ES2893208T3 - Compuesto de pirazoloxazolidinona contra el virus de la hepatitis B - Google Patents

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ES2893208T3 ES17778663T ES17778663T ES2893208T3 ES 2893208 T3 ES2893208 T3 ES 2893208T3 ES 17778663 T ES17778663 T ES 17778663T ES 17778663 T ES17778663 T ES 17778663T ES 2893208 T3 ES2893208 T3 ES 2893208T3
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Abstract

Un compuesto que tiene la fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable o enantiómero o tautómero del mismo: **(Ver fórmula)** en la que, cada uno de R1, R2 y R3 se selecciona independientemente de hidrógeno, halógeno, alquilo C1-C3, amino e hidroxilo; **(Ver fórmula)** se selecciona de: **(Ver fórmula)** R6 se selecciona de deuterio, halógeno, amino e hidroxilo; n es 0, 1 o 2; Q es arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido con uno o más halógenos, el grupo arilo es fenilo y el heteroarilo se selecciona de furilo, pirrolilo, tienilo y piridilo; el enantiómero es un racemato o el isómero R.

Description

DESCRIPCIÓN
Compuesto de pirazoloxazolidinona contra el virus de la hepatitis B
Campo técnico
La presente invención se refiere a una clase de compuestos de pirazoloxazolidinona que tienen actividad antivirus de la hepatitis B.
Antecedentes
La hepatitis B vírica es una enfermedad causada por el virus de la hepatitis B (VHB), que se caracteriza principalmente por lesiones inflamatorias del hígado y que puede causar daños en múltiples órganos. La hepatitis B es muy prevalente en todo el mundo, afecta principalmente a niños y adultos jóvenes y, en un pequeño número de estos, puede transformarse en cirrosis hepática o cáncer de hígado. Por tanto, se ha convertido en una enfermedad mundial que amenaza gravemente la salud humana. También es una de las enfermedades más extendidas y dañinas. El virus de la hepatitis B no tiene un período epidémico determinado. Puede desarrollarse durante todo el año y, en su mayoría, se desarrolla esporádicamente. En los últimos años, la incidencia de hepatitis B ha aumentado significativamente. Los estudios han demostrado que la inhibición del VHB está directamente relacionada con el efecto terapéutico de la hepatitis B (véase, por ejemplo, Klaus Klumpp y Thibaut Crépin, Capsid proteins of enveloped viruses as antiviral drug targets, Current Opinion in Virology, 2014, 5:63-71; Timothy M. Block, Siddhartha Rawat, Carol L. Brosgart, Chronic hepatitis B: A wave of new therapies on the horizon, Antiviral Research, 121,2015, 69-81).
Aunque existen muchos métodos para el tratamiento de la infección por el virus de la hepatitis B, estos son muy limitados. Solo en muy pocos pacientes se pueden observar la reducción continua del ADN del VHB en suero, la conversión serológica del antígeno e y el antígeno s y otros efectos del tratamiento.
Por ejemplo, el interferón alfa se ha utilizado ampliamente para el tratamiento de la infección crónica por VHB durante muchos años, pero el interferón solo es eficaz para tipos específicos de pacientes y se tolera mal. De manera similar, la lamivudina (3'-tio-2',3'-didesoxicitidina) se ha utilizado para el tratamiento de la infección por VHB debido a su marcado efecto inhibidor sobre la replicación del VHB, pero debido al aumento gradual de las tasas de resistencia, la eficacia en una gran proporción de pacientes es limitada. El adefovir dipivoxil recientemente comercializado (9-[2-[[bis[(pivaloiloxi)metil]fosfinil]metoxi]etil]adenina) es eficaz para los pacientes resistentes a lamivudina, pero el fármaco tiene la desventaja de que la tasa de respuesta viral sostenida es baja (menos del 20%) y la dosis máxima tolerada y la duración del tratamiento suelen estar limitadas debido a su nefrotoxicidad.
Estudios recientes han descubierto que varios medicamentos tienen una buena actividad anti-VHB y han entrado en estudios clínicos. Por ejemplo, 2'-fluoro-5-metil-p-L-uracilarabinósido (Bukwang), 2'-desoxi-5-fluoro-3'-tiocitidina (Gilead), 2'-desoxi-L-timidina (Idenix) , 2'-desoxi-L-citidina (Idenix) y otros nucleósidos mostraron una actividad anti-VHB significativa. Además, compuestos de nucleósidos cíclicos, tales como 2-amino-1,9-dihidro-9-[(1S,3R,4S)-4-hidroxi-3-hidroximetil-2-metilenciclopentil]-6H-purina-6-ona monohidratado (Bristol-Myers Squibb) y los compuestos de nucleósidos acíclicos que se dirigen al hígado, como Ribapharm, también son clínicamente activos contra el VHB.
El documento WO 2006/033995 A describe compuestos de pirazoloxazolidinona que tienen actividad anti-VHB.
Aunque la mayoría de los fármacos anti-VHB descubiertos recientemente presentan una buena actividad antiviral in vitro, las bajas tasas de respuesta y resistencia limitan la eficacia clínica de estos fármacos. Por lo tanto, aunque actualmente existen muchos fármacos y métodos para tratar el VHB, todavía se necesitan clínicamente fármacos y métodos de tratamiento nuevos o mejorados.
En resumen, los fármacos terapéuticos existentes para el VHB tienen las limitaciones de un efecto terapéutico limitado, fácil resistencia a los fármacos y alta toxicidad. Por lo tanto, existe una necesidad urgente de nuevos fármacos con alta eficacia, baja toxicidad y diferentes perfiles de resistencia a fármacos clínicamente.
Sumario de la invención
El objeto de la presente invención es proporcionar una clase de compuestos que tienen la función de inhibir la replicación del VHB.
Otro objeto de la presente invención es proporcionar un uso farmacéutico del compuesto anterior.
Un aspecto de la invención se refiere a un compuesto de fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable o enantiómero o tautómero del mismo,
Figure imgf000003_0001
en la que,
Ri a R6, n y Q son como se definen a continuación.
Otro aspecto de la invención se refiere a un compuesto de fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable o enantiómero o tautómero del mismo, para su uso en la inhibición del virus de la hepatitis B.
Otro aspecto de la invención se refiere a un compuesto de fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable o enantiómero o tautómero del mismo, para su uso en el tratamiento de una infección por el virus de la hepatitis B en un mamífero, particularmente un ser humano.
Otro aspecto de la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable o enantiómero o tautómero del mismo, y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Otro aspecto de la invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable o enantiómero o tautómero del mismo, en la fabricación de un medicamento para inhibir el virus de la hepatitis B. Otro aspecto de la invención se refiere a un método para inhibir el virus de la hepatitis B que comprende administrar a un sujeto que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable o enantiómero o tautómero del mismo.
Descripción de la invención
Un aspecto de la invención se refiere a un compuesto que tiene la siguiente fórmula general I, o una sal farmacéuticamente aceptable o enantiómero o tautómero del mismo:
Figure imgf000003_0002
en la que,
cada uno de R1, R2 y R3 se selecciona independientemente de hidrógeno, halógeno, alquilo C1-C3 , amino e hidroxilo; R4 y R5 , junto con el átomo de carbono al que están unidos, forman un grupo heterocíclico de cinco miembros que contiene al menos un átomo de nitrógeno seleccionado entre los grupos indicados a continuación;
R6 se selecciona de deuterio, halógeno, amino e hidroxilo;
n es 0, 1 o 2;
Q es arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido con uno o más halógenos, el arilo es fenilo y el heteroarilo se selecciona de furilo, pirrolilo, tienilo y piridilo.
Los compuestos de la presente solicitud pueden tener tautómeros. Por ejemplo, las dos partes estructurales siguientes se consideran una parte estructural equivalente en esta solicitud.
Figure imgf000004_0001
De manera similar, las dos partes estructurales siguientes también se consideran una parte estructural equivalente en esta solicitud.
Figure imgf000004_0002
Los compuestos de la presente solicitud tienen un carbono quiral que puede tener configuración R o S, o una combinación de las mismas. La presente invención se limita a los racematos y los isómeros R.
Por tanto, en una realización, el carbono quiral en la fórmula I está en configuración R y la estructura se muestra en la fórmula I-R:
Figure imgf000004_0003
En una realización, en la fórmula I y la fórmula I-R:
cada uno de R1, R2 y R3 es independientemente hidrógeno o halógeno; preferiblemente, R1 y R3 son ambos hidrógeno y R2 es halógeno; más preferiblemente, R1 y R3 son ambos hidrógeno y R2 es bromo;
R6 es deuterio o halógeno;
Q es arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido con uno o más halógenos, especialmente flúor, dicho arilo es fenilo, y dicho heteroarilo se selecciona de furilo, pirrolilo y tienilo.
En una realización, R6 en la fórmula I y la fórmula I-R es flúor.
En una realización, Q en la fórmula I y la fórmula I-R es p-fluorofenilo.
En otra realización, Q en la fórmula I y la fórmula I-R es tienilo o furilo, preferiblemente furan-2-ilo.
Según la invención, el resto
Figure imgf000004_0004
en la fórmula I y la fórmula I-R se selecciona de:
Figure imgf000005_0001
preferiblemente:
Figure imgf000005_0002
más preferiblemente:
Figure imgf000005_0003
En una realización, el compuesto de fórmula I se selecciona de:
Ċ
Figure imgf000006_0001
En una realización preferida, el compuesto de fórmula I se selecciona de:
Figure imgf000006_0002
Figure imgf000007_0001
En una realización más preferida, el compuesto de fórmula I se selecciona de:
Figure imgf000007_0002
Los términos y expresiones en la presente solicitud generalmente tienen el siguiente significado a menos que se especifique lo contrario.
El término "alquilo" se refiere a un grupo hidrocarbilo saturado lineal o ramificado. En la presente solicitud, el grupo alquilo puede incluir de 1 a 3 átomos de carbono. Por ejemplo, el término "alquilo C1-C3" se refiere a un grupo hidrocarbilo saturado lineal o ramificado que tiene de 1 a 3 átomos de carbono, incluidos metilo, etilo, n-propilo e isopropilo. En la presente solicitud, "alquilo C1-C3" es preferiblemente metilo.
El término "alcoxi" se refiere a -O-alquilo, en el que el término "alquilo" es como se definió anteriormente. Por ejemplo, el término "alcoxi C1-C3" se refiere a -O-(alquilo C1-C3).
El término "halógeno" es flúor, cloro, bromo o yodo. En algunas realizaciones, el halógeno es flúor.
El término "trifluorometilo" es un grupo -CF3.
El término "trifluorometoxi" es un grupo -OCF3.
El término "amino" es un grupo -NH2.
El término "arilo" se refiere a fenilo.
El término "heteroarilo" se refiere a pirrolilo, furilo, tienilo y piridilo. Se puede unir un grupo heteroarilo al resto de restos de la molécula a través de cualquier sitio adecuado del anillo. Por ejemplo, pirrolilo puede ser pirrol-1-ilo, pirrol-2-ilo o pirrol-3-ilo; furilo puede ser furan-2-ilo o furan-3-ilo; tienilo puede ser tiofen-2-ilo o tiofen-3-ilo.
La expresión "una sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a aquellas sales que conservan la eficacia biológica y las propiedades del compuesto original, que tienen la actividad farmacéutica deseada y no son biológicamente o de otro modo indeseables. Dichas sales incluyen, pero no se limitan a: (1) sales con ácidos (sales ácidas) obtenidas haciendo reaccionar la base libre del compuesto original con ácidos inorgánicos u orgánicos; los ácidos inorgánicos incluyen, entre otros, ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido metansulfónico, y los ácidos orgánicos incluyen, entre otros, ácido acético, ácido tricloroacético, ácido propiónico, ácido butírico, ácido maleico, ácido ptoluensulfónico, ácido málico, ácido malónico, ácido cinámico, ácido cítrico, ácido fumárico, ácido canfórico, ácido diglucónico, ácido aspártico, ácido tartárico; (2) sales (sal básica) obtenidas mediante la sustitución de un protón ácido presente en un compuesto original por un ion metálico o coordinado con una base orgánica.
Otro aspecto de la invención se refiere a un compuesto de fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable o enantiómero o tautómero del mismo, para su uso en la inhibición del virus de la hepatitis B.
Otro aspecto de la invención se refiere a un compuesto de fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable o enantiómero o tautómero del mismo, para uso en el tratamiento de una infección por el virus de la hepatitis B en un mamífero, particularmente un ser humano.
Otro aspecto de la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable o enantiómero o tautómero del mismo, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
El propósito de la composición farmacéutica es facilitar la administración del compuesto al organismo. En general, los compuestos de la presente invención se pueden administrar en una forma de dosificación adecuada con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables. Estas formas de dosificación son adecuadas para administración oral, administración rectal, administración tópica y otras administraciones parenterales (por ejemplo, subcutánea, intramuscular, intravenosa, etc.). Por ejemplo, las formas de dosificación adecuadas para la administración oral incluyen cápsulas, comprimidos, gránulos, jarabes y similares. Los compuestos de la presente invención contenidos en estas formulaciones pueden ser polvos sólidos o gránulos; disoluciones o suspensiones en líquidos acuosos o no acuosos; emulsiones de agua en aceite o aceite en agua y similares. Las formas de dosificación descritas anteriormente se pueden preparar a partir del compuesto activo con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables mediante un método farmacéutico habitual. Un vehículo farmacéuticamente aceptable se refiere a un excipiente o diluyente que no causa una irritación significativa al organismo y no interfiere con la actividad biológica y las propiedades del compuesto administrado. Los vehículos anteriores deben ser compatibles con el compuesto activo u otros excipientes. Para formulaciones sólidas, los vehículos no tóxicos usados habitualmente incluyen, pero no se limitan a manitol, lactosa, almidón, estearato de magnesio, carbonato de calcio, fosfato de calcio, almidón, celulosa y derivados de los mismos, glucosa, sacarosa, gelatina y similares. Los vehículos para formulaciones líquidas incluyen agua, disolución salina fisiológica, disolución acuosa de dextrosa, aceites vegetales, etilenglicol, polietilenglicol y similares. El compuesto activo puede formar una disolución o suspensión con el vehículo anterior.
En algunas realizaciones, la composición farmacéutica es una forma de dosificación unitaria adecuada para la administración única de una dosis precisa. En otras realizaciones, la cantidad del compuesto está en el intervalo de aproximadamente 0,001 mg/kg de peso corporal/día a aproximadamente 1000 mg/kg de peso corporal/día. En algunas realizaciones, la cantidad del compuesto varía de aproximadamente 0,5 mg/kg de peso corporal/día a aproximadamente 50 mg/kg de peso corporal/día. En algunas realizaciones, la cantidad del compuesto es de aproximadamente 0,001 g/día a aproximadamente 7 g/día. En otras realizaciones, la cantidad de compuesto es de aproximadamente 0,002 g/día a aproximadamente 6 g/día. En otras realizaciones, la cantidad del compuesto es de aproximadamente 0,005 g/día a aproximadamente 5 g/día. En otras realizaciones, los niveles de dosis por debajo del límite inferior del intervalo anterior pueden ser suficientes. En otras realizaciones, pueden requerirse niveles de dosis por encima del límite superior del intervalo anterior. En algunas realizaciones, el compuesto se administra en una sola dosis una vez al día. En otras realizaciones, el compuesto se administra en múltiples dosis, más de una vez al día. En algunas realizaciones, el individuo al que se administra la composición farmacéutica es un mamífero. En otras realizaciones, el mamífero es un ser humano. En otras realizaciones, la composición farmacéutica comprende además al menos un fármaco anti-VHB. En otras realizaciones, la composición farmacéutica y dicho al menos un fármaco anti-VHB se combinan en un producto de combinación en formas de dosificación separadas, respectivamente.
La composición farmacéutica de la presente invención puede comprender además otros fármacos anti-VHB, que pueden ser inhibidores de la polimerasa del VHB, inmunomoduladores o interferones. Específicamente, los otros fármacos contra el VHB pueden ser lamivudina, telbivudina, tenofovir, entecavir, adefovir dipivoxil, alfaferona, aloferón, celmoleucina, clevudina, emtricitabina, famciclovir, feilong, baoganling CP, intefina, interferón alfa-lb, interferón alfa, interverión alfa-2a, interferón beta-1a, interferón alfa-2, interleuquina-2, mivotilato, nitazoxanida, interferón alfa-2a pegilado, ribavirina, roferón-A, sizofirano, euforavac, veldona, rintatolimod, fosfazida, heplisav, interferón alfa-2b, levamisol, propagermanio y similares.
Estos fármacos adicionales se pueden administrar por separado de las composiciones farmacéuticas que contienen los compuestos de la invención como parte de un régimen de tratamiento de dosis múltiples. Como alternativa, tales fármacos pueden ser parte de una forma de dosificación unitaria, mezclados con un compuesto de la invención en una única composición. Cuando se administran por separado como parte de un régimen de tratamiento de dosis múltiples, los dos agentes activos se pueden administrar simultáneamente, secuencialmente o a intervalos entre sí para producir la actividad deseada de estos fármacos.
Otro aspecto de la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable o enantiómero o tautómero del mismo, o una composición farmacéutica de la presente invención en la fabricación de un medicamento para inhibir el virus de la hepatitis B.
En una realización, el medicamento es para tratar una infección por el virus de la hepatitis B en un mamífero, en particular en un ser humano.
Otro aspecto de la invención se refiere a un método para inhibir la replicación del virus de la hepatitis B, que comprende administrar a un sujeto que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable o enantiómero o interconversión del mismo, o la composición farmacéutica de la presente invención.
En una realización, el método es para tratar una infección por el virus de la hepatitis B en un mamífero, en particular en un ser humano.
En la presente solicitud, la expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" puede ser la cantidad que alivia uno o más síntomas de una enfermedad o trastorno en un sujeto hasta cierto punto, que provoca que uno o más parámetros fisiológicos y bioquímicos asociados con una enfermedad o trastorno, o la causa de una enfermedad o trastorno, se recupere parcial o completamente a la normalidad y/o que reduce la probabilidad de la aparición de una enfermedad o trastorno.
En la presente solicitud, las enfermedades implicadas en una infección por el virus de la hepatitis B incluyen hepatitis aguda, hepatitis crónica, cirrosis hepática y carcinoma hepatocelular. Los síntomas de una infección aguda por el virus de la hepatitis B pueden ser asintomáticos o pueden ser los mismos que los de la hepatitis aguda. Los pacientes con infecciones virales crónicas pueden desarrollar una enfermedad activa que puede ser cirrosis o cáncer de hígado. El método de administración y la forma de dosificación específicos dependen de las propiedades fisicoquímicas del propio compuesto y de la gravedad de la enfermedad a la que se aplica.
Se puede usar una PCR y un ensayo inmunoadsorbente ligado a enzimas (ELISA) para cuantificar el efecto de los compuestos de la presente solicitud sobre la replicación del VHB.
La presente invención también proporciona métodos para preparar los compuestos anteriores, y métodos de preparación similares se describen en el documento PCT/US/06/28343, presentado el 21 de julio, 2006 (documento WO 2007/014023 A).
Las preparaciones del compuesto de la presente invención pueden referirse a los siguientes métodos, pero sin limitarse a ellos:
Vía 1
La resolución quiral de los compuestos de la presente solicitud se logró mediante cromatografía de fluidos supercríticos (SFC) de acuerdo con el método de Berger. Véase, Berger, T.A., "Practical advantages of packed column supercritical fluid chromatography in supporting combinatorial chemistry ", ACS Symposium Series (2000), 748 (Unified Chromatography), 203-233; Berger, T.A., Todd, B.S,, "Packed column supercritical fluid chromatography of oligoethers using pure carbon dioxide with flame ionization and ultraviolet detection", Chromatographia (2001), 54 (11/12), 777­ 781; Berger, T.A., Todd, B.S., "Packed column supercritical fluid chromatography of polysiloxanes using pure and hexane modified carbon dioxide with flame ionization and ultraviolet detection", Chromatographia (2001), 54 (11/12), 771-775.
El procedimiento de resolución quiral de Berger se puede resumir de la siguiente manera: la mezcla racémica (60 mg) se disuelve en metanol (2 mL) y la disolución resultante se inyecta en una columna quiral de preparación (ChiralPak AD-H SFC, d.i. 1 cm x 25 cm). Las condiciones de SFC son las siguientes: fase móvil: CO2 al 65% y metanol al 35%, caudal: 10 ml/min, longitud de onda de detección: 220 nm. Los estereoisómeros se pueden separar en diferentes tiempos de retención. La configuración absoluta se determina comparando los resultados de la difracción de cristales de CP060 (CP060 es 2-(3,5-di-terc-butil-4-hidroxifenil)-3-[3-[N-metil-N-[2-[3,4-(metilendioxi)fenoxi]etil]amino]propil]-1,3-tiazolin-4-ona, CP060-(R)-(+), [a] D = 33,3°; CP060-(S )-(-), [a]D = -33,5°) (Kato, Tatsuya; Ozaki, Tomokazu; Tamura, Kazuhiko; Suzuki, Yoshiyuki; Akima, Michitaka; Ohi, Nobuhiro, "Novel Calcium Antagonists with Both Calcium Overload Inhibition and Antioxidant Activity. 2. Structure-Activity Relationships of Thiazolidinone Derivatives", Journal of Medicinal Chemistry (1999), 42 (16), 3134-3146). La configuración R del compuesto de la presente invención se determina basándose en el método anterior.
Descripción detallada de la invención
La invención se ilustra mediante los siguientes ejemplos no limitantes. Los ejemplos marcados con el símbolo * son ejemplos de referencia que no forman parte de la presente invención.
Ejemplo 1: 3-(2-(1 H-benzo[d]imidazol-5-il)etil)-2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolin-4-ona
Figure imgf000010_0001
Etapa 1. 1 -(4-bromofenil)-2-(1 -(4-fluorofenil)etiliden)hidrazina
Se añadieron 1-(4-fluorofenil)etanona (113,2 g, 820,6 mmol), clorhidrato de 1-(4-bromofenil)hidrazina (183 g, 820,6 mmol) y acetato de potasio (80,4 g, 820,6 mmol) en etanol (1,8 L), y la mezcla se agitó durante la noche a 88 °C. La mezcla de reacción se concentró al vacío hasta la sequedad, luego se disolvió en diclorometano, se filtró para dar un producto bruto, que finalmente se lavó con éter de petróleo para dar 145 g de 1-(4-bromofenil)-2-(1-(4-fluorofenil)etiliden) hidrazina. Rendimiento: 59%; EM: 307,0 [M+H]+.
Etapa 2. 1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1H-pirazol-4-formaldehído
Se añadió lentamente gota a gota oxicloruro de fósforo (83,5 ml) a DMF anhidra (68,75 ml) en condiciones anhidras y enfriado en un baño de hielo y, después de agitar durante 30 min, se disolvió bajo protección de nitrógeno 1-(4-bromofenil)-2-(1 -(4-fluorofenil)etiliden)hidrazina (125 g, 407,2 mmol) en una pequeña cantidad de DMF, que se añadió lentamente gota a gota a la mezcla de reacción. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y se calentó hasta 702C. Después de 5 horas de reacción, la disolución de reacción se vertió en agua helada, se filtró, se lavó con acetona y se filtró para obtener 145 g de 1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-formaldehído. Rendimiento: 94%.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-afe) 59,97 (s, 1H); 9,39 (s, 1H); 8,03-7,96 (m, 4H); 7,79-4,77 (d, 2H); 7,38-7,33 (m, 2H). Etapa 3. 2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-4-1 H-pirazolil)-3-(4-nitrofenetil)oxazolin-4-ona
Se disolvieron 1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1H-pirazol-4-formaldehído (72,0 g, 208,7 mmol), 2-hidroxi-N-(4-nitrofenetil)acetamida (59,0 g, 250,4 mmol) y ácido p-toluensulfónico (21,5 g, 104,4 mmol) en 2 litros de tolueno. La mezcla se calentó hasta el reflujo con un separador de agua durante 16 horas, luego se extrajo con acetato de etilo y el disolvente se secó por evaporación rotatoria. El producto bruto se dispersó en agua y se filtró después de agitar durante 15 min. La torta se dispersó en metanol, se filtró después de agitar durante 30 min. El disolvente se secó mediante evaporación rotatoria para dar 92,0 g de 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-4-1H-pirazolil)-3-(4-nitrofenetil)oxazolin-4-ona. Rendimiento: 94%.
RMN de 1H (400 MHz, CDCla) 58,03 (d, 2H); 7,86 (s, 1H); 7,65-7,61 (m, 7H); 7,19-7,14 (m, 5H); 5,92 (s, 1H) 4,41 -4,28 (m, 2H); 3,91-3,87 (m, 1H); 3,09-3,05 (m, 1H); 2,87-2,82 (m, 2H).
Etapa 4. 3-(4-aminofenetil)-2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-4-1 H-pirazolil)oxazolin-4-ona
Se disolvió 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-4-1H-pirazolil)-3-(4-nitrofenetil)oxazolin-4-ona (92,0 g, 18,15 mmol) en acetato de etilo/metanol (1/1) (2000 ml), se añadió Ni Raney (9,2 g), Se introdujo gas hidrógeno y la mezcla se agitó a 30°C durante 16 horas, luego se filtró y se concentró para dar 88 g de 3-(4-aminofenetil)-2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-4-1 H-pirazolil)oxazolina-4-ona. Rendimiento: 93%; EM: 521,2 [M+H]+ .
Etapa 5: 3-(4-acetamino-3-nitrofenetil)-2-(3-(4-fluorofenil)-1 -(4-bromofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolidin-4-ona
Se disolvió 3-(4-aminofenetil)-2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-4-1H-pirazolil)oxazolin-4-ona (86,0 g, 165,1 mmol) en Ac2O (900 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 60 min. Una vez completada la reacción, se enfrió hasta 0°C, y luego una formada disolución agregando HNO3 (al 65%) (16,0 ml) a AcO2 enfriado en un baño de hielo se añadió lentamente (123 ml) a la mezcla de reacción. La mezcla de reacción se agitó durante la noche a 0 °C. Una TLC (metanol:diclorometano = 1:10) mostró que la reacción estaba casi completa. A continuación, la mezcla de reacción se concentró al vacío y el producto bruto se recristalizó en acetato de etilo y se filtró para dar 3-(4-acetamino-3-nitrofenetil)-2-(3-(4-fluorofenil)-1-(4-bromofenil))-1H-pirazol-4-il)oxazolidin-4-ona (70 g, 70% de rendimiento).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-afe) 5 10,15 (s, 1H); 8,74 (s, 1H); 7,91-7,29 (m, 13H); 6,17 (s, 1H); 4,31-4,20 (m, 2H); 3,75-3,71 (m, 1H); 3,06-3,01 (m, 1H); 2,79-2,73 (m, 2H); 2,05 (s, 3H).
Etapa 6. 3-(4-amino-3-nitrofenil)-2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazolil-4-il)oxazolin-4-ona
Se disolvió N-(4-(2-(2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-4-1 H-pirazolil)-4-oxazolin-3-il)etil)-2-nitrofenil)acetamida (70 g, 114,6 mmol) en metanol (1000 ml) y NaOH 1 M (690 ml) y se calentó a reflujo durante la noche. La disolución de reacción se filtró para dar 60,0 g de 3-(4-amino-3 nitrofenetil)-2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1H-pirazolil-4-il)oxazolin-4-ona. Rendimiento 93,8%; EM: 566,1 [M+H]+ .
Etapa 7. 2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(3,4-diaminofenetil)oxazolin-4-ona
Se disolvió 3-(4-amino-3-nitrofenil)-2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1H-pirazol-4 il)oxazolin-4-ona (60,0 g, 106,0 mmol) en acetato de etilo/metanol (1/1) (2000 ml), se añadió Ni Raney (6,0 g), se introdujo gas hidrógeno y la mezcla se agitó a 30°C durante 16 horas. La mezcla se filtró y se concentró para obtener 55,0 g de 3-(4-aminofenetil)-2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-4-1 H-pirazolil)oxazolin-4-ona. Rendimiento: 90%.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-afe) 58,72 (s, 1H); 9,71 (d, 2H); 7,74-7,63 (m, 4H); 7,35-7,31 (m, 2H); 6,36 (d, 1H); 6,25 (s, 1H); 6,09-6,06 (d, 3H); 4,39-6,25 (m, 6H); 3,61-3,59 (m, 1H); 2,82-2,79 (m, 1H); 2,39-2,37 (m, 2H). EM: 536,2 [M+H]+ . Etapa 8. 3-(2-(1 H-benzo[D]imidazol-5-il)etil)-2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolin-4-ona Se disolvió 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1H-pirazol-4-il)-3-(3,4-diaminofenetil)oxazolin-4-ona (300 mg, 0,56 mmol) en 5 ml de ácido fórmico. La disolución de reacción se agitó a 70 °C durante 1 hora y se concentró hasta la sequedad. El producto bruto se aisló mediante cromatografía en columna de fase inversa para dar un sólido blanco (80 mg, rendimiento: 26%).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-afe) 512,29 (s, 1H); 8,73 (s, 1H); 7,89 (d, J = 8,4 Hz, 2H); 7,72 (d, J = 8,8 Hz, 2H); 7,59­ 7,62 (m, 2H); 7,39-7,41 (m, 1H); 7,23-7,28 (m, 3H); 6,89 (d, J = 8,4 Hz, 1H); 6,05 (s, 1H); 4,19-4,29 (m, 2H); 3,73-3,80 (m, 1H); 2,95-3,02 (m, 1H); 2,07-2,86 (m, 2H). EM: 548 [M+H]+ .
Ejemplo 2: 3-(2-(1 H-benzo[a][1,2,3]triazol-5-il)etil)-2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolin-4-ona
Figure imgf000012_0001
Se disolvió 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(3,4-diaminofenetil)oxazolin-4-ona (300 mg, 0,56 mmol) en 5 ml de ácido acético y se añadió una disolución de nitrito de sodio (58 mg, 0,84 mmol) en 5 mL de agua. La disolución de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, se añadieron 50 ml de agua y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (60 ml). El producto se extrajo con una disolución de bicarbonato de sodio al 10% y disolución salina saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró hasta la sequedad. El producto bruto se aisló mediante cromatografía en columna de fase inversa para dar un sólido blanco (105 mg, rendimiento: 34%).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-ate) 515,53 (s, 1H); 8,75 (s, 1 H); 7,89 (d, J = 8,8 Hz, 2H); 7,72 (d, J = 8,4 Hz, 3H); 7,59­ 7,63 (m, 3H); 7,23-7,27 (m, 2H); 7,14 (d, J = 8,0 Hz, 1H); 6,08 (s, 1H); 4,19-4,29 (m, 2H); 3,78-3,85 (m, 1H); 3,02-3,09 (m, 1 H); 2,81-2,93 (m, 2H). EM: 549 [M+H]+.
Ejemplo 3: 3-(2-(2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo[a]imidazol-5-il)etil)-2-(1-(4-bromofenil))-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-oxazolidin-4-ona
Figure imgf000012_0002
Se añadió gradualmente CDI (4,23 g, 26,10 mmol) a una disolución de 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(3,4-diaminofenetil)oxazolin-4-ona (7,0 g, 13,05 mmol) en DMF (10 ml). La mezcla se agitó bajo nitrógeno a 80°C durante 5 horas. La disolución de reacción se vertió en disolución salina saturada (1000 ml) para precipitar un sólido marrón. La torta del filtro resultante se secó al vacío a 60°C y se purificó mediante una columna de gel de sílice (diclorometano:metanol = 10:1) para dar 3-(2-(2-oxo-2,3-dihidro-1H-benzo[a]imidazol-5-il)etil)-2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-oxazolidin-4-ona (5,56 g, rendimiento: 75,4%) como un sólido de color amarillo pálido.
RMN de 1H (400 MHz, CDCta) 510,46-10,45 (d, J = 4,8 Hz, 2H); 8,72 (s, 1H); 7,90-7,88 (m, 2H); 7,73-7,71 (d, J = 9,2 Hz, 2H); 7,65-7,61 (m, 2H); 7,29 (t, J = 8,8 Hz, 2H); 6,71 (t, J = 8,0 Hz, 2H); 6,62-6,59 (m, 2H); 6,02 (s, 1 H); 4,26-4,24 (m, 2H); 3,89-3,83 (m, 1H); 2,98-2,91 (m, 1 H); 2,51 -2,50 (m, 2H). EM, m/z: 563,8 (M++H).
Se separó quiralmente 3-(2-(2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo[d]imidazol-5-il)etil)-2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-oxazolidin-4-ona (87 g) mediante SFC (columna: AS-H; tamaño de columna: 0,46 cm DI x 15 cm L; volumen de inyección: 2,0 pl; fase móvil: HEP/IPA (DEA al 0,1%) = 60/40 (V/V); caudal: 0,5 mL/min; longitud de onda: UV 254 nm; temperatura: 35°C) en dos isómeros ópticos.
(R)-3-(2-(2-oxo-2,3-dihidro-1)H-benzo[a]imidazol-5-il)etil)-2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-oxazolidin-4-ona, sólido blanco, 34,72 g, rendimiento 39,9%. [a]D 41,04° (c 0,5019 g/ml, 19,9°C); pureza: 98,47%, e.e.: 100,00%.
(S)-3-(2-(2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo[a]imidazol-5-il)etil)-2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-oxazolidin-4-ona, sólido blanco, 35,09 g, rendimiento 40,3%. [a]D -39,89° (c 0,5014 g/ml, 20,0°C); pureza: 99,65%, e.e.: 98,65%.
Ejemplo 4*: 3-(2-(2-amino-1 H-benzo[a]imidazol-6-il)etil)-2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolin-4-ona
Figure imgf000013_0001
Se disolvió 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(3,4-diaminofenetil)oxazolin-4-ona (140 mg, 0,26 mmol) en metanol (8 ml) y agua (2 ml). Después de agitar a temperatura ambiente, se disolvió bromuro de cianógeno en 2 ml de metanol y luego se añadió gota a gota a la disolución de reacción. La disolución de reacción se volvió turbia después de media hora, y una TLC (diclorometano:metanol = 10:1) mostró que el material de partida se había consumido. Después de diluir la disolución de reacción con 50 mL de agua, el metanol se eliminó a baja temperatura por evaporación rotatoria, se ajustó a básico con 5 mL de amoniaco y luego se extrajo dos veces con acetato de etilo (50 mL x 2). La fase orgánica se lavó tres veces con disolución salina saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró, se concentró por evaporación rotatoria y el residuo se disolvió en DMF y se purificó por HPLC para dar el producto diana de 3-(2-(2-amino-1 H-benzo[d]imidazol-6-il)etil)-2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolin-4-ona como un sólido blanco (30 mg, rendimiento: 20,5%).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-afe) 58,68 (s, 1H); 7,88 (d, J = 7,6 Hz, 2H); 7,72 (d, J = 7,6 Hz, 2H); 7,59 (s, 2H) 7,27 (t, J = 8,0 Hz, 2H); 6,92 (d, J = 7,2 Hz, 1H); 6,82 (s, 1H); 6,55 (d, J = 6,8 Hz, 1H); 6,07 (s, 2H); 6,03 (s, 1H); 4,28-4,19 (m, 2H); 3,72-3,68 (m, 1H); 2,92-2,89 (m, 1H); 2,70-2,60 (m, 2H); EM: 563,2 [M+H]+.
Ejemplo 5: 2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(2,3-dihidro-2-tio-1 H-benzo[D]imidazol-5-il)etil)oxazolin-4-ona
Figure imgf000013_0002
Se disolvieron 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1H-pirazol-4il)-3-(3,4-diaminofenetil)oxazolin-4-ona (100 mg, 0,19 mmol), disulfuro de carbono (142 mg, 1,87 mmol) e hidróxido de potasio (40 mg, 0,71 mmol). en etanol (2,5 ml) y agua (0,2 ml) y se calentó a reflujo bajo argón durante dos horas. Una TLC (diclorometano:metanol = 15:1) mostró que el material de partida se había consumido. La disolución de reacción se concentró por evaporación rotatoria y el residuo se disolvió en DMF (3 ml), se filtró y se purificó por HPLC para dar el producto diana de 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(2,3-dihidro-2-tio-1 H -benzo[D]imidazol-5-il)etil)oxazolin-4-ona como un sólido blanco (43 mg, rendimiento: 39,8%).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-ds) 512,41 (d, J = 4,8 Hz, 2H); 8,71 (s, 1H); 7,88 (d, J = 8,0 Hz, 2H); 7,72 (d, J = 8,0 Hz, 2H); 7,61 (d, J = 4,8 Hz, 2H); 7,29 (t, J = 8,2 Hz, 2H); 6,94 (t, J = 8,0 Hz, 1H); 6,86 (s, 1H); 6,82 (d, J = 7,6 Hz, 1H); 6,03 (s, 1H); 4,29-4,20 (m, 2H); 3,74-3,70 (m, 1H); 2,97-2,94 (m, 1H); 2,77-2,50 (m, 2H); EM: 580,2 [M+H]+.
Ejemplo 6: 2-(3-(4-fluorofenil)-1 -(4-yodofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo[d]imidazol-5-il)etil)oxazolidin-4-ona
Figure imgf000014_0001
Etapa 1.2-(3-(4-fluorofenil)-1 -(4-yodofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(4-nitrofenetil)oxazolidin-4-ona
Una disolución de 3-(4-fluorofenil)-1-(4-yodofenil)-1H-pirazol-5-formaldehído (1,18 g, 3 mol), 2-hidroxi-N-(4-metoxifenetil)acetamida (741 mg, 3,3 mmol) y ácido p-toluensulfónico (160 mg) en tolueno (100 ml) se calentó por reflujo con separación del agua durante la noche. Una TLC (éter de petróleo:acetato de etilo = 1:1) mostró que la reacción se había completado. La disolución de reacción se concentró y se purificó mediante una columna de gel de sílice (éter de petróleo:acetato de etilo = 10:1) para dar 2-(3-(4-fluorofenil)-1-(4-yodofenil)-1 H-pirazol-4-(il)-3-(4-nitrofenetil)oxazolidin-4-ona (1,78 g, rendimiento: 99,1%) como un sólido amarillo; EM: m/z: 599 (M++H).
Etapa 2. 3-(4-aminofenetil)-2-(3-(4-fluorofenil)-1 -(4-yodofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolidin-4-ona
Se añadió polvo de hierro (1,4 g) a una disolución de 2-(3-(4-fluorofenil)-1-(4-yodofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(4-nitrofenetil)oxazolidin-4-ona (1,5 g, 2,5 mmol) en tetrahidrofurano (100 ml) y ácido acético (100 ml). La mezcla se agitó durante la noche a 60 °C. Una TLC (éter de petróleo:acetato de etilo = 1:1) mostró que la reacción estaba casi completa. El polvo de hierro se eliminó por filtración. El filtrado se concentró al vacío y se purificó mediante una columna de gel de sílice (éter de petróleo:acetato de etilo = 5: 1) para dar 3-(4-aminofenetil)-2-(3-(4-fluorofenil)-1-(4-yodofenil) )-1 H-pirazol-4-il)oxazolidin-4-ona (1,2 g, rendimiento: 84,4%) como un sólido amarillo; EM: m/z: 569 (M++H).
Etapa 3. 3-(4-acetamido-3-nitrofenetil)-2-(3-(4-fluorofenil)-1 -(4-yodofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolidin-4-ona
A una disolución de 3-(4-aminofenetil)-2-(3-(4-fluorofenil)-1-(4-yodofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolidin-4-ona (1,2 g, 2,11 mmol) en anhídrido acético (12 ml) a 0°C se le añadió lentamente gota a gota una disolución de HNO3 (al 65%, 5 mL) en anhídrido acético (5 mL). La reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente, y una TLC (diclorometano:metanol = 15:1) mostró que la reacción se había completado. La mezcla de reacción se concentró y se purificó mediante una columna de gel de sílice (diclorometano:metanol = 30:1) para dar 3-(4-acetamido-3-nitrofenetil)-2-(3-(4-fluorofenil)-1-(4-yodofenil)-1H-pirazol-4-il)oxazolidin-4-ona (660 mg, rendimiento: 65,28%) como un sólido marrón; EM: m/z: 656 (M++H).
Etapa 4. 3-(4-amino-3-nitrofenil)-2-(3-(4-fluorofenil)-1 -(4-yodofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolidin-4-ona
A una disolución de 3-(4-acetamino-3-nitrofenetil)-2-(3-(4-fluorofenil)-1-(4-yodofenil)-1H-pirazol-4-il)oxazolidin-4-ona (660 mg, 1 mmol) en metanol (10 ml), se le añadió una disolución de hidróxido de sodio (40 mg de NaOH disueltos en 5 ml de agua) y la mezcla se calentó a reflujo durante 2 horas. Una TLC (diclorometano:metanol = 10: 1) mostró que la reacción se había completado. La disolución de reacción se concentró y se purificó mediante una columna de gel de sílice (diclorometano:metanol = 30:1) para dar 3-(4-amino-3-nitrofenil)-2-(3-(4-fluorofenil)-1-(4-yodofenil)-1H-pirazol-4-il)oxazolidin-4-ona (200 mg, rendimiento: 32,6%) como un sólido marrón; EM: m/z: 614 (M++H).
Etapa 5. 3-(3,4-diaminofenetil)-2-(3-(4-fluorofenil)-1 -(4-yodofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolidin-4-ona
A una disolución de 3-(4-amino-3-nitrofenil)-2-(3-(4-fluorofenil)-1-(4-yodofenil)-1H-pirazol-4-il)oxazolidin-4-ona (200 mg, 0,327 mmol) en tetrahidrofurano (10 ml) se le añadió Ni Raney (200 mg) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente bajo hidrógeno gaseoso durante 5 horas. Una TLC (diclorometano:metanol = 10:1) mostró que la reacción se había completado. La disolución de reacción se concentró y se purificó mediante una columna de gel de sílice (diclorometano:metanol = 50:1) para dar 3-(3,4-diaminofenetil)-2-(3-(4-fluorofenil)-1-(4-yodofenil)-1H-pirazol-4-il)oxazolidin-4-ona (115 mg, rendimiento: 69,3%) como un sólido marrón; EM: m/z: 509 (M++H).
Etapa 6. 2-(3-(4-fluorofenil)-1 -(4-yodofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)oxazolidin-4-ona
A una disolución de 3-(3,4-diaminofenetil)-2-(3-(4-fluorofenil)-1 -(4-yodofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolidin-4-ona (115 mg, 0,197 mmol) en DMF (5 ml) se añadió CDI (64 mg, 0,394 mmol) y la mezcla se agitó a 80 °C durante 8 horas. Una TLC (diclorometano:metanol = 10:1) mostró que la reacción se había completado. La mezcla de reacción se extinguió con 20 ml de agua y se extrajo con acetato de etilo (20 ml x 2). Los extractos se recogieron, se lavaron con disolución salina saturada, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron y se purificaron mediante una columna de gel de sílice (diclorometano:metanol = 50: 1) para dar 2-(3-(4-fluorofenil)-1-(4-yodofenil)-1H-pirazol-4-il)-3-(2-(2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo[d]imidazol-5-il)metil)oxazolidin-4-ona (30 mg, rendimiento: 24,9%) como un sólido blanco.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-ds) 5 10,46-10,44 (d, 2H); 8,71 (s, 1H); 7,88-7,86 (d, 2H); 7,75-7,73 (d, 2H); 7,60 (m, 2H); 7,30-7,26 (t, 2H); 6,73-6,71 (d, J = 8,1 Hz, 1H); 6,63-6,59 (t, 2H); 6,02 (s, 1H); 4,25-4,20 ( m, 2H); 3,68-3,69 (m, 1H); 2,92-2,89 (m, 1H); 2,67-2,60 (m, 2H); EM: m/z: 509 (M++H).
Ejemplo 7: 2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(5-fluoro-1 H-benzo[d]imidazol-6-il)etil)oxazolin-4-ona
Figure imgf000015_0001
Se disolvieron 1,2-difluoro-4-nitro (20 g, 0,13 mol), cianoacetato de etilo (19 g, 0,16 mol) y carbonato de potasio (35 g, 0,25 mol) en acetonitrilo y se calentaron hasta 90 °C durante la noche. Una TLC (éter de petróleo :acetato de etilo = 10:1) mostró que se había consumido el material de partida. El líquido de reacción se secó mediante evaporación rotatoria y el material bruto se acidificó con ácido clorhídrico 2 M (200 ml) y se extrajo tres veces con acetato de etilo (100 ml). Las fases de acetato de etilo reunidas se lavaron dos veces con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron, y el filtrado se secó por evaporación rotatoria. El producto bruto se disolvió en diclorometano y se mezcló con gel de sílice y se purificó mediante una columna de gel de sílice (EP:AE = 10:1-1:1) para dar un compuesto de 2-ciano-2-(2-fluoro-4-nitrofenil)acetato de etilo como un aceite marrón, 31 g, Rendimiento: 97,6%.
RMN de 1H (400 MHz, CDCla) 58,15 (d, J = 8,8 Hz, 1H); 8,05 (d, J = 9,2 Hz, 1H); 7,77 (t, J = 8,0 Hz, 1H); 5,11 (s, 1H); 4,34-4,35 (m, 2H); 1,35-1,26 (m, 3H).
Etapa 2. 2-(2-difluoro-4-nitrofenil)acetonitrilo
Se disolvieron 2-ciano-2-(2-fluoro-4-nitrofenil)acetato de etilo (31 g, 0,12 mol), cloruro de sodio (15 g, 0,25 mol) y agua (0,13 ml, 0,12 mol) en dimetilsulfóxido (200 ml), luego se calentó hasta 100°C durante la noche. Una TLC (éter de petróleo:acetato de etilo = 2:1) mostró que el material de partida se había consumido. La disolución de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente, se extinguió añadiéndola a 1 litro de agua y se extrajo tres veces con 200 ml de acetato de etilo. Las fases orgánicas reunidas se lavaron tres veces con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el filtrado se secó por evaporación rotatoria. El producto bruto se purificó mediante una columna de gel de sílice (éter de petróleo:acetato de etilo = 10:1-2:1) para dar 2-(2-difluoro-4-nitrofenil)acetonitrilo como un sólido marrón rojizo, 20 g, rendimiento: 90,3%.
Etapa 3. 2-(2-fluoro-4-nitrofenil)etanamina
Se disolvió 2-(2-difluoro-4-nitrofenil)acetonitrilo (20 g, 0,11 mol) en 80 ml de tetrahidrofurano y se añadió gota a gota una disolución 1 M de borano en tetrahidrofurano (150 ml, 0,15 mol) enfriando en un baño de hielo. Una vez completada la adición, se volvió a poner a temperatura ambiente y se calentó hasta 80 °C durante dos horas a reflujo. Una TLC (éter de petróleo:acetato de etilo = 2:1) mostró que se había consumido la mayor parte del material de partida. La disolución de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se añadió gota a gota metanol con enfriamiento en un baño de hielo hasta que no se formaron burbujas en la disolución de reacción. La disolución de reacción se concentró mediante evaporación rotatoria para dar un aceite negro (22 g, rendimiento: 108%), que se utilizó directamente en la siguiente reacción; EM: 185,1 [M+H]+.
Etapa 4. N-(2-fluoro-4-nitrofenetil)-2-hidroxiacetamida
Se disolvieron 2-(2-fluoro-4-nitrofenil)etanamina (22 g, 118 mmol) y glicolato de metilo (40 g, 444,4 mmol) en 100 ml de metanol y se calentaron a reflujo durante dos días. Una TLC (diclorometano:metanol = 10:1) mostró que se había consumido el material de partida. La disolución de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se concentró mediante evaporación rotatoria. El producto bruto se purificó mediante una columna de gel de sílice (éter de petróleo:acetato de etilo = 5:1-1:2) para dar un compuesto de N-(2-fluoro-4-nitrofenetil)-2-hidroxiacetamida como un sólido negro, 12 g, rendimiento: 42%; EM: 243,3 [M+H]+.
Etapa 5. 2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazolil-4-il)-3-(2-fluoro-4-nitrofenetil)oxazolin-4-ona
Se disolvieron N-(2-fluoro-4-nitrofenetil)-2-hidroxiacetamida (4 g, 16,53 mmol), 1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1H-pirazol-4-formaldehído (5,88 g, 17,21 mmol) y ácido p-toluensulfónico monohidrato (1,57 g, 8,26 mmol) en 100 ml de tolueno y la mezcla se calentó a 150°C y se separó el agua durante la noche con un separador de agua. Una TLC (éter de petróleo:acetato de etilo = 2:1) mostró que el material de partida se había consumido. La disolución de reacción se concentró mediante evaporación rotatoria y se purificó mediante columna de gel de sílice (éter de petróleo:acetato de etilo = 2:1 -0:1) para dar un compuesto de 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1H-pirazolil-4-il)-3-(2-fluoro-4-nitrofenetil)oxazolin-4-ona como un producto bruto, que luego se suspendió con acetato de etilo y se filtró, y la torta del filtro se secó en una estufa para dar una sólido blanco (4,5 g, rendimiento: 48%); EM: 569,1 [M+H]+.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-afe) 58,77 (s, 1H); 7,90 (d, J = 7,2 Hz, 4H); 7,73-7,66 (m, 4H); 7,51 (t, J = 8,0 Hz, 1H); 7,30 (t, J = 8,8 Hz, 2H); 6,14 (s, 1H); 4,32-4,22 (m, 2H); 3,78-3,71 (m, 1H); 3,11-3,04 (m, 1H); 2,86 (s, 2H).
Etapa 6. 3-(4-amino-2-fluorofenetil)-2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolin-4-ona
Se disolvió 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazolil-4-il)-3-(2-fluoro-4-nitrofenetil)oxazolin-4-ona (4,5 g, 7,92 mmol) en acetato de etilo (50 ml)/metanol (100 ml), se añadió Ni Raney (100 mg) ), y la reacción se hidrogenó con un globo de hidrógeno a presión normal a 30°C. Después de 1 hora de reacción, se detuvo la reacción y se filtró la disolución de reacción. La torta del filtro se lavó con acetato de etilo y el filtrado se secó mediante evaporación rotatoria para dar el producto diana (sólido blanco, 4,2 g, rendimiento: 98,5%). El compuesto se utilizó directamente en la siguiente reacción sin purificación.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-afe) 58,77 (s, 1H); 7,91 (d, J = 8,8 Hz, 2H); 7,73 (d, J = 8,4 Hz, 2H); 7,66 (t, J = 7,6 Hz, 2H); 7,33 (t, J = 8,3 Hz, 1H); 6,75 (t, J = 8,4 Hz, 1H); 6,25-6,16 (m, 3H); 5,25 (s, 2H); 4,30-4,20 (m, 2H); 3,64-3,57 (m, 1H); 2,86-2,79 (m, 1H); 2,59-2,42 (m, 2H); EM: 541,1 [M+H]+.
Etapa 7. 3-(2-fluoro-5-nitro-4-acetaminofenetil)-2-(3-(4-fluorofenil)-1 -(4-bromofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolidin-4-ona
Se disolvió 3-(4-amino-2-fluorofenetil)-2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1H-pirazol-4-il)oxazolin-4-ona (4,2 g, 7,8 mmol) en 30 ml de anhídrido acético y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 min. La disolución de reacción pasó de transparente a turbia y una TLC (éter de petróleo:acetato de etilo = 1:1) mostró que el material de partida se había consumido. Con enfriamiento en un baño de hielo, se añadió lentamente gota a gota a la disolución de reacción ácido nítrico concentrado al 65% (2,12 g, 21,86 mmol). Una vez completada la adición gota a gota, se retiró el baño de hielo y la mezcla se agitó durante la noche. Una TLC (éter de petróleo:acetato de etilo = 1:1) mostró que se había consumido el material de partida. La reacción se diluyó con acetato de etilo (100 ml), se lavó una vez con agua y salmuera respectivamente, luego se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y el filtrado se concentró por evaporación rotatoria. El producto bruto se purificó mediante una columna de gel de sílice (éter de petróleo:acetato de etilo = 5:1-1:1) para dar un compuesto de 3-(2-fluoro-5-nitro-4-acetaminofenetil)-2-(3-(4-fluorofenil)-1-(4-bromofenil)-1 H -pirazol-4-il)oxazolidin-4-ona como un sólido amarillo, que luego se suspendió con acetato de etilo y se filtró. La torta del filtro se secó en una estufa para dar un sólido de color amarillo pálido (2,4 g, rendimiento: 49,2%).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-afe) 5 10,23 (s, 1H); 8,76 (s, 1H); 7,95 (d, J = 7,2 Hz, 1H); 7,89 (d, J = 8,8 Hz, 2H) 7,73­ 7,68 (m, 4H); 7,59 (d, J = 11,6 Hz, 1H); 7,31 (t, J = 8,8 Hz, 2H); 6,24 (s, 1H); 4,30-4,20 (m, 2H), 3,74-3,67 (m, 1H); 3,06-3,01 (m, 1H); 2,79-2,77 (m, 2H); EM: 626,2 [M+h ]+.
Etapa 8. 3-(2-fluoro-4-amino-5-nitrofenetil)-2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolin-4-ona
Se disolvió N-(4-(2-(2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-4-oxazolin-3-il)etil)-3-fluoro-2-nitrofenil)acetamida (1,8 g, 2,88 mmol) en 20 ml de etanol, se añadió 2 ml de ácido sulfúrico concentrado, y la mezcla se calentó a reflujo durante 2 horas y se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con acetato de etilo (40 ml), se agitó con agua helada (100 ml), se ajustó el pH a neutro con bicarbonato de sodio saturado, se extrajo con acetato de etilo (40 ml), se lavó con disolución salina saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro, y se secó con evaporación rotatoria. El producto bruto se separó por cromatografía en columna (éter de petróleo:acetato de etilo = 3:1) para dar el producto diana 3-(2-fluoro-4-amino-5-nitrofentil)-2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1H-pirazol-4-il)oxazolin-4-ona como un sólido amarillo (0,8 g, rendimiento: 47,6%).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-ds) 58,79 (s, 1H); 7,90 (d, J = 8,4 Hz, 2H); 7,85 (d, J = 7,6 Hz, 1H); 7,74-7,67 (m, 4H); 7,45 (s, 2H); 7,30 (t, J = 8,6Hz, 2H); 6,62 (d, J = 12,4Hz, 1H); 6,24 (s, 1H); 4,30-4,20 (m, 2H); 3,69-3,34 (m, 1H); 2,96­ 2,92 (m, 1H); 2,66-2,57 (m, 2H); EM: 586,1 [M+H]+.
Etapa 9. 2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(4,5-diamino-2-fluorofenetil)oxazolin-4-ona
Se disolvió 3-(2-fluoro-4-amino-5-nitrofenetil)-2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1H-pirazol-4-il)oxazolin-4-ona (200 mg, 0,33 mmol) en 50 ml de acetato de etilo y 100 ml de metanol, se añadió Ni Raney (50 mg) y la reacción se hidrogenó a presión atmosférica. Después de 1 hora de reacción, la reacción se detuvo, la disolución de reacción se filtró, la torta del filtro se lavó con metanol y el filtrado se secó por evaporación rotatoria para obtener el producto deseado como un sólido marrón (0,7 g, rendimiento: 94% ). Este compuesto se utilizó para la siguiente reacción sin purificación.
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-afe) 58,77 (s, 1H); 7,91 (d, J = 8,0 Hz, 2H); 7,72 (d, J = 8,0 Hz, 2H); 7,64 (s, 2H) 7,33 (t, J = 8,4 Hz, 2H); 6,23-6,14 (m, 3H); 4,65 (s, 2H); 3,58-3,55 (m, 1H); 2,81-2,78 (m, 1H), 2,41-2,40 (m, 2H); EM: 556,1 [m H]+.
Etapa 10. 2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(5-fluoro-1 H-benzo[djimidazol-6-il)etil)oxazolin-4-ona
Se disolvió 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1H-pirazol-4-il)-3-(4,5-diamino-2-fluorofenetil)oxazolin-4-ona (280 mg, 0,51 mmol) en 5 ml de ácido fórmico. La disolución de reacción se agitó a 70 °C durante 1 hora, se concentró hasta la sequedad, se diluyó con acetato de etilo y se ajustó el pH a neutro con bicarbonato de sodio saturado. La fase orgánica se lavó con disolución salina saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se filtró. El filtrado se concentró mediante evaporación rotatoria y el producto bruto se aisló mediante cromatografía en columna de fase inversa para dar un sólido blanco (120 mg, rendimiento: 42,1%).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-afe) 5 12,40 (s, 1H); 8,78 (s, 1H); 8,17 (s, 1H); 7,90 (d, J = 8,8 Hz, 2H); 7,73 (d, J = 8,8 Hz, 2H); 7,64 (t, J = 6,8 Hz, 2H); 7,37 (s, 1H); 7,27 (t, J = 8,8 Hz, 2H); 6,17 (s, 1H); 4,31-4,21 (m, 2H); 3,79-3,73 (m, 1H); 3,03-2,96 (m, 1H); 2,89-2,74 (m, 2H); EM: 566,1 [M+H]+.
Ejemplo 8: 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(6-fluoro-2-carbonil-2,3-dihidro-1 H-benzo[D]imidazol-5-il)etil)oxazolin-4-ona
Figure imgf000018_0001
Se disolvieron 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(3,4-diamino-2-fluorofenetil)oxazolin-4-ona (300 mg, 0,54 mmol) y CDI (106 mg, 0,65 mmol) en DMF (5 mL) y la mezcla se agitó bajo nitrógeno a 80°C durante 2 horas. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se vertió en agua (100 ml), se extrajo dos veces con acetato de etilo (50 ml) y las fases orgánicas se recogieron y lavaron una vez con disolución salina saturada, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el filtrado se secó mediante evaporación rotatoria y el producto bruto se purificó mediante columna de gel de sílice (diclorometano:metanol = 1:0-40:1) para dar el producto diana como un sólido blanco (200 mg, rendimiento: 64%).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-afe) 510,64 (s, 1H); 10,55 (s, 1H); 8,77 (s, 1H); 7,90 (d, J = 8,4 Hz, 2H); J = 8,4 Hz, 2H); 7,65 (t, J = 7 Hz, 2H); 7,29 (t, J = 8,4 Hz, 2H); 6,67-6,60 (m, 2H); 6,13 (s, 1H); 4,30-4,20 (m, 2H); 3,70 (m, 1H); 2,91 (m, 1 H); 2,74-2,62 (m, 2H); EM: 580,2 [M+H]+.
Se separó quiralmente 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(6-fluoro-2-carbonil-2,3-dihidro-1 H-benzo[D]imidazol-5-il)etil)oxazolin-4-ona (19,5 g) mediante SFC (columna: OJ-H; tamaño de la columna: 0,46 cm DI x 15 cm L; volumen de inyección: 2,0 pl; fase móvil: HEP/EtOH = 60/40 (V/V); caudal: 0,5 ml/min; longitud de onda: UV 254 nm; temperatura: 25°C) para dar dos isómeros ópticos.
(S)-2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(6-fluoro-2-carbonil-2,3-dihidro-1H-benzo[d]imidazol-5-il)etil)oxazolin-4-ona, sólido blanco, 7,48 g, rendimiento 38,4%. tR 3,557 min, [a]D -38,78° (c 0,5261 g/100 ml, 21,4°C); pureza: 99,62%, e.e.: 100,0%.
(R)-2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(6-fluoro-2-carbonil-2,3-dihidro-1 H-benzo[d]imidazol-5-il)etil)oxazolin-4-ona, sólido blanco, 7,98 g, rendimiento del 40,9%. tR 5,784 min, [a]D 37,20° (c 0,4893 g/100 ml, 19,7°C); pureza: 98,93%, e.e.: 99,02%.
Ejemplo 9: 3-(2-(5-fluoro-1 H-benzo[d][1,2,3]triazol-6-il)etil)-2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolin-4-ona
Figure imgf000018_0002
Se disolvió 2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)1 H-pirazol-4-il)-3-(3,4-diamino-2-fluorofenetil)oxazolin-4-ona (160 mg, 0,29 mmol) en ácido acético glacial (5 ml) y agua (1 ml). Con enfriamiento en un baño de hielo, se disolvió nitrito de sodio (40 mg, 0,578 mmol) en 2 ml de agua y luego se añadió gota a gota a la disolución de reacción. Después de media hora, una TLC (diclorometano:metanol = 15:1) mostró que el material de partida se había consumido. La disolución de reacción se vertió en 100 ml de agua helada, se ajustó a básica con bicarbonato de sodio saturado y se extrajo dos veces con acetato de etilo (50 ml x 2). Las fases orgánicas reunidas se lavaron tres veces con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se filtraron. El filtrado se concentró por evaporación rotatoria y el residuo se disolvió en DMF y se purificó por HPLC para dar el producto diana de 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1H-pirazol-4-il)-3-(2-(5-fluoro-1H-benzo[D][1,2,3]triazol-6-il)etil)oxazolin-4-ona como un sólido blanco (65 mg, rendimiento: 39,8%).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-de) 58,78 (s, 1 H); 7,89 (d, J = 8,4 Hz, 2H); 7,78 (d, J = 4,8 Hz, 1 H); 7,72 (d, J = 8,0 Hz, 2H); 7,64 (s, 2H); 7,26 (t, J = 9,2 Hz, 2H); 6,22 (s, 1 H); 4,29-4,19 (m, 2H); 3,81 -3,76 (m, 1H), 3,07-3,04 (m, 1 H); 2,87­ 2,83 (m, 2H); EM: 567,2 [M+H]+.
Ejemplo 10: 2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(5,7-difluoro-1 H-benzo[d]imidazol-6-il)etil)oxazolin-4-ona
Figure imgf000019_0001
Etapa 1.2-ciano-2-(2,6-difluoro-4-nitrofenil) acetato de etilo
Se disolvió cianoacetato de etilo (4,8 g, 42,3 mmol) en DMF anhidra (40 ml), se añadió NaH al 60% (1,7 g, 42,3 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y luego se añadió 1,2,3-trifluoro-5-nitrobenceno (5 g, 28,2 mmol). Se hicieron reaccionar a 70°C durante 16 horas. Después de enfriar hasta la temperatura ambiente, se agregaron 40 ml de agua y el pH se ajustó a 2-3 con ácido clorhídrico 2 M y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (200 ml). La disolución de acetato de etilo se lavó con disolución salina saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se secó por evaporación rotatoria para dar 2-ciano-2-(2,6-difluoro-4-nitrofenil)acetato de etilo como un producto bruto aceitoso marrón (8.5 gramo). Este compuesto se utilizó directamente en la siguiente etapa sin purificación.
Etapa 2. 2-(2,6-difluoro-4-nitrofenil)acetonitrilo
Se disolvió 2-ciano-2-(2,6-difluoro-4-nitrofenil)acetato de etilo (8,5 g, 31,5 mmol) en DMSO (30 ml) y se añadieron cloruro de litio (1,3 g, 31,5 mmol) y 1 ml de agua. La reacción se llevó a cabo durante 3 horas a 130°C, luego la mezcla se enfrió hasta la temperatura ambiente y, luego de agregar 100 mL de agua, se extrajo con acetato de etilo (200 mL). La disolución de acetato de etilo se lavó con disolución salina saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se secó por evaporación rotatoria. El producto bruto se aisló mediante cromatografía en columna (acetato de etilo:metanol = 10:1) para dar 2-(2,6-difluoro-4-nitrofenil)acetonitrilo como un sólido amarillo (4,0 g).
Etapa 3. 2-(2,6-difluoro-4-nitrofenil)etanamina
Se disolvió 2-(2,6-difluoro-4-nitrofenil)acetonitrilo (4,0 g, 20,2 mmol) en 30 ml de tetrahidrofurano y se añadió una disolución de borano en tetrahidrofurano (40 ml, 1 M). La mezcla se calentó a reflujo durante 3 horas y luego se enfrió hasta la temperatura ambiente. Después de que se añadieran lentamente gota a gota 10 ml de metanol, la mezcla se calentó a reflujo durante 1 hora. La disolución de reacción se concentró para obtener un producto bruto de 2-(2,6-difluoro-4-nitrofenil)etanamina como un aceite marrón (4,6 g); EM: 203 [M+H]+. Este compuesto se utilizó directamente en la siguiente etapa sin purificación.
Etapa 4. N-(2,6-difluoro-4-nitrofenetil)-2-hidroxiacetamida
Se disolvió 2-(2,6-difluoro-4-nitrofenil)etanamina (4,6 g, 22,8 mmol) en metanol (60 ml) y luego se añadió 2-hidroxiacetato de metilo (10 g, 111 mmol). La mezcla se calentó a reflujo durante 40 horas. La disolución de reacción se concentró y el producto bruto se aisló mediante cromatografía en columna (elución de diclorometano:metanol = 40:1) para dar N-(2,6-difluoro-4-nitrofenetil)-2-hidroxiacetamida como un sólido amarillo (2,5 g, rendimiento: 42%); EM: 261 [M+H]+.
Etapa 5. 2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazolil-4il)-3-(2,6-difluoro-4-nitrofenetil)oxazolin-4-ona
Se disolvieron N-(2,6-difluoro-4-nitrofenetil)-2-hidroxiacetamida (2,5 g, 9,6 mmol) y 1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-formaldehído (3,3 g, 9,6 mmol) en tolueno (60 ml), se añadió ácido p-toluensulfónico (825 mg, 4,8 mmol) y la mezcla se calentó a reflujo durante 16 horas con un separador de agua. La disolución de reacción se concentró y se agregaron 50 ml de agua. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (60 mL). Los extractos se lavaron respectivamente con disolución de bicarbonato de sodio al 10% y disolución salina saturada, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se secaron por evaporación rotatoria. El producto bruto se separó mediante cromatografía en columna (diclorometano:metanol = 30:1) para obtener 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1H-pirazolil-4-il)-3-(2,6-difluoro-4-nitrofenetil)oxazolin-4-ona (2,6 g, rendimiento: 46%) como un sólido blanco; EM: 589 [M+H]+.
Etapa 6. 3-(4-amino-2,6-difluorofenetil)-2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolin-4-ona
Se disolvió 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazolil-4-il)-3-(2,6-difluoro-4-nitrofenetil)oxazolin-4-ona (2,6 g, 4,4 mmol) en acetato de etilo/metanol (1:1, 40 ml), se añadió Ni Raney (300 mg) y la mezcla se hidrogenó a presión atmosférica. Después de 2 horas de reacción, la reacción se detuvo, la disolución de reacción se filtró, la torta del filtro se lavó con acetato de etilo y el filtrado se secó por evaporación rotatoria para obtener 3-(4-amino-2,6-difluorofenetil)-2- (1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazo 1-4-il)oxazolin-4-ona como un sólido blanco (2,3 g, rendimiento: 93%); EM: 559 [M+H]+; este compuesto se utilizó directamente en la siguiente etapa sin purificación.
Etapa 7. 3-(2,6-difluoro-5-nitro-4-acetamidofenetil)-2-(3-(4-fluorofenil)-1 -(4-bromofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolidin-4-ona
Se disolvió 3-(4-amino-2,6-difluorofenil)-2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1H-pirazol-4-il)oxazolin-4-ona (1,8 g, 3,2 mmol) en 20 ml de diclorometano, se añadió 1 ml de anhídrido acético y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La disolución de reacción se concentró y se añadió éter dietílico (20 ml) al residuo. La mezcla se filtró para dar 3-(2,6-difluoro-4-acetamidofenetil)-2-(3-(4-fluorofenil)-1-(4-bromofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolidin-4-ona como un sólido blanco (1,8 g, 93% de rendimiento); EM: 601 [M+H]+.
Etapa 8. 3-(2,6-difluoro-5-nitro-4-acetamidofenetil)-2-(3-(4-fluorofenil)-1 -(4-bromofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolidin-4-ona
Se disolvió 3-(2,6-difluoro-4-acetamidofenetil)-2-(3-(4-fluorofenil)-1 -(4-bromofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolidin-4-ona (1,8 g, 3 mmol) en 20 ml de ácido sulfúrico concentrado, se añadió nitrato de potasio (455 mg, 4,5 mmol) a 0°C, y luego la mezcla se devolvió a la temperatura ambiente. La reacción se agitó durante 2 horas. La reacción se vertió en hielo triturado y se extrajo con acetato de etilo (60 ml). Los extractos se lavaron respectivamente con disolución de bicarbonato de sodio al 10% y disolución salina saturada, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se secaron por evaporación rotatoria. El producto bruto se separó por cromatografía en columna (diclorometano:metanol = 40:1) para obtener 3-(2,6-difluoro-5-nitro-4-acetamidofentil)-2-(3-(4-fluorofenil)-1-(4-bromofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolidin-4-ona como un sólido de color amarillo pálido (800 mg, rendimiento: 41%); EM: 646 [M+H]+.
Etapa 9. 3-(4-amino-2,6-difluoro-3-nitrofenetil)-2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolin-4-ona
Se disolvió 3-(2,6-difluoro-5-nitro-4-acetamidofenetil)-2-(3-(4-fluorofenil)-1 -(4-bromofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolidin-4-ona (800 mg, 1,24 mmol) en 10 ml de metanol, se añadieron 0,5 ml de ácido sulfúrico concentrado y la mezcla se calentó a reflujo durante 2 horas y se concentró bajo presión reducida. Se añadió agua (20 ml) al residuo y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (40 ml). Los extractos se lavaron respectivamente con disolución de bicarbonato de sodio al 10% y disolución salina saturada, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se secaron por evaporación rotatoria. El producto bruto se aisló mediante cromatografía en columna (diclorometano:metanol = 30:1) para obtener 3-(4-amino-2,6-difluoro-3-nitrofenetil)-2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolin-4-ona (520 mg, rendimiento: 69%) como un sólido amarillo; EM: 604 [M+H]+.
Etapa 10. 2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(3,4-diamino-2,6-difluorofenetil)oxazolin-4-ona
Se disolvió 3-(4-amino-2,6-difluoro-3-nitrofenetil)-2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolin-4-ona (480 mg, 0,8 mmol) en 5 ml de acetato de etilo y 5 ml de metanol, se añadió Ni Raney (20 mg) y la mezcla se hidrogenó a presión atmosférica. Después de 1 hora de reacción, se detuvo la reacción, se filtró la disolución de reacción y se lavó la torta del filtro con una disolución de acetato de etilo/etanol (1:1). El filtrado se secó mediante evaporación rotatoria para dar 2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(3,4-diamino-2,6-difluorfenetil)oxazolin-4-ona como un sólido marrón (450 mg, rendimiento: 98%), que se usó directamente en la siguiente reacción sin purificación; EM: 574 [M+H]+.
Etapa 11.2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(5,7-difluoro-1 H)-benzo[d]imidazol-6-il)etil)oxazolin-4-ona
Se disolvió 2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(3,4-diamino-2,6-difluorfenetil)oxazolin-4-ona (190 mg, 0,33 mmol) en 5 ml de ácido fórmico. La reacción se agitó a 70°C durante 1 hora, se concentró hasta la sequedad y el producto bruto se aisló mediante cromatografía en columna de fase inversa para dar 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(5,7-difluoro-1 H-benzo[D]imidazol-6-il)etil)oxazolin-4-ona (88 mg, rendimiento: 45,8%).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-ofe) 58,82 (s, 1H); 8,33 (s, 1 H); 7,90 (d, J = 8,4 Hz, 2H); 7,73 (d, J = 8,4 Hz, 2H); 7,62­ 7,66 (m, 2H); 7,26-7,30 (m, 2H); 7,19 (d, J = 9,6 Hz, 1H); 6,19 (s, 1H); 4,19-4,31 (m, 2H); 3,66-3,69 (m, 1 H); 2,79-2,98 (m, 3H); EM: 584 [M+H]+.
Ejemplo 11: 2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(4,6-difluoro-2-carbonil-2,3-dihidro-1 H-benzo[D]imidazol-5-il)etil)oxazolin-4-ona
Figure imgf000021_0001
Se disolvió 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(3,4-diamino-2,6-difluorofenetil)oxazolin-4-ona (260 mg, 0,45 mmol) en 8 ml de DMF seca y se añadió CDI (88 mg , 0,54 mmol). La disolución de reacción se agitó a 80 °C durante 16 horas, se enfrió hasta la temperatura ambiente, luego se añadieron 30 ml de agua y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (30 ml x 2). El extracto se lavó con una disolución saturada de cloruro de sodio, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró para dar un producto bruto, que se purificó por cromatografía en columna (diclorometano:metanol = 30:1) para dar 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1H-pirazol-4-il)-3-(2-(4,6-difluoro-2-carbonil-2,3-dihidro-1 H-benzo[a]imidazol-5-il)etil)oxazolin-4-ona (160 mg), que se lavó con diclorometano para dar el producto como un sólido blanco (120 mg, rendimiento: 44%).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-ofe) 510,93-11,03 (m, 2H); 8,83 (s, 1 H); 7,91 (d, J = 6,8 Hz, 2H); 7,65-7,74 (m, 4H); 7,26­ 7,32 (m, 2H); 6,57 (d, J = 8,8 Hz, 1 H); 6,16 (s, 1H); 4,21-4,32 (m, 2H); 3,61 -3,64 (m, 1 H); 2,91 -2,94 (m, 1 H); 2,67-2,74 (m, 2H); EM: 600 [M+H]+.
Ejemplo 12: 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(5,7-difluoro-1 Hhidrógeno-benzo[D][1,2,3]triazol-6-il)etil)oxazolin-4-ona
Figure imgf000021_0002
Se disolvió 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(3,4-diamino-2,6-difluorofenetil)oxazolin-4-ona (130 mg, 0,23 mmol) en ácido acético glacial (5 ml)/agua (3 ml) y se disolvió nitrito de sodio (32 mg, 0,46 mmol) en 2 ml de agua y luego se añadió al líquido de reacción enfriando en un baño de hielo. Una TLC (diclorometano:metanol = 15:1) mostró que la materia prima se había consumido después de media hora. La disolución de reacción se vertió en 100 ml de agua helada, se ajustó a básica con bicarbonato de sodio saturado y se extrajo dos veces con acetato de etilo (50 ml x 2). Las fases orgánicas reunidas se lavaron tres veces con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron por evaporación rotatoria. El residuo se disolvió en DMF y se sometió a purificación por HPLC para dar un sólido blanco (65 mg, rendimiento: 40%).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-ok) 58,84 (s, 1 H), 7,90 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,73 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,66 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 7,48 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,29 (t, J = 8,4 Hz, 2H), 6,23 (s, 1H), 4,32-4,20 (m, 2H), 3,71 -3,68 (m, 1H), 3,05-3,02 (m, 1H), 2,90-2,84 (m, 2H); EM: 583,1 [M+H]+.
Ejemplo 13: 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4,6-difluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(2-oxo-dihidroindol-5-il)etil)oxazolin-4-ona
Figure imgf000022_0001
Etapa 1.2-(5-fluoro-2-nitrofenil)formiato de metilo
Se añadió lentamente ácido sulfúrico concentrado (16,0 g) a 2-(3-fluorofenil)acetato de metilo (16,0 g, 95,23 mmol) con enfriamiento en un baño de hielo, y se añadió lentamente gota a gota ácido nítrico (12,0 ml) media hora más tarde. Después de la adición, la mezcla se agitó durante 2 horas y luego la disolución de reacción se vertió lentamente en agua helada, se extrajo con acetato de etilo y la fase orgánica se concentró hasta la sequedad para dar un sólido blanco (10,6 g, rendimiento: 52%).
RMN de 1H (400 MHz, CDCla) 58,22-8,19 (m, 1H); 7,18-7,16 (m, 1H); 7,14-7,06 (m, 1H); 4,03 (s, 2H); 3,73 (s, 3H).
Etapa 2. 2-(2-nitrofenil)cianoformiato de metilo
Se disolvió cianoacetato de etilo (5,3 g, 46,9 mmol) en DMF anhidra (50 ml) y se añadió NaH (al 60%) (1,9 g, 46,9 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se añadió metil-2-(5-fluoro-2-nitrofenil)formiato (5 g, 28,2 mmol) y la reacción se llevó a cabo a 80 °C durante 16 horas. Después de enfriar la mezcla hasta la temperatura ambiente, se añadió agua y se ajustó el pH con ácido clorhídrico (2 M) a 3. La mezcla se extrajo con acetato de etilo y se secó por evaporación rotatoria para dar un producto bruto, que pasó a través de una columna para dar el producto como un aceite marrón (6,7 g, rendimiento: 93%); EM: 305 [M-H]+.
Etapa 3. 2-(5-(cianometil)-2-nitrofenil)formiato de metilo
Se disolvió 2-(2-nitrofenil)cianoformiato de metilo (1,0 g, 3,26 mmol) en DMSO (10 ml) y se añadieron cloruro de sodio (0,57 g, 9,80 mmol) y 0,05 ml de agua. Después de reaccionar durante 1,5 horas a 140 °C, la mezcla se enfrió hasta la temperatura ambiente, se añadió agua y se extrajo con acetato de etilo. El extracto se secó mediante evaporación rotatoria y el producto bruto se separó mediante cromatografía en columna (elución de diclorometano/metanol = 30:1) para dar el producto deseado como un aceite rojo (700 mg, rendimiento: 76%).
Etapa 4. 2-(5-(2-aminoetil)-2-nitrofenil)formiato de metilo
Se disolvió 2-(5-(cianometil)-2-nitrofenil)formiato de metilo (0,7 g, 2,99 mmol) en tetrahidrofurano (5 ml) y se añadió una disolución de borano en tetrahidrofurano (3,29 ml, 1 M). La mezcla se calentó a reflujo durante 2 horas, se enfrió hasta la temperatura ambiente, se añadieron lentamente gota a gota 10 ml de metanol y la disolución de reacción se concentró para dar el producto diana como un sólido marrón rojizo (638 mg, rendimiento: 87%); EM: 238 [M+H]+.
Etapa 5. 5-(2-(2-hidroxiacetamida)etil)-2-nitrobenzoato de metilo
Se disolvió 2-(5-(2-aminoetil)-2-nitrofenil)formiato de metilo (638 mg, 2,68 mmol) en metanol (10 ml) y se añadió 2-hidroxiacetato de metilo (2,68 g, 8,04 mmol). La mezcla se calentó a reflujo durante 40 horas, la disolución de reacción se concentró y el producto bruto se aisló por cromatografía en columna (eluida con diclorometano/metanol = 40:1) para dar el producto diana como un aceite rojo (100 mg, rendimiento: 12,6%). EM: 296 [M+H]+.
Etapa 6.2-(5-(2-(2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-4-oxooxazolidin-3-il)metil)-2-nitrofenil)formiato de metilo
Se disolvieron 5-(2-(2-hidroxiacetamida)etil)-2-nitrobenzoato de metilo (100 mg, 0,34 mmol) y 1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil))-1 H-pirazol-4-formaldehído (116 mg, 0,34 mmol) en tolueno (13 ml) y se añadió ácido p-toluensulfónico (32,1 mg, 0,17 mmol). La mezcla se calentó a reflujo a 150°C durante 16 horas con un separador de agua. La disolución de reacción se concentró, se le añadió agua, se extrajo con acetato de etilo (60 ml), se lavó con una disolución de bicarbonato de sodio al 10%, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se secó por evaporación rotatoria. El producto bruto se preparó en fase líquida para dar el producto diana como un sólido marrón (60 mg, rendimiento: 28%); EM: 623 [M+H]+.
Etapa 7. 2-(5-(2-(2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-4-oxooxazolidin-3-il)metil)-2-aminofenil)formiato de metilo
Se disolvió 2-(5-(2-(2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-4-oxooxazolidin-3-il)metil)-2-nitrofenil)metilformiato de metilo en acetato de etilo/metanol (1:1) (6 ml), se añadió Ni Raney (6 mg) y la mezcla se hidrogenó a presión atmosférica. Después de reaccionar durante 16 horas, se detuvo la reacción, se filtró la disolución de reacción, se lavó la torta del filtro con acetato de etilo y se secó el filtrado mediante evaporación rotatoria para dar el producto diana como un sólido amarillo (58 mg, rendimiento: 97%). Este compuesto se utilizó directamente en la siguiente reacción sin purificación; EM: 593 [M+H]+.
Etapa 8. 2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(2-oxoindolin-5-il)etil)oxazolin-4-ona
Se disolvió 2-(5-(2-(2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-4-oxooxazolidin-3-il)metil)-2-aminofenil)metilformiato de metilo (58 mg, 0,1 mmol) en 2 ml de ácido acético glacial y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La disolución de reacción se concentró para dar un sólido bruto, que se preparó mediante HPLC para dar un producto como un sólido de color amarillo pálido (8 mg, rendimiento: 15%).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-ds) 510,24 (s, 1H); 8,73 (s, 1H); 7,91-7,89 (d, J = 8,4 Hz, 2H); 7,73-7,71 (m, 2H); 7,67­ 7,64 (m, 4H); 7,32-7,28 (t, J = 8,8 y 8,0 Hz, 2H); 6,86-6,82 (m, 2H); 6,62-6,60 (d, J = 7,6 Hz, 1H); 6,02 (s, 1H); 4,26 (m, 2H); 3,69-3,66 (m, 1H); 3,18 (s, 2H); 2,92 (m, 1H); 2,66 (m, 2H); EM: 561 [M+h ]+.
Se separó quiralmente 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4,6-difluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(2-oxoindolin-5-il)etil)oxazolin-4-ona (18 g) mediante SFC (columna: OJ-H; tamaño de columna: 0,46 cm DI x 15 cm L; volumen de inyección: 2,0 gl; fase móvil: HEP/EtOH = 60/40 (V/V); caudal: 0,5 ml/min; longitud de onda: UV 254 nm; temperatura: 25°C) a dar dos isómeros ópticos.
(S)-2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4,6-difluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(2-oxoindolin-5-il)etil)oxazolin-4-ona, sólido blanco, 6,46 g, rendimiento del 35,9%. tR 2,629 min, [a]D -22,77° (c 0,5007 g/100 ml, 18,4°c ); pureza: 98,39%, e.e.: 100,0%.
(R)-2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4,6-difluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(2-oxoindolin-5-il)etil)oxazolin-4-ona, sólido blanco, 6,63 g, 36,8% de rendimiento. tR 7,951 min, [a]D 23,08° (c 0,5113 g/100 ml, 19,2°c ); pureza: 99,10%, e.e.: 100,00%.
Ejemplo 14*: 2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-difluorofenil)-1 H-pirazol)-3-(2-(3,3-difluoro-2-oxoindolin-5-etil)oxoindolin-4-ona
Figure imgf000023_0001
Se disolvieron el compuesto 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1H-pirazol-4-il)-3-(3,4-diaminofenetil)oxazolin-4-ona (521 mg, 1,0 mmol), 2-bromo-2,2-difluoroacetato de etilo (0,388 ml, 3,0 mmol), Cp2Fe (19 mg, 0,1 mmol) en 5 ml de DMSO. Bajo protección de nitrógeno, la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas, luego se añadieron 2 ml de ácido sulfúrico concentrado 1 M en DMSO y la reacción continuó durante 24 horas bajo protección de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se vertió en agua helada y se extrajo con acetato de etilo. El extracto se extrajo con disolución salina saturada y se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró hasta la sequedad y el producto bruto se aisló por HPLC preparativa para dar un sólido blanco (10 mg, rendimiento: 1,6%).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-afe) 511,03 (s, 1H), 8,72 (s, 1H), 7,90 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,73-7,65 (m, 4H), 7,35 -7,20 (m, 4H), 6,78 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,07 (s, 1H), 4,27-4,24 (m, 2H), 3,74-3,70 (m, 1H), 3,02-2,95 (m, 1H), 2,73-2,64 (m, 2H); EM: 597 [M+H]+.
Ejemplo 15: 3-(2-(2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo[d]imidazol-5-il)etil)-2-(1-(4-fluorofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-oxazolidin-4-ona
Figure imgf000024_0001
Se añadieron 1-(4-fluorofenil)etanona (17,0 g, 123 mmol), clorhidrato de 1-(4-fluorofenil)hidrazina (20,0 g, 123 mmol) y acetato de potasio (12,0 g, 123 mmol) a etanol (200 ml) y la mezcla se agitó a 88 °C durante la noche. La mezcla de reacción se concentró al vacío hasta la sequedad y se disolvió en diclorometano, que se filtró para dar un producto bruto que se lavó con éter de petróleo para dar 1 -(4-fluorofenil)-2-(1 -(4-fluorofenil)etiliden)hidrazina (26,0 g, 105 mmol, rendimiento: 85%).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-ds) 59,25 (s, 2H); 7,82-7,80 (m, 2H); 7,23-7,18 (m, 4H); 7,08-7,04 (m, 2H); 2,24 (s, 3H).
Etapa 2. 1-(4-fluorofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-formaldehído
Se añadió lentamente gota a gota oxicloruro de fósforo (13,5 ml, 142 mmol) a DMF anhidra (11 ml, 142 mmol) con enfriamiento en un baño de hielo y, después de agitar durante 30 min, se añadió lentamente gota a gota a la disolución de reacción una disolución de 1-(4-fluorofenil)-2-(1-(4-fluorofenil)etiliden)hidrazina (20,0 g, 81,2 mmol) en 25 ml de DMF anhidra, y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, luego se elevó la temperatura a 70 °C y la reacción se continuó durante 5 horas, y la disolución de reacción se vertió en agua helada y se filtró. El sólido se suspendió con acetona y se filtró para dar el producto como un sólido blanco (18 g, 63,4 mmol, rendimiento: 78%).
Etapa 3. 2-(1 -(4-fluorofenil)-3-(4-fluorofenil)-4-1 H-pirazolil)-3-(4-nitrofenetil)oxazolin-4-ona
Se disolvieron 1-(4-fluorofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-formaldehído (9,65 g, 33,9 mmol), 2-hidroxi-N-(4-nitrofenetil)acetamida (9,14 g, 40,8 mmol) y ácido p-toluensulfónico monohidrato (3,23 g, 16,9 mmol) en 250 mL de tolueno. La mezcla se calentó a reflujo con un separador de agua durante 16 horas. La mezcla se extrajo con acetato de etilo y se secó mediante evaporación rotatoria. El producto bruto se dispersó en agua y se filtró después de agitar durante 15 minutos. La torta del filtro se dispersó en metanol, se filtró después de agitar durante 30 minutos. El disolvente se secó mediante evaporación rotatoria para dar 2-(1-(4-fluorofenil)-3-(4-fluorofenil)-4-1H-pirazolil)-3-(4-nitrofenetil)oxazolin-4-ona (13,3 g, 27,1 mmol, rendimiento: 80%).
Etapa 4. 3-(4-aminofenetil)-2-(1 -(4-fluorofenil)-3-(4-fluorofenil)-4-1 H-pirazolil)oxazolin-4-ona
Se disolvió 2-(1-(4-fluorofenil)-3-(4-fluorofenil)-4-1H-pirazolil)-3-(4-nitrofenetil)oxazolin-4-ona (13,3 g, 27,1 mmol) en acetato de etilo/metanol (1:1 ,300 ml), se añadió Ni Raney (2,6 g), se introdujo gas hidrógeno y la mezcla se agitó a 50 °C durante 16 horas y luego se filtró. El filtrado se concentró para dar 3-(4-aminfenetil)-2-(1-(4-fluorofenil)-3-(4 fluorofenil)-4-1 H-pirazolil)oxazolin-4-ona (12 g, 26,2 mmol, rendimiento: 97%).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-afe) 58,71 (s, 1H); 8,00 (m, 2H); 7,69 (m, 2H); 7,42 (t, 2H); 7,36 (t, 2H); 6,73 (d, 2H); 6,45 (d, 2H); 6,13 (s, 1H); 4,92 (s, 2H); 4,28 (dd, 2H, J = 13 y 21 Hz); 3,65 (m, 1H); 2,87 (m, 1H); 2,62-2,42 (m, 2H).
Etapa 5. N-(4-(2-(2-(1 -(4-fluorofenil)-3-(4-fluorofenil)-4-1 H-pirazolil)-4-oxazolin-3-il)etil)-2-nitrofenil)acetamida
Se disolvió 3-(4-aminofenetil)-2-(1-(4-fluorofenil)-3-(4-fluorofenil)-4-1 H-pirazolil)oxazolin-4-ona (12,0 g, 26 mmol) en Ac2O (100 mL) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 60 min. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se enfrió hasta 0°C y luego se añadió HNO3 (al 65%, 2,7 ml) lentamente a la mezcla de reacción. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Una TLC (éter de petróleo:acetato de etilo = 1:2) mostró que la reacción estaba casi completa. La mezcla de reacción se concentró al vacío hasta la sequedad y el producto bruto se recristalizó en acetato de etilo y se filtró para dar un sólido blanco (12,0 g, 21,9 mmol, rendimiento: 73%).
Etapa 6. 3-(4-amino-3-nitrofenil)-2-(1 -(4-fluorofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazolil-4-il)oxazolin-4-ona
Se disolvió N-(4-(2-(2-(1-(4-fluorofenil)-3-(4-fluorofenil)-4-1 H-pirazolil)-4-oxazolin-3-il)etil)-2-nitrofenil)acetamida (12,0 g, 22 mmol) en metanol (300 ml), NaOH (1 N, 40 ml) y la mezcla se sometió a reflujo durante la noche. Se añadió acetato de etilo a la disolución de reacción y la mezcla se repartió. La fase de acetato de etilo se lavó con disolución salina saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y el filtrado se concentró al vacío para dar un producto bruto de 3-(4-amino-3-nitrofenetil)-2-(1-(4-fluorofenil)-3-(4-fluorofenil)-1H-pirazolil-4-il)oxazolin-4-ona (10,0 g, 19,8 mmol, rendimiento: 90%) que se utilizó directamente en la siguiente reacción.
Etapa 7. 2-(1 -(4-fluorofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(3,4-diaminofenetil)oxazolin-4-ona
Se disolvió 3-(4-amino-3-nitrofenetil)-2-(1-(4-fluorofenil)-3-(4-fluorofenil)-1H-pirazolil-4-il)oxazolin-4-ona bruta (10,0 g, 19.8 mmol) en acetato de etilo/metanol (1:1, 400 ml), se añadió Ni Raney (2,0 g), se introdujo gas hidrógeno y la mezcla se agitó a 50 °C durante 16 horas y luego se filtró. El filtrado se concentró para dar 3-(4-aminofenetil)-2-(1-(4-fluorofenil)-3-(4-fluorofenil)-4-1 H-pirazolil)oxazolin-4-ona bruta (9,0 g, 18,9 mmol, rendimiento: 95%) que se utilizó directamente en la siguiente reacción.
Etapa 8. 2-(1 -(4-fluorofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(6-fluoro-2-carbonil-2,3-dihidro-1 H-benzo[D]imidazol-5-il)etil)oxazolin-4-ona
Se disolvieron 2-(1-(4-fluorofenil)-3-(4-fluorofenil)-1H-pirazol-4-il)-3-(3,4-diaminofenetil)oxazolin-4-ona bruta (9,0 g, 18.9 mmol) y CDI (3,8 g, 23,4 mmol) en DMF anhidra (10 ml) y la mezcla se agitó bajo protección de nitrógeno a 60 °C durante 4 horas. Una vez completada la reacción, la disolución de reacción se vertió en agua (300 ml) y se extrajo con acetato de etilo (300 ml x 3). Las fases orgánicas reunidas se lavaron una vez con disolución salina saturada, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el filtrado se secó por evaporación rotatoria para dar un producto bruto (6,0 g) que se lavó con diclorometano y se filtró. El sólido se secó al vacío para dar 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(6-fluoro-2-carbonil-2,3-dihidro-1 H-benzo[D]imidazol-5-il)etil)oxazolin-4-ona (3,0 g, 6,0 mmol, 32%: rendimiento).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-afe) 5 10,44 (s, 2H), 8,65 (s, 1H), 7,96-7,92 (m, 2H), 7,64-7,61 (m, 2H), 7,37 (t, J = 8,4 Hz, 2H), 7,28 (t, J = 8,8 Hz, 2H), 6,73-6,59 (m, 3H), 6,02 (s, 1H), 4,26-4,23 (m, 2H), 3,67-3,63 (m, 1H), 2,91-2,88 (m, 1H) , 2,68-2,62 (m, 2H); EM: 502,2 [M+H]+ .
Se separó quiralmente 3-(2-(2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo[a]imidazol-5-il)etil)-2-(1 -(4-fluorofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-oxazolidin-4-ona (3 g) mediante SFC (columna: OJ-H; tamaño de columna: 0,46 cm DI x 15 cm L; volumen de inyección: 2,0 gl; fase móvil: HEP/EtOH = 60/40 (V/V); caudal: 0,5 ml/min; longitud de onda: UV 254 nm; temperatura: 25°C) para dar dos isómeros ópticos.
(S)-3-(2-(2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo[D]imidazol-5-il)etil)-2-(1-(4-fluorofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-oxazoiidin-4-ona, sólido blanco, 1,00 g, rendimiento 33,3%. tR 1,831 min, [a]D -12,30° (c 0,5040 g/100 ml, 14,7°C); pureza: 99,52%, e.e.: 100,0%.
(R)-3-(2-(2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo[d]imidazol-5-il)etil)-2-(1-(4-fluorofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-oxazolidin-4-ona, sólido blanco, 0,88 g, rendimiento 29,3%. tR 2,275 min, [a]D +14,80° (c 0,5001 g/100 ml, 14,1°C); pureza: 99,45%, e.e.: 99,54%.
Ejemplo 16: 6-(2-{2-[1 -(4-bromo-fenil)-3-(4-fluoro-fenil)-1 -hidropirazol-4-il]-4-carbonil-oxazolin-3-il}-etil)-3-hidro-2-carbonil-benzoxazol
Figure imgf000026_0001
Etapa 1. (3-metoxi-4-nitro-fenil)-cianoacetato de etilo
Se disolvió cianoacetato de etilo (3,6 g, 32,1 mmol) en DMF (50 ml), luego se añadió gradualmente hidruro de sodio (0,9 g, al 60% en aceite mineral, 37,9 mmol) a temperatura ambiente y, después de la adición, la mezcla se agitó durante media hora, y luego se añadió 3-metoxi-4-nitrofluorobenceno (5,0 g, 29,2 mmol). La reacción se calentó hasta 100 °C y se agitó durante una hora. Una TLC (éter de petróleo:acetato de etilo = 10:1) mostró que se había consumido el material de partida. La disolución de reacción se extinguió con 300 ml de cloruro de amonio saturado acuoso con hielo, luego se añadió ácido clorhídrico diluido hasta que se desvaneció el color marrón rojizo y se extrajo dos veces con acetato de etilo (100 ml x 2). Las fases orgánicas reunidas se lavaron tres veces con disolución salina saturada y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el filtrado se concentró para dar un aceite marrón bruto (9,0 g, 100%), que se utilizó directamente en la siguiente reacción.
Etapa 2. (3-metoxi-4-nitro-fenil)-acetonitrilo
Se disolvieron (3-metoxi-4-nitrofenil)-cianoacetato de etilo (9,0 g, 0,034 mol), cloruro de sodio (3,37 g, 0,058 mol) y agua (0,54 ml, 0,03 mol) en DMSO (90 ml), y se calentó a 100°C durante la noche. Una TLC mostró que se había consumido el material de partida. La mezcla de reacción se diluyó con 500 ml de agua y se extrajo dos veces con acetato de etilo (100 ml x 2). Las fases orgánicas reunidas se lavaron tres veces con disolución salina saturada, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el filtrado se concentró. El producto bruto se purificó mediante una columna de gel de sílice para dar un sólido de color marrón rojizo (2,6 g, 40%).
Etapa 3. (3-metoxi-4-nitrofenil)-etilamina
Se disolvió (3-metoxi-4-nitro-fenil)-acetonitrilo (2,6 g, 13,5 mmol) en tetrahidrofurano (10 ml) y luego se añadió lentamente gota a gota una disolución de borano 1 N en tetrahidrofurano (67 ml, 67 mmol) a temperatura ambiente. temperatura. Una vez completada la adición, la reacción se calentó a reflujo durante una hora y una TLC mostró que el material de partida se había consumido. La disolución de reacción se extinguió mediante la adición gota a gota de metanol con enfriamiento en un baño de hielo y se concentró para dar un aceite negro bruto (2,9 g, 100%), que se usó directamente en la siguiente reacción. EM: 197,1 [M+H]+.
Etapa 4. 2-hidroxi-N-[2-(3-metoxi-4-nitrofenil)-etil]-acetamida
Se disolvieron (3-metoxi-4-nitrofenil)-etilamina (2,9 g, 0,014 mmol) y glicolato de metilo (20,0 g, 0,222 mol) en metanol (30 ml) y se calentaron a reflujo durante la noche. Una TLC mostró que se había consumido el material de partida, y luego la disolución de reacción se concentró y el producto bruto se purificó mediante una columna de gel de sílice (éter de petróleo:acetato de etilo = de 5:1 a 0:1) para dar el producto (2,0 g, 56%) como un aceite marrón.
RMN de 1H (400 MHz, CDCla) 57,81 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,93 (s, 1H), 6,86 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,80 (s, 1H), 4,05 (s, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,61-3,56 (m, 2H), 2,93-2,89 (m, 2H); EM: 255,3 [M+H]+.
Etapa 5. 2-[1-(4-bromo-fenil)-3-(4-fluoro-fenil)-1-hidro-pirazol-4-il]-3-[2-(3-metoxil-4-nitro-fenil)-etil]-4-carbonil-oxazolina
Se disolvieron 2-hidroxi-N-[2-(3-metoxi-4-nitrofenil)-etil]-acetamida (4,0 g, 3,94 mmol), 1-[1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1-hidro-pirazol-4-formaldehído (1,4 g, 4,13 mmol) y ácido p-toluensulfónico monohidrato (0,37 g, 1,97 mmol) en tolueno (20 ml). La mezcla se calentó a reflujo a 150 °C durante la noche con un separador de agua para separar el agua. Los ensayos de TLC mostraron que las materias primas habían desaparecido. La reacción se concentró y el material bruto se purificó mediante una columna de gel de sílice para dar el producto como un sólido amarillo (1,1 g, 48%).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-ds) 58,74 (s, 1H), 7,90 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,73-7,64 (m, 5H), 7,29 (t, J = 8,4 Hz, 2H), 7,07 (s, 1H), 6,80 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,05 (s, 1H), 4,31-4,23 (m, 2H), 3,85-3,81 (m, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,14-3,07 (m, 1H) ), 2,85-2,73 (m, 2H); EM: 581,1 [M+H]+.
Etapa 6. 2-[1-(4-bromo-fenil)-3-(4-fluoro-fenil)-1-hidro-pirazol-4-il]-3-[2-(3-hidroxi-4-nitro-fenil)-etil]-4-carbonil-oxazolina
Se disolvió 2-[1 -(4-bromo-fenil)-3-(4-fluoro-fenil)-1 -hidro-pirazol-4-il]-3-[2-(3-metoxi-4-nitrofenil)-etil]-4-carboniloxazolina (0,9 g, 1,55 mmol) en diclorometano (20 ml) y se añadió gota a gota tribromuro de boro (1,9 g, 7,75 mmol) a -78 °C en un baño de acetona con hielo seco. La reacción se agitó durante la noche y se dejó que la temperatura volviese de modo natural a la temperatura ambiente. Una TLC mostró que se había consumido el material de partida, la reacción se extinguió con metanol, se ajustó a la neutralidad con bicarbonato de sodio y se extrajo dos veces con diclorometano (50 ml x 2). Las fases orgánicas reunidas se lavaron dos veces con disolución salina saturada, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se filtraron, y el filtrado se concentró para dar un sólido amarillo bruto (777 mg) que se usó directamente en la siguiente reacción. EM: 569,1 [M+H]+.
Etapa 7. 2-[1-(4-bromo-fenil)-3-(4-fluoro-fenil)-1-hidro-pirazol-4-il]-3-[2-(3-hidroxi-4-amino-fenil)-etil]-4-carbonil-oxazolina
Se disolvió 2-[1 -(4-bromo-fenil)-3-(4-fluoro-fenil)-1 -hidro-pirazol-4-il]-3-[2-(3-hidroxi-4-nitrofenil)-etil]-4-carboniloxazolina (777 mg, 1,37 mmol) en metanol (50 ml), se añadió Ni-Ra (100 mg) y la mezcla se agitó a presión atmosférica durante 1 hora. Una TLC mostró que se había consumido el material de partida. La disolución de reacción se filtró a través de celite y el filtrado se concentró para dar un sólido marrón (660 mg) que se usó directamente en la siguiente etapa. EM: 537,1 [M+H]+.
Etapa 8. 6-(2-{2-[1 -(4-bromo-fenil)-3-(4-fluoro-fenil)-1 -hidro-pirazol-4-il]-4-carbonil-oxazolin-3-il}-etil)-3-hidro-2-carbonil-benzoxazol
Se disolvió 2-[1 -(4-bromo-fenil)-3-(4-fluoro-fenil)-1 -hidro-pirazol-4-il]-3-[2-(3-hidroxi-4-aminofenil)-etil]-4-carboniloxazolina (300 mg, 0,559 mmol) en DMF anhidra (10 ml), seguido de la adición de carbonildiimidazol CDI (110 mg, 0,67 mmol) a temperatura ambiente. La reacción se calentó a 70°C durante una hora. Una TLC mostró que se había consumido el material de partida. La reacción se extinguió con 100 ml de agua y se extrajo dos veces con acetato de etilo (50 ml x 2). Las fases orgánicas reunidas se lavaron tres veces con disolución salina saturada, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentró el filtrado. El producto bruto se sometió a HPLC para dar un producto sólido de color blanco (100 mg, 32%).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-afe) 511,44 (s, 1H), 8,71 (s, 1H), 7,90 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,72 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,65­ 7,61 (dd, J = 8,8 Hz , 5,6 Hz, 2H), 7,28 (t, J = 8,8 Hz, 2H), 7,00 (s, 1H), 6,87-6,80 (m, 2H), 5,97 (s), 1H), 4,30-4,21 (m, 2 H ), 3,75-3,70 (m, 1H), 3,00-2,94 (m, 1H), 2,71-2,65 (m, 2H); EM: 563,1 [M+H]+.
Ejemplo 17: 5-(2-(2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-4-oxazolin-3-il)etil)benzo[d]oxazol-2(3H)-ona
Figure imgf000028_0001
Se disolvió ácido 2-(4-hidroxifenil)acético (12 g, 78,9 mmol) en ácido acético (75 ml), se enfrió hasta 0 °C y luego se añadió gota a gota ácido nítrico (al 65%, 4,08 ml, 91,9 mmol). La disolución de reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Después de la filtración, el sólido se lavó con éter (10 ml x 2) y se secó a presión reducida para dar ácido 2-(4-hidroxi-3-nitrofenil)acético (10,0 g, 50 mmol, rendimiento: 64%).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-afe) 5 12,42 (m, 1H), 10,84 (m, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,45 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 3,60 (s, 2H).
Etapa 2. 2-(4-metoxi-3-nitrofenil)acetato de metilo
Se disolvió ácido 2-(4-hidroxi-3-nitrofenil)acético (10,0 g, 50 mmol) en N,N-dimetilformamida (100 ml) y se añadió carbonato de potasio (21,0 g, 152,2 mmol) a la disolución. Luego se añadió yoduro de metilo (21,0 g, 147,9 mmol). La mezcla de reacción se calentó hasta 50 °C y se hizo reaccionar durante 30 min. Una TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla de reacción se añadió lentamente a 300 ml de agua, se filtró y el sólido se lavó con agua y se secó al vacío para dar 2-(4-metoxi-3-nitrofenil)acetato de metilo (11,2 g, 49,8 mmol, rendimiento: 98%).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-ds) 57,81 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,57 (dd, J = 2,4 y 8,8 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,75 (s , 2H), 3,63 (s, 3H); EM: 226,3 [M+H]+.
Etapa 3. Ácido 2-(4-metoxi-3-nitrofenil)acético
Se disolvió 2-(4-metoxi-3-nitrofenil)acetato de metilo (8,0 g, 35,6 mmol) en tetrahidrofurano (80 ml) y agua (20 ml). Se añadió lentamente hidróxido de litio monohidrato (4,5 g, 106,7 mmol) a la disolución de reacción y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se eliminó el tetrahidrofurano a presión reducida y se ajustó el pH a 3 con ácido clorhídrico (3 N). La mezcla de reacción se agitó durante 15 minutos y luego se filtró. La torta del filtro se lavó con 50 ml de agua y se secó para dar ácido 2-(4-metoxi-3-nitrofenil)acético. (6,0 g, 28,4 mmol, rendimiento: 80%).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-afe) 512,46 (m, 1H), 7,79 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,56 (dd, J = 2,4 y 8,8 Hz, 1H), 7,32 (d), J = 8,8 Hz, 1H), 3,91 ( s, 3H), 3,64 (s, 2H).
Etapa 4. 2-(4-metoxi-3-nitrofenil)acetamida
Se añadió ácido 2-(4-metoxi-3-nitrofenil)acético (6,0 g, 28,4 mmol) a cloruro de tionilo (20 ml), luego la mezcla se calentó hasta 100 °C y se hizo reaccionar durante 1 hora. La disolución de reacción se evaporó hasta la sequedad y se disolvió en tetrahidrofurano (80 ml). La disolución se añadió lentamente a amoniaco acuoso (50 ml) a 0 °C y se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 1 hora. El tetrahidrofurano se eliminó mediante evaporación rotatoria. El producto se filtró y la torta se secó para dar 2-(4-metoxi-3-nitrofenil)acetamida (5,0 g, 23,8 mmol, rendimiento 84%).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-afe) 57,77 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,53 (dd, J = 2,4 y 8,8 Hz, 1H), 7,30 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,95 (sa, 2H), 3,90 (s , 3H), 3,42 (s, 2H); EM: 211,3 [M+H]+.
Etapa 5. 2-(4-metoxi-3-nitrofenil)etanamina
Se añadió 2-(4-metoxi-3-nitrofenetil)acetamida (2,0 g, 9,52 mmol) a tetrahidrofurano (80 ml), luego se añadió una disolución de borano en tetrahidrofurano (1 M, 50 ml, 50 mmol) y la mezcla se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. Luego, la temperatura se elevó hasta 70°C y la mezcla se hizo reaccionar durante 2 horas. La disolución de reacción se extinguió con ácido clorhídrico concentrado, se eliminó el tetrahidrofurano por evaporación rotatoria y el pH se ajustó a 9 con carbonato de sodio saturado. La disolución de reacción se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 3). Los extractos se recogieron, se lavaron con disolución salina saturada y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. El filtrado se evaporó hasta la sequedad para dar 2-(4-metoxi-3-nitrofenil)etanamina (2 g, 9,52 mmol, rendimiento: 100%). EM: 197,3 [M+H]+.
Etapa 6. 2-hidroxi-N-(4-metoxi-3-nitrofenetil)acetamida
Se disolvieron 2-(4-metoxi-3-nitrofenetil)etanamina (2,0 g, 10,2 mmol) y glicolato de metilo (18,0 g, 200 mmol) en 50 ml de metanol y se calentaron a reflujo durante dos días. La disolución de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se concentró por evaporación rotatoria hasta la sequedad. El producto bruto se purificó mediante una columna de gel de sílice (éter de petróleo:acetato de etilo = 5: 1-1: 2) para dar el compuesto de 2-hidroxi-N-(4-metoxi-3-nitrofenetil)acetamida (550 mg, 2,2 mmol, rendimiento: 21%).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-afe) 57,69 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,41 (dd, J = 2,4 y 8,8 Hz, 1H), 7,05 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,81 (sa, 1H), 4,06 (s , 2H), 3,94 (s, 3H), 3,44 (m, 2H), 2,94 (m, 2H); EM: 255,3 [M+H]+.
Etapa 7. 2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(4-metoxi-3-nitrofenil)oxazolin-4-ona
Se disolvieron 2-nidroxi-N-(4-metoxi-3-nitrofenetil)acetamida (550 mg, 2,2 mmol), 1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-formaldehído (747 mg, 2,2 mmol) y ácido p-toluensulfónico monohidrato (74 mg, 0,43 mmol) en 50 ml de tolueno. La mezcla se calentó a 150°C durante la noche con un separador de agua para separar el agua. Una TLC (éter de petróleo:acetato de etilo = 2:1) mostró que el material de partida se había consumido. La disolución de reacción se concentró mediante evaporación rotatoria y luego se purificó mediante columna de gel de sílice (éter de petróleo:acetato de etilo = 2:1-0:1) para dar el compuesto de 2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(4-metoxi-3-nitrofenil)oxazolin-4-ona (600 mg, 1,03 mmol, rendimiento: 50%).
RMN de 1H (400 MHz, CDCla) 57,89 (s, 1H), 7,66-7,59 (m, 6H), 7,48 (s, 1H), 7,24 (m, 1H), 7,17 (m, 2H), 6,90 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 5,95 (s, 1H), 4,34 (dd, J = 13,6 y 20,8 Hz, 2H), 3,87 (s, 3H), 3,80 (m, 1H), 3,02 (m, 1H), 2,73 (m, 2H); EM: 581,1,583,1 [M+H]+.
Etapa 8. 2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(4-hidroxi-3-nitrofenil)oxazolin-4-ona
Se disolvió 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1H-pirazol-4-il)-3-(4-metoxi-3-nitrofenil)oxazolin-4-ona (600 mg, 1,03 mmol) en diclorometano (10 ml), se enfrió hasta -70°C y luego se añadió lentamente tribromuro de boro (774 mg, 3,09 mmol). La disolución de reacción se calentó lentamente hasta la temperatura ambiente y se agitó durante 1 hora. Una TLC (éter de petróleo:acetato de etilo = 1:1) mostró que se había consumido el material de partida. La reacción se enfrió hasta -70 °C, se extinguió con metanol (10 ml) y se añadió bicarbonato de sodio sólido (2 g) y la mezcla de reacción se calentó lentamente hasta la temperatura ambiente y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró hasta la sequedad. Se añadieron 20 ml de acetato de etilo para formar una disolución. La disolución se lavó con disolución saturada de bicarbonato de sodio (5 ml) y disolución salina saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se filtró, y el filtrado se concentró hasta la sequedad para dar 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(4-hidroxi-3-nitrofenil)oxazolin-4-ona (600 mg, 1,03 mmol, rendimiento: 100%). EM: 567,2, 569,1 [M+H]+.
Etapa 9. 2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(4-hidroxi-3-aminofenil)oxazolin-4-ona
Se disolvió 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1H-pirazol-4-il)-3-(4-hidroxi-3-nitrofenil)oxazolin-4-ona (600 mg, 1,03 mmol) en metanol (10 ml), se añadió Ni Raney (100 mg), y la mezcla se hidrogenó con un globo de hidrógeno a presión normal a 30 °C. Después de reaccionar durante 1 hora, se filtró la disolución de reacción y se lavó la torta con acetato de etilo. El filtrado se secó mediante evaporación rotatoria para obtener un producto bruto, que se purificó mediante columna de gel de sílice para dar 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1H-pirazol-4-il)-3-(4-hidroxi-3-aminofenil)oxazolin-4-ona (250 mg, 0,46 mmol, rendimiento: 45%). EM: 537,1,539,1 [M+H]+.
Etapa 10. 5-(2-(2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-4-oxazolin-3-il)etil)benzo[D]oxazol-2(3H)-ona
Se disolvieron 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(4-hidroxi-3-aminophenil)oxazolin-4-ona (250 mg, 0,46 mmol) y N,N'-carbonildiimidazol (327 mg, 2,32 mmol) en N,N-dimetilformamida (15 ml) y se agitó a 70 °C durante la noche. Después de que la mezcla de reacción se concentrara al vacío hasta la sequedad, se purificó mediante HPLC preparativa para dar 5-(2-(2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1H-pirazol-4-il)-4-oxazolin-3-il)etil)benzo[d]oxazol-2(3H)-ona (96,4 mg, 0,17 mmol, rendimiento: 40%).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-afe) 511,43 (m, 1H), 8,72 (s, 1H), 7,91 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 7,73 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,65 (d, J = 8,8 Hz, 2 H ), 7,31 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,02 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,79 (s, 1H), 6,76 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 5,96 (s, 1H) ), 4,26 (dd, J = 13,2 y 21,6 Hz, 2H), 3,73 (m, 1H), 2,94 (m, 1H), 2,70 (m, 2H); EM: 563,2, 565,1 [M+H]+.
Ejemplo 18: 2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-p¡razol-4-¡l)-3-(2-(2-carbonil-2,3-d¡h¡drobenzo[a[]t¡azol-6-¡l)et¡l)-4-carbonil-oxazolina
Figure imgf000030_0001
Etapa 1.3-(4-am¡no-3-yodofen¡l)-2-(1 -(4-bromofen¡l)-3-(4-fluorofen¡l)-1 H-pirazol-4-¡l)-4-carbon¡l-oxazolina
Se d¡solv¡ó 3-(4-am¡nofen¡l)-2-(1-(4-bromofen¡l)-3-(4-fluorofen¡l)-1-h¡drop¡razol-4-¡l)-4-carbon¡l-oxazol¡na (100 mg, 0,192 mmol) en ác¡do acét¡co glac¡al (5 ml), y se añad¡ó gota a gota cloruro de yodo (37 mg, 0,23 mmol) d¡suelto en 1 ml de d¡clorometano a temperatura amb¡ente, y la mezcla se agitó a temperatura amb¡ente durante 0,5 horas. La reacc¡ón se d¡luyó con 100 ml de agua y se extrajo dos veces con acetato de et¡lo (50 ml x 2). Las fases orgán¡cas reun¡das se lavaron dos veces con d¡soluc¡ón sal¡na saturada, se secaron sobre sulfato de sod¡o anh¡dro, se f¡ltraron y el f¡ltrado se concentró. El producto bruto se pur¡f¡có med¡ante una columna de gel de síl¡ce (éter de petróleo:acetato de et¡lo = 5:1-1:1) para dar el producto como un sól¡do marrón (100 mg, rend¡m¡ento: 81%).
RMN de 1H (400 MHz, CDCla) 57,79 (s, 1H), 7,64-7,58 (m, 6H), 7,27 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,16 (t, J = 8,4 Hz, 2H), 6,80 (d, J = 8,0 Hz , 1H), 6,53 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 5,86 (s, 1H), 4,36-4,27 (m, 2H), 3,97 (s, 2H), 3,82-3,75 (m, 1H), 2,95-2,88 (m, 1H), 2,62-2,59 (m, 2H); EM: 647,1 [M+H]+.
Etapa 2. (4-(2-(2-(1 -(4-bromofen¡l)-3-(4-fluorobenceno)-1 -h¡dro-p¡razol-4-¡l)-4-carboniloxazol¡n-3-¡l)et¡l)-2-yodobencen)carbamato de et¡lo
Se d¡solv¡eron 3-(4-am¡no-3-yodofen¡l)-2-(1 -(4-bromofen¡l)-3-(4-fluorofen¡l)-1 -h¡dro-p¡razol-4-¡l)-4-carbon¡l-oxazol¡na (100 mg , 0,15 mmol) y carbonato de potas¡o (212 mg, 1,54 mmol) en acetona (5 ml) y luego se añad¡ó cloroform¡ato de et¡lo (90 mg, 1,54 mmol) gota a gota a temperatura amb¡ente. La mezcla se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 2 horas. La reacc¡ón se d¡luyó con 100 ml de agua y se extrajo dos veces con acetato de et¡lo (50 ml x 2). Las fases orgán¡cas reun¡das se lavaron dos veces con d¡soluc¡ón sal¡na saturada, se secaron sobre sulfato de sod¡o anh¡dro, se f¡ltraron y el f¡ltrado se concentró. El producto bruto se pur¡f¡có med¡ante una columna de gel de síl¡ce (éter de petróleo:acetato de et¡lo = 1:1) para dar el producto como un sólido marrón (90 mg, rend¡m¡ento: 81%).
RMN de 1H (400 MHz, CDCla) 57,86 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,63-7,58 (m, 6H), 7,40 (s, 1H), 7,15 (t, J = 8,4 Hz, 2H), 6,98 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,79 (s, 1H), 5,84 (s, 1H), 4,38-4,28 (m, 2H), 3,80-3,74 (m, 1H), 2,98-2,93 (m, 1H), 2,69-2,65 (m, 2H); EM: 721,1 [M+H]+.
Etapa 3. 2-(1-(4-bromofen¡l)-3-(4-fluorofen¡l)-1-h¡dro-p¡razol-4-¡l)-3-(2-(2-carbon¡l-2,3-d¡hidrobenzo[a[]t¡azol-6-¡l)et¡l)-4-carbon¡l-oxazol¡na
En un matraz de tres bocas cerrado a reflujo de 100 ml se d¡solv¡eron (4-(2-(2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1-hidrop¡razol-4-¡l)-4-carbon¡loxazol¡n-3-¡l)et¡l)-2-yodobencen)carbamato de et¡lo (80 mg, 0,111 mmol), Cul (2,2 mg, 0,011 mmol) y Na2S.9H2Ü (80 mg, 0,333 mmol) en DMF (5 ml). La mezcla se calentó a 80°C bajo n¡trógeno y se agitó durante la noche. Una LC-MS mostró que el mater¡al de part¡da había desapareado y que se había formado el ¡ntermed¡o. La reacc¡ón se enfr¡ó hasta la temperatura amb¡ente, luego se calentó hasta la 130°C bajo protecc¡ón de n¡trógeno después de agregar 3 ml de ác¡do acét¡co glac¡al con una jer¡nga y luego se agitó durante 3 horas. La d¡soluc¡ón de reacc¡ón se enfr¡ó hasta la temperatura amb¡ente y se f¡ltró con d¡atom¡ta. El res¡duo del f¡ltro se lavó con acetato de et¡lo (50 mL), el f¡ltrado se lavó una vez con 100 mL de agua, la fase acuosa se extrajo una vez con acetato de etilo (50 mL) y las fases orgán¡cas reunidas se lavaron tres veces con disolución salina saturada. se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron, y el filtrado se concentró y se purificó para dar un sólido blanco (4 mg, rendimiento: 6%).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-afe) 58,77 (s, 1H), 7,95 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,78 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,70 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 7,34 (t, J = 8,8 Hz, 3H), 7,02-6,95 (m, 2H), 6,09 (s, 1H), 4,36-4,28 (m, 2H), 3,79-3,75 (m, 1H), 3,07-3,00 (m, 1H), 2,77-2,68 (m, 2H); EM: 579,2 [M+H]+.
Ejemplo 19: 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(2-oxo-2,3-dihidrobenzo[d]tiazol-5-il)etil)oxazolin-4-ona
Figure imgf000031_0001
Se disolvió 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(4-hidroxi-3-nitrofenil)oxazolin-4-ona (800 mg, 1,45 mmol) en DMF anhidra (10 ml), se añadió hidruro de sodio (al 60%, 70 mg , 1,75 mmol) a 0 °C y la mezcla se agitó durante 30 min. Se añadió lentamente gota a gota cloruro de dimetilaminotioacilo (356 mg, 11,18 mmol) a la mezcla de reacción protegida con nitrógeno y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La disolución de reacción se vertió en agua helada y se extrajo con acetato de etilo. La fase de acetato de etilo se lavó tres veces con disolución salina saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y el filtrado se evaporó hasta la sequedad. El producto bruto se purificó mediante una columna de gel de sílice para dar ácido O-(4-(2-(2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1H-pirazol-4-il)-4-oxazolin-3-il)etil)-2-nitrofenil)dimetilaminotiocarboxílico (230 mg, 0,35 mmol, rendimiento: 24%).
RMN de 1H (400 MHz, CDCla) 57,93 (s, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,70-7,56 (m, 6H), 7,36 (dd, J = 8,4, 2,0, 1H), 7,21 7,08 (m, 3H), 5,89 (s, 1H), 4,39-4,28 (m, 2H), 3,86-3,76 (m, 1H), 3,47 (s, 3H), 3,40 (s, 3H), 3,03-2,96 (m, 1H), 2,82 (m, 2H); EM: 654.2, 656,2 [M+H]+.
Etapa 2. Ácido S-(4-(2-(2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-4-oxazolin-3-il)etil)-2-nitrofenil)dimetilaminotiocarboxílico
Se añadió ácido O-(4-(2-(2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-4-oxazol-3-il)etil)-2-nitrofenil)dimetilaminotiocarboxílico (230 mg, 0,35 mmol) a sulfolano (2 ml) a temperatura ambiente y la temperatura se elevó hasta 150°C bajo una atmósfera de nitrógeno y la mezcla se hizo reaccionar durante 1 hora. La disolución de reacción se vertió en agua helada y se extrajo con acetato de etilo. La fase de acetato de etilo se lavó tres veces con disolución salina saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y el filtrado se evaporó hasta la sequedad. El producto bruto se purificó mediante una columna de gel de sílice para dar ácido S-(4-(2-(2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-4-oxazolin-3-il)etil)-2-nitrofenil)dimetilaminotiocarboxílico (230 mg, 0,35 mmol, rendimiento: 100%).
RMN de 1H (400 MHz, CDCla) 57,95 (s, 1H), 7,66-7,52 (m, 8H), 7,27 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,15 (t, J = 8,4 Hz, 2H), 5,79 (s, 1H), 4,39-4,25 (m, 2H), 3,82-3,68 (m, 1H), 3,13 (s, 3H), 3,02 (s, 3H), 3,00-2,95 (m, 1H), 2,86-2,81 (m, 2H); EM: 654.2, 656,2 [M+H]+.
Etapa 3. Ácido S-(2-amino-4-(2-(2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-4-oxazolin-3-il)etil)fenil)dimetilaminotiocarboxílico
Se disolvió ácido S-(4-(2-(2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-4-oxazolin-3-il)etil)-2-nitrofenil)dimetilaminotiocarboxílico (230 mg, 0,35 mmol) en acetato de etilo (20 ml) y se añadió lentamente dicloruro de estaño (665 mg, 3,5 mol). La mezcla fue agitada a temperatura ambiente durante la noche. Se añadió acetato de etilo (50 ml) para diluir la reacción y el pH se ajustó a básico con bicarbonato de sodio saturado. La mezcla de reacción se filtró, la fase de acetato de etilo del filtrado se lavó con disolución salina saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y el filtrado se evaporó hasta la sequedad para dar S-(2-amino-4-(2-(2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-4-oxazolin-3-il)etil)fenil)dimetilaminotioato (200 mg), que se usó directamente para la siguiente reacción. EM: 624,3, 626,2 [M+H]+.
Etapa 4. 3-(3-amino-4-mercaptofenil)-2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolin-4-ona
El ácido S-(2-amino-4-(2-(2-(1 -(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-4-oxazolin-3-il)etil)fenil)dimetilaminotiocarboxílico bruto (200 mg) se disolvió en metanol (20 ml) y se añadió lentamente hidróxido de sodio (2 N, 2 ml, 4 mol). La mezcla se calentó hasta 70 °C y se agitó durante la noche. Después de que la disolución de reacción se enfriara hasta la temperatura ambiente, el pH se ajustó a 7, el metanol se eliminó mediante evaporación rotatoria y el remanente se extrajo con acetato de etilo. La fase de acetato de etilo se lavó con disolución salina saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y el filtrado se evaporó hasta la sequedad para dar 3-(3-amino-4-mercaptofenil)-2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1H-pirazol-4-il)oxazolin-4-ona bruta (180 mg) que se utilizó directamente en la siguiente etapa.
Etapa 5. 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(2-oxo-2,3-dihidrobenzo[d]tiazol-5-il)etil)oxazolin-4-ona
La 3-(3-amino-4-mercaptofenil)-2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1H-pirazol-4-il)oxazolin-4-ona bruta (180 mg) se disolvió en tetrahidrofurano (20 ml) y se añadió N,N'-carbonildiimidazol (105 mg, 0,648 mmol). Después de que la temperatura se elevase hasta 70°C, la mezcla se hizo reaccionar durante la noche. La disolución de reacción se evaporó hasta la sequedad y luego se preparó mediante HPLC para dar 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1H-pirazol-4-il)-3-(2-(2-oxo-2,3-dihidrobenzo[d]tiazol-5-il)etil)oxazolin-4-ona (14,5 mg, 0,025 mmol).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-ds) 511,71 (s, 1H), 8,73 (s, 1H), 7,90 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 7,71 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,66­ 7,62 (m, 2H), 7,34-7,27 (m, 3H), 6,82-6,81 (m, 2H), 6,02 (s, 1H), 4,31-4,25 (m, 2H), 3,84-3,66 (m, 1H), 3,00-2,96 (m, 1H) , 2,80-2,67 (m, 2H); EM: 579,2, 581,0 [M+H]+.
Ejemplo 20: 2-(1 -(4-bromofenil)-3-(tiofen-3-il)-1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo[d]imidazol-5-il)etil)oxazolidin-4-ona
Figure imgf000032_0001
Etapa 1. 4-(2-aminoetil)anilina
Se añadieron 2-(4-nitrofenil)etanamina (5,0 g, 30 mmol) y Ni Raney (500 mg) a metanol (50 ml) y la mezcla se agitó bajo 1 atmósfera de hidrógeno durante la noche. La mezcla de reacción se filtró, el Ni Raney se lavó con metanol (50 ml x 4) y el filtrado se secó mediante evaporación rotatoria para dar 4-(2-aminoetil)anilina (4,1 g, 30 mmol), rendimiento: 100%.
Etapa 2. N-(4-(2-acetaminoetil)fenil)acetamida
Se disolvió 4-(2-aminoetil)anilina (4,1 g, 30 mmol) en diclorometano (100 ml) y, después de que la disolución se enfriara hasta 0°C, se añadió gota a gota anhídrido acético (15,3 g, 150 mmol) con enfriamiento en un baño de hielo. Se retiró el baño de hielo y se dejó reaccionar la mezcla a temperatura ambiente durante 2 horas. El diclorometano se eliminó mediante evaporación rotatoria. La disolución concentrada se añadió a 50 ml de agua, se agitó durante 30 min y luego se filtró para dar un compuesto de N-(4-(2-acetaminoetil)fenil)acetamida (4,9 g, 22,3 mmol, rendimiento: 74%). EM: 221.2 [M+H]+.
Etapa 3. N-(4-acetamino-3-nitrofenetil)acetamida
Se disolvió N-(4-(2-acetaminoetil)fenil)acetamida (4,9 g, 22,3 mmol) en ácido sulfúrico concentrado (30 ml) y, después de que la disolución de reacción se enfriase hasta 0° C con enfriamiento en un baño de hielo, se añadió lentamente gota a gota ácido nítrico humeante (2,1 g, 33,3 mmol) y se retiró el baño de hielo y se dejó reaccionar la mezcla a temperatura ambiente durante 1 hora. La disolución de reacción se añadió lentamente a 400 ml de agua helada por la pared de la botella, se agitó durante 15 minutos y luego se filtró. La torta del filtro se lavó con 50 ml de agua y la torta del filtro se secó para obtener N-(4-acetamino-3-nitrofenetil)acetamida bruta (5,2 g), que se usó directamente para la siguiente reacción.
Etapa 4. 4-(2-aminoetil)-2-nitroanilina
La N-(4-acetamino-3-nitrofenetil)acetamida bruta (5,2 g) se añadió a ácido clorhídrico (6 M, 60 ml) y luego se calentó hasta 100 °C y se hizo reaccionar durante la noche (16 horas). La disolución de reacción se evaporó hasta la sequedad, y se le añadió bicarbonato de sodio saturado y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. La fase de acetato de etilo se lavó con disolución salina saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y el filtrado se evaporó para dar 4-(2-aminoetil)-2-nitroanilina bruta (1,5 g), que se usó directamente para la siguiente reacción. EM: 182,0 [M+H]+.
Etapa 5. Carbamato de terc-butil-4-amino-3-nitrofenilo
La 4-(2-aminoetil)-2-nitroanilina bruta (1,5 g, aproximadamente 8,3 mmol) se añadió a hidróxido de sodio (1 M, 50 ml) y se añadió Boc2Ü (2,2 g, 10,1 mmol) con agitación. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La disolución de reacción se ajustó a pH 7-8 con ácido clorhídrico diluido y se extrajo con acetato de etilo. Las fases de acetato de etilo se reunieron, se secaron sobre Na2SÜ4 anhidro, se filtraron, y el filtrado se secó mediante evaporación rotatoria para dar un producto bruto, que se purificó mediante una columna de gel de sílice (éter de petróleo:acetato de etilo = de 20:1 a 5:1) para dar carbamato de terc-butil-4-amino-3-nitrofenilo (1,8 g, 6,4 mmol). EM: 304,3 [M+Na]+.
Etapa 6. 3,4-diaminofenetilcarbamato de terc-butil terc-butilo
Se disolvió carbamato de terc-butil-4-amino-3-nitrofenilo (1,8 g, 6,4 mmol) en metanol (100 ml), se añadió Pd/C (0,36 g), se introdujo gas hidrógeno y la mezcla se agitó a 30°C durante 16 horas. A continuación, la mezcla se filtró y se concentró para dar 3,4-diaminofenetilcarbamato de terc-butil terc-butilo (1,6 g, 6,4 mmol, rendimiento: 100%). EM: 274.3 [M+Na]+.
Etapa 7. (2-(2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo[d]imidazol-5-il)etil)carbamato de terc-butil terc-butilo
Se añadió 3,4-diaminofenetilcarbamato de terc-butil terc-butilo (1,6 g, 6,4 mmol) a acetonitrilo (30 ml) y se añadió N,N'-carbonildiimidazol (CDI) (1,2 g, 7,4 mmol) con agitación. La disolución de reacción se calentó hasta 60 °C y se agitó durante 3 horas. La disolución de reacción se secó mediante evaporación rotatoria y el producto bruto se purificó mediante columna de gel de sílice para dar (2-(2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo[d]imidazol-5-il)etil)carbamato de terc-butil terc-butilo (1,3 g, 4,7 mmol, rendimiento: 73%).
Etapa 8. Clorhidrato de 5-(2-aminoetil)-1 H-benzo[d]imidazol-2(3H)-ona
Se añadió (2-(2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo[d]imidazol-5-il)etil)carbamato de terc-butil terc-butilo (1,3 g, 4,7 mmol) a metanol (30 ml), se añadió gota a gota ácido clorhídrico 6 M en metanol (10 ml) con agitación a temperatura ambiente y la mezcla se agitó. durante otros 30 min. La disolución de reacción se concentró hasta la sequedad para dar clorhidrato de 5-(2-aminoetil)-1 H-benzo[d]imidazol-2(3H)-ona (1,3 g). EM: 178,3 [M+H]+.
Etapa 9. 2-hidroxi-N-(2-(2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo[d]imidazol-5-il)etil)acetamida
Se disolvieron clorhidrato de 5-(2-aminoetil)-1 H-benzo[d]imidazol-2(3H)-ona (1,3 g, 4,7 mmol), glicolato de metilo (8,5 g, 94,4 mmol) y trietilamina (1,4 g, 13,8 mmol) en 20 ml de metanol y se calentaron a reflujo durante dos días. La mezcla de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente y se concentró mediante evaporación rotatoria. El producto bruto se purificó mediante una columna de gel de sílice (éter de petróleo:acetato de etilo = 1:2, luego diclorometano:metanol = 3:1) para dar 2-hidroxi-N-(2-(2)-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo[a]imidazol-5-il)etil)acetamida (2,0 g).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-afe) 510,54 (s, 2H), 10,50 (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 6,83 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,76 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 3,77 (s, 2H), 3,28 (m, 2H), 2,70 (m, 2H); EM: 236,2 [M+H]+.
Etapa 10. 1-(4-bromofenil)-2-(1-(tiofen-2-il)etiliden)hidrazina
Se añadieron 1-(tiofen-2-il)etanona (2,0 g, 15,87 mmol), clorhidrato de 1-(4-bromofenil)hidrazina (3,54 g, 15,87 mmol) y acetato de potasio (1,56 g, 15,87 mmol) a etanol (32 ml) y se agitó durante la noche a 80°C. Después de que la mezcla de reacción se concentrara al vacío hasta la sequedad, se añadió agua y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. La fase de acetato de etilo se concentró para dar un producto bruto, que finalmente se lavó con un disolvente mixto (éter de petróleo:acetato de etilo = 50: 1,50 ml) para dar 1 -(4-bromofenil)-2-(1 -(tiofen-2-il)etiliden)hidrazina (3,5 g, 11,9 mmol, rendimiento: 75%).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-de) 57,64 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,37-7,25 (m, 4H), 7,04 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 2,22 (s), 3H); EM: 295,2, 297,1 [M+H]+.
Etapa 11. 1 -(4-bromofenil)-3-(tiofen-2-il)-1 H-pirazol-4-formaldehído
Se añadió lentamente gota a gota oxicloruro de fósforo (3,78 g, 24,6 mmol) a DMF anhidra (3,3 ml) con enfriamiento en un baño de hielo y, después de agitar durante 30 min, se añadió lentamente 1-(4-bromofenil)-2-(1-(tiofen-2-il)etiliden)hidrazina (3,3 g, 11,18 mmol) disuelta en una pequeña cantidad de DMF anhidra a la mezcla de reacción bajo protección con nitrógeno, y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y, después de elevar la temperatura hasta 70°C, la reacción continuó durante 5 horas. La disolución de reacción se vertió en agua helada y se extrajo con acetato de etilo. La fase de acetato de etilo se lavó tres veces con disolución salina saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró, y el filtrado se evaporó hasta la sequedad para dar 1-(4-bromofenil)-3-(tiofen-2-il)-1 H-pirazol-4-formaldehído (3,5 g, 10,5 mmol, rendimiento: 94%).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-afe) 510,04 (s, 1H), 9,38 (s, 1H), 8,43 (s, 1H), 7,96 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,78 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,72 (m, 2H); EM: 335,1 [M+H]+.
Etapa 12. 2-(1-(4-bromofenil)-3-(tiofen-2-il)-1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo[a]imidazol-5-il)etil)oxazolidin-4-ona
Se disolvieron 1-(4-bromofenil)-3-(tiofen-2-il)-1 H-pirazol-4-formaldehído (500 mg, 1,5 mmol), 2-hidroxi-N-(2-(2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo[a]imidazol-5-il)etil)acetamida (500 mg, 1,5 mmol) y ácido p-toluensulfónico monohidrato (366 mg, 2,1 mmol) en 100 ml de tolueno y N-metilpirrolidona (10 ml) y se calentaron a 160°C durante la noche con un separador de agua. La disolución de reacción se concentró mediante evaporación rotatoria y se purificó mediante HPLC preparativa para dar 2-(1-(4-bromofenil)-3-(tiofen-2-il)-1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo[D]imidazol-5-il)etil)oxazolidin-4-ona (3,6 mg).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-de) 510,46 (m, 2H), 8,68 (s, 1H), 7,89 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,72-7,65 (m, 4H), 7,42 (q, J = 2,0 Hz, 1H), 6,75 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,64-6,61 (m, 2H), 4,33-4,21 (m, 2H), 3,69-3,67 (m, 1H), 2,96-2,93 (m, 1H), 2,71-2,59 (m, 2H); EM: 550,1,552,0 [M+H]+.
Ejemplo 21: 2-(1 -(4-bromofenil)-3-(furan-3-il)-1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo[a]imidazol-5-il)etil)oxazolidin-4-ona
Figure imgf000034_0001
Etapa 1. 1-(4-bromofenil)-2-(1-(furan-3-il)etiliden)hidrazina
Se añadieron 1-(furan-3-il)etanona (4,2 g, 38,2 mmol), clorhidrato de 1-(4-bromofenil)hidrazina (8,5 g, 38,2 mmol) y acetato de potasio (3,7 g, 38,2 mmol) en etanol (50 ml). ) y se agitaron a 80°C durante la noche. La mezcla de reacción se concentró al vacío hasta la sequedad, luego se añadió agua y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. La fase de acetato de etilo se concentró para dar un producto bruto, que se lavó con un disolvente mixto (éter de petróleo:acetato de etilo = 50:1,50 ml) para dar 1 -(4-bromofenil)-2-(1 -(furan-3-il)etiliden)hidrazina (3,8 g, 13,7 mmol, rendimiento: 36%). EM: 279,2, 281,1 [M+H]+.
Etapa 2. 1-(4-bromofenil)-3-(furan-3-il)-1 H-pirazol-4-formaldehído
Se añadió lentamente gota a gota oxicloruro de fósforo (1,14 g, 7,46 mmol) a DMF anhidra (2 ml) con enfriamiento en un baño de hielo y, después de agitar durante 30 min, se añadió lentamente bajo protección de nitrógeno 1-(4-bromofenil)-2-(1 -(furan-3)-il)etiliden)hidrazina (1,0 g, 3,39 mmol) disuelta en una pequeña cantidad de DMF anhidra a la mezcla de reacción, y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y, después de que se elevase la temperatura hasta 70°C, la reacción continuó durante 5 horas. La disolución de reacción se vertió en agua helada y se extrajo con acetato de etilo. La fase de acetato de etilo se lavó tres veces con disolución salina saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró, y el filtrado se evaporó hasta la sequedad. El producto bruto se lavó con un disolvente mixto (acetato de etilo :éter de petróleo = 50:1, 20 ml) y se filtró para dar 1-(4-bromofenil)-3-(furan-3-il)-1H-pirazol-4-formaldehído (1,0 g, 10,5 mmol, rendimiento: 90%). e M: 317, 319,1 [M+H]+.
Etapa 3. 2-(1 -(4-bromofenil)-3-(furan-3-il)-1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo[d]imidazol-5-il)etil)oxazolidin-4-ona
Se disolvieron 1-(4-bromofenil)-3-(furan-3-il)-1H-pirazol-4-formaldehído (500 mg, 1,58 mmol), 2-hidroxi-N-(2-(2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo[d]imidazol-5-il)etil)acetamida (500 mg, 1,5 mmol) y ácido p-toluensulfónico monohidrato (366 mg, 2,1 mmol) en 100 ml de tolueno y N-metilpirrolidona (10 ml), y la mezcla se calentó a 160°C durante la noche con un separador de agua. La disolución de reacción se concentró mediante evaporación rotatoria y se purificó mediante HPLC preparativa para dar 2-(1-(4-bromofenil)-3-(furan-3-il)-1H-pirazol-4-il)-3-(2-(2-oxo-2,3-dihidro-1H-benzo[d]imidazol-5-il)etil)oxazolidin-4-ona (7,2 mg, rendimiento: 1%).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-ds) 510,47 (s, 2H), 8,68 (s, 1H), 7,90 (s, 1H), 7,86 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,79 (s, 1H), 7,71 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,80 (s, 1H), 6,76 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,64-6,62 (m, 2H), 6,17 (s, 1H), 4,33 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 4,23 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,68-3,65 (m, 1H), 2,96-2,93 (m, 1H), 2,71-2,60 (m, 2H) EM: 534,536,2 [M+H]+.
Se separó quiralmente 2-(1-(4-bromofenil)-3-(furan-3-il)-1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(2-oxo-2,3-dihidrógeno-1 H-benzo[D]imidazol-5-il)etil)oxazolidin-4-ona (20 g) mediante SFC (columna: OJ-H; tamaño de columna: 0,46 cm DI x 15 cm L; cantidad de inyección: 2,0 pl; fase móvil: HEP/EtOH = 60/40 (V/V); caudal: 0,5 ml/min; longitud de onda: UV 254 nm; temperatura: 25°C) para dar dos isómeros ópticos.
(S)-2-(1-(4-bromofenil)-3-(furan-3-il)-1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo[D]imidazol-5-il)etil)oxazolidin-4-ona, sólido blanco, 8,63 g, rendimiento del 43,2%. tR 1,766 min, [a]D -43,94° (c 0,5007 g/100 ml, 21,4°C); pureza: 99,64%, e.e.: 100,0%.
(R)-2-(1-(4-bromofenil)-3-(furan-3-il)-1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo[D]imidazol-5-il)etil)oxazolidin-4-ona, sólido blanco, 8,26 g, rendimiento 41,3%. tR 3,724 min, [a]D 47,00° (c 0,4979 g/100 ml, 21,3°C); pureza: 100,00%, e.e.: 99,03%.
Ejemplo 22: 2-(1 -(4-bromofenil)-3-(furan-2-il)-1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo[D]imidazol-5-il)etil)oxazolidin-4-ona
Figure imgf000035_0001
Etapa 1. (4-bromofenil)-2-(1-(furan-2-il)etiliden)hidrazina
Se disolvieron 1-(furan-2-il)etanona (100 g, 0,91 mol) y clorhidrato de 1-(4-bromofenil) hidrazina (162 g, 0,87 mol) en tolueno (1 L) y se añadió ácido clorhídrico al 36% (60 gotas). La mezcla se calentó a 150°C y se agitó durante 2 horas con un separador de agua. La disolución de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente. Se añadió diclorometano a la disolución de reacción para disolver el producto y el filtrado se filtró para dar un filtrado negro rojizo. El filtrado se secó mediante evaporación rotatoria y el producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo:diclorometano = 1:1) para dar un sólido amarillo. Se añadió éter de petróleo y la mezcla se agitó durante 20 min y se filtró para dar un producto sólido amarillo puro (68,0 g, rendimiento: 27%).
Etapa 2. 1-(4-bromofenil)-3-(furan-2-il)-1 H-pirazol-4-formaldehído
Con enfriamiento en un baño de hielo, se añadió lentamente POCh (12,1 g, 78,85 mmol) a DMF seca (60 ml). Después de agitar durante 15 min, la mezcla se calentó lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante otros 30 min. Se añadió (4-bromofenil)-2-(1-(furan-2-il)etiliden)hidrazina (10,0 g, 35,84 mmol) a la mezcla de reacción y la mezcla se agitó en una incubadora durante 30 minutos. La temperatura se elevó gradualmente hasta 70°C y se continuó agitando durante 3 horas. La disolución de reacción se vertió lentamente en agua helada y se extinguió, se agitó a 0 °C durante 30 min y se filtró. El sólido resultante se disolvió en una pequeña cantidad de etanol y diclorometano y luego se secó por evaporación rotatoria. El producto bruto se aisló y se purificó mediante una columna de gel de sílice para dar el producto como un sólido amarillo (10,5 g, rendimiento: 92%).
Etapa 3. 3-(3-nitro-4-terc-butilamidofenetil)-2-(3-(furan-2-il))-1 -(4-bromofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolidin-4-ona
Bajo protección de nitrógeno, se disolvieron 2-hidroxi-N-(3-nitro-4-terc-butilamidofenetil)acetamida (4,3 g, 13,31 mmol), 1-(4-bromofenil)-3-(furan-2-il)-1 H-pirazol-4-formaldehído (4,22 g, 13,31 mmol) y TsOH (506 mg, 2,66 mmol) en tolueno (100 ml). La mezcla se calentó lentamente hasta 150 °C y se mantuvo a reflujo durante la noche con un separador de agua. Se añadió acetato de etilo (100 ml) a la mezcla de reacción, que se lavó con bicarbonato de sodio saturado (100 ml) y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y el filtrado se concentró hasta la sequedad a presión reducida. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo:acetato de etilo = 5:1) para dar el producto como un aceite amarillo (1,8 g, rendimiento: 22%).
Etapa 4. 3-(3-nitro-4-aminofenetil)-2-(3-(furan-2-il))-1 -(4-bromofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolidin-4-ona
Bajo protección de nitrógeno, se disolvieron 3-(3-nitro-4-terc-butiliamidofenetil)-2-(3-(furan-2-il))-1-(4-bromofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolidin-4-ona (1,42 g, 2,28 mmol) y 1 N NaOH (15 ml, 14,27 mmol) en metanol (50 ml). La mezcla se calentó lentamente hasta 70 °C y se mantuvo a reflujo durante 2 horas. Se añadió acetato de etilo (100 ml) a la disolución de reacción, que se lavó dos veces con agua (100 ml) y disolución salina saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se filtró, y el filtrado se concentró hasta la sequedad a presión reducida mediante evaporación rotatoria. Después de añadir gel de sílice, el producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo:acetato de etilo = 2:1) para dar el producto como un aceite amarillo (720 mg, rendimiento: 60%).
Etapa 5: 3-(3,4-diaminofenetil)-2-(3-(furan-2-il))-1 -(4-bromofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolidin-4-ona
Bajo protección de nitrógeno, se disolvieron 3-(3-nitro-4-aminofenetil)-2-(3-(furan-2-il))-1-(4-bromofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolidin-4-ona (500 mg, 0,93 mmol) y polvo de hierro reducido (260 mg, 4,65 mmol) y cloruro de amonio (497 mg, 9,3 mmol) en etanol y agua (2:1,30 ml). La temperatura se elevó lentamente hasta 85 °C y la mezcla se sometió a reflujo durante 1,5 horas. Se añadió diclorometano (50 ml) a la disolución de reacción y se eliminó el polvo de hierro por filtración. Después de la evaporación rotatoria del disolvente etanol, se añadió diclorometano (50 ml). La mezcla se lavó una vez con agua (50 mL) y disolución salina saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se filtró, y el filtrado se concentró hasta la sequedad a presión reducida para dar el producto bruto (400 mg), que se utilizó en la siguiente reacción.
Etapa 6. 2-(1 -(4-bromofenil)-3-(furan-2-il)-1 H-pirazol-4-il)-3-(2-(2-oxo-2,3-dihidro-1 H-benzo[d|imidazol-5-il)etil)oxazolidin-4-ona
Bajo protección de nitrógeno, se disolvieron 3-(3,4-diaminofenetil)-2-(3-(furan-2-il))-1-(4-bromofenil)-1 H-pirazol-4-il) oxazolidin-4-ona (400 mg, 0,8 mmol) y CDI (400 mg, 2,5 mmol) en DMF anhidra (6 ml) y se agitaron a 80 °C durante la noche. La disolución de reacción se extrajo con acetato de etilo (2 x 60 mL) y la fase orgánica se lavó dos veces con agua (100 mL) y disolución salina saturada (150 mL), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y el filtrado se concentró hasta la sequedad a presión reducida. Después de añadir gel de sílice, el producto bruto se separó y se purificó mediante una columna de gel de sílice (éter de petróleo:acetato de etilo = 2: 1) para dar un sólido de color amarillo pálido (198 mg, rendimiento: 48%).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-ofe) 510,47 (s, 2H), 8,75 (s, 1H), 7,87 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,78 (s, 1H), 7,73 (d), J = 8,8 Hz, 2H), 6,80-6,76 (m, 2H), 6,65-6,63 (m, 3H), 6,31 (s, 1H), 4,34 (d, J = 13,2 Hz, 1 H), 4,23 (d, J = 13,2 Hz, 1H), 3,76­ 3,64 (m, 1H), 2,98-2,94 (m, 1 H), 2,76-2,72 (m, 1 H), 2,64-2,61 (m, 1H); EM: 534 [M 1]+.
Ejemplo 23*: (5-(2-(2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolin-4-ona-3-il)etil)-1 H-benzo[D]imidazol-2-il)carbamato de metilo
Etapa 1.2-metil-N,N'-dimetoxicarboniltiourea
Se suspendió ácido 2-metil-2-tiourea-sulfúrico (1,6 g, 5,75 mmol) en 15 ml de agua y se enfrió hasta 0 °C. Se añadió cloroformiato de metilo (2,5 g, 26,45 mmol) y la mezcla se agitó a 0 °C durante 5 min. El pH de la disolución de reacción se mantuvo en aproximadamente 9 con una disolución acuosa de NaOH al 25%, y la reacción se agitó durante 5 horas, luego precipitó una gran cantidad de un sólido blanco. Este se filtró y la torta del filtro se lavó con agua para dar 2-metil-N,N'-dimetoxicarboniltiourea (1,1 g, rendimiento: 93%).
Etapa 2. (5-(2-(2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorofenil)-1 H-pirazol-4-il)oxazolin-4-ona-3-il)etil)-1 H-benzo[D]imidazol-2-il)carbamato de metilo
Se añadieron 2-metil-N,N'-dimetoxicarboniltiourea (42 mg, 0,21 mmol) y 2-(1-(4-bromofenil)-3-(4-fluorobenceno)-1 H-pirazol-4-il)-3-(3,4-diaminofenetil)oxazolin-4-ona (100 mg, 0,19 mmol) a un matraz de fondo redondo, y luego se añadió HOAc (10 ml), y el gas en su interior se reemplazó por nitrógeno. La disolución de reacción se calentó hasta 80 °C y se hizo reaccionar durante 1 hora. El disolvente se eliminó mediante evaporación rotatoria y el producto bruto se lavó con metanol para dar el producto como un sólido blanco (65 mg, rendimiento: 56%).
RMN de 1H (400 MHz, DMSO-ote) 511,48 (s ancho, 2H), 8,64 (s, 1 H), 7,86 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,70 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,61 -7,58 (m, 2H), 7,27-7,20 (m, 3H), 7,09 (s, 1 H), 6,77 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,99 (s, 1 H), 4,29-4,21 (m, 2H), 3,74-3,70 (m, 4H), 2,98-2,93 (m, 1 H), 2,78-2,68 (m, 2H); EM: 619 [M+H]+.
Ejemplo 24: Experimento in vitro de actividad anti-VHB
Dilución del compuesto: las concentraciones iniciales de todos los compuestos usados en los experimentos de actividad anti-VHB in vitro fueron 1 pM, diluido 3 veces en 8 concentraciones; las concentraciones iniciales de todos los compuestos usados en el ensayo de citotoxicidad fueron 100 pM, diluido 3 veces en 8 concentraciones; y las aguas madres del compuesto se diluyeron con DMSO. El compuesto de control fue lamivudina, que tenía una concentración inicial de 100 nM en el experimento de actividad anti-VHB in vitro y una concentración inicial de 100 pM en el ensayo de citotoxicidad, diluido 3 veces en 8 concentraciones.
Experimento de actividad anti-VHB in vitro: Células HepG2.2.15 (4 x 104 células/pocillo) se sembraron en placas de 96 pocillos y se cultivaron durante la noche a 37°C en CO2 al 5%. Al día siguiente, se agregaron cultivos frescos que contenían compuestos en diferentes concentraciones a los pocillos de cultivo. Al quinto día, se aspiró y se retiró el medio de cultivo antiguo de los pocillos de cultivo. Se añadió medio fresco que contenía los compuestos en diferentes concentraciones. Al octavo día, se recogieron los sobrenadantes de los pocillos de cultivo y se utilizaron para extraer el ADN del VHB en el sobrenadante. Se utilizó el ensayo de qPCR para detectar el contenido en ADN del VHB en el sobrenadante de HepG2.2.15.
Análisis de datos y cálculo del porcentaje de inhibición: El porcentaje de inhibición se calculó utilizando la siguiente fórmula:
% de inhibición = [(cantidad de VHB en el control de DMSO - cantidad de VHB en la muestra)/cantidad de VHB en el control de DMSO)] x 100%.
Usando los métodos de ensayo anteriores, las estructuras de las partes de los compuestos de la presente invención y las correspondientes actividades anti-VHB se muestran en la siguiente tabla.
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Ejemplo 25: Ensayo in vitro de actividad anti-VHB de cepas genotípicas diferentes
Se ensayó la actividad in vitro de los compuestos contra diferentes cepas genotípicas de VHB usando un modelo de células de transfección transitoria. Células HepG2 (4 x 104 células/pocillo) que se habían transfectado con diferentes cepas genotípicas del VHB se sembraron en placas de 96 pocillos y se cultivaron durante la noche a 37°C en CO2 al 5%. Al día siguiente, se agregaron cultivos frescos que contenían los compuestos en diferentes concentraciones a los pocillos de cultivo. Al quinto día, se aspiró y se retiró el medio de cultivo antiguo de los pocillos de cultivo. Se añadió el medio fresco que contenía los compuestos en diferentes concentraciones. Al octavo día, se recogieron los sobrenadantes de los pocillos de cultivo y se utilizaron para extraer el ADN del VHB en el sobrenadante. Se utilizó el ensayo de qPCR para detectar el contenido en ADN del VHB en el sobrenadante de HepG2. Los resultados experimentales se muestran en la siguiente tabla (EC50 mM):
Figure imgf000042_0002
Ejemplo 26: Experimento de actividad anti-VHB de cepas resistentes a fármacos de nucleósidos in vitro
Se ensayó la actividad in vitro de los compuestos contra cepas de VHB resistentes a fármacos de nucleósidos utilizando un modelo de células de transfección transitoria. Células HepG2 (4 x 104 células/pocillo) que se habían transfectado con cepas de VHB resistentes a fármacos de nucleósidos se sembraron en placas de 96 pocillos y se cultivaron durante la noche a 37°C en CO2 al 5%. Al día siguiente, se agregaron cultivos frescos que contenían los compuestos en diferentes concentraciones a los pocillos de cultivo. Al quinto día, se aspiró y se retiró el medio de cultivo antiguo de los pocillos de cultivo. Se añadió el medio fresco que contenía los compuestos en diferentes concentraciones. Al octavo día, se recogieron los sobrenadantes de los pocillos de cultivo y se utilizaron para extraer el ADN del VHB en el sobrenadante. Se utilizó el ensayo de qPCR para detectar el contenido en ADN del VHB en el sobrenadante de HepG2. Los resultados experimentales se muestran en la siguiente tabla (EC50 mM):
Figure imgf000042_0001
Ejemplo 27: Determinación farmacocinética
La farmacocinética del compuesto del ejemplo 3 (racemato) en la presente solicitud se determinó en ratas.
Métodos y condiciones de medición:
Los compuestos de ensayo se administraron por vía intravenosa (IV) y oral (PO) a ratas Sprague Dawley una vez. Se recolectaron muestras de sangre en diferentes momentos. Se utilizó LC/MS/MS para determinar la concentración de los compuestos de ensayo en el plasma de rata después de la administración de los compuestos de ensayo y DE calcular los parámetros relacionados.
Los momentos para la recogida de la sangre de los animales fueron: antes de la administración, 5 min, 15 min, 30 min, 1 h, 2 h, 4 h, 6 h, 8 h y 24 h después de la administración. Se recogieron de cada animal aproximadamente 0,3 ml de sangre a través de la venopunción yugular u otra venopunción apropiada y se anticoagularon con heparina sódica. Se recogieron muestras de sangre y se colocaron en hielo y se centrifugó el plasma (centrifugación: 8000 rpm, 6 min, 4°C). Las muestras de plasma se conservaron en una nevera a -70°C antes del análisis.
Se tomaron 50 pL de muestra hacia un tubo de centrífuga de 1,5 mL y se agregaron 250 pL de disolución de patrón interno. Después de someter a vórtice durante 60 segundos y de centrifugar durante 5 min (14.000 revoluciones/min), se tomaron 200 pL de sobrenadante hacia una placa de muestras de 96 pocillos para su análisis.
Espectrómetro de masas: API 4000, Applied Biosystems, Inc., fuente de ionización por electronebulización (ESI), analizador de masas de cuadrupolo en tándem.
Condiciones de espectrometría de masas: fuente de iones: Fuente de ionización por electronebulización (ESI); Gas auxiliar (Gas1): 60 psi; Gas auxiliar (Gas2): 60 psi; Gas de cortina (CUR): 14 psi; Gas de colisión (CAD): 6; Voltaje de la fuente de iones (IS): 5500 V; Temperatura de la fuente de iones (TEM): 550°C
Condiciones de la fase líquida: Cromatografía en columna: Thermo AQUASIL C18 (50 x 2,1 mm); la fase móvil cromatográfica: A es ácido fórmico al 0,1% en agua, la disolución B es ácido fórmico al 0,1% en metanol (A:B = 80%:20%-10%:90%); caudal: 500 pL/min; volumen de inyección: 1 pL.
De acuerdo con los datos de concentración en sangre del fármaco, se calcularon los parámetros farmacocinéticos del compuesto de ensayo usando el software de cálculo farmacocinético WinNonlin 5.2 de modelo no compartimental. El resultado es el siguiente.
Figure imgf000043_0001
Además, se determinó en ratones la farmacocinética del compuesto del Ejemplo 3 (isómero R) en la presente solicitud. Métodos y condiciones de medición:
Los compuestos de ensayo se administraron por vía subcutánea a un ratón hembra BALB/c una vez y se tomaron muestras de sangre en diferentes momentos. Se utilizó LC/MS/MS para determinar la concentración de los compuestos de ensayo en el plasma de rata después de la administración de los compuestos de ensayo y de calcular los parámetros relevantes.
Los momentos para la recogida de sangre del animal fueron: antes de la administración, 5 min, 15 min, 30 min, 1 h, 2 h, 4 h, 8 h y 24 h después de la administración.
Espectrómetro de masas: Triple Quad 5500. Condiciones de espectrometría de masas: Detección SRM Condiciones de la fase líquida: Columna: XSELECT CSHTM XP C18 (2,1 x 50 mm, 2,5 pm); Fase móvil cromatográfica: fase móvil A: FA al 0,025% y NH4ÜAc 1 mM en agua/disolución de CAN (v: v, 95: 5), fase móvil B: FA al 0,025% y NH4ÜAc en1 mM disolución de ACN/agua (v:v, 95:5) (A:B = 65%:35%-10%:90%); Caudal: 0,6 ml/min; Temperatura de la columna: 50°C.
De acuerdo con los datos de concentración en sangre del fármaco, se calcularon los parámetros farmacocinéticos del compuesto de ensayo usando el software de cálculo farmacocinético WinNonlin 5.2 de modelo no compartimental.
El resultado es el siguiente.
Figure imgf000044_0001
Ejemplo 28: Determinación de la farmacodinámica in vivo
Métodos y condiciones de medición:
Inyección a alta presión de ADN del VHB en la vena de la cola y métodos de administración:
La disolución de ADN plasmídico del VHB se inyectó a alta presión a través de las venas de la cola del ratón: el ADN plasmídico se disolvió previamente en disolución salina fisiológica (10 gg/1,4 ml, 10 gg/1,5 ml) antes de la inyección y se conservó a 4°C hasta su utilización. Se inyectó a los ratones una disolución de ADN plasmídico a una dosis del 8% del peso corporal en la vena de la cola en 5 segundos. Si el volumen de inyección es menor o igual a 1,4 ml, se utilizaron 10 gg/1,4 ml de disolución de plásmido; si el volumen de inyección es mayor o igual a 1,5 ml, se utilizaron 10 pg/1,5 ml de disolución de plásmido.
En el día 12-72, los ratones se inyectaron por vía intraperitoneal de forma continua con el compuesto de ensayo o disolvente durante 7 días. Se extrajo sangre de la vena submandibular en los días 1°, 3° y 5°, se anticoaguló con heparina sódica, y se centrifugó a 4°C en 7.000 x g durante 10 minutos para preparar plasma. El plasma se dividió en dos y uno se envió a grupos antiinfecciosos del Departamento de Biología para la detección del ADN del VHB y el otro estaba listo para su uso.
El día 7°, después de que todos los ratones fueron sacrificados por CO2, se recogió sangre del corazón para preparar plasma y se recogieron tejidos hepáticos. El tejido hepático se dividió en tres secciones, y dos recolectadas de los lóbulos izquierdos se congelaron rápidamente en nitrógeno líquido y se transfirieron para ser conservadas a -80 °C hasta que fueron enviadas a grupos antiinfecciosos in vitro en el Departamento de Biología en WuXi Apptech para la detección del ADN del VHB. El tejido hepático restante se congeló en hielo seco y se transfirió para conservarlo a -80 °C para su aplicación como reemplazo.
Análisis de muestra:
Se utilizó una PCR cuantitativa para detectar el contenido en ADN del VHB en plasma de ratón.
De acuerdo con las instrucciones del kit de sangre de ADN QlAamp 96, se extrajo el ADN del plasma de ratón.
Detección cuantitativa por PCR del contenido en ADN del VHB: Para descartar una posible interferencia con el ADN plasmídico del VHB inyectado, se utilizaron simultáneamente dos conjuntos de cebadores y sondas para el ensayo. Se usó un conjunto de cebadores y sondas para identificar la secuencia de ADN del VHB (cebadores de VHB) y pudo detectar simultáneamente el ADN plasmídico del VHB y el ADN del VHB replicado, y el otro conjunto de cebadores y sondas se usó para reconocer la secuencia del vector pAAV2 (cebador de pAAV2) y solo se pudo detectar el ADN plasmídico del VHB.
Contenido en ADN del VHB = contenido en ADN detectado por los cebadores de VHB - contenido en ADN detectado por los cebadores de pAAV2
El resultado fue el siguiente:
La dosis del compuesto de ensayo (compuesto del ejemplo 3, isómero R) fue de 25 mpk. El contenido en ADN del VHB en el plasma de ratón se redujo significativamente en el día 1° y 3°, con una disminución de 0,55 log y 1,84 log, respectivamente, con diferencia estadística.

Claims (11)

  1. REIVINDICACIONES
    1 Un compuesto que tiene la fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable o enantiómero o tautómero del mismo:
    Figure imgf000045_0001
    en la que,
    cada uno de R1, R2 y R3 se selecciona independientemente de hidrógeno, halógeno, alquilo C1-C3, amino e hidroxilo;
    Figure imgf000045_0002
    R6 se selecciona de deuterio, halógeno, amino e hidroxilo;
    n es 0, 1 o 2;
    Q es arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido con uno o más halógenos, el grupo arilo es fenilo y el heteroarilo se selecciona de furilo, pirrolilo, tienilo y piridilo;
    el enantiómero es un racemato o el isómero R.
  2. 2.- El compuesto de la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable o enantiómero o tautómero del mismo, en el que el carbono quiral está en configuración R y la estructura se muestra en la fórmula I-R:
    Figure imgf000045_0003
  3. 3.- El compuesto de la reivindicación 1 o 2, o una sal farmacéuticamente aceptable o enantiómero o tautómero del mismo, en el que
    cada uno de R1, R2 y R3 es independientemente hidrógeno o halógeno;
    Figure imgf000045_0004
    se selecciona de:
    Figure imgf000046_0001
    Q es arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido con uno o más halógenos, dicho arilo es fenilo, y dicho heteroarilo se selecciona de furilo, pirrolilo y tienilo.
  4. 4.- El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, o una sal farmacéuticamente aceptable o enantiómero o tautómero del mismo, en el que Q es p-fluorofenilo, o tienilo o furilo;
    Figure imgf000046_0002
  5. 5.- El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, o una sal farmacéuticamente aceptable o enantiómero o tautómero del mismo, en el que el siguiente resto en la fórmula I y la fórmula I-R:
    Figure imgf000046_0003
  6. 6.- El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 -5, o una sal farmacéuticamente aceptable o enantiómero o tautómero del mismo, en el que el siguiente resto en la fórmula I y la fórmula I-R:
    Figure imgf000046_0004
  7. 7.- El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 -5, o una sal farmacéuticamente aceptable o enantiómero o tautómero del mismo, en el que el siguiente resto en la fórmula I y la fórmula I-R:
    Figure imgf000047_0001
  8. 8.- El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, o una sal farmacéuticamente aceptable o enantiómero o tautómero del mismo, en el que el compuesto se selecciona de:
    Figure imgf000048_0001
  9. 9.- Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 -8, o una sal farmacéuticamente aceptable o enantiómero o tautómero del mismo, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
  10. 10.- Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, o una sal farmacéuticamente aceptable o enantiómero o tautómero del mismo, o la composición farmacéutica de la reivindicación 9 para su uso en la fabricación de un medicamento para inhibir el virus de la hepatitis B.
  11. 11.- El compuesto o la composición farmacéutica para el uso de la reivindicación 10, en el que el medicamento se usa en el tratamiento de una infección por el virus de la hepatitis B en un mamífero.
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