CN113699065A - 一种死谷芽孢杆菌及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种死谷芽孢杆菌及其应用，属于生物技术领域。该死谷芽孢已于2021年03月05日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.21871，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，其分类学命名为Bacillus vallismortis。该菌株具有较高的抑制植物病原真菌生长的能力，同时可以较好的抑制杂草生长，且具有较高的遗传稳定性，不污染环境，生态安全，耐盐碱性以及耐高温性能，能够广泛应用到植物病原致病真菌，特别是玉米茎腐病菌、玉米大斑病菌、玉米圆斑病菌、水稻纹枯病菌、番茄枯萎病菌和玉米田杂草的防治中。

Description

一种死谷芽孢杆菌及其应用

技术领域

本发明属于微生物技术领域，尤其涉及一种死谷芽孢杆菌及其应用。

背景技术

植物病害是影响农业生产的主要因素之一，一直以来化学农药防治病虫害对农业生产起了十分重要的作用。由于化学试剂的大面积使用对人类和环境等造成诸多危害，如污染生态环境、危害人畜、产生抗药性，伤害非靶标生物，农药残留等问题，严重影响了人类健康和生态平衡等一系列问题，随着全球范围内研制开发高效低毒生防制剂的兴起，开发微生物制剂来控制有害生物，已经成为替代或减少化学农药使用的新型防治措施之一，受到世界各国学者、企业和消费者的重视。利用有益微生物防治植物病害始于1921年的Hartely利用真菌防治猝倒病(王晓宇，中国农业科学，2011)。到目前植物病害生防微生物已涉及真菌、放线菌、细菌乃至病毒(噬菌体)等种群，而利用拮抗微生物来防治植物病害成为生物防治的一个主策略，并已显示出良好的应用前景。

目前，应用较多的生防细菌是促进植物生长的根际细菌(plant growthpromoting rhizobacteria,PGPR)，其对植物的有益作用主要表现在防病和刺激生长两个方面。对病害的防治机制包括拮抗、寄生、竞争、捕食等多种方式,产生的抗生素是拮抗作用的重要作用方式之一。植物促生细菌通过植于根系和优先占领根系或抑制根上有害细菌或真菌的生长从而达到防控作用。其中芽孢杆菌是一群好氧或兼性好氧、产芽孢的杆菌的总称,分布范围广,生理特征多样,易分离和培养,是土壤、植物根表和根际的重要微生物种群。

死谷芽孢杆菌(枯草芽孢近缘)于1996年第1次被报道，是枯草芽孢杆菌的近亲。死谷芽孢杆菌由于能够产生对热、紫外线、电磁辖射和某些化学药品具有很强抗性的芽孢,可忍受各种不良环境,也有利于生防菌剂的生产、加工、储存,是一种理想的生防微生物。死谷芽孢杆菌通过成功定殖至植物根际、体表或体内，与病原菌竞争植物周围的营养，分泌抗菌物质以抑制病原菌生长，同时诱导植物防御系统抵御病原菌入侵，从而达到生防的目的。由于它生长速度快、营养需求简单，在植物的表面易于存活、定殖与繁殖，而且生产芽孢杆菌制剂的工艺简单，制剂稳定，施用方便，储存期长，因此死谷芽孢杆菌用作生防菌剂具有良好的应用前景。

据报道，死谷芽孢杆菌对多种由丝状植物病原真菌所引起的植物病害具有良好的防治作用，在粮食作物中，由立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)引起的纹枯病、由稻梨孢(Magnaporthe grisea)引起的稻瘟病、由禾白粉菌(Erysiphe raminis)引起的禾谷类白粉病等；蔬菜中由灰葡萄孢(Botrytis cinerea)引起的茄科和葫芦科灰霉病、由尖镰孢菌(Fusarium oxysporum)引起的黄瓜枯萎病、由瓜果腐霉(Pythium aphanidermatum)引起的根腐病以及由疫霉属(Phytophthora)引起的疫病和核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)等引起的蔬菜病害；死谷芽孢杆菌还可以控制采后水果的多种疫病如草莓灰霉病(Botrytis cinerea)和白粉病(Erysiphe raminis)，香蕉枯萎病(Fusarium oxysporum)等。可知，死谷芽孢杆菌现已成为一种理想的生防细菌，筛选对病原真菌有高效抑制作用的菌株是防治植物病害的有效方法之一。

除草剂广泛用于农林牧业生产、环境和家庭卫生除害防疫、工业品防霉与防蛀等。而为了追求效果，经常导致除草剂的过量使用，致使植物抗药性的产生以及极易产生药害，达不到最好的防效，针对此问题，2002年，北京第188届香山科学大会上，我国科学家首次提出了“绿色农药”的概念，随后“绿色农药”得到国家大力支持，人们对农药也有了新的认知。

“绿色农药”一般是指对人类健康安全无害、对环境友好、超低用量、高选择性，以及绿色工艺流程等。这种农药多由从生物体内提取的有效物质、活性物质组成，或是生物源的合成农药。

微生物农药一般是指来源于微生物及其天然产物，包括以菌治菌，以菌治虫，抑菌除草；微生物除草剂具有降解速度快，不易产生抗药性，人畜无害，研究潜力大、来源广泛等多种优点，其对环境更能减少污染，起到一定的保护作用；这些优点使其在市场上有更大的发展空间。

目前已知对植物真菌病害具有防治作用的死谷芽孢杆菌大多效果不佳、作用对象比较单一、易受自然环境影响、竞争存活能力有限等弊端(张慧,杨兴明,冉炜.土壤学报,2008)。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种死谷芽孢杆菌，该死谷芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC NO.21871，分类命名为Bacillus vallismortis。

本发明的目的之二在于提供一种微生物菌液，该微生物菌液是保藏编号为CGMCCNO.21871的死谷芽孢杆菌(Bacillus vallismortis)发酵获得的。

优选的，所述微生物菌液的制备方法如下：将权利要求1所述的死谷芽孢杆菌在牛肉膏蛋白胨培养基中培养，培养温度为37℃，时间为48h，转速为200rpm，即制得微生物菌液。

本发明的目的之三在于提供一种微生物菌剂，该微生物菌剂是由保藏编号为CGMCC NO.21871的死谷芽孢杆菌(Bacillus vallismortis)的微生物菌液制备得到的。

优选的，所述微生物菌剂的制备方法为：向微生物菌液中添加0.5％阿拉伯树胶、0.12％吐温-20、0.05％抗坏血酸，即制得微生物菌剂。

本发明的目的之四在于提供保藏编号为CGMCC NO.21871的死谷芽孢杆菌(Bacillus vallismortis)或者上述微生物菌液或者上述微生物菌剂在防治植物真菌病害中的应用。

优选的，所述植物真菌病害的真菌病原体为玉米茎腐病菌、玉米大斑病菌、玉米圆斑病菌、水稻纹枯病菌或番茄枯萎病菌。

更优选的，植物真菌病害的真菌病原体为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、拟轮枝镰刀菌(Fusarium verticillioides)、禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、层出镰刀菌(Fusarium proliferatum)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、玉米圆斑病菌(Helminthosporium carbonum)、玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)或多变根毛霉(Pseudocercospora phrymae)。

本发明的目的之五在于提供保藏编号为CGMCC NO.21871的死谷芽孢杆菌(Bacillus vallismortis)或者上述微生物菌液或者上述微生物菌剂在抑制杂草中的应用。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

本发明从玉米茎秆中分离得到一株死谷芽孢杆菌菌株，该菌株对多种植物真菌病害具有良好的防治效果同时具有一定的抑制杂草生长的能力，该菌株遗传稳定，且不容易产生抗性，可制备成新型的作物病害生物杀菌剂、微生物除草剂，具有良好的应用前景。

生物保藏说明：

保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；

保藏编号：CGMCC NO.21871；

保藏日期：2021年03月05日；

保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；

分类学命名：Bacillus vallismortis。

附图说明

图1为实施例1中梯度稀释示意图。

图2为实施例3中TC7-1的16SrDNA聚类分析图。

图3为实施例4中8种植物病原真菌与菌株TC7-1的对峙培养结果图。

具体实施方式

实施例1

从玉米茎秆中分离微生物，步骤如下：

采集河北省植物生理与分子病理学实验室盆栽种植的长势良好的玉米植株，将茎杆用自来水清洗3min，清除杂质，用滤纸吸干表面多余的水分，秤取2.0g，于超净工作台中进行表面消毒，用无菌研钵研磨至匀浆，加入10mL无菌水混匀后静置15min，所得上清作为母液，稀释10倍、100倍、1000倍，三个浓度梯度(具体稀释方法如图1所示)，然后分别取200μL涂布于LB固体培养基(培养基组成为：胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，氯化钠10g/L，琼脂，15g/L)平板上，以最后一次稀释液作为对照，于28℃下培养，并每24h观察一次。选择对照中无菌落，而此前的稀释液中长出菌落的菌株，根据菌落形态、颜色等特征挑取单菌落于固体LB培养基上纯化编号，纯化后于液体LB培养基中培养，并于-80℃保存。

实施例2

拮抗菌株的筛选，步骤如下：

防治植物真菌病害的拮抗细菌的筛选过程如下：在无菌培养皿中均匀加入100μL浓度为1×10⁷cfu/mL禾谷镰刀菌孢悬液，倒入融化并冷却至约50℃的PDA培养基20mL充分混匀。待培养基完全凝固后，用接种针点接供试的拮抗菌，每皿点8-10个待测细菌菌株，25℃培养箱中培养4-7天后，检测抑菌圈的有无及大小。经初次测试将有拮抗作用的菌株纯化后进行重复测试，基本方法同上，每平板点接3个菌株，各3次重复。根据拮抗带(抑菌圈边缘与菌落边缘的间距)的宽度确定拮抗程度。拮抗带>1mm的菌株定为有拮抗作用的菌株；拮抗带>4mm的作为拮抗细菌，进行拮抗性复筛试验，选择一个抑制作用最强的菌株，命名为TC7-1。

实施例3

死谷芽孢杆菌的16S rDNA的序列测定和分析及生理生化试验鉴定，步骤如下：

死谷芽孢杆菌DNA提取采用常规酚法，用细菌通用引物扩增16S rDNA序列，引物序列为27F(SEQ ID NO.1:AGAGTTTGATCCTGGCTCAG)和1492R(SEQ ID NO.2:GGTTACCTTGTTACGACTT)。PCR反应体系(50μL)为：10X PCR缓冲液5μL、dNTP 4μL、引物各1μL、DNA模板2.5μL、Takara Taq酶0.25μL、超纯水36μL。PCR扩增程序为94℃ 3min；94℃ 1min，52℃ 1min，72℃ 1.5min，30个循环；72℃ 10min。扩增产物送上海生工生物科技有限公司进行测序。

将测得的16S rDNA序列输入GenBank，应用BLAST软件进行同源性搜索。选取不同菌株的16S rDNA序列并与GenBank中已知的16S rDNA进行同源性比较。

同源比较结果如下：

将该PCR扩增产物在GenBank中进行blast比对结果表明，本发明的菌株TC7-1与其高度同源的50个菌种均是芽孢杆菌属，其同源性均在98％以上，图2为TC7-1的16S rDNA序列同Bacillus subtilis，Bacillus thuringiensis，Bacillus licheniformis，Bacillusfusiformis，Bacillus magaterium，Bacillus cereus，Bacillus anthracis，Bacillusatrophaeus，Bacillus mycoides，Bacillus pumilus，Pseudomonas fluorescens，Pseudomonas aeruginosa，Acinetobacter baumannii，Acinetobacter sp，Alcaligenesfaecalis等15种细菌的16S rDNA聚类分析。

由图2可知，菌株TC7-1与Bacillus vallismortis同源性最高。表1所示为菌株TC7-1的16S rDNA同源性高的10个菌株。

表1 16S rDNA同源性比较

序列ID	菌株	同源性
			gi|273032821|GU205781.1	Bacillus vallismortis strain JY3A	99％
gi|2043809879|MZ267282.1	Bacillus vallismortis strain LZH-L2	98％
			gi|1569295213|NZ_CP026362.1	Bacillus vallismortis strain DSM 11031	99％
gi|1955889378|MW474832.1	Bacillus vallismortis strain LZH-J16	99％
			gi|1945512049|MW368829.1	Bacillus vallismortis strain AA6	98％
gi|1296502149|NZ_NXEM01000029.1	Bacillus vallismortis strain TD3	99％
			gi|1189305439|NZ_CP020893.1	Bacillus vallismortis strain NBIF-001	98％
gi|2043689762|MZ266601.1	Bacillus magaterium strain AYS-23	98％
			gi|1193825332|MF111936.1	Bacillus sp.strain S3-1	99％
gi|52783855|NC_006322.1	Bacillus licheniformis DSM 13	98％

对筛选的拮抗细菌进行初步的生理生化鉴定，包括革兰氏测定、接触酶反应、VP试验、淀粉水解以及6.5％NaCl生长试验等，所述试验方法采用本领域的测定这类生理生化指标的常规试验方法，结果如表2所示。

表2菌株的生理生化指标测定

测定指标	菌株特征	测定指标	菌株特征
				革兰氏染色	+	吲哚产生	-
6.5％NaCl	+	氧化酶	+
				丙酸盐的利用	-	柠檬酸盐利用	+
明胶液化	-	V-P测定	+
				卵黄反应	-	接触酶	+
淀粉水解	+

由图2结合表2所示的菌株生理生化指标可推断TC7-1菌株属于死谷芽孢杆菌。

实施例4

本实施例进行死谷芽孢杆菌对尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、拟轮枝镰刀菌(Fusarium verticillioides)、禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、层出镰刀菌(Fusarium proliferatum)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、玉米圆斑病菌(Helminthosporium carbonum)、玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)、多变根毛霉(Pseudocercospora phrymae)的生长抑制试验。

采用平板对峙法，将直径为5mm的供试的8种植物病原真菌与菌株TC7-1于PDA固体培养基上对峙培养，每个处理重复3次，25℃恒温培养箱培养5d，观察抑菌效果。图3示出抑菌效果，其中A为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)，B为拟轮枝镰刀菌(Fusariumverticillioides)，C为禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)，D为层出镰刀菌(Fusariumproliferatum)，E为立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)，F为玉米圆斑病菌(Helminthosporium carbonum)，G为玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)，H为多变根毛霉(Pseudocercospora phrymae)，抑菌圈直径均大于2.8cm。可见，TC7-1菌株对以上8种植物病原真菌均有良好的抑制效果，表明TC7-1菌株具有较广的抑菌谱。

实施例5

利用死谷芽孢杆菌TC7-1制备微生物菌剂，步骤如下：

将死谷芽孢杆菌TC7-1在牛肉膏蛋白胨培养基(培养基组成为：牛肉膏蛋白胨3g/L，蛋白胨10g/L，NaCl5g/L，pH为7.0-7.2)中培养，培养温度为37℃，时间为48h，转速为200rpm，即制得微生物菌液。向制得的微生物菌液中添加0.5％阿拉伯树胶、0.12％吐温-20、0.05％抗坏血酸，即制得微生物菌剂。该液态菌剂在保存30d后活菌数仍有1.34×10⁹CFU/mL，活菌数达到农用微生物菌剂产品的要求。该液态菌剂的稳定性、持久性、安全性有保障，具有良好的市场应用潜力。

实施例6

本实施例进行死谷芽孢杆菌微生物菌剂对尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、拟轮枝镰刀菌(Fusarium verticillioides)、禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、层出镰刀菌(Fusarium proliferatum)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、玉米圆斑病菌(Helminthosporium carbonum)、玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)、多变根毛霉(Pseudocercospora phrymae)的分生孢子抑制试验。

将实施例5所述微生物菌剂以1×10¹⁰、5×10⁹、2×10⁹、1×10⁹和2×10⁸的浓度(单位：CFU/mL)分别与尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、拟轮枝镰刀菌(Fusariumverticillioides)、禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、层出镰刀菌(Fusariumproliferatum)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、玉米圆斑病菌(Helminthosporiumcarbonum)、玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)、多变根毛霉(Pseudocercosporaphrymae)的10⁵CFU/mL的分生孢子等体积混合，将其置于96孔细胞培养板内，25℃恒温培养箱培养5d，观察抑菌效果。由表3可知本发明所示菌株的微生物菌剂对尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、拟轮枝镰刀菌(Fusarium verticillioides)、禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、层出镰刀菌(Fusarium proliferatum)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、玉米圆斑病菌(Helminthosporium carbonum)、玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)、多变根毛霉(Pseudocercospora phrymae)有很好的抑制生长效果。

表3本发明微生物菌剂对病原真菌孢子萌发抑制试验

实施例7

死谷芽孢杆菌的遗传稳定性试验，步骤如下：

将活化的死谷芽孢杆菌接种于牛肉膏蛋白胨培养基内，37℃培养，每隔24h传代一次，共传40代，将传代的第1代、第10代、第20代、第30代、第40代对尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)、拟轮枝镰刀菌(Fusarium verticillioides)、禾谷镰刀菌(Fusariumgraminearum)、层出镰刀菌(Fusarium proliferatum)、立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)、玉米圆斑病菌(Helminthosporium carbonum)、玉米大斑病菌(Setosphaeriaturcica)、多变根毛霉(Pseudocercospora phrymae)的孢子萌发抑制试验，以5×10⁹CFU/mL的死谷芽孢杆菌菌液与真菌的分生孢子(孢子浓度10⁵CFU/mL)悬浮液等体积混合进行萌发抑制率试验，结果见表4，可见死谷芽孢杆菌经多次转代后其抑菌活性未发生显著差异变化，说明该菌株具有很好的遗传稳定性。

表4本发明死谷芽孢杆菌对病原真菌孢子悬浮液抑制稳定性试验

实施例8

温室试验，步骤如下：

本实验在河北农业大学植物分子病理学与真菌毒素实验室温室中进行，每小区两行，严格隔离，三次重复，随机区组排列，将玉米茎腐病菌、玉米大斑病菌、玉米圆斑病菌、水稻纹枯病菌、番茄枯萎病菌的孢子溶液喷洒到土壤中。种植前玉米种子、番茄种子、水稻种子使用实施例5所得的稀释至浓度5×10⁹CFU/mL的死谷芽孢杆菌微生物菌剂浸泡30min，以水浸泡为对照进行播种，2个月后对玉米、水稻、番茄生长的生长状况及病情指数进行测量分析，结果如表5所示，用菌剂处理种子后，其抗病能力明显增强。

表5本发明死谷芽孢杆菌菌剂处理种子后对真菌抗病性的温室试验

实施例9

一.供试药剂

除草剂：50％莠去津悬浮剂(山东滨农科技有限公司)

二.试验方案：

2.1.试验处理

处理1:死谷芽孢杆菌悬浮液(22×10⁸CFU/g)

处理2:LB培养基对照

处理3:莠去津推荐剂量对照

处理4:空白对照

4次重复

2.2.对玉米的安全性试验

挑选发芽露白且长势一致的玉米种子分别种植于7cm×7cm×10cm的花盆中，每盆5棵。土壤为营养土、蛭石按1:1比例混合而成，培养过程中保持土壤湿润，在玉米3-5叶期，使用3WP-2000型行走式喷雾塔进行茎叶喷雾。按2.1所述的方案进行处理，并设空白对照。在药后7d取玉米地上部分测量其鲜重，计算抑制率。

三.试验调查

微生物菌株死谷芽孢杆菌对玉米的安全性分析，如表6所示：

表6使用死谷芽孢杆菌对玉米的抑制率

	处理1	处理2	处理3
				抑制率	-9.89％	-0.43％	-0.14％

药后7d，各处理对玉米的的抑制率均为负值小于1％，对于玉米生长的影响极小，对玉米是安全的。

实施例10

一.供试药剂

除草剂：50％莠去津悬浮剂(山东滨农科技有限公司)

二.试验方案：

1.试验处理

处理1:死谷芽孢杆菌悬浮液(22×10⁸CFU/g)

处理2:LB培养基对照

处理3:莠去津推荐剂量

处理4:空白对照

四次重复

2.除草活性测定

2.1.室内除草活性测定

室内利用平皿测定菌株对反枝苋、稗草种子抑制作用(以反枝苋为例)。在3×3cm的培养皿中加入20粒提前催好芽，生长良好露白的反枝苋种子，在培养皿中加入稀释20倍的菌悬液3ml，对其7天后的生长抑制率进行调查。

2.2.温室除草活性测定

室外利用茎叶喷雾法测定菌株对反枝苋、稗草的鲜重抑制率，利用发酵24小时的菌株悬浮液，10ml利用喷壶均匀的喷在杂草表面，以叶片有小水珠不滴为好，7天后调查其鲜重抑制率。

鲜重抑制率＝[(空白对照组杂草鲜重-处理组残存杂草鲜重)/空白对照组杂草鲜重]×100％

3.试验地区

河北省保定市河北农业大学西校区温室。

4.施药时期

杂草生长至2-3叶期时进行喷药处理。

三.试验调查

3.1.室内杂草防效调查

在培养皿中生长7天后，按照抑制率公式计算各处理的根长/茎长的生长抑制率，单位为百分率(％)。

抑制率＝[(空白对照组的根(芽)长-处理组的根(芽)长)/空白对照组的根(芽)长]×100％。

3.2.温室杂草防效调查

喷药后在温室生长7天调查各处理地上部鲜重抑制率，单位为百分率(％)。

四.试验结果

4.3室内杂草防效调查

施药后在光照培养箱培养7天后的杂草根长、茎长抑制率如表7、表8所示：

表7反枝苋生长活性抑制率

	根长(cm)	抑制率(％)	茎长(cm)	抑制率(％)
					处理1	2.92	28.43	0.51	17.79
处理2	4.07	0.09	0.70	-12.90
					处理3	1.03	74.69	0.07	88.71
处理4	4.07		0.62

表8稗草生长活性抑制率

	根长(cm)	抑制率(％)	茎长(cm)	抑制率(％)
					处理1	2.91	36.88	0.64	25.58
处理2	4.22	8.46	0.87	-1.16
					处理3	1.51	67.25	0.23	73.26
处理4	4.61		0.86

如表7和表8所示，本发明的死谷芽孢杆菌在对两种杂草的除草活性试验中，可以有效抑制其根长和茎长生长，且LB培养基稀释20倍对杂草生长并无明显影响，可达现有市售除草剂一半的抑制效果。

4.2温室杂草防效调查

施药后7天对其地上部鲜重的防效如表9所示：

表9死谷芽孢杆菌对杂草地上部鲜重抑制率

如表9所示，使用死谷芽孢杆菌发酵液对两种杂草做茎叶喷雾时，抑制率均在50％以上，与莠去津处理组鲜重抑制率相当；培养基对杂草茎叶生长并无明显影响，在重复试验中中，甚至有促进现象。

以上所述，微生物菌株死谷芽孢杆菌不仅能有效抑制两种杂草的各生长因子(尤其对地上部鲜重抑制作用更为明显)，同时对靶标作物相对安全。

由上述试验可知：50％莠去津悬浮剂每亩用药量350mL对单子叶杂草稗草根的抑制作用达到67.25％，对茎的抑制作用达到73.26％，对双子叶植物反枝苋根的抑制作用达到74.69％，对茎的抑制作用达到88.71％；在茎叶喷雾中对单子叶杂草稗草地上部鲜重的抑制作用达到69.23％，对双子叶植物反枝苋的鲜重抑制作用达到45.73％。

本发明提供的一种微生物菌株死谷芽孢杆菌在平皿法测定中对单子叶杂草稗草根的抑制作用达到36.88％，对茎的抑制作用达到25.58％，对双子叶植物反枝苋根的抑制作用达到28.43％，对茎的抑制作用达到17.79％；在茎叶喷雾法测定中对单子叶杂草稗草地上部鲜重的抑制作用达到56.41％，对双子叶植物反枝苋的鲜重抑制作用达到51.63％，抑制效果同莠去津相当或优于莠去津。

以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

序列表

<110> 河北农业大学

<120> 一种死谷芽孢杆菌及其应用

<130> 2021.07.06

<141> 2021-08-13

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列()

<400> 1

agagtttgat cctggctcag 20

<210> 2

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列()

<400> 2

ggttaccttg ttacgactt 19

Claims (9)

1.一种死谷芽孢杆菌，其特征在于，所述死谷芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC NO.21871，分类命名为Bacillus vallismortis。

2.一种微生物菌液，其特征在于，所述微生物菌液是由权利要求1中的死谷芽孢杆菌发酵获得的。

3.根据权利要求2所述的微生物菌液，其特征在于，所述微生物菌液的制备方法如下：将权利要求1所述的死谷芽孢杆菌在牛肉膏蛋白胨培养基中培养，培养温度为37℃，时间为48h，转速为200rpm，即制得微生物菌液。

4.一种微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂是由权利要求2或者权利要求3中的微生物菌液制备得到的。

5.根据权利要求4所述的微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂的制备方法为：向微生物菌液中添加0.5％阿拉伯树胶、0.12％吐温-20、0.05％抗坏血酸，即制得微生物菌剂。

6.权利要求1中所述的死谷芽孢杆菌或者权利要求2中所述的微生物菌液或者权利要求4中所述的微生物菌剂在防治植物真菌病害中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述植物真菌病害的真菌病原体为玉米茎腐病菌、玉米大斑病菌、玉米圆斑病菌、水稻纹枯病菌或番茄枯萎病菌。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，植物真菌病害的真菌病原体为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、拟轮枝镰刀菌(Fusarium verticillioides)、禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、层出镰刀菌(Fusarium proliferatum)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、玉米圆斑病菌(Helminthosporium carbonum)、玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)或多变根毛霉(Pseudocercospora phrymae)。

9.权利要求1中所述的死谷芽孢杆菌或者权利要求2中所述的微生物菌液或者权利要求4中所述的微生物菌剂在抑制杂草中的应用。

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