CN113624857A - 一种红霉素菌渣中红霉素a的液质联用检测方法 - Google Patents

一种红霉素菌渣中红霉素a的液质联用检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN113624857A
CN113624857A CN202110713041.5A CN202110713041A CN113624857A CN 113624857 A CN113624857 A CN 113624857A CN 202110713041 A CN202110713041 A CN 202110713041A CN 113624857 A CN113624857 A CN 113624857A
Authority
CN
China
Prior art keywords
erythromycin
detection method
solution
volume ratio
phase
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202110713041.5A
Other languages
English (en)
Inventor
董丽萍
邓留杰
韩丽丽
热沙来提
芦梦楚
安双双
殷文娟
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yili Chuanning Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Yili Chuanning Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Yili Chuanning Biotechnology Co ltd filed Critical Yili Chuanning Biotechnology Co ltd
Priority to CN202110713041.5A priority Critical patent/CN113624857A/zh
Publication of CN113624857A publication Critical patent/CN113624857A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
    • G01N30/72—Mass spectrometers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/86—Signal analysis
    • G01N30/8675—Evaluation, i.e. decoding of the signal into analytical information
    • G01N30/8679—Target compound analysis, i.e. whereby a limited number of peaks is analysed
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N2030/042—Standards
    • G01N2030/047—Standards external
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N2030/065—Preparation using different phases to separate parts of sample

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Library & Information Science (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)

Abstract

本发明涉及微生物发酵培养基残渣的检测技术领域，具体涉及一种红霉素菌渣中残留红霉素A的液质联用检测方法。本发明的检测方法包括如下步骤：(1)使用提取剂溶解菌渣中的残留成分，得到供试品溶液；所述提取剂为有机溶剂和水的混合溶剂；(2)将红霉素A标准品制成标准品溶液；(3)采用超高效液相色谱‑串联质谱检测供试品溶液和标准品溶液，得到供试品溶液和标准品溶液的谱图，计算菌渣中红霉素A的含量。本发明的检测方法能快速有效检测红霉素菌渣中红霉素A残留量，在红霉素菌渣的无害化处理和资源化利用中具有很好的应用前景。

Description

一种红霉素菌渣中红霉素A的液质联用检测方法
技术领域
本发明涉及微生物发酵培养基残渣的检测技术领域，具体涉及一种红霉素菌渣中残留红霉素A的液质联用检测方法。
背景技术
红霉素是由红霉素链霉菌产生的一种十四元大环内酯类抗生素，红霉素A为主要活性成分，对革兰阳性菌具有强大抗菌作用。生产红霉素剩余的培养基残余物(以下简称“菌渣”)含有丰富的营养物质，其中蛋白质和多糖含量较高，故将其处理后转化为肥料、饲料是非常经济的选择。
但是，菌渣中还含有大量菌丝体，如果处置不当，会引起二次发酵，产生红霉素A等抗生素，造成异味，污染水体，甚至还有使微生物产生耐药性基因的潜在风险。在2008年修订的《国家危险废物名录》中，抗生素菌渣被列为一种危险废弃物，因此，对抗生素菌渣进行资源化利用前，必须要对其进行无害化处理，并对其中的红霉素A残留进行检测。
中国发明专利“CN107907616A一种菌渣中红霉素残留的检测方法”中提供了一种利用高效液相色谱法检测菌渣中红霉素残留的方法。该方法前处理步骤较为繁杂，需要反复有机试剂提取，提取液需要进一步去脂、萃取和氮吹等，而且，上机样品采用紫外检测器进行检测，灵敏度相对较低，无法满足人们更高的需求。另有食品和农业领域采用液相色谱-串联质谱检测红霉素A含量的相关报道，但是，前处理方法均涉及固相萃取、旋转蒸发和氮吹等过程，这样大大提高了样品前处理成本。
发明内容
针对现有技术中的缺陷，本发明提供一种红霉素菌渣中残留红霉素A的液质联用检测方法，目的在于：建立一种准确度高、灵敏度高、专属性强、重现性好的方法，快速有效检测红霉素菌渣中红霉素A残留量。
一种红霉素菌渣中红霉素A的液质联用检测方法，其中，红霉素A的检出限为25.0μg/kg；
本发明还提供一种红霉素菌渣中残留红霉素A的液质联用检测方法，包括如下步骤：
(1)使用提取剂溶解红霉素菌渣中的残留成分，得到供试品溶液；所述提取剂为有机溶剂和水的混合溶剂，所述有机溶剂的体积比为50～100％；
(2)将红霉素A标准品制成标准品溶液；
(3)采用高效液相色谱-质谱联用检测供试品溶液和标准品溶液，得到供试品溶液和标准品溶液的谱图，计算菌渣中红霉素A的含量；
其中，色谱条件为：色谱柱为C18柱；流动相包括弱极性相和强极性相，所述弱极性相选自甲醇或乙腈，强极性相选自甲酸水溶液、乙酸水溶液、甲酸-甲酸铵溶液或乙酸-乙酸铵溶液，其中酸含量为0.1％～0.5％(v/v)，铵盐浓度为0.01M～0.20M。
优选的，步骤(1)中，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、乙腈或丙酮。
优选的，步骤(1)中，所述有机溶剂选自甲醇。
优选的，步骤(1)中，所述有机溶剂的体积比为100％。
优选的，步骤(1)中，所述红霉素菌渣含水率为2％～95％；和/或，所述菌渣与提取剂的用量比例为0.5～2.0g:10～50mL；和/或，所述供试品溶液通过如下方式得到：将菌渣用提取剂定容后，涡旋振荡2～10min，然后4000～8000rpm，离心5～10min，取上清液。
优选的，步骤(3)中，所述色谱条件还包括：色谱柱为Waters-C18柱，2.1×50mm，1.7μm；流动相以甲醇为弱极性相，0.1％(v/v)甲酸水溶液为强极性相。
优选的，步骤(3)中，所述色谱条件还包括：洗脱过程为梯度洗脱，洗脱程序包括初始阶段、中间阶段和末尾阶段，所述初始阶段的时长为1～3min，初始阶段弱极性相的体积比为5％～10％；所述中间阶段的时长为5～15min，中间阶段弱极性相的体积比为40％～95％；所述末尾阶段的时长为2～10min，末尾阶段弱极性相的体积比为5％～10％；和/或，流速为0.2～0.4mL/min；和/或，柱温为25～40℃；和/或，进样量为2～20μL。
优选的，步骤(3)中，所述色谱条件还包括：流速为0.25mL/min；和/或，柱温为35℃；和/或，进样量为10μL；和/或，所述洗脱程序为：
初始阶段：0～1.5min，弱极性相的体积比为10％；
中间阶段：4min，弱极性相的体积比为40％；7～9min，弱极性相的体积比为60％；
末尾阶段：10～11min，弱极性相的体积比为10％。
优选的，步骤(3)中，所述质谱条件为：电离方式为电喷雾正离子模式；和/或，离子源温度为150～200℃；和/或，去溶剂气温度为400～600℃；和/或，去溶剂气流量为400～800mL/min；和/或，喷雾电压为2.8～3.5kv；和/或，锥孔电压为28～40V；和/或，碰撞电压25～35V；和/或，扫描模式为多反应监测模式，扫描母离子m/z为734.35，子离子m/z为158.07。
优选的，步骤(3)中，所述质谱条件为：电离方式为电喷雾正离子模式；和/或，离子源温度为150℃；和/或，去溶剂气温度为450℃；和/或，去溶剂气流量为650mL/min；和/或，喷雾电压为3.2kv；和/或，锥孔电压为34V；和/或，碰撞电压30V；和/或，扫描模式为多反应监测模式，扫描母离子m/z为734.35，子离子m/z为158.07。
通过本发明的技术方案，能够用简单的方法和成本更低的溶剂对红霉素菌渣中的红霉素A进行有效的提取，并通过优选的色谱条件对红霉素A进行分离，进而通过质谱进行含量检测。本发明的检测方法具有准确度高、灵敏度高、专属性强、重现性好的优点。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1为本发明方法的流程示意图；
图2为实施例1中红霉素A标准样品的总离子流图；
图3为实施例1中红霉素菌渣样品中红霉素A的总离子流图。
具体实施方式
以下实施例中所用的试剂均为市售品。
实施例1
仪器：超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱仪。
色谱条件：色谱柱为Waters-C18柱(2.1×50mm，1.7μm)，流动相：甲醇-0.1％甲酸水溶液；梯度洗脱，0～1.5min，10％甲醇，4min，40％甲醇，7～9min，60％甲醇，10～11min，10％甲醇；流速为0.25mL/min；柱温为35℃；进样量为10μL。
质谱条件：电离方式为电喷雾正离子模式；离子源温度为150℃；去溶剂气温度为450℃；去溶剂气流量为650mL/min；喷雾电压为3.2kv；锥孔电压为34V；碰撞电压30V；扫描模式为多反应监测(MRM)模式，扫描母离子m/z为734.35，子离子m/z为158.07。
检测步骤：
1)供试品样品制备：准确称取1.0g红霉素菌渣于比色管中，加入甲醇溶液，摇匀并定容至10mL，涡旋振荡5min，然后4000rpm离心10min，取上清液，将上清液过0.22μm有机滤膜后，即得供试品。
2)标准曲线绘制：用超纯水将红霉素A标准贮备液逐级稀释成浓度为1.0μg/L、5.0μg/L、25.0μg/L、100.0μg/L、500.0μg/L的标准工作溶液，采用高效液相色谱-三重四极杆串联质谱仪对上述标准溶液进行检测分析，以测得峰面积及对应标准工作溶液浓度绘制标准曲线，并求得回归方程和相关系数。
3)检测分析：将标准工作品溶液和供试品样品注入高效液相色谱仪中，采用前述色谱和质谱条件分析，然后根据外标法计算红霉素A残留量。
对本实施例方法的各项指标进行考察，结果如表1所示：
表1验证指标
Figure BDA0003133708000000041
注：检出限为样品在3倍信噪比时的浓度；定量限为样品在10倍信噪比时的浓度；加标回收率为样品加标浓度水平为0.80mg/kg时的回收率。
以上实施例证明，本发明所建立的方法准确度高、灵敏度高、专属性强、重现性好，能快速有效检测红霉素菌渣中红霉素A残留量，在红霉素菌渣的无害化处理和资源化利用中具有很好的应用前景。

Claims (10)

1.一种红霉素菌渣中红霉素A的液质联用检测方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)使用提取剂溶解红霉素菌渣中的残留成分，得到供试品溶液；所述提取剂为有机溶剂和水的混合溶剂，所述有机溶剂的体积比为50～100％；
(2)红霉素A标准品溶液的配制；
(3)采用超高效液相色谱-串联质谱检测供试品溶液和标准品溶液，得到供试品溶液和标准品溶液的谱图，计算菌渣中红霉素A的含量；
其中，色谱条件为：色谱柱为C18柱；流动相包括弱极性相和强极性相，所述弱极性相选自甲醇或乙腈，强极性相选自甲酸水溶液、乙酸水溶液、甲酸-甲酸铵溶液或乙酸-乙酸铵溶液，其中酸含量为0.01％～0.5％(v/v)，铵盐浓度为0.01M～0.20M。
2.按照权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(1)中，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、乙腈或丙酮。
3.按照权利要求2所述的检测方法，其特征在于：步骤(1)中，所述有机溶剂选自甲醇。
4.按照权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(1)中，所述有机溶剂的体积比为100％。
5.按照权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(1)中，所述红霉素菌渣含水率为2％～95％；和/或，所述菌渣与提取剂的用量比例为0.5～2.0g:10～50mL；和/或，所述供试品溶液通过如下方式得到：将菌渣用提取剂定容后，涡旋振荡2～10min，然后4000～8000rpm，离心5～10min，取上清液。
6.按照权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(3)中，所述色谱条件还包括：色谱柱为Waters-C18柱；流动相以甲醇为弱极性相，0.1％(v/v)甲酸水溶液为强极性相。
7.按照权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(3)中，所述色谱条件还包括：洗脱过程为梯度洗脱，洗脱程序包括初始阶段、中间阶段和末尾阶段，所述初始阶段的时长为1～3min，初始阶段弱极性相的体积比为5％～10％；所述中间阶段的时长为5～15min，中间阶段弱极性相的体积比为40％～95％；所述末尾阶段的时长为2～10min，末尾阶段弱极性相的体积比为5％～10％；和/或，流速为0.2～0.4mL/min；和/或，柱温为25～40℃；和/或，进样量为2～20μL。
8.按照权利要求7所述的检测方法，其特征在于：步骤(3)中，所述色谱条件还包括：流速为0.25mL/min；和/或，柱温为35℃；和/或，进样量为10μL；和/或，所述洗脱程序为：
初始阶段：0～1.5min，弱极性相的体积比为10％；
中间阶段：4min，弱极性相的体积比为40％；7～9min，弱极性相的体积比为60％；
末尾阶段：10～11min，弱极性相的体积比为10％。
9.按照权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(3)中，所述质谱条件为：电离方式为电喷雾正离子模式；和/或，离子源温度为150～200℃；和/或，去溶剂气温度为400～600℃；和/或，去溶剂气流量为400～800mL/min；和/或，喷雾电压为2.8～3.5kv；和/或，锥孔电压为28～40V；和/或，碰撞电压25～35V；和/或，扫描模式为多反应监测模式，扫描母离子m/z为734.35，子离子m/z为158.07。
10.按照权利要求9所述的检测方法，其特征在于：步骤(3)中，所述质谱条件为：电离方式为电喷雾正离子模式；和/或，离子源温度为150℃；和/或，去溶剂气温度为450℃；和/或，去溶剂气流量为650mL/min；和/或，喷雾电压为3.2kv；和/或，锥孔电压为34V；和/或，碰撞电压30V；和/或，扫描模式为多反应监测模式，扫描母离子m/z为734.35，子离子m/z为158.07。
CN202110713041.5A 2021-06-25 2021-06-25 一种红霉素菌渣中红霉素a的液质联用检测方法 Pending CN113624857A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110713041.5A CN113624857A (zh) 2021-06-25 2021-06-25 一种红霉素菌渣中红霉素a的液质联用检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110713041.5A CN113624857A (zh) 2021-06-25 2021-06-25 一种红霉素菌渣中红霉素a的液质联用检测方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN113624857A true CN113624857A (zh) 2021-11-09

Family

ID=78378456

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110713041.5A Pending CN113624857A (zh) 2021-06-25 2021-06-25 一种红霉素菌渣中红霉素a的液质联用检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113624857A (zh)

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS61155954A (ja) * 1984-12-28 1986-07-15 Shimadzu Corp エリスロマイシン系抗生物質分析装置
US20050272166A1 (en) * 2004-05-06 2005-12-08 Li Jin Methods and systems for detection, identification and quantitation of macrolides and their impurities
US20080138907A1 (en) * 2004-12-16 2008-06-12 Nippon Meat Packers, Inc. Extractant Solution for Residual Veterinary Agent in Livestock Product or Seafood
CN108195963A (zh) * 2017-12-29 2018-06-22 宁夏希望田野生物农业科技有限公司 一种土壤中红霉素残留量的检测方法
CN112697893A (zh) * 2020-11-27 2021-04-23 伊犁川宁生物技术股份有限公司 一种红霉素菌渣中红霉素a残留效价的测定方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS61155954A (ja) * 1984-12-28 1986-07-15 Shimadzu Corp エリスロマイシン系抗生物質分析装置
US20050272166A1 (en) * 2004-05-06 2005-12-08 Li Jin Methods and systems for detection, identification and quantitation of macrolides and their impurities
US20080138907A1 (en) * 2004-12-16 2008-06-12 Nippon Meat Packers, Inc. Extractant Solution for Residual Veterinary Agent in Livestock Product or Seafood
CN108195963A (zh) * 2017-12-29 2018-06-22 宁夏希望田野生物农业科技有限公司 一种土壤中红霉素残留量的检测方法
CN112697893A (zh) * 2020-11-27 2021-04-23 伊犁川宁生物技术股份有限公司 一种红霉素菌渣中红霉素a残留效价的测定方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
YU Y.TANG等: "Development of a Quantitative Multi-Class Method for 18 Antibiotics in Chicken, Pig, and Fish Muscle using UPLC-MS/MS", 《FOOD ANAL. METHODS》 *
李丽等: "应用高效液相色谱法对饲料中五种抗生素的同时检测", 《现代畜牧兽医》 *
李烈飞等: "UPLC-MS/MS检测猪肉中3种大环内酯类药物残留量", 《肉类工业》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107121518B (zh) 一种同时富集检测饮用水中酚类、雌激素类和雄激素类内分泌干扰物的方法
CN110618217A (zh) 一种检测油脂中杂环胺类物质的方法
CN111562327A (zh) 一种基于分子网络的废水中致毒有机污染物非目标筛查分析的方法
Quan et al. Determining eight biogenic amines in surface water using high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry
CN106770775A (zh) 一种用于检测农村饮用水中抗生素的方法
Zhao et al. Sample preparation and mass spectrometry for determining mycotoxins, hazardous fungi, and their metabolites in the environment, food, and healthcare
da Silva et al. Sample preparation and antibiotic quantification in vinasse generated from sugarcane ethanol fuel production
CN111220722B (zh) 一种同时测定土壤中8种对羟基苯甲酸酯类化合物的方法
CN114113365B (zh) 一种红霉素发酵废水中抗生素类物质的液相色谱-串联质谱检测方法
CN113624857A (zh) 一种红霉素菌渣中红霉素a的液质联用检测方法
CN105572249B (zh) 活性炭对酒产品影响的风险评估方法
CN108663464B (zh) 检测水果蔬菜或土壤中的环酰菌胺的方法
CN111679007A (zh) 一种同时检测饮用水中13种卤代酰胺类消毒副产物的方法
CN107884502B (zh) 一种土壤中阿维菌素残留量的检测方法
CN107907616B (zh) 一种菌渣中红霉素残留的检测方法
CN104198641B (zh) 一种测定白酒中环二肽的方法
CN111474279B (zh) 检测大环内酯抗生素化合物的方法和试剂盒
CN113624858A (zh) 一种青霉素菌渣中青霉素残留的液质联用检测方法
CN113109468B (zh) 一种测定动物饲料中利福平含量的方法
CN111474278A (zh) 检测大环内酯类化合物的代谢物的方法和试剂盒
CN111707763A (zh) 一种食品快速检测氯霉素的方法
CN104407085A (zh) 应用液质-质联用仪测定淡水池塘底泥中氯霉素的方法
CN111220594A (zh) 一种利用超高分辨质谱筛选链霉菌农药活性菌株的方法
CN114397381A (zh) 一种沼液中阿莫西林的提取及含量检测方法
LU502638B1 (en) METHOD FOR RAPID ANALYSIS OF TRACE AMOUNTS OF ß-RECEPTOR BLOCKERS IN ENVIRONMENTAL SEDIMENT

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination