CN113519508B - 一种莠去津混悬剂及其制备方法、高效液相色谱检测方法 - Google Patents

一种莠去津混悬剂及其制备方法、高效液相色谱检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种莠去津混悬剂及其制备方法、高效液相色谱检测方法。莠去津混悬剂，其包括莠去津和玉米油，所述莠去津的粒径在5μm以下。本发明以玉米油作为溶媒，通过控制莠去津粒径，配制成稳定、均一的混悬液体制剂；再通过高效液相色谱的分析方法，利用标准曲线对混悬液体制剂进行浓度测定。本发明可降低辅料对样品检测的影响，能够准确、高效地检测毒理给药试验时制剂的浓度，且成本较低，实验操作方便，准确性高，重复性好，结果判断客观、灵敏度高；对农药的毒性试验研究有十分重要的意义。通过建立相应的技术手段，指导药物的早期研发和安全性评价，降低药物开发风险。

Description

一种莠去津混悬剂及其制备方法、高效液相色谱检测方法
技术领域
本发明属于农药制剂技术领域，具体涉及一种莠去津混悬剂及其制备方法、高效液相色谱检测方法。
背景技术
中国是农业大国，农药制剂对农业发展具有关键性作用，其主要可分为杀虫剂、杀菌剂、除草剂等，而莠去津就是一种使用普遍的除草剂。莠去津的除草性质是1957年由瑞士的H·盖辛和E·克努斯利发现的，1958年由瑞士的嘉基公司开发生产，后来发展成世界产量最大的除草剂。中国在70年代开始生产。随着除草剂的普及，莠去津在中国的产量越来越高，其危害也逐渐显现。
近年来，农药的使用安全越来越受重视，莠去津作为一种内吸选择性苗前、苗后除草剂，以根吸收为主，茎叶吸收很少，迅速传导到植物分生组织及叶部，干扰光合作用，使杂草致死。在玉米等抗性作物体内，被玉米酮酶分解生成无毒物质，因而对作物安全的特点得到广泛使用。因此，探索莠去津使用过程中经皮染毒后的毒性特征和作用靶器官显得尤为重要，为使用后中毒的观察指标和治疗提供了依据。此外，为保证莠去津经皮毒性试验的准确性，混悬液体制剂的浓度是试验的关键参数。
相关研究表明，混悬液体制剂存在物理不稳定性，主要包括分散性、奥式熟化和悬浮稳定性等三个方面。而莠去津混悬剂也存在严重的膏化和析水问题，因此均一、稳定的莠去津混悬剂是整个毒性试验检测过程的关键步骤。目前，有关莠去津混悬剂的制备主要是添加分散剂、乳化剂和粘度调节剂等，在制备过程中需要充分研磨，使整个混悬体系稳定均一，从而为后续检测分析提供基础。研究者曾利用正交试验得出制剂中含有质量分数为1.5％的乳化剂、1.5％的宁乳、0.5％的农乳和0.1％的黄原胶较为理想，从而使整个混悬剂的体系稳定均一。然而，目前这些方法的主要是用于农药喷洒农作物的配制方案，不适用于动物给药。莠去津经皮毒性试验的给药对象为动物，因此给药制剂中不能使用或者仅能极少量使用乳化剂等有机溶剂及有毒试剂。但是现有技术中对于如何制备一种安全、均一、稳定的莠去津混悬液体制剂报道较少，而根据国家食品药品监督管理总局的化学药物(原料药和制剂)稳定性研究技术指导原则以及非临床给药制剂分析方法学验证指导原则进行的方法学验证更无明确报道。为完成毒性试验的测定，亟待一种经过给药制剂分析方法学验证的均一、稳定、且对动物无副作用的莠去津混悬剂用于动物给药。
近年来研究者开发了大量莠去津混悬剂的检测方法，主要包括高效液相色谱、气相色谱、高效液相色谱质谱联用和气相色谱质谱联用。而检测样品在进样前，需进行较为复杂的前处理过程，例如液液萃取及固液萃取等操作。同时由于不同的莠去津水混悬剂中所添加的分散剂、乳化剂等的不同，其所需分离色谱的方法参数也有差异。一种针对简便、快速、稳定且对动物无副作用的莠去津混悬剂的检测方法的开发也极为重要。
发明内容
本发明实际要解决的技术问题是克服了现有技术中，通过动物给药进行毒性试验过程中，缺乏均一、稳定、且对动物无副作用的莠去津混悬剂的制备方法的缺陷，从而提供了一种精准的莠去津混悬剂及其制备方法、高效液相色谱检测方法。
本发明主要通过以下技术方案解决上述技术问题。
本发明提供一种莠去津混悬剂，其包括莠去津和玉米油，所述莠去津的粒径在5μm以下。
本发明中，若只采用玉米油作为溶媒，而不对莠去津的粒径进行控制的话，莠去津混悬剂很难达到均一稳定的效果。只有采用玉米油的同时，对粒径控制在5μm以下，才能获得相应的均一稳定的莠去津混悬剂。
本发明中，所述莠去津可为本领域常规市售所得产品。例如在一实施例中，购于山东侨昌化学有限公司。
本发明中，所述玉米油可为市售获得。例如在一实施例中，购于益海嘉里食品营销有限公司。
本发明中，所述莠去津的粒径优选1-5μm。
本发明中，可通过本领域常规方法将莠去津的粒径达到5μm以下，优选通过研磨的方法获得。所述研磨一般在研钵中进行。
本发明中，所述莠去津混悬剂中优选不含有本领域常规的分散剂、乳化剂或表面活性剂。所述的表面活性剂可为农药(应用于农作物)中常规使用的宁乳、农乳等。
本发明中，所述莠去津混悬剂中优选不含有除玉米油以外的溶剂。所述溶剂可为本领域常规的能够促使莠去津溶解的溶剂。
本发明中，所述莠去津混悬剂中，莠去津的浓度优选为1～300mg/mL，例如10mg/mL、50mg/mL、80mg/mL、100mg/mL、150mg/mL、200mg/mL、250mg/mL或者280mg/mL。
本发明还提供一种所述莠去津混悬剂的制备方法，其包括下述步骤：将所述莠去津和所述玉米油混合均匀即可。
本发明中，所述混合均匀的操作和方法可为本领域常规，优选按下述步骤进行：将莠去津研磨至所述粒径在5μm以下后，与玉米油混合均匀即可，更优选将莠去津研磨至所述粒径在5μm以下后，加入玉米油后，继续研磨至外观均一，混合均匀即可。
根据常识可知，研磨至玉米油和莠去津混合均匀后，将所得混合溶液转移至容器中，再用玉米油清洗研钵至表面无明显莠去津残留，所得清洗液均转移至所述容器中，再加入玉米油至所需体积后，搅拌均匀即可。
其中，所述搅拌的操作和条件可为本领域常规。优选所述搅拌的时间为15min以上，更优选为30min以上。
本发明还提供了一种所述莠去津混悬剂的高效液相色谱检测方法，其包括以下步骤：将待测样品进行高效液相色谱检测莠去津即可；
其中，所述待测样品为所述莠去津混悬剂稀释所得。
本发明中，所述待测样品中，莠去津的浓度优选为1～20μg/mL，例如10μg/mL或者12μg/mL。
本发明中，所述稀释过程中使用的溶剂种类可为本领域常规，优选为醇溶剂和/或水，更优选为含醇水溶液。所述醇溶剂可为本领域常规，优选为甲醇和/乙醇，更优选为甲醇。
其中，所述含醇水溶液中，醇溶剂与水的体积比可为50-80：35，优选为(60-70)：35，更优选为65:35。
本发明中，所述稀释的操作和条件可为本领域常规，例如可根据所述莠去津混悬剂中莠去津浓度，以及，所述待测样品中莠去津的浓度进行一次稀释或多次稀释。
在优选实施例中，所述稀释的操作可按下述步骤进行：移取适量莠去津混悬剂至合适规格的容量瓶中，加入容量瓶体积的50％～80％甲醇溶解(例如65％)，混匀至无明显油滴，再用超纯水稀释定容至刻度，摇匀。若有第二步稀释，则移取适量第一步溶液至合适规格的容量瓶中，加入甲醇水溶液(甲醇水溶液中，甲醇的体积百分比为50％～80％)稀释定容至刻度，摇匀即得。
本发明中，优选将所述待测样品用孔径为0.22μm的PVDF滤头过滤后，弃去初滤液。
其中，所述PVDF滤头优选为直径为33mm厂家为Millex的滤头。
其中，所述初滤液为过滤开始时获得的滤液，一般为1～5mL，优选1mL。
本发明中，所述高效液相色谱检测的操作和条件均为本领域常规。
本发明中，所述高效液相色谱检测中，优选采用等度洗脱。所述等度洗脱过程中，采用的流动相为甲醇和水。
其中，所述水一般为超纯水。
其中，所述甲醇和所述水的体积比优选为(60-70)：35，更优选为65:35。
本发明中，所述高效液相色谱检测中，优选采用十八烷基键合硅胶色谱柱。其中，所述的十八烷基键合硅胶色谱柱为规格为150×4.6mm(L×ID)，5μm，优选为WatersSymmetry-Shield RP18色谱柱。
本发明中，所述高效液相色谱检测中，所述流动相的流速可为本领域常规，优选为0.8～1.2mL/min，更优选1.0mL/min。
本发明中，所述高效液相色谱检测中，所述色谱柱的柱温可为本领域常规，优选为30～40℃，更优选为35℃。
本发明中，所述高效液相色谱检测中，检测波长可为本领域常规，优选为200～250nm，更优选为220nm。
本发明中，所述高效液相色谱检测中，进样体积可为本领域常规，优选为10～20μL，更优选为10μL。
本发明中，所述高效液相色谱检测中，进样器温度可为本领域常规，优选为2-10℃，更优选为6℃。
本发明中，所述高效液相色谱检测中，洗脱时间可为本领域常规，优选5-10min，更优选为8min。
本发明中，所述莠去津的高效液相色谱检测方法，优选包括下述步骤：
(1)配置一系列浓度的含有莠去津的标准溶液；
(2)采用如前所述的高效液相色谱检测方法对步骤(1)的所述标准溶液分别进行检测，测得相应的莠去津峰面积；
(3)以所述标准溶液中测定的莠去津峰面积为纵坐标，以所述标准溶液中莠去津的浓度为横坐标，建立线性回归方程；
(4)将所述待测样品的峰面积代入步骤(3)中线性回归方程，即可获得所述待测样品中莠去津浓度。
步骤(1)中，所述标准溶液的配置中，采用的莠去津标准品可市售获得。本发明优选实施例中，购于中国计量科学研究院。
步骤(1)中，优选至少有三个不同浓度的标准溶液。不同浓度的标准溶液个数越多，所得线性回归方程准确性更高。例如，本发明优选实施例中，在绘制线性回归方程时，配置了5组不同浓度的标准溶液。
步骤(1)中，所述标准溶液中，莠去津的浓度可为本领域常规，优选为1～20μg/mL，例如1μg/mL、2μg/mL、4μg/mL、10μg/mL和20μg/mL。
步骤(3)中，所述线性回归方程优选为y＝101.9534x+1.3815，R2＝1.0000。由此可知，莠去津在1～20μg/mL浓度范围内具有良好的线性，确定此范围为该方法的检测范围。
本发明中，根据常识可知，所述莠去津混悬剂中莠去津的浓度为所述待测样品中莠去津浓度乘以稀释因子。其中，所述稀释因子为所述莠去津混悬剂中莠去津的浓度与所述待测样品中莠去津浓度的比值。
在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：
本发明以玉米油作为溶媒，通过控制莠去津粒径，配制成稳定、均一的混悬液体制剂；再通过高效液相色谱的分析方法，利用标准曲线对混悬液体制剂进行浓度测定。同时，本方法根据化学药物(原料药和制剂)稳定性研究技术指导原则进行了方法学验证，确保了方法的正确性和可行性。
本发明可降低辅料对样品检测的影响，能够准确、高效地检测毒理给药试验时制剂的浓度，且成本较低，实验操作方便，准确性高，重复性好，结果判断客观、灵敏度高；对农药的毒性试验研究有十分重要的意义。通过建立相应的技术手段，指导药物的早期研发和安全性评价，降低药物开发风险，推动国内相关领域学科发展。
附图说明
图1为实施例1中标准样品的峰面积与其对应的浓度的标准曲线示意图。
图2为实施例1中稀释剂B(浓度为65％甲醇水溶液)的高效液相色谱图。
图3为实施例1中稀释后的玉米油样品的高效液相色谱图。
图4为标准样品S5上样后，稀释剂B(65％％甲醇水溶液)的高效液相色谱图。
图5为1μg/mL莠去津标准溶液(即S1)的高效液相色谱图。
图6为20μg/mL莠去津标准溶液(即S5)的高效液相色谱图。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
介绍和概述
本发明通过举例而非给出限制的方式来进行说明。应注意的是，在本公开文件中所述的“一”或“一种”实施方式未必是指同一种具体实施方式，而是指至少有一种。
下文将描述本发明的各个方面。然而，对于本领域中的技术人员显而易见的是，可根据本发明的仅一些或所有方面来实施本发明。为说明起见，本文给出具体的编号、材料和配置，以使人们能够透彻地理解本发明。然而，对于本领域中的技术人员将显而易见的是，本发明无需具体的细节即可实施。在其他例子中，为不使本发明费解而省略或简化了众所周知的特征。
将各种操作作为多个分立的步骤而依次进行描述，且以最有助于理解本发明的方式来说明；然而，不应将按次序的描述理解为暗示这些操作必然依赖于顺序。
将根据典型种类的反应物来说明各种实施方式。对于本领域中的技术人员将显而易见的是，本发明可使用任意数量的不同种类的反应物来实施，而不只是那些为说明目的而在这里给出的反应物。此外，也将显而易见的是，本发明并不局限于任何特定的混合示例。
实验材料及器材：
高效液相色谱仪(厂家：Agilent，型号：1260)、分析天平(厂家：METTLERTOLEDO)、磁力搅拌器、过滤头(厂家：Millex，规格：PVDF/33mm*0.22μm)、色谱柱(厂家：Agilent，型号：Symmetry-Shield RP18,150×4.6mm(L×ID)，5μm)
实验试剂：
甲醇(购自：Merck)、超纯水(来自Milli-Q超纯水仪)、玉米油(购自：益海嘉里食品营销有限公司)、莠去津标准品(购自：中国计量科学研究院)、莠去津原药(购自：山东侨昌化学有限公司)。
实施例1：HPLC检测方法的可行性
HPLC法检测莠去津的标准曲线制定：
(1)将莠去津标准品用甲醇稀释至1μg/mL、2μg/mL、4μg/mL、10μg/mL和20μg/mL，分别标记为S1、S2、S3、S4、S5标准样品，同时配制稀释后的玉米油样品(用甲醇将玉米油稀释100倍所得)、稀释剂B(65％甲醇水溶液)样品空白样品、以及质控样品(莠去津标准品用甲醇稀释至8μg/mL)，性能检查样品(莠去津标准品用甲醇稀释至8μg/mL)以及储备液比较样品(莠去津标准品用甲醇稀释至8μg/mL)。
(2)HPLC检测方法如下：
色谱柱Waters Symmetry-Shield RP18[150×4.6mm(L×ID)，5μm]；
等度洗脱。洗脱溶剂为甲醇：超纯水＝65:35，v/v；
检测波长220nm；
柱温35℃；
进样器温度6℃；
流速1.0mL/min；
进样体积10μL；
运行时间8min；
采用如上检测方法，所有样品按照进样顺序进行进样，用于考察系统适应性、残留、灵敏度和分离度等考察项。进样顺序：在S1-S5样品进样前，必须先至少进行3份质控样品考察系统适应性，后续进样空白样品稀释剂B、S1-S5样品、储备液比较样品、空白样品稀释剂B、和性能检查样品。
每个浓度测定一次，以标准溶液中测定的莠去津峰面积(Y)为纵坐标，与其相应的浓度(X)为横坐标建立线性回归方程(图1)，方程为y＝101.9534x+1.3815，R2＝1.0000，标准曲线中的回算浓度和标示值偏差结果见表1，相对偏差均在可接受范围内(回算值与标示值偏差在±10％，标准曲线的上下限的偏差在20％内)。可知莠去津在1～20μg/mL浓度范围内具有良好的线性，确定此范围为该方法的检测范围。
表1标准曲线中的回算浓度和标示值偏差结果
Figure BDA0002458334140000091
注：S1～S5指标准曲线中的五个浓度点的编号，LLOQ为标曲下限，即为S1样品。
根据图2～6可知，该方法的特异性、残留、灵敏度、分离度等都符合国家食品药品监督管理总局的化学药物(原料药和制剂)稳定性研究技术指导原则(2015年修订)以及非临床给药制剂分析方法学验证指导原则的标准，具体参见化学药物(原料药和制剂)稳定性研究技术指导以及NonClinicalDose Formulation Analysis Method Validation andSample Analysis中的描述，结果如表2所示。
图2为稀释剂B(浓度为65％甲醇水溶液)的高效液相色谱图。由图2可知，甲醇溶剂峰出峰时间为2.790min。
图3为稀释后的玉米油的高效液相色谱图。由图3可知，甲醇溶剂峰出峰时间为2.790min、出峰时间为4.198min为干扰峰此处峰面积应不大于LLOQ的10％，符合标准。
图4为标准样品S5上样后，稀释剂B(65％％甲醇水溶液)的高效液相色谱图。图4与图2相同，由此可见，并没有标准样品的残留物质。
图5为1μg/mL莠去津标准溶液(即S1)的高效液相色谱图。其中，2.789min为溶剂峰，4.197min为莠去津峰。
图6为20μg/mL莠去津标准溶液(即S5)的高效液相色谱图。其中，2.789min为溶剂峰，4.197min为莠去津峰，各峰保留时间之间有间距，分离度好。
表2特异性、残留、灵敏度、分离度数据汇总
Figure BDA0002458334140000101
注：表中ULOQ指标准曲线中的浓度最高点，即为S5样品，LLOQ指标准曲线中的浓度最低点，即为S1样品。
表3系统适应性结果(质控样品，连续进样6次)
Figure BDA0002458334140000102
根据HPLC仪器软件中的图谱及导出数据计算得表3中的数据，莠去津峰的拖尾因子介于0.9和1.5之间。理论塔板数不得低于3000。连续进样6针的保留时间和峰面积的RSD％不得大于5.0％。性能检查样品的测定浓度和理论浓度的相对误差必须在±5.0％之内。储备液比较样品的测定浓度和理论浓度的相对误差必须在±5.0％之内。因此，该方法满足指导原则中系统适应性的要求。
以上结果证明本方法中用于检测莠去津的HPLC检测方法的可行性。
实施例2：莠去津混悬剂配制方法的可行性
(1)莠去津混悬液体制剂的配制：
称取适量莠去津置于合适的研钵中，研磨至无颗粒后(粒径在5μm以下)加入适量的玉米油，继续研磨至外观均一，转移至合适的容器中，再用适量玉米油清洗研钵，至研钵表面无明显莠去津残留，清洗液均转移至合适的容器中，加适量玉米油至所需体积，随后搅拌至少15min至外观均一。配制浓度如表4所示：
表4莠去津混悬液体制剂的配制
序号 浓度(mg/mL)
1 1
2 300
(2)待测样品制备：
①移取适量莠去津混悬液体制剂至合适规格的容量瓶中，加入大约容量瓶体积65％的甲醇溶解，混匀至无明显油滴，再用超纯水稀释定容至刻度，摇匀。若有第二步稀释，则移取适量第一步溶液至合适规格的容量瓶中，加65％甲醇水溶液稀释定容至刻度，摇匀即得。稀释后样品浓度如表5：
表5待测样品的制备
序号 混悬液体制剂浓度(mg/mL) 稀释后浓度(μg/mL)
1 1 10
2 300 12
②将稀释后样品溶液用0.22μm的滤头过滤，弃去初滤液1mL。
(3)将步骤(2)制得的待测样品按照实施例1步骤(2)中公开的HPLC检测方法进行检测(待测样品在空白样品稀释剂B进样之后，性能检查样品进样之前进行进样)，分别测得相应的峰面积，将峰面积带入回归方程计算后，获得相应的浓度，再乘以稀释因子，样品1的稀释因子为100，样品2的稀释因子为25000，可得到莠去津混悬液体制剂的浓度。具体数据如表6：
表6待测样品测定的数据
Figure BDA0002458334140000111
Figure BDA0002458334140000121
效果实施例1：莠去津混悬剂浓度的准确度及精密度验证
本发明HPLC法检测莠去津混悬液体制剂浓度的批内准确度和精密度：重复进行实施例2，对浓度为1mg/mL以及300mg/mL的莠去津混悬液体制剂分别稀释至10μg/mL、12μg/mL后，按照实施例1步骤(2)中公开的HPLC检测方法分别6次平行进样检测，分别测得相应的峰面积，将峰面积带入回归方程计算后，获得相应的浓度，再乘以稀释因子，可得到莠去津混悬液体制剂的浓度。
每份测定一次，计算6份结果的相对标准偏差(RSD，％)和平均回收率(平均回收率＝测定浓度均值/理论浓度×100％)。批内准确度和精密度试验结果显示，该检测方法的批内相对标准偏差为1.0％和0.3％(不超过10.0％，满足常规HPLC混悬液体制剂检测要求)，平均回收率为94.0％和97.0％(介于85.0％～115.0％之间，满足常规HPLC混悬液体制剂检测要求)，具体数据如表7：
表7批内准确度和精密度测定结果
Figure BDA0002458334140000122
Figure BDA0002458334140000131
效果实施例2：莠去津混悬剂稳定性验证
莠去津混悬剂室温储存24h及2～8℃储存8d后稳定性测试，具体如下：
(1)根据实施例2中的步骤(1)平行制备三组样品，每组样品平行配制两份莠去津混悬液体，制剂浓度为1mg/mL、300mg/mL；
(2)第一组无需储存，立即进行检测：
根据实施例2中的步骤(2)(3)分别稀释后混悬剂、采用HPLC检测方法进行检测，计算混悬液体制剂浓度，详见表8及表9中的第2列数据(0h测定浓度，即初始测定浓度)。
(3)第二组在室温下放置24h后进行检测：
室温下放置24h后，根据实施例2中的步骤(2)(3)分别稀释后混悬剂、采用HPLC检测方法进行检测两份平行样品，计算混悬液体制剂浓度，详见表8的第3列数据(24h测定浓度)。
计算室温24h测定浓度与0h测定浓度的相对偏差RD和回收率，详见表8的第5-6列数据。
(4)第三组在2～8℃下放置8d后进行检测：
2～8℃下放置8d后，根据实施例2中的步骤(2)(3)分别稀释后混悬剂、采用HPLC检测方法进行检测，计算混悬液体制剂浓度，详见表9的第3列数据(8d测定浓度)。
计算室温2～8℃下放置8d测定浓度与0h测定浓度的相对偏差RD和回收率，详见表9的第5-6列数据。
表8第一组和第二组制剂的稳定性结果
Figure BDA0002458334140000132
Figure BDA0002458334140000141
表9第一组和第三组制剂的稳定性结果
Figure BDA0002458334140000142
表8及表9可知，室温24h样品、2～8℃样品与0h的样品的相对偏差RD及回收率均在可接受范围内(偏差在3.0％以内，回收率在105％以内)，因此通过效果实施例2的方法制备莠去津混悬剂在室温24h及2～8℃贮存8d稳定性好，为后续毒性试验给药制剂的保存提供了理论依据。
效果实施例3：莠去津混悬剂均一性验证
根据效果实施例2中的方法，平行配制三组样品，每组样品莠去津混悬液体制剂浓度有1mg/mL、300mg/mL。
(1)第一组无需储存，立即进行检测：
根据实施例2中的步骤(2)(3)分别稀释后混悬剂，分别取上、中、下层样品，每层样品平行处理2份，每份采用HPLC检测方法进行检测，计算混悬液体制剂浓度，详见表10的数据(0h测定浓度)。
(2)第二组在室温下放置24h后进行检测：
室温下放置24h后，根据实施例2中的步骤(2)(3)分别稀释后混悬剂，分别取上、中、下层样品，每层样品平行处理2份，每份采用HPLC检测方法进行检测，计算混悬液体制剂浓度，详见表11的数据(室温24h测定浓度)。
(3)第三组在2～8℃下放置8d后进行检测：
2～8℃下放置8d后，根据实施例2中的步骤(2)(3)分别稀释后混悬剂，分别取上、中、下层样品，每层样品平行处理2份，每份采用HPLC检测方法进行检测，计算混悬液体制剂浓度，详见表12的数据(室温24h测定浓度)。
表10第一组均一性结果(0小时)
Figure BDA0002458334140000151
表11第二组室温保存24小时后均一性结果
Figure BDA0002458334140000152
表12第三组2～8℃保存8天后均一性结果
Figure BDA0002458334140000153
Figure BDA0002458334140000161
表8-12中，
Figure BDA0002458334140000162
RD％＝|x1-x2|/(x1+x2)×100％(x1为两份平行样品的第一份测得浓度值，x2为第二份平行样品测得浓度值)；回收率％＝测得浓度/初始浓度或理论浓度×100％
根据表10-12的结果所示，所有的结果平行样品的相对平均偏差(RD)在3％以内，总体的相对标准偏差(RSD)在4％以内，因此通过实施例3的方法制备莠去津混悬剂在室温24h及2～8℃贮存8d稳定性好，为后续毒性试验给药制剂的保存提供了理论依据。
以上效果实施均根据国家食品药品监督管理总局的化学药物(原料药和制剂)稳定性研究技术指导原则以及非临床给药制剂分析方法学验证指导原则，从而保证了方法的正确性和可行性。
以上所述具体实施例仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进或替换，这些改进或替换也应当视为本发明的保护范围。

Claims (5)

1.一种莠去津混悬剂，其特征在于，其由莠去津和玉米油组成，所述莠去津的粒径在5μm以下，所述莠去津混悬剂中不含有分散剂、乳化剂或表面活性剂，所述莠去津混悬剂中不含有除玉米油以外的溶剂，莠去津的浓度为1~300mg/mL；
所述莠去津混悬剂的制备方法包括下述步骤：将所述莠去津和所述玉米油混合均匀，所述混合均匀的操作按下述步骤进行：将莠去津研磨至所述粒径在5μm以下后，加入玉米油后，继续研磨至混合均匀。
2.如权利要求1所述的莠去津混悬剂，其特征在于，所述莠去津的粒径为1-5μm；
和/或，所述莠去津混悬剂中，莠去津的浓度为10mg/mL、50mg/mL、80mg/mL、100mg/mL、150mg/mL、200mg/mL、250mg/mL或者280mg/mL。
3.如权利要求1所述的莠去津混悬剂，其特征在于，所述莠去津混悬剂的制备方法中，在研磨至玉米油和莠去津混合均匀后，将所得混合溶液转移至容器中，再用玉米油清洗研钵至表面无明显莠去津残留，所得清洗液均转移至所述容器中，再加入玉米油至所需体积后，搅拌均匀。
4.如权利要求3所述的莠去津混悬剂，其特征在于，所述搅拌的时间为15min以上。
5.如权利要求4所述的莠去津混悬剂，其特征在于，所述搅拌的时间为30min以上。
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EP0142485B1 (en) * 1983-09-19 1989-03-01 Monsanto Company Emulsion flowable formulation containing a mixture of alachlor/atrazine as the active agent
CN101627768A (zh) * 2009-08-24 2010-01-20 王春源 一种复配除草剂及其制备方法、使用方法
CN101743988B (zh) * 2010-01-25 2013-06-19 陕西上格之路生物科学有限公司 一种玉米田除草剂组合物
CN105699573A (zh) * 2016-03-31 2016-06-22 山东五洲检测有限公司 一种水体中莠去津残留量的检测方法
CN107439578A (zh) * 2017-08-04 2017-12-08 安徽圣丰生化有限公司 一种含烟嘧磺隆、环磺酮和莠去津可分散油悬浮剂及其制备方法
CN107960406A (zh) * 2017-11-06 2018-04-27 南宁泰达丰生物科技有限公司 一种采用高压均质机制备农药悬浮剂的方法

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