CN104198641B - 一种测定白酒中环二肽的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种测定白酒中环二肽的方法，包括以下步骤：a、取白酒酒样，过SPE？C18柱后，再用甲醇洗脱，洗脱液在温度不高于60℃下浓缩至原白酒酒样体积的1/50～1/10，得待测样品；b、将步骤a的待测样品上样至液相-质谱联用仪，质谱全离子扫描后，通过全离子扫描峰，初步得出可能存在的环二肽；c、再将步骤a的待测样品上样至液相-质谱联用仪，针对每一种可能存在的环二肽，通过选择离子检测后，得到特征离子峰；d、根据步骤c得到的特征离子峰，进一步证明白酒中是否存在步骤b得出的环二肽，最后得出结论。本发明方法可以准确、快速地测定出白酒样品中环二肽的种类，为白酒中环二肽的检测提供了更有效的方法。
Description
技术领域
本发明属于化学分析技术领域，具体涉及一种测定白酒中环二肽的方法。
背景技术
环二肽(cyclicdipeptides)又叫2，5-二酮哌嗪等衍生物(2,5-diketopiperazinederivatives)，该类化合物在人、脊椎动物、无脊椎动物、植物、真菌和细菌中均有发现，由于环二肽形成一个稳定的六元环结构，具有一定的构象约束作用，有两个氢键给体和两个氢键受体，氢键是药物与受体相互作用的主要方式之一，因而环二肽在药物化学中是一个重要的药效团。目前发现许多环二肽具有强的生理活性，引起了有机化学家、生物学家和药物学家的广泛兴趣。环二肽的报道不多，至今没有查到有关白酒中环二肽的报道。
白酒是中国的国粹，是传统固态发酵的产物，自然接种使大曲和酒糟中存在各种各样的微生物，其中不乏真菌和细菌，尤其是发酵后期以细菌为主，加上传统白酒独特的蒸馏工艺，高沸点的环二肽被带进入酒中，成为酒体的一部分。白酒中的环二肽种类很多，已检出二十多种，但通常含量很低，在ug/L级甚至更低，少数几个在mg/L级，从而为白酒中环二肽的检测带来了很大困难。
据有关报道，现有的检测技术主要采用LC-MS-MS、核磁质谱等仪器设备来检测，而针对白酒来说，其环二肽的相对含量较低，且样品中的风味物质很多，难以分离，不能像文献报道的进行纯化后进行核磁质谱检测；使用LC-MS-MS进行检测，由于其属于低分辨率高灵敏度的仪器，质量准确度小于2000ppm，对定性未知物易造成假阳性，必须使用标准品进行对照检测。所以，本领域急需寻找一种能够准确快速地检测白酒中环二肽的方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种白酒中环二肽的检测方法。该方法包括以下步骤：
a、取白酒酒样，过SPEC18柱后，再用甲醇洗脱，洗脱液在温度不高于60℃下浓缩至原白酒酒样体积的1/50～1/10，得待测样品；
b、将步骤a的待测样品上样至液相-质谱(LC-QTOF)联用仪，质谱全离子扫描后，通过全离子扫描峰，初步得出可能存在的环二肽；
c、再将步骤a的待测样品上样至液相-质谱(LC-QTOF)联用仪，针对每一种步骤b初步得出可能存在的环二肽，通过选择离子检测后，得到特征离子峰；
d、根据步骤c得到的特征离子峰，进一步证明白酒中是否存在步骤b初步得出的环二肽，最后得出结论。
进一步的，上述方法中，当步骤b中出现的两个分子离子峰的相隔时间小于1min时，在步骤c进行选择离子检测时，对其中一个进行检测，再重复操作步骤c，对另一个进行检测。
进一步的，上述方法中，当步骤b中初步判断某一时间的峰为某种环二肽的分子离子峰时，步骤c中，则在此时间正负0.5min内用此种环二肽相应的碰撞能量进行选择离子检测。
进一步的，上述方法中，操作步骤c时，对于液相条件，控制液相条件与步骤b相同；对于质谱条件，除步骤b采用全离子扫描、步骤c采用选择离子检测外，控制其它条件与步骤b相同。
进一步的，上述方法步骤b或c中，液相色谱条件为：流动相：A为0.1％甲酸水溶液，B为甲醇，梯度洗脱为：0-18min：10～100％B；18.1-26min：100％B；26.1-30min：100～10％B；30.1-32min：10％B；32min：停止。
更进一步的，上述方法步骤b或c中，液相色谱条件为：色谱柱为C18柱，柱长100mm，内径2.1mm，柱温20～30℃，流速0.1mL/min，进样量为1～10uL。
更进一步的，上述方法步骤b或c中，液相色谱仪为美国Agilent公司1290系列高效液相色谱仪。
进一步的，上述方法步骤b中，质谱条件为：电喷雾离子源，正模式，全离子扫描，离子源温度280～325℃，干燥气流量5～12mL/min，雾化气压力30～40psig，毛细管电压4000v，毛细管出口电压60～150v。
进一步的，上述方法步骤c中，质谱条件为：电喷雾离子源，正模式，选择离子检测，离子源温度280～325℃，干燥气流量5～12mL/min，雾化气压力30～40psig，毛细管电压4000v，毛细管出口电压60～150v。
更进一步的，当步骤b中初步判断某一时间的峰为环(丙氨酸-脯氨酸)的分子离子峰时，步骤c中选择离子检测时所需的碰撞能量为18～22v。优选为20v。
更进一步的，当步骤b中初步判断某一时间的峰为环(二氨基丁酸)的分子离子峰时，步骤c中选择离子检测时所需的碰撞能量为3～7v。优选为5v。
更进一步的，当步骤b中初步判断某一时间的峰为环(亮氨酸-丙氨酸)的分子离子峰时，步骤c中选择离子检测时所需的碰撞能量为18～22v。优选为20v。
更进一步的，当步骤b中初步判断某一时间的峰为环(异亮氨酸-缬氨酸)的分子离子峰时，步骤c中选择离子检测时所需的碰撞能量为13～17v。优选为15v。
更进一步的，当步骤b中初步判断某一时间的峰为环(苏氨酸-脯氨酸)的分子离子峰时，步骤c中选择离子检测时所需的碰撞能量为18～22v。优选为20v。
更进一步的，当步骤b中初步判断某一时间的峰为环(脯氨酸-苯丙氨酸)的分子离子峰时，步骤c中选择离子检测时所需的碰撞能量为13～17v。优选为15v。
更进一步的，当步骤b中初步判断某一时间的峰为环(苯丙氨酸-丙氨酸)的分子离子峰时，步骤c中选择离子检测时所需的碰撞能量为18～22v。优选为20v。
更进一步的，当步骤b中初步判断某一时间的峰为环(亮氨酸-异亮氨酸)的分子离子峰时，步骤c中选择离子检测时所需的碰撞能量为13～17v。优选为15v。
更进一步的，当步骤b中初步判断某一时间的峰为环(缬氨酸-缬氨酸)的分子离子峰时，步骤c中选择离子检测时所需的碰撞能量为3～7v。优选为5v。
更进一步的，当步骤b中初步判断某一时间的峰为环(酪氨酸-脯氨酸)的分子离子峰时，步骤c中选择离子检测时所需的碰撞能量为13～17v。优选为15v。
更进一步的，当步骤b中初步判断某一时间的峰为环(苯丙氨酸-缬氨酸)的分子离子峰时，步骤c中选择离子检测时所需的碰撞能量为8～12v。优选为10v。
更进一步的，当步骤b中初步判断某一时间的峰为环(脯氨酸-亮氨酸)的分子离子峰时，步骤c中选择离子检测时所需的碰撞能量为13～17v。优选为15v。
更进一步的，当步骤b中初步判断某一时间的峰为环(二苯丙氨酸)的分子离子峰时，步骤c中选择离子检测时所需的碰撞能量为13～17v。优选为15v。
更进一步的，质谱仪为美国Agilent公司6520B系列四级杆飞行时间质谱检测器。
本发明方法可不对白酒酒样进行纯化提取，仅对白酒酒样进行简单处理后，通过选择合适的液质条件，简单、快速、准确地检测出白酒中的环二肽物质。同时，本发明方法可不使用标准物，不仅节约了程序，而且节约了成本。该分析方法精确性高、重复性好、稳定性好。
附图说明
图1实施例1的52°浓香型白酒样品全扫描色谱图
图2实施例1的52°浓香型白酒酒样中环(丙氨酸-脯氨酸)二级质谱图
图3实施例1的52°浓香型白酒酒样中环(二氨基丁酸)二级质谱图
图4实施例1的52°浓香型白酒酒样中环(亮氨酸-丙氨酸)二级质谱图
图5实施例1的52°浓香型白酒酒样中环(苏氨酸-脯氨酸)二级质谱图
图6实施例1的52°浓香型白酒酒样中环(脯氨酸-苯丙氨酸)二级质谱图
图7实施例1的52°浓香型白酒酒样中环(苯丙氨酸-丙氨酸)二级质谱图
图8实施例1的52°浓香型白酒酒样中环(亮氨酸-异亮氨酸)二级质谱图
图9实施例1的52°浓香型白酒酒样中环(缬氨酸-缬氨酸)二级质谱图
图10实施例1的52°浓香型白酒酒样中环(酪氨酸-脯氨酸)二级质谱图
图11实施例1的52°浓香型白酒酒样中环(苯丙氨酸-缬氨酸)二级质谱图
图12实施例1的52°浓香型白酒酒样中环(脯氨酸-亮氨酸)二级质谱图
图13实施例1的52°浓香型白酒酒样中环(二苯丙氨酸)二级质谱图
图14实施例1的52°浓香型白酒酒样中环(异亮氨酸-缬氨酸)二级质谱图
图15实施例2的53°清香型白酒样品全扫描色谱图
图16实施例2的53°清香型白酒样中环(丙氨酸-脯氨酸)二级质谱图
图17实施例2的53°清香型白酒样中环(苯丙氨酸-丙氨酸)二级质谱图
图18实施例2的53°清香型白酒样中环(酪氨酸-脯氨酸)二级质谱图
图19实施例2的53°清香型白酒样中环(苯丙氨酸-缬氨酸)二级质谱图
图20实施例2的53°清香型白酒样中环(脯氨酸-亮氨酸)二级质谱图
图21实施例2的53°清香型白酒样中环(二苯丙氨酸)二级质谱图
图22实施例2的53°清香型白酒样中环(亮氨酸-异亮氨酸)二级质谱图
图23实施例3的53°酱香型白酒样品全扫描色谱图
图24实施例3的53°酱香型白酒酒样中环(丙氨酸-脯氨酸)二级质谱图
图25实施例3的53°酱香型白酒酒样中环(二氨基丁酸)二级质谱图
图26实施例3的53°酱香型白酒酒样中环(异亮氨酸-缬氨酸)二级质谱图
图27实施例3的53°酱香型白酒酒样中环(缬氨酸-缬氨酸)二级质谱图
图28实施例3的53°酱香型白酒酒样中环(脯氨酸-苯丙氨酸)二级质谱图
图29实施例3的53°酱香型白酒酒样中环(亮氨酸-异亮氨酸)二级质谱图
图30实施例3的53°酱香型白酒酒样中环(酪氨酸-脯氨酸)二级质谱图
图31实施例3的53°酱香型白酒酒样中环(脯氨酸-亮氨酸)二级质谱图
图32实施例3的53°酱香型白酒酒样中环(二苯丙氨酸)二级质谱图
图33实施例3的53°酱香型白酒酒样中环(亮氨酸-丙氨酸)二级质谱图
图34实施例3的53°酱香型白酒酒样中环(苏氨酸-脯氨酸)二级质谱图
图35实施例3的53°酱香型白酒酒样中环(苯丙氨酸-丙氨酸)二级质谱图
图36实施例3的53°酱香型白酒酒样中环(苯丙氨酸-缬氨酸)二级质谱图
具体实施方式
一种白酒中环二肽的检测方法，包括以下步骤：
a、取白酒酒样，过SPEC18柱后，再用甲醇洗脱，洗脱液在温度不高于60℃下浓缩至原白酒酒样体积的1/50～1/10，得待测样品；
b、将步骤a的待测样品上样至液相-质谱(LC-QTOF)联用仪，质谱全离子扫描后，通过全离子扫描峰，初步得出可能存在的环二肽；
c、再将步骤a的待测样品上样至液相-质谱(LC-QTOF)联用仪，针对每一种步骤b初步得出可能存在的环二肽，通过选择离子检测后，得到特征离子峰；
d、根据步骤c得到的特征离子峰，进一步证明白酒中是否存在步骤b初步得出的环二肽，最后得出结论。
进一步的，上述方法中，为了相邻物质不产生干扰，当步骤b中出现的两个分子离子峰的相隔时间小于1min时，在步骤c进行选择离子检测时，对其中一个进行检测，再重复操作步骤c，对另一个进行检测。
进一步的，上述方法中，当步骤b中初步判断某一时间的峰为某种环二肽的分子离子峰时，步骤c中，则在此时间正负0.5min内用此种环二肽相应的碰撞能量进行选择离子检测。
更进一步的，为了能够得到好的环二肽物质的碎片离子峰，不让离子峰被打得太碎或没被打碎而不利于分析，发明人经过大量实验发现，当步骤b中初步判断某一时间的峰为环(丙氨酸-脯氨酸)的分子离子峰时，步骤c中选择离子检测时所需的碰撞能量为18～22v。优选为20v。
更进一步的，为了能够得到好的环二肽物质的碎片离子峰，不让离子峰被打得太碎或没被打碎而不利于分析，发明人经过大量实验发现，当步骤b中初步判断某一时间的峰为环(二氨基氨酸)的分子离子峰时，步骤c中选择离子检测时所需的碰撞能量为3～7v。优选为5v。
更进一步的，为了能够得到好的环二肽物质的碎片离子峰，不让离子峰被打得太碎或没被打碎而不利于分析，发明人经过大量实验发现，当步骤b中初步判断某一时间的峰为环(亮氨酸-丙氨酸)的分子离子峰时，步骤c中选择离子检测时所需的碰撞能量为18～22v。优选为20v。
更进一步的，为了能够得到好的环二肽物质的碎片离子峰，不让离子峰被打得太碎或没被打碎而不利于分析，发明人经过大量实验发现，当步骤b中初步判断某一时间的峰为环(异亮氨酸-缬氨酸)的分子离子峰时，步骤c中选择离子检测时所需的碰撞能量为13～17v。优选为15v。
更进一步的，为了能够得到好的环二肽物质的碎片离子峰，不让离子峰被打得太碎或没被打碎而不利于分析，发明人经过大量实验发现，当步骤b中初步判断某一时间的峰为环(苏氨酸-脯氨酸)的分子离子峰时，步骤c中选择离子检测时所需的碰撞能量为18～22v。优选为20v。
更进一步的，为了能够得到好的环二肽物质的碎片离子峰，不让离子峰被打得太碎或没被打碎而不利于分析，发明人经过大量实验发现，当步骤b中初步判断某一时间的峰为环(脯氨酸-苯丙氨酸)的分子离子峰时，步骤c中选择离子检测时所需的碰撞能量为13～17v。优选为15v。
更进一步的，为了能够得到好的环二肽物质的碎片离子峰，不让离子峰被打得太碎或没被打碎而不利于分析，发明人经过大量实验发现，当步骤b中初步判断某一时间的峰为环(苯丙氨酸-丙氨酸)的分子离子峰时，步骤c中选择离子检测时所需的碰撞能量为18～22v。优选为20v。
更进一步的，为了能够得到好的环二肽物质的碎片离子峰，不让离子峰被打得太碎或没被打碎而不利于分析，发明人经过大量实验发现，当步骤b中初步判断某一时间的峰为环(亮氨酸-异亮氨酸)的分子离子峰时，步骤c中选择离子检测时所需的碰撞能量为13～17v。优选为15v。
更进一步的，为了能够得到好的环二肽物质的碎片离子峰，不让离子峰被打得太碎或没被打碎而不利于分析，发明人经过大量实验发现，当步骤b中初步判断某一时间的峰为环(缬氨酸-缬氨酸)的分子离子峰时，步骤c中选择离子检测时所需的碰撞能量为3～7v。优选为5v。
更进一步的，为了能够得到好的环二肽物质的碎片离子峰，不让离子峰被打得太碎或没被打碎而不利于分析，发明人经过大量实验发现，当步骤b中初步判断某一时间的峰为环(酪氨酸-脯氨酸)的分子离子峰时，步骤c中选择离子检测时所需的碰撞能量为13～17v。优选为15v。
更进一步的，为了能够得到好的环二肽物质的碎片离子峰，不让离子峰被打得太碎或没被打碎而不利于分析，发明人经过大量实验发现，当步骤b中初步判断某一时间的峰为环(苯丙氨酸-缬氨酸)的分子离子峰时，步骤c中选择离子检测时所需的碰撞能量为8～12v。优选为10v。
更进一步的，为了能够得到好的环二肽物质的碎片离子峰，不让离子峰被打得太碎或没被打碎而不利于分析，发明人经过大量实验发现，当步骤b中初步判断某一时间的峰为环(脯氨酸-亮氨酸)的分子离子峰时，步骤c中选择离子检测时所需的碰撞能量为13～17v。优选为15v。
更进一步的，为了能够得到好的环二肽物质的碎片离子峰，不让离子峰被打得太碎或没被打碎而不利于分析，发明人经过大量实验发现，当步骤b中初步判断某一时间的峰为环(二苯丙氨酸)的分子离子峰时，步骤c中选择离子检测时所需的碰撞能量为13～17v。优选为15v。
进一步的，上述方法中，为了结果准确可靠，操作步骤c时，对于液相条件，控制液相条件与步骤b相同；对于质谱条件，除步骤b采用全离子扫描、步骤c采用选择离子检测外，控制其它条件与步骤b相同。
发明人经过大量研究发现将白酒酒样通过SPEC18柱，其不仅可以富集目标物质，而且可以除杂，除去白酒中的大量乙醇、酸、酯等物质，再利用甲醇将吸附在小柱上的环二肽解吸下来，进行下一步操作，从而减少后期杂质对环二肽检测的干扰。
进一步的，为了能够将待测样品中的各种环二肽物质很好地分离开来，发明人对流动相以及洗脱条件进行过大量实验、筛选、分析，最后将步骤b或c中的液相色谱条件控制为流动相：A为0.1％甲酸水溶液，B为甲醇，梯度洗脱为：0-18min：10～100％B；18.1-26min：100％B；26.1-30min：100～10％B；30.1-32min：10％B；32min：停止。
更进一步的，上述方法步骤b或c中，液相色谱条件为：色谱柱为C18柱，柱长100mm，内径2.1mm，柱温20～30℃，流速0.1mL/min，进样量为1～10uL。
更进一步的，上述方法步骤b或c中，液相色谱仪为美国Agilent公司1290系列高效液相色谱仪。
进一步的，发明人对全离子扫描时的质谱条件经过大量的实验、筛选、分析后，最后控制步骤b中质谱条件为：电喷雾离子源，正模式，全离子扫描，离子源温度280～325℃，干燥气流量5～12mL/min，雾化气压力30～40psig，毛细管电压4000v，毛细管出口电压60～150v。
进一步的，发明人对选择离子检测时的质谱条件经过大量的实验、筛选、分析后，最后控制步骤c中质谱条件为：电喷雾离子源，正模式，选择离子检测，离子源温度280～325℃，干燥气流量5～12mL/min，雾化气压力30～40psig，毛细管电压4000v，毛细管出口电压60～150v。
更进一步的，质谱仪为美国Agilent公司6520B系列四级杆飞行时间质谱检测器。
本发明方法中，待测样品第一次进样至LC-QTOF时，得到的全离子扫描图，可以分析出某一个时间的分子离子峰是多少，例如：第5min出现的分子离子峰是169.0971、第6.1min出现的分子离子峰是171.1128、……、第14.3min出现的分子离子峰是199.1077，初步分析可能是环(丙氨酸-脯氨酸)、环(二氨基丁酸)、……、环(苏氨酸-脯氨酸)；那么第二次进样时，除外加碰撞能量外，控制各条件与第一次相同，为了检测是否有环(丙氨酸-脯氨酸)存在，可在5min左右加入18～22v的碰撞能量进行轰击，分析得到的特征离子峰，从而得出结论。对于其他时间的物质，采用相同的方法，控制不同的碰撞能量，进行轰击，分析得到的特征离子峰，从而得出结论。在具体的操作过程中，步骤c可一针进样，每一个分子离子峰的出峰时间都外加碰撞能量轰击；但是，为了不让时间上相邻的物质产生干扰，也可以重复操作步骤c，直到将所有的物质检测完为止。
表1环二肽名称、分子式、母离子、子离子、碰撞能量
| 名称 | 分子式 | M+(m/z) | MS/MS特征子离子 | 碰撞能量(v) |
| 环(丙氨酸-脯氨酸) | C8H12N2O2 | 169.0971 | 70.0660，44.0505 | 20 |
| 环(二氨基丁酸) | C8H14N2O2 | 171.1128 | 86.0607 | 5 |
| 环(亮氨酸-丙氨酸) | C9H16N2O2 | 185.1285 | 86.0972，44.0505 | 20 |
| 环(异亮氨酸-缬氨酸) | C11H20N2O2 | 213.1598 | 72.0814，86.0980 | 15 |
| 环(苏氨酸-脯氨酸) | C9H14N2O3 | 199.1077 | 70.0659，74.0605 | 20 |
| 环(脯氨酸-苯丙氨酸) | C14H16N2O2 | 245.1285 | 70.0660，120.0807 | 15 |
| 环(苯丙氨酸-丙氨酸) | C12H14N2O2 | 219.1128 | 44.0505，120.0807 | 20 |
| 环(亮氨酸-异亮氨酸) | C12H22N2O2 | 227.1754 | 86.0972 | 15 |
| 环(缬氨酸-缬氨酸) | C10H18N2O2 | 199.1441 | 100.0762 | 5 |
| 环(酪氨酸-脯氨酸) | C14H16N2O3 | 261.1234 | 70.0660，136.0759 | 15 |
| 环(苯丙氨酸-缬氨酸) | C14H18N2O2 | 247.1441 | 72.0816，120.0807 | 10 |
| 环(脯氨酸-亮氨酸) | C11H19N2O2 | 211.1441 | 70.0660，86.0969 | 15 |
| 环(二苯丙氨酸) | C18H18N2O2 | 295.1441 | 120.0807 | 15 |
实施例1
a、取浓香型白酒样品50mL(52°浓香型白酒)，过SPEC18柱后，再用50mL甲醇洗脱，洗脱液于40℃浓缩至2mL，得待测样品；
b、将步骤a的待测样品上样至液相-质谱(LC-QTOF)联用仪，质谱全离子扫描后，得到全离子扫描图(见图1)，通过全离子扫描峰，初步判断有环(丙氨酸-脯氨酸)、环(二氨基丁酸)、环(亮氨酸-丙氨酸)、环(异亮氨酸-缬氨酸)、环(苏氨酸-脯氨酸)、环(脯氨酸-苯丙氨酸)、环(苯丙氨酸-丙氨酸)、环(亮氨酸-异亮氨酸)、环(缬氨酸-缬氨酸)、环(酪氨酸-脯氨酸)、环(苯丙氨酸-缬氨酸)、环(脯氨酸-亮氨酸)、环(二苯丙氨酸)存在；
其中，液相色谱条件：色谱柱：AgilentEclipsePlusC182.1*100mm1.8-micron；柱温：30℃；进样量：5uL；流动相：A：0.1％甲酸水溶液，B：甲醇；流速：0.1mL/min；梯度洗脱方式：0-18min：10～100％B；18.1-26min：100％B；26.1-30min：100～10％B；30.1-32min：10％B；32min，停止；
质谱条件为：电喷雾离子源；正离子扫描；全离子扫描；离子源温度：300℃；雾化气压力：35psig；干燥气流量：10L/min；毛细管电压：4000V；毛细管出口电压：90V；
c、再将步骤a的待测样品上样至液相-质谱(LC-QTOF)联用仪，针对每一种可能存在的环二肽，通过选择离子检测后，得到特征离子峰(见图2-14)；
其中，液相色谱条件：色谱柱：AgilentEclipsePlusC182.1*100mm1.8-micron；柱温：30℃；进样量：5uL；流动相：A：0.1％甲酸水溶液，B：甲醇；流速：0.1mL/min；梯度洗脱方式：0-18min：10～100％B；18.1-26min：100％B；26.1-30min：100～10％B；30.1-32min：10％B；32min，停止；
质谱条件为：电喷雾离子源；正离子扫描；选择离子检测；离子源温度：300℃；雾化气压力：35psig；干燥气流量：10L/min；毛细管电压：4000V；毛细管出口电压：90V；
控制碰撞能量见表1；
d、根据步骤c得到的特征离子峰，进一步证明白酒中存在环(丙氨酸-脯氨酸)、环(二氨基丁酸)、环(亮氨酸-丙氨酸)、环(异亮氨酸-缬氨酸)、环(苏氨酸-脯氨酸)、环(脯氨酸-苯丙氨酸)、环(苯丙氨酸-丙氨酸)、环(亮氨酸-异亮氨酸)、环(缬氨酸-缬氨酸)、环(酪氨酸-脯氨酸)、环(苯丙氨酸-缬氨酸)、环(脯氨酸-亮氨酸)、环(二苯丙氨酸)存在。
经过上述步骤检测到此浓香型白酒酒样中的环二肽化合物有环(丙氨酸-脯氨酸)、环(二氨基丁酸)、环(亮氨酸-丙氨酸)、环(异亮氨酸-缬氨酸)、环(苏氨酸-脯氨酸)、环(脯氨酸-苯丙氨酸)、环(苯丙氨酸-丙氨酸)、环(亮氨酸-异亮氨酸)、环(缬氨酸-缬氨酸)、环(酪氨酸-脯氨酸)、环(苯丙氨酸-缬氨酸)、环(脯氨酸-亮氨酸)、环(二苯丙氨酸)。
图1为52°浓香型白酒样品全扫描色谱图，图2至图14为52°浓香型白酒样品中检出的目标物的二级质谱图。
实施例2
a、取清香型白酒样品100mL(53°清香型白酒)，过SPEC18柱后，再用50mL甲醇洗脱，洗脱液于30℃浓缩至2mL，得待测样品；
b、将步骤a的待测样品上样至液相-质谱(LC-QTOF)联用仪，质谱全离子扫描后，得到全离子扫描图(见图15)，通过全离子扫描峰，初步判断有环(丙氨酸-脯氨酸)、环(苯丙氨酸-丙氨酸)、环(亮氨酸-异亮氨酸)、环(酪氨酸-脯氨酸)、环(苯丙氨酸-缬氨酸)、环(脯氨酸-亮氨酸)、环(二苯丙氨酸)存在；
其中，液相色谱条件：色谱柱：AgilentEclipsePlusC182.1*100mm1.8-micron；柱温：25℃；进样量：10uL；流动相：A：0.1％甲酸水溶液，B：甲醇；流速：0.1mL/min；梯度洗脱方式：0-18min：10～100％B；18.1-26min：100％B；26.1-30min：100～10％B；30.1-32min：10％B；32min，停止；
质谱条件：电喷雾离子源；正离子扫描；全离子扫描；离子源温度：325℃；雾化气压力：40psig；干燥气流量：5L/min；毛细管电压：4000V；毛细管出口电压：150V；
c、再将步骤a的待测样品上样至液相-质谱(LC-QTOF)联用仪，针对每一种可能存在的环二肽，通过选择离子检测后，得到特征离子峰(见图16-22)；
其中，液相色谱条件：色谱柱：AgilentEclipsePlusC182.1*100mm1.8-micron；柱温：25℃；进样量：10uL；流动相：A：0.1％甲酸水溶液，B：甲醇；流速：0.1mL/min；梯度洗脱方式：0-18min：10～100％B；18.1-26min：100％B；26.1-30min：100～10％B；30.1-32min：10％B；32min，停止；
质谱条件为：电喷雾离子源；正离子扫描；选择离子检测；离子源温度：325℃；雾化气压力：40psig；干燥气流量：5L/min；毛细管电压：4000V；毛细管出口电压：150V；
控制碰撞能量见表1；
d、根据步骤c得到的特征离子峰，进一步证明白酒中存在环(丙氨酸-脯氨酸)、环(苯丙氨酸-丙氨酸)、环(亮氨酸-异亮氨酸)、环(酪氨酸-脯氨酸)、环(苯丙氨酸-缬氨酸)、环(脯氨酸-亮氨酸)、环(二苯丙氨酸)。
经过上述步骤检测此清香型白酒酒样中的环二肽化合物有环(丙氨酸-脯氨酸)、环(苯丙氨酸-丙氨酸)、环(亮氨酸-异亮氨酸)、环(酪氨酸-脯氨酸)、环(苯丙氨酸-缬氨酸)、环(脯氨酸-亮氨酸)、环(二苯丙氨酸)。
图15为53°清香型白酒样品全扫描色谱图，图16至图22为53°清香型白酒样品中检出的目标物的二级质谱图。
实施例3
a、取酱香型白酒样品20mL(53°酱香型白酒)，过SPEC18柱后，再用50mL甲醇洗脱，洗脱液于60℃浓缩至2mL，得待测样品；
b、将步骤a的待测样品上样至液相-质谱(LC-QTOF)联用仪，质谱全离子扫描后，得到全离子扫描图(见图23)，通过全离子扫描峰，初步判断有环(丙氨酸-脯氨酸)、环(二氨基丁酸)、环(亮氨酸-丙氨酸)、环(异亮氨酸-缬氨酸)、环(苏氨酸-脯氨酸)、环(脯氨酸-苯丙氨酸)、环(苯丙氨酸-丙氨酸)、环(亮氨酸-异亮氨酸)、环(缬氨酸-缬氨酸)、环(酪氨酸-脯氨酸)、环(苯丙氨酸-缬氨酸)、环(脯氨酸-亮氨酸)、环(二苯丙氨酸)；
其中，液相色谱条件：色谱柱：AgilentEclipsePlusC182.1*100mm1.8-micron；柱温：20℃；进样量：1uL；流动相：A：0.1％甲酸水溶液，B：甲醇；流速：0.1mL/min；梯度洗脱方式：0-18min：10～100％B；18.1-26min：100％B；26.1-30min：100～10％B；30.1-32min：10％B；32min，停止；
质谱条件：电喷雾离子源；正离子扫描；全离子扫描；离子源温度：280℃；雾化气压力：30psig；干燥气流量：12L/min；毛细管电压：4000V；毛细管出口电压：60V；
c、再将步骤a的待测样品上样至液相-质谱(LC-QTOF)联用仪，针对每一种可能存在的环二肽，通过选择离子检测后，得到特征离子峰(见图24-36)；
其中，液相色谱条件：液相色谱条件：色谱柱：AgilentEclipsePlusC182.1*100mm1.8-micron；柱温：20℃；进样量：1uL；流动相：A：0.1％甲酸水溶液，B：甲醇；流速：0.1mL/min；梯度洗脱方式：0-18min：10～100％B；18.1-26min：100％B；26.1-30min：100～10％B；30.1-32min：10％B；32min，停止；
质谱条件为：电喷雾离子源；正离子扫描；选择离子检测；离子源温度：280℃；雾化气压力：30psig；干燥气流量：12L/min；毛细管电压：4000V；毛细管出口电压：60V；
控制碰撞能量见表1；
d、根据步骤c得到的特征离子峰，进一步证明白酒中存在环(丙氨酸-脯氨酸)、环(二氨基丁酸)、环(亮氨酸-丙氨酸)、环(异亮氨酸-缬氨酸)、环(苏氨酸-脯氨酸)、环(脯氨酸-苯丙氨酸)、环(苯丙氨酸-丙氨酸)、环(亮氨酸-异亮氨酸)、环(缬氨酸-缬氨酸)、环(酪氨酸-脯氨酸)、环(苯丙氨酸-缬氨酸)、环(脯氨酸-亮氨酸)、环(二苯丙氨酸)。
经过上述步骤检测此酱香型白酒酒样中的环二肽化合物有环(丙氨酸-脯氨酸)、环(二氨基丁酸)、环(亮氨酸-丙氨酸)、环(异亮氨酸-缬氨酸)、环(苏氨酸-脯氨酸)、环(脯氨酸-苯丙氨酸)、环(苯丙氨酸-丙氨酸)、环(亮氨酸-异亮氨酸)、环(缬氨酸-缬氨酸)、环(酪氨酸-脯氨酸)、环(苯丙氨酸-缬氨酸)、环(脯氨酸-亮氨酸)、环(二苯丙氨酸)。
图23为53°酱香型白酒酒样品全扫描色谱图，图24至图36为53°酱香型白酒酒样品中检出的目标物的二级质谱图。
Claims (3)
1.一种测定白酒中环二肽的方法，其特征在于：包括以下步骤：
a、取白酒酒样，过SPEC18柱后，再用甲醇洗脱，洗脱液在温度不高于60℃下浓缩至原白酒酒样体积的1/50～1/10，得待测样品；
b、将步骤a的待测样品上样至LC-QTOF联用仪，质谱全离子扫描后，通过全离子扫描峰，初步得出可能存在的环二肽；
c、再将步骤a的待测样品上样至LC-QTOF联用仪，针对每一种步骤b初步得出可能存在的环二肽，通过选择离子检测后，得到特征离子峰；
d、根据步骤c得到的特征离子峰，进一步证明白酒中是否存在步骤b初步得出的环二肽，最后得出结论；
所述的环二肽为环(丙氨酸-脯氨酸)、环(二氨基丁酸)、环(亮氨酸-丙氨酸)、环(异亮氨酸-缬氨酸)、环(苏氨酸-脯氨酸)、环(脯氨酸-苯丙氨酸)、环(苯丙氨酸-丙氨酸)、环(亮氨酸-异亮氨酸)、环(缬氨酸-缬氨酸)、环(酪氨酸-脯氨酸)、环(苯丙氨酸-缬氨酸)、环(脯氨酸-亮氨酸)或环(二苯丙氨酸)；
液相色谱条件为：流动相：A为0.1％甲酸水溶液，B为甲醇，梯度洗脱为：0-18min：10～100％B；18.1-26min：100％B；26.1-30min：100～10％B；30.1-32min：10％B；32min：停止；色谱柱为C18柱，柱长100mm，内径2.1mm，柱温20～30℃，流速0.1mL/min，进样量1～10μL；
步骤b中，质谱条件为：电喷雾离子源，正模式，全离子扫描，离子源温度280～325℃，干燥气流量5～12mL/min，雾化气压力30～40psig，毛细管电压4000V，毛细管出口电压60～150V；
步骤c中，质谱条件为：电喷雾离子源，正模式，选择离子检测，离子源温度280～325℃，干燥气流量5～12mL/min，雾化气压力30～40psig，毛细管电压4000V，毛细管出口电压60～150V。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：当步骤b中出现的两个分子离子峰的相隔时间小于1min时，在步骤c进行选择离子检测时，对其中一个进行检测，再重复操作步骤c，对另一个进行检测。
3.根据权利要求1或2任一项所述的方法，其特征在于：当步骤b中初步判断某一时间的峰为某种环二肽的分子离子峰时，步骤c中，则在此时间正负0.5min内用此种环二肽相应的碰撞能量进行选择离子检测。
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Citations (2)
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Non-Patent Citations (7)
| Title |
|---|
| Antifungal compounds from cultures of dairy Propionibacteria type strains;Helena Lind et al;《FEMS Microbiology Letters》;20070630;第271卷(第2期);310-315 * |
| Improvement of the quality and shelf life of wheat bread by fermentation with the antifungal strain Lactobacillus plantarum FST 1.7;F.DalBello et al;《Journal of Cereal Science》;20070531;第45卷(第3期);309-318 * |
| L-羟脯氨酸寡肽混合物的高效液相色谱分离与质谱分析;孙艳亭 等;《色谱》;20070730;第25卷(第4期);524-527 * |
| Structural and Biochemical Characterization of the Cytochrome P450 CypX (CYP134A1) from Bacillus subtilis:A Cyclo-l-leucyl-l-leucyl Dipeptide Oxidase;Max J. Cryle et al;《Biochemistry》;20100727;第49卷(第34期);7282-7296 * |
| 从细脚拟青霉分离的新环二肽与;郑永标 等;《高等学校化学学报》;20140810;第35卷(第8期);1665-1669 * |
| 海洋细菌Roseobactersp.发酵液中化学成分的研究;孟旭鹏 等;《中国海洋药物杂志》;20090428;第28卷(第2期);6-10 * |
| 高效液相色谱-电喷雾串联质谱法确证海洋微生物产生的新环肽的连接顺序;李厚金 等;《分析测试学报》;20051025;第24卷(第5期);46-49 * |
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