CN113544130B - 一种btk抑制剂环衍生物及其制备方法和药学上的应用 - Google Patents

一种btk抑制剂环衍生物及其制备方法和药学上的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113544130B
CN113544130B CN202080018945.XA CN202080018945A CN113544130B CN 113544130 B CN113544130 B CN 113544130B CN 202080018945 A CN202080018945 A CN 202080018945A CN 113544130 B CN113544130 B CN 113544130B
Authority
CN
China
Prior art keywords
pyrimidin
phenoxyphenyl
pyrazolo
piperidinyl
amino
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202080018945.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN113544130A (zh
Inventor
张晨
廖雨亭
王健民
祝国智
叶飞
唐平明
陈孝刚
黄正刚
吴守涛
李瑶
严庞科
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tibet Haisike Pharmaceutical Co ltd
Original Assignee
Tibet Haisike Pharmaceutical Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Tibet Haisike Pharmaceutical Co ltd filed Critical Tibet Haisike Pharmaceutical Co ltd
Publication of CN113544130A publication Critical patent/CN113544130A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113544130B publication Critical patent/CN113544130B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/07—Optical isomers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/09—Geometrical isomers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/13—Crystalline forms, e.g. polymorphs

Abstract

涉及一种BTK抑制剂环衍生物及其制备方法和药学上的应用，所述BTK抑制剂环衍生物为通式(I)所述的化合物或者其立体异构体、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，所述BTK抑制剂环衍生物用于治疗与BTK相关疾病如肿瘤或自身免疫系统疾病。

Description

一种BTK抑制剂环衍生物及其制备方法和药学上的应用
技术领域
本发明涉及一种通式(I)所述的化合物或者其立体异构体、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，及其中间体和制备方法，以及在BTK相关疾病如肿瘤或自身免疫系统疾病中的用途。
背景技术
布鲁顿酪氨酸蛋白激酶(BTK,Bruton’s tyrosine kinase)是非受体蛋白酪氨酸激酶Tec家族的成员，是B细胞抗原受体(BCR)信号通路中的关键调节因子，分布在淋巴系统、造血及血液系统中。BTK突变会引起下游肿瘤细胞的增殖、分化以及血管生成等信号通路的激活，会导致X连锁无丙种球蛋白血症、非霍奇金淋巴瘤(NHL)与许多B细胞恶性肿瘤，包括慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、套细胞淋巴瘤以及弥漫大B细胞淋巴瘤。由于主要在B细胞和髓细胞中表达，BTK是一种靶向性和安全性较好的靶点。
PROTAC(proteolysis targeting chimera)分子是一类能够同时结合靶向蛋白和E3泛素连接酶的双功能化合物，此类化合物能够诱导靶蛋白被细胞的蛋白酶体识别，引起靶向蛋白的降解，能够有效地降低靶向蛋白在细胞中的含量。通过在PROTAC分子引入能结合不同靶向蛋白的配体，使PROTAC技术应用于各种疾病的治疗成为可能，该技术近年来同时得到了广泛的关注。
发明内容
本发明开发了一种结构新颖的、药效好、生物利用度高、更安全的BTK抑制剂，用于治疗与BTK相关疾病如肿瘤或自身免疫系统疾病。
本发明开发了一种结构新颖的、药效好、生物利用度高、更安全、能抑制或降解BTK的BTK抑制剂与E3泛素连接酶的PROTAC化合物，用于治疗与BTK相关疾病如肿瘤或自身免疫系统疾病。
本发明涉及一种通式(I)所述的化合物或者其立体异构体、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中
B-L-K (I)；
L选自-Ak1-Cy1-Ak2-Cy2-Ak3-Cy3-Ak4-Cy4-Ak5-；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4和Ak5各自独立的选自CH2、O或者键；
Cy1、Cy2、Cy3和Cy4各自独立的选自3至12元杂环、3至12元环烷基、6至10元芳基或键，所述杂环、环烷基或芳基任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、oxo(氧代，＝O)、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自O、S、N的杂原子；
Cy1、Cy2、Cy3和Cy4不能同时为键；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4或Ak5为O时，不能直接与B连接；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4或Ak5不为键时，互相不能直接连接；
当Cy1、Cy2、Cy3和Cy4中有3个都为键时，Ak1、Ak2、Ak3、Ak4和Ak5中至少有一个选自CH2并与B相连接；
当Ak1、Cy1、Ak2、Cy2、Ak3、Cy3、Ak4、Cy4、Ak5有4个及以上不为键时，Cy1、Cy2、Cy3和Cy4中至少有一个不为哌啶、哌嗪、嘧啶或吡啶；
B选自B1-W1-B2-B3-B4-；
B1选自6元杂芳环或苯基，所述的杂芳环或苯基进一步任选被0至4个Rb1所取代，所述的杂芳环含有1至4个选自O、S、N的杂原子；
W1选自-O-、-S-、-NH-、-NHCO-或-CONH-；
B2选自6元杂芳环或苯基，所述的杂芳环或苯基任选进一步任选被0至4个Rb2所取代，所述的杂芳环含有1至4个选自O、S、N的杂原子；
B3选自8-10元杂并环，所述的杂并环任选进一步任选被0至4个Rb3所取代，所述的杂并环含有1至4个选自O、S、N的杂原子；
B4选自5-6元饱和杂环，所述的饱和杂环任选进一步任选被0至4个Rb4所取代，所述的饱和杂环含有1至2个选自O、S、N的杂原子；
Rb1、Rb2、Rb3或Rb4各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基，所述的烷基和烷氧基任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
K选自
Rk2选自CH2、C＝O、S＝O、SO2；
Rk1、Rk3或Rk4各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、COOH、C1-4烷基或C1-4烷氧基；
Rk5选自C＝O或p1或p2各自独立的选自0、1、2、3或4。
其中可以理解的是，本发明的Ak1、Ak2、Ak3、Ak4和Ak5、以及Cy1、Cy2、Cy3和Cy4、以及B2、B3和B4各自独立的为取代基时，其为亚基。
本发明的一些实施方案涉及一种通式(I)所述的化合物或者其立体异构体、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中
L选自-Ak1-Cy1-Ak2-Cy2-Ak3-Cy3-Ak4-Cy4-Ak5-；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4和Ak5各自独立的选自CH2、O或者键；Cy1、Cy2、Cy3和Cy4各自独立的选自3元杂环、4元杂环、5元杂环、6元杂环、7元杂环、8杂环、9元杂环、10元杂环、11元杂环、12杂环、3元环烷基、4元环烷基、5元环烷基、6元环烷基、7元环烷基、8元环烷基、9元环烷基、10元环烷基、11元环烷基、12元环烷基、6至10元芳基或键，优选键、4元杂单环、5元杂单环、6元杂单环、7元杂单环、5元杂并环、6元杂并环、7元杂并环、8元杂并环、9元杂并环、10元杂并环、6元杂螺环、7元杂螺环、8元杂螺环、9元杂螺环、10元杂螺环、11元杂螺环、12元杂螺环、7元杂桥环、8元杂桥环、9元杂桥环、10元杂桥环、4元单环烷基、5元单环烷基、6元单环烷基、7元单环烷基、5元并环烷基、6元并环烷基、7元并环烷基、8元并环烷基、9元并环烷基、10元并环烷基、6元螺环烷基、7元螺环烷基、8元螺环烷基、9元螺环烷基、10元螺环烷基、11元螺环烷基、12元螺环烷基、7元桥环烷基、8元桥环烷基、9元桥环烷基、10元桥环烷基或6-10元芳基，所述芳基、环烷基、杂单环、杂并环、杂螺环或杂桥环任选进一步被0、1、2、3或4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、oxo、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，所述的杂单环、杂并环、杂螺环或杂桥环含有1、2、3或4个选自O、S、N的杂原子；
Cy1、Cy2、Cy3和Cy4不能同时为键；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4或Ak5为O时，不能直接与B连接；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4或Ak5不为键时，互相不能直接连接；
当Cy1、Cy2、Cy3和Cy4中有3个都为键时，Ak1、Ak2、Ak3、Ak4和Ak5中至少有一个选自CH2并与B相连接；
当Ak1、Cy1、Ak2、Cy2、Ak3、Cy3、Ak4、Cy4、Ak5有4个及以上不为键时，Cy1、Cy2、Cy3和Cy4中至少有一个不为哌啶、哌嗪、嘧啶或吡啶；
B选自B1-W1-B2-B3-B4-；
B1选自6元杂芳环或苯基，优选苯基或吡啶基，所述的杂芳环、苯基或吡啶基进一步任选被0、1、2、3或4个Rb1所取代，所述的杂芳环含有1、2、3或4个选自O、S、N的杂原子；
W1选自-O-、-NHCO-或-CONH-；
B2选自6元杂芳环或苯基，优选苯基或吡啶基，所述的杂芳环、苯基或吡啶基进一步任选被0、1、2、3或4个Rb2所取代，所述的杂芳环含有1、2、3或4个选自O、S、N的杂原子；
B3选自8元杂并环、9元杂并环或10元杂并环，优选取代或未取代的咪唑并嘧啶、吡唑并嘧啶、咪唑并吡嗪、吡唑并吡嗪、咪唑并四氢嘧啶、吡唑并四氢嘧啶，当被取代时，杂并环、咪唑并嘧啶、吡唑并嘧啶、咪唑并吡嗪、吡唑并吡嗪、咪唑并四氢嘧啶、吡唑并四氢嘧啶任选进一步任选被0、1、2、3或4个Rb3所取代，所述的杂并环含有1、2、3或4个选自O、S、N的杂原子；
B4选自5元饱和杂环或6元饱和杂环，优选取代或未取代的氮杂环戊基、哌啶或哌嗪，所述的杂环、氮杂环戊基、哌啶或哌嗪任选进一步任选被0、1、2、3或4个Rb4所取代，所述的饱和杂环含有1至2个选自O、S、N的杂原子；
K选自
或者K可以选自
或者K可以选自
或者K可以选自
或者K可以选自
Rk2选自CH2、C＝O、S＝O、SO2；
Rk1、Rk3或Rk4各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、COOH、C1-4烷基或C1-4烷氧基；
Rk5选自C＝O或
p1或p2各自独立的选自0、1、2、3或4。
根据本发明的一些实施方案，其中，
L选自-Ak1-Cy1-Ak2-Cy2-Ak3-Cy3-Ak4-Cy4-Ak5-；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4和Ak5各自独立的选自CH2、O或者键；
Cy1、Cy2、Cy3和Cy4各自独立的选自3至12元杂环、3至12元环烷基、6至10元芳基或键，所述杂环、环烷基或芳基任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、的取代基所取代，所述的杂环含有1至4个选自O、S、N的杂原子。
根据本发明的一些实施方案，其中，Ak2、Ak3和Ak4为键；Ak1和Ak5各自独立的选自CH2、O或者键。
本发明的一些实施例涉及一种通式(I)所述的化合物或者其立体异构体、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中
L选自-Ak1-Cy1-Ak2-Cy2-Ak3-Cy3-Ak4-Cy4-Ak5-；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4和Ak5各自独立的选自CH2、O或者键；
Cy1、Cy2、Cy3和Cy4各自独立的选自取代或未取代的键、苯基、萘基、环丁基、环戊基、环己基、环丁基并环丁基、环丁基并环戊基、环丁基并环己基、环戊基并环戊基、环戊基并环己基、环己基并环己基、环丙基并环丁基、环丙基并环戊基、环丙基并环己基、环丁基螺环丁基、环丁基螺环戊基、环丁基螺环己基、环戊基螺环戊基、环戊基螺环己基、环己基螺环己基、环丙基螺环丁基、环丙基螺环戊基、环丙基螺环己基、氮杂环丁基、氮杂环戊基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三氮唑基、四氮唑基、环丙基并氮杂环丁基、环丙基并氮杂环戊基、环丙基并氮杂环己基、环丙基并哌啶基、环丁基并氮杂环丁基、环丁基并氮杂环戊基、环丁基并氮杂环己基、环丁基并哌啶基、环戊基并氮杂环丁基、环戊基并氮杂环戊基、环戊基并氮杂环己基、环戊基并哌啶基、环己基并氮杂环丁基、环己基并氮杂环戊基、环己基并氮杂环己基、环己基并哌啶基、氮杂环丁基并氮杂环丁基、氮杂环丁基并氮杂环戊基、氮杂环丁基并氮杂环己基、氮杂环丁基并哌啶基、氮杂环戊基并氮杂环丁基、氮杂环戊基并氮杂环戊基、氮杂环戊基并氮杂环己基、氮杂环戊基并哌啶基、氮杂环己基并氮杂环丁基、氮杂环己基并氮杂环戊基、氮杂环己基并氮杂环己基、氮杂环己基并哌啶基、环丁基螺氮杂环丁基、环丁基螺氮杂环戊基、环丁基螺氮杂环己基、环戊基螺氮杂环丁基、环戊基螺氮杂环戊基、环戊基螺氮杂环己基、环己基螺氮杂环丁基、环己基螺氮杂环戊基、环己基螺氮杂环己基、氮杂环丁基螺氮杂环丁基、氮杂环丁基螺氮杂环戊基、氮杂环丁基螺氮杂环己基、氮杂环戊基螺氮杂环丁基、氮杂环戊基螺氮杂环戊基、氮杂环戊基螺氮杂环己基、氮杂环己基螺氮杂环丁基、氮杂环己基螺氮杂环戊基、氮杂环己基螺氮杂环己基、环丁基螺哌啶基、环戊基螺哌啶基、环己基螺哌啶基、氮杂环丁基螺哌啶基、氮杂环戊基螺哌啶基、氮杂环己基螺哌啶基、 优选取代或未取代的键、苯基、萘基、环丁基、环戊基、环己基、氮杂环丁基、氮杂环戊基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三氮唑基、四氮唑基、氮杂环丁基并氮杂环丁基、氮杂环丁基并氮杂环戊基、氮杂环丁基并氮杂环己基、氮杂环丁基并哌啶基、氮杂环戊基并氮杂环丁基、氮杂环戊基并氮杂环戊基、氮杂环戊基并氮杂环己基、氮杂环戊基并哌啶基、环己基螺氮杂环丁基、环丁基螺氮杂环己基、环戊基并氮杂环戊基、氮杂环己基并氮杂环丁基、氮杂环己基并氮杂环戊基、氮杂环丁基螺氮杂环丁基、氮杂环丁基螺氮杂环戊基、氮杂环丁基螺氮杂环己基、氮杂环戊基螺氮杂环丁基、氮杂环戊基螺氮杂环戊基、氮杂环戊基螺氮杂环己基、氮杂环己基螺氮杂环丁基、氮杂环己基螺氮杂环戊基、氮杂环己基螺氮杂环己基、氮杂环丁基螺哌啶基、氮杂环戊基螺哌啶基、或/>当被取代时，任选进一步被0、1、2、3或4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、oxo、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，优选被0、1、2、3或4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、oxo、甲基、乙基、异丙基、甲氧基、乙氧基或异丙氧基的取代基所取代；
Cy1、Cy2、Cy3和Cy4不能同时为键；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4或Ak5为O时，不能直接与B连接；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4或Ak5不为键时，互相不能直接连接；
当Cy1、Cy2、Cy3和Cy4中有3个都为键时，Ak1、Ak2、Ak3、Ak4和Ak5中至少有一个选自CH2并与B相连接；
当Ak1、Cy1、Ak2、Cy2、Ak3、Cy3、Ak4、Cy4、Ak5有4个及以上不为键时，Cy1、Cy2、Cy3和Cy4中至少有一个不为哌啶基、哌嗪基、嘧啶基或吡啶基；
B选自 优选/>
或者B可以选自
或者B可以选自
Rb1、Rb2、Rb3或Rb4各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基，优选选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、甲基或甲氧基；所述的甲基、甲氧基、烷基和烷氧基任选进一步被0、1、2、3或4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，优选被0、1、2、3或4选自H、F、Cl、Br、I的取代基所取代；
n1、n2、n3、n4、n5、n6、n7、n8、n9、n10、n11、n12各自独立的选自0、1、2、3或4；
K选自优选/>
或者K可以选自
或者K可以选自
或者K可以选自
或者K可以选自
Rk2选自CH2或C＝O；
Rk1、Rk3或Rk4各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、COOH、C1-4烷基或C1-4烷氧基，优选H、F、Cl、Br、I、OH或NH2；
p1或p2各自独立的选自0、1或2。
本发明的一些实施方案涉及一种通式(I)所述的化合物或者其立体异构体、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中
L选自-Ak1-Cy1-Ak2-Cy2-Ak3-Cy3-Ak4-Cy4-Ak5-；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4和Ak5各自独立的选自CH2、O或者键；
Cy1、Cy2、Cy3和Cy4各自独立的选自取代或未取代的键、苯基、萘基、环丁基、环戊基、环己基、环丁基并环丁基、环丁基并环戊基、环丁基并环己基、环戊基并环戊基、环戊基并环己基、环己基并环己基、环丙基并环丁基、环丙基并环戊基、环丙基并环己基、环丁基螺环丁基、环丁基螺环戊基、环丁基螺环己基、环戊基螺环戊基、环戊基螺环己基、环己基螺环己基、环丙基螺环丁基、环丙基螺环戊基、环丙基螺环己基、氮杂环丁基、氮杂环戊基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三氮唑基、四氮唑基、环丙基并氮杂环丁基、环丙基并氮杂环戊基、环丙基并氮杂环己基、环丙基并哌啶基、环丁基并氮杂环丁基、环丁基并氮杂环戊基、环丁基并氮杂环己基、环丁基并哌啶基、环戊基并氮杂环丁基、环戊基并氮杂环戊基、环戊基并氮杂环己基、环戊基并哌啶基、环己基并氮杂环丁基、环己基并氮杂环戊基、环己基并氮杂环己基、环己基并哌啶基、氮杂环丁基并氮杂环丁基、氮杂环丁基并氮杂环戊基、氮杂环丁基并氮杂环己基、氮杂环丁基并哌啶基、氮杂环戊基并氮杂环丁基、氮杂环戊基并氮杂环戊基、氮杂环戊基并氮杂环己基、氮杂环戊基并哌啶基、氮杂环己基并氮杂环丁基、氮杂环己基并氮杂环戊基、氮杂环己基并氮杂环己基、氮杂环己基并哌啶基、环丁基螺氮杂环丁基、环丁基螺氮杂环戊基、环丁基螺氮杂环己基、环戊基螺氮杂环丁基、环戊基螺氮杂环戊基、环戊基螺氮杂环己基、环己基螺氮杂环丁基、环己基螺氮杂环戊基、环己基螺氮杂环己基、氮杂环丁基螺氮杂环丁基、氮杂环丁基螺氮杂环戊基、氮杂环丁基螺氮杂环己基、氮杂环戊基螺氮杂环丁基、氮杂环戊基螺氮杂环戊基、氮杂环戊基螺氮杂环己基、氮杂环己基螺氮杂环丁基、氮杂环己基螺氮杂环戊基、氮杂环己基螺氮杂环己基、环丁基螺哌啶基、环戊基螺哌啶基、环己基螺哌啶基、氮杂环丁基螺哌啶基、氮杂环戊基螺哌啶基、氮杂环己基螺哌啶基、 优选取代或未取代的键、苯基、萘基、环丁基、环戊基、环己基、氮杂环丁基、氮杂环戊基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三氮唑基、四氮唑基、氮杂环丁基并氮杂环丁基、氮杂环丁基并氮杂环戊基、氮杂环丁基并氮杂环己基、氮杂环丁基并哌啶基、氮杂环戊基并氮杂环丁基、氮杂环戊基并氮杂环戊基、氮杂环戊基并氮杂环己基、氮杂环戊基并哌啶基、环己基螺氮杂环丁基、环丁基螺氮杂环己基、环戊基并氮杂环戊基、氮杂环己基并氮杂环丁基、氮杂环己基并氮杂环戊基、氮杂环丁基螺氮杂环丁基、氮杂环丁基螺氮杂环戊基、氮杂环丁基螺氮杂环己基、氮杂环戊基螺氮杂环丁基、氮杂环戊基螺氮杂环戊基、氮杂环戊基螺氮杂环己基、氮杂环己基螺氮杂环丁基、氮杂环己基螺氮杂环戊基、氮杂环己基螺氮杂环己基、氮杂环丁基螺哌啶基、氮杂环戊基螺哌啶基、或/>当被取代时，任选进一步被0、1、2、3或4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、oxo、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，优选被0、1、2、3或4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、oxo、甲基、乙基、异丙基、甲氧基、乙氧基或异丙氧基的取代基所取代；
Cy1、Cy2、Cy3和Cy4不能同时为键；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4或Ak5为O时，不能直接与B连接；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4或Ak5不为键时，互相不能直接连接；
当Cy1、Cy2、Cy3和Cy4中有3个都为键时，Ak1、Ak2、Ak3、Ak4和Ak5中至少有一个选自CH2并与B相连接；
当Ak1、Cy1、Ak2、Cy2、Ak3、Cy3、Ak4、Cy4、Ak5有4个及以上不为键时，Cy1、Cy2、Cy3和Cy4中至少有一个不为哌啶基、哌嗪基、嘧啶基或吡啶基；
B选自优选/>
或者B可以选自
或者B可以选自
Rb1、Rb2、Rb3或Rb4各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基，优选选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、甲基或甲氧基；所述的甲基、甲氧基、烷基和烷氧基任选进一步被0、1、2、3或4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，优选被0、1、2、3或4选自H、F、Cl、Br、I的取代基所取代；
n1、n2、n3、n4各自独立的选自0、1、2、3或4；
K选自优选/> />
或者K可以选自
或者K可以选自
或者K可以选自
或者K可以选自
Rk2选自CH2或C＝O；
Rk1、Rk3或Rk4各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、COOH、C1-4烷基或C1-4烷氧基，优选H、F、Cl、Br、I、OH或NH2；
p1或p2各自独立的选自0、1或2。
本发明的一些实施方案涉及一种通式(I)所述的化合物或者其立体异构体、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中
L选自-Ak1-Cy1-Ak2-Cy2-Ak3-Cy3-Ak4-Cy4-Ak5-；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4和Ak5各自独立的选自CH2、O或者键；
Cy1、Cy2、Cy3和Cy4各自独立的选自取代或未取代的键、苯基、萘基、环丁基、环戊基、环己基、环丁基并环丁基、环丁基并环戊基、环丁基并环己基、环戊基并环戊基、环戊基并环己基、环己基并环己基、环丙基并环丁基、环丙基并环戊基、环丙基并环己基、环丁基螺环丁基、环丁基螺环戊基、环丁基螺环己基、环戊基螺环戊基、环戊基螺环己基、环己基螺环己基、环丙基螺环丁基、环丙基螺环戊基、环丙基螺环己基、氮杂环丁基、氮杂环戊基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三氮唑基、四氮唑基、环丙基并氮杂环丁基、环丙基并氮杂环戊基、环丙基并氮杂环己基、环丙基并哌啶基、环丁基并氮杂环丁基、环丁基并氮杂环戊基、环丁基并氮杂环己基、环丁基并哌啶基、环戊基并氮杂环丁基、环戊基并氮杂环戊基、环戊基并氮杂环己基、环戊基并哌啶基、环己基并氮杂环丁基、环己基并氮杂环戊基、环己基并氮杂环己基、环己基并哌啶基、氮杂环丁基并氮杂环丁基、氮杂环丁基并氮杂环戊基、氮杂环丁基并氮杂环己基、氮杂环丁基并哌啶基、氮杂环戊基并氮杂环丁基、氮杂环戊基并氮杂环戊基、氮杂环戊基并氮杂环己基、氮杂环戊基并哌啶基、氮杂环己基并氮杂环丁基、氮杂环己基并氮杂环戊基、氮杂环己基并氮杂环己基、氮杂环己基并哌啶基、环丁基螺氮杂环丁基、环丁基螺氮杂环戊基、环丁基螺氮杂环己基、环戊基螺氮杂环丁基、环戊基螺氮杂环戊基、环戊基螺氮杂环己基、环己基螺氮杂环丁基、环己基螺氮杂环戊基、环己基螺氮杂环己基、氮杂环丁基螺氮杂环丁基、氮杂环丁基螺氮杂环戊基、氮杂环丁基螺氮杂环己基、氮杂环戊基螺氮杂环丁基、氮杂环戊基螺氮杂环戊基、氮杂环戊基螺氮杂环己基、氮杂环己基螺氮杂环丁基、氮杂环己基螺氮杂环戊基、氮杂环己基螺氮杂环己基、环丁基螺哌啶基、环戊基螺哌啶基、环己基螺哌啶基、氮杂环丁基螺哌啶基、氮杂环戊基螺哌啶基、氮杂环己基螺哌啶基、 优选取代或未取代的键、苯基、萘基、环丁基、环戊基、环己基、氮杂环丁基、氮杂环戊基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三氮唑基、四氮唑基、氮杂环丁基并氮杂环丁基、氮杂环丁基并氮杂环戊基、氮杂环丁基并氮杂环己基、氮杂环丁基并哌啶基、氮杂环戊基并氮杂环丁基、氮杂环戊基并氮杂环戊基、氮杂环戊基并氮杂环己基、氮杂环戊基并哌啶基、环己基螺氮杂环丁基、环丁基螺氮杂环己基、环戊基并氮杂环戊基、氮杂环己基并氮杂环丁基、氮杂环己基并氮杂环戊基、氮杂环丁基螺氮杂环丁基、氮杂环丁基螺氮杂环戊基、氮杂环丁基螺氮杂环己基、氮杂环戊基螺氮杂环丁基、氮杂环戊基螺氮杂环戊基、氮杂环戊基螺氮杂环己基、氮杂环己基螺氮杂环丁基、氮杂环己基螺氮杂环戊基、氮杂环己基螺氮杂环己基、氮杂环丁基螺哌啶基、氮杂环戊基螺哌啶基、或/>当被取代时，任选进一步被0、1、2、3或4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、oxo、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，优选被0、1、2、3或4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、oxo、甲基、乙基、异丙基、甲氧基、乙氧基或异丙氧基的取代基所取代；
Cy1、Cy2、Cy3和Cy4不能同时为键；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4或Ak5为O时，不能直接与B连接；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4或Ak5不为键时，互相不能直接连接；
当Cy1、Cy2、Cy3和Cy4中有3个都为键时，Ak1、Ak2、Ak3、Ak4和Ak5中至少有一个选自CH2并与B相连接；
当Ak1、Cy1、Ak2、Cy2、Ak3、Cy3、Ak4、Cy4、Ak5有4个及以上不为键时，Cy1、Cy2、Cy3和Cy4中至少有一个不为哌啶基、哌嗪基、嘧啶基或吡啶基；
B选自优选/>
或者B可以选自
或者B可以选自
Rb1、Rb2、Rb3或Rb4各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基，优选选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、甲基或甲氧基；所述的甲基、甲氧基、烷基和烷氧基任选进一步被0、1、2、3或4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，优选被0、1、2、3或4选自H、F、Cl、Br、I的取代基所取代；
n5、n6、n7、n8各自独立的选自0、1、2、3或4；
K选自优选/> />
或者K可以选自
或者K可以选自
或者K可以选自
或者K可以选自
Rk2选自CH2或C＝O；
Rk1、Rk3或Rk4各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、COOH、C1-4烷基或C1-4烷氧基，优选H、F、Cl、Br、I、OH或NH2；
p1或p2各自独立的选自0、1或2。
本发明的一些实施例涉及一种通式(I)所述的化合物或者其立体异构体、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中
L选自-Ak1-Cy1-Ak2-Cy2-Ak3-Cy3-Ak4-Cy4-Ak5-；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4和Ak5各自独立的选自CH2、O或者键；
Cy1、Cy2、Cy3和Cy4各自独立的选自取代或未取代的键、苯基、萘基、环丁基、环戊基、环己基、环丁基并环丁基、环丁基并环戊基、环丁基并环己基、环戊基并环戊基、环戊基并环己基、环己基并环己基、环丙基并环丁基、环丙基并环戊基、环丙基并环己基、环丁基螺环丁基、环丁基螺环戊基、环丁基螺环己基、环戊基螺环戊基、环戊基螺环己基、环己基螺环己基、环丙基螺环丁基、环丙基螺环戊基、环丙基螺环己基、氮杂环丁基、氮杂环戊基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三氮唑基、四氮唑基、环丙基并氮杂环丁基、环丙基并氮杂环戊基、环丙基并氮杂环己基、环丙基并哌啶基、环丁基并氮杂环丁基、环丁基并氮杂环戊基、环丁基并氮杂环己基、环丁基并哌啶基、环戊基并氮杂环丁基、环戊基并氮杂环戊基、环戊基并氮杂环己基、环戊基并哌啶基、环己基并氮杂环丁基、环己基并氮杂环戊基、环己基并氮杂环己基、环己基并哌啶基、氮杂环丁基并氮杂环丁基、氮杂环丁基并氮杂环戊基、氮杂环丁基并氮杂环己基、氮杂环丁基并哌啶基、氮杂环戊基并氮杂环丁基、氮杂环戊基并氮杂环戊基、氮杂环戊基并氮杂环己基、氮杂环戊基并哌啶基、氮杂环己基并氮杂环丁基、氮杂环己基并氮杂环戊基、氮杂环己基并氮杂环己基、氮杂环己基并哌啶基、环丁基螺氮杂环丁基、环丁基螺氮杂环戊基、环丁基螺氮杂环己基、环戊基螺氮杂环丁基、环戊基螺氮杂环戊基、环戊基螺氮杂环己基、环己基螺氮杂环丁基、环己基螺氮杂环戊基、环己基螺氮杂环己基、氮杂环丁基螺氮杂环丁基、氮杂环丁基螺氮杂环戊基、氮杂环丁基螺氮杂环己基、氮杂环戊基螺氮杂环丁基、氮杂环戊基螺氮杂环戊基、氮杂环戊基螺氮杂环己基、氮杂环己基螺氮杂环丁基、氮杂环己基螺氮杂环戊基、氮杂环己基螺氮杂环己基、环丁基螺哌啶基、环戊基螺哌啶基、环己基螺哌啶基、氮杂环丁基螺哌啶基、氮杂环戊基螺哌啶基、氮杂环己基螺哌啶基、 优选取代或未取代的键、苯基、萘基、环丁基、环戊基、环己基、氮杂环丁基、氮杂环戊基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三氮唑基、四氮唑基、氮杂环丁基并氮杂环丁基、氮杂环丁基并氮杂环戊基、氮杂环丁基并氮杂环己基、氮杂环丁基并哌啶基、氮杂环戊基并氮杂环丁基、氮杂环戊基并氮杂环戊基、氮杂环戊基并氮杂环己基、氮杂环戊基并哌啶基、环己基螺氮杂环丁基、环丁基螺氮杂环己基、环戊基并氮杂环戊基、氮杂环己基并氮杂环丁基、氮杂环己基并氮杂环戊基、氮杂环丁基螺氮杂环丁基、氮杂环丁基螺氮杂环戊基、氮杂环丁基螺氮杂环己基、氮杂环戊基螺氮杂环丁基、氮杂环戊基螺氮杂环戊基、氮杂环戊基螺氮杂环己基、氮杂环己基螺氮杂环丁基、氮杂环己基螺氮杂环戊基、氮杂环己基螺氮杂环己基、氮杂环丁基螺哌啶基、氮杂环戊基螺哌啶基、或/>当被取代时，任选进一步被0、1、2、3或4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、oxo、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，优选被0、1、2、3或4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、oxo、甲基、乙基、异丙基、甲氧基、乙氧基或异丙氧基的取代基所取代；
Cy1、Cy2、Cy3和Cy4不能同时为键；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4或Ak5为O时，不能直接与B连接；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4或Ak5不为键时，互相不能直接连接；
当Cy1、Cy2、Cy3和Cy4中有3个都为键时，Ak1、Ak2、Ak3、Ak4和Ak5中至少有一个选自CH2并与B相连接；
当Ak1、Cy1、Ak2、Cy2、Ak3、Cy3、Ak4、Cy4、Ak5有4个及以上不为键时，Cy1、Cy2、Cy3和Cy4中至少有一个不为哌啶基、哌嗪基、嘧啶基或吡啶基；
B选自优选/>
或者B可以选自
或者B可以选自
Rb1、Rb2、Rb3或Rb4各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基，优选选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、甲基或甲氧基；所述的甲基、甲氧基、烷基和烷氧基任选进一步被0、1、2、3或4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，优选被0、1、2、3或4选自H、F、Cl、Br、I的取代基所取代；
n9、n10、n11、n12各自独立的选自0、1、2、3或4；
K选自优选/> />
或者K可以选自
或者K可以选自
或者K可以选自
或者K可以选自
Rk2选自CH2或C＝O；
Rk1、Rk3或Rk4各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、COOH、C1-4烷基或C1-4烷氧基，优选H、F、Cl、Br、I、OH或NH2；
p1或p2各自独立的选自0、1或2。
本发明的一些实施例涉及一种通式(I)所述的化合物或者其立体异构体、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中
L选自
或者L可以选自
或者L可以选自/>
L左边与B连接，L右边与K连接；
B选自
或者B可以选自
Rb4选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基，优选选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、甲基或甲氧基；所述的甲基、甲氧基、烷基和烷氧基任选进一步被0、1、2、3或4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，优选被0、1、2、3或4选自H、F、Cl、Br、I的取代基所取代；
n4、n8、n12各自独立的选自0、1、2、3或4，
或者B可以选自
K选自
或者K可以选自
Rk1选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、COOH、C1-4烷基或C1-4烷氧基，优选H、F、Cl、Br、I、OH或NH2，
p1选自0、1或2，
或者K可以选自/>
或者K可以选自
或者K可以选自
本发明的一些实施例涉及一种通式(I)所述的化合物或者其立体异构体、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中
L选自/>
或者L可以选自
或者L可以选自 />
L左边与B连接，L右边与K连接；
B选自
或者B可以选自
Rb4选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基，优选选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、甲基或甲氧基；所述的甲基、甲氧基、烷基和烷氧基任选进一步被0、1、2、3或4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，优选被0、1、2、3或4选自H、F、Cl、Br、I的取代基所取代，
n4、n8、n12各自独立的选自0、1、2、3或4，
或者B可以选自/>
K可以选自 />
或者K可以选自
本发明的一些实施例涉及一种通式(I)所述的化合物或者其立体异构体、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中
L选自 />
或者L可以选自
或者L可以选自
L左边与B连接，L右边与K连接；
B选自
或者B可以选自
Rb4选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基，优选选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、甲基或甲氧基，所述的甲基、甲氧基、烷基和烷氧基任选进一步被0、1、2、3或4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，优选被0、1、2、3或4选自H、F、Cl、Br、I的取代基所取代，
n4、n8、n12各自独立的选自0、1、2、3或4，
或者B可以选自 />
K选自
本发明的一些实施例涉及一种通式(I)所述的化合物或者其立体异构体、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中
L选自 />
或者L可以选自
或者L可以选自
L左边与B连接，L右边与K连接；
B选自
/>
或者B可以选自
Rb4选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基，优选选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、甲基或甲氧基；所述的甲基、甲氧基、烷基和烷氧基任选进一步被0、1、2、3或4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，优选被0、1、2、3或4选自H、F、Cl、Br、I的取代基所取代；
n4选自0、1、2、3或4，
或者B可以选自
K选自
或者K可以选自
Rk1选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、COOH、C1-4烷基或C1-4烷氧基，优选H、F、Cl、Br、I、OH或NH2，
p1选自0、1或2，
或者K可以选自 />
或者K可以选自
或者K可以选自
本发明的一些实施例涉及一种通式(I)所述的化合物或者其立体异构体、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中
L选自/>
或者L可以选自
或者L可以选自 />
L左边与B连接，L右边与K连接；
B选自
或者B可以选自
Rb4选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基，优选选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、甲基或甲氧基；所述的甲基、甲氧基、烷基和烷氧基任选进一步被0、1、2、3或4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，优选被0、1、2、3或4选自H、F、Cl、Br、I的取代基所取代；
n4选自0、1、2、3或4；
或者B可以选自
K选自
或者K可以选自
Rk1选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、COOH、C1-4烷基或C1-4烷氧基，优选H、F、Cl、Br、I、OH或NH2，
p1选自0、1或2，
或者K可以选自
或者K可以选自
或者K可以选自
本发明的一些实施例涉及一种通式(I)所述的化合物或者其立体异构体、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中
L选自/>
或者L可以选自
或者L可以选自/>
L左边与B连接，L右边与K连接；
B选自
或者B可以选自
Rb4选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基，优选选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、甲基或甲氧基；所述的甲基、甲氧基、烷基和烷氧基任选进一步被0、1、2、3或4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，优选被0、1、2、3或4选自H、F、Cl、Br、I的取代基所取代；
n8选自0、1、2、3或4；
或者B可以选自
K选自/>
或者K可以选自
Rk1选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、COOH、C1-4烷基或C1-4烷氧基，优选H、F、Cl、Br、I、OH或NH2，
p1选自0、1或2，
或者K可以选自
或者K可以选自
或者K可以选自/>
本发明的一些实施例涉及一种通式(I)所述的化合物或者其立体异构体、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中
L选自
或者L可以选自/>
或者L可以选自
L左边与B连接，L右边与K连接；
B选自
或者B可以选自
Rb4选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基，优选选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、甲基或甲氧基；所述的甲基、甲氧基、烷基和烷氧基任选进一步被0、1、2、3或4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、CONH2、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，优选被0、1、2、3或4选自H、F、Cl、Br、I的取代基所取代，
n12选自0、1、2、3或4；
或者B可以选自
K选自
或者K可以选自
Rk1选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN、COOH、C1-4烷基或C1-4烷氧基，优选H、F、Cl、Br、I、OH或NH2，
p1选自0、1或2，
或者K可以选自
或者K可以选自 />
或者K可以选自
本发明的一些实施例涉及一种通式(I)所述的化合物或者其立体异构体、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中化合物选自通式(Ia)或(Ib)所示的化合物，
B-Cy1-Cy2-K(Ia)
B-Cy1-Cy2-Cy3-K(Ib)
B选自/>
Cy1、Cy2、Cy3各自独立的选自取代的或者未取代的如下基团之一：4至6元含氮杂单环、5至10元含氮杂并环、6至10元含氮杂螺环、4至6元单环烷基或苯基，所述苯基、环烷基、杂单环、杂并环或杂螺环任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、oxo、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，所述的杂单环、杂并环或杂螺环含有1至4个选自O、S、N的杂原子；
或者Cy1、Cy2、Cy3可以各自独立的选自取代的或者未取代的如下基团之一：
当被取代时，任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、oxo、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
K选自
本发明的一些实施例涉及一种通式(I)所述的化合物或者其立体异构体、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中化合物选自通式(Ia)或(Ib)所示的化合物，
B选自
Cy1、Cy2、Cy3各自独立的选自取代的或者未取代的如下基团之一：/>
K选自 优选/> />
本发明的一些实施例涉及一种通式(I)所述的化合物或者其立体异构体、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中该化合物选自如下结构之一：
/>
/>
/>
/>
/>
/>
本发明的一些实施例涉及一种通式(I)所述的化合物或者其立体异构体、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，其中所述的盐选自三氟乙酸盐。
本发明涉及一种药物组合物，包括本发明所述的化合物或者其立体异构体、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶，以及药学上可接受的载体。
本发明涉及一种本发明所述的化合物或者其立体异构体、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶在用于制备治疗与BTK活性或表达量相关疾病的药物中的应用。
本发明涉及一种本发明所述的化合物或者其立体异构体、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶在用于制备治疗与抑制或降解BTK相关疾病的药物中的应用。
本发明涉及的本发明述的化合物或者其立体异构体、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶的应用，所述的疾病选自肿瘤或自身免疫疾病。
本发明涉及的本发明述的化合物或者其立体异构体、溶剂化物、前药、代谢产物、药学上可接受的盐或共晶的应用，所述的肿瘤选自非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、套细胞淋巴瘤、B细胞淋巴瘤，自身免疫疾病选自内风湿关节炎或银屑病。
合成方法一：
通式(Z-1)与通式(Z-2)通过还原胺化、亲核取代反应或者偶联反应得到对应通式(Z-3)，如果通式(Z-3)反应位有氨基保护基，先脱除氨基保护基后再与通式(Z-4)通过亲核取代反应得到对应通式(II)即通式(I)，更长链的制备，可以重复按照上面第一步方法及脱氨基保护基制备得到；
R4-Cy1-R5(Z-2-1)+R6-Cy2-R7(Z-2-2)→R4-Cy1-Ak2-Cy2-R7(Z-2-3)，
通式(Z-2-1)与通式(Z-2-2)反应可以通过亲核取代反应、偶联反应或者还原胺化得到通式(Z-2-3)，更长链的制备，可以重复按照上面方法制备得到；
如果(Z-2-1)反应位有氨基保护基，脱除保护基后与通式(Z-2-2)反应可以通过亲核取代反应或者偶联反应或者还原胺化得到通式(Z-2-3)，更长链的制备，可以重复按照上面方法制备得到；
或者通式(Z-1)与通式(Z-2-1)通过亲核取代反应、偶联反应或者还原胺化反应(可以通过通式(Z-2-3)制备方法增加链的长度)得到得到对应通式(II)即通式(I)，其中L链的长度可以通过通式(Z-2-3)的制备方法制备。
合成方法二：
如果通式(Z-2)反应位有氨基保护基，先脱除氨基保护基后再与通式(Z-4)通过亲核取代反应或者偶联反应得到对应通式(Z-5)，通式(Z-5)与通式(Z-1)通过亲核取代反应或者偶联反应得到对应通式(II)即通式(I)；
合成方法三：
部分链L可以先于通式(Z-1)发生亲核取代反应或者偶联反应，然后再与链L的其它部分发生亲核取代反应或者偶联反应(合成方法见通式(Z-2-3)制备)，以此类推至得到通式(Z-3)，通式(Z-3)与通式(Z-4)通过亲核取代反应或者偶联反应得到对应通式(II)即通式(I)；
合成方法四：
或者部分链L可以先于通式(Z-4)发生亲核取代反应或者偶联反应，然后再与链L的其它部分发生亲核取代反应或者偶联反应(合成方法见通式(Z-2-3)制备)，以此类推至得到通式(Z-5)，通式(Z-5)与通式(Z-1)通过亲核取代反应或者偶联反应得到对应通式(II)即通式(I)；
合成方法五：
OH-B4-H(Z-7)→OH-B4-L-R2(Z-8)→OTs-B4-L-R2(Z-9)+B1-W1-B2-B3-H(Z-10)→B-L-R2(Z-3)
通式(Z-7)与通式(Z-2)发生亲核取代反应或者偶联反应得到通式(Z-8)
或者通式(Z-7)与部分链L发生亲核取代反应或者偶联反应，然后再与链L的其它部分发生亲核取代反应或者偶联反应(合成方法见通式(Z-2-3)的制备)，得到通式(Z-8)，通式(Z-8)与对甲苯磺酰氯反应得到通式(Z-9)，通式(Z-9)与通式(Z-10)发生亲核取代反应或者偶联反应得到通式(Z-3)；
合成方法六：
通式(Z-1)与通式(Z-2-1)通过还原胺化反应得到对应通式(Z-11)，如果通式(Z-11)反应位有氨基保护基，先脱除氨基保护基后再与通式(Z-2-2)通过还原胺化反应得到通式(Z-12)，如果通式(Z-12)反应位有氨基保护基，先脱除氨基保护基后再与通式(Z-4)通过亲核取代反应得到通式(Z-13)，即通式(I)。
合成方法七：
通式(Z-14)与甲基磺酰氯反应得到通式(Z-15)，通式(Z-15)与通式(Z-10)发生亲核取代反应得到通式(Z-16)，如果通式(Z-16)反应位有氨基保护基，先脱除氨基保护基后再与通式(Z-2-1)通过还原胺化得到对应通式(Z-11)，如果通式(Z-11)反应位有氨基保护基，先脱除氨基保护基后再与通式(Z-2-2)通过还原胺化反应得到通式(Z-12)，如果通式(Z-12)反应位有氨基保护基，先脱除氨基保护基后再与通式(Z-4)通过亲核取代反应得到通式(Z-13)，即通式(I)。
通式(Z-1)合成方法见J.Med.Chem.2015,58,9625-9638；
通式(Z-4)合成方法见WO2017197056；
R1选自(＝O)、-CHO、F、Cl、Br、I、OTf；
R2选自H、(＝O)、-CHO、F、Cl、Br、I或氨基保护基，优选Boc；
R3选自NH2、F、Cl、Br、I、OTf、OH；
R4、R5、R6、R7各自独立的选自H、(＝O)、-CHO、H、F、Cl、Br、I、OTf或氨基保护基。
本发明还提供了如下所示的化合物，
除非有相反的陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义：
本发明所述基团和化合物中所涉及的碳、氢、氧、硫、氮或F、Cl、Br、I均包括它们的同位素情况，及本发明所述基团和化合物中所涉及的碳、氢、氧、硫或氮任选进一步被一个或多个它们对应的同位素所替代，其中碳的同位素包括12C、13C和14C，氢的同位素包括氕(H)、氘(D，又叫重氢)、氚(T，又叫超重氢)，氧的同位素包括16O、17O和18O，硫的同位素包括32S、33S、34S和36S，氮的同位素包括14N和15N，氟的同位素包括17F和19F，氯的同位素包括35Cl和37Cl，溴的同位素包括79Br和81Br。
“烷基”是指1至20个碳原子的直链或支链饱和脂肪族烃基，优选为1至8个碳原子的烷基，更优选为1至6个碳原子的烷基，进一步优选为1至4个碳原子的烷基。非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、正己基及其各种支链异构体；所述的烷基可以任选进一步被0至6个选自F、Cl、Br、I、羟基、巯基、硝基、氰基、氨基、烷基氨基、酰胺基、烯基、炔基、C1-6烷基、C1-6羟基烷基、C1-6烷氧基、3至8元碳环基、3至8元杂环基、3至8元碳环基氧基、3至8元杂环基氧基、羧基或者羧酸酯基的取代基所取代，本文中出现的烷基，其定义与本定义一致。
“烷氧基”是指-O-烷基。非限制性实施例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、正己氧基、环丙氧基和环丁氧基。所述的烷基可以任选进一步被0至5个选自F、Cl、Br、I、羟基、巯基、硝基、氰基、氨基、烷基氨基、烯基、炔基、烷基、羟基烷基、烷氧基、碳环基、杂环基、碳环基氧基、杂环基氧基、羧基或者羧酸酯基的取代基所取代。本文中出现的烷氧基，其定义与本定义一致。
“杂环基”或”杂环”是指取代的或未取代的饱和或不饱和的芳香环或者非芳香环，芳香环或者非芳香环可以是3至8元的单环、4至12元双环或者10至15元三环体系，且包含1至3个选自N、O或S的杂原子，优选3至8元杂环基，杂环基的环中选择性取代的N、S可被氧化成各种氧化态。杂环基可以连接在杂原子或者碳原子上，杂环基可以连接有桥环或者螺环，非限制性实施例包括环氧乙基、氮杂环丙基、氧杂环丁基、氮杂环丁基、1,3-二氧戊环基、1,4-二氧戊环基、1,3-二氧六环基、氮杂环庚基、吡啶基、呋喃基、噻吩基、吡喃基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、咪唑基、哌啶基、哌叮基、吗啉基、硫代吗啉基、1,3-二噻基、二氢呋喃基、二氢吡喃基、二噻戊环基、四氢呋喃基、四氢吡咯基、四氢咪唑基、四氢噻唑基、四氢吡喃基、苯并咪唑基、苯并吡啶基、吡咯并吡啶基、苯并二氢呋喃基、氮杂二环[3.2.1]辛烷基、氮杂二环[5.2.0]壬烷基、氧杂三环[5.3.1.1]十二烷基、氮杂金刚烷基和氧杂螺[3.3]庚烷基。所述的杂环基可以任选进一步被0至5个选自F、Cl、Br、I、＝O、羟基、巯基、硝基、氰基、氨基、烷基氨基、酰胺基、烯基、炔基、烷基、羟基烷基、烷氧基、碳环基、杂环基、碳环基氧基、杂环基氧基、羧基或者羧酸酯基的取代基所取代。本文中出现的杂环基，其定义与本定义一致。
“螺环”是指取代的或未取代的单环之间共用一个碳原子(称螺原子)的5至20元多环基团，其可以包含0至5个双键，且可以含有0至5个选自N、O或S(＝O)n的杂原子。优选为6至14元，进一步优选为6至12元，更优选6至10元，其非限定性实例包括：
当被取代时，取代基可以为1至5个选自F、Cl、Br、I、烷基、环烷基、烷氧基、卤代烷基、硫醇、羟基、硝基、巯基、氨基、氰基、异氰基、芳基、杂芳基、杂环基、桥环基、螺环基、并环基、羟基烷基、＝O、羰基、醛、羧酸、甲酸酯、-(CH2)m-C(＝O)-Ra、-O-(CH2)m-C(＝O)-Ra、-(CH2)m-C(＝O)-NRbRc、-(CH2)mS(＝O)nRa、-(CH2)m-烯基-Ra、ORd或-(CH2)m-炔基-Ra(其中m、n为0、1或2)、芳基硫基、硫代羰基、硅烷基或-NRbRc等基团，其中Rb与Rc独立选自包括H、羟基、氨基、羰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、磺酰基、三氟甲磺酰基，作为选择，Rb与Rc可形成五或六元环烷基或杂环基。Ra与Rd各自独立选自芳基、杂芳基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、羰基、酯基、桥环基、螺环基或并环基。本文中出现的螺环，其定义与本定义一致。
“并环”是指系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对碳原子的多环基团，其中一个或多个环可以含有0个或多个双键，且可以是取代的或未取代，并环体系中的各个环可以含0至5个选自N、S(＝O)n或O的杂原子。优选为5至20元，进一步优选为5至14元，更有选5至12元，再进一步优选5至10元。非限定性实例包括：
当被取代时，取代基可以为1至5个选自F、Cl、Br、I、烷基、环烷基、烷氧基、卤代烷基、硫醇、羟基、硝基、巯基、氨基、氰基、异氰基、芳基、杂芳基、杂环基、桥环基、螺环基、并环基、羟基烷基、＝O、羰基、醛、羧酸、甲酸酯、-(CH2)m-C(＝O)-Ra、-O-(CH2)m-C(＝O)-Ra、-(CH2)m-C(＝O)-NRbRc、-(CH2)mS(＝O)nRa、-(CH2)m-烯基-Ra、ORd或-(CH2)m-炔基-Ra(其中m、n为0、1或2)、芳基硫基、硫代羰基、硅烷基或-NRbRc等基团，其中Rb与Rc独立选自包括H、羟基、氨基、羰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、磺酰基、三氟甲磺酰基，作为选择，Rb与Rc可形成五或六元环烷基或杂环基。Ra与Rd各自独立选自芳基、杂芳基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、羰基、酯基、桥环基、螺环基或并环基。本文中出现的并环，其定义与本定义一致。
“桥环”是指任意两个不直接连接的碳原子的多环基团，可以含有0个或多个双键，且可以是取代的或未取代的，并环体系中的任意环可以含0至5个选自N、S(＝O)n或O杂原子或基团(其中n为1、1、2)。环原子包含5至20个原子，优选为5至14个原子，进一步优选5至12个，在进一步优选5至10个。非限定性实例包括
和金刚烷。当被取代时，取代基可以为1至5个选自F、Cl、Br、I、烷基、环烷基、烷氧基、卤代烷基、硫醇、羟基、硝基、巯基、氨基、氰基、异氰基、芳基、杂芳基、杂环基、桥环基、螺环基、并环基、羟基烷基、＝O、羰基、醛、羧酸、甲酸酯、-(CH2)m-C(＝O)-Ra、-O-(CH2)m-C(＝O)-Ra、-(CH2)m-C(＝O)-NRbRc、-(CH2)mS(＝O)nRa、-(CH2)m-烯基-Ra、ORd或-(CH2)m-炔基-Ra(其中m、n为0、1或2)、芳基硫基、硫代羰基、硅烷基或-NRbRc等基团，其中Rb与Rc独立选自包括H、羟基、氨基、羰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、磺酰基、三氟甲磺酰基，作为选择，Rb与Rc可形成五或六元环烷基或杂环基。Ra与Rd各自独立选自芳基、杂芳基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、羰基、酯基、桥环基、螺环基或并环基。本文中出现的桥环，其定义与本定义一致。
“杂单环”是指单环体系的“杂环基”或“杂环”，本文中出现的杂单环，其定义与本定义一致。
“杂并环”是指含有杂原子的“并环”。本文中出现的杂并环，其定义与本定义一致。
“杂螺环”是指含有杂原子的“螺环”。本文中出现的杂螺环，其定义与本定义一致。
“杂桥环”是指含有杂原子的“桥环”。本文中出现的杂桥环，其定义与本定义一致。
“杂芳基”或“杂芳环”是指取代或未取代的5至14元芳香环，且含有1至5个选自N、O或S(＝O)n杂原子或基团，优选5至10元杂芳香环，进一步优选5至6元。杂芳基的非限制性实施例包括但不限于吡啶基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡喃基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、咪唑基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、1,3-二噻烷基、苯并咪唑基、苯并咪唑、苯并吡啶、吡咯并吡啶等。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，非限制性实施例包含 当被取代时，取代基可以为1至5个选自F、Cl、Br、I、烷基、环烷基、烷氧基、卤代烷基、硫醇、羟基、硝基、巯基、氨基、氰基、异氰基、芳基、杂芳基、杂环基、桥环基、螺环基、并环基、羟基烷基、＝O、羰基、醛、羧酸、甲酸酯、-(CH2)m-C(＝O)-Ra、-O-(CH2)m-C(＝O)-Ra、-(CH2)m-C(＝O)-NRbRc、-(CH2)mS(＝O)nRa、-(CH2)m-烯基-Ra、ORd或-(CH2)m-炔基-Ra(其中m、n为0、1或2)、芳基硫基、硫代羰基、硅烷基或-NRbRc等基团，其中Rb与Rc独立选自包括H、羟基、氨基、羰基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、磺酰基、三氟甲磺酰基，作为选择，Rb与Rc可形成五或六元环烷基或杂环基。Ra与Rd各自独立选自芳基、杂芳基、烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、羰基、酯基、桥环基、螺环基或并环基。本文中出现的杂芳基或杂芳环，其定义与本定义一致。
“任选”或“任选地”是指随后所描述的事件或环境可以但不必须发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。如：“任选被F取代的烷基”指烷基可以但不必须被F取代，说明包括烷基被F取代的情形和烷基不被F取代的情形。
“药学上可接受的盐”或者“其药学上可接受的盐”是指本发明化合物保持游离酸或者游离碱的生物有效性和特性，且所述的游离酸通过与无毒的无机碱或者有机碱，所述的游离碱通过与无毒的无机酸或者有机酸反应获得的盐。
“药物组合物”是指一种或多种本发明所述化合物、其药学上可接受的盐或前药和其它化学组分形成的混合物，其中，“其它化学组分”是指药学上可接受的载体、赋形剂和/或一种或多种其它治疗剂。
“载体”是指不会对生物体产生明显刺激且不会消除所给予化合物的生物活性和特性的材料。
“赋形剂”是指加入到药物组合物中以促进化合物给药的惰性物质。非限制性实施例包括碳酸钙、磷酸钙、糖、淀粉、纤维素衍生物(包括微晶纤维素)、明胶、植物油、聚乙二醇类、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂和崩解剂。
“前药”是指可经体内代谢转化为具有生物活性的本发明化合物。本发明的前药通过修饰本发明化合物中的氨基或者羧基来制备，该修饰可以通过常规的操作或者在体内被除去，而得到母体化合物。当本发明的前药被施予哺乳动物个体时，前药被割裂形成游离的氨基或者羧基。
“共晶”是指活性药物成分(API)和共晶形成物(CCF)在氢键或其他非共价键的作用下结合而成的晶体，其中API和CCF的纯态在室温下均为固体，并且各组分间存在固定的化学计量比。共晶是一种多组分晶体，既包含两种中性固体之间形成的二元共晶，也包含中性固体与盐或溶剂化物形成的多元共晶。
“动物”是指包括哺乳动物，例如人、陪伴动物、动物园动物和家畜，优选人、马或者犬。
“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体，包括顺反异构体、对映异构体和构象异构体。
“任选”或“任选地”或“选择性的”或“选择性地”是指随后所述的事件或状况可以但未必发生，该描述包括其中发生该事件或状况的情况及其中未发生的情况。例如，“选择性地被烷基取代的杂环基”是指该烷基可以但未必存在，该描述包括其中杂环基被烷基取代的情况，及其中杂环基未被烷基取代的情况。
“DC50”是指降解50％蛋白时的剂量。
具体实施方式
以下结合实施例详细说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围包括但是不限于此。
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或(和)质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用(Bruker Avance III 400和Bruker Avance 300)核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代氯仿(CDCl3)，氘代甲醇(CD3OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)；
MS的测定用(Agilent 6120B(ESI)和Agilent 6120B(APCI))；
HPLC的测定使用Agilent 1260DAD高压液相色谱仪(Zorbax SB-C18 100×4.6mm,3.5μM)；
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm-0.20mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm-0.5mm；
柱层析一般使用烟台黄海硅胶200-300目硅胶为载体；
本发明的己知起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买于泰坦科技、安耐吉化学、上海德默、成都科龙化工、韶远化学科技、百灵威科技等公司；
P13I：(合成参考文献：Y.Sun,X.Zhao,N.Ding,H.Gao,Y.Wu,Y.Yang,M.Zhao,J.Hwang,Y.Song,W.Liu,Y.Rao,CellRes.2018,28,779-781.)；
Tf：三氟甲磺酰基；
Boc：叔丁氧基羰基；
Ts：对甲苯磺酰基；
Cbz：苄氧羰基；
Ms：甲基磺酰基；
TMS：三甲基硅基；DMSO：二甲基亚砜；DMF：N,N′-二甲基甲酰胺；DME：乙二醇二甲醚；DCM：二氯甲烷；DIPEA：N,N'-二异丙基乙胺；DCE：1,2-二氯乙烷；Pd2dba3：三二亚苄基丙酮二钯；JohnPhos：(2-联苯基)二叔丁基膦；THF：四氢呋喃；DIAD：偶氮二甲酸二异丙酯；CDI：N,N′-羰基二咪唑；MsCl：甲基磺酰氯；TFA：三氟乙酸。
实施例1：
5-[2-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物1)
5-[2-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
第一步：2-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-7-氮杂螺[3.5]壬-7-甲酸叔丁酯(1b)
Tert-butyl2-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
将3-(4-苯氧基苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1a)(合成方法见J.Med.Chem.2015,58,9625-9638)(0.200g，0.473mmol)溶解在5mL1,2-二氯乙烷中，加入2-氧代-7-氮杂螺[3.5]壬-7-甲酸叔丁酯(0.100g，0.418mmol)和冰醋酸(0.0567g，0.946mmol)，室温搅拌1h，再加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.177g，0.836mmol)，加完后室温反应过夜。滴加饱和碳酸氢钠溶液调节pH至9-10，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-9:1)，得到2-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-7-氮杂螺[3.5]壬-7-甲酸叔丁酯(1b)(0.152g，产率：60％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.23(s,1H),7.66(d,2H),7.44(t,2H),7.24-7.05(m,5H),4.70-4.60(m,1H),3.35-3.25(m,4H),3.22-3.16(m,2H),2.97-2.87(m,2H),2.78-2.65(m,1H),2.24-2.11(m,2H),2.03-1.94(m,2H),1.94-1.84(m,4H),1.60-1.51(m,2H),1.48(t,2H),1.38(s,9H)。
LCMS m/z＝610.3[M+1]+。
第二步：1-[1-(7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1c)
1-[1-(7-Azaspiro[3.5]nonan-2-yl)-4-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将2-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-7-氮杂螺[3.5]壬-7-甲酸叔丁酯(1b)(0.150g，0.246mmol)溶解在2mL二氯甲烷中，加入5mL 4N的盐酸乙酸乙酯溶液，室温搅拌2h。反应液减压浓缩后，残留物加入20mL二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至9-10，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得1-[1-(7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1c)(0.090g，产率：72％)。
LCMS m/z＝510.3[M+1]+。
第三步：5-[2-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物1)
5-[2-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
将1-[1-(7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1c)(0.090g，0.18mmol)溶解在2mL二甲亚砜中，加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(0.049g，0.18mmol)和二异丙基乙基胺(0.11g，0.88mmol)，加完后90℃反应2h。冷却至室温，慢慢滴加10mL水，过滤，滤饼用20mL二氯甲烷溶解，再用5mL饱和氯化钠溶液洗涤，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-9:1)，得到5-[2-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物1)(0.092g，产率：68％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.61(s,1H),8.39(s,1H),7.68-7.60(m,3H),7.39(t,2H),7.27(d,1H),7.20-7.06(m,3H),7.09(d,2H),7.04(dd,1H),5.56(br,2H),4.97-4.90(m,1H),4.80(s,1H),3.38(dd,4H),3.06(s,2H),2.95-2.66(m,5H),2.44(s,2H),2.12(dd,6H),1.69(d,6H)。
LCMS m/z＝383.8[M/2+1]+。
实施例2：
5-[4-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物2)
5-[4-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
第一步：4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(2a)
Tert-butyl 4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]piperidine-1-carboxylate
将3-(4-苯氧基苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1a)(合成方法见J.Med.Chem.2015,58,9625-9638)(0.500g，1.29mmol)溶解在5mL1,2-二氯乙烷中，向其加入4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.309g，1.55mmol)和冰醋酸(0.412g，6.86mmol)，加完后于65℃搅拌反应3h，再冷却至室温，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.548g，2.59mmol)，加完后室温反应过夜。滴加饱和碳酸氢钠溶液调节pH至9-10，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-19:1)，得到4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(2a)(0.310g，产率：42％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.34(s,1H),7.64(d,2H),7.39(t,2H),7.19-7.13(m,3H),7.08(d,2H),5.73(br,2H),4.82-4.72(m,1H),4.25-4.10(m,2H),3.17-3.05(m,2H),2.73(t,2H),2.60-2.35(m,5H),2.08-1.99(m,2H),1.90-1.76(m,2H),1.55-1.45(m,11H)。
第二步：3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-(4-哌啶基)-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(2b)
3-(4-phenoxyphenyl)-1-[1-(4-piperidyl)-4-piperidyl]pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(2a)(0.310g，0.544mmol)溶解在2mL二氯甲烷中，加入5mL 4N盐酸乙酸乙酯溶液，室温搅拌2h。反应液减压浓缩后残留物加入20mL二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至9-10，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-(4-哌啶基)-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(2b)(0.256g，产率：>99％)。
LCMS m/z＝235.8[M/2+1]+。
第三步：4-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(2c)
Tert-butyl 4-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]piperidine-1-carboxylate
将3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-(4-哌啶基)-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(2b)(0.256g，0.545mmol)溶解在3mL1,2-二氯乙烷中，加入4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.130g，0.654mmol)和冰醋酸(0.174g，2.89mmol)，加完后于65℃搅拌反应3h，再冷却至室温，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.231g，1.09mmol)，加完后室温反应过夜。滴加饱和碳酸氢钠溶液调节pH至9-10，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-19:1)，得到4-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(2c)(0.230g，产率：65％)。
第四步：3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-(4-哌啶基)-4-哌啶基]-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(2d)
3-(4-phenoxyphenyl)-1-[1-[1-(4-piperidyl)-4-piperidyl]-4-piperidyl]pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将4-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(2c)(0.230g，0.352mmol)溶解在2mL二氯甲烷中，加入5mL4N盐酸乙酸乙酯溶液，室温搅拌2h。反应液减压浓缩后残留物加入20mL二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至9-10，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-(4-哌啶基)-4-哌啶基]-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(2d)(0.195g，产率：>99％)。
LCMS m/z＝277.3[M/2+1]+。
第五步：5-[4-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物2)
5-[4-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
将3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-(4-哌啶基)-4-哌啶基]-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(2d)(0.165g，0.299mmol)溶解在2mL二甲亚砜中，加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(0.0907g，0.328mmol)和二异丙基乙基胺(0.193g，1.49mmol)，加完后于90℃搅拌反应2h。冷却至室温，慢慢滴加10mL水，过滤，滤饼用20mL二氯甲烷溶解，再用5mL饱和氯化钠溶液洗涤，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-92:8)，得到5-[4-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物2)(0.157g，产率：65％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.06(s,1H),8.23(s,1H),7.67-7.64(m,3H),7.46-7.40(m,2H),7.31(s,1H),7.25-7.23(m,1H),7.22-7.10(m,5H),5.06(dd,1H),4.67-4.57(m,1H),4.10-4.02(m,2H),3.06-2.82(m,7H),2.62-2.47(m,3H),2.35-2.07(m,7H),2.06-1.97(m,1H),1.94-1.86(m,2H),1.85-1.77(m,2H),1.77-1.70(m,2H),1.54-1.36(m,4H)。
LCMS m/z＝405.3[M/2+1]+。
实施例3：
5-[5-[5-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]嘧啶-2-基]-1,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮四三氟乙酸盐(化合物3)
5-[5-[5-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]pyrimidin-2-yl]-1,3,3a,4,6,6a-hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrol-2-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione tetratrifluoroacetate
第一步：2-(5-溴嘧啶-2-基)-1,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-5-甲酸叔丁酯(3b)
Tert-butyl 2-(5-bromopyrimidin-2-yl)-1,3,3a,4,6,6a-hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrole-5-carboxylate
将5-溴-2-氯-嘧啶(1.0g，5.17mmol)溶解在10mL无水乙醇中，加入2-Boc-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯(1.32g，6.20mmol)，再加入三乙胺(1.31g，12.9mmol)，加完后于60℃搅拌反应2h。冷却至室温，加入20mL水和50mL乙酸乙酯，分液，有机层用20mL饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝9:1-4:1)，得到2-(5-溴嘧啶-2-基)-1,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-5-甲酸叔丁酯(3b)(1.80g，产率：94％)。
第二步：2-[5-(4-羟基-1-哌啶基)嘧啶-2-基]-1,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-5-甲酸叔丁酯(3c)
Tert-butyl 2-[5-(4-hydroxy-1-piperidyl)pyrimidin-2-yl]-1,3,3a,4,6,6a-hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrole-5-carboxylate
将2-(5-溴嘧啶-2-基)-1,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-5-甲酸叔丁酯(3b)(1.0g，2.71mmol)溶解在10mL干燥甲苯中，依次加入4-羟基哌啶(0.548g，5.42mmol)、JohnPhos(2-(二叔丁基膦)联苯)(0.0808g，0.271mmol，CAS：224311-51-7)和叔丁醇钠(0.520g，5.42mmol)，置换氮气三次，再加入Pd2(dba)3(0.060g，0.135mmol，CAS：51364-51-3)，加入后于100℃搅拌反应2h。冷却至室温，加入20mL二氯甲烷和20mL水，分液，有机层用10mL饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝4:1-0:100)，得到2-[5-(4-羟基-1-哌啶基)嘧啶-2-基]-1,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-5-甲酸叔丁酯(3c)(0.300g，产率：28％)。
LCMS m/z＝390.3[M+1]+。
第三步：2-[5-[4-(对甲苯磺酰氧基)-1-哌啶基]嘧啶-2-基]-1,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-5-甲酸叔丁酯(3d)
Tert-butyl 2-[5-[4-(p-tosyloxy)-1-piperidyl]pyrimidin-2-yl]-1,3,3a,4,6,6a-hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrole-5-carboxylate
将2-[5-(4-羟基-1-哌啶基)嘧啶-2-基]-1,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-5-甲酸叔丁酯(3c)(0.300g，0.770mmol)溶解在10mL二氯甲烷中，加入4-二甲氨基吡啶(0.113g，0.924mmol)，再加入对甲苯磺酰氯(0.176g，0.924mmol)，加完后室温反应2h。加入20mL饱和碳酸氢钠溶液和20mL二氯甲烷，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝2:3-1:4)，得到2-[5-[4-(对甲苯磺酰氧基)-1-哌啶基]嘧啶-2-基]-1,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-5-甲酸叔丁酯(3d)(0.420g，产率：>99％)。
LCMS m/z＝544.3[M+1]+。
第四步：2-[5-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]嘧啶-2-基]-1,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-5-甲酸叔丁酯(3e)
Tert-butyl 2-[5-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]pyrimidin-2-yl]-1,3,3a,4,6,6a-hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrole-5-carboxylate
/>
将2-[5-[4-(对甲苯磺酰氧基)-1-哌啶基]嘧啶-2-基]-1,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-5-甲酸叔丁酯(3d)(0.400g，0.736mmol)溶解在5mLN,N′-二甲基甲酰胺中，加入3-(4-苯氧基苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1a)(合成方法见J.Med.Chem.2015,58,9625-9638)(0.268g，0.883mmol)，再加入碳酸铯(0.479g，1.47mmol)，加完后于80℃搅拌反应2h。冷却至室温，加入10mL水和30mL乙酸乙酯，分液，有机层用10mL饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝2:3-1:4)至(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝25:2)，得到2-[5-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]嘧啶-2-基]-1,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-5-甲酸叔丁酯(3e)(0.200g，产率：40％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.37(s,1H),8.19(s,2H),7.70-7.62(m,2H),7.44-7.34(m,2H),7.21-7.13(m,3H),7.13-7.05(m,2H),5.80(br,2H),4.94-4.85(m,1H),3.85-3.75(m,2H),3.72-3.58(m,2H),3.54-3.46(m,4H),3.38-3.24(m,2H),3.02-2.90(m,4H),2.64-2.52(m,2H),2.16-2.12(m,2H),1.45(s,9H)。
LCMS m/z＝675.3[M+1]+。
第五步：1-[1-[2-(2,3,3a,4,6,6a-六氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡咯-5-基)嘧啶-5-基]-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(3f)
1-[1-[2-(2,3,3a,4,6,6a-hexahydro-1H-pyrrolo[3,4-c]pyrrol-5-yl)pyrimidin-5-yl]-4-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将2-[5-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]嘧啶-2-基]-1,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-5-甲酸叔丁酯(3e)(0.200g，0.296mmol)溶解在2mL二氯甲烷中，加入10mL 4N盐酸乙酸乙酯溶液，室温搅拌1h。反应液浓缩后向粗品加入30mL二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至9-10，分液，水层再用20mL二氯甲烷萃取一次，合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得1-[1-[2-(2,3,3a,4,6,6a-六氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡咯-5-基)嘧啶-5-基]-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(3f)(0.170g，产率：>99％)。
LCMS m/z＝288.2[M/2+1]+。
第六步：5-[5-[5-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]嘧啶-2-基]-1,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮四三氟乙酸盐(化合物3)
5-[5-[5-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]pyrimidin-2-yl]-1,3,3a,4,6,6a-hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrol-2-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione tetratrifluoroacetate
将1-[1-[2-(2,3,3a,4,6,6a-六氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡咯-5-基)嘧啶-5-基]-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(3f)(0.170g，0.296mmol)溶解在2mL二甲亚砜中，加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(0.090g，0.325mmol)和二异丙基乙基胺(0.191g，1.48mmol)，加完后于90℃搅拌反应2h。冷却至室温，慢慢滴加10mL水，过滤，滤饼用20mL二氯甲烷溶解，再用5mL饱和氯化钠溶液洗涤，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品过Pre-HPLC(仪器及制备柱：采用Glison GX-281制备液相，制备柱型号是Sunfire C18，5μm，内径×长度＝30mm×150mm)。制备方法：粗品用甲醇和二甲亚砜溶解，并用0.45μm滤膜过滤，制备成样品液。流动相体系：乙腈/水(含0.1％TFA)。梯度洗脱方法：乙腈由5％梯度洗脱60％(洗脱时间15min)，冻干得到5-[5-[5-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]嘧啶-2-基]-1,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮四三氟乙酸盐(化合物3)(0.082g，产率：22％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.39(s,1H),8.36(s,1H),8.19(s,2H),7.69-7.59(m,3H),7.40(t,2H),7.20-7.12(m,3H),7.11-7.06(m,2H),6.96(d,1H),6.70(dd,1H),6.30(br,2H),4.95-4.88(m,2H),3.94-3.86(m,2H),3.86-3.70(m,2H),3.60(dd,2H),3.57-3.48(m,2H),3.41(dd,2H),3.27-3.12(m,2H),3.04-2.65(m,6H),2.64-2.51(m,2H),2.19-2.10(m,2H)。
LCMS m/z＝416.3[M/2+1]+。
实施例4：
5-[2-[5-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物4)
5-[2-[5-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]pyrimidin-2-yl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
第一步：2-(5-溴嘧啶-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-甲酸叔丁酯(4a)
Tert-butyl 2-(5-bromopyrimidin-2-yl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
将5-溴-2-氯-嘧啶(3a)(1.0g，5.17mmol)溶解在10mL无水乙醇中，加入2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-甲酸叔丁酯盐酸盐(1.60g，6.20mmol)，再加入三乙胺(1.31g，12.9mmol)，加完后于60℃搅拌反应2h。冷却至室温，加入20mL水和50mL乙酸乙酯，分液，有机层用30mL饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝4:1)，得到2-(5-溴嘧啶-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-甲酸叔丁酯(4a)(1.60g，产率：81％)。
LCMS m/z＝383.1[M+1]+。
第二步：2-[5-(4-羟基-1-哌啶基)嘧啶-2-基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-甲酸叔丁酯(4b)
Tert-butyl 2-[5-(4-hydroxy-1-piperidyl)pyrimidin-2-yl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
将2-(5-溴嘧啶-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-甲酸叔丁酯(4a)(1.00g，2.61mmol)溶解在10mL干燥甲苯中，加入4-羟基哌啶(0.264g，2.61mmol)、JohnPhos(0.0389g，0.130mmol)和叔丁醇钠(0.251g，2.61mmol)，置换氮气三次，再加入Pd2(dba)3(0.060g，0.13mmol)，加入后于100℃搅拌反应2h。冷却至室温，加入20mL二氯甲烷和20mL水，分液，有机层用10mL饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝4:1-0:100)，得到2-[5-(4-羟基-1-哌啶基)嘧啶-2-基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-甲酸叔丁酯(4b)(0.530g，产率：50％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.14(s,2H),4.64(s,1H),3.68(s,4H),3.61-3.53(m,1H),3.31-3.23(m,6H),2.76-2.65(m,2H),1.87-1.75(m,2H),1.71-1.59(m,4H),1.58-1.44(m,2H),1.39(s,9H)。
LCMS m/z＝404.3[M+1]+。
第三步：2-[5-[4-(对甲苯磺酰氧基)-1-哌啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-甲酸叔丁酯(4c)
Tert-butyl 2-[5-[4-(p-tosyloxy)-1-piperidyl]pyrimidin-2-yl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
将2-[5-(4-羟基-1-哌啶基)嘧啶-2-基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-甲酸叔丁酯(4b)(0.530g，1.31mmol)溶解在10mL二氯甲烷中，加入4-二甲氨基吡啶(0.321g，2.63mmol)，再加入对甲苯磺酰氯(0.501g，2.63mmol)，加完后室温反应2h。加入20mL饱和碳酸氢钠溶液和20mL二氯甲烷，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝2:3-1:4)，得到2-[5-[4-(对甲苯磺酰氧基)-1-哌啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-甲酸叔丁酯(4c)(0.550g，产率：75％)。
LCMS m/z＝558.3[M+1]+。
第四步：2-[5-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-甲酸叔丁酯(4d)
Tert-butyl 2-[5-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]pyrimidin-2-yl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
将2-[5-[4-(对甲苯磺酰氧基)-1-哌啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-甲酸叔丁酯(4c)(0.500g，0.897mmol)溶解在5mL N,N′-二甲基甲酰胺中，加入3-(4-苯氧基苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1a)(合成方法见J.Med.Chem.2015,58,9625-9638)(0.326g，1.08mmol)，再加入碳酸铯(0.584g，1.79mmol)，加完后于80℃搅拌反应2h。冷却至室温，加入10mL水和30mL乙酸乙酯，分液，有机层用10mL饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝2:3-1:4)至(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝25:2)，得到2-[5-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-甲酸叔丁酯(4d)(0.230g，产率：37％)。
LCMS m/z＝345.3[M/2+1]+。
第五步：1-[1-[2-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-5-基]-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(4e)
1-[1-[2-(2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl)pyrimidin-5-yl]-4-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将2-[5-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-甲酸叔丁酯(4d)(0.230g，0.334mmol)溶解在2mL二氯甲烷中，加入10mL 4N盐酸乙酸乙酯溶液，室温搅拌1h。反应液浓缩后向粗品加入30mL二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至9-10，分液，水层再用20mL二氯甲烷萃取一次，合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得1-[1-[2-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-5-基]-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(4e)(0.197g，产率：>99％)。
LCMS m/z＝589.3[M+1]+。
第六步：5-[2-[5-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物4)
5-[2-[5-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]pyrimidin-2-yl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
将1-[1-[2-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-5-基]-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(4e)(0.170g，0.289mmol)溶解在2mL二甲亚砜中，加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(0.0877g，0.318mmol)和二异丙基乙基胺(0.187g，1.44mmol)，加完后于90℃搅拌反应2h。冷却至室温，慢慢滴加10mL水，过滤，滤饼用20mL二氯甲烷溶解，再用5mL饱和氯化钠溶液洗涤，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯纯化(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-92:8)，得到5-[2-[5-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物4)(0.030g，产率：11％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.06(s,1H),8.28(s,1H),8.25(s,2H),7.68-7.65(m,3H),7.44(t,2H),7.35(s,1H),7.28(d,1H),7.22-7.09(m,5H),5.06(dd,1H),4.90-4.80(m,1H),3.77(s,4H),3.63-3.58(m,2H),3.55-3.47(m,4H),2.95-2.85(m,3H),2.63-2.51(m,2H),2.40-2.27(m,2H),2.05-1.97(m,3H),1.83(s,4H)。
LCMS m/z＝423.3[M/2+1]+。
实施例5：
5-[7-[5-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物5)
5-[7-[5-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]pyrimidin-2-yl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
第一步：7-(5-溴嘧啶-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-甲酸叔丁酯(5a)
Tert-butyl 7-(5-bromopyrimidin-2-yl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate
将5-溴-2-氯-嘧啶(3a)(1.0g，5.17mmol)溶解在10mL无水乙醇中，加入2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酸叔丁酯盐酸盐(1.60g，6.20mmol)，再加入三乙胺(1.31g，12.9mmol)，加完后于60℃搅拌反应2h。冷却至室温，加入20mL水和50mL乙酸乙酯，分液，有机层用20mL饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝4:1)，得到7-(5-溴嘧啶-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-甲酸叔丁酯(5a)(1.60g，产率：81％)。
第二步：7-[5-(4-羟基-1-哌啶基)嘧啶-2-基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-甲酸叔丁酯(5b)
Tert-butyl 7-[5-(4-hydroxy-1-piperidyl)pyrimidin-2-yl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate
将7-(5-溴嘧啶-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-甲酸叔丁酯(5a)(0.500g，1.30mmol)溶解在10mL干燥甲苯中，加入4-羟基哌啶(0.264g，2.61mmol)、JohnPhos(0.0389g，0.130mmol)和叔丁醇钠(0.251g，2.61mmol)，置换氮气三次，再加入Pd2(dba)3(0.060g，0.065mmol)，加入后于100℃搅拌反应2h。冷却至室温，加入20mL二氯甲烷和20mL水，分液，有机层用10mL饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝4:1-0:100)，得到7-[5-(4-羟基-1-哌啶基)嘧啶-2-基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-甲酸叔丁酯(5b)(0.200g，产率：38％)。
LCMS m/z＝404.3[M+1]+。
第三步：7-[5-[4-(对甲苯磺酰氧基)-1-哌啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-甲酸叔丁酯(5c)
Tert-butyl 7-[5-[4-(p-tosyloxy)-1-piperidyl]pyrimidin-2-yl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate
将7-[5-(4-羟基-1-哌啶基)嘧啶-2-基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-甲酸叔丁酯(5b)(0.380g，0.942mmol)溶解在10mL二氯甲烷中，加入4-二甲氨基吡啶(0.230g，1.88mmol)，再加入对甲苯磺酰氯(0.359g，1.88mmol)，加完后室温反应2h。加入20mL饱和碳酸氢钠溶液和20mL二氯甲烷，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝2:3-1:4)，得到7-[5-[4-(对甲苯磺酰氧基)-1-哌啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-甲酸叔丁酯(5c)(0.440g，产率：84％)。
LCMS m/z＝558.3[M+1]+。
第四步：7-[5-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-甲酸叔丁酯(5d)
Tert-butyl 7-[5-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]pyrimidin-2-yl]-2，7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate
将7-[5-[4-(对甲苯磺酰氧基)-1-哌啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-甲酸叔丁酯(5c)(0.440g，0.789mmol)溶解在5mLN,N′-二甲基甲酰胺中，加入3-(4-苯氧基苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1a)(合成方法见J.Med.Chem.2015,58,9625-9638)(0.287g，0.947mmol)，再加入碳酸铯(0.514g，1.58mmol)，加完后于80℃搅拌反应2h。冷却至室温，加入10mL水和30mL乙酸乙酯，分液，有机层用10mL饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝2:3-1:4)至(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝25:2)，得到7-[5-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-甲酸叔丁酯(5d)(0.230g，产率：42％)。
LCMS m/z＝689.3[M+1]+。
第五步：1-[1-[2-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)嘧啶-5-基]-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(5e)
1-[1-[2-(2,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl)pyrimidin-5-yl]-4-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3，4-d]pyrimidin-4-amine
将7-[5-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-甲酸叔丁酯(5d)(0.230g，0.334mmol)溶解在2mL二氯甲烷中，加入10mL4 N盐酸乙酸乙酯溶液，室温搅拌1h。反应液浓缩后向粗品加入30mL二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至9-10，分液，水层再用20mL二氯甲烷萃取一次，合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得1-[1-[2-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)嘧啶-5-基]-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(5e)(0.197g，产率：>99％)。
LCMS m/z＝589.3[M+1]+。
第六步：5-[7-[5-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物5)
5-[7-[5-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]pyrimidin-2-yl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
将1-[1-[2-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)嘧啶-5-基]-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(5e)(0.170g，0.289mmol)溶解在2mL二甲亚砜中，加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(0.0877g，0.318mmol)、二异丙基乙基胺(0.187g，1.44mmol)，加完后于90℃搅拌反应2h。冷却至室温，慢慢滴加10mL水，过滤，滤饼用20mL二氯甲烷溶解，再用5mL饱和氯化钠溶液洗涤，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯纯化(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-92:8),得到5-[7-[5-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物5)(0.040g，产率：16％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.19(s,1H),8.39(s,1H),8.18(s,2H),7.65(d,3H),7.39(t,2H),7.22-7.12(m,3H),7.08(d,2H),6.81(s,1H),6.54(d,1H),5.93(br,2H),5.00-4.84(m,2H),3.80(d,8H),3.55(d,2H),3.04-2.66(m,5H),2.66-2.50(m,2H),2.20-2.05(m,3H),1.89(s,4H)。
LCMS m/z＝423.3[M/2+1]+。
实施例6：
5-(3-(4-((4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮三三氟乙酸盐(化合物6)
5-(3-(4-((4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione tritrifluoroacetate
第一步：4-((4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(6a)
Tert-butyl 4-((4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
将3-(4-苯氧基苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1a)(合成方法见J.Med.Chem.2015,58,9625-9638)(0.25g,0.59mmol)溶解在20mL二氯甲烷中，依次加入冰醋酸(0.052g，0.89mmol)和4-甲酰基哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.152g,0.71mmol)，氮气氛围下搅拌1h，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.627g,2.96mmol)，室温搅拌过夜。加入20mL饱和碳酸氢钠溶液淬灭反应，搅拌，静置分层，水相用二氯甲烷萃取(15mL x 2)，合并有机相，用30mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:1-25:1)，得4-((4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(6a)(0.284g，产率：82％)。
第二步：3-(4-苯氧基苯基)-1-(1-(哌啶-4-基甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(6b)
3-(4-Phenoxyphenyl)-1-(1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将4-((4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(6a)(0.284g,0.487mmol)用2mL甲醇溶解，滴加10mL饱和盐酸乙酸乙酯溶液，室温反应过夜。减压浓缩得粗品，粗品用饱和碳酸氢钠溶液调pH至8-9，用二氯甲烷萃取(20mL x 3)，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得3-(4-苯氧基苯基)-1-(1-(哌啶-4-基甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(6b)(0.22g，产率：94％)。
第三步：3-(4-((4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(6c)
Tert-butyl 3-(4-((4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)azetidine-1-carboxylate
将3-(4-苯氧基苯基)-1-(1-(哌啶-4-基甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(6b)(0.22g,0.455mmol)溶解在20mL1,2-二氯乙烷中，依次加入冰醋酸(0.055g,0.910mmol)和3-氧代氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(0.094g,0.546mmol)，氮气氛围下搅拌1h，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.578g,2.73mmol)，室温搅拌过夜。加入20mL饱和碳酸氢钠溶液淬灭反应，搅拌，静置分层，水相用二氯甲烷萃取(15mL x 2)，合并有机相，用30mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:1-25:1)，得3-(4-((4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(6c)(0.25g，产率：86％)。
第四步：1-(1-((1-(氮杂环丁-3-基)哌啶-4-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(6d)
1-(1-((1-(azetidin-3-yl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将3-(4-((4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(6c)(0.25g,0.391mmol)用2mL甲醇溶解，滴加10mL饱和盐酸乙酸乙酯溶液，室温反应过夜。减压浓缩得粗品，粗品用饱和碳酸氢钠溶液调pH至8-9，二氯甲烷萃取(20mL x 3)，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得1-(1-((1-(氮杂环丁-3-基)哌啶-4-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(6d)(0.137g，产率：65％)。
第五步：5-(3-(4-((4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮三三氟乙酸盐(化合物6)
5-(3-(4-((4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione tritrifluoroacetate
将1-(1-((1-(氮杂环丁-3-基)哌啶-4-基)甲基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(6d)(0.137g,0.254mmol)溶解于10mL二甲亚砜中，依次加入N,Nˊ-二异丙基乙胺(0.330g,2.54mmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(0.1g,0.331mmol)，氮气氛围下加热至90℃反应6h。向反应液中加入10mL水析出固体，抽滤，滤液用乙酸乙酯萃取(40mL x 2)，合并有机相，用50mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:1-20:1)，得0.127g粗品，粗品过Pre-HPLC(仪器及制备柱：采用Glison GX-281制备液相，制备柱型号是Sunfire C18，5μm，内径×长度＝30mm×150mm)。制备方法：粗品用甲醇和二甲亚砜溶解，并用0.45μm滤膜过滤，制备成样品液。流动相体系：乙腈/水(含0.1％ TFA)。梯度洗脱方法：乙腈由5％梯度洗脱60％(洗脱时间15min)，冻干得到5-(3-(4-((4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮三三氟乙酸盐(化合物6)(78mg，产率：27％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.07(s,1H),8.34(s,1H),7.77-7.62(m,3H),7.50-7.41(m,2H),7.24-7.10(m,5H),6.90(d,1H),6.76(dd,1H),5.08(dd,2H),4.35(d,6H),4.27(d,6H),3.73(d,2H),3.62-3.49(m,2H),2.97-2.80(m,3H),2.57(dd,3H),2.26-1.99(m,6H)。
LCMS m/z＝398.3[M/2+1]+。
实施例7：
5-(2-(5-((4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)甲基)嘧啶-2-基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮三三氟乙酸盐(化合物7)
5-(2-(5-((4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)pyrimidin-2-yl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione tritrifluoroacetate
第一步：7-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-甲酸叔丁酯(7a)
Tert-butyl 7-[2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)-1,3-dioxo-isoindolin-5-yl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate
将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(1.0g,3.62mmol)溶于20mL DMSO中，室温下加入2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-甲酸叔丁酯(0.82g,3.62mmol)和DIPEA(N,N-二异丙基乙胺)(2.3g,3.62mmol)，于90℃搅拌反应2h。向反应液中加入50mL水，水相用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，有机相用水洗涤(20mL×2)，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:1-20:1)，得到7-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-甲酸叔丁酯(7a)(1.0g，产率：57％)。
LCMS m/z＝483.3[M+1]+。
第二步：5-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮盐酸盐(7b)
5-(2,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl)-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dionehydrochloride
将7-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-甲酸叔丁酯(7a)(2.0g,4.14mmol)溶于20mL的4N盐酸乙酸乙酯溶液中并加入5mL的甲醇，室温反应2h。将反应液直接浓缩，得到5-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮盐酸盐(7b)(1.5g，产率：86％)。
LCMS m/z＝383.2[M+1]+。
第三步：1-[1-[(2-氯嘧啶-5-基)甲基]-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(7c)
1-[1-[(2-chloropyrimidin-5-yl)methyl]-4-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将3-(4-苯氧基苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1a)(合成方法见J.Med.Chem.2015,58,9625-9638)(2.97g,7.0mmol)溶于20mL1,2-二氯乙烷中，室温下加入2-氯嘧啶-5-甲醛(1.0g,7.0mmol)，再加入1mL醋酸，室温反应1h。向反应液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(4.5g,21.0mmol)，室温反应过夜。将反应液倒入50mL饱和碳酸氢钠溶液，水相用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，有机相用水洗涤(50mL×2)，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到1-[1-[(2-氯嘧啶-5-基)甲基]-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(7c)(0.4g，产率：11.1％)。
LCMS m/z＝513.6[M+1]+。
第四步：5-[2-[5-[[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]甲基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮三三氟乙酸盐(化合物7)
5-[2-[5-[[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]methyl]pyrimidin-2-yl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione tritrifluoroacetate
将1-[1-[(2-氯嘧啶-5-基)甲基]-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(7c)(0.2g,0.39mmol)溶于2mL DMF中，室温下加入5-(2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮盐酸盐(7b)(0.32g,0.78mmol)和三乙胺(0.15g,1.55mmol)，升温至80℃反应5h。将反应液倒入50mL水中，水相用二氯甲烷/甲醇(v/v)＝10:1萃取(50mL×3)，合并有机相，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品过Pre-HPLC(仪器及制备柱：采用Glison GX-281制备液相，制备柱型号是Sunfire C18，5μm，内径×长度＝30mm×150mm)。制备方法：粗品用甲醇和二甲亚砜溶解，并用0.45μm滤膜过滤，制备成样品液。流动相体系：乙腈/水(含0.1％ TFA)。梯度洗脱方法：乙腈由5％梯度洗脱60％(洗脱时间15min)，冻干得到5-[2-[5-[[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]甲基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮三三氟乙酸盐(化合物7)(0.08g，产率：20％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.48(s,2H),8.42(s,1H),7.65(t,3H),7.45-7.37(m,2H),7.33(d,1H),7.27-7.13(m,4H),7.13-7.05(m,2H),5.31-5.17(m,1H),5.05(dd,1H),4.31(s,2H),3.96(s,4H),3.73(d,2H),3.54-3.43(m,4H),3.43-3.31(m,2H),2.90-2.54(m,5H),2.41(s,2H),2.16-2.02(m,1H),1.99-1.88(m,4H)。
LCMS m/z＝859.3[M+1]+。
实施例8：
5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮三三氟乙酸盐(化合物8)
5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dionetritrifluoroacetate
第一步：3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(8a)
Tert-butyl 3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidine-1-carboxylate
将3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-(4-哌啶基)-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(2b)(0.256g,0.545mmol)溶解在20mL1,2-二氯乙烷中，依次加入冰醋酸(0.049g,0.818mmol)和3-氧代氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(0.131g,0.763mmol)，氮气氛围下加热至65℃搅拌反应3h，然后降温至室温后加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.693g,3.27mmol)，室温搅拌过夜。加入20mL饱和碳酸氢钠溶液淬灭反应，搅拌，静置分层，水相用二氯甲烷萃取(15mL x2)，合并有机相，用30mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100/1-15/1)，得3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(8a)(0.301g，产率：88％)。
第二步：1-(1'-(氮杂环丁-3-基)-[1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(8b)
1-(1'-(azetidin-3-yl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(8a)(0.301g,0.482mmol)用2mL甲醇溶解，滴加10mL4N盐酸乙酸乙酯溶液，室温反应过夜。减压浓缩得粗品，粗品用饱和碳酸氢钠溶液调pH至9-10，用二氯甲烷萃取(20mL x 3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得1-(1'-(氮杂环丁-3-基)-[1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(8b)(0.239g，产率：70％)。
第三步：5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮三三氟乙酸盐(化合物8)
5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dionetritrifluoroacetate
将1-(1'-(氮杂环丁-3-基)-[1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(8b)(0.239g,0.456mmol)溶解于10mL二甲亚砜中，依次加入N,N′-二异丙基乙胺(0.295g,2.28mmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(0.164g,0.592mmol)，氮气氛围下加热至90℃反应6h。加入10mL水析出固体，抽滤，滤液用乙酸乙酯萃取(40mL x 2)，合并有机相，用50mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100/1-20/1)，得粗品。粗品过Pre-HPLC(仪器及制备柱：采用Glison GX-281制备液相，制备柱型号是Sunfire C18，5μm，内径×长度＝30mm×150mm)。制备方法：粗品用甲醇和二甲亚砜溶解，并用0.45μm滤膜过滤，制备成样品液。流动相体系：乙腈/水(含0.1％ TFA)。梯度洗脱方法：乙腈由5％梯度洗脱60％(洗脱时间15min)，冻干得到5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮三三氟乙酸盐(化合物8)(0.207g，产率：40％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.07(s,1H),8.34(s,1H),7.72(d,1H),7.66(d,2H),7.45(t,2H),7.23-7.09(m,5H),6.89(s,1H),6.75(d,1H),5.19-5.04(m,2H),4.40-4.05(m,7H),3.76-3.27(m,7H),2.97-2.75(m,2H),2.64-2.52(m,3H),2.40-2.19(m,4H),2.08-1.79(m,3H)。
LCMS m/z＝781.3[M+1]+。
实施例8-1:
5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物8-1)
5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将化合物8(2g)溶于50mL二氯甲烷，用质量分数为28％的浓氨水(50mL x 5)洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物加入20mL乙酸乙酯，搅拌3h，过滤，滤饼进行真空干燥，得到游离碱5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物8-1)(1.3g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.22(brs,1H),8.39(s,1H),7.67-7.60(m,3H),7.42-7.34(m,2H),7.19-7.10(m,3H),7.10-7.04(m,2H),6.78(d,1H),6.51(dd,1H),5.89(brs,2H),4.96-4.88(m,1H),4.83-4.70(m,1H),4.14-4.04(m,2H),3.92-3.84(m,2H),3.39-3.30(m,1H),3.18-3.04(m,2H),3.00-2.91(m,2H),2.90-2.65(m,3H),2.56-2.32(m,5H),2.16-2.01(m,3H),2.01-1.84(m,4H),1.73-1.59(m,2H)。
LC-MS m/z＝781.4[M+1]+。
实施例9：
5-(4-((4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)甲基)-[1,4'-双哌啶]-1'-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮四三氟乙酸盐(化合物9)
5-(4-((4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dionetetratrifluoroacetate
第一步：4-((4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)甲基)-[1,4'-双哌啶]-1'-甲酸叔丁酯(9a)
Tert-butyl 4-((4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)-[1,4'-bipiperidine]-1'-carboxylate
将3-(4-苯氧基苯基)-1-(1-(哌啶-4-基甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(6b)(0.44g,0.91mmol)溶于10mL1,2-二氯乙烷中，室温下加入4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.24g,1.18mmol)，加热至50℃，搅拌1h后降至室温。向反应液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.48g,2.28mmol)，室温反应过夜。将反应液倒入50mL饱和碳酸氢钠溶液，水相用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，有机相用水洗涤(50mL×2)，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到4-((4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)甲基)-[1,4'-双哌啶]-1'-甲酸叔丁酯(9a)(0.31g，产率：51％)。
LCMS m/z＝667.4[M+1]+。
第二步：1-(1-([1,4'-双哌啶]-4-基甲基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(9b)
1-(1-([1,4'-bipiperidin]-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将4-((4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)甲基)-[1,4'-双哌啶]-1'-甲酸叔丁酯(9a)(0.31g,0.46mmol)溶于6mL二氯甲烷中，加入2mL三氟乙酸，室温反应2h。用20mL 2N氢氧化钠水溶液调pH至9-10，水相用二氯甲烷萃取(10mL×3)，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到1-(1-([1,4'-双哌啶]-4-基甲基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(9b)(0.17g，产率：65％)。
LCMS m/z＝567.4[M+1]+。
第三步：5-(4-((4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)甲基)-[1,4'-双哌啶]-1'-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮四三氟乙酸盐(化合物9)
5-(4-((4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dionetetratrifluoroacetate
将1-(1-([1,4'-双哌啶]-4-基甲基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(9b)(0.17g,0.3mmol)溶于5mL DMSO中，室温下加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(0.1g,0.36mmol)和N,N'-二异丙基乙胺(0.3g,2.3mmol)，升温至80℃反应3h。将反应液倒入20mL水中，水相用二氯甲烷/甲醇(v/v)＝10:1萃取(30mL×3)，合并有机相，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品过Pre-HPLC(仪器及制备柱：采用Glison GX-281制备液相，制备柱型号是Sunfire C18，5μm，内径×长度＝30mm×150mm)。制备方法：粗品用甲醇和二甲亚砜溶解，并用0.45μm滤膜过滤，制备成样品液。流动相体系：乙腈/水(含0.1％ TFA)。梯度洗脱方法：乙腈由5％梯度洗脱60％(洗脱时间15min)，冻干得到5-(4-((4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)甲基)-[1,4'-双哌啶]-1'-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮四三氟乙酸盐(化合物9)(0.11g，产率：45％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.06(s,1H),9.46(d,2H),8.32(s,1H),7.72-7.55(m,3H),7.47-7.41(m,3H),7.35-7.29(m,1H),7.22-7.12(m,5H),5.10-5.05(m,2H),4.26(d,2H),3.71(d,2H),3.63-3.39(m,4H),3.32-3.17(m,2H),3.07-2.85(m,6H),2.65-2.51(m,4H),2.32-1.94(m,8H),1.72-1.69(m,2H),1.48-1.45(m,2H)。
LCMS m/z＝412.3[M/2+1]+。
实施例10：
5-(4-(3-((4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)甲基)氮杂环丁-1-基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮四三氟乙酸盐(化合物10)
5-(4-(3-((4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)azetidin-1-yl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione tetratrifluoroacetate
第一步：3-((4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)甲基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(10a)
Tert-butyl 3-((4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)azetidine-1-carboxylate
将3-(4-苯氧基苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1a)(合成方法见J.Med.Chem.2015,58,9625-9638)(0.5g,1.29mmol)溶于15mLDME中，室温下加入3-甲酰基氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(0.31g,1.68mmol)，于室温搅拌反应0.5h后加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.68g,3.22mmol)，室温搅拌过夜。向反应液中加入50mL水，水相用二氯甲烷萃取(30mL×3)，合并有机相，有机相用水洗涤(20mL×2)，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:1-20:1)，得到3-((4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)甲基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(10a)(0.65g，产率：91％)。
LCMS m/z＝556.4[M+1]+。
第二步：1-(1-(氮杂环丁-3-基甲基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(10b)
1-(1-(azetidin-3-ylmethyl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将3-((4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)甲基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(10a)(0.61g,1.17mmol)溶于6mL二氯甲烷中，加入2mL三氟乙酸，室温反应2h。用20mL 2N氢氧化钠水溶液调pH至9-10，水相用二氯甲烷萃取(10mL×3)，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到1-(1-(氮杂环丁-3-基甲基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(10b)(0.47g，产率：89％)。
LCMS m/z＝456.3[M+1]+。
第三步：4-(3-((4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)甲基)氮杂环丁-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(10c)
Tert-butyl 4-(3-((4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)azetidin-1-yl)piperidine-1-carboxylate
/>
将1-(1-(氮杂环丁-3-基甲基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(10b)(0.47g,1.03mmol)溶于10mL 1,2-二氯乙烷中，室温下加入4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.27g,1.34mmol)，加热到50℃，搅拌1h后降至室温。向反应液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.55g,2.58mmol)，室温反应过夜。将反应液倒入50mL饱和碳酸氢钠溶液，水相用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，有机相用水洗涤(50mL×2)，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到4-(3-((4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)甲基)氮杂环丁-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(10c)(0.31g，产率：48％)。
LCMS m/z＝639.8[M+1]+。
第四步：3-(4-苯氧基苯基)-1-(1-((1-(哌啶-4-基)氮杂环丁-3-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(10d)
3-(4-phenoxyphenyl)-1-(1-((1-(piperidin-4-yl)azetidin-3-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将4-(3-((4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)甲基)氮杂环丁-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(10c)(0.31g,0.49mmol)溶于6mL二氯甲烷中，加入2mL三氟乙酸，室温反应2h。用20mL 2N氢氧化钠水溶液调pH至9-10，水相用二氯甲烷萃取(10mL×3)，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到3-(4-苯氧基苯基)-1-(1-((1-(哌啶-4-基)氮杂环丁-3-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(10d)(0.18g，产率：65％)。
LCMS m/z＝539.7[M+1]+。
第五步：5-(4-(3-((4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)甲基)氮杂环丁-1-基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮四三氟乙酸盐(化合物10)
5-(4-(3-((4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)azetidin-1-yl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione tetratrifluoroacetate
将3-(4-苯氧基苯基)-1-(1-((1-(哌啶-4-基)氮杂环丁-3-基)甲基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(10d)(0.18g,0.34mmol)溶于5mL DMSO中，室温下加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(0.12g,0.37mmol)和N,N'-二异丙基乙胺(0.3g,2.3mmol)，升温至80℃反应3h。将反应液倒入20mL水中，水相用二氯甲烷/甲醇(v/v)＝10:1萃取(30mL×3)，合并有机相，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品过Pre-HPLC(仪器及制备柱：采用Glison GX-281制备液相，制备柱型号是Sunfire C18，5μm，内径×长度＝30mm×150mm)。制备方法：粗品用甲醇和二甲亚砜溶解，并用0.45μm滤膜过滤，制备成样品液。流动相体系：乙腈/水(含0.1％ TFA)。梯度洗脱方法：乙腈由5％梯度洗脱60％(洗脱时间15min)，冻干得到5-(4-(3-((4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)甲基)氮杂环丁-1-基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮四三氟乙酸盐(化合物10)(0.13g，产率：48％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.06(s,1H),8.31(s,1H),7.72-7.54(m,3H),7.48-7.39(m,3H),7.33-7.31(m,1H),7.24-7.09(m,5H),5.10-5.05(m,3H),4.25-4.08(m,7H),3.70-3.38(m,6H),3.01-2.89(m,3H),2.69-2.39(m,4H),2.22-2.19(m,2H),2.10-1.89(m,3H),1.41-1.39(m,2H)。
LCMS m/z＝398.3[M/2+1]+。
实施例11：
5-[4-[4-[4-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮六三氟乙酸盐(化合物11)
5-[4-[4-[4-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione hexatrifluoroacetate
/>
第一步：3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(11a)
Tert-butyl 3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidine-1-carboxylate
将3-(4-苯氧基苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1a)(合成方法见J.Med.Chem.2015,58,9625-9638)(0.500g，1.29mmol)溶解在5mL 1,2-二氯乙烷中，加入3-氧代氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(0.266g，1.55mmol)和冰醋酸(0.412g，6.86mmol)，加完后于65℃搅拌反应3h，再冷却至室温，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.548g，2.59mmol)，加完后室温反应过夜。滴加饱和碳酸氢钠溶液调pH至9-10，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-19:1)，得到3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(11a)(0.700g，产率：>99％)。
LCMS m/z＝542.3[M+1]+。
第二步：1-[1-(氮杂环丁-3-基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(11b)
1-[1-(azetidin-3-yl)-4-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(11a)(0.700g，1.29mmol)溶解在2mL二氯甲烷中，加入5mL 4N盐酸乙酸乙酯溶液，室温搅拌2h。反应液减压浓缩后残留物加入20mL二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠溶液调pH至9-10，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得1-[1-(氮杂环丁-3-基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(11b)(0.410g，产率：72％)。
LCMS m/z＝442.2[M+1]+。
第三步：4-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(11c)
Tert-butyl 4-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]piperidine-1-carboxylate
将1-[1-(氮杂环丁-3-基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(11b)(0.410g，0.929mmol)溶解在5mL1,2-二氯乙烷中，加入4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.222g，1.11mmol)和冰醋酸(0.296g，4.92mmol)，加完后于65℃搅拌反应3h，再冷却至室温，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.394g，1.86mmol)，加完后室温反应过夜。滴加饱和碳酸氢钠溶液调pH至9-10，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-19:1)，得到4-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(11c)(0.380g，产率：66％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.35(s,1H),7.67-7.61(m,2H),7.43-7.35(m,2H),7.21-7.12(m,3H),7.11-7.05(m,2H),5.56(br,2H),4.82-4.72(m,1H),4.07-3.93(m,2H),3.72-3.55(m,2H),3.15-2.87(m,5H),2.81(t,2H),2.49-2.35(m,2H),2.17-1.97(m,5H),1.75-1.67(m,2H),1.45(s,9H),1.35-1.25(m,2H)。
第四步：3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-(4-哌啶基)氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(11d)
3-(4-phenoxyphenyl)-1-[1-[1-(4-piperidyl)azetidin-3-yl]-4-piperidyl]pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将4-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(11c)(0.380g，0.608mmol)溶解在2mL二氯甲烷中，加入5mL 4N盐酸乙酸乙酯溶液，室温搅拌2h。反应液减压浓缩后残留物加入20mL二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠溶液调pH至9-10，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-(4-哌啶基)氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(11d)(0.256g，产率：80％)。
LCMS m/z＝263.3[M/2+1]+。
第五步：4-[4-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]-1-哌啶基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(11e)
Tert-butyl 4-[4-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]-1-piperidyl]piperidine-1-carboxylate
将3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-(4-哌啶基)氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(11d)(0.256g，0.488mmol)溶解在3mL 1,2-二氯乙烷中，加入4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.117g，0.585mmol)和冰醋酸(0.155g，2.59mmol)，加完后于65℃搅拌反应3h，再冷却至室温，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.207g，0.976mmol)，加完后室温反应过夜。滴加饱和碳酸氢钠溶液调pH至9-10，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-19:1)，得到4-[4-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]-1-哌啶基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(11e)(0.244g，产率：71％)。
LCMS m/z＝708.5[M+1]+。
第六步：3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-(4-哌啶基)-4-哌啶基]氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(11f)
3-(4-phenoxyphenyl)-1-[1-[1-[1-(4-piperidyl)-4-piperidyl]azetidin-3-yl]-4-piperidyl]pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将4-[4-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]-1-哌啶基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(11e)(0.244g，0.345mmol)溶解在2mL二氯甲烷中，加入5mL 4N盐酸乙酸乙酯溶液，室温搅拌2h。反应液减压浓缩后残留物加入20mL二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠溶液调pH至9-10，分液，水层用100mL二氯甲烷/甲醇(v/v)＝10:1萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-(4-哌啶基)-4-哌啶基]氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(11f)(0.209g，产率：>99％)。
LCMS m/z＝304.8[M/2+1]+。
第七步：4-[4-[4-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(11g)
Tert-butyl 4-[4-[4-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]piperidine-1-carboxylate
将3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-(4-哌啶基)-4-哌啶基]氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(11f)(0.208g，0.342mmol)溶解在3mL 1,2-二氯乙烷中，加入4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.102g，0.513mmol)和冰醋酸(0.109g，1.81mmol)，加完后于65℃搅拌反应3h，再冷却至室温，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.145g，0.684mmol)，加完后室温反应过夜。滴加饱和碳酸氢钠溶液调节pH至9-10，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-7:3)，得到4-[4-[4-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(11g)(0.152g，产率：56％)。
LCMS m/z＝396.3[M/2+1]+。
第八步：3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-[1-(4-哌啶基)-4-哌啶基]-4-哌啶基]氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(11h)
3-(4-phenoxyphenyl)-1-[1-[1-[1-[1-(4-piperidyl)-4-piperidyl]-4-piperidyl]azetidin-3-yl]-4-piperidyl]pyrazolo[3，4-d]pyrimidin-4-amine
将4-[4-[4-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(11g)(0.152g，0.192mmol)溶解在2mL二氯甲烷中，加入5mL 4N盐酸乙酸乙酯溶液，室温搅拌2h。反应液减压浓缩后残留物加入20mL二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠溶液调pH至9-10，分液，水层用100mL二氯甲烷/甲醇(v/v)＝10:1萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-[1-(4-哌啶基)-4-哌啶基]-4-哌啶基]氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(11h)(0.133g，产率：>99％)。
LCMS m/z＝346.4[M/2+1]+。
第九步：5-[4-[4-[4-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮六三氟乙酸盐(化合物11)
5-[4-[4-[4-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dionehexatrifluoroacetate
将3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-[1-(4-哌啶基)-4-哌啶基]-4-哌啶基]氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(11h)(0.130g，0.188mmol)溶解在2mL二甲亚砜中，加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(0.0676g，0.245mmol)和二异丙基乙基胺(0.122g，0.941mmol)，加完后于90℃搅拌反应2h。冷却至室温，慢慢滴加10mL水，过滤，滤饼用20mL二氯甲烷溶解，再用5mL饱和氯化钠溶液洗涤，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品过Pre-HPLC(仪器及制备柱：采用Glison GX-281制备液相，制备柱型号是Sunfire C18，5μm，内径×长度＝30mm×150mm)。制备方法：粗品用甲醇和二甲亚砜溶解，并用0.45μm滤膜过滤，制备成样品液。流动相体系：乙腈/水(含0.1％ TFA)。梯度洗脱方法：乙腈由5％梯度洗脱60％(洗脱时间15min)，冻干得到5-[4-[4-[4-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮六三氟乙酸盐(化合物11)(0.013g，产率：4％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.06(s,1H),8.28(s,1H),7.78-7.62(m,4H),7.47-7.40(m,2H),7.36-7.28(m,1H),7.26-7.06(m,5H),5.08(dd,1H),4.89-4.78(m,1H),4.31-4.10(m,5H),4.04-3.88(m,4H),3.68-3.45(m,6H),3.07-2.81(m,6H),2.65-2.53(m,2H),2.41-1.82(m,12H),1.76-1.48(m,5H),1.32-1.21(m,4H)。
LCMS m/z＝474.4[M/2+1]+。
实施例12：
5-[4-[4-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮五三氟乙酸盐(化合物12)
5-[4-[4-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dionepentatrifluoroacetate
第一步：4-[4-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(12a)
Tert-butyl 4-[4-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]piperidine-1-carboxylate
将3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-(4-哌啶基)-4-哌啶基]-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(2d)(0.8g,1.45mmol)溶解在20mL 1,2-二氯乙烷中，加入N-叔丁氧羰基-4-哌啶酮(0.9g,4.51mmol)，再加入醋酸(0.4g,6.67mmol)和无水硫酸钠(1g)，加完后85℃反应3h，冷却至室温，加入三乙酰氧基硼氢化钠(2g,9.43mmol)，室温反应过夜。滴加饱和碳酸氢钠溶液调pH至9-10，有机层无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析分离提纯(DCM/MeOH(v/v)＝50/1-5/1)，得4-[4-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(12a)(0.7g,产率：70％)。
LCMS m/z＝736.5[M+1]+。
第二步：3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-(4-哌啶基)-4-哌啶基]-4-哌啶基]-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(12b)
3-(4-phenoxyphenyl)-1-[1-[1-[1-(4-piperidyl)-4-piperidyl]-4-piperidyl]-4-piperidyl]pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将4-[4-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(12a)(0.7g,0.95mmol)溶于5mL二氯甲烷中，加入5mL三氟乙酸，室温搅拌过夜。减压除去溶剂，加入20mL二氯甲烷和2mL乙醇，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，水相再用20mL二氯甲烷和2mL乙醇萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-(4-哌啶基)-4-哌啶基]-4-哌啶基]-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(12b)(0.60g,产率：99％)。
LCMS m/z＝636.3[M+1]+。
第三步：5-[4-[4-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮五三氟乙酸盐(化合物12)
5-[4-[4-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dionepentatrifluoroacetate
将3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-(4-哌啶基)-4-哌啶基]-4-哌啶基]-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(12b)(0.25g,0.39mmol)、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(0.11g,0.39mmol)和三乙胺(0.12g,1.2mmol)溶于3mL DMSO中，升温至90℃搅拌12h。冷却至室温，加入10mL水，过滤，滤饼过Pre-HPLC(仪器及制备柱：采用Glison GX-281制备液相，制备柱型号是Sunfire C18，5μm，内径×长度＝30mm×150mm)。制备方法：粗品用甲醇和二甲亚砜溶解，并用0.45μm滤膜过滤，制备成样品液。流动相体系：乙腈/水(含0.1％ TFA)。梯度洗脱方法：乙腈由5％梯度洗脱60％(洗脱时间15min)，冻干得到5-[4-[4-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮五三氟乙酸盐(化合物12)(0.15g,产率：28％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.07(s,1H),10.05(br,2H),8.33(s,1H),7.75-7.62(m,3H),7.48-7.39(m,3H),7.35-7.29(m,1H),7.24-7.10(m,5H),5.27-5.04(m,3H),5.04-4.35(br,5H),4.30-4.20(m,2H),3.73-3.43(m,8H),3.13-2.84(m,6H),2.64-2.54(m,2H),2.40-2.17(m,6H),2.15-1.87(m,7H),1.77-1.60(m,2H)。
LCMS m/z＝892.4[M+1]+。
实施例13：
5-[3-[4-[4-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物13)
5-[3-[4-[4-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
第一步：3-[4-[4-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(13a)
Tert-butyl 3-[4-[4-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]azetidine-1-carboxylate
在50mL反应瓶中依次加入3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-(4-哌啶基)-4-哌啶基]氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(11f)(420mg，0.69mmol)、乙酸(41.4mg，0.69mmol)、3-氧代氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(118mg，0.69mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(292.5mg，1.38mmol)和二氯甲烷(20mL)，加完后在室温下搅拌反应3h。将反应液抽滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液(8mL)洗涤，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩，得到3-[4-[4-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(13a)(350mg，产率：67％)。
第二步：1-[1-[1-[1-[1-(氮杂环丁-3-基)-4-哌啶基]-4-哌啶基]氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(13b)
1-[1-[1-[1-[1-(azetidin-3-yl)-4-piperidyl]-4-piperidyl]azetidin-3-yl]-4-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将3-[4-[4-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(13a)(350mg，0.46mmol)溶于8mL的4N盐酸乙酸乙酯溶液中并加入5mL的甲醇，室温反应2h。将反应液直接浓缩，然后反应体系用乙酸乙酯(30mL)稀释，用饱和碳酸氢钠溶液(10mL)淬灭，乙酸乙酯(5mL×3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到1-[1-[1-[1-[1-(氮杂环丁-3-基)-4-哌啶基]-4-哌啶基]氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(13b)(180mg，产率：59％)。
第三步：5-[3-[4-[4-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物13)
5-[3-[4-[4-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
将1-[1-[1-[1-[1-(氮杂环丁-3-基)-4-哌啶基]-4-哌啶基]氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(13b)(180mg，0.27mmol)溶于DMSO(20mL)中，室温下加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(74.5mg，0.27mmol)和DIPEA(174.4mg,1.35mmol)，于90℃搅拌反应2h。向反应液中加入50mL水，水相用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，有机相用水洗涤(20mL×2)，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:1-20:1)，得到粗品。粗品过Pre-HPLC(仪器及制备柱：采用Glison GX-281制备液相，制备柱型号是Sunfire C18，5μm，内径×长度＝30mm×150mm)。制备方法：粗品用甲醇和二甲亚砜溶解，并用0.45μm滤膜过滤，制备成样品液。流动相体系：乙腈/水(含0.1％TFA)。梯度洗脱方法：乙腈由5％梯度洗脱60％(洗脱时间15min)，制备产品经碱化浓缩得到5-[3-[4-[4-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物13)(63mg，产率：25％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.37(s,1H),7.74-7.49(m,4H),7.43-7.34(m,2H),7.18-7.13(m,3H),7.09-7.04(m,2H),6.77(d,1H),6.51(dd,1H),5.67(br,2H),5.01-4.88(m,2H),4.34-4.20(m,1H),4.08(t,2H),3.90-3.82(m,2H),3.58-3.50(m,2H),3.38-3.30(m,1H),3.13-3.05(m,1H),3.00-2.70(m,11H),2.46(t,2H),2.38-2.29(m,2H),2.19-2.14(m,2H),1.94-1.86(m,6H),1.81-1.74(m,2H),1.67-1.59(m,2H),1.44-1.39(m,2H),0.99-0.90(m,2H)。
LCMS m/z＝460.4[M/2+1]+。
实施例14
5-[4-[4-[4-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮六三氟乙酸盐(化合物14)
5-[4-[4-[4-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dionehexatrifluoroacetate
第一步：4-[4-[4-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(14a)
Tert-butyl 4-[4-[4-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]piperidine-1-carboxylate
将3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-(4-哌啶基)-4-哌啶基]-4-哌啶基]-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(12b)(0.3g,0.47mmol)溶解在20mL 1,2-二氯乙烷中，加入N-叔丁氧羰基-4-哌啶酮(0.28g,1.42mmol)，再加入醋酸(0.14g,2.36mmol)和0.5克无水硫酸钠，加完后升温至85℃反应3h，冷却至室温，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.5g,2.36mmol)，室温反应过夜。滴加饱和碳酸氢钠水溶液调pH至9-10，有机层用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析分离提纯(DCM/MeOH(v/v)＝50/1-5/1)，得4-[4-[4-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(14a)(0.13g，产率：33％)。
LCMS m/z＝819.5[M+1]+。
第二步：3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-[1-(4-哌啶基)-4-哌啶基]-4-哌啶基]-4-哌啶基]-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺五三氟乙酸盐(14b)
3-(4-phenoxyphenyl)-1-[1-[1-[1-[1-(4-piperidyl)-4-piperidyl]-4-piperidyl]-4-piperidyl]-4-piperidyl]pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-aminepentatrifluoroacetate
将4-[4-[4-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(14a)(0.13g,0.16mmol)溶于2mLDCM中，加入2mL三氟乙酸，加毕，室温搅拌过夜。减压除去溶剂，粗品直接用于下一步。
LCMS m/z＝719.5[M+1]+。
第三步：5-[4-[4-[4-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮六三氟乙酸盐(化合物14)
5-[4-[4-[4-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dionehexatrifluoroacetate
将3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-[1-(4-哌啶基)-4-哌啶基]-4-哌啶基]-4-哌啶基]-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺五三氟乙酸盐(14b)(0.20g,0.16mmol)、2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(0.05g,0.17mmol)和三乙胺(0.12g,1.2mmol)溶于3mL DMSO中，升温至120℃搅拌6h。冷却至室温，加入10mL水，过滤，滤饼过Pre-HPLC(仪器及制备柱：采用Glison GX-281制备液相，制备柱型号是Sunfire C18，5μm，内径×长度＝30mm×150mm)。制备方法：粗品用甲醇和二甲亚砜溶解，并用0.45μm滤膜过滤，制备成样品液。流动相体系：乙腈/水(含0.1％TFA)。梯度洗脱方法：乙腈由浓度(v/v，下同)5％梯度洗脱至浓度60％(洗脱时间15min)，冻干得到5-[4-[4-[4-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮六三氟乙酸盐(化合物14)(0.06g，产率：25％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.06(s,1H),10.01(br,2H),8.32(s,1H),7.74-7.62(m,3H),7.48-7.40(m,3H),7.35-7.28(m,1H),7.24-7.10(m,5H),5.24-4.92(m,3H),4.60-4.17(m,9H),3.75-3.45(m,11H),3.13-2.85(m,8H),2.67-2.56(m,2H),2.40-2.20(m7H),2.14-1.88(m,8H),1.77-1.57(m,2H)。
LCMS m/z＝975.5[M+1]+。
实施例15：
5-[4-[4-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物15)
5-[4-[4-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
第一步：5-[4-[4-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物15)
5-[4-[4-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
将3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-(4-哌啶基)-4-哌啶基]氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(11f)(164mg，0.27mmol)溶于20mL DMSO中，室温下加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(74.5mg,0.27mmol)和DIPEA(174.4mg,1.35mmol)，于90℃搅拌反应2h。向反应液中加入50mL水，水相用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，有机相用水洗涤(20mL×2)，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:1-20:1)，得到粗品。粗品过Pre-HPLC(仪器及制备柱：采用Glison GX-281制备液相，制备柱型号是Sunfire C18，5μm，内径×长度＝30mm×150mm)。制备方法：粗品用甲醇和二甲亚砜溶解，并用0.45μm滤膜过滤，制备成样品液。流动相体系：乙腈/水(含0.1％TFA)。梯度洗脱方法：乙腈由浓度5％梯度洗脱至浓度60％(洗脱时间15min)，制备产品经碱化浓缩得到5-[4-[4-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物15)(58mg，产率：25％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.38(s,1H),7.75-7.58(m,4H),7.54-7.51(m,1H),7.40-7.36(m,2H),7.17-7.13(m,3H),7.08-7.02(m,3H),5.65(s,2H),4.95-4.91(m,2H),4.32-4.20(m,1H),3.97(d,2H),3.61(s,1H),3.53(s,1H),3.11-3.10(m,1H),2.99-2.90(m,7H),2.86-2.85(m,1H),2.80-2.69(m,3H),2.60-2.59(m,1H),2.49-2.44(m,1H),2.27-2.14(m,4H),1.95-1.86(m,6H),1.77-1.72(m,2H),1.67-1.61(m,2H),0.96-0.94(m,2H)。
LCMS m/z＝864.5[M+1]+。
实施例16：
5-[4-[3-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]吡咯-1-基]氮杂环丁-1-基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物16)
5-[4-[3-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]pyrrolidin-1-yl]azetidin-1-yl]-1-piperidyl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
第一步：3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(16a)
Tert-butyl 3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]pyrrolidine-1-carboxylate
在50mL反应瓶中依次加入3-(4-苯氧基苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1a)(合成方法见J.Med.Chem.2015,58,9625-9638)(1.16g，3mmol)、乙酸(180mg，3mmol)、3-氧代吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(555.7mg，3mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(953.7mg，4.5mmol)和二氯甲烷(40mL)，加完后在室温下搅拌反应3h。将反应液抽滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液(30mL)洗涤，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩，得到3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(16a)(1.2g，产率：72％)。
第二步：3-(4-苯氧基苯基)-1-(1-吡咯烷-3-基-4-哌啶基)吡唑并[3,4-b]吡啶-4-胺(16b)
3-(4-phenoxyphenyl)-1-(1-pyrrolidin-3-yl-4-piperidyl)pyrazolo[3,4-b]pyridin-4-amin
将3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(16a)(1.1g,2mmol)溶于10mL的4N盐酸乙酸乙酯溶液中并加入5mL的甲醇，室温反应2h。将反应液直接浓缩，然后反应体系以乙酸乙酯(30mL)稀释，用饱和碳酸氢钠(10mL)淬灭，乙酸乙酯(5mL×3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到3-(4-苯氧基苯基)-1-(1-吡咯烷-3-基-4-哌啶基)吡唑并[3,4-b]吡啶-4-胺(16b)(837mg，产率：92％)。
第三步：3-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]吡咯-1-基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(16c)
Tert-butyl 3-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]pyrrolidin-1-yl]azetidine-1-carboxylate
在50mL反应瓶中，依次加入3-(4-苯氧基苯基)-1-(1-吡咯烷-3-基-4-哌啶基)吡唑并[3,4-b]吡啶-4-胺(16b)(837mg，1.84mmol)、乙酸(110.4mg，1.84mmol)、3-氧代氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(315mg，1.84mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(924mg，4.36mmol)和二氯甲烷(40mL)，加完后在室温下搅拌反应3h。将反应液抽滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液(20mL)洗涤，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩，得到3-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]吡咯-1-基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(16c)(680mg，产率：61％)。
LCMS m/z＝611.4[M+1]+。
第四步：1-[1-[1-(氮杂环丁-3-基)吡咯-3-基]-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(16d)
1-[1-[1-(azetidin-3-yl)pyrrolidin-3-yl]-4-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将3-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]吡咯-1-基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(16c)(680mg，1.11mmol)溶于8mL的4N盐酸乙酸乙酯溶液中并加入5mL的甲醇，室温反应2h。将反应液直接浓缩，然后反应体系用乙酸乙酯(30mL)稀释，用饱和碳酸氢钠(10mL)淬灭，乙酸乙酯(5mL×3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到1-[1-[1-(氮杂环丁-3-基)吡咯-3-基]-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(16d)(420mg，产率：74％)。
第五步：4-[3-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]吡咯-1-基]氮杂环丁-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(16e)
Tert-butyl 4-[3-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]pyrrolidin-1-yl]azetidin-1-yl]piperidine-1-carboxylate
在50mL反应瓶中，依次加入1-[1-[1-(氮杂环丁-3-基)吡咯-3-基]-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(16d)(420mg，0.82mmol)、乙酸(49.2mg，0.82mmol)、4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(163.4mg，0.82mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(348mg，1.64mmol)和二氯甲烷(35mL)，加完后在室温下搅拌反应3h。将反应液抽滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液(15mL)洗涤，分液后有机层用无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩，得到4-[3-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]吡咯-1-基]氮杂环丁-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(16e)(320mg，产率：56％)。
第六步：3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-(4-哌啶基)氮杂环丁-3-基]吡咯-3-基]-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(16f)
3-(4-phenoxyphenyl)-1-[1-[1-[1-(4-piperidyl)azetidin-3-yl]pyrrolidin-3-yl]-4-piperidyl]pyrazolo[3，4-d]pyrimidin-4-amine
将4-[3-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]吡咯-1-基]氮杂环丁-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(16e)(320mg，0.46mmol)溶于8mL的4N盐酸乙酸乙酯溶液中并加入5mL的甲醇，室温反应2h。将反应液直接浓缩，然后反应体系以乙酸乙酯(30mL)稀释，用饱和碳酸氢钠(10mL)淬灭，乙酸乙酯(5mL×3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-(4-哌啶基)氮杂环丁-3-基]吡咯-3-基]-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(16f)(210mg，产率：77％)。
第七步：5-[4-[3-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]吡咯-1-基]氮杂环丁-1-基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物16)
5-[4-[3-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]pyrrolidin-1-yl]azetidin-1-yl]-1-piperidyl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
将3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-(4-哌啶基)氮杂环丁-3-基]吡咯-3-基]-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(16f)(210mg，0.35mmol)溶于DMSO(20mL)中，室温下加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(96.7mg,0.35mmol)和DIPEA(174.4mg,1.35mmol)，于90℃搅拌反应2h。向反应液中加入50mL水，分层，水相用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，有机相用水洗涤(20mL×2)，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:1-20:1)，得到粗品。粗品过Pre-HPLC(仪器及制备柱：采用Glison GX-281制备液相，制备柱型号是SunfireC18，5μm，内径×长度＝30mm×150mm)。制备方法：粗品用甲醇和二甲亚砜溶解，并用0.45μm滤膜过滤，制备成样品液。流动相体系：乙腈/水(含0.1％TFA)。梯度洗脱方法：乙腈由浓度5％梯度洗脱至浓度60％(洗脱时间15min)，制备产品经碱化浓缩得到5-[4-[3-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]吡咯-1-基]氮杂环丁-1-基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物16)(58mg，产率：32％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.38(s,1H),7.75-7.50(m,4H),7.42-7.35(m,2H),7.256-7.25(m,1H),7.19-7.10(m,3H),7.08-7.06(m,2H),7.04-6.98(m,1H),5.72(s,2H),5.00-4.90(m,2H),4.67(s,2H),4.38-4.18(m,1H),3.86-3.74(m,2H),3.47-3.42(m,2H),3.13-2.98(m,6H),2.90-2.64(m,6H),2.45-2.43(m,1H),2.37-2.32(m,2H),2.19-2.10(m,5H),2.05-2.03(m,2H),1.81-1.77(m,2H),0.98-0.90(m,2H)。
LCMS m/z＝425.8[M/2+1]+。
实施例17：
5-[3-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物17)
5-[3-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidin-1-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
第一步：3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(17a)
tert-butyl 3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidine-1-carboxylate
将3-(4-苯氧基苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1a)(合成方法见J.Med.Chem.2015,58,9625-9638)(0.500g,1.29mmol)溶解在5mL 1,2-二氯乙烷中，依次加入3-氧代氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(0.266g,1.55mmol)和冰醋酸(0.412g,6.86mmol)，加完后65℃反应3h。反应液冷却至室温，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.548g,2.59mmol)，加完后室温反应过夜。向反应液中滴加饱和碳酸氢钠溶液调pH至9-10，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-19:1)，得到3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(17a)(0.700g，产率：>99％)。
LCMS m/z＝542.3[M+1]+。
第二步：1-[1-(氮杂环丁-3-基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(17b)
1-[1-(azetidin-3-yl)-4-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(17a)(0.700g,1.29mmol)溶解在2mL二氯甲烷中，加入5mL 4N盐酸乙酸乙酯溶液，室温搅拌2h。反应液减压浓缩后残留物加入20mL二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠溶液调pH至9-10，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得1-[1-(氮杂环丁-3-基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(17b)(0.410g,产率：72％)。
LCMS m/z＝442.2[M+1]+。
第三步：3-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(17c)
tert-butyl 3-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidine-1-carboxylate
/>
将1-[1-(氮杂环丁-3-基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(17b)(0.200g,0.453mmol)溶解在5mL 1,2-二氯乙烷中，依次加入3-氧代氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(0.116g,0.680mmol)和冰醋酸(0.0544g,0.906mmol)，加完后65℃反应3h。反应液冷却至室温，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.192g,0.906mmol)，加完后室温反应过夜。向反应液滴加饱和碳酸氢钠溶液调pH至9-10，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-19:1)，得到3-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(17c)(0.150g,产率：56％)。
LCMS m/z＝597.3[M+1]+。
第四步：1-[1-[1-(氮杂环丁-3-基)氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(17d)
1-[1-[1-(azetidin-3-yl)azetidin-3-yl]-4-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将3-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(17c)(0.140g,0.235mmol)溶解在2mL二氯甲烷中，加入5mL 4N盐酸乙酸乙酯溶液，室温搅拌2h。反应液减压浓缩后残留物加入20mL二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠溶液调pH至9-10，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得1-[1-[1-(氮杂环丁-3-基)氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(17d)(0.100g,产率：86％)。
LCMS m/z＝497.3[M+1]+。
第五步：5-[3-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物17)
5-[3-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidin-1-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
将1-[1-[1-(氮杂环丁-3-基)氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(17d)(0.100g,0.201mmol)溶解在2mL二甲亚砜中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(0.0667g,0.242mmol)和二异丙基乙胺(0.130g,1.01mmol)，加完后90℃反应2h。反应液冷却至室温，慢慢滴加10mL水，过滤，滤饼用20mL二氯甲烷溶解，再用5mL饱和氯化钠溶液洗涤，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-19:1)，得到5-[3-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异二氢吲哚-1,3-二酮(化合物17)(0.063g，产率：42％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.99(s,1H),8.39(s,1H),7.72-7.57(m,3H),7.45-7.32(m,2H),7.21-7.11(m,3H),7.10-7.04(m,2H),6.78(d,1H),6.52(dd,1H),5.81(brs,2H),4.92(dd,1H),4.87-4.71(m,1H),4.08-3.99(m,2H),3.94-3.83(m,2H),3.76-3.65(m,1H),3.64-3.49(m,2H),3.20-3.04(m,3H),3.00-2.64(m,5H),2.52-2.34(m,2H),2.18-1.89(m,5H)。
LCMS m/z＝377.3[M/2+1]+。
实施例17-1：
5-[3-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-基]-2-[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]异吲哚啉-1,3-二酮(化合物17-a)
5-[3-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidin-1-yl]-2-[(3R)-2,6-dioxo-3-piperidyl]isoindoline-1,3-dione
5-[3-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-基]-2-[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]异吲哚啉-1,3-二酮(化合物17-b)
5-[3-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidin-1-yl]-2-[(3S)2,6-dioxo-3-piperidyl]isoindoline-1,3-dione
第一步：化合物17-a及17-b制备
化合物17通过高效液相色谱法分离制备得到化合物17-a及17-b。制备条件如下：
仪器及制备柱：采用Thar 200preparative SFC(SFC-7)制备液相，制备柱型号ChiralCel OJ,250×50mm I.D.,10μm。
制备方法：粗品用甲醇/二氯甲烷溶解，制备成样品液。
流动相体系：sCO2(超临界CO2)/乙醇，等梯度洗脱：sCO2/乙醇＝55/45。
流速：200mL/min
化合物17-a及17-b的分析方法：
仪器：安捷伦HPLC1260
色谱柱：大赛璐CHIRALPAK IC
规格：4.6mm×250mm，5μm
流动相A：20mM碳酸氢铵溶液(二乙胺调节pH至9.0)
流动相B：乙腈
柱温：35℃
流速：0.8mL/min
波长：264nm
洗脱程序：流动相A:B＝20:80，等度洗脱50min。
化合物17-a保留时间：32.234min；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.04(s,1H),8.38(s,1H),7.69-7.60(m,3H),7.42-7.34(m,2H),7.21-7.11(m,3H),7.11-7.05(m,2H),6.78(d,1H),6.52(dd,1H),5.63(brs,2H),4.92(dd,1H),4.85-4.72(m,1H),4.09-3.98(m,2H),3.93-3.82(m,2H),3.74-3.64(m,1H),3.61-3.50(m,2H),3.16-3.01(m,3H),2.99-2.64(m,5H),2.52-2.34(m,2H),2.17-1.95(m,5H)。
化合物17-b保留时间：36.797min。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.37(s,1H),7.68-7.57(m,3H),7.43-7.33(m,2H),7.20-7.10(m,3H),7.10-7.04(m,2H),6.78(d,1H),6.52(dd,1H),5.71(brs,2H),4.92(dd,1H),4.84-4.72(m,1H),4.08-3.98(m,2H),3.91-3.82(m,2H),3.76-3.64(m,1H),3.60-3.50(m,2H),3.16-3.01(m,3H),2.98-2.62(m,5H),2.51-2.34(m,2H),2.17-1.97(m,5H)。
实施例17-a
5-[3-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-基]-2-[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]异吲哚啉-1,3-二酮(化合物17-a)
5-[3-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidin-1-yl]-2-[(3R)-2,6-dioxo-3-piperidyl]isoindoline-1,3-dione
第一步：4-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)[1,3'-双氮杂环丁]-1'-基)邻苯二甲酸酯(17e)
Dimethyl 4-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-[1,3'-biazetidin]-1'-yl)phthalate
将1-[1-[1-(氮杂环丁-3-基)氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(17d)(83g,0.167mol)溶解于400mL DMSO中，加入4-氟邻苯二甲酸二甲酯(40g,0.188mol)(合成方法见Beilstein J.Org.Chem.2017,13,2659-2662)和DIPEA(43.17g,0.334mol)，于85℃下搅拌反应5h。将反应液冷却至室温，加入4L水析出黄色固体，抽滤干燥，得粗品4-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)[1,3'-双氮杂环丁]-1'-基)邻苯二甲酸酯(17e)(120g)。
LC-MS m/z＝689.3[M+1]+。
第二步：4-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-[1,3'-双氮杂环丁]-1'-基)邻苯二酸(17f)
4-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-[1,3'-biazetidin]-1'-yl)phthalic acid
将上述粗品4-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)[1,3'-双氮杂环丁]-1'-基)邻苯二甲酸酯(17e)(120g)溶于400mL 1,4-二氧六环中，加入300mL甲醇及200mL 5mol/L氢氧化钠溶液，于75℃下搅拌反应1h。冷却至室温，减压浓缩出大部分甲醇和1,4-二氧六环，加入1L水，用1L二氯甲烷/甲醇(v/v)＝9:1的混合溶剂萃取，分离出水相，水相用醋酸调体系pH至5.0，再用1L二氯甲烷/甲醇(v/v)＝9:1的混合溶剂萃取，分离出有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得粗品4-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-[1,3'-双氮杂环丁]-1'-基)邻苯二酸(17f)(93g)。
LCMS m/z＝661.3[M+1]+。
第三步：5-[3-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-基]-2-[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]异吲哚啉-1,3-二酮(化合物17-a)
5-[3-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidin-1-yl]-2-[(3R)-2,6-dioxo-3-piperidyl]isoindoline-1,3-dione
将上述粗品4-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-[1,3'-双氮杂环丁]-1'-基)邻苯二酸(17f)(40.0g)溶解在200mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入N-甲基咪唑(7.20g，87.7mmol)，再加入四甲基氯代脲六氟磷酸酯(20.0g，71.3mmol)，室温搅拌30min，加入200mL无水甲醇，室温搅拌16h。将反应液减压浓缩，残留物加入500mL水打浆1h，减压抽滤，滤饼用100mL水洗涤一次，收集滤饼干燥，得粗品(40g)。将该粗品(28.0g)溶解在175mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入二异丙基乙基胺(8.03g，62.1mmol)，再加入HATU(18.9g，49.7mmol)，室温搅拌30min，依次加入(R)-3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(8.90g，54.1mmol)(合成方法见Heterocycles2015,91,764-781)和二异丙基乙基胺(8.03g，62.1mmol)，继续室温搅拌30min。将反应液慢慢滴加到700mL正在搅拌的水中，减压抽滤，滤饼用50mL水洗涤，收集滤饼，用300mL甲醇与二氯甲烷(v/v)＝1:9的混合溶剂溶解，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后向残留物加入350mL二氯甲烷和二异丙基乙基胺(8.03g，62.1mmol)，室温搅拌18h。向反应液中加入100mL水和100mL二氯甲烷，分液，有机层用100mL饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-93:7)，得5-[3-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-基]-2-[(3R)-2,6-二氧代-3-哌啶基]异吲哚啉-1,3-二酮(化合物17-a)(16.0g，从化合物17d算三步产率：42％，ee＝96％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.04(s,1H),8.38(s,1H),7.69-7.60(m,3H),7.42-7.34(m,2H),7.21-7.11(m,3H),7.11-7.05(m,2H),6.78(d,1H),6.52(dd,1H),5.63(brs,2H),4.92(dd,1H),4.85-4.72(m,1H),4.09-3.98(m,2H),3.93-3.82(m,2H),3.74-3.64(m,1H),3.61-3.50(m,2H),3.16-3.01(m,3H),2.99-2.64(m,5H),2.52-2.34(m,2H),2.17-1.95(m,5H)。
LCMS m/z＝753.3[M+1]+。
实施例17-b
5-[3-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-基]-2-[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]异吲哚啉-1,3-二酮(化合物17-b)
5-[3-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidin-1-yl]-2-[(3S)-2,6-dioxo-3-piperidyl]isoindoline-1,3-dione
第一步：4-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)[1,3'-双氮杂环丁]-1'-基)邻苯二甲酸酯(17e)
Dimethyl 4-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-[1,3'-biazetidin]-1'-yl)phthalate
将1-[1-[1-(氮杂环丁-3-基)氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(17d)(83g,0.167mol)溶解于400mLDMSO中，加入4-氟邻苯二甲酸二甲酯(40g,0.188mol)(合成方法见Beilstein J.Org.Chem.2017,13,2659-2662)和DIPEA(43.17g,0.334mol)，于85℃下搅拌反应5h。将反应液冷却至室温，加入4L水析出黄色固体，抽滤干燥，得粗品4-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)[1,3'-双氮杂环丁]-1'-基)邻苯二甲酸酯(17e)(120g)。
LC-MS m/z＝689.3[M+1]+。
第二步：4-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-[1,3'-双氮杂环丁]-1'-基)邻苯二酸(17f)
4-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-[1,3'-biazetidin]-1'-yl)phthalic acid
将上述粗品4-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)[1,3'-双氮杂环丁]-1'-基)邻苯二甲酸酯(17e)(120g)溶于400mL1,4-二氧六环中，加入300mL甲醇及200mL5mol/L氢氧化钠溶液，于75℃下搅拌反应1h。冷却至室温，减压浓缩出大部分甲醇和1,4-二氧六环，加入1L水，用1L二氯甲烷/甲醇(v/v)＝9:1的混合溶剂萃取，分离出水相，水相用醋酸调体系pH至5.0，再用1L二氯甲烷/甲醇(v/v)＝9:1的混合溶剂萃取，分离出有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得粗品4-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-[1,3'-双氮杂环丁]-1'-基)邻苯二酸(17f)(93g)。
LCMS m/z＝661.3[M+1]+。
第三步：5-[3-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-基]-2-[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]异吲哚啉-1,3-二酮(化合物17-b)
5-[3-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidin-1-yl]-2-[(3S)-2,6-dioxo-3-piperidyl]isoindoline-1,3-dione
将上述粗品4-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-[1,3'-双氮杂环丁]-1'-基)邻苯二酸(17f)(40.0g)溶解在200mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入N-甲基咪唑(7.20g，87.7mmol)，再加入四甲基氯代脲六氟磷酸酯(20.0g，71.3mmol)，室温搅拌30min，加入200mL无水甲醇，室温搅拌16h。将反应液减压浓缩，残留物加入500mL水打浆1h，减压抽滤，滤饼用100mL水洗涤一次，收集滤饼干燥，得粗品(40g)。将该粗品(40.0g)溶解在200mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入二异丙基乙基胺(11.5g，89.0mmol)，再加入HATU(27.0g，71.0mmol)，室温搅拌30min，依次加入(S)-3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(12.7g，77.2mmol)(合成方法见Heterocycles 2015,91,764-781)和二异丙基乙基胺(11.5g，89.0mmol)，继续室温搅拌30min。将反应液慢慢滴加到800mL正在搅拌的水中，减压抽滤，滤饼用100mL水洗涤，收集滤饼，用600mL甲醇与二氯甲烷(v/v)＝1:9的混合溶剂溶解，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后向残留物加入400mL二氯甲烷和二异丙基乙基胺(11.5g，89.0mmol)，室温搅拌18h。向反应液中加入100mL水和100mL二氯甲烷，分液，有机层用100mL饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-93:7)，得5-[3-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-基]-2-[(3S)-2,6-二氧代-3-哌啶基]异吲哚啉-1,3-二酮(化合物17-b)(20.0g，从化合物17d算三步产率：37％，ee＝93％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.37(s,1H),7.68-7.57(m,3H),7.43-7.33(m,2H),7.20-7.10(m,3H),7.10-7.04(m,2H),6.78(d,1H),6.52(dd,1H),5.71(brs,2H),4.92(dd,1H),4.84-4.72(m,1H),4.08-3.98(m,2H),3.91-3.82(m,2H),3.76-3.64(m,1H),3.60-3.50(m,2H),3.16-3.01(m,3H),2.98-2.62(m,5H),2.51-2.34(m,2H),2.17-1.97(m,5H)。
LCMS m/z＝753.3[M+1]+。
实施例18：
cis-5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸盐(化合物18)
cis-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dionetrifluoroacetate
/>
第一步：cis-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-甲酸叔丁酯(18a)
cis-tert-butyl 4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidine]-1'-carboxylate
将3-(4-苯氧基苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1a)(合成方法见J.Med.Chem.2015,58,9625-9638)(1.5g,3.88mmol)溶解于10mL DMSO与50mL DCE中，加入N-Boc-3-氟-4-哌啶酮(2.1g,9.70mmol)，室温搅拌10分钟后，向其加入三乙酰氧基硼氢化钠(4.1g，19.40mmol)，室温下搅拌过夜。向反应液中缓慢滴加80mL饱和碳酸氢钠溶液，用100mL二氯甲烷萃取，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得到cis-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-1-甲酸叔丁酯(18a)(980mg，收率：43％)。
LC-MS m/z＝588.3[M+1]+。
第二步：cis-1-(3'-氟-[1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(18b)
cis-1-(3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine trifluoroacetate
将cis-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-1-甲酸叔丁酯(18a)(0.5g,0.85mmol)溶解到50mL DCM中，加入10mL三氟乙酸，室温搅拌4h。将反应体系直接减压浓缩即得cis-1-(3'-氟-[1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(18b)(0.60g)。
LCMS m/z＝488.5[M+1]+。
第三步：cis-3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(18c)
cis-tert-butyl 3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidine-1-carboxylate
将cis-1-(3'-氟-[1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(18b)(540mg)溶于15mL1,2-二氯乙烷与2mL DMSO中，加入3-氧代氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(564mg,3.30mmol)，室温搅拌10分钟，加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.4g，6.60mmol)，室温搅拌过夜。向反应液中缓慢滴加80mL饱和碳酸氢钠溶液，用50mLDCM萃取，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得cis-3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(18c)(290mg)。
LCMS m/z＝643.3[M+1]+。
第四步：cis-1-(1'-(氮杂环丁-3-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(18d)
cis-1-(1'-(azetidin-3-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3，4-d]pyrimidin-4-amine trifluoroacetate
将cis-3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(18c)(290mg,0.45mmol)溶解到10mL DCM中，加入2mL三氟乙酸，室温搅拌4h。将反应体系直接减压浓缩即得cis-1-(1'-(氮杂环丁-3-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(18d)(0.30g)。
LCMS m/z＝543.5[M+1]+。
第五步：cis-5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸盐(化合物18)
cis-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dionetrifluoroacetate
将cis-1-(1'-(氮杂环丁-3-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(18d)(0.3g)溶于8.5mL DMSO中，加入1.5mLDIPEA和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(250mg，0.90mmol)，于80℃搅拌5h。将反应液冷却至室温，加入10mL水，用50mL乙酸乙酯萃取，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得cis-5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸盐(化合物18)(80mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.05(s,1H),8.23(s,1H),7.71-7.61(m,3H),7.47-7.39(m,2H),7.22-7.08(m,5H),6.82-6.78(m,1H),6.66(dd,1H),5.11-4.92(m,2H),4.71-4.58(m,1H),4.15-4.05(m,2H),3.92-3.77(m,2H),3.45-3.36(m,1H),3.17-3.02(m,3H),2.99-2.82(m,2H),2.64-2.53(m,3H),2.47-2.39(m,2H),2.23-1.97(m,5H),1.96-1.79(m,3H),1.75-1.64(m,1H)。
LCMS m/z＝799.3[M+1]+。
实施例18-1：
cis-5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物18-1)
cis-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1，4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2，6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1，3-dione
将化合物18(50mg)溶于10mL质量分数为28％的浓氨水中，用DCM萃取(12mL×3)，合并有机相，用质量分数为28％的浓氨水洗涤(12mL×3)，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，向残留物中加10mL石油醚打浆0.5h，过滤，得到游离碱cis-5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物18-1)(35mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.16(s,1H),8.38(s,1H),7.69-7.59(m,3H),7.43-7.34(m,2H),7.21-7.03(m,5H),6.78(d,1H),6.52(dd,1H),5.72(brs,2H),5.20-4.97(m,1H),4.96-4.88(m,1H),4.87-4.73(m,1H),4.16-4.04(m,2H),4.00-3.85(m,2H),3.52-3.43(m,1H),3.36-3.13(m,3H),3.10-3.00(m,1H),2.95-2.62(m,5H),2.59-2.35(m,3H),2.25-2.00(m,6H),1.89-1.79(m,1H)。
LCMS m/z＝799.3[M+1]+。
实施例19：
trans-5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-基)-[1,3'-双氮杂环丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸盐(化合物19)
trans-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoropiperidin-1-yl)-[1,3'-biazetidin]-1'-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione trifluoroacetate
/>
第一步：3-氟-4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(19b)
tert-butyl 3-fluoro-4-hydroxypiperidine-1-carboxylate
将3-氟-4-哌啶酮-甲酸叔丁酯(19a)(6.51g,30.0mmol)溶解于80mL无水甲醇中，在室温下缓慢分批加入硼氢化钠(2.28g，60.0mmol)，加完后室温搅拌30分钟。反应液用150mL饱和碳酸氢钠溶液淬灭，用100mL二氯甲烷萃取，有机相用100mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝2:1)，得顺反异构体混合物3-氟-4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(19b)(5.7g，cis/trans＝2.5:1，收率：87％)。
LC-MS m/z＝220.1[M+1]+。
第二步：trans-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(19c)
trans-tert-butyl 4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoropiperidine-1-carboxylate
将顺反异构体混合物3-氟-4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(19b)(cis/trans＝2.5:1)(1.0g,4.56mmol)和3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1.15g，3.80mmol)溶于40mL THF中，向其加入三苯基膦(1.5g，5.72mmol)，在氮气氛围下缓慢滴加DIAD(1.15g，5.69mmol)，加完后室温搅拌过夜。反应完毕，缓慢往体系里加入50mL饱和碳酸氢钠溶液，用100mL二氯甲烷萃取，有机相用100mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝15:1)，得trans-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(19c)(0.8g，收率：35％)。
LCMS m/z＝505.4[M+1]+。
第三步：trans-1-(3-氟哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(19d)
trans-1-(3-fluoropiperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine trifluoroacetate
将trans-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(19c)(800mg,1.59mmol)溶解到20mL DCM中，加入5mL三氟乙酸，室温搅拌4h。反应完毕，将体系直接减压浓缩，即得trans-1-(3-氟哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(19d)(0.90g)。
LCMS m/z＝405.3[M+1]+。
第四步：trans-3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(19e)
trans-tert-butyl 3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoropiperidin-1-yl)azetidine-1-carboxylate
将trans-1-(3-氟哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(19d)(0.8g)溶于35mL DCE与5mL DMSO中，加入3-氧代氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(542mg,3.17mmol)，室温搅拌10分钟后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.68g，7.92mmol)，室温搅拌过夜。向反应液中缓慢加入30mL饱和碳酸氢钠水溶液，用50mL乙酸乙酯萃取，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得trans-3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(19e)(930mg)。
LCMS m/z＝560.5[M+1]+。
第五步：trans-1-(1-(氮杂环丁-3-基)-3-氟哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(19f)
trans-1-(1-(azetidin-3-yl)-3-fluoropiperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine trifluoroacetate
将trans-3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(19e)(500mg,0.89mmol)溶解到20mL DCM中，加入5mL三氟乙酸，室温搅拌4h。反应完后将体系直接减压浓缩，得trans-1-(1-(氮杂环丁-3-基)-3-氟哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(19f)(0.65g)。
LCMS m/z＝460.3[M+1]+。
第六步：trans-3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-基)-[1,3'-双氮杂环丁]-1'-甲酸叔丁酯(19g)
trans-tert-butyl 3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoropiperidin-1-yl)-[1，3'-biazetidine]-1'-carboxylate
将trans-1-(1-(氮杂环丁-3-基)-3-氟哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(19f)(650mg)溶于25mL DCE与2mL DMSO中，加入3-氧代氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(485mg,2.83mmol)，室温搅拌10分钟后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.12g，5.28mmol)，室温搅拌过夜。向反应体系中缓慢加入60mL饱和碳酸氢钠溶液，用60mL乙酸乙酯萃取，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得trans-3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-基)-[1,3'-双氮杂环丁]-1'-甲酸叔丁酯(19g)(450mg)。
LCMS m/z＝615.6[M+1]+。
第七步：trans-1-(1-([1,3'-双氮杂环丁]-3-基)-3-氟哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(19h)
trans-1-(1-([1,3'-biazetidin]-3-yl)-3-fluoropiperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine trifluoroacetate
将trans-3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-基)-[1,3'-双氮杂环丁]-1'-甲酸叔丁酯(19g)(400mg,0.65mmol)溶解在20mL DCM中，加入4mL三氟乙酸，室温搅拌4h。将反应体系直接减压浓缩，得trans-1-(1-([1,3'-双氮杂环丁]-3-基)-3-氟哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(19h)(0.56g)。
LCMS m/z＝515.5[M+1]+。
第八步：trans-5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-基)-[1,3'-双氮杂环丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸盐(化合物19)
trans-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoropiperidin-1-yl)-[1,3'-biazetidin]-1'-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione trifluoroacetate
将trans-1-(1-([1,3'-双氮杂环丁]-3-基)-3-氟哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(19h)(0.5g)溶于25mL DMSO中，加入3mLDIPEA和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(352mg，1.28mmol)，于外浴80℃搅拌反应5h。将反应液冷却至室温，加入50mL水，用100mL乙酸乙酯萃取，有机相用100mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得trans-5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-基)-[1,3'-双氮杂环丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸盐(化合物19)(120mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.05(s,1H),8.25(s,1H),7.73-7.60(m,3H),7.48-7.40(m,2H),7.23-7.10(m,5H),6.80(d,1H),6.66(dd,1H),5.25-5.00(m,2H),4.88-4.75(m,1H),4.12-4.00(m,2H),3.89-3.78(m,2H),3.75-3.62(m,1H),3.54-3.39(m,2H),3.28-2.96(m,4H),2.95-2.77(m,2H),2.64-2.53(m,2H),2.30-2.08(m,3H),2.07-1.92(m,2H)。
LCMS m/z＝771.3[M+1]+。
实施例19-1：
trans-5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-基)-[1,3'-双氮杂环丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物19-1)
trans-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoropiperidin-1-yl)-[1,3'-biazetidin]-1'-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将化合物19(95mg)溶于17mL质量分数为28％的浓氨水中，用DCM萃取(20mL×3)，合并有机相，用质量分数为28％的浓氨水洗涤(20mL×3)，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，向残留物中加17mL石油醚打浆0.5h，过滤，得到游离碱trans-5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-基)-[1,3'-双氮杂环丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物19-1)(80mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.30(brs,1H),8.40(s,1H),7.69-7.61(m,3H),7.43-7.35(m,2H),7.21-7.04(m,5H),6.79(d,1H),6.53(dd,1H),5.73(brs,2H),5.36-5.13(m,1H),4.97-4.83(m,2H),4.11-4.00(m,2H),3.94-3.84(m,2H),3.76-3.56(m,3H),3.30-3.05(m,4H),2.93-2.64(m,4H),2.54-2.39(m,1H),2.23-2.02(m,4H)。
LCMS m/z＝771.3[M+1]+。
实施例20：
trans-5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸盐(化合物20)
trans-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione trifluoroacetate
第一步：trans-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-甲酸叔丁酯(20a)
trans-tert-butyl 4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidine]-1'-carboxylate
将trans-1-(3-氟哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(19d)(520mg)溶于15mL DCE与2mL DMSO中，加入N-Boc-4-哌啶酮(1.05g,5.27mmol)，室温搅拌10分钟后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.12g，5.28mmol)，室温搅拌过夜。缓慢向反应体系中加入50mL饱和碳酸氢钠溶液，用50mL DCM萃取，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得trans-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-甲酸叔丁酯(20a)(500mg)。
LCMS m/z＝588.4[M+1]+。
第二步：trans-1-(3-氟-[1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(20b)
trans-1-(3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine trifluoroacetate
将trans-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-甲酸叔丁酯(20a)(500mg,0.85mmol)溶解到20mL DCM中，加入5mL三氟乙酸，室温搅拌4h。将反应体系直接减压浓缩，得trans-1-(3-氟-[1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(20b)(0.60g)。
LCMS m/z＝488.3[M+1]+。
第三步：trans-3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(20c)
trans-tert-butyl 3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidine-1-carboxylate
将trans-1-(3-氟-[1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(20b)(600mg)溶于35mL DCE与2mL DMSO中，加入3-氧代氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(727mg,4.25mmol)，室温搅拌10分钟后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(900mg，4.25mmol)，室温搅拌过夜。向反应体系中缓慢加入80mL饱和碳酸氢钠溶液，用50mL DCM萃取，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得trans-3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(20c)(550mg)。
LCMS m/z＝643.4[M+1]+。
第四步：trans-1-(1'-(氮杂环丁-3-基)-3-氟-[1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(20d)
trans-1-(1'-(azetidin-3-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine trifluoroacetate
将trans-3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(20c)(500mg,0.78mmol)溶解到25mLDCM中，加入5mL三氟乙酸，室温搅拌4h。将反应体系直接减压浓缩，即得trans-1-(1'-(氮杂环丁-3-基)-3-氟-[1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(20d)(0.55g)。
LCMS m/z＝543.2[M+1]+。
第五步：trans-5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸盐(化合物20)
trans-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione trifluoroacetate
将trans-1-(1'-(氮杂环丁-3-基)-3-氟-[1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(20d)(0.5g)溶于25mL DMSO中，加入3mLDIPEA和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(310mg，1.12mmol)，于外浴80℃搅拌反应5h。将反应液冷却至室温，加入50mL水，用100mL乙酸乙酯萃取，有机相用100mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇＝15:1-8:1)，得trans-5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸盐(化合物20)(120mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.05(s,1H),8.24(s,1H),7.72-7.61(m,3H),7.47-7.40(m,2H),7.22-7.10(m,5H),6.79(d,1H),6.65(dd,1H),5.19-4.94(m,2H),4.83-4.70(m,1H),4.15-4.05(m,2H),3.89-3.76(m,2H),3.41-3.34(m,1H),3.00-2.81(m,4H),2.63-2.52(m,2H),2.49-2.32(m,4H),2.24-2.10(m,1H),2.07-1.94(m,2H),1.94-1.82(m,2H),1.82-1.70(m,2H),1.57-1.41(m,2H)。
LCMS m/z＝799.3[M+1]+。
实施例20-1：
trans-5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物20-1)
trans-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将化合物20(90mg)溶于17mL质量分数为28％的浓氨水中，用DCM萃取(20mL×3)，合并有机相，用质量分数为28％的浓氨水洗涤(20mL×3)，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，向残留物中加17mL石油醚打浆0.5h，过滤，得到游离碱trans-5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物20-1)(70mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.86(brs,1H),8.39(s,1H),7.71-7.60(m,3H),7.43-7.35(m,2H),7.21-7.11(m,3H),7.11-7.04(m,2H),6.79(d,1H),6.53(dd,1H),5.78(brs,2H),5.33-5.10(m,1H),4.97-4.81(m,2H),4.16-4.06(m,2H),4.00-3.86(m,2H),3.48-3.34(m,2H),3.08-2.94(m,3H),2.93-2.65(m,3H),2.59-2.36(m,4H),2.17-1.97(m,4H),1.96-1.85(m,2H),1.78-1.62(m,2H)。
LCMS m/z＝799.3[M+1]+。
实施例21：
5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-[1,3'-联氮杂环丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(化合物21)
5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-[1,3'-biazetidin]-1'-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
/>
第一步：2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮(21b)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5,6-difluoroisoindoline-1,3-dione
将4,5-二氟邻苯二甲酸(21a)(500mg,2.47mmol)溶解到25mL乙腈中，加入3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(0.41g,2.49mmol)与CDI(0.8g，4.94mmol)，外浴加热至回流，反应4h。将反应体系直接减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝2:1)，得2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮(21b)(0.4g，产率：55.0％)。
LCMS m/z＝295.2[M+1]+。
第二步：5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-[1,3'-联氮杂环丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(化合物21)
5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-[1,3'-biazetidin]-1'-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
将1-[1-[1-(氮杂环丁-3-基)氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(17d)(0.25g,0.50mmol)溶于10mL DMSO中，加入1mL DIPEA和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮(21b)(180mg，0.61mmol)，外浴80℃搅拌5h。将反应液冷却至室温，加入50mL水淬灭，用100mL乙酸乙酯萃取，有机相用100mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝15:1)，得5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-[1,3'-联氮杂环丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(化合物21)(100mg，收率：26％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.07(s,1H),8.23(s,1H),7.70-7.63(m,2H),7.58(d,1H),7.48-7.40(m,2H),7.22-7.09(m,5H),6.92(d,1H),5.06(dd,1H),4.74-4.61(m,1H),4.24-4.14(m,2H),4.00-3.88(m,2H),3.66-3.55(m,1H),3.49-3.39(m,2H),3.08-2.78(m,6H),2.64-2.52(m,2H),2.29-2.13(m,2H),2.09-1.96(m,3H),1.96-1.85(m,2H)。
LCMS m/z＝771.3[M+1]+。
实施例22：
4-[3-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物22)
4-[3-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
将1-(1'-(氮杂环丁-3-基)-[1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(8b)(0.12g,0.23mmol)溶于3mL DMSO中，加入0.2mL DIPEA和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(90mg，0.30mmol)，外浴90℃搅拌5h。将反应液冷却至室温，用50mL乙酸乙酯萃取，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得4-[3-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物22)(58mg，收率：32％)
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.41(s,1H),8.34(s,1H),7.63(d,2H),7.48-7.35(m,3H),7.22-7.11(m,4H),7.10-7.05(m,2H),6.60(d,1H),5.80(brs,2H),4.92(dd,1H),4.87-4.68(m,1H),4.44-4.31(m,2H),4.11-4.01(m,2H),3.30-3.08(m,3H),3.02-2.93(m,2H),2.92-2.68(m,4H),2.63-2.39(m,4H),2.14-2.09(m,3H),1.99-1.89(m,4H),1.77-1.62(m,2H)。
LCMS m/z＝781.3[M+1]+。
实施例23：
5-[4-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物23)
5-[4-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]-1-piperidyl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
第一步：4-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(23a)
tert-butyl 4-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]piperidine-1-carboxylate
将1-[1-(氮杂环丁-3-基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(11b)(0.12g,0.27mmol)溶解于5mL DCE中，加入4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.5g,3.0mmol)。室温搅拌10分钟后，向其加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.6g，3.0mmol)，室温下搅拌过夜。向反应液中缓慢滴加30mL饱和碳酸氢钠溶液，用30mL二氯甲烷萃取，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得到4-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(23a)(0.15g，收率：88％)。
LC-MS m/z＝625.3[M+1]+。
第二步：3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-(4-哌啶基)氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(23b)
3-(4-phenoxyphenyl)-1-[1-[1-(4-piperidyl)azetidin-3-yl]-4-piperidyl]pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将4-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(23a)(0.15g,0.24mmol)溶解到5mL DCM中，加入1.5mL三氟乙酸，室温搅拌3h。向反应液中缓慢滴加饱和碳酸氢钠溶液调pH至9-10，用30mL二氯甲烷萃取，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后得3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-(4-哌啶基)氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(23b)(0.12g，产率：95％)。
LCMS m/z＝525.3[M+1]+。
第三步：5-[4-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物23)
5-[4-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]-1-piperidyl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
将3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-(4-哌啶基)氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(23b)(0.12g,0.23mmol)溶于3mL DMSO中，加入0.4mL DIPEA和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(90mg，0.30mmol)，外浴90℃搅拌5h。将反应液冷却至室温，用50mL乙酸乙酯萃取，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得5-[4-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物23)(6mg，收率：4％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.55(s,1H),8.33(s,1H),7.67(d,1H),7.64-7.58(m,2H),7.41-7.34(m,2H),7.27-7.24(m,1H),7.19-7.10(m,3H),7.09-7.01(m,3H),5.80(brs,2H),4.92(dd,1H),4.86-4.75(m,1H),4.22-4.04(m,2H),3.98-3.88(m,2H),3.54-3.34(m,3H),3.03-2.68(m,8H),2.49-2.33(m,3H),2.28-2.06(m,5H),2.00-1.93(m,3H)。
LCMS m/z＝781.3[M+1]+。
实施例24：
5-[3-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]吡咯-1-基]氮杂环丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物24)
5-[3-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]pyrrolidin-1-yl]azetidin-1-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
将1-[1-[1-(氮杂环丁-3-基)吡咯-3-基]-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(16d)(0.1g,0.20mmol)溶于3mL DMSO中，加入0.2mL DIPEA和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(75mg，0.27mmol)，外浴90℃搅拌5h。将反应液冷却至室温，用50mL乙酸乙酯萃取，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得5-[3-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]吡咯-1-基]氮杂环丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物24)(30mg，收率：20％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.75(s,1H),8.36(s,1H),7.67-7.62(m,3H),7.43-7.36(m,2H),7.21-7.12(m,3H),7.11-7.07(m,2H),6.79(d,1H),6.52(dd,1H),5.74(brs,2H),4.93(dd,1H),4.88-4.76(m,1H),4.14-4.06(m,2H),3.97-3.89(m,2H),3.62-3.53(m,1H),3.28-3.16(m,1H),3.15-3.00(m,2H),2.97-2.70(m,6H),2.67-2.58(m,1H),2.57-2.39(m,4H),2.35-2.23(m,2H),2.16-2.09(m,3H)。
LCMS m/z＝767.3[M+1]+。
实施例25：
3-[5-[3-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]-1-氧代异吲哚啉-2-基]哌啶-2,6-二酮(化合物25)
3-[5-[3-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]-1-oxo-isoindolin-2-yl]piperidine-2,6-dione
将1-(1'-(氮杂环丁-3-基)-[1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(8b)(0.635g，1.21mmol)溶解在12mL 1,4-二氧六环中，依次加入3-(5-溴-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(合成方法见J.Med.Chem.2018,61,492-503)(0.587g，1.82mmol)和碳酸铯(1.17g，3.63mmol)，置换氮气三次，加入甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(RuPhos-Pd-G3)(0.300g,0.363mmol)，加完后再置换氮气三次，于100℃封管中搅拌反应2h。将反应液冷却至室温，加入20mL二氯甲烷和10mL水，分液，水层再用20mL二氯甲烷萃取，合并有机层，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-19:1)，得到3-[5-[3-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]-1-氧代异吲哚啉-2-基]哌啶-2,6-二酮(化合物25)(0.045g，产率5％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.92(s,1H),8.24(s,1H),7.69-7.63(m,2H),7.49(d,1H),7.47-7.40(m,2H),7.22-7.08(m,5H),6.54-6.46(m,2H),5.03(dd,1H),4.80-4.62(m,1H),4.25(dd,2H),4.05-3.95(m,2H),3.74-3.63(m,2H),3.36-3.28(m,1H),3.20-2.97(m,2H),2.96-2.83(m,3H),2.64-2.09(m,7H),2.05-1.74(m,7H),1.65-1.43(m,2H)。
LCMS m/z＝767.4[M+1]+。
实施例26：
3-[5-[3-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-基]-1-氧代异吲哚啉-2-基]哌啶-2,6-二酮(化合物26)
3-[5-[3-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidin-1-yl]-1-oxo-isoindolin-2-yl]piperidine-2,6-dione
将1-[1-[1-(氮杂环丁-3-基)氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(17d)(0.600g，1.21mmol)溶解在12mL 1,4-二氧六环中，依次加入3-(5-溴-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(合成方法见J.Med.Chem.2018,61,492-503)(0.586g，1.81mmol)和碳酸铯(1.17g，3.63mmol)，置换氮气三次，加入甲磺酸(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(RuPhos-Pd-G3)(0.300g,0.363mmol)，加完后置换氮气三次，于100℃封管搅拌反应2h。将反应液冷却至室温，加入20mL二氯甲烷和10mL水，分液，水层再用20mL二氯甲烷萃取，合并有机层，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-19:1)，得到3-[5-[3-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-基]-1-氧代异吲哚啉-2-基]哌啶-2,6-二酮(化合物26)(0.053g，产率：6％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.91(s,1H),8.23(s,1H),7.70-7.63(m,2H),7.52-7.40(m,3H),7.23-7.08(m,5H),6.55-6.44(m,2H),5.03(dd,1H),4.72-4.61(m,1H),4.24(dd,2H),3.99-3.87(m,2H),3.74-3.58(m,3H),3.48-3.36(m,2H),3.04-2.78(m,6H),2.64-2.52(m,1H),2.41-2.28(m,1H),2.25-2.14(m,2H),2.07-1.83(m,5H)。
LCMS m/z＝739.3[M+1]+。
实施例27：
4-[3-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物27)
4-[3-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidin-1-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
将1-[1-[1-(氮杂环丁-3-基)氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(17d)(0.100g，0.201mmol)溶解在2mL二甲亚砜中，依次加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(0.0667g，0.242mmol)和二异丙基乙基胺(0.130g，1.01mmol)，加完后90℃反应2h。将反应液冷却至室温，慢慢滴加10mL水，过滤，滤饼用20mL二氯甲烷溶解，再用5mL饱和氯化钠溶液洗涤，分液，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-19:1)，得到4-[3-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物27)(0.063g，产率：42％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.05(s,1H),8.23(s,1H),7.69-7.63(m,2H),7.56(dd,1H),7.47-7.40(m,2H),7.23-7.08(m,6H),6.79(d,1H),5.05(dd,1H),4.72-4.62(m,1H),4.25-4.14(m,2H),4.00-3.90(m,2H),3.57-3.48(m,1H),3.47-3.39(m,2H),3.04-2.78(m,6H),2.63-2.45(m,2H),2.27-2.13(m,2H),2.07-1.83(m,5H)。
LCMS m/z＝753.3[M+1]+。
实施例28：
5-[3-[3-[(3R)-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物28)
5-[3-[3-[(3R)-3-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidin-1-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
第一步：3-[(3R)-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(28b)
tert-butyl 3-[(3R)-3-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidine-1-carboxylate
将(R)-3-(4-苯氧基苯基)-1-(哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(28a)(1.00g，2.59mmol)溶解在10mL氯仿中，依次加入3-氧代氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(0.665g，3.88mmol)和冰醋酸(0.311g，5.18mmol)，加完后70℃反应3h，冷却至室温，加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.10g，5.18mmol)，加完后室温反应2h。反应完毕，滴加饱和碳酸氢钠溶液调pH至9-10，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-19:1)，得到3-[(3R)-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(28b)(0.600g，产率：43％)。
LCMS m/z＝542.2[M+1]+。
第二步：1-[(3R)-1-(氮杂环丁-3-基)-3-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(28c)
1-[(3R)-1-(azetidin-3-yl)-3-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将3-[(3R)-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(28b)(0.600g，1.11mmol)溶解在2mL二氯甲烷中，加入10mL 4N盐酸乙酸乙酯溶液，室温搅拌2h。反应液减压浓缩后向残留物中加入20mL二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠溶液调pH至9-10，分液，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得1-[(3R)-1-(氮杂环丁-3-基)-3-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(28c)(0.450g，产率：92％)。
LCMS m/z＝442.2[M+1]+。
第三步：3-[3-[(3R)-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(28d)
tert-butyl 3-[3-[(3R)-3-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidine-1-carboxylate
将1-[(3R)-1-(氮杂环丁-3-基)-3-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(28c)(0.300g，0.680mmol)溶解在10mL氯仿中，加入3-氧代氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(0.174g，1.02mmol)和冰醋酸(0.0816g，1.36mmol)，加完后70℃反应3h，冷却至室温，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.288g，1.36mmol)，加完后室温反应2h。反应完毕，滴加饱和碳酸氢钠溶液调pH至9-10，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-19:1)，得到3-[3-[(3R)-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(28d)(0.090g，产率：22％)。
LCMS m/z＝597.3[M+1]+。
第四步：1-[(3R)-1-[1-(氮杂环丁-3-基)氮杂环丁-3-基]-3-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(28e)
1-[(3R)-1-[1-(azetidin-3-yl)azetidin-3-yl]-3-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将3-[3-[(3R)-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(28d)(0.090g，0.15mmol)溶解在2mL二氯甲烷中，加入5mL 4N盐酸乙酸乙酯溶液，室温搅拌2h。反应液减压浓缩后向残留物加入20mL二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠溶液调pH至9-10，分液，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得1-[(3R)-1-[1-(氮杂环丁-3-基)氮杂环丁-3-基]-3-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(28e)(0.075g)。
LCMS m/z＝497.3[M+1]+。
第五步：5-[3-[3-[(3R)-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物28)
5-[3-[3-[(3R)-3-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidin-1-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
将1-[(3R)-1-[1-(氮杂环丁-3-基)氮杂环丁-3-基]-3-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(28e)(0.075g，0.201mmol)溶解在2mL二甲亚砜中，加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(0.050g，0.066mmol)和二异丙基乙基胺(0.098g，0.76mmol)，加完后90℃反应2h。将反应液冷却至室温，慢慢滴加10mL水，过滤，滤饼用20mL二氯甲烷溶解，再用5mL饱和氯化钠溶液洗涤，分液，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-9:1)，得到5-[3-[3-[(3R)-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物28)(0.050g，产率：44％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.04(s,1H),8.24(s,1H),7.68-7.59(m,3H),7.47-7.39(m,2H),7.22-7.09(m,5H),6.77(d,1H),6.64(dd,1H),5.04(dd,1H),4.83-4.72(m,1H),4.06-3.98(m,2H),3.82-3.73(m,2H),3.66-3.56(m,1H),3.45-3.32(m,2H),3.06-2.72(m,6H),2.63-2.45(m,2H),2.37-2.27(m,1H),2.07-1.95(m,3H),1.90-1.78(m,2H),1.72-1.58(m,1H)。
LCMS m/z＝753.4[M+1]+。
实施例29：
5-(3-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯-1-基)-[1,3'-联氮杂环丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸盐(化合物29)
5-(3-(3-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)pyrrolidin-1-yl)-[1,3'-biazetidin]-1'-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dionetrifluoroacetate
第一步：3-羟基吡咯-1-甲酸叔丁酯(29b)
tert-butyl 3-hydroxypyrrolidine-1-carboxylate
将3-氧代吡咯-1-甲酸叔丁酯(29a)(5.56g,30.0mmol)溶解于80mL无水甲醇中，缓慢分批加入硼氢化钠(2.28g，60.0mmol)，加完后室温搅拌30分钟。反应完毕，加入150mL饱和碳酸氢钠溶液淬灭，用200mL DCM萃取，有机相用100mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝2:1)，得到3-羟基吡咯-1-甲酸叔丁酯(29b)(4.7g，收率：84％)。
LC-MS m/z＝188.1[M+1]+。
第二步：3-((甲基磺酰基)氧基)吡咯-1-甲酸叔丁酯(29c)
tert-butyl 3-((methylsulfonyl)oxy)pyrrolidine-1-carboxylate
将3-羟基吡咯-1-甲酸叔丁酯(29b)(1.0g,5.34mmol)溶解于30mL二氯甲烷中，加入DIPEA(2.1g，16.25mmol)，室温下缓慢滴加MsCl(0.74g，6.41mmol)，加完后室温搅拌2h。向反应液加入40mL水，用100mL DCM萃取，有机相用100mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝5:1)，得到3-((甲基磺酰基)氧基)吡咯-1-甲酸叔丁酯(29c)(1.4g，收率：98％)。
LC-MS m/z＝266.2[M+1]+。
第三步：3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯-1-甲酸叔丁酯(29d)
tert-butyl 3-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)pyrrolidine-1-carboxylate
将3-((甲基磺酰基)氧基)吡咯-1-甲酸叔丁酯(29c)(1.0g,3.77mmol)和3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(0.75g，2.48mmol)溶于40mL DMF中，加入碳酸钾(1.24g，8.99mmol)，于80℃搅拌反应4h。将反应液冷却至室温，加入50mL水，用100mL乙酸乙酯萃取，有机相用100mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝15:1)，得到3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯-1-甲酸叔丁酯(29d)(0.91g，收率：78％)。
LCMS m/z＝473.4[M+1]+。
第四步：3-(4-苯氧基苯基)-1-(吡咯-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(29e)
3-(4-phenoxyphenyl)-1-(pyrrolidin-3-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-aminetrifluoroacetate
将3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯-1-甲酸叔丁酯(29d)(910mg,1.87mmol)溶解于20mL DCM中，加入8mL三氟乙酸，室温搅拌4h。将反应体系直接减压浓缩，得到3-(4-苯氧基苯基)-1-(吡咯-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(29e)(1.1g)。
LCMS m/z＝373.3[M+1]+。
第五步：3-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯-1-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(29f)
tert-butyl 3-(3-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)pyrrolidin-1-yl)azetidine-1-carboxylate
将3-(4-苯氧基苯基)-1-(吡咯-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(29e)(420mg)溶于15mL DCE与2mL DMSO中，加入Boc-氮杂环丁酮(253mg,1.48mmol)，室温搅拌10分钟后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(628mg，2.96mmol)，室温搅拌过夜。向反应体系中缓慢加入30mL饱和碳酸氢钠溶液，用100mL DCM萃取，有机相用100mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得到3-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯-1-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(29f)(320mg)。
LCMS m/z＝528.5[M+1]+。
第六步：1-(1-(氮杂环丁-3-基)吡咯-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(29g)
1-(1-(azetidin-3-yl)pyrrolidin-3-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine trifluoroacetate
将3-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯-1-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(29f)(320mg,0.61mmol)溶解到20mL DCM中，加入5mL三氟乙酸，室温搅拌4h。将反应体系直接减压浓缩，得到1-(1-(氮杂环丁-3-基)吡咯-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(29g)(380mg)。
LCMS m/z＝428.4[M+1]+。
第七步：3-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯-1-基)-[1,3'-联氮杂环丁]-1'-甲酸叔丁酯(29h)
tert-butyl 3-(3-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)pyrrolidin-1-yl)-[1,3'-biazetidine]-1'-carboxylate
/>
将1-(1-(氮杂环丁-3-基)吡咯-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(29g)(380mg)溶于15mL DCE与2mL DMSO中，加入Boc-氮杂环丁酮(210mg,1.22mmol)，室温搅拌10分钟，加入三乙酰氧基硼氢化钠(515mg，2.44mmol)，室温搅拌过夜。向反应体系中缓慢加入30mL饱和碳酸氢钠溶液，用100mL DCM萃取，有机相用100mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得到3-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯-1-基)-[1,3'-联氮杂环丁]-1'-甲酸叔丁酯(29h)(300mg)。
LCMS m/z＝583.6[M+1]+。
第八步：1-(1-([1,3'-联氮杂丁]-3-基)吡咯-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(29i)
1-(1-([1,3'-biazetidin]-3-yl)pyrrolidin-3-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine trifluoroacetate
将3-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯-1-基)-[1,3'-联氮杂环丁]-1'-甲酸叔丁酯(29h)(300mg,0.51mmol)溶解到10mL DCM中，加入5mL三氟乙酸，室温搅拌4h。将反应体系直接减压浓缩，得到1-(1-([1,3'-联氮杂丁]-3-基)吡咯-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(29i)(0.38g)。
LCMS m/z＝483.4[M+1]+。
第九步：5-(3-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯-1-基)-[1,3'-联氮杂环丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸盐(化合物29)
5-(3-(3-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)pyrrolidin-1-yl)-[1,3'-biazetidin]-1'-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dionetrifluoroacetate
将1-(1-([1,3'-联氮杂丁]-3-基)吡咯-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(29i)(0.38g)溶于25mL DMSO中，加入3mL DIPEA和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(211mg，0.77mmol)，于80℃搅拌反应5h。将反应液冷却至室温，加入50mL水，用100mL乙酸乙酯萃取，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝15:1-5:1)，得到5-(3-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯-1-基)-[1,3'-联氮杂环丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸盐(化合物29)(130mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.06(s,1H),8.25(s,1H),7.78-7.57(m,3H),7.49-7.35(m,2H),7.27-7.05(m,5H),6.78(d,1H),6.64(dd,1H),5.49-5.31(m,1H),5.05(dd,1H),4.14-3.97(m,2H),3.87-3.76(m,2H),3.71-3.61(m,1H),3.53-3.39(m,3H),3.23-3.06(m,3H),2.96-2.70(m,4H),2.65-2.45(m,2H),2.41-2.24(m,2H),2.07-1.95(m,1H)。
LCMS m/z＝739.3[M+1]+。
实施例30：
(7S)-7-[1-[1-[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基]氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]-4-哌啶基]-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺三氟乙酸盐(化合物30)
(7S)-7-[1-[1-[1-[2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)-1,3-dioxo-isoindolin-5-yl]azetidin-3-yl]-4-piperidyl]-4-piperidyl]-2-(4-phenoxyphenyl)-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carboxamide trifluoroacetate
/>
第一步：4-[4-[(7S)-3-氨基甲酰基-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基]-1-哌啶基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(30b)
tert-butyl 4-[4-[(7S)-3-carbamoyl-2-(4-phenoxyphenyl)-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[1,5-a]pyrimidin-7-yl]-1-piperidyl]piperidine-1-carboxylate
将(S)-2-(4-苯氧基苯基)-7-(哌啶-4-基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(30a)(95％ee)(合成方法见WO2018033853)(0.2g，0.48mmol)和4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.57g，2.87mmol)溶于20mL氯仿中，加入醋酸(0.14g，2.4mmol)，加入1克分子筛和1克无水硫酸钠，升温至65℃搅拌2h，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.61g，2.87mmol)，继续在此温度下搅拌过夜。将反应液过滤，滤液减压浓缩后，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝50:1-7:1)，得到4-[4-[(7S)-3-氨基甲酰基-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基]-1-哌啶基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(30b)(0.2g，产率：69％)。
LCMS m/z＝601.3[M+1]+。
第二步：(7S)-2-(4-苯氧基苯基)-7-[1-(4-哌啶基)-4-哌啶基]-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(30c)
(7S)-2-(4-phenoxyphenyl)-7-[1-(4-piperidyl)-4-piperidyl]-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carboxamide
将4-[4-[(7S)-3-氨基甲酰基-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基]-1-哌啶基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(30b)(0.2g，0.33mmol)溶于5mL二氯甲烷中，加入5mL三氟乙酸，室温搅拌2h。将反应液减压除去溶剂，加入20mL二氯甲烷和2mL乙醇的混合液，用50mL饱和碳酸氢钠溶液洗涤，水相再用20mL二氯甲烷和2mL乙醇的混合液萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得(7S)-2-(4-苯氧基苯基)-7-[1-(4-哌啶基)-4-哌啶基]-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(30c)(0.16g，产率：96％)。
LCMS m/z＝501.3[M+1]+。
第三步：3-[4-[4-[(7S)-3-氨基甲酰基-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(30d)
tert-butyl 3-[4-[4-[(7S)-3-carbamoyl-2-(4-phenoxyphenyl)-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[1,5-a]pyrimidin-7-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]azetidine-1-carboxylate
将(7S)-2-(4-苯氧基苯基)-7-[1-(4-哌啶基)-4-哌啶基]-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(30c)(0.14g，0.28mmol)和3-氧代氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(0.24g，1.4mmol)溶于20mL氯仿中，加入醋酸(0.08g，1.4mmol)，加入1克4分子筛和1克无水硫酸钠，升温至65℃搅拌2h，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.3g，1.4mmol)，继续在此温度下搅拌过夜。将反应液过滤，滤液减压浓缩后，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝50:1-7:1)，得到3-[4-[4-[(7S)-3-氨基甲酰基-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(30d)(0.1g，产率：55％)。
LCMS m/z＝656.4[M+1]+。
第四步：(7S)-7-[1-[1-(氮杂环丁-3-基)-4-哌啶基]-4-哌啶基]-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺三氟乙酸盐(30e)
(7S)-7-[1-[1-(azetidin-3-yl)-4-piperidyl]-4-piperidyl]-2-(4-phenoxyphenyl)-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carboxamidetrifluoroacetate
将3-[4-[4-[(7S)-3-氨基甲酰基-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基]-1-哌啶基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(30d)(0.1g，0.15mmol)溶于2mL二氯甲烷中，加入2mL三氟乙酸，室温搅拌过夜。将反应液减压除去溶剂，得到(7S)-7-[1-[1-(氮杂环丁-3-基)-4-哌啶基]-4-哌啶基]-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺三氟乙酸盐(30e)(0.12g)。
LCMS m/z＝556.3[M+1]+。
第五步：(7S)-7-[1-[1-[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基]氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]-4-哌啶基]-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺三氟乙酸盐(化合物30)
(7S)-7-[1-[1-[1-[2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)-1,3-dioxo-isoindolin-5-yl]azetidin-3-yl]-4-piperidyl]-4-piperidyl]-2-(4-phenoxyphenyl)-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carboxamide trifluoroacetate
将(7S)-7-[1-[1-(氮杂环丁-3-基)-4-哌啶基]-4-哌啶基]-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺三氟乙酸盐(30e)(0.12g)溶于3mL DMSO中，加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(0.04g，0.16mmol)和三乙胺(0.07g，0.67mmol)，升温至120℃搅拌4h。将反应液冷却至室温，加入10mL水和20mL乙酸乙酯，萃取后，有机层减压除去溶剂，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝50:1-10:1)，得到(7S)-7-[1-[1-[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基]氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]-4-哌啶基]-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺三氟乙酸盐(化合物30)(45mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.05(s,1H),7.64(d,1H),7.50(d,2H),7.45-7.38(m,2H),7.21-7.14(m,1H),7.12-7.02(m,4H),6.78(d,1H),6.72-6.61(m,2H),5.05(dd,1H),4.16-3.96(m,3H),3.87-3.73(m,2H),3.35-3.28(m,1H),2.97-2.78(m,3H),2.58-2.52(m,11H),2.10-1.73(m,8H),1.72-1.45(m,4H)。
LCMS m/z＝812.4[M+1]+。
实施例31：
(7S)-7-[1-[1-[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基]氮杂环丁-3-基]氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺三氟乙酸盐(化合物31)
(7S)-7-[1-[1-[1-[2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)-1,3-dioxo-isoindolin-5-yl]azetidin-3-yl]azetidin-3-yl]-4-piperidyl]-2-(4-phenoxyphenyl)-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carboxamide trifluoroacetate
第一步：3-[4-[(7S)-3-氨基甲酰基-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(31a)
tert-butyl 3-[4-[(7S)-3-carbamoyl-2-(4-phenoxyphenyl)-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[1,5-a]pyrimidin-7-yl]-1-piperidyl]azetidine-1-carboxylate
将(S)-2-(4-苯氧基苯基)-7-(哌啶-4-基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(30a)(95％ee)(合成方法见WO2018033853)(0.2g，0.48mmol)和3-氧代氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(0.41g，2.40mmol)溶于20mL氯仿中，加入醋酸(0.14g，2.4mmol)，加入1克4分子筛和1克无水硫酸钠，升温至65℃，搅拌2h，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.61g，2.87mmol)，继续在此温度下搅拌过夜。将反应液过滤，滤液减压浓缩后，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝50:1-7:1)，得到3-[4-[(7S)-3-氨基甲酰基-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(31a)(0.25g，产率：91％)。
LCMS m/z＝573.4[M+1]+。
第二步：(7S)-7-[1-(氮杂环丁-3-基)-4-哌啶基]-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(31b)
(7S)-7-[1-(azetidin-3-yl)-4-piperidyl]-2-(4-phenoxyphenyl)-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carboxamide
将3-[4-[(7S)-3-氨基甲酰基-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(31a)(0.25g，0.44mmol)溶于5mL二氯甲烷中，加入5mL三氟乙酸，室温搅拌2h。将反应液减压除去溶剂，加入20mL二氯甲烷和2mL乙醇的混合液，用50mL饱和碳酸氢钠溶液洗涤，水相再用20mL二氯甲烷和2mL乙醇的混合液萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到(7S)-7-[1-(氮杂环丁-3-基)-4-哌啶基]-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(31b)(0.19g，产率：92％)。
LCMS m/z＝473.4[M+1]+。
第三步：3-[3-[4-[(7S)-3-氨基甲酰基-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(31c)
tert-butyl 3-[3-[4-[(7S)-3-carbamoyl-2-(4-phenoxyphenyl)-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[1,5-a]pyrimidin-7-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidine-1-carboxylate
将(7S)-7-[1-(氮杂环丁-3-基)-4-哌啶基]-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(31b)(0.19g，0.40mmol)和3-氧代氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(0.34g，2.01mmol)溶于20mL氯仿中，加入醋酸(0.12g，2.01mmol)，加入1克4分子筛和1克无水硫酸钠，升温至65℃搅拌2h，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.43g，2.01mmol)，继续在此温度下搅拌过夜。将反应液过滤，滤液减压浓缩后，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝50:1-7:1)，得到3-[3-[4-[(7S)-3-氨基甲酰基-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(31c)(0.14g，产率：46％)。
LCMS m/z＝628.3[M+1]+。
第四步：(7S)-7-[1-[1-(氮杂环丁-3-基)氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(31d)
(7S)-7-[1-[1-(azetidin-3-yl)azetidin-3-yl]-4-piperidyl]-2-(4-phenoxyphenyl)-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carboxamide
将3-[3-[4-[(7S)-3-氨基甲酰基-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(31c)(0.14g，0.22mmol)溶于5mL二氯甲烷中，加入5mL三氟乙酸，室温搅拌2h。将反应液减压除去溶剂，加入20mL二氯甲烷和2mL乙醇的混合液，用50mL饱和碳酸氢钠溶液洗涤，水相再用20mL二氯甲烷和2mL乙醇的混合液萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到(7S)-7-[1-[1-(氮杂环丁-3-基)氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(31d)(0.10g，产率：85％)。
LCMS m/z＝528.3[M+1]+。
第五步：(7S)-7-[1-[1-[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基]氮杂环丁-3-基]氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺三氟乙酸盐(化合物31)
(7S)-7-[1-[1-[1-[2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)-1,3-dioxo-isoindolin-5-yl]azetidin-3-yl]azetidin-3-yl]-4-piperidyl]-2-(4-phenoxyphenyl)-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carboxamide trifluoroacetate
将(7S)-7-[1-[1-(氮杂环丁-3-基)氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(31d)(0.03g，0.057mmol)溶于3mL DMSO中，加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(0.019g，0.068mmol)和三乙胺(0.022g，0.17mmol)，升温至120℃搅拌4h。将反应液冷却至室温，加入10mL水和20mL乙酸乙酯萃取，有机层减压除去溶剂，残留物过Pre-HPLC(仪器及制备柱：采用Glison GX-281制备液相，制备柱型号是Sunfire C18，5μm，内径×长度＝30mm×150mm)。制备方法：粗品用甲醇和二甲亚砜溶解，并用0.45μm滤膜过滤，制备成样品液。流动相体系：乙腈/水(含0.1％TFA)。梯度洗脱方法：乙腈由5％梯度洗脱60％(洗脱时间15min)，冻干得到(7S)-7-[1-[1-[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基]氮杂环丁-3-基]氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺三氟乙酸盐(化合物31)(15mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.05(s,1H),7.68(d,1H),7.53-7.47(m,2H),7.45-7.38(m,2H),7.21-7.14(m,1H),7.13-6.98(m,4H),6.96-6.44(m,3H),5.06(dd,1H),4.22-3.60(m,11H),3.45-3.26(m,4H),2.97-2.64(m,3H),2.63-2.45(m,2H),2.34-2.15(m,1H),2.12-1.50(m,7H)。
LCMS m/z＝784.3[M+1]+。
实施例32：
5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(化合物32)
5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2，6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1，3-dione
将1-(1'-(氮杂环丁-3-基)-[1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(8b)(290mg,0.55mmol)溶于10mL DMSO中，加入1mL DIPEA和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮(21b)(150mg，0.51mmol)，外浴80℃搅拌5h。将反应液冷却至室温，加入50mL水，用100mL乙酸乙酯萃取，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝15:1)，得到5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(化合物32)(150mg，收率：34％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.06(s,1H),8.23(s,1H),7.70-7.63(m,2H),7.60(d,1H),7.48-7.39(m,2H),7.23-7.09(m,5H),6.92(d,1H),5.07(dd,1H),4.69-4.57(m,1H),4.28-4.18(m,2H),4.02-3.90(m,2H),3.30-3.21(m,1H),3.07-2.96(m,2H),2.94-2.80(m,3H),2.69-2.52(m,2H),2.41-2.27(m,3H),2.24-2.08(m,2H),2.07-1.96(m,1H),1.96-1.70(m,6H),1.56-1.39(m,2H)。
LCMS m/z＝799.3[M+1]+。
实施例33：
4-[8-氨基-3-[(2S)-1-[1-[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基]氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]吡咯-2-基]咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-基]-N-(2-吡啶基)苯甲酰胺(化合物33)
4-[8-amino-3-[(2S)-1-[1-[1-[2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)-1,3-dioxo-isoindolin-5-yl]azetidin-3-yl]-4-piperidyl]pyrrolidin-2-yl]imidazo[1,5-a]pyrazin-1-yl]-N-(2-pyridyl)benzamide
第一步：4-[(2S)-2-[8-氨基-1-[4-(2-吡啶基氨基甲酰基)苯基]咪唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]吡咯-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(33b)
tert-butyl 4-[(2S)-2-[8-amino-1-[4-(2-pyridylcarbamoyl)phenyl]imidazo[1,5-a]pyrazin-3-yl]pyrrolidin-1-yl]piperidine-1-carboxylate
将(S)-4-(8-氨基-3-(吡咯-2-基)咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-基)-N-(吡啶-2-基)苯甲酰胺(33a)(0.500g，1.25mmol)溶解在5mL 1,2-二氯乙烷中，加入N-叔丁氧羰基-4-哌啶酮(0.374g，1.88mmol)和冰醋酸(0.150g，2.50mmol)，加完后65℃反应3h，冷却至室温，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.531g，2.50mmol)，加完后室温反应过夜。向反应体系中滴加饱和碳酸氢钠溶液调pH至9-10，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-19:1)，得到4-[(2S)-2-[8-氨基-1-[4-(2-吡啶基氨基甲酰基)苯基]咪唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]吡咯-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(33b)(0.340g，产率：47％)。
LCMS m/z＝583.3[M+1]+。
第二步：4-[8-氨基-3-[(2S)-1-(4-哌啶基)吡咯-2-基]咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-基]-N-(2-吡啶基)苯甲酰胺(33c)
4-[8-amino-3-[(2S)-1-(4-piperidyl)pyrrolidin-2-yl]imidazo[1,5-a]pyrazin-1-yl]-N-(2-pyridyl)benzamide
将4-[(2S)-2-[8-氨基-1-[4-(2-吡啶基氨基甲酰基)苯基]咪唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]吡咯-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(33b)(0.340g，0.583mmol)溶解在2mL二氯甲烷中，加入5mL 4N盐酸二氧六环溶液，室温搅拌1h。反应液减压浓缩后向残留物加入20mL二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠溶液调pH至9-10，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离纯化(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝19:0-1:1)，得到4-[8-氨基-3-[(2S)-1-(4-哌啶基)吡咯-2-基]咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-基]-N-(2-吡啶基)苯甲酰胺(33c)(0.206g，产率：73％)。
LCMS m/z＝483.3[M+1]+。
第三步：3-[4-[(2S)-2-[8-氨基-1-[4-(2-吡啶基氨基甲酰基)苯基]咪唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]吡咯-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(33d)
tert-butyl 3-[4-[(2S)-2-[8-amino-1-[4-(2-pyridylcarbamoyl)phenyl]imidazo[1,5-a]pyrazin-3-yl]pyrrolidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidine-1-carboxylate
将4-[8-氨基-3-[(2S)-1-(4-哌啶基)吡咯-2-基]咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-基]-N-(2-吡啶基)苯甲酰胺(33c)(0.200g，0.414mmol)溶解在5mL 1,2-二氯乙烷中，加入2mL二甲亚砜，加入3-氧代氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(0.106g，0.622mmol)和冰醋酸(0.0498g，0.829mmol)，加完后65℃反应3h，冷却至室温，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.176g，0.829mmol)，加完后室温反应2h。向反应体系中滴加饱和碳酸氢钠溶液调pH至9-10，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-19:1)，得到3-[4-[(2S)-2-[8-氨基-1-[4-(2-吡啶基氨基甲酰基)苯基]咪唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]吡咯-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(33d)(0.090g，产率：34％)。
第四步：4-[8-氨基-3-[(2S)-1-[1-(氮杂环丁-3-基)-4-哌啶基]吡咯-2-基]咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-基]-N-(2-吡啶基)苯甲酰胺(33e)
4-[8-amino-3-[(2S)-1-[1-(azetidin-3-yl)-4-piperidyl]pyrrolidin-2-yl]imidazo[1,5-a]pyrazin-1-yl]-N-(2-pyridyl)benzamide
将3-[4-[(2S)-2-[8-氨基-1-[4-(2-吡啶基氨基甲酰基)苯基]咪唑并[1,5-a]吡嗪-3-基]吡咯-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(33d)(0.090g，0.14mmol)溶解在2mL二氯甲烷中，加入5mL4N盐酸二氧六环溶液，室温搅拌1h。反应液减压浓缩后，向残留物加入20mL二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠溶液调pH至9-10，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得4-[8-氨基-3-[(2S)-1-[1-(氮杂环丁-3-基)-4-哌啶基]吡咯-2-基]咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-基]-N-(2-吡啶基)苯甲酰胺(33e)(0.076g，产率：>99％)。
LCMS m/z＝538.3[M+1]+。
第五步：4-[8-氨基-3-[(2S)-1-[1-[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基]氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]吡咯-2-基]咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-基]-N-(2-吡啶基)苯甲酰胺(化合物33)
4-[8-amino-3-[(2S)-1-[1-[1-[2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)-1,3-dioxo-isoindolin-5-yl]azetidin-3-yl]-4-piperidyl]pyrrolidin-2-yl]imidazo[1,5-a]pyrazin-1-yl]-N-(2-pyridyl)benzamide
将4-[8-氨基-3-[(2S)-1-[1-(氮杂环丁-3-基)-4-哌啶基]吡咯-2-基]咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-基]-N-(2-吡啶基)苯甲酰胺(33e)(0.076g，0.141mmol)溶解在2mL二甲亚砜中，加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(0.0468g，0.170mmol)和二异丙基乙基胺(0.0913g，0.707mmol)，加完后90℃反应2h。将反应液冷却至室温，慢慢滴加10mL水，过滤，滤饼用20mL二氯甲烷溶解，再用5mL饱和氯化钠溶液洗涤，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-19:1)，得到4-[8-氨基-3-[(2S)-1-[1-[1-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基]氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]吡咯-2-基]咪唑并[1,5-a]吡嗪-1-基]-N-(2-吡啶基)苯甲酰胺(化合物33)(0.055g，产率：49％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.53-8.37(m,2H),8.20-7.98(m,3H),7.83-7.75(m,1H),7.73-7.56(m,2H),7.51-7.38(m,1H),7.29-7.21(m,1H),7.16-7.05(m,2H),6.80-6.71(m,1H),6.48-6.40(m,1H),5.50(brs,2H),4.99-4.89(m,1H),4.53-4.41(m,1H),4.13-4.02(m,1H),3.99-3.83(m,1H),3.82-3.32(m,4H),2.97-2.58(m,6H),2.56-2.30(m,2H),2.25-1.55(m,11H)。
LCMS m/z＝794.3[M+1]+。
实施例34：
5-[1-[4-[(3R)-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]环己基]氮杂环丁-3-基]氧基-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物34-a)
5-[1-[4-[(3R)-3-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]cyclohexyl]azetidin-3-yl]oxy-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
5-[1-[4-[(3R)-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]环己基]氮杂环丁-3-基]氧基-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物34-b)
5-[1-[4-[(3R)-3-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]cyclohexyl]azetidin-3-yl]oxy-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
第一步：1-[(3R)-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)-3-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(34a)
1-[(3R)-1-(1,4-dioxaspiro[4.5]decan-8-yl)-3-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将(R)-3-(4-苯氧基苯基)-1-(哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(28a)(1.00g，2.59mmol)溶解在10mL氯仿中，加入1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-酮(0.606g，3.88mmol)和冰醋酸(0.311g，5.18mmol)，加完后70℃反应3h，再冷却至室温，加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.10g，5.18mmol)，加完后室温反应2h。向反应体系中滴加饱和碳酸氢钠溶液调pH至9-10，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-19:1)，得到1-[(3R)-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)-3-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(34a)(0.530g，产率：39％)。
LCMS m/z＝527.3[M+1]+。
第二步：4-[(3R)-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]环己酮(34b)
4-[(3R)-3-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]cyclohexanone
将1-[(3R)-1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)-3-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(34a)(0.530g，1.01mmol)溶解在5mL四氢呋喃中，加入5mL4N盐酸水溶液，室温搅拌1h。将反应液浓缩后向残留物加入20mL二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠溶液调pH至9-10，分液，水层再用20mL二氯甲烷萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到4-[(3R)-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]环己酮(34b)(0.480g，产率：99％)。
第三步：3-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]氧基氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(34d)
tert-butyl 3-[2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)-1,3-dioxo-isoindolin-5-yl]oxyazetidine-1-carboxylate
将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-羟基异吲哚啉-1,3-二酮(34c)(合成方法见US20180099940)(1.00g，3.65mmol)溶解在10mL DMF中，加入3-((甲基磺酰基)氧基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(1.01g，4.01mmol)和碳酸铯(2.38g，7.29mmol)，加完后于110℃微波反应2h。将反应液冷却至室温，加入20mL水和50mL乙酸乙酯，分液，水层再用20mL乙酸乙酯萃取，合并有机层，有机相用20mL饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩所得粗品用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝4:1-1:1)，得到3-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]氧基氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(34d)(0.670g，产率：43％)。
第四步：5-(氮杂环丁-3-基氧基)-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮盐酸盐(34e)
5-(azetidin-3-yloxy)-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dionehydrochlorate
将3-[2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1,3-二氧代-异吲哚啉-5-基]氧基氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(34d)(0.670g，1.56mmol)溶解在2mL二氯甲烷中，加入10mL2N盐酸乙酸乙酯溶液，室温搅拌2h。将反应液过滤，收集滤饼干燥得5-(氮杂环丁-3-基氧基)-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮盐酸盐(34e)(0.484g)。
LCMS m/z＝330.1[M+1]+。
第五步：5-[1-[4-[(3R)-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]环己基]氮杂环丁-3-基]氧基-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物34-a)
5-[1-[4-[(3R)-3-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]cyclohexyl]azetidin-3-yl]oxy-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
5-[1-[4-[(3R)-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]环己基]氮杂环丁-3-基]氧基-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物34-b)
5-[1-[4-[(3R)-3-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]cyclohexyl]azetidin-3-yl]oxy-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
将5-(氮杂环丁-3-基氧基)-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮盐酸盐(34e)(0.066g)溶解在2mL无水甲醇中，加入碳酸氢钠固体(0.020g，0.24mmol)，室温搅拌20分钟，过滤，滤饼用1mL甲醇洗涤，合并滤液浓缩后，将残留物溶解在2mL氯仿中，加入0.5mL DMSO、冰醋酸(0.022g，0.36mmol)和4-[(3R)-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]环己酮(34b)(0.13g，0.27mmol)，加完后于70℃搅拌反应5h，冷却至室温，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.077g，0.36mmol)，室温反应过夜。向反应体系中滴加饱和碳酸氢钠溶液调pH至9-10，加入20mL二氯甲烷，分液，水层再用10mL二氯甲烷萃取一次，合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-6:1)，得到5-[1-[4-[(3R)-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]环己基]氮杂环丁-3-基]氧基-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物34-a)(23mg)和5-[1-[4-[(3R)-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]环己基]氮杂环丁-3-基]氧基-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物34-b)(25mg)两纯品。
化合物34-a：(展开剂：二氯甲烷/甲醇＝10:1，Rf值＝0.45)
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.79(s,1H),8.39(s,1H),7.77(d,1H),7.67-7.61(m,2H),7.42-7.34(m,2H),7.21-7.12(m,4H),7.11-7.05(m,3H),5.64(brs,2H),5.54-5.37(m,1H),4.95(dd,1H),4.88-4.79(m,1H),3.89-3.77(m,2H),3.54-3.40(m,1H),3.36-3.15(m,2H),3.12-3.01(m,2H),2.95-2.65(m,5H),2.46-2.40(m,1H),2.28-2.09(m,4H),2.06-1.95(m,3H),1.92-1.72(m,5H),1.49-1.44(m,1H)。
LCMS m/z＝796.3[M+1]+。
化合物34-b：(展开剂：二氯甲烷/甲醇＝10:1，Rf值＝0.35)
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.77(s,1H),8.37(s,1H),7.78(d,1H),7.66-7.60(m,2H),7.42-7.36(m,2H),7.20-7.05(m,7H),5.60(brs,2H),5.32-5.16(m,1H),4.99-4.88(m,2H),3.99-3.87(m,2H),3.42-3.00(m,5H),2.94-2.62(m,5H),2.58-2.46(m,1H),2.27-2.06(m,8H),1.98-1.88(m,2H),1.53-1.44(m,1H),1.20-1.11(m,2H)。
LCMS m/z＝796.4[M+1]+。
实施例35
5-[4-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]吡唑-1-基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物35)
5-[4-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]pyrazol-1-yl]-1-piperidyl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
第一步：4-[4-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(35a)
tert-butyl 4-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]pyrazol-1-yl]piperidine-1-carboxylate
将4-(4-碘吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.500g，1.33mmol)溶解在2mL二甲亚砜中，依次加入3-(4-苯氧基苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1a)(合成方法见J.Med.Chem.2015,58,9625-9638)(0.615g，1.59mmol)、L-脯氨酸(0.0610g，0.530mmol)和碳酸钾(0.550g，3.98mmol)，置换氮气三次，加入碘化亚铜(0.0505g，0.265mmol)，加完后加热至100℃反应5h。将反应液冷却至室温，加入5mL水和10mL乙酸乙酯，分液，水层再用10mL乙酸乙酯萃取，合并有机层，有机相用10mL饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，所得粗品用硅胶柱色谱分离纯化(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-19:1)，得4-[4-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(35a)(0.0730g，产率：9％)。
第二步：3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-(4-哌啶基)吡唑-4-基]-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(35b)
3-(4-phenoxyphenyl)-1-[1-[1-(4-piperidyl)pyrazol-4-yl]-4-piperidyl]pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将4-[4-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(35a)(0.0730g，0.115mmol)溶解在2mL二氯甲烷中，加入5mL 4N盐酸乙酸乙酯溶液，室温搅拌2h。反应液浓缩后粗品加入20mL二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠溶液调pH至9-10，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-(4-哌啶基)吡唑-4-基]-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(35b)(0.0615g，产率：>99％)。
第三步：5-[4-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]吡唑-1-基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物35)
5-[4-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]pyrazol-1-yl]-1-piperidyl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
将3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-(4-哌啶基)吡唑-4-基]-4-哌啶基]吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(35b)(0.0600g，0.112mmol)溶解在2mL二甲亚砜中，加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(0.0402g，0.146mmol)和二异丙基乙胺(0.0724g，0.560mmol)，加完后于90℃搅拌反应2h。将反应液冷却至室温，加入10mL水，过滤，滤饼用20mL二氯甲烷溶解，再用5mL饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩所得粗品用硅胶柱色谱分离纯化(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-92:8)，得5-[4-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]吡唑-1-基]-1-哌啶基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物35)(0.0350g，产率：40％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.36(s,1H),8.23(s,1H),7.73-7.69(m,1H),7.68-7.60(m,2H),7.43-7.36(m,2H),7.33(d,1H),7.29-7.26(m,2H),7.21-7.05(m,6H),6.15(brs,2H),4.99-4.83(m,2H),4.36-4.28(m,1H),4.12-4.02(m,2H),3.58-3.49(m,2H),3.23-3.12(m,2H),2.95-2.67(m,5H),2.63-2.50(m,2H),2.30-2.21(m,2H),2.18-2.05(m,5H)。
LCMS m/z＝792.3[M+1]+。
实施例36
5-[1-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]环己基]氮杂环丁-3-基]氧基-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物36-a)
5-[1-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]cyclohexyl]azetidin-3-yl]oxy-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
5-[1-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]环己基]氮杂环丁-3-基]氧基-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸盐(化合物36-b)
5-[1-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]cyclohexyl]azetidin-3-yl]oxy-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dionetrifluoroacetate
第一步：1-[1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(36a)
1-[1-(1,4-dioxaspiro[4.5]decan-8-yl)-4-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将3-(4-苯氧基苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1a)(合成方法见J.Med.Chem.2015,58,9625-9638)(1.00g，2.59mmol)溶解在5mL1,2-二氯乙烷中，加入1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-酮(0.606g，3.88mmol)和冰醋酸(0.311g，5.18mmol)，加完后于65℃搅拌反应3h，再冷却至室温，加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.10g，5.18mmol)，加完后室温反应2h。向反应液滴加饱和碳酸氢钠溶液调pH至9-10，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-19:1)，得到1-[1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(36a)(0.800g，产率：59％)。
LCMS m/z＝527.3[M+1]+。
第二步：4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]环己酮(36b)
4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]cyclohexanone
将1-[1-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(36a)(0.800g，1.52mmol)溶解在10mL四氢呋喃中，加入10mL 4N盐酸水溶液，室温搅拌1h。将反应液浓缩，残留物中加入20mL二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠溶液调pH至9-10，水相再用20mL二氯甲烷萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩用硅胶柱色谱分离纯化(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝19:1-9:1)，得到4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]环己酮(36b)(0.600g，产率：82％)。
LCMS m/z＝483.3[M+1]+。
第三步：5-[1-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]环己基]氮杂环丁-3-基]氧基-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物36-a)
5-[1-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]cyclohexyl]azetidin-3-yl]oxy-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
5-[1-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]环己基]氮杂环丁-3-基]氧基-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸盐(化合物36-b)
5-[1-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]cyclohexyl]azetidin-3-yl]oxy-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dionetrifluoroacetate
将5-(氮杂环丁-3-基氧基)-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮盐酸盐(34e)(0.056g，0.15mmol)溶解在2mL无水甲醇中，加入碳酸氢钠固体(0.017g，0.20mmol)，室温搅拌20分钟，过滤，滤饼用1mL甲醇洗涤，合并滤液浓缩后将残留物溶解在2mL氯仿中，依次加入0.5mL DMSO、冰醋酸(0.018g，0.30mmol)和4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]环己酮(36b)(0.11g，0.23mmol)，加完后于70℃搅拌反应5h，冷却至室温，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.064g，0.30mmol)，室温反应过夜。向反应体系滴加饱和碳酸氢钠溶液调pH至9-10，加入20mL二氯甲烷，分液，水层再用10mL二氯甲烷萃取一次，合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-6:1)，得到5-[1-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]环己基]氮杂环丁-3-基]氧基-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物36-a)(0.020g)纯品和另一异构体粗品，粗品过Pre-HPLC(仪器及制备柱：采用Glison GX-281制备液相，制备柱型号是Sunfire C18，5μm,内径×长度＝30mm×150mm)。制备方法：粗品用甲醇和二甲亚砜溶解，并用0.45μm滤膜过滤，制备成样品液。流动相体系：乙腈/水(含0.1％TFA)。梯度洗脱方法：乙腈由浓度5％梯度洗脱至浓度60％(洗脱时间15min)，冻干得到5-[1-[4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]环己基]氮杂环丁-3-基]氧基-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸盐(化合物36-b)(7mg)纯品。
化合物36-a：(展开剂：二氯甲烷/甲醇＝10:1，Rf值＝0.45)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.09(s,1H),8.27(s,1H),7.89-7.83(m,1H),7.66(d,2H),7.47-7.41(m,2H),7.33-7.28(m,2H),7.23-7.10(m,5H),5.16-5.00(m,3H),3.87-3.75(m,2H),3.58-3.39(m,4H),3.22-3.05(m,3H),2.95-2.84(m,1H),2.68-2.53(m,3H),2.46-2.40(m,1H),2.26-2.14(m,2H),2.09-1.95(m,2H),1.84-1.68(m,5H),1.49-1.37(m,3H)。
LCMS m/z＝796.3[M+1]+。
化合物36-b：(展开剂：二氯甲烷/甲醇＝10:1，Rf值＝0.35)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.11(s,1H),8.30(s,1H),7.92(d,1H),7.74-7.61(m,2H),7.50-7.32(m,4H),7.26-7.09(m,5H),5.38-5.29(m,1H),5.18-5.05(m,2H),4.78-4.63(m,2H),4.43-4.24(m,2H),3.66-3.56(m,2H),3.28-3.21(m,3H),2.95-2.84(m,1H),2.68-2.54(m,2H),2.29-1.94(m,8H),1.60-1.45(m,2H),1.36-1.22(m,4H)。
LCMS m/z＝796.2[M+1]+。
实施例37
5-[4-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]环己氧基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物37)
5-[4-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]cyclohexoxy]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
第一步：1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-醇(37b)
1,4-dioxaspiro[4.5]decan-8-ol
将1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-酮(37a)(1.00g，6.40mmol)溶解在10mL无水甲醇中，慢慢加入硼氢化钠(0.484g，12.8mmol)，加完后室温反应20分钟。向反应体系中慢慢滴加20mL饱和氯化铵水溶液，用二氯甲烷萃取(30mL×2)，合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-醇(37b)(0.800g，产率：79％)。
第二步：1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基甲磺酸酯(37c)
1,4-dioxaspiro[4.5]decan-8-yl methanesulfonate
将1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-醇(37b)(0.800g，5.06mmol)溶解在10mL二氯甲烷中，加入三乙胺(1.28g，12.6mmol)，冰浴冷却至0℃，慢慢加入甲基磺酰氯(1.16g，10.1mmol)，加完后缓慢升至室温反应2h。向反应体系中加入20mL饱和碳酸氢钠溶液和20mL二氯甲烷，分液，有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离纯化(乙酸乙酯/石油醚(v/v)＝1:4-3:7)，得到1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基甲磺酸酯(37c)(0.640g，产率：54％)。
第三步：5-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基氧基)-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(37d)
5-(1,4-dioxaspiro[4.5]decan-8-yloxy)-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-羟基异吲哚啉-1,3-二酮(34c)(合成方法见US20180099940)(0.0500g，0.182mmol)溶解在2mL DMF中，加入1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基甲磺酸酯(37c)(0.0474g，0.201mmol)和碳酸铯(0.119g，0.365mmol)，加完后于110℃微波搅拌反应2h。将反应液冷却至室温，加入20mL水和50mL乙酸乙酯，分液，水层再用20mL乙酸乙酯萃取，合并有机层，有机相用20mL饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离纯化(乙酸乙酯/石油醚(v/v)＝1:4-1:1)，得到5-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基氧基)-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(37d)(0.0240g，产率：32％)。
LCMS m/z＝415.1[M+1]+。
第四步：2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-(4-氧代环己氧基)异吲哚啉-1,3-二酮(37e)
2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)-5-(4-oxocyclohexoxy)isoindoline-1,3-dione
将5-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基氧基)-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(37d)(0.024g，0.058mmol)溶解在5mL四氢呋喃中，加入5mL4N盐酸水溶液，室温搅拌1h。将反应液浓缩，向粗品中加入20mL二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠溶液调pH至9-10，分液，水层再用20mL二氯甲烷萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-(4-氧代环己氧基)异吲哚啉-1,3-二酮(37e)(0.021g，产率：>99％)。
LCMS m/z＝371.1[M+1]+。
第五步：5-[4-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]环己氧基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物37)
5-[4-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]cyclohexoxy]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
/>
将1-[1-(氮杂环丁-3-基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(17b)(0.025g，0.057mmol)溶解在2mL氯仿中，加入冰醋酸(0.0068g，0.11mmol)和2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-5-(4-氧代环己氧基)异吲哚啉-1,3-二酮(37e)(0.021g，0.057mmol)，加完后于70℃搅拌反应5h，冷却至室温，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.024g，0.11mmol)，室温反应过夜。向反应液滴加饱和碳酸氢钠溶液调pH至9-10，加入20mL二氯甲烷，分液，水相再用10mL二氯甲烷萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-6:1)，得到5-[4-[3-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]环己氧基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物37)(0.020g，产率：44％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.09(s,1H),8.26-8.20(m,1H),7.86-7.77(m,1H),7.69-7.63(m,2H),7.50-7.39(m,3H),7.38-7.32(m,1H),7.23-7.08(m,5H),5.15-5.07(m,1H),4.81-4.59(m,2H),3.60-3.39(m,3H),2.95-2.81(m,4H),2.64-2.53(m,2H),2.26-2.11(m,3H),2.10-1.73(m,9H),1.70-1.36(m,5H)。
LCMS m/z＝796.3[M+1]+。
实施例38
5-[3-[3-[(3S,4R)-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物38)
5-[3-[3-[(3S,4R)-4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-3-fluoro-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidin-1-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
第一步：(3S,4S)-3-氟-4-甲基磺酰氧基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(38b)
tert-butyl(3S,4S)-3-fluoro-4-methylsulfonyloxy-piperidine-1-carboxylate
将(3S,4S)-3-氟-4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(38a)(2.0g,9.13mmol)溶解于30mL二氯甲烷中，加入DIPEA(4.48g,34.66mmol)，缓慢滴加甲基磺酰氯(1.6g,13.97mmol)，加完后室温搅拌2h。反应液用40mL水淬灭，用100mL DCM萃取三次，有机相用100mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝5:1)，得(3S,4S)-3-氟-4-甲基磺酰氧基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(38b)(2.65g，收率：98％)。
第二步：(3S,4R)-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯(38c)
tert-butyl(3S,4R)-4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-3-fluoro-piperidine-1-carboxylate
将(3S,4S)-3-氟-4-甲基磺酰氧基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(38b)(2.45g,8.25mmol)和3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1.0g，3.30mmol)溶于20mL DMF中，加入碳酸铯(2.14g，6.6mmol)，于100℃搅拌反应7h。将反应冷却至室温，往反应体系里加入50mL水，用100mL乙酸乙酯萃取三次，有机相用100mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝15:1)，得(3S,4R)-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯(38c)(0.9g，收率：54％)。
LCMS m/z＝505.3[M+1]+。
第三步：1-[(3S,4R)-3-氟-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(38d)
1-[(3S,4R)-3-fluoro-4-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将(3S,4R)-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯(38c)(0.9g,1.79mmol)溶解到10mL DCM中，加入5mL三氟乙酸，室温搅拌4h。将反应体系直接减压浓缩，残留物用60mL 5N氢氧化钠溶液溶解，用100mL二氯甲烷萃取三次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得1-[(3S,4R)-3-氟-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(38d)(0.7g，产率：97％)。
LCMS m/z＝405.2[M+1]+。
第四步：3-[(3S,4R)-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-哌啶基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(38e)
tert-butyl 3-[(3S,4R)-4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-3-fluoro-1-piperidyl]azetidine-1-carboxylate
将1-[(3S,4R)-3-氟-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(38d)(0.7g,1.73mmol)溶于35Ml DCE与5mL DMSO中，加入3-氧代氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(542mg,3.17mmol)，室温搅拌10分钟后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.68g，7.93mmol)，室温搅拌过夜。向反应液中缓慢加入30mL饱和碳酸氢钠溶液，用50mL乙酸乙酯萃取三次，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得3-[(3S,4R)-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-哌啶基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(38e)(0.88g，收率：91％)。
LCMS m/z＝560.5[M+1]+。
第五步：1-((3S,4R)-1-(氮杂环丁-3-基)-3-氟哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-胺(38f)
1-((3S,4R)-1-(azetidin-3-yl)-3-fluoropiperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将3-[(3S,4R)-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-哌啶基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(38e)(880mg,1.57mmol)溶解到20mL DCM中，加入5mL三氟乙酸，室温搅拌4h。反应完后将体系直接减压浓缩，残留物用50mL 5N氢氧化钠溶液溶解，用50mL DCM萃取三次，有机相用30mL1 N氢氧化钠溶液洗涤两次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得1-((3S,4R)-1-(氮杂环丁-3-基)-3-氟哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-胺(38f)(0.65g，收率：90％)。
LCMS m/z＝460.3[M+1]+。
第六步：3-[3-[(3S,4R)-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)]吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(38g)
tert-butyl 3-[3-[(3S,4R)-4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-3-fluoro-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidine-1-carboxylate
将1-((3S,4R)-1-(氮杂环丁-3-基)-3-氟哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-胺(38f)(650mg,1.42mmol)溶于25mL DCE与2mL DMSO中，加入3-氧代氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(485mg,2.84mmol)，室温搅拌10分钟后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.12g，5.28mmol)，室温搅拌过夜。向反应体系中缓慢加入60mL饱和碳酸氢钠溶液，用60mL乙酸乙酯萃取三次，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得3-[3-[(3S,4R)-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)]吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(38g)(0.46g，收率：53％)。
LCMS m/z＝615.6[M+1]+。
第七步：1-[(3S,4R)-1-[1-(氮杂环丁-3-基)氮杂环丁-3-基]-3-氟-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(38h)
1-[(3S,4R)-1-[1-(azetidin-3-yl)azetidin-3-yl]-3-fluoro-4-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将3-[3-[(3S,4R)-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)]吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(38g)(400mg,0.65mmol)溶解在20mL DCM中，加入4mL三氟乙酸，室温搅拌4h。将反应体系直接减压浓缩，残留物用30mL 5N氢氧化钠溶液溶解，用30mL DCM萃取三次，有机相用30mL 1N氢氧化钠溶液洗涤两次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得1-[(3S,4R)-1-[1-(氮杂环丁-3-基)氮杂环丁-3-基]-3-氟-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(38h)(0.28g，收率：84％)。
LCMS m/z＝515.5[M+1]+。
第八步：5-[3-[3-[(3S,4R)-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物38)
5-[3-[3-[(3S,4R)-4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-3-fluoro-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidin-1-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
将1-[(3S,4R)-1-[1-(氮杂环丁-3-基)氮杂环丁-3-基]-3-氟-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(38h)(0.28g,0.54mmol)溶于25mL DMSO中，加入3mLDIPEA和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(300mg，1.09mmol)，于外浴80℃搅拌反应5h。将反应液冷却至室温，加入50mL水，用100mL乙酸乙酯萃取，有机相用100mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得5-[3-[3-[(3S,4R)-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物38)(0.126g，收率：30％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.91(s,1H),8.38(s,1H),7.69-7.61(m,3H),7.43-7.35(m,2H),7.21-7.05(m,5H),6.79(d,1H),6.53(dd,1H),5.68(brs,2H),5.20-5.01(m,1H),4.99-4.82(m,2H),4.10-4.02(m,2H),3.96-3.87(m,2H),3.80-3.66(m,1H),3.66-3.56(m,2H),3.32-2.97(m,6H),2.92-2.65(m,3H),2.49-2.29(m,1H),2.29-2.19(m,1H),2.17-2.07(m,2H)。
LCMS m/z＝771.3[M+1]+。
实施例39：
5-(3-((3R,4R)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-基)-[1,3'-双二氮杂环丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物39)
5-(3-((3R,4R)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoropiperidin-1-yl)-[1,3'-biazetidin]-1'-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
第一步：(3R,4S)-3-氟-4-((甲基磺酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(39b)
tert-butyl(3R,4S)-3-fluoro-4-((methylsulfonyl)oxy)piperidine-1-carboxylate
将(3R,4S)-3-氟-4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(39a)(2.0g,9.13mmol)溶解于30mL二氯甲烷中，加入DIPEA(2.76g，21.35mmol)，冷却至0℃，缓慢滴加甲基磺酰氯(1.25g，10.91mmol)，加完后室温搅拌30分钟。反应完毕，加入40mL水淬灭，用50mL二氯甲烷萃取，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝3:1)，得(3R,4S)-3-氟-4-((甲基磺酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(39b)(2.7g，收率：>99％)。
第二步：(3R,4R)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(39c)
tert-butyl(3R,4R)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoropiperidine-1-carboxylate
将(3R,4S)-3-氟-4-((甲基磺酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(39b)(2.20g,7.41mmol)和3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1.0g，3.30mmol)溶于30mLDMF中，加入碳酸铯(3.23g，9.91mmol)，于100℃搅拌反应4h。将反应液冷却至室温，向其加入50mL水，用50mL乙酸乙酯萃取，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝50:1)，得(3R,4R)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(39c)(900mg，收率：54％)。
LCMS m/z＝505.3[M+1]+。
第三步：1-((3R,4R)-3-氟哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(39d)
1-((3R,4R)-3-fluoropiperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将(3R,4R)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(39c)(900mg,1.79mmol)溶解到15mL二氯甲烷中，加入10mL三氟乙酸，室温搅拌4h。将反应体系直接减压浓缩，残留物用30mL 5N氢氧化钠溶液溶解，用50mL二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得1-((3R,4R)-3-氟哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(39d)(670mg,收率：93％)。
LCMS m/z＝405.3[M+1]+。
第四步：3-((3R,4R)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(39e)
tert-butyl 3-((3R,4R)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoropiperidin-1-yl)azetidine-1-carboxylate
将1-((3R,4R)-3-氟哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(39d)(670mg，1.66mmol)溶于35mL DCE中，加入3-氧代氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(566mg,3.31mmol)，室温搅拌10分钟后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.4g，6.61mmol)，室温搅拌过夜。向反应液中缓慢加入30mL饱和碳酸氢钠溶液，用30mL二氯甲烷萃取三次，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得3-((3R,4R)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(39e)(860mg,收率：93％)。
LCMS m/z＝560.3[M+1]+。
第五步：1-((3R,4R)-1-(氮杂环丁-3-基)-3-氟哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(39f)
1-((3R,4R)-1-(azetidin-3-yl)-3-fluoropiperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将3-((3R,4R)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(39e)(810mg,1.45mmol)溶解到20mL DCM中，加入5mL三氟乙酸，室温搅拌4h。反应完后将体系直接减压浓缩，残留物用30mL 5N氢氧化钠水溶液溶解，用30mL DCM萃取三次，有机相用30mL 1N氢氧化钠溶液洗涤两次，无水硫酸钠干燥，浓缩得到1-((3R,4R)-1-(氮杂环丁-3-基)-3-氟哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(39f)(0.63g,收率：95％)。
LCMS m/z＝460.2[M+1]+。
第六步：3-((3R,4R)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-基)-[1,3'-双二氮杂环丁烷]-1'-甲酸叔丁酯(39g)
tert-butyl 3-((3R,4R)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoropiperidin-1-yl)-[1,3'-biazetidine]-1'-carboxylate
将1-((3R,4R)-1-(氮杂环丁-3-基)-3-氟哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(39f)(580mg,1.26mmol)溶于30mL DCE中，加入3-氧代氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(432mg,2.53mmol)，室温搅拌10分钟后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.07g，5.05mmol)，室温搅拌过夜。向反应体系中缓慢加入30mL饱和碳酸氢钠溶液，用30mL二氯甲烷萃取三次，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得3-((3R,4R)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-基)-[1,3'-双二氮杂环丁烷]-1'-甲酸叔丁酯(39g)(600mg,收率：77％)。
LCMS m/z＝615.3[M+1]+。
第七步：1-((3R,4R)-1-([1,3'-双二氮杂环丁]-3-基)-3-氟哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(39h)
1-((3R,4R)-1-([1,3'-biazetidin]-3-yl)-3-fluoropiperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将3-((3R,4R)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-基)-[1,3'-双二氮杂环丁烷]-1'-甲酸叔丁酯(39g)(550mg,0.896mmol)溶解在20mL DCM中，加入4mL三氟乙酸，室温搅拌4h。将反应体系直接减压浓缩，残留物用30mL 5N氢氧化钠溶液溶解，用30mL DCM萃取三次，有机相用30mL 1N氢氧化钠溶液洗涤两次，无水硫酸钠干燥，浓缩得到1-((3R,4R)-1-([1,3'-双二氮杂环丁]-3-基)-3-氟哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(39h)(0.43g,收率：93％)。
LCMS m/z＝515.2[M+1]+。
第八步：5-(3-((3R,4R)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-基)-[1,3'-双二氮杂环丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物39)
5-(3-((3R,4R)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoropiperidin-1-yl)-[1,3'-biazetidin]-1'-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将1-((3R,4R)-1-([1,3'-双二氮杂环丁]-3-基)-3-氟哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(39h)(300mg,0.584mmol)溶于25mL DMSO中，加入1.5mL DIPEA和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(274mg,0.993mmol)，于外浴80℃搅拌反应5h。将反应液冷却至室温，加入50mL水，用100mL乙酸乙酯萃取，有机相用100mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝15:1)，得5-(3-((3R,4R)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-基)-[1,3'-双二氮杂环丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物39)(300mg,收率：67％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.61(s,1H),8.41(s,1H),7.69-7.61(m,3H),7.43-7.35(m,2H),7.20-7.05(m,5H),6.79(d,1H),6.53(dd,1H),5.80(brs,2H),5.35-5.14(m,1H),4.97-4.83(m,2H),4.09-4.01(m,2H),3.93-3.85(m,2H),3.75-3.55(m,3H),3.29-3.05(m,4H),2.92-2.64(m,4H),2.53-2.39(m,1H),2.22-2.05(m,4H)。
LCMS m/z＝771.3[M+1]+。
实施例40：
5-(3-((3R,4R)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物40)
5-(3-((3R,4R)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
第一步：(3R,4R)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-甲酸叔丁酯(40a)
tert-butyl(3R,4R)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidine]-1'-carboxylate
将1-((3R,4R)-3-氟哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(39d)(800mg，1.98mmol)溶于35mL DCE中，加入4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(787mg,3.95mmol)，室温搅拌10分钟后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.68g，7.93mmol)，室温搅拌过夜。向反应液中缓慢加入30mL饱和碳酸氢钠溶液，用30mL DCM萃取三次，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得(3R,4R)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-甲酸叔丁酯(40a)(970mg,收率：83％)。
LCMS m/z＝588.3[M+1]+。
第二步：1-((3R,4R)-3-氟-[1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(40b)
1-((3R,4R)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将(3R,4R)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-甲酸叔丁酯(40a)(960mg,1.64mmol)溶解到20mL DCM中，加入8mL三氟乙酸，室温搅拌4h。反应完后将体系直接减压浓缩，残留物用30mL 5N氢氧化钠溶液溶解，用30mL DCM萃取三次，有机相用30mL 1N氢氧化钠溶液洗涤两次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得1-((3R,4R)-3-氟-[1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(40b)(0.79g,收率：99％)。
LCMS m/z＝488.3[M+1]+。
第三步：3-((3R,4R)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(40c)
tert-butyl 3-((3R,4R)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidine-1-carboxylate
/>
将1-((3R,4R)-3-氟-[1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(40b)(540mg,1.11mmol)溶于30mL DCE中，加入3-氧代氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(380mg,2.22mmol)，室温搅拌10分钟后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(940mg，4.44mmol)，室温搅拌过夜。向反应体系中缓慢加入30mL饱和碳酸氢钠溶液，用30mL DCM萃取三次，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得3-((3R,4R)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(40c)(630mg,收率：88％)。
LCMS m/z＝643.4[M+1]+。
第四步：1-((3R,4R)-1'-(氮杂环丁-3-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(40d)
1-((3R,4R)-1'-(azetidin-3-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将3-((3R,4R)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(40c)(600mg,0.93mmol)溶解在20mLDCM中，加入8mL三氟乙酸，室温搅拌4h。将反应体系直接减压浓缩，残留物用30mL 5N氢氧化钠溶液溶解，用30mL二氯甲烷萃取三次，有机相用30mL 1N氢氧化钠溶液洗涤两次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得1-((3R,4R)-1'-(氮杂环丁-3-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(40d)(0.47g,收率：93％)。
LCMS m/z＝543.3[M+1]+。
第五步：5-(3-((3R,4R)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物40)
5-(3-((3R,4R)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将1-((3R,4R)-1'-(氮杂环丁-3-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(40d)(350mg,0.65mmol)溶于25mL DMSO中，加入1.5mLDIPEA和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(267mg，0.97mmol)，于外浴80℃搅拌反应5h。将反应液冷却至室温，加入50mL水，用100mL乙酸乙酯萃取，有机相用100mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝15:1)，得5-(3-((3R,4R)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物40)(380mg,收率：74％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.76(s,1H),8.41(s,1H),7.69-7.61(m,3H),7.42-7.34(m,2H),7.20-7.11(m,3H),7.11-7.05(m,2H),6.79(d,1H),6.52(dd,1H),5.83(brs,2H),5.29-5.10(m,1H),4.97-4.80(m,2H),4.12-4.06(m,2H),3.95-3.85(m,2H),3.45-3.31(m,2H),3.06-2.92(m,3H),2.91-2.68(m,3H),2.56-2.35(m,4H),2.16-1.93(m,4H),1.92-1.82(m,2H),1.74-1.58(m,2H)。
LCMS m/z＝799.3[M+1]+。
实施例41：
5-(3-((3R,4S)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-基)-[1,3'-双二氮杂环丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物41)
5-(3-((3R,4S)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoropiperidin-1-yl)-[1,3'-biazetidin]-1'-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
/>
第一步：(3R,4R)-3-氟-4-((甲基磺酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(41b)
tert-butyl(3R,4R)-3-fluoro-4-((methylsulfonyl)oxy)piperidine-1-carboxylate
将(3R,4R)-3-氟-4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(41a)(3.0g,13.70mmol)溶解于80mL二氯甲烷中，加入三乙胺(4.15g，41.09mmol)，冷却至0℃，缓慢滴加甲基磺酰氯(1.88g，16.41mmol)，加完后于室温搅拌反应30分钟。反应液用40mL水淬灭，用100mL DCM萃取三次，有机相用100mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝3:1)，得(3R,4R)-3-氟-4-((甲基磺酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(41b)(4.1g,收率：>99％)。
第二步：(3R,4S)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(41c)
tert-butyl(3R,4S)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoropiperidine-1-carboxylate
将(3R,4R)-3-氟-4-((甲基磺酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(41b)(3.92g,13.20mmol)和3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(2.0g,6.60mmol)溶于50mLDMF中，加入碳酸铯(6.45g，19.80mmol)，于100℃搅拌反应4h。将反应冷却至室温，往反应体系里加入80mL水，用100mL乙酸乙酯萃取三次，有机相用100mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝50:1)，得(3R,4S)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(41c)(2.5g,收率：75％)。
LCMS m/z＝505.3[M+1]+。
第三步：1-((3R,4S)-3-氟哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(41d)
1-((3R,4S)-3-fluoropiperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
/>
将(3R,4S)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(41c)(2.5g,4.96mmol)溶解到60mL DCM中，加入20mL三氟乙酸，室温搅拌4h。将反应体系直接减压浓缩，残留物用60mL 5N氢氧化钠溶液溶解，用100mL二氯甲烷萃取三次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得1-((3R,4S)-3-氟哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(41d)(2.1g,收率：>99％)。
LCMS m/z＝405.3[M+1]+。
第四步：3-((3R,4S)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(41e)
tert-butyl 3-((3R,4S)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoropiperidin-1-yl)azetidine-1-carboxylate
将1-((3R,4S)-3-氟哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(41d)(900mg,2.23mmol)溶于35mL DCE中，加入3-氧代氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(762mg,4.46mmol)，室温搅拌10分钟后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.89g，8.92mmol)，室温搅拌过夜。向反应液中缓慢加50mL饱和碳酸氢钠溶液，用50mL DCM萃取三次，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得3-((3R,4S)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(41e)(1.18g,收率：95％)。
LCMS m/z＝560.3[M+1]+。
第五步：1-((3R,4S)-1-(氮杂环丁-3-基)-3-氟哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(41f)
1-((3R,4S)-1-(azetidin-3-yl)-3-fluoropiperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将3-((3R,4S)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(41e)(800mg,1.43mmol)溶解到20mL DCM中，加入8mL三氟乙酸，室温搅拌4h。反应完后将体系直接减压浓缩，残留物用50mL 5N氢氧化钠溶液溶解，用50mL DCM萃取三次，有机相用30mL 1N氢氧化钠溶液洗涤两次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得1-((3R,4S)-1-(氮杂环丁-3-基)-3-氟哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(41f)(0.57g,收率：87％)。
LCMS m/z＝460.2[M+1]+。
第六步：3-((3R,4S)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-基)-[1,3'-双二氮杂环丁]-1'-甲酸叔丁酯(41g)
tert-butyl 3-((3R,4S)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoropiperidin-1-yl)-[1,3'-biazetidine]-1'-carboxylate
将1-((3R,4S)-1-(氮杂环丁-3-基)-3-氟哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(41f)(500mg,1.09mmol)溶于30mL DCE中，加入3-氧代氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(372mg,2.18mmol)，室温搅拌10分钟后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.93g，4.39mmol)，室温搅拌过夜。向反应体系中缓慢加入50mL饱和碳酸氢钠溶液，用50mL DCM萃取三次，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得3-((3R,4S)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-基)-[1,3'-双二氮杂环丁]-1'-甲酸叔丁酯(41g)(480mg,收率：72％)。
LCMS m/z＝615.3[M+1]+。
第七步：1-((3R,4S)-1-([1,3'-双二氮杂环丁]-3-基)-3-氟哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(41h)
1-((3R,4S)-1-([1,3'-biazetidin]-3-yl)-3-fluoropiperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将3-((3R,4S)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-基)-[1,3'-双二氮杂环丁]-1'-甲酸叔丁酯(41g)(480mg,0.78mmol)溶解在20mLDCM中，加入8mL三氟乙酸，室温搅拌4h。将反应体系直接减压浓缩，残留物用30mL 5N氢氧化钠溶液溶解，用30mL DCM萃取三次，有机相用30mL 1N氢氧化钠溶液洗涤两次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得1-((3R,4S)-1-([1,3'-双二氮杂环丁]-3-基)-3-氟哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(41h)(0.40g,收率：>99％)。
LCMS m/z＝515.2[M+1]+。
第八步：5-(3-((3R,4S)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-基)-[1,3'-双二氮杂环丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物41)
5-(3-((3R,4S)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoropiperidin-1-yl)-[1,3'-biazetidin]-1'-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将1-((3R,4S)-1-([1,3'-双二氮杂环丁]-3-基)-3-氟哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(41h)(300mg,0.58mmol)溶于25mL DMSO中，加入1.5mLDIPEA和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(242mg，0.88mmol)，于外浴80℃搅拌反应5h。将反应液冷却至室温，加入50mL水，用100mL乙酸乙酯萃取，有机相用100mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝15:1)，得5-(3-((3R,4S)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟哌啶-1-基)-[1,3'-双二氮杂环丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物41)(280mg,收率：63％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.07(s,1H),8.39(s,1H),7.68-7.60(m,3H),7.41-7.34(m,2H),7.19-7.04(m,5H),6.78(d,1H),6.51(dd,1H),5.86(brs,2H),5.18-5.00(m,1H),4.98-4.81(m,2H),4.08-4.00(m,2H),3.92-3.84(m,2H),3.74-3.66(m,1H),3.66-3.56(m,2H),3.26-2.95(m,6H),2.90-2.65(m,3H),2.46-2.29(m,1H),2.28-2.17(m,1H),2.16-2.05(m,2H)。
LCMS m/z＝771.3[M+1]+。
实施例42：
5-(3-((3R,4S)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物42)
5-(3-((3R,4S)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
第一步：(3R,4S)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-甲酸叔丁酯(42a)
tert-butyl(3R,4S)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidine]-1'-carboxylate
将1-((3R,4S)-3-氟哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(41d)(0.9g,2.23mmol)溶于35mL DCE中，加入4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(887mg,4.46mmol)，室温搅拌10分钟后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.89g，8.92mmol)，室温搅拌过夜。向反应液中缓慢加50mL饱和碳酸氢钠溶液，用50mL DCM萃取三次，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得(3R,4S)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-甲酸叔丁酯(42a)(1.08g,收率：83％)。
LCMS m/z＝588.3[M+1]+。
第二步：1-((3R,4S)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(42b)
1-((3R,4S)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将(3R,4S)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-甲酸叔丁酯(42a)(800mg,1.36mmol)溶解到30mL DCM中，加入10mL三氟乙酸，室温搅拌4h。反应完后将反应体系直接减压浓缩，残留物用50mL 5N氢氧化钠溶液溶解，用50mL DCM萃取三次，有机相用50mL 1N氢氧化钠溶液洗涤两次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得1-((3R,4S)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(42b)(600mg,收率：91％)。
LCMS m/z＝488.3[M+1]+。
第三步：3-((3R,4S)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(42c)
tert-butyl 3-((3R,4S)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidine-1-carboxylate
将1-((3R,4S)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(42b)(550mg,1.13mmol)溶于30mL DCE中，加入3-氧代氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(380mg,2.22mmol)，室温搅拌10分钟后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.95g,4.48mmol)，室温搅拌过夜。向反应体系中缓慢加入50mL饱和碳酸氢钠溶液，用50mL DCM萃取三次，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得3-((3R,4S)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(42c)(620mg,收率：85％)。
LCMS m/z＝643.4[M+1]+。
第四步：1-((3R,4S)-1'-(氮杂环丁-3-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(42d)
1-((3R,4S)-1'-(azetidin-3-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将3-((3R,4S)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(42c)(580mg,0.90mmol)溶解在20mLDCM中，加入8mL三氟乙酸，室温搅拌4h。将反应体系直接减压浓缩，残留物用30mL 5N氢氧化钠溶液溶解，用30mL DCM萃取三次，有机相用30mL 1N氢氧化钠溶液洗涤两次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得1-((3R,4S)-1'-(氮杂环丁-3-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(42d)(480mg,收率：98％)。
LCMS m/z＝543.3[M+1]+。
第五步：5-(3-((3R,4S)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物42)
5-(3-((3R,4S)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将1-((3R,4S)-1'-(氮杂环丁-3-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(42d)(300mg,0.55mmol)溶于25mL DMSO中，加入1.5mLDIPEA和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(229mg，0.83mmol)，于外浴80℃搅拌反应5h。将反应液冷却至室温，加入50mL水，用100mL乙酸乙酯萃取，有机相用100mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝15:1)，得5-(3-((3R,4S)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物42)(340mg,收率：77％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.63-9.46(m,1H),8.39(s,1H),7.68-7.61(m,3H),7.41-7.34(m,2H),7.20-7.04(m,5H),6.79(d,1H),6.52(dd,1H),5.78(brs,2H),5.23-5.00(m,1H),4.97-4.77(m,2H),4.13-4.06(m,2H),3.93-3.84(m,2H),3.42-3.29(m,2H),3.27-3.14(m,1H),3.08-2.92(m,3H),2.92-2.65(m,4H),2.65-2.46(m,2H),2.18-2.06(m,2H),2.02-1.84(m,4H),1.76-1.61(m,2H)。
LCMS m/z＝799.3[M+1]+。
实施例43
5-[3-[3-[(3S,4S)-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物43)
5-[3-[3-[(3S,4S)-4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-3-fl uoro-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidin-1-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
第一步：(3S,4R)-3-氟-4-甲基磺酰氧基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(43b)
tert-butyl(3S,4R)-3-fluoro-4-methylsulfonyloxy-piperidine-1-carboxylate
将(3S,4R)-3-氟-4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(43a)(6.0g,27.39mmol)溶解于30mL二氯甲烷中，加入DIPEA(7.06g,54.62mmol)，缓慢滴加甲基磺酰氯(0.376g,3.28mmol)，加完后室温搅拌2h。反应液用40mL水淬灭，用100mL DCM萃取三次，有机相用100mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝5:1)，得(3S,4R)-3-氟-4-甲基磺酰氧基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(43b)(7.97g,收率：98％)。
第二步：(3S,4S)-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(43c)
tert-butyl(3S,4S)-4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-3-fluoro-piperidine-1-carboxylate
将(3S,4R)-3-氟-4-甲基磺酰氧基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(43b)(2.45g,8.25mmol)和3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1.0g,3.30mmol)溶于20mL DMF中，加入碳酸铯(2.14g,6.57mmol)，于100℃搅拌反应7h。将反应冷却至室温，往反应体系里加入50mL水，用100mL乙酸乙酯萃取三次，有机相用100mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝15:1)，得(3S,4S)-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(43c)(0.9g,收率：54％)。
LCMS m/z＝505.3[M+1]+。
第三步：1-[(3S,4S)-3-氟-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(43d)
1-[(3S,4S)-3-fluoro-4-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将(3S,4S)-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟哌啶-1-甲酸叔丁酯(43c)(0.9g,1.79mmol)溶解到20mL DCM中，加入5mL三氟乙酸，室温搅拌4h。将反应体系直接减压浓缩，残留物用60mL 5N氢氧化钠溶液溶解，用100mL二氯甲烷萃取三次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得1-[(3S,4S)-3-氟-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(43d)(0.7g,收率：97％)。
LCMS m/z＝405.3[M+1]+。
第四步：3-[(3S,4S)-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-哌啶基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(43e)
tert-butyl 3-[(3S,4S)-4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-3-fluoro-1-piperidyl]azetidine-1-carboxylate
将1-[(3S,4S)-3-氟-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(43d)(0.7g,1.73mmol)溶于35mL DCE与5mL DMSO中，加入3-氧代氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(542mg,3.17mmol)，室温搅拌10分钟后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.68g，7.93mmol)，室温搅拌过夜。向反应液中缓慢加入30mL饱和碳酸氢钠溶液，用50mL乙酸乙酯萃取三次，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得3-[(3S,4S)-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-哌啶基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(43e)(800mg,收率：83％)。
LCMS m/z＝560.3[M+1]+。
第五步：1-[(3S,4S)-1-(氮杂环丁-3-基)-3-氟-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(43f)
1-[(3S,4S)-1-(azetidin-3-yl)-3-fluoro-4-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将3-[(3S,4S)-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-哌啶基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(43e)(500mg,0.89mmol)溶解到20mL DCM中，加入5mL三氟乙酸，室温搅拌4h。反应完后将体系直接减压浓缩，残留物用50mL 5N氢氧化钠溶液溶解，用50mL DCM萃取三次，有机相用30mL 1N氢氧化钠溶液洗涤两次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得1-[(3S,4S)-1-(氮杂环丁-3-基)-3-氟-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(43f)(0.4g,收率：98％)。
LCMS m/z＝460.2[M+1]+。
第六步：3-[3-[(3S,4S)-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(43g)
tert-butyl 3-[3-[(3S,4S)-4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-3-fluoro-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidine-1-carboxylate
将1-[(3S,4S)-1-(氮杂环丁-3-基)-3-氟-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(43f)(0.4g,0.87mmol)溶于25mL DCE与2mL DMSO中，加入3-氧代氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(485mg,2.83mmol)，室温搅拌10分钟后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.12g，5.28mmol)，室温搅拌过夜。向反应体系中缓慢加入60mL饱和碳酸氢钠溶液，用60mL乙酸乙酯萃取三次，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得3-[3-[(3S,4S)-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(43g)(450mg,收率：84％)。
LCMS m/z＝615.3[M+1]+。
第七步：1-[(3S,4S)-1-[1-(氮杂环丁-3-基)氮杂环丁-3-基]-3-氟-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(43h)
1-[(3S,4S)-1-[1-(azetidin-3-yl)azetidin-3-yl]-3-fluoro-4-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将3-[3-[(3S,4S)-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(43g)(400mg,0.65mmol)溶解在20mL DCM中，加入4mL三氟乙酸，室温搅拌4h。将反应体系直接减压浓缩，残留物用30mL 5N氢氧化钠溶液溶解，用30mL DCM萃取三次，有机相用30mL 1N氢氧化钠溶液洗涤两次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得1-[(3S,4S)-1-[1-(氮杂环丁-3-基)氮杂环丁-3-基]-3-氟-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(43h)(0.33g,收率：99％)。
LCMS m/z＝515.2[M+1]+。
第八步：5-[3-[3-[(3S,4S)-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物43)
5-[3-[3-[(3S,4S)-4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-3-fluoro-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidin-1-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
将1-[(3S,4S)-1-[1-(氮杂环丁-3-基)氮杂环丁-3-基]-3-氟-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(43h)(0.33g,0.64mmol)溶于25mL DMSO中，加入3mLDIPEA和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(352mg，1.28mmol)，于外浴80℃搅拌反应5h。将反应液冷却至室温，加入50mL水，用100mL乙酸乙酯萃取，有机相用100mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得5-[3-[3-[(3S,4S)-4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-哌啶基]氮杂环丁-1-基]氮杂环丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-哌啶基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物43)(125mg,收率：25％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.61(s,1H),8.41(s,1H),7.69-7.61(m,3H),7.43-7.35(m,2H),7.21-7.05(m,5H),6.79(d,1H),6.53(dd,1H),5.80(brs,2H),5.35-5.13(m,1H),4.97-4.83(m,2H),4.09-4.01(m,2H),3.93-3.85(m,2H),3.75-3.55(m,3H),3.29-3.06(m,4H),2.92-2.65(m,4H),2.53-2.39(m,1H),2.22-2.05(m,4H)。
LCMS m/z＝771.3[M+1]+。
实施例44：
5-(3-((3S,4S)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物44)
5-(3-((3S,4S)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dio ne
第一步：(3S,4S)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-甲酸叔丁酯(44a)
tert-butyl(3S,4S)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidine]-1'-carboxylate
将1-[(3S,4S)-3-氟-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(43d)(800mg，1.98mmol)溶于35mL DCE中，加入4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(787mg,3.95mmol)，室温搅拌10分钟后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.68g，7.93mmol)，室温搅拌过夜。向反应液中缓慢加入30mL饱和碳酸氢钠溶液，用30mL DCM萃取三次，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得(3S,4S)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-甲酸叔丁酯(44a)(970mg,收率：83％)。
LCMS m/z＝588.3[M+1]+。
第二步：1-((3S,4S)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(44b)
1-((3S,4S)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将(3S,4S)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-甲酸叔丁酯(44a)(650mg,1.11mmol)溶解到20mL DCM中，加入8mL三氟乙酸，室温搅拌4h。反应完后将体系直接减压浓缩，残留物用30mL 5N氢氧化钠溶液溶解，用30mL DCM萃取三次，有机相用30mL 1N氢氧化钠溶液洗涤两次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得1-((3S,4S)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(44b)(540mg,收率：>99％)。
LCMS m/z＝488.3[M+1]+。
第三步：3-((3S,4S)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(44c)
tert-butyl 3-((3S,4S)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidine-1-carboxylate
将1-((3S,4S)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(44b)(500mg,1.03mmol)溶于30mL DCE中，加入3-氧代氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(350mg,2.05mmol)，室温搅拌10分钟后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(870mg，4.10mmol)，室温搅拌过夜。向反应体系中缓慢加入30mL饱和碳酸氢钠溶液，用30mL DCM萃取三次，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得3-((3S,4S)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(44c)(560mg,收率：85％)。
LCMS m/z＝643.4[M+1]+。
第四步：1-((3S,4S)-1'-(氮杂环丁-3-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(44d)
1-((3S,4S)-1'-(azetidin-3-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxy-phenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将3-((3S,4S)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(44c)(500mg,0.78mmol)溶解在20mLDCM中，加入8mL三氟乙酸，室温搅拌4h。将反应体系直接减压浓缩，残留物用30mL 5N氢氧化钠溶液溶解，用30mL二氯甲烷萃取三次，有机相用30mL 1N氢氧化钠溶液洗涤两次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得1-((3S,4S)-1'-(氮杂环丁-3-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(44d)(420mg,收率：>99％)。
LCMS m/z＝543.3[M+1]+。
第五步：5-(3-((3S,4S)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物44)
5-(3-((3S,4S)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dio ne
将1-((3S,4S)-1'-(氮杂环丁-3-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(44d)(310mg,0.57mmol)溶于25mL DMSO中，加入1.5mLDIPEA和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(236mg，0.86mmol)，于外浴80℃搅拌反应5h。将反应液冷却至室温，加入50mL水，用100mL乙酸乙酯萃取，有机相用100mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝15:1)，得5-(3-((3S,4S)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物44)(310mg,收率：68％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.49(s,1H),8.41(s,1H),7.71-7.58(m,3H),7.43-7.33(m,2H),7.22-7.11(m,3H),7.11-7.03(m,2H),6.83-6.74(m,1H),6.57-6.47(m,1H),5.78(brs,2H),5.33-5.09(m,1H),4.98-4.79(m,2H),4.16-4.04(m,2H),3.96-3.85(m,2H),3.46-3.31(m,2H),3.07-2.91(m,3H),2.91-2.65(m,3H),2.57-2.34(m,4H),2.18-1.93(m,4H),1.92-1.82(m,2H),1.74-1.58(m,2H)。
LCMS m/z＝799.3[M+1]+。
实施例45：
5-(3-((3S,4R)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物45)
5-(3-((3S,4R)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
第一步：(3S,4R)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-甲酸叔丁酯(45a)
tert-butyl(3S,4R)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidine]-1'-carboxylate
将1-[(3S,4R)-3-氟-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(38d)(1.1g,2.72mmol)溶于35mL DCE中，加入4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.08g,5.43mmol)，室温搅拌10分钟后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(2.31g，10.90mmol)，室温搅拌过夜。向反应液中缓慢加入50mL饱和碳酸氢钠溶液，用50mL DCM萃取三次，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得(3S,4R)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-甲酸叔丁酯(45a)(1.4g,收率：88％)。
LCMS m/z＝588.3[M+1]+。
第二步：1-((3S,4R)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(45b)
1-((3S,4R)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将(3S,4R)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-甲酸叔丁酯(45a)(1.4g,2.38mmol)溶解到30mL DCM中，加入10mL三氟乙酸，室温搅拌4h。反应完后将体系直接减压浓缩，残留物用50mL 5N氢氧化钠溶液溶解，用50mL DCM萃取三次，有机相用30mL 1N氢氧化钠溶液洗涤两次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得1-((3S,4R)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(45b)(1.2g,产率：>99％)。
LCMS m/z＝488.3[M+1]+。
第三步：3-((3S,4R)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(45c)
tert-butyl 3-((3S,4R)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidine-1-carboxylate
将1-((3S,4R)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(45b)(600mg,1.23mmol)溶于30mL DCE中，加入3-氧代氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(421mg,2.46mmol)，室温搅拌10分钟后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.04g，4.91mmol)，室温搅拌过夜。向反应体系中缓慢加入50mL碳酸氢钠溶液，用50mL DCM萃取三次，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得3-((3S,4R)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(45c)(700mg,收率：89％)。
LCMS m/z＝643.4[M+1]+。
第四步：1-((3S,4R)-1'-(氮杂环丁-3-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(45d)
1-((3S,4R)-1'-(azetidin-3-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将3-((3S,4R)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(45c)(600mg,0.93mmol)溶解在20mLDCM中，加入8mL三氟乙酸，室温搅拌4h。将反应体系直接减压浓缩，残留物用30mL 5N氢氧化钠溶液溶解，用30mL DCM萃取三次，有机相用30mL 1N氢氧化钠溶液洗涤两次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得1-((3S,4R)-1'-(氮杂环丁-3-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(45d)(0.44g,收率：87％)。
LCMS m/z＝543.3[M+1]+。
第五步：5-(3-((3S,4R)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物45)
5-(3-((3S,4R)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将1-((3S,4R)-1'-(氮杂环丁-3-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(45d)(300mg,0.55mmol)溶于25mL DMSO中，加入1.5mLDIPEA和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(229mg，0.83mmol)，于外浴80℃搅拌反应5h。将反应液冷却至室温，加入50mL水，用100mL乙酸乙酯萃取，有机相用100mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝15:1)，得5-(3-((3S,4R)-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物45)(220mg,收率：50％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.37(s,1H),8.39(s,1H),7.68-7.60(m,3H),7.42-7.34(m,2H),7.20-7.04(m,5H),6.79(d,1H),6.52(dd,1H),5.74(brs,2H),5.23-5.02(m,1H),4.97-4.79(m,2H),4.14-4.05(m,2H),3.94-3.84(m,2H),3.41-3.29(m,2H),3.27-3.15(m,1H),3.07-2.92(m,3H),2.92-2.66(m,4H),2.65-2.48(m,2H),2.18-2.06(m,2H),2.03-1.84(m,4H),1.75-1.61(m,2H)。
LCMS m/z＝799.3[M+1]+。
实施例46-1：
trans-5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮-P1(化合物46-1)
trans-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione-P1
/>
/>
第一步：cis-3-氟-4-羟基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(46b)
Cis-tert-butyl 3-fluoro-4-hydroxy-piperidine-1-carboxylate
将3-氟-4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(46a)(13.0g，59.8mmol)溶解在130mL无水甲醇中，慢慢加入硼氢化钠(4.52g，119.5mmol)，加完后室温搅拌30分钟。将反应液用60mL饱和氯化铵溶液淬灭，用200mL二氯甲烷萃取，有机相用100mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝4:1-7:3)，得到cis-3-氟-4-羟基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(46b)(9.0g，产率：69％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.70-4.51(m,1H),3.99-3.83(m,2H),3.79-3.60(m,1H),3.52-3.33(m,1H),3.25-3.10(m,1H),1.95(br.s,1H),1.89-1.69(m,2H),1.46(s,9H)。
第二步：cis-3-氟-4-甲基磺酰氧基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(46c)
Cis-tert-butyl 3-fluoro-4-methylsulfonyloxy-piperidine-1-carboxylate
将cis-3-氟-4-羟基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(46b)(1.20g，5.47mmol)溶解在12mL二氯甲烷中，加入三乙胺(0.720g，7.12mmol)，0℃下慢慢滴加甲磺酰氯(0.940g，8.21mmol)，加完后在0℃下反应30min。在0℃下向反应液中滴加10mL饱和氯化铵溶液淬灭反应，回至室温，分液，水相再用20mL二氯甲烷萃取，合并有机相，有机相用20mL饱和氯化钠溶液洗涤一次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗品cis-3-氟-4-甲基磺酰氧基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(46c)(1.60g)。
第三步：trans-4-叠氮基-3-氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯(46d)
trans-tert-butyl 4-azido-3-fluoro-piperidine-1-carboxylate
将上述粗品cis-3-氟-4-甲基磺酰氧基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(46c)(1.60g)溶解在10mL DMF中，加入叠氮化钠(1.05g，16.2mmol)，加完后于95℃搅拌反应5h。将反应液冷却至室温，加入10mL水，用50mL乙酸乙酯萃取，分液，有机相再用20mL饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝9:1)，得到trans-4-叠氮基-3-氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯(46d)(0.900g，从化合物46b算两步收率：67％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.46-4.25(m,1H),4.21-4.00(m,1H),3.87-3.77(m,1H),3.71-3.59(m,1H),3.19-2.97(m,2H),2.06-1.94(m,1H),1.59-1.49(m,1H),1.46(s,9H)。
第四步：trans-4-氨基-3-氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯(46e)
trans-tert-butyl 4-amino-3-fluoro-piperidine-1-carboxylate
将trans-4-叠氮基-3-氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯(46d)(0.900g，3.68mmol)溶解在10mL无水乙醇中，加入150mg 10％钯碳，在氢气球氛围下室温搅拌16h。将反应液抽滤，滤液减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-20:1)，得到trans-4-氨基-3-氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯(46e)(0.500g，产率：62％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.42-4.19(m,1H),4.18-3.92(m,2H),2.98-2.69(m,3H),1.93-1.82(m,1H),1.55(br.s,2H),1.46(s,9H),1.41-1.28(m,1H)。
第五步：trans-3-氟-4-(4-氧代-1-哌啶基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(46f)
trans-tert-butyl 3-fluoro-4-(4-oxo-1-piperidyl)piperidine-1-carboxylate
将戊-1,4-二烯-3-醇(5.0g，59.4mmol)溶解在50mL 1,2-二氯乙烷中，加入2-碘酰基苯甲酸(IBX)(33g，117.8mmol)，于70℃搅拌反应3h。将反应液冷却至室温，抽滤，滤液直接用于下一步。
将trans-4-氨基-3-氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯(46e)(3.6g，16.5mmol)溶解在10mL无水甲醇中，加入二异丙基乙基胺(4.26g，33.0mmol)，再加入上述滤液，于70℃搅拌反应3h。将反应液冷却至室温，反应液减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝4:1-2:3)，得到trans-3-氟-4-(4-氧代-1-哌啶基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(46f)(4.0g，产率：81％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.61-4.31(m,2H),4.16-4.00(m,1H),3.06-2.91(m,4H),2.87-2.66(m,3H),2.45(t,4H),1.90-1.79(m,1H),1.60-1.48(m,1H),1.46(s,9H)。
LCMS m/z＝301.3[M+1]+。
第六步：trans-3-氟-4-(4-羟基-1-哌啶基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(46g)
trans-tert-butyl 3-fluoro-4-(4-hydroxy-1-piperidyl)piperidine-1-carboxylate
将trans-3-氟-4-(4-氧代-1-哌啶基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(46f)(4.0g，13.3mmol)溶解在40mL无水甲醇中，加入硼氢化钠(0.505g，13.3mmol)，加完后室温反应10min。向反应液滴加25mL饱和氯化铵溶液淬灭反应，用50mL乙酸乙酯萃取两次，合并有机相，有机相用30mL饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-9:1)，得到trans-3-氟-4-(4-羟基-1-哌啶基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(46g)(3.2g，产率：80％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.65-4.40(m,1H),4.38-4.22(m,1H),4.09-3.91(m,1H),3.76-3.61(m,1H),2.99-2.39(m,7H),2.00-1.71(m,3H),1.65-1.41(m,12H)。
LCMS m/z＝303.3[M+1]+。
第七步：trans-3-氟-4-[4-(对甲苯磺酰氧基)-1-哌啶基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(46h)
trans-tert-butyl 3-fluoro-4-[4-(p-tolylsulfonyloxy)-1-piperidyl]piperidine-1-carboxylate
/>
将trans-3-氟-4-(4-羟基-1-哌啶基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(46g)(1.80g，5.95mmol)溶解在18mL吡啶中，加入对甲苯磺酰氯(2.27g，11.9mmol)，加完后于70℃搅拌反应2小时。将反应液冷却至室温，加入30mL水和60mL乙酸乙酯，分液，有机相依次用20mL饱和碳酸氢钠溶液、40mL 0.5mol/L盐酸和20mL饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗品trans-3-氟-4-[4-(对甲苯磺酰氧基)-1-哌啶基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(46h)(2.48g)。
第八步：trans-4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-3-氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯(46i)
trans-tert-butyl-4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]-3-fluoro-piperidine-1-carboxylate
将3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1.50g，4.95mmol)溶解在10mL DMF中，依次加入上述粗品trans-3-氟-4-[4-(对甲苯磺酰氧基)-1-哌啶基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(46h)(2.48g)和碳酸铯(3.24g，9.94mmol)，加完后于60℃搅拌反应2h。将反应液冷却至室温，加入10mL水和20mL乙酸乙酯，分液，有机相用5mL饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝100:0-50:1)，得到trans-4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-3-氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯(46i)(0.900g，产率：31％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.36(s,1H),7.69-7.62(m,2H),7.43-7.35(m,2H),7.21-7.11(m,3H),7.11-7.05(m,2H),5.64(br.s,2H),4.86-4.74(m,1H),4.69-4.46(m,1H),4.42-4.25(m,1H),4.12-3.94(m,1H),3.19-3.03(m,2H),2.87-2.63(m,5H),2.50-2.34(m,2H),2.12-2.01(m,2H),1.93-1.84(m,1H),1.63-1.50(m,1H),1.47(s,9H)。
第九步：trans-4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-3-氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯-P1(46i-1)
trans-tert-butyl-4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]-3-fluoro-piperidine-1-carboxylate-P1
trans-4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-3-氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯-P2(46i-2)
trans-tert-butyl-4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]-3-fluoro-piperidine-1-carboxylate-P2
以及
化合物46i通过高效液相色谱法分离制备得到化合物46i-1及46i-2。制备条件如下：
仪器及制备柱：采用MG II preparative SFC(SFC-1)制备液相，制备柱型号ChiralPak IC,250×30mm I.D.,10μm。
制备方法：粗品用甲醇/二氯甲烷溶解，制备成样品液。
流动相体系：sCO2/异丙醇(含0.1％氨水)，等梯度洗脱：sCO2/异丙醇(含0.1％氨水)＝55/45。
流速：80mL/min
化合物46i-1及46i-2的分析方法：
仪器：Waters UPC2 analytical SFC(SFC-H)
色谱柱：CHIRALPAK IC
规格：150mm×4.6mm，3μm
流动相A：sCO2
流动相B：异丙醇(含0.05％二乙胺)
柱温：35℃
流速：2.5mL/min
波长：254nm
等梯度洗脱：流动相A:B＝60:40。
化合物46i-1保留时间：6.576min(绝对构型没有确定，其结构为上面式46i-a和46i-b之一)；
化合物46i-2保留时间：8.951min(绝对构型没有确定，其结构为上面式46i-a和46i-b之一，且与化合物46i-1为异构体，即，当化合物46i-1结构为式46i-a的结构时，化合物46i-2结构为式46i-b的结构；当化合物46i-1结构为式46i-b的结构时，化合物46i-2结构为式46i-a的结构)。
第十步：trans-1-(3'-氟-[1,4'-双哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺-P1(46j)
trans-1-(3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine-P1
将trans-4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-3-氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯-P1(46i-1，其结构为式46i-a和式46i-b之一)(420mg,0.71mmol)溶解到20mL DCM中，加入8mL三氟乙酸，室温搅拌4小时。将反应液直接减压浓缩，残留物用30mL 5mol/L NaOH溶液溶解，用DCM萃取(30mL×4)，合并有机相，有机相用1mol/LNaOH溶液洗涤(30mL×2)，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到trans-1-(3'-氟-[1,4'-双哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺-P1(46j)(340mg，收率：98％)，其中的手性碳构型与第十步的原料(化合物46i-1)对应的手性碳的构型一致。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.36(s,1H),7.71-7.61(m,2H),7.43-7.33(m,2H),7.20-7.11(m,3H),7.11-7.04(m,2H),5.52(br.s,2H),4.84-4.72(m,1H),4.71-4.46(m,1H),3.43-3.33(m,1H),3.17-2.99(m,3H),2.86-2.75(m,1H),2.74-2.50(m,4H),2.49-2.31(m,2H),2.11-1.97(m,2H),1.94-1.84(m,1H),1.84-1.70(m,1H),1.62-1.48(m,1H)。
LCMS m/z＝488.3[M+1]+。
第十一步：trans-3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯-P1(46k)
trans-tert-butyl 3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidine-1-carboxylate-P1
将trans-1-(3'-氟-[1,4'-双哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺-P1(46j)(300mg,0.62mmol)溶于30mL DCE中，加入3-氧代氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(211mg,1.23mmol)，室温搅拌10min后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(522mg，2.46mmol)，室温搅拌16h。将反应液用DCM萃取(30mL×3)，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得到trans-3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯-P1(46k)(380mg，收率：95％)，其中的手性碳构型与第十步的原料(化合物46i-1)对应的手性碳的构型一致。
LCMS m/z＝643.4[M+1]+。
第十二步：trans-1-(1'-(氮杂环丁-3-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺-P1(46l)
trans-1-(1'-(azetidin-3-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine-P1
将trans-3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯-P1(46k)(380mg,0.59mmol)溶解在20mL DCM中，加入8mL三氟乙酸，室温搅拌4h。将反应体系直接减压浓缩，残留物用30mL5mol/L NaOH溶液溶解，用DCM萃取(30mL×4)，合并有机相，有机相用1mol/L NaOH溶液洗涤(30mL×2)，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗品trans-1-(1'-(氮杂环丁-3-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺-P1(46l)(260mg)，其中的手性碳构型与第十步的原料(化合物46i-1)对应的手性碳的构型一致。
LCMS m/z＝543.3[M+1]+。
第十三步：trans-5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮-P1(化合物46-1)
trans-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione-P1
或
将上述粗品trans-1-(1'-(氮杂环丁-3-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺-P1(46l)(260mg)溶于15mL DMSO中，加入1.5mLDIPEA和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(191mg，0.69mmol)，于80℃搅拌反应5h。将反应液冷却至室温，加入30mL水淬灭，用100mL乙酸乙酯萃取，有机相用100mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝15:1)，得到trans-5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮-P1(化合物46-1)(220mg，从化合物46k算两步收率：47％)，化合物46-1结构为上面46-a和46-b所示结构之一，且其中的手性碳构型与第十步的原料(化合物46i-1)对应的手性碳的构型一致。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.28(s,1H),8.39(s,1H),7.69-7.60(m,3H),7.42-7.34(m,2H),7.20-7.11(m,3H),7.10-7.04(m,2H),6.79(d,1H),6.53(dd,1H),5.71(br.s,2H),4.93(dd,1H),4.87-4.60(m,2H),4.14-4.07(m,2H),3.90-3.81(m,2H),3.50-3.40(m,1H),3.24-2.98(m,3H),2.94-2.62(m,7H),2.50-2.33(m,2H),2.17-1.94(m,6H),1.70-1.60(m,1H)。
LCMS m/z＝799.3[M+1]+。
实施例46-2：
trans-5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮-P2(化合物46-2)
trans-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione-P2
/>
第一步：trans-1-(3'-氟-[1,4'-双哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺-P2(46m)
trans-1-(3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]py rimidin-4-amine-P2
将trans-4-[4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-3-氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯-P2(46i-2，实施例46-1的化合物46i-1的异构体)(420mg,0.71mmol)溶解到20mL DCM中，加入8mL三氟乙酸，室温搅拌4h。反应完后将体系直接减压浓缩，残留物用30mL 5mol/L NaOH溶液溶解，用DCM萃取(30mL×4)，合并有机相，用1mol/LNaOH溶液洗涤(30mL×2)，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到trans-1-(3'-氟-[1,4'-双哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺-P2(46m)(330mg，收率：95％)，其中的手性碳构型与(化合物46i-2)对应的手性碳的构型一致。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.36(s,1H),7.70-7.61(m,2H),7.43-7.34(m,2H),7.20-7.11(m,3H),7.10-7.05(m,2H),5.54(brs,2H),4.85-4.72(m,1H),4.68-4.46(m,1H),3.43-3.33(m,1H),3.17-2.99(m,3H),2.86-2.75(m,1H),2.74-2.50(m,4H),2.48-2.31(m,2H),2.10-1.96(m,2H),1.93-1.81(m,1H),1.79-1.62(m,1H),1.61-1.46(m,1H)。
LCMS m/z＝488.3[M+1]+。
第二步：trans-3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯-P2(46n)
trans-tert-butyl3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidine-1-carboxylate-P2
将trans-1-(3'-氟-[1,4'-双哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺-P2(46m)(300mg,0.62mmol)溶于30mL DCE中，加入3-氧代氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(211mg,1.23mmol)，室温搅拌10min后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(522mg，2.46mmol)，室温搅拌16h。将反应液用DCM萃取(30mL×3)，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得到trans-3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯-P2(46n)(390mg，收率：98％)，其中的手性碳构型与(化合物46i-2)对应的手性碳的构型一致。
LCMS m/z＝643.4[M+1]+。
第三步：trans-1-(1'-(氮杂环丁-3-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺-P2(46o)
trans-1-(1'-(azetidin-3-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine-P2
将trans-3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯-P2(46n)(370mg,0.58mmol)溶解在20mL DCM中，加入8mL三氟乙酸，室温搅拌4h。将反应体系直接减压浓缩，残留物用30mL5mol/L NaOH溶液溶解，用DCM萃取(30ml×4)，合并有机相，有机相用1mol/L NaOH溶液洗涤(30mL×2)，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗品trans-1-(1'-(氮杂环丁-3-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺-P2(46o)(270mg)，其中的手性碳构型与(化合物46i-2)对应的手性碳的构型一致。
LCMS m/z＝543.3[M+1]+。
第四步：trans-5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮-P2(化合物46-2)
trans-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione-P2
将上述粗品trans-1-(1'-(氮杂环丁-3-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺-P2(46o)(270mg)溶于15mL DMSO中，加入1.5mLDIPEA和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(191mg，0.69mmol)，于80℃搅拌反应5h。将反应液冷却至室温，加入30mL水，用100mL乙酸乙酯萃取，有机相用100mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝15:1)，得到trans-5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-双哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮-P2(化合物46-2)(260mg，从化合物46n算两步收率：56％)，化合物46-2结构为上面46-b和46-a所示结构之一，且其中的手性碳构型与第一步的原料(化合物46i-2)对应的手性碳的构型一致；即，化合物46-2为实施例46-1的化合物46-1的异构体。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.86(s,1H),8.38(s,1H),7.69-7.60(m,3H),7.43-7.34(m,2H),7.21-7.11(m,3H),7.10-7.04(m,2H),6.79(d,1H),6.53(dd,1H),5.63(brs,2H),4.93(dd,1H),4.87-4.59(m,2H),4.14-4.07(m,2H),3.90-3.81(m,2H),3.50-3.40(m,1H),3.25-3.00(m,3H),2.94-2.62(m,7H),2.51-2.35(m,2H),2.18-1.94(m,6H),1.77-1.62(m,1H)。
LCMS m/z＝799.3[M+1]+。
实施例47：
(7S)-7-(1-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)氮杂环丁-3-基)哌啶-4-基)-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(化合物47)
(7S)-7-(1-(1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)azetidin-3-yl)piperidin-4-yl)-2-(4-phenoxyphenyl)-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carboxamide
将(7S)-7-[1-(氮杂环丁-3-基)-4-哌啶基]-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(31b)(250mg,0.53mmol)溶于25mL DMSO中，加入1.0mL DIPEA和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(220mg，0.80mmol)，于80℃搅拌反应5h。将反应液冷却至室温，加入50mL水，用100mL乙酸乙酯萃取，有机相用100mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝15:1)，得到(7S)-7-(1-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)氮杂环丁-3-基)哌啶-4-基)-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(化合物47)(210mg,收率：54％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.53-8.41(m,1H),7.63(d,1H),7.53-7.46(m,2H),7.40-7.32(m,2H),7.18-7.11(m,1H),7.10-7.01(m,4H),6.78(d,1H),6.63-6.57(m,1H),6.52(dd,1H),5.21(br.s,2H),4.95-4.87(m,1H),4.14-4.05(m,2H),3.98-3.78(m,2H),3.47-3.29(m,3H),3.06-2.64(m,5H),2.35-2.05(m,4H),2.02-1.86(m,2H),1.86-1.76(m,1H),1.74-1.38(m,4H)。
LCMS m/z＝729.3[M+1]+。
实施例48：
(7S)-7-(1'-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)-[1,4'-二哌啶]-4-基)-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(化合物48)
(7S)-7-(1'-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-2-(4-phenoxyphenyl)-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carboxamide
将(7S)-2-(4-苯氧基苯基)-7-[1-(4-哌啶基)-4-哌啶基]-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(30c)(250mg,0.50mmol)溶于25mL DMSO中，加入1.0mL DIPEA和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(207mg，0.75mmol)，于80℃搅拌反应5h。将反应液冷却至室温，加入50mL水，用100mL乙酸乙酯萃取，有机相用100mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝15:1)，得到(7S)-7-(1'-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)-[1,4'-二哌啶]-4-基)-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(化合物48)(200mg,收率：53％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.81(br.s,1H),7.66(d,1H),7.53-7.45(m,2H),7.40-7.32(m,2H),7.29-7.24(m,1H),7.19-7.10(m,1H),7.10-6.99(m,5H),6.62-6.57(m,1H),5.26(br.s,2H),4.97-4.88(m,1H),4.16-4.06(m,1H),4.04-3.94(m,2H),3.46-3.36(m,2H),3.21-3.03(m,2H),3.03-2.91(m,2H),2.90-2.65(m,4H),2.47-2.22(m,3H),2.22-2.02(m,5H),1.87-1.58(m,6H)。
LCMS m/z＝757.3[M+1]+。
实施例49-1
cis-5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮-P1(化合物49-1)
cis-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione-P1
第一步：cis-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-甲酸叔丁酯-P1(18a-1)
cis-tert-butyl 4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidine]-1'-carboxylate-P1
以及
cis-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-甲酸叔丁酯-P2(18a-2)
cis-tert-butyl 4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidine]-1'-carboxylate-P2
以及
化合物18a通过高效液相色谱法分离制备得到化合物18a-1及18a-2。制备条件如下：
仪器及制备柱：采用MG II preparative SFC(SFC-1)制备液相，制备柱型号Cellulose-2,250×30mm I.D.,5μm。
制备方法：粗品用甲醇/二氯甲烷溶解，制备成样品液。
流动相体系：sCO2/乙醇(含0.1％氨水)，等梯度洗脱：sCO2/乙醇(含0.1％氨水)＝60/40。
流速：50mL/min
化合物18a-1及18a-2的分析方法：
仪器：Waters UPC2 analytical SFC(SFC-H)
色谱柱：Cellulose-2,I.D.
规格：150mm×4.6mm，3μm
流动相A：sCO2
流动相B：乙醇(含0.05％二乙胺)
柱温：35℃
流速：2.5mL/min
波长：220nm
等梯度洗脱：流动相A:B＝60:40。
化合物18a-1保留时间：7.201min；绝对构型没有确定，其结构为上面式18a-a和18a-b之一；
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.29(s,1H),7.58(d,1H),7.35-7.27(m,2H),7.23-7.16(m,1H),7.13-7.04(m,3H),7.03-6.97(m,2H),5.51(br.s,2H),4.99-4.62(m,2H),4.46-4.10(m,2H),3.14-2.94(m,2H),2.87-2.25(m,7H),2.01-1.86(m,3H),1.65-1.57(m,1H),1.39(s,9H)。
化合物18a-2保留时间：8.585min。绝对构型没有确定，其结构为上面式18a-a和18a-b之一，且与化合物18a-1为异构体，即，当化合物18a-1结构为式18a-a的结构时，化合物18a-2结构为式18a-b的结构；当化合物18a-1结构为式18a-b的结构时，化合物18a-2结构为式18a-a的结构。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.29(s,1H),7.58(d,1H),7.35-7.27(m,2H),7.21-7.16(m,1H),7.13-7.04(m,3H),7.03-6.97(m,2H),5.41(br.s,2H),5.00-4.60(m,2H),4.53-4.03(m,2H),3.15-3.00(m,2H),2.92-2.22(m,7H),2.02-1.85(m,3H),1.69-1.51(m,1H),1.39(s,9H)。
第二步：cis-1-(3'-氟-[1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺-P1(49a)
cis-1-(3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine-P1
将cis-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-甲酸叔丁酯-P1(18a-1，其结构为式18a-a和式18a-b之一)(1.0g,1.7mmol)溶解到20mL DCM中，加入5mL三氟乙酸，室温搅拌3h。向反应液中缓慢滴加30mL饱和碳酸氢钠溶液，加入30mL二氯甲烷和50mL水，分离出有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗品cis-1-(3'-氟-[1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺-P1(49a)(0.8g)，其中的手性碳构型与(化合物18a-1)对应的手性碳的构型一致。
LC-MS m/z＝488.3[M+1]+。
第三步：cis-3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯-P1(49b)
Cis-tert-butyl 3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidine-1-carboxylate-P1
将上述粗品cis-1-(3'-氟-[1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺-P1(49a)(0.8g)溶解于30mL DCE中，加入3-氧杂氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(0.6g,3.5mmol)，室温搅拌10min，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.7g,3.3mmol)，室温下搅拌反应16h。向反应液中加入30mL饱和碳酸氢钠溶液，加入50mL二氯甲烷和50mL水，分离出有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得到cis-3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯-P1(49b)(1.0g，从化合物18a-1算两步收率：92％)，其中的手性碳构型与(化合物18a-1)对应的手性碳的构型一致。
LC-MS m/z＝643.4[M+1]+。
第四步：cis-1-(1'-(氮杂环丁-3-基)-3'-氟-[1,4'-双哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺-P1(49c)
Cis-1-(1'-(azetidin-3-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine-P1
将cis-3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯-P1(49b)(1.0g,1.56mmol)溶解到20mLDCM中，加入5mL三氟乙酸，室温搅拌3h。向反应液中缓慢滴加30mL饱和碳酸氢钠溶液，加入30mL二氯甲烷和50mL水，分离出有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗品cis-1-(1'-(氮杂环丁-3-基)-3'-氟-[1,4'-双哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺-P1(49c)(0.7g)，其中的手性碳构型与(化合物18a-1)对应的手性碳的构型一致。
LCMS m/z＝543.3[M+1]+。
第五步：cis-5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮-P1(化合物49-1)
cis-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione-P1
将上述粗品cis-1-(1'-(氮杂环丁-3-基)-3'-氟-[1,4'-双哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺-P1(49c)(0.2g)溶于5mL DMSO中，加入DIPEA(0.21g,1.6mmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(0.14g，0.5mmol)，于90℃搅拌反应3h。将反应液冷却至室温，加入50mL乙酸乙酯和50mL水，分离出有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得到cis-5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮-P1(化合物49-1)(0.05g，从化合物49b算两步收率：14％)，化合物49-1结构为上面49-a和49-b所示结构之一，且其中的手性碳构型与第二步的原料(化合物18a-1)对应的手性碳的构型一致。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.97(s,1H),8.38(s,1H),7.69-7.59(m,3H),7.43-7.34(m,2H),7.20-7.04(m,5H),6.78(d,1H),6.52(dd,1H),5.69(brs,2H),5.13-4.88(m,2H),4.84-4.73(m,1H),4.15-4.05(m,2H),3.99-3.87(m,2H),3.52-3.43(m,1H),3.28-3.12(m,3H),3.09-3.00(m,1H),2.93-2.33(m,8H),2.24-2.00(m,6H),1.84-1.76(m,1H)。
LCMS m/z＝799.3[M+1]+。
实施例49-2
cis-5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮-P2(化合物49-2)
cis-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione-P2
/>
第一步：cis-1-(3'-氟-[1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺-P2(49d)
cis-1-(3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine-P2
将cis-4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-甲酸叔丁酯-P2(18a-2，其结构为式18a-a和式18a-b之一，化合物18a-1的异构体)(0.82g,1.4mmol)溶解到20mL DCM中，加入5mL三氟乙酸，室温搅拌3h。向反应液中缓慢滴加30mL饱和碳酸氢钠溶液，加入30mL二氯甲烷和50mL水，分离出有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗品cis-1-(3'-氟-[1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺-P2(49d)(0.62g)，其中的手性碳构型与化合物18a-2对应的手性碳的构型一致。
LC-MS m/z＝488.3[M+1]+。
第二步：cis-3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯-P2(49e)
Cis-tert-butyl 3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidine-1-carboxylate-P2
将上述粗品cis-1-(3'-氟-[1,4'-联哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺-P2(49d)(0.62g)溶解于30mL DCE中，加入3-氧杂氮杂环丁-1-甲酸甲酸叔丁酯(0.43g,2.5mmol)，室温搅拌10min，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.64g,3.0mmol)，室温下搅拌反应16h。向反应液中加入30mL饱和碳酸氢钠溶液，加入50mL二氯甲烷和50mL水，分离出有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得到cis-3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯-P2(49e)(0.6g，从化合物18a-2算两步收率：67％)，其中的手性碳构型与化合物18a-2对应的手性碳的构型一致。
LC-MS m/z＝643.4[M+1]+。
第三步：cis-1-(1'-(氮杂环丁-3-基)-3'-氟-[1,4'-双哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺-P2(49f)
Cis-1-(1'-(azetidin-3-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine-P2
将cis-3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯-P2(49e)(0.6g,0.93mmol)溶解到20mLDCM中，加入5mL三氟乙酸，室温搅拌3h。向反应液中缓慢滴加30mL饱和碳酸氢钠溶液，加入30mL二氯甲烷和50mL水，分离出有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗品cis-1-(1'-(氮杂环丁-3-基)-3'-氟-[1,4'-双哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺-P2(49f)(0.45g)，其中的手性碳构型与化合物18a-2对应的手性碳的构型一致。
LCMS m/z＝543.3[M+1]+。
第四步：cis-5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮-P2(化合物49-2)
cis-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione-P2
将上述粗品cis-1-(1'-(氮杂环丁-3-基)-3'-氟-[1,4'-双哌啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺-P2(49f)(0.2g)溶于5mL DMSO中，加入DIPEA(0.21g,1.6mmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(0.14g，0.5mmol)，于90℃搅拌反应3h。将反应液冷却至室温，加入50mL乙酸乙酯和50mL水，分离出有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得到cis-5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-联哌啶]-1'-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮-P2(化合物49-2)(0.27g，从化合物49e算两步收率：82％)，化合物49-2结构为上面49-a和49-b所示结构之一，且其中的手性碳构型与第一步的原料(化合物18a-2)对应的手性碳的构型一致，即化合物49-2为化合物49-1的异构体。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.66(s,1H),8.38(s,1H),7.67-7.60(m,3H),7.42-7.34(m,2H),7.20-7.11(m,3H),7.10-7.04(m,2H),6.78(d,1H),6.52(dd,1H),5.79(brs,2H),5.13-4.88(m,2H),4.83-4.72(m,1H),4.16-4.04(m,2H),4.00-3.86(m,2H),3.52-3.42(m,1H),3.24-3.12(m,3H),3.09-3.00(m,1H),2.91-2.32(m,8H),2.23-1.98(m,6H),1.84-1.76(m,1H)。
LCMS m/z＝799.4[M+1]+。
实施例50：
5-(3-(2-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物50)
5-(3-(2-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
第一步：2-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]哌啶-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-甲酸叔丁酯(50a)
tert-butyl 2-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
将3-(4-苯氧基苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1a)(合成方法见J.Med.Chem.2015,58,9625-9638)(400mg,1.04mmol)溶于5mL DCE中，室温下依次加入2-氧代-7-氮杂螺[3.5]壬-7-甲酸叔丁酯(493mg,2.06mmol)、冰乙酸(0.15mL,2.6mmol)和无水硫酸钠(700mg)，搅拌5min后加入三乙酰氧基硼氢化钠(655mg,3.09mmol)，室温搅拌16h。向反应液中加入50mL水，用2mol/L氢氧化钠水溶液调水相pH为10，用二氯甲烷萃取(30mL×3)，合并有机相，有机相用水洗涤(20mL×2)，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝10:1-8:1)，得到2-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]哌啶-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-甲酸叔丁酯(50a)(600mg，产率：95％)。
LCMS m/z＝610.4[M+1]+。
第二步：1-(1-(7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(50b)
1-(1-(7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将2-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]哌啶-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-甲酸叔丁酯(50a)(600mg,0.98mmol)溶于4mL二氯甲烷中，加入2mL三氟乙酸，室温反应2h。将反应液用2mol/L氢氧化钠溶液调pH至10，水相用二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗品1-(1-(7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(50b)(458mg)。
LCMS m/z＝510.3[M+1]+。
第三步：3-(2-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(50c)
tert-butyl 3-(2-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)azetidine-1-carboxylate
将上述粗品1-(1-(7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(50b)(458mg)溶于5mL DCE中，室温下依次加入1-Boc-3-氮杂环丁酮(308mg,1.80mmol)、冰乙酸(0.13mL,2.25mmol)和无水硫酸钠(700mg)，搅拌30min后加入三乙酰氧基硼氢化钠(634mg,2.99mmol)，室温搅拌16h。向反应液中加入50mL水，用2mol/L氢氧化钠溶液调水相pH为10，用二氯甲烷萃取(30mL×3)，合并有机相，有机相用水洗涤(20mL×2)，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝10:1-8:1)，得到3-(2-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(50c)(501mg，从化合物50a算两步产率：77％)。
LCMS m/z＝665.4[M+1]+。
第四步：1-(1-(7-(氮杂环丁-3-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(50d)
1-(1-(7-(azetidin-3-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将3-(2-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(50c)(501mg,0.75mmol)溶于5mL二氯甲烷中，加入2mL三氟乙酸，室温反应2.5h。将反应液用2mol/L氢氧化钠溶液调pH至10，水相用二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗品1-(1-(7-(氮杂环丁-3-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(50d)(350mg)。
LCMS m/z＝565.4[M+1]+。
第五步：5-(3-(2-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物50)
5-(3-(2-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将上述粗品1-(1-(7-(氮杂环丁-3-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(50d)(192mg)溶于5mL DMSO中，室温下加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(102mg,0.37mmol)和二异丙基乙基胺(220mg,1.70mmol)，于80℃搅拌反应4h。将反应液倒入20mL水中，水相用二氯甲烷/甲醇(v/v)＝10:1混合溶剂萃取(30mL×3)，合并有机相，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝15:1-8:1)，得到5-(3-(2-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物50)(112mg，从化合物50c算两步产率：33％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.29(s,1H),7.61-7.52(m,3H),7.36-7.28(m,2H),7.16-6.97(m,5H),6.70(d,1H),6.44(dd,1H),5.76(br.s,2H),4.85(dd,1H),4.80-4.66(m,1H),4.06-3.96(m,2H),3.86-3.76(m,2H),3.28-3.18(m,1H),3.07-2.96(m,1H),2.86-2.57(m,5H),2.43-2.31(m,3H),2.31-2.17(m,3H),2.09-1.92(m,7H),1.77-1.66(m,2H),1.65-1.54(m,4H)。
LCMS m/z＝821.4[M+1]+。
实施例51：
5-(2'-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-7,7'-二氮杂[2,7'-bis双螺[3.5]壬烷]-7-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物51)
5-(2'-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-7,7'-diaza[2,7'-bispiro[3.5]nonan]-7-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
第一步：2-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(51a)
tert-butyl 2-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
将3-(4-苯氧基苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1a)(合成方法见J.Med.Chem.2015,58,9625-9638)(1.0g，2.59mmol)溶于35mL DCE中，加入2-氧代-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(1.24g,5.18mmol)，室温搅拌10min后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.37g，6.46mmol)，室温搅拌16h。向反应液中缓慢加入30mL饱和碳酸氢钠水溶液，用二氯甲烷萃取(30mL×3)，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得2-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(51a)(1.5g，收率：95％)。
LCMS m/z＝610.4[M+1]+。
第二步：1-(1-(1-(7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(51b)
1-(1-(7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine trifluoroacetate
将2-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(51a)(1.5g,2.46mmol)溶解到20mL二氯甲烷中，加入8mL三氟乙酸，室温搅拌4h。反应完后将反应体系直接减压浓缩，得粗品1-(1-(1-(7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(51b)(1.8g)。
LCMS m/z＝510.3[M+1]+。
第三步：2'-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-7,7'-二氮杂[2,7'-双螺[3.5]壬烷]-7-甲酸叔丁酯(51c)
tert-butyl 2'-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-7,7'-diaza[2,7'-bispiro[3.5]nonane]-7-carboxylate
将上述粗品1-(1-(1-(7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(51b)(1.8g)溶于40mL DCE中，加入固体碳酸氢钠(620mg，7.38mmol)，室温搅拌20min后，加入2-氧代-7-氮杂螺[3.5]壬-7-甲酸叔丁酯(1.18g,4.93mmol)，室温搅拌10min后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.56g，7.36mmol)，室温搅拌16h。向反应体系中缓慢加入60mL饱和碳酸氢钠水溶液，用二氯甲烷萃取(80mL×3)，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝10:1)，得2'-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-7,7'-二氮杂[2,7'-双螺[3.5]壬烷]-7-甲酸叔丁酯(51c)(1.2g，从化合物51a算两步收率：67％)。
LCMS m/z＝733.3[M+1]+。
第四步：1-(1-(7,7'-二氮杂[2,7'-双螺[3.5]壬烷]-2'-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(51d)
1-(1-(7,7'-diaza[2,7'-bispiro[3.5]nonan]-2'-yl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxy-phenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine hydrochloride
将2'-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-7,7'-二氮杂[2,7'-双螺[3.5]壬烷]-7-甲酸叔丁酯(51c)(300mg,0.41mmol)溶解在5mL甲醇中，加入10mL 2N盐酸乙酸乙酯溶液，室温搅拌4h。将反应体系直接减压浓缩，得粗品1-(1-(7,7'-二氮杂[2,7'-双螺[3.5]壬烷]-2'-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(51d)(0.36g)。
LCMS m/z＝633.5[M+1]+。
第五步：5-(2'-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-7,7'-二氮杂[2,7'-bis双螺[3.5]壬烷]-7-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物51)
5-(2'-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-7,7'-diaza[2,7'-bispiro[3.5]nonan]-7-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将上述粗品1-(1-(7,7'-二氮杂[2,7'-双螺[3.5]壬烷]-2'-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(51d)(0.36g)溶于25mL DMSO中，加入固体碳酸氢钠(138mg，1.64mmol)，室温搅拌10min，加入1.5mL DIPEA和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(166mg，0.60mmol)，于80℃搅拌反应5h。将反应液冷却至室温，加入50mL水，过滤，收集固体，用水洗涤，固体用50mL二氯甲烷溶解，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝15:1)，得5-(2'-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-7,7'-二氮杂[2,7'-bis双螺[3.5]壬烷]-7-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物51)(120mg，从化合物51c算两步收率：33％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.38(s,1H),7.70-7.59(m,3H),7.43-7.34(m,2H),7.29-7.24(m,1H),7.22-6.98(m,6H),5.75(br.s,2H),4.93(dd,1H),4.84-4.71(m,1H),3.48-3.26(m,4H),3.09-2.98(m,2H),2.93-2.80(m,2H),2.79-2.65(m,3H),2.50-2.17(m,5H),2.17-1.91(m,10H),1.90-1.48(m,12H)。
LCMS m/z＝889.5[M+1]+。
实施例52：
5-(2-((3aR,6aS)-5-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)六氢环戊并[c]吡咯-2(1H)-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物52)
5-(2-((3aR,6aS)-5-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
/>
第一步：(3aR,6aS)-5-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)六氢环戊[c]吡咯-2(1H)-甲酸叔丁酯(52a)
tert-butyl(3aR,6aS)-5-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)hexahydrocyclopenta[c]pyrrole-2(1H)-carboxylate
将3-(4-苯氧基苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1a)(合成方法见J.Med.Chem.2015,58,9625-9638)(1.0g，2.59mmol)溶于35mL DCE中，加入(3aR,6aS)-5-氧代六氢环戊[c]吡咯-2(1H)-甲酸叔丁酯(1.17g,5.19mmol)，室温搅拌10min后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.37g，6.46mmol)，室温搅拌16h。向反应液中缓慢加入30mL饱和碳酸氢钠水溶液，用二氯甲烷萃取(30mL×3)，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得(3aR,6aS)-5-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)六氢环戊[c]吡咯-2(1H)-甲酸叔丁酯(52a)(1.4g，收率:91％)。
LCMS m/z＝596.4[M+1]+。
第二步：1-(1-((3aR,6aS)-八氢环戊[c]吡咯-5-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(52b)
1-(1-((3aR,6aS)-octahydrocyclopenta[c]pyrrol-5-yl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine trifluoroacetate
将(3aR,6aS)-5-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)六氢环戊[c]吡咯-2(1H)-甲酸叔丁酯(52a)(1.5g,2.52mmol)溶解到20mL DCM中，加入8mL三氟乙酸，室温搅拌4h。反应完后将反应体系直接减压浓缩，即得粗品1-(1-((3aR,6aS)-八氢环戊[c]吡咯-5-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(52b)(1.6g)。
LCMS m/z＝496.3[M+1]+。
第三步：2-((3aR,6aS)-5-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)八氢环戊并[c]吡咯-2(1H)-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-甲酸叔丁酯(52c)
tert-butyl 2-((3aR,6aS)-5-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
将上述粗品1-(1-((3aR,6aS)-八氢环戊[c]吡咯-5-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(52b)(0.8g)溶于30mL DCE中，加入固体碳酸氢钠(386mg，4.60mmol)，室温搅拌20min后，加入2-氧代-7-氮杂螺[3.5]壬-7-甲酸叔丁酯(550mg,2.30mmol)，室温搅拌10min后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(731mg，3.45mmol)，室温搅拌16h。向反应体系中缓慢加入60mL饱和碳酸氢钠水溶液，用DCM萃取(80mL×3)，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝10:1)，得2-((3aR,6aS)-5-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)八氢环戊并[c]吡咯-2(1H)-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-甲酸叔丁酯(52c)(0.63g，从化合物52a算两步收率：70％)。
LCMS m/z＝719.5[M+1]+。
第四步：1-(1-((3aR,6aS)-2-(7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)八氢环戊[c]吡咯-5-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(52d)
1-(1-((3aR,6aS)-2-(7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)octahydrocyclopenta[c]pyrrol-5-yl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine hydrochloride
将2-((3aR,6aS)-5-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)八氢环戊并[c]吡咯-2(1H)-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-甲酸叔丁酯(52c)(300mg,0.42mmol)溶解在5mL甲醇中，加入10mL 2mol/L盐酸乙酸乙酯溶液，室温搅拌4h。将反应体系直接减压浓缩，即得粗品1-(1-((3aR,6aS)-2-(7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)八氢环戊[c]吡咯-5-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(52d)(0.36g)。
LCMS m/z＝619.4[M+1]+。
第五步：5-(2-((3aR,6aS)-5-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)六氢环戊并[c]吡咯-2(1H)-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物52)
5-(2-((3aR,6aS)-5-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将上述粗品1-(1-((3aR,6aS)-2-(7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)八氢环戊[c]吡咯-5-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(52d)(0.36g)溶于25mL DMSO中，加入固体碳酸氢钠(138mg，1.64mmol)，室温搅拌10min后，加入1.5mLDIPEA和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(166mg，0.60mmol)，于80℃搅拌反应5h。将反应液冷却至室温，加入50mL水，过滤，收集固体，用水洗涤，固体用50mL二氯甲烷溶解，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝15:1)，得5-(2-((3aR,6aS)-5-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)六氢环戊并[c]吡咯-2(1H)-基)-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物52)(100mg，从化合物52c算两步收率：27％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.06(br.s,1H),8.39(s,1H),7.68-7.60(m,3H),7.42-7.34(m,2H),7.29-7.24(m,1H),7.20-6.99(m,6H),5.84(br.s,2H),4.98-4.90(m,1H),4.83-4.71(m,1H),3.44-3.29(m,4H),3.25-3.14(m,2H),2.94-2.66(m,4H),2.64-2.31(m,9H),2.30-2.07(m,5H),2.07-1.93(m,4H),1.89-1.59(m,6H),1.46-1.32(m,2H)。
LCMS m/z＝875.4[M+1]+。
实施例53：
5-((3aR,3'aR,6aS,6'aS)-5-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)十二氢-1H-[2,5'-双(环戊[c]吡咯]]-2'(1'H)-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸盐(化合物53)
5-((3aR,3'aR,6aS,6'aS)-5-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)dodecahydro-1H-[2,5'-bi(cyclopenta[c]pyrrol)]-2'(1'H)-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dionetrifluoroacetate
第一步：(3aR,3'aR,6aS,6'aS)-5-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)十二氢-1H-[2,5'-双(环戊[c]吡咯)]-2'(1'H)-甲酸叔丁酯(53a)
tert-butyl(3aR,3'aR,6aS,6'aS)-5-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)dodecahydro-1H-[2,5'-bi(cyclopenta[c]pyrrole)]-2'(1'H)-carboxylate
将上述粗品1-(1-((3aR,6aS)-八氢环戊[c]吡咯-5-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(52b)(0.5g)溶于30mL DCE中，加入固体碳酸氢钠(386mg，4.60mmol)，室温搅拌20min后，加入(3aR,6aS)-5-氧代六氢环戊[c]吡咯-2(1H)-甲酸叔丁酯(0.45g,2.0mmol)，40℃下继续反应1h，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.42g，2.0mmol)，室温搅拌16h。向反应体系中缓慢加入60mL饱和碳酸氢钠水溶液，用DCM萃取(80mL×3)，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝10:1)，得(3aR,3'aR,6aS,6'aS)-5-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)十二氢-1H-[2,5'-双(环戊[c]吡咯)]-2'(1'H)-甲酸叔丁酯(53a)(0.25g，从化合物52a算两步收率：45％)。
LCMS m/z＝705.5[M+1]+。
第二步：3-(4-苯氧基苯基)-1-(1-((3aR,3'aR,6aS,6'aS)-十四氢-1H-[2,5'-双(环戊[c]吡咯)]-5-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(53b)
3-(4-phenoxyphenyl)-1-(1-((3aR,3'aR,6aS,6'aS)-tetradecahydro-1H-[2,5'-bi(cyclopenta[c]pyrrol)]-5-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine trifluoroacetate
将(3aR,3'aR,6aS,6'aS)-5-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)十二氢-1H-[2,5'-双(环戊[c]吡咯)]-2'(1'H)-甲酸叔丁酯(53a)(0.25g,0.35mmol)溶解在8mL二氯甲烷中，加入2mL三氟乙酸，室温搅拌4h。将反应体系减压浓缩，得粗品3-(4-苯氧基苯基)-1-(1-((3aR,3'aR,6aS,6'aS)-十四氢-1H-[2,5'-双(环戊[c]吡咯)]-5-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(53b)(0.2g)。
LCMS m/z＝605.4[M+1]+。
第三步：5-((3aR,3'aR,6aS,6'aS)-5-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)十二氢-1H-[2,5'-双(环戊[c]吡咯]]-2'(1'H)-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸盐(化合物53)
5-((3aR,3'aR,6aS,6'aS)-5-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)dodecahydro-1H-[2,5'-bi(cyclopenta[c]pyrrol)]-2'(1'H)-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dionetrifluoroacetate
将上述粗品3-(4-苯氧基苯基)-1-(1-((3aR,3'aR,6aS,6'aS)-十四氢-1H-[2,5'-双(环戊[c]吡咯)]-5-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(53b)(0.32g)溶于10mL DMSO中，加入固体碳酸氢钠(0.14g，1.67mmol)，室温搅拌10min，加入DIPEA(0.13g，1.0mmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(0.12g，0.43mmol)，于90℃下反应4h。将反应液冷却至室温，加入50mL乙酸乙酯和50mL水，分离有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝15:1)，得5-((3aR,3'aR,6aS,6'aS)-5-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)十二氢-1H-[2,5'-双(环戊[c]吡咯]]-2'(1'H)-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸盐(化合物53)(50mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.56(br.s,1H),8.36(s,1H),7.67-7.60(m,3H),7.42-7.34(m,2H),7.20-7.04(m,5H),6.95(d,1H),6.69(dd,1H),5.56(br.s,2H),4.92(dd,1H),4.84-4.70(m,1H),3.62-3.52(m,2H),3.43-3.35(m,2H),3.26-3.13(m,2H),2.94-2.37(m,15H),2.37-1.93(m,13H)。
LCMS m/z＝861.4[M+1]+。
实施例54：
5-(7-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物54)
5-(7-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)azetidin-1-yl)-2-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
/>
第一步：7-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-氮杂螺[3.5]壬-2-甲酸叔丁酯(54a)
tert-butyl 7-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)azetidin-1-yl)-2-azaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate
将1-[1-(氮杂环丁-3-基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(17b)(1.0g,2.26mmol)溶于30mL DCE中，加入7-氧代-2-氮杂螺[3.5]壬-2-甲酸叔丁酯(0.82g,3.43mmol)，室温搅拌10min后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.2g，5.66mmol)，室温搅拌16h。向反应体系中缓慢加入60mL饱和碳酸氢钠水溶液，用DCM萃取(80mL×3)，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝10:1)，得7-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-氮杂螺[3.5]壬-2-甲酸叔丁酯(54a)(1.2g，收率：80％)。
LCMS m/z＝665.3[M+1]+。
第二步：1-(1-(1-(2-(氮杂螺[3.5]壬-7-基)氮杂环丁-3-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(54b)
1-(1-(1-(2-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)azetidin-3-yl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxy-phenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine hydrochloride
将7-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-氮杂螺[3.5]壬-2-甲酸叔丁酯(54a)(300mg,0.45mmol)溶解在5mL甲醇中，加入10mL 2mol/L盐酸乙酸乙酯溶液，室温搅拌4h。将反应体系直接减压浓缩，得粗品1-(1-(1-(2-(氮杂螺[3.5]壬-7-基)氮杂环丁-3-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(54b)(0.35g)。
LCMS m/z＝565.4[M+1]+。
第三步：5-(7-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物54)
5-(7-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)azetidin-1-yl)-2-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将上述粗品1-(1-(1-(2-(氮杂螺[3.5]壬-7-基)氮杂环丁-3-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(54b)(0.35g)溶于25mL DMSO中，加入固体碳酸氢钠(152mg，1.81mmol)，室温搅拌10min，加入1.5mL DIPEA和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(186mg，0.67mmol)，于80℃搅拌反应5h。将反应液冷却至室温，加入50mL水，过滤，收集固体，用水洗涤，固体用50mL二氯甲烷溶解，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝15:1)，得5-(7-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物54)(95mg，从化合物54a算两步收率：26％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.23(br.s,1H),8.38(s,1H),7.68-7.59(m,3H),7.43-7.35(m,2H),7.21-7.11(m,3H),7.11-7.05(m,2H),6.76(d,1H),6.49(dd,1H),5.64(br.s,2H),4.93(dd,1H),4.84-4.72(m,1H),3.78-3.56(m,6H),3.15-2.65(m,8H),2.49-2.36(m,2H),2.16-1.94(m,8H),1.81-1.72(m,2H),1.59-1.49(m,2H),1.26-1.16(m,2H)。
LCMS m/z＝821.4[M+1]+。
实施例55：
5-(7-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2,2'-二氮杂[2,7'-双螺[3.5]壬]-2'-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物55)
5-(7-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-2,2'-diaza[2,7'-bispiro[3.5]nonan]-2'-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
第一步：7-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-氮杂螺[3.5]壬-2-甲酸叔丁酯(55a)
tert-butyl 7-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-2-azaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate
将3-(4-苯氧基苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1a)(合成方法见J.Med.Chem.2015,58,9625-9638)(1.0g，2.59mmol)溶于35mL DCE中，加入7-氧代-2-氮杂螺[3.5]壬-2-甲酸叔丁酯(0.93g,3.89mmol)，室温搅拌10min后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.37g，6.46mmol)，室温搅拌16h。向反应液中缓慢加入30mL饱和碳酸氢钠水溶液，用DCM萃取(30mL×3)，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得7-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-氮杂螺[3.5]壬-2-甲酸叔丁酯(55a)(1.4g，收率:89％)。
LCMS m/z＝610.4[M+1]+。
第二步：1-(1-(2-氮杂螺[3.5]壬-7-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(55b)
1-(1-(2-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine hydrochloride
将7-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-氮杂螺[3.5]壬-2-甲酸叔丁酯(55a)(1.4g,2.30mmol)溶解到5mL甲醇中，加入25mL2mol/L盐酸乙酸乙酯溶液，室温搅拌4h。反应完后将体系直接减压浓缩，得粗品1-(1-(2-氮杂螺[3.5]壬-7-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(55b)(1.5g)。
LCMS m/z＝510.3[M+1]+。
第三步：7-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2,2'-二氮杂[2,7'-双螺[3.5]壬烷]-2'-甲酸叔丁酯(55c)
tert-butyl 7-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-2,2'-diaza[2,7'-bispiro[3.5]nonane]-2'-carboxylate
将上述粗品1-(1-(2-氮杂螺[3.5]壬-7-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(55b)(0.8g)溶于40mL DCE中，加入固体碳酸氢钠(330mg，3.93mmol)，室温搅拌20min，加入7-氧代-2-氮杂螺[3.5]壬-2-甲酸叔丁酯(0.47g,1.96mmol)，室温搅拌10min后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.70g，3.30mmol)，室温搅拌16h。向反应体系中缓慢加入60mL饱和碳酸氢钠水溶液，用DCM萃取(80mL×3)，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝10:1)，得7-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2,2'-二氮杂[2,7'-双螺[3.5]壬烷]-2'-甲酸叔丁酯(55c)(0.70g，从化合物55a算两步收率：78％)。
LCMS m/z＝733.3[M+1]+。
第四步：1-(1-(2,2'-二氮杂[2,7'-双螺[3.5]壬-7-基]哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(55d)
1-(1-(2,2'-diaza[2,7'-bispiro[3.5]nonan]-7-yl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine hydrochloride
将7-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2,2'-二氮杂[2,7'-双螺[3.5]壬烷]-2'-甲酸叔丁酯(55c)(300mg,0.41mmol)溶解在5mL甲醇中，加入15mL 2mol/L盐酸乙酸乙酯溶液，室温搅拌4h。将反应体系直接减压浓缩，即得粗品1-(1-(2,2'-二氮杂[2,7'-双螺[3.5]壬-7-基]哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(55d)(0.32g)。
LCMS m/z＝633.5[M+1]+。
第五步：5-(7-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2,2'-二氮杂[2,7'-双螺[3.5]壬]-2'-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物55)
5-(7-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-2,2'-diaza[2,7'-bispiro[3.5]nonan]-2'-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将上述粗品1-(1-(2,2'-二氮杂[2,7'-双螺[3.5]壬-7-基]哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(55d)(0.32g)溶于25mL DMSO中，加入固体碳酸氢钠(138mg，1.64mmol)，室温搅拌10min，加入1.5mL DIPEA和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(166mg，0.60mmol)，于80℃搅拌反应5h。将反应液冷却至室温，加入50mL水，过滤，收集固体，用水洗涤，固体用50mL二氯甲烷溶解，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝15:1)，得5-(7-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2,2'-二氮杂[2,7'-双螺[3.5]壬]-2'-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物55)(70mg，从化合物55c算两步收率：19％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.13(br.s,1H),8.38(s,1H),7.71-7.57(m,3H),7.43-7.33(m,2H),7.22-7.02(m,5H),6.76(d,1H),6.49(dd,1H),5.62(br.s,2H),4.97-4.88(m,1H),4.83-4.68(m,1H),3.76-3.60(m,4H),3.40-2.60(m,9H),2.50-2.26(m,5H),2.19-1.92(m,8H),1.88-1.70(m,4H),1.58-1.41(m,4H),1.35-1.23(m,4H)。
LCMS m/z＝889.4[M+1]+。
实施例56：
5-(3-(7-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物56)
5-(3-(7-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-2-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
第一步：3-(7-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(56a)
tert-butyl 3-(7-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-2-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)azetidine-1-carboxylate
将1-(1-(2-氮杂螺[3.5]壬-7-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(55b)(0.6g)溶于40mL DCE中，加入固体碳酸氢钠(247mg，2.94mmol)，室温搅拌20min，加入3-氧代氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(337mg,1.97mmol)，室温搅拌10min后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.52g，2.45mmol)，室温搅拌16h。向反应体系中缓慢加入60mL饱和碳酸氢钠水溶液，用DCM萃取(80mL×3)，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝10:1)，得3-(7-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(56a)(0.44g，从化合物55a算两步收率：72％)。
LCMS m/z＝665.4[M+1]+。
第二步：1-(1-(2-(氮杂环丁-3-基)-2-氮杂螺[3.5]壬-7-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(56b)
1-(1-(2-(azetidin-3-yl)-2-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine hydrochloride
将3-(7-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(56a)(250mg,0.38mmol)溶解在5mL甲醇中，加入15mL 2mol/L盐酸乙酸乙酯溶液，室温搅拌4h。将反应体系直接减压浓缩，即得粗品1-(1-(2-(氮杂环丁-3-基)-2-氮杂螺[3.5]壬-7-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(56b)(0.28g)。
LCMS m/z＝565.1[M+1]+。
第五步：5-(3-(7-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物56)
5-(3-(7-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-2-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将1-(1-(2-(氮杂环丁-3-基)-2-氮杂螺[3.5]壬-7-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(56b)(0.28g)溶于15mL DMSO中，加入固体碳酸氢钠(127mg，1.51mmol)，室温搅拌10min，加入1.5mL DIPEA和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(157mg，0.57mmol)，于80℃搅拌反应5h。将反应液冷却至室温，加入50mL水，过滤，收集固体，用水洗涤，固体用50mL二氯甲烷溶解，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝15:1)，得5-(3-(7-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物56)(110mg，从化合物56a算两步收率：35％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.64(br.s,1H),8.38(s,1H),7.68-7.59(m,3H),7.42-7.34(m,2H),7.20-7.10(m,3H),7.10-7.04(m,2H),6.77(d,1H),6.50(dd,1H),5.75(br.s,2H),4.92(dd,1H),4.85-4.68(m,1H),4.07-3.96(m,2H),3.88-3.78(m,2H),3.72-3.62(m,1H),3.20-2.96(m,6H),2.92-2.65(m,3H),2.58-2.28(m,5H),2.17-2.07(m,2H),2.07-2.03(m,2H),2.03-1.97(m,1H),1.91-1.81(m,2H),1.53-1.42(m,2H),1.39-1.30(m,2H)。
LCMS m/z＝821.2[M+1]+。
实施例57：
5-(3-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物57)
5-(3-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-8-azabicyclo[3.2.1]octan-8-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
第一步：3-(4-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-甲酸叔丁酯(57a)
tert-butyl 3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-8-azabicyclo[3.2.1]octane-8-carboxylate
将3-(4-苯氧基苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1a)(合成方法见J.Med.Chem.2015,58,9625-9638)(5.0g，12.94mmol)溶于85mL DCE中，加入3-氧代-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(5.82g,25.83mmol)，于55℃搅拌反应2h后，冷却至室温，加入三乙酰氧基硼氢化钠(8.23g，38.83mmol)，室温搅拌16h。向反应液中缓慢加入100mL饱和碳酸氢钠水溶液，用DCM萃取(120mL×3)，有机相用150mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝20:1)，得3-(4-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-甲酸叔丁酯(57a)(0.4g，收率:5％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.36(s,1H),7.68-7.61(m,2H),7.42-7.35(m,2H),7.21-7.05(m,5H),5.53(br.s,2H),4.85-4.65(m,1H),4.40-4.15(m,2H),3.18-2.99(m,2H),2.98-2.82(m,1H),2.48-2.30(m,4H),2.11-1.91(m,4H),1.83-1.59(m,6H),1.47(s,9H)。
LCMS m/z＝596.4[M+1]+。
第二步：1-(1-(8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(57b)
1-(1-(8-azabicyclo[3.2.1]octan-3-yl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine hydrochloride
将3-(4-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-甲酸叔丁酯(57a)(0.38g,0.64mmol)溶解到5mL甲醇中，加入25mL2mol/L盐酸乙酸乙酯溶液，室温搅拌4h。反应完后将体系直接减压浓缩，即得粗品1-(1-(8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(57b)(0.4g)。
LCMS m/z＝496.3[M+1]+。
第三步：3-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(57c)
tert-butyl 3-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-8-azabicyclo[3.2.1]octan-8-yl)azetidine-1-carboxylate
将上述粗品1-(1-(8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(57b)(0.17g)溶于20mL DCE中，加入固体碳酸氢钠(96mg，1.14mmol)，室温搅拌20min，加入N-Boc-氮杂环丁酮(96mg,0.56mmol)，室温搅拌10min后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.18g，0.85mmol)，室温搅拌16h。向反应体系中缓慢加入20mL饱和碳酸氢钠水溶液，用DCM萃取(50mL×3)，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝10:1)，得3-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(57c)(0.16g，从化合物57a算两步收率：90％)。
LCMS m/z＝651.4[M+1]+。
第四步：1-(1-(8-(氮杂环丁-3-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(57d)
1-(1-(8-(azetidin-3-yl)-8-azabicyclo[3.2.1]octan-3-yl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine hydrochloride
将3-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(57c)(150mg,0.23mmol)溶解在5mL甲醇中，加入15mL2mol/L盐酸乙酸乙酯溶液，室温搅拌4h。将反应体系直接减压浓缩，即得粗品1-(1-(8-(氮杂环丁-3-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(57d)(0.16g)。
LCMS m/z＝551.3[M+1]+。
第五步：5-(3-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物57)
5-(3-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-8-azabicyclo[3.2.1]octan-8-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将上述粗品1-(1-(8-(氮杂环丁-3-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(57d)(0.16g)溶于10mL DMSO中，加入固体碳酸氢钠(78mg，0.93mmol)，室温搅拌10min，加入1.0mL DIPEA和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(95mg，0.34mmol)，于80℃搅拌反应5h。将反应液冷却至室温，加入50mL水，过滤，收集固体，用水洗涤，固体用50mL二氯甲烷溶解，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝15:1)，得5-(3-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物57)(80mg，从化合物57c算两步收率：43％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.30(br.s,1H),8.38(s,1H),7.68-7.59(m,3H),7.43-7.34(m,2H),7.21-7.03(m,5H),6.77(d,1H),6.50(dd,1H),5.68(br.s,2H),4.92(dd,1H),4.83-4.67(m,1H),4.18-4.04(m,2H),3.86-3.77(m,2H),3.76-3.62(m,1H),3.36-3.26(m,2H),3.22-3.03(m,2H),2.93-2.65(m,4H),2.51-2.27(m,4H),2.17-1.92(m,5H),1.84-1.60(m,6H)。
LCMS m/z＝807.1[M+1]+。
实施例58：
5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物58)
5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-8-azabicyclo[3.2.1]octan-8-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将上述粗品1-(1-(8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(57b)(0.2g)溶于10mL DMSO中，加入固体碳酸氢钠(113mg，1.35mmol)，室温搅拌10min，加入1.0mL DIPEA和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(139mg，0.50mmol)，于80℃搅拌反应5h。将反应液冷却至室温，加入20mL水，过滤，收集固体，用水洗涤，固体用50mL二氯甲烷溶解，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝15:1)，得5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物58)(110mg，从化合物57a算两步收率：46％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.06(br.s,1H),8.36(s,1H),7.70-7.64(m,1H),7.64-7.58(m,2H),7.41-7.33(m,2H),7.19-7.03(m,6H),6.92(dd,1H),5.64(br.s,2H),4.97-4.89(m,1H),4.77-4.64(m,1H),4.47-4.39(m,2H),3.10-2.65(m,6H),2.42-2.24(m,4H),2.18-2.08(m,3H),2.04-1.94(m,2H),1.92-1.82(m,2H),1.82-1.74(m,4H)。
LCMS m/z＝752.3[M+1]+。
实施例59：
5-(3-((3aR,6aS)-5-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)六氢环戊[c]吡咯-2(1H)-氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物59)
5-(3-((3aR,6aS)-5-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
第一步：3-((3aR,6aS)-5-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)六氢环戊[c]吡咯-2(1H)-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(59a)
tert-butyl 3-((3aR,6aS)-5-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)azetidine-1-carboxylate
将上述粗品1-(1-((3aR,6aS)-八氢环戊[c]吡咯-5-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐(52b)(270mg)溶于6mL DCE中，室温下依次加入1-Boc-3-氮杂环丁酮(188mg,1.10mmol)、冰乙酸(0.08mL)和无水硫酸钠(400mg)，搅拌30min后加入三乙酰氧基硼氢化钠(400mg,1.89mmol)，室温搅拌16h。向反应液中加入50mL水，用2mol/L氢氧化钠水溶液调水相pH为10，用二氯甲烷萃取(30mL×3)，合并有机相，有机相用水洗涤(20mL×2)，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝10:1-8:1)，得到3-((3aR,6aS)-5-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)六氢环戊[c]吡咯-2(1H)-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(59a)(265mg，从化合物52a算两步产率：96％)。
LCMS m/z＝651.4[M+1]+。
第二步：1-(1-((3aR,6aS)-2-(氮杂环丁-3-基)六氢环戊[c]吡咯-5-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(59b)
1-(1-((3aR,6aS)-2-(azetidin-3-yl)octahydrocyclopenta[c]pyrrol-5-yl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将3-((3aR,6aS)-5-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)六氢环戊[c]吡咯-2(1H)-基)氮杂环丁-1-甲酸叔丁酯(59a)(210mg,0.32mmol)溶于2mL二氯甲烷中，加入1mL三氟乙酸，室温反应2.5h。将反应液用2mol/L氢氧化钠水溶液调pH至10，水相用二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗品1-(1-((3aR,6aS)-2-(氮杂环丁-3-基)六氢环戊[c]吡咯-5-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(59b)(165mg)。
LCMS m/z＝551.4[M+1]+。
第三步：5-(3-((3aR,6aS)-5-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)六氢环戊[c]吡咯-2(1H)-氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物59)
5-(3-((3aR,6aS)-5-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将上述粗品1-(1-((3aR,6aS)-2-(氮杂环丁-3-基)六氢环戊[c]吡咯-5-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(59b)(165mg)溶于5mL DMSO中，室温下加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(82mg,0.30mmol)和二异丙基乙基胺(194mg,1.50mmol)，升温至80℃反应4h。将反应液冷却至室温后倒入20mL水中，水相用二氯甲烷/甲醇(v/v)＝10:1的混合溶剂萃取(30mL×3)，合并有机相，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝15:1-8:1)，得到5-(3-((3aR,6aS)-5-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)六氢环戊[c]吡咯-2(1H)-氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物59)(108mg，从化合物59a算两步产率：42％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.36(s,1H),8.13(s,1H),7.68-7.58(m,3H),7.43-7.33(m,2H),7.22-7.02(m,5H),6.77(d,1H),6.50(dd,1H),5.43(br.s,2H),4.93(dd,1H),4.82-4.68(m,1H),4.11-4.03(m,2H),3.94-3.83(m,2H),3.51-3.42(m,1H),3.23-3.11(m,2H),2.94-2.63(m,4H),2.62-2.30(m,8H),2.28-2.16(m,3H),2.16-2.08(m,1H),2.06-1.95(m,2H),1.44-1.22(m,3H)。
LCMS m/z＝807.4[M+1]+。
实施例60：
5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-[1,3':1',3”-联三氮杂环丁]-1”-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物60)
5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-[1,3':1',3”-terazetidin]-1”-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
第一步：3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-[1,3':1',3”-联三氮杂环丁烷]-1”-甲酸叔丁酯(60a)
tert-butyl 3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-[1,3':1',3”-terazetidine]-1”-carboxylate
将1-[1-[1-(氮杂环丁-3-基)氮杂环丁-3-基]-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(17d)(496mg,1.00mmol)溶于10mL DCE中，室温下依次加入1-Boc-3-氮杂环丁酮(342mg,2.00mmol)、冰乙酸(0.15mL)和无水硫酸钠(800mg)，室温搅拌30min后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(726mg,3.43mmol)，室温搅拌16h。向反应液中加入50mL水，用2N氢氧化钠水溶液调水相pH为10，用二氯甲烷萃取(30mL×3)，合并有机相，有机相用水洗涤(20mL×2)，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝10:1-8:1)，得到3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-[1,3':1',3”-联三氮杂环丁烷]-1”-甲酸叔丁酯(60a)(521mg，产率：80％)。
LCMS m/z＝652.5[M+1]+。
第二步：1-(1-([1,3':1',3”-联三氮杂环丁]-3-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(60b)
1-(1-([1,3':1',3”-terazetidin]-3-yl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-[1,3':1',3”-联三氮杂环丁烷]-1”-甲酸叔丁酯(60a)(143mg,0.22mmol)溶于4mL二氯甲烷中，加入2mL三氟乙酸，室温反应1.5h。将反应液用2mol/L氢氧化钠水溶液调pH至10，水相用二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗品1-(1-([1,3':1',3”-联三氮杂环丁]-3-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(60b)(113mg)。
LCMS m/z＝552.4[M+1]+。
第三步：5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-[1,3':1',3”-联三氮杂环丁]-1”-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物60)
5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-[1,3':1',3”-terazetidin]-1”-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将上述粗品1-(1-([1,3':1',3”-联三氮杂环丁]-3-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(60b)(113mg)溶于5mL DMSO中，室温下加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(55mg,0.20mmol)和二异丙基乙基胺(129mg,1.00mmol)，升温至80℃反应3.5h。将反应液冷却至室温后倒入20mL水中，水相用二氯甲烷/甲醇(v/v)＝10:1的混合溶剂萃取(30mL×3)，合并有机相，有机相用40mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝15:1-8:1)，得到5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-[1,3':1',3”-联三氮杂环丁]-1”-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物60)(99mg，从化合物60a算两步产率：56％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.37(s,1H),7.68-7.59(m,3H),7.43-7.35(m,2H),7.21-7.11(m,3H),7.11-7.05(m,2H),6.76(d,1H),6.49(dd,1H),5.72(br.s,2H),4.96-4.87(m,1H),4.84-4.70(m,1H),4.08-3.96(m,2H),3.88-3.78(m,2H),3.69-3.60(m,1H),3.60-3.51(m,2H),3.44-3.32(m,3H),3.18-2.96(m,5H),2.96-2.64(m,5H),2.50-2.33(m,2H),2.16-1.97(m,5H)。
LCMS m/z＝808.4[M+1]+。
实施例61：
5-((3aR,6aS)-5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)六氢环戊[c]吡咯-2(1H)-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物61)
5-((3aR,6aS)-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)azetidin-1-yl)hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
第一步：(3aR,6aS)-5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)六氢环戊[c]吡咯-2(1H)-甲酸叔丁酯(61a)
tert-butyl(3aR,6aS)-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)azetidin-1-yl)hexahydrocyclopenta[c]pyrrole-2(1H)-carboxylate
将1-[1-(氮杂环丁-3-基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(17b)(650mg,1.47mmol)溶于12mL DCE中，室温下依次加入(3aR,6aS)-5-氧代六氢环戊[c]吡咯-2(1H)-甲酸叔丁酯(451mg,2.00mmol)、冰乙酸(0.14mL)和无水硫酸钠(700mg)，室温搅拌30min后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(636mg,3.00mmol)，室温搅拌16h。向反应液中加入50mL水，用2mol/L氢氧化钠水溶液调水相pH至10，用二氯甲烷萃取(30mL×3)，合并有机相，有机相用水洗涤(20mL×2)，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝10:1-8:1)，得到(3aR,6aS)-5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)六氢环戊[c]吡咯-2(1H)-甲酸叔丁酯(61a)(310mg，产率：32％)。
LCMS m/z＝651.4[M+1]+。
第二步：1-(1-((3aR,6aS)-2-(氮杂环丁-3-基)八氢环戊[c]吡咯-5-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(61b)
1-(1-((3aR,6aS)-2-(azetidin-3-yl)octahydrocyclopenta[c]pyrrol-5-yl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将(3aR,6aS)-5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)六氢环戊[c]吡咯-2(1H)-甲酸叔丁酯(61a)(310mg,0.48mmol)溶于3mL二氯甲烷中，加入2mL三氟乙酸，室温反应2.5h。将反应液用2mol/L氢氧化钠水溶液调pH至10，水相用二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到粗品1-(1-((3aR,6aS)-2-(氮杂环丁-3-基)八氢环戊[c]吡咯-5-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(61b)(255mg)。
LCMS m/z＝551.4[M+1]+。
第三步：5-((3aR,6aS)-5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)六氢环戊[c]吡咯-2(1H)-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物61)
5-((3aR,6aS)-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)azetidin-1-yl)hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将上述粗品1-(1-((3aR,6aS)-2-(氮杂环丁-3-基)八氢环戊[c]吡咯-5-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(61b)(200mg)溶于8mL DMSO中，室温下加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(99mg,0.36mmol)和二异丙基乙基胺(233mg,1.80mmol)，升温至80℃反应4h。将反应液冷却至室温后倒入20mL水中，水相用二氯甲烷/甲醇(v/v)＝10:1的混合溶剂萃取(30mL×3)，合并有机相，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝15:1-8:1)，得到5-((3aR,6aS)-5-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)六氢环戊[c]吡咯-2(1H)-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物61)(148mg，从化合物61a算两步产率：49％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.52(br.s,1H),8.37(s,1H),7.69-7.60(m,3H),7.44-7.34(m,2H),7.24-7.02(m,5H),6.96(d,1H),6.67(dd,1H),5.48(br.s,2H),4.92(dd,1H),4.83-4.70(m,1H),3.70-3.43(m,4H),3.42-3.30(m,2H),3.10-2.65(m,10H),2.49-2.32(m,2H),2.16-1.94(m,6H),1.52-1.20(m,4H)。
LCMS m/z＝807.4[M+1]+。
实施例62：
5-(2-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-7-氮杂螺环[3.5]壬-7-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物62)
5-(2-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)azetidin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
第一步：2-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(62a)
tert-butyl 2-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)azetidin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
将1-[1-(氮杂环丁-3-基)-4-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(17b)(650mg,1.47mmol)溶于12mL DCE中，室温下依次加入2-氧代-7-氮杂螺环[3.5]壬-7-甲酸叔丁酯(479mg,2.00mmol)、冰乙酸(0.14mL)和无水硫酸钠(700mg)，室温搅拌30min后加入三乙酰氧基硼氢化钠(636mg,3.00mmol)，室温搅拌16h。向反应液中加入50mL水，用2mol/L氢氧化钠水溶液调水相pH至10，用二氯甲烷萃取(30mL×3)，合并有机相，有机相用水洗涤(20mL×2)，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝10:1-8:1)，得到2-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(62a)(404mg，产率：41％)。
LCMS m/z＝665.4[M+1]+。
第二步：1-(1-(1-(7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氮杂环丁-3-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(62b)
1-(1-(1-(7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)azetidin-3-yl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
将2-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯(62a)(200mg,0.30mmol)溶于2mL二氯甲烷中，加入1mL三氟乙酸，室温反应2h。将反应液用2mol/L氢氧化钠水溶液调pH至10，水相用二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗品1-(1-(1-(7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氮杂环丁-3-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(62b)(161mg)。
LCMS m/z＝565.4[M+1]+。
第三步：5-(2-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-7-氮杂螺环[3.5]壬-7-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物62)
5-(2-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)azetidin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
将上述粗品1-(1-(1-(7-氮杂螺[3.5]壬-2-基)氮杂环丁-3-基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(62b)(161mg)溶于6mL DMSO中，室温下加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(合成方法见WO2017197056)(80mg,0.29mmol)和二异丙基乙基胺(188mg,1.45mmol)，升温至80℃反应4h。将反应液冷却至室温后倒入20mL水中，水相用二氯甲烷/甲醇(v/v)＝10:1的混合溶剂萃取(30mL×3)，合并有机相，有机相用50mL水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后，粗品用硅胶柱色谱分离提纯(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝15:1-8:1)，得到5-(2-(3-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-7-氮杂螺环[3.5]壬-7-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物62)(128mg，从化合物62a算两步产率：52％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.34(br.s,1H),8.39(s,1H),7.70-7.60(m,3H),7.43-7.33(m,2H),7.27-7.24(m,1H),7.20-6.99(m,6H),5.82(br.s,2H),5.00-4.89(m,1H),4.85-4.71(m,1H),3.67-3.51(m,2H),3.46-3.21(m,5H),3.16-2.66(m,8H),2.50-2.33(m,2H),2.20-1.92(m,7H),1.87-1.61(m,6H)。
LCMS m/z＝821.4[M+1]+。
测试例
1.细胞增殖抑制实验
SU-DHL-4、Mino、SU-DHL-6培养基为RPMI1640+10％FBS，培养于37℃、5％CO2孵箱中。细胞铺板96孔板。其中SU-DHL-4细胞20000个/孔，Mino和SU-DHL-6细胞5000个/孔，每孔90μL。每孔加入10μL不同浓度的化合物。每个浓度设3复孔，最后一列为DMSO溶媒对照组，在37℃、5％CO2条件下继续培养72小时。72小时后，每孔加入100μL检测试剂(Cell ViabilityAssay，Promega，G7573)，混匀2分钟，室温孵育10分钟，用酶标仪(PHERAstar FSX)测定荧光信号值。使用origin9.2软件，计算化合物抑制细胞增殖的IC50值，并根据式(1)计算在化合物最高浓度下的抑制率Max inhi.％。
Max inhi.％＝(1-T72给药/T72溶媒)×100 式(1)。
OCI-LY10、TMD-8细胞培养基为RPMI1640+10％FBS，培养于37℃、5％CO2孵箱中。细胞铺板96孔板。其中OCI-LY10细胞10000个/孔，TMD-8细胞8000个/孔，每孔90μL，于37℃、5％CO2条件下培养过夜。第二天每孔加入10μL不同浓度的化合物。每个浓度设3复孔，最后一列为DMSO溶媒对照组，在37℃、5％CO2条件下继续培养72小时。72小时后，每孔加入50μL检测试剂(Cell Viability Assay，Promega，G7573)，混匀2分钟，室温孵育10分钟，Envision2104读板仪(PerkinElmer)测定荧光信号值。抑制率使用式(2)计算，其中RLUcompound为药物处理组的读数，RLUcontrol为溶剂对照组的平均值，RLUblank为无细胞孔平均值。应用GraphPad Prism软件，计算IC50值。
IR(％)＝(1-(RLUcompound-RLUblank)/(RLUcontrol-RLUblank))*100％ 式(2)
抑制Mino细胞增殖的IC50值结果见表1.
表1抑制Mino细胞增殖的IC50值
/>
/>
*注：为其三氟乙酸盐。
抑制Mino细胞增殖的Max inhi.％值结果见表1-1。
表1-1抑制Mino细胞增殖的Max inhi.％值
序号 化合物编号 Mino Max inhi.％
1 化合物15 99.8
2 化合物16 99.7
3 化合物26 74.3
4 化合物29 71.2
5 化合物30 82.5
6 化合物31 78.3
7 化合物48 95.7
8 化合物51 99.7
9 化合物52 99.7
10 化合物53 99.6
11 化合物55 99.9
12 化合物56 99.9
13 化合物57 99.2
14 化合物58 95.3
抑制SU-DHL-4细胞增殖的IC50值结果见表2。
表2抑制SU-DHL-4细胞的IC50值
/>
*注：为其三氟乙酸盐。
抑制SU-DHL-4细胞增殖的Max inhi.％值结果见表2-1。
表2-1抑制SU-DHL-4细胞增殖的Max inhi.％值
/>
抑制SU-DHL-6细胞增殖的IC50值结果见表2-2。
表2-2抑制SU-DHL-6细胞的IC50值
序号 化合物编号 IC50(nM)
1 P13I* 1638
2 化合物2 26
3 化合物6 166
4 化合物8 399
5 化合物9 155
6 化合物10 77
7 化合物11 109
8 化合物12 106
9 化合物14 86
10 化合物17 744
11 化合物17-a 524
12 化合物17-b 662
13 化合物18-1 29
14 化合物19 782
15 化合物32 393
16 化合物38 888
17 化合物40 54
18 化合物41 670
19 化合物42 177
20 化合物43 407
21 化合物45 125
*注：为其三氟乙酸盐。
抑制OCI-LY10细胞增殖的IC50值结果见表2-3。
表2-3抑制OCI-LY10细胞的IC50值
序号 化合物编号 IC50(nM)
1 P13I* 29
2 化合物8 3
3 化合物17 5
4 化合物18-1 4
5 化合物19-1 23
6 化合物40 3
7 化合物42 3
8 化合物45 3
*注：为其三氟乙酸盐。
抑制TMD-8细胞增殖的IC50值结果见表2-4。
表2-4抑制TMD-8细胞的IC50值
序号 化合物编号 IC50(nM)
1 P13I* 104
2 化合物8 22
3 化合物17 22
4 化合物18-1 8
5 化合物19-1 14
6 化合物40 12
7 化合物42 16
8 化合物45 16
*注：为其三氟乙酸盐。
结论：运用本发明技术所合成的化合物对SU-DHL-4细胞和SU-DHL-6细胞(人B淋巴瘤细胞)、Mino细胞(套细胞淋巴瘤细胞)、OCI-LY10细胞(弥漫大B细胞淋巴瘤细胞)及TMD-8细胞(人弥漫大B淋巴瘤细胞)增殖有显著的抑制作用。
2.大鼠药代动力学测试
实验目的：本试验通过单剂量静脉和灌胃给予受试物于SD大鼠，测定大鼠血浆中受试物的浓度，评价受试物在大鼠体内药代特征和生物利用度。
试验动物：雄性SD大鼠，200～250g，6～8周龄，6只/受试物。购于成都达硕实验动物有限公司。
试验方法：试验当天，6只SD大鼠按体重随机分组。给药前1天禁食不禁水12～14h，给药后4h给食。给药如表3所示。
表3
*剂量以游离碱计。
取样：于给药前及给药后异氟烷麻醉经眼眶取血0.1ml，置于EDTAK2离心管中。5000rpm，4℃离心10min，收集血浆。
G1组采集血浆时间点：0,5min,15min,30min,1,2,4,6,8,24h。
G2组采集血浆时间点：0,15min,30min,1,2,4,6,8,24h。
分析检测前，所有样品存于-80℃。用LC-MS/MS对样品进行定量分析。结果如表4。
表4化合物在大鼠血浆中药代动力学参数
*注：i.g.(灌胃)给予化合物。
**注：为其三氟乙酸盐；
#注：各检测点浓度低于定量下线0.5ng/mL。
结论：运用本发明技术所合成的化合物在大鼠体内具有一定的口服生物利用度。
3.小鼠药代动力学测试
实验目的：本试验通过单剂量静脉和灌胃给予受试物于ICR小鼠，测定小鼠血浆中受试物的浓度，评价受试物在小鼠体内药代特征和生物利用度。
试验动物：雄性ICR小鼠，20～25g，6～8周龄，24只/化合物。购于成都达硕实验动物有限公司。
试验方法：试验当天，24只ICR小鼠按体重随机分组。给药前1天禁食不禁水12～14h，给药后4h给食。给药如表5所示。
表5
*剂量以游离碱计；
取样：于给药前及给药后异氟烷麻醉经眼眶取血0.06ml，置于EDTAK2离心管中。5000rpm，4℃离心10min，收集血浆。
G1组采集血浆时间点：0,5min,15min,30min,1,2,4,6,8,24h；
G2组采集血浆时间点：0,15min,30min,1,2,4,6,8,24h；
分析检测前，所有样品存于-80℃。用LC-MS/MS对样品进行定量分析。结果如表6。
表6受试化合物小鼠药代动力学参数
受试化合物 给药方式* AUC0-t(ng/ml·h) F(％)
化合物17 i.g.(10mg/kg) 2426 10.8
*注：i.g.(灌胃)给予化合物。
结论：运用本发明技术所合成的化合物在小鼠体内具有一定的口服生物利用度。
4.大鼠药代动力学测试
实验目的：本试验通过单剂量静脉和灌胃给予受试物于SD大鼠，测定大鼠血浆中受试物的浓度，评价受试物在大鼠体内药代特征和生物利用度。
试验动物：雄性SD大鼠，200～250g，6～8周龄，6只/化合物。购于成都达硕实验动物有限公司。
试验方法：试验当天，6只SD大鼠按体重随机分组。给药前1天禁食不禁水12～14h，给药后4h给食。给药如表7所示。
表7
/>
*剂量以游离碱计。
取样：于给药前及给药后异氟烷麻醉经眼眶取血0.1mL，置于EDTAK2离心管中。5000rpm，4℃离心10min，收集血浆。
G1组采集血浆时间点：0,5min,15min,30min,1,2,4,6,8,24h。
G2组采集血浆时间点：0,15min,30min,1,2,4,6,8,24h。
分析检测前，所有样品存于-80℃。用LC-MS/MS对样品进行定量分析。结果如表8。
表8化合物在大鼠血浆中药代动力学参数
受试化合物 给药方式* AUC0-t(ng/ml·h) F(％)
P13I** i.g.(20mg/kg) 0# 0#
化合物38 i.g.(20mg/kg) 7257±2863 13.3±5.2
化合物39 i.g.(20mg/kg) 2831±474 9.1±1.5
化合物40 i.g.(20mg/kg) 5419±1263 17.4±4.0
化合物41 i.g.(20mg/kg) 7906±1099 10.8±1.5
化合物42 i.g.(20mg/kg) 1195±327 9.14±2.5
化合物43 i.g.(20mg/kg) 4495±886 11.0±2.2
化合物44 i.g.(20mg/kg) 877±98 5.73±0.64
化合物45 i.g.(20mg/kg) 3437±1491 19.7±8.5
*注：i.g.(灌胃)给予化合物；
**注：游离型；
#注：各检测点浓度低于定量下线0.5ng/mL。
结论：运用本发明技术所合成的化合物在大鼠体内具有一定的口服生物利用度。
5.Mino细胞中BTK降解检测
Mino人套细胞淋巴瘤细胞株，购自于ATCC，培养条件：RPMI-1640+15％FBS+1％双抗，培养于37℃，5％CO2孵箱中。细胞铺板6孔板，5×105个/孔。铺板后，加入不同浓度化合物，37℃，5％CO2孵箱中培养48小时。培养结束后，收集细胞，加入RIPA裂解液(beyotime,Cat.P0013B)于冰上裂解15分钟后，12000rpm，4℃离心10分钟，收集上清蛋白样品，用BCA试剂盒(Beyotime,Cat.P0009)进行蛋白定量后，将蛋白稀释为0.25mg/mL，使用全自动蛋白质印迹定量分析仪(Proteinsimple)运用试剂盒(Protein simple,Cat.SM-W004)检测BTK(CST,Cat.8547S)和内参β-actin(CST,Cat.3700S)的表达。使用compass软件计算BTK相对于内参的表达量并使用Origen9.2软件根据式(3)计算DC50值。其中BTK给药为不同剂量给药组BTK表达量，BTK溶媒为溶媒对照组BTK表达量。结果如表9。
BTK％＝BTK给药/BTK溶媒×100 式(3)
表9Mino细胞中BTK降解的DC50值
序号 化合物编号 DC50(nM)
1 化合物8-1 22.9
2 化合物17 10.9
结论：运用本发明技术所合成的化合物对Mino细胞中的BTK有显著的降解作用。
6、小鼠脾脏BTK蛋白降解检测
雌性ICR小鼠，6-8周龄，购自于北京维通利华实验动物技术有限公司，适应3天后开始实验。连续3天灌胃给于不同剂量的化合物后，取小鼠脾脏，收集脾脏细胞，加入RIPA裂解液(beyotime,Cat.P0013B)于冰上裂解15分钟后，12000rpm，4℃离心10分钟，收集上清蛋白样品，用BCA试剂盒(Beyotime,Cat.P0009)进行蛋白定量后，将蛋白稀释为0.25mg/mL，使用全自动蛋白质印迹定量分析仪(Proteinsimple)检测BTK(CST,Cat.8547S)和内参β-actin(CST,Cat.3700S)的表达。使用compass软件计算BTK相对于内参的表达量并使用Origen9.2软件根据式(4)计算DD50值。其中BTK给药为不同剂量给药组BTK表达量，BTK溶媒为溶媒对照组BTK表达量。结果如表10。
BTK％＝BTK给药/BTK溶媒×100 式(4)
表10化合物小鼠脾脏BTK蛋白降解的DD50值
序号 化合物编号 DD50(mg/kg)
1 化合物8-1 3.8
2 化合物17 3.8
3 化合物17-a 19.8
4 化合物17-b 2.2
5 化合物18-1 1.9
6 化合物40 2.1
7 化合物42 1.9
8 化合物45 1.4
结论：运用本发明技术所合成的化合物对小鼠脾脏BTK蛋白有显著的降解作用。
7、体外激酶检测
激酶BTK wt(Carna,Cat.No08-180)和BTK C481S(Carna,Cat.No08-547)配制成2.5×的激酶溶液，底物FAM-P2(GL Biochem,Cat.No.112394)与ATP((Sigma,Cat.No.A7699-1G)配制成2.5×的底物溶液。在384孔板中加入5μL不同浓度的化合物，加入10μL2.5×的激酶溶液，室温孵育10分钟。加入10μL2.5×的底物溶液，于28℃孵育适当时间后，加入30μL终止液终止反应，使用Caliper EZ reader2仪器检测。运用XLFit excel add-in version5.4.0.8软件计算IC50值。抑制率计算公式见式(5)，其中max为DMSO对照读数，min为阴性对照读数，conversion为化合物读数
抑制率％＝(max-conversion)/(max-min)*100. 式(5)
其结果见表11：
表11抑制BTK wt/C481S激酶的IC50值
结论：运用本发明技术所合成的化合物对BTKwt/C481S激酶有显著的抑制作用。

Claims (19)

1.一种通式(I)所述的化合物或者其立体异构体、或药学上可接受的盐，其中B-L-K(I)；
L选自
或者L选自
或者L选自
L左边与B连接，L右边与K连接；
B选自
或者B选自
K选自
或者K选自
2.根据权利要求1所述的化合物或者其立体异构体、或药学上可接受的盐，其中，L选自：
3.根据权利要求1所述的化合物或者其立体异构体、或药学上可接受的盐，其中，B选自：
4.根据权利要求1所述的化合物或者其立体异构体、或药学上可接受的盐，其中
K选自
5.根据权利要求1所述的化合物或者其立体异构体、或药学上可接受的盐，其中
K选自
6.根据权利要求1所述的化合物或者其立体异构体、或药学上可接受的盐，其中
B选自
或者B选自
7.根据权利要求6所述的化合物或者其立体异构体、或药学上可接受的盐，其中，B选自
8.通式(Ia)或(Ib)所示的化合物或者其立体异构体、或药学上可接受的盐，
B-Cy1-Cy2-K(Ia)
B-Cy1-Cy2-Cy3-K(Ib)
B选自
Cy1、Cy2、Cy3各自独立的选自如下基团之一：
K选自
9.根据权利要求8所述的化合物或者其立体异构体、或药学上可接受的盐，其中，B选自：
10.根据权利要求8所述的化合物或者其立体异构体、或药学上可接受的盐，其中，Cy1、Cy2、Cy3各自独立的选自如下基团之一：
11.一种化合物或者其立体异构体、或药学上可接受的盐，其中所述化合物选自如下结构之一：
12.一种化合物或者其立体异构体、或药学上可接受的盐，其中所述化合物选自如下结构之一：
/>
/>
13.根据权利要求1至12任意一项所述的化合物或者其立体异构体、或药学上可接受的盐，其中所述的盐选自三氟乙酸盐。
14.一种药物组合物，包括权利要求1-13任意一项所述的化合物或者其立体异构体、或药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
15.权利要求1-13任意一项所述的化合物或者其立体异构体、或药学上可接受的盐在用于制备治疗与BTK活性或表达量相关疾病的药物中的应用。
16.权利要求1-13任意一项所述的化合物或者其立体异构体、或药学上可接受的盐在用于制备治疗与抑制或降解BTK相关疾病的药物中的应用。
17.根据权利要求15-16任意一项所述的应用，其中，所述的疾病选自肿瘤或自身免疫疾病。
18.根据权利要求17所述的应用，其特征在于，所述的肿瘤选自非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、套细胞淋巴瘤、或B细胞淋巴瘤；所述自身免疫疾病选自内风湿关节炎或银屑病。
19.一种如下所示的化合物，
/>
CN202080018945.XA 2019-05-31 2020-05-29 一种btk抑制剂环衍生物及其制备方法和药学上的应用 Active CN113544130B (zh)

Applications Claiming Priority (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910454977 2019-05-31
CN2019104549773 2019-05-31
CN201910706239 2019-08-02
CN2019107062393 2019-08-02
CN201910997078 2019-10-25
CN2019109970788 2019-10-25
CN201911291561 2019-12-16
CN2019112915610 2019-12-16
PCT/CN2020/093455 WO2020239103A1 (zh) 2019-05-31 2020-05-29 一种btk抑制剂环衍生物及其制备方法和药学上的应用

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202410132207.8A Division CN118027041A (zh) 2019-05-31 2020-05-29 一种btk抑制剂环衍生物及其制备方法和药学上的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113544130A CN113544130A (zh) 2021-10-22
CN113544130B true CN113544130B (zh) 2024-01-09

Family

ID=73553513

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202080018945.XA Active CN113544130B (zh) 2019-05-31 2020-05-29 一种btk抑制剂环衍生物及其制备方法和药学上的应用

Country Status (13)

Country Link
US (1) US11542266B1 (zh)
EP (1) EP3978496A4 (zh)
JP (1) JP2022534650A (zh)
KR (1) KR20220016049A (zh)
CN (1) CN113544130B (zh)
AU (1) AU2020281410A1 (zh)
BR (1) BR112021024131A2 (zh)
CA (1) CA3133004A1 (zh)
IL (1) IL287332A (zh)
MX (1) MX2021012756A (zh)
SG (1) SG11202110085TA (zh)
TW (1) TWI762939B (zh)
WO (1) WO2020239103A1 (zh)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA3133004A1 (en) * 2019-05-31 2020-12-03 Sichuan Haisco Pharmaceutical Co., Ltd. Btk inhibitor ring derivative, preparation method therefor and pharmaceutical application thereof
CA3167746A1 (en) * 2020-01-29 2021-08-05 Foghorn Therapeutics Inc. Compounds and uses thereof
AU2020436612A1 (en) 2020-03-16 2022-09-01 Flash Therapeutics, Llc Compounds for treating or inhibiting recurrence of acute myeloid leukemia
TW202216715A (zh) 2020-07-07 2022-05-01 大陸商四川海思科製藥有限公司 降解btk激酶的化合物、製造方法及其應用
US11787800B2 (en) 2020-07-29 2023-10-17 Foghorn Therapeutics Inc. BRD9 degraders and uses thereof
TW202220997A (zh) * 2020-09-09 2022-06-01 新加坡商海思科醫藥有限公司 一種降解btk化合物的鹽及其晶型和在醫藥上的用途
EP4253384A1 (en) * 2020-11-25 2023-10-04 Haisco Pharmaceuticals Pte. Ltd. Method for preparing btk degrading agent
WO2022111448A1 (zh) * 2020-11-25 2022-06-02 四川海思科制药有限公司 一种btk降解剂的制备方法
CN116348460A (zh) * 2020-11-25 2023-06-27 四川海思科制药有限公司 一种btk降解剂的制备方法
WO2022253250A1 (zh) * 2021-06-01 2022-12-08 正大天晴药业集团股份有限公司 含有并环或螺环的布鲁顿酪氨酸激酶降解剂
CN115521313B (zh) * 2021-06-24 2023-11-03 山东大学 一种降解btk蛋白的化合物及其制备方法和应用
WO2023283263A1 (en) 2021-07-06 2023-01-12 Foghorn Therapeutics Inc. Citrate salt, pharmaceutical compositions, and methods of making and using the same
TW202321219A (zh) 2021-08-11 2023-06-01 大陸商四川海思科製藥有限公司 雜環衍生物及其組合物和藥學上的應用
US20230137175A1 (en) * 2021-08-17 2023-05-04 Endotarget Inc. Compounds and methods for the targeted degradation of bruton's tyrosine kinase
WO2023072270A1 (zh) * 2021-10-29 2023-05-04 百极弘烨(南通)医药科技有限公司 Protac化合物、含其的药物组合物及其制备方法和应用
WO2023125907A1 (en) * 2021-12-30 2023-07-06 Beigene, Ltd. Degradation of bruton's tyrosine kinase (btk) by conjugation of btk inhibitors with e3 ligase ligand and methods of use

Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1520298A (zh) * 2001-03-22 2004-08-11 �����ʩ���عɷݹ�˾ 作为治疗剂的吡唑并嘧啶类
US20050256309A1 (en) * 2004-05-12 2005-11-17 Altenbach Robert J Tri-and bi-cyclic heteroaryl histamine-3 receptor ligands
CN102869664A (zh) * 2010-01-27 2013-01-09 沃泰克斯药物股份有限公司 吡唑并嘧啶类激酶抑制剂
US20130303551A1 (en) * 2011-01-10 2013-11-14 Nicholas D. Adams Pyrimidinone derivatives as fatty acid synthase inhibitors
CN104530046A (zh) * 2014-12-10 2015-04-22 广东东阳光药业有限公司 二氮杂螺类化合物及其在药物中的应用
CN104603109A (zh) * 2012-07-17 2015-05-06 策迪拉有限公司 作为组织转谷氨酰胺酶的抑制剂的吡啶酮衍生物
US20160102083A1 (en) * 2013-04-30 2016-04-14 Glaxosmithkline Intellectual Property (No.2) Limited Enhancer of zeste homolog 2 inhibitors
CN107849047A (zh) * 2015-09-28 2018-03-27 四川海思科制药有限公司 一种联苯衍生物及其制备方法和在医药上的用途
CN107922409A (zh) * 2015-08-17 2018-04-17 鲁宾有限公司 作为parp抑制剂的杂芳基衍生物
CN108290871A (zh) * 2015-09-29 2018-07-17 阿斯泰克斯治疗有限公司 具有抗癌活性的mdm2-p53相互作用的异吲哚啉酮抑制剂
CN108617166A (zh) * 2015-10-21 2018-10-02 大冢制药株式会社 蛋白激酶抑制剂苯并内酰胺化合物
CN109422752A (zh) * 2017-09-03 2019-03-05 上海美志医药科技有限公司 一类具有抑制并降解布鲁顿酪氨酸蛋白激酶Btk活性的化合物
WO2019127008A1 (zh) * 2017-12-26 2019-07-04 清华大学 一种靶向降解btk的化合物及其应用

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NZ599199A (en) * 2007-03-20 2013-10-25 Celgene Corp 4'-o-substituted isoindoline derivatives and compositions comprising and methods of using the same
US7718662B1 (en) * 2009-10-12 2010-05-18 Pharmacyclics, Inc. Pyrazolo-pyrimidine inhibitors of bruton's tyrosine kinase
NZ627709A (en) 2010-06-23 2014-12-24 Hanmi Science Co Ltd Novel fused pyrimidine derivatives for inhibition of tyrosine kinase activity
US9783524B2 (en) 2013-07-11 2017-10-10 Betta Pharmaceuticals Co., Ltd. Protein tyrosine kinase modulators and methods of use
WO2016004272A1 (en) * 2014-07-02 2016-01-07 Pharmacyclics Llc Inhibitors of bruton's tyrosine kinase
WO2017134685A2 (en) * 2016-02-02 2017-08-10 Sun Pharma Advanced Research Company Limited Novel hydrazino compounds as btk inhibitors
JP6972002B2 (ja) 2016-03-11 2021-11-24 エンジェル・ファーマシューティカル・カンパニー・リミテッド ブルトン型チロシンキナーゼを調節する化合物及び方法
WO2017197056A1 (en) 2016-05-10 2017-11-16 C4 Therapeutics, Inc. Bromodomain targeting degronimers for target protein degradation
WO2017197055A1 (en) 2016-05-10 2017-11-16 C4 Therapeutics, Inc. Heterocyclic degronimers for target protein degradation
TWI760356B (zh) 2016-08-16 2022-04-11 英屬開曼群島商百濟神州有限公司 (ｓ)-７-(１-丙烯醯基六氫吡啶-４-基)-２-(４-苯氧基苯基)-４,５,６,７-四氫吡唑並［１，５-ａ]嘧啶-３-甲醯胺的晶型、其製備和用途
GB201614134D0 (en) 2016-08-18 2016-10-05 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Novel compounds
AU2017341723B2 (en) 2016-10-11 2021-12-16 Arvinas Operations, Inc. Compounds and methods for the targeted degradation of androgen receptor
CN106831787B (zh) * 2017-01-20 2018-10-23 成都倍特药业有限公司 用作布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂的化合物及其制备方法和应用
US10370381B2 (en) 2017-02-24 2019-08-06 Gilead Sciences, Inc. Inhibitors of bruton'S tyrosine kinase
CN109422696B (zh) * 2017-09-04 2020-10-30 北京睿熙生物科技有限公司 布鲁顿酪氨酸激酶的抑制剂
CN108191871B (zh) * 2018-01-02 2020-02-18 成都倍特药业有限公司 新型布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂及其制备方法和应用
CA3133004A1 (en) * 2019-05-31 2020-12-03 Sichuan Haisco Pharmaceutical Co., Ltd. Btk inhibitor ring derivative, preparation method therefor and pharmaceutical application thereof

Patent Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1520298A (zh) * 2001-03-22 2004-08-11 �����ʩ���عɷݹ�˾ 作为治疗剂的吡唑并嘧啶类
US20050256309A1 (en) * 2004-05-12 2005-11-17 Altenbach Robert J Tri-and bi-cyclic heteroaryl histamine-3 receptor ligands
CN102869664A (zh) * 2010-01-27 2013-01-09 沃泰克斯药物股份有限公司 吡唑并嘧啶类激酶抑制剂
US20130303551A1 (en) * 2011-01-10 2013-11-14 Nicholas D. Adams Pyrimidinone derivatives as fatty acid synthase inhibitors
CN104603109A (zh) * 2012-07-17 2015-05-06 策迪拉有限公司 作为组织转谷氨酰胺酶的抑制剂的吡啶酮衍生物
US20160102083A1 (en) * 2013-04-30 2016-04-14 Glaxosmithkline Intellectual Property (No.2) Limited Enhancer of zeste homolog 2 inhibitors
CN104530046A (zh) * 2014-12-10 2015-04-22 广东东阳光药业有限公司 二氮杂螺类化合物及其在药物中的应用
CN107922409A (zh) * 2015-08-17 2018-04-17 鲁宾有限公司 作为parp抑制剂的杂芳基衍生物
CN107849047A (zh) * 2015-09-28 2018-03-27 四川海思科制药有限公司 一种联苯衍生物及其制备方法和在医药上的用途
CN108290871A (zh) * 2015-09-29 2018-07-17 阿斯泰克斯治疗有限公司 具有抗癌活性的mdm2-p53相互作用的异吲哚啉酮抑制剂
CN108617166A (zh) * 2015-10-21 2018-10-02 大冢制药株式会社 蛋白激酶抑制剂苯并内酰胺化合物
CN109422752A (zh) * 2017-09-03 2019-03-05 上海美志医药科技有限公司 一类具有抑制并降解布鲁顿酪氨酸蛋白激酶Btk活性的化合物
WO2019127008A1 (zh) * 2017-12-26 2019-07-04 清华大学 一种靶向降解btk的化合物及其应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"PROTAC-induced BTK degradation as a novel therapy for mutated BTK C481S induced ibrutinib-resistant B-cell malignancies"以及其Supporting Information;Yonghui Sun等;《Cell Research》;第28卷;第779–781页以及其Supporting Information的第1-21页 *
"PROTAC-Mediated Degradation of Bruton’s Tyrosine Kinase Is Inhibited by Covalent Binding"及Supporting Information;Christopher P. Tinworth等;《ACS Chem. Biol.》;第14卷;第342−347页及Supporting Information的第1-42页 *
Christopher P. Tinworth等."PROTAC-Mediated Degradation of Bruton’s Tyrosine Kinase Is Inhibited by Covalent Binding"及Supporting Information.《ACS Chem. Biol.》.2019,第14卷第342−347页及Supporting Information的第1-42页. *
Yonghui Sun等."PROTAC-induced BTK degradation as a novel therapy for mutated BTK C481S induced ibrutinib-resistant B-cell malignancies"以及其Supporting Information.《Cell Research》.2018,第28卷第779–781页以及其Supporting Information的第1-21页. *

Also Published As

Publication number Publication date
IL287332A (en) 2021-12-01
CA3133004A1 (en) 2020-12-03
WO2020239103A1 (zh) 2020-12-03
EP3978496A4 (en) 2022-08-17
KR20220016049A (ko) 2022-02-08
AU2020281410A1 (en) 2021-10-07
CN113544130A (zh) 2021-10-22
EP3978496A1 (en) 2022-04-06
SG11202110085TA (en) 2021-10-28
TW202110825A (zh) 2021-03-16
TWI762939B (zh) 2022-05-01
US11542266B1 (en) 2023-01-03
BR112021024131A2 (pt) 2022-01-11
JP2022534650A (ja) 2022-08-03
MX2021012756A (es) 2022-04-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN113544130B (zh) 一种btk抑制剂环衍生物及其制备方法和药学上的应用
CN112010858B (zh) 一种btk抑制剂及其制备方法和药学上的应用
AU2022209304A1 (en) Heteroaryl compounds for treating Huntington's disease
BR112019025740A2 (pt) Compostos para tratar a doença de huntington
WO2020005882A1 (en) Heteroaryl compounds for treating huntington's disease
BR112012020922B1 (pt) compostos de pirrolopirimidina como inibidores de cdk4/6, seu uso, e composição farmacêutica
CN116134028A (zh) 一种具有降解btk激酶的化合物及其制备方法和药学上的应用
KR20200100709A (ko) 4-아자인돌 화합물
WO2022133038A1 (en) Tetrahydropyridopyrimidine pan-kras inhibitors
TW202208358A (zh) 用於治療亨汀頓舞蹈症之htt調節劑
WO2020048605A1 (en) Novel pyrrolidine amine compounds for the treatment of autoimmune disease
EP4269402A1 (en) Aromatic heterocyclic compound, pharmaceutical composition and use thereof
IL266312A (en) Derived from pyrido [4,3-D] pyrimidine and its acceptable pharmacological salt
CN113999233A (zh) 一种btk抑制剂环衍生物及其制备方法和药学上的应用
CA3200524A1 (en) Ppar.gamma. modulators and methods of use
CN112390785A (zh) 一种bet家族溴域抑制剂环衍生物及其制备方法和药学上的应用
CN118027041A (zh) 一种btk抑制剂环衍生物及其制备方法和药学上的应用
EP3849974A1 (en) Pyrazolopyridine amine compounds for the treatment of autoimmune disease
TW202409030A (zh) 五元並六元含氮化物、其中間體、製備方法和應用
TW202225163A (zh) 芳香雜環類化合物、藥物組合物及其應用
WO2023244604A1 (en) Tetrahydropyridopyrimidine pan-kras inhibitors
WO2024054512A1 (en) Akt1 modulators
TW202330548A (zh) 用於降解egfr激酶的化合物
WO2023244615A1 (en) Azaquinazoline pan-kras inhibitors
CN115557946A (zh) 杂环内酰胺类化合物，包含其的药物组合物及其用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 40053673

Country of ref document: HK

SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20231114

Address after: 856099 Xingfu Jiayuan Economic Development Zone, Gyerba, Nedong District, Shannan City, Tibet Autonomous Region

Applicant after: Tibet Haisike Pharmaceutical Co.,Ltd.

Address before: 611130 Sichuan Chengdu Wenjiang District Science and Technology Park cross strait Bailey Road 136

Applicant before: SICHUAN HAISCO PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.

TA01 Transfer of patent application right
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant