CN110734871B - 一种解淀粉芽孢杆菌及其在农业生产中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及功能微生物筛选与应用技术领域,具体提供了一株新的解淀粉芽孢杆菌VB1266(Bacillus amyloliquefaciens VB1266),保藏编号CCCTCC NO:M2019440,并提供了其在农业生产中的应用。所述解淀粉芽孢杆菌筛选自白俄罗斯明斯克地区的土壤中,对禾旋孢腔菌、尖孢镰刀菌、立枯丝核菌、串珠镰刀菌、禾谷镰孢菌等常见病原菌均有较强的抑制作用,可有效防治常见作物病害,及提高作物产量,应用前景广泛。

Description

一种解淀粉芽孢杆菌及其在农业生产中的应用
技术领域
本发明涉及功能微生物筛选技术领域,具体涉及一种解淀粉芽孢杆菌及其在农业生产中的应用。
背景技术
微生物和农业的关系十分密切,素有“微生物大本营”之称的土壤中,微生物扮演着质循环的主要角色,有着不可替代的作用。它们分解动植物的残体废物而将其转化为腐殖质,促进土壤良好结构的形成。许多土壤微生物可固定空气中的氮素和转化各类有机物,不断为植物提供可有效利用的碳、氮、磷、钾等各类营养元素。自然界还广泛存在昆虫的病原微生物和植物病菌的拮抗微生物,它们可用于植物病虫害的防治而部分替代化学农药。另外,通过微生物繁殖和发酵能生产有机酸、氨基酸、生长激素、抗生素、各类酶制剂等多种产品,可分别用作饲料添加剂、食品添加剂和农药等,应用日益广泛。
1、微生物肥料
微生物肥料,又称细菌肥料或生物肥料,是一类通过人工培养对植物有益的微生物而制成的微生物制剂。微生物肥料的功效是一种综合性作用,一般不直接为农作物提供营养元素,主要起间接营养作用,能增进土壤肥力,改良土壤结构,刺激作物生长,改善作物品质,增强植物抗病(虫)和抗逆性。使用微生物肥料后有效可以减少化肥的施用量,提高肥料利用率。
按微生物种类可分为五大类:①细菌类肥料(如根瘤菌肥、固氮菌肥、解磷菌肥、解钾菌肥、光合菌肥);②放线菌类肥料(如抗生菌肥);③真菌类肥料(菌根真菌肥:包括外生菌根菌剂和内生菌根菌剂);④藻类肥料(如固氮蓝藻菌肥);⑤复合型微生物肥料,即肥料由两种以上微生物按一定比例组合形成。
2、微生物农药
微生物农药是指非化学合成、具有杀虫防病作用的微生物制剂,如微生物杀虫剂、杀菌剂、农用抗生素等,这一类微生物包括杀虫防病的细菌、病毒和真菌。
杀虫微生物中研究最多、用量最大的是苏云金芽孢杆菌,该菌在生成芽孢时菌体中可形成一个或多个具有强烈杀菌作用的称为内毒素的蛋白晶体,因而可广泛用于粮食、经济作物与蔬菜、林业以及一些卫生害虫的防潮。苏云金芽孢杆菌的另一个突出优点是选择性强,对人畜、天敌、植物都非常安全,堪称“无公害农药”。但该菌也存在一些缺点和不足,如毒素蛋白晶体易受环境因素作用而分解;杀虫作用不持久,田间防治效果仅能维持3,4天;杀虫谱偏窄,仅对部分鳞翅目害虫有效,常年使用,害虫可能产生抗药性等。
另外,自然界中许多微生物对植物病原菌具有抑制和拮抗作用。例如,不少细菌、放线菌和真菌通过产生抗生素或争夺营养与生存空间而阻止病害的发生与蔓延,但防治病害的效果也受到复杂环境条件的影响而不能稳定或持久。
3、饲料用微生物制剂
新型饲料微生物制剂的研究已经成为饲料产业技术革新和产品更新换代的主要手段,对于消除抗营养因子、提高资源利用率、开辟新的饲料来源以及解决畜牧业环境污染都有重要作用。
4、环境净化
微生物在各类农业环境污染物的分解中可以发挥独特的作用,能够有效分解植物秸秆、畜禽粪便、残留农药、工业废水、生活垃圾等多种污染物的微生物菌株正在陆续发掘应用。生物降解和生物恢复技术具有效率高、速度快、成本低、反应条件温和以及无二次污染等显著优点,成为国际上农业环境污染治理的重要发展方向。由于污染物成分和环境污染因素的复杂性,用于环境污染净化的微生物不仅应有很强的降解能力和对环境的耐受性,而且要有降解能力的多样性。
微生物在农业生产中的广泛应用有利于改善农业生态环境,提高粮食产量,减少环境污染,实现农业的可持续发展,对促进农业生产的变革具有明显的现实意义和深远的历史影响。挖掘、筛选、拓展新的功能性微生物菌种,选育具有作物亲和性、地域性、针对性、适应性、生产性优良的微生物产品,提高应用效果的稳定性,是目前本领域的研究重点。
发明内容
本发明的目的是提供一株新的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),并提供了其在农业生产中的应用。所述解淀粉芽孢杆菌筛选自白俄罗斯明斯克地区的土壤中,对多种病原菌具有显著抑制作用,可有效防治常见作物病害,及提高作物产量,应用前景广泛。
本发明一方面提供了一种解淀粉芽孢杆菌,命名为解淀粉芽孢杆菌VB1266(Bacillus amyloliquefaciens VB1266),已于2019年6月6日保藏于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心,其保藏号为CCTCC NO:M2019440。
本发明一方面提供了所述解淀粉芽孢杆菌在植物病害防治中的应用。
所述植物病害包括炭疽病、纹枯病、弯孢病、根腐病、白绢病、白粉病、疮痂病、灰霉病、枯萎病、褐斑病和果腐病中的任意一种。
本发明一方面提供了所述解淀粉芽孢杆菌在生物肥中的应用。
本发明还提供了一种微生物制剂,包含上述解淀粉芽孢杆菌VB1266。
所述微生物制剂还包含芽孢杆菌、假单胞菌、土壤杆菌、固氮菌、根瘤菌、青霉菌、曲霉菌、根霉菌、链霉菌中的任意一种或两种或多种的组合。
所述微生物制剂中解淀粉芽孢杆菌VB1266的活菌量至少为108CFU/g。
本发明还提供了上述微生物制剂在生物肥中的应用。
本发明还提供了上述微生物制剂在植物病害防治中的应用。
本发明筛选到的解淀粉芽孢杆菌VB1266对禾旋孢腔菌、尖孢镰刀菌、立枯丝核菌、串珠镰刀菌、禾谷镰孢菌等常见病原菌均有较强的抑制作用,尤其是对立枯丝核菌、禾谷镰孢菌和草莓炭疽菌的抑菌效果最强,抑菌带宽度超过23mm。所述解淀粉芽孢杆菌可广泛应用于常见植物病害的防治,其中对玉米纹枯病、玉米弯孢病和草莓炭疽病的防治效率分别高达91.9%、88.0%和89.8%,取得了意料不到的技术效果。所述解淀粉芽孢杆菌还能显著促进小麦生长,提高小麦的生产性能,使小麦产量普遍提高19.4%-25.83%,增产效果明显。
此外,解淀粉芽孢杆菌VB1266能向胞外有效分泌纤维素酶、内切葡聚糖酶、淀粉酶和蛋白酶,其发酵上清液中内切葡聚糖酶的酶活能达到1.2U/ml。所述解淀粉芽孢杆菌耐低温能力较强,在10℃低温条件下仍可以有效生长。解淀粉芽孢杆菌VB1266能显著促进玉米秸秆的降解。与空白对照组相比,VB1266菌粉处理组玉米秸秆的失重率提高了23.5%-50.5%。其中,当解淀粉芽孢杆菌VB1266菌粉添加量为1.0g时,玉米秸秆的降解效果最好,失重率达到30.7%;而当菌粉添加量继续增加到1.5g时,玉米秸秆的失重率反而降低,取得了意料不到的技术效果。
综上本发明提供的解淀粉芽孢杆菌VB1266可作为生防菌剂、生物肥、生物腐熟剂等,广泛应用于农业生产领域,效果显著,应用前景广阔。
附图说明
图1为VB1266菌株的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)。
具体实施方式
本发明实施例中选用的设备和试剂可以选自市售任意一种。对于实施例中所用到的具体方法或材料,本领域技术人员可以在本发明技术思路的基础上,根据已有的技术进行常规的替换选择,而不仅限于本发明实施例的具体记载。
下面结合具体实施例进一步阐述本发明。
实施例1菌株筛选与鉴定
1、菌株筛选:
(1)土壤样品:采集自白俄罗斯明斯克地区的土壤。
(2)采用梯度稀释法制备土壤稀释液,然后进行平板涂布和划线培养,分离获得多株土壤微生物;再进一步采用透明圈法筛选出对立枯丝核菌、尖孢镰刀菌和禾旋孢腔菌等病原菌抑菌效果最显著的三株菌,分别命名为VB1263,VB1264,VB1266。
2、菌株鉴定:
VB1266菌株形态特征:菌落呈圆形,米黄色,直径3-5mm,菌落边缘光滑,湿润,有光泽,中间隆起;菌体为短直杆状,革兰氏阳性菌;可产生芽孢,芽孢呈椭圆形,局部呈圆形;孢子囊不膨胀;细胞单独、成对或呈短链状存在。
对VB1266菌株进行分子生物学鉴定,测定其16S rDNA序列和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)(如图1所示)。
结合上述生物学特性和分子生物学鉴定结果,,申请人确认VB1266菌株为解淀粉芽孢杆菌,命名为解淀粉芽孢杆菌VB1266(Bacillus amyloliquefaciens VB1266)。
申请人已于2019年6月6日将上述解淀粉芽孢杆菌VB1266(Bacillusamyloliquefaciens VB1266)保藏于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M2019440。
实施例2解淀粉芽孢杆菌VB1266抑菌能力评价
1、菌液的制备
先将解淀粉芽孢杆菌VB1266进行活化,然后挑取活化后的解淀粉芽孢杆菌VB1266接种于LB液体培养基中,37℃,220r/min培养14h,获得活菌量为108-109CFU/ml的菌液。
2、病原菌的制备
将禾旋孢腔菌、尖孢镰刀菌、立枯丝核菌、串珠镰刀菌、禾谷镰孢菌、禾谷丝核菌、草莓炭疽菌、灰霉菌、链格孢和腐霉菌共10种病原菌(山东省农科院植保所提供)分别接种于PDA培养基上,30℃培养5天后备用。
3、平板抑菌试验
在营养琼脂培养基的中央接种直径为7mm的病原菌菌饼,将已经灭菌的滤纸片放于菌饼两侧距离培养皿中心25mm处,吸取20ul解淀粉芽孢杆菌VB1266菌液浸润滤纸片;然后将培养皿放于30℃培养箱中培养5天后取出,测量抑菌带的宽度。每种病原菌做三个重复,取平均值。这种滤纸片方法可以避免菌液扩散到外面形成不规则的菌落,可以快速准确统计抑菌效果。
解淀粉芽孢杆菌VB1266对上述10种病原菌的抑菌效果详见表1。
表1解淀粉芽孢杆菌VB1266对不同病原菌的抑菌效果
病原菌 抑菌带平均宽度(mm)
禾旋孢腔菌 22.0±0.9
尖孢镰刀菌 21.0±1.1
立枯丝核菌 23.0±1.0
串珠镰刀菌 22.0±1.2
禾谷镰孢菌 23.0±0.8
禾谷丝核菌 21.0±1.1
草莓炭疽菌 23.0±1.0
灰霉菌(灰葡萄孢菌) 22.0±1.0
链格孢 21.0±1.0
腐霉菌 21.0±1.0
从表1的结果可以看出,本发明提供的解淀粉芽孢杆菌VB1266对上述10种病原菌均具有明显的抑制作用,其中对立枯丝核菌、禾谷镰孢菌和草莓炭疽菌的抑菌效果最强,抑菌带宽度超过23mm。
实施例3解淀粉芽孢杆菌VB1266在玉米纹枯病防治中的应用
1、解淀粉芽孢杆菌VB1266菌粉制备
将解淀粉芽孢杆菌VB1266在5吨发酵罐中进行液体发酵,当镜检芽孢率达到90%以上时停止发酵;5000rpm离心10min,去除发酵上清液,将菌泥进行喷雾干燥,制得活菌量为10亿/g的菌粉。
2、立枯丝核菌孢子悬浮液的制备
将立枯丝核菌接种到PDA培养基中,30℃培养5天直至长满整个平板。用已灭菌打孔器(内径d=5mm)在已经培养好的菌盘上打孔制成菌饼,再用灭菌接种针采用无菌操作技术将5块病原菌菌饼接种到100ml PDA培养液中,恒温振荡培养5d,培养条件为25℃、200r/min,然后将培养好的病原菌孢子液用四层灭菌纱布过滤到已经灭菌的50ml离心管中,将孢子悬浮液充分混匀后吸取少量,滴到水晶计数板上,在显微镜下计算孢子数量,孢子浓度达到106CFU/ml备用。
3、玉米纹枯病防治实验
(1)实验地点:青岛农业大学校内。
(2)实验设计:
针对立枯丝核菌导致的玉米纹枯病害,在温室中进行盆栽实验,每个盆中装4kg土,
栽种6棵玉米,每个处理组50个重复。
①空白对照组:不施用VB1266菌粉;按20ml/盆的比例将立枯丝核菌孢子悬浮液浇施于盆栽土壤中;
②VB1266菌粉处理组:先将VB1266菌粉按10-60g/盆的用量随水浇施于盆栽玉米的根部,48h后再按20ml/盆的用量将立枯丝核菌孢子悬浮液浇施于盆栽土壤中。其中:
处理组1:VB1266菌粉用量为10g/盆;
处理组2:VB1266菌粉用量为20g/盆;
处理组3:VB1266菌粉用量为40g/盆;
处理组4:VB1266菌粉用量为60g/盆。
在玉米苗期生长过程中记录得病植株,统计病害发生情况,计算解淀粉芽孢杆菌VB1266对玉米纹枯病的防治效率,具体结果见表2。
病害分级标准:0级无病斑;1级:病斑面积占叶面积的1/4以下;2级:病斑面积占叶面积的1/4-2/4;3级:病斑面积占叶面积的2/4-3/4;4级:病斑面积占叶面积的3/4以上。
病情指数=[∑(病级值×该级发病叶数)/(调查总叶数×最高病级值)]×100。
防治效率的计算公式=[1-(处理组病情指数/对照组病情指数)]×100%。
表2解淀粉芽孢杆菌VB1266对玉米纹枯病的防治效果
Figure BDA0002185506180000061
Figure BDA0002185506180000071
从表2的数据可以看出,与对照组相比,施用解淀粉芽孢杆菌VB1266菌粉的各处理组玉米的纹枯病病情指数得到大幅度降低,从而说明本发明提供的解淀粉芽孢杆菌VB1266对玉米纹枯病具有显著的防治效果,防治效率最高达到91.9%,取得了意料不到的技术效果。
实施例4解淀粉芽孢杆菌VB1266在玉米大田弯孢病防治中的应用
1、实验地点:
青岛市即墨七级镇玉米大田种植区,该种植区内的玉米播种时间相同,玉米长势相近。
2、玉米弯孢病防治实验:
选取10m×10m的方形区域作为一个实验区,共设置15个实验区,且每个实验区之间保持5米的间隔。每个处理组随机选择3个实验区进行实验。
(1)空白对照组:清水浇施玉米根部;
(2)VB1266菌粉处理组:将VB1266菌粉(活菌量为10亿/g)按1-4kg/亩的用量随水浇施于苗期玉米的根部,间隔7天用一次,连续使用三次。其中:
处理组1:VB1266菌粉用量为1kg/亩;
处理组2:VB1266菌粉用量为2kg/亩;
处理组3:VB1266菌粉用量为3kg/亩;
处理组4:VB1266菌粉用量为4kg/亩。
在玉米生长期内,统计玉米弯孢病发病情况,计算解淀粉芽孢杆菌VB1266对玉米弯孢病的防治效率,具体结果见表3。
病害分级标准:0级无病斑;1级:病斑面积占叶面积的1/4以下;2级:病斑面积占叶面积的1/4-2/4;3级:病斑面积占叶面积的2/4-3/4;4级:病斑面积占叶面积的3/4以上。
病情指数=[∑(病级值×该级发病叶数)/(调查总叶数×最高病级值)]×100。
防治效率的计算公式=[1-(处理组病情指数/对照组病情指数)]×100%。
表3解淀粉芽孢杆菌VB1266对玉米弯孢病的防治效果
Figure BDA0002185506180000072
Figure BDA0002185506180000081
从表3的数据可以看出,施用解淀粉芽孢杆菌VB1266菌粉的各处理组玉米的弯孢病病情指数仅为8.4-24.5,远远低于对照组。从而说明本发明提供的解淀粉芽孢杆菌VB1266对玉米弯孢病具有显著的防治效果,防治效率最高达到88.0%,取得了意料不到的技术效果。
实施例5解淀粉芽孢杆菌VB1266在草莓炭疽病防治中的应用
1、实验地点:
青岛市城阳区上马街道草莓种植基地。
2、草莓炭疽病防治实验:
选取10m×8m的区域作为一个实验区,每个实验区内有10垄草莓,约800±20株。共设置15个实验区,每个实验区之间设立保护行。每个处理组随机选择3个实验区进行实验。
(1)空白对照组:清水浇施草莓根部;
(2)VB1266菌粉处理组:将VB1266菌粉(活菌量10亿/g)按0.5-3kg/亩的用量随水浇施于草莓根部,间隔7天用一次,连续使用三次。其中:
处理组1:VB1266菌粉用量为0.5kg/亩;
处理组2:VB1266菌粉用量为1kg/亩;
处理组3:VB1266菌粉用量为2kg/亩;
处理组4:VB1266菌粉用量为3kg/亩。
在草莓结果期统计草莓炭疽病发病株数,计算解淀粉芽孢杆菌VB1266对草莓炭疽病的防治效率,具体结果见表4。
发病率=发病草莓株数/草莓总株数×100%。
防治效率%=(空白对照组发病率-处理组发病率)/空白对照组发病率×100%。
表4解淀粉芽孢杆菌VB1266对草莓炭疽病的防治效果
Figure BDA0002185506180000082
Figure BDA0002185506180000091
从表4的结果可知,空白对照组草莓的炭疽病发病率高达62.8%,而在苗期施用解淀粉芽孢杆菌VB1266菌粉的各处理组草莓的发病率明显降低,尤其是处理组4草莓的发病率最低,仅有6.4%。从而说明本发明提供的解淀粉芽孢杆菌VB1266对草莓炭疽病具有显著的防治效果,防治效率高达89.8%,取得了意料不到的技术效果。
实施例6解淀粉芽孢杆菌VB1266在小麦种植中的应用
1、实验地点:
烟台市莱阳市高格庄镇小麦种植区,该种植区内的小麦播种时间相同,小麦长势相近。
2、小麦种植实验:
选取10m×20m的区域作为一个实验区,共设置25个实验区,且每个实验区之间保持1米的间隔。每个处理组随机选择5个实验区进行实验。
(1)空白对照组:清水浇施小麦根部;
(2)VB1266菌粉处理组:将VB1266菌粉(活菌量为10亿/g)按1-4kg/亩的用量随水浇施于苗期小麦的根部,间隔7天用一次,连续使用三次。其中:
处理组1:VB1266菌粉用量为1kg/亩;
处理组2:VB1266菌粉用量为2kg/亩;
处理组3:VB1266菌粉用量为3kg/亩;
处理组4:VB1266菌粉用量为4kg/亩。
在小麦成熟期,统一进行收割、脱粒和晾晒,统计各实验区小麦的产量,计算小麦的平均产量和增产率,具体结果见表5。
增产率=(处理组小麦产量-空白对照组小麦产量)/空白对照组小麦产量×100%。
表5解淀粉芽孢杆菌VB1266对小麦产量的影响
Figure BDA0002185506180000092
Figure BDA0002185506180000101
从表5的结果可知,通过在小麦苗期施用解淀粉芽孢杆菌VB1266菌粉,可以使处理组小麦的产量普遍提高19.4%-25.83%,增产效果明显。从而说明,本发明提供的解淀粉芽孢杆菌VB1266能显著促进小麦生长,提高小麦的生产性能,进而增加小麦的产量,取得了显著的效果。
实施例7解淀粉芽孢杆菌VB1266产酶和耐低温能力评价
1、纤维素酶
将实施例2制备得到的解淀粉芽孢杆菌VB1266菌液接种到含有羧甲基纤维素的琼脂培养基上,37℃培养48h后,菌液周围有透明圈产生,透明圈直径为18mm。从而说明,本发明筛选到的解淀粉芽孢杆菌VB1266能向胞外有效分泌纤维素酶。
2、内切葡聚糖酶
将实施例2制备得到的解淀粉芽孢杆菌VB1266菌液进行离心,去除菌体,获得发酵上清液。采用下述方法检测发酵上清液中内切葡聚糖酶的酶活。结果显示,解淀粉芽孢杆菌VB1266发酵上清液中内切葡聚糖酶活为1.2U/ml。
(1)酶活定义
在一定条件下,每分钟水解底物,生成等同于1微摩尔还原糖的酶量,被定义为1个单位U。
(2)酶活测定方法
①吸取0.5mL待测酶液于16×120mm的试管中,40℃预热5min;
②加入一片底物(Megazyme T-CUR200)于酶液中,不要震荡,40℃反应10min;
③加入10mL Trizma Base终止液,涡旋振荡;
④在室温中放置5min,再次涡旋振荡;
⑤用whatman 1号滤纸过滤,直径9cm;
⑥590nm下比色。
⑦空白:将底物加入0.5mL浸提缓冲液中,其余与样品反应一致,每一批次反应只需要只做1个空白。
(3)酶活计算
标准曲线:
①pH5.0:mU/mL=3.3×Abs.+0.04
②pH6.5:mU/mL=7×Abs.+0.25
③pH4.5:mU/mL=4.1×Abs.+0.7
酶活:U=Y×(1/1000)×2×n
其中,Y—酶活mU
1/1000—mU到U的转换系数
2—0.5mL到1.0mL的转换系数
n—稀释倍数
3、淀粉酶
将实施例2制备得到的解淀粉芽孢杆菌VB1266菌液接种到含有淀粉的琼脂培养基上,37℃培养48h,可以看到VB1266菌株周围有透明圈产生,透明圈直径为16mm。从而说明,本发明提供的解淀粉芽孢杆菌VB1266能向胞外有效分泌淀粉酶。
4、蛋白酶
将实施例2制备得到的解淀粉芽孢杆菌VB1266菌液接种到含有脱脂奶粉的琼脂培养基上,37℃培养48h,可以看到VB1266菌株周围有透明圈产生,透明圈直径为20mm。从而说明,本发明提供的解淀粉芽孢杆菌VB1266能向胞外有效分泌蛋白酶。
5、耐低温能力评价
将解淀粉芽孢杆菌VB1266接种于营养肉汤培养基中,37℃,220r/min培养14h,将培养好的菌液点接到营养琼脂培养基上,10℃低温条件下培养,3天后均能观察到有菌落生长,说明该菌株在10℃低温条件下可以有效生长。
实施例8解淀粉芽孢杆菌VB1266在促进玉米秸秆降解中的应用
首先将玉米秸秆破碎成2cm左右,然后将秸秆与土壤按1:2的质量比混匀。准备40个陶盆,每个陶盆中装入5kg上述秸秆与土壤的混合物。
(1)空白对照组:不添加任何菌剂;
(2)将解淀粉芽孢杆菌VB1266菌粉按照0.5-1.5g/盆的用量加入到陶盆中,与玉米秸秆与土壤的混合物混匀。每个处理组10个重复。其中:
处理组1:VB1266菌粉用量为0.5g/盆;
处理组2:VB1266菌粉用量为1.0g/盆;
处理组3:VB1266菌粉用量为1.5g/盆。
2个月后,分别称量各陶盆中混合物的重量,计算玉米秸秆的失重率。具体结果见表6。
失重率%=(降解前重量-降解后重量)/降解前重量×100%。
表6解淀粉芽孢杆菌VB1266对玉米秸秆降解效果的影响
实验分组 VB1266菌粉用量 平均失重率
空白对照组 0 20.4%
VB1266处理组1 0.5g/盆 25.2%
VB1266处理组2 1.0g/盆 30.7%
VB1266处理组3 1.5g/盆 29.4%
从表6的数据可以看出,本发明提供的解淀粉芽孢杆菌VB1266能有效促进玉米秸秆的降解。与空白对照组相比,VB1266菌粉处理组玉米秸秆的失重率提高了23.5%-50.5%。其中,当解淀粉芽孢杆菌VB1266菌粉添加量为1.0g时,玉米秸秆的降解效果最好,失重率达到30.7%;而当菌粉添加量继续增加到1.5g时,玉米秸秆的失重率反而降低,取得了意料不到的技术效果。
综上所述,本发明提供的解淀粉芽孢杆菌VB1266可单独作为生防菌剂、生物肥、生物腐熟剂等,广泛应用于农业生产领域,还可与其他芽孢杆菌、假单胞菌、土壤杆菌、固氮菌、根瘤菌、青霉菌、曲霉菌、根霉菌、链霉菌中的任意一种或多种进行组合,用于植物病害防治,提高土壤肥力以及促进秸秆等农业废弃物的降解,应用前景广阔。

Claims (7)

1.一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)VB1266,其特征在于,所述解淀粉芽孢杆菌的保藏号为CCTCC NO:M2019440。
2.权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌在植物病害防治中的应用,其特征在于,所述的植物病害为玉米纹枯病、玉米弯孢病或草莓炭疽病中的任意一种。
3.权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌在制备生物肥中的应用。
4.一种微生物制剂,其特征在于,所述的微生物制剂包含权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌。
5.如权利要求4所述的微生物制剂,其特征在于,所述的微生物制剂中解淀粉芽孢杆菌的活菌量至少为108CFU/g。
6.权利要求4或5所述的微生物制剂在植物病害防治中的应用,其特征在于,所述的植物病害为玉米纹枯病、玉米弯孢病或草莓炭疽病中的任意一种。
7.权利要求4或5所述的微生物制剂在制备生物肥中的应用。
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Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111286479B (zh) * 2020-03-13 2021-02-05 上海市农业科学院 一种抑制或拮抗植物病原菌的贝莱斯芽孢杆菌及其分离培养方法和应用
CN111349589B (zh) * 2020-04-29 2022-04-08 福建省农业科学院植物保护研究所 一种防治金线莲茎腐病的解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN111621447B (zh) * 2020-07-02 2022-06-28 河南省科学院生物研究所有限责任公司 一株解淀粉芽孢杆菌ws3-1在防治花生白绢病中的应用
CN111676172B (zh) * 2020-07-15 2021-07-13 元和生物科技(德州)有限公司 一种多功能寡营养纤维素降解菌复配菌剂及其应用
CN111944717B (zh) * 2020-08-05 2022-04-15 中国农业大学 解淀粉芽孢杆菌tl106及其应用
CN115322928A (zh) * 2022-08-10 2022-11-11 河北省科学院生物研究所 解淀粉芽孢杆菌zlp-01及其应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005059112A1 (en) * 2003-12-17 2005-06-30 Kt & G Co., Ltd The novel bacillus amyloliquefaciens ktgb0202 and control method of plant pathogenic funzi using that
US6960342B2 (en) * 2002-09-12 2005-11-01 National Taiwan University Method for inhibiting pathogenic fungi in plants using Bacillus amyloliquefaciens
CN1952116A (zh) * 2006-04-18 2007-04-25 兰州大学 一株解淀粉芽孢杆菌菌株及其应用
CN105368747A (zh) * 2015-12-02 2016-03-02 中国农业科学院麻类研究所 一株解淀粉芽孢杆菌菌株及其应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6960342B2 (en) * 2002-09-12 2005-11-01 National Taiwan University Method for inhibiting pathogenic fungi in plants using Bacillus amyloliquefaciens
WO2005059112A1 (en) * 2003-12-17 2005-06-30 Kt & G Co., Ltd The novel bacillus amyloliquefaciens ktgb0202 and control method of plant pathogenic funzi using that
CN1952116A (zh) * 2006-04-18 2007-04-25 兰州大学 一株解淀粉芽孢杆菌菌株及其应用
CN105368747A (zh) * 2015-12-02 2016-03-02 中国农业科学院麻类研究所 一株解淀粉芽孢杆菌菌株及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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解淀粉芽孢杆菌HAB-9的鉴定及对17株植物病原菌的拮抗作用;陈照等;《热带农业科学》;20190730(第7期);第47-52页 *

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