CN113552276A - 一种川芎茶调滴丸的检测方法 - Google Patents
一种川芎茶调滴丸的检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113552276A CN113552276A CN202110762349.9A CN202110762349A CN113552276A CN 113552276 A CN113552276 A CN 113552276A CN 202110762349 A CN202110762349 A CN 202110762349A CN 113552276 A CN113552276 A CN 113552276A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- taking
- test
- methanol
- ethyl acetate
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/90—Plate chromatography, e.g. thin layer or paper chromatography
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
Abstract
本发明涉及一种川芎茶调滴丸的检测方法，检测方法包括对滴丸中川芎、羌活药材的薄层鉴别检查，对滴丸中阿魏酸含量的测定。通过方法学考察，该检测方法具有专属性强、耐用性好、良好的回收率等效果，能有效的检测川芎茶调滴丸的质量情况，进一步提高产品质量。
Description
技术领域
本发明涉及药物检测领域，具体涉及一种川芎茶调滴丸的检测方法。
背景技术
川芎茶调滴丸，为贵州健兴药业有限公司的产品，功效为疏风止痛。用于风邪头痛，或有恶寒、发热、鼻塞；擅长于治少阳、厥阴头痛，同时也用偏头痛、神经性头痛或外伤后遗症所致的头痛、大脑供血不足等。
川芎茶调滴丸收载于YBZ25332005-2009Z，标准中原有检测项目为：性状；川芎的薄层鉴别；橙皮苷薄层鉴别；防风的薄层鉴别；甘草次酸薄层鉴别；检查；甘草酸的含量测定。但是在实际检测中，发现该检测方法对存在以下缺陷：(1)川芎药材薄层鉴别主斑点较模糊、且出现拖尾现象，斑点Rf值偏小，重现性差，影响检验结果的判断；(2)原检测项目中未对羌活药材薄层鉴别进行检查；(3)检测项目中未涉及川芎和羌活药材的含量测定，不能有效控制川芎茶调滴丸成品的质量。
为了解决上述问题，有效的提高产品质量，提升川芎茶调滴丸的质量标准，本发明团队对川芎茶调滴丸原检测方法进行深入研发、考察，建立了一种用于川芎茶调滴丸的检测方法，该方法不仅解决了川芎薄层鉴别出现的斑点模糊，重现性差的问题，还研究出了利用川芎的薄层鉴别条件可以同时鉴别羌活药材，节约了检测成本，提高检测效率；为了有效的控制川芎茶调滴丸产品质量，发明团队经过了大量的实验研究，还建立了滴丸中阿魏酸含量测定的方法，进一步提高产品质量标准。
发明内容
本发明的目的是提供一种川芎茶调滴丸的检测方法。
1、本发明提供一种川芎茶调滴丸的检测方法，所述滴丸由以下处方及制法制成：
【处方】川芎244.8g 白芷122.4g 羌活122.4g 细辛61.2g
防风91.8g 薄荷489.6g 荆芥244.8g 甘草122.4g
【制法】取拣选后的川芎、羌活、细辛、防风、薄荷、荆芥药材，加8倍量60％稀乙醇浸泡2小时；再以温度70℃、蒸汽压力0.1MPa加热回流提取2次，每次1小时，收集提取液；将提取后的药物残渣与拣选后的白芷、甘草投入提取罐中，煎煮二次，第一次加10倍量的60％稀乙醇，加热至沸，保持微沸2小时，120目过滤；第二次加10倍量的水，加热至沸，保持微沸2小时，120目过滤，收集滤液；合并滤液，减压浓缩至50℃时，相对密度为1.35的稠膏；称取5倍稠膏量的基质聚乙二醇6000在油浴中加热至熔融，加入稠膏中，混匀，熔融，于85℃状态下保温，用85℃保温滴头以滴距为5cm、滴速为55滴/min滴入滴丸机中，通过温度保持在9℃冷凝剂冷凝，收缩成丸，取出，去除冷凝剂，干燥，即得；
本发明所述滴丸中川芎、羌活药材薄层鉴别方法为：取本品5g，研细，加乙酸乙酯50ml，超声处理15～25分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，取上清液作为供试品溶液；另取川芎对照药材0.3g，加60～90℃的石油醚20ml，密塞，浸渍3～5小时，时时振摇，滤过，溶液挥至约1ml，作为对照药材溶液；另取羌活对照药材0.5g，加水60ml，煎煮20～40分钟，放冷，离心5～15分钟，取上清液，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚提取液，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、两种对照药材溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以比例为7:3:2的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
优选的，
本发明所述滴丸中川芎、羌活药材薄层鉴别方法为：取本品5g，研细，加乙酸乙酯50ml，超声处理18～22分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，取上清液作为供试品溶液；另取川芎对照药材0.3g，加60～90℃的石油醚20ml，密塞，浸渍3.5～4.5小时，时时振摇，滤过，溶液挥至约1ml，作为对照药材溶液；另取羌活对照药材0.5g，加水60ml，煎煮25～35分钟，放冷，离心8～12分钟，取上清液，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚提取液，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、两种对照药材溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以比例为7:3:2的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
进一步优选的，
本发明所述滴丸中川芎、羌活药材薄层鉴别方法为：取本品5g，研细，加乙酸乙酯50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，取上清液作为供试品溶液；另取川芎对照药材0.3g，加60～90℃的石油醚20ml，密塞，浸渍4小时，时时振摇，滤过，溶液挥至约1ml，作为对照药材溶液；另取羌活对照药材0.5g，加水60ml，煎煮30分钟，放冷，离心10分钟，取上清液，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚提取液，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、两种对照药材溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以比例为7:3:2的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
本发明所述滴丸中阿魏酸含量测定的方法为：
色谱条件与系统适用性试验以色谱柱为CORTECS UPLC T3 1.8um；柱温为35℃；以比例为50：60的甲醇-0.5～1.5％醋酸溶液为流动相，检测波长为254nm，流速为0.30ml/min，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于8000；
对照品溶液的制备取阿魏酸对照品适量，精密称定，加比例为20﹕1的45％乙醇-冰醋酸混合溶液制成每1ml含10μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取本品研细，精密称定0.5g，精密加入60～80％甲醇溶液25ml，称定重量，超声30～60分钟，放冷，再称定重量，用60-80％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
优选的，
本发明所述滴丸中阿魏酸含量测定的方法为：
色谱条件与系统适用性试验以色谱柱为CORTECS UPLC T3 1.8um；柱温为35℃；以比例为50：60的甲醇-0.8～1.2％醋酸溶液为流动相，检测波长为254nm，流速为0.30ml/min，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于8000；
对照品溶液的制备取阿魏酸对照品适量，精密称定，加比例为20﹕1的45％乙醇-冰醋酸混合溶液制成每1ml含10μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取本品研细，精密称定0.5g，精密加入65～75％甲醇溶液25ml，称定重量，超声40～50分钟，放冷，再称定重量，用65～75％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
进一步优选的，
本发明所述滴丸中阿魏酸含量测定的方法为：
色谱条件与系统适用性试验以色谱柱为CORTECS UPLC T3 1.8um；柱温为35℃；以比例为50：60的甲醇-1％醋酸溶液为流动相，检测波长为254nm，流速为0.30ml/min，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于8000；
对照品溶液的制备取阿魏酸对照品适量，精密称定，加比例为20﹕1的45％乙醇-冰醋酸混合溶液制成每1ml含10μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取本品研细，精密称定0.5g，精密加入70％甲醇溶液25ml，称定重量，超声45分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本发明所述色谱条件与系统适用性试验中，所述甲醇，浓度为60～80％。
本发明所述色谱条件与系统适用性试验中，所述甲醇，浓度为65～75％。
本发明所述色谱条件与系统适用性试验中，所述甲醇，浓度为70％。
有益效果：
1、本发明在川芎茶调滴丸原有检测项目的基础上，优化了川芎药材的薄层鉴别，新增了羌活药材的薄层鉴别和阿魏酸含量测定，更有利于保证产品的质量，提升了检测的标准；且可在同一薄层条件下同时检测滴丸中川芎和羌活药材的薄层鉴别，节药成本，缩短检测时间。
2、本发明川芎和羌活药材的薄层鉴别方法，通过了提取溶剂、提取方式、提取时间、展开剂及比例进行了筛选实验，得到了在同一色谱条件下可同时鉴别川芎和羌活的药材，该方法检测结果斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好；并通过了方法学考察，表明不同湿度条件下，用高效薄层板和硅胶G商品板进行试验，色谱图斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，验证试验表明重现性好、耐用性好，进一步证明了该薄层鉴别方法的准确性和可靠性。
3、本发明根据川芎茶调丸的质量标准，对阿魏酸含量测定方法进行了流动相及梯度、样品提取方式及提取时间、色谱柱规格等进行筛选，得到了阿魏酸含量测定方法的优选方法，该方法出峰时间快、峰形好，分离度、峰纯度均合格，且准确度高，稳定性好，操作简便快捷。
4、本发明通过阿魏酸含量检测方法优化前和优化后的对比试验，结果优化前方法中，阿魏酸相邻峰的分离度均大于1.5，但阿魏酸未能与相邻峰达到基线分离，且阿魏酸峰的纯度角度未均小于纯度阈值；优化后方法中，阿魏酸峰与相邻峰的分离度均大于2.0，达到基线分离，且对称因子明显降低，峰形较好，阿魏酸峰的纯度角度均小于纯度阈值，所以“优化方法”更适用于川芎茶调滴丸中阿魏酸的含量检测。
5、本发明阿魏酸含量检测方法通过了方法学验证考察，在系统适用性确认中，结果显示阿魏酸峰面积的相对标准偏差(RSD)小于2.0％；保留时间的相对标准偏差(RSD)小于1.0％；理论塔板数均大于8000；分离度均大于1.5；故阿魏酸含量测定方法符合系统适用性要求；在专属性考察中，结果显示空白溶剂对各峰出峰位置处无干扰，本方法测定的含量具有专属性；按照规定色谱条件以PDA检测器进行190nm～400nm扫描检测，计算峰纯度，结果显示各待测峰的纯度角均小于纯度阈值，纯度符合要求；在精密度考察中，结果显示6份样品含量结果，RSD为0.97％，中间精密度考察结果，RSD为1.4％，表明重复性考察、中间精密度均符合要求；在加样回收率试验中，结果表明阿魏酸的回收率为98.72％，RSD为0.89％，说明本法有良好的回收率；线性关系的考察中，结果表明阿魏酸进样浓度在10μg/ml～500μg/ml范围内呈良好的线性关系，线性方程为Y＝2826.4x+103.01，R2＝0.9998；在耐用性、流速变化试验、不同色谱柱试验、被测溶液的稳定性试验考察中，结果RSD值均合格，表明被测溶液阿魏酸峰面积24h内RSD均小于2％，故被测溶液在24h内均稳定。
6、本发明根据重复性试验结果，6份样品中阿魏酸的平均含量为0.3212mg/g，暂定川芎茶调滴丸中阿魏酸含量标准为0.5mg/袋。
具体实施方式
实施例1
【处方】川芎244.8g、白芷122.4g、羌活122.4g、细辛61.2g、防风91.8g、薄荷489.6g、荆芥244.8g、甘草122.4g。
【制法】以上八味，川芎、羌活、细辛、防风、薄荷、荆芥进行水蒸气蒸馏，收集挥发油；蒸馏后的水溶液别器收集；药渣与白芷、甘草加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，加入蒸馏后的水溶液，浓缩至70℃时相对密度为1.15的清膏，冷却至室温，浓缩液加乙醇使含醇量达70％，搅匀，冷藏24小时，吸取上清液，回收乙醇，减压浓缩至70℃时相对密度为1.20的稠膏，取聚乙二醇6000加热熔融，依次加入上述浸膏、挥发油，搅匀，制成滴丸1000g，即得；
【鉴别】
(1)取本品5g，研细，加乙酸乙酯50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，取上清液作为供试品溶液；另取川芎对照药材0.3g，加60～90℃的石油醚20ml，密塞，浸渍4小时，时时振摇，滤过，溶液挥至约1ml，作为对照药材溶液；另取羌活对照药材0.5g，加水60ml，煎煮30分钟，放冷，离心10分钟，取上清液，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚提取液，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、两种对照药材溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以比例为7:3:2的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(2)取本品5g，研细，加水50ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次50ml，分取水液，用乙酸乙酯提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，水液再加水饱和正丁醇提取3次，每次40ml，合并正丁醇液，加正丁醇饱和的水洗涤2次，每次40ml，弃去洗液，正丁醇液蒸干，加水20ml使溶解，加入活性炭0.1g，加热煮沸脱色，趁热抽滤，滤液蒸干，加甲醇1ml使溶解，离心，取上清液作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一含0.5％氢氧化钠的羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(20﹕3﹕2)为展开剂，20℃以下展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铝乙醇溶液，热风吹干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(3)取本品5g，研细，加水50ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次50ml，分取水液，用乙酸乙酯提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，加丙酮30ml使溶解，滤过，滤液蒸干，加水20ml使溶解，加乙酸乙酯提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取防风对照药材0.5g,加丙酮20ml，加热回流20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，离心，取上清液作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、对照药材溶液2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(4﹕1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(4)取本品5g，研碎，加三氯甲烷30ml，超声提取10分钟，倾去三氯甲烷液，沉淀加水10ml，加热使溶解，离心，取上清液作为供试品溶液。另取甘草次酸对照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μll，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以石油醚(30～60℃)-环己烷-乙酸乙酯-冰乙酸(4﹕8﹕8﹕0.5)为展开剂，置20℃以下展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
【检查】符合滴丸项下有关的各项规定。
【含量测定】甘草酸
供试品溶液的制备取装量差异项下本品，研细，取1.2g，精密称定，加流动相40ml超声使溶解，滤过，滤纸及容器用少量流动相洗涤，滤液蒸至近干，残渣加流动相溶解并定容于10ml量瓶中，摇匀，即得。
对照品溶液的制备精密称取甘草酸单铵盐对照品10mg，置50ml量瓶中，用流动相溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含甘草酸单铵盐对照品0.2mg，折合甘草酸为0.1959mg)。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每袋含甘草以甘草酸(C42H62O16)计，不得少于1.60mg。
【含量测定】阿魏酸
色谱条件与系统适用性试验以色谱柱为CORTECS UPLC T3 1.8um；柱温为35℃；以比例为50：60的70％甲醇-1％醋酸溶液为流动相，检测波长为254nm，流速为0.30ml/min，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于8000；
对照品溶液的制备取阿魏酸对照品适量，精密称定，加比例为20﹕1的45％乙醇-冰醋酸混合溶液制成每1ml含10μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取本品研细，精密称定0.5g，精密加入70％甲醇溶液25ml，称定重量，超声45分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每袋含川芎和羌活以阿魏酸(C10H10O4)计，不得少于0.5mg。
【功能与主治】疏风止痛。用于风邪头痛，或有恶寒、发热、鼻塞。
【用法与用量】口服，一次1袋，一日3次。
【规格】每袋装2g
【贮藏】密封。
【有效期】30个月
实施例2
【处方】川芎244.8g、白芷122.4g、羌活122.4g、细辛61.2g、防风91.8g、薄荷489.6g、荆芥244.8g、甘草122.4g。
【制法】以上八味，川芎、羌活、细辛、防风、薄荷、荆芥进行水蒸气蒸馏，收集挥发油；蒸馏后的水溶液别器收集；药渣与白芷、甘草加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，加入蒸馏后的水溶液，浓缩至70℃时相对密度为1.10的清膏，冷却至室温，浓缩液加乙醇使含醇量达70％，搅匀，冷藏24小时，吸取上清液，回收乙醇，减压浓缩至70℃时相对密度为1.25的稠膏，取聚乙二醇6000加热熔融，依次加入上述浸膏、挥发油，搅匀，制成滴丸1000g，即得；
【鉴别】
(1)取本品5g，研细，加乙酸乙酯50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，取上清液作为供试品溶液；另取川芎对照药材0.3g，加60～90℃的石油醚20ml，密塞，浸渍4小时，时时振摇，滤过，溶液挥至约1ml，作为对照药材溶液；另取羌活对照药材0.5g，加水60ml，煎煮30分钟，放冷，离心10分钟，取上清液，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚提取液，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、两种对照药材溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以比例为7:3:2的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(2)取本品5g，研细，加水50ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次50ml，分取水液，用乙酸乙酯提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，水液再加水饱和正丁醇提取3次，每次40ml，合并正丁醇液，加正丁醇饱和的水洗涤2次，每次40ml，弃去洗液，正丁醇液蒸干，加水20ml使溶解，加入活性炭0.1g，加热煮沸脱色，趁热抽滤，滤液蒸干，加甲醇1ml使溶解，离心，取上清液作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一含0.5％氢氧化钠的羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(20﹕3﹕2)为展开剂，20℃以下展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铝乙醇溶液，热风吹干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(3)取本品5g，研细，加水50ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次50ml，分取水液，用乙酸乙酯提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，加丙酮30ml使溶解，滤过，滤液蒸干，加水20ml使溶解，加乙酸乙酯提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取防风对照药材0.5g,加丙酮20ml，加热回流20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，离心，取上清液作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、对照药材溶液2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(4﹕1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(4)取本品5g，研碎，加三氯甲烷30ml，超声提取10分钟，倾去三氯甲烷液，沉淀加水10ml，加热使溶解，离心，取上清液作为供试品溶液。另取甘草次酸对照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μll，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以石油醚(30～60℃)-环己烷-乙酸乙酯-冰乙酸(4﹕8﹕8﹕0.5)为展开剂，置20℃以下展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
【检查】符合滴丸项下有关的各项规定。
【含量测定】甘草酸
供试品溶液的制备取装量差异项下本品，研细，取1.2g，精密称定，加流动相40ml超声使溶解，滤过，滤纸及容器用少量流动相洗涤，滤液蒸至近干，残渣加流动相溶解并定容于10ml量瓶中，摇匀，即得。
对照品溶液的制备精密称取甘草酸单铵盐对照品10mg，置50ml量瓶中，用流动相溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含甘草酸单铵盐对照品0.2mg，折合甘草酸为0.1959mg)。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每袋含甘草以甘草酸(C42H62O16)计，不得少于1.60mg。
【含量测定】阿魏酸
色谱条件与系统适用性试验以色谱柱为CORTECS UPLC T3 1.8um；柱温为35℃；以比例为50：60的70％甲醇-1％醋酸溶液为流动相，检测波长为254nm，流速为0.30ml/min，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于8000；
对照品溶液的制备取阿魏酸对照品适量，精密称定，加比例为20﹕1的45％乙醇-冰醋酸混合溶液制成每1ml含10μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取本品研细，精密称定0.5g，精密加入70％甲醇溶液25ml，称定重量，超声45分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每袋含川芎和羌活以阿魏酸(C10H10O4)计，不得少于0.5mg。
【功能与主治】疏风止痛。用于风邪头痛，或有恶寒、发热、鼻塞。
【用法与用量】口服，一次1袋，一日3次。
【规格】每袋装2g
【贮藏】密封。
【有效期】30个月。
实施例3
【处方】川芎244.8g、白芷122.4g、羌活122.4g、细辛61.2g、防风91.8g、薄荷489.6g、荆芥244.8g、甘草122.4g。
【制法】以上八味，川芎、羌活、细辛、防风、薄荷、荆芥进行水蒸气蒸馏，收集挥发油；蒸馏后的水溶液别器收集；药渣与白芷、甘草加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，加入蒸馏后的水溶液，浓缩至70℃时相对密度为1.20的清膏，冷却至室温，浓缩液加乙醇使含醇量达70％，搅匀，冷藏24小时，吸取上清液，回收乙醇，减压浓缩至70℃时相对密度为1.30的稠膏，取聚乙二醇6000加热熔融，依次加入上述浸膏、挥发油，搅匀，制成滴丸1000g，即得；
【鉴别】
(1)取本品5g，研细，加乙酸乙酯50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，取上清液作为供试品溶液；另取川芎对照药材0.3g，加60～90℃的石油醚20ml，密塞，浸渍4小时，时时振摇，滤过，溶液挥至约1ml，作为对照药材溶液；另取羌活对照药材0.5g，加水60ml，煎煮30分钟，放冷，离心10分钟，取上清液，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚提取液，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、两种对照药材溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以比例为7:3:2的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(2)取本品5g，研细，加水50ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次50ml，分取水液，用乙酸乙酯提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，水液再加水饱和正丁醇提取3次，每次40ml，合并正丁醇液，加正丁醇饱和的水洗涤2次，每次40ml，弃去洗液，正丁醇液蒸干，加水20ml使溶解，加入活性炭0.1g，加热煮沸脱色，趁热抽滤，滤液蒸干，加甲醇1ml使溶解，离心，取上清液作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一含0.5％氢氧化钠的羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(20﹕3﹕2)为展开剂，20℃以下展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铝乙醇溶液，热风吹干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(3)取本品5g，研细，加水50ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次50ml，分取水液，用乙酸乙酯提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，加丙酮30ml使溶解，滤过，滤液蒸干，加水20ml使溶解，加乙酸乙酯提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取防风对照药材0.5g,加丙酮20ml，加热回流20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，离心，取上清液作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、对照药材溶液2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(4﹕1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(4)取本品5g，研碎，加三氯甲烷30ml，超声提取10分钟，倾去三氯甲烷液，沉淀加水10ml，加热使溶解，离心，取上清液作为供试品溶液。另取甘草次酸对照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μll，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以石油醚(30～60℃)-环己烷-乙酸乙酯-冰乙酸(4﹕8﹕8﹕0.5)为展开剂，置20℃以下展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
【检查】合滴丸项下有关的各项规定。
【含量测定】甘草酸
供试品溶液的制备取装量差异项下本品，研细，取1.2g，精密称定，加流动相40ml超声使溶解，滤过，滤纸及容器用少量流动相洗涤，滤液蒸至近干，残渣加流动相溶解并定容于10ml量瓶中，摇匀，即得。
对照品溶液的制备精密称取甘草酸单铵盐对照品10mg，置50ml量瓶中，用流动相溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含甘草酸单铵盐对照品0.2mg，折合甘草酸为0.1959mg)。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每袋含甘草以甘草酸(C42H62O16)计，不得少于1.60mg。
【含量测定】阿魏酸
色谱条件与系统适用性试验以色谱柱为CORTECS UPLC T3 1.8um；柱温为35℃；以比例为50：60的70％甲醇-1％醋酸溶液为流动相，检测波长为254nm，流速为0.30ml/min，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于8000；
对照品溶液的制备取阿魏酸对照品适量，精密称定，加比例为20﹕1的45％乙醇-冰醋酸混合溶液制成每1ml含10μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取本品研细，精密称定0.5g，精密加入70％甲醇溶液25ml，称定重量，超声45分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每袋含川芎和羌活以阿魏酸(C10H10O4)计，不得少于0.5mg。
【功能与主治】疏风止痛。用于风邪头痛，或有恶寒、发热、鼻塞。
【用法与用量】口服，一次1袋，一日3次。
【规格】每袋装2g
【贮藏】密封。
【有效期】30个月
实施例4
【处方】川芎244.8g、白芷122.4g、羌活122.4g、细辛61.2g、防风91.8g、薄荷489.6g、荆芥244.8g、甘草122.4g。
【制法】以上八味，川芎、羌活、细辛、防风、薄荷、荆芥进行水蒸气蒸馏，收集挥发油；蒸馏后的水溶液别器收集；药渣与白芷、甘草加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，加入蒸馏后的水溶液，浓缩至70℃时相对密度为1.10的清膏，冷却至室温，浓缩液加乙醇使含醇量达70％，搅匀，冷藏24小时，吸取上清液，回收乙醇，减压浓缩至70℃时相对密度为1.25的稠膏，取聚乙二醇6000加热熔融，依次加入上述浸膏、挥发油，搅匀，制成滴丸1000g，即得；
【鉴别】
(1)取本品5g，研细，加乙酸乙酯50ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，取上清液作为供试品溶液；另取川芎对照药材0.3g，加60～90℃的石油醚20ml，密塞，浸渍3小时，时时振摇，滤过，溶液挥至约1ml，作为对照药材溶液；另取羌活对照药材0.5g，加水60ml，煎煮20分钟，放冷，离心5分钟，取上清液，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚提取液，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、两种对照药材溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以比例为7:3:2的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
鉴别(2)、(3)、(4)，同实施例1。
【检查】符合滴丸项下有关的各项规定。
【含量测定】甘草酸同实施例1。
【含量测定】阿魏酸
色谱条件与系统适用性试验以色谱柱为CORTECS UPLC T3 1.8um；柱温为35℃；以比例为50：60的60％甲醇-0.5％醋酸溶液为流动相，检测波长为254nm，流速为0.30ml/min，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于8000；
对照品溶液的制备取阿魏酸对照品适量，精密称定，加比例为20﹕1的45％乙醇-冰醋酸混合溶液制成每1ml含10μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取本品研细，精密称定0.5g，精密加入60％甲醇溶液25ml，称定重量，超声30分钟，放冷，再称定重量，用80％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品每袋含川芎和羌活以阿魏酸(C10H10O4)计，不得少于0.5mg。
【功能与主治】疏风止痛。用于风邪头痛，或有恶寒、发热、鼻塞。
【用法与用量】口服，一次1袋，一日3次。
【规格】每袋装2g
【贮藏】密封。
【有效期】30个月
实施例5
【处方】川芎244.8g、白芷122.4g、羌活122.4g、细辛61.2g、防风91.8g、薄荷489.6g、荆芥244.8g、甘草122.4g。
【制法】以上八味，川芎、羌活、细辛、防风、薄荷、荆芥进行水蒸气蒸馏，收集挥发油；蒸馏后的水溶液别器收集；药渣与白芷、甘草加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，加入蒸馏后的水溶液，浓缩至70℃时相对密度为1.20的清膏，冷却至室温，浓缩液加乙醇使含醇量达70％，搅匀，冷藏24小时，吸取上清液，回收乙醇，减压浓缩至70℃时相对密度为1.30的稠膏，取聚乙二醇6000加热熔融，依次加入上述浸膏、挥发油，搅匀，制成滴丸1000g，即得；
【鉴别】
(1)取本品5g，研细，加乙酸乙酯50ml，超声处理25分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，取上清液作为供试品溶液；另取川芎对照药材0.3g，加60～90℃的石油醚20ml，密塞，浸渍5小时，时时振摇，滤过，溶液挥至约1ml，作为对照药材溶液；另取羌活对照药材0.5g，加水60ml，煎煮40分钟，放冷，离心15分钟，取上清液，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚提取液，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、两种对照药材溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以比例为7:3:2的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
鉴别(2)、(3)、(4)，同实施例1。
【检查】符合滴丸项下有关的各项规定。
【含量测定】甘草酸同实施例1。
【含量测定】阿魏酸
色谱条件与系统适用性试验以色谱柱为CORTECS UPLC T3 1.8um；柱温为35℃；以比例为50：60的80％甲醇-1.5％醋酸溶液为流动相，检测波长为254nm，流速为0.30ml/min，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于8000；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为50：60的80％甲醇-1.5％醋酸溶液为流动相；检测波长为254nm，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于8000；
对照品溶液的制备取阿魏酸对照品适量，精密称定，加比例为20﹕1的45％乙醇-冰醋酸混合溶液制成每1ml含10μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取本品研细，精密称定0.5g，精密加入80％甲醇溶液25ml，称定重量，超声60分钟，放冷，再称定重量，用80％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每袋含川芎和羌活以阿魏酸(C10H10O4)计，不得少于0.5mg。
【功能与主治】疏风止痛。用于风邪头痛，或有恶寒、发热、鼻塞。
【用法与用量】口服，一次1袋，一日3次。
【规格】每袋装2g
【贮藏】密封。
【有效期】30个月
实施例6
【处方】川芎244.8g、白芷122.4g、羌活122.4g、细辛61.2g、防风91.8g、薄荷489.6g、荆芥244.8g、甘草122.4g。
【制法】以上八味，川芎、羌活、细辛、防风、薄荷、荆芥进行水蒸气蒸馏，收集挥发油；蒸馏后的水溶液别器收集；药渣与白芷、甘草加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，加入蒸馏后的水溶液，浓缩至70℃时相对密度为1.10的清膏，冷却至室温，浓缩液加乙醇使含醇量达70％，搅匀，冷藏24小时，吸取上清液，回收乙醇，减压浓缩至70℃时相对密度为1.25的稠膏，取聚乙二醇6000加热熔融，依次加入上述浸膏、挥发油，搅匀，制成滴丸1000g，即得；
【鉴别】
(1)取本品5g，研细，加乙酸乙酯50ml，超声处理18分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，取上清液作为供试品溶液；另取川芎对照药材0.3g，加60～90℃的石油醚20ml，密塞，浸渍3.5小时，时时振摇，滤过，溶液挥至约1ml，作为对照药材溶液；另取羌活对照药材0.5g，加水60ml，煎煮25分钟，放冷，离心8分钟，取上清液，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚提取液，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、两种对照药材溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以比例为7:3:2的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
鉴别(2)、(3)、(4)，同实施例1。
【检查】符合滴丸项下有关的各项规定。
【含量测定】甘草酸同实施例1。
【含量测定】阿魏酸
色谱条件与系统适用性试验以色谱柱为CORTECS UPLC T3 1.8um；柱温为35℃；以比例为50：60的65％甲醇-0.8％醋酸溶液为流动相，检测波长为254nm，流速为0.30ml/min，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于8000；
对照品溶液的制备取阿魏酸对照品适量，精密称定，加比例为20﹕1的45％乙醇-冰醋酸混合溶液制成每1ml含10μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取本品研细，精密称定0.5g，精密加入65％甲醇溶液25ml，称定重量，超声35分钟，放冷，再称定重量，用65％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每袋含川芎和羌活以阿魏酸(C10H10O4)计，不得少于0.5mg。
【功能与主治】疏风止痛。用于风邪头痛，或有恶寒、发热、鼻塞。
【用法与用量】口服，一次1袋，一日3次。
【规格】每袋装2g
【贮藏】密封。
【有效期】30个月
实施例7
【处方】川芎244.8g、白芷122.4g、羌活122.4g、细辛61.2g、防风91.8g、薄荷489.6g、荆芥244.8g、甘草122.4g。
【制法】以上八味，川芎、羌活、细辛、防风、薄荷、荆芥进行水蒸气蒸馏，收集挥发油；蒸馏后的水溶液别器收集；药渣与白芷、甘草加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，加入蒸馏后的水溶液，浓缩至70℃时相对密度为1.20的清膏，冷却至室温，浓缩液加乙醇使含醇量达70％，搅匀，冷藏24小时，吸取上清液，回收乙醇，减压浓缩至70℃时相对密度为1.30的稠膏，取聚乙二醇6000加热熔融，依次加入上述浸膏、挥发油，搅匀，制成滴丸1000g，即得；
【鉴别】
(1)取本品5g，研细，加乙酸乙酯50ml，超声处理22分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，取上清液作为供试品溶液；另取川芎对照药材0.3g，加60～90℃的石油醚20ml，密塞，浸渍4.5小时，时时振摇，滤过，溶液挥至约1ml，作为对照药材溶液；另取羌活对照药材0.5g，加水60ml，煎煮35分钟，放冷，离心12分钟，取上清液，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚提取液，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、两种对照药材溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以比例为7:3:2的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
鉴别(2)、(3)、(4)，同实施例1。
【检查】符合滴丸项下有关的各项规定。
【含量测定】甘草酸同实施例1。
【含量测定】阿魏酸
色谱条件与系统适用性试验以色谱柱为CORTECS UPLC T3 1.8um；柱温为35℃；以比例为50：60的75％甲醇-1.2％醋酸溶液为流动相，检测波长为254nm，流速为0.30ml/min，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于8000；
对照品溶液的制备取阿魏酸对照品适量，精密称定，加比例为20﹕1的45％乙醇-冰醋酸混合溶液制成每1ml含10μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备取本品研细，精密称定0.5g，精密加入75％甲醇溶液25ml，称定重量，超声50分钟，放冷，再称定重量，用75％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每袋含川芎和羌活以阿魏酸(C10H10O4)计，不得少于0.5mg。
【功能与主治】疏风止痛。用于风邪头痛，或有恶寒、发热、鼻塞。
【用法与用量】口服，一次1袋，一日3次。
【规格】每袋装2g
【贮藏】密封。
【有效期】30个月
为了进一步验证本发明的有效性，发明人进行了一系列的验证试验，摘录部分如下：
实验例
1材料、设备、试剂及对照品
1.1材料
1.2设备
1.3试剂
1.4对照品
2滴丸中川芎、羌活药材薄层鉴别方法的筛选
2.1优化前川芎茶调滴丸中川芎药材的薄层鉴别方法：
取本品加水50ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次50ml，分取水液合并乙醚提取液，自然挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，取上清液作为供试品溶液。另取川芎对照药材0.3g，加石油醚(60～90℃)20ml，密塞，浸渍4小时，时时振摇，滤过，溶液挥至约1ml，作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、对照药材溶液2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(9﹕1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
结果：川芎药材薄层鉴别主斑点较模糊、且出现拖尾现象，斑点Rf值偏小，重现性差。
2.2优化前羌活药材的薄层鉴别方法参照川芎茶调丸质量标准：
取本品20g，研细，加水300ml，煎煮30分钟，放冷，离心(转速为每分钟1500转)10分钟，取上清液，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚提取液，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取羌活对照药材0.5g，加水60ml，煎煮30分钟，放冷，离心10分钟，取上清液，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(4：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在85℃加热约5分钟，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点。
结果：川芎药材薄层鉴别主斑点较模糊、且出现拖尾现象，斑点Rf值偏小，重现性差。
2.3优化后暂定滴丸中川芎、羌活药材薄层鉴别方法
根据“2.1”和“2.2”项下的薄层结果，结合川芎、羌活药材的检测标准，考虑用同一薄层方法同时鉴别，方法如下：
取本品5g，研细，加乙酸乙酯50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，取上清液作为供试品溶液；另取川芎对照药材0.3g，加60～90℃的石油醚20ml，密塞，浸渍4小时，时时振摇，滤过，溶液挥至约1ml，作为对照药材溶液；另取羌活对照药材0.5g，加水60ml，煎煮30分钟，放冷，离心10分钟，取上清液，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚提取液，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、两种对照药材溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以比例为7:3:2的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
2.3.1供试品提取溶剂的选择：
方法1：取本品5g，用乙醚50ml，振摇提取30min。
方法2：取本品5g，用甲醇50ml，振摇提取30min。
方法3：取本品5g，用乙酸乙酯50ml，振摇提取30min。
以上三种提取溶剂处理的样品，分别按“2.3”项下的方法进行薄层检测，结果见表1。
表1供试品提取溶剂的筛选表
结果，由表1可知，“方法3”处理的样品，斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好，故“乙酸乙酯”为优选提取溶剂。
2.3.2供试品提取方式的选择：
方法1：取本品5g，用乙酸乙酯50ml，振摇提取30min。
方法2：取本品5g，用乙酸乙酯50ml，回流提取30min。
方法3：取本品5g，用乙酸乙酯50ml，超声提取30min。
以上三种提取方式处理的样品，分别按“2.3”项下的方法进行薄层检测，结果见表2。
表2供试品提取方式的筛选表
结果，由表2可知，方法2、方法3处理的样品，斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好，考虑检测简便的问题，故提取方式优选为“超声提取”。
2.3.3供试品提取时间的选择：
方法1：取本品5g，用乙酸乙酯50ml，超声提取15min。
方法2：取本品5g，用乙酸乙酯50ml，超声提取25min。
方法3：取本品5g，用乙酸乙酯50ml，超声提取20min。
以上三种提取时间处理的样品，分别按“2.3”项下的方法进行薄层检测，结果见表3。
表3供试品提取时间的筛选表
结果，由表3可知，方法2、方法3处理的样品，斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好，考虑检测成本的问题，故提取时间优选为“20min”。
2.3.4薄层色谱展开剂的选择：
方法1：以环己烷-乙酸乙酯(9﹕1)为展开剂(参照2.1项下方法)；
方法2：以环己烷-乙酸乙酯(4：1)为展开剂(参照2.2项下方法)；
方法3：环己烷-乙酸乙酯-甲醇:(7:3:2)；
以上三种展开剂展开，分别按“2.3”项下的方法进行薄层检测，结果见表4。
表4展开剂筛选表
结果，由表4可知，方法3展开的样品，斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好，考虑检测成本的问题，故展开剂优选为“环己烷-乙酸乙酯-甲醇”。
2.3.5薄层色谱展开剂比例的选择：
方法1：环己烷-乙酸乙酯-甲醇:(7:3:3)；
方法2：环己烷-乙酸乙酯-甲醇:(7:2:2)；
方法3：环己烷-乙酸乙酯-甲醇:(7:1:1)；
方法4：环己烷-乙酸乙酯-甲醇:(8:3:2)；
方法5：环己烷-乙酸乙酯-甲醇:(7:3:2)
以上五种展开剂比例展开，分别按“2.3”项下的方法进行薄层检测，结果见表5。
表5展开剂比例筛选表
结果，由表5可知，按方法5比例展开，斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好，故展开剂比例优选为“环己烷-乙酸乙酯-甲醇:(7:3:2)”。
2.4方法学验证
2.4.1专属性
取川芎茶调滴丸、川芎对照药材、羌活对照药材及缺川芎、羌活阴性样品，同“2.3”项所述方法制得供试品溶液、对照品溶液及阴性供试品溶液，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲醇(7:3:2)为展开剂,展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，且斑点分离较好，阴性无干扰。
2.4.2重现性
取按“实施例1”制备的川芎茶调滴丸10批，分别按“2.3”项下薄层鉴别方法展开，结果见表6。
表6试验方法、条件及重现性试验结果
2.4.3耐用性
2.4.3.1不同薄层板的比较
取按“实施例1”制备的川芎茶调滴丸10批，分别按“2.3”项下栀子药材的薄层鉴别修定的方法展开，比较青岛海洋化工厂分厂硅胶G商品板和高效硅胶G商品板的薄层，结果见表7。
表7不同薄层板耐用性结果表
结果：高效硅胶板商品板斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中；硅胶G商品板斑点清晰，分离达到要求,Rf值适中，故本方法耐用性好。
2.4.3.2不同湿度的比较
比较低湿度(30％)和高湿度(75％)环境下高效薄层板展开效果，结果见表8。
表8低湿度(30％)和高湿度(75％)环境下高效薄层板展开效果表
结果：斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，两个条件下均能得到较好的鉴别色谱。
2.5结论
经过上述方法学实验研究，川芎茶调滴丸中川芎、羌活药材薄层鉴别方法为：取本品5g，研细，加乙酸乙酯50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，取上清液作为供试品溶液；另取川芎对照药材0.3g，加60～90℃的石油醚20ml，密塞，浸渍4小时，时时振摇，滤过，溶液挥至约1ml，作为对照药材溶液；另取羌活对照药材0.5g，加水60ml，煎煮30分钟，放冷，离心10分钟，取上清液，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚提取液，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、两种对照药材溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以比例为7:3:2的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。该方法在不同湿度条件下，用高效薄层板和硅胶G商品板进行试验，色谱图斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，验证试验表明重现性好、耐用性好。
3阿魏酸含量含量检测方法的筛选
3.1阿魏酸含量方法流动相的选择
之前我公司川芎茶调滴丸检测项目没有涉及阿魏酸含量，为有效的提高产品质量，提升川芎茶调滴丸的质量标准，建立了滴丸中阿魏酸含量测定的方法，进一步提高产品质量标准，首先参照川芎茶调丸中阿魏酸含量测定方法进行检测：
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-2％醋酸溶液(20﹕80)为流动相；检测波长为323nm。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于8000。
对照品溶液的制备取阿魏酸对照品适量，精密称定，加45％乙醇-冰醋酸(20﹕1)混合溶液制成每1ml含10μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品，研细，取约0.5g，精密称定，精密加入45％乙醇-冰醋酸(20﹕1)混合溶液25ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用45％乙醇-冰醋酸(20﹕1)混合溶液补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
取“实施例1”制备的川芎茶调滴丸，按以上检测方法测定阿魏酸含量，结果发现峰分离度差，峰形不好、精确度差、稳定性差等问题，针对此问题，对阿魏酸含量方法中流动相比例、波长、提取溶剂及色谱柱等进行考察，具体如下：
3.1.1流动相比例考察
优化方法一：以色谱柱为CORTECS UPLC T3 1.6um；柱温：35℃；以甲醇-0.5％醋酸溶液(40﹕60)为流动相；检测波长为323nm；流速为0.30ml/min，进样体积为10μl。
结果：该方法峰形，峰纯度均良好，但该方法稳定性差，个别出现相邻峰分离度不好的情况。
优化方法二：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱为CORTECS UPLC T31.6um；柱温：35℃；以甲醇-1.5％醋酸溶液(50﹕60)为流动相；检测波长为323nm；流速为0.30ml/min，进样体积为10μl。
结果：该方法峰形，峰纯度均良好，但该方法稳定性差，少数出现相邻峰分离度不好的情况。
优化方法三：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱为CORTECS UPLC T31.6um；柱温：35℃；以甲醇-1％醋酸溶液(50﹕60)为流动相；检测波长为323nm；流速为0.30ml/min，进样体积为10μl。
结果：该方法峰形，峰纯度均良好，该方法稳定性好，少数出现相邻峰分离度不好的情况。
优化方法四：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱为CORTECS UPLC T31.6um；柱温：35℃；以70％甲醇-1％醋酸溶液(50﹕60)为流动相；检测波长为323nm；流速为0.30ml/min，进样体积为10μl。
结果:该方法峰形，峰纯度，分离度、峰形均较好，且该方法稳定性好，适用于川芎茶调滴丸的检验，故“70％甲醇-1％醋酸溶液(50﹕60)”作为川芎茶调滴丸含量检测的最优流动比例。
3.2检测波长的确定
以流动相为70％甲醇-1％醋酸溶液(50﹕60)，再进行检测波长的筛选：
取本品，研细，取约0.5g，精密称定，精密加入45％乙醇-冰醋酸(20﹕1)混合溶液25ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用45％乙醇-冰醋酸(20﹕1)混合溶液补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，即得。记录190～400nm范围内的吸收光谱。
结果:在254nm左右，阿魏酸有最大吸收，峰响应高，基线平稳，因此选择“254nm”为阿魏酸含量检测波长。
3.3提取溶剂的考察
以流动相为70％甲醇-1％醋酸溶液(50﹕60)，波长为254nm，再进行提取溶剂的筛选：
精密称定川芎茶调滴丸0.5016g，0.5014g，0.5036g，0.5045g，0.5001g，0.5042g，0.5003g，0.5006g，0.5012g，0.4988g分别置25ml锥形瓶中，分别精密加入45％乙醇-冰醋酸(20﹕1)，60％甲醇，70％甲醇，80％甲醇，70％乙腈25ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，分别用相应的溶剂溶剂补充重量，超声处理20min，放冷，再称定重量，用相同的溶剂补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，即得，按上述色谱条件进行测定，结果见表9。
表9阿魏酸含量方法溶剂考察表
结果：用70％甲醇和80％乙醇处理样品，峰面积相差不大，采用70％甲醇作溶剂，阿魏酸含量最高，因此选择“70％甲醇”作为阿魏酸含量方法的供试品处理溶剂。
3.4溶剂提取方式及提取时间的考察
以流动相为0％甲醇-1％醋酸溶液(50﹕60)，检测波长为254nm，提取溶剂为70％甲醇，再进行提取方式及提取时间的筛选：
精密称定川芎茶调滴丸0.5003g，0.5065g，0.5063g，0.5099g，0.5037g，0.5023g，0.5007g，0.5024g，0.5021g，0.5023g、0.5002g、0.5012g分别置25ml锥形瓶中，分别精密加入70％甲醇，80％甲醇，70％乙腈25ml，称定重量，分别超声处理30min，45min，60min，回流提取30min，20min，30min，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得，按上述色谱条件进行测定，结果见表10。
表10阿魏酸含量方法提取方式考察表
结果：采用超声处理45min，60min，回流提取60min中，阿魏酸含量结果无明显差异，所以选择“超声45min”为提取方式的优选。
3.5色谱柱的考察
以流动相为0％甲醇-1％醋酸溶液(50﹕60)，检测波长为254nm，提取溶剂为70％甲醇，提取方式为超声45min，再进行色谱柱的考察：
精密称定川芎茶调滴丸0.5003g，置25ml锥形瓶中，分别精密加入70％甲醇25ml，称定重量，超声处理45min，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得，分别用：
CORTECS UPLC T3(100mm×2.1mm,1.6μm)；
ACQUITY UPLC BEH(100mm×2.1mm,1.7μm)；
ACQUITY UPLC HSS T3(100mm×2.1mm,1.8μm)MVK，按上述色谱条件进行测定：结果见表11、表12、表13。
表11阿魏酸含量色谱柱考察
表12阿魏酸含量色谱柱考察
表13阿魏酸含量色谱柱考察
结果：用不同规格的色谱柱考察优化中的阿魏酸含量色谱条件，色谱柱CORTECSUPLC T3(2.1*100mm，1.6um)，峰形较好，分离度和峰纯度均合格，所以阿魏酸含量检测方法用CORTECS UPLC T3(2.1*100mm，1.6um)色谱柱。
3.6结论：经过以上筛选实验，得出阿魏酸含量测定的优选方法如下：
色谱条件与系统适用性试验以色谱柱为CORTECS UPLC T3 1.8um；柱温为35℃；以比例为50：60的70％甲醇-1％醋酸溶液为流动相，检测波长为254nm，流速为0.30ml/min，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于8000；
供试品溶液的制备取本品研细，精密称定0.5g，精密加入70％甲醇溶液25ml，称定重量，超声45分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
3.7阿魏酸含量检测方法优化前和优化后的对比试验
取“实例1”制备的川芎茶调滴丸10批，分别按“3.6”方法进行含量检测，结果见表14、表15。
表14阿魏酸含量方法优化前后结果对比考察表一
表15阿魏酸含量方法优化前后结果对比考察表二
结论：优化前方法中，阿魏酸相邻峰的分离度均大于1.5，但阿魏酸未能与相邻峰达到基线分离，且阿魏酸峰的纯度角度未均小于纯度阈值；优化后方法中，阿魏酸峰与相邻峰的分离度均大于2.0，达到基线分离，且对称因子明显降低，峰形较好，阿魏酸峰的纯度角度均小于纯度阈值，所以，“优化后的方法”更适用于川芎茶调滴丸中阿魏酸的含量检测。
3.8阿魏酸含量检测方法学验证考察
3.8.1阿魏酸含量测定样品制备与方法
色谱条件与系统适用性试验：以色谱柱为CORTECS UPLC T3 1.8um；柱温为35℃；以比例为50：60的70％甲醇-1％醋酸溶液为流动相，检测波长为254nm，流速为0.30ml/min，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于8000；
对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，加比例为20﹕1的45％乙醇-冰醋酸混合溶液制成每1ml含10μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取本品研细，精密称定0.5g，精密加入70％甲醇溶液25ml，称定重量，超声45分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
3.8.2高效液相色谱系统适用性确认
3.8.2.1阿魏酸含量测定方法的系统适用性确认方法：
分别精密吸取“3.8.1”项下对照品溶液10μl，连续6次进样；供试品溶液10μl 1次进样测定，记录色谱数据。
3.8.2.2阿魏酸含量测定方法系统适用性确认接受标准：
阿魏酸面积的相对标准偏差(RSD)不得过2.0％；
阿魏酸保留时间的相对标准偏差(RSD)不得过1.0％；
主峰(阿魏酸的理论板数按阿魏酸峰计算应大于8000；
主峰(阿魏酸)的分离度应大于1.5；
系统适用性确认结果，见表16、表17。
表16系统适用性确认结果信息表
表17系统适用性确认结果信息表
结果：阿魏酸峰面积的相对标准偏差(RSD)小于2.0％；保留时间的相对标准偏差(RSD)小于1.0％；理论塔板数均大于8000；分离度均大于1.5；故阿魏酸含量测定方法符合系统适用性要求。
3.8专属性考察
3.8.1阿魏酸含量测定方法的专属性确认方法：
精密吸取”3.8.1”项下阿魏酸对照品溶液10ul，供试品溶液及样品提取溶剂各10ul注入液相色谱仪，记录色谱数据；另采用PDA检测器对对照品溶液、供试品溶液中的阿魏酸色谱峰进行峰光谱扫描和纯度检测。
3.8.1.1方法确认接受标准：
3.8.1.2供试品溶液主峰保留时间与阿魏酸对照品溶液主峰保留时间一致；
3.8.1.3样品提取溶剂在阿魏酸峰保留时间处均应为平直基线，无吸收峰；
3.8.1.4阿魏酸对照品溶液峰、供试品溶液待测峰纯度角度应小于纯度阈值。
3.8.2专属性考察结果，见表18。
表18专属性实验结果
3.8.3色谱峰纯度考察结果，见表19。
表19色谱峰纯度角度和纯度阈值列表
结果：结果表明空白溶剂对各峰出峰位置处无干扰，本方法测定表的含量具有专属性；按照规定色谱条件以PDA检测器进行190nm～400nm扫描检测，计算峰纯度，结果显示各待测峰的纯度角均小于纯度阈值，纯度符合要求。
3.9精密度
3.9.1重复性考察
由同一人分别称取6份样品，分别按“3.8.1”项下供试品溶液制备方法制成样品供试液，以既定色谱条件测定含量，并计算RSD，RSD应不大于3％。结果见表20：
表20重复性实验结果
3.9.2中间精密度考察
由两个实验员分别称取6份样品，按“3.8.1”供试品溶液制备方法制成样品供试液，在不同天同一实验室同仪器上分别进样10μl，测定其峰面积值，计算含量及RSD，RSD应不大于6％。结果见表21。
表21中间精密度实验结果
结果：结果表明重复性考察、中间精密度均符合要求。
3.10加样回收率试验
采用加样回收，精密吸取已测定阿魏酸含量为0.32mg/g的样品，再加阿魏酸对照品适量，按“3.8.1”项下色谱条件测定，计算回收率，结果见表22。
表22回收率试验
结果：结果表明阿魏酸的回收率为98.72％，RSD为0.89％，说明本法有良好的回收率。
3.11线性关系的考察
精密取浓度10μg/ml、20μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、500μg/ml的阿魏酸溶液，以标准浓度对其相含量进行回归分析，得到线性方程为Y＝2826.4x+103.01，R2＝0.9998，表明阿魏酸进样浓度在10μg/ml～500μg/ml范围内呈良好的线性关系，结果见表23。
表23阿魏酸线性关系考察
3.12阿魏酸含量测定方法耐用性考察
3.12.1流动相组成变化试验：按“3.8.1”项下含量测定方法制备样品，配制不同浓度流动相进行检测，证明流动相组成小变动能满足系统适用性试验要求，结果见表24；
表24流动相组成变化试验结果
3.12.2柱温变化试验：按“3.8.1”项下含量测定方法制备样品，改变柱温进行检测，证明柱温的小变动能满足系统适用性试验要求。结果见表25。
表25柱温变化试验结果
3.12.3流速变化试验：按3.8.1项下含量测定方法制备样品，改变流速进行检测，证明流速的小变动，能满足系统适用性试验要求。结果见表26。
表26流速变化试验结果
3.12.4不同色谱柱试验：按“3.8.1”项下含量测定方法制备样品，用不同型号及不同批次的色谱柱进行检测，证明不同批次色谱柱能满足系统适用性试要求。结果见表27。
表27不同色谱柱类型变化
3.12.5被测溶液的稳定性试验：按“3.8.1”项下含量测定方法制备样品，测试不同时间点被测溶液的峰面积，计算RSD考察被测溶液的稳定性。结果见表28。
表28溶液稳定性考察
结果：经试验ACQUITY UPLC HSS T3 1.8um(100×2.1mm)色谱柱不适用该方法，CORTECS UPLCT3 1.6um(100×2.1mm)与ACQUITY UPLC BEH C18 1.7um(100×2.1mm)色谱柱适用于该方法；
其余测定条件小的变动能满足系统适用性试验要求；被测溶液阿魏酸峰面积24h内RSD均小于2％，故被测溶液在24h内均稳定。
3.13结论
经过上述方法学实验研究，川芎茶调滴丸中阿魏酸含量测定优选方法为：色谱条件与系统适用性试验：以色谱柱为CORTECS UPLC T3 1.8um；柱温为35℃；以比例为50：60的70％甲醇-1％醋酸溶液为流动相，检测波长为254nm，流速为0.30ml/min，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于8000；对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，加比例为20﹕1的45％乙醇-冰醋酸混合溶液制成每1ml含10μg的溶液，即得；供试品溶液的制备：取本品研细，精密称定0.5g，精密加入70％甲醇溶液25ml，称定重量，超声45分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。该方法出峰形好，分离度、峰纯度均合格，且准确度高，稳定性好，操作简便快捷。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (10)
1.一种川芎茶调滴丸的检测方法，所述滴丸处方及制法如下：
处方
制法 以上八味，川芎、羌活、细辛、防风、薄荷、荆芥进行水蒸气蒸馏，收集挥发油；蒸馏后的水溶液别器收集；药渣与白芷、甘草加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，加入蒸馏后的水溶液，浓缩至70℃时相对密度为1.10～1.20的清膏，冷却至室温，浓缩液加乙醇使含醇量达70％，搅匀，冷藏24小时，吸取上清液，回收乙醇，减压浓缩至70℃时相对密度为1.25～1.30的稠膏，取聚乙二醇6000加热熔融，依次加入上述浸膏、挥发油，搅匀，制成滴丸1000g，即得；
基特征在于，所述滴丸的检测方法包括：滴丸中川芎、羌活药材的薄层鉴别，滴丸中阿魏酸的含量测定。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述滴丸中川芎、羌活药材薄层鉴别方法为：取本品5g，研细，加乙酸乙酯50ml，超声处理15～25分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，取上清液作为供试品溶液；另取川芎对照药材0.3g，加60～90℃的石油醚20ml，密塞，浸渍3～5小时，时时振摇，滤过，溶液挥至约1ml，作为对照药材溶液；另取羌活对照药材0.5g，加水60ml，煎煮20～40分钟，放冷，离心5～15分钟，取上清液，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚提取液，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、两种对照药材溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以比例为7:3:2的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于：所述滴丸中川芎、羌活药材薄层鉴别方法为：取本品5g，研细，加乙酸乙酯50ml，超声处理18～22分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，取上清液作为供试品溶液；另取川芎对照药材0.3g，加60～90℃的石油醚20ml，密塞，浸渍3.5～4.5小时，时时振摇，滤过，溶液挥至约1ml，作为对照药材溶液；另取羌活对照药材0.5g，加水60ml，煎煮25～35分钟，放冷，离心8～12分钟，取上清液，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚提取液，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、两种对照药材溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以比例为7:3:2的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于：所述滴丸中川芎、羌活药材薄层鉴别方法为：取本品5g，研细，加乙酸乙酯50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，取上清液作为供试品溶液；另取川芎对照药材0.3g，加60～90℃的石油醚20ml，密塞，浸渍4小时，时时振摇，滤过，溶液挥至约1ml，作为对照药材溶液；另取羌活对照药材0.5g，加水60ml，煎煮30分钟，放冷，离心10分钟，取上清液，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚提取液，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、两种对照药材溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以比例为7:3:2的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述滴丸中阿魏酸含量测定的方法为：
色谱条件与系统适用性试验 以色谱柱为CORTECS UPLC T3 1.8um；柱温为35℃；以比例为50：60的甲醇-0.5～1.5％醋酸溶液为流动相，检测波长为254nm，流速为0.30ml/min，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于8000；
对照品溶液的制备 取阿魏酸对照品适量，精密称定，加比例为20﹕1的45％乙醇-冰醋酸混合溶液制成每1ml含10μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取本品研细，精密称定0.5g，精密加入60～80％甲醇溶液25ml，称定重量，超声30～60分钟，放冷，再称定重量，用60-80％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于：所述滴丸中阿魏酸含量测定的方法为：
色谱条件与系统适用性试验以色谱柱为CORTECS UPLC T3 1.8um；柱温为35℃；以比例为50：60的甲醇-0.8～1.2％醋酸溶液为流动相，检测波长为254nm，流速为0.30ml/min，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于8000；
对照品溶液的制备 取阿魏酸对照品适量，精密称定，加比例为20﹕1的45％乙醇-冰醋酸混合溶液制成每1ml含10μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取本品研细，精密称定0.5g，精密加入65～75％甲醇溶液25ml，称定重量，超声40～50分钟，放冷，再称定重量，用65～75％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于：所述滴丸中阿魏酸含量测定的方法为：
色谱条件与系统适用性试验 以色谱柱为CORTECS UPLC T3 1.8um；柱温为35℃；以比例为50：60的甲醇-1％醋酸溶液为流动相，检测波长为254nm，流速为0.30ml/min，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于8000；
对照品溶液的制备 取阿魏酸对照品适量，精密称定，加比例为20﹕1的45％乙醇-冰醋酸混合溶液制成每1ml含10μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 取本品研细，精密称定0.5g，精密加入70％甲醇溶液25ml，称定重量，超声45分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
8.根据权利要求5～6任一项所述的检测方法，其特征在于：所述色谱条件与系统适用性试验中，所述甲醇，浓度为60～80％。
9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于：所述色谱条件与系统适用性试验中，所述甲醇，浓度为65～75％。
10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于：所述色谱条件与系统适用性试验中，所述甲醇，浓度为70％。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110762349.9A CN113552276B (zh) | 2021-07-06 | 2021-07-06 | 一种川芎茶调滴丸的检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110762349.9A CN113552276B (zh) | 2021-07-06 | 2021-07-06 | 一种川芎茶调滴丸的检测方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113552276A true CN113552276A (zh) | 2021-10-26 |
| CN113552276B CN113552276B (zh) | 2022-07-19 |
Family
ID=78131368
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110762349.9A Active CN113552276B (zh) | 2021-07-06 | 2021-07-06 | 一种川芎茶调滴丸的检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113552276B (zh) |
Citations (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003059370A1 (en) * | 2002-01-18 | 2003-07-24 | Pangenomics Co., Ltd. | Crude drug compositions for treating or preventing arthritic diseases and the preparation process |
| CN1739612A (zh) * | 2005-09-08 | 2006-03-01 | 王衡新 | 疏风止痛的中药制剂及其制备方法和质量控制方法 |
| CN101181343A (zh) * | 2007-11-19 | 2008-05-21 | 广州奇星药业有限公司 | 一种千柏鼻炎片的质量控制方法 |
| CN101513456A (zh) * | 2008-02-22 | 2009-08-26 | 北京亚东生物制药有限公司 | 治疗头痛的中药组合物及其制备方法和质量控制方法 |
| CN101637567A (zh) * | 2009-07-17 | 2010-02-03 | 贵州信邦制药股份有限公司 | 中药制剂中川芎的质量控制方法 |
| CN101708223A (zh) * | 2009-11-04 | 2010-05-19 | 山东鲁泰环中制药有限公司 | 中药复方大青叶制剂的制备方法、质量控制方法和应用 |
| CN101829191A (zh) * | 2009-09-22 | 2010-09-15 | 贵州健兴药业有限公司 | 一种治疗头痛的川芎茶调滴丸及其制备方法 |
| CN102590423A (zh) * | 2012-02-27 | 2012-07-18 | 贵州威门药业股份有限公司 | 川芎茶调颗粒制剂指纹图谱的测定方法 |
| CN103784505A (zh) * | 2014-02-24 | 2014-05-14 | 福州华凯医药科技有限公司 | 川芎茶调制剂 |
| CN103800438A (zh) * | 2014-02-24 | 2014-05-21 | 福州华凯医药科技有限公司 | 川芎茶调制剂和制法 |
| CN103816223A (zh) * | 2014-02-24 | 2014-05-28 | 贵州威门药业股份有限公司 | 无糖型川芎茶调颗粒 |
| CN111024834A (zh) * | 2019-11-27 | 2020-04-17 | 浙江金大康动物保健品有限公司 | 一种羌活药材的梯度全信息薄层鉴别方法 |
| US20200323936A1 (en) * | 2019-04-10 | 2020-10-15 | Artashes MIRZATUNY | Herbal composition for the treatment of headache |
-
2021
- 2021-07-06 CN CN202110762349.9A patent/CN113552276B/zh active Active
Patent Citations (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003059370A1 (en) * | 2002-01-18 | 2003-07-24 | Pangenomics Co., Ltd. | Crude drug compositions for treating or preventing arthritic diseases and the preparation process |
| CN1739612A (zh) * | 2005-09-08 | 2006-03-01 | 王衡新 | 疏风止痛的中药制剂及其制备方法和质量控制方法 |
| CN101181343A (zh) * | 2007-11-19 | 2008-05-21 | 广州奇星药业有限公司 | 一种千柏鼻炎片的质量控制方法 |
| CN101513456A (zh) * | 2008-02-22 | 2009-08-26 | 北京亚东生物制药有限公司 | 治疗头痛的中药组合物及其制备方法和质量控制方法 |
| CN101637567A (zh) * | 2009-07-17 | 2010-02-03 | 贵州信邦制药股份有限公司 | 中药制剂中川芎的质量控制方法 |
| CN101829191A (zh) * | 2009-09-22 | 2010-09-15 | 贵州健兴药业有限公司 | 一种治疗头痛的川芎茶调滴丸及其制备方法 |
| CN101708223A (zh) * | 2009-11-04 | 2010-05-19 | 山东鲁泰环中制药有限公司 | 中药复方大青叶制剂的制备方法、质量控制方法和应用 |
| CN102590423A (zh) * | 2012-02-27 | 2012-07-18 | 贵州威门药业股份有限公司 | 川芎茶调颗粒制剂指纹图谱的测定方法 |
| CN103784505A (zh) * | 2014-02-24 | 2014-05-14 | 福州华凯医药科技有限公司 | 川芎茶调制剂 |
| CN103800438A (zh) * | 2014-02-24 | 2014-05-21 | 福州华凯医药科技有限公司 | 川芎茶调制剂和制法 |
| CN103816223A (zh) * | 2014-02-24 | 2014-05-28 | 贵州威门药业股份有限公司 | 无糖型川芎茶调颗粒 |
| US20200323936A1 (en) * | 2019-04-10 | 2020-10-15 | Artashes MIRZATUNY | Herbal composition for the treatment of headache |
| CN111024834A (zh) * | 2019-11-27 | 2020-04-17 | 浙江金大康动物保健品有限公司 | 一种羌活药材的梯度全信息薄层鉴别方法 |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| 付莉 等: "三种制剂中多味药材的同时鉴别研究", 《中国药事》 * |
| 刘燕 等: "HPLC和UPLC法测定活血止痛制剂中阿魏酸", 《药物分析杂志》 * |
| 吕盼 等: "续断舒筋膏质量控制方法研究", 《中药与临床》 * |
| 国家药典委员会 编: "《中华人民共和国药典2015年版一部》", 30 June 2015, 中国医药科技出版社 * |
| 李喜香 等: "骨痹止痛液的质量标准提高研究", 《中国药房》 * |
| 黄俊忠 等: "筋痛消配质量标准的建立", 《中国药师》 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113552276B (zh) | 2022-07-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109709251B (zh) | 苓桂术甘汤指纹图谱的检测方法 | |
| CN112587642B (zh) | 一种保元药物组合物的制备方法及其检测方法 | |
| CN113390985B (zh) | 一种麻黄汤物质基准及其制备方法和质量检测方法 | |
| CN101966223A (zh) | 一种复方扶芳藤制剂的指纹图谱检测方法 | |
| CN101926889B (zh) | 芍杞颗粒剂的检测方法 | |
| CN114577574A (zh) | 一种三化汤基准样品冻干粉及其制备方法和质量检测方法 | |
| CN101264226B (zh) | 一种治疗糖尿病的药物的质量检测方法 | |
| CN108459129B (zh) | 一种防己茯苓汤组合物的质量控制方法 | |
| CN116626204A (zh) | 一种地黄丸类方制剂中熟地黄质量控制的方法 | |
| CN113552276B (zh) | 一种川芎茶调滴丸的检测方法 | |
| CN110850022A (zh) | 一种用于双冬胶囊质量的检测方法 | |
| CN101352565A (zh) | 一种活血化瘀、解毒消肿颗粒剂的质量控制方法 | |
| CN115837063A (zh) | 一种改进的肺力咳药物组合物的制备及检测方法 | |
| CN114544852B (zh) | 一种改进的癃清胶囊质量检测方法 | |
| CN114166958B (zh) | 中药复方苍藿平胃颗粒的指纹图谱的检测方法及其应用 | |
| CN113156010B (zh) | 一种厚朴温中汤物质基准的质量控制方法 | |
| CN111351883B (zh) | 一种槐芩软膏中芦丁的含量测定方法 | |
| CN109709250B (zh) | 参茸酒指纹图谱的检测方法 | |
| CN101703728B (zh) | 一种温胃舒胶囊的检测方法 | |
| CN101711827A (zh) | 清热凉血、滋阴养肾的中药制剂及其制备方法和检测方法 | |
| CN105203486B (zh) | 一种用于通关藤的检测方法 | |
| CN114441703B (zh) | 一种和肝利胆糖浆的检测方法 | |
| CN114487159B (zh) | 一种用于川贝清肺糖浆的检测方法 | |
| CN113759040B (zh) | 猫爪草及其制剂特征图谱及其构建方法和猫爪草及其制剂的含量测定方法 | |
| CN102539615A (zh) | 芪白平肺胶囊定性定量检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |