。

实施例26

N-丁基-2-(4-(4-氟-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酰胺

GC分析：保留时间＝14.741min，峰面积：100％，方法L；质量(m/z):374.1。

¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ9.44(s,1H),7.42(dt,J＝7.9,0.9Hz,1H),7.35(s,1H),7.06(td,J＝7.9,4.8Hz,1H),7.00(ddd,J＝10.8,7.8,1.0Hz,1H),6.81(dd,J＝3.2,2.2Hz,1H),4.38–4.30(m,2H),4.01(s,4H),3.83–3.75(m,2H),3.31(td,J＝7.1,6.1Hz,2H),1.58–1.50(m,2H),1.43–1.31(m,2H),0.99–0.91(m,3H)。

实施例27

N-丁基-2-(4-(5-氟-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酰胺

从-氟-1H-吲哚-2-甲酸(50mg,0.279mmol)和N-丁基-2-氧代-2-(哌嗪-1-基)乙酰胺(54.8mg,0.257mmol)，按照上述方法3，获得呈固体的N-丁基-2-(4-(5-氟-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酰胺(26.6mg,25％产率)(95％纯度，基于HPLC)。

Rt(方法K)5.32min,m/z 375[M+H]+

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.41(br s,1H),7.36(dd,J＝8.9,4.4Hz,2H),7.29(dd,J＝9.1,2.5Hz,1H),7.06(td,J＝9.1,2.5Hz,1H),6.74(dd,J＝2.2,0.9Hz,1H),4.37–4.27(m,2H),4.01(br s,4H),3.86–3.72(m,2H),3.41–3.23(m,2H),1.61–1.48(m,2H),1.46–1.32(m,2H),0.94(t,J＝7.3Hz,3H)。

合成方法4

向2-[4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基]-2-氧代乙酸乙酯(129mg,0.4mmol)的溶液中加入含2-甲基丙-2-胺的EtOH。将所得混合物回流过夜以提供水解产物。然后蒸发反应混合物并且将残余物与2-甲基丙-2-胺(45.0μl,0.42mmol)、N-乙基-N-异丙基丙-胺(224μl,1.28mmol)一起溶解在Me-THF(2mL)中，并在N₂下在冰上冷却。加入HATU(179mg,0.47mmol)，移去冰浴并将混合物在室温下搅拌12小时。反应混合物用EtOAc(15mL)稀释并用1N HCl、NaHCO₃溶液和盐水洗涤。有机层经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过快速柱色谱法纯化，得到呈白色固体的产物(129mg,85％产率)。

按照合成方法4制备以下实施例。

实施例52

N-叔丁基-2-[4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基]-2-氧代乙酰胺

GC分析：保留时间＝14.338min，峰面积：100％，方法L；质量(m/z):356.1。

¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ9.23(s,1H),7.66(dt,J＝8.1,1.0Hz,1H),7.44(dq,J＝8.3,1.0Hz,1H),7.31(ddd,J＝8.3,7.0,1.2Hz,1H),7.15(ddd,J＝8.0,7.0,1.0Hz,1H),6.79(dd,J＝2.2,0.9Hz,1H),4.31

“4.27(m,2H),4.02(s,4H),3.79

“3.74(m,2H),1.40(s,9H)。

合成方法5

在N₂下向1,3-双(2-异丙基苯基)-4,5-二氢-1H-咪唑-3-鎓-2-化物(1.86mg,6.0μmol)(IMes)于无水Me-THF中的溶液中依序加入2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸乙酯(0.04g,0.12mmol)和2-氨基乙-1-醇(11μL,0.18mmol)。通过TLC和HPLC-MS分析监测反应混合物，指示在50℃下5h后完全转化。在旋转蒸发仪上减压除去挥发物，并且所得残余物通过快速柱色谱法纯化，得到呈白色固体的所需产物(18mg,38％产率)。

按照合成方法5制备以下实施例。

实施例3

2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-(2-羟基乙基)-2-氧代乙酰胺

HPLC分析：保留时间＝6.585min，峰面积：98％，方法L；质量(m/z):345.1[M+H]⁺343.0[M-H]^-。

¹H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.63(m,1H),7.44(m,1H),7.23(m,1H),7.10–7.05(m,1H),6.88(m,1H),3.95(s,4H),3.83–3.78(m,2H),3.77–3.72(m,2H),3.66(t,2H),3.41(t,2H)。

实施例2

(R)-2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-(2-羟基丙基)-2-氧代乙酰胺

HPLC分析：保留时间＝7.007min，峰面积：99％，方法L；质量(m/z):359.1[M+H]⁺357.1[M-H]^-。

¹H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.63(m,J＝8.0Hz,1H),7.45(m,J＝8.2Hz,1H),7.26–7.21(m,1H),7.08(m,J＝7.0Hz,1H),6.88(m,1H),3.95(s,4H),3.91–3.87(m,1H),3.83–3.78(m,2H),3.77–3.72(m,2H),3.22(dd,J＝13.5,7.2Hz,2H),1.19(d,J＝6.3Hz,3H)。

实施例28

2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-(2-羟基丙基)-2-氧代乙酰胺

HPLC分析：保留时间＝6.845min，峰面积：100％，方法L；质量(m/z):359.1[M+H]⁺357.1[M-H]^-。

¹H NMR(500MHz,甲醇-d4)δ7.63(dd,J＝8.1,1.2Hz,1H),7.47–7.41(m,1H),7.23(ddd,J＝8.2,7.0,1.2Hz,1H),7.08(ddd,J＝8.0,6.9,1.0Hz,1H),6.90–6.86(m,1H),3.94(s,4H),3.89(dd,J＝6.6,4.5Hz,1H),3.83–3.78(m,2H),3.78–3.72(m,2H),3.35(d,J＝2.9Hz,1H),3.26–3.19(m,1H),1.19(d,J＝6.3Hz,3H)。

实施例29

2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-(4-羟基丁基)-2-氧代乙酰胺

HPLC分析：保留时间＝7.133min，峰面积：95％，方法L；质量(m/z):373.0[M+H]⁺407.0[M+Cl]^-。

¹H NMR(300MHz,甲醇-d4)δ7.62(d,J＝8.1Hz,1H),7.44(d,J＝8.3Hz,1H),7.27–7.17(m,2H),7.07(t,J＝7.5Hz,1H),6.87(s,1H),3.94(s,4H),3.74(q,J＝6.4,4.5Hz,4H),3.58(q,J＝5.7Hz,2H),3.21-3.31(m,2H),1.74–1.48(m,4H)。

实施例30

2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-((1-羟基环丁基)甲基)-2-氧代乙酰胺

从2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸乙酯(50mg,0.152mmol)和1-(氨基甲基)环丁-1-醇(23mg,0.228mmol)，按照上述方法5，获得呈固体的2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-((1-羟基环丁基)甲基)-2-氧代乙酰胺(50mg,86％产率)(100％纯度，基于HPLC)。

Rt(方法K)4.57min,m/z 385[M+H]+

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.14(br s,1H),7.67(d,J＝8.0Hz,2H),7.44(dd,J＝8.3,1.0Hz,1H),7.31(ddd,J＝8.3,7.0,1.1Hz,1H),7.16(ddd,J＝8.0,7.0,1.0Hz,1H),6.80(dd,J＝2.2,0.9Hz,1H),4.37–4.22(m,2H),4.02(br s,4H),3.87–3.71(m,2H),3.51(d,J＝6.1Hz,2H),2.13–1.99(m,4H),1.85–1.70(m,1H),1.67–1.52(m,1H)。

实施例31

2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-((1-(羟基甲基)环丙基)甲基)-2-氧代乙酰胺

从2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸乙酯(50mg,0.152mmol)和(1-(氨基甲基)环丙基)甲醇(23mg,0.228mmol)，按照上述方法5，获得呈固体的2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-((1-(羟基甲基)环丙基)甲基)-2-氧代乙酰胺(37mg,64％产率)(99％纯度，基于HPLC)。

Rt(方法K)4.47min,m/z 385[M+H]+

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.30(br s,1H),7.87(br s,1H),7.66(dd,J＝8.0,1.0Hz,1H),7.44(dd,J＝8.3,0.9Hz,1H),7.31(ddd,J＝8.3,7.0,1.2Hz,1H),7.16(ddd,J＝8.0,7.0,1.0Hz,1H),6.80–6.71(m,1H),4.32–4.27(m,2H),4.03(br s,4H),3.82–3.77(m,2H),3.43(s,2H),3.32(d,J＝6.3Hz,2H),0.56–0.49(m,4H)。

实施例32

2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-(2-羟基-2-甲基丙基)-2-氧代乙酰胺

从2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸乙酯(50mg,0.152mmol)和1-氨基-2-甲基丙-2-醇(20.3mg,0.228mmol)，按照上述方法5，获得呈固体的2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-(2-羟基-2-甲基丙基)-2-氧代乙酰胺(56.5mg,44％产率)(100％纯度，基于HPLC)。

Rt(方法K)4.41min,m/z 373[M+H]+

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ9.19(br s,1H),7.71–7.58(m,2H),7.44(dd,J＝8.3,1.0Hz,1H),7.31(ddd,J＝8.2,7.0,1.2Hz,1H),7.16(ddd,J＝8.0,7.0,1.0Hz,1H),6.80(dd,J＝2.1,0.9Hz,1H),4.35–4.24(m,2H),4.03(br s,4H),3.86–3.76(m,2H),3.33(d,J＝6.4Hz,2H),1.27(s,6H)。

实施例33

2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-((1r,4r)-4-羟基环己基)-2-氧代乙酰胺

从2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸乙酯(50mg,0.152mmol)和(1r,4r)-4-氨基环己-1-醇(26mg,0.228mmol)，按照上述方法5，获得呈固体的2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-((1r,4r)-4-羟基环己基)-2-氧代乙酰胺(13mg,22％产率)(95％纯度，基于HPLC)。

Rt(方法K)4.34min,m/z 399[M+H]+

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ9.32(br s,1H),7.68(dd,J＝8.1,1.1Hz,1H),7.45(dd,J＝8.3,1.0Hz,1H),7.32(ddd,J＝8.3,7.0,1.2Hz,1H),7.26–7.21(m,1H),7.17(ddd,J＝8.0,6.9,1.0Hz,1H),6.81(d,J＝2.3Hz,1H),4.42–4.27(m,2H),4.04(br s,4H),3.86–3.77(m,2H),3.76–3.60(m,2H),2.04(d,J＝11.6Hz,4H),1.57–1.19(m,4H)。

合成方法6

步骤4：向1,3-双(2-异丙基苯基)-4,5-二氢-1H-咪唑-3-鎓-2-化物(IMes)(2.33mg,7.59μmol)于无水2-Me-THF(1.2mL)中的溶液中加入2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸乙酯(50mg,0.152mmol)(参见合成方法2)和(1R,2R)-2-氨基环己-1-醇(26.2mg,0.228mmol)。将混合物在50℃下搅拌过夜。减压除去溶剂并且所得残余物通过硅胶快速柱色谱法(0至10％MeOH的CH₂Cl₂溶液，梯度)纯化，得到呈固体的2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-((1R,2R)-2-羟基环己基)-2-氧代乙酰胺(35.6mg,59％产率)(100％纯度，基于HPLC)。

按照合成方法6制备以下实施例。

实施例34

N-[(1S,2S)-2-羟基环己基]-2-[4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基]-2-氧代乙酰胺

Rt(方法K)4.68min,m/z 399[M+H]+

¹H NMR(500MHz,,CDCl₃)δ9.17(br s,1H),7.67(dd,J＝8.1,1.1Hz,1H),7.44(dd,J＝8.3,1.0Hz,1H),7.40–7.34(m,1H),7.31(ddd,J＝8.2,7.0,1.2Hz,1H),7.16(ddd,J＝8.0,7.0,1.0Hz,1H),6.80(dd,J＝2.2,0.9Hz,1H),4.32(dd,J＝6.4,4.1Hz,2H),4.02(brs,4H),3.83–3.73(m,2H),3.70–3.60(m,1H),3.43(td,J＝10.0,4.5Hz,1H),2.12–1.97(m,2H),1.84–1.57(m,2H),1.48–1.16(m,4H)。

实施例35

2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代-N-(四氢呋喃-3-基)乙酰胺

从2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸酯(40mg,0.121mmol)和四氢呋喃-3-胺(15.87mg,0.182mmol)，按照上述方法6，获得呈固体的2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代-N-(四氢呋喃-3-基)乙酰胺(16mg,36％产率)(95％纯度，基于HPLC)。

Rt(方法K)4.46min,m/z 371[M+H]+

¹H NMR(500MHz,,CDCl₃)δ9.33(br s,1H),7.66(dq,J＝8.0,1.0Hz,1H),7.58(d,J＝7.9Hz,1H),7.48–7.40(m,1H),7.31(ddd,J＝8.2,7.0,1.2Hz,1H),7.16(ddd,J＝8.0,7.0,1.0Hz,1H),6.79(dd,J＝2.2,0.9Hz,1H),4.53–4.44(m,1H),4.32(td,J＝4.6,1.7Hz,2H),4.02(br s,4H),3.96(dt,J＝8.9,7.4Hz,1H),3.89(dd,J＝9.5,5.6Hz,1H),3.83(td,J＝8.6,5.7Hz,1H),3.80–3.76(m,2H),3.72(dd,J＝9.5,3.0Hz,1H),2.39–2.25(m,1H),1.96–1.83(m,1H)。

实施例36

(S)-2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-(2-羟基丙基)-2-氧代乙酰胺

从2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸酯(50mg,0.152mmol)和(S)-1-氨基丙-2-醇(17.1mg,0.228mmol)，按照上述方法6，获得呈固体的(S)-2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-(2-羟基丙基)-2-氧代乙酰胺(19.7mg,20％产率)(95％纯度，基于HPLC)。

Rt(方法K)4.80min,m/z 359[M+H]+

¹H NMR(500MHz,CD₃OD)δ8.04(s,1H),7.62(dt,J＝8.0,1.0Hz,1H),7.44(dd,J＝8.3,1.0Hz,1H),7.23(ddd,J＝8.3,7.0,1.1Hz,1H),7.19(s,1H),7.07(ddd,J＝8.0,7.0,1.0Hz,1H),6.87(d,J＝0.9Hz,1H),3.94(br s,4H),3.89(ddd,J＝7.2,6.3,4.5Hz,1H),3.82–3.78(m,2H),3.75–3.70(m,2H),3.36–3.30(m,1H),3.21(dd,J＝13.5,7.2Hz,1H),1.18(d,J＝6.3Hz,3H)。

合成方法7

步骤1：将KOH溶液(0.5M于无水MeOH中)(7.68mL,3.84mmol)加入到4-(2-乙氧基-2-氧代乙酰基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1g,3.49mmol)于无水MeOH(2mL)中的溶液中。将所得溶液在室温下搅拌2小时。在真空下蒸发反应混合物，得到白色固体。加入Et₂O并且对反应混合物进行声波处理直至获得悬浮液。将后者过滤，滤饼用Et₂O洗涤并真空干燥，得到2-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸钾(898mg,87％产率)。

步骤2：将2-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸钾(55mg,0.162mmol)、(S)-1,1,1-三氟丙-2-胺盐酸盐(24.23mg,0.162mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(85μL,0.486mmol)溶解在无水2-Me-THF(1.5mL)中并在惰性气氛下在冰上冷却。加入HATU(67.6mg,0.178mmol)，移去冰浴并且将混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物用EtOAc稀释并用1M HCl、饱和NaHCO₃溶液和盐水洗涤。有机层经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过柱色谱法(0至5％MeOH的CH₂Cl₂溶液，梯度)纯化，得到呈固体的(S)-2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代-N-(1,1,1-三氟丙-2-基)乙酰胺(42.2mg,66％产率)(100％纯度，基于HPLC)。

按照合成方法7制备以下实施例。

实施例37

2-[4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基]-2-氧代-N-[(2S)-1,1,1-三氟丙-2-基]乙酰胺

Rt(方法K)5.40min,m/z 397[M+H]+

¹H NMR(500MHz,,CDCl₃)δ9.32(br s,1H),7.66(dq,J＝8.1,0.9Hz,1H),7.57(d,J＝9.8Hz,1H),7.44(dd,J＝8.3,1.0Hz,1H),7.31(ddd,J＝8.2,7.0,1.1Hz,1H),7.16(ddd,J＝8.0,7.0,1.0Hz,1H),6.80(dd,J＝2.2,0.9Hz,1H),4.68–4.56(m,1H),4.39–4.24(m,2H),4.04(br s,4H),3.87–3.75(m,2H),1.40(d,J＝7.0Hz,3H)。

实施例38

(R)-2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代-N-(1,1,1-三氟丙-2-基)乙酰胺

从2-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸钾(48.3mg,0.142mmol)和(R)-1,1,1-三氟丙-2-胺盐酸盐(21.28mg,0.142mmol)，按照上述方法7，获得呈固体的(R)-2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代-N-(1,1,1-三氟丙-2-基)乙酰胺(15mg,27％产率)(91％纯度，基于HPLC)。

Rt(方法K)5.32min,m/z 397[M+H]+

¹H NMR(400MHz,,CDCl₃)δ9.26(br s,1H),7.67(d,J＝8.0Hz,1H),7.55(d,J＝9.7Hz,1H),7.44(dt,J＝8.4,1.0Hz,1H),7.31(ddd,J＝8.3,7.0,1.1Hz,1H),7.16(ddd,J＝8.0,7.0,1.0Hz,1H),6.80(dd,J＝2.1,0.9Hz,1H),4.70–4.55(m,1H),4.41–4.23(m,2H),4.04(br s,4H),3.84–3.68(m,2H),1.40(d,J＝7.0Hz,3H)。

实施例39

2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-(4-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)-2-氧代乙酰胺

从2-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸钾(50mg,0.147mmol)和4-甲基四氢-2H-吡喃-4-胺盐酸盐(22.34mg,0.147mmol)，按照上述方法7，获得呈固体的2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-(4-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)-2-氧代乙酰胺(9.5mg,16％产率)(95％纯度，基于HPLC)。

Rt(方法K)4.75min,m/z 399[M+H]+

¹H NMR(500MHz,,CDCl₃)δ9.39(br s,1H),7.66(dd,J＝8.1,1.0Hz,1H),7.44(dd,J＝8.3,0.9Hz,1H),7.30(ddd,J＝8.3,7.0,1.1Hz,1H),7.28(br s,1H),7.15(ddd,J＝8.0,7.0,1.0Hz,1H),6.79(dd,J＝2.2,0.9Hz,1H),4.33–4.28(m,2H),4.03(br s,4H),3.81–3.77(m,2H),3.76–3.72(m,2H),3.64(ddd,J＝12.2,9.6,2.8Hz,2H),2.12–2.04(m,2H),1.73(ddd,J＝13.9,9.7,4.2Hz,2H),1.47(s,3H)。

实施例40

2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺

从2-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸钾(100mg,0.295mmol)和四氢-2H-吡喃-4-胺盐酸盐(40.5mg,0.295mmol)，按照上述方法7，获得呈固体的2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰胺(51mg,45％产率)(97％纯度，基于HPLC)。

Rt(方法K)4.53min,m/z 385[M+H]+

¹H NMR(400MHz,,CDCl₃)δ9.46(br s,1H),7.66(dd,J＝8.0,1.1Hz,1H),7.44(dd,J＝8.3,1.0Hz,1H),7.38(s,1H),7.30(ddd,J＝8.6,6.8,1.0Hz,1H),7.15(td,J＝7.4,6.9,0.8Hz,1H),6.84–6.75(m,1H),4.33(t,J＝5.3Hz,2H),4.08–3.94(m,7H),3.83–3.76(m,2H),3.55–3.45(m,2H),1.90(d,J＝12.9Hz,2H),1.62–1.50(m,2H)。

实施例41

2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-(1-(甲氧基甲基)环丁基)-2-氧代乙酰胺

从2-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸钾(100mg,0.295mmol)和1-(甲氧基甲基)环丁-1-胺盐酸盐(44.7mg,0.295mmol)，按照上述方法7，获得呈固体的2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-(1-(甲氧基甲基)环丁基)-2-氧代乙酰胺(42mg,36％产率)(98％纯度，基于HPLC)。

Rt(方法K)5.04min,m/z 399[M+H]+

¹H NMR(400MHz,,CDCl₃)δ9.41(br s,1H),7.66(dd,J＝8.1,1.1Hz,1H),7.52(brs,1H),7.44(dd,J＝8.3,1.0Hz,1H),7.34–7.27(m,1H),7.15(ddd,J＝8.0,6.9,1.0Hz,1H),6.78(d,J＝1.5Hz,1H),4.31–4.23(m,2H),4.01(br s,4H),3.82–3.73(m,2H),3.60(s,2H),3.40(s,3H),2.61–2.41(m,2H),2.20–2.08(m,2H),2.02–1.77(m,2H)。

合成方法8

步骤1：将KOH 0.5M于无水MeOH(7mL,3.5mmol)中的溶液加入到4-(2-乙氧基-2-氧代乙酰基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(911.5mg,3.18mmol)于无水MeOH(1.82mL)中的溶液中。将所得溶液在室温下搅拌2小时。真空蒸发反应混合物，得到白色固体。加入Et₂O并且对反应混合物进行声波处理直至获得悬浮液。将后者过滤，滤饼用Et₂O洗涤并真空干燥，得到2-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸钾(841.4mg,89％产率)。

步骤2：将2-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸钾(841.4mg,2.84mmol)、2-甲基丙-2-胺(0.448mL,4.26mmol)和DIPEA(0.989mL,5.68mmol)溶解于无水2-Me-THF(10mL)中并在惰性气氛下在冰上冷却。加入HATU(1.184g,3.12mmol)，移去冰浴，并且将混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物用EtOAc稀释并用1M HCl、饱和NaHCO₃溶液和盐水洗涤。减压除去溶剂，得到4-(2-(叔丁基氨基)-2-氧代乙酰基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(297mg,33％产率)。

步骤3：向4-(2-(叔丁基氨基)-2-氧代乙酰基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(295mg,0.94mmol)于CH₂Cl₂(4.38mL)中的溶液中缓慢加入三氟乙酸(1.44mL,18.83mmol)。在搅拌2h后，减压除去溶剂。将粗制混合物真空浓缩，得到N-(叔丁基)-2-氧代-2-(哌嗪-1-基)乙酰胺(183mg,91％产率)。

步骤4：向5,6-二氟-1H-吲哚-2-甲酸(25mg,0.127mmol)于无水THF(0.7mL)中的溶液中加入CDI)(17.07g,0.105mmol)。将混合物在惰性气氛下在50℃下搅拌1h。然后，加入N-(叔丁基)-2-氧代-2-(哌嗪-1-基)乙酰胺(24.88mg,0.117mmol)并且将所得混合物在惰性气氛下在50℃下搅拌过夜。减压除去溶剂并稀释于EtOAc和饱和NaHCO₃溶液中。用EtOAc(×3)萃取水层。合并的有机相用水、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并减压除去溶剂。残余物通过柱色谱法(0至10％MeOH的CH₂Cl₂溶液，梯度)纯化，得到呈固体的N-(叔丁基)-2-(4-(5,6-二氟-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酰胺(16mg,32％产率)(97％纯度，基于HPLC)。

按照合成方法8制备以下实施例。

实施例42

N-叔丁基-2-[4-(5,6-二氟-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基]-2-氧代乙酰胺

Rt(方法K)5.34min,m/z 393[M+H]+

¹H NMR(500MHz,,CDCl₃)δ9.35(br s,1H),7.38(dd,J＝10.3,7.7Hz,1H),7.23–7.15(m,2H),6.73(s,1H),4.34–4.27(m,2H),4.00(br s,4H),3.82–3.71(m,2H),1.40(s,9H)。

实施例43

N-(叔丁基)-2-(4-(4,6-二氟-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酰胺

从4,6-二氟-1H-吲哚-2-甲酸(40mg,0.203mmol)和N-(叔丁基)-2-氧代-2-(哌嗪-1-基)乙酰胺(39.8mg,0.187mmol)，按照上述方法8，获得呈固体的N-(叔丁基)-2-(4-(4,6-二氟-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酰胺(24.3mg,31％产率)(94％纯度，基于HPLC)。

Rt(方法K)5.51min,m/z 393[M+H]+

¹H NMR(400MHz,,CDCl₃)δ9.59(br s,1H),7.18(br s,1H),7.00–6.88(m,1H),6.83(dd,J＝2.2,0.9Hz,1H),6.65(td,J＝10.0,2.0Hz,1H),4.35–4.24(m,2H),4.01(br s,4H),3.81–3.72(m,2H),1.40(s,9H)。

实施例44

N-(叔丁基)-2-(4-(4-甲基-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酰胺

从4-甲基-1H-吲哚-2-甲酸(40mg,0.228mmol)和N-(叔丁基)-2-氧代-2-(哌嗪-1-基)乙酰胺(44.8mg,0.1210mmol)，按照上述方法8，获得呈固体的N-(叔丁基)-2-(4-(4-甲基-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酰胺(10.2mg,12％产率)(96％纯度，基于HPLC)。

Rt(方法K)5.41min,m/z 371[M+H]+

¹H NMR(400MHz,,CDCl₃)δ9.38(br s,1H),7.28(br s,1H),7.24–7.14(m,2H),6.94(dt,J＝7.0,1.0Hz,1H),6.79(dd,J＝2.2,1.0Hz,1H),4.31–4.25(m,2H),4.04(br s,4H),3.81–3.72(m,2H),2.56(s,3H),1.41(s,9H)。

实施例45

N-(叔丁基)-2-(4-(6-氯-5-氟-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酰胺

从6-氯-5-氟-1H-吲哚-2-甲酸(25mg,0.117mmol)和N-(叔丁基)-2-氧代-2-(哌嗪-1-基)乙酰胺(22.97mg,0.108mmol)，按照上述方法8，获得呈固体的N-(叔丁基)-2-(4-(6-氯-5-氟-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酰胺(22mg,46％产率)(91％纯度，基于HPLC)。

Rt(方法K)5.64min,m/z 409[M+H]+

¹H NMR(500MHz,,CDCl₃)δ9.52(br s,1H),7.47(dd,J＝6.0,0.9Hz,1H),7.37(d,J＝9.2Hz,1H),7.18(s,1H),6.73(dd,J＝2.2,0.9Hz,1H),4.33–4.26(m,2H),4.00(br s,4H),3.79–3.73(m,2H),1.40(s,9H)。

实施例46

N-(叔丁基)-2-(4-(5-氟-4-甲基-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酰胺

从5-氟-4-甲基-1H-吲哚-2-甲酸(25mg,0.129mmol)和N-(叔丁基)-2-氧代-2-(哌嗪-1-基)乙酰胺(25.4mg,0.119mmol)，按照上述方法8，获得呈固体的N-(叔丁基)-2-(4-(5-氟-4-甲基-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酰胺(14mg,28％产率)(91％纯度，基于HPLC)。

Rt(方法K)5.55min,m/z 389[M+H]+

¹H NMR(300MHz,,CDCl₃)δ9.33(br s,1H),7.25–7.14(m,2H),7.08–6.97(m,1H),6.79–6.72(m,1H),4.36–4.23(m,2H),4.03(br s,4H),3.81–3.67(m,2H),2.45(d,J＝1.9Hz,3H),1.40(s,9H)。

实施例47

N-(叔丁基)-2-(4-(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酰胺

从5-氯-1H-吲哚-2-甲酸(25mg,0.128mmol)和N-(叔丁基)-2-氧代-2-(哌嗪-1-基)乙酰胺(25.1mg,0.118mmol)，按照上述方法8，获得呈固体的N-(叔丁基)-2-(4-(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酰胺(17,7mg,35％产率)(93％纯度，基于HPLC)。

Rt(方法K)5.68min,m/z 391[M+H]+

¹H NMR(500MHz,,CDCl₃)δ9.29(s,1H),7.62(d,J＝2.0Hz,1H),7.36(d,J＝8.8Hz,1H),7.29–7.22(m,1H),7.17(br s,1H),6.72(dd,J＝2.2,1.0Hz,1H),4.33–4.26(m,2H),4.00(br s,4H),3.81–3.73(m,2H),1.40(s,9H)。

合成方法9

步骤1：进料溶液1：在室温下将(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(321mg,1.5mmol)于CH₂Cl₂(7.5mL)中的溶液与NEt₃(314μL,2.25mmol)混合并且所得混合物以0.5ml/min泵入。进料溶液2：2-氯-2-氧代乙酸乙酯(184μL,1.65mmol)于CH₂Cl₂(7.5mL)中的溶液以0.5ml/min泵入。反应混合物在室温下流过PTF 1/16”管线圈，停留时间为5min。一旦收集到所得粗制混合物，就除去溶剂并将白色结晶产物与水混合。产物用EtOAc(×3)萃取并用饱和NH₄Cl溶液、饱和NaHCO₃溶液和盐水洗涤。合并的有机相经Na₂SO₄干燥并减压浓缩，得到(2R,5S)-4-(2-乙氧基-2-氧代乙酰基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(360.8mg,77％产率)。

步骤2：向(2R,5S)-4-(2-乙氧基-2-氧代乙酰基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(360.8mg,1.15mmol)于CH₂Cl₂(5.3mL)中的溶液中缓慢加入三氟乙酸(1.76mL,23.0mmol)。在搅拌2h后，减压除去溶剂。将粗制混合物真空浓缩，得到2-((2S,5R)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸乙酯(240mg,98％产率)。

步骤3：向1H-吲哚-2-甲酸(195mg,1.21mmol)于无水THF(7.5mL)中的溶液中加入CDI(163mg,1.00mmol)。将混合物在惰性气氛下在50℃下搅拌1h。然后，加入2-((2S,5R)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸乙酯(239mg,1.11mmol)并且将所得混合物在惰性气氛下在50℃下搅拌过夜。减压除去溶剂并在EtOAc和饱和NaHCO₃溶液之间分配。用EtOAc(×3)萃取水层。合并的有机相用水、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并减压除去溶剂。将残余物溶解在最少体积的EtOH中并通过加入水使产物沉淀，得到呈白色固体的产物2-((2S,5R)-4-(1H-吲哚-2-羰基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸酯(254.5mg,59％产率)。

步骤4：将KOH 0.5M于无水MeOH(0.5mL,0.251mmol)中的溶液中加入到2-((2S,5R)-4-(1H-吲哚-2-羰基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸乙酯(81.4mg,0.228mmol)于无水MeOH(0.15mL)中的溶液中。将所得溶液在室温下搅拌2小时。将反应混合物真空蒸发，得到白色固体。加入Et₂O并且对反应混合物进行声波处理直至获得悬浮液。将后者过滤，滤饼用Et₂O洗涤并真空干燥，得到2-((2S,5R)-4-(1H-吲哚-2-羰基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸钾(60mg,72％产率)。

步骤5：将2-((2S,5R)-4-(1H-吲哚-2-羰基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸钾(50mg,0.14mmol)、2-甲基丙-2-胺(29μL,0.272mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(71μL,0.408mmol)溶解于无水2-Me-THF(1.3mL)中并在惰性气氛下在冰上冷却。加入HATU(56.8mg,0.15mmol)，移去冰浴并且将混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物用EtOAc稀释并用1M HCl、饱和NaHCO₃溶液和盐水洗涤。有机层经Na₂SO₄干燥、过滤并减压浓缩。残余物通过柱色谱法(0至5％MeOH的CH₂Cl₂溶液，梯度)纯化，得到呈固体的2-((2S,5R)-4-(1H-吲哚-2-羰基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-N-(叔丁基)-2-氧代乙酰胺(29.6mg,57％产率)(98％纯度，基于HPLC)。

按照合成方法9制备以下实施例。

实施例48

N-叔丁基-2-[(2S,5R)-4-(1H-吲哚-2-羰基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-2-氧代乙酰胺

Rt(方法K)5.35min,m/z 385[M+H]+

¹H NMR(300MHz,,CDCl₃)δ9.49(br s,1H),7.66(d,J＝8.0Hz,1H),7.44(dq,J＝8.3,0.9Hz,1H),7.29(ddd,J＝8.2,6.9,1.1Hz,1H),7.15(ddd,J＝8.0,6.9,1.1Hz,2H),6.77(s,1H),5.43–5.31(m,1H),5.16–5.01(m,1H),5.01–4.71(m,2H),4.54–4.20(m,2H),1.45–1.33(m,15H)。

实施例49

(S)-2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)-3-甲基哌嗪-1-基)-N-(叔丁基)-2-氧代乙酰胺

从(S)-2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)-3-甲基哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸钾(50mg,0.141mmol)和2-甲基丙-2-胺(30μL,0.283mmol)，按照上述方法9，获得呈固体的(S)-2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)-3-甲基哌嗪-1-基)-N-(叔丁基)-2-氧代乙酰胺(24.4mg,47％产率)(96％纯度，基于HPLC)。

Rt(方法K)5.26min,m/z 371[M+H]+

¹H NMR(300MHz,,CDCl₃)δ9.34(br s,1H),7.66(dt,J＝8.0,1.0Hz,1H),7.43(dd,J＝8.3,0.9Hz,1H),7.30(ddd,J＝8.3,7.0,1.2Hz,1H),7.21–7.09(m,2H),6.82–6.75(m,1H),5.24–4.90(m,2H),4.67–4.32(m,2H),3.57–3.24(m,2H),3.12–2.90(m,1H),1.40–1.40(m,12H)。

实施例50

(R)-2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)-3-甲基哌嗪-1-基)-N-(叔丁基)-2-氧代乙酰胺

从(R)-2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)-3-甲基哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸钾(35mg,0.099mmol)和2-甲基丙-2-胺(21μL,0.198mmol)，按照上述方法9，获得呈固体的(R)-2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)-3-甲基哌嗪-1-基)-N-(叔丁基)-2-氧代乙酰胺(17.4mg,47％产率)(97％纯度，基于HPLC)。

Rt(方法K)5.24min,m/z 371[M+H]+

¹H NMR(300MHz,,CDCl₃)δ9.31(br s,1H),7.66(d,J＝8.1Hz,1H),7.43(d,J＝8.2Hz,1H),7.34–7.27(m,1H),7.22–7.09(m,2H),6.79(s,1H),5.27–4.91(m,2H),4.71–4.33(m,2H),3.61–3.44(m,1H),3.38–3.21(m,1H),3.13–2.91(m,1H),1.47–1.36(m,12H)。

实施例51

2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-N-(叔丁基)-2-氧代乙酰胺

从2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2-氧代乙酸钾(50mg,0.141mmol)和2-甲基丙-2-胺(30μL,0.283mmol)，按照上述方法9，获得呈固体的2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-N-(叔丁基)-2-氧代乙酰胺(39.4mg,75％产率)(99％纯度，基于HPLC)。

Rt(方法K)5.13min,m/z 371[M+H]+

¹H NMR(500MHz,,CDCl₃)δ9.61(br s,1H),7.70–7.60(m,1H),7.43(ddd,J＝8.3,1.9,0.9Hz,1H),7.28(ddd,J＝8.3,7.0,1.1Hz,1H),7.13(ddd,J＝8.1,7.0,1.0Hz,2H),6.83(s,1H),4.33–3.62(m,8H),2.34–1.81(m,2H),1.37(s,12H)。

合成方法10

步骤1：将1H-吲哚-2-甲酸(0.4M,3.2mmol)于无水THF中的溶液(0.4M,8mL，流速0.33mL/min)和CDI于无水THF中的溶液(0.4M,8mL，流速0.33mL/min)在Y型件中组合并在10mL(1/8”o.d)PFA反应器中在70℃下反应(15min停留时间)。流出流然后立即与1,4-二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯于无水THF(0.42M,8mL,0.33mL/min)中的流入溶液一起在Y型件中输送并在20mL VapourTec快速混合器(3.2mm o.d)孔反应器中在70℃下反应。在反应器后放置一个40psi背压调节器。40min后收集输出流。减压除去溶剂并且将所得油状物在乙酸乙酯和饱和NaHCO₃水溶液之间分配。用EtOAc萃取水层3次。乙酸乙酯层然后用水和盐水洗涤并且经Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂，得到呈白色固体的所需产物(563mg,51％产率)。

步骤2：将TFA(1mL,12.9mmol)加入到4-(1H-吲哚-2-羰基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯(280mg,0.81mmol)于DCM(2mL)中的溶液中。2h后，蒸发反应混合物并且其原样用于下一步骤。

步骤3：向冷却(0-5℃)的搅拌的(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)(1H-吲哚-2-基)甲酮(198mg,0.81mmol,TFA盐)和三乙胺(0.28mL,2.0mmol)于无水DCM(2mL)中的溶液中加入含2-氯-2-氧代乙酸乙酯(0.091mL,0.81mmol)的无水DCM(1.5mL)。将反应混合物搅拌1h，然后升温至室温并搅拌过夜。减压除去溶剂。将残余物溶于水(15mL)中，用EtOAc(3×15mL)萃取，然后用饱和NH₄Cl水溶液(15mL)、饱和NaHCO₃水溶液(15mL)和饱和NaCl水溶液(15mL)洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并浓缩。获得呈灰白色固体的所需产物(53mg,19％产率)。

步骤4：将2-(4-(1H-吲哚-2-羰基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2-氧代乙酸乙酯于EtOH:DCM(8:2)中的溶液(0.3M,1.3mL，流速0.15mL/min)和正丁基胺于EtOH:DCM(8:2)中的溶液(3M,1.3mL，流速0.15mL/min)在Y型件中混合并在10mL(1/8”o.d)PFA反应器中在100℃(35min停留时间)下反应，所述反应器具有175psi的背压调节器。在50min后收集输出流，蒸发并经由快速柱色谱法纯化，得到呈白色固体的最终产物(32.1mg,36％产率)

按照合成方法10制备以下实施例。

实施例8

N-丁基-2-[4-(1H-吲哚-2-羰基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-基]-2-氧代乙酰胺

GC分析：保留时间＝15.287min，峰面积：100％，方法L；质量(m/z):370.2。

¹H NMR(500MHz,氯仿-d)δ9.28(d,J＝17.2Hz,1H),7.65(ddd,J＝8.0,1.0Hz,1H),7.41(ddd,J＝8.2,1.0Hz,1H),7.28(dddd,J＝8.2,7.0,1.1Hz,1H),7.13(dddd,J＝8.0,7.0,1.0Hz,1H),6.83(s,1H),4.34–3.73(m,7H),3.68(t,J＝6.2Hz,1H),3.27(m,2H),2.35–1.97(m,2H),1.54–1.44(m,2H),1.39–1.30(m,2H),0.91(t,J＝7.4Hz,3H)。

合成方法11

步骤1：向4,6-二氟-1H-吲哚-2-甲酸(1.9g,10mmol)于无水2-Me-THF(100mL)中的溶液中加入CDI(g,10mmol)。将混合物在氮气下在50℃下搅拌1h。然后，加入2-氧代-2-(哌嗪-1-基)乙酸乙酯(2.0g,11mmol)并且将所得混合物在70℃下搅拌15h。减压除去溶剂并且将所得油状物在乙酸乙酯和饱和NaHCO₃溶液之间分配。用EtOAc萃取水层三次。合并的有机萃取物然后用水和盐水洗涤并经Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂，得到呈黄色固体的所需产物(3.5g,91％产率)。

步骤2：在N₂下向1,3-双(2-异丙基苯基)-4,5-二氢-1H-咪唑-3-鎓-2-化物(2.52mg,8.1μmol)(IMes)于无水2-Me-THF中的溶液中依序加入2-(4-(4,6-二氟-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙酸乙酯(60mg g,0.16mmol)和2-氨基乙-1-醇(11.00μL,0.18mmol)。在50℃下6h后，在旋转蒸发仪上减压除去挥发物，并且所得残余物通过快速柱色谱法纯化，得到呈白色固体的所需产物(62.5mg,51％产率)。

按照合成方法11制备以下实施例。

实施例53

2-(4-(4,6-二氟-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-((1-羟基环丙基)甲基)-2-氧代乙酰胺

HPLC分析：保留时间＝8.338min，峰面积：93％，方法L；质量(m/z):407.1[M+H]⁺405.0[M-H]^-。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.73(t,J＝5.8Hz,1H),7.07–7.02(m,1H),6.95(dd,J＝2.3,0.9Hz,1H),6.91(td,J＝10.4,2.1Hz,1H),5.37(s,1H),3.81(s,4H),3.65–3.57(m,4H),3.29(d,J＝5.8Hz,2H),0.58–0.49(m,4H)。

实施例54

2-(4-(4,6-二氟-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-(3-羟基丙基)-2-氧代乙酰胺

HPLC分析：保留时间＝7.911min，峰面积：95％，方法L；质量(m/z):395.1[M+H]⁺393.0[M-H]^-。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.69(t,J＝5.7Hz,1H),7.04(ddd,J＝9.4,2.1,0.8Hz,1H),6.95(d,J＝1.5Hz,1H),6.90(td,J＝10.4,2.1Hz,1H),4.46(t,J＝5.1Hz,1H),3.80(s,4H),3.65–3.55(m,4H),3.43(td,J＝6.3,5.0Hz,2H),3.24–3.16(m,2H),1.61(p,J＝6.6Hz,2H)。

实施例55

2-(4-(4,6-二氟-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-((1-(羟基甲基)环丙基)甲基)-2-氧代乙酰胺

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.68(t,J＝5.8Hz,1H),7.04(ddd,J＝9.4,2.1,0.9Hz,1H),6.95(d,J＝0.9Hz,1H),6.90(td,J＝10.4,2.1Hz,1H),4.52(t,J＝5.6Hz,1H),3.80(s,3H),3.59(dt,J＝7.8,4.4Hz,4H),3.28(d,J＝5.6Hz,2H),3.19(d,J＝5.8Hz,2H),0.47–0.32(m,4H)。HPLC分析：保留时间＝8.430min，峰面积：95％，方法L；质量(m/z):421.1[M+H]⁺419.0[M-H]^-。

实施例56

2-(4-(4,6-二氟-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-(6-羟基己基)-2-氧代乙酰胺

HPLC分析：保留时间＝8.720min，峰面积：97％，方法L；质量(m/z):437.1[M+H]⁺435.0[M-H]^-。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.71(t,J＝5.7Hz,1H),7.04(ddd,J＝9.3,2.1,0.9Hz,1H),6.95(dd,J＝2.3,0.9Hz,1H),6.90(td,J＝10.4,2.1Hz,1H),4.32(t,J＝5.2Hz,1H),3.79(s,4H),3.59(q,J＝5.8Hz,4H),3.38(td,J＝6.5,5.1Hz,2H),3.12(q,J＝6.7Hz,2H),1.42(m,3H),1.31–1.24(m,5H)。

实施例57

2-(4-(4,6-二氟-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-(5-羟基戊基)-2-氧代乙酰胺

HPLC分析：保留时间＝8.389min，峰面积：99％，方法L；质量(m/z):423.1[M+H]⁺421.0[M-H]^-

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.71(t,J＝5.8Hz,1H),7.04(ddd,J＝9.4,2.2,0.8Hz,1H),6.95(d,J＝0.9Hz,1H),6.89(td,J＝10.4,2.1Hz,1H),4.35(t,J＝5.1Hz,1H),3.90–3.70(m,4H),3.63–3.56(m,4H),3.38(td,J＝6.5,5.1Hz,2H),3.13(td,J＝7.0,5.7Hz,2H),1.50–1.38(m,4H),1.34–1.25(m,2H)。

实施例58

(S)-2-(4-(4,6-二氟-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-(2-羟基丙基)-2-氧代乙酰胺

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.64(t,J＝5.9Hz,1H),7.04(ddd,J＝9.4,2.1,0.8Hz,1H),6.95(s,1H),6.90(td,J＝10.4,2.1Hz,1H),4.73(d,J＝4.9Hz,1H),3.80(s,4H),3.71(qd,J＝6.2,4.9Hz,1H),3.60(dt,J＝7.2,3.4Hz,4H),3.09(t,J＝6.0Hz,2H),1.04(d,J＝6.2Hz,3H)。

HPLC分析：保留时间＝8.098min，峰面积：97％，方法L；质量(m/z):395.1[M+H]⁺393.0[M-H]^-。

实施例59

2-(4-(4,6-二氟-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-(2-乙基-4-羟基丁基)-2-氧代乙酰胺

HPLC分析：保留时间＝8.923min，峰面积：99％，方法L；质量(m/z):437.1[M+H]⁺435.0[M-H]^-。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.65(t,J＝5.9Hz,1H),7.04(ddd,J＝9.4,2.1,0.8Hz,1H),6.97–6.94(m,1H),6.90(td,J＝10.4,2.1Hz,1H),4.38(t,J＝5.0Hz,1H),3.80(s,4H),3.63–3.54(m,4H),3.43(tdt,J＝7.0,5.1,3.4Hz,2H),3.17–3.05(m,2H),1.59(p,J＝6.3Hz,1H),1.45–1.22(m,4H),0.85(t,J＝7.4Hz,3H)。

实施例60

2-(4-(4,6-二氟-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-(4-羟基戊基)-2-氧代乙酰胺

HPLC分析：保留时间＝8.455min，峰面积：99％，方法L；质量(m/z):423.1[M+H]⁺421.0[M-H]^-。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.72(t,J＝5.8Hz,1H),7.05(ddd,J＝9.4,2.1,0.8Hz,1H),6.95(d,J＝0.9Hz,1H),6.91(td,J＝10.4,2.1Hz,1H),4.38(d,J＝4.7Hz,1H),3.80(s,4H),3.66–3.53(m,5H),3.13(q,J＝6.9Hz,2H),1.61–1.37(m,2H),1.36–1.27(m,2H),1.04(d,J＝6.1Hz,3H)。

实施例61

2-(4-(4,6-二氟-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-(4-羟基-2,2-二甲基丁基)-2-氧代乙酰胺

HPLC分析：保留时间＝8.878min，峰面积：99％，方法L；质量(m/z):437.1[M+H]⁺435.0[M-H]^-。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.58(t,J＝6.3Hz,1H),7.04(ddd,J＝9.3,2.1,0.8Hz,1H),6.95(d,J＝0.9Hz,1H),6.90(td,J＝10.4,2.1Hz,1H),4.35(t,J＝4.9Hz,1H),3.81(s,4H),3.66–3.52(m,4H),3.47(td,J＝7.2,4.8Hz,2H),3.01(d,J＝6.4Hz,2H),1.39(t,J＝7.2Hz,2H),0.86(s,6H)。

实施例62

2-(4-(4,6-二氟-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-(4-羟基丁基)-2-氧代乙酰胺

HPLC分析：保留时间＝8.134min，峰面积：100％，方法L；质量(m/z):395.1[M+H]⁺393.0[M-H]^-。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ4.40(t,J＝5.1Hz,1H),3.80(s,4H),3.65–3.55(m,4H),3.40(td,J＝6.3,5.0Hz,2H),3.14(q,J＝6.8Hz,2H),1.51–1.38(m,4H)。

实施例63

2-(4-(4,6-二氟-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-(2-甲氧基丙基)-2-氧代乙酰胺

1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ9.54(s,1H),7.57(s,1H),6.95–6.89(m,1H),6.83(dd,J＝2.3,0.9Hz,1H),6.65(td,J＝10.0,2.0Hz,1H),4.34–4.26(m,2H),4.01(s,4H),3.84–3.76(m,2H),3.62–3.44(m,2H),3.36(s,3H),3.18(ddd,J＝13.4,6.9,5.1Hz,1H),1.17(d,J＝6.1Hz,3H)。HPLC分析：保留时间＝8.725min，峰面积：97％，方法L；质量(m/z):409.1[M+H]⁺407.0[M-H]^-。

实施例64

(R)-2-(4-(4,6-二氟-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-(2-羟基丙基)-2-氧代乙酰胺

HPLC分析：保留时间＝8.134min，峰面积：95％，方法L；质量(m/z):395.1[M+H]⁺393.0[M-H]^-。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.65(t,J＝5.9Hz,1H),7.04(ddd,J＝9.4,2.1,0.8Hz,1H),6.95(d,J＝0.9Hz,1H),6.90(td,J＝10.4,2.1Hz,1H),4.74(d,J＝4.8Hz,1H),3.80(s,4H),3.71(qd,J＝6.1,4.9Hz,1H),3.65–3.53(m,4H),3.09(t,J＝6.0Hz,2H),1.04(d,J＝6.2Hz,3H)。

实施例65

2-(4-(4,6-二氟-1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基)-N-((1-甲氧基环丙基)甲基)-2-氧代乙酰胺

HPLC分析：保留时间＝8.923min，峰面积：97％，方法L；质量(m/z):421.1[M+H]⁺419.0[M-H]^-。

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ8.85(t,J＝6.0Hz,1H),7.04(ddd,J＝9.3,2.1,0.8Hz,1H),6.95(dd,J＝2.2,0.9Hz,1H),6.89(td,J＝10.4,2.1Hz,1H),3.80(s,4H),3.60(dt,J＝7.2,3.7Hz,4H),3.37(d,J＝6.0Hz,2H),3.22(d,J＝1.0Hz,3H),1.53–1.44(m,1H),0.71–0.65(m,2H),0.60–0.55(m,2H)。

实施例66

2-[4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基]-N-(1-甲基环庚基)-2-氧代乙酰胺

LCMS(ESI):[M+H]⁺m/z:计算值411.27；实验值411.2；Rt＝2.662min。

实施例67

2-[4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基]-N-(2-甲基丁-2-基)-2-氧代乙酰胺

LCMS(ESI):[M+H]⁺m/z:计算值371.23；实验值371.2；Rt＝2.539min。

实施例68

N-(5-羟基-2-甲基戊-2-基)-2-[4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基]-2-氧代乙酰胺

LCMS(ESI):[M+H]⁺m/z:计算值401.24；实验值401.0；Rt＝2.216min。

实施例69

2-[4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基]-2-氧代-N-(4,4,4-三氟-2-甲基丁-2-基)乙酰胺

LCMS(ESI):[M+H]⁺m/z:计算值425.2；实验值425.0；Rt＝2.925min。

实施例70

N-环庚基-2-[4-(1H-吲哚-2-羰基)哌嗪-1-基]-2-氧代乙酰胺

LCMS(ESI):[M+H]⁺m/z:计算值397.25；实验值397.4；Rt＝3.129min。

所选择的本发明化合物在如下所述的衣壳组装和HBV复制测定法中进行测定，并且这些活性化合物的代表性组示于表1(衣壳组装测定法)和表2(HBV复制测定法)中。

生化衣壳组装测定法

组装效应物活性的筛选是基于Zlotnick等人,(2007)发表的荧光淬灭测定法进行的。使用pET表达系统(Merck Chemicals,Darmstadt)，将含有融合到第150位处的独一无二的半胱氨酸残基的149个氨基酸的N末端组装结构域的C末端截短的核心蛋白在大肠杆菌中表达。使用一系列尺寸排阻色谱步骤进行核心二聚体蛋白的纯化。简而言之，将来自表达通过NdeI/XhoI克隆到表达质粒pET21b中的核心蛋白的编码序列的1L BL21(DE3)Rosetta2培养物的细胞团块，用本源裂解缓冲液(Qproteome细菌蛋白质制备试剂盒；Qiagen,Hilden)在冰上处理1h。离心步骤后，在冰上搅拌2h期间，用0.23g/ml固体硫酸铵使上清液沉淀。进一步离心后，将所得团块溶解在缓冲液A(100mM Tris,pH 7.5；100mM NaCl；2mM DTT)中，随后装载到缓冲液A平衡的CaptoCore 700柱(GE HealthCare,Frankfurt)上。将含有组装的HBV衣壳的柱流过液针对缓冲液N(50mM NaHCO3 pH 9.6；5mM DTT)透析，然后加入尿素至终浓度3M，以在冰上将衣壳解离成核心二聚体持续1.5h。然后将蛋白质溶液装载到1LSephacryl S300柱上。用缓冲液N洗脱后，通过SDS-PAGE鉴定含有核心二聚体的级分，随后合并并针对50mM HEPES pH 7.5；5mM DTT进行透析。为了提高纯化的核心二聚体的组装能力，从添加5M NaCl开始并包括上述尺寸排阻色谱步骤，进行了第二轮组装和解体。从最后一个层析步骤，将含有核心二聚体的级分合并，并分成等分试样以1.5至2.0mg/ml之间的浓度储存在-80℃下。

在即将标记之前，通过以20mM的终浓度添加新鲜制备的DTT来还原核心蛋白。在冰上温育40min后，使用Sephadex G-25柱(GE HealthCare,Frankfurt)和50mM HEPES,pH 7.5除去储存缓冲液和DTT。为了进行标记，将1.6mg/ml核心蛋白与终浓度为1mM的BODIPY-FL马来酰亚胺(Invitrogen,Karlsruhe)在4℃和黑暗中温育过夜。在标记后，通过使用SephadexG-25柱的额外脱盐步骤除去游离染料。将标记的核心二聚体分成等分试样储存在4℃下。在二聚体状态下，标记的核心蛋白的荧光信号高，并且在核心二聚体组装成高分子衣壳结构的过程中被淬灭。所述筛选测定法在黑色384孔微量滴定板中进行，总测定体积为10μl，使用50mM HEPES pH 7.5和1.0至2.0μM标记的核心蛋白。每种筛选化合物从100μM、31.6μM或10μM的终浓度开始，使用0.5对数单位连续稀释，以8种不同浓度添加。在任何情况下，整个微量滴定板上的DMSO浓度为0.5％。通过注入NaCl至300μM的终浓度开始组装反应，这将组装过程诱导到最大淬灭信号的大约25％。在反应开始后6min，使用Clariostar读板器(BMGLabtech,Ortenberg)，使用477nm的激发和525nm的发射来测量荧光信号。使用含有2.5M和0M NaCl的HEPES缓冲液作为100％和0％组装对照。实验一式三份进行三次。使用Graph PadPrism 6软件(GraphPad Software,La Jolla,USA)通过非线性回归分析计算EC₅₀值。

从HepAD38细胞上清液测定HBV DNA

在稳定转染的细胞系HepAD38中分析了抗HBV活性，所述细胞系已被描述为分泌高水平的HBV病毒粒子(Ladner等人,1997)。简而言之，将HepAD38细胞在37℃、5％CO₂和95％湿度下在200μl维持培养基中培养，所述培养基是Dulbecco改良的Eagle培养基/营养物混合物F-12(Gibco,Karlsruhe)、10％胎牛血清(PAN Biotech Aidenbach)，补充有50μg/ml青霉素/链霉素(Gibco,Karlsruhe)、2mM L-谷氨酰胺(PAN Biotech,Aidenbach)、400μg/mlG418(AppliChem,Darmstadt)和0.3μg/ml四环素。细胞以1:5比率每周传代培养一次，但传代通常不超过十次。对于所述测定法，将60,000个细胞在不含任何四环素的维持培养基中接种到96孔板的每个孔中，并用测试化合物的连续半对数稀释液进行处理。为了使边缘效应最小化，不使用板的外侧36个孔，而是填充了测定培养基。在每个测定板上，分别分配了六个孔用于病毒对照(未处理的HepAD38细胞)和六个孔用于细胞对照(用0.3μg/ml四环素处理的HepAD38细胞)。此外，在每个实验中都制备了一块板，其被设置成具有参考抑制剂如BAY 41-4109、恩替卡韦(entecavir)和拉米夫定(lamivudine)来代替筛选化合物。一般来说，实验一式三份进行三次。在第6天，在MagNa Pure LC仪器上使用MagNA Pure 96DNA和病毒NA小体积试剂盒(Roche Diagnostics,Mannheim)按照制造商的说明从100μl过滤的细胞培养上清液(AcroPrep Advance 96滤板,0.45μMSupor膜,PALL GmbH,Dreieich)自动纯化HBV DNA。EC50值由HBV DNA的相对拷贝数计算。简而言之，将100μl含有HBV DNA的洗脱液中的5μl与1μM反义引物tgcagaggtgaagcgaagtgcaca、0.5μM正义引物gacgtcctttgtttacgtcccgtc、0.3μM杂交探针acggggcgcacctctctttacgcgg-FL和LC640-ctccccgtctgtgccttctcatctgc-PH(TIBMolBiol,Berlin)一起用PCR LC480 Probes Master试剂盒(Roche)配制成终体积为12.5μl。在Light Cycler 480实时系统(RocheDiagnostics,Mannheim)上使用以下方案进行PCR：在95℃下预温育1min，扩增：40个循环×(95℃下10秒，60℃下50秒，70℃下1秒)，在40℃下冷却10秒。使用pCH-9/3091的HBV质粒DNA(Nassal等人,1990,Cell 63:1357–1363)和LightCycler 480SW 1.5软件(RocheDiagnostics,Mannheim)对病毒载量相对于已知标准品进行定量，并利用GraphPad Prism6(GraphPad Software Inc.,La Jolla,USA)使用非线性回归计算EC₅₀值。

细胞存活率测定法

使用AlamarBlue存活率测定法，在0.3μg/ml四环素(其阻断HBV基因组的表达)存在下评估HepAD38细胞中的细胞毒性。测定法条件和板布局类似于抗HBV测定法，但使用了其他对照。在每个测定板上，含有未处理的HepAD38细胞的六个孔用作100％存活率对照，并且仅填充有测定培养基的六个孔用作0％存活率对照。此外，在每个实验中，从60μM最终测定浓度开始的几何浓度系列的环己酰亚胺用作阳性对照。在六天的温育期后，将AlamarBlue Presto细胞存活率试剂(ThermoFisher,Dreieich)以1/11的稀释度添加到测定板的每个孔中。在37℃下温育30至45min后，使用Tecan Spectrafluor Plus读板器分别利用激发滤光片550nm和发射滤光片595nm，读取与活细胞数量成正比的荧光信号。将数据归一化为未处理对照(100％存活率)和测定培养基(0％存活率)的百分率，然后使用非线性回归和GraphPad Prism 6.0(GraphPad Software,La Jolla,USA)计算CC50。使用平均EC₅₀和CC₅₀值来计算每种测试化合物的选择性指数(SI＝CC₅₀/EC₅₀)。

体内功效模型

HBV研究和抗病毒剂的临床前试验受限于所述病毒的狭窄物种和组织嗜性、可用感染模型的缺乏以及由黑猩猩这种对HBV完全易感的唯一动物的使用带来的限制。替代动物模型是基于使用与HBV相关的嗜肝DNA病毒，并且已在土拨鼠肝炎病毒(WHV)感染的土拨鼠或鸭乙型肝炎病毒(DHBV)感染的鸭或绒毛猴HBV(WM-HBV)感染的树鼩中测试了各种抗病毒化合物(概述于Dandri等人,2017,Best Pract Res Clin Gastroenterol 31,273-279)。然而，替代病毒的使用具有若干限制。例如，亲缘关系最远的DHBV和HBV之间的序列同源性仅约40％，这是HAP家族的核心蛋白组装修饰剂对DHBV和WHV似乎无活性但高效抑制HBV的原因(Campagna等人,2013,J.Virol.87,6931-6942)。小鼠不被HBV感染，但主要工作聚焦于HBV复制和感染的小鼠模型的开发，例如人类HBV转基因小鼠的产生(HBV tg小鼠)、小鼠中HBV基因组的流体动力学注射(HDI)或具有人源化肝脏和/或人源化免疫系统的小鼠的产生，以及将基于含有HBV基因组的腺病毒(Ad-HBV)或腺相关病毒(AAV-HBV)的病毒载体静脉内注射到具有免疫能力的小鼠中(概述于Dandri等人,2017,Best Pract Res ClinGastroenterol 31,273-279)。使用完整HBV基因组的转基因小鼠，可以证实鼠类肝细胞产生感染性HBV病毒粒子的能力(Guidotti等人,1995,J.Virol.,69:6158-6169)。由于转基因小鼠对病毒蛋白具有免疫耐受性并且在产生HBV的小鼠中未观察到肝损伤，因此这些研究表明HBV本身不引起细胞病变。HBV转基因小鼠已被用于测试几种抗HBV药剂如聚合酶抑制剂和核心蛋白组装修饰剂的功效(Weber等人,2002,Antiviral Research 54 69-78；Julander等人,2003,Antivir.Res.,59:155-161)，从而证明HBV转基因小鼠非常适合许多类型的体内临床前抗病毒测试。

如Paulsen等人,2015,PLOSone,10:e0144383中所述，在位置2916/2917处携带移码突变(GC)的HBV转基因小鼠(Tg[HBV1.3fsX^-3'5'])可用于证实核心蛋白组装修饰剂的体内抗病毒活性。简而言之，在实验前通过qPCR检查所述HBV转基因小鼠血清中的HBV特异性DNA(参见“从HepAD38细胞上清液测定HBV DNA”部分)。每个治疗组由大约10周龄的五只雄性和五只雌性动物组成，滴度为每毫升血清10⁷-10⁸个病毒粒子。将化合物在合适的媒介物如2％DMSO/98％tylose(0.5％甲基纤维素/99.5％PBS)或50％PEG400中配制成混悬液，并每天一至三次口服施用于动物，持续10天时段。所述媒介物作为阴性对照，而合适媒介物中的1μg/kg恩替卡韦是阳性对照。使用异氟烷蒸发器通过眼球后血液采样获得血液。为了收集终末心脏穿刺，在最后一次处理血液或器官后六小时，用异氟烷麻醉小鼠，并且随后通过CO₂暴露处死。将眼球后(100-150μl)和心脏穿刺(400-500μl)血样分别收集到Microvette300LH或Microvette 500LH中，接着经由离心(10min，2000g，4℃)分离血浆。获取肝组织并在液氮中速冻。所有样品均储存在-80℃直至进一步使用。按照制造商的说明，从50μl血浆或25mg肝组织中提取病毒DNA，并使用DNeasy 96血液和组织试剂盒(Qiagen,Hilden)在50μl AE缓冲液(血浆)中洗脱或使用DNeasy组织试剂盒(Qiagen,Hilden)在320μl AE缓冲液(肝组织)中洗脱。使用LightCycler 480 Probes Master PCR试剂盒(Roche,Mannheim)按照制造商的说明对洗脱的病毒DNA进行qPCR，以确定HBV拷贝数。所使用的HBV特异性引物包括正向引物5'-CTG TAC CAA ACC TTC GGA CGG-3'、反向引物5'-AGG AGA AAC GGG CTGAGG C-3'和FAM标记探针FAM-CCA TCA TCC TGG GCT TTC GGA AAA TT-BBQ。一份总体积为20μl的PCR反应样品含有5μl DNA洗脱液和15μl主混合物(包含0.3μM正向引物、0.3μM反向引物、0.15μM FAM标记探针)。在Roche LightCycler1480上使用以下方案进行qPCR：在95℃预温育1分钟，扩增：(95℃下10秒，60℃下50秒，70℃下1秒)×45个循环，在40℃冷却10秒。如上所述生成标准曲线。所有样品一式两份进行测试。所述测定法的检测限为～50HBV DNA拷贝(使用范围为250-2.5×10⁷个拷贝数的标准品)。结果表示为HBV DNA拷贝/10μl血浆或HBV DNA拷贝/100ng总肝脏DNA(相对于阴性对照归一化)。

多项研究表明，不仅转基因小鼠是证明新化学实体的体内抗病毒活性的合适模型，而且在小鼠体内使用HBV基因组的流体动力学注射以及使用感染HBV阳性患者血清的免疫缺陷型人类肝脏嵌合小鼠也已频繁地用于剖测靶向HBV的药物(Li等人,2016,Hepat.Mon.16:e34420；Qiu等人,2016,J.Med.Chem.59:7651-7666；Lutgehetmann等人,2011,Gastroenterology,140:2074-2083)。此外，通过接种低剂量的含有HBV基因组的腺病毒(Huang等人,2012,Gastroenterology 142:1447-1450)或腺相关病毒(AAV)载体(Dion等人,2013,J Virol.87:5554-5563)，也已在有免疫能力的小鼠中成功地建立慢性HBV感染。该模型也可用于证实新型抗HBV剂的体内抗病毒活性。

表1：衣壳组装测定法

在表1中，“A”表示IC₅₀<5μM；“B”表示5μM<IC₅₀<10μM；“C”表示IC₅₀<100μM

表2：HBV复制测定法

在表1中，“+++”表示EC₅₀<1μM；“++”表示1μM<EC₅₀<10μM；“+”表示EC₅₀<100μM

序列表

<110> 艾库里斯有限及两合公司（AiCuris GmbH & Co. KG）

<120> 具有抗乙型肝炎病毒(HBV)活性的新型草酰哌嗪类化合物

<130> A75286WO

<160> 7

<170> PatentIn 3.5版

<210> 1

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 反义引物HBV

<400> 1

tgcagaggtg aagcgaagtg caca 24

<210> 2

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 正义引物HBV

<400> 2

gacgtccttt gtttacgtcc cgtc 24

<210> 3

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 杂交探针FL HBV

<400> 3

acggggcgca cctctcttta cgcgg 25

<210> 4

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 杂交探针PH HBV

<400> 4

ctccccgtct gtgccttctc atctgc 26

<210> 5

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> HBV正向引物

<400> 5

ctgtaccaaa ccttcggacg g 21

<210> 6

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> HBV反向引物

<400> 6

aggagaaacg ggctgaggc 19

<210> 7

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 用于HBV的FAM标记探针

<400> 7

ccatcatcct gggctttcgg aaaatt 26

Claims

1.一种用于在对象中预防或治疗HBV感染的式I化合物或其可药用盐，或者式I化合物或其可药用盐的溶剂化物，或者式I化合物的前药或其可药用盐或溶剂化物，

其中

-R1、R2、R3和R4对于每个位置来说独立地选自H、D和C1-C6烷基

-R5和R6任选地连接以形成C4-C8杂环基环

-n是0、1或2

-m是0、1或2

2.根据权利要求1所述的用于在对象中预防或治疗HBV感染的式I化合物或其可药用盐，或者式I化合物或其可药用盐的溶剂化物，或者式I化合物的前药或其可药用盐或溶剂化物，

其中

-R1、R2、R3和R4对于每个位置来说独立地选自H、D和C1-C6烷基

-R5和R6任选地连接以形成C4-C8杂环基环

-n是0、1或2

-m是0、1或2

3.根据权利要求1所述的用于在对象中预防或治疗HBV感染的式I化合物或其可药用盐，或者式I化合物或其可药用盐的溶剂化物，或者式I化合物的前药或其可药用盐或溶剂化物，

其中

-R1、R2、R3和R4对于每个位置来说独立地选自H、D和C1-C6烷基

-R5和R6任选地连接以形成C4-C8杂环基环

-n是0、1或2

-m是0、1或2

4.根据权利要求1至3中的任一项所述的用于在对象中预防或治疗HBV感染的式I化合物或其可药用盐，或者式I化合物或其可药用盐的溶剂化物，或者式I化合物的前药或其可药用盐或溶剂化物，

其中所述前药选自酯和酰胺，优选脂肪酸的烷基酯。

5.根据权利要求1、3或4中的任一项所述的用于在对象中预防或治疗HBV感染的式I化合物，其为式II化合物或其可药用盐，或者式II化合物或其可药用盐的溶剂化物，或者式II化合物的前药或其可药用盐或溶剂化物，

其中

-R1、R2、R3和R4对于每个位置来说独立地选自H、D和C1-C6烷基

-R5和R6任选地连接以形成C4-C8杂环基环

-n是0、1或2

-m是0、1或2

6.根据权利要求1或3至5中的任一项所述的用于在对象中预防或治疗HBV感染的式I化合物，其为式II化合物或其可药用盐，或者式II化合物或其可药用盐的溶剂化物，或者式II化合物的前药或其可药用盐或溶剂化物，

其中

-R1、R2、R3和R4对于每个位置来说独立地选自H、D和C1-C6烷基

-R5和R6任选地连接以形成C4-C8杂环基环

-n是0、1或2

-m是0、1或2

7.根据权利要求1或3至6中的任一项所述的用于在对象中预防或治疗HBV感染的式I化合物，其为式IIa化合物或其可药用盐，或者式IIa化合物或其可药用盐的溶剂化物，或者式IIa化合物的前药或其可药用盐或溶剂化物，

其中

-R1、R2、R3和R4对于每个位置来说独立地选自H、D和C1-C6烷基

-n是0、1或2

-m是0、1或2

8.根据权利要求1或3至7中的任一项所述的用于在对象中预防或治疗HBV感染的式I化合物，其为式IIa化合物或其可药用盐，或者式IIa化合物或其可药用盐的溶剂化物，或者式IIa化合物的前药或其可药用盐或溶剂化物，

其中

-R1、R2、R3和R4对于每个位置来说独立地选自H、D和C1-C6烷基

-n是0、1或2

-m是0、1或2

9.根据权利要求1或3至8中的任一项所述的用于在对象中预防或治疗HBV感染的式I化合物，其为式IIb化合物或其可药用盐，或者式IIb化合物或其可药用盐的溶剂化物，或者式IIb化合物的前药或其可药用盐或溶剂化物，

其中

10.根据权利要求1或3至9中的任一项所述的用于在对象中预防或治疗HBV感染的式I化合物，其为式IIb化合物或其可药用盐，或者式IIb化合物或其可药用盐的溶剂化物，或者式IIb化合物的前药或其可药用盐或溶剂化物，

其中

11.根据权利要求1、3或4中的任一项所述的用于在对象中预防或治疗HBV感染的式I化合物，其为式III化合物或其可药用盐，或者式III化合物或其可药用盐的溶剂化物，或者式III化合物的前药或其可药用盐或溶剂化物，

其中

-R1、R2、R3和R4对于每个位置来说独立地选自H、D和C1-C6烷基

-R5和R6任选地连接以形成C4-C8杂环基环

-n是0、1或2

-m是0、1或2

12.根据权利要求1、3、4或11中的任一项所述的用于在对象中预防或治疗HBV感染的式I化合物，其为式IIIa化合物或其可药用盐，或者式IIIa化合物或其可药用盐的溶剂化物，或者式IIIa化合物的前药或其可药用盐或溶剂化物，

其中

-R1、R2、R3和R4对于每个位置来说独立地选自H、D和C1-C6烷基

-n是0、1或2

-m是0、1或2

13.根据权利要求1、3、4、11或12中的任一项所述的用于在对象中预防或治疗HBV感染的式I化合物，其为式IIIb化合物或其可药用盐，或者式IIIb化合物或其可药用盐的溶剂化物，或者式IIIb化合物的前药或其可药用盐或溶剂化物，

其中

14.一种药物组合物，所述药物组合物包含如权利要求1至13中的任一项所定义的化合物或其可药用盐，或者所述化合物或其可药用盐的溶剂化物或水合物，或者所述化合物的前药或其可药用盐或溶剂化物或水合物，以及可药用载体，所述药物组合物用于在对象中预防或治疗HBV感染。

15.一种在有需要的个体中治疗HBV感染的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的如权利要求1至13中的任一项所定义的化合物或其可药用盐，或者所述化合物或其可药用盐的溶剂化物或水合物，或者所述化合物的前药或其可药用盐或溶剂化物或水合物。

16.一种用于制备如权利要求1所定义的式I化合物的方法，所述方法包括使式IV化合物

其中Q如上定义，与式V化合物反应

其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、n和m如权利要求1所定义。

17.根据权利要求16所述的用于制备式I化合物的方法，其中使式IV化合物

其中Q如上定义，与式V化合物反应

其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、n和m如权利要求3所定义。