TW202110825A - Btk抑制劑環衍生物及其製備方法和藥學上的應用 - Google Patents
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Abstract
本發明提供了一種BTK抑制劑環衍生物及其製備方法和藥學上的應用。所述BTK抑制劑環衍生物為一種通式（I）所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶。所述BTK抑制劑環衍生物用於治療與BTK相關疾病如腫瘤或自身免疫系統疾病。
B-L-K （I）
其中B, L, K之定義與說明書中相同。
Description
本發明涉及一種通式（I）所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，及其中間體和製備方法，以及在BTK相關疾病如腫瘤或自身免疫系統疾病中的用途。
布魯頓酪胺酸蛋白激酶 (BTK, Bruton’s tyrosine kinase) 是非受體蛋白酪胺酸激酶Tec家族的成員，是B細胞抗原受體 (BCR) 信號通路中的關鍵調節因子，分佈在淋巴系統、造血及血液系統中。BTK突變會引起下游腫瘤細胞的增殖、分化以及血管生成等信號通路的激活，會導致X連鎖無丙種球蛋白血症、非霍奇金淋巴瘤 (NHL) 與許多B細胞惡性腫瘤，包括慢性淋巴細胞性白血病 (CLL)、套細胞淋巴瘤以及彌漫大B細胞淋巴瘤。由於主要在B細胞和髓細胞中表達，BTK是一種靶向性和安全性較好的靶點。
PROTAC (proteolysis targeting chimera) 分子是一類能夠同時結合靶向蛋白和E3泛素連接酶的雙功能化合物，此類化合物能夠誘導靶蛋白被細胞的蛋白酶體識別，引起靶向蛋白的降解，能夠有效地降低靶向蛋白在細胞中的含量。通過在PROTAC分子引入能結合不同靶向蛋白的配體，使PROTAC技術應用於各種疾病的治療成為可能，該技術近年來同時得到了廣泛的關注。
本發明開發了一種結構新穎的、藥效好、生物利用度高、更安全的BTK抑制劑，用於治療與BTK相關疾病如腫瘤或自身免疫系統疾病。
本發明開發了一種結構新穎的、藥效好、生物利用度高、更安全、能抑制或降解BTK的BTK抑制劑與E3泛素連接酶的PROTAC化合物，用於治療與BTK相關疾病如腫瘤或自身免疫系統疾病。
本發明涉及一種通式（I）所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中
B-L-K （I）；
L選自-Ak1-Cy1-Ak2-Cy2-Ak3-Cy3-Ak4-Cy4-Ak5-；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4和Ak5各自獨立的選自CH2
、O或者鍵；
Cy1、Cy2、Cy3和Cy4各自獨立的選自3至12員雜環、3至12員環烷基、6至10員芳基或鍵，所述雜環、環烷基或芳基任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、oxo（氧代，=O）、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基的取代基所取代，所述的雜環含有1至4個選自O、S、N的雜原子；
Cy1、Cy2、Cy3和Cy4不能同時為鍵；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4或Ak5為O時，不能直接與B連接；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4或Ak5不為鍵時，互相不能直接連接；
當Cy1、Cy2、Cy3和Cy4中有3個都為鍵時，Ak1、Ak2、Ak3、Ak4和Ak5中至少有一個選自CH2
並與B相連接；
當Ak1、Cy1、Ak2、Cy2、Ak3、Cy3、Ak4、Cy4、Ak5有4個及以上不為鍵時，Cy1、Cy2、Cy3和Cy4中至少有一個不為呱啶、呱嗪、嘧啶或吡啶；
B選自B1-W1-B2-B3-B4-；
B1選自6員雜芳環或苯基，所述的雜芳環或苯基進一步任選被0至4個Rb1
所取代，所述的雜芳環含有1至4個選自O、S、N的雜原子；
W1選自-O-、-S-、-NH-、-NHCO-或-CONH-；
B2選自6員雜芳環或苯基，所述的雜芳環或苯基任選進一步任選被0至4個Rb2
所取代，所述的雜芳環含有1至4個選自O、S、N的雜原子；
B3選自8-10員雜並環，所述的雜並環任選進一步任選被0至4個Rb3
所取代，所述的雜並環含有1至4個選自O、S、N的雜原子；
B4選自5-6員飽和雜環，所述的飽和雜環任選進一步任選被0至4個Rb4
所取代，所述的飽和雜環含有1至2個選自O、S、N的雜原子；
Rb1
、Rb2
、Rb3
或Rb4
各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基，所述的烷基和烷氧基任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基的取代基所取代；
K選自
；
Rk2
選自CH2
、C=O、S=O、SO2
；
Rk1
、Rk3
或Rk4
各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、COOH、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基；
Rk5
選自C=O或
；p1或p2各自獨立的選自0、1、2、3或4。
其中可以理解的是，本發明的Ak1、Ak2、Ak3、Ak4和Ak5、以及Cy1、Cy2、Cy3和Cy4、以及B2、B3和B4各自獨立的為取代基時，其為亞基。
本發明的一些實施方案涉及一種通式（I）所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中
L選自-Ak1-Cy1-Ak2-Cy2-Ak3-Cy3-Ak4-Cy4-Ak5-；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4和Ak5各自獨立的選自CH2
、O或者鍵；Cy1、Cy2、Cy3和Cy4各自獨立的選自3員雜環、4員雜環、5員雜環、6員雜環、7員雜環、8雜環、9員雜環、10員雜環、11員雜環、12雜環、3員環烷基、4員環烷基、5員環烷基、6員環烷基、7員環烷基、8員環烷基、9員環烷基、10員環烷基、11員環烷基、12員環烷基、6至10員芳基或鍵，較佳為鍵、4員雜單環、5員雜單環、6員雜單環、7員雜單環、5員雜並環、6員雜並環、7員雜並環、8員雜並環、9員雜並環、10員雜並環、6員雜螺環、7員雜螺環、8員雜螺環、9員雜螺環、10員雜螺環、11員雜螺環、12員雜螺環、7員雜橋環、8員雜橋環、9員雜橋環、10員雜橋環、4員單環烷基、5員單環烷基、6員單環烷基、7員單環烷基、5員並環烷基、6員並環烷基、7員並環烷基、8員並環烷基、9員並環烷基、10員並環烷基、6員螺環烷基、7員螺環烷基、8員螺環烷基、9員螺環烷基、10員螺環烷基、11員螺環烷基、12員螺環烷基、7員橋環烷基、8員橋環烷基、9員橋環烷基、10員橋環烷基或6-10員芳基，所述芳基、環烷基、雜單環、雜並環、雜螺環或雜橋環任選進一步被0、1、2、3或4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、oxo、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基的取代基所取代，所述的雜單環、雜並環、雜螺環或雜橋環含有1、2、3或4個選自O、S、N的雜原子；
Cy1、Cy2、Cy3和Cy4不能同時為鍵；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4或Ak5為O時，不能直接與B連接；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4或Ak5不為鍵時，互相不能直接連接；
當Cy1、Cy2、Cy3和Cy4中有3個都為鍵時，Ak1、Ak2、Ak3、Ak4和Ak5中至少有一個選自CH2
並與B相連接；
當Ak1、Cy1、Ak2、Cy2、Ak3、Cy3、Ak4、Cy4、Ak5有4個及以上不為鍵時，Cy1、Cy2、Cy3和Cy4中至少有一個不為呱啶、呱嗪、嘧啶或吡啶；
B選自B1-W1-B2-B3-B4-；
B1選自6員雜芳環或苯基，較佳為苯基或吡啶基，所述的雜芳環、苯基或吡啶基進一步任選被0、1、2、3或4個Rb1
所取代，所述的雜芳環含有1、2、3或4個選自O、S、N的雜原子；
W1選自-O-、-NHCO-或-CONH-；
B2選自6員雜芳環或苯基，較佳為苯基或吡啶基，所述的雜芳環、苯基或吡啶基進一步任選被0、1、2、3或4個Rb2
所取代，所述的雜芳環含有1、2、3或4個選自O、S、N的雜原子；
B3選自8員雜並環、9員雜並環或10員雜並環，較佳為取代或未取代的咪唑並嘧啶、吡唑並嘧啶、咪唑並吡嗪、吡唑並吡嗪、咪唑並四氫嘧啶、吡唑並四氫嘧啶，當被取代時，雜並環、咪唑並嘧啶、吡唑並嘧啶、咪唑並吡嗪、吡唑並吡嗪、咪唑並四氫嘧啶、吡唑並四氫嘧啶任選進一步任選被0、1、2、3或4個Rb3
所取代，所述的雜並環含有1、2、3或4個選自O、S、N的雜原子；
B4選自5員飽和雜環或6員飽和雜環，較佳為取代或未取代的氮雜環戊基、呱啶或呱嗪，所述的雜環、氮雜環戊基、呱啶或呱嗪任選進一步任選被0、1、2、3或4個Rb4
所取代，所述的飽和雜環含有1至2個選自O、S、N的雜原子；
K選自，
或者K可以選自
、
或
，
或者K可以選自
、
、
或
，
或者K可以選自
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
或
，
或者K可以選自
、、、、、、
或
，
Rk2
選自CH2
、C=O、S=O、SO2
；
Rk1
、Rk3
或Rk4
各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、COOH、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基；
Rk5
選自C=O或；
p1或p2各自獨立的選自0、1、2、3或4。
根據本發明的一些實施方案，其中，
L選自-Ak1-Cy1-Ak2-Cy2-Ak3-Cy3-Ak4-Cy4-Ak5-；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4和Ak5各自獨立的選自CH2
、O或者鍵；
Cy1、Cy2、Cy3和Cy4各自獨立的選自3至12員雜環、3至12員環烷基、6至10員芳基或鍵，所述雜環、環烷基或芳基任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、的取代基所取代，所述的雜環含有1至4個選自O、S、N的雜原子。
根據本發明的一些實施方案，其中，Ak2、Ak3和Ak4為鍵；Ak1和Ak5各自獨立的選自CH2
、O或者鍵。
本發明的一些實施例涉及一種通式（I）所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中
L選自-Ak1-Cy1-Ak2-Cy2-Ak3-Cy3-Ak4-Cy4-Ak5-；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4和Ak5各自獨立的選自CH2
、O或者鍵；
Cy1、Cy2、Cy3和Cy4各自獨立的選自取代或未取代的鍵、苯基、萘基、環丁基、環戊基、環己基、環丁基並環丁基、環丁基並環戊基、環丁基並環己基、環戊基並環戊基、環戊基並環己基、環己基並環己基、環丙基並環丁基、環丙基並環戊基、環丙基並環己基、環丁基螺環丁基、環丁基螺環戊基、環丁基螺環己基、環戊基螺環戊基、環戊基螺環己基、環己基螺環己基、環丙基螺環丁基、環丙基螺環戊基、環丙基螺環己基、氮雜環丁基、氮雜環戊基、呱啶基、嗎啉基、呱嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三氮唑基、四氮唑基、環丙基並氮雜環丁基、環丙基並氮雜環戊基、環丙基並氮雜環己基、環丙基並呱啶基、環丁基並氮雜環丁基、環丁基並氮雜環戊基、環丁基並氮雜環已基、環丁基並呱啶基、環戊基並氮雜環丁基、環戊基並氮雜環戊基、環戊基並氮雜環己基、環戊基並呱啶基、環己基並氮雜環丁基、環己基並氮雜環戊基、環己基並氮雜環己基、環己基並呱啶基、氮雜環丁基並氮雜環丁基、氮雜環丁基並氮雜環戊基、氮雜環丁基並氮雜環己基、氮雜環丁基並呱啶基、氮雜環戊基並氮雜環丁基、氮雜環戊基並氮雜環戊基、氮雜環戊基並氮雜環己基、氮雜環戊基並呱啶基、氮雜環己基並氮雜環丁基、氮雜環己基並氮雜環戊基、氮雜環己基並氮雜環己基、氮雜環己基並呱啶基、環丁基螺氮雜環丁基、環丁基螺氮雜環戊基、環丁基螺氮雜環己基、環戊基螺氮雜環丁基、環戊基螺氮雜環戊基、環戊基螺氮雜環己基、環己基螺氮雜環丁基、環己基螺氮雜環戊基、環己基螺氮雜環己基、氮雜環丁基螺氮雜環丁基、氮雜環丁基螺氮雜環戊基、氮雜環丁基螺氮雜環己基、氮雜環戊基螺氮雜環丁基、氮雜環戊基螺氮雜環戊基、氮雜環戊基螺氮雜環己基、氮雜環己基螺氮雜環丁基、氮雜環己基螺氮雜環戊基、氮雜環己基螺氮雜環己基、環丁基螺呱啶基、環戊基螺呱啶基、環己基螺呱啶基、氮雜環丁基螺呱啶基、氮雜環戊基螺呱啶基、氮雜環己基螺呱啶基、
、
、
、
、
，較佳為取代或未取代的鍵、苯基、萘基、環丁基、環戊基、環己基、氮雜環丁基、氮雜環戊基、呱啶基、嗎啉基、呱嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三氮唑基、四氮唑基、氮雜環丁基並氮雜環丁基、氮雜環丁基並氮雜環戊基、氮雜環丁基並氮雜環己基、氮雜環丁基並呱啶基、氮雜環戊基並氮雜環丁基、氮雜環戊基並氮雜環戊基、氮雜環戊基並氮雜環己基、氮雜環戊基並呱啶基、環己基螺氮雜環丁基、環丁基螺氮雜環己基、環戊基並氮雜環戊基、氮雜環己基並氮雜環丁基、氮雜環己基並氮雜環戊基、氮雜環丁基螺氮雜環丁基、氮雜環丁基螺氮雜環戊基、氮雜環丁基螺氮雜環己基、氮雜環戊基螺氮雜環丁基、氮雜環戊基螺氮雜環戊基、氮雜環戊基螺氮雜環己基、氮雜環己基螺氮雜環丁基、氮雜環己基螺氮雜環戊基、氮雜環己基螺氮雜環己基、氮雜環丁基螺呱啶基、氮雜環戊基螺呱啶基、或
；當被取代時，任選進一步被0、1、2、3或4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、oxo、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基的取代基所取代，較佳為被0、1、2、3或4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、oxo、甲基、乙基、異丙基、甲氧基、乙氧基或異丙氧基的取代基所取代；
Cy1、Cy2、Cy3和Cy4不能同時為鍵；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4或Ak5為O時，不能直接與B連接；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4或Ak5不為鍵時，互相不能直接連接；
當Cy1、Cy2、Cy3和Cy4中有3個都為鍵時，Ak1、Ak2、Ak3、Ak4和Ak5中至少有一個選自CH2
並與B相連接；
當Ak1、Cy1、Ak2、Cy2、Ak3、Cy3、Ak4、Cy4、Ak5有4個及以上不為鍵時，Cy1、Cy2、Cy3和Cy4中至少有一個不為呱啶基、呱嗪基、嘧啶基或吡啶基；
B選自
、
或
，較佳為
、
、
或
；
或者B可以選自
、
、
或
，
或者B可以選自、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、、或；
Rb1
、Rb2
、Rb3
或Rb4
各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基，較佳為選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、甲基或甲氧基；所述的甲基、甲氧基、烷基和烷氧基任選進一步被0、1、2、3或4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基的取代基所取代，較佳為被0、1、2、3或4選自H、F、Cl、Br、I的取代基所取代；
n1、n2、n3、n4、n5、n6、n7、n8、n9、n10、n11、n12各自獨立的選自0、1、2、3或4；
K選自
或
，較佳為、或；
或者K可以選自、或，
或者K可以選自、、或；
或者K可以選自、、、、、、、、、、、、、、、或，
或者K可以選自、、、、、、或；
Rk2
選自CH2
或C=O；
Rk1
、Rk3
或Rk4
各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、COOH、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基，較佳為H、F、Cl、Br、I、OH或NH2
；
p1或p2各自獨立的選自0、1或2。
本發明的一些實施方案涉及一種通式（I）所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中
L選自-Ak1-Cy1-Ak2-Cy2-Ak3-Cy3-Ak4-Cy4-Ak5-；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4和Ak5各自獨立的選自CH2
、O或者鍵；
Cy1、Cy2、Cy3和Cy4各自獨立的選自取代或未取代的鍵、苯基、萘基、環丁基、環戊基、環己基、環丁基並環丁基、環丁基並環戊基、環丁基並環己基、環戊基並環戊基、環戊基並環己基、環己基並環己基、環丙基並環丁基、環丙基並環戊基、環丙基並環己基、環丁基螺環丁基、環丁基螺環戊基、環丁基螺環己基、環戊基螺環戊基、環戊基螺環己基、環己基螺環己基、環丙基螺環丁基、環丙基螺環戊基、環丙基螺環己基、氮雜環丁基、氮雜環戊基、呱啶基、嗎啉基、呱嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三氮唑基、四氮唑基、環丙基並氮雜環丁基、環丙基並氮雜環戊基、環丙基並氮雜環己基、環丙基並呱啶基、環丁基並氮雜環丁基、環丁基並氮雜環戊基、環丁基並氮雜環己基、環丁基並呱啶基、環戊基並氮雜環丁基、環戊基並氮雜環戊基、環戊基並氮雜環己基、環戊基並呱啶基、環己基並氮雜環丁基、環己基並氮雜環戊基、環己基並氮雜環己基、環己基並呱啶基、氮雜環丁基並氮雜環丁基、氮雜環丁基並氮雜環戊基、氮雜環丁基並氮雜環己基、氮雜環丁基並呱啶基、氮雜環戊基並氮雜環丁基、氮雜環戊基並氮雜環戊基、氮雜環戊基並氮雜環己基、氮雜環戊基並呱啶基、氮雜環己基並氮雜環丁基、氮雜環己基並氮雜環戊基、氮雜環己基並氮雜環己基、氮雜環己基並呱啶基、環丁基螺氮雜環丁基、環丁基螺氮雜環戊基、環丁基螺氮雜環己基、環戊基螺氮雜環丁基、環戊基螺氮雜環戊基、環戊基螺氮雜環己基、環己基螺氮雜環丁基、環己基螺氮雜環戊基、環己基螺氮雜環己基、氮雜環丁基螺氮雜環丁基、氮雜環丁基螺氮雜環戊基、氮雜環丁基螺氮雜環己基、氮雜環戊基螺氮雜環丁基、氮雜環戊基螺氮雜環戊基、氮雜環戊基螺氮雜環己基、氮雜環己基螺氮雜環丁基、氮雜環己基螺氮雜環戊基、氮雜環己基螺氮雜環己基、環丁基螺呱啶基、環戊基螺呱啶基、環己基螺呱啶基、氮雜環丁基螺呱啶基、氮雜環戊基螺呱啶基、氮雜環己基螺呱啶基、、、、、，較佳為取代或未取代的鍵、苯基、萘基、環丁基、環戊基、環己基、氮雜環丁基、氮雜環戊基、呱啶基、嗎啉基、呱嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三氮唑基、四氮唑基、氮雜環丁基並氮雜環丁基、氮雜環丁基並氮雜環戊基、氮雜環丁基並氮雜環己基、氮雜環丁基並呱啶基、氮雜環戊基並氮雜環丁基、氮雜環戊基並氮雜環戊基、氮雜環戊基並氮雜環己基、氮雜環戊基並呱啶基、環己基螺氮雜環丁基、環丁基螺氮雜環己基、環戊基並氮雜環戊基、氮雜環己基並氮雜環丁基、氮雜環己基並氮雜環戊基、氮雜環丁基螺氮雜環丁基、氮雜環丁基螺氮雜環戊基、氮雜環丁基螺氮雜環己基、氮雜環戊基螺氮雜環丁基、氮雜環戊基螺氮雜環戊基、氮雜環戊基螺氮雜環己基、氮雜環己基螺氮雜環丁基、氮雜環己基螺氮雜環戊基、氮雜環己基螺氮雜環己基、氮雜環丁基螺呱啶基、氮雜環戊基螺呱啶基、或；當被取代時，任選進一步被0、1、2、3或4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、oxo、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基的取代基所取代，較佳為被0、1、2、3或4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、oxo、甲基、乙基、異丙基、甲氧基、乙氧基或異丙氧基的取代基所取代；
Cy1、Cy2、Cy3和Cy4不能同時為鍵；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4或Ak5為O時，不能直接與B連接；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4或Ak5不為鍵時，互相不能直接連接；
當Cy1、Cy2、Cy3和Cy4中有3個都為鍵時，Ak1、Ak2、Ak3、Ak4和Ak5中至少有一個選自CH2
並與B相連接；
當Ak1、Cy1、Ak2、Cy2、Ak3、Cy3、Ak4、Cy4、Ak5有4個及以上不為鍵時，Cy1、Cy2、Cy3和Cy4中至少有一個不為呱啶基、呱嗪基、嘧啶基或吡啶基；
B選自，較佳為或，
或者B可以選自
，
或者B可以選自、、、、、、、、或、 ；
Rb1
、Rb2
、Rb3
或Rb4
各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基，較佳為選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、甲基或甲氧基；所述的甲基、甲氧基、烷基和烷氧基任選進一步被0、1、2、3或4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基的取代基所取代，較佳為被0、1、2、3或4選自H、F、Cl、Br、I的取代基所取代；
n1、n2、n3、n4各自獨立的選自0、1、2、3或4；
K選自或，較佳為、或，
或者K可以選自、或，
或者K可以選自、、或；
或者K可以選自、、、、、、、、、、、、、、、或，
或者K可以選自、、、、、、或；
Rk2
選自CH2
或C=O；
Rk1
、Rk3
或Rk4
各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、COOH、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基，較佳為H、F、Cl、Br、I、OH或NH2
；
p1或p2各自獨立的選自0、1或2。
本發明的一些實施方案涉及一種通式（I）所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中
L選自-Ak1-Cy1-Ak2-Cy2-Ak3-Cy3-Ak4-Cy4-Ak5-；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4和Ak5各自獨立的選自CH2
、O或者鍵；
Cy1、Cy2、Cy3和Cy4各自獨立的選自取代或未取代的鍵、苯基、萘基、環丁基、環戊基、環己基、環丁基並環丁基、環丁基並環戊基、環丁基並環己基、環戊基並環戊基、環戊基並環己基、環己基並環己基、環丙基並環丁基、環丙基並環戊基、環丙基並環己基、環丁基螺環丁基、環丁基螺環戊基、環丁基螺環己基、環戊基螺環戊基、環戊基螺環己基、環己基螺環己基、環丙基螺環丁基、環丙基螺環戊基、環丙基螺環己基、氮雜環丁基、氮雜環戊基、呱啶基、嗎啉基、呱嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三氮唑基、四氮唑基、環丙基並氮雜環丁基、環丙基並氮雜環戊基、環丙基並氮雜環己基、環丙基並呱啶基、環丁基並氮雜環丁基、環丁基並氮雜環戊基、環丁基並氮雜環己基、環丁基並呱啶基、環戊基並氮雜環丁基、環戊基並氮雜環戊基、環戊基並氮雜環己基、環戊基並呱啶基、環己基並氮雜環丁基、環己基並氮雜環戊基、環己基並氮雜環己基、環己基並呱啶基、氮雜環丁基並氮雜環丁基、氮雜環丁基並氮雜環戊基、氮雜環丁基並氮雜環己基、氮雜環丁基並呱啶基、氮雜環戊基並氮雜環丁基、氮雜環戊基並氮雜環戊基、氮雜環戊基並氮雜環己基、氮雜環戊基並呱啶基、氮雜環己基並氮雜環丁基、氮雜環己基並氮雜環戊基、氮雜環己基並氮雜環己基、氮雜環己基並呱啶基、環丁基螺氮雜環丁基、環丁基螺氮雜環戊基、環丁基螺氮雜環己基、環戊基螺氮雜環丁基、環戊基螺氮雜環戊基、環戊基螺氮雜環己基、環己基螺氮雜環丁基、環己基螺氮雜環戊基、環己基螺氮雜環己基、氮雜環丁基螺氮雜環丁基、氮雜環丁基螺氮雜環戊基、氮雜環丁基螺氮雜環己基、氮雜環戊基螺氮雜環丁基、氮雜環戊基螺氮雜環戊基、氮雜環戊基螺氮雜環己基、氮雜環己基螺氮雜環丁基、氮雜環己基螺氮雜環戊基、氮雜環己基螺氮雜環己基、環丁基螺呱啶基、環戊基螺呱啶基、環己基螺呱啶基、氮雜環丁基螺呱啶基、氮雜環戊基螺呱啶基、氮雜環己基螺呱啶基、、、、、，較佳為取代或未取代的鍵、苯基、萘基、環丁基、環戊基、環己基、氮雜環丁基、氮雜環戊基、呱啶基、嗎啉基、呱嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三氮唑基、四氮唑基、氮雜環丁基並氮雜環丁基、氮雜環丁基並氮雜環戊基、氮雜環丁基並氮雜環己基、氮雜環丁基並呱啶基、氮雜環戊基並氮雜環丁基、氮雜環戊基並氮雜環戊基、氮雜環戊基並氮雜環己基、氮雜環戊基並呱啶基、環己基螺氮雜環丁基、環丁基螺氮雜環己基、環戊基並氮雜環戊基、氮雜環己基並氮雜環丁基、氮雜環己基並氮雜環戊基、氮雜環丁基螺氮雜環丁基、氮雜環丁基螺氮雜環戊基、氮雜環丁基螺氮雜環己基、氮雜環戊基螺氮雜環丁基、氮雜環戊基螺氮雜環戊基、氮雜環戊基螺氮雜環己基、氮雜環己基螺氮雜環丁基、氮雜環己基螺氮雜環戊基、氮雜環己基螺氮雜環己基、氮雜環丁基螺呱啶基、氮雜環戊基螺呱啶基、或；當被取代時，任選進一步被0、1、2、3或4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、oxo、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基的取代基所取代，較佳為被0、1、2、3或4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、oxo、甲基、乙基、異丙基、甲氧基、乙氧基或異丙氧基的取代基所取代；
Cy1、Cy2、Cy3和Cy4不能同時為鍵；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4或Ak5為O時，不能直接與B連接；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4或Ak5不為鍵時，互相不能直接連接；
當Cy1、Cy2、Cy3和Cy4中有3個都為鍵時，Ak1、Ak2、Ak3、Ak4和Ak5中至少有一個選自CH2
並與B相連接；
當Ak1、Cy1、Ak2、Cy2、Ak3、Cy3、Ak4、Cy4、Ak5有4個及以上不為鍵時，Cy1、Cy2、Cy3和Cy4中至少有一個不為呱啶基、呱嗪基、嘧啶基或吡啶基；
B選自，較佳為，
或者B可以選自
；
或者B可以選自或；
Rb1
、Rb2
、Rb3
或Rb4
各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基，較佳為選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、甲基或甲氧基；所述的甲基、甲氧基、烷基和烷氧基任選進一步被0、1、2、3或4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基的取代基所取代，較佳為被0、1、2、3或4選自H、F、Cl、Br、I的取代基所取代；
n5、n6、n7、n8各自獨立的選自0、1、2、3或4；
K選自或，較佳為、或，
或者K可以選自、或，
或者K可以選自、、或；
或者K可以選自、、、、、、、、、、、、、、、或，
或者K可以選自、、、、、、或；
Rk2
選自CH2
或C=O；
Rk1
、Rk3
或Rk4
各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、COOH、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基，較佳為H、F、Cl、Br、I、OH或NH2
；
p1或p2各自獨立的選自0、1或2。
本發明的一些實施例涉及一種通式（I）所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中
L選自-Ak1-Cy1-Ak2-Cy2-Ak3-Cy3-Ak4-Cy4-Ak5-；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4和Ak5各自獨立的選自CH2
、O或者鍵；
Cy1、Cy2、Cy3和Cy4各自獨立的選自取代或未取代的鍵、苯基、萘基、環丁基、環戊基、環己基、環丁基並環丁基、環丁基並環戊基、環丁基並環己基、環戊基並環戊基、環戊基並環己基、環己基並環己基、環丙基並環丁基、環丙基並環戊基、環丙基並環己基、環丁基螺環丁基、環丁基螺環戊基、環丁基螺環己基、環戊基螺環戊基、環戊基螺環己基、環己基螺環己基、環丙基螺環丁基、環丙基螺環戊基、環丙基螺環己基、氮雜環丁基、氮雜環戊基、呱啶基、嗎啉基、呱嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三氮唑基、四氮唑基、環丙基並氮雜環丁基、環丙基並氮雜環戊基、環丙基並氮雜環己基、環丙基並呱啶基、環丁基並氮雜環丁基、環丁基並氮雜環戊基、環丁基並氮雜環己基、環丁基並呱啶基、環戊基並氮雜環丁基、環戊基並氮雜環戊基、環戊基並氮雜環己基、環戊基並呱啶基、環己基並氮雜環丁基、環己基並氮雜環戊基、環己基並氮雜環己基、環己基並呱啶基、氮雜環丁基並氮雜環丁基、氮雜環丁基並氮雜環戊基、氮雜環丁基並氮雜環己基、氮雜環丁基並呱啶基、氮雜環戊基並氮雜環丁基、氮雜環戊基並氮雜環戊基、氮雜環戊基並氮雜環己基、氮雜環戊基並呱啶基、氮雜環己基並氮雜環丁基、氮雜環己基並氮雜環戊基、氮雜環己基並氮雜環己基、氮雜環己基並呱啶基、環丁基螺氮雜環丁基、環丁基螺氮雜環戊基、環丁基螺氮雜環己基、環戊基螺氮雜環丁基、環戊基螺氮雜環戊基、環戊基螺氮雜環己基、環己基螺氮雜環丁基、環己基螺氮雜環戊基、環己基螺氮雜環己基、氮雜環丁基螺氮雜環丁基、氮雜環丁基螺氮雜環戊基、氮雜環丁基螺氮雜環己基、氮雜環戊基螺氮雜環丁基、氮雜環戊基螺氮雜環戊基、氮雜環戊基螺氮雜環己基、氮雜環己基螺氮雜環丁基、氮雜環己基螺氮雜環戊基、氮雜環己基螺氮雜環己基、環丁基螺呱啶基、環戊基螺呱啶基、環己基螺呱啶基、氮雜環丁基螺呱啶基、氮雜環戊基螺呱啶基、氮雜環己基螺呱啶基、、、、、，較佳為取代或未取代的鍵、苯基、萘基、環丁基、環戊基、環己基、氮雜環丁基、氮雜環戊基、呱啶基、嗎啉基、呱嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三氮唑基、四氮唑基、氮雜環丁基並氮雜環丁基、氮雜環丁基並氮雜環戊基、氮雜環丁基並氮雜環己基、氮雜環丁基並呱啶基、氮雜環戊基並氮雜環丁基、氮雜環戊基並氮雜環戊基、氮雜環戊基並氮雜環己基、氮雜環戊基並呱啶基、環己基螺氮雜環丁基、環丁基螺氮雜環己基、環戊基並氮雜環戊基、氮雜環己基並氮雜環丁基、氮雜環己基並氮雜環戊基、氮雜環丁基螺氮雜環丁基、氮雜環丁基螺氮雜環戊基、氮雜環丁基螺氮雜環己基、氮雜環戊基螺氮雜環丁基、氮雜環戊基螺氮雜環戊基、氮雜環戊基螺氮雜環己基、氮雜環己基螺氮雜環丁基、氮雜環己基螺氮雜環戊基、氮雜環己基螺氮雜環己基、氮雜環丁基螺呱啶基、氮雜環戊基螺呱啶基、或；當被取代時，任選進一步被0、1、2、3或4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、oxo、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基的取代基所取代，較佳為被0、1、2、3或4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、oxo、甲基、乙基、異丙基、甲氧基、乙氧基或異丙氧基的取代基所取代；
Cy1、Cy2、Cy3和Cy4不能同時為鍵；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4或Ak5為O時，不能直接與B連接；
Ak1、Ak2、Ak3、Ak4或Ak5不為鍵時，互相不能直接連接；
當Cy1、Cy2、Cy3和Cy4中有3個都為鍵時，Ak1、Ak2、Ak3、Ak4和Ak5中至少有一個選自CH2
並與B相連接；
當Ak1、Cy1、Ak2、Cy2、Ak3、Cy3、Ak4、Cy4、Ak5有4個及以上不為鍵時，Cy1、Cy2、Cy3和Cy4中至少有一個不為呱啶基、呱嗪基、嘧啶基或吡啶基；
B選自，較佳為，
或者B可以選自
；
或者B可以選自或；
Rb1
、Rb2
、Rb3
或Rb4
各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基，較佳為選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、甲基或甲氧基；所述的甲基、甲氧基、烷基和烷氧基任選進一步被0、1、2、3或4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基的取代基所取代，較佳為被0、1、2、3或4選自H、F、Cl、Br、I的取代基所取代；
n9、n10、n11、n12各自獨立的選自0、1、2、3或4；
K選自或，較佳為、或，
或者K可以選自、或，
或者K可以選自、、或，
或者K可以選自、、、、、、、、、、、、、、、或，
或者K可以選自、、、、、、或；Rk2
選自CH2
或C=O；
Rk1
、Rk3
或Rk4
各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、COOH、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基，較佳為H、F、Cl、Br、I、OH或NH2
；
p1或p2各自獨立的選自0、1或2。
本發明的一些實施例涉及一種通式（I）所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中
L選自
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
或
、
、
、
、
、
、
，
或者L可以選自
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
或
；
或者L可以選自
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
或
；
L左邊與B連接，L右邊與K連接；
B選自、、或，
或者B可以選自
、
、
或
，
Rb4
選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基，較佳為選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、甲基或甲氧基；所述的甲基、甲氧基、烷基和烷氧基任選進一步被0、1、2、3或4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基的取代基所取代，較佳為被0、1、2、3或4選自H、F、Cl、Br、I的取代基所取代；
n4、n8、n12各自獨立的選自0、1、2、3或4，
或者B可以選自、、、、、、、、、、、、或；
K選自、或；
或者K可以選自、或，
Rk1
選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、COOH、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基，較佳為H、F、Cl、Br、I、OH或NH2
，
p1選自0、1或2，
或者K可以選自、、或，
或者K可以選自、、、、、、、、、、、、、、、或，
或者K可以選自、、、、、、或。
本發明的一些實施例涉及一種通式（I）所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中
L選自、、、、、、、、、、、、或、、、、、、；
或者L可以選自、、
、、、、、、、、、或；
或者L可以選自、、、、、、、 、、、、、或；
L左邊與B連接，L右邊與K連接；
B選自、、或，
或者B可以選自
、
、
或
，
Rb4
選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基，較佳為選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、甲基或甲氧基；所述的甲基、甲氧基、烷基和烷氧基任選進一步被0、1、2、3或4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基的取代基所取代，較佳為被0、1、2、3或4選自H、F、Cl、Br、I的取代基所取代，
n4、n8、n12各自獨立的選自0、1、2、3或4，
或者B可以選自、、、、、、、、、、、、或；
K可以選自、、、、、、、、、、、、、、、或，
或者K可以選自、、、、、、或。
本發明的一些實施例涉及一種通式（I）所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中
L選自、、、、、、、、、、、、或、、、、、、；
或者L可以選自、、、、、、、、、、、或；
或者L可以選自、、、、、、、 、、、、、或；
L左邊與B連接，L右邊與K連接；
B選自、、或，
或者B可以選自、、或，
Rb4
選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基，較佳為選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、甲基或甲氧基，所述的甲基、甲氧基、烷基和烷氧基任選進一步被0、1、2、3或4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基的取代基所取代，較佳為被0、1、2、3或4選自H、F、Cl、Br、I的取代基所取代，
n4、n8、n12各自獨立的選自0、1、2、3或4，
或者B可以選自、、、、、、、、、、、、或；
K選自、、、、、、或。
本發明的一些實施例涉及一種通式（I）所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中
L選自、、、、、、、、、、、、、、、、、、、；
或者L可以選自、、、、、、、、、、、或；
或者L可以選自、、、、、、、 、、、、、或；
L左邊與B連接，L右邊與K連接；
B選自；
或者B可以選自
，
Rb4
選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基，較佳為選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、甲基或甲氧基；所述的甲基、甲氧基、烷基和烷氧基任選進一步被0、1、2、3或4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基的取代基所取代，較佳為被0、1、2、3或4選自H、F、Cl、Br、I的取代基所取代；
n4選自0、1、2、3或4，
或者B可以選自、、、、、、或；
K選自、或，
或者K可以選自、或，
Rk1
選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、COOH、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基，較佳為H、F、Cl、Br、I、OH或NH2
，
p1選自0、1或2，
或者K可以選自、、或，
或者K可以選自、、、、、、、、、、、、、、、或，
或者K可以選自、、、、、、或。
本發明的一些實施例涉及一種通式（I）所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中
L選自、、、、、、、、、、、、、、、、、、、；
或者L可以選自、、、、、、、、、、、或；
或者L可以選自、、、、、、、 、、、、、或；
L左邊與B連接，L右邊與K連接；
B選自
或者B可以選自
，
Rb4
選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基，較佳為選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、甲基或甲氧基；所述的甲基、甲氧基、烷基和烷氧基任選進一步被0、1、2、3或4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基的取代基所取代，較佳為被0、1、2、3或4選自H、F、Cl、Br、I的取代基所取代；
n4選自0、1、2、3或4；
或者B可以選自；
K選自、或，
或者K可以選自、或，
Rk1
選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、COOH、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基，較佳為H、F、Cl、Br、I、OH或NH2
，
p1選自0、1或2，
或者K可以選自、、或，
或者K可以選自、、、、、、、、、、、、、、、或，
或者K可以選自、、、、、、或。
本發明的一些實施例涉及一種通式（I）所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中
L選自、、、、、、、、、、、、、、、、、、、；
或者L可以選自、、、、、、、、、、、或；
或者L可以選自、、、、、、、 、、、、、或；
L左邊與B連接，L右邊與K連接；
B選自，
或者B可以選自
；
Rb4
選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基，較佳為選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、甲基或甲氧基；所述的甲基、甲氧基、烷基和烷氧基任選進一步被0、1、2、3或4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基的取代基所取代，較佳為被0、1、2、3或4選自H、F、Cl、Br、I的取代基所取代；
n8選自0、1、2、3或4；
或者B可以選自；
K選自、或，
或者K可以選自、或，
Rk1
選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、COOH、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基，較佳為H、F、Cl、Br、I、OH或NH2
，
p1選自0、1或2，
或者K可以選自、、或，
或者K可以選自、、、、、、、、、、、、、、、或，
或者K可以選自、、、、、、或。
本發明的一些實施例涉及一種通式（I）所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中
L選自、、、、、、、、、、、、、、、、、、、；
或者L可以選自、、、、、、、、、、、或；
或者L可以選自、、、、、、、 、、、、、或；
L左邊與B連接，L右邊與K連接；
B選自，
或者B可以選自
；
Rb4
選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基，較佳為選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、甲基或甲氧基；所述的甲基、甲氧基、烷基和烷氧基任選進一步被0、1、2、3或4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、CONH2
、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基的取代基所取代，較佳為被0、1、2、3或4選自H、F、Cl、Br、I的取代基所取代，
n12選自0、1、2、3或4；
或者B可以選自；
K選自、或，
或者K可以選自、或，
Rk1
選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、CN、COOH、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基，較佳為H、F、Cl、Br、I、OH或NH2
，
p1選自0、1或2，
或者K可以選自、、或，
或者K可以選自、、、、、、、、、、、、、、、或，
或者K可以選自、、、、、、或。
本發明的一些實施例涉及一種通式（I）所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中化合物選自通式(Ia)或(Ib)所示的化合物，
B-Cy1-Cy2-K (Ia)
B-Cy1-Cy2-Cy3-K (Ib)
B選自、、或，、、、、、、、、或；
Cy1、Cy2、Cy3各自獨立的選自取代的或者未取代的如下基團之一：4至6員含氮雜單環、5至10員含氮雜並環、6至10員含氮雜螺環、4至6員單環烷基或苯基，所述苯基、環烷基、雜單環、雜並環或雜螺環任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、oxo、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基的取代基所取代，所述的雜單環、雜並環或雜螺環含有1至4個選自O、S、N的雜原子；
或者Cy1、Cy2、Cy3可以各自獨立的選自取代的或者未取代的如下基團之一：
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、、
、
或
，當被取代時，任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2
、oxo、C1-4
烷基或C1-4
烷氧基的取代基所取代；
K選自、、或。
本發明的一些實施例涉及一種通式（I）所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中化合物選自通式(Ia)或(Ib)所示的化合物，
B選自、、或，、、、、、、、、或；
Cy1、Cy2、Cy3各自獨立的選自取代的或者未取代的如下基團之一：、、、、、、、、、
、、、、 、、、、、、或；
K選自、、、、、、、、、、、、、、、或，較佳為、、、、、、或。
本發明的一些實施例涉及一種通式（I）所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中該化合物選自如下結構之一：
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 | 。 |
本發明的一些實施例涉及一種通式（I）所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中所述的鹽選自三氟乙酸鹽。
本發明涉及一種藥物組合物，包括本發明所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，以及藥學上可接受的載體。
本發明涉及一種本發明所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶在用於製備治療與BTK活性或表達量相關疾病的藥物中的應用。
本發明涉及一種本發明所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶在用於製備治療與抑制或降解BTK相關疾病的藥物中的應用。
本發明涉及的本發明所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶的應用，其特徵在於，所述的疾病選自腫瘤或自身免疫疾病。
本發明涉及的本發明所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶的應用，其特徵在於，所述的腫瘤選自非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴細胞性白血病、套細胞淋巴瘤、B細胞淋巴瘤，自身免疫疾病選自內風濕關節炎或銀屑病。
合成方法一：
通式（Z-1）與通式（Z-2）通過還原胺化、親核取代反應或者偶聯反應得到對應通式（Z-3），如果通式（Z-3）反應位有胺基保護基，先脫除胺基保護基後再與通式（Z-4）通過親核取代反應得到對應通式（II）即通式（I），更長鏈的製備，可以重複按照上面第一步方法及脫胺基保護基製備得到；
R4
-Cy1-R5
（Z-2-1）+ R6
-Cy2-R7
（Z-2-2）
R4
-Cy1-Ak2-Cy2-R7
（Z-2-3），
通式（Z-2-1）與通式（Z-2-2）反應可以通過親核取代反應、偶聯反應或者還原胺化得到通式（Z-2-3），更長鏈的製備，可以重複按照上面方法製備得到；
如果（Z-2-1）反應位有胺基保護基，脫除保護基後與通式（Z-2-2）反應可以通過親核取代反應或者偶聯反應或者還原胺化得到通式（Z-2-3），更長鏈的製備，可以重複按照上面方法製備得到；
或者通式（Z-1）與通式（Z-2-1）通過親核取代反應、偶聯反應或者還原胺化反應（可以通過通式（Z-2-3）製備方法增加鏈的長度）得到得到對應通式（II）即通式（I），其中L鏈的長度可以通過通式（Z-2-3）的製備方法製備。
合成方法二：
如果通式（Z-2）反應位有胺基保護基，先脫除胺基保護基後再與通式（Z-4）通過親核取代反應或者偶聯反應得到對應通式（Z-5），通式（Z-5）與通式（Z-1）通過親核取代反應或者偶聯反應得到對應通式（II）即通式（I）；
合成方法三：
部分鏈L可以先於通式（Z-1）發生親核取代反應或者偶聯反應，然後再與鏈L的其它部分發生親核取代反應或者偶聯反應（合成方法見通式（Z-2-3）製備），以此類推至得到通式（Z-3），通式（Z-3）與通式（Z-4）通過親核取代反應或者偶聯反應得到對應通式（II）即通式（I）；
合成方法四：
或者部分鏈L可以先於通式（Z-4）發生親核取代反應或者偶聯反應，然後再與鏈L的其它部分發生親核取代反應或者偶聯反應（合成方法見通式（Z-2-3）製備），以此類推至得到通式（Z-5），通式（Z-5）與通式（Z-1）通過親核取代反應或者偶聯反應得到對應通式（II）即通式（I）；
合成方法五：
OH-B4-H（Z-7）OH-B4-L-R2
（Z-8）OTs-B4-L-R2
（Z-9）+B1-W1-B2-B3-H （Z-10）B-L-R2
（Z-3）
通式（Z-7）與通式（Z-2）發生親核取代反應或者偶聯反應得到通式（Z-8）
或者通式（Z-7）與部分鏈L發生親核取代反應或者偶聯反應，然後再與鏈L的其它部分發生親核取代反應或者偶聯反應（合成方法見通式（Z-2-3）的製備），得到通式（Z-8），通式（Z-8）與對甲苯磺醯氯反應得到通式（Z-9），通式（Z-9）與通式（Z-10）發生親核取代反應或者偶聯反應得到通式（Z-3）；
合成方法六：
通式（Z-1）與通式（Z-2-1）通過還原胺化反應得到對應通式（Z-11），如果通式（Z-11）反應位有胺基保護基，先脫除胺基保護基後再與通式（Z-2-2）通過還原胺化反應得到通式（Z-12），如果通式（Z-12）反應位有胺基保護基，先脫除胺基保護基後再與通式（Z-4）通過親核取代反應得到通式（Z-13），即通式（I）。
合成方法七：
通式（Z-14）與甲基磺醯氯反應得到通式（Z-15），通式（Z-15）與通式（Z-10）發生親核取代反應得到通式（Z-16），如果通式（Z-16）反應位有胺基保護基，先脫除胺基保護基後再與通式（Z-2-1）通過還原胺化得到對應通式（Z-11），如果通式（Z-11）反應位有胺基保護基，先脫除胺基保護基後再與通式（Z-2-2）通過還原胺化反應得到通式（Z-12），如果通式（Z-12）反應位有胺基保護基，先脫除胺基保護基後再與通式（Z-4）通過親核取代反應得到通式（Z-13），即通式（I）。
通式（Z-1）合成方法見J. Med. Chem. 2015 , 58,
9625-9638；
通式（Z-4）合成方法見WO2017197056；
R1
選自（=O）、-CHO、F、Cl、Br、I、OTf；
R2
選自H、（=O）、-CHO、F、Cl、Br、I或胺基保護基，較佳為Boc；
R3
選自NH2
、F、Cl、Br、I、OTf、OH；
R4
、R5
、R6
、R7
各自獨立的選自H、（=O）、-CHO、H、F、Cl、Br、I、OTf或胺基保護基。
除非有相反的陳述，在說明書和申請專利範圍中使用的術語具有下述含義：
本發明所述基團和化合物中所涉及的碳、氫、氧、硫、氮或F、Cl、Br、I均包括它們的同位素情况，及本發明所述基團和化合物中所涉及的碳、氫、氧、硫或氮任選進一步被一個或多個它們對應的同位素所替代，其中碳的同位素包括12
C、13
C和14
C，氫的同位素包括氕(H)、氘(D，又叫重氫)、氚(T，又叫超重氫)，氧的同位素包括16
O、17
O和18
O，硫的同位素包括32
S、33
S、34
S和36
S，氮的同位素包括14
N和15
N，氟的同位素包括17
F和19
F，氯的同位素包括35
Cl和37
Cl，溴的同位素包括79
Br和81
Br。
「烷基」是指1至20個碳原子的直鏈或支鏈飽和脂肪族烴基，較佳為1至8個碳原子的烷基，更佳為1至6個碳原子的烷基，進一步較佳為1至4個碳原子的烷基。非限制性實施例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、第二丁基、異丁基、第三丁基、正戊基、異戊基、新戊基、正己基及其各種支鏈異構體；所述的烷基可以任選進一步被0至6個選自F、Cl、Br、I、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、烷基胺基、醯胺基、烯基、炔基、C1-6
烷基、C1-6
羥基烷基、C1-6
烷氧基、3至8員碳環基、3至8員雜環基、3至8員碳環基氧基、3至8員雜環基氧基、羧基或者羧酸酯基的取代基所取代，本文中出現的烷基，其定義與本定義一致。
「烷氧基」是指-O-烷基。非限制性實施例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、第二丁氧基、第三丁氧基、正戊氧基、正己氧基、環丙氧基和環丁氧基。所述的烷基可以任選進一步被0至5個選自F、Cl、Br、I、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、烷基胺基、烯基、炔基、烷基、羥基烷基、烷氧基、碳環基、雜環基、碳環基氧基、雜環基氧基、羧基或者羧酸酯基的取代基所取代。本文中出現的烷氧基，其定義與本定義一致。
「雜環基」或「雜環」是指取代的或未取代的飽和或不飽和的芳香環或者非芳香環，芳香環或者非芳香環可以是3至8員的單環、4至12員双環或者10至15員三環體系，且包含1至3個選自N、O或S的雜原子，較佳為3至8員雜環基，雜環基的環中選擇性取代的N、S可被氧化成各種氧化態。雜環基可以連接在雜原子或者碳原子上，雜環基可以連接有橋環或者螺環，非限制性實施例包括環氧乙基、氮雜環丙基、氧雜環丁基、氮雜環丁基、1,3-二氧戊環基、1,4-二氧戊環基、1,3-二氧六環基、氮雜環庚基、吡啶基、呋喃基、噻吩基、吡喃基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、咪唑基、哌啶基、哌叮基、嗎啉基、硫代嗎啉基、1,3-二噻基、二氫呋喃基、二氫吡喃基、二噻戊環基、四氫呋喃基、四氫吡咯基、四氫咪唑基、四氫噻唑基、四氫吡喃基、苯並咪唑基、苯並吡啶基、吡咯並吡啶基、苯並二氫呋喃基、氮雜二環[3.2.1]辛烷基、氮雜二環[5.2.0]壬烷基、氧雜三環[5.3.1.1]十二烷基、氮雜金剛烷基和氧雜螺[3.3]庚烷基。所述的雜環基可以任選進一步被0至5個選自F、Cl、Br、I、=O、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、烷基胺基、醯胺基、烯基、炔基、烷基、羥基烷基、烷氧基、碳環基、雜環基、碳環基氧基、雜環基氧基、羧基或者羧酸酯基的取代基所取代。本文中出現的雜環基，其定義與本定義一致。
「螺環」是指取代的或未取代的單環之間共用一個碳原子(稱螺原子)的5至20員多環基團，其可以包含0至5個雙鍵，且可以含有0至5個選自N、O或S(=O)n
的雜原子。較佳為6至14員，進一步較佳為6至12員，更佳為6至10員，其非限定性實例包括：
。當被取代時，取代基可以為1至5個選自F、Cl、Br、I、烷基、環烷基、烷氧基、鹵代烷基、硫醇、羥基、硝基、巰基、胺基、氰基、異氰基、芳基、雜芳基、雜環基、橋環基、螺環基、並環基、羥基烷基、=O、羰基、醛、羧酸、甲酸酯、-(CH2
)m
-C(=O)-Ra
、-O-(CH2
)m
-C(=O)-Ra
、-(CH2
)m
-C(=O)-NRb
Rc
、-(CH2
)m
S(=O)n
Ra
、-(CH2
)m
-烯基-Ra
、ORd
或-(CH2
)m
-炔基-Ra
(其中m、n為0、1或2)、芳基硫基、硫代羰基、矽烷基或-NRb
Rc
等基團，其中Rb
與Rc
獨立選自包括H、羥基、胺基、羰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、磺醯基、三氟甲磺醯基，作為選擇，Rb
與Rc
可形成五或六員環烷基或雜環基。Ra
與Rd
各自獨立選自芳基、雜芳基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、羰基、酯基、橋環基、螺環基或並環基。本文中出現的螺環，其定義與本定義一致。
「並環」是指系統中的每個環與體系中的其他環共享毗鄰的一對碳原子的多環基團，其中一個或多個環可以含有0個或多個雙鍵，且可以是取代的或未取代，並環體系中的各個環可以含0至5個選自Ｎ、S(=O)n
或O的雜原子。較佳為5至20員，進一步較佳為5至14員，更佳為5至12員，再進一步較佳為5至10員。非限定性實例包括：
當被取代時，取代基可以為1至5個選自F、Cl、Br、I、烷基、環烷基、烷氧基、鹵代烷基、硫醇、羥基、硝基、巰基、胺基、氰基、異氰基、芳基、雜芳基、雜環基、橋環基、螺環基、並環基、羥基烷基、=O、羰基、醛、羧酸、甲酸酯、-(CH2
)m
-C(=O)-Ra
、-O-(CH2
)m
-C(=O)-Ra
、-(CH2
)m
-C(=O)-NRb
Rc
、-(CH2
)m
S(=O)n
Ra
、-(CH2
)m
-烯基-Ra
、ORd
或-(CH2
)m
-炔基-Ra
(其中m、n為0、1或2)、芳基硫基、硫代羰基、矽烷基或-NRb
Rc
等基團，其中Rb
與Rc
獨立選自包括H、羥基、胺基、羰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、磺醯基、三氟甲磺醯基，作為選擇，Rb
與Rc
可形成五或六員環烷基或雜環基。Ra
與Rd
各自獨立選自芳基、雜芳基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、羰基、酯基、橋環基、螺環基或並環基。本文中出現的並環，其定義與本定義一致。
「橋環」是指任意兩個不直接連接的碳原子的多環基團，可以含有0個或多個雙鍵，且可以是取代的或未取代的，並環體系中的任意環可以含0至5個選自Ｎ、S(=O)n
或O雜原子或基團(其中n為1、1、2)。環原子包含5至20個原子，較佳為5至14個原子，進一步較佳為5至12個，在進一步較佳為5至10個。非限定性實例包括
、、、、
和金剛烷。當被取代時，取代基可以為1至5個選自F、Cl、Br、I、烷基、環烷基、烷氧基、鹵代烷基、硫醇、羥基、硝基、巰基、胺基、氰基、異氰基、芳基、雜芳基、雜環基、橋環基、螺環基、並環基、羥基烷基、=O、羰基、醛、羧酸、甲酸酯、-(CH2
)m
-C(=O)-Ra
、-O-(CH2
)m
-C(=O)-Ra
、-(CH2
)m
-C(=O)-NRb
Rc
、-(CH2
)m
S(=O)n
Ra
、-(CH2
)m
-烯基-Ra
、ORd
或-(CH2
)m
-炔基-Ra
(其中m、n為0、1或2)、芳基硫基、硫代羰基、矽烷基或-NRb
Rc
等基團，其中Rb
與Rc
獨立選自包括H、羥基、胺基、羰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、磺醯基、三氟甲磺醯基，作為選擇，Rb
與Rc
可形成五或六員環烷基或雜環基。Ra
與Rd
各自獨立選自芳基、雜芳基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、羰基、酯基、橋環基、螺環基或並環基。本文中出現的橋環，其定義與本定義一致。
「雜單環」是指單環體系的「雜環基」或「雜環」，本文中出現的雜單環，其定義與本定義一致。
「雜並環」是指含有雜原子的「並環」。本文中出現的雜並環，其定義與本定義一致。
「雜螺環」是指含有雜原子的「螺環」。本文中出現的雜螺環，其定義與本定義一致。
「雜橋環」是指含有雜原子的「橋環」。本文中出現的雜橋環，其定義與本定義一致。
「雜芳基」或「雜芳環」是指取代或未取代的5至14員芳香環，且含有1至5個選自N、O或S(=O)n
雜原子或基團，較佳為5至10員雜芳香環，進一步較佳為5至6員。雜芳基的非限制性實施例包括但不限於吡啶基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡喃基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、咪唑基、呱啶基、嗎啉基、硫代嗎啉基、1,3-二噻烷基、苯並咪唑基、苯並咪唑、苯並吡啶、吡咯並吡啶等。所述雜芳基環可以稠合於芳基、雜環基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為雜芳基環，非限制性實施例包含
和
。當被取代時，取代基可以為1至5個選自F、Cl、Br、I、烷基、環烷基、烷氧基、鹵代烷基、硫醇、羥基、硝基、巰基、胺基、氰基、異氰基、芳基、雜芳基、雜環基、橋環基、螺環基、並環基、羥基烷基、=O、羰基、醛、羧酸、甲酸酯、-(CH2
)m
-C(=O)-Ra
、-O-(CH2
)m
-C(=O)-Ra
、-(CH2
)m
-C(=O)-NRb
Rc
、-(CH2
)m
S(=O)n
Ra
、-(CH2
)m
-烯基-Ra
、ORd
或-(CH2
)m
-炔基-Ra
(其中m、n為0、1或2)、芳基硫基、硫代羰基、矽烷基或-NRb
Rc
等基團，其中Rb
與Rc
獨立選自包括H、羥基、胺基、羰基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、磺醯基、三氟甲磺醯基，作為選擇，Rb
與Rc
可形成五或六員環烷基或雜環基。Ra
與Rd
各自獨立選自芳基、雜芳基、烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、羰基、酯基、橋環基、螺環基或並環基。本文中出現的雜芳基或雜芳環，其定義與本定義一致。
「任選」或「任選地」是指隨後所描述的事件或環境可以但不必須發生，該說明包括該事件或環境發生或不發生的場合。如：「任選被F取代的烷基」指烷基可以但不必須被F取代，說明包括烷基被F取代的情形和烷基不被F取代的情形。
「藥學上可接受的鹽」或者「其藥學上可接受的鹽」是指本發明化合物保持游離酸或者游離鹼的生物有效性和特性，且所述的游離酸通過與無毒的無機鹼或者有機鹼，所述的游離鹼通過與無毒的無機酸或者有機酸反應獲得的鹽。
「藥物組合物」是指一種或多種本發明所述化合物、其藥學上可接受的鹽或前藥和其它化學組分形成的混合物，其中，「其它化學組分」是指藥學上可接受的載體、賦形劑和/或一種或多種其它治療劑。
「載體」是指不會對生物體產生明顯刺激且不會消除所給予化合物的生物活性和特性的材料。
「賦形劑」是指加入到藥物組合物中以促進化合物給藥的惰性物質。非限制性實施例包括碳酸鈣、磷酸鈣、糖、澱粉、纖維素衍生物 (包括微晶纖維素)、明膠、植物油、聚乙二醇類、稀釋劑、成粒劑、潤滑劑、粘合劑和崩解劑。
「前藥」是指可經體內代謝轉化為具有生物活性的本發明化合物。本發明的前藥通過修飾本發明化合物中的胺基或者羧基來製備，該修飾可以通過常規的操作或者在體內被除去，而得到母體化合物。當本發明的前藥被施予哺乳動物個體時，前藥被割裂形成游離的胺基或者羧基。
「共晶」是指活性藥物成分(API)和共晶形成物(CCF)在氫鍵或其他非共價鍵的作用下結合而成的晶體，其中API和CCF的純態在室溫下均為固體，並且各組分間存在固定的化學計量比。共晶是一種多組分晶體，既包含兩種中性固體之間形成的二員共晶，也包含中性固體與鹽或溶劑化物形成的多員共晶。
「動物」是指包括哺乳動物，例如人、陪伴動物、動物園動物和家畜，較佳為人、馬或者犬。
「立體異構體」是指由分子中原子在空間上排列方式不同所產生的異構體，包括順反異構體、對映異構體和構象異構體。
「任選」或「任選地」或「選擇性的」或「選擇性地」是指隨後所述的事件或狀況可以但未必發生，該描述包括其中發生該事件或狀況的情況及其中未發生的情況。例如，「選擇性地被烷基取代的雜環基」是指該烷基可以但未必存在，該描述包括其中雜環基被烷基取代的情況，及其中雜環基未被烷基取代的情況。
「DC50」是指降解50%蛋白時的劑量。
以下結合實施例詳細說明本發明的技術方案，但本發明的保護範圍包括但是不限於此。
化合物的结構是通過核磁共振(NMR)或(和)質譜(MS)來確定的。 NMR位移(δ)以10-6
(ppm)的單位给出。NMR的測定是用(Bruker Avance III 400和Bruker Avance 300)核磁儀，測定溶劑為氘代二甲基亞碸 (DMSO-d6
)，氘代氯仿(CDCl3
)，氘代甲醇(CD3
OD)，内標為四甲基矽烷(TMS)；
MS的測定用(Agilent 6120B(ESI) 和Agilent 6120B(APCI))；
HPLC的測定使用Agilent 1260DAD高壓液相色譜儀 (Zorbax SB-C18 100 × 4.6 mm, 3.5 μM)；
薄層層析矽膠板使用烟台黄海HSGF254或青島GF254 矽膠板，薄層色譜法(TLC)使用的矽膠板採用的規格是0.15 mm - 0.20 mm，薄層層析分離纯化產品採用的規格是0.4 mm - 0.5 mm；
管柱層析一般使用烟台黄海矽膠200-300目矽膠為载體；
本發明的已知起始原料可以採用或按照本領域已知的方法來合成，或可購買於泰坦科技、安耐吉化學、上海德默、成都科龍化工、韶遠化學科技、百靈威科技等公司；
P13I：
（合成參考文獻：Y. Sun, X. Zhao, N. Ding, H. Gao, Y. Wu, Y. Yang, M. Zhao, J. Hwang, Y. Song, W. Liu, Y. Rao,Cell Res. 2018
,28
, 779-781.）；
Tf：三氟甲磺醯基；
Boc：第三丁氧基羰基；
Ts：對甲苯磺醯基；
Cbz：苄氧羰基；
Ms：甲基磺醯基；
TMS：三甲基矽基；DMSO：二甲基亞碸；DMF：N,N′-二甲基甲醯胺；DME：乙二醇二甲醚；DCM：二氯甲烷；DIPEA：N,N'-二異丙基乙胺；DCE：1,2-二氯乙烷；Pd2
dba3
：三二亞苄基丙酮二鈀；JohnPhos：(2-聯苯基)二第三丁基膦；THF：四氫呋喃；DIAD：偶氮二甲酸二異丙酯；CDI：N,N′-羰基二咪唑；MsCl：甲基磺醯氯；TFA：三氟乙酸。
實施例
1
：
5-[2-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮(化合物 1
)
5-[2-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione 
第一步：2-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-7-氮雜螺[3.5]壬-7-甲酸第三丁酯 (1b)
Tert-butyl 2-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]-7- azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
將3-(4-苯氧基苯基)-1-(呱啶-4-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (1a) (合成方法見J. Med. Chem. 2015 , 58,
9625-9638) (0.200 g，0.473 mmol) 溶解在5mL1,2-二氯乙烷中，加入2-氧代-7-氮雜螺[3.5]壬-7-甲酸第三丁酯 (0.100 g，0.418 mmol) 和冰醋酸 (0.0567 g，0.946 mmol)，室溫攪拌1h，再加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.177 g，0.836 mmol)，加完後室溫反應過夜。滴加飽和碳酸氫鈉溶液調節pH至9-10，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-9:1)，得到2-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-7-氮雜螺[3.5]壬-7-甲酸第三丁酯 (1b) (0.152 g，產率：60%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ 8.23 (s, 1H), 7.66 (d, 2H), 7.44 (t, 2H), 7.24 – 7.05 (m, 5H), 4.70 – 4.60 (m, 1H), 3.35 – 3.25 (m, 4H), 3.22 – 3.16 (m, 2H), 2.97 – 2.87 (m, 2H), 2.78 – 2.65 (m, 1H), 2.24 – 2.11 (m, 2H), 2.03 – 1.94 (m, 2H), 1.94 – 1.84 (m, 4H), 1.60 – 1.51 (m, 2H), 1.48 (t, 2H), 1.38 (s, 9H)。
LCMS m/z = 610.3 [M+1]+
。
第二步：1-[1-(7-氮雜螺[3.5]壬-2-基)-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (1c)
1-[1-(7-Azaspiro[3.5]nonan-2-yl)-4-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將2-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-7-氮雜螺[3.5]壬-7-甲酸第三丁酯 (1b) (0.150 g，0.246 mmol) 溶解在2mL二氯甲烷中，加入5mL 4 N的鹽酸乙酸乙酯溶液，室溫攪拌2h。反應液減壓濃縮後，殘留物加入20mL二氯甲烷，用飽和碳酸氫鈉溶液調節pH至9-10，分液，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得1-[1-(7-氮雜螺[3.5]壬-2-基)-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (1c) (0.090 g，產率：72%)。
LCMS m/z = 510.3 [M+1]+
。
第三步：5-[2-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物1)
5-[2-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
將1-[1-(7-氮雜螺[3.5]壬-2-基)-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (1c) (0.090 g，0.18 mmol) 溶解在2mL二甲亞碸中，加入2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (0.049 g，0.18 mmol) 和二異丙基乙基胺 (0.11 g，0.88 mmol)，加完後90℃反應2h。冷卻至室溫，慢慢滴加10mL水，過濾，濾餅用20mL二氯甲烷溶解，再用5mL飽和氯化鈉溶液洗滌，分液，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-9:1)，得到5-[2-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物1) (0.092 g，產率：68%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.61 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.68 – 7.60 (m, 3H), 7.39 (t, 2H), 7.27 (d, 1H), 7.20 – 7.06 (m, 3H), 7.09 (d, 2H), 7.04 (dd, 1H), 5.56 (br, 2H), 4.97 – 4.90 (m, 1H), 4.80 (s, 1H), 3.38 (dd, 4H), 3.06 (s, 2H), 2.95 – 2.66 (m, 5H), 2.44 (s, 2H), 2.12 (dd, 6H), 1.69 (d, 6H)。
LCMS m/z = 383.8 [M/2 +1]+
。
實施例
2
：
5-[4-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物 2
)
5-[4-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione 
第一步：4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (2a)
Tert-butyl 4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl] piperidine-1-carboxylate
將3-(4-苯氧基苯基)-1-(呱啶-4-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (1a) (合成方法見J. Med. Chem. 2015 , 58,
9625-9638) (0.500 g，1.29 mmol) 溶解在5mL1,2-二氯乙烷中，向其加入4-氧代呱啶-1-甲酸第三丁酯 (0.309 g，1.55 mmol) 和冰醋酸 (0.412 g，6.86 mmol)，加完後於65℃攪拌反應3h，再冷卻至室溫，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.548 g，2.59 mmol)，加完後室溫反應過夜。滴加飽和碳酸氫鈉溶液調節pH至9-10，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-19:1)，得到4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (2a) (0.310 g，產率：42%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.34 (s, 1H), 7.64 (d, 2H), 7.39 (t, 2H), 7.19 – 7.13 (m, 3H), 7.08 (d, 2H), 5.73 (br, 2H), 4.82 – 4.72 (m, 1H), 4.25 – 4.10 (m, 2H), 3.17 – 3.05 (m, 2H), 2.73 (t, 2H), 2.60 – 2.35 (m, 5H), 2.08 – 1.99 (m, 2H), 1.90 – 1.76 (m, 2H), 1.55 – 1.45 (m, 11H)。
第二步：3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-(4-呱啶基)-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (2b)
3-(4-phenoxyphenyl)-1-[1-(4-piperidyl)-4-piperidyl]pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (2a) (0.310 g，0.544 mmol) 溶解在2mL二氯甲烷中，加入5mL 4 N鹽酸乙酸乙酯溶液，室溫攪拌2h。反應液減壓濃縮後殘留物加入20mL二氯甲烷，用飽和碳酸氫鈉溶液調節pH至9-10，分液，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-(4-呱啶基)-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (2b) (0.256 g，產率：＞99%)。
LCMS m/z = 235.8 [M/2+1]+
。
第三步：4-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (2c)
Tert-butyl 4-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1- piperidyl]-1-piperidyl]piperidine-1-carboxylate
將3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-(4-呱啶基)-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (2b) (0.256 g，0.545 mmol) 溶解在3mL1,2-二氯乙烷中，加入4-氧代呱啶-1-甲酸第三丁酯 (0.130 g，0.654 mmol) 和冰醋酸 (0.174 g，2.89 mmol)，加完後於65℃攪拌反應3h，再冷卻至室溫，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.231 g，1.09 mmol)，加完後室溫反應過夜。滴加飽和碳酸氫鈉溶液調節pH至9-10，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-19:1)，得到4-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (2c) (0.230 g，產率：65%)。
第四步：3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-(4-呱啶基)-4-呱啶基]-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (2d)
3-(4-phenoxyphenyl)-1-[1-[1-(4-piperidyl)-4-piperidyl]-4-piperidyl]pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將4-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (2c) (0.230 g，0.352 mmol) 溶解在2mL二氯甲烷中，加入5mL 4 N鹽酸乙酸乙酯溶液，室溫攪拌2h。反應液減壓濃縮後殘留物加入20mL二氯甲烷，用飽和碳酸氫鈉溶液調節pH至9-10，分液，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-(4-呱啶基)-4-呱啶基]-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (2d) (0.195 g，產率：＞99%)。
LCMS m/z = 277.3 [M/2 +1]+
。
第五步：5-[4-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物2)
5-[4-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
將3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-(4-呱啶基)-4-呱啶基]-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (2d) (0.165 g，0.299 mmol) 溶解在2mL二甲亞碸中，加入2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (0.0907 g，0.328 mmol) 和二異丙基乙基胺 (0.193 g，1.49 mmol)，加完後於90℃攪拌反應2h。冷卻至室溫，慢慢滴加10mL水，過濾，濾餅用20mL二氯甲烷溶解，再用5mL飽和氯化鈉溶液洗滌，分液，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-92:8)，得到5-[4-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物2) (0.157 g，產率：65%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ 11.06 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.67 – 7.64 (m, 3H), 7.46 – 7.40 (m, 2H), 7.31 (s, 1H), 7.25 –7.23 (m, 1H), 7.22 – 7.10 (m, 5H), 5.06 (dd, 1H), 4.67 – 4.57 (m, 1H), 4.10 – 4.02 (m, 2H), 3.06 – 2.82 (m, 7H), 2.62 – 2.47 (m, 3H), 2.35 – 2.07 (m, 7H), 2.06 – 1.97 (m, 1H), 1.94 – 1.86 (m, 2H), 1.85 – 1.77 (m, 2H), 1.77 – 1.70 (m, 2H), 1.54 – 1.36 (m, 4H)。
LCMS m/z = 405.3 [M/2 +1]+
。
實施例
3
：
5-[5-[5-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]嘧啶-2-基]-1,3,3a,4,6,6a-六氫吡咯並[3,4-c]吡咯-2-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮四三氟乙酸鹽 (化合物 3
)
5-[5-[5-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]pyrimidin-2-yl]-1,3,3a,4,6,6a-hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrol-2-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione tetratrifluoroacetate
第一步：2-(5-溴嘧啶-2-基)-1,3,3a,4,6,6a-六氫吡咯並[3,4-c]吡咯-5-甲酸第三丁酯 (3b)
Tert-butyl 2-(5-bromopyrimidin-2-yl)-1,3,3a,4,6,6a-hexahydropyrrolo[3,4-c] pyrrole-5-carboxylate
將5-溴-2-氯-嘧啶 (1.0 g，5.17 mmol) 溶解在10mL無水乙醇中，加入2-Boc-六氫吡咯並[3,4-c]吡咯 (1.32 g，6.20 mmol)，再加入三乙胺 (1.31 g，12.9 mmol)，加完後於60℃攪拌反應2h。冷卻至室溫，加入20mL水和50mL乙酸乙酯，分液，有機層用20mL飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (石油醚/乙酸乙酯 (v/v) = 9:1-4:1)，得到2-(5-溴嘧啶-2-基)-1,3,3a,4,6,6a-六氫吡咯並[3,4-c]吡咯-5-甲酸第三丁酯 (3b) (1.80 g，產率：94%)。
第二步：2-[5-(4-羥基-1-呱啶基)嘧啶-2-基]-1,3,3a,4,6,6a-六氫吡咯並[3,4-c]吡咯-5-甲酸第三丁酯 (3c)
Tert-butyl 2-[5-(4-hydroxy-1-piperidyl)pyrimidin-2-yl]-1,3,3a,4,6,6a-hexahydropyrrolo [3,4-c]pyrrole-5-carboxylate
將2-(5-溴嘧啶-2-基)-1,3,3a,4,6,6a-六氫吡咯並[3,4-c]吡咯-5-甲酸第三丁酯 (3b) (1.0 g，2.71 mmol) 溶解在10mL乾燥甲苯中，依次加入4-羥基呱啶 (0.548 g，5.42 mmol)、JohnPhos （2-(二第三丁基膦)聯苯）(0.0808 g，0.271mmol，CAS：224311-51-7) 和第三丁醇鈉 (0.520 g，5.42 mmol)，置換氮氣三次，再加入Pd2
(dba)3
(0.060 g，0.135 mmol，CAS：51364-51-3)，加入後於100℃攪拌反應2h。冷卻至室溫，加入20mL二氯甲烷和20mL水，分液，有機層用10mL飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (石油醚/乙酸乙酯 (v/v) = 4:1-0:100)，得到2-[5-(4-羥基-1-呱啶基)嘧啶-2-基]-1,3,3a,4,6,6a-六氫吡咯並[3,4-c]吡咯-5-甲酸第三丁酯 (3c) (0.300 g，產率：28%)。
LCMS m/z = 390.3 [M+1]+
。
第三步：2-[5-[4-(對甲苯磺醯氧基)-1-呱啶基]嘧啶-2-基]-1,3,3a,4,6,6a-六氫吡咯並[3,4-c]吡咯-5-甲酸第三丁酯 (3d)
Tert-butyl 2-[5-[4-(p-tosyloxy)-1-piperidyl]pyrimidin-2-yl]-1,3,3a,4,6,6a-hexahydropyrrolo [3,4-c]pyrrole-5-carboxylate
將2-[5-(4-羥基-1-呱啶基)嘧啶-2-基]-1,3,3a,4,6,6a-六氫吡咯並[3,4-c]吡咯-5-甲酸第三丁酯 (3c) (0.300 g，0.770 mmol) 溶解在10mL二氯甲烷中，加入4-二甲胺基吡啶 (0.113 g，0.924 mmol)，再加入對甲苯磺醯氯 (0.176 g，0.924 mmol)，加完後室溫反應2h。加入20mL飽和碳酸氫鈉溶液和20mL二氯甲烷，分液，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (石油醚/乙酸乙酯 (v/v) = 2:3-1:4)，得到2-[5-[4-(對甲苯磺醯氧基)-1-呱啶基]嘧啶-2-基]-1,3,3a,4,6,6a-六氫吡咯並[3,4-c]吡咯-5-甲酸第三丁酯 (3d) (0.420 g，產率：＞99%）。
LCMS m/z = 544.3 [M+1]+
。
第四步：2-[5-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]嘧啶-2-基]-1,3,3a,4,6,6a-六氫吡咯並[3,4-c]吡咯-5-甲酸第三丁酯 (3e)
Tert-butyl 2-[5-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1- piperidyl]pyrimidin-2-yl]-1,3,3a,4,6,6a-hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrole-5-carboxylate
將2-[5-[4-(對甲苯磺醯氧基)-1-呱啶基]嘧啶-2-基]-1,3,3a,4,6,6a-六氫吡咯並[3,4-c]吡咯-5-甲酸第三丁酯 (3d) (0.400 g，0.736 mmol) 溶解在5mLN,N′
-二甲基甲醯胺中，加入3-(4-苯氧基苯基)-1-(呱啶-4-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (1a) (合成方法見J. Med. Chem. 2015 , 58,
9625-9638) (0.268 g，0.883 mmol)，再加入碳酸銫 (0.479 g，1.47 mmol)，加完後於80℃攪拌反應2h。冷卻至室溫，加入10mL水和30mL乙酸乙酯，分液，有機層用10mL飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (石油醚/乙酸乙酯 (v/v) = 2:3-1:4) 至 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 25:2)，得到2-[5-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]嘧啶-2-基]-1,3,3a,4,6,6a-六氫吡咯並[3,4-c]吡咯-5-甲酸第三丁酯 (3e) (0.200 g，產率：40%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.37 (s, 1H), 8.19 (s, 2H), 7.70 – 7.62 (m, 2H), 7.44 – 7.34 (m, 2H), 7.21 – 7.13 (m, 3H), 7.13 – 7.05 (m, 2H), 5.80 (br, 2H), 4.94 – 4.85 (m, 1H), 3.85 – 3.75 (m, 2H), 3.72 – 3.58 (m, 2H), 3.54-3.46 (m, 4H), 3.38 – 3.24 (m, 2H), 3.02 – 2.90 (m, 4H), 2.64 – 2.52 (m, 2H), 2.16 – 2.12 (m, 2H), 1.45 (s, 9H)。
LCMS m/z = 675.3 [M+1]+
。
第五步：1-[1-[2-(2,3,3a,4,6,6a-六氫-1H-吡咯並[3,4-c]吡咯-5-基)嘧啶-5-基]-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (3f)
1-[1-[2-(2,3,3a,4,6,6a-hexahydro-1H-pyrrolo[3,4-c]pyrrol-5-yl)pyrimidin-5-yl]-4-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將2-[5-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]嘧啶-2-基]-1,3,3a,4,6,6a-六氫吡咯並[3,4-c]吡咯-5-甲酸第三丁酯 (3e) (0.200 g，0.296 mmol) 溶解在2mL二氯甲烷中，加入10mL 4 N鹽酸乙酸乙酯溶液，室溫攪拌1h。反應液濃縮後向粗品加入30mL二氯甲烷，用飽和碳酸氫鈉溶液調節pH至9-10，分液，水層再用20mL二氯甲烷萃取一次，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得1-[1-[2-(2,3,3a,4,6,6a-六氫-1H-吡咯並[3,4-c]吡咯-5-基)嘧啶-5-基]-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (3f) (0.170 g，產率：＞99%)。
LCMS m/z = 288.2 [M/2 +1]+
。
第六步：5-[5-[5-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]嘧啶-2-基]-1,3,3a,4,6,6a-六氫吡咯並[3,4-c]吡咯-2-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 四三氟乙酸鹽 (化合物3)
5-[5-[5-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]pyrimidin-2-yl]-1,3,3a,4,6,6a-hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrol-2-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione tetratrifluoroacetate
將1-[1-[2-(2,3,3a,4,6,6a-六氫-1H-吡咯並[3,4-c]吡咯-5-基)嘧啶-5-基]-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (3f) (0.170 g，0.296 mmol) 溶解在2mL二甲亞碸中，加入2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (0.090 g，0.325 mmol) 和二異丙基乙基胺 (0.191 g，1.48 mmol)，加完後於90℃攪拌反應2h。冷卻至室溫，慢慢滴加10mL水，過濾，濾餅用20mL二氯甲烷溶解，再用5mL飽和氯化鈉溶液洗滌，分液，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品過Pre-HPLC (儀器及製備柱：採用Glison GX-281製備液相，製備柱型號是Sunfire C18，5 μm，內徑×長度 = 30 mm×150 mm)。製備方法：粗品用甲醇和二甲亞碸溶解，並用0.45 μm濾膜過濾，製備成樣品液。流動相體系：乙腈/水 (含0.1% TFA)。梯度沖提方法：乙腈由5%梯度沖提60% (沖提時間15 min)，凍乾得到5-[5-[5-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]嘧啶-2-基]-1,3,3a,4,6,6a-六氫吡咯並[3,4-c]吡咯-2-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮四三氟乙酸鹽 (化合物3) (0.082 g，產率：22%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.39 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.19 (s, 2H), 7.69 – 7.59 (m, 3H), 7.40 (t, 2H), 7.20 –7.12 (m, 3H), 7.11 – 7.06 (m, 2H), 6.96 (d, 1H), 6.70 (dd, 1H), 6.30 (br, 2H), 4.95 – 4.88 (m, 2H), 3.94 – 3.86 (m, 2H), 3.86 – 3.70 (m, 2H), 3.60 (dd, 2H), 3.57-3.48 (m, 2H), 3.41 (dd, 2H), 3.27-3.12 (m, 2H), 3.04 – 2.65 (m, 6H), 2.64-2.51 (m, 2H), 2.19-2.10 (m, 2H)。
LCMS m/z = 416.3 [M/2 +1]+
。
實施例
4
：
5-[2-[5-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物 4
)
5-[2-[5-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]pyrimidin-2-yl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione 
第一步：2-(5-溴嘧啶-2-基)-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-甲酸第三丁酯 (4a)
Tert-butyl 2-(5-bromopyrimidin-2-yl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
將5-溴-2-氯-嘧啶 (3a) (1.0 g，5.17 mmol) 溶解在10mL無水乙醇中，加入2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-甲酸第三丁酯鹽酸鹽 (1.60 g，6.20 mmol)，再加入三乙胺 (1.31 g，12.9 mmol)，加完後於60℃攪拌反應2h。冷卻至室溫，加入20mL水和50mL乙酸乙酯，分液，有機層用30mL飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (石油醚/乙酸乙酯 (v/v) = 4:1)，得到2-(5-溴嘧啶-2-基)-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-甲酸第三丁酯 (4a) (1.60 g，產率：81%)。
LCMS m/z = 383.1 [M+1]+
。
第二步：2-[5-(4-羥基-1-呱啶基)嘧啶-2-基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-甲酸第三丁酯 (4b)
Tert-butyl 2-[5-(4-hydroxy-1-piperidyl)pyrimidin-2-yl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane- 7-carboxylate
將2-(5-溴嘧啶-2-基)-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-甲酸第三丁酯 (4a) (1.00 g，2.61 mmol) 溶解在10mL乾燥甲苯中，加入4-羥基呱啶 (0.264 g，2.61 mmol)、JohnPhos (0.0389 g，0.130 mmol)和第三丁醇鈉 (0.251 g，2.61 mmol)，置換氮氣三次，再加入Pd2
(dba)3
(0.060 g，0.13 mmol)，加入後於100℃攪拌反應2h。冷卻至室溫，加入20mL二氯甲烷和20mL水，分液，有機層用10mL飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (石油醚/乙酸乙酯 (v/v) = 4:1-0:100)，得到2-[5-(4-羥基-1-呱啶基)嘧啶-2-基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-甲酸第三丁酯 (4b) (0.530 g，產率：50%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ 8.14 (s, 2H), 4.64 (s, 1H), 3.68 (s, 4H), 3.61 – 3.53 (m, 1H), 3.31 –3.23 (m, 6H), 2.76 – 2.65 (m, 2H), 1.87 – 1.75 (m, 2H), 1.71 – 1.59 (m, 4H), 1.58 – 1.44 (m, 2H), 1.39 (s, 9H)。
LCMS m/z = 404.3 [M+1]+
。
第三步：2-[5-[4-(對甲苯磺醯氧基)-1-呱啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-甲酸第三丁酯 (4c)
Tert-butyl 2-[5-[4-(p-tosyloxy)-1-piperidyl]pyrimidin-2-yl]-2,7-diazaspiro[3.5] nonane-7-carboxylate
將2-[5-(4-羥基-1-呱啶基)嘧啶-2-基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-甲酸第三丁酯 (4b) (0.530 g，1.31 mmol) 溶解在10mL二氯甲烷中，加入4-二甲胺基吡啶 (0.321 g，2.63 mmol)，再加入對甲苯磺醯氯 (0.501 g，2.63 mmol)，加完後室溫反應2h。加入20mL飽和碳酸氫鈉溶液和20mL二氯甲烷，分液，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (石油醚/乙酸乙酯 (v/v) = 2:3-1:4)，得到2-[5-[4-(對甲苯磺醯氧基)-1-呱啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-甲酸第三丁酯 (4c) (0.550 g，產率：75%)。
LCMS m/z = 558.3 [M+1]+
。
第四步：2-[5-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-甲酸第三丁酯 (4d)
Tert-butyl 2-[5-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl] pyrimidin-2-yl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
將2-[5-[4-(對甲苯磺醯氧基)-1-呱啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-甲酸第三丁酯 (4c) (0.500 g，0.897 mmol) 溶解在5mLN,N′
-二甲基甲醯胺中，加入3-(4-苯氧基苯基)-1-(呱啶-4-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (1a) (合成方法見J. Med. Chem. 2015 , 58,
9625-9638) (0.326 g，1.08 mmol)，再加入碳酸銫 (0.584 g，1.79 mmol)，加完後於80℃攪拌反應2h。冷卻至室溫，加入10mL水和30mL乙酸乙酯，分液，有機層用10mL飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (石油醚/乙酸乙酯 (v/v) = 2:3-1:4) 至 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 25:2)，得到2-[5-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-甲酸第三丁酯 (4d) (0.230 g，產率：37%)。
LCMS m/z = 345.3 [M/2 +1]+
。
第五步：1-[1-[2-(2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-5-基]-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (4e)
1-[1-[2-(2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl)pyrimidin-5-yl]-4-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將2-[5-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-甲酸第三丁酯 (4d) (0.230 g，0.334 mmol) 溶解在2mL二氯甲烷中，加入10mL 4 N鹽酸乙酸乙酯溶液，室溫攪拌1h。反應液濃縮後向粗品加入30mL二氯甲烷，用飽和碳酸氫鈉溶液調節pH至9-10，分液，水層再用20mL二氯甲烷萃取一次，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得1-[1-[2-(2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-5-基]-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (4e) (0.197 g，產率：＞99%)。
LCMS m/z = 589.3 [M+1]+
。
第六步：5-[2-[5-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物4)
5-[2-[5-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]pyrimidin-2-yl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
將1-[1-[2-(2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-5-基]-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (4e) (0.170 g，0.289 mmol) 溶解在2mL二甲亞碸中，加入2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (0.0877 g，0.318 mmol) 和二異丙基乙基胺 (0.187 g，1.44 mmol)，加完後於90℃攪拌反應2h。冷卻至室溫，慢慢滴加10mL水，過濾，濾餅用20mL二氯甲烷溶解，再用5mL飽和氯化鈉溶液洗滌，分液，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-92:8)，得到5-[2-[5-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物4) (0.030 g，產率：11%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ 11.06 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.25 (s, 2H), 7.68 – 7.65 (m, 3H), 7.44 (t, 2H), 7.35 (s, 1H), 7.28 (d, 1H), 7.22 – 7.09 (m, 5H), 5.06 (dd, 1H), 4.90 – 4.80 (m, 1H), 3.77 (s, 4H), 3.63 – 3.58 (m, 2H), 3.55 – 3.47 (m, 4H), 2.95 – 2.85 (m, 3H), 2.63 – 2.51 (m, 2H), 2.40 – 2.27 (m, 2H), 2.05 – 1.97 (m, 3H), 1.83 (s, 4H)。
LCMS m/z = 423.3 [M/2 +1]+
。
實施例
5
：
5-[7-[5-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物 5
)
5-[7-[5-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]pyrimidin-2-yl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione 
第一步：7-(5-溴嘧啶-2-基)-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-甲酸第三丁酯 (5a)
Tert-butyl 7-(5-bromopyrimidin-2-yl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate
將5-溴-2-氯-嘧啶 (3a) (1.0 g，5.17 mmol) 溶解在10mL無水乙醇中，加入2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-甲酸第三丁酯鹽酸鹽 (1.60 g，6.20 mmol)，再加入三乙胺 (1.31 g，12.9 mmol)，加完後於60℃攪拌反應2h。冷卻至室溫，加入20mL水和50mL乙酸乙酯，分液，有機層用20mL飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (石油醚/乙酸乙酯 (v/v) = 4:1)，得到7-(5-溴嘧啶-2-基)-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-甲酸第三丁酯 (5a) (1.60 g，產率：81%)。
第二步：7-[5-(4-羥基-1-呱啶基)嘧啶-2-基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-甲酸第三丁酯 (5b)
Tert-butyl 7-[5-(4-hydroxy-1-piperidyl)pyrimidin-2-yl]-2,7-diazaspiro[3.5] nonane-2-carboxylate
將7-(5-溴嘧啶-2-基)-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-甲酸第三丁酯 (5a) (0.500 g，1.30 mmol) 溶解在10mL乾燥甲苯中，加入4-羥基呱啶 (0.264 g，2.61 mmol)、JohnPhos (0.0389 g，0.130 mmol) 和第三丁醇鈉 (0.251 g，2.61 mmol)，置換氮氣三次，再加入Pd2
(dba)3
(0.060 g，0.065 mmol)，加入後於100℃攪拌反應2h。冷卻至室溫，加入20mL二氯甲烷和20mL水，分液，有機層用10mL飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (石油醚/乙酸乙酯 (v/v) = 4:1-0:100)，得到7-[5-(4-羥基-1-呱啶基)嘧啶-2-基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-甲酸第三丁酯 (5b) (0.200 g，產率：38%)。
LCMS m/z = 404.3 [M+1]+
。
第三步：7-[5-[4-(對甲苯磺醯氧基)-1-呱啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-甲酸第三丁酯 (5c)
Tert-butyl 7-[5-[4-(p-tosyloxy)-1-piperidyl]pyrimidin-2-yl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane- 2-carboxylate
將7-[5-(4-羥基-1-呱啶基)嘧啶-2-基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-甲酸第三丁酯 (5b) (0.380 g，0.942 mmol) 溶解在10mL二氯甲烷中，加入4-二甲胺基吡啶 (0.230 g，1.88 mmol)，再加入對甲苯磺醯氯 (0.359 g，1.88 mmol)，加完後室溫反應2h。加入20mL飽和碳酸氫鈉溶液和20mL二氯甲烷，分液，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (石油醚/乙酸乙酯 (v/v) = 2:3-1:4)，得到7-[5-[4-(對甲苯磺醯氧基)-1-呱啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-甲酸第三丁酯 (5c) (0.440 g，產率：84%)。
LCMS m/z = 558.3 [M+1]+
。
第四步：7-[5-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-甲酸第三丁酯 (5d)
Tert-butyl 7-[5-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl] pyrimidin-2-yl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate
將7-[5-[4-(對甲苯磺醯氧基)-1-呱啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-甲酸第三丁酯 (5c) (0.440 g，0.789 mmol) 溶解在5mLN,N′
-二甲基甲醯胺中，加入3-(4-苯氧基苯基)-1-(呱啶-4-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (1a) (合成方法見J. Med. Chem. 2015 , 58,
9625-9638) (0.287 g，0.947 mmol)，再加入碳酸銫 (0.514 g，1.58 mmol)，加完後於80℃攪拌反應2h。冷卻至室溫，加入10mL水和30mL乙酸乙酯，分液，有機層用10mL飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (石油醚/乙酸乙酯 (v/v) = 2:3-1:4) 至 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 25:2)，得到7-[5-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-甲酸第三丁酯 (5d) (0.230 g，產率：42%)。
LCMS m/z = 689.3 [M+1]+
。
第五步：1-[1-[2-(2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-基)嘧啶-5-基]-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (5e)
1-[1-[2-(2,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl)pyrimidin-5-yl]-4-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將7-[5-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-甲酸第三丁酯 (5d) (0.230 g，0.334 mmol) 溶解在2mL二氯甲烷中，加入10mL4 N鹽酸乙酸乙酯溶液，室溫攪拌1h。反應液濃縮後向粗品加入30mL二氯甲烷，用飽和碳酸氫鈉溶液調節pH至9-10，分液，水層再用20mL二氯甲烷萃取一次，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得1-[1-[2-(2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-基)嘧啶-5-基]-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (5e) (0.197 g，產率：＞99%)。
LCMS m/z = 589.3 [M+1]+
。
第六步：5-[7-[5-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物5)
5-[7-[5-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]pyrimidin-2-yl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
將1-[1-[2-(2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-基)嘧啶-5-基]-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (5e) (0.170 g，0.289 mmol) 溶解在2mL二甲亞碸中，加入2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (0.0877 g，0.318 mmol)、二異丙基乙基胺 (0.187 g，1.44 mmol)，加完後於90℃攪拌反應2h。冷卻至室溫，慢慢滴加10mL水，過濾，濾餅用20mL二氯甲烷溶解，再用5mL飽和氯化鈉溶液洗滌，分液，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-92:8), 得到5-[7-[5-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物5) (0.040 g，產率：16%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 9.19 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.18 (s, 2H), 7.65 (d, 3H), 7.39 (t, 2H), 7.22-7.12 (m, 3H), 7.08 (d, 2H), 6.81 (s, 1H), 6.54 (d, 1H), 5.93 (br, 2H), 5.00 – 4.84 (m, 2H), 3.80 (d, 8H), 3.55 (d, 2H), 3.04–2.66 (m, 5H), 2.66–2.50 (m, 2H), 2.20–2.05 (m, 3H), 1.89 (s, 4H)。
LCMS m/z = 423.3 [M/2 +1]+
。
實施例
6
：
5-(3-(4-((4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)甲基)呱啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮三三氟乙酸鹽 (化合物 6
)
5-(3-(4-((4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione tritrifluoroacetate
第一步：4-((4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)甲基)呱啶-1-甲酸第三丁酯 (6a)
Tert-butyl 4-((4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl) piperidin-1-yl)methyl)piperidine-1-carboxylate
將3-(4-苯氧基苯基)-1-(呱啶-4-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (1a) (合成方法見J. Med. Chem. 2015 , 58,
9625-9638) (0.25 g, 0.59 mmol) 溶解在20mL二氯甲烷中，依次加入冰醋酸 (0.052 g，0.89 mmol) 和4-甲醯基呱啶-1-甲酸第三丁酯 (0.152 g, 0.71 mmol)，氮氣氛圍下攪拌1h，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.627 g, 2.96 mmol)，室溫攪拌過夜。加入20mL飽和碳酸氫鈉溶液淬滅反應，攪拌，靜置分層，水相用二氯甲烷萃取 (15 mL x 2)，合併有機相，用30mL飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:1-25:1)，得4-((4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)甲基)呱啶-1-甲酸第三丁酯 (6a) (0.284 g，產率：82%)。
第二步：3-(4-苯氧基苯基)-1-(1-(呱啶-4-基甲基)呱啶-4-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (6b)
3-(4-Phenoxyphenyl)-1-(1-(piperidin-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將4-((4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)甲基)呱啶-1-甲酸第三丁酯 (6a) (0.284 g, 0.487 mmol) 用2mL甲醇溶解，滴加10mL飽和鹽酸乙酸乙酯溶液，室溫反應過夜。減壓濃縮得粗品，粗品用飽和碳酸氫鈉溶液調pH至8-9，用二氯甲烷萃取 (20 mL x 3)，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得3-(4-苯氧基苯基)-1-(1-(呱啶-4-基甲基)呱啶-4-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (6b) (0.22 g，產率：94%)。
第三步：3-(4-((4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)甲基)呱啶-1-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (6c)
Tert-butyl 3-(4-((4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl) piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)azetidine-1-carboxylate
將3-(4-苯氧基苯基)-1-(1-(呱啶-4-基甲基)呱啶-4-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (6b) (0.22 g, 0.455 mmol) 溶解在20mL1,2-二氯乙烷中，依次加入冰醋酸 (0.055 g , 0.910 mmol) 和3-氧代氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (0.094 g, 0.546 mmol)，氮氣氛圍下攪拌1h，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.578 g, 2.73 mmol)，室溫攪拌過夜。加入20mL飽和碳酸氫鈉溶液淬滅反應，攪拌，靜置分層，水相用二氯甲烷萃取 (15 mL x 2)，合併有機相，用30mL飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇(v/v) = 100:1-25:1)，得3-(4-((4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)甲基)呱啶-1-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (6c) (0.25 g，產率：86%)。
第四步：1-(1-((1-(氮雜環丁-3-基)呱啶-4-基)甲基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (6d)
1-(1-((1-(azetidin-3-yl)piperidin-4-yl)methyl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將3-(4-((4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)甲基)呱啶-1-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (6c) (0.25 g, 0.391 mmol) 用2mL甲醇溶解，滴加10mL飽和鹽酸乙酸乙酯溶液，室溫反應過夜。減壓濃縮得粗品，粗品用飽和碳酸氫鈉溶液調pH至8-9，二氯甲烷萃取 (20 mL x 3)，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得1-(1-((1-(氮雜環丁-3-基)呱啶-4-基)甲基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (6d) (0.137 g，產率：65%)。
第五步：5-(3-(4-((4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)甲基)呱啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮三三氟乙酸鹽 (化合物6)
5-(3-(4-((4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)piperidin-1-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione tritrifluoroacetate
將1-(1-((1-(氮雜環丁-3-基)呱啶-4-基)甲基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (6d) (0.137 g, 0.254 mmol) 溶解於10mL二甲亞碸中，依次加入N,Nˊ
-二異丙基乙胺 (0.330 g, 2.54 mmol) 和2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (0.1 g, 0.331 mmol)，氮氣氛圍下加熱至90℃反應6h。向反應液中加入10mL水析出固體，抽濾，濾液用乙酸乙酯萃取 (40 mL x 2)，合併有機相，用50mL飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:1-20:1)，得0.127 g粗品，粗品過Pre-HPLC (儀器及製備柱：採用Glison GX-281製備液相，製備柱型號是Sunfire C18，5 μm，內徑×長度 = 30 mm×150 mm)。製備方法：粗品用甲醇和二甲亞碸溶解，並用0.45 μm濾膜過濾，製備成樣品液。流動相體系：乙腈/水 (含0.1% TFA)。梯度沖提方法：乙腈由5%梯度沖提60% (沖提時間15 min)，凍乾得到5-(3-(4-((4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)甲基)呱啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮三三氟乙酸鹽 (化合物6) (78 mg，產率：27%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ 11.07 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.77–7.62 (m, 3H), 7.50–7.41 (m, 2H), 7.24-7.10 (m, 5H), 6.90 (d, 1H), 6.76 (dd, 1H), 5.08 (dd, 2H), 4.35 (d, 6H), 4.27 (d, 6H), 3.73 (d, 2H), 3.62-3.49 (m, 2H), 2.97–2.80 (m, 3H), 2.57 (dd, 3H), 2.26–1.99 (m, 6H)。
LCMS m/z = 398.3 [M/2 +1]+
。
實施例
7
：
5-(2-(5-((4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)甲基)嘧啶-2-基)-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮三三氟乙酸鹽 (化合物 7
)
5-(2-(5-((4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)pyrimidin-2-yl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione tritrifluoroacetate
第一步：7-[2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)-1,3-二氧代-異吲哚啉-5-基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-甲酸第三丁酯 (7a)
Tert-butyl 7-[2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)-1,3-dioxo-isoindolin-5-yl]-2,7-diazaspiro[3.5] nonane-2-carboxylate
將2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (1.0 g, 3.62 mmol) 溶於20mL DMSO中，室溫下加入2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-甲酸第三丁酯 (0.82 g, 3.62 mmol) 和DIPEA (N,N-二異丙基乙胺) (2.3 g, 3.62 mmol)，於90℃攪拌反應2h。向反應液中加入50mL水，水相用乙酸乙酯萃取 (50 mL × 3)，合併有機相，有機相用水洗滌 (20 mL × 2)，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:1-20:1)，得到7-[2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)-1,3-二氧代-異吲哚啉-5-基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-甲酸第三丁酯 (7a) (1.0 g，產率：57%)。
LCMS m/z = 483.3 [M+1]+
。
第二步：5-(2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-基)-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮鹽酸鹽(7b)
5-(2,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl)-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione hydrochloride
將7-[2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)-1,3-二氧代-異吲哚啉-5-基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-甲酸第三丁酯 (7a) (2.0 g, 4.14 mmol) 溶於20mL的4 N鹽酸乙酸乙酯溶液中並加入5mL的甲醇，室溫反應2h。將反應液直接濃縮，得到5-(2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-基)-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮鹽酸鹽 (7b) (1.5 g，產率：86%)。
LCMS m/z = 383.2 [M+1]+
。
第三步：1-[1-[(2-氯嘧啶-5-基)甲基]-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (7c)
1-[1-[(2-chloropyrimidin-5-yl)methyl]-4-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將3-(4-苯氧基苯基)-1-(呱啶-4-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (1a) (合成方法見J. Med. Chem. 2015 , 58,
9625-9638) (2.97 g, 7.0 mmol) 溶於20mL1,2-二氯乙烷中，室溫下加入2-氯嘧啶-5-甲醛 (1.0 g, 7.0 mmol)，再加入1mL醋酸，室溫反應1h。向反應液中加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (4.5 g, 21.0 mmol)，室溫反應過夜。將反應液倒入50mL飽和碳酸氫鈉溶液，水相用乙酸乙酯萃取 (50 mL × 3)，合併有機相，有機相用水洗滌 (50 mL × 2)，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，得到1-[1-[(2-氯嘧啶-5-基)甲基]-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (7c) (0.4 g，產率：11.1%)。
LCMS m/z = 513.6 [M+1]+
。
第四步：5-[2-[5-[[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]甲基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮三三氟乙酸鹽 (化合物7)
5-[2-[5-[[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]methyl]pyrimidin-2-yl]-2,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione tritrifluoroacetate
將1-[1-[(2-氯嘧啶-5-基)甲基]-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (7c) (0.2 g, 0.39 mmol) 溶於2mL DMF中，室溫下加入5-(2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-基)-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮鹽酸鹽 (7b) (0.32 g, 0.78 mmol) 和三乙胺 (0.15 g, 1.55 mmol)，升溫至80℃反應5h。將反應液倒入50mL水中，水相用二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 10:1 萃取 (50 mL × 3)，合併有機相，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗品過Pre-HPLC (儀器及製備柱：採用Glison GX-281製備液相，製備柱型號是Sunfire C18，5 μm，內徑×長度 = 30 mm×150 mm)。製備方法：粗品用甲醇和二甲亞碸溶解，並用0.45 μm濾膜過濾，製備成樣品液。流動相體系：乙腈/水 (含0.1% TFA)。梯度沖提方法：乙腈由5%梯度沖提60% (沖提時間15 min)，凍乾得到5-[2-[5-[[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]甲基]嘧啶-2-基]-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮三三氟乙酸鹽 (化合物7) (0.08 g，產率：20%)。
1
H NMR (400 MHz, CD3
OD) δ 8.48 (s, 2H), 8.42 (s, 1H), 7.65 (t, 3H), 7.45–7.37 (m, 2H), 7.33 (d, 1H), 7.27–7.13 (m, 4H), 7.13–7.05 (m, 2H), 5.31-5.17 (m, 1H), 5.05 (dd, 1H), 4.31 (s,2H), 3.96 (s, 4H), 3.73 (d, 2H), 3.54-3.43 (m, 4H), 3.43–3.31 (m, 2H), 2.90–2.54 (m, 5H), 2.41 (s, 2H), 2.16 – 2.02 (m, 1H), 1.99-1.88 (m, 4H)。
LCMS m/z = 859.3 [M+1]+
。
實施例
8
：
5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮三三氟乙酸鹽 (化合物 8
)
5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione tritrifluoroacetate
第一步：3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (8a)
Tert-butyl 3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)- [1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidine-1-carboxylate
將3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-(4-呱啶基)-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (2b) (0.256 g, 0.545 mmol) 溶解在20mL1,2-二氯乙烷中，依次加入冰醋酸 (0.049 g , 0.818 mmol) 和3-氧代氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (0.131 g, 0.763 mmol)，氮氣氛圍下加熱至65℃攪拌反應3h，然後降溫至室溫後加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.693 g, 3.27 mmol)，室溫攪拌過夜。加入20mL飽和碳酸氫鈉溶液淬滅反應，攪拌，靜置分層，水相用二氯甲烷萃取 (15 mL x 2)，合併有機相，用30mL飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100/1-15/1)，得3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (8a) (0.301 g，產率：88%)。
第二步：1-(1'-(氮雜環丁-3-基)-[1,4'-聯呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (8b)
1-(1'-(azetidin-3-yl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (8a) (0.301 g, 0.482 mmol) 用2mL甲醇溶解，滴加10mL 4 N鹽酸乙酸乙酯溶液，室溫反應過夜。減壓濃縮得粗品，粗品用飽和碳酸氫鈉溶液調pH至9-10，用二氯甲烷萃取 (20 mL x 3)，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得1-(1'-(氮雜環丁-3-基)-[1,4'-聯呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (8b) (0.239 g，產率：70%)。
第三步：5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮三三氟乙酸鹽 (化合物8)
5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione tritrifluoroacetate
將1-(1'-(氮雜環丁-3-基)-[1,4'-聯呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (8b) (0.239 g, 0.456 mmol) 溶解於10mL二甲亞碸中，依次加入N,N′
-二異丙基乙胺 (0.295 g, 2.28 mmol) 和2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (0.164 g, 0.592 mmol)，氮氣氛圍下加熱至90℃反應6h。加入10mL水析出固體，抽濾，濾液用乙酸乙酯萃取 (40 mL x 2)，合併有機相，用50mL飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，殘留物用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100/1-20/1)，得粗品。粗品過Pre-HPLC (儀器及製備柱：採用Glison GX-281製備液相，製備柱型號是Sunfire C18，5 μm，內徑×長度 = 30 mm×150 mm)。製備方法：粗品用甲醇和二甲亞碸溶解，並用0.45 μm濾膜過濾，製備成樣品液。流動相體系：乙腈/水 (含0.1% TFA)。梯度沖提方法：乙腈由5%梯度沖提60% (沖提時間15 min)，凍乾得到5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮三三氟乙酸鹽 (化合物8) (0.207 g，產率：40%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ 11.07 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.72 (d, 1H), 7.66 (d, 2H),7.45 (t, 2H), 7.23–7.09 (m, 5H), 6.89 (s, 1H), 6.75 (d, 1H), 5.19–5.04 (m, 2H), 4.40 – 4.05 (m, 7H), 3.76-3.27 (m, 7H),2.97-2.75 (m, 2H), 2.64–2.52 (m, 3H), 2.40–2.19 (m, 4H), 2.08-1.79 (m, 3H)。
LCMS m/z = 781.3 [M+1]+
。
實施例
8-1:
5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物 8-1
)
5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將化合物8 (2 g) 溶於50mL二氯甲烷，用質量分數為28%的濃氨水 (50 mL x 5) 洗滌，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物加入20mL乙酸乙酯，攪拌3h，過濾，濾餅進行真空乾燥，得到游離鹼5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物8-1) (1.3 g)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 10.22 (brs, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.67 – 7.60 (m, 3H), 7.42 – 7.34 (m, 2H), 7.19 – 7.10 (m, 3H), 7.10 – 7.04 (m, 2H), 6.78 (d, 1H), 6.51 (dd, 1H), 5.89 (brs, 2H), 4.96 – 4.88 (m, 1H), 4.83 – 4.70 (m, 1H), 4.14 – 4.04 (m, 2H), 3.92 – 3.84 (m, 2H), 3.39 – 3.30 (m, 1H), 3.18 – 3.04 (m, 2H), 3.00 – 2.91 (m, 2H), 2.90 – 2.65 (m, 3H), 2.56 – 2.32 (m, 5H), 2.16 – 2.01 (m, 3H), 2.01 – 1.84 (m, 4H), 1.73 – 1.59 (m, 2H)。
LC-MS m/z = 781.4 [M+1]+
。
實施例
9
：
5-(4-((4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)甲基)-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮四三氟乙酸鹽 (化合物 9
)
5-(4-((4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione tetratrifluoroacetate
第一步：4-((4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)甲基)-[1,4'-雙呱啶]-1'-甲酸第三丁酯 (9a)
Tert-butyl 4-((4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1- yl)methyl)-[1,4'-bipiperidine]-1'-carboxylate
將3-(4-苯氧基苯基)-1-(1-(呱啶-4-基甲基)呱啶-4-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (6b) (0.44 g, 0.91 mmol) 溶於10mL1,2-二氯乙烷中，室溫下加入4-氧代呱啶-1-甲酸第三丁酯 (0.24 g, 1.18 mmol)，加熱至50℃，攪拌1h後降至室溫。向反應液中加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.48 g, 2.28 mmol)，室溫反應過夜。將反應液倒入50mL飽和碳酸氫鈉溶液，水相用乙酸乙酯萃取 (50 mL × 3)，合併有機相，有機相用水洗滌 (50 mL × 2)，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，得到4-((4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)甲基)-[1,4'-雙呱啶]-1'-甲酸第三丁酯 (9a) (0.31 g，產率：51%)。
LCMS m/z = 667.4 [M+1]+
。
第二步：1-(1-([1,4'-雙呱啶]-4-基甲基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (9b)
1-(1-([1,4'-bipiperidin]-4-ylmethyl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將4-((4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)甲基)-[1,4'-雙呱啶]-1'-甲酸第三丁酯 (9a) (0.31 g, 0.46 mmol) 溶於6mL二氯甲烷中，加入2mL三氟乙酸，室溫反應2h。用20mL 2 N氫氧化鈉水溶液調pH至9-10，水相用二氯甲烷萃取 (10 mL × 3)，有機相用無水硫酸鈉乾燥，濃縮，得到1-(1-([1,4'-雙呱啶]-4-基甲基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (9b) (0.17 g，產率：65%)。
LCMS m/z = 567.4 [M+1]+
。
第三步：5-(4-((4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)甲基)-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮四三氟乙酸鹽 (化合物9)
5-(4-((4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione tetratrifluoroacetate
將1-(1-([1,4'-雙呱啶]-4-基甲基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (9b) (0.17 g, 0.3 mmol) 溶於5mL DMSO中，室溫下加入2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (0.1 g, 0.36 mmol) 和N,N'
-二異丙基乙胺 (0.3 g, 2.3 mmol)，升溫至80℃反應3h。將反應液倒入20mL水中，水相用二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 10:1萃取 (30 mL × 3)，合併有機相，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗品過Pre-HPLC (儀器及製備柱：採用Glison GX-281製備液相，製備柱型號是Sunfire C18，5 μm，內徑×長度 = 30 mm×150 mm)。製備方法：粗品用甲醇和二甲亞碸溶解，並用0.45 μm濾膜過濾，製備成樣品液。流動相體系：乙腈/水 (含0.1% TFA)。梯度沖提方法：乙腈由5%梯度沖提60% (沖提時間15 min)，凍乾得到5-(4-((4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)甲基)-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮四三氟乙酸鹽 (化合物9) (0.11 g，產率：45%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ 11.06 (s, 1H), 9.46 (d, 2H), 8.32 (s, 1H), 7.72 – 7.55 (m, 3H), 7.47 – 7.41 (m, 3H), 7.35 – 7.29 (m, 1H), 7.22 – 7.12 (m, 5H), 5.10 – 5.05 (m, 2H), 4.26 (d, 2H), 3.71 (d, 2H), 3.63 – 3.39 (m, 4H), 3.32 – 3.17 (m, 2H),3.07 – 2.85 (m, 6H), 2.65 – 2.51 (m, 4H), 2.32 – 1.94 (m, 8H), 1.72 – 1.69 (m, 2H), 1.48 – 1.45 (m, 2H)。
LCMS m/z = 412.3 [M/2 +1]+
。
實施例
10
：
5-(4-(3-((4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)甲基)氮雜環丁-1-基)呱啶-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮四三氟乙酸鹽 (化合物 10
)
5-(4-(3-((4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)azetidin-1-yl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione tetratrifluoroacetate
第一步：3-((4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)甲基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (10a)
Tert-butyl 3-((4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl) piperidin-1-yl)methyl)azetidine-1-carboxylate
將3-(4-苯氧基苯基)-1-(呱啶-4-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (1a) (合成方法見J. Med. Chem. 2015 , 58,
9625-9638) (0.5 g, 1.29 mmol) 溶於15mLDME中，室溫下加入3-甲醯基氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (0.31 g, 1.68 mmol)，於室溫攪拌反應0.5h後加入三乙醯氧基硼氫化鈉(0.68 g, 3.22 mmol)，室溫攪拌過夜。向反應液中加入50mL水，水相用二氯甲烷萃取 (30 mL × 3)，合併有機相，有機相用水洗滌 (20 mL × 2)，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:1-20:1)，得到3-((4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)甲基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (10a) (0.65 g，產率：91%)。
LCMS m/z = 556.4 [M+1]+
。
第二步：1-(1-(氮雜環丁-3-基甲基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (10b)
1-(1-(azetidin-3-ylmethyl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將3-((4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)甲基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (10a) (0.61 g, 1.17 mmol) 溶於6mL二氯甲烷中，加入2mL三氟乙酸，室溫反應2h。用20mL 2 N氫氧化鈉水溶液調pH至9-10，水相用二氯甲烷萃取 (10 mL × 3)，有機相用無水硫酸鈉乾燥，濃縮，得到1-(1-(氮雜環丁-3-基甲基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (10b) (0.47 g，產率：89%)。
LCMS m/z = 456.3 [M+1]+
。
第三步：4-(3-((4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)甲基)氮雜環丁-1-基)呱啶-1-甲酸第三丁酯 (10c)
Tert-butyl 4-(3-((4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)azetidin-1-yl)piperidine-1-carboxylate
將1-(1-(氮雜環丁-3-基甲基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (10b) (0.47 g, 1.03 mmol) 溶於10mL 1,2-二氯乙烷中，室溫下加入4-氧代呱啶-1-甲酸第三丁酯 (0.27 g, 1.34 mmol)，加熱到50℃，攪拌1h後降至室溫。向反應液中加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.55 g, 2.58 mmol)，室溫反應過夜。將反應液倒入50mL飽和碳酸氫鈉溶液，水相用乙酸乙酯萃取 (50 mL × 3)，合併有機相，有機相用水洗滌 (50 mL × 2)，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，得到4-(3-((4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)甲基)氮雜環丁-1-基)呱啶-1-甲酸第三丁酯 (10c) (0.31 g，產率：48%)。
LCMS m/z = 639.8 [M+1]+
。
第四步：3-(4-苯氧基苯基)-1-(1-((1-(呱啶-4-基)氮雜環丁-3-基)甲基)呱啶-4-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (10d)
3-(4-phenoxyphenyl)-1-(1-((1-(piperidin-4-yl)azetidin-3-yl)methyl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將4-(3-((4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)甲基)氮雜環丁-1-基)呱啶-1-甲酸第三丁酯 (10c) (0.31 g, 0.49 mmol) 溶於6mL二氯甲烷中，加入2mL三氟乙酸，室溫反應2h。用20mL 2 N氫氧化鈉水溶液調pH至9-10，水相用二氯甲烷萃取 (10 mL × 3)，有機相用無水硫酸鈉乾燥，濃縮，得到3-(4-苯氧基苯基)-1-(1-((1-(呱啶-4-基)氮雜環丁-3-基)甲基)呱啶-4-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (10d) (0.18 g，產率：65%)。
LCMS m/z = 539.7 [M+1]+
。
第五步：5-(4-(3-((4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)甲基)氮雜環丁-1-基)呱啶-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮四三氟乙酸鹽 (化合物10)
5-(4-(3-((4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)methyl)azetidin-1-yl)piperidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione tetratrifluoroacetate
將3-(4-苯氧基苯基)-1-(1-((1-(呱啶-4-基)氮雜環丁-3-基)甲基)呱啶-4-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (10d) (0.18 g, 0.34 mmol) 溶於5mL DMSO中，室溫下加入2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (0.12 g, 0.37 mmol) 和N,N'
-二異丙基乙胺 (0.3 g, 2.3 mmol)，升溫至80℃反應3h。將反應液倒入20mL水中，水相用二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 10:1萃取 (30 mL × 3)，合併有機相，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗品過Pre-HPLC (儀器及製備柱：採用Glison GX-281製備液相，製備柱型號是Sunfire C18，5 μm，內徑×長度 = 30 mm×150 mm)。製備方法：粗品用甲醇和二甲亞碸溶解，並用0.45 μm濾膜過濾，製備成樣品液。流動相體系：乙腈/水 (含0.1% TFA)。梯度沖提方法：乙腈由5%梯度沖提60% (沖提時間15 min)，凍乾得到5-(4-(3-((4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)甲基)氮雜環丁-1-基)呱啶-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮四三氟乙酸鹽 (化合物10) (0.13 g，產率：48%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ 11.06 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.72–7.54 (m, 3H), 7.48–7.39 (m, 3H), 7.33–7.31 (m, 1H), 7.24–7.09 (m, 5H), 5.10–5.05 (m, 3H), 4.25–4.08 (m,7H), 3.70–3.38 (m, 6H), 3.01–2.89 (m, 3H), 2.69–2.39 (m, 4H), 2.22–2.19 (m, 2H), 2.10–1.89 (m, 3H), 1.41–1.39 (m, 2H)。
LCMS m/z = 398.3 [M/2 +1]+
。
實施例
11
：
5-[4-[4-[4-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮六三氟乙酸鹽 (化合物 11
)
5-[4-[4-[4-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione hexatrifluoroacetate
第一步：3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (11a)
Tert-butyl 3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl] azetidine-1-carboxylate
將3-(4-苯氧基苯基)-1-(呱啶-4-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (1a) (合成方法見J. Med. Chem. 2015 , 58,
9625-9638) (0.500 g，1.29 mmol) 溶解在5mL 1,2-二氯乙烷中，加入3-氧代氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (0.266 g，1.55 mmol) 和冰醋酸 (0.412 g，6.86 mmol)，加完後於65℃攪拌反應3h，再冷卻至室溫，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.548 g，2.59 mmol)，加完後室溫反應過夜。滴加飽和碳酸氫鈉溶液調pH至9-10，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-19:1)，得到3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (11a) (0.700 g，產率：＞99%)。
LCMS m/z = 542.3 [M+1]+
。
第二步：1-[1-(氮雜環丁-3-基)-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (11b)
1-[1-(azetidin-3-yl)-4-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (11a) (0.700 g，1.29 mmol) 溶解在2mL二氯甲烷中，加入5mL 4 N鹽酸乙酸乙酯溶液，室溫攪拌2h。反應液減壓濃縮後殘留物加入20mL二氯甲烷，用飽和碳酸氫鈉溶液調pH至9-10，分液，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得1-[1-(氮雜環丁-3-基)-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (11b) (0.410 g，產率：72%)。
LCMS m/z = 442.2 [M+1]+
。
第三步：4-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (11c)
Tert-butyl 4-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl] azetidin-1-yl]piperidine-1-carboxylate
將1-[1-(氮雜環丁-3-基)-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (11b) (0.410 g，0.929 mmol) 溶解在5mL1,2-二氯乙烷中，加入4-氧代呱啶-1-甲酸第三丁酯 (0.222 g，1.11 mmol) 和冰醋酸 (0.296 g，4.92 mmol)，加完後於65℃攪拌反應3h，再冷卻至室溫，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.394 g，1.86 mmol)，加完後室溫反應過夜。滴加飽和碳酸氫鈉溶液調pH至9-10，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-19:1)，得到4-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (11c) (0.380 g，產率：66%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.35 (s, 1H), 7.67–7.61 (m, 2H), 7.43–7.35 (m, 2H), 7.21–7.12 (m, 3H), 7.11–7.05 (m, 2H), 5.56 (br, 2H), 4.82–4.72 (m, 1H), 4.07–3.93 (m, 2H), 3.72–3.55 (m, 2H), 3.15–2.87 (m, 5H), 2.81 (t, 2H), 2.49–2.35 (m, 2H), 2.17–1.97 (m, 5H), 1.75–1.67 (m, 2H), 1.45 (s, 9H), 1.35–1.25 (m, 2H)。
第四步：3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-(4-呱啶基)氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (11d)
3-(4-phenoxyphenyl)-1-[1-[1-(4-piperidyl)azetidin-3-yl]-4-piperidyl]pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將4-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (11c) (0.380 g，0.608 mmol) 溶解在2mL二氯甲烷中，加入5mL 4 N鹽酸乙酸乙酯溶液，室溫攪拌2h。反應液減壓濃縮後殘留物加入20mL二氯甲烷，用飽和碳酸氫鈉溶液調pH至9-10，分液，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-(4-呱啶基)氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (11d) (0.256 g，產率：80%)。
LCMS m/z = 263.3 [M/2 +1]+
。
第五步：4-[4-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]-1-呱啶基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (11e)
Tert-butyl 4-[4-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl] azetidin-1-yl]-1-piperidyl]piperidine-1-carboxylate
將3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-(4-呱啶基)氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (11d) (0.256 g，0.488 mmol) 溶解在3mL 1,2-二氯乙烷中，加入4-氧代呱啶-1-甲酸第三丁酯 (0.117 g，0.585 mmol) 和冰醋酸 (0.155 g，2.59 mmol)，加完後於65℃攪拌反應3h，再冷卻至室溫，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.207 g，0.976 mmol)，加完後室溫反應過夜。滴加飽和碳酸氫鈉溶液調pH至9-10，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-19:1)，得到4-[4-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]-1-呱啶基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (11e) (0.244 g，產率：71%)。
LCMS m/z = 708.5 [M+1]+
。
第六步：3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-(4-呱啶基)-4-呱啶基]氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (11f)
3-(4-phenoxyphenyl)-1-[1-[1-[1-(4-piperidyl)-4-piperidyl]azetidin-3-yl]-4-piperidyl]pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將4-[4-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]-1-呱啶基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (11e) (0.244 g，0.345 mmol) 溶解在2mL二氯甲烷中，加入5mL 4 N鹽酸乙酸乙酯溶液，室溫攪拌2h。反應液減壓濃縮後殘留物加入20mL二氯甲烷，用飽和碳酸氫鈉溶液調pH至9-10，分液，水層用100mL二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 10:1萃取，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-(4-呱啶基)-4-呱啶基]氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (11f) (0.209 g，產率：＞99%)。
LCMS m/z = 304.8 [M/2 +1]+
。
第七步：4-[4-[4-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (11g)
Tert-butyl 4-[4-[4-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1- piperidyl]azetidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]piperidine-1-carboxylate
將3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-(4-呱啶基)-4-呱啶基]氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (11f) (0.208 g，0.342 mmol) 溶解在3mL 1,2-二氯乙烷中，加入4-氧代呱啶-1-甲酸第三丁酯 (0.102 g，0.513 mmol) 和冰醋酸 (0.109 g，1.81 mmol)，加完後於65℃攪拌反應3h，再冷卻至室溫，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.145 g，0.684 mmol)，加完後室溫反應過夜。滴加飽和碳酸氫鈉溶液調節pH至9-10，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-7:3)，得到4-[4-[4-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (11g) (0.152 g，產率：56%)。
LCMS m/z = 396.3 [M/2 +1]+
。
第八步：3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-[1-(4-呱啶基)-4-呱啶基]-4-呱啶基]氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (11h)
3-(4-phenoxyphenyl)-1-[1-[1-[1-[1-(4-piperidyl)-4-piperidyl]-4-piperidyl]azetidin-3-yl]-4-piperidyl]pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將4-[4-[4-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (11g) (0.152 g，0.192 mmol) 溶解在2mL二氯甲烷中，加入5mL 4 N鹽酸乙酸乙酯溶液，室溫攪拌2h。反應液減壓濃縮後殘留物加入20mL二氯甲烷，用飽和碳酸氫鈉溶液調pH至9-10，分液，水層用100mL二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 10:1萃取，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-[1-(4-呱啶基)-4-呱啶基]-4-呱啶基]氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (11h) (0.133 g，產率：＞99%）。
LCMS m/z = 346.4 [M/2 +1]+
。
第九步：5-[4-[4-[4-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮六三氟乙酸鹽 (化合物11)
5-[4-[4-[4-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione hexatrifluoroacetate
將3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-[1-(4-呱啶基)-4-呱啶基]-4-呱啶基]氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (11h) (0.130 g，0.188 mmol) 溶解在2mL二甲亞碸中，加入2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (0.0676 g，0.245 mmol) 和二異丙基乙基胺 (0.122 g，0.941 mmol)，加完後於90℃攪拌反應2h。冷卻至室溫，慢慢滴加10mL水，過濾，濾餅用20mL二氯甲烷溶解，再用5mL飽和氯化鈉溶液洗滌，分液，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品過Pre-HPLC (儀器及製備柱：採用Glison GX-281製備液相，製備柱型號是Sunfire C18，5 μm，內徑×長度 = 30 mm×150 mm)。製備方法：粗品用甲醇和二甲亞碸溶解，並用0.45 μm濾膜過濾，製備成樣品液。流動相體系：乙腈/水 (含0.1% TFA)。梯度沖提方法：乙腈由5%梯度沖提60% (沖提時間15 min)，凍乾得到5-[4-[4-[4-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮六三氟乙酸鹽 (化合物11) (0.013 g，產率：4%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ 11.06 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.78–7.62 (m, 4H), 7.47–7.40 (m, 2H), 7.36–7.28 (m, 1H), 7.26–7.06 (m, 5H), 5.08 (dd, 1H), 4.89-4.78(m, 1H), 4.31–4.10 (m, 5H), 4.04–3.88 (m, 4H), 3.68–3.45 (m, 6H), 3.07–2.81 (m, 6H), 2.65–2.53 (m, 2H), 2.41–1.82 (m, 12H), 1.76–1.48 (m, 5H), 1.32–1.21 (m, 4H)。
LCMS m/z = 474.4 [M/2 +1]+
。
實施例
12
：
5-[4-[4-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮五三氟乙酸鹽 (化合物 12
)
5-[4-[4-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione pentatrifluoroacetate
第一步：4-[4-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (12a)
Tert-butyl 4-[4-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1- piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]piperidine-1-carboxylate
將3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-(4-呱啶基)-4-呱啶基]-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (2d) (0.8 g, 1.45 mmol) 溶解在20mL 1,2-二氯乙烷中，加入N
-第三丁氧羰基-4-呱啶酮 (0.9 g, 4.51 mmol)，再加入醋酸 (0.4 g, 6.67 mmol) 和無水硫酸鈉 (1 g)，加完後85℃反應3h，冷卻至室溫，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (2 g, 9.43 mmol)，室溫反應過夜。滴加飽和碳酸氫鈉溶液調pH至9-10，有機層無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，殘留物用矽膠管柱層析分離純化 (DCM/MeOH (v/v) = 50/1-5/1)，得4-[4-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (12a) (0.7 g, 產率：70%)。
LCMS m/z = 736.5 [M+1]+
。
第二步：3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-(4-呱啶基)-4-呱啶基]-4-呱啶基]-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (12b)
3-(4-phenoxyphenyl)-1-[1-[1-[1-(4-piperidyl)-4-piperidyl]-4-piperidyl]-4-piperidyl]pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將4-[4-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (12a) (0.7 g, 0.95 mmol) 溶於5mL二氯甲烷中，加入5mL三氟乙酸，室溫攪拌過夜。減壓除去溶劑，加入20mL二氯甲烷和2mL乙醇，用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，水相再用20mL二氯甲烷和2mL乙醇萃取，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-(4-呱啶基)-4-呱啶基]-4-呱啶基]-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (12b) (0.60 g, 產率：99%)。
LCMS m/z = 636.3 [M+1]+
。
第三步：5-[4-[4-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮五三氟乙酸鹽 (化合物12)
5-[4-[4-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione pentatrifluoroacetate
將3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-(4-呱啶基)-4-呱啶基]-4-呱啶基]-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (12b) (0.25 g, 0.39 mmol)、2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (0.11 g, 0.39 mmol) 和三乙胺 (0.12 g, 1.2 mmol) 溶於3mL DMSO中，升溫至90℃攪拌12h。冷卻至室溫，加入10mL水，過濾，濾餅過Pre-HPLC (儀器及製備柱：採用Glison GX-281製備液相，製備柱型號是Sunfire C18，5 μm，內徑×長度 = 30 mm×150 mm)。製備方法：粗品用甲醇和二甲亞碸溶解，並用0.45 μm濾膜過濾，製備成樣品液。流動相體系：乙腈/水 (含0.1% TFA)。梯度沖提方法：乙腈由5%梯度沖提60% (沖提時間15 min)，凍乾得到5-[4-[4-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮五三氟乙酸鹽 (化合物12) (0.15 g, 產率：28%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ 11.07 (s, 1H), 10.05 (br, 2H), 8.33 (s, 1H), 7.75 – 7.62 (m, 3H), 7.48 – 7.39 (m, 3H), 7.35 – 7.29 (m, 1H), 7.24 – 7.10 (m, 5H), 5.27 – 5.04 (m, 3H), 5.04 – 4.35 (br, 5H), 4.30 – 4.20 (m, 2H), 3.73 – 3.43 (m, 8H), 3.13 – 2.84 (m, 6H), 2.64 – 2.54 (m, 2H), 2.40 – 2.17 (m, 6H), 2.15 – 1.87 (m, 7H), 1.77 – 1.60 (m, 2H)。
LCMS m/z = 892.4 [M+1]+
。
實施例
13
：
5-[3-[4-[4-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物 13
)
5-[3-[4-[4-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
第一步：3-[4-[4-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯 (13a)
Tert-butyl 3-[4-[4-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1- piperidyl]azetidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]azetidine-1-carboxylate
在50mL反應瓶中依次加入3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-(4-呱啶基)-4-呱啶基]氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (11f) (420 mg，0.69 mmol)、乙酸 (41.4 mg，0.69 mmol)、3-氧代氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯 (118 mg，0.69 mmol)、三乙醯氧基硼氫化鈉 (292.5 mg，1.38 mmol) 和二氯甲烷 (20 mL)，加完後在室溫下攪拌反應3 h。將反應液抽濾，濾液用飽和碳酸氫鈉溶液 (8 mL) 洗滌，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，抽濾，濾液減壓濃縮，得到3-[4-[4-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯 (13a) (350 mg，產率：67%)。
第二步：1-[1-[1-[1-[1-(氮雜環丁-3-基)-4-呱啶基]-4-呱啶基]氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (13b)
1-[1-[1-[1-[1-(azetidin-3-yl)-4-piperidyl]-4-piperidyl]azetidin-3-yl]-4-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將3-[4-[4-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯 (13a) (350 mg，0.46mmol) 溶於8mL的4 N鹽酸乙酸乙酯溶液中並加入5mL的甲醇，室溫反應2h。將反應液直接濃縮，然後反應體系用乙酸乙酯 (30 mL) 稀釋，用飽和碳酸氫鈉溶液 (10 mL) 淬滅，乙酸乙酯 (5 mL × 3) 萃取，合併有機相，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到1-[1-[1-[1-[1-(氮雜環丁-3-基)-4-呱啶基]-4-呱啶基]氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (13b) (180 mg，產率：59%)。
第三步：5-[3-[4-[4-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物13)
5-[3-[4-[4-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
將1-[1-[1-[1-[1-(氮雜環丁-3-基)-4-呱啶基]-4-呱啶基]氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (13b) (180 mg，0.27 mmol) 溶於DMSO (20 mL) 中，室溫下加入2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (74.5 mg，0.27 mmol) 和DIPEA (174.4 mg, 1.35 mmol)，於90℃攪拌反應2h。向反應液中加入50mL水，水相用乙酸乙酯萃取 (50 mL × 3)，合併有機相，有機相用水洗滌 (20 mL × 2)，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，殘留物用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:1-20:1)，得到粗品。粗品過Pre-HPLC (儀器及製備柱：採用Glison GX-281製備液相，製備柱型號是Sunfire C18，5 μm，內徑×長度 = 30 mm×150 mm)。製備方法：粗品用甲醇和二甲亞碸溶解，並用0.45 μm濾膜過濾，製備成樣品液。流動相體系：乙腈/水 (含0.1% TFA)。梯度沖提方法：乙腈由5%梯度沖提60% (沖提時間15 min)，製備產品經鹼化濃縮得到5-[3-[4-[4-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物13) (63 mg，產率：25%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.37 (s, 1H), 7.74 – 7.49 (m, 4H), 7.43 – 7.34 (m, 2H), 7.18 – 7.13 (m, 3H), 7.09 – 7.04 (m, 2H), 6.77 (d, 1H), 6.51 (dd, 1H), 5.67 (br, 2H), 5.01 – 4.88 (m, 2H), 4.34 – 4.20 (m, 1H), 4.08 (t, 2H), 3.90 – 3.82 (m, 2H), 3.58 – 3.50 (m, 2H), 3.38 – 3.30 (m, 1H), 3.13 – 3.05 (m, 1H), 3.00 – 2.70 (m, 11H), 2.46 (t, 2H), 2.38 – 2.29 (m, 2H), 2.19 – 2.14 (m, 2H), 1.94 – 1.86 (m, 6H), 1.81 – 1.74 (m, 2H), 1.67-1.59 (m, 2H), 1.44 – 1.39 (m, 2H), 0.99 – 0.90 (m, 2H)。
LCMS m/z = 460.4 [M/2 +1]+
。
實施例
14
5-[4-[4-[4-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮六三氟乙酸鹽 (化合物 14
)
5-[4-[4-[4-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione hexatrifluoroacetate
第一步：4-[4-[4-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (14a)
Tert-butyl 4-[4-[4-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1- piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]piperidine-1-carboxylate
將3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-(4-呱啶基)-4-呱啶基]-4-呱啶基]-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (12b) (0.3 g, 0.47 mmol) 溶解在20mL 1,2-二氯乙烷中，加入N
-第三丁氧羰基-4-呱啶酮(0.28 g, 1.42 mmol)，再加入醋酸 (0.14 g, 2.36 mmol) 和0.5克無水硫酸鈉，加完後升溫至85℃反應3h，冷卻至室溫，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.5 g, 2.36 mmol)，室溫反應過夜。滴加飽和碳酸氫鈉水溶液調pH至9-10，有機層用無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮，殘留物用矽膠管柱層析分離純化 (DCM/MeOH (v/v) = 50/1-5/1)，得4-[4-[4-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (14a) (0.13 g，產率：33%)。
LCMS m/z = 819.5 [M+1]+
。
第二步：3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-[1-(4-呱啶基)-4-呱啶基]-4-呱啶基]-4-呱啶基]-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺五三氟乙酸鹽 (14b)
3-(4-phenoxyphenyl)-1-[1-[1-[1-[1-(4-piperidyl)-4-piperidyl]-4-piperidyl]-4-piperidyl]-4-piperidyl]pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine pentatrifluoroacetate
將4-[4-[4-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (14a) (0.13 g, 0.16 mmol) 溶於2mLDCM中，加入2mL三氟乙酸，加畢，室溫攪拌過夜。減壓除去溶劑，粗品直接用於下一步。
LCMS m/z = 719.5 [M+1]+
。
第三步：5-[4-[4-[4-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮六三氟乙酸鹽 (化合物14)
5-[4-[4-[4-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione hexatrifluoroacetate
將3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-[1-(4-呱啶基)-4-呱啶基]-4-呱啶基]-4-呱啶基]-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺五三氟乙酸鹽 (14b) (0.20 g, 0.16 mmol)、2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (0.05 g, 0.17 mmol) 和三乙胺 (0.12 g, 1.2 mmol) 溶於3mL DMSO中，升溫至120℃攪拌6 h。冷卻至室溫，加入10mL水，過濾，濾餅過Pre-HPLC (儀器及製備柱：採用Glison GX-281製備液相，製備柱型號是Sunfire C18，5 μm，內徑×長度 = 30 mm×150 mm)。製備方法：粗品用甲醇和二甲亞碸溶解，並用0.45 μm濾膜過濾，製備成樣品液。流動相體系：乙腈/水 (含0.1% TFA)。梯度沖提方法：乙腈由濃度（v/v，下同）5%梯度沖提至濃度60% (沖提時間15 min)，凍乾得到5-[4-[4-[4-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮六三氟乙酸鹽 (化合物14) (0.06 g，產率：25%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ 11.06 (s, 1H), 10.01 (br, 2H), 8.32 (s, 1H), 7.74 – 7.62 (m, 3H), 7.48 – 7.40 (m, 3H), 7.35 – 7.28 (m, 1H), 7.24 – 7.10 (m, 5H), 5.24 – 4.92 (m, 3H), 4.60 – 4.17 (m, 9H), 3.75 – 3.45 (m, 11H), 3.13 – 2.85 (m, 8H), 2.67 – 2.56 (m, 2H), 2.40 – 2.20 (m 7H), 2.14 – 1.88 (m, 8H), 1.77 – 1.57 (m, 2H)。
LCMS m/z = 975.5 [M+1]+
。
實施例
15
：
5-[4-[4-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異二氫吲哚-1,3-二酮 (化合物 15
)
5-[4-[4-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione 
第一步：5-[4-[4-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異二氫吲哚-1,3-二酮 (化合物15)
5-[4-[4-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
將3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-(4-呱啶基)-4-呱啶基]氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (11f) (164 mg，0.27 mmol) 溶於20mL DMSO中，室溫下加入2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (74.5 mg, 0.27 mmol) 和DIPEA (174.4 mg, 1.35 mmol)，於90℃攪拌反應2h。向反應液中加入50mL水，水相用乙酸乙酯萃取 (50 mL × 3)，合併有機相，有機相用水洗滌 (20 mL × 2)，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:1-20:1)，得到粗品。粗品過Pre-HPLC (儀器及製備柱：採用Glison GX-281製備液相，製備柱型號是Sunfire C18，5 μm，內徑×長度 = 30 mm×150 mm)。製備方法：粗品用甲醇和二甲亞碸溶解，並用0.45 μm濾膜過濾，製備成樣品液。流動相體系：乙腈/水 (含0.1% TFA)。梯度沖提方法：乙腈由濃度5%梯度沖提至濃度60% (沖提時間15 min)，製備產品經鹼化濃縮得到5-[4-[4-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異二氫吲哚-1,3-二酮 (化合物15) (58 mg，產率：25%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.38 (s, 1H), 7.75 – 7.58 (m, 4H), 7.54 – 7.51 (m, 1H), 7.40 – 7.36 (m, 2H), 7.17 – 7.13 (m, 3H), 7.08 – 7.02 (m, 3H), 5.65 (s, 2H), 4.95 – 4.91 (m, 2H), 4.32 – 4.20 (m, 1H), 3.97 (d, 2H), 3.61 (s, 1H), 3.53 (s, 1H), 3.11 – 3.10 (m, 1H), 2.99 – 2.90 (m, 7H), 2.86 – 2.85 (m, 1H), 2.80 – 2.69 (m, 3H), 2.60 – 2.59 (m, 1H), 2.49 – 2.44 (m, 1H), 2.27 – 2.14 (m, 4H), 1.95 – 1.86 (m, 6H), 1.77 – 1.72 (m, 2H), 1.67 – 1.61(m, 2H), 0.96 – 0.94 (m, 2H)。
LCMS m/z = 864.5 [M+1]+
。
實施例
16
：
5-[4-[3-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]吡咯-1-基]氮雜環丁-1-基]-1-呱啶基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異二氫吲哚-1,3-二酮 (化合物 16
)
5-[4-[3-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]pyrrolidin-1-yl]azetidin-1-yl]-1-piperidyl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione 
第一步：3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]吡咯烷-1-甲酸第三丁酯 (16a)
Tert-butyl 3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl] pyrrolidine-1-carboxylate
在50mL反應瓶中依次加入3-(4-苯氧基苯基)-1-(呱啶-4-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (1a) (合成方法見J. Med. Chem. 2015 , 58,
9625-9638) (1.16 g，3 mmol)、乙酸 (180 mg，3 mmol)、3-氧代吡咯烷-1-羧酸第三丁酯 (555.7 mg，3 mmol)、三乙醯氧基硼氫化鈉 (953.7 mg，4.5 mmol)和二氯甲烷 (40 mL)，加完後在室溫下攪拌反應3 h。將反應液抽濾，濾液用飽和碳酸氫鈉溶液 (30 mL) 洗滌，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，抽濾，濾液減壓濃縮，得到3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]吡咯烷-1-甲酸第三丁酯 (16a) (1.2 g，產率：72%)。
第二步：3-(4-苯氧基苯基)-1-(1-吡咯烷-3-基-4-呱啶基)吡唑並[3,4-b]吡啶-4-胺 (16b)
3-(4-phenoxyphenyl)-1-(1-pyrrolidin-3-yl-4-piperidyl)pyrazolo[3,4-b]pyridin-4-amin
將3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]吡咯烷-1-甲酸第三丁酯 (16a) (1.1 g, 2 mmol) 溶於10mL的4 N鹽酸乙酸乙酯溶液中並加入5mL的甲醇，室溫反應2h。將反應液直接濃縮，然後反應體系以乙酸乙酯 (30 mL) 稀釋，用飽和碳酸氫鈉 (10 mL) 淬滅，乙酸乙酯 (5 mL × 3) 萃取，合併有機相，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到3-(4-苯氧基苯基)-1-(1-吡咯烷-3-基-4-呱啶基)吡唑並[3,4-b]吡啶-4-胺 (16b) (837 mg，產率：92%)。
第三步：3-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]吡咯-1-基]氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯 (16c)
Tert-butyl 3-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl] pyrrolidin-1-yl]azetidine-1-carboxylate
在50mL反應瓶中，依次加入3-(4-苯氧基苯基)-1-(1-吡咯烷-3-基-4-呱啶基)吡唑並[3,4-b]吡啶-4-胺 (16b) (837 mg，1.84 mmol)、乙酸 (110.4 mg，1.84 mmol)、3-氧代氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯 (315 mg，1.84 mmol)、三乙醯氧基硼氫化鈉 (924 mg，4.36 mmol) 和二氯甲烷 (40 mL)，加完後在室溫下攪拌反應3 h。將反應液抽濾，濾液用飽和碳酸氫鈉溶液 (20 mL) 洗滌，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，抽濾，濾液減壓濃縮，得到3-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]吡咯-1-基]氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯 (16c) (680 mg，產率：61%)。
LCMS m/z = 611.4 [M+1]+
。
第四步：1-[1-[1-(氮雜環丁-3-基)吡咯-3-基]-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (16d)
1-[1-[1-(azetidin-3-yl)pyrrolidin-3-yl]-4-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將3-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]吡咯-1-基]氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯 (16c) (680 mg，1.11 mmol) 溶於8mL的4 N鹽酸乙酸乙酯溶液中並加入5mL的甲醇，室溫反應2h。將反應液直接濃縮，然後反應體系用乙酸乙酯 (30mL) 稀釋，用飽和碳酸氫鈉 (10 mL) 淬滅，乙酸乙酯 (5 mL × 3) 萃取，合併有機相，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到1-[1-[1-(氮雜環丁-3-基)吡咯-3-基]-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (16d) (420 mg，產率：74%)。
第五步：4-[3-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]吡咯-1-基]氮雜環丁-1-基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (16e)
Tert-butyl 4-[3-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl] pyrrolidin-1-yl]azetidin-1-yl]piperidine-1-carboxylate
在50 mL反應瓶中，依次加入1-[1-[1-(氮雜環丁-3-基)吡咯-3-基]-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (16d) (420 mg，0.82 mmol)、乙酸 (49.2 mg，0.82 mmol)、4-氧代呱啶-1-甲酸第三丁酯 (163.4 mg，0.82 mmol)、三乙醯氧基硼氫化鈉 (348 mg，1.64 mmol) 和二氯甲烷 (35 mL)，加完後在室溫下攪拌反應3 h。將反應液抽濾，濾液用飽和碳酸氫鈉溶液 (15 mL) 洗滌，分液後有機層用無水硫酸鈉乾燥，抽濾，濾液減壓濃縮，得到4-[3-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]吡咯-1-基]氮雜環丁-1-基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (16e) (320 mg，產率：56%)。
第六步：3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-(4-呱啶基)氮雜環丁-3-基]吡咯-3-基]-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (16f)
3-(4-phenoxyphenyl)-1-[1-[1-[1-(4-piperidyl)azetidin-3-yl]pyrrolidin-3-yl]-4-piperidyl]pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將4-[3-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]吡咯-1-基]氮雜環丁-1-基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (16e) (320 mg，0.46 mmol) 溶於8mL的4 N鹽酸乙酸乙酯溶液中並加入5mL的甲醇，室溫反應2h。將反應液直接濃縮，然後反應體系以乙酸乙酯 (30 mL)稀釋，用飽和碳酸氫鈉 (10 mL) 淬滅，乙酸乙酯 (5 mL × 3) 萃取，合併有機相，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-(4-呱啶基)氮雜環丁-3-基]吡咯-3-基]-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (16f) (210 mg，產率：77%)。
第七步：5-[4-[3-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]吡咯-1-基]氮雜環丁-1-基]-1-呱啶基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異二氫吲哚-1,3-二酮 (化合物16)
5-[4-[3-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]pyrrolidin-1-yl]azetidin-1-yl]-1-piperidyl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
將3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-[1-(4-呱啶基)氮雜環丁-3-基]吡咯-3-基]-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (16f) (210 mg，0.35 mmol) 溶於DMSO (20 mL) 中，室溫下加入2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (96.7 mg, 0.35 mmol) 和DIPEA (174.4 mg, 1.35 mmol)，於90℃攪拌反應2h。向反應液中加入50mL水，分層，水相用乙酸乙酯萃取 (50 mL × 3)，合併有機相，有機相用水洗滌 (20 mL × 2)，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:1-20:1)，得到粗品。粗品過Pre-HPLC (儀器及製備柱：採用Glison GX-281製備液相，製備柱型號是Sunfire C18，5 μm，內徑×長度 = 30 mm×150 mm)。製備方法：粗品用甲醇和二甲亞碸溶解，並用0.45 μm濾膜過濾，製備成樣品液。流動相體系：乙腈/水 (含0.1% TFA)。梯度沖提方法：乙腈由濃度5%梯度沖提至濃度60% (沖提時間15 min)，製備產品經鹼化濃縮得到5-[4-[3-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]吡咯-1-基]氮雜環丁-1-基]-1-呱啶基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異二氫吲哚-1,3-二酮 (化合物16) (58 mg，產率：32%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.38 (s, 1H), 7.75 – 7.50 (m, 4H), 7.42 – 7.35 (m, 2H), 7.256-7.25(m, 1H), 7.19 – 7.10 (m, 3H), 7.08-7.06 (m, 2H), 7.04 – 6.98 (m, 1H), 5.72 (s, 2H), 5.00-4.90(m, 2H), 4.67 (s, 2H), 4.38 – 4.18 (m, 1H), 3.86 – 3.74 (m, 2H), 3.47-3.42 (m, 2H), 3.13 – 2.98 (m, 6H), 2.90 – 2.64 (m, 6H), 2.45-2.43 (m, 1H), 2.37 – 2.32 (m, 2H), 2.19 – 2.10 (m, 5H), 2.05-2.03 (m, 2H), 1.81 – 1.77 (m, 2H), 0.98-0.90 (m, 2H)。
LCMS m/z = 425.8 [M/2 +1]+
。
實施例
17
：
5-[3-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異二氫吲哚-1,3-二酮 (化合物 17
)
5-[3-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidin-1-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione 
第一步：3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (17a)
tert-butyl 3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl] azetidine-1-carboxylate
將3-(4-苯氧基苯基)-1-(呱啶-4-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (1a) (合成方法見J. Med. Chem. 2015
,58
, 9625-9638) (0.500 g, 1.29 mmol) 溶解在5mL 1,2-二氯乙烷中，依次加入3-氧代氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (0.266 g, 1.55 mmol) 和冰醋酸 (0.412 g, 6.86 mmol)，加完後65℃反應3h。反應液冷卻至室溫，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.548 g, 2.59 mmol)，加完後室溫反應過夜。向反應液中滴加飽和碳酸氫鈉溶液調pH至9-10，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-19:1)，得到3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (17a) (0.700 g，產率：＞99%)。
LCMS m/z = 542.3 [M+1]+
。
第二步：1-[1-(氮雜環丁-3-基)-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (17b)
1-[1-(azetidin-3-yl)-4-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (17a) (0.700 g, 1.29 mmol) 溶解在2mL二氯甲烷中，加入5mL 4 N鹽酸乙酸乙酯溶液，室溫攪拌2h。反應液減壓濃縮後殘留物加入20mL二氯甲烷，用飽和碳酸氫鈉溶液調pH至9-10，分液，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得1-[1-(氮雜環丁-3-基)-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (17b) (0.410 g, 產率：72%)。
LCMS m/z = 442.2 [M+1]+
。
第三步：3-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (17c)
tert-butyl 3-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl] azetidin-1-yl]azetidine-1-carboxylate
將1-[1-(氮雜環丁-3-基)-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (17b) (0.200 g, 0.453 mmol) 溶解在5mL 1,2-二氯乙烷中，依次加入3-氧代氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (0.116 g, 0.680 mmol) 和冰醋酸 (0.0544 g, 0.906 mmol)，加完後65℃反應3h。反應液冷卻至室溫，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.192 g, 0.906 mmol)，加完後室溫反應過夜。向反應液滴加飽和碳酸氫鈉溶液調pH至9-10，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-19:1)，得到3-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (17c) (0.150 g, 產率：56%)。
LCMS m/z = 597.3 [M+1]+
。
第四步：1-[1-[1-(氮雜環丁-3-基)氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (17d)
1-[1-[1-(azetidin-3-yl)azetidin-3-yl]-4-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將3-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (17c) (0.140 g, 0.235 mmol) 溶解在2mL二氯甲烷中，加入5mL 4 N鹽酸乙酸乙酯溶液，室溫攪拌2h。反應液減壓濃縮後殘留物加入20mL二氯甲烷，用飽和碳酸氫鈉溶液調pH至9-10，分液，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得1-[1-[1-(氮雜環丁-3-基)氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (17d) (0.100 g, 產率：86%)。
LCMS m/z = 497.3 [M+1]+
。
第五步：5-[3-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異二氫吲哚-1,3-二酮 (化合物17)
5-[3-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidin-1-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
將1-[1-[1-(氮雜環丁-3-基)氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (17d) (0.100 g, 0.201 mmol) 溶解在2mL二甲亞碸中，依次加入2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (0.0667 g, 0.242 mmol) 和二異丙基乙胺 (0.130 g, 1.01 mmol)，加完後90℃反應2h。反應液冷卻至室溫，慢慢滴加10mL水，過濾，濾餅用20mL二氯甲烷溶解，再用5mL飽和氯化鈉溶液洗滌，分液，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-19:1)，得到5-[3-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異二氫吲哚-1,3-二酮 (化合物17) (0.063 g，產率：42%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 9.99 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.72 – 7.57 (m, 3H), 7.45 – 7.32 (m, 2H), 7.21 – 7.11 (m, 3H), 7.10 – 7.04 (m, 2H), 6.78 (d, 1H), 6.52 (dd, 1H), 5.81 (brs, 2H), 4.92 (dd, 1H), 4.87 – 4.71 (m, 1H), 4.08 – 3.99 (m, 2H), 3.94 – 3.83 (m, 2H), 3.76 – 3.65 (m, 1H), 3.64 – 3.49 (m, 2H), 3.20 – 3.04 (m, 3H), 3.00 – 2.64 (m, 5H), 2.52 – 2.34 (m, 2H), 2.18 – 1.89 (m, 5H)。
LCMS m/z = 377.3 [M/2 +1]+
。
實施例
17-1
：
5-[3-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-基]-2- [(3R)-2,6-二氧代-3-呱啶基]異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物 17-a
)
5-[3-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidin-1-yl]-2-[(3R)-2,6-dioxo-3-piperidyl]isoindoline-1,3-dione
5-[3-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-基]-2- [(3S)-2,6-二氧代-3-呱啶基]異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物 17-b
)
5-[3-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidin-1-yl]-2-[(3S)2,6-dioxo-3-piperidyl]isoindoline-1,3-dione
第一步：化合物17-a及17-b製備
化合物17通過高效液相色譜法分離製備得到化合物17-a及17-b。製備條件如下：
儀器及製備柱：採用Thar 200 preparative SFC (SFC-7) 製備液相，製備柱型號ChiralCel OJ, 250 × 50 mm I.D., 10 μm。
製備方法：粗品用甲醇/二氯甲烷溶解，製備成樣品液。
流動相體系：sCO2
（超臨界CO2
）/乙醇，等梯度沖提：sCO2
/乙醇 = 55/45。
流速：200 mL/min
化合物17-a及17-b的分析方法：
儀器：安捷倫HPLC1260
色譜柱：大賽璐CHIRALPAK IC
規格：4.6 mm × 250 mm，5 µm
流動相A：20 mM碳酸氫銨溶液 (二乙胺調節pH至9.0)
流動相B：乙腈
柱溫：35 ℃
流速：0.8 mL/min
波長：264 nm
沖提程序：流動相A:B = 20:80，等度沖提50 min。
化合物17-a保留時間：32.234 min；
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 9.04 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 7.69 – 7.60 (m, 3H), 7.42 – 7.34 (m, 2H), 7.21 – 7.11 (m, 3H), 7.11 – 7.05 (m, 2H), 6.78 (d, 1H), 6.52 (dd, 1H), 5.63 (brs, 2H), 4.92 (dd, 1H), 4.85 – 4.72 (m, 1H), 4.09 – 3.98 (m, 2H), 3.93 – 3.82 (m, 2H), 3.74 – 3.64 (m, 1H), 3.61 – 3.50 (m, 2H), 3.16 – 3.01 (m, 3H), 2.99 – 2.64 (m, 5H), 2.52 – 2.34 (m, 2H), 2.17 – 1.95 (m, 5H)。
化合物17-b保留時間：36.797 min。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.37 (s, 1H), 7.68 – 7.57 (m, 3H), 7.43 – 7.33 (m, 2H), 7.20 – 7.10 (m, 3H), 7.10 – 7.04 (m, 2H), 6.78 (d, 1H), 6.52 (dd, 1H), 5.71 (brs, 2H), 4.92 (dd, 1H), 4.84 – 4.72 (m, 1H), 4.08 – 3.98 (m, 2H), 3.91 – 3.82 (m, 2H), 3.76 – 3.64 (m, 1H), 3.60 – 3.50 (m, 2H), 3.16 – 3.01 (m, 3H), 2.98 – 2.62 (m, 5H), 2.51 – 2.34 (m, 2H), 2.17 – 1.97 (m, 5H)。
實施例
17-a
5-[3-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-基]-2-[(3R)-2,6-二氧代-3-呱啶基]異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物17-a)
5-[3-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidin-1-yl]-2-[(3R)-2,6-dioxo-3-piperidyl]isoindoline-1,3-dione 
第一步：4-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)[1,3'-雙氮雜環丁]-1'-基)鄰苯二甲酸酯 (17e)
Dimethyl 4-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-[1,3'-biazetidin]-1'-yl)phthalate
將1-[1-[1-(氮雜環丁-3-基)氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (17d) (83 g, 0.167 mol) 溶解於400 mL DMSO中，加入4-氟鄰苯二甲酸二甲酯 (40 g, 0.188 mol) (合成方法見Beilstein J. Org. Chem. 2017
,13
, 2659-2662) 和DIPEA (43.17 g, 0.334 mol)，於85℃下攪拌反應5 h。將反應液冷卻至室溫，加入4 L水析出黃色固體，抽濾乾燥，得粗品4-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)[1,3'-雙氮雜環丁]-1'-基)鄰苯二甲酸酯 (17e) (120 g)。
LC-MS m/z = 689.3 [M+1]+
。
第二步：4-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-[1,3'-雙氮雜環丁]-1'-基)鄰苯二酸 (17f)
4-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-[1,3'-biazetidin]-1'-yl)phthalic acid
將上述粗品4-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)[1,3'-雙氮雜環丁]-1'-基)鄰苯二甲酸酯 (17e) (120 g) 溶於400 mL 1,4-二氧六環中，加入300 mL甲醇及200 mL 5 mol/L氫氧化鈉溶液，於75 ℃下攪拌反應1 h。冷卻至室溫，減壓濃縮出大部分甲醇和1,4-二氧六環，加入1 L水，用1 L二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 9:1的混合溶劑萃取，分離出水相，水相用醋酸調體系pH至5.0，再用1 L二氯甲烷/甲醇 (v/v) =9:1的混合溶劑萃取，分離出有機相，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得粗品4-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-[1,3'-雙氮雜環丁]-1'-基)鄰苯二酸 (17f) (93 g)。
LCMS m/z = 661.3 [M+1]+
。
第三步：5-[3-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-基]-2-[(3R)-2,6-二氧代-3-呱啶基]異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物17-a)
5-[3-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidin-1-yl]-2-[(3R)-2,6-dioxo-3-piperidyl]isoindoline-1,3-dione
將上述粗品4-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-[1,3'-雙氮雜環丁]-1'-基)鄰苯二酸 (17f) (40.0 g) 溶解在200 mL N,N-二甲基甲醯胺中，加入N-甲基咪唑 (7.20 g，87.7 mmol)，再加入四甲基氯代脲六氟磷酸酯 (20.0 g，71.3 mmol)，室溫攪拌30 min，加入200 mL無水甲醇，室溫攪拌16 h。將反應液減壓濃縮，殘留物加入500 mL水打漿1 h，減壓抽濾，濾餅用100 mL水洗滌一次，收集濾餅乾燥，得粗品 (40 g)。將該粗品 (28.0 g) 溶解在175 mL N,N-二甲基甲醯胺中，加入二異丙基乙基胺 (8.03 g，62.1 mmol)，再加入HATU (18.9 g，49.7 mmol)，室溫攪拌30 min，依次加入 (R)-3-胺基呱啶-2,6-二酮鹽酸鹽 (8.90 g，54.1 mmol) (合成方法見Heterocycles 2015
,91
, 764-781) 和二異丙基乙基胺 (8.03 g，62.1 mmol)，繼續室溫攪拌30 min。將反應液慢慢滴加到700 mL正在攪拌的水中，減壓抽濾，濾餅用50 mL水洗滌，收集濾餅，用300 mL甲醇與二氯甲烷 (v/v) =1:9的混合溶劑溶解，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後向殘留物加入350 mL二氯甲烷和二異丙基乙基胺 (8.03 g，62.1 mmol)，室溫攪拌18 h。向反應液中加入100 mL水和100 mL二氯甲烷，分液，有機層用100 mL飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-93:7)，得5-[3-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-基]-2-[(3R)-2,6-二氧代-3-呱啶基]異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物17-a) (16.0 g，從化合物17d算三步產率：42%，ee = 96%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 9.04 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 7.69 – 7.60 (m, 3H), 7.42 – 7.34 (m, 2H), 7.21 – 7.11 (m, 3H), 7.11 – 7.05 (m, 2H), 6.78 (d, 1H), 6.52 (dd, 1H), 5.63 (brs, 2H), 4.92 (dd, 1H), 4.85 – 4.72 (m, 1H), 4.09 – 3.98 (m, 2H), 3.93 – 3.82 (m, 2H), 3.74 – 3.64 (m, 1H), 3.61 – 3.50 (m, 2H), 3.16 – 3.01 (m, 3H), 2.99 – 2.64 (m, 5H), 2.52 – 2.34 (m, 2H), 2.17 – 1.95 (m, 5H)。
LCMS m/z = 753.3 [M+1]+
。
實施例
17-b
5-[3-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-基]-2-[(3S)-2,6-二氧代-3-呱啶基]異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物17-b)
5-[3-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidin-1-yl]-2-[(3S)-2,6-dioxo-3-piperidyl]isoindoline-1,3-dione 
第一步：4-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)[1,3'-雙氮雜環丁]-1'-基)鄰苯二甲酸酯 (17e)
Dimethyl 4-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-[1,3'-biazetidin]-1'-yl)phthalate
將1-[1-[1-(氮雜環丁-3-基)氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (17d) (83 g, 0.167 mol) 溶解於400 mL DMSO中，加入4-氟鄰苯二甲酸二甲酯 (40 g, 0.188 mol) (合成方法見Beilstein J. Org. Chem.
2017,13
, 2659-2662) 和DIPEA (43.17 g, 0.334 mol)，於85℃下攪拌反應5 h。將反應液冷卻至室溫，加入4 L水析出黃色固體，抽濾乾燥，得粗品4-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)[1,3'-雙氮雜環丁]-1'-基)鄰苯二甲酸酯 (17e) (120 g)。
LC-MS m/z = 689.3 [M+1]+
。
第二步：4-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-[1,3'-雙氮雜環丁]-1'-基)鄰苯二酸 (17f)
4-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-[1,3'-biazetidin]-1'-yl)phthalic acid
將上述粗品4-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)[1,3'-雙氮雜環丁]-1'-基)鄰苯二甲酸酯 (17e) (120 g) 溶於400 mL 1,4-二氧六環中，加入300 mL甲醇及200 mL 5 mol/L氫氧化鈉溶液，於75 ℃下攪拌反應1 h。冷卻至室溫，減壓濃縮出大部分甲醇和1,4-二氧六環，加入1 L水，用1 L二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 9:1的混合溶劑萃取，分離出水相，水相用醋酸調體系pH至5.0，再用1 L二氯甲烷/甲醇 (v/v) =9:1的混合溶劑萃取，分離出有機相，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得粗品4-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-[1,3'-雙氮雜環丁]-1'-基)鄰苯二酸 (17f) (93 g)。
LCMS m/z = 661.3 [M+1]+
。
第三步：5-[3-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-基]-2-[(3S)-2,6-二氧代-3-呱啶基]異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物17-b)
5-[3-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidin-1-yl]-2-[(3S)-2,6-dioxo-3-piperidyl]isoindoline-1,3-dione
將上述粗品4-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-[1,3'-雙氮雜環丁]-1'-基)鄰苯二酸 (17f) (40.0 g) 溶解在200 mL N,N-二甲基甲醯胺中，加入N-甲基咪唑 (7.20 g，87.7 mmol)，再加入四甲基氯代脲六氟磷酸酯 (20.0 g，71.3 mmol)，室溫攪拌30 min，加入200 mL無水甲醇，室溫攪拌16 h。將反應液減壓濃縮，殘留物加入500 mL水打漿1 h，減壓抽濾，濾餅用100 mL水洗滌一次，收集濾餅乾燥，得粗品 (40 g)。將該粗品 (40.0 g) 溶解在 200 mL N,N-二甲基甲醯胺中，加入二異丙基乙基胺 (11.5 g，89.0 mmol)，再加入HATU (27.0 g，71.0 mmol)，室溫攪拌30 min，依次加入 (S)-3-胺基呱啶-2,6-二酮鹽酸鹽 (12.7 g，77.2 mmol) (合成方法見Heterocycles
2015,91
, 764-781) 和二異丙基乙基胺 (11.5 g，89.0 mmol)，繼續室溫攪拌30 min。將反應液慢慢滴加到800 mL正在攪拌的水中，減壓抽濾，濾餅用100 mL水洗滌，收集濾餅，用600 mL甲醇與二氯甲烷 (v/v) = 1:9 的混合溶劑溶解，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後向殘留物加入400 mL二氯甲烷和二異丙基乙基胺 (11.5 g，89.0 mmol)，室溫攪拌18 h。向反應液中加入100 mL水和100 mL二氯甲烷，分液，有機層用100 mL飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-93:7)，得5-[3-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-基]-2-[(3S)-2,6-二氧代-3-呱啶基]異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物17-b) (20.0 g，從化合物17d算三步產率：37%，ee = 93%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.37 (s, 1H), 7.68 – 7.57 (m, 3H), 7.43 – 7.33 (m, 2H), 7.20 – 7.10 (m, 3H), 7.10 – 7.04 (m, 2H), 6.78 (d, 1H), 6.52 (dd, 1H), 5.71 (brs, 2H), 4.92 (dd, 1H), 4.84 – 4.72 (m, 1H), 4.08 – 3.98 (m, 2H), 3.91 – 3.82 (m, 2H), 3.76 – 3.64 (m, 1H), 3.60 – 3.50 (m, 2H), 3.16 – 3.01 (m, 3H), 2.98 – 2.62 (m, 5H), 2.51 – 2.34 (m, 2H), 2.17 – 1.97 (m, 5H)。
LCMS m/z = 753.3 [M+1]+
。
實施例
18
：
cis
-5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸鹽 (化合物 18
)
cis
-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione trifluoroacetate 
第一步：cis
-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-甲酸第三丁酯 (18a)
cis
-tert-butyl 4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro- [1,4'-bipiperidine]-1'-carboxylate
將3-(4-苯氧基苯基)-1-(呱啶-4-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (1a) (合成方法見J. Med. Chem. 2015
,58
, 9625-9638) (1.5 g, 3.88 mmol) 溶解於10mL DMSO與50mL DCE中，加入N
-Boc-3-氟-4-呱啶酮 (2.1 g, 9.70 mmol)，室溫攪拌10分鐘後，向其加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (4.1 g，19.40 mmol)，室溫下攪拌過夜。向反應液中緩慢滴加80mL飽和碳酸氫鈉溶液，用100mL二氯甲烷萃取，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得到cis
-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-1-甲酸第三丁酯 (18a) (980 mg，收率：43%)。
LC-MS m/z = 588.3 [M+1]+
。
第二步：cis
-1-(3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (18b)
cis
-1-(3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine trifluoroacetate
將cis
-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-1-甲酸第三丁酯 (18a) (0.5 g, 0.85 mmol) 溶解到50mL DCM中，加入10mL三氟乙酸，室溫攪拌4h。將反應體系直接減壓濃縮即得cis
-1-(3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (18b) (0.60 g)。
LCMS m/z = 488.5 [M+1]+
。
第三步：cis
-3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (18c)
cis
-tert-butyl 3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro- [1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidine-1-carboxylate
將cis
-1-(3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (18b) (540 mg) 溶於15mL 1,2-二氯乙烷與2mL DMSO中，加入3-氧代氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (564 mg, 3.30 mmol)，室溫攪拌10分鐘，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (1.4 g，6.60 mmol)，室溫攪拌過夜。向反應液中緩慢滴加80mL飽和碳酸氫鈉溶液，用50mL DCM萃取，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得cis
-3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (18c) (290 mg)。
LCMS m/z = 643.3 [M+1]+
。
第四步：cis
-1-(1'-(氮雜環丁-3-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (18d)
cis
-1-(1'-(azetidin-3-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine trifluoroacetate
將cis
-3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (18c) (290 mg, 0.45 mmol) 溶解到10mL DCM中，加入2mL三氟乙酸，室溫攪拌4h。將反應體系直接減壓濃縮即得cis
-1-(1'-(氮雜環丁-3-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (18d) (0.30 g)。
LCMS m/z = 543.5 [M+1]+
。
第五步：cis
-5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸鹽 (化合物18)
cis
-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione trifluoroacetate
將cis
-1-(1'-(氮雜環丁-3-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (18d) (0.3 g) 溶於8.5mL DMSO中，加入1.5mL DIPEA和2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (250 mg，0.90 mmol)，於80℃攪拌5h。將反應液冷卻至室溫，加入10mL水，用50mL乙酸乙酯萃取，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得cis
-5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸鹽 (化合物18) (80 mg)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ 11.05 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.71 – 7.61 (m, 3H), 7.47 – 7.39 (m, 2H), 7.22 – 7.08 (m, 5H), 6.82 – 6.78 (m, 1H), 6.66 (dd, 1H), 5.11 – 4.92 (m, 2H), 4.71 – 4.58 (m, 1H), 4.15 – 4.05 (m, 2H), 3.92 – 3.77 (m, 2H), 3.45 – 3.36 (m, 1H), 3.17 – 3.02 (m, 3H), 2.99 – 2.82 (m, 2H), 2.64 – 2.53 (m, 3H), 2.47 – 2.39 (m, 2H), 2.23 – 1.97 (m, 5H), 1.96 – 1.79 (m, 3H), 1.75 – 1.64 (m, 1H)。
LCMS m/z = 799.3 [M+1]+
。
實施例
18-1
：
cis
-5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物 18-1
)
cis
-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將化合物18 (50 mg) 溶於10mL質量分數為28%的濃氨水中，用DCM萃取 (12 mL × 3)，合併有機相，用質量分數為28%的濃氨水洗滌 (12 mL × 3)，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，向殘留物中加10mL石油醚打漿0.5h，過濾，得到游離鹼cis
-5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物18-1) (35 mg)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 9.16 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 7.69 – 7.59 (m, 3H), 7.43 – 7.34 (m, 2H), 7.21 – 7.03 (m, 5H), 6.78 (d, 1H), 6.52 (dd, 1H), 5.72 (brs, 2H), 5.20 – 4.97 (m, 1H), 4.96 – 4.88 (m, 1H), 4.87 – 4.73 (m, 1H), 4.16 – 4.04 (m, 2H), 4.00 – 3.85 (m, 2H), 3.52 – 3.43 (m, 1H), 3.36 – 3.13 (m, 3H), 3.10 – 3.00 (m, 1H), 2.95 – 2.62 (m, 5H), 2.59 – 2.35 (m, 3H), 2.25 – 2.00 (m, 6H), 1.89 – 1.79 (m, 1H)。
LCMS m/z = 799.3 [M+1]+
。
實施例
19
：
trans
-5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-基)-[1,3'-雙氮雜環丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸鹽 (化合物 19
)
trans
-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoropiperidin-1-yl)-[1,3'-biazetidin]-1'-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione trifluoroacetate 
第一步：3-氟-4-羥基呱啶-1-甲酸第三丁酯 (19b)
tert-butyl 3-fluoro-4-hydroxypiperidine-1-carboxylate
將3-氟-4-呱啶酮-甲酸第三丁酯 (19a) (6.51 g, 30.0 mmol) 溶解於80mL無水甲醇中，在室溫下緩慢分批加入硼氫化鈉 (2.28 g，60.0 mmol)，加完後室溫攪拌30分鐘。反應液用150mL飽和碳酸氫鈉溶液淬滅，用100mL二氯甲烷萃取，有機相用100mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (石油醚/乙酸乙酯 (v/v) = 2:1)，得順反異構體混合物3-氟-4-羥基呱啶-1-甲酸第三丁酯 (19b) (5.7 g，cis
/trans
= 2.5:1，收率：87%)。
LC-MS m/z = 220.1 [M+1]+
。
第二步：trans
-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-甲酸第三丁酯 (19c)
trans
-tert-butyl 4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3- fluoropiperidine-1-carboxylate
將順反異構體混合物3-氟-4-羥基呱啶-1-甲酸第三丁酯 (19b) (cis
/trans
= 2.5:1) (1.0 g, 4.56 mmol) 和3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (1.15 g，3.80 mmol) 溶於40mL THF中，向其加入三苯基膦 (1.5 g，5.72 mmol)，在氮氣氛圍下緩慢滴加DIAD (1.15 g，5.69 mmol)，加完後室溫攪拌過夜。反應完畢，緩慢往體系裡加入50mL飽和碳酸氫鈉溶液，用100mL二氯甲烷萃取，有機相用100mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 15:1)，得trans
-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-甲酸第三丁酯 (19c) (0.8 g，收率：35%)。
LCMS m/z = 505.4 [M+1]+
。
第三步：trans
-1-(3-氟呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (19d)
trans
-1-(3-fluoropiperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine trifluoroacetate
將trans
-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-甲酸第三丁酯 (19c) (800 mg, 1.59 mmol) 溶解到20mL DCM中，加入5mL三氟乙酸，室溫攪拌4h。反應完畢，將體系直接減壓濃縮，即得trans
-1-(3-氟呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (19d) (0.90 g)。
LCMS m/z = 405.3 [M+1]+
。
第四步：trans
-3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (19e)
trans
-tert-butyl 3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoropiperidin-1-yl)azetidine-1-carboxylate
將trans
-1-(3-氟呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (19d) (0.8 g) 溶於35mL DCE與5mL DMSO中，加入3-氧代氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (542 mg, 3.17 mmol)，室溫攪拌10分鐘後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (1.68 g，7.92 mmol)，室溫攪拌過夜。向反應液中緩慢加入30mL飽和碳酸氫鈉水溶液，用50mL乙酸乙酯萃取，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得trans
-3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (19e) (930 mg)。
LCMS m/z = 560.5 [M+1]+
。
第五步：trans
-1-(1-(氮雜環丁-3-基)-3-氟呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (19f)
trans
-1-(1-(azetidin-3-yl)-3-fluoropiperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine trifluoroacetate
將trans
-3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (19e) (500 mg, 0.89 mmol) 溶解到20mL DCM中，加入5mL三氟乙酸，室溫攪拌4h。反應完後將體系直接減壓濃縮，得trans
-1-(1-(氮雜環丁-3-基)-3-氟呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (19f) (0.65 g)。
LCMS m/z = 460.3 [M+1]+
。
第六步：trans
-3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-基)-[1,3'-雙氮雜環丁]-1'-甲酸第三丁酯 (19g)
trans
-tert-butyl 3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoropiperidin-1-yl)-[1,3'-biazetidine]-1'-carboxylate
將trans
-1-(1-(氮雜環丁-3-基)-3-氟呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (19f) (650 mg) 溶於25mL DCE與2mL DMSO中，加入3-氧代氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (485 mg, 2.83 mmol)，室溫攪拌10分鐘後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (1.12 g，5.28 mmol)，室溫攪拌過夜。向反應體系中緩慢加入60mL飽和碳酸氫鈉溶液，用60mL乙酸乙酯萃取，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得trans
-3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-基)-[1,3'-雙氮雜環丁]-1'-甲酸第三丁酯 (19g) (450 mg)。
LCMS m/z = 615.6 [M+1]+
。
第七步：trans
-1-(1-([1,3'-雙氮雜環丁]-3-基)-3-氟呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (19h)
trans
-1-(1-([1,3'-biazetidin]-3-yl)-3-fluoropiperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine trifluoroacetate
將trans
-3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-基)-[1,3'-雙氮雜環丁]-1'-甲酸第三丁酯 (19g) (400 mg, 0.65 mmol) 溶解在20mL DCM中，加入4mL三氟乙酸，室溫攪拌4h。將反應體系直接減壓濃縮，得trans
-1-(1-([1,3'-雙氮雜環丁]-3-基)-3-氟呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (19h) (0.56 g)。
LCMS m/z = 515.5 [M+1]+
。
第八步：trans
-5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-基)-[1,3'-雙氮雜環丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸鹽 (化合物19)
trans
-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoropiperidin-1-yl)-[1,3'-biazetidin]-1'-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione trifluoroacetate
將trans
-1-(1-([1,3'-雙氮雜環丁]-3-基)-3-氟呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (19h) (0.5 g) 溶於25mL DMSO中，加入3mL DIPEA和2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (352 mg，1.28 mmol)，於外浴80℃攪拌反應5h。將反應液冷卻至室溫，加入50mL水，用100mL乙酸乙酯萃取，有機相用100mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得trans
-5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-基)-[1,3'-雙氮雜環丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸鹽 (化合物19) (120 mg)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ 11.05 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.73 – 7.60 (m, 3H), 7.48 – 7.40 (m, 2H), 7.23 – 7.10 (m, 5H), 6.80 (d, 1H), 6.66 (dd, 1H), 5.25 – 5.00 (m, 2H), 4.88 – 4.75 (m, 1H), 4.12 – 4.00 (m, 2H), 3.89 – 3.78 (m, 2H), 3.75 – 3.62 (m, 1H), 3.54 – 3.39 (m, 2H), 3.28 – 2.96 (m, 4H), 2.95 – 2.77 (m, 2H), 2.64 – 2.53 (m, 2H), 2.30 – 2.08 (m, 3H), 2.07 – 1.92 (m, 2H)。
LCMS m/z = 771.3 [M+1]+
。
實施例
19-1
：
trans
-5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-基)-[1,3'-雙氮雜環丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物 19-1
)
trans
-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoropiperidin-1-yl)-[1,3'-biazetidin]-1'-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將化合物19 (95 mg) 溶於17mL質量分數為28%的濃氨水中，用DCM萃取 (20 mL × 3)，合併有機相，用質量分數為28%的濃氨水洗滌 (20 mL × 3)，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，向殘留物中加17mL石油醚打漿0.5h，過濾，得到游離鹼trans
-5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-基)-[1,3'-雙氮雜環丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物19-1) (80 mg)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 9.30 (brs, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.69 – 7.61 (m, 3H), 7.43 – 7.35 (m, 2H), 7.21 – 7.04 (m, 5H), 6.79 (d, 1H), 6.53 (dd, 1H), 5.73 (brs, 2H), 5.36 – 5.13 (m, 1H), 4.97 – 4.83 (m, 2H), 4.11 – 4.00 (m, 2H), 3.94 – 3.84 (m, 2H), 3.76 – 3.56 (m, 3H), 3.30 – 3.05 (m, 4H), 2.93 – 2.64 (m, 4H), 2.54 – 2.39 (m, 1H), 2.23 – 2.02 (m, 4H)。
LCMS m/z = 771.3 [M+1]+
。
實施例
20
：
trans
-5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸鹽 (化合物 20
)
trans
-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione trifluoroacetate 
第一步：trans
-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-甲酸第三丁酯 (20a)
trans
-tert-butyl 4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro- [1,4'-bipiperidine]-1'-carboxylate
將trans
-1-(3-氟呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (19d) (520 mg) 溶於15mL DCE與2mL DMSO中，加入N
-Boc-4-呱啶酮 (1.05 g, 5.27 mmol)，室溫攪拌10分鐘後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (1.12 g，5.28 mmol)，室溫攪拌過夜。緩慢向反應體系中加入50mL飽和碳酸氫鈉溶液，用50mL DCM萃取，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得trans
-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-甲酸第三丁酯 (20a) (500 mg)。
LCMS m/z = 588.4 [M+1]+
。
第二步：trans
-1-(3-氟-[1,4'-聯呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (20b)
trans
-1-(3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine trifluoroacetate
將trans
-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-甲酸第三丁酯 (20a) (500 mg, 0.85 mmol) 溶解到20mL DCM中，加入5mL三氟乙酸，室溫攪拌4h。將反應體系直接減壓濃縮，得trans
-1-(3-氟-[1,4'-聯呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (20b) (0.60 g)。
LCMS m/z = 488.3 [M+1]+
。
第三步：trans
-3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (20c)
trans
-tert-butyl 3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidine-1-carboxylate
將trans
-1-(3-氟-[1,4'-聯呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (20b) (600 mg) 溶於35mL DCE與2mL DMSO中，加入3-氧代氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (727 mg, 4.25 mmol)，室溫攪拌10分鐘後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (900 mg，4.25 mmol)，室溫攪拌過夜。向反應體系中緩慢加入80mL飽和碳酸氫鈉溶液，用50mL DCM萃取，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得trans
-3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (20c) (550 mg)。
LCMS m/z = 643.4 [M+1]+
。
第四步：trans
-1-(1'-(氮雜環丁-3-基)-3-氟-[1,4'-聯呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (20d)
trans
-1-(1'-(azetidin-3-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine trifluoroacetate
將trans
-3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (20c) (500 mg, 0.78 mmol) 溶解到25mL DCM中，加入5mL三氟乙酸，室溫攪拌4h。將反應體系直接減壓濃縮，即得trans
-1-(1'-(氮雜環丁-3-基)-3-氟-[1,4'-聯呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (20d) (0.55 g)。
LCMS m/z = 543.2 [M+1]+
。
第五步：trans
-5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸鹽 (化合物20)
trans
-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione trifluoroacetate
將trans
-1-(1'-(氮雜環丁-3-基)-3-氟-[1,4'-聯呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (20d) (0.5 g) 溶於25mL DMSO中，加入3mL DIPEA和2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (310 mg，1.12 mmol)，於外浴80℃攪拌反應5h。將反應液冷卻至室溫，加入50mL水，用100mL乙酸乙酯萃取，有機相用100mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 = 15:1-8:1)，得trans
-5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸鹽 (化合物20) (120 mg)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ 11.05 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.72 – 7.61 (m, 3H), 7.47 – 7.40 (m, 2H), 7.22 – 7.10 (m, 5H), 6.79 (d, 1H), 6.65 (dd, 1H), 5.19 – 4.94 (m, 2H), 4.83 – 4.70 (m, 1H), 4.15 – 4.05 (m, 2H), 3.89 – 3.76 (m, 2H), 3.41 – 3.34 (m, 1H), 3.00 – 2.81 (m, 4H), 2.63 – 2.52 (m, 2H), 2.49 – 2.32 (m, 4H), 2.24 – 2.10 (m, 1H), 2.07 – 1.94 (m, 2H), 1.94 – 1.82 (m, 2H), 1.82 – 1.70 (m, 2H), 1.57 – 1.41 (m, 2H)。
LCMS m/z = 799.3 [M+1]+
。
實施例
20-1
：
trans
-5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物 20-1
)
trans
-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將化合物20 (90 mg) 溶於17mL質量分數為28%的濃氨水中，用DCM萃取 (20 mL × 3)，合併有機相，用質量分數為28%的濃氨水洗滌 (20 mL × 3)，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，向殘留物中加17mL石油醚打漿0.5h，過濾，得到游離鹼trans
-5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物20-1) (70 mg)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.86 (brs, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.71 – 7.60 (m, 3H), 7.43 – 7.35 (m, 2H), 7.21 – 7.11 (m, 3H), 7.11 – 7.04 (m, 2H), 6.79 (d, 1H), 6.53 (dd, 1H), 5.78 (brs, 2H), 5.33 – 5.10 (m, 1H), 4.97 – 4.81 (m, 2H), 4.16 – 4.06 (m, 2H), 4.00 – 3.86 (m, 2H), 3.48 – 3.34 (m, 2H), 3.08 – 2.94 (m, 3H), 2.93 – 2.65 (m, 3H), 2.59 – 2.36 (m, 4H), 2.17 – 1.97 (m, 4H), 1.96 – 1.85 (m, 2H), 1.78 – 1.62 (m, 2H)。
LCMS m/z = 799.3 [M+1]+
。
實施例
21
：
5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-[1,3'-聯氮雜環丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物 21
)
5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-[1,3'-biazetidin]-1'-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione 
第一步：2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5,6-二氟異吲哚啉-1,3-二酮 (21b)
2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-5,6-difluoroisoindoline-1,3-dione
將4,5-二氟鄰苯二甲酸 (21a) (500 mg, 2.47 mmol) 溶解到25mL乙腈中，加入3-胺基呱啶-2,6-二酮鹽酸鹽 (0.41 g, 2.49 mmol) 與CDI (0.8 g，4.94 mmol)，外浴加熱至回流，反應4h。將反應體系直接減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (石油醚/乙酸乙酯 (v/v) = 2:1)，得2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5,6-二氟異吲哚啉-1,3-二酮 (21b) (0.4 g，產率：55.0%)。
LCMS m/z = 295.2 [M+1]+
。
第二步：5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-[1,3'-聯氮雜環丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物21)
5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-[1,3'-biazetidin]-1'-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione
將1-[1-[1-(氮雜環丁-3-基)氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (17d) (0.25 g, 0.50 mmol) 溶於10mL DMSO中，加入1mL DIPEA和2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5,6-二氟異吲哚啉-1,3-二酮 (21b) (180 mg，0.61 mmol)，外浴80℃攪拌5h。將反應液冷卻至室溫，加入50mL水淬滅，用100mL乙酸乙酯萃取，有機相用100mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 15:1)，得5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-[1,3'-聯氮雜環丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物21) (100 mg，收率：26%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ 11.07 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.70 – 7.63 (m, 2H), 7.58 (d, 1H), 7.48 – 7.40 (m, 2H), 7.22 – 7.09 (m, 5H), 6.92 (d, 1H), 5.06 (dd, 1H), 4.74 – 4.61 (m, 1H), 4.24 – 4.14 (m, 2H), 4.00 – 3.88 (m, 2H), 3.66 – 3.55 (m, 1H), 3.49 – 3.39 (m, 2H), 3.08 – 2.78 (m, 6H), 2.64 – 2.52 (m, 2H), 2.29 – 2.13 (m, 2H), 2.09 – 1.96 (m, 3H), 1.96 – 1.85 (m, 2H)。
LCMS m/z = 771.3 [M+1]+
。
實施例
22
：
4-[3-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物 22
)
4-[3-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione 
將1-(1'-(氮雜環丁-3-基)-[1,4'-聯呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (8b) (0.12 g, 0.23 mmol) 溶於3mL DMSO中，加入0.2mL DIPEA和2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-4-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (90 mg，0.30 mmol)，外浴90℃攪拌5h。將反應液冷卻至室溫，用50mL乙酸乙酯萃取，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得4-[3-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物22) (58 mg，收率：32%)
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.41 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.63 (d, 2H), 7.48 – 7.35 (m, 3H), 7.22 – 7.11 (m, 4H), 7.10 – 7.05 (m, 2H), 6.60 (d, 1H), 5.80 (brs, 2H), 4.92 (dd, 1H), 4.87 – 4.68 (m, 1H), 4.44 – 4.31 (m, 2H), 4.11 – 4.01 (m, 2H), 3.30 – 3.08 (m, 3H), 3.02 – 2.93 (m, 2H), 2.92 – 2.68 (m, 4H), 2.63 – 2.39 (m, 4H), 2.14 – 2.09 (m, 3H), 1.99 – 1.89 (m, 4H), 1.77 – 1.62 (m, 2H)。
LCMS m/z = 781.3 [M+1]+
。
實施例
23
：
5-[4-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]-1-呱啶基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物 23
)
5-[4-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]-1-piperidyl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione 
第一步：4-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (23a)
tert-butyl 4-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]piperidine-1-carboxylate
將1-[1-(氮雜環丁-3-基)-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (11b) (0.12 g, 0.27 mmol) 溶解於5mL DCE中，加入4-氧代呱啶-1-甲酸第三丁酯 (0.5 g, 3.0 mmol)。室溫攪拌10分鐘後，向其加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.6 g，3.0 mmol)，室溫下攪拌過夜。向反應液中緩慢滴加30mL飽和碳酸氫鈉溶液，用30mL二氯甲烷萃取，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得到4-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (23a) (0.15 g，收率：88%)。
LC-MS m/z = 625.3 [M+1]+
。
第二步：3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-(4-呱啶基)氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (23b)
3-(4-phenoxyphenyl)-1-[1-[1-(4-piperidyl)azetidin-3-yl]-4-piperidyl]pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將4-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (23a) (0.15 g, 0.24 mmol) 溶解到5mL DCM中，加入1.5mL三氟乙酸，室溫攪拌3h。向反應液中緩慢滴加飽和碳酸氫鈉溶液調pH至9-10，用30mL二氯甲烷萃取，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後得3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-(4-呱啶基)氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (23b) (0.12 g，產率：95%)。
LCMS m/z = 525.3 [M+1]+
。
第三步：5-[4-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]-1-呱啶基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物23)
5-[4-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]-1-piperidyl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
將3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-(4-呱啶基)氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (23b) (0.12 g, 0.23 mmol) 溶於3mL DMSO中，加入0.4mL DIPEA和2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (90 mg，0.30 mmol)，外浴90℃攪拌5h。將反應液冷卻至室溫，用50mL乙酸乙酯萃取，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得5-[4-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]-1-呱啶基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物23) (6 mg，收率：4%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.55 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.67 (d, 1H), 7.64 – 7.58 (m, 2H), 7.41 – 7.34 (m, 2H), 7.27 – 7.24 (m, 1H), 7.19 – 7.10 (m, 3H), 7.09 – 7.01 (m, 3H), 5.80 (brs, 2H), 4.92 (dd, 1H), 4.86 – 4.75 (m, 1H), 4.22 – 4.04 (m, 2H), 3.98 – 3.88 (m, 2H), 3.54 – 3.34 (m, 3H), 3.03 – 2.68 (m, 8H), 2.49 – 2.33 (m, 3H), 2.28 – 2.06 (m, 5H), 2.00 – 1.93 (m, 3H)。
LCMS m/z = 781.3 [M+1]+
。
實施例
24
：
5-[3-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]吡咯-1-基]氮雜環丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物 24
)
5-[3-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]pyrrolidin-1-yl]azetidin-1-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione 
將1-[1-[1-(氮雜環丁-3-基)吡咯-3-基]-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (16d) (0.1 g, 0.20 mmol) 溶於3mL DMSO中，加入0.2mL DIPEA和2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (75 mg，0.27 mmol)，外浴90℃攪拌5h。將反應液冷卻至室溫，用50mL乙酸乙酯萃取，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得5-[3-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]吡咯-1-基]氮雜環丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物24) (30 mg，收率：20%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.75 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.67 – 7.62 (m, 3H), 7.43 – 7.36 (m, 2H), 7.21 – 7.12 (m, 3H), 7.11 – 7.07 (m, 2H), 6.79 (d, 1H), 6.52 (dd, 1H), 5.74 (brs, 2H), 4.93 (dd, 1H), 4.88 – 4.76 (m, 1H), 4.14 – 4.06 (m, 2H), 3.97 – 3.89 (m, 2H), 3.62 – 3.53 (m, 1H), 3.28 – 3.16 (m, 1H), 3.15 – 3.00 (m, 2H), 2.97 – 2.70 (m, 6H), 2.67 – 2.58 (m, 1H), 2.57 – 2.39 (m, 4H), 2.35 – 2.23 (m, 2H), 2.16 – 2.09 (m, 3H)。
LCMS m/z = 767.3 [M+1]+
。
實施例
25
：
3-[5-[3-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]-1-氧代異吲哚啉-2-基]呱啶-2,6-二酮 (化合物 25
)
3-[5-[3-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]-1-oxo-isoindolin-2-yl]piperidine-2,6-dione 
將1-(1'-(氮雜環丁-3-基)-[1,4'-聯呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (8b) (0.635 g，1.21 mmol) 溶解在12mL 1,4-二氧六環中，依次加入3-(5-溴-1-氧代異吲哚啉-2-基)呱啶-2,6-二酮 (合成方法見J. Med. Chem. 2018
,61
, 492−503) (0.587 g，1.82 mmol) 和碳酸銫 (1.17 g，3.63 mmol)，置換氮氣三次，加入甲磺酸(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-聯苯基)(2-胺基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II) (RuPhos-Pd-G3) (0.300 g, 0.363 mmol)，加完後再置換氮氣三次，於100℃封管中攪拌反應2h。將反應液冷卻至室溫，加入20mL二氯甲烷和10mL水，分液，水層再用20mL二氯甲烷萃取，合併有機層，用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-19:1)，得到3-[5-[3-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]-1-氧代異吲哚啉-2-基]呱啶-2,6-二酮 (化合物25) (0.045 g，產率5%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ 10.92 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.69 – 7.63 (m, 2H), 7.49 (d, 1H), 7.47 – 7.40 (m, 2H), 7.22 – 7.08 (m, 5H), 6.54 – 6.46 (m, 2H), 5.03 (dd, 1H), 4.80 – 4.62 (m, 1H), 4.25 (dd, 2H), 4.05 – 3.95 (m, 2H), 3.74 – 3.63 (m, 2H), 3.36 – 3.28 (m, 1H), 3.20 – 2.97 (m, 2H), 2.96 – 2.83 (m, 3H), 2.64 – 2.09 (m, 7H), 2.05 – 1.74 (m, 7H), 1.65 – 1.43 (m, 2H)。
LCMS m/z = 767.4 [M+1]+
。
實施例
26
：
3-[5-[3-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-基]-1-氧代異吲哚啉-2-基]呱啶-2,6-二酮 (化合物 26
)
3-[5-[3-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidin-1-yl]-1-oxo-isoindolin-2-yl]piperidine-2,6-dione 
將1-[1-[1-(氮雜環丁-3-基)氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (17d) (0.600 g，1.21 mmol) 溶解在12mL 1,4-二氧六環中，依次加入3-(5-溴-1-氧代異吲哚啉-2-基)呱啶-2,6-二酮 (合成方法見J. Med. Chem. 2018
,61
, 492−503) (0.586 g，1.81 mmol) 和碳酸銫 (1.17 g，3.63 mmol)，置換氮氣三次，加入甲磺酸(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-聯苯基)(2-胺基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II) (RuPhos-Pd-G3) (0.300 g, 0.363 mmol)，加完後置換氮氣三次，於100℃封管攪拌反應2h。將反應液冷卻至室溫，加入20mL二氯甲烷和10mL水，分液，水層再用20mL二氯甲烷萃取，合併有機層，用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-19:1)，得到3-[5-[3-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-基]-1-氧代異吲哚啉-2-基]呱啶-2,6-二酮 (化合物26) (0.053 g，產率：6%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ 10.91 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.70 – 7.63 (m, 2H), 7.52 – 7.40 (m, 3H), 7.23 – 7.08 (m, 5H), 6.55 – 6.44 (m, 2H), 5.03 (dd, 1H), 4.72 – 4.61 (m, 1H), 4.24 (dd, 2H), 3.99 – 3.87 (m, 2H), 3.74 – 3.58 (m, 3H), 3.48 – 3.36 (m, 2H), 3.04 – 2.78 (m, 6H), 2.64 – 2.52 (m, 1H), 2.41 – 2.28 (m, 1H), 2.25 – 2.14 (m, 2H), 2.07 – 1.83 (m, 5H)。
LCMS m/z = 739.3 [M+1]+
。
實施例
27
：
4-[3-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物 27
)
4-[3-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidin-1-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione 
將1-[1-[1-(氮雜環丁-3-基)氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (17d) (0.100 g，0.201 mmol) 溶解在2mL二甲亞碸中，依次加入2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-4-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (0.0667 g，0.242 mmol) 和二異丙基乙基胺 (0.130 g，1.01 mmol)，加完後90℃反應2h。將反應液冷卻至室溫，慢慢滴加10mL水，過濾，濾餅用20mL二氯甲烷溶解，再用5mL飽和氯化鈉溶液洗滌，分液，用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-19:1)，得到4-[3-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物27) (0.063 g，產率：42%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ 11.05 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.69 – 7.63 (m, 2H), 7.56 (dd, 1H), 7.47 – 7.40 (m, 2H), 7.23 – 7.08 (m, 6H), 6.79 (d, 1H), 5.05 (dd, 1H), 4.72 – 4.62 (m, 1H), 4.25 – 4.14 (m, 2H), 4.00 – 3.90 (m, 2H), 3.57 – 3.48 (m, 1H), 3.47 – 3.39 (m, 2H), 3.04 – 2.78 (m, 6H), 2.63 – 2.45 (m, 2H), 2.27 – 2.13 (m, 2H), 2.07 – 1.83 (m, 5H)。
LCMS m/z = 753.3 [M+1]+
。
實施例
28
：
5-[3-[3-[(3R)-3-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物 28
)
5-[3-[3-[(3R)-3-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidin-1-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
第一步：3-[(3R)-3-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (28b)
tert-butyl 3-[(3R)-3-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1- piperidyl]azetidine-1-carboxylate
將 (R)-3-(4-苯氧基苯基)-1-(呱啶-3-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (28a) (1.00 g，2.59 mmol) 溶解在10mL氯仿中，依次加入3-氧代氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (0.665 g，3.88 mmol) 和冰醋酸 (0.311 g，5.18 mmol)，加完後70℃反應3h，冷卻至室溫，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (1.10 g，5.18 mmol)，加完後室溫反應2h。反應完畢，滴加飽和碳酸氫鈉溶液調pH至9-10，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-19:1)，得到3-[(3R)-3-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (28b) (0.600 g，產率：43%)。
LCMS m/z = 542.2 [M+1]+
。
第二步：1-[(3R)-1-(氮雜環丁-3-基)-3-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (28c)
1-[(3R)-1-(azetidin-3-yl)-3-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將3-[(3R)-3-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (28b) (0.600 g，1.11 mmol) 溶解在2mL二氯甲烷中，加入10mL 4 N鹽酸乙酸乙酯溶液，室溫攪拌2h。反應液減壓濃縮後向殘留物中加入20mL二氯甲烷，用飽和碳酸氫鈉溶液調pH至9-10，分液，用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得1-[(3R)-1-(氮雜環丁-3-基)-3-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (28c) (0.450 g，產率：92%)。
LCMS m/z = 442.2 [M+1]+
。
第三步：3-[3-[(3R)-3-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (28d)
tert-butyl 3-[3-[(3R)-3-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1- piperidyl]azetidin-1-yl]azetidine-1-carboxylate
將1-[(3R)-1-(氮雜環丁-3-基)-3-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (28c) (0.300 g，0.680 mmol) 溶解在10mL氯仿中，加入3-氧代氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (0.174 g，1.02 mmol) 和冰醋酸 (0.0816 g，1.36 mmol)，加完後70℃反應3h，冷卻至室溫，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.288 g，1.36 mmol)，加完後室溫反應2h。反應完畢，滴加飽和碳酸氫鈉溶液調pH至9-10，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-19:1)，得到3-[3-[(3R)-3-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (28d) (0.090 g，產率：22%)。
LCMS m/z = 597.3 [M+1]+
。
第四步：1-[(3R)-1-[1-(氮雜環丁-3-基)氮雜環丁-3-基]-3-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (28e)
1-[(3R)-1-[1-(azetidin-3-yl)azetidin-3-yl]-3-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將3-[3-[(3R)-3-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (28d) (0.090 g，0.15 mmol) 溶解在2mL二氯甲烷中，加入5mL 4 N鹽酸乙酸乙酯溶液，室溫攪拌2h。反應液減壓濃縮後向殘留物加入20mL二氯甲烷，用飽和碳酸氫鈉溶液調pH至9-10，分液，用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得1-[(3R)-1-[1-(氮雜環丁-3-基)氮雜環丁-3-基]-3-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (28e) (0.075 g)。
LCMS m/z = 497.3 [M+1]+
。
第五步：5-[3-[3-[(3R)-3-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物28)
5-[3-[3-[(3R)-3-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidin-1-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
將1-[(3R)-1-[1-(氮雜環丁-3-基)氮雜環丁-3-基]-3-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (28e) (0.075 g，0.201 mmol) 溶解在2mL二甲亞碸中，加入2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (0.050 g，0.066 mmol) 和二異丙基乙基胺 (0.098 g，0.76 mmol)，加完後90℃反應2h。將反應液冷卻至室溫，慢慢滴加10mL水，過濾，濾餅用20mL二氯甲烷溶解，再用5mL飽和氯化鈉溶液洗滌，分液，用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-9:1)，得到5-[3-[3-[(3R)-3-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物28) (0.050 g，產率：44%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ 11.04 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.68 – 7.59 (m, 3H), 7.47 – 7.39 (m, 2H), 7.22 – 7.09 (m, 5H), 6.77 (d, 1H), 6.64 (dd, 1H), 5.04 (dd, 1H), 4.83 – 4.72 (m, 1H), 4.06 – 3.98 (m, 2H), 3.82 – 3.73 (m, 2H), 3.66 – 3.56 (m, 1H), 3.45 – 3.32 (m, 2H), 3.06 – 2.72 (m, 6H), 2.63 – 2.45 (m, 2H), 2.37 – 2.27 (m, 1H), 2.07 – 1.95 (m, 3H), 1.90 – 1.78 (m, 2H), 1.72 – 1.58 (m, 1H)。
LCMS m/z = 753.4 [M+1]+
。
實施例
29
：
5-(3-(3-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯-1-基)-[1,3'-聯氮雜環丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸鹽 (化合物 29
)
5-(3-(3-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)pyrrolidin-1-yl)-[1,3'-biazetidin]-1'-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione trifluoroacetate 
第一步：3-羥基吡咯-1-甲酸第三丁酯 (29b)
tert-butyl 3-hydroxypyrrolidine-1-carboxylate
將3-氧代吡咯-1-甲酸第三丁酯 (29a) (5.56 g, 30.0 mmol) 溶解於80mL無水甲醇中，緩慢分批加入硼氫化鈉 (2.28 g，60.0 mmol)，加完後室溫攪拌30分鐘。反應完畢，加入150mL飽和碳酸氫鈉溶液淬滅，用200mL DCM萃取，有機相用100mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (石油醚/乙酸乙酯 (v/v) = 2:1)，得到3-羥基吡咯-1-甲酸第三丁酯 (29b) (4.7 g，收率：84%)。
LC-MS m/z = 188.1 [M+1]+
。
第二步：3-((甲基磺醯基)氧基)吡咯-1-甲酸第三丁酯 (29c)
tert-butyl 3-((methylsulfonyl)oxy)pyrrolidine-1-carboxylate
將3-羥基吡咯-1-甲酸第三丁酯 (29b) (1.0 g, 5.34 mmol) 溶解於30mL二氯甲烷中，加入DIPEA (2.1 g，16.25 mmol)，室溫下緩慢滴加MsCl (0.74 g，6.41 mmol)，加完後室溫攪拌2h。向反應液加入40mL水，用100mL DCM萃取，有機相用100mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (石油醚/乙酸乙酯 (v/v) = 5:1)，得到3-((甲基磺醯基)氧基)吡咯-1-甲酸第三丁酯 (29c) (1.4 g，收率：98%)。
LC-MS m/z = 266.2 [M+1]+
。
第三步：3-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯-1-甲酸第三丁酯 (29d)
tert-butyl 3-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl) pyrrolidine-1-carboxylate
將3-((甲基磺醯基)氧基)吡咯-1-甲酸第三丁酯 (29c) (1.0 g, 3.77 mmol) 和3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (0.75 g，2.48 mmol) 溶於40mL DMF中，加入碳酸鉀 (1.24 g，8.99 mmol)，於80℃攪拌反應4h。將反應液冷卻至室溫，加入50mL水，用100mL乙酸乙酯萃取，有機相用100mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 15:1)，得到3-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯-1-甲酸第三丁酯 (29d) (0.91 g，收率：78%)。
LCMS m/z = 473.4 [M+1]+
。
第四步：3-(4-苯氧基苯基)-1-(吡咯-3-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (29e)
3-(4-phenoxyphenyl)-1-(pyrrolidin-3-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine trifluoroacetate
將3-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯-1-甲酸第三丁酯 (29d) (910 mg, 1.87 mmol) 溶解於20mL DCM中，加入8mL三氟乙酸，室溫攪拌4h。將反應體系直接減壓濃縮，得到3-(4-苯氧基苯基)-1-(吡咯-3-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (29e) (1.1 g)。
LCMS m/z = 373.3 [M+1]+
。
第五步：3-(3-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯-1-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (29f)
tert-butyl 3-(3-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)pyrrolidin-1-yl)azetidine-1-carboxylate
將3-(4-苯氧基苯基)-1-(吡咯-3-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (29e) (420 mg) 溶於15mL DCE與2mL DMSO中，加入Boc-氮雜環丁酮 (253 mg, 1.48 mmol)，室溫攪拌10分鐘後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (628 mg，2.96 mmol)，室溫攪拌過夜。向反應體系中緩慢加入30mL飽和碳酸氫鈉溶液，用100mL DCM萃取，有機相用100mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得到3-(3-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯-1-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (29f) (320 mg)。
LCMS m/z = 528.5 [M+1]+
。
第六步：1-(1-(氮雜環丁-3-基)吡咯-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (29g)
1-(1-(azetidin-3-yl)pyrrolidin-3-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine trifluoroacetate
將3-(3-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯-1-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (29f) (320 mg, 0.61 mmol) 溶解到20mL DCM中，加入5mL三氟乙酸，室溫攪拌4h。將反應體系直接減壓濃縮，得到1-(1-(氮雜環丁-3-基)吡咯-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (29g) (380 mg)。
LCMS m/z = 428.4 [M+1]+
。
第七步：3-(3-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯-1-基)-[1,3'-聯氮雜環丁]-1'-甲酸第三丁酯 (29h)
tert-butyl 3-(3-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)pyrrolidin-1-yl)-[1,3'-biazetidine]-1'-carboxylate
將1-(1-(氮雜環丁-3-基)吡咯-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (29g) (380 mg) 溶於15mL DCE與2mL DMSO中，加入Boc-氮雜環丁酮 (210 mg, 1.22 mmol)，室溫攪拌10分鐘，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (515 mg，2.44 mmol)，室溫攪拌過夜。向反應體系中緩慢加入30mL飽和碳酸氫鈉溶液，用100mL DCM萃取，有機相用100mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得到3-(3-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯-1-基)-[1,3'-聯氮雜環丁]-1'-甲酸第三丁酯 (29h) (300 mg)。
LCMS m/z = 583.6 [M+1]+
。
第八步：1-(1-([1,3'-聯氮雜丁]-3-基)吡咯-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (29i)
1-(1-([1,3'-biazetidin]-3-yl)pyrrolidin-3-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo [3,4-d]pyrimidin-4-amine trifluoroacetate
將3-(3-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯-1-基)-[1,3'-聯氮雜環丁]-1'-甲酸第三丁酯 (29h) (300 mg, 0.51 mmol) 溶解到10mL DCM中，加入5mL三氟乙酸，室溫攪拌4h。將反應體系直接減壓濃縮，得到1-(1-([1,3'-聯氮雜丁]-3-基)吡咯-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (29i) (0.38 g)。
LCMS m/z = 483.4 [M+1]+
。
第九步：5-(3-(3-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯-1-基)-[1,3'-聯氮雜環丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸鹽 (化合物29)
5-(3-(3-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)pyrrolidin-1-yl)-[1,3'-biazetidin]-1'-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione trifluoroacetate
將1-(1-([1,3'-聯氮雜丁]-3-基)吡咯-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (29i) (0.38 g) 溶於25mL DMSO中，加入3mL DIPEA和2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (211 mg，0.77 mmol)，於80℃攪拌反應5h。將反應液冷卻至室溫，加入50mL水，用100mL乙酸乙酯萃取，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 15:1-5:1)，得到5-(3-(3-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯-1-基)-[1,3'-聯氮雜環丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸鹽 (化合物29) (130 mg)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ 11.06 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.78 – 7.57 (m, 3H), 7.49 – 7.35 (m, 2H), 7.27 – 7.05 (m, 5H), 6.78 (d, 1H), 6.64 (dd, 1H), 5.49 – 5.31 (m, 1H), 5.05 (dd, 1H), 4.14 – 3.97 (m, 2H), 3.87 – 3.76 (m, 2H), 3.71 – 3.61 (m, 1H), 3.53-3.39 (m, 3H), 3.23 – 3.06 (m, 3H), 2.96 – 2.70 (m, 4H), 2.65 – 2.45 (m, 2H), 2.41 – 2.24 (m, 2H), 2.07 – 1.95 (m, 1H)。
LCMS m/z = 739.3 [M+1]+
。
實施例
30
：
(7S)-7-[1-[1-[1-[2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基]氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]-4-呱啶基]-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺三氟乙酸鹽 (化合物 30
)
(7S)-7-[1-[1-[1-[2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)-1,3-dioxo-isoindolin-5-yl]azetidin-3-yl]-4-piperidyl]-4-piperidyl]-2-(4-phenoxyphenyl)-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carboxamide trifluoroacetate
第一步：4-[4-[(7S)-3-胺基甲醯基-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-7-基]-1-呱啶基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (30b)
tert-butyl 4-[4-[(7S)-3-carbamoyl-2-(4-phenoxyphenyl)-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[1,5-a] pyrimidin-7-yl]-1-piperidyl]piperidine-1-carboxylate
將 (S)-2-(4-苯氧基苯基)-7-(呱啶-4-基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺 (30a) (95% ee) (合成方法見WO2018033853) (0.2 g，0.48 mmol) 和4-氧代呱啶-1-甲酸第三丁酯 (0.57 g，2.87 mmol) 溶於20mL氯仿中，加入醋酸 (0.14 g，2.4 mmol)，加入1克4 Å分子篩和1克無水硫酸鈉，升溫至65℃攪拌2h，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.61 g，2.87 mmol)，繼續在此溫度下攪拌過夜。將反應液過濾，濾液減壓濃縮後，殘留物用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 50:1-7:1)，得到4-[4-[(7S)-3-胺基甲醯基-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-7-基]-1-呱啶基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (30b) (0.2 g，產率：69%)。
LCMS m/z = 601.3 [M+1]+
。
第二步：(7S)-2-(4-苯氧基苯基)-7-[1-(4-呱啶基)-4-呱啶基]-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺 (30c)
(7S)-2-(4-phenoxyphenyl)-7-[1-(4-piperidyl)-4-piperidyl]-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carboxamide
將4-[4-[(7S)-3-胺基甲醯基-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-7-基]-1-呱啶基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (30b) (0.2 g，0.33 mmol) 溶於5mL二氯甲烷中，加入5mL三氟乙酸，室溫攪拌2h。將反應液減壓除去溶劑，加入20mL二氯甲烷和2mL乙醇的混合液，用50mL飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，水相再用20mL二氯甲烷和2mL乙醇的混合液萃取，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得 (7S)-2-(4-苯氧基苯基)-7-[1-(4-呱啶基)-4-呱啶基]-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺 (30c) (0.16 g，產率：96%)。
LCMS m/z = 501.3 [M+1]+
。
第三步：3-[4-[4-[(7S)-3-胺基甲醯基-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-7-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (30d)
tert-butyl 3-[4-[4-[(7S)-3-carbamoyl-2-(4-phenoxyphenyl)-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo [1,5-a]pyrimidin-7-yl]-1-piperidyl]-1-piperidyl]azetidine-1-carboxylate
將 (7S)-2-(4-苯氧基苯基)-7-[1-(4-呱啶基)-4-呱啶基]-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺 (30c) (0.14 g，0.28 mmol) 和3-氧代氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (0.24 g，1.4 mmol) 溶於20mL氯仿中，加入醋酸 (0.08 g，1.4 mmol)，加入1克4 Å分子篩和1克無水硫酸鈉，升溫至65℃攪拌2h，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.3 g，1.4 mmol)，繼續在此溫度下攪拌過夜。將反應液過濾，濾液減壓濃縮後，殘留物用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 50:1-7:1)，得到3-[4-[4-[(7S)-3-胺基甲醯基-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-7-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (30d) (0.1 g，產率：55%)。
LCMS m/z = 656.4 [M+1]+
。
第四步：(7S)-7-[1-[1-(氮雜環丁-3-基)-4-呱啶基]-4-呱啶基]-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺三氟乙酸鹽 (30e)
(7S)-7-[1-[1-(azetidin-3-yl)-4-piperidyl]-4-piperidyl]-2-(4-phenoxyphenyl)-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carboxamide trifluoroacetate
將3-[4-[4-[(7S)-3-胺基甲醯基-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-7-基]-1-呱啶基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (30d) (0.1 g，0.15 mmol) 溶於2mL二氯甲烷中，加入2mL三氟乙酸，室溫攪拌過夜。將反應液減壓除去溶劑，得到 (7S)-7-[1-[1-(氮雜環丁-3-基)-4-呱啶基]-4-呱啶基]-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺三氟乙酸鹽 (30e) (0.12 g)。
LCMS m/z = 556.3 [M+1]+
。
第五步：(7S)-7-[1-[1-[1-[2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基]氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]-4-呱啶基]-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺三氟乙酸鹽 (化合物30)
(7S)-7-[1-[1-[1-[2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)-1,3-dioxo-isoindolin-5-yl]azetidin-3-yl]-4-piperidyl]-4-piperidyl]-2-(4-phenoxyphenyl)-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carboxamide trifluoroacetate
將 (7S)-7-[1-[1-(氮雜環丁-3-基)-4-呱啶基]-4-呱啶基]-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺三氟乙酸鹽 (30e) (0.12 g) 溶於3mL DMSO中，加入2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (0.04 g，0.16 mmol) 和三乙胺 (0.07 g，0.67 mmol)，升溫至120℃攪拌4h。將反應液冷卻至室溫，加入10mL水和20mL乙酸乙酯，萃取後，有機層減壓除去溶劑，殘留物用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 50:1-10:1)，得到 (7S)-7-[1-[1-[1-[2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基]氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]-4-呱啶基]-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺三氟乙酸鹽 (化合物30) (45 mg)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ 11.05 (s, 1H), 7.64 (d, 1H), 7.50 (d, 2H), 7.45 – 7.38 (m, 2H), 7.21 – 7.14 (m, 1H), 7.12 – 7.02 (m, 4H), 6.78 (d, 1H), 6.72 – 6.61 (m, 2H), 5.05 (dd, 1H), 4.16 – 3.96 (m, 3H), 3.87 – 3.73 (m, 2H), 3.35 – 3.28 (m, 1H), 2.97 – 2.78 (m, 3H), 2.58 – 2.52 (m, 11H), 2.10 – 1.73 (m, 8H), 1.72 – 1.45 (m, 4H)。
LCMS m/z = 812.4 [M+1]+
。
實施例
31
：
(7S)-7-[1-[1-[1-[2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基]氮雜環丁-3-基]氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺三氟乙酸鹽 (化合物 31
)
(7S)-7-[1-[1-[1-[2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)-1,3-dioxo-isoindolin-5-yl]azetidin-3-yl]azetidin-3-yl]-4-piperidyl]-2-(4-phenoxyphenyl)-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carboxamide trifluoroacetate
第一步：3-[4-[(7S)-3-胺基甲醯基-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-7-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (31a)
tert-butyl 3-[4-[(7S)-3-carbamoyl-2-(4-phenoxyphenyl)-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[1,5-a]pyrimidin-7-yl]-1-piperidyl]azetidine-1-carboxylate
將(S)-2-(4-苯氧基苯基)-7-(呱啶-4-基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺 (30a) (95% ee) (合成方法見WO2018033853) (0.2 g，0.48 mmol) 和3-氧代氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (0.41 g，2.40 mmol) 溶於20mL氯仿中，加入醋酸 (0.14 g，2.4 mmol)，加入1克4 Å分子篩和1克無水硫酸鈉，升溫至65℃，攪拌2h，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.61 g，2.87 mmol)，繼續在此溫度下攪拌過夜。將反應液過濾，濾液減壓濃縮後，殘留物用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 50:1-7:1)，得到3-[4-[(7S)-3-胺基甲醯基-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-7-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (31a) (0.25 g，產率：91%)。
LCMS m/z = 573.4 [M+1]+
。
第二步：(7S)-7-[1-(氮雜環丁-3-基)-4-呱啶基]-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺 (31b)
(7S)-7-[1-(azetidin-3-yl)-4-piperidyl]-2-(4-phenoxyphenyl)-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carboxamide
將3-[4-[(7S)-3-胺基甲醯基-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-7-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (31a) (0.25 g，0.44 mmol) 溶於5mL二氯甲烷中，加入5mL三氟乙酸，室溫攪拌2h。將反應液減壓除去溶劑，加入20mL二氯甲烷和2mL乙醇的混合液，用50mL飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，水相再用20mL二氯甲烷和2mL乙醇的混合液萃取，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到 (7S)-7-[1-(氮雜環丁-3-基)-4-呱啶基]-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺 (31b) (0.19 g，產率：92%)。
LCMS m/z = 473.4 [M+1]+
。
第三步：3-[3-[4-[(7S)-3-胺基甲醯基-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-7-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (31c)
tert-butyl 3-[3-[4-[(7S)-3-carbamoyl-2-(4-phenoxyphenyl)-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[1,5-a]pyrimidin-7-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidine-1-carboxylate
將 (7S)-7-[1-(氮雜環丁-3-基)-4-呱啶基]-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺 (31b) (0.19 g，0.40 mmol) 和3-氧代氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (0.34 g，2.01 mmol) 溶於20mL氯仿中，加入醋酸 (0.12 g，2.01 mmol)，加入1克4 Å分子篩和1克無水硫酸鈉，升溫至65℃攪拌2h，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.43 g，2.01 mmol)，繼續在此溫度下攪拌過夜。將反應液過濾，濾液減壓濃縮後，殘留物用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 50:1-7:1)，得到3-[3-[4-[(7S)-3-胺基甲醯基-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-7-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (31c) (0.14 g，產率：46%)。
LCMS m/z = 628.3 [M+1]+
。
第四步：(7S)-7-[1-[1-(氮雜環丁-3-基)氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺 (31d)
(7S)-7-[1-[1-(azetidin-3-yl)azetidin-3-yl]-4-piperidyl]-2-(4-phenoxyphenyl)-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carboxamide
將3-[3-[4-[(7S)-3-胺基甲醯基-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-7-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (31c) (0.14 g，0.22 mmol) 溶於5mL二氯甲烷中，加入5mL三氟乙酸，室溫攪拌2h。將反應液減壓除去溶劑，加入20mL二氯甲烷和2mL乙醇的混合液，用50mL飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，水相再用20mL二氯甲烷和2mL乙醇的混合液萃取，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到 (7S)-7-[1-[1-(氮雜環丁-3-基)氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺 (31d) (0.10 g，產率：85%)。
LCMS m/z = 528.3 [M+1]+
。
第五步：(7S)-7-[1-[1-[1-[2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基]氮雜環丁-3-基]氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺三氟乙酸鹽 (化合物31)
(7S)-7-[1-[1-[1-[2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)-1,3-dioxo-isoindolin-5-yl]azetidin-3-yl]azetidin-3-yl]-4-piperidyl]-2-(4-phenoxyphenyl)-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carboxamide trifluoroacetate
將 (7S)-7-[1-[1-(氮雜環丁-3-基)氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺 (31d) (0.03 g，0.057 mmol) 溶於3mL DMSO中，加入2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (0.019 g，0.068 mmol) 和三乙胺 (0.022 g，0.17 mmol)，升溫至120℃攪拌4h。將反應液冷卻至室溫，加入10mL水和20mL乙酸乙酯萃取，有機層減壓除去溶劑，殘留物過Pre-HPLC (儀器及製備柱：採用Glison GX-281製備液相，製備柱型號是Sunfire C18，5 μm，內徑×長度 = 30 mm×150 mm)。製備方法：粗品用甲醇和二甲亞碸溶解，並用0.45 μm濾膜過濾，製備成樣品液。流動相體系：乙腈/水 (含0.1% TFA)。梯度沖提方法：乙腈由5%梯度沖提60% (沖提時間15 min)，凍乾得到 (7S)-7-[1-[1-[1-[2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基]氮雜環丁-3-基]氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺三氟乙酸鹽 (化合物31) (15 mg)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d 6
) δ 11.05 (s, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.53 – 7.47 (m, 2H), 7.45 – 7.38 (m, 2H), 7.21 – 7.14 (m, 1H), 7.13 – 6.98 (m, 4H), 6.96 – 6.44 (m, 3H), 5.06 (dd, 1H), 4.22 – 3.60 (m, 11H), 3.45 – 3.26 (m, 4H), 2.97 – 2.64 (m, 3H), 2.63 – 2.45 (m, 2H), 2.34 – 2.15 (m, 1H), 2.12 – 1.50 (m, 7H)。
LCMS m/z = 784.3 [M+1]+
。
實施例
32
：
5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物 32
)
5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-6-fluoroisoindoline-1,3-dione 
將1-(1'-(氮雜環丁-3-基)-[1,4'-聯呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (8b) (290 mg, 0.55 mmol) 溶於10mL DMSO中，加入1mL DIPEA和2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5,6-二氟異吲哚啉-1,3-二酮 (21b) (150 mg，0.51 mmol)，外浴80℃攪拌5h。將反應液冷卻至室溫，加入50mL水，用100mL乙酸乙酯萃取，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 15:1)，得到5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物32) (150 mg，收率：34%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ 11.06 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.70 – 7.63 (m, 2H), 7.60 (d, 1H), 7.48 – 7.39 (m, 2H), 7.23 – 7.09 (m, 5H), 6.92 (d, 1H), 5.07 (dd, 1H), 4.69 – 4.57 (m, 1H), 4.28 – 4.18 (m, 2H), 4.02 – 3.90 (m, 2H), 3.30 – 3.21 (m, 1H), 3.07 – 2.96 (m, 2H), 2.94 – 2.80 (m, 3H), 2.69 – 2.52 (m, 2H), 2.41 – 2.27 (m, 3H), 2.24 – 2.08 (m, 2H), 2.07 – 1.96 (m, 1H), 1.96 – 1.70 (m, 6H), 1.56 – 1.39 (m, 2H)。
LCMS m/z = 799.3 [M+1]+
。
實施例
33
：
4-[8-胺基-3-[(2S)-1-[1-[1-[2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基]氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]吡咯-2-基]咪唑並[1,5-a]吡嗪-1-基]-N-(2-吡啶基)苯甲醯胺 (化合物 33
)
4-[8-amino-3-[(2S)-1-[1-[1-[2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)-1,3-dioxo-isoindolin-5-yl]azetidin-3-yl]-4-piperidyl]pyrrolidin-2-yl]imidazo[1,5-a]pyrazin-1-yl]-N-(2-pyridyl)benzamide 
第一步：4-[(2S)-2-[8-胺基-1-[4-(2-吡啶基胺基甲醯基)苯基]咪唑並[1,5-a]吡嗪-3-基]吡咯-1-基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (33b)
tert-butyl 4-[(2S)-2-[8-amino-1-[4-(2-pyridylcarbamoyl)phenyl]imidazo[1,5-a]pyrazin-3-yl]pyrrolidin-1-yl]piperidine-1-carboxylate
將 (S)-4-(8-胺基-3-(吡咯-2-基)咪唑並[1,5-a]吡嗪-1-基)-N-(吡啶-2-基)苯甲醯胺 (33a) (0.500 g，1.25 mmol) 溶解在5mL 1,2-二氯乙烷中，加入N
-第三丁氧羰基-4-呱啶酮 (0.374 g，1.88 mmol) 和冰醋酸 (0.150 g，2.50 mmol)，加完後65℃反應3h，冷卻至室溫，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.531 g，2.50 mmol)，加完後室溫反應過夜。向反應體系中滴加飽和碳酸氫鈉溶液調pH至9-10，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-19:1)，得到4-[(2S)-2-[8-胺基-1-[4-(2-吡啶基胺基甲醯基)苯基]咪唑並[1,5-a]吡嗪-3-基]吡咯-1-基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (33b) (0.340 g，產率：47%)。
LCMS m/z = 583.3 [M+1]+
。
第二步：4-[8-胺基-3-[(2S)-1-(4-呱啶基)吡咯-2-基]咪唑並[1,5-a]吡嗪-1-基]-N-(2-吡啶基)苯甲醯胺 (33c)
4-[8-amino-3-[(2S)-1-(4-piperidyl)pyrrolidin-2-yl]imidazo[1,5-a]pyrazin-1-yl]-N-(2-pyridyl)benzamide
將4-[(2S)-2-[8-胺基-1-[4-(2-吡啶基胺基甲醯基)苯基]咪唑並[1,5-a]吡嗪-3-基]吡咯-1-基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (33b) (0.340 g，0.583 mmol) 溶解在2mL二氯甲烷中，加入5mL 4 N鹽酸二氧六環溶液，室溫攪拌1h。反應液減壓濃縮後向殘留物加入20mL二氯甲烷，用飽和碳酸氫鈉溶液調pH至9-10，分液，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 19:0-1:1)，得到4-[8-胺基-3-[(2S)-1-(4-呱啶基)吡咯-2-基]咪唑並[1,5-a]吡嗪-1-基]-N-(2-吡啶基)苯甲醯胺 (33c) (0.206 g，產率：73%)。
LCMS m/z = 483.3 [M+1]+
。
第三步：3-[4-[(2S)-2-[8-胺基-1-[4-(2-吡啶基胺基甲醯基)苯基]咪唑並[1,5-a]吡嗪-3-基]吡咯-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (33d)
tert-butyl 3-[4-[(2S)-2-[8-amino-1-[4-(2-pyridylcarbamoyl)phenyl]imidazo[1,5-a]pyrazin-3-yl]pyrrolidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidine-1-carboxylate
將4-[8-胺基-3-[(2S)-1-(4-呱啶基)吡咯-2-基]咪唑並[1,5-a]吡嗪-1-基]-N-(2-吡啶基)苯甲醯胺 (33c) (0.200 g，0.414 mmol) 溶解在5mL 1,2-二氯乙烷中，加入2mL二甲亞碸，加入3-氧代氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (0.106 g，0.622 mmol) 和冰醋酸 (0.0498 g，0.829 mmol)，加完後65℃反應3h，冷卻至室溫，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.176 g，0.829 mmol)，加完後室溫反應2h。向反應體系中滴加飽和碳酸氫鈉溶液調pH至9-10，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-19:1)，得到3-[4-[(2S)-2-[8-胺基-1-[4-(2-吡啶基胺基甲醯基)苯基]咪唑並[1,5-a]吡嗪-3-基]吡咯-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (33d) (0.090 g，產率：34%)。
第四步：4-[8-胺基-3-[(2S)-1-[1-(氮雜環丁-3-基)-4-呱啶基]吡咯-2-基]咪唑並[1,5-a]吡嗪-1-基]-N-(2-吡啶基)苯甲醯胺 (33e)
4-[8-amino-3-[(2S)-1-[1-(azetidin-3-yl)-4-piperidyl]pyrrolidin-2-yl]imidazo[1,5-a]pyrazin-1-yl]-N-(2-pyridyl)benzamide
將3-[4-[(2S)-2-[8-胺基-1-[4-(2-吡啶基胺基甲醯基)苯基]咪唑並[1,5-a]吡嗪-3-基]吡咯-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (33d) (0.090 g，0.14 mmol) 溶解在2mL二氯甲烷中，加入5mL 4 N鹽酸二氧六環溶液，室溫攪拌1h。反應液減壓濃縮後，向殘留物加入20mL二氯甲烷，用飽和碳酸氫鈉溶液調pH至9-10，分液，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得4-[8-胺基-3-[(2S)-1-[1-(氮雜環丁-3-基)-4-呱啶基]吡咯-2-基]咪唑並[1,5-a]吡嗪-1-基]-N-(2-吡啶基)苯甲醯胺 (33e) (0.076 g，產率：＞99%)。
LCMS m/z = 538.3 [M+1]+
。
第五步：4-[8-胺基-3-[(2S)-1-[1-[1-[2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基]氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]吡咯-2-基]咪唑並[1,5-a]吡嗪-1-基]-N-(2-吡啶基)苯甲醯胺 (化合物33)
4-[8-amino-3-[(2S)-1-[1-[1-[2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)-1,3-dioxo-isoindolin-5-yl]azetidin-3-yl]-4-piperidyl]pyrrolidin-2-yl]imidazo[1,5-a]pyrazin-1-yl]-N-(2-pyridyl)benzamide
將4-[8-胺基-3-[(2S)-1-[1-(氮雜環丁-3-基)-4-呱啶基]吡咯-2-基]咪唑並[1,5-a]吡嗪-1-基]-N-(2-吡啶基)苯甲醯胺 (33e) (0.076 g，0.141 mmol) 溶解在2mL二甲亞碸中，加入2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (0.0468 g，0.170 mmol) 和二異丙基乙基胺 (0.0913 g，0.707 mmol)，加完後90℃反應2h。將反應液冷卻至室溫，慢慢滴加10mL水，過濾，濾餅用20mL二氯甲烷溶解，再用5mL飽和氯化鈉溶液洗滌，分液，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-19:1)，得到4-[8-胺基-3-[(2S)-1-[1-[1-[2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基]氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]吡咯-2-基]咪唑並[1,5-a]吡嗪-1-基]-N-(2-吡啶基)苯甲醯胺 (化合物33) (0.055 g，產率：49%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.53 – 8.37 (m, 2H), 8.20 – 7.98 (m, 3H), 7.83 – 7.75 (m, 1H), 7.73 – 7.56 (m, 2H), 7.51 – 7.38 (m, 1H), 7.29 – 7.21 (m, 1H), 7.16 – 7.05 (m, 2H), 6.80 – 6.71 (m, 1H), 6.48 – 6.40 (m, 1H), 5.50 (brs, 2H), 4.99 – 4.89 (m, 1H), 4.53 – 4.41 (m, 1H), 4.13 – 4.02 (m, 1H), 3.99 – 3.83 (m, 1H), 3.82 – 3.32 (m, 4H), 2.97 – 2.58 (m, 6H), 2.56 – 2.30 (m, 2H), 2.25 – 1.55 (m, 11H)。
LCMS m/z = 794.3 [M+1]+
。
實施例
34
：
5-[1-[4-[(3R)-3-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]環己基]氮雜環丁-3-基]氧基-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物 34-a
)
5-[1-[4-[(3R)-3-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]cyclohexyl]azetidin-3-yl]oxy-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
5-[1-[4-[(3R)-3-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]環己基]氮雜環丁-3-基]氧基-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物 34-b
)
5-[1-[4-[(3R)-3-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]cyclohexyl]azetidin-3-yl]oxy-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
第一步：1-[(3R)-1-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)-3-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (34a)
1-[(3R)-1-(1,4-dioxaspiro[4.5]decan-8-yl)-3-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將 (R)-3-(4-苯氧基苯基)-1-(呱啶-3-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (28a) (1.00 g，2.59 mmol) 溶解在10mL氯仿中，加入1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-酮 (0.606 g，3.88 mmol) 和冰醋酸 (0.311 g，5.18 mmol)，加完後70℃反應3h，再冷卻至室溫，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (1.10 g，5.18 mmol)，加完後室溫反應2h。向反應體系中滴加飽和碳酸氫鈉溶液調pH至9-10，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-19:1)，得到1-[(3R)-1-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)-3-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (34a) (0.530 g，產率：39%)。
LCMS m/z = 527.3 [M+1]+
。
第二步：4-[(3R)-3-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]環己酮 (34b)
4-[(3R)-3-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]cyclohexanone
將1-[(3R)-1-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)-3-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (34a) (0.530 g，1.01 mmol) 溶解在5mL四氫呋喃中，加入5mL 4 N鹽酸水溶液，室溫攪拌1h。將反應液濃縮後向殘留物加入20mL二氯甲烷，用飽和碳酸氫鈉溶液調pH至9-10，分液，水層再用20mL二氯甲烷萃取，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到4-[(3R)-3-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]環己酮 (34b) (0.480 g，產率：99%)。
第三步：3-[2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)-1,3-二氧代-異吲哚啉-5-基]氧基氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (34d)
tert-butyl 3-[2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)-1,3-dioxo-isoindolin-5-yl]oxyazetidine-1-carboxylate
將2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-羥基異吲哚啉-1,3-二酮 (34c) (合成方法見US20180099940) (1.00 g，3.65 mmol) 溶解在10mL DMF中，加入3-((甲基磺醯基)氧基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (1.01 g，4.01 mmol) 和碳酸銫 (2.38 g，7.29 mmol)，加完後於110℃微波反應2h。將反應液冷卻至室溫，加入20mL水和50mL乙酸乙酯，分液，水層再用20mL乙酸乙酯萃取，合併有機層，有機相用20mL飽和氯化鈉洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮所得粗品用矽膠柱色譜分離純化 (石油醚/乙酸乙酯 (v/v) = 4:1-1:1)，得到3-[2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)-1,3-二氧代-異吲哚啉-5-基]氧基氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (34d) (0.670 g，產率：43%)。
第四步：5-(氮雜環丁-3-基氧基)-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮鹽酸鹽 (34e)
5-(azetidin-3-yloxy)-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione hydrochlorate
將3-[2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)-1,3-二氧代-異吲哚啉-5-基]氧基氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (34d) (0.670 g，1.56 mmol) 溶解在2mL二氯甲烷中，加入10mL 2 N鹽酸乙酸乙酯溶液，室溫攪拌2h。將反應液過濾，收集濾餅乾燥得5-(氮雜環丁-3-基氧基)-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮鹽酸鹽 (34e) (0.484 g)。
LCMS m/z = 330.1 [M+1]+
。
第五步：5-[1-[4-[(3R)-3-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]環己基]氮雜環丁-3-基]氧基-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物34-a)
5-[1-[4-[(3R)-3-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]cyclohexyl]azetidin-3-yl]oxy-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
5-[1-[4-[(3R)-3-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]環己基]氮雜環丁-3-基]氧基-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物34-b)
5-[1-[4-[(3R)-3-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]cyclohexyl]azetidin-3-yl]oxy-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
將5-(氮雜環丁-3-基氧基)-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮鹽酸鹽 (34e) (0.066 g) 溶解在2mL無水甲醇中，加入碳酸氫鈉固體 (0.020 g，0.24 mmol)，室溫攪拌20分鐘，過濾，濾餅用1mL甲醇洗滌，合併濾液濃縮後，將殘留物溶解在2mL氯仿中，加入0.5mL DMSO、冰醋酸 (0.022 g，0.36 mmol) 和4-[(3R)-3-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]環己酮 (34b) (0.13 g，0.27 mmol)，加完後於70℃攪拌反應5h，冷卻至室溫，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.077 g，0.36 mmol)，室溫反應過夜。向反應體系中滴加飽和碳酸氫鈉溶液調pH至9-10，加入20mL二氯甲烷，分液，水層再用10mL二氯甲烷萃取一次，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-6:1)，得到5-[1-[4-[(3R)-3-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]環己基]氮雜環丁-3-基]氧基-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物34-a) (23 mg) 和5-[1-[4-[(3R)-3-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]環己基]氮雜環丁-3-基]氧基-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物34-b) (25 mg) 兩純品。
化合物 34-a ：
(展開劑：二氯甲烷/甲醇 = 10:1，Rf值 = 0.45)
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.79 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.77 (d, 1H), 7.67 – 7.61 (m, 2H), 7.42 – 7.34 (m, 2H), 7.21 – 7.12 (m, 4H), 7.11 – 7.05 (m, 3H), 5.64 (brs, 2H), 5.54 – 5.37 (m, 1H), 4.95 (dd, 1H), 4.88 – 4.79 (m, 1H), 3.89 – 3.77 (m, 2H), 3.54 – 3.40 (m, 1H), 3.36 – 3.15 (m, 2H), 3.12 – 3.01 (m, 2H), 2.95 – 2.65 (m, 5H), 2.46 – 2.40 (m, 1H), 2.28 – 2.09 (m, 4H), 2.06 – 1.95 (m, 3H), 1.92 – 1.72 (m, 5H), 1.49 – 1.44 (m, 1H)。
LCMS m/z = 796.3 [M+1]+
。
化合物 34-b ：
(展開劑：二氯甲烷/甲醇 = 10:1，Rf值 = 0.35)
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.77 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.78 (d, 1H), 7.66 – 7.60 (m, 2H), 7.42 – 7.36 (m, 2H), 7.20 – 7.05 (m, 7H), 5.60 (brs, 2H), 5.32 – 5.16 (m, 1H), 4.99 – 4.88 (m, 2H), 3.99 – 3.87 (m, 2H), 3.42 – 3.00 (m, 5H), 2.94 – 2.62 (m, 5H), 2.58 – 2.46 (m, 1H), 2.27 – 2.06 (m, 8H), 1.98 – 1.88 (m, 2H), 1.53 – 1.44 (m, 1H), 1.20 – 1.11 (m, 2H)。
LCMS m/z = 796.4 [M+1]+
。
實施例
35
5-[4-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]吡唑-1-基]-1-呱啶基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物 35
)
5-[4-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]pyrazol-1-yl]-1-piperidyl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione 
第一步：4-[4-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]吡唑-1-基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (35a)
tert-butyl 4-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]pyrazol-1-yl]piperidine-1-carboxylate
將4-(4-碘吡唑-1-基)呱啶-1-甲酸第三丁酯 (0.500 g，1.33 mmol) 溶解在2mL二甲亞碸中，依次加入3-(4-苯氧基苯基)-1-(呱啶-4-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (1a) (合成方法見J. Med. Chem. 2015
,58
, 9625-9638) (0.615 g，1.59 mmol)、L-脯胺酸 (0.0610 g，0.530 mmol) 和碳酸鉀 (0.550 g，3.98 mmol)，置換氮氣三次，加入碘化亞銅 (0.0505 g，0.265 mmol)，加完後加熱至100℃反應5h。將反應液冷卻至室溫，加入5mL水和10mL乙酸乙酯，分液，水層再用10mL乙酸乙酯萃取，合併有機層，有機相用10mL飽和氯化鈉洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-19:1)，得4-[4-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]吡唑-1-基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (35a) (0.0730 g，產率：9%)。
第二步：3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-(4-呱啶基)吡唑-4-基]-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (35b)
3-(4-phenoxyphenyl)-1-[1-[1-(4-piperidyl)pyrazol-4-yl]-4-piperidyl]pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將4-[4-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]吡唑-1-基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (35a) (0.0730 g，0.115 mmol) 溶解在2mL二氯甲烷中，加入5mL 4 N鹽酸乙酸乙酯溶液，室溫攪拌2h。反應液濃縮後粗品加入20mL二氯甲烷，用飽和碳酸氫鈉溶液調pH至9-10，分液，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-(4-呱啶基)吡唑-4-基]-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (35b) (0.0615g，產率：＞99%)。
第三步：5-[4-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]吡唑-1-基]-1-呱啶基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物35)
5-[4-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]pyrazol-1-yl]-1-piperidyl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
將3-(4-苯氧基苯基)-1-[1-[1-(4-呱啶基)吡唑-4-基]-4-呱啶基]吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (35b) (0.0600 g，0.112 mmol) 溶解在2mL二甲亞碸中，加入2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (0.0402 g，0.146 mmol) 和二異丙基乙胺 (0.0724 g，0.560 mmol)，加完後於90℃攪拌反應2h。將反應液冷卻至室溫，加入10mL水，過濾，濾餅用20mL二氯甲烷溶解，再用5mL飽和氯化鈉洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮所得粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-92:8)，得5-[4-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]吡唑-1-基]-1-呱啶基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物35) (0.0350 g，產率：40%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.36 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.73 – 7.69 (m, 1H), 7.68 – 7.60 (m, 2H), 7.43 – 7.36 (m, 2H), 7.33 (d, 1H), 7.29 – 7.26 (m, 2H), 7.21 – 7.05 (m, 6H), 6.15 (brs, 2H), 4.99 – 4.83 (m, 2H), 4.36 – 4.28 (m, 1H), 4.12 – 4.02 (m, 2H), 3.58 – 3.49 (m, 2H), 3.23 – 3.12 (m, 2H), 2.95 – 2.67 (m, 5H), 2.63 – 2.50 (m, 2H), 2.30 – 2.21 (m, 2H), 2.18 – 2.05 (m, 5H)。
LCMS m/z = 792.3 [M+1]+
。
實施例
36
5-[1-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]環己基]氮雜環丁-3-基]氧基-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物 36-a
)
5-[1-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]cyclohexyl]azetidin-3-yl]oxy-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
5-[1-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]環己基]氮雜環丁-3-基]氧基-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸鹽 (化合物 36-b
)
5-[1-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]cyclohexyl]azetidin-3-yl]oxy-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione trifluoroacetate
第一步：1-[1-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (36a)
1-[1-(1,4-dioxaspiro[4.5]decan-8-yl)-4-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將3-(4-苯氧基苯基)-1-(呱啶-4-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (1a) (合成方法見J. Med. Chem. 2015
,58
, 9625-9638) (1.00 g，2.59 mmol) 溶解在5mL1,2-二氯乙烷中，加入1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-酮 (0.606 g，3.88 mmol) 和冰醋酸 (0.311 g，5.18 mmol)，加完後於65℃攪拌反應3h，再冷卻至室溫，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (1.10 g，5.18 mmol)，加完後室溫反應2h。向反應液滴加飽和碳酸氫鈉溶液調pH至9-10，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-19:1)，得到1-[1-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (36a) (0.800 g，產率：59%)。
LCMS m/z = 527.3 [M+1]+
。
第二步：4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]環己酮 (36b)
4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]cyclohexanone
將1-[1-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (36a) (0.800 g，1.52 mmol) 溶解在10mL四氫呋喃中，加入10mL 4 N鹽酸水溶液，室溫攪拌1h。將反應液濃縮，殘留物中加入20mL二氯甲烷，用飽和碳酸氫鈉溶液調pH至9-10，水相再用20mL二氯甲烷萃取，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 19:1-9:1)，得到4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]環己酮 (36b) (0.600 g，產率：82%)。
LCMS m/z = 483.3 [M+1]+
。
第三步：5-[1-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]環己基]氮雜環丁-3-基]氧基-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物36-a)
5-[1-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]cyclohexyl]azetidin-3-yl]oxy-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
5-[1-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]環己基]氮雜環丁-3-基]氧基-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸鹽 (化合物36-b)
5-[1-[4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]cyclohexyl]azetidin-3-yl]oxy-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione trifluoroacetate
將5-(氮雜環丁-3-基氧基)-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮鹽酸鹽 (34e) (0.056 g，0.15 mmol) 溶解在2mL無水甲醇中，加入碳酸氫鈉固體 (0.017 g，0.20 mmol)，室溫攪拌20分鐘，過濾，濾餅用1mL甲醇洗滌，合併濾液濃縮後將殘留物溶解在2mL氯仿中，依次加入0.5mL DMSO、冰醋酸 (0.018 g，0.30 mmol) 和4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]環己酮 (36b) (0.11 g，0.23 mmol)，加完後於70℃攪拌反應5h，冷卻至室溫，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.064 g，0.30 mmol)，室溫反應過夜。向反應體系滴加飽和碳酸氫鈉溶液調pH至9-10，加入20mL二氯甲烷，分液，水層再用10mL二氯甲烷萃取一次，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-6:1)，得到5-[1-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]環己基]氮雜環丁-3-基]氧基-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物36-a) (0.020 g) 純品和另一異構體粗品，粗品過Pre-HPLC (儀器及製備柱：採用Glison GX-281製備液相，製備柱型號是Sunfire C18，5 μm, 內徑×長度 = 30 mm×150 mm)。製備方法：粗品用甲醇和二甲亞碸溶解，並用0.45 μm濾膜過濾，製備成樣品液。流動相體系：乙腈/水 (含0.1% TFA)。梯度沖提方法：乙腈由濃度5%梯度沖提至濃度60% (沖提時間15 min)，凍乾得到5-[1-[4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]環己基]氮雜環丁-3-基]氧基-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸鹽 (化合物36-b) (7 mg) 純品。
化合物 36-a
：(展開劑：二氯甲烷/甲醇 = 10:1，Rf值 = 0.45)
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ 11.09 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.89 – 7.83 (m, 1H), 7.66 (d, 2H), 7.47 – 7.41 (m, 2H), 7.33 – 7.28 (m, 2H), 7.23 – 7.10 (m, 5H), 5.16 – 5.00 (m, 3H), 3.87 – 3.75 (m, 2H), 3.58 – 3.39 (m, 4H), 3.22 – 3.05 (m, 3H), 2.95 – 2.84 (m, 1H), 2.68 – 2.53 (m, 3H), 2.46 – 2.40 (m, 1H), 2.26 – 2.14 (m, 2H), 2.09 – 1.95 (m, 2H), 1.84 – 1.68 (m, 5H), 1.49 – 1.37 (m, 3H)。
LCMS m/z = 796.3 [M+1]+
。
化合物 36-b
：(展開劑：二氯甲烷/甲醇 = 10:1，Rf值 = 0.35)
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ 11.11 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.92 (d, 1H), 7.74 – 7.61 (m, 2H), 7.50 – 7.32 (m, 4H), 7.26 – 7.09 (m, 5H), 5.38 – 5.29 (m, 1H), 5.18 – 5.05 (m, 2H), 4.78 – 4.63 (m, 2H), 4.43 – 4.24 (m, 2H), 3.66 – 3.56 (m, 2H), 3.28 – 3.21 (m, 3H), 2.95 – 2.84 (m, 1H), 2.68 – 2.54 (m, 2H), 2.29 – 1.94 (m, 8H), 1.60 – 1.45 (m, 2H), 1.36 – 1.22 (m, 4H)。
LCMS m/z = 796.2 [M+1]+
。
實施例
37
5-[4-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]環己氧基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物 37
)
5-[4-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]cyclohexoxy]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione 
第一步：1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-醇 (37b)
1,4-dioxaspiro[4.5]decan-8-ol
將1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-酮 (37a) (1.00 g，6.40 mmol) 溶解在10mL無水甲醇中，慢慢加入硼氫化鈉 (0.484 g，12.8 mmol)，加完後室溫反應20分鐘。向反應體系中慢慢滴加20mL飽和氯化銨水溶液，用二氯甲烷萃取 (30 mL × 2)，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-醇 (37b) (0.800 g，產率：79%)。
第二步：1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基甲磺酸酯 (37c)
1,4-dioxaspiro[4.5]decan-8-yl methanesulfonate
將1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-醇 (37b) (0.800 g，5.06 mmol) 溶解在10mL二氯甲烷中，加入三乙胺 (1.28 g，12.6 mmol)，冰浴冷卻至0℃，慢慢加入甲基磺醯氯 (1.16 g，10.1 mmol)，加完後緩慢升至室溫反應2h。向反應體系中加入20mL飽和碳酸氫鈉溶液和20mL二氯甲烷，分液，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (乙酸乙酯/石油醚 (v/v) = 1:4-3:7)，得到1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基甲磺酸酯 (37c) (0.640 g，產率：54%)。
第三步：5-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基氧基)-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (37d)
5-(1,4-dioxaspiro[4.5]decan-8-yloxy)-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
將2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-羥基異吲哚啉-1,3-二酮 (34c) (合成方法見US20180099940) (0.0500 g，0.182 mmol) 溶解在2mL DMF中，加入1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基甲磺酸酯 (37c) (0.0474 g，0.201 mmol) 和碳酸銫 (0.119 g，0.365 mmol)，加完後於110℃微波攪拌反應2h。將反應液冷卻至室溫，加入20mL水和50mL乙酸乙酯，分液，水層再用20mL乙酸乙酯萃取，合併有機層，有機相用20mL飽和氯化鈉洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (乙酸乙酯/石油醚 (v/v) = 1:4-1:1)，得到5-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基氧基)-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (37d) (0.0240 g，產率：32%)。
LCMS m/z = 415.1 [M+1]+
。
第四步：2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)-5-(4-氧代環己氧基)異吲哚啉-1,3-二酮 (37e)
2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)-5-(4-oxocyclohexoxy)isoindoline-1,3-dione
將5-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基氧基)-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (37d) (0.024 g，0.058 mmol) 溶解在5mL四氫呋喃中，加入5mL 4 N鹽酸水溶液，室溫攪拌1h。將反應液濃縮，向粗品中加入20mL二氯甲烷，用飽和碳酸氫鈉溶液調pH至9-10，分液，水層再用20mL二氯甲烷萃取，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)-5-(4-氧代環己氧基)異吲哚啉-1,3-二酮 (37e) (0.021 g，產率：＞99%)。
LCMS m/z = 371.1 [M+1]+
。
第五步：5-[4-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]環己氧基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物37)
5-[4-[3-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]azetidin-1-yl]cyclohexoxy]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
將1-[1-(氮雜環丁-3-基)-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (17b) (0.025 g，0.057 mmol) 溶解在2mL氯仿中，加入冰醋酸 (0.0068 g，0.11 mmol) 和2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)-5-(4-氧代環己氧基)異吲哚啉-1,3-二酮 (37e) (0.021 g，0.057 mmol)，加完後於70℃攪拌反應5h，冷卻至室溫，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.024 g，0.11 mmol)，室溫反應過夜。向反應液滴加飽和碳酸氫鈉溶液調pH至9-10，加入20mL二氯甲烷，分液，水相再用10mL二氯甲烷萃取，合併有機層，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-6:1)，得到5-[4-[3-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]環己氧基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物37) (0.020 g，產率：44%)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
) δ 11.09 (s, 1H), 8.26 – 8.20 (m, 1H), 7.86 – 7.77 (m, 1H), 7.69 – 7.63 (m, 2H), 7.50 – 7.39 (m, 3H), 7.38 – 7.32 (m, 1H), 7.23 – 7.08 (m, 5H), 5.15 – 5.07 (m, 1H), 4.81 – 4.59 (m, 2H), 3.60 – 3.39 (m, 3H), 2.95 – 2.81 (m, 4H), 2.64 – 2.53 (m, 2H), 2.26 – 2.11 (m, 3H), 2.10 – 1.73 (m, 9H), 1.70 – 1.36 (m, 5H)。
LCMS m/z = 796.3 [M+1]+
。
實施例
38
5-[3-[3-[(3S,4R)-4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物 38
)
5-[3-[3-[(3S,4R)-4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-3-fluoro-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidin-1-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
第一步：(3S,4S)-3-氟-4-甲基磺醯氧基-呱啶-1-甲酸第三丁酯 (38b)
tert-butyl (3S,4S)-3-fluoro-4-methylsulfonyloxy-piperidine-1-carboxylate
將 (3S,4S)-3-氟-4-羥基呱啶-1-甲酸第三丁酯 (38a) (2.0 g, 9.13 mmol) 溶解於30mL二氯甲烷中，加入DIPEA (4.48 g, 34.66 mmol)，緩慢滴加甲基磺醯氯 (1.6 g, 13.97 mmol)，加完後室溫攪拌2h。反應液用40mL水淬滅，用100mL DCM萃取三次，有機相用100mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (石油醚/乙酸乙酯 (v/v) = 5:1)，得 (3S,4S)-3-氟-4-甲基磺醯氧基-呱啶-1-甲酸第三丁酯 (38b) (2.65 g，收率：98%)。
第二步：(3S,4R)-4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-呱啶-1-甲酸第三丁酯 (38c)
tert-butyl (3S,4R)-4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-3-fluoro-piperidine-1-carboxylate
將 (3S,4S)-3-氟-4-甲基磺醯氧基-呱啶-1-甲酸第三丁酯 (38b) (2.45 g, 8.25 mmol) 和3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (1.0 g，3.30 mmol) 溶於20mL DMF中，加入碳酸銫 (2.14 g，6.6 mmol)，於100℃攪拌反應7h。將反應冷卻至室溫，往反應體系裡加入50mL水，用100mL乙酸乙酯萃取三次，有機相用100mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 15:1)，得 (3S,4R)-4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-呱啶-1-甲酸第三丁酯 (38c) (0.9 g，收率：54%)。
LCMS m/z = 505.3 [M+1]+
。
第三步：1-[(3S,4R)-3-氟-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (38d)
1-[(3S,4R)-3-fluoro-4-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將 (3S,4R)-4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-呱啶-1-甲酸第三丁酯 (38c) (0.9 g, 1.79 mmol) 溶解到10mL DCM中，加入5mL三氟乙酸，室溫攪拌4h。將反應體系直接減壓濃縮，殘留物用60mL 5 N氫氧化鈉溶液溶解，用100mL二氯甲烷萃取三次，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得1-[(3S,4R)-3-氟-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (38d) (0.7 g，產率：97%)。
LCMS m/z = 405.2 [M+1]+
。
第四步：3-[(3S,4R)-4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-呱啶基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (38e)
tert-butyl 3-[(3S,4R)-4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-3-fluoro-1-piperidyl]azetidine-1-carboxylate
將1-[(3S,4R)-3-氟-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (38d) (0.7 g, 1.73 mmol) 溶於35Ml DCE與5mL DMSO中，加入3-氧代氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (542 mg, 3.17 mmol)，室溫攪拌10分鐘後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (1.68 g，7.93 mmol)，室溫攪拌過夜。向反應液中緩慢加入30mL飽和碳酸氫鈉溶液，用50mL乙酸乙酯萃取三次，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得3-[(3S,4R)-4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-呱啶基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (38e) (0.88 g，收率：91%)。
LCMS m/z = 560.5 [M+1]+
。
第五步：1-((3S,4R)-1-(氮雜環丁-3-基)-3-氟呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-胺 (38f)
1-((3S,4R)-1-(azetidin-3-yl)-3-fluoropiperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將3-[(3S,4R)-4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-呱啶基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (38e) (880 mg, 1.57 mmol) 溶解到20mL DCM中，加入5mL三氟乙酸，室溫攪拌4h。反應完後將體系直接減壓濃縮，殘留物用50mL 5 N氫氧化鈉溶液溶解，用50mL DCM萃取三次，有機相用30mL1 N氫氧化鈉溶液洗滌兩次，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得1-((3S,4R)-1-(氮雜環丁-3-基)-3-氟呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-胺 (38f) (0.65 g，收率：90%)。
LCMS m/z = 460.3 [M+1]+
。
第六步：3-[3-[(3S,4R)-4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)]吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (38g)
tert-butyl 3-[3-[(3S,4R)-4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-3-fluoro-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidine-1-carboxylate
將1-((3S,4R)-1-(氮雜環丁-3-基)-3-氟呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-4-胺 (38f) (650 mg, 1.42 mmol) 溶於25mL DCE與2mL DMSO中，加入3-氧代氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (485 mg, 2.84 mmol)，室溫攪拌10分鐘後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (1.12 g，5.28 mmol)，室溫攪拌過夜。向反應體系中緩慢加入60mL飽和碳酸氫鈉溶液，用60mL乙酸乙酯萃取三次，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得3-[3-[(3S,4R)-4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)]吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (38g) (0.46 g，收率：53%)。
LCMS m/z = 615.6 [M+1]+
。
第七步：1-[(3S,4R)-1-[1-(氮雜環丁-3-基)氮雜環丁-3-基]-3-氟-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (38h)
1-[(3S,4R)-1-[1-(azetidin-3-yl)azetidin-3-yl]-3-fluoro-4-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將3-[3-[(3S,4R)-4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)]吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (38g) (400 mg, 0.65 mmol) 溶解在20mL DCM中，加入4mL三氟乙酸，室溫攪拌4h。將反應體系直接減壓濃縮，殘留物用30mL 5 N氫氧化鈉溶液溶解，用30mL DCM萃取三次，有機相用30mL 1 N氫氧化鈉溶液洗滌兩次，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得1-[(3S,4R)-1-[1-(氮雜環丁-3-基)氮雜環丁-3-基]-3-氟-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (38h) (0.28 g，收率：84%)。
LCMS m/z = 515.5 [M+1]+
。
第八步：5-[3-[3-[(3S,4R)-4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物38)
5-[3-[3-[(3S,4R)-4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-3-fluoro-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidin-1-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
將1-[(3S,4R)-1-[1-(氮雜環丁-3-基)氮雜環丁-3-基]-3-氟-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (38h) (0.28 g, 0.54 mmol) 溶於25mL DMSO中，加入3mL DIPEA和2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (300 mg，1.09 mmol)，於外浴80℃攪拌反應5h。將反應液冷卻至室溫，加入50mL水，用100mL乙酸乙酯萃取，有機相用100mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得5-[3-[3-[(3S,4R)-4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物38) (0.126 g，收率：30%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.91 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 7.69 – 7.61 (m, 3H), 7.43 – 7.35 (m, 2H), 7.21 –7.05 (m, 5H), 6.79 (d, 1H), 6.53 (dd, 1H), 5.68 (brs, 2H), 5.20 – 5.01 (m, 1H), 4.99 – 4.82 (m, 2H), 4.10 – 4.02 (m, 2H), 3.96 – 3.87 (m, 2H), 3.80 – 3.66 (m, 1H), 3.66 – 3.56 (m, 2H), 3.32 –2.97 (m, 6H), 2.92 – 2.65 (m, 3H), 2.49 – 2.29 (m, 1H), 2.29 – 2.19 (m, 1H), 2.17 – 2.07 (m, 2H)。
LCMS m/z = 771.3 [M+1]+
。
實施例
39
：
5-(3-((3R,4R)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-基)-[1,3'-雙二氮雜環丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物 39
)
5-(3-((3R,4R)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoropiperidin-1-yl)-[1,3'-biazetidin]-1'-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
第一步：(3R,4S)-3-氟-4-((甲基磺醯基)氧基)呱啶-1-甲酸第三丁酯 (39b)
tert-butyl (3R,4S)-3-fluoro-4-((methylsulfonyl)oxy)piperidine-1-carboxylate
將 (3R,4S)-3-氟-4-羥基呱啶-1-甲酸第三丁酯 (39a) (2.0 g, 9.13 mmol) 溶解於30mL二氯甲烷中，加入DIPEA (2.76 g，21.35 mmol)，冷卻至0 ℃，緩慢滴加甲基磺醯氯 (1.25 g，10.91 mmol)，加完後室溫攪拌30分鐘。反應完畢，加入40mL水淬滅，用50mL二氯甲烷萃取，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (石油醚/乙酸乙酯 (v/v) = 3:1)，得 (3R,4S)-3-氟-4-((甲基磺醯基)氧基)呱啶-1-甲酸第三丁酯 (39b) (2.7 g，收率：＞99%)。
第二步：(3R,4R)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-甲酸第三丁酯 (39c)
tert-butyl (3R,4R)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoropiperidine-1-carboxylate
將 (3R,4S)-3-氟-4-((甲基磺醯基)氧基)呱啶-1-甲酸第三丁酯 (39b) (2.20 g, 7.41 mmol) 和3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (1.0 g，3.30 mmol) 溶於30mL DMF中，加入碳酸銫 (3.23 g，9.91 mmol)，於100 ℃攪拌反應4h。將反應液冷卻至室溫，向其加入50mL水，用50mL乙酸乙酯萃取，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 50:1)，得 (3R,4R)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-甲酸第三丁酯 (39c) (900 mg，收率：54%)。
LCMS m/z = 505.3 [M+1]+
。
第三步：1-((3R,4R)-3-氟呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (39d)
1-((3R,4R)-3-fluoropiperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將 (3R,4R)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-甲酸第三丁酯 (39c) (900 mg, 1.79 mmol) 溶解到15mL二氯甲烷中，加入10mL三氟乙酸，室溫攪拌4h。將反應體系直接減壓濃縮，殘留物用30mL 5 N氫氧化鈉溶液溶解，用50mL二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得1-((3R,4R)-3-氟呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (39d) (670 mg, 收率：93%)。
LCMS m/z = 405.3 [M+1]+
。
第四步：3-((3R,4R)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (39e)
tert-butyl 3-((3R,4R)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoropiperidin-1-yl)azetidine-1-carboxylate
將1-((3R,4R)-3-氟呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (39d) (670 mg，1.66 mmol) 溶於35mL DCE中，加入3-氧代氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (566 mg, 3.31 mmol)，室溫攪拌10分鐘後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (1.4 g，6.61 mmol)，室溫攪拌過夜。向反應液中緩慢加入30mL飽和碳酸氫鈉溶液，用30mL二氯甲烷萃取三次，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得3-((3R,4R)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (39e) (860 mg, 收率：93%)。
LCMS m/z = 560.3 [M+1]+
。
第五步：1-((3R,4R)-1-(氮雜環丁-3-基)-3-氟呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (39f)
1-((3R,4R)-1-(azetidin-3-yl)-3-fluoropiperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將3-((3R,4R)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (39e) (810 mg, 1.45 mmol) 溶解到20mL DCM中，加入5mL三氟乙酸，室溫攪拌4h。反應完後將體系直接減壓濃縮，殘留物用30mL 5 N氫氧化鈉水溶液溶解，用30mL DCM萃取三次，有機相用30mL 1 N氫氧化鈉溶液洗滌兩次，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到1-((3R,4R)-1-(氮雜環丁-3-基)-3-氟呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (39f) (0.63 g, 收率：95%)。
LCMS m/z = 460.2 [M+1]+
。
第六步：3-((3R,4R)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-基)-[1,3'-雙二氮雜環丁烷]-1'-甲酸第三丁酯 (39g)
tert-butyl 3-((3R,4R)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoropiperidin-1-yl)-[1,3'-biazetidine]-1'-carboxylate
將1-((3R,4R)-1-(氮雜環丁-3-基)-3-氟呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (39f) (580 mg, 1.26 mmol) 溶於30mL DCE中，加入3-氧代氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (432 mg, 2.53 mmol)，室溫攪拌10分鐘後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (1.07 g，5.05 mmol)，室溫攪拌過夜。向反應體系中緩慢加入30mL飽和碳酸氫鈉溶液，用30mL二氯甲烷萃取三次，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得3-((3R,4R)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-基)-[1,3'-雙二氮雜環丁烷]-1'-甲酸第三丁酯 (39g) (600 mg, 收率：77%)。
LCMS m/z = 615.3 [M+1]+
。
第七步：1-((3R,4R)-1-([1,3'-雙二氮雜環丁]-3-基)-3-氟呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (39h)
1-((3R,4R)-1-([1,3'-biazetidin]-3-yl)-3-fluoropiperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d] pyrimidin-4-amine
將3-((3R,4R)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-基)-[1,3'-雙二氮雜環丁烷]-1'-甲酸第三丁酯 (39g) (550 mg, 0.896 mmol) 溶解在20mL DCM中，加入4mL三氟乙酸，室溫攪拌4h。將反應體系直接減壓濃縮，殘留物用30mL 5 N氫氧化鈉溶液溶解，用30mL DCM萃取三次，有機相用30mL 1 N氫氧化鈉溶液洗滌兩次，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到1-((3R,4R)-1-([1,3'-雙二氮雜環丁]-3-基)-3-氟呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (39h) (0.43 g, 收率：93%)。
LCMS m/z = 515.2 [M+1]+
。
第八步：5-(3-((3R,4R)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-基)-[1,3'-雙二氮雜環丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物39)
5-(3-((3R,4R)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoropiperidin-1-yl)-[1,3'-biazetidin]-1'-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將1-((3R,4R)-1-([1,3'-雙二氮雜環丁]-3-基)-3-氟呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (39h) (300 mg, 0.584 mmol) 溶於25mL DMSO中，加入1.5mL DIPEA和2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (274 mg, 0.993 mmol)，於外浴80℃攪拌反應5h。將反應液冷卻至室溫，加入50mL水，用100mL乙酸乙酯萃取，有機相用100mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 15:1)，得5-(3-((3R,4R)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-基)-[1,3'-雙二氮雜環丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物39) (300 mg, 收率：67%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 9.61 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 7.69 – 7.61 (m, 3H), 7.43 – 7.35 (m, 2H), 7.20 – 7.05 (m, 5H), 6.79 (d, 1H), 6.53 (dd, 1H), 5.80 (brs, 2H), 5.35 – 5.14 (m, 1H), 4.97 – 4.83 (m, 2H), 4.09 – 4.01 (m, 2H), 3.93 – 3.85 (m, 2H), 3.75 – 3.55 (m, 3H), 3.29 – 3.05 (m, 4H), 2.92 – 2.64 (m, 4H), 2.53 – 2.39 (m, 1H), 2.22 – 2.05 (m, 4H)。
LCMS m/z = 771.3 [M+1]+
。
實施例
40
：
5-(3-((3R,4R)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物 40
)
5-(3-((3R,4R)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
第一步：(3R,4R)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-甲酸第三丁酯 (40a)
tert-butyl (3R,4R)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidine]-1'-carboxylate
將1-((3R,4R)-3-氟呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺(39d) (800 mg，1.98 mmol) 溶於35mL DCE中，加入4-氧代呱啶-1-甲酸第三丁酯 (787 mg, 3.95 mmol)，室溫攪拌10分鐘後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (1.68 g，7.93 mmol)，室溫攪拌過夜。向反應液中緩慢加入30mL飽和碳酸氫鈉溶液，用30mL DCM萃取三次，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得 (3R,4R)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-甲酸第三丁酯 (40a) (970 mg, 收率：83%)。
LCMS m/z = 588.3 [M+1]+
。
第二步：1-((3R,4R)-3-氟-[1,4'-聯呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (40b)
1-((3R,4R)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將 (3R,4R)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-甲酸第三丁酯 (40a) (960 mg, 1.64 mmol) 溶解到20mL DCM中，加入8mL三氟乙酸，室溫攪拌4h。反應完後將體系直接減壓濃縮，殘留物用30mL 5 N氫氧化鈉溶液溶解，用30mL DCM萃取三次，有機相用30mL 1 N氫氧化鈉溶液洗滌兩次，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得1-((3R,4R)-3-氟-[1,4'-聯呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (40b) (0.79 g, 收率：99%)。
LCMS m/z = 488.3 [M+1]+
。
第三步：3-((3R,4R)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (40c)
tert-butyl 3-((3R,4R)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidine-1-carboxylate
將1-((3R,4R)-3-氟-[1,4'-聯呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (40b) (540 mg, 1.11 mmol) 溶於30mL DCE中，加入3-氧代氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (380 mg, 2.22 mmol)，室溫攪拌10分鐘後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (940 mg，4.44 mmol)，室溫攪拌過夜。向反應體系中緩慢加入30mL飽和碳酸氫鈉溶液，用30mL DCM萃取三次，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得3-((3R,4R)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (40c) (630 mg, 收率：88%)。
LCMS m/z = 643.4 [M+1]+
。
第四步：1-((3R,4R)-1'-(氮雜環丁-3-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (40d)
1-((3R,4R)-1'-(azetidin-3-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo [3,4-d] pyrimidin-4-amine
將3-((3R,4R)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (40c) (600 mg, 0.93 mmol) 溶解在20mL DCM中，加入8mL三氟乙酸，室溫攪拌4h。將反應體系直接減壓濃縮，殘留物用30mL 5 N氫氧化鈉溶液溶解，用30mL二氯甲烷萃取三次，有機相用30mL 1 N氫氧化鈉溶液洗滌兩次，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得1-((3R,4R)-1'-(氮雜環丁-3-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (40d) (0.47 g, 收率：93%)。
LCMS m/z = 543.3 [M+1]+
。
第五步：5-(3-((3R,4R)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物40)
5-(3-((3R,4R)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將1-((3R,4R)-1'-(氮雜環丁-3-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (40d) (350 mg, 0.65 mmol) 溶於25mL DMSO中，加入1.5mL DIPEA和2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (267 mg，0.97 mmol)，於外浴80℃攪拌反應5h。將反應液冷卻至室溫，加入50mL水，用100mL乙酸乙酯萃取，有機相用100mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 15:1)，得5-(3-((3R,4R)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物40) (380 mg, 收率：74%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 9.76 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 7.69 – 7.61 (m, 3H), 7.42 – 7.34 (m, 2H), 7.20 – 7.11 (m, 3H), 7.11 – 7.05 (m, 2H), 6.79 (d, 1H), 6.52 (dd, 1H), 5.83 (brs, 2H), 5.29 – 5.10 (m, 1H), 4.97 – 4.80 (m, 2H), 4.12 – 4.06 (m, 2H), 3.95 – 3.85 (m, 2H), 3.45 – 3.31 (m, 2H), 3.06 – 2.92 (m, 3H), 2.91 – 2.68 (m, 3H), 2.56 – 2.35 (m, 4H), 2.16 – 1.93 (m, 4H), 1.92 – 1.82 (m, 2H), 1.74 – 1.58 (m, 2H)。
LCMS m/z = 799.3 [M+1]+
。
實施例
41
：
5-(3-((3R,4S)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-基)-[1,3'-雙二氮雜環丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物 41
)
5-(3-((3R,4S)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoropiperidin-1-yl)-[1,3'-biazetidin]-1'-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
第一步：(3R,4R)-3-氟-4-((甲基磺醯基)氧基)呱啶-1-甲酸第三丁酯 (41b)
tert-butyl (3R,4R)-3-fluoro-4-((methylsulfonyl)oxy)piperidine-1-carboxylate
將 (3R,4R)-3-氟-4-羥基呱啶-1-甲酸第三丁酯 (41a) (3.0 g, 13.70 mmol) 溶解於80mL二氯甲烷中，加入三乙胺 (4.15 g，41.09 mmol)，冷卻至0 ℃，緩慢滴加甲基磺醯氯 (1.88 g，16.41 mmol)，加完後於室溫攪拌反應30分鐘。反應液用40mL水淬滅，用100mL DCM萃取三次，有機相用100mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (石油醚/乙酸乙酯 (v/v) = 3:1)，得(3R,4R)-3-氟-4-((甲基磺醯基)氧基)呱啶-1-甲酸第三丁酯 (41b) (4.1 g, 收率：＞99%)。
第二步：(3R,4S)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-甲酸第三丁酯 (41c)
tert-butyl (3R,4S)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoropiperidine-1-carboxylate
將 (3R,4R)-3-氟-4-((甲基磺醯基)氧基)呱啶-1-甲酸第三丁酯 (41b) (3.92 g, 13.20 mmol) 和3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (2.0 g, 6.60 mmol)溶於50mL DMF中，加入碳酸銫 (6.45 g，19.80 mmol)，於100℃攪拌反應4h。將反應冷卻至室溫，往反應體系裡加入80mL水，用100mL乙酸乙酯萃取三次，有機相用100mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 50:1)，得 (3R,4S)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-甲酸第三丁酯 (41c) (2.5 g, 收率：75%)。
LCMS m/z = 505.3 [M+1]+
。
第三步：1-((3R,4S)-3-氟呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (41d)
1-((3R,4S)-3-fluoropiperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將 (3R,4S)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-甲酸第三丁酯 (41c) (2.5 g, 4.96 mmol) 溶解到60mL DCM中，加入20mL三氟乙酸，室溫攪拌4h。將反應體系直接減壓濃縮，殘留物用60mL 5 N氫氧化鈉溶液溶解，用100mL二氯甲烷萃取三次，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得1-((3R,4S)-3-氟呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (41d) (2.1 g, 收率：＞99%)。
LCMS m/z = 405.3 [M+1]+
。
第四步：3-((3R,4S)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (41e)
tert-butyl 3-((3R,4S)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoropiperidin-1-yl)azetidine-1-carboxylate
將1-((3R,4S)-3-氟呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (41d) (900 mg, 2.23 mmol) 溶於35mL DCE中，加入3-氧代氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (762 mg, 4.46 mmol)，室溫攪拌10分鐘後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (1.89 g，8.92 mmol)，室溫攪拌過夜。向反應液中緩慢加50mL飽和碳酸氫鈉溶液，用50mL DCM萃取三次，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得3-((3R,4S)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (41e) (1.18 g, 收率：95%)。
LCMS m/z = 560.3 [M+1]+
。
第五步：1-((3R,4S)-1-(氮雜環丁-3-基)-3-氟呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (41f)
1-((3R,4S)-1-(azetidin-3-yl)-3-fluoropiperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將3-((3R,4S)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (41e) (800 mg, 1.43 mmol) 溶解到20mL DCM中，加入8mL三氟乙酸，室溫攪拌4h。反應完後將體系直接減壓濃縮，殘留物用50mL 5 N氫氧化鈉溶液溶解，用50mL DCM萃取三次，有機相用30mL 1 N氫氧化鈉溶液洗滌兩次，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得1-((3R,4S)-1-(氮雜環丁-3-基)-3-氟呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (41f) (0.57 g, 收率：87%)。
LCMS m/z = 460.2 [M+1]+
。
第六步：3-((3R,4S)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-基)-[1,3'-雙二氮雜環丁]-1'-甲酸第三丁酯 (41g)
tert-butyl 3-((3R,4S)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoropiperidin-1-yl)-[1,3'-biazetidine]-1'-carboxylate
將1-((3R,4S)-1-(氮雜環丁-3-基)-3-氟呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (41f) (500 mg, 1.09 mmol) 溶於30mL DCE中，加入3-氧代氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (372 mg, 2.18 mmol)，室溫攪拌10分鐘後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.93 g，4.39 mmol)，室溫攪拌過夜。向反應體系中緩慢加入50mL飽和碳酸氫鈉溶液，用50mL DCM萃取三次，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得3-((3R,4S)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-基)-[1,3'-雙二氮雜環丁]-1'-甲酸第三丁酯 (41g) (480 mg, 收率：72%)。
LCMS m/z = 615.3 [M+1]+
。
第七步：1-((3R,4S)-1-([1,3'-雙二氮雜環丁]-3-基)-3-氟呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4 -d]嘧啶-4-胺 (41h)
1-((3R,4S)-1-([1,3'-biazetidin]-3-yl)-3-fluoropiperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將3-((3R,4S)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-基)-[1,3'-雙二氮雜環丁]-1'-甲酸第三丁酯 (41g) (480 mg, 0.78 mmol) 溶解在20mL DCM中，加入8mL三氟乙酸，室溫攪拌4h。將反應體系直接減壓濃縮，殘留物用30mL 5 N氫氧化鈉溶液溶解，用30mL DCM萃取三次，有機相用30mL 1 N氫氧化鈉溶液洗滌兩次，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得1-((3R,4S)-1-([1,3'-雙二氮雜環丁]-3-基)-3-氟呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4 -d]嘧啶-4-胺 (41h) (0.40 g, 收率：＞99%)。
LCMS m/z = 515.2 [M+1]+
。
第八步：5-(3-((3R,4S)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-基)-[1,3'-雙二氮雜環丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物41)
5-(3-((3R,4S)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoropiperidin-1-yl)-[1,3'-biazetidin]-1'-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將1-((3R,4S)-1-([1,3'-雙二氮雜環丁]-3-基)-3-氟呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4 -d]嘧啶-4-胺 (41h) (300 mg, 0.58 mmol) 溶於25mL DMSO中，加入1.5mL DIPEA和2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (242 mg，0.88 mmol)，於外浴80℃攪拌反應5h。將反應液冷卻至室溫，加入50mL水，用100mL乙酸乙酯萃取，有機相用100mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 15:1)，得5-(3-((3R,4S)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟呱啶-1-基)-[1,3'-雙二氮雜環丁]-1'-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物41) (280 mg, 收率：63%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 10.07 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.68 – 7.60 (m, 3H), 7.41 – 7.34 (m, 2H), 7.19 – 7.04 (m, 5H), 6.78 (d, 1H), 6.51 (dd, 1H), 5.86 (brs, 2H), 5.18 – 5.00 (m, 1H), 4.98 – 4.81 (m, 2H), 4.08 – 4.00 (m, 2H), 3.92 – 3.84 (m, 2H), 3.74 – 3.66 (m, 1H), 3.66 – 3.56 (m, 2H), 3.26 – 2.95 (m, 6H), 2.90 – 2.65 (m, 3H), 2.46 – 2.29 (m, 1H), 2.28 – 2.17 (m, 1H), 2.16 – 2.05 (m, 2H)。
LCMS m/z = 771.3 [M+1]+
。
實施例
42
：
5-(3-((3R,4S)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物 42
)
5-(3-((3R,4S)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
第一步：(3R,4S)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-甲酸第三丁酯 (42a)
tert-butyl (3R,4S)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidine]-1'-carboxylate
將1-((3R,4S)-3-氟呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (41d) (0.9 g, 2.23 mmol) 溶於35mL DCE中，加入4-氧代呱啶-1-甲酸第三丁酯 (887 mg, 4.46 mmol)，室溫攪拌10分鐘後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (1.89 g，8.92 mmol)，室溫攪拌過夜。向反應液中緩慢加50mL飽和碳酸氫鈉溶液，用50mL DCM萃取三次，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得 (3R,4S)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-甲酸第三丁酯 (42a) (1.08 g, 收率：83%)。
LCMS m/z = 588.3 [M+1]+
。
第二步：1-((3R,4S)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (42b)
1-((3R,4S)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將 (3R,4S)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-甲酸第三丁酯 (42a) (800 mg, 1.36 mmol) 溶解到30mL DCM中，加入10mL三氟乙酸，室溫攪拌4h。反應完後將反應體系直接減壓濃縮，殘留物用50mL 5 N氫氧化鈉溶液溶解，用50mL DCM萃取三次，有機相用50mL 1 N 氫氧化鈉溶液洗滌兩次，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得1-((3R,4S)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (42b) (600 mg, 收率：91%)。
LCMS m/z = 488.3 [M+1]+
。
第三步：3-((3R,4S)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (42c)
tert-butyl 3-((3R,4S)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl) -3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidine-1-carboxylate
將1-((3R,4S)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (42b) (550 mg, 1.13 mmol) 溶於30mL DCE中，加入3-氧代氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (380 mg, 2.22 mmol)，室溫攪拌10分鐘後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.95 g, 4.48 mmol)，室溫攪拌過夜。向反應體系中緩慢加入50mL飽和碳酸氫鈉溶液，用50mL DCM萃取三次，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得3-((3R,4S)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (42c) (620 mg, 收率：85%)。
LCMS m/z = 643.4 [M+1]+
。
第四步：1-((3R,4S)-1'-(氮雜環丁-3-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (42d)
1-((3R,4S)-1'-(azetidin-3-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將3-((3R,4S)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (42c) (580 mg, 0.90 mmol) 溶解在20mL DCM中，加入8mL三氟乙酸，室溫攪拌4h。將反應體系直接減壓濃縮，殘留物用30mL 5 N氫氧化鈉溶液溶解，用30mL DCM萃取三次，有機相用30mL 1 N氫氧化鈉溶液洗滌兩次，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得1-((3R,4S)-1'-(氮雜環丁-3-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (42d) (480 mg, 收率：98%)。
LCMS m/z = 543.3 [M+1]+
。
第五步：5-(3-((3R,4S)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物42)
5-(3-((3R,4S)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將1-((3R,4S)-1'-(氮雜環丁-3-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (42d) (300 mg, 0.55 mmol) 溶於25mL DMSO中，加入1.5mL DIPEA和2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (229 mg，0.83 mmol)，於外浴80℃攪拌反應5h。將反應液冷卻至室溫，加入50mL水，用100mL乙酸乙酯萃取，有機相用100mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 15:1)，得5-(3-((3R,4S)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物42) (340 mg, 收率：77%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 9.63 – 9.46 (m, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.68 – 7.61 (m, 3H), 7.41 – 7.34 (m, 2H), 7.20 – 7.04 (m, 5H), 6.79 (d, 1H), 6.52 (dd, 1H), 5.78 (brs, 2H), 5.23 – 5.00 (m, 1H), 4.97 – 4.77 (m, 2H), 4.13 – 4.06 (m, 2H), 3.93 – 3.84 (m, 2H), 3.42 – 3.29 (m, 2H), 3.27 – 3.14 (m, 1H), 3.08 – 2.92 (m, 3H), 2.92 – 2.65 (m, 4H), 2.65 – 2.46 (m, 2H), 2.18 – 2.06 (m, 2H), 2.02 – 1.84 (m, 4H), 1.76 – 1.61 (m, 2H)。
LCMS m/z = 799.3 [M+1]+
。
實施例
43
5-[3-[3-[(3S,4S)-4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物 43
)
5-[3-[3-[(3S,4S)-4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-3-fluoro-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidin-1-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
第一步：(3S,4R)-3-氟-4-甲基磺醯氧基-呱啶-1-甲酸第三丁酯 (43b)
tert-butyl (3S,4R)-3-fluoro-4-methylsulfonyloxy-piperidine-1-carboxylate
將 (3S,4R)-3-氟-4-羥基呱啶-1-甲酸第三丁酯 (43a) (6.0 g, 27.39 mmol) 溶解於30mL二氯甲烷中，加入DIPEA (7.06 g, 54.62 mmol)，緩慢滴加甲基磺醯氯 (0.376 g, 3.28 mmol)，加完後室溫攪拌2h。反應液用40mL水淬滅，用100mL DCM萃取三次，有機相用100mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (石油醚/乙酸乙酯 (v/v) = 5:1)，得 (3S,4R)-3-氟-4-甲基磺醯氧基-呱啶-1-甲酸第三丁酯 (43b) (7.97 g, 收率：98%)。
第二步：(3S,4S)-4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟呱啶-1-甲酸第三丁酯 (43c)
tert-butyl (3S,4S)-4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-3-fluoro-piperidine-1-carboxylate
將 (3S,4R)-3-氟-4-甲基磺醯氧基-呱啶-1-甲酸第三丁酯 (43b) (2.45 g, 8.25 mmol) 和3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (1.0 g, 3.30 mmol) 溶於20mL DMF中，加入碳酸銫 (2.14 g, 6.57 mmol)，於100℃攪拌反應7h。將反應冷卻至室溫，往反應體系裡加入50mL水，用100mL乙酸乙酯萃取三次，有機相用100mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 15:1)，得 (3S,4S)-4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟呱啶-1-甲酸第三丁酯 (43c) (0.9 g, 收率：54%)。
LCMS m/z = 505.3 [M+1]+
。
第三步：1-[(3S,4S)-3-氟-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (43d)
1-[(3S,4S)-3-fluoro-4-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將 (3S,4S)-4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟呱啶-1-甲酸第三丁酯 (43c) (0.9 g, 1.79 mmol) 溶解到20mL DCM中，加入5mL三氟乙酸，室溫攪拌4h。將反應體系直接減壓濃縮，殘留物用60mL 5 N氫氧化鈉溶液溶解，用100mL二氯甲烷萃取三次，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得1-[(3S,4S)-3-氟-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (43d) (0.7 g, 收率：97%)。
LCMS m/z = 405.3 [M+1]+
。
第四步：3-[(3S,4S)-4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-呱啶基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (43e)
tert-butyl 3-[(3S,4S)-4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-3-fluoro-1-piperidyl]azetidine-1-carboxylate
將1-[(3S,4S)-3-氟-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (43d) (0.7 g, 1.73 mmol) 溶於35mL DCE與5mL DMSO中，加入3-氧代氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (542 mg, 3.17 mmol)，室溫攪拌10分鐘後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (1.68 g，7.93 mmol)，室溫攪拌過夜。向反應液中緩慢加入30mL飽和碳酸氫鈉溶液，用50mL乙酸乙酯萃取三次，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得3-[(3S,4S)-4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-呱啶基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (43e) (800 mg, 收率：83%)。
LCMS m/z = 560.3 [M+1]+
。
第五步：1-[(3S,4S)-1-(氮雜環丁-3-基)-3-氟-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (43f)
1-[(3S,4S)-1-(azetidin-3-yl)-3-fluoro-4-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將3-[(3S,4S)-4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-呱啶基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (43e) (500 mg, 0.89 mmol) 溶解到20mL DCM中，加入5mL三氟乙酸，室溫攪拌4h。反應完後將體系直接減壓濃縮，殘留物用50mL 5 N氫氧化鈉溶液溶解，用50mL DCM萃取三次，有機相用30mL 1 N氫氧化鈉溶液洗滌兩次，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得1-[(3S,4S)-1-(氮雜環丁-3-基)-3-氟-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (43f) (0.4 g, 收率：98%)。
LCMS m/z = 460.2 [M+1]+
。
第六步：3-[3-[(3S,4S)-4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (43g)
tert-butyl 3-[3-[(3S,4S)-4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-3-fluoro-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidine-1-carboxylate
將1-[(3S,4S)-1-(氮雜環丁-3-基)-3-氟-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (43f) (0.4 g, 0.87 mmol) 溶於25mL DCE與2mL DMSO中，加入3-氧代氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (485 mg, 2.83 mmol)，室溫攪拌10分鐘後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (1.12 g，5.28 mmol)，室溫攪拌過夜。向反應體系中緩慢加入60mL飽和碳酸氫鈉溶液，用60mL乙酸乙酯萃取三次，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得3-[3-[(3S,4S)-4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (43g) (450 mg, 收率：84%)。
LCMS m/z = 615.3 [M+1]+
。
第七步：1-[(3S,4S)-1-[1-(氮雜環丁-3-基)氮雜環丁-3-基]-3-氟-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (43h)
1-[(3S,4S)-1-[1-(azetidin-3-yl)azetidin-3-yl]-3-fluoro-4-piperidyl]-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將3-[3-[(3S,4S)-4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (43g) (400 mg, 0.65 mmol) 溶解在20mL DCM中，加入4mL三氟乙酸，室溫攪拌4h。將反應體系直接減壓濃縮，殘留物用30mL 5 N氫氧化鈉溶液溶解，用30mL DCM萃取三次，有機相用30mL 1 N氫氧化鈉溶液洗滌兩次，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得1-[(3S,4S)-1-[1-(氮雜環丁-3-基)氮雜環丁-3-基]-3-氟-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (43h) (0.33 g, 收率：99%)。
LCMS m/z = 515.2 [M+1]+
。
第八步：5-[3-[3-[(3S,4S)-4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物43)
5-[3-[3-[(3S,4S)-4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-3-fluoro-1-piperidyl]azetidin-1-yl]azetidin-1-yl]-2-(2,6-dioxo-3-piperidyl)isoindoline-1,3-dione
將1-[(3S,4S)-1-[1-(氮雜環丁-3-基)氮雜環丁-3-基]-3-氟-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (43h) (0.33 g, 0.64 mmol) 溶於25mL DMSO中，加入3mL DIPEA和2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (352 mg，1.28 mmol)，於外浴80℃攪拌反應5h。將反應液冷卻至室溫，加入50mL水，用100mL乙酸乙酯萃取，有機相用100mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得5-[3-[3-[(3S,4S)-4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-3-氟-1-呱啶基]氮雜環丁-1-基]氮雜環丁-1-基]-2-(2,6-二氧代-3-呱啶基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物43) (125 mg, 收率：25%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 9.61 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 7.69 – 7.61 (m, 3H), 7.43 – 7.35 (m, 2H), 7.21 – 7.05 (m, 5H), 6.79 (d, 1H), 6.53 (dd, 1H), 5.80 (brs, 2H), 5.35 – 5.13 (m, 1H), 4.97 – 4.83 (m, 2H), 4.09 – 4.01 (m, 2H), 3.93 – 3.85 (m, 2H), 3.75 – 3.55 (m, 3H), 3.29 – 3.06 (m, 4H), 2.92 – 2.65 (m, 4H), 2.53 – 2.39 (m, 1H), 2.22 – 2.05 (m, 4H)。
LCMS m/z = 771.3 [M+1]+
。
實施例
44
：
5-(3-((3S,4S)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物 44
)
5-(3-((3S,4S)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
第一步：(3S,4S)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-甲酸第三丁酯 (44a)
tert-butyl (3S,4S)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidine]-1'-carboxylate
將1-[(3S,4S)-3-氟-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (43d) (800 mg，1.98 mmol) 溶於35mL DCE中，加入4-氧代呱啶-1-甲酸第三丁酯 (787 mg, 3.95 mmol)，室溫攪拌10分鐘後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (1.68 g，7.93 mmol)，室溫攪拌過夜。向反應液中緩慢加入30mL飽和碳酸氫鈉溶液，用30mL DCM萃取三次，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得 (3S,4S)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-甲酸第三丁酯 (44a) (970 mg, 收率：83%)。
LCMS m/z = 588.3 [M+1]+
。
第二步：1-((3S,4S)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (44b)
1-((3S,4S)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將 (3S,4S)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-甲酸第三丁酯 (44a) (650 mg, 1.11 mmol) 溶解到20mL DCM中，加入8mL三氟乙酸，室溫攪拌4h。反應完後將體系直接減壓濃縮，殘留物用30mL 5 N氫氧化鈉溶液溶解，用30mL DCM萃取三次，有機相用30mL 1 N氫氧化鈉溶液洗滌兩次，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得1-((3S,4S)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (44b) (540 mg, 收率：＞99%)。
LCMS m/z = 488.3 [M+1]+
。
第三步：3-((3S,4S)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (44c)
tert-butyl 3-((3S,4S)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidine-1-carboxylate
將1-((3S,4S)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (44b) (500 mg, 1.03 mmol) 溶於30mL DCE中，加入3-氧代氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (350 mg, 2.05 mmol)，室溫攪拌10分鐘後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (870 mg，4.10 mmol)，室溫攪拌過夜。向反應體系中緩慢加入30mL飽和碳酸氫鈉溶液，用30mL DCM萃取三次，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得3-((3S,4S)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (44c) (560 mg, 收率：85%)。
LCMS m/z = 643.4 [M+1]+
。
第四步：1-((3S,4S)-1'-(氮雜環丁-3-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (44d)
1-((3S,4S)-1'-(azetidin-3-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxy-phenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將3-((3S,4S)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (44c) (500 mg, 0.78 mmol) 溶解在20mL DCM中，加入8mL三氟乙酸，室溫攪拌4h。將反應體系直接減壓濃縮，殘留物用30mL 5 N氫氧化鈉溶液溶解，用30mL二氯甲烷萃取三次，有機相用30mL 1 N氫氧化鈉溶液洗滌兩次，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得1-((3S,4S)-1'-(氮雜環丁-3-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (44d) (420 mg, 收率：＞99%)。
LCMS m/z = 543.3 [M+1]+
。
第五步：5-(3-((3S,4S)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物44)
5-(3-((3S,4S)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將1-((3S,4S)-1'-(氮雜環丁-3-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (44d) (310 mg, 0.57 mmol) 溶於25mL DMSO中，加入1.5mL DIPEA和2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (236 mg，0.86 mmol)，於外浴80℃攪拌反應5h。將反應液冷卻至室溫，加入50mL水，用100mL乙酸乙酯萃取，有機相用100mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 15:1)，得5-(3-((3S,4S)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物44) (310 mg, 收率：68%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 9.49 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 7.71 – 7.58 (m, 3H), 7.43 – 7.33 (m, 2H), 7.22 – 7.11 (m, 3H), 7.11 – 7.03 (m, 2H), 6.83 – 6.74 (m, 1H), 6.57 – 6.47 (m, 1H), 5.78 (brs, 2H), 5.33 – 5.09 (m, 1H), 4.98 – 4.79 (m, 2H), 4.16 – 4.04 (m, 2H), 3.96 – 3.85 (m, 2H), 3.46 – 3.31 (m, 2H), 3.07 – 2.91 (m, 3H), 2.91 – 2.65 (m, 3H), 2.57 – 2.34 (m, 4H), 2.18 – 1.93 (m, 4H), 1.92 – 1.82 (m, 2H), 1.74 – 1.58 (m, 2H)。
LCMS m/z = 799.3 [M+1]+
。
實施例
45
：
5-(3-((3S,4R)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物 45
)
5-(3-((3S,4R)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
第一步：(3S,4R)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶] -1'-甲酸第三丁酯 (45a)
tert-butyl (3S,4R)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidine]-1'-carboxylate
將1-[(3S,4R)-3-氟-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (38d) (1.1 g, 2.72 mmol) 溶於35mL DCE中，加入4-氧代呱啶-1-甲酸第三丁酯 (1.08 g, 5.43 mmol)，室溫攪拌10分鐘後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (2.31 g，10.90 mmol)，室溫攪拌過夜。向反應液中緩慢加入50mL飽和碳酸氫鈉溶液，用50mL DCM萃取三次，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得 (3S,4R)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶] -1'-甲酸第三丁酯 (45a) (1.4 g, 收率：88%)。
LCMS m/z = 588.3 [M+1]+
。
第二步：1-((3S,4R)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (45b)
1-((3S,4R)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將 (3S,4R)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶] -1'-甲酸第三丁酯 (45a) (1.4 g, 2.38 mmol) 溶解到30mL DCM中，加入10mL三氟乙酸，室溫攪拌4h。反應完後將體系直接減壓濃縮，殘留物用50mL 5 N氫氧化鈉溶液溶解，用50mL DCM萃取三次，有機相用30mL 1 N氫氧化鈉溶液洗滌兩次，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得1-((3S,4R)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (45b) (1.2 g, 產率：＞99%)。
LCMS m/z = 488.3 [M+1]+
。
第三步：3-((3S,4R)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (45c)
tert-butyl 3-((3S,4R)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidine-1-carboxylate
將1-((3S,4R)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (45b) (600 mg, 1.23 mmol) 溶於30mL DCE中，加入3-氧代氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (421 mg, 2.46 mmol)，室溫攪拌10分鐘後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (1.04 g，4.91 mmol)，室溫攪拌過夜。向反應體系中緩慢加入50mL碳酸氫鈉溶液，用50mL DCM萃取三次，有機相用50mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得3-((3S,4R)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (45c) (700 mg, 收率：89%)。
LCMS m/z = 643.4 [M+1]+
。
第四步：1-((3S,4R)-1'-(氮雜環丁-3-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (45d)
1-((3S,4R)-1'-(azetidin-3-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將3-((3S,4R)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (45c) (600 mg, 0.93 mmol) 溶解在20mL DCM中，加入8mL三氟乙酸，室溫攪拌4h。將反應體系直接減壓濃縮，殘留物用30mL 5 N氫氧化鈉溶液溶解，用30mL DCM萃取三次，有機相用30mL 1 N氫氧化鈉溶液洗滌兩次，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得1-((3S,4R)-1'-(氮雜環丁-3-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (45d) (0.44 g, 收率：87%)。
LCMS m/z = 543.3 [M+1]+
。
第五步：5-(3-((3S,4R)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物45)
5-(3-((3S,4R)-4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將1-((3S,4R)-1'-(氮雜環丁-3-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (45d) (300 mg, 0.55 mmol) 溶於25mL DMSO中，加入1.5mL DIPEA和2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (229 mg，0.83 mmol)，於外浴80℃攪拌反應5h。將反應液冷卻至室溫，加入50mL水，用100mL乙酸乙酯萃取，有機相用100mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 15:1)，得5-(3-((3S,4R)-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物45) (220 mg, 收率：50%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 9.37 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.68 – 7.60 (m, 3H), 7.42 – 7.34 (m, 2H), 7.20 – 7.04 (m, 5H), 6.79 (d, 1H), 6.52 (dd, 1H), 5.74 (brs, 2H), 5.23 – 5.02 (m, 1H), 4.97 – 4.79 (m, 2H), 4.14 – 4.05 (m, 2H), 3.94 – 3.84 (m, 2H), 3.41 – 3.29 (m, 2H), 3.27 – 3.15 (m, 1H), 3.07 – 2.92 (m, 3H), 2.92 – 2.66 (m, 4H), 2.65 – 2.48 (m, 2H), 2.18 – 2.06 (m, 2H), 2.03 – 1.84 (m, 4H), 1.75 – 1.61 (m, 2H)。
LCMS m/z = 799.3 [M+1]+
。
實施例
46-1
：
trans-5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮-P1(化合物46-1)
trans-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione-P1
或
第一步：cis-3-氟-4-羥基-呱啶-1-甲酸第三丁酯 (46b)
Cis-tert-butyl 3-fluoro-4-hydroxy-piperidine-1-carboxylate
將3-氟-4-氧代呱啶-1-甲酸第三丁酯 (46a) (13.0 g，59.8 mmol) 溶解在130 mL無水甲醇中，慢慢加入硼氫化鈉 (4.52 g，119.5 mmol)，加完後室溫攪拌30分鐘。將反應液用60 mL飽和氯化銨溶液淬滅，用200 mL二氯甲烷萃取，有機相用100 mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (石油醚/乙酸乙酯 (v/v) = 4:1-7:3)，得到cis-3-氟-4-羥基-呱啶-1-甲酸第三丁酯 (46b) (9.0 g，產率：69%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 4.70 – 4.51 (m, 1H), 3.99 – 3.83 (m, 2H), 3.79 – 3.60 (m, 1H), 3.52 – 3.33 (m, 1H), 3.25 – 3.10 (m, 1H), 1.95 (br.s, 1H), 1.89 – 1.69 (m, 2H), 1.46 (s, 9H)。
第二步：cis-3-氟-4-甲基磺醯氧基-呱啶-1-甲酸第三丁酯 (46c)
Cis-tert-butyl 3-fluoro-4-methylsulfonyloxy-piperidine-1-carboxylate
將cis-3-氟-4-羥基-呱啶-1-甲酸第三丁酯 (46b) (1.20 g，5.47 mmol) 溶解在12 mL二氯甲烷中，加入三乙胺 (0.720 g，7.12 mmol)，0 ℃下慢慢滴加甲磺醯氯 (0.940 g，8.21 mmol)，加完後在0℃下反應30 min。在0℃下向反應液中滴加10 mL飽和氯化銨溶液淬滅反應，回至室溫，分液，水相再用20 mL二氯甲烷萃取，合併有機相，有機相用20 mL飽和氯化鈉溶液洗滌一次，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到粗品cis-3-氟-4-甲基磺醯氧基-呱啶-1-甲酸第三丁酯 (46c) (1.60 g)。
第三步：trans-4-疊氮基-3-氟-呱啶-1-甲酸第三丁酯 (46d)
trans-tert-butyl 4-azido-3-fluoro-piperidine-1-carboxylate
將上述粗品cis-3-氟-4-甲基磺醯氧基-呱啶-1-甲酸第三丁酯 (46c) (1.60 g) 溶解在10 mL DMF中，加入疊氮化鈉 (1.05 g，16.2 mmol)，加完後於95℃攪拌反應5 h。將反應液冷卻至室溫，加入10 mL水，用50 mL乙酸乙酯萃取，分液，有機相再用20 mL飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (石油醚/乙酸乙酯 (v/v) = 9:1)，得到trans-4-疊氮基-3-氟-呱啶-1-甲酸第三丁酯 (46d) (0.900 g，從化合物46b算兩步收率：67%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 4.46 – 4.25 (m, 1H), 4.21 – 4.00 (m, 1H), 3.87 – 3.77 (m, 1H), 3.71 – 3.59 (m, 1H), 3.19 – 2.97 (m, 2H), 2.06 – 1.94 (m, 1H), 1.59 – 1.49 (m, 1H), 1.46 (s, 9H)。
第四步：trans-4-胺基-3-氟-呱啶-1-甲酸第三丁酯 (46e)
trans-tert-butyl 4-amino-3-fluoro-piperidine-1-carboxylate
將trans-4-疊氮基-3-氟-呱啶-1-甲酸第三丁酯 (46d) (0.900 g，3.68 mmol) 溶解在10 mL無水乙醇中，加入150 mg 10%鈀碳，在氫氣球氛圍下室溫攪拌16 h。將反應液抽濾，濾液減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-20:1)，得到trans-4-胺基-3-氟-呱啶-1-甲酸第三丁酯 (46e) (0.500 g，產率：62%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 4.42 – 4.19 (m, 1H), 4.18 – 3.92 (m, 2H), 2.98 – 2.69 (m, 3H), 1.93 – 1.82 (m, 1H), 1.55 (br.s, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.41 – 1.28 (m, 1H)。
第五步：trans-3-氟-4-(4-氧代-1-呱啶基)呱啶-1-甲酸第三丁酯 (46f)
trans-tert-butyl 3-fluoro-4-(4-oxo-1-piperidyl)piperidine-1-carboxylate
將戊-1,4-二烯-3-醇 (5.0 g，59.4 mmol) 溶解在50 mL 1,2-二氯乙烷中，加入2-碘醯基苯甲酸 (IBX) (33 g，117.8 mmol)，於70 ℃攪拌反應3 h。將反應液冷卻至室溫，抽濾，濾液直接用於下一步。
將trans-4-胺基-3-氟-呱啶-1-甲酸第三丁酯 (46e) (3.6 g，16.5 mmol) 溶解在10 mL無水甲醇中，加入二異丙基乙基胺 (4.26 g，33.0 mmol)，再加入上述濾液，於70 ℃攪拌反應3 h。將反應液冷卻至室溫，反應液減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (石油醚/乙酸乙酯 (v/v) = 4:1-2:3)，得到trans-3-氟-4-(4-氧代-1-呱啶基)呱啶-1-甲酸第三丁酯 (46f) (4.0 g，產率：81%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 4.61 – 4.31 (m, 2H), 4.16 – 4.00 (m, 1H), 3.06 – 2.91 (m, 4H), 2.87 – 2.66 (m, 3H), 2.45 (t, 4H), 1.90 – 1.79 (m, 1H), 1.60 – 1.48 (m, 1H), 1.46 (s, 9H)。
LCMS m/z = 301.3 [M+1]+
。
第六步：trans-3-氟-4-(4-羥基-1-呱啶基)呱啶-1-甲酸第三丁酯 (46g)
trans-tert-butyl 3-fluoro-4-(4-hydroxy-1-piperidyl)piperidine-1-carboxylate
將trans-3-氟-4-(4-氧代-1-呱啶基)呱啶-1-甲酸第三丁酯 (46f) (4.0 g，13.3 mmol) 溶解在40 mL無水甲醇中，加入硼氫化鈉 (0.505 g，13.3 mmol)，加完後室溫反應10 min。向反應液滴加25 mL飽和氯化銨溶液淬滅反應，用50 mL乙酸乙酯萃取兩次，合併有機相，有機相用30 mL飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-9:1)，得到trans-3-氟-4-(4-羥基-1-呱啶基)呱啶-1-甲酸第三丁酯 (46g) (3.2 g，產率：80%）。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 4.65 – 4.40 (m, 1H), 4.38 – 4.22 (m, 1H), 4.09 – 3.91 (m, 1H), 3.76 – 3.61 (m, 1H), 2.99 – 2.39 (m, 7H), 2.00 – 1.71 (m, 3H), 1.65 – 1.41 (m, 12H)。
LCMS m/z = 303.3 [M+1]+
。
第七步：trans-3-氟-4-[4-(對甲苯磺醯氧基)-1-呱啶基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (46h)
trans-tert-butyl 3-fluoro-4-[4-(p-tolylsulfonyloxy)-1-piperidyl]piperidine-1-carboxylate
將trans-3-氟-4-(4-羥基-1-呱啶基)呱啶-1-甲酸第三丁酯 (46g) (1.80 g，5.95 mmol) 溶解在18 mL吡啶中，加入對甲苯磺醯氯 (2.27 g，11.9 mmol)，加完後於70 ℃攪拌反應2小時。將反應液冷卻至室溫，加入30 mL水和60 mL乙酸乙酯，分液，有機相依次用20 mL飽和碳酸氫鈉溶液、40 mL 0.5 mol/L鹽酸和20 mL飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到粗品trans-3-氟-4-[4-(對甲苯磺醯氧基)-1-呱啶基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (46h) (2.48 g)。
第八步：trans-4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-3-氟-呱啶-1-甲酸第三丁酯 (46i)
trans-tert-butyl-4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]-3-fluoro-piperidine-1-carboxylate
將3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (1.50 g，4.95 mmol) 溶解在10 mL DMF中，依次加入上述粗品trans-3-氟-4-[4-(對甲苯磺醯氧基)-1-呱啶基]呱啶-1-甲酸第三丁酯 (46h) (2.48 g) 和碳酸銫 (3.24 g，9.94 mmol)，加完後於60 ℃攪拌反應2 h。將反應液冷卻至室溫，加入10 mL水和20 mL乙酸乙酯，分液，有機相用5 mL飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 100:0-50:1)，得到trans-4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-3-氟-呱啶-1-甲酸第三丁酯 (46i) (0.900 g，產率：31%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.36 (s, 1H), 7.69 – 7.62 (m, 2H), 7.43 – 7.35 (m, 2H), 7.21 – 7.11 (m, 3H), 7.11 – 7.05 (m, 2H), 5.64 (br.s, 2H), 4.86 – 4.74 (m, 1H), 4.69 – 4.46 (m, 1H), 4.42 – 4.25 (m, 1H), 4.12 – 3.94 (m, 1H), 3.19 – 3.03 (m, 2H), 2.87 – 2.63 (m, 5H), 2.50 – 2.34 (m, 2H), 2.12 – 2.01 (m, 2H), 1.93 – 1.84 (m, 1H), 1.63 – 1.50 (m, 1H), 1.47 (s, 9H)。
第九步：trans-4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-3-氟-呱啶-1-甲酸第三丁酯-P1 (46i-1)
trans-tert-butyl-4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]-3-fluoro-piperidine-1-carboxylate-P1
trans-4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-3-氟-呱啶-1-甲酸第三丁酯 -P2(46i-2)
trans-tert-butyl-4-[4-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]-1-piperidyl]-3-fluoro-piperidine-1-carboxylate-P2
式46i-a，以及
式46i-b
化合物46i通過高效液相色譜法分離製備得到化合物46i-1及46i-2。製備條件如下：
儀器及製備柱：採用MG II preparative SFC (SFC-1) 製備液相，製備柱型號ChiralPak IC, 250 × 30 mm I.D., 10 μm。
製備方法：粗品用甲醇/二氯甲烷溶解，製備成樣品液。
流動相體系：sCO2
/異丙醇 (含0.1%氨水)，等梯度沖提：sCO2
/異丙醇 (含0.1%氨水) = 55/45。
流速：80 mL/min
化合物46i-1及46i-2的分析方法：
儀器：Waters UPC2 analytical SFC (SFC-H)
色譜柱：CHIRALPAK IC
規格：150 mm × 4.6 mm，3 µm
流動相A：sCO2
流動相B：異丙醇 (含0.05%二乙胺)
柱溫：35 ℃
流速：2.5 mL/min
波長：254 nm
等梯度沖提：流動相A:B = 60:40。
化合物46i-1保留時間：6.576 min（絕對構型沒有確定，其結構為上面式46i-a和46i-b之一）；
化合物46i-2保留時間：8.951 min（絕對構型沒有確定，其結構為上面式46i-a和46i-b之一，且與化合物46i-1為異構體，即，當化合物46i-1結構為式46i-a的結構時，化合物46i-2結構為式46i-b的結構；當化合物46i-1結構為式46i-b的結構時，化合物46i-2結構為式46i-a的結構）。
第十步：trans-1-(3'-氟-[1,4'-雙呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺-P1 (46j)
trans-1-(3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine-P1
將trans-4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-3-氟-呱啶-1-甲酸第三丁酯-P1 (46i-1，其結構為式46i-a和式46i-b之一) (420 mg, 0.71 mmol) 溶解到20 mL DCM中，加入8 mL三氟乙酸，室溫攪拌4小時。將反應液直接減壓濃縮，殘留物用30 mL 5 mol/L NaOH溶液溶解，用DCM萃取 (30 mL × 4)，合併有機相，有機相用1 mol/L NaOH溶液洗滌 (30 mL × 2)，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到trans-1-(3'-氟-[1,4'-雙呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺-P1 (46j) (340 mg，收率：98%)，其中的手性碳構型與第十步的原料（化合物46i-1）對應的手性碳的構型一致。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.36 (s, 1H), 7.71 – 7.61 (m, 2H), 7.43 – 7.33 (m, 2H), 7.20 – 7.11 (m, 3H), 7.11 – 7.04 (m, 2H), 5.52 (br.s, 2H), 4.84 – 4.72 (m, 1H), 4.71 – 4.46 (m, 1H), 3.43 – 3.33 (m, 1H), 3.17 – 2.99 (m, 3H), 2.86 – 2.75 (m, 1H), 2.74 – 2.50 (m, 4H), 2.49 – 2.31 (m, 2H), 2.11 – 1.97 (m, 2H), 1.94 – 1.84 (m, 1H), 1.84 – 1.70 (m, 1H), 1.62 – 1.48 (m, 1H)。
LCMS m/z = 488.3 [M+1]+
。
第十一步：trans-3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯-P1 (46k)
trans-tert-butyl 3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidine-1-carboxylate -P1
將trans-1-(3'-氟-[1,4'-雙呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺-P1 (46j) (300 mg, 0.62 mmol) 溶於30 mL DCE中，加入3-氧代氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (211 mg, 1.23 mmol)，室溫攪拌10 min後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (522 mg，2.46 mmol)，室溫攪拌16 h。將反應液用DCM萃取 (30 mL × 3)，有機相用50 mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得到trans-3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯-P1 (46k) (380 mg，收率：95%)，其中的手性碳構型與第十步的原料（化合物46i-1）對應的手性碳的構型一致。
LCMS m/z = 643.4 [M+1]+
。
第十二步：trans-1-(1'-(氮雜環丁-3-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺-P1 (46l)
trans-1-(1'-(azetidin-3-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine-P1
將trans-3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯-P1 (46k) (380 mg, 0.59 mmol) 溶解在20 mL DCM中，加入8 mL三氟乙酸，室溫攪拌4 h。將反應體系直接減壓濃縮，殘留物用30 mL 5 mol/L NaOH溶液溶解，用DCM萃取 (30 mL × 4)，合併有機相，有機相用1 mol/L NaOH溶液洗滌 (30 mL × 2)，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到粗品trans-1-(1'-(氮雜環丁-3-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 -P1(46l) (260 mg) ，其中的手性碳構型與第十步的原料（化合物46i-1）對應的手性碳的構型一致。
LCMS m/z = 543.3 [M+1]+
。
第十三步：trans-5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮-P1 (化合物46-1)
trans-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione-P1
式46-a，或
式46-b
將上述粗品trans-1-(1'-(氮雜環丁-3-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 -P1(46l) (260 mg) 溶於15 mL DMSO中，加入1.5 mL DIPEA和2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (191 mg，0.69 mmol)，於80 ℃攪拌反應5 h。將反應液冷卻至室溫，加入30 mL水淬滅，用100 mL乙酸乙酯萃取，有機相用100 mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 15:1)，得到trans-5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 -P1(化合物46-1) (220 mg，從化合物46k算兩步收率：47%)，化合物46-1結構為上面46-a和46-b所示結構之一，且其中的手性碳構型與第十步的原料（化合物46i-1）對應的手性碳的構型一致。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 9.28 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.69 – 7.60 (m, 3H), 7.42 – 7.34 (m, 2H), 7.20 – 7.11 (m, 3H), 7.10 – 7.04 (m, 2H), 6.79 (d, 1H), 6.53 (dd, 1H), 5.71 (br.s, 2H), 4.93 (dd, 1H), 4.87 – 4.60 (m, 2H), 4.14 – 4.07 (m, 2H), 3.90 – 3.81 (m, 2H), 3.50 – 3.40 (m, 1H), 3.24 – 2.98 (m, 3H), 2.94 – 2.62 (m, 7H), 2.50 – 2.33 (m, 2H), 2.17 – 1.94 (m, 6H), 1.70 – 1.60 (m, 1H)。
LCMS m/z = 799.3 [M+1]+
。
實施例
46-2
：
trans-5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮-P2 (化合物46-2)
trans-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione-P2
或 
第一步：trans-1-(3'-氟-[1,4'-雙呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺-P2 (46m)
trans-1-(3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine-P2
將trans-4-[4-[4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-呱啶基]-3-氟-呱啶-1-甲酸第三丁酯-P2 (46i-2，實施例46-1的化合物46i-1的異構體) (420 mg, 0.71 mmol) 溶解到20 mL DCM中，加入8 mL三氟乙酸，室溫攪拌4 h。反應完後將體系直接減壓濃縮，殘留物用30 mL 5 mol/L NaOH溶液溶解，用DCM萃取 (30 mL × 4)，合併有機相，用1 mol/L NaOH溶液洗滌 (30 mL × 2)，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到trans-1-(3'-氟-[1,4'-雙呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 -P2(46m) (330 mg，收率：95%)，其中的手性碳構型與（化合物46i-2）對應的手性碳的構型一致。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.36 (s, 1H), 7.70 – 7.61 (m, 2H), 7.43 – 7.34 (m, 2H), 7.20 – 7.11 (m, 3H), 7.10 – 7.05 (m, 2H), 5.54 (brs, 2H), 4.85 – 4.72 (m, 1H), 4.68 – 4.46 (m, 1H), 3.43 – 3.33 (m, 1H), 3.17 – 2.99 (m, 3H), 2.86 – 2.75 (m, 1H), 2.74 – 2.50 (m, 4H), 2.48 – 2.31 (m, 2H), 2.10 – 1.96 (m, 2H), 1.93 – 1.81 (m, 1H), 1.79 – 1.62 (m, 1H), 1.61 – 1.46 (m, 1H)。
LCMS m/z = 488.3 [M+1]+
。
第二步：trans-3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯-P2 (46n)
trans-tert-butyl 3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidine-1-carboxylate-P2
將trans-1-(3'-氟-[1,4'-雙呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺-P2 (46m) (300 mg, 0.62 mmol) 溶於30 mL DCE中，加入3-氧代氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (211 mg, 1.23 mmol)，室溫攪拌10 min後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (522 mg，2.46 mmol)，室溫攪拌16 h。將反應液用DCM萃取 (30 mL × 3)，有機相用50 mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得到trans-3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯-P2 (46n) (390 mg，收率：98%)，其中的手性碳構型與（化合物46i-2）對應的手性碳的構型一致。
LCMS m/z = 643.4 [M+1]+
。
第三步：trans-1-(1'-(氮雜環丁-3-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 -P2(46o)
trans-1-(1'-(azetidin-3-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine-P2
將trans-3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯-P2 (46n) (370 mg, 0.58 mmol) 溶解在20 mL DCM中，加入8 mL三氟乙酸，室溫攪拌4 h。將反應體系直接減壓濃縮，殘留物用30 mL 5 mol/L NaOH溶液溶解，用DCM萃取 (30 ml × 4)，合併有機相，有機相用1 mol/L NaOH溶液洗滌 (30 mL × 2)，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到粗品trans-1-(1'-(氮雜環丁-3-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺-P2 (46o) (270 mg) ，其中的手性碳構型與（化合物46i-2）對應的手性碳的構型一致。
LCMS m/z = 543.3 [M+1]+
。
第四步：trans-5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮-P2 (化合物46-2)
trans-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione-P2
式46-b，或
式46-a
將上述粗品trans-1-(1'-(氮雜環丁-3-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 -P2(46o) (270 mg) 溶於15 mL DMSO中，加入1.5 mL DIPEA和2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (191 mg，0.69 mmol)，於80 ℃攪拌反應5 h。將反應液冷卻至室溫，加入30 mL水，用100 mL乙酸乙酯萃取，有機相用100 mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 15:1)，得到trans-5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-雙呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮-P2 (化合物46-2) (260 mg，從化合物46n算兩步收率：56%)，化合物46-2結構為上面46-b和46-a所示結構之一，且其中的手性碳構型與第一步的原料（化合物46i-2）對應的手性碳的構型一致；即，化合物46-2為實施例46-1的化合物46-1的異構體。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.86 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 7.69 – 7.60 (m, 3H), 7.43 – 7.34 (m, 2H), 7.21 – 7.11 (m, 3H), 7.10 – 7.04 (m, 2H), 6.79 (d, 1H), 6.53 (dd, 1H), 5.63 (brs, 2H), 4.93 (dd, 1H), 4.87 – 4.59 (m, 2H), 4.14 – 4.07 (m, 2H), 3.90 – 3.81 (m, 2H), 3.50 – 3.40 (m, 1H), 3.25 – 3.00 (m, 3H), 2.94 – 2.62 (m, 7H), 2.51 – 2.35 (m, 2H), 2.18 – 1.94 (m, 6H), 1.77 – 1.62 (m, 1H)。
LCMS m/z = 799.3 [M+1]+
。
實施例
47
：
(7S)-7-(1-(1-(2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-1,3-二氧異吲哚啉-5-基)氮雜環丁-3-基)呱啶-4-基)-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺 (化合物47)
(7S)-7-(1-(1-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)azetidin-3-yl)piperidin-4-yl)-2-(4-phenoxyphenyl)-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carboxamide 
將 (7S)-7-[1-(氮雜環丁-3-基)-4-呱啶基]-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺 (31b) (250 mg, 0.53 mmol) 溶於25 mL DMSO中，加入1.0 mL DIPEA和2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (220 mg，0.80 mmol)，於80 ℃攪拌反應5 h。將反應液冷卻至室溫，加入50 mL水，用100 mL乙酸乙酯萃取，有機相用100 mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 15:1)，得到 (7S)-7-(1-(1-(2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-1,3-二氧異吲哚啉-5-基)氮雜環丁-3-基）呱啶-4-基)-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺 (化合物47) (210 mg, 收率：54%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.53 – 8.41 (m, 1H), 7.63 (d, 1H), 7.53 – 7.46 (m, 2H), 7.40 – 7.32 (m, 2H), 7.18 – 7.11 (m, 1H), 7.10 – 7.01 (m, 4H), 6.78 (d, 1H), 6.63 – 6.57 (m, 1H), 6.52 (dd, 1H), 5.21 (br.s, 2H), 4.95 – 4.87 (m, 1H), 4.14 – 4.05 (m, 2H), 3.98 – 3.78 (m, 2H), 3.47 – 3.29 (m, 3H), 3.06 – 2.64 (m, 5H), 2.35 – 2.05 (m, 4H), 2.02 – 1.86 (m, 2H), 1.86 – 1.76 (m, 1H), 1.74 – 1.38 (m, 4H)。
LCMS m/z = 729.3 [M+1]+
。
實施例
48
：
(7S)-7-(1'-(2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-1,3-二氧異吲哚啉-5-基)-[1,4'-二呱啶]-4-基)-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺 (化合物48)
(7S)-7-(1'-(2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-5-yl)-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-2-(4-phenoxyphenyl)-4,5,6,7-tetrahydropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carboxamide 
將 (7S)-2-(4-苯氧基苯基)-7-[1-(4-呱啶基)-4-呱啶基]-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺 (30c) (250 mg, 0.50 mmol) 溶於25 mL DMSO中，加入1.0 mL DIPEA和2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (207 mg，0.75 mmol)，於80 ℃攪拌反應5 h。將反應液冷卻至室溫，加入50 mL水，用100 mL乙酸乙酯萃取，有機相用100 mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 15:1)，得到 (7S)-7-(1'-(2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-1,3-二氧異吲哚啉-5-基)-[1,4'-二呱啶]-4-基)-2-(4-苯氧基苯基)-4,5,6,7-四氫吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺 (化合物48) (200 mg, 收率：53%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.81 (br.s, 1H), 7.66 (d, 1H), 7.53 – 7.45 (m, 2H), 7.40 – 7.32 (m, 2H), 7.29 – 7.24 (m, 1H), 7.19 – 7.10 (m, 1H), 7.10 – 6.99 (m, 5H), 6.62 – 6.57 (m, 1H), 5.26 (br.s, 2H), 4.97 – 4.88 (m, 1H), 4.16 – 4.06 (m, 1H), 4.04 – 3.94 (m, 2H), 3.46 – 3.36 (m, 2H), 3.21 – 3.03 (m, 2H), 3.03 – 2.91 (m, 2H), 2.90 – 2.65 (m, 4H), 2.47 – 2.22 (m, 3H), 2.22 – 2.02 (m, 5H), 1.87 – 1.58 (m, 6H)。
LCMS m/z = 757.3 [M+1]+
。
實施例
49-1
cis
-5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮-P1 (化合物49-1)
cis
-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione-P1
或
第一步：cis
-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-甲酸第三丁酯 -P1(18a-1)
cis
-tert-butyl 4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidine]-1'-carboxylate-P1
以及
cis
-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-甲酸第三丁酯-P2 (18a-2)
cis
-tert-butyl 4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidine]-1'-carboxylate-P2
式18a-a，以及
式18a-b
化合物18a通過高效液相色譜法分離製備得到化合物18a-1及18a-2。製備條件如下：
儀器及製備柱：採用MG II preparative SFC (SFC-1) 製備液相，製備柱型號Cellulose-2, 250 × 30 mm I.D., 5 μm。
製備方法：粗品用甲醇/二氯甲烷溶解，製備成樣品液。
流動相體系：sCO2
/乙醇 (含0.1%氨水)，等梯度沖提：sCO2
/乙醇 (含0.1%氨水) = 60/40。
流速：50 mL/min
化合物18a-1及18a-2的分析方法：
儀器：Waters UPC2 analytical SFC (SFC-H)
色譜柱：Cellulose-2, I.D.
規格：150 mm × 4.6 mm，3 µm
流動相A：sCO2
流動相B：乙醇 (含0.05%二乙胺)
柱溫：35 ℃
流速：2.5 mL/min
波長：220 nm
等梯度沖提：流動相A:B = 60:40。
化合物18a-1保留時間：7.201 min；絕對構型沒有確定，其結構為上面式18a-a和18a-b之一；
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.29 (s, 1H), 7.58 (d, 1H), 7.35 – 7.27 (m, 2H), 7.23 – 7.16 (m, 1H), 7.13 – 7.04 (m, 3H), 7.03 – 6.97 (m, 2H), 5.51 (br.s, 2H), 4.99 – 4.62 (m, 2H), 4.46 – 4.10 (m, 2H), 3.14 – 2.94 (m, 2H), 2.87 – 2.25 (m, 7H), 2.01 – 1.86 (m, 3H), 1.65 – 1.57 (m, 1H), 1.39 (s, 9H)。
化合物18a-2保留時間：8.585 min。絕對構型沒有確定，其結構為上面式18a-a和18a-b之一，且與化合物18a-1為異構體，即，當化合物18a-1結構為式18a-a的結構時，化合物18a-2結構為式18a-b的結構；當化合物18a-1結構為式18a-b的結構時，化合物18a-2結構為式18a-a的結構。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.29 (s, 1H), 7.58 (d, 1H), 7.35 – 7.27 (m, 2H), 7.21 – 7.16 (m, 1H), 7.13 – 7.04 (m, 3H), 7.03 – 6.97 (m, 2H), 5.41 (br.s, 2H), 5.00 – 4.60 (m, 2H), 4.53 – 4.03 (m, 2H), 3.15 – 3.00 (m, 2H), 2.92 – 2.22 (m, 7H), 2.02 – 1.85 (m, 3H), 1.69 – 1.51 (m, 1H), 1.39 (s, 9H)。
第二步：cis
-1-(3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 -P1(49a)
cis
-1-(3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine-P1
將cis
-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-甲酸第三丁酯-P1 (18a-1，其結構為式18a-a和式18a-b之一) (1.0 g, 1.7 mmol) 溶解到20 mL DCM中，加入5 mL三氟乙酸，室溫攪拌3 h。向反應液中緩慢滴加30 mL飽和碳酸氫鈉溶液，加入30 mL二氯甲烷和50 mL水，分離出有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到粗品cis
-1-(3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 -P1(49a) (0.8 g)，其中的手性碳構型與（化合物18a-1）對應的手性碳的構型一致。
LC-MS m/z = 488.3 [M+1]+
。
第三步：cis
-3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯-P1 (49b)
Cis
-tert-butyl 3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidine-1-carboxylate-P1
將上述粗品cis
-1-(3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺-P1 (49a) (0.8 g) 溶解於30 mL DCE中，加入3-氧雜氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (0.6 g, 3.5 mmol)，室溫攪拌10 min，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.7 g, 3.3 mmol)，室溫下攪拌反應16 h。向反應液中加入30 mL飽和碳酸氫鈉溶液，加入50 mL二氯甲烷和50 mL水，分離出有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得到cis
-3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯-P1 (49b) (1.0 g，從化合物18a-1算兩步收率：92%)，其中的手性碳構型與（化合物18a-1）對應的手性碳的構型一致。
LC-MS m/z = 643.4 [M+1]+
。
第四步：cis
-1-(1'-(氮雜環丁-3-基)-3'-氟-[1,4'-雙呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d ]嘧啶-4-胺-P1 (49c)
Cis
-1-(1'-(azetidin-3-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine-P1
將cis
-3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯-P1 (49b) (1.0 g, 1.56 mmol) 溶解到20 mL DCM中，加入5 mL三氟乙酸，室溫攪拌3 h。向反應液中緩慢滴加30 mL飽和碳酸氫鈉溶液，加入30 mL二氯甲烷和50 mL水，分離出有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到粗品cis
-1-(1'-(氮雜環丁-3-基)-3'-氟-[1,4'-雙呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d ]嘧啶-4-胺-P1 (49c) (0.7 g)，其中的手性碳構型與（化合物18a-1）對應的手性碳的構型一致。
LCMS m/z = 543.3 [M+1]+
。
第五步：cis
-5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮-P1 (化合物49-1)
cis
-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione-P1
式49-a，或
式49-b
將上述粗品cis
-1-(1'-(氮雜環丁-3-基)-3'-氟-[1,4'-雙呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d ]嘧啶-4-胺-P1 (49c) (0.2 g) 溶於5 mL DMSO中，加入DIPEA (0.21 g, 1.6 mmol) 和2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (0.14 g，0.5 mmol)，於90 ℃攪拌反應3 h。將反應液冷卻至室溫，加入50 mL乙酸乙酯和50 mL水，分離出有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得到cis
-5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮-P1 (化合物49-1) (0.05 g，從化合物49b算兩步收率：14%)，化合物49-1結構為上面49-a和49-b所示結構之一，且其中的手性碳構型與第二步的原料（化合物18a-1）對應的手性碳的構型一致。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.97 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 7.69 – 7.59 (m, 3H), 7.43 – 7.34 (m, 2H), 7.20 – 7.04 (m, 5H), 6.78 (d, 1H), 6.52 (dd, 1H), 5.69 (brs, 2H), 5.13 – 4.88 (m, 2H), 4.84 – 4.73 (m, 1H), 4.15 – 4.05 (m, 2H), 3.99 – 3.87 (m, 2H), 3.52 – 3.43 (m, 1H), 3.28 – 3.12 (m, 3H), 3.09 – 3.00 (m, 1H), 2.93 – 2.33 (m, 8H), 2.24 – 2.00 (m, 6H), 1.84 – 1.76 (m, 1H)。
LCMS m/z = 799.3 [M+1]+
。
實施例
49-2
cis
-5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮-P2 (化合物49-2)
cis
-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione-P2或 
第一步：cis
-1-(3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 -P2(49d)
cis
-1-(3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine-P2
將cis
-4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-甲酸第三丁酯-P2 (18a-2，其結構為式18a-a和式18a-b之一，化合物18a-1的異構體) (0.82 g, 1.4 mmol) 溶解到20 mL DCM中，加入5 mL三氟乙酸，室溫攪拌3 h。向反應液中緩慢滴加30 mL飽和碳酸氫鈉溶液，加入30 mL二氯甲烷和50 mL水，分離出有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到粗品cis
-1-(3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺-P2 (49d) (0.62 g)，其中的手性碳構型與化合物18a-2對應的手性碳的構型一致。
LC-MS m/z = 488.3 [M+1]+
。
第二步：cis
-3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯-P2 (49e)
Cis
-tert-butyl 3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidine-1-carboxylate-P2
將上述粗品cis
-1-(3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺-P2 (49d) (0.62 g) 溶解於30 mL DCE中，加入3-氧雜氮雜環丁-1-甲酸甲酸第三丁酯 (0.43 g, 2.5 mmol)，室溫攪拌10 min，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.64 g, 3.0 mmol)，室溫下攪拌反應16 h。向反應液中加入30 mL飽和碳酸氫鈉溶液，加入50 mL二氯甲烷和50 mL水，分離出有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得到cis
-3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯-P2 (49e) (0.6 g，從化合物18a-2算兩步收率：67%)，其中的手性碳構型與化合物18a-2對應的手性碳的構型一致。
LC-MS m/z = 643.4 [M+1]+
。
第三步：cis
-1-(1'-(氮雜環丁-3-基)-3'-氟-[1,4'-雙呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d ]嘧啶-4-胺-P2 (49f)
Cis
-1-(1'-(azetidin-3-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine-P2
將cis
-3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 -P2(49e) (0.6 g, 0.93 mmol) 溶解到20 mL DCM中，加入5 mL三氟乙酸，室溫攪拌3 h。向反應液中緩慢滴加30 mL飽和碳酸氫鈉溶液，加入30 mL二氯甲烷和50 mL水，分離出有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到粗品cis
-1-(1'-(氮雜環丁-3-基)-3'-氟-[1,4'-雙呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d ]嘧啶-4-胺-P2 (49f) (0.45 g)，其中的手性碳構型與化合物18a-2對應的手性碳的構型一致。
LCMS m/z =543.3 [M+1]+
。
第四步：cis
-5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮-P2 (化合物49-2)
cis
-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)-3'-fluoro-[1,4'-bipiperidin]-1'-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione-P2
式49-b，或
式49-a
將上述粗品cis
-1-(1'-(氮雜環丁-3-基)-3'-氟-[1,4'-雙呱啶]-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d ]嘧啶-4-胺 -P2(49f) (0.2 g) 溶於5 mL DMSO中，加入DIPEA (0.21 g, 1.6 mmol) 和2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (0.14 g，0.5 mmol)，於90 ℃攪拌反應3 h。將反應液冷卻至室溫，加入50 mL乙酸乙酯和50 mL水，分離出有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得到cis
-5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)-3'-氟-[1,4'-聯呱啶]-1'-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮-P2 (化合物49-2) (0.27 g，從化合物49e算兩步收率：82%)，化合物49-2結構為上面49-a和49-b所示結構之一，且其中的手性碳構型與第一步的原料（化合物18a-2）對應的手性碳的構型一致，即化合物49-2為化合物49-1的異構體。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 9.66 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 7.67 – 7.60 (m, 3H), 7.42 – 7.34 (m, 2H), 7.20 – 7.11 (m, 3H), 7.10 – 7.04 (m, 2H), 6.78 (d, 1H), 6.52 (dd, 1H), 5.79 (brs, 2H), 5.13 – 4.88 (m, 2H), 4.83 – 4.72 (m, 1H), 4.16 – 4.04 (m, 2H), 4.00 – 3.86 (m, 2H), 3.52 – 3.42 (m, 1H), 3.24 – 3.12 (m, 3H), 3.09 – 3.00 (m, 1H), 2.91 – 2.32 (m, 8H), 2.23 – 1.98 (m, 6H), 1.84 – 1.76 (m, 1H)。
LCMS m/z = 799.4 [M+1]+
。
實施例
50
：
5-(3-(2-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物50)
5-(3-(2-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
第一步：2-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]呱啶-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬-7-甲酸第三丁酯 (50a)
tert-butyl 2-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
將3-(4-苯氧基苯基)-1-(呱啶-4-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (1a) (合成方法見J. Med. Chem.
2015, 58,
9625-9638) (400 mg, 1.04 mmol) 溶於5 mL DCE中，室溫下依次加入2-氧代-7-氮雜螺[3.5]壬-7-甲酸第三丁酯 (493 mg, 2.06 mmol)、冰乙酸 (0.15 mL, 2.6 mmol) 和無水硫酸鈉 (700 mg)，攪拌5 min後加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (655 mg, 3.09 mmol)，室溫攪拌16 h。向反應液中加入50 mL水，用2 mol/L氫氧化鈉水溶液調水相pH為10，用二氯甲烷萃取 (30 mL × 3)，合併有機相，有機相用水洗滌 (20 mL × 2)，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 10:1-8:1)，得到2-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]呱啶-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬-7-甲酸第三丁酯 (50a) (600 mg，產率：95%)。
LCMS m/z = 610.4 [M+1]+
。
第二步：1-(1-(7-氮雜螺[3.5]壬-2-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (50b)
1-(1-(7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將2-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基]呱啶-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬-7-甲酸第三丁酯 (50a) (600 mg, 0.98 mmol) 溶於4 mL二氯甲烷中，加入2 mL三氟乙酸，室溫反應2 h。將反應液用2 mol/L氫氧化鈉溶液調pH至10，水相用二氯甲烷萃取 (10 mL × 3)，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到粗品1-(1-(7-氮雜螺[3.5]壬-2-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (50b) (458 mg)。
LCMS m/z = 510.3 [M+1]+
。
第三步：3-(2-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (50c)
tert-butyl 3-(2-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)azetidine-1-carboxylate
將上述粗品1-(1-(7-氮雜螺[3.5]壬-2-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (50b) (458 mg) 溶於5 mL DCE中，室溫下依次加入1-Boc-3-氮雜環丁酮 (308 mg, 1.80 mmol)、冰乙酸 (0.13 mL, 2.25 mmol) 和無水硫酸鈉 (700 mg)，攪拌30 min後加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (634 mg, 2.99 mmol)，室溫攪拌16 h。向反應液中加入50 mL水，用2 mol/L氫氧化鈉溶液調水相pH為10，用二氯甲烷萃取 (30 mL × 3)，合併有機相，有機相用水洗滌 (20 mL × 2)，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 10:1-8:1)，得到3-(2-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (50c) (501 mg，從化合物50a算兩步產率：77%)。
LCMS m/z = 665.4 [M+1]+
。
第四步：1-(1-(7-(氮雜環丁-3-基)-7-氮雜螺[3.5]壬-2-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (50d)
1-(1-(7-(azetidin-3-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將3-(2-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (50c) (501 mg, 0.75 mmol) 溶於5 mL二氯甲烷中，加入2 mL三氟乙酸，室溫反應2.5 h。將反應液用2 mol/L氫氧化鈉溶液調pH至10，水相用二氯甲烷萃取 (10 mL × 3)，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到粗品1-(1-(7-(氮雜環丁-3-基)-7-氮雜螺[3.5]壬-2-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (50d) (350 mg)。
LCMS m/z = 565.4 [M+1]+
。
第五步：5-(3-(2-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物50)
5-(3-(2-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將上述粗品1-(1-(7-(氮雜環丁-3-基)-7-氮雜螺[3.5]壬-2-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (50d) (192 mg) 溶於5 mL DMSO中，室溫下加入2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (102 mg, 0.37 mmol) 和二異丙基乙基胺 (220 mg, 1.70 mmol)，於80℃攪拌反應4 h。將反應液倒入20 mL水中，水相用二氯甲烷/甲醇 (v/v) =10:1混合溶劑萃取 (30 mL × 3)，合併有機相，有機相用50 mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 15:1-8:1)，得到5-(3-(2-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物50) (112 mg，從化合物50c算兩步產率：33%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.29 (s, 1H), 7.61 – 7.52 (m, 3H), 7.36 – 7.28 (m, 2H), 7.16 – 6.97 (m, 5H), 6.70 (d, 1H), 6.44 (dd, 1H), 5.76 (br.s, 2H), 4.85 (dd, 1H), 4.80 – 4.66 (m, 1H), 4.06 – 3.96 (m, 2H), 3.86 – 3.76 (m, 2H), 3.28 – 3.18 (m, 1H), 3.07 – 2.96 (m, 1H), 2.86 – 2.57 (m, 5H), 2.43 – 2.31 (m, 3H), 2.31 – 2.17 (m, 3H), 2.09 – 1.92 (m, 7H), 1.77 – 1.66 (m, 2H), 1.65 – 1.54 (m, 4H)。
LCMS m/z = 821.4 [M+1]+
。
實施例
51
：
5-(2'-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-7,7'-二氮雜[2,7'-bis雙螺[3.5]壬烷]-7-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物51)
5-(2'-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-7,7'-diaza[2,7'-bispiro[3.5]nonan]-7-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione 
第一步：2-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-甲酸第三丁酯 (51a)
tert-butyl 2-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
將3-(4-苯氧基苯基)-1-(呱啶-4-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (1a) (合成方法見J. Med. Chem.
2015,58
, 9625-9638) (1.0 g，2.59 mmol) 溶於35 mL DCE中，加入2-氧代-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-甲酸第三丁酯 (1.24 g, 5.18 mmol)，室溫攪拌10 min後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (1.37 g，6.46 mmol)，室溫攪拌16 h。向反應液中緩慢加入30 mL飽和碳酸氫鈉水溶液，用二氯甲烷萃取 (30 mL × 3)，有機相用50 mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得2-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-甲酸第三丁酯 (51a) (1.5 g，收率：95%)。
LCMS m/z = 610.4 [M+1]+
。
第二步：1-(1-(1-(7-氮雜螺[3.5]壬-2-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (51b)
1-(1-(7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine trifluoroacetate
將2-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-甲酸第三丁酯 (51a) (1.5 g, 2.46 mmol) 溶解到20 mL二氯甲烷中，加入8 mL三氟乙酸，室溫攪拌4 h。反應完後將反應體系直接減壓濃縮，得粗品1-(1-(1-(7-氮雜螺[3.5]壬-2-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (51b) (1.8 g)。
LCMS m/z = 510.3 [M+1]+
。
第三步：2'-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-7,7'-二氮雜[2,7'-雙螺[3.5]壬烷]-7-甲酸第三丁酯 (51c)
tert-butyl 2'-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-7,7'-diaza[2,7'-bispiro[3.5]nonane]-7-carboxylate
將上述粗品1-(1-(1-(7-氮雜螺[3.5]壬-2-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (51b) (1.8 g) 溶於40 mL DCE中，加入固體碳酸氫鈉 (620 mg，7.38 mmol)，室溫攪拌20 min後，加入2-氧代-7-氮雜螺[3.5]壬-7-甲酸第三丁酯 (1.18 g, 4.93 mmol)，室溫攪拌10 min後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (1.56 g，7.36 mmol)，室溫攪拌16 h。向反應體系中緩慢加入60 mL飽和碳酸氫鈉水溶液，用二氯甲烷萃取 (80 mL × 3)，有機相用50 mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 10:1)，得2'-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-7,7'-二氮雜[2,7'-雙螺[3.5]壬烷]-7-甲酸第三丁酯 (51c) (1.2 g，從化合物51a算兩步收率：67%)。
LCMS m/z = 733.3 [M+1]+
。
第四步：1-(1-(7,7'-二氮雜[2,7'-雙螺[3.5]壬烷]-2'-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺鹽酸鹽 (51d)
1-(1-(7,7'-diaza[2,7'-bispiro[3.5]nonan]-2'-yl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxy-phenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine hydrochloride
將2'-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-7,7'-二氮雜[2,7'-雙螺[3.5]壬烷]-7-甲酸第三丁酯 (51c) (300 mg, 0.41 mmol) 溶解在5 mL甲醇中，加入10 mL 2 N鹽酸乙酸乙酯溶液，室溫攪拌4 h。將反應體系直接減壓濃縮，得粗品1-(1-(7,7'-二氮雜[2,7'-雙螺[3.5]壬烷]-2'-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺鹽酸鹽 (51d) (0.36 g)。
LCMS m/z = 633.5 [M+1]+
。
第五步：5-(2'-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-7,7'-二氮雜[2,7'-bis雙螺[3.5]壬烷]-7-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物51)
5-(2'-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-7,7'-diaza[2,7'-bispiro[3.5]nonan]-7-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將上述粗品1-(1-(7,7'-二氮雜[2,7'-雙螺[3.5]壬烷]-2'-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺鹽酸鹽 (51d) (0.36 g) 溶於25 mL DMSO中，加入固體碳酸氫鈉 (138 mg，1.64 mmol)，室溫攪拌10 min，加入1.5 mL DIPEA和2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (166 mg，0.60 mmol)，於80℃攪拌反應5 h。將反應液冷卻至室溫，加入50 mL水，過濾，收集固體，用水洗滌，固體用50 mL二氯甲烷溶解，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 15:1)，得5-(2'-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-7,7'-二氮雜[2,7'-bis雙螺[3.5]壬烷]-7-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物51) (120 mg，從化合物51c算兩步收率：33%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.38 (s, 1H), 7.70 – 7.59 (m, 3H), 7.43 – 7.34 (m, 2H), 7.29 – 7.24 (m, 1H), 7.22 – 6.98 (m, 6H), 5.75 (br.s, 2H), 4.93 (dd, 1H), 4.84 – 4.71 (m, 1H), 3.48 – 3.26 (m, 4H), 3.09 – 2.98 (m, 2H), 2.93 – 2.80 (m, 2H), 2.79 – 2.65 (m, 3H), 2.50 – 2.17 (m, 5H), 2.17 – 1.91 (m, 10H), 1.90 – 1.48 (m, 12H)。
LCMS m/z = 889.5 [M+1]+
。
實施例
52
：
5-(2-((3aR,6aS)-5-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)六氫環戊並[c]吡咯-2(1H)-基)-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物52)
5-(2-((3aR,6aS)-5-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione 
第一步：(3aR,6aS)-5-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)六氫環戊[c]吡咯-2(1H)-甲酸第三丁酯 (52a)
tert-butyl (3aR,6aS)-5-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)hexahydrocyclopenta[c]pyrrole-2(1H)-carboxylate
將3-(4-苯氧基苯基)-1-(呱啶-4-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (1a) (合成方法見J. Med. Chem.
2015, 58,
9625-9638) (1.0 g，2.59 mmol) 溶於35 mL DCE中，加入 (3aR,6aS)-5-氧代六氫環戊[c]吡咯-2(1H)-甲酸第三丁酯 (1.17 g, 5.19 mmol)，室溫攪拌10 min後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (1.37 g，6.46 mmol)，室溫攪拌16 h。向反應液中緩慢加入30 mL飽和碳酸氫鈉水溶液，用二氯甲烷萃取 (30 mL × 3)，有機相用50 mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得 (3aR,6aS)-5-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)六氫環戊[c]吡咯-2(1H)-甲酸第三丁酯 (52a) (1.4 g，收率: 91%)。
LCMS m/z = 596.4 [M+1]+
。
第二步：1-(1-((3aR,6aS)-八氫環戊[c]吡咯-5-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (52b)
1-(1-((3aR,6aS)-octahydrocyclopenta[c]pyrrol-5-yl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine trifluoroacetate
將 (3aR,6aS)-5-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)六氫環戊[c]吡咯-2(1H)-甲酸第三丁酯 (52a) (1.5 g, 2.52 mmol) 溶解到20 mL DCM中，加入8 mL三氟乙酸，室溫攪拌4 h。反應完後將反應體系直接減壓濃縮，即得粗品1-(1-((3aR,6aS)-八氫環戊[c]吡咯-5-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (52b) (1.6 g)。
LCMS m/z = 496.3 [M+1]+
。
第三步：2-((3aR,6aS)-5-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)八氫環戊並[c]吡咯-2(1H)-基)-7-氮雜螺[3.5]壬-7-甲酸第三丁酯 (52c)
tert-butyl 2-((3aR,6aS)-5-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
將上述粗品1-(1-((3aR,6aS)-八氫環戊[c]吡咯-5-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (52b) (0.8 g) 溶於30 mL DCE中，加入固體碳酸氫鈉 (386 mg，4.60 mmol)，室溫攪拌20 min後，加入2-氧代-7-氮雜螺[3.5]壬-7-甲酸第三丁酯 (550 mg, 2.30 mmol)，室溫攪拌10 min後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (731 mg，3.45 mmol)，室溫攪拌16 h。向反應體系中緩慢加入60 mL飽和碳酸氫鈉水溶液，用DCM萃取 (80 mL × 3)，有機相用50 mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 10:1)，得2-((3aR,6aS)-5-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)八氫環戊並[c]吡咯-2(1H)-基)-7-氮雜螺[3.5]壬-7-甲酸第三丁酯 (52c) (0.63 g，從化合物52a算兩步收率：70%)。
LCMS m/z = 719.5 [M+1]+
。
第四步：1-(1-((3aR,6aS)-2-(7-氮雜螺[3.5]壬-2-基)八氫環戊[c]吡咯-5-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺鹽酸鹽 (52d)
1-(1-((3aR,6aS)-2-(7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)octahydrocyclopenta[c]pyrrol-5-yl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine hydrochloride
將2-((3aR,6aS)-5-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)八氫環戊並[c]吡咯-2(1H)-基)-7-氮雜螺[3.5]壬-7-甲酸第三丁酯 (52c) (300 mg, 0.42 mmol) 溶解在5 mL甲醇中，加入10 mL 2 mol/L鹽酸乙酸乙酯溶液，室溫攪拌4 h。將反應體系直接減壓濃縮，即得粗品1-(1-((3aR,6aS)-2-(7-氮雜螺[3.5]壬-2-基)八氫環戊[c]吡咯-5-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺鹽酸鹽 (52d) (0.36 g)。
LCMS m/z = 619.4 [M+1]+
。
第五步：5-(2-((3aR,6aS)-5-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)六氫環戊並[c]吡咯-2(1H)-基)-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物52)
5-(2-((3aR,6aS)-5-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將上述粗品1-(1-((3aR,6aS)-2-(7-氮雜螺[3.5]壬-2-基)八氫環戊[c]吡咯-5-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺鹽酸鹽 (52d) (0.36 g) 溶於25 mL DMSO中，加入固體碳酸氫鈉 (138 mg，1.64 mmol)，室溫攪拌10 min後，加入1.5 mL DIPEA和2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (166 mg，0.60 mmol)，於80℃攪拌反應5 h。將反應液冷卻至室溫，加入50 mL水，過濾，收集固體，用水洗滌，固體用50 mL二氯甲烷溶解，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 15:1)，得5-(2-((3aR,6aS)-5-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)六氫環戊並[c]吡咯-2(1H)-基)-7-氮雜螺[3.5]壬-7-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物52) (100 mg，從化合物52c算兩步收率：27%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 10.06 (br.s, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.68 – 7.60 (m, 3H), 7.42 – 7.34 (m, 2H), 7.29 – 7.24 (m, 1H), 7.20 – 6.99 (m, 6H), 5.84 (br.s, 2H), 4.98 – 4.90 (m, 1H), 4.83 – 4.71 (m, 1H), 3.44 – 3.29 (m, 4H), 3.25 – 3.14 (m, 2H), 2.94 – 2.66 (m, 4H), 2.64 – 2.31 (m, 9H), 2.30 – 2.07 (m, 5H), 2.07 – 1.93 (m, 4H), 1.89 – 1.59 (m, 6H), 1.46 – 1.32 (m, 2H)。
LCMS m/z = 875.4 [M+1]+
。
實施例
53
：
5-((3aR,3'aR,6aS,6'aS)-5-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)十二氫-1H-[2,5'-雙(環戊[c]吡咯]]-2'(1'H)-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸鹽 (化合物53)
5-((3aR,3'aR,6aS,6'aS)-5-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)dodecahydro-1H-[2,5'-bi(cyclopenta[c]pyrrol)]-2'(1'H)-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione trifluoroacetate 
第一步：(3aR,3'aR,6aS,6'aS)-5-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)十二氫-1H-[2,5'-雙(環戊[c]吡咯)]-2'(1'H)-甲酸第三丁酯 (53a)
tert-butyl (3aR,3'aR,6aS,6'aS)-5-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)dodecahydro-1H-[2,5'-bi(cyclopenta[c]pyrrole)]-2'(1'H)-carboxylate
將上述粗品1-(1-((3aR,6aS)-八氫環戊[c]吡咯-5-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (52b) (0.5 g) 溶於30 mL DCE中，加入固體碳酸氫鈉 (386 mg，4.60 mmol)，室溫攪拌20 min後，加入 (3aR,6aS)-5-氧代六氫環戊[c]吡咯-2(1H)-甲酸第三丁酯 (0.45 g, 2.0 mmol)，40℃下繼續反應1 h，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.42 g，2.0 mmol)，室溫攪拌16 h。向反應體系中緩慢加入60 mL飽和碳酸氫鈉水溶液，用DCM萃取 (80 mL × 3)，有機相用50 mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 10:1)，得 (3aR,3'aR,6aS,6'aS)-5-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)十二氫-1H-[2,5'-雙(環戊[c]吡咯)]-2'(1'H)-甲酸第三丁酯 (53a) (0.25 g，從化合物52a算兩步收率：45%)。
LCMS m/z = 705.5 [M+1]+
。
第二步：3-(4-苯氧基苯基)-1-(1-((3aR,3'aR,6aS,6'aS)-十四氫-1H-[2,5'-雙(環戊[c]吡咯)]-5-基)呱啶-4-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (53b)
3-(4-phenoxyphenyl)-1-(1-((3aR,3'aR,6aS,6'aS)-tetradecahydro-1H-[2,5'-bi(cyclopenta[c]pyrrol)]-5-yl)piperidin-4-yl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine trifluoroacetate
將 (3aR,3'aR,6aS,6'aS)-5-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)十二氫-1H-[2,5'-雙(環戊[c]吡咯)]-2'(1'H)-甲酸第三丁酯 (53a) (0.25 g, 0.35 mmol) 溶解在8 mL二氯甲烷中，加入2 mL三氟乙酸，室溫攪拌4 h。將反應體系減壓濃縮，得粗品3-(4-苯氧基苯基)-1-(1-((3aR,3'aR,6aS,6'aS)-十四氫-1H-[2,5'-雙(環戊[c]吡咯)]-5-基)呱啶-4-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (53b) (0.2 g)。
LCMS m/z = 605.4 [M+1]+
。
第三步：5-((3aR,3'aR,6aS,6'aS)-5-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)十二氫-1H-[2,5'-雙(環戊[c]吡咯]]-2'(1'H)-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸鹽 (化合物53)
5-((3aR,3'aR,6aS,6'aS)-5-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)dodecahydro-1H-[2,5'-bi(cyclopenta[c]pyrrol)]-2'(1'H)-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione trifluoroacetate
將上述粗品3-(4-苯氧基苯基)-1-(1-((3aR,3'aR,6aS,6'aS)-十四氫-1H-[2,5'-雙(環戊[c]吡咯)]-5-基)呱啶-4-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (53b) (0.32 g) 溶於10 mL DMSO中，加入固體碳酸氫鈉 (0.14 g，1.67 mmol)，室溫攪拌10 min，加入DIPEA (0.13 g，1.0 mmol) 和2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (0.12 g，0.43 mmol)，於90℃下反應4 h。將反應液冷卻至室溫，加入50 mL乙酸乙酯和50 mL水，分離有機相，有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 15:1)，得5-((3aR,3'aR,6aS,6'aS)-5-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)十二氫-1H-[2,5'-雙(環戊[c]吡咯]]-2'(1'H)-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮三氟乙酸鹽 (化合物53) (50 mg)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.56 (br.s, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.67 – 7.60 (m, 3H), 7.42 – 7.34 (m, 2H), 7.20 – 7.04 (m, 5H), 6.95 (d, 1H), 6.69 (dd, 1H), 5.56 (br.s, 2H), 4.92 (dd, 1H), 4.84 – 4.70 (m, 1H), 3.62 – 3.52 (m, 2H), 3.43 – 3.35 (m, 2H), 3.26 – 3.13 (m, 2H), 2.94 – 2.37 (m, 15H), 2.37 – 1.93 (m, 13H)。
LCMS m/z = 861.4 [M+1]+
。
實施例
54
：
5-(7-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-氮雜螺[3.5]壬-2-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物54)
5-(7-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)azetidin-1-yl)-2-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione 
第一步：7-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-氮雜螺[3.5]壬-2-甲酸第三丁酯 (54a)
tert-butyl 7-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)azetidin-1-yl)-2-azaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate
將1-[1-(氮雜環丁-3-基)-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (17b) (1.0 g, 2.26 mmol) 溶於30 mL DCE中，加入7-氧代-2-氮雜螺[3.5]壬-2-甲酸第三丁酯 (0.82 g, 3.43 mmol)，室溫攪拌10 min後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (1.2 g，5.66 mmol)，室溫攪拌16 h。向反應體系中緩慢加入60 mL飽和碳酸氫鈉水溶液，用DCM萃取 (80 mL × 3)，有機相用50 mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 10:1)，得7-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-氮雜螺[3.5]壬-2-甲酸第三丁酯 (54a) (1.2 g，收率：80%)。
LCMS m/z = 665.3 [M+1]+
。
第二步：1-(1-(1-(2-(氮雜螺[3.5]壬-7-基)氮雜環丁-3-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺鹽酸鹽 (54b)
1-(1-(1-(2-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)azetidin-3-yl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxy-phenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine hydrochloride
將7-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-氮雜螺[3.5]壬-2-甲酸第三丁酯 (54a) (300 mg, 0.45 mmol) 溶解在5 mL甲醇中，加入10 mL 2 mol/L鹽酸乙酸乙酯溶液，室溫攪拌4 h。將反應體系直接減壓濃縮，得粗品1-(1-(1-(2-(氮雜螺[3.5]壬-7-基)氮雜環丁-3-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺鹽酸鹽 (54b) (0.35 g)。
LCMS m/z = 565.4 [M+1]+
。
第三步：5-(7-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-氮雜螺[3.5]壬-2-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物54)
5-(7-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)azetidin-1-yl)-2-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將上述粗品1-(1-(1-(2-(氮雜螺[3.5]壬-7-基)氮雜環丁-3-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺鹽酸鹽 (54b) (0.35 g) 溶於25 mL DMSO中，加入固體碳酸氫鈉 (152 mg，1.81 mmol)，室溫攪拌10 min，加入1.5 mL DIPEA和2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (186 mg，0.67 mmol)，於80℃攪拌反應5 h。將反應液冷卻至室溫，加入50 mL水，過濾，收集固體，用水洗滌，固體用50 mL二氯甲烷溶解，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 15:1)，得5-(7-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-氮雜螺[3.5]壬-2-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物54) (95 mg，從化合物54a算兩步收率：26%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 9.23 (br.s, 1H), 8.38 (s, 1H), 7.68 – 7.59 (m, 3H), 7.43 – 7.35 (m, 2H), 7.21 – 7.11 (m, 3H), 7.11 – 7.05 (m, 2H), 6.76 (d, 1H), 6.49 (dd, 1H), 5.64 (br.s, 2H), 4.93 (dd, 1H), 4.84 – 4.72 (m, 1H), 3.78 – 3.56 (m, 6H), 3.15 – 2.65 (m, 8H), 2.49 – 2.36 (m, 2H), 2.16 – 1.94 (m, 8H), 1.81 – 1.72 (m, 2H), 1.59 – 1.49 (m, 2H), 1.26 – 1.16 (m, 2H)。
LCMS m/z = 821.4 [M+1]+
。
實施例
55
：
5-(7-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-2,2'-二氮雜[2,7'-雙螺[3.5]壬]-2'-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物55)
5-(7-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-2,2'-diaza[2,7'-bispiro[3.5]nonan]-2'-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione 
第一步：7-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-2-氮雜螺[3.5]壬-2-甲酸第三丁酯 (55a)
tert-butyl 7-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-2-azaspiro[3.5]nonane-2-carboxylate
將3-(4-苯氧基苯基)-1-(呱啶-4-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (1a) (合成方法見J. Med. Chem.
2015, 58,
9625-9638) (1.0 g，2.59 mmol) 溶於35 mL DCE中，加入7-氧代-2-氮雜螺[3.5]壬-2-甲酸第三丁酯 (0.93 g, 3.89 mmol)，室溫攪拌10 min後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (1.37 g，6.46 mmol)，室溫攪拌16 h。向反應液中緩慢加入30 mL飽和碳酸氫鈉水溶液，用DCM萃取 (30 mL × 3)，有機相用50 mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得7-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-2-氮雜螺[3.5]壬-2-甲酸第三丁酯 (55a) (1.4 g，收率: 89%)。
LCMS m/z = 610.4 [M+1]+
。
第二步：1-(1-(2-氮雜螺[3.5]壬-7-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺鹽酸鹽 (55b)
1-(1-(2-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine hydrochloride
將7-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-2-氮雜螺[3.5]壬-2-甲酸第三丁酯 (55a) (1.4 g, 2.30 mmol) 溶解到5 mL甲醇中，加入25 mL 2 mol/L 鹽酸乙酸乙酯溶液，室溫攪拌4 h。反應完後將體系直接減壓濃縮，得粗品 1-(1-(2-氮雜螺[3.5]壬-7-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺鹽酸鹽 (55b) (1.5 g)。
LCMS m/z = 510.3 [M+1]+
。
第三步：7-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-2,2'-二氮雜[2,7'-雙螺[3.5]壬烷]-2'-甲酸第三丁酯 (55c)
tert-butyl 7-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-2,2'-diaza[2,7'-bispiro[3.5]nonane]-2'-carboxylate
將上述粗品 1-(1-(2-氮雜螺[3.5]壬-7-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺鹽酸鹽 (55b) (0.8 g) 溶於40 mL DCE中，加入固體碳酸氫鈉 (330 mg，3.93 mmol)，室溫攪拌20 min，加入7-氧代-2-氮雜螺[3.5]壬-2-甲酸第三丁酯 (0.47 g, 1.96 mmol)，室溫攪拌10 min後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.70 g，3.30 mmol)，室溫攪拌16 h。向反應體系中緩慢加入60 mL飽和碳酸氫鈉水溶液，用DCM萃取 (80 mL × 3)，有機相用50 mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 10:1)，得7-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-2,2'-二氮雜[2,7'-雙螺[3.5]壬烷]-2'-甲酸第三丁酯 (55c) (0.70 g，從化合物55a算兩步收率：78%)。
LCMS m/z = 733.3 [M+1]+
。
第四步：1-(1-(2,2'-二氮雜[2,7'-雙螺[3.5]壬-7-基]呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺鹽酸鹽 (55d)
1-(1-(2,2'-diaza[2,7'-bispiro[3.5]nonan]-7-yl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine hydrochloride
將7-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-2,2'-二氮雜[2,7'-雙螺[3.5]壬烷]-2'-甲酸第三丁酯 (55c) (300 mg, 0.41 mmol) 溶解在5 mL甲醇中，加入15 mL 2 mol/L鹽酸乙酸乙酯溶液，室溫攪拌4 h。將反應體系直接減壓濃縮，即得粗品1-(1-(2,2'-二氮雜[2,7'-雙螺[3.5]壬-7-基]呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺鹽酸鹽 (55d) (0.32 g)。
LCMS m/z = 633.5 [M+1]+
。
第五步：5-(7-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-2,2'-二氮雜[2,7'-雙螺[3.5]壬]-2'-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物55)
5-(7-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-2,2'-diaza[2,7'-bispiro[3.5]nonan]-2'-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將上述粗品1-(1-(2,2'-二氮雜[2,7'-雙螺[3.5]壬-7-基]呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺鹽酸鹽 (55d) (0.32 g) 溶於25 mL DMSO中，加入固體碳酸氫鈉 (138 mg，1.64 mmol)，室溫攪拌10 min，加入1.5 mL DIPEA和2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (166 mg，0.60 mmol)，於80℃攪拌反應5 h。將反應液冷卻至室溫，加入50 mL水，過濾，收集固體，用水洗滌，固體用50 mL二氯甲烷溶解，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 15:1)，得5-(7-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-2,2'-二氮雜[2,7'-雙螺[3.5]壬]-2'-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物55) (70 mg，從化合物55c算兩步收率：19%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 9.13 (br.s, 1H), 8.38 (s, 1H), 7.71 – 7.57 (m, 3H), 7.43 – 7.33 (m, 2H), 7.22 – 7.02 (m, 5H), 6.76 (d, 1H), 6.49 (dd, 1H), 5.62 (br.s, 2H), 4.97 – 4.88 (m, 1H), 4.83 – 4.68 (m, 1H), 3.76 – 3.60 (m, 4H), 3.40 – 2.60 (m, 9H), 2.50 – 2.26 (m, 5H), 2.19 – 1.92 (m, 8H), 1.88 – 1.70 (m, 4H), 1.58 – 1.41 (m, 4H), 1.35 – 1.23 (m, 4H)。
LCMS m/z = 889.4 [M+1]+
。
實施例
56
：
5-(3-(7-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-2-氮雜螺[3.5]壬-2-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物56)
5-(3-(7-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-2-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
第一步：3-(7-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-2-氮雜螺[3.5]壬-2-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (56a)
tert-butyl 3-(7-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-2-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)azetidine-1-carboxylate
將1-(1-(2-氮雜螺[3.5]壬-7-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺鹽酸鹽 (55b) (0.6 g) 溶於40 mL DCE中，加入固體碳酸氫鈉 (247 mg，2.94 mmol)，室溫攪拌20 min，加入3-氧代氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (337 mg, 1.97 mmol)，室溫攪拌10 min後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.52 g，2.45 mmol)，室溫攪拌16 h。向反應體系中緩慢加入60 mL飽和碳酸氫鈉水溶液，用DCM萃取 (80 mL × 3)，有機相用50 mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 10:1)，得3-(7-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-2-氮雜螺[3.5]壬-2-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (56a) (0.44 g，從化合物55a算兩步收率：72%)。
LCMS m/z = 665.4 [M+1]+
。
第二步：1-(1-(2-(氮雜環丁-3-基)-2-氮雜螺[3.5]壬-7-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4 -d]嘧啶-4-胺鹽酸鹽 (56b)
1-(1-(2-(azetidin-3-yl)-2-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine hydrochloride
將3-(7-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-2-氮雜螺[3.5]壬-2-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (56a) (250 mg, 0.38 mmol) 溶解在5 mL甲醇中，加入15 mL 2 mol/L鹽酸乙酸乙酯溶液，室溫攪拌4 h。將反應體系直接減壓濃縮，即得粗品1-(1-(2-(氮雜環丁-3-基)-2-氮雜螺[3.5]壬-7-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4 -d]嘧啶-4-胺鹽酸鹽 (56b) (0.28 g)。
LCMS m/z = 565.1 [M+1]+
。
第五步：5-(3-(7-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-2-氮雜螺[3.5]壬-2-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物56)
5-(3-(7-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-2-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將1-(1-(2-(氮雜環丁-3-基)-2-氮雜螺[3.5]壬-7-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4 -d]嘧啶-4-胺鹽酸鹽 (56b) (0.28 g) 溶於15 mL DMSO中，加入固體碳酸氫鈉 (127 mg，1.51 mmol)，室溫攪拌10 min，加入1.5 mL DIPEA和2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (157 mg，0.57 mmol)，於80℃攪拌反應5 h。將反應液冷卻至室溫，加入50 mL水，過濾，收集固體，用水洗滌，固體用50 mL二氯甲烷溶解，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 15:1)，得5-(3-(7-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-2-氮雜螺[3.5]壬-2-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物56) (110 mg，從化合物56a算兩步收率：35%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 9.64 (br.s, 1H), 8.38 (s, 1H), 7.68 – 7.59 (m, 3H), 7.42 – 7.34 (m, 2H), 7.20 – 7.10 (m, 3H), 7.10 – 7.04 (m, 2H), 6.77 (d, 1H), 6.50 (dd, 1H), 5.75 (br.s, 2H), 4.92 (dd, 1H), 4.85 – 4.68 (m, 1H), 4.07 – 3.96 (m, 2H), 3.88 – 3.78 (m, 2H), 3.72 – 3.62 (m, 1H), 3.20 – 2.96 (m, 6H), 2.92 – 2.65 (m, 3H), 2.58 – 2.28 (m, 5H), 2.17 – 2.07 (m, 2H), 2.07 – 2.03 (m, 2H), 2.03 – 1.97 (m, 1H), 1.91 – 1.81 (m, 2H), 1.53 – 1.42 (m, 2H), 1.39 – 1.30 (m, 2H)。
LCMS m/z = 821.2 [M+1]+
。
實施例
57
：
5-(3-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-8-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物57)
5-(3-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-8-azabicyclo[3.2.1]octan-8-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione 
第一步：3-(4-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-8-甲酸第三丁酯 (57a)
tert-butyl 3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-8-azabicyclo[3.2.1]octane-8-carboxylate
將3-(4-苯氧基苯基)-1-(呱啶-4-基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (1a) (合成方法見J. Med. Chem.
2015, 58,
9625-9638) (5.0 g，12.94 mmol) 溶於85 mL DCE中，加入3-氧代-8-氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁酯 (5.82 g, 25.83 mmol)，於55℃攪拌反應2 h後，冷卻至室溫，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (8.23 g，38.83 mmol)，室溫攪拌16 h。向反應液中緩慢加入100 mL飽和碳酸氫鈉水溶液，用DCM萃取 (120 mL × 3)，有機相用150 mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 20:1)，得3-(4-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-8-甲酸第三丁酯 (57a) (0.4 g，收率: 5%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.36 (s, 1H), 7.68 – 7.61 (m, 2H), 7.42 – 7.35 (m, 2H), 7.21 – 7.05 (m, 5H), 5.53 (br.s, 2H), 4.85 – 4.65 (m, 1H), 4.40 – 4.15 (m, 2H), 3.18 – 2.99 (m, 2H), 2.98 – 2.82 (m, 1H), 2.48 – 2.30 (m, 4H), 2.11 – 1.91 (m, 4H), 1.83 – 1.59 (m, 6H), 1.47 (s, 9H)。
LCMS m/z = 596.4 [M+1]+
。
第二步：1-(1-(8-氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺鹽酸鹽 (57b)
1-(1-(8-azabicyclo[3.2.1]octan-3-yl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine hydrochloride
將3-(4-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-8-甲酸第三丁酯 (57a) (0.38 g, 0.64 mmol) 溶解到5 mL甲醇中，加入25 mL 2 mol/L鹽酸乙酸乙酯溶液，室溫攪拌4 h。反應完後將體系直接減壓濃縮，即得粗品1-(1-(8-氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺鹽酸鹽 (57b) (0.4 g)。
LCMS m/z = 496.3 [M+1]+
。
第三步：3-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-8-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (57c)
tert-butyl 3-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-8-azabicyclo[3.2.1]octan-8-yl)azetidine-1-carboxylate
將上述粗品1-(1-(8-氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺鹽酸鹽 (57b) (0.17 g) 溶於20 mL DCE中，加入固體碳酸氫鈉 (96 mg，1.14 mmol)，室溫攪拌20 min，加入N-Boc-氮雜環丁酮 (96 mg, 0.56 mmol)，室溫攪拌10 min後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (0.18 g，0.85 mmol)，室溫攪拌16 h。向反應體系中緩慢加入20 mL飽和碳酸氫鈉水溶液，用DCM萃取 (50 mL × 3)，有機相用50 mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 10:1)，得3-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-8-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (57c) (0.16 g，從化合物57a算兩步收率：90%)。
LCMS m/z = 651.4 [M+1]+
。
第四步：1-(1-(8-(氮雜環丁-3-基)-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺鹽酸鹽 (57d)
1-(1-(8-(azetidin-3-yl)-8-azabicyclo[3.2.1]octan-3-yl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine hydrochloride
將3-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-8-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (57c) (150 mg, 0.23 mmol) 溶解在5 mL甲醇中，加入15 mL 2 mol/L鹽酸乙酸乙酯溶液，室溫攪拌4 h。將反應體系直接減壓濃縮，即得粗品1-(1-(8-(氮雜環丁-3-基)-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺鹽酸鹽 (57d) (0.16 g)。
LCMS m/z = 551.3 [M+1]+
。
第五步：5-(3-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-8-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物57)
5-(3-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-8-azabicyclo[3.2.1]octan-8-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將上述粗品1-(1-(8-(氮雜環丁-3-基)-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺鹽酸鹽 (57d) (0.16 g) 溶於10 mL DMSO中，加入固體碳酸氫鈉 (78 mg，0.93 mmol)，室溫攪拌10 min，加入1.0 mL DIPEA和2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (95 mg，0.34 mmol)，於80℃攪拌反應5 h。將反應液冷卻至室溫，加入50 mL水，過濾，收集固體，用水洗滌，固體用50 mL二氯甲烷溶解，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 15:1)，得5-(3-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-8-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物57) (80 mg，從化合物57c算兩步收率：43%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 9.30 (br.s, 1H), 8.38 (s, 1H), 7.68 – 7.59 (m, 3H), 7.43 – 7.34 (m, 2H), 7.21 – 7.03 (m, 5H), 6.77 (d, 1H), 6.50 (dd, 1H), 5.68 (br.s, 2H), 4.92 (dd, 1H), 4.83 – 4.67 (m, 1H), 4.18 – 4.04 (m, 2H), 3.86 – 3.77 (m, 2H), 3.76 – 3.62 (m, 1H), 3.36 – 3.26 (m, 2H), 3.22 – 3.03 (m, 2H), 2.93 – 2.65 (m, 4H), 2.51 – 2.27 (m, 4H), 2.17 – 1.92 (m, 5H), 1.84 – 1.60 (m, 6H)。
LCMS m/z = 807.1 [M+1]+
。
實施例
58
：
5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-8-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物58)
5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-8-azabicyclo[3.2.1]octan-8-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione 
將上述粗品1-(1-(8-氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺鹽酸鹽 (57b) (0.2 g) 溶於10 mL DMSO中，加入固體碳酸氫鈉 (113 mg，1.35 mmol)，室溫攪拌10 min，加入1.0 mL DIPEA和2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (139 mg，0.50 mmol)，於80℃攪拌反應5 h。將反應液冷卻至室溫，加入20 mL水，過濾，收集固體，用水洗滌，固體用50 mL二氯甲烷溶解，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 15:1)，得5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-8-氮雜雙環[3.2.1]辛-8-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物58) (110 mg，從化合物57a算兩步收率：46%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 9.06 (br.s, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.70 – 7.64 (m, 1H), 7.64 – 7.58 (m, 2H), 7.41 – 7.33 (m, 2H), 7.19 – 7.03 (m, 6H), 6.92 (dd, 1H), 5.64 (br.s, 2H), 4.97 – 4.89 (m, 1H), 4.77 – 4.64 (m, 1H), 4.47 – 4.39 (m, 2H), 3.10 – 2.65 (m, 6H), 2.42 – 2.24 (m, 4H), 2.18 – 2.08 (m, 3H), 2.04 – 1.94 (m, 2H), 1.92 – 1.82 (m, 2H), 1.82 – 1.74 (m, 4H)。
LCMS m/z = 752.3 [M+1]+
。
實施例
59
：
5-(3-((3aR,6aS)-5-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)六氫環戊[c]吡咯-2(1H)-氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物59)
5-(3-((3aR,6aS)-5-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione 
第一步：3-((3aR,6aS)-5-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)六氫環戊[c]吡咯-2(1H)-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (59a)
tert-butyl 3-((3aR,6aS)-5-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)azetidine-1-carboxylate
將上述粗品1-(1-((3aR,6aS)-八氫環戊[c]吡咯-5-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸鹽 (52b) (270 mg) 溶於6 mL DCE中，室溫下依次加入1-Boc-3-氮雜環丁酮 (188 mg, 1.10 mmol)、冰乙酸 (0.08 mL) 和無水硫酸鈉 (400 mg)，攪拌30 min後加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (400 mg, 1.89 mmol)，室溫攪拌16 h。向反應液中加入50 mL水，用2 mol/L氫氧化鈉水溶液調水相pH為10，用二氯甲烷萃取 (30 mL × 3)，合併有機相，有機相用水洗滌 (20 mL × 2)，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 10:1-8:1)，得到3-((3aR,6aS)-5-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)六氫環戊[c]吡咯-2(1H)-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (59a) (265 mg，從化合物52a算兩步產率：96%)。
LCMS m/z = 651.4 [M+1]+
。
第二步：1-(1-((3aR,6aS)-2-(氮雜環丁-3-基)六氫環戊[c]吡咯-5-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (59b)
1-(1-((3aR,6aS)-2-(azetidin-3-yl)octahydrocyclopenta[c]pyrrol-5-yl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將3-((3aR,6aS)-5-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)六氫環戊[c]吡咯-2(1H)-基)氮雜環丁-1-甲酸第三丁酯 (59a) (210 mg, 0.32 mmol) 溶於2 mL二氯甲烷中，加入1 mL三氟乙酸，室溫反應2.5 h。將反應液用2 mol/L氫氧化鈉水溶液調pH至10，水相用二氯甲烷萃取 (10 mL × 3)，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到粗品1-(1-((3aR,6aS)-2-(氮雜環丁-3-基)六氫環戊[c]吡咯-5-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (59b) (165 mg)。
LCMS m/z = 551.4 [M+1]+
。
第三步：5-(3-((3aR,6aS)-5-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)六氫環戊[c]吡咯-2(1H)-氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物59)
5-(3-((3aR,6aS)-5-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)azetidin-1-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將上述粗品1-(1-((3aR,6aS)-2-(氮雜環丁-3-基)六氫環戊[c]吡咯-5-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (59b) (165 mg) 溶於5 mL DMSO中，室溫下加入2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (82 mg, 0.30 mmol) 和二異丙基乙基胺 (194 mg, 1.50 mmol)，升溫至80℃反應4 h。將反應液冷卻至室溫後倒入20 mL水中，水相用二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 10:1的混合溶劑萃取 (30 mL × 3)，合併有機相，有機相用50 mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 15:1-8:1)，得到5-(3-((3aR,6aS)-5-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)六氫環戊[c]吡咯-2(1H)-氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物59) (108 mg，從化合物59a算兩步產率：42%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.36 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.68 – 7.58 (m, 3H), 7.43 – 7.33 (m, 2H), 7.22 – 7.02 (m, 5H), 6.77 (d, 1H), 6.50 (dd, 1H), 5.43 (br.s, 2H), 4.93 (dd, 1H), 4.82 – 4.68 (m, 1H), 4.11 – 4.03 (m, 2H), 3.94 – 3.83 (m, 2H), 3.51 – 3.42 (m, 1H), 3.23 – 3.11 (m, 2H), 2.94 – 2.63 (m, 4H), 2.62 – 2.30 (m, 8H), 2.28 – 2.16 (m, 3H), 2.16 – 2.08 (m, 1H), 2.06 – 1.95 (m, 2H), 1.44 – 1.22 (m, 3H)。
LCMS m/z = 807.4 [M+1]+
。
實施例
60
：
5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-[1,3':1',3''-聯三氮雜環丁]-1''-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物60)
5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-[1,3':1',3''-terazetidin]-1''-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione 
第一步：3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-[1,3':1',3''-聯三氮雜環丁烷]-1''-甲酸第三丁酯 (60a)
tert-butyl 3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-[1,3':1',3''-terazetidine]-1''-carboxylate
將1-[1-[1-(氮雜環丁-3-基)氮雜環丁-3-基]-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (17d) (496 mg, 1.00 mmol) 溶於10 mL DCE中，室溫下依次加入1-Boc-3-氮雜環丁酮 (342 mg, 2.00 mmol)、冰乙酸 (0.15 mL) 和無水硫酸鈉(800 mg)，室溫攪拌30 min後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (726 mg, 3.43 mmol)，室溫攪拌16 h。向反應液中加入50 mL水，用2 N氫氧化鈉水溶液調水相pH為10，用二氯甲烷萃取 (30 mL × 3)，合併有機相，有機相用水洗滌 (20 mL × 2)，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 10:1-8:1)，得到3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-[1,3':1',3''-聯三氮雜環丁烷]-1''-甲酸第三丁酯 (60a) (521 mg，產率：80%)。
LCMS m/z = 652.5 [M+1]+
。
第二步：1-(1-([1,3':1',3''-聯三氮雜環丁]-3-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (60b)
1-(1-([1,3':1',3''-terazetidin]-3-yl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-[1,3':1',3''-聯三氮雜環丁烷]-1''-甲酸第三丁酯 (60a) (143 mg, 0.22 mmol) 溶於4 mL二氯甲烷中，加入2 mL三氟乙酸，室溫反應1.5 h。將反應液用2 mol/L氫氧化鈉水溶液調pH至10，水相用二氯甲烷萃取 (10 mL × 3)，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到粗品1-(1-([1,3':1',3''-聯三氮雜環丁]-3-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (60b) (113 mg)。
LCMS m/z = 552.4 [M+1]+
。
第三步：5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-[1,3':1',3''-聯三氮雜環丁]-1''-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物60)
5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)-[1,3':1',3''-terazetidin]-1''-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將上述粗品1-(1-([1,3':1',3''-聯三氮雜環丁]-3-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (60b) (113 mg) 溶於5 mL DMSO中，室溫下加入2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (55 mg, 0.20 mmol) 和二異丙基乙基胺 (129 mg, 1.00 mmol)，升溫至80℃反應3.5 h。將反應液冷卻至室溫後倒入20 mL水中，水相用二氯甲烷/甲醇 (v/v) =10:1的混合溶劑萃取 (30 mL × 3)，合併有機相，有機相用40 mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 15:1-8:1)，得到5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)-[1,3':1',3''-聯三氮雜環丁]-1''-基)-2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物60) (99 mg，從化合物60a算兩步產率：56 %)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.37 (s, 1H), 7.68 – 7.59 (m, 3H), 7.43 – 7.35 (m, 2H), 7.21 – 7.11 (m, 3H), 7.11 – 7.05 (m, 2H), 6.76 (d, 1H), 6.49 (dd, 1H), 5.72 (br.s, 2H), 4.96 – 4.87 (m, 1H), 4.84 – 4.70 (m, 1H), 4.08 – 3.96 (m, 2H), 3.88 – 3.78 (m, 2H), 3.69 – 3.60 (m, 1H), 3.60 – 3.51 (m, 2H), 3.44 – 3.32 (m, 3H), 3.18 – 2.96 (m, 5H), 2.96 – 2.64 (m, 5H), 2.50 – 2.33 (m, 2H), 2.16 – 1.97 (m, 5H)。
LCMS m/z = 808.4 [M+1]+
。
實施例
61
：
5-((3aR,6aS)-5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)氮雜環丁-1-基)六氫環戊[c]吡咯-2(1H)-基)-2-(2,6-二氧呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物61)
5-((3aR,6aS)-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)azetidin-1-yl)hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione 
第一步：(3aR,6aS)-5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)氮雜環丁-1-基)六氫環戊[c]吡咯-2(1H)-甲酸第三丁酯 (61a)
tert-butyl (3aR,6aS)-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)azetidin-1-yl)hexahydrocyclopenta[c]pyrrole-2(1H)-carboxylate
將1-[1-(氮雜環丁-3-基)-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (17b) (650 mg, 1.47 mmol) 溶於12 mL DCE中，室溫下依次加入 (3aR,6aS)-5-氧代六氫環戊[c]吡咯-2(1H)-甲酸第三丁酯 (451 mg, 2.00 mmol)、冰乙酸 (0.14 mL) 和無水硫酸鈉 (700 mg)，室溫攪拌30 min後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (636 mg, 3.00 mmol)，室溫攪拌16 h。向反應液中加入50 mL水，用2 mol/L氫氧化鈉水溶液調水相pH至10，用二氯甲烷萃取 (30 mL × 3)，合併有機相，有機相用水洗滌 (20 mL × 2)，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 10:1-8:1)，得到 (3aR,6aS)-5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)氮雜環丁-1-基)六氫環戊[c]吡咯-2(1H)-甲酸第三丁酯 (61a) (310 mg，產率：32%)。
LCMS m/z = 651.4 [M+1]+
。
第二步：1-(1-((3aR,6aS)-2-(氮雜環丁-3-基)八氫環戊[c]吡咯-5-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (61b)
1-(1-((3aR,6aS)-2-(azetidin-3-yl)octahydrocyclopenta[c]pyrrol-5-yl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將 (3aR,6aS)-5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)氮雜環丁-1-基)六氫環戊[c]吡咯-2(1H)-甲酸第三丁酯 (61a) (310 mg, 0.48 mmol) 溶於3 mL二氯甲烷中，加入2 mL三氟乙酸，室溫反應2.5 h。將反應液用2 mol/L氫氧化鈉水溶液調pH至10，水相用二氯甲烷萃取 (10 mL × 3)，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，濃縮，得到粗品1-(1-((3aR,6aS)-2-(氮雜環丁-3-基)八氫環戊[c]吡咯-5-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (61b) (255 mg)。
LCMS m/z = 551.4 [M+1]+
。
第三步：5-((3aR,6aS)-5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)氮雜環丁-1-基)六氫環戊[c]吡咯-2(1H)-基)-2-(2,6-二氧呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物61)
5-((3aR,6aS)-5-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)azetidin-1-yl)hexahydrocyclopenta[c]pyrrol-2(1H)-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將上述粗品1-(1-((3aR,6aS)-2-(氮雜環丁-3-基)八氫環戊[c]吡咯-5-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (61b) (200 mg) 溶於8 mL DMSO中，室溫下加入2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (99 mg, 0.36 mmol) 和二異丙基乙基胺 (233 mg, 1.80 mmol)，升溫至80℃反應4 h。將反應液冷卻至室溫後倒入20 mL水中，水相用二氯甲烷/甲醇 (v/v) =10:1的混合溶劑萃取 (30 mL × 3)，合併有機相，有機相用50 mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 15:1-8:1)，得到5-((3aR,6aS)-5-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)氮雜環丁-1-基)六氫環戊[c]吡咯-2(1H)-基)-2-(2,6-二氧呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物61) (148 mg，從化合物61a算兩步產率：49%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 8.52 (br.s, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.69 – 7.60 (m, 3H), 7.44 – 7.34 (m, 2H), 7.24 – 7.02 (m, 5H), 6.96 (d, 1H), 6.67 (dd, 1H), 5.48 (br.s, 2H), 4.92 (dd, 1H), 4.83 – 4.70 (m, 1H), 3.70 – 3.43 (m, 4H), 3.42 – 3.30 (m, 2H), 3.10 – 2.65 (m, 10H), 2.49 – 2.32 (m, 2H), 2.16 – 1.94 (m, 6H), 1.52 – 1.20 (m, 4H)。
LCMS m/z = 807.4 [M+1]+
。
實施例
62
：
5-(2-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-7-氮雜螺環[3.5]壬-7-基)-2-(2,6-二氧呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物62)
5-(2-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)azetidin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione 
第一步：2-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-甲酸第三丁酯 (62a)
tert-butyl 2-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)azetidin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
將1-[1-(氮雜環丁-3-基)-4-呱啶基]-3-(4-苯氧基苯基)吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (17b) (650 mg, 1.47 mmol) 溶於12 mL DCE中，室溫下依次加入2-氧代-7-氮雜螺環[3.5]壬-7-甲酸第三丁酯 (479 mg, 2.00 mmol)、冰乙酸 (0.14 mL) 和無水硫酸鈉 (700 mg)，室溫攪拌30 min後加入三乙醯氧基硼氫化鈉 (636 mg, 3.00 mmol)，室溫攪拌16 h。向反應液中加入50 mL水，用2 mol/L氫氧化鈉水溶液調水相pH至10，用二氯甲烷萃取 (30 mL × 3)，合併有機相，有機相用水洗滌 (20 mL × 2)，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 10:1-8:1)，得到2-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-甲酸第三丁酯 (62a) (404 mg，產率：41%)。
LCMS m/z = 665.4 [M+1]+
。
第二步：1-(1-(1-(7-氮雜螺[3.5]壬-2-基)氮雜環丁-3-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (62b)
1-(1-(1-(7-azaspiro[3.5]nonan-2-yl)azetidin-3-yl)piperidin-4-yl)-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine
將2-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-甲酸第三丁酯 (62a) (200 mg, 0.30 mmol) 溶於2 mL二氯甲烷中，加入1 mL三氟乙酸，室溫反應2 h。將反應液用2 mol/L氫氧化鈉水溶液調pH至10，水相用二氯甲烷萃取 (10 mL × 3)，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到粗品1-(1-(1-(7-氮雜螺[3.5]壬-2-基)氮雜環丁-3-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (62b) (161 mg)。
LCMS m/z = 565.4 [M+1]+
。
第三步：5-(2-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-7-氮雜螺環[3.5]壬-7-基)-2-(2,6-二氧呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物62)
5-(2-(3-(4-(4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl)piperidin-1-yl)azetidin-1-yl)-7-azaspiro[3.5]nonan-7-yl)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione
將上述粗品1-(1-(1-(7-氮雜螺[3.5]壬-2-基)氮雜環丁-3-基)呱啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-4-胺 (62b) (161 mg) 溶於6 mL DMSO中，室溫下加入2-(2,6-二氧代呱啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮 (合成方法見WO2017197056) (80 mg, 0.29 mmol) 和二異丙基乙基胺 (188 mg, 1.45 mmol)，升溫至80℃反應4 h。將反應液冷卻至室溫後倒入20 mL水中，水相用二氯甲烷/甲醇 (v/v) =10:1的混合溶劑萃取 (30 mL × 3)，合併有機相，有機相用50 mL水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後，粗品用矽膠柱色譜分離純化 (二氯甲烷/甲醇 (v/v) = 15:1-8:1)，得到5-(2-(3-(4-(4-胺基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑並[3,4-d]嘧啶-1-基)呱啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-7-氮雜螺環[3.5]壬-7-基)-2-(2,6-二氧呱啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮 (化合物62) (128 mg，從化合物62a算兩步產率：52%)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3
) δ 10.34 (br.s, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.70 – 7.60 (m, 3H), 7.43 – 7.33 (m, 2H), 7.27 – 7.24 (m, 1H), 7.20 – 6.99 (m, 6H), 5.82 (br.s, 2H), 5.00 – 4.89 (m, 1H), 4.85 – 4.71 (m, 1H), 3.67 – 3.51 (m, 2H), 3.46 – 3.21 (m, 5H), 3.16 – 2.66 (m, 8H), 2.50 – 2.33 (m, 2H), 2.20 – 1.92 (m, 7H), 1.87 – 1.61 (m, 6H)。
LCMS m/z = 821.4 [M+1]+
。
測試例
1.
細胞增殖抑制實驗
SU-DHL-4、Mino、SU-DHL-6培養基為RPMI1640+10%FBS，培養於37 ℃、5% CO2
孵箱中。細胞鋪板96孔板。其中SU-DHL-4細胞20000個/孔，Mino和SU-DHL-6細胞5000個/孔，每孔90 μL。每孔加入10 μL不同濃度的化合物。每個濃度設3複孔，最後一列為DMSO 溶媒對照組，在37 ℃、5% CO2
條件下繼續培養72小時。72小時後，每孔加入100 μL檢測試劑（Cell Viability Assay，Promega，G7573），混勻2分鐘，室溫孵育10分鐘，用酶標儀（PHERAstar FSX）測定熒光信號值。使用origin9.2軟件，計算化合物抑制細胞增殖的IC50
值，並根據式（1）計算在化合物最高濃度下的抑制率Max inhi. %。
Max inhi.%=(1-T72給藥/T72溶媒) ×100 式（1）。
OCI-LY10、TMD-8細胞培養基為RPMI1640+10%FBS，培養於37 ℃、5% CO2
孵箱中。細胞鋪板96孔板。其中OCI-LY10細胞10000個/孔，TMD-8細胞8000個/孔，每孔90 μL，於37 ℃、5% CO2
條件下培養過夜。第二天每孔加入10 μL不同濃度的化合物。每個濃度設3複孔，最後一列為DMSO 溶媒對照組，在37 ℃、5% CO2
條件下繼續培養72小時。72小時後，每孔加入50 μL檢測試劑（Cell Viability Assay，Promega，G7573），混勻2分鐘，室溫孵育10分鐘，Envision2104讀板儀（PerkinElmer）測定熒光信號值。抑制率使用式（2）計算，其中RLUcompound
為藥物處理組的讀數，RLUcontrol
為溶劑對照組的平均值，RLUblank
為無細胞孔平均值。應用GraphPad Prism軟件，計算IC50
值。
IR (%) = (1– (RLUcompound
– RLUblank
) / (RLUcontrol
– RLUblank
))*100% 式（2）
抑制Mino細胞增殖的IC50
值結果見表1.
表1 抑制Mino細胞增殖的IC50
值
*註：為其三氟乙酸鹽。
| 序號 | 化合物編號 | IC50 (nM) |
| 1 | P13I* | 844 |
| 2 | 化合物2 | 633 |
| 3 | 化合物6 | 421 |
| 4 | 化合物8 | 309 |
| 5 | 化合物9 | 367 |
| 6 | 化合物10 | 405 |
| 7 | 化合物11 | 114 |
| 8 | 化合物12 | 183 |
| 9 | 化合物13 | 677 |
| 10 | 化合物17 | 20 |
| 11 | 化合物17-a | 8.0 |
| 12 | 化合物17-b | 7.2 |
| 13 | 化合物18-1 | 18 |
| 14 | 化合物19 | 48 |
| 15 | 化合物20-1 | 32 |
| 16 | 化合物23 | 295 |
| 17 | 化合物24 | 629 |
| 18 | 化合物25 | 282 |
| 19 | 化合物27 | 503 |
| 20 | 化合物32 | 188 |
| 21 | 化合物38 | 81 |
| 22 | 化合物39 | 41 |
| 23 | 化合物40 | 7.3 |
| 24 | 化合物41 | 10.3 |
| 25 | 化合物42 | 15 |
| 26 | 化合物43 | 10 |
| 27 | 化合物44 | 15 |
| 28 | 化合物45 | 9.6 |
| 29 | 化合物46-1 | 27 |
| 30 | 化合物49-1 | 113 |
| 31 | 化合物49-2 | 10 |
| 32 | 化合物50 | 112 |
| 33 | 化合物54 | 200 |
| 34 | 化合物59 | 501 |
| 35 | 化合物60 | 165 |
| 36 | 化合物61 | 100 |
| 37 | 化合物62 | 38 |
抑制Mino細胞增殖的Max inhi.%值結果見表1-1。
表1-1 抑制Mino細胞增殖的Max inhi.%值
| 序號 | 化合物編號 | Mino Max inhi.% |
| 1 | 化合物15 | 99.8 |
| 2 | 化合物16 | 99.7 |
| 3 | 化合物26 | 74.3 |
| 4 | 化合物29 | 71.2 |
| 5 | 化合物30 | 82.5 |
| 6 | 化合物31 | 78.3 |
| 7 | 化合物48 | 95.7 |
| 8 | 化合物51 | 99.7 |
| 9 | 化合物52 | 99.7 |
| 10 | 化合物53 | 99.6 |
| 11 | 化合物55 | 99.9 |
| 12 | 化合物56 | 99.9 |
| 13 | 化合物57 | 99.2 |
| 14 | 化合物58 | 95.3 |
抑制SU-DHL-4細胞增殖的IC50
值結果見表2。
表2 抑制SU-DHL-4細胞的IC50
值
*註：為其三氟乙酸鹽。
| 序號 | 化合物編號 | IC50 (nM) |
| 1 | P13I* | 1184 |
| 2 | 化合物2 | 41 |
| 3 | 化合物8 | 255 |
| 4 | 化合物9 | 295 |
| 5 | 化合物11 | 189 |
| 6 | 化合物12 | 56 |
| 7 | 化合物13 | 70 |
| 8 | 化合物14 | 60 |
| 9 | 化合物17 | 367 |
| 10 | 化合物17-a | 481 |
| 11 | 化合物17-b | 460 |
| 12 | 化合物18-1 | 20 |
| 13 | 化合物19-1 | 394 |
| 14 | 化合物32 | 330 |
| 15 | 化合物37 | 631 |
| 16 | 化合物38 | 469 |
| 17 | 化合物40 | 74 |
| 18 | 化合物41 | 329 |
| 19 | 化合物42 | 382 |
| 20 | 化合物43 | 330 |
| 21 | 化合物45 | 110 |
抑制SU-DHL-4細胞增殖的Max inhi.%值結果見表2-1。
表2-1 抑制SU-DHL-4細胞增殖的Max inhi.%值
| 序號 | 化合物編號 | SU-DHL-4 Max inhi.% |
| 1 | 化合物34-a | 94.4 |
| 2 | 化合物34-b | 99.2 |
| 3 | 化合物36-a | 99.6 |
| 4 | 化合物36-b | 99.8 |
抑制SU-DHL-6細胞增殖的IC50
值結果見表2-2。
表2-2 抑制SU-DHL-6細胞的IC50
值
*註：為其三氟乙酸鹽。
| 序號 | 化合物編號 | IC50 (nM) |
| 1 | P13I* | 1638 |
| 2 | 化合物2 | 26 |
| 3 | 化合物6 | 166 |
| 4 | 化合物8 | 399 |
| 5 | 化合物9 | 155 |
| 6 | 化合物10 | 77 |
| 7 | 化合物11 | 109 |
| 8 | 化合物12 | 106 |
| 9 | 化合物14 | 86 |
| 10 | 化合物17 | 744 |
| 11 | 化合物17-a | 524 |
| 12 | 化合物17-b | 662 |
| 13 | 化合物18-1 | 29 |
| 14 | 化合物19 | 782 |
| 15 | 化合物32 | 393 |
| 16 | 化合物38 | 888 |
| 17 | 化合物40 | 54 |
| 18 | 化合物41 | 670 |
| 19 | 化合物42 | 177 |
| 20 | 化合物43 | 407 |
| 21 | 化合物45 | 125 |
抑制OCI-LY10細胞增殖的IC50
值結果見表2-3。
表2-3 抑制OCI-LY10細胞的IC50
值
*註：為其三氟乙酸鹽。
| 序號 | 化合物編號 | IC50 (nM) |
| 1 | P13I* | 29 |
| 2 | 化合物8 | 3 |
| 3 | 化合物17 | 5 |
| 4 | 化合物18-1 | 4 |
| 5 | 化合物19-1 | 23 |
| 6 | 化合物40 | 3 |
| 7 | 化合物42 | 3 |
| 8 | 化合物45 | 3 |
抑制TMD-8細胞增殖的IC50
值結果見表2-4。
表2-4 抑制TMD-8細胞的IC50
值
*註：為其三氟乙酸鹽。
| 序號 | 化合物編號 | IC50 (nM) |
| 1 | P13I* | 104 |
| 2 | 化合物8 | 22 |
| 3 | 化合物17 | 22 |
| 4 | 化合物18-1 | 8 |
| 5 | 化合物19-1 | 14 |
| 6 | 化合物40 | 12 |
| 7 | 化合物42 | 16 |
| 8 | 化合物45 | 16 |
結論：運用本發明技術所合成的化合物對SU-DHL-4細胞和SU-DHL-6細胞（人B淋巴瘤細胞）、Mino細胞（套細胞淋巴瘤細胞）、OCI-LY10細胞（彌漫大B細胞淋巴瘤細胞）及TMD-8細胞（人彌漫大B淋巴瘤細胞）增殖有顯著的抑制作用。
2.
大鼠藥代動力學測試
實驗目的
：本試驗通過單劑量靜脈和灌胃給予受試物於SD大鼠，測定大鼠血漿中受試物的濃度，評價受試物在大鼠體內藥代特徵和生物利用度。
試驗動物
：雄性SD大鼠，200~250g，6~8周齡，6只/受試物。購於成都達碩實驗動物有限公司。
試驗方法
：試驗當天，6只SD大鼠按體重隨機分組。給藥前1天禁食不禁水12~14h，給藥後4h給食。
表3
*劑量以游離鹼計。
| 組別 | 數量 | 給藥信息 | ||||||
| 雄性 | 受試物 | 給藥劑量* (mg/kg) | 給藥濃度 (mg/mL) | 給藥體積 (mL/kg) | 採集樣本 | 給藥 方式 | 溶媒 | |
| G1 | 3 | 本發明化合物 | 5 | 1 | 5 | 血漿 | 靜脈 | 5%DMSO+5%Solutol+90%Saline |
| G2 | 3 | 本發明化合物 | 20 | 2 | 10 | 血漿 | 灌胃 | 0.5%MC |
取樣：
於給藥前及給藥後異氟烷麻醉經眼眶取血0.1 ml，置於EDTAK2離心管中。5000rpm，4o
C離心10 min，收集血漿。
G1組採集血漿時間點：0, 5min, 15 min, 30min, 1, 2, 4, 6, 8, 24 h。
G2組採集血漿時間點：0, 15 min, 30min, 1, 2, 4, 6, 8, 24 h。
分析檢測前，所有樣品存於-80o
C。用LC-MS/MS對樣品進行定量分析。
表4化合物在大鼠血漿中藥代動力學參數
*註：i.g.（灌胃）給予化合物。**
註：為其三氟乙酸鹽；#
註：各檢測點濃度低於定量下線0.5 ng/mL。
| 受試化合物 | 給藥方式* | AUC0-t (ng/ml·h) | F(%) |
| P13I** | i.g. (20mg/kg) | 0# | 0# |
| 化合物1 | i.g. (20mg/kg) | 479±197 | N/A |
| 化合物2 | i.g. (20mg/kg) | 18.6±2.8 | N/A |
| 化合物3 | i.g. (20mg/kg) | 211±46 | N/A |
| 化合物4 | i.g. (20mg/kg) | 36.0±10 | N/A |
| 化合物5 | i.g. (20mg/kg) | 81.7±68 | N/A |
| 化合物6 | i.g. (20mg/kg) | 328±41 | N/A |
| 化合物7 | i.g. (20mg/kg) | 105±54 | N/A |
| 化合物8 | i.g. (20mg/kg) | 634±238 | 11.8±4.4 |
| 化合物9 | i.g. (20mg/kg) | 8.93±4.3 | N/A |
| 化合物17 | i.g. (20mg/kg) | 2344±274 | 6.57±0.77 |
| 化合物18-1 | i.g. (20mg/kg) | 218±68 | N/A |
| 化合物19-1 | i.g. (20mg/kg) | 1263±117 | N/A |
| 化合物20-1 | i.g. (20mg/kg) | 891±164 | N/A |
| 化合物21 | i.g. (20mg/kg) | 3205±973 | 12.4±3.8 |
| 化合物32 | i.g. (20mg/kg) | 322±64 | N/A |
| 化合物37 | i.g. (20mg/kg) | 473±105 | N/A |
| 化合物49-2 | i.g. (20mg/kg) | 475±237 | 4.14±2.1 |
結論：運用本發明技術所合成的化合物在大鼠體內具有一定的口服生物利用度。
3.
小鼠藥代動力學測試
實驗目的：
本試驗通過單劑量靜脈和灌胃給予受試物於ICR小鼠，測定小鼠血漿中受試物的濃度，評價受試物在小鼠體內藥代特徵和生物利用度。
試驗動物：
雄性ICR小鼠，20~25g，6~8周齡，24只/化合物。購於成都達碩實驗動物有限公司。
試驗方法：
試驗當天，24只ICR小鼠按體重隨機分組。給藥前1天禁食不禁水12~14 h，給藥後4 h給食。
表5
*
劑量以游離鹼計；
| 組別 | 數量 | 給藥信息 | ||||||
| 雄性 | 受試物 | 給藥劑量* (mg/kg) | 給藥濃度 (mg/mL) | 給藥體積 (mL/kg) | 採集 樣本 | 給藥 方式 | 溶媒 | |
| G1 | 9 | 本發明 化合物 | 5 | 1 | 5 | 血漿 | 靜脈 | 5% DMSO + 5% Solutol + 90% Saline |
| G2 | 15 | 本發明 化合物 | 10 | 1 | 10 | 血漿 | 口服 (灌胃) | 0.5% MC |
取樣：
於給藥前及給藥後異氟烷麻醉經眼眶取血0.06 ml，置於EDTAK2
離心管中。5000 rpm，4o
C離心10 min，收集血漿。
G1組採集血漿時間點：0, 5 min, 15 min, 30 min, 1, 2, 4, 6, 8, 24 h；
G2組採集血漿時間點：0, 15 min, 30 min, 1, 2, 4, 6, 8, 24 h；
分析檢測前，所有樣品存於-80o
C。用LC-MS/MS對樣品進行定量分析。
表6 受試化合物小鼠藥代動力學參數
*註：i.g.（灌胃）給予化合物。
| 受試化合物 | 給藥方式* | AUC0-t (ng/ml·h) | F(%) |
| 化合物17 | i.g. (10mg/kg) | 2426 | 10.8 |
結論：運用本發明技術所合成的化合物在小鼠體內具有一定的口服生物利用度。
4.
大鼠藥代動力學測試
實驗目的：
本試驗通過單劑量靜脈和灌胃給予受試物於SD大鼠，測定大鼠血漿中受試物的濃度，評價受試物在大鼠體內藥代特徵和生物利用度。
試驗動物：
雄性SD大鼠，200~250g，6~8周齡，6只/化合物。購於成都達碩實驗動物有限公司。
試驗方法：
試驗當天，6只SD大鼠按體重隨機分組。給藥前1天禁食不禁水12~14 h，給藥後4 h給食。
表7
*劑量以游離鹼計。
| 組別 | 數量 | 給藥信息 | ||||||
| 雄性 | 受試物 | 給藥劑量* (mg/kg) | 給藥濃度 (mg/mL) | 給藥體積 (mL/kg) | 採集樣本 | 給藥 方式 | 溶媒 | |
| G1 | 3 | 本發明 化合物 | 5 | 1 | 5 | 血漿 | 靜脈 | 5% DMSO + 5% Solutol + 90% Saline |
| G2 | 3 | 本發明 化合物 | 20 | 2 | 10 | 血漿 | 口服 (灌胃) | 5% DMSO+5%Solutol +30%PEG-400+60% (20%SBE-β-CD) |
取樣：
於給藥前及給藥後異氟烷麻醉經眼眶取血0.1 mL，置於EDTAK2離心管中。5000 rpm，4o
C離心10 min，收集血漿。
G1組採集血漿時間點：0, 5 min, 15 min, 30 min, 1, 2, 4, 6, 8, 24 h。
G2組採集血漿時間點：0, 15 min, 30 min, 1, 2, 4, 6, 8, 24 h。
分析檢測前，所有樣品存於-80o
C。用LC-MS/MS對樣品進行定量分析。
表8化合物在大鼠血漿中藥代動力學參數
*註：i.g.（灌胃）給予化合物；**
註：游離型；#
註：各檢測點濃度低於定量下線0.5 ng/mL。
| 受試化合物 | 給藥方式* | AUC0-t (ng/ml·h) | F(%) |
| P13I** | i.g. (20mg/kg) | 0# | 0# |
| 化合物38 | i.g. (20mg/kg) | 7257±2863 | 13.3±5.2 |
| 化合物39 | i.g. (20mg/kg) | 2831±474 | 9.1±1.5 |
| 化合物40 | i.g. (20mg/kg) | 5419±1263 | 17.4±4.0 |
| 化合物41 | i.g. (20mg/kg) | 7906±1099 | 10.8±1.5 |
| 化合物42 | i.g. (20mg/kg) | 1195±327 | 9.14±2.5 |
| 化合物43 | i.g. (20mg/kg) | 4495±886 | 11.0±2.2 |
| 化合物44 | i.g. (20mg/kg) | 877±98 | 5.73±0.64 |
| 化合物45 | i.g. (20mg/kg) | 3437±1491 | 19.7±8.5 |
結論：運用本發明技術所合成的化合物在大鼠體內具有一定的口服生物利用度。
5. Mino
細胞中
BTK
降解檢測
Mino人套細胞淋巴瘤細胞株，購自於ATCC，培養條件：RPMI-1640 + 15% FBS + 1%雙抗，培養於37 ℃，5% CO2
孵箱中。細胞鋪板6孔板，5×105個/孔。鋪板後，加入不同濃度化合物，37 ℃，5% CO2
孵箱中培養48小時。培養結束後，收集細胞，加入RIPA裂解液（beyotime, Cat. P0013B）於冰上裂解15分鐘後，12000 rpm，4 ℃離心10分鐘，收集上清蛋白樣品，用BCA試劑盒（Beyotime, Cat. P0009）進行蛋白定量後，將蛋白稀釋為0.25 mg/mL，使用全自動蛋白質印跡定量分析儀（Proteinsimple）運用試劑盒（Protein simple, Cat. SM-W004）檢測BTK（CST, Cat.8547S）和內參β-actin（CST, Cat. 3700S）的表達。使用compass軟件計算BTK相對於內參的表達量並使用Origen9.2軟件根據式（3）計算DC50
值。其中BTK給藥為不同劑量給藥組BTK表達量，BTK溶媒為溶媒對照組BTK表達量。
BTK%=BTK給藥/BTK溶媒×100 式（3）
表9 Mino細胞中BTK降解的DC50
值
| 序號 | 化合物編號 | DC50 (nM) |
| 1 | 化合物8-1 | 22.9 |
| 2 | 化合物17 | 10.9 |
結論：運用本發明技術所合成的化合物對Mino細胞中的BTK有顯著的降解作用。
6
、小鼠脾臟
BTK
蛋白降解檢測
雌性ICR小鼠，6-8周齡，購自於北京維通利華實驗動物技術有限公司，適應3天后開始實驗。連續3天灌胃給於不同劑量的化合物後，取小鼠脾臟，收集脾臟細胞，加入RIPA裂解液（beyotime, Cat. P0013B）於冰上裂解15分鐘後，12000 rpm，4 ℃離心10分鐘，收集上清蛋白樣品，用BCA試劑盒（Beyotime, Cat. P0009）進行蛋白定量後，將蛋白稀釋為0.25 mg/mL，使用全自動蛋白質印跡定量分析儀（Proteinsimple）檢測BTK（CST, Cat.8547S）和內參β-actin（CST, Cat. 3700S）的表達。使用compass軟件計算BTK相對於內參的表達量並使用Origen9.2軟件根據式（4）計算DD50
值。其中BTK給藥
為不同劑量給藥組BTK表達量，BTK溶媒
為溶媒對照組BTK表達量。
BTK%=BTK給藥
/BTK溶媒
×100 式（4）
表10 化合物小鼠脾臟BTK蛋白降解的DD50
值
| 序號 | 化合物編號 | DD50 (mg/kg) |
| 1 | 化合物8-1 | 3.8 |
| 2 | 化合物17 | 3.8 |
| 3 | 化合物17-a | 19.8 |
| 4 | 化合物17-b | 2.2 |
| 5 | 化合物18-1 | 1.9 |
| 6 | 化合物40 | 2.1 |
| 7 | 化合物42 | 1.9 |
| 8 | 化合物45 | 1.4 |
結論：運用本發明技術所合成的化合物對小鼠脾臟BTK蛋白有顯著的降解作用。
7
、體外激酶檢測
激酶BTK wt（Carna , Cat.No 08-180）和BTK C481S（Carna , Cat.No 08-547）配製成2.5× 的激酶溶液，底物FAM-P2（GL Biochem, Cat. No. 112394）與ATP（(Sigma, Cat. No. A7699-1G）配製成2.5× 的底物溶液。在384孔板中加入5 µL不同濃度的化合物，加入10 µL 2.5× 的激酶溶液，室溫孵育10分鐘。加入10 µL 2.5× 的底物溶液，於28 ℃孵育適當時間後，加入30 µL終止液終止反應，使用Caliper EZ reader2儀器檢測。運用XLFit excel add-in version 5.4.0.8軟件計算IC50
值。抑制率計算公式見式（5），其中max為DMSO對照讀數，min為陰性對照讀數，conversion為化合物讀數
抑制率%= (max-conversion)/(max-min)*100. 式（5）
其結果見表11：
表11 抑制BTK wt/C481S激酶的IC50
值
| 序號 | 化合物編號 | BTK C481S IC50 (nM) | BTK wt IC50 (nM) |
| 1 | 化合物17 | 8 | 6.3 |
結論：運用本發明技術所合成的化合物對BTKwt/C481S激酶有顯著的抑制作用。
Claims (19)
- 一種通式（I）所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中 B-L-K （I）； L選自-Ak1-Cy1-Ak2-Cy2-Ak3-Cy3-Ak4-Cy4-Ak5-； Ak1、Ak2、Ak3、Ak4和Ak5各自獨立的選自CH2 、O或者鍵； Cy1、Cy2、Cy3和Cy4各自獨立的選自3至12員雜環、3至12員環烷基、6至10員芳基或鍵，所述雜環、環烷基或芳基任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2 、oxo、C1-4 烷基或C1-4 烷氧基的取代基所取代，所述的雜環含有1至4個選自O、S、N的雜原子； Cy1、Cy2、Cy3和Cy4不能同時為鍵； Ak1、Ak2、Ak3、Ak4或Ak5為O時，不能直接與B連接； Ak1、Ak2、Ak3、Ak4或Ak5不為鍵時，互相不能直接連接； 當Cy1、Cy2、Cy3和Cy4中有3個都為鍵時，Ak1、Ak2、Ak3、Ak4和Ak5中至少有一個選自CH2 並與B相連接； 當Ak1、Cy1、Ak2、Cy2、Ak3、Cy3、Ak4、Cy4、Ak5有4個及以上不為鍵時，Cy1、Cy2、Cy3和Cy4中至少有一個不為呱啶基、呱嗪基、嘧啶基或吡啶基； B選自B1-W1-B2-B3-B4-； B1選自6員雜芳環或苯基，所述的雜芳環或苯基進一步任選被0至4個Rb1 所取代，所述的雜芳環含有1至4個選自O、S、N的雜原子； W1選自-O-、-S-、-NH-、-NHCO-或-CONH-； B2選自6員雜芳環或苯基，所述的雜芳環或苯基任選進一步任選被0至4個Rb2 所取代，所述的雜芳環含有1至4個選自O、S、N的雜原子； B3選自8-10員雜並環，所述的雜並環任選進一步任選被0至4個Rb3 所取代，所述的雜並環含有1至4個選自O、S、N的雜原子； B4選自5-6員飽和雜環，所述的飽和雜環任選進一步任選被0至4個Rb4 所取代，所述的飽和雜環含有1至2個選自O、S、N的雜原子； Rb1 、Rb2 、Rb3 或Rb4 各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2 、CN、CONH2 、C1-4 烷基或C1-4 烷氧基，所述的烷基和烷氧基任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2 、CN、CONH2 、C1-4 烷基或C1-4 烷氧基的取代基所取代； K選自； Rk2 選自CH2 、C=O、S=O、SO2 ； Rk1 、Rk3 或Rk4 各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2 、CN、COOH、C1-4 烷基或C1-4 烷氧基； Rk5 選自C=O或
；p1或p2各自獨立的選自0、1、2、3或4。
- 根據請求項1所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中 Cy1、Cy2、Cy3和Cy4各自獨立的選自鍵、4-7員雜單環、5-10員雜並環、6-12員雜螺環、7-10員雜橋環、4-7員單環烷基、5-10員並環烷基、6-12員螺環烷基、7-10員橋環烷基或6-10員芳基，所述芳基、環烷基、雜單環、雜並環、雜螺環或雜橋環任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2 、oxo、C1-4 烷基或C1-4 烷氧基的取代基所取代，所述的雜單環、雜並環、雜螺環或雜橋環含有1至4個選自O、S、N的雜原子； B1選自苯基或吡啶基，所述的苯基或吡啶基進一步任選被0至4個Rb1 所取代，所述的雜芳環含有1至4個選自O、S、N的雜原子； W1選自-O-、-NHCO-或-CONH-； B2選自苯基或吡啶基，所述的苯基或吡啶基進一步任選被0至4個Rb2 所取代，所述的雜芳環含有1至4個選自O、S、N的雜原子； B3選自取代或未取代的咪唑並嘧啶、吡唑並嘧啶、咪唑並吡嗪、吡唑並吡嗪、咪唑並四氫嘧啶、吡唑並四氫嘧啶，當被取代時，任選進一步被0至4個Rb3 所取代，所述的雜並環含有1至4個選自O、S、N的雜原子； B4選自取代或未取代的氮雜環戊基、呱啶或呱嗪，所述的氮雜環戊基、呱啶或呱嗪任選進一步任選被0至4個Rb4 所取代，所述的飽和雜環含有1至2個選自O、S、N的雜原子。
- 根據請求項2所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中 Cy1、Cy2、Cy3和Cy4各自獨立的選自取代的或者未取代的如下基團之一：鍵、苯基、萘基、環丁基、環戊基、環己基、環丁基並環丁基、環丁基並環戊基、環丁基並環己基、環戊基並環戊基、環戊基並環己基、環己基並環己基、環丙基並環丁基、環丙基並環戊基、環丙基並環己基、環丁基螺環丁基、環丁基螺環戊基、環丁基螺環己基、環戊基螺環戊基、環戊基螺環己基、環己基螺環己基、環丙基螺環丁基、環丙基螺環戊基、環丙基螺環己基、氮雜環丁基、氮雜環戊基、呱啶基、嗎啉基、呱嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三氮唑基、四氮唑基、環丙基並氮雜環丁基、環丙基並氮雜環戊基、環丙基並氮雜環己基、環丙基並呱啶基、環丁基並氮雜環丁基、環丁基並氮雜環戊基、環丁基並氮雜環己基、環丁基並呱啶基、環戊基並氮雜環丁基、環戊基並氮雜環戊基、環戊基並氮雜環己基、環戊基並呱啶基、環己基並氮雜環丁基、環己基並氮雜環戊基、環己基並氮雜環己基、環己基並呱啶基、氮雜環丁基並氮雜環丁基、氮雜環丁基並氮雜環戊基、氮雜環丁基並氮雜環己基、氮雜環丁基並呱啶基、氮雜環戊基並氮雜環丁基、氮雜環戊基並氮雜環戊基、氮雜環戊基並氮雜環己基、氮雜環戊基並呱啶基、氮雜環己基並氮雜環丁基、氮雜環己基並氮雜環戊基、氮雜環己基並氮雜環己基、氮雜環己基並呱啶基、環丁基螺氮雜環丁基、環丁基螺氮雜環戊基、環丁基螺氮雜環己基、環戊基螺氮雜環丁基、環戊基螺氮雜環戊基、環戊基螺氮雜環己基、環己基螺氮雜環丁基、環己基螺氮雜環戊基、環己基螺氮雜環己基、氮雜環丁基螺氮雜環丁基、氮雜環丁基螺氮雜環戊基、氮雜環丁基螺氮雜環己基、氮雜環戊基螺氮雜環丁基、氮雜環戊基螺氮雜環戊基、氮雜環戊基螺氮雜環己基、氮雜環己基螺氮雜環丁基、氮雜環己基螺氮雜環戊基、氮雜環己基螺氮雜環己基、環丁基螺呱啶基、環戊基螺呱啶基、環己基螺呱啶基、氮雜環丁基螺呱啶基、氮雜環戊基螺呱啶基、氮雜環己基螺呱啶基、、
、
、
、
，當被取代時，任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2 、oxo、C1-4 烷基或C1-4 烷氧基的取代基所取代； B選自
、
或
； Rb1 、Rb2 、Rb3 或Rb4 各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2 、CN、CONH2 、甲基或甲氧基，所述的甲基或甲氧基任選進一步被0至4選自H、F、Cl、Br、I的取代基所取代； n1、n2、n3、n4、n5、n6、n7、n8、n9、n10、n11、n12各自獨立的選自0、1、2、3或4； K選自
或
； Rk2 選自CH2 或C=O； Rk1 、Rk3 或Rk4 各自獨立的選自H、F、Cl、Br、I、OH或NH2 ； p1或p2各自獨立的選自0、1或2。
- 根據請求項3所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中 L選自、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
， 或者L可以選自
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
或
； 或者L可以選自
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
或
L左邊與B連接，L右邊與K連接； B選自
、
、
或
， 或者B可以選自
、
、
、
、
、
、
、
、
或
；K選自
、
或
； 或者K可以選自
。
- 根據請求項4所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中 K選自、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
或
。
- 根據請求項4所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中 K選自、
、、、、、或
。
- 根據請求項4所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中 B選自； 或者B可以選自、、、、或。
- 根據請求項4所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中 B選自； 或者B可以選自。
- 根據請求項4所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中 B選自； 或者B可以選自。
- 根據請求項4所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中 B選自； 或者B可以選自。
- 根據請求項2所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中，化合物選自通式(Ia)或(Ib)所示的化合物， B-Cy1-Cy2-K (Ia) B-Cy1-Cy2-Cy3-K (Ib) B選自、、或，、、、、、、、、或； Cy1、Cy2、Cy3各自獨立的選自取代的或者未取代的如下基團之一：4至6員含氮雜單環、5至10員含氮雜並環、6至10員含氮雜螺環、4至6員單環烷基或苯基，所述苯基、環烷基、雜單環、雜並環或雜螺環任選進一步被0至4個選自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2 、oxo、C1-4 烷基或C1-4 烷氧基的取代基所取代，所述的雜單環、雜並環或雜螺環含有1至4個選自O、S、N的雜原子； K選自、、或。
- 根據請求項11所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中， Cy1、Cy2、Cy3各自獨立的選自取代的或者未取代的如下基團之一：、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
或
； K選自
、、、、、、、、、、、、、、、或。 - 一種化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中所述化合物選自如下結構之一：
。 - 根據請求項1至13任意一項所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，其中所述的鹽選自三氟乙酸鹽。
- 一種藥物組合物，包括請求項1-14任意一項所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶，以及藥學上可接受的載體。
- 一種如請求項1-14任意一項所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶的用途，其係用於製備治療與BTK活性或表達量相關疾病的藥物。
- 一種如請求項1-14任意一項所述的化合物或者其立體異構體、溶劑化物、前藥、代謝產物、藥學上可接受的鹽或共晶的用途，其係用於製備治療與抑制或降解BTK相關疾病的藥物。
- 根據請求項16-17任意一項所述的用途，其中，所述的疾病選自腫瘤或自身免疫疾病。
- 根據請求項18所述的用途，其特徵在於，所述的腫瘤選自非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴細胞性白血病、套細胞淋巴瘤、或B細胞淋巴瘤；所述自身免疫疾病選自內風濕關節炎或銀屑病。
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